CN103764657A - 作为alk1抑制剂的羟甲基芳基取代的吡咯并三嗪 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及新的式（I）的5-[(羟甲基)芳基]-取代的吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺，涉及制备所述化合物的方法，涉及含有所述化合物的药物组合物，以及涉及所述化合物或组合物用于治疗血管生成相关的疾病，尤其是血管生成相关的眼部疾病的用途。
Description
本发明涉及新的5-[(羟甲基)芳基]取代的吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺，涉及制备所述化合物的方法，涉及含有所述化合物的药物组合物，以及涉及所述化合物或组合物用于治疗血管生成相关疾病（尤其是血管生成相关的眼部疾病）的用途。
术语血管生成也被称为新血管形成（neovascularisation），其意为形成新的血管的过程。其不仅参与正常发育也参与许多病理学状态，所述病理学状态包括，例如，癌症、风湿性关节炎、组织损伤后的伤口愈合、动脉粥样硬化、牛皮癣和眼部疾病。
在发达国家，各种眼部疾病是绝大多数视觉障碍和失明的原因，这些眼部疾病的特征在于、病因在于和/或结果是脉络膜新血管形成、视网膜新血管形成或虹膜新血管形成或者视网膜水肿[Campochiaro(2004),Exp.Opin.Biol.Ther.4:1395-1402]。
例如，与糖尿病相关的视网膜病是在1型糖尿病中造成失明的主要原因，其在2型糖尿病中也是常见的。另一与新血管形成相关的眼部疾病是年龄相关性黄斑变性（AMD）。AMD是西方世界中50岁或以上人群失明的最常见原因，并且随着年龄的增长其越来越普遍。AMD分为湿性（新血管）或干性（非新血管）。湿型疾病是造成最严重的视力丧失的原因。
一些其它不太常见，但是却造成衰弱的视网膜疾病包括脉络膜新生血管膜（CNVM）、囊样黄斑水肿（CME，还称为黄斑水肿或黄斑肿胀）、视网膜前膜（ERM，黄斑皱褶）和黄斑裂孔。在CNVM中，来自脉络膜的畸形血管穿过视网膜层生长。这些脆弱的新血管非常容易破裂，从而造成血液和流体在视网膜层内淤积。在CME——其因为疾病、损伤或手术而发生——中，液体在黄斑层内聚集，从而造成模糊、扭曲的中央视力。ERM（黄斑皱褶）是在黄斑上方形成的玻璃纸样膜，其可通过造成视力模糊和扭曲而影响中央视力。
还相关的疾病为例如，视网膜色素上皮细胞（RPE）的增生和萎缩性改变、视网膜脱落、脉络膜静脉阻塞、视网膜静脉阻塞、伴随以下疾病的角膜血管形成：角膜炎、角膜移植术或角膜成形术，缺氧导致的角膜血管形成（例如频繁配戴隐形眼镜的结果）、翼状胬肉结膜、视网膜下水肿和视网膜内水肿。
已经发现血管内皮生长因子（VEGF）是血管生成的重要调节剂，并且已经涉及许多病症（包括AMD和糖尿病性视网膜病）的病理学。此外，对于AMD，已经显示玻璃体内注射抗VEGF抑制剂（如哌加他尼（pegaptinib）、兰尼单抗（ranibizumab）或阿柏西普（aflibercept））可减少脉络膜血管形成和血管渗漏[Gragoudas(2004),N.Engl.J.Med.351:2805-2816;Rosenfeld(2006),N.Engl.J.Med.355:1419-1431;Dixon(2009),Expert Opin.Investig.Drugs18:1573-1580]。
目前对AMD的医疗标准是雷珠单抗（兰尼单抗）——一种抗VEGF疗法。然而，所有用雷珠单抗治疗的患者中仅1/3表现出视力得到改善[Rosenfeld(2006),N.Engl.J.Med.355:1419-1431]。因此，具有不依赖于VEGF的作用模式的新型抗血管生成治疗策略具有改善目前的眼部疾病（糖尿病性视网膜病和AMD）的医疗标准的潜力。
ALK1（激活素受体样激酶-1）是TGFβ受体家族的Ser/Thr激酶受体，其优先在内皮细胞中表达并且参与血管形成。这一家族的成员通过以下方式调节其生物学活性：通过与I型和II型丝氨酸/苏氨酸激酶受体TβRI和TβRII及辅助性III型受体的异四聚体复合物的配体结合。TGFβ以及高亲和性配体BMP9和BMP10可活化BMPRII或AcrRII与III型受体内皮糖蛋白的受体复合物中的ALK1[Scharpfenecker(2007),J.Cell Sci.120:964-972]。BMP9与微血管内皮细胞中ALK1的结合活化了Smad1/5/8通路[David(2007),Blood109(5):1953-1961]。过去曾假设BMP9抑制内皮细胞迁移和生成。然而，大部分的研究发现ALK1受体活化促进内皮细胞迁移、增殖和管形成[Goumans(2002),EMBOJournal21(7):1743-1753;Wu(2006),Microvasc.Res.71:12-19]。
BMP9和BMP10活化ALK1受体复合物。在内皮细胞中，TGFβ也可活化ALK1，而在大多数细胞类型中TGFβ通过ALK5进行信号传导。ALK5活化引起Smad2/3磷酸化，而ALK1活化引起Smad1/5磷酸化。每条Smad信号通路最终均导致对特定的靶基因集的调节：Smad2/3信号传导诱导PAI-1表达和Id-1抑制，而Smad1/5信号传导诱导Smad6、Smad7和Id-1表达并降低PAI-1表达[Deng(2006),J.CellBiol.134:1563-1571;Ota(2002),J.Cell Physiol.193:299-318]。
III型受体内皮糖蛋白尤其在内皮细胞中在ALK1和ALK5通路的微调中起作用，调节配体受体相互作用[ten Dijke(2008),Angiogenesis11:79-89]。内皮糖蛋白促进TGFβ/ALK1的相互作用，但是降低TGFβ/ALK5的相互作用[David(2007),Blood109:1953-1961]。
在内皮糖蛋白和ALK1中的突变与称为遗传出血性毛细血管扩张症（分别简称为HHT1和HHT2）的常染色体显性遗传病有关，其特征为血管生成障碍，如动静脉畸形和毛细血管扩张[Fernandez-Lopez(2006),Clin.Med.&Res.4:66-78]。仅具有ALK1基因（ALK+/-）的一个功能性拷贝的RIP1-Tag2小鼠与ALK1wt小鼠相比表现出肿瘤进展延缓和微血管密度较低。使用可溶性ALK1-Fc受体构建体RAP-041时有类似的现察结果，所述RAP-041抑制体内肿瘤血管生成并限制肿瘤生长[Cunha(2010),J.Exp.Med.207:85-100]。
因此，迫切需要发现有效并且选择性的ALK1抑制剂，以进一步说明ALK1在血管生理学和病理学中的作用并且得到用于与血管生成和血管重塑相关的疾病的潜在治疗策略。
在WO2007/147647-A1中，某些3-芳基取代的吡唑并[1,5-a]嘧啶衍生物被描述为当时公开的第一个小分子ALK1激酶抑制剂。这些化合物据说可用于治疗失调的血管生长的疾病，尤其用于实体瘤和其转移以及眼部的血管生成依赖性疾病（例如年龄相关性黄斑变性）。
已经公开了各种对许多蛋白激酶具有明显抑制作用的吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺衍生物，例如WO00/71129-A1、WO2005/121147-A1、WO2007/056170-A2、WO2007/061882-A2、WO2007/064883-A2、WO2007/064931-A2、WO2007/079164-A2、WO2008/089105-A2、WO2009/136966-A1和WO2010/12696。一般而言，这些化合物据说可用于治疗增殖性和/或血管生成相关性疾病（例如癌症）。但是，这些公开出版物均未记载ALK1作为潜在靶向激酶。
令人惊奇的是，目前已经发现在5位具有羟甲基芳基取代基的吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺衍生物呈现有效的和选择性ALK1激酶抑制作用，这使得这些化合物对治疗与血管生成相关的眼部疾病特别有用。
因此，在一方面，本发明涉及通式（I）的5-[(羟甲基)芳基]取代的吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺
其中
A为N或C-R2，其中
R2代表氢、氟或氯，
R1代表氢、氟、氯、甲基、乙基或甲氧基，
并且
Z代表(C1-C4)-烷基或(C3-C6)-环烷基，其各自可被羟基取代，
或者
Z代表下式的杂环基
其中*表示连接至吡咯并三嗪部分的位点，
且
R3代表氢或羟基，
条件是当R3为羟基时，该羟基不连接至位置与环氮原子相邻的环碳原子，
或者
Z代表下式的噻唑基
其中*表示连接至吡咯并三嗪部分的位点，
并且
R4代表氢、甲基、乙基、氨基或氨甲基，
或者
Z代表下式的基团
其中*表示连接至吡咯并三嗪部分的位点，
R5代表(C3-C6)-环烷基、氧杂环丁烷基（oxetanyl）、四氢呋喃基或四氢吡喃基，
R6代表氢或羟基，
R7代表氢或羟基，
条件是当R7为羟基时，该羟基不连接至位置与环氮原子相邻的环碳原子，
并且
Y为O、NH或NCH3。
本发明的化合物还可以其盐、溶剂合物和/或所述盐的溶剂合物的形式存在。
本发明的化合物为式(I)的化合物及其盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，式(I)所包括的具有下述式的化合物及其盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，以及式(I)所包括的以下作为实施方案实例提及的化合物及其盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中式(I)所包括的以下提及的化合物并非已经为盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物。
用于本发明目的的盐优选地为本发明化合物的药学上可接受的盐（例如，参见S.M.Berge et al.,"Pharmaceutical Salts",J.Pharm.Sci.1977,66,1-19）。还涵盖本身不适合药物应用但可以用于例如本发明化合物的盐的分离或纯化的盐。
药学上可接受的盐包括无机酸、羧酸和磺酸的酸加成盐，例如以下酸的盐：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、反丁烯二酸、顺丁烯二酸和苯甲酸。
本发明上下文中的溶剂合物是指通过与溶剂分子化学计量配位形成络合物的本发明化合物的那些形式，其为固态或液态。水合物是溶剂合物的一种具体形式，其中与水发生配位。本发明上下文中优选的溶剂合物是水合物。
本发明的化合物可以（通过不对称中心的性质或者通过限制旋转）以异构体（对映异构体、非对映异构体）的形式存在。可以存在任何异构体，其中不对称中心为(R)-、(S)-或(R,S)-构型。
还应理解当在本发明的化合物中存在两个或多个不对称中心时，通常可以存在具有示例性结构的若干个非对映异构体和对映异构体，并且纯的非对映异构体和纯的对映异构体代表优选的实施方案。纯的立体异构体、纯的非对映异构体、纯的对映异构体及其混合物意欲在本发明的范围内。
由于双键或环周围的取代基性质产生的几何异构体可以为顺（=Z-）式或反（=E-）式，并且两种异构形式均在本发明的范围内。
本发明化合物的所有异构体，无论是经分离的、纯的、部分纯的或是外消旋混合物，均包括在本发明的范围内。所述异构体的纯化和所述异构体混合物的分离是可以通过本领域已知的标准技术实现。例如，通过色谱法或结晶法可将非对映异构混合物分离成单个异构体，通过手性相上的色谱方法或通过拆分可将外消旋体分离成各自的对映异构体。
此外，本发明包括上述化合物的所有可能的互变异构形式。
除非另有说明，以下定义适用于本说明书和权利要求书通篇使用的取代基和残基：
(C 1 -C 4 )-烷基代表具有1至4个碳原子的直链或支链饱和烃基。实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基。
(C 3 -C 6 )-环烷基代表具有3至6个环碳原子的单环饱和烃基。实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基。
在本文件通篇中，为了简要起见，优选使用单数语言而非复数语言，但是如果没有另外说明，单数语言通常意为包括复数语言。例如，表述“一种在患者中治疗一种疾病的方法，所述方法包括向患者给予有效量的一种式（I）的化合物”意为包括同时治疗一种以上疾病以及给予一种以上式（I）的化合物。
在一个优选的实施方案中，本发明涉及通式（I）的化合物，其中
A为C-R2，其中
R2代表氢或氟，
R1代表氢、氟、氯、甲基、乙基或甲氧基，
并且
Z代表正丙基、正丁基或环己基，其各自可以被羟基取代，
或者
Z代表下式的杂环基
其中*表示连接至吡咯并三嗪部分的位点，
或者
Z代表下式的噻唑基
其中*表示连接至吡咯并三嗪部分的位点，
并且
R4代表甲基、乙基、氨基或氨甲基，
或者
Z代表下式的基团
其中*表示连接至吡咯并三嗪部分的位点，
R5代表环丙基或四氢吡喃-4-基，
R6代表羟基，
并且
Y为O。
在一个特别优选的实施方案中，本发明涉及通式（I）的化合物，其中
A为C-R2，其中
R2代表氢或氟，
R1代表氢、氟、甲基、乙基或甲氧基，
并且
Z代表4-羟丁基或4-羟基环己基，
或者
Z代表下式的杂环基
其中*表示连接至吡咯并三嗪部分的位点，
或者
Z代表下式的噻唑基
其中*表示连接至吡咯并三嗪部分的位点，
并且
R4代表甲基、乙基、氨基或氨甲基，
或者
Z代表下式的基团
其中*表示连接至吡咯并三嗪部分的位点，
并且
R5代表环丙基。
在一个独特的实施方案中，本发明涉及通式（I）的化合物，其中
A为C-R2，其中
R2代表氢或氟。
在另一个独特的实施方案中，本发明涉及通式（I）的化合物，其中
A为C-R2，其中
R2代表氟，
并且
R1代表氟。
根据需要，在残基的各个组合或优选组合中特别指出的残基定义也可用其它组合的残基定义替代，无论针对所述残基所指出的特定组合如何。特别优选两种或多种上述优选范围的组合。
在另一个实施方案中，本发明涉及用于制备通式（I）的化合物的方法，其特征在于式（II）的溴代吡咯并三嗪
其中Z具有上述定义，
或者
[A]在存在合适的钯催化剂和碱的情况下与式（III）的芳基硼酸或酯偶联得到式（I）的目标化合物
其中A和R1具有上述定义，
并且
R8代表氢或(C1-C4)-烷基，或者两个R8残基连接在一起形成-(CH2)2-、-C(CH3)2-C(CH3)2-、-(CH2)3-或-CH2-C(CH3)2-CH2-桥，
其中A、Z和R1具有上述定义，
或者
[B]在存在合适的钯催化剂和碱的情况下首先被转化成相应的式（IV）的硼酸或酯衍生物，然后再被与式（V）的芳基溴偶联同样得到式（I）的目标化合物，
其中Z具有上述定义，
并且
R9代表氢或(C1-C4)-烷基，或者两个R9残基连接在一起形成-(CH2)2-、-C(CH3)2-C(CH3)2-、-(CH2)3-或-CH2-C(CH3)2-CH2-桥，
其中A和R1具有上述定义，
其中A、Z和R1具有上述定义，
随后任选地，如果合适，通过(i)将式（I）的化合物分离成它们各自的对映异构体和/或非对映异构体，优选使用色谱方法进行分离，和/或(ii)通过用相应的溶剂和/或酸处理，将式（I）的化合物转化成它们各自的水合物、溶剂合物、盐和/或所述盐的水合物或溶剂合物。
如上文所列出的，式（I）的化合物可通过溴代吡咯并三嗪（II）和芳基硼酸酯或硼酸（III）之间的偶联反应（“Suzuki偶联”）合成。所述偶联通常在高温下使用钯催化剂、碱和惰性溶剂进行。催化剂和反应条件的概述可见于文献[参见，例如，S.Kotha et al.,Tetrahedron2002,58,9633-9695;T.E.Barder et al.,J.Am.Chem.Soc.2005,127,4685-4696]。在该反应中优选的催化剂为四(三苯基膦)钯(0)。优选的碱为作为水溶液使用的碳酸钠。所述反应是在有机溶剂中进行，所述有机溶剂在反应条件下是惰性的，例如1,4-二氧杂环己烷、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺（DMF）或二甲基亚砜（DMSO）；或者所述反应是在水或这些溶剂的混合物中进行。优选地，所述反应在1,4-二氧杂环己烷和水的混合物或乙腈和水的混合物中进行。所述反应通常在+100℃至+250℃，优选+120℃至150℃的温度下进行。加热优选通过单模式微波装置进行。所述反应通常在惰性气氛，优选在氩气下进行。
用于Suzuki偶联的反应参与物的可逆反应性有时可能是有利的。出于此目的，根据上述方法中的一种，首先将溴代吡咯并三嗪（II）转化成相应的硼酸酯（IV），然后再与芳基溴（V）交叉偶联。从（II）到（IV）的转化是通过金属介导的硼烷基化反应实现。优选的方法是钯催化的“Miyaura硼烷基化反应”[参见，例如，J.Takagi et al.,J.Am.Chem.Soc.2002,124,8001-8006;T.Ishiyama et al.,J.Org.Chem.1995,60,7508-7510;A.L.S.Thompson et al.,Synthesis2005,547-550]。用于交叉偶联反应(IV)+(V)→(I)的方法、试剂和溶剂选自前述部分所提及的那些。
芳基硼酸（III）[R8=H]和芳基硼酸酯(III)[R8=烷基，或者两个R8连在一起形成环状硼酸酯，例如，频那醇酯（pinacolato ester）]是市售可得的，或者它们可用金属介导的硼烷基化反应由相应的芳基卤化物或芳基三氟甲磺酸酯（aryl triflate）方便地制备（参见前述部分）。硼烷基化和随后的Suzuki偶联可以在两步单独的步骤中进行，所述步骤包括中间体（III）的分离和纯化。或者，硼烷基化和交叉偶联可以作为一锅法直接使用（III）进行而不经分离和纯化。
如果伯胺或仲胺部分形成式(I)的目标化合物中的Z基团的部分，则在上述硼烷基化和偶联反应中，使用所述胺的经保护衍生物而不使用游离胺作为起始的吡咯并三嗪（II）通常是有利的。出于此目的，可以使用常规的临时氨基保护基，例如酰基（例如乙酰基或三氟乙酰基）或氨基甲酸酯类型保护基（例如Boc基团、Cbz基团或Fmoc基团）。优选使用三氟乙酰基或Boc基。类似地，在偶联组分（III）和（IV）中的羟基功能分别可以在反应过程中被临时地阻断，优选地作为甲硅烷基醚衍生物，例如三甲硅烷基醚或叔丁基二甲硅烷基醚。
然后，这些保护基可以在偶联反应混合物的水性后处理过程中被同时除去，或者它们可以在随后的单独反应步骤中使用本领域已知的标准方法除去。上述分别来自式（II）、（III）和（V）的相应游离胺或醇，或者来自其它前体化合物（参见下述部分）的经保护的中间体的制备也可按照文献中描述的一般方法容易地实现[参见，例如，T.W.Greene和P.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,Wiley,New York,1999]。
本发明的化合物的制备可由以下合成方案进行描述：
方案1
可以用于制备式（II）的溴代吡咯并三嗪的合成方法学可根据存在于（II）中的Z基团的化学类型进行构造。下文给出了描述这些各种路线的实例（参见合成方案2-6）。更详细的方法在描述具体中间体和本发明示例性化合物的实验部分提供。
例如，含有烷基或羟烷基残基作为Z基团的式（II）的化合物可通过以下方式获得：使用溴代吡咯并三嗪（VI）和式（VII）的端炔之间的偶联反应作为关键步骤（方案2）。这一反应类型（“Sonogashira反应”）通常是在存在钯-铜催化剂体系和碱的情况下进行。这一反应的一些实例在文献中有所描述[参见，例如，R.Chinchilla和C.Nájera,Chem.Rev.2007,107,874-922]。在本发明中，优选的铜来源为碘化亚铜(I)，使用四(三苯基膦)钯(0)作为钯催化剂，而吡咯烷既作为碱也作为溶剂。所述偶联反应有利地在同步微波辐照下进行。
然后使用常规的钯或铂催化剂，对所获得的炔（VIII）进行催化氢化。优选地，使用二氧化铂(IV)作为催化剂并且所述反应在作为溶剂的乙酸中进行。在一些情况下，通过这一方法获得产物（IX）和（X）的混合物，二者在任何情况下均可通过色谱方法容易地分离。随后的溴化反应（优选地使用1,3-二溴-5,5-二甲基乙内酰脲作为溴来源，反应在惰性溶剂例如THF或DMF中进行）分别获得目标的吡咯并三嗪（IIa）和（IIb）。
起始化合物7-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺(VI)的制备在前文已有描述[参见WO2007/056170-A2(中间体B)]。
方案2
[m=0或1，n=1或2]
类型（IIc）的溴代吡咯并三嗪前体是可通过化合物（VI）与金属（例如镁或锂）的金属化作用或者通过使用有机镁或有机锂试剂的卤素-金属交换来制备。优选的金属为镁，其是通过在溶剂（例如THF或乙醚）中的使用异丙基溴化镁的处理而引入（VI）中。然后，中间体有机金属类与环烷酮或杂环烷酮（XI）[R、R’连接在一起形成环烷基或杂环烷基环]反应以得到叔醇（XIIa）。
生成式（XIIb）的仲醇的补充路线使用Vilsmeier甲酰化反应，通过该反应将氨基吡咯并三嗪（XIII）转化成醛（XIV）（方案3）。侧链的引入是通过随后在溶剂（例如THF或乙醚）中加入合适的格林试剂（XV）[R’’=烷基或环烷基]来实现。最后，化合物（XIIa）和（XIIb）的溴化反应分别提供了目标吡咯并三嗪（IIc）和（IId），所述溴代反应优选使用1,3-二溴-5,5-二甲基乙内酰脲，在惰性溶剂（例如THF或DMF）中进行。
起始化合物吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺（XIII）在前文已有描述[参见WO2007/056170-A2(中间体A)]。
方案3
式（II）的吡咯并三嗪（其中Z代表未取代的环烷基或经碳键合的氮杂-杂环基）可通过以下方式制备：将式（XIIc）的叔醇的脱氢生成式（XVI）的不饱和碳环或杂环，所述反应使用常规试剂，例如三氟乙酸酐、三氟甲磺酸酐、五氧化二磷(V)、硫酸或其他强酸（方案4）。随后使用常规催化剂（例如钯碳）进行的催化氢化产生式（XVII）的饱和类似物。氢化步骤优选地是在含有少量水性三氟乙酸的溶剂（如甲醇、乙醇或THF）中进行。最后，如上所述，用1,3-二溴-5,5-二甲基乙内酰脲进行的溴化反应提供目标吡咯并三嗪（IIe）。
醇前体物（XIIc）自身可通过方案3中描述的合成路线[参见化合物（XIIa）的制备]容易地获得。
方案4
式（II）的吡咯并三嗪（其中Z代表1,3-噻唑-4-基基团）可通过以下方法制备：使化合物（VI）进行如上所述的金属化反应，然后通过与氯代乙酰氯反应得到中间体（XVIII），接着中间体（XVIII）与硫代酰胺或硫脲（XIX）[R4如上文定义]缩合以得到前体化合物（XX）（方案5）。最后，如上所述，用1,3-二溴-5,5-二甲基乙内酰脲进行的溴化反应提供目标吡咯并三嗪（IIf）。
方案5
式（II）的吡咯并三嗪（其中Z代表N-环状氨基甲基基团）可通过以下方式制备：在酸性溶剂（例如乙酸）中，或者在酸与有机溶剂的混合物中使吡咯并三嗪（XIII）与甲醛和（XXI）类的环状胺反应（方案6）。然后，用上述1,3-二溴-5,5-二甲基乙内酰脲对所获得的产物（XXII）进行的溴化反应得到目标吡咯并三嗪（IIg）。
方案6
[G=例如CH2、CH(OH)、O或N-Boc]
式(V)、(VII)、(XI)、(XV)、(XIX)和(XXI)的化合物或者是市售可得的，由文献已知的，或者可用易于获得的起始原料通过采用文献中描述的常规方法容易地制备。
本发明的化合物具有有价值的药理学性质，并且其可用于预防和治疗人和动物的疾病。
本发明的化合物是ALK1激酶的有效的和选择性抑制剂。因此它们可用于治疗和/或预防与血管生成相关的疾病，尤其是与血管生成相关的眼部疾病。
对于本发明，术语治疗（treatment或treating）包括抑制、延迟、缓和、减弱、限制、减轻或消退疾病、障碍、病症或状态，其发生和/或进程，和/或其症状。术语预防（prevention或preventing）包括减小以下风险：患有、感染或经历疾病、障碍、病症或状态，其发生和/或进程，和/或其症状。术语预防（prevention）包括预防（prophylaxis）。疾病、障碍、病症或状态的治疗或预防可以是部分的或完全的。
可以用本发明的化合物治疗和/或预防的与血管生成相关的眼部疾病包括（但不限于）年龄相关性黄斑变性（AMD）、糖尿病性视网膜病，尤其是糖尿病性黄斑水肿（DME），其他视网膜病例如，脉络膜新生血管（CNV）、脉络膜新生血管膜（CNVM）、囊样黄斑水肿（CME）、视网膜前膜（ERM）和黄斑裂孔、视网膜色素上皮细胞（RPE）的增生改变、视网膜色素上皮细胞的萎缩改变、视网膜脱落、脉络膜静脉阻塞、视网膜静脉阻塞、伴随例如以下疾病的角膜血管形成：角膜炎、角膜移植术或角膜成形术，缺氧导致的角膜血管形成（例如频繁配戴隐形眼镜的后果）、翼状胬肉结膜、视网膜下水肿和视网膜内水肿。
在本发明的上下文中，术语年龄相关性黄斑变性（AMD）包括AMD的湿性（或渗出性、新血管形成）和干性（或非渗出性、非新血管形成）表现。
本发明的化合物还可用于治疗和/或预防与血管生成相关的炎性疾病，例如类风湿性关节炎、牛皮癣、接触性皮炎、湿疹、肺动脉高血压、多发性硬化症，以及肠道炎性疾病（例如克罗恩氏病）。还可以用本发明的化合物治疗和/或预防纤维化病，例如纤维化（fibrosis）和肝硬化（cirrhosis）。
鉴于本发明化合物的活性范围，其特别适合用于治疗和/预防眼部疾病，例如，年龄相关性黄斑变性（AMD）、脉络膜新生血管（CNV）、糖尿病性视网膜病和糖尿病性黄斑水肿（DME）。
以上提及的疾病均已在人类中被良好的明确，但是它们也以相似的病因学存在于其它动物（包括哺乳动物）中，并且可在这些动物中用本发明的化合物进行治疗。
因此，本发明还涉及本发明的化合物用于治疗和/或预防疾病（尤其是上述疾病）的用途。
本发明还涉及本发明的化合物用于制备治疗和/或预防疾病（尤其是上述疾病）的药物组合物的用途。
本发明还涉及本发明的化合物用在治疗和/或预防疾病，尤其是上述疾病的方法中的用途。
本发明还涉及用于治疗和/或预防疾病，尤其是上述疾病的方法，所述方法是通过使用有效量的至少一种本发明的化合物进行。
本发明的化合物可作为单独的药剂给药或与一种或多种其它治疗药剂组合给药，其中所述组合不会造成不可接受的副作用。该组合治疗包括给予含有上述式（I）化合物和一种或多种其它治疗剂的单一药物剂型，同样也包括给予式（I）的化合物和以其单独药物剂型形式的每种其它治疗剂。例如，可以向所述患者给予式（I）的化合物和治疗剂，所述式（I）的化合物和治疗剂一起在单一口服剂量组合物（例如片剂或胶囊剂）中，或者各个药剂可以分离的剂型给药至所述患者。
如果使用分离的剂型，式（I）的化合物和一种或多种其它治疗剂可以基本上同时（即并行的）或在分开的交错时间（即序贯的）给药。
特别地，本发明的化合物可以与VEGF介导的血管生成抑制剂或其他信号通路抑制剂一起以固定的或分离的结合物形式使用，所述VEGF介导的血管生成抑制剂例如，ACTB-1003、阿柏西普（aflibercept）、阿帕替尼（apatinib）、阿西替尼（axitinib）、贝伐单抗（bevacizumab）、贝伐西尼（bevasiranib）、BMS-690514、布立尼布（brivanib）、西地尼布（cediranib）、CT-322、多韦替尼（dovitinib）、E7080、foretinib、KH-902、利尼伐尼（linifanib）、MGCD-265、莫特沙尼（motesanib）、OTS-102、帕唑帕尼（pazopanib）、哌加他尼（pegaptanib）、雷珠单抗（ranibizumab）、瑞戈非尼（regorafenib）、鲁伯斯塔（ruboxystaurin）、索拉非尼（sorafenib）、SU-14813、舒尼替尼（sunitinib）、替拉替尼（telatinib）、TG-100801、tivozanib、TSU-68、凡德他尼（vandetanib）、vargatef、瓦他拉尼（vatalanib）和XL-184，所述其他信号通路抑制剂例如，ACU-4429、双硫仑（disulfiram）、E-10030、芬维a胺（fenretinide）、美卡拉明（mecamylamine）、PF-04523655、西罗莫司（sirolimus）、sonepcizumab、坦度螺酮（tandospirone）和伏洛昔单抗（volociximab）。
因此，在另一个实施方案中，本发明涉及一种药物组合物，其包括至少一种本发明的化合物和一种或多种其它治疗剂，所述药物组合物用于治疗和/或预防疾病，尤其是上述疾病。
本发明的化合物还可以其自身或在组合物中用于研究和诊断，或者用作分析参考标准品等。
在另一方面，本发明涉及药物组合物，其包括本发明化合物中的至少一种和一种或多种惰性、无毒、药学上合适的赋形剂，并且涉及其用于上述目的的用途。
本发明的化合物可具有全身作用和/或局部作用。为此目的，其可以适合的方式给药，例如通过口服、肠胃外、肺、鼻、舌、舌下、颊、直肠、真皮、透皮、结膜、结膜下、玻璃体内、耳或局部途径。
本发明的化合物可以适于这些给药途径的给药形式给药。
适用于口服给药的给药形式为这样的给药形式，即其根据现有技术发挥功能并且快速地和/或以改良方式释放本发明化合物，并且其含有晶体和/或无定形和/或溶解的形式的本发明化合物，例如片剂（未包衣或包衣片剂，例如具有肠溶衣或延缓溶解的包衣或不溶性包衣，所述包衣控制本发明化合物的释放）、在口腔中迅速崩解的片剂、或膜剂/薄片剂、膜剂/冻干剂、胶囊剂（例如硬明胶或软明胶胶囊）、糖衣片剂、颗粒剂、丸剂、粉剂、乳剂、悬浮剂、气溶胶或溶液剂。
可进行肠胃外给药，同时避免吸收步骤（例如静脉内、动脉内、心内、椎内或腰髓内）或包括吸收（例如肌内、皮下、皮内、经皮或腹膜内途径）。适于肠胃外给药的给药形式尤其为以溶液剂、悬浮剂、乳剂、冻干剂或无菌粉剂形式的注射和输注制品。
适于其他给药途径的形式包括，例如，用于吸入的药剂形式（例如，粉末吸入剂、喷雾剂）、滴鼻剂、溶液剂或喷雾剂；用于舌、舌下或颊给药的片剂或胶囊剂（例如，锭剂（troches,lozenges））；栓剂、耳部或眼部制剂（例如滴剂、软膏剂）、阴道胶囊剂、水性悬浮剂（洗剂、振荡合剂（shaking mixture））、亲脂性悬浮剂、软膏剂、乳膏剂（cream）、乳、糊剂、泡沫剂、扑粉剂和透皮治疗系统（例如贴剂）。
本发明的化合物可以本身已知的方式通过与惰性的、非毒性的、药学上合适的赋形剂混合而转化成上文提及的给药形式。这些赋形剂例如包括载体（例如微晶纤维素、乳糖、甘露醇）、溶剂（例如液体聚乙二醇）、乳化剂（例如十二烷基硫酸钠）、表面活性剂（例如，聚氧脱水山梨糖醇油酸酯）、分散剂（例如聚乙烯吡咯烷酮）、合成和天然的聚合物（例如白蛋白）、稳定剂（例如抗氧化剂，例如抗坏血酸）、着色剂（例如无机颜料，例如铁氧化物）以及调味剂和/或矫味剂。
一般来说，已经证明有利的是，对于肠胃外给药，给药量为约0.001至1mg/kg，优选约0.01至0.5mg/kg体重以获得有效的结果。对于口服给药，示例性剂量范围为约0.01至100mg/kg，优选0.01至20mg/kg，更优选约0.1至10mg/kg体重。
然而，本发明药物组合物中的活性成分的实际剂量水平和给药时程可能会有所改变，以获得可对特定患者、组合物和给药模式有效实现所需治疗反应的活性成分的量，并且对患者是非毒性的。因此，在适当情况下，可能必须偏离所述剂量，特别是根据患者的年龄、性别、体重、膳食和整体健康状况、给药途径、对活性化合物的个体响应、制剂性质及进行给药的时间点或间隔。因此，在一些情况下，使用低于上述最小量的量可能是足够的，而在其他情况下，必须超过所述上限。当给予相对较大量时，建议将这些剂量分成一天内的多个单独剂量。
对于治疗和/预防眼部疾病，如上所述，本发明化合物优选的给药途径为眼部局部给药或者通过眼部给药系统给药。眼内注射剂是适于此目的的本发明化合物的另一种给药方式。
向眼内区域的递送可通过注射实现，所述注射使用套管或使用其它设计成将精确测定量的所需制剂引入眼内特定区室或组织（例如后房或视网膜）的侵入型装置。眼内注射可以进入玻璃体中（玻璃体内）、在结膜下方（结膜下）、在眼后方（眼球后）、进入巩膜中或在筋膜囊下方（筋膜囊下），并且可以为储库（depot）形式。还考虑了其它眼内给药途径和注射部位及形式，并且它们均在本发明的范围内。
本发明的化合物可以以本领域技术人员已知的方式被制剂，以实现向眼球的后方的足够递送，所述制剂可为常规剂量，例如使用滴眼剂，或者通过使用递送系统实现本发明化合物的控释（例如缓释）。
用于本发明化合物的优选眼部制剂包括这些化合物的水溶液剂、悬浮剂或胶体，其为液滴剂、液体洗剂、喷雾剂、软膏剂或胶体形式，所述化合物与适于制造和使用所述应用形式的赋形剂混合。或者，本发明的化合物可以经由脂质体或其它本领域已知的眼部递送系统施用至眼。
合适的剂量水平可以通过眼部疾病治疗领域的技术人员已知的任何合适的方法确定。优选地，对于局部给药，以1至4次每天的频率给予活性物质，或者如果使用药物递送系统，则以更低给药频率给予活性物质。通常，用于局部施用的眼部制剂含有约0.001%至10%浓度范围的活性成分。
下列示例性实施方案解释了本发明。本发明不限于这些实施例。
除非另有说明，在下列测试和实施例中的百分比为重量百分比；份数为重量份数。液体/液体溶液的溶剂比例、稀释比例及浓度均基于体积计。
A.实施例
缩写和首字母缩略词：
Ac 乙酰基
aq. 水性（溶液）
Boc 叔丁氧羰基
br. 宽峰（1H NMR信号）
Cbz 苄氧羰基
conc. 浓的
DCI 直接化学电离(MS)
DCM 二氯甲烷
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
e.e. 对映体过量
EI 电子轰击电离(MS)
ent 对映体、对映体纯的
eq. 当量
ESI 电喷雾电离(MS)
Et 乙基
EtOAc 乙酸乙酯
Fmoc (9H-芴-9-基甲氧基)羰基
GC/MS 气相色谱偶合的质谱
h 小时
Hal 卤素
1H NMR 质子核磁共振谱
HPLC 高效液相色谱
LC/MS 液相色谱偶合的质谱
Me 甲基
MeOH 甲醇
min 分钟
MS 质谱
of th. 理论值的（化学收率）
PdCl2(dppf) [1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)
Ph 苯基
rac 外消旋的、外消旋体
Rf TLC保留因子
rt 室温
Rt 保留时间(HPLC)
satd. 饱和的
TBAF 四丁基氟化铵
tBu 叔丁基
tert 叔
TFA 三氟乙酸
TFAA 三氟乙酸酐
THF 四氢呋喃
TLC 薄层色谱
制备型HPLC纯化方法：
方法1：
装置：Gilson Abimed HPLC,双泵系统；柱：ReproSil C18，250mm x30mm；洗脱剂A：水/1%氨，洗脱剂B：乙腈；梯度：0-3min10%B，5.01-31min95%B，31min95%B；流速：50mL/min；UV检测：210nm。
方法2：
装置：Gilson Abimed HPLC，双泵系统；柱：Kromasil-100A C18，5μm，250mm x30mm；洗脱剂A：水/0.05-0.5%TFA，洗脱剂B：乙腈；梯度：0-5min5%B，5.01-10min10%B，10.01-20min40%B，20.01-27min50%B，27.01-40min60%B，40.01-45min90%B，45.01-60min100%B；流速：15-60mL/min；UV检测：210nm。
方法3：
装置：Gilson Abimed HPLC，双泵系统；柱：Grom-Sil-120ODS-4HE，250mm x30mm；洗脱剂A：水，洗脱剂B：乙腈；梯度：0-3min10%B，3.01-35min98%B，35.01-40min98%B；流速：50mL/min；UV检测：210nm。
方法4：
装置：Gilson Abimed HPLC，双泵系统；柱：Grom-Sil-120ODS-4HE，250mm x30mm；洗脱剂A：水/0.5%氨，洗脱剂B：乙腈；梯度：0-3min10%B，3.01-35min98%B，35.01-40min98%B;流速：50mL/min；UV检测：210nm。
方法5：
装置：Gilson Abimed HPLC，双泵系统；柱：Chromatorex C1810μm，250mm x30mm；洗脱剂A：水，洗脱剂B：乙腈；梯度：0-3min10%B，5.01-31min90%B，31min90%B；流速：50mL/min；UV检测：210nm。
方法6：
装置：Gilson Abimed HPLC，双泵系统；柱：Chromatorex C1810μm，250mm x30mm；洗脱剂A：水/0.5%TFA，洗脱剂B：乙腈；梯度：0-3min10%B，5.01-31min90%B，31min90%B；流速：50mL/min；UV检测：210nm。
方法7：
装置：Gilson Abimed HPLC，双泵系统；柱：ReproSil C1810μm，250mm x40mm；洗脱剂A：水，洗脱剂B：乙腈；梯度：0-3min10%B，5.01-31min95%B，31min95%B；流速：50mL/min；UV检测：210nm。
方法8：
装置：Gilson Abimed HPLC，双泵系统；柱：ReproSil C1810μm，250mm x30mm；洗脱剂A：水，洗脱剂B：乙腈；梯度：0-3min10%B，5.01-31min95%B，31min95%B；流速：50mL/min；UV检测：210nm。
方法9：
装置：Gilson Abimed HPLC，双泵系统；柱：Waters Sunfire C185μm，250mm x20mm；洗脱剂A：水，洗脱剂B：乙腈；梯度：0min20%B，15min60%B，15.01-19min20%B；流速：25mL/min；UV检测：210nm。
分析型HPLC、LC/MS和GC/MS方法
方法1(HPLC):
仪器：配有DAD检测的Agilent1100；柱：Agilent Zorbax EclipseXDB-C84.6，150mm x5mm；洗脱剂A：0.01%TFA在水中，洗脱剂B：0.01%TFA在乙腈中；梯度：0-1min10%B，4-5min90%B，5.5min10%B；流速：2.0mL/min；温度：30℃；UV检测：210nm。
方法2(HPLC):
仪器：配有DAD检测的HP1100；柱：Kromasil100RP-18，60mm x2.1mm，3.5μm；洗脱剂A：5mL高氯酸(70%)/L水，洗脱剂B：乙腈；梯度：0min2%B，0.5min2%B，4.5min90%B，6.5min90%B，6.7min2%B，7.5min2%B；流速：0.75mL/min；温度：30℃；UV检测：210nm.
方法3(HPLC):
仪器：配有DAD检测的HP1100；柱：Kromasil100RP-18，60mm x2.1mm，3.5μm；洗脱剂A：5mL高氯酸(70%)/L水，洗脱剂B：乙腈；梯度：0min2%B，0.5min2%B，4.5min90%B，9min90%B，9.2min2%B，10min2%B；流速：0.75mL/min；温度：30℃；UV检测：210nm。
方法4(LC/MS)：
仪器：配有HPLC Agilent1100系列的Micromass Platform LCZ；柱：Thermo Hypersil GOLD3μ，20mm x4mm；洗脱剂A：1L水+0.5mL50%甲酸，洗脱剂B：1L乙腈+0.5mL50%甲酸；梯度：0.0min100%A→0.2min100%A→2.9min30%A→3.1min10%A→5.5min10%A；温度：50℃；流速：0.8mL/min；UV检测：210nm。
方法5(LC/MS):
仪器：配有HPLC Waters Alliance2795/HP1100的MicromassZQ；柱：Phenomenex Synergi2.5μMAX-RP100A Mercury，20mmx4mm；洗脱剂A：1L水+0.5mL50%甲酸，洗脱剂B：1L乙腈+0.5mL50%甲酸；梯度：0.0min90%A→2.5min30%A→3.0min5%A→4.0min5%A；流速：2mL/min；温度：50℃；UV检测：210nm。
方法6(LC/MS):
仪器：配有Waters UPLC Acquity的Micromass QuattroPremier；柱：Thermo Hypersil GOLD1.9μ，50mm x1mm；洗脱剂A：1L水+0.5mL50%甲酸，洗脱剂B：1L乙腈+0.5ml50%甲酸；梯度：0.0min90%A→0.1min90%A→1.5min10%A→2.2min10%A；温度：50℃；流速：0.33mL/min；UV检测：210nm。
方法7(LC/MS):
仪器：配有HPLC Waters Alliance2795的Micromass ZQ；柱：Phenomenex Synergi2.5μMAX-RP100A Mercury，20mm x4mm；洗脱剂A：1L水+0.5mL50%甲酸，洗脱剂B：1L乙腈+0.5mL50%甲酸；梯度：0.0min90%A→0.1min90%A→3.0min5%A→4.0min5%A→4.01min90%A；流速：2mL/min；温度：50℃；UV检测：210nm。
方法8(GC/MS):
仪器：Micromass GCT，GC6890；柱：Restek RTX-35，15m x200μm x0.33μm；氦气恒流：0.88mL/min；炉温：70℃；进样口：250℃；梯度：70℃，30℃/min→310℃(保持3min)。
方法9(HPLC):
仪器：配有DAD检测的Agilent1100；柱：Merck ChromolithSpeed ROD，150mm x5mm；洗脱剂A：0.01%甲酸在水中，洗脱剂B：乙腈；梯度：0min5%B，2.5min95%B，3min95%B；流速：5.0mL/min；温度：40℃；UV检测：210nm。
方法10(LC/MS):
仪器：Waters Acquity SQD UPLC系统；柱：Waters AcquityUPLC HSS T31.8μ，50mm x1mm；洗脱剂A：1L water+0.25mL99%甲酸，洗脱剂B：1L乙腈+0.25mL99%甲酸；梯度：0.0min90%A→1.2min5%A→2.0min5%A；温度：50℃；流速：0.40mL/min；UV检测：208-400nm。
一般合成方法1：
5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪衍生物与芳基硼酸或酯的Suzuki偶联：
在微波反应器瓶中将5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪A（约0.5mmol）、芳基硼酸（1.2当量）或相应的硼酸酯（例如硼酸二甲酯或硼酸频那醇酯）和四(三苯基膦)钯(0)（0.1当量）溶解于1,4-二氧杂环己烷（约4.0mL）和2M碳酸钠水溶液（1.5mL）的混合物中。将反应容器轧盖，在单模式微波装置中将混合物加热至140℃，加热1小时。冷却后，通过Celite垫过滤反应混合物，用1,4-二氧杂环己烷冲洗Celite垫以洗脱所有的有机物。减压下将合并的滤液蒸发至干燥，通过制备型HPLC纯化剩余物以得到目标化合物C。
一般合成方法2：
进行芳基溴化物的硼烷基化和随后与5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪衍生物的Suzuki偶联，而不分离中间体芳基硼酸或酯：
在微波反应器容器中将芳基溴化物D（约0.5mmol）溶解于DMF（3mL）中，将氩气鼓泡通过溶液，鼓泡5分钟，加入[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)-二氯甲烷络合物（0.1当量）、乙酸钾（3当量）和联硼酸频那醇酯（1.2当量）。将容器轧盖，在单模式微波装置中将混合物加热至130℃，持续60分钟。然后，过滤所得悬液。将所得滤液转移至另一微波加工容器中，并且加入四(三苯基膦)钯(0)（0.1当量）、2M碳酸钠水溶液（4当量）和5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪A（1当量）。将所述容器轧盖，然后将所述混合物在单模式微波装置中加热至140℃，持续1小时。将由此获得的粗反应混合物直接注射至制备型HPLC柱中以分离和纯化目标化合物C。
起始物质和中间体：
中间体1A
[2,6-二氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基]甲醇
将(4-溴-2,6-二氟苯基)甲醇（1.03g,4.62mmol）溶解于干燥的1,4-二氧杂环己烷（10mL）中。将氩气鼓泡通过溶液，然后加入[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)-二氯甲烷络合物（302mg,0.37mmol,0.08eq.）、无水乙酸钾（907mg,9.24mmol,2eq.）和联硼酸频那醇酯（1.23g,4.85mmol,1.05eq.），在单模式微波装置中加热混合物至130℃，加热1小时。冷却后即过滤所得混合物并且在减压下除去溶剂。向剩余物中加入环己烷（200mL）并且剧烈搅拌所得混合物30分钟。然后通过过滤除去不溶物，蒸馏除去环己烷，通过硅胶快速色谱（二氯甲烷/乙腈梯度）纯化剩余物。合并并蒸发含有产物的级分。题述化合物自发结晶成棕色固体。收率：790mg（理论值的63%）。
GC-MS（方法8）：Rt=5.36min;MS(EI):m/z(%)=270.3(15)[M]+.
中间体2A
[3,5-二氟-4-(羟甲基)苯基]硼酸
将[4-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-3,5-二氟苯基]硼酸（19.3g,63.9mmol;粗品,通过Hattori,Bioorg.Med.Chem.2006,14,3258-3262的方法制备）溶解于400mL水性乙酸（60%）中并且在40℃下搅拌5小时。然后在减压下蒸发溶剂，并通过硅胶快速色谱（以0%至2%溶于二氯甲烷中的甲醇进行梯度洗脱）纯化剩余物以得到3.46g（理论值的25%,LC-MS纯度87%）题述化合物。
LC-MS（方法7）:Rt=0.50min;MS(ESIpos):m/z(%)=171.2(100)[M-OH]+,MS(ESIneg):m/z(%)=187.3(100)[M-H]-.
中间体3A
(4-溴-2-氯苯基)甲醇
该题述化合物是根据记载于WO2004/074270-A2[实施例A(147),步骤1]中的方法制备。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ(ppm)=1.62(t,3H),2.32(s,3H),4.64(d,2H),7.23(d,1H),7.32(s,1H),7.33(d,1H).
中间体4A
(4-溴-2-甲基苯基)甲醇
该题述化合物根据描述于EP1544208-A1（参考实施例14）中的方法制备。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ(ppm)=1.62(t,3H),2.32(s,3H),4.64(d,2H),7.23(d,1H),7.32(s,1H),7.33(d,1H).
中间体5A
(5-溴代吡啶-2-基)甲醇
将5-溴代吡啶-2-羧酸酯（2.00g,9.27mmol）溶解于乙醇（20.0mL）中。在0℃下加入硼氢化钠，室温下搅拌混合物18小时。然后在减压下浓缩混合物，用1N盐酸淬灭，用固体碳酸钾中和并用二氯甲烷萃取。用硫酸镁干燥有机层并蒸发以得到1.57g（理论值的90%）题述化合物。
LC-MS（方法6）:Rt=0.56min;MS(ESIpos):m/z(%)=188.0(100)[M+H]+.
中间体6A
[6-(羟甲基)吡啶-3-基]硼酸
在氩气气氛下向中间体5A（1.50g,7.98mmol）和联硼酸频那醇酯（2.23g,8.28mmol）的脱气DMF（120mL）溶液中加入1,1'-双(二苯基膦)二茂铁-氯化钯(II)（292mg,0.40mmol）和乙酸钾（2.35g,23.9mmol）。将混合物加热至80℃，加热18小时，然后冷却至室温。过滤悬浮液，用二氧杂环己烷洗涤剩余物。在减压下浓缩合并的滤液，将油状剩余物溶解于50mL乙酸乙酯和50mL环己烷中并使其在室温下静置过夜。通过过滤收集形成的沉淀并将其丢弃。蒸发滤液，将剩余物再次溶解于100mL乙酸乙酯中并用50mL水萃取两次。浓缩水层得到690mg（理论值的56%）题述化合物，该化合物不经进一步纯化而使用。
LC-MS（方法6）:Rt=0.18min;MS(ESIpos):m/z(%)=154.0(100)[M+H]+.
中间体7A
3-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)丙-2-炔-1-醇
起始物质7-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺是根据在WO2007/056170-A2中所述的方法（中间体B）合成。
将7-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺（1.0g,4.69mmol）、碘化亚铜(I)（89mg,0.47mmol,0.1eq.）和四(三苯基膦)钯(0)（542mg,0.47mmol,0.1eq.）置于微波反应瓶中并抽真空1小时。然后用氩气吹扫容器，加入吡咯烷（15mL）和2-丙炔-1-醇（2.63g,47mmol,10eq.），将容器轧盖并在单模式微波装置中加热至85℃，加热120分钟。待冷却后，将反应混合物倾入120mL的浓氯化铵水溶液中，用乙酸乙酯萃取该溶液两次。用无水硫酸钠干燥并蒸发合并的有机层，通过快速色谱（Biotage二氧化硅柱，乙酸乙酯）纯化剩余物。通过LC-MS显示形成的产物（222mg）是纯的，并将其用于进一步转换。
HPLC（方法2）:Rt=2.59min;
LC-MS（方法6）:Rt=0.28min;MS(ESIpos):m/z(%)=189.2(100)[M+H]+.
中间体8A和中间体9A
3-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)丙-1-醇和7-丙基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺
在氩气气氛下将中间体7A（444mg,2.36mmol）溶解于乙酸（18mL）中。加入二氧化铂(IV)（40mg,0.18mmol,0.08eq.），在常压的氢气气氛下，于室温下剧烈搅拌混合物3小时。然后通过过滤除去催化剂，蒸馏除去溶剂，并使剩余物进行快速色谱（Biotage二氧化硅柱，环己烷/乙酸乙酯梯度）。在两个不同的色谱级分中获得中间体8A（185mg,理论值的41%）和9A（170mg,理论值的41%）：
中间体8A：
HPLC（方法2）:Rt=2.68min;
LC-MS（方法4）:Rt=0.83min;MS(ESIpos):m/z(%)=193.1(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=191.1(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.80(m,2H),2.86(t,J=7.7Hz,2H),3.45(m,2H),4.49(t,J=5.1Hz,1H),6.41(d,J=4.2Hz,1H),6.69(d,J=4.2Hz,1H),7.50(br.s,2H),7.78(s,1H).
中间体9A：
HPLC（方法1）:Rt=3.22min;
LC-MS（方法4）:Rt=1.23min;MS(ESIpos):m/z(%)=177.1(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=175.2(30)[M-H]-
中间体10A
3-(4-氨基-5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)丙-1-醇
将中间体8A（105mg,0.55mmol）溶解于THF（8.75mL）中并冷却至-20℃。加入1,3-二溴-5,5-二甲基乙内酰脲（78.1mg,0.5eq.），在-20℃下搅拌混合物1小时。然后用0.5mL浓的连二亚硫酸钠水溶液淬灭反应，升温至室温并将其在乙酸乙酯和水之间分配。用无水硫酸钠干燥有机相，蒸馏除去溶剂。收率：145mg（理论值的98%）。
HPLC（方法1）:Rt=2.96min;HPLC（方法2）:Rt=2.95min;
LC-MS（方法5）:Rt=1.03min;MS(ESIpos):m/z(%)=271.0(100)和273.0(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=269.0(99)和271.0(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.75(m,2H),2.83(t,J=8.1Hz,2H),3.43(m,2H),4.50(t,J=5.4Hz,1H),6.62(s,1H),7.81(s,1H).
中间体11A
5-溴-7-丙基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺
将中间体9A（110mg,0.62mmol）溶解于THF（4.44mL）中并冷却至-20℃。加入1,3-二溴-5,5-二甲基乙内酰脲（89mg,0.5eq.），在-20℃下搅拌混合物1小时。然后用0.5mL浓的连二亚硫酸钠水溶液淬灭反应，升温至室温并将其在乙酸乙酯和水之间分配。用无水硫酸钠干燥有机相，蒸馏除去溶剂。收率：154mg（85%纯，理论值的82%）。
HPLC（方法1）:Rt=3.78min;
LC-MS（方法7）:Rt=1.55min;MS(ESIpos):m/z(%)=255.0(99)和257.2(100)[M+H]+.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=0.91(t,J=7.3Hz,3H),1.65(m,2H),2.79(t,J=7.6Hz,2H),3.31(s,2H),6.63(s,1H),7.95(s,1H).
中间体12A
4-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)丁-3-炔-1-醇
将7-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺（1.0g,4.69mmol）、碘化亚铜(I)（89mg,0.47mmol,0.1eq.）和四(三苯基膦)钯(0)（542mg,0.47mmol,0.1eq.）装至微波反应器瓶中并抽真空1小时。然后用氩气吹扫容器，加入吡咯烷（15mL）和3-丁炔-1-醇（3.36g,47mmol,10eq.），将容器轧盖并在单模式微波装置中加热至85℃，加热120分钟。待冷却后，将反应混合物倾入120mL的浓氯化铵水溶液中，用乙酸乙酯萃取该溶液两次。用无水硫酸钠干燥合并的有机层并蒸发，通过快速色谱（Biotage二氧化硅柱，乙酸乙酯）纯化剩余物。所形成的产物（735mg）具有足够的纯度（66%，通过HPLC）用于进一步的转换。
HPLC（方法2）:Rt=2.77min;
LC-MS（方法4）:Rt=0.96min;MS(ESIpos):m/z(%)=203.1(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=201.1(100)[M-H]-.
中间体13A
4-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)丁-1-醇
将中间体12A（607mg,3.00mmol）溶解于乙酸（64mL）中，加入二氧化铂(IV)（50mg,0.22mmol,0.07eq.），在常压的氢气气氛下搅拌混合物15小时。然后通过过滤除去催化剂，在减压下蒸发滤液，通过快速色谱（Biotage二氧化硅柱，乙酸乙酯）纯化剩余物。收率：350mg（理论值的57%）。
HPLC（方法2）:Rt=2.92min;
LC-MS（方法4）:Rt=0.94min;MS(ESIpos):m/z(%)=207.1(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=205.3(100)[M-H]-.
中间体14A
4-(4-氨基-5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)丁-1-醇
-20℃下，将中间体13A（330mg,1.60mmol）溶解于THF（26mL）中，并且加入1,3-二溴-5,5-二甲基乙内酰脲（229mg,0.80mmol）。在-20℃下搅拌混合物1小时。然后用浓亚硫酸钠水溶液（0.5mL）淬灭反应。加入乙酸乙酯，分离水层，用硫酸钠干燥有机相并且蒸发。随后通过制备型HPLC（方法2）纯化粗产物获得175mg（理论值的84%）题述化合物。
HPLC（方法1）:Rt=3.13min;
LC-MS（方法5）:Rt=1.23min;MS(ESIpos):m/z(%)=285.0(98)和287.0(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=283.0(100)和285.0(98)[M-H]-.
1H-NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.39-1.48(m,2H),1.60-1.69(m,2H),3.31(t,J=7.3Hz,2H),3.40(m,2H),4.46(br.s,1H),6.61(s,1H),7.82(s,1H).
中间体15A
4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-甲醛
起始物质吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺是根据描述于WO2007/056170-A2（中间体）中的方法合成。
将吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺（20.5g,152mmol）溶解于150mL DMF中。冰水冷却下，以一定速率滴加磷酰氯（31.3mL,336mmol），该滴加速率使内温不升至高于30℃。然后在50℃下加热混合物2天。待冷却后，加入另一份磷酰氯（14.2mL,152mmol），并且在50℃下继续再搅拌24小时。待冷却后，将该反应批次缓慢倾倒至2.0L饱和碳酸氢钠水溶液和2.0L乙酸乙酯的混合物中。加入固体碳酸氢钠直至停止产生气体。分离层，用0.5L乙酸乙酯萃取水层，用硫酸钠干燥合并的有机相并且浓缩。将剩余物悬浮于100mL二异丙基醚中，在室温下搅拌10分钟然后过滤。50℃下，将干燥的剩余物在6N盐酸（500mL）中搅拌1小时，然后倾倒至冰/水混合物（1000mL）中。用固体碳酸氢钠小心地中和混合物，室温下搅拌30分钟并再次过滤。用水和轻石油洗涤剩余物以得到20.6g（理论值的83%）白色晶体，不进一步纯化该晶体而用于下一步骤。
中间体16A
4-氨基-5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-甲醛
将中间体15A（20.6g,127mmol）溶解于525mL DMF中。在0℃下，加入1,3-二溴-5,5-二甲基乙内酰脲（21.8g,76.2mmol），并使混合物在冰冷却下搅拌1小时，以及在室温下再搅拌2小时。过滤形成的悬浮液，用DMF和乙醚洗涤剩余物。丢弃滤液，干燥剩余的难溶性晶体得到20.0g（理论值的65%,通过HPLC确定80%纯度）题述化合物。不进一步纯化该物质而将其使用。
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=7.42(s,1H),8.12(s,1H),10.22(s,1H).
中间体17A
(4-氨基-5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)(环丙基)甲醇
将中间体16A（500mg,1.66mmol）悬浮于干燥THF（30mL）中。在0℃下，加入0.5M环丙基溴化镁的乙醚溶液（10mL,5.0mmol）。室温搅拌混合物1小时。然后，加入另一份Grignard溶液（6.6mL,3.3mmol）。在室温下再搅拌30分钟后，用饱和氯化铵水溶液淬灭反应并用乙酸乙酯（2x20mL）萃取。用盐水洗涤合并的有机层，硫酸镁干燥并浓缩。通过制备型HPLC（方法4）纯化剩余物。收率：0.14g(理论值的29%)。
LC-MS（方法6）:Rt=0.75min;MS(ESIpos):m/z(%)=283.0(100)[M+H]+.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=0.35(m,3H),0.45(m,1H),1.28(m,1H),4.62(t,1H),5.26(d,1H),6.75(s,1H),7.84(s,1H).
中间体18A
(4-氨基-5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)(四氢-2H-吡喃-4-基)甲醇
在配有冷凝器、温度计和滴液漏斗的50mL三颈烧瓶中，用氩气吹扫该三颈瓶，在干燥THF（14mL）中由镁屑（484mg,19.9mmol）和4-氯四氢吡喃（2.4g,19.9mmol）制备格氏试剂。在0℃下向该溶液中加入中间体16A（1.2g,3.98mmol）的THF（20mL）悬浮液，并使反应混合物在室温下搅拌1小时。然后用饱和氯化铵水溶液淬灭反应并用乙酸乙酯（2x50mL）萃取。用盐水洗涤有机层，用硫酸镁干燥并浓缩。通过制备型HPLC（方法3）纯化剩余物。收率：0.5g（理论值的38%）。
LC-MS（方法6）:Rt=0.66min;MS(ESIpos):m/z(%)=327.0(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=325.1(100)[M-H]-.
中间体19A
8-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-醇
根据在WO2007/056170-A2（中间体B）所述的方法合成起始物质7-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺。
在氩气下，于室温下将7-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺（9.20g,35.41mmol）溶解于THF（105mL）中。加入氯代三甲基硅烷（9.08mL,7.77g,70.82mmol,2eq.），并且在室温下搅拌混合物3小时。然后冷却至0℃，加入2-丙基氯化镁（74mL的2.0M THF溶液,149mmol,4.2eq.）。再搅拌混合物3小时同时升温至室温。然后，加入1,4-二氧杂螺[4.5]-癸-8-酮（8.38g,53.12mmol,1.5eq.），再继续搅拌16小时。用浓氯化铵水溶液和冰的1:1混合物淬灭反应直至pH值达到6-7。用两批乙酸乙酯萃取混合物，用无水碳酸钠干燥合并的有机萃取物并且浓缩至干燥。从乙醚中结晶题述化合物。收率：6.05g（理论值的58%）。
HPLC（方法1）:Rt=2.89min;
LC-MS（方法6）:Rt=0.38min;MS(ESIpos):m/z(%)=291.2(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=289.4(100)[M-H]-.
中间体20A
7-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺
0℃下将中间体19A（2.81g,60%纯度,5.82mmol）溶解于吡啶（18mL）。缓慢加入三氟乙酸酐（2.46mL,3.66g,17.45mmol,3eq.），室温下搅拌反应混合物16小时。蒸馏除去溶剂，将剩余物在水和乙酸乙酯之间分配。硫酸钠干燥有机萃取物并蒸发。将剩余物在0℃下与乙醚一起研磨以得到2.95g（HPLC确定92%纯度，理论值的99%）的题述化合物。
HPLC（方法1）:Rt=4.55min;
LC-MS（方法5）:Rt=2.28min;MS(ESIpos):m/z(%)=369.1(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=367.1(100)[M-H]-.
中间体21A
7-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺
在氩气下将中间体20A（2.95g,10.8mmol）溶解于甲醇（1.07L）中。加入钯碳（10%,400mg），在室温和常压下，在氢气气氛下剧烈搅拌混合物24小时。通过过滤除去催化剂，在减压下蒸馏除去溶剂以得到2.11g（理论值的71%）的题述化合物。
HPLC（方法1）:Rt=3.14min;
LC-MS（方法6）:Rt=0.68min;MS(ESIpos):m/z(%)=275.3(100)[M+H]+.
中间体22A
4-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)环己酮
0℃下将中间体21A（2.11g,7.69mmol）溶解于1M盐酸（23mL）和甲醇（6.80mL）的混合物中，并且在冰冷却下搅拌3小时。然后，通过加入浓碳酸氢钠水溶液调节pH值至6-7。用三批二氯甲烷萃取混合物，并且用无水硫酸钠干燥合并的有机萃取物，过滤并蒸发。不经进一步纯化所得剩余物（923mg,理论值的52%）而将其用于下一合成步骤。
HPLC（方法2）:Rt=3.06min;
LC-MS（方法4）:Rt=1.02min;MS(ESIpos):m/z(%)=231.1(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=229.2(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.86(ddd,2H),2.25-2.36(m,4H),2.59(ddd,2H),3.59(m,1H),6.45(d,1H),6.82(d,1H),7.60(br.s,1H),7.82(s,1H).
中间体23A
反-4-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)环己醇
将中间体22A（452mg,1.96mmol）溶解于THF（15mL）中，并且将溶液冷却至0℃。滴加氢化铝锂溶液（1M在THF中,2.94mL,2.94mmol）。随后，在0℃下搅拌溶液10分钟，然后通过加入浓氯化铵水溶液淬灭反应。用3批二氯甲烷萃取混合物，用无水硫酸钠干燥合并的有机萃取物，过滤并蒸发。不进一步纯化所得剩余物（360mg,77%纯度,理论值的61%）而将其用于下一合成步骤。
HPLC（方法1）:Rt=2.62min;
LC-MS（方法6）:Rt=0.29min;MS(ESIpos):m/z(%)=233.2(100)[M+H]+.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.30(m,2H),1.42(m,2H),1.91(m,2H),1.99(m,2H),2.97(tt,1H),3.45(m,1H),4.60(d,1H),6.39(d,1H),6.79(d,1H),7.53(br.s,2H),7.80(s,1H).
中间体24A
反-4-(4-氨基-5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)环己醇
-20℃下将中间体23A（360mg,85%纯度,1.19mmol）溶解于THF（8mL）中。加入1,3-二溴-5,5-二甲基乙内酰脲（188mg,0.66mmol,0.55eq.）。在-20℃下搅拌混合物1小时，然后加入0.5mL浓连二亚硫酸钠水溶液，并且用乙酸乙酯萃取混合物。用无水硫酸钠干燥有机萃取物，过滤并蒸发。不进一步纯化所得剩余物（463mg,66%纯度,理论值的83%）而将其用于下一合成步骤。
HPLC（方法1）:Rt=3.22min;
LC-MS（方法7）:Rt=1.03min;MS(ESIpos):m/z(%)=311.2和313.0(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=309.2(50)和311.2(40)[M-H]-.
中间体25A
3-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯
根据在WO2007/056170-A2（中间体B）中描述的方法合成起始物质7-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺。
室温下，在氩气气氛下将7-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺（17.29g,81mmol）溶解于THF（214mL）中。加入氯代三甲基硅烷（20.60mL,17.63g,162mmol,2eq.），并且在室温下搅拌混合物3小时。然后冷却至0℃，加入2-丙基氯化镁（170mL的2.0M THF溶液,340mmol,4.2eq.）。再搅拌混合物3小时同时升温至室温。然后，加入3-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯（25.00g,121mmol,1.5eq.），再继续搅拌16小时。用浓氯化铵水溶液和冰的1:1混合物淬灭反应直至pH值达到6-7。用两批乙酸乙酯萃取混合物，用无水硫酸钠干燥合并的有机萃取物并且浓缩至干燥。将剩余物与乙醚（50mL）一起研磨后结晶题述化合物。用乙醚洗涤所得晶体并且干燥得到17.20g（理论值的64%）。
HPLC（方法2）:Rt=3.53min;
LC-MS（方法5）:Rt=1.36min;MS(ESIpos):m/z(%)=334.1(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=332.0(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.19-1.43(m,9H),1.72-1.88(m,2H),2.38-2.46(m,1H),3.02-3.20(m,1H),3.44-3.96(m,4H),6.58(d,1H),6.81(d,1H),7.82(s,1H).
中间体26A
外消旋的3-(4-氨基-5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯
-20℃下将中间体25A（120mg,0.36mmol）溶解于THF（6.0mL）中，加入1,3-二溴-5,5-二甲基乙内酰脲（51mg,0.18mmol,0.5eq.）。在-20℃下搅拌混合物2小时，然后加入浓亚硫酸钠水溶液（0.5mL）淬灭反应。加入乙酸乙酯，分离水层，用硫酸钠干燥有机萃取物并且蒸发。获得呈淡黄色固体的题述化合物（148mg,理论值的95%）。
HPLC（方法1）:Rt=4.03min;
LC-MS（方法5）:Rt=1.99min;MS(ESIpos):m/z(%)=412.0(90)和414.0(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=410.0(100)和412.0(85)[M-H]-.
中间体27A
5-{4-[(三氟乙酰基)氨基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基}-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯
在0℃下将中间体25A（8.32g,24.95mmol）溶解于吡啶（116mL）中。缓慢加入三氟乙酸酐（8.81mL,13.10g,62.36mmol,2.5eq.），在室温下搅拌反应混合物16小时。然后，再次冷却至0℃，并且加入150mL乙醚。在0℃下搅拌混合物并同时缓慢沉淀出题述化合物。最后滤出产物并用乙醚洗涤。真空蒸发滤液，在0℃下将剩余物与乙醚一起研磨，在用乙醚洗涤后得到第二批题述化合物。合并两批次得到7.80g（通过HPLC确定92%纯度,理论值的76%)呈黄色晶体的题述化合物。
HPLC（方法1）:Rt=3.91min;
LC-MS（方法7）:Rt=2.45min;MS(ESIpos):m/z(%)=412.2(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=410.2(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.48(s,9H),1.92(m,2H),3.58(m,2H),6.90(d,1H),7.30(d,1H),8.03-8.10(m,1H),8.42(s,1H).
中间体28A
外消旋的3-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将中间体27A（7.80g,92%纯度,17.54mmol）溶解于甲醇（400mL）中。加入三氟乙酸（6.76mL,10.0g,88mmol,5eq.）、水（3.16mL,175mmol,10eq.）和10%的钯碳（30mg），在室温和常压下氢化混合物24小时。然后通过过滤除去催化剂并且真空蒸发溶剂。不进行进一步纯化而将所得粗产物（8.79g,75%纯度，定量收率）用于下一合成步骤。
HPLC（方法1）:Rt=3.64min;
LC-MS（方法7）:Rt=1.26min;MS(ESIpos):m/z(%)=318.3(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=316.4(100)[M-H]-.
中间体29A
7-[(3R)-哌啶-3-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺三氟乙酸盐
起始物质(R)-3-(4-氨基-5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)哌啶-1-羧酸苄酯在WO2007/056170-A2（中间体DDD）中已有描述。
在室温和常压下，在10%钯碳（30mg）的存在下，在甲醇（50mL）和三氟乙酸（2.70mL）的混合物中氢化1.50g（3.49mmol）该起始物质。随后，通过过滤除去催化剂并且真空蒸发所有挥发物以得到1.10g（理论值的95%）题述化合物。
HPLC（方法2）:Rt=2.17min;
LC-MS（方法6）:Rt=0.17min;MS(ESIpos):m/z(%)=218(100)[M+H]+.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.75(m,2H),1.92(m,1H),2.05(m,1H),2.93(m,1H),3.06(m,1H),3.31(d,1H),3.50(d,1H),3.57(m,1H),6.78(d,1H),7.20(m,1H),8.10(s,1H),8.63(m,1H),8.82(m,1H),9.02(br.s,1H).
中间体30A
(3R)-3-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将中间体29A（1.10g,5.06mmol）悬浮于二氯甲烷（6.60mL）中，加入三乙胺（1.55mL,1.13g,11.14mmol,2.20eq.），搅拌混合物30分钟直至起始物质完全溶解。然后，加入二碳酸二叔丁酯（1.22g,5.57mmol,1.1eq.），并且搅拌反应混合物16小时。随后，加入5%水性柠檬酸，分离各相，用硫酸钠干燥有机层并且进行分离。通过制备型HPLC纯化剩余物（方法2）。收率：595mg（理论值的37%）。
HPLC（方法2）:Rt=4.01min;
LC-MS（方法5）:Rt=1.54min;MS(ESIpos):m/z(%)=318.1(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=316.1(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.38(s,9H),1.45(m,2H),1.72(m,2H),2.02(m,2H),2.90(m,1H),3.17(m,1H),3.85(m,1H),4.08(m,1H),6.47(d,1H),6.80(d,1H),7.58(br.s,1H),7.81(s,1H).
中间体31A
3-(4-氨基-5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
-20℃下将中间体28A（8.28g,75%纯度,14.39mmol）溶解于THF（222mL）中，加入1,3-二溴-5,5-二甲基乙内酰脲（2.06g,7.19mmol,0.5eq.）。在-20℃下搅拌混合物2小时，然后加入浓亚硫酸钠水溶液（0.5mL）淬灭反应。加入乙酸乙酯，分离水层，用硫酸钠干燥有机萃取物并且蒸发。获得呈淡黄色固体的题述化合物（6.30g,理论值的86%）。
LC-MS（方法5）:Rt=2.27min;MS(ESIpos):m/z(%)=396.0(80)和397.9(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=394.0(90)和396.0(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.35(s,9H),1.40-1.44(m,2H),1.71(m,1H),1.98(m,1H),2.95(m,1H),3.20(m,1H),3.75(m,1H),4.00(m,1H),6.67(s,1H),7.86(s,1H).
中间体32A
(3R)-3-(4-氨基-5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
从中间体30A出发，以与外消旋化混合物（中间体31A）相同的方法制备题述化合物。分析数据与中间体31A示出的数据相同。
中间体33A
1-(4-氨基-5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氯乙酮
根据在WO2007/056170-A2（中间体N,步骤1）中描述的方法制备该化合物。
HPLC（方法1）:Rt=4.27min;
LC-MS（方法5）:Rt=1.70min;MS(ESIpos):m/z(%)=289.0(75)和290.9(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=287.0(75)和288.9(100)[M-H]-.
中间体34A
5-溴-7-(2-甲基-1,3-噻唑-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺
在微波反应瓶中将中间体33A（100mg,0.35mmol）和硫代乙酰胺（30mg,0.40mmol,1.15eq.）溶解于1,4-二氧杂环己烷（3.0mL）中。将瓶轧盖，在单模式微波装置中将混合物加热至130℃，加热60分钟。待冷却后，蒸馏除去溶剂，将剩余物与乙腈一起研磨并且过滤。弃去滤液。以结晶固体形式分离得到题述化合物。收率：99mg（理论值的92%）。
HPLC（方法1）:Rt=4.00min;
LC-MS（方法6）:Rt=1.05min;MS(ESIpos):m/z(%)=310.0(90)和312(100)[M+H]+.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=2.71(s,3H),7.20(s,1H),8.02(s,1H),8.28(s,1H).
中间体35A
5-溴-7-(2-乙基-1,3-噻唑-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺
将中间体33A（100mg,0.35mmol）和硫代丙酰胺（32mg,0.36mmol,1.05eq.）在乙醇（3.0mL）中回流4.5小时。待冷却后，将混合物在乙酸乙酯和碳酸氢钠水溶液之间分配。用无水硫酸钠干燥有机层并且蒸馏除去溶剂。真空干燥产物以得到91mg（0.28mmol,理论值的81%）呈淡白色固体的题述化合物。
HPLC（方法1）:Rt=4.30min;
LC-MS（方法7）:Rt=1.84min;MS(ESIpos):m/z(%)=324.2(100)和325.8(98)[M+H]+.
中间体36A
7-(2-氨基-1,3-噻唑-4-基)-5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺
在微波反应瓶中将中间体33A（100mg,0.35mmol）和硫脲（32mg,0.41mmol,1.2eq.）悬浮于1,4-二氧杂环己烷（3mL）中，然后将反应瓶轧盖。在单模式微波装置中将混合物加热至120℃，加热60分钟。冷却后即加入水，通过过滤收集形成的沉淀并且用二氧杂环己烷洗涤。真空干燥淡白色固体以得到98mg（理论值的91%）题述化合物。
HPLC（方法1）:Rt=3.19min;
LC-MS（方法5）:Rt=1.25min;MS(ESIpos):m/z(%)=310.9(95)和312.9(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=309.0(100)和310.9(70)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=7.17(s,1H),7.52(s,1H),8.07(s,1H).
中间体37A
1-{4-[(4-氨基-5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基]哌嗪-1-基}-2,2,2-三氟乙酮
根据在WO2007/056170-A2（实施例416，步骤6）中描述的方法制备该化合物。
中间体38A
5-溴-7-(吗啉-4-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺
根据在WO2007/064931-A2（中间体C）中描述的方法制备该化合物。
中间体39A
7-(吗啉-4-基甲基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺
在氩气气氛下向中间体38A（5.59g,17.9mmol）和联硼酸频那醇酯（10.0g,39.4mmol）的脱气DMF（120mL）溶液中加入1,1'-双(二苯基膦)二茂铁-二氯化钯(II)（786mg,1.07mmol）和乙酸钾（7.03g,71.6mmol）。将混合物加热至80℃，加热5小时，然后冷却至室温。过滤悬浮液，减压蒸干滤液，通过硅胶快速色谱（以含2%至5%的甲醇的二氯甲烷进行梯度洗脱）纯化剩余物得到1.30g(理论值的20%)含有一些相应的硼酸衍生物的题述化合物。该化合物不经进一步纯化而使用。
LC-MS（方法6）:Rt=0.73min;MS(ESIpos):m/z(%)=360.3(30)[M+H]+.
中间体40A
5-[4-({[叔丁基(二甲基)甲硅基]氧基}甲基)-3,5-二氟苯基]-7-(吗啉-4-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺
从中间体38A（200mg,0.64mmol）和[4-({[叔丁基(二甲基)甲硅基]氧基}甲基)-3,5-二氟苯基]硼酸（314mg,0.77mmol,74%纯度；通过Hattori,Bioorg.Med.Chem.2006,14,3258-3262的方法制备）出发，通过一般合成方法1获得该题述化合物。通过制备型HPLC（方法3）进行粗产物的纯化。收率：110mg（理论值的32%,LC-MS纯度92%)。
LC-MS（方法6）:Rt=1.18min;MS(ESIpos):m/z(%)=490.1(30)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=488.3(100)[M-H]-.
中间体41A
4-[4-氨基-7-(吗啉-4-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基]-2-氟苯甲酸甲酯
从中间体38A（200mg,0.64mmol）和[3-氟-4-(甲氧羰基)苯基]硼酸（139mg,0.71mmol）出发，通过一般合成方法1获得该题述化合物。通过制备型HPLC（方法3）进行粗产物的纯化。收率：80mg（理论值的32%）。
LC-MS（方法6）:Rt=0.66min;MS(ESIpos):m/z(%)=386.1(80)[M+H]+.
中间体42A
4-[4-氨基-7-(吗啉-4-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基]苯甲醛
向中间体38A（300mg,0.96mmol）的脱气DMF（9.0mL）溶液中加入(4-甲酰基苯基)硼酸（216mg,1.44mmol）、四(三苯基膦)钯(0)（111mg,0.1mmol）和2M碳酸钠水溶液（2.4mL）。在氩气下将混合物加热至90℃，加热17小时，然后冷却至室温并且通过制备型HPLC（方法3）直接纯化。收率：150mg（理论值的46%）。
LC-MS（方法6）:Rt=0.44min;MS(ESIpos):m/z(%)=338.2(30)[M+H]+.
中间体43A
5-溴-6-甲基-7-(吗啉-4-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺
根据在WO2007/056170-A2（中间体O）中描述的方法制备该化合物。
中间体44A
1-[(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基]哌啶-4-醇
将4-羟基哌啶（3.62g,35.8mmol）和37%的福尔马林溶液（2.9g,35.8mmol）溶解于乙酸（150mL）中并且在室温下搅拌1小时。向该溶液中加入吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺（2.0g,14.9mmol；根据在WO2007/056170-A2，中间体A中描述的方法制备）的乙酸（150mL）溶液，在60℃下搅拌混合物2小时。然后蒸发溶剂，将剩余物溶解于200mL半浓的碳酸氢钾水溶液中并且用200mL二氯甲烷萃取。用水（2x50mL）洗涤有机层并且弃去有机层。将合并的水层蒸发至干燥，用二氯甲烷与甲醇10:1的混合物（2x100mL）处理剩余物。蒸发有机萃取物，通过制备型HPLC（方法4）纯化剩余物以得到1.16g（理论值的15%）题述化合物。
LC-MS（方法7）:Rt=0.18min;MS(ESIpos):m/z(%)=248.3(30)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=246.5(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.35(br.m,2H),1.67(br.m,2H),2.07(t,2H),2.70(br.m,2H),3.38(br.m,1H),3.75(s,2H),4.51(br,1H),6.52(d,1H),6.84(d,1H),7.62(br,2H),7.82(s,1H).
中间体45A
1-[(4-氨基-5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基]哌啶-4-醇
-20℃下将中间体44A（1.10g,4.45mmol）溶解于THF（16.5mLmL）中。以每10分钟约100mg份数加入1,3-二溴-5,5-二甲基乙内酰脲（636mg,2.22mmol）。随后，在室温下再搅拌混合物1小时，然后通过制备型HPLC（方法4）直接纯化。收率：0.61g（理论值的42%）。
LC-MS（方法4）:Rt=0.75min;MS(ESIpos):m/z(%)=326.0(30)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=324.0(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.35(br.m,2H),1.67(br.m,2H),2.08(t,2H),2.68(br.m,2H),3.39(br.m,1H),3.74(s,2H),4.51(br,1H),6.69(s,1H),7.86(s,1H).
中间体46A
1-[(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基]吡咯烷-3-醇
将3-吡咯烷醇（1.56g,17.9mmol）和37%的福尔马林溶液（1.45g,17.9mmol）溶解于乙酸（75mL）中并且在室温下搅拌10分钟。向该溶液中加入吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺（2.0g,14.9mmol)）的乙酸（75mL）溶液，并且在60℃下搅拌混合物4小时。待蒸发后，将剩余物溶解于200mL的1N碳酸钾水溶液中并用乙酸乙酯萃取（3x200mL）。用盐水洗涤合并的有机层，用硫酸镁干燥并且减压浓缩。通过制备型HPLC（方法4）纯化剩余物以得到390mg（理论值的11%）题述化合物。
LC-MS（方法4）:Rt=0.22min;MS(ESIpos):m/z(%)=234.2(20)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=223.0(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.50(br.m,1H),1.94(m,1H),2.34(dd,1H),2.44(dd,1H),2.60(dd,1H),2.71(dd,1H),3.84(dd,2H),4.15(br,1H),4.65(d,1H),6.52(d,1H),6.83(d,1H),7.61(br,2H),7.82(s,1H).
中间体47A
1-[(4-氨基-5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基]吡咯烷-3-醇
将中间体46A（0.9g,3.86mmo）溶解于DMF（14.2mL）中并冷却至-20℃。以每10分钟约100mg份数加入1,3-二溴-5,5-二甲基乙内酰脲（606mg,2.12mmol），并且在室温下继续搅拌1小时。将混合物在10%的碳酸氢钾水溶液（50mL）和乙酸乙酯（100mL）之间分配。用另一份乙酸乙酯（100mL）萃取水层，然后用二氯甲烷（100mL）萃取水层。用硫酸镁干燥合并的有机层并且蒸发，通过制备型HPLC（方法4）纯化剩余物。收率：0.44g（理论值的37%）。
LC-MS（方法6）:Rt=0.21min;MS(ESIpos):m/z(%)=314.0(100)[M+H]+.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.50(br.m,1H),1.95(m,1H),2.34(dd,1H),2.45(m,1H),2.60(m,1H),2.70(dd,1H),3.84(dd,2H),4.15(br,1H),4.65(d,1H),6.71(s,1H),7.86(s,1H).
中间体48A
1-[(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基]哌啶-3-醇
以3-羟基哌啶（1.80g,17.9mmol）作为起始物质，以与中间体46A相似的方法制备题述化合物。待浓缩反应混合物后，将剩余物溶解于饱和碳酸钾水溶液中并且用300mL二氯甲烷萃取。用盐水洗涤有机层，用硫酸镁干燥并减压浓缩。通过制备型HPLC（方法4）纯化剩余物以得到650mg（理论值的18%）题述化合物。
LC-MS（方法6）:Rt=0.16min;MS(ESIpos):m/z(%)=248.2(60)[M+H]+.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=0.99(m,1H),1.37(br.m,1H),1.57(br.m,1H),1.74(m,2H),1.88(t,1H),2.68(br.m,1H),2.83(br.dd,1H),3.41(br.m,1H),3.78(dd,2H),4.54(d,1H),6.52(d,1H),6.84(d,1H),7.61(br,2H),7.82(s,1H).
中间体49A
1-[(4-氨基-5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基]哌啶-3-醇
与中间体47A的制备相似，从中间体48A（690mg,2.79mmol）出发制备该题述化合物，通过制备型HPLC（方法4）纯化后得到348mg（93%LC-MS纯度,理论值的36%）产物。
LC-MS（方法4）:Rt=0.85min;MS(ESIpos):m/z(%)=226.0(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=223.9(70)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=0.99(m,1H),1.37(m,1H),1.57(br.m,1H),1.74(m,2H),1.89(m,1H),2.66(br.m,1H),2.81(br.m,1H),3.41(br.m,1H),3.77(dd,2H),4.54(d,1H),6.70(s,1H),7.86(s,1H).
中间体50A
1-({4-氨基-5-[4-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-3,5-二氟苯基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基}甲基)哌啶-3-醇
由中间体49A（200mg,0.61mmol）和[4-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-3,5-二氟苯基]硼酸（222mg,0.74mmol;通过Hattori,Bioorg.Med.Chem.2006,14,3258-3262的方法制备）出发，通过一般合成方法1获得题述化合物。通过制备型HPLC（方法3）进行粗产物的纯化。收率：153mg（理论值的50%）。
LC-MS（方法7）:Rt=1.55min;MS(ESIpos):m/z(%)=504.1(100)[M+H]+.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=0.11(s,6H),0.86(s,9H),1.01(m,1H),1.40(br.m,1H),1.59(br.m,1H),1.77(m,2H),1.94(m,1H),2.72(br.m,1H),2.87(br.m,1H),3.43(m,1H),3.82(dd,2H),4.55(d,1H),4.74(s,2H),6.75(s,1H),7.18(dd,2H),7.95(s,1H).
中间体51A
外消旋的3-{4-氨基-5-[3,5-二氟-4-(羟甲基)苯基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基}吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
起始物质3-(4-氨基-5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的制备已经描述于WO2007/056170-A2（中间体I）中。
根据一般合成方法1，将该化合物（60mg,0.16mmol）与中间体2A（47mg,0.17mmol,1.1eq.）偶联。通过制备型HPLC（方法2）纯化粗产物得到67mg（理论值的84%）题述化合物。
HPLC（方法2）:Rt=4.08min;
LC-MS（方法7）:Rt=1.66min;MS(ESIpos):m/z(%)=446.2(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=444.3(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.39(s,9H),2.10(m,1H),2.33(m,1H),3.37(m,2H),3.46(m,1H),3.70-3.89(m,2H),4.51(s,2H),6.80(s,1H),7.15(m,2H),8.03(s,1H).
中间体52A
外消旋的3-{4-氨基-5-[3,5-二氟-4-(羟甲基)苯基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基}-3-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯
根据一般合成方法2将中间体26A（148mg,0.35mmol）与(4-溴-2,6-二氟苯基)甲醇（75mg,0.34mmol）偶联。使用制备型HPLC（方法2）进行粗产物的纯化。收率：46mg（理论值的28%）。
HPLC（方法3）:Rt=3.90min;
LC-MS（方法7）:Rt=1.56min;MS(ESIpos):m/z(%)=476.2(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=474.2(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.22-1.58(m,10H),1.80(m,2H),3.19(m,1H),3.48(m,1H),3.62(m,1H),3.74(m,1H),4.00(m,1H),4.52(m,2H),5.39(t,1H),6.78(s,1H),7.10(m,2H),7.94(s,1H).
中间体53A
4-{4-氨基-5-[4-(羟甲基)苯基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基}哌啶-1-羧酸叔丁酯
根据描述于WO2007/056170-A2（实施例1，步骤3）中的方法制备起始物质4-(4-氨基-5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
然后根据一般合成方法1将该化合物（400mg,1.01mmol）与4-(羟甲基)苯基硼酸（184mg,1.21mmol,1.2eq.）反应。通过制备型HPLC（方法2）纯化粗产物以得到326mg（理论值的76%）题述化合物。
HPLC（方法2）:Rt=4.07min;
LC-MS（方法6）:Rt=1.06min;MS(ESIpos):m/z(%)=424.3(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=422.3(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.52-1.65(m,2H),1.92-2.00(m,2H),2.89(br.s,2H),3.10(m,1H),3.28-3.37(m,2H),4.06(d,2H),4.60(s,2H),6.68(s,1H),7.47(s,5H),8.02(s,1H).
中间体54A
外消旋的3-{4-氨基-5-[3,5-二氟-4-(羟甲基)苯基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基}哌啶-1-羧酸叔丁酯
根据一般合成方法1使中间体31A（200mg,0.39mmol）和中间体2A（138mg,0.51mmol,1.3eq.）反应，通过制备型HPLC（方法2）纯化后获得130mg（理论值的72%）题述化合物。
HPLC（方法3）:Rt=4.23min;
LC-MS（方法6）:Rt=1.17min;MS(ESIpos):m/z(%)=460.1(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=458.1(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.39(s,9H),1.48(m,2H),1.74(m,2H),2.93(m,1H),3.22(m,1H),3.85(m,1H),4.11(m,1H),4.53(s,2H),6.78(s,1H),7.12(m,2H),8.02(s,1H).
中间体55A
(3R)-3-{4-氨基-5-[3,5-二氟-4-(羟甲基)苯基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基}哌啶-1-羧酸叔丁酯
根据一般合成方法2将中间体32A（115mg,0.28mmol）与(4-溴-2,6-二氟苯基)甲醇（76mg,0.33mmol,1.2eq.）偶联来合成对映体纯的R-异构体。收率：48mg（理论值的38%）。
或者，使用制备型手性HPLC[柱：基于选择的聚(N-甲基丙烯酰基-L-亮氨酸-叔丁酰胺)的手性硅胶相，250mm x20mm；洗脱剂：乙酸乙酯/异己烷4:1；流速：20mL/min；UV检测：260nm]，从中间体54A（40mg）的外消旋化合物中分离获得题述化合物。收率：20mg（R-异构体）。
分析型手性HPLC[柱：基于选择的聚(N-甲基丙烯酰基-L-亮氨酸-叔丁酰胺)的手性硅胶相，250mm x4mm；洗脱剂：乙酸乙酯/异己烷4:1；流速：1mL/min；UV检测：260nm]：Rt=5.68min;e.e.>99.5。
HPLC（方法3）:Rt=4.23min;
LC-MS（方法6）:Rt=1.17min;MS(ESIpos):m/z(%)=460.1(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=458.1(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.39(s,9H),1.48(m,2H),1.74(m,2H),2.93(m,1H),3.22(m,1H),3.85(m,1H),4.11(m,1H),4.53(s,2H),6.78(s,1H),7.12(m,2H),8.02(s,1H).
中间体56
(3S)-3-{4-氨基-5-[3,5-二氟-4-(羟甲基)苯基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基}哌啶-1-羧酸叔丁酯
使用如描述中间体55A的制备型HPLC，从中间体54A（40mg）的外消旋化合物中分离获得对映异构纯的S-异构体。收率：19mg（S-异构体）。
分析型手性HPLC[柱：基于选择的聚(N-甲基丙烯酰基-L-亮氨酸-叔丁酰胺)的手性硅胶相，250mm x4mm；洗脱剂：乙酸乙酯/异己烷4:1；流速：1mL/min；UV检测：260nm]:Rt=7.87min;e.e.>99.5.
HPLC（方法3）:Rt=4.23min;
LC-MS（方法6）:Rt=1.17min;MS(ESIpos):m/z(%)=460.1(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=458.1(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.39(s,9H),1.48(m,2H),1.74(m,2H),2.93(m,1H),3.22(m,1H),3.85(m,1H),4.11(m,1H),4.53(s,2H),6.78(s,1H),7.12(m,2H),8.02(s,1H).
中间体57A
[2-氟-6-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基]甲醇
在微波反应器瓶中，将(4-溴-2-氟-6-甲基苯基)甲醇（2.0g,9.13mmol）溶解于1,4-二氧杂环己烷（20.0mL）中，并且用氩气冲洗溶液。然后加入联硼酸频那醇酯（2.43g,9.59mmol）、1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]氯化钯(II)（298mg,0.37mmol）和乙酸钾（1.34g,13.7mmol），将反应容器轧盖，并且在单模式微波装置中加热混合物至130℃，加热1小时。冷却后，过滤混合物并且蒸发滤液。用环己烷（100mL）处理剩余物并且搅拌10分钟。再次过滤溶液，蒸发滤液，通过色谱法（Biotage25M二氧化硅柱，以15mL/min流速的二氯甲烷）纯化剩余物。合并并蒸发含有题述化合物的级分，题述化合物自发结晶成黄色固体（2.18g,理论值的90%）。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ(ppm)=1.30(s,12H),2.39(s,3H),4.51(m,2H),5.01(t,1H),7.14(d,1H),7.31(s,1H).
中间体58A
[2-乙基-6-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基]甲醇
使用在1,4-二氧杂环己烷（20mL）中的(4-溴-2-乙基-6-氟苯基)甲醇（2.00g,8.58mmol）、联硼酸频那醇酯（2.29g,9.01mmol）、1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]氯化钯(II)（280mg,0.34mmol）和乙酸钾（1.26g,12.87mmol），类似于中间体57A合成并纯化题述化合物。收率：2.16g（理论值的90%）黄色晶体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ(ppm)=1.17(t,3H),1.30(s,12H),2.76(q,2H),4.50(m,2H),5.03(t,1H),7.14(d,1H),7.32(s,1H).
中间体59A
[2-氟-6-甲氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基]甲醇
使用在1,4-二氧杂环己烷（20mL）中的(4-溴-2-甲氧基-6-氟苯基)甲醇（2.00g,8.51mmol）、联硼酸频那醇酯（2.27g,8.90mmol）、1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]氯化钯(II)（278mg,0.34mmol）和乙酸钾（1.25g,12.76mmol），类似于中间体57A合成并纯化题述化合物。收率：1.81g（理论值的75%）黄色晶体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ(ppm)=1.30(s,12H),3.83(s,3H),4.47(m,2H),4.86(t,1H),6.97(d,1H),7.02(s,1H).
中间体60A
1-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)环己醇
氩气下，于室温下将7-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺（1.20g,5.63mmol）溶解于THF（25mL）中。加入氯代三甲基硅烷（1.43mL,11.27mmol），并且在室温下搅拌混合物3小时。然后冷却至0℃，加入2-丙基氯化镁（11.8mL的2.0M THF溶液,23.7mmol），再搅拌混合物3小时同时升至室温。然后，加入环己酮（0.88mL,8.45mmol），再继续搅拌16小时。用浓氯化铵水溶液和冰的混合物（1:1）淬灭反应直至pH值达到6-7。用两批乙酸乙酯萃取混合物，无水硫酸钠干燥合并的有机萃取物并且浓缩至干燥。不进一步纯化而使用此产物（纯度～68%通过HPLC确定）。收率：1.87g（理论值的97%）。
LC-MS（方法5）:Rt=1.10min;MS(ESIpos):m/z(%)=233(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=231(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ(ppm)=1.28-1.33(m,1H),1.42-1.50(m,2H),1.58-1.63(m,1H),1.67-1.78(m,4H),2.13-2.23(m,2H),6.69(d,1H),7.20(d,1H),8.02(s,1H),8.58(br.s,1H),9.00(br.s,1H).
中间体61A
1-(4-氨基-5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)环己醇
将中间体60A（80mg,0.34mmol）溶解于THF（5.0mL）中并将混合物冷却至-20℃。一次性加入1,3-二溴-5,5-二甲基乙内酰脲（49mg,0.17mmol），并且继续搅拌1小时。然后用浓连二亚硫酸钠水溶液（0.5mL）淬灭反应，并且用乙酸乙酯萃取混合物。用盐水洗涤有机萃取物，用无水硫酸钠干燥，蒸馏除去溶剂得到98mg（理论值的91%）题述化合物。
LC-MS（方法4）:Rt=1.90min;MS(ESIpos):m/z(%)=311(95)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=309(90)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ(ppm)=1.20-1.33(m,1H),1.42-1.52(m,2H),1.58-1.78(m,5H),2.15-2.23(m,2H),5.01(br.s,2H),6.63(s,1H),7.82(s,1H).
中间体62A
{[4-(4-氨基-5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-1,3-噻唑-2-基]甲基}氨基甲酸叔丁酯
将中间体33A（109mg,0.38mmol）和(2-氨基-2-硫代乙基)氨基甲酸叔丁酯（79mg,0.41mmol）溶解于乙醇（6.5mL）中。将混合物加热至回流，加热20小时。然后过滤混合物，并且蒸发滤液。将剩余物与乙腈一起研磨以得到67mg（理论值的42%）呈棕灰色晶状固体的题述化合物。
LC-MS（方法7）:Rt=1.81min;MS(ESIpos):m/z(%)=425(80)和427(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=423(50)和425(100)[M-H]-.
中间体63A
3-{4-氨基-5-[3-氟-4-(羟甲基)-5-甲氧基苯基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]-三嗪-7-基}哌啶-1-羧酸叔丁酯
在微波反应器瓶中将中间体31A（120mg,0.30mmol）和中间体59A（104mg,0.36mmol）溶解于乙腈（2.0mL）中并且用氩气冲洗。加入四(三苯基膦)钯(0)（35mg,0.03mmol）和2.0M碳酸钠水溶液（0.5mL），在单模式微波装置中将混合物加热至150℃，加热1小时。待冷却后，过滤混合物并且蒸发滤液。通过快速色谱（Biotage25M二氧化硅柱，二氯甲烷+2-5%甲醇，流速10mL/min）纯化剩余物得到51mg（理论值的36%）题述化合物。
LC-MS（方法6）:Rt=1.16min;MS(ESIpos):m/z(%)=472(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=470(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ(ppm)=1.31-2.10(m,13H),2.88-2.91(m,2H),3.19-3.27(m,2H),3.87(s,1H),4.12(m,1H),4.50(m,1H),4.82(t,1H),6.68(s,1H),6.83(d,1H),6.90(s,1H),7.92(s,1H).
中间体64A
3-{4-氨基-5-[3-氟-4-(羟甲基)-5-甲基苯基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基}哌啶-1-羧酸叔丁酯
在微波反应器瓶中将中间体31A（120mg,0.30mmol）和中间体57A（97mg,0.36mmol）溶解于乙腈（2.0mL）中并且用氩气冲洗。加入四(三苯基膦)钯(0)（35mg,0.03mmol）和2.0M碳酸钠水溶液（0.5mL），在单模式微波装置中将混合物加热至150℃，加热1小时。待冷却后，过滤混合物并且蒸发滤液。通过快速色谱（Biotage25M二氧化硅柱，二氯甲烷+2-5%甲醇，流速10mL/min）纯化剩余物得到110mg（理论值的71%）题述化合物。
LC-MS（方法4）:Rt=2.03min;MS(ESIpos):m/z(%)=456(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=454(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ(ppm)=1.31-2.11(m,13H),2.42(s,3H),2.88-2.91(m,2H),3.17-3.30(m,2H),3.80(m,1H),4.54(m,1H),4.82(t,1H),6.64(s,1H),7.04(d,1H),7.12(s,1H),7.93(s,1H).
中间体65A
3-{4-氨基-5-[3-氟-4-(羟甲基)-5-甲基苯基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基}吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
根据在WO2007/056170-A2（中间体I）中描述的方法合成起始物质3-(4-氨基-5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯。
在微波反应器瓶中，将3-(4-氨基-5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯（120mg,0.31mmol）溶解于乙腈（2.2mL）中并且用氩气冲洗。加入中间体57A（100mg,0.38mmol）、四(三苯基膦)钯(0)（36mg,0.03mmol）和2.0M碳酸钠水溶液（0.5mL），在单模式微波装置中将混合物加热至150℃，加热1小时。待冷却后，过滤混合物并且蒸发滤液。通过快速色谱（Biotage25M二氧化硅柱，二氯甲烷+2-5%甲醇，流速10mL/min）纯化剩余物得到91mg（理论值的54%）题述化合物。
LC-MS（方法5）:Rt=2.00min;MS(ESIpos):m/z(%)=442(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=440(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ(ppm)=1.41(m,9H),2.00-2.48(m,2H),3.29-3.53(m,3H),3.71-3.90(m,2H),4.55(m,2H),4.99(t,1H),6.63(s,1H),7.06(d,1H),7.12(s,1H),7.92(s,1H).
中间体66A
外消旋的3-{4-氨基-5-[3-乙基-5-氟-4-(羟甲基)苯基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基}吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
根据在WO2007/056170-A2（中间体I）中描述的方法合成起始物质3-(4-氨基-5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯。
在微波反应器瓶中将3-(4-氨基-5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯（111mg,0.29mmol）、中间体58A（98mg,0.35mmol）和四(三苯基膦)钯(0)（17mg,0.015mmol）溶解于乙腈（2.3mL）与2M碳酸钠水溶液（0.53mL）的混合物中。使用氩气脱气5分钟后，将反应瓶轧盖，在单模式微波装置中将混合物加热至150℃，加热1小时。待冷却至室温后，加入饱和的碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯萃取混合物。用硫酸钠干燥合并的有机层，过滤并且浓缩。通过制备型HPLC（方法5）纯化剩余物。收率：83mg（理论值的63%）。
HPLC（方法9）:Rt=1.61min;
LC-MS（方法10）:Rt=1.02min;MS(ESIpos):m/z(%)=456.4(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=454.4(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.22(t,3H),1.41(s,9H),2.1(m,1H),2.80(q,2H),3.30-3.43(m,2H),3.44-3.51(m,1H),3.78(m,1H),4.55(d,2H),5.00(t,1H),6.68(s,1H),7.09(d,1H),7.15(s,1H),7.95(s,1H).
中间体67A
外消旋的3-{4-氨基-5-[3-乙基-5-氟-4-(羟甲基)苯基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基}哌啶-1-羧酸叔丁酯
在微波反应器瓶中将中间体31A（148mg,0.29mmol）、中间体58A（98mg,0.35mmol）和四(三苯基膦)钯(0)（17mg,0.015mmol）溶解于乙腈（2.3mL）与2M碳酸钠水溶液（0.67mL）的混合物中。使用氩气脱气5分钟后，将反应瓶轧盖，在单模式微波装置中将混合物加热至150℃，加热1小时。待冷却至室温后，加入饱和的碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯萃取混合物。用硫酸钠干燥合并的有机层，过滤并且浓缩。通过制备型HPLC（方法5）纯化剩余物。收率：105mg（理论值的76%）。
HPLC（方法9）:Rt=1.71min;
LC-MS（方法10）:Rt=1.08min;MS(ESIpos):m/z(%)=470.4(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=468.4(75)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.22(t,3H),1.38(s,9H),1.50(m,1H),1.65-1.90(m,2H),2.06(m,1H),2.80(q,2H),2.98(m,1H),3.20-3.43(m,2H),3.8(m,1H),4.08(m,1H),4.55(d,2H),5.02(t,1H),6.65(s,1H),7.07(d,1H),7.13(s,1H),7.93(s,1H).
中间体68A
4-{4-氨基-7-[环丙基(羟基)甲基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基}-2-甲氧基苯甲酸甲酯
在氩气下，将中间体17A（250mg,0.88mmol）、[3-甲氧基-4-(甲氧基羰基)苯基]硼酸（223mg,1.06mmol）和四(三苯基膦)钯(0)（102mg,0.088mmol）溶解于1,4-二氧杂环己烷（5.5mL）与2M碳酸钠水溶液（1.32mL）的混合物中，并且加热回流16小时。此后，加入另一批四(三苯基膦)钯(0)（102mg,0.088mmol）并且再继续加热24小时。待冷却至室温后，过滤反应混合物，浓缩滤液，通过制备型HPLC（方法7）纯化剩余物。收率：130mg（80%纯度，理论值的32%）
LC-MS（方法10）:Rt=0.80min;MS(ESIpos):m/z(%)=369.3(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=367.3(75)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=0.41(m,3H),0.49(m,1H),1.37(m,1H),3.81(s,3H),4.68(d,1H),6.92(s,1H),7.13(dd,1H),7.22(d,1H),7.77(d,1H),8.05(s,1H).
中间体69A
7-(丙-1-烯-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺
根据在WO2007/056170-A2（中间体B）中描述的方法合成起始物质7-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺。
在氩气下，将7-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺（426mg,2mmol）和4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂硼烷（420mg,2.5mmol）溶解于1,2-二甲氧基乙烷（10mL）和碳酸钠水溶液（2M,4mL）的混合物中。将反应混合物脱气，加入1,1'-双(二苯基膦)二茂铁氯化钯(II)（73mg,0.1mmol）。在90℃搅拌过夜后，用乙酸乙酯（40mL）稀释反应混合物，加入水（10mL），分离两层。用乙酸乙酯（2x40mL）萃取水层，用硫酸钠干燥合并的有机层，过滤并且浓缩。通过快速色谱（puriFlash,Interchim,从1:1环己烷/乙酸乙酯至100%乙酸乙酯梯度）纯化剩余物得到呈淡黄色固体的题述化合物。收率：304mg（理论值的81%）。
HPLC（方法10）:Rt=0.83min;
LC-MS（方法10）:Rt=0.57min;MS(ESIpos):m/z(%)=175.1(100)[M+H]+.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=2.15(s,3H),5.22(m,1H),6.30(m,1H),6.73(d,1H),6.91(d,1H),7.69(m,1H),7.91(s,1H).
中间体70A
7-异丙基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺
在氩气下将中间体69A（149mg,0.86mmol）溶解于乙酯与乙酸乙酯（1:1,40mL）的混合物中。加入钯碳（10%,9.1mg），在室温常压下，在氢气气氛中剧烈搅拌混合物16小时。此后，通过过滤除去催化剂，减压蒸馏除去溶剂以得到131mg（理论值的80%）呈无色固体的题述化合物。不进一步纯化该产物而将其用于下一合成步骤。
HPLC（方法10）:Rt=0.81min;
LC-MS（方法10）:Rt=0.56min;MS(ESIpos):m/z(%)=177.0(100)[M+H]+.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.27(d,6H),3.36(m,1H),6.41(d,1H),6.80(d,1H),7.48-7.59(m,2H),7.80(s,1H).
中间体71A
5-溴-7-异丙基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺
将中间体70A（125mg,0.71mmol）溶解于干燥THF（21mL）中并且冷却至-78℃。以相等的两份加入1,3-二溴-5,5-二甲基乙内酰脲（81mg,0.28mmol）。在-78℃下搅拌反应混合物1小时，然后将其升至室温过夜。待加入水（20mL）后再搅拌20分钟，通过过滤收集沉淀的固体并且真空干燥。不进一步纯化由此获得的粗产物（(209mg,>理论值的100%）而将其用于下一合成步骤。
HPLC（方法9）:Rt=1.35min.
LC-MS（方法10）:Rt=0.91min;MS(ESIpos):m/z(%)=257.0(100)[M+H]+.
中间体72A
外消旋的1-(4-氨基-5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)乙醇
将中间体16A（500mg,1.66mmol）悬浮于THF（10mL）中并且冷却至0℃。加入甲基溴化镁（3N在乙醚中，1.7mL），搅拌反应混合物30分钟。然后，加入饱和氯化铵水溶液，用乙酸乙酯（2x20mL）萃取混合物。用硫酸镁干燥合并的有机层，过滤并浓缩以得到235mg（理论值的46%）题述产物，不进一步纯化该产物而将其用于下一合成步骤。
LC-MS（方法5）:Rt=0.73min;MS(ESIpos):m/z(%)=259.1(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=257.1(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.41(d,3H),5.16(m,1H),5.30(m,1H),6.70(s,1H),7.85(s,1H).
制备实施例
实施例1
[4-(4-氨基-7-丙基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)苯基]甲醇
从中间体11A（100mg,0.39mmol）和4-(羟甲基)苯基硼酸（60mg,0.39mmol）出发，通过一般合成方法1获得题述化合物。通过制备型HPLC（方法2）进行粗产物的纯化。收率：33mg（理论值的30%）。
HPLC（方法1）:Rt=3.47min;HPLC（方法2）:Rt=3.78min;
LC-MS（方法4）:Rt=0.91min;MS(ESIpos):m/z(%)=283.2(100)[M+H]+.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=0.97(t,J=7.4Hz,3H),1.71(m,2H),3.31(s,2H),4.52(s,2H),6.54(s,1H),7.42(s,4H),7.89(s,1H).
实施例2
[4-(4-氨基-7-丙基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)-2,6-二氟苯基]甲醇
从中间体11A（118mg,0.46mmol）和(4-溴-2,6-二氟苯基)甲醇（108mg,0.49mmol）出发，通过一般合成方法2获得题述化合物。通过制备型HPLC（方法2）进行粗产物的纯化。收率：59mg（理论值的40%）。
HPLC（方法2）:Rt=3.94min;
LC-MS（方法7）:Rt=1.47min;MS(ESIpos):m/z(%)=319.3(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=317.3(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=0.95(t,3H),1.71(m,2H),4.52(m,2H),5.26(t,1H),6.64(s,1H),7.10(m,2H),7.91(s,1H).
实施例3
3-{4-氨基-5-[4-(羟甲基)苯基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基}丙-1-醇
从中间体10A（100mg,0.37mmol）和4-(羟甲基)苯基硼酸（67mg,0.44mmol,1.2eq.）出发，根据一般合成方法1获得题述化合物。通过制备型HPLC（方法2）纯化粗产物得到73mg（理论值的66%）呈无色固体的题述化合物。
HPLC（方法1）:Rt=2.91min;HPLC（方法2）:Rt=3.14min;
LC-MS（方法6）:Rt=0.60min;MS(ESIpos):m/z(%)=299.3(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=297.4(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.84(m,2H),2.95(t,J=7.6Hz,2H),3.50(m,2H),4.58(s,2H),6.67(s,1H),7.41(s,4H),8.03(s,1H).
实施例4
4-{4-氨基-5-[4-(羟甲基)苯基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基}丁-1-醇
从中间体14A（75mg,0.26mmol）和4-(羟甲基)苯基硼酸（48mg,0.32mmol）出发，通过一般合成方法1获得题述化合物。通过制备型HPLC（方法2）进行粗产物的纯化。收率：66mg（理论值的80%）。
HPLC（方法2）:Rt=3.28min;
LC-MS（方法6）:Rt=0.68min;MS(ESIpos):m/z(%)=313.3(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=311.2(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.48-1.51(m,2H),1.67-1.70(m,2H),2.91(t,J=7.6Hz,2H),3.42(t,J=6.4Hz,2H),4.58(s,2H),6.67(s,1H),7.42(s,4H),8.03(s,1H).
实施例5
{4-氨基-5-[3,5-二氟-4-(羟甲基)苯基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基}(环丙基)甲醇
从中间体17A（125mg,0.44mmol）和中间体2A（114mg,0.53mmol）出发，通过一般合成方法1获得题述化合物。通过制备型HPLC（方法3）纯化粗产物。收率：73mg（理论值的48%）。
LC-MS（方法7）:Rt=1.09min;MS(ESIpos):m/z(%)=347.3(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=345.3(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=0.39(m,3H),0.48(m,1H),1.35(m,1H),4.54(d,2H),4.67(m,1H),5.26(m,2H),6.80(s,1H),7.14(m,2H),7.92(s,1H).
实施例6
{4-氨基-5-[3,5-二氟-4-(羟甲基)苯基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基}(四氢-2H-吡喃-4-基)甲醇
从中间体18A（200mg,0.61mmol）和中间体2A（158mg,0.73mmol）出发，通过一般合成方法1获得题述化合物。通过制备型HPLC（方法3）纯化粗产物。收率：125mg（理论值的52%）。
LC-MS（方法5）:Rt=1.29min;MS(ESIpos):m/z(%)=391.1(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=389.0(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.24(br.d,1H),1.36(m,2H),1.68(br.d,1H),2.03(m,1H),2.60(t,2H),3.82(m,2H),4.54(s,2H),4.95(br.d,1H),5.28(br,1H),5.33(br,1H),6.73(s,1H),7.14(m,2H),7.93(s,1H).
实施例7
反-4-{4-氨基-5-[3,5-二氟-4-(羟甲基)苯基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基}环己醇
从中间体24A（323mg,85%纯度,0.88mmol）和中间体1A（286mg,1.06mmol,1.2eq.）出发，通过一般合成方法1获得题述化合物。首先通过快速色谱（Biotage二氧化硅填充柱，洗脱剂：二氯甲烷/甲醇95:5）进行粗产物的纯化。通过制备型HPLC（方法2）进行进一步的纯化。收率：72mg（理论值的21%）。
HPLC（方法2）:Rt=3.37min;
LC-MS（方法7）:Rt=1.01min;MS(ESIpos):m/z(%)=375.3(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=373.3(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.32(m,2H),1.50(m,2H),1.98(m,2H),2.04(m,2H),3.04(tt,1H),3.47(m,1H),4.51(m,2H),4.61(d,1H),5.26(t,1H),6.60(s,1H),7.12(m,2H),7.91(s,1H).
实施例8
外消旋的{4-[4-氨基-7-(吡咯烷-3-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基]-2,6-二氟苯基}甲醇
0℃下，将中间体51A（67mg,0.15mmol）溶解于30%的三氟乙酸的二氯甲烷（6mL）溶液中。在该温度下搅拌反应混合物20分钟，然后在减压下除去所有挥发物。通过制备型HPLC（方法2）纯化剩余物。将由此获得的产物溶解于乙酸乙酯中并且用饱和碳酸钠水溶液洗涤。用无水硫酸钠干燥有机层，蒸馏除去溶剂以得到21mg（理论值的41%）题述化合物。
HPLC（方法2）:Rt=2.96min;
LC-MS（方法6）:Rt=0.34min;MS(ESIpos):m/z(%)=346.1(20)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=344.2(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.94(m,1H),2.22(m,1H),2.94(m,1H),3.00-3.16(m,2H),3.40(m,2H),3.72(m,1H),4.51(s,2H),5.22(br.s,1H),6.71(s,1H),7.11(m,2H),7.92(s,1H).
实施例9
外消旋的3-{4-氨基-5-[3,5-二氟-4-(羟甲基)苯基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基}哌啶-3-醇
0℃下，将中间体52A（46mg,0.10mmol）溶解于30%的三氟乙酸的二氯甲烷（1.5mL）溶液中。在该温度下搅拌反应混合物30min，然后在减压下除去所有挥发物。通过制备型HPLC（方法2）纯化剩余物。将由此获得的产物溶解于乙酸乙酯中并且用饱和碳酸钠水溶液洗涤。用无水硫酸钠干燥有机层，蒸馏除去溶剂以得到20mg（理论值的55%）题述化合物。
HPLC（方法2）:Rt=2.94min;
LC-MS（方法4）:Rt=1.01min;MS(ESIpos):m/z(%)=358.1(100)[M-H2O+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=374.1(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.48(m,1H),1.89(m,2H),2.40-2.69(m,2H),2.92(d,1H),3.02(d,1H),3.40(m,1H),4.52(m,2H),5.26(t,1H),5.45(s,1H),6.72(s,1H),7.13(m,2H),7.94(s,1H).
实施例10
{4-[4-氨基-7-(哌啶-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基]苯基}甲醇
将中间体53A（324mg,0.77mmol）溶解于二氯甲烷（15mL）中。加入三氟乙酸（1.5mL），室温下搅拌混合物16小时。再加入另一份三氟乙酸（1.5mL）并且继续搅拌直至HPLC（方法1）指示起始物质完全转化。然后在减压下除去所有挥发物，并且通过制备型HPLC（方法1）纯化剩余物得到226mg（理论值的91%）题述化合物。
HPLC（方法1）:Rt=3.37min;HPLC（方法2）:Rt=2.90min;
LC-MS（方法4）:Rt=0.90min;MS(ESIpos):m/z(%)=324.1(75)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=322.2(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.79-1.95(m,2H),2.16-2.23(m,2H),3.05-3.19(m,2H),3.37-3.52(m,3H),4.56(s,2H),5.49(s,2H),6.66(s,1H),7.43(s,4H),8.03(s,1H),8.39-8.50(m,1H),8.65-8.69(m,1H).
实施例11
(4-{4-氨基-7-[(3R)-哌啶-3-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基}-2,6-二氟苯基)甲醇
0℃下，将中间体55A（35mg,0.08mmol）溶解于30%的三氟乙酸的二氯甲烷（1.5mL）溶液中。在该温度下搅拌反应混合物30分钟，然后在减压下除去所有挥发物。通过制备型HPLC（方法2）纯化剩余物。将由此获得的产物溶解于乙酸乙酯中并且用饱和碳酸钠水溶液洗涤。用无水硫酸钠干燥有机层，蒸馏除去溶剂以得到18mg（理论值的66%）题述化合物。
HPLC（方法2）:Rt=3.10min;
LC-MS（方法6）:Rt=0.55min;MS(ESIpos):m/z(%)=360.2(20)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=358.3(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.67(m,2H),1.83(m,1H),2.75(m,1H),2.86(m,1H),3.20(d,1H),3.41(m,2H),4.53(m,2H),5.29(t,1H),6.70(s,1H),7.11(m,1H),7.94(s,1H).
实施例12
(4-{4-氨基-7-[(3S)-哌啶-3-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基}-2,6-二氟苯基)甲醇
从中间体56A（19mg,0.04mmol）出发，通过与所述将中间体55A转化为实施例11的方法相同的方法获得该题述化合物。收率：12mg（理论值的81%）。
HPLC、LC-MS和1H-NMR与实施例11示出的相同。
实施例13
{4-[4-氨基-7-(2-甲基-1,3-噻唑-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基]苯基}甲醇
将中间体33A（60mg,0.21mmol）和硫代乙酰胺（15mg,0.20mmol,0.95eq.）溶解于1,4-二氧杂环己烷（2mL）中并且回流4.5小时。待冷却后，加入4-(羟甲基)苯基硼酸（38mg,0.25mmol,1.2eq.）、四(三苯基膦)钯(0)（59mg,0.07mmol,0.25eq.）和2M碳酸钠水溶液（0.4mL）。在100℃下温和地搅拌混合物16小时。然后，加入另一份四(三苯基膦)钯(0)（24mg,0.1eq.），并且在100℃下继续再搅拌4小时。然后过滤反应混合物，在减压下蒸发滤液并且通过制备型HPLC（方法2）纯化剩余物以得到28mg（理论值的40%）呈灰白色晶体的题述化合物。
HPLC（方法1）:Rt=3.85min;HPLC（方法2）:Rt=3.60min;
LC-MS（方法6）:Rt=0.94min;MS(ESIpos):m/z(%)=338.2(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=336.1(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=2.73(s,3H),4.58(s,2H),7.17(s,1H),7.45(d,J=8.3Hz,2H),7.50(d,J=8.3Hz,2H),8.09(s,1H),8.33(s,1H).
实施例14
{4-[4-氨基-7-(2-甲基-1,3-噻唑-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基]-2,6-二氟苯基}甲醇
从中间体34A（75mg,0.24mmol）和中间体1A（78mg,0.29mmol,1.2eq）出发，通过一般合成方法1获得题述化合物。通过制备型HPLC（方法2）进行粗产品的纯化。收率：27mg（理论值的30%）。
HPLC（方法1）:Rt=3.79min;
LC-MS（方法6）:Rt=1.03min;MS(ESIpos):m/z(%)=374.0(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=372.2(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=2.72(s,3H),4.53(s,2H),7.18-7.27(m,2H),8.11(s,1H),8.33(s,1H).
实施例15
{4-[4-氨基-7-(2-乙基-1,3-噻唑-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基]苯基}甲醇
根据一般合成方法1，使中间体35A（91mg,0.28mmol）与4-(羟甲基)苯基硼酸（51mg,0.34mmol,1.2eq.）反应。通过制备型HPLC（方法2）纯化粗产物获得68mg（理论值的69%）呈无色晶体的题述化合物。
HPLC（方法1）:Rt=3.73min;
LC-MS（方法6）:Rt=1.05min;MS(ESIpos):m/z(%)=352.2(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=350.3(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.36(t,J=7.6Hz,3H),3.06(q,J=7.6Hz,2H),4.58(s,2H),7.19(s,1H),7.46(d,J=8.0Hz,2H),7.52(d,J=8.0Hz,2H),8.12(s,1H),8.36(s,1H).
实施例16
{4-[4-氨基-7-(2-乙基-1,3-噻唑-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基]-2,6-二氟苯基}甲醇
从中间体35A（34mg,0.11mmol）和中间体1A（34mg,0.13mmol,1.2eq.）出发，通过一般合成方法1获得题述化合物。通过制备型HPLC（方法2）进行粗产物的纯化。收率：16mg（理论值的40%）。
HPLC（方法1）:Rt=4.04min;
LC-MS（方法6）:Rt=1.15min;MS(ESIpos):m/z(%)=388.0(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=386.1(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.38(t,3H),3.06(q,2H),4.55(s,2H),7.20-7.31(m,3H),8.16(s,1H),8.38(s,1H).
实施例17
{4-[4-氨基-7-(2-氨基-1,3-噻唑-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基]苯基}甲醇
从中间体36A（55mg,0.18mmol）和4-(羟甲基)苯基硼酸（32mg,0.21mmol）出发，通过一般合成方法1获得题述化合物。通过制备型HPLC（方法2）进行粗产物的纯化。收率：29mg（理论值的49%）。
HPLC（方法1）:Rt=3.03min;
LC-MS（方法5）:Rt=1.21min;MS(ESIpos):m/z(%)=339.1(30)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=337.1(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=4.58(m,2H),5.75(m,1H),6.93(s,1H),7.05(m,2H),7.43(m,4H),7.55(s,1H),8.08(s,1H).
实施例18
{4-[4-氨基-7-(哌嗪-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基]苯基}甲醇
在微波反应器瓶中将中间体37A（200mg,0.49mmol）、4-(羟甲基)苯基硼酸（90mg,0.59mmol,1.2eq.）和四(三苯基膦)钯(0)（57mg,0.05mmol,0.1eq.）溶解于1,4-二氧杂环己烷（4.0mL）和2M碳酸钠水溶液（1.0mL）的混合物中。将反应容器轧盖，并且在单模式微波装置中将混合物加热至140℃，加热1小时。待冷却后，将混合物经硅藻土垫过滤，用1,4-二氧杂环己烷冲洗硅藻土垫以洗脱所有的有机物。将合并的滤液在减压下蒸发至干燥，通过制备型HPLC（方法1）纯化剩余物以得到75mg（理论值的45%）题述化合物。
HPLC（方法1）:Rt=2.85min;
LC-MS（方法4）:Rt=0.93min;MS(ESIpos):m/z(%)=339.1(30)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=337.2(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=2.38(br.s,4H),2.63(m,4H),3.80(s,2H),4.55(s,2H),5.26(br.s,1H),6.60(s,1H),7.39(s,4H),7.90(s,1H).
实施例19
{4-[4-氨基-7-(吗啉-4-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基]苯基}甲醇
从中间体38A（200mg,0.64mmol）和4-(羟甲基)苯基硼酸（116mg,0.77mmol,1.2eq.）出发，根据一般合成方法1获得题述化合物。通过制备型HPLC（方法2）纯化粗产物。将由此获得的物质溶解于几毫升的乙腈与水的混合物中，加入2M碳酸钠水溶液，搅拌混合物10min。在此期间，沉淀出题述化合物。通过过滤分离晶体并且真空干燥以得到95mg（理论值的49%）无色固体。
HPLC（方法1）:Rt=3.21min;
LC-MS（方法4）:Rt=0.93min;MS(ESIpos):m/z(%)=340(1)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=338.2(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=2.47(m,4H),3.31(s,4H),3.53(t,2H),3.82(s,1H),4.56(d,2H),5.22(t,1H),6.63(s,1H),7.42(s,4H),7.90(s,1H).
实施例20
{4-[4-氨基-7-(吗啉-4-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基]-2,6-二氟苯基}甲醇
向中间体40A（110mg,0.22mmol）的THF（2.2mL）溶液中加入0.45mL（0.45mmol）1M的四丁基氟化铵（TBAF）的THF溶液，室温下搅拌该混合物1小时。然后在减压下蒸发反应混合物，将剩余物悬浮于3mL甲醇中并且室温搅拌5分钟。过滤形成的沉淀，用少量甲醇洗涤并且真空干燥以得到68mg（理论值的81%）题述化合物。
LC-MS（方法4）:Rt=1.03min;MS(ESIpos):m/z(%)=376.0(80)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=374.1(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=2.45(br.m,4H),3.56(t,4H),3.82(s,2H),4.54(d,2H),5.27(t,1H),6.75(s,1H),7.16(m,2H),7.95(s,1H).
实施例21
{4-[4-氨基-7-(吗啉-4-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基]-2-氟苯基}甲醇
向中间体41A（65.0mg,0.17mmol）的THF（2.0mL）悬浮液中加入0.2mL（0.2mmol）的1M氢化铝锂的THF溶液，在室温下搅拌混合物1小时。用水淬灭所述反应然后通过制备型HPLC（方法3）直接纯化以得到35mg（理论值的58%）题述化合物。
LC-MS（方法6）:Rt=0.98min;MS(ESIpos):m/z(%)=358.1(20)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=356.2(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=2.46(br.m,4H),3.56(t,4H),3.83(s,2H),4.60(d,2H),5.32(t,1H),6.70(s,1H),7.27(dd,2H),7.55(t,1H),7.94(s,1H).
实施例22
{4-[4-氨基-7-(吗啉-4-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基]-2-氯苯基}甲醇
在微波反应器瓶中将中间体39A（200mg,0.56mmol）、中间体3A（112mg,0.51mmol）和四(三苯基膦)钯(0)（58mg,0.05mmol）溶解于1,4-二氧杂环己烷（4.0mL）和2M碳酸钠水溶液（1.0mL）的混合物中。将反应容器轧盖，并且在单模式微波装置中将混合物加热至140℃，加热1小时。待冷却后，过滤混合物，并且通过制备型HPLC（方法3）纯化滤液以得到48mg（理论值的23%）题述化合物。
LC-MS（方法6）:Rt=0.53min;MS(ESIpos):m/z(%)=374.1(80)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=372.2(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=2.46(br.m,4H),3.56(t,4H),3.83(s,2H),4.61(d,2H),5.45(t,1H),6.70(s,1H),7.44(dd,1H),7.49(d,1H),7.63(t,1H),7.94(s,1H).
实施例23
{4-[4-氨基-7-(吗啉-4-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基]-2-甲基苯基}甲醇
与实施例28的制备相似，使中间体39A（200mg,0.56mmol）与中间体4A（102mg,0.51mmol）反应得到9mg（理论值的5%）题述化合物。
LC-MS（方法4）:Rt=1.00min;MS(ESIpos):m/z(%)=354.3(10)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=372.2(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=2.30(s,3H),2.45(br.m,4H),3.56(t,4H),3.83(s,2H),4.54(d,2H),5.13(t,1H),6.63(s,1H),7.26(s,1H),7.26(d,1H),7.45(d,1H),7.91(s,1H).
实施例24
{5-[4-氨基-7-(吗啉-4-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基]哌啶-2-基}甲醇
从中间体38A（200mg,0.64mmol）和中间体6A（147mg,0.96mmol）出发，通过一般合成方法1获得题述化合物。通过制备型HPLC（方法4）纯化粗产物。通过将产物悬浮于乙腈（2mL）中并且通过过滤收集剩余的固体来除去余下的不纯物质。收率：27mg（理论值的12%）。
LC-MS（方法4）:Rt=0.78min;MS(ESIpos):m/z(%)=341(10)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=339.3(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=2.46(br.m,4H),3.56(t,4H),3.84(s,2H),4.62(d,2H),5.46(t,1H),6.73(s,1H),7.54(d,1H),7.86(dd,1H),7.95(d,1H),8.56(s,1H).
实施例25
1-({4-氨基-5-[3,5-二氟-4-(羟甲基)苯基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基}甲基)哌啶-4-醇
从中间体45A（200mg,0.61mmol）和中间体2A（159mg,0.74mmol）出发，通过一般合成方法1获得题述化合物。通过制备型HPLC（方法3）纯化粗产物。收率：103mg（理论值的43%）。
LC-MS（方法4）:Rt=0.98min;MS(ESIpos):m/z(%)=390.1(60)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=388.2(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.36(br.m,2H),1.68(br.m,2H),2.12(br.m,2H),2.75(br.m,2H),3.41(br.m,1H),3.79(s,2H),4.51(d,1H),4.54(d,2H),5.27(t,1H),6.72(s,1H),7.15(m,2H),7.94(s,1H).
实施例26
1-({4-氨基-5-[3,5-二氟-4-(羟甲基)苯基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基}甲基)吡咯烷-3-醇
从中间体47A（110mg,0.35mmol）和中间体2A（91.3mg,0.42mmol）出发，通过一般合成方法1获得题述化合物。通过制备型HPLC（方法3）纯化粗产物。收率：69mg（理论值的52%）。
LC-MS（方法4）:Rt=0.25min;MS(ESIpos):m/z(%)=376.1(20)[M+H]+.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.54(m,1H),1.98(m,1H),2.43(br.d,1H),2.69(m,1H),2.79(dd,1H),3.93(dd,2H),4.18(br,1H),4.53(d,2H),4.69(d,1H),5.27(t,1H),6.75(s,1H),7.16(m,2H),7.95(s,1H).
实施例27
1-({4-氨基-5-[3,5-二氟-4-(羟甲基)苯基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基}甲基)哌啶-3-醇
向中间体50A（150mg,0.30mmol）的THF（3.0mL）溶液中加入0.60mL（0.60mmol）1M的四丁基氟化铵（TBAF）的THF溶液，室温下搅拌该混合物1小时。然后浓缩反应混合物，并且通过制备型HPLC（方法3）纯化剩余物得到65mg（理论值的56%）题述化合物。
LC-MS（方法7）:Rt=0.33min;MS(ESIpos):m/z(%)=390.3(100)[M+H]+.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.02(br.m,1H),1.40(br.m,1H),1.60(br.m,1H),1.77(br.m,2H),1.95(br.m,1H),2.73(br.m,1H),2.88(br.m,1H),3.43(br.m,1H),3.83(br.m,2H),4.54(br.d,3H),5.27(t,1H),6.74(s,1H),7.15(m,2H),7.95(s,1H).
实施例28
反-4-{4-氨基-5-[3-乙基-5-氟-4-(羟甲基)苯基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基}环己醇
在微波反应器瓶中将中间体24A（120mg,0.39mmol）和中间体58A（130mg,0.46mmol）溶解于乙腈（3.0mL）中并且用氩气冲洗。加入四(三苯基膦)钯(0)（22mg,0.02mmol）和2.0M碳酸钠水溶液（0.7mL），在单模式微波装置中将混合物加热至150℃，加热1小时。待冷却后，过滤混合物并且蒸发滤液。通过制备型HPLC（方法2）纯化剩余物得到36mg（理论值的23%）题述化合物。
LC-MS（方法6）:Rt=0.82min;MS(ESIpos):m/z(%)=385(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=383(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ(ppm)=1.24(t,3H),1.28-1.38(m,2H),1.46-1.54(m,2H),1.94-1.97(m,2H),2.01-2.05(m,2H),2.82(q,2H),3.03(m,1H),3.47(m,1H),4.53(m,2H),4.61(d,1H),5.02(t,1H),6.58(s,1H),7.08(d,1H),7.15(s,1H),7.90(s,1H).
实施例29
反-4-{4-氨基-5-[3-氟-4-(羟甲基)-5-甲氧基苯基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基}环己醇
在微波反应器瓶中将中间体24A（120mg,0.39mmol）和中间体59A（163mg,80%纯度,0.46mmol）溶解于乙腈（2.0mL）中并且用氩气冲洗。加入四(三苯基膦)钯(0)（45mg,0.04mmol）和2.0M碳酸钠水溶液（0.5mL），在单模式微波装置中将混合物加热至150℃，加热1小时。待冷却后，过滤混合物并且蒸发滤液。通过制备型HPLC（方法2）纯化剩余物得到6mg（理论值的4%）题述化合物。
LC-MS（方法5）:Rt=1.36min;MS(ESIpos):m/z(%)=387(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=385(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ(ppm)=1.24-1.33(m,2H),1.42-1.53(m,2H),1.90-1.93(m,2H),2.00-2.04(m,2H),3.04(m,1H),3.46(m,1H),3.82(s,3H),4.48(m,2H),4.60(d,1H),4.83(t,1H),6.60(s,1H),6.85(d,1H),6.90(s,1H),7.91(s,1H).
实施例30
{4-[4-氨基-7-(哌啶-3-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基]-2-氟-6-甲氧基苯基}甲醇
0℃下，将中间体63A（50mg,0.11mmol）溶解于30%三氟乙酸的二氯甲烷（5.0mL）溶液中。在该温度下搅拌反应混合物30分钟，然后通过减压下蒸馏除去所有挥发物。通过制备型HPLC（方法2）纯化剩余物。将由此获得的产物溶解在乙酸乙酯中并且用饱和碳酸钠水溶液洗涤。用无水硫酸钠干燥有机层，蒸馏除去溶剂得到30mg（理论值的76%）题述化合物。
LC-MS（方法6）:Rt=0.59min;MS(ESIpos):m/z(%)=372(10)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=370(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ(ppm)=1.50-2.08(m,4H),2.94(m,2H),3.17-3.30(m,3H),3.85(s,3H),4.51(m,2H),4.82(t,1H),6.60(s,1H),6.84(d,1H),6.89(s,1H),7.90(s,1H).
实施例31
{4-[4-氨基-7-(哌啶-3-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基]-2-氟-6-甲基苯基}甲醇
0℃下，将中间体64A（110mg,0.21mmol）溶解于30%三氟乙酸的二氯甲烷（5.0mL）溶液中。在该温度下搅拌反应混合物30min，然后通过减压下蒸馏除去所有挥发物。通过制备型HPLC（方法2）纯化剩余物。将由此获得的产物溶解在乙酸乙酯中并且用饱和碳酸钠水溶液洗涤。用无水硫酸钠干燥有机层，蒸馏除去溶剂得到59mg（理论值的78%）题述化合物。
LC-MS（方法4）:Rt=1.10min;MS(ESIpos):m/z(%)=356(40)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=354(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ(ppm)=1.44-2.08(m,4H),2.42(s,3H),2.94(m,2H),3.17-3.27(m,3H),4.53(m,2H),4.98(t,1H),6.54(s,1H),7.06(d,1H),7.11(s,1H),7.90(s,1H).
实施例32
{4-[4-氨基-7-(吡咯烷-3-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基]-2-氟-6-甲基苯基}甲醇
0℃下，将中间体65A（90mg,0.17mmol）溶解于30%三氟乙酸的二氯甲烷（5.0mL）溶液中。在该温度下搅拌反应混合物30分钟，然后通过减压下蒸馏除去所有挥发物。通过制备型HPLC（方法2）纯化剩余物。将由此获得的产物溶解在乙酸乙酯中并且用饱和碳酸钠水溶液洗涤。用无水硫酸钠干燥有机层，蒸馏除去溶剂得到27mg（理论值的47%）题述化合物。
LC-MS（方法4）:Rt=1.03min;MS(ESIpos):m/z(%)=342(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=340(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ(ppm)=1.80-2.21(m,2H),2.43(s,3H),2.78-2.81(m,1H),2.85-3.02(m,2H),3.22-3.27(m,1H),3.63(m,1H),4.55(br.s,2H),4.98(t,1H),6.63(s,1H),7.06(d,1H),7.11(s,1H),7.90(s,1H).
实施例33
1-{4-氨基-5-[3,5-二氟-4-(羟甲基)苯基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基}环己醇三氟乙酸盐
在微波反应器瓶中将中间体61A（95mg,0.31mmol）和中间体1A（87mg,0.32mmol）溶解于DMF（2.0mL）中并且用氩气冲洗。加入四(三苯基膦)钯(0)（35mg,0.03mmol）和2.0M碳酸钠水溶液（0.5mL），在单模式微波装置中将混合物加热至150℃，加热1小时。待冷却后，过滤混合物并且通过制备型HPLC（方法2）直接纯化滤液得到6mg（理论值的4%）题述化合物。
LC-MS（方法6）:Rt=1.05min;MS(ESIpos):m/z(%)=375(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=373(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ(ppm)=1.20-1.33(m,1H),1.42-1.51(m,2H),1.60-1.82(m,5H),2.17-2.28(m,2H),4.51(s,2H),6.76(s,1H),7.17(m,2H),8.02(s,1H).
实施例34
(4-{4-氨基-7-[2-(氨基甲基)-1,3-噻唑-4-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基}-2,6-二氟苯基)甲醇
在微波反应器瓶中将中间体62A（67mg,0.16mmol）、中间体1A（51mg,0.19mmol）、四(三苯基膦)钯(0)（18mg,0.02mmol）和2.0M碳酸钠水溶液（0.94mL）溶解于1,4-二氧杂环己烷（2.50mL）中。将瓶轧盖，并且在单模式微波装置中将混合物加热至140℃，加热3小时。然后过滤混合物，用乙腈稀释滤液并且用乙醚处理。收集形成的沉淀并且通过制备型HPLC（方法2）纯化。随后用20%三氟乙酸的二氯甲烷（2mL）溶液处理由此获得的产物（15mg），处理20min。通过蒸馏除去挥发物，用浓碳酸钠水溶液处理剩余物并且用乙酸乙酯萃取。用无水硫酸钠干燥有机萃取物，蒸馏除去溶剂以得到呈无色固体的题述化合物（10mg,理论值的13%）。
LC-MS（方法4）:Rt=1.12min;MS(ESIpos):m/z(%)=389(25)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=387(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=4.24(s,2H),4.53(m,2H),5.30(t,1H),7.18-7.23(m,3H),8.11(s,1H),8.40(s,1H).
实施例35
对映异构-{4-[4-氨基-7-(吡咯烷-3-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基]-2,6-二氟苯基}甲醇（对映异构体1）
通过使用制备型手性HPLC[柱：Daicel Chiralpak AD-H,250mmx20mm;洗脱剂：异己烷/乙醇35:65；流速20mL/min;UV检测：220nm]分离外消旋的实施例8（54mg）获得题述化合物。收率：12.5mg。
分析型手性HPLC[柱：Daicel Chiralpak AD-H,5μm,250mm x4.6mm；洗脱剂：异己烷/乙醇50:50+0.2%二乙胺；流速：1.0mL/min；温度：40℃；UV检测：220nm]：Rt=9.452min,e.e.>99%。
HPLC（方法9）:Rt=0.70min;
LC-MS（方法10）:Rt=0.42min;MS(ESIpos):m/z(%)=346.1(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=344.0(100)[M-H]-.
实施例36
对映异构-{4-[4-氨基-7-(吡咯烷-3-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基]-2,6-二氟苯基}甲醇(对映异构体2)
通过使用制备型手性HPLC[柱：Daicel Chiralpak AD-H,250mmx20mm;洗脱剂：异己烷/乙醇35:65；流速20mL/min;UV检测：220nm]分离外消旋的实施例8（54mg）获得题述化合物。收率：14mg。
分析型手性HPLC[柱：Daicel Chiralpak AD-H,5μm,250mm x4.6mm；洗脱剂：异己烷/乙醇50:50+0.2%二乙胺；流速：1.0mL/min；温度：40℃；UV检测：220nm]：Rt=13.695min,e.e.>99%。
HPLC（方法9）:Rt=0.71min;
LC-MS（方法10）:Rt=0.42min;MS(ESIpos):m/z(%)=346.1(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=344.0(100)[M-H]-.
实施例37
外消旋-{4-[4-氨基-7-(吡咯烷-3-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基]-2-乙基-6-氟苯基}甲醇
0℃下将中间体66A（72mg,0.158mmol）溶解于二氯甲烷（3.8mL）中并且加入三氟乙酸（1.0mL）。0℃下搅拌反应混合物40分钟，在减压下除去所有挥发物。通过制备型HPLC（方法6）纯化剩余物。使用饱和碳酸钠水溶液将合并的含有产物的级分调节至碱性pH并且浓缩至干燥。将形成的剩余物悬浮于乙酸乙酯（50mL）中并且过滤。用盐水（5mL）洗涤有机层，用无水硫酸钠干燥并且蒸馏除去溶剂以得到31mg（理论值的56%）题述化合物。
HPLC（方法9）:Rt=0.81min;
LC-MS（方法10）:Rt=0.55min;MS(ESIpos):m/z(%)=356.3(50)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=354.2(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.23(t,3H),1.84-2.24(m,1H),2.81(q,2H),2.80-2.99(m,1H),3.00-3.72(m,1H),4.56(d,2H),5.00(t,1H),6.68(s,1H),7.09(d,1H),7.14(m,2H),7.92(s,1H).
实施例38
外消旋-{4-[4-氨基-7-(哌啶-3-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基]-2-乙基-6-氟苯基}甲醇
0℃下将中间体67A（108mg,0.230mmol）溶解于二氯甲烷（5.2mL）中并且加入三氟乙酸（1.4mL）。0℃下搅拌反应混合物40分钟，在减压下除去所有挥发物。通过制备型HPLC（方法6）纯化剩余物。使用饱和碳酸钠水溶液将合并的含有产物的级分调节至碱性pH并且浓缩至干燥。将形成的剩余物悬浮于乙酸乙酯（50mL）中并且过滤。用盐水（5mL）洗涤有机层，用无水硫酸钠干燥并且蒸馏除去溶剂以得到83mg（理论值的85%）题述化合物。
HPLC（方法9）:Rt=0.81min;
LC-MS（方法10）:Rt=0.58min;MS(ESIpos):m/z(%)=370.3(50)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=368.3(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.22(t,3H),1.51-1.72(m,2H),2.00-2.10(m,1H),2.51-2.65(m,2H),2.81(q,2H),2.95-3.03(m,1H),3.20-3.27(m,1H),4.56(d,2H),5.00(t,1H),6.60(s,1H),7.07(d,1H),7.14(m,2H),7.91(s,1H).
实施例39
外消旋-{4-氨基-5-[3-乙基-5-氟-4-(羟甲基)苯基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基}(环丙基)甲醇
在微波反应器瓶中将中间体17A（83mg,0.29mmol）、中间体58A（98mg,0.35mmol）、四(三苯基膦)钯(0)（17mg,0.015mmol）溶解于乙腈（2.3mL）和2.0M碳酸钠水溶液（0.53mL）的混合物中。使用氩气脱气5分钟后，将反应容器轧盖，并且在单模微波装置中将混合物加热至150℃，加热1小时。待冷却至室温后，加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯萃取混合物3次。用硫酸钠干燥合并的有机层，过滤并且浓缩。通过制备型HPLC（方法5）纯化剩余物以得到题述化合物。收率：63mg（理论值的61%）。
HPLC（方法9）:Rt=1.13min;
LC-MS（方法10）:Rt=0.78min;MS(ESIpos):m/z(%)=357.3(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=355.3(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=0.39(m,3H),0.48(m,1H),1.23(t,3H),1.35(m,1H),2.81(q,2H),4.56(d,2H),4.68(m,1H),5.01(m,1H),5.21(m,1H),6.76(s,1H),7.09(d,1H),7.14(s,1H),7.90(s,1H).
实施例40
外消旋-{4-氨基-5-[4-(羟甲基)-3-甲氧基苯基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基}(环丙基)甲醇
将中间体68A（130mg,0.353mmol）溶解于四氢呋喃（6.9mL）中并且冷却至0℃。滴加氢化铝锂（1M在乙醚中,0.78mL），并且使反应混合物升温至室温过夜。然后用水淬灭反应混合物并且过滤。浓缩滤液，通过制备型HPLC（方法8）纯化剩余物以得到题述化合物。收率：63mg（理论值的51%）。
LC-MS（方法10）:Rt=0.62min;MS(ESIpos):m/z(%)=341.2(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=339.1(100)[M-H]-.
实施例41
对映异构-4-氨基-5-[4-(羟甲基)-3-甲氧基苯基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基}(环丙基)甲醇（对映异构体1）
通过使用制备型手性HPLC[柱：Daicel Chiralpak IC,5μm,250mm x20mm;洗脱剂：叔丁基甲基醚/甲醇85:15；流速15mL/min;温度：40℃；UV检测：220nm]分离外消旋的实施例40（63mg）获得题述化合物。收率：17mg。
分析型手性HPLC[柱：Daicel Chiralpak IC,5μm,250mm x4.6mm；洗脱剂：叔丁基甲基醚/甲醇85:15；流速：1.0mL/min；温度：40℃；UV检测：220nm]：Rt=4.76min,e.e.>99%。
LC-MS（方法10）:Rt=0.67min;MS(ESIpos):m/z(%)=341.2(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=339.1(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=0.40(m,3H),0.48(m,1H),1.36(m,1H),3.83(s,3H),4.54(d,2H),4.68(m,1H),5.07(t,1H),5.25(d,1H),6.74(s,1H),7.00(s,1H),7.03(d,1H),7.47(d,1H),7.89(s,1H).
实施例42
对映异构-4-氨基-5-[4-(羟甲基)-3-甲氧基苯基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基}(环丙基)甲醇(对映异构体2)
通过使用制备型手性HPLC[柱：Daicel Chiralpak IC,5μm,250mm x20mm;洗脱剂：叔丁基甲基醚/甲醇85:15；流速15mL/min;温度：40℃；UV检测：220nm]分离外消旋的实施例40（63mg）获得题述化合物。收率：25mg。
分析型手性HPLC[柱：Daicel Chiralpak IC,5μm,250mm x4.6mm；洗脱剂：叔丁基甲基醚/甲醇85:15；流速：1.0mL/min；温度：40℃；UV检测：220nm]：Rt=6.37min,e.e.>99%。
LC-MS（方法10）:Rt=0.67min;MS(ESIpos):m/z(%)=341.2(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=339.1(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=0.40(m,3H),0.48(m,1H),1.36(m,1H),3.83(s,3H),4.54(d,2H),4.68(m,1H),5.07(t,1H),5.25(d,1H),6.74(s,1H),7.00(s,1H),7.03(d,1H),7.47(d,1H),7.89(s,1H).
实施例43
[4-(4-氨基-7-异丙基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)-2,6-二氟苯基]甲醇
在微波反应器瓶中将中间体71A（181mg,0.709mmol）、中间体1A（239mg,0.887mmol）和四(三苯基膦)钯(0)（41mg,0.035mmol）溶解于N,N-二甲基甲酰胺（12.5mL）和2.0M碳酸钠水溶液（1.42mL）的混合物中。将反应容器轧盖，并且在单模式微波装置中将混合物加热至130℃，加热2小时。待冷却至室温后，经硅藻土过滤反应混合物并且浓缩。将形成的剩余物溶解于乙酸乙酯（100mL）中并且用水和盐水（各10mL）洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤并且浓缩。通过快速色谱（puriFlash,Interchim,环己烷/乙酸乙酯1:1至100%乙酸乙酯梯度）纯化剩余物，接着通过制备型HPLC（方法6）纯化。合并含有产物的组分并且使用饱和碳酸钠水溶液调节至碱性pH。除去乙腈溶剂，通过过滤收集沉淀的产物。收率：69mg（理论值的31%）。
HPLC（方法9）:Rt=1.35min;
LC-MS（方法10）:Rt=0.90min;MS(ESIpos):m/z(%)=319.0(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=317.0(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.30(d,6H),3.42(m,1H),4.54(s,2H),5.26(s,1H),6.65(s,1H),7.14(m,2H),7.94(s,1H).
实施例44
外消旋-1-{4-氨基-5-[3,5-二氟-4-(羟甲基)苯基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基}乙醇
在微波反应器瓶中将中间体72A（230mg,0.743mmol）、中间体2A（192mg,0.89mmol）和四(三苯基膦)钯(0)（86mg,0.074mmol）溶解于1,4-二氧杂环己烷（4.6mL）和2.0M碳酸钠水溶液（1.16mL）的混合物中。将反应容器轧盖，并且在单模式微波装置中将混合物加热至140℃，加热1小时。待冷却至室温后，通过制备型HPLC（方法8）纯化反应混合物以得到48mg物质，其通过制备型HPLC（方法9）进一步纯化。收率：11mg（理论值的4.6%）。
LC-MS（方法5）:Rt=0.89min;MS(ESIpos):m/z(%)=321.3(100)[M+H]+,MS(ESIneg):m/z(%)=319.3(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ(ppm)=1.47(d,3H),4.54(m,2H),5.16-5.39(m,2H),6.74(s,1H),6.88(m,1H),7.14(m,2H),7.94(s,1H).
B.生物学活性的评价
缩写和首字母缩略词：
ATCC 美国典型培养物保藏中心
ATP 三磷酸腺苷
Bq 贝可
BrdU 5-溴-2-脱氧尿苷
BSA 牛血清白蛋白
CHO 中国仓鼠卵巢
cpm 每分钟计数
Ct 循环阈值
DMEM/F12 Dulbecco改良Eagle培养基/Ham's F12培养基(1:1)
DMSO 二甲基亚砜
DNA 脱氧核糖核酸
DTT 二硫苏糖醇
EDTA 乙二胺-四乙酸
ENGS MV 微血管内皮细胞培养基
FAM 羧基荧光素琥珀酰亚胺酯
FCS 胎牛血清
hBMP9 人形态发生因子9（human bone morphogenicfactor9）
HEPES 4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙磺酸
HMVEC 人微血管内皮细胞
HPMC 羟丙基甲基纤维素
HTRF 均相时间分辨荧光
HUVEC 人血管内皮细胞
[I] 抑制剂浓度
IC50 具有50%抑制作用的浓度
LDH 乳酸脱氢酶
mRNA 信使核糖核酸
NADH 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸
Nonidet P40 4-乙基苯氧基-聚(乙二醇)醚(n=11)
PBS 磷酸盐缓冲盐水
PE 聚乙烯
PEG 聚乙二醇
PK 丙酮酸激酶
p.o. 口服
qPCR 定量聚合酶链反应
RNA 核糖核酸
RTL buffer RNeasy裂解缓冲液
SEQ ID NO 序列号
SFM 无血清培养基
TAMRA 羧基四甲基罗丹明
Tris 2-氨基-2-羟甲基丙烷-1,3-二醇
Triton X-100 4-叔辛基苯氧基-聚(乙二醇)醚(n=10)
对本发明化合物活性的证明可以通过本领域公知的体外、离体和体内测定完成。例如，为了证明本发明的化合物的活性，可以使用下列测定。
B-1a.利用纳入性放射性标记闪烁的体外酶抑制（闪板测定法）
试验原理：
将在DMSO中稀释的试验化合物与合适的底物/共底物（此处为：生物素化α-酪蛋白和33P-ATP）在相应的测定缓冲液中混合。加入目的酶（此处为：ALK1激酶）开始酶反应。将放射性标记纳入至底物中的酶催化性纳入是经由闪烁测定的。通过将生物素化的底物特异性地结合至链霉亲和素包被的微量滴定板（闪板）以及伴随的洗涤步骤来将纳入的放射性标记从游离的放射性标记中分离出来。闪烁信号强度（每分钟计数，cpm）与酶活性成正比。酶抑制使得信号强度减弱。通过cpm与[I]的图确定IC50值。
反应缓冲液：
反应缓冲液含有50mM Tris pH8.0(Sigma)、1mM MnCl2(Sigma)、0.01%Nonidet P40(Fluka)、0.5x完全无EDTA的蛋白酶抑制剂（Roche;含有一些抑制丝氨酸和半胱氨酸（但非金属）蛋白酶的蛋白酶抑制剂的混合物；1片含有蛋白酶抑制剂足够用于50ml细胞提取物的蛋白酶抑制剂；用于该测定的浓度相当于在100ml中有1片)。
其它缓冲液：
1.）终止溶液：Dulbecco's PBS(PAA,Pasching,Austria)、25mMEDTA(Sigma)、25μM ATP(Roche)、0.05%Triton X-100(Sigma)；
2.）饱和缓冲液：Dulbecco's PBS(PAA,Pasching,Austria)、100μMATP(Roche)、0.2%Triton X-100(Sigma)；
3.）洗涤缓冲液：Dulbecco's PBS(PAA,Pasching,Austria)。
酶溶液：
将ALK1(Invitrogen,Paisley,United Kingdom)储备溶液（35.7ng/μ）稀释至4ng/μl；在所述反应中的终浓度为1ng/μl。
底物溶液：
根据制造商（Pierce,Bonn,Germany）的方法，将去磷酸化的α-酪蛋白(Sigma)生物素化，获得61.6μM储备溶液。简单地说，将
Sulfo-NHS-Biotin试剂（磺基琥珀酰亚胺基-6-(生物素氨基)己酸酯;Pierce,Bonn,Germany）以等摩尔量加至α-酪蛋白中并且在冰上孵育2小时。此后，通过透析（2x2小时且过夜）除去生物素试剂。
在每次试验前将100mM冷（未标记的）的ATP（Roche）溶液以1:100稀释。对于底物混合，将α-酪蛋白稀释至2.22μM使得在反应中的终浓度为1μMα-酪蛋白。此外，加入冷的ATP得到1.11μM溶液，这使得在反应中的终浓度为500nM。
放射性ATP溶液：
将储备溶液（9.25MBq/25μl的33P-ATP;Perkin Elmer,Rodgau,Germany）稀释至651.2Bq/μl。这相当于162.8Bq/μl的终浓度。
化合物溶液：
将化合物溶解于100%DMSO中（10mM储备溶液）并且稀释至2mM。在DMSO中以1:3.16逐步地制造其它稀释液。
逐步方案：
将9μl体积的底物溶液供至384孔微量滴定板（Greiner Bio-One,Solingen,Germany）的每个孔中。加入1μl化合物溶液和5μl放射性ATP溶液。随着加入5μl酶溶液，酶反应开始。室温下孵育所得混合物60分钟，然后通过加入10μl终止溶液停止。用每孔50μl饱和缓冲液饱和384孔微量滴定闪板（Perkin Elmer,Rodgau,Germany），饱和至少60分钟。随后，弃去20μl体积并且替代为20μl被终止的ALK1反应混合物。通过室温下过夜孵育使生物素化的底物结合至所述闪板。通过反复的洗涤步骤（每孔3x50μl洗涤缓冲液）从未结合的组分中分离出结合的底物。最后，加入50μl洗涤缓冲液，在合适的计数器（Perkin Elmer,Rodgau,Germany）中测定闪烁信号（cpm）。本发明个体化合物的IC50值列于下表1：
表1
| 实施例编号 | ALK1 IC50 [nM] |
| 1 | 2.0 |
| 2 | 2.8 |
| 3 | 4.0 |
| 4 | 1.0 |
| 5 | 1.3 |
| 6 | 40 |
| 7 | 2.0 |
| 8 | 4.4 |
| 9 | 5.7 |
| 10 | 8.0 |
| 11 | 1.9 |
| 12 | 5.9 |
| 13 | 4.0 |
| 14 | 5.3 |
| 15 | 60 |
| 16 | 2.6 |
| 17 | 2.0 |
| 18 | 80 |
| 19 | 19 |
| 20 | 30 |
| 21 | 25 |
| 22 | 17 |
| 23 | 30 |
| 24 | 140 |
| 实施例编号 | ALK1IC50[nM] |
| 25 | 65 |
| 26 | 30 |
| 27 | 70 |
| 28 | 170 |
| 29 | 1.0 |
| 30 | 2.0 |
| 31 | 4.0 |
| 32 | 4.0 |
| 33 | 15 |
| 34 | 4.1 |
| 40 | 3.2 |
| 41 | 3.5 |
| 42 | 1.2 |
| 43 | 1.9 |
| 44 | 3.8 |
B-1b.ALK1激酶测定（ProQinase方案）
在放射测量测定中，使用在96孔PerkinElmer FlashPlatesTM(Boston,MA,USA)中的作为底物的γ-33P-ATP和酪蛋白，在ProQinaseGmbH(Freiburg,Germany)中测定ALK1(Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)激酶活性。所述化合物在50μl的总体积内以1x10-4M至3x10-9M范围中的10个浓度进行试验，每个试验中最终的DMSO浓度为1%。以下列顺序混合所测定的组分：
-20μl测定缓冲液(70mM HEPES-NaOH,pH7.5、3mMMgCl2、3mM MnCl2、2μM正钒酸钠、1.2mM DTT)；
-5μlγ-33P-ATP(1.0μM在水中,约6x105cpm/孔)；
-5μl测试化合物的溶液(在10%DMSO中)；
-10μl底物(200μg/ml,1.0μg/50μl终浓度)/酶(4μg/ml,
20ng/50μl=5.5nM终浓度)溶液(1:1混合物)。
将所得反应混合物在30℃下孵育60分钟并且通过加入50μl2%(v/v)磷酸终止反应。抽吸所述板并且用200μl0.9%(w/v)氯化钠洗涤两次。用微板闪烁计数器（Microbeta,Wallac）确定33Pi的纳入。使用BeckmanCoulter/SAGIANTMCore System进行所有测定。
将从与标记的ATP的非特异性底物结合中获得的中位值设定为背景水平，而在不存在任何抑制剂的情况下测定的中位值被认为反映ALK1激酶的完全活性。从完全活性（fa）值以及由含有样品的试验化合物获得的值（试验化合物活性，tca）中减去背景活性（ba）。试验化合物活性的剩余活性（residual activity）计算如下：
剩余活性(%)=100x[(tca-ba)/(fa-ba)]
使用Quattro Workflow V3.1.0(Quattro Research GmbH,Munich,Germany)计算每个浓度的剩余活性和化合物的IC50值。用于确定IC50的拟合模型为"Sigmoidal response(可变斜率)"，其参数"峰值"固定在100%并且"基值"固定在0%。所使用的拟合方法为最小二乘法拟合。
从该测定中获得的代表性IC50值列于下表2：
表2
| 实施例编号 | ALK1 IC50[nM] |
| 7 | 6.7 |
| 11 | 3.0 |
| 28 | 124 |
| 35 | 6.9 |
| 36 | 21 |
| 37 | <3 |
| 38 | 4.0 |
| 39 | 5.7 |
B-2a.Smad7目标基团诱导：HMVEC细胞测定和TaqMan表达分析
通过BMP9对ALK1受体的活化诱导Smad1/5信号传导通路并且增加目标基因Smad6、Smad7和Id-1的表达。测定在经BMP9刺激的内皮细胞中Smad7-mRNA的诱导，以监测ALK1激酶抑制剂的细胞潜能。
在每孔有10000个细胞的96孔板中，将人微血管内皮细胞（HMVECadult,Cell Systems,St.Katharinen）接种在具有所有补充物的完全ENGS MV培养基（LifeLine Cell Technology）中。在37℃和7.5%CO2下于潮湿孵育箱中孵育4h后，将培养基替换为基本培养基（含有0.02%FCS但无补充物的ENGS MV）。16h后，向培养物中加入试验化合物或培养基（对照），接着在30min后加入hBMP9(R&D Systems)。1至4h后除去培养基，用磷酸盐缓冲盐水小心地洗涤板，用150μl/孔的冰冷RLT缓冲液(Qiagen)来使细胞裂解。
根据制造商的说明书（Invitrogen,USA），使用
试剂方法分离总细胞RNA并且用DNAseI处理以除去基因组DNA的污染。
对于hSmad7的mRNA分布的相对定量，首先根据制造商的方法使用ImProm-II Reverse Transcription System(Promega,USA)使每个样品的总RNA逆转录。使用水将终体积调节至200μl。
对于选定的mRNA的相对定量，根据制造商的说明书和方法，使用Applied Bioscience ABI7900HT Sequence Detection System。设置PCR反应以定量hSmad7-mRNA和管家基因L32-mRNA。使用Applied Bioscience ABI Primer ExpressTM软件设计hSmad7和L32的正向引物和反向引物以及探针，并且通过Eurogentec(Belgium)合成它们。hSmad7正向引物的序列为：引物1（SEQ ID NO1）。hSmad7反向引物的序列为：引物2（SEQ ID NO2）。使用探针1（SEQ ID NO3）作为hSmad7的探针，所述探针1标记有FAM（作为报告染料（reporter dye））和TAMRA（作为淬灭剂（quencher））。L32正向引物的序列为：引物3（SEQ ID NO4）。L32反向引物的序列为：引物4（SEQ ID NO5）。使用探针2（SEQ ID NO6）作为L32的探针，所述探针1标记有FAM（作为报告染料）和TAMRA（作为淬灭剂）。
SEQ ID列表:
5'至3'
SEQ ID NO 1 hSmad7引物1 CCCTCCTTACTCCAGATACCC
(正向引物)
SEQ ID NO 2 hSmad7引物2 GGAGGAAGGCACAGCATCT
(反向引物)
SEQ ID NO 3 hSmad7探针1 TTTTCTCAAACCAACTGCAGACTGTCC
SEQ ID NO 4 L32引物3 AAGTTCATCCGGCACCAGTC
(正向引物)
SEQ ID NO 5 L32引物4 TGGCCCTTGAATCTTCTACGA
(反向引物)
SEQ ID NO 6 L32探针2 CCCAGAGGCATTGACAACAGGG
以每孔加入总共20μl来准备以下试剂：200nM1x qPCR-MasterMix(Eurogentec,Belgium)、200nM hSmad7正向引物、200nM hSmad7反向引物、200nM hSmad7FAM/TAMRA标记的探针1(SEQ ID NO3)和5μl模板cDNA。相应地，在平行样品中5使用每孔加入的L32FAM/TAMRA标记的探针2(SEQ ID NO6)和L32正向引物和反向引物准备共20μl的第二混合物。
热循环参数为在50℃下2min，接着在95℃下10min，接着进行40个循环，每个循环为在95℃下熔融15秒和在60℃下退火/延伸1min。相对表达量的计算：
通过ΔΔCt方法（Δ-ΔCt）由PCR产物定量曲线的拐点计算Ct（循环阈）值：
ΔCt=CthSmad7–CtL32；相对表达量=2(15-ΔCt)。
基于不同的化合物浓度下的相对Smad7表达来计算试验化合物5的IC50值。代表性的值列于下表3：
表3
| 实施例编号 | hSmad7IC50[nM] |
| 1 | 100 |
| 2 | 125 |
| 3 | 180 |
| 实施例编号 | hSmad7IC50[nM] |
| 5 | 150 |
| 7 | 130 |
| 8 | 60 |
| 11 | 90 |
| 17 | 120 |
| 20 | 4400 |
| 21 | 6000 |
| 22 | 800 |
B-2b.Smad7目标基因诱导：HUVEC细胞测定和TaqMan表达 分析
在基于细胞的测定中测试ALK1抑制剂的体外效价。骨形态发生蛋白9（BMP9）在人血管内皮细胞（HUVEC）中经由ALK1活化诱导Smad7mRNA表达。
以1.5x104个2代HUVEC（Lonza,Basel,Switzerland）/孔接种于96孔板的含有EGM-2添加剂和生长因子（Lonza,CC-3156和CC-4176）的EBM-2培养基中。4h后，将所述培养基换成具有0.2%胎牛血清（FCS）的EBM-2，并且将所得细胞在37℃、5%CO2下于潮湿孵育箱中饥饿处理20h。以介于1至10000nM之间的11个不同浓度加入试验化合物，1小时后用1ng/ml的重组人BMP9蛋白（溶解于4mM盐酸中,0.1%BSA为10μg/ml；R&D Systems,Minneapolis,MN,USA,3209BP）刺激所述细胞。除去培养基，在100μl RLT缓冲液（Qiagen,Hilden,Germany）中裂解所述细胞。根据制造商的说明，使用Qiagen RNeasy96试剂盒(订单号74182)分离RNA并且用65μl无RNA酶的水从柱上洗脱。在无RNA酶的96孔圆底板中使用Omniscript Kit(Qiagen,205113)进行定量RT-PCR的逆转录。向每孔中加入6.8μl反应混合物，其含有2μl10x RT缓冲液、2μl dNTP(每个5mM（5mM each）)、1.6μl随机引物N6(125μM)、0.25μl Rnase Out(40U/μl)和1μl Omniscript逆转录酶。加入13.2μl RNA/水混合物后，混合板的内容物，在37℃下孵育1h并且通过加入80μl无RNA酶的水将各孔的总体积调节至100μl。
人Smad7mRNA的定量是在TaqMan上进行，其使用EurogentecqPCR Mastermix Plus(RT-QP2X-03-075+;Cologne,Germany)并且使用人L32作为管家内参mRNA。对于每个qPCR反应，加入2.8μl引物混合物、10μl master mix、2.2μl水和5μl cDNA。热循环参数为50℃下2min，接着在95℃下10min，随后进行40次以下循环：在95℃下熔融15秒和在60℃下退火/延伸1分钟。
将通过1ng/ml BMP9诱导（未加入任何抑制剂）的Smad7mRNA水平设定为100%诱导，使用这一值计算每个试验化合物的%抑制率。对于每个试验化合物，以四次平行试验确定每个值。使用MicrosoftExcel确定IC50值。使用加权的、无约束的ML拟合。
从该测定中获得的代表性的IC50值列于下表4：
表4
| 实施例编号 | hSmad7IC50[nM] |
| 1 | 94 |
| 2 | 160 |
| 3 | 120 |
| 5 | 290 |
| 7 | 140 |
| 11 | 180 |
| 17 | 290 |
| 20 | 5900 |
| 21 | 790 |
| 22 | 3100 |
| 30 | 51 |
| 37 | 330 |
| 39 | 500 |
| 40 | 62 |
| 41 | 77 |
| 42 | 6.6 |
| 43 | 27 |
B-3.在激光诱导的脉络膜新血管形成（CNV）模型中的全身性 功效
该研究的目的在于确定每日全身性给予一次（i.p.）试验化合物是否使激光诱导的脉络膜新血管形成大鼠模型中血管渗漏和/或脉络膜新血管形成降低。
为此，选择16只无明显眼部缺陷迹象的有色Brown-Norway大鼠，将它们随机分成两组，每组8只动物。在第0天，通过腹膜内注射（15mg/kg甲苯噻嗪和80mg/kg氯胺酮）将所述动物麻醉。在滴入一滴0.5%托吡卡胺以散大瞳孔后，通过在右眼视神经盘附近进行六个75μm大小的脉络膜灼伤来诱导脉络膜新血管形成，所述灼伤为使用在150mW的532nm氩激光光凝术进行100ms。通过每日一次腹膜内（i.p.）注射给予所述试验化合物和赋形剂对照（10%乙醇、90%PEG400），所述试验化合物的给药量为在第0天和第1天给予50mg/kg，接着在第2天至第23天继续给予20mg/kg。在研究开始前以及在研究期间每天记录一次所有动物的体重。
在第21天使用Heidelberg's Retinal Angiograph(HRA)进行血管造影。在麻醉和瞳孔散大后，皮下注射10%荧光素钠染料，注射染料10min后记录图像。两名检查员以盲法评价血管造影片上荧光素的血管渗漏并且以0（无渗漏）至3（深度染色）评分。
在第23天安乐处死后，采集眼珠并且将其在室温下固定在4%多聚甲醛中1小时。洗涤后，小心剥离视网膜，在用FITC-isolectineB4抗体封闭后将巩膜-脉络膜平整固定（flat-mounted）并且孵育。在荧光显微镜（Apotom）下以488nm激发波长检测平整固定的制品。使用Axiovision4.6软件，通过对图象的形态分析对脉络膜新血管形成的体积进行评价。
对于作为本发明代表性化合物的实施例11，在该模型中获得以下结果：
B-4.在激光诱导的脉络膜新血管形成（CNV）模型中的局部效 能
该研究的目的在于确定每日两次局部给予（滴眼剂）试验化合物是否使辐射激光的脉络膜新血管形成大鼠模型的血管渗漏和/或脉络膜新血管形成降低。
为此，选择65只无明显眼部缺陷迹象的有色Brown-Norway大鼠，将它们随机分成6个不同的组（每组动物数n见下表）。在第0天，通过腹膜内注射（15mg/kg甲苯噻嗪和80mg/kg氯胺酮）将所述动物麻醉。在滴入一滴0.5%托吡卡胺以散大瞳孔后，通过使用532nm氩激光在每只动物的一只眼睛的视网膜灼烧六个孔（Bruch破坏）（损伤尺寸:50μm;激光强度:150mW;刺激持续时间:100ms）以诱导脉络膜新血管形成。通过将各滴眼剂输注至感染的眼睛来每日两次局部给予试验化合物和赋形剂对照。所述试验化合物给药量如下：在23天的完全观察期期间，以10至14小时间隔每日两次将10μl滴眼剂施用至受感染的眼睛，所述滴眼剂含有20mg/ml的各试验化合物，其或者悬浮于100%液体石蜡中，或者悬浮于液体赋形剂（HPMC15cP3.5%、聚山梨醇酯800.5%、NaCl0.9%在水中）中。对照动物每日两次局部接受各赋形剂（100%液体石蜡或液体赋形剂）。在研究开始前以及在研究期间每天记录一次所有动物的体重。
在第21天使用荧光眼底相机(Kowe)进行血管造影。此处，在麻醉和瞳孔散大后，皮下注射10%荧光素钠染料，注射染料2min和10min后记录图像。三名对组分配（试验化合物对比赋形剂）不知情的不同检查员评价血管造影片上荧光素的血管渗漏并且以0（无渗漏）至3（深度染色）评分。
在第23天处死动物，采集眼珠并且将其在室温下固定在4%多聚甲醛中1小时。洗涤后，小心剥离视网膜，洗涤、用FITC-isolectineB4抗体封闭和染色以显现血管。然后，将巩膜-脉络膜平整固定并且在荧光显微镜（Keyence Biozero）下以488nm激发波长检测。使用ImageTool软件测量脉络膜新血管形成的面积（单位μm2）。
对于作为本发明代表性化合物的实施例7和11，在该模型中获得以下结果：
虽然已经参考特定的实施方案公开了本发明，但是显而易见的是本领域的技术人员可以在不脱离本发明的真实精神和范围下设计其它的实施方案和变型。权利要求意在解读为包括所有这些实施方案和等价变型。
C.涉及药物组合物的实施例
本发明的药物组合物可如下说明：
无菌静脉溶液：
使用无菌、注射用水可制造5mg/mL本发明所需化合物的溶液，如果需要，调节pH。用无菌的5%葡萄糖稀释所述溶液至1-2mg/mL用于给药，并且作为静脉输注液经约60分钟给药。
用于静脉给药的冻干粉剂：
可用(i)作为冻干粉末的100-1000mg本发明所需的化合物、(ii)32-327mg/mL柠檬酸钠和(iii)300-3000mg葡聚糖40来制备无菌制剂。用无菌的、注射用生理盐水或者5%葡萄糖将所述制剂复原至10至20mg/mL的浓度，再进一步用生理盐水或5%葡萄糖将该制剂稀释至0.2至0.4mg/mL，以静脉推注或通过15-60分钟的静脉输注给药。
肌内悬浮液：
可制备以下溶液或悬浮液用于肌内注射：
50mg/mL本发明所需的水不溶性化合物；5mg/mL羧甲基纤维素钠；4mg/mL Tween80；9mg/mL氯化钠；9mg/mL苄醇。
硬壳胶囊：
通过各自用100mg本发明所需的粉末状化合物、150mg乳糖、50mg纤维素和6mg硬脂酸镁填充两件式硬明胶胶囊来制备大量单元胶囊。
软明胶胶囊：
制备溶于可消化油（例如大豆油、棉籽油或橄榄油）中的本发明所需化合物的混合物，并且通过正位移泵将其注射至熔融明胶中以形成含有100mg活性成分的软明胶胶囊。洗涤并干燥所得胶囊。可将本发明的所需化合物溶解于聚乙二醇、甘油和山梨糖醇的混合物中以制备水溶混性药物混合物。
片剂：
通过常规方法制备大量片剂以使得剂量单位为100mg的本发明所需的化合物、0.2mg的胶体二氧化硅、5mg的硬脂酸镁、275mg的微晶纤维素、11mg的淀粉和98.8mg的乳糖。
可施加合适的水性和非水性包衣以增加可口性、提高美观度和稳定性或延迟吸收。
用于局部施用至眼的溶液或悬浮液（滴眼剂）：
用在5mL无菌生理盐水中复原的100mg冻干粉末形式的本发明化合物制备无菌制剂。可以使用约0.001重量%至1重量%的苯扎氯铵、硫柳汞、硝酸苯汞等作为防腐剂。
Claims (10)
1.式（I）的化合物，或其药学上可接受的盐、水合物和/或溶剂合物，
其中
A为N或C-R2，其中
R2代表氢、氟或氯，
R1代表氢、氟、氯、甲基、乙基或甲氧基，
并且
Z代表(C1-C4)-烷基或(C3-C6)-环烷基，其各自可以被羟基取代，
或者
Z代表下式的杂环基
其中*表示连接至吡咯并三嗪部分的位点，
并且
R3代表氢或羟基，
条件是当R3为羟基时，该羟基不连接至位置与环氮原子相邻的环碳原子，
或者
Z代表下式的噻唑基
其中*表示连接至吡咯并三嗪部分的位点，
并且
R4代表氢、甲基、乙基、氨基或氨甲基，
或者
Z代表下式的基团
其中*表示连接至吡咯并三嗪部分的位点，
R5代表(C3-C6)-环烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基或四氢吡喃基，
R6代表氢或羟基，
R7代表氢或羟基，
条件是当R7为羟基时，该羟基不连接至位置与环氮原子相邻的环碳原子，
并且
Y为O、NH或NCH3。
2.权利要求1所述的式（I）的化合物，或者其药学上可接受的盐、合物和/或溶剂合物，其中
A为C-R2，其中
R2代表氢或氟，
R1代表氢、氟、氯、甲基、乙基或甲氧基，
并且
Z代表正丙基、正丁基或环己基，其各自可以被羟基取代，
或者
Z代表下式的杂环基
其中*表示连接至吡咯并三嗪部分的位点，
或者
Z代表下式的噻唑基
其中*表示连接至吡咯并三嗪部分的位点，
并且
R4代表甲基、乙基、氨基或氨基甲基，
或者
Z代表下式的基团
其中*表示连接至吡咯并三嗪部分的位点，
R5代表环丙基或四氢吡喃-4-基，
R6代表羟基，
并且
Y为O。
3.权利要求1或2所述的式（I）的化合物，或者其药学上可接受的盐、水合物和/或溶剂合物，其中
A为C-R2，其中
R2代表氢或氟，
R1代表氢、氟、甲基、乙基或甲氧基，
并且
Z代表4-羟丁基或4-羟基环己基，
或者
Z代表下式的杂环基
其中*表示连接至吡咯并三嗪部分的位点，
或者
Z代表下式的噻唑基
其中*表示连接至吡咯并三嗪部分的位点，
并且
R4代表甲基、乙基、氨基或氨甲基，
或者
Z代表下式的基团
其中*表示连接至吡咯并三嗪部分的位点，
并且
R5代表环丙基。
4.一种制备如权利要求1至3所限定的式（I）的化合物的方法，其特征在于式（II）的溴代吡咯并三嗪
其中Z具有权利要求1至3所述的含义，
或者
[A]在存在合适的钯催化剂和碱的情况下被与式（III）的芳基硼酸或酯偶联而产生式（I）的目标化合物
其中A和R1具有权利要求1至3所述的含义，
并且
R8代表氢或(C1-C4)-烷基，或者两个R8残基连接在一起形成-(CH2)2-、-C(CH3)2-C(CH3)2-、-(CH2)3-或-CH2-C(CH3)2-CH2-桥，
其中A、Z和R1具有权利要求1至3所述的含义，
或者
[B]在存在合适的钯催化剂和碱的情况下首先被转化成相应的式（IV）的硼酸或酯，然后再将其与式（V）的芳基溴偶联以同样得到式（I）的目标化合物，
其中Z具有权利要求1至3所述的含义，
并且
R9代表氢或(C1-C4)-烷基，或者两个R9残基连接在一起形成-(CH2)2-、-C(CH3)2-C(CH3)2-、-(CH2)3-或-CH2-C(CH3)2-CH2-桥，
其中A和R1具有权利要求1至3所述的含义，
其中A、Z和R1具有权利要求1至3所述的含义，
随后任选地，如果合适，通过(i)将式（I）的化合物分离成它们各自的对映异构体和/或非对映异构体，和/或(ii)通过用相应的溶剂和/或酸处理，将式（I）的化合物转化成它们各自的水合物、溶剂合物、盐和/或所述盐的水合物或溶剂合物。
5.权利要求1至3任一项所限定的化合物，其用于治疗或预防疾病。
6.权利要求1至3任一项所限定的化合物用于制造治疗或预防年龄相关性黄斑变性（AMD）、脉络膜新生血管（CNV）、糖尿病性视网膜病和糖尿病性黄斑水肿（DME）的药剂的用途。
7.一种药物组合物，其包含权利要求1至3任一项限定的化合物或其药学上可接受的盐、水合物和/或溶剂合物，以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。
8.权利要求7的药物组合物，还包括一种或多种其它治疗剂。
9.权利要求7或8限定的药物组合物，其用于治疗或预防年龄相关性黄斑变性（AMD）、脉络膜新生血管（CNV）、糖尿病性视网膜病和糖尿病性黄斑水肿（DME）。
10.一种在哺乳动物中治疗或预防年龄相关性黄斑变性（AMD）、脉络膜新生血管（CNV）、糖尿病性视网膜病和糖尿病性黄斑水肿（DME）的方法，所述方法包括向需要治疗或预防的哺乳动物给予治疗有效量的一种或多种权利要求1至3任一项所限定的化合物，或者给予治疗有效量的权利要求7至9任一项所限定的药物组合物。
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| AU2015243261B2 (en) * | 2014-04-10 | 2020-06-25 | Lankenau Institute For Medical Research | Methods and compositions for the treatment of ocular diseases and disorders |
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| US10047096B2 (en) | 2014-11-25 | 2018-08-14 | Bayer Pharma Aktiengesellschaft | Substituted pyridobenzodiazepinone-derivatives and use thereof |
| AU2016249537B2 (en) | 2015-04-16 | 2020-01-30 | Merck Patent Gmbh | 3-(1H-benzimidazol-2-yl)-1H-pyridin-2-one derivatives |
| US10053465B2 (en) | 2015-08-26 | 2018-08-21 | Incyte Corporation | Pyrrolopyrimidine derivatives as TAM inhibitors |
| RS65129B1 (sr) * | 2016-03-28 | 2024-02-29 | Incyte Corp | Jedinjenja pirolotriazina kao inhibitori tam |
| CN109111447A (zh) * | 2017-06-23 | 2019-01-01 | 中国科学院上海药物研究所 | 7-位取代吡咯并三嗪类化合物或其药学上可用的盐，及其制备方法和用途 |
| EP3988552A1 (en) | 2017-09-27 | 2022-04-27 | Incyte Corporation | Salts of pyrrolotriazine derivatives useful as tam inhibitors |
| AU2019293618A1 (en) | 2018-06-29 | 2021-02-18 | Incyte Corporation | Formulations of an AXL/MER inhibitor |
| WO2024097980A1 (en) | 2022-11-04 | 2024-05-10 | Bristol-Myers Squibb Company | Ret-ldd protein inhibitors |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000071129A1 (en) * | 1999-05-21 | 2000-11-30 | Bristol-Myers Squibb Company | Pyrrolotriazine inhibitors of kinases |
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| WO2007061882A2 (en) * | 2005-11-18 | 2007-05-31 | Bristol-Myers Squibb Company | Pyrrolotriazine kinase inhibitors |
| CN101365701A (zh) * | 2005-11-18 | 2009-02-11 | 布里斯托尔-迈尔斯.斯奎布公司 | 吡咯并三嗪激酶抑制剂 |
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