ES2616749T3 - Mutantes degradantes del proteoglucano para el tratamiento del SNC - Google Patents

Mutantes degradantes del proteoglucano para el tratamiento del SNC Download PDF

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Abstract

Un polipéptido mutante de condroitinasa ABC de tipo I purificado que degrada un proteoglucano, seleccionándose dicho polipéptido entre la SEQ ID NO: 2, la SEQ ID NO: 3 o la SEQ ID NO: 4, en donde el polipéptido retiene su actividad degradante de proteoglucanos.

Description

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Las moléculas degradantes de proteoglucano similares a condroitinasa AC (SEQ ID NO: 5), así como los mutantes de eliminación y/o sustitución de los polipéptidos degradantes de proteoglucano pueden clonarse en una serie de vectores de expresión bacterianos así como de mamífero. Los ejemplos no limitantes de estos vectores incluyen pET15b, pET14b, pGEX 6P1, pDNA4HisMax o pSECTag2b. Los polipéptidos mutantes de eliminación de la presente invención muestran la capacidad para degradar los proteoglucanos, tales como condroitina CS y DS, y tienen un tamaño y un peso molecular menor que los polipéptidos de enzima madura, lo que se espera que facilite su difusión en células, tejidos y a través de membranas. Los vectores de expresión pueden incluir la secuencia de ácido nucleico que expresa un polipéptido degradante de proteoglucano unido operablemente a una secuencia de control de la expresión. Unido operablemente puede referirse a un engarce entre una secuencia de control de la expresión y una secuencia codificante, donde el engarce permite que la secuencia de control de la expresión controle la expresión de la secuencia codificante.
Las propiedades de los mutantes de origen natural, sustituidos o de eliminación de las moléculas degradantes de proteoglucano pueden alterarse introduciendo una diversidad de mutaciones en la proteína. Dichas alteraciones se introducen de manera adecuada usando las técnicas de mutagénesis, por ejemplo, pero sin limitación, mutagénesis por PCR y las moléculas de polipéptidos mutados se sintetizan de manera adecuada usando los vectores de expresión.
Preferentemente, las eliminaciones incluyen cualesquiera dos aminoácidos separados y eliminaciones internas de aminoácidos en el polipéptido. La eliminación da como resultado polipéptidos mutantes degradantes de proteoglucano que son más pequeños que la enzima madura y conservan la capacidad degradante de proteoglucano. Pueden fusionarse o unirse los polipéptidos degradantes de proteoglucano a otro polipéptido. Polipéptido se usa para abarcar de manera unívoca secuencias de aminoácidos para mutantes de cualquier longitud que tienen actividad degradante de proteoglucano y mejorar la plasticidad, incluyendo aquellas menos la secuencia de señal que forma parte inicialmente del polipéptido cuando se traduce y que se escinde mediante una modificación traduccional del hospedador.
Los ácidos nucleicos mutantes incluyen eliminaciones y/o sustituciones de nucleótidos de genes que expresan los polipéptidos degradantes de proteoglucano maduros. A nivel de ADN, se usan mutaciones de eliminación y sustitución para introducir sustituciones y/o eliminaciones de aminoácidos en la proteína codificada. Estas eliminaciones y sustituciones de nucleótidos pueden usarse para introducir eliminaciones y/o sustituciones en regiones conformacionales o activas importantes del polipéptido. Un fragmento de ácido nucleico es un ácido nucleico que tiene menos nucleótidos que la secuencia de nucleótidos que codifica la secuencia de aminoácidos completa de un polipéptido degradante de proteoglucano, aunque preferentemente codifica un polipéptido mutante que retiene cierta actividad biológica de la proteína de longitud completa, por ejemplo, el fragmento de polipéptido expresado conserva la capacidad para inducir degradación de proteoglucanos, promover la difusión de agentes terapéuticos en células y tejido o promover la regeneración de neuritas. También pueden usarse genes que codifican mutantes N o C-terminales de dominios de polipéptido degradante de proteoglucano unidos a otros polipéptidos en construcciones para la expresión de proteínas de fusión unidas a polipéptidos degradantes de proteoglucano mutantes.
Los polipéptidos degradantes de proteoglucano mutantes de eliminación de la presente invención también pueden incluir derivados de estos polipéptidos que se han modificado química o enzimáticamente, pero que conservan su actividad biológica para degradar proteoglucanos. Puede controlarse la actividad degradante de proteoglucano de estos mutantes dependiendo de la eliminación o sustitución efectuada en el polipéptido o el ácido nucleico usado para expresar el polipéptido. Las variantes, fragmentos o análogos de los polipéptidos degradantes de proteoglucano maduro o los ácidos nucleicos y vectores usados para expresarlos incluyen polipéptidos mutantes y ácidos nucleicos que tienen una secuencia que difiere del polipéptido maduro o la secuencia de ácido nucleico en una o más eliminaciones, de tal forma que los polipéptidos degradantes de proteoglucano conservan su actividad biológica y pueden degradar proteoglucanos y preferentemente, degradan proteoglucanos de sulfato de condroitina.
Debido a la degeneración del código genético, un experto habitual en la materia reconocerá que un gran número de moléculas de ácido nucleico que tienen una secuencia al menos un 80%, preferentemente un 85% o 90%, aún más preferentemente un 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a una secuencia de ácido nucleico que codifica una molécula degradante de proteoglucano mutante codificará un polipéptido mutante que tenga actividad degradante de proteoglucano y preferentemente actividad degradante de condroitina. Se reconocerá además que, para dichas moléculas de ácido nucleico que no son variantes degeneradas, un número razonable también codificará un polipéptido mutante que tenga actividad degradante de proteoglucano. Esto se debe a sustituciones de aminoácidos que o bien tienen menos probabilidad o no tienen probabilidad de afectar a la actividad del polipéptido (por ejemplo, reemplazando un aminoácido alifático con un segundo aminoácido alifático) para degradar proteoglucanos y preferentemente para degradar condroitina.
Las variantes incluidas en la invención pueden contener eliminaciones individuales en las secuencias de ácido nucleico o de polipéptido. Dichos cambios eliminarán un solo aminoácido o un pequeño porcentaje de aminoácidos en la secuencia codificada.
El descubrimiento acerca de que la actividad degradante de proteoglucano de los polipéptidos mutantes de
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eliminación de la presente invención puede controlarse para que sea menor, aproximadamente la misma o mayor que la de la molécula degradante de proteoglucano de longitud completa tiene otra ventaja potencial. Puede administrarse una composición farmacéutica que contiene las moléculas degradantes de proteoglucano por vía parenteral, intravenosa o subcutánea. El uso de un hidrogel compuesto de polímero biodegradable que encierra el polipéptido y que libera el polipéptido de manera continua está limitado por la cantidad de polipéptido que puede atraparse en el hidrogel. El uso de un mutante de eliminación del polipéptido con mayor actividad específica implica que, en base molar, puede atraparse más cantidad de la sustancia activa en el mismo volumen, aumentando de este modo el tiempo entre administraciones sucesivas o posiblemente evitando administraciones repetidas.
La purificación del polipéptido obtenido después de la expresión depende de la célula hospedadora y la construcción de expresión usada. En general, la purificación de los mutantes de eliminación o sustitución de proteoglucano puede efectuarse del mismo modo que la purificación de polipéptidos de longitud completa nativos, incluyendo el uso de etiquetas de histidina.
Los polipéptidos y proteínas degradantes de proteoglucano mutantes se administran en una cantidad eficaz para degradar los CSPG. Los polipéptidos pueden usarse para ayudar en la difusión de composiciones terapéuticas y diagnósticas a tejidos y pueden usarse para promover la recuperación de la función neurológica y el crecimiento de neuritas. Una vez que se han purificado las proteínas o polipéptidos degradantes de proteoglucano hasta un grado deseado, pueden suspenderse o diluirse en un vehículo fisiológico o excipiente adecuado para el tratamiento del SCI
o para ensayos de exploración de composiciones que promueven el crecimiento de neuritas in vitro en sustratos adecuados, tales como agrecano. En modelos de SCI, las dosis intratecales de las condroitinasas en ratas ha sido de aproximadamente 0,06 unidades en días alternos durante 14 días. Una dosis para un humano de 70 kilogramos puede ser de aproximadamente 17 unidades. Aproximadamente a 100 unidades/miligramo, esto podría ser aproximadamente igual a 170 microgramos. Las dosis de hasta 20 unidades parecen seguras en sujetos mamíferos, tales como ratas. Las composiciones pueden incluir un polipéptido degradante de proteoglucano del primer aspecto de la presente invención. Estas composiciones también pueden incluir otras moléculas degradantes de proteoglucano y mutantes de eliminación y/o sustitución de estas, moléculas que bloquean la acción de inhibidores del crecimiento de neuritas, moléculas que promueven la adhesión de neuritas o axones, diagnósticas, terapéuticas
o el mutante de molécula degradante de proteoglucano como parte de una proteína de fusión. Puede añadirse la mezcla de proteína de fusión a un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable, generalmente a concentraciones en el intervalo de 1 ug a 500 mg/kg de sujeto. La administración del agente puede ser por inyección de bolo, suministro intravenoso, infusión continua, liberación sostenida a partir de implantes o agentes farmacéuticos de liberación sostenida. La administración por inyección puede ser intramuscular, peritoneal, subcutánea, intravenosa o intratecal. La administración oral puede incluir comprimidos o cápsulas, preferentemente, la dosificación oral es una formulación de liberación sostenida para administración una o dos veces al día. La administración percutánea puede ser una vez al día y preferentemente, es una administración de menos de una vez al día. Puede continuarse la administración al paciente humano o a otro sujeto mamífero hasta que se logra una mejora medible en la función autónoma o motora en el paciente.
Los polipéptidos degradantes de proteoglucano mutantes o los polipéptidos de fusión que los incluyen también pueden expresarse o secretarse por células genéticamente modificadas. Pueden recogerse y purificarse los polipéptidos degradantes de proteoglucano de eliminación o los polipéptidos de fusión para una composición terapéutica, o pueden implantarse las células genéticamente modificadas, ya estén solas o en una cápsula en o próxima al sitio del daño en el SNC o un tejido en el que se desea la difusión controlada de moléculas terapéuticas o diagnósticas. Los ácidos nucleicos mutantes para expresar polipéptidos degradantes de proteoglucanos mutantes se ilustran por los ejemplos no limitantes de condroitinasa ABC I (SEQ ID NO: 22 y 28) que codifican polipéptidos de condroitinasa ABC I sustituidos y aquellos con secuencias de aminoácidos sin líder; ácido nucleico mutante de condroitinasa B (SEQ ID NO: 21) que codifica el polipéptido mutante NΔ120 CΔ120 de condroitinasa B (SEQ ID NO: 21); y ácido nucleico mutante de condroitinasa AC (SEQ ID NO: 19) que codifica un polipéptido mutante NΔ50 CΔ275 de condroitinasa AC (SEQ ID NO: 11). Un ejemplo no limitante de un ácido de nucleico de fusión incluye una construcción de ADN de fusión de TAT-mutante de eliminación de condroitinasa ABC I (SEQ ID NO: 41). Otro ejemplo podría ser un ácido nucleico para TAT-condroitinasa ABC I-NΔ60 (SEQ ID NO: 43) para el polipéptido expresado (SEQ ID NO: 44).
Una vez se administran los polipéptidos degradantes de proteoglucano mutantes a células o a un tejido con CSPG, la degradación de los CSPG elimina las moléculas inhibidoras que bloquean el crecimiento de neuritas y permite la regeneración de neuritas en el área afectada. La eliminación de CSPG también promueve la plasticidad en el SNC. Por ejemplo, los polipéptidos de longitud completa de condroitinasa AC (SEQ ID NO: 5), y condroitinasa B, (SEQ IDNO: 12), degradan a CS y DS, respectivamente, dando como resultado disacáridos sulfatados no saturados. La condroitinasa AC, (SEQ ID NO: 5), escinde a CS en los engarces 1, 4 glucosídico entre la N-acetilgalactosamina y el ácido glucurónico en la cadena principal de polisacárido del CS. La escisión se produce mediante eliminación beta con un patrón de acción endolítico aleatorio. La condroitinasa AC, (SEQ ID NO: 12) escinde el engarce de ácido idurónico de 1, 4 galactosamina en la cadena principal de polisacárido de DS. La escisión tanto de CS como de DS se produce mediante un proceso de beta-eliminación que diferencia estos mecanismos enzimáticos de las enzimas degradantes de GAG de mamífero. La condroitinasa ABC I, (SEQ ID NO: 1), la condroitinasa ABC II (SEQ ID NO: 27), también son exo y endo liasas que escinden tanto a CS como a DS. La retirada de CS y DS de una cicatriz glial permite la regeneración de los crecimientos de neuritas en el área dañada y promueve la plasticidad. Por ejemplo,
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regeneración de neuritas u otros agentes terapéuticos en el área afectada. La regeneración y la plasticidad de las células nerviosas en el área del SNC afectada puede permitir la recuperación de la función motora y sensorial. Las mejoras clínicamente relevantes variaran entre una mejora detectable hasta una restauración completa de una función nerviosa deteriorada o perdida, variando según los pacientes y los daños individuales.
Ejemplo 3
Este ejemplo muestra que los mutantes de eliminación de condroitinasa son biológicamente activos.
Las condroitinasas AC y B producidas de manera recombinante han mostrado eficacia in vitro al superar la barrera de una frontera de sustrato inhibidor, tal como agrecano y dan como resultado una extensión de neuritas para neuronas corticales de rata. Para facilitar un transporte eficaz de las enzimas anteriores al sitio del daño, se prepararon mutantes de eliminación de estas condroitinasas para determinar los polipéptidos de tamaño mínimo capaces de degradar los CSPG. Se ha explorado la actividad de escisión de estos mutantes in vitro mediante un ensayo zimográfico usando agrecano como sustrato. Se observó que un polipéptido truncado de condroitinasa AC (nΔ50-cΔ275) (SEQ ID NO:11) que carece de los aminoácidos 50 y 275 desde los extremos amino y carboxilo termina, respectivamente, que tiene un peso molecular de 38 kDa en comparación con los 75 kDa de la proteína de longitud completa, tenía aproximadamente el tamaño mínimo de condroitinasa AC mutante que conserva actividad, según se evaluó mediante el ensayo zimográfico, FIG. 4(B). Sin embargo, también se ha demostrado que un mutante aún más pequeño, el mutante de eliminación de condroitinasa B (nΔ 120-cΔ 120) (SEQ ID NO:17) que carece de 120 aminoácidos desde cada uno de los extremos amino y carboxilo terminal, que tiene un peso molecular de 26 kDa en comparación con los 52 kDa de la proteína de longitud completa, conserva la actividad en el ensayo zimográfico, FIG. 6(B). Podrían usarse estos y otros mutantes de eliminación aún más pequeños como agentes terapéuticos potenciales con menor inmunogenicidad y una capacidad de penetración en tejidos similar o mayor en comparación con la enzima madura y pueden usarse para el tratamiento del daño en la médula espinal.
Se generaron una serie de mutantes de eliminación de condroitinasa AC y B mediante PCR usando los ADNc de longitud completa para las condroitinasas AC y B como moldes y se clonaron en el vector de expresión pET15b en los sitios de Ndel y BamHI. Se construyeron mutantes de eliminación con etiquetas de histidina para facilitar la detección y purificación. Cada uno de estos ADNc se indujo mediante isopropil-β-D-tiogalactopiranósido (IPTG) y se confirmó la expresión mediante transferencia de Western usando anticuerpo anti-His (Novagen). La FIG. 3(A) muestra de manera esquemática varios mutantes de eliminación no limitantes, y la FIG. 3(B) muestra la confirmación de la expresión de estos polipéptidos mutantes de condroitinasa AC mediante transferencia de Western con antietiqueta de histidina. Las figuras 5 y 6 muestran la misma información para las eliminaciones de condroitinasa B. Las transferencias de Western demuestran proteínas del tamaño predicho. La PAGE zimográfica de los mutantes de eliminación muestra bandas intensas de digestión de sustrato (claro) y tinción de carbohidratos negativa.
Ensayo zimográfico. Se vertieron geles de SDS-poliacrilamida con agrecano (85 μg/ml) polimerizado en los mismos. Se corrieron extractos en bruto de mutantes de eliminación de condroitinasas AC y B y se renaturalizaron a 37 °C durante una noche. Después de la separación, el gel se incuba en cetilpiridinio al 0,2% durante 90 minutos a temperatura ambiente. La digestión de los proteoglucanos por las condroitinasas se visualiza tiñendo el gel con azul de toluidina al 0,2% en etanol-H2O-ácido acético (50:49:1 v/v/v) durante 30 minutos y destiñendo con etanol-H2Oácido acético (50:49:1 v/v/v). Después de la destinción, se incuba el gel durante una noche en una solución de Stains-all a 50 µg/ml en etanol al 50% en la oscuridad y se destiñe con H2O. La aparición de bandas claras en el gel muestra la digestión por las condroitinasas del CSPG que dejan a la proteína central, que permanece sin teñir (FIG. 4 y FIG. 6).
Ejemplo 4
Este ejemplo describe la unión de una etiqueta de His a un polipéptido degradante de proteoglucano mutante.
Pueden generarse mutantes de eliminación de la enzima condroitinasa ABC I, donde el mutante carece de un número determinado de aminoácidos respecto del extremo N-terminal y mantiene actividad degradante de proteoglucano (SEQ ID NO: 2-4). Esta eliminación N-terminal mantiene una etiqueta de histidina, que está unida al extremo N-terminal; sin embargo la condroitinasa ABC I de longitud completa (SEQ ID NO:1) etiquetada de manera similar no mantuvo la etiqueta de histidina después de la expresión.
Pueden prepararse mutantes de eliminación catalíticamente activos de condroitinasa ABC I, por ejemplo, pero sin limitación, eliminando 20 y 60 aminoácidos, respectivamente, desde el extremo N-terminal de la proteína ABC I madura, tal como se muestra en la FIG. 7. También puede producirse un polipéptido mutante con eliminaciones tanto N como C-terminales, tal como condroitinasa ABC I-NΔ60-CΔ80 (SEQ ID NO:4).
Estos mutantes de eliminación de condroitinasa y mutantes de otras moléculas degradantes de proteoglucano pueden usarse para la construcción de proteína quimérica de fusión en N-terminal. El ensayo prueba estos polipéptidos de fusión respecto de la degradación de condroitina y puede usarse para determinar la eficacia de ABC I madura frente a varios mutantes de eliminación en composiciones y proteínas de fusión respecto de la especificidad de sustrato, la unión a sustrato y la penetración en tejidos. Puede llevarse este ensayo funcional para caracterizar la actividad del polipéptido de proteoglucano mutante o de polipéptidos de fusión que los incluyen. En
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este ensayo funcional, pueden emplacarse neuronas de los ganglios de la raíz dorsal (DRG) sobre agrecano o agrecano tratado con un polipéptido degradante de proteoglucano mutante o un polipéptido de fusión que incluye el mutante. Se espera que las neuronas emplacadas sobre agrecano no logren adherirse a la placa y extiendan los axones. Por el contrario, cabría expresar que las neuronas emplacadas en agrecano tratado con un polipéptido degradante de proteoglucano mutante o un polipéptido de fusión que incluye el mutante en una composición o como parte de un polipéptido de fusión se adhieran a la superficie y extiendan axones. Se cree que el crecimiento axonal extenso, que se observa para un sustrato de agrecano tratado con una condroitinasa, tal como condroitinasa ABC I (SEQ ID NO: 1 o 37) se debe a la digestión de los carbohidratos en la proteína central de agrecano, que crea un sustrato más permisivo para el crecimiento de axones.
Ejemplo 5
Este ejemplo predictivo describe un mutante de condroitinasa ABC I que tiene estructura de proteína nativa, pero que carece de actividad catalítica degradante de proteoglucano.
Este mutante puede prepararse en forma de un control nulo o negativo para bioensayos y estudios SCI. Basándose en la estructura cristalina de la condroitinasa ABC I, pueden prepararse un mutante de sitio específico, denominado H501a y Y508a (SEQ ID NO: 36) para eliminar la actividad catalítica en el sitio activo putativo. Pueden ensayarse dichos mutantes respecto de la inactivación de la actividad catalítica y SEC para comparar la enzima de tipo silvestre. También puede usarse el mutante de actividad nula para proporcionar un control negativo para las diversas proteínas de fusión degradantes de proteoglucano para su uso en bioensayos y en última instancia, en estudios en animales SCI.
Este ejemplo ilustra ejemplos de polipéptidos degradantes de proteoglucano mutantes que incluyen tanto sustituciones como eliminaciones en los polipéptidos; aquellos relacionados con la condroitinasa ABC I y las SEQ ID NO: 2, 3 y 4 conforman el primer aspecto de la presente invención.
La secuencia de condroitinasa ABC I (SEQ ID NO: 37) es una secuencia publicada para un péptido de condroitinasa ABC I maduro e incluye la secuencia líder. La secuencia de condroitinasa ABC I (SEQ ID NO: 37) es similar a (SEQ ID NO: 1 o 29), aunque la (SEQ ID NO: 1) no tiene los primeros 25 aminoácidos de la (SEQ ID NO: 37), y los aminoácidos en las posiciones 154 y 195 de la (SEQ ID NO: 37) difieren de aquellas (sustituciones) encontradas en posiciones similares cuando la (SEQ ID NO: 1) y la (SEQ ID NO: 37) se alinean.
La (SEQ ID NO: 38-40) ilustra eliminaciones desde el extremo N o C-terminal del polipéptido de la (SEQ ID NO: 37) y sustituciones en relación con la (SEQ ID NO: 1). Estos polipéptidos mutantes son NΔ20 (SEQ ID NO: 38), NΔ60 (SEQ ID NO: 39) y NΔ60 CΔ80 (SEQ ID NO: 40).
Ejemplo 7
Este ejemplo presenta ilustraciones no limitantes de polipéptidos mutantes, incluyendo aquellos de la presente invención fusionados con un polipéptido de transducción de membrana, tal como, pero sin limitación, la porción polipeptídica de la proteína TAT del VIH. En el listado de secuencias incluido en la memoria descriptiva se proporcionan listados de secuencias completos para los polipéptidos de fusión mutantes.
Una secuencia de nucleótidos para TAT-condroitinasa ABC I-nΔ20 (SEQ ID NO: 41), una porción de la cual se ilustra a continuación, muestra los nucleótidos de la secuencia de TAT resaltados mediante subrayado unidos a los nucleótidos de condroitinasa.
1 ggtc gtaaaaagcg tcgtcaacgt cgtcgtcctc ctcaatgcgc acaaaataac
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Los nucleótidos subrayados en esta porción de la secuencia del ácido nucleico indican una secuencia de TAT unida al 5' del ácido nucleico de condroitinasa ABC I-NΔ20 (SEQ ID NO. 47).
Una secuencia de aminoácidos para TAT-condroitinasa ABC I-nΔ20 (SEQ ID NO: 42), una porción de la cual se muestra a continuación, ilustra los aminoácidos de la secuencia de TAT resaltados mediante subrayado en el extremo N-terminal de la condroitinasa ABC I-NΔ20 (SEQ ID NO. 2).
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Una secuencia de nucleótidos para TAT-ABCI-NΔ60 (SEQ ID NO: 43), una porción de la cual se ilustra a continuación, muestra los nucleótidos N-terminales de TAT (SEQ ID NO. 49) resaltados mediante subrayado.
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Families Citing this family (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030226656A1 (en) 2001-06-01 2003-12-11 Junji Harada Total heat exchanging element-use paper
AU2003304173A1 (en) 2002-05-04 2005-01-04 Acorda Therapeutics, Inc. Compositions and methods for promoting neuronal outgrowth
WO2003102160A2 (en) 2002-06-03 2003-12-11 Massachusetts Institute Of Technology Rationally designed polysaccharide lyases derived from chondroitinase b
DE60337009D1 (de) * 2002-08-15 2011-06-16 Acorda Therapeutics Inc Chimärisches protein
MXPA05009429A (es) 2003-03-05 2005-12-12 Halozyme Inc Glicoproteina hialuronidasa soluble (shasegp), proceso para preparar la misma, usos y composiciones farmaceuticas que la comprenden.
MXPA05012307A (es) * 2003-05-16 2006-07-03 Acorda Therapeutics Inc Mutantes que degradan proteoglicanos para tratamiento del snc.
US7959914B2 (en) 2003-05-16 2011-06-14 Acorda Therapeutics, Inc. Methods of reducing extravasation of inflammatory cells
ES2373039T3 (es) * 2003-05-16 2012-01-30 Acorda Therapeutics, Inc. Composiciones y métodos para el tratamiento de lesiones del cns.
CA2558984A1 (en) 2004-03-10 2005-09-22 Massachusetts Institute Of Technology Recombinant chondroitinase abc i and uses thereof
JP4926962B2 (ja) * 2004-05-18 2012-05-09 アコーダ セラピューティクス、インク． コンドロイチン分解酵素とその安定な製剤の精製法
CA2623635C (en) 2005-09-26 2013-04-02 Acorda Therapeutics, Inc. Compositions and methods of using chondroitinase abci mutants
EP2042190A4 (en) 2006-05-19 2012-05-30 Aichi Prefecture MEDIUM TO REDUCE BRAIN DAMAGE
ES2473610T3 (es) 2006-10-10 2014-07-07 Acorda Therapeutics, Inc. Composiciones y métodos de uso de mutantes de condroitinasa ABCI
ES2520765T3 (es) * 2007-02-15 2014-11-11 Allergan, Inc. Uso de toxina botulínica para el tratamiento de hiperhidrosis
EP2174661B1 (en) 2007-06-29 2012-12-19 National University Corporation Nagoya University Agent for improving neuropathic pain
US20090286289A1 (en) * 2008-03-10 2009-11-19 Pang Danny Z Production of Hyaluronate Unsaturated Disaccharides and its Application
EP2153844A1 (en) * 2008-08-14 2010-02-17 HAUBECK, Hans-Dieter Human hyaluronidases for axonal regrowth
US20110311521A1 (en) 2009-03-06 2011-12-22 Pico Caroni Novel therapy for anxiety
US20110142949A1 (en) * 2009-10-16 2011-06-16 The Research Foundation Of State University Of New York Chondroitinase treatment method for demyelination-related conditions and diseases
WO2011133862A1 (en) * 2010-04-23 2011-10-27 Oregon Health And Science University Methods and compositions for promoting myelination
US20130143805A1 (en) * 2010-08-13 2013-06-06 Georgetown University Ggf2 and methods of use
WO2012034049A2 (en) 2010-09-10 2012-03-15 University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education Implantable medical devices having double walled microspheres
WO2012136768A1 (en) 2011-04-08 2012-10-11 Hans-Dieter Haubeck Use of mutants of human hyaluronidase ph-20 with increased chondroitinase activity for axonal regrowth
JP6067746B2 (ja) 2011-12-30 2017-01-25 ハロザイム インコーポレイテッド Ｐｈ２０ポリペプチド変異体、その製剤および使用
US20160244740A1 (en) * 2013-09-27 2016-08-25 Ohio State Innovation Foundation Mutant chondroitinase abc i compositions and methods of their use
US20230092556A1 (en) * 2016-04-29 2023-03-23 Inovio Pharmaceuticals, Inc. In vivo use of chondroitinase and/or hyaluronidase to enhance delivery of an agent
JP2019537432A (ja) 2016-10-04 2019-12-26 ユニバーシティ オブ フロリダ リサーチ ファンデーション インコーポレーティッド 標的化エフェクタータンパク質およびその使用
EP3645557B1 (en) 2017-06-28 2024-10-23 The Cleveland Clinic Foundation Treatment of nervous system injury and neurodegenerative disorders and related conditions
US11407797B2 (en) 2017-10-11 2022-08-09 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Modified gal-1 proteins and uses thereof
WO2019162942A1 (en) * 2018-02-20 2019-08-29 Carmel Haifa University Economic Corporation Ltd. Compositions and methods for delivery and expression of small inhibitory peptides and use thereof
JP2020028277A (ja) * 2018-08-24 2020-02-27 国立大学法人弘前大学 グリコサミノグリカン分解酵素又はその阻害物質の検出方法
WO2020087051A1 (en) * 2018-10-26 2020-04-30 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Targeted chondroitinase abc fusion proteins and complexes thereof
EP4093387A4 (en) * 2020-01-24 2024-04-24 Dompé farmaceutici S.p.A. GROWTH FACTOR FORMULATION FOR A CONDITION ASSOCIATED WITH AN OTIC EVENT
CN111593040B (zh) * 2020-06-20 2022-08-30 山东大学 硫酸皮肤素裂解酶及其应用

Family Cites Families (151)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5338157B1 (en) * 1992-09-09 1999-11-02 Sims Deltec Inc Systems and methods for communicating with ambulat
US5083710A (en) * 1988-09-06 1992-01-28 Oxy-Dry Corporation Powder sprayer with automatic powder supply system
US5153827A (en) * 1989-01-30 1992-10-06 Omni-Flow, Inc. An infusion management and pumping system having an alarm handling system
US5320725A (en) * 1989-08-02 1994-06-14 E. Heller & Company Electrode and method for the detection of hydrogen peroxide
US5270194A (en) 1989-08-31 1993-12-14 Instrumentation Laboratory Spa Stabilized glucose oxidase from Aspergillus Niger
AU6872691A (en) 1989-10-27 1991-05-31 Case Western Reserve University Inhibition of cell growth by keratan sulfate, chondroitin sulfate, dermatan sulfate and other glycans
US5652122A (en) 1989-12-21 1997-07-29 Frankel; Alan Nucleic acids encoding and methods of making tat-derived transport polypeptides
US5804604A (en) 1989-12-21 1998-09-08 Biogen, Inc. Tat-derived transport polypeptides and fusion proteins
US5108819A (en) * 1990-02-14 1992-04-28 Eli Lilly And Company Thin film electrical component
US5679650A (en) 1993-11-24 1997-10-21 Fukunaga; Atsuo F. Pharmaceutical compositions including mixtures of an adenosine compound and a catecholamine
US5593852A (en) * 1993-12-02 1997-01-14 Heller; Adam Subcutaneous glucose electrode
US5322063A (en) * 1991-10-04 1994-06-21 Eli Lilly And Company Hydrophilic polyurethane membranes for electrochemical glucose sensors
US5262522A (en) 1991-11-22 1993-11-16 Immunex Corporation Receptor for oncostatin M and leukemia inhibitory factor
US5284140A (en) * 1992-02-11 1994-02-08 Eli Lilly And Company Acrylic copolymer membranes for biosensors
US6087323A (en) * 1992-04-03 2000-07-11 Cambridge Neuroscience, Inc. Use of neuregulins as modulators of cellular communication
JP3980657B2 (ja) 1992-06-26 2007-09-26 生化学工業株式会社 コンドロイチナーゼａｂｃ、その製造法及び医薬組成物
US5496718A (en) 1992-06-26 1996-03-05 Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha (Seikagaku Corporation) Chondroitinase ABC isolated from proteus vulgaris ATCC 6896
US7008783B1 (en) * 1992-09-22 2006-03-07 Maruha Corporation Gene encoding chondroitinase ABC and uses therefor
US5307263A (en) * 1992-11-17 1994-04-26 Raya Systems, Inc. Modular microprocessor-based health monitoring system
US5879163A (en) * 1996-06-24 1999-03-09 Health Hero Network, Inc. On-line health education and feedback system using motivational driver profile coding and automated content fulfillment
US5899855A (en) * 1992-11-17 1999-05-04 Health Hero Network, Inc. Modular microprocessor-based health monitoring system
US5897493A (en) * 1997-03-28 1999-04-27 Health Hero Network, Inc. Monitoring system for remotely querying individuals
US5832448A (en) * 1996-10-16 1998-11-03 Health Hero Network Multiple patient monitoring system for proactive health management
US5913310A (en) * 1994-05-23 1999-06-22 Health Hero Network, Inc. Method for diagnosis and treatment of psychological and emotional disorders using a microprocessor-based video game
ZA938555B (en) * 1992-11-23 1994-08-02 Lilly Co Eli Technique to improve the performance of electrochemical sensors
US5299571A (en) * 1993-01-22 1994-04-05 Eli Lilly And Company Apparatus and method for implantation of sensors
US5578480A (en) 1993-04-23 1996-11-26 American Cyanamid Company Methods for the isolation and purification of the recombinantly expressed chondroitinase I and II enzymes from P. vulgaris
AU697156B2 (en) * 1993-04-23 1998-10-01 American Cyanamid Company Cloning and expression of the chondroitinase I and II genes from (p. vulgaris)
US6248562B1 (en) 1993-11-01 2001-06-19 Research Foundation State University Of New York Chimeric proteins comprising borrelia polypeptides and uses therefor
WO1995013091A1 (en) 1993-11-12 1995-05-18 International Technology Management Associates, Ltd. Methods of repairing connective tissues
US5497772A (en) * 1993-11-19 1996-03-12 Alfred E. Mann Foundation For Scientific Research Glucose monitoring system
US5594638A (en) * 1993-12-29 1997-01-14 First Opinion Corporation Computerized medical diagnostic system including re-enter function and sensitivity factors
US5660176A (en) * 1993-12-29 1997-08-26 First Opinion Corporation Computerized medical diagnostic and treatment advice system
FR2716286A1 (fr) * 1994-02-16 1995-08-18 Debiotech Sa Installation de surveillance à distance d'équipements commandables.
US5536249A (en) * 1994-03-09 1996-07-16 Visionary Medical Products, Inc. Pen-type injector with a microprocessor and blood characteristic monitor
US5630710A (en) * 1994-03-09 1997-05-20 Baxter International Inc. Ambulatory infusion pump
US5390671A (en) * 1994-03-15 1995-02-21 Minimed Inc. Transcutaneous sensor insertion set
US5391250A (en) * 1994-03-15 1995-02-21 Minimed Inc. Method of fabricating thin film sensors
US5498536A (en) 1994-04-22 1996-03-12 American Cyanamid Company Chondroitinase II from Proteus vulgaris
US5482473A (en) * 1994-05-09 1996-01-09 Minimed Inc. Flex circuit connector
US5704366A (en) * 1994-05-23 1998-01-06 Enact Health Management Systems System for monitoring and reporting medical measurements
CA2712304C (en) 1994-06-10 2011-10-25 United States Surgical Corporation Recombinant chimeric proteins and methods of use thereof
US5997863A (en) 1994-07-08 1999-12-07 Ibex Technologies R And D, Inc. Attenuation of wound healing processes
US6093563A (en) * 1994-07-08 2000-07-25 Ibex Technologies R And D, Inc. Chondroitin lyase enzymes
US5505709A (en) * 1994-09-15 1996-04-09 Minimed, Inc., A Delaware Corporation Mated infusion pump and syringe
US5573506A (en) * 1994-11-25 1996-11-12 Block Medical, Inc. Remotely programmable infusion system
US6326166B1 (en) 1995-12-29 2001-12-04 Massachusetts Institute Of Technology Chimeric DNA-binding proteins
CA2212006A1 (en) 1995-02-03 1996-08-08 G.D. Searle & Co. Novel c-mpl ligands
US5792743A (en) 1995-04-19 1998-08-11 Acorda Therapeutics Method for promoting neural growth comprising administering a soluble neural cell adhesion molecule
US5609060A (en) * 1995-04-28 1997-03-11 Dentsleeve Pty Limited Multiple channel perfused manometry apparatus and a method of operation of such a device
US5772635A (en) * 1995-05-15 1998-06-30 Alaris Medical Systems, Inc. Automated infusion system with dose rate calculator
US6313265B1 (en) 1995-07-24 2001-11-06 The Scripps Research Institute Neurite outgrowth-promoting polypeptides containing fibronectin type III repeats and methods of use
US5750926A (en) * 1995-08-16 1998-05-12 Alfred E. Mann Foundation For Scientific Research Hermetically sealed electrical feedthrough for use with implantable electronic devices
US5754111A (en) * 1995-09-20 1998-05-19 Garcia; Alfredo Medical alerting system
US6689265B2 (en) * 1995-10-11 2004-02-10 Therasense, Inc. Electrochemical analyte sensors using thermostable soybean peroxidase
US5869301A (en) 1995-11-02 1999-02-09 Lockhead Martin Energy Research Corporation Method for the production of dicarboxylic acids
US5861018A (en) * 1996-05-28 1999-01-19 Telecom Medical Inc. Ultrasound transdermal communication system and method
US5885245A (en) * 1996-08-02 1999-03-23 Sabratek Corporation Medical apparatus with remote virtual input device
JP3702450B2 (ja) 1996-12-18 2005-10-05 ニプロ株式会社 乳酸脱水素酵素測定用試薬
US6043437A (en) * 1996-12-20 2000-03-28 Alfred E. Mann Foundation Alumina insulation for coating implantable components and other microminiature devices
US6032119A (en) * 1997-01-16 2000-02-29 Health Hero Network, Inc. Personalized display of health information
US5960085A (en) * 1997-04-14 1999-09-28 De La Huerga; Carlos Security badge for automated access control and secure data gathering
US6200564B1 (en) 1997-04-11 2001-03-13 J. Thomas Lamont Pharmaceutical compositions containing chondroitinase and uses therefor
JP4172842B2 (ja) 1997-05-02 2008-10-29 生化学工業株式会社 コンドロイチナーゼ組成物
DE69829605T2 (de) 1997-05-02 2006-02-09 Seikagaku Corp. Chondroitinase enthaltende Zusammensetzungen
US6558351B1 (en) * 1999-06-03 2003-05-06 Medtronic Minimed, Inc. Closed loop system for controlling insulin infusion
DE69808402T2 (de) 1997-08-22 2003-07-03 Seikagaku Corp., Tokio/Tokyo Arzneimittel zur Behandlung von durch Hernie gestörter intervertebraler Bandscheibe
US6153187A (en) 1997-09-02 2000-11-28 Insight Strategy & Marketing Ltd. Use of glycosaminoglycans degrading enzymes for management of airway associated diseases
US20010006630A1 (en) 1997-09-02 2001-07-05 Oron Yacoby-Zeevi Introducing a biological material into a patient
US5917346A (en) * 1997-09-12 1999-06-29 Alfred E. Mann Foundation Low power current to frequency converter circuit for use in implantable sensors
US6071391A (en) * 1997-09-12 2000-06-06 Nok Corporation Enzyme electrode structure
WO1999017819A1 (en) * 1997-10-02 1999-04-15 Micromed Technology, Inc. Implantable pump system
JP4319348B2 (ja) 1997-10-17 2009-08-26 ジェネンテック・インコーポレーテッド ヒトトール相同体
US6081736A (en) * 1997-10-20 2000-06-27 Alfred E. Mann Foundation Implantable enzyme-based monitoring systems adapted for long term use
US6579690B1 (en) * 1997-12-05 2003-06-17 Therasense, Inc. Blood analyte monitoring through subcutaneous measurement
US6134461A (en) * 1998-03-04 2000-10-17 E. Heller & Company Electrochemical analyte
CA2322748A1 (en) 1998-03-13 1999-09-16 Human Genome Sciences, Inc. Vascular endothelial growth factor 2
AU3006899A (en) 1998-03-13 1999-09-27 Biomarin Pharmaceutical Inc. Carbohydrate-modifying enzymes for burn and wound debridement and methods for treatment
WO1999047190A1 (en) * 1998-03-16 1999-09-23 Medtronic, Inc. Hemostatic system and components for extracorporeal circuit
US5904708A (en) * 1998-03-19 1999-05-18 Medtronic, Inc. System and method for deriving relative physiologic signals
US6171575B1 (en) 1998-04-06 2001-01-09 Shinichi Okuyama Method of radioisotopic assessment of the integrity and function of the nose-brain barrier
US6175752B1 (en) * 1998-04-30 2001-01-16 Therasense, Inc. Analyte monitoring device and methods of use
US6554798B1 (en) * 1998-08-18 2003-04-29 Medtronic Minimed, Inc. External infusion device with remote programming, bolus estimator and/or vibration alarm capabilities
US6558320B1 (en) * 2000-01-20 2003-05-06 Medtronic Minimed, Inc. Handheld personal data assistant (PDA) with a medical device and method of using the same
JP2003527822A (ja) 1998-08-27 2003-09-24 マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー ヘパリナーゼｉおよびｉｉ由来の合理的に設計されたヘパリナーゼ
EP1117422B1 (en) 1998-10-06 2005-09-28 Stryker Corporation Use of op-1 for the preparation of a pharmaceutical composition for repairing a defect locus in a non articular cartilage tissue of a mammal
US6560741B1 (en) * 1999-02-24 2003-05-06 Datastrip (Iom) Limited Two-dimensional printed code for storing biometric information and integrated off-line apparatus for reading same
US6360888B1 (en) * 1999-02-25 2002-03-26 Minimed Inc. Glucose sensor package system
JP2003514765A (ja) 1999-02-28 2003-04-22 ワシントン ユニバーシティー 新規形質導入分子およびその使用方法
WO2000059942A2 (en) 1999-04-02 2000-10-12 Eli Lilly And Company Human obesity protein binding protrein-2 homolog and uses thereof
SE9901428D0 (sv) 1999-04-21 1999-04-21 Karolinska Innovations Ab Amphibodies
WO2000074080A1 (en) * 1999-06-02 2000-12-07 Composite Materials, L.L.C. An article shielded against emi and rfi
JP4723140B2 (ja) 1999-06-08 2011-07-13 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 改善された薬物動態特性を有する改変キメラポリペプチド
EP1192269A2 (en) * 1999-06-18 2002-04-03 Therasense, Inc. MASS TRANSPORT LIMITED i IN VIVO /i ANALYTE SENSOR
US6804558B2 (en) * 1999-07-07 2004-10-12 Medtronic, Inc. System and method of communicating between an implantable medical device and a remote computer system or health care provider
US6553263B1 (en) * 1999-07-30 2003-04-22 Advanced Bionics Corporation Implantable pulse generators using rechargeable zero-volt technology lithium-ion batteries
US6610820B1 (en) * 1999-10-12 2003-08-26 University Of Lausanne Cell-permeable peptide inhibitors of the JNK signal transduction pathway
WO2001030845A1 (en) * 1999-10-22 2001-05-03 American Home Products Corporation Pablo, a polypeptide that interacts with bcl-xl, and uses related thereto
AU781600B2 (en) 1999-12-02 2005-06-02 Biomarin Pharmaceutical Inc. Attenuation of fibroblast proliferation
US20030152946A1 (en) * 1999-12-27 2003-08-14 Shigeomi Shimizu Bh4-fused polypeptides
AU784349C (en) * 2000-01-12 2006-09-28 Yale University Nogo receptor-mediated blockade of axonal growth
US20030060765A1 (en) * 2000-02-16 2003-03-27 Arthur Campbell Infusion device menu structure and method of using the same
US6895263B2 (en) * 2000-02-23 2005-05-17 Medtronic Minimed, Inc. Real time self-adjusting calibration algorithm
ATE502567T1 (de) * 2000-05-19 2011-04-15 Welch Allyn Protocol Inc Vorrichtung zur überwachung von patienten
WO2002076503A1 (en) * 2000-06-20 2002-10-03 Mayo Foundation For Medical Education And Research Treatment of central nervous system diseases by antibodies against glatiramer acetate
EP1294765B1 (en) * 2000-06-22 2013-11-27 Amgen, Inc. Use of an antibody specific for an IL-17 like polypeptide
US20020055857A1 (en) * 2000-10-31 2002-05-09 Mault James R. Method of assisting individuals in lifestyle control programs conducive to good health
WO2002045749A2 (en) * 2000-11-02 2002-06-13 Research Foundation Of City University Of New York Methods for stimulating nervous system regeneration and repair by inhibition phosphodiesterase type 4
JP2004515534A (ja) * 2000-12-12 2004-05-27 エンカム ファーマシューティカルズ アクティーゼルスカブ 生存を促進するｎｃａｍ結合化合物およびｎｃａｍリガンド結合化合物
US20020142299A1 (en) 2001-01-09 2002-10-03 Davidson Beverly L. PTD-modified proteins
GB0103174D0 (en) * 2001-02-08 2001-03-28 Smithkline Beecham Plc Novel method of treatment
EP1392849B2 (en) * 2001-02-15 2012-01-18 University Of Chicago Yeast screens for agents affecting protein folding
JP2004531250A (ja) * 2001-04-06 2004-10-14 ビオ・ビジョン・アーゲー 慢性痴呆疾患の検出方法、関連ペプチドおよび検出試薬
CA2367636C (en) 2001-04-12 2010-05-04 Lisa Mckerracher Fusion proteins
US6748250B1 (en) * 2001-04-27 2004-06-08 Medoptix, Inc. Method and system of monitoring a patient
US6676816B2 (en) * 2001-05-11 2004-01-13 Therasense, Inc. Transition metal complexes with (pyridyl)imidazole ligands and sensors using said complexes
AU2002311535A1 (en) 2001-06-26 2003-01-08 Decode Genetics Ehf. Nucleic acids encoding protein kinases
ES2378227T3 (es) 2001-08-13 2012-04-10 University Of Florida Research Foundation, Inc. Materiales y métodos para favorecer la reparación del tejido nervioso
US7025760B2 (en) * 2001-09-07 2006-04-11 Medtronic Minimed, Inc. Method and system for non-vascular sensor implantation
US20030049258A1 (en) 2001-09-11 2003-03-13 Martin Ungerer Method of increasing the contractility of a heart, a heart muscle or cells of a heart muscle
JP2005505285A (ja) 2001-10-09 2005-02-24 イミュネックス・コーポレーション 哺乳動物ｃ型レクチン
US6728576B2 (en) * 2001-10-31 2004-04-27 Medtronic, Inc. Non-contact EKG
GB0205022D0 (en) 2002-03-04 2002-04-17 Univ Cambridge Tech Materials and methods for the treatment of cns damage
EP1499233A4 (en) * 2002-04-16 2009-02-18 Carematix Inc METHOD AND APPARATUS FOR REMOTELY MONITORING THE STATUS OF A PATIENT
AU2003304173A1 (en) 2002-05-04 2005-01-04 Acorda Therapeutics, Inc. Compositions and methods for promoting neuronal outgrowth
US7807618B2 (en) 2002-05-20 2010-10-05 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Methods and compositions for delivering enzymes and nucleic acid molecules to brain, bone and other tissues
WO2003102160A2 (en) 2002-06-03 2003-12-11 Massachusetts Institute Of Technology Rationally designed polysaccharide lyases derived from chondroitinase b
US7163545B2 (en) 2002-07-29 2007-01-16 Mayo Foundation For Medical Education And Research Spinal cord surgical implant
JP4527950B2 (ja) 2002-08-09 2010-08-18 シスメックス株式会社 脂質測定試薬
US7074581B2 (en) 2002-08-09 2006-07-11 Sysmex Corporation Reagent for assaying lipid
ATE469913T1 (de) * 2002-08-10 2010-06-15 Univ Yale Antagonisten des nogo-rezeptors
DE60337009D1 (de) 2002-08-15 2011-06-16 Acorda Therapeutics Inc Chimärisches protein
JP2004113166A (ja) 2002-09-27 2004-04-15 Mitsui Chemicals Inc ハロペルオキシダ−ゼ活性の安定化方法
US7736309B2 (en) * 2002-09-27 2010-06-15 Medtronic Minimed, Inc. Implantable sensor method and system
US20040061232A1 (en) * 2002-09-27 2004-04-01 Medtronic Minimed, Inc. Multilayer substrate
US7138330B2 (en) * 2002-09-27 2006-11-21 Medtronic Minimed, Inc. High reliability multilayer circuit substrates and methods for their formation
US7162289B2 (en) * 2002-09-27 2007-01-09 Medtronic Minimed, Inc. Method and apparatus for enhancing the integrity of an implantable sensor device
US20040074785A1 (en) * 2002-10-18 2004-04-22 Holker James D. Analyte sensors and methods for making them
US20050038680A1 (en) * 2002-12-19 2005-02-17 Mcmahon Kevin Lee System and method for glucose monitoring
EP1614040A4 (en) * 2003-04-08 2009-03-11 Medic4All Ag PORTABLE WIRELESS GATEWAY FOR MEDICAL REMOTE EXAMINATIONS
MXPA05012307A (es) 2003-05-16 2006-07-03 Acorda Therapeutics Inc Mutantes que degradan proteoglicanos para tratamiento del snc.
ES2373039T3 (es) 2003-05-16 2012-01-30 Acorda Therapeutics, Inc. Composiciones y métodos para el tratamiento de lesiones del cns.
EP2354155B1 (en) 2003-05-16 2017-05-03 Acorda Therapeutics, Inc. Fusion Proteins for Treatment of CNS
US7959914B2 (en) 2003-05-16 2011-06-14 Acorda Therapeutics, Inc. Methods of reducing extravasation of inflammatory cells
US20050038331A1 (en) * 2003-08-14 2005-02-17 Grayson Silaski Insertable sensor assembly having a coupled inductor communicative system
CA2558984A1 (en) * 2004-03-10 2005-09-22 Massachusetts Institute Of Technology Recombinant chondroitinase abc i and uses thereof
JP4926962B2 (ja) 2004-05-18 2012-05-09 アコーダ セラピューティクス、インク． コンドロイチン分解酵素とその安定な製剤の精製法
EP1815370A2 (en) * 2004-11-12 2007-08-08 Koninklijke Philips Electronics N.V. Message integrity for secure communication of wireless medical devices
US20090081951A1 (en) * 2004-11-16 2009-03-26 Koninklijke Philips Electronics N.V. Time synchronization in wireless ad hoc networks of medical devices and sensors
CA2623635C (en) 2005-09-26 2013-04-02 Acorda Therapeutics, Inc. Compositions and methods of using chondroitinase abci mutants
ES2473610T3 (es) 2006-10-10 2014-07-07 Acorda Therapeutics, Inc. Composiciones y métodos de uso de mutantes de condroitinasa ABCI

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