ES2598027T3 - Pirrolotriazinas sustituidas con hidroximetilarilo como inhibidores de ALK1 - Google Patents

Pirrolotriazinas sustituidas con hidroximetilarilo como inhibidores de ALK1 Download PDF

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Karl-Heinz Schlemmer
Thomas Schlange
Andreas Schall
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Abstract

Un compuesto de fórmula (I)**Fórmula** en la que A es N o C-R2, en el que R2 representa hidrógeno, flúor o cloro, R1 representa hidrógeno, flúor, cloro, metilo, etilo o metoxi, y Z representa alquilo (C1-C4) o cicloalquilo (C3-C6), cada uno de los cuales puede estar sustituido con hidroxi, o Z representa un grupo heterocíclico de fórmula**Fórmula** en la que * indica el punto de unión al resto de pirrolotriazina, y R3 representa hidrógeno o hidroxi, con la condición de que cuando R3 sea hidroxi, este hidroxi no esté unido a un átomo de carbono del anillo situado adyacente al átomo de nitrógeno del anillo, o Z representa un grupo tiazol de fórmula**Fórmula** en la que * indica el punto de unión al resto de pirrolotriazina, y R4 representa hidrógeno, metilo, etilo, amino o aminometilo, o Z representa un grupo de fórmula**Fórmula** en la que * indica el punto de unión al resto de pirrolotriazina, R5 representa cicloalquilo (C3-C6), oxetanilo, tetrahidrofuranilo o tetrahidropiranilo, R6 representa hidrógeno o hidroxi, R7 representa hidrógeno o hidroxi, con la condición de que cuando R7 sea hidroxi, este hidroxi no esté unido a un átomo de carbono del anillo situado adyacente al átomo de nitrógeno del anillo, e Y es O, NH o NCH3, o una sal, un hidrato y/o un solvato del mismo farmacéuticamente aceptables.

Description

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DESCRIPCION
Pirrolotriazinas sustituidas con hidroximetilarilo como inhibidores de ALK1
Esta invencion se refiere a pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-aminas sustituidas con 5-[(hidroximetil)arilo] novedosas, a procedimientos para la preparacion de tales compuestos, a composiciones farmaceuticas que contienen tales compuestos y al uso de tales compuestos o composiciones para tratar trastornos relacionados con la angiogenesis, en particular trastornos oculares relacionados con la angiogenesis.
El termino angiogenesis, tambien denominada neovascularizacion, significa el procedimiento de formacion de nuevos vasos sangumeos. Este esta involucrado en el desarrollo normal asf como en numerosos estados patologicos que incluyen, por ejemplo, cancer, artritis reumatoide, cicatrizacion de heridas despues de una lesion en un tejido, aterosclerosis, psoriasis, y enfermedades de los ojos.
Varios trastornos oculares que son responsables de la mayona de las morbididades visuales y cegueras en los pafses desarrollados se caracterizan por, estan son causados por y/o dan lugar a neovascularizacion coroidea, retiniana o del iris o edema retiniano [Campochiaro (2004), Exp. Opin. Biol. Ther. 4: 1395-1402].
Por ejemplo, la retinopatfa asociada con diabetes es una causa que lleva a la ceguera en la diabetes de tipo 1, y tambien es comun en la diabetes de tipo 2. Otro trastorno ocular que involucra la neovascularizacion es la degeneracion macular relacionada con la edad (DME). La DME es la causa mas comun de perdida de la vision en Occidente en sujetos de 50 anos o mas, y su prevalencia aumenta con la edad. La DME se clasifica como humeda (neovascular) o seca (no neovascular). La forma humeda de la enfermedad es responsable de la perdida de la vision mas severa.
Varias otras retinopatfas menos comunes, pero sin embargo debilitantes, incluyen membrana neovascular coroidea (MNVC), edema macular cistoideo (EMC, tambien denominado edema macular o hinchazon macular), membrana epi-retiniana (MER, carnosidad macular) y agujero macular. En la MNVC, los vasos sangumeos anormales que surgen del coroide crecen a traves de las capas retinianas. Los nuevos vasos fragiles se rompen facilmente, lo que causa que se junten sangre y fluido dentro de las capas de la retina. En el EMC, que puede producirse como un resultado de una enfermedad, lesion o cirugfa, se reune fluido dentro de las capas de la macula, lo que causa una vision central borrosa, distorsionada. La MER (carnosidad macular) es una membrana similar a un celofan que se forma sobre la macula, que afecta la vision central tornandola borrosa y distorsionada.
Tambien se refieren a trastornos como cambios hipertroficos y atroficos del epitelio del pigmento retiniano (EPR), desprendimiento de retina, oclusion de la vena coroidea, oclusion de la vena retiniana, angiogenesis en la cornea seguido de, por ejemplo, queratitis, transplante de cornea o queratoplastfa, angiogenesis en la cornea debido a hipoxia (por ej., como un resultado del uso extensivo de lentes de contacto), pterigion conjuntiva, edema subretiniano y edema intrarretiniano.
Se ha descubierto que el factor de crecimiento endotelial vascular (FCEV) es un modulador importante de la angiogenesis y se ha implicado en la patologfa de un numero de afecciones que incluyen DME y retinopatfa diabetica. Ademas, se ha demostrado para DME que la inyeccion intravttrea de un inhibidor anti-FCEV como pegaptanib, ranibizumab o aflibercept reduce la angiogenesis coroidea y fuga vascular [Gragoudas (2004), N. Engl. J. Med. 351: 2805-2816; Rosenfeld (2006), N. Engl. J. Med. 355: 1419-1431; Dixon (2009), Expert Opin. Investig. Drugs 18: 15731580].
El cuidado estandar actual para DME es lucentis (ranibizumab), una terapia anti-FCEV. Sin embargo, unicamente 1/3 de todos los pacientes con DME tratados con lucentis muestran una mejora en la vision [Rosenfeld (2006), N. Engl. J. Med. 355: 1419-1431]. Por lo tanto, nuevas opciones terapeuticas anti-angiogenicas con un modo de accion independiente de FCEV tienen el potencial de mejorar el cuidado estandar actual en enfermedades oculares como retinopatfa diabetica y DME.
El ALK1 (receptor de activina tipo quinasa-1) es un receptor de la Ser/Thr quinasa de la familia de receptores de TGFp preferencialmente expresado en las celulas endoteliales e involucrado en la angiogenesis. Los miembros de esta familia median su actividad biologica por la union de ligandos a un complejo del receptor heterotetramerico de receptores de serina/treonina quinasa de tipo I y tipo II TpRI y TpRII y receptores de tipo III accesorios. TGFp, asf como los ligandos de alta afinidad BMP9 y BMp10 pueden activar el ALK1 en complejos receptores con BMpRII o ActRII y endoglina del receptor de tipo III [Scharpfenecker (2007), J. Cell Sci. 120: 964-972]. La union de BMP9 al ALK1 en celulas endoteliales microvasculares activa la via Smad1/5/8 [David (2007), Blood 109 (5): 1953-1961]. Se ha postulado que BMP9 inhibe la migracion y el crecimiento de las celulas endoteliales. Sin embargo, la mayona de los estudios encuentran que la activacion del receptor ALK1 promueve la migracion, proliferacion y la formacion de tubo de celulas endoteliales [Goumans (2002), EmBo Journal 21 (7): 1743-1753; Wu (2006), Microvasc. Res. 71: 1219].
BMP9 y BMP10 activan los complejos del receptor ALK1. En las celulas endoteliales, TGFp tambien puede activar el ALK1 mientras que en la mayona de los tipos de celulas, TGFp se senaliza a traves de ALK5. La activacion de ALK5 conduce a la fosforilacion de Smad2/3 mientras que la activacion de ALK1 da lugar a la fosforilacion de Smad1/5.
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Cada v^a de senalizacion de Smad finalmente da lugar a la regulacion de grupos espedficos de genes diana: la senalizacion de Smad2/3 induce la expresion de PAI-1 y la represion de Id-1, mientras que la senalizacion de Smad1/5 induce la expresion de Smad6, Smad7 e Id-1 y reduce la expresion de PAI-1 [Deng (2006), J. Cell Biol. 134: 1563-1571; Ota (2002), J. Cell Physiol. 193: 299-318].
La endoglina del receptor de tipo III cumple un rol en el ajuste fino de las vfas de ALK1 y ALK5, en especial en las celulas endoteliales, por la regulacion de las interacciones del ligando-receptor [ten Dijke (2008), Angiogenesis 11: 79-89]. La endoglina facilita la interaccion TGFp/ALK1 pero reduce la interaccion TGFp/ALK5 [David (2007), Blood 109: 1953-1961].
Las mutaciones en la endoglina y en el ALK1 estan ligadas al trastorno dominante autosomico denominado telangiectasia hemorragica hereditaria (HHT1 y HHT2, respectivamente) con caractensticas de perturbaciones angiogenicas como malformaciones venoso-arteriales y telangiectasias [Fernandez-Lopez (2006), Clin. Med. & Res. 4: 66-78]. Los ratones RIP1-Tag2 con solo una copia funcional del gen ALK1 (ALK1+/-) muestran una progresion retardada del tumor y una densidad menor de los microvasos en comparacion con los ratones ALK1wt. Se realizaron observaciones similares con el constructo RAP-041del receptor ALK1-Fc soluble, que inhibio la angiogenesis tumoral in vivo y limito el crecimiento tumoral [Cunha (2010), J. Exp. Med. 207: 85-100].
El descubrimiento de los inhibidores potentes y selectivos de ALK1 es, por lo tanto, altamente deseable para elucidar adicionalmente el rol del ALK1 en la fisiologfa y patologfa de los vasos sangumeos, y para derivar opciones terapeuticas potenciales para enfermedades asociadas con la angiogenesis y la remodelacion vascular.
En el documento WO 2007/147647-A1, ciertos derivados de pirazolo[1,5-a]pirimidina sustituidos con 3-arilo se describieron como los primeros inhibidores de la ALK1 quinasa de moleculas pequenas publicados hasta ese momento. Se dijo que estos compuestos eran utiles para el tratamiento de enfermedades del crecimiento vascular desregulado, en particular de tumores solidos y sus metastasis y, tambien, de enfermedades de los ojos dependientes de la angiogenesis, tales como degeneracion macular relacionada con la edad.
Varios derivados de pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina con perfiles de inhibicion distintivos frente a un intervalo de protema quinasas se han desvelado, entre otras cosas, en los documentos WO 00/71129-A1, WO 2005/121147-A1, WO2007/056170-A2, WO 2007/061882-A2, WO 2007/064883-A2, WO 2007/064931-A2, WO 2007/079164-A2, WO 2008/089105-A2, WO 2009/136966-A1 y WO 2010/126960-A1. Generalmente, se afirmo que estos compuestos eran utiles para el tratamiento de trastornos proliferativos y/o relacionados con la angiogenesis, tales como cancer. Sin embargo, ninguna de estas publicaciones se refiere a ALK1 como una quinasa diana potencial.
Sorprendentemente, ahora se ha descubierto que los derivados de pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina que tienen un sustituyente de hidroximetilarilo en la posicion 5 exhiben una inhibicion potente y selectiva de la ALK1 quinasa que torna a estos compuestos particularmente utiles para el tratamiento de trastornos oculares relacionados con la angiogenesis.
Por lo tanto, en un aspecto, la presente invencion se refiere a pirrolo-[2,1 f][1,2,4]triazin-4-aminas sustituidas con 5- [(hidroximetil)arilo] de la formula general (I)
imagen1
en la que
A es N o C-R2, en la que
R2 representa hidrogeno, fluor o cloro,
R1 representa hidrogeno, fluor, cloro, metilo, etilo o metoxi, y
Z representa alquilo (C1-C4) o cicloalquilo (C3-C6), cada uno de los cuales puede sustituirse con hidroxi, o
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Z representa un grupo heterodclico de la formula
imagen2
en la que * indica el punto de union al resto de pirrolotriazina,
y3
R representa hidrogeno o hidroxi,
con la condicion de que cuando R3 sea hidroxi, este hidroxi no este unido a un atomo de carbono del anillo situado adyacente al atomo de nitrogeno del anillo,
o
Z representa un grupo tiazol de la formula
*
-Q
R4
en la que * indica el punto de union al resto de pirrolotriazina, y
R4 representa hidrogeno, metilo, etilo, amino o aminometilo, o
imagen3
en la que * indica el punto de union al resto de pirrolotriazina,
R5 representa cicloalquilo (C3-C6), oxetanilo, tetrahidrofuranilo o tetrahidropiranilo,
R6 representa hidrogeno o hidroxi,
R7 representa hidrogeno o hidroxi,
con la condicion de que cuando R7 sea hidroxi, este hidroxi no este unido a un atomo de carbono del anillo situado adyacente al atomo de nitrogeno del anillo, y
Y es O, NH o NCH3.
Los compuestos de acuerdo con esta invencion tambien pueden estar presentes en la forma de sus sales, solvatos y/o solvatos de las sales.
Los compuestos de acuerdo con la invencion son los compuestos de la formula (I) y sus sales, solvatos y solvatos de las sales, los compuestos incluidos en la formula (I) de las formulas mencionadas a continuacion y sus sales, solvatos y solvatos de las sales, y los compuestos incluidos en la formula (I) y mencionados a continuacion como realizaciones representativas y sus sales, solvatos y solvatos de las sales, en los que los compuestos incluidos en la formula (I) y mencionados a continuacion no sean ya sales, solvatos y solvatos de las sales.
Sales, para los propositos de la presente invencion, son preferentemente sales farmaceuticamente aceptables de los compuestos de acuerdo con la invencion (por ejemplo, vease S. M. Berge et al., "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci. 1977, 66, 1-19). Tambien se incluyen las sales que no son en sf mismas adecuadas para usos farmaceuticos pero que pueden utilizarse, por ejemplo, por el aislamiento o purificacion de los compuestos de acuerdo con la invencion.
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Sales farmaceuticamente aceptables incluyen sales con adicion de acido de acidos minerales, acidos carboxflicos y acidos sulfonicos, por ejemplo sales de acido clorddrico, acido bromddrico, acido sulfurico, acido fosforico, acido metanosulfonico, acido etanosulfonico, acido bencenosulfonico, acido toluenosulfonico, acido naftalendisulfonico, acido acetico, acido propionico, acido lactico, acido tartarico, acido malico, acido dtrico, acido fumarico, acido maleico y acido benzoico.
Solvatos en el contexto de la invencion se designan como aquellas formas de los compuestos de acuerdo con la invencion que forman un complejo en el estado solido o lfquido por coordinacion estequiometrica con moleculas de disolventes. Los hidratos son una forma espedfica de solvatos, en los que la coordinacion se lleva a cabo con agua. Los hidratos son solvatos preferidos en el contexto de la presente invencion.
Los compuestos de esta invencion pueden, sea por la naturaleza de los centros asimetricos o por la rotacion restringida, estar presentes en la forma de isomeros (enantiomeros, diastereomeros). Cualquier isomero puede estar presente en el que el centro asimetrico este en la configuracion (R)-, (S) o (R,S).
Tambien se apreciara que cuando dos o mas centros asimetricos estan presentes en los compuestos de la invencion, tambien seran posibles varios diastereomeros y enantiomeros de las estructuras ejemplificadas, y que los diastereomeros puros y enantiomeros puros representan realizaciones preferidas. Se pretende que los estereoisomeros puros, diastereomeros puros, enantiomeros puros y mezclas de los mismos, esten dentro del ambito de la invencion.
Isomeros geometricos por la naturaleza de los sustituyentes alrededor de un enlace doble o un anillo pueden estar presentes en forma cis (= Z-) o trans (= E-), y ambas formas isomericas estan dentro del ambito de la invencion.
Todos los estereoisomeros e isomeros geometricos, si estan separados, son puros, parcialmente puros, o estan en mezcla racemica, de los compuestos de esta invencion estan abarcados dentro del ambito de esta invencion. La purificacion de dichos isomeros y la separacion de dichas mezclas isomericas pueden lograrse por tecnicas estandar conocidas en la tecnica. Por ejemplo, las mezclas diastereomericas pueden separarse en isomeros individuales por procedimientos cromatograficos o cristalizacion, y los racematos pueden separarse en los enantiomeros respectivos ya sea por procedimientos cromatograficos sobre fases quirales o por resolucion.
Ademas, se incluyen de acuerdo con la presente invencion todas las formas tautomericas posibles de los compuestos descritos con anteriormente.
A menos que se indique lo contrario, las siguientes definiciones aplican para los sustituyentes y residuos utilizados a lo largo de toda esta memoria descriptiva y reivindicaciones:
Alquilo (C1-C4) representa un radical hidrocarburo saturado, de cadena lineal o ramificada que tiene de 1 a 4 atomos de carbono. Los ejemplos incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, terc- butilo.
Cicloalquilo (C3-Cr) representa un radical hidrocarbono saturado, monodclico que tiene de 3 a 6 atomos de carbono del anillo. Los ejemplos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo.
A lo largo de este documento, con propositos de simplicidad, se da preferencia al uso de terminos singulares sobre terminos plurales, pero, en general, con la intencion de incluir los terminos plurales a menos que se indique lo contrario. Por ejemplo, con la expresion "Un procedimiento para tratar una enfermedad en un paciente, que comprende administrar a un paciente una cantidad efectiva de un compuesto de la formula (I)" se pretende incluir el tratamiento simultaneo de mas de una enfermedad asf como la administracion de mas de un compuesto de la formula (I).
En una realizacion preferida, la presente invencion se refiere a compuestos de la formula general (I), en la que
A es C-R2, en la que
R2 representa hidrogeno o fluor,
R1 representa hidrogeno, fluor, cloro, metilo, etilo o metoxi,
y
Z representa n-propilo, n-butilo o ciclohexilo, cada uno de los cuales puede sustituirse con hidroxi,
o
Z representa un grupo heterodclico de la formula
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en la que * indica el punto de union al resto de pirrolotriazina, o
Z representa un grupo tiazol de la formula
*
-Q
R4
en la que * indica el punto de union al resto de pirrolotriazina,
y
R4 representa metilo, etilo, amino o aminometilo,
o
Z representa un grupo de la formula
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en la que * indica el punto de union al resto de pirrolotriazina,
R5 representa ciclopropilo o tetrahidropiran-4-ilo,
R6 representa hidroxi, y Y es O.
En una realizacion particularmente preferida, la presente invencion se refiere a compuestos de la formula general (I), en la que
A es C-R2, en la que
R2 representa hidrogeno o fluor,
R1 representa hidrogeno, fluor, metilo, etilo o metoxi,
y
Z representa 4-hidroxibutilo o 4-hidroxiciclohexilo, o
Z representa un grupo heterodclico de la formula
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o
Z representa un grupo tiazol de la formula
*
-Q
R4
en la que * indica el punto de union al resto de pirrolotriazina,
y
R4 representa metilo, etilo, amino o aminometilo, o
Z representa un grupo de la formula
R
I
,/CH
5 \
OH
en la que * indica el punto de union al resto de pirrolotriazina,
y5
R representa ciclopropilo.
En una realizacion distinta, la presente invencion se refiere a compuestos de la formula general (I), en la que
A es C-R2, en la que
R2 representa hidrogeno o fluor.
En otra realizacion distinta, la presente invencion se refiere a compuestos de la formula general (I), en la que
A es C-R2, en la que
R2 representa fluor,
y
R1 representa fluor.
Las definiciones de residuos indicadas en forma espedfica en las combinaciones respectivas o combinaciones preferidas de residuos tambien se reemplazan de acuerdo con lo deseado por las definiciones de residuos de otras combinaciones, independientemente de las combinaciones particulares indicadas para los residuos. En particular, se prefieren combinaciones de dos o mas de los intervalos preferidos mencionados anteriormente.
En otra realizacion, la presente invencion se refiere a un procedimiento para preparar los compuestos de la formula general (I), caracterizado porque una bromopirrolotriazina de la formula (II)
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(II),
en la que Z tiene el significado descrito anteriormente, ya sea
[A] acoplada con un ester o acido arilboronico de la formula (III)
en la que A y R1 tienen los significados
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l8 l8
R8 R8 (III),
descritos anteriormente,
y
R8 representa hidrogeno o alquilo (C1-C4), o ambos residuos R8 estan ligados juntos para formar un puente - (CH2)2-, -C(CH3)2-C(CH3)2-, -(CH2)3- o -CH2-C(CH3)2-CH2-,
en presencia de un catalizador de paladio adecuado y una base para producir el compuesto diana de la formula (I)
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en la que A, Z y R1 tienen los significados descritos anteriormente, o
[B] convertida en primer lugar en el derivado de ester o acido boronico correspondiente de la formula (IV)
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en la que Z tiene el significado descrito anteriormente,
y
R9 representa hidrogeno o alquilo (C1-C4), o ambos residuos R9 estan ligados juntos para formar un puente - (CH2)2-, -C(CH3)2-C(CH3)2-, -(CH2)3- o -CH2-C(CH3)2-CH2-,
que despues se acopla con un bromuro de arilo de la formula (V)
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en la que A y R1 tienen los significados descritos anteriormente,
en presencia de un catalizador de paladio adecuado y una base para dar tambien el compuesto diana de la formula (I)
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en la que A, Z y R1 tienen los significados descritos anteriormente, seguido opcionalmente, cuando sea apropiado, por (/) la separacion de los compuestos de la formula (I) en sus respectivos enantiomeros y/o diastereomeros, preferentemente usando procedimientos cromatograficos, y/o (ii) la conversion de los compuestos de la formula (I) en sus respectivos hidratos, solvatos, sales y/o hidratos o solvatos de las sales por el tratamiento con los disolventes y/o acidos correspondientes.
Como se indica anteriormente, pueden sintetizarse compuestos de la formula (I) por una reaccion de acoplamiento ("acoplamiento de Suzuki") entre la bromopirrolotriazina (II) y un boronato de arilo o acido boronico (III). Este acoplamiento generalmente se lleva a cabo a una temperatura elevada usando un catalizador de paladio, una base y 20 un disolvente inerte. Una perspectiva general de los catalizadores y condiciones de reaccion puede hallarse en la bibliograffa [vease, por ejemplo, S. Kotha et al., Tetrahedron 2002, 58, 9633-9695; T. E. Barder et al., J. Am. Chem. Soc. 2005, 127, 4685-4696]. El catalizador preferido en esta reaccion es tetragu/s(trifenilfosfina)paladio (0). La base preferida es carbonato de sodio empleado como una solucion acuosa. La reaccion se lleva a cabo en disolventes organicos que son inertes en las condiciones de reaccion, tales como 1,4-dioxano, acetonitrilo, W,W-dimetilformamida 25 (DMF) o dimetilsulfoxido (DMSO), o en agua o en mezclas de estos disolventes. Preferentemente, la reaccion se lleva a cabo en una mezcla de 1,4-dioxano y agua o acetonitrilo y agua. La reaccion generalmente se lleva a cabo a
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temperaturas entre +100 °C y +250 °C, preferentemente a +120 °C y +150 °C. El calentamiento preferentemente se efectua mediante un dispositivo de microondas de modo unico. Las reacciones normalmente se ejecutan en una atmosfera de gas inerte, preferentemente en argon.
Una reactividad inversa de los pares de reaccion para el acoplamiento de Suzuki puede algunas veces menudo ser favorable. Para este proposito, la bromopirrolotriazina (II) en primer lugar se convierte al boronato correspondiente (IV) y despues se acopla en forma cruzada con un bromuro de arilo (V) de acuerdo con uno de los procedimientos descritos anteriormente. La conversion de (II) a (IV) se logra por una reaccion de borilacion mediada con metal. El procedimiento preferido es la "borilacion de Miyaura" catalizada con paladio [vease, por ejemplo, J. Takagi et al., J. Am. Chem. Soc. 2002, 124, 8001-8006; T. Ishiyama et al., J. Org. Chem. 1995, 60, 7508-7510; A. L. S. Thompson et al., Synthesis 2005, 547-550]. Los procedimientos, reactivos y disolventes para la reaccion de acoplamiento cruzado (IV) + (V) ^ (I) se escogen entre los mencionados en la seccion previa.
Los acidos arilboronicos (III) [R8 = H] y boronatos de arilo (III) [R8 = alquilo, o ambos R8 estan ligados juntos para formar un ester boronico dclico, por ej., un ester de pinacolato] se encuentran disponibles en el mercado, o pueden prepararse en forma conveniente a partir de los haluros de arilo o triflatos de arilo correspondientes usando una reaccion de borilacion mediada con metal (por referencias, vease la seccion previa). La borilacion y el acoplamiento de Suzuki subsiguiente pueden llevarse a cabo en dos etapas separadas que incluyen aislamiento y purificacion del intermedio (III). Alternativamente, la borilacion y el acoplamiento cruzado pueden llevarse a cabo como un procedimiento unico usando (III) directamente sin aislamiento ni purificacion.
En casos en los que un resto de amina primaria o secundaria forme parte del grupo Z en los compuestos diana de la formula (I), puede, a menudo, ser beneficioso en las reacciones de borilacion y acoplamiento descritas anteriormente, utilizarse un derivado protegido de esta amina como la pirrolotriazina de inicio (II) en lugar del compuesto de amina libre. Para este proposito, pueden emplearse grupos de proteccion de amino temporarios convencionales, tales como grupos acilo (por ej., acetilo o trifluoroacetilo) o grupos de proteccion del tipo carbamato (por ej., un grupo Boc, Cbz o Fmoc). Preferentemente, se utiliza un trifluoroacetilo o un grupo Boc. Similarmente, la funcion de hidroxi en los componentes de acoplamiento (III) y (V), respectivamente, puede bloquearse en forma temporaria durante el procedimiento, preferentemente como un derivado de eter de sililo tal como un eter de trimetilsililo o terc-butildimetilsililo.
Despues, estos grupos de proteccion pueden escindirse en forma concomitante durante el tratamiento acuoso de las mezclas de reaccion de acoplamiento, o pueden retirarse en una etapa de reaccion separada, de manera posterior usando procedimientos estandar conocidos en la tecnica. La preparacion de los intermedios protegidos descritos anteriormente a partir de las aminas libres o alcoholes de la formula (II), (III) y (V) correspondientes, respectivamente, o a partir de otros compuestos precursores (vease la seccion a continuacion) tambien se logra facilmente siguiendo procedimientos generales descritos en la bibliograffa [vease, por ejemplo, T. W. Greene and P. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley, Nueva York, 1999].
La preparacion de los compuestos de la invencion puede ilustrarse por medio del siguiente esquema de smtesis: Esquema 1
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Las metodolog^as sinteticas que pueden utilizarse para preparar las bromopirrolotriazinas de la formula (II) pueden estructurarse de acuerdo con el quimiotipo del grupo Z presente en (II). Se dan a continuacion ejemplos que ilustran estas diversas rutas (vease los esquemas de smtesis 2-6). Se proporcionan procedimientos mas detallados en la 5 Seccion Experimental que describen intermedios espedficos y compuestos representativos de la invencion.
Por ejemplo, pueden obtenerse compuestos de la formula (II) que contienen un residuo alquilo o hidroxialquilo como el grupo Z por el empleo de una reaccion de acoplamiento entre la bromopirrolotriazina (VI) y un alquino terminal de la formula (VII) como la etapa clave (esquema 2). Este tipo de reaccion ("reaccion de Sonogashira") normalmente se lleva a cabo en presencia de un sistema catalizador de paladio-cobre y una base. Se han descrito en la bibliograffa, 10 varios ejemplos de esta reaccion [vease, por ejemplo, R. Chinchilla and C. Najera, Chem. Rev. 2007, 107, 874-922]. En la presente invencion, la fuente de cobre preferida es yoduro de cobre (I), tefragu/s(trifenilfosfina)paladio (0) se utiliza como un catalizador de paladio y la pirrolidina actua tanto base y como disolvente. La reaccion de acoplamiento se lleva a cabo ventajosamente en irradiacion concurrente de microondas.
Despues, el alquino resultante (VIII) se somete a una hidrogenacion catalftica empleando un catalizador de paladio o 15 platino habitual. Preferentemente, se utiliza oxido de platino (IV) como el catalizador, y la reaccion se ejecuta en acido acetico como el disolvente. En algunos casos, se obtiene una mezcla de productos (IX) y (X) por este procedimiento que, en cualquier caso, puede separarse facilmente a traves de procedimientos cromatograficos. Una reaccion de bromacion posterior, preferentemente usando 1,3-dibromo-5,5-dimetilhidantoma como la fuente de bromo, en un disolvente inerte tal como THF o DMF produce las pirrolotriazinas (IIa) y (IIb) diana, respectivamente.
20 La preparacion del compuesto de partida 7-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina (VI) se ha descrito previamente [vease el documento WO 2007/056170-A2 (Intermedio B)].
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Pueden prepararse precursores de bromopirrolotriazina de tipo (IIc) (esquema 3) por la metalacion del compuesto (VI) con un metal, tal como magnesio o litio o por un intercambio de halogeno-metal usando un reactivo de organo- 5 magnesio u organo-litio. El metal preferido es magnesio que se introduce en (VI) por el tratamiento con bromuro de isopropilmagnesio en un disolvente tal como THF o eter de dietilo. Despues, las especies organo-metalicas intermedias se hacen reaccionar con una cicloalcanona o heterocicloalcanona (XI) [R, R' estan unidos para formar un anillo cicloalquilo o heterocicloalquilo] para dar el alcohol terciario (Xlla).
Una ruta complementaria que lleva a alcoholes secundarios de la formula (Xllb) utiliza una reaccion de formilacion 10 de Vilsmeier a traves de la que aminopirrolotriazina (XIII) se transforma en el aldehfdo (XIV) (esquema 3). La intro- duccion de cadena lateral se logra por la adicion subsiguiente de un reactivo de Grignard adecuado (XV) [R'' = alquilo o cicloalquilo] en un disolvente tal como THF o dietil eter. Finalmente, la bromacion de compuestos (XIIa) y (XIIb), preferentemente usando 1,3-dibromo-5,5-dimetilhidantoma, en un disolvente inerte tal como THF o DMF proporciona las pirrolotriazinas (IIc) y (IId) diana, respectivamente.
15 La preparacion del compuesto de inicio pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina (XIII) se ha descrito previamente [vease el documento WO 2007/056170-A2 (Intermedio A)].
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Pueden prepararse pirrolotriazinas de la formula (II) en la que Z representa un grupo aza-heterociclilo unido a cicloalquilo o carbono no sustituido por la deshidratacion de un alcohol terciario de la formula (XIIc) al carbo o 5 heterociclo no saturado de la formula (XVI), por el empleo de agentes habituales tales como anl^drido del acido trifluoroacetico, anhndrido del acido trifluorometanosulfonico, oxido de fosforo (V), acido sulfurico u otros acidos fuertes (esquema 4). La hidrogenacion catalttica subsiguiente usando un catalizador convencional tal como paladio sobre carbono da el analogo saturado de la formula (XVII). La etapa de hidrogenacion preferentemente se lleva a cabo en un disolvente como metanol, etanol o THF que contiene una pequena cantidad de acido trifluoroacetico 10 acuoso. Finalmente, la bromacion con 1,3-dibromo-5,5-dimetilhidantoma, como se describe anteriormente, proporciona la pirrolotriazina diana (IIe).
Los precursores de alcohol (XIIc) en sf mismos son facilmente accesibles por la ruta sintetica representada en el esquema 3 [cf.preparacion del compuesto (XIIa)].
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Pueden prepararse pirrolotriazinas de la formula (II) en la que Z representa un grupo 1,3-tiazol-4-ilo por la metalacion del compuesto (VI), como se describe anteriormente, seguido por reaccion con cloruro de cloroacetilo para dar el 5 intermedio (XVIII), y despues condensacion con una tioamida o tiourea (XIX) [como R4 como se ha definido anteriormente] para producir el compuesto precursor (XX) (esquema 5). La bromacion con 1,3-dibromo-5,5-dimetil- hidantoma, como se describe anteriormente, finalmente proporciona la pirrolotriazina diana (IIf).
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Pueden obtenerse pirrolotriazinas de la formula (II) en la que Z representa un grupo aminometilo N-dclico por la reaccion de pirrolotriazina (XIII) con formaldelddo y una amina dclica de tipo (XXI) en un disolvente acido, tal como 5 acido acetico, o en una mezcla de un acido un disolvente organico (esquema 6). La bromacion del producto resultante (XXII) con 1,3-dibromo-5,5-dimetilhidantoma, como se describe anteriormente, proporciona despues la pirrolotriazina diana (IIg).
Esquema 6
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Los compuestos de las formulas (V), (VII), (XI), (XV), (XIX) y (XXI) estan disponibles en el mercado, se conocen entre la bibliograffa o pueden prepararse a partir de materiales de partida facilmente disponibles por la adaptacion de procedimientos estandar descritos en la bibliograffa.
Los compuestos de la presente invencion tienen propiedades farmacologicas valiosas y pueden utilizarse para la prevencion y tratamiento de enfermedades en seres humanos y animales.
Los compuestos de la presente invencion son inhibidores potentes y selectivos de la ALK1 quinasa. Por lo tanto, pueden utilizarse para el tratamiento y/o prevencion de trastornos relacionados con la angiogenesis, en particular trastornos oculares relacionados con la angiogenesis.
Para la presente invencion, el termino "tratamiento" o "tratando" incluye inhibir, retrasar, aliviar, mitigar, detener, reducir o causar la regresion de una enfermedad, trastorno, afeccion o estado, su desarrollo y/o progresion, y/o sus smtomas. El termino "prevencion" o "previniendo" incluye reducir el riesgo de sufrir, contraer o experimentar una enfermedad, trastorno, afeccion o estado, su desarrollo y/o progresion, y/o sus smtomas. El termino prevencion incluye profilaxis. El tratamiento o prevencion de una enfermedad, trastorno, afeccion o estado puede ser parcial o completo.
Los trastornos oculares relacionados con la angiogenesis que pueden tratarse y/o prevenirse con los compuestos de la presente invencion incluyen, pero sin limitacion, degeneracion macular relacionada con la edad (DME), retinopatfa diabetica, en particular edema macular diabetico (EMD), otras retinopatfas tales como neovascularizacion coroidea (NVC), membrana neovascular coroidea (MNVC), edema macular cistoideo (EMC), membrana epi-retiniana (MER) y agujero macular, cambios hipertroficos del epitelio del pigmento retiniano (EPR), cambios atroficos del epitelio del pigmento retiniano, desprendimiento de retina, oclusion de la vena coroidea, oclusion de la vena retiniana, angiogenesis en la cornea despues de, por ejemplo, queratitis, transplante de cornea o queratoplastfa, angiogenesis en la cornea causada por hipoxia (por ej., inducida por el uso extensivo de lentes de contacto), pterigion conjuntiva, edema subretiniano, y edema intrarretiniano.
En el contexto de la presente invencion, el termino degeneracion macular relacionada con la edad (DME) abarca las manifestaciones tanto humedas (o exudativas, neovasculares) como secas (o no exudativas, no neovasculares) de la DME.
Los compuestos de la presente invencion pueden ademas utilizarse para el tratamiento y/o prevencion de enfermedades inflamatorias asociadas con angiogenesis, tales como artritis reumatoide, psoriasis, dermatitis de contacto, asma, hipertension pulmonar, esclerosis multiples, y enfermedades inflamatorias de los intestinos tales como enfermedad de Crohn. Tambien pueden tratarse y/o prevenirse enfermedades fibroticas, tales como fibrosis y cirrosis, con los compuestos de la presente invencion.
Por virtud de su perfil de actividad, los compuestos de la presente invencion son particularmente adecuados para el tratamiento y/o prevencion de enfermedades oculares, tales como degeneracion macular relacionada con la edad (DME), neovascularizacion coroidea (NVC), retinopatfa diabetica y edema macular diabetico (EMD).
Los trastornos mencionados anteriormente se han caracterizado en forma adecuada en seres humanos, pero tambien existen como una etiologfa similar en otros animales, que incluyen mairnferos, y pueden tratarse en tales animales con los compuestos de la presente invencion.
Por lo tanto, la presente invencion ademas se refiere al uso de los compuestos de acuerdo con la invencion para el tratamiento y/o prevencion de trastornos, en especial de los trastornos mencionados anteriormente.
La presente invencion ademas se refiere al uso de los compuestos de acuerdo con la invencion para preparar una composicion farmaceutica para el tratamiento y/o prevencion de trastornos, en especial de los trastornos mencionados anteriormente.
La presente invencion ademas se refiere al uso de los compuestos de acuerdo con la invencion en un procedimiento para el tratamiento y/o prevencion de trastornos, en especial de los trastornos mencionados anteriormente.
La presente invencion ademas se refiere a un procedimiento para el tratamiento y/o la prevencion de trastornos, en especial de los trastornos mencionados anteriormente, usando una cantidad efectiva de al menos uno de los compuestos de acuerdo con la invencion.
Pueden administrarse compuestos de la presente invencion como el unico agente farmaceutico o en combinacion con uno o mas agentes terapeuticos adicionales en los que la combinacion no causa efectos adversos inaceptables. Esta terapia de combinacion incluye la administracion de una formulacion de dosis farmaceutica unica que contiene un compuesto de la formula (I), como el definido anteriormente, y uno o mas agentes terapeuticos adicionales, asf como la administracion de un compuesto de la formula (I) y cada agente terapeutico adicional en su propia formulacion de dosis farmaceutica separada. Por ejemplo, un compuesto de la formula (I) y un agente terapeutico pueden administrarse al paciente en forma conjunta en una composicion de dosis oral unica tal como un comprimido o capsula, o cada agente puede administrarse en formulaciones de dosis separadas.
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En el caso en que se utilizan formulaciones de dosis separadas, el compuesto de la formula (I) y uno o mas agentes terapeuticos adicionales pueden administrarse esencialmente en el mismo momento (es decir, concurrentemente) o en momentos escalonadamente separados (es decir, secuencialmente).
En particular, los compuestos de la presente invencion pueden utilizarse en combinacion fija o separada con inhibidores de la angiogenesis mediada por FCEV, tales como, por ejemplo, ACTB-1003, aflibercept, apatinib, axi- tinib, bevacizumab, bevasiranib, BMS-690514, brivanib, cediranib, CT-322, dovitinib, E7080, foretinib, KH-902, linifanib, MGCD-265, motesanib, OTS-102, pazopanib, pegaptanib, ranibizumab, regorafenib, ruboxistaurina, sorafenib, SU-14813, sunitinib, telatinib, TG-100801, tivozanib, TSU-68, vandetanib, vargatef, vatalanib y XL-184, o con inhibidores de otras vfas de senalizacion, tales como, por ejemplo, ACU-4429, disulfiram, E-10030, fenretinida, mecamilamina, PF-04523655, sirolimus, sonepcizumab, tandospirona y volociximab.
Por lo tanto, en una realizacion adicional, la presente invencion se refiere a composiciones farmaceuticas que comprenden al menos uno de los compuestos de acuerdo con la invencion y uno o mas agentes terapeuticos adicionales para el tratamiento y/o prevencion de trastornos, en especial de los trastornos mencionados anteriormente.
Los compuestos de la presente invencion tambien pueden utilizarse, como tales o en composiciones, en investigacion y diagnosticos, o como patrones de referencia analftica y similares.
En otro aspecto, la presente invencion se refiere a composiciones farmaceuticas que comprenden al menos uno de los compuestos de acuerdo con la invencion junto con uno o mas excipientes inertes, no toxicos, farmaceuticamente adecuados y al uso de los mismos para los propositos mencionados anteriormente.
Los compuestos de acuerdo con la invencion pueden actuar sistemica y/o localmente. Para este proposito, pueden administrarse en una forma adecuada tal como, por ejemplo, por ruta oral, parenteral, pulmonar, nasal, lingual, sublingual, bucal, rectal, dermica, transdermica, conjuntiva, subconjuntiva, intravttrea, otica o topica.
Los compuestos de acuerdo con la invencion pueden administrarse en formas de aplicacion adecuadas para estas rutas de administracion.
Son formas de aplicacion adecuadas para administracion oral que funcionan de acuerdo con la tecnica previa y que administran los compuestos de acuerdo con la invencion rapidamente y/o en forma modificada, y que contienen los compuestos de acuerdo con la invencion en forma cristalina, amorfa y/o disuelta, tal como, por ejemplo, comprimidos (comprimidos revestidos o no revestidos, por ejemplo que tienen revestimientos entericos o revestimientos que son insolubles o se disuelven con un retraso y controlan la liberacion del compuesto de acuerdo con la invencion), comprimidos que se desintegran rapidamente en la boca, o pelfculas/obleas, pelfculas/liofilisatos, capsulas (por ej., capsulas de gelatina dura o blanda), comprimidos con revestimientos de azucar, granulos, microgranulos, polvos, emulsiones, suspensiones, aerosoles o soluciones.
La administracion parenteral puede tener lugar con la omision de una etapa de absorcion (por ej., intravenosa, intraarterial, intracardfaca, intraespinal o intralumbar) o con la inclusion de una absorcion (por ej., intramuscular, subcutanea, intracutanea, percutanea o intraperitoneal). Las formas de aplicacion adecuadas para administracion parenteral son, entre otras, preparaciones para inyeccion e infusion en la forma de soluciones, suspensiones, emulsiones, liofilisatos o polvos esteriles.
Las formas adecuadas para otras rutas de administracion incluyen, por ejemplo, formas farmaceuticas para inhalacion (por ej., inhaladores de polvo, nebulizadores), gotas nasales, soluciones o pulverizadores, comprimidos o capsulas para administracion lingual, sublingual o bucal (por ej., pastillas, pastillas para chupar), supositorios, preparaciones para los ofdos y los ojos (por ej., gotas, pomadas), capsulas vaginales, suspensiones acuosas (lociones, mezclas para agitar), suspensiones lipofflicas, pomadas, cremas, leche, pastas, espumas, polvos secantes, y sistemas terapeuticos transdermicos (por ej., parches).
Los compuestos de acuerdo con la invencion pueden convertirse a las formas de aplicacion mencionadas en una manera conocida por sf misma por la mezcla con excipientes inertes, no toxicos, farmaceuticamente adecuados. Estos excipientes incluyen, entre otros, vehnculos (por ej., celulosa microcristalina, lactosa, manitol), disolventes (por ej., polietilenglicoles lfquidos), emulsificantes (por ej., dodecil sulfato de sodio), tensioactivos (por ej., oleato de polioxisorbitan), dispersantes (por ej., polivinilpirrolidona), polfmeros sinteticos y naturales (por ej., albumina), estabilizadores (por ej., antioxidantes tales como, por ejemplo, acido ascorbico), colorantes (por ej., pigmentos inorganicos tales como, por ejemplo, oxidos de hierro), y agentes enmascarantes del sabor y/u olor.
Generalmente, ha resultado ser ventajoso administrar cantidades de administracion parenteral de aproximadamente 0,001 a 1 mg/kg, preferentemente, de aproximadamente 0,01 a 0,5 mg/kg, del peso corporal para lograr resultados efectivos. En la administracion oral, un intervalo de dosis representativo es de aproximadamente 0,01 a 100 mg/kg, preferentemente, de aproximadamente 0,01 a 20 mg/kg, y, mas preferentemente, de aproximadamente 0,1 a 10 mg/kg de peso corporal.
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No obstante, los niveles de dosificacion y el curso del tiempo de administracion reales de los principios activos en las composiciones farmaceuticas de la invencion pueden variar de modo de obtener una cantidad del principio activo que sea efectiva para lograr la respuesta terapeutica deseada para un paciente, composicion y modo de administracion particulares, sin ser toxica para el paciente. Por lo tanto, puede ser necesario, en el caso en que sea apropiado, desviarse de las cantidades declaradas, en particular como una funcion de la edad, genero, peso corporal, dieta y estado de salud general del paciente, ruta de administracion, respuesta individual al principio activo, naturaleza de la preparacion y tiempo o intervalo sobre el que se lleva a cabo la administracion. Por lo tanto, puede ser satisfactorio, en algunos casos, utilizar menos que la cantidad minima mencionada anteriormente mientras que, en otros casos, debe excederse el lfmite superior declarado. En el caso de una administracion de mayores cantidades, puede ser aconsejable dividir estas cantidades en multiples dosis individuales a lo largo del dfa.
Para el tratamiento y/o la prevencion de enfermedades oculares, como las descritas anteriormente, la ruta de administracion preferida de los compuestos de la invencion es en forma topica al ojo o por un sistema de administracion ocular de farmacos. Las inyecciones intraoculares son otra manera de administrar los compuestos de la presente invencion que es adecuada para tales propositos.
La administracion a areas dentro del ojo puede lograrse por inyeccion, a traves del empleo de una canula u otro dispositivo invasivo disenado para introducir cantidades medidas con precision de una formulacion deseada a un compartimiento o tejido particular dentro del ojo (por ej., camara posterior o retina). Una inyeccion intraocular puede aplicarse al vftreo (intravttrea), en la conjuntiva (subconjutiva), detras del ojo (retrobulbar), dentro de la esclera, o en la Capsula de Tenon (sub-Tenon) y puede hacerse en forma de liberacion prolongada. Tambien se contemplan otras rutas de administracion y sitios y formas de inyeccion intraocular y estan dentro del ambito de la invencion.
Los compuestos de acuerdo con la invencion pueden formularse en una manera conocida por los expertos en la materia a fin de dar una administracion adecuada al fondo del ojo, que puede ser a traves de una dosificacion regular, tal como con gotas oculares, o usando un sistema de administracion para proporcionar una liberacion controlada, tal como una liberacion lenta, de los compuestos de acuerdo con la invencion.
Las formulaciones oculares preferidas para los compuestos de la presente invencion incluyen soluciones acuosas, suspensiones o geles de estos compuestos en la forma de gotas de lfquido, jabones lfquidos, pulverizadores, pomadas o geles, mezclados con excipientes adecuados para la elaboracion y uso de tales formas de aplicacion. Alternativamente, los compuestos de la presente invencion pueden aplicarse al ojo via liposomas u otros sistemas de administracion ocular que son bien conocidos en la tecnica.
Los niveles de dosificacion apropiados pueden determinarse por cualquier procedimiento adecuado conocido por los expertos en la materia para tratar enfermedades de los ojos. Preferentemente, el principio activo se administra en una frecuencia de 1 a 4 veces por dfa para administracion topica, o con menor frecuencia si se utiliza un sistema de administracion de farmacos. Tfpicamente, una formulacion ocular pretendida para aplicacion topica contiene el principio activo en un intervalo de concentracion de aproximadamente 0,001 % a 10 %.
Las siguientes realizaciones representativas ilustran la invencion. La invencion no se restringe a los ejemplos.
Los porcentajes presentes en las siguientes pruebas y ejemplos se expresan, a menos que se indique lo contrario, en peso; las partes estan en peso. Cada una de las proporciones de disolvente, las proporciones de dilucion y las concentraciones informadas para soluciones lfquidas/lfquidas se basan en volumen.
A. Ejemplos
Abreviaturas y Acronimos:
Ac
acetilo
ac.
acuosa (solucion)
Boc
ferc-butoxicarbonilo
a.
ancho (senal de RMN 1H)
Cbz
benciloxicarbonilo
Celite®
marca registrada de la marca de tierra diatomacea de Celite Corp
conc.
concentrado
DCI
ionizacion qrnmica directa (EM)
DCM
diclorometano
DMF
W,W-dimetilformamida
DMSO
dimetilsulfoxido
e.e.
exceso enantiomerico
EI
ionizacion por impacto de electrones (EM)
ent
enantiomero, enantiomericamente puro
equiv.
equivalente(s)
IEN
ionizacion por electropulverizacion (EM)
Et
etilo
EtOAc
acetato de etilo
5
10
15
20
25
Fmoc
(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonilo
GC/EM
espectroscopfa de masas acoplada a cromatograffa de gases
h
hora(s)
Hal
halogeno
RMN'H
espectroscopfa de resonancia magnetica nuclear de protones
HPLC
cromatograffa ffquida de alto rendimiento
CL/EM
espectroscopfa de masas acoplada a cromatograffa ffquida
Me
metilo
MeOH
metanol
min
minuto(s)
EM
espectroscopfa de masas
de t.
de teona (rendimiento qmmico)
PdCl2(dppf)
[1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II)
Ph
fenilo
rac
racemico, racemato
Fr
factor de retencion TLC
TA
temperatura ambiente
Tr
tiempo de retencion (HPLC)
sat.
saturado
TBAF
fluoruro de tetrabutilamonio
tBu
terc-butilo
terc
terciario
TFA
acido trifluoroacetico
TFAA
anhffdrido del acido trifluoroacetico
THF
tetrahidrofurano
TLC
cromatograffa en capa fina
Procedimientos de purificacion por HPLC preparativa:
Procedimiento 1:
Dispositivo: HPLC Gilson Abimed, sistema de bomba binaria; columna: ReproSil C18, 250 mm x 30 mm; eluyente A: agua / amomaco 1 %, eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0-3 min. B 10%, 5,01-31 min. B 95%, 31 min. 95% B; caudal de flujo: 50 ml/min; deteccion UV: 210 nm.
Procedimiento 2:
Dispositivo: HPLC Gilson Abimed, sistema de bomba binaria; columna: Kromasil-100A C18, 5 pm, 250 mm x 30 mm; eluyente A: agua / TFA 0,05-0,5 %, eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0-5 min 5 % B, 5,01-10 min B 10 %, 10,0120 min B 40 %, 20,01-27 min B 50 %, 27,01-40 min B 60 %, 40,01-45 min B 90 %, 45,01-60 min B 100 %; caudal de flujo: 15-60 ml/min; deteccion UV: 210 nm.
Procedimiento 3:
Dispositivo: HPLC Gilson Abimed, sistema de bomba binaria; columna: Grom-Sil-120 ODS-4HE, 250 mm x 30 mm; eluyente A: agua, eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0-3 min B 10%, 3,01-35 min B 98%, 35,01-40 min B 98%; caudal de flujo: 50 ml/min; deteccion UV: 210 nm.
Procedimiento 4:
Dispositivo: HPLC Gilson Abimed, sistema de bomba binaria; columna: Grom-Sil-120 ODS-4HE, 250 mm x 30 mm; eluyente A: agua / amomaco 0,5 %, eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0-3 min B 10 %, 3,01-35 min B 98 %, 35,0140 min B 98 %; caudal de flujo: 50 ml/min; deteccion UV: 210 nm.
Procedimiento 5:
Dispositivo: HPLC Gilson Abimed, sistema de bomba binaria; columna: Chromatorex C18 10 pm, 250 mm x 30 mm; eluyente A: agua, eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0-3 min B 10 %, 5,01-31 min B 90 %, 31 min 90 % B; caudal de flujo: 50 ml/min; deteccion UV: 210 nm.
Procedimiento 6:
Dispositivo: HPLC Gilson Abimed, sistema de bomba binaria; columna: Chromatorex C18 10 pm, 250 mm x 30 mm; eluyente A: agua / 0.5 % TFA, eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0-3 min B 10 %, 5,01-31 min B 90 %, 31 min 90 % B; caudal de flujo: 50 ml/min; deteccion UV: 210 nm.
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45
Dispositivo: HPLC Gilson Abimed, sistema de bomba binaria; columna: ReproSil C18 10 pm, 250 mm x 40 mm; eluyente A: agua, eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0-3 min B 10 %, 5,01-31 min B 95 %, 31 min 95 % B; caudal de flujo: 50 ml/min; deteccion UV: 210 nm.
Procedimiento 8:
Dispositivo: HPLC Gilson Abimed, sistema de bomba binaria; columna: ReproSil C18 10 pm, 250 mm x 30 mm; eluyente A: agua, eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0-3 min B 10 %, 5,01-31 min B 95 %, 31 min 95 % B; caudal de flujo: 50 ml/min; deteccion UV: 210 nm.
Procedimiento 9:
Dispositivo: HPLC Gilson Abimed, sistema de bomba binaria; columna: Waters Sunfire C18 5 pm, 250 mm x 20 mm; eluyente A: agua, eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0 min B 20 %, 15 min B 60 %, 15,01-19 min B 20 %; caudal de flujo: 25 ml/min; deteccion UV: 210 nm.
Procedimientos analiticos HPLC, CL/EM y GC/EM:
Procedimiento 1 (HPLC):
Instrumento: Agilent 1100 con deteccion DAD; columna: Agilent Zorbax Eclipse XDB-C8 4,6, 150 mm x 5 mm; eluyente A: TFA 0,01 % en agua, eluyente B: TFA 0,01 % en acetonitrilo; gradiente: 0-1 min B 10 %, 4-5 min B 90 %, 5,5 min B 10 %; caudal de flujo: 2,0 ml/min; temperatura: 30 °C; deteccion UV: 210 nm.
Procedimiento 2 (HPLC):
Instrumento: HP 1100 con deteccion DAD; columna: Kromasil 100 RP-18, 60 mm x 2,1 mm, 3,5 pm; eluyente A: acido perclorico 5 ml (70 %) / agua en L, eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0 min B 2 %, 0,5 min B 2 %, 4,5 min B 90 %, 6,5 min B 90 %, 6,7 min B 2 %, 7,5 min B 2 %; caudal de flujo: 0,75 ml/min; temperatura: 30 °C; deteccion UV: 210 nm.
Procedimiento 3 (HPLC):
Instrumento: HP 1100 con deteccion DAD; columna: Kromasil 100 RP-18, 60 mm x 2,1 mm, 3,5 pm; eluyente A: acido perclorico 5 ml (70 %) / agua en L, eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0 min B 2 %, 0,5 min B 2 %, 4,5 min B 90 %, 9 min B 90 %, 9,2 min B 2 % , 10 min B 2 %; caudal de flujo: 0,75 ml/min; temperatura: 30 °C; deteccion UV: 210 nm.
Procedimiento 4 (CL/EM):
Instrumento: Micromass Platform LCZ con HPLC Agilent 1100 Series; columna: Thermo Hypersil GOLD 3p, 20 mm x 4 mm; eluyente A: 1 l de agua + 0,5 ml de acido formico 50 %, eluyente B: 1 l de acetonitrilo + 0,5 ml de acido formico 50 %; gradiente: 0,0 min A 100 % ^ 0,2 min A 100 % ^ 2,9 min A 30 % ^ 3,1 min A 10 % ^ 5,5 min A 10 %; temperatura: 50 °C; caudal de flujo: 0,8 ml/min; deteccion UV: 210 nm.
Procedimiento 5 (CL/EM):
Instrumento: Micromass ZQ con HPLC Waters Alliance 2795 / HP 1100; columna: Phenomenex Synergi 2,5p MAX- RP 100A Mercury, 20 mm x 4 mm; eluyente A: 1 l de agua + 0,5 ml de acido formico 50%, eluyente B: 1 l de acetonitrilo + 0,5 ml de acido formico 50 %; gradiente: 0,0 min A 90 % ^ 2,5 min A 30 % ^ 3,0 min A 5 % ^ 4,0 min A 5 %; caudal de flujo: 2 ml/min; temperatura: 50 °C; deteccion UV: 210 nm.
Procedimiento 6 (CL/EM):
Instrumento: Micromass Quattro Premier con Waters UPLC Acquity; columna: Thermo Hypersil GOLD 1,9p, 50 mm x 1 mm; eluyente A: 1 l de agua + 0,5 ml de acido formico 50 %, eluyente B: 1 l de acetonitrilo + 0,5 ml de acido formico 50 %; gradiente: 0,0 min A 90 % ^ 0,1 min A 90 % ^ 1,5 min A 10 % ^ 2,2 min A 10 %; temperatura: 50 °C; caudal de flujo: 0,33 ml/min; deteccion UV: 210 nm.
Procedimiento 7 (CL/EM):
Instrumento: Micromass ZQ con HPLC Waters Alliance 2795; columna: Phenomenex Synergi 2,5p MAX-RP 100A Mercury, 20 mm x 4 mm; eluyente A: 1 l de agua + 0,5 ml de acido formico 50 %, eluyente B: 1 l de acetonitrilo + 0,5 ml de acido formico 50 %; gradiente: 0,0 min A 90 % ^ 0,1 min A 90 % ^ 3,0 min A 5 % ^ 4,0 min A 5 % ^ 4,01 min A 90 %; caudal de flujo: 2 ml/min; temperatura: 50 °C; deteccion UV: 210 nm.
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Procedimiento 8 (GC/EM):
Instrumento: Micromass GCT, GC6890; columna: Restek RTX-35, 15 m x 200 pm x 0,33 pm; flujo constante con helio: 0,88 ml/min; horno: 70 °C; entrada: 250 °C; gradiente: 70 °C, 30 °C/min ^ 310 °C (mantener durante 3 min).
Procedimiento 9 (HPLC):
Instrumento: Agilent 1100 con deteccion DAD; columna: Merck Chromolith Speed ROD, 150 mm x 5 mm; eluyente A: acido formico 0,01 % en agua, eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0 min B 5 %, 2,5 min B 95 %, 3 min B 95 %; caudal de flujo: 5,0 ml/min; temperatura: 40 °C; deteccion UV: 210 nm.
Procedimiento 10 (CL/EM):
Instrumento: Sistema UPLC de Waters Acquity SQD; columna: Waters Acquity UPLC HSS T3 1,8p, 50 mm x 1 mm; eluyente A: 1 l de agua + 0,25 ml de acido formico 99 %, eluyente B: 1 l de acetonitrilo + 0,25 ml de acido formico 99 %; gradiente: 0,0 min A 90 % ^ 1,2 min A 5 % ^ 2,0 min A 5 %; temperatura: 50 °C; caudal de flujo: 0,40 ml/min; deteccion UV: 208-400 nm.
Procedimiento sintetico general 1:
Acoplamiento de Suzuki de derivados de 5-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina con acidos o esteres arilboronicos:
imagen19
Una 5-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina A (aproximadamente 0,5 mmol), acido arilboronico B (1,2 equivalentes) o un ester boronico correspondiente, por ej., un boronato de dimetilo o boronato de pinacolato, y tetraquis(trifenil- fosfina)paladio (0) (0,1 equivalentes) se disuelven en una mezcla de 1,4-dioxano (aproximadamente 4,0 ml) y una solucion acuosa de carbonato de sodio 2 M (1,5 ml) en un vial reactor de microondas. Al recipiente de reaccion se le coloca una tapa engastada, y la mezcla se calienta a 140 °C durante 1 h en un dispositivo de microondas de modo unico. Despues del enfriamiento, la mezcla de reaccion se filtra sobre un lecho de Celite que se aclara con 1,4- dioxano para eluir todo el material organico. El filtrado combinado se evapora a sequedad a presion reducida, y el residuo se purifica por HPLC preparativa para dar el compuesto C diana.
Procedimiento sintetico general 2:
Borilacion de bromuros de arilo y acoplamiento de Suzuki subsiguiente con derivados de 5-bromopirrolo[2,1- f][1,2,4]triazina sin aislamiento del acido o ester arilboronico intermedio:
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Se disuelve bromuro de arilo D (aproximadamente 0,5 mmol) en DMF (3 ml) en un recipiente reactor de microondas, se burbujea argon a traves de la solucion durante 5 min, y se anaden complejo de [1,1'- bis(difenilfosfino)ferroceno]didoropaladio(N)-diclorometano (0,1 equivalentes), acetato de potasio (3 equivalentes) y bis(pinacolato)diboro (1,2 equivalentes). Al recipiente se le coloca una tapa engastada, y la mezcla se calienta a 130 °C durante 60 min en un dispositivo de microondas de modo unico. Despues, la suspension se filtra, el filtrado se transfiere a otro vial de procedimiento de microondas, y se anaden fefragu/s(trifenilfosfina)paladio (0) (0,1 equivalentes), solucion acuosa de carbonato de sodio 2 M (4 equivalentes) y la 5-bromopirrolo[2,1- f][1,2,4]triazina A (1 equivalente). Al vial se le coloca una tapa engastada, y la mezcla se calienta a 140 °C durante 1 h en un dispositivo de microondas de modo unico. La mezcla de reaccion bruta asf obtenida se inyecta directamente sobre una columna de HPLC preparativa para la separacion y purificacion del compuesto C diana.
Materiales de Inicio e Intermedios:
Intermedio 1A
[2,6-Difluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil]metanol
OH
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3
Se disolvio (4-bromo-2,6-difluorofenil)metanol (1,03 g, 4,62 mmol) en 1,4-dioxano seco (10 ml). Se burbujeo argon a traves de la solucion, despues se anadieron complejo de [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio- diclorometano (302 mg, 0,37 mmol, 0,08equiv.), acetato de potasio anhidro (907 mg, 9,24 mmol, 2 equiv.) y bis(pinacolato)diboro (1,23 g, 4,85 mmol, 1,05 equiv.), y la mezcla se calento a 130 °C durante 1 h en un dispositivo de microondas de modo unico. Despues del enfriamiento, la mezcla se filtro, y el disolvente se retiro a presion reducida. Se anadio ciclohexano (200 ml) al residuo, y la mezcla se agito vigorosamente durante 30 min. Despues, el material no disuelto se retiro por filtracion, el ciclohexano se retiro por destilacion y el residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida sobre gel de silice (gradiente de diclorometano/acetonitrilo). Las fracciones que conteman el producto se combinaron y evaporaron. El compuesto del titulo cristalizo espontaneamente en forma de un solido de color parduzco: 790 mg (63 % del t.).
CG-EM (procedimiento 8): Tr = 5,36 min; EM (EI): m/z (%) = 270,3 (15) [M]+.
Intermedio 2A
Acido [3,5-difluoro-4-(hidroximetil)fenil]bor6nico
OH
imagen22
/B^OH
HO
Se disolvio acido [4-({[terc-butil(dimetil)silil]oxi}metil)-3,5-difluorofenil]bor6nico (19,3 g, 63,9 mmol; material en bruto, 5 preparado por el procedimiento de Hattori, Bioorg. Med. Chem. 2006, 14, 3258-3262) en 400 ml de acido acetico acuoso (66 %) y se agito a 40 °C durante 5 h. Despues, la solucion se evaporo a presion reducida, y el residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida sobre gel de sflice (elucion de gradiente de metanol en diclorometano del 0 % al 2 %) para dar 3,46 g (25 % del t., Pureza de CL-EM 87 %) del compuesto del tttulo.
CL-EM (procedimiento 7): Tr = 0,50 min; EM (lENpos): m/z (%) = 171,2 (100) [M-OH]+, EM (lENneg): m/z (%) = 187,3 10 (100) [M-H]-
Intermedio 3A
(4-Bromo-2-clorofenil)metanol
OH
Cl
Br
El compuesto del tttulo se preparo de acuerdo con el procedimiento descrito en el documento WO 2004/074270-A2 15 [Ejemplo A(147), etapa 1].
RMN 1H (400 MHz, CDCla): 6 (ppm) = 2,00 (a, 1H), 4,74 (s, 2H), 7,38 (d, 1H), 7,43 (dd, 1H), 7,53 (d, 1H).
Intermedio 4A
(4-Bromo-2-metilfenil)metanol
OH
imagen23
CH„
\\
Br
20 El compuesto del tftulo se preparo de acuerdo con el procedimiento descrito en EP 1 544 208-A1 (Ejemplo de Referencia 14).
RMN 1H (400 MHz, CDCla): 6 (ppm) = 1,62 (t, 3H), 2,32 (s, 3H), 4,64 (d, 2H), 7,23 (d, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,33 (d, 1H).
Intermedio 5A
(5-Bromopiridin-2-il)metanol
OH
imagen24
Br
Se disolvio 5-bromopiridin-2-carboxilato de metilo (2,00 g, 9,27 mmol) en etanol (20,0 ml). Se anadio borohidruro de sodio (1,05 g, 27,8 mmol) a 0 °C, y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 18 h. Despues, la mezcla se concentro a presion reducida, se inactivo con acido clorhndrico 1 N, se neutralizo con carbonato de potasio solido y 5 se extrajo con diclorometano. La fase organica se seco sobre sulfato de magnesio y se evaporo para dar 1,57 g (90 % del t.) del compuesto del tttulo.
CL-EM (procedimiento 6): Tr = 0,56 min; EM (lENpos): m/z (%) = 188,0 (100) [M+H]+.
Intermedio 6A
Acido [6-(hidroximetil)piridin-3-il]boronico
10
OH
imagen25
/B~~OH
HO
A una solucion del Intermedio 5A (1,50 g, 7,98 mmol) y bis(pinacolato)diboro (2,23 g, 8,28 mmol) en DMF desgasificado (120 ml) se le anadio en una atmosfera de argon, cloruro de 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno-paladio (II) (292 mg, 0,40 mmol) y acetato de potasio (2,35 g, 23,9 mmol). La mezcla se calento a 80 °C durante 18 h y despues se enfrio a temperatura ambiente. La suspension se filtro, y el residuo se lavo con dioxano. Los filtrados
15 combinados se concentraron a presion reducida, y el residuo aceitoso se tomo en 50 ml de acetato de etilo y 50 ml de ciclohexano y se dejo reposar a temperatura ambiente durante toda la noche. El precipitado resultante se recogio por filtracion y se descarto. El filtrado se evaporo, y el residuo se disolvio de nuevo en 100 ml de acetato de etilo y se extrajo dos veces con 50 ml de agua. La fase acuosa se concentro para dar 690 mg (56 % del t.) del compuesto del tftulo que se utilizo sin purificacion adicional.
20 CL-EM (procedimiento 6): Tr= 0,18 min; EM (lENpos): m/z (%) = 154,0 (100) [M+H]+.
Intermedio 7A
3-(4-Aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)prop-2-in-1-ol
NH
imagen26
El material de partida 7-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina se sintetizo de acuerdo con el procedimiento 25 descrito en el documento WO 2007/056170-A2 (Intermedio B).
Se cargaron 7-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina (1,0 g, 4,69 mmol), yoduro de cobre (I) (89 mg, 0,47 mmol, 0,1 equiv.) y tefragu/s(trifenilfosfina)paladio (0) (542 mg, 0,47 mmol, 0,1 equiv.) en un vial reactor de microondas y se evacuaron durante 1 h. Despues, el recipiente se ventilo con argon, se anadieron pirrolidina (15 ml) y 2-propin-1-ol (2,63 g, 47 mmol, 10 equiv.), y al recipiente se le coloco una tapa engastada y se calento a 85 °C durante 120 min en
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un dispositivo de microondas de modo unico. Despues del enfriamiento, la mezcla de reaccion se vertio en 120 ml de una solucion concentrada acuosa de cloruro de amonio que se extrajo dos veces con acetato de etilo. Las fases organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporaron, y el residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida (columna de sflice de Biotage, acetato de etilo). El producto resultante (222 mg) surgio puro por CL-EM (procedimiento 6) y se utilizo para transformaciones adicionales.
HPLC (procedimiento 2): Tr = 2,59 min;
CL-EM (procedimiento 6): Tr = 0,28 min; EM (lENpos): m/z (%) = 189,2 (100) [M+H]+.
Intermedio 8A e Intermedio 9A
3-(4-Aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)propan-1-ol y 7-Propilpirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina
imagen27
El Intermedio 7A (444 mg, 2,36 mmol) se disolvio en acido acetico (18 ml) en una atmosfera de argon. Se anadio oxido de platino (IV) (40 mg, 0,18 mmol, 0,08 equiv.), y la mezcla se agito vigorosamente durante 3ha temperatura ambiente en una atmosfera de hidrogeno a presion de ambiente. Despues, el catalizador se retiro por filtracion, el disolvente se retiro por destilacion, y el residuo se sometio a cromatograffa ultrarrapida (columna de sflice de Biotage, gradiente de ciclohexano/acetato de etilo). Los Intermedios 8A (185 mg, 41 % del t.) y 9A (170 mg, 41 % del t.) se obtuvieron en dos fracciones cromatograficas diferentes:
Intermedio 8A:
HPLC (procedimiento 2): Tr = 2,68 min;
CL-EM (procedimiento 4): Tr = 0,83 min; EM (IENpos): m/z (%) = 193,1 (100) [M+H]+, EM (IENneg): m/z (%) = 191,1 (100) [M-H]'.
RMN *H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,80 (m, 2H), 2,86 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 3,45 (m, 2H), 4,49 (t, J = 5,1 Hz, 1H), 6,41 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 6,69 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 7,50 (s a, 2H), 7,78 (s, 1H).
Intermedio 9A:
HPLC (procedimiento 1): Tr = 3,22 min;
CL-EM (procedimiento 4): Tr = 1,23 min; EM (IENpos): m/z (%) = 177,1 (100) [M+H]+, EM (IENneg): m/z (%) = 175,2 (30) [M-H]'.
Intermedio 10A
3-(4-Amino-5-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)propan-1-ol
imagen28
El Intermedio 8A (105 mg, 0,55 mmol) se disolvio en THF (8,75 ml) y se enfrio a -20 °C. Se anadio 1,3-dibromo-5,5- dimetilhidantorna (78,1 mg, 0,5 equiv.), y la mezcla se agito a -20 °C durante 1 h. Despues, la reaccion se detuvo con 0,5 ml de una solucion concentrada acuosa de ditionita de sodio, se calento a temperatura ambiente y se repartio entre acetato de etilo y agua. La fase organica se seco sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se retiro por destilacion. Rendimiento: 145 mg (98 % del t.).
HPLC (procedimiento 1): Tr = 2,96 min; HPLC (procedimiento 2): Tr = 2,95 min;
CL-EM (procedimiento 5): Tr = 1,03 min; EM (IENpos): m/z (%) = 271,0 (100) y 273,0 (100) [M+H]+, EM (IENneg): m/z (%) = 269,0 (99) y 271,0 (100) [M-H]'.
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RMN 1H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,75 (m, 2H), 2,83 (t, J = 8,1 Hz, 2H), 3,43 (m, 2H), 4,50 (t, J = 5,4 Hz, 1H), 6,62 (s, 1H), 7,81 (s, 1H).
Intermedio 11A
5-Bromo-7-Propilpirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina
imagen29
El Intermedio 9A (110 mg, 0,62 mmol) se disolvio en THF (4,44 ml) y se enfrio a -20 °C. Se anadio 1,3-dibromo-5,5- dimetilhidantoma (89 mg, 0,5 equiv.), y la mezcla se agito a -20 °C durante 1 h. Despues, la reaccion se detuvo con 0,5 ml de una solucion concentrada acuosa de ditionita de sodio, se calento a temperatura ambiente y se repartio entre acetato de etilo y agua. La fase organica se seco sobre sulfato de sodio anhidro, y el disolvente se retiro por destilacion. Rendimiento: 154 mg (85 % puro, 82 % del t.).
HPLC (procedimiento 1): Tr = 3,78 min;
CL-EM (procedimiento 7): Tr= 1,55 min; EM (lENpos): m/z (%) = 255,0 (99) y 257,2 (100) [M+H]+.
RMN 1H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 0,91 (t, J = 7,3 Hz, 3H), 1,65 (m, 2H), 2,79 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 3,31 (s, 2H), 6,63 (s, 1H), 7,95 (s, 1H).
Intermedio 12A
4-(4-Aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)but-3-in-1-ol
imagen30
Se cargaron 7-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina (1,0 g, 4,69 mmol), yoduro de cobre (I) (89 mg, 0,47 mmol, 0,1 equiv.) y tefragu/s(trifenilfosfina)paladio (0) (542 mg, 0,47 mmol, 0,1 equiv.) en un vial reactor de microondas y se evacuaron durante 1 h. Despues, el recipiente se ventilo con argon, se anadieron pirrolidina (15 ml) y 3-butin-1-ol (3,36 g, 47 mmol, 10 equiv.), y al recipiente se le coloco una tapa engastada y se calento a 85 °C durante 120 min en un dispositivo de microondas de modo unico. Despues del enfriamiento, la mezcla de reaccion se vertio en 120 ml de una solucion concentrada acuosa de cloruro de amonio y se extrajo dos veces con acetato de etilo. Las fases organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporaron, y el residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida (columna de sflice de Biotage, acetato de etilo). El producto resultante (735 mg) fue lo suficientemente puro (66 % por HPLC) para transformaciones adicionales.
HPLC (procedimiento 2): Tr = 2,77 min;
CL-EM (procedimiento 4): Tr = 0,96 min; EM (lENpos): m/z (%) = 203,1 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 201,1 (100) [M-H]-.
Intermedio 13A
imagen31
El intermedio 12A (607 mg, 3,00 mmol) se disolvio en acido acetico (64 ml), y se anadio oxido de platino (IV) (50 mg, 0,22 mmol, 0,07 equiv.). La mezcla se agito en una atmosfera de hidrogeno a presion ambiente durante 15 horas. Despues, el catalizador se retiro por filtracion, el filtrado se evaporo a presion reducida, y el residuo se purifico por 5 cromatograffa ultrarrapida (columna de s^lice de Biotage, acetato de etilo). Rendimiento: 350 mg (57 % del t.).
HPLC (procedimiento 2): Tr = 2,92 min;
CL-EM (procedimiento 4): Tr = 0,94 min; EM (lENpos): m/z (%) = 207,1 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 205,3 (100) [M-H]".
Intermedio 14A
10 4-(4-Amino-5-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)butan-1-ol
imagen32
El Intermedio 13A (330 mg, 1,60 mmol) se disolvio en THF (26 ml) a -20 °C y se anadio 1,3-dibromo-5,5- dimetilhidantoma (229 mg, 0,80 mmol). La mezcla se agito a -20 °C durante 1 h.
Despues, la reaccion se detuvo con una solucion concentrada acuosa de sulfito de sodio (0,5 ml). Se anadio acetato 15 de etilo, se separo la fase acuosa, y la fase organica se seco sobre sulfato de sodio y se evaporo. El producto en bruto se purifico posteriormente por HPLC preparativa (procedimiento 2) para dar 175 mg (84% del t.) del compuesto del tttulo.
HPLC (procedimiento 1): Tr = 3,13 min;
CL-EM (procedimiento 5): Tr = 1,23 min; EM (lENpos): m/z (%) = 285,0 (98) y 287,0 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z 20 (%) = 283,0 (100) y 285,0 (98) [M-H]-.
RMN 1H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,39-1,48 (m, 2H), 1,60-1,69 (m, 2H), 3,31 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 3,40 (m, 2H), 4,46 (s a, 1H), 6,61 (s, 1H), 7,82 (s, 1H).
Intermedio 15A
4-Aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-carbaldel'ndo
25
NH
imagen33
El material de partida pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina se sintetizo de acuerdo con el procedimiento descrito en el documento WO 2007/056170-A2 (Intermedio A).
Se disolvio pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina (20,5 g, 152 mmol) en 150 ml de DMF. En enfriamiento con hielo, se anadio cloruro de fosforilo (31,3 ml, 336 mmol) gota a gota, a una velocidad tal que la temperatura interna no se 30 elevara por encima de 30 °C. Despues, la mezcla se calento durante 2 dfas a 50 °C. Despues del enfriamiento, se anadio otra porcion de cloruro de fosforilo (14,2 ml, 152 mmol), y la agitacion continuo durante otras 24 h a 50 °C. Despues del enfriamiento, la partida de reaccion se vertio lentamente en una mezcla de 2,0 l de una solucion
saturada acuosa de bicarbonato de sodio y 2,0 l de acetato de etilo. Se anadio bicarbonato de sodio solido hasta que se detuviera la evolucion del gas. Las capas se separaron, la fase acuosa se extrajo con 0,5 l de acetato de etilo, y las fases organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio y concentraron. El residuo se suspendio en 100 ml de eter de diisopropilo, se agito a temperatura ambiente durante 10 min y despues se filtro. El residuo seco 5 se agito en acido clorhndrico 6 N (500 ml) durante 1 h a 50 °C y despues se vertio en una mezcla de hielo/agua (1000 ml). La mezcla se neutralizo cuidadosamente con bicarbonato de sodio solido, se agito durante 30 min a temperatura ambiente y despues se filtro de nuevo. El residuo se lavo con agua y ligroma para producir 20,6 g (83 % del t.) de cristales de color blanco que se utilizaron en la proxima etapa sin purificacion adicional.
Intermedio 16A
10 4-Amino-5-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-carbaldel'ndo
imagen34
El Intermedio 15A (20,6 g, 127 mmol) se disolvio en 525 ml de DMF. A 0 °C, se anadio 1,3-dibromo-5,5- dimetilhidantoma (21,8 g, 76,2 mmol), y la mezcla se agito durante 1 h en enfriamiento con hielo y durante 2h adicionales a temperatura ambiente. La suspension resultante se filtro, y el residuo se lavo con DMF y eter de dietilo. 15 El filtrado se descarto, y los cristales poco solubles restantes se secaron para dar 20,0 g (65% del t., 80% de pureza de HPLC) del compuesto del tftulo. Este material se utilizo sin purificacion adicional.
RMN 1H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 7,42 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 10,22 (s, 1H).
Intermedio 17A
(4-Amino-5-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)(ciclopropil)metanol
20
imagen35
El Intermedio 16A (500 mg, 1,66 mmol) se suspendio en THF seco (30 ml). A 0 °C, se anadio una solucion 0,5 M de bromuro de ciclopropil magnesio en eter de dietilo (10 ml, 5,0 mmol). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 1 h. Despues, se anadio otra porcion de la solucion de Grignard (6,6 ml, 3,3 mmol). Despues de la agitacion adicional durante 30 min a temperatura ambiente, la reaccion se detuvo con una solucion saturada acuosa de 25 cloruro de amonio y se extrajo con acetato de etilo (2 x 20 ml). Las fases organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio y se concentraron. El residuo se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 4). Rendimiento: 0,14 g (29 % del t.).
CL-EM (procedimiento 6): Tr = 0,75 min; EM (lENpos): m/z (%) = 283,0 (100) [M+H]+.
RMN 1H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 0,35 (m, 3H), 0,45 (m, 1H), 1,28 (m, 1H), 4,62 (t, 1H), 5,26 (d, 1H), 6,75 (s, 30 1H), 7,84 (s, 1H).
Intermedio 18A
5
10
15
20
25
30
imagen36
En un matraz de 3 cuellos de 50 ml equipado con un condensador, un termometro y un embudo de goteo, que se purgo con argon, se preparo un reactivo de Grignard a partir de virutas de magnesio (484 mg, 19,9 mmol) y 4- clorotetrahidropirano (2,4 g, 19,9 mmol) en THF seco (14 ml). A esta solucion se le anadio a 0 °C una suspension del Intermedio 16A (1,2 g, 3,98 mmol) en THF (20 ml), y la mezcla de reaccion se dejo agitar durante 1 h a temperatura ambiente. Despues, esta se inactivo con una solucion saturada acuosa de cloruro de amonio y se extrajo con acetato de etilo (2 x 50 ml). La fase organica se lavo con salmuera, se seco sobre sulfato de magnesio y se concentro. El residuo se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 3). Rendimiento: 0,5 g (38 % del t.).
CL-EM (procedimiento 6): Tr = 0,66 min; EM (lENpos): m/z (%) = 327,0 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 325,1 (100) [M-H]-.
Intermedio 19A
8-(4-Aminopin-olo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-ol
NH
imagen37
N
El material de partida 7-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina se sintetizo de acuerdo con el procedimiento descrito en el documento WO 2007/056170-A2 (Intermedio B).
Se disolvio 7-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina (9,20 g, 35,41 mmol) en THF (105 ml) en argon a temperatura ambiente, se anadio clorotrimetilsilano (9,08 ml, 7,77 g, 70,82 mmol, 2 equiv.) y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 3 h. Despues, esta se enfrio a 0 °C y se anadio cloruro de 2-propil magnesio (74 ml de una solucion 2,0 M en THF, 149 mmol, 4.2 equiv.). La mezcla se agito durante 3 h adicionales mientras se calentaba a temperatura ambiente. Despues, se anadio 1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-ona (8,38 g, 53,12 mmol, 1,5 equiv.), y la agitacion continuo durante otras 16 h. La reaccion se inactivo con una mezcla 1:1 de una solucion concentrada acuosa de cloruro de amonio y hielo hasta que el valor del pH alcanzo 6-7. La mezcla se extrajo con dos porciones de acetato de etilo, y los extractos organicos combinados se secaron sobre carbonato de sodio anhidro y se concentro a sequedad. El compuesto del tttulo se cristalizo a partir de eter de dietilo. Rendimiento: 6,05 g (58 % del t.).
HPLC (procedimiento 1): Tr = 2,89 min;
CL-EM (procedimiento 6): Tr = 0,38 min; EM (lENpos): m/z (%) = 291,2 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 289,4 (100) [M-H]-.
Intermedio 20A
NH
imagen38
El Intermedio 19A (2,81 g, 60 % de pureza, 5,82 mmol) se disolvio en piridina (18 ml) a 0 °C. Se anadio lentamente anhndrido trifluoroacetico (2,46 ml, 3,66 g, 17,45 mmol, 3equiv.) y la mezcla de reaccion se agito a temperature ambiente durante 16 h. El disolvente se retiro por destilacion, y el residuo se repartio entre agua y acetato de etilo. El 5 extracto organico se seco sobre sulfato de sodio y se evaporo. El residuo se trituro con eter de dietilo a 0 °C para producir 2,95 g (92 % puro por HPLC, 99 % del t.) del compuesto del tttulo.
HPLC (procedimiento 1): Tr = 4,55 min;
CL-EM (procedimiento 5): Tr = 2,28 min; EM (lENpos): m/z (%) = 369,1 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 367,1 (100) [M-H]-.
10 Intermedio 21A
7-(1,4-Dioxaespiro[4.5]dec-8-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina
NH„
imagen39
El Intermedio 20A (2,95 g, 10,8 mmol) se disolvio en metanol (1,07 l) en argon. Se anadio paladio sobre carbon vegetal (10%, 400 mg), y la mezcla se agito vigorosamente durante 24 horas en una atmosfera de hidrogeno a 15 presion ambiente y temperatura ambiente. El catalizador se retiro por filtracion y el disolvente se retiro por destilacion a presion reducida para dar 2,11 g (71 % del t.) del compuesto del tftuio.
HPLC (procedimiento 1): Tr = 3,14 min;
CL-EM (procedimiento 6): Tr = 0,68 min; EM (lENpos): m/z (%) = 275,3 (100) [M+H]+.
Intermedio 22A
20 4-(4-Aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)ciclohexanona
imagen40
El Intermedio 21A (2,11 g, 7,69 mmol) se disolvio en una mezcla de acido clorhndrico 1 M (23 ml) y metanol (6,80 ml) a 0 °C y se agito en enfriamiento con hielo durante 3 h. Despues, el valor del pH se ajusto a 6-7 por la adicion de una
solucion concentrada acuosa de bicarbonato de sodio. La mezcla se extrajo con tres porciones de diclorometano, y los extractos organicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se evaporaron. El residuo (923 mg, 52 % del t.) se utilizo sin purificacion adicional en la proxima etapa sintetica.
HPLC (procedimiento 2): Tr = 3,06 min;
5 CL-EM (procedimiento 4): Tr = 1,02 min; EM (lENpos): m/z (%) = 231,1 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 229,2 (100) [M-H]".
RMN 'h (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,86 (ddd, 2H), 2,25-2,36 (m, 4H), 2,59 (ddd, 2H), 3,59 (m, 1H), 6,45 (d, 1H), 6,82 (d, 1H), 7,60 (s a, 1H), 7,82 (s, 1H).
Intermedio 23A
10 frans-4-(4-Aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)ciclohexanol
NH
imagen41
HO
El Intermedio 22A (452 mg, 1,96 mmol) se disolvio en THF (15 ml), y la solucion se enfrio a 0 °C. Se anadio una solucion de hidruro de litio y aluminio (1 M en THF, 2,94 ml, 2,94 mmol) gota a gota. Posteriormente, la solucion se agito a 0 °C durante 10 min y despues se inactivo por la adicion de una solucion concentrada acuosa de cloruro de 15 amonio. La mezcla se extrajo con 3 porciones de diclorometano, y los extractos organicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se evaporaron. El residuo (360 mg, 77 % de pureza, 61 % del t.) se utilizo en la proxima etapa sintetica sin purificacion adicional.
HPLC (procedimiento l): Tr = 2.62 min;
CL-EM (procedimiento 6): Tr = 0,29 min; EM (lENpos): m/z (%) = 233,2 (100) [M+H]+.
20 RMN 1H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,30 (m, 2H), 1,42 (m, 2H), 1,91 (m, 2H), 1,99 (m, 2H), 2,97 (tt, 1H), 3,45 (m, 1H), 4,60 (d, 1H), 6,39 (d, 1H), 6,79 (d, 1H), 7,53 (s a, 2H), 7,80 (s, 1H).
Intermedio 24A
frans-4-(4-Amino-5-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)ciclohexanol
imagen42
HO
25 El Intermedio 23A (360 mg, 85 % de pureza, 1,19 mmol) se disolvio en THF (8 ml) a -20 °C y se anadio 1,3-dibromo- 5,5-dimetilhidantoma (188 mg, 0,66 mmol, 0,55equiv.). La mezcla se agito a -20 °C durante 1 h, despues se anadieron 0,5 ml de una solucion concentrada acuosa de ditionita de sodio, y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. El extracto organico se seco sobre sulfato de sodio anhidro, se filtro y se evaporo. El producto en bruto (463 mg, 66 % de pureza, 83 % del t.) se utilizo en la proxima etapa sintetica sin purificacion adicional.
30 HPLC (procedimiento 1): Tr = 3,22 min;
CL-EM (procedimiento 7): Tr = 1,03 min; EM (lENpos): m/z (%) = 311,2 y 313,0 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 309,2 (50) y 311,2 (40) [M-H]-.
5
10
15
20
25
Intermedio 25A
3-(4-Aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-hidroxipiperidin-1-carboxilato de ferc-butilo
imagen43
3
3
El material de partida 7-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina se sintetizo de acuerdo con el procedimiento descrito en el documento WO 2007/056170-A2 (Intermedio B).
Se disolvio 7-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina (17,29 g, 81 mmol) en THF (214 ml) en argon a temperature ambiente. Se anadio clorotrimetilsilano (20,60 ml, 17,63 g, 162 mmol, 2 equiv.) y la mezcla se agito a temperature ambiente durante 3 h. Despues, se enfrio a 0 °C y se anadio cloruro de 2-propil magnesio (170 ml de una solucion 2,0 M en THF, 340 mmol, 4.2 equiv.). La mezcla se agito durante 3 h adicionales mientras se calentaba a temperatura ambiente. Despues, se anadio 3-oxopiperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (25,00 g, 121 mmol, 1,5 equiv.) y la agitacion continuo durante otras 16 h. La reaccion se inactivo con una mezcla 1:1 de una solucion concentrada acuosa de cloruro de amonio y hielo hasta que el valor del pH alcanzo 6-7. La mezcla se extrajo con dos porciones de acetato de etilo, y los extractos organicos combinados se secaron sobre carbonato de sodio anhidro y se concentraron a sequedad. El compuesto del tftulo cristalizo tras la trituracion del residuo con eter de dietilo (50 ml). Los cristales se lavaron con eter de dietilo y se secaron para dar 17,20 g (64 % del t.).
HPLC (procedimiento 2): Tr = 3,53 min;
CL-EM (procedimiento 5): Tr = 1,36 min; EM (lENpos): m/z (%) = 334,1 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 332,0 (100) [M-H]',
RMN *H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,19-1,43 (m, 9H), 1,72-1,88 (m, 2H), 2,38-2,46 (m, 1H), 3,02-3,20 (m, 1H), 3,44-3,96 (m, 4H), 6,58 (d, 1H), 6,81 (d, 1H), 7,82 (s, 1H).
Intermedio 26A
3-(4-amino-5-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-hidroxipiperidin-1-carboxilato de rac-ferc-butilo
imagen44
3
3
El Intermedio 25A (120 mg, 0,36 mmol) se disolvio en THF (6,0 ml) a -20 °C, y se anadio 1,3-dibromo-5,5- dimetilhidantorna (51 mg, 0,18 mmol, 0,5 equiv.). La mezcla se agito a -20 °C durante 2 h y despues se inactivo con una solucion concentrada acuosa de sulfito de sodio (0,5 ml). Se anadio acetato de etilo, se separo la fase acuosa, y el extracto organico se seco sobre sulfato de sodio y se evaporo. El compuesto del tftulo (148 mg, 95 % del t.) se obtuvo en forma de un solido de color amarillo claro.
HPLC (procedimiento 1): Tr = 4,03 min;
CL-EM (procedimiento 5): Tr = 1,99 min; EM (lENpos): m/z (%) = 412,0 (90) y 414,0 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 410,0 (100) y 412,0 (85) [M-H]".
Intermedio 27A
5 5-{4-[(trifluoroacetil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il}-3,6-dihidropiridin-1(2H)-carboxilato de terc-butilo
O
HN
acf
imagen45
3
El Intermedio 25A (8,32 g, 24,95 mmol) se disolvio en piridina (116 ml) a 0 °C. Se anadio lentamente anhndrido trifluoroacetico (8,81 ml, 13,10 g, 62,36 mmol, 2,5 equiv.) y la mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 16 h. Despues, se enfrio de nuevo a 0 °C, y se anadieron 150 ml de eter de dietilo. La mezcla se agito a 0 °C 10 mientras precipitaba lentamente el compuesto del titulo. Finalmente, el producto se filtro y lavo con eter de dietilo. El filtrado se evaporo al vado, y el residuo se trituro con eter de dietilo a 0 °C para dar un segundo cultivo del compuesto del tttulo despues de un lavado con eter de dietilo. Los dos cultivos se combinaron para producir 7,80 g (92 % puro por HPLC, 76 % del t.) del compuesto del tttulo en forma de cristales de color amarillo.
HPLC (procedimiento 1): Tr = 3,91 min;
15 CL-EM (procedimiento 7): Tr = 2,45 min; EM (lENpos): m/z (%) = 412,2 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 410,2 (100) [M-H]".
RMN 'h (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,48 (s, 9H), 1,92 (m, 2H), 3,58 (m, 2H), 6,90 (d, 1H), 7,30 (d, 1H), 8,038,10 (m, 1H), 8,42 (s, 1H).
Intermedio 28A
20 3-(4-Aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)piperidin-1-carboxilato de rac-terc-butilo
imagen46
3
3
El Intermedio 27A (7,80 g, 92% de pureza, 17,54 mmol) se disolvio en metanol (400 ml). Se anadieron acido trifluoroacetico (6,76 ml, 10,0 g, 88 mmol, 5 equiv.), agua (3,16 ml, 175 mmol, 10 equiv.) y paladio al 10% sobre carbon vegetal (30 mg), y la mezcla se hidrogeno durante 24 h a temperatura ambiente y presion ambiente. 25 Despues, el catalizador se retiro por filtracion y el disolvente se evaporo al vacfo. El producto en bruto (8,79 g, 75 %
5
10
15
20
25
30
puro, rendimiento cuantitativo) se utilizo en la proxima etapa sintetica sin purificacion adicional.
HPLC (procedimiento 1): Tr = 3.64 min;
CL-EM (procedimiento 7): Tr = 1,26 min; EM (IENpos): m/z (%) = 318,3 (100) [M+H]+, EM (IENneg): m/z (%) = 316,4 (100) [M-H]".
Intermedio 29A
Trifluoroacetato de 7-[(3R)-piperidin-3-il]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina
NH
imagen47
El material de partida (R)-3-(4-amino-5-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)piperidin-1-carboxilato de bencilo se ha descrito en el documento WO 2007/056170-A2 (Intermedio DDD).
Se hidrogenaron 1,50 g (3,49 mmol) de este material durante 16 h a temperatura ambiente y presion ambiente en presencia de paladio al 10 % sobre carbon vegetal (30 mg) en una mezcla de metanol (50 ml) y acido trifluoroacetico (2,70 ml). Posteriormente, el catalizador se retiro por filtracion y todos los volatiles se evaporaron al vado para dar 1,10 g (95 % del t.) del compuesto del tttulo.
HPLC (procedimiento 2): Tr = 2,17 min;
CL-EM (procedimiento 6): Tr = 0,17 min; EM (IENpos): m/z (%) = 218 (100) [M+H]+.
RMN 1H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,75 (m, 2H), 1,92 (m, 1H), 2,05 (m, 1H), 2,93 (m, 1H), 3,06 (m, 1H), 3,31 (d, 1H), 3,50 (d, 1H), 3,57 (m, 1H), 6,78 (d, 1H), 7,20 (m, 1H), 8,10 (s, 1H), 8,63 (m, 1H), 8,82 (m, 1H), 9,02 (s a, 1H).
Intermedio 30A
(3R)-3-(4-Aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo
NH
imagen48
CH
3
3
El Intermedio 29A (1,10 g, 5,06 mmol) se suspendio en diclorometano (6,60 ml), se anadio trietilamina (1,55 ml, 1,13 g, 11,14 mmol, 2,20 equiv.), y la mezcla se agito durante 30 min hasta que el material de partida se disolvio completamente. Despues, se anadio dicarbonato de di-ferc-butilo (1,22 g, 5,57 mmol, 1,1 equiv.), y la mezcla de reaccion se agito durante 16 h. Posteriormente, se anadio acido cftrico acuoso al 5 %, las fases se separaron, y la fase organica se seco sobre sulfato de sodio y se evaporo. El residuo se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 2). Rendimiento: 595 mg (37 % del t.).
HPLC (procedimiento 2): Tr = 4,01 min;
CL-EM (procedimiento 5): Tr = 1,54 min; EM (IENpos): m/z (%) = 318,1 (100) [M+H]+, EM (IENneg): m/z (%) = 316,1 (100) [M-H]-.
RMN 'H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,38 (s, 9H), 1,45 (m, 2H), 1,72 (m, 2H), 2,02 (m, 2H), 2,90 (m, 1H), 3,17 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 4,08 (m, 1H), 6,47 (d, 1H), 6,80 (d, 1H), 7,58 (s a, 1H), 7,81 (s, 1H).
Intermedio 31A
3-(4-amino-5-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)piperidin-1-carboxilato de rac-terc-butilo
imagen49
El Intermedio 28A (8,28 g, 75% de pureza, 14,39 mmol) se disolvio en THF (222 ml) a -20 °C, y se anadio 1,35 dibromo-5,5-dimetilhidantoma (2,06 g, 7,19 mmol, 0,5 equiv.). La mezcla se agito a -20 °C durante 2 h y despues se inactivo con una solucion concentrada acuosa de sulfito de sodio (0,5 ml). Se anadio acetato de etilo, se separo la fase acuosa, y el extracto organico se seco sobre sulfato de sodio y se evaporo. El compuesto del tftulo (6,30 g, 86 % del t.) se obtuvo en forma de un solido de color amarillo claro.
CL-EM (procedimiento 5): Tr = 2,27 min; EM (lENpos): m/z (%) = 396,0 (80) y 397,9 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z 10 (%) = 394,0 (90) y 396,0 (100) [M-H]-.
RMN 1H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,35 (s, 9H), 1,40-1,44 (m, 2H), 1,71 (m, 1H), 1,98 (m, 1H), 2,95 (m, 1H), 3,20 (m, 1H), 3,75 (m, 1H), 4,00 (m, 1H), 6,67 (s, 1H), 7,86 (s, 1H).
Intermedio 32A
15
(3R)-3-(4-amino-5-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo
imagen50
CH3
CH3
El compuesto del tftulo se preparo en la misma forma como la mezcla racemica (Intermedio 31A), comenzando a partir del Intermedio 30A. Los datos analfticos fueron identicos a los mostrados para el Intermedio 31A.
Intermedio 33A
1-(4-Amino-5-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2-cloroetanona
imagen51
El compuesto se preparo de acuerdo con el procedimiento descrito en el documento WO 2007/056170-A2 (Intermedio N, etapa 1).
5
10
15
20
25
HPLC (procedimiento 1): Tr = 4,27 min;
CL-EM (procedimiento 5): Tr = 1,70 min; EM (IENpos): m/z (%) = 289,0 (75) y 290,9 (100) [M+H]+, EM (IENneg): m/z (%) = 287,0 (75) y 288,9 (100) [M-H]".
Intermedio 34A
5-Bromo-7-(2-metil-1,3-tiazol-4-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina
imagen52
El Intermedio 33A (100 mg, 0,35 mmol) y tioacetamida (30 mg, 0,40 mmol, 1,15 equiv.) se disolvieron en 1,4-dioxano (3,0 ml) en un vial de reaccion de microondas. Al vial se le coloco una tapa engastada, y la mezcla se calento a 130 °C durante 60 min en un dispositivo de microondas de modo unico. Despues del enfriamiento, el disolvente se retiro por destilacion, y el residuo se trituro con acetonitrilo y se filtro. El filtrado se descarto. El compuesto del tttulo se aislo en forma de solido cristalino. Rendimiento: 99 mg (92 % del t.).
HPLC (procedimiento 1): Tr = 4,00 min;
CL-EM (procedimiento 6): Tr= 1,05 min; EM (IENpos): m/z (%) = 310,0 (90) y 312 (100) [M+H]+,
RMN 1H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 2,71 (s, 3H), 7,20 (s, 1H), 8,02 (s, 1H), 8,28 (s, 1H).
Intermedio 35A
5-Bromo-7-(2-etil-1,3-tiazol-4-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina
imagen53
El Intermedio 33A (100 mg, 0,35 mmol) y tiopropionamida (32 mg, 0,36 mmol, 1,05 equiv.) se calentaron a reflujo en etanol (3,0 ml) durante un periodo de 4,5 h. Despues del enfriamiento, la mezcla se repartio entre acetato de etilo y una solucion acuosa de bicarbonato de sodio. La fase organica se seco sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se retiro por destilacion. El producto se seco al vacfo para dar 91 mg (0,28 mmol, 81 % del t.) del compuesto del tttulo en forma de solido de color blanquecino.
HPLC (procedimiento 1): Tr = 4,30 min;
CL-EM (procedimiento 7): Tr= 1,84 min; EM (IENpos): m/z (%) = 324,2 (100) y 325,8 (98) [M+H]+.
Intermedio 36A
7-(2-Amino-1,3-tiazol-4-il)-5-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina
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El Intermedio 33A (100 mg, 0,35 mmol) y tiourea (32 mg, 0,41 mmol, 1,2equiv.) se suspendieron en 1,4-dioxano (3 ml) en un vial de reaccion de microondas al que despues se le coloco una tapa engastada. La mezcla se calento a 120 °C durante 60 min en un dispositivo de microondas de modo unico. Tras el enfriamiento, se anadio agua, y el precipitado resultante se recogio por filtracion y se lavo con dioxano. El solido de color blanquecino se seco al vado 5 para dar 98 mg (91 % del t.) del compuesto del tttulo.
HPLC (procedimiento 1): Tr = 3,19 min;
CL-EM (procedimiento 5): Tr = 1,25 min; EM (lENpos): m/z (%) = 310,9 (95) y 312,9 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 309,0 (100) y 310,9 (70) [M-H]".
RMN 1H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 7,17 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 8,07 (s, 1H).
10 Intermedio 37A
1-{4-[(4-Amino-5-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)metil]piperazin-1-il}-2,2,2-trifluoroetanona
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El compuesto se preparo de acuerdo con el procedimiento descrito en el documento WO 2007/056170-A2 (Ejemplo 416, etapa 6).
15 Intermedio 38A
5-Bromo-7-(morfolin-4-ilmetil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina
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El compuesto se preparo de acuerdo con el procedimiento descrito en el documento WO 2007/064931-A2 (Intermedio C).
20 Intermedio 39A
7-(Morfolin-4-ilmetil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina
imagen57
A una solucion del Intermedio 38A (5,59 g, 17,9 mmol) y bis(pinacolato)diboro (10,0 g, 39,4 mmol) en DMF desgasificado (120 ml) se le anadio, en una atmosfera de argon, cloruro de 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno-paladio (II) (786 mg, 1,07 mmol) y acetato de potasio (7,03 g, 71,6 mmol). La mezcla se calento a 80°C durante 5 h y despues se enfrio a temperatura ambiente. Se anadio ferc-butil metil eter (100 ml) y la suspension se filtro. El filtrado 5 se evaporo a sequedad a presion reducida, y el residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida sobre gel de sflice (elucion de gradiente de metanol del 2 % al 5 % en diclorometano) para dar 1,30 g (20 % del t.) del compuesto del tttulo que contema cierta cantidad del derivado de acido boronico. Este producto se utilizo sin purificacion adicional. CL-EM (procedimiento 6): Tr = 0,73 min; EM (lENpos): m/z (%) = 360,3 (30) [M+H]+.
Intermedio 40A
10 5-[4-({[ferc-butil(dimetil)silil]oxi}metil)-3,5-difluorofenil]-7-(morfolin-4-ilmetil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina
El compuesto del tttulo se obtuvo por el procedimiento sintetico general 1 a partir del Intermedio 38A (200 mg, 0,64 mmol) y acido [4-({[ferc-butil(dimetil)silil]oxi}metil)-3,5-difluorofenil]boronico (314 mg, 0,77 mmol, 74% de pureza; preparado por el procedimiento de Hattori, Bioorg. Med. Chem. 2006, 14, 3258-3262). La purificacion del 15 producto en bruto se llevo a cabo por HPLC preparativa (procedimiento 3). Rendimiento: 110 mg (32 % del t., Pureza de CL-EM 92 %).
CL-EM (procedimiento 6): Tr = 1,18 min; EM (IENpos): m/z (%) = 490,1 (30) [M+H]+, EM (IENneg): m/z (%) = 488,3 (100) [M-H]-.
Intermedio 41A
20 4-[4-amino-7-(morfolin-4-ilmetil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]-2-fluorobenzoato de metilo
El compuesto del tttulo se obtuvo por el procedimiento sintetico general 1 a partir del Intermedio 38A (200 mg, 0,64 mmol) y acido [3-fluoro-4-(metoxicarbonil)fenil]boronico (139 mg, 0,71 mmol). La purificacion del producto en
imagen58
imagen59
O
O
HaC"
imagen60
bruto se llevo a cabo por HPLC preparativa (procedimiento 3). Rendimiento: 80 mg (32 % del t.). CL-EM (procedimiento 6): Tr = 0,66 min; EM (IENpos): m/z (%) = 38,1 (80) [M+H]+.
Intermedio 42A
4-[4-Amino-7-(morfolin-4-ilmetil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]benzaldel'ndo
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O
H
^N
5
A una solucion del Intermedio 38A (300 mg, 0,96 mmol) en DMF desgasificado (9,0 ml) se le anadio acido (4-formilfenil)bor6nico (216 mg, 1,44 mmol), tefraqu/s(trifenilfosfina)paladio (0) (111 mg, 0,1 mmol) y una solucion acuosa de carbonato de sodio 2 M (2,4 ml). La mezcla se calento a 90 °C en argon durante 17 h, despues se enfrio a temperatura ambiente y se purifico directamente por HPLC preparativa (procedimiento 3). Rendimiento: 150 mg 10 (46% del t.).
CL-EM (procedimiento 6): Tr = 0,44 min; EM (IENpos): m/z (%) = 338,2 (30) [M+H]+.
Intermedio 43A
5-Bromo-6-metil-7-(morfolin-4-ilmetil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina
15 El compuesto se preparo de acuerdo con el procedimiento descrito en el documento WO 2007/056170-A2 (Intermedio O).
Intermedio 44A
1-[(4-Aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)metil]piperidin-4-ol
20 Se disolvieron 4-hidroxipiperidina (3,62 g, 35,8 mmol) y una solucion de formalina al 37 % (2,9 g, 35,8 mmol) en
imagen62
NH
NH
imagen63
acido acetico (150 ml) y se agito a temperatura ambiente durante 1 h. A esta solucion se le anadio una solucion de pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina (2,0 g, 14,9 mmol; preparada de acuerdo con el procedimiento descrito en el documento WO 2007/056170-A2, Intermedio A) en acido acetico (150 ml), y la mezcla se agito a 60 °C durante 2 h. Despues, el disolvente se evaporo, y el residuo se tomo en 200 ml de una solucion de bicarbonato de sodio medio 5 concentrada acuosa y se extrajo con 200 ml de diclorometano. La fase organica se lavo con agua (2 x 50 ml) y se descarto. Las fases acuosas combinadas se evaporaron a sequedad, y el residuo se trato con una mezcla 10:1 de diclorometano y metanol (2 x 100 ml). Los extractos organicos se evaporaron y el residuo se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 4) para dar 1,16 g (15 % del t.) del compuesto del tttulo.
CL-EM (procedimiento 7): Tr = 0,18 min; EM (lENpos): m/z (%) = 248,3 (30) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 246,5 10 (100) [M-H]".
RMN 'h (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,35 (a. m, 2H), 1,67 (a. m, 2H), 2,07 (t, 2H), 2,70 (a. m, 2H), 3,38 (a. m, 1H), 3,75 (s, 2H), 4,51 (a. 1H), 6,52 (d, 1H), 6,84 (d, 1H), 7,62 (a. 2H), 7,82 (s, 1H).
Intermedio 45A
1-[(4-Amino-5-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)metil]piperidin-4-ol
15
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El Intermedio 44A (1,10 g, 4,45 mmol) se disolvio en DMF (16,5 ml) y se enfrio a -20 °C. Se anadio 1,3-dibromo-5,5- dimetilhidantoma (636 mg, 2,22 mmol) cada 10 min en aproximadamente porciones de 100 mg. Posteriormente, la mezcla se agito a temperatura ambiente durante una hora adicional y despues se purifico directamente por HPLC preparativa (procedimiento 4). Rendimiento: 0,61 g (42 % del t.).
20 CL-EM (procedimiento 4): Tr = 0,75 min; EM (lENpos): m/z (%) = 326,0 (30) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 324,0 (100) [M-H]-.
RMN 'H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,35 (m a, 2H), 1,67 (m a, 2H), 2,08 (t, 2H), 2,68 (m a, 2H), 3,39 (m a, 1H), 3,74 (s, 2H), 4,51 (a, 1H), 6,69 (s, 1H), 7,86 (s, 1H).
Intermedio 46A
25 1-[(4-Aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)metil]pirrolidin-3-ol
NH
imagen65
Se disolvieron 3-pirrolidinol (1,56 g, 17,9 mmol) y una solucion de formalina 37% (1,45 g, 17,9 mmol) en acido acetico (75 ml) y se agito a temperatura ambiente durante 10 min A esta solucion se le anadio una solucion de pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina (2,0 g, 14,9 mmol) en acido acetico (75 ml), y la mezcla se agito a 60 °C durante 30 4 h. Despues de la evaporacion, el residuo se tomo en 200 ml de una solucion acuosa de carbonato de potasio 1 N y
se extrajo con acetato de etilo (3 x 200 ml). Las fases organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio y se concentraron a presion reducida. El residuo se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 4) para dar 390 mg (11 % del t.) del compuesto del tttulo.
CL-EM (procedimiento 4): Tr = 0,22 min; EM (lENpos): m/z (%) = 234,2 (20) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 223,0 35 (100) [M-H]-.
RMN 'H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,50 (m a, 1H), 1,94 (m, 1H), 2,34 (dd, 1H), 2,44 (dd, 1H), 2,60 (dd, 1H), 2,71 (dd, 1H), 3,84 (dd, 2H), 4,15 (a, 1H), 4,65 (d, 1H), 6,52 (d, 1H), 6,83 (d, 1H), 7,61 (a, 2H), 7,82 (s, 1H).
Intermedio 47A
1-[(4-Amino-5-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)metil]pirrolidin-3-ol
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El Intermedio 46A (0,9 g, 3,86 mmol) se disolvio en DMF (14,2 ml) y se enfrio a -20 °C. Se anadio 1,3-dibromo-5,5- 5 dimetilhidantoma (606 mg, 2,12 mmol) cada 10 min, aproximadamente en porciones de 100 mg, y la agitacion continuo a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla se repartio entre una solucion acuosa de bicarbonato de potasio al 10 % (50 ml) y acetato de etilo (100 ml). La fase acuosa se extrajo con otra porcion de acetato de etilo (100 ml) y despues con diclorometano (100 ml). Las fases organicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron y el residuo se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 4). Rendimiento: 0,44 g 10 (37% del t.).
CL-EM (procedimiento 6): Tr = 0,21 min; EM (lENpos): m/z (%) = 314,0 (100) [M+H]+.
RMN 1H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,50 (m a, 1H), 1,95 (m, 1H), 2,34 (dd, 1H), 2,45 (m, 1H), 2,60 (m, 1H), 2,70 (dd, 1H), 3,84 (dd, 2H), 4,15 (a, 1H), 4,65 (d, 1H), 6,71 (s, 1H), 7,86 (s, 1H).
Intermedio 48A
15 1-[(4-Aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)metil]piperidin-3-ol
imagen67
El compuesto del tftulo se preparo en analogfa al Intermedio 46A con 3-hidroxipiperidina (1,80 g, 17,9 mmol) como material de partida. Despues de la concentracion de la mezcla de reaccion, el residuo se tomo en una solucion saturada acuosa de carbonato de potasio y se extrajo con 300 ml de diclorometano. La fase organica se lavo con 20 salmuera, se seco sobre sulfato de magnesio y se concentro a presion reducida. El residuo se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 4) para dar 650 mg (18 % del t.) del compuesto del tftulo.
CL-EM (procedimiento 6): Tr = 0,16 min; EM (lENpos): m/z (%) = 248,2 (60) [M+H]+.
RMN 1H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 0,99 (m, 1H), 1,37 (m a, 1H), 1,57 (m a, 1H), 1,74 (m, 2H), 1,88 (t, 1H), 2,68 (m a, 1H), 2,83 (a, dd, 1H), 3,41 (m a, 1H), 3,78 (dd, 2H), 4,54 (d, 1H), 6,52 (d, 1H), 6,84 (d, 1H), 7,61 (a, 2H), 25 7,82 (s, 1H).
Intermedio 49A
1-[(4-Amino-5-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)metil]piperidin-3-ol
HO
imagen68
En analog^a a la preparacion del Intermedio 47A, el compuesto del tftulo se preparo a partir del Intermedio 48A (690 mg, 2,79 mmol) para dar 348 mg (93% de pureza por CL-EM, 36% del t.) del producto despues de la purificacion por HPLC preparativa (procedimiento 4).
CL-EM (procedimiento 4): Tr = 0,85 min; EM (IENpos): m/z (%) = 226,0 (100) [M+H]+, EM (IENneg): m/z (%) = 223,9 5 (70) [M-H]-.
RMN 1H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 0,99 (m, 1H), 1,37 (m, 1H), 1,57 (m a, 1H), 1,74 (m, 2H), 1,89 (m, 1H), 2,66 (m a, 1H), 2,81 (m a, 1H), 3,41 (m a, 1H), 3,77 (dd, 2H), 4,54 (d, 1H), 6,70 (s, 1H), 7,86 (s, 1H).
Intermedio 50A
1-({4-Amino-5-[4-({[terc-butil(dimetil)silil]oxi}metil)-3,5-difluorofenil]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il}metil)piperidin-3-ol
imagen69
10
El compuesto del tftulo se obtuvo por el procedimiento sintetico general 1 a partir del Intermedio 49A (200 mg, 0,61 mmol) y acido [4-({[terc-butil(dimetil)silil]oxi}metil)-3,5-difluorofenil]bor6nico (222 mg, 0,74 mmol; preparado por el procedimiento de Hattori, Bioorg. Med. Chem. 2006, 14, 3258-3262). La purificacion del producto en bruto se llevo a cabo por HPLC preparativa (procedimiento 3). Rendimiento: 153 mg (50 % del t.).
15 CL-EM (procedimiento 7): Tr= 1,55 min; EM (IENpos): m/z (%) = 504,1 (100) [M+H]+.
RMN 1H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 0,11 (s, 6H), 0,86 (s, 9H), 1,01 (m, 1H), 1,40 (m a, 1H), 1,59 (m a, 1H), 1,77 (m, 2H), 1,94 (m, 1H), 2,72 (m a, 1H), 2,87 (m a, 1H), 3,43 (m, 1H), 3,82 (dd, 2H), 4,55 (d, 1H), 4,74 (s, 2H), 6,75 (s, 1H), 7,18 (dd, 2H), 7,95 (s, 1H).
Intermedio 51A
20 3-{4-amino-5-[3,5-difluoro-4-(hidroximetil)fenil]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il}pirrolidin-1-carboxilato de rac-terc-butilo
OH
imagen70
La preparacion del material de partida 3-(4-amino-5-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)pirrolidino-1-carboxilato de terc-butilo se ha descrito en el documento WO 2007/056170-A2 (Intermedio I).
Este compuesto (60 mg, 0,16 mmol) se acoplo de acuerdo con el procedimiento sintetico general 1 con el Intermedio 2A (47 mg, 0,17 mmol, 1,1 equiv.). El producto en bruto se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 2) para dar 67 mg (84 % del t.) del compuesto del tttulo.
HPLC (procedimiento 2): Tr = 4,08 min;
5 CL-EM (procedimiento 7): Tr = 1,66 min; EM (lENpos): m/z (%) = 446,2 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 444,3 (100) [M-H]-.
RMN ’H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,39 (s, 9H), 2,10 (m, 1H), 2,33 (m, 1H), 3,37 (m, 2H), 3,46 (m, 1H), 3,703,89 (m, 2H), 4,51 (s, 2H), 6,80 (s, 1H), 7,15 (m, 2H), 8,03 (s, 1H).
Intermedio 52A
10 3-{4-amino-5-[3,5-difluoro-4-(hidroximetil)fenil]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il}-3-hidroxipiperidin-1-carboxilato de rac- terc-butilo
OH
imagen71
CH3
CH3
El Intermedio 26A (148 mg, 0,35 mmol) y (4-bromo-2,6-difluorofenil)metanol (75 mg, 0,34 mmol) se acoplaron de acuerdo con el procedimiento sintetico general 2. La purificacion del producto en bruto se llevo a cabo usando HPLC 15 preparativa (procedimiento 2). Rendimiento: 46 mg (28 % de t.).
HPLC (procedimiento 3): Tr = 3,90 min;
CL-EM (procedimiento 7): Tr = 1,56 min; EM (lENpos): m/z (%) = 476,2 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 474,2 (100) [M-H]-.
RMN *H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,22-1,58 (m, 10H), 1,80 (m, 2H), 3,19 (m, 1H), 3,48 (m, 1H), 3,62 (m, 1H), 20 3,74 (m, 1H), 4,00 (m, 1H), 4,52 (m, 2H), 5,39 (t, 1H), 6,78 (s, 1H), 7,10 (m, 2H), 7,94 (s, 1H).
Intermedio 53A
4-{4-amino-5-[4-(hidroximetil)fenil]pirrolo[2,1 -f][1,2,4]triazin-7-il}piperidin-1 -carboxilato de terc-butilo
OH
imagen72
El material de partida 4-(4-amino-5-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo se
preparo de acuerdo con el procedimiento descrito en el documento WO 2007/056170-A2 (Ejemplo 1, etapa 3).
Despues este compuesto (400 mg, 1,01 mmol) se hizo reaccionar acido 4-(hidroximetil)fenilbor6nico (184 mg, 1,21 mmol, 1,2equiv.) de acuerdo con el procedimiento sintetico general 1. El producto en bruto se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 2) para dar 326 mg (76 % del t.) del compuesto del tttulo.
5 HPLC (procedimiento 2): Tr = 4,07 min;
CL-EM (procedimiento 6): Tr = 1,06 min; EM (lENpos): m/z (%) = 424,3 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 422,3 (100) [M-H]-.
RMN 'h (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,52-1,65 (m, 2H), 1,92-2,00 (m, 2H), 2,89 (s a, 2H), 3,10 (m, 1H), 3,283,37 (m, 2H), 4,06 (d, 2H), 4,60 (s, 2H), 6,68 (s, 1H), 7,47 (s, 5H), 8,02 (s, 1H).
10 Intermedio 54A
3-{4-amino-5-[3,5-difluoro-4-(hidroximetil)fenil]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il}piperidin-1-carboxilato de rac-terc-butilo
OH
imagen73
3
3
El Intermedio 31A (200 mg, 0,39 mmol) y el Intermedio 2A (138 mg, 0,51 mmol, 1,3 equiv.) se hicieron reaccionar de acuerdo con el procedimiento sintetico general 1 produciendo 130 mg (72 % del t.) del compuesto del tttulo despues 15 de la purificacion por HPLC preparativa (procedimiento 2).
HPLC (procedimiento 3): Tr = 4,23 min;
CL-EM (procedimiento 6): Tr = 1,17 min; EM (lENpos): m/z (%) = 460,1 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 458,1 (100) [M-H]'.
RMN 'H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,39 (s, 9H), 1,48 (m, 2H), 1,74 (m, 2H), 2,93 (m, 1H), 3,22 (m, 1H), 3,85 20 (m, 1H), 4,11 (m, 1H), 4,53 (s, 2H), 6,78 (s, 1H), 7,12 (m, 2H), 8,02 (s, 1H).
Intermedio 55A
(3R)-3-{4-amino-5-[3,5-difluoro-4-(hidroximetil)fenil]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il}piperidin-1-carboxilato de terc-butilo
OH
imagen74
CH3
CH,
5
10
15
20
25
30
El isomero R enantiomericamente puro se sintetizo por el acoplamiento del Intermedio 32A (115 mg, 0,28 mmol) con (4-bromo-2,6-difluorofenil)metanol (76 mg, 0,33 mmol, 1,2 equiv.) de acuerdo con el procedimiento sintetico general 2. Rendimiento: 48 mg (38 % del t.).
Alternativamente, el compuesto del tftulo se obtuvo por la separacion del compuesto racemico del Intermedio 54A (40 mg) usando HPLC quiral preparativa [columna: fase quiral en gel de sflice basada en el selector poli(N- metacriloil-L-leucina-ferc-butilamida), 250 mm x 20 mm; eluyente: acetato de etilo/isohexano 4:1; caudal de flujo: 20 ml/min; deteccion UV: 260 nm]. Rendimiento: 20 mg (isomero R).
HPLC quiral analttica [columna: fase quiral en gel de sflice basada en el selector poli(N-metacriloil-L-leucina-ferc- butilamida), 250 mm x 4 mm; eluyente: acetato de etilo/isohexano 4:1; caudal de flujo: 1 ml/min; deteccion UV: 260 nm]: Tr = 5,68 min; e.e. >99.5.
HPLC (procedimiento 3): Tr = 4,23 min;
CL-EM (procedimiento 6): Tr = 1,17 min; EM (lENpos): m/z (%) = 460,1 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 458,1 (100) [M-H]-.
RMN 'h (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,39 (s, 9H), 1,48 (m, 2H), 1,74 (m, 2H), 2,93 (m, 1H), 3,22 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 4,11 (m, 1H), 4,53 (s, 2H), 6,78 (s, 1H), 7,12 (m, 2H), 8,02 (s, 1H).
Intermedio 56A
(3S)-3-{4-amino-5-[3,5-difluoro-4-(hidroximetil)fenil]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il}piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo
OH
imagen75
imagen76
CH,
3
El isomero S enantiomericamente puro se obtuvo por la separacion del compuesto racemico del Intermedio 54A (40 mg) usando HPLC quiral preparativa como se describe para el Intermedio 55A. Rendimiento: 19 mg (isomero S).
HPLC quiral analttica [columna: fase quiral en gel de sflice basada en el selector poli(N-metacriloil-L-leucina-ferc- butilamida), 250 mm x 4 mm; eluyente: acetato de etilo/isohexano 4:1; caudal de flujo: 1 ml/min; deteccion UV: 260 nm]: Tr = 7,87 min; e.e. >99,5.
HPLC (procedimiento 3): Tr = 4,23 min;
CL-EM (procedimiento 6): Tr = 1,17 min; EM (IENpos): m/z (%) = 460,1 (100) [M+H]+, EM (IENneg): m/z (%) = 458,1 (100) [M-H]-.
RMN 'H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,39 (s, 9H), 1,48 (m, 2H), 1,74 (m, 2H), 2,93 (m, 1H), 3,22 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 4,11 (m, 1H), 4,53 (s, 2H), 6,78 (s, 1H), 7,12 (m, 2H), 8,02 (s, 1H).
Intermedio 57A
[2-Fluoro-6-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil]metanol
imagen77
F
O
O
H3C^_
_^-CH
H3C
CH3
5
10
15
20
25
Se disolvio (4-bromo-2-fluoro-6-metilfenil)metanol (2,0 g, 9,13 mmol) en 1,4-dioxano (20,0 ml) en un vial reactor de microondas, y la solucion se enjuago con argon. Despues, se anadieron bis(pinacolato)diboro (2,43 g, 9,59 mmol), cloruro de 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno-paladio (II) (298 mg, 0,37 mmol) y acetato de potasio (1,34 g, 13,7 mmol). Al recipiente de reaccion se le coloco una tapa engastada, y la mezcla se calento a 130 °C durante 1 h en un dispositivo de microondas de modo unico. Despues del enfriamiento, la mezcla de reaccion se filtro y el filtrado se evaporo. El residuo se trato con ciclohexano (100 ml) y se agito durante 10 min. La solucion se filtro de nuevo, el filtrado se evaporo y el residuo se purifico por cromatograffa (cartucho de sflice de 25M de Biotage, caudal de flujo diclorometano a 15 ml/min). Las fracciones que conteman el compuesto del tftulo se combinaron y se evaporaron, y el compuesto del tftulo cristalizo espontaneamente en forma de un solido de color amarillo (2,18 g, 90 % del t.).
RMN 1H (400 MHz, DMSO-de): 6 (ppm) = 1,30 (s, 12H), 2,39 (s, 3H), 4,51 (m, 2H), 5,01 (t, 1H), 7,14 (d, 1H), 7,31 (s, 1H).
Intermedio 58A
[2-Etil-6-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil]metanol
imagen78
H3C CH3
El compuesto del tftulo se sintetizo y purifico en analogfa al Intermedio 57A usando (4-bromo-2-etil-6- fluorofenil)metanol (2,00 g, 8,58 mmol), bis(pinacolato)diboro (2,29 g, 9,01 mmol), cloruro de 1,1'- bis(difenilfosfino)ferroceno-paladio (II) (280 mg, 0,34 mmol) y acetato de potasio (1,26 g, 12,87 mmol) en 1,4-dioxano (20 ml). Rendimiento: 2,16 g (90 % del t.) como cristales amarillos.
RMN 1H (400 MHz, DMSO-de): 6 (ppm) = 1,17 (t, 3H), 1,30 (s, 12H), 2,76 (q, 2H), 4,50 (m, 2H), 5,03 (t, 1H), 7,14 (d, 1H), 7,32 (s, 1H).
Intermedio 59A
[2-Fluoro-6-metoxi-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil]metanol
.OH
H3C
imagen79
F
o'B'o
HgC^___L-'CH-.
H C CH
El compuesto del tftulo se sintetizo y purifico en analogfa al Intermedio 57A usando (4-bromo-2-metoxi-6- fluorofenil)metanol (2,00 g, 8,51 mmol), bis(pinacolato)diboro (2,27 g, 8,90 mmol), cloruro de 1,1'-
bis(difenilfosfino)ferroceno-paladio (II) (278 mg, 0,34 mmol) y acetato de potasio (1,25 g, 12,76 mmol) en 1,4-dioxano (20 ml). Rendimiento: 1,81 g (75 % del t.) como cristales amarillos.
RMN 1H (400 MHz, DMSO-de): 6 (ppm) = 1,30 (s, 12H), 3,83 (s, 3H), 4,47 (m, 2H), 4,86 (t, 1H), 6,97 (d, 1H), 7,02 (s, 1H).
5
10
15
20
25
imagen80
Se disolvio 7-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina (1,20 g, 5,63 mmol) en THF (25 ml) en argon a temperatura ambiente. Se anadio clorotrimetilsilano (1,43 ml, 11,27 mmol) y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 3 h. Despues, se enfrio a 0 °C, se anadio cloruro de 2-propil magnesio (11,8 ml de una solucion 2,0 M en THF, 23,7 mmol), y la agitacion se mantuvo durante otras 3 h mientras que la mezcla de reaccion se dejo calentar a temperatura ambiente. Despues, se anadio ciclohexanona (0,88 ml, 8,45 mmol), y la agitacion continuo durante 16 h. La reaccion se inactivo con una mezcla (1:1) de una solucion concentrada acuosa de cloruro de amonio y hielo hasta que el pH alcanzo 6-7. La mezcla se extrajo con dos porciones de acetato de etilo, y los extractos organicos combinados se secaron sobre carbonato de sodio anhidro y se concentraron a sequedad. El producto obtenido de esta manera se utilizo sin purificacion adicional (pureza ~68 % por HPLC). Rendimiento: 1,87 g (97 % del t.).
CL-EM (procedimiento 5): Tr = 1,10 min; EM (lENpos): m/z (%) = 233 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 231 (100) [M-H]'.
RMN *H (400 MHz, DMSO-de): 6 (ppm) = 1,28-1,33 (m, 1H), 1,42-1,50 (m, 2H), 1,58-1,63 (m, 1H), 1,67-1,78 (m, 4H), 2,13-2,23 (m, 2H), 6,69 (d, 1H), 7,20 (d, 1H), 8,02 (s, 1H), 8,58 (s a, 1H), 9,00 (s a, 1H).
Intermedio 61A
1-(4-Amino-5-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)ciclohexanol
imagen81
El Intermedio 60A (80 mg, 0,34 mmol) se disolvio en THF (5,0 ml), y la mezcla se enfrio a -20 °C. Se anadio 1,3- dibromo-5,5-dimetilhidantoma (49 mg, 0,17 mmol) de una vez y la agitacion continuo durante 1 h. La reaccion se inactivo con una solucion concentrada acuosa de ditionito de sodio (0,5 ml), y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. El extracto organico se lavo con salmuera, se seco sobre sulfato de sodio y el disolvente se retiro por destilacion para dar 98 mg (91 % del t.) del compuesto del tttulo.
CL-EM (procedimiento 4): Tr = 1,90 min; EM (lENpos): m/z (%) = 311 (95) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 309 (90) [M-H]-.
RMN 1H (400 MHz, DMSO-de): 6 (ppm) = 1,20-1,33 (m, 1H), 1,42-1,52 (m, 2H), 1,58-1,78 (m, 5H), 2,15-2,23 (m, 2H), 5,01 (s a, 2H), 6,63 (s, 1H), 7,82 (s, 1H).
imagen82
El Intermedio 33A (109 mg, 0,38 mmol) y (2-amino-2-tioxoetil)carbamato de ferc-butilo (79 mg, 0,41 mmol) se 5 disolvieron en etanol (6,5 ml). La mezcla se calento a reflujo durante 20 h. Despues, la mezcla se filtro y el filtrado se evaporo. El residuo se trituro con acetonitrilo para dar 67 mg (42 % del t.) del compuesto del tftulo en forma de un solido cristalino de color parduzco-gris.
CL-EM (procedimiento 7): Tr = 1,81 min; EM (lENpos): m/z (%) = 425 (80) y 427 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 423 (50) y 425 (100) [M-H]-.
10 Intermedio 63A
3-{4-amino-5-[3-fluoro-4-(hidroximetil)-5-metoxifenil]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il}piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo
OH
imagen83
CH
3
3
El Intermedio 31A (120 mg, 0,30 mmol) y el Intermedio 59A (104 mg, 0,36 mmol) se disolvieron en acetonitrilo (2,0 ml) en un vial reactor de microondas y se enjuagaron con argon. Se anadieron fefragu/s(trifenilfosfina)paladio (0) 15 (35 mg, 0,03 mmol) y una solucion ac. de carbonato de sodio 2,0 M (0,5 ml), y la mezcla se calento a 150 °C durante
1 h en un dispositivo de microondas de modo unico. Despues del enfriamiento, la mezcla se filtro y el filtrado se evaporo. El residuo se purifico por cromatografta ultrarrapida (cartucho de sflice de 25M de Biotage, diclorometano + metanol 2-5 %, caudal de flujo 10 ml/min) para dar 51 mg (36 % del t.) del compuesto del tftulo.
CL-EM (procedimiento 6): Tr = 1,16 min; EM (lENpos): m/z (%) = 472 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 470 20 (100) [M-H]-.
RMN ^H (400 MHz, DMSO-d6): 6 (ppm) = 1,31-2,10 (m, 13H), 2,88-2,91 (m, 2H), 3,19-3,27 (m, 2H), 3,87 (s, 1H), 4,12 (m, 1H), 4,50 (m, 1H), 4,82 (t, 1H), 6,68 (s, 1H), 6,83 (d, 1H), 6,90 (s, 1H), 7,92 (s, 1H).
OH
imagen84
CH
3
3
El Intermedio 31A (120 mg, 0,30 mmol) y el Intermedio 57A (97 mg, 0,36 mmol) se disolvieron en acetonitrilo (2,0 ml) 5 en un vial reactor de microondas y se enjuagaron con argon. Se anadieron fefragu/s(trifenilfosfina)paladio (0) (35 mg, 0,03 mmol) y una solucion ac. de carbonato de sodio 2,0 M (0.5 ml) y la mezcla se calento a 150 °C durante 1 h en un dispositivo de microondas de modo unico. Despues del enfriamiento, la mezcla se filtro y el filtrado se evaporo. El residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida (cartucho de sflice de 25M de Biotage, diclorometano + metanol 25 %, caudal de flujo 10 ml/min) para dar 110 mg (71 % del t.) del compuesto del tttulo.
10 CL-EM (procedimiento 4): Tr = 2,03 min; EM (lENpos): m/z (%) = 456 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 454 (100) [M-H]-.
RMN ^H (400 MHz, DMSO-d6): 6 (ppm) = 1,31-2,11 (m, 13H), 2,42 (s, 3H), 2,88-2,91 (m, 2H), 3,17-3,30 (m, 2H),
3,80 (m, 1H), 4,54 (m, 1H), 4,82 (t, 1H), 6,64 (s, 1H), 7,04 (d, 1H), 7,12 (s, 1H), 7,93 (s, 1H).
Intermedio 65A
15 3-{4-amino-5-[3-fluoro-4-(hidroximetil)-5-metilfenil]pirrolo[2,1 -f][1,2,4]triazin-7-il}pirrolidin-1 -carboxilato de ferc-butilo
OH
imagen85
3
3
El material de partida 3-(4-amino-5-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)pirrolidin-1-carboxilato de ferc-butilo se sintetizo de acuerdo con el procedimiento descrito en el documento WO 2007/056170-A2 (Intermedio I).
5
10
15
20
25
30
Se disolvio 3-(4-amino-5-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (120 mg,
0,31 mmol) en acetonitrilo (2,2 ml) en un vial reactor de microondas y se enjuagaron con argon. Se anadieron el Intermedio 57A (100 mg, 0,38 mmol), tetragu/s(trifenilfosfina)paladio (0) (36 mg, 0,03 mmol) y una solucion ac. de carbonato de sodio 2,0 M (0,5 ml), y la mezcla se calento a 150 °C durante 1 h en un dispositivo de microondas de modo unico. Despues del enfriamiento, la mezcla se filtro y el filtrado se evaporo. El residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida (cartucho de sflice de 25M de Biotage, diclorometano + metanol 2-5 %, caudal de flujo 10 ml/min) para dar 91 mg (54 % del t.) del compuesto del tttulo.
CL-EM (procedimiento 5): Tr = 2,00 min; EM (lENpos): m/z (%) = 442 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 440 (100) [M-H]'.
RMN *H (400 MHz, DMSO-de): 6 (ppm) = 1,41 (m, 9H), 2,00-2,48 (m, 2H), 3,29-3,53 (m, 3H), 3,71-3,90 (m, 2H), 4,55 (m, 2H), 4,99 (t, 1H), 6,63 (s, 1H), 7,06 (d, 1H), 7,12 (s, 1H), 7,92 (s, 1H).
Intermedio 66A
3-{4-amino-5-[3-etil-5-fluoro-4-(hidroximetil)fenil]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il}pirrolidin-1-carboxilato de rac-terc-butilo
imagen86
O
El material de partida 3-(4-amino-5-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo se sintetizo de acuerdo con el procedimiento descrito en el documento WO 2007/056170-A2 (Intermedio I).
Se disolvieron 3-(4-amino-5-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (111 mg, 0,29 mmol), el Intermedio 58A (98 mg, 0,35 mmol) y tetragu/s(trifenilfosfina)paladio (0) (17 mg, 0,015 mmol) en una mezcla de acetonitrilo (2,3 ml) y una solucion acuosa de carbonato de sodio 2 M (0,53 ml) en un vial reactor de microondas. Despues de la desgasificacion durante 5 min usando argon, al recipiente de reaccion se le coloco una tapa engastada, y la mezcla se calento a 150 °C durante 1 h en un dispositivo de microondas de modo unico. Despues del enfriamiento a temperatura ambiente, se anadio una solucion saturada acuosa de bicarbonato de sodio, y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. Las fases organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron. El residuo se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 5). Rendimiento: 83 mg (63 % del t.).
HPLC (procedimiento 9): Tr= 1,61 min;
CL-EM (procedimiento 10): Tr= 1,02 min; EM (IENpos): m/z (%) = 456,4 (100) [M+H]+, EM (IENneg): m/z (%) = 454,4 (100) [M-H]'.
RMN 1H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,22 (t, 3H), 1,41 (s, 9H), 2,1 (m, 1H), 2,80 (q, 2H), 3,30-3,43 (m, 2H), 3,443,51 (m, 1H), 3,78 (m, 1H), 4,55 (d, 2H), 5,00 (t, 1H), 6,68 (s, 1H), 7,09 (d, 1H), 7,15 (s, 1H), 7,95 (s, 1H).
imagen87
El Intermedio 31A (148 mg, 0,29 mmol), el Intermedio 58A (98 mg, 0,35 mmol) y tetragu/s(trifenilfosfina)paladio (0) 5 (17 mg, 0,015 mmol) se disolvieron en una mezcla de acetonitrilo (2,3 ml) y una solucion acuosa de carbonato de
sodio 2 M (0,67 ml) en un vial reactor de microondas. Despues de la desgasificacion durante 5 min usando argon, al recipiente de reaccion se le coloco una tapa engastada y la mezcla se calento a 150 °C durante 1 h en un dispositivo de microondas de modo unico. Despues el enfriamiento a temperatura ambiente, se anadio una solucion saturada acuosa de bicarbonato de sodio y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. Las fases organicas combinadas se 10 secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron. El residuo se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 5). Rendimiento: 105 mg (76 % del t.).
HPLC (procedimiento 9): Tr= 1,71 min;
CL-EM (procedimiento 10): Tr= 1,08 min; EM (lENpos): m/z (%) = 470,4 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 468,4 (75) [M-H]-.
15 RMN 1H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,22 (t, 3H), 1,38 (s, 9H), 1,50 (m, 1H), 1,65-1,90 (m, 2H), 2,06 (m, 1H),
2,80 (q, 2H), 2,98 (m, 1H), 3,20-3,43 (m, 2H), 3,8 (m, 1H), 4,08 (m, 1H), 4,55 (d, 2H), 5,02 (t, 1H), 6,65 (s, 1H), 7,07 (d, 1H), 7,13 (s, 1H), 7,93 (s, 1H).
Intermedio 68A
4-{4-amino-7-[ciclopropil(hidroxi)metil]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}-2-metoxibenzoato de rac-metilo
O
imagen88
20
El Intermedio 17A (250 mg, 0,88 mmol), acido [3-metoxi-4-(metoxicarbonil)fenil]boronico (223 mg, 1,06 mmol) y tetragu/s(trifenilfosfina)paladio (0) (102 mg, 0,088 mmol) se disolvieron en una mezcla de 1,4-dioxano (5,5 ml) y una
solucion acuosa de carbonato de sodio 2 M (1,32 ml) en argon y se calentaron a reflujo durante 16 h. Despues, se anadio otra porcion de tefraqu/s(trifenilfosfina)paladio (0) (102 mg, 0,088 mmol) y el calentamiento continuo durante otras 24 h. Despues el enfriamiento a temperature ambiente, la mezcla de reaccion se filtro, el filtrado se concentro y el residuo se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 7). Rendimiento: 130 mg (80 % de pureza, 32 % del t.).
5 CL-EM (procedimiento 10): Tr= 0,80 min; EM (lENpos): m/z (%) = 369,3 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 367,3 (75) [M-H]-.
RMN 1H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 0,41 (m, 3H), 0,49 (m, 1H), 1,37 (m, 1H), 3,81 (s, 3H), 4,68 (d, 1H), 6,92 (s, 1H), 7,13 (dd, 1H), 7,22 (d, 1H), 7,77 (d, 1H), 8,05 (s, 1H).
Intermedio 69A
10 7-(Prop-1-en-2-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina
NH
imagen89
El material de partida 7-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina se sintetizo de acuerdo con el procedimiento descrito en el documento WO 2007/056170-A2 (Intermedio B).
En una atmosfera de argon, se disolvieron 7-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina (426 mg, 2 mmol) y 4,4,5,515 tetrametil-2-(prop-1-en-2-il)-1,3,2-dioxaborolano (420 mg, 2,5 mmol) en una mezcla de 1,2-dimetoxietano (10 ml) y una solucion acuosa de carbonato de sodio (2 M, 4 ml). La mezcla de reaccion se desgasifico, y se anadio cloruro de 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenopaladio (II) (73 mg, 0,1 mmol). Despues de la agitacion a 90 °C durante toda la noche, la mezcla de reaccion se diluyo con acetato de etilo (40 ml), se anadio agua (10 ml) y las fases se separaron. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 40 ml), y las fases organicas combinadas se secaron sobre sulfato 20 de sodio, se filtraron y se concentraron. El residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida (puriFlash, Interchim, ciclohexano/acetato de etilo 1:1 a gradiente de acetato de etilo 100 %) para producir el producto del tttulo como un solido ligeramente amarillo. Rendimiento: 304 mg (81 % del t.).
HPLC (procedimiento 10): Tr = 0,83 min;
CL-EM (procedimiento 10): Tr = 0,57 min; EM (IENpos): m/z (%) = 175,1 (100) [M+H]+.
25 RMN 1H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 2,15 (s, 3H), 5,22 (m, 1H), 6,30 (m, 1H), 6,73 (d, 1H), 6,91 (d, 1H), 7,69 (m, 1H), 7,91 (s, 1H).
Intermedio 70A
7-Isopropilpirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina
imagen90
30 El Intermedio 69A (149 mg, 0,86 mmol) se disolvio en una mezcla de etanol y acetato de etilo (1:1,40 ml) en argon. Se anadio paladio sobre carbon vegetal (10 %, 9,1 mg), y la mezcla se agito vigorosamente durante 16 h en una atmosfera de hidrogeno a presion ambiente y temperatura ambiente. Despues, el catalizador se retiro por filtracion, y el disolvente se retiro por destilacion a presion reducida para dar 131 mg (80 % del t.) del compuesto del tftulo como un solido incoloro. Este producto se utilizo en la proxima etapa sintetica sin purificacion adicional.
35 HPLC (procedimiento 10): Tr = 0,81 min;
CL-EM (procedimiento 10): Tr = 0,56 min; EM (IENpos): m/z (%) = 177,0 (100) [M+H]+.
RMN 1H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,27 (d, 6H), 3,36 (m, 1H), 6,41 (d, 1H), 6,80 (d, 1H), 7,48-7,59 (m, 2H),
7,80 (s, 1H).
5
10
15
20
25
imagen91
El Intermedio 70A (125 mg, 0,71 mmol) se disolvio en THF seco (21 ml) y se enfrio a -78 °C. Se anadio 1,3-dibromo- 5,5-dimetilhidantoma (81 mg, 0,28 mmol) en dos porciones iguales. La mezcla de reaccion se agito a -78 °C durante 1 h y despues se dejo calentar a temperatura ambiente durante toda la noche. Despues de la adicion de agua (20 ml) y la agitacion adicional durante 20 min, el solido precipitado se recogio por filtracion y se seco al vado. El producto en bruto obtenido de esta manera (209 mg, >100% del t.) se utilizo en la proxima etapa sintetica sin purificacion adicional.
HPLC (procedimiento 9): Tr = 1,35 min.
CL-EM (procedimiento 10): Tr = 0,91 min; EM (lENpos): m/z (%) = 257,0 (100) [M+H]+.
Intermedio 72A
rac-1-(4-Amino-5-bromopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)etanol
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N
El Intermedio 16A (500 mg, 1,66 mmol) se suspendio en THF (10 ml) y se enfrio a 0 °C. Se anadio una solucion de bromuro de metil magnesio (3 N en eter de dietilo, 1,7 ml), y la mezcla de reaccion se agito durante 30 min. Despues, se anadio una solucion saturada acuosa de cloruro de amonio, y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (2 x 20 ml). Las fases organicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron para producir 235 mg (46 % del t.) del producto del tttulo que se utilizo en la proxima etapa sintetica sin purificacion adicional.
CL-EM (procedimiento 5): Tr = 0,73 min; EM (lENpos): m/z (%) = 259,1 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 257,1 (100) [M-H]'.
RMN *H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,41 (d, 3H), 5,16 (m, 1H), 5,30 (m, 1H), 6,70 (s, 1H), 7,85 (s, 1H). Ejemplos de Preparacion:
Ejemplo 1
[4-(4-Amino-7-propilpirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il)fenil]metanol
OH
imagen93
5
10
15
20
25
30
El compuesto del tftulo se obtuvo por el procedimiento sintetico general 1 a partir del Intermedio 11A (100 mg, 0,39 mmol) y acido 4-(hidroximetil)fenilbor6nico (60 mg, 0,39 mmol). La purificacion del producto en bruto se llevo a cabo por HPLC preparativa (procedimiento 2). Rendimiento: 33 mg (30 % del t.).
HPLC (procedimiento 1): Tr = 3,47 min; HPlC (procedimiento 2): Tr = 3,78 min;
CL-EM (procedimiento 4): Tr = 0,91 min; EM (lENpos): m/z (%) = 283,2 (100) [M+H]+.
RMN 1H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 0,97 (t, J = 7,4 Hz, 3H), 1,71 (m, 2H), 3,31 (s, 2H), 4,52 (s, 2H), 6,54 (s, 1H), 7,42 (s, 4H), 7,89 (s, 1H).
Ejemplo 2
[4-(4-Amino-7-propilpirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il)-2,6-difluorofenil]metanol
OH
imagen94
El compuesto del tftulo se obtuvo por el procedimiento sintetico general 2 a partir del Intermedio 11A (118 mg, 0,46 mmol) y (4-bromo-2,6-difluorofenil)metanol (108 mg, 0,49 mmol). La purificacion del producto en bruto se llevo a cabo por HPLC preparativa (procedimiento 2). Rendimiento: 59 mg (40 % del t.).
HPLC (procedimiento 2): Tr = 3,94 min;
CL-EM (procedimiento 7): Tr = 1,47 min; EM (lENpos): m/z (%) = 319,3 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 317,3 (100) [M-H]'.
RMN 'H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 0,95 (t, 3H), 1,71 (m, 2H), 4,52 (m, 2H), 5,26 (t, 1H), 6,64 (s, 1H), 7,10 (m, 2H), 7,91 (s, 1H).
Ejemplo 3
3-{4-Amino-5-[4-(hidroximetil)fenil]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il}propan-1-ol
OH
imagen95
El compuesto del tftulo se obtuvo a partir del Intermedio 10A (100 mg, 0,37 mmol) y acido 4-(hidroxi- metil)fenilboronico (67 mg, 0,44 mmol, 1,2 equiv.) de acuerdo con el procedimiento sintetico general 1. El producto en bruto se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 2) para dar 73 mg (66 % del t.) del compuesto del tftulo en forma de solido incoloro.
HPLC (procedimiento 1): Tr = 2,91 min; HPLC (procedimiento 2): Tr = 3,14 min;
CL-EM (procedimiento 6): Tr = 0,60 min; EM (lENpos): m/z (%) = 299,3 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 297,4 (100) [M-H]'.
RMN 'h (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,84 (m, 2H), 2,95 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 3,50 (m, 2H), 4,58 (s, 2H), 6,67 (s, 1H), 7,41 (s, 4H), 8,03 (s, 1H).
OH
imagen96
El compuesto del tftulo se obtuvo por el procedimiento sintetico general 1 a partir del Intermedio 14A (75 mg, 5 0,26 mmol) y acido 4-(hidroximetil)fenilbor6nico (48 mg, 0,32 mmol). La purificacion del producto en bruto se llevo a
cabo por HPLC preparativa (procedimiento 2). Rendimiento: 66 mg (80 % del t.).
HPLC (procedimiento 2): Tr = 3,28 min;
CL-EM (procedimiento 6): Tr = 0,68 min; EM (lENpos): m/z (%) = 313,3 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 311,2 (100) [M-H]-.
10 RMN ’H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,48-1,51 (m, 2H), 1,67-1,70 (m, 2H), 2,91 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 3,42 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 4,58 (s, 2H), 6,67 (s, 1H), 7,42 (s, 4H), 8,03 (s, 1H).
Ejemplo 5
{4-Amino-5-[3,5-difluoro-4-(hidroximetil)fenil]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il}(ciclopropil)metanol
OH
imagen97
15 El compuesto del tftulo se obtuvo a partir del Intermedio 17A (125 mg, 0,44 mmol) y el Intermedio 2A (114 mg, 0,53 mmol) por el procedimiento sintetico general 1. El producto en bruto se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 3). Rendimiento: 73 mg (48 % del t.).
CL-EM (procedimiento 7): Tr = 1,09 min; EM (lENpos): m/z (%) = 347,3 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 345,3 (100) [M-H]-.
20 RMN *H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 0,39 (m, 3H), 0,48 (m, 1H), 1,35 (m, 1H), 4,54 (d, 2H), 4,67 (m, 1H), 5,26 (m, 2H), 6,80 (s, 1H), 7,14 (m, 2H), 7,92 (s, 1H).
5
10
15
20
imagen98
El compuesto del tftulo se obtuvo a partir del Intermedio 18A (200 mg, 0,61 mmol) y el Intermedio 2A (158 mg, 0,73 mmol) por el procedimiento sintetico general 1. El producto en bruto se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 3). Rendimiento: 125 mg (52 % del t.).
CL-EM (procedimiento 5): Tr = 1,29 min; EM (lENpos): m/z (%) = 391,1 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 389,0 (100) [M-H]-.
RMN 'H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,24 (a, d, 1H), 1,36 (m, 2H), 1,68 (a, d, 1H), 2,03 (m, 1H), 2,60 (t, 2H), 3,82 (m, 2H), 4,54 (s, 2H), 4,95 (a, d, 1H), 5,28 (a, 1H), 5,33 (a, 1H), 6,73 (s, 1H), 7,14 (m, 2H), 7,93 (s, 1H).
Ejemplo 7
frans-4-{4-Amino-5-[3,5-difluoro-4-(hidroximetil)fenil]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il}ciclohexanol
OH
imagen99
HO
El compuesto del tftulo se obtuvo por el procedimiento sintetico general 1 a partir del Intermedio 24A (323 mg, 85 % de pureza, 0,88 mmol) y el Intermedio 1A (286 mg, 1,06 mmol, 1,2 equiv.). La purificacion del producto en bruto se llevo a cabo en primer lugar por cromatograffa ultrarrapida (cartucho empacado de sflice de Biotage, eluyente diclorometano/metanol 95:5). Se llevo a cabo una purificacion adicional por HPLC preparativa (procedimiento 2). Rendimiento: 72 mg (21 % del t.).
HPLC (procedimiento 2): Tr = 3,37 min;
CL-EM (procedimiento 7): Tr = 1,01 min; EM (IENpos): m/z (%) = 375,3 (100) [M+H]+, EM (IENneg): m/z (%) = 373,3 (100) [M-H]-.
RMN 'h (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,32 (m, 2H), 1,50 (m, 2H), 1,98 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 3,04 (tt, 1H), 3,47 (m, 1H), 4,51 (m, 2H), 4,61 (d, 1H), 5,26 (t, 1H), 6,60 (s, 1H), 7,12 (m, 2H), 7,91 (s, 1H).
5
10
15
20
25
rac-{4-[4-Amino-7-(pirrolidin-3-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]-2,6-difluorofenil}metanol
OH
imagen100
El Intermedio 51A (67 mg, 0,15 mmol) se disolvio en una solucion al 30 % de acido trifluoroacetico en diclorometano (6 ml) a 0 °C. La mezcla de reaccion se agito a esta temperatura durante 20 min, despues, todos los volatiles se retiraron a presion reducida. El residuo se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 2). El producto obtenido de esta manera se disolvio en acetato de etilo y se lavo con una solucion saturada acuosa de carbonato de sodio. La fase organica se seco sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se retiro por destilacion para dar 21 mg (41 % del t.) del compuesto del tttulo.
HPLC (procedimiento 2): Tr = 2,96 min;
CL-EM (procedimiento 6): Tr = 0,34 min; EM (lENpos): m/z (%) = 346,1 (20) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 344,2 (100) [M-H]".
RMN ’H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,94 (m, 1H), 2,22 (m, 1H), 2,94 (m, 1H), 3,00-3,16 (m, 2H), 3,40 (m, 2H), 3,72 (m, 1H), 4,51 (s, 2H), 5,22 (s a, 1H), 6,71 (s, 1H), 7,11 (m, 2H), 7,92 (s, 1H).
Ejemplo 9
rac-3-{4-Amino-5-[3,5-difluoro-4-(hidroximetil)fenil]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il}piperidin-3-ol
OH
imagen101
El Intermedio 52A (46 mg, 0,10 mmol) se disolvio en una solucion al 30 % de acido trifluoroacetico en diclorometano (1,5 ml) a 0 °C. La mezcla de reaccion se agito a esta temperatura durante 30 min, despues, todos los volatiles se retiraron a presion reducida. El residuo se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 2). El producto obtenido de esta manera se disolvio en acetato de etilo y se lavo con una solucion saturada acuosa de carbonato de sodio. La fase organica se seco sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se retiro por destilacion para dar 20 mg (55 % del t.) del compuesto del tttulo.
HPLC (procedimiento 2): Tr = 2,94 min;
CL-EM (procedimiento 4): Tr = 1,01 min; EM (lENpos): m/z (%) = 358,1 (100) [M-H2O+H]+, EM (lENneg): m/z (%) =
Ejemplo 10
5 {4-[4-Amino-7-(piperidin-4-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]fenil}metanol
OH
imagen102
El Intermedio 53A (324 mg, 0,77 mmol) se disolvio en diclorometano (15 ml). Se anadio acido trifluoroacetico (1,5 ml) y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 16 h. Se anadio otra porcion de acido trifluoroacetico (1,5 ml), y la agitacion continuo hasta que HPLC (procedimiento 1) indico la conversion completa del material de partida. 10 Despues, todos los volatiles se retiraron a presion reducida y el residuo se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 1) para dar 226 mg (91 % del t.) del compuesto del tttulo.
HPLC (procedimiento 1): Tr = 3,37 min; HPLC (procedimiento 2): Tr = 2,90 min;
CL-EM (procedimiento 4): Tr = 0,90 min; EM (lENpos): m/z (%) = 324,1 (75) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 322,2 (100) [M-H]-
15 RMN *H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,79-1,95 (m, 2H), 2,16-2,23 (m, 2H), 3,05-3,19 (m, 2H), 3,37-3,52 (m, 3H), 4,56 (s, 2H), 5,49 (s, 2H), 6,66 (s, 1H), 7,43 (s, 4H), 8,03 (s, 1H), 8,39-8,50 (m, 1H), 8,65-8,69 (m, 1H).
Ejemplo 11
(4-{4-Amino-7-[(3R)-piperidin-3-il]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}-2,6-difluorofenil)metanol
OH
imagen103
20 El Intermedio 55A (35 mg, 0,08 mmol) se disolvio en una solucion al 30 % de acido trifluoroacetico en diclorometano (1,5 ml) a 0 °C. La mezcla de reaccion se agito a esta temperatura durante 30 min, despues, todos los volatiles se retiraron a presion reducida. El residuo se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 2). El producto obtenido de
esta manera se disolvio en acetato de etilo y se lavo con una solucion saturada acuosa de carbonato de sodio. La fase organica se seco sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se retiro por destilacion para dar 18 mg (66 % del t.) del compuesto del tttulo.
HPLC (procedimiento 2): Tr = 3,10 min;
5 CL-EM (procedimiento 6): Tr = 0,55 min; EM (IENpos): m/z (%) = 360,2 (20) [M+H]+, EM (IENneg): m/z (%) = 358,3 (100) [M-H]".
RMN ’H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,67 (m, 2H), 1,83 (m, 1H), 2,75 (m, 1H), 2,86 (m, 1H), 3,20 (d, 1H), 3,41 (m, 2H), 4,53 (m, 2H), 5,29 (t, 1H), 6,70 (s, 1H), 7,11 (m, 1H), 7,94 (s, 1H). [a]^ = +16,8° (c = 0,515, metanol).
Ejemplo 12
10 (4-{4-Amino-7-[(3S)-piperidin-3-il]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}-2,6-difluorofenil)metanol
OH
imagen104
El compuesto del tttulo se obtuvo a partir del Intermedio 56A (19 mg, 0,04 mmol) por el mismo procedimiento que se describe para la conversion del Intermedio 55A al Ejemplo 11. Rendimiento: 12 mg (81 % del t.).
Los datos de HPLC, CL-EM y RMN 1H fueron identicos a los mostrados para el Ejemplo 11.
15 Ejemplo 13
{4-[4-Amino-7-(2-metil-1,3-tiazol-4-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]fenil}metanol
OH
imagen105
(2 ml) y se calentaron a reflujo durante 4,5 h. Despues del enfriamiento, se anadieron acido 4-(hidroximetil)fenil- 20 boronico (38 mg, 0,25 mmol, 1,2equiv.), tefraga/s(trifenilfosfina)paladio (0) (59 mg, 0,07 mmol, 0,25equiv.) y una solucion acuosa de carbonato de sodio 2M (0,4 ml). La mezcla se agito suavemente a 100 °C durante 16 h. Despues, se anadio otra porcion de tefraga/s(trifenilfosfina)paladio (0) (24 mg, 0,1 equiv.), y la agitacion a 100 °C
continuo durante otras 4 h. Despues, la mezcla de reaccion se filtro, el filtrado se evaporo a presion reducida, y el residuo se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 2) para dar 28 mg (40 % del t.) del compuesto del tftulo en forma de cristales de color blanquecinos.
HPLC (procedimiento 1): Tr = 3,85 min; HPLC (procedimiento 2): Tr = 3,60 min;
5 CL-EM (procedimiento 6): Tr = 0,94 min; EM (IENpos): m/z (%) = 338,2 (100) [M+H]+, EM (IENneg): m/z (%) = 336,1 (100) [M-H]-.
RMN *H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 2,73 (s, 3H), 4,58 (s, 2H), 7,17 (s, 1H), 7,45 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,50 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 8,09 (s, 1H), 8,33 (s, 1H).
El compuesto del tftulo se obtuvo por el procedimiento sintetico general 1 a partir del Intermedio 34A (75 mg, 0,24 mmol) y el Intermedio 1A (78 mg, 0,29 mmol, 1,2 equiv.). La purificacion del producto en bruto se llevo a cabo por HPLC preparativa (procedimiento 2). Rendimiento: 27 mg (30 % del t.).
15 HPLC (procedimiento 1): Tr = 3,79 min;
CL-EM (procedimiento 6): Tr = 1,03 min; EM (IENpos): m/z (%) = 374,0 (100) [M+H]+, EM (IENneg): m/z (%) = 372,2 (100) [M-H]".
RMN *H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 2,72 (s, 3H), 4,53 (s, 2H), 7,18-7,27 (m, 2H), 8,11 (s, 1H), 8,33 (s, 1H). Ejemplo 15
20 {4-[4-Amino-7-(2-etil-1,3-tiazol-4-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]fenil}metanol
El Intermedio 35A (91 mg, 0,28 mmol) se hizo reaccionar con acido 4-(hidroximetil)fenilboronico (51 mg, 0,34 mmol, 1,2 equiv.) de acuerdo con el procedimiento sintetico general 1. El producto en bruto se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 2) para dar 68 mg (69 % del t.) del compuesto del tftulo en forma de cristales incoloros.
Ejemplo 14
10 {4-[4-Amino-7-(2-metil-1,3-tiazol-4-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]-2,6-difluorofenil}metanol
OH
H3C
F
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OH
imagen107
HPLC (procedimiento 1): Tr = 3,73 min;
CL-EM (procedimiento 6): Tr = 1,05 min; EM (lENpos): m/z (%) = 352,2 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 350,3 (100) [M-H]-.
RMN *H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,36 (t, J = 7,6 Hz, 3H), 3,06 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 4,58 (s, 2H), 7,19 (s, 1H), 5 7,46 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,52 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 8,12 (s, 1H), 8,36 (s, 1H).
Ejemplo 16
{4-[4-Amino-7-(2-etil-1,3-tiazol-4-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]-2,6-difluorofenil}metanol
OH
imagen108
El compuesto del tftulo se obtuvo por el procedimiento sintetico general 1 a partir del Intermedio 35A (34 mg, 10 0,11 mmol) y el Intermedio 1A (34 mg, 0,13 mmol, 1,2 equiv.). La purificacion del producto en bruto se llevo a cabo
por HPLC preparativa (procedimiento 2). Rendimiento: 16 mg (40 % del t.).
HPLC (procedimiento 1): Tr = 4,04 min;
CL-EM (procedimiento 6): Tr = 1,15 min; EM (lENpos): m/z (%) = 388,0 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 386,1 (100) [M-H]".
15 RMN *H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,38 (t, 3H), 3,06 (q, 2H), 4,55 (s, 2H), 7,20-7,31 (m, 3H), 8,16 (s, 1H), 8,38 (s, 1H).
Ejemplo 17
{4-[4-Amino-7-(2-amino-1,3-tiazol-4-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]fenil}metanol
OH
imagen109
20 El compuesto del tftulo se obtuvo por el procedimiento sintetico general 1 a partir del Intermedio 36A (55 mg, 0,18 mmol) y acido 4-(hidroximetil)fenilboronico (32 mg, 0,21 mmol). La purificacion del producto en bruto se llevo a cabo por HPLC preparativa (procedimiento 2). Rendimiento: 29 mg (49 % del t.).
HPLC (procedimiento 1): Tr = 3,03 min;
CL-EM (procedimiento 5): Tr = 1,21 min; EM (lENpos): m/z (%) = 339,1 (30) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 337,1
Ejemplo 18
5 {4-[4-Amino-7-(piperazin-1-ilmetil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]fenil}metanol
OH
imagen110
El Intermedio 37A (200 mg, 0,49 mmol), acido 4-(hidroximetil)fenilboronico (90 mg, 0,59 mmol, 1,2equiv.) y tefragu/s(trifenilfosfina)paladio (0) (57 mg, 0,05 mmol, 0,1 equiv.) se disolvieron en una mezcla de 1,4-dioxano (4,0 ml) y una solucion acuosa de carbonato de sodio 2 M (1,0 ml) en un vial reactor de microondas. Al recipiente de 10 reaccion se le coloco una tapa engastada y la mezcla se calento a 140 °C durante 1 h en un dispositivo de microondas de modo unico. Despues del enfriamiento, la mezcla se filtro sobre un lecho de Celite que se aclaro con 1,4-dioxano para eluir todo el material organico. El filtrado combinado se evaporo a sequedad a presion reducida y el residuo se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 1) para dar 75 mg (45 % del t.) del compuesto del tttulo. HPLC (procedimiento 1): Tr = 2,85 min;
15 CL-EM (procedimiento 4): Tr = 0,93 min; EM (lENpos): m/z (%) = 339,1 (30) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 337,2 (100) [M-H]-.
RMN 'H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 2,38 (s a, 4H), 2,63 (m, 4H), 3,80 (s, 2H), 4,55 (s, 2H), 5,26 (s a, 1H), 6,60 (s, 1H), 7,39 (s, 4H), 7,90 (s, 1H).
Ejemplo 19
20 {4-[4-Amino-7-(morfolin-4-ilmetil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]fenil}metanol
OH
O
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El compuesto del tftulo se obtuvo a partir del Intermedio 38A (200 mg, 0,64 mmol) y acido 4- (hidroximetil)fenilboronico (116 mg, 0,77 mmol, 1,2 equiv.) de acuerdo con el procedimiento sintetico general 1. El producto en bruto se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 2). El material obtenido de esta manera se 25 disolvio en unos pocos mililitros de una mezcla de acetonitrilo y agua, se anadio una solucion acuosa de carbonato de sodio 2M y la mezcla se agito durante 10 min. Durante este tiempo, el compuesto del tftulo precipito. Los
cristales se aislaron por filtracion y se secaron al vado para dar 95 mg (49 % del t.) de un solido incoloro.
HPLC (procedimiento 1): Tr = 3,21 min;
CL-EM (procedimiento 4): Tr = 0,93 min; EM (IENpos): m/z (%) = 340 (1) [M+H]+, EM (IENneg): m/z (%) = 338,2 (100) [M-H]-.
5 RMN 'H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 2,47 (m, 4H), 3,31 (s, 4H), 3,53 (t, 2H), 3,82 (s, 1H), 4,56 (d, 2H), 5,22 (t, 1H), 6,63 (s, 1H), 7,42 (s, 4H), 7,90 (s, 1H).
Ejemplo 20
{4-[4-Amino-7-(morfolin-4-ilmetil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]-2,6-difluorofenil}metanol
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10 A una solucion del Intermedio 40A (110 mg, 0,22 mmol) en THF (2,2 ml) se le anadieron 0,45 ml (0,45 mmol) de una solucion de fluoruro de tetrabutilamonio 1 M (TBAF) en THF y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 1 h. Despues, la mezcla de reaccion se evaporo a presion reducida, y el residuo se suspendio en 3 ml de metanol y se agito a temperatura ambiente durante 5 min. El precipitado resultante se filtro, se lavo con una pequena cantidad de metanol y se seco al vado para dar 68 mg (81 % del t.) del compuesto del tttulo.
15 CL-EM (procedimiento 4): Tr = 1,03 min; EM (IENpos): m/z (%) = 376,0 (80) [M+H]+, EM (IENneg): m/z (%) = 374,1 (100) [M-H]".
RMN 'H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 2,45 (m a, 4H), 3,56 (t, 4H), 3,82 (s, 2H), 4,54 (d, 2H), 5,27 (t, 1H), 6,75 (s, 1H), 7,16 (m, 2H), 7,95 (s, 1H).
Ejemplo 21
20 {4-[4-Amino-7-(morfolin-4-ilmetil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]-2-fluorofenil}metanol
OH
C
imagen113
A una suspension del Intermedio 41A (65,0 mg, 0,17 mmol) en THF (2,0 ml) se le anadieron 0,2 ml (0,2 mmol) de una solucion de hidruro de litio y aluminio 1 M en THF y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 1 h. La solucion resultante se inactivo con agua y despues se purifico directamente por HPLC preparativa (procedimiento 3) 25 para dar 35 mg (58 % del t.) del compuesto del tttulo.
CL-EM (procedimiento 6): Tr = 0,98 min; EM (IENpos): m/z (%) = 358,1 (20) [M+H]+, EM (IENneg): m/z (%) = 356,2
5
10
15
20
25
Ejemplo 22
{4-[4-Amino-7-(morfolin-4-ilmetil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]-2-clorofenil}metanol
OH
C
imagen114
El Intermedio 39A (200 mg, 0,56 mmol), el Intermedio 3A (112 mg, 0,51 mmol) y tefragu/s-(trifenilfosfina)paladio (0) (58 mg, 0,05 mmol) se disolvieron en una mezcla de 1,4-dioxano (4,0 ml) y una solucion acuosa de carbonato de sodio 2 M (1,0 ml) en un vial reactor de microondas. Al recipiente de reaccion se le coloco una tapa engastada y la mezcla se calento a 140 °C durante 1 h en un dispositivo de microondas de modo unico. Despues del enfriamiento, la mezcla se filtro y el filtrado se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 3) para dar 48 mg (23 % del t.) del compuesto del tttulo.
CL-EM (procedimiento 6): Tr = 0,53 min; EM (lENpos): m/z (%) = 374,1 (80) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 372,2 (100) [M-H]".
RMN *H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 2,46 (m a, 4H), 3,56 (t, 4H), 3,83 (s, 2H), 4,61 (d, 2H), 5,45 (t, 1H), 6,70 (s, 1H), 7,44 (dd, 1H), 7,49 (d, 1H), 7,63 (t, 1H), 7,94 (s, 1H).
Ejemplo 23
{4-[4-Amino-7-(morfolin-4-ilmetil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]-2-metilfenil}metanol
OH
imagen115
N
En analogfa a la preparacion del Ejemplo 28, se hizo reaccionar el Intermedio 39A (200 mg, 0,56 mmol) con el Intermedio 4A (102 mg, 0,51 mmol) para dar 9 mg (5 % del t.) del compuesto del tttulo.
CL-EM (procedimiento 4): Tr = 1,00 min; EM (IENpos): m/z (%) = 354,3 (10) [M+H]+, EM (IENneg): m/z (%) = 372,2 (100) [M-H]-.
RMN *H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 2,30 (s, 3H), 2,45 (m a, 4H), 3,56 (t, 4H), 3,83 (s, 2H), 4,54 (d, 2H), 5,13 (t, 1H), 6,63 (s, 1H), 7,26 (s, 1H), 7,26 (d, 1H), 7,45 (d, 1H), 7,91 (s, 1H).
OH
imagen116
El compuesto del tftulo se obtuvo a partir del Intermedio 38A (200 mg, 0,64 mmol) y el Intermedio 6A (147 mg, 5 0,96 mmol) por el procedimiento sintetico general 1. El producto en bruto se purifico por HPLC preparativa
(procedimiento 4). Las impurezas restantes se retiraron por la suspension del producto en acetonitrilo (2 ml) y la recoleccion del solido restante por filtracion. Rendimiento: 27 mg (12 % del t.).
CL-EM (procedimiento 4): Tr = 0,78 min; EM (lENpos): m/z (%) = 341 (10) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 339,3 (100) [M-H]-.
10 RMN 'H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 2,46 (m a, 4H), 3,56 (t, 4H), 3,84 (s, 2H), 4,62 (d, 2H), 5,46 (t, 1H), 6,73 (s, 1H), 7,54 (d, 1H), 7,86 (dd, 1H), 7,95 (d, 1H), 8,56 (s, 1H).
Ejemplo 25
1-({4-Amino-5-[3,5-difluoro-4-(hidroximetil)fenil]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il}metil)piperidin-4-ol
imagen117
15 El compuesto del tftulo se obtuvo a partir del Intermedio 45A (200 mg, 0,61 mmol) y el Intermedio 2A (159 mg, 0,74 mmol) por el procedimiento sintetico general 1. El producto en bruto se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 3). Rendimiento: 103 mg (43 % del t.).
CL-EM (procedimiento 4): Tr = 0,98 min; EM (IENpos): m/z (%) = 390,1 (60) [M+H]+, EM (IENneg): m/z (%) = 388,2 (100) [M-H]".
20 RMN 'H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,36 (m a, 2H), 1,68 (m a, 2H), 2,12 (m a, 2H), 2,75 (m a, 2H), 3,41 (m a, 1H), 3,79 (s, 2H), 4,51 (d, 1H), 4,54 (d, 2H), 5,27 (t, 1H), 6,72 (s, 1H), 7,15 (m, 2H), 7,94 (s, 1H).
OH
imagen118
El compuesto del tftulo se obtuvo a partir del Intermedio 47A (110 mg, 0,35 mmol) y el Intermedio 2A (91,3 mg, 5 0,42 mmol) por el procedimiento sintetico general 1. El producto en bruto se purifico por HPLC preparativa
(procedimiento 3). Rendimiento: 69 mg (52 % del t.).
CL-EM (procedimiento 4): Tr = 0,25 min; EM (lENpos): m/z (%) = 376,1 (20) [M+H]+.
RMN 1H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,54 (m, 1H), 1,98 (m, 1H), 2,43 (a, d, 1H), 2,69 (m, 1H), 2,79 (dd, 1H), 3,93 (dd, 2H), 4,18 (a, 1H), 4,53 (d, 2H), 4,69 (d, 1H), 5,27 (t, 1H), 6,75 (s, 1H), 7,16 (m, 2H), 7,95 (s, 1H).
10 Ejemplo 27
1-({4-Amino-5-[3,5-difluoro-4-(hidroximetil)fenil]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il}metil)piperidin-3-ol
OH
imagen119
A una solucion del Intermedio 50A (150 mg, 0,30 mmol) en THF (3,0 ml) se le anadieron 0,60 ml (0,60 mmol) de una solucion de fluoruro de tetrabutilamonio 1 M (TBAF) en THF y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 15 1 h. Despues, la mezcla de reaccion se concentro, y el residuo se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 3)
para dar 65 mg (56 % del t.) del compuesto del tftulo.
CL-EM (procedimiento 7): Tr = 0,33 min; EM (lENpos): m/z (%) = 390,3 (100) [M+H]+.
RMN 1H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,02 (m a, 1H), 1,40 (m a, 1H), 1,60 (m a, 1H), 1,77 (m a, 2H), 1,95 (m a, 1H), 2,73 (m a, 1H), 2,88 (m a, 1H), 3,43 (m a, 1H), 3,83 (m a, 2H), 4,54 (a, d, 3H), 5,27 (t, 1H), 6,74 (s, 1H), 7,15 (m, 20 2H), 7,95 (s, 1H).
OH
imagen120
HO
El Intermedio 24A (120 mg, 0,39 mmol) y el Intermedio 58A (130 mg, 0,46 mmol) se disolvieron en acetonitrilo 5 (3,0 ml) en un vial reactor de microondas y se enjuagaron con argon. Se anadieron tefraga/s(trifenilfosfina)paladio (0)
(22 mg, 0,02 mmol) y una solucion ac. de carbonato de sodio 2,0 M (0,7 ml) y la mezcla se calento a 150 °C durante 1 h en un dispositivo de microondas de modo unico. Despues del enfriamiento, la mezcla se filtro y el filtrado se evaporo. El residuo se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 2) para dar 36 mg (23 % del t.) del compuesto del tftulo.
10 CL-EM (procedimiento 6): Tr = 0,82 min; EM (lENpos): m/z (%) = 385 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 383 (100) [M-H]-.
RMN *H (400 MHz, DMSO-d6): 8 (ppm) = 1,24 (t, 3H), 1,28-1,38 (m, 2H), 1,46-1,54 (m, 2H), 1,94-1,97 (m, 2H), 2,012,05 (m, 2H), 2,82 (q, 2H), 3,03 (m, 1H), 3,47 (m, 1H), 4,53 (m, 2H), 4,61 (d, 1H), 5,02 (t, 1H), 6,58 (s, 1H), 7,08 (d, 1H), 7,15 (s, 1H), 7,90 (s, 1H).
15 Ejemplo 29
frans-4-{4-Amino-5-[3-fluoro-4-(hidroximetil)-5-metoxifenil]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il}ciclohexanol
OH
H3C
imagen121
HO
El Intermedio 24A (120 mg, 0,39 mmol) y el Intermedio 59A (163 mg, 80 % de pureza, 0,46 mmol) se disolvieron en acetonitrilo (2,0 ml) en un vial reactor de microondas y se lavaron con argon. Se anadieron 20 tefraga/s(trifenilfosfina)paladio (0) (45 mg, 0,04 mmol) y una solucion ac. de carbonato de sodio 2,0 M (0,5 ml), y la mezcla se calento a 150 °C durante 1 h en un dispositivo de microondas de modo unico. Despues del enfriamiento,
la mezcla se filtro y el filtrado se evaporo. El residuo se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 2) para dar 6 mg (4 % del t.) del compuesto del tttulo.
CL-EM (procedimiento 5): Tr = 1,36 min; EM (IENpos): m/z (%) = 387 (100) [M+H]+, EM (IENneg): m/z (%) = 385 (100) [M-H]-.
5 RMN *H (400 MHz, DMSO-de): 8 (ppm) = 1,24-1,33 (m, 2H), 1,42-1,53 (m, 2H), 1,90-1,93 (m, 2H), 2,00-2,04 (m, 2H), 3,04 (m, 1H), 3,46 (m, 1H), 3,82 (s, 3H), 4,48 (m, 2H), 4,60 (d, 1H), 4,83 (t, 1H), 6,60 (s, 1H), 6,85 (d, 1H), 6,90 (s, 1H), 7,91 (s, 1H).
Ejemplo 30
{4-[4-Amino-7-(piperidin-3-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]-2-fluoro-6-metoxifenil}metanol
10
OH
imagen122
El Intermedio 63A (50 mg, 0,11 mmol) se disolvio en una solucion al 30 % de acido trifluoroacetico en diclorometano (5,0 ml) a 0 °C. La mezcla de reaccion se agito a esta temperatura durante 30 min, despues todos los volatiles se retiraron por destilacion a presion reducida. El residuo se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 2). El producto obtenido de esta manera se disolvio en acetato de etilo y se lavo con una solucion saturada acuosa de 15 carbonato de sodio. La fase organica se seco sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se retiro por destilacion para dar 30 mg (76 % del t.) del compuesto del tttulo.
CL-EM (procedimiento 6): Tr = 0,59 min; EM (IENpos): m/z (%) = 372 (10) [M+H]+, EM (IENneg): m/z (%) = 370 (100) [M-H]-.
RMN 1H (400 MHz, DMSO-de): 8 (ppm) = 1,50-2,08 (m, 4H), 2,94 (m, 2H), 3,17-3,30 (m, 3H), 3,85 (s, 3H), 4,51 (m, 20 2H), 4,82 (t, 1H), 6,60 (s, 1H), 6,84 (d, 1H), 6,89 (s, 1H), 7,90 (s, 1H).
Ejemplo 31
{4-[4-Amino-7-(piperidin-3-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]-2-fluoro-6-metilfenil}metanol
OH
imagen123
El Intermedio 64A (110 mg, 0,21 mmol) se disolvio en una solucion al 30% de acido trifluoroacetico en diclorometano (5,0 ml) a 0 °C. La mezcla de reaccion se agito a esta temperatura durante 30 min, despues todos los volatiles se retiraron por destilacion a presion reducida. El residuo se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 2). El producto obtenido de esta manera se disolvio en acetato de etilo y se lavo con una solucion saturada acuosa 5 de carbonato de sodio. La fase organica se seco sobre sulfato de sodio anhidro, y el disolvente se retiro por destilacion para dar 59 mg (78 % del t.) del compuesto del tttulo.
CL-EM (procedimiento 4): Tr = 1,10 min; EM (lENpos): m/z (%) = 356 (40) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 354 (100) [M-H]-.
RMN 1H (400 MHz, DMSO-de): 8 (ppm) = 1,44-2,08 (m, 4H), 2,42 (s, 3H), 2,94 (m, 2H), 3,17-3,27 (m, 3H), 4,53 (m, 10 2H), 4,98 (t, 1H), 6,54 (s, 1H), 7,06 (d, 1H), 7,11 (s, 1H), 7,90 (s, 1H).
Ejemplo 32
{4-[4-Amino-7-(pirrolidin-3-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]-2-fluoro-6-metilfenil}metanol
OH
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El Intermedio 65A (90 mg, 0,17 mmol) se disolvio en una solucion al 30 % de acido trifluoroacetico en diclorometano 15 (5,0 ml) a 0 °C. La mezcla de reaccion se agito a esta temperatura durante 30 min, despues todos los volatiles se
retiraron por destilacion a presion reducida. El residuo se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 2). El producto obtenido de esta manera se disolvio en acetato de etilo y se lavo con una solucion saturada acuosa de carbonato de sodio. La fase organica se seco sobre sulfato de sodio anhidro, y el disolvente se retiro por destilacion para dar 27 mg (47 % del t.) del compuesto del tttulo.
20 CL-EM (procedimiento 4): Tr = 1,03 min; EM (lENpos): m/z (%) = 342 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 340 (100) [M-H]-.
RMN *H (400 MHz, DMSO-de): 8 (ppm) = 1,80-2,21 (m, 2H), 2,43 (s, 3H), 2,78-2,81 (m, 1H), 2,85-3,02 (m, 2H), 3,223,27 (m, 1H), 3,63 (m, 1H), 4,55 (s a, 2H), 4,98 (t, 1H), 6,63 (s, 1H), 7,06 (d, 1H), 7,11 (s, 1H), 7,90 (s, 1H).
Ejemplo 33
25 Trifluoroacetato de 1-{4-amino-5-[3,5-difluoro-4-(hidroximetil)fenil]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il}ciclohexanol
OH
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El Intermedio 61A (95 mg, 0,31 mmol) y el Intermedio 1A (87 mg, 0,32 mmol) se disolvieron en DMF (2,0 ml) en un recipiente reactor de microondas y se enjuagaron con argon. Se anadieron tetraga/s(trifenilfosfina)paladio (0) (35 mg, 0,03 mmol) y una solucion ac. de carbonato de sodio 2,0 M (0,5 ml) y la mezcla se calento a 150 °C durante 1 h en un dispositivo de microondas de modo unico. Despues del enfriamiento, la mezcla se filtro y el filtrado se purifico directamente por HPLC preparativa (procedimiento 2) para dar 6 mg (4 % del t.) del compuesto del tttulo. CL-EM (procedimiento 6): Tr = 1,05 min; EM (lENpos): m/z (%) = 375 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 373 (100) [M-H]-.
RMN *H (400 MHz, DMSO-de): 8 (ppm) = 1,20-1,33 (m, 1H), 1,42-1,51 (m, 2H), 1,60-1,82 (m, 5H), 2,17-2,28 (m, 2H), 4,51 (s, 2H), 6,76 (s, 1H), 7,17 (m, 2H), 8,02 (s, 1H).
Ejemplo 34
(4-{4-Amino-7-[2-(aminometil)-1,3-tiazol-4-il]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}-2,6-difluorofenil)metanol
El Intermedio 62A (67 mg, 0,16 mmol), el Intermedio 1A (51 mg, 0,19 mmol), tetraga/s(trifenilfosfina)paladio (0) (18 mg, 0,02 mmol) y una solucion ac. de carbonato de sodio 2,0 M (0,94 ml) se disolvieron en 1,4-dioxano (2,50 ml) en un vial reactor de microondas. Al vial se le coloco una tapa engastada, y la mezcla se calento a 140 °C durante 3 h en un dispositivo de microondas de modo unico. Despues, la mezcla de reaccion se filtro, y el filtrado se diluyo con acetonitrilo y se trato con eter de dietilo. El precipitado resultante se recogio y purifico por HPLC preparativa (procedimiento 2). El producto obtenido de esta manera (15 mg) se trato posteriormente con una solucion al 20 % de acido trifluoroacetico en diclorometano (2 ml) durante 20 min. Los volatiles se retiraron por destilacion, y el residuo se trato con una solucion concentrada acuosa de carbonato de sodio y se extrajo con acetato de etilo. El extracto organico se seco sobre sulfato de sodio anhidro, y el disolvente se retiro por destilacion para dar el compuesto del tttulo (10 mg, 13 % del t.) como un solido incoloro.
CL-EM (procedimiento 4): Tr = 1,12 min; EM (IENpos): m/z (%) = 389 (25) [M+H]+, EM (IENneg): m/z (%) = 387 (100) [M-H]-.
RMN 1H (400 MHz, de-DMSO): 8 (ppm) = 4,24 (s, 2H), 4,53 (m, 2H), 5,30 (t, 1H), 7,18-7,23 (m, 3H), 8,11 (s, 1H), 8,40 (s, 1H).
Ejemplo 35
ent-{4-[4-Amino-7-(pirrolidin-3-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]-2,6-difluorofenil}metanol (enant/omero 1)
OH
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OH
F
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El compuesto del tftulo se obtuvo por la separacion del Ejemplo racemico 8 (54 mg) usando HPLC quiral preparativa [columna: Daicel Chiralpak AD-H, 250 mm x 20 mm; eluyente: isohexano/etanol 35:65; caudal de flujo: 20 ml/min; deteccion UV: 220 nm]. Rendimiento: 12,5 mg.
HPLC quiral analftica [columna: Daicel Chiralpak AD-H, 5 pm, 250 mm x 4,6 mm; eluyente: isohexano/etanol 50:50 + dietilamina 0,2%; caudal de flujo: 1,0 ml/min; temperatura: 40 °C; deteccion UV: 220 nm]: Tr = 9.452 min, e.e. >99 %.
HPLC (procedimiento 9): Tr = 0,70 min;
CL-EM (procedimiento 10): Tr= 0,42 min; EM (lENpos): m/z (%) = 346,1 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 344,0 (100) [M-H]-.
Ejemplo 36
ent-{4-[4-Amino-7-(pirrolidin-3-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]-2,6-difluorofenil}metanol (enantiomero 2)
OH
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El compuesto del tftulo se obtuvo por la separacion del Ejemplo racemico 8 (54 mg) usando HPLC quiral preparativa [columna: Daicel Chiralpak AD-H, 250 mm x 20 mm; eluyente: isohexano/etanol 35:65; caudal de flujo: 20 ml/min; deteccion UV: 220 nm]. Rendimiento: 14 mg.
HPLC quiral analftica [columna: Daicel Chiralpak AD-H, 5 pm, 250 mm x 4.6 mm; eluyente: isohexano/etanol 50:50 + dietilamina 0,2%; caudal de flujo: 1,0 ml/min; temperatura: 40 °C; deteccion UV: 220 nm]: Tr = 13,695 min, e.e. >99 %.
HPLC (procedimiento 9): Tr = 0,71 min;
CL-EM (procedimiento 10): Tr= 0,42 min; EM (lENpos): m/z (%) = 346,1 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 344,0 (100) [M-H]-.
Ejemplo 37
rac-{4-[4-Amino-7-(pirrolidin-3-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]-2-etil-6-fluorofenil}metanol
OH
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El Intermedio 66A (72 mg, 0,158 mmol) se disolvio en diclorometano (3,8 ml) a 0 °C y se anadio acido trifluoroacetico (1,0 ml). La mezcla de reaccion se agito a 0 °C durante 40 min, despues todos los volatiles se retiraron a presion reducida. El residuo se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 6). Las fracciones combinadas que conteman producto se ajustaron a pH basico usando una solucion saturada acuosa de carbonato de sodio y se concentraron a sequedad. El residuo resultante se suspendio en acetato de etilo (50 ml) y se filtro. La fase organica se lavo con salmuera (5 ml), se seco sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se retiro por destilacion para dar 31 mg (56 % del t.) del compuesto del tttulo.
HPLC (procedimiento 9): Tr = 0,81 min;
CL-EM (procedimiento 10): Tr = 0,55 min; EM (lENpos): m/z (%) = 356,3 (50) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 354,2 (100) [M-H]-.
RMN ’h (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,23 (t, 3H), 1,84-2,24 (m, 1H), 2,81 (q, 2H), 2,80-2,99 (m, 1H), 3,00-3,72 (m, 1H), 4,56 (d, 2H), 5,00 (t, 1H), 6,68 (s, 1H), 7,09 (d, 1H), 7,14 (m, 2H), 7,92 (s, 1H).
Ejemplo 38
rac-{4-[4-Amino-7-(piperidin-3-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]-2-etil-6-fluorofenil}metanol
OH
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El Intermedio 67A (108 mg, 0,230 mmol) se disolvio en diclorometano (5,2 ml) a 0 °C y se anadio acido trifluoroacetico (1,4 ml). La mezcla de reaccion se agito a 0 °C durante 40 min, despues, todos los volatiles se retiraron a presion reducida. El residuo se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 6). Las fracciones combinadas que conteman producto se ajustaron a pH basico usando una solucion saturada acuosa de carbonato de sodio y se concentraron a sequedad. El residuo resultante se suspendio en acetato de etilo (50 ml) y se filtro. La fase organica se lavo con salmuera (5 ml), se seco sobre sulfato de sodio anhidro, y el disolvente se retiro por destilacion para dar 83 mg (85 % del t.) del compuesto del tttulo.
HPLC (procedimiento 9): Tr = 0,81 min;
CL-EM (procedimiento 10): Tr = 0,58 min; EM (lENpos): m/z (%) = 370,3 (50) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 368,3 (100) [M-H]-.
RMN ’h (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,22 (t, 3H), 1,51-1,72 (m, 2H), 2,00-2,10 (m, 1H), 2,51-2,65 (m, 2H), 2,81 (q, 2H), 2,95-3,03 (m, 1H), 3,20-3,27 (m, 1H), 4,56 (d, 2H), 5,00 (t, 1H), 6,60 (s, 1H), 7,07 (d, 1H), 7,14 (m, 2H), 7,91 (s, 1H).
Ejemplo 39
rac-{4-Amino-5-[3-etil-5-fluoro-4-(hidroximetil)fenil]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il}(ciclopropil)metanol
OH
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El Intermedio 17A (83 mg, 0,29 mmol), el Intermedio 58A (98 mg, 0,35 mmol) y tetraga/s(trifenilfosfina)paladio (0) (17 mg, 0,015 mmol) se disolvieron en una mezcla de acetonitrilo (2,3 ml) y una solucion acuosa de carbonato de sodio 2 M (0,53 ml) en un vial reactor de microondas. Despues de la desgasificacion durante 5 min usando argon, al recipiente de reaccion se le coloco una tapa engastada, y la mezcla se calento a 150 °C durante 1 h en un dispositivo de microondas de modo unico. Despues del enfriamiento a temperatura ambiente, se anadio una solucion saturada acuosa de bicarbonato de sodio, y la mezcla se extrajo tres veces con acetato de etilo. Las fases organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron. El residuo se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 5) para dar el compuesto del tftulo. Rendimiento: 63 mg (61 % del t.).
HPLC (procedimiento 9): Tr = 1,13 min;
CL-EM (procedimiento 10): Tr = 0,78 min; EM (lENpos): m/z (%) = 357,3 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 355,3 (100) [M-H]-.
RMN *H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 0,39 (m, 3H), 0,48 (m, 1H), 1,23 (t, 3H), 1,35 (m, 1H), 2,81 (q, 2H), 4,56 (d, 2H), 4,68 (m, 1H), 5,01 (m, 1H), 5,21 (m, 1H), 6,76 (s, 1H), 7,09 (d, 1H), 7,14 (s, 1H), 7,90 (s, 1H).
Ejemplo 40
rac-{4-Amino-5-[4-(hidroximetil)-3-metoxifenil]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il}(ciclopropil)metanol
OH
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El Intermedio 68A (130 mg, 0,353 mmol) se disolvio en tetrahidrofurano (6,9 ml) y se enfrio a 0 °C. Se anadio una solucion de hidruro de litio y aluminio (1 M en dietileter, 0,78 ml) gota a gota y la mezcla de reaccion se dejo calentar a temperatura ambiente durante toda la noche. Despues, la mezcla de reaccion se inactivo con agua y se filtro. El filtrado se concentro y el residuo se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 8) para dar el compuesto del tftulo. Rendimiento: 63 mg (51 % del t.).
CL-EM (procedimiento 10): Tr= 0,62 min; EM (lENpos): m/z (%) = 341,2 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 339,1 (100) [M-H]".
Ejemplo 41
ent-4-Amino-5-[4-(hidroximetil)-3-metoxifenil]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il}(ciclopropil)metanol (enant/omero 1)
OH
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El compuesto del tftulo se obtuvo por la separacion del Ejemplo racemico 40 (63 mg) usando HPLC quiral preparativa [columna: Daicel Chiralpak IC, 5 pm, 250 mm x 20 mm; eluyente: terc-butil metil eter/metanol 85:15; caudal de flujo: 15 ml/min; temperatura: 40 °C; deteccion UV: 220 nm]. Rendimiento: 17 mg.
HPLC quiral analftica [columna: Daicel Chiralpak IC, 5 pm, 250 mm x 4,6 mm; eluyente: ferc-butil metil eter/metanol 85:15; caudal de flujo: 1,0 ml/min; temperatura: 40 °C; deteccion UV: 220 nm]: Tr = 4.76 min, e.e. >99 %.
CL-EM (procedimiento 10): Tr= 0,67 min; EM (lENpos): m/z (%) = 341,2 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 339,1 (100) [M-H]-.
RMN 'h (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 0,40 (m, 3H), 0,48 (m, 1H), 1,36 (m, 1H), 3,83 (s, 3H), 4,54 (d, 2H), 4,68 (m, 1H), 5,07 (t, 1H), 5,25 (d, 1H), 6,74 (s, 1H), 7,00 (s, 1H), 7,03 (d, 1H), 7,47 (d, 1H), 7,89 (s, 1H).
Ejemplo 42
ent-4-Amino-5-[4-(hidroximetil)-3-metoxifenil]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il}(ciclopropil)metanol (enantiomero 2)
OH
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El compuesto del tftulo se obtuvo por la separacion del Ejemplo racemico 40 (63 mg) usando HPLC quiral preparativa [columna: Daicel Chiralpak IC, 5 pm, 250 mm x 20 mm; eluyente: terc-butil metil eter/metanol 85:15; caudal de flujo: 15 ml/min; temperatura: 40 °C; deteccion UV: 220 nm]. Rendimiento: 25 mg.
HPLC quiral analftica [columna: Daicel Chiralpak IC, 5 pm, 250 mm x 4,6 mm; eluyente: terc-butil metil eter/metanol 85:15; caudal de flujo: 1,0 ml/min; temperatura: 40 °C; deteccion UV: 220 nm]: Tr = 6,37 min, e.e. >99 %.
CL-EM (procedimiento 10): Tr= 0,67 min; EM (IENpos): m/z (%) = 341,2 (100) [M+H]+, EM (IENneg): m/z (%) = 339,1 (100) [M-H]'.
RMN 'H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 0,40 (m, 3H), 0,48 (m, 1H), 1,36 (m, 1H), 3,83 (s, 3H), 4,54 (d, 2H), 4,68 (m, 1H), 5,07 (t, 1H), 5,25 (d, 1H), 6,74 (s, 1H), 7,00 (s, 1H), 7,03 (d, 1H), 7,47 (d, 1H), 7,89 (s, 1H).
Ejemplo 43
[4-(4-Amino-7-isopropilpirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il)-2,6-difluorofenil]metanol
OH
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El Intermedio 71A (181 mg, 0,709 mmol), el Intermedio 1A (239 mg, 0,887 mmol) y tetragu/s(trifenilfosfina)paladio (0)
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(41 mg, 0,035 mmol) se disolvieron en una mezcla de W,A/-dimetilformamida (12,5 ml) y una solucion acuosa de carbonato de sodio 2 M (1,42 ml) en un vial reactor de microondas. Al recipiente de reaccion se le coloco una tapa engastada, y la mezcla se calento a 130 °C durante 2 h en un dispositivo de microondas de modo unico. Despues del enfriamiento a temperatura ambiente, la mezcla de reaccion se filtro a traves de Celite y se concentro. El residuo resultante se disolvio en acetato de etilo (100 ml) y se lavo con agua y con salmuera (10 ml c/u). La fase organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro. El residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida (puriFlash, Interchim, ciclohexano/acetato de etilo 1:1 a gradiente de acetato de etilo al 100 %) seguido por HPLC preparativa (procedimiento 6). Las fracciones que conteman producto se combinaron y ajustaron a pH basico usando una solucion saturada acuosa de carbonato de sodio. El disolvente de acetonitrilo se retiro, y el producto precipitado se recogio por filtracion. Rendimiento: 69 mg (31 % del t.).
HPLC (procedimiento 9): Tr= 1,35 min;
CL-EM (procedimiento 10): Tr= 0,90 min; EM (lENpos): m/z (%) = 319,0 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 317,0 (100) [M-H]-.
RMN 'H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,30 (d, 6H), 3,42 (m, 1H), 4,54 (s, 2H), 5,26 (s, 1H), 6,65 (s, 1H), 7,14 (m, 2H), 7,94 (s, 1H).
Ejemplo 44
rac-1-{4-Amino-5-[3,5-difluoro-4-(hidroximetil)fenil]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il}etanol
OH
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El Intermedio 72A (230 mg, 0,743 mmol), el Intermedio 2A (192 mg, 0,89 mmol) y tefraga/s(trifenilfosfina)paladio (0) (86 mg, 0,074 mmol) se disolvieron en una mezcla de 1,4-dioxano (4,6 ml) y una solucion acuosa de carbonato de sodio 2 M (1,16 ml) en un vial reactor de microondas. Al recipiente de reaccion se le coloco una tapa engastada, y la mezcla se calento a 140 °C durante 1 h en un dispositivo de microondas de modo unico. Despues del enfriamiento a temperatura ambiente, la mezcla de reaccion se purifico por HPLC preparativa (procedimiento 8) para producir 48 mg de material que se purifico en forma adicional por HPLC preparativa (procedimiento 9). Rendimiento: 11 mg (4,6% del t.).
CL-EM (procedimiento 5): Tr = 0,89 min; EM (lENpos): m/z (%) = 321,3 (100) [M+H]+, EM (lENneg): m/z (%) = 319,3 (100) [M-H]".
RMN 'H (400 MHz, de-DMSO): 6 (ppm) = 1,47 (d, 3H), 4,54 (m, 2H), 5,16-5,39 (m, 2H), 6,74 (s, 1H), 6,88 (m, 1H), 7,14 (m, 2H), 7,94 (s, 1H).
B. Evaluacion de la Actividad Biologica
Abreviaturas y Acronimos:
ATCC
Recoleccion de Cultivos de Tipo Americana
ATP
trifosfato de adenosina
Bq
Bequerel
BrdU
5-bromo-2-desoxiuridina
BSA
albumina de suero bovino
CHO
ovario de hamster chino
cpm
recuentos por minuto
Ct
umbral del ciclo
DMEM/F12
medio de Eagle modificado por Dulbecco / medio F12 de Ham (1:1
DMSO
sulfoxido de dimetilo
ADN
acido desoxirribonucleico
DTT
ditiotreitol
EDTA
acido etilendiamino-tetraacetico
5
10
15
20
25
ENGS MV
medio de cultivo celular endotelial microvascular
FAM
carboxifluorescema ester de succinimidilo
FCS
suero fetal bovino
hBMP9
factor 9 morfogenetico oseo humano
HEPES
acido 4-(2-hidroxietil)piperazin-1-etanosulfonico
HMVEC
celulas endoteliales microvasculares humanas
HPMC
hidroxipropil metil celulosa
HTRF
fluorescencia homogenea resuelta en el tiempo
HUVEC
celulas endoteliales vasculares humanas
[I]
concentracion del inhibidor
CI50
concentracion con un efecto inhibitorio del 50 %
LDH
lactato deshidrogenasa
ARNm
acido ribonucleico mensajero
NADH
dinucleotido de nicotinamida adenina
Nonidet P40
4-etilfenoxi-poli(etilenglicol)eter (n = 11)
PBS
solucion salina tamponada con fosfato
PE
polietileno
PEG
polietilenglicol
PK
piruvato quinasa
p.o.
per os
PCRq
reaccion en cadena de la polimerasa cuantitativa
ARN
acido ribonucleico
tampon RTL
tampon de lisis RNeasy
Num. de ID SEQ
numero de identidad de secuencia
SFM
medio libre de suero
TAMRA
carboxitetrametilrodamina
Tris
2-amino-2-hidroximetilpropan-1,3-diol
Triton X-100
4-terc-octilfenoxi-poli(etilenglicol)eter (n = 10)
La demostracion de la actividad de los compuestos de la presente invencion puede lograrse a traves de valoraciones in vitro, ex vivo, e in vivo que son bien conocidas en la tecnica. Por ejemplo, para demostrar la actividad de los compuestos de la presente invencion, pueden utilizarse las siguientes valoraciones.
B-1a. Inhibicion de enzimas in vitro usando centelleo de radiomarcado incorporado (valoracion flashplate)
Principio dl prueba:
Se mezclan compuestos de prueba diluidos en DMSO con un sustrato / co-sustrato adecuado (en la presente: a- casema biotinilada y 33P-ATP) en un tampon de valoracion correspondiente. La adicion de la enzima de interes (en la presente: ALK1 quinasa) inicia la reaccion de la enzima. La incorporacion catalizada por enzima del radiomarcado en el sustrato se mide por centelleo. El radiomarcado incorporado se separa del radiomarcado libre via una union espedfica del sustrato biotinilado a placas de microtitulacion revestidas con estreptavidina (flashplates) y etapas de lavado concomitantes. La intensidad de la senal de centelleo (recuentos por minuto, cpm) es proporcional a la actividad de la enzima. La inhibicion de enzimas da lugar a una reduccion en la intensidad de la senal. Los valores de CI 50 de los compuestos de ensayo se determinan por trazados de cpm-versus-[I].
Tampon de reaccion:
El tampon de reaccion contiene Tris 50 mM pH 8,0 (Sigma), MnCl2 1 mM (Sigma), Nonidet P40 0,01 % (Fluka), inhibidores de proteasa Complete EDTA-free 0,5 x (Roche; que contienen una mezcla de varios inhibidores de pro- teasa para la inhibicion de serina y cistema (pero no metalo-) proteasas; 1 comprimido contiene inhibidores de proteasa suficientes para un extracto de celulas de 50 ml; la concentracion utilizada en esta valoracion corresponde a 1 comprimido en 100 ml).
Otros tampones:
1. ) Solucion quelante: PBS de Dulbecco (PAA, Pasching, Austria), EDTA 25 mM (Sigma), ATP 25 pM (Roche), Triton X-100 0,05 % (Sigma);
2. ) Tampon de saturacion: PBS de Dulbecco (PAA, Pasching, Austria), ATP 100 pM (Roche), Triton X-100 0,2 % (Sigma);
3. ) Tampon de lavado: PBS de Dulbecco (PAA, Pasching, Austria).
Solucion de enzimas:
Se diluye solucion patron (35,7 ng/pl) de ALK1 (Invitrogen, Paisley, Reino Unido) a 4 ng/pl; la concentracion final en
Solucion de sustrato:
Se biotinila a-casema desfosforilada (Sigma) de acuerdo con el protocolo del fabricante (Pierce, Bonn, Alemania) lo que da lugar a una solucion patron de 61,6 pM. En resumen, se anade un reactivo de Sulfo-NHS-Biotina de EZ-Link® 5 (sulfosuccinimidil-6-(biotinamido)hexanoato; Pierce, Bonn, Alemania) en una molaridad igual a a-casema y se incuba sobre hielo durante 2 h. Despues, el reactivo de biotina se elimina por dialisis (2 x 2 h y durante toda la noche).
Una solucion 100 mM de ATP (Roche) fna (no marcada) se diluye a 1:100 antes de cada ensayo. Para la mezcla del sustrato, se diluye a-casema a 2,22 pM dando lugar a una concentracion final de a-casema 1 pM en la reaccion. Ademas, se anade ATP fno para dar una solucion 1,11 pM que da lugar a una concentracion final de 500 nM en la 10 reaccion.
Solucion de ATP radiactivo:
La solucion patron (9,25 MBq/25 pl de 33P-ATP; Perkin Elmer, Rodgau, Alemania) se diluye a 651,2 Bq/pl. Esto corresponde a una concentracion final de 162,8 Bq/pl.
Solucion de compuestos:
15 Se disuelven compuestos en DMSO 100% (solucion patron 10 mM) y se diluyen a 2 mM. Se llevan a cabo diluciones adicionales por etapas a 1:3,16 en DMSO.
Protocolo por etapas:
Un volumen de 9 pl de una solucion de sustrato se proporciona en cada pocillo de una placa de microtitulacion de 384 pocillos (Greiner Bio-One, Solingen, Alemania). Se anaden 1 pl de una solucion de compuesto y 5 pl de la 20 solucion de ATP radiactivo. La reaccion de enzimas comienza con la adicion de 5 pl de una solucion de enzimas. La mezcla se incuba durante 60 minutos a temperatura ambiente y despues se detiene por la adicion de 10 pl de una solucion quelante. Las flashplates de microtitulacion de 384 pocillos (Perkin Elmer, Rodgau, Alemania) se saturan con 50 pl de tampon de saturacion por pocillo durante al menos 60 minutos. Posteriormente, se descarta un volumen de 20 pl que se reemplaza con 20 pl de la mezcla de reaccion de ALK1 detenida. La union de sustrato biotinilado a 25 la flashplate se permite durante la incubacion durante toda la noche a temperatura ambiente. El sustrato unido se separa de los componentes no unidos a traves de etapas de lavado repetidas (3 x 50 pl de tampon de lavado por pocillo). Finalmente, se anaden 50 pl de tampon de lavado, y la senal de centelleo (cpm) se mide en un contador adecuado (Perkin Elmer, Rodgau, Alemania).
Los valores de CI50 para los compuestos individuales de la presente invencion se enumeran en la Tabla 1 a 30 continuacion:
Tabla 1
Num. de Ejemplo
Cl5odeALK1 [nM]
1
2,0
2
2,8
3
4,0
4
1,0
5
1,3
6
40
7
2,0
8
4,4
9
5,7
10
8,0
11
1,9
12
5,9
13
4,0
14
5,3
15
60
16
2,6
17
2,0
18
80
19
19
5
10
15
20
25
(continuacion)
Num. de Ejemplo
CI50 deALKI [nM]
20
30
21
25
22
17
23
30
24
140
25
65
26
30
27
70
28
170
29
1,0
30
2,0
31
4,0
32
4,0
33
15
34
4,1
40
3,2
41
3,5
42
1,2
43
1,9
44
3,8
B-1b. Valoracion de ALK1 quinasa (protocolo ProQinase)
La actividad de la ALK1 (Invitrogen, Carlsbad, CA, EE.UU.) quinasa se midio en una valoracion radiometrica de ProQinase GmbH (Freiburg, Alemania) usando y-33P-ATP y casema (Sigma, St. Louis, MO, EE.UU.) como sustrato en FlashPlates™ PerkinElmer de 96 pocillos (Boston, MA, EE.UU.). Los compuestos se ensayaron en 10 concentraciones en el intervalo de 1 x 10"4 M a 3 x 10"9 M en un volumen total de 50 jl con una concentracion final de DMSO de 1 % c/u. Los componentes de valoracion se mezclaron en el siguiente orden:
- 20 jl de tampon de valoracion (HEPES-NaOH 70 mM, pH 7,5, MgCh 3 mM, MnCh 3 mM, ortovanadato de sodio 2 jM, DTT 1,2 mM);
- 5 jl de y-33P-ATP (1,0 jM en agua, aproximadamente 6 x 105 cpm por pocillo);
- 5 jl de una solucion de compuesto de ensayo (en DMSO 10 %);
- Solucion (mezcla 1:1) de 10 jl de sustrato (200 jg/ml, 1,0 jg/50 jl de concentracion final) / enzima (4 jg/ml, 20 ng/50 jl = 5,5 nM de concentracion final).
Las mezclas de reaccion se incubaron a 30 °C durante 60 minutos y se detuvieron por la adicion de 50 jl de acido fosforico 2 % (v/v). Las placas se aspiraron y lavaron dos veces con 200 jl de cloruro de sodio 0,9 % (p/v). La incorporacion de 33Pi se determino con un contador de centelleos de microplacas (Microbeta, Wallac). Todas las valoraciones se llevaron a cabo usando un Sistema Central de BeckmanCoulter/SAGIAN™
Los valores medios obtenidos a partir de la union de sustrato no espedfico de ATP marcado se ajustaron como un nivel basal, mientras que se considero que los valores medios medidos en ausencia de cualquier inhibidor reflejaban la actividad total de la ALK1 quinasa. La actividad basal (ba) se sustrajo del valor de la actividad total (fa) asf como de los valores obtenidos a partir del compuesto de ensayo que contema muestras (actividad del compuesto de ensayo, tca). La actividad residual en el ultimo se calculo como sigue:
actividad residual (%) = 100 x [(tca-ba)/(fa-ba)]
Las actividades residuales para cada concentracion y los valores de CI50 del compuesto se calcularon usando Quattro Workflow V3.1.0 (Quattro Research GmbH, Munich, Alemania). El modelo de ajuste para las determinaciones de la CI50 fue "Respuesta sigmoidal (pendiente variable)" con parametros "superiores" fijos al 100 % e "inferiores" al 0 %. El procedimiento de ajuste utilizado fue un ajuste por cuadrados mmimos.
Los valores de CI50 representativos a partir de esta valoracion se enumeran en la Tabla 2 a continuacion:
5
10
15
20
25
30
35
Tabla2
Num. de Ejemplo
Cl5odeALK1 [nM]
7
6,7
11
3,0
28
124
35
6,9
36
21
37
< 3
Num. de Ejemplo
CI50 deALKI [nM]
38
4,0
39
5,7
B-2a. Induccion del gen diana Smad7: valoracion de celulas HMVEC y analisis de expresion TaqMan
La activacion de los receptores de ALK1 por BMP9 induce la via de senalizacion Smad1/5 y potencia la expresion de genes diana Smad6, Smad7 e Id-1. Se determino que la induccion de Smad7-ARNm en celulas endoteliales estimuladas por BMP9 monitoree la potencia celular de los inhibidores de la ALK1 quinasa.
Se sembraron celulas endoteliales microvasculares humanas (HMVECadult, Cell Systems, St. Katharinen) en medio MV ENGS completo con todos los suplementos (LifeLine Cell Technology) en placas con 96 pocillos con 10.000 celulas por pocillo. Despues de 4 h de incubacion a 37 °C y con CO2 7,5 % en una incubadora humidificada, el medio se reemplazo con medio mmimo (ENGS MV sin suplementos que contuvieran FCS 0,02 %). Despues de 16 h, se anadieron compuestos de prueba o medio (controles) a los cultivos, seguido 30 min despues por la adicion de hBMP9 (R&D Systems). El medio se retiro 1 a 4 h despues, las placas se lavaron cuidadosamente con una solucion salina tamponada con fosfato, y las celulas se lisaron con 150 pl por pocillo de tampon RLT helado (Qiagen).
Se aislo ARN celular total con el protocolo del reactivo Trizol® de acuerdo con las especificaciones del fabricante (Invitrogen, EE.UU.) y se trato con ADNsa I para eliminar la contaminacion de ADN genomico.
Para la cuantificacion relativa de la distribucion del ARNm de hSmad7, el ARN total de cada muestra en primer lugar se transcribio en forma inversa usando el Sistema de Transcripcion Inversa ImProm-II (Promega, EE.UU.) de acuerdo con el protocolo del fabricante. El volumen final se ajusto a 200 pl con agua.
Para la cuantificacion relativa del ARNm seleccionado, se utilizo el Sistema de Deteccion de Secuencia ABI 7900HT de Applied Bioscience de acuerdo con las especificaciones y los protocolos del fabricante. Las reacciones de PCR se ajustaron para cuantificar hSmad7- y el gen constitutivo L32-ARNm. Los cebadores directos e inversos y las sondas para hSmad7 y L32 se disenaron usando el software ABI Primer Express™ de Applied Bioscience y se sintetizaron por Eurogentec (Belgica). La secuencia del cebador directo de hSmad7 fue: Cebador 1 (Num. de ID SEQ 1). La secuencia del cebador inverso de hSmad7 fue: Cebador 2 (Num. de ID SEQ 2). La sonda 1 (Num. de ID SEQ 3), marcada con FAM como el tinte reportero y TAMRA como el inactivador, se utilizo como una sonda para hSmad7. La secuencia del cebador directo de L32 fue: Cebador 3 (Num. de ID SEQ 4). La secuencia del cebador inverso de L32 fue: Cebador 4 (Num. de ID SEQ 5). La sonda 2 (Num. de ID SEQ 6), marcada con FAM como el tinte reportero y TAMRA como el inactivador, se utilizo como una sonda para L32.
SEQ ID NO 1 SEQ ID NO 2 SEQ ID NO 3 SEQ ID NO 4 SEQ ID NO 5 SEQ ID NO 6
Listado SEQ ID:
cebador 1 de hSmad7 1 (cebador directo) cebador 2 de hSmad7 (cebador inverso) sonda 1 de hSmad7 cebador 3 de L32 (cebador directo) cebador 4 de L32 (cebador inverso) sonda 2 de L32
5' a 3'
CCCTCCTTACTCCAGATACCC
GGAGGAAGGCACAGCATCT
TTTTCTCAAACCAACTGCAGACTGTCC
AAGTTCATCCGGCACCAGTC
TGGCCCTTGAATCTTCTACGA
CCCAGAGGCATTGACAACAGGG
Los siguientes reactivos se prepararon en un total de 20 pl adicionados por pocillo: 1 x qPCR-MasterMix (Eurogentec, Belgica) y cebadores directos e inversos de hSmad7 cada uno a 200 nM, sonda 1 de hSmad7 200 nM marcada con FAM/TAMRA (Num. de ID SEQ 3), y 5 pl de plantilla de ADNc. En consecuencia, se preparo una segunda mezcla en un total de 20 pl usando la zona 2 de L32 marcada con FAM/TAMRA (Num. de ID SEQ 6) y cebadores directos e inversos de L32 adicionados por pocillo en muestras paralelas.
Los parametros de ciclacion termica fueron de 2 min a 50 °C, seguido por 10 min a 95 °C, seguido por 40 ciclos de fusion a 95 °C durante 15 seg y anillado/extension a 60 °C durante 1 min.
5
10
15
20
25
30
35
Los valores Ct (umbral del ciclo) se calcularon a partir del punto de giro de las curvas de cantidad del producto de PCR por el procedimiento AACt (delta-delta Ct):
ACt = CthSmad7 - CtL32; expresion relativa = 2(15-ACt).
Los valores CI50 de los compuestos de ensayo se calcularon sobre la base de las expresiones relativas de Smad7 en diferentes concentraciones de compuesto. Los valores representativos se enumeran en la Tabla 3 a continuacion:
Tabla 3
Num. de Ejemplo
CI50 de hSmad7 [nM]
1
100
2
125
3
180
5
150
7
130
8
60
11
90
17
120
20
4400
21
6000
22
800
B-2b. Induccion del gen diana Smad7: valoracion de celulas HUVEC y analisis de expresion TaqMan
La potencia in vitro de los inhibidores de ALK1 se ensayo en una valoracion basada en celulas. La protema morfogenetica osea 9 (BMP9) induce la expresion de ARNm de Smad7 en las celulas endoteliales vasculares humanas (HUVEC) via la activacion de ALK1.
Se sembraron HUVEC de pasaje 2 1,5 x 104 (Lonza, Basilea, Suiza) por pocillo en una placa de 96 pocillos en medio de EBM-2 que contema aditivos de EGM-2 y factores de crecimiento (Lonza, CC-3156 y CC-4176). Despues de 4 h, el medio se cambio a EBM-2 con suero fetal bovino 0,2 % (FCS) y las celulas se privaron de suero durante 20 h en una incubadora humidificada a 37 °C, CO2 5%. Se anadieron compuestos de ensayo en 11 concentraciones diferentes entre 0 y 10 000 nM una hora antes de la estimulacion de las celulas durante 3 h con protema BMP9 recombinante humana a 1 ng/ml (disuelta en acido clortndrico 4 mM, BSA 0,1 % a 10 pg/ml; R&D Systems, Minneapolis, MN, EE.UU., 3209BP). El medio se retiro, y las celulas se lisaron en 100 pl de tampon RLT (Qiagen, Hilden, Alemania). Se aislo ARN usando el Kit RNeasy 96 de Qiagen (Num. de orden 74182) de acuerdo con las instrucciones del fabricante que se eluyo a partir de las columnas con 65 pl de agua libre de ARNsa. La transcripcion inversa para TA-PCR cuantitativa se llevo a cabo con el Kit Omniscript (Qiagen, 205113) en placas de fondo redondo de 96 pocillos libres de ARNsa. Por pocillo, se anadieron 6,8 pl de una mezcla maestra de reaccion que contema 2 pl de tampon TA 10x, 2 pl de dNTPs (5 mM c/u), 1,6 pl de cebador aleatorio N6 (125 pM), 0,25 pl de Rnase Out (40 U/pl) y 1 pl de Transcriptasa Inversa de Omniscript. Despues de la adicion de 13,2 pl de la mezcla de ARN/agua, los contenidos de las placas se mezclaron, se incubaron durante 1 ha 37 °C y el volumen total se ajusto a 100 pl en cada pocillo por la adicion de 80 pl de agua libre de ARNsa.
La cuantificacion del ARNm de Smad7 humano se llevo a cabo en un TaqMan usando Eurogentec qPCR Mastermix Plus (TA-QP2X-03-075+; Colonia, Alemania) y el empleo de L32 humana como un ARNm de referencia constitutiva. Por reaccion de PCRc, se anadieron 2,8 pl de mezcla cebadora, 10 pl de mezcla maestra, 2,2 pl de agua y 5 pl de ADNc. Los parametros de ciclacion termica fueron de 2 min a 50 °C, seguido por 10 min a 95 °C, seguido por 40 ciclos de fusion a 95 °C durante 15 seg y anillado/extension a 60 °C durante 1 min.
Los niveles de ARNm de Smad7 inducidos por 1 ng/ml de BMP9 sin la adicion de ningun inhibidor se ajustaron a una induccion del 100 %, y el porcentaje de inhibicion se calculo para cada compuesto de prueba con este valor. Para cada compuesto de ensayo, cada valor se determino por cuadruplicado. Los valores de CI50 se determinaron usando Microsoft Excel. El procedimiento de ajuste utilizado fue un ajuste por ML no limitado ponderado.
5
10
15
20
25
Los valores de CI50 representativos de esta valoracion se enumeran en la Tabla 4 a continuacion:
Tabla 4
Num. de Ejemplo
CI50 de hSmad7 [nM]
1
94
2
160
3
120
5
290
7
140
11
180
17
290
20
5900
21
790
22
3100
30
51
37
330
39
500
40
62
41
77
42
6,6
43
27
B-3. Eficacia sistemica en el modelo de neovascularizacion coroidea inducida por laser (NVC)
El objetivo de este estudio fue determinar si una administracion sistemica diaria (i.p.) de un compuesto de ensayo daba lugar a una reduccion de la fuga vascular y/o neovascularizacion coroidea en un modelo de ratas de neovascularizacion coroidea inducida por laser.
Con este proposito, se seleccionaron 16 ratas pardas sin signos visibles de defectos oculares y se dividieron aleatoriamente en dos grupos de ocho animales cada uno. El dfa 0, los animales se anestesiaron por una inyeccion intraperitoneal (15 mg/kg de xilacina y 80 mg/kg de ketamina). Despues de la instilacion de una gota de tropicamida 0,5 % para dilatar las pupilas, se indujo la neovascularizacion coroidea por la ejecucion de seis quemaduras coroideas con un tamano de 75 pm alrededor del disco optico del ojo derecho usando fotocoagulacion con laser de argon de 532 nm a 150 mW durante 100 ms. El compuesto de ensayo y el vehmulo de control (etanol 10 %, PEG 400 90 %) se administraron una vez al dfa por inyecciones intraperitoneales (i.p.) con una dosificacion del compuesto de ensayo a 50 mg/kg los dfas 0 y 1, continuando despues con 20 mg/kg desde el dfa 2 hasta el dfa 23. El peso corporal de todos los animales se registro antes del comienzo y una vez al dfa durante el estudio.
Se llevo a cabo una angiograffa el dfa 21 usando el Angiografo Retiniano de Heidelberg (HRA). Despues de la anestesia y la dilatacion pupilar, se inyecto subcutaneamente tinte de fluorescema de sodio 10%, y se registraron imagenes 10 min despues de la inyeccion del tinte. La fuga vascular de la fluorescema sobre los angiogramas se evaluo por dos examinadores en una forma enmascarada y se califico con 0 (sin fugas) a 3 (intensamente manchada).
Despues de la eutanasia el dfa 23, los ojos se cosecharon y fijaron en solucion de paraformaldehndo al 4 % durante 1 hora a temperatura ambiente. Despues del lavado, la retina se pelo cuidadosamente, y la esclera-coroide se lamino en plano y se incubo despues del bloqueo con un anticuerpo de FITC-isolectina B4. Las preparaciones laminadas en plano se examinaron en un microscopio de fluorescencia (Apotom) con una longitud de onda de excitacion de 488 nm. El volumen de la neovascularizacion coroidea se califico por el analisis morfometrico de imagenes usando el software 4.6 de Axiovision.
Para el Ejemplo 11 como un representante de los compuestos de la presente invencion, los siguientes resultados se obtuvieron en este modelo:
fuga vascular [calificacion de angiograffa] volumen de lesion de neovascularizacion coroidea [pm3 x 100 000]
Ejemplo 11
0,68 + 0,35 3,48 + 0,40
Vehmulo de control
1,7 + 0,32 5,83 + 0,55
5
10
15
20
25
30
35
B-4. Eficacia topica en el modelo de neovascularizacion coroidea (NVC) inducida por laser
El objetivo de este estudio fue determinar si una administracion topica dos veces al dfa (gotas oculares) de un compuesto de ensayo daba lugar a una reduccion de la fuga vascular y/o neovascularizacion coroidea en un modelo de ratas de neovascularizacion coroidea inducida por laser.
Con este proposito, se seleccionaron 65 ratas de Noruega marrones sin signos visibles de defectos oculares y se asignaron aleariotoriamente a seis grupos diferentes (por los numeros n, vease la tabla a continuacion). El dfa 0, los animales se anestesiaron por una inyeccion intraperitoneal (15 mg/kg de xilacina y 80 mg/kg de ketamina). Despues de la instilacion de una gota de tropicamida 0,5 % para dilatar las pupilas, se indujo la neovascularizacion coroidea por la quemadura de seis agujeros en la retina (rotura de la membrana de Bruch) de un ojo por animal usando un laser de argon (tamano de la lesion: 50 pm; intensidad del laser: 150 mW; duracion del estimulo: 100 ms). Los compuestos de ensayo y los vehmulos de control se administraron topicamente dos veces al dfa por la instilacion de las respectivas gotas oculares al ojo afectado. Los compuestos de ensayo se dosificaron como sigue: se aplicaron 10 pl de una formulacion de gotas oculares que contema 20 mg/ml del compuesto de ensayo respectivo suspendido en parafina lfquida 100 % o en un vehmulo acuoso (HPMC 15 cP 3,5 %, polisorbato 80 0,5 %, NaCl 0,9 % en agua) al ojo afectado dos veces al dfa con un intervalo de 10 a 14 horas durante el penodo de observacion completo de 23 dfas. Los animales de control recibieron el vehmulo respectivo (parafina lfquida 100% o vehmulo acuoso) topicamente dos veces al dfa. El peso corporal de todos los animales se registro antes del comienzo y una vez al dfa durante el estudio.
Se llevo a cabo una angiograffa el dfa 21 usando una camara de fondo de fluorescencia (Kowe). En el presente documento, despues de la anestesia y la dilatacion pupilar, se inyecto subcutaneamente tinte de fluorescema de sodio 10%, y se registraron imagenes 2 y 10 min despues de la inyeccion del tinte. La fuga vascular de la fluorescema sobre los angiogramas se evaluo por tres examinadores diferentes que se cegaron por la distribucion de los grupos (compuesto de prueba versus vehmulo), y se califico con 0 (sin fugas) a 3 (intensamente manchada).
El dfa 23, los animales se sacrificaron, y los ojos se cosecharon y fijaron en solucion de paraformaldehndo al 4 % durante 1 hora a temperatura ambiente. Despues del lavado, la retina se pelo cuidadosamente, se lavo, bloqueo y mancho con un anticuerpo de FITC-isolectina B4 con el fin de visualizar la vasculatura. Despues, las esclera- coroides se laminaron en plano y se examinaron bajo un microscopio de fluorescencia (Keyence Biozero) con una longitud de onda de excitacion de 488 nm. El area (en pm2) de la neovascularizacion coroidea se midio usando el software de ImageTool.
Para los Ejemplos 7 y 11 como compuestos representativos de la presente invencion, los siguientes resultados se obtuvieron en este modelo:
fuga vascular [calificacion de HRA] tamano de lesion de neovascularizacion coroidea [pm2 x 10 000]
Ejemplo 7 (vehmulo acuoso; n = 9)
1,49 + 0,24 6,14 +1,60
Ejemplo 7 (vehmulo de parafina; n = 8)
1,52 + 0,21 6,21 + 0,99
Ejemplo 11 (vehmulo acuoso; n = 7)
1,66 + 0,29 5,50 + 1,38
Ejemplo 11 (vehmulo de parafina; n = 12)
1,41 + 0,29 6,45 + 1,63
vehmulo acuoso de control (n = 12)
1,87 + 0,27 7,84 + 1,09
vehmulo de parafina de control (n = 17)
1,97 + 0,19 7,00 + 1,00
Aunque la invencion se ha desvelado con referencia a realizaciones espedficas, es aparente que los expertos en la materia pueden concebir otras realizaciones y variaciones de la invencion sin desviarse del espmitu y ambito verdaderos de la invencion. Se pretende que las reivindicaciones se interpreten con la inclusion de todas las tales realizaciones y variaciones equivalentes.
C. Ejemplos referentes a Composiciones Farmaceuticas
Composiciones farmaceuticas de acuerdo con la presente invencion pueden ilustrarse como sigue:

Claims (10)

  1. 5
    10
    15
    imagen1
    en la que
    A es N o C-R2, en el que
    R2 representa hidrogeno, fluor o cloro,
    R1 representa hidrogeno, fluor, cloro, metilo, etilo o metoxi,
    y
    Z representa alquilo (C1-C4) o cicloalquilo (C3-C6), cada uno de los cuales puede estar sustituido con hidroxi, o
    Z representa un grupo heterodclico de formula
    imagen2
    en la que * indica el punto de union al resto de pirrolotriazina, y R3 representa hidrogeno o hidroxi,
    con la condicion de que cuando R3 sea hidroxi, este hidroxi no este unido a un atomo de carbono del anillo situado adyacente al atomo de nitrogeno del anillo,
    o
    Z representa un grupo tiazol de formula
    *
    -Q
    R4
    20 en la que * indica el punto de union al resto de pirrolotriazina, y
    R4 representa hidrogeno, metilo, etilo, amino o aminometilo, o
    5
    10
    15
    20
    25
    imagen3
    en la que * indica el punto de union al resto de pirrolotriazina,
    R5 representa cicloalquilo (C3-C6), oxetanilo, tetrahidrofuranilo o tetrahidropiranilo,
    R6 representa hidrogeno o hidroxi,
    R7 representa hidrogeno o hidroxi,
    con la condicion de que cuando R7 sea hidroxi, este hidroxi no este unido a un atomo de carbono del anillo situado adyacente al atomo de nitrogeno del anillo, e
    Y es O, NH o NCH3,
    o una sal, un hidrato y/o un solvato del mismo farmaceuticamente aceptables.
  2. 2. El compuesto de formula (I) de acuerdo con la Reivindicacion 1, en el que A es C-R2, en la que
    R2 representa hidrogeno o fluor,
    R1 representa hidrogeno, fluor, cloro, metilo, etilo o metoxi,
    y
    Z representa n-propilo, n-butilo o ciclohexilo, cada uno de los cuales puede estar sustituido con hidroxi,
    o
    Z representa un grupo heterodclico de formula
    imagen4
    o
    Z representa un grupo tiazol de formula
    *
    -Q
    R4
    en la que * indica el punto de union al resto de pirrolotriazina, y
    R4 representa metilo, etilo, amino o aminometilo,
    o
    5
    10
    15
    20
    25
    imagen5
    en la que * indica el punto de union al resto de pirrolotriazina,
    R5 representa ciclopropilo o tetrahidropiran-4-ilo,
    R6 representa hidroxi,
    y
    Y es O,
    o una sal, un hidrato y/o un solvato del mismo farmaceuticamente aceptables.
  3. 3. El compuesto de formula (I) de acuerdo con la Reivindicacion 1 o 2, en la que A es C-R2, en la que
    R2 representa hidrogeno o fluor,
    R1 representa hidrogeno, fluor, metilo, etilo o metoxi,
    y
    Z representa 4-hidroxibutilo o 4-hidroxiciclohexilo, o
    Z representa un grupo heterodclico de formula
    imagen6
    o
    Z representa un grupo tiazol de formula
    *
    -Q
    R4
    en la que * indica el punto de union al resto de pirrolotriazina, y
    R4 representa metilo, etilo, amino o aminometilo,
    o
    Z representa un grupo de formula
    5
    10
    15
    20
    25
    R
    ,/CH
    5' \
    OH
    en la que * indica el punto de union al resto de pirrolotriazina,
    y
    R5 representa ciclopropilo,
    o una sal, un hidrato y/o un solvato del mismo, farmaceuticamente aceptables.
  4. 4. El compuesto de formula (I) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3, en la que
    A es C-R2, en el que
    R2 representa hidrogeno o fluor,
    o una sal, un hidrato y/o un solvato del mismo, farmaceuticamente aceptables.
  5. 5. El compuesto de formula (I) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3, en la que
    A es C-R2, en el que R2 representa fluor,
    o una sal, un hidrato y/o un solvato del mismo, farmaceuticamente aceptables.
  6. 6. Un procedimiento de prepracion de un compuesto de formula (I) como se define en las Reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque una bromopirrolotriazina de formula (II)
    imagen7
    (II),
    en la que Z tiene el significado indicado en la reivindicacion 1 a 3, esta o bien
    [A] acoplada con un acido arilboronico o ester de formula (III)
    imagen8
    en la que A y R1 tienen los significados indicados en la reivindicacion 1 a 3, y
    R8 representa hidrogeno o alquilo (C1-C4) o ambos residuos R8 estan unidos para formar un puente -(CH2)2-, - C(CH3)2-C(CH3)2-, -(CH2)3- o -CH2-C(CH3)2-CH2-,
    en presencia de un catalizador de paladio adecuado y una base para producir el compuesto diana de formula (I)
    5
    imagen9
    en la que A, Z y R1 tienen los significados indicados en la reivindicacion 1 a 3, o
    [B] convertida en primer lugar en el acido boronico correspondiente o derivado de ester de formula (IV)
    imagen10
    10
    en la que Z tiene el significado indicado en la reivindicacion 1 a 3, y
    R9 representa hidrogeno o alquilo (C1-C4), o ambos residuos R9 estan unidos para formar un puente -(CH2)2-, -C(CHa)2-C(CHa)2-, -(CH2)3- o -CH2-C(CH3)2-CH2-,
    que despues se acopla con un bromuro de arilo de formula (V)
    imagen11
    en la que A y R1 tienen los significados indicados en la reivindicacion 1 a 3,
    en presencia de un catalizador de paladio adecuado y una base para dar tambien el compuesto diana de formula (I)
    5
    imagen12
    en la que A, Z y R1 tienen los significados indicados en la reivindicacion 1 a 3,
    opcionalmente seguido, donde sea adecuado, por (i) la separacion de los compuestos de formula (I) en sus respectivos enantiomeros y/o diastereomeros, y/o (ii) la conversion de los compuestos de formula (l) en sus respectivos hidratos, solvatos, sales y/o hidratos o solvatos de las sales por medio del tratamiento con los disolventes y/o acidos correspondientes.
  7. 7. Compuesto como el definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 para su uso en el tratamiento o la prevencion de enfermedades.
  8. 8. Uso de un compuesto como el definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 para la fabricacion de una 10 composicion farmaceutica para el tratamiento o la prevencion de degeneracion macular relacionada con la edad (DME), neovascularizacion coroidea (NVC), retinopatfa diabetica y edema macular diabetico (EMD).
  9. 9. Una composicion farmaceutica que comprende un compuesto como el definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o una sal, un hidrato y/o un solvato del mismo farmaceuticamente aceptable, y uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables.
    15 10. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 9 que ademas comprende uno o mas agentes terapeuticos
    adicionales.
  10. 11. La composicion farmaceutica como se define en la reivindicacion 9 o 10 para su uso en el tratamiento o la prevencion de degeneracion macular relacionada con la edad (DME), neovascularizacion coroidea (NVC), retinopatfa diabetica y edema macular diabetico (EMD).
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Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2707361B1 (en) 2011-05-10 2017-08-23 Gilead Sciences, Inc. Fused heterocyclic compounds as sodium channel modulators
TWI622583B (zh) 2011-07-01 2018-05-01 基利科學股份有限公司 作為離子通道調節劑之稠合雜環化合物
NO3175985T3 (es) 2011-07-01 2018-04-28
CN104080789B (zh) * 2012-01-31 2016-05-11 南京奥昭生物科技有限公司 作为布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂的环状分子
JP6692795B2 (ja) * 2014-04-10 2020-05-13 ランケナー インスティテュート フォー メディカル リサーチ 眼疾患および眼障害の治療のための方法および組成物
EP3148993B1 (en) 2014-05-28 2019-02-27 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Process for preparing thiazole derivatives
US10023576B2 (en) 2014-10-22 2018-07-17 Bristol-Myers Squibb Company Heteroaryl substituted pyrrolotriazine amine compounds as PI3K inhibitors
WO2016064957A1 (en) 2014-10-22 2016-04-28 Bristol-Myers Squibb Company Bicyclic heteroaryl amine compounds as pi3k inhibitors
US10047096B2 (en) 2014-11-25 2018-08-14 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Substituted pyridobenzodiazepinone-derivatives and use thereof
EP3283475B1 (en) 2015-04-16 2019-10-16 Merck Patent GmbH 3-(1h-benzimidazol-2-yl)-1h-pyridin-2-one derivatives
WO2017035366A1 (en) 2015-08-26 2017-03-02 Incyte Corporation Pyrrolopyrimidine derivatives as tam inhibitors
TWI753892B (zh) 2016-03-28 2022-02-01 美商英塞特公司 作為ｔａｍ抑制劑之吡咯并三嗪化合物
CN109111447A (zh) 2017-06-23 2019-01-01 中国科学院上海药物研究所 7-位取代吡咯并三嗪类化合物或其药学上可用的盐，及其制备方法和用途
MX2020003375A (es) 2017-09-27 2020-08-03 Incyte Corp Sales de inhibidores de macrofagos asociados a tumores (tam).
TWI832871B (zh) 2018-06-29 2024-02-21 美商英塞特公司 Axl/mer 抑制劑之調配物
WO2024097980A1 (en) 2022-11-04 2024-05-10 Bristol-Myers Squibb Company Ret-ldd protein inhibitors

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000071129A1 (en) * 1999-05-21 2000-11-30 Bristol-Myers Squibb Company Pyrrolotriazine inhibitors of kinases
ATE469161T1 (de) 2002-08-08 2010-06-15 Kissei Pharmaceutical Pyrazolderivat, dieses enthaltende medizinische zusammensetzung, medizinische verwendung davon, und zwischenprodukt für dessen herstellung
US7148226B2 (en) 2003-02-21 2006-12-12 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of hepatitis C virus RNA-dependent RNA polymerase, and compositions and treatments using the same
UY28931A1 (es) 2004-06-03 2005-12-30 Bayer Pharmaceuticals Corp Derivados de pirrolotriazina utiles para tratar trastornos hiper-proliferativos y enfermedades asociadas con angiogenesis
DE102005042742A1 (de) * 2005-09-02 2007-03-08 Schering Ag Substituierte Imidazo[1,2b]pyridazine als Kinase-Inhibitoren, deren Herstellung und Verwendung als Arzneimittel
WO2007056170A2 (en) 2005-11-02 2007-05-18 Bayer Healthcare Ag Pyrrolo[2,1-f] [1,2,4] triazin-4-ylamines igf-1r kinase inhibitors for the treatment of cancer and other hyperproliferative diseases
US7514435B2 (en) * 2005-11-18 2009-04-07 Bristol-Myers Squibb Company Pyrrolotriazine kinase inhibitors
EP1957485B1 (en) 2005-12-02 2013-02-13 Bayer HealthCare, LLC Substituted 4-amino-pyrrolotriazine derivatives useful for treating hyper-proliferative disorders and diseases associated with angiogenesis
PE20070855A1 (es) 2005-12-02 2007-10-14 Bayer Pharmaceuticals Corp Derivados de 4-amino-pirrolotriazina sustituida como inhibidores de quinasas
US7772231B2 (en) 2005-12-29 2010-08-10 Abbott Laboratories Substituted pyrazolo[3,4-d]pyrimidines as protein kinase inhibitors
EP1873157A1 (en) * 2006-06-21 2008-01-02 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Pyrazolopyrimidines and salts thereof, pharmaceutical compositions comprising same, methods of preparing same and uses of same
CA2667962A1 (en) * 2006-10-30 2008-05-08 Novartis Ag Heterocyclic compounds as antiinflammatory agents
NZ598927A (en) 2007-01-12 2013-09-27 Biocryst Pharm Inc Antiviral nucleoside analogs
US8124759B2 (en) 2007-05-09 2012-02-28 Abbott Laboratories Inhibitors of protein kinases
PE20090506A1 (es) * 2007-07-26 2009-05-28 Novartis Ag DERIVADOS DE IMIDAZO-[1,2-b]-PIRIDAZIN COMO INHIBIDORES DE ALK5 Y/O ALK4
WO2009050183A2 (en) * 2007-10-17 2009-04-23 Novartis Ag Imidazo [1, 2-a] pyridine derivatives useful as alk inhibitors
EA019507B1 (ru) * 2008-05-13 2014-04-30 Айрм Ллк Конденсированные азотсодержащие гетероциклы и содержащие их композиции в качестве ингибиторов киназы
JP5656976B2 (ja) 2009-04-29 2015-01-21 ローカス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド ピロロトリアジン化合物

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