ES2567134T3

ES2567134T3 - Transaminación enzimática de análogos de ciclopamina

Info

Publication number: ES2567134T3
Application number: ES10807181.2T
Authority: ES
Inventors: Brian Austad; Adilah Bahadoor; Jitendra D. Belani; Somarajannair Janardanannair; Charles W. Johannes; Gregg F. Keaney; Priscilla L. WHITE; Sheldon L. Wallerstein
Original assignee: Infinity Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Infinity Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2009-08-05
Filing date: 2010-08-05
Publication date: 2016-04-20
Anticipated expiration: 2030-08-05
Also published as: EP2462115A4; JP2017131233A; US9879293B2; AU2010279325A1; CA2769795C; WO2011017551A1; JP2013501073A; CA2769795A1; US8703448B2; JP6141015B2; US20140371456A1; US20160177354A1; EP2462115B1; EP2462115A1; US20120083607A1; AU2010279325B2; CN102574791A

Abstract

Un proceso para preparar un compuesto de la fórmula (II): **Fórmula** o una sal del mismo; de un compuesto de la fórmula (I): **Fórmula** o una sal del mismo; en donde: R1 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, haloalquilo, -OR16, -C(O)R16, -CO2R16, -SO2R16, - C(O)N(R17)(R17), -[C(R16)2]q-R16, -[(W)-N(R17)C(O)]qR16, -[(W)-C(O)]qR16, -[(W)- C(O)O]qR16, -[(W)-OC(O)]qR16, -[(W)-SO2]qR16, -[(W)-N(R17)SO2]qR16, -[(W)-C(O)N(R17)]qR17, -[(W)-O]qR16, -[(W)- N(R17)]qR16, o -[(W)-S]qR16; en donde W es un dirradical y q es 1, 2, 3, 4, 5, o 6; cada R2 y R3 es, independientemente, H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, haloalquilo, halo, -OR16, -OR16,-N(R17)2, o -SR16, o R2 y R3 tomados juntos forman un enlace doble o forman un grupo **Fórmula** en donde Z es NR17, O, o C(R18)2; R4 es independientemente H, halo, -OR16, -N(R17)2, o -SR16; cada R5 y R6, es, independientemente, H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, halo, -OR16, -N(R17)2, o -SR16; o R5 y R6 tomados juntos con el carbono al que se unen forman C>=O, C>=S, C>=N-OR17, C>=N-R17, C>=N-N(R17)2, o forman un anillo de 3-8 miembros opcionalmente sustituido; cada R7, R8, R9, R10, R11, R12 y R13 es, independientemente, H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, halo, -OR16, -N(R17)2, o -SR16; o R10 y R11 tomados juntos, o R11 y R12 tomados juntos, forman un enlace doble o forman un grupo **Fórmula** en donde Z es NR17, O, o C(R18))2; cada R14 y R15 es, independientemente, H, halo, -OR16, -N(R17)2, o -SR16; o R14 y R15 tomados juntos con el carbono al que se unen forman C>=O o C>=S; X es un enlace o el grupo -C(R19)2-; en donde cada R19 es, independientemente, H, alquilo, aralquilo, halo, -CN, -OR16, o -N(R17)2; R16 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo o - [C(R20)2]p-R21 en donde p es 0-6; o cualesquiera dos ocurrencias de R16 en el mismo sustituyente se toman juntas para formar un anillo opcionalmente sustituido de 4-8 miembros; R17 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, -C(>=O)R20, - C(>=O)OR20, -SO2R20, -C(>=O)N(R20)2, o -[C(R20))2]p-R21 en donde p es 0-6; o cualesquiera dos ocurrencias de R17 en el mismo sustituyente se toman juntas para formar un anillo opcionalmente sustituido de 4-8 miembros; R18 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, halo, -CN, -OR20, -OSi(R20)3,-C(>=O)R20, -C(>=O)OR20, -SO2R20 o -C(>=O)N(R20)2; R20 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, o heteroaralquilo; o cualesquiera dos ocurrencias de R20 en el mismo sustituyente se toman juntas para formar un anillo opcionalmente sustituido de 4-8 miembros; R21 es -OR22, -N(R22)C(>=O)R22, -N(R22)C(>=O)OR22, -N(R22)SO2(R22),-C(>=O)R22N(R22)2, -OC(>=O)R22N(R22)(R22), - SO2N(R22)(R22), -N(R22)(R22), -C(>=O)OR22, -C(>=O)N(OH)(R22), -OS(O)2OR22, -S(O)2OR22, -OP(>=O)(OR22)(OR22), - N(R22)P(O)(OR22)(OR22), o -P(>=O)(OR22)(OR22); y R22 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo; o cualesquiera dos ocurrencias de R22 en el mismo sustituyente se toman juntas para formar un anillo opcionalmente sustituido de 4-8 miembros; dicho proceso comprende poner en contacto un compuesto de la fórmula (I) o una sal del mismo, una molécula donante amino, y una enzima transaminasa de amina omega en una solución para proporcionar un compuesto de la fórmula (II) o una sal del mismo, en donde el alquilo es un radical de hidrocarburo de cadena recta o ramificada, saturado que contiene entre uno y treinta átomos de carbono, el alquenilo es un radical de hidrocarburo de cadena recta o ramificada que tiene por lo menos un enlace doble carbono-carbono mediante el retiro de un único átomo de hidrógeno, y que contiene entre dos y treinta átomos de carbono, el alquinilo es un radical de hidrocarburo de cadena recta o ramificada que tiene por lo menos un enlace triple carbono-carbono mediante el retiro de un único átomo de hidrógeno, y que contiene entre dos y treinta átomos de carbono, el cicloalquilo es un sistema de anillo de hidrocarburo monocíclico o bicíclico saturado que tiene de 3-15 miembros del anillo de carbono, el arilo es un sistema de anillo de hidrocarburo monocíclico o bicíclico aromático que tiene un total de 6-10 miembros del anillo de carbono, el aralquilo es un grupo alquilo sustituido por un grupo arilo, en donde el punto de unión está en el grupo alquilo, es un sistema de anillo de hidrocarburo monocíclico o bicíclico aromático que tiene 5-10 átomos de anillo en donde los átomos de anillo comprenden, además de los átomos de carbono, de uno a cinco heteroátomos, el heteroaralquilo es un grupo alquilo sustituido por un grupo heteroarilo, en donde el punto de unión está en el grupo alquilo y el heterocicloalquilo o heterociclilo es un hidrocarburo monocíclico de 5-7 miembros no aromático estable o hidrocarburo bicíclico de 7-10 miembros no aromático estable que es ya sea saturado o parcialmente insaturado, y que tiene, además de los átomos de carbono, uno o más heteroátomos, que se sustituyen opcionalmente con uno o más sustituyentes.

Description

5

10

15

20

25

30

35

40

DESCRIPCION

Transaminacion enzimatica de analogos de ciclopamina

Esta solicitud reivindica el beneficio de la Solicitud Provisional Estadounidense No. 61/231,439, presentada en agosto 5, 2009.

La ciclopamina, un producto natural aislado de Veratrum califomicum, ha surgido como una herramienta farmacologica significativa para validar la ruta Hedgehog (Hh) en cancer. La ciclopamina actua directamente sobre SMO e inhibe el crecimiento de tumor en diversos modelos de cancer pancreatico, de meduloblastoma, de prostata, pulmonar microcftico, y del tubo digestivo en murinos. Sin embargo, el desarrollo clmico de ciclopamina como un agente terapeutico en cancer se ve obstaculizado por su pobre solubilidad, sensibilidad al acido, y potencia debil con relacion a otros antagonistas Hh indicados de molecula pequena.

Ha habido una atencion considerable en el desarrollo de analogos novedosos de ciclopamina con potencia mejorada, y propiedades farmacocineticas y farmaceuticas mejoradas con relacion a ciclopamina (vease, por ejemplo, Patentes Estadounidenses 7,230,004 y 7,407,967, incorporadas aqrn mediante referencia). A partir de ese esfuerzo, un analogo de sulfonamida de anillo D de siete miembros de ciclopamina, IPI-926, surgio como un candidato de desarrollo clmico (vease Tremblay et al., “Discovery of a Potent and Orally Active Hedgehog Pathway Antagonist (IPI-926)” J. Med. Chem. (2009) 52:4400-4418, incorporado aqrn mediante referencia). Se requieren grandes cantidades de IPI-926 para desarrollo clmico. Mas aun, se pueden sintetizar otros analogos amino promisorios siguiendo rutas similares a aquellas utilizadas para generar IPI-926.

imagen1

Ciclopamina IPI-926

Se proporcionan procesos novedosos para la smtesis de analogos amino, tales como IPI-926, de materiales de partida cetona.

Por ejemplo, en un aspecto, se proporciona un proceso para preparar un compuesto de la formula (II):

Antecedentes

Resumen

R0

h2n

imagen2

R12

o una sal del mismo;

de un compuesto de la formula (I):

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

imagen3

o una sal del mismo;

en donde R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 R10, R11, R12, R13, R14, R15, y X son como se define aqrn,

el proceso comprende poner en contacto un compuesto de la formula (I) o una sal del mismo, una molecula donante amino, y una enzima transaminasa de amina omega en una solucion para proporcionar un compuesto de la formula (II) o una sal del mismo.

En determinadas realizaciones, el proceso comprende adicionalmente agregar un cofactor a la solucion.

En determinadas realizaciones, el cofactor es fosfato piridoxal (PLP).

En determinadas realizaciones, el cofactor es una coenzima. En determinadas realizaciones, la coenzima se selecciona de deshidrogenasa L-alanina (LADH), deshidrogenasa lactato (LDH), fosfato de dinucleotido de adenina nicotinamida (NADPH), dinucleotido de adenina nicotinamida (NAD), deshidrogenasa formiato (FDH), y deshidrogenasa glucosa (GDH).

En determinadas realizaciones, el proceso comprende adicionalmente agregar una mezcla de reductasa de piruvato a la solucion. Como se utiliza aqrn, el termino “mezcla de reductasa de piruvato” se refiere a una combinacion que incluye una enzima que es capaz de mediar la reduccion de piruvato y uno o mas (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, o 6, por ejemplo, 2, 3 o 4, por ejemplo, 2 o 3) agentes adicionales (por ejemplo, una enzima, una coenzima o cofactor, un agente de reduccion asf como tambien combinaciones de los mismos).

En realizaciones, la enzima que es capaz de mediar la reduccion de piruvato es LDH.

En realizaciones, la combinacion incluye un agente (por ejemplo, una enzima) que es capaz de regenerar una coenzima o cofactor que media la reduccion de piruvato. En determinadas realizaciones, la combinacion puede incluir una enzima que es capaz de regenerar NADPH. Dichas enzimas pueden incluir, sin limitacion, GDH y FDH.

En realizaciones, la combinacion incluye un agente de reduccion. Los agentes de reduccion pueden incluir, sin limitacion, glucosa o formiato.

En realizaciones, la combinacion incluye una coenzima o cofactor. Las coenzimas o cofactores pueden incluir, sin limitacion, NAD.

En realizaciones, la combinacion incluye un agente (por ejemplo, una enzima) que es capaz de regenerar una coenzima o cofactor que media la reduccion de piruvato como se define en cualquier parte aqrn; y uno o mas agentes adicionales (por ejemplo, 2 o 3 agentes adicionales). Por ejemplo, la combinacion puede incluir un agente (por ejemplo, una enzima) que es capaz de regenerar una coenzima o cofactor que media la reduccion de piruvato como se define en cualquier parte aqrn; y uno o ambos de los siguientes: un agente de reduccion y una coenzima o cofactor.

En realizaciones, una mezcla de reductasa de piruvato incluye LDH, un agente (por ejemplo, una enzima) que es capaz de regenerar una coenzima o cofactor que media la reduccion de piruvato como se define en cualquier parte aqrn; y uno o mas agentes adicionales (por ejemplo, 2 o 3 agentes adicionales); por ejemplo, uno o ambos de los siguientes: un agente de reduccion y una coenzima o cofactor. Por ejemplo, una mezcla de reductasa de piruvato puede incluir LDH, GDH, y glucosa y puede incluir adicionalmente NAD, por ejemplo, PRM-102 (Codexis), que incluye LDH, GDH, glucosa, y NAD+. Como otro ejemplo, una mezcla de reductasa de piruvato puede incluir LDH, FDH, y formiato y puede incluir adicionalmente NAD.

En determinadas realizaciones, cuando se genera piruvato durante el curso de los procesos descritos aqrn, el piruvato se puede retirar, convertir qmmicamente a otro producto y opcionalmente retirar adicionalmente; o reciclar (o combinaciones

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

de los mismos). Los metodos que describen dichas operaciones se describen en, por ejemplo, Koszelewski, D., et al., Tends in Biotechnology 2010, 28, 324-332, que se incorpora aqu mediante referencia en su totalidad.

En determinadas realizaciones, la enzima genera preferiblemente un compuesto de la formula (II), o una sal del mismo, en donde el grupo amino nuevamente formado tiene estereoqumica (R) o (S).

La enzima es una transaminasa de amina omega.

En determinadas realizaciones, la transaminasa de amina omega se selecciona del grupo que consiste de ATA-101, ATA- 102, ATA-103, ATA-104, ATA-105, ATA-106, ATA-107, ATA-108, ATA-109, ATA-110, ATA-113, ATA-114, ATA-115, ATA- 116, ATA-117, ATA-124, una transaminasa de amina omega de Chromobacterium violaceum, una transaminasa de amina omega de Alcaligenes denitrificans, una transaminasa de amina omega de Arthrobactercitreus, una transaminasa de amina omega de Klebsiella pneumoniae, una transaminasa de amina omega de Bacillus thuringiensis, una transaminasa de amina omega de Bacillus cereus, y una transaminasa de amina omega de Vibrio fluvialis.

En determinadas realizaciones, la molecula donante amino es una amina o una sal de la misma. En determinadas realizaciones, la amina se selecciona de piridoxamina, metilbencilamina, 2-aminobutano, propil amina, isopropil amina, 1,1,1-trifluoropropan- 2-amina, 1,1,1,3,3,3-hexafluoropropan-2-amina, bencil amina, 2-amino-1-butanol, 1-amino-1- feniletano, 1-amino-1-(2-metoxi-5-fluorofenil)etano, 1-amino-1-fenilpropano, 1-amino-1-(4hidroxifenil)propano, 1-amino-

1- (4-bromofenil)propano, 1-amino-1-(4-nitrofenil)propano, 1-fenil-2-aminopropano, 1 -(3-trifluorometilfenil)- 2-

aminopropano, 2-aminopropanol, 1-amino-1-fenilbutano, 1-fenil-2-aminobutano, 1-(2,5-dimetoxi-4-metilfenil)- 2- aminobutano, 1-fenil-3-aminobutano, 1-(4-hidroxifenil)-3-aminobutano, 1-amino-1-(2-naftil) etano, cis-2- metilciclopentanamina, trans-2-metilciclopentanamina, cis-3-metilciclopentanamina, trans-3- metilciclopentanamina, cis-

2- etilciclopentanamina, trans-2-etilciclopentanamina, cis-3-etilciclopentanamina, trans-3-etilciclopentanamina, cis-2- metilciclohexanamina, trans-2-metilciclohexanamina, cis-3-metilciclohexanamina, trans-3-metilciclohexanamina, cis-2- etilciclohexanamina, trans-2-etilciclohexanamina, cis-3-etilciclohexanamina, trans-3-etilciclohexanamina, 1- aminotetralina, 2-aminotetralina, 2-amino-5-metoxitetralina, 1-aminoindano, 2-aminoindano, 2-amino-1-propanol, cis-1- amino-2-indanol, trans-1-amino-2-indanol, 1-amino-6-hidroxiindanamina, taurina, o una sal del mismo.

En determinadas realizaciones, la molecula donante amino es una molecula donante de amino quiral. En determinadas realizaciones, la molecula donante de amino quiral es una amina quiral o sal del mismo, por ejemplo, una amina que contiene por lo menos un centro asimetrico. Las aminas quirales de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, (R)- metilbencilamina, (S)-metilbencilamina, (S)-2- aminobutano, (R)-2-aminobutano, (S)-1-aminoindano, (R)-1-aminoindano, (R)-1,1,1-trifluoropropan-2-amina, (S)-1,1,1- trifluoropropan-2-amina, (R)-2-amino-1-propanol, (S)-2-amino-1-propanol, (1R, 2S)-cis-1-amino-2-indanol, (1R, 2R)-trans-1-amino-2-indanol, 1-(R)-amino-6-hidroxiindanamina, 1-(S)-amino-6- hidroxiindanamina, (R)-2-amino-1- butanol, (S)-2-amino-1-butanol, (R)-1-amino-1-feniletano, (S)-1-amino-1-feniletano,

(R) -1-amino-1-(2-metoxi- 5-fluorofenil)etano, (S)-1-amino-1-(2-metoxi-5-fluorofenil)etano, (R)-1-amino-1-fenilpropano,

(S) -1-amino- 1-fenilpropano, (R)-1-amino-1-(4-hidroxifenil)-propano, (S)-1-amino-1-(4-hidroxifenil)-propano, (R)-1-amino-

1-(4-bromofenil)propano, (S)-1-amino-1-(4-bromofenil)propano, (R)-1-amino-1-(4-nitrofenil)propano, (S)-1-amino- 1-(4- nitrofenil)propano, (R)-1-fenil-2-aminopropano, (S)-1-fenil-2-aminopropano, (R)-1-(3-trifluorometilfenil)- 2-aminopropano, (S)-1-(3-trifluorometilfenil)-2-aminopropano, (R)-1-amino-1-fenilbutano, (S)-1-amino-1- fenilbutano, (R)-1-fenil-2- aminobutano, (S)-1-fenil-2-aminobutano, (R)-1-(2,5-di-metoxi-4-metilfenil)-2- aminobutano, (S)-1-(2,5-di-metoxi-4- metilfenil)-2-aminobutano, (R)-1-fenil-3-aminobutano, (S)-1-fenil-3- aminobutano, (R)-1-(4-hidroxifenil)-3-aminobutano, (S)-1-(4-hidroxifenil)-3-aminobutano, (R)-1-amino-1-(2- naftil)etano, (S)-1-amino-1-(2-naftil)etano, (R)-1-aminotetralina, (S)-1-aminotetralina, (R)-2-aminotetralina, (S)-2- aminotetralina, (R)-2-amino-5-metoxitetralina, (S)-2-amino-5- metoxitetralina, (1R,2S)-cis-2-metilciclopentanamina, (1S,2R)-cis-2-metilciclopentanamina, (1R,2R)-trans-2-

metilciclopentanamina, (1S,2S)-trans-2-metilciclopentanamina, (1R,3S)-cis-3-metilciclopentanamina, (1S,3R)-cis-3-

metilciclopentanamina, (1R,3R)-trans-3-metilciclopentanamina, (1S,3S)-trans-3-metilciclopentanamina, (1R,2S)-cis-2-

(1S,2R)-cis-2-etilciclopentanamina, (1R,2R)-trans-2-etilciclopentanamina, (1S,2S)-trans-2- (1R,3S)-cis-3- etilciclopentanamina, (1S,3R)-cis-3-etilciclopentanamina, (1R,3R)-trans-3-

(1S,3S)-trans- 3-etilciclopentanamina, (1R,2S)-cis-2-metilciclohexanamina, (1S,2R)-cis-2-

(1R,2R)-trans-2-metilciclohexanamina, (1S,2S)-trans-2-metilciclohexanamina, (1R,3S)-cis-3- (1S,3R)-cis-3-metilciclohexanamina, (1R,3R)-trans-3-metilciclohexanamina, (1S,3S)-trans-3- (1R,2S)-cis-2-etilciclohexanamina, (1S,2R)-cis-2-etilciclohexanamina, (1R,2R)-trans-2-

(1S,2S)-trans-2-etilciclohexanamina, (1R,3S)-cis-3-etilciclohexanamina, (1S,3R)-cis-3-

etilciclopentanamina,

metilciclohexanamina,

etilciclohexanamina,

etilciclohexanamina, (1R,3R)-trans-3-etilciclohexanamina, (1S,3S)-trans-3-etilciclohexanamina, o una sal de los mismos.

En determinadas realizaciones, la molecula donante amino es un aminoacido o un polipeptido del mismo y/o sal del mismo. En determinadas realizaciones, el aminoacido se selecciona de glicina, alanina, acido aspartico, fenilalanina, acido 2- aminopentanodioico, 3-aminobutirato, Y-aminobutirato, p-alanina, asparagina, cistema, acido glutamico, glutamina, prolina, selenocistema, serina, tirosina, arginina, histidina, ornitina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, treonina, triptofano, valina, y polipeptidos de los mismos y/o sales de los mismos.

En determinadas realizaciones, la molecula donante de amino quiral es un aminoacido quiral o un polipeptido del mismo y/o una sal del mismo, por ejemplo, que contiene por lo menos un centro asimetrico. Los aminoacidos quirales de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, (L)-alanina, (D)-alanina, acido (L)- aspartico, acido (D)- aspartico, (L)-fenilalanina, (D)-

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

fenilalanina, acido (2S)-2-aminopentanodioico, (L)-asparagina, (D)-asparagina, (L)-cistema, (D)-cistema, (L)-glutamina, (D)-glutamina, acido (L)-glutamico, acido (D)-glutamico, (L)-prolina, (D)-prolina, (L)-selenocistema, (D)-selenocistema, (L)- serina, (D)-serina, (L)-tirosina, (D)-tirosina, (L)-arginina, (D)-arginina, (L)-histidina, (D)-histidina, (L)-isoleucina, (D)- isoleucina, (L)-leucina, (D)-leucina, (L)-lisina, (D)-lisina, (L)-metionina, (D)-metionina, (L)-treonina, (D)-treonina, (L)- triptofano, (D)-triptofano, (L)- valina, (D)-valina, (L)-ornitina, (D)-ornitina, (3R)-aminobutirato, (3S)-aminobutirato y polipeptidos de los mismos y/o sales de los mismos.

En determinadas realizaciones, la solucion es una solucion regulada. En determinadas realizaciones, la solucion regulada es una solucion regulada de fosfato de sodio.

En determinadas realizaciones, el pH de la solucion esta entre aproximadamente 5 y aproximadamente 9, entre aproximadamente 5 y aproximadamente 8, entre aproximadamente 6 y aproximadamente 8, entre aproximadamente 7 y aproximadamente 8, entre aproximadamente 7 y aproximadamente 7.5, o entre aproximadamente 7.5 y aproximadamente 8.

En determinadas realizaciones, el pH de la solucion es menor de aproximadamente 9, menor de aproximadamente 8.5, o menor de aproximadamente 8. En determinadas realizaciones, el pH de la solucion es aproximadamente 7. En determinadas realizaciones, el pH de la solucion es aproximadamente 7.5. En determinadas realizaciones, el pH de la solucion es aproximadamente 8.

En determinadas realizaciones, el compuesto de la formula (I) o una sal del mismo y un compuesto de la formula (II) o una sal del mismo se seleccionan de cualquier grupo de los compuestos proporcionados en las Tablas 1, 2, 3,4 o 5.

En determinadas realizaciones, el proceso comprende adicionalmente poner en contacto un compuesto de la formula (II) o una sal del mismo con un agente de sulfonilacion para proporcionar un compuesto de la formula (III):

imagen4

o una sal del mismo, en donde R23 es alquilo o arilo.

En determinadas realizaciones, el agente de sulfonilacion se selecciona de cloruro de bencenosulfonilo, anlddrido bencenosulfonilo, cloruro p-toluenosulfonilo, anlddrido p-toluenosulfonilo, cloruro metanosulfonilo, y anlddrido metanosulfonilo. En determinadas realizaciones, el agente de sulfonilacion es cloruro metanosulfonilo o anlddrido metanosulfonilo, y R23 es -CH3.

Los detalles de realizaciones adicionales o alternativas se establecen en la Descripcion Detallada y los Ejemplos que acompanan como se describe mas adelante. Otras caractensticas, objetos y ventajas de la invencion seran evidentes a partir de esta descripcion y de las reivindicaciones.

Definiciones

Las definiciones de grupos funcionales espedficos y terminos qrnmicos se describen en mayor detalle mas adelante. Los elementos qrnmicos se identifican de acuerdo con la Tabla Periodica de los Elementos, version CAS, Handbook of Chemistry and Physics, 75th Ed., cubierta interna, y los grupos funcionales espedficos se definen de manera general como se describe alli. Adicionalmente, los principios generales de qmmica organica, asf como tambien las unidades estructurales funcionales espedficas y reactividad, se describen en Organic Chemistry, Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito, 1999; Smith and March March's Advanced Organic Chemistry, 5ta Edicion, John Wiley & Sons, Inc., New York, 2001; Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers, Inc., New York, 1989; y Carruthers, Some Modern Methods of Organic Syntheses, 3ra Edicion, Cambridge University Press, Cambridge, 1987.

Determinados compuestos de la presente invencion comprenden uno o mas centros asimetricos, y de esta forma pueden existir en diversas formas isomericas, por ejemplo, enantiomeros y/o diastereomeros. Los compuestos proporcionados

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

aqrn pueden estar en la forma de un enantiomero individual, diastereomero o isomero geometrico, o pueden estar en la forma de una mezcla de estereoisomeros, que incluyen mezclas racemicas y mezclas enriquecidas en uno o mas estereoisomeros. En determinadas realizaciones, los compuestos de la invencion son compuestos enantiopuros. En determinadas otras realizaciones, se proporcionan mezclas de estereoisomeros.

Adicionalmente, determinados compuestos, como se describe aqrn pueden tener uno o mas enlaces dobles que pueden existir como el isomero cis o trans, o E o Z, a menos que se indique otra cosa. La invencion abarca adicionalmente los compuestos como isomeros individuales sustancialmente libres de otros isomeros, y alternativamente, como mezclas de diversos isomeros, por ejemplo, mezclas racemicas de isomeros E/Z o mezclas enriquecidas en un isomero E/Z.

Los terminos “enantiomericamente enriquecidos”, “enantiomericamente puros” y “no racemicos”, como se utilizan intercambiablemente aqrn, se refieren a composiciones en las que el porcentaje en peso de un enantiomero es mayor que la cantidad de un enantiomero en una mezcla de control de la composicion racemica (por ejemplo, mayor de 1:1 en peso). Por ejemplo, una preparacion enantiomericamente enriquecida del enantiomero (S), significa una preparacion del compuesto que tiene mas de 50% en peso del enantiomero (S) con relacion al enantiomero (R), mas preferiblemente por lo menos 75% en peso, e incluso mas preferiblemente por lo menos 80% en peso. En algunas realizaciones, el enriquecimiento puede ser mucho mayor de 80% en peso, proporcionando una preparacion “sustancialmente enantiomericamente enriquecida”, “sustancialmente enantiomericamente pura” o “sustancialmente no racemica”, que se refiere a preparaciones de composiciones que tienen por lo menos 85% en peso de un enantiomero con relacion a otro enantiomero, mas preferiblemente por lo menos 90% en peso, e incluso mas preferiblemente por lo menos 95% en peso. Los enantiomeros se pueden aislar de mezclas mediante los metodos conocidos por aquellos expertos en la tecnica, que incluyen cromatograffa lfquida de alta presion quiral (HPLC) y la formacion y cristalizacion de sales quirales; o se pueden preparar enantiomeros preferidos mediante smtesis asimetrica. Vease, por ejemplo, Jacques, et al., Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley Interscience, New York, 1981); Wilen, S.H., et al., Tetrahedron 33:2725 (1977); Eliel, E.L. Stereochemical of Carbon Compounds (McGraw-Hill, NY, 1962); y Wilen, S.H. Tables de Resolving Agents and Optical Resolutions p. 268 (E.L. Eliel, Ed., Univ. de Notre Dame Press, Notre Dame, IN 1972).

Los atomos de carbono, a menos que se especifique otra cosa, se pueden sustituir opcionalmente con uno o mas sustituyentes. El numero de sustituyentes se limita normalmente por el numero de valencias disponibles en el atomo de carbono, y se puede sustituir mediante reemplazo de uno o mas de los atomos de hidrogeno que estanan disponibles en el grupo no sustituido. Los sustituyentes adecuados se conocen en la tecnica e incluyen, pero no se limitan a, alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, alcoxi, alquiltio, arilo, ariloxi, ariltio, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, cicloalquilo, heterociclilo, halo, azido, hidroxilo, tio, amino, nitro, nitrilo, imido, amido, acido carboxflico, aldetudo, carbonilo, ester, sililo, haloalquilo, haloalcoxi (por ejemplo, perfluoroalcoxi tal como -OCF3), =O, =S, y similares.

Cuando se enumera un rango de valores, pretende abarcar cada valor y subrango dentro del rango. Por ejemplo, un grupo alquilo que contiene 1-6 atomos de carbono (alquilo C1-6) pretende abarcar, alquilo C1, C2, C3, C4, C5, C6, C1-6, C2-6, C3-6, C4-6, C5-6, C1-5, C2-5, C3-5, C4-5, C14, C24, C34, C13, C23, y C12.

El termino “alquilo”, como se utiliza aqrn, se refiere a un radical de hidrocarburo de cadena recta o ramificada, saturada que contiene entre uno y treinta atomos de carbono. En determinadas realizaciones, el grupo alquilo contiene 1-20 atomos de carbono. Los grupos alquilo, a menos que se especifique otra cosa, se pueden sustituir opcionalmente con uno o mas sustituyentes. En determinadas realizaciones, el grupo alquilo contiene 1-10 atomos de carbono. En determinadas realizaciones, el grupo alquilo contiene 1-6 atomos de carbono. En determinadas realizaciones, el grupo alquilo contiene 1-5 atomos de carbono. En determinadas realizaciones, el grupo alquilo contiene 1-4 atomos de carbono. En determinadas realizaciones, el grupo alquilo contiene 1-3 atomos de carbono. En determinadas realizaciones, el grupo alquilo contiene

1- 2 atomos de carbono. En determinadas realizaciones, el grupo alquilo contiene 1 atomo de carbono. Ejemplos de radicales alquilo incluyen, pero no se limitan a, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, iso-butilo, sec-butilo, sec-pentilo, iso-pentilo, tertbutilo, n-pentilo, neopentilo, n-hexilo, sec-hexilo, n-heptilo, n-octilo, n-decilo, n-undecilo, dodecilo, y similares.

El termino “alquenilo”, como se utiliza aqrn, denota un radical de hidrocarburo de cadena recta o ramificada que tiene por lo menos un enlace doble carbono-carbono mediante el retiro de un unico atomo de hidrogeno, y que contiene entre dos y treinta atomos de carbono. Los grupos alquenilo, a menos que se especifique de otra forma, se puede sustituir opcionalmente con uno o mas sustituyentes. En determinadas realizaciones, el grupo alquenilo contiene 2-20 atomos de carbono. En determinadas realizaciones, el grupo alquenilo contiene 2-10 atomos de carbono. En determinadas realizaciones, el grupo alquenilo contiene 2-6 atomos de carbono. En determinadas realizaciones, el grupo alquenilo contiene 2-5 atomos de carbono. En determinadas realizaciones, el grupo alquenilo contiene 2-4 atomos de carbono. En determinada realizacion, el grupo alquenilo contiene 2-3 atomos de carbono. En determinadas realizaciones, el grupo alquenilo contiene 2 atomos de carbono. Los grupos alquenilo incluyen, por ejemplo, etenilo, propenilo, butenilo, 1-metil-

2- buten-1-ilo, y similares.

El termino “alquinilo”, como se utiliza aqrn, denota un radical de hidrocarburo de cadena recta o ramificada que tiene por lo menos un enlace triple carbono-carbono mediante el retiro de un unico atomo de hidrogeno, y que contiene entre dos y treinta atomos de carbono. Los grupos alquinilo, a menos que se especifique otra cosa, se pueden sustituir opcionalmente por uno o mas sustituyentes. En determinadas realizaciones, el grupo alquinilo contiene 2-20 atomos de

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

carbono. En determinadas realizaciones, el grupo alquinilo contiene 2-10 atomos de carbono. En determinadas realizaciones, el grupo alquinilo contiene 2-6 atomos de carbono. En determinadas realizaciones, el grupo alquinilo contiene 2-5 atomos de carbono. En determinadas realizaciones, el grupo alquinilo contiene 2-4 atomos de carbono. En determinadas realizaciones, el grupo alquinilo contiene 2-3 atomos de carbono. En determinadas realizaciones, el grupo alquinilo contiene 2 atomos de carbono. Los grupos alquinilo representativos incluyen, pero no se limitan a, etinilo, 2- propinilo (propargilo), 1 -propinilo, y similares.

Los terminos “cicloalquilo”, utilizados solos o como parte de una unidad estructural mas grande, se refieren a un sistema de anillo de hidrocarburo monodclico o bidclico saturado que tiene de 3-15 miembros del anillo de carbono. Los grupos cicloalquilo, a menos que se especifique otra cosa, se pueden sustituir opcionalmente por uno o mas sustituyentes. En determinadas realizaciones, los grupos cicloalquilo contienen 3-10 miembros del anillo de carbono. En determinadas realizaciones, los grupos cicloalquilo contienen 3-9 miembros del anillo de carbono. En determinadas realizaciones, los grupos cicloalquilo contienen 3-8 miembros del anillo de carbono. En determinadas realizaciones, los grupos cicloalquilo contienen 3-7 miembros del anillo de carbono. En determinadas realizaciones, los grupos cicloalquilo contienen 3-6 miembros del anillo de carbono. En determinadas realizaciones, los grupos cicloalquilo contienen 3-5 miembros del anillo de carbono. Los grupos cicloalquilo incluyen, sin limitacion, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, y ciclooctilo. El termino “cicloalquilo” tambien incluye sistemas de anillo de hidrocarburo saturados que se fusionan a uno o mas anillos arilo o heteroarilo, tales como decahidronaftilo o tetrahidronaftilo, en donde el punto de union esta en el anillo de hidrocarburo saturado.

El termino “arilo” utilizado solo o como parte de una unidad estructural mas grande (como el “aralquilo”), se refiere a un sistema de anillo de hidrocarburo monodclico y bidclico aromatico que tiene un total de 6-10 miembros del anillo de carbono. Los grupos arilo, a menos que se especifique otra cosa, pueden sustituir opcionalmente uno o mas sustituyentes. En determinadas realizaciones de la presente invencion, “arilo” se refiere a un sistema de anillo aromatico que incluye, pero no se limita a, fenilo, bifenilo, naftilo, antracilo y similares, que puede llevar uno o mas sustituyentes. Tambien se incluye dentro del alcance del termino “arilo”, como se utiliza aqrn, es un grupo en el que un anillo arilo se fusiona a uno o mas anillos no aromaticos, tales como indanilo, eftalimidilo o tetrahidronaftalilo, y similares, en donde el punto de union esta en el anillo arilo.

El termino “aralquilo” se refiere a un grupo alquilo, como se define aqrn, sustituido por un grupo arilo, como se define aqrn, en donde el punto de union esta en el grupo alquilo.

El termino “heteroatomo” se refiere un boro, fosforo, selenio, nitrogeno, oxfgeno, o azufre, e incluye cualquier forma oxidada de nitrogeno o azufre, y cualquier forma cuaternizada de nitrogeno abasico.

Los terminos “heteroarilo” utilizado solo o como parte de una unidad estructural mayor, por ejemplo, “heteroaralquilo”, se refieren a un sistema de anillo de hidrocarburo monodclico o bidclico aromatico que tiene 5-10 atomos de anillo en donde los atomos de anillo comprenden, ademas de los atomos de carbono, de uno a cinco heteroatomos. Los grupos heteroarilo, a menos que se especifique otra cosa, se pueden sustituir opcionalmente uno o mas sustituyentes. Cuando se utiliza en referencia a un atomo de anillo de un grupo heteroarilo, el termino “nitrogeno” incluye un nitrogeno sustituido. Los grupos heteroarilo incluyen, sin limitacion, tienilo, furanilo, pirrolilo, imidazolilo, pirazolilo, triazolilo, tetrazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, oxadiazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, tiadiazolilo, piridilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, indolizinilo, purinilo, naftiridinilo, y epteridinilo. Los terminos “heteroarilo” y “heteroar-”, como se utilizan aqrn, tambien incluye grupos en los que un anillo heteroarilo se fusiona a uno o mas anillos arilo, cicloalquilo o heterocicloalquilo, en donde el punto de union esta en el anillo heteroarilo. Ejemplos no limitantes incluyen indolilo, isoindolilo, benzotienilo, benzofuranilo, dibenzofuranilo, indazolilo, benzimidazolilo, benztiazolilo, quinolilo, isoquinolilo, cinolinilo, eftalazinilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, 4H-quinolizinilo, carbazolilo, acridinilo, fenazinilo, fenotiazinilo, fenoxazinilo, tetrahidroquinolinilo, y tetrahidroisoquinolinilo.

El termino “heteroaralquilo” se refiere a un grupo alquilo, como se define aqrn, sustituido por un grupo heteroarilo, como se define aqrn, en donde el punto de union esta en el grupo alquilo.

Como se utiliza aqrn, los terminos “heterocicloalquilo” o “heterociclilo” se refieren a un hidrocarburo monodclico de 5-7 miembros no aromatico estable o hidrocarburo bidclico de 7-10 miembros no aromatico estable que es ya sea saturado o parcialmente insaturado, y que tiene, ademas de los atomos de carbono, uno o mas heteroatomos. Los grupos heterocicloalquilo o heterociclilo, a menos que se especifique otra cosa, se puede sustituir opcionalmente uno o mas sustituyentes. Cuando se utiliza en referencia a un atomo de anillo de un grupo heterocicloalquilo, el termino “nitrogeno” incluye un nitrogeno sustituido. El punto de union de un grupo heterocicloalquilo puede estar en cualquiera de sus atomos de anillo de carbono o heteroatomo que resulta en una estructura estable. Ejemplos de grupos heterocicloalquilo incluyen, sin limitacion, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotienilo, pirrolidinilo, pirrolidonilo, piperidinilo, pirrolinilo, tetrahidroquinolinilo, tetrahidroisoquinolinilo, decahidroquinolinilo, oxazolidinilo, piperazinilo, dioxanilo, dioxolanilo, diazepinilo, oxazepinilo, tiazepinilo, morfolinilo, y quinuclidinilo. “Heterocicloalquilo” tambien incluye grupos en los que el anillo heterocicloalquilo se fusiona a uno o mas anillos arilo, heteroarilo o cicloalquilo, tal como indolinilo, cromanilo, fenantridinilo, o tetrahidroquinolinilo, en donde el radical o punto de union esta en el anillo heterocicloalquilo.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

El termino “no saturado”, como se utiliza aqm, significa que una unidad estructural tiene uno o mas enlaces dobles o triples.

Como se utiliza aqm, el termino “parcialmente insaturados” se refiere a un unidad estructural del anillo que incluye por lo menos un enlace doble o triple. El termino “parcialmente insaturado” pretende abarcar anillos que tienen multiples sitios de insaturacion, pero no pretende incluir grupos aromaticos, tales como unidades estructurales arilo o heteroarilo, como se define aqm.

El termino “dirradical” como se utiliza aqm se refiere a grupos alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, y heteroaralquilo, como se describe aqm, en donde 2 atomos de hidrogeno se retiran para formar una unidad estructural divalente. Los dirradicales finalizan normalmente con un sufijo de “-eno”. Por ejemplo, los dirradicales alquilo se denominan como alquilenos (por ejemplo:

imagen5

y -(CR'2)x- en donde R' es hidrogeno u otro sustituyente y x es 1,2, 3, 4, 5 o 6); los dirradicales alquenilo se denominan como “alquenilenos”; los dirradicales alquinilo se denominan como “alquinilenos”; los dirradicales arilo y aralquilo se denominan como “arilenos” y “aralquilenos”, respectivamente (por ejemplo:

imagen6

); los dirradicales heteroarilo y heteroaralquilo se denominan como “heteroarilenos” y “heteroaralquilenos”, respectivamente (por ejemplo:

imagen7

); los dirradicales cicloalquilo se denominan como “cicloalquilenos”; los dirradicales heterocicloalquilo se denominan como “heterocicloalquilenos”; y similares.

Los terminos “halo” y “halogeno” como se utiliza aqm se refieren a un atomo seleccionad de fluor (fluoro, -F), cloro (cloro, -Cl), bromo (bromo, -Br), y yodo (yodo, -I).

Como se utiliza aqm, el termino “haloalquilo” se refiere a un grupo alquilo, como se describe aqm, en donde uno o mas de los atomos de hidrogeno del grupo alquilo se reemplaza con uno o mas atomos de halogeno. En determinadas realizaciones, el grupo haloalquilo es un grupo perhaloalquilo, es decir, que tiene todos los atomos de hidrogeno del grupo alquilo reemplazados con halogenos (por ejemplo, tal como el grupo perfluoroalquilo -CF3).

Como se utiliza aqm Como se utiliza aqm Como se utiliza aqm Como se utiliza aqm Como se utiliza aqm Como se utiliza aqm Como se utiliza aqm

el termino “azido” se refiere al grupo -N3.

el termino “nitrilo” se refiere al grupo -CN.

el termino “nitro” se refiere al grupo -NO2.

el termino “hidroxilo” o “hidroxi” se refiere al grupo -OH.

el termino “tiol” o “tio” se refiere al grupo -SH.

el termino “acido carboxflico” se refiere al grupo -CO2H.

el termino “aldelmdo” se refiere al grupo -CHO.

Como se utiliza aqm, el termino “alcoxi” se refiere al grupo -OR', en donde R' es un grupo alquilo, alquenilo o alquinilo, como se define aqm.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

Como se utiliza aqm, el termino “ariloxi” se refiere al grupo -OR', en donde cada R' es un grupo arilo o heteroarilo, como se define aqm.

Como se utiliza aqm, el termino “alquilotio” o “alquilotiooxi” se refiere al grupo -SR', en donde cada R' es, independientemente, una unidad estructural de carbono, tal como, por ejemplo, un grupo alquilo, alquenilo, o alquinilo, como se define aqm.

Como se utiliza aqm, el termino “ariltio” se refiere al grupo -SR', en donde cada R' es un grupo arilo o heteroarilo, como se define aqm.

Como se utiliza aqm, el termino “amino” se refiere al grupo -NR'2, en donde cada R' es, independientemente, hidrogeno, una unidad estructural de carbono, tal como, por ejemplo, un grupo alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo o heteroarilo, como se define aqm, o dos grupos R' juntos con el atomo de nitrogeno al que se unen forman un anillo de 5-8 miembros.

Como se utiliza aqm, el termino “carbonilo” se refiere al grupo -C(=O)R', en donde R' es, independientemente, una unidad estructural de carbono, tal como, por ejemplo, un grupo alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo o heteroarilo, como se define aqm.

Como se utiliza aqm, el termino “ester” se refiere al grupo -C(=O)OR' o -OC(=O)R' en donde cada R' es, independientemente, una unidad estructural de carbono, tal como, por ejemplo, un grupo alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo o heteroarilo, como se define aqm.

Como se utiliza aqm, el termino “amida” o “amido” se refiere al grupo -C(=O)N(R')2 o -NR'C(=O)R' en donde cada R' es, independientemente, hidrogeno o a unidad estructural de carbono, tal como, por ejemplo, un grupo alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo o heteroarilo, como se define aqm, o dos grupos R'juntos con el atomo de nitrogeno al que se unen forman un anillo de 5-8 miembros.

Como se utiliza aqm, el termino “imida” o “imido” se refiere al grupo -C(=NR')N(R')2 o -NR'C(=NR')R' en donde cada R' es, independientemente, hidrogeno o una unidad estructural de carbono, tal como, por ejemplo, un grupo alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo o heteroarilo, como se define aqm, o en donde dos grupos R' juntos con el atomo de nitrogeno al que se unen forman un anillo de 5-8 miembros.

Como se utiliza aqm “sililo” se refiere al grupo -Si(R')3 en donde R' es una unidad estructural de carbono, tal como, por ejemplo, un grupo alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo o heteroarilo.

El termino “sal” se refiere a sales de adicion de acido organico e inorganico de los compuestos de la presente invencion. Ejemplos no limitantes de sales representativas incluyen sales derivadas de acidos organicos e inorganicos adecuados, por ejemplo, acido clorhfdrico, acido bromhndrico, acido fosforico, acido sulfurico y acido perclorico o con acidos organicos tales como acido acetico, acido oxalico, acido maleico, acido tartarico, acido cftrico, acido succmico o acido malonico o al utilizar otros metodos utilizados en la tecnica tal como intercambio de iones. Otras sales de adicion acida incluyen sales adipato, alginato, ascorbato, aspartato, bencenosulfonato, benzoato, bisulfato, borato, butirato, canforato, canforsulfonato, citrato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, formiato, fumarato, glucoheptonato, glicerofosfato, gluconato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, yodhidrato, 2-hidroxi-etanosulfonato, lactobionato, lactato, laurato, lauril sulfato, malato, maleato, malonato, metanosulfonato, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, pectinato, persulfato, 3- fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, estearato, succinato, sulfato, tartrato, tiocianato, p-toluenosulfonato, undecanoato, valerato, y similares (vease, por ejemplo, Berge et al. (1977) “Pharmaceutical Salts”, J. Pharm. Sci. 66:1-19, incorporado aqm como referencia).

Breve descripcion de los dibujos

La FIGURA 1 describe la smtesis qmmica de IPI-926 en seis etapas del material de partida cetona como se describe en Tremblay et al., “Discovery of a Potent and Orally Active Hedgehog Pathway Antagonist (IPI-926)” J. Med. Chem. (2009) 52:4400-4418. El metodo de transaminacion de la invencion acorta esta ruta mediante por lo menos tres etapas.

La FIGURA 2 describe dos tipos de transaminacion enzimatica. La figura 2a describe la deshidrogenasa L-alanina (LADH) / deshidrogenasa formiato (FDH) que promueve la transaminacion. La figura 2b describe la deshidrogenasa lactato (LDH) / Deshidrogenasa glucosa (GDH) que promueve la transaminacion.

Descripcion detallada

Se proporciona un proceso para preparar un compuesto de la formula (II):

5

10

15

20

25

30

35

imagen8

o una sal del mismo;

de un compuesto de la formula (I):

imagen9

o una sal del mismo; en donde:

R1 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, haloalquilo, -OR16, -C(O)R16, -CO2R16, -SO2R16, -C(O)N(R17)(R17), -[C(R16)2]q-R16, -[(W)-N(R17)C(O)]qR16, [(W)-C(O)]qR16, -[(W)- C(O)O]qR16, -[(W)-OC(O)]q R16,-[(W)-SO2]qR16, -[(W)-N(R17)SO2]qR16, -[(W)-C(O)N(R17)]qR17, -[(W)-O]qR16, -[(W)- N(R17)]qR16, o -[(W)-S]qR16; en donde W es un dirradical y q es 1, 2, 3, 4, 5, o 6;

cada R2 y R3 es, independientemente, H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, haloalquilo, halo, -Or16, -OR16, -N(R17)2, o -SR16, o R2yR3 tornados juntos forman un enlace doble o forman un grupo

imagen10

en donde Z es NR17, O, o C(R18)2;

R4 es independientemente H, halo, -OR16, -N(R17)2, o -SR16;

cada R5 y R6, es, independientemente, H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, halo, -OR16, -N(R17)2, o -SR16;

o R5 y R6tomados juntos con el carbono al que se unen, forman C=O, C=S, C=N-OR17, C=N-R17, C=NN( R17)2, o forman un anillo de 3-8 miembros opcionalmente sustituido;

cada R7, R8, R9, R10, R11, R12 y R13 es, independientemente, H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, halo, -OR16, -N(R17)2, o -SR16; o R10 y R11 tomados juntos,

o R11 y R12 tomados juntos, forman un enlace doble o forman un grupo

imagen11

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

en donde Z es NR17, O, o C(R18)2;

cada R14 y R15 es, independientemente, H, halo, -OR16, -N(R17)2, o -SR16; o R14 y R15 tomados juntos con el carbono al que se unen, forman C=O o C=S;

X es un enlace o el grupo -C(R19)2-; en donde cada R19 es, independientemente, H, alquilo, aralquilo, halo, -CN, -OR16, o -N(R17)2;

R16 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo o - [C(R20)2]p-R21 en donde p es 0-6; o cualesquiera dos ocurrencias de R16 en el mismo sustituyente se toman juntas para formar un anillo opcionalmente sustituido de 4-8 miembros;

R17 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, -C(=O)R20, - C(=O)OR20, -SO2R20, -C(=O)N(R20)2, o -[C(R20)2]p-R21 en donde p es 0-6; o cualesquiera dos ocurrencias de R17 en el mismo sustituyente se toman juntas para formar un anillo opcionalmente sustituido de 4-8 miembros;

R18 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, halo, -CN, -OR20, -OSi(R20)a,-C(=O)R20, -C(=O)OR20, -SO2R20, o -C(=O)N(R20)2;

R20 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, o heteroaralquilo; o cualesquiera dos ocurrencias de R20 en el mismo sustituyente se toman juntas para formar un anillo opcionalmente sustituido de 4-8 miembros;

R21 es -OR22, -N(R22)C(=O)R22, -N(R22)C(=O)OR22, -N(R22)SO2(R22),-C(=O)R22N(R22)2, -OC(=O)R22N(R22)(R22), - SO2N(R22)(R22), -N(R22)(R22), -C(=O)OR22,-C(=O)N(OH)(R22), -OS(O)2OR22, -S(O)2OR22, -OP(=O)(OR22)(OR22),- N(R22)P(O)(OR22)(OR22), o -P(=O)(OR22)(OR22); y

R22 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo; o cualesquiera dos ocurrencias de R22 en el mismo sustituyente se toman juntas para formar un anillo opcionalmente sustituido de 4-8 miembros; el proceso comprende poner en contacto un compuesto de la formula (I) o una sal del mismo, una molecula donante amino, y una enzima transaminasa de amina omega en una solucion para proporcionar un compuesto de la formula (II) o una sal del mismo.

En determinadas realizaciones, R1 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, haloalquilo, -OR16, -C(O)R16, -CO2R16,-SO2R16, -C(O)N(R17)(R17), o -[C(R16)2]q-R16 En determinadas realizaciones, R1 es H, aralquilo,-C(O)R16, -CO2R16, -SO2R16 o -C(O)N(R17)(R17). En determinadas realizaciones, R1 es H, aralquilo o - CO2R16.

En determinadas realizaciones, R1 es H.

En determinadas realizaciones, R1 es aralquilo.

En determinadas realizaciones, R1 es -CO2R16 En determinadas realizaciones, R1 es -CO2R16 y R16 es alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo o heteroaralquilo. En determinadas realizaciones, R1 es un grupo -Boc (por ejemplo, en donde R1 es -CO2R16 y R16 es t-butilo). En determinadas realizaciones, R1 es un grupo -CBz (por ejemplo, en donde R1 es -CO2R16 y R16 es bencilo).

En determinadas realizaciones, R2 y R3 tomados juntos forman un enlace doble.

En determinadas realizaciones, R2 y R3 forman un grupo:

imagen12

en donde Z es -NR17-, -O-, o -C(R18)2-. En determinadas realizaciones, Z es -C(R18)2-. En determinadas realizaciones, Z es -CH2-.

En determinadas realizaciones, X es un enlace. Por ejemplo, en determinadas realizaciones, en donde R2 y R3 se toman juntas forman un enlace doble, o en donde R2 y R3 forman un grupo:

5

10

15

20

25

30

35

imagen13

y Z es -NR17-, -O-, o -C(R18)2-, entonces X es un enlace.

En determinadas realizaciones, X es el grupo -C(R19)2-. En determinadas realizaciones, R19 es H, por ejemplo, en donde X es -CH2-.

En determinadas realizaciones, en donde R2 y R3 se toman juntas forman un enlace doble, entonces X es el grupo - C(R19)2-. En determinadas realizaciones, en donde R2 y R3 se toman juntas forman un enlace doble, entonces X es el grupo -CH2-.

En determinadas realizaciones, R4 es H.

En determinadas realizaciones, cada R5 y R6, es, independientemente, H, o R5 y R6 tornados juntos, junto con el carbono al que se unen, forman C=O. En determinadas realizaciones, cada uno de R5 y R6 es independientemente H. En determinadas realizaciones, R5y R6tomados juntos con el carbono al que se unen forman C=O.

En determinadas realizaciones, R7 y R8 son cada uno H.

En determinadas realizaciones, R9 y R10 son cada uno H.

En determinadas realizaciones, R11 es H.

En determinadas realizaciones, R12 y R13 son cada uno H.

En determinadas realizaciones, R14 y R15 son cada uno H.

En determinadas realizaciones, cada uno de R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14 y R15 es H.

En determinadas realizaciones, R9 es H y R10 y R11 tomados juntos forman un enlace doble.

En determinadas realizaciones, R13 es H, y R11 y R12 tomados juntos forman un enlace doble.

En determinadas realizaciones, el compuesto de la formula (I) es un compuesto de la formula (I-AA):

imagen14

o sal del mismo, y el compuesto de la formula (II) es un compuesto de la formula (II-AA):

imagen15

En determinadas realizaciones, el compuesto de la formula (I) es un compuesto de la formula (I-BB):

imagen16

o sal del mismo,

10 y el compuesto de la formula (II) es un compuesto de la formula (II-BB):

imagen17

15

o sal del mismo,

en donde R1, R2, R3, R5, R6 y X son como se define aqrn.

En determinadas realizaciones, el compuesto de la formula (I) es un compuesto de la formula (I-CC):

imagen18

o sal del mismo,

5

imagen19

5 o sal del mismo,

en donde R1 y X son como se define aqm.

Los compuestos de ejemplo de la formula (I) se proporcionan en la Patente Estadounidense No. 7,230,004, Patente Estadounidense No. 7,407,967, Publicacion Estadounidense No. 20080293754, y Publicacion Estadounidense No. 10 20090012109.

En determinadas realizaciones, el compuesto de la formula (I) o una sal del mismo, y un compuesto de la formula (II) o una sal del mismo, se seleccionan del grupo de compuestos, o sales de los mismos, proporcionados en las Tablas 1, 2, 3 y 4, y en donde R1 es como se definio anteriormente y aqm:

15

Tabla 1.

Compuesto de la formula (I): Compuesto de la formula (II)

R1 f Me/^Me MeThVy 0 ~H °*Hr (l-a): R1 , H N—\ MV^'rX V*Me Me/TiVy 0 (H-a)

R1 H^rvMe Me, yC J Me '• fiJH 0 H _Lbb)_____________________________________________: R1 Hj'YMe Me, yL J Me yV J/Y° H MeThAy XIaP1 Am_________________________________________________

Tabla 1.

imagen20

ltd.

imagen21

IM.

imagen22

ltd.

imagen23

lid

imagen24

imagen25

(I-e)

(II-e)

Tabla 1.

Compuesto de la formula (I): Compuesto de la formula (II)

d1 n H N'Y'Me Me, J Me <yr MeMHV / r hTh o i*r d-f): R1 n^Me Me, J Me YV v/V Jf ThT H (H-f)

Tabla 2.

Compuesto de la formula (I): Compuesto de la formula (II)

R1 1 ■ j H N—\ %XV\>Me XjXjiA 0 (i-g): R1 r H N—i MC'r\VMe r~\ PT m^hVy X X^X ^ H^N fT (ii-g)

R1 H^Me Me, SC J Me Y V' r^Y° H MeHA / 0 JHD___________________________________________: R1 HN--YMe Me, sL J XvX MeHnYv H*N JM1___________________________________________________

Tabla 2.

Compuesto de la formula (I): Compuesto de la formula (II)

R1 u N"~VMe Me,, pL T Me MeTTlV. / (M): R1 i Me H N^N>ivle Me, yL J Me YV y\oH Me/JHVV [ ThT 1=1 (ll-i)

R1 t Mey^y\^Me M®r>ky ° H ° (i-j): R1 1 Mew^O"Me (IN)

R1 nj-Y* Me, X J Me '-(V °vY\0 H MeHA/ ° (l-k): R1 Me, y. J Me '/V VyV° A (ll-k)

R1 H N'^YMe Me, J Me ''/V V/T0 *H MenA^y J 1=1 0 (l-l): R1 HN-^yMe Me,, yL j Me Xr v/V°/H M eAW ii (ll-l)

Tabla 3.

imagen26

O'

(l-m)

imagen27

H2N

(ll-m)

imagen28

JM.

imagen29

H2N

UllOl

imagen30

JM.

imagen31

h2n

lib°l

imagen32

0

(i-p)

imagen33

h2n

(ll-p)

Tabla 3.

Compuesto de la formula (I): Compuesto de la formula (II)

R1 Me, yL I Me 'Yyr 0 H d-q): R1 h^V8 Me, V J Me '/ x VyV H Me/TlV/ (H-q)

R1 HN'-yMe Me, J Me \ n V/V° H fpjH JM)___________________________________________: R1 JrY' Me, V J Me '’(V \3\°H H JM)____________________________________________________

Tabla 4.

Compuesto de la formula (I): Compuesto de la formula (II)

R1 t H N—\ MV^'rsO-Me MeHA^J ° H JMl____________________________________________: R1 1 H |\j—, MewrVVMe JM)___________________________________________________

Tabla 4.

Compuesto de la formula (I): Compuesto de la formula (II)

R1 Me, T MeY^^ MejT\y (l-t): R1 H N^yMe Me, yL J MeTHyV f T fi) I H (ll-t)

R1 Me, yL J Me Y V 3~r°H MertXy f T hT 1=1 (l-u): R1 Me, X Me MeT^X/ X X1^ J ^ (ll-u)

R1 / Me H*,N“\ Me/VM-ye MxX'~X ° H r ThJ h (l-v): R1 H N—x MeTfA^J H (I l-v)

R1 HN--YMe Me, >1 J Me '(V °vY\0 H (l-w): p1 n «ff^yMe Me, X J Me '/ X °vYY° H MeflnV/ (I l-w)

5

10

15

20

25

Tabla 4.

Compuesto de la formula (I): Compuesto de la formula (II)

R1 Me, >1 J Me Y x a/A-° H jh d-x): R1 Hj'YUe Me, Si J Me '/ p V/v° Me/Ti\_V H2N^^ (ll-x)

En determinadas realizaciones, R1 es H.

En determinadas realizaciones, R1 es aralquilo.

En determinadas realizaciones, R1 es -CO2R16. En determinadas realizaciones, R1 es -CO2R16 y R16 es alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo o heteroaralquilo. En determinadas realizaciones, R1 es un grupo -Boc (por ejemplo, en donde R1 es -CO2R16 y R16 es t-butilo). En determinadas realizaciones, R1 es un grupo -CBz (por ejemplo, en donde R1 es -CO2R16 y R16 es bencilo).

En determinadas realizaciones, el proceso genera preferiblemente un compuesto de la formula (II), o una sal del mismo, de un compuesto de la formula (I), o sal del mismo, en donde el grupo amino nuevamente formado proporcionado en la formula (II) tiene estereoqumica (R) o (S).

Por ejemplo, en determinadas realizaciones, el proceso genera preferiblemente un compuesto de la formula (II), o sal del mismo, en donde el grupo amino nuevamente formado tiene estereoqmmica (S), por ejemplo, un compuesto de la formula (S)-(II):

imagen34

o una sal del mismo,

en donde R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15 y X son como se define aqm.

En determinadas realizaciones, el proceso genera preferiblemente un compuesto de la formula (II), o sal del mismo, en donde el grupo amino nuevamente formado tiene estereoqmmica (R), por ejemplo, un compuesto de la formula (R)-(II):

5

10

15

20

25

imagen35

o una sal del mismo,

en donde R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15 y X son como se define aqrn.

Como se utiliza aqrn, “genera preferiblemente” se refiere a la produccion de un estereoisomero de un compuesto de la formula (II) en exceso sobre el otro estereoisomero. En determinadas realizaciones, el proceso genera preferiblemente un compuesto de la formula (II), o una sal del mismo, en donde el grupo amino nuevamente formado tiene (R) o estereoqumica (S), mayor de 40% exceso diastereomerico (de), mayor de 50% de, mayor de 60% de, mayor de 70% de, mayor de 75% de, mayor de 80% de, mayor de 85% de, mayor de 90% de, mayor de 95% de, mayor de 98% de, o mayor de 99% de, segun se determina mediante HPLC.

En una realizacion preferida, el proceso genera preferiblemente un compuesto de la formula (II), o sal del mismo, en donde el grupo amino nuevamente formado tiene estereoqmmica (R).

Por ejemplo, en determinadas realizaciones, el compuesto de la formula (I) es de la formula (I-AA):

imagen36

o sal del mismo,

y el compuesto de la formula (II) es de la formula (R)-(II-AA):

imagen37

o sal del mismo,

en donde R1, R2, R3, R5, R6, R10, R11, R12 y X son como se define aqrn.

En determinadas realizaciones, el compuesto de la formula (I) es de la formula (I-BB):

5

imagen38

o sal del mismo,

y el compuesto de la formula (II) es de la formula ('R^-(II-BB):

imagen39

o sal del mismo,

10 en donde R1, R2, R3, R5, R6 y X son como se define aqm.

En determinadas realizaciones, el compuesto de la formula (I) es de la formula (I-CC): 15

imagen40

15

o sal del mismo,

y el compuesto de la formula (II) es de la formula ('R^-(II-CC):

imagen41

o sal del mismo, en donde R1 y X son como se define aqm.

5 En otra realizacion preferida, el compuesto de las formulas (I) y (II) se seleccionan del grupo de compuestos, o sales de los mismos, proporcionados en la Tabla 1.

En determinadas realizaciones preferidas, el proceso genera preferiblemente un compuesto de la formula (II) de la Tabla 1, o sal del mismo, en donde el grupo amino nuevamente formado tiene la estereoqmmica (R).

10

Por ejemplo, en determinadas realizaciones, el compuesto de las formulas (I) y (II) se seleccionan de un grupo de compuestos, o sales de los mismos, proporcionados en la Tabla 5, en donde el grupo amino nuevamente formado del compuesto de la formula (II) tiene la estereoqmmica (R):

Tabla 5.

Compuesto de la formula (I)

Compuesto de la formula (II)

imagen42

1M

(R)-(II-a)

imagen43

imagen44

Tabla 5.

Compuesto de la formula (I)

Compuesto de la formula (II)

imagen45

O

lb£l

imagen46

h2n

r^-di-c)

imagen47

o

JM

imagen48

H2N'

(R)-( H-d)

imagen49

(I-e)

imagen50

h2n'

r^KII-e)

imagen51

imagen52

JHL

h2n

(R)-( H-f)

En determinadas realizaciones, el compuesto de la formula (I) es un compuesto de la formula (I-a):

5

10

15

20

25

30

35

imagen53

o sal del mismo,

y el compuesto de la formula (II) es un compuesto de la formula ('Rj-(II-a):

imagen54

o una sal del mismo,

en donde R1 es como se define aqrn.

En determinadas realizaciones, R1 es H.

En determinadas realizaciones, R1 es aralquilo.

Las cetonas enmascaradas (se proporcionan para informacion, pero no hacen parte de la presente invencion)

En determinadas realizaciones, el compuesto de la formula (I) es una cetona enmascarada. En este contexto, una “cetona enmascarada” se refiere a un compuesto qmmicamente modificado de la formula (I) o sal del mismo que contiene un grupo funcional que se transforma in situ (por ejemplo, mediante hidrolisis) en la cetona.

Las cetonas enmascaradas de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, aminales y hemiaminales (vease, por ejemplo, Vogel et al, J. Org. Chem. (2004) 69:4487-4491; Reeder and Meyers, Tetrahedron Letters (1999) 40:31115-31 18), acetales y hemiacetales (vease por ejemplo, Boyce et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. (2008) 18:5771-5773), hidratos (vease por ejemplo, Silverman et al., J. Med. Chem. (1987) 31: 1566-1570), iminas (vease por ejemplo, Hine et ai, J. Am. Chem. Soc. (1970) 92:5194-5199), oximas (vease por ejemplo, Sha et al, J. Am. Chem. Soc. (2006) 128:9687-9692), tiocarbonilos (vease por ejemplo, Kalm, J. Chem. Soc. (1961) 2925-2929), tioacetales y tiohemiacetales (vease por ejemplo Ogura et al., Tetrahedron Letters (1986) 27:3665-3668), eteres enol (vease por ejemplo, Manis and Rathke, J Org. Chem. (1981) 46:5348-5351), y sales de los mismos.

Por ejemplo, se proporciona un proceso para preparar un compuesto de la formula (II):

5

10

15

20

25

imagen55

o una sal del mismo;

de una cetona enmascarada de un compuesto de la formula (I):

imagen56

o sal del mismo;

en donde R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15 y X son como se define aqm; el proceso comprende

poner en contacto una cetona enmascarada de un compuesto de la formula (I) o una sal del mismo, una molecula donante amino, y una enzima amina transaminasa en una solucion para proporcionar un compuesto de la formula (II) o una sal del mismo.

En determinadas realizaciones, un compuesto de la formula (I) es una cetona enmascarada que tiene la formula (I-DD):

imagen57

o una sal del mismo, en donde:

R24 y R25 se seleccionan de-OR26, -SR26, y -N(R26)2, o R24 y R25 se toman juntos para formar el grupo =S, =N-R26, o =N-OR26, o R24 es -OR27 o -O(C=O)R27 y R25 y R8 o R25 y R9 se toman juntos para formar un enlace;

R26 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, - C(=O)R27, - C(=O)OR27 o -C(=O)N(R28)2, o cualesquiera dos ocurrencias de R26 se toman juntas para formar un anillo opcionalmente sustituido de 4-8 miembros;

R27 es alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, o heteroaralquilo; y R28 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, o heteroaralquilo; o cualesquiera dos ocurrencias de R28 en el mismo sustituyente se toman juntas para formar un anillo opcionalmente sustituido de 4-8 miembros.

5

10

15

20

25

30

En determinadas realizaciones, un compuesto de la formula (I-DD) o una sal del mismo, es un hidrato, un acetal o un hemiacetal.

En determinadas realizaciones, un compuesto de la formula (I-DD) o una sal del mismo, es un hidrato, un acetal o un hemiacetal de la formula (I-EE):

imagen58

o una sal del mismo, en donde:

R26 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo,- C(=O)R27, -C(=O)OR2> o -C(=O)N(R28)2, o cualesquiera dos ocurrencias de R26 se toman juntas para formar un anillo opcionalmente sustituido de 4-8 miembros;

En determinadas realizaciones, un compuesto de la formula (I-DD) o una sal del mismo, es un aminal o hemiaminal.

En determinadas realizaciones, un compuesto de la formula (I-DD), o una sal del mismo, es un aminal o hemiaminal de la formula (I-FF);

imagen59

o una sal del mismo, en donde:

R25 es -OR26 o -N(R26)2;

R26 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo,- C(=O)R27, -C(=O)OR27 o -C(=O)N(R28)2; o cualesquiera dos ocurrencias de R26 se toman juntas para formar un anillo opcionalmente sustituido de 4-8 miembros;

R27 es alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, o heteroaralquilo; y

5

10

15

20

25

30

35

R28 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, o heteroaralquilo; o cualesquiera dos ocurrencias de R28 en el mismo sustituyente se toman juntas para formar un anillo opcionalmente sustituido de 4-8 miembros.

En determinadas realizaciones, un compuesto de la formula (I-DD) o una sal del mismo, es un tioacetal o tiohemiacetal.

En determinadas realizaciones, un compuesto de la formula (I-DD) o una sal del mismo, es un tioacetal o tiohemiacetal de la formula (I-GG):

imagen60

o una sal del mismo, en donde:

R25 es -OR26 o -SR26,

R26 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo,- C(=O)R27, -C(=O)OR27 o -C(=O)N(R28)2, o cualesquiera dos ocurrencias de R26 se toman juntas para formar un anillo opcionalmente sustituido de 4-8 miembros;

En determinadas realizaciones, un compuesto de la formula (I-DD) o una sal del mismo, es una imina.

En determinadas realizaciones, un compuesto de la formula (I-DD) o una sal del mismo, es una imina de la formula (I-HH)

imagen61

o una sal del mismo, en donde:

R26 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo,- C(=O)R27, -C(=O)OR27 o -C(=O)N(R28)2;

5

10

15

20

25

30

35

En determinadas realizaciones, un compuesto de la formula (I-DD) o una sal del mismo, es una oxima.

En determinadas realizaciones, un compuesto de la formula (I-DD) o una sal del mismo, es una oxima de la formula (I- JJ):

imagen62

o una sal del mismo, en donde:

R26 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo,- C(=O)R27, - C(=O)OR27 o -C(=O)N(R28)2;

En determinadas realizaciones, un compuesto de la formula (I-DD) o una sal del mismo, es un tiocarbonilo.

En determinadas realizaciones, un compuesto de la formula (I-DD) o una sal del mismo, es un tiocarbonilo de la formula (1-KK):

imagen63

o una sal del mismo.

En determinadas realizaciones, un compuesto de la formula (I-DD) o una sal del mismo, es un eter enol.

En determinadas realizaciones, un compuesto de la formula (I-DD) o una sal del mismo, es un eter enol de las formulas (I-LL) o (I-MM):

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

imagen64

o una mezcla de los mismos y/o una sal de los mismos,

en donde R24 es -OR27 o -O(C=O)R27 y R27 es alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, o heteroaralquilo.

Molecula Donante Amino

Una “molecula donante amino” es un compuesto que tiene un grupo -NH2 que, durante el curso de la reaccion, se transfiere al compuesto de la formula (I). Las moleculas donantes amino incluyen aminas y aminoacidos.

En determinadas realizaciones, la molecula donante amino es un amina o sal de la misma (por ejemplo, una amina primaria). La amina de ejemplo incluye, pero no se limita a, piridoxamina, metilbencilamina, 2-aminobutano, propil amina, isopropil amina, 1,1,1-trifluoropropan-2-amina, 1,1,1,3,3;3-hexafluoropropan-2-amina, bencil amina, 2-amino-1-butanol, 1- amino-1- feniletano, 1-amino-1-(2-metoxi-5-fluorofenil)etano, 1-amino-1-fenilpropano, 1-amino- 1-(4hidroxifenil)propano, 1-amino-1-(4-bromofenil)propano, 1-amino-1-(4-nitrofenil)propano, 1-fenil-2-aminopropano, 1 -(3-trifluorometilfenil )-2- aminopropano, 2-aminopropanol, 1-amino-1-fenilbutano, 1-fenil-2-aminobutano, 1-(2,5-dimetoxi-4-metilfenil)-2- aminobutano, 1-fenil-3-aminobutano, 1-(4-hidroxifenil)-3-aminobutano, 1-amino-1-(2-naftil)etano, cis-2- metilciclopentanamina, trans-2-metilciclopentanamina, cis-3-metilciclopentanamina, trans-3-metilciclopentanamina, cis-2- etilciclopentanamina, trans-2-etilciclopentanamina, cis- 3-etilciclopentanamina, trans-3-etilciclopentanamina, cis-2- metilciclohexanamina, trans-2-metilciclohexanamina, cis-3-metilciclohexanamina, trans-3-metilciclohexanamina, cis-2- etilciclohexanamina, trans-2-etilciclohexanamina, cis-3-etilciclohexanamina; trans-3-etilciclohexanamina, 1-

aminotetralina, 2-aminotetralina, 2-amino- 5-metoxitetralina, 1-aminoindano, 2-aminoindano, 2-amino-1-propanol, cis-1- amino-2-indanol, trans-1-amino-2-indanol, 1-amino-6-hidroxiindanamina, taurina, y sales de los mismos.

En determinadas realizaciones, la molecula donante amino es un aminoacido o un polipeptido del mismo y/o una sal del mismo. Un polipeptido, como se utiliza aqrn, se refiere a dos o mas aminoacidos unidos por un enlace de peptido. En determinadas realizaciones, el polipeptido es un dipeptido (por ejemplo, dos aminoacidos unidos por un enlace de peptido).

En determinadas realizaciones, el aminoacido se selecciona de glicina, alanina, acido aspartico, fenilalanina, acido 2- aminopentanodioico, 3-aminobutirato, Y-aminobutirato, p-alanina, asparagina, cistema, acido glutamico, glutamina, prolina, selenocistema, serina, tirosina, arginina, histidina, ornitina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, treonina, triptofano, valina, y polipeptidos de los mismos y/o sales de los mismos.

En determinadas realizaciones, la molecula donante amino es una molecula donante de amino quiral o una sal de la misma, por ejemplo, una molecula donante amino que contiene por lo menos un centro asimetrico. En determinadas realizaciones, el grupo amino (-NH2) que se va a transferir se une a un carbono quiral. En determinadas realizaciones, el carbono quiral tiene estereoqmmica (R). En determinadas realizaciones, el carbono quiral tiene estereoqmmica (S).

En determinadas realizaciones, la molecula donante de amino quiral es una amina quiral o una sal de la misma, por ejemplo, una amina que contiene por lo menos un centro asimetrico. Las aminas quirales de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, (R)-metilbencilamina, (S)-metilbencilamina, (S)-2-aminobutano, (R)-2-aminobutano, (S)-1-aminoindano, (R)-1- aminoindano, (R)-1,1,1-trifluoropropan- 2-amina, (S)-1,1,1-trifluoropropan-2-amina, (R)-2-amino-1-propanol, (S)-2-amino- 1-propanol, (1R, 2S)-cis- 1-amino-2-indanol, (1R, 2R)-trans-1-amino-2-indanol, 1-(R)-amino-6-hidroxiindanamina, 1-(S)- amino-6-hidroxiindanamina, (R)-2-amino-1-butanol, (S)-2-amino-1-butanol, (R)-1-amino-1-feniletano, (S)-1-amino-1- feniletano, (R)- 1-amino-1-(2-metoxi-5-fluorofenil)etano, (S)-1-amino-1-(2-metoxi-5-fluorofenil)etano, (R)-1-amino-1- fenilpropano, (S)-1-amino-1-fenilpropano, (R)-1-amino-1-(4-hidroxifenil)-propano, (S)-1-amino-1-(4-hidroxifenil)-propano, (R)-1-amino-1-(4-bromofenil)propano, (S)-1-amino-1-(4-bromofenil)propano, (R)-1-amino-1-(4-nitrofenil) propano, (S)-1- amino-1-(4-nitrofenil)propano, (R)-1-fenil-2-aminopropano, (S)-1-fenil-2-aminopropano, (R)-1-(3-trifluorometilfenil)-2- aminopropano, (S)-1-(3-trifluorometilfenil}-2-aminopropano (R)-1-amino-1-fenilbutano, (S)-1-amino-1-fenilbutano, (R)-1- fenil-2-aminobutano, (S)-1-fenil-2-aminobutano, (R)-1-(2,5-di-metoxil- 4-metilfenil)-2-aminobutano, (S)-1-(2,5-di-metoxi-4- metilfenil)-2-aminobutano, (R)-1-fenil-3-aminobutano, (S)-1-fenil-3-aminobutano, (R)-1-(4-hidroxifenil)-3-aminobutano,

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

(S)-1-(4-hidroxifenil)-3-aminobutano, (R)-1-amino-1-(2-naftil)etano, (S)-1-amino-1-(2-naftil)etano (R)-l-aminotetralina, (S)- 1-aminotetralina, (R)-2-aminotetralina, (S)-2-aminotetralina, (R)-2-amino-5-metoxitetralina, (S)-2-amino-5-metoxitetralina, (1R,2S)-c/s-2-metilciclopentanamina, (1S,2R)-c/s-2-metilciclopentanamina, (1R,2R)-trans-2-metilciclopentanamina,

(1S,2S)-trans-2- metilciclopentanamina, (1R,3S)-c/s-3-metilciclopentanamina, (1S,3R)-c/s-3-metilciclopentanamina, (1R,3R)-trans-3-metilciclopentanamina, (1S,3S)-trans-3-metilciclopentanamina, (1R,2S)-c/s-2-etilciclopentanamina,

(1S,2R)-c/s-2-etilciclopentanamina, (1R,2R)-trans-2-etilciclopentanamina, (1S,2S)-trans-2-etilciclopentanamina, (1R,3S)- c/s-3-etilciclopentanamina, (1S,3R)-c/s-3-etilciclopentanamina, (1R,3R)-trans-3-etilciclopentanamina, (1S,3S)-trans-3- etilciclopentanamina, (1R,2S)-c/s-2-metilciclohexanamina, (1S,2R)-c/s-2-metilciclohexanamina,

metilciclohexanamina, (1S,2S)-trans-2-metilciclohexanamina, (1R,3S)-c/s-3- metilciclohexanamina, metilciclohexanamina, (1R,3R)-trans-3-metilciclohexanamina, (1S,3S)-trans-3-metilciclohexanamina, (1S,2R)-c/s-2-etilciclohexanamina; (1R,2R)-trans-2-etilciclohexanamina,

(1R,3S)-c/s-3-etilciclohexanamina, (1S,3R)-c/s-3-etilciclohexanamina, (1S,3S)-trans-3-etilciclohexanamina, y sales de los mismos.

etilciclohexanamina

(1R,2R)-trans-2- (1S,3R)-c/s-3- (1R,2S)-c/s-2- (1S,2S)-trans-2- (1R,3R)-trans-3-

En determinadas realizaciones, la molecula donante de amino quiral es un aminoacido quiral o un polipeptido del mismo y/o una sal del mismo, por ejemplo, que contiene por lo menos un centro asimetrico. Los aminoacidos quirales de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, (L)-alanina, (D)-alanina, acido (L)- aspartico, acido (D)- aspartico, (L)-fenilalanina, (D)- fenilalanina, acido (2S)- 2-aminopentanodioico, (L)-asparagina, (D)-asparagina, (L)-cistema, (D)-cistema, (L)-glutamina, (D)-glutamina, acido (L)-glutamico, acido (D)-glutamico, (L)-prolina, (D)-prolina, (L)-selenocistema, (D)-selenocistema, (L)- serina, (D)-serina, (L)-tirosina, (D)-tirosina, (L)-arginina, (D)-arginina, (L)-histidina, (D)-histidina, (L)-isoleucina, (D)- isoleucina, (L)-leucina, (D)-leucina, (L)-lisina, (D)-lisina, (L)-metionina, (D)-metionina, (L)-treonina, (D)-treonina, (L)- triptofano, (D)-triptofano, (L)- valina, (D)-valina, (L)-ornitina, (D)-ornitina, (3R)-aminobutirato, (3S)-aminobutirato y polipeptidos de los mismos y/o sales de los mismos.

En determinadas realizaciones, la molecula donante de amino quiral es (R)-metilbencilamina o una sal del mismo. En otras realizaciones, la molecula donante de amino quiral es (S)-metilbencilamina o una sal del mismo.

En determinadas realizaciones, la molecula donante de amino quiral es (L)-alanina o una sal del mismo. En determinadas realizaciones, la molecula donante de amino quiral es (D)-alanina o una sal del mismo.

En determinadas realizaciones, la molecula donante de amino quiral es (S)-l-aminoindano. En determinadas realizaciones, la molecula donante de amino quiral es (R)-l-aminoindano.

En determinadas realizaciones, el proceso comprende poner en contacto un compuesto de la formula (I), una molecula donante de amino quiral, y una enzima transaminasa amina en una solucion para proporcionar un compuesto de la formula (II), o una sal del mismo, con el grupo amino nuevamente formado que tiene estereoqmmica (S).

En determinadas realizaciones, el proceso comprende poner en contacto un compuesto de la formula (I), o una sal del mismo, una molecula donante de amino quiral, y una enzima transaminasa amina en una solucion para proporcionar un compuesto de la formula (II), o una sal del mismo, con el grupo amino nuevamente formado que tiene estereoqmmica (R).

Enz/ma Transam/nasa am/na (ATA)

Una enzima transaminasa amina (ATA) cataliza la transferencia del grupo -NH2 de la molecula donante amino a un compuesto que tiene un grupo funcional cetona, por ejemplo, un compuesto de la formula (I), con el proposito de proporcionar un compuesto de la formula (II).

En determinadas realizaciones, la enzima transaminasa amina genera preferiblemente un compuesto de la formula (II), o una sal del mismo, con el grupo amino nuevamente formado que tiene estereoqum/ca (R) o (S). Como se utiliza aqm, “genera preferiblemente” se refiere a la produccion de un estereoisomero de un compuesto de la formula (II) en exceso sobre el otro estereoisomero.

En determinadas realizaciones, la enzima transaminasa amina genera preferiblemente un compuesto de la formula (II), o una sal del mismo, con el grupo amino nuevamente formado que tiene estereoqmmica (R),

En determinadas realizaciones, la enzima transaminasa amina genera preferiblemente un compuesto de la formula (II), o una sal del mismo, con el grupo amino nuevamente formado que tiene la estereoqmmica (S).

En determinadas realizaciones, la enzima transaminasa amina genera preferiblemente un compuesto de la formula (II), o una sal del mismo, con el grupo amino nuevamente formado que tiene estereoqum/ca (R) o (S), mayor de 40% exceso diastereomerico (de), mayor de 50% de, mayor de 60% de, mayor de 70% de, mayor de 75% de, mayor de 80% de, mayor de 85% de, mayor de 90% de, mayor de 95% de, mayor de 98% de, o mayor de 99% de, segun se determina mediante HPLC.

En determinadas realizaciones, la enzima transaminasa amina genera preferiblemente un compuesto enantiomericamente puro de la formula (II), o sal del mismo.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

La enzima transaminasa amina es una enzima transaminasa de amina omega.

Las enzimas transaminasa de amina omega de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, enzimas de transaminasa de amina omega de Codexis, Inc. (Redwood City, CA), tal como ATA-101, ATA-102, ATA-103, ATA-104, ATA-105, ATA-106, ATA- 107, ATA-108, ATA-109, ATA-110, ATA-113, ATA-114, ATA-115, ATA-116, ATA-117y ATA-124; transaminasas de amina omega de Vibriofltivialis, Alcaligenes denitrificans, Klebsiella pneumoniae, o Bacillus thuringiensis, tal como se describe en el documento WO 2007093372, transaminasas de amina omega de Chromobacterium violaceum, tal como se describe en Smithies et al., Tetrahedron Asymmetry (2009) 570-574, transaminasas de amina omega de Bacillus cereus, tal como se describe en Nakano et al., J. Biochem. (1977) 81:1375-1381 y transaminasas de amina omega de Arthrobactercitreus, tal como se describe en Cassimjee et al., ChemComm (2010) 46:5569-5571,

Otras transaminasas de amina omega adecuadas de ejemplo que se pueden utilizar de acuerdo con la presente invencion se describen en Iwasaki et al., Biotechnol. Lett. (2003) 25:1843-1846; Shin et al., Biotechnol. Bioeng. (1997) 55:348-358; Shin and Kim, Biosc. Biotechnol. Biochem. (2001) 65:1782-1788; Koszelewski et al., Trends in Biotechnology (2010) 28:324-332, y Shin and Kim, Biotechnol. Bioeng. (1998) 60:534- 540.

La inmovilizacion de la enzima transaminasa amina tambien puede ser efectiva para mejorar la estabilidad de la enzima que a su vez permitira su reutilizacion, haciendo por lo tanto el proceso mas economico. La inmovilizacion de las enzimas se ha logrado mediante una adsorcion simple en una resina hidrofoba o mediante enlace cruzado covalente intermolecular de enzimas con una variedad de grupos funcionales o finalmente al incorporar enzimas en la red de una matriz polimerica o una membrana. La inmovilizacion covalente de la transaminasa de amina omega de Vibrio fluvialis JS 17 ha sido reportada por Lee y colaboradores en donde los autores adsorbieron la enzima sobre globulos de quitosan y posteriormente se entrecruzaron con glutaraldehfdo (Yi et al., Proc. Biochem. (2007) 42: 895-898). La enzima transaminasa amina inmovilizada sobre globulos de quitosan retiene ca. 77% de su actividad despues de cinco reacciones consecutivas con el sustrato que indica la utilidad del proceso.

En determinadas realizaciones, la enzima transaminasa de amina omega es una enzima transaminasa amina de Codexis, Inc.

En determinadas realizaciones, la enzima transaminasa de amina omega es ATA-113.

En determinadas realizaciones, la enzima transaminasa de amina omega es ATA-117.

En determinadas realizaciones, la enzima transaminasa de amina omega es una transaminasa de amina omega de Vibrio fluvialis.

En determinadas realizaciones, la enzima transaminasa de amina omega es una transaminasa de amina omega de Alcaligenes denitrificans.

En determinadas realizaciones, la enzima transaminasa de amina omega es una transaminasa de amina omega de Arthrobactercitreus.

En determinadas realizaciones, la enzima transaminasa de amina omega es una transaminasa de amina omega de Klebsiella pneumonia.

En determinadas realizaciones, la enzima transaminasa de amina omega es una transaminasa de amina omega de Bacillus thuringiensis.

En determinadas realizaciones, la enzima transaminasa de amina omega es una transaminasa de amina omega de Bacillus cereus.

En determinadas realizaciones, la enzima transaminasa de amina omega es una transaminasa de amina omega de Chromobacterium violaceum.

En determinadas realizaciones, la enzima transaminasa de amina omega es una enzima transaminasa de amina omega inmovilizada.

Cofactores

En determinadas realizaciones, el proceso comprende adicionalmente agregar un cofactor a la solucion. Los cofactores incluyen grupos protesicos que se unen a una enzima durante la reaccion enzimatica, y coenzimas que actuan para transferir grupos qmmicos durante la reaccion enzimatica.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

Los cofactores de ejemplo incluyen el grupo protesico fosfato piridoxal (PLP) y coenzimas tales como deshidrogenasa L- alanina (LADH), deshidrogenasa lactato (LDH), fosfato de dinucleotido de adenina nicotinamida (NADPH), dinucleotido de adenina nicotinamida (NAD), deshidrogenasa formiato (FDH) y deshidrogenasa glucosa (GDH).

En determinadas realizaciones, el proceso comprende adicionalmente agregar el cofactor fosfato piridoxal (PLP) a la solucion.

En determinadas realizaciones, la enzima transaminasa amina y el cofactor fosfato piridoxal agregado a la solucion se precomplejan antes de poner en contacto con el compuesto de la formula I. En otras realizaciones, la enzima transaminasa amina (ATA) y fosfato piridoxal agregado a la solucion no se precomplejan antes de poner en contacto con el compuesto de la formula I (es dedr, cada uno se agrega individualmente a la solucion).

En determinadas realizaciones, el proceso comprende adicionalmente agregar una coenzima a la solucion. En determinadas realizaciones, el proceso comprende adicionalmente agregar una o mas coenzimas seleccionadas de deshidrogenasa L-alanina (LADH), deshidrogenasa lactato (LDH), fosfato de dinucleotido de adenina nicotinamida (NADPH), dinucleotido de adenina nicotinamida (NAD), deshidrogenasa formiato (FDH), y deshidrogenasa glucosa (GDH) a la solucion.

En determinadas realizaciones, el proceso comprende adicionalmente agregar la coenzima LADH a la solucion.

En determinadas realizaciones, el proceso comprende adicionalmente agregar la coenzima FDH a la solucion.

En determinadas realizaciones, el proceso comprende adicionalmente agregar la coenzima NAD a la solucion.

En determinadas realizaciones, el proceso comprende adicionalmente agregar la coenzima LDH a la solucion.

En determinadas realizaciones, el proceso comprende adicionalmente agregar la coenzima GDH a la solucion.

En determinadas realizaciones, el proceso comprende adicionalmente agregar una mezcla de LADH, FDH y NAD a la solucion.

En determinadas realizaciones, el proceso comprende adicionalmente agregar una mezcla de coenzimas LDH, GDH y NAD a la solucion.

En determinadas realizaciones, el proceso comprende adicionalmente agregar un azucar a la solucion. En determinadas realizaciones, el azucar es glucosa.

En determinadas realizaciones, el proceso comprende adicionalmente agregar una mezcla de reductasa de piruvato a la solucion. En determinadas realizaciones, el proceso comprende adicionalmente agregar una mezcla de coenzimas LDH, GDH, NAD, y el azucar glucosa (por ejemplo, por ejemplo, mezcla de reductasa de piruvato PRM-102, disponible de Codexis, Inc.) a la solucion.

En determinadas realizaciones, el proceso comprende adicionalmente agregar amoniaco o una sal de amonio a la solucion. En determinadas realizaciones, la sal de amonio es formiato de amonio (NH4CO2H). El formiato de amonio se puede obtener in situ de la combinacion de acido formico y amoniaco.

Otra Condicion de Reaccion

En determinadas realizaciones, la solucion comprende una solucion acuosa.

En determinadas realizaciones, la solucion acuosa es una solucion acuosa regulada. Los reguladores de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, acido 3-{[tris(hidroximetil)metil]amino}propanosulfonico (TAPS), N,N-bis(2-hidroxietil)glicina (Bicina), tris(hidroximetil)metilamina (Tris), N-tris(hidroximetil)metilglicina (Tricina), acido 4-2-hidroxietil-1-piperazinaetanosulfonico (HEPES), acido 2-{[tris(hidroximetil)metil]amino}etanosulfonico (TES), acido 3-(N-morfolino) propanosulfonico (MOPS), piperazina-N,N'-bis(acido 2-etanosulfonico) (PIPES), acido dimetilarsmico (Cacodilato), acido 2-(N- morfolino)etanosulfonico (MES), acido carbonico, solucion salina regulada con fosfato (PBS), acetato, fosfato de sodio, y sales de los mismos.

En determinadas realizaciones, la solucion acuosa regulada es una solucion regulada de fosfato de sodio.

En determinadas realizaciones, la solucion comprende adicionalmente un cosolvente. En determinadas realizaciones, el cosolvente es un solvente organico.

En determinadas realizaciones, el solvente organico es miscible en agua. En determinadas realizaciones, el solvente organico es inmiscible en agua.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

En determinadas realizaciones, la solucion es un sistema monofasico, por ejemplo, comprende uno solucion acuosa y uno o mas solventes organicos miscibles en agua. Los solventes organicos miscibles en agua adecuados incluyen, pero no se limitan a, alcoholes organicos (por ejemplo, metanol (MeOH), etanol (EtOH), isopropanol (iPrOH) y 2,2,2- trifluoroetanol (CF3CH2OH)), dimetilsulfoxido (DMSO), dimetilformamida (DMF), glicoles (por ejemplo, etilenglicol y propilenglicol), y mezclas de los mismos.

En determinadas realizaciones, la solucion comprende una solucion acuosa y un alcohol organico. En determinadas realizaciones, la solucion comprende una solucion acuosa y metanol.

Sin embargo, en otras realizaciones, la solucion es un sistema bifasico, por ejemplo, comprende una solucion acuosa y uno o mas solventes organicos inmiscibles en agua. Los solventes organicos inmiscibles en agua adecuados incluyen, pero no se limitan a, alcanos (por ejemplo, hexano, heptano, perfluorohexano), esteres (por ejemplo, acetato de etilo (EtOAc), acetato de isopropilo (iPrOAc)), cetonas (por ejemplo, ciclohexanona), eteres (por ejemplo, 2-metil tetrahidrofurano), y hidrocarburos aromaticos (por ejemplo, tolueno, xilenos, benceno).

En determinadas realizaciones, el pH de la solucion es menor de aproximadamente 9, menor de aproximadamente 8.5, o menor de aproximadamente 8. En determinadas realizaciones, el pH de la solucion es aproximadamente 7. En determinadas realizaciones, el pH de la solucion es aproximadamente 75. En determinadas realizaciones, el pH de la solucion es aproximadamente 8.

En determinadas realizaciones, la temperatura de la solucion es por lo menos aproximadamente 20 °C, por lo menos aproximadamente 25 °C, por lo menos aproximadamente 30 °C, o por lo menos aproximadamente 35 °C. En determinadas realizaciones, la temperatura de la solucion es entre aproximadamente 20 °C y aproximadamente 50 °C.

En determinadas realizaciones, el proceso comprende adicionalmente una resina. La adsorcion del material de partida cetona (I) o el producto amina (II) en la resina reduce su concentracion respectiva en el medio de reaccion, y de esta forma reduce su propension a inhibir la enzima. Las resinas de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, resinas Amberlite™, Amberlyst™ y Dowex™.

En determinadas realizaciones, el proceso comprende adicionalmente un solublizante tal como una ciclodextrina o un surfactante. Las ciclodextrinas de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, p-ciclodextrinas y Y-ciclodextrinas. Los surfactantes de ejemplo incluyen, pero no se limitan a esteres de acido graso sorbitan (por ejemplo monolaurato polioxietileno sorbitan [Tween 20], polioxietileno sorbitan [Tween 60], monooleato polioxietileno sorbitan [Tween 80], monopalmitato de sorbitan [Span 40], monostearato de sorbitan [Span 60], triestearato de sorbitan [Span 65], gliceril monooleato, monooleato de sorbitan [Span 80]), esteres polioxietileno (por ejemplo monoestearato de polioxietileno [Myrj 45], aceite de ricino hidrogenado polioxietileno, aceite de ricino polietoxilatado, estearato de polioximetileno, y Solutol), eteres de polioxietileno, (por ejemplo lauril eter polioxietileno [Brij 30]), monolaurato dietilenglicol, oleato trietanolamina, oleato de sodio, oleato de potasio, oleato de etilo, acido oleico, laurato de etilo, lauril sulfato de sodio, Pluronic F 68, Poloxamero 188, y/o combinaciones de los mismos.

En determinadas realizaciones, el proceso comprende adicionalmente un sulfato (por ejemplo, por ejemplo, bisulfato de sodio). Por ejemplo, cuando se utiliza bencilamina como la molecula donante amino, bisulfato de sodio reacciona con el subproducto benzaldehfdo para formar un aducto insoluble de bisulfito.

En determinadas realizaciones, el proceso comprende adicionalmente una enzima de deshidrogenasa (por ejemplo, una deshidrogenasa de alcohol de levadura (YADH) tal como de Saccharomyces cerevisiae). Por ejemplo, cuando se utiliza isopropil amina como la molecula donante amino, una enzima YADH convierte el subproducto de acetona a isopropanol, cambiando por lo tanto el equilibrio y dirigiendo la reaccion a terminacion (vease Cassimjee et al., Chem Comm (2010) 46:5569-5571).

Realizaciones Adicionales

En determinadas realizaciones, se proporciona un proceso para preparar un compuesto de la formula (Rj-(II-a):

5

10

15

20

25

30

35

40

imagen65

o una sal del mismo;

de un compuesto de la formula (I-a):

imagen66

o una sal del mismo; en donde:

R1 es H, aralquilo, o -CO2R16;

R16 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo o - [C(R20)2]p-R21 en donde p es 0-6;

R21 es -OR22, -N(R22)C(=O)R22, -N(R22)C(=O)OR22, -N(R22)SO2(R22),-C(=O)R22N(R22)2, -OC(=O)R22N(R22)(R22), - SO2N(R22)(R22), -N(R22)(R22), -C(=O)OR22,-C(=O)N(OH)(R22), -OS(O)2OR22, -S(O)2OR22, -OP(=O)(OR22)(OR22),- N(R22)p(o)(OR22)(oR12), o -P(=O)(OR22)(OR22); y R22 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo; o cualesquiera dos ocurrencias de R22 en el mismo sustituyente se toman juntas para formar un anillo opcionalmente sustituido de 4-8 miembros; el proceso comprende poner en contacto un compuesto de la formula (I-a) o una sal del mismo, una molecula donante amino, y una enzima transaminasa de amina omega en una solucion para proporcionar un compuesto de la formula ('Rj-(II-a) o una sal del mismo.

En determinadas realizaciones, R1 es H, aralquilo, o -CO2R16

En determinadas realizaciones, R1 es H.

En determinadas realizaciones, R1 es aralquilo.

En determinadas realizaciones, la molecula donante amino es una molecula donante de amino quiral. En determinadas realizaciones, la molecula donante de amino quiral es (R)-metilbencilamina o una sal del mismo. En otras realizaciones, la molecula donante de amino quiral es (S)-metilbencilamina o una sal del mismo.

En determinadas realizaciones, la enzima transaminasa amina es una enzima transaminasa de amina omega. En 5 determinadas realizaciones, la enzima transaminasa de amina omega es ATA-113 de Codexis, Inc. En determinadas realizaciones, la enzima transaminasa de amina omega esATA-117 de Codexis, Inc. En determinadas realizaciones, la enzima transaminasa de amina omega es una transaminasa de amina omega de Vibrio fluvialis.

Etapas Adicionales

10

En determinadas realizaciones, el proceso comprende adicionalmente poner en contacto un compuesto de la formula (II):

imagen67

15 o una sal del mismo,

en donde R1 R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15 y X son como se define aqrn, con un agente de

sulfonilacion para proporcionar un compuesto de la formula (III):

imagen68

20

o una sal del mismo,

en donde R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15 y son como se define aqrn, y R23 es alquilo o arilo.

Los agentes de sulfonilacion de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, cloruro de bencenosulfonilo, anhndrido 25 bencenosulfonilo, cloruro p-toluenosulfonilo, anhndrido p-toluenosulfonilo, cloruro metanosulfonilo, y anhndrido metanosulfonilo.

En determinadas realizaciones, el agente de sulfonilacion es cloruro de bencenosulfonilo o anhndrido bencenosulfonilo, y R23 es bencenilo (es dear, -C6H5).

30

En determinadas realizaciones, el agente de sulfonilacion es cloruro p-toluenosulfonilo o anhndrido p-toluenosulfonilo, y R23 es toluenilo (es dedr, -C6H4(p-CH3)).

En determinadas realizaciones, el agente de sulfonilacion es cloruro metanosulfonilo o anhfdrido metanosulfonilo, y R23 35 es metilo (es dedr, -CH3).

En determinadas realizaciones, el compuesto de la formula (II) es:

5

imagen69

o una sal del mismo, y el compuesto de la formula (III) es:

imagen70

o una sal del mismo,

en donde R1 y R23 son como se define aqm.

10

En determinadas realizaciones, el compuesto de la formula (II) es:

imagen71

15 o una sal del mismo,

y el compuesto de la formula (III) es:

5

10

15

20

25

imagen72

o una sal del mismo,

en donde R1 y R23 son como se define aqm.

En determinadas realizaciones, R1 es H.

En determinadas realizaciones, R1 es aralquilo.

En determinadas realizaciones, R1 es -CO2R16.

En determinadas realizaciones en donde R1 es aralquilo o -CO2R16, el proceso comprende adicionalmente desproteger el compuesto de la formula (III) en donde R1 es aralquilo o -CO2R16 para proporcionar un compuesto de la formula (III) en donde R1 es H. Los metodos de desproteccion de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, condiciones de reduccion, tal como hidrogenacion.

Por ejemplo, en determinadas realizaciones, el proceso comprende adicionalmente desproteger el compuesto de la formula ('R^-(IM-a):

imagen73

o sal del mismo,

en donde R1 es aralquilo o -CO2R16, para proporcionar un compuesto de la formula ('R^-(IM-b):

imagen74

5

10

15

20

25

30

o sal del mismo,

en donde R23 es como se define aqm.

Ejemplificacion

La presente divulgacion ahora se describe de manera general, se entendera mas facilmente mediante referencia a los siguiente ejemplos, que se incluyen unicamente para propositos de ilustracion y no pretenden limitar la descripcion aqm.

Terminacion Enzimatica del Compuesto (I-a)

imagen75

Materiales y Metodos

Enzimas. Las enzimas transaminasa amina se compran de fuentes comercialmente disponibles, almacenadas a -20 °C, y se utilizan como se recibe: ATA-113 (Codexis, Redwood City, CA; Lote no. 104020902); ATA-117 (Codexis, Redwood City, CA; Lote no. 104020902); transaminasa omega de Vibrio fluvialis (Fluka; cat. no 08374); transaminasa glutamato piruvato (Fluka); transaminasa de rango amplio (Fluka).

Coenzimas. Las coenzimas utilizadas durante la investigacion incluyen: deshidrogenasa L-alanina (LADH, Sigma, no. A7653-100U), deshidrogenasa formiato (FDH, Codexis, FDH-101) y mezcla de reductasa de piruvato (PRM-102, Codexis), que es una mezcla deshidrogenasa lactato (LDH), deshidrogenasa glucosa (GDH), glucosa y NAD+.

pH. Se utilizan los siguientes reguladores durante la investigacion: regulador de fosfato de sodio 100 mM (pH 7; Fluka no. 82637); regulador de fosfato de sodio 20 mM (pH 7.5; Fluka, no. 82592); regulador de fosfato de sodio 20 mM (pH 8; Fluka, no. 82593).

Metodo HPLC 1. Columna C18 de simetna 4.6 x 150 mm; mdice de flujo 1.5 mL/min; fase movil A = TFA al 0.1 % en agua; fase movil B = TFA al 0.1 % en acetonitrilo; inyeccion de 10 mL; temperatura de columna 40 °C; longitud de onda de deteccion = 215 nm (todas las especies). Tiempo de retencion del compuesto (II-a) (R1 = H: S-(II-a) = 5.9 min; R-(II-a), = 6.8 min).

Gradiente del Metodo HPLC 1:

Tiempo (minutos): % de fase movil A % de fase movil B

0: 90 10

1.0: 90 10

10.0: 40 60

11.0: 5 95

12.0: 5 95

5

10

15

20

25

30

35

Tiempo (minutos): % de fase movil A % de fase movil B

13.0: 90 10

15.0: 90 10

Metodo HPLC 2. Columna XBridge C8 4.6 x 75 mm; mdice de flujo 1.0 mL / min; fase movil A = regulador de formiato de amonio 10 mM, pH 3.8; fase movil B = acido formico al 0.05% en acetonitrilo; inyeccion 5 pL; temperature de columna 40 °C; longitud de onda de deteccion = 215 nm (todas las especies). Tiempo de retencion del compuesto (II-a) (R1 = Bn: S- (Il-a) = 7.0 min; R-(II-a) = 7.5 min).

Gradiente del Metodo HPLC 2:

Tiempo (minutos): % de fase movil A % de fase movil B

0: 80 20

2: 80 20

16: 5 95

18: 5 95

18.1: 80 20

20: 80
20

Metodo HPLC 3. Columna Eclipse 3CDB-C8 4.6 x 50 mm; mdice de flujo 1.5 mL/min; fase movil A = TFA al 0.1 % en agua; fase movil B = TFA al 0.1 % en acetonitrilo; inyeccion de 10 pL; temperatura de columna 40 °C; longitud de onda de deteccion = 215 nm (todas las especies). Tiempo de retencion del compuesto (II-a) (R1 = Cbz: S-(II-a) = 6.0 min; R-(II- a) = 6.1 min).

Gradiente del Metodo HPLC 3:

Tiempo (minutos): % de fase movil A % de fase movil B

0: 70 30

2.0: 70 30

8.0: 0 100

10.0: 0 100

12.0: 70 30

15.0: 70 30

Metodos Experimentales Generales

Metodo A: Se agregan a un frasco el compuesto (I-a), una solucion regulada de fosfato de sodio, fosfato piridoxal 1 mM (PLP), una enzima transaminasa amina, una molecula donante amino, PRM-102 y, opcionalmente, un cosolvente. El frasco se tapa y la reaccion se agita a 30 °C durante 72 horas. La mezcla de reaccion luego se liofiliza y el residuo se vuelve a disolver en metanol (2 mL). Una parte de 100 pL de la solucion de metanol se filtra y se analiza mediante HPLC. Los resultados de los Experimentos 1-8 utilizando el Metodo A se resumen en la Tabla 6.

Metodo B: Se agregan a un frasco el compuesto (I-a), una solucion regulada de fosfato de sodio, fosfato piridoxal 1 mM (PLP), enzima transaminasa amina, D-alanina, formiato de amonio (NH4CO2H), solucion de deshidrogenasa L-alanina (LADH) (8.05 U/mL), solucion de deshidrogenasa formiato (FDH) (10 U/mL), nAd (1 mM) y un cosolvente. El frasco se tapa y la reaccion se agita a 30 °C durante 72 horas. La mezcla de reaccion luego se liofiliza y el residuo se vuelve a disolver en metanol (2 mL). Una parte de 100 pL de la solucion de metanol se filtra y se analiza mediante HPLC. Los resultados de los Experimentos 1-10 utilizando el Metodo B se resumen en la Tabla 7.

Metodo C: Se agregan a un frasco el compuesto (I-a), una solucion regulada de fosfato de sodio, fosfato piridoxal (PLP) (0.5 mM a 1 mM), una enzima transaminasa amina, una molecula donante amino, y, opcionalmente, un cosolvente y PRM- 102. El frasco se tapa y la reaccion se agita a 37 °C durante 24 horas a aproximadamente 6 dfas (144 horas). La mezcla

5

10

15

20

25

30

35

de reaccion luego se liofiliza y el residuo se vuelve a disolver en metanol (2 mL). Una parte de 100 pL de la solucion de metanol se filtra y se analiza mediante HPLC. Los resultados de los Experimentos 1-28 utilizando el Metodo C se resumen en la Tabla 8.

Metodo D: Se agregan a un frasco el compuesto (I-a), una solucion regulada de fosfato de sodio, fosfato piridoxal (PLP) (0.5 mM), una enzima transaminasa amina, una molecula donante amino (5 equivalentes), PRM-102, y, opcionalmente, un cosolvente. El frasco se tapa y la reaccion se agita a 37 °C durante 24 horas a aproximadamente 7 dfas (168 horas). Una parte de 100 pL de la mezcla de reaccion se diluye con 1 volumen de MeOH y se analiza mediante HPLC. Los resultados de los Experimentos 1-13 utilizando el Metodo D se resumen en la Tabla 9.

Metodo E: Se agregan a un frasco el compuesto (I-a), una solucion regulada de fosfato de sodio, fosfato piridoxal (PLP) (0.5 mM), una enzima transaminasa amina, L-alanina (5 equivalentes), PRM-102, y metanol (10% v/v). El frasco se tapa y la reaccion se agita a 37 °C durante 24 horas a aproximadamente 7 dfas (168 horas). Una parte de 100 pL de la mezcla de reaccion se diluye con 1 volumen de MeOH y se analiza mediante HPLC. Los resultados de los Experimentos 1-5 utilizando el Metodo E se resumen en la Tabla 10.

Metodo F: Se agregan a un frasco el compuesto (I-a), una solucion regulada de fosfato de sodio (pH = 7.5), fosfato piridoxal (PLP) (0.5 mM), una enzima transaminasa amina, L-alanina (5 equivalentes), PRM-102, y metanol (10% v/v). El frasco se tapa y la reaccion se agita a 37 °C durante 24 horas a aproximadamente 7 dfas (168 horas). El pH de la capa acuosa se supervisa al inicio y durante el curso de la reaccion y si es necesario, se ajusta a 7.5 utilizando 0.1 M solucion de NaOH. Una parte de 100 pL de la mezcla de reaccion se diluye con 1 volumen de MeOH y se analiza mediante HPLC. Los resultados de los Experimentos 1-9 utilizando el Metodo F se resumen en la Tabla 11.

Metodo G: El compuesto (I-a), una solucion regulada de fosfato de sodio (pH = 7.5), fosfato piridoxal (PLP) (0.5 mM), una enzima transaminasa amina, L-alanina (5 equivalentes), PRM-102, un aditivo (100% peso/peso) y metanol (10% v/v) se agregan a un frasco. El frasco se tapa y la reaccion se agita a 37 °C durante 24 horas a aproximadamente 7 dfas (168 horas). Una parte de 100 pL de la mezcla de reaccion se diluye con 1 volumen de MeOH y se analiza mediante HPLC. Los resultados de los Experimentos 1-5 utilizando el Metodo G se resumen en la Tabla 12.

Metodo H: Se agregan a un frasco el compuesto (I-a), una solucion regulada de fosfato de sodio (pH = 7.5), fosfato piridoxal (PLP) (0.5 mM), una enzima transaminasa amina, L-alanina (5 equivalentes), PRM-102, un cosolvente (10 a 20% v/v). El frasco se tapa y la reaccion se agita a 37 °C durante 24 horas a aproximadamente 7 dfas (168 horas). Una parte de 100 pL de la mezcla de reaccion se diluye con 1 volumen de MeOH y se analiza mediante HPLC. Los resultados de los Experimentos 1-12 utilizando el Metodo H se resumen en la Tabla 13.

Tabla 6. Metodo A

: (l-a) Regulador PH Solvente Go PLP (mM) Enzima Donante amina PRM-102 (mg) Tiempo (hrs) 2 % de Conversion

1: 6.5 mg (R1 = H, sal de citrato) 100 mM (0.85 mL) 7 MeOH (0.15 mL) 1 ATA-117 (3 mg) D-alanina (4.5 mg) 39 72 (S) 3 %

2: 6.5 mg (R1 = H, sal de citrato) 100 mM (0.85 mL) 7 CF3CH2OH (0.15mL) 1 ATA-117 (3 mg) D-alanina (4.5 mg) 39 72 — n/a

3: 20 mg (R1 = H, sal de citrato) 100 mM (2 mL) 7 ninguno 1 ATA-117 (3 mg) D-alanina (95 mg) 60 72 (S) 3%

4: 20 mg (R1 = H, sal de citrato) 100 mM (1.8 mL) 7 MeOH (0.2 mL) 1 ATA-117 (10 mg) D-alanina (11 mg) 60 72 (S) 2%

5: 20 mg (R1 = H, sal de citrato) 100 mM (1.8 mL) 7 MeOH (0.2 mL) 1 transaminasa de rango amplio (1.7 mg) D-alanina (11 mg) 60 72 — n/a

6: 20 mg (R1 = H, sal de citrato) 100 mM (1.8 mL) 7 MeOH (0.2 mL) 1 transaminasa de glutamato piruvato (1 mg) D-alanina (11 mg) 60 72 — n/a

7: 20 mg (R1 = H, sal de citrato) 100 mM (2 mL) 7 ninguno 1 ATA-113 (10 mg) L-alanina (9.5 mg) 60 72 (S) 15 %

8: 70 mg (R3 = H, sal de citrato) 100 mM (1.8 mL) 7 MeOH (0.2 mL) 1 ATA-113 (10 mg) L-alanina (11 mg) 60 72 (S) 5%

Tabla 7. Metodo B

: (l-a) Regulador PH cosolvente PLP (mM) enzima donante NH4CO2H (mg) FDH (mL) LADH (mL) NAD (mM) 2 %

1: 3.5 mg (R1 = H, sal de citrato) 100 mM (0.85 mL) 7 DMSO (0.15 mL) 1 ATA-117 (3 mg) D-alanina (9.5 mg) 4 25 10 1 ... n/a

2: 3-5 mg (R1 = H, sal de citrato) 100 mM (0.85 mL) 7 MeOH (0.15 mL) 1 ATA-117 (3mg) D-alanina (9.5 mg) 4 25 10 1 (S) 1 %

3: 3.5 mg (R1=H, sal de citrato) 20 mM (0.85 mL) 7.5 DMSO (0.15 mL) 1 ATA-117 (3 mg) D-alanina (9.5 mg) 4 25 10 1 ... n/a

4: 3.5 mg (R1 = H, sal de citrato) 20 mM (0.85 mL) 7.5 MeOH (0.15 mL) 1 ATA-117 (3 mg) D-alanina (9.5 mg) 4 25 10 1 ... n/a

5: 6.5 mg (R1 = H, sal de citrato) 100 mM (0.85 mL) 7 CF3CH2OH (0.15 mL) 1 ATA-117 (3 mg) D-alanina (13 mg) 6 50 20 1 ... n/a

6: 6.5 mg (R1 = H, sal de citrato) 100 mM (0.85 mL) 7 MeOH (0.15 mL) 1 ATA-117 (3 mg) D-alanina (22 mg) 9 50 20 1 (S) 5 %

7: 3.5 mg (R1 = H, sal de citrato) 100 mM (0.85 mL) 7 MeOH (0.15 mL) 1 ATA-113 (1.3 mg) D-alanina (9.5 mg) 4 22 8.8 1 (S) 8 %

8: 3.5 mg (R1 = H, sal de citrato) 100 mM (0.85 mL) 7 DMSO (0.15 mL) 1 ATA-113 (1.3 mg) D-alanina (9.5 mg) 4 22 8.8 1 (S) 37 %

9: 10 mg (R1 = H, sal de citrato) 100 mM (8.5 mL) 7 DMSO (1.5 mL) 1 ATA-113 (13 mg) D-alanina (95 mg) 40 216 86 1 (S) 12%

10: 3.5 mg (R1 = H, sal de citrato) 100 mM (0.85 mL) 7 DMSO (13 mL); Et20 (0.2 mL) 1 ATA-113 (1.3 mg) D-alanina (12 mg) 5 22 8.8 1 (S) 10 %

Tabla 8. Metodo C

: (l-a) Regulador PH Cosolvente PLP (mM) Enzima Donante amina PRM-102 Tiempo (hrs) 2 % de Conversion

1: 15 mg (R1 = H) 100 mM (1.8 mL) 7 MeOH (0.2 mL) 1 ATA-117 (10 mg) D-alanina (13 mg) 60 24 (S) 2%

2: 15 mg (R1 = H) 100 mM (1.8 mL) 7 MeOH (0.2 mL) 1 ATA-113 (10 mg) L-alanina (13 mg) 60 24 (S) 10%

3: 1 mg (R1 = H) 20 mM (1.2 mL) 7.5 MeOH (0.12 mL) 0.5 ATA-113 (2 mg) (5)-metil bencil amina (1.4 ML) ninguno 72 (S) 9%

4: 1 mg (R1 =H) 20 mM (1.2 mL) 7.5 MeOH (0.12 mL) 0.5 ATA-113 (2 mg) (S)-metil bencil amina (1.4 ML) 30 72 (S) 41%

5: 8.5 mg (R1 = H) 20 mM (10 mL) 7.5 MeOH (1 mL) 1 ATA-113 (20 mg) (S)-metil bencil amina (13 ML) 300 72 (S) 42%

6: 1 mg (R1 = H) 20 mM (1.2 mL) 7.5 MeOH (0.12 mL) 0.5 ATA-117 (2 mg) (S)-metil bencil amina (1.4 ML) ninguno 72 - n/a

7: 1 mg (R1 = H) 20 mM (1.2 mL) 7.5 MeOH (0.12 mL) 0.5 ATA-117 (2 mg) (5)-metil bencil amina (1.4 ML) 30 72 - n/a

8: 1 mg (R1 = H) 20 mM (1.2 mL) 7.5 MeOH (0.12 mL) 0.5 ATA-117 (4 mg) (S)-metil bencil amina (1.4 ML) 60 72 - n/a

9: 8.5 mg (R1 = H) 20 mM (10 mL) 7.5 MeOH (1 mL) 0.5 ATA-117 (10 mg) (S)-metil bencil amina (13 ML) 150 72 - n/a

10: 8.5 mg (R1 = H) 20 mM (9 mL) 8 MeOH (1 mL) 0.5 ATA-117 (20 mg) (S)-metil bencil amina (13 ML) 300 72 - n/a

11: 6.4 mg (R1 = H) 20 mM (9 mL) 8 MeOH (1 mL) 0.5 ATA-117 (20 mg) (S)-metil bencil amina (13 ML) 300 72 - n/a

12: 4.3 mg (R1 = H) 20 mM (9 mL) 8 MeOH (1 mL) 0.5 ATA-117 (20 mg) (S)-metil bencil amina (13 ML) 300 72 - n/a

13: 2.1 mg (R1 = H) 20 mM (9 mL) 8 MeOH (1 mL) 0.5 ATA-117 (20 mg) (S)-metil bencil amina (13 ML) 300 72 - n/a

14: 1.6 mg (R1 = H) 20 mM (1.2 mL) 7.5 ninguno 1 Vibrio fluvialis (55 ML) (S)-metil bencil amina (13 ML) ninguno 72 (R) 2%

Tabla 8. Metodo C

15: 1 mg (R1 = H) 20 mM (1.2 mL) 7.5 MeOH (0.12 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (100 |jL) (R)-metil bencil amina (1.4 ML) ninguno 72 (R) 10%

16: 4.3 mg (R1 = H) 20 mM (4.95 mL) 7.5 MeOH (0.55 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (155 |jL) (R)-metil bencil amina (6.5 ML) 140 72 (R) 15 %

17: 1.6 mg (R1 = H) 20 mM (2 mL) 7.5 ninguno 0.5 Vibrio Fluvialis (100 |jL) (S)-metil bencil amina (1.4 ML) ninguno 72 (R) 3%

18: 8.5 mg (R1 = H) 20 mM (10 mL) 7.5 MeOH (1 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (100 |jL) (Ty-metil bencil amina (13 ML) ninguno 72 (R) 10 %

19: 3.5 mg (R1 = H) 20 mM (10 mL) 7.5 MeOH (1 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (310 |jL) (S)-metil bencil amina (13 ML) ninguno 72 (R) 10%

20: 8.5 mg (R1 = H) 20 mM (10 mL) 7.5 MeOH (1 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (310 |jL) (S)-metil bencil amina (13 ML) 275 72 (R) 10%

21: 14 mg (R1 = H, sal de citrato) 20 mM (10 mL) 7.5 MeOH (1 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (310 |jL) (R)-metil bencil amina (13 ML) 300 72 (R) 17%

22: 7 mg (R1 = H, sal de citrato) 20 mM (5 mL) 7.5 MeOH (0.5 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (155 |jL) (R)-metil bencil amina (7 pL) 150 144 (R) 28%

23: 5.5 mg (R1 = Bn) 20 mM (5 mL) 7.5 EtOAC (0.5 mL) 1 Vibrio Fluvialis (150 |jL) (R)-metil bencil amina (7 pL) 150 72 — n/a

24: 5.5 mg (R1 = Bn) 20 mM (5 mL) 7.5 ciclohexano (0.3 mL) 1 Vibrio Flmialis (150 |jL) (R)-metil bencil amina (7 pL) 150 72 — n/a

25: 8.5 mg (R1 = Bn) 20 mM (10 mL) 7 MeOH (1 mL) 0.5 ATA-113 (20 mg) (S)-metil bencil amina (13 ML) 300 72 (S) 1.7%

26: O P° CD cn ^3 (Q II 20 mM (10 mL) 7 MeOH (1 mL) 0.5 ATA-113 (20 mg) (S)-metil bencil amina (13 ML) 300 72 (S) 2%

27: 8.5 mg (R1 = Bn) 20 mM (10 mL) 7 MeOH (1 mL) 0.5 ATA-117 (20 mg) (S)-metil bencil amina (13 ML) 300 72 ... n/a

28: 8.5 mg (R1 = Cbz) 10 mM (10 mL) 7 MeOH (1 mL) 0.5 ATA-117 (20 mg) (S)-metil bencil amina (13 ML) 300 72 ... n/a

Tabla 9. Metodo D

: (l-a) Regulador PH Cosolvente PLP (mM) Enzima Donante amina (5 equiv.) PRM- 102 (mg) Tiempo (hrs) 2 % de Conversion

1: 14 mg (R1 = H, sal de citrato) 20 mM (9 mL) 7.0 MeOH (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (310 |jL) L-alanina 300 mg 168 (R) 16.1%

2: 14 mg (R1 = H, sal de citrato) 20 mM (9 mL) 7.0 MeOH (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (310 |jL) D-alanina 300 mg 168 (R) 12.7%

3: 14 mg (R1 = H, sal de citrato) 20 mM (9 mL) 7.0 MeOH (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (310 |jL) R-Metilbencilamina 300 mg 168 (R) 14.1%

4: 14 mg (R1 = H, sal de citrato) 20 mM (9 mL) 7.0 MeOH (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (310 |jL) S-Metil bencilamina 300 mg 168 (R) 7.6%

5: 14 mg (R1 = H, sal de citrato) 20 mM (9 mL) 7.0 MeOH (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (310 |jL) 2-aminoindano 300 mg 168 (R) 4.1%

6: 14 mg (R1 = H, sal de citrato) 20 mM (9 mL) 7.0 MeOH (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (310 |jL) S-1-Aminoindano 300 mg 168 — n/a

7: 14 mg (R1 = H, sal de citrato) 20 mM (9 mL) 7.0 MeOH (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (310 |jL) R-1-Aminoindano 300 mg 168 (R) 5.1%

8: 14 mg (R1 = H, sal de citrato) 20 mM (9 mL) 7.0 MeOH (1.0 mL) - 0.5 Vibrio Fluvialis (310 |jL) R-2-Amino-1 -propanol 300 mg 168 (R) 3.8%

9: 14 mg (R1 = H, sal de citrato) 20 mM (9 mL) 7.0 MeOH (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluaialis (310 pL) S-2-Amino-1 -propanot 300 mg 168 (R) 4.6%

10: 14 mg (R1 = H, sal de citrato) 20 mM (9 mL) 7.0 MeOH (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (310 |jL) (1R, 2 S)-cis-1 -Am in o-2- indanol 300 mg 168 - n/a

Tabla 9. Metodo D

11: 14 mg (R1 = H, sal de citrato) 20 mM (9 mL) 7.0 MeOH (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (310 |jL) (1R, 2R)-frans-1-Amino- 2-indanol 300 mg 168 - n/a

12: 14 mg (R1 = H, sal de citrato) 20 mM (9 mL) 7.0 MeOH (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (310 |jL) 1-R-Amino-6- hidroxiindanamina 300 mg 168 - nia

13: 14 mg (R1 = H, sal de citrato) 20 mM (9 mL) 7.0 MeOH (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (310 |jL) Isopropilamina 300 mg 168 (R) 8.4%

4^

00

Tabla 10. Metodo E

: (l-a) Regulador PH Cosolvente PLP (mM) Enzima Donante amina PRM-102 (mg) Tiempo (hrs) 2 % de Conversion

1: 14 mg (R1 = H, sal de citrato) 20 mM (9 mL) 7.0 MeOH (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (155 |jL) L-alanina (10 mg) 300 mg 168 (R) 6.4%

2: 14 mg (R1 = H, sal de citrato) 20 mM (9 mL) 8.0 MeOH (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (155 |jL) L-alanina (10 mg) 300 mg 168 (R) 14.9%

3: 14 mg (R1 = H, sal de citrato) 20 mM (9 mL) 9.0 MeOH (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (155 |jL) L-alanina (10 mg) 300 mg 168 (R) 10.2%

4: 14 mg (R1 = H, sal de citrato) 100 mM (9 mL) 8.1 MeOH (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (155 |j L) L-alanina (10 mg) 300 mg 168 (R) 3.6%

5: 14 mg (R1 = H, sal de citrato) 100 mM (9 mL) 7.1 MeOH (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (155 |j L) L-alanina (10 mg) 300 mg 168 (R) 7.9%

4^

CD

Tabla 11. Metodo F

1: 14 mg(R1= H, sal de citrato) 20 mM (9 mL) 7.5 MeOH (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (155 pL) D-alanina (10 mg) 300 mg 168 (R) 12.7%

2: 14 mg(R1= H, sal de citrato) 20 mM (9 mL) 7.5 MeOH (1.0 mL) ninguno Vibrio Fluvialis (155 pL) D-alanina (10 mg) 300 mg 168 - n/a

3: 14 mg(R1= H, sal de citrato) 20 mM (9 mL) 7.5 MeOH (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (155 pL) L-alanina (10 mg) 300 mg 168 (R) 16.1%

4: 14 mg(R1= H, sal de citrato) 20 mM (9 mL) 7.5 MeOH (1.0 mL) ninguno Vibrio Fluvialis (155 pL) L-alanina (10 mg) 300 mg 168 - n/a

5: 14 mg(R1= H, sal de citrato) 20 nM (9 mL) 7.5 MeOH (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (310 pL) L-alanina (10 mg) 300 mg 168 (R) 31%

6: 14 mg(R1= H, sal de citrato) 20 mM (9 mL) 7.5 MeOH (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (310 pL en el dia 1, 155 |jL en el dia 4) L-alanina (10 mg) 300 mg 168 (R) 41.1%

7: 14 mg(R1= H, sal de citrato) 20 mM (9 mL) 7.5 MeOH (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis, TANDA NUEVA (310 |jL en el dia 1, 155 |jL en el dia 6) L-alanina (10 mg) 300 mg 168 (R) 48.7%

8: 45 mg(R1= H, sal de citrato) 20 mM (9 mL) 7.5 MeOH (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis TANDA NUEVA (310 |jL) L-alanina (10 mg) 300 mg 168 (R) 8.6%

9: 14 mg(R1= H, sal de citrato) 20 mM (9 mL) 7.5 MeOH (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis, TANDA NUEVA (310 |jL) L-alanina (20 mg) 300 mg 168 (R) 14.5%

Tabla 12. Metodo G

: (l-a) Regulador Aditivos Cosolvente PLP (mM) Enzima Donante amina PRM-102 (mg) Tiempo (hrs) 2 % de Conversion

1: 14 mg (R1 = H, sal de citrato) 20 mM (9 mL) Resina Amberlite (100 % en peso) MeOH (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (310 pL) L-alanina (10 mg) 300 mg 96 (R) 3.7%

2: 14 mg (R1 = H, sal de citrato) 20 mM (9 mL) Resina Dowex (100 % en peso) MeOH (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (310 pL) L-alanina (10 mg) 300 mg 96 — n/a

3: 14 mg (R1 = H, sal de citrato) 20 mM (9 mL) (3-Ciclodextrina (100 % en peso) MeOH (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (310 pL) L-alanina (10 mg) 300 mg 96 (R) 14.0

4: 14 mg (R1 = H, sal de citrato) 20 mM (9 mL) y-Ciclodextrina (100 % en peso) MeOH (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (310 pL) L-alanina (10 mg) 300 mg 96 (R) 11.4

5: 14 mg (R1 = H, sal de citrato) 20 mM (9 mL) Bisulfito de sodio (100 % en peso) MeOH (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (310 pL) bencilamina (10 mg) 300 mg 96 — n/a

Tabla 13. Metodo H

: (l-a) Regulador PH Cosolvente PLP (mM) Enzima Donante amina PRM- 102 (mg) Tiempo (hrs) 2 % de Conversion

1: 14 mg(R1 = H, sal de citrato) 20 mM (9 mL) 7.5 ninguno 0.5 Vibrio Fluvialis (155 pL) L-alanina (10 mg) 300 mg 168 (R) 6.4%

2: 14 mg(R1 = H) 20 mM (9 mL) 7.5 MeOH (1.0 mL) (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (155 pL) L-alanina (10 mg) 300 mg 168 (R) 14.9%

3: 14 mg(R1 = H) 20 mM (9 mL) 7.5 DMSO (1.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (155 pL) L-alanina (10 mg) 300 mg 168 (R) 8.2%

4: 14 mg(R1 = H) 100 mM (9 mL) 7.5 Heptano (2.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (155 p L) L-alanina (10 mg) 300 mg 168 — n/a

5: 14 mg(R1 = H) 100 mM (9 mL) 7.5 Heptano (2.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (155 p L) R-Metil bencilamina 300 mg 168 — n/a

6: 14 mg(R1 = H) 100 mM (9 mL) 7.5 Tolueno (2.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (155 p L) L-alanina (10 mg) 300 mg 168 — n/a

7: 14 mg(R1 = H) 100 mM (9 mL) 7.5 Tolueno (2.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (155 p L) R-Metil bencilamina 300 mg 168 — n/a

8: 14 mg(R1 = H) 100 mM (9 mL) 7.5 2-Metil tetrahidrofurano (2.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (155 p L) L-alanina (10 mg) 300 mg 168 — n/a

9: 14 mg(R1 = H) 100 mM (9 mL) 7.5 2-Metil tetrahidrofurano (2.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (155 p L) R-Metil bencilamina 300 mg 168 — n/a

10: 14 mg(R1 = H) 100 mM (9 mL) 7.5 Acetato de etilo (2.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (155 p L) L-alanina (10 mg) 300 mg 168 (R) 12.9% (capa acuosa) 1.1% (capa organica)

Tabla 13. Metodo H

11: 14 mg (R1 = H) 100 mM (9 mL) 7.5 Hexanos (2.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (155 p L) L-alanina (10 mg) 300 mg 168 (R) 4.2% (capa acuosa) 1.6% (capa organica)

12: 14 mg (R1 = H) 100 mM (9 mL) 7.5 Perfluorohexano (2.0 mL) 0.5 Vibrio Fluvialis (155 p L) L-alanina (10 mg) 300 mg 168 — n/a

cn

co

5

10

15

20

25

30

35

40

Leyenda de las Tablas

PLP: fosfato piridoxal

PRM 102: Mezcla de reductasa de piruvato disponible de Codexis, Inc.

(R): isomero preferiblemente generado (R)

(S): isomero preferiblemente generado (S)

%: Porcentaje de conversion del isomero preferido segun se determina mediante HPLC

n/a: No se detecta producto mediante HPLC

Me: metilo, -CH3

Bn: bencilo, -CH2C6H5

Cbz: carbobenciloxi, -C(=O)OCH2C6H5

DMSO: dimetilsulfoxido

MeOH: metanol

EtOAc: acetato de etilo

Ejemplo: Evaluacion de Transaminasas Candidato. Se evaluan transaminasas candidato utilizando las condiciones de reaccion descritas en el Metodo A anterior (vease Tabla 6). Estos experimented se llevan a cabo utilizando PRM-102 (en forma de polvo) como el sistema de coenzima y D-alanina o L-alanina como la molecula donante amino. En todas menos en dos de las series, se emplea un cosolvente miscible en agua (metanol o trifluoroetanol (CF3CH2OH)). Como se muestra en la Tabla 6, se observan los % de conversiones de 5% y 15% cuando la transaminacion se realiza en la presencia de la enzima transaminasa de amina omega ATA-113, y se observan % de conversiones de 2% y 3% cuando la transaminacion se realiza en la presencia de la enzima transaminasa de amina omega ATA-117. Las enzimas de transaminasa de amina omega ATA-117, conocidas de manera general son una transaminasa selectiva (R), que produce el compuesto (S)-(II-a) a diferencia del compuesto (R)-(II-a). ATA-113, conocido de manera general es una transaminasa selectiva (S), que produce el compuesto (S)-(II-a). El descriptor “n/a” indica que el producto de transaminacion (II-a) no se detecta mediante HPLC en la mezcla de reaccion.

Ejemplo: Evaluacion de mezclas de coenzima FDH/LADH/NAD. Las mezclas candidato de la coenzimas FDH, LADH y NAD se evaluan utilizando las condiciones de reaccion que se describe en el Metodo B anterior (vease Tabla 7). Estos experimentos se llevan a cabo utilizando ATA-117 y aTA-113 como la enzima transferasa amina; D-alanina como la molecula donante amino; y DMSO, metanol o trifluoroetanol como el cosolvente. Como se muestra en la Tabla 7, los % de conversion de 1% a 37% se observan utilizando este sistema de coenzima. Adicionalmente, se logra transaminacion utilizando ATA-117 o ATA-113 como la enzima transaminasa. El descriptor “n/a” indica que el producto de transaminacion (II-a) no se detecta mediante HPLC en la mezcla de reaccion.

Ejemplo: Comparacion de transaminasa omega de Vibrio fluvialis con ATA-117 y ATA-113. La actividad de la transaminasa omega de Vibrio fluvialis se compara con las actividades de ATA-117 y ATA-113 utilizando las condiciones de reaccion que se describe en el Metodo C anterior (vease Tabla 8). Estos experimentos se llevan a cabo utilizando PRM-102 como el sistema de coenzima y una de las siguientes moleculas donantes amino: D-alanina, L-alanina, (S)-metil bencilamina y

(R) -metil bencilamina. Cuando se emplea ATA-117 o ATA-113 como la enzima transaminasa, se produce el compuesto

(S) -(IIa). Como se indica en la Tabla 8, esta estereoqmmica de producto (S) se obtiene con la molecula donante aminos D-alanina, L-alanina, y (S)-metil bencilamina. En contraste, cuando la transaminasa de amina omega de Vibrio fluvialis se emplea como la enzima transaminasa amina, se produce el compuesto (R)-(II-a). Como se indica en la Tabla 8, dicha estereoqmmica de producto se obtiene cuando se utiliza (R) o (S)-metil bencilamina como la molecula donante amino. El descriptor “n/a” indica que el producto de transaminacion (II-a) no se detecta mediante HPLC en la mezcla de reaccion.

Ejemplo: Evaluacion de moleculas donante amino candidatas. Las moleculas donante amino candidatas se evaluan utilizando las condiciones de reaccion que se describen en el Metodo D anterior (vease Tabla 9). Estos experimentos se llevan a cabo utilizando la transaminasa omega de Vibrio fluvialis; un regulador de fosfato 20 mM (pH = 7.0); y metanol como el cosolvente. Se prueban L-alanina, D-alanina, (R)-metilbencilamina, (S)-metilbencilamina, 2-aminoindano, (R)-1- aminoindano, (R)-2-amino- 1-propanol, (S)-2-amino-1-propanol, (1R, 2S)-cis-1-amino-2-indanol, (1R, 2R)-trans-1-amino- 2-indanol, 1-(R)-amino-6- hidroxiindanamina y isopropilamina. Como se indica en la Tabla 9, solo se observa el compuesto (R)-(II-a). L-alanina como molecula donante amino proporciona un % de Conversion de 16.1% durante un periodo de 7 dfas. El descriptor “n/a” indica que el producto de transaminacion (II-a) no se detecta mediante HPLC en la mezcla de reaccion.

5

10

15

20

25

30

35

40

Ejemplo: Evaluacion de pH de Reaccion del Candidato y Concentraciones del Regulador. El pH de reaccion del candidato y las concentraciones del regulador se evaluan utilizando las condiciones de reaccion que se describen en el Metodo E anterior (vease Tabla 10). Estos experimented se llevan a cabo utilizando reguladores con diferentes pH y molaridades. Como se muestra en la Tabla 10, se encuentra un regulador de fosfato 20 mM (que mantiene un pH = 8.0) para proporcionar un % de Conversion de 14.9%. Se encuentra que el aumento en la molaridad del regulador(100 mM) provoca la precipitacion del material de partida (I-a) y reduce la conversion al producto (R)-(II-a). El descriptor “n/a” indica que el producto de transaminacion (II-a) no se detecta mediante HPLC en la mezcla de reaccion.

La Tabla 11 muestra los resultados para reacciones de transaminacion conducidas a pH = 7.5. Estas reacciones se supervisan para cualquier cambio en el pH, y cualquier cambio en el pH de la mezcla de reaccion se ajusta utilizando solucion de hidroxido de sodio 0.1 N (Metodo F). Sin embargo, tambien se encuentra que la conversion es dependiente de la edad de la enzima. Se encuentra que una botella fresca de enzima aumenta % de conversion hasta 31% utilizando L-alanina durante un periodo de 7 dfas y 2 unidades/mg del compuesto de sustrato (I-a). Cuando la mezcla de reaccion se carga con una unidad adicional de enzima fresca al final del dia 6, la conversion mejora a 48.7%. El descriptor “n/a” indica que el producto de transaminacion (II-a) no se detecta mediante HPLC en la mezcla de reaccion.

Ejemplo: Evaluacion de Aditivos Candidato. Los aditivos candidato se evaluan utilizando las condiciones de reaccion que se describe en el Metodo G anterior (vease Tabla 12). Estos experimentos se llevan a cabo utilizando aditivos, tales como resinas, ciclodextrinas y sulfitos. Se detectan las resinas capaces de adsorber el compuesto del material de partida (I-a) asf como tambien el compuesto de producto (II-a). Adicionalmente, tambien se prueban p- y Y-ciclodextrinas que se conocen por solubilizar los compuestos organicos (% de conversiones de 14.0% y 11.4% se observan para p- y y- ciclodextrina, respectivamente). El descriptor “n/a” indica que el producto de transaminacion (II-a) no se detecta mediante HPLC en la mezcla de reaccion.

Ejemplo: Evaluacion de los Cosolventes Candidato. Los cosolventes candidato se evaluan utilizando las condiciones de reaccion que se describe en Metodo H anterior (vease Tabla 13). Para sistemas monofasicos, se encuentra que utilizando metanol como el cosolvente proporciona el % mayor de Conversion de aquellos probados. Para los sistemas bifasicos, se encuentra que utilizar acetato de etilo como el cosolvente proporciona el % mayor de Conversion de aquellos probaos. El descriptor “n/a” indica que el producto de transaminacion (II-a) no se detecta mediante HPLC en la mezcla de reaccion.

Sulfonilacion de ejemplo de los compuestos de la formula (II)

imagen76

El procedimiento se describe en Tremblay et al., “Discovery of a Potent and Orally Active Hedgehog Pathway Antagonist (IPI-926)” J. Med. Chem. (2009) 52:4400-4418, incorporado aqrn mediante referencia.

Una solucion de amina (R1 = CBz) (5.10 g, 9.09 mmol, 1 equiv) en diclorometano (60 mL) se trata con diisopropiletilamina (5.88 g, 45.5 mmol, 5.0 equiv), se enfna a 0 °C, y se trata con cloruro metanosulfonilo (2.08 g, 18.2 mmol, 2.0 equiv). La mezcla de reaccion se agita durante 30 min y se somete a particion entre bicarbonato de sodio acuoso saturado y acetato de etilo. La capa organica se separa, se seca sobre sulfato de sodio, y se concentra hasta secado para proporcionar un residuo crudo. El residuo se purifica utilizando cromatograffa de gel de silice (10-30% de EtOAc/hexanos) para proporcionar el producto sulfonilado N-Cbz. Se pone una suspension del producto aislado y 10% de paladio sobre carbono

(1.0 g) en 2-propanol (50 mL) bajo atmosfera de hidrogeno y se agita durante 4 h a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion luego se filtra en Celita y el filtrado se concentra hasta secado. El residuo luego se purifica utilizando cromatograffa de gel de sflice (0-5% de DCM/MeOH) para dar IPI-926 (4.06 g, 8.05 mmol, 95% durante dos etapas). RMN SH (400 MHz, CDC13) 6.90 (br s, 1H), 3.31 (dt, J= 10.6, 3.8 Hz, 1H), 3.20 (br s, 1H), 3.10 (dd, J=13.7, 4.5 Hz, 1H), 2.91 5 (s, 3H), 2.62 (dd, J=9.9, 7.6 Hz, 1H), 2.33 (br d, J=14.5 Hz,1H), 2.27-2.15 (m, 1H), 2.10 (dd, J=14.5, 6.9 Hz, 1H), 1.99

1.17 (m, 28H), 1.05 (q, J=11.6 Hz, 1H), 0.93 (d, J=7.4 Hz, 3H), 0.88 (d, J=6.6 Hz, 3H), 0.86 (s, 3H); RMN SC (100 MHz, CDCl3) 140.47, 124.53, 82.48, 76.97, 63.73, 54.08, 53.87, 50.12,49.98, 47.19, 44.73, 42.27, 42.10, 40.24, 37.55, 37.44, 36.04, 34.44, 31.87, 31.33, 30.46, 29.79, 28.37, 27.94, 26.26, 24.19, 22.70, 18.92, 10.19; m/z=505.29 [M+H]+; HPLC 99.1 a/a% a 215 nm.

10

Claims

5

10

15

20

25

30

35

REIVINDICACIONES

1. Un proceso para preparar un compuesto de la formula (II):

imagen1

o una sal del mismo;

de un compuesto de la formula (I):

imagen2

o una sal del mismo; en donde:

R1 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, haloalquilo, -OR16, -C(O)R16, -CO2R16, -SO2R16, - C(O)N(R17)(R17), -[C(R16)2]q-R16, -[(W)-N(R17)C(O)]qR16, -[(W)-C(O)]qR16, -[(W)- C(O)O]qR16, -[(W)-OC(O)]qR16, -[(W)-SO2]qR16, -[(W)-N(R17)SO2]qR16, -[(W)-C(O)N(R17)]qR17, -[(W)-O]qR16, -[(W)- N(R17)]qR16, o -[(w)-S]qR16; en donde W es un dirradical y q es 1, 2, 3, 4, 5, o 6;

cada R2 y R3 es, independientemente, H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, haloalquilo, halo, -Or16, -OR16,-N(R17)2, o -SR16, o R2y R3 tornados juntos forman un enlace doble o forman un grupo

imagen3

en donde Z es NR17, O, o C(R18)2;

R4 es independientemente H, halo, -OR16, -N(R17)2, o -SR16;

cada R5 y R6, es, independientemente, H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, halo, -OR16, -N(R17)2, o -SR16; o R5 y R6 tomados juntos con el carbono al que se unen forman C=O, C=S, C=N-OR17, C=N-R17, C=N-N(R17)2, o forman un anillo de 3-8 miembros opcionalmente sustituido;

cada R7, R8, R9, R10, R11, R12 y R13 es, independientemente, H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, halo, -OR16, -N(R17)2, o -SR16; o R10 y R11 tomados juntos, o R11 y R12 tomados juntos, forman un enlace doble o forman un grupo

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

imagen4

en donde Z es NR17, O, o C(R18))2;

cada R14 y R15 es, independientemente, H, halo, -OR16, -N(R17)2, o -SR16; o R14 y R15 tomados juntos con el carbono al que se unen forman C=O o C=S;

X es un enlace o el grupo -C(R19)2-; en donde cada R19 es, independientemente, H, alquilo, aralquilo, halo, -CN, -OR16, o -N(R17)2;

R16 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo o - [C(R20)2]p-R21 en donde p es 0-6; o cualesquiera dos ocurrencias de R16 en el mismo sustituyente se toman juntas para formar un anillo opcionalmente sustituido de 4-8 miembros;

R17 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, -C(=O)R20, - C(=O)OR20, -SO2R20, -C(=O)N(R20)2, o -[C(R20))2]p-R21 en donde p es 0-6; o cualesquiera dos ocurrencias de R17 en el mismo sustituyente se toman juntas para formar un anillo opcionalmente sustituido de 4-8 miembros;

R18 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, halo, -CN, -OR20, -OSi(R20)a,-C(=O)R20, -C(=O)OR20, -SO2R20 o -C(=O)N(R20)2;

R20 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, o heteroaralquilo; o cualesquiera dos ocurrencias de R20 en el mismo sustituyente se toman juntas para formar un anillo opcionalmente sustituido de 4-8 miembros;

R21 es -OR22, -N(R22)C(=O)R22, -N(R22)C(=O)OR22, -N(R22)SO2(R22),-C(=O)R22N(R22)2, -OC(=O)R22N(R22)(R22), - SO2N(R22)(R22), -N(R22)(R22), -C(=O)OR22, -C(=O)N(OH)(R22), -OS(O)2OR22, -S(O)2OR22, -OP(=O)(OR22)(OR22), - N(R22)P(O)(OR22)(OR22), o -P(=O)(OR22)(OR22); y

R22 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo; o cualesquiera dos ocurrencias de R22 en el mismo sustituyente se toman juntas para formar un anillo opcionalmente sustituido de 4-8 miembros; dicho proceso comprende poner en contacto un compuesto de la formula (I) o una sal del mismo, una molecula donante amino, y una enzima transaminasa de amina omega en una solucion para proporcionar un compuesto de la formula (II) o una sal del mismo, en donde el alquilo es un radical de hidrocarburo de cadena recta o ramificada, saturado que contiene entre uno y treinta atomos de carbono, el alquenilo es un radical de hidrocarburo de cadena recta o ramificada que tiene por lo menos un enlace doble carbono-carbono mediante el retiro de un unico atomo de hidrogeno, y que contiene entre dos y treinta atomos de carbono, el alquinilo es un radical de hidrocarburo de cadena recta o ramificada que tiene por lo menos un enlace triple carbono-carbono mediante el retiro de un unico atomo de hidrogeno, y que contiene entre dos y treinta atomos de carbono, el cicloalquilo es un sistema de anillo de hidrocarburo monodclico o bidclico saturado que tiene de 3-15 miembros del anillo de carbono, el arilo es un sistema de anillo de hidrocarburo monodclico o bidclico aromatico que tiene un total de 6-10 miembros del anillo de carbono, el aralquilo es un grupo alquilo sustituido por un grupo arilo, en donde el punto de union esta en el grupo alquilo, es un sistema de anillo de hidrocarburo monodclico o bidclico aromatico que tiene 5-10 atomos de anillo en donde los atomos de anillo comprenden, ademas de los atomos de carbono, de uno a cinco heteroatomos, el heteroaralquilo es un grupo alquilo sustituido por un grupo heteroarilo, en donde el punto de union esta en el grupo alquilo y el heterocicloalquilo o heterociclilo es un hidrocarburo monodclico de 5-7 miembros no aromatico estable o hidrocarburo bidclico de 7-10 miembros no aromatico estable que es ya sea saturado o parcialmente insaturado, y que tiene, ademas de los atomos de carbono, uno o mas heteroatomos, que se sustituyen opcionalmente con uno o mas sustituyentes.
2. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde el proceso comprende adicionalmente agregar un cofactor a la solucion, en particular fosfato piridoxal (PLP).
3. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 2, en donde el cofactor es una coenzima, en particular seleccionada de deshidrogenasa L-alanina (LADH), deshidrogenasa lactato (LDH), fosfato de dinucleotido de adenina nicotinamida (NADPH), dinucleotido de adenina nicotinamida (NAD), deshidrogenasa formiato (FDH), y deshidrogenasa glucosa (GDH).
4. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde el proceso comprende adicionalmente agregar una mezcla de reductasa de piruvato a la solucion. 5
5. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde la enzima genera preferiblemente un compuesto de la formula (II) o una sal del mismo en donde el grupo amino nuevamente formado tiene estereoqmmica (R) o estereoqmmica

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

(S), o en donde la enzima genera preferiblemente un compuesto enantiomericamente puro de la formula (II) o sal del mismo.
6. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde la enzima es la transaminasa de amina omega, en particular seleccionada del grupo que consiste de ATA-101, ATA-102, ATA-103, ATA-104, ATA-105, ATA-106, ATA-107, ATA-108, ATA- 109, ATA-110, ATA-113, ATA-114, ATA-115, ATA-116, ATA-117, ATA-124, una transaminasa de amina omega de Chromobacterium violaceum, una transaminasa de amina omega de Alcaligenes denitrificans, una transaminasa de amina omega de Arthrobactercatreus, una transaminasa de amina omega de Klebsiella pneumoniae, una transaminasa de amina omega de Bacillus thurangaensas, una transaminasa de amina omega de Bacillus cereus, y una transaminasa de amina omega de Vibrio fluvialis.
7. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde la molecula donante amino es una amina o sal de la misma, o en donde la molecula donante amino es un aminoacido, un polipeptido del mismo y/o una sal del mismo.
8. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde la molecula donante amino se selecciona de

piridoxamina, metilbencilamina, 2-aminobutano, propilamina, isopropilamina, 1,1,1-trifluoropropan-2-amina, 1,1,1,3,3,3- hexafluoropropan- 2-amina, bencilamina, 2-amino-1-butanol, 1-amino-1-feniletano, 1-amino-1-(2-metoxi-5-fluorofenil) etano, 1-amino-1-fenilpropano, 1-amino-1-(4-hidroxifenil)propano, 1-amino-1-(4-bromofenil)propano, 1-amino-1-(4- nitrofenil)propano, 1-fenil-2-aminopropano, 1-(3-trifluorometilfenil)-2-aminopropano, 2-aminopropanol, 1-amino-1- fenilbutano, 1-fenil-2-aminobutano, 1-(2,5-dimetoxi-4-metilfenil)-2-aminobutano, 1-fenil-3-aminobutano, 1-(4-hidroxifenil)- 3-aminobutano, 1-amino-1-(2-naftil)etano, cis-2-metilciclopentanamina, trans-2-metilciclopentanamina, cis-3-

metilciclopentanamina, trans-3-metilciclopentanamina, cis-2-etilciclopentanamina, trans-2-etilciclopentanamina, cis-3- etilciclopentanamina, trans-3-etilciclopentanamina, cis-2-metilciclohexanamina, trans-2-metilciclohexanamina, cis-3- metilciclohexanamina, trans-3-metilciclohexanamina, cis-2-etilciclohexanamina, trans-2-etilciclohexanamina, cis-3- etilciclohexanamina, trans-3-etilciclohexanamina, 1-aminotetralina, 2 aminotetralina, 2-amino-5-metoxitetralina, 1- aminoindano, 2-aminoindano, 2-amino-1-propanol, cis-1-amino-2-indanol, trans-1-amino-2-indanol, 1-amino-6- hidroxiindanamina, taurina, y sales de los mismos, o en donde la molecula donante amino se selecciona de glicina, alanina, acido aspartico, fenilalanina, acido 2-aminopentanodioico, 3-aminobutirato, Y-aminobutirato, p-alanina, asparagina, cistema, acido glutamico, glutamina, prolina, selenocistema, serina, tirosina, arginina, histidina, ornitina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, treonina, triptofano, valina, y polipeptidos de los mismos y/o sales de los mismos.
9. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde la molecula donante amino es una molecula donante de amino quiral.
10. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde la solucion es una solucion regulada.
11. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde el pH de la solucion esta entre 5 y 9.
12. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde R1 es H, aralquilo o -CO2R16.
13. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde R2 y R3 tomados juntos forman un enlace doble o forman

un grupo:

imagen5

en donde Z es NR17, O, o C(R18)2.
14. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde X es un enlace, o en donde X es el grupo -C(R19)2-.
15. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde R4 es H.
16. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde cada uno de R5 y R6 es independientemente H, o R5 y

R6 tomados juntos con el carbono al que se unen forman C=O.
17.
18.
19.
20.

El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde R7 y R8 son cada uno H.

El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde R9y R10 son cada uno H.

El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde R11 es H.

El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde R12 y R13 son cada uno H.

10
21. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde R9 es H y R10 y R11 tomados juntos forman un enlace doble.
22. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde R13 es H, y R11 y R12 tomados juntos forman un enlace doble.
23. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde cada uno de R9, R10, R11, R12 y R13 es H.
24. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde R14 y R15 son cada uno H.
25. (Modificada) El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde el compuesto de la formula (I) o una sal del

mismo y un compuesto de la formula (II) o una sal del mismo se seleccionan de los compuestos proporcionados en las

Tablas 1, 2, 3, 4 o 5, que son

Tabla 1.

Compuesto de la formula (I)

Compuesto de la formula (II)

R1 1 ,, H N-a Me v>Me (1-3)

R1 , H N—\ MV^'rX V*Me Me/TiVy 0 (11-3)

R1 H^rvMe Me, J Me '• AjH 0 H _Lbb)_____________________________________________

Rl H^Me Me M eThn_v rtm Am_________________________________________________

Tabla 1.

Compuesto de la formula (I)

Compuesto de la formula (II)

imagen6

ltd.

imagen7

IM.

imagen8

ltd.

imagen9

lid

imagen10

imagen11

(I-e)

(II-e)

Tabla 1.

Compuesto de la formula (I)

Compuesto de la formula (II)

d1 n H N'Y'Me Me, J Me <yr MeMHV / r hTh o i*r d-f)

R1 n^Me Me, J Me YV o/H-O 'H Jf ThT H H2N'^T^ (H-f)

Tabla 2.

Compuesto de la formula (I)

Compuesto de la formula (II)

R1 1 ■ j H N—\ Me XjXjiA 0 (i-g)

R1 r H N—i MC'r\VMe r~\ VT m^hVy X X^X ^ (ii-g)

R1 HiAVMe Me, SC J Me Y V' r^Y° H MeHA / 0 JHD___________________________________________

R1 HN"~YMe Me, sL J XvX MefHVy w'KMy jm]___________________________________________________

Tabla 2.

Compuesto de la formula (I)

Compuesto de la formula (II)

R1 u N"~VMe Me,, pL T Me (N)

R1 i Me H N^N>ivle Me, yL J Me YV y\oH Me/JHVV [ ThT 1=1 (IN)

R1 t MeWjJV^Me ° (i-j)

R1 1 Mew^O"Me (IN)

R1 nj-V*8 Me, X J Me '-(V °vY\0 H MeHA/ ° (l-k)

R1 N''X>*Me Me, y. J Me '/V VyV° A H2N^fiA (ll-k)

R1 H N'^YMe Me, J Me ''/V V/T0 *H MenA^y J 1=1 0 (l-l)

R1 HN-^yMe Me,, yL j Me Xr v/V°/H M eAW ii (ll-l)

Tabla 3.

Compuesto de la formula (I)

Compuesto de la formula (II)

imagen12

O'

(l-m)

imagen13

H2N

(ll-m)

imagen14

JM.

imagen15

H2N

UllOl

imagen16

JJbol

imagen17

h2n

lib°l

imagen18

0

(i-p)

imagen19

h2n

(ll-p)

Tabla 3.

Compuesto de la formula (I)

Compuesto de la formula (II)

R1 Me, yL I Me 'Yyr 0 H d-q)

R1 Me, V J Me '/ x VyV H Me_nA_y (H-q)

R1 HN'-yMe Me, J Me Yx V/V° H fpjH JM)___________________________________________

R1 Me, V J Me '’(V q/>W H MyH\_v J^TrIh jm____________________________________________________

Tabla 4.

Compuesto de la formula (I)

Compuesto de la formula (II)

R1 t H N—\ Menyy0 ,h jmi____________________________________________

R1 1 H |M—. MewrVVMe JM)___________________________________________________

Tabla 4.

Compuesto de la formula (I)

Compuesto de la formula (II)

R1 Me, yL T MeY^^ MejT\y (l-t)

R1 H N^yMe Me, yL J MeTHyV f T fi) I H (ll-t)

R1 Me, yL J Me Y V 3~r°H MeHTy / f T hT 1=1 (l-u)

R1 Me, yL J Me MeT^X/ X X1”1 J ^ (ll-u)

R1 / Me H*,N“\ Me/VM-ye MXXX~X ° H r ThJ h (l-v)

R1 H N—y mXjX^X h (ll-v)

R1 HN--YMe Me, >1 J Me '(V °vY\0 H (l-w)

p1 n «ff^yMe Me, X J Me '/ X °vYY° H MeflnV/ (I l-w)

Tabla 4.

Compuesto de la formula (I)

Compuesto de la formula (II)

R1 H^YMe Me, >1 J Me Y x a/A-° H M ehn__/ jh d-x)

R1 Hj'YUe Me, Si J Me '/ p V/Y°,H Me/Ti\_V h2n^^ (ll-x)

Tabla 5.

Compuesto de la formula (I)

Compuesto de la formula (II)

imagen20

O

JM

imagen21

imagen22

o

Ibb)

imagen23

Tabla 5.

Compuesto de la formula (I)

Compuesto de la formula (II)

imagen24

O

lb£l

imagen25

imagen26

O

JM

imagen27

imagen28

(I-e)

imagen29

h2n'

r^KII-e)

imagen30

JHL

imagen31
26. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde el compuesto de la formula (I) es un compuesto de la formula (I-a):

5

10

15

20

25

imagen32

o sal del mismo, y

el compuesto de la formula (II) es un compuesto de la formula

imagen33

o una sal del mismo.
27. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, que comprende adicionalmente poner en contacto un compuesto de la formula (II) o una sal del mismo con un agente de sulfonilacion para proporcionar un compuesto de la formula (III):

imagen34

o una sal del mismo, en donde R23 es alquilo o arilo.
28. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 27, en donde el agente de sulfonilacion se selecciona de cloruro de bencenosulfonilo, anhndrido bencenosulfonilo, cloruro p-toluenosulfonilo, anhndrido p-toluenosulfonilo, cloruro metanosulfonilo, y anhndrido metanosulfonilo, o en donde el agente de sulfonilacion es cloruro metanosulfonilo o anhndrido metanosulfonilo, y R23 es -CH3.
29. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde el proceso genera preferiblemente un compuesto de la formula (II) o una sal del mismo en donde el grupo amino nuevamente formado tiene estereoqmmica (R).