ES2555533T3

ES2555533T3 - Nuevas composiciones para prevenir y/o tratar trastornos de almacenamiento lisosomal

Info

Publication number: ES2555533T3
Application number: ES10825397.2T
Authority: ES
Inventors: Robert Boyd; Gary Lee; Philip Rybczynski
Original assignee: Amicus Therapeutics Inc
Current assignee: Amicus Therapeutics Inc
Priority date: 2009-10-19
Filing date: 2010-10-05
Publication date: 2016-01-04
Anticipated expiration: 2030-10-05
Also published as: AR078607A1; DK2995306T3; SI2995306T1; ES2716871T3; KR20120099437A; HUE041971T2; US20110091442A1; RU2012120760A; LT2995306T; PT2995306T; TW201603811A; CA2778349C; BR112012009123A2; AU2010308397A1; RU2016103139A; DK2490533T3; KR101848938B1; JP2013508367A; CA2778349A1; CN105193802A

Abstract

Un compuesto de Fórmula II:**Fórmula** en donde: R1 es C(R2)(R3)(R4); R2 es hidrógeno, -OH o halógeno; R3 es hidrógeno, -OH, halógeno o -CH3; R4 es halógeno, -CH3, fenilo, fluorofenilo, metilfenilo, ciclohexilmetilo, en donde cuando R4 es un halógeno, R2 y R3 no pueden ser hidrógeno; R3 y R4 pueden juntarse con el átomo de carbono al que están unidos para formar un anillo cicloalquilo, que puede estar opcionalmente sustituido por uno o más átomos de halógeno; R6 es hidrógeno o fenilalquilo; Z es opcional, cuando está presente Z es -(CH2)-, -C(>=O) -, -S(>=O)2NH-, -S(>=O)2-, -S(>=O)2-CH2-, C(>=O)-NH-, -S(>=O)2NR9-, -C(>=S)-NH- o -C(>=O)2-CH2-, R9 es hidrógeno o CH3; R5 es hidrógeno o aminofenilalquilo; R7 es -OH o halógeno; y R8 es hidrógeno, halógeno o -CH3; siempre que R2 y R3 no sean ambos hidrógeno cuando R4 sea halógeno, y cuando Z no esté presente, R7 sea -OH, R5, R6 y R8 sean hidrógeno; o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de este; para su uso en la prevención y/o el tratamiento de un trastorno de almacenamiento lisosomal en un paciente con riesgo de desarrollar o que se le diagnostique dicho trastorno.

Description

imagen1

imagen2

imagen3

OH OH

imagen4

OH OH

imagen5

imagen6

imagen7

imagen8

OH F

N H

imagen9

imagen10

imagen11

imagen12

imagen13

5

10

15

20

25 Trastorno de almacenamiento lisosomal Enzima defectuosa

Enfermedad de Pompe: -Glucosidasa ácida

Enfermedad de Gaucher: Glucosidasa ácida o Glucocerebrosidasa

Enfermedad de Fabry: -Galactosidasa A

GM1-gangliosidosis: -Galactosidasa ácida

Enfermedad de Tay-Sachs: -Hexosaminidasa A

Enfermedad de Sandhoff: -Hexosaminidasa B

Enfermedad de Niemann-Pick: Esfingomielinasa ácida

Enfermedad de Krabbe: Galactocerebrosidasa

Enfermedad de Farber: Ceramidasa ácida

Leucodistrofia metacromática: Arilsulfatasa A

Enfermedad de Hurler-Scheie: -L-Iduronidasa

Enfermedad de Hunter: Iduronato-2-sulfatasa

Enfermedad de Sanfilippo A: Heparán N-sulfatasa

Enfermedad de Sanfilippo B: -N-Acetilglucosaminidasa

Enfermedad de Sanfilippo C: Acetil-CoA: -glucosaminida

N-acetiltransferasa

Enfermedad de Sanfilippo D: N-Acetilglucosamina-6-sulfato sulfatasa

Enfermedad de Morquio A: N-Acetilglucosamina-6-sulfato sulfatasa

Enfermedad de Morquio B: -galactosidasa ácida

Enfermedad de Maroteaux-Lamy: Arilsulfatasa B

Enfermedad de Sly: -Glucuronidasa

alfa.-Mannosidosis: -Mannosidasa ácida

beta.-Mannosidosis: -Mannosidasa ácida

Fucosidosis: -L-fucosidasa ácida

Sialidosis: Sialidasa

Enfermedad de Schindler-Kanzaki: -N-acetilgalactosaminidasa

El trastorno de almacenamiento lisosomal más común, la enfermedad de Gaucher, se caracteriza por la acumulación del glicolípido glucocerebrósido (también conocido como glucosilceramida). Se han descrito tres fenotipos para la

30 enfermedad de Gaucher que se indican por la ausencia (tipo 1) o presencia de participación neurológica durante la infancia (tipo 2) o la adolescencia (tipo 3). Por ejemplo, ver Grabowski, Gaucher’s disease. Adv Hum Genet 1993; 21:377-441.

Los tres tipos de enfermedad de Gaucher se heredan en un modo autosómico recesivo. Ambos padres deben ser portadores para afectar al niño. Si ambos padres son portadores, hay una en cuatro, o 25%, de posibilidades en

35 cada embarazo de afectar al niño. Se recomienda asesoramiento genético y pruebas genéticas a las familias que pueden ser portadoras de mutaciones. Cada tipo está ligado a mutaciones particulares. En total, hay aproximadamente 80 mutaciones conocidas que conducen a la enfermedad de Gaucher (ver, por ejemplo, McKusick, V.A.: Mendelian Inheritance in Man. A Catalog of Human Genes and Genetic Disorders. Baltimore: Johns Hopkins University Press, 1998 (12.ª edición)).

40 La enfermedad de Gaucher Tipo 1 es panétnica, pero es especialmente frecuente entre personas de ascendencia judía ashkenazí, con una tasa de portadores de 1 en 17 judíos ashkenazí. Las mutaciones N370S y 84GG son las mutaciones más frecuentes en el gen glucocerebrosidasa entre los judíos ashkenazí, con tasas de 1 en 17,5 para N370S y 1 en 400 para 84GG en la población ashkenazí general sana y están asociadas con la enfermedad de Gaucher leve y aguda, respectivamente. La mutación 84GG ocurre casi exclusivamente entre los judíos ashkenazí.

45 Otras variantes raras del gen glucocerebrosidasa identificadas en pacientes de ascendencia ashkenazí con la enfermedad de Gaucher incluyen L444P, IVS2+1G→A, V394L y R496H. A diferencia de la presentación de la enfermedad de Gaucher Tipo 1 en los judíos ashkenazí, la enfermedad de Gaucher Tipo 1 tiende a ser aguda y progresiva en pacientes japoneses (ver, Ida et al., Type 1 Gaucher Disease Patients: Phenotypic Expression and Natural History in Japanese Patients, Blood Cells, Molecules and Diseases, 1984, 24(5):73-81). Adicionalmente, la

50 enfermedad de Gaucher Tipo 3, asociada con una o dos copias de la variante L444P del gen glucocerebrosidasa es frecuente en pacientes suecos de la región de Norrbotten.

Un diagnóstico definitivo de la enfermedad de Gaucher se hace con pruebas genéticas. Como hay numerosas mutaciones diferentes, a veces es necesaria la secuenciación del gen glucocerebrosidasa para confirmar el diagnóstico. El diagnóstico prenatal está disponible y es útil cuando hay un factor de riesgo genético conocido. Sin

55 embargo, un diagnóstico de la enfermedad de Gaucher también puede suponerse por anormalidades bioquímicas tales como altos niveles de fosfatasa alcalina, enzima conversora de angiotensina (ACE) e inmunoglobulina, o mediante un análisis celular que muestre un citoplasma con aspecto de "papel arrugado" y macrófagos cargados de glicolípidos. Particularmente, la enfermedad de Niemann-Pick es similar en que se caracteriza por la acumulación de GM2-gangliósidos y GM1-gangliósidos, además del glucocerebrósido (Vanier et al., Brain Pathology. 1998; 8: 163-74).

60 Los síntomas de la enfermedad de Gaucher incluyen los siguientes:

 Hepatomegalia y esplenomegalia indoloras (el tamaño del bazo puede ser 1500-3000 ml, en comparación con el tamaño normal de 50-200 ml)  Hiperesplenismo: la destrucción rápida y prematura de células sanguíneas que conduce a anemia, neutropenia y trombocitopenia (con un riesgo aumentado de infección y hemorragia) 5  Cirrosis del hígado, aunque rara  Los síntomas neurológicos ocurren solo en algunos tipos de Gaucher (ver a continuación):

o Tipo II: convulsiones graves, hipertonía, retardo mental, apnea.

o Tipo III: espasmos musculares conocidos como mioclono, convulsiones, demencia, apraxia muscular ocular. 10  Osteoporosis: 75% desarrollan anormalidades óseas visibles debido a la acumulación de glucosilceramida.

Se describe comúnmente una deformidad del fémur distal en la forma de un matraz Erlenmeyer.  Pigmentación amarillenta-marrón de la piel

Compuestos

A continuación se proporcionan nuevos compuestos de la presente invención:

(3R,4R,5S)-5-(difluorometil)piperidina-3,4-diol

imagen14

OH (3R,4R,5S)-5-bencilpiperidina-3,4-diol

imagen15

H

(3R,4R,5R)-5-(1-hidroxietil)piperidina-3,4-diol

imagen16

HO: OH OH

HO: N H OH OH

N H

imagen17

(3R,4R,5R)-5-(1-hidroxietil)piperidina-3,4-diol (estereoisómero A)

(3R,4R,5R)-5-(1-hidroxietil)piperidina-3,4-diol (estereoisómero B)

(3R,4R,5S)-5-(1-fluoroetil)piperidina-3,4-diol

(3R,4R,5S)-5-(1-fluoroetil)piperidina-3,4-diol (estereoisómero A)

OH F

H

imagen18

imagen19

(3R,4R,5S)-5-(1-fluoroetil)piperidina-3,4-diol (estereoisómero B)

OH F

N H

(3R,4R,5S)-5-etilpiperidina-3,4-diol

imagen20

(3R,4R,5S)-5-isopropilpiperidina-3,4-diol

(3R,4R,5S)-5-(2-hidroxipropan-2-il)piperidina-3,4-diol

(4R,5R)-3,3-difluoro-5-(hidroximetil)piperidin-4-ol

OH OH

imagen21

imagen22

H

(4R,5R)-5-(hidroximetil)-3-metilpiperidina-3,4-diol

(3R,4R,5S)-5-(1,1-difluoroetil)piperidina-3,4-diol

(3R,4R,5S)-5-(trifluorometil)piperidina-3,4-diol

imagen23

(3R,4R,5S)-5-ciclopropilpiperidina-3,4-diol

H

imagen24

(3R,4R,5S)-5-(2,2-difluorociclopropil)piperidina-3,4-diol

F

H

imagen25(3R,4R,5S)-1-bencil-5-(difluorometil)piperidina-3,4-diol

imagen26

(3R,4R,5R)-5-((S)-hidroxi(fenilo)metil)piperidina-3,4-diol

OH OH

imagen27

imagen28

H

(3R,4R,5S)-5-(difluorometil)-1-(metilsulfonilo)piperidina-3,4-diol

(3R,4R,5R)-5-((4-fluorofenilo)(hidroxi)metil)piperidina-3,4-diol

(3R,4R,5S)-5-(4-metilbencil)piperidina-3,4-diol

(3S,4R,5R)-3-(difluorometil)-4,5-dihidroxi-N-fenilpiperidina-1carboxamida

imagen29

OH: F

imagen30: imagen31 (3R,4R,5S)-5-((R)-1-fluoropropil)piperidina-3,4-diol clorhidrato

OH: F

imagen32: imagen33 (3R,4R,5S)-5-((S)-1-fluoropropil)piperidina-3,4-diol clorhidrato

Proceso químico

Las composiciones de la presente invención pueden obtenerse de acuerdo con uno o más de los siguientes esquemas.

Esquema de proceso 1:

imagen34

imagen35

imagen36

O

imagen37O

O OH

O imagen38 imagen39O

imagen40O

imagen41 imagen42O

imagen43O

O OH K2CO3;

O 1.Pd(OH)2; H2

imagen44 imagen45O imagen46N

O

CN

imagen47

BnCl

2. HCl

BnO imagen48O N

HCl

H

imagen49

12 3

imagen50

imagen51

imagen52O

O imagen53O

imagen54OF

imagen55O OH F

OO O

F 1. HCl HO OSwern DAST

imagen56F

N imagen572. Pd(OH)2; H2 imagen58NN

imagen59HCl H

6

4 5

((2S,3S,4aR,8R,8aR)-2,3-Dimetoxi-2,3-dimetiloctahidro-[1,4]dioxino[2,3-c]piridin-8-il)metanol clorhidrato (2).

Se combinó una solución de 1 (20,0 g, 55,0 mmol) en MeOH (500 mL) con Pd(OH)2 (4-6 g) y formiato de amonio (14 g, 220 mmol) y la mezcla se calentó a 50-55ºC. Se agregaron cantidades adicionales (3x100,0 mmol) de formiato de

10 amonio en las siguientes 8 hrs. Después de la adición final, la mezcla de reacción se agitó adicionalmente y se calentó otras 16 hrs a 50-55ºC. El catalizador se retiró mediante filtración y el filtrado se evaporó al vacío. El producto bruto se disolvió en acetona (150 mL), se filtró y se agregó HCl en 2-PrOH. Después de sembrar y luego enfriar en un baño de hielo, el producto se recogió como un sólido cristalino blanco (11,0 g, 71%). 1H RMN (DMSOd6) 9,45 (s, 2H), 4,80 (t, 1H, ex), 3,85 (m, 1H), 3,0-3,75 (m, 11H), 2,8 (q, 2H), 1,95 (m, 1H), 1,2 (2, 6H).

15 ((2S,3S,4aR,8R,8aR)-6-Bencil-2,3-dimetoxi-2,3-dimetiloctahidro-[1,4]dioxino[2,3-c]piridin-8-il)metanol (3). A una solución de 2 (14,85 g, 50,0 mmol) en DMF (200 mL) se agregó K2CO3 (17,25 g, 125 mmol) y la mezcla se agitó a 40ºC durante aproximadamente 4 hrs. En este momento se agregó BnCl (5,7 mL, 50,0 mmol) en una porción y la reacción se agitó a 40ºC durante toda la noche. El disolvente se evaporó al vacío y el residuo se suspendió en agua (600 mL) y se agregó HCl para disolver el residuo. La solución se lavó con Et2O y luego se basificó con Na2CO3. La

20 solución se extrajo con EtOAc (2x) y los extractos combinados se lavaron con agua y luego con salmuera y luego se secaron sobre MgSO4. La solución se filtró y el filtrado se evaporó al vacío para proporcionar el compuesto del título (17,2 g, >95%) como un aceite viscoso incoloro a amarillo pálido que se utilizó sin purificación adicional. 1H RMN

imagen60

imagen61

imagen62

5

10

15

20

25

30

(CDCl3) 7,3 (m, 5H), 3,6-3,8 (m, 2H), 3,5 (s, 3H), 3,4 (t, 1H), 3,26 (s, 3H), 3,268 (s, 3H), 2,9 (m, 2H), 2,2 (br s, 1H), 2,05 (m, 1H), 1,85 (t, 1H), 1,28 (s, 3H), 1,26 (s, 3H).

((2S,3S,4aR,8R,8aR)-6-Bencil-2,3-dimetoxi-2,3-dimetiloctahidro-[1,4]dioxino[2,3-c]piridin-8-il)carboxaldehído (Procedimiento General A) (4). A una solución de DMSO (7,3 g, 96,9 mmol) en CH2Cl2 (150 mL) enfriada hasta alcanzar -78ºC se agregó una solución de cloruro de oxalilo (6,1 mL, 72,8 mmol) en CH2Cl2 gota a gota. Después de que se completó la adición la mezcla de reacción se agitó durante 30 min adicionales, momento en el cual se agregó gota a gota una solución de 3 (17,0 g, 48,4 mmol) en CH2Cl2. Una vez completada la adición, la reacción se agitó durante 1 hr a -78ºC y luego se agregó gota a gota diisopropiletilamina (34,4 mL, 193 mmol). Una vez completada esta adición se retiró el baño de enfriamiento y la mezcla de reacción se dejó entibiar hasta alcanzar 0ºC, momento en el cual se agregó NaHCO3 saturado. La mezcla se diluyó con algo de CH2Cl2 adicional y luego la capa orgánica se separó y se secó sobre MgSO4. Después de filtrar, el disolvente se evaporó al vacío y el producto bruto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Hex/EtOAc) para proporcionar el compuesto del título (12,7 g, 75%) como un aceite viscoso. 1H RMN (CDCl3) 9,73 (s, 1H), 7,2 (m, 5H), 3,75 (m, 2H), 3,5 (q, 2H), 3,2 (2s, 6H), 2,7-3,0 (m, 3H), 2,05 (m, 2H), 1,25 (2s, 6H).

((2S,3S,4aR,8S,8aR)-6-Bencil-8,8-difluorometil-2,3-dimetoxi-2,3-dimetiloctahidro-[1,4]dioxino[2,3-c]piridina Clorhidrato (Procedimiento General B) (5). A una solución de DAST (1,4 mL, 10,3 mmol) en CH2Cl2 (50 mL) enfriada hasta alcanzar -15ºC se agregó una solución de 4 (2,4 g, 6,9 mmol) gota a gota. Después de 10 minutos se retiró el baño de hielo y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. En este momento la mezcla de reacción se enfrió nuevamente en un baño de hielo y la reacción se aplacó mediante adición de NaHCO3 saturado (gota a gota al comienzo dado que esto produce una leve exotermia). La capa orgánica se separó y se secó sobre Na2SO4, se filtró y el disolvente se evaporó al vacío para proporcionar un aceite amarillo. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Hex/EtOAc) para proporcionar el compuesto del título (1,6 g, 62%) como un aceite incoloro. 1H RMN (CDCl3) 7,2 (m, 5H), 6,0 (dt, 1H), 3,75 (m, 1H), 3,55 (m, 3H), 3,2 (2s, 6H), 2,95 (m, 1H), 2,85 (m, 1H), 2,3 (m, 2H), 1,5 (br s, 1H), 1,2 (2s, 6H).

(3R,4R, 5S)-5-(Difluorometil)piperdina 3,4-diol Clorhidrato (Procedimiento General C) (6). El compuesto 5 (1,6 g, 4,3 mmol) se calentó a reflujo en una mezcla de EtOH/H2O/HCl (40 mL/40 mL/5 mL) y la reacción se controló mediante HPLC hasta que el material de partida ya no pudo detectarse. El disolvente se evaporó al vacío y luego se coevaporó 2x con EtOH. El residuo se disolvió en MeOH y se hidrogenó sobre Pd(OH)2. Cuando se completó, el catalizador se retiró mediante filtración y el filtrado se evaporó al vacío. El residuo se recristalizó a partir de EtOH (50 mL) para obtener el compuesto del título (0,55 g, 66%) como un sólido blanco (pf 168-170ºC). 1H RMN (D2O) 6,15 (dt, 1H), 4,3-4,8 (m, 2H), 3,0 (t, 1H), 2,85 (t, 1H), 2,3 (m, 1H).

5

10

15

20

25

imagen63

imagen64

O

imagen65O

imagen66

imagen67

imagen68

imagen69

O

O OH

O

RMgCl

4

imagen70

N

imagen71N

imagen72

imagen73

imagen74

imagen75

imagen76DAST

DAST

16

15

imagen77

imagen78

imagen79

imagen80

imagen81 imagen82O

O

imagen83O

imagen84

imagen85

O

1. HCl

imagen86OF

OF

2. Pd(OH)2; H2

O

imagen87N

imagen88N

imagen89

imagen90

imagen91OH OH OH OH

imagen92

HO

imagen93HO

imagen94R

12

11

imagen95

imagen96

imagen97

imagen98

imagen99

imagen100

N

HCl

H HCl H

1. HCl 1. HCl

17 10

2. Pd(OH)2; H2 2. Pd(OH)2; H2

imagen101

imagen102

OH F

imagen103OH F

HO

imagen104HO

imagen105N

H HCl imagen106N H HCl

13 14

(R)y(S)-1-((2S,3S,4aR,8R,8aR)-6-Bencil-2,3-dimetoxi-2,3-dimetiloctahidro-[1,4]dioxino[2,3-c]piridin-8-il)etanol Procedimiento General D (15/16). A una solución de 4 (7,0 g, 20,0 mmol) en THF seco (100 mL) se agregó MeMgBr (20,0 mL, 1,4 M en 3:1 THF/tolueno) y la reacción se agitó durante toda la noche a temperatura ambiente. La reacción se aplacó con NH4Cl saturado y la mezcla se extrajo con EtOAc (2x). Los extractos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y el filtrado se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (hexano/2-PrOH) para proporcionar el isómero principal (15) (1,6 g, 24,6%). 1H RMN (CDCl3),7,3 (m, 5H), 4,15 (m, 1H), 3,5-3,9 (m, 3H), 3,3 (2s, 6H), 2,85 (m, 2H), 2,0 (2m, 4H), 1,3 (2s, 6H), 1,2 (d, 3H). También se aisló el isómero menor (16) (0,55 g, 7,5%) 7,3 (m, 5H), 3,75 (m, 2H), 3,5 (m, 2H), 3,2 (2s, 6H), 2,8 (m, 2H), 2,0 (t, 1H), 1,75 (m, 2H), 1,2 (2s, 6H), 1,0 (d, 3H).

(3R,4R, 5R)-5((R)-1-Hidroxietil)piperdina 3,4-diol (17). Se agitó el compuesto 15 (0,55 g, 1,5 mmol) en una mezcla de 9/1 TFA:H2O (20 mL) hasta que el material de partida ya no pudo detectarse mediante HPLC. Los volátiles se retiraron y el residuo se coevaporó 2-3x con EtOH y luego se disolvió en EtOH y se trató con K2CO3 sólido. Después de filtrar el sólido, el filtrado se evaporó al vacío y el residuo se convirtió en una sal HCl y se hidrogenó sobre Pd(OH)2. El catalizador se filtró y el filtrado se evaporó al vacío. El producto bruto se purificó utilizando una resina de intercambio iónico (Dowex 50WX8-200) eluyendo con NH4OH 0,1 N. Las fracciones apropiadas se combinaron y liofilizaron para proporcionar el compuesto del título (0,12 g, 50%). 1H RMN (D2O) 4,2 (q, 1H), 3,65 (m, 1H), 3,45 (m, 3H), 2,8 (m, 2H), 1,65 (m, 1H), 1,15 (d, 3H).

(3R,4R, 5R)-5((S)-1-Hidroxietil)piperdina 3,4-diol (10). El compuesto 16 (0,34 g, 0,93 mmol) se desprotegió como se describió anteriormente para proporcionar el compuesto del título (0,11 g, 75%). 1H RMN (D2O) 4,15 (m, 2H), 3,5 (m, 1H), 3,35 (t, 1H), 3,15 (m, 2H), 1,8 (m, 1H), 1,1 (d, 3H).

((2S,3S,4aR,8R,8aR)-6-Bencil-8(S)-(1-fluoroetil)-2,3-dimetoxi-2,3-dimetiloctahidro-[1,4]dioxino[2,3-c]piridina (11). El compuesto 15 (1,8 g, 5,0 mmol) se fluoró utilizando el Procedimiento General B. La cromatografía en gel de sílice (Hex/EtOAc) proporcionó el compuesto del título (0,42 g, 23%). 1H RMN (CDCl3) 7,25 (m, 5H), 4,7-4,9 (dq, 1H), 3,75 (m, 2H), 3,4 (m, 2H), 3,2 (2s, 6H), 2,8 (m, 2H), 2,0 (m, 3H), 1,35 (dd, 3H), 1,2 (2s, 6H).

(3R,4R, 5R)-5((S)-1-Fluoroetil)piperdina 3,4-diol Clorhidrato (13). El compuesto 11 (0,42 g, 1,14 mmol) se desprotegió como se describe en el Procedimiento General C. Después de retirar el catalizador, el filtrado se evaporó al vacío y luego se coevaporó con EtOH (2x). El residuo resultante se trituró con acetona para proporcionar

5

10

15

20

25

30

el compuesto del título (0,20 g, 88%) como un sólido blanco. 1H RMN (DMSO-d6) 9,0 (br s, 2H), 5,6 (d, 1H, ex), 5,4 (d, 1H, ex), 5,0-5,2 (dq, 1H), 3,55 (m, 1H), 3,2 (m, 2H), 2,9 (t, 1H), 2,7 (t, 1H), 2,2 (m, 1H), 1,3 (dd, 3H).

((2S,3S,4aR,8R,8aR)-6-Bencil-8(R)-(1-fluoroetil)-2,3-dimetoxi-2,3-dimetiloctahidro-[1,4]dioxino[2,3-c]piridina (12). El compuesto 16 (0,55 g, 1,5 mmol) se fluoró utilizando el Procedimiento General B para proporcionar el compuesto del título (0,22 g, 40%). 1H RMN (CDCl3) 7,3 (m, 5H), 5,0 (dq, 1H), 3,8 (m, 1H), 3,5-3,75 (m, 3H), 3,3 (2s, 6H), 3,0 (d, 1H), 2,9 (m, 1H), 2,1 (m, 2H), 1,85 (m, 1H), 1,3 (2s, 6H).

(3R,4R, 5R)-5((R)-(1-Fluoroetil)piperdina 3,4-diol Clorhidrato (1H). El compuesto 12 (0,22 g, 0,6 mmol) se desprotegió como se describe en el Procedimiento General C. Después de retirar el catalizador, el filtrado se evaporó al vacío y luego se coevaporó con EtOH (2x). El residuo resultante se trituró con acetona para proporcionar el compuesto del título (0,08 g, 67%) como un sólido blanco. 1H RMN (D2O) 5,1 (dq, 1H), 3,5 (m, 4H), 2,8 (m, 2H), 1,8 (m, 1H), 1,3 (dd, 3H).

Esquema de proceso 2:

imagen107

O

imagen108O O OH

imagen109

Oimagen110O

imagen111O imagen112O O O OH K2CO3;O 1.Pd(OH)2; H2

imagen113

imagen114

imagen115

imagen116

imagen117 imagen118Oimagen119NO CN BnCl 2. HCl

imagen120

BnO imagen121O N

HCl

H

imagen122

12 3

imagen123O

imagen124

O O

imagen125OFimagen126O OH F

imagen127

OO O

1. HCl HO O FSwern DAST

imagen128F imagen129N imagen1302. Pd(OH)2; H2 imagen131NN

imagen132HCl H

6

45

Una solución de 1 (20,0 g, 55,0 mmol) en MeOH (500 mL) se combinó con Pd(OH)2 (4-6 g) y formiato de amonio (14 g, 220 mmol) y la mezcla se calentó a 50-55ºC. Se agregaron cantidades adicionales (3x100,0 mmol) de formiato de amonio en las siguientes 8 hrs. Después de la adición final, la mezcla de reacción se agitó adicionalmente y se calentó otras 16 hrs a 50-55ºC. El catalizador se retiró mediante filtración y el filtrado se evaporó al vacío. El producto bruto se disolvió en acetona (150 mL), se filtró y se agregó HCl en 2-PrOH. Después de añadir gérmenes cristalinos y luego enfriar en un baño de hielo, el producto se recogió como un sólido cristalino blanco (11,0 g, 71%).1H RMN (DMSO-d6) 9,45 (s, 2H), 4,80 (t, 1H, ex), 3,85 (m, 1H), 3,0-3,75 (m, 11H), 2,8 (q, 2H), 1,95 (m, 1H), 1,2 (2, 6H).

((2S,3S,4aR,8R,8aR)-6-Bencil-2,3-dimetoxi-2,3-dimetiloctahidro-[1,4]dioxino[2,3-c]piridin-8-il)metanol (3).A una solución de 2 (14,85 g, 50,0 mmol) en DMF (200 mL) se agregó K2CO3 (17,25 g, 125 mmol) y la mezcla se agitó a 40ºC durante aproximadamente 4 hrs. En este momento se agregó BnCl (5,7 mL, 50,0 mmol) en una porción y la reacción se agitó a 40ºC durante toda la noche. El disolvente se evaporó al vacío y el residuo se suspendió en agua (600 mL) y se agregó HCl para disolver el residuo. La solución se lavó con Et2O y luego se basificó con Na2CO3. La solución se extrajo con EtOAc (2x) y los extractos combinados se lavaron con agua y luego con salmuera y luego se secaron sobre MgSO4. La solución se filtró y el filtrado se evaporó al vacío para proporcionar el compuesto del título (17,2 g, >95%) como un aceite viscoso incoloro a amarillo pálido que se utilizó sin purificación adicional. 1H RMN (CDCl3) 7,3 (m, 5H), 3,6-3,8 (m, 2H), 3,5 (s, 3H), 3,4 (t, 1H), 3,26 (s, 3H), 3,268 (s, 3H), 2,9 (m, 2H), 2,2 (br s, 1H), 2,05 (m, 1H), 1,85 (t, 1H), 1,28 (s, 3H), 1,26 (s, 3H).

imagen133

imagen134

imagen135

imagen136

imagen137

imagen138

imagen139

imagen140

imagen141

imagen142

imagen143

imagen144

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

((2S,3S,4aR,8R,8aR)-6-Bencil-2,3-dimetoxi-2,3-dimetiloctahidro-[1,4]dioxino[2,3-c]piridin-8-il)carboxaldehído (Procedimiento General A) (4). A una solución de DMSO (7,3 g, 96,9 mmol) en CH2Cl2 (150 mL) enfriada hasta alcanzar -78ºC se agregó una solución de cloruro de oxalilo (6,1 mL, 72,8 mmol) en CH2Cl2 gota a gota. Después de que se completó la adición la mezcla de reacción se agitó durante 30 min adicionales, momento en el que se agregó gota a gota una solución de 3 (17,0 g, 48,4 mmol) en CH2Cl2. Una vez completada la adición, la reacción se agitó durante 1 hr a -78ºC y luego se agregó gota a gota diisopropiletilamina (34,4 mL, 193 mmol). Una vez completada esta adición, el baño de enfriamiento se retiró y la mezcla de reacción se dejó entibiar hasta alcanzar 0ºC, momento en el que se agregó NaHCO3 saturado. La mezcla se diluyó con algo de CH2Cl2 adicional y luego la capa orgánica se separó y se secó sobre MgSO4. Después de filtrar, el disolvente se evaporó al vacío y el producto bruto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Hex/EtOAc) para proporcionar el compuesto del título (12,7 g, 75%) como un aceite viscoso. 1H RMN (CDCl3) 9,73 (s, 1H), 7,2 (m, 5H), 3,75 (m, 2H), 3,5 (q, 2H), 3,2 (2s, 6H), 2,7-3,0 (m, 3H), 2,05 (m, 2H), 1,25 (2s, 6H).

((2S,3S,4aR,8S,8aR)-6-Bencil-8,8-difluorometil-2,3-dimetoxi-2,3-dimetiloctahidro-[1,4]dioxino[2,3-c]piridina Clorhidrato (Procedimiento General B) (5). A una solución de DAST (1,4 mL, 10,3 mmol) en CH2Cl2 (50 mL) enfriada hasta alcanzar -15ºC se agregó una solución de 4 (2,4 g, 6,9 mmol) gota a gota. Después de 10 minutos se retiró el baño de hielo y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. En este momento la mezcla de reacción se enfrió nuevamente en un baño de hielo y la reacción se aplacó mediante adición de NaHCO3 saturado (gota a gota al comienzo ya que esto produce una leve exotermia). La capa orgánica se separó y se secó sobre Na2SO4, se filtró y el disolvente se evaporó al vacío para proporcionar un aceite amarillo. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Hex/EtOAc) para proporcionar el compuesto del título (1,6 g, 62%) como un aceite incoloro. 1H RMN (CDCl3) 7,2 (m, 5H), 6,0 (dt, 1H), 3,75 (m, 1H), 3,55 (m, 3H), 3,2 (2s, 6H), 2,95 (m, 1H), 2,85 (m, 1H), 2,3 (m, 2H), 1,5 (br s, 1H), 1,2 (2s, 6H).

(3R,4R, 5S)-5-(Difluorometil)piperdina 3,4-diol Clorhidrato (Procedimiento General C) (6). El compuesto 5 (1,6 g, 4,3 mmol) se calentó a reflujo en una mezcla de EtOH/H2O/HCl (40 mL/40 mL/5 mL) y la reacción se controló mediante HPLC hasta que el material de partida no pudo detectarse. El disolvente se evaporó al vacío y luego se coevaporó 2x con EtOH. El residuo se disolvió en MeOH y se hidrogenó sobre Pd(OH)2. Cuando se completó, el catalizador se retiró mediante filtración y el filtrado se evaporó al vacío. El residuo se recristalizó a partir de EtOH (50 mL) para obtener el compuesto del título (0,55 g, 66%) como un sólido blanco (pf 168-170ºC). 1H RMN (D2O) 6,15 (dt, 1H), 4,3-4,8 (m, 2H), 3,0 (t, 1H), 2,85 (t, 1H), 2,3 (m, 1H).

imagen145

6 7(a-e)

(3R,4R, 5S)-1.Butil-5-(difluorometil)piperdina 3,4-diol (Procedimiento General D) (7a; R5 = Bu). Una mezcla de 6 (0,30 g, 1,4 mmol), K2CO3 (0,48 g, 3,5 mmol) y BuBr (0,20 g, 1,4 mmol) se combinó en DMF (10 mL) y se calentó durante toda la noche a 60ºC. El disolvente se evaporó al vacío y el residuo se disolvió en EtOAc, se lavó con agua y luego con salmuera y se secó sobre Na2SO4. Después de la filtración, el filtrado se evaporó al vacío para proporcionar el producto bruto que se purificó mediante cromatografía (CH2Cl2/(9:1) MeOH/NH4OH) para proporcionar el compuesto del título (0,25 g, 80%) como un jarabe incoloro. MH+ = 224. 1H RMN (DMSO-d6) 6,2 (t, 1H, J = 57 Hz), 5,13 (d, 1H, ex), 4,91 (d, 1H, ex), 3,3 (m, 1H), 3,1 (m,1H), 2,9 (m, 2H), 2,3 (m, 2H), 1,95 (m, 2H), 1,75 (t, 1H), 1,2-1,5 (2 m, 4H), 0,9 (t, 3H).

(3R,4R, 5S)-1.Alil-5-(difluorometil)piperdina 3,4-diol (7b; R5 = alilo). Siguiendo el Procedimiento General D utilizando bromuro de alilo (0,17 g, 1,4 mmol) se obtuvo el compuesto del título como un sólido blanco (0,22 g, 76%). MH+ = 208. 1H RMN (DMSO-d6) 6,2 (t, 1H, J = 57 Hz), 5,8 (m, 1H), 5,2 (m, 3H), 4,92 (d, 1H), 3,3 (m, 1H), 3,1 (1H), 2,95 (d, 2H), 2,85 (d, 2H), 1,9 (br m, 2H), 1,75 (t, 1H).

(3R,4R, 5S)-5-(Difluorometil)-1-(4-fluorobencil)piperdina 3,4-diol (7c; R5 = 4-fluorobencilo). Siguiendo el Procedimiento General D, excepto que la reacción se llevó a cabo a temperatura ambiente y utilizando bromuro de 4-fluorobencilo (0,26 g, 1,4 mmol) se obtuvo el compuesto del título como un sólido blanco (0,22 g, 56%). MH+ = 276. 1H RMN (DMSO-d6) 7,4 (m, 2H), 7,15 (m, 2H), 6,2 (t, 1H, J = 57 Hz), 5,2 (d, 1H, ex), 4,9 (d, 1H, ex), 3,5 (q, 2H), 3,3 (m, 1H), 3,1 (m, 1H), 2,8 (m, 2H), 2,0 (m, 2H), 1,8 (t, 1H).

5

10

15

20

25

30

35

40

(3R,4R, 5S)-5-(Difluorometil)-1-(4-metilbencil)piperdina 3,4-diol (7d; R5 = 4-metilbencilo). Siguiendo el Procedimiento General D, excepto que la reacción se llevó a cabo a temperatura ambiente y utilizando bromuro de 4-metilbencilo (0,26 g, 1,4 mmol) el compuesto del título se obtuvo como un sólido blanco (0,30, 81%). MH+ = 272. 1H RMN (DMSO-d6) 7,2 (m, 4H), 6,2 (t, 1H, J = 57 Hz), 5,2 (d, 1H, ex), 4,9 (d, 1H, ex), 3,5 (q, 2H), 3,3 (1H), 3,05 (m, 1H), 2,8 (m, 2H), 2,5 (s, 3H), 1,95 (m, 2H), 1,8 (t, 1H).

(3R,4R, 5S)-5-(Difluorometil)-1-(4-metoxibencil)piperdina 3,4-diol (7e; R5 = 4-metoxibencilo). Siguiendo el Procedimiento General D, excepto que la reacción se llevó a cabo a temperatura ambiente y utilizando cloruro de 4metoxibencilo (0,26 g, 1,4 mmol) se obtuvo el compuesto del título como un jarabe incoloro (0,19 g, 49%). MH+ =

288. 1H RMN (DMSO-d6) 7,3 (m, 1H), 6,85 (m, 3H) 6,2 (t, 1H, J = 57 Hz), 5,2 (d, 1H, ex), 4,9 (d, 1H, ex), 3,75 (s, 3H), 3,5 (q, 2H), 3,4 (m, 1H), 3,1 (m, 1H), 2,85 (m, 2H), 1,95 (m, 2H), 1,8 (t, 1H).

OH F imagen146OH F R5ZX; K2CO3 HO HO

imagen147FF

imagen148N HCl N H

Z

imagen149R5

6 8(a-c)

1-((3S,4R, 5R)-3-(Difluorometil)-4,5-dihidroxipiperdina-1-il)pentano-1-ona (8a; Z = CO; R5 = butilo). Siguiendo el Procedimiento General D, excepto que la reacción se llevó a cabo a temperatura ambiente y utilizando cloruro de pentanoilo (0,17 g, 1,4 mmol), el compuesto del título se obtuvo como un sólido blanco (0,26 g, 71%). MH+ = 252. 1H RMN (DMSO-d6) 5,9-6,5 (dt, 1H), 5,35 (m, 1H, ex), 5,25 (m, 1H), ex), 4,2 (dd, 1H), 3,75 (dd, 1H), 3,35 (m, 2H), 3,1 (m, 1H), 2,85 (m, 1H), 2,3 (t, 2H), 1,9 br m, 1H), 1,4 (m, 2H), 1,25 (m, 2H), 0,85 (t, 3H).

(3R,4R, 5S)-5-(Difluorometil)-1-(metanosulfonilo)piperdina 3,4-diol (8b; Z = SO2; R5 = Me) Siguiendo el Procedimiento General D, excepto que la reacción se llevó a cabo a temperatura ambiente y utilizando cloruro de metanosulfonilo (0,16 g, 1,4 mmol), el compuesto del título se obtuvo como un sólido blanco (0,17 g, 51%). 1H RMN (DMSO-d6) 6,2 (t, 1H, J = 53 Hz), 5,43 (d, 1H, ex), 5,38 (d, 1H, ex), 3,2-3,7 (m, 4H), 2,95 (s, 3H), 2,85 (m, 1H), 2,7 (t, 1H), 2,1 (br s, 1H). (3R,4R, 5S)-5-(Difluorometil)-1-tosilpiperdina 3,4-diol (8b; Z = SO2; R5 = Ph) Siguiendo el Procedimiento General D, excepto que la reacción se llevó a cabo a temperatura ambiente y utilizando cloruro de toluenosulfonilo (0,26, 1,4 mmol), el compuesto del título se obtuvo como un sólido blanco (0,35 g, 67%). 1H RMN (DMSO-d6) 7,6 (d, 2H), 7,45 (d, 2H), 6,25 (t, 1H, J = 53 Hz), 5,4 (2d, 2H, ex), 3,3-3,55 (m, 4H), 3,2 (m, 1H), 2,5 (m, 3H), 2,4 (t, 1H), 2,1 (m, 1H).

imagen150

6 9(a-e)

(3S,4R, 5R)-3-(Difluorometil)-4,5-dihidroxi-N-propilpiperdina-1-carboxamida (Procedimiento General E) (9a; X = O; R5 = propilo). A una solución de 6 (base libre) (0,29 g, 1,2 mmol) en DMF seco (5 mL), se agregó isocianato de propilo (0,10 g, 1,2 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El disolvente se evaporó al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía (CH2Cl2/ MeOH) para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (0,14 g, 48%). MH+ = 253. 1H RMN (DMSO-d6) 6,7 (t, 1H), 6,22 (t, 1H, J = 53 Hz), 5,25 (d, 1H, ex), 5,15 (d, 1H, ex), 4,05 (d, 1H), 3,9 (d, 1H), 3,3 (m, 2H), 3,0 (q, 2H), 2,5 (m, 1H), 1,8 (br d, 1H), 1,4 (m, 2H), 0,85 (t, 3H).

(3S,4R, 5R)-3-(Difluorometil)-4,5-dihidroxi-N-fenilpiperdina-1-carboxamida (9b; X = O; R5 = fenilo). Siguiendo el Procedimiento General E y utilizando isocianato de fenilo (0,14 g, 1,2 mmol) el compuesto del título se obtuvo como un sólido blanco (0,21 g, 62%). MH+ = 287. 1H RMN (DMSO-d6) 8,7 (s, 1H), 7,45 (d, 2H), 7,3 (t, 2H), 6,95 (t, 1H), 6,3 (t, 1H, J = 53 Hz), 5,35 (d, 1H), 5,25 (d, 1H), 4,1 (t, 2H), 3,3 (m, 2H), 2,85 (t, 1H), 2,75 (t, 1H), 1,95 (br d, 1H).

(3S,4R, 5R)-3-(Difluorometil)-4,5-dihidroxi-N-butilpiperdina-1-carboxamida (9c; X = O; R5 = butilo). Siguiendo el Procedimiento General E y utilizando isocianato de butilo (0,12 g, 1,2 mmol) el compuesto del título se obtuvo como

un sólido blanco (0,24 g, 76%). MH+ = 267. 1H RMN (DMSO-d6) 6,6 (t, 1H), 6,2 (t, 1H, J = 53 Hz), 5,25 (d, 1H), 5,1 (d, 1H), 4,05 (d, 1H), 3,9 (d, 1H), 3,35 (m, 2H), 3,05 (q, 2H), 2,65 (t, 1H), 2,45 (m, 1H), 1,8 (br d, 1H), 1,2-1,4 (2 m, 4H), 0,85 (t, 3H).

5 (3S,4R, 5R)-3-(Difluorometil)-4,5-dihidroxi-N-butilpiperdina-1-carbotioamida (9d; X = S; R5 = butilo). Siguiendo el Procedimiento General E y utilizando isotiocianato de butilo (0,14 g, 1,2 mmol) el compuesto del título se obtuvo como un jarabe incoloro (0,21 g, 63%). MH+ = 283. 1H RMN (DMSO-d6) 7,85 (t, 1H), 6,25 (t, 1H), 5,35 (2d, 2H), 4,8 (d, 1H), 4,45 (d, 1H), 3,45 (m, 2H), 3,25 (m, 1H), 3,05 (t, 1H), 2,8 (t, 1H), 1,85 (br d, 1H), 1,4 (m, 2H), 1,35 (m, 2H), 1,1 (m, 1H), 0,95 (t, 3H).

10 (3S,4R, 5R)-3-(Difluorometil)-4,5-dihidroxi-N-fenilpiperdina-1-carbotioamida (9e; X = S; R5 = fenilo). Siguiendo el Procedimiento General E y utilizando isotiocianato de fenilo (0,16 g, 1,2 mmol) el compuesto del título se obtuvo como un sólido blanco (0,31 g, 86%). MH+ = 303. 1H RMN (DMSO-d6) 9,5 (s, 1H), 7,3 (m, 4H), 7,1 (t, 1H), 6,35 (t, 1H), 5,35 (2d, 2H), 4,85 (d, 1H), 4,55 (d, 1H), 3,45 (m, 2H), 3,2 (t, 1H), 3,0 (t, 1H), 2,05 (br d, 1H).

Los expertos en la técnica también podrán obtener compuestos de la presente invención mediante el uso de los 15 siguientes esquemas generales:

imagen151

O

imagen152O

imagen153O OH

O imagen154O

imagen155O

imagen156 imagen157O

imagen158

imagen159

O

O OH K2CO3;

O 1.Pd(OH)2; H2

imagen160 imagen161O imagen162N

O CN

imagen163

BnCl

2. HCl

BnO imagen164O N

HCl

H

imagen165

12 3

imagen166

imagen167

imagen168

imagen169

imagen170

imagen171

imagen172

imagen173

imagen174

imagen175O

O

imagen176

imagen177 imagen178O

O Fimagen179O

OH F

O O

O

1. HCl HO O FSwern DAST

imagen180F N imagen1812. Pd(OH)2; H2

NN

imagen182

imagen183HCl H

6

4 5

Esquema 3

imagen184

imagen185

imagen186

imagen187

imagen188

imagen189O

O

imagen190

imagen191

imagen192

imagen193

imagen194O

imagen195OF

O

O OH

O

OH F

O

R

Desoxo-flúor

R

1. HCl HO

RMgCl

imagen196R

imagen197 imagen198N

imagen199N

imagen200

imagen2012. Pd(OH)2; H2

imagen202 imagen203N

HCl

H

7a-c imagen204 8a-c 9a-c

Swern

imagen2051. HCl 2. Pd(OH)2; H2

OH OH O HO R imagen206O

imagen207OO imagen208NO HR

14a-c

imagen209N

imagen210

imagen211

imagen212

imagen213

10a-c

OH OH HO

imagen214R

imagen215 imagen216N H[H]

1.: HCl

2.: Pd(OH)2; H2

15a-c

imagen217

OO

OH F

O

OF

O OH

Desoxo-flúor

HO

O

R

O

1. HCl

-

imagen218R

R

imagen219

imagen220N

2. Pd(OH)2; H2

imagen221N imagen222NH

HCl

imagen223

imagen224

imagen225

13a-c

11a-c 12a-c

Esquema 4

OH F

imagen226

F

OH F

R HO

F OH F

imagen227 imagen228NHO

F Rimagen229O N

imagen230 imagen231RX

RHN imagen232O

RNCO RC(O)Cl

imagen233OH F OH F

HO F

HO

RNCS

F

imagen2346

imagen235 imagen236N

imagen237 imagen238N imagen239SO2 RSO2Cl R RHN

S

imagen240

OH F

imagen241

imagen242SO2

RHN Esquema 5 OH

OH

O HO CF3CF3 CF3 HO CF3

imagen243TM

Nimagen244Nimagen245N

N

: imagen246
R'

R'

R'

imagen247R'

Oimagen248O Esquema 6 OOOimagen249O imagen250Oimagen251O

imagen252

O

OH F

imagen253O

OF

F

Desoxo-flúor

F

HO

-O

10a

imagen254

imagen255

N

H

Bn

O

imagen256OH

O

10a Ph3PCH3Br

HO

O

BuLi

imagen257N

imagen258

N

H

Bn

Oimagen259O

imagen260

imagen261

imagen262

imagen263OH

O

imagen264F

O

imagen265O

imagen266 imagen267OH

O

HO

9-BBN

imagen268

imagen269

imagen270

N H2O2 N NBn Bn H

imagen271

O

imagen272O O

FF

imagen273 imagen274OO imagen275O

O

imagen276OH O

O

HO F

CBr2F2/HMPT Zn, THF

imagen277

NN imagen278NBn Bn H

imagen279O

O O

imagen280F

imagen281F

O

O OH

O O

F

imagen282HO

imagen283FO CBr2F2/Ph3P

imagen284

imagen285

imagen286

KF/18-Cr-6, monoglima

KF --

NN

N

Bn H

Bn

O

imagen287 imagen288OH

O

imagen289O

HO

O

imagen290

imagen291N

imagen292N

HN

Bn

Esquema 7

Sales, solvatos y profármacos

Los compuestos de la presente invención incluyen sales, solvatos farmacéuticamente aceptables de los compuestos divulgados en la presente. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales derivadas de bases inorgánicas tales como Li, Na, K, Ca, Mg, Fe, Cu, Zn, Mn; sales de bases orgánicas tales como [Nu],[Nu]'-diacetiletilendiamina,

imagen293

imagen294

imagen295

imagen296

5

10

15

20

25

30

factores tales como la edad, afección y tamaño del paciente, así como también el riesgo de desarrollar el trastorno o la gravedad de los síntomas del trastorno tratado al que se hace referencia.

Terapia de fármacos combinada

Los agentes terapéuticos de la presente invención pueden administrarse en combinación con al menos otro agente terapéutico. Se comprende que la administración de los agentes terapéuticos de la presente invención con al menos otro agente terapéutico comprende la administración que es secuencial o concurrente. En una realización, los agentes terapéuticos se administran en formas de dosificación separadas. En otra realización, dos o más agentes terapéuticos se administran conjuntamente en la misma forma de dosificación.

En determinadas realizaciones, los agentes terapéuticos de la presente invención se administran en combinación con al menos otro agente terapéutico que es un agente antidisquinesia (por ejemplo, Carbidopa, Levodopa), un agente antiinfeccioso (por ejemplo, Miglustat), un agente antineoplásico (por ejemplo, Busulfán, Ciclofosfamida), un agente gastrointestinal (por ejemplo, Metilprednisolona), un micronutriente (por ejemplo, Calcitriol, Colecalciferol, Ergocalciferoles, Vitamina D), un agente vasoconstrictor (por ejemplo, Calcitriol). En una realización preferida, los otros agentes terapéuticos mencionados anteriormente se administran cuando el trastorno es enfermedad de Gaucher.

En determinadas realizaciones, los agentes terapéuticos de la presente invención se administran en combinación con alopregnanolona, una dieta baja en colesterol o agentes de disminución de colesterol tales como estatinas (por ejemplo, Lipitor®); fibratos tales como fenofibrato (Lipidil®); niacina; y/o resinas de unión tales como colestiramina (Questran®).

En una realización, los agentes terapéuticos de la presente invención se administran en combinación con terapia de genes. La terapia de genes se contempla tanto con genes de reemplazo tales como glucocerebrosidasa como con ARN inhibitorio (ARNsi) para el gen SNCA. La terapia de genes se describe en más detalle en la Patente de los Estados Unidos No. 7.446.098 presentada el 17 de febrero de 2004.

En una realización, los agentes terapéuticos de la presente invención se administran en combinación con al menos otro agente terapéutico que es un agente antiinflamatorio (por ejemplo, ibuprofeno u otro AINES).

En una realización, los agentes terapéuticos de la presente invención se administran en combinación con un inhibidor de sustrato para glucocerebrosidasa, tal como N-butil-desoxinojirimicina (Zavesca®; miglustat disponible de Actelion Pharmaceuticals, EUA, Inc., San Francisco del Sur, CA, EE. UU.).

También se contemplan las combinaciones de los agentes terapéuticos de la presente invención con al menos otro agente terapéutico que es un agente terapéutico para una o más enzimas lisosomales. La Tabla 2 contiene una lista no taxativa de agentes terapéuticos para enzimas lisosomales.

Tabla 2

ENZIMA LISOSOMAL: AGENTE TERAPÉUTICO

α-Glucosidasa No. de acceso de GenBank Y00839: 1-desoxinojirimicina (DNJ) α-homonojirimicina castanospermina

β-Glucosidasa ácida (β-glucocerebrosidasa) No. de acceso de GenBank J03059: isofagomina C-bencil isofagomina y derivados N-alquil (C9-12)-DNJ Glucoimidazol (y derivados) C-alquil-IFG (y derivados) N-alquil-β-valeinaminas Flufenozina calisteginas A3, B1, B2 y C1

α-Galactosidasa A No. de acceso de GenBank NM000169: 1-desoxigalactonojirimicina (DGJ) α-alo-homonojirimicina α-galacto-homonojirimicina β-1-C-butil-desoxinojirimicina calisteginas A2 y B2 N-metil calisteginas A2 y B2

β-Galactosidasa ácida No. de acceso de GenBank M34423: 4-epi-isofagomina 1-desoxigalactonojirimicina

Galactocerebrosidasa (β-Galactosidasa ácida) No. de acceso de GenBank D25283: 4-epi-isofagomina 1-desoxigalactonojirimicina

α-Manosidasa ácida No. de acceso de GenBank U68567: 1-desoximanojirimicina Swainsonina Manostatina A

5

10

15

20

25

30

β-Manosidasa ácida No. de acceso de GenBank U60337: 2-hidroxi-isofagomina

α-L-fucosidasa ácida No. de acceso de GenBank NM_000147: 1-desoxifuconojirimicina β-homofuconojirimicina 2,5-imino-1,2,5-tridesoxi-L-glucitol 2,5-desoxi-2,5-imino-D-fucitol 2,5-imino-1,2,5-tridesoxi-L-altritol

α-N-Acetilglucosaminidasa No. de acceso de GenBank U40846: 1,2-didesoxi-2-N-acetamido-nojirimicina

α-N-Acetilgalactosaminidasa No. de acceso de GenBank M62783: 1,2-didesoxi-2-N-acetamido-galactonojirimicina

β-Hexosaminidasa A No. de acceso de GenBank NM_000520: 2-N-acetilamino-isofagomina 1,2-didesoxi-2-acetamido-nojirimicina Nagstatina

β-Hexosaminidasa B No. de acceso de GenBank NM_000521: 2-N-acetamido-isofagomina 1,2-didesoxi-2-acetamido-nojirimicina Nagstatina

α-L-Iduronidasa No. de acceso de GenBank NM_000203: 1-desoxiduronojirimicina 2-carboxi-3,4,5-tridesoxipiperidina

β-Glucuronidasa No. de acceso de GenBank NM_000181: 6-carboxi-isofagomina 2-carboxi-3,4,5-tridesoxipiperidina

Sialidasa No. de acceso de GenBank U84246: ácido 2,6-didesoxi-2,6, imino-siálico Siastatina B

Iduronato sulfatasa No. de acceso de GenBank AF_011889: 2,5-anhidromanitol-6-sulfato

esfingomielinasa ácida No. de acceso de GenBank M59916: desipramina, fosfatidilinositol-4,5-difosfato

En determinadas realizaciones, los agentes terapéuticos de la presente invención se administran en combinación con al menos un agente terapéutico que es un agente antidisquinesia (por ejemplo, Carbidopa, Levodopa), un agente antiinfeccioso (por ejemplo, Ciclosporina, Miglustat, Pirimetamina), un agente antineoplásico (por ejemplo, Alemtuzumab, Azatioprina, Busulfán, Clofarabina, Ciclofosfamida, Melfalan, Metotrexato, Rituximab), un agente antireumático (por ejemplo, Rituximab), un agente gastrointestinal (por ejemplo, Metilprednisolona), un micronutriente (por ejemplo, Calcitriol, Colecalciferol, Ergocalciferoles, Ácido fólico, Vitamina D), un agente de control reproductivo (por ejemplo, Metotrexato), un agente del sistema respiratorio (por ejemplo, Tetrahidrozolina), un agente vasoconstrictor (por ejemplo, Calcitriol, Tetrahidrozolina).

En determinadas realizaciones, los agentes terapéuticos de la presente invención se administran en combinación con al menos un agente terapéutico que es un agente terapéutico para β-hexosaminidasa A y/o un agente terapéutico para β-galactosidasa ácida. En determinadas realizaciones, los agentes terapéuticos de la presente invención se administran en combinación con al menos un agente terapéutico que es un agente antiinfeccioso (por ejemplo, Miglustat), un agente antineoplásico (por ejemplo, Alemtuzumab, Busulfán, Ciclofosfamida), un agente gastrointestinal (por ejemplo, Metilprednisolona). En una realización, la combinación mencionada anteriormente se administra a sujetos en riesgo o diagnosticados con la enfermedad de Niemann-Pick (por ejemplo, enfermedad de Niemann-Pick tipo C).

Ejemplos

La presente invención se describe también por medio de los ejemplos que se presentan a continuación. El uso de dichos ejemplos es únicamente ilustrativo y de ningún modo limita el alcance y significado de la invención o de cualquier término ejemplificado. De este modo, la invención no está limitada a ninguna realización particular preferida descrita en la presente. De hecho, muchas modificaciones y variaciones de la invención serán evidentes para los expertos en la técnica luego de leer la presente memoria descriptiva. Por lo tanto, la invención debe estar limitada únicamente por los términos de las reivindicaciones adjuntas junto con el alcance completo de los equivalentes a los cuales se refieren las reivindicaciones.

Ejemplo 1: Determinación de constantes de inhibición

La afinidad de unión (definida aquí mediante la constante de unión Ki) de GCasa para nuevos compuestos de la presente invención se determinó empíricamente utilizando ensayos de inhibición enzimática. Brevemente, los ensayos de inhibición enzimática utilizados monitorearon la capacidad de un compuesto de prueba de unir y evitar la hidrólisis de un sustrato fluorogénico en un modo dependiente de la concentración. Específicamente, la actividad enzimática de GCasa humana recombinante, (GCasa hr; Cerezime®, Genzyme Corp.) se midió utilizando sustrato fluorogénico de 4-metilumbeliferil--D-glucopiranosida (4-MU--D-Glc) en ausencia o en presencia de diversas cantidades de cada compuesto de prueba. Los datos resultantes se analizaron comparando todas las muestras de

prueba con la muestra testigo sin inhibición (sin compuesto; corresponde al 100% de actividad enzimática) para determinar la actividad enzimática residual en presencia de un compuesto de prueba. Los datos de actividad residual normalizada se graficaron posteriormente (sobre el eje y) en relación con la concentración del compuesto de prueba (sobre el eje x) para extrapolar la concentración del compuesto de prueba que conduce al 50% de 5 inhibición de la actividad enzimática (definida como CI50). El valor de CI50 para cada compuesto de prueba se insertó luego en la ecuación de Cheng-Prusoff (que se detalla a continuación) para derivar en la constante de inhibición absoluta Ki que refleja con precisión la afinidad de unión de GCasa para el compuesto de prueba. Los ensayos de inhibición enzimática se realizaron en 7,0 de pH (pH del retículo endoplásmico) y en 5,2 de pH (pH lisosomal) para obtener una percepción sobre la afinidad de unión (es decir, potencia) de los compuestos para GCasa en el retículo

10 endoplásmico y lisosoma.

Ensayo in vitro

Se prepararon diversas concentraciones de compuestos de prueba en la solución amortiguadora “M" que consiste en 50 mM de solución amortiguadora de fosfato de sodio con taurocolato de sodio al 0,25% en 7,0 de pH y 5,2 de pH. La enzima (Cerezima®, una forma recombinante de la enzima β-glucocerebrosidasa humana) también se diluyó 15 en la misma solución amortiguadora “M” en 7,0 de pH y 5,2 de pH. La solución de sustrato consistía en 3 mM de 4metilumbeliferona β-D-glucopiranosida en solución amortiguadora “M” con Tritón X-100 al 0,15% en ambos pH. Se agregaron cinco microlitros de enzima diluida a 15 l de las diversas concentraciones de inhibidor o solución amortiguadora “M” sola y se incubó a 37oC durante 1 hora con 50 l de la preparación de sustrato para evaluar la actividad de β-glucosidasa en 7,0 de pH y 5,2 de pH. Las reacciones se detuvieron mediante la adición de un

20 volumen igual de 0,4 de M glicina, pH 10,6. La fluorescencia se midió sobre un lector de placa durante 1 seg/pocillo utilizando 355 nm de excitación y 460 nm de emisión. Las incubaciones sin enzima agregada o sin inhibidores agregados se utilizaron para definir la actividad sin enzima y la actividad máxima, respectivamente, y normalizar el % de inhibición para un ensayo dado. Los resultados de dichos ensayos de inhibición in vitro para el compuesto de referencia IFG-tartrato y diversos compuestos de prueba se resumen a continuación en Tabla 2A.

25

Tabla 2A: Determinación in vitro de las constantes de inhibición

Cto. No.: Nombre de compuesto CI50 (µM)pH 5,2 K1 (µM)pH 5,2 CI50 (µM)pH 7,0 K1 (µM)pH 7,0

6: (3R,4R,5S)-5(difluorometil)-piperidina3,4-diol 0,0259±0,0014 0,0136±0,0008 0,0058±0,00023 0,00306±0,00012

13: (3R,4R,5S)-5-(1fluoroetil)-piperidina-3,4diol* 0,0946±0,0028 0,0498±0,0015 0,0171±0,0008 0,009±0,0004

9: (3R,4R,5R)-5-(1hidroxietil)-piperidina3,4-diol* 0,107±0,0041 0,044±0,0017 0,020±0,0008 0,010±0,0004

10: (3R,4R,5R)-5-(1hidroxietil)-piperidina3,4-diol* 0,343±0,021 0,142±0,0088 0,066±0,0041 0,035±0,0021

14: (3R,4R,5S)-5-(1fluoroetil)-piperidina-3,4diol* 0,038±0,0016 0,016±0,0007 0,007±0,0003 0,004±0,0001

Ninguno: Clorhidrato (3R,4R,5S)5-((R)-1-fluoropropil)piperidina-3,4-diol 0,291±0,006 0,121±0,0026 0,060±0,0029 0,031±0,0015

Ninguno: (3R,4R,5S)-5-bencilpiperidina-3,4-diol 0,659±0,028 0,273±0,012 0,127±0,01 0,067±0,005

Ninguno: (3R,4R,5R)-5-((S)hidroxi(fenil)metil)piperidina-3,4-diol 3,29±0,25 1,36±0,10 0,017±0,0035 0,0089±0,0018

Ninguno: (3R,4R,5S)-5-(2hidroxipropan-2 0,234±0,0037 0,097±0,0015 0,029±0,0013 0,015±0,0007

il)piperidina-3,4-diol

Ninguno: Tartrato de IFG 0,049±0,0029 0,026±0,0015 0,0074±0,00007 0,0039±0,000037

Notas: * Estereoisómero A y/o B

Ensayo in situ

El efecto de los compuestos nuevos de la presente invención sobre la actividad lisosomal de GCasa se ensayó in situ utilizando fibroblastos establecidos de un sujeto normal. Las células sembradas en placas de 48 pocillos se 5 incubaron con las concentraciones indicadas de compuesto durante 16-24 horas. Para los ensayos de respuesta a dosis, las células se incubaron in situ con el sustrato 5-(pentafluorobenzoilamino)fluoresceína di--D-glucopiranosida (PFBFDGlu) durante 1 hora y posteriormente se lisaron para determinar el alcance de la hidrólisis de sustrato en presencia del compuesto. El ensayo empleó un rango de 12 concentraciones que comprenden 5 órdenes de magnitud, centrados en el CI50. Específicamente, se emplearon lo siguientes rangos de concentración: (3R,4R,5S)10 5-(difluorometil)piperidina-3,4-diol, (3R,4R,5S)-5-(1-fluoroetil)piperidina-3,4-diol, (3R,4R,5R)-5-(1-hidroxietil)piperidina-3,4-diol, clorhidrato (3R,4R,5S)-5-((R)-1-fluoropropil)piperidina-3,4-diol, y (3R,4R,5S)-5-bencilpiperidina3,4-diol: 1,0 x 10-3 a 3,0 x 10-9 M; (3R,4R,5R)-5-(1-hidroxietil)-piperidina-3,4-diol: 1,0 x 10-4 a 3,0 x 10-10 M; y (3R,4R,5R)-5-(1-fluoroetil)-piperidina-3,4-diol: 1,0 x 10-3 a 3,0 x 10-11 M; en donde el compuesto se diluyó en serie

1:3 a partir de la concentración más alta en los rangos especificados. La inhibición se determinó como la relación

15 entre la actividad en presencia de compuesto y la actividad en ausencia de compuesto. Para los ensayos de lavado, las células se trataron con compuesto durante 16-24 horas a una concentración igual a CI90. Las células se lavaron profusamente y se incubaron en un medio libre de fármaco para permitir que el compuesto neto fluyera de las células. Luego se evaluó la actividad de GCasa lisosomal de las células en intervalos de 2 horas en un período total de 8 horas después de la eliminación del compuesto. El aumento en la actividad con el tiempo se ajustó con una

20 función exponencial única para determinar el tiempo de lavado del compuesto. Los resultados de dichos ensayos de inhibición in situ para el compuesto de referencia IFG-tartrato y diversos compuestos de prueba se resumen a continuación en la Tabla 2B.

Tabla 2B: Determinación in situ de las constantes de inhibición

Cto. No.: Compuesto Nombre CI50 in situ (µM) lavado in situ (hr) CE50 (µM) Emax (%)

6: (3R,4R,5S)-5(difluorometil)piperidina-3,4-diol 0,408 ± 0,046 2,1 ± 0,30 0,018 ± 0,008 105,6 ± 8,7

13: (3R,4R,5S)-5-(1fluoroetil)-piperidina3,4-diol* 0,650 ± 0,172 2,7 ± 0,12 0,044 ± 0,005 92,8 ± 6,6

9: (3R,4R,5R)-5-(1hidroxietil)-piperidina3,4-diol* 0,518 ± 0,022 10,5 ± 1,75 0,49 ± 0,06 83,7 ± 2,9

10: (3R,4R,5R)-5-(1hidroxietil)-piperidina3,4-diol* 0,798 ± 0,043 12 ± 1,65 1,06 ± 0,12 99,3 ± 4,9

14: (3R,4R,5S)-5-(1fluoroetil)-piperidina3,4-diol* 0,061 ± 0,019 3,7 ± 0,63 0,026 ± 0,003 89,7 ± 3,5

ninguno: (3R,4R,5S)-5-((R)-1fluoropropil)-piperidina3,4-diol clorhidrato 0,972 ± 0,201 SD 0,086 ± 0,002 84,0 ± 4,1

ninguno: (3R,4R,5S)-5-bencilpiperidina-3,4-diol 1,299 ± 0,323 1,2 ± 0,13 0,18 ± 0,01 98,0 ± 4,5

ninguno: (3R,4R,5R)-5-((S)hidroxi(fenil)metil)- SD SD 4,99 ± 0,86 72,1 ± 3,5

imagen297

5

10

15

20

25

30

Ejemplo 3: Mejora de GCasa

Se evaluó en ratones la capacidad de los compuestos de prueba administrados oralmente (3R,4R,5S)-5(difluorometil)piperidina-3,4-diol, (3R,4R,5S)-5-(1-fluoroetil)piperidina-3,4-diol, (3R,4R,5S)-5-((R)-1fluoropropil)piperidina-3,4-diol clorhidrato o (3R,4R,5S)-5-bencilpiperidina-3,4-diol de elevar los niveles de GCasa. A estos efectos, a ratones (57BL/6) macho tipo salvaje de 8 semanas de edad se les administró una única dosis oralmente (por sonda) de un compuesto de la presente invención (es decir, (3R,4R,5S)-5-(difluorometil)piperidina3,4-diol, (3R,4R,5S)-5-(1-fluoroetil)piperidina-3,4-diol, (3R,4R,5S)-5-((R)-1-fluoropropil)piperidina-3,4-diol clorhidrato

o (3R,4R,5S)-5-bencilpiperidina-3,4-diol). Los detalles de la dosis administrada para cada compuesto se proporcionan en las Tablas 3A y 3B. Las soluciones de dosificación se prepararon en agua. Los compuestos se administraron en 2 semanas de la siguiente forma: semana 1, lun-vie (con administración), sáb-dom (sin administración); semana 2, lun-jue (con administración); necropsia el viernes. Por lo tanto, se proporcionó un total de 9 dosis (soluciones de dosificación preparadas todos los días) a cada ratón, con un lavado de 24 horas entre la última dosis y la necropsia.

Después de completarse la dosificación, los ratones se sacrificaron con CO2 y se extrajo sangre entera en tubos con heparina de litio de la vena cava inferior. Se recolectó plasma mediante centrifugación de la sangre a 2700g durante 10 minutos a 4°C. Se retiraron tejidos de hígado, bazo, pulmón y cerebro, se lavaron en PBS frío, se secaron, se congelaron sobre hielo seco y se almacenaron a -80°C hasta el análisis. Los niveles de GCasa se midieron homogenizando aproximadamente 50 mg de tejido en 500 L de solución amortiguadora McIlvane (MI) (100 mM de citrato de sodio, 200 mM de fosfato de sodio dibásico, taurocolato de sodio al 0,25%, y Tritón X-100 al 0,1%, pH 5,2) a 5,2 de pH durante 3-5 segundos sobre hielo con un microhomogenizador. Los homogenados se incubaron luego a temperatura ambiente sin y con 2,5 mM de condutirol-B-epóxido (CBE) durante 30 min. Finalmente, se agregaron 3,7 mM de sustrato 4-metilumbeliferril--glucósido (4-MUG) y se incubaron a 37C durante 60 min. Las reacciones se detuvieron mediante la adición de 0,4 M de glicina, pH 10,6. La fluorescencia se midió sobre un lector de placas durante 1seg/pocillo utilizando 355 nm de excitación y 460 nm de emisión. Se determinó la proteína total en lisados utilizando el kit MicroBCA de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Una curva estándar de 4metilumbeliferona (4-MU) en el rango de 1,0 nM a 50 M se ejecutó en paralelo para la conversión de los datos de fluorescencia brutos en la actividad absoluta de GCasa (en presencia y ausencia de CBE) y se expresó en nanomoles de 4-MU liberados por miligramo de proteína por hora (nmol/mg proteína/hora). Los niveles de GCasa y los niveles de proteína se calcularon utilizando Microsoft Excel (Redmond, WA) y GraphPad Prism versión 4.02.

Las Tablas 3A y 3B resumen la dosis administrada para cada compuesto examinado en ratones como se describe anteriormente, así como también el nivel resultante de mejora de GCasa en cerebro y bazo, respectivamente, la concentración de compuesto en tejido, la concentración de compuesto en ensayo de GCasa y la constante de inhibición (Ki).

Tabla 3A: Mejora de GCasa en cerebro

Nombre del compuesto: Dosis (mg/kg)Ensayode sangre entera Aumento de GCasa (veces) Concentración de compuesto en tejido 2,2 nmol/kg Concentración de compuesto en ensayo de GCasa (µM) Ki pH 5,2 (uM)

(3R,4R,5S)-5(difluorometil)-piperidina3,4-diol: 10 2,1 55 0,0002 0,0136±0,0008

(3R,4R,5S)-5(difluorometil)-piperidina3,4-diol: 100 2,6 301 0,0010

(3R,4R,5S)-5-(1-fluoroetil)piperidina-3,4-diol*: 10 1,5 50 0,0002 0,0498±0,0015

(3R,4R,5S)-5-(1-fluoroetil)piperidina-3,4-diol*: 100 2,4 415 0,0014

(3R,4R,5S)-5-(1hidroxietil)-piperidina-3,4diol*: SD SD SD SD 0,044±0,0017

(3R,4R,5R)-5-(1hidroxietil)-piperidina-3,4-: SD SD SD SD 0,142±0,0088

diol*

(3R,4R,5S)-5-(1-fluoroetil)piperidina-3,4-diol*: 10 1,5 BLQ (1) BLQ 0.016±0,0007

(3R,4R,5S)-5-(1-fluoroetil)piperidina-3,4-diol*: 100 2,2 41 0,0001

Clorhidrato (3R,4R,5S)-5((R)-1-fluoropropil)piperidina-3,4-diol: 10 0,9 BLQ (2) BLQ 0,121±0,0026

Clorhidrato (3R,4R,5S)-5((R)-1-fluoropropil)piperidina-3,4-diol: 100 1,1 38 0,0001

(3R,4R,5S)-5-bencilpiperidina-3,4-diol: 10 1,2 SD SD 0,273±0,012

(3R,4R,5S)-5-bencilpiperidina-3,4-diol: 100 1,4 SD SD

(3R,4R,5R)-5-((S)hidroxi(fenil)metil)piperidina-3,4-diol: SD SD SD SD 1,36±0,10

(3R,4R,5S)-5-(2hidroxipropan-2il)piperidina-3,4-diol: SD SD SD SD 0,097±0,0015

Notas: * Estereoisómero A y/o B (1) BQL (Debajo del límite de cuantificación) < 7,4 nmol/kg; (2) BQL < 2,2 nmol/kg SD: Sin determinar

Tabla 3B: Mejora de GCasa en bazo

Nombre del compuesto: Dosis (mg/kg)Ensayode sangre entera Aumento de GCasa (veces) Concentración de compuestoen tejido Concentración de compuesto en ensayo de GCasa Ki pH 5,2 (uM)

(3R,4R,5S)-5(difluorometil)-piperidina3,4-diol: 10 1,9 100 0,0003 0,0136±0,0008

(3R,4R,5S)-5(difluorometil)-piperidina3,4-diol: 100 2,4 435 0,0015

(3R,4R,5S)-5-(1-fluoroetil)piperidina-3,4-diol*: 10 1,0 BLQ (1) BLQ 0,0498±0,0015

(3R,4R,5S)-5-(1-fluoroetil)piperidina-3,4-diol*: 100 1,5 948 0,0032

(3R,4R,5R)-5-(1hidroxietil)-piperidina-3,4diol*: SD SD SD SD 0,044±0,0017

(3R,4R,5R)-5-(1hidroxietil)-piperidina-3,4-: SD SD SD SD 0,142±0,0088

diol*

(3R,4R,5S)-5-(1-fluoroetil)piperidina-3,4-diol*: 10 1,6 BLQ (2) BLQ 0,016±0,0007

(3R,4R,5S)-5-(1-fluoroetil)piperidina-3,4-diol*: 100 2,3 99 0,0003

Clorhidrato (3R,4R,5S)-5((R)-1-fluoropropil)piperidina-3,4-diol: 10 0,7 21 0,0001 0,121±0,0026

Clorhidrato (3R,4R,5S)-5((R)-1-fluoropropil)piperidina-3,4-diol: 100 0,7 60 0,0002

(3R,4R,5S)-5-bencilpiperidina-3,4-diol: 10 1,0 SD SD 0,273±0,012

(3R,4R,5S)-5-bencilpiperidina-3,4-diol: 100 1,2 SD SD

Notas: * Estereoisómero A y/o B (1) BLQ < 6,8 nmol/kg; (2) BLQ < 7,9 nmol/kg SD: Sin determinar

Como se refleja en las Tablas 3A y 3B, los ratones a los que se les administró (3R,4R,5S)-5-(difluorometil)piperidina3,4-diol, (3R,4R,5S)-5-(1-fluoroetil)piperidina-3,4-diol o (3R,4R,5S)-5-bencilpiperidina-3,4-diol demostraron una mejora significativa de Gcasa en cerebro y bazo.

5 Ejemplo 4: Farmacocinética de rata

Los datos de farmacocinética (PK) se obtuvieron en ratas para evaluar la biodisponibilidad del compuesto de prueba. En particular, se calcularon los siguientes parámetros de PK: biodisponibilidad medida por área bajo la curva de Concentración/Tiempo (AUC), fracción de dosis disponible (%F; se define también a continuación), aclaramiento (CL), volumen de distribución (Vd) y semivida (t½). A estos efectos, a ratas macho Sprague-Dawley de 8 semanas 10 de edad se les proporcionó una única dosis intravenosa (IV) equivalente a 3 mg/kg de dosis de base libre o dosis oral (por sonda) única en aumento del compuesto de prueba equivalente a 10, 30, y 100 mg/kg de base libre. Se utilizaron tres ratas por grupo de dosificación. Se recolectó la sangre en un período de 24 horas. Los puntos de tiempo para la recolección de sangre después de la administración intravenosa fueron: 0, 2,5, 5, 10, 15, 30, 45 min, 1, 2, 4, 8, 12 y 24 hrs; los puntos de tiempo para la recolección de sangre después de las administraciones orales

15 fueron: 0, 5, 15, 30, 45 min, 1, 2, 3, 4, 8, 12 y 24 hrs. Se analizaron los niveles de compuesto de las muestras en plasma mediante LC-MS/MS en PPD. Los datos sin procesar se analizaron mediante análisis no compartimental en Win-nonLin para calcular VD, %F, CL y t½.

Los parámetros farmacocinéticos para (3R,4R,5S)-5-(difluorometil)piperidina-3,4-diol, (3R,4R,5S)-5-(1fluoroetil)piperidina-3,4-diol y (3R,4R,5S)-5-bencilpiperidina-3,4-diol en base al estudio antemencionado se detallan

20 a continuación en las Tablas 4A-D.

Tabla 4A: PK de rata para (3R,4R,5S)-5-(difluorometil)-piperidina-3,4-diol-HCl

Dosis (mg/kg)

Sal: Base libre Vía AUClast (hr*ng/ml) %F t1/2 (h) Cmax (ng/mL) CL (mL/hr/kg) VD (mL/kg)

imagen298

imagen299

Claims

imagen1

imagen2

en donde:

R1 es C(R2)(R3)(R4); R2 es hidrógeno, -OH o halógeno; 5 R3 es hidrógeno, -OH, halógeno o –CH3;

R4 es halógeno, –CH3, fenilo, fluorofenilo, metilfenilo, ciclohexilmetilo, en donde cuando R4 es un halógeno, R2 y R3 no pueden ser hidrógeno; R3 y R4 pueden juntarse con el átomo de carbono al que están unidos para formar un anillo cicloalquilo, que

puede estar opcionalmente sustituido por uno o más átomos de halógeno;

10 R7 es –OH; R6 es hidrógeno y R8 es hidrógeno; siempre que R2 y R3 no sean ambos hidrógeno cuando R4 sea un halógeno.
3. Un compuesto seleccionado de:

imagen3

imagen4

OH OH

N H

37

OH OH

imagen5

imagen6

imagen7

imagen8

OH F

OH F

N H

imagen9

38

imagen10

imagen11

imagen12

imagen13

o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de este.
6. Un compuesto para su uso según la reivindicación 3, en donde el compuesto es: OH F

H

o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de este.
7. Un compuesto para su uso según la reivindicación 3, en donde el compuesto es:

imagen14

imagen15

H 10 o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de este.
8. Un compuesto para su uso según la reivindicación 3, en donde el compuesto es:

imagen16

o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de este.

15
9. Un compuesto para su uso según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el trastorno de almacenamiento lisosomal es la enfermedad de Niemann-Pick.
10. Un compuesto para su uso según cualquiera de la reivindicaciones 1-8, en donde el trastorno de 20 almacenamiento lisosomal es la enfermedad de Gaucher.
11. Un compuesto para su uso según cualquiera de la reivindicaciones 1-10, en combinación con al menos otro agente terapéutico.

25 12. Un compuesto para su uso según la reivindicación 11, en donde el o los otros agentes terapéuticos son imiglucerasa o 1,5-(butilimino)-1,5-didesoxi-D-glucitol.

42

imagen17