KR20140006037A

KR20140006037A - 리소좀의 산 리파제 결핍을 치료하는 방법들

Info

Publication number: KR20140006037A
Application number: KR1020137024408A
Authority: KR
Inventors: 마이클 하틀레인; 마이클 콘시노; 파올로 마르티니; 무투라만 메이야판; 페리클레스 칼리아스; 알라 로마쉬코; 브라이언 페스카토어; 로렌스 찰나스; 잔 파월; 브라이언 펠리스; 낸시 사비올리
Original assignee: 시나게바 바이오파르마, 코포레이션
Priority date: 2011-02-15
Filing date: 2012-02-15
Publication date: 2014-01-15
Also published as: US20140044697A1; EP2675472A4; EP2675472A1; US8945542B2; WO2012112681A1

Abstract

본 발명은 리소좀의 산 리파제 결핍 (LALD) 질환, 상세하게는 울만병 및 콜레스테릴 에스테르 축적병 (CESD)의 효과적인 치료를 위한 조성물들 및 방법들을 제공한다. 무엇보다도, 본 발명은 리소좀 산 리파제 (lysosomal acid lipase)의 치료적 유효량을 개인에게 투여하는 단계를 포함하는, 리소좀 산 리파제 결핍 (LALD) 질환을 앓고 있는 개인에서 발달 손상 또는 영양실조를 치료하는 방법을 제공한다.

Description

리소좀의 산 리파제 결핍을 치료하는 방법들 {METHODS FOR TREATING LYSOSOMAL ACID LIPASE DEFICIENCY}

리소좀 산 리파제 (lysosomal acid lipase, LDL) 결핍은 드물지만 심각한 질환이다. 정상적인 조건들 하에서, 인체는 지방성 물질 (콜리세테릴 에스테르들 및 트리글리세라이드들)을 분해하는 효소인 리소좀 산 리파제 (LAL)을 생산한다. LAL 결핍은 신체가 충분한 LAL을 생산하지 못할 때 발생한다. LAL 효소의 결여는 전형적으로 간, 비장, 위, 혈관 벽들, 및 기타 중요한 기관들을 포함하는 다양한 조직들에서 지방성 물질의 대량적 축적 (build-up)을 유도한다. 그 결과로, LAL 결핍은 전형적으로 유의한 유병율 및 치사율과 연관되고, 개인들을 유아기부터 성인기에 이르기까지 침범할 수 있다.

전형적으로, LAL 효소의 극도의 낮은 수준들은 때로 울만 질환 (Wolman Disease)이라고 불리는 (울만병, 울만 증후군으로도 역시 알려져 있음) LDL 결핍의 조기 발병을 초래한다. 조기 발병 LAL 결핍은 전형적으로 생애의 첫 해에 유아들을 침범한다. 예를 들면, 장 세포들에서 지방성 물질의 축적은 신체가 영양분들을 흡수하는 것을 막는다. 결론적으로, 울만병은 신속하게 진행하고 전형적으로 치명적인, 흡수장애, 성장 부전 및 유의한 무게 손실을 특징으로 하는 병태이다. 이들 유아들은 성장의 장애로 인해 또한 간 부전으로 인한 다른 합병증들로 인해 그들 생애의 첫 해 동안 사망한다.

늦은 발병의 LAL 결핍은 때로 콜레스테릴 에스테르 축적병 (cholesteryl ester storage disease, CESD)이라고 불리고, 소아들과 성인들을 침범할 수 있다. 전형적으로, CESD 환자들은 확장된 간 (간비대증), 간경변, 만성 간부전, 중증 미성숙의 죽상동맥경화증, 동맥들의 경화, 또는 혈청 저밀도 지질단백질 (LDL)의 올라간 수준들을 겪는다. 소아들도 역시 부신샘들에서 칼슘 침전들을 가지고 황달을 발생시킬 수 있다.

현재까지 LDL 결핍증을 위한 승인된 요법들은 전혀 없다.

본 출원은 2011년 2월 15일자로 제출된 미국 가특허 출원 일련번호 제 61/443,179호에 대한 우선권을 주장하고 있고, 그의 전부는 본 명세서에서 참고문헌으로 통합된다.

본 발명은 리소좀 산 리파제 결핍 (lysosomal acid lipase deficiency, LALD) 질환, 상세하게는 울만병 (Wolman's disease) 및 콜레스테릴 에스테르 축적병 (Cholesteryl Ester Storage Disease, CESD)의 효과적인 치료를 위한 조성물들 및 방법들을 제공한다. 본 발명은 부분적으로, 동물 질환 모델에게 재조합 리소좀 산 리파제의 투여가 다양한 기관들 (예로, 간, 비장, 위)에서 지방성 물질들의 대량적 축적, 상세하게는 울만병의 가장 호된 증상인 발달 손상 (종말증 (cachexia) 또는 생식부전 (failure to thrive)이라고도 역시 언급됨)을 포함하는, LALD 질환의 다양한 증상들을 치료하는데 (예로, 개선하거나, 저해하거나 발병을 지연하는 데) 예기치 않게도 효과적인 점의 발견을 기초로 하고 있다.

따라서, 한 가지 관점에서, 본 발명은 리소좀 산 리파제 (lysosomal acid lipase)의 치료적 유효량을 개인에게 투여하는 단계를 포함하는, LALD 질환을 앓고 있는 개인에서 발달 손상 또는 영양실조를 치료하는 방법을 제공한다. 일정 구현예들에서, 치료되고 있는 LALD 질환은 울만병이다. 일정 구현예들에서, 치료되고 있는 LALD 질환은 콜레스테릴 에스테르 축적병 (CESD)이다.

일정 구현예들에서, 발달 손상 또는 영양실조를 치료하는 단계는 무게 증가 (gain)를 촉진하는 단계를 포함한다. 일정 구현예들에서, 발달 손상 또는 영양실조를 치료하는 단계는 무게 손실 (loss)를 감소시키거나 예방하는 단계를 포함한다. 일정 구현예들에서, 발달 손상 또는 영양실조를 치료하는 단계는 조직 허약 또는 쇠약을 감소시키거나 제거하는 단계를 포함한다. 일정 구현예들에서, 조직 허약 또는 쇠약은 근육 및/또는 피하의 허약 또는 쇠약이다. 일정 구현예들에서, 발달 손상 또는 영양실조를 치료하는 단계는 구토 및/또는 설사의 빈도 및/또는 강도를 감소시키는 단계를 포함한다.

소정의 구현예들에서, 리소좀 산 리파제의 투여 단계는 또한 육안적 간, 비장, 및/또는 창자 병리학의 해소 (예로, 체중과 대비한 간, 비장, 및/또는 위 크기에서 감소)를 유도한다. 일정 구현예들에서, 리소좀 산 리파제의 투여 단계는 또한 조직들에서 지질 축적의 감소를 유도한다. 일정 구현예들에서, 조직들은 간, 비장, 창자, 골수, 신장, 혈관 벽들, 및 그들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일정 구현예들에서, 지질은 콜레스테롤 및/또는 트리글리세라이드들을 포함한다. 일정 구현예들에서, 지질 축적은 치료 이전의 지질 축적 수준과 비교 시, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95% 넘게 감소된다. 일정 구현예들에서, 지질 축적은 실질적으로 제거된다.

리소좀 산 리파제는 적절한 방법이라면 모두에 의해 투여될 수 있는 것으로 이해될 것이다. 소정의 구현예들에서, 리소좀 산 리파제는 정맥내로 투여된다. 소정의 구현예들에서, 리소좀 산 리파제는 피하로 투여된다. 일정 구현예들에서, 리소좀 산 리파제는 근육내로 투여된다. 일정 구현예들에서, 리소좀 산 리파제는 경막내로 또는 뇌실내로 투여된다. 소정의 구현예들에서, 리소좀 산 리파제는 경구로 투여된다.

리소좀 산 리파제의 치료적 유효량은 일정 투여 간격으로 정기적으로 투여될 수 있다. 일정 구현예들에서, 리소좀 산 리파제는 매월 투여된다. 일정 구현예들에서, 리소좀 산 리파제는 격월로 투여된다. 일정 구현예들에서, 리소좀 산 리파제는 매주 투여된다. 일정 구현예들에서, 리소좀 산 리파제는 매주 두 번 투여된다. 일정 구현예들에서, 리소좀 산 리파제는 매일 투여된다. 일정 구현예들에서, 리소좀 산 리파제는 시간 경과 시 변화되는 간격으로 투여된다.

소정의 구현예들에서, 치료적 유효량은 적어도 약 0.01 mg/kg 체중이다. 일정 구현예들에서, 치료적 유효량은 적어도 약 0.1 mg/kg 체중이다. 소정의 구현예들에서, 치료적 유효량은 적어도 약 0.5 mg/kg 체중이다. 소정의 구현예들에서, 치료적 유효량은 적어도 약 1 mg/kg 체중이다. 일정 구현예들에서, 치료적 유효량은 약 10 mg/kg 체중 이하이다. 일정 구현예들에서, 치료적 유효량은 약 5 mg/kg 체중 이하이다. 일정 구현예들에서, 치료적 유효량은 약 4 mg/kg 체중 이하이다. 일정 구현예들에서, 치료적 유효량은 약 3 mg/kg 체중 이하이다. 일정 구현예들에서, 치료적 유효량은 약 2 mg/kg 체중 이하이다. 일정 구현예들에서, 치료적 유효량은 약 1 mg/kg 체중 이하이다. 일정 구현예들에서, 치료적 유효량은 약 0.01 내지 10 mg/kg 체중의 범위이다. 일정 구현예들에서, 치료적 유효량은 약 0.01 내지 5 mg/kg 체중의 범위이다. 일정 구현예들에서, 치료적 유효량은 약 0.01 내지 2 mg/kg 체중의 범위이다. 일정 구현예들에서, 치료적 유효량은 약 0.01 내지 1 mg/kg 체중의 범위이다. 일정 구현예들에서, 치료적 유효량은 약 0.01, 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0 mg/kg 체중이다.

소정의 구현예들에서, 리소좀 산 리파제는 인간 리소좀 산 리파제 (서열번호 1)와 적어도 80% 일치하는 아미노산 서열을 가진다. 일정 구현예들에서, 리소좀 산 리파제는 인간 리소좀 산 리파제 (서열번호 1)와 적어도 90% 일치하는 아미노산 서열을 가진다. 일정 구현예들에서, 리소좀 산 리파제는 인간 리소좀 산 리파제 (서열번호 1)와 적어도 95% 일치하는 아미노산 서열을 가진다. 일정 구현예들에서, 리소좀 산 리파제는 인간 리소좀 산 리파제 (서열번호 1)이다.

일정 구현예들에서, 리소좀 산 리파제는 재조합으로 생산된다. 일정 구현예들에서, 리소좀 산 리파제는 포유동물 세포들로부터 재조합으로 생산된다. 일정 구현예들에서, 리소좀 산 리파제는 유전자전환 (transgenic) 조류에서 재조합으로 생산된다. 일정 구현예들에서, 리소좀 산 리파제는 자연적으로-생기는 리소좀 산 리파제의 당화 양상과는 다른 당화 양상을 가진다. 일정 구현예들에서, 리소좀 산 리파제는 하나 이상의 N-글리칸 구조들을 포함한다.

또 다른 관점에서, 본 발명은 LALD 질환을 앓고 있거나 이에 취약한 개인에게 리소좀 산 리파제의 치료적 유효량을 일정 투여 간격으로 정기적으로 투여하는 단계를 포함하는, 리소좀 산 리파제 결핍 (LALD) 질환 (예로, 울만병 또는 콜레스테릴 에스테르 축적병 (CESD))을 치료하는 방법을 제공한다. 일정 구현예들에서, 치료적 유효량은 적어도 약 0.01 mg/kg 체중이다 (예로, 적어도 약 0.05 mg/kg, 적어도 약 0.1 mg/kg, 적어도 약 0.2 mg/kg, 적어도 약 0.3 mg/kg, 적어도 약 0.4 mg/kg, 적어도 약 0.5 mg/kg, 적어도 약 0.6 mg/kg, 적어도 약 0.7 mg/kg, 적어도 약 0.8 mg/kg, 적어도 약 0.9 mg/kg, 또는 적어도 약 1.0 mg/kg 체중). 일정 구현예들에서, 치료적 유효량은 적어도 약 20 mg/kg 체중 이하이다 (예로, 약 15 mg/kg 이하, 약 10 mg/kg 이하, 약 8 mg/kg 이하, 약 6 mg/kg, 약 5 mg/kg 이하, 약 4 mg/kg 이하, 약 3 mg/kg 이하, 약 2 mg/kg 이하, 또는 약 1 mg/kg 이하). 일정 구현예들에서 리소좀 산 리파제는 정맥내로 투여된다. 일정 구현예들에서 리소좀 산 리파제는 피하로 투여된다.

보다 또 다른 관점에서, 본 발명은 LALD 질환을 앓고 있거나 이에 취약한 개인에게 리소좀 산 리파제의 치료적 유효량을 일정 투여 간격으로 정기적으로 투여하는 단계로서, 리소좀 산 리파제는 피하로 투여되는 단계를 포함하는, 리소좀 산 리파제 결핍 (LALD) 질환 (예로, 울만병 또는 콜레스테릴 에스테르 축적병 (CESD))을 치료하는 방법을 제공한다.

보다 또 다른 관점에서, 본 발명은 LALD 질환을 앓고 있거나 이에 취약한 개인에게 리소좀 산 리파제의 치료적 유효량을 일정 투여 간격으로 정기적으로 투여하는 단계로서, 치료되고 있는 개인의 상대적 간 무게 또는 부피 (예로, 체중에 대비한 간 무게 또는 부피)는 대조군과 비교 시 약 50% 넘게 (예로, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 또는 약 95% 넘게)으로 감소되는 단계를 포함하는, 리소좀 산 리파제 결핍 (LALD) 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 일정 구현예들에서, 적합한 대조군은 치료 이전에 치료되고 있는 개인의 상대적 간 무게 또는 부피이다. 일정 구현예들에서, 적합한 대조군은 치료 없이 동일한 형태의 LALD 질환을 앓고 있는 대조군 개인들의 평균 상대적 간 무게 또는 부피이다. 일정 구현예들에서, 리소좀 산 리파제의 치료적 유효량을 투여하는 단계는 건강한 개인의 수치와 비슷한 치료되고 있는 개인의 상대적 간 무게 또는 부피를 유도한다. 일정 구현예들에서, 리소좀 산 리파제의 치료적 유효량을 투여하는 단계는 또한 치료되고 있는 개인의 감소된 상대적 비장 무게 또는 부피 (예로, 체중과 대비한 비장 무게 또는 부피)를 대조군 (예로, 치료 이전에 치료되고 있는 개인의 상대적 비장 무게 또는 부피, 또는 치료 없이 동일한 형태의 LALD 질환을 앓고 있는 대조군 개인들의 평균 상대적 비장 무게 또는 부피)과 비교 시 약 50% 넘게 (예로, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 또는 약 95% 넘게)으로 유도한다. 일정 구현예들에서, 리소좀 산 리파제의 치료적 유효량을 투여하는 단계는 또한 건강한 개인의 수치와 비슷한 치료되고 있는 개인의 상대적 비장 무게 또는 부피를 유도한다.

또 다른 관점에서, 본 발명은 LALD 질환을 앓고 있거나 이에 취약한 개인에게 리소좀 산 리파제를 치료의 서로 다른 단계들에서 서로 다른 용량들을 사용하는 것을 포함하는 투여 요법을 사용하여 투여하는 단계를 포함하는, 리소좀 산 리파제 결핍 (LALD) 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 일정 구현예들에서, 본 발명은 LALD 질환을 앓고 있거나 이에 취약한 개인에게 리소좀 산 리파제를 제 1 용량으로 제 1 기간 동안 정기적으로 투여하고, 또한 상기 개인에서 리소좀 산 리파제를 제 2 용량으로 제 2 기간 동안 정기적으로 투여하는 단계를 포함하는, 리소좀 산 리파제 결핍 (LALD) 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 일정 구현예들에서, 제 2 용량은 제 1 용량보다 더 낮다. 일정 구현예들에서, 제 1 용량은 0.1 내지 5 mg/kg 체중 (예로, 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 또는 5.0 mg/kg 체중)의 범위이다. 일정 구현예들에서, 제 2 용량은 0 내지 2 mg/kg 체중 (예로, 약 0.01, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.2, 1.4, 1.6, 1.8, 또는 2.0 mg/kg 체중)의 범위이다. 일정 구현예들에서, 제 1 기간은 3개월, 6개월, 9개월, 또는 12개월 이상이다. 일정 구현예들에서, 제 2 기간은 6개월, 12개월, 2년 또는 수명보다 길다.

보다 또 다른 관점에서, 본 발명은 상기 다양한 구현예들에서 기술된 바와 같이 리소좀 산 리파제의 치료적 유효량 및 약제학적 담체를 포함하는, 리소좀 산 리파제 결핍 (LALD) 질환 (예로, 울만병 또는 CESD)을 치료하는 약제학적 조성물을 제공한다.

본 출원에서 사용되는 바, 용어들 "약 (about)" 및 "대략 (approximately)"은 동의어들로서 사용된다. 약/대략이 있거나 없는 본 출원에 사용되는 수치들이라면 모두가 적절한 기술분야에서의 당업자라면 인정할 어떠한 정상적인 변동이라도 포괄하도록 의미된다.

본 발명의 다른 특징들, 목적들, 및 장점들은 다음의 상세한 설명에서 명확해진다. 그러나, 상세한 설명은 본 발명의 구현예들을 가리키면서, 제한이 아닌 단지 설명으로서 주어진다. 본 발명의 범위 내에서의 다양한 변화들 및 변형들은 상세한 설명으로부터 당업자들에게 자명하게 될 것이다.

정의들

본 발명을 더욱 잘 이해하기 위하여, 소정의 용어들이 먼저 하기에 정의된다. 다음의 용어들 및 기타 다른 용어들에 대한 추가적인 정의들이 본 명세서 전체를 통하여 설명된다.

개선 ( amelioration ): 본 명세서에서 사용되는 바, 용어 "개선"은 개체의 상태의 예방 (prevention), 감소 (reduction) 또는 완화 (palliation), 또는 상태의 개선 (improvement)을 의미한다. 개선은 질환 병태의 완전한 회복 또는 완전한 예방을 포함하지만 이들을 요구하지는 않는다. 일정 구현예들에서, 개선은 적절한 질환 조직들의 리소좀들 내에 축적된 물질들의 감소를 포함한다.

생물학적으로 활성을 가진 ( biologically active ): 본 명세서에서 사용되는 바, 용어 (phrase) "생물학적으로 활성을 가진"은 생물학적 시스템 (biological system)에서, 상세하게는 유기체에서 활성을 가지는 제제라면 모두의 특징을 말한다. 예를 들면, 유기체에게 투여될 때 본 생물에 미치는 생물학적 효과를 가지는 제제는 생물학적으로 활성을 가지는 것으로 고려된다. 상세한 구현예들에서, 단백질 또는 폴리펩타이드가 생물학적으로 활성을 가지는 경우, 단백질 또는 폴리펩타이드의 생물학적 활성 적어도 하나를 공유하는 단백질 또는 폴리펩타이드의 부분은 "생물학적으로 활성을 가진" 부분으로서 언급된다.

발달 손상 ( developmental impairment ): 본 명세서에서 사용되는 바, 용어 "발달 손상"은 "생식부전" 또는 "종말증"이라고도 역시 말하고, LALD 질환을 앓고 있는 환자에서 영양실조, 또는 성장 부전과 연관된, 이에 제한되는 것은 아니지만 빈약한 무게 증가, 또는 무게 손실, 다양한 조직들의 허약 또는 쇠약 (근육, 피하 조직들 등)를 포함하는 다양한 증상들을 포함한다. 발달 손상은 전형적으로 빈번한 구토, 설사, 또는 복부 팽창과 연관되어 있다. 본 명세서에서 사용되는 바, 발달 손상은 울만병 및 CESD 둘 다의 증상들을 포괄한다.

개선하다 ( improve ), 증가하다 ( increase ) 또는 감소하다 ( reduce ): 본 명세서에서 사용되는 바, 용어들 "개선하다", "증가하다" 또는 "감소하다" 또는 문법적 동의어들은 본 명세서에서 기술된 치료의 개시 이전에 동일한 개인에서의 측정 또는 본 명세서에서 기술된 치료의 부재 시 대조군 개인 (또는 다수의 대조군 개인들)에서의 측정과 같은 기저선 측정과는 대비되는 수치들을 가리킨다. "대조군 개인 (control individual)"은 치료되고 있는 개인과 동일한 형태의 리소좀 축적병으로 고생하고, (치료된 개인 및 대조군 개인(들)에서 질환의 단계들이 비슷한 점을 보장하는) 치료되고 있는 개인과 거의 동일한 연령인 개인이다.

개인 (individual), 개체 (subject), 환자 ( patient): 본 명세서에서 사용되는 바, 용어들 "개체", "개인" 또는 "환자"는 인간 또는 비-인간 포유동물 개체를 말한다. 치료되고 있는 개인 ("환자" 또는 "개체"라도도 역시 말함)은 리소좀 축적병, 예를 들면 LAL 결핍 질환 (예로, 울만병과 같은 조기-발병; 콜레스테릴 에스테르 축적병 (CESD)와 같은 만기-발병)을 질환을 앓는 개인 (태아, 유아, 소아, 청소년, 또는 성인 인간)이다.

리소좀 효소 결핍 ( lysosomal enzyme deficiency ): 본 명세서에서 사용되는 바, "리소좀 효소 결핍"은 리소좀들에서 거대분자들 (예로, 지방성 물질들)을 펩타이드들, 아미노산들, 단당류들, 핵산들 및 지방산들로 분해하는 데 요구되는 적어도 하나의 효소들 (예로, 리소좀 산 리파제)의 결핍으로부터 유발되는 유전적 장애들의 그룹을 말한다. 그 결과로, 리소좀 효소 결핍들을 앓고 있는 개인들은 다양한 조직들 (예로, 간, 비장, 창자, 혈관 벽들 및 기타 기관들)에서 축적된 물질들을 가진다.

리소좀 효소 ( lysosomal enzyme ): 본 명세서에서 사용되는 바, 용어 "리소좀 효소"는 포유동물 리소좀들에서 축적된 물질들을 감소시킬 수 있고 하나 이상의 리소좀 효소 결핍 증상들 (예로, 발달 손상, 간 부전 등)을 회복시키거나 개선시킬 수 있는 효소라면 모두 (예로, 리소좀 산 리파제 (LAL))를 말한다. 본 발명에 적합한 리소좀 효소들은 야생형 또는 변형된 리소좀 효소들을 둘 다 포함하고, 재조합 및 합성 방법들을 사용하여 생산되거나 천연의 출처들로부터 정제될 수 있다.

폴리펩타이드 ( polypeptide ): 본 명세서에서 사용되는 바, "폴리펩타이드"는 일반적으로 말하자면 펩타이드 결합에 의해 서로 부착된 적어도 두 개의 아미노산들의 가닥을 말한다. 일정 구현예들에서, 폴리펩타이드는 적어도 하나의 펩타이드 결합에 의해 다른 것들과 각각 부착된 적어도 3 내지 5개의 아미노산들을 포함할 수 있다. 당업자들이라면 폴리펩타이드들이 선택적으로 폴리펩타이드 사슬 내로 통합될 수 있는 "비-천연의 (non-natural)" 아미노산들 또는 기타 다른 실체들을 그럼에도 불구하고 때로 포함할 수 있는 점을 인정할 것이다.

실질적인 상동성 ( Substantial homology ): 본 발명에서 어구 "실질적인 상동성"은 아미노산 또는 핵산 서열들 간의 비교를 말하는 것으로 사용된다. 당업자들이라면 인정할 바와 같이, 일반적으로 두 개의 서열들은 그들의 해당하는 위치들에서 상동한 잔기들을 포함하는 경우 "실질적으로 상동한 (substantially homologous)" 것으로 고려된다. 상동한 잔기들은 일치하는 잔기들 (identical residues)일 수 있다. 임의적으로, 상동한 잔기들은 대략적으로 유사한 구조적 및/또는 기능적 특징들을 가지는 비-일치하는 잔기일 수 있다. 예를 들면, 당업자들이라면 잘 숙지하고 있는 바와 같이, 전형적으로 소정의 아미노산들은 "소수성" 또는 "친수성" 아미노산들로서, 및/또는 "극성" 또는 "비극성" 측쇄들을 가지는 것으로서 분류된다. 하나의 아미노산의 동일한 유형의 또 다른 이마노산으로의 치환은 종종 "상동한" 치환으로서 고려될 수 있다.

당해 기술 분야에서 알려져 있는 바와 같이, 아미노산 또는 핵산 서열들은 뉴클레오타이드 서열들의 경우 BLASTN, 아미노산 서열들의 경우 BLASTP, 갭 (gapped) BLAST, 및 PSI-BLAST와 같은 시판되는 컴퓨터 프로그램들에서 입수가능한 것들을 포함하는 다양한 알고리즘들이라면 모두를 사용하여 비교될 수 있다. 이러한 대표적인 프로그램들은 Altschul, et al., Basic local alignment search tool, J. Mol . Biol ., 215(3): 403-410, 1990; Altschul, et al., Methods in Enzymology; Altschul, et al., "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs", Nucleic Acids Res. 25:3389-3402, 1997; Baxevanis, et al., Bioinformatics : A Practical Guide to the Analysis of Genes and Proteins, Wiley, 1998; 또한 Misener, et al., (eds.), Bioinformatics Methods and Protocols (Methods in Molecular Biology, Vol. 132), Humana Press, 1999에 기술되어 있다. 상동한 서열들을 확인하는 것에 추가하여, 상기 언급된 프로그램들은 전형적으로 상동성의 정도 지시를 제공한다. 일정 구현예들에서, 두 개의 서열들은 잔기들의 적절한 연장길이 (stretch)에 걸쳐서 해당하는 그들의 잔기들의 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상이 상동한 경우라면 실질적으로 상동한 것으로 고려된다. 일정 구현예들에서, 적절한 연장길이는 완전한 서열이다. 일정 구현예들에서, 적절한 연장길이는 적어도 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 또는 500개 이상의 잔기들이다.

실질적인 일치도 ( substantial identity ): 본 명세서에서 어구 "실질적인 일치도"는 은 아미노산 또는 핵산 서열들 간의 비교를 말하는 것으로 사용된다. 당업자라면 인정할 바와 같이, 일반적으로 두 개의 서열들은 그들의 해당하는 위치들에서 일치하는 잔기들을 포함하는 경우 "실질적으로 일치하는 (substantially identical)" 것으로 고려된다. 당해 기술 분야에서 알려져 있는 바와 같이, 아미노산 또는 핵산 서열들은 뉴클레오타이드 서열들의 경우 BLASTN, 아미노산 서열들의 경우 BLASTP, 갭 (gapped) BLAST, 및 PSI-BLAST와 같은 시판되는 컴퓨터 프로그램들에서 입수가능한 것들을 포함하는 다양한 알고리즘들이라면 모두를 사용하여 비교될 수 있다. 이러한 대표적인 프로그램들은 Altschul, et al., Basic local alignment search tool, J. Mol . Biol ., 215(3): 403-410, 1990; Altschul, et al., Methods in Enzymology; Altschul, et al., "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs", Nucleic Acids Res. 25:3389-3402, 1997; Baxevanis, et al., Bioinformatics : A Practical Guide to the Analysis of Genes and Proteins, Wiley, 1998; 또한 Misener, et al., (eds.), Bioinformatics Methods and Protocols (Methods in Molecular Biology, Vol. 132), Humana Press, 1999에 기술되어 있다. 일치하는 서열들을 확인하는 것에 추가하여, 상기에 언급된 프로그램들은 전형적으로 일치도의 정도 지시를 제공한다. 일정 구현예들에서, 두 개의 서열들은 잔기들의 적절한 연장길이에 걸쳐서 해당하는 그들의 잔기들의 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상이 일치하는 경우라면 실질적으로 일치하는 것으로 고려된다. 일정 구현예들에서, 적절한 연장길이는 완전한 서열이다. 일정 구현예들에서, 적절한 연장길이는 적어도 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 또는 500개 이상의 잔기들이다.

치료적 유효량 ( therapeutically effective amount ): 본 명세서에서 사용되는 바, 용어 "치료적 유효량"은 의학적 치료라면 모두에 적용가능한 합리적인 유익/위험 비율로 치료되는 개체에 미치는 치료적 효과를 부여하는 치료적 리소좀 효소 (예로, 리소좀 산 리파제 (LAL))의 양을 말한다. 치료적 효과는 주관적 (예로, 일정의 테스트 또는 마커에 의해 측정가능) 또는 객관적 (예로, 개체가 효과의 표시하거나 느낌)일 수 있다. 상세하게, "치료적 유효량"은 질환과 연관된 증상들을 개선하거나 질환의 발병을 예방하거나 지연시키는 것, 및/또는 질환의 증상들의 중증도 또는 빈도도 역시 경감하는 것에 의해서와 같이 원하는 질환 또는 병태를 치료하거나, 개선하거나, 예방하는 데, 또는 검출가능한 치료적 또는 예방적 효과를 나타내는 데 효과적인 치료적 단백질 또는 조성물의 양을 말한다. 치료적 유효량은 공통적으로 다수의 단위 투여량들을 포함할 수 있는 투여 요법 (dosing regimen)으로 투여된다. 특정한 치료적 단백질이라면 모두의 경우, 치료적 유효량 (및/또는 효과적인 투여 요법 내의 적절한 단위 투여량)은, 예를 들면 투여의 경로 또는 다른 치료제들과의 조합에 의존하여 다양화될 수 있다. 또한, 특정한 환자를 위한 치료적 유효량 (및/또는 단위 투여량)은 치료되는 장애 및 장애의 중증도; 적용되는 특이적 치료제의 활성; 적용되는 특이적 조성물; 환자의 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별 및 식이요법; 투여 시간, 투여 경로, 및/또는 배출율 또는 적용되는 특이적 융합 단백질의 대사; 치료의 지속기간; 및 의학적 기술분야에서 잘 알려져 있는 요인들 등을 포함하는 다양한 요인들에 의존할 수 있다.

치료 ( treatment ): 본 명세서에서 사용되는 바, 용어 "치료" (또한 "치료하다 (treat)" 또는 "치료하는 (treating)")은 부분적으로 또는 완벽하게 특정한 질환, 장애, 및/또는 병태 (예로, 리소좀 산 리파제 결핍 (LALD))의 하나 이상의 증상들 또는 특징들을 완화시키고, 개선시키고, 안정시키고, 억제하고, 발병을 지연시키고, 중증도를 감소시키고 및/또는 이의 빈도를 감소시키는 치료적 단백질 (예로, 리소좀 산 리파제 결핍 (LALD) 질환)의 투여라면 모두를 말한다. 이러한 치료는 적절한 질환, 장애 및/또는 병태의 징후들을 발현하지 않는 개체 및/또는 단지 질환, 장애 및/또는 병태의 초기 징후들만을 나타내는 개체에게 할 수 있다. 임의적으로 또는 추가적으로, 이러한 치료는 적절한 질환, 장애 및/또는 병태의 하나 이상의 확립된 징후들을 발현하는 개체에게 할 수 있다.

본 발명은 리소좀의 산 리파제 결핍 (LALD) 질환, 상세하게는 울만병 및 CESD의 치료를 위한 조성물들 및 방법들을 제공한다. 무엇보다도, 본 발명은 리소좀 산 리파제의 치료적 유효량을 LALD 질환을 앓고 있거나 이에 취약한 포유동물에게 투여하는 조성물들 및 방법들을 제공한다.

본 발명의 다양한 관점들은 다음의 섹션들에서 자세하게 기술된다. 섹션들의 사용은 본 발명을 제한하도록 의미하지 않는다. 각 섹션은 본 발명의 관점이라면 모두에 적용될 수 있다. 본 출원에서 "또는 (or)"의 사용은 달리 진술되지 않는 경우라면 "및/또는 (and/or)"을 의미한다.

리소좀 산 리파제 결핍

리소좀 산 리파제 (LAL)는 리소좀에서 콜레스테롤 에스테르들 및 트리글리세라이드들을 가수분해하는 효소이다. LAL 결핍 질환 (LALD)는 LAL 활성의 결여로부터 유발되고 다양한 조직들에서 지방성 물질의 대량적 축적을 유도하는 상염색체 열성 유전병이다. LALD는 전형적으로 생애 첫 해에 유아들을 침범하는 때로 울만질환이라고 불리는 (울만병, 울만 증후군으로도 역시 알려져 있음) LALD의 조기 발병으로서 소견을 나타낼 수 있다. 임의적으로 또는 추가적으로, LALD는 소아들 및 성인들을 침범할 수 있는 LALD의 만기 발병 (때로, 콜레스테릴 에스테르 축적병 (CESD))으로서 소견을 나타낼 수 있다.

울만병에 의해 걸린 개인들은 전형적으로 다른 조직들보다도 비장, 간, 골수, 소장, 부신샘들, 림프절들에 축적되는 지질들의 해로운 양들을 가진다. 일정 경우들에서, 칼슘 침전들이 침범된 개인들의 부신샘들에서 관찰된다. 울만병을 가진 유아들은 보통 출생 시 건강하게 보이지만 바로 간비장 비대증, 발달 손상 또는 종말들 (빈약한 무게 증가, 무게 손실, 조직 허약 또는 쇠약), 낮은 근육 긴장, 황달, 구토, 설사, 발달 지연, 빈혈, 및/또는 음식으로부터 빈약한 영양분들의 흡수를 포함하는, 장애의 징후들 및 증상들을 발달시킨다 (예를 들면, Genetics Home Reference http://ghr.nlm.nih.gov/을 참조하고, 그의 내용들 전부는 본 명세서에서 참고문헌으로 통합되어 있다). 이들 유아들은 전형적으로 심각한 영양실조를 발생시키고 그들의 생애 첫 해에 죽는다. 예를 들면, 크록커 (Crocker) 및 동료들은 울만병에 걸린 세 명의 개인들의 사례 연구들을 발표하였다 (Crocker, et al. Pediatrics "Wolman's disease: Three New Patients with a Recently Described Lipidosis" 1965, 그의 내용들 전부는 본 명세서에서 참고문헌으로 통합되어 있다). 크록커 및 동료들에 의해 연구된 세 명 개인들 각각은 적어도 부분적으로는 무게 증가에서 획득 부전 또는 어려움으로 인해 입원하였다. 개인들은 무엇보다도 설사 및 구토로도 역시 고생하였고, 영양 섭취의 노력에도 불구하고 기아의 병태로 죽었다.

만기 발병 LAL 결핍은 때로 콜레스테릴 에스테르 축적병 (CESD)이라고 불리고, 소아들 및 성인들을 침범한다. 전형적으로, CESD 환자들은 확장된 간 (간비대증), 간경변, 만성 간부전, 중증 미성숙 죽상동맥경화증, 동맥들의 경화, 또는 혈청 저밀도 지질단백질 (LDL)의 올라간 수준들을 겪게 된다. 소아들은 부신샘들에서 칼슘 침전들을 가지고 황달을 발생시킬 수도 역시 있다.

비-인간 동물 모델들이 LALD를 연구하도록 개발되었다. 요시다 (LAL 결핍) 래트는 인간 울만병과 가장 유사한 유전적 지질 축적병의 동물 모델로서 특성분석되어 왔다 (Yoshida and Kuriyama, Laboratory Animal Science 40(5) 1990, 그의 내용들 전부는 본 명세서에서 참고문헌으로 통합되어 있다). 인간들과 같이, 침범된 래트들은 상염색체 열성 방식으로 질환을 유전시키고, 질환은 발달 손상 및 종말증, 간비장비대증, 림프절 확장, 및 비후 확장된 창자를 특징으로 한다. 많은 특징적인 거품 세포들이 침범된 마우스의 간들 및 비장들에서 관찰된다. 콜레스테릴 에스테르들 및 트리글리세라이드들 둘 다의 대량적 세포내 축적이 간, 부신샘 및 창자에서 관찰되고 있다. 침범된 래트들은 전형적으로 약 120일령에서 생식 없이 죽는다.

요시다 래트 LALD 모델의 생물학적 특성분석이 수행되었다 (예를 들면, Kuriyama et al. Journal of Lipid Research 31:1695; 1990, 그의 내용들 전부는 본 명세서에서 참고문헌으로 통합되어 있다). 침범된 래트들은 다양한 조직들에서 콜레스테릴 에스테르들 (예로, 간 및 비장에서 각각 13.3배 및 2.5배), 자유 콜레스테롤 (예로, 간 및 비장에서 각각 2.8배 및 1.33배) 또한 트리글리세라이드들 (예로, 간에서 5.4배)를 축적하였다. 침범된 래트들은 간 및 비장 둘 다에서 리놀레산 (예로, 18:2) 및 아라키돈산 (예로, 20:4)의 높은 백분율을 보여주었다.

실시예들 섹션에서 기술된 바와 같이, 본 발명은 재조합 인간 리소좀 산 리파제 (rhLAL)을 요시다 래트들에게 투여하는 단계가 다양한 울만병 또는 CESD-유사 증상들을 성공적으로 치료하여 개선된 육안적 간, 비장 및 창자 병리학, 다양한 조직들에서 유의하게 감소된 지질 축적, 및 상세하게는 놀랍게도 신체 성장 및 체중 증가에서 실질적인 개선을 가져왔던 점을 확인하였다. 그리하여, 처리된 동물들은 야생형 동물들과 비슷한 주간 체중 증가 백분율을 가진 체중 증가를 나타내었다. 따라서, 무엇보다도, 본 발명자들은 발달 부전 또는 종말증, 울만병에서 본 가장 호된 증상이 재조합 리소좀 산 리파제를 사용하여 효과적으로 치료될 수 있는 점을 보여주었다.

리소좀 산 리파제

본 발명을 위해 적합한 리소좀 산 리파제 효소는 포유동물 조직들에서 축적된 지방성 물질들을 감소시킬 수 있거나 하나 이상의 리소좀 산 리파제 결핍 (LALD) 질환 증상들 (예로, 발달 손상, 또는 간부전 등)을 회복시키거나 개선할 수 있는 효소라면 모두를 포함한다.

일정 구현예들에서, 인간 리소좀 산 리파제 (LAL) (인간 리소좀 산 지질 리파제 또는 콜레스테릴 에스테르 가수분해효소라고도 역시 말함)가 사용되었다. 전형적으로, 인간 LAL의 성숙한 형태가 사용되었다. 성숙한 인간 LAL (서열번호 1)의 서열이 하기 표 1에 나열되고 하기에 기술된다. 전형적으로, 인간 LAL은 N-말단에서 21개-아미노산 신호 펩타이드를 포함하는 전구체 단백질로서 먼저 합성된다. 신호 펩타이드는 번역후 전달되어 인간 LAL의 성숙한 형태를 가져온다. 신호 펩타이드 (서열번호 2) 및 전장의 전구체 단백질 (서열번호 3)의 서열들도 역시 표 1에 나타나 있다. 하기 표 1은 인간 리소좀 산 리파제/콜레스테릴 에스테르 가수분해효소 (P38571)를 나타낸다.

인간 리소좀 산 리파제 폴리펩타이드들의 천연 변이체들이 알려져 있다. 예를 들면, 일정 구현예들에서, 서열번호 1의 1번 내지 35번 잔기들에 해당하는 서열번호 3의 1번 내지 56번 잔기들이 결실된다. 일정 구현예들에서, 서열번호 1의 36번 내지 55번 잔기들에 해당하는 서열번호 3의 57번 내지 76번 잔기들 (DGYILCLNRIPHGRKNHSDK)이 MACLEFVPFDVQMCLEFLPS (서열번호 4)와 치환된다. 일정 구현예들에서, 서열번호 1의 2번 잔기에 해당하는 서열번호 3의 23번 잔기는 Gly의 Arg으로 치환을 가진다. 일정 구현예들에서, 서열번호 1의 8번 잔기에 해당하는 서열번호 3의 29번 잔기는 Val의 Leu로 치환을 가진다. 일정 구현예들에서, 서열번호 1의 207번 잔기에 해당하는 서열번호 3의 228번 잔기는 Phe의 Ser으로 치환을 가진다.

일정 구현예들에서, 본 발명을 위해 적합한 리소좀 산 리파제 효소는 서열번호 1과 실질적으로 상동하다. 일정 구현예들에서, 적합한 리소좀 산 리파제 효소는 서열번호 1과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 상동한 서열을 가진다.

일정 구현예들에서, 적합한 리소좀 산 리파제 효소는 서열번호 1과 실질적으로 일치한다. 일정 구현예들에서, 적합한 리소좀 산 리파제 효소는 서열번호 1과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 일치하는 서열을 가진다.

일정 구현예들에서, 본 발명을 위해 적합한 리소좀 산 리파제 효소는 인간 LAL의 단편, 또는 인간 LAL, 또는 그의 일부분과 같은 리소좀 산 리파제를 포함하는 융합 단백질이다.

본 발명을 위해 적합한 리소좀 산 리파제 효소는 입수가능한 수단이라면 모두에 의해 생산될 수 있다. 예를 들면, 리소좀 산 리파제 효소들은 LAL 폴리펩타니즈-인코딩 핵산을 발현하도록 조작된 숙주세포 시스템을 사용하여 재조합으로 생산될 수 있다. 임의적으로 또는 추가적으로, 리소좀 산 리파제 효소들은 화학적 합성에 의해 부분적으로 또는 전적으로 제조될 수 있다. 임의적으로 또는 추가적으로, 리소좀 산 리파제 효소들은 천연 출처들로부터도 역시 정제될 수 있다.

리소좀 산 리파제 효소들이 재조합으로 생산되는 곳에서, 발현 시스템이라면 모두가 사용될 수 있다. 단지 수 개의 예를 들자면, 기지의 발현 시스템들로는 예를 들면 달걀, 배큘로바이러스, 식물, 효모, 또는 포유동물 세포들을 포함한다.

일정 구현예들에서, 본 발명을 위해 적합한 리소좀 산 리파제 효소들은 포유동물 세포들에서 생산된다. 본 발명에 따라 사용될 수 있는 포유동물 세포들의 비제한적인 예들로는 BALB/c 마우스 골수종 계열 (NSO/l, ECACC 제 85110503호); 인간 망막모세포들 (PER.C6, CruCell, Leiden, 네델란드); SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 계열 (COS-7, ATCC CRL 1651); 인간 배아 신장 계열 (현탁 배양에서의 성장을 위해 서브클론된 293 또는 293 세포들, Graham et al., J. Gen Virol., 36: 59,1977); 인간 섬유육종 세포주 (HT1080); 새끼 햄스터 신장 세포들 (BHK, ATCC CCL 10); 중국 햄스터 난소 세포들 +/-DHFR (CHO, Urlaub and Chasin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77: 4216, 1980); 마우스 세르톨리 세포들 (TM4, Mather, Biol. Reprod., 23: 243-251, 1980); 원숭이 신장 세포들 (CV1 ATCC CCL 70); 아프리카의 녹색 원숭이 신장 세포들 (VERO-76, ATCC CRL-1 587); 인간 자궁경부 암종 세포들 (HeLa, ATCC CCL 2); 고양이 신장 세포들 (MDCK, ATCC CCL 34); 버팔로 래트 간 세포들 (BRL 3A, ATCC CRL 1442); 인간 폐 세포들 (W138, ATCC CCL 75); 인간 간 세포들 (Hep G2, HB 8065); 마우스 유선 종양 (MMT 060562, ATCC CCL51); TRI 세포들 (Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci., 383:44-68, 1982); MRC 5 세포들; FS4 세포들; 및 인간 간암 계열 (Hep G2)을 포함한다.

일정 구현예들에서, 본 발명을 위해 적합한 리소좀 산 리파제 효소들은 조류 발현 시스템들에서, 예로 키메라 닭들의 달걀들에서 생산된다. 리소좀 산 리파제들을 포함하는 단백질들을 조류 발현 시스템들에서 발현하는 대표적인 방법론들은 국제특허출원 PCT 제 WO 2004/015123호 또한 미국 특허공고들 제 20060191026호, 제 20090178147호; 제 20090180989호; 제 20100083389호; 및 제 2010033219호에 기술되어 있고, 이들 각각의 내용들 전부는 본 명세서에서 참고문헌으로 통합된다.

일정 구현예들에서, 본 발명을 위해 적합한 리소좀 산 리파제 효소들은 식물 발현 시스템들에서, 예로 담배 식물들 또는 관련 종들 (예로, 니코티아나 (Nicotiana) 종)에서 생산된다. 일정 구현예들에서, 리소좀 산 리파제 효소는 니 코티아나 벤타미아나 (Nicotiana benthamiana)에서 발현된다. 리소좀 산 리파제들을 포함하는 단백질들을 식물 발현 시스템들에서 발현하는 대표적인 방법론들이 당해 기술분야에서 알려져 있다. 예를 들면, GENEWARE^®기술학은 담배 식물 내에 이종유래 단백질들을 발현하도록 변형된 담배 모자이크 바이러스 벡터를 사용한다. 발현된 단백질들은 연속적으로 분리되고 및/또는 정제될 수 있다.

일정 구현예들에서, 본 발명을 위해 적합한 리소좀 산 리파제 효소들은 효모 발현 시스템들에서, 예로 메틸영양성 효모에서 생산된다. 일정 구현예들에서, 리소좀 산 리파제 효소는 피키아 파스토리스 (Pichia pastoris)에서 발현된다. 리소좀 산 리파제들을 포함하는 단백질들을 효모 발현 시스템들에서 발현하는 대표적인 방법론들이 당해 기술분야에서 알려져 있다 (예를 들면, Daly, et al. J Mol Recognit. 18:119 (2005)를 참조하고, 그의 내용들 전부는 본 명세서에서 참고문헌으로 통합되어 있다).

다른 발현 시스템들이 당해 기술분야에서 알려져 있고 본 명세서에서 기술된 리소좀 산 리파제 효소들을 생산하는 데 사용될 수 있는 점이 이해될 것이다.

일정 구현예들에서, 적합한 발현 시스템에 의해 생산된 리소좀 산 리파제 효소들은 자연적으로-생기는 인간 LAL의 수치와 유사하거나 일치하는 당화 수준 또는 양상을 가질 수 있다. 일정 구현예들에서, 적합한 발현 시스템에 의해 생산된 리소좀 산 리파제 효소들은 자연적으로-생기는 인간 LAL과 비교 시 증가된 또는 감소된 당화 수준 또는 변경된 당화 양상을 가질 수 있다. 예를 들면, 리소좀 산 리파제들이 그의 발명이 본 명세서에서 참고문헌으로 통합되어 있는 미국 특허공고 제 20090178147호에 기술된 바와 같이 트랜스유전자 (transgene)-강화된 당화 조류들을 사용하여 생산될 수 있다. 일정 구현예들에서, 본 발명을 위해 적합한 리소좀 산 리파제들은 그의 발명이 본 명세서에서 참고문헌으로 통합되어 있는 국제특허출원 제 WO 2011133960호에 기술된 바와 같이 다양한 N-글리칸 구조들과 같은 특정한 당화 양상을 포함할 수 있다.

일정 구현예들에서, 적합한 리소좀 산 리파제 효소들은 효소의 당화 수준 또는 양상을 변경하도록 번역후 변형될 수 있다. 예를 들면, 리소좀 산 리파제 효소는 당화 수준들을 증가시키거나 감소시키도록 변형될 수 있다. 일정 구현예들에서, 리소좀 산 리파제 효소는 당화될 수 있다.

LAL 결핍의 치료

본 발명의 방법들은 LALD 질환들을 앓고 있거나 이에 취약한 개인들, 상세하게는 울만병 또는 콜리스테릴 에스테르 축적병 (CESD)에 의해 침범된 이들 개인들을 효과적으로 치료하는 데 사용될 수 있다. 용어들, "치료하다" 또는 "치료"는 본 명세서에서 사용되는 바, 본 질환과 연관된 하나 이상의 증상들의 개선, 질환의 하나 이상의 증상들의 예방 또는 발병의 지연, 및/또는 질환의 하나 이상의 증상들의 중증도 또는 빈도의 감소를 말한다.

일정 구현예들에서, 치료는 LALD 환자에서 발달 손상의 부분적으로 또는 완전하게 완화, 개선, 이완, 저해, 발병의 지연, 중증도 및/또는 유병율의 경감을 말한다. 본 명세서에서 사용되는 바, 용어 "발달 손상 (developmental impairment)"은 LALD 질환을 앓고 있는 환자에서 영양실조, 또는 성장 부전과 연관된, 이에 제한되는 것은 아니지만 발달 지연, 빈약한 무게 증가, 또는 무게 손실, 다양한 조직들의 허약 또는 쇠약 (근육, 피하 조직들 등)를 포함하는 다양한 증상들을 포함한다. 발달 손상은 전형적으로 빈번한 구토, 설사, 또는 복부 팽창과 연관되어 있다. 발달 손상은 영양 실조, 종말증 또는 생식부전이라고도 역시 말한다. 본 명세서에서 사용되는 바, 발달 손상은 울만병 및 CESD 둘 다의 증상들을 포괄한다.

따라서, 일정 구현예들에서, 치료는 개선된 체중 증가 (예로, 전체 무게 증가, 주당, 개월당, 2개월당, 6개월당 등의 체중 증가 백분율)를 말한다. 소정의 구현예들에서, 전체중 증가는 평균적으로 주당 약 0.1 kg, 약 0.2 kg, 약 0.3 kg, 약 0.4 kg, 약 0.5 kg, 약 0.6 kg, 약 0.7 kg, 약 0.8 kg, 약 0.9 kg, 약 1 kg, 약 1.1 kg, 약 1.2 kg, 약 1.3 kg, 약 1.4 kg, 약 1.5 kg, 약 1.6 kg, 약 1.7 kg, 약 1.8 kg, 약 1.9 kg, 약 2 kg, 약 2.1 kg, 약 2.2 kg, 약 2.3 kg, 약 2.4 kg, 약 2.5 kg, 약 2.6 kg, 약 2.7 kg, 약 2.8 kg, 약 2.9 kg, 또는 약 3 kg 이상이다. 일정 구현예들에서, 주당 체중 증가 백분율은 평균적으로 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 100% 넘게 증가이다. 본 명세서에서 사용되는 바, 체중 증가 백분율은 증가 이전의 기본 전체중과 전체중 증가를 비교하여 결정된다. 일정 구현예들에서, 치료는 LALD 환자에서 정상적인 전체중 증가 또는 체중 증가 백분율을 유도한다. 본 명세서에서 사용되는 바, 정상적인 전체중 증가 또는 체중 증가 백분율은 LALD 환자와 동일한 발달 단계 (예로, 동일한 연령, 동일한 성별)에서 평균적 건강한 개인의 경우 평균 전체중 증가 또는 평균 체중 증가 백분율을 말한다.

일정 구현예들에서, 치료는 감소된 또는 예방된 무게 손실 (예로, 전체중 손실, 주당, 개월당, 2개월당, 6개월당 등의 체중 감소 백분율)를 말한다. 일정 구현예들에서, 전체중 손실은 평균적으로 주당 약 0.1 kg, 약 0.2 kg, 약 0.3 kg, 약 0.4 kg, 약 0.5 kg, 약 0.6 kg, 약 0.7 kg, 약 0.8 kg, 약 0.9 kg, 약 1 kg, 약 1.1 kg, 약 1.2 kg, 약 1.3 kg, 약 1.4 kg, 약 1.5 kg, 약 1.6 kg, 약 1.7 kg, 약 1.8 kg, 약 1.9 kg, 약 2 kg, 약 2.1 kg, 약 2.2 kg, 약 2.3 kg, 약 2.4 kg, 약 2.5 kg, 약 2.6 kg, 약 2.7 kg, 약 2.8 kg, 약 2.9 kg, 또는 약 3 kg 이하이다. 일정 구현예들에서, 무게 손실 백분율은 평균적으로 주당 약 0.1%, 약 0.5%, 약 1%, 약 1.5%, 약 2%, 약 2.5%, 약 3%, 약 3.5%, 약 4%, 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 또는 약 25% 이하이다. 본 명세서에서 사용되는 바, 체중 손실 백분율은 손실 이전에 기저 전체중과 전체중 증가를 비교하여 결정된다.

일정 구현예들에서, 치료는 감소된 또는 제거된 조직 허약 또는 쇠약 (예로, 근육 및/또는 피하 조직들에서 허약 또는 쇠약)을 말한다. 일정 구현예들에서, 치료는 구토 및/또는 설사의 감소된 빈도를 말한다.

일정 구현예들에서, 치료는 다양한 조직들 (예로, 간, 비장, 창자, 혈관 벽들, 골수, 골수, 부신샘들 (각 신장 첨부 상의 작은 호르몬-생산 샘들)에서 지방성 물질 (예로, 콜레스테롤 및/또는 트리글리세라이드들과 같은 지질들)의 축적의 감소를 말한다. 일정 구현예들에서, 치료는 지질 축적의 감소를 10% 넘게, 20% 넘게, 30% 넘게, 40% 넘게, 50% 넘게, 60% 넘게, 70% 넘게, 80% 넘게, 90% 넘게, 또는 95% 넘게 유도한다. 일정 구현예들에서, 치료는 다양한 조직들 (예로, 간, 비장, 창자, 혈관 벽들, 골수, 골수, 부신샘들 (각 신장의 첨부 상의 작은 호르몬-생산 샘들)에서 지질 축적의 실질적인 제거를 유도한다.

일정 구현예들에서, 치료는 다양한 조직들 (예로, 간, 비장, 소장들)에서 개선된 육안적 조직 병리학을 말한다. 예를 들면, 치료는 전체중 대비 감소된 상대적 조직 (예로, 간, 비장, 소장) 무게 및/또는 부피를 유도할 수 있다. 일정 구현예들에서, 치료는 치료전 상태와 비교 시 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%로 전체중 대비 감소된 상대적 조직 (예로, 간, 비장, 소장) 무게 및/또는 부피를 말한다. 일정 구현예들에서, 본 발명에 따른 치료는 동일한 발달 단계 (예로, 동일한 연령 및 성별)에서 건강한 개인의 수치와 유사한 상대적 조직 (예로, 간, 비장, 소장) 무게 및/또는 부피를 유도한다.

조직 분석들, 예로 지방 함량 및/또는 육안적 조직 병리학, 및/또는 상대적 조직 무게 또는 부피가 당해 기술분야에서 입수가능하고, 본 명세서에서 기술된 적절한 방법이라면 모두에 의해 결정될 수 있는 점이 이해될 것이다. 예를 들면, 일정 구현예들에서, 조직 병리학 및 상대적 무게/부피는 자기공명 영상화 (MRI) 및/또는 자기공명 분광분석법 (MRS)에 의해 분석된다. 예로, d'Assignies et al . Magnetic Resonance 21: 301 2011를 참조하고, 그의 내용은 본 명세서에서 참고문헌으로 통합되어 있다. 다시그니 및 동료들은 MRI/MRS에 의해 환자들에서 간 부피 및 전체 간 지방 함량의 동시적 평가를 기재하였다. 추가적인 조직 분석 방법들로는, 이에 제한되는 것은 아니지만 전산화 단층촬영법 (CT), 조직 생검, 조직 기능의 생화학적 테스트들, 제논 청소율들, 또는 그들의 조합을 포함한다. 따라서, 일정 구현예들에서, 치료는 본 명세서에서 기술되거나 당해 기술분야에서 알려져 있는 하나 이상의 방법들에 의해 결정된 바와 같이 개선된 육안적 조직 병리학, 형태, 상대적 조직 무게 또는 부피, 또는 지방 함량을 말한다.

일정 구현예들에서 치료는 혈청에서 지방성 물질 (예로, 콜레스테롤 및/또는 트리글리세라이드들과 같은 지질들)의 감소를 말한다. 일정 구현예들에서, 치료는 치료 이전 수준과 비교 시, 10% 넘게, 20% 넘게, 30% 넘게, 40% 넘게, 50% 넘게, 60% 넘게, 70% 넘게, 80% 넘게, 90% 넘게, 또는 95% 넘게 혈청에서 지질의 감소를 유도한다. 일정 구현예들에서, 본 발명에 따른 치료는 동일한 발달 단계 (예로, 동일한 연령 및 성별)에서 건강한 개인의 수치와 유사한 혈청 지방성 물질 (예로, 콜레스테롤 및/또는 트리글리세라이드들과 같은 지질들) 수준을 유도한다.

일정 구현예들에서, 치료는 혈액에서 소정의 효소들의 존재 및/또는 양들 또는 활성들에 의해 결정된 바와 같이 조직 기능 (예로, 간, 심장, 근육, 신장 등)의 개선을 말한다. 예를 들면, 조직 기능은 아스파테이트 아미노전이효소 (AST) (혈청 글루타믹 옥살아세틱 트랜스아미나제 (SGOT)라고도 역시 알려져 있음) 및/또는 알라닌 아미노전이효소 (ALT) (혈청 글루타믹 피루빅 트랜스아미나제 (SGPT)라고도 역시 알려져 있음)의 존재 및/또는 양들에 의해 결정될 수 있다. AST는 정상적으로 간, 심장, 근육, 신장, 및 뇌에서 발견되고, 전형적으로 이들 조직이라면 모두가 손상될 때 혈청 내로 방출된다. ALT는 소량들로 다른 조직들에서 발견될 수는 있긴 하더라도 정상적으로는 주로 간에서 발견된다. ALT는 전형적으로 간 상해의 결과로서 혈청 내로 방출되고, 간 상태의 매우 특이적인 지시자로서 작용한다. 다양한 조직 (예로, 간, 심장, 근육, 신장 등) 기능을 지시하는 기타 효소들이 당해 기술분야에 숙지되어 있고, 본 발명에 따라 치료 효능을 감시하는 데 사용될 수 있다.

일정 구현예들에서, 치료는 증가된 생존 (예로, 생존 시간)을 말한다. 예를 들면, 치료는 환자의 증가된 기대 수명을 유도할 수 있다. 일정 구현예들에서, 본 발명에 따른 치료는 치료 없이 유사한 질환 형태를 가진 한 명 이상의 대조군 개인들의 평균 기대 수명과 비교 시, 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 100%, 약 105%, 약 110%, 약 115%, 약 120%, 약 125%, 약 130%, 약 135%, 약 140%, 약 145%, 약 150%, 약 155%, 약 160%, 약 165%, 약 170%, 약 175%, 약 180%, 약 185%, 약 190%, 약 195%, 또는 약 200% 넘게 환자의 증가된 기대 수명을 유도한다. 일정 구현예들에서, 본 발명에 따른 치료는 치료 없이 유사한 질환 형태를 가진 한 명 이상의 대조군 개인들의 평균 기대 수명과 비교 시, 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 약 6개월, 약 7개월, 약 8개월, 약 9개월, 약 10개월, 약 11개월, 약 12개월, 약 2년, 약 3년, 약 4년, 약 5년, 약 6년, 약 7년, 약 8년, 약 9년, 또는 약 10년 넘게 환자의 증가된 기대 수명을 유도한다. 일정 구현예들에서, 본 발명에 따른 치료는 환자, 상세하게는 울만병을 앓고 있는 환자의 장기간 생존을 유도한다. 본 명세서에서 사용되는 바, 용어 "장기간 생존"은 약 10년, 15년, 20년, 25년, 또는 30년 이상보다 긴 생존 시간 또는 기대 수명을 말한다.

용어들 "개선하다", "증가하다" 또는 "감소하다"는 본 명세서에서 사용되는 바, 본 명세서에서 기술되는 치료의 개시 이전에 동일한 개인에서 측정 또는 본 명세서에서 기술된 치료의 부재 시 대조군 개인 (또는 복수의 대조군 개인들)과 같은 기저선 측정과 대비한 수치들을 가리킨다. "대조군 개인"은 (치료된 개인 및 대조군 개인(들)에서 질환의 단계들이 비슷한 점을 입증하도록) 치료되고 있는 개인과 거의 동일한 연령 및/또는 성별이고, 치료되고 있는 개인과 동일한 형태의 리소좀 산 리파제 결핍 (LALD) 질환 (조기-발병 (예로, 울만병) 또는 만기-발병 (예로, 콜레스테릴 에스테르 축적병 (CESD))으로 시달리는 개인이다.

치료되고 있는 개인 ("환자" 또는 "개체"라고도 역시 말함)은 리소좀 산 리파제 결핍 (LALD) 질환 (조기-발병 (예로, 울만병) 또는 만기-발병 (예로, 콜레스테릴 에스테르 축적병 (CESD))을 가지거나 리소좀 산 리파제 결핍 (LALD) 질환을 발생시키도록 잠재력을 가지는 개인 (태아, 유아, 소아, 청소년, 또는 성인 인간)이다. 개인은 남아있는 내인성 리소좀 산 리파제 (LAL) 활성을 가지거나, 측정가능한 활성을 전혀 가지지 않을 수 있다. 예를 들면, 리소좀 산 리파제 결핍 (LALD) 질환을 가지는 개인은 정상적 LAL 활성의 약 1% 이하인 LAL 활성 (예로, 보통 조기-발병 울만병과 연관된 LAL 활성), 또는 정상적 LAL 활성의 약 1 내지 10%인 LAL 활성 (예로, 보통 만기-발병 콜레스테릴 에스테르 축적병 (CESD)과 연관된 LAL 활성)을 가질 수 있다.

일정 구현예들에서, 개인은 최근에 본 질환으로 진단되었던 개인이다. 전형적으로, 조기 치료 (진단 이후 가능한 빨리 시작하는 치료)가 질환의 효과들을 최소화하고 치료의 유익들을 최대화하는 데 중요하다.

리소좀 산 리파제의 투여

본 발명의 방법들에서, 리소좀 산 리파제 (LAL)은 전형적으로 개인에게 단독으로, 또는 리소좀 산 리파제 (LAL)을 포함하는 조성물들 또는 약제들로 (예로, 질환의 치료를 위한 약제의 제조) 투여된다. 본 조성물들은 약제학적 조성물을 제조하도록 생리학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제와 제형화될 수 있다. 단체 및 조성물은 무균일 수 있다. 제형물은 투여 방식을 맞추어야 한다.

적합한 약제학적으로 허용가능한 담체들로는 이에 제한되는 것은 아니지만 물, 염 용액들 (예로, NaCl), 식염수, 완충된 식염수, 알코올들, 글리세롤, 에탄올, 아라빅 검, 식물성 오일들, 벤질 알코올들, 폴리에틸렌 글리콜들, 젤라틴, 락토스, 아밀로스 또는 전분과 같은 탄수화물들, 만니톨, 슈크로스, 또는 기타와 같은 당들, 덱스트로스, 마그네슘 스테아레이트, 탈크, 실리크산, 점성 파라핀, 향오일, 지방산 에스테르들, 하이드록시메틸셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈 등, 뿐만 아니라 그들의 조합을 포함한다. 약제학적 조제물들은, 원하는 경우라면, 활성을 가진 화합물들과 유해하게 반응하지 않거나 그들의 활성을 개입하지 않는 보조적 제제들 (예로, 광택제들, 보존제들, 안정화제들, 습윤제들, 에멀전화제들, 삼투압에 영향을 주는 염들, 완충액들, 채색성, 향미성 및/또는 방향성 물질들 등)과 혼합될 수 있다. 일정 구현예들에서, 정맥내 투여에 적합한 물-용해성 담체가 사용된다.

본 조성물 또는 약제는, 원하는 경우라면, 소량들의 습윤 또는 에멀전화 제제들, 또는 pH 완충 제제들도 역시 포함할 수 있다. 조성물은 액상 용액, 현탁액, 에멀전, 정제, 환약, 캡슐, 지속된 방출 제형물, 또는 분말일 수 있다. 조성물은 트리글리세라이드들과 같은 통상적인 결합제들 및 담체들로 좌약으로서도 역시 제형화될 수 있다. 경구 제형물은 약제학적 등급의 만니톨, 락토스, 전분, 마그네슘 스테아레이트, 폴리비닐 피롤리돈, 소듐 사카린, 셀룰로스, 마그네슘 카보네이트 등과 같은 표준 담체들을 포함할 수 있다.

본 조성물 또는 약제는 인간들에게 투여를 위해 적응된 약제학적 조성물로서 일상적인 절차들에 따라 제형화될 수 있다. 예를 들면, 일정 구현예들에서, 정맥내 투여를 위한 조성물은 전형적으로 무균의 등장성 수용성 완충액에 있는 용액이다. 필요한 경우, 조성물은 주사 부위에서 통증을 경감하도록 용해화 제제 및 국소적 마취제도 역시 포함할 수 있다. 일반적으로, 성분들은 별도로 공급되거나 단위 용량 형태, 예를 들면 앰풀 또는 활성 제제의 정량을 표시하는 사케트와 같은 완전 밀봉된 용기에 넣은 건조 동결건조된 분말 또는 무수 농축물로서 다함께 혼합된다. 조성물이 주입에 의해 투여되는 경우, 이것은 무균의 약제학적 등급의 물, 식염수 또는 덱스트로스/물을 포함하는 주입병으로 조제될 수 있다. 조성물이 주사에 의해 투여되는 경우, 주사용 무균의 물 또는 식염수의 앰풀이 성분들이 투여 이전에 혼합될 수 있도록 제공될 수 있다.

리소좀 산 리파제 (LAL)은 중성 또는 염 형태들로서 제형화될 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 염들로는 염산, 인산, 아세트산, 옥살산, 타르타르산 등으로부터 유래한 것들과 같은 자유 아미노기들과 형성된 염들, 소듐, 포타슘, 암모니움, 칼슘, 철 수산화물들, 이소프로필아민, 트리에틸아민-2-에틸아미노 에탄올, 히스티딘, 프로케인 등으로부터 유래한 것들과 같은 자유 카르복실기들과 형성된 염들을 포함한다.

리소좀 산 리파제 (LAL) (또는 리소좀 산 리파제 (LAL)을 포함하는 조성물 또는 약제)는 적절한 경로라면 모두에 의해 투여된다. 일정 구현예들에서, 리소좀 산 리파제 (LAL)는 정맥내로 투여된다. 일정 구현예들에서, 리소좀 산 리파제 (LAL)는 피하로 투여된다. 일정 구현예들에서, 리소좀 산 리파제 (LAL)는 심장 또는 근육 (예로, 근육내로), 또는 신경계 (예로, 뇌 내로 직접적 주사; 뇌실내로; 경막내로)와 같은 표적 조직으로 직접적 투여에 의해 투여된다. 임의적으로, 리소좀 산 리파제 (LAL) (또는 리소좀 산 리파제 (LAL)을 포함하는 조성물 또는 약제)는 비경구적으로, 경피적으로, 또는 경점막으로 (예로, 구강으로 또는 비강내로) 투여될 수 있다. 하나 이상의 경로가 원하는 경우라면 동시에 사용될 수 있다.

리소좀 산 리파제 (LAL) (또는 리소좀 산 리파제 (LAL)을 포함하는 조성물 또는 약제)는 단독으로, 또는 항히스타민들 (예로, 디펜하이드라민), 또는 면역억제제들 또는 항-리소좀 산 리파제 (LAL) 항체들과 대항하는 면역치료적 제제들과 같은 기타 제제들과 결합하여 투여될 수 있다.

용어 "결합하여 (in conjuction with)"는 제제가 리소좀 산 리파제 (LAL) (또는 리소좀 산 리파제 (LAL)을 포함하는 조성물) 이전에, 이와 거의 동시에, 또는 이에 이어서 투여되는 것을 가리킨다. 예를 들면, 제제는 리소좀 산 리파제 (LAL)를 포함하는 조성물 내로 혼합되고, 이에 의해 리소좀 산 리파제 (LAL)와 동시에 투여될 수 있다; 임의적으로, 제제는 혼합하는 단계 없이도 (예로, 리소좀 산 리파제 (LAL)도 역시 투여되는 정맥내 라인 상에서 제제의 "업힌 (pyggybacking)" 전달 또는 그의 역에 의해) 동시에 투여될 수 있다. 또 다른 예에서, 제제는 리소좀 산 리파제 (LAL)의 투여의 단기 프레임 이내 (예로 24시간 이내)이지만 별도로 (예로, 첨가되지 않고) 투여될 수 있다. 일정 구현예들에서, 리소좀 산 리파제 (LAL) (또는 리소좀 산 리파제 (LAL)를 포함하는 조성물)는 항-리소좀 산 리파제 (LAL) 항체들의 양들을 감소시키거나 이들의 생산을 방지하도록 설계된 면역억제 또는 면역치료 요법과 결합하여 투여된다. 예를 들면, 혈우병 환자들에서 사용되는 것들과 유사한 프로토콜 (Nilsson et al . (1988) N. Engl . J. Med ., 318:947-50)이 항-리소좀 산 리파제 (LAL) 항체들을 감소시키는 데 사용될 수 있다. 이러한 요법은 항-리소좀 산 리파제 (LAL) 항체들을 가지거나, 이를 가질 위험성이 있는 개인들에서 사용될 수 있다. 일정 구현예들에서, 면역억제 또는 면역치료 요법은 항-리소좀 산 리파제 (LAL) 항체들의 생산 가능성을 최소화하기 위하여, 리소좀 산 리파제 (LAL)의 첫 번째 투여 이전에 시작된다.

리소좀 산 리파제 (LAL) (또는 리소좀 산 리파제 (LAL)를 포함하는 조성물 또는 약제)는 치료적 유효량 (예로, 규칙적인 간격들로 투여될 때, 상기 기술된 바와 같이 질환과 연관된 증상들을 개선하고, 질환의 발병을 예방 또는 지연시키고, 및/또는 질환의 증상들의 중증도 또는 빈도도 역시 경감하는 것과 같이 질환을 치료하는 데 충분한 용량)으로 투여된다. 본 명세서에서 사용되는 바, 치료적 유효량은 치료적 유효 투여량 또는 치료적 유효 용량이라고도 역시 언급된다. 질환의 치료를 위해 치료적으로 효과적일 수 있는 투여량은 질환의 효과들의 본성 및 정도에 의존할 것이고, 표준 임상적 기법들에 의해 결정될 수 있다. 또한, 시험관내 또는 생체내 검정법들은 선택적으로 하기에 예시된 것들과 같은 최적의 용량 범위들을 확인하는 것을 돕는 데 사용될 수 있다. 사용될 정확한 투여량은 투여의 경로, 및 질환의 심각성에 의존할 것이고, 의사의 판단 및 각 환자의 상황들에 따라 결정되어야 한다. 예를 들면, 일정 구현예들에서, 피하적 투여를 위한 리소좀 산 리파제 (LAL)의 치료적 유효량은 정맥내 투여를 위한 리소좀 산 리파제 (LAL)의 치료적 유효량보다 약 1.5배, 약 2배, 약 2.5배, 약 2.5배, 약 3배, 약 3.5배, 약 4배, 약 4.5배, 약 5배, 약 5.5배, 약 6배, 약 6.5배, 약 7배, 약 7.5배, 약 8배, 약 8.5배, 약 9배, 약 9.5배, 또는 약 10배 이상이다. 유효 투여량들은 시험관내 또는 동물 모델 테스트 시스템들로부터 유래된 용량-반응 곡선들로부터 외삽될 수 있다 (예로, 본 명세서에서 그의 내용 전부가 참고문헌으로 통합되어 있는 "Guidance for Industry: Estimating Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers" Pharmacology and Toxicology, July 2005에서 미국 보건부, 식품 및 의약품청, 또한 약물평가 및 연구센터에 의해 기술된 바와 같음).

일정 구현예들에서, 치료적 유효량은 예를 들면 약 0.01 mg/kg 이상, 약 0.05 mg/kg 이상, 약 0.1 mg/kg 이상, 약 0.5 mg/kg 이상, 약 1.0 mg/kg 이상, 약 1.5 mg/kg 이상, 약 2.0 mg/kg 이상, 약 2.5 mg/kg 이상, 약 5.0 mg/kg 이상, 약 7.5 mg/kg 이상, 약 10 mg/kg 이상, 약 12.5 mg/kg 이상, 약 15 mg/kg 이상, 약 17.5 mg/kg 이상, 약 20 mg/kg 이상, 약 22.5 mg/kg 이상, 또는 약 25 mg/kg 체중 이상일 수 있다. 일정 구현예들에서, 치료적 유효량은 약 0.01 내지 25 mg/kg, 약 0.01 내지 20 mg/kg, 약 0.01 내지 15 mg/kg, 약 0.01 내지 10 mg/kg, 약 0.01 내지 7.5 mg/kg, 약 0.01 내지 5 mg/kg, 약 0.01 내지 4 mg/kg, 약 0.01 내지 3 mg/kg, 약 0.01 내지 2 mg/kg, 약 0.01 내지 1.5 mg/kg, 약 0.01 내지 1.0 mg/kg, 약 0.01 내지 0.5 mg/kg, 약 0.01 내지 0.1 mg/kg, 약 1 내지 20 mg/kg, 약 4 내지 20 mg/kg, 약 5 내지 15 mg/kg, 약 5 내지 10 mg/kg 체중일 수 있다. 일정 구현예들에서, 치료적 유효량은 약 0.01 mg/kg, 약 0.05 mg/kg, 약 0.1 mg/kg, 약 0.2 mg/kg, 약 0.3 mg/kg, 약 0.4 mg/kg, 약 0.5 mg/kg, 약 0.6 mg/kg, 약 0.7 mg/kg, 약 0.8 mg/kg, 약 0.9 mg/kg, 약 1.0 mg/kg, 약 1.1 mg/kg, 약 1.2 mg/kg, 약 1.3 mg/kg 약 1.4 mg/kg, 약 1.5 mg/kg, 약 1.6 mg/kg, 약 1.7 mg/kg, 약 1.8 mg/kg, 약 1.9 mg/kg, 약 2.0 mg/kg, 약 2.5 mg/kg, 약 3.0 mg/kg, 약 4.0 mg/kg, 약 5.0 mg/kg, 약 6.0 mg/kg, 약 7.0 mg/kg, 약 8.0 mg/kg, 약 9.0 mg/kg, 약 10.0 mg/kg, 약 11.0 mg/kg, 약 12.0 mg/kg, 약 13.0 mg/kg, 약 14.0 mg/kg, 약 15.0 mg/kg, 약 16.0 mg/kg, 약 17.0 mg/kg, 약 18.0 mg/kg, 약 19.0 mg/kg, 또는 약 20.0 mg/kg 체중 이상이다. 일정 구현예들에서, 치료적 유효량은 약 30 mg/kg 이하, 약 20 mg/kg 이하, 약 15 mg/kg 이하, 약 10 mg/kg 이하, 약 7.5 mg/kg 이하, 약 5 mg/kg 이하, 약 4 mg/kg 이하, 약 3 mg/kg 이하, 약 2 mg/kg 이하, 또는 약 1 mg/kg 체중 이하이다.

특정한 개인을 위한 유효 투여량은 개인의 필요들에 의존하여 시간 경과 시 다양화 (예로, 증가 또는 감소)될 수 있다. 예를 들면, 신체적 질병 또는 스트레스의 기간 동안, 항-리소좀 산 리파제 (LAL) 항체들이 존재하게 되거나 증가하는 경우라면, 또는 질환 증상들이 악화되는 경우라면, 용량의 양이 증가될 수 있다.

보다 또 다른 예에서, 치료적 조성물의 로딩 투여량 (예로, 초기 더 높은 투여량)은 치료 과정의 시작 시 주어질 수 있고, 치료적 조성물의 감소된 유지 투여량 (예로, 연속적 더 낮은 투여량)의 투여가 이어진다. 어떠한 이론들에 의해 얽매이지 않더라도, 로딩 투여량은 조직들에서 (예로, 간에서) 지방성 물질들의 초기 및 전형적으로 대량적 축적을 청소하고, 유지 투여는 초기 청소 이후에 지방성 물질들의 축적을 예방하는 것으로 고찰된다.

로딩 투여량 및 유지 투여량의 양들, 간격들, 및 치료의 지속기간은 본 명세서에서 예시된 것들 및 당해 기술분야에서 알려져 있는 것들과 같은 입수가능한 방법이라면 모두에 의해 결정될 수 있다. 일정 구현예들에서, 로딩 투여량의 양은 약 0.01 내지 1 mg/kg, 약 0.01 내지 5 mg/kg, 약 0.01 내지 10 mg/kg, 약 0.1 내지 10 mg/kg, 약 0.1 내지 20 mg/kg, 약 0.1 내지 25 mg/kg, 약 0.1 내지 30 mg/kg, 약 0.1 내지 5 mg/kg, 약 0.1 내지 2 mg/kg, 약 0.1 내지 1 mg/kg, or 약 0.1 내지 0.5 mg/kg 체증이다. 일정 구현예들에서, 유지 투여량의 양은 약 0 내지 10 mg/kg, 약 0 내지 5 mg/kg, 약 0 내지 2 mg/kg, 약 0 내지 1 mg/kg, 약 0 내지 0.5 mg/kg, 약 0 내지 0.4 mg/kg, 약 0 내지 0.3 mg/kg, 약 0 내지 0.2 mg/kg, 약 0 내지 0.1 mg/kg 체중이다. 일정 구현예들에서, 로딩 투여량은 주어진 기간 동안 (예로, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12개월 이상) 및/또는 주어진 횟수의 투여량들 (예로, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 또는 30번 이상의 투여량들) 동안 규칙적 간격들로 개인에게 투여되고, 유지 투여가 이어진다. 일정 구현예들에서 유지 투여량은 0 내지 2 mg/kg, 약 0 내지 1.5 mg/kg, 약 0 내지 1.0 mg/kg, 약 0 내지 0.75 mg/kg, 약 0 내지 0.5 mg/kg, 약 0 내지 0.4 mg/kg, 약 0 내지 0.3 mg/kg, 약 0 내지 0.2 mg/kg, 또는 약 0 내지 0.1 mg/kg 체중의 범위이다. 일정 구현예들에서, 유지 투여량은 약 0.01, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.2, 1.4, 1.6, 1.8, 또는 2.0 mg/kg 체중이다. 일정 구현예들에서, 유지 투여는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12개월 동안 투여된다. 일정 구현예들에서, 유지 투여는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10년 동안 투여된다. 일정 구현예들에서, 유지 투여는 무한대로 (예로, 수명 동안) 투여된다.

리소좀 산 리파제 (LAL)의 치료적 유효량 (또는 리소좀 산 리파제 (LAL)를 포함하는 조성물 또는 약제)은 질환의 효과들의 성질 및 정도에 의존하여, 또한 진행을 기초로 하여 규칙적인 간격들로 투여된다. 본 명세서에서 사용되는 바, "간격"으로 투여는 치료적 유효량이 정기적으로 (한 번 투여량과는 구별되는 바와 같음) 투여되는 것을 가리킨다. 간격은 표준 임상적 기법들에 의해 결정될 수 있다. 일정 구현예들에서, 리소좀 산 리파제 (LAL)는 격월로, 매월, 매월 두 번, 3주마다, 격주로, 매주, 매주 두 번, 매주 세 번, 또는 매일 투여된다. 단일한 개인을 위한 투여 간격은 고정될 간격일 필요가 없고, 개인의 필요들에 의존하여 시간 경과 시 다양화될 수 있다. 예를 들면, 신체적 질병 또는 스트레스의 기간 동안, 항-리소좀 산 리파제 (LAL) 항체들이 존재하게 되거나 증가하는 경우라면, 또는 질환 증상들이 악화되는 경우라면, 투여량들 간의 간격은 감소될 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 바, 용어 "격월로"는 2개월당 한 번 (예로, 2개월마다 한 번)의 투여를 의미하고; 용어 "매월"은 개월당 한 번의 투여를 의미하고; 용어 "격주로"는 2주당 한 번 (예로, 2주마다 한 번)의 투여를 의미하고; 용어 "매주"는 주당 한 번의 투여를 의미하고; 용어 "매일"은 하루당 한 번의 투여를 의미한다.

본 발명은 추가적으로 본 명세서에서 기술된 방법들에 의해서와 같은 리소좀 산 리파제 결핍 (LALD) 질환 (예로, 울만병 또는 CESD)의 치료를 위한 조성물의 투여에 관한 지침들을 포함하는 라벨을 가진 용기 (예로, 바이알, 병, 정맥내 투여용 백, 주사기 등)에 있는, 본 명세서에서 기술된 바와 같이 인간 리소좀 산 리파제 (LAL)을 포함하는 약제학적 조성물에 속한다.

도면들은 단지 설명의 목적들을 위한 것이고, 제한하려는 것이 아니다.
도 1은 rhLAL의 대표적인 SDS-PAGE 분석을 나타낸 것이다. rhLAL는 SDS-PAGE에 의해 분석되었고 쿠마시 염색에 의해 영상화되었으며 BSA와 비교되었다. 레인 1 내지 3: 각각 BSA, 1, 2.5, 및 5 μg. 레인 4 내지 6: 각각 rhLAL, 1, 2.5 및 5 μg. 단백질 분자량 마커들은 왼쪽에 라벨된다.
도 2는 PNGase에 의한 대표적인 당화를 나타낸 것이다. rhLAL은 PNGase F의 존재 (레인 1 및 2) 또는 부재 (레인 2 및 3) 시 1시간 (레인 1 및 2) 또는 밤샘 (레인 3 및 4) 동안 배양되었다.
도 3은 야생형 및 LAL 결핍 요시다 래트들의 6주령에서 대표적인 크기 비교를 나타낸 것이다.
도 4는 야생형 및 LAL 결핍 요시다 래트들의 13주령에서 대표적인 크기 비교를 나타낸 것이다.
도 5는 야생형 및 LAL 결핍 요시다 래트들의 5 내지 14주령에서 대표적인 무게 증가 비교를 나타낸 것이다.
도 6은 야생형 및 LAL 결핍 요시다 래트들의 7 및 19주령에서 대표적인 복부 팽창의 진행을 나타낸 것이다.
도 7은 야생형 및 LAL 결핍 요시다 래트들의 14주령에서 대표적인 간 및 비장 크기 비교를 나타낸 것이다.
도 8은 야생형 및 LAL 결핍 요시다 래트들의 대표적인 간 및 비장 무게 비교를 나타낸 것이다.
도 9는 LAL 결핍 요시다 래트들의 간에서 대표적인 지질 축적을 나타낸 것이다. 오일 레드 O 염색은 LAL 결핍 요시다 래트들의 간들에서 야생형 동물들과 대비하여 중성 지질 (적색 침전들)의 큰 세포성 축적들을 나타내었다. 지질 축적은 100일째 간들 전체를 통한 현저한 지질 축적과 함께 연령-의존적이다. 영상들은 20배이다.
도 10은 LAL 결핍 요시다 래트들의 비장에서 대표적인 지질 축적을 나타낸 것이다. 오일 레드 O 염색은 LAL 결핍 요시다 래트들의 비장들에서 야생형 동물들과 대비하여 중성 지질들의 큰 세포성 축적들을 나타내었다. 지질 축적은 100일째 비장들 전체를 통한 현저한 지질 축적으로 연령-의존적이다. 영상들은 20배이다.
도 11은 LAL 결핍 요시다 래트들의 소장에서 대표적인 지질 축적을 나타낸 것이다. 오일 레드 O 염색은 LAL 결핍 요시다 래트들의 소장들에서 야생형 동물들과 대비하여 중성 지질들의 큰 세포성 축적들을 나타내었다. 지질 축적은 100일째 소장들 전체를 통한 현저한 지질 축적과 함께 연령-의존적이다. 영상들은 20배이다.
도 12는 rhLAL 치료를 위한 대표적인 연구 설계를 나타낸 것이다. 동형접합 LAL 결핍 요시다 래트들은 정맥내 투여를 통해 rhLAL 또는 운반체 대조군의 다양한 투여량들의 5 또는 10번의 주간 주입들이 투여되었다.
도 13은 운반체 대조군 또는 1 mg/mL rhLAL로 처리된 10주 연구에서 LAL 결핍 요시다 래트들의 대표적인 크기 비교를 나타낸 것이다.
도 14는 운반체 대조군 또는 0.5 mg/mL rhLAL로 처리된 13주 연구에서 LAL 결핍 요시다 래트들의 대표적인 크기 비교를 나타낸 것이다.
도 15는 운반체 대조군 또는 다양한 투여량들의 rhLAL로 5주령에 시작하여 10주 동안 처리된 수컷 및 암컷 야생형 래트들 및 LAL 결핍 요시다 래트들에서 대표적인 체중 증가를 나타낸 것이다.
도 16은 운반체 대조군 또는 다양한 투여량들의 rhLAL로 5주령에 시작하여 10주 동안 처리된 야생형 래트들 및 LAL 결핍 요시다 래트들에서 대표적인 주간 체중 증가 백분율을 나타낸 것이다.
도 17은 운반체 대조군 또는 다양한 투여량들의 rhLAL로 10주령에 시작하여 5주 동안 처리된 야생형 래트들 및 LAL 결핍 요시다 래트들에서 대표적인 체중 증가를 나타낸 것이다.
도 18은 운반체 대조군 또는 다양한 투여량들의 rhLAL로 5주령에 시작하여 10주 동안 처리된 야생형 래트들 및 LAL 결핍 요시다 래트들의 부검 시 대표적인 육안적 간 병리학의 해소 및 간 무게를 나타낸 것이다.
도 19는 운반체 대조군의 5번 투여량들 또는 다양한 양들의 rhLAL의 5번 투여량들로 처리된 야생형 래트들 및 LAL 요시다 래트들의 부검 시 대표적인 육안적 간 병리학의 해소를 나타낸 것이다. 동물들은 9주째 부검되었다.
도 20은 운반체 대조군 또는 다양한 투여량들의 rhLAL로 5주령에 시작하여 10주 동안 처리된 야생형 래트들 및 LAL 결핍 요시다 래트들의 전체중의 백분율로서 부검 시 대표적인 비장 무게를 나타낸 것이다. 동물들은 14주째에 부검되었다. rhLAL로 처리된 동물들은 야생형 동물들과 대비하여 유사한 상대적 비장 무게를 나타내었다.
도 21은 운반체 대조군 또는 다양한 투여량들의 rhLAL로 10주령에 시작하여 5주 동안 처리된 야생형 래트들 및 LAL 결핍 요시다 래트들의 전체중의 백분율로서 부검 시 대표적인 비장 무게를 나타낸 것이다. rhLAL로 처리된 동물들은 야생형 동물들과 대비하여 유사한 상대적 비장 무게를 나타내었다.
도 22는 야생형 래트들 및 LAL 결핍 요시다 래트들로부터 나온 간들의 H & E 및 오일 레드 O 염색에 의한 대표적인 특성 분석을 나타낸 것이다.
도 23은 야생형 래트들 및 LAL 결핍 요시다 래트들로부터 나온 비장들의 H & E 및 오일 레드 O 염색에 의한 대표적인 특성 분석을 나타낸 것이다.
도 24는 야생형 래트들 및 LAL 결핍 요시다 래트들로부터 나온 소장들의 H & E 및 오일 레드 O 염색에 의한 대표적인 특성 분석을 나타낸 것이다.
도 25는 운반체 대조군 또는 다양한 투여량들의 rhLAL로 5주령에 시작하여 10주 동안 처리된 야생형 래트들 및 LAL 결핍 요시다 래트들의 H & E 염색에 의한 대표적인 간 형태를 나타낸 것이다.
도 26은 운반체 대조군 또는 다양한 투여량들의 rhLAL로 5주령에 시작하여 10주 동안 처리된 야생형 래트들 및 LAL 결핍 요시다 래트들의 오일 레드 O 염색에 의한 간에서 대표적인 지질 축적을 나타낸 것이다.
도 27은 운반체 대조군 또는 다양한 투여량들의 rhLAL로 5주령에 시작하여 10주 동안 처리된 야생형 래트들 및 LAL 결핍 요시다 래트들의 H & E 염색에 의한 대표적인 비장 형태를 나타낸 것이다.
도 28은 운반체 대조군 또는 다양한 투여량들의 rhLAL로 5주령에 시작하여 10주 동안 처리된 야생형 래트들 및 LAL 결핍 요시다 래트들의 오일 레드 O 염색에 의한 비장에서 대표적인 지질 축적을 나타낸 것이다.
도 29는 운반체 대조군 또는 다양한 투여량들의 rhLAL로 5주령에 시작하여 10주 동안 처리된 야생형 래트들 및 LAL 결핍 요시다 래트들의 H & E 염색에 의한 대표적인 소장 형태를 나타낸 것이다.
도 30은 운반체 대조군 또는 다양한 투여량들의 rhLAL로 5주령에 시작하여 10주 동안 처리된 야생형 래트들 및 LAL 결핍 요시다 래트들의 오일 레드 O 염색에 의한 소장에서 대표적인 지질 축적을 나타낸 것이다.
도 31은 운반체 대조군 또는 다양한 투여량들의 rhLAL로 10주령에 시작하여 5주 동안 처리된 야생형 래트들 및 LAL 결핍 요시다 래트들의 오일 레드 O 염색에 의한 간, 비장, 및 소장에서 대표적인 지질 축적을 나타낸 것이다.
도 32는 운반체 대조군 또는 다양한 투여량들의 rhLAL로 10주령에 시작하여 5주 동안, 5주령에 시작하여 10주 동안, 또는 5주령에 시작하여 5주 동안 처리된 LAL 결핍 요시다 래트들의 간들에서 대표적인 지질 축적을 나타낸 것이다. 영상들은 10배이다. 현저한 지질 축적의 감소가 운반체-대조군 처리된 동물들과 대비하여 모든 처리된 그룹들의 간들에서 관찰되었다.
도 33은 운반체 대조군 또는 다양한 투여량들의 rhLAL로 10주령에 시작하여 5주 동안, 5주령에 시작하여 10주 동안, 또는 5주령에 시작하여 5주 동안 처리된 LAL 결핍 요시다 래트들의 비장들에서 대표적인 지질 축적을 나타낸 것이다. 영상들은 10배이다. 현저한 지질 축적의 감소가 운반체-대조군 처리된 동물들과 대비하여 모든 처리된 그룹들의 비장들에서 관찰되었다. 5주령에 시작하여 0.5 mg, 1.0 mg, 및 2.0 mg으로 처리된 동물들에서, 지질 침전들이 거의 검출되지 않았다.
도 34는 운반체 대조군 또는 다양한 투여량들의 rhLAL로 10주령에 시작하여 5주 동안, 5주령에 시작하여 10주 동안, 또는 5주령에 시작하여 5주 동안 처리된 LAL 결핍 요시다 래트들의 소장들에서 대표적인 지질 축적을 나타낸 것이다. 영상들은 10배이다. 현저한 지질 축적의 감소가 운반체-대조군 처리된 동물들과 대비하여 모든 처리된 그룹들의 소장들에서 2.0 mg의 rhLAL로 처리된 그룹에서의 현저한 감소와 함께 관찰되었다.
도 35는 1 mg/kg 또는 2 mg/kg의 rhLAL로 5주령에서 시작하여 5주 동안 처리된 LAL 결핍 요시다 래트들의 간 및 비장에서 대표적인 지질 축적을 나타낸 것이다. 지질 축적에서 더 큰 감소들이 5번 투여량들에 이어서 1 mg/kg과 대비하여 2 mg/kg에서 관찰되었고, 2 mg/kg이 생존 연구의 "로딩" 투여량 단계를 위해 선택된 용량으로서 입증되었다.
도 36은 생존 및/또는 유지 투여량 연구를 위한 대표적인 연구 설계를 나타낸 것이다. 생존 투여량 연구들을 위해 야생형 래트들 또는 동형접합 LAL 결핍 요시다 래트들은 다양한 투여량들의 rhLAL (예로, 0.1 mg/kg, 0.5 mg/kg, 1 mg/kg) 또는 운반체 대조군으로 5주령에서 시작하여 26주 동안 매주 처리된다. 유지 투여량 연구들을 위해 야생형 래트들 또는 동형접합 LAL 결핍 요시다 래트들은 rhLAL의 2 mg/kg "로딩 투여량"으로 5주 동안 매주 처리되었고, 다양한 양들의 rhLAL가 21주 동안 매주 이어졌다.
도 37은 생존 투여량 연구를 위한 대표적인 연구 설계를 나타낸 것이다.
도 38은 생존 연구 동안 대표적인 체중 증가를 나타낸 것이다. 생존 투여량 연구들을 위해 야생형 래트들 또는 동형접합 LAL 결핍 요시다 래트들은 다양한 투여량들의 rhLAL (예로, 0.05 mg/kg, 0.5 mg/kg, 1 mg/kg) 또는 운반체 대조군으로 38주까지 동안 매주 처리되었다.
도 39는 생존 연구 동안 대표적인 생존 백분율을 나타낸 것이다. 생존 투여량 연구들을 위해 야생형 래트들 또는 동형접합 LAL 결핍 요시다 래트들은 다양한 투여량들의 rhLAL (예로, 0.05 mg/kg, 0.5 mg/kg, 1 mg/kg) 또는 운반체 대조군으로 38주까지 동안 매주 처리되었다.
도 40은 해소 및 유지 연구를 위한 대표적인 연구 설계를 나타낸 것이다.
도 41은 해소 및 유지 연구 동안 대표적인 체중 증가를 나타낸 것이다. 유지 투여량 연구들을 위해 야생형 래트들 또는 동형접합 LAL 결핍 요시다 래트들은 rhLAL의 2 mg/kg "로딩 투여량"으로 매주 처리되었고, 다양한 양들의 rhLAL가 매주 이어졌다.
도 42는 해소 및 유지 연구 동안 대표적인 생존 백분율을 나타낸 것이다. 유지 투여량 연구들을 위해 야생형 래트들 또는 동형접합 LAL 결핍 요시다 래트들은 rhLAL의 2 mg/kg "로딩 투여량"으로 매주 처리되었고, 매주 다양한 양들의 rhLAL로 이어졌다.
도 43은 약물역학적 연구를 위한 대표적인 연구 설계를 나타낸 것이다.
도 44는 피하로 (SC) 또는 정맥내로 (IV) 전달된 다양한 양들의 rhLAL로 처리된 야생형 래트들 또는 동형접합 LAL 결핍 요시다 래트들의 대표적인 육안적 간 병리학 분석을 나타낸 것이다.
도 45는 피하로 (SC) 또는 정맥내로 (IV) 전달된 다양한 양들의 rhLAL로 처리된 야생형 래트들 또는 동형접합 LAL 결핍 요시다 래트들의 대표적인 체중 변화 백분율 및 상대적 간 무게를 나타낸 것이다.
도 46은 피하로 (SC) 또는 정맥내로 (IV) 전달된 다양한 양들의 rhLAL로 처리된 야생형 래트들 또는 동형접합 LAL 결핍 요시다 래트들의 간, 비장 및 소장의 H & E에 의한 대표적인 형태학적 분석을 나타낸 것이다.
도 47은 피하로 (SC) 또는 정맥내로 (IV) 전달된 다양한 양들의 rhLAL로 처리된 야생형 래트들 또는 동형접합 LAL 결핍 요시다 래트들의 간, 비장 및 소장의 오일 레드 O 염색에 의한 대표적인 지질 축적 분석을 나타낸 것이다.

본 발명은 다음의 실시예들에 의해 더욱 또한 보다 상세하게 기술될 것이다. 그러나, 실시예들은 제한하려는 것이 아닌 설명의 목적들을 위해 포함된다.

실시예들

실시예 1: 재조합 인간 리소좀 산 리파제 ( rhLAL )의 생산

본 실시예에서 기술된 실험들은 재조합 LAL이 포유동물 세포들로부터 발현되고 정제될 수 있는 점을 보여준다.

상세하게, 배양된 인간 세포들은 전기천공에 의해 인간 리소좀 산 리파제 오픈 리딩 프레임을 포함하는 플라스미드로 형질전환되었고 제한 희석에 의해 클론되었다. 안정한 클론들은 0.4 mg/mL G418을 포함하는 클로닝 배지를 사용하여 선별되었다. 클론들이 증식되었고 rhLAL 발현 및 활성이 엘라이자 및 LAL 활성 검정법들을 사용하여 분석되었다.

전체적으로, 384개 클론들이 rhLAL 발현 및 활성에 대해 분석되었다. 35번 클론이 가장 높고 가장 안정한 rhLAL 발현을 가지는 것으로 결정되었다. 진탕 플라스크에서 발현은 평균적으로 3 내지 4 pcd이었고 파동 반응기에서 발현은 평균적으로 4 내지 6 pcd이었다. 35번 클론이 증식되었고 세포 뱅크가 준비되었다.

35번 클론은 10 L 파동 백들에 있는 5 mL 파동 배양액들 내로 접종되었다. 파동 백들은 하루당 5 L로 관류되었고, 조정된 배지 (CM)는 수확되었고, 여과되었으며, 초여과에 의한 농축까지 4℃에서 7일까지 동안 저장되었다. CM은 10 kDa MWCO UF/DF 농축기를 사용하여 농축되었고, 가공될 때까지 -20℃에서 10 내지 40일 동안 저장되었다. 정제 이전에, 농축된 CM은 해동되었고, 전도성이 200 mM의 최종 농도로 NaCl의 첨가에 의해 증가되었다. 정제는 Q 세파로스 FF 컬럼으로 가공하는 (polishing) 단계로 이어지는 부틸-세파로스 4FF 컬럼 포획이 관여하였다. 정제된 rhLAL은 최종 저장 완충액, PBS pH = 6.5에 대항하여 투석되었고, 무균 여과되었으며 -80℃에서 저장되었다.

rhLAL의 소정의 특징들이 결정되었다. DNA 코딩 서열은 분자량이 43 kDa인 것을 예측하였다. 정제된 rhLAL은 변성화 SDS-PAGE 웨스턴 및 쿠마시, 또한 고유 크기 배제 크로마토그래피가 시행되었다. rhLAL의 번역후 변형들은 SDS-PAGE 웨스턴 또는 고유의 등전기 초점화 (IFE)가 이어지는 당질소화 (glycodigestion)에 의해 결정되었다.

도 1에서 나타난 바와 같이, rhLAL은 변성화 SDS-PAGE에 의해 분석되었고 쿠마시에 의해 영상화되어 BSA와 비교되었다. 레인 1 내지 3은 1, 2.5 및 5 μg의 BSA를 각각 포함하였다. 레인 4 내지 6은 1, 2.5 및 5 μg의 rhLAL을 각각 포함하였다. 단백질 분자량 마커들은 왼쪽에 라벨되었다. 정제된 rhLAL은 ~ 54.5 kDa의 외관상의 분자량을 보여주었다. 인간 LAL 단백질은 그의 일차 아미노산 서열을 기초로 하여 6개의 잠재적인 N-당화 부위들을 가진다. PNGase F와의 배양에 의한 정제된 rhLAL의 탈당화는 ~ 50 kDa의 분자량을 가진 미처리된 단백질과 대비하여 ~ 42 kDa으로 단백질의 분자량에서 감소를 유도하였다 (도 2). 이들 연구들은 정제된 rhLAL의 단백질 골격 상에 탄수화물들의 존재를 가리켰다.

실시예 2: rhLAL 를 사용한 LAL 결핍 요시다 래트들의 처리

본 실시예에서 기술된 실험들은 rhLAL이 울만병 및 콜레스테릴 에스테르 축적병 (CESD)과 같은 LALD 질환들을 효과적으로 치료할 수 있는 점을 보여주도록 설계된다. 요시다 (LAL 결핍) 래트가 동물 모델로서 사용되었다.

상기에 기술된 바와 같이, 요시다 (LAL 결핍) 래트는 LALD 질환의 자연적으로 생기는 동물 모델이다 (Yoshida and Kuriyama, Laboratory Animal Science 40(5) 1990). 침범된 래트들은 상염색체 열성 방식으로 질환을 유전시키고, 질환은 발달 손상 및/또는 종말증, 간비장비대증, 림프절 확장, 및 비후 확장된 창자를 특징으로 한다. 많은 특징적인 거품 세포들이 침범된 마우스의 간들 및 비장들에서 관찰된다. 전형적으로, 대식세포인 컵퍼 (Kupffer) 세포가 지질 축적으로 "거품 세포"로 된다. 콜레스테릴 에스테르들 및 트리글리세라이드들 둘 다의 대량적 세포내 축적이 간, 부신샘 및 창자에서 관찰된다. 침범된 래트들은 전형적으로 약 120일령에서 생식 없이 죽고, 이는 정상 래트의 전형적 수명의 대략 1/6이다.

먼저, 야생형 및 동형접합 LAL 결핍 래트들의 일반적 건강, 주간 체중들, 또한 혈청 화학과 같은 생활 (in-life) 평가들이 수행되었다. 도 3 및 도 4에서 나타난 바와 같이, 동형접합 LAL 결핍 래트는 6주 및 13주령에서 각각 야생형과 비교 시 보다 더 작은 체중을 가졌다. 야생형 및 LAL 결핍 래트들의 체중 비교는 도 5에 나타낸다. 동형접합 LAL 결핍 래트들은 도 6에 나타난 바와 같이 복부 팽창의 진행도 역시 보여주었다. 종합하면, 이들 데이타는 본 실험에서 사용된 요시다 래트가 LALD 질환, 상세하게는 울만병의 특징적인 증상들인 발달 손상 또는 빈약한 발달 진행 및 무게 증가와 같은 종말증의 소견을 나타내는 점을 가리킨다.

사후 분석들이 다양한 조직들에서 크기, 무게, 및 지질 축적을 평가하도록 수행되었다. 예를 들면, 14주령의 야생형 및 동형접합 LAL 결핍 래트들의 간 및 비장 크기들이 도 7에 나타난 바와 같이 비교되었다. 부검 시 간 및 비장 무게들 (전체중의 백분율)도 역시 결정되었다 (도 8). 오일 레드 O 염색을 사용한 조직학이 다양한 조직들 (예로, 간, 비장, 및 창자)에서 지질 축적을 결정하도록 수행되었다. 오일 레드 O 염색은 야생형 동물들과 대비하여 LAL 결핍 요시다 래트들의 간들 (도 9), 비장들 (도 10), 및 소장 (도 11)에서 중성 지질 (적색 침전들)의 큰 세포성 축적들을 나타내었다. 도 9, 도 10, 및 도 11에서 나타난 바와 같이, 지질 축적은 100일째 간들, 비장들 및 소장 전체를 통하여 현저한 지질 축적과 함께 연령-의존적이다. 추가적인 조직 분석이 간 및 비장에서와 같이 콜레스테롤 및/또는 트리글리세라이드들을 결정하도록 수행되었다. LAL 수준들도 역시 간 및 비장을 포함하는 다양한 조직들에서 결정된다. 또한, 혈청 항-LAL 항체 수준이 결정된다.

rhLAL 처리는 무게 증가를 촉진한다

재조합 인간 LAL (rhLAL)은 실시예 1에 기술된 바와 같이 발현되었고 정제되었다. 동형접합 LAL 결핍 요시다 래트들은 도 12에 나타난 실험적 설계에 따라, 정맥내 투여를 통해 다양한 투여량들의 rhLAL 또는 운반체 대조군의 주간 5번 또는 10번 주입들로 투여되었다. 대조군 야생형 래트들은 미처리되었다. rhLAL 및 운반체로 처리된 동물들의 일반적 건강, 주간 체중들, 및 혈청 화학과 같은 생활 평가들이 평가되었다. 도 13에서 나타난 바와 같이 10주째 1 mg/kg 투여량 수준에서 rhLAL로 처리된 동형접합 LAL 결핍 요시다 래트는 운반체로 처리된 동형접합 LAL 결핍 래트와 비교 시 유의하게 더 큰 신체를 가졌다. 도 14에서 나타난 바와 같이 13주째 0.5 mg/kg 투여량 수준에서 rhLAL로 처리된 동형접합 LAL 결핍 요시다 래트는 운반체로 처리된 동형접합 LAL 결핍 래트와 비교 시 유의하게 더 높은 체중을 가졌다.

용량-반응성 체중 증가도 역시 결정되었다. 상세하게, 동형접합 LAL 결핍 요시다 래트들은 5주령에 시작하여 10주 동안 0.1 mg/kg rhLAL, 0.5 mg/kg rhLAL, 1.0 mg/kg rhLAL, 2.0 mg/kg rhLAL 또는 운반체 대조군의 주간 투여로 처리되었고, 용량-반응성 체중 증가를 보여주었다. 대표적인 결과들이 도 15A 및 도 15B에 나타나 있다. 주간 체중 증가 백분율도 역시 결정되었고 대표적인 결과들이 도 16에 나타나 있다. 관찰될 수 있는 바와 같이 rhLAL 처리된 래드들의 경우 주간 체중 증가 백분율은 야생형 동물들과 유사하였다. 상세하게, 신속한 체중 증가가 rhLAL로 투여 시 첫 번째 개월에 관찰되었다.

두 번째 투여 요법은 10주령에 시작하여 5주 동안 처리된 동물들에서 체중 증가를 결정하는 데 사용되었다. 상세하게, 동형접합 LAL 결핍 요시다 래트들은 10주령에 시작하여 5주 동안 0.5 mg/kg rhLAL, 1.0 mg/kg rhLAL 또는 운반체 대조군의 주간 투여로 처리되었고, 대표적인 결과들은 도 17A 및 도 17B에 나타나 있다. 관찰될 수 있는 바와 같이, 무게 증가는 본 5주 투여 요법을 사용하여 rhLAL로 처리된 동물들에서도 역시 관찰되었다.

rhLAL 처리는 간 병리학을 개선한다

간 병리학에서 rhLAL 처리의 효과를 평가하기 위하여, 0.1 mg/kg, 0.5 mg/kg, 1.0 mg/kg, 2.0 mg/kg의 용량으로 5주령에 시작하여 rhLAL의 10번 투여량들, 또는 운반체 대조군을 수여받은 동물들이 14주째 희생되었다. 육안적 간 병리학이 평가되었고 부검 시 간 무게가 전체중의 %로서 결정되었다. 대표적인 결과들은 도 18에 나타나 있다. 관찰될 수 있는 바와 같이, 다양한 투여량들에서 rhLAL의 처리는 육안적 간 병리학의 해소를 유도하였다. 상세하게, 0.5 mg/kg 이상의 rhLAL에서 투여량들로의 처리는 유의하게 개선된 육안적 간 병리학을 가졌다. 또한, rhLAL의 처리는 부검 시 간 무게도 역시 유의하게 감소시켰다. 도 18에서 관찰될 수 있는 바와 같이, 0.1 mg/kg, 0.5 mg/kg rhLAL, 1 mg/kg, 또는 2 mg/kg rhLAL의 10번 투여량의 처리는 야생형 동물들에서 전체중과 대비한 간 무게와 비슷한, 전체중의 백분율로서 유사한 상대적 간 무게를 유도하였다.

또 다른 실험에서, 서로 다른 투여 요법이 육안적 간 병리학의 해소를 결정하는 데 사용되었다. 상세하게, 동물들은 1 mg/kg, 또는 2 mg/kg에서 rhLAL의 5번 투여량들을 수여받았고 9주째 희생되었다. 대표적인 결과들은 도 19A에 나타나 있다. 또 다른 실험에서, 동물들은 10주령에 시작하여 0.5 mg/kg, 또는 1 mg/kg에서 rhLAL의 5번 투여량들을 수여받았고 대표적인 결과들은 도 19B에 나타나 있다.

처리된 동물들에서 상대적 비장 무게의 용량-관련 감소도 역시 관찰되었다. 한 가지 실험에서, 동물들은 5주령에 시작하여 0.1 mg/kg, 0.5 mg/kg, 1 mg/kg, 2 mg/kg에서 rhLAL의 10번 투여량들 또는 운반체를 수여받았고 다음으로 희생되었다. 도 20에서 나타난 바와 같이, 처리된 동물들은 야생형 동물들과 비교 시 유사한 상대적 비장 무게들을 (전체중의 백분율로서) 나타내었다. 또 다른 실험에서, 10주령에 시작하여 0.5 mg/kg, 1.0 mg/kg에서 rhLAL의 5번 투여량들 또는 운반체를 수여받았다. 처리된 동물들은 야생형 동물들과 비교 시 유사한 상대적 비장 무게들을 (전체중의 백분율로서) 나타내었다. 대표적인 결과들은 도 21에 나타나 있다.

rhLAL 처리는 지질 축적을 감소시키고 형태를 개선한다.

헤마톡실린 및 에오신 (H & E) 염색 및 오일 레드 O 염색이 수행되었다. 전형적으로, H & E 염색은 포르말린-고정된 파라핀 포매된 조직 상에서 수행되고, 파라핀 가공과정이 지방들을 용해시키는 반면 자세한 형태를 보존한다. 일반적으로, H & E 염색은 조직 유형 및 형태의 확인을 허용한다. 전형적으로 오일 레드 O 염색은 포르말린-고정된 냉동 조직 상에서 수행되고, 형태가 타협될 수 있는 반면 지질들을 보존한다. 일반적으로, 오일 레드 O 염색은 중성 지질 및 트리글리세라이드들의 확인을 허용한다.

먼저, 미처리된 요시다 래트 간, 비장 및 소장은 H & E 및 오일 레드 O 염색에 의해 분석되었다. 도 22에서 관찰될 수 있는 바와 같이, 미처리된 요시다 래트들의 간들은 100일째 현저한 공포화와 함께, 간세포들 및 컵퍼 세포들 둘 다에서 연령-의존성 지질 축적을 나타낸다. 도 23에서 관찰될 수 있는 바와 같이, 미처리된 요시다 래트들의 비장들은 100일째 현저한 공포화와 함께, 적색 속질 (RP)의 대식세포들에서 연령-의존성 지질 축적을 나타낸다. 도 24에서 관찰될 수 있는 바와 같이, 미처리된 요시다 래트들의 소장들은 100일째 현저한 융모의 확대와 함께, 고유판 (LP)의 대식세포들에서 연령-의존성 지질 축적을 나타낸다.

지질 축적 및 형태에 미치는 rhLAL 처리의 효과를 결정하기 위하여, 다음의 투여 요법이 사용되었다: 35일령에 시작하여 0.1 mg/kg, 0.5 mg/kg, 1.0 mg/kg, 또는 2.0 mg/kg rhLAL로 10번 주간 주입들. 간들의 H & E 염색 및 레드 오일 O 염색으로부터 나온 대표적인 결과들은 도 25 (H & E), 도 26 (오일 레드 O)에 나타나 있다. 형태는 세포 수들을 감소시켜서 개선되었고, 개선은 rhLAL의 낮은 용량들에서도 관찰되었다. 오일 레드 O 염색은 처리된 그룹들 모두에 있는 간세포들 및 컵퍼 세포들에서 지질들의 현저한 감소를 보여주었다. 간에서의 지질-감소는 용량-의존적이었다. 비장의 H & E 염색 및 레드 오일 O 염색으로부터 나온 대표적인 결과들은 도 27 (H & E), 도 28 (오일 레드 O)에 나타나 있다. 형태는 적색 속질에서 거품 세포 수들을 감소시켜서 개선되었고, 개선은 rhLAL의 낮은 용량들에서도 관찰되었다. 오일 레드 O 염색은 처리된 그룹들 모두에 있는 적색 속질에서 지질들의 현저한 감소를 보여주었다. 비장에서의 지질-감소는 용량-의존적이었다. 소장의 H & E 염색 및 레드 오일 O 염색으로부터 나온 대표적인 결과들은 도 27 (H & E), 도 28 (오일 레드 O)에 나타나 있다. 처리된 그룹들에서, 소장의 융모는 고유판에서 거품 세포 수들의 감소에 의해 가늘어졌다.

또 다른 시험에서, 지질 축적 및 형태에 미치는 rhLAL 처리의 효과를 결정하기 위하여, 다음의 투여 요법이 사용되었다: 70일령에 시작하여 0.5 mg/kg, 또는 1.0 mg/kg rhLAL로 5번 주간 주입들. 지질들의 감소를 보여주는 간, 비장 및 소장의 레드 오일 O 염색으로부터 나온 대표적인 결과들은 도 31에 나타나 있다.

또한 지질 축적에 미치는 rhLAL 처리의 효과를 결정하기 위하여, 다음의 투여 요법이 사용되었다:

1. 70일령에 시작하여 0.5 mg/kg, 또는 1.0 mg/kg rhLAL로 5번 주간 주입들.

2. 35일령에 시작하여 0.5 mg/kg, 또는 1.0 mg/kg rhLAL로 10번 주간 주입들.

3. 35일령에 시작하여 1.0 mg/kg, 또는 2.0 mg/kg rhLAL로 5번 주간 주입들

대표적인 결과들은 도 32 (간), 도 33 (비장들), 및 도 34 (소장들)에서 나타나 있다. 도 32에서 관찰될 수 있는 바와 같이, 지질 축적의 현저한 감소가 운반체 대조군과 대비하여 모든 처리된 그룹들의 간들에서 확인되었다. 최상의 결과들이 2.0 mg 그룹에서 (단지 5번 주입들로) 관찰되었다. 도 33은 지질 축적의 현저한 감소가 운반체 대조군과 대비하여 모든 처리된 그룹들의 비장들에서 확인되었던 점을 보여준다. 30일령에 시작하여 0.5, 1.0 및 2.0 mg/kg으로 처리된 동물들에서, 지질 침전들은 거의 검출되지 않았다. 지질 축적의 감소는 운반체 대조군과 대비하여 모든 처리된 그룹들의 소장들에서도 2.0 mg 그룹에서 (단지 5번 주입들로) 현저한 감소와 함께 역시 확인되었다 (도 34).

요약하면, 이들 실험들은 (1) 처리된 동물들이 야생형과 대비하여 유사한 주간 증가%를 가진 용량-반응성 무게 증가를 나타내었고; (2) LAL 처리된 동물들은 현저한 육안적 간, 비장 및 창자 병리학의 해소를 보여주었고; (3) H & E 염색 평가는 간, 비장 및 창자에서 형태학적 개선을 보여주었고; 또한 (4) 오일 레드 O 염색 평가는 간, 비장 및 창자에서 지질 염색에서 용량-반응성 감소를 보여주었다. 이들 결과들은 LALD 질환의 다양한 증상들을 치료하는 데, rhLAL 치료가 낮은 용량에서도 효과적인 점을 보여주었다. 또한, 상기 결과들은 rhLAL이 울만병의 가장 호된 증상인 발달 손상 (종말증 또는 생식부전)을 치료하는 데 유의한 치료적 효과를 가지는 점을 보여주고 있다.

실시예 3: 생존/유지 투여량 연구 설계 및 투여량 선택

두 가지-투여량 (예로, 생존/유지) 처리 요법은 LALD 질환 (예로, 울만병)을 치료하는 데 바람직한 것으로 고찰된다. 본 실시예는 적절한 생존/유지 투여량들을 선택하도록 설계된다. 임상적 징후들, 체중들, 육안적 및 현미경적 병리학으로부터 관찰된 바와 같이, 0.1, 0.5, 및 1 mg/kg과 같은 용량들이 생존 연구를 위해 선택되었다. 생존 연구의 "로딩" 투여량 단계를 위한 적절한 용량을 선택하기 위하여, 1 또는 2 mg/kg으로 (35일째 시작하여 5번 주간 용량들) 처리된 동물들의 간, 비장 및 소장에서 지질 축적의 감소들이 비교되었다. 대표적인 결과들은 도 35에 나타나 있다. 관찰될 수 있는 바와 같이, 지질 축적에서 더 큰 감소들이 5번 투여량들 이후에 1 mg/kg과 대비하여 2 mg/kg에서 관찰되었다. 본 데이타는 1 mg/kg이 5번 투여량들 이후에 조직들에서 지질 축적을 더욱 효과적으로 해소하는 점을 가리킨다; 따라서, 본 용량이 생존 연구의 "로딩" 투여량 단계를 위해 선택된다.

생존/유지 투여량 연구를 위한 대표적인 설계는 도 36에 나타나 있다. 연구 종료점들은 다음을 포함한다: 전반적인 동물들의 생존은 적어도 6개월까지 동안 평가된다. 복강의 도면들이 준비된다. 간 및 비장 무게 및 육안적 병리학이 결정된다. 자유 콜레스테롤, 콜레스테롤 에스테르들 및/또는 전체 콜레스테롤의 혈장 수준들이 다양한 시간대들에서 측정된다. 간, 비장 및/또는 소장의 조직병리학 (예로, H & E 염색 및/또는 오일 레드 O 염색)이 수행된다. 동물들 (예로, 간, 비장)에서 rhLAL 수준들 및 정착이 측정된다. 조직 (간, 비장) 콜레스테롤 및 트리글리세라이드 수준들이 측정된다. 항-rhLAL 항체 수준들 (전체, IgG, IgE)은 측정된다.

생존 연구

본 연구의 목적은 rhLAL의 주간 정맥내 전달이 LAL 결핍 요시다 래트에서 평균 생존을 배가할 수 있는지 여부를 결정하는 것이었다. 생존 연구를 위한 대표적인 연구 설계는 도 37에 나타나 있다. 동물들 모두 (수컷 및 암컷 조합)에서 생존 연구 동안 무게 증가가 도 38에 나타나 있다. 38번 용량들까지 동안 주간 정맥내 주입들을 통해 다양한 용량들의 rhLAL로 처리된 LAL 결핍 요시다 래트들의 생존 분석이 도 39에 나타나 있다. 관찰될 수 있는 바와 같이, rhLAL의 주간 정맥내 투여량들은 LAL 결핍 요시다 래트의 평균 수명을 두 배 이상 증가시켰다. 처리된 동물 (주간 1 mg/kg rhLAL)에서 체중 증가는 야생형 동물들과 유사한 경로를 따랐지만, LAL 결핍 요시다 래트들은 rhLAL의 제 1 용량이 주어질 때 5주령에서 분명하게 나타났던 체중 결핍을 재획득하지는 않았다.

청소 및 유지 연구

본 연구의 목적은 지질들이 rhLAL의 단기간 높은 용량 및 다음으로 rhLAL의 더 낮은 주간 용량에서 동물들의 유지에 의해 간으로부터 청소될 수 있는지 여부를 결정하는 것이었다. 청소 및 유지 연구를 위한 대표적인 연구 설계는 도 40에 나타나 있다. 동물들 모두 (수컷 및 암컷 조합)에서 청소 및 유지 연구 동안 무게 증가는 도 41에 나타나 있다. rhLAL의 로딩 투여량 및 다양한 유지 투여량들로 처리된 LAL 결핍 요시다 래트의 생존 분석은 도 42에 나타나 있다. LAL 결핍 요시다 래트에게 단기간 (예로, 4주) 더 높은 용량의 rhLAL (2 g/kg)를 주는 것은 간에서 축적된 지질들을 효과적으로 감소시켰다. rhLAL의 낮은 주간 유지 투여량 (주간 0.1 mg/kg)으로 계속적인 처리는 체중의 유지 및 처리된 동물들의 생존에서 개선을 유도하였다.

실시예 4. rhLAL 의 약물역학적 효과: 피하 vs 정맥내 경로들의 비교

본 연구의 목적은 LAL 결핍 요시다 래트에서 rhLAL의 피하 (SC) 전달을 정맥내 (IV) 전달과 비교하는 것이었다. 약물역학적 연구를 위한 대표적인 연구 설계는 도 43에 나타나 있다. 수컷 LAL 결핍 요시다 래트들은 5주령에 시작하여 5주 동안 주간으로 0.5 mg/kg SC, 2.5 mg/kg SC, 또는 0.5 mg/kg IV가 투여되었다. SC 또는 IV 투여를 통해 다양한 용량들의 rhLAL로 처리된 LAL 결핍 요시다 래트들의 육안적 간 병리학이 도 44에 나타나 있다. 관찰될 수 있는 바와 같이, A (SC, 운반체)는 팽창되고, 탈색된/창백한 간을 가지고; 그룹 B (SC, 0.5 mg/kg rhLAL)는 팽창되고 창백한 간을 가지고; 그룹 C (SC, 2.5 mg/kg rhLAL)는 야생형과 크기 및 색상에서 유사한 간을 가지고; 또한 그룹 D (IV, 0.5 mg/kg rhLAL)는 정상적인 크기 및 색상인 것으로 보이는 간을 가진다. SC 또는 IV 투여를 통해 다양한 용량들의 rhLAL로 처리된 LAL 결핍 요시다 래트들에서 체중 변화 백분율 및 상대적인 간 무게는 도 45에 나타나 있다. 더 낮은 체중 증가가 SC 운반체 및 SC 0.5 mg/kg rhLAL로 투여된 동물들에서 처리의 경과 시 관찰되었다. SC 2.5 mg/kg 및 IV 0.5 mg/kg로 처리된 동물들은 rhLAL 처리의 경과 시 증가된 체중을 가졌다. 용량 반응이 간 및 비장 무게들에서 전체중의 백분율로서 비교될 때 관찰되었다. SC 2.5 mg/kg rhLAL 처리된 동물들은 간 및 비장 둘 다의 상대적 기관 무게들에서 IV 0.5 mg/kg rhLAL 처리된 동물들과 근접한다.

형태학적 및 지질 축적 분석들이 H & E 및 오일 레드 O 염색을 사용하여 각각 수행되었다. 도 46에서 관찰될 수 있는 바와 같이, 형태학적 개선은 rhLAL 처리된 동물들의 간, 비장 및 소장의 H & E 염색에 의해 관찰된다. 육안적 관찰들이 간에서 용량-반응을 지지한다. 도 47에서 관찰될 수 있는 바와 같이, 간, 비장 및 소장에서 지질 축적은 rhLAL 처리된 동물들에서 감소되었다. 전반적으로, rhLAL SC 주입으로 처리된 침범된 동물들은 간, 비장 및 소장에서 용량-의존적 및 현저한 형태학적 및 지질 축적 개선들을 보여주었다. 2.5 mg/kg rhLAL의 SC 주입으로 처리는 0.5 mg/kg rhLAL의 IV 주입으로 처리와 유사한 형태학적 개선들 및 지질 축적 감소를 유도하였던 점이 관찰되었다.

종합하면, 이들 결과들은 rhLAL의 피하적 투여가 LALD 질환의 다양한 증상들을 치료하는 데 효과적인 점을 보여준다. rhLAL 피하적 주입으로 처리된 침범된 동물들은 간, 비장 및 소장에서 용량-의존적 및 현저한 형태학적 및 지질 축적 개선들을 보여주었다. 예를 들면, 용량 반응은 체중 백분율로서 비교될 때 간 및 비장 무게들에서 관찰되었다. 또한, 피하로 2.5 mg/kg 용량은 간 및 비장의 형태학적 개선 및 지질 축적 감소 둘 다에서 정맥내 0.5 mg/kg 용량과 근접한다.

동등성

당업자들은 본 명세서에서 기술된 본 발명의 특정한 구현예들과의 많은 동등물들을 단지 일상적인 실험법을 사용하여 인식하거나, 규명할 수 있을 것이다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명에 제한되도록 의도되지 않고, 오히려 첨부된 청구항들에서 설명된 바와 같다. 본 명세서에서 사용되는 바, 용어 표현들 "하나 (a)" 및 "하나 (an)"는 명세서에서, 또한 청구항들에서 달리 분명하게 정반대를 가리키지 않는 경우라면 복수의 형태들을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 그룹의 하나 이상의 구성원들 간에 "또는"을 포함하는 청구항들 또는 상세한 설명들은 그룹 구성원들의 하나, 하나 이상, 또는 모두가 존재하거나 적용되거나, 달리 정반대를 가리키지 않는 경우라면 주어진 산물 또는 방법에 적절하거나, 달리 문맥으로부터 명백하다면 만족된 것으로 고려된다. 본 발명은 정확하게 그룹의 한 구성원이 존재하거나 적용되거나, 달리 주어진 산물 또는 방법에 적절한 구현예들을 포함한다. 본 발명은 그룹의 하나 이상 또는 구성원 전부가 존재하거나 적용되거나, 달리 주어진 산물 또는 방법에 적절한 구현예들도 역시 포함한다. 또한, 본 발명은 달리 표시되지 않는 경우 또는 반박이나 불일치가 나올 수 있는 기술분야의 당업자에게 자명한 경우라면 하나 이상의 청구항들로부터 나온 하나 이상의 제한들, 요소들, 조항들, 설명적 용어들 등이 동일한 기본 청구항 (또는 적절한 다른 청구항)에 의존하는 또 다른 청구항 내로 도입되는 변형들, 조합들, 및 순열들을 포괄하는 것으로 이해된다. 요소들이 리스트들로서 표현되는 경우 (예로, 마쿠쉬 (Markush) 그룹 또는 유사한 형식), 요소들의 각 소그룹도 역시 기재되고, 요소(들)이라면 모두가 그룹으로부터 삭제될 수 있는 것으로 이해된다. 일반적으로, 본 발명, 또는 본 발명의 관점은 특정한 요소들, 특징들 등을 포함하는 것으로서 언급되는 경우에, 본 발명의 소정의 구현예들 또는 본 발명의 관점들은 이러한 요소들, 특징들 등으로 구성되거나 이들로 필수적으로 구성되는 것으로 이해되어야 한다. 단순화의 목적들을 위해, 이들 구현예들은 모든 경우가 본 명세서에서 상세하게 설명되지 않았다. 본 발명의 구현예라면 모두, 예로 선행기술 내에서 확인되는 구현예라면 모두가 특정한 배제가 본 명세서에 재인용되는지 여부와는 상관없이, 청구항들로부터 분명하게 배제될 수 있는 것으로도 역시 이해되어야 한다.

정반대가 분명하게 표시되지 않은 경우라면, 하나 이상의 작용을 포함하는 본 명세서에서 청구된 방법들이라면 모두에서, 본 방법의 작용들의 순서는 반드시 본 방법의 작용들이 재인용된 순서에 제한되지는 않지만, 본 발명이 순서가 제한된 구현예들을 포함하는 것으로도 역시 이해되어야 한다. 또한, 청구항들이 조성물을 재인용하는 경우, 본 발명은 조성물을 사용하는 방법들 및 조성물을 제조하는 방법들을 포괄한다. 청구항들이 조성물을 재인용하는 경우, 본 발명은 조성물을 사용하는 방법들 및 조성물을 제조하는 방법들을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다.

참고문헌들의 통합

본 출원에서 인용된 모든 출판물들 및 특허 문서들은 각 개별 출판물 또는 특허 문서가 본 명세서에서 통합되어 있는 것과 동일한 정도로 그들의 전부가 참고문헌으로 통합되어 있다.

SEQUENCE LISTING <110> SYNAGEVA BIOPHARMA, CORP. <120> METHODS FOR TREATING LYSOSOMAL ACID LIPASE DEFICIENCY <130> 2006685-0103 <150> US 61/443,179 <151> 2011-02-15 <160> 4 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 378 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Ser Gly Gly Lys Leu Thr Ala Val Asp Pro Glu Thr Asn Met Asn Val 1 5 10 15 Ser Glu Ile Ile Ser Tyr Trp Gly Phe Pro Ser Glu Glu Tyr Leu Val 20 25 30 Glu Thr Glu Asp Gly Tyr Ile Leu Cys Leu Asn Arg Ile Pro His Gly 35 40 45 Arg Lys Asn His Ser Asp Lys Gly Pro Lys Pro Val Val Phe Leu Gln 50 55 60 His Gly Leu Leu Ala Asp Ser Ser Asn Trp Val Thr Asn Leu Ala Asn 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gly Phe Ile Leu Ala Asp Ala Gly Phe Asp Val Trp Met 85 90 95 Gly Asn Ser Arg Gly Asn Thr Trp Ser Arg Lys His Lys Thr Leu Ser 100 105 110 Val Ser Gln Asp Glu Phe Trp Ala Phe Ser Tyr Asp Glu Met Ala Lys 115 120 125 Tyr Asp Leu Pro Ala Ser Ile Asn Phe Ile Leu Asn Lys Thr Gly Gln 130 135 140 Glu Gln Val Tyr Tyr Val Gly His Ser Gln Gly Thr Thr Ile Gly Phe 145 150 155 160 Ile Ala Phe Ser Gln Ile Pro Glu Leu Ala Lys Arg Ile Lys Met Phe 165 170 175 Phe Ala Leu Gly Pro Val Ala Ser Val Ala Phe Cys Thr Ser Pro Met 180 185 190 Ala Lys Leu Gly Arg Leu Pro Asp His Leu Ile Lys Asp Leu Phe Gly 195 200 205 Asp Lys Glu Phe Leu Pro Gln Ser Ala Phe Leu Lys Trp Leu Gly Thr 210 215 220 His Val Cys Thr His Val Ile Leu Lys Glu Leu Cys Gly Asn Leu Cys 225 230 235 240 Phe Leu Leu Cys Gly Phe Asn Glu Arg Asn Leu Asn Met Ser Arg Val 245 250 255 Asp Val Tyr Thr Thr His Ser Pro Ala Gly Thr Ser Val Gln Asn Met 260 265 270 Leu His Trp Ser Gln Ala Val Lys Phe Gln Lys Phe Gln Ala Phe Asp 275 280 285 Trp Gly Ser Ser Ala Lys Asn Tyr Phe His Tyr Asn Gln Ser Tyr Pro 290 295 300 Pro Thr Tyr Asn Val Lys Asp Met Leu Val Pro Thr Ala Val Trp Ser 305 310 315 320 Gly Gly His Asp Trp Leu Ala Asp Val Tyr Asp Val Asn Ile Leu Leu 325 330 335 Thr Gln Ile Thr Asn Leu Val Phe His Glu Ser Ile Pro Glu Trp Glu 340 345 350 His Leu Asp Phe Ile Trp Gly Leu Asp Ala Pro Trp Arg Leu Tyr Asn 355 360 365 Lys Ile Ile Asn Leu Met Arg Lys Tyr Gln 370 375 <210> 2 <211> 21 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Lys Met Arg Phe Leu Gly Leu Val Val Cys Leu Val Leu Trp Thr 1 5 10 15 Leu His Ser Glu Gly 20 <210> 3 <211> 399 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Met Lys Met Arg Phe Leu Gly Leu Val Val Cys Leu Val Leu Trp Thr 1 5 10 15 Leu His Ser Glu Gly Ser Gly Gly Lys Leu Thr Ala Val Asp Pro Glu 20 25 30 Thr Asn Met Asn Val Ser Glu Ile Ile Ser Tyr Trp Gly Phe Pro Ser 35 40 45 Glu Glu Tyr Leu Val Glu Thr Glu Asp Gly Tyr Ile Leu Cys Leu Asn 50 55 60 Arg Ile Pro His Gly Arg Lys Asn His Ser Asp Lys Gly Pro Lys Pro 65 70 75 80 Val Val Phe Leu Gln His Gly Leu Leu Ala Asp Ser Ser Asn Trp Val 85 90 95 Thr Asn Leu Ala Asn Ser Ser Leu Gly Phe Ile Leu Ala Asp Ala Gly 100 105 110 Phe Asp Val Trp Met Gly Asn Ser Arg Gly Asn Thr Trp Ser Arg Lys 115 120 125 His Lys Thr Leu Ser Val Ser Gln Asp Glu Phe Trp Ala Phe Ser Tyr 130 135 140 Asp Glu Met Ala Lys Tyr Asp Leu Pro Ala Ser Ile Asn Phe Ile Leu 145 150 155 160 Asn Lys Thr Gly Gln Glu Gln Val Tyr Tyr Val Gly His Ser Gln Gly 165 170 175 Thr Thr Ile Gly Phe Ile Ala Phe Ser Gln Ile Pro Glu Leu Ala Lys 180 185 190 Arg Ile Lys Met Phe Phe Ala Leu Gly Pro Val Ala Ser Val Ala Phe 195 200 205 Cys Thr Ser Pro Met Ala Lys Leu Gly Arg Leu Pro Asp His Leu Ile 210 215 220 Lys Asp Leu Phe Gly Asp Lys Glu Phe Leu Pro Gln Ser Ala Phe Leu 225 230 235 240 Lys Trp Leu Gly Thr His Val Cys Thr His Val Ile Leu Lys Glu Leu 245 250 255 Cys Gly Asn Leu Cys Phe Leu Leu Cys Gly Phe Asn Glu Arg Asn Leu 260 265 270 Asn Met Ser Arg Val Asp Val Tyr Thr Thr His Ser Pro Ala Gly Thr 275 280 285 Ser Val Gln Asn Met Leu His Trp Ser Gln Ala Val Lys Phe Gln Lys 290 295 300 Phe Gln Ala Phe Asp Trp Gly Ser Ser Ala Lys Asn Tyr Phe His Tyr 305 310 315 320 Asn Gln Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Asn Val Lys Asp Met Leu Val Pro 325 330 335 Thr Ala Val Trp Ser Gly Gly His Asp Trp Leu Ala Asp Val Tyr Asp 340 345 350 Val Asn Ile Leu Leu Thr Gln Ile Thr Asn Leu Val Phe His Glu Ser 355 360 365 Ile Pro Glu Trp Glu His Leu Asp Phe Ile Trp Gly Leu Asp Ala Pro 370 375 380 Trp Arg Leu Tyr Asn Lys Ile Ile Asn Leu Met Arg Lys Tyr Gln 385 390 395 <210> 4 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Met Ala Cys Leu Glu Phe Val Pro Phe Asp Val Gln Met Cys Leu Glu 1 5 10 15 Phe Leu Pro Ser 20

Claims

리소좀 산 리파제 (lysosomal acid lipase)의 치료적 유효량을 개인에게 투여하는 단계를 포함하는, 리소좀 산 리파제 결핍 (LALD) 질환을 앓고 있는 개인에서 발달 손상 또는 영양실조를 치료하는 방법.
제 1항에 있어서,
상기 LALD는 울만병인, 방법.
제 1항에 있어서,
상기 LALD는 콜레스테릴 에스테르 축적병 (CESD)인, 방법.
제 1항 내지 제 3항의 어느 한 항에 있어서,
발달 손상 또는 영양실조를 치료하는 단계는 무게 증가를 촉진하는 단계를 포함하는, 방법.
제 1항 내지 제 3항의 어느 한 항에 있어서,
발달 손상 또는 영양실조를 치료하는 단계는 무게 손실을 감소시키거나 예방하는 단계를 포함하는, 방법.
제 1항 내지 제 3항의 어느 한 항에 있어서,
발달 손상 또는 영양실조를 치료하는 단계는 조직 허약 또는 쇠약을 감소시키거나 제거하는 단계를 포함하는, 방법.
제 6항에 있어서,
상기 조직 허약 또는 쇠약은 근육 및/또는 피하의 허약 또는 쇠약인, 방법.
제 1항 내지 제 3항의 어느 한 항에 있어서,
발달 손상 또는 영양실조를 치료하는 단계는 구토 및/또는 설사의 빈도 및/또는 강도를 감소시키는 단계를 포함하는, 방법.
제 1항 내지 제 8항의 어느 한 항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제의 투여 단계는 체중과 대비하여 간, 비장, 및 위 크기에서 감소를 더욱 유도하는, 방법.
제 1항 내지 제 9항의 어느 한 항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제의 투여 단계는 조직들에서 지질 축적의 감소를 더욱 유도하는, 방법.
제 10항에 있어서,
상기 조직들은 간, 비장, 창자, 골수, 신장, 혈관 벽들, 및 그들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
제 10항 또는 제 11항에 있어서,
상기 지질은 콜레스테롤 및/또는 트리글리세라이드들을 포함하는, 방법.
제 10항 내지 제 12항의 어느 한 항에 있어서,
상기 지질 축적은 20% 넘게 감소되는, 방법.
제 10항 내지 제 12항의 어느 한 항에 있어서,
상기 지질 축적은 40% 넘게 감소되는, 방법.
제 10항 내지 제 12항의 어느 한 항에 있어서,
상기 지질 축적은 80% 넘게 감소되는, 방법.
제 10항 내지 제 12항의 어느 한 항에 있어서,
상기 지질 축적이 제거되는, 방법.
제 1항 내지 제 16항의 어느 한 항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제는 정맥내로 투여되는, 방법.
제 1항 내지 제 17항의 어느 한 항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제는 피하로 투여되는, 방법.
제 1항 내지 제 16항의 어느 한 항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제는 근육내로 투여되는, 방법.
제 1항 내지 제 16항의 어느 한 항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제는 경막내로 또는 뇌실내로 투여되는, 방법.
제 1항 내지 제 20항의 어느 한 항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제는 매월 투여되는, 방법.
제 1항 내지 제 20항의 어느 한 항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제는 격월로 투여되는, 방법.
제 1항 내지 제 20항의 어느 한 항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제는 매주 투여되는, 방법.
제 1항 내지 제 20항의 어느 한 항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제는 매주 두 번 투여되는, 방법.
제 1항 내지 제 20항의 어느 한 항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제는 매일 투여되는, 방법.
제 1항 내지 제 20항의 어느 한 항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제는 시간 경과 시 변화되는 간격으로 투여되는, 방법.
제 1항 내지 제 26항의 어느 한 항에 있어서,
치료적 유효량은 적어도 0.01 mg/kg 체중인, 방법.
제 1항 내지 제 26항의 어느 한 항에 있어서,
치료적 유효량은 적어도 0.1 mg/kg 체중인, 방법.
제 1항 내지 제 26항의 어느 한 항에 있어서,
치료적 유효량은 적어도 0.5 mg/kg 체중인, 방법.
제 1항 내지 제 26항의 어느 한 항에 있어서,
치료적 유효량은 10 mg/kg 체중 이하인, 방법.
제 1항 내지 제 26항의 어느 한 항에 있어서,
치료적 유효량은 1 mg/kg 체중 이하인, 방법.
제 1항 내지 제 26항의 어느 한 항에 있어서,
치료적 유효량은 약 0.3 mg/kg 체중인, 방법.
제 1항 내지 제 32항의 어느 한 항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제는 인간 리소좀 산 리파제 (서열번호 1)와 적어도 80% 일치하는 아미노산 서열을 가지는, 방법.
제 1항 내지 제 33항의 어느 한 항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제는 인간 리소좀 산 리파제 (서열번호 1)와 적어도 90% 일치하는 아미노산 서열을 가지는, 방법.
제 1항 내지 제 34항의 어느 한 항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제는 인간 리소좀 산 리파제 (서열번호 1)와 적어도 95% 일치하는 아미노산 서열을 가지는, 방법.
제 1항 내지 제 35항의 어느 한 항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제는 인간 리소좀 산 리파제 (서열번호 1)인, 방법.
제 1항 내지 제 36항의 어느 한 항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제는 재조합으로 생산되는, 방법.
제 37항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제는 포유동물 세포들로부터 재조합으로 생산되는, 방법.
제 37항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제는 유전자전환 조류에서 재조합으로 생산되는, 방법.
제 37항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제는 자연적으로-생기는 리소좀 산 리파제의 당화 양상과는 다른 당화 양상을 가지는, 방법.
제 37항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제는 하나 이상의 N-글리칸 구조들을 포함하는, 방법.
LALD 질환을 앓고 있거나 이에 취약한 개인에게 리소좀 산 리파제의 치료적 유효량을 일정 투여 간격으로 정기적으로 투여하는 단계로서, 상기 치료적 유효량은 적어도 0.01 mg/kg 체중인 단계를 포함하는, 리소좀 산 리파제 결핍 (LALD) 질환을 치료하는 방법.
LALD 질환을 앓고 있거나 이에 취약한 개인에게 리소좀 산 리파제의 치료적 유효량을 일정 투여 간격으로 정기적으로 투여하는 단계로서, 상기 치료적 유효량은 10 mg/kg 체중 이하인 단계를 포함하는, 리소좀 산 리파제 결핍 (LALD) 질환을 치료하는 방법.
LALD 질환을 앓고 있거나 이에 취약한 개인에게 리소좀 산 리파제의 치료적 유효량을 일정 투여 간격으로 정기적으로 투여하는 단계로서, 상기 리소좀 산 리파제는 피하로 투여되는 단계를 포함하는, 리소좀 산 리파제 결핍 (LALD) 질환을 치료하는 방법.
LALD 질환을 앓고 있거나 이에 취약한 개인에게 리소좀 산 리파제의 치료적 유효량을 일정 투여 간격으로 정기적으로 투여하는 단계로서, 치료되고 있는 개인의 상대적 간 무게 또는 부피는 대조군과 비교 시 약 50% 넘게 감소되는 단계를 포함하는, 리소좀 산 리파제 결핍 (LALD) 질환을 치료하는 방법.
제 45항에 있어서,
상기 치료되고 있는 개인의 상대적 간 무게 또는 부피는 대조군과 비교 시 약 80% 넘게 감소되는, 방법.
제 45항 또는 제 46항에 있어서,
상기 대조군은 치료 이전에 상기 치료되고 있는 개인의 상대적 간 무게 또는 부피인, 방법.
제 45항 또는 제 46항에 있어서,
상기 대조군은 치료 없이 동일한 형태의 LALD 질환을 앓고 있는 대조군 개인들의 평균 상대적 간 무게 또는 부피인, 방법.
제 45항에 있어서,
상기 치료되고 있는 개인의 상대적 간 무게 또는 부피는 건강한 개인의 수치와 비슷한, 방법.
제 45항 내지 제 49항의 어느 한 항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제의 치료적 유효량의 투여 단계는 치료되고 있는 개인의 감소된 상대적 비장 무게 또는 부피를 대조군과 비교 시 약 50% 넘게 더욱 유도하는, 방법.
제 50항에 있어서,
상기 치료되고 있는 개인의 상대적 비장 무게 또는 부피는 건강한 개인의 수치와 비슷한, 방법.
LALD 질환을 앓고 있거나 이에 취약한 개인에게 리소좀 산 리파제를 제 1 용량으로 제 1 기간 동안 정기적으로 투여하는 단계; 및
상기 개인에서 상기 리소좀 산 리파제를 제 2 용량으로 제 2 기간 동안 정기적으로 투여하는 단계:
를 포함하는, 리소좀 산 리파제 결핍 (LALD) 질환을 치료하는 방법.
제 52항에 있어서,
상기 제 2 용량은 상기 제 1 용량보다 더 낮은, 방법.
제 52항 또는 제 53항에 있어서,
상기 제 1 용량은 0.1 내지 5 mg/kg 체중의 범위인, 방법.
제 52항 내지 제 54항의 어느 한 항에 있어서,
상기 제 2 용량은 0 내지 2 mg/kg 체중의 범위인, 방법.
리소좀 산 리파제의 치료적 유효량 및 약제학적 담체를 포함하고, 상기 치료적 유효량은 적어도 0.01 mg/kg 체중인, 리소좀 산 리파제 결핍 (LALD) 질환을 치료하는 약제학적 조성물.
리소좀 산 리파제의 치료적 유효량 및 약제학적 담체를 포함하고, 상기 치료적 유효량은 10 mg/kg 체중 이하인, 리소좀 산 리파제 결핍 (LALD) 질환을 치료하는 약제학적 조성물.
제 56항 또는 제 57항에 있어서,
상기 LALD 질환은 울만병인, 약제학적 조성물.
제 56항 또는 제 57항에 있어서,
상기 LALD 질환은 콜레스테릴 에스테르 축적병 (CESD)인, 약제학적 조성물.
제 56항 내지 제 59항의 어느 한 항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제는 인간 리소좀 산 리파제 (서열번호 1)와 적어도 80% 일치하는 아미노산 서열을 가지는, 약제학적 조성물.
제 56항 내지 제 60항의 어느 한 항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제는 인간 리소좀 산 리파제 (서열번호 1)와 적어도 90% 일치하는 아미노산 서열을 가지는, 약제학적 조성물.
제 56항 내지 제 61항의 어느 한 항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제는 인간 리소좀 산 리파제 (서열번호 1)와 적어도 95% 일치하는 아미노산 서열을 가지는, 약제학적 조성물.
제 56항 내지 제 62항의 어느 한 항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제는 인간 리소좀 산 리파제 (서열번호 1)인, 약제학적 조성물.
제 56항 내지 제 63항의 어느 한 항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제는 재조합으로 생산되는, 약제학적 조성물.
제 64항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제는 포유동물 세포들로부터 재조합으로 생산되는, 약제학적 조성물.
제 64항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제는 유전자전환 조류에서 재조합으로 생산되는, 약제학적 조성물.
제 56항 내지 제 66항의 어느 한 항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제는 자연적으로-생기는 리소좀 산 리파제의 당화 양상과는 다른 당화 양상을 가지는, 약제학적 조성물.
제 56항 내지 67항의 어느 한 항에 있어서,
상기 리소좀 산 리파제는 하나 이상의 N-글리칸 구조들을 포함하는, 약제학적 조성물.