ES2599507T3

ES2599507T3 - Derivados de etinilo como moduladores de la actividad del receptor mGluR5

Info

Publication number: ES2599507T3
Application number: ES13776507.9T
Authority: ES
Inventors: Georg Jaeschke; Lothar Lindemann; Antonio Ricci; Daniel Rueher; Heinz Stadler; Eric Vieira
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 2012-10-18
Filing date: 2013-10-15
Publication date: 2017-02-02
Anticipated expiration: 2033-10-15
Also published as: MA38010B1; EA026941B1; PE20150733A1; PH12015500346B1; CN104603110A; IL237217A; EP2909178A1; JP2015534961A; CR20150158A; CN104603110B; IL237217A0; MY171517A; ZA201500343B; JP6263542B2; AU2013331782B2; TW201420575A; PH12015500346A1; BR112015002320A2; AR093029A1; CA2879489A1

Abstract

Un compuesto de la fórmula I:**Fórmula** en la que: Y es N o CH; R1 es flúor o cloro; o una sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable, una mezcla racémica, o sus correspondientes enantiómeros y/o isómeros ópticos y/o estereoisómeros.

Description

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Unas 24 h antes del ensayo, en placas de 96 hoyos negras, de fondo transparente, recubiertas con poli-D-lisina, se siembran 5x104 células/hoyo. Se introducen las células junto con 2,5 µM Fluo-4AM en un tampón de carga (1xHBSS, 20 mM HEPES) a 37ºC durante 1 h y se lavan cinco veces con el tampón de carga. Se transfieren las células a un sistema llamado Functional Drug Screening System 7000 (Hamamatsu, París, Francia) y se añaden 11 5 diluciones en serie semilogarítmicas del compuesto a ensayar a 37ºC y se incuban las células durante 10-30 min efectuando el registro de la fluorescencia en línea. Después del paso de la preincubación se añade a las células el agonista L-glutamato en una concentración correspondiente a la EC20 (por ejemplo unos 80 μM) efectuando el registro de la fluorescencia en línea; con el fin de tomar en consideración las variaciones del día a día en la capacidad de respuesta de las células, se determina la EC20 del glutamato inmediatamente antes de cada ensayo, regis

10 trando la curva completa de dosis-respuesta al glutamato.

Se miden las respuestas en forma de incremento de pico de fluorescencia menos la basal (es decir, la fluorescencia resultante sin la adición del L-glutamato), normalizada en el efecto estimulador máximo obtenido con concentraciones saturadas de L-glutamato. Se trazan las gráficas con el % de estimulación máxima empleando el programa 15 informático XLfit, un programa de ajuste de curvas que permite trazar curvas iterativas de los datos empleando el algoritmo de Levenburg-Marquardt. La ecuación del análisis de competición de sitio individual que se emplea es la siguiente: y = A + ((B-A)/(1+((x/C)D))), en la que y es el efecto estimulador máximo en %, A es la y mínima, B es la y máxima, C es la EC50, x es el log10 de la concentración del compuesto competidor y D es la pendiente de la curva (el coeficiente de Hill). A partir de estas curvas de la EC50 (concentración en la que se logra una estimulación se

20 mimáxima) se calculan el coeficiente de Hill así como la respuesta máxima en % del efecto estimulador máximo obtenido con concentraciones saturadas de L-glutamato.

Las señales positivas obtenidas durante la preincubación con los compuestos PAM ensayados (es decir, antes de la aplicación de la concentración EC20 del L-glutamato) indican la actividad agonista, la ausencia de tales señales 25 demuestra la falta de actividad agonista. La depresión de la señal observada después de la adición de la concentración EC20 del L-glutamato indica la actividad inhibidora del compuesto ensayado.

En la posterior lista se recogen los resultados correspondientes a los compuestos de los ejemplos, todos ellos tienen valores EC50 inferiores o iguales a 100 nM. 30

compuesto del ejemplo: PAM mGlu5, EC50 [nM] eficacia, [%]

compuesto de referencia 1 N N O F: 16 64

compuesto de referencia 2 N N N O F: 23 55

compuesto del ejemplo 1 N N O F: inactivo

compuesto del ejemplo 2 N N O Cl: inactivo

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Comparación de los compuestos de la invención con los compuestos de referencia 1 y 2

De la tabla siguiente se desprende que los compuestos de la invención (NAM) tienen un perfil claramente diferente al de los compuestos de referencia 1 y 2 (PAM), que son estructuralmente similares.

compuesto del ejemplo: estructura ensayo PAM de mGlu5, EC50 (nM) fijación al MPEP, Ki (nM) perfil de actividad

compuesto de referencia 1: F N N O 16 29 PAM

compuesto de referencia 2: F N N N O 23 51 PAM

O

N N

1: F imagen4 inactivo 42 NAM

O

N N

2: Cl imagen5 inactivo 24 NAM

O

N N

N

3: F imagen6 inactivo 94 NAM

O

N N

N

4: Cl imagen7 inactivo 46 NAM

Los compuestos de la fórmula I pueden obtenerse por los métodos que se indican a continuación, por métodos descritos en los ejemplos o por métodos similares. Los expertos ya conocen las condiciones apropiadas para los pasos de reacción individuales. El orden de las reacciones no se limita a los descritos en los esquemas, sino que en

10 función de los materiales de partida y de su correspondiente reactividad, el orden de los pasos de reacción podrá alterarse libremente. Los materiales de partida son productos comerciales o compuestos que pueden obtenerse por métodos similares a los descritos a continuación, por métodos descritos en las referencias que se citan en la descripción o en los ejemplos, o por métodos ya conocidos de química orgánica.

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Paso 2: ácido 5-(3-fluor-feniletinil)-piridina-2-carboxílico

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F

O N

imagen14O

5 Se disuelve el 5-(3-fluor-feniletinil)-piridina-2-carboxilato de metilo (1,9 g, 7,44 mmoles) (ejemplo 1, paso 1) en THF (30 ml) y agua (30 ml) y se le añade a temperatura ambiente el LiOH (357 mg, 24,9 mmoles, 2 equiv.). Se agita la mezcla a temperatura ambiente durante 16 horas. Se acidifica la mezcla reaccionante con HCl 4 N a un pH de 2,5 y se evapora el THF para formar una suspensión amarilla. Se enfría la suspensión a 0-5ºC y se filtra. Se lavan los cristales con agua fría y se concentran a sequedad. Se obtiene el ácido 5-(3-fluor-feniletinil)-piridina-2-carboxílico

10 deseado (1,71 g, rendimiento = 95%) en forma de sólido ligeramente amarillo, EM: m/e = 239,9 (M+H+).

Paso 3: tert-butil-etil-amida del ácido 5-(3-fluor-feniletinil)-piridina-2-carboxílico

O N

imagen15N

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F

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15 Se disuelve el ácido 5-(3-fluor-feniletinil)-piridina-2-carboxílico (100 mg, 0,41 mmoles) (ejemplo 1, paso 2) en dioxano (1 ml) y se le añaden a temperatura ambiente la base de Hunig (217 µl, 1,24 mmoles, 3 equiv.), la tert-butil-etilamina (63 mg, 0,62 mmoles, 1,5 equiv.) y el TBTU (146 mg, 0,45 mmoles, 1,1 equiv.). Se agita la mezcla a temperatura ambiente durante 16 horas. Se concentra la mezcla reaccionante y se extrae con una solución saturada de NaHCO3

20 y dos veces con un pequeño volumen de diclorometano. Se purifica el producto en bruto por cromatografía flash introduciendo directamente las fases de diclorometano en una columna de gel de sílice y eluyendo con un gradiente de acetato de etilo en heptano de 0:100 a 0:100. Se obtiene la tert-butil-etil-amida del ácido 5-(3-fluor-feniletinil)piridina-2-carboxílico deseada (102 mg, rendimiento = 76%) en forma de aceite ligeramente amarillo, EM: m/e = 325,3 (M+H+).

25 Ejemplo 2

tert-butil-etil-amida del ácido 5-(3-cloro-fenil-etinil)-piridina-2-carboxílico

O N

imagen22N

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Cl

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Paso 1: ácido 5-(3-cloro-feniletinil)-piridina-2-carboxílico

O

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Cl

35 Se obtiene el compuesto epigrafiado en forma de sólido blanco, EM: m/e = 258,4/260,4 (M+H+), aplicando un método químico similar al descrito en el ejemplo 1, paso 1, a partir del ácido 5-bromo-piridina-2-carboxílico y el 3clorofenil-acetileno.

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Claims

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