EA026941B1

EA026941B1 - ПРОИЗВОДНЫЕ ЭТИНИЛА В КАЧЕСТВЕ МОДУЛЯТОРОВ АКТИВНОСТИ РЕЦЕПТОРА mGluR5

Info

Publication number: EA026941B1
Application number: EA201590676A
Authority: EA
Inventors: Георг Ешке; Лотар Линдеманн; Антонио Риччи; Даниэль Рюхер; Хайнц Штадлер; Эрик Виейра
Original assignee: Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг
Priority date: 2012-10-18
Filing date: 2013-10-15
Publication date: 2017-06-30
Also published as: CR20150158A; EP2909178A1; TWI504593B; ES2599507T3; AR093029A1; MA38010A1; EP2909178B1; HK1206715A1; WO2014060384A1; CA2879489A1; AU2013331782A1; CN104603110B; CL2015000890A1; IL237217A0; AU2013331782B2; NZ703537A; EA201590676A1; JP6263542B2; ZA201500343B; JP2015534961A

Abstract

Изобретение относится к этинильным производным формулыгде Y представляет собой N или СH; Rпредставляет собой фтор- или хлор-, или к их фармацевтически приемлемой соли присоединения кислоты и/или стереоизомеру. Неожиданно было обнаружено, что соединения общей формулы представляют собой антагонисты метаботропного рецептора глутамата (отрицательные аллостерические модуляторы).

Description

Настоящее изобретение относится к этинильным производным формулы I

где Υ представляет собой N или СН;

К¹ представляет собой фтор- или хлор-, или к их фармацевтически приемлемой соли присоединения кислоты, к рацемической смеси или к ее соответствующему энантиомеру, и/или оптическому изомеру, и/или стереоизомеру.

Теперь неожиданно обнаружили, что соединения общей формулы I представляют собой антагонисты метаботропного рецептора глутамата (ΝΑΜ - отрицательные аллостерические модуляторы). Соединения формулы I отличаются наличием ценных терапевтических свойств. Их можно использовать в лечении или предупреждении расстройств, опосредованных рецептором тО1иК5 (метаботропный рецептор глутамата 5).

В центральной нервной системе (ЦНС) передача стимулов происходит посредством взаимодействия нейромедиатора, который выпускается нейроном, с нейрорецептором.

Г лутамат является важным возбуждающим нейромедиатором в мозге и играет уникальную роль во множестве функций центральной нервной системы (ЦНС). Рецепторы стимулов, зависимые от глутамата, делят на две главные группы. Первая главная группа, а именно ионотропные рецепторы, формирует контролируемые лигандом ионные каналы. Метаботропные рецепторы глутамата (тО1иК) принадлежат ко второй главной группе и, кроме того, принадлежат к семейству рецепторов, связанных с О-белком.

В настоящее время известны восемь разных членов данных тО1иК, и некоторые из них даже имеют подтипы. Согласно гомологии их последовательностей, механизмам трансдукции сигнала и селективности в отношении агонистов эти восемь рецепторов можно подразделять на три подгруппы:

тО1иК1 и тО1иК5 принадлежат к группе I, тО1иК2 и тО1иК3 принадлежат к группе II и тО1иК4, тО1иК6, тО1иК7 и тО1иК8 принадлежат к группе III.

Отрицательные аллостерические модуляторы метаботропных рецепторов глутамата, принадлежащих к первой группе, можно использовать для лечения или предупреждения острых и/или хронических неврологических расстройств, таких как болезнь Паркинсона, синдром Мартина-Белл, аутистические расстройства, когнитивные расстройства и нарушения памяти, а также хронической и острой боли и гастроэзофагального рефлюкса (ОЕКЭ).

Другие поддающиеся лечению показания в связи с этим представляют собой ограниченную функцию мозга, вызванную операциями шунтирования или трансплантами, плохую подачу крови в мозг, травмы спинного мозга, травмы головы, гипоксию, вызванную беременностью, остановку сердца и гипогликемию. Другие поддающиеся лечению показания представляют собой ишемию, хорею Гентингтона, боковой амиотрофический склероз (АЬ§), деменцию, вызванную СПИД (синдром приобретенного иммунодефицита), травмы глаза, ретинопатию, идиопатический паркинсонизм или паркинсонизм, вызванный лекарственными средствами, а также состояния, которые приводят к функциям глутаматной недостаточности, такие как, например, мышечные спазмы, конвульсии, мигрень, недержание мочи, никотиновая зависимость, опиатная зависимость, тревожность, рвота, дискинезия и депрессии.

Расстройствами, полностью или частично опосредованными тО1иК5, являются, например, острые, травматические и хронические дегенеративные процессы нервной системы, такие как болезнь Альцгеймера, старческое слабоумие, болезнь Паркинсона, хорея Гентингтона, боковой амиотрофический склероз и рассеянный склероз, психиатрические расстройства, такие как шизофрения и тревожность, депрессия, боль и зависимость от лекарственных средств (Ехрей Θρίη. Тйег. Ра1еи18 (2002), 12, (12)).

Селективные антагонисты тО1иК5 являются особенно полезными для лечения расстройств, когда желательным является уменьшение активации рецептора тО1иК5, таких как тревожность и боль, депрессия, синдром Мартина-Белл, расстройства аутического спектра, болезнь Паркинсона и гастроэзофагальный рефлюкс (ОЕКЭ).

Целями настоящего изобретения являются соединения формулы I и их фармацевтически приемлемые соли, вышеупомянутые соединения в качестве фармацевтически активных веществ и их получение. Другими целями данного изобретения являются лекарственные средства на основе соединения согласно изобретению и их изготовление, а также применение данных соединений в контроле или предупреждении расстройств, опосредованных рецептором тО1иК5 (ΝΑΜ), которые представляют собой тревожность и боль, депрессию, синдром Мартина-Белл, расстройства аутического спектра, болезнь Паркинсона и гастроэзофагальный рефлюкс (ОЕКЭ), и, соответственно, получение соответствующих лекарственных средств.

Одним воплощением настоящего изобретения являются соединения формулы I, где Υ представляет собой Ν.

- 1 026941

Данные соединения представляют собой трет-бутилэтиламид 5-(3-фторфенилэтинил)пиримидин-2-карбоновой кислоты; трет-бутилэтиламид 5-(3-хлорфенилэтинил)пиримидин-2-карбоновой кислоты.

Одним другим воплощением настоящего изобретения являются соединения формулы I, где Υ представляет собой СН.

Данные соединения представляют собой трет-бутилэтиламид 5-(3-фторфенилэтинил)пиридин-2-карбоновой кислоты; трет-бутилэтиламид 5-(3-хлорфенилэтинил)пиридин-2-карбоновой кислоты.

Конкретное воплощение данного изобретения состоит из следующих соединений: трет-бутилэтиламид 5-(3-фторфенилэтинил)пиридин-2-карбоновой кислоты; трет-бутилэтиламид 5-(3-хлорфенилэтинил)пиридин-2-карбоновой кислоты; трет-бутилэтиламид 5-(3-фторфенилэтинил)пиримидин-2-карбоновой кислоты; трет-бутилэтиламид 5-(3-хлорфенилэтинил)пиримидин-2-карбоновой кислоты.

Соединения, которые являются аналогичными соединениям по настоящему изобретению, в общем, были описаны в качестве положительных аллостерических модуляторов рецептора тС1иК5. Неожиданно обнаружили, что вместо положительных аллостерических модуляторов тС1иК5 были получены высокоэффективные антагонисты тС1иК5, которые имеют полностью противоположную фармакологию по сравнению с положительными аллостерическими модуляторами.

Главное различие между положительными и отрицательными аллостерическими модуляторами можно увидеть на фигуре. Положительный аллостерический модулятор тС1иК5 (РАМ) приводит к повышенной активности рецептора (мобилизация Са²+) в присутствии фиксированной концентрации глутамата, тогда как аллостерический антагонист (отрицательный аллостерический модулятор, ΝΑΜ) приводит к уменьшению активации рецептора. На фигуре показано общее поведение ΝΑΜ и РАМ при тех же самых условиях. Аффинность в отношении рецептора на фигуре составляет приблизительно 10^-7 М для РАМ и от 10^-7 до 10^-8 М для ΝΑΜ. Данные значения также можно измерять с использованием анализа связывания с вытеснением радиоактивного лиганда (МРЕР), см. описание анализа.

На фигуре показано сравнение положительного аллостерического модулятора (РАМ) тС1иК5 и антагониста тС1иК5 (отрицательный аллостерический модулятор -^АМ).

Показания, на которые могут быть направлены данные соединения, являются не одинаковыми: NΑΜ тС1иК5 являются полезными для показаний, когда желательным является уменьшение избыточной активности рецептора, таких как тревожность и боль, депрессия, синдром Мартина-Белл, расстройства аутического спектра, болезнь Паркинсона и гастроэзофагальный рефлюкс (ΟΕΡΌ). РАМ тС1иК5, с другой стороны, являются полезными при показаниях, когда желательной является нормализация пониженной активности рецептора, таких как психоз, эпилепсия, шизофрения, болезнь Альцгеймера и ассоциированные когнитивные расстройства, а также туберозный склероз.

Данное различие может быть продемонстрировано на практике, например в животной модели тревожности, как, например, в конфликтном тесте Фогеля питья у крыс, когда соединения по изобретению демонстрируют анксиолитическую активность, тогда как РАМ тС1иК не демонстрируют активность в данной животной модели.

Биологические анализы и данные.

Анализ внутриклеточной мобилизации Са²+.

Была получена моноклональная линия клеток НЕК-293 (клетки эмбриональной почки человека), стабильно трансфицированная кДНК, кодирующей человеческий рецептор тС1и5; для работы с положительными аллостерическими модуляторами (РАМ) тС1и5 была отобрана линия клеток с низкими уровнями экспрессии рецептора и низкой конститутивной активностью рецептора для обеспечения различения агонистической активности по сравнению с активностью РАМ. Клетки культивировали согласно стандартным протоколам (Ргезйиеу, 2000) в среде Игла, модифицированной по Дульбекко, с высокой концентрацией глюкозы, дополненной 1 мМ глутамином, 10% (об./об.) инактивированной нагреванием сывороткой телят коров, пенициллином/стрептомицином, 50 мкг/мл гигромицина и 15 мкг/мл бластицидина (все реактивы для культуры клеток и антибиотики - от 1пуПгодеп. Базель, Швейцария).

Примерно за 24 ч до эксперимента 5х10⁴ клеток/лунку высевали на покрытые поли-Э-лизином 96луночные планшеты с черным/прозрачным дном. Клетки загружали 2,5 мкМ Р1ио-4АМ в загрузочном буфере (1х НВББ (сбалансированный солевой раствор Хенкса), 20 мМ НЕРЕБ) в течение 1 ч при 37°С и пять раз промывали загрузочным буфером. Клетки переносили в Риисйоиа1 Эгид Бсгеешид Бу51ет 7000 (Натата18и, Париж, Франция), добавляли 11 полулогарифмических серийных разведений опытного соединения при 37°С и клетки инкубировали в течение 10-30 мин с записью флуоресценции онлайн. После данной стадии предынкубации к клеткам добавляли агонист - Ь-глутамат в концентрации, соответствующей ЕС₂₀ (эффективная концентрация, дающая 20% от максимального эффекта) (типично около 80 мкМ), с записью флуоресценции онлайн; для того чтобы учесть вариации в чувствительности клеток от суток к суткам, ЕС20 глутамата определяли немедленно перед каждым экспериментом путем записи всей кривой ответа на глутамат в зависимости от дозы.

- 2 026941

Ответы измеряли как пиковое увеличение флуоресценции минус исходный уровень (т.е. флуоресценция без добавления Ь-глутамата) при нормировании по максимальному стимулирующему эффекту, полученному с насыщающими концентрациями Ь-глутамата. Графики строили с указанием % максимального стимулирующего эффекта, используя ХЫй, программу для аппроксимации кривых, которая итерационно откладывает на графике данные с использованием алгоритма Левенбюрга-Марквардта. Используемым уравнением конкурентного анализа в одном сайте было у = А + ((В-А)/(1+((х/С)И))), где у представляет собой % от максимального стимулирующего эффекта, А представляет собой минимальный у, В представляет собой максимальный у, С представляет собой ЕС₅₀, х представляет собой 1од10 концентрации конкурирующего соединения и Ό представляет собой наклон кривой (коэффициент Хилла). Из данных кривых рассчитывали ЕС50 (концентрация, при которой достигается полумаксимальная стимуляция), коэффициент Хилла, а также максимальный ответ в % от максимального стимулирующего ответа, полученного с насыщающими концентрациями Ь-глутамата.

Положительные сигналы, полученные во время предынкубации с опытными соединениями, являющимися РАМ (т.е. до применения ЕС₂₀ концентрации Ь-глутамата), указывали на агонистическую активность, отсутствие таких сигналов демонстрировало недостаток агонистических активностей. Падение сигнала, наблюдаемое после добавления ЕС₂₀ концентрации Ь-глутамата, указывало на ингибирующую активность опытного соединения.

В приведенном ниже списке примеров показаны соответствующие результаты для соединений, которые все имеют значения ЕС₅₀, меньшие или равные 100 нМ.

Пример	РАМ тб1и5 ЕС₅„ [нМ]	Эффективность [%]

9				16	64
Р
Эталонное соединение 1
9		>N4 аД	о \ 1	23	55
Р
Эталонное соединение 2
Р^ и	'Чу'	[Г г!?	Ά к	неактивное
у Пр.1

		г	9 \ '^Νγ4Υ	неактивное
[I Пр.2
Р^			.^ N Уч	неактивное
у Пр.З ⁴
		г	4^Ν У.	неактивное
Пр.4

- 3 026941

Анализ связывания МРЕР.

Для экспериментов по связыванию кДНК, кодирующую человеческий рецептор тО1иК5а, временно трансфицировали в клетки ΕΒΝΑ с использованием методики, описанной ЗсЫаедег и СйгМещеп [Су1о1есЬпо1о§у, 15:1-13 (1998)]. Гомогенаты клеточной мембраны хранили при -80°С до суток анализа, после чего их оттаивали, ресуспендировали и политронизировали в буфере для связывания, содержащем 15 мМ ТП5-НС1. 120 мМ ЫаС1, 100 мМ КС1, 25 мМ СаС1₂, 25 мМ МдС1₂, рН 7,4, до конечной концентрации в анализе, составляющей 20 мкг белка/лунку.

Определяли изотермы насыщения путем добавления на данные мембраны 12 концентраций [³Н]МРЕР (0,04-100 нМ) (в общем объеме 200 мкл) на 1 ч при 4°С. Эксперименты по конкуренции проводили с фиксированной концентрацией [³Н]МРЕР (2 нМ) и значения 1С₅₀ (полумаксимальная ингибирующая концентрация) опытных соединений оценивали с использованием 11 концентраций (0,3-10000 нМ). Инкубации проводили в течение 1 ч при 4°С.

В конце инкубации мембраны фильтровали на ишйДег (96-луночный белый микропланшет со связанным фильтром СР/С, предынкубированным 1 ч в 0,1% РЕ1 в промывочном буфере, Раскагб ВюЗшепсе, Мепбеп, СТ) с коллектором клеток РШегтаЮ 96 (Раскагб ВюЗшепсе) и 3 раза промывали холодным 50 мМ буфером Тг18-НС1, рН 7,4. Неспецифичное связывание измеряли в присутствии 10 мкМ МРЕР. Радиоактивность на фильтре считали (3 мин) на сцинтилляционном счетчике для микропланшетов Раскагб Тор-соип! с поправкой гашения после добавления 45 мкл Мюгоксш! 40 (СапЬегга Раскагб 8.А., Цюрих, Швейцария) и встряхивания в течение 20 мин.

В приведенном ниже списке примеров показаны соответствующие результаты для всех соединений, которые имеют значения ЕС₅₀, меньшие или равные 100 нМ.

Пример	Связывание шС1и5-МРЕР ЕС_ео (нМ)
лУ Р Эталонное соединение 1	29
А. >ν ¹ Р Эталонное соединение 2	51
1	42
2	24
3	94
4	46

Сравнение соединений по изобретению с эталонными соединениями 1 и 2.

Как можно видеть в приведенной ниже таблице, соединения по изобретению (ΝΑΜ) демонстрируют четко отличающийся профиль по сравнению со структурно сходными эталонными соединениями 1 и 2 (РАМ).

- 4 026941

Соединения формулы I можно изготовлять приведенными ниже способами, способами, приведенными в примерах, или аналогичными способами. Подходящие условия реакции для индивидуальных стадий реакции известны специалисту в данной области. Последовательность реакций не ограничивается последовательностью, показанной на схемах, однако последовательность стадий реакции можно свободно изменять, в зависимости от исходных веществ и их соответствующей реакционной способности. Исходные вещества либо имеются в продаже, либо могут быть получены способами, аналогичными способам, приведенным ниже, способами, описанными в ссылках, процитированных в описании или в примерах, или способами, известными в данной области.

Настоящие соединения формулы I и их фармацевтически приемлемые соли можно получать способами, известными в данной области, например вариантами способа, описанными ниже, причем данный способ включает проведение взаимодействия соединения формулы

с соединением формулы

с образованием соединения формулы I

- 5 026941

где заместители описаны выше.

Получение соединений формулы I в дальнейшем более подробно описано на схеме 1 и в примерах 1-4.

Этинилпиридиновое или этинилпиримидиновое соединение формулы I можно получать, например, сочетанием по Соногашира метилового эфира 5-бромпиридин-2-карбоновой кислоты или метилового эфира 5-бромпиримидин-2-карбоновой кислоты 1 с подходящим образом замещенным арилацетиленом 2, с последующим омылением с снованием, таким как ЫОН, с получением соответствующей кислоты 3 или сочетанием по Соногашира 5-бромпиридин-2-карбоновой кислоты или 5-бромпиримидин-2карбоновой кислоты 1 с подходящим образом замещенным арилацетиленом 2 с прямым получением соответствующей кислоты 3. Желательные этинильные соединения общей формулы I (схема 1) получают проведением взаимодействия соответствующей кислоты 3 с трет-бутилэтиламином 4 в присутствии основания, такого как основание Хунига, и пептидного связывающего реактива, такого как ТВТи, в растворителе, таком как диоксан, или получением ίη 5Йи соответствующего хлорангидрида с оксалилхлоридом и ΌΜΡ (кат.) в растворителе, таком как дихлорметан, с последующей реакцией с третбутилэтиламином 4 в присутствии основания, такого как пиридин.

Фармацевтически приемлемые соли соединений формулы I могут быть легко изготовлены согласно способам, известным как таковые, и учитывая природу соединения, подлежащего превращению в соль. Для образования фармацевтически приемлемых солей основных соединений формулы I подходят неорганические или органические кислоты, такие как, например, соляная кислота, бромисто-водородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота или лимонная кислота, муравьиная кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, уксусная кислота, янтарная кислота, винная кислота, метансульфоновая кислота, п-толуолсульфоновая кислота и т.п. Для образования фармацевтически приемлемых солей кислотных соединений подходят соединения, которые содержат щелочные металлы или щелочно-земельные металлы, например натрий, калий, кальций, магний или т.п., основные амины или основные аминокислоты.

Кроме того, данное изобретение также относится к лекарственным средствам, содержащим одно или более чем одно соединение по настоящему изобретению и фармацевтически приемлемые эксципиенты, для лечения и предупреждения расстройств, опосредованных рецептором тС1иК5 (ΝΑΜ), таких как тревожность и боль, депрессия, синдром Мартина-Белл, расстройства аутического спектра, болезнь Паркинсона и гастроэзофагальный рефлюкс (ΟΕΚΌ). Изобретение также относится к применению соединения согласно настоящему изобретению, а также его фармацевтически приемлемой соли для изготовления лекарственных средств для лечения и предупреждения расстройств, опосредованных рецептором тС1иК5 (ΝΑΜ), как описано выше.

Фармакологическая активность соединений была протестирована с использованием следующего способа.

кДНК, кодирующая крысиный рецептор тС1иК5а, была временно трансфицирована в клетки ΕΒΝΑ с использованием методики, описанной Ε.-Ι БсЫаедет и К. СНгМещеп (Су1о1есЬпо1о§у 1998, 15, 1-13). Измерения [Са²+]внутр. проводили на клетках ΕΒΝΑ, трансфицированных тС1иК5а, после инкубации клеток с Р1ио 3-АМ (доступным у РЬИКА, конечная концентрация 0,5 мкМ) в течение 1 ч при 37°С, с последующими 4 промывками буфером для анализа (ΌΜΕΜ, дополненная солями Хэнкса и 20 мМ ΗΕΡΕδ). Измерения [Са²⁺]внутр. проводили с использованием планшет-ридера для флуориметрической визуализа- 6 026941 ции (РЫРК, Мо1еси1аг Όβνίοβδ Согрогайоп, Ьа 1о11а, СА, США). Когда соединения были оценены как антагонисты, их тестировали относительно 10 мкМ глутамата в качестве агониста.

Кривые ингибирования (антагонисты) аппроксимировали с использованием четырехпараметрического логистического уравнения, дающего 1С₅₀ и коэффициент Хилла, используя программу итерационной нелинейной аппроксимации кривых Опщп (Мюгоса1 8ой^аге 1пс., Ыог1Ьатр1оп, МА, США).

Приведены значения К₁ протестированных соединений. Значение К₁ определяется посредством следующей формулы:

_к. ₌ -Кщι₊ -И ес₅₀ в которой значения 1С₅₀ представляют собой те концентрации, протестированных соединений в мкМ, посредством которых оказывается 50%-ное противодействие эффекту соединений;

[Ь] представляет собой концентрацию;

значение ЕС₅₀ представляет собой концентрацию соединений в мкМ, которая осуществляет 50%ную стимуляцию.

Соединения по настоящему изобретению представляют собой антагонисты рецептора тО1иК5а. Активности соединений формулы I, измеренные в описанном выше анализе, находятся в интервале К₁меньше 100 мкМ.

Соединения формулы I и их фармацевтически приемлемые соли можно использовать в качестве лекарственных средств, например в форме фармацевтических препаратов. Фармацевтические препараты можно вводить перорально, например, в форме таблеток, покрытых таблеток, драже, твердых и мягких желатиновых капсул, растворов, эмульсий или суспензий. Однако введение также может осуществляться ректально, например в форме суппозиториев, или парентерально, например в форме инъекционных растворов.

Соединения формулы I и их фармацевтически приемлемые соли можно перерабатывать с фармацевтически инертными неорганическими или органическими носителями для получения фармацевтических препаратов. В качестве таких носителей для таблеток, покрытых таблеток, драже и твердых желатиновых капсул можно использовать, например, лактозу, кукурузный крахмал или его производные, тальк, стеариновую кислоту или ее соли и т.п. Подходящими носителями для мягких желатиновых капсул являются, например, растительные масла, воска, жиры, полутвердые и жидкие полиолы и т.п.; однако, в зависимости от природы активного вещества, в случае мягких желатиновых капсул носители обычно не требуются. Подходящими носителями для получения растворов и сиропов являются, например, вода, полиолы, сахароза, инвертированный сахар, глюкоза и т.п. Для водных инъекционных растворов водорастворимых солей соединений формулы I можно использовать адъюванты, такие как спирты, полиолы, глицерин, растительные масла и т.п., но, как правило, они не являются необходимыми. Подходящими носителями для суппозиториев являются, например, природные или отвержденные масла, воска, полужидкие или жидкие полиолы и т.п.

Кроме того, фармацевтические препараты могут содержать консерванты, солюбилизаторы, стабилизаторы, увлажнители, эмульгаторы, подсластители, красители, корригенты, соли для изменения осмотического давления, буферы, маскирующие агенты или антиоксиданты. Кроме того, они также могут содержать другие терапевтически полезные вещества.

Как упомянуто ранее, целью настоящего изобретения также являются лекарственные средства, содержащие соединение формулы I или его фармацевтически приемлемые соли и терапевтически инертный эксципиент, как и способ получения таких лекарственных средств, который включает объединение одного или более чем одного соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли и, если желательно, одного или более чем одного другого терапевтически полезного вещества в лекарственную форму совместно с одним или более чем одним терапевтически инертным носителем.

Дозировка может варьировать в широких пределах и, естественно, адаптируется для индивидуальных требований в каждом конкретном случае. В общем, эффективная дозировка для перорального или парентерального введения составляет 0,01-20 мг/кг/сутки, причем дозировка 0,1-10 мг/кг/сутки является предпочтительной для всех описанных показаний. Ежесуточная дозировка для взрослого человека, весящего 70 кг, соответственно составляет 0,7-1400 мг в сутки, предпочтительно 7-700 мг в сутки.

- 7 026941

Следующие примеры приведены для дополнительного пояснения изобретения. Пример 1.

трет-Бутилэтиламид 5-(3-фторфенилэтинил)пиридин-2-карбоновой кислоты

Стадия 1. Метиловый эфир 5-(3-фторфенилэтинил)пиридин-2-карбоновой кислоты о

бис-(Трифенилфосфин)палладий(П) дихлорид (406 мг, 580 мкмоль, 0,05 экв.) растворяли в 25 мл ИМР (диметилформамид). Добавляли при комнатной температуре метиловый эфир 5-бромпиридин-2карбоновой кислоты (2,5 г, 11,6 ммоль) и 3-фторфенилацетилен (2,22 г, 18,5 ммоль, 1,6 экв.). Добавляли триэтиламин (3,5 г, 4,84 мл, 34,7 ммоль, 3 экв.), трифенилфосфин (91 мг, 347 мкмоль, 0,03 экв.) и йодид меди(1) (66 мг, 347 мкмоль, 0,03 экв.) и смесь перемешивали в течение 20 ч при 80°С. Реакционную смесь охлаждали и упаривали досуха с использованием сорбента 1во1и1с®. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией на силикагеле (70 г), осуществляя элюцию градиентом этилацетат:гептан от 0:100 до 80:20. Желательный метиловый эфир 5-(3-фторфенилэтинил)пиридин-2-карбоновой кислоты (1,95 г, выход 66%) получали в виде светло-желтого твердого вещества.

МС (масс-спектрометрия): т/е равно 256,3 (М+Н+).

Стадия 2. 5-(3-Фторфенилэтинил)пиридин-2-карбоновая кислота

Метиловый эфир 5-(3-фторфенилэтинил)пиридин-2-карбоновой кислоты (1,9 г, 7,44 ммоль) (пример 1, стадия 1) растворяли в ТНР (тетрагидрофуран) (30 мл) и воде (30 мл) и добавляли при комнатной температуре ЫОН (357 мг, 24,9 ммоль, 2 экв.). Смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь подкисляли 4н. НС1 до рН 2,5 и выпаривали ТНР с получением желтой суспензии. Данную суспензию охлаждали до 0-5°С и фильтровали. Кристаллы промывали холодной водой и осуществляли упаривание досуха. Желательную 5-(3-фторфенилэтинил)пиридин-2карбоновую кислоту (1,71 г, выход 95%) получали в виде светло-желтого твердого вещества.

МС: т/е равно 239,9 (М+Н+).

Стадия 3. трет-Бутилэтиламид 5-(3-фторфенилэтинил)пиридин-2-карбоновой кислоты

5-(3-Фтор-фенилэтинил)пиридин-2-карбоновую кислоту (100 мг, 0,41 ммоль) (пример 1, стадия 2) растворяли в диоксане (1 мл) и добавляли при комнатной температуре основание Хунига (217 мкл, 1,24 ммоль, 3 экв.), трет-бутилэтиламин (63 мг, 0,62 ммоль, 1,5 экв.) и ТВТи (146 мг, 0,45 ммоль, 1,1 экв.). Данную смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь упаривали и экстрагировали нысыщенным раствором ЫаНСО₃ и два раза маленьким объемом дихлорметана. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией путем непосредственной загрузки слоев дихлорметана на колонку с силикагелем и элюирования градиентом этилацетат: гептан от 0:100 до 100:0. Желательный трет-бутилэтиламид 5-(3-фторфенилэтинил)пиридин-2-карбоновой кислоты (102 мг, выход 76%) получали в виде светло-желтого масла.

МС: т/е равно 325,3 (М+Н+).

Пример 2.

трет-Бутилэтиламид 5-(3 -хлорфенилэтинил)пиридин-2 -карбоновой кислоты

- 8 026941

Стадия 1. 5-(3-Хлорфенилэтинил)пиридин-2-карбоновая кислота

Соединение, указанное в заголовке, получали в виде белого твердого вещества, используя химию, аналогичную химии, описанной в примере 1, стадия 1, из 5-бром-пиридин-2-карбоновой кислоты и 3 -хлорфенилацетилена.

МС: т/е равно 258,4/260,4 (М+Н+).

Стадия 2. трет-Бутилэтиламид 5-(3-хлорфенилэтинил)пиридин-2-карбоновой кислоты

Соединение, указанное в заголовке, получали в виде светло-желтого масла, используя химию, аналогичную химии, описанной в примере 1, стадия 3, из 5-(3-хлорфенилэтинил)пиридин-2-карбоновой кислоты (пример 2, стадия 1) и трет-бутилэтиламина.

МС: т/е равно 341,5/343,5 (М+Н+).

Пример 3.

трет-Бутилэтиламид 5-(3-фторфенилэтинил)пиримидин-2-карбоновой кислоты

Стадия 1. 5-(3-Фторфенилэтинил)пиримидин-2-карбоновая кислота

Соединение, указанное в заголовке, было получено в виде светло-желтого твердого вещества, используя химию, аналогичную химии, описанной в примере 1, стадия 1, из 5-бром-пиримидин-2карбоновой кислоты и 3-фторфенилацетилена.

МС: т/е равно 243,4 (М+Н+).

Стадия 2. трет-Бутилэтиламид 5-(3-фторфенилэтинил)пиримидин-2-карбоновой кислоты

5-(3-Фторфенилэтинил)пиримидин-2-карбоновую кислоту (100 мг, 0,41 ммоль) (пример 3, стадия 1) суспендировали в дихлорметане (1 мл) и ΌΜΡ (10 мкл). Добавляли по каплям оксалилхлорид (40 мкл, 0,45 ммоль, 1,1 экв.) при комнатной температуре и перемешивали смесь в течение 1 ч при температуре флегмообразования. Затем реакционную смесь добавляли к смеси диизопропилэтиламина (235 мкл, 1,34 ммоль, 3,3 экв.) и трет-бутилэтиламина (43 мг, 0,41 ммоль, 1 экв.) в ТНР (2 мл). Данную смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре и упаривали в присутствии сорбента 18о1и1е® досуха. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией на колонке с 20 г силикагеля, элюируя градиентом гептан: этилацетат от 100:0 до 0:100. Желательный трет-бутилэтиламид

5-(3-фторфенилэтинил)пиримидин-2-карбоновой кислоты (97 мг, выход 78%) получали в виде белого твердого вещества.

МС: т/е равно 326,5 (М+Н+).

- 9 026941

Пример 4.

трет-Бутилэтиламид 5-(3-хлорфенилэтинил)пиримидин-2-карбоновой кислоты

Стадия 1. 5-(3-Хлорфенилэтинил)пиримидин-2-карбоновая кислота

Соединение, указанное в заголовке, получали в виде белого твердого вещества, используя химию, аналогичную химии, описанной в примере 1, стадия 1, из 5-бром-пиримидин-2-карбоновой кислоты и 3хлорфенилацетилена.

МС: т/е равно 259,4/261,4 (М+Н+).

Стадия 2. трет-Бутилэтиламид 5-(3-хлорфенилэтинил)пиримидин-2-карбоновой кислоты

Соединение, указанное в заголовке, получали в виде белого твердого вещества, используя химию, аналогичную химии, описанной в примере 3, стадия 2, из 5-(3-хлорфенилэтинил)пиримидин-2карбоновой кислоты (пример 4, стадия 1) и трет-бутилэтиламина.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение формулы I где Υ представляет собой N или СН;

К¹ представляет собой фтор- или хлор-, или его фармацевтически приемлемая соль присоединения кислоты и/или стереоизомер.
2. Соединение формулы I по п.1, где Υ представляет собой N.
3. Соединение формулы I по п.2, выбранное из группы, включающей трет-бутилэтиламид 5-(3-фторфенилэтинил)пиримидин-2-карбоновой кислоты; трет-бутилэтиламид 5-(3-хлорфенилэтинил)пиримидин-2-карбоновой кислоты.
4. Соединение формулы I по п.1, где Υ представляет собой СН.
5. Соединение формулы I по п.4, выбранное из группы, включающей трет-бутилэтиламид 5-(3-фторфенилэтинил)пиридин-2-карбоновой кислоты; трет-бутилэтиламид 5-(3-хлорфенилэтинил)пиридин-2-карбоновой кислоты.
6. Применение соединения по любому из пп.1-5 в качестве отрицательного аллостерического модулятора тО1иК5.
7. Способ получения соединения формулы I, как описано в п.1, включающий проведение взаимодействия соединения формулы с соединением формулы с образованием соединения формулы I

- 10 026941 где К¹ и Υ такие, как определено в п.1.
8. Фармацевтическая композиция для отрицательной аллостерической модуляции тС1иК5, содержащая соединение по любому из пп.1-5 и терапевтически активный носитель.
9. Применение соединения по любому из пп.1-5 для лечения состояний, при которых полезным является ингибирование тС1иК5.
10. Применение соединения по любому из пп.1-5 для изготовления лекарственного средства для лечения состояний, при которых полезным является ингибирование тС1иК5.
11. Способ лечения состояний, при которых полезным является ингибирование тС1иК5, который включает введение эффективного количества соединения, как определено по любому из пп.1-5.