ES2617591T3 - Compuestos de bis(fluoroalquil)-1,4-benzodiazepinona como inhibidores de Notch - Google Patents

Compuestos de bis(fluoroalquil)-1,4-benzodiazepinona como inhibidores de Notch Download PDF

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George V. Delucca
Daniel O'MALLEY
Patrice Gill
Claude A. Quesnelle
Brian E. Fink
Yufen Zhao
Francis Y. Lee
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Abstract

Un compuesto de Formula (I):**Fórmula** y/o al menos una sal del mismo, en la que: R1 es -CH2CH2CF3; R2 es -CH2CH2CF3 o -CH2CH2CH2CF3; R3 es H, -CH3 o Rx; R4 es H o Ry; Rx es: -CH2OC(O)CH(CH3)NH2, -CH2OC(O)CH(NH2)CH(CH3)2, - CH2OC(O)CH((CH(CH3)2)NHC(O)CH(NH2)CH(CH3)2,**Fórmula** Ry es: -SCH2CH(NH2)C(O)OH, -SCH2CH(NH2)C(O)OCH3 o -SCH2CH(NH2)C(O)OC(CH3)3; el anillo A es fenilo o piridinilo; cada Ra es independientemente Cl, alquilo C1-3, -CH2OH, -CF3, ciclopropilo, -OCH3 y/u -O(ciclopropilo); cada Rb es independientemente F, Cl, -CH3, -CH2OH, -CF3, ciclopropilo y/u -OCH3; y es cero, 1 o 2; y z es cero, 1 o 2; a condicion de que si el anillo A es fenilo y z es cero, entonces y es 1 o 2 y al menos un Ra es alquilo C1-3, -CH2OH, -CF3, ciclopropilo u -O(ciclopropilo); a condicion de que si R3 es Rx, entonces R4 es H; y a condicion de que si R4 es Ry, entonces R3 es H o -CH3.

Description

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DESCRIPCION
Compuestos de bis(fluoroalquil)-1,4-benzodiazepinona como inhibidores de Notch
La presente invention se refiere, en general, a compuestos de benzodiazepinona utiles como inhibidores de Notch. La invencion tambien se refiere a composiciones farmaceuticas que comprenden al menos un compuesto de acuerdo con la invencion que es util para el tratamiento de afecciones relacionadas con la via de Notch, tales como el cancer y otras enfermedades proliferativas.
La senalizacion de Notch se ha implicado en diversos procesos celulares, tales como la especificacion del destino celular, la diferenciacion, la proliferation, la apoptosis y la angiogenesis. (Bray, Nature Reviews Molecular Cell Biology, 7:678-689 (2006); Fortini, Developmental Cell 16:633-647 (2009)). Las proteinas Notch son moleculas transmembrana heterodimericas de un solo paso. La familia Notch incluye 4 receptores, NOTCH 1-4, que se activan tras la fijacion a ligandos de la familia DSL (de tipo Delta 1,3, 4 y Jagged 1 y 2).
La activation y la maduracion de NOTCH requiere de una serie de etapas de procesamiento, incluida una etapa de escision proteolitica mediada por gamma secretasa, un complejo de multiples proteinas que contiene Presenilina 1 o Presenilina 2, nicastrina, APH1 y PEN2. Una vez que NOTCH se escinde, el dominio intracelular de NOTCH (NICD) se libera de la membrana. El NlCD liberado se transloca al nucleo, donde funciona como un activador transcripcional junto con los miembros de la familia CSL (RBPSUH, "supresor de hairless" y LAG1). Los genes diana de NOTCH incluyen miembros de la familia HES, tales como HES-1. HES-1 funciona como un represor transcripcional de genes, tales como HERP1 (tambien conocido como HEY2), HERP2 (tambien conocido como HEY1) y HATH1 (tambien conocido como ATOH1).
La activacion anomala de la via de Notch contribuye a la oncogenesis. La activacion de la senalizacion de Notch se ha implicado en la patogenia de diversos tumores solidos, que incluyen el de ovario, pancreas y mama y tumores hematicos, tales como leucemias, linfomas y mieloma multiple. La funcion de la inhibition de Notch y su utilidad en el tratamiento de diversos tumores solidos y hematicos se describen en Miele, L. et al., Current Cancer Drug Targets, 6:313-323 (2006); Bolos, V. et al., Endocrine Reviews, 28:339-363 (2007); Shih, i-M. et al., Cancer Research, 67:1879-1882 (2007); Yamaguchi, N. et al., Cancer Research, 68:1881-1888 (2008); Miele, L., Expert Review Anticancer Therapy, 8:1197-1201 (2008); Purow, B., Current Pharmaceutical Biotechnology, 10:154-160 (2009); Nefedova y. et al., Drug Resistance Updates, 11:210-218 (2008); Dufraine, J. et al., Oncogene, 27:5132-5137 (2008); y Jun, H.T. et al., Drug Development Research, 69:319-328 (2008).
Todavia existe una necesidad de compuestos que sean utiles como inhibidores de Notch y que tengan una estabilidad metabolica suficiente para proporcionar niveles eficaces de exposition al farmaco. Ademas, todavia existe una necesidad de compuestos utiles como inhibidores de Notch que se puedan administrar al paciente por via oral o intravenosa.
La patente de los EE.UU. N.° 7,053,084 B1 desvela compuestos de succinoilamino benzodiazepina utiles para tratar trastornos neurologicos, tales como la enfermedad de Alzheimer. La referencia desvela que estos compuestos de succinoilamino benzodiazepina inhiben la actividad gamma secretasa y el procesamiento de la proteina precursora de amiloide ligada a la formation de depositos neurologicos de proteina amiloide.
Los solicitantes han descubierto compuestos potentes que tienen actividad como inhibidores de Notch y suficiente estabilidad metabolica para proporcionar niveles eficaces de exposicion al farmaco tras la administration oral o intravenosa. Estos compuestos se proporcionan por ser utiles como compuestos farmaceuticos con valores deseables de estabilidad, biodisponibilidad, indice terapeutico y toxicidad, que son importantes para su capacidad farmacologica.
Sintesis de la invencion
La presente invencion satisface la necesidad anterior, dado que proporciona compuestos de bis(fluoroalquil)1,4- benzodiazepinona que son utiles como inhibidores selectivos de la via de senalizacion de Notch, incluyendo los profarmacos de los mismos identificados en el presente documento.
La presente invencion tambien proporciona composiciones farmaceuticas que comprenden un vehiculo farmaceuticamente aceptable; y al menos un compuesto de Formula (I).
La presente invencion tambien proporciona al menos un compuesto de Formula (I) para su uso en el tratamiento de una enfermedad o trastorno asociados a la actividad del receptor Notch, en un paciente mamifero.
La presente invencion tambien proporciona procesos e intermedios para fabricar los compuestos de Formula (I).
La presente invencion tambien proporciona los compuestos de Formula (I) para su uso en terapia.
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La presente invencion tambien desvela el uso de los compuestos de Formula (I) para la fabrication de un medicamento para el tratamiento del cancer.
Los compuestos de Formula (I) y las composiciones que comprenden los compuestos se pueden usar para el tratamiento, la prevention o la curacion de diversas afecciones relacionadas con el receptor Notch. Las composiciones farmaceuticas que comprenden estos compuestos son utiles para el tratamiento, la prevencion o la ralentizacion de la progresion de enfermedades o trastornos diversas areas terapeuticas, tales como el cancer.
Se expondran en forma amplia estas y otras caracteristicas de la invencion a medida que avanza la divulgation.
Breve descripcion de los dibujos
La invencion se ilustra con referencia a los dibujos adjuntos que se describen a continuation.
La Figura 1 muestra la eficacia antitumoral del Ejemplo 1 contra la leucemia linfoblastica aguda de linfocitos T humana TALL1. Las dosis se administraron por via oral en los dias indicados con (^); via oral, cada dia x 10. Cada simbolo representa la carga tumoral mediana de un grupo de 8 ratones. (•) Control; (O) Ejemplo 1, 0,625 mg/kg/adm; (■) Ejemplo 1, 1,25 mg/kg/adm; (□) Ejemplo 1,2,5 mg/kg/adm; (▲) Ejemplo 1, 10 mg/kg.
La Figura 2 muestra la eficacia antitumoral del Ejemplo 1 en el carcinoma de mama humano MDA-MB-157. Las dosis se administraron por via oral en los dias indicados con (^); via oral, dos veces al dia x 15 (10 dias de administration; 2 dias de reposo; 5 dias de administration). Cada simbolo representa la carga tumoral mediana de un grupo de 8 ratones. (•) Control; (♦) Ejemplo 1, 2,5 mg/kg/adm, dos veces al dia; (□) Ejemplo 1, 5 mg/kg/adm, dos veces al dia; (▲) Ejemplo 1, 7,5 mg/kg/adm, dos veces al dia.
La Figura 3 muestra la eficacia antitumoral del Ejemplo 1 en el carcinoma de mama humano MDA-MB-157. Las dosis se administraron por via oral en los dias indicados con (^); via oral, cada dia x 15 (10 dias de administracion; 2 dias de reposo; 5 dias de administracion). Cada simbolo representa la carga tumoral mediana de un grupo de 8 ratones. (•) Control; (O) Ejemplo 1, 5 mg/kg/adm, cada dia; (▲) Ejemplo 1, 10 mg/kg/adm, cada dia; (□) Ejemplo 1,20 mg/kg/adm, cada dia.
La Figura 4 muestra la eficacia antitumoral del Ejemplo 3 contra la leucemia linfoblastica aguda de linfocitos T humana TALL1. Las dosis se administraron por via oral en los dias indicados con (^); via oral, cada dia x 10. Cada simbolo representa la carga tumoral mediana de un grupo de 8 ratones. (•) Control; (O) Ejemplo 1, 0,625 mg/kg/adm; (■) Ejemplo 1, 1,25 mg/kg/adm; (□) Ejemplo 1,2,5 mg/kg/adm; (▲) Ejemplo 1, 10 mg/kg.
La Figura 5 muestra la eficacia antitumoral del Ejemplo 1 en el carcinoma de mama triple negativo humano HCC- 1599 con translocation de Notch 1. Las dosis se administraron por via oral en los dias indicados con (^); via oral, cada dia x 15 (10 dias de administracion; 2 dias de reposo; 5 dias de administracion). Cada simbolo representa la carga tumoral mediana de un grupo de 8 ratones. (•) Control; (♦) Ejemplo 1, 5 mg/kg/adm, cada dia; (□) Ejemplo 1, 10 mg/kg/adm, cada dia; (▲) Ejemplo 1,20 mg/kg/adm, cada dia.
La Figura 6 muestra la eficacia antitumoral sinergica mediante la quimioterapia combinada con el Ejemplo 1 y Paclitaxel en el carcinoma de mama humano MDA-MB-468. Cada simbolo representa la carga tumoral mediana de un grupo de 8 ratones. (•) Control; (♦) Paclitaxel, 12 mg/kg/adm, cada 7 dias x 3, IV; (□) Ejemplo 1, 2,5 mg/kg/adm, via oral, dos veces al dia x 15 (10 dias de administracion; 2 dias de reposo; 5 dias de administracion); (■) Ejemplo 1, 5 mg/kg/adm, via oral, dos veces al dia x 15 (10 dias de administracion; 2 dias de reposo; 5 dias de administracion); (▲) combination de Paclitaxel y Ejemplo 1, 2,5 mg/kg/adm; (A) combination de Paclitaxel y Ejemplo 1, 5 mg/kg/adm.
Descripcion detallada
El primer aspecto de la presente invencion proporciona al menos un compuesto de Formula (I):
R3
imagen1
N
H
O
R2
imagen2
O
Ri
nhr4
y/o al menos una sal del mismo; en la que: Ri es -CH2CH2CF3;
R2 es -CH2CH2CF3 o -CH2CH2CH2CF3; R3 es H, -CH3 o Rx;
R4 es H o Ry;
Rx es -CH2OC(O)CH(CH3)NH2, -CH2OC(O)CH(NH2)CH(CH3)2, -CH2OC(O)CH((C
5
-CH2OC(O)CH2^/ V- OP(O)(OH)2 H(CH3)2)NHC(O)CH(NH2)CH(CH3)2, \=/
H3C
-CH2OC(O)CH2C(CH3)2^ /^CH3
(HO)2(O)PO
-CH2OC(O)
o
imagen3
CH2OP(O)(OH)2
Ry es -SCH2CH(NH2)C(O)OH, -SCH2CH(NH2)C(O)OCH3 o -SCH2CH(NH2)C(O)OC(CH3)3;
10 El anillo A es fenilo o piridinilo;
cada Ra es independientemente Cl, alquilo C1-3, -CH2OH, -CF3, ciclopropilo, -OCH3 y/u -O(ciclopropilo); cada Rb es independientemente F, Cl, -CH3, -CH2OH, -CF3, ciclopropilo y/u -OCH3; y es cero, 1 o 2; y z es cero, 1 o 2;
15 a condicion de que si el anillo A es fenilo y z es cero, entonces y es 1 o 2 y al menos un Ra es alquilo C1-3, -CF3, ciclopropilo u -O(ciclopropilo); a condicion de que si R3 es Rx, entonces R4 es H; y a condicion de que si R4 es Ry, entonces R3 es H o -CH3.
20 Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (I), en el que R3 es H o -CH3; R4 es H; y Ri, R2, el anillo A, Ra, Rb y y z se definen en el primer aspecto. Esta realizacion incluye los compuestos de Formula (II), en los que R3 es H y R4 es H:
25
h n ^ r2
imagen4
nh2
(II)
y los compuestos de Formula (III), en los que R3 es -CH3 y R4 es H:
CH3
imagen5
N
H
R2
O =2
imagen6
O
Ri
NH2
(III).
30
Los compuestos de Formula (II) y la Formula (III) son utiles como inhibidores selectivos de la via de senalizacion de Notch.
Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo, en el que (i) R3 es Rx y R4 es H; o (ii) R4 es Ry y R3 es H o -CH3; y Ri, R2, el anillo A, Ra, Rb, Rx, Ry y y z se definen en el primer 35 aspecto. Esta realizacion incluye los compuestos de Formula (IV), en los que R3 es Rx y R4 es H:
5
10
15
20
25
30
35
40
45
imagen7
nh2
(IV)
R3
imagen8
N
H
O
R2
imagen9
O
Ri
NHRy
(V).
Los compuestos de la presente realizacion son utiles como profarmacos de los compuestos de Formula (II) y Formula (III).
Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (IV) y/o al menos una sal del mismo, en el que R3 es Rx y R4 es H; y Ri, R2, Rx, el anillo A, Ra, Rb y y z se definen en el primer aspecto. Esta realizacion incluye compuestos en los que el anillo A es fenilo. Los compuestos de la presente realizacion son utiles como profarmacos de los compuestos de Formula (II) y Formula (III).
Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (V) y/o al menos una sal del mismo, en el que R4 es Ry y R3 es H o -CH3; y Ri, R2, Ry, el anillo A, Ra, Rb y y z se definen en el primer aspecto. Esta realizacion incluye compuestos en los que R3 es H y el anillo A es fenilo. Esta realizacion tambien incluye compuestos en los que R3 es -CH3 y el anillo A es fenilo. Los compuestos de la presente realizacion son utiles como profarmacos de los compuestos de Formula (II) y Formula (III).
Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo, en el que el anillo A es fenilo; y Ri, R2, R3, R4, Rx, Ry, Ra, Rb y y z se definen en el primer aspecto. Esta realizacion incluye compuestos en los que R3 es H. Esta realizacion tambien incluye compuestos en los que R3 es H y z es 1 o 2.
Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (I), en el que el anillo A es fenilo; R3 es H o CH3; R4 es H; y Ri, R2, Ra, Rb y y z se definen en el primer aspecto. Esta realizacion incluye compuestos en los que R3 es H. Esta realizacion tambien incluye compuestos en los que R3 es H y z es 1 o 2.
Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo, en el que R2 es -CH2CH2CF3; y Ri, R3, R4, el anillo A, Rx, Ry, Ra, Rb y y z se definen en el primer aspecto. Esta realizacion incluye compuestos en los que el anillo A es fenilo. Esta realizacion tambien incluye compuestos en los que z es 1 o 2.
Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo, en el que R2 es -CH2CH2CH2CF3; y Ri, R3, R4, el anillo A, Ra, Rb y y z se definen en el primer aspecto. Esta realizacion incluye compuestos en los que el anillo A es fenilo. Esta realizacion tambien incluye compuestos en los que z es 1 o 2.
Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo, en el que el anillo A es piridinilo; y Ri, R2, R3, R4, Ra, Rb y y z se definen en el primer aspecto. Esta realizacion incluye compuestos en los que R3 es H. Esta realizacion tambien incluye compuestos en los que R3 es H y z es 1 o 2.
Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo, en el que R2 es -CH2CH2CF3; el anillo A es fenilo; Ra es alquilo Ci-3 o -CH2OH; cada Rb es independientemente F y/o Cl; y es 1; z es 1 o 2; y Ri, R3 y R4 se definen en el primer aspecto.
Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo, en el que y es 1, z es 1 o 2 y Ri, R2, R3, R4, el anillo A, Ra y Rb se definen en el primer aspecto. Esta realizacion incluye compuestos en los que el anillo A es fenilo. Esta realizacion tambien incluye compuestos en los que el anillo A es
fenilo y z es 1.
5
imagen10
NHR4
en la que:
10 Ri es -CH2CH2CF3;
R2 es -CH2CH2CF3 o -CH2CH2CH2CF3;
R3 es H, -CH3 o Rx;
R4 es H o Ry;
Rx es: -CH2OC(O)CH(CH3)NH2, -CH2OC(O)CH(NH2)CH(CH3)2,
15 -CH2OC(O)CH((CH(CH3)2)NHC(O)CH(NH2)CH(CH3)2,
-CH2OC(O)CH2^/ OP(O)(OH)2
20
25
H3C
-ch2oc(0)Ch2c(Ch3)2^ y—ch3
(HO)2(O)PO
-CH2OC(O)
o
imagen11
CH2OP(O)(OH)2
Ry es: -SCH2CH(NH2)C(O)OH, -SCH2CH(NH2)C(O)OCH3 o -SCH2CH(NH2)C(O)OC(CH3)3;
Ra es Cl, -CH3, -CH(CH3)2, -CH2OH, -CF3, ciclopropilo, -OCH3 u -O(ciclopropilo); cada Rb es independientemente F, Cl, -CH2OH, -CF3, ciclopropilo y/u -OCH3; y es cero o 1; z es cero, 1 o 2;
a condicion de que si z es cero, entonces y es 1 y Ra es -CH3, -CH2OH, -CF3, ciclopropilo u -O(ciclopropilo). En la presente realizacion se incluyen compuestos en los que y es 1; y z es cero, 1 o 2. Esta realizacion tambien incluye compuestos en los que y es 1 y z es 1.
30 Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo, que tiene la estructura:
R R R2
imagen12
imagen13
O
R1
nhr4
35 en la que Ri, R2, R3, R4, Ra y Rb se definen en el primer aspecto. Esta realizacion incluye compuestos en los que Ra es Cl, -CH2OH o alquilo C1-3 y Rb es F, Cl, -CH3, -CF3, ciclopropilo u -OCH3. Esta realizacion tambien incluye compuestos en los que Ra es metilo y Rb es F, Cl o CF3.
5
Ra R3
R,
imagen14
nhr4
en la que Ra es alquilo C1-3; Rb es F o Cl; y Ri, R2, R3 y R4 se definen en el primer aspecto. Esta realizacion incluye compuestos en los que R2 es -CH2CH2CF3. Esta realizacion tambien incluye compuestos en los que R2 es -CH2CH2CF3, Ra es metilo y Rb es F o Cl.
10 Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo, que tiene la estructura:
R3 ^ R2
imagen15
nhr4
15 en la que y es cero y Ri, R2, R3, R4 y Rb se definen en el primer aspecto. Esta realizacion incluye compuestos en los que Rb es -CH3, -CH2OH u -OCH3. Esta realizacion tambien incluye compuestos en los que R3 es H o -CH3 y R4 es H.
Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo, que tiene la 20 estructura:
CF3
imagen16
O
imagen17
nhr4
en la que R3 y R4 se definen en el primer aspecto. Esta realizacion incluye compuestos en los que R3 es H o -CH3 y 25 R4 es H.
Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo, que tiene la estructura:
CH3 R O .N- '
imagen18
1-
N
F
CF3 ^ 3
O =
imagen19
nh2
en la que R3 es H, -CH3 o Rx, en la que Rx se define en el primer aspecto. Esta realizacion tambien incluye compuestos en los que R3 es Rx.
5
Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo, que tiene la estructura:
CF3
10
CH3 R3 r,
imagen20
O
imagen21
NHRy
en la que R3 es H o -CH3 y Ry se define en el primer aspecto. Esta realizacion incluye compuestos en los que R3 es H. Esta realizacion tambien incluye compuestos en los que R3 es -CH3.
Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo, que tiene la 15 estructura:
CF
3
Ra R3
imagen22
imagen23
NHR,
y
en la que Ra es -CH3 o -CH2OH; R3 es H o -CH3 y Ry se define en el primer aspecto. Esta realizacion incluye 20 compuestos en los que R3 es H. Esta realizacion tambien incluye compuestos en los que R3 es -CH3.
Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (I) y/o una sal del mismo, que tiene la estructura:
imagen24
O
imagen25
nhr4
en la que R3 es H o Rx; R4 es H o Ry; a condicion de que si R3 es Rx, entonces R4 es H; y a condicion de que si R4 es Ry, entonces R3 es H; y en la que Rx y Ry se definen en el primer aspecto.
5
Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (I) que tiene la estructura:
imagen26
CF3
xJ 3
O =
imagen27
nh2
10 en la que R3 es H o -CH3.
Una realizacion proporciona un compuesto de Formula (I) que tiene la estructura:
15
imagen28
CF3
xJ 3
O =
imagen29
nh2
Una realizacion proporciona un compuesto de Formula (I) que tiene la estructura:
imagen30
cf3
xj3
O =
imagen31
nh2
imagen32
O
imagen33
nh2
5
10
o cualquier mezcla de los dos compuestos.
Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (I) y/o una sal del mismo, que tiene la estructura:
CF3
R„
imagen34
O
imagen35
NH2
en la que Rx se define en el primer aspecto.
Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (I) y/o una sal del mismo, que tiene la estructura:
CF3
15
CH3 R3 n
imagen36
O
imagen37
NHRy
en la que R3 es H o -CH3; y Ry se define en el primer aspecto.
Una realizacion proporciona una composition que comprende: (i) al menos un compuesto de Formula (I) que tiene la 20 estructura:
5
10
15
20
25
30
imagen38
O
imagen39
NHR.
4
y/o una sal del mismo; (ii) un compuesto de Formula (I) que tiene la estructura:
CF3
imagen40
imagen41
NH
2
o (iii) una mezcla de (i) y (ii); en la que R3 es H o Rx; R4 es H o Ry; a condicion de que si R3 es Rx, entonces R4 es H; y a condicion de que si R4 es Ry, entonces R3 es H; y en la que Rx y Ry se definen en el primer aspecto.
Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (I) y/o una sal del mismo, que tiene la estructura:
ch
cf
*3
imagen42
imagen43
3
nhr.
4
en la que R3 es H o Rx; R4 es H o Ry; a condicion de que si R3 es Rx, entonces R4 es H; y a condicion de que si R4 es Ry, entonces R3 es H; y en la que Rx y Ry se definen en el primer aspecto. Esta realizacion incluye compuestos en los que R3 es H o -CH3; y R4 es H. Esta realizacion tambien incluye compuestos en los que R3 es H y R4 es H.
Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo, en el que Ri, R2, R3, R4, el anillo A, Ra, Rb y y z se definen en el primer aspecto y a condicion de que si el anillo A es fenilo y z es cero, entonces y es 1 o 2 y al menos un Ra es metilo, isopropilo, -CH2OH, ciclopropilo y/u -O(ciclopropilo).
Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo, en el que R3 es H; y Ri, R2, R4, Ra, Rb y y z se definen en el primer aspecto. Esta realizacion incluye compuestos en los que R3 es deuterio (D) o tritio (T). Esta realizacion tambien incluye compuestos en los que R2 es -CH2CH2CF3.
Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo, en el que R3 es -CH3; y Ri, R2, R4, Ra, Rb y y z se definen en el primer aspecto. R3 incluye grupos metilo en los que uno o mas atomos de hidrogeno se sustituyen de manera isotopica con deuterio (D) y/o tritio (T). En un ejemplo de la presente realizacion, R3 es -CD3. Esta realizacion tambien incluye compuestos en los que R2 es -CH2CH2CF3.
5
10
15
20
25
30
35
40
Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo, en el que Ri, R2, R3, R4, el anillo A, Ra, Rb y y z se definen en el primer aspecto, a condicion de que el compuesto de Formula (I) o la sal del mismo no sean:
CF3
CH3 R3 n
imagen44
O
imagen45
NHRy
Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (I) en donde R3 es H o -CH3; R4 es H; Ri, R2, el anillo A, Ra, Rb y y z se definen en el primer aspecto, a condicion de que el compuesto de Formula (I) no sea:
imagen46
CF3 ^ 3
O =
imagen47
nh2
Una realizacion proporciona un compuesto de Formula (I) seleccionado entre: (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-fluorofenil)-9- metil-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (1); (2R,3S)-N-((3S)-5-(3- clorofenil)-9-etil-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (2); (2r,3s)-N- ((3S)-5-(3-clorofenil)-9-isopropil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (3); (2R,3S)-N-(9-cloro-5-(3,4-dimetilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2- (3,3,3-trifluoropropil)succinamida (4); (2R,3S)-N-(9-cloro-5-(3,5-dimetilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin- 3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (5); (2R,3S)-N-((3S)-9-etil-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-
dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (6); (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-clorofenil)-9-
metil-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida(7); (2R,3S)-N-((3S)-5-(3- clorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3- trifluoropropil)succinamida (8); (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-metilfenil)-2-oxo-9-(trifluorometil)-2,3-dihidro-1 H-1,4- benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (9); (2R,3S)-N-((3S)-9-cloro-5-(3,5-dimetilfenil)-2-oxo-
2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (10); (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-metilfenil)-
2- oxo-9-(trifluorometil)-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-
trifluoropropil)succinamida (11); (2R,3S)-N-((3S)-9-isopropil-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-
3- il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (12); (2R,3S)-N-((3S)-9-isopropil-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro-1H-1,4-
benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (13); (2R,3S)-N-((3S)-9-(ciclopropiloxi)-5-(3-metilfenil)-2- oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (14); (2R,3S)-N- ((3S)-9-(ciclopropiloxi)-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3- trifluoropropil)succinamida (15); (2R,3S)-N-((3S)-9-(ciclopropiloxi)-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3- il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (16); (2R,3S)-N-((3S)-9-cloro-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3- dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (17); (2R,3S)-N-((3S)-9- metil-2-oxo-5-(3-(trifluorometil)fenil)-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3- trifluoropropil)succinamida (18); (2R,3S)-N-((3S)-9-(ciclopropiloxi)-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3- il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (19); (2R,3S)-N-((3S)-9-metil-2-oxo-5-(3-(trifluorometil)fenil)-2,3-dihidro- 1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (20); (2R,3S)-N-((3S)-9-cloro-5-(2-metilfenil)-2- oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (21); (2R,3S)-N-((3S)-5-(4-
fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (22);
(2R,3S)-N-((3S)-9-metil-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (23); (2R,3S)-N-((3S)-9-ciclopropil-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-
trifluoropropil)succinamida (24); (2R,3S)-N-((3S)-9-cloro-5-(3-ciclopropilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
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benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (25); (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-clorofenil)-9-metoxi-2-oxo-2,3- dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (26); (2R,3S)-N-((3s)-5-(4-clorofenil)-9- metoxi-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (27); (2R,3S)-N-((3S)-9- doro-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (28); (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-metilfenil)-9-metoxi-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3- trifluoropropil)succinamida (29); (2R,3S)-N-((3S)-5-(4-(hidroximetil)fenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3- il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (3o); (2R,3S)-N-((3s)-5-(2-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-
benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (31); (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro- 1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (32); (2R,3S)-N-((3S)-9-metoxi-2-oxo-5-(5-
(trifluorometil)-2-piridinil)-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (33);
(2R,3S)-N-((3s)-5-(5-doro-2-piridinil)-9-metoxi-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3- trifluoropropil)succinamida (34); (2R,3S)-N-((3S)-5-(4-metoxifenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3- bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (35); (2R,3S)-N-((3S)-5-(4-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3- il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (36); (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-(hidroximetil)-2-oxo-2,3-dihidro- 1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (37); L-valinato de ((3S)-3-(((2R,3S)-3-carbamoil- 6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4- benzodiazepin-1-il)metilo (38); L-alaninato de ((3S)-3-(((2R,3S)-3-carbamoil-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3- trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-1-il)metilo (39); S- (((2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3-(((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)carbamoil)-2- (3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-L-cistema (40); S-(((2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3-(((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-
oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)carbamoil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-L-cisteinato de terc- butilo (41); S-(((2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3-(((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-
il)carbamoil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-L-cisteinato de metilo (42); (4-(fosfonooxi)fenil)acetato de ((3S)- 3-(((2R,3S)-3-carbamoil-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3- dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-1-il)metilo (43); L-valil-L-valinato de ((3S)-3-(((2R,3S)-3-carbamoil-6,6,6-trifluoro-2- (3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-1-il)metilo (44); y sales de los mismos.
Una realizacion proporciona un compuesto de Formula (I) seleccionado entre: (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-fluorofenil)-9- metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (1); L-valinato de ((3S)-3- (((2R,3S)-3-carbamoil-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro- 1H-1,4-benzodiazepin-1-il)metilo (38); L-alaninato de ((3S)-3-(((2R,3S)-3-carbamoil-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3- trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-1-il)metilo (39); S- (((2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3-(((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)carbamoil)-2- (3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-L-cistema (40); S-(((2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3-(((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-
oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)carbamoil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-L-cisteinato de terc- butilo (41); S-(((2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3-(((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-
il)carbamoil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-L-cisteinato de metilo (42); (4-(fosfonooxi)fenil)acetato de ((3S)- 3-(((2R,3S)-3-carbamoil-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3- dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-1-il)metilo (43); L-valil-L-valinato de ((3S)-3-(((2R,3S)-3-carbamoil-6,6,6-trifluoro-2- (3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-1-il)metilo (44); y sales de los mismos.
Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (I), en el que R3 es H o -CH3; y R4 es H; en el que el compuesto de Formula (I) tiene un valor de semivida metabolica de al menos 45 minutos, medido en el ensayo de semivida de estabilidad metabolica humana que se describe en el presente documento.
Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (I), en el que R3 es H o -CH3; y R4 es H; en el que el compuesto de Formula (I) tiene un valor de semivida metabolica de al menos 60 minutos, medido en el ensayo de semivida de estabilidad metabolica humana que se describe en el presente documento.
Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (I), en el que R3 es H o -CH3; y R4 es H; en el que el compuesto de Formula (I) tiene un valor de semivida metabolica de al menos 70 minutos, medido en el ensayo de semivida de estabilidad metabolica humana que se describe en el presente documento.
La presente invencion abarca todas las combinaciones de los aspectos y/o realizaciones de la invencion expuestas en el presente documento. Cabe destacar que todas las realizaciones de la presente invencion pueden tomarse en conjunto con cualquier otra realizacion, a fin de describir la adicion de mas realizaciones. Tambien cabe destacar que cada elemento individual de las realizaciones tiene por objeto combinarse con cualquier otro elemento de cualquiera de las realizaciones para describir una realizacion adicional.
Definiciones
Las caracteristicas y ventajas de la invencion pueden comprenderlas con mas facilidad los expertos en la materia mediante la lectura de la siguiente descripcion detallada. Debe tenerse en cuenta que ciertas caracteristicas de la invencion que, a fin de que resulten mas claras, se han descrito anteriormente y se describen a continuacion en el
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contexto de realizaciones separadas, tambien pueden combinarse para formar una sola realizacion. Por otra parte, diversas caracteristicas de la invencion que, a fin de expresar brevedad, se describen en el contexto de una sola realizacion, tambien se pueden combinar, a fin de formar subcombinaciones de las mismas. Las realizaciones identificadas en el presente documento como de ejemplo o de preferencia tienen como objetivo ser ilustrativas y no limitantes.
A menos que, en el presente documento, se establezca especificamente lo contrario, las referencias en singular tambien pueden incluir el plural. Por ejemplo, "un" puede referirse a uno o mas de uno.
A menos que se indique lo contrario, debe asumirse que cualquier heteroatomo con valencias insatisfechas tiene suficientes atomos de hidrogeno como para satisfacer las valencias.
Las definiciones que se establecen en el presente documento prevaleceran sobre las definiciones en cualquier otra patente, solicitud de patente y/o publicacion de solicitud de patente incorporada en el presente documento como referencia.
A continuacion, se enumeran definiciones sobre varios terminos usados para describir la presente invencion. Estas definiciones se aplican a los terminos como se usan en toda la memoria descriptiva (a menos que se limiten en momentos especificos) ya sea individualmente o como parte de un grupo mas grande.
En toda la memoria descriptiva, el experto en la materia puede elegir los grupos y sus sustituyentes, para proporcionar compuestos y porciones estables.
Los terminos "halo" y "halogeno", como se usan en el presente documento, se refieren a F, Cl, Br o I.
El termino "alquilo", como se usa en el presente documento, se refiere a grupos de hidrocarburo alifaticos saturados de la cadena lineal o ramificada que contienen, por ejemplo, de 1 a 12 atomos de carbono, de 1 a 6 atomos de carbono y de 1 a 4 atomos de carbono. Los ejemplos de grupos de alquilo incluyen, pero no se limitan a, metilo (Me), etilo (Et), propilo (por ejemplo, n-propilo e /-propilo), butilo (por ejemplo, n-butilo, /-butilo, sec-butilo y t-butilo) y pentilo (por ejemplo, n-pentilo, isopentilo, neopentilo), n-hexilo, 2-metilopentilo, 2-etilobutilo, 3-metilopentilo y 4-metilpentilo. Cuando aparezcan numeros en superindice despues del simbolo "C", el superindice define con mayor especificidad la cantidad de atomos de carbono que un grupo particular puede contener. Por ejemplo, "alquilo C1-3" indica grupos alquilo de cadena lineal o ramificada con 1 a 3 atomos de carbono.
La frase "farmaceuticamente aceptable" se emplea en el presente documento para referirse a los compuestos, los materiales, las composiciones y/o las formas de dosificacion que, dentro del alcance del criterio medico sensato, son adecuados para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin provocar excesiva toxicidad, irritacion, reaccion alergica ni otros problemas o complicaciones proporcionales con una relacion riesgo/beneficio razonable.
Los compuestos de Formula (I) pueden formar sales que tambien se encuentran dentro del alcance de la presente invencion. A menos que se indique lo contrario, la referencia a un compuesto de la invencion pretende incluir la referencia a una o mas sales del mismo. La expresion "sal o sales" indica sales acidas y/o basicas formadas con acidos y bases organicas y/o inorganicas. Ademas, la expresion "sal o sales" puede incluir zwitteriones (sales internas), por ejemplo, cuando un compuesto de Formula (I) contiene una porcion basica, tal como una amina o un anillo de piridina o imidazol y una porcion acida, tal como un acido carboxilico. Se prefieren sales farmaceuticamente aceptables (es decir, sales no toxicas fisiologicamente aceptables), por ejemplo, sales de metal y de amina aceptables en las que el cation no contribuye sustancialmente a la toxicidad ni a la actividad biologica de la sal. Sin embargo, otras sales tambien pueden ser utiles, por ejemplo, en las etapas de aislamiento o purificacion que se pueden usar durante la preparacion y, por ello, estan contempladas dentro del alcance de la invencion. Las sales de los compuestos de Formula (I) se pueden formar, por ejemplo, mediante la reaccion de un compuesto de Formula (I) con una cantidad de acido o base, tal como una cantidad equivalente, en un medio, tal como uno en el que la sal precipita o en un medio acuoso y la posterior liofilizacion.
Las sales de adicion acida de ejemplo incluyen acetatos (tales como los que se forman con acido acetico o acido trihaloacetico, por ejemplo, acido trifluoroacetico), adipatos, alginatos, ascorbatos, aspartatos, benzoatos, bencenosulfonatos, bisulfatos, boratos, butiratos, citratos, camforatos, camforsulfonatos, ciclopentanopropionatos, digluconatos, dodecilsulfatos, etanosulfonatos, fumaratos, glucoheptanoatos, glicerofosfatos, hemisulfatos, heptanoatos, hexanoatos, clorhidratos (formados con acido clorhidrico), bromhidratos (formados con bromuro de hidrogeno) yodhidratos, maleatos (formados con acido maleico), 2-hidroxietansulfonatos, lactatos, metanosulfonatos (formados con acido metanosulfonico), 2-naftalensulfonatos, nicotinatos, nitratos, oxalatos, pectinatos, persulfatos, 3-fenilpropionatos, fosfatos, picratos, pivalatos, propionatos, salicilatos, succinatos, sulfatos (tales como los que se forman con acido sulfurico), sulfonatos (tales como los que se mencionan en el presente documento), tartratos, tiocianatos, toluenosulfonatos, tales como tosilatos, undecanoatos y similares.
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Las sales basicas de ejemplo incluyen sales de amonio, sales de metales alcali, tales como sales de sodio, litio y potasio, sales de metales alcalinoterreos, tales como sales de calcio y magnesio; sales de bario, cinc y aluminio; sales con bases organicas (por ejemplo, aminas organicas), tales como trialquilaminas, tales como trietilamina, procama, dibencilamina, N-bencil-p-fenetilamina, 1-efenamina, N,W'-dibenciletilen-diamina, dehidroabietilamina, N- etilpiperidina, bencilamina, diciclohexilamina o aminas y sales similares farmaceuticamente aceptables con aminoacidos, tales como arginina, lisina y similares. Los grupos que contienen nitrogeno basico se pueden cuaternizar con agentes, tales como haluros de alquilo inferior (por ejemplo, cloruros, bromuros y yoduros de metilo, etilo, propilo y butilo), sulfatos de dialquilo (por ejemplo, sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo y diamilo), haluros de cadena larga (por ejemplo, cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, miristilo y estearilo), haluros de aralquilo (por ejemplo, bromuros de bencilo y fenetilo) y otros. Las sales preferidas incluyen sales de monoclorhidrato, hidrogenosulfato, metanosulfonato, fosfato o nitrato.
Los compuestos de Formula (I) pueden proporcionarse como solidos amorfos o solidos cristalinos. Puede emplearse la liofilizacion para proporcionar los compuestos de Formula (I) en forma de un solido.
Ademas, cabe destacar que los solvatos (por ejemplo, hidratos) de los compuestos de Formula (I) tambien se encuentran dentro del alcance de la presente invencion. El termino "solvato" significa una asociacion fisica de un compuesto de Formula (I) con una o mas moleculas de disolvente, organicas o inorganicas. Esta asociacion fisica incluye la union al hidrogeno. En ciertos casos, el solvato es capaz de aislarse, por ejemplo, cuando una o mas moleculas de disolvente se incorporan en la red cristalina del solido cristalino. El "solvato" abarca tanto solvatos en fase de solucion como solvatos que se pueden aislar. Los solvatos de ejemplo incluyen hidratos, etanolatos, metanolatos, isopropanolatos, solvatos de acetonitrilo y solvatos de acetato de etilo. Los metodos de solvatacion son conocidos en la tecnica.
Cualquier compuesto que pueda convertirse in vivo para proporcionar el agente bioactivo (es decir, el compuesto de Formula (I)) es un profarmaco. Los compuestos de Formula (I) en los que R3 es Rx o R4 es Ry son utiles como profarmacos de los compuestos de Formula (I), en los que R3 es H o -CH3 y R4 es H.
En la tecnica, se conocen diversas formas de profarmacos y estas se describen en:
a) Wermuth, C.G. et al., The Practice of Medicinal Chemistry, capitulo 31, Academic Press (1996);
b) Bundgaard, H. ed., Design of Prodrugs, Elsevier (1985);
c) Bundgaard, H., capitulo 5, “Design and Application of Prodrugs”, Krosgaard-Larsen, P. et al., eds., A Textbook of Drug Design and Development, pp. 113-191, Harwood Academic Publishers (1991); y
d) Testa, B. et al., Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism, Wiley-VCH (2003).
Ademas, los compuestos de Formula (I), despues de la preparacion, se pueden aislar y purificar para obtener una composition que contiene una cantidad en peso igual o superior al 99 % de un compuesto de Formula (I) ("sustancialmente puro"), que luego se usa o se formula como se describe en el presente documento. Dichos compuestos "sustancialmente puros" de Formula (I) tambien se contemplan en el presente documento como parte de la presente invencion.
Las expresiones "compuesto estable" y "estructura estable" se refieren a un compuesto que es lo suficientemente robusto para sobrevivir al aislamiento a un grado util de pureza de una mezcla de reaction y a la formulation en un agente terapeutico eficaz. La presente invencion pretende comprender compuestos estables.
La frase "cantidad terapeuticamente eficaz" pretende incluir una cantidad de un compuesto de la presente invencion solo, una cantidad de la combination de compuestos reivindicados o una cantidad de un compuesto de la presente invencion en combinacion con otros principios activos eficaces para actuar como inhibidores de un receptor NOTCH o eficaces para tratar o prevenir enfermedades proliferativas, tales como el cancer.
Como se usan en el presente documento, los terminos "tratar" o "tratamiento" abarcan el tratamiento de una patologia en un mamifero, particularmente en un ser humano, e incluyen: (a) evitar que ocurra la enfermedad en un mamifero, en particular, cuando el mamifero tiene predisposition a la enfermedad, pero aun no se le ha diagnosticado; (b) inhibir la enfermedad, es decir, detener su desarrollo y/o (c) aliviar la enfermedad, es decir, provocar la regresion de la enfermedad.
Los compuestos de la presente invencion pretenden incluir todos los isotopos de los atomos que aparecen en presentes compuestos. Los isotopos incluyen los atomos que tienen el mismo numero atomico, pero diferentes numeros masicos. A modo de ejemplo general y sin limitation, los isotopos de hidrogeno incluyen deuterio (D) y tritio (T). Los isotopos de carbono incluyen 13C y 14C. Por lo general, los compuestos de la invencion marcados isotopicamente se pueden preparar mediante tecnicas convencionales conocidas por los expertos en la materia o mediante procesos analogos a los que se describen en el presente documento, usando un reactivo adecuado marcado isotopicamente en lugar de un reactivo no marcado.
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Los compuestos de acuerdo con la Formula (I) y/o las sales de los mismos pueden administrarse por cualquier medio adecuado para la afeccion que se desea tratar, que puede depender de la necesidad de un tratamiento espedfico del sitio o de la cantidad del compuesto de Formula (l) que debe administrarse.
La presente invention tambien abarca una clase de composiciones farmaceuticas que comprenden el compuesto de Formula (I) y/o una sal del mismo; y uno o mas vehiculos y/o diluyentes y/o adyuvantes farmaceuticamente aceptables (denominados, en forma conjunta, materiales "vehiculos") y, si se desea, otros principios activos. Los compuestos de Formula (I) pueden administrarse mediante cualquier via adecuada, preferentemente, en forma de una composition farmaceutica adaptada a dicha via y en una dosis eficaz para el tratamiento previsto. Los compuestos y las composiciones de la presente invencion pueden administrarse, por ejemplo, por via oral, a traves de la mucosa o por via parenteral, que incluye por via intravascular, intravenosa, intraperitoneal, subcutanea, intramuscular e intraesternal en formulaciones de dosificacion unitarias que contienen vehiculos, adyuvantes y vehiculos farmaceuticamente aceptables. Por ejemplo, el vehiculo farmaceutico puede contener una mezcla de manitol o lactosa y celulosa microcristalina. La mezcla puede contener componentes adicionales, tales como un agente lubricante, por ejemplo, estearato de magnesio y un agente de disgregacion, tal como crospovidona. La mezcla del vehiculo puede cargarse en una capsula de gelatina o puede tener forma de comprimido. La composicion farmaceutica puede administrarse en forma de dosificacion oral o, por ejemplo, como una infusion.
Para la administration oral, la composicion farmaceutica puede estar en forma, por ejemplo, de un comprimido, una capsula, una capsula liquida, una suspension o un liquido. Preferentemente, la composicion farmaceutica presenta una forma de dosificacion unitaria que contiene una cantidad particular del principio activo. Por ejemplo, la composicion farmaceutica puede proporcionarse como un comprimido o una capsula que comprende una cantidad del principio activo en el rango de aproximadamente 1 a 2000 mg, preferentemente, de aproximadamente 1 a 500 mg y, mas preferentemente, de aproximadamente 5 a 150 mg. Una dosis diaria adecuada para un ser humano u otro mamifero puede variar ampliamente, en funcion de la afeccion del paciente y de otros factores, pero puede determinarse usando metodos de rutina.
Todas las composiciones farmaceuticas que se contemplan en el presente documento pueden administrarse, por ejemplo, por via oral a traves de cualquier preparation oral aceptable y adecuada. Las preparaciones orales de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, comprimidos, trociscos, pastillas para chupar, suspensiones acuosas y aceitosas, polvos o granulos dispersables, emulsiones, capsulas duras y blandas, capsulas liquidas, jarabes y elixires. Las composiciones farmaceuticas para la administracion oral pueden prepararse de acuerdo con cualquier metodo conocido en la materia para fabricar composiciones farmaceuticas para la administracion oral. A fin de proporcionar preparaciones farmaceuticas de sabor agradable, una composicion farmaceutica de acuerdo con la invencion puede contener, al menos, un agente seleccionado entre agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes colorantes, demulcentes, antioxidantes y agentes conservantes.
Por ejemplo, un comprimido puede prepararse mezclando, al menos, un compuesto de Formula (I) con, al menos, un excipiente farmaceuticamente aceptable no toxico adecuado para la fabrication de comprimidos. Por ejemplo, los excipientes incluyen, pero no se limitan a, por ejemplo, diluyentes inertes, tales como carbonato de calcio, carbonato de sodio, lactosa, fosfato de calcio y fosfato de sodio; agentes de granulation y disgregacion, tales como celulosa microcristalina, croscarmelosa de sodio, almidon de maiz y acido alginico; agentes de fijacion, tales como almidon, gelatina, polivinilpirrolidona y goma arabiga; y agentes lubricantes, tales como estearato de magnesio, acido estearico y talco. Ademas, un comprimido puede estar no recubierto o recubierto mediante tecnicas conocidas, a fin de enmascarar el sabor desagradable de un farmaco o de retrasar la disgregacion y la absorcion del principio activo en el tracto gastrointestinal y, de esa manera, prolongar los efectos del principio activo durante mas tiempo. Los ejemplos de materiales hidrosolubles para enmascarar el sabor, incluyen, pero no se limitan a, hidroxipropil- metilcelulosa e hidroxipropil-celulosa. Los ejemplos de materiales retardantes incluyen, pero no se limitan a, etilcelulosa y acetato butirato de celulosa.
Las capsulas de gelatina dura pueden prepararse, por ejemplo, mezclando al menos un compuesto de Formula (I) con al menos un diluyente solido inerte, tal como carbonato de calcio, fosfato de calcio y caolin.
Las capsulas de gelatina blanda pueden prepararse, por ejemplo, mezclando al menos un compuesto de Formula (I) con al menos un vehiculo hidrosoluble, tal como propilenglicol y al menos un medio oleoso, tal como aceite de cacahuete, parafina liquida y aceite de oliva.
Una suspension acuosa puede prepararse, por ejemplo, mezclando al menos un compuesto de Formula (I) con al menos un ejemplo adecuado para la fabricacion de una solution acuosa. Los ejemplos de excipientes adecuados para la fabricacion de una suspension acuosa incluyen, pero no se limitan a, agentes de suspension, tales como carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa, hidroxipropilmetil-celulosa, alginato de sodio, acido alginico, polivinilpirrolidona, goma de tragacanto y goma arabiga; agentes dispersantes o humectantes, tales como un fosfatido natural, por ejemplo, lecitina; productos de condensation de oxido de alquileno con acidos grasos, tales como estearato de polioxietileno; productos de condensacion de oxido de etileno con alcoholes alifaticos de cadena larga, tales como heptadecaetilen-oxicetanol; productos de condensacion de oxido de etileno con esteres parciales derivados de acidos grasos y hexitol, tales como monooleato de polioxietileno sorbitol; y productos de condensacion
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de oxido de etileno con esteres parciales derivados de acidos grasos y anhidridos de hexitol, tales como monooleato de polioxietileno sorbitano. Una suspension acuosa tambien puede contener, al menos, un conservante, tal como p- hidroxibenzoato de etilo y n-propilo; al menos, un agente colorante; al menos, un agente aromatizante; y/o al menos, un agente edulcorante, incluyendo, pero sin limitacion, sacarosa, sacarina y aspartamo.
Las suspensiones oleosas pueden prepararse, por ejemplo, suspendiendo, al menos un compuesto de Formula (I) en un aceite vegetal, tal como aceite de cacahuete, aceite de oliva, aceite de sesamo o aceite de coco; o en un aceite mineral, tal como parafina liquida. Una suspension oleosa tambien puede contener, al menos, un agente espesante, tal como cera de abejas, parafina solida y alcohol cetilico. A fin de obtener una suspension oleosa de sabor agradable, puede agregarse, al menos, uno de los agentes edulcorantes descritos anteriormente y/o, al menos, un agente aromatizante a la suspension oleosa. Una suspension oleosa tambien puede contener, al menos, un conservante, incluyendo, pero sin limitacion, un antioxidante, tal como hidroxianisol butilado y alfa-tocofenol.
Los polvos y granulos dispersables pueden prepararse, por ejemplo, mezclando, al menos, un compuesto de Formula (I) con al menos un agente dispersante y/o humectante, al menos, un agente de suspension y/o, al menos, un conservante. Los agentes dispersantes, agentes humectantes y agentes de suspension adecuados son como se han descrito anteriormente. Los ejemplos de conservantes incluyen, pero no se limitan a, antioxidantes, por ejemplo, acido ascorbico. Ademas, los polvos y granulos dispersables tambien pueden contener, al menos, un excipiente, incluyendo, pero sin limitacion, agentes edulcorantes, agentes aromatizantes y agentes colorantes.
Una emulsion de, al menos, un compuesto de Formula (I) puede prepararse, por ejemplo, como una emulsion de aceite en agua. La fase oleosa de las emulsiones que comprenden compuestos de Formula (I) puede formarse con ingredientes conocidos en una forma conocida. Por ejemplo, la fase oleosa puede proporcionarse mediante, pero sin limitacion, por ejemplo, un aceite vegetal, tal como aceite de oliva y aceite de cacahuete, un aceite mineral, tal como parafina liquida y mezclas de los mismos. Si bien la fase puede comprender solo un emulsionante, puede comprender una mezcla de, al menos, un emulsionante con una grasa o con un aceite o con ambos. Los agentes emulsionantes incluyen, pero no se limitan a, por ejemplo, fosfatidos naturales, por ejemplo, lecitina de soja, esteres o esteres parciales derivados de acidos grasos y anhidridos de hexitol, tales como monooleato de sorbitano y productos de condensacion de esteres parciales con oxido de etileno, tales como monooleato de polioxietilen sorbitano. Preferentemente, se incluye un emulsionante hidrofilo junto con un emulsionante que actua como estabilizantes. Tambien se prefiere incluir un aceite y una grasa. Juntos, el emulsionante con o sin el estabilizante constituye la denominada cera emulsionante y la cera junto con el aceite y la grasa constituyen la denominada base de unguento emulsionante que forma la fase dispersa oleosa de las formulaciones cremosas. Una emulsion tambien puede contener un agente edulcorante, un agente aromatizante, un agente conservante y/o un agente antioxidante. Los emulsionantes y los estabilizantes de emulsion adecuados para su uso en una formulacion de la presente invention incluyen Tween 60, Span 80, alcohol cetoestearilico, alcohol miristilico, monoestearato de glicerilo, laurilsulfato de sodio, diestearato de glicerilo solo o con una cera u otros materiales conocidos en la materia.
Los compuestos de Formula (I) tambien se pueden administrar, por ejemplo, por via intravenosa, subcutanea y/o intramuscular mediante cualquier forma inyectable adecuada y farmaceuticamente aceptable. Los ejemplos de formas inyectables incluyen, pero no se limitan a, por ejemplo, soluciones acuosas esteriles que comprenden disolventes y vehiculos aceptables, tales como agua, solution de Ringer y solution isotonica de cloruro de sodio; microemulsiones esteriles de aceite en agua; y suspensiones acuosas u oleaginosas.
Las formulaciones para la administration parenteral pueden ser en forma de soluciones o suspensiones inyectables isotonicas esteriles acuosas o no acuosas. Estas soluciones y suspensiones pueden prepararse de polvos o granulos esteriles usando uno o mas de los vehiculos o diluyentes mencionados para su uso en formulaciones para la administracion oral o usando otros agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspension. Los compuestos pueden disolverse en agua, polietilenglicol, propilenglicol, etanol, aceite de maiz, aceite de algodon, aceite de cacahuete, aceite de sesamo, alcohol bencilico, cloruro de sodio, goma tragacanto y/o varios tampones. En las artes farmaceuticas, se conocen ampliamente otros adyuvantes y modos de administracion. El principio activo tambien puede administrarse mediante inyeccion como una composition con vehiculos adecuados, que incluyen solucion salina, dextrosa o agua o con ciclodextrina (es decir, CAPTISOL®), solubilization cosolvente (es decir, propilenglicol) o solubilizacion con cosolvente (es decir, Tween 80).
La preparation inyectable esteril tambien puede ser una solucion o suspension inyectable esteril en un diluyente o disolvente aceptable para la administracion parenteral no toxica, por ejemplo, como una solucion en 1,3-butanodiol. Entre los vehiculos y disolventes aceptables que pueden emplearse, se encuentran el agua, la solucion de Ringer y la solucion de cloruro de sodio isotonica. Ademas, los aceites no volatiles esteriles se emplean de manera convencional como disolvente o medio de suspension. Con este fin, puede emplearse cualquier aceite no volatil suave, incluyendo los monogliceridos o digliceridos sinteticos. Ademas, los acidos grasos, tales como el acido oleico, pueden usarse en la preparacion de inyectables.
Una microemulsion de aceite en agua esteril inyectable puede prepararse, por ejemplo, 1) disolviendo, al menos, un compuesto de Formula (I) en una fase oleosa, tal como una mezcla de aceite y lecitina de soja; 2) combinando la Formula (I) que contiene la fase oleosa con una mezcla de agua y glicerol; y 3) procesando la combination para
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formar una microemulsion.
Una suspension acuosa u oleaginosa esteril puede prepararse de acuerdo con metodos conocidos en la materia. Por ejemplo, una solucion o suspension acuosa esteril puede prepararse con un diluyente o disolvente no toxico aceptable para la administration parenteral, tal como 1,3-butanodiol; y una suspension oleaginosa esteril puede prepararse con un disolvente o medio de suspension no toxico esteril, tal como aceites no volatiles esteriles, por ejemplo, monogliceridos o digliceridos sinteticos; y acidos grasos, por ejemplo, acido oleico.
Los excipientes, adyuvantes y vehiculos farmaceuticamente aceptables que pueden usarse en las composiciones farmaceuticas de la presente invention incluyen, pero no se limitan a, intercambiadores ionicos, alumina, estearato de aluminio, lecitina, sistemas autoemulsionantes de liberation de farmacos (SEDDS), tales como succinato de d- alfa-tocoferol polietilenglicol 1000, tensioactivos usados en formas de dosificacion farmaceuticas, tales como Tweens, aceite de ricino polietoxilado, tal como tensioactivo CREMOPHOR® (BASF) u otras matrices de administracion polimerica, proteinas sericas, tales como albumina de suero humana, sustancias tamponantes, tales como fosfatos, glicina, acido sorbico, sorbato de potasio, mezclas de gliceridos parciales de acidos grasos vegetales saturados, agua, sales o electrolitos, tales como sulfato de protamina, fosfato de hidrogeno disodico, hidrogenofosfato de potasio, cloruro de sodio, sales de cinc, silice coloidal, trisilicato de magnesio, polivinilpirrolidona, sustancias a base de celulosa, polietilenglicol, carboximetilcelulosa de sodio, poliacrilatos, ceras, polimeros del bloque polietileno-polioxipropileno, polietilenglicol y lanolina. Las ciclodextrinas, tales como alfa, beta y gamma-ciclodextrina o los derivados quimicamente modificados, tales como hidroxialquilciclodextrinas, incluidas 2 y 3-hidroxipropil-ciclodextrinas u otros derivados solubilizados, tambien pueden usarse de manera beneficiosa para mejorar la administracion de compuestos de las formulas que se describen en el presente documento.
Los compuestos farmaceuticamente activos de la presente invencion pueden procesarse de acuerdo con metodos farmaceuticos convencionales, a fin de producir agentes medicinales para la administracion a pacientes, incluidos los seres humanos y otros mamiferos. Las composiciones farmaceuticas pueden someterse a operaciones farmaceuticas convencionales, tales como esterilizacion y/o pueden contener adyuvantes convencionales, tales como conservantes, estabilizantes, agentes humectantes, emulsionantes, tampones, etc. Los comprimidos y las pildoras pueden prepararse adicionalmente con recubrimientos entericos. Dichas composiciones tambien pueden comprender adyuvantes, tales como agentes humectantes, edulcorantes, aromatizantes y perfumantes.
Las cantidades de compuestos que se administran y el regimen de dosificacion para tratar una afeccion con los compuestos y/o las composiciones de la presente invencion dependen de una diversidad factores, que incluyen la edad, el peso, el sexo, la afeccion medica del sujeto, el tipo de enfermedad, la gravedad de la enfermedad, la via y la frecuencia de administracion y el compuesto particular que se emplea. Por ello, el regimen de dosificacion puede variar ampliamente, pero puede determinarse habitualmente usando metodos convencionales. Puede ser adecuada una dosis diaria de aproximadamente 0,001 a 100 mg/kg de peso corporal, preferentemente, de entre aproximadamente 0,005 y aproximadamente 50 mg/kg de peso corporal y, mucho mas preferentemente, de entre aproximadamente 0,01 a 10 mg/kg de peso corporal. La dosis diaria puede administrarse en una a cuatro dosis por dia.
Los compuestos activos de la presente invencion se combinan habitualmente con uno o mas adyuvantes adecuados para la via de administracion indicada con fines terapeuticos. Si se administran por via oral, los compuestos pueden mezclarse con lactosa, sacarosa, almidon en polvo, esteres de celulosa de acidos alcanoicos, alquilesteres de celulosa, talco, acido estearico, estearato de magnesio, oxido de magnesio, sales de sodio y calcio de acido fosforico y sulfurico, gelatina, goma arabiga, alginato de sodio, polivinilpirrolidona y/o alcohol polivimlico y luego, se producen comprimidos y capsulas para la administracion conveniente. Dichas capsulas o comprimidos pueden contener una formulation para la liberacion controlada como pueden proporcionarse en una dispersion del compuesto activo en hidroxipropilmetilcelulosa.
Las composiciones farmaceuticas de la presente invencion comprenden al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo y opcionalmente, un agente adicional seleccionado entre cualquier excipiente, adyuvante y vehiculo farmaceuticamente aceptables. Las composiciones alternativas de la presente invencion comprenden un compuesto de Formula (I) que se describe en el presente documento o un profarmaco del mismo identificado en el presente documento y un excipiente, adyuvante o vehiculo farmaceuticamente aceptable.
UTILIDAD
Los compuestos de Formula (I) son utiles para el tratamiento del cancer, por ejemplo, tipos de cancer dependientes de la activation de Notch. La activation de Notch esta involucrada en la patogenia de diversos tumores solidos, que incluyen el de ovario, pancreas y mama y tumores hematicos, tales como leucemias, linfomas y mieloma multiple.
En una realization, se usa un compuesto de Formula (I) y/o una sal del mismo para tratar el cancer en un mamifero que lo necesita. La presente invencion se puede usar para tratar diversos tipos de cancer, incluyendo, pero sin limitation, cancer de vejiga, cancer de mama, cancer colorrectal, cancer gastrico, cancer de cabeza y de cuello, cancer de rinon, cancer de higado, cancer de pulmon, incluido el cancer de pulmon no microcitico (CpNm), cancer
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de ovario, cancer de pancreas, cancer de la vesicula biliar, cancer de prostata, cancer de tiroides, osteosarcoma, rabdomiosarcoma, histiocitoma fibroso maligno (HFM), fibrosarcoma, glioblastomas/astrocitomas, neuroblastoma, melanoma, leucemia linfoblastica aguda de linfocitos T (LLA-T) y mesotelioma. Por ejemplo, la presente realizacion se usa para tratar el cancer de mama, cancer de colon o cancer de pancreas. Preferentemente, el mamifero es un ser humano. Por ejemplo, en la presente realizacion, puede administrarse una cantidad terapeuticamente eficaz para tratar el cancer. La presente realizacion incluye la administracion del compuesto que tiene la estructura:
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y/o al menos una sal del mismo. En la presente realizacion, las vias de administracion incluyen la administracion parenteral y la administracion oral.
En una realizacion, se usa al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo para tratar el cancer en un mamifero que lo necesita, en la que el cancer es el cancer colorrectal. Preferentemente, el mamifero es un ser humano. Por ejemplo, en la presente realizacion, puede administrarse una cantidad terapeuticamente eficaz para tratar el cancer. En la presente realizacion, las vias de administracion incluyen la administracion parenteral y la administracion oral.
En una realizacion, se usa al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo para tratar el cancer en un mamifero que lo necesita, en la que el cancer es el cancer de mama triple negativo. Preferentemente, el mamifero es un ser humano. Por ejemplo, en la presente realizacion, puede administrarse una cantidad terapeuticamente eficaz para tratar el cancer. En la presente realizacion, las vias de administracion incluyen la administracion parenteral y la administracion oral.
En una realizacion, se usa al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo para tratar el cancer en un mamifero que lo necesita, en la que el cancer tiene una translocacion de al menos uno de los receptores Notch. Por ejemplo, el carcinoma de mama triple negativo humano HCC-1599 tiene una translocacion de Notch 1.
En una realizacion, se usa al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo para tratar el cancer en un mamifero que lo necesita, en la que el cancer es el cancer de pulmon no microcitico. Preferentemente, el mamifero es un ser humano. Por ejemplo, en la presente realizacion, puede administrarse una cantidad terapeuticamente eficaz para tratar el cancer. En la presente realizacion, las vias de administracion incluyen la administracion parenteral y la administracion oral.
En una realizacion, se usa al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo para tratar el cancer en un mamifero que lo necesita, en la que el cancer es el cancer pancreatico. Preferentemente, el mamifero es un ser humano. Por ejemplo, en la presente realizacion, puede administrarse una cantidad terapeuticamente eficaz para tratar el cancer. En la presente realizacion, las vias de administracion incluyen la administracion parenteral y la administracion oral.
En una realizacion, se usa al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo para tratar el cancer en un mamifero que lo necesita, en la que el cancer es el cancer de ovario. Preferentemente, el mamifero es un ser humano. Por ejemplo, en la presente realizacion, puede administrarse una cantidad terapeuticamente eficaz para tratar el cancer. En la presente realizacion, las vias de administracion incluyen la administracion parenteral y la administracion oral.
En una realizacion, se usa al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo para tratar el cancer en un mamifero que lo necesita, en la que el cancer es melanoma. Preferentemente, el mamifero es un ser humano. Por ejemplo, en la presente realizacion, puede administrarse una cantidad terapeuticamente eficaz para tratar el cancer. En la presente realizacion, las vias de administracion incluyen la administracion parenteral y la administracion oral.
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En una realizacion, se desvela el uso de al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo, para la fabrication de un medicamento para el tratamiento del cancer. Preferentemente, en la presente realizacion, los tipos de cancer que pueden tratarse incluyen uno o mas de: cancer de vejiga, cancer de mama, cancer colorrectal, cancer gastrico, cancer de cabeza y de cuello, cancer de rinon, cancer de higado, cancer de pulmon, incluido el cancer de pulmon no microcitico (CpNM), cancer de ovario, cancer de pancreas, cancer de la vesicula biliar, cancer de prostata, cancer de tiroides, osteosarcoma, rabdomiosarcoma, histiocitoma fibroso maligno (HFM), fibrosarcoma, glioblastomas/astrocitomas, neuroblastoma, melanoma, leucemia linfoblastica agua de linfocitos T (LLA-T) y mesotelioma. Los medicamentos adecuados de la presente realizacion incluyen medicamentos para la administration parenteral, tales como soluciones, suspensiones y medicamentos para la administration oral, tales como comprimidos, capsulas, soluciones y suspensiones.
Una realizacion proporciona al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo, para su uso en la terapia para el tratamiento del cancer. En la presente realizacion, los tipos de cancer que pueden tratarse incluyen uno o mas de los siguientes: cancer de vejiga, cancer de mama, cancer colorrectal, cancer gastrico, cancer de cabeza y de cuello, cancer de rinon, cancer de higado, cancer de pulmon, incluido el cancer de pulmon no microcitico (CPNM), cancer de ovario, cancer de pancreas, cancer de la vesicula biliar, cancer de prostata, cancer de tiroides, osteosarcoma, rabdomiosarcoma, histiocitoma fibroso maligno (HFM), fibrosarcoma, glioblastomas/astrocitomas, neuroblastoma, melanoma, leucemia linfoblastica aguda de linfocitos T (LLA-T) y mesotelioma.
En una realizacion, se usa al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo para tratar el cancer en un mamifero, en la que el cancer depende de la activation de Notch. El metodo de la presente invention se puede usar para tratar diversos tipos de cancer, incluyendo, pero sin limitation, cancer de vejiga, cancer de mama, cancer colorrectal, cancer gastrico, cancer de cabeza y de cuello, cancer de rinon, cancer de higado, cancer de pulmon, incluido el cancer de pulmon no microcitico (CPNM), cancer de ovario, cancer de pancreas, cancer de la vesicula biliar, cancer de prostata, cancer de tiroides, osteosarcoma, rabdomiosarcoma, histiocitoma fibroso maligno (HFM), fibrosarcoma, glioblastomas/astrocitomas, neuroblastoma, melanoma, leucemia linfoblastica aguda de linfocitos T (LLA-T) y mesotelioma. Preferentemente, la presente realizacion se usa para tratar el cancer de mama, cancer de colon o cancer de pancreas. Preferentemente, el mamifero es un ser humano. Por ejemplo, en la presente realizacion, puede administrarse una cantidad terapeuticamente eficaz para tratar el cancer. Las vias de administracion adecuadas incluyen la administracion parenteral y la administracion oral.
Para el tratamiento del cancer, con frecuencia resulta ventajoso usar una combination de agentes quimioterapeuticos y/u otros tratamientos (por ejemplo, radioterapia). El segundo (o tercer) agente puede tener un mecanismo de action igual o diferente del agente terapeutico primario. Por ejemplo, pueden emplearse combinaciones de farmacos, en las que dos o mas de los farmacos que se administran actuan de diferentes maneras o en diferentes fases del ciclo celular y/o en las que dos o mas de los farmacos tienen toxicidades o efectos secundarios que no se superponen y/o en las que cada uno de los farmacos que se combinan tienen eficacia demostrada para tratar la enfermedad particular manifestada por el paciente.
En una realizacion, se usan al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo; y uno o mas agentes antineoplasicos adicionales para tratar el cancer.
La frase "agente antineoplasico adicional" se refiere a un farmaco seleccionado entre cualquiera de los siguientes: agentes alquilantes (que incluyen mostazas nitrogenadas, sulfonatos de alquilo, nitrosoureas, derivados de etilenimina y triazenos); antiangiogenicos (que incluyen inhibidores de metaloproteinasa de matriz ); antimetabolitos (que incluyen inhibidores de adenosina desaminasa, antagonistas del acido folico, analogos de purina y analogos de pirimidina); antibioticos o anticuerpos (que incluyen anticuerpos monoclonales, anticuerpos cTlA-4, antraciclinas); inhibidores de aromatasa; modificadores de la respuesta del ciclo celular; enzimas; inhibidores de la proteina farnesil transferasa; esteroides y agentes hormonales y antihormonales (que incluyen analogos sinteticos, glucocorticoides, estrogenos/antiestrogenos [por ejemplo, MSRE], androgenos/antiandrogenos, gestagenos, agonistas del receptor de progesterona y agonistas y antagonistas de liberation de la hormona luteinizante [LHRH]); moduladores del sistema del factor de crecimiento tipo insulina (IGF)/receptor del factor de crecimiento tipo insulina (IGFR) (que incluyen inhibidores de IGFR1); inhibidores de la senalizacion de integrina; inhibidores de cinasa (que incluyen inhibidores de multicinasa y/o inhibidores de cinasa Src o Src/abl, inhibidores de cinasa dependiente de ciclina [CDK], anticuerpos panHer, Her-1 y Her-2, inhibidores de VEGF, que incluyen anticuerpos anti-VEGF, inhibidores de EGFR, inhibidores de la proteina activada por mitogenos [MAP], inhibidores de MET, inhibidores de MEK, inhibidores de aurora cinasa, inhibidores de PDGF y otros inhibidores de tirosina cinasa o inhibidores de serina/treonina cinasa; agentes desorganizadores de microtubulos, tales como ecteinascidinas o sus analogos y derivados; agentes de estabilizacion de microtubulos, tales como taxanos y epotilonas naturales y sus analogos sinteticos y semisinteticos; agentes desestabilizantes de union a microtubulos (que incluyen alcaloides de la vinca); inhibidores de topoisomerasa; inhibidores de la prenil-protema transferasa; complejos de coordination de platino; inhibidores de la transduction de senal; y otros agentes usados como agentes antineoplasicos y citotoxicos, tales como modificadores de la respuesta biologica, factores de crecimiento y moduladores inmunitarios.
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En consecuencia, los compuestos de la presente invencion pueden administrarse en combinacion con otros tratamientos contra el cancer utiles para tratar el cancer u otras enfermedades proliferativas. La invencion de la presente invencion tambien desvela el uso de al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo para preparar medicamentos para el tratamiento del cancer y/o comprende el envasado de un compuesto de Formula (I) del presente documento junto con instrucciones de que el compuesto debe usarse en combinacion con otros agentes antineoplasicos o citotoxicos y tratamientos para el tratamiento del cancer. La presente invencion tambien comprende combinaciones de al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo y al menos un agente adicional en forma de kit, por ejemplo, cuando se envasan juntos o se colocan en envases separados para comercializarlos juntos como un kit o cuando se envasan para que se formulen juntos.
En una realization, se usan al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo; dasatinib y, opcionalmente, uno o mas agentes antineoplasicos adicionales, para tratar el cancer.
En una realizacion, se usan al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo; paclitaxel y, opcionalmente, uno o mas agentes antineoplasicos adicionales, para tratar el cancer.
En una realizacion, se usan al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo; tamoxifeno y, opcionalmente, uno o mas agentes antineoplasicos adicionales, para tratar el cancer.
En una realizacion, se usan al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo; un glucocorticoide y, opcionalmente, uno o mas agentes antineoplasicos adicionales, para tratar el cancer. Un ejemplo de un glucocorticoide adecuado es dexametasona.
En una realizacion, se usan al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo; carboplatino y, opcionalmente, uno o mas agentes antineoplasicos adicionales, para tratar el cancer.
Los compuestos de la presente invencion pueden formularse o coadministrarse con otros agentes terapeuticos que se seleccionan porque son particularmente utiles en el abordaje de los efectos asociados a las afecciones antes mencionadas. Por ejemplo, los compuestos de la invencion pueden formularse con agentes para prevenir nauseas, hipersensibilidad e irritation gastrica, tales como antiemeticos y antihistaminicos Hi y H2.
En una realizacion, se proporcionan composiciones farmaceuticas que comprenden al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo; uno o mas agentes adicionales seleccionados entre un agente inhibidor de cinasa (molecula pequena, polipeptido y anticuerpo), un inmunosupresor, un agente antineoplasico, un agente antiviral, un agente antiinflamatorio, un agente antifungico, un antibiotico o un compuesto contra la hiperproliferacion vascular; y cualquier excipiente, adyuvante o vehiculo farmaceuticamente aceptables.
Los otros agentes terapeuticos anteriores, cuando se usan en combinacion con los compuestos de la presente invencion, se pueden emplear, por ejemplo, en las cantidades indicadas en el Physicians' Desk Reference (PDR) o como lo determine un experto en la materia. En los metodos de la presente invencion, dichos otros agentes terapeuticos se pueden administrar antes, durante o despues de la administration de los compuestos de la invencion.
Sin embargo, el nivel de dosis especifico y la frecuencia de dosificacion para cualquier sujeto particular pueden modificarse y, en general, esto depende de diversos factores, que incluyen, pero no se limitan a, la biodisponibilidad del compuesto especifico de Formula (I) en la forma administrada, la estabilidad metabolica y la duration de la action del compuesto especifico de Formula (I), la especie, el peso corporal, la salud general, el sexo, la dieta del sujeto, el modo y el tiempo de administracion, la velocidad de elimination, la combinacion de farmacos y la gravedad de la afeccion particular. Por ejemplo, puede ser adecuada una dosis diaria de aproximadamente 0,001 a 100 mg/kg de peso corporal, preferentemente, de aproximadamente 0,005 a aproximadamente 50 mg/kg de peso corporal y, mucho mas preferentemente, de aproximadamente 0,01 a 10 mg/kg de peso corporal. La dosis diaria puede administrarse en una a cuatro dosis por dia.
La administracion puede ser continua, es decir, todos los dias o intermitente. Las expresiones "intermitente" o "de forma intermitente", como se usan en el presente documento, significan detener y comenzar ya sea en intervalos regulares o irregulares. Por ejemplo, la administracion intermitente incluye la administracion de 1 a 6 dias por semana; la administracion en ciclos (por ejemplo, la administracion diaria durante 2 a 8 semanas consecutivas seguidos de un periodo de reposo sin administracion de hasta 1 semana); o la administracion en dias alternos.
En una realizacion, el al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo se administran de forma continua a un paciente que lo necesita, una o mas veces al dia. Por ejemplo, se administra una cantidad terapeuticamente eficaz del compuesto de Formula (I) a un paciente que lo necesita, una o mas veces al dia durante dias consecutivos.
En una realizacion, al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo se administran de forma intermitente a un paciente que lo necesita, una o mas veces al dia. Por ejemplo, se administra una cantidad
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terapeuticamente eficaz del compuesto de Formula (I) a un paciente que lo necesita, una o mas veces al dia de acuerdo con una pauta intermitente.
En una realizacion, al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo se administran a un paciente que lo necesita, una o mas veces al dia durante dias consecutivos seguidos de uno o mas dias sin administracion. Preferentemente, se administra una cantidad terapeuticamente eficaz del compuesto de Formula (I). Los ejemplos de la dosificacion continua con un reposo farmacologico son ciclos de: 7 dias de tratamiento seguidos de 7 dias sin tratamiento; 14 dias de tratamiento seguidos de 7 dias sin tratamiento; y 7 dias de tratamiento seguidos de 14 dias sin tratamiento. Un ciclo de tratamiento/sin tratamiento puede repetirse varias veces, segun sea necesario para tratar a un paciente.
En una realizacion, al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo se administran a un paciente que lo necesita, de acuerdo con una pauta de dosificacion intermitente. Las pautas de dosificacion intermitente son pautas de repeticion que incluyen dias en los que al paciente se le administra el compuesto de Formula (I) y dias en los que al paciente no se le administra el compuesto de Formula (I). Los ejemplos de pautas de dosificacion intermitente son los siguientes: dosificacion 4 dias por semana durante 3 semanas consecutivas seguidas de una semana sin dosificacion y la repeticion con un intervalo de 4 semanas; dosificacion 5 dias por semana durante 2 semanas consecutivas seguidas de 1 semana sin dosificacion y la repeticion con un intervalo de 3 semanas; y la dosificacion 4 dias por semana durante una semana seguida de 2 semanas sin dosificacion y la repeticion con un intervalo de 3 semanas. Preferentemente, se administra una cantidad terapeuticamente eficaz del compuesto de Formula (I).
En una realizacion, al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo se administran 1 dia, seguido de 6 dias de reposo y se repite en una pauta semanal.
En una realizacion, al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo se administran 1 dia, seguido de 6 dias de reposo y se repite en una pauta semanal durante 1 a 4 semanas y seguidas de una semana de reposo. Por ejemplo, el compuesto de Formula (I) se administra 1 dia seguido de 6 dias de reposo durante 3 semanas seguidas de una semana de reposo. Este ciclo de 4 semanas se puede repetir una o mas veces.
En una realizacion, al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo se administran 2 dias consecutivos seguidos de siguen 5 dias de reposo y se repite en una pauta semanal.
En una realizacion, al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo se administran 3 dias consecutivos seguidos de 4 dias de reposo y se repite en una pauta semanal.
En una realizacion, al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo se administran 1 dia seguido de 10 a 13 dias de reposo.
En una realizacion, al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo se administran una vez por dia (cada dia). Esta realizacion incluye la administracion oral una vez por dia.
En una realizacion, al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo se administran dos veces por dia (dos veces al dia). Esta realizacion incluye la administracion oral dos veces por dia.
En una realizacion, al menos un compuesto de Formula (I) y/o al menos una sal del mismo se administran dia por medio: un dia de administracion seguido de un dia de reposo. Este ciclo de 2 dias se puede repetir una o mas veces.
METODOS DE PREPARACI6N
Los compuestos de la presente invencion pueden prepararse de varias maneras conocidas por los expertos en la materia de la sintesis organica. Los compuestos de la presente invencion se pueden sintetizar con los metodos que se describen a continuacion, junto con los metodos de sintesis conocidos en la materia de la quimica organica de sintesis o sus variaciones consideradas por el experto en la materia. Los metodos preferidos incluyen, pero no se limitan a, los que se describen a continuacion. Todas las referencias citadas en el presente documento se incorporan en su totalidad por referencia.
Los compuestos de la presente invencion se pueden preparar usando las reacciones y tecnicas que se describen en esta seccion. Las reacciones se realizan en disolventes adecuados para los reactivos y materiales usados y son adecuadas para las transformaciones que se realizan. Ademas, en la descripcion de los metodos de sintesis indicados a continuacion, se debe tener en cuenta que todas las condiciones de reaccion propuestas, incluso la eleccion del disolvente, la atmosfera de reaccion, la temperatura de reaccion, la duracion del experimento y los procedimientos de preparacion se eligen por ser las condiciones convencionales para esa reaccion, que debe reconocer facilmente un experto en la materia. Un experto en la materia de la sintesis organica comprendera que la funcionalidad presente en diversas porciones de la molecula debe ser compatible con los reactivos y las reacciones
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propuestas. Dichas restricciones a los sustituyentes que son compatibles con las condiciones de reaccion seran evidentes para un experto y, por ello, se deben usar metodos alternativos. En ocasiones, esto requerira cierto criterio para modificar el orden de las etapas de sintesis o para seleccionar un esquema particular del proceso en lugar de otro, a fin de obtener el compuesto deseado de la invencion. Otra consideracion importante en la planificacion de cualquier via de sintesis en esta area es la eleccion prudente del grupo protector que se usa para la proteccion de los grupos funcionales reactivos presentes en los compuestos descritos en la presente invencion. Una explicacion con autoridad que describe muchas alternativas para el medico experto es Greene et al. (Protective Groups in Organic Synthesis, 3a edicion, Wiley and Sons (1999)).
Los compuestos de Formula (I) pueden prepararse con referencia a los metodos que se ilustran en los siguientes Esquemas. Como puede verse en ellos, el producto final es un compuesto que tiene la misma formula estructural que la Formula (I). Cabe destacar que cualquier compuesto de Formula (I) puede producirse mediante los esquemas por medio de la selection adecuada de reactivos con una sustitucion apropiada. Un experto en la materia puede seleccionar con facilidad los disolventes, las temperaturas, las presiones y otras condiciones de reaccion. Los materiales de partida estan disponibles en el mercado o los expertos en la materia pueden prepararlos con facilidad. Los constituyentes de los compuestos son como se definen en el presente documento o en otra section de la memoria descriptiva.
La sintesis de los compuestos de Formula (I) puede realizarse usando los metodos resumidos en los Esquemas 1 a 7.
Esquema 1
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La preparation de benzodiazepinona (iv) puede realizarse mediante multiples metodos conocidos por los expertos en la materia. Por ejemplo, como se indica en el Esquema 1, una 2-aminobenzofenona (i) sustituida de manera adecuada (por ejemplo, de Walsh, D.A., Synthesis, 677 (1980); y las referencias citadas en el mismo u otros metodos conocidos por los expertos en la materia) se puede acoplar con el derivado de glicina protegido (ii) (PG = grupo protector, por ejemplo, Pg = CBz, vease Katritzky, A.R. et al., Org. Chem., 55:2206-2214 (1990)), tratarse con un reactivo, tal como amoniaco y someterse a la ciclacion para obtener la benzodiazepinona (iii), de acuerdo con el procedimiento esbozado en la bibliografia (por ejemplo, Sherrill, R.G. et al., J. Org. Chem., 60:730 (1995); u otras vias conocidas por los expertos en la materia). La mezcla racemica resultante puede separarse (usando los procedimientos conocidos por los expertos en la materia) para obtener los enantiomeros individuales o puede usarse como racemato. Ademas, si R3 es H, (iii) puede tratarse, por ejemplo, con un reactivo, tal como MeI y una base, tal como K2CO3, en un disolvente, tal como DMF, a fin de preparar R3 que es metilo.
Etapa 2: La desproteccion de (iii) puede realizarse mediante varias formas conocidas por los expertos en la materia. Por ejemplo, con PG = CBz, el Compuesto (iii) puede tratarse con un reactivo, tal como HBr, en un disolvente, tal como AcOH. El Compuesto (iv) puede usarse como racemato. Como alternativa, el Compuesto (iv) puede someterse a resolution enantiomerica usando metodos convencionales (por ejemplo, cromatografia preparativa quiral).
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El compuesto (xii) en el Esquema 2 puede prepararse mediante la secuencia de smtesis esbozada en el Esquema 2.
10 Etapa 1: El acido (v) puede convertirse en el compuesto (vii) de multiples formas conocidas por los expertos en la materia. Por ejemplo, el tratamiento del acido (v) con un reactivo, tal como cloruro de oxalilo, en un disolvente, tal como DCM, produce el cloruro de acido (vi). El compuesto (vi) se puede tratar con una oxazolidinona (a) en condiciones convencionales para obtener el compuesto (vii) (Evans, D.A. et al., J. Am. Chem Soc., 112:4011 (1990)).
15 Etapa 2: La segunda etapa del Esquema 2 se realiza tratando el compuesto (vii) con una base, tal como bis(trimetilsilil)-amida de sodio o diisopropilamida de litio, en un disolvente, tal como THF, a baja temperatura, tal como -78 °C, en una atmosfera inerte. El enolato resultante de (vii) se trata con un reactivo, tal como bromoacetato de terc-butilo, para obtener el compuesto (viii, Ry = t-butilo).
Etapa 3: La conversion del compuesto (viii) en (ix) puede realizarse tratando el compuesto (viii) con peroxido de 20 hidrogeno e hidroxido de litio a una temperatura adecuada, usando una mezcla de disolventes, tal como THF/agua.
Etapa 4: El compuesto (ix) puede convertirse en una mezcla del compuesto (x) y el compuesto (xi) generando el enolato de (ix) con una base, tal como LDA, en un disolvente, tal como THF, a baja temperatura, tal como -78 °C, en una atmosfera inerte y con un tratamiento adicional con un reactivo (R2-LG) que tiene un grupo saliente 25 adecuado (por ejemplo, Lg = triflato (LG = grupo saliente)). La mezcla resultante de diastereomeros (x/xi)
despues se puede utilizar en las etapas de smtesis posteriores.
Etapa 5: Como alternativa, la mezcla (x/xi) puede someterse a condiciones de epimerizacion, por ejemplo, mediante el tratamiento con LDA y cloruro de dietilaluminio y despues la inactivacion con metanol o acido acetico, a fin de enriquecer el diastereomero deseado. La mezcla resultante de compuestos (x/xi) enriquecida 5 diastereomericamente despues se puede utilizar en etapas de smtesis posteriores o la mezcla de diastereoisomeros se puede separar, si se desea, usando condiciones adecuadas, tales como HPLC preparativa, HPLC preparativa quiral o cromatografia en gel de silice y el diastereoisomero puro deseado resultante (xi) se puede usar en las siguientes etapas.
Etapa 6: Como alternativa, la mezcla de acidos diastereomericos (x) y (xi) se puede proteger mediante el 10 tratamiento, por ejemplo, con bromuro de bencilo en presencia de una base, tal como K2CO3, en un disolvente, tal como DMF. La mezcla resultante de diastereoisomeros se puede separar, si se desea, usando condiciones adecuadas, tales como HPLC preparativa, HPLC preparativa quiral o cromatografia en gel de silice y el compuesto diastereoisomerico puro deseado resultante (xii) se puede usar en la siguiente etapa.
Etapa 7: La ultima etapa del Esquema 2 es la etapa de desproteccion y puede realizarse mediante varias formas 15 conocidas por un experto en la materia. Por ejemplo, cuando Rw = bencilo en el compuesto (xii), el tratamiento en condiciones de alta hidrogenacion mediante el uso de un catalizador, tal como paladio sobre carbon, en un disolvente, tal como MeOH, en una atmosfera de hidrogeno puede proporcionar el compuesto (xi) que se puede usar con posterioridad.
20 Como alternativa, el compuesto (xi) se puede preparar de acuerdo con la secuencia de etapas del Esquema 3.
Esquema 3
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Etapa 1: La primera etapa del Esquema 3 se obtiene convirtiendo el compuesto (xiii) en un ester (xv) y usando una de las multiples formas conocidas por los expertos en la materia, tales como el tratamiento con un acetimidato sustituido, tal como el compuesto (xiv) en presencia de un reactivo, tal como trifluoruro de boro eterato, a una temperatura adecuada en un disolvente, tal como THF.
Etapa 2: El acido (v) puede convertirse en el compuesto (vi) de multiples formas conocidas por los expertos en la materia. Por ejemplo, el tratamiento del acido (v) con un reactivo, tal como cloruro de oxalilo, en un disolvente, tal como DCM, produce el cloruro de acido (vi). El compuesto (vi) se puede tratar con una oxazolidinona (a) en condiciones convencionales para obtener el compuesto (vii) (Evans, D.A. et al., J. Am. Chem Soc., 112:4011 (1990)).
Etapa 3: El compuesto (vii) se puede convertir en una mezcla de diastereomeros (xvi) de varias maneras (Baran, P. et al., J. Am. Chem. Soc., 130(34):11546 (2008)). Por ejemplo, el compuesto (xv) se trata con una base, tal como LDA, en un disolvente, tal como tolueno, a baja temperatura, tal como -78 °C, en una atmosfera inerte, tal como N2. La mezcla resultante se anade a una solucion del compuesto (vii) tratado con cloruro de litio y una base, tal como LDA, en un disolvente, tal como tolueno, en una atmosfera inerte, tal como N2. A la mezcla resultante de los enolatos de los compuestos (xv) y (vii), se le anade bis(2-etilhexanoiloxi) cobre, a baja temperatura, tal como -78 °C, en una atmosfera inerte, tal como N2 y se calienta a temperatura ambiente para obtener el compuesto (xvi).
Etapa 4: La conversion del compuesto (xvi) en una mezcla del compuesto (x) y el compuesto (xi) puede realizarse tratandolo con peroxido de hidrogeno e hidroxido de litio a una temperatura adecuada, usando una mezcla de disolventes, tal como THF/agua. La mezcla resultante de diastereomeros despues se puede utilizar en las etapas de sintesis posteriores. Si es necesario, en este punto, puede separarse la mezcla resultante de diastereomeros mediante cromatografia en gel de silice o HPLC preparativa.
Etapa 5: Como alternativa, la mezcla (x/xi) puede someterse a condiciones de epimerizacion, por ejemplo, mediante el tratamiento con LDA y cloruro de dietilaluminio y despues la inactivacion con metanol o acido acetico, a fin de enriquecer el diastereomero deseado. La mezcla resultante de compuestos enriquecida diastereomericamente despues se puede utilizar en etapas de sintesis posteriores o la mezcla de diastereoisomeros se puede separar, si se desea, usando condiciones adecuadas, tales como HPLC preparativa, HPLC preparativa quiral o cromatografia en gel de silice y el diastereoisomero puro deseado resultante (xi) se puede usar en las siguientes etapas.
Etapa 6: Como alternativa, la mezcla de acidos diastereomericos (x) y (xi) se puede proteger mediante el tratamiento, por ejemplo, con bromuro de bencilo en presencia de una base, tal como K2CO3, en un disolvente, tal como DMF. La mezcla resultante de diastereoisomeros se puede separar, si se desea, usando condiciones adecuadas, tales como HPLC preparativa, HPLC preparativa quiral o cromatografia en gel de silice y el compuesto diastereoisomerico puro deseado resultante (xii) se puede usar en las siguientes etapas.
Etapa 7: La ultima etapa del Esquema 3 es la etapa de desproteccion y puede realizarse mediante varias formas conocidas por un experto en la materia. Por ejemplo, cuando Rw = bencilo en el compuesto (xii), el tratamiento en condiciones de alta hidrogenacion mediante el uso de un catalizador, tal como paladio sobre carbon, en un disolvente, tal como MeOH, en una atmosfera de hidrogeno puede proporcionar el compuesto (xi) que se puede usar con posterioridad, por ejemplo, en la etapa 1 del Esquema 4.
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5 Etapa 1: Los compuestos de estructura (iv) se pueden acoplar al compuesto diastereomericamente puro (xi) o a una mezcla diastereomerica de compuestos (x/xi) en presencia de un reactivo de acoplamiento, tal como TBTU y una base, tal como TEA, en un disolvente, tal como DMF, para obtener el compuesto (xiii) como un compuesto diastereomericamente puro o como una mezcla de diastereoisomeros, segun corresponda, de acuerdo con la pureza enantiomerica y/o diastereomerica de los socios de acoplamiento. Esta mezcla se puede usar como tal en 10 la siguiente etapa o, si se desea, se puede purificar usando una tecnica de separacion adecuada, tal como cromatografia preparativa quiral, para obtener los compuestos diastereomericamente puros.
Etapa 2: El tratamiento del compuesto (xiii) con un acido, tal como TFA, a una temperatura adecuada, tal como 0 °C, en un disolvente, tal como DCM, proporciona el compuesto (xiv) como un compuesto diastereomericamente puro o como una mezcla de diastereoisomeros. Esta mezcla se puede usar tal cual en la siguiente etapa o, si se 15 desea, se puede purificar usando una tecnica de separacion adecuada, tal como cromatografia preparativa quiral, para obtener los compuestos diastereomericamente puros.
Etapa 3: La conversion del compuesto (xiv) en el compuesto (xv, R4 = H) puede realizarse mediante el acoplamiento del compuesto (xiv) con una fuente de amina adecuada, tal como cloruro de amonio o amoniaco, una carbodiimida, tal como EDC, HOBT y una base, tal como TEA, en un disolvente, tal como DMF. Si es 20 necesario, la mezcla diastereomerica puede separarse usando una tecnica de separacion adecuada, tal como una cromatografia preparativa quiral.
Se pueden preparar compuestos adicionales de la presente invencion a partir del compuesto xv (R4 = H), de acuerdo con el Esquema 5.
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Etapa 1: Un acido carboxilico funcionalizado de manera adecuada (PG-L-CO2H) o una sal de carboxilato (xvi) se pueden tratar con un agente alquilante, tal como clorosulfato de clorometilo, en presencia de una base, tal como Na2CO3 y una sal de amonio cuaternario, tal como sulfato de tetrabutilamonio, en una mezcla bifasica de agua y un disolvente organico adecuado, tal como DCM a baja temperatura, tal como 0 °C, para obtener el compuesto 10 xvii.
Etapa 2: El tratamiento del compuesto xv con el compuesto xvii en un disolvente adecuado, tal como DCM, en presencia de una base, tal como K2CO3, produce el compuesto xviii.
Etapa 3: La desproteccion del compuesto xviii puede realizarse mediante varias formas conocidas por un experto en la materia. Por ejemplo, cuando PG = tBu o Boc, el compuesto xviii se puede tratar con un reactivo, tal como 15 acido trifluoroacetico, en un disolvente, tal como DCM, para obtener el compuesto xix (-CH2OC(O)L = Rx).
Como alternativa, los compuestos xix se pueden preparar como se describe en el Esquema 6.
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Etapa 1: Se pueden usar diversos metodos conocidos en la tecnica para preparar los compuestos xix. Por ejemplo, como se indica en el Esquema 6, una benzodiazepina sustituida de manera adecuada (xv) se puede tratar con un tioeter de haloalquilo, tal como (clorometil)(metil)sulfano, en presencia de una base, tal como carbonato de cesio, en un disolvente adecuado, tal como N,N-dimetilformamida (DMF), para obtener los 10 compuestos de la Formula xx.
Etapa 2: El tratamiento del compuesto xx con un reactivo, tal como cloruro de sulfurilo, en presencia de una sal de amina, tal como cloruro de trietilamonio en un disolvente aprotico, tal como diclorometano (DCM), se puede usar para la transformacion en los compuestos de la Formula xxi (Hal = cloro).
Etapa 3: Los compuestos de la Formula xviii se pueden preparar del compuesto xxi mediante el tratamiento con 15 un acido carboxilico sustituido de manera adecuada o sal de carboxilato en presencia de una base (cuando se comienza de un acido carboxilico), tal como carbonato de potasio en un disolvente aprotico, tal como acetonitrilo o DMF.
Etapa 4: La desproteccion del compuesto iv puede realizarse mediante varias formas conocidas por un experto en la materia. Por ejemplo, cuando PG = tBu o Boc, el compuesto xviii se puede tratar con un reactivo, tal como 20 acido trifluoroacetico, en un disolvente, tal como DCM, para obtener el compuesto xix (-CH2OC(O)L = Rx).
La preparacion de profarmacos a base de sulfenamida del compuesto de origen xv se muestra en el Esquema 7.
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Etapa 1: Una mezcla de una sal de plata, tal como nitrato de plata y un disulfuro, tal como 2,2'- disulfandiilbis(etan-2,1-diil)dicarbamato de terc-butilo en un disolvente alcoholico, tal como MeOH, se puede tratar con el compuesto i en presencia de una base, tal como trietilamina, para obtener el compuesto xxii.
Etapa 2: La desproteccion del compuesto xxii puede realizarse mediante varias formas conocidas por un experto en la materia. Por ejemplo, cuando PG = tBu o Boc, el compuesto xxii se puede tratar con un reactivo, tal como acido trifluoroacetico, en un disolvente, tal como DCM, para obtener el compuesto xxiii (-S-M = Ry).
Ejemplos
La invencion se define adicionalmente en los siguientes Ejemplos. Debe comprenderse que los Ejemplos solo se proporcionan con fines ilustrativos. Mediante el analisis anterior y los Ejemplos, el experto en la materia puede determinar las caracteristicas esenciales de la invencion y, sin apartarse del espiritu y alcance de la misma, puede realizar diversos cambios y modificaciones, a fin de adaptar la invencion a diversos usos y condiciones. Como resultado, la invencion no se limita a los ejemplos ilustrativos que se establecen a continuacion en el presente documento, sino que se define mediante las reivindicaciones adjuntas.
ABREVIATURAS
ACN
AcOH
AlMe3
acetonitrilo acido acetico trimetilaluminio
ac
Bn
Boc
Boc2O
CBz
DCC
DCM
DIEA
DMAP
DME
DMF
DMSO
Pd(dppf)2Cl2
EDC
Et2AlCl
Et3N
Et2O
EtOH
EtOAc
acuoso
bencilo
terc-butoxicarbonilo
dicarbonato de di-terc-butilo
benciloxicarbonilo
1,3-diciclohexilcarbodiimida
diclorometano
diisopropiletilamina
dimetilaminopiridina
1,2-dimetoxietano
dimetilformamida
sulfoxido de dimetilo
[1,1'-b/s(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio(II)
clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
cloruro de dietilaluminio
trietiamina
eter dietilico
etanol
acetato de etilo
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equiv.
g
h
HOBt
HPLC
iPrOH
KOtBu
LCMS
LDA
LiHMDS
Me
MeI
MeOH
min
ml
mmol
MTBE
NaHMDS
n-BuLi
NH4OAC
NMP
Pd(OAc)2
RT o Rt
sat
t-Bu
t-BuLi
tBuOH
tBuOMe
TBTU
TEA
TFA
Tf2O
THF
equivalencia o equivalencias gramo o gramos hora u horas hidroxibenzotriazol
cromatografia de liquidos de alta presion alcohol isopropilico terc-butoxido de potasio
cromatografia de liquidos-espectroscopia de masas diisopropilamida de litio bis(trimetilsilil)amida de litio metilo
yoduro de metilo metanol
minuto o minutos
mililitro o mililitros
milimolar
metil t-butil eter
bis(trimetilsilil)amida de sodio
n-butil litio
acetato de amonio
N-metilpirrolidinona
acetato de paladio
tiempo de retencion
saturado
butilo terciario
t-butil litio
alcohol butilico terciario terc-butilmetileter
tetrafluoroborato de O-(1 H-benzotriazol-1-il)-W,W,W'W'-tetrametiluronio
trietilamina
acido trifluoroacetico
anhudrido trifluorometilsulfonico
tetrahidrofurano
Intermedio S-1: Acido (2R,3S)-3-(terc-butoxicarbonil)-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoico
CF3
O
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Me.
Me
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CF
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(S-1)
Intermedio S-1A: Trifluorometanosulfonato de 3,3,3-trifluoropropilo
F3C
O>
S^F
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O
(S-1A)
A una solucion agitada fria (-25 °C) de 2,6-lutidina (18,38 ml, 158 mmol) en DCM, se le anadio Tf2O (24,88 ml, 147 mmol) durante 3 min y la mezcla se agito durante 5 min. A la mezcla de reaccion, se le anadio 3,3,3- trifluoropropan-1-ol (12 g, 105 mmol) durante un intervalo de 3 min. Despues de 2 h, la mezcla de reaccion se calento a temperatura ambiente y se agito durante 1 h. La mezcla de reaccion se concentro hasta la mitad de su volumen, despues se purifico cargandola directamente en una columna de gel de silice (330 g, ISCO) y el producto se eluyo con DCM para obtener el Intermedio S-1A (13,74 g, 53 %) en forma de un aceite incoloro. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) 5 ppm 4,71 (2 H, t, J = 6,15 Hz), 2,49-2,86 (2 H, m).
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Intermedio S-1B: (4S)-4-bencil-3-(5,5,5-trifluoropentanoil)-1,3-oxazolidin-2-ona
O
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CF3
(S-1 B)
A una solucion agitada de acido 5,5,5-trifluoropentanoico (14,76 g, 95 mmol) y DMF (0,146 ml) en DCM (50 ml), se le anadio lentamente cloruro de oxalilo (8,27 ml, 95 mmol). Despues de 2 h, la mezcla se concentro a sequedad. Se cargo un matraz diferente con (S)-4-benciloxazolidin-2-ona (16,75 g, 95 mmol) en THF (100 ml) y despues se enfrio a -78 °C. A la solucion, se le anadio lentamente n-BuLi (2,5 M, 37,8 ml, 95 mmol) durante 10 min, se agitaron durante 10 min y despues se anadio lentamente una solucion del cloruro de acido anterior en THF (50 ml) durante 5 min. La mezcla se agito durante 30 min y despues se calento a temperatura ambiente. La reaccion se inactivo con NH4Cl acuoso saturado. Despues, se anadio LiCl al 10 % acuoso a la mezcla y esta se extrajo con Et2O. La capa organica se lavo con NaHCO3 acuoso saturado y despues con salmuera, se seco (MgSO4), se filtro y se concentro a sequedad. El residuo se purifico mediante cromatografia SiO2 (columna ISCO, 330 g, que se eluyo con un gradiente de hexano al 100 % a EtOAc al 100 %) para obtener el producto Intermedio S-1B; (25,25 g, 85 %): RMN 1H (400 MHz, CDCl3) 5 ppm 7,32-7,39 (2 H, m), 7,30 (1 H, d, J = 7,05 Hz), 7,18-7,25 (2 H, m), 4,64-4,74 (1 H, m), 4,174,27 (2 H, m), 3,31 (1 H, dd, J = 13,35, 3,27 Hz), 3,00-3,11 (2 H, m), 2,79 (1 H, dd, J = 13,35, 9,57 Hz), 2,16-2,28 (2 H, m), 1,93-2,04 (2 H, m).
Intermedio S-1C: (3R)-3-(((4S)-4-bencil-2-oxo-1,3-oxazolidin-3-il)carbonil)-6,6,6-trifluorohexanoato de terc-butilo
O O
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O
Me
Me
O Me
(S-1C)
A una solucion agitada fria (-78 °C) del Intermedio S-1B (3,03 g, 9,61 mmol) en THF (20 ml), se le anadio NaHMDS (1,0 M en THF) (10,6 ml, 10,60 mmol) en una atmosfera de nitrogeno. Despues de 2 h, se anadio 2-bromoacetato de terc-butilo (5,62 g, 28,8 mmol) puro mediante una jeringa a -78 °C y se continuo agitando a la misma temperatura. Despues de 6 horas, la mezcla de reaccion se calento a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se dividio en NH4Cl saturado y EtOAc. La fase organica se separo y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (3 veces). Las fases organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presion reducida. El residuo se purifico mediante cromatografia ultrarrapida (Teledyne ISCO CombiFlash Rf, del 5 % al 100 % de disolvente A/B=hexanos/EtOAc, REDISEP® SiO2 120 g). La concentration de las fracciones adecuadas produjo el Intermedio S-1C (2,79 g, 67,6 %) en forma de un aceite viscoso incoloro: RMN 1H (400 MHz, CDCb) 5 ppm 7,34 (2 H, d, J = 7,30 Hz), 7,24-7,32 (3 H, m), 4,62-4,75 (1 H, m, J = 10,17, 6,89, 3,43, 3,43 Hz), 4,15-4,25 (3 H, m), 3,35 (1 H, dd, J = 13,60, 3,27 Hz), 2,84 (1 H, dd, J = 16,62, 9,57 Hz), 2,75 (1 H, dd, J = 13,35, 10,07 Hz), 2,47 (1 H, dd, J = 16,62, 4,78 Hz), 2,11-2,23 (2 H, m), 1,90-2,02 (1 H, m), 1,72-1,84 (1 H, m), 1,44 (9 H, s).
Intermedio S-1D: Acido (2R)-2-(2-terc-butoxi-2-oxoetil)-5,5,5-trifluoropentanoico
O
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(S-1 D)
A una solucion agitada fria (0 °C) del Intermedio S-1C (2,17 g, 5,05 mmol) en THF (50 ml) y agua (15 ml), se le anadio una solucion de LiOH (0,242 g, 10,11 mmol) y H2O2 (2,065 ml, 20,21 mmol) en H2O (2 ml). Despues de 10 min, la mezcla de reaccion se retiro del bano de hielo, se agito durante 1 h y despues se enfrio a 0 °C. Se anadieron NaHCO3 acuoso saturado (25 ml) y Na2SO3 acuoso saturado (25 ml) a la mezcla de reaccion y la mezcla se agito durante 10 min y despues se concentro parcialmente. La mezcla resultante se extrajo con DCM (2 veces),
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se enfrio con hielo y se acidifico con HCl concentrado a pH 3. La mezcla se saturo con NaCI solido, se extrajo con EtOAc (3 veces) y despues se seco sobre MgSO4, se filtro y se concentro hasta un aceite incoloro para obtener el Intermedio S-1D, 1,2514 g, 92 %): RMN 1H (400 MHz, CDCl3) 5 ppm 2,83-2,95 (1 H, m), 2,62-2,74 (1 H, m), 2,45 (1 H, dd, J = 16,62, 5,79 Hz), 2,15-2,27 (2 H, m), 1,88-2,00 (1 H, m), 1,75-1,88 (1 H, m), 1,45 (9 H, s).
Intermedio S-1: Acido (2R,3S)-3-(ferc-butoxicarbonil)-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoico e Intermedio S- 1E: Acido (2R,3R)-3-(fen>butoxicarbonil)-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoico
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(S-1 E)
A una solucion agitada fria (-78 °C) del Intermedio S-1D (5 g, 18,50 mmol) en THF (60 ml), se le anadio lentamente LDA (22,2 ml, 44,4 mmol, 2,0 M) durante 7 min. Despues de agitar durante 2 h, se anadio el Intermedio S-1A (6,38 g, 25,9 mmol) a la mezcla de reaccion durante 3 min. Despues de 60 min, la mezcla de reaccion se calento a - 25 °C (hielo/MeOH/hielo seco) y se agito durante 60 min adicionales, en cuyo momento se anadio NH4Cl acuoso saturado. La fase acuosa separada se acidifico con HCl 1 N a pH 3 y despues se extrajo con Et2O. Las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera (2 veces), se secaron sobre MgSO4, se filtraron se concentraron para obtener una mezcla 1:4 (I1:I1E) (determinada mediante RMN 1H) del Intermedio S-1 y del Intermedio S-1E (6,00 g, 89 %) en forma de un solido de color amarillo palido. RMN 1H (500 MHz, CDCb) 5 ppm 2,81 (1 H, ddd, J = 10,17, 6,32, 3,85 Hz), 2,63-2,76 (1 H, m), 2,02-2,33 (4 H, m), 1,86-1,99 (2 H, m), 1,68-1,85 (2 H, m), 1,47 (9 H, s).
A una solucion agitada fria (-78 °C) de una mezcla del Intermedio S-1 y del Intermedio S-1E (5,97 g, 16,30 mmol) en THF (91 ml), se le anadio gota a gota LDA (19 ml, 38,0 mmol, 2,0 M en THF/hexano/etilbenceno) mediante una jeringa durante 10 min (la temperatura interna nunca supero los -65 °C, sonda J-KEM® en solucion de reaccion). La mezcla se agito durante 15 min, despues se calento a temperatura ambiente (bano de agua a 24 °C), se agito durante 15 min y se enfrio a -78 °C durante 15 min. A la mezcla de reaccion, se le anadio Et2AlCl (41 ml, 41,0 mmol, 1 M en hexano) mediante una jeringa (la temperatura interna nunca supero los 55 °C), la mezcla se agito durante 10 min, despues se calento a temperatura ambiente (bano a 24 °C) durante 15 min y despues nuevamente a -78 °C durante 15 min. Mientras tanto, un matraz de fondo redondo de 1000 ml se cargo con MeOH (145 ml) y se enfrio previamente a -78 °C. La mezcla de reaccion se transfirio con agitacion vigorosa a traves de una canula durante 5 min a MeOH. El matraz se retiro del bano, se anadio hielo y despues se anadio lentamente HCl 1 N (147 ml, 147 mmol). Se observo desprendimiento de gas a medida que se anadia HCl. La mezcla de reaccion se calento a temperatura ambiente, durante lo cual el desprendimiento de gas disminuyo. La mezcla de reaccion se diluyo con EtOAc (750 ml), se saturo con NaCl y la fase organica se separo, se lavo con una solucion de fluoruro de potasio (8,52 g, 147 mmol) y HCl 1 N (41 ml, 41,0 mmol) en agua (291 ml) y salmuera (100 ml), despues se seco (Na2SO4), se filtro y se concentro al vacio. El analisis por RMN 1H mostro que el producto era una mezcla 9:1 del Intermedio S- 1 y del Intermedio S-1E. La mezcla enriquecida del Intermedio S-1 y del Intermedio S-1E (6,12 g, >99 % de rendimiento) se obtuvo en forma de un solido de color ambar oscuro: RMN 1H (400 MHz, CDCb) 5 ppm 2,64-2,76 (2 H, m), 2,04-2,35 (4 H, m), 1,88-2,00 (2 H, m), 1,71-1,83 (2 H, m), 1,48 (9 H, s).
Procedimiento alternativo para obtener el Intermedio S-1:
Intermedio S-1F: 4-terc-butil 2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinato de (2R,3S)-1-bencilo
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(S-1 F)
A una solucion agitada de una mezcla 9:1 enriquecida del Intermedio S-1 y el Intermedio S-1E (5,98 g, 16,33 mmol) en DMF (63 ml), se le anadieron carbonato de potasio (4,06 g, 29,4 mmol) y bromuro de bencilo (2,9 ml, 24,38 mmol); despues la mezcla se agito durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se diluyo con EtOAc (1000 ml), se lavo con LiCl al 10 % (200 ml, 3 veces) y salmuera (200 ml), se seco (Na2SO4), se filtro, se
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concentro y despues se seco al vado. El residuo se purifico mediante cromatografia con SiO2 usando un gradiente de tolueno:hexano. El Intermedio S-1F purificado en forma diastereomerica (4,81g, 65 %) se obtuvo en forma de un solido incoloro: RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 5 7,32-7,43 (m, 5H), 5,19 (d, J = 12,10 Hz, 1H), 5,15 (d, J = 12,10 Hz, 1H), 2,71 (dt, J = 3,52, 9,20 Hz, 1H), 2,61 (dt, J = 3,63, 9,63 Hz, 1H), 1,96-2,21 (m, 4H), 1,69-1,96 (m, 3H), 1,56-1,67 (m, 1H), 1,45 (s, 9H).
Intermedio S-1: Acido (2R,3S)-3-(terc-butoxicarbonil)-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoico
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(S-1)
A una solucion del Intermedio S-1F (4,81 g, 10,54 mmol) en MeOH (100 ml), se le anadio paladio sobre carbono al 10 % (humedo, tipo Degussa, 568,0 mg, 0,534 mmol) en un matraz de presion de H2. El recipiente se purgo con N2 (4 veces), despues con H2 (2 veces), finalmente se presurizo a 50 psi (344,738 kPa) y se agito durante la noche. El recipiente de reaccion se despresurizo y se purgo con nitrogeno. La mezcla se filtro a traves de CELITE®, se lavo con MeOH, despues se concentro y se seco al vado. El Intermedio S-1 (3,81 g, 99 % de rendimiento) se obtuvo en forma de un solido incoloro: RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 5 2,62-2,79 (m, 2H), 2,02-2,40 (m, 4H), 1,87-2,00 (m, 2H), 1,67-1,84 (m, 2H), 1,48 (s, 9H).
Procedimiento alternativo para obtener el Intermedio S-1:
Intermedio S-1: Acido (2R,3S)-3-(terc-butoxicarbonil)-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoico
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(S-1)
El Intermedio S-1, como una mezcla con el Intermedio S-1E, se preparo mediante un procedimiento similar al anterior del Intermedio S-1D para obtener una mezcla 1:2,2 del Intermedio S-1 y del Intermedio S-1E (8,60 g, 23,48 mmol), que se enriquecio usando LDA (solucion 2,0 M en THF, etilbenceno y heptano, 28,2 ml, 56,4 mmol) y cloruro de dietilaluminio (solucion 1,0 M en hexano, 59 ml, 59,0 mmol) en THF (91 ml). Despues de la preparacion como se describio anteriormente, el residuo resultante se obtuvo como una mezcla 13,2:1 (mediante RMN 1H) del Intermedio S-1 y del Intermedio S-1E, que se trato de la siguiente manera: El material en bruto se disolvio en MTBE (43 ml). Se cargaron lentamente hexanos (26 ml) a la mezcla de reaccion mientras la temperatura se mantenia por debajo de 30 °C. La mezcla de reaccion se agito durante 10 min. Despues, se anadio terc-butilamina (2,7 ml, 1,1 eq.) lentamente durante un periodo de 20 minutos mientras la temperatura se mantenia por debajo de 30 °C. Se observo que esta adicion era exotermica. La mezcla de reaccion se agito durante 2 h por debajo de 30 °C y despues se filtro. El material solido se lavo con MTBE:hexano 5:3 (80 ml) y el filtrado se concentro y se aparto. El solido filtrado se disolvio en diclorometano (300 ml), se lavo con HCl 1 N (100 ml) y la capa organica se lavo con salmuera (100 ml, 2 veces) y despues se concentro a presion reducida por debajo de 45 °C para obtener el Intermedio S-1 (5,46 g, 64 %).
Segundo procedimiento alternativo para preparar el Intermedio S-1:
Intermedio S-1G: 5,5,5-trifluoropentanoato de terc-butilo
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(S-1G)t
A una solucion agitada de acido 5,5,5-trifluoropentanoico (5 g, 32,0 mmol) en THF (30 ml) y hexano (30 ml) a 0 °C, se le anadio 2,2,2-tricloroacetimidato de terc-butilo (11,46 ml, 64,1 mmol). La mezcla se agito durante 15 min a 0 °C.
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Se anadio trifluoruro de boro eterato (0,406 ml, 3,20 mmol) y la mezcla de reaccion se calento a temperatura ambiente durante la noche. A la mezcla de reaccion transparente, se anadio NaHCO3 solido (5 g) y se agito durante 30 min. La mezcla se filtro a traves de mgSO4 y se lavo con hexanos (200 ml). La solucion se dejo en reposo durante 45 min y el material solido resultante se retiro filtrandolo en el mismo filtro de MgSO4 nuevamente, se lavo con hexanos (100 ml) y se concentro a presion reducida sin calentamiento. El volumen se redujo a aproximadamente 30 ml, se filtro a traves de un embudo fritado limpio, se lavo con hexano (5 ml) y despues se concentro a presion reducida sin calentamiento. El aceite puro resultante se filtro a traves de un disco de filtro de membrana de nailon de 0,45 |jm para obtener el Intermedio S-1G (6,6 g, 31,4 mmol 98 % de rendimiento) en forma de un aceite incoloro: RMN 1H (400 MHz, CDCb) 5 ppm 1,38 (s, 9 H) 1,74-1,83 (m, 2 H) 2,00-2,13 (m, 2 H) 2,24 (t, J = 7,28 Hz, 2 H).
Intermedio S-1H: (4S)-4-(propan-2-il)-3-(5,5,5-trifluoropentanoil)-1,3-oxazolidin-2-ona
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H3C (S-1H)
A una solucion agitada de acido 5,5,5-trifluoropentanoico (5,04 g, 32,3 mmol) en DCM (50 ml) y DMF (3 gotas), se le anadio cloruro de oxalilo (3,4 ml, 38,8 mmol) gota a gota durante 5 min. La solucion se agito hasta que disminuyo el burbujeo. La mezcla de reaccion se concentro a presion reducida para obtener un aceite de color amarillo palido. A otro matraz cargado con una solucion de (4S)-4-(propan-2-il)-1,3-oxazolidin-2-ona (4,18 g, 32,4 mmol) en THF (100 ml) a -78 °C, se le anadio gota a gota n-BuLi (2,5 M en hexano) (13,0 ml, 32,5 mmol) mediante una jeringa durante 5 min. Despues de agitar durante 10 min, se anadio el cloruro de acido anterior disuelto en THF (20 ml) mediante una canula durante 15 min. La mezcla de reaccion se calento a 0 °C y despues a temperatura ambiente, mientras el bano se calentaba y se agito durante la noche. A la mezcla de reaccion, se le anadio NH4Cl saturado y la mezcla se extrajo con EtOAc (2 veces). Las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presion reducida. El material en bruto se purifico mediante cromatografia ultrarrapida (Teledyne ISCO CombiFlash Rf, del 5 % al 60 % de disolvente A/B = hexanos/EtOAc, REDISEP® SiO2 de 120 g). La concentration de las fracciones adecuadas produjo el Intermedio S-1H (7,39 g, 86 %) en forma de un aceite incoloro: RMN 1H (400 MHz, CDCb) 5 ppm 4,44 (1 H, dt, J = 8,31, 3,53 Hz), 4,30 (1 H, t, J = 8,69 Hz), 4,23 (1
H, dd, J = 9,06, 3,02 Hz), 2,98-3,08 (2 H, m), 2,32-2,44 (1 H, m, J = 13,91, 7,02, 7,02, 4,03 Hz), 2,13-2,25 (2 H, m),
I, 88-2,00 (2 H, m), 0,93 (3 H, d, J = 7,05 Hz), 0,88 (3 H, d, J = 6,80 Hz).
Intermedio S-11: 6,6,6-trifluoro-3-((S)-4-isopropil-2-oxooxazolidin-3-carbonil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoato de (2S,3R)-terc-butilo e Intermedio S-1J: 6,6,6-trifluoro-3-((S)-4-isopropil-2-oxooxazolidin-3-carbonil)-2-(3,3,3-
trifluoropropil)hexanoato de (2R,3R)-terc-butilo
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(S-1J)
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A una solucion agitada fria (-78 °C) de diisopropilamina (5,3 ml, 37,2 mmol) en THF (59 ml) en una atmosfera de nitrogeno, se le anadio n-BuLi (2,5 M en hexano) (14,7 ml, 36,8 mmol). La mezcla despues se calento a 0 °C para obtener una solucion 0,5 M de LDA. Otro recipiente se cargo con el Intermedio S-1H (2,45 g, 9,17 mmol). El material se destilo azeotropicamente dos veces con benceno (la entrada de aire del RotoVap se equipo con una entrada de nitrogeno para excluir la humedad por completo) y despues se anadio tolueno (15,3 ml). Esta solucion se anadio a un matraz que contenia cloruro de litio seco (1,96 g, 46,2 mmol). A la mezcla se resultante, enfriada a -78 °C, se le anadio la solucion de LDA (21,0 ml, 10,5 mmol) y la mezcla se agito a -78 °C durante 10 min, se calento a 0 °C durante 10 min y despues se enfrio a -78 °C. A otro recipiente de reaccion que contenia el Intermedio S-1G (3,41 g, 16,07 mmol), que tambien se destilo azeotropicamente dos veces con benceno, se le anadio tolueno (15,3 ml), se enfrio a -78 °C y se anadio LDA (37,0 ml, 18,5 mmol). La solucion resultante se agito a -78 °C durante 25 min. En ese momento, el enolato derivado del ester se transfirio mediante una canula a la solucion de enolato de oxazolidinona y se agito a -78 °C durante 5 min mas, en cuyo momento se retiro el tapon; se anadio rapidamente bis(2-etilhexanoiloxi)cobre en polvo solido (9,02 g, 25,8 mmol) al recipiente de reaccion y se reemplazo el septo. El recipiente se retiro de inmediato del bano frio y se sumergio en un bano de agua caliente (40 °C) con agitation rapida; simultaneamente, el color cambio del color turquesa inicial al color marron. La mezcla de reaccion se agito
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durante 20 min, despues se vertio en NH4OH acuoso al 5 % (360 ml) y se extrajo con EtOAc (2 veces). Las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presion reducida. El residuo se purifico mediante cromatografia ultrarrapida (Teledyne ISCO CombiFlash Rf, del 0 % al 60 % de disolvente A/B=hexanos/EtOAc, REDISEP® SiO2 120 g). La concentracion de las fracciones adecuadas produjo una mezcla del Intermedio S-1I y del Intermedio S-1J (2,87 g, 66 %) en forma de un aceite viscoso de color amarillo palido. El analisis por RMN 1H mostro que el producto era una mezcla 1,6:1 de diastereomeros S-1I:S-1J, segun se determino mediante la integracion de los multipletes a 2,74 y 2,84 ppm: RMN 1H (400 MHz, CDCb) 5 ppm 4,43-4,54 (2 H, m), 4,23-4,35 (5 H, m), 4,01 (1 H, ddd, J = 9,54, 6,27, 3,51 Hz), 2,84 (1 H, ddd, J = 9,41, 7,28, 3,64 Hz), 2,74 (1 H, ddd, J = 10,29, 6,27, 4,02 Hz), 2,37-2,48 (2 H, m, J = 10,38, 6,98, 6,98, 3,51, 3,51 Hz), 2,20-2,37 (3 H, m), 1,922,20 (8 H, m), 1,64-1,91 (5 H, m), 1,47 (18 H, s), 0,88-0,98 (12 H, m).
Intermedio S-1: Acido (2R,3S)-3-(ferc-butoxicarbonil)-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoico e Intermedio S- 1E: Acido (2R,3R)-3-(ferc-butoxicarbonil)-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoico
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(S-1 E)
A una solucion agitada fria (0 °C) del Intermedio S-1I y del Intermedio S-1J (4,54 g, 9,51 mmol) en THF (140 ml) y agua (42 ml), se le anadieron secuencialmente peroxido de hidrogeno (al 30 % en agua) (10,3 g, 91 mmol) y LiOH (685,3 mg, 28,6 mmol). La mezcla se agito durante 1 h. En ese momento, el recipiente de reaccion se retiro del bano frio y despues se agito durante 1,5 h. A la mezcla de reaccion, se le anadieron NaHCO3 saturado (45 ml) y Na2SO3 saturado (15 ml) y despues la mezcla se concentro parcialmente a presion reducida. La solucion en bruto resultante se extrajo con DCm (3 veces). La fase acuosa se acidifico a pH~1-2 con HCl 1 N y se extrajo con DCM (3 veces) y despues con EtOAc (1 vez). Las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presion reducida para obtener una mezcla de los Intermedios S-1 y S-1E (3,00 g, 86 %) en forma de un aceite incoloro: RMN 1H (400 MHz, CDCb) 5 ppm 2,76-2,84 (1 H, m, diastereomero 2), 2,64-2,76 (3 H, m), 2,04-2,35 (8 H, m), 1,88-2,00 (4 H, m), 1,71-1,83 (4 H, m), 1,48 (9 H, s, diastereomero 1), 1,46 (9 H, s, diastereomero 2); el analisis por RMN 1H mostro una mezcla 1,7:1 de S-1E:S-1F mediante la integracion de los picos de los grupos t-butilo.
Intermedio S-1: Acido (2R,3S)-3-(ferc-butoxicarbonil)-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoico e Intermedio S- 1F: Acido (2R,3R)-3-(ferc-butoxicarbonil)-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoico
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(S-1 E)
A una solucion agitada fria (-78 °C) de diisopropilamina (1,7 ml, 11,93 mmol) en THF (19 ml) en una atmosfera de nitrogeno, se le anadio n-BuLi (2,5 M en hexanos) (4,8 ml, 12,00 mmol). La mezcla se agito durante 5 min y despues se calento a 0 °C. En un recipiente separado, a una solucion agitada fria (-78 °C) de la mezcla de los Intermedios S- 1 y S-1E (1,99 g, 5,43 mmol) en THF (18 ml), se le anadio lentamente la solucion de LDA preparada con anterioridad a traves de una canula durante 25 min. La mezcla se agito durante 15 min, despues se calento a temperatura ambiente (se coloco en un bano de agua a 24 °C) durante 15 min y despues se volvio a enfriar a -78 °C durante 15 min. A la mezcla de reaccion, se le anadio Et2AlCl (1 M en hexano) (11,4 ml, 11,40 mmol) con una jeringa. La mezcla se agito durante 10 min, se calento a temperatura ambiente durante 15 min y despues se volvio a enfriar a - 78 °C durante 15 min. Se anadio metanol (25 ml) rapidamente, se agito vigorosamente mientras se calentaba a temperatura ambiente y despues se concentro a ~1/4 del volumen original. La mezcla se disolvio en EtOAc y se lavo con HCl 1 N (50 ml) y hielo (75 g). La fase acuosa se separo y se extrajo con EtOAc (2 veces). Las capas organicas combinadas se lavaron con una mezcla de KF (2,85 g en 75 ml de agua) y HCl 1 N (13 ml) [solucion resultante a pH 3-4] y despues con salmuera, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presion reducida para obtener una mezcla diastereomerica enriquecida 9:1 (S-1:S-1E) (segun se determino mediante RMN 1H) del Intermedio S-1 y del Intermedio S-1E (2,13 g, >99 %) en forma de un aceite viscoso de color amarillo palido: RMN 1H (400 MHz,
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CDCI3) 5 ppm 2,64-2,76 (2 H, m), 2,04-2,35 (4 H, m), 1,88-2,00 (2 H, m), 1,71-1,83 (2 H, m), 1,48 (9 H, s). Intermedio S-2: Acido (2R,3S)-3-(ferc-butoxicarbonil)-6,6,6-trifluoro-2-(3-fluoropropil)hexanoico
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(S-2)
Intermedio S-2: Acido (2R,3S)-3-(ferc-butoxicarbonil)-7,7,7-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)heptanoico e Intermedio S- 2A: Acido (2R,3R)-3-(ferc-butoxicarbonil)-7,7,7-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)heptanoico
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CF3 (S-2) CF3 (S-2A)
A una solucion agitada fria (-78 °C) del Intermedio S-1D (1,72 g, 6,36 mmol) en THF (30 ml), se le anadio lentamente LDA (7,32 ml, 14,6 mmol) durante 7 min. Despues de agitar durante 1 h, se anadio 4,4,4- trifluorobutiltrifluorometanosulfonato (2,11 g, 8,11 mmol) a la mezcla de reaccion durante 2 min. Despues de 15 min, la mezcla de reaccion se calento a -25 °C (hielo/MeOH/hielo seco) durante 1 h y despues se enfrio a -78 °C. Despues de 80 min, la reaccion se inactivo con una solucion acuosa saturada de NH4Cl (10 ml). La mezcla de reaccion se volvio a diluir con salmuera y la solucion se ajusto a pH 3 con HCl 1 N. La capa acuosa se extrajo con eter. Las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentraron a presion reducida para obtener una mezcla de los Intermedios S-2 y S-2A (2,29 g, 95 %) en forma de un aceite incoloro. RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 5 2,83-2,75 (m, 1H), 2,64 (ddd, J = 9,9, 6,7, 3,6 Hz, 1H), 2,322,03 (m, 5H), 1,98-1,70 (m, 3H), 1,69-1,52 (m, 3H), 1,50-1,42 (m, 9H). El analisis por RMN 1H mostro una mezcla 1:4,5 (S-2:S-2A) de diastereomeros mediante la integration de los picos de los grupos t-Bu.
Intermedio S-2: Acido (2R,3S)-3-(ferc-butoxicarbonil)-7,7,7-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)heptanoico e Intermedio S- 2A: Acido (2R,3R)-3-(ferc-butoxicarbonil)-7,7,7-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)heptanoico
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Me
(S-2A)
Una mezcla del Intermedio S-2 y del Intermedio S-2A (2,29 g, 6,02 mmol) se disolvio en THF (38 ml) para obtener una solucion incolora que se enfrio a -78 °C. Despues, se anadio lentamente LDA (7,23 ml, 14,5 mmol) (2,0 M en heptano/THF/etilbenceno) a la mezcla de reaccion durante 3 min. Despues de agitar durante 15 min, la mezcla de reaccion se coloco en un bano de agua a temperatura ambiente. Despues de 15 min, la mezcla de reaccion se volvio a colocar en un bano a -78 °C y despues se anadio lentamente cloruro de dietilaluminio (14,5 ml, 14,5 mmol) (1 M en hexano) durante 5 min. La mezcla de reaccion se agito a -78 °C. Despues de 15 min, la mezcla de reaccion se coloco en un bano de agua a temperatura ambiente durante 10 min y despues se volvio a enfriar a -78 °C. Despues de 15 min, la reaccion se inactivo con MeOH (30,0 ml, 741 mmol), se retiro del bano a -78 °C y se concentro. A la mezcla de reaccion, se le anadio hielo y HCl (60,8 ml, 60,8 mmol) y la mezcla resultante se extrajo con EtOAc (200 ml, 2 veces). La capa organica se lavo con fluoruro de potasio (3,50 g, 60,3 mmol) en 55 ml de H2O y 17,0 ml de HCl 1 N. Las capas organicas se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentraron a presion
reducida para obtener una mezcla enriquecida del Intermedio S-2 y del Intermedio S-2A (2,25 g, 98 % de rendimiento) en forma de un aceite de color amarillo claro. RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 5 2,83-2,75 (m, 1H), 2,64 (ddd, J = 9,9, 6,7, 3,6 Hz, 1H), 2,32-2,03 (m, 5H), 1,98-1,70 (m, 3H), 1,69-1,52 (m, 3H), 1,50-1,42 (m, 9H). El analisis por RMN 1H mostro una relacion 9:1 a favor del diastereomero deseado Intermedio S-2.
5
Intermedio S-2B: (2R,3S)-1-bencil 4-ferc-butil 2,3-bis(4,4,4-trifluorobutil)succinato
/CF 3
O
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O'
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O
CH
3
O
CH
3
CH
3
CF
3
(S-2B)
10 A una mezcla 9:1 de Intermedio S-2, Intermedio S-2A (2,24 g, 5,89 mmol) y carbonato de potasio (1,60 g, 11,58 mmol) en DMF (30 ml) se anadio bromuro de bencilo (1,20 ml, 10,1 mmol). La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 19 h. La mezcla de reaccion se diluyo con acetato de etilo (400 ml) y se lavo con una solucion de LiCl al 10 % (3 x 100 ml) y salmuera (50 ml), despues se seco en sulfato de magnesio anhidro, se filtro y se concentro a sequedad al vacio. El residuo se purifico mediante cromatografia ultrarrapida (Teledyne ISCO 15 CombiFlash de 0 % a 100 % disolvente A/B = hexano/EtOAc, REDISEP® SiO2 de 220 g, que se detecto a 254 nm y se controlo a 220 nm). La concentracion de las fracciones adecuadas produjo el Intermedio S-2B (1,59 g, 57,5 %). HPLC: TR = 3,863 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD de 4,6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos que contenia TFA al 0,1 %, 4 ml/min, que se controlo a 220 nm), RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 5 7,407,34 (m, 5H), 5,17 (d, J = 1,8 Hz, 2H), 2,73-2,64 (m, 1H), 2,55 (td, J = 10,0, 3,9 Hz, 1H), 2,16-1,82 (m, 5H), 1,79-1,57 20 (m, 3H), 1,53-1,49 (m, 1H), 1,45 (s, 9H), 1,37-1,24 (m, 1H).
Intermedio S-2: Acido (2R,3S)-3-(terc-butoxicarbonil)-6,6,6-trifluoro-2-(4,4,4-trifluorobutil)hexanoico
CF
3
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O
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(S-2)
A una solucion agitada del Intermedio S-2B (1,59 g, 3,37 mmol) en MeOH (10 ml) y EtOAc (10 ml) en nitrogeno, se le anadio Pd/C al 10 % (510 mg). La atmosfera se reemplazo con hidrogeno y la mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 2,5 h. El catalizador de paladio se filtro a traves de una pelicula de policarbonato de 4 |jM y se aclaro con MeOH. El filtrado se concentro a presion reducida para obtener el Intermedio S-2 (1,28 g, 99 %). RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 5 2,76-2,67 (m, 1H), 2,65-2,56 (m, 1H), 2,33-2,21 (m, 1H), 2,17-2,08 (m, 3H), 1,93 (dtd, J = 14,5, 9,9, 5,2 Hz, 1H), 1,84-1,74 (m, 2H), 1,70-1,52 (m, 3h), 1,48 (s, 9h).
Intermedio A-1: (2-amino-3-metilfenil)(3-fluorofenil)metanona
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(A-1)
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Intermedio A-1A: 2-amino-N-metoxi-N,3-dimetilbenzamida
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En un matraz de fondo redondo de 1 l, se anadieron acido 2-amino-3-metilbenzoico (11,2 g, 74,1 mmol) y clorhidrato de N,O-dimetilhidroxilamina (14,45 g, 148 mmol) en DCM (500 ml) para obtener una suspension de color marron palido. La mezcla de reaccion se trato con Et3N (35 ml), hObT (11,35 g, 74,1 mmol) y EDC (14,20 g, 74,1 mmol) y despues se agito a temperatura ambiente durante 24 horas. La mezcla se lavo con LiCl al 10 % y despues se acidifico con HCl 1 N. La capa organica se lavo sucesivamente con LiCl al 10 % y NaHCO3 acuoso. La capa organica se decoloro con carbon, se filtro y el filtrado se seco sobre MgSO4. La mezcla se filtro y se concentro para obtener 13,22 g (92 % de rendimiento) del Intermedio A-1A. EM(EN): m/z = 195,1 [M+H+]; HPLC: TR = 1,118 min. (H2O/MeOH con TFA, CHROMOLITH® ODS S5 4,6 x 50 mm, gradiente = 4 min, longitud de onda = 220 nm); RMN 1H (500 MHz, cloroformo-d) 5 7,22 (dd, J = 7,8, 0,8 Hz, 1H), 7,12-7,06 (m, 1H), 6,63 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 4,63 (s. a., 2H), 3,61 (s, 3H), 3,34 (s, 3H), 2,17 (s, 3H).
Intermedio A-1: (2-amino-3-metilfenil)(3-fluorofenil)metanona
F
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En un matraz de fondo redondo de 500 ml, se enfrio una solucion de 1-fluoro-3-yodobenceno (13,61 ml, 116 mmol) en THF (120 ml) en un bano a -78 °C. Se anadio gota a gota una solucion de n-BuLi, (2,5 M en hexano, 46,3 ml, 116 mmol) durante 10 minutos. La solucion se agito a -78 °C durante 30 minutos y despues se trato con una solucion del Intermedio A-1A (6,43 g, 33,1 mmol) en THF (30 ml). Despues de 1,5 h, la mezcla de reaccion se anadio a una mezcla de hielo y HCl 1 N (149 ml, 149 mmol) y el matraz de reaccion se aclaro con THF (5 ml) y se combino con la mezcla acuosa. La mezcla resultante se diluyo con LiCl acuoso al 10 % y el pH se ajusto a 4 con NaOH 1 N. Despues la mezcla se extrajo con Et2O, se lavo con salmuera, se seco sobre MgSO4, se filtro y se concentro. El residuo resultante se purifico mediante cromatografia en gel de silice (220 g de ISCO) que se eluyo con un gradiente de EtOAc al 10 %/hexano a EtOAc al 30 %/hexano para obtener el Intermedio A-1 (7,11 g, 94 % de rendimiento) en forma de un aceite. EM(EN): m/z = 230,1 [M+H+]; HPLC: TR = 2,820 min Pureza = 99 %. (H2O/MeOH con TFA, CHROMOLITH® ODS S5 4,6 x 50 mm, gradiente = 4 min, longitud de onda = 220 nm).
Los compuestos que se enumeran a continuacion en la Tabla 1 (Intermedios A-2 a A-9) se prepararon de acuerdo con el procedimiento de sintesis general descrito para el Intermedio A-1, usando el reactivo de anilina y organometalico adecuado.
Tabla 1
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A-9
CM O (2-amino-3-metilfenil) (fenil)metanona 0,981 212
O
1 H2O/CH3CN con TFA, BEH C18 1,75 pm, 2,1 x 50 mm, gradiente = 2 min, longitud de onda = 220 nm.
2 H2O/MeOH con TFA al 0,1 %, Luna C18 3 pm, 4,6 x 30 mm, gradiente = 3,5 min, longitud de onda = 220.
3 MeOH/H2O/TFA al 0,1 %, Waters Sunfire C18 3,5 p, 2,1 x 30 mm, 1 ml/min, 4 min de gradiente, longitud de onda = 254 nm.
4 H2O/CH3CN con TFA al 0,05 %, BEH C18 1,7 pm, 2,1 x 50 mm, gradiente (2 %-98 %) = 1 min, longitud de onda = 220.
5 H2O/MeOH con TFA al 0,1 %, PHENOMENEX® 2,5 pm, 2,0 x 30 mm, gradiente = 2 min, longitud de onda = 220.
Intermedio A-10: (2-amino-3-isopropilfenil)(3-clorofenil)metanona
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Se anadio gota a gota 2-isopropilanilina (3 ml, 21,19 mmol) a una solucion de tricloroborano (1 M en diclorometano) (23,31 ml, 23,31 mmol) y dicloroetano (50 ml) a 0 °C y la mezcla se agito durante 10 min. Despues, se anadieron 3- clorobenzonitrilo (5,83 g, 42,4 mmol) y tricloruro de aluminio (3,11 g, 23,31 mmol) y la mezcla se agito a 0 °C durante 25 minutos. Se retiro el bano de hielo y la mezcla se calento a 75 °C durante la noche. Despues la mezcla se enfrio a temperatura ambiente. Despues, se le anadio HCl 6 N (60 ml, 10 eq.) y la mezcla se calento a 75 °C. Despues de 4 h, se le anadio HCl 12 N (10 ml) y el calentamiento continuo durante la noche a 75 °C. La mezcla se enfrio a temperatura ambiente, se transfirio a un matraz Erlenmeyer, se diluyo con acetato de etilo, se enfrio a 0 °C y se elevo cuidadosamente a pH 10 con NaOH acuoso al 50 %. La mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (4 veces). Los extractos de acetato de etilo se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se concentraron para obtener un aceite de color ambar transparente. El aceite se suspendio en una cantidad minima de heptano y se purifico en un sistema de cromatografia ISCO companion (cartucho de silice de 220 g, que se eluyo con 0-20 % acetato de etilo/heptano, 150 ml/min) para obtener el Intermedio A-10 (2,85 g, 10,41 mmol, 49,1 % de rendimiento). RT de HPLC = 3,876 min, de 10/90 a 90/10 (MeOH/H2O/TFA al 0,1 %, Waters Sunfire C18 3,5 pm, 2,1 x 30 mm, 1 ml/min, 4 min de gradiente, longitud de onda = 254 nm); EM(EN): m/z = 274 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 5 7,63 (t, J = 1,7 Hz, 1H), 7,55-7,48 (m, 2H), 7,44-7,29 (m, 3h), 6,65 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 6,43 (s. a., 2h), 3,11-2,87 (m, 1H), 1,34 (d, J = 6,8 Hz, 6H).
Los compuestos que se enumeran a continuacion en la Tabla 2 (Intermedios A-11 a A-14) se prepararon de acuerdo con el procedimiento de sintesis general descrito para el Intermedio A-10, usando la anilina y el nitrilo de arilo adecuados, obtenidos mediante los metodos conocidos por los expertos en la materia.
Tabla 2
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A-12
Et 1 .nh2 (lY Me (2-amino-3-etilfenil)(m-tolil) metanona 3,59 240
A-13
Me (2-amino-3-isopropilfenil)(m- tolil)metanona 3,68 254
A-14
Me^-Me 1 nh2 a (2-amino-3-isopropilfenil) (fenil)metanona 3,45 240
1 MeOH/H2O/TFA al 0,1 %, Waters Sunfire C18 3,5 p, 2,1 x 30 mm, 1 ml/min, 4 min de gradiente, longitud de onda = 254 nm.
Intermedio A-15: (2-amino-3-ciclopropoxifenil)(m-tolil)metanona
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(A-15)
Intermedio A-15A: Acido 3-hidroxi-2-nitrobenzoico
HO NO2
\=( O
^ //
OH (A-15 A)
A un matraz de 250 ml, se le anadieron acido 3-cloro-2-nitrobenzoico (10 g, 49,6 mmol) y una solution de hidroxido de potasio (40 g, 727 mmol) en agua (70 ml). La suspension espesa se calento a reflujo durante 12 horas. La solucion se enfrio en hielo y se llevo cuidadosamente a pH 3 con HCl concentrado. La mezcla acuosa se extrajo con EtOAc (3 veces). Las capas organicas se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron con sulfato de sodio y se concentraron al vacio. La mezcla de producto en bruto se disolvio en diclorometano y el precipitado de color amarillo resultante se filtro para obtener el Intermedio A-15A (6 g, 32,8 mmol, 66,0 % de rendimiento). HPLC: TR = 0,85 min (H2O/MeOH con TfA, Sunfire C18 3,5 pm, 2,1 x 30 mm, gradiente = 4 min, longitud de onda = 220 nm); EM(EN): m/z = 206 [M+Na]+; RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 5 7,56-7,35 (m, 1H), 7,23 (dd, J = 7,9, 1,5 Hz, 1H).
Intermedio A-15B: 3-hidroxi-2-nitrobenzoato de metilo
HO NO2
y=( o
^ //
OMe (A-15B)
A un matraz de 100 ml que contenia MeOH (60 ml) a 0 °C, se le anadio lentamente cloruro de tionilo (9,96 ml, 137 mmol). La solucion se agito a 0 °C durante 30 minutos y despues se anadio el Intermedio A-15A (10 g, 54,6 mmol). La solucion de reaction se calento a reflujo durante 6 h. La mezcla de reaction se concentro a
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sequedad para obtener un residuo de color amarillo brillante. La mezcla de producto en bruto se purifico mediante cromatografia en gel de silice (del 0 % al 100 % de EtOAC/heptano durante 15 minutos, columna de 80 g) para obtener el producto deseado (10,2 g, 95 % de rendimiento). HPlC: TR = 1,75 min (H2O/MeOH con TFA, Sunfire C18
3,5 |jm, 2,1 x 30 mm, gradiente = 4 min, longitud de onda = 220 nm); EM(EN): m/z = 220 [M+Na]+; RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 5 7,60 (dd, J = 8,5, 7,4 Hz, 1H), 7,33-7,22 (m, 5H), 7,10 (dd, J = 7,5, 1,3 Hz, 1H), 3,96 (s, 3H).
Intermedio A-15C: 2-nitro-3-(viniloxi)benzoato de metilo
O
OMe
(A-15C)
Una mezcla de acetato de cobre (II) (11,98 g, 65,9 mmol) y diclorometano (80 ml) se agito a temperatura ambiente durante 10 minutos, antes de la adicion de 2,4,6-trivinil-1,3,5,2,4,6-trioxatriborinano:piridina (1:1) (10,63 g, 44,2 mmol, 0,67 eq), el Intermedio A-15B (13 g, 65,9 mmol), piridina (26,7 ml, 330 mmol) y tamices moleculares (1 g). La mezcla resultante de color azul oscuro se agito a temperatura ambiente durante 5 dias y la mezcla de reaccion se dejo abierta al aire. La mezcla de reaccion se filtro a traves de un lecho de CELITE® y se lavo con diclorometano. El filtrado se lavo con acetato de amonio acuoso 3 M (2 veces), agua y salmuera, despues se seco y se concentro al vacio. La mezcla de producto en bruto se purifico mediante cromatografia en gel de silice (del 0 % al 20 % de EtOAC/DCM durante 15 minutos, columna de 120 g) para obtener el Intermedio A-15C (7,42 g, 33,2 mmol, 50,4 % de rendimiento). HPLC: TR = 2,487 min (H2O/MeOH con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 2,1 x 30 mm, gradiente = 4 min, longitud de onda = 220 nm); EM(EN): m/z = 246 [M+Na]+; RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 5 7,77 (dd, J = 7,8, 1,2 Hz, 1H), 7,55 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 7,38 (dd, J = 8,4, 1,3 Hz, 1H), 6,61 (dd, J = 13,6, 5,9 Hz, 1H), 4,95 (dd, J = 13,6, 2,4 Hz, 1H), 4,69 (dd, J = 5,9, 2,4 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 1,56 (s, 1H), 0,03 (s, 1H).
Intermedio A-15D: 3-ciclopropoxi-2-nitrobenzoato de metilo
no2 o
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v-7^ it OMe
(A-15D)
Una solucion de acido 2,2,2-tricloroacetico (16,30 g, 100 mmol) en diclorometano (100 ml) se anadio lentamente a traves de un embudo de adicion a una solucion de dietilcinc (hexanos 1 M, 100 ml, 100 mmol) a -10 °C en una atmosfera de nitrogeno. La mezcla de reaccion se agito durante 10 min, despues se anadio diyodometano (8 ml, 100 mmol) gota a gota a traves de una jeringa y la mezcla de reaccion se agito durante 10 min. Se anadio lentamente una solucion del Intermedio A-15C (7,42 g, 33,2 mmol) en diclorometano (20 ml) a traves de un embudo de adicion. La solucion se calento a temperatura ambiente durante la noche. Despues la mezcla de reaccion se enfrio a 0 °C y se inactivo con HCl 1 M. La mezcla de reaccion se transfirio a una ampolla de decantacion y la capa acuosa se extrajo con diclorometano (3 veces). Los extractos combinados se lavaron con bicarbonato de sodio saturado, agua y salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron. La mezcla de producto en bruto se purifico mediante cromatografia en gel de silice (0 % de EtOAC/heptano durante 15 minutos, columna de 220 g) para obtener el Intermedio A-15D (4,7 g, 19,81 mmol, 60,0 % de rendimiento). HPLC: TR = 2,66 min (H2O/MeOH con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 2,1 x 30 mm, gradiente = 4 min, longitud de onda = 220 nm); EM(EN): m/z = 260 [M+Na]+; RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 5 7,68-7,57 (m, 2H), 7,57-7,41 (m, 1H), 4,03-3,82 (m, 4H), 0,94-0,78 (m, 4H).
Intermedio A-15E: Acido 3-ciclopropoxi-2-nitrobenzoico
NO2 O
(A-15E)
Una solucion de Intermedio A-15D (4,7 g, 19,81 mmol) en THF (30 ml) y MeOH (30 ml) se trato con una solucion de hidroxido de litio (2,88 g, 120 mmol) en agua (15 ml, 833 mmol). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 2 horas. Los disolventes organicos se retiraron a presion reducida. La suspension acuosa resultante se diluyo con agua, se acidifico con HCl 1 M y se extrajo con acetato de etilo (3 veces). Los extractos se combinaron y se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron para obtener el Intermedio A- 15E (4,35 g, 19,8 mmol, 98 % de rendimiento). HPLC: TR = 2,186 min (H2O/MeOH con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 2,1
x 30 mm, gradiente = 4 min, longitud de onda = 220 nm); EM(EN): m/z = 246 [M+Na]+; RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 5 7,76 (dd, J = 7,7, 1,8 Hz, 1H), 7,68-7,46 (m, 2H), 4,02 (tt, J = 6,0, 2,9 Hz, 1H), 1,00-0,52 (m, 4H).
Intermedio A-15F: Acido 2-amino-3-ciclopropoxibenzoico 5
nh2 o
IT OH
(A-15F)
Una mezcla del Intermedio A-15E (420 mg, 1,882 mmol), cinc (1230 mg, 18,82 mmol) y cloruro de amonio (1007 mg, 18,82 mmol) en etanol (10 ml) y agua (5 ml) se agito a temperatura ambiente durante 5 minutos. La mezcla de 10 reaccion se concentro al vado y despues la mezcla de reaccion se diluyo con agua. La mezcla se acidifico levemente y despues se extrajo con DCM (2 veces). Las capas organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron para obtener el Intermedio A-15F en forma de un aceite de color castano. HPLC: TR = 1,96 min (H2O/MeOH con TFA, Sunfire C18 3,5 |jm, 2,1 x 30 mm, gradiente = 4 min, longitud de onda = 220 nm); EM(EN): m/z = 194,12 [M+H]+; RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) 5 7,67-7,43 (m, 1H), 7,23 (dd, J = 7,9, 1,1 Hz, 1h), 6,62 (s, 15 1H), 3,82 (s, 1H), 0,82-0,63 (m, 4H).
Intermedio A-15G: 8-ciclopropoxi-2-metil-4H-benzo[d][1,3]oxazin-4-ona
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(A-15G)
Una solucion del Intermedio A-15F (1 g, 5,18 mmol) y anhidrido acetico (4,88 ml, 51,8 mmol) se calento a 140 °C durante 1 hora. La mezcla de reaccion se enfrio y se concentro al vado y el residuo se diluyo con tolueno y se concentro para obtener el Intermedio A-15G. HPLC: TR = 1,22 min (H2O/MeOH con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 2,1 x 30 mm, gradiente = 4 min, longitud de onda = 220 nm); EM(EN): m/z = 218,12 [M+H]+; RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 5 7,82 (dd, J = 7,9, 1,3 Hz, 1H), 7,71 (dd, J = 8,1, 1,3 Hz, 1H), 7,55-7,37 (m, 1H), 4,02-3,75 (m, 1H), 2,52 (s, 3H), 1,08-0,74 (m, 4H).
Intermedio A-15H: N-(2-ciclopropoxi-6-(3-metilbenzoil)fenil)acetamida
Me
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O'
O
NH O
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Me
(A-15H)
Una solucion del Intermedio A-15G (1 g, 4,60 mmol) en eter (5 ml) y tolueno (10 ml) se enfrio a -10 °C (metanol/hielo). Se anadio gota a gota una solucion de bromuro de m-tolilmagnesio (5,06 ml, 5,06 mmol) durante 10 minutos. Una vez que se completo la adicion, el matraz se retiro del bano de hielo y se agito a temperatura ambiente 35 durante 1,5 h. Despues la solucion se enfrio a -10 °C y se anadieron 40 ml de HCl 1 N. La mezcla se diluyo con acetato de etilo (50 ml). La fase organica se lavo con NaOH 0,5 M y despues con agua y se concentro al vado. El residuo se uso en la siguiente reaccion en el estado en que se encontraba. HPLC: TR = 2,808 min (H2O/MeOH con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 2,1 x 30 mm, gradiente = 4 min, longitud de onda = 220 nm); EM(EN): m/z = 310,05 [M+H]+.
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Intermedio A-15: (2-amino-3-ciclopropoxifenil)(m-tolil)metanona
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(A-15)
Una solucion del Intermedio A-15H (495 mg, 1,6 mmol) en etanol (10 ml) y HCl 6 N (5 ml) se calento a 90 °C durante
4,5 horas. La mezcla de reaccion se concentro, despues se diluyo con 10 ml de agua y se extrajo con acetato de etilo (50 ml, 3 veces). Las fases organicas agrupadas se lavaron con hidroxido de sodio 1 N, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron al vacio. La mezcla de producto en bruto se purifico mediante cromatografia en gel de 5 silice (del 0 % al 100 % de EtOAC/heptano durante 10 minutos, columna de 12 g) para aislar el Intermedio A-15 (250 mg, 0,935 mmol, 58,4 % de rendimiento) en forma de un aceite de color amarillo. HPLC: TR = 3,58 min (H2O/MeOH con TFA, Sunfire C18 3,5 |jm, 2,1 x 30 mm, gradiente = 4 min, longitud de onda = 220 nm); EM(EN): m/z = 268,02 [M+H]+.
10 Los compuestos que se enumeran a continuacion en la Tabla 3 (Intermedios A-16 a A-17) se prepararon de acuerdo con el procedimiento de sintesis general descrito para el Intermedio A-15, usando el reactivo de anilina y organometalico adecuados, obtenidos mediante los metodos conocidos por los expertos en la materia.
Tabla 3
Intermedio
Estructura Nombre TR de HPLC (min)1 CL/EM [M+H]+
A-16
OMe JL .nh2 fV Cl (2-amino-3-m etoxifeni l)(3- clorofenil)metanona 2,15 262
A-17
OMe 1 NHo Cl (2-amino-3-m etoxifeni l)(4- clorofenil)metanona 2,14 262
15
1H2O/CH3CN con NH4OAc, PUROSPHER® STAR RP-18 3,5 jm, 4 x 55 mm, gradiente = 2 min, longitud de onda = 220 nm.
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Intermedio A-18: (2-amino-3-clorofenil)(m-tolil)metanona
Cl
nh2 o
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Me
(A-18)
Intermedio A-18A: (3-cloro-2-nitrofenil)(m-tolil)metanona
25
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(A-18A)
Una solucion de acido 3-cloro-2-nitrobenzoico (2,5 g, 12,40 mmol) en tetrahidrofurano (50 ml) se trato con cloruro de oxalilo (1,194 ml, 13,64 mmol) y despues con DMF (0,096 ml, 1,240 mmol). La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 2 h. Despues de enfriar a 0 °C, se anadio una solucion 1 M de bromuro de m- 30 tolilmagnesio (24,81 ml, 24,81 mmol). Despues de 1 h, se anadio otra porcion de bromuro de m-tolilmagnesio (24,81 ml, 24,81 mmol). Despues de 1 h, la mezcla de reaccion se dividio en acetato de etilo (200 ml) y HCl 1 N (150 ml). La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (100 ml, 2 veces). Las fases organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El material en bruto se purifico mediante cromatografia ultrarrapida (Teledyne ISCO CombiFlash Rf, del 0 % al 100 % de disolvente A/B = acetato de etilo/heptano,
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REDISEP® SiO2 de 120 g) para obtener el Intermedio A-18A (0,700 g, 21 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-ds) 5 8,04 (dd, J = 8,1, 1,1 Hz, 1H), 7,82 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 7,71 (dd, J = 7,7, 1,1 Hz, 1H), 7,66-7,54 (m, 3H), 7,52-7,46 (m, 1H), 2,40 (s, 3H).
Intermedio A-18:
Una mezcla del Intermedio A-18A (0,710 g, 2,58 mmol) en THF (7,5 ml), etanol (14,75 ml) y agua (3,7 ml) se trato con cloruro de amonio acuoso saturado (4 ml) y hierro en polvo (0,647 g, 11,59 mmol). Despues la mezcla se calento a 100 °C con agitacion. Despues 2 h, la mezcla de reaccion se filtro a traves de CELITe® y el filtrado se dividio en acetato de etilo (100 ml) y NaHCO3 acuoso saturado (75 ml). La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (50 ml, 1 vez). Las fases organicas combinadas se secaron con Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El material en bruto se purifico mediante cromatografia ultrarrapida (Teledyne ISCO CombiFlash Rf, del 0 % al 100 % de disolvente A/B = acetato de etilo/heptano, REDISEP® SiO2 de 24 g) para obtener el Intermedio A-18 (0,417 g, 66 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-ds) 5 7,56 (dd, J = 7,8, 1,4 Hz, 1H), 7,47-7,35 (m, 4H), 7,31 (dd, J = 8,0, 1,4 Hz, 1H), 7,01 (s, 2H), 6,61 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 2,39 (s, 3H).
Intermedio A-19: (2-amino-3-metoxifenil)(m-tolil)metanona
MeO
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Me
(A-19)
El Intermedio A-19 se preparo a partir del acido 3-metoxi-2-nitrobenzoico de acuerdo con el procedimiento de sintesis general descrito para el Intermedio A-18. TR de HPLC = 2,21 min (H2O/CH3CN con TfA, Sunfire C18
3,5 |jm, 2,1 x 30 mm, gradiente = 2 min, longitud de onda = 220 nm). [M+H+] = 246.
Intermedio A-20: (2-amino-3-clorofenil)(o-tolil)metanona
Cl
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(A-20)
Intermedio A-20A: 7-cloro-3-hidroxi-3-(o-tolil)indolin-2-ona
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En un matraz de fondo redondo de 100 ml, se enfrio una solucion de 7-cloroindolin-2,3-diona (1 g, 5,51 mmol) en THF (10 ml) en un bano de hielo/agua. Se anadio una solucion de bromuro de o-tolilmagnesio (2 M, 5,51 ml,
11,01 mmol) y la mezcla de reaccion se retiro del bano de enfriamiento y se calento a temperatura ambiente. Despues de 1 hora, la mezcla de reaccion se inactivo con NH4Cl acuoso saturado y se extrajo con EtOAc. La capa organica se seco sobre MgSO4, se filtro y se concentro para obtener el Intermedio A-20A. EM(EN): m/z = 272 [M-H-]; HPLC: TR = 2,478 min (H2O/MeOH con TFA, CHROmOlITH® ODS S5 4,6 x 50 mm, gradiente = 4 min, longitud de onda = 220 nm).
Intermedio A-20:
En un matraz de fondo redondo de 250 ml, se calento una solucion de ferrocianuro de potasio (5,28 g, 14,33 mmol), NaHCO3 (1,25g, 14,88 mmol) y NaOH (0,22 g, 5,51 mmol) en agua (45 ml) a 100 °C. Despues de 30 min, se anadio gota a gota una solucion del Intermedio A-20A (1,5 g, 5,51 mmol) en THF (2 ml) durante 5 min, la mezcla de reaccion se calento a 100 °C durante 17 horas y despues se enfrio a temperatura ambiente. La mezcla se diluyo con NaHCO3 acuoso saturado y se extrajo con EtOAc. La capa organica se trato con carbon activado, se seco sobre MgSO4, se seco y se concentro para obtener el Intermedio A-20 (1,208 g, 89 %). EM(EN): m/z = 246 [M+H+]; HPLC: TR = 3,208 min (H2O/MeOH con TFA, CHROMOLITH® ODS S5 4,6 x 50 mm, gradiente = 4 min, longitud de onda = 220 nm). RMN 1H (500 MHz, DMSO-ds) 5 7,55 (dd, J = 7,6, 1,5 Hz, 1H), 7,48-7,37 (m, 3H), 7,33 (d, J = 7,5 Hz, 1H),
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7,29 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 7,22 (dd, J = 7,6, 1,2 Hz, 1H), 7,05 (dd, J = 8,2, 1,5 Hz, 1H), 6,54 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 2,16 (s, 3H).
Los compuestos que se enumeran a continuacion en la Tabla 4 (Intermedios A-21 a A-22) se prepararon de acuerdo con el procedimiento de sintesis general descrito para el Intermedio A-20, usando el reactivo de isatina y organometalico adecuado.
Tabla 4
Intermedio
Estructura Nombre TR de HPLC (min) CL/EM [M+H1+
A-21
Cl 1 NHo CL (2-amino-3-clorofenil)(3- ciclopropilfenil)metanona 3,691 272
A-22
Br JL NH2 C) (2-amino-3-bromofenil)(fenil)metanona 1,892 330
1 MeOH/H2O/TFA al 0,1 %, Waters Sunfire C18 3,5 |jm, 2,1 x 30 mm, 1 ml/min, 4 min de gradiente, longitud de onda = 254 nm). 2 H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 gm, 2,1 x 30 mm, gradiente = 4 min, longitud de onda = 220 nm.
Intermedio A-23: (2-aminofenil)(m-tolil)metanona
nh2 o
Me
(A-23)
A un matraz de fondo redondo de 250 ml, cargado con magnesio (0,947 g, 39,0 mmol) y eter dietilico (50,0 ml), se le anadieron 2 gotas de dibromoetano. La mezcla de reaccion se calento a 60 °C durante 5 min y despues se retiro del calor. Despues, se anadio lentamente 1-bromo-3-metilbenceno (5 g, 29,2 mmol) en eter dietilico (50 ml), en porciones hasta que se obtuvo el reflujo. Se anadio gota a gota el bromuro resultante para mantener el reflujo. Despues de la adicion, la mezcla de reaccion se sometio a reflujo durante 3 h. Despues, se anadio lentamente 2- aminobenzonitrilo (1,151 g, 9,74 mmol) en eter dietilico (50,0 ml) durante 10 min. La mezcla resultante se sometio a reflujo durante la noche. El volumen de la mezcla de reaccion se redujo a 1/3 y se anadieron 100 g de hielo picado y 50 ml de HCl 6 N con agitacion. Despues de 3 h a temperatura ambiente, el pH se ajusto a pH 8 con NaOH 5 N y la reaccion se diluyo con NaHCO3 saturado (50 ml). Las dos fases se separaron y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (200 ml, 2 veces). Las capas organicas combinadas se secaron con MgSO4, se filtraron y se concentraron. El material en bruto se purifico mediante cromatografia ultrarrapida (Teledyne ISCO CombiFlash Rf, del 0 % al 70 % de disolvente A/B = acetato de etilo/heptano, REDISEP® SiO2 de 80 g) para obtener el Intermedio A-23 (1,84 g, 89 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-ds) 5 7,44-7,23 (m, 6H), 7,08 (s. a., 2H), 6,86 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,50 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 2,38 (s, 3H).
Los compuestos que se enumeran a continuacion en la Tabla 5 (Intermedios A-24 a A-27) se prepararon de acuerdo con el procedimiento de sintesis general descrito para el Intermedio A-23, usando el haluro de arilo y nitrilo de arilo adecuados.
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Tabla 5
Intermedio
Estructura Nombre TR de HPLC1 min CL/EM [M+H1+
A-24
__ nh2 Me (2-aminofenil)(p-tolil) metanona 1,90 212
A-25
__ NHo <X„ MeO (2-aminofenil)(4-metoxifenil)metanona 1,73 228
A-26
__ nh2 f^yue (2-aminofenil)(o-tolil)metanona 1,90 212
A-27
^ .nh2 CL, OTBDMS (2-aminofen i l)(4-(((terc- butildimetilsilil)oxi)metil) fenil)metanona 2,55 342
1 H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 |jm, 2,1 x 30 mm, gradiente = 2 min, longitud de onda = 220 nm.
Intermedio A-28: (2-amino-3-metoxifenil)(5-(trifluorometil)piridin-2-il)metanona
5
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(A-28)
Intermedio A-28A: (2-metoxi-6-(5-(trifluorometil)picolinoil)fenil)carbamato de terc-butilo
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A una solucion agitada fria (-23 °C) de 2-metoxifenilcarbamato de terc-butilo (443,3 mg, 1,986 mmol) en eter (5 ml) en N2, se le anadio t-BuLi (2,6 ml, 4,42 mmol). La mezcla de reaccion se agito durante 2 h y despues se enfrio a -78 °C. A la mezcla de reaccion, se le anadio gota a gota una solucion de 5-(trifluorometil)picolinato de metilo (501,3 mg, 2,44 mmol) en eter (10 ml) a traves de una canula durante 5 min. Despues de 2 h, la mezcla de reaccion
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se calento a temperatura ambiente, se agito durante 1 hora mas y despues la reaccion se inactivo mediante la adicion de agua con agitacion vigorosa. La mezcla de reaccion se diluyo con EtOAc, la fase organica se separo, se lavo con NaCl saturado, despues se seco (Na2SO4), se filtro y se concentro para obtener un solido de color amarillo. El residuo se purifico mediante cromatografia ultrarrapida (Teledyne ISCO CombiFlash Rf, del 0 % al 100 % de disolvente A/B = hexano/EtOAc, REDISEP® SiO2 de 40 g) para obtener el Intermedio A-28A (546,8 mg, 69,5 % de rendimiento) en forma de un solido de color amarillo: RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 5 ppm 8,83-8,88 (1 H, m), 8,24 (1 H, d, J = 8,4 Hz), 8,07 (1 H, dd, J = 8,4, 1,8 Hz), 7,25 (1 H, d, J = 1,5 Hz), 7,18-7,24 (1 H, m), 7,09 (1 H, dd, J = 8,0, 1,7 Hz), 6,95 (1 H, s), 3,93 (3 H, s), 1,25 (9 H, s).
Intermedio A-28:
MeO
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(A-28)
A una solucion agitada del Intermedio A-28A (545 mg, 1,375 mmol) en DCM (15 ml), se le anadio TFA (0,106 ml, 1,375 mmol). Despues de 2 h, la mezcla de reaccion se diluyo con tolueno (30 ml) y despues se concentro. El residuo se purifico mediante cromatografia ultrarrapida (Teledyne ISCO CombiFlash Rf, del 0 % al 20 % de disolvente A/B = DCM/MeOH, REDISEP® SiO2 de 40 g, que se cargo con una solucion de DCM) para obtener el producto Intermedio A-28 (376,8 mg, 93 % de rendimiento)): RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 5 ppm 8,94-8,99 (1 H, m), 8,11 (1 H, dt, J = 8,1, 1,1 Hz), 7,86 (1 H, d, J = 8,1 Hz), 7,17 (1 H, dd, J = 8,4, 1,1 Hz), 6,89 (1 H, dd, J = 7,9,
1,1 Hz), 6,55 (1 H, m, J = 16,1 Hz), 3,92 (3 H, s).
Intermedio A-29: (2-amino-3-metoxifenil)(5-cloropiridin-2-il)metanona
MeO
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(A-29)
Intermedio A-28A: (2-(5-cloropicolinoil)-6-metoxifenil)carbamato de terc-butilo
Cl
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OMe N .0
HN—^ Me
0 0—(-Me
Me (A-29A)
A una solucion agitada fria (-23 °C) de 2-metoxifenilcarbamato de terc-butilo (548 mg, 2,454 mmol) en eter (6 ml) en N2, se le anadio t-BuLi (3,2 ml, 5,44 mmol). Despues de agitar durante 2,5 h, la mezcla de reaccion se enfrio a -78 °C. A la mezcla de reaccion, se le anadio gota a gota una solucion de 5-cloropicolinato de etilo (564,5 mg,
3.04 mmol) en eter (12 ml) a traves de una canula durante 5 min. La mezcla de reaccion se agito durante 60 min y despues se calento a temperatura ambiente. Despues de 1,5 h, a la mezcla de reaccion, se le anadio H2O con agitacion vigorosa. La mezcla de reaccion se diluyo con EtOAc y la fase organica se separo, se lavo con NaCl saturado, despues se seco (Na2SO4), se filtro y se concentro para obtener el producto Intermedio A-29A (511,5 mg,
57.4 % de rendimiento)) en forma de un solido de color amarillo: RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 5 ppm 8,55 (1 H, dd, J = 2,3, 0,6 Hz), 8,08 (1 H, dd, J = 8,4, 0,7 Hz), 7,80 (1 H, dd, J = 8,4, 2,4 Hz), 7,16-7,25 (2 H, m), 7,06 (1 H, dd, J = 7,5, 2,2 Hz), 6,90 (1 H, s), 3,92 (3 H, s), 1,28 (9 H, s).
Intermedio A-29:
A una solucion agitada del Intermedio A-29A (511,5 mg, 1,410 mmol) en DCM (14 ml), se le anadio TFA (14 ml, 182 mmol). Despues de 60 min, la mezcla de reaccion se concentro al vacio, se volvio a disolver en DCM, se lavo con NaHCO3 saturado, se seco (MgSO4), se filtro y se concentro para obtener el Intermedio A-29 (402,1 mg, 100 % de rendimiento) en forma de un solido de color ambar: TR de HPLC = 2,763 min. (Waters Sunfire C18 2,5 |jm 2,1 x 30 mm, MeOH/H2O/TFA, 4 min de gradiente, longitud de onda = 254 nm), RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 5 ppm 8,66 (1 H, dd, J = 2,4, 0,7 Hz), 7,85 (1 H, dd, J = 8,4, 2,4 Hz), 7,75 (1 H, dd, J = 8,4, 0,7 Hz), 7,25 (1 H, dd, J = 8,4,
1,1 Hz), 6,89 (1 H, dd, J = 7,7, 1,1 Hz), 6,55 (1 H, dd, J = 8,3, 7,8 Hz), 4,74 (2 H, s. a.), 3,91 (3 H, s). EM(EN): m/z = 263 [M+H+].
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Intermedio B-1: (S)-3-amino-5-(3-fluorofenil)-9-metil-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona
O nh2
y—^
HN N
MeWVxN
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(B-1)
Intermedio B-1A: (5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-3-il)carbamato de (S)-bencilo
F
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(B-1A)
En un matraz de fondo redondo de 1 l, se enfrio una solucion de acido 2-(1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-il)-2- ((fenoxicarbonil)amino)acetico (J. Org. Chem., 55:2206-2214 (1990)) (19,37 g, 62,0 mmol) en THF (135 ml) en un bano de hielo/agua y se trato con cloruro de oxalilo (5,43 ml, 62,0 mmol) y 4 gotas de DMF. La mezcla de reaccion se agito durante 4 horas. Despues, se anadio una solucion del Intermedio A-1 (7,11 g, 31,0 mmol) en THF (35 ml) y la solucion resultante se retiro del bano de hielo/agua y se agito a temperatura ambiente durante 1,5 horas. Despues la mezcla se trato con una solucion de amoniaco (7 M en MeOH) (19,94 ml, 140 mmol). Despues de 15 min, se le anadio otra porcion de amoniaco (7 M en MeOH) (19,94 ml, 140 mmol) y la mezcla resultante se cerro hermeticamente en N2 y se agito durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se concentro a ~1/2 del volumen, despues se diluyo con AcOH (63 ml) y se agito a temperatura ambiente durante 4 horas. Despues la mezcla de reaccion se concentro y el residuo se diluyo con 500 ml agua para obtener un precipitado. Se anadieron hexano y Et2O y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 1 hora para formar un solido de color naranja. Se retiro el Et2O en un flujo de nitrogeno y la capa acuosa decanto. El residuo se trituro con 40 ml de iPrOH y se agito a temperatura ambiente para obtener un precipitado de color blanco. El solido se filtro, se lavo con iPrOH y despues se seco en un filtro en un flujo de nitrogeno para obtener el Intermedio B-1A racemico (5,4 g, 41,7 % de rendimiento).
El Intermedio B-1A racemico (5,9 g, 14,3 mmol) se resolvio usando las condiciones de SFC quiral que se describen a continuacion. El estereoisomero deseado se recolecto como el segundo pico en orden de elucion: Instrumento: Berger SFC MGIII, columna: CHIRALPAK® IC 25 x 3 cm, 5 cm; temp. de columna: 45 °C; fase movil: CO2/MeOH (45/55); caudal: 160 ml/min; deteccion a 220 nm.
Despues de la evaporacion del disolvente, se obtuvo el Intermedio B-1A (2,73 g, 46 % de rendimiento) en forma de un solido de color blanco. HPLC: TR = 3,075 min (H2O/MeOH con TFA, CHROMOLITH® ODS S5 4,6 x 50 mm, gradiente = 4 min, longitud de onda = 220 nm). TR de HPLC quiral: 8,661 min (AD, 60 % (EtOH/MeOH)/heptano) > 99 %ee. EM(EN): m/z = 418,3 [M+H+];RMN 1H (500 MHz, DMSO-ds) 5 10,21 (s, 1H), 8,38 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,577,47 (m, 2H), 7,41-7,29 (m, 8H), 7,25-7,17 (m, 2H), 5,10-5,04 (m, 3h), 2,42 (s, 3H).
Intermedio B-1: (S)-3-amino-5-(3-fluorofenil)-9-metil-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona.
En un matraz de fondo redondo de 100 ml, una solucion del Intermedio B-1A (2,73 g, 6,54 mmol) en acido acetico (12 ml) se trato con HBr, al 33 % en HOAc (10,76 ml, 6,.4 mmol) y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 1 hora. La solucion se diluyo con Et2O para obtener un precipitado de color amarillo. El solido de color amarillo se filtro y se aclaro con Et2O en nitrogeno. El solido se transfirio a un matraz de fondo redondo de 100 ml y se anadio agua (se formo un precipitado de color blanco). La suspension se volvio lentamente basica con NaHCO3 saturado. El precipitado pegajoso resultante se extrajo con EtOAc. La capa organica se lavo con agua, se seco sobre MgSO4, despues se filtro y se concentro a sequedad para obtener el Intermedio B-1 (1,68 g, 91 % de rendimiento) en forma de un solido espumoso de color blanco. Em(EN): m/z = 284,2 [M+H+]; HPLC: TR = 1,72 min (H2O/MeOH con TFA, CHROMOLITH® ODS S5 4,6 x 50 mm, gradiente = 4 min, longitud de onda = 220 nm). RMN 1H (400 MHz, DMSO-ds) 5 10,01 (s. a., 1H), 7,56-7,44 (m, 2H), 7,41-7,26 (m, 3H), 7,22-7,11 (m, 2H), 4,24 (s, 1H), 2,55 (s. a., 2H), 2,41 (s, 3H).
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Los compuestos que se enumeran a continuacion en la Tabla 6 (Intermedios B-2 a B-3) se prepararon de acuerdo con el procedimiento de smtesis general descrito para el Intermedio B-1, usando los materiales de partida, el Intermedio A-10 y el Intermedio A-4, respectivamente.
Tabla 6
Intermedio
Estructura Nombre TR de HPLC (min) CL/EM [M+H]+
B-2a
Me^Me Y H O H J }-nh2 (S)-3-amino-5-(3-clorofenil)-9- isopropil-1 H-benzo[e][1,4]diazepin- 2(3H)-ona 2,611 328
B-3b
CM I 0 (S)-3-amino-5-(3-clorofenil)-9-metil- 1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona 0,732 330,1
1 MeOH/H2O/TFA al 0,1 %, Waters Sunfire C18 3,5 jm, 2,1 x 30 mm, 1 ml/min, 4 min de gradiente, longitud de onda = 254 nm. 2 H2O/CH3CN con TFA al 0,05 %, BEH C18 1,7 |jm, 2,1 x 50 mm, gradiente (2 %-98 %) = 1 min, longitud de onda = 220 nm. Condiciones de separation quiral: a Instrumento: Berger SFC MGIII; columna: Lux Cell-4, 250 x 30 mm de DI, 5 jm, temp. de columna: 45 °C; fase movil: CO2/MeOH (70/30); caudal: 200 ml/min; detection 220 nm. b Instrumento: Berger SfC MGIII, columna: CHIRALPAK® IC 25 x 3 cm, 5 jm; temp. de columna: 45 °C; fase movil: CO2/MeOH (55/45); caudal: 180 ml/min; deteccion a 220 nm.
Intermedio B-4: (S)-3-amino-9-metil-5-fenil-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona
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NH,
(B-4)
Intermedio B-4A: (9-metil-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-3-il)carbamato de (S)-bencilo
O
nA°^Y^
h u
(B-4A)
Una mezcla de acido 2-(1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-il)-2-(((benciloxi)carbonil)amino)acetico (5,50 g, 16,87 mmol) se suspendio en THF (40,9 ml) y se enfrio a 0 °C. Se anadio cloruro de oxalilo (1,477 ml, 16,87 mmol) y despues 50 |jl de DMF. Se observo desprendimiento de gas. Despues de 2 h, se anadio una solucion del Intermedio A-9 (1,62 g, 7,67 mmol) y N-metilmorfolina (2,53 ml, 23,00 mmol) en THF (20 ml) y la mezcla de reaccion se calento gradualmente. Despues de 3,5 h, se anadio amoniaco (7 M en MeOH) (21,29 ml, 149 mmol) y la mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante la noche. A esta mezcla, se le anadieron 5 ml de amoniaco 7 M y la mezcla
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5
10
15
20
25
30
35
40
45
de reaccion se agito durante 5 horas. Despues la mezcla se diluyo con EtOAc, se lavo con H2O, NaOH 1 M y salmuera. La capa organica se concentro y se suspendio en acido acetico (15,34 ml) y despues se anadio acetato de amonio (2,96 g, 38,3 mmol). Despues de 4,5 horas, se anadio H2O para precipitar el producto. El precipitado se recolecto mediante filtracion, se lavo con agua y se seco al aire para obtener el Intermedio B-4A (2,48 g, 81 %). HPLC: TR = 1,01 min (H2O/CH3CN con TFA, BeH C18 1,75 |jm, 2,1 x 50 mm, gradiente = 2 min, longitud de onda = 220 nm); EM(EN): m/z = 400,3 [M+H]+.
El Intermedio B-4A racemico (10,8 g, 27,0 mmol) se resolvio usando las condiciones de SFC quiral que se describen a continuacion. El estereoisomero deseado se recolecto como el primer pico en orden de elucion: Instrumento: Berger SFC MGIII, columna: OJ-H 25 X 3 cm, 5 cm; temp. de columna: 45 °C; fase movil: CO2/MeOH (70/30); caudal: 200 ml/min; deteccion a 220 nm. Despues de la evaporacion del disolvente, se obtuvo el Intermedio B-4A (2,67 g, 6,68 mmol) en forma de un solido de color blanco. HPLC: TR = 2,761 min (H2O/MeOH con TFA, ChROMOLITH® SpeedROD 4,6 x 50 mm, gradiente = 4 min, longitud de onda = 220 nm). EM(EN): m/z = 400,3 [M+H]+.
Intermedio B-4:
Una solucion del Intermedio B-4A (2,6 g, 6,51 mmol) en 33 % de HBr en HOAc (10,71 ml, 65,1 mmol) se agito a temperatura ambiente durante 2 h. Se anadio eter dietilico y el solido de color amarillo resultante se recolecto mediante fi ltracion y se aclaro con eter. El solido higroscopico se disolvio en MeOH, se concentro y se seco al vacio para obtener el Intermedio B-4 (2,59 g, 93 %). HPLC: TR = 1,433 min (H2O/MeOH con TFA, CHROMOLITH® SpeedROD 4,6 x 50 mm, gradiente = 4 min, longitud de onda = 220 nm). EM(EN): m/z = 266,0 [M+H]+.
Intermedio B-5: 3-amino-5-(4-(((ferc-butildimetilsilil)oxi)metil)fenil)-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona
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Intermedio B-5A: (5-(4-(((ferc-butildimetilsilil)oxi)metil)fenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-3-il)carbamato de bencilo
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N
H
O
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(B-5A)
En un matraz de fondo redondo de 100 ml, una suspension de acido 2-(1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-il)-2- (benciloxicarbonilamino)acetico (0,952 g, 2,92 mmol) y del Intermedio A-27 (0,83 g, 2,430 mmol) en dCm (20 ml) se trato con una solucion de DCC (0,602 g, 2,92 mmol) en DCM (5 ml). La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente en nitrogeno durante la noche. A la mezcla de reaccion, se le anadio Na2CO3 saturado (25 ml) y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 1 h. La suspension se filtro, las capas se separaron y la fase organica se concentro a sequedad. La mezcla de reaccion en bruto se diluyo con MeOH (10 ml) y se anadio amoniaco 2 N en metanol (14,58 ml, 29,2 mmol). Despues la mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante la noche. Despues se anadio AcOH (13,91 ml, 243 mmol) directamente a la mezcla de reaccion y la mezcla se agito a temperatura ambiente en nitrogeno durante 72 h. El pH de la reaccion se ajusto a pH 12 con NaHCO3 saturado. La mezcla de reaccion se dividio en DCM (100 ml) y salmuera (50 ml). La capa acuosa se volvio a extraer con DCM (50 ml, 2 veces). Las fases organicas combinadas se secaron con Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presion reducida. El material en bruto se purifico mediante cromatografia ultrarrapida (Teledyne ISCO CombiFlash Rf, del 0 % al 75 % de disolvente A/B = acetato de etilo/heptano, REDISEP® SiO2 de 80 g). La concentracion de las
fracciones adecuadas produjo una muestra que se purifico nuevamente mediante cromatografia ultrarrapida (Teledyne ISCO CombiFlash Rf, del 0 % al 60 % de disolvente A/B = acetato de etilo/heptano, REDISEP® SiO2 de 40 g). La concentration de las fracciones adecuadas produjo el Intermedio B-5A (0,368 g, 29 %). TR de CL/EM = 2,472 min, de 10/90 a 90/10 (MeOH/H2O/TFA al 0,1 %, Waters Sunfire C18 3,5 |jm, 2,1 x 30 mm, 1 ml/min, 2 min de 5 gradiente, longitud de onda = 220 nm); EM(EN): m/z = 530 [M+1]; RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) 5 10,84 (s, 1H), 8,39 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,64 (t, J = 7,7 Hz, 1h), 7,50-7,43 (m, 1h), 7,43-7,28 (m, 10H), 7,29-7,21 (m, 1H), 5,09 (s, 1H), 5,05 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,98 (s, 1H), 4,78 (s, 2H), 0,95-0,88 (m, 9H), 0,13-0,03 (m, 6h).
Intermedio B-5:
10
Una solution del Intermedio B-5A (330 mg, 0,623 mmol) en acetato de etilo (20 ml) se trato con Pd/C al 20 % (agua al 50 %) (200 mg, 0,623 mmol) para obtener una suspension. La mezcla de reaction se purgo 3 veces con vacio y nitrogeno y despues se purgo 3 veces con vacio e hidrogeno. La mezcla se agito en una atmosfera de hidrogeno durante 4 h. La mezcla de reaccion se filtro en CELITE® y el filtrado se concentro a presion reducida para obtener el 15 Intermedio B-5 (0,190 g, 77 %). HPLC: TR = 2,0,3 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 |jm, 2,1 x 30 mm, gradiente = 2 min, longitud de onda = 220 nm). CL/EM: M+H = 396; RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 5 10,66 (s. a., 1H), 7,59 (ddd, J = 8,3, 7,1, 1,5 Hz, 1H), 7,49-7,43 (m, 2H), 7,41-7,34 (m, 2H), 7,30-7,24 (m, 3H), 7,24-7,17 (m, 1H), 4,77 (s, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,24 (s, 2H), 0,94-0,91 (m, 9H), 0,10 (s, 6H).
20 Los compuestos que se enumeran a continuation en la Tabla 7 (Intermedios B-6 a B-26) se prepararon de acuerdo con el procedimiento de sintesis general descrito para el Intermedio B-1 y los Intermedios B-4 a B-5, usando el material de partida indicado.
Tabla 7
Intermedio
Estructura Nombre TR de HPLC (min) CL/EM [M+H]+ Material de partida
B-6
?' H 0 0 I )~nh2 Me Me 3-amino-9-cloro-5-(3,4-dimetilfenil)- 1 H-benzo[e] [1,4]diazepin-2(3H)-ona 0,731 314 A-2
B-7
P H O ]} I }~nh2 N Cl 3-amino-5-(3-clorofenil)-9-etil-1H- benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona 2,242 314,11 A-11
B-8
H O n I >~nh2 Me 3-amino-9-etil-5-(m-tolil)-1 H- benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona 2,332 294,13 A-12
B-9
9F3 H O n I >-nh2 N Me 3-amino-5-(m-tolil)-9-(trifluorometil)- 1 H-benzo[e] [1,4]diazepin-2(3H)-ona 1,843 334,3 A-5
B-10
MeN_.Me T H ,0 H 1 )~nh2 Me 3-amino-9-isopropil-5-(m-tolil)-1H- benzo[e][1,4] diazepin-2(3H)-ona 2,512 308 A-13
B-11
Me^^Me T H /° ■tVa! || 1 )~^nh2 3-amino-9-isopropil-5-fenil-1 H- benzo[e][1,4] diazepin-2(3H)-ona 2,292 294 A-14
B-12
N H O U I y^m2 Me 3-amino-9-ddopropoxi-5-(m-tolN)- 1 H-benzo[e][1,4] diazepin-2(3H)-ona 2,362 333,08 A-15
B-13
^0 H ArNX |l | y-m2 3-amino-9-ddopropoxi-5-feniMH- benzo[e][1,4] diazepin-2(3H)-ona 2,182 308,14 A-6
B-14
91 H O rVNiL n I >~nh2 Me 3-amino-9-cloro-5-(m-tolil)-1 H- benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona 1,474 300 A-18
B-15
lVle H o ■rV'v 1 }~nfi2 cf3 3-amino-9-metil-5-(3- (trifluorometil)fenil)-1 H- benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona 0,736 334,0 A-7
B-16
91 H 0 rViL y 1 >-nh2 ^YMe 3-amino-9-cloro-5-(o-tolil)-1 H- benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona 1,787 300 A-20
B-17
lYle H p n t )^nh2 F 3-amino-5-(4-fluorofenil)-9-metil-1H- benzo[e][1,4] diazepin-2(3H)-ona 0,656 284,0 A-8
B-18
91 H /° n i )~nh2 3-amino-9-doro-5-(3-ddopropilfeml)- 1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona 2,292 326,12 A-21
B-19
9Me H 0 n i ym2 Cl 3-amino-5-(3-clorofenil)-9-metoxi- 1 H-benzo[e][1,4] diazepin-2(3H)-ona 2,184 316 A-16
B-20
9Me H 0 0 1 >-nh2 Cl 3-amino-5-(4-clorofenil)-9-metoxi- 1 H-benzo[e][1,4] diazepin-2(3H)-ona 2,234 316 A-17
B-21
9Me H O n-Vil n | ym2 N Me 3-amino-9-metoxy-5-(m-tolil)-1H- benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona 1,454 296 A-19
B-22
H .0 y 1 >-nh2 Me 3-amino-5-(m-tolil)-1 H- benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona 1,394 266 A-23
B-23
H O n j yNH2 Me' 3-amino-5-(p-tolil)-1 H- benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona 1,384 266 A-24
B-24
OMe H o ArNiL y i >-nh2 r^N Sj F3c 3-amino-9-metoxi-5-(5- (trifluorometil)piridin-2-il)-1H- benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona 1,795 351 A-28
B-25
H p y I >-nh2 MeO 3-amino-5-(4-metoxifenil)-1 H- benzo[e] [1,4]diazepin-2(3H)-ona 1,284 282 A-25
B-26
9Me H 0 ArNiL y 1 )~-nh2 N [ N kj Cl 3-amino-5-(5-cloropiridin-2-il)-9- metoxi-1 H-benzo[e] [1,4]diazepin- 2(3H)-ona 1,585 317 A-29
B-27
?' H O y 1 )^nh2 3-amino-9-cloro-5-(3,5-dimetilfenil)- 1 H-benzo[e] [1,4]diazepin-2(3H)-ona 0,721 314 A-3
Me
1 H2O/CH3CN con TFA, BEH C18 1,75 |jm, 2,1 x 50 mm, gradiente = 2 min, longitud de onda = 220 nm.
2 MeOH/H2O/TFA al 0,1 %, Waters Sunfire C18 3,5 |jm, 2,1 x 30 mm, 1 ml/min, 4 min de gradiente, longitud de onda = 254 nm.
3 H2O/MeOH con TFA al 0,1 %, Luna C18 3 jm, 4,6 x 30 mm, gradiente = 3,5 min, longitud de onda = 220 nm.
4 H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 2,1 x 30 mm, gradiente = 2 min, longitud de onda = 220 nm.
5 Waters Sunfire C18 2,1 x 30 mm 3,5 jm; H2O/MeOH/TFA, gradiente = 4 min, longitud de onda = 254 nm.
6 H2O/CH3CN con TFA al 0,05 %, BEH C18 1,7 jm, 2,1 x 50 mm, gradiente (2 %-98 %) = 1 min, longitud de onda = 220.
7 H2O/MeOH con TFA, CHROMOLITH® ODS S5, 4,6 x 50 mm, gradiente = 4 min, longitud de onda =
220 nm.
Intermedio B-28: 3-amino-9-ciclopropil-5-fenil-1H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona
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(B-28)
Intermedio B-28A: (9-bromo-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-3-il)carbamato de bencilo
5
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(B-28A)
10 El Intermedio B-28A se preparo a partir del Intermedio A-22 mediante los procedimientos generales descritos para el Intermedio B-1. HPLC: Tr = 2,048 min (H2O/MeOH con TFA, Ascentis Express C18 2,7 jm, 2,1 x 50 mm, gradiente = 4 min, longitud de onda = 220 nm); EM(EN): m/z = 464 [M+H+].
15
Intermedio B-28B: (9-ciclopropil-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-3-il)carbamato de bencilo
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(B-28B)
A una mezcla agitada del Intermedio B-28A (2,00 g, 4,31 mmol), Pd(dppf)2Ch (946 mg, 1,29 mmol), fosfato de potasio dibasico (2,25 g, 12,9 mmol) y ester del acido ciclopropilboronico y acido metiliminodiacetico (1,70 g, 20 8,61 mmol) en dioxano (12 ml) en nitrogeno, se le anadio agua (3 ml). La mezcla de reaccion se calento a 85 °C
durante 20 h y despues se enfrio a temperatura ambiente. La mezcla se diluyo con EtOAc (40 ml) y se filtro a traves de un lecho de gel de silice de 1 pulgada y en la parte superior se coloco un lecho de CELITE® de 1/2 pulgada. Se volvio a eluir con EtOAc. El filtrado se concentro a presion reducida y se purifico mediante cromatografia ultrarrapida
5
10
15
20
25
30
(Teledyne ISCO CombiFlash, del 0 % al 17 % de disolvente A/B = DCM/acetona, REDISEP® SiO2 de 120 g, que se detecto a 254 nM y se controlo a 220 nM). La concentracion de las fracciones adecuadas produjo el Intermedio B- 28B (1,20 g, 65 %). HPLC: TR = 3,246 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4,6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contenia TFA al 0,1 %, 4 ml/min, control a 220 nm). EM(EN): m/z = 426,1 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) 5 10,29 (s, 1H), 8,38 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,57-7,32 (m, 10H), 7,30 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,20 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,11 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 5,08 (s, 2h), 5,04 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 2,26-2,13 (m, 1H), 1,09-0,95 (m, 2H), 0,87-0,78 (m, 1H), 0,61-0,52 (m, 1H).
Intermedio B-28:
El Intermedio B-28 se preparo a partir del Intermedio B-28A mediante tratamiento con HBr al 33 %/acido acetico de acuerdo con el procedimiento general detallado para el Intermedio B-1. HPLC: TR = 2,085 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4,6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contenia TFA al 0,1 %, 4 ml/min, control a 220 nm). CL/EM: M+H = 292,1. RMN 1H (400 MHz, DMSO-ds) 5 10,78 (s, 1H), 9,01 (s. a., 3H), 7,65-7,48 (m, 5H), 7,38 (dd, J = 7,6, 1,2 Hz, 1H), 7,26 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,19-7,14 (m, 1H), 2,27-2,16 (m, 1H), 1,14-0,98 (m, 2H), 0,91-0,80 (m, 1H), 0,67-0,56 (m, 1H).
Los siguientes Intermedios (B-29 a B-30) se prepararon de acuerdo con los metodos generales descritos para el Intermedio B-5 del material de partida indicado.
Tabla 8
Intermedio
Estructura Nombre RT de HPLC (min)1 CL/EM [M+H]+ Material de partida
B-29
H ,0 y 1 )~^nh2 3-amino-5-(o-tolil)-1 H- benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona 1,33 266 A-26
B-30
H ,0 y 1 )^-nh2 MeO 3-amino-5-(4-metoxifenil)-1 H- benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona 1,28 282 A-25
1 H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 |jm, 2,1 x 30 mm, gradiente = 2 min, longitud de onda = 220 nm.
Ejemplo 1
(2R,3S)-N-((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-
trifluoropropil)succinamida
CF
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3
NH
2
O
CF
3
5
10
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25
30
35
40
45
Intermedio 1A: 6,6,6-trifluoro-3-(((S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-3-
il)carbamoil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoato de (2S,3R)-ferc-butilo
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O.
CH3
CH3 CH3
F
F
(1A)
En un matraz de fondo redondo de 100 ml, una solucion del Intermedio B-1 (1683 mg, 5,94 mmol), Et3N (1,656 ml, 11,88 mmol) e Intermedio S-1 en DMF (20 ml) se trato con tetrafluoroborato de o-benzotriazol-1-il-N,W,W'W- tetrametiluronio (3815 mg, 11,88 mmol) y se agito a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reaccion se diluyo con agua y NaHCO3 acuoso saturado. Se formo un precipitado de color blanquecino, que se filtro y se lavo con agua. El solido resultante se seco en el filtro en un flujo de nitrogeno para obtener el Intermedio 1A (3,7 g, 99 % de rendimiento). EM(EN): m/z = 632,4[M+H+]; HPLC: TR = 3,635 min Pureza = 98 %. (H2O/MeOH con TFA, CHROMOLITH® ODS S5 4,6 x 50 mm, gradiente = 4 min, longitud de onda = 220 nm). RMN 1H (400 MHz, metanol- d4) 5 7,53 (t, J = 4,5 Hz, 1H), 7,46-7,30 (m, 3H), 7,28-7,23 (m, 1H), 7,23-7,18 (m, 2H), 5,37 (s, 1H), 2,88 (td, J = 10,4,
3,4 Hz, 1H), 2,60 (td, J = 10,2, 4,1 Hz, 1H), 2,54-2,40 (m, 1H), 2,47 (s, 3 H), 2,33-2,12 (m, 3H), 1,98-1,69 (m, 4H), 1,51 (s, 9H).
Intermedio 1B: Acido (2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3-(((S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-
benzo[e][1,4]diazepin-3-il)carbamoil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoico
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F
(1B)
En un matraz de fondo redondo de 250 ml, una solucion del Intermedio 1A (3,7 g, 5,86 mmol) en DCM (25 ml) se trato con TFA (25 ml) y la solucion resultante de color naranja palido se agito a temperatura ambiente durante 1,5 horas. Despues la mezcla de reaccion se concentro para obtener el Intermedio 1B. HPLC: TR = 3,12 min (H2O/MeOH con TFA, CHROMOLITH® ODS S5 4,6 x 50 mm, gradiente = 4 min, longitud de onda = 220 nm). EM(EN): m/z = 576,3 (M+H)+. RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) 5 7,54 (t, J = 4,5 Hz, 1H), 7,49-7,29 (m, 3H), 7,28-7,15 (m, 3H), 5,38 (s. a., 1H), 2,89 (td, J = 10,3, 3,7 Hz, 1H), 2,67 (td, J = 9,9, 4,2 Hz, 1H), 2,56-2,38 (m, 1H), 2,48 (s, 3 H), 2,34-2,13 (m, 3H), 2,00-1,71 (m, 4H).
Ejemplo 1:
En un matraz de fondo redondo de 250 ml, una solucion del Intermedio 1B (4,04 g, 5,86 mmol) en THF (50 ml) se trato con amoniaco (2 M en iPrOH) (26,4 ml, 52,7 mmol) y despues con HOBT (1,795 g, 11,72 mmol) y EdC (2,246 g, 11,72 mmol). La suspension de color blanco resultante se agito a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reaccion se diluyo con agua y NaHCO3 acuoso saturado. El solido resultante se filtro, se aclaro con agua y despues se seco en el filtro en un flujo de nitrogeno. El producto en bruto se suspendio en 20 ml de iPrOH, se agito a temperatura ambiente durante 20 min, despues se filtro, se lavo con iPrOH y se seco al vacio para obtener 2,83 g de solido. El solido se disolvio en EtOH a reflujo (100 ml) y se trato lentamente con 200 mg de carbon activado, que se anadio en pequenas porciones. La mezcla caliente se filtro a traves de CELITE® y se aclaro con EtOH caliente. El filtrado se redujo a la mitad del volumen y se dejo enfriar y el precipitado de color blanco formado se filtro y se aclaro con EtOH para obtener 2,57 g de solido de color blanco. Una segunda recristalizacion en EtOH (70 ml) produjo el Ejemplo 1 (2,39 g, 70 % de rendimiento) en forma de un solido de color blanco. HPLC: TR = 10,859 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 |jm, 3,0 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 575,3 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) 5 7,57-7,50 (m, 1H), 7,47-7,30 (m, 3H), 7,297,15 (m, 3H), 5,38 (s, 1H), 2,85-2,75 (m, 1H), 2,59 (td, J = 10,5, 4,0 Hz, 1H), 2,53-2,41 (m, 4H), 2,31-2,10 (m, 3H),
1,96-1,70 (m, 4H).
Ejemplo 2
5 (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-dorofenil)-9-etil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-
trifluoropropil)succinamida
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10 Intermedio 2A: 3-((5-(3-clorofenil)-9-etil-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-3-il)carbamoil)-6,6,6-trifluoro-2- (3,3,3-trifluoropropil)hexanoato de (2S,3R)-ferc-butilo
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15 A una solucion de dibromhidrato del Intermedio B-7 (130 mg, 0,273 mmol), Intermedio S-1 (100 mg, 0,273 mmol) y TBTU (105 mg, 0,328 mmol) en DMF (2 ml), se le anadio TEA (0,190 ml, 1,367 mmol) gota a gota. La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla de reaccion se vertio lentamente en una solucion agitada de agua con cierta cantidad de NaHCO3 saturado. La mezcla de producto se extrajo con DCM, se lavo con solucion de LiCl al 10 %, se seco y se concentro al vacio. La mezcla de producto en bruto se purifico mediante cromatografia en 20 gel de silice (ISCO, del 0 % al 50 % de EtOAC/heptano durante 10 minutos, usando una columna de 12 g) para obtener el Intermedio 2A (116 mg, 0,175 mmol, 64,1 % de rendimiento). TR de HPLC = 1,20 min, H2O/CH3CN con TFA, BEH C18 1,75 |jm, 2,1 x 50 mm, gradiente = 2 min, longitud de onda = 220 nm. EM(EN): m/z = 662,3 [M+H+].
Intermedio 2B: Acido (2S,3R)-3-((5-(3-clorofenil)-9-etil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-3-il)carbamoil)- 25 6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoico
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Una solucion del Intermedio 2A (115 mg, 0,174 mmol) en DCM (3 ml) se trato con TFA (0,668 ml, 1,737 mmol). La 30 mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 2 horas y despues se concentro a sequedad. La mezcla en bruto se diluyo con tolueno y nuevamente se concentro a sequedad para obtener el Intermedio 2B (87 mg, 0,144 mmol, 83 % de rendimiento). HPLC TR = 3,695 (H2O/CH3CN con TfA, Waters Sunfire C18 2,1 x 30 mm 3,5 um, 4 min de gradiente, deteccion a 220 nm). EM(EN): m/z = 606,1 [M+H+].
5
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40
Una solucion del Intermedio 2B (101 mg, 0,167 mmol), HOBT (77 mg, 0,500 mmol) y EDC (96 mg, 0,500 mmol) en THF (2381 |jl) se trato con amoniaco 2 N en IPA (583 |jl, 1,167 mmol). La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 2 horas. Despues la mezcla de reaccion se diluyo con agua (5 ml) y se extrajo con dCm. Las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron y despues se concentraron al vacio. La mezcla de producto en bruto se purifico mediante cromatografia en gel de silice (ISCO, del 0 % al 100 % de EtOAC/heptano durante 15 minutos, usando una columna de 12 g). Despues de la separacion de los diastereomeros (Berger SFC MGII, IC quiral, 25 x 3 cm de DI, 5 jm, CO2/MeOH 92/8, 85 ml/min, detection a 220 nm), se obtuvo el Ejemplo 2 (38 mg, 38 %). HPLC: TR = 9,656 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 605,1 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) 5 7,70-7,63 (m, 1H), 7,61-7,56 (m, 1H), 7,55-7,45 (m, 2H), 7,44-7,37 (m, 1H), 7,33-7,19 (m, 2H), 5,38 (s, 1H), 3,38-3,26 (m, 2H), 3,08-2,88 (m, 1H), 2,87-2,70 (m, 2H), 2,69-2,40 (m, 2H), 2,36-2,02 (m, 3H), 2,01-1,69 (m, 3H), 1,34 (t, J = 7,5 Hz, 3h).
Los siguientes ejemplos se prepararon de acuerdo con los metodos generales descritos para el Ejemplo 1 y el Ejemplo 2.
Ejemplo 3
(2R,3S)-N-((3S)-5-(3-clorofenil)-9-isopropil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-
trifluoropropil)succinamida
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CF3
O
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nh
2
o
CF3
(3)
El Ejemplo 3 se preparo a partir del Intermedio B-2 y del Intermedio S-1 quirales de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. Se obtuvo el Ejemplo 3. HPLC: TR = 10,134 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 619 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) 5 7,67 (m, 2H), 7,48 (m, 2H), 7,42 (m, 1H), 7,33 (m, 1H), 7,23 (m, 1H), 5,38 (s, 1h), 3,563,38 (m, 1H), 2,92-2,74 (m, 1H), 2,68-2,42 (m, 2H), 2,38-2,09 (m, 3H), 2,00-1,69 (m, 4H), 1,41 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 1,29 (d, J = 6,8 Hz, 3H).
Ejemplo 4
(2R,3S)-N-(9-cloro-5-(3,4-dimetilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-
trifluoropropil)succinamida
CF3
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0
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nh2
0
CF3
h
(4)
El Ejemplo 4 se preparo a partir del Intermedio B-6 y del Intermedio S-2 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. Despues de la separacion de los diastereomeros mediante SFC quiral (instrumento: Berger SFC MGII, columna: IC quiral 25 x 3 cm, 5 jm; fase movil: CO2/MeOH 88/12, caudal: 85 ml/min; deteccion a 220 nm), se obtuvo el Ejemplo 4. HPLC: TR = 9,771 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 619 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) 5 7,76 (dd, J = 7,8, 1,7 Hz, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,34-7,15 (m, 4H), 5,35 (s, 1h), 2,75 (td, J = 10,6, 4,3 Hz,
5
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30
1H), 2,58-2,48 (m, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,25-2,05 (m, 3H), 1,86-1,66 (m, 4H), 1,65-1,45 (m, 3H). Ejemplo 5
(2R,3S)-N-(9-cloro-5-(3,5-dimetilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-
trifluoropropil)succinamida
Cl
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3
2
(5)
El Ejemplo 5 se preparo a partir del Intermedio B-27 y del Intermedio S-2 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. Despues de la separacion de los diastereomeros mediante SFC quiral (instrumento: Berger SFC MGII, columna: RR Whelk O1 25 x 3 cm, 5 |jm; fase movil: CO2/MeOH 85/15, caudal: 85 ml/min; deteccion a 220 nm), se obtuvo el Ejemplo 5. HPLC: TR = 9,824 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18
3,5 jm, 4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 619 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) 5 7,76 (dd, J = 7,7, 1,8 Hz, 1H), 7,32-7,23 (m, 2H), 7,16 (s, 3H), 5,36 (s, 1H), 2,81-2,71 (m, 1H), 2,53 (d, J = 10,3 Hz, 1H), 2,31 (s, 6H), 2,24-2,04 (m, 3H), 1,84-1,69 (m, 3H), 1,62-1,47 (m, 3H), 1,29 (s, 1H).
Ejemplo 6
(2R,3S)-N-((3S)-9-etil-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-
trifluoropropil)succinamida
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CF
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3
NH
2
O
CF
3
H
(6)
El Ejemplo 6 se preparo a partir del Intermedio B-8 y del Intermedio S-1 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separacion de los diastereomeros (Berger SFC MGII, CHIRALPAK® IC, 25 x 3 cm de DI, 5 jm, CO2/MeOH 92/8, 85 ml/min, deteccion a 220 nm) produjo el Ejemplo 6. HPLC: TR = 9,556 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z 585,2 = [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) 5 7,60-7,52 (m, 1H), 7,49-7,43 (m, 1H), 7,38-7,16 (m, 5H), 5,37 (s, 1H), 3,04-2,89 (m, 1H), 2,87-2,71 (m, 2H), 2,68-2,39 (m, 2H), 2,37 (s, 3H), 2,33-2,09 (m, 3H), 1,99-1,65 (m, 4H), 1,34 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
5
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25
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(2R,3S)-N-((3S)-5-(3-dorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-
trifluoropropil)succinamida
CF
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O
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3
NH
2
O
CF
3
(7)
El Ejemplo 7 se preparo a partir del Intermedio B-3 y del Intermedio S-1 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separacion de los diastereomeros mediante cromatografia SFC preparativa (instrumento: Berger SFC MGII, columna: OD-H quiral 25 x 3 cm, 5 mm; fase movil: CO2/MeOH 90/10; caudal: 85 ml/min; deteccion a 220 nm) produjo el Ejemplo 7. HPLC: TR = 9,328 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18
3,5 |jm, 3,0 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); eM(EN): m/z = 591,2 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, metanol-d4 5 7,65 (t, J = 1,9 Hz, 1H), 7,59-7,50 (m, 2H), 7,50-7,44 (m, 1H), 7,44-7,37 (m, 1H), 7,27-7,20 (m, 2H), 5,39 (s, 1H), 2,86-2,76 (m, 1H), 2,66-2,56 (m, 1H), 2,56-2,46 (m, 4H), 2,33-2,14 (m, 3H), 1,95-1,74 (m, 4H).
Ejemplo 8
(2R,3S)-N-((3S)-5-(3-clorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-
trifluoropropil)succinamida
XF,
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O
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NH
2
O
CF,
H
(8)
El Ejemplo 8 se preparo a partir del Intermedio B-3 y del Intermedio S-2 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separacion de los diastereomeros mediante cromatografia SFC preparativa (instrumento: Berger SFC MGII, columna: Regis Welk-O R,R 25 x 3 cm, 5 mm; fase movil: CO2/MeOH 85/15; caudal: 85 ml/min; deteccion a 220 nm) produjo el Ejemplo 8. HPLC: TR = 9,531 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18
3,5 jm, 3,0 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); eM(EN): m/z = 605,2 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) 5 7,69 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,58-7,50 (m, 2H), 7,47-7,40 (m, 2H), 7,27-7,19 (m, 2H), 5,37 (s, 1H), 2,78 (td, J = 10,3, 4,0 Hz, 1H), 2,60-2,46 (m, 5H), 2,30-2,11 (m, 3H), 1,89-1,71 (m, 3H), 1,67-1,50 (m, 3H).
Ejemplo 9
(2R,3S)-N-((3S)-5-(3-metilfenil)-2-oxo-9-(trifluorometil)-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3- trifluoropropil)succinamida
CF3
CF3 H O O O
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)-N'
N H J O
CF3
CH3
NH2
(9)
5
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25
30
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40
El Ejemplo 9 se preparo a partir del Intermedio B-9 y del Intermedio S-1 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separacion de los diastereomeros mediante cromatografia SFC preparativa (instrumento: Berger SFC MGII, columna: OD-H quiral 25 x 3 cm, 5 |jm; fase movil: CO2/MeOH 92/8; caudal: 85 ml/min; deteccion a 220 nm) produjo el Ejemplo 9. HPLC: TR = 9,488 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18
3,5 jm, 3,0 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 625,3[M+H+]; RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) 5 8,03 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,68-7,62 (m, 1H), 7,53-7,45 (m, 2H), 7,40-7,30 (m, 3H), 5,47 (s, 1H), 2,82 (td, J = 10,5, 4,0 Hz, 1H), 2,60 (td, J = 10,5, 3,7 Hz, 1H), 2,53-2,41 (m, 1H), 2,38 (s, 3H), 2,32-2,14 (m, 3H), 1,99-1,71 (m, 4H).
Ejemplo 10
(2R,3S)-N-((3S)-9-cloro-5-(3,5-dimetilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-
trifluoropropil)succinamida
CF3
Cl
imagen142
H
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NH
2
O
CF
3
(10)
El Ejemplo 10 se preparo a partir del Intermedio B-27 y del Intermedio S-1 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separacion de los diastereomeros mediante SFC quiral (instrumento: Berger SFC MGIII, columna: CHIRALCEL® OD-H 25 x 3 cm, 5 jm; fase movil: CO2/MeOH 92/18; caudal: 150 ml/min; deteccion a 220 nm) produjo el Ejemplo 10. HPLC: TR = 10,878 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 605 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) 5 7,76 (dd, J = 7,7, 1,5 Hz, 1H), 7,33-7,23 (m, 2H), 7,15 (s, 3H), 5,39 (s, 1H), 2,84-2,75 (m, 1H), 2,59 (td, J = 10,3, 4,2 Hz, 1H), 2,51-2,39 (m, 1H), 2,30 (s, 6H), 2,26-2,12 (m, 3H), 1,95-1,70 (m, 4H).
Ejemplo 11
(2R,3S)-N-((3S)-5-(3-metilfenil)-2-oxo-9-(trifluorometil)-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2- (3,3,3-trifluoropropil)succinamida
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3
2
(11)
El Ejemplo 11 se preparo a partir del Intermedio B-9 y del Intermedio S-2 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separacion de los diastereomeros mediante cromatografia SFC preparativa (instrumento: Berger SFC MGII, columna: OD-H quiral 25 x 3 cm, 5 jm; fase movil: CO2/MeOH 92/8; caudal: 85 ml/min; deteccion a 220 nm) produjo el Ejemplo 11. HPLC: TR = 9,699 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18
3,5 jm, 3,0 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 639,3 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) 5 8,03 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,67-7,61 (m, 1H), 7,52-7,44 (m, 2H), 7,41-7,31 (m, 3H), 5,45 (s, 1H), 2,83-2,74 (m, 1H), 2,61-2,42 (m, 2H), 2,39 (s, 3H), 2,35-2,05 (m, 3H), 1,90-1,69 (m, 3H), 1,68-1,48 (m, 3H).
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HaC
'3'
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CH3 CF-
3
NH
'2
CH3
(12)
El Ejemplo 12 se preparo a partir del Intermedio B-10 y del Intermedio S-1 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separacion de los diastereomeros (instrumento: Berger SFC MGIII, columna: Lux Cell-4, 250 x 30 mm, 5 |jm; temp. de columna: 45 °C, fase movil: CO2/MeOH 88/12; deteccion a 220 nm) produjo el Ejemplo 12. HPLC: TR = 15,924 min (MeOH/H2O con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254); EM(EN): m/z = 599 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) 5 7,63 (dd, J = 7,7, 1,3 Hz, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,37-7,24 (m, 4H), 7,19 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 5,36 (s, 1H), 3,52-3,37 (m, 1H), 2,86-2,74 (m, 1H), 2,64-2,42 (m, 2H), 2,36 (s, 3H), 2,32-2,11 (m, 3H), 1,96-1,69 (m, 4H), 1,39 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 1,28 (d, J = 6,8 Hz, 3H).
Ejemplo 13
(2R,3S)-N-((3S)-9-isopropil-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-
trifluoropropil)succinamida
El Ejemplo 13 se preparo a partir del Intermedio B-11 y del Intermedio S-1 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separacion de los diastereomeros (instrumento: Berger SFC MGII, columna: CHIRALPAK® IC 250 x 30 mm, 5 jm; fase movil: CO2/MeOH 90/10; caudal: 85 ml/min; deteccion a 220 nm) produjo el Ejemplo 13. HPLC: TR = 15,481 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 mm, 4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 586 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) 5 7,70-7,56 (m, 3h), 7,56-7,47 (m, 1H), 7,47-7,36 (m, 2H), 7,36-7,25 (m, 1H), 7,25-7,12 (m, 1H), 5,39 (s, 1H), 3,53-3,38 (m, 1H), 2,83 (m, 1H), 2,70-2,41 (m, 2H), 2,37-2,05 (m, 3H), 2,00-1,69 (m, 4H), 1,40 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 1,35-1,21 (m, 3H).
H3C CH3
imagen147
CF3
(13)
5
10
15
20
25
30
O
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2
(14)
El Ejemplo 14 se preparo a partir del Intermedio B-12 y del Intermedio S-2 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separacion de los diastereomeros (Berger SFC MGII, AS-H quiral 25 X 3 cm de DI, 5 |jm, CO2/MeOH 80/20, 85 ml/min, deteccion a 220 nm) produjo el Ejemplo 14. HPLC: TR = 10,064 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 627,20 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) 5 7,65-7,56 (m, 1H), 7,46-7,39 (m, 1H), 7,37-7,16 (m, 4H), 7,00-6,84 (m, 1H), 5,37 (s, 1H), 4,06-3,91 (m, 1H), 2,87-2,68 (m, 1H), 2,64-2,44 (m, 2H), 2,37 (s, 3H), 2,32-2,00 (m, 3H), 1,98-1,50 (m, 4H), 1,50-1,22 (m, 2H), 1,05-0,84 (m, 4H).
Ejemplo 15
(2R,3S)-N-((3S)-9-(ciclopropiloxi)-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3- trifluoropropil)succinamida
CF
imagen150
O
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3
NH
2
O
CF
3
(15)
H
El Ejemplo 15 se preparo a partir del Intermedio B-12 y del Intermedio S-1 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separacion de los diastereomeros (Berger SFC MGII, AS-H quiral 25 X 3 cm de DI, 5 jm, CO2/MeOH 80/20, 85 ml/min, deteccion a 220 nm) produjo el Ejemplo 15. HPLC: Tr = 9,844 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 613,25 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) 5 7,63-7,58 (m, 1H), 7,47-7,39 (m, 1H), 7,38-7,20 (m, 4H), 6,98-6,91 (m, 1H), 5,40 (s, 1H), 4,04-3,94 (m, 1H), 2,88-2,75 (m, 1H), 2,66-2,55 (m, 1H), 2,55-2,39 (m, 1H), 2,39-2,33 (m, 2H), 2,32-2,09 (m, 3H), 2,01-1,65 (m, 3H), 1,52-1,23 (m, 3H), 1,03-0,84 (m, 4H).
5
10
15
20
25
30
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(16)
El Ejemplo 16 se preparo a partir del Intermedio B-13 y del Intermedio S-2 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separacion de los diastereomeros (Berger SFC MGII, AS-H quiral 25 X 3 cm de DI, 5 |jm, CO2/MeOH 80/20, 85 ml/min, deteccion a 220 nm) produjo el Ejemplo 16. HPLC: TR = 9,74 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 613,2 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) 5 7,64-7,55 (m, 3H), 7,55-7,49 (m, 1H), 7,44 (d, J =
7,5 Hz, 2H), 7,26 (s, 1H), 6,98-6,91 (m, 1H), 5,38 (s, 1H), 4,04-3,96 (m, 1H), 2,81-2,71 (m, 1h), 2,62-2,41 (m, 2H), 2,18 (s, 4H), 1,90-1,68 (m, 3H), 1,68-1,33 (m, 3H), 0,93-0,86 (m, 4H).
Ejemplo 17
(2R,3S)-N-((3S)-9-cloro-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-
trifluoropropil)succinamida
Cl
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imagen154
3
2
(17)
El Ejemplo 17 se preparo a partir del Intermedio B-14 y del Intermedio S-2 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. El solido se purifico mediante cromatografia SFC preparativa (Berger SFC MGII, AD-H 250 x 30 mm de DI, 5 cm, CO2/IPA 75/25, 150 ml/min) para obtener el Ejemplo 17. HPlC: TR = 11,04 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 605,3 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, DMSO-ds) 5 10,45 (s, 1H), 9,45 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,84 (dd, J = 5,9, 3,3 Hz, 1H), 7,62 (s. a., 1H), 7,41 (s, 1H), 7,38-7,34 (m, 2H), 7,33-7,26 (m, 3H), 7,03 (s, 1H), 5,21 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 2,79-2,70 (m, 1H), 2,69-2,59 (m, 1H), 2,46-2,38 (m, 1H), 2,34 (s, 3h), 2,31-2,19 (m, 2H), 2,18-2,07 (m, 1H), 1,65-1,53 (m, 3H), 1,49-1,41 (m, 1H), 1,39-1,29 (m, 2H).
5
10
15
20
25
30
CF3
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H
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NH2
O
CF
3
(18)
El Ejemplo 18 se preparo a partir del Intermedio B-15 y del Intermedio S-2 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separacion de los diastereomeros mediante cromatografia SFC preparativa (instrumento: Berger SFC MGII, columna: Regis Welk-O R,R 25 x 3 cm, 5 mm; fase movil: CO2/MeOH 90/10; caudal: 85 ml/min; deteccion a 220 nm) produjo el Ejemplo 18. HPLC: TR = 9,678 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18
3,5 |jm, 3,0 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 639,4 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) 5 8,01 (s, 1H), 7,83 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,77 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,68-7,60 (m, 1H), 7,57 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 7,28-7,17 (m, 2H), 5,40 (s, 1H), 2,79 (td, J = 10,5, 4,0 Hz, 1H), 2,62-2,45 (m, 5H), 2,35-2,18 (m, 2H), 2,16-2,03 (m, 1H), 1,91-1,70 (m, 3H), 1,69-1,48 (m, 3H).
Ejemplo 19
(2R,3S)-N-((3S)-9-(ciclopropiloxi)-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-
trifluoropropil)succinamida
imagen157
(19)
El Ejemplo 19 se preparo a partir del Intermedio B-13 y del Intermedio S-1 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separacion de los diastereomeros (Berger SFC MGII, AS-H quiral 25 x 3 cm de DI, 5 jm, CO2/MeOH 80/20, 85 ml/min, deteccion a 220 nm) produjo el Ejemplo 19. HPLC: tR = 14,967 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 599,1 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) 5 7,61 (dd, J = 8,1, 1,3 Hz, 1H), 7,59-7,54 (m, 2H), 7,54-7,47 (m, 1H), 7,47-7,37 (m, 2H), 7,25 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 6,95 (dd, J = 7,9, 1,1 Hz, 1H), 5,41 (s, 1H), 4,00 (t, J = 4,4 Hz, 1H), 2,82 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 2,61 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 2,55-2,38 (m, 1H), 2,36-2,11 (m, 3H), 2,07-1,70 (m, 4H), 0,91 (d, J = 4,4 Hz, 4H).
5
10
15
20
25
30
CF3
imagen158
H
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NH
2
O
CF
3
(20)
El Ejemplo 20 se preparo a partir del Intermedio B-15 y del Intermedio S-1 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separacion de los diastereomeros mediante cromatografia SFC preparativa (instrumento: Berger SFC MGII, columna: PHENOMENEX® Lux Cellulose 2 25 x 3 cm, 5 |jm; fase movil: CO2/MeOH 92/8; caudal: 85 ml/min; deteccion a 220 nm) produjo el Ejemplo 20. HPLC: TR = 9,483 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 3,0 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 625,1 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) 5 7,97 (s, 1H), 7,81 (dd, J = 13,1, 7,8 Hz, 2H), 7,67-7,60 (m, 1H), 7,57 (dd, J = 6,8, 1,3 Hz, 1H), 5,43 (s, 1H), 2,83 (td, J = 10,5, 4,0 Hz, 1H), 2,61 (td, J = 10,3, 3,5 Hz, 1H), 2,57-2,46 (m, 4H), 2,32-2,12 (m, 3H), 1,98-1,74 (m, 4H).
Ejemplo 21
(2R,3S)-N-((3S)-9-cloro-5-(2-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-
trifluoropropil)succinamida
CF
imagen160
3
nh2
(21)
El Ejemplo 21 se preparo a partir del Intermedio B-16 y del Intermedio S-1 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. El estereoisomero deseado se recolecto como el segundo pico en orden de elucion mediante cromatografia SFC (instrumento: Berger SFC MGII, columna: OD-H quiral 25 x 3 cm, 5 mm; fase movil: CO2/MeOH 85/15; caudal: 85 ml/min; deteccion a 220 nm) para obtener el Ejemplo 21. HPLC: TR = 11,11 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 591[M+H+]; RMN 1H (500 MHz, metanol-d4) 5 7,73 (dd, J = 8,0, 1,4 Hz, 1H), 7,40-7,32 (m, 1H), 7,297,21 (m, 3H), 7,18 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 7,08 (dd, J = 7,9, 1,5 Hz, 1H), 5,45 (s, 1H), 2,79 (td, J = 10,5, 4,0 Hz, 1h), 2,59 (td, J = 10,4, 3,9 Hz, 1H), 2,51-2,38 (m, 1H), 2,30-2,08 (m, 3H), 2,04 (s, 3H), 1,94-1,67 (m, 4H).
5
10
15
20
25
30
35
CFa
imagen161
O
imagen162
NH
2
O
CFa
(22)
El Ejemplo 22 se preparo a partir del Intermedio B-17 y del Intermedio S-1 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separacion de los diastereomeros mediante cromatografia SFC preparativa (instrumento: Berger SFC MGII, columna: IC quiral 25 x 3 cm, 5 |jm; fase movil: CO2/MeOH 92/8; caudal: 85 ml/min; deteccion a 220 nm) produjo el Ejemplo 22. HPLC: TR = 9,016 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 3,0 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 575,1 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) 5 7,69-7,60 (m, 2H), 7,53 (dd, J = 5,8, 2,5 Hz, 1H), 7,24-7,18 (m, 2H), 7,17-7,09 (m, 2H), 5,36 (s, 1H), 2,80 (td, J = 10,4, 4,1 Hz, 1H), 2,58 (td, J = 10,5, 3,6 Hz, 1H), 2,53-2,43 (m, 4H), 2,31-2,11 (m, 3H), 1,95-1,73 (m, 4H).
Ejemplo 23
(2R,3S)-N-((3S)-9-metil-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida
CF3
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O
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OF.
3
NH
2
O
(23)
El Ejemplo 23 se preparo a partir del Intermedio B-4 y del Intermedio S-1 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. HPLC: TR = 7,843 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 557,4 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) 5 7,63-7,57 (m, 1H), 7,56-7,47 (m, 1H), 7,46-7,37 (m, 1H), 7,25-7,18 (m, 1H), 5,39 (s, 1H), 2,82 (td, J = 10,5, 4,0 Hz, 1H), 2,61 (td, J = 10,5, 3,5 Hz, 1h), 2,56-2,40 (m, 4H), 2,36-2,07 (m, 3H), 1,99-1,70 (m, 4H).
Ejemplo 24
(2R,3S)-N-((3S)-9-ciclopropil-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-
trifluoropropil)succinamida
imagen165
5
10
15
20
25
30
35
40
El Ejemplo 24 se preparo a partir del Intermedio B-28 y del Intermedio S-1 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. Este solido se purifico mediante cromatografia SFC preparativa (Berger SFC MGII, IC quiral 250 x 30 mm de DI, 5 |jm, CO2/MeOH 85/15, 85 ml/min) para obtener el Ejemplo 24. HPLC: TR = 11,56 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 583,2 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) 5 10,28 (s, 1H), 9,45 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,65 (s. a., 1H), 7,56-7,49 (m, 3H), 7,47-7,40 (m, 2H), 7,28 (dd, J = 7,7, 1,3 Hz, 1H), 7,20 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 7,15-7,08 (m, 2H), 5,24 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 2,81 (td, J = 9,8, 5,1 Hz, 1H), 2,54 (s. a., 1H), 2,31-2,07 (m, 4H), 1,78-1,53 (m, 5H), 1,11-0,96 (m, 2H), 0,84-0,76 (m, 1H), 0,71-0,62 (m, 1H).
Ejemplo 25
(2R,3S)-N-((3S)-9-cloro-5-(3-ciclopropilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3- trifluoropropil)succinamida
imagen166
(25)
El Ejemplo 25 se preparo a partir del Intermedio B-18 y del Intermedio S-1 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separacion de los diastereomeros (instrumento: Berger SFC MGII, IC quiral 25 x 3 cm de DI, 5jm, CO2/MeOH 90/10, 85 ml/min, deteccion a 220 nm) produjo el Ejemplo 25. HPLC: TR = 8,81 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 617,0 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) 5 7,88-7,70 (m, 1H), 7,45-7,11 (m, 6H), 5,46-5,31 (m, 1H), 2,82 (td, J = 10,4, 4,1 Hz, 1H), 2,69-2,40 (m, 2H), 2,36-2,06 (m, 3H), 2,00-1,58 (m, 5H), 1,06-0,94 (m, 2h), 0,800,62 (m, 2H).
Ejemplo 26
(2R,3S)-N-((3S)-5-(3-clorofenil)-9-metoxi-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-
trifluoropropil)succinamida
OCH3
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CF
3
O
imagen168
NH
2
O
CF
3
(26)
El Ejemplo 26 se preparo a partir del Intermedio B-19 y del Intermedio S-1 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. El solido se purifico mediante cromatografia SFC preparativa (instrumento: Berger SFC MGII, AS-H 250 x 30 mm de DI, 5 jm, CO2/MeOH 82/18, 85 ml/min) para obtener el Ejemplo 26. HPLC: TR = 9,32 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 607 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) 5 10,13 (s, 1H), 9,51 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,68-7,59 (m, 3H), 7,52-7,45 (m, 1H), 7,42-7,32 (m, 2H), 7,30-7,24 (m, 1H), 7,13 (s, 1H), 6,92 (dd, J = 7,9, 1,1 Hz, 1H), 5,25 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H), 2,85-2,75 (m, 1H), 2,63-2,54 (m, 1H), 2,31-2,09 (m, 4H), 1,75-1,52 (m, 4H).
5
10
15
20
25
30
imagen169
nh2
ci
(27)
El Ejemplo 27 se preparo a partir del Intermedio B-20 y del Intermedio S-1 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. El solido se purifico mediante cromatografia SFC preparativa (instrumento: Berger SFC MGII, AS-H 250 x 30 mm de DI, 5 |jm, CO2/MeOH 82/18, 85 ml/min) para obtener el Ejemplo 27. HPLC: TR = 9,44 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 607 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) 5 10,12 (s, 1H), 9,51 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,66 (s. a., 1 h), 7,58-7,50 (m, 4H), 7,36-7,31 (m, 1H), 7,30-7,22 (m, 1H), 7,14 (s, 1H), 6,90 (dd, J = 7,8, 1,2 Hz, 1h), 5,24 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 2,82-2,74 (m, 1H), 2,64-2,55 (m, 1H), 2,30-2,08 (m, 4H), 1,76-1,51 (m, 4H).
El Ejemplo 28 se preparo a partir del Intermedio B-14 y del Intermedio S-1 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. El solido se purifico mediante cromatografia SFC preparativa (instrumento: Berger SFC MGII, IC-H 250 x 30 mm de DI, 5 jm, CO2/MeOH 92/8, 85 ml/min) para obtener el Ejemplo 28. HPLC: TR = 9,36 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 591 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, DMSO-ds) 5 10,48 (s. a., 1H), 9,40 (s. a., 1H), 7,87-7,60 (m, 2H), 7,47-7,04 (m, 5H), 5,15 (s. a., 1H), 4,15 (dd, J = 5,7, 3,3 Hz, 1H), 2,81 (td, J = 9,9, 4,8 Hz, 1H), 2,40-2,02 (m, 5H), 1,83-1,53 (m, 4H), 1,45-1,18 (m, 3H), 0,98-0,79 (m, 2H).
Ejemplo 28
(2R,3S)-N-((3S)-9-cloro-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-
trifluoropropil)succinamida
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CH3
(28)
5
10
15
20
25
30
35
40
OCH
CF.
3
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imagen172
3
NH
2
O
CF
3
H
(29)
El Ejemplo 29 se preparo a partir del Intermedio B-21 y del Intermedio S-1 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. El material en bruto se purifico mediante HPLC preparativa en las siguientes condiciones: Columna: Waters XBridge C18, 19 x 250 mm, particulas de 5 |jm; columna Guard: Waters XBridge C18, 19 x 10 mm, particulas de 5 jm; fase movil A: acetonitrilo:agua 5:95 con acetato de amonio 10 mM; fase movil B: acetonitrilo:agua 95:5 con acetato de amonio 10 mM; gradiente: 15-100 % de B durante 25 minutos, despues 5 minutos de retencion a 100 % de B; flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenian el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporacion centrifuga. El material se volvio a purificar mediante HPLC preparativa en las siguientes condiciones: Columna: Waters XBridge C18, 19 x 250 mm, particulas de 5 jm; columna Guard: Waters XBridge C18, 19 x 10 mm, particulas de 5 jm; fase movil A: acetonitrilo:agua 5:95 con acetato de amonio 10 mM; fase movil B: acetonitrilo:agua 95:5 con acetato de amonio 10 mM; gradiente: 20-55 % de B durante 40 minutos, despues 15 minutos de retencion a 55 % de B; flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenian el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporacion centrifuga. El material se volvio a purificar mediante HPLC preparativa en las siguientes condiciones: Columna: Waters XBridge C18, 19 x 100 mm, particulas de 5 jm; columna Guard: Waters XBridge C18, 19 x 10 mm, particulas de 5 jm; fase movil A: acetonitrilo:agua 5:95 con acetato de amonio 10 mM; fase movil B: acetonitrilo:agua 95:5 con acetato de amonio 10 mM; gradiente: 5100 % de B durante 10 minutos, despues 5 minutos de retencion a 100 % de B; flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenian el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporacion centrifuga para obtener el Ejemplo 29. HPLC: TR = 2,38 min (H2O/CH3CN con TFA, SUPELCO® Ascentis Express C18, 4,6 x 50 mm, 2,7 um, gradiente = 4 min, longitud de onda = 220); EM(EN): m/z = 586 [M+H+]; RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 5 10,12 (s. a., 1H), 9,53 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,43-7,10 (m, 7H), 6,87 (dd, J = 7,9, 1,0 Hz, 1H), 5,24 (d, J =
7,4 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 2,80 (td, J = 10,0, 4,7 Hz, 1H), 2,63-2,54 (m, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,30-2,09 (m, 3H), 1,78-1,53 (m, 4H).
Ejemplo 30
(2R,3S)-N-((3S)-5-(4-(hidroximetil)fenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-
trifluoropropil)succinamida
imagen173
(30)
El Ejemplo 30 se preparo a partir del Intermedio B-5 y del Intermedio S-1 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. El solido se purifico mediante cromatografia SFC preparativa (instrumento: Berger SFC MGII, Lux Cellulose-2 250 x 30 mm de DI, 5 |jm, CO2/MeOH 85/15, 85 ml/min) para obtener el Ejemplo 30. HPLC: TR = 6,91 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 573 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, DMSO-ds) 5 10,84 (s, 1H), 9,49 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,70-7,60 (m, 2H), 7,51-7,43 (m, 2H), 7,42-7,36 (m, 2H), 7,36-7,29 (m, 2H), 7,29-7,22 (m, 1H), 7,14 (s.
5
10
15
20
25
30
a., 1H), 5,30 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 5,25 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 4,57 (d, J = 5,7 Hz, 2H), 2,88-2,73 (m, 1H), 2,64-2,54 (m, 2H), 2,31-2,00 (m, 3H), 1,85-1,43 (m, 4H).
Ejemplo 31
(2R,3S)-N-((3S)-5-(2-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida
CF
imagen174
3
nh2
(31)
El Ejemplo 31 se preparo a partir del Intermedio B-29 y del Intermedio S-1 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. El solido se purifico mediante cromatografia SFC preparativa (instrumento: Berger SFC MGII, Lux Cellulose-2 250 x 30 mm de DI, 5 |jm, CO2/MeOH 90/10, 85 ml/min) para obtener el Ejemplo 31. HPLC: TR = 8,68 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 557 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, DMSO-ds) 5 10,94 (s. a., 1H), 9,47 (d, J =
7.5 Hz, 1H), 7,69-7,55 (m, 2H), 7,41-7,21 (m, 4H), 7,20-7,11 (m, 3H), 7,05 (dd, J = 7,9, 1,3 Hz, 1H), 5,29 (d, J =
7.5 Hz, 1H), 2,78 (td, J = 10,0, 4,7 Hz, 1H), 2,31 -2,07 (m, 3H), 2,02-1,94 (m, 3H), 1,76-1,51 (m, 4H).
Ejemplo 32
(2R,3S)-N-((3S)-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida
CF3
imagen175
imagen176
NH
2
O
CF
3
H
(32)
El Ejemplo 32 se preparo a partir del Intermedio B-22 y del Intermedio S-1 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. Este solido se purifico mediante cromatografia SFC preparativa (instrumento: Berger SFC MGII, PHENOMENEX® Lux Cellulose-2 250 x 30 mm de DI, 5jm, CO2/MeOH 90/10, 85 ml/min) para obtener el Ejemplo 32. HPLC: TR = 9,35 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 557 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, DMSO-ds) 5 10,84 (s, 1H), 9,50 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,69-7,61 (m, 2H), 7,40-7,18 (m, 7H), 7,14 (s. a., 1H), 5,26 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 2,872,75 (m, 1H), 2,55 (d, J = 2,0 Hz, 2H), 2,33 (s, 3H), 2,30-2,06 (m, 3H), 1,80-1,50 (m, 4H).
5
10
15
20
25
30
OCH
CF
imagen177
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3
NH
2
O
CF
3
F3C
(33)
El Ejemplo 33 se preparo a partir del Intermedio B-24 y del Intermedio S-1 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. Despues de la separacion de los diastereomeros (instrumento: Berger SFC MGII, AS-H 250 x 46 mm de DI, 5 |jm, CO2/MeOH 80/20, 85 ml/min) se obtuvo el Ejemplo 33. HPLC: TR = 9,364 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 642 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, DMSO-ds) 5 ppm 10,19 (1 H, s), 9,58 (1 H, d, J = 7,5 Hz), 8,98 (1 H, d, J = 0,9 Hz), 8,40 (1 H, dd, J = 8,4, 2,0 Hz), 8,15 (1 H, d, J = 8,4 Hz), 7,65 (1 H, s. a.), 7,30 (1 H, dd, J = 8,4, 1,1 Hz), 7,20 (1 H, t, J = 8,0 Hz), 7,14 (1 H, s. a.), 6,93 (1 H, dd, J = 7,9, 1,1 Hz), 5,35 (1 H, d, J = 7,3 Hz), 3,92 (3 H, s), 2,74-2,85 (1 H, m), 2,55-2,65 (1 H, m), 2,05-2,31 (4 H, m), 1,47-1,77 (4 H, m).
Ejemplo 34
(2R,3S)-N-((3S)-5-(5-cloro-2-piridinil)-9-metoxi-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-
trifluoropropil)succinamida
och3
imagen179
CF
3
O
imagen180
NH
2
O
CF
3
(34)
El Ejemplo 34 se preparo a partir del Intermedio B-26 y del Intermedio S-1 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. Este solido se purifico mediante cromatografia SFC preparativa (instrumento: Berger SFC MGII, AS-H 250 x 46 mm de DI, 5 jm, Co2/MeOH 75/25, 85 ml/min) para obtener el Ejemplo 34. HPLC: TR = 8,43 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 587 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, DMSO-ds) 5 10,14 (s, 1H), 9,55 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 8,688,58 (m, 1H), 8,11 (dd, J = 8,5, 2,5 Hz, 1H), 7,99 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,66 (s. a., 1H), 7,33-7,26 (m, 1H), 7,21 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,14 (s. a., 1H), 6,93 (dd, J = 7,9, 1,1 Hz, 1H), 5,30 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 3,92 (s, 3H), 2,84-2,72 (m, 1H), 2,65-2,56 (m, 1H), 2,31 -2,04 (m, 3H), 1,76-1,47 (m, 4H).
5
10
15
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25
30
imagen181
CF3
NH2
h3co
'3
(35)
El Ejemplo 35 se preparo a partir del Intermedio B-25 y del Intermedio S-1 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. Los diastereomeros se separaron mediante HPLC quiral (CHIRALPAK® AD 5 cm x 50 cm, /'-propanol isocratico 10 |jM al 30 %:heptano 100 ml/min) para obtener el Ejemplo 35. HPLC: TR = 8,68 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 573 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, DMSO-ds) 5 10,81 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 9,48 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 7,64 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 7,46 (dd, J = 8,7, 4,1 Hz, 2H), 7,39-7,22 (m, 3H), 7,00 (dd, J = 8,8, 3,3 Hz, 2H), 5,22 (dd, J = 9,4,
7,6 Hz, 1H), 3,82 (s, 3H), 2,97-2,84 (m, 1H), 2,37-2,08 (m, 4H), 1,85-1,55 (m, 4H), 1,43-1,32 (m, 3H).
(2R,3S)-N-((3S)-5-(4-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida
El Ejemplo 36 se preparo a partir del Intermedio B-23 y del Intermedio S-1 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. Los diastereomeros se separaron mediante HPLC preparativa quiral (CHIRALPAK® AD 5 cm x 50 cm, /-propanol isocratico 10 jM al 20 %:heptano 100 ml/min) para obtener el Ejemplo 36. HPLC: TR = 9,32 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 jm, 4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 557 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, DMSO-ds) 5 10,80 (s, 1H), 9,46 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,70-7,57 (m, 2H), 7,39 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,35-7,19 (m, 5H), 7,12 (s, 1H), 5,23 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 2,84-2,74 (m, 1H), 2,36 (s, 3H), 2,27-2,07 (m, 3H), 1,77-1,52 (m, 5H).
Ejemplo 36
imagen182
CF3
H3C
(36)
5
10
15
20
25
30
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Intermedio 37A: N-metoxi-N,3-dimetil-2-nitrobenzamida
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Me OMe
(37A)
A una suspension de acido 3-metil-2-nitrobenzoico (5 g, 27,6 mmol) en DCM (50 ml), se le anadio cloruro de oxalilo (4,83 ml, 55,2 mmol) y despues 2 gotas de DMF. La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 1,5 h, despues se concentro y se destilo azeotropicamente con DCM/tolueno, lo que dio como resultado un solido de color blanco que se seco en alto vado durante la noche. A una mezcla de N,O-dimetilhidroxilamina, HCl (5,38 g, 55,2 mmol) y TEA (11,54 ml, 83 mmol) en DCM (80 ml) a 0 °C, se le anadio lentamente una solucion del cloruro de acido anterior en DCM (20 ml). La reaccion se agito durante 30 min, despues se inactivo con agua y se extrajo con DCM. La capa organica se separo, se lavo con HCl 1 N, NaHCO3 saturado y salmuera, despues se seco y se concentro para obtener el Intermedio 37A (6,05 g, 98 %). HPLC: TR = 1,27 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4,6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contenia TFA al 0,1 %, 4 ml/min, control a 220 nm), RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 5 7,52 - 7,45 (m, 1H), 7,42 - 7,35 (m, 2H), 3,48 (s. a., 3H), 3,33 (s, 3H), 2,51 (s, 3H).
Intermedio 37B: 3-(bromometil)-N-metoxi-N-metil-2-nitrobenzamida
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Una mezcla del Intermedio 37A (5,5 g, 24,53 mmol), NBS (5,24 g, 29,4 mmol) y peroxido de benzoilo (0,594 g, 2,453 mmol) en CCU (80 ml) se purgo con nitrogeno y despues se calento a 80 °C durante 4,5 h. La mezcla de reaccion se enfrio a temperatura ambiente y despues se inactivo con agua. La mezcla se extrajo con DCM y los extractos combinados se lavaron con NaHCO3 saturado y salmuera, despues se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a sequedad. El material en bruto se purifico mediante cromatografia ultrarrapida (columna de SiO2, 80 g, EtOAc/hexano = 0 - 100 %) para obtener el Intermedio 37B.
5
10
15
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30
Intermedio 37C: 3-(hidroximetil)-N-metoxi-N-metil-2-nitrobenzamida
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Una mezcla del Intermedio 37B (3,7 g, 4,88 mmol) y carbonato de calcio (2,93 g, 29,3 mmol) en dioxano (25 ml)/agua (25 ml) se agito a reflujo durante 5 h. Despues la mezcla se enfrio a temperatura ambiente, el solido se retiro mediante filtracion y el filtrado se extrajo con EtOAc. Las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron a sequedad. El residuo en bruto se purifico mediante cromatografia ultrarrapida (columna de SiO2, 80 g, EtOAc/hexano = 20-100 %) para obtener el Intermedio 37C (1,079 g, 78 %). HPlC: TR = 0,75 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4,6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contenia TFA al 0,1 %, 4 ml/min, control a 220 nm), EM(EN): m/z = 241,0 [M+H+].
Intermedio 37D: 3-(((ferc-butildimetilsilil)oxi)metil)-N-metoxi-N-metil-2-nitrobenzamida
Me
Me^|^Me
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Me OMe (37D)
A una solucion del Intermedio 37C (1,079 g, 4,49 mmol) y TBDMS-Cl (1,016 g, 6,74 mmol) en DMF (4 ml), se le anadio imidazol (0,612 g, 8,98 mmol). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 1 h. Se anadio agua y la mezcla se extrajo con EtOAc. Los extractos combinados se lavaron con LiCl al 10 % y salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a sequedad. El material en bruto se purifico mediante cromatografia ultrarrapida (columna de SiO2, 40 g, EtOAc/hexano = 0-30 %) para obtener el Intermedio 37D (1,25 g, 79 %). HPLC: TR = 3,05 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4,6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contenia TfA al 0,1 %, 4 ml/min, control a 220 nm), EM(EN): m/z = 355,0 [M+H+]. RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 5 7,90 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,70 - 7,62 (m, 1H), 7,47 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 4,98 (s, 2H), 3,46 (s. a., 3H), 3,36 (s. a., 3H), 0,98 (s, 9H), 0,15 (s, 6h).
Intermedio 37E: 2-amino-3-(((ferc-butildimetilsilil)oxi)metil)-N-metoxi-N-metilbenzamida
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Una mezcla del Intermedio 37D (1,25 g, 3,53 mmol) y 10 % de Pd/C (200 mg, 0,188 mmol) en EtOAc (50 ml) se purgo con hidrogeno. Despues la mezcla se agito en una atmosfera de hidrogeno durante 1,5 h. La suspension se filtro y el filtrado se concentro a sequedad. El material en bruto se purifico mediante cromatografia ultrarrapida (columna de SiO2, 24 g, EtOAc/hexano = 0-40 %) para obtener el Intermedio 37E (939 mg, 82 %). HPLC: TR =
5
10
15
20
25
30
35
2,986 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4,6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contema TFA al 0,1 %, 4 ml/min, control a 220 nm), EM(EN): m/z = 325,2 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 5 7,32 (dd, J = 7,7, 1,5 Hz, 1H), 7,11 (dd, J = 7,5, 1,5 Hz, 1H), 6,68 - 6,62 (m, 1H), 5,21 (s. a., 2H), 4,71 (s, 2H), 3,61 (s, 3H), 3,36 (s, 3H), 0,92 (s, 9H), 0,09 (s, 6H).
Intermedio 37F: (2-amino-3-(((ferc-butildimetilsilil)oxi)metil)fenil)(3-fluorofenil)metanona
Me
Me^|^Me
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(37F)
A una solucion de 1-fluoro-3-yodobenceno (0,782 ml, 6,66 mmol) en THF (6 ml) a -78 °C, se le anadio gota a gota nBuLi (2,5 M en hexano, 2,66 ml, 6,66 mmol). Despues de que se completara la adicion, la mezcla se agito a -78 °C durante 40 min. Despues se anadio gota a gota una solucion del Intermedio 37E (540 mg, 1,664 mmol) en THF (2,5 ml). Despues la mezcla se agito a -78 °C durante 2 h. La mezcla resultante se vertio en hielo con HCl (7,49 ml, 7,49 mmol) y se extrajo con EtOAc. Los extractos combinados se lavaron con salmuera, se secaron y se concentraron. El material en bruto se purifico mediante cromatografia ultrarrapida (columna de SiO2, 12 g, EtOAc/hexano = 0-15 %) para obtener el Intermedio 37F (271 mg, 45 %). HPLC: Tr = 3,70 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4,6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contema TFA al 0,1 %, 4 ml/min, control a 220 nm), EM(EN): m/z = 360,4 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) d 7,49 - 7,33 (m, 4H), 7,27 - 7,20 (m, 2H), 6,84 (s. a., 2H), 6,57 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 4,77 (s, 2H), 0,95 (s, 9H), 0,13 (s, 6H).
Intermedio 37G: 9-(((ferc-butildimetilsilil)oxi)metil)-5-(3-fluorofenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-3-
il)carbamato de bencilo
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(37G)
A una solucion de acido 2-(1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-il)-2-(((benciloxi)carbonil)amino)acetico (608 mg, 1,864 mmol) en THF (7 ml) enfriada a 0 °C, se le anadio cloruro de oxalilo (0,157 ml, 1,789 mmol) y despues DMF (0,02 ml). La mezcla resultante se agito a 0 °C durante 1,5 h. Despues se anadio lentamente una solucion del Intermedio 37F (268 mg, 0,745 mmol) y 4-metilmorfolina (0,246 ml, 2,236 mmol) en THF (3 ml). Despues de la adicion, la mezcla de reaccion se calento a temperatura ambiente y se agito durante 1 h. A continuacion, se anadio amoniaco 7 N en MeOH (4 ml, 28,0 mmol) y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla resultante se concentro y el residuo se trato con EtOAc y agua. La capa organica se separo y la capa acuosa se extrajo con EtOAc. Los extractos organicos combinados se lavaron con NaOH 1 N, NaHCO3 saturado y salmuera, despues se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron. Despues el residuo se disolvio en acido acetico (1,5 ml,
26,2 mmol) y se trato con acetato de amonio (287 mg, 3,73 mmol). La mezcla se agito a 40 °C durante 2 h. Despues la mezcla de reaccion se trato con agua y se extrajo con EtOAc. Los extractos combinados se lavaron con agua, NaHCO3 saturado y salmuera, despues se secaron y se concentraron. El material en bruto se purifico mediante
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cromatografia ultrarrapida (columna de SiO2, 12 g, EtOAc/hexano = 0-40 %) para obtener el Intermedio 37G (256 mg, 63 %). HPlC: TR = 3,61 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4,6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contenia TFA al 0,1 %, 4 ml/min, control a 220 nm), EM(EN): m/z = 548,5 [M+H+].
Intermedio 37H: 3-amino-5-(3-fluorofenil)-9-(hidroximetil)-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona
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(37H)
Una mezcla del Intermedio 37G (255 mg, 0,466 mmol) en 33 % de HBr en HOAc (1149 |jl, 6,98 mmol) se agito a temperatura ambiente durante 1 h. Se anadio eter y el precipitado solido resultante se recolecto mediante filtracion y se aclaro con eter. El solido se disolvio en MeOH (10 ml) y se anadio K2CO3 (1,3 g). La mezcla se agito durante 40 min, despues se filtro y se concentro a sequedad para obtener el Intermedio 37H (133 mg). HPLC: TR = 1,102 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4,6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contenia tFa al 0,1 %, 4 ml/min, control a 220 nm), EM(EN): m/z = 300,2 [M+H+].
Intermedio 37I: 6,6,6-trifluoro-3-((5-(3-fluorofenil)-9-(hidroximetil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-3- il)carbamoil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoato de (2S,3R)-ferc-butilo
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A una solucion del Intermedio 37H (130 mg, 0,434 mmol), Intermedio S-1 (159 mg, 0,434 mmol) y TBTU (167 mg, 0,521 mmol) en DMF (1,5 ml), se le anadio TEA (0,133 ml, 0,956 mmol). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 45 min. Se anadio agua y el solido se recolecto mediante filtracion, se aclaro con agua y se seco. El solido resultante se purifico mediante cromatografia ultrarrapida (columna de SiO2, 12 g, EtOAc/hexano = 0-80 %) para obtener el Intermedio 37I (66 mg 23 %). HPLC: TR = 3,27 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4,6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contenia TFA al 0,1 %, 4 ml/min, control a 220 nm), EM(EN): m/z = 648,3 [M+H+].
Intermedio 37J: Acido (2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3-((5-(3-fluorofenil)-9-(hidroximetil)-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-
benzo[e][1,4]diazepin-3-il)carbamoil)-2-(3,3,3-trifluoropropil) hexanoico
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A una solucion del Intermedio 37I (65 mg, 0,100 mmol) en DCM (2 ml), se le anadio TFA (2 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 3 h y despues se concentro a sequedad. El material en bruto se purifico mediante
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HPLC preparativa de fase inversa (MeOH acuoso, que contema TFA al 0,1 %). Las fracciones deseadas se combinaron y se concentraron a sequedad para obtener el Intermedio 37J (30 mg, 51 %). HPLC: TR = 2,680 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4,6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contema TFA al 0,1 %, 4 ml/min, control a 220 nm), EM(EN): m/z = 592,3 [M+H+].
Ejemplo 37:
A una mezcla del Intermedio 37J (30 mg, 0,051 mmol), EDC (34,0 mg, 0,178 mmol) y HOBT (27,2 mg, 0,178 mmol) en THF (2 ml), se le anadio amoniaco 2 M en IPA (0,507 ml, 1,014 mmol). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante la noche y despues se concentro. Se anadio agua al residuo y la mezcla se extrajo con EtOAc. Los extractos organicos combinados se lavaron con NaHCO3 saturado y salmuera, despues se secaron (MgSO4) y se concentraron para obtener 30 mg del producto en bruto en forma de una mezcla de dos diastereomeros. Los diastereomeros se separaron mediante SFC quiral (Berger SFC MGII, ID quiral 25 x 3 cm de DI, 5 |jm, CO2/MeOH 85/15, 85 ml/min, deteccion a 220 nm) para obtener el Ejemplo 37 (10 mg, 35 %). HPLC: TR = 7,44 min (H2O/CH3CN con TFA, Xbridge Phenyl 3,5 um, 4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); Em(EN): m/z = 591,2 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, metanol^) 5 7,68 - 7,62 (m, 1H), 7,46 - 7,39 (m, 1H), 7,38 - 7,20 (m, 5H), 5,43 (s, 1H), 4,94 - 4,88 (m, 1H), 4,80 - 4,73 (m, 1H), 2,80 (td, J = 10,3, 4,0 Hz, 1H), 2,59 (td, J = 10,5, 3,7 Hz, 1H), 2,54 - 2,39 (m, 1H), 2,31 - 2,10 (m, 3H), 1,96 - 1,70 (m, 4H).
Ejemplo 38
L-valinato de ((3S)-3-(((2R,3S)-3-carbamoil-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3-fluorofenil)-9- metil-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-1-il)metilo
H2N
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2
(38)
Intermedio 38A: 2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato de (S)-clorometilo
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H
NWMe
X XMe
.. O Me Me
(38A)
A una mezcla de acido (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoico (4 g, 18,41 mmol), sulfato acido de tetrabutilamonio (1,25 g, 3,68 mmol) y Na2CO3 (9,76 g, 92 mmol) en DCM (80 ml) y agua (80 ml) agitada vigorosamente, enfriada en un bano de hielo/agua, se le anadio lentamente clorosulfato de clorometilo (3,8 ml, 36,8 mmol) durante 4 min. Despues de agitar en el bano de hielo/agua durante 30 min, el bano frio se retiro y la mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente. Despues de agitar durante 16 h a temperatura ambiente, la mezcla de reaccion se diluyo con agua y se extrajo con DCM. La capa acuosa se volvio a extraer con DCM y las capas organicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron para obtener el Intermedio 38A (5,45 g).
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F
NH,
(38B)
A una mezcla agitada del Ejemplo 1 (400 mg, 0,696 mmol) y K2CO3 (289 mg, 2,089 mmol) en DMF (4 ml), se le anadio lentamente el Intermedio 38A (555 mg, 2,089 mmol) en DMF (3 ml). Despues de agitar a temperatura ambiente durante 22 h, la mezcla de reaccion se diluyo con EtOAc y se lavo 3 veces con solucion acuosa de LiCl al 10 %. La capa organica se seco sobre MgSO4, se filtro y se concentro. El material en bruto se purifico mediante cromatografia ultrarrapida (Teledyne ISCO CombiFlash del 20 % al 70 % de disolvente A/B = hexano/acetona, REDISEP® SiO2 120 g, deteccion a 254 nm y control a 220 nm) para obtener el Intermedio 38B (213,3 mg, 38,1 %). HPLC: TR = 3,428 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4,6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contenia TFA al 0,1 %, 4 ml/min, control a 220 nm), EM(EN): m/z = 804,5 [M+H+].
Ejemplo 38:
A una mezcla agitada del Intermedio 38B (213,3 mg, 0,265 mmol) en DCM (6 ml), se le anadio HCl 4 N en dioxano (0,663 ml, 2,65 mmol) a temperatura ambiente. Despues de agitar durante 1,5 h, la mezcla de reaccion se concentro y el material en bruto se purifico mediante HPLC preparativa (YMC C18, 30 x 100, 10-90 % de metanol acuoso durante 12 minutos, que contenia TFA al 0,1 %, 30 ml/min, detectado y control a 220 nM). Las fracciones que contenian el producto se combinaron y despues se concentraron mediante liofilizacion para obtener el Ejemplo 38 (154 mg, 70,3 %) en forma de una sal de tFa. HPLC: TR = 10,854 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 |jm,
4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 704,6 [M+H+]; RMN 1H (500 MHz, DMSO-ds) 5 9,46 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 8,14 (s. a., 3H), 7,72-7,62 (m, 2H), 7,57-7,50 (m, 1H), 7,47-7,37 (m, 4H), 7,27 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,13 (s, 1H), 6,15 (d, J = 10,3 Hz, 1H), 5,50 (d, J = 10,3 Hz, 1H), 5,38 (d, J = 6,7 Hz, 1 h), 2,83 (td, J = 10,2, 4,3 Hz, 1H), 2,45 (s, 4H), 2,29-2,18 (m, 1H), 2,17-2,06 (m, 2H), 1,81-1,72 (m, 1H), 1,72-1,48 (m, 4H), 0,66 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 0,62 (d, J = 6,9 Hz, 3H).
Ejemplo 39
L-alaninato de ((3S)-3-(((2R,3S)-3-carbamoil-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3-fluorofenil)-9- metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-1-il)metilo
H2N
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NH
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Cl
O H
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Me O Me
(39A)
A una mezcla de acido (S)-2-((ferc-butoxicarbonil)amino) propanoico (1 g, 5,29 mmol), sulfato acido de tetrabutilamonio (0,359 g, 1,057 mmol) y Na2CO3 (2,80g, 26,4mmol) en DCM 20 (ml) y agua (20 ml) agitada vigorosamente, enfriada en un bano de hielo/agua, se le anadio lentamente clorosulfato de clorometilo (1,09 ml, 10,57 mmol) durante 4 min. Despues de agitar un bano de hielo/agua durante 30 min, el bano frio se retiro y la mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente. Despues de agitar durante 16 h a temperatura ambiente, la mezcla de reaccion se diluyo con agua y se extrajo con DCM. La capa acuosa se volvio a extraer con DCM y las capas organicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron. El material en bruto (1,64 g) se uso tal cual sin purificacion adicional.
Ejemplo 39:
El Ejemplo 39 se preparo a partir del Ejemplo 1 y del Intermedio 39A de acuerdo con el procedimiento general indicado para el Ejemplo 38. HPLC: TR = 7,443 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 |jm, 4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 676 [M+H+]; RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 5 9,45 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 8,17 (s. a., 3H), 7,72-7,63 (m, 2H), 7,58-7,49 (m, 1H), 7,48-7,36 (m, 4H), 7,25 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 7,14 (s. a., 1H), 6,15 (d, J = 10,3 Hz, 1H), 5,50 (d, J = 10,3 Hz, 1H), 5,38 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 2,83 (td, J = 10,1,
4,2 Hz, 1H), 2,45 (s, 3H), 2,29-2,06 (m, 3H), 1,77-1,48 (m, 4H), 0,94 (d, J = 7,2 Hz, 3H).
Ejemplo 40
S-(((2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3-(((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)carbamoil)-2- (3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-L-cistema
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CF
3
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O
CF
3
S
H
O
T OH
nh2
(40)
Intermedio 40A: 3,3'-disulfandiilbis(2-((ferc-butoxicarbonil)amino)propanoato) de (2R,2'R)-di-ferc-butilo
Me
Me
Me^O
O^NH S
O Me
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Me"l ^
Me O
S HN Me
M4e
r
O
Me
Me
(40A)
Una suspension de diclorhidrato de 3,3'-disulfandiilbis(2-aminopropanoato) de (2R,2'R)-di-terc-butilo (1,9 g, 4,47 mmol) en DMF (50 ml) a temperatura ambiente se trato con TEA (1,556 ml, 11,17 mmol) y despues con dicarbonato de di-terc-butilo (2,437 g, 11,17 mmol). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reaccion se vertio en EtOAc (100 ml) y se lavo con HCl 0,1 N (100 ml, 2 veces) y despues con NaHCO3 acuoso saturado (100 ml) y salmuera (100 ml). La capa organica se seco (Na2SO4), se filtro y se concentro a sequedad. El producto en bruto se disolvio en una pequena cantidad de DCM y se purifico mediante cromatografia ultrarrapida (columna de SiO2, de acetato de etilo al 0 %/hexanos a acetato de etilo al 20 %/hexanos, 120 g, 30 min de gradiente) para obtener el Intermedio 40A (1,65 g, 66,8 %). RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 5 5,34 (d, J = 5,9 Hz, 2H), 4,46 (d, J = 5,9 Hz, 2H), 3,27-3,07 (m, 4H), 1,49 (s, 18H), 1,46 (s, 18H).
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Intermedio 40B: 2-((ferc-butoxicarbonil)amino)-3-(((2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3-(((S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3- dihidro-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-3-il)carbamoil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanamido)tio)propanoato de (R)-ferc-butilo
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3
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Me
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(40B)
Una suspension leve de nitrato de plata (118 mg, 0,696 mmol) en metanol (18 ml) se trato con el Intermedio 40A (385 mg, 0,696 mmol). La mezcla de reaccion se agito durante 30 min y despues se anadieron el Ejemplo 1 (100 mg, 0,174 mmol) y TEA (97 |jl, 0,696 mmol). La reaccion se agito a temperatura ambiente durante la noche y despues se concentro a sequedad. El producto en bruto se disolvio en una pequena cantidad de DCM y se purifico mediante cromatografia ultrarrapida (columna de SiO2, de acetato de etilo al 0 %/hexanos a acetato de etilo al 100 %/hexanos, 24 g, 30 min de gradiente) para obtener el Intermedio 40B (78 mg, 52,7 %). TR de HPLC= 3,443 min (CHROMOLITH® SpeedROD, 5,0 um, 4,6 mm x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso que contenia TFA al 0,1 %, 4 min de gradiente, control a 220 nm). [M+H+] = 850,5.
Ejemplo 40:
Una solucion del Intermedio 40B (78 mg, 0,092 mmol) en DCM (5 ml) a 0 °C se trato con TFA (0,5 ml, 6,49 mmol) y se calento lentamente a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante la noche y despues se concentro a sequedad. El producto de la reaccion en bruto se disolvio en una pequena cantidad de MeOH y se purifico mediante HpLC de fase inversa (YMC ODS C18 5 um 30 x 100 mm, 10-90 % de metanol acuoso que contenia TFA al 0,1 %, 15 ml/min, 30 min de gradiente, control a 220 nm). El producto (tiempo de retencion = 24,980 minutos) se aislo y se liofilizo a sequedad. El solido resultante se suspendio en agua y se trato con HCl 0,1 N (1 ml) a 0 °C. La solucion se volvio a liofilizar a sequedad para obtener el Ejemplo 40 en forma de una sal de HCl (29 mg, 41,5 %). TR de HPLC: = 9,328 min (Sunfire C18 3,5 um, 3 x 150 mm, del 10 % de agua/ACN 95/5 con TFA al 0,05 % al 100 % de agua/ACN 5/95 con TFA al 0,05 %, 15 min de gradiente, caudal = 0,5 ml/min, control a 220 y 254 nm). EM(EN): m/z = 694,4 [M+H+]. RMN 1H (400 MHz, DMSO-ds) 5 10,23 (s, 1H), 9,65 (s, 1H), 9,52 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 8,44 (s. a., 2H), 7,55 (dd, J = 6,6, 1,5 Hz, 1H), 7,51-7,44 (m, 1H), 7,42-7,33 (m, 2h), 7,287,23 (m, 1H), 7,22-7,17 (m, 2h), 5,25 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 4,02-3,94 (m, 1h), 3,27 (dd, J = 15,1,4,1 Hz, 1H), 3,02 (dd, J = 15,1, 8,9 Hz, 1H), 2,92 (td, J = 10,6, 3,3 Hz, 1H), 2,74-2,65 (m, 1H), 2,28-2,11 (m, 4H), 1,85-1,74 (m, 1H), 1,731,64 (m, 1H), 1,64-1,54 (m, 1H), 1,48-1,36 (m, 1H).
Ejemplo 41
S-(((2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3-(((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)carbamoil)-2- (3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-L-cisteinato de terc-butilo
CF3
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O
H
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'S
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CF
3
O
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CH3
CH
3
CH3
(41)
Una solucion del Intermedio 40B (417 mg, 0,491 mmol) en DCM (20 ml) se trato con TFA (2 ml, 26,0 mmol) y se agito a temperatura ambiente durante 24 h. La solucion resultante se concentro a sequedad. El producto de la reaccion en bruto se disolvio en una pequena cantidad de MeOH y se purifico mediante HPLC de fase inversa (YMC ODS C18 5 um 20 x 100mm, 10-90 % de metanol acuoso que contenia TFA al 0,1 %, 15 ml/min, 30 min de gradiente, control a 220 nm). El producto (tiempo de retencion = 27,037 minutos) se aislo y se liofilizo a sequedad. El material resultante se convirtio en base libre con NaHCO3 acuoso saturado para obtener el Ejemplo 41 (12 mg,
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3.03 %). HPLC: TR = 8,726 min (Xbridge Phenyl 3,5 |jm, 3 x 150 mm, del 10 % de agua/ACN 95/5 con TFA al 0,05 % al 100 % de agua/ACN 5/95 con TFA al 0,05 %, 15 min de gradiente, caudal = [caudal], control a 220 y 254 nm). EM(EN): m/z = 750, 4,4 [M+H+]. RMN 1H (400 MHz, DMSO-ds) 5 10,25 (s, 1H), 9,62 (s, 1H), 9,54 (d, J =
7.3 Hz, 1H), 8,46 (s. a., 3H), 7,56 (dd, J = 6,6, 1,8 Hz, 1H), 7,53-7,45 (m, 1H), 7,43-7,33 (m, 2H), 7,29-7,24 (m, 1H), 7,23-7,17 (m, 2H), 5,26 (d, J = 7,3 Hz, 1h), 3,98 (s. a., 1h), 3,24 (dd, J = 15,0, 4,2 Hz, 1H), 3,03 (dd, J = 15,0, 9,0 Hz, 1H), 2,94 (td, J = 10,3, 3,4 Hz, 1H), 2,76-2,66 (m, 1h), 2,48-2,44 (m, 1H), 2,29-2,12 (m, 3H), 1,87-1,77 (m, 1H), 1,75-1,67 (m, 1H), 1,65-1,54 (m, 1H), 1,49 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 1,46 (s, 9H).
Ejemplo 42
S-(((2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3-(((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)carbamoil)-2- (3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-L-cisteinato de metilo
CF,
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H O
O
NH
2
CF,
(42)
H
Intermedio 42A: 2-((ferc-butoxicarbonil)amino)-3-(((2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3-(((S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3- dihidro-1 H-benzo[e][1,4]diazepin-3-il)carbamoil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanamido)tio)propanoato de (R)-metilo
CF3
Me ,n~/ o r h
n H J o
cf3
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3
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hn
o
I Me
0\pMe
Me
(42A)
Una solucion de nitrato de plata (118 mg, 0,696 mmol) en metanol (9 ml) se trato con 3,3'-disulfandiilbis(2-((ferc- butoxicarbonil)amino) propanoato) de (2R,2'R)-dimetilo (326 mg, 0,696 mmol). La mezcla de reaccion se agito durante 30 minutos y despues se anadieron el Ejemplo 1 (100 mg, 0,174 mmol) y TEA (0,097 ml, 0,696 mmol). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante la noche y despues se concentro a sequedad. El producto en bruto se disolvio en una pequena cantidad de CH2Ch y se purifico mediante cromatografia ultrarrapida (columna de SiO2, de acetato de etilo al 0 %/hexanos a acetato de etilo al 80 %/hexanos, 4 g) para obtener el Intermedio 42A. (80 mg, 57 %). TR de HPLC = 3,20 min (CHROMOLITH® SpeedROD, 5,0 um, 4,6 mm x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso que contenia TFA al 0,1 %, 4 min de gradiente, control a 220 nm). EM(EN): m/z = 808,3 [M+H+].
Ejemplo 42:
A una solucion del Intermedio 42A (80 mg, 0,099 mmol) en DCM (2 ml) a 0 °C, se le anadio TFA (0,5 ml). La mezcla se agito durante 2,5 h mientras se calentaba a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se concentro y el residuo se purifico mediante cromatografia ultrarrapida en gel de silice (columna de 4 g, 0-8 % MeOH/DCM con 0,1 % de NH4OH) para obtener un solido de color blanco, que se trato adicionalmente con eter para obtener el producto purificado (29,5 mg, 41 %). TR de HPLC = 2,570 min (CHROMOLITH® SpeedROD, 5,0 um, 4,6 mm x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso que contenia TFA al 0,1 %, 4 min de gradiente, control a 220 nm). EM(EN): m/z = 708,2 [M+H+]. RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) 5 7,58-7,52 (m, 1H), 7,48-7,32 (m, 3H), 7,30-7,19 (m, 3H), 5,39 (s, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,63 (dd, J = 8,7, 4,1 Hz, 1H), 3,30-3,24 (m, 1H), 2,90 (td, J = 10,4, 3,6 Hz, 1H), 2,78 (dd, J = 14,3,
8,6 Hz, 1H), 2,69 (td, J = 10,0, 3,6 Hz, 1H), 2,57-2,38 (m, 4H), 2,36-2,06 (m, 3H), 2,05-1,90 (m, 1H), 1,89-1,74 (m, 2H), 1,63 (tt, J = 12,5, 4,3 Hz, 1H).
Ejemplo 43
(4-(fosfonooxi)fenil)acetato de ((3S)-3-(((2R,3S)-3-carbamoil-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-5- (3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-1-il)metilo
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cf3
CH3 ^ O
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V-N
N H
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NH
2
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CF3
F
(43)
Intermedio 43A: (2R,3S)-3-(trifluoropropil)-N1-((S,Z)-1-(metiltiometil)-2-oxo-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2,3-dihidro-1H- benzo[e][1,4]diazepin-3-il)metil-2-(3,3,3-trifluoropropil)succinamida
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nh
2
f
(43A)
A una mezcla del Ejemplo 1 (278 mg, 0,484 mmol) en DMF (2,75 ml), se le anadieron CS2CO3 (315 mg, 0,968 mmol) y (clorometil)(metil)sulfano (0,081 ml, 0,919 mmol) en nitrogeno. Esta mezcla se agito a temperatura ambiente durante 110 min y despues se diluyo con agua. La capa acuosa se extrajo con EtOAc. Los extractos de EtOAc combinados se lavaron con salmuera. La capa organica se seco en sulfato de magnesio anhidro, se filtro y se concentro a presion reducida para obtener el producto en bruto. El material en bruto se purifico mediante cromatografia ultrarrapida (Teledyne ISCO CombiFlash del 0 % al 100 % de disolvente A/B = hexano/EtOAc, REDISEP® SiO2 40 g, deteccion a 254 nM y control a 220 nM). La concentration de las fracciones adecuadas produjo el Intermedio 43A (198 mg, 64,5 %). HPLC: TR = 3,205 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4,6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contenia TFA al 0,1 %, 4 ml/min, control a 220 nm), EM(EN): m/z = 635,4 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, DMSO-ds) 5 9,49 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,577,51 (m, 1H), 7,49-7,36 (m, 4H), 7,23 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,13 (s, 1H), 5,57 (d, J = 14,1 Hz, 1H), 5,33 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 4,38 (d, J = 14,3 Hz, 1H), 2,80 (td, J = 9,8, 4,1 Hz, 1H), 2,61-2,54 (m, 1H), 2,46-2,44 (m, 1H), 2,42 (s, 3H), 2,30
2,06 (m, 4H), 1,68 (s, 3h), 1,64-1,48 (m, 3H).
Intermedio 43B: 2-(4-(di-ferc-butoxifosforiloxi)fenil)acetato de metilo
O
t-Bu-O-P.
/ O t-Bu-O O
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O
Me
(43B)
Una solution agitada de 2-(4-hidroxifenil)acetato de metilo (1,80 g, 10,83 mmol) se combino con 1H-tetrazol en MeCN (65 ml, 10,83 mmol) y despues se anadio dietilfosforamidita de di-terc-butilo (5,91 g, 23,70 mmol). La mezcla de reaction se agito a temperatura ambiente durante 35 min y despues se concentro a sequedad. El material en bruto se disolvio en 50 ml de DCM y se anadio H2O2 al 30 % (30 ml). Despues de agitar a temperatura ambiente durante 30 min, la mezcla se diluyo con DCM y se lavo con agua, solucion saturada de NaHCO3 y despues salmuera. La capa organica se concentro y se purifico mediante cromatografia ultrarrapida (Teledyne ISCO
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CombiFlash del 0 % al 100 % de disolvente A/B = hexano/EtOAc, REDISEP® SO 80 g, deteccion a 254 nM y control a 220 nM). La concentracion de las fracciones adecuadas produjo el Intermedio 43B (3,94 g, rendimiento cuantitativo). RmN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 5 ppm 7,25-7,14 (m, 4H), 3,69 (s, 3H), 3,59 (s, 2H), 1,51 (s, 18H).
Intermedio 43C: Acido 2-(4-(di-ferc-butoxifosforiloxi)fenil)acetico
O
t-Bu-0-P^ t-Bu-0 O
A una solucion agitada del Intermedio 43B (0,635 g, 1,772 mmol) en THF (12,0 ml) y agua (3,00 ml), se le anadio hidroxido de litio (0,122 g, 2,14 mmol). La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 2 h y despues las capas organicas se retiraron a presion reducida. La mezcla resultante se diluyo con 10 ml de solucion de fosfato a pH 4. La mezcla resultante se extrajo con EtOAc. Los extractos de EtOAc combinados se lavaron con salmuera, se secaron sulfato de magnesio anhidro, se filtraron y se concentraron para obtener el Intermedio 43C (0,462 g, 76 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-ds) 5 ppm 12,30 (s. a., 1H), 7,25 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,13-7,03 (m, 2H), 3,55 (s, 2H), 1,44 (s, 1H).
Intermedio 43D: 2-(4-(di-ferc-butoxifosforiloxi)fenil)acetato de ((S,Z)-3-((R)-2-((S)-1-amino-3-trifluoro-1-oxopropan-2- il)-5,5,5-trifluoropentanamido)-2-oxo-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2,3-dihidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-1-il)metilo
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H
(43D)
A una mezcla agitada del Intermedio 43A (195 mg, 0,307 mmol) y clorhidrato de trietilamina (85,0 mg, 0,615 mmol) en DCM (3,00 ml) en nitrogeno, se le anadio cloruro de sulfurilo (0,037 ml, 0,461 mmol). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 25 min y despues se concentro a sequedad para obtener un solido de color amarillo. El Intermedio 43C (221 mg, 0,640 mmol) y Cs2CO3 (417 mg, 1,281 mmol) se combinaron en DMF (1,50 ml) a temperatura ambiente en nitrogeno. A esta mezcla se le anadio una solucion del solido de color amarillo anterior en DMF (2,00 ml). La mezcla resultante se agito a temperatura ambiente durante 148 minutos y despues se diluyo con agua y EtOAc. La capa organica se separo y se lavo con solucion de LiCl al 10 % y despues con salmuera. La capa organica se seco con sulfato de magnesio anhidro, se filtro y se concentro a sequedad. El producto en bruto se purifico mediante cromatografia ultrarrapida (Teledyne ISCO CombiFlash del 0 % al 100 % de disolvente A/B = hexano/EtOAc, REDISEP® SiO2 24 g, deteccion a 254 nM y control a 220 nM). La concentracion de las fracciones adecuadas produjo el Intermedio 43D (152 mg, 53,5 %). HPLC: TR = 3,640 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4,6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contenia TFA al 0,1 %, 4 ml/min, control a 220 nm), EM(EN): m/z = 931,6 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, DMSO-ds) 5 9,47 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,68-7,60 (m, 2H), 7,54-7,46 (m, 1H), 7,44-7,33 (m, 4H), 7,20 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,13 (s. a., 1H), 6,97-6,91 (m, 2h), 6,87-6,80 (m, 2H), 6,05 (d, J = 10,3 Hz, 1H), 5,38 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 5,36 (s, 1H), 3,22 (t, J = 1,0 Hz, 2H), 2,81 (dt, J = 9,8, 5,0 Hz, 1H), 2,45 (d, J = 3,3 Hz, 1H), 2,41 (s, 3h), 2,30-2,20 (m, 1H), 2,18-2,06 (m, 3H), 1,69 (d, J = 10,6 Hz, 1H), 1,63-1,51 (m, 3H), 1,43 (s, 18H).
Ejemplo 43:
A una solucion agitada del Intermedio 43D (148 mg, 0,159 mmol) en DCM (1,64 ml), se le anadio TFA (0,16 ml, 2,077 mmol) a 0 °C. La mezcla se agito a 0 °C durante 10 min y despues a temperatura ambiente durante 40 min y a continuacion se concentro a presion reducida para obtener el Ejemplo 43 (126,6 mg, 94 %). HPLC: TR = 9,95 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3,5 mm, 4,6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de onda = 220 y 254 nm); EM(EN): m/z = 819,5 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, DMSO-ds) 5 9,51 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 7,547,49 (m, 1H), 7,48-7,40 (m, 3H), 7,37 (d, J = 7,7 Hz, 1h), 7,22 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,15 (s. a., 1H), 6,97 (d, J =
8,6 Hz, 2H), 6,84 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,07 (d, J = 10,6 Hz, 1H), 5,40 (s, 1H), 5,38 (s, 1H), 3,32-3,15 (m, 2H), 2,83 (s. a., 1H), 2,58-2,56 (m, 1H), 2,43 (s, 3H), 2,15 (dd, J = 19,7, 8,5 Hz, 4H), 2,01 (s, 1h), 1,71 (s, 2H), 1,67-1,51 (m, 3H).
Ejemplo 44
L-valil-L-valinato de ((3S)-3-(((2R,3S)-3-carbamoil-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3- fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-1-il)metilo
HN
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(44)
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Intermedio 44A: (2R,3S)-3-(trifluoropropil)-N1-((S,Z)-1-(metiltiometil)-2-oxo-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2,3-dihidro-1H- benzo[e][1,4]diazepin-3-il)metil-2-(3,3,3-trifluoropropil)succinamida
Me
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F
o
o
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nh
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(44A)
A una mezcla del Ejemplo 1 (278 mg, 0,484 mmol) en DMF (2,75 ml), se le anadieron CS2CO3 (315 mg, 0,968 mmol) y (clorometil)(metil)sulfano (0,081 ml, 0,919 mmol) en nitrogeno. Esta mezcla se agito a temperatura ambiente 15 durante 110 min y despues se diluyo con agua. La capa acuosa se extrajo con EtOAc. Los extractos de EtOAc combinados se lavaron con salmuera. La capa organica se seco en sulfato de magnesio anhidro, se filtro y se concentro a presion reducida para obtener el producto en bruto. Se purifico mediante cromatografia ultrarrapida (Teledyne IsCo CombiFlash del 0 % al 100 % de disolvente A/B = hexano/EtOAc, REDISEP® SiO2 40 g, deteccion a 254 nM y control a 220 nM). La concentracion de las fracciones adecuadas produjo el Intermedio 44A (198 mg, 20 64,5 %). HPLC: TR = 3,205 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4,6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso
durante 4 minutos, que contenia TFA al 0,1 %, 4 ml/min, control a 220 nm), EM(EN): m/z = 635,4 [M+H+]; RMN 1H (400 MHz, DMSO-ds) 5 9,49 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,57-7,51 (m, 1H), 7,49-7,36 (m, 4H), 7,23 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,13 (s, 1H), 5,57 (d, J = 14,1 Hz, 1H), 5,33 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 4,38 (d, J = 14,3 Hz, 1h), 2,80 (td, J = 9,8, 4,1 Hz, 1H), 2,61-2,54 (m, 1H), 2,46-2,44 (m, 1H), 2,42 (s, 3H), 2,30-2,06 (m, 4H), 1,68 (s, 3H), 1,64-1,48 25 (m, 3H).
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Intermedio 44B: 2-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanamido)-3-metilbutanoato de (S)-((S)-3-((2R,3S)-3-
carbamoil-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanamido)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-lH-
benzo[e][1,4]diazepin-1-il)metilo
Me, Me /^Me
O
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F
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(44B)
A una mezcla agitada del Intermedio 44A (157 mg, 0,247 mmol) y clorhidrato de trietilamina (68,1 mg, 0,495 mmol) en DCM (3,00 ml) en nitrogeno, se le anadio cloruro de sulfurilo (0,030 ml, 0,371 mmol). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 60 min y despues se concentro a sequedad para obtener un solido de color amarillo. El residuo se disolvio en DMF (2 ml) y se anadio a una mezcla agitada de acido (S)-2-((S)-2-((terc- butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanamido)-3-metilbutanoico (313 mg, 0,989 mmol) y Cs2CO3 (403 mg, 1,236 mmol) en DMF (2,0 ml) a temperatura ambiente en nitrogeno. La mezcla resultante se agito a temperatura ambiente durante 2,5 h y despues se anadieron agua y NaHCO3 acuoso saturado. Se formo un precipitado de color blanco, que se recolecto mediante filtracion, se aclaro con agua y se seco al vacio. El material en bruto se purifico mediante cromatografia ultrarrapida (Teledyne ISCO CombiFlash del 20 % al 70 % de disolvente A/B = hexano/acetona, REDISEP® SiO2 80 g, deteccion a 254 nM y control a 220 nM). La concentration de las fracciones adecuadas produjo el Intermedio 44B (148,4 mg, 66,5 %). HPLC: TR = 3,486 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4,6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contenia TFA al 0,1 %, 4 ml/min, control a 220 nm), EM(EN): m/z = 903,7 [M+H+].
A una solution agitada del Intermedio 44B (148 mg, 0,164 mmol) en DCM (4,00 ml) en nitrogeno, se le anadio HCl 4 N en dioxano (0,410 ml, 1,639 mmol). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 60 min y despues se concentro a sequedad para obtener el Ejemplo 44 (148 mg, 97 %). HPLC: TR = 8,038 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4,6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contenia TFA al 0,1 %, 4 ml/min, control a 220 nm), EM(EN): m/z = 803,6 [M+H+]; RMN 1H (500 MHz, DMSO-ds) 5 9,49 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 8,35 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 8,02 (d, J = 4,4 Hz, 3H), 7,69-7,62 (m, 2H), 7,55-7,48 (m, 1H), 7,45-7,35 (m, 4H), 7,24 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 7,12 (s. a., 1H), 6,03 (d, J = 10,3 Hz, 1H), 5,41-5,34 (m, 2H), 3,93 (dd, J = 7,6, 5,4 Hz, 1 h), 3,66-3,62 (m, 1H), 2,82 (td, J = 10,2, 4,3 Hz, 1H), 2,43 (s, 4H), 2,29-2,07 (m, 3H), 1,99 (dc, J = 13,2, 6,8 Hz, 1 h), 1,76-1,66 (m, 2H), 1,63-1,49 (m, 3h), 0,88 (dd, J = 10,0, 6,9 Hz, 6H), 0,61 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 0,57 (d, J =
6,7 Hz, 3H).
Compuestos comparativos 45 a 48
Los compuestos comparativos 45 a 48 se pueden preparar de acuerdo con los procedimientos descritos en la patente de los EE.UU. N.° 7.053.084 para los Ejemplos 8, 12a, 38 y 45a, respectivamente.
Ejemplo 44:
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Ejemplo 49
5 Formulacion farmaceutica que comprende (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4- benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida
Se formulo un producto farmacologico de inyeccion que comprend^a (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo- 2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida, Ejemplo 1, como una solucion esteril 10 lista para su uso (RTU, del ingles ready-to-use) de uso unico para la administracion intravenosa (IV). Se preparo una mezcla de vehnculos mezclando polietileglicol 400 al 80 % v/v y agua al 20 % v/v a temperatura ambiente. Se anadio el Ejemplo 1 (0,2 mg/ml) a la mezcla del vehiculo preparada. La formulacion se sometio a ultrasonido durante aproximadamente 20 minutos hasta que se disolvio el Ejemplo 1.
15 Ejemplo 50
Formulacion farmaceutica que comprende (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4- benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida
5
10
15
20
25
30
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50
55
Se formulo un producto farmacologico que comprendia (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro- 1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida, Ejemplo 1, adecuado para la administration oral como una solution o capsula. La formulation oral comprend^a polietilenglicol 300 al 70 % v/v, etanol al 10 % v/v, TPGS al 10 % v/v, CREMOPHOR® RH40 al 10 % v/v y Ejemplo 1 (hasta 4 mg/ml de la concentration del farmaco).
Se calentaron previamente TPGS solido y CREMOPHOR® para licuar los materiales. Despues se midio la cantidad adecuada de cada uno de los excipientes y se mezclaron a temperatura ambiente. Se anadio la cantidad necesaria del Ejemplo 1 a la mezcla de vehiculos preparada. La formulacion se sometio a ultrasonido durante aproximadamente 20 minutos hasta que se disolvio el Ejemplo 1.
Ejemplo 51
Formulacion farmaceutica que comprende (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4- benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida
Se formulo un producto farmacologico que comprendia (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro- 1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida, Ejemplo 1, adecuado para la administracion oral como una solucion o capsula. La formulacion oral comprendia polietilenglicol 300 al 80 % v/v, etanol al 10 % v/v, TPGS al 10 % v/v y Ejemplo 1 (hasta 4 mg/ml de la concentracion del farmaco).
Se calento previamente TPGS solido para licuar el material. Despues se midio la cantidad adecuada de cada uno de los excipientes y se mezclaron a temperatura ambiente. Se anadio la cantidad necesaria del Ejemplo 1 a la mezcla de vehiculos preparada. La formulacion se sometio a ultrasonido durante aproximadamente 20 minutos hasta que se disolvio el Ejemplo 1.
ENSAYOS BIOL6GICOS
Las propiedades farmacologicas de los compuestos de la presente invention se pueden confirmar mediante varios ensayos biologicos. Los ejemplos de ensayos biologicos, que aparecen a continuation, se realizaron con los compuestos de la invencion.
Ensayo de transactivacion de Notch-CBF1
El ensayo de transactivacion en celulas de Notch-CBF1 (factor I de union al promotor C) se basa en la capacidad que tienen los fragmentos del dominio intracelular Notch (NICD) liberados de funcionar como factores de transcription junto con CBF1 y otros factores nucleares. Se usaron ensayos de luciferasa para medir el antagonismo de la actividad transcripcional de Notch-CBF1. Se cotransfectan celulas de cancer de cuello uterino HeLa de manera transitoria con plasmidos pCDNA3.1/hygro que contienen los receptores Notch 1, Notch 2, Notch 3 o Notch 4 truncados y un vector indicador de luciferasa PGL3 que contenia 4 copias del sitio de fijacion a CBF1. Despues las celulas se evaluaron para determinar la actividad de Notch-CBF1 en ausencia o presencia de los compuestos de ensayo. Las celulas HeLa, mantenidas en DMEM (alta glucosa con HEPES), 1x glutamina/penicilina/estreptomicina y suero bovino fetal al 10 %, se transfectaron de manera transitoria en un matraz T175 (4,5 x106 celulas/matraz) usando el kit Monster Transfection (Mirus n.° MIR2906) de acuerdo con las especificaciones de los fabricantes. La Tabla 9 indica la cantidad de ADN respectivo para las transfecciones.
Tabla 9
ADN (jg) CBF1 (jg) Vector (jg) ADN total (jg)
Notch 1 humano
6 14,4 15,6 36,0
Notch 2 humano
2 14,4 19,6 36,0
Notch 3 humano
0,3 14,4 21,3 36,0
Notch 4 humano
4 14,4 17,6 36,0
Seis horas despues de la transfection, las celulas se tripsinizaron y se sembraron en placas de cultivo tisular negras recubiertas con Poli-D-lisina de 384 pocillos a una densidad de 5 x 103 celulas/pocillo en 95 |jl de un medio de ensayo (DMEM (alta glucosa con HEPES), 1x glutamina/penicilina/estreptomicina, BSA al 0,0125 %, 1x aminoacidos no esenciales). Se anadio a las celulas un medio de ensayo (5 jl) que contenia los compuestos de ensayo en concentraciones finales que variaban de 5 jM a 8,4 x 10-5 jM (diluciones en serie con factor de dilution 3) y despues las placas de celulas se incubaron durante 18 horas a 37 °C y CO2 al 5 %. Los pocillos de control contenian el vehiculo DMSO (recuentos totales) o 0,5 jM de un inhibidor de moleculas pequenas propio (recuentos de fondo). Se usaron duplicados para cada muestra. La actividad de la luciferasa se midio despues de una incubation de 20 minutos con 50 jl de reactivos de luciferasa STEADY-GLO® de acuerdo con las especificaciones del fabricante (Promega, n.° del cat. E2550) y se analizo mediante el lector de placas Envision (PerkinElmer, Boston, MA).
El efecto antagonista de los compuestos se expreso como 100 x [1-(muestra promedio-fondo promedio)/(total promedio-fondo promedio)], en la que la muestra es la actividad de la luciferasa en presencia del compuesto de ensayo, el fondo es igual a la actividad de la luciferasa en presencia del control del inhibidor de moleculas pequenas y el total se induce por senales en los pocillos de DMSO. Los datos se representaron usando una ecuacion logistica 5 de cuatro parametros y el valor de CI50 se definio como la concentracion del compuesto que inhibio el 50 % de la actividad de la luciferasa.
La siguiente Tabla 10 enumera los valores de CI50 de Notch 1 y Notch 3 para los Ejemplos 1-37 de la presente invencion y los compuestos comparativos 45-48 que se midieron anteriormente en el ensayo de transactivacion de 10 Notch-CBF1. En algunos casos, el valor es un promedio de multiples experimentos en el que N es la cantidad de experimentos realizados. Los compuestos de la presente invencion, de acuerdo con los Ejemplos 1-37, mostraron valores de Notch 1 de 12,2 nM o menos y valores de CI50 de Notch 3 de 15,0 nM o menos.
Tabla 10
Ejemplo
Notch 1 (CI50, nM) N Notch 3 (CI50, nM) N
1
7,8 8 8,5 7
2
4,9 3 4,3
2
3
1,8 6 1,9 6
4
8,5 3 7,3 2
5
2,3 1 4,0 1
6
7,2 3 4,5 3
7
4,4 2 4,4 1
8
6,0 2 11,6 1
9
3,0 2 3,7 2
10
2,5 3 5,4 3
11
8,2 2 15,0 1
12
3,0 2 3,2 1
13
3,4 2 4,9 1
14
7,7 2 12,6 1
15
4,4 2 4,4 1
16
5,8 2 3,7 1
17
5,7 2 2,4 1
18
4,6 3 7,7 3
19
4,8 5 4,0 4
20
1,6 2 1,4 1
21
3,3 2 6,1 2
22
3,1 2 6,3 2
23
4,7 5 8,3 4
24
1,4 2 2,1 2
25
1,7 3 2,9 3
26
3,7 2 3,4 3
27
2,8 2 2,7 1
28
4,8 3 7,2 3
29
3,9 1 5,7 1
30
4,3 1 4,2 1
31
2,8 2 4,6 2
32
6,4 6 6,1 6
33
4,3 3 7,4 3
34
4,8 3 13,4 3
35
4,8 3 7,9 2
36
12,2 3 3,0 2
37
6,2 1 9,3 1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Compuesto comparativo 45
64,1 1 48,3 1
Compuesto comparativo 46
42,4 2 74,5 2
Compuesto comparativo 47
5,1 3 13,5 4
Compuesto comparativo 48
12,3 1 12,5 1
Panel de estabilidad metabolica de alto rendimiento (HT, del ingles High Throughput)
Los compuestos administrados por v^a parenteral ingresan en el torrente sanguineo y experimentan uno o mas pasos a traves del hngado. Los compuestos que no son metabolizados facilmente por el hngado se pueden administrar a niveles plasmaticos terapeuticamente eficaces durante periodos terapeuticamente eficaces.
Generalmente, los compuestos administrados por via oral se absorben a traves de las paredes intestinales en el torrente sanguineo y experimentan un primer paso a traves del higado. Los compuestos que no se metabolizan facilmente en el primer paso a traves del higado se pueden distribuir a otras areas del cuerpo en cantidades terapeuticamente eficaces.
El ensayo de estabilidad metabolica evaluo la estabilidad metabolica mediada por CYP in vitro usando microsomas de seres humanos, rata, raton, perron y/o mono despues de una incubacion de diez minutos. Cada compuesto se ensayo por duplicado.
Los resultados de estos ensayos se expresaron como la fraccion del compuesto parental que permanecio en la mezcla de reaccion despues de una incubacion de diez minutos (porcentaje remanente). En general, estos resultados se usaron para evaluar solo el alcance del metabolismo mediado por CYP o dependiente de NADPH del compuesto de ensayo. Cuando el compuesto se metabolizaba significativamente (remanente <40-50 %), esto indicaba un aclaramiento elevado del compuesto in vivo debido al metabolismo mediado por CYP. Sin embargo, si el compuesto mostraba un metabolismo moderado (50-80 %) o bajo (>85 %) en estos ensayos in vitro, todavia era posible un aclaramiento elevado in vivo mediante otras vias de metabolismo y elimination.
Los resultados de porcentaje remanente estos ensayos se utilizaron para predecir el aclaramiento del compuesto in vivo, suponiendo que el metabolismo mediado por CYP era una via de eliminacion predominante. En diferentes especies microsomicas, los intervalos de resultados fueron aproximadamente como se indican en la Tabla 11.
Tabla 11
Directrices para la interpretation de los resultados de estabilidad metabolica
Aclaramiento mediado por CYP
Porcentaje remanente despues de 10 minutos
Ser humano
Rata Raton Perro Mono
Baja
>90 >85 >85 >90 >85
Media
60-90 40-85 50-85 55-90 40-85
Alta
<60 <40 <50 <55 <40
Metodos y materiales
Incubacion con microsomas de higado
El compuesto de ensayo se recibio como una solution madre 3,5 mM en DMSO al 100 por ciento. El compuesto de ensayo se diluyo para crear una solucion de acetonitrilo 50 |jM (ACN) que contenia DMSO al 1,4 %, que despues se uso como una solucion madre 100x para la incubacion con microsomas. Cada compuesto se evaluo por separado por duplicado en cada una de las tres especies en el conjunto de ensayos de estabilidad metabolica en ser humano, rata y raton o como especies individuales en el conjunto de ensayos de estabilidad metabolica en perros o de estabilidad metabolica en monos. Las soluciones de compuesto, NADPH y microsomas hepaticos se combinaron para la incubacion en tres etapas:
1. Se calentaron previamente a 37 °C 152 jl de suspension de microsomas hepaticos, una concentration proteica de 1,1 mg/ml en NaPi 100 mM, pH 7,4, tampon MgCh 5 mM.
2. Se anadieron 1,7 jl de compuesto 50 jM (ACN al 98,6 %, DMSO al 1,4 %) al mismo tubo y se incubaron previamente a 37 °C durante 5 minutos.
3. La reaccion se inicio mediante la adicion de 17 jl de una solucion 10 mM de NADPH calentada previamente en NaPi 100 mM, pH 7,4.
Los componentes de la reaccion se mezclaron bien y se transfirieron inmediatamente 75 jl de la mezcla de reaccion a 150 jl de solucion de inactivacion/detencion (punto temporal cero, To). Las reacciones se incubaron a 37 °C durante 10 minutos y despues, se transfirio una alicuota adicional de 75 jl a 150 jl de solucion de inactivation. Se
5
10
15
20
25
30
35
uso DMN 100 |jM que contema acetonitrilo (un patron de UV para control de calidad de inyecciones), como solucion inactivadora, a fin de finalizar las reacciones metabolicas.
Las mezclas inactivadas se centrifugaron a 1500 rpm (~500 X g) en una centrifuga SX4750 ALLEGRA® X-12 (Beckman Coulter Inc., Fullerton, CA) durante 15 minutos hasta obtener sedimentos de microsomas desnaturalizados. Despues, se transfirio un volumen de 90 jl de extracto de sobrenadante, que contema la mezcla de compuesto parental y sus metabolitos a una placa separada de 96 pocillos para el analisis por UV-CL/EM-EM, a fin de determinar el porcentaje de compuesto parental que permanecia en la mezcla.
Tabla 12
Ensayo de estabilidad metabolica - Componentes de la reaccion
Componentes de la reaccion
Concentration final en el ensayo de estabilidad metabolica
Compuesto (sustrato)
0,5 jM
Tampon NaPi, pH 7,4
100 mM
DMSO
0,014 %
Acetonitrilo
0,986 %
Microsomas (ser humano, rata, raton) (BD/Gentest)
proteina 1 mg/ml
NADPH
1,0 mM
MgCl2
5,0 mM
Tiempo de incubation a 37 °C
0 minutos y 10 minutos
Solucion de inactivacion/detencion (ACN + DMN 100 jM)
150 jl
Muestra de reaccion
75 jl
Sedimentation de microsomas desnaturalizados
15 minutos
Analisis del sobrenadante por UV-CL/EM
0,17 jM
Analisis de muestras - Instrumentacion
HPLC: Pump-Thermo Surveyor; Automuestreador-CTC/LEAP HTS; detector de UV-Thermo Surveyor PDA plus; Columna VARIAN® C18, 3 jm, 2 x 20 mm con un filtro en linea de 0,5 jm; fase movil para el analisis previo de integridad estructural: (A) 98 % de agua, 2 % de acetonitrilo con acetato de amonio 10 mM; (B) 10 % de agua, 90 % de acetonitrilo con acetato de amonio 10 mM; analisis de muestra de reaccion de fase movil: (A) 98 % de agua, 2 % de acetonitrilo con un 0,1 % de acido formico; (B) 2 % de agua, 98 % de acetonitrilo con un 0,1 % de acido formico; (C) 0,1 % de hidroxido de amonio en agua; (D) 0,1 % de hidroxido de amonio en acetonitrilo.
Espectrometro de masas: Espectrometro de masas de triple cuadrupolo Thermo TSQ QUANTUM® Ultra;
Analisis de muestras - Analisis previo de la integridad estructural
El analisis previo de integridad estructural de estabilidad metabolica se uso para evaluar la pureza de los compuestos que se analizan. Los compuestos se recibieron en placas de 96 pocillos como 57 jl de una solucion 3,5 mM de DMSO. Las soluciones madre en DMSO de compuesto 3,5 mM se diluyeron 18 veces con una solucion que contema volumenes iguales de acetonitrilo, isopropanol y MilliQ-H2O. Las soluciones resultantes (200 jM) se analizaron para determinar la integridad estructural mediante CL-UV/EM en un espectrometro de masas de trampa de iones Thermo LCQ Deca XP Plus, usando una columna Waters XBridge C18, 5 jm, 2 x 50 mm con una columna Guard Waters Sentry de 2,1 mm y las condiciones de CL que se describen en la tabla a continuation, con una inyeccion de 5 jl y un caudal de 1 ml/min. Los datos adquiridos reflejaron la pureza mediante la absorbancia UV a 220 nm. Solo se notificaron los resultados de los compuestos con una pureza superior al 50 %.
Tabla 13
Estabilidad metabolica - Gradiente de integridad estructural
Tiempo de gradiente (min)
% de A % de B
0,00
100 0
4,00
0 100
5,00
0 100
5,10
100 0
6,00
100 0
5
10
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30
35
40
Analisis de muestras - Muestras incubadas
La optimizacion de las condiciones de EM/EM se realizo en un espectrometro de masas de cuadripolo triple Thermo TSQ Quantum equipado con una fuente de electronebulizacion calentada (H-IEN) mediante infusion automatizada para obtener transiciones de SRM y sus correspondientes valores de energia de colision. Las soluciones de compuesto en una concentration de 20 jM en metanol:agua 1:1 se sometieron a infusion a un caudal de 90 |jl/min; despues, se combinaron con la fase movil a un caudal de 50 jl/min antes de introducirse en la fuente. Todos los compuestos se optimizaron usando primero las fases moviles A y B (50 % de A y 50 % de B) y, de ser necesario, usando las fases moviles C y D (tambien con una composition 50:50). Los parametros optimizados, que inclman polaridad, transition de SRM y energia de colision, se almacenaron en una base de datos de MICROSOFT ACCESS®.
Las condiciones de espectrometria de masa obtenidas de la infusion automatizada se usaron para analizar las muestras de incubation del ensayo de estabilidad metabolica. El volumen de inyeccion fue de 5 jl y el caudal fue de 0,8 ml/min. El gradiente utilizado se muestra en la tabla a continuation. Todas las muestras se inyectaron con el gradiente usando primero las fases moviles A y B. De ser necesario (por ejemplo, por motivos de cromatografia), las muestras se volvieron a inyectar con el mismo gradiente, pero usando las fases moviles C y D. Todos los parametros del analisis por CL-EM/EM se capturaron electronicamente en los archivos de datos sin procesar.
Tabla 14
Estabilidad metabolica - Gradiente de analisis de muestras
Tiempo de gradiente (min)
% de A (o % de C) % de B (o % de D)
0,00
95 5
0,20
95 5
0,30
0 100
1,05
0 100
1,10
95 5
1,50
95 5
Analisis de datos
La integration de picos se realizo con el software XCALIBUR®. El calculo del porcentaje remanente se realizo comparando las areas de picos de CL-EM/EM de las muestras de Tiominutos con las de las muestras de Tominuto para cada compuesto.
Control de calidad
Se evaluo un conjunto de tres compuestos junto con el compuesto de ensayo en cada placa del ensayo. Los datos se aceptaban y se cargaban solo si los resultados para los tres compuestos de control se encontraban dentro de los intervalos esperados que se indican a continuacion.
Tabla 15
Ensayo de estabilidad metabolica - Valores de compuestos de control por especie de microsoma.
Comparativo
Porcentaje remanente promedio ± DT
Ser humano
Rata Raton Perro Mono
Nefazodona
0,4 ± 0,4 0,7 ± 0,6 0,4 ± 0,3 0,4 ± 0,4 0,6 ± 0,5
Verapamilo
13,3 ± 3,5 4,4 ± 2,1 13,0 ± 4,2 5,6 ± 1,8 0,5 ± 0,5
Carbamazepina
96 ± 6 84 ± 9 90 ± 10 81 ± 7 89 ± 13
DT = Desviacion tipica
Panel de semivida de estabilidad metabolica
La tasa de metabolismo y semivida determinada in vitro en microsomas hepaticos de ser humano o animal se uso para determinar el aclaramiento intrinseca (CLnt) y el aclaramiento hepatica (CLh,b) de un compuesto. Estos parametros fueron utiles para predecir el aclaramiento humano in vivo, que define el nivel de exposition al farmaco in vivo (Obach et al., 1997, 1999).
5
10
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50
El panel de ensayos de semivida de la estabilidad metabolica evalua el curso de tiempo y la tasa del metabolismo mediado por CYP (dependiente de NADPH) in vitro en microsomas de ser humano, rata, raton, perro y mono. El curso del tiempo abarca 45 minutos de incubacion e incluye los puntos temporales de 0, 5, 10, 15, 30 y 45 minutos, en cada uno de los cuales se midio la cantidad de compuesto de ensayo remantente en la mezcla.
Directrices para la interpretacion de los resultados
Los resultados del ensayo de semivida de estabilidad metabolica se expresan como una semivida (T1/2, min). En general, estos resultados deben usarse para evaluar unicamente el alcance del metabolismo mediado por CYP o dependiente de NADPH, del compuesto de ensayo. Cuando el compuesto se metabolizo significativamente (T1/2 < 14 minutos), esto indico un aclaramiento elevado in vivo debido al metabolismo mediado por CYP. Sin embargo, si el compuesto demostraba un metabolismo moderado (14-70 minutos) o bajo (>70 minutos) en estos ensayos in vitro, todavia era posible un aclaramiento elevado in vivo mediante otras vias de metabolismo y eliminacion.
Los resultados de estos ensayos predijeron el aclaramiento del compuesto in vivo, suponiendo que el metabolismo mediado por CYP era una via de eliminacion predominante. En microsomas de ser humano, los intervalos de resultados fueron, aproximadamente, como se indican en la siguiente tabla:
Tabla 16
Directrices para la interpretacion de los resultados de semivida de estabilidad metabolica
Aclaramiento mediado por CYP
T1/2, minutos
Ser humano
Bajo
>70
Medio
14-70
Elevado
<14
Metodos y materiales
Se adquirieron microsomas hepaticos de BD-Biosciences (Woburn, MA) y NADPH de AppliChem Inc; todos los demas reactivos se obtuvieron de Sigma.
Incubacion con microsomas hepaticos
El compuesto de ensayo se recibio como una solucion madre 3,5 mM en DMSO al 100 %. El compuesto de ensayo se diluyo para crear una solucion 50 |jM de acetonitrilo (ACN) que contenia DMSO al 1,4 %, que despues se uso como una solucion madre diluida 100 veces para la incubacion con microsomas. Cada compuesto se ensayo en microsomas hepaticos de ser humano, rata, raton, perro y mono. Las soluciones de compuesto, NADPH y microsomas hepaticos se combinaron para la incubacion en tres etapas:
1. Se calentaron previamente a 37 °C, 450 jl de suspension de microsomas hepaticos, concentration proteica de 1,1 mg/ml en NaPi 100 mM, pH 7,4, tampon de MgCh 5 mM.
2. Se anadieron 5 jl de compuesto 50 jM (ACN al 98,6 %, DMSO al 1,4 %) al mismo tubo y se incubaron previamente a 37 °C durante 5 minutos.
3. La reaction se inicio mediante la adicion de 50 jl de una solucion 10 mM de NADPH calentada previamente en NaPi 100 mM, pH 7,4.
Los componentes de la reaccion se mezclaron bien y se transfirieron de inmediato 65 jl a 130 jl de solucion de inactivacion/detencion (punto temporal cero, To). Las reacciones se incubaron a 37 °C durante 5, 10, 15, 30 y 45 minutos y en cada punto temporal, se transfirio una alicuota de 65 jl a 130 jl de solucion de inactivation. Se uso acetonitrilo que contenia patron interno (100 ng/ml) como solucion de inactivacion para finalizar las reacciones metabolicas.
Las mezclas inactivadas se centrifugaron a 1500 rpm (~500 X g) en unan centrifuga SX4750 ALLEGRA® X-12 (Beckman Coulter Inc., Fullerton, CA) durante 15 minutos hasta obtener sedimentos de microsomas desnaturalizados. Un volumen de 90 jl de extracto de sobrenadante, que contenia la mezcla de compuesto parental y sus metabolitos, se transfirio despues a una placa separada de 96 pocillos para el analisis por CL/EM-MS, a fin de determinar el porcentaje de compuesto parental que permanecia en la mezcla.
Tabla 17
Ensayos de semivida de estabilidad metabolica - Componentes de la reaccion
Componentes de la reaccion
Concentration final en el ensayo de estabilidad metabolica
Compuesto (sustrato)
0,5 jM
Tampon de NaPi, pH 7,4
100 mM
DMSO
0,014 %
Acetonitrilo
0,986 %
Microsomas (ser humano, rata, raton) (BD/Gentest)
proteina 1 mg/ml
NADPH
1,0 mM
MgCl2
5,0 mM
Tiempo de incubacion a 37 °C
0, 5, 10, 15, 30 y 45 minutos
Solucion de inactivacion/detencion (ACN + DMN 100 |jM)
130 jl
Muestra de reaccion
65 jl
Sedimentacion de microsomas desnaturalizados
15 minutos
Analisis de muestras - Instrumentacion
5 HPLC: Bombas binarias Pump-Shimadzu CL-20 AD Series; Automuestreador CTC/LEAP HTS
La siguiente Tabla 18 enumera el valor de semivida metabolica mediada por CYP para los Ejemplos 1-37 de la presente invencion y para los Compuestos comparativos 45-48 medido en el ensayo de semivida de estabilidad metabolica humana. En algunos casos, el valor es un promedio de multiples experimentos en los que N es la 10 cantidad de experimentos realizados. Los compuestos de la presente invencion, de acuerdo con los Ejemplos 1-37, tuvieron valores de semivida de estabilidad metabolica de 31 minutos o mas. Por el contrario, los Compuestos comparativos 45-48 tuvieron valores de semivida de estabilidad metabolica de 8 minutos o menos.
Tabla 18
Ejemplo
MSV (ti/2, min) N
1
103 8
2
32 1
3
73 5
4
31 1
5
33 1
6
33 1
7
>120 1
8
71 1
9
113 1
10
54 2
11
42 1
12
53 2
13
48 2
14
56 1
15
101 1
16
108 1
17
56 2
18
>120 1
19
108 1
20
>120 1
21
107 2
22
>120 1
23
101 5
5
10
15
20
25
30
35
24
62 1
25
>120 1
26
82 1
27
115 1
28
98 3
29
98 1
30
92 2
31
100 1
32
82 3
33
82 3
34
116 2
35
118 1
36
>120 2
37
61 1
Compuesto comparativo 45
8 1
Compuesto comparativo 46
6 1
Compuesto comparativo 47
6 1
Compuesto comparativo 48
3 1
Los compuestos ejemplificados de la invencion mostraron la ventaja sorprendente de un aclaramiento bajo debido al metabolismo mediado por CYP en el ensayo de semivida de estabilidad metabolica humana. Los compuestos de la presente invencion, de acuerdo con los Ejemplos 1-37, tuvieron semividas metabolicas en el intervalo de 31 minutos a mas de 120 minutos en el ensayo de semivida de estabilidad metabolica humana. Por el contrario, los Compuestos comparativos 45-48 tuvieron semividas metabolicas de 8 minutos o menos en el ensayo de estabilidad metabolica humana. Los Compuestos comparativos 45-48 mostraron un aclaramiento elevado en el ensayo de estabilidad metabolica humana, lo cual indico que los compuestos se retiraron mediante microsomas hepaticos.
Los compuestos de la presente invencion (Ejemplos 1-37) se compararon con los Compuestos comparativos 45-48 desvelados en la patente de los EE.UU. N.° 7.456.172 y se descubrio que son especialmente ventajosos. Los compuestos de la presente invencion tuvieron la ventaja sorprendente de su actividad combinada como inhibidores de Notch 1 y Notch 3 y de una estabilidad metabolica superior con respecto a los microsomas hepaticos. Como se muestra en las Tablas 10 y 18, en los ensayos notificados, los Ejemplos 1-37 de la presente invencion tuvieron valores de CI50 para Notch 1 de 12,2 nM o menos y valores de CI50 para Notch 3 de 15,0 nM o menos; y semividas de estabilidad metabolica humana de 31 minutos o mas en el ensayo de semivida de estabilidad metabolica humana. Por el contrario, en pruebas similares, los Compuestos comparativos 45-48 tuvieron valores de CI50 para Notch 1 en el intervalo de 5,1 nM a 64,1 nM y valores de CI50 para Notch 3 en el intervalo de 12,5 nM a 74,5 nM; y semividas de estabilidad metabolica humana de 8 minutos o menos.
Modelos de xenoinjertos tumorales humanos en ratones
Todos los roedores se obtuvieron de Harlan Sprague Dawley Co. (Indianapolis, Indiana) y se mantuvieron en un ambiente libre de amoniaco, en una colonia definida y libre de patogenos. Todos los ratones se pusieron en cuarentena aproximadamente 1 semana antes de su uso para el ensayo de propagacion tumoral y eficacia farmacologica. Se les suministraron alimentos y agua a los ratones, a demanda. El programa de cuidado de animales del Instituto de investigaciones farmaceuticas de Bristol-Myers Squibb cuenta con la completa acreditacion de la American Association for Accreditation of Laboratory Animal Care (AAALAC). Todos los experimentos se realizaron de acuerdo con los metodos y las directrices para pruebas en animales de Bristol-Myers Squibb (BMS).
Se cultivaron xenoinjertos tumorales y se mantuvieron de manera subcutanea (SC) en ratones inmunodeprimidos balb/c nu/nu desnudos o NOD-SCID (Harlan Sprague Dawley). Los tumores se propagaron como trasplantes subcutaneos en la cepa de ratones adecuada (Tabla 19) usando fragmentos tumorales obtenidos de los ratones donantes.
Tabla 19
Tipos histologicos y requisito de cepa/genero de los ratones huesped para la propagacion de
varios xenoinjertos tumorales humanos en ratones
Tipo de tumor
Histologia Cepa de raton Sexo
TALL-1
ALL NOD-SCID hembra
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Tipos histologicos y requisito de cepa/genero de los ratones huesped para la propagacion de varios xenoinjertos tumorales humanos en ratones
Tipo de tumor
Histologia Cepa de raton Sexo
HPB-ALL
ALL NOD-SCID hembra
ALL-SIL
ALL NOD-SCID hembra
MDA-MB-157
mama NOD-SCID hembra
MDA-MB-468
mama NOD-SCID hembra
PAT-34
ovario desnudo hembra
PAT-50
ovario desnudo hembra
PAT-26
pancreas desnudo hembra
PAT-27
pancreas desnudo hembra
Ensayos preclmicos de quimioterapia
Las cantidades de animales necesarias para detectar una respuesta significativa se agruparon al comienzo del experimento y a cada uno se le administro un implante subcutaneo de un fragmento tumoral (~ 20 mg) con un trocar de calibre 13. Los tumores crecieron hasta la ventana de tamano predeterminada (se excluyeron los tumores fuera del intervalo) y los animales se distribuyeron de manera uniforme en distintos grupos de tratamiento y de control. En general, habia 8 ratones por grupo de tratamiento y de control, con la excepcion de los experimentos realizados en el modelo de tumor SAL-IGF (este no se incluye en la Tabla 19), en el cual habia normalmente 5 ratones por grupo de tratamiento o de control. El tratamiento de cada animal se baso en el peso corporal individual. Los animales que recibieron tratamiento se controlaron a diario para determinar la toxicidad/mortalidad relacionada con el tratamiento. Cada grupo de animales se peso antes del inicio del tratamiento (Pi) y nuevamente despues de la ultima dosis de tratamiento (P2). La diferencia de peso corporal (P2-P1) proporciona una medida de toxicidad relacionada con el tratamiento.
La respuesta del tumor se determino mediante la medicion de los tumores con un calibre dos veces por semana, hasta que los tumores alcanzaron un tamano "objetivo" predeterminado de 0,5 mg o 1 mg, segun el tipo de tumor. Los pesos tumorales (mg) se estimaron a partir de la formula:
Peso tumoral = (longitud x ancho2) 2
Los criterios de respuesta del tumor se expresan en terminos de inhibicion del crecimiento tumoral (% de ICT). El retraso del crecimiento tumoral se define como la diferencia en tiempo (dias) necesaria para que los tumores tratados (T) alcancen un tamano objetivo predeterminado, en comparacion con los del grupo de control (C). Para ello, el peso tumoral de un grupo se expresa como peso tumoral medio (PTP).
La inhibicion del crecimiento tumoral se calcula de la siguiente manera:
% de inhibicion del crecimiento tumoral =
' Tt
C o ^
1-----
* —
V To
Ct j
(
1
V
Co" Ct,
donde
Ct = mediana del tamano del tumor de control al final del tratamiento Co = mediana del tamano del tumor de control al inicio del tratamiento Tt = mediana del tamano del tumor del grupo tratado al final del tratamiento To = mediana del tamano del tumor del grupo tratado al inicio del tratamiento
La actividad se define como la inhibicion del crecimiento tumoral durable en un 50 % o mas (es decir, ICT > 50 %) o log de destruccion celular de 0,5 o mas (LDC > 0,5) durante un periodo equivalente al menos a un 1 tiempo de duplicacion del volumen tumoral y el tratamiento farmacologico debe realizarse durante un periodo equivalente al menos a 2 tiempos de duplicacion del volumen tumoral.
La respuesta tumoral tambien se expreso en terminos de retraso del crecimiento del tumor (valor de RCT), que se
define como la diferencia en tiempo (dias) necesaria para que los tumores sometidos a tratamiento (T) alcancen un
tamano objetivo predeterminado, en comparacion con los del grupo de control (C).
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
Siempre que fue posible, la actividad antitumoral se determino en un intervalo de niveles de dosis hasta la dosis maxima tolerada (DMT), que se define como el nivel de dosis inmediatamente por debajo del cual ocurrio la toxicidad excesiva (es decir, mas de una muerte). Cuando se produjo la muerte, se registro el d^a de la muerte. Se considero que los ratones sometidos al tratamiento que murieron antes de que sus tumores alcanzaran el tamano objetivo murieron por la toxicidad del farmaco. No murio ningun raton de control con un tumor que tuviera un tamano menor al tamano objetivo. Se considero que los grupos de tratamiento con mas de una muerte provocada por la toxicidad del farmaco tuvieron tratamientos excesivamente toxicos y sus datos no se incluyeron en la evaluacion de la eficacia antitumoral de un compuesto.
La posible interaccion de la toxicidad del farmaco que afecta a la tolerabilidad del tratamiento es una consideracion importante en los ensayos de quimioterapia combinada. La interpretacion de los resultados de terapias combinadas debe basarse en la comparacion de la actividad antitumoral de la mejor respuesta posible para los agentes individuales con la combination en dosis toleradas de manera comparable. Por lo tanto, el sinergismo terapeutico se definio como el efecto terapeutico alcanzado con un regimen tolerado de los reactivos combinados que supero el efecto optimo alcanzado en cualquier dosis tolerada de monoterapia. Las evaluaciones estadisticas de los datos se realizaron usando el ensayo de Wilcoxon generalizado de Gehan. La significancia estadistica se declaro en P < 0,05.
Administration de farmacos
En estudios in vitro, todos los agentes se disolvieron en DMSO al 100 % y se diluyeron en serie en medios/suero bovino fetal al 10 %. Los siguientes excipientes se usaron para la administracion de los inhibidores de Notch a los roedores: ETOH/TPGS/PEG300 (10:10:80). En general, los inhibidores de Notch se administraron por via oral en una pauta de cada dia x 15, 10 dias de administracion-2 dias de reposo-5 dias de administracion, aunque tambien se habian evaluado otras pautas que demostraron ser eficaces. Por ejemplo, el regimen de dosificacion que consiste en cada dia x 12, 4 dias de administracion-3 dias de reposo demostro ser tan eficaz como cada dia x 15, 10 dias de administracion-2 dias de reposo-5 dias de administracion. En los estudios de dos veces al dia, la segunda dosis se administro de 6 a 12 horas despues de la primera dosis.
Actividad antitumoral in vivo
La actividad antitumoral del Ejemplo 1 administrado por via oral (VO) se evaluo en xenoinjertos tumorales humanos implantados en ratones. Como se muestra en las Figuras 1-4, el Ejemplo 1 presento actividad antitumoral.
La siguiente Tabla 20 enumera la actividad antitumoral de los ejemplos de la presente invention medida en los modelos de xenoinjertos tumorales humanos en ratones. Los compuestos de la presente invencion, como se ejemplifican mediante los Ejemplos 1 y 3, mostraron actividad antitumoral con la administracion oral (VO).
Tabla 20
Administracion oral
Ejemplo
Dosis (mg/kg) Actividad antitumoral
TALL1 (LDC)
MDA-MB-157 (% de ICT) MDA-MB-468 (% de ICT)
1
10-20 >4,3 91 98
3
10 4,0 NA NA
TALL1: cada dia x 10. MDA-MD-157 y MDA-MB-468: cada dia x 15, 10 dias de administracion-2 dias de reposo-5 dias de administracion. cada dia - una vez por dia. LDC - Log de destruction celular.
Evaluacion del profarmaco: Farmacocinetica de dosis unica en ratas
Se usaron ratas macho SPRAGUE DAWLEY® (250-300 g) para los estudios farmacocineticos. Las ratas se sometieron a ayuno durante la noche anterior a la administracion de la dosis y se alimentaron 4 h despues de la dosis. En cada estudio, distintos grupos de animales (N = 2-3) recibieron el compuesto de ensayo mediante sonda oral. Se tomaron muestras de sangre (~0,3 ml) de la vena yugular en tubos que contenian K2EDTA 0,5, 1, 3, 5, 7 y 24 h despues de la dosis. Las muestras de plasma, obtenidas mediante centrifugation a 4 °C (1500-2000 xg), se almacenaron a -20 °C hasta el momento del analisis mediante CL/EM/EM.
Analisis de datos para los ensayos farmacocineticos
Los parametros farmacocineticos se obtuvieron mediante analisis no compartimental de los datos de concentration plasmatica (determinada mediante CL/EM/EM) frente al tiempo (Software ThermoKinetica version 5.0). La concentracion maxima (Cmax) y el tiempo para la Cmax, Tmax, se registraron directamente a partir de observaciones experimentales. El area bajo la curva desde el tiempo cero hasta el ultimo tiempo de muestreo (ABCo-t) se calculo usando una combinacion de adiciones totales trapezoidales lineales y logaritmicas. El aclaramiento plasmatico total
(CLTp), el volumen de distribucion del estado estacionario (Vss), la semivida de eliminacion aparente (ti/2) y el tiempo medio de residencia (TRM) se calcularon despues de la administracion IV. El calculo de ti/2 se realizo usando un mmimo de 3 puntos temporales con concentraciones cuantificables. La biodisponibilidad oral absoluta F se calculo como la relacion de los valores de ABC normalizados por dosis despues de la dosis oral e IV. Las 5 exposiciones plasmaticas del Ejemplo 1 (ABCo-24h o ABCo-7h) despues de la administracion de los profarmacos se compararon con la exposicion despues de la administracion del Ejemplo 1. Se estimaron las biodisponibilidades relativas de los profarmacos con respecto al Ejemplo 1 (Tabla 21).
Tabla 21
Administracion del profarmaco de ejemplo a ratas: Niveles sanguineos de Ejemplo 1
Ejemplo
Dosis (mg/kg) ABCo-24h del Ejemplo 1 despues de la administracion del profarmaco (nM^h) % de biodisponibilidad relativa con respecto al Ejemplo 1
38
6,44 865 66
40
6,35 276 * 39
42
6,16 1540 117
43
3,00 193 35
44
7,62 557 42
* ABCo-7h
10

Claims (12)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    45
    REIVINDICACIONES
    R3
    imagen1
    N
    H
    O
    R2
    imagen2
    O
    Ri
    nhr4
    y/o al menos una sal del mismo, en la que:
    Ri es -CH2CH2CF3;
    R2 es -CH2CH2CF3 o -CH2CH2CH2CF3;
    R3 es H, -CH3 o Rx;
    R4 es H o Ry;
    Rx es: -CH2OC(O)CH(CH3)NH2, -CH2OC(O)CH(NH2)CH(CH3)2,
    CH2OC(O)CH((CH(CH3)2)NHC(O)CH(NH2)CH(CH3)2,
    -CH2OC(O)CH2^/ V- OP(O)(OH)2
    H3C
    -CH2OC(O)CH2C(CH3)2
    (HO)2(O)PO
    imagen3
    ch3
    o
    -CH20C(0)-
    imagen4
    \
    CH20P(0)(0H)2
    Ry es: -SCH2CH(NH2)C(O)OH, -SCH2CH(NH2)C(O)OCH3 o -SCH2CH(NH2)C(O)OC(CH3)3; el anillo A es fenilo o piridinilo;
    cada Ra es independientemente Cl, alquilo C1-3, -CH2OH, -CF3, ciclopropilo, -OCH3 y/u -O(ciclopropilo); cada Rb es independientemente F, Cl, -CH3, -CH2OH, -CF3, ciclopropilo y/u -OCH3; y es cero, 1 o 2; y z es cero, 1 o 2;
    a condicion de que si el anillo A es fenilo y z es cero, entonces y es 1 o 2 y al menos un Ra es alquilo C1-3, -CH2OH, -CF3, ciclopropilo u -O(ciclopropilo); a condicion de que si R3 es Rx, entonces R4 es H; y a condicion de que si R4 es Ry, entonces R3 es H o -CH3.
  2. 2. El compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1 y/o al menos una sal del mismo, en el que:
    el anillo A es fenilo;
    R3 es H; y z es 1 o 2.
  3. 3. El compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1 y/o al menos una sal del mismo, en el que:
    R2 es -CH2CH2CF3; el anillo A es fenilo; y z es 1 o 2.
  4. 4. El compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1 y/o al menos una sal del mismo, en el que:
    R2 es -CH2CH2CF3; el anillo A es fenilo;
    Ra es alquilo C1-3 o -CH2OH;
    cada Rb es independientemente F y/o Cl;
    5
    10
    15
    20
    25
    30
    y es 1; y z es 1 o 2.
    R HO
    imagen5
    N
    H
    r2
    O =2
    imagen6
    O
    Ri
    nh2
  5. 6. El compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1 y/o al menos una sal del mismo, que tiene la estructura:
    CF3
    imagen7
    O
    imagen8
    nhr4
    en la que:
    R3 es H o Rx;
    R4 es H o Ry;
    a condicion de que si R3 es Rx, entonces R4 es H; y
    a condicion de que si R4 es Ry, entonces R3 es H.
  6. 7. El compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1, que tiene la estructura:
    imagen9
    CF3
    xJ 3
    O =
    imagen10
    nh2
  7. 8. El compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1, seleccionado entre: (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2- oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (1); (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-
    clorofenil)-9-etil-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (2); (2r,3s)-N- ((3S)-5-(3-clorofenil)-9-isopropil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (3); (2R,3S)-N-(9-cloro-5-(3,4-dimetilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2- (3,3,3-trifluoropropil)succinamida (4); (2R,3S)-N-(9-cloro-5-(3,5-dimetilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin- 3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (5); (2R,3S)-N-((3S)-9-etil-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-
    dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (6); (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-clorofenil)-9-
    metil-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (7); (2R,3S)-N-((3S)-5-(3- clorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-
    5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    45
    50
    55
    trifluoropropil)succinamida (8); (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-metilfenil)-2-oxo-9-(trifluorometil)-2,3-dihidro-1 H-1,4- benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (9); (2R,3S)-N-((3S)-9-cloro-5-(3,5-dimetilfenil)-2-oxo-
    2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (1 o); (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-metilfenil)-
    2- oxo-9-(trifluorometil)-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-
    trifluoropropil)succinamida (11); (2R,3S)-N-((3S)-9-isopropil-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-
    3- il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (12); (2R,3S)-N-((3S)-9-isopropil-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro-1H-1,4-
    benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (13); (2R,3S)-N-((3S)-9-(ciclopropiloxi)-5-(3-metilfenil)-2- oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (14); (2R,3S)-N- ((3S)-9-(ciclopropiloxi)-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3- trifluoropropil)succinamida (15); (2R,3S)-N-((3S)-9-(ciclopropiloxi)-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3- il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (16); (2R,3S)-N-((3S)-9-cloro-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3- dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (17); (2R,3S)-N-((3S)-9- metil-2-oxo-5-(3-(trifluorometil)fenil)-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3- trifluoropropil)succinamida (18); (2R,3S)-N-((3S)-9-(ciclopropiloxi)-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3- il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (19); (2R,3S)-N-((3S)-9-metil-2-oxo-5-(3-(trifluorometil)fenil)-2,3-dihidro- 1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (20); (2R,3S)-N-((3S)-9-cloro-5-(2-metilfenil)-2- oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (21); (2R,3S)-N-((3S)-5-(4-
    fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (22);
    (2R,3S)-N-((3S)-9-metil-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (23); (2R,3S)-N-((3S)-9-ciclopropil-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-
    trifluoropropil)succinamida (24); (2R,3S)-N-((3S)-9-cloro-5-(3-ciclopropilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-
    benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (25); (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-clorofenil)-9-metoxi-2-oxo-2,3- dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (26); (2R,3S)-N-((3s)-5-(4-clorofenil)-9- metoxi-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (27); (2R,3S)-N-((3S)-9- cloro-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (28); (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-metilfenil)-9-metoxi-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3- trifluoropropil)succinamida (29); (2R,3S)-N-((3S)-5-(4-(hidroximetil)fenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3- il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (3o); (2R,3S)-N-((3s)-5-(2-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-
    benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (31); (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro- 1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (32); (2R,3S)-N-((3S)-9-metoxi-2-oxo-5-(5-
    (trifluorometil)-2-piridinil)-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (33);
    (2R,3S)-N-((3s)-5-(5-cloro-2-piridinil)-9-metoxi-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3- trifluoropropil)succinamida (34); (2R,3S)-N-((3S)-5-(4-metoxifenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3- bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (35); (2R,3S)-N-((3S)-5-(4-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3- il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (36); (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-(hidroximetil)-2-oxo-2,3-dihidro- 1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (37); L-valinato de ((3S)-3-(((2R,3S)-3-carbamoil- 6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4- benzodiazepin-1-il)metilo (38); L-alaninato de ((3S)-3-(((2R,3S)-3-carbamoil-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3- trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-1-il)metilo (39); S- (((2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3-(((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)carbamoil)-2- (3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-L-cistema (40); S-(((2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3-(((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-
    oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-il)carbamoil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-L-cisteinato de terc- butilo (41); S-(((2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3-(((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-1,4-benzodiazepin-3-
    il)carbamoil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-L-cisteinato de metilo (42); (4-(fosfonooxi)fenil)acetato de ((3S)- 3-(((2R,3S)-3-carbamoil-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3- dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-1-il)metilo (43); L-valil-L-valinato de ((3S)-3-(((2R,3S)-3-carbamoil-6,6,6-trifluoro-2- (3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-1-il)metilo (44); y sales de los mismos.
  8. 9. Una composicion farmaceutica que comprende un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 y/o al menos una sal del mismo; y un vehiculo farmaceuticamente aceptable.
  9. 10. Una composicion que comprende:
    (i) al menos un compuesto de Formula (I) que tiene la estructura:
    5
    10
    15
    20
    25
    30
    imagen11
    O
    imagen12
    nhr4
    y/o al menos una sal del mismo;
    (ii) un compuesto de Formula (I) que tiene la estructura:
    CF3
    imagen13
    O
    imagen14
    O
    CF3
    nh2
    o
    (iii) una mezcla de (i) y (ii);
    en la que:
    R3 es H o Rx;
    R4 es H o Ry;
    Rx es: -CH2OC(O)CH(CH3)NH2, -CH2OC(O)CH(NH2)CH(CH3)2,
    CH2OC(O)CH((CH(CH3)2)NHC(O)CH(NH2)CH(CH3)2,
    -CH2OC(O)CH2^^ V- OP(O)(OH)2
    H3C
    -CH2OC(O)CH2C(CH3)2H )—ch3
    (HO)2(O)PO
    imagen15
    -CH2OC(O)—(f V- CH2OP(O)(OH)2
    Ry es: -SCH2CH(NH2)C(O)OH, -SCH2CH(NH2)C(O)OCH3 o -SCH2CH(NH2)C(O)OC(CH3)3;
    o
    a condicion de que si R3 es Rx, entonces R4 es H; y a condicion de que si R4 es Ry, entonces R3 es H.
  10. 11. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o las sales farmaceuticamente aceptables del mismo, para su uso en terapia.
  11. 12. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o las sales farmaceuticamente aceptables del mismo, para su uso en el tratamiento del cancer.
    imagen16
    CF.
    O =
    imagen17
    nh2
    5 o las sales farmaceuticamente aceptables del mismo, para su uso en el tratamiento del cancer.
  12. 14. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o las sales farmaceuticamente aceptables del mismo, para su uso con uno o mas agentes adicionales seleccionados entre dasatinib, paclitaxel, tamoxifeno, dexametasona y carboplatino, administrados secuencial o simultaneamente, para el tratamiento del 10 cancer.
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