CN102458472B - 药物组合物、食品饮料以及与它们相关的方法 - Google Patents

药物组合物、食品饮料以及与它们相关的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN102458472B
CN102458472B CN201080030813.5A CN201080030813A CN102458472B CN 102458472 B CN102458472 B CN 102458472B CN 201080030813 A CN201080030813 A CN 201080030813A CN 102458472 B CN102458472 B CN 102458472B
Authority
CN
China
Prior art keywords
domain
aminoacid sequence
aim
protein
sequence
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201080030813.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN102458472A (zh
Inventor
宫崎彻
Original Assignee
Sumitomo Dainippon Pharma Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sumitomo Dainippon Pharma Co Ltd filed Critical Sumitomo Dainippon Pharma Co Ltd
Publication of CN102458472A publication Critical patent/CN102458472A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102458472B publication Critical patent/CN102458472B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
    • C07K14/4703—Inhibitors; Suppressors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
    • A23L2/52—Adding ingredients
    • A23L2/66—Proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)

Abstract

本发明提供一种新型药物组合物、食品饮料以及与它们相关的方法。根据本发明的药物组合物，特征在于，作为有效成分而包含下述的(I)或(II)的蛋白质：(I)巨噬细胞凋亡抑制因子；(II)由巨噬细胞凋亡抑制因子的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与所述氨基酸序列具有同源性的氨基酸序列构成，且具有抑制前脂肪细胞向成熟脂肪细胞的分化的功能和/或在成熟脂肪细胞中诱导脂滴分解的功能的蛋白质。即，本发明所涉及的药物组合物作为有效成分，例如包含：由序列表1中示出的氨基酸序列构成的蛋白质、由序列表5中示出的氨基酸序列构成的蛋白质、或者这些蛋白质在不损坏抑制前脂肪细胞向成熟脂肪细胞的分化的功能和/或在成熟脂肪细胞中诱导脂滴分解的功能的范围内发生变异的蛋白质。

Description

药物组合物、食品饮料以及与它们相关的方法
技术领域
本发明涉及一种药物组合物、食品饮料以及关于它们的方法。
背景技术
目前，人们正在进行各种抗肥胖药物的研发。例如，有报道指出脂肪酸合成酶(FAS)的抑制剂通过降低下丘脑的神经肽Y(NPY)的产生量，引起显著的食欲减退，从而最终达到减少体重或脂肪量的效果(例如，参照非专利文献1)。
现有技术文献
非专利文献
非专利文献1：Loftus，T.M.等Science 288：2379-2381(2000)
发明内容
技术问题
然而，对于将作用于脑神经系统的低分子化合物作为有效成分的抗肥胖药物而言，会引起不良的副作用(例如，厌食症)。
因此，人们迫切期望研制出不会伴随这种副作用(例如，厌食症)的新的抗肥胖药物。
本发明是鉴于上述技术问题而提出的，目的之一在于提供新型药物组合物、食品饮料以及与它们相关的方法。
技术方案
为了解决上述问题的本发明的一种实施方式所涉及的药物组合物，特征在于，作为有效成分而包含下述的(I)或(II)的蛋白质：(I)巨噬细胞凋亡抑制因子；(II)由巨噬细胞凋亡抑制因子的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与所述氨基酸序列具有同源性的氨基酸序列构成，且具有抑制前脂肪细胞向成熟脂肪细胞的分化的功能和/或在成熟脂肪细胞中诱导脂滴分解的功能的蛋白质。根据本发明，可以提供新型药物组合物。
为了解决上述问题的本发明的一种实施方式所涉及的蛋白质，特征在于，是所述(I)的蛋白质或者所述(II)的蛋白质，且作为药物组合物的有效成分使用。根据本发明，可以提供用于新的药物用途的蛋白质。
为了解决上述问题的本发明的一种实施方式所涉及的方法，特征在于，制备所述药物组合物。根据本发明，可以提供制备新型药物组合物的方法。
为了解决上述问题的本发明的一种实施方式所涉及的方法，特征在于，向生物机体给予所述药物组合物。根据本发明，可以提供向生物机体给予新型药物组合物的方法。
为了解决上述问题的本发明的一种实施方式所涉及的食品饮料，特征在于，包含下述的(I)或(II)的蛋白质：(I)巨噬细胞凋亡抑制因子；(II)由巨噬细胞凋亡抑制因子的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与所述氨基酸序列具有同源性的氨基酸序列构成，且具有抑制前脂肪细胞向成熟脂肪细胞的分化的功能和/或在成熟脂肪细胞中诱导脂滴分解的功能的蛋白质。根据本发明，可以提供新型食品饮料。
为了解决上述问题的本发明的一种实施方式所涉及的方法，特征在于，制造所述食品饮料。根据本发明，可以提供制造新型食品饮料的方法。
附图说明
图1为将人类AIM氨基酸序列与cDNA碱基序列相对应起来而示出的说明图。
图2为示出属于SRCR-SF的分子的一种示例的说明图。
图3为将人类AIM氨基酸序列、小鼠AIM氨基酸序列以及它们共有的共有序列相对应起来而示出的说明图。
图4是示出巨噬细胞浸润到脂肪组织而产生AIM的状态的显微镜照的一种示例的说明图。
图5A是示出对脂肪细胞的AIM处理方案的一种示例的说明图。
图5B是示出对根据图5A中示出的方案用AIM处理的细胞采用油红O脂肪染色的结果的一种示例的说明图。
图6A是示出对脂肪细胞的AIM处理方案的一种示例的说明图。
图6B是示出对根据图6A中示出的方案用AIM处理的细胞采用油红O脂肪染色的结果的一种示例的说明图。
图7A是示出根据图6A中示出的方案用AIM处理时得到的具有脂滴的细胞的数的测定结果的一种示例的说明图。
图7B是示出根据图6A中示出的方案用AIM处理时得到的具有脂滴的细胞的数中的脂滴直径的测定结果的一种示例的说明图。
图8A是示出根据图6A中示出的方案用AIM处理时释放到培养上清液中的甘油的量的测定结果的一种示例的说明图。
图8B是示出根据图6A中示出的方案用AIM处理时释放到培养上清液中的游离脂肪酸的量的测定结果的一种示例的说明图。
图9是以模式化示出伴随脂肪细胞分化的主要的基因的表达模式的说明图。
图10是示出根据图5A以及图6A中示出的方案用AIM处理的细胞中的基因表达的分析结果的一种示例的说明图。
图11A是示出对于脂肪细胞的AIM处理方案的一种示例的说明图。
图11B是示出根据图11A中示出的方案用AIM或FAS抑制剂处理的细胞中的FAS酶活性的测定结果的一种示例的说明图。
图11C是示出根据图11A中示出的方案用AIM或FAS抑制剂处理的细胞中的FAS酶活性的测定结果的另一种示例的说明图。
图12A是示出对根据图11A中示出的方案用AIM或FAS抑制剂处理的细胞采用油红O脂肪染色的结果的一种示例的说明图。
图12B是示出对根据图11A中示出的方案用AIM或FAS抑制剂处理的细胞中的基因表达的分析结果的一种示例的说明图。
图13A是示出根据图11A中示出的方案用AIM或FAS抑制剂处理时释放到培养上清液中的甘油的量的测定结果的一种示例的说明图。
图13B是示出根据图11A中示出的方案用AIM或FAS抑制剂处理时释放到培养上清液中的游离脂肪酸的量的测定结果的一种示例的说明图。
图14是示出证实添加有HA标签的AIM和添加有FLAG标签的FAS的结合的免疫沉淀的结果的一种示例的说明图。
图15A是示出用AIM处理并用抗AIM抗体染色的细胞的共焦显微镜照的一种示例的说明图。
图15B是示出用AIM处理并用抗AIM抗体染色的细胞的共焦显微镜照的另一种示例的说明图。
图16A是示出用AIM处理的细胞的免疫电子显微镜照的一种示例的说明图。
图16B是示出用AIM处理的细胞的免疫电子显微镜照的另一种示例的说明图。
图17是以模式化示出AIM内吞进入细胞内的机制的说明图。
图18A是示出将采用AIM以及CD36双重染色的脂肪细胞通过共焦显微镜以二维方式分析的结果的一种示例的说明图。
图18B是示出将采用AIM以及CD36双重染色的脂肪细胞通过共焦显微镜以三维方式分析的结果的一种示例的说明图。
图18C是示出将采用AIM以及CD36双重染色的脂肪细胞通过共焦显微镜以三维方式分析的结果的另一种示例的说明图。
图18D是示出将采用AIM以及CD36双重染色的脂肪细胞通过共焦显微镜以三维方式分析的结果的又一个另一种示例的说明图。
图19A是示出将不存在CD36中和抗体的情况下用AIM处理的细胞用抗AIM抗体染色的结果的一种示例的说明图。
图19B是示出将用CD36中和抗体的同时用AIM处理的细胞用抗AIM抗体染色的结果的一种示例的说明图。
图20A是示出拍摄AIM-/- Adipo-/-小鼠的腹腔内脂肪组织的照片的一种示例的说明图。
图20B是示出拍摄AIM+/+ Adipo-/-小鼠的腹腔内脂肪组织的照片的一种示例的说明图。
图21A是示出AIM-/- Adipo-/-小鼠以及AIM+/+ Adipo-/-小鼠的体重的测定结果的一种示例的说明图。
图21B是示出AIM-/- Adipo-/-小鼠以及AIM+/+ Adipo-/-小鼠的脂肪组织的重量的测定结果的一种示例的说明图。
图22A是示出给予BSA的小鼠的脂肪组织的显微镜观察结果的一种示例的说明图。
图22B是示出给予AIM的小鼠的脂肪组织的显微镜观察结果的一种示例的说明图。
图23A是示出用HFD喂食之前的AIM-/- Adipo-/-小鼠以及AIM+/+ Adipo-/-小鼠的体重的测定结果的一种示例的说明图。
图23B是示出用HFD喂食之后的AIM-/- Adipo-/-小鼠以及AIM+/+ Adipo-/-小鼠的体重的测定结果的一种示例的说明图。
图23C是示出AIM-/- Adipo-/-小鼠以及AIM+/+ Adipo-/-小鼠的内脏脂肪的重量的测定结果的一种示例的说明图。
图23D是示出AIM-/- Adipo-/-小鼠以及AIM+/+ Adipo-/-小鼠的皮下脂肪的重量的测定结果的一种示例的说明图。
图23E是示出AIM-/- Adipo-/-小鼠以及AIM+/+ Adipo-/-小鼠的肝脏的重量的测定结果的一种示例的说明图。
图24A是示出用HFD喂食之前的AIM-/-小鼠以及AIM+/+小鼠的体重的测定结果的一种示例的说明图。
图24B是示出用HFD喂食之后的AIM-/-小鼠以及AIM+/+小鼠的体重的测定结果的一种示例的说明图。
图24C是示出AIM-/-小鼠以及AIM+/+小鼠的内脏脂肪组织的重量的测定结果的一种示例的说明图。
图24D是示出AIM-/-小鼠以及AIM+/+小鼠的皮下脂肪组织的重量的测定结果的一种示例的说明图。
图24E是示出AIM-/-小鼠以及AIM+/+小鼠的肝脏的重量的测定结果的一种示例的说明图。
图25是示出AIM-/-小鼠以及AIM+/+小鼠的饲料摄入量的测定结果的一种示例的说明图。
图26是示出AIM+/+小鼠以及AIM-/-小鼠的脂肪细胞的大小的测定结果的一种示例的说明图。
图27A是示出从AIM+/+小鼠采集的内脏脂肪组织切片用HE染色而在相差显微镜下观察的结果的一种示例的说明图。
图27B是示出从AIM-/-小鼠采集的内脏脂肪组织切片用HE染色而在相差显微镜下观察的结果的一种示例的说明图。
图28A是示出AIM+/+小鼠以及AIM-/-小鼠的体重的测定结果的一种示例的说明图。
图28B是示出AIM+/+小鼠以及AIM-/-小鼠的内脏脂肪组织的重量的测定结果的一种示例的说明图。
图28C是示出AIM+/+小鼠以及AIM-/-小鼠的皮下脂肪组织的重量的测定结果的一种示例的说明图。
图29A是示出AIM+/+小鼠以及AIM-/-小鼠的体温的测定结果的一种示例的说明图。
图29B是示出AIM+/+小鼠以及AIM-/-小鼠的耗氧速率的测定结果的一种示例的说明图。
图29C是示出AIM+/+小鼠以及AIM-/-小鼠的饲料摄入量的测定结果的一种示例的说明图。
图29D是示出AIM+/+小鼠以及AIM-/-小鼠的活动性的评价结果的一种示例的说明图。
图30A是示出给予AIM或者BSA的AIM-/-小鼠的体重的测定结果的一种示例的说明图。
图30B是示出给予AIM或者BSA的AIM-/-小鼠的内脏脂肪组织的重量的测定结果的一种示例的说明图。
图30C是示出给予AIM或者BSA的AIM-/-小鼠的皮下脂肪组织的重量的测定结果的一种示例的说明图。
图31是示出给予AIM或者BSA的AIM-/-小鼠的mRNA水平的评价结果的一种示例的说明图。
图32是示出确认体内(in vivo)的AIM和FAS结合的结果的一种示例的说明图。
图33A是示出确认体外(in vitro)的AIM和FAS结合的结果的一种示例的说明图。
图33B是示出确认体外(in vitro)的AIM和FAS结合的结果的另一种示例的说明图。
图34A是示出二聚化的FAS以及各区域的主要功能的说明图。
图34B是示出将FAS各区域用Flag序列标记，并通过共沉淀试验研究该各区域与用HA标记的AIM的结合的结果的一种示例的说明图。
图35A是示出向野生型CD36+/+小鼠从静脉注射rAIM，分析向脂肪组织的rAIM的内吞的结果的一种示例的说明图。
图35B是示出向CD36-/-小鼠从静脉注射rAIM，分析向脂肪组织的rAIM的内吞的结果的一种示例的说明图。
图36A是示出在相差显微镜下观察分化刺激前的HMSC的结果的一种示例的说明图。
图36B是示出在相差显微镜下观察rhAIM不存在下被分化刺激后的HMSC的结果的一种示例的说明图。
图36C是示出在相差显微镜下观察rhAIM存在下被分化刺激后的HMSC的结果的一种示例的说明图。
图37是示出HMSC中的Glut-4的mRNA水平的评价结果的一种示例的说明图。
图38是示出采用抗小鼠AIM抗体对狗血清以及猫血清进行免疫印迹试验的结果的一种示例的说明图。
具体实施方式
以下，说明本发明的一种实施方式。需要说明的是，本发明不受本实施方式的任何限制。
首先，对于作为与本发明相关的蛋白质的巨噬细胞凋亡抑制因子(Apoptosis Inhibitor of Macrophage，以下称为“AIM”。)，进行说明。
AIM在其氨基酸序列中存在保守的三个SRCR(Scavenger ReceptorCysteine-Rich)结构域(从N末端依次称为SRCR1、SRCR2、SRCR3。)，是具有由该三个SRCR结构域串联的分子结构的分泌蛋白。
本发明的发明人研究团队通过克隆小鼠基因，构建基因敲除小鼠，并基于分析结果，首次发表了由巨噬细胞特异性产生的、作为具有抑制巨噬细胞的凋亡的功能的分泌蛋白的小鼠AIM(文献1：Miyazaki，T.等Increasedsusceptibility of thymocytes to apoptosis in mice lacking AIM，a novel murinemacrophage-derived soluble factor belonging to the scavenger receptorcysteine-rich domain superfamily.J Exp Med.189：413-422，1999.；文献2：Haruta，I.，Kato，Y.，Hashimoto，E.，Minjares，C.，Kennedy，S.，Uto，H.，Yamauchi，K.，Kobayashi，M.，Yusa，S.，Muller，U.，Hayashi，N.& Miyazaki，T.Association ofAIM，a novel apoptosis inhibitory factor，with hepatitis via supporting macrophagesurvival and enhancing phagocytotic function of macrophages.J.Biol.Chem.276：22910-22914(2001).)。
另一方面，其他研究团队发表过人类基因序列的“Spα”(Secretion proteinα)(文献3：Gebe，J.A.等Molecular cloning，mapping to human chromosome 1q21-q23，and cell binding characteristics of Spalpha，a new member of thescavenger receptor cysteine-rich(SRCR)family of proteins.J Biol Chem.272：6151-6158，1997.)。并且，此后作为基因组测序工程的一环，将该基因命名为“Api6”。而且，由于具有三个SRCR结构域的结构与CD5的细胞外结构域相似，因此又将该基因命名为“CD5L”。并且，最近提出将这些名称统一为“CD5L”。但是，从分子名称应当反映其功能的观点考虑，将这些蛋白质名称均统一为“AIM”，应该更为恰当。
小鼠AIM是由示出在序列表5中的氨基酸序列构成的蛋白质。并且，人类AIM是由示出在序列表1中的氨基酸序列构成的蛋白质。在此，图1是将人类AIM氨基酸序列(序列表1中示出的氨基酸序列)与cDNA碱基序列(序列表9中示出的碱基序列)相对应起来而示出的。
接着，对AIM分子的特征进行说明。小鼠AIM原本是作为清道夫受体富含半胱氨酸残基超家族(Scavenger-Receptor Cysteine-Rich Super-Family，SRCR-SF)的新组成员而发现的，是具有54kDa分子量的分子。
图2中示出属于该SRCR-SF的分子的一种示例。如图2所示，AIM分子由在属于SRCR-SF的组成员分子之间保守的富含半胱氨酸残基的三个SRCR结构域串联而成。
该AIM虽然包含相比于作为最为靠近N末端侧的SRCR结构域的SRCR1，更靠近N末端侧的信号肽，但是不包含相当于跨膜结构域或胞内结构域的部分，在序列上是典型的分泌蛋白。需要说明的是，如图2所示，CD5或CD6等具有三个相同的SRCR结构域的其他SRCR-SF的组成员属于跨膜蛋白。
另外提一下，“SRCR-SF”的名称是由于富含半胱氨酸残基的结构域在清道夫受体中最初被记载而被命名的名称，但并不是所有的包含该结构域的分子都具有清道夫功能。实际上，小鼠AIM不具有清道夫功能。
小鼠AIM与人类AIM的氨基酸序列具有68％的同源性。并且，虽然小鼠AIM中包含三个N-糖化位点，但人类AIM中没有N-糖化位点。
图3是将人类AIM氨基酸序列(序列表1中示出的氨基酸序列的单字母标记)、小鼠AIM氨基酸序列(序列表5中示出的氨基酸序列的单字母标记)以及它们共有的共有序列相对应起来而示出的。在图3的六段中，示出在最上段到第三段的用方框圈起来的部分是SRCR1结构域的氨基酸序列(涉及人类AIM的序列表2中示出的氨基酸序列以及涉及小鼠AIM的序列表6中示出的氨基酸序列)。并且，示出在第三段到第五段的用方框圈起来的部分是SRCR2结构域的氨基酸序列(涉及人类AIM的序列表3中示出的氨基酸序列以及涉及小鼠AIM的序列表7中示出的氨基酸序列)。并且，示出在第五段到第六段的用方框圈起来的部分是SRCR3结构域的氨基酸序列(涉及人类AIM的序列表4中示出的氨基酸序列以及涉及小鼠AIM的序列表8中示出的氨基酸序列)。
进一步地，对于迄今为止了解到的AIM的功能进行说明。AIM的一部分功能在最初分析基因敲除小鼠时即已明确(上述文献1)。即，已经了解到虽然AIM基因缺失(AIM-/-)小鼠基本上没有出现异常，但腹腔巨噬细胞中，对于通过各种刺激而诱导的凋亡的抵抗性低下。同样地，如果用重组AIM分子处理AIM-/-巨噬细胞，则会提高凋亡抵抗性。即，已经明确AIM具有抑制巨噬细胞的凋亡的功能。
对于AIM而言，能够抑制的凋亡并不是通过限定的刺激而诱导的凋亡，其能够作用于通过Fas/CD95、放射线、类固醇、感染(李斯特菌等)、氧化LDL等各种刺激而诱导的凋亡。AIM究竟通过什么样的机制抑制凋亡，尚不明了。
并且，本发明的发明人对于这种AIM反复进行了专心研究，其结果独立发现AIM发挥以下意外的功能。即，抑制前脂肪细胞向成熟脂肪细胞的分化，并且在成熟的脂肪细胞中诱导脂滴分解(lipolysis，脂解作用)。由此出发，最终完成了本发明。
而且，令人惊讶的是，虽然AIM已经被明确属于分泌蛋白，但在细胞膜表面上表达的CD36介导下内吞进入细胞质内，由此发挥其功能。
该事实表明，AIM仅特异性地作用于表达有CD36的细胞。即，例如AIM对不表达CD36的脑神经系统的细胞不起作用。
并且，由于AIM是一种蛋白，因此不会通过血脑屏障。从而，AIM不会引起诸如由于现有的将低分子物质作为有效成分的抗肥胖药物而引起的副作用(例如，厌食症)。
接着，对本实施方式所涉及的药物组合物(以下，称为“本药物组合物”。)进行说明。本药物组合物作为有效成分而含有包含上述AIM的特定蛋白质(以下，称为“本蛋白质”。)。
即，本药物组合物作为有效成分而包含下述的(I)或(II)的蛋白质，(I)巨噬细胞凋亡抑制因子(AIM)；(II)由巨噬细胞凋亡抑制因子(AIM)的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与所述氨基酸序列具有同源性的氨基酸序列构成，且具有抑制前脂肪细胞向成熟脂肪细胞的分化的功能和/或在成熟脂肪细胞中诱导脂滴分解的功能的蛋白质。在此，所述(I)的蛋白质是天然AIM，而所述(II)的蛋白质是该天然AIM的变异蛋白。
本蛋白质是所述(I)的蛋白质或所述(II)的蛋白质，是作为药物组合物的有效成分而使用的蛋白质。并且，本蛋白质是例如在后述的任意疾病的诊断、治疗或预防中所使用的蛋白质。
本药物组合物作为有效成分而包含例如人类或人类以外的动物(以下，仅称为“动物”。)的AIM。
本蛋白质例如是由序列表1中示出的氨基酸序列构成的蛋白质。即，此时，本蛋白质是人类的AIM，是具有抑制巨噬细胞凋亡的功能(以下，称为“凋亡抑制功能”)的分泌蛋白。
并且，本蛋白质例如是动物的AIM。对于动物，只要是人以外的动物，没有特别限制，例如是哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、天竺鼠等啮齿类；兔；狗；猫；猪；牛；马；猴)。更加具体地，本蛋白质例如是小鼠、狗或猫的AIM。
本蛋白质例如是由序列表5中示出的氨基酸序列构成的蛋白质。即，此时，本蛋白质是小鼠的AIM，是具有凋亡抑制功能的分泌蛋白。
这些AIM例如可以利用基因重组技术而制备。即，首先，将序列表9中示出的人类AIM的cDNA(需要说明的是，序列表9中示出的碱基序列中3′末端的“tag”是终止密码子。)整合到适当的表达载体(pCAGGS等)。接着，将该表达载体导入到动物细胞株(CHO细胞、293T细胞等)，使该动物细胞产生人类AIM。
由于人类AIM属于分泌蛋白，因此产生的重组人类AIM会被释放到培养上清液中。从而，例如，可以通过在该人类AIM上添加HA等标签多肽(9～12个氨基酸)，利用固定有针对该标签多肽的抗体的纯化柱，从培养上清液纯化该人类AIM。并且，例如，预先得到抗AIM抗体时，还可以采用该抗AIM抗体，从培养上清液纯化没有添加标签的人类AIM。
在此，对于人以外的动物的AIM，也可以采用同样的方法制备AIM。即，例如，对于小鼠，可以通过利用序列表10中示出的小鼠AIM的cDNA(需要说明的是，序列表10中示出的碱基序列中3′末端的“tga”是终止密码子。)，按照与制备上述的人类AIM时相同的顺序，得到重组小鼠AIM。
并且，对于其他的动物种(例如，狗、猫)，例如，也可以基于包含保守的SRCR结构域、具有三个该SRCR结构域串联的形态、是分泌蛋白，这三个特征，从该其他动物种的cDNA文库中获得AIM的cDNA，按照与制备上述的人类AIM时相同的顺序，得到重组AIM。
并且，例如，还可以从公知的数据库(例如，National Center forBiotechnology Information(NCBI，美国国家生物技术信息中心)提供的数据库)得到AIM的氨基酸序列。具体而言，例如，将狗AIM的氨基酸序列示出在序列表11中，将黑猩猩AIM的氨基酸序列示出在序列表12中，将大鼠AIM的氨基酸序列示出在序列表13中。
进一步地，对于在这些天然AIM的部分氨基酸序列中发生如后述的变异的AIM类似蛋白质，例如，只要合成并使用对应的cDNA，就可以按照相同的顺序，作为重组变异AIM而获得。
并且，对于本蛋白质而言，在不损坏其抑制前脂肪细胞向成熟脂肪细胞的分化的功能(以下，称为“脂肪分化抑制功能”。)和/或在成熟脂肪细胞中诱导脂滴分解(lipolysis，脂解作用)的功能(以下，称为“脂解功能”。)的范围内，可以使用在上述的天然AIM的氨基酸序列中发生变异的蛋白质(AIM变异蛋白)。
即，本药物组合物作为有效成分而包含例如人类或动物的AIM变异蛋白。
如上所述，AIM变异蛋白是由AIM氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与所述氨基酸序列具有同源性的氨基酸序列构成，且具有脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的蛋白质。
在此，对以下说明的AIM变异蛋白，没有明确记载时，也可以具有如下所述的特征。即，AIM变异蛋白也可以是分泌蛋白。并且，AIM变异蛋白也可以具有凋亡抑制功能。并且，AIM变异蛋白也可以是其氨基酸序列所包含的氨基酸数目为300～400个，优选为320～380个，更优选为340～360个的蛋白质。
并且，当AIM变异蛋白的氨基酸序列与天然AIM的氨基酸序列具有80％以上的同源性时，以及当AIM变异蛋白的结构域的氨基酸序列与天然AIM的结构域的氨基酸序列具有80％以上的同源性时，该同源性优选为85％以上，更优选为90％以上，尤其优选为95％。
并且，AIM变异蛋白也可以是与AIM同样地在CD36介导下作用于细胞的蛋白质。此时，AIM变异蛋白与AIM同样地、特异性地作用于含有CD36的细胞。并且，AIM变异蛋白也可以是与AIM同样地，与细胞的脂肪酸合成酶(FAS)结合而降低该FAS的活性的蛋白质。
本蛋白质例如是由序列表1中示出的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与序列表1中示出的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成，且具有脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的蛋白质。
本蛋白质也可以是分泌蛋白。此时，本蛋白质包含分泌蛋白的特征氨基酸序列。具体而言，本蛋白质例如由具有以下分子结构的分泌蛋白形成：在其氨基酸序列的N端(最前部分)包含疏水性的短的序列(leader sequence，前导序列)，但不包含跨膜序列(transmembrane region，跨膜区(同样具有疏水性))、细胞内结构域。实际上，天然AIM是具有这种分子结构的分泌蛋白。并且，本蛋白质也可以具有凋亡抑制功能。
本蛋白质例如是由序列表1中示出的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列构成，且具有脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的蛋白质。
此时，本蛋白质是由与序列表1中示出的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成的蛋白质。并且，本蛋白质也可以是分泌蛋白。并且，本蛋白质也可以具有凋亡抑制功能。
并且，本蛋白质例如是由序列表1中示出的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列构成，并且由序列表2中示出的氨基酸序列或者序列表2中示出的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与序列表2中示出的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成的第一结构域、由序列表3中示出的氨基酸序列或者序列表3中示出的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与序列表3中示出的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成的第二结构域、以及由序列表4中示出的氨基酸序列或者序列表4中示出的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与序列表4中示出的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成的第三结构域串联而成，而且具有脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的蛋白质。
即，该本蛋白质具有三个结构域，即人类AIM的SRCR1结构域或者在该结构域中发生变异的结构域、SRCR2结构域或者在该结构域中发生变异的结构域、以及SRCR3结构域或者在该结构域中发生变异的结构域。并且，此时，本蛋白质也可以是由与序列表1中示出的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成的蛋白质。并且，本蛋白质也可以是分泌蛋白。并且，本蛋白质也可以具有凋亡抑制功能。并且，本蛋白质也可以是其氨基酸序列所包含的氨基酸数目为300～400个，优选为320～380个，更优选为340～360个的蛋白质。
并且，第一结构域、第二结构域以及第三结构域中的至少一个结构域也可以是由与该至少一个结构域对应的序列表中示出的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与该对应的序列表中示出的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成的结构域。并且，第一结构域、第二结构域以及第三结构域也可以从N末端侧依次连接。
而且，本蛋白质例如是由序列表2中示出的氨基酸序列或者序列表2中示出的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列构成的第一结构域、由序列表3中示出的氨基酸序列或者序列表3中示出的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列构成的第二结构域、以及由序列表4中示出的氨基酸序列或者序列表4中示出的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列构成的第三结构域串联而成，且具有脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的蛋白质。
并且，本蛋白质例如是由序列表2中示出的氨基酸序列构成的第一结构域(人类AIM的SRCR1结构域)、由序列表3中示出的氨基酸序列构成的第二结构域(人类AIM的SRCR2结构域)、以及由序列表4中示出的氨基酸序列构成的第三结构域(人类AIM的SRCR3结构域)串联而成，且具有脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的蛋白质。
即，该本蛋白质作为SRCR结构域具有三个结构域，即人类AIM的SRCR1结构域、SRCR2结构域以及SRCR3结构域。并且，此时，本蛋白质也可以是由与序列表1中示出的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成的蛋白质。并且，本蛋白质也可以是分泌蛋白。并且，本蛋白质也可以具有凋亡抑制功能。并且，本蛋白质也可以是其氨基酸序列所包含的氨基酸数目为300～400个，优选为320～380个，更优选为340～360个的蛋白质。
并且，具有上述的第一结构域、第二结构域以及第三结构域的任意一种本蛋白质，也可以是该第一结构域、第二结构域以及第三结构域直接串联而成，且具有脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的蛋白质。
即，此时，本蛋白质是由第一结构域的氨基酸序列、第二结构域的氨基酸序列以及第三结构域的氨基酸序列直接串联而成的氨基酸序列构成的蛋白质。因此，此时，本蛋白质例如不包含相当于人类AIM中构成SRCR1结构域与SRCR2结构域之间的连接部分的氨基酸序列、构成该SRCR2结构域与SRCR3结构域之间的连接部分的氨基酸序列的、结构域之间的连接部分。但是，包含上述的第一结构域、第二结构域以及第三结构域的本蛋白质，不限于此，也可以是包含结构域之间的连接部分的蛋白质。
并且，本蛋白质例如是由序列表2中示出的氨基酸序列或者序列表2中示出的氨基酸序列中共有序列(图3中示出的SRCR1结构域部分的共有序列)以外的部分经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列构成的第一结构域、由序列表3中示出的氨基酸序列或者序列表3中示出的氨基酸序列中共有序列(图3中示出的SRCR2结构域部分的共有序列)以外的部分经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列构成的第二结构域、以及由序列表4中示出的氨基酸序列或者序列表4中示出的氨基酸序列中共有序列(图3中示出的SRCR3结构域部分的共有序列)以外的部分经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列构成的第三结构域串联而成，且具有脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的蛋白质。
即，该本蛋白质具有三个结构域，即人类AIM的SRCR1结构域或者在人类AIM的SRCR1结构域的共有序列以外的部分发生变异的结构域、人类AIM的SRCR2结构域或者在SRCR2结构域的共有序列以外的部分发生变异的结构域、以及人类AIM的SRCR3结构域或者在SRCR3结构域的共有序列以外的部分发生变异的结构域。并且，此时，本蛋白质是由序列表1中示出的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列构成的蛋白质。即，本蛋白质也可以是由与序列表1中示出的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成的蛋白质。并且，本蛋白质也可以是分泌蛋白。并且，本蛋白质也可以具有凋亡抑制功能。并且，本蛋白质也可以是其氨基酸序列所包含的氨基酸数目为300～400个，优选为320～380个，更优选为340～360个的蛋白质。
并且，第一结构域、第二结构域以及第三结构域中的至少一个结构域也可以是由该至少一个结构域对应的序列表中示出的氨基酸序列中共有序列以外的部分经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列构成的结构域。并且，第一结构域、第二结构域以及第三结构域中的至少一个结构域也可以是由与该至少一个结构域对应的序列表中示出的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成的结构域。即，第一结构域、第二结构域以及第三结构域中的至少一个结构域也可以是由该至少一个结构域对应的序列表中示出的氨基酸序列中共有序列以外的部分经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列构成的结构域。并且，第一结构域、第二结构域以及第三结构域也可以从N末端侧依次连接。
并且，具有上述的在共有序列以外的部分发生变异的第一结构域、第二结构域以及第三结构域的任意一种本蛋白质，也可以是该第一结构域、第二结构域以及第三结构域直接串联而成，且具有脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的蛋白质。
即，此时，本蛋白质是由第一结构域的氨基酸序列、第二结构域的氨基酸序列以及第三结构域的氨基酸序列直接串联而成的氨基酸序列构成的蛋白质。但是，包含上述的在共有序列以外的部分发生变异的第一结构域、第二结构域以及第三结构域的本蛋白质，不限于此，也可以是包含结构域之间的连接部分的蛋白质。
并且，本蛋白质例如是下述的(x1)、(x2)或(x3)蛋白质，且具有脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的蛋白质。(x1)由序列表2中示出的氨基酸序列构成的第一结构域蛋白或者多个所述第一结构域蛋白串联而成的蛋白质；(x2)由序列表3中示出的氨基酸序列构成的第二结构域蛋白或者多个所述第二结构域蛋白串联而成的蛋白质；(x3)由序列表4中示出的氨基酸序列构成的第三结构域蛋白或者多个所述第三结构域蛋白串联而成的蛋白质。
即，此时，本蛋白质例如是由人类AIM的SRCR1结构域构成的蛋白质(第一结构域蛋白)，或者多个该SRCR1结构域串联而成的蛋白质(所述(x1)的蛋白质)。并且，本蛋白质例如是由人类AIM的SRCR2结构域构成的蛋白质(第二结构域蛋白)，或者多个该SRCR2结构域串联而成的蛋白质(所述(x2)的蛋白质)。并且，本蛋白质例如是由人类AIM的SRCR3结构域构成的蛋白质(第三结构域蛋白)，或者多个该SRCR3结构域串联而成的蛋白质(所述(x3)的蛋白质)。
并且，同样地，本蛋白质例如也可以是下述的(y1)、(y2)或(y3)蛋白质，且具有脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的蛋白质。(y1)由序列表2中示出的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与序列表2中示出的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成的第一结构域蛋白或者多个所述第一结构域蛋白串联而成的蛋白质；(y2)由序列表3中示出的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与序列表3中示出的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成的第二结构域蛋白或者多个所述第二结构域蛋白串联而成的蛋白质；(y3)由序列表4中示出的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与序列表4中示出的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成的第三结构域蛋白或者多个所述第三结构域蛋白串联而成的蛋白质。
并且，同样地，本蛋白质例如也可以是下述的(z1)、(z2)或(z3)蛋白质，且具有脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的蛋白质。(z1)由在序列表2中示出的氨基酸序列中共有序列以外的部分经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列构成的第一结构域蛋白或者多个所述第一结构域蛋白串联而成的蛋白质；(z2)由在序列表3中示出的氨基酸序列中共有序列以外的部分经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列构成的第二结构域蛋白或者多个所述第二结构域蛋白串联而成的蛋白质；(z3)由在序列表4中示出的氨基酸序列中共有序列以外的部分经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列构成的第三结构域蛋白或者多个所述第三结构域蛋白串联而成的蛋白质。
并且，具有上述的第一结构域蛋白、第二结构域蛋白或第三结构域蛋白的任意一种本蛋白质，也可以是多个该第一结构域蛋白、第二结构域蛋白或第三结构域蛋白直接串联而成的蛋白质。但是，本蛋白质不限于此，也可以是包含结构域之间的连接部分的蛋白质。
并且，本蛋白质例如是由动物的AIM的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与该动物的AIM的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成，且具有脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的蛋白质。
此时，动物只要是人以外的动物，没有特别限制，例如是哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、天竺鼠等啮齿类；兔；狗；猫；猪；牛；马；猴)。更加具体地，例如是小鼠、狗或者猫。
即，本蛋白质例如是由序列表5中示出的氨基酸序列(小鼠AIM的氨基酸序列)经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与序列表5中示出的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成，且具有脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的蛋白质。
此时，本蛋白质也可以是分泌蛋白。并且，本蛋白质也可以具有凋亡抑制功能。
并且，同样地，本蛋白质例如是由序列表11中示出的氨基酸序列(狗AIM的氨基酸序列)、序列表12中示出的氨基酸序列(黑猩猩AIM的氨基酸序列)或者序列表13中示出的氨基酸序列(大鼠AIM的氨基酸序列)经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与序列表11、序列表12或者序列表13中示出的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成，且具有脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的蛋白质。
进一步地，本蛋白质例如是由动物的AIM的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列构成，且具有脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的蛋白质。
此时，动物只要是人以外的动物，没有特别限制，例如是哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、天竺鼠等啮齿类；兔；狗；猫；猪；牛；马；猴)。更加具体地，例如是小鼠、狗或者猫。
即，本蛋白质例如是由序列表5中示出的氨基酸序列(小鼠AIM的氨基酸序列)经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列构成，且具有脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的蛋白质。
此时，本蛋白质例如是由与序列表5中示出的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成的蛋白质。并且，本蛋白质也可以是分泌蛋白。并且，本蛋白质也可以具有凋亡抑制功能。
并且，同样地，本蛋白质例如是由序列表11中示出的氨基酸序列(狗AIM的氨基酸序列)、序列表12中示出的氨基酸序列(黑猩猩AIM的氨基酸序列)或者序列表13中示出的氨基酸序列(大鼠AIM的氨基酸序列)经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列构成，且具有脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的蛋白质。
并且，本蛋白质例如是由具有SRCR1结构域、SRCR2结构域以及SRCR3结构域的动物的AIM的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列构成，并且由该SRCR1结构域的氨基酸序列或者该SRCR1结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与该SRCR1结构域的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成的第一结构域、由该SRCR2结构域的氨基酸序列或者该SRCR2结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与该SRCR2结构域的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成的第二结构域、以及由该SRCR3结构域的氨基酸序列或者该SRCR3结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与该SRCR3结构域的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成的第三结构域串联而成，而且具有脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的蛋白质。
此时，本蛋白质也可以是由与动物的AIM的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成的蛋白质。并且，本蛋白质也可以是分泌蛋白。并且，本蛋白质也可以具有凋亡抑制功能。并且，本蛋白质也可以是其氨基酸序列所包含的氨基酸数目为300～400个，优选为320～380个，更优选为340～360个的蛋白质。
并且，第一结构域、第二结构域以及第三结构域中的至少一个结构域也可以是由与该至少一个结构域对应的SRCR结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与该对应的SRCR结构域的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成的结构域。并且，第一结构域、第二结构域以及第三结构域也可以从N末端侧依次连接。
此时，动物只要是人以外的动物，没有特别限制，例如是哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、天竺鼠等啮齿类；兔；狗；猫；猪；牛；马；猴)。更加具体地，例如是小鼠、狗或者猫。
即，例如，动物的AIM的氨基酸序列是序列表5中示出的氨基酸序列(小鼠AIM的氨基酸序列)，SRCR1结构域的氨基酸序列是序列表6中示出的氨基酸序列，SRCR2结构域的氨基酸序列是序列表7中示出的氨基酸序列，SRCR3结构域的氨基酸序列是序列表8中示出的氨基酸序列。
并且，同样地，动物的AIM的氨基酸序列例如也可以是序列表11中示出的氨基酸序列(狗AIM的氨基酸序列)、序列表12中示出的氨基酸序列(黑猩猩AIM的氨基酸序列)或序列表13中示出的氨基酸序列(大鼠AIM的氨基酸序列)。
进一步地，本蛋白质例如是由所述SRCR1结构域的氨基酸序列或者该SRCR1结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列构成的第一结构域、由所述SRCR2结构域的氨基酸序列或者该SRCR2结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列构成的第二结构域、以及由所述SRCR3结构域的氨基酸序列或者该SRCR3结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列构成的第三结构域串联而成，且具有脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的蛋白质。
此时，同样地，动物只要是人以外的动物，没有特别限制，例如是哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、天竺鼠等啮齿类；兔；狗；猫；猪；牛；马；猴)。更加具体地，例如是小鼠、狗或者猫。
即，本蛋白质例如是由序列表6中示出的氨基酸序列或者序列表6中示出的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列构成的第一结构域、由序列表7中示出的氨基酸序列或者序列表7中示出的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列构成的第二结构域、以及由序列表8中示出的氨基酸序列或者序列表8中示出的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列构成的第三结构域串联而成，且具有脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的蛋白质。
即，该本蛋白质具有三个结构域，即小鼠AIM的SRCR1结构域或者在该结构域中发生变异的结构域、SRCR2结构域或者在该结构域中发生变异的结构域、以及SRCR3结构域或者在该结构域中发生变异的结构域。并且，此时，本蛋白质是由序列表5中示出的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列构成的蛋白质。即，本蛋白质也可以是由与序列表5中示出的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成的蛋白质。并且，本蛋白质也可以是分泌蛋白。并且，本蛋白质也可以具有凋亡抑制功能。并且，本蛋白质也可以是其氨基酸序列所包含的氨基酸数目为300～400个，优选为320～380个，更优选为340～360个的蛋白质。
并且，本蛋白质例如是由所述SRCR1结构域的氨基酸序列构成的第一结构域、由所述SRCR2结构域的氨基酸序列构成的第二结构域、以及由所述SRCR3结构域的氨基酸序列构成的第三结构域串联而成，且具有脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的蛋白质。
此时，同样地，动物只要是人以外的动物，没有特别限制，例如是哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、天竺鼠等啮齿类；兔；狗；猫；猪；牛；马；猴)。更加具体地，例如是小鼠、狗或者猫。
即，本蛋白质例如是由序列表5中示出的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列构成，并且由序列表6中示出的氨基酸序列构成的第一结构域(小鼠AIM的SRCR1结构域)、由序列表7中示出的氨基酸序列构成的第二结构域(小鼠AIM的SRCR2结构域)、以及由序列表8中示出的氨基酸序列构成的第三结构域(小鼠AIM的SRCR3结构域)串联而成，且具有脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的蛋白质。
即，该本蛋白质作为SRCR结构域具有三个，即小鼠AIM的SRCR1结构域、SRCR2结构域以及SRCR3结构域。并且，此时，本蛋白质也可以是由与序列表5中示出的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成的蛋白质。即，本蛋白质例如也可以是由序列表5中示出的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列构成的蛋白质。并且，本蛋白质也可以是分泌蛋白。并且，本蛋白质也可以具有凋亡抑制功能。并且，本蛋白质也可以是其氨基酸序列所包含的氨基酸数目为300～400个，优选为320～380个，更优选为340～360个的蛋白质。
并且，具有上述的第一结构域、第二结构域以及第三结构域的任意一种本蛋白质，也可以是该第一结构域、第二结构域以及第三结构域直接串联而成，且具有脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的蛋白质。
即，此时，本蛋白质是由第一结构域的氨基酸序列、第二结构域的氨基酸序列以及第三结构域的氨基酸序列直接串联而成的氨基酸序列构成的蛋白质。但是，包含上述的第一结构域、第二结构域以及第三结构域的本蛋白质，不限于此，也可以是包含结构域之间的连接部分的蛋白质。
并且，本蛋白质例如是由具有SRCR1结构域、SRCR2结构域以及SRCR3结构域的动物的AIM的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列构成，并且由该SRCR1结构域的氨基酸序列或者在该SRCR1结构域的氨基酸序列中除了共有序列以外的部分经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列构成的第一结构域、由该SRCR2结构域的氨基酸序列或者在该SRCR2结构域的氨基酸序列中除了共有序列以外的部分经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列构成的第二结构域、以及由该SRCR3结构域的氨基酸序列或者在该SRCR3结构域的氨基酸序列中除了共有序列以外的部分经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列构成的第三结构域串联而成，而且具有脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的蛋白质。
此时，本蛋白质也可以是由与动物的AIM的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成的蛋白质。并且，本蛋白质也可以是分泌蛋白。并且，本蛋白质也可以具有凋亡抑制功能。并且，本蛋白质也可以是其氨基酸序列所包含的氨基酸数目为300～400个，优选为320～380个，更优选为340～360个的蛋白质。
并且，第一结构域、第二结构域以及第三结构域中的至少一个结构域也可以是由在该至少一个结构域对应的SRCR结构域的氨基酸序列中共有序列以外的部分经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列构成的结构域。并且，第一结构域、第二结构域以及第三结构域中的至少一个结构域也可以是由与该至少一个结构域所对应的SRCR结构域的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成的结构域。即，第一结构域、第二结构域以及第三结构域中的至少一个结构域也可以是由在该至少一个结构域对应的SRCR结构域的氨基酸序列中共有序列以外的部分经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列构成的结构域。并且，第一结构域、第二结构域以及第三结构域也可以从N末端侧依次连接。
动物只要是人以外的动物，没有特别限制，例如是哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、天竺鼠等啮齿类；兔；狗；猫；猪；牛；马；猴)。更加具体地，例如是小鼠、狗或者猫。
即，本蛋白质例如是由序列表6中示出的氨基酸序列或者序列表6中示出的氨基酸序列中共有序列(图3中示出的SRCR1结构域部分的共有序列)以外的部分经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列构成的第一结构域、由序列表7中示出的氨基酸序列或者序列表7中示出的氨基酸序列中共有序列(图3中示出的SRCR2结构域部分的共有序列)以外的部分经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列构成的第二结构域、以及由序列表8中示出的氨基酸序列或者序列表8中示出的氨基酸序列中共有序列(图3中示出的SRCR3结构域部分的共有序列)以外的部分经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列构成的第三结构域串联而成，且具有脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的蛋白质。
即，该本蛋白质作为SRCR结构域具有三个，即小鼠AIM的SRCR1结构域或者在小鼠AIM的SRCR1结构域的共有序列以外的部分发生变异的结构域、小鼠AIM的SRCR2结构域或者在SRCR2结构域的共有序列以外的部分发生变异的结构域、以及小鼠AIM的SRCR3结构域或者在SRCR3结构域的共有序列以外的部分发生变异的结构域。并且，此时，本蛋白质可以是由与序列表5中示出的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成的蛋白质。并且，本蛋白质也可以是分泌蛋白。并且，本蛋白质也可以具有凋亡抑制功能。并且，本蛋白质也可以是其氨基酸序列所包含的氨基酸数目为300～400个，优选为320～380个，更优选为340～360个的蛋白质。
并且，同样地，动物的AIM的氨基酸序列例如也可以是序列表11中示出的氨基酸序列(狗AIM的氨基酸序列)、序列表12中示出的氨基酸序列(黑猩猩AIM的氨基酸序列)或序列表13中示出的氨基酸序列(大鼠AIM的氨基酸序列)。
并且，包含上述的在共有序列以外的部分发生变异的第一结构域、第二结构域以及第三结构域的任意一种本蛋白质，也可以是该第一结构域、第二结构域以及第三结构域直接串联而成，且具有脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的蛋白质。
即，此时，本蛋白质是由第一结构域的氨基酸序列、第二结构域的氨基酸序列以及第三结构域的氨基酸序列直接串联而成的氨基酸序列构成的蛋白质。但是，包含上述的在共有序列以外的部分发生变异的第一结构域、第二结构域以及第三结构域的本蛋白质，不限于此，也可以是包含结构域之间的连接部分的蛋白质。
并且，本蛋白质例如是下述的(p1)、(p2)或(p3)蛋白质，且具有脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的蛋白质。(p1)由动物的AIM的SRCR1结构域的氨基酸序列构成的第一结构域蛋白或者多个所述第一结构域蛋白串联而成的蛋白质；(p2)由动物的AIM的SRCR2结构域的氨基酸序列构成的第二结构域蛋白或者多个所述第二结构域蛋白串联而成的蛋白质；(p3)由动物的AIM的SRCR3结构域的氨基酸序列构成的第三结构域蛋白或者多个所述第三结构域蛋白串联而成的蛋白质。
即，此时，本蛋白质例如是由动物AIM的SRCR1结构域构成的蛋白质(第一结构域蛋白)，或者多个该SRCR1结构域串联而成的蛋白质(所述(p1)的蛋白质)。并且，本蛋白质例如是由动物AIM的SRCR2结构域构成的蛋白质(第二结构域蛋白)，或者多个该SRCR2结构域串联而成的蛋白质(所述(p2)的蛋白质)。并且，本蛋白质例如是由动物AIM的SRCR3结构域构成的蛋白质(第三结构域蛋白)，或者多个该SRCR3结构域串联而成的蛋白质(所述(p3)的蛋白质)。
并且，同样地，本蛋白质例如是下述的(q1)、(q2)或(q3)蛋白质，且具有脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的蛋白质。(q1)由动物的AIM的SRCR1结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与所述SRCR1结构域的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成的第一结构域蛋白或者多个所述第一结构域蛋白直接串联而成的蛋白质；(q2)由动物的AIM的SRCR2结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与所述SRCR2结构域的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成的第二结构域蛋白或者多个所述第二结构域蛋白直接串联而成的蛋白质；(q3)由动物的AIM的SRCR3结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与所述SRCR3结构域的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成的第三结构域蛋白或者多个所述第三结构域蛋白直接串联而成的蛋白质。
并且，同样地，本蛋白质例如是下述的(r1)、(r2)或(r3)蛋白质，且具有脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的蛋白质。(r1)由动物的脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的SRCR1结构域的氨基酸序列中共有序列以外的部分经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列构成的第一结构域蛋白或者多个所述第一结构域蛋白直接串联而成的蛋白质；(r2)由动物的脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的SRCR2结构域的氨基酸序列中共有序列以外的部分经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列构成的第二结构域蛋白或者多个所述第二结构域蛋白直接串联而成的蛋白质；(r3)由动物的脂肪分化抑制功能和/或脂解功能的SRCR3结构域的氨基酸序列中共有序列以外的部分经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列构成的第三结构域蛋白或者多个所述第三结构域蛋白直接串联而成的蛋白质。
并且，具有上述的第一结构域蛋白、第二结构域蛋白或第三结构域蛋白的任意一种本蛋白质，也可以是多个该第一结构域蛋白、第二结构域蛋白或第三结构域蛋白直接串联而成的蛋白质。但是，本蛋白质不限于此，也可以是包含结构域之间的连接部分的蛋白质。
此时，动物只要是人以外的动物，没有特别限制，例如是哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、天竺鼠等啮齿类；兔；狗；猫；猪；牛；马；猴)。更加具体地，例如是小鼠、狗或者猫。
即，例如，当动物的AIM是小鼠AIM时，所述SRCR1结构域的氨基酸序列是序列表6中示出的氨基酸序列，所述SRCR2结构域的氨基酸序列是序列表7中示出的氨基酸序列，所述SRCR3结构域的氨基酸序列是序列表8中示出的氨基酸序列。
并且，同样地，动物的AIM的氨基酸序列例如也可以是序列表11中示出的氨基酸序列(狗AIM的氨基酸序列)、序列表12中示出的氨基酸序列(黑猩猩AIM的氨基酸序列)或序列表13中示出的氨基酸序列(大鼠AIM的氨基酸序列)。
本药物组合物作为有效成分而包含上述的本蛋白质中的一种或多种。并且，本药物组合物可以进一步包含药学上可接受的载体。对于药学上可接受的载体，没有特别限制，例如可以优选使用能够在抗体药学等所谓的蛋白质制剂中使用的载体。具体而言，例如可以使用在赋形剂、溶剂、稀释剂、分散剂、乳化剂、助溶剂、悬浮剂、稳定剂、等张剂、缓冲剂、pH调节剂、安抚剂、防腐剂、抗氧化剂中的一种或两种以上。
对于本药物组合物的剂型，没有特别限制，例如可以制备成注射剂、片剂、丸剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、液剂、糖浆剂。即，本医药组合物例如可以制备成注射到生物机体组织内的局部注射剂；注射到血管内的静脉注射剂、动脉注射剂或者滴剂；腹腔内给药的注射剂。
当本药物组合物为局部注射剂时，本药物组合物例如可以制备成直接注射到脂肪组织(内脏脂肪组织、皮下脂肪组织等)的脂肪组织注射剂、皮下注射剂、肌肉注射剂。
并且，当本药物组合物为注射剂时，本药物组合物例如可以将含有本蛋白质和上述的药学上可接受的载体的溶液经过冷冻干燥等方法进行干燥，制备成粉末状，并于安瓶等容器中无菌保存。在此，本发明的发明人确认出AIM的功能不会因这种干燥以及再溶解而被破坏。
并且，给予本药物组合物时，将其粉末溶解于适当的溶剂(例如，生理盐水、林格氏溶液、其他注射用溶液)中，由此配制出由将本蛋白质作为有效成分而包含的液状注射剂形成的本药物组合物。并且，当本药物组合物为注射剂时，例如还可以将含有本蛋白质和上述的药学上可接受的载体的溶液直接无菌保存于安瓶等容器中。
本药物组合物中的本蛋白质的含量，根据剂型、剂量等而适当地确定，例如本药物组合物可以被制备成包含0.1～10重量％的本蛋白质的液状注射剂。
本药物组合物用于人或动物的疾病诊断、治疗或预防中。动物只要是人以外的动物，没有特别限制，但优选表达野生型AIM，其脂肪细胞表达CD36的动物。具体而言，动物例如是哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、天竺鼠等啮齿类；兔；狗；猫；猪；牛；马；猴)，更加具体地，例如是小鼠、狗或者猫。即，本药物组合物例如用于人或人以外的哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、天竺鼠等啮齿类；兔；狗；猫；猪；牛；马；猴)的疾病诊断、治疗或预防中，更加具体地，例如用于人、小鼠、狗或者猫的疾病诊断、治疗或预防中。
即，本药物组合物例如是给予人的药物组合物(人用药物组合物)。并且，本药物组合物例如是给予动物的药物组合物(动物用药物组合物)。动物只要是人以外的动物，没有特别限制，但优选表达野生型AIM，其脂肪细胞表达CD36的动物。具体而言，动物例如是哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、天竺鼠等啮齿类；兔；狗；猫；猪；牛；马；猴)，更加具体地，例如是小鼠、狗或者猫。即，本药物组合物例如是给予人或人以外的哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、天竺鼠等啮齿类；兔；狗；猫；猪；牛；马；猴)的药物组合物，更加具体地，例如是给予人、小鼠、狗或者猫的药物组合物。
在此，对于成为本药物组合物适用对象的疾病，应当广义地解释，包括在生物机体的结构或功能上有任意不适感的所有的状态。即，本药物组合物例如是为了诊断、治疗或预防代谢性疾病(metabolic disorder，代谢失调)、脂肪瘤(肿瘤)、(包括神经的)退化性疾病而向生物机体给予的药物组合物。这些疾病领域中，例如还包括诸如糖尿病、肥胖症、高血压、动脉硬化等心血管疾病；脂肪瘤。
更加具体地，本药物组合物例如为了诊断、治疗或预防与脂肪组织有关的不适感而使用。作为与脂肪组织有关的不适感，例如可以举出肥胖、脂肪肉瘤(liposarcoma)。即，本药物组合物将消除或预防伴随肥胖而引起的不适感作为目的，为了适当调节内脏脂肪和/或皮下脂肪的量而使用。并且，本药物组合物为了缩小脂肪肉瘤或者抑制其增大而使用。并且，本药物组合物例如还可以将调节外形上能看到的期望的部位的脂肪组织的量作为目的，用于美容整形或整形外科上的治疗中。即，本药物组合物将减少脂肪组织、抑制其增加、降低其增加程度作为目的，向生物机体给药。
并且，本实施方式所涉及的方法(以下，称为“本方法”。)中的一个，例如是向生物机体给予有效量的本蛋白质的方法。即，本方法是向生物机体给予上述的本药物组合物的方法。
在此，生物机体例如是人。并且，生物机体例如是动物。动物只要是人以外的动物，没有特别限制，但优选表达野生型AIM，其脂肪细胞表达CD36的动物。具体而言，动物例如是哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、天竺鼠等啮齿类；兔；狗；猫；猪；牛；马；猴)，更加具体地，例如是小鼠、狗或者猫。
本方法例如是为了诊断、治疗或者预防人或人以外的哺乳动物的疾病，向该人或人以外的哺乳动物给予对该诊断、治疗或者预防有效的量的本蛋白质(即，本药物组合物)的方法。
对于本蛋白质的给药方法，没有特别限制，例如可以举出，通过局部注射等的局部给药、通过静脉注射、动脉注射、点滴注射等的血管内给药、口服给药。
当将本蛋白质局部给药时，例如，将本药物组合物配制成注射剂，利用注射器等局部给药器具，将该注射剂注射到生物机体的组织内。即，例如以消除或预防肥胖、美容整形等作为目的，将本药物组合物直接注射到内脏脂肪组织或皮下脂肪组织等脂肪组织内。并且，例如，对于患有脂肪肉瘤的患者，将本药物组合物局部注射到该脂肪肉瘤组织内。
当将本蛋白质向血管内给药时，将本药物组合物配制成注射剂，并利用注射器、输液器具等血管内给药器具，将该注射剂注射到生物机体的血管内。当将本蛋白质口服给药时，将本药物组合物配制成诸如片剂、丸剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、液剂、糖浆剂等口服给药剂，并使患者服用该口服给药剂。在此，AIM在pH值2～3左右的酸性条件下，其分子结构仍稳定，不会丧失功能。
如此，可以通过将本蛋白质向生物机体内给药，有效地减少该生物机体内的脂肪组织的量，抑制其增加或者降低其增加的程度。其中，当将本蛋白质通过注射给药时，尤其是将本蛋白质向脂肪组织内局部给药时，可以更加有效地减少该脂肪组织的量，抑制其增加或者降低其增加的程度。
本蛋白质的剂量根据给药对象的症状、年龄、体重等因素而适当地确定，例如一次剂量可以是每1kg体重给予0.1～5mg。当然，本蛋白质的剂量只要是在对减少作为给药对象的生物机体的脂肪组织，抑制其增加或者降低其增加的程度有效的范围内，则不限于上述剂量。即，例如局部给药时，由于可以使本蛋白质有效且确实地到达该本蛋白质的作用部位，因此与血管内给药等全身给药时相比，可以减少剂量。
并且，本蛋白质的给药方案同样也根据给药对象的症状、年龄、体重等因素而适当地确定，例如可以以1周～几周的间隔，实施几周～几月多次给药。
根据这种本蛋白质的给药，该本蛋白质在到达的生物机体的脂肪组织内，可以诱导成熟脂肪细胞中的脂肪的分解，并且还可以抑制前脂肪细胞向成熟脂肪细胞的分化。即，本药物组合物例如还可以称为前脂肪细胞的分化抑制剂或成熟脂肪细胞中的脂肪分解诱导剂。并且，给予本蛋白质的结果，得到减少生物机体的脂肪组织的量、抑制其增加、降低其增加的程度的效果，进而能够得到降低体重的效果。
并且，本方法只要是与本蛋白质的使用有关的，不限于上述示例。即，本方法例如是将本蛋白质作为药物组合物的有效成分而使用的方法。并且，本方法例如是将本蛋白质作为有效成分含有的药物组合物的制备方法。此时，本方法例如也可以是将本蛋白质与药学上可接受的载体混合，制备含有该本蛋白质和该载体的药物组合物的方法。
并且，本蛋白质还可以适用于食品饮料。即，本实施方式所涉及的食品饮料(以下，称为“本食品饮料”。)是含有本蛋白质(即，所述(I)AIM或(II)由AIM的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的、与所述氨基酸序列具有同源性的氨基酸序列构成，且具有脂肪分化抑制功能和/或脂肪分解功能的蛋白质)的食品饮料。即，本食品饮料例如是含有本蛋白质的食品。并且，本食品饮料例如是含有本蛋白质的饮料。
并且，本食品饮料例如是含有本蛋白质的经口摄入组合物。该经口摄入组合物例如是不制备成药物，而是使需要者类似于维生素剂等机能增强剂辅助摄取的组合物，例如制备成片剂、胶囊剂、颗粒、凝胶等形态。并且，本食品饮料例如是含有本蛋白质的食品饮料用添加剂。该食品饮料用添加剂例如是在食品饮料制造工艺中作为部分原料而使用或者添加到原料中的组合物。
并且，与本食品饮料相关的本方法例如是将本蛋白质作为食品饮料的部分原料而使用的方法。并且，本方法是制造含有本蛋白质的食品饮料的方法。此时，本方法例如也可以是将本蛋白质与其他原料混合，制造含有该本蛋白质和该其他原料的食品饮料的方法。
在此，记载本发明的一方面。本发明的一种实施方式所涉及的药物组合物是将作为有效成分而含有以下的(a)至(l)中一种或多种蛋白质作为特征的药物组合物。(a)由序列表1中示出的氨基酸序列构成的蛋白质；(b)由序列表5中示出的氨基酸序列构成的蛋白质；(c)由序列表1中示出的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列构成，且具有抑制前脂肪细胞向成熟脂肪细胞分化的功能和/或在成熟脂肪细胞中诱导脂滴分解的功能的蛋白质；(d)由序列表5中示出的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列构成，且具有抑制前脂肪细胞向成熟脂肪细胞分化的功能和/或在成熟脂肪细胞中诱导脂滴分解的功能的蛋白质；(e)由序列表1中示出的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与该序列表1示出的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成，且具有抑制前脂肪细胞向成熟脂肪细胞分化的功能和/或在成熟脂肪细胞中诱导脂滴分解的功能的蛋白质；(f)由序列表5中示出的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与该序列表5示出的氨基酸序列具有80％以上的同源性的氨基酸序列构成，且具有抑制前脂肪细胞向成熟脂肪细胞分化的功能和/或在成熟脂肪细胞中诱导脂滴分解的功能的蛋白质；(g)由序列表2中示出的氨基酸序列构成的第一结构域、由序列表3中示出的氨基酸序列构成的第二结构域以及由序列表4中示出的氨基酸序列构成的第三结构域串联而成，且具有抑制前脂肪细胞向成熟脂肪细胞分化的功能和/或在成熟脂肪细胞中诱导脂滴分解的功能的蛋白质；(h)由序列表6中示出的氨基酸序列构成的第一结构域、由序列表7中示出的氨基酸序列构成的第二结构域以及由序列表8中示出的氨基酸序列构成的第三结构域串联而成，且具有抑制前脂肪细胞向成熟脂肪细胞分化的功能和/或在成熟脂肪细胞中诱导脂滴分解的功能的蛋白质；(i)由序列表2中示出的氨基酸序列或者序列表2中示出的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列构成的第一结构域、由序列表3中示出的氨基酸序列或者序列表3中示出的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列构成的第二结构域以及由序列表4中示出的氨基酸序列或者序列表4中示出的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列构成的第三结构域串联而成，且具有抑制前脂肪细胞向成熟脂肪细胞分化的功能和/或在成熟脂肪细胞中诱导脂滴分解的功能的蛋白质；(j)由序列表6中示出的氨基酸序列或者序列表6中示出的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列构成的第一结构域、由序列表7中示出的氨基酸序列或者序列表7中示出的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列构成的第二结构域以及由序列表8中示出的氨基酸序列或者序列表8中示出的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列构成的第三结构域串联而成，且具有抑制前脂肪细胞向成熟脂肪细胞分化的功能和/或在成熟脂肪细胞中诱导脂滴分解的功能的蛋白质；(k)由序列表2中示出的氨基酸序列或者在序列表2中示出的氨基酸序列中共有序列以外的部分经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列构成的第一结构域、由序列表3中示出的氨基酸序列或者在序列表3中示出的氨基酸序列中共有序列以外的部分经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列构成的第二结构域以及由序列表4中示出的氨基酸序列或者在序列表4中示出的氨基酸序列中共有序列以外的部分经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列构成的第三结构域串联而成，且具有抑制前脂肪细胞向成熟脂肪细胞分化的功能和/或在成熟脂肪细胞中诱导脂滴分解的功能的蛋白质；(l)由序列表6中示出的氨基酸序列或者在序列表6中示出的氨基酸序列中共有序列以外的部分经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列构成的第一结构域、由序列表7中示出的氨基酸序列或者在序列表7中示出的氨基酸序列中共有序列以外的部分经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列构成的第二结构域以及由序列表8中示出的氨基酸序列或者在序列表8中示出的氨基酸序列中共有序列以外的部分经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列构成的第三结构域串联而成，且具有抑制前脂肪细胞向成熟脂肪细胞分化的功能和/或在成熟脂肪细胞中诱导脂滴分解的功能的蛋白质。
本发明的一种实施方式所涉及的方法的特征在于，向生物机体给予所述药物组合物。并且，本发明的一种实施方式所涉及的方法的特征在于，向生物机体给予所述(a)至(l)中一种或多种蛋白质的有效量。并且，本发明的一种实施方式所涉及的方法的特征在于，将所述(a)至(l)中一种或多种蛋白质作为药物组合物的有效成分使用。并且，本发明的一种实施方式所涉及的方法的特征在于，制备作为有效成分而含有所述(a)至(l)中一种或多种蛋白质的药物组合物。并且，本发明的一种实施方式所涉及的食品饮料的特征在于，含有所述(a)至(l)中一种或多种蛋白质。并且，本发明的一种实施方式所涉及的方法的特征在于，制备含有所述(a)至(l)中一种或多种蛋白质的食品饮料。
接着，对本实施方式所涉及的具体实施例进行说明。
实施例1
[脂肪组织中的巨噬细胞的AIM表达]
对C57BL/6小鼠采用高脂饮食(High Fat Diet：HFD，60％脂肪热量饲料)喂养20周。并且，同样也对肥胖程度更显著的脂联素(adiponectin)基因敲除小鼠(Adipo-/-小鼠)，采用HFD喂养。然后，从这些小鼠腹腔内部采集内脏脂肪组织。使用该脂肪组织制作的石蜡切片用抗巨噬细胞单克隆抗体(F4/80)以及抗小鼠AIM多克隆抗体(SA-1)进行双重染色。
图4示出将染色的切片通过相差显微镜以及荧光显微镜观察的结果的一种示例。图4中，对于野生型的C57BL/6小鼠(Wild-type)以及Adipo-/-小鼠(Adiponectin-/-)，分别示出相差显微镜照(Phase)、染色了巨噬细胞的荧光显微镜照(F4/80macrophage)、染色了AIM的荧光显微镜照(AIM)以及将这些荧光显微镜照合并的照片(merge)。
如图4所示，可以确认，在野生型小鼠以及Adipo-/-小鼠中，均出现巨噬细胞染色部分与AIM染色部分相重叠，且浸润到脂肪组织的巨噬细胞强烈表达AIM。
实施例2
[AIM的对脂肪细胞分化的抑制]
为了研究浸润到脂肪组织的巨噬细胞所产生的AIM对周围的脂肪细胞起什么样的作用，进行了在3T3L1前脂肪细胞(preadipocyte)向成熟脂肪细胞分化的培养过程中用AIM处理的实验。
即，如图5A所示，根据以下的互不相同的4种方案a至d，进行了3T3L1细胞的培养。(a)没有用AIM处理；(b)从分化诱导刺激开始时起用AIM处理10天(day2～day12)；(c)仅在分化诱导前的增殖(clonal expansion，克隆增殖)期间(day(-2)～day2)用AIM处理；(d)仅在分化诱导刺激的初期(day2～day4)用AIM处理。
作为AIM，使用小鼠重组AIM蛋白质或者人类重组AIM蛋白质。这些重组AIM蛋白质，通过培养由小鼠或人类的AIM的表达载体转染的来源于人类的HEK293T细胞，从该培养上清分离纯化而配制。其中，在以下示出的其他实施例中，作为AIM使用同样的重组AIM蛋白质。AIM处理，通过在培养液中以5μg/ml浓度添加AIM而进行。
并且，如图5A所示，3T3L1细胞的分化诱导通过以下步骤进行：首先，培养3T3L1细胞4天(day(-2)～day2)，使其增殖(cell proliferation)，然后在含有胰岛素、地塞米松(DEX)、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)的培养液中培养2天(day2day4)，由此开始分化诱导刺激，进一步地，在含有胰岛素的培养液中培养2天(day4～day6)。
分化诱导刺激期间(day2～day6)过后，在不含有这些分化诱导刺激因子的培养液中继续培养。并且，用油红O(oil-red-o)对从分化诱导刺激开始起第十天(day12)的细胞进行染色，观察从3T3L1细胞向成熟脂肪细胞的分化状况。
图5B中示出，分别对于四种方案a～d，用小鼠AIM(小鼠rAIM)或者人类AIM(人类rAIM)处理的实验(但是，方案a是没有用AIM处理)中得到的染色后的细胞的显微镜照。其中，对使用人类AIM的方案c，没有拍摄显微镜照(N.D.)。
如图5B所示，根据方案d仅在分化诱导刺激的初期(day2-day4)用AIM处理时，几乎没有观察到包含脂滴的细胞，3T3L1细胞的分化几乎完全被抑制住。即，AIM在存在有上述的分化诱导因子的情况下，抑制3T3L1细胞的分化。
在此需要说明的是，配制包含有分化诱导因子和AIM的培养液之后，利用纯化柱从该培养液去除AIM时，该分化诱导因子仍然没有丧失分化3T3L1细胞的能力(没有示出数据)。因此，认为分化诱导因子与AIM之间实质上不存在化学相互作用。
并且，根据方案b从分化诱导刺激开始时起用AIM处理10天(day2-day12)时，也几乎没有观察到包含脂滴的细胞，3T3L1细胞的分化几乎完全被抑制住。并且，还确认出这种AIM的分化抑制效果跟AIM浓度有关(没有示出数据)。即，如果对3T3L1细胞进行处理的AIM的浓度减少到1μg/ml、0.1μg/ml，则AIM的分化抑制效果也会下降。
并且，没有发现AIM的处理会增加死细胞数。因此，认为AIM不会诱导细胞死亡，而通过减少向成熟脂肪细胞分化的3T3L1细胞的数量来发挥分化抑制作用。
另一方面，根据方案c仅在分化诱导前(day(-2)-day2)用AIM处理时，确认出与根据方案a没有用AIM处理时同样地，几乎所有的细胞包含有脂滴，几乎所有的3T3L1细胞分化成成熟脂肪细胞。即，仅在分化诱导前使用AIM处理时，3T3L1细胞的向成熟脂肪细胞的分化没有被抑制住。但是，从分化诱导前开始经过分化诱导期间且其后(day(-2)-day12)也继续用AIM处理时，3T3L1细胞的向脂肪细胞的分化完全被抑制住(没有示出数据)。
在此，小鼠AIM和人类AIM的氨基酸序列之间的同源性高达68％左右。并且，如图3所示，在小鼠AIM和人类AIM中，SRCR结构域中的共有序列(CD5、CD6等包含SRCR结构域的其他分子中也保守的氨基酸序列)完全一致。并且，如上所述，人类AIM与小鼠AIM同样地，抑制作为来源于小鼠的细胞的3T3L1细胞的分化。即，人与小鼠之间，关于AIM功能具有互换性。
实施例3
[AIM的脂滴分解(lipolysis，脂解作用)的诱导]
研究了对于成熟脂肪细胞的AIM的效果。如图6A所示，与上述的实施例2同样地，作为方案e进行了以下培养实验。即，从3T3L1细胞分化而在细胞质内形成脂滴开始用小鼠AIM处理6天(day6-day12)。
并且，用油红O(oil-red-o)对从分化诱导刺激开始起第十天(day12)的细胞进行染色。并且，计算具有脂滴的细胞数。进一步地，对于具有脂滴的细胞，测定脂滴的直径。其中，为了进行比较，对于通过上述的方案a培养的细胞以及通过方案d培养的细胞，也进行了细胞计数以及脂滴直径的测定。
并且，回收根据方案e用AIM处理而培养后的培养液的上清液，通过ELISA法测定包含在该上清液中的甘油以及游离脂肪酸(free fatty acids，FFAs)的量。并且，为了进行比较，对于上述的方案a，同样也测定包含在培养上清液中的甘油以及游离脂肪酸的量。
在此，为了防止包含在培养液中的白蛋白吸附游离脂肪酸，从分化诱导开始起的第十天(day 12)时，将10％FBS(胎牛血清)添加培养液换成无血清培养液，将细胞进一步在该无血清培养液中培养6小时，然后测定包含在该无血清培养液的上清液中的甘油以及游离脂肪酸。
图6B中示出脂肪被油红O染色的细胞的显微镜照。图7A以及图7B中分别示出对于方案a、d以及e(Exp.a，d，e)，评价具有脂滴的细胞(Droplet(+)cells)的数(个/104μm2)以及脂滴的相对大小(脂滴相对直径)(％)的结果。其中，图7B中示出的脂滴的相对大小是将在没有用AIM处理的方案a中得到的细胞所具有的脂滴的大小视为100％而计算出的。图8A以及图8B中分别示出对于方案a以及e(Exp.a，e)，测定培养液中的甘油浓度(甘油释放量)(mM)以及游离脂肪酸浓度(FFA释放量)(×10mM)的结果。
如图6B以及图7A所示，通过方案e用AIM处理分化后的脂肪细胞而继续培养时得到的具有脂滴的细胞的数与通过方案a没有用AIM处理分化后的脂肪细胞而培养时相比，显著减少。
并且，如图7B所示，在方案e中得到的包含在脂肪细胞中的脂滴的直径与在方案a中得到的细胞中的相比，缩小至约25％。
并且，如图8A以及图8B所示，根据方案e用AIM处理时，与根据方案a没有用AIM处理时相比，培养上清液中的甘油浓度以及游离脂肪酸浓度均显著增加。
进一步地，根据方案e用AIM处理时，观察到用AIM处理后，培养液的粘度急剧增加。该观察结果支持培养液中的甘油以及游离脂肪酸的量显著增加的事实。
如此，确认出AIM诱导成熟脂肪细胞的脂解(lipolysis)。从以上结果可以确认，AIM不仅抑制前脂肪细胞的分化以及成熟，而且还作用于成熟的脂肪细胞而诱导脂解(lipolysis)，发挥使成熟脂肪细胞“变瘦的功能”。
实施例4
[AIM的对伴随脂肪细胞分化的基因群的表达的抑制]
对于在上述的实施例2以及实施例3中通过上述的五种方案a～e培养的细胞，在从分化诱导刺激开始起的第十天(day12)时，进行回收，通过定量RT-PCR(QPCR)分析伴随脂肪化而表达的基因的表达量。
在此，图9中以模式化示出伴随脂肪细胞分化的主要的基因的表达模式。如图9的左侧的虚线方框内示出的那样，在分化诱导期，基于分化诱导刺激，暂时诱导C/EBPβ，据此C/EBPα，其次PPARγ的表达被上调。进一步地，因PPARγ而诱导诸如脂肪酸合成酶(Fatty acid synthase，FAS)、CD36、葡萄糖转运蛋白4(Glucose transporter 4，Glut4)等对于分化的脂肪细胞必须的功能性基因的表达。
此后，如果C/EBPα以下的基因表达一定程度被上调，则如图9的右侧的虚线方框内示出的那样，根据FAS而产生的脂肪酸(fatty acids，FAs)活化PPARγ蛋白质，其使C/EBPα基因的表达维持在一定水平。C/EBPα进一步诱导PPARγ基因的表达。根据这种交互刺激，即使C/EBPβ的表达水平已下调，也形成维持PPARγ以及C/EBPα的表达的机制(参照图9的右侧的虚线方框)。
图10中示出通过五种方案a～e培养的细胞中的基因表达的分析结果。如图10所示，根据方案d仅在分化诱导刺激的初期(day2-day4)用AIM(小鼠AIM，本实施例4中以下相同)处理时以及根据方案b从分化诱导刺激开始用AIM处理10天(day2-day12)时，C/EBPα、PPARγ、CD36、Glut4各基因的表达几乎完全被抑制。其中，非常有趣的是，在这些情况下，只有FAS基因表达反而稍微上调。
另一方面，根据方案c仅在分化诱导前(day(-2)-day2)用AIM处理时以及根据方案e仅在细胞分化诱导后(day6-day12)用AIM处理时，与根据方案a没有用AIM处理时比较，基因表达模式没有出现变化。如此，对于FAS基因表达以外的基因，基于AIM处理的表达调控的实验结果与上述实施例2中的细胞形态学上的变化结果相匹配。
实施例5
[AIM的对FAS酶活性的抑制]
研究AIM是否对FAS的酶活性产生影响。即，如图11A所示，根据上述的方案d仅在3T3L1细胞的分化诱导初期(day2-day4)用AIM(小鼠AIM，本实施例5中以下相同)处理，然后从分化诱导开始经过2天后(day4)，回收细胞，配制细胞裂解液(cell lysate)，测定FAS的酶活性。
并且，作为与上述的方案e相似的方案f，在3T3L1细胞分化之后用AIM处理4天(day8-day12)，然后从分化诱导开始起十天后(day12)，回收细胞，配制细胞裂解液(cell lysate)，测定FAS的酶活性。其中，FAS的酶活性基于丙二酸单酰辅酶A(malonyl-CoA)消耗量进行测定。
并且，代替AIM而使用FAS抑制剂(C75)，根据方案d以及f用25μM浓度的该FAS抑制剂处理，与上述AIM的情形同样地，从分化诱导开始经过2天后(day4，方案d)以及10天后(day12，方案f)，回收细胞，测定FAS的酶活性。
进一步地，为了进行比较，对于根据上述方案a没有用AIM处理而培养的细胞，也分别在分化诱导开始经过2天后(day4)以及10天后(day12)的时间，同样测定FAS的酶活性。
图11B以及图11C中示出FAS的酶活性(Fatty acid synthase activity，脂肪酸合成酶活性)(nmol NADPH/min/mg蛋白质)的测定结果。图11B中分别示出对于根据方案a没有用AIM处理时(None)、根据方案d用AIM处理时(AIM(5μg/ml))、根据方案d用FAS抑制剂处理时(C75(25μM))，从分化诱导开始经过2天后(day4)得到的结果。图11C中分别示出对于根据方案a没有用AIM处理时(None)、根据方案f用AIM处理时(AIM(5μg/ml))、根据方案f用FAS抑制剂处理时(C75(25μM))，从分化诱导开始经过10天后(day12)得到的结果。
如图11B以及图11C所示，任意一种方案中，用AIM处理时与没有用AIM处理时相比，FAS的酶活性均显著下降。该AIM降低FAS的酶活性的程度与用作为FAS抑制剂的C75的有效浓度(25μM)处理时相同。
并且，图12A以及图12B中分别示出对于根据方案a没有用AIM处理时(None)、根据方案d用AIM处理时(AIM(5μg/ml))、根据方案d用FAS抑制剂处理时(C75(25μM))，分别从分化诱导开始经过2天后(day4)，进行细胞的油红O染色以及基因表达的RT-PCR分析的结果。
并且，图13A以及图13B中分别示出对于根据方案a没有用AIM处理时(None)、根据方案f用AIM处理时(AIM)、根据方案f用FAS抑制剂处理时(C75)，从分化诱导开始经过10天后(day12)，测定培养液中的甘油浓度(甘油释放量)(mM)以及游离脂肪酸浓度(FFA释放量)(×10mM)的结果。
如这些图12A、图12B、图13A以及图13B所示，用AIM处理时和用FAS抑制剂(C75)处理时，发现对于细胞的形态、基因表达、甘油以及游离脂肪酸的细胞外释放，具有相同的效果。即，在前脂肪细胞的分化以及成熟脂肪细胞中的脂解作用(lipolysis)这两个方面，AIM表现出与C75相同的效果。
在上述的实施例4中只有FAS基因的表达没有被AIM抑制的原因，认为是根据AIM的FAS功能抑制，可能出现了负反馈(negative feedback)，根据PPARγ以外的表达调控系统(例如，基于LXR-SREBP1系统的调控等)，FAS基因的表达被上调。
并且，认为如果对成熟脂肪细胞用AIM处理，以抑制FAS功能，则由于内源性的游离脂肪酸(FFAs)的量会下降，因此作为对游离脂肪酸(FFAs)的量下降的反馈，诱导脂解作用(lipolysis)，从而调节FFAs的量。
实施例6
[脂肪细胞内的AIM和FAS的结合]
细胞中的FAS活性调节，并不是根据磷酸化等蛋白修饰而进行的，而主要是根据表达调控和分子结构调节而进行的。通过AIM处理，即使FAS的活性降低，在FAS的表达上，如上所述，并没有确认出在mRNA水平、蛋白质的量中的任意一方面的下调。因此，作为一种可能性，认为AIM与FAS结合，在结构上抑制其活性。
为此，为了证实上述的假设，首先，构建均表达添加有HA标签的AIM(小鼠AIM)和添加有FLAG标签的FAS的HEK293T细胞。并且，将该HEK293T细胞培养预定时间之后，回收，配制细胞裂解液(cell lysate)，采用抗FLAG抗体进行免疫沉淀。
其结果，如图14所示，确认出添加有HA标签的AIM(HA-AIM)和添加有FLAG标签的FAS(FL-FAS)的共沉淀。即，可以确认存在AIM与FAS结合的可能性。该结果支持上述的假设。
实施例7
[AIM的向脂肪细胞的内吞]
AIM是由巨噬细胞分泌的可溶性蛋白。通常，分泌蛋白分子与存在于靶细胞的膜表面的受体结合，引起信号转导，由此功能性地作用于靶细胞。然而，如上所述，要想使AIM与FAS结合而抑制其活性，AIM作为分子需要内吞进入到细胞内。
为了证明上述观点，与上述的其他实施例同样地，分化诱导3T3L1细胞，从分化诱导后的培养第四天(day4)起用AIM(小鼠AIM)(5μg/ml)处理3小时。然后，回收细胞，用抗AIM抗体对细胞内进行染色。在此，进一步地对细胞核采用DAPI进行染色。
图15A以及图15B示出用AIM处理培养3小时后染色的细胞在共焦显微镜下观察的结果的一种示例。图15A示出用200倍的倍数，图15B示出用400倍的倍数拍摄的结果。如图15A以及图15B所示，确认出AIM以圆点(dot)状(在原图中呈红色)内吞到细胞质内。
进一步地，通过采用胶体金标记的抗AIM抗体的免疫电子显微镜法，确认AIM内吞到脂肪细胞的现象。图16A以及图16B中分别示出用AIM处理后培养3小时(3hr)以及12小时(overnight，过夜)的细胞的免疫电子显微镜照。图16A示出从用AIM处理经过3小时(3hr)后回收的细胞，图16B示出从用AIM处理经过12小时后回收的细胞的结果。
如图16A所示，在AIM的存在下培养3小时的细胞的细胞质内，AIM以圆点状聚集在被认为是内涵体(endosome)的粒子(particle)的膜上。这认为是AIM与脂肪细胞表面的某种分子结合，并以结合的状态与该表面分子一同内吞(Endocytosis)到细胞内而出现的现象。
并且，如图16B所示，在AIM的存在下培养12小时的细胞的细胞质内，内涵体(endosome)变性，从此处还可以观察到AIM进入到细胞质中。其中，AIM没有聚集在吞噬体(Phagosome)、吞噬溶酶体(Phagolysosome)或者线粒体(mitochondria)上。图17以模式化示出基于这些观点推测的AIM内吞进入细胞内的机制。
实施例8
[细胞表面的CD36分子介导下的AIM内吞(internalization)]
如上所述，认为AIM在细胞表面分子的介导下内吞到细胞内。因此，认定了该细胞表面分子。
CD36是二次跨膜分子，在脂肪细胞或巨噬细胞中表达，参与包括脂肪酸、LDL等的多种分子的细胞内内吞。因此，构建超表达C端上添加有FLAG标签的小鼠CD36的HEK293细胞，将该细胞与小鼠AIM一同培养3小时。然后，回收细胞，采用抗AIM抗体以及抗CD36抗体染色，通过共焦显微镜观察。
图18A至图18D中示出得到的共焦显微镜照。图18示出以二维方式分析的结果(2-dimensional analysis，二维分析)，图18B至图18D分别示出以三位方式分析的结果(3-dimensional analysis，三位分析)。如图18A至图18D所示，如果以二维以及三位方式进行分析，则观察到，在细胞的表达有CD36的部位(原图中FLAG以红色表示)上结合有AIM圆点(dot)(原图中以绿色表示)的形态。并且，在部分细胞上，还观察到AIM内吞到细胞内的形态。从这些结果认为，AIM与CD36结合，内吞(internalize)到细胞内。
但是，本次使用的HEK293T细胞中，主要观察到的是AIM存在于细胞表面的形态，与上述的实施例7的脂肪细胞(分化的3T3-L1细胞)相比，几乎没有观察到AIM进入到细胞内的形态。其原因认为是，HEK293T细胞与脂肪细胞相比，内吞(endocytosis)能力较弱，因此与CD36结合的AIM容易以结合的状态停留在细胞表面上。
并且，进一步地，为了确认AIM在CD36介导下内吞的事实，用AIM处理通过上述的分化诱导而分化的3T3L 1脂肪细胞时，同时用抑制与CD36的配体(ligand)结合的中和抗体处理。然后，回收培养的3T3L 1脂肪细胞，用抗AIM抗体染色。并且，对没有用CD36中和抗体处理而仅用AIM进行同样的处理而培养的3T3L1脂肪细胞，也进行同样的染色。
图19A以及图19B分别示出没有用CD36中和抗体处理时(no CD36antibody，无CD36抗体)以及用CD36中和抗体处理时(with CD36 neutralizingantibody，使用CD36中和抗体)的染色结果。如图19A所示，没有用CD36中和抗体处理时，可以观察到AIM内吞到细胞内的现象(原图中AIM在细胞内以红色的圆点状被检测出)。另一方面，如图19B所示，当用CD36中和抗体处理时，细胞内完全没有被抗AIM抗体染色，没有观察到AIM的内吞。
即，由于用CD36中和抗体进行处理，因此向细胞内的AIM的内吞被显著地抑制住。从以上结果可以明确，负责向脂肪细胞的AIM的内吞作用的至少一种分子是CD36。
实施例9
[AIM缺失小鼠的体重以及脂肪量的增加]
从上述的实施例中得到的实验结果可以明确，AIM抑制前脂肪细胞的成熟以及分化，并且诱导成熟的脂肪细胞中发生脂解作用(lipolysis)。因此，为了研究该作用在生物机体内的效果，对AIM被敲除的AIM缺失小鼠(AIM-/-小鼠)以及AIM没有被敲除的正常的小鼠(AIM+/+小鼠)，采用高脂饮食(HFD)喂养20周以上，测定体重和内脏白色脂肪的重量。其结果，AIM缺失的AIM-/-小鼠与AIM+/+小鼠相比，体重以及内脏白色脂肪的重量的增加有意义地被加剧(没有示出数据)。
进一步地，为了增强肥胖的发展效果，将上述的两种小鼠分别与脂联素(adiponectin)基因敲除小鼠(Adipo-/-小鼠)交配，构建AIM-/- Adipo-/-小鼠和AIM+/+ Adipo-/-小鼠。并且，对这些小鼠同样采用HFD处理20周以上，进行分析。
图20A以及图20B分别示出拍摄AIM-/- Adipo-/-小鼠(AIM-/-)以及AIM+/+ Adipo-/-小鼠(AIM+/+)的腹腔内的照片。在图20A中，上侧的箭头表示肠粘膜脂肪组织，下侧的箭头表示附睾脂肪组织。图21A以及图21B分别示出AIM+/+ Adipo-/-小鼠(WT)以及AIM-/- Adipo-/-小鼠(KO)的体重(Bodyweight(g))以及内脏白色脂肪组织的重量(Total fat tissue(g)，总脂肪组织(g))的测定结果。
如图21A以及图21B所示，与上述的没有被敲除脂联素基因的小鼠同样地，AIM缺失的AIM-/- Adipo-/-小鼠与AIM+/+ Adipo-/-小鼠相比，体重以及内脏白色脂肪重量的增加被加剧。这种体重增加的加剧，主要是由于脂肪组织重量增加的加剧而引起的。
这些结果支持以下结论。即，由浸润到脂肪组织的巨噬细胞分泌的AIM在周围的脂肪细胞中，通过降低FAS活性，诱导脂解作用(lipolysis)，同时抑制新的成熟脂肪细胞的分化，由此抑制性地调节脂肪组织的量(mass)。
并且，有报道指出，对于小鼠给予FAS抑制剂(C75)，会降低下丘脑的神经肽Y(NPY)的产生量，引起显著的食欲减退以及体重减少。
与此相比，AIM-/-小鼠和AIM+/+小鼠之间在摄入量(Food intake)上没有出现差异。因此，本次的AIM给予实验中，不存在如同全身给予上述的FAS抑制剂(C75)时出现的对于脑神经系统的作用，在AIM-/-小鼠中出现的脂肪量的增加，认为是AIM的缺失直接对脂肪细胞引起影响的结果。
这认为是，由于AIM需要在不包含于下丘脑的细胞中，而包含于脂肪细胞中的作为特异性的内吞中介物(endocytosis mediator)的CD36的存在下，发挥作用的结果。
实施例10
[向肥胖小鼠给予AIM而引起的脂解(Lipolysis)的诱导]
构建采用HFD处理20周以上的肥胖的AIM-/-小鼠。另一方面，准备纯化的小鼠重组AIM蛋白，将该AIM以0.2mg/m浓度溶解于PBS(磷酸缓冲液，pH7.4)的AIM溶液配置成注射剂。并且，将该AIM注射剂通过小鼠的尾静脉，一周两次，四周给药。
对于剂量来说，每1g小鼠体重给予1μg。其中，决定该剂量时，基于上述的体外(in vitro)实验中的培养液中的AIM浓度，考虑使小鼠血液中的AIM浓度达到与该培养液中的AIM浓度相同的程度而决定。
并且，作为对照，同样地对于用HFD处理20周以上的肥胖的AIM-/-小鼠，根据同样的方案，从尾静脉注射相同量的牛血清白蛋白(BSA)。并且，对于给药后的小鼠，测定体重，同时采集内脏白色脂肪组织而测定重量。
其结果，在体重以及脂肪组织的总重量上，根据AIM给予与否而没有确认出有意义的差异，但是在采集的脂肪组织中，在局部(点状)观察到脂肪细胞的缩小以及分解，为了处理这个而聚集的巨噬细胞，而且好像是大致释放出(分解)了脂滴的脂肪细胞的、脂肪细胞的前细胞(分化诱导前的3T3L1那样的细胞)。
图22A以及图22B中示出用显微镜观察被苏木精-伊红(Hematoxylin-Eosin，HE)染色的脂肪组织切片的结果。图22A示出关于给予白蛋白的小鼠(BSA injected(control)，BSA注射(对照))的结果，图22B示出关于给予AIM的小鼠(rAIM injected，rAIM注射)的结果。
如图22A以及图22B所示，可以确认出当给予AIM时与给予白蛋白时相比，脂肪组织的脂肪细胞的大小显著减小的同时，巨噬细胞显著聚集。即，向肥胖小鼠全身(systemic)静脉注射纯化AIM蛋白时，在该肥胖小鼠的脂肪组织中诱导脂肪分解(Lipolysis)。
本次实验中，在部分脂肪组织中局部观察到脂解(Lipolysis)的原因认为可能是，通过静脉注射全身给药时，脂肪组织中的局部浓度只在局部充分上升(认为局部浓度根据毛细血管的走行等而被决定)，而不能达到在整个脂肪组织中诱导脂解(lipolysis)且减少脂肪组织的总重量以及体重的程度的可能性较高。但是，如上所述，可以明确地确认AIM在生物机体中也表现出诱导脂解(lipolysis)的作用。在此，没有确认出根据AIM的给予而导致小鼠的摄入量发生变化。
如上所述，为了根据AIM而诱导脂解(lipolysis)，认为有效的是提高生物机体内的局部浓度。因此，认为例如通过局部注射，将AIM局部注射到脂肪组织内，由此可以更有效地诱导脂解(lipolysis)，并有效地减少脂肪组织的重量以及体重。并且，认为通过将AIM全身给药以及局部给药，还可以得到抑制生物机体内的前脂肪细胞的分化的效果。
在此，说明通过上述的实施例1至10得到的部分见解。在实施例1中，确认出浸润到肥胖的小鼠脂肪组织中的巨噬细胞产生AIM。了解到巨噬细胞也同样地浸润到肥胖的人类脂肪组织中。因此，认为浸润到人的脂肪组织中的巨噬细胞也产生AIM。
在实施例2中，确认出AIM抑制前脂肪细胞的成熟分化。并且，在小鼠AIM以及人类AIM中的任意一个均表现出同样的分化抑制功能。这种小鼠和人之间的分化抑制功能的互换性，认为是由于AIM氨基酸序列具有高的同源性，而且参与前脂肪细胞的分化以及AIM的功能表达的分子之间也具有高的同源性而导致的。
在实施例3中，确认出AIM作用于成熟的脂肪细胞而诱导脂滴分解(Lipolysis)。在实施例7以及实施例8中，确认出AIM与脂肪细胞的细胞膜表面上的CD36分子结合，通过内吞作用(endocytosis)而进入到细胞质内。
在实施例5以及实施例6中，确认出内吞到细胞内的AIM进入到细胞质内，与脂肪酸合成酶(Fatty acid synthase；FAS)结合而抑制其酶活性。因此，基于AIM的前脂肪细胞的分化抑制以及成熟脂肪细胞中的脂肪分解诱导，认为是该AIM抑制FAS而产生的结果。
在实施例9中，确认出如果采用高脂饮食(High Fat Diet，HFD)处理，则AIM缺失(AIM-/-)小鼠与正常(AIM+/+)小鼠相比，体重以及脂肪组织的重量增加得更快。
但是，没有确认出AIM缺失(AIM-/-)小鼠和正常(AIM+/+)小鼠之间的在摄入量上的差异。即，认为AIM并不像现有的抗肥胖药物那样诱导食欲减退，而根据完全不同的机制(AIM直接特异性地作用于脂肪细胞或脂肪组织的机制)抑制体重以及脂肪组织重量的增加。
进一步地，在实施例10中，确认出如果向肥胖的AIM-/-小鼠从尾静脉全身注射纯化重组AIM蛋白(4周)，则在脂肪组织中局部发生脂解(lipolysis)。即，实际在生物机体也确认出与在体外(in vitro)实验中确认出的对于培养细胞的效果相同的效果。
如上所述，人类AIM以及小鼠AIM中含有保守的三个特征性的结构域(SRCR1～3)，氨基酸序列的同源性高达68％。而且，参与AIM向脂肪细胞的内吞的CD36以及作为AIM的一种靶分子的FAS也在人与小鼠之间具有较高的同源性。即，负责基于AIM的前脂肪细胞的分化以及成熟脂肪细胞中的脂解(lipolysis)的分子的任意一个，均在人与小鼠之间具有较高的同源性。在此，对于现有的其他药物而言，存在虽然在利用小鼠的实验中有效果，但在人体上没有得到效果的例子，这主要是因为参与该效果的分子在小鼠和人之间同源性较低而引起的。
并且，在体外(in vitro)实验中，人类AIM以及小鼠AIM中的任意一个在相同的浓度范围下均对于来源于小鼠的脂肪细胞发挥同样的分化抑制功能以及脂肪分解诱导功能。并且，采用与在体外(in vitro)实验中获得效果的浓度对应的剂量，向小鼠机体内给予AIM时，实际确认出在脂肪组织中发生脂解(lipolysis)。因此，认为AIM在人的机体内也同样作用于脂肪细胞，获得同样的效果的可能性非常之高。
并且，AIM为了发挥如上所述的功能，需要在CD36的介导下内吞进入到细胞内。根据该作用机制，向生物机体内给予AIM时，不需要考虑如同现有的FAS抑制剂中出现的那种对脑神经系统引起的副作用。
实际上，AIM缺失小鼠的摄入量与正常的小鼠相比，没有出现差异。因此，认为向人机体给予AIM时，至少不会出现如同现有的FAS抑制剂中出现的那种对脑神经系统引起的副作用。
实施例11
[给予肥胖小鼠的AIM的向脂肪细胞的内吞以及与FAS的结合]
对于从肥胖小鼠采集的脂肪组织样品，采用抗巨噬细胞F4/80抗体(红色)以及抗小鼠AIM多克隆抗体(SA-1)(绿色)进行共染色，在荧光显微镜下观察。其结果，包围巨噬细胞的若干个脂肪细胞被抗AIM抗体染色。另一方面，与巨噬细胞分开的脂肪细胞没有被抗AIM抗体染色。发明人认为，这些结果说明来源于巨噬细胞的AIM被组织内的脂肪细胞内吞。
进一步地，向肥胖AIM-/-小鼠的附睾脂肪组织直接注射小鼠rAIM，然后在组织学上分析该脂肪组织。即，向附睾脂肪组织的若干处直接注射共100μg的rAIM。从注射经过3小时后，从附睾脂肪组织制作组织切片，将该组织切片用抗AIM抗体以及抗巨噬细胞抗体染色。
其结果，在注射了rAIM的脂肪组织内，AIM-/-脂肪细胞被染色成AIM阳性。即，确认出脂肪组织中的外源性的rAIM内吞进入脂肪细胞。在更高倍数的荧光显微镜下观察时，观察到在脂肪细胞的细胞质内，内吞(endocytosed)的rAIM以点状聚集(dot-forming accumulation)。
并且，将rAIM通过静脉注射而向AIM-/-小鼠全身给药，然后在组织学上分析脂肪组织。即，向AIM-/-小鼠通过静脉内注射全身给予200μg的rAIM。从注射经过3小时后，从附睾脂肪组织制作组织切片，将该组织切片用抗AIM抗体以及抗巨噬细胞抗体染色。
其结果，在脂肪组织的脂肪细胞内，虽然与上述的向组织内直接注射时相比程度较低，但是检测出内吞的rAIM信号。非常有趣的是，脂肪组织的巨噬细胞也被抗AIM抗体染色。该结果给出以下启示，即外源性rAIM同样内吞到巨噬细胞内。
进一步地，使用来源于这些脂肪组织的裂解物(lysate)，使内吞的rAIM沉淀，研究内源性FAS是否发生共沉淀。即，使用HA-tagged rAIM和抗HA抗体，通过免疫印迹(Western blotting)分析在沉淀物中是否包含FAS。
其结果，rAIM以及FAS两种蛋白发生共沉淀。从该结果确认出，内吞的rAIM和细胞质内的FAS结合。
从这些所有的结果证实，在体内(in vivo)在生理学上实现了通过脂肪细胞的AIM的内吞以及随之发生的该AIM与细胞质内的FAS的结合。
实施例12
[AIM缺失导致的肥胖的促进]
为了试验在体内(in vivo)中AIM对脂肪细胞的效果，分析了采用HFD喂食40周以上的AIM-/- Adipo-/-小鼠以及AIM+/+ Adipo-/-小鼠的肥胖状态。在此，采用Adipo-/-背景的小鼠是有用的，因为在实验AIM缺失对于脂肪组织量的影响时，可以排除脂联素(Adiponectin)的参与。
分析结果示出在图23A至图23E。图23A示出用HFD喂食之前的体重(BW(pre))(g)，图23B示出用HFD喂食之后的体重(BW(HFD))(g)。图23C、图23D以及图23E分别示出用HFD喂食之后的内脏脂肪(VisceralFat)的重量(g)、皮下脂肪(Subcutaneous Fat)的重量(g)以及肝脏(Liver)的重量(g)。在图23A至图23E中，“+/+”表示AIM+/+ Adipo-/-小鼠的结果，“-/-”表示AIM-/- Adipo-/-小鼠的结果。
如图23A以及图23B所示，在体重增加方面，与AIM+/+ Adipo-/-小鼠相比，在AIM-/- Adipo-/-小鼠中被加快。如图23C以及图23D所示，这种体重的差异主要是因脂肪组织的重量增加而导致的。
并且，如图23E所示，肝脏组织的重量也同样地与AIM+/+ Adipo-/-小鼠相比，在AIM-/- Adipo-/-小鼠中得到显著地增加。该结果揭示AIM还作用于肝细胞(hepatocyte)，并控制该细胞内的甘油储藏的可能性。其中，心脏或肾脏等其他脏器的重量在两种小鼠之间大致相同。
在用HFD喂食40周以上的没有敲除脂联素(Adiponectin)基因的AIM-/-小鼠以及AIM+/+小鼠分析中，也观察到同样的结果。将分析结果示出在图24A至图24E中。如图24A至图24E所示，与Adipo-/-背景的小鼠同样地，与AIM+/+小鼠相比，AIM-/-小鼠的体重、脂肪组织重量以及肝脏重量的增加更显著。
图25中示出对于用HFD喂食的AIM-/-小鼠以及AIM+/+小鼠评价成为其食欲指标的饲料摄入量(Food intake(g/24h))的结果。在图25中，“+/+”表示AIM+/+小鼠的结果，“-/-”表示AIM-/-小鼠的结果。
在此，如上述的实施例9中也记载的那样，有报道指出给予FAS抑制剂C75时，会降低小鼠下丘脑的神经肽Y(NPY)的产生，其结果引起显著的食欲减退，作为整体，加速体重的减少(Loftus，T.M.等Reduced food intakeand body weight in mice treated with fatty acid synthase inhibitors.Science 288，2379-2381(2000)；Kumar，M.V.，Shimokawa，T.，Nagy，T.R.& Lane，M.D.Differential effects of a centrally acting fatty acid synthase inhibitor in lean andobese mice.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99，1921-1925(2002)；Shimokawa，T.，Kumar，M.V.& Lane，M.D.Effect of a fatty acid synthase inhibitor on food intakeand expression of hypothalamic neuropeptides.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99，66-71(2002)；Chakravarthy，M.V.等Inactivation of hypothalamic FAS protectsmice from diet-induced obesity and inflammation.J.Lipid Res.50，630-640(2009))。
与此相比，本发明所涉及的实验中，如图25所示，AIM-/-小鼠和AIM+/+小鼠之间在24小时的饲料摄入量(g/24h)上大致相同。即，说明AIM不具有神经学上的效果。发明人认为，其原因在于，AIM的作用需要由没有报道出在下丘脑的细胞中表达的CD36介导的、特异性内吞过程(endocytoticprocess)。
在此，用HFD喂食的AIM-/-小鼠以及AIM+/+小鼠(无论Adipo-/-背景还是Adipo+/+背景)中，血清中的TNFα以及IL-6的水平没有显著的差异，且血液中的葡萄糖水平也大致相同。
实施例13
[AIM缺失小鼠的脂肪细胞大小、脂肪组织量以及体重的增加]
给AIM-/-小鼠以及AIM+/+小鼠用HFD喂食20周。并且，从各小鼠采集的附睾脂肪组织切片用HE染色，在显微镜下观察。并且，利用安装有图像分析软件的计算机，评价各组织切片的显微镜照内的不同区域中的50个独立的脂肪细胞的大小。脂肪细胞的大小以平均值±标准偏差(SEM)(in pixels)来表示。
图26中示出分别对于AIM+/+小鼠(“+/+”)以及AIM-/-小鼠(“-/-”)测定脂肪细胞的大小(pixel/cell)的结果。图27A以及图27B中示出从AIM+/+小鼠(“+/+”)以及AIM-/-小鼠(“-/-”)采集的内脏脂肪组织切片用HE染色而在相差显微镜下观察的结果。其中，在图27A以及图27B中示出的比例尺表示100μm。
如图26、图27A以及图27B所示，与上述的体外(in vitro)实验中的3T3-L1细胞的观察结果相同，肥胖AIM-/-小鼠的内脏脂肪细胞的大小与肥胖AIM+/+小鼠相比，更大。
并且，给AIM-/-小鼠以及AIM+/+小鼠采用HFD喂食12周，测定体重以及脂肪组织的重量。图28A、图28B以及图28C中分别示出对于AIM+/+小鼠(“+/+”)以及AIM-/-小鼠(“-/-”)分别测定体重(Body)(g)、内脏脂肪组织(Visceral fat)的重量(g)以及皮下脂肪组织(Subcutaneous fat)的重量(g)的结果。
如图28A至图28C所示，关于上述的脂肪细胞的增大，在用HFD喂食12周后的体重、内脏脂肪组织的重量以及皮下脂肪组织的重量的增加方面，与AIM+/+小鼠相比，在AIM-/-小鼠中增加得更快。
在此，需要说明的是，用HFD喂食的AIM+/+小鼠和AIM-/-小鼠中，代谢速度(metabolic rates)大致相同。图29A、图29B、图29C中分别示出对于AIM+/+小鼠(“+/+”)以及AIM-/-小鼠(“-/-”)，作为反映代谢速度的指标分别评价体温(Body temperature)(℃)、耗氧速率(Oxygen Consumption)(VO2/min/kg)以及饲料摄入量(Food Intake)(g/24h)的结果。其中，在图29C中表示在用HFD喂食时(HFD)和用普通饲料喂食时(normal chow，普通食物)，每24小时摄食的饲料的量。如图29A至图29C所示，在体温、耗氧速率以及饲料摄入量中的任意一项上，AIM+/+小鼠和AIM-/-小鼠之间不存在较大的差异。
进一步地，用HFD喂食的AIM+/+小鼠和AIM-/-小鼠的活动性(Locomotoractivity)也大致相同。图29D中示出对于AIM+/+小鼠(“+/+”)以及AIM-/-小鼠(“-/-”)，分别评价活动性(Locomotor activity)(count)的结果。图29D中示出黑暗环境下(Dark)12小时以及光照环境下(light)12小时的活动性以及共24小时的综合活动性(Total)。
从这些结果认为，AIM通过特异性地作用于脂肪细胞，由此对脂肪组织量产生影响。
实施例14
[基于向AIM缺失小鼠给予AIM而引起的对脂肪组织量以及体重增加的抑制]
向AIM-/-小鼠用HFD喂食15周期间，在最后9周向该AIM-/-小鼠的腹腔内注射小鼠rAIM，研究该rAIM的给予是否抑制脂肪组织量的增加。即，最后的9周，向AIM-/-小鼠的腹腔内每周3次注射rAIM([150μg/注射/小鼠]×[3次/周]＝[450μg/小鼠/周])，第15周测定体重、内脏脂肪的重量以及皮下脂肪的重量。其中，作为对照，对于按照同样的方案而向腹腔内给予BSA(BovineSerum Albumin，牛血清白蛋白)的AIM-/-小鼠，也测定体重、内脏脂肪的重量以及皮下脂肪的重量。
图30A、图30B以及图30C中示出对于给予BSA的AIM-/-小鼠(“BSA”)以及给予rAIM的AIM-/-小鼠(“rAIM”)，分别测定体重(Body)(g)、内脏脂肪组织(Visceral fat)的重量(g)以及皮下脂肪组织(Subcutaneous fat)的重量(g)的结果(n＝3，即给予BSA的AIM-/-小鼠以及给予rAIM的AIM-/-小鼠分别为3例)。
如图30A至图30C所示，对于内脏脂肪的重量以及皮下脂肪的重量这两项指标的增加来说，与体重同样地，相比于作为对照而注射BSA的小鼠，在注射rAIM的小鼠中显著减小。
进一步地，对于给予BSA的AIM-/-小鼠以及给予rAIM的AIM-/-小鼠，分别评价FSP27、Perilipin(围脂滴蛋白)以及Adipophilin(脂肪分化相关蛋白)的mRNA水平。mRNA水平使用从附睾脂肪分离的RNA，通过QPCR测定。
图31中示出对于给予BSA的AIM-/-小鼠(“BSA”)以及给予rAIM的AIM-/-小鼠(“rAIM”)，分别进行评价的FSP27、Perilipin以及Adipophilin的mRNA水平(n＝3)。其中，图31中示出的值表示经GAPDH归一化(normalizedto GAPDH)的、相对于注射BSA的小鼠的结果的相对值(Relative Expression)。
如图31所示，与用rAIM处理上述的3T3-L1脂肪细胞时观察到的结果同样地，随着进行脂解(lipolysis)而减少的FSP27、Perilipin以及Adipophilin的mRNA水平，也相比于作为对照而注射BSA的小鼠，注射rAIM的小鼠中较低。因此，认为根据AIM的注射，生物机体内进行了脂解(lipolysis)。
实施例15
[AIM的向FAS的结合]
体内(in vivo)以及体外(in vitro)两种实验中，均确认出AIM与FAS的结合。即，向肥胖AIM-/-小鼠的附睾脂肪组织的若干处直接注射共100μg的用HA标记的小鼠rAIM。从注射经过3小时后，采集附睾脂肪组织。接着，使用抗HA抗体，从该脂肪组织的裂解物沉淀分离内吞的rAIM。并且，采用免疫印迹(WB)，分析在得到的沉淀物中是否包含FAS。其结果，如图32所示，确认出两种蛋白发生共沉淀，内吞的rAIM和内源性的细胞质内FAS结合。
进一步地，使用表达用Flag标记的FAS和用HA标记的小鼠AIM这两种蛋白的HEK293T细胞以及抗Flag抗体或抗HA抗体，进行共免疫沉淀试验。其结果，如图33A以及图33B所示，两种蛋白均发生共沉淀。因此，认为AIM具有与FAS结合的能力。
进一步地，试图绘出FAS中的对于AIM的结合区域。如图34A所示，FAS由下述的7个独立的功能结构域构成。即，酮脂酰合成酶(ketoacylsynthase，KS)、丙二酰转移酶和乙酰转移酶(malonyl/acetyl transferase，MAT)、脱水酶(dehydrase，DH)、烯酰还原酶(enoylreductase，ER)、酮脂酰还原酶(ketoreductase，KR)、酰基载体蛋白(acyl carrier protein，ACP)以及硫酯酶(thioesterase，TE)。在DH结构域和ER结构域之间包含中央核心区(central core，CC)。认为，该CC不具有已知的酶功能，而起结构上稳定二聚体的作用。在此，图34A中示出头尾(head-to-tail)二聚化的FAS以及其各区域的主要功能。
因此，通过共沉淀试验，研究用Flag标记的FAS的各区域与用HA标记的AIM的结合。即，使N末端中添加有Flag标签的FAS的各结构域，在表达用HA标记的小鼠AIM的HEK293T细胞中，稳定表达。并且，使用抗Flag抗体以及抗HA抗体，通过共免疫沉淀试验，研究各区域与AIM的结合。其结果，如图34B所示，AIM特异性地结合于ER、DH、TE以及CC结构域。但是，AIM不结合于参与初期的酰基链集合体(initial asyl chain assembly，初期的酰基链装配)(即，伴随二氧化碳的释放的、乙酰基以及丙二酰基向3-ketobutyryl-ACP的缩合(condensation))的、包含KS以及MAT的N末端区域(参照图34A)。因此，认为AIM对于脂肪酸链延长(由ER以及DH参与)以及释放合成的棕榈酸酯(palmitate)(依赖于TE)产生影响。其中，ER或KR的过度表达会带来多数细胞的死亡。这会引起使用这些细胞裂解物的WB中的信号低下(图34B的下侧板，通道：ER以及KR)。
实施例16
[细胞表面CD36介导下的AIM的内吞]
对于缺失CD36的CD36-/-小鼠以及野生型CD36+/+小鼠，分别从静脉注射小鼠rAIM，分析向脂肪组织的rAIM的内吞。即，将在PSB中溶解rAIM而配制的注射液分别静脉注射到CD36-/-小鼠以及CD36+/+小鼠(300μg/小鼠)。从注射经过16小时后，处死小鼠，从其附睾脂肪组织制作组织切片。并且，将组织切片用抗AIM抗体染色。
其结果，如图35A以及图35B所示，在CD36-/-小鼠(CD36-/-)的脂肪组织中检测出的AIM的信号水平与CD36+/+小鼠(CD36+/+)相比，显著地低下。即，向脂肪细胞的rAIM内吞，相比于CD36+/+小鼠(CD36+/+)，在CD36-/-小鼠(CD36-/-)中显著地少。
实施例17
[人rAIM的对人前脂肪细胞的成熟的抑制]
为了确认AIM在人细胞中也作用于脂肪细胞分化(adipogenesis)，在重组人AIM(rhAIM)的存在以及不存在下，刺激人间叶干细胞(humanmesenchymal stem cell，HMSC)(Lonza Walkersville Inc.，USA)的分化。
即，将HMSC，在间叶干细胞基础培养基(Mesenchymal Stem Cell BasalMedium，MSCBM)(Lonza Walkersville Inc.)中培养10天，以达到汇合。然后，将细胞在rhAIM存在(10μg/mL)或者不存在下，加入人胰岛素、MCGS、地塞米松(dexamethasone)、吲哚美辛(indomethacin)以及IBMX，培养3天，由此刺激该细胞的分化(adipogenesis)(adipogenesis induction)(参考文献：Janderrova等，Obes.Res.11：65，2003)。经过该刺激后，将细胞在添加有人胰岛素以及MCGS的MSCBM中培养10天。并且，回收细胞，用油红O染色。
图36A、图36B以及图36C中分别示出在相差显微镜下观察分化刺激前(Pre-stimulation)、rhAIM不存在下刺激后(rhAIM(-))以及10μg/mL的rhAIM存在下刺激后(rhAIM(10μg/mL))的细胞的结果。
如图36A至图36C所示，rhAIM戏剧性地抑制HMSC的分化。并且，通过RT-PCR评价在成熟脂肪细胞中表达的Glut-4的mRNA水平。并且，对于β肌动蛋白的mRNA，也同样地进行评价。在图37中示出其结果。图37中示出评价分化刺激前(Pre)、rhAIM不存在下刺激后(-rhAIM)以及10μg/mL的rhAIM存在下刺激后(+rhAIM)的细胞中的Glut-4以及β肌动蛋白的mRNA的水平的结果。如图37所示，与上述的组织学分析结果一致，Glut-4的mRNA水平，相比于rhAIM不存在的状态，在rhAIM存在下显著地减少。
实施例18
[狗以及猫中的AIM的表达]
为了研究狗以及猫中的AIM的表达，采用抗小鼠AIM多克隆抗体(SA-1)，对从3只狗以及3只猫采集的血清进行免疫印迹试验。并且，为了进行比较，对小鼠血清也同样进行免疫印迹试验。
图38中示出对于狗3例(dog 1、2、3)、猫3例(cat 1、2、3)以及小鼠(mouse)分别进行免疫印迹的结果。如图38所示，在狗血清中检测出明显的条带。另一方面，在猫血清中检测出分子量比狗更大、而与小鼠大致相同的、较浅的条带。即，确认出在狗以及猫中也表达，与小鼠AIM具有能够被抗小鼠AIM多克隆抗体检测出的程度的同源性的AIM。
在此，说明通过上述的实施例11至18得到的部分见解。在实施例11中，在向AIM-/-小鼠的附睾脂肪组织直接注射rAIM以及向AIM-/-小鼠静脉注射rAIM的任意一种情况下，均出现给予的外源性rAIM内吞进入脂肪细胞，且内吞的rAIM与该脂肪细胞的细胞质内的内源性FAS结合的现象。并且，在实施例16中，确认出向CD36-/-小鼠以及野生型CD36+/+小鼠分别静脉注射rAIM时，向脂肪细胞的rAIM的内吞，相比于CD36+/+小鼠，在CD36-/-小鼠中显著地少。即，在上述的实施例5至8中采用培养细胞进行的体外(in vitro)实验中确认出的现象，在采用小鼠进行的体内(in vivo)实验中也被确认出。其中，实施例15中，再次确认出在细胞内AIM与FAS结合，同时还获得关于FAS的与AIM结合的区域的见解。
在实施例12以及实施例13中，示出以下现象：用HFD喂食的AIM-/-小鼠的体重、脂肪组织的重量、肝脏的重量以及脂肪组织中所包含的脂肪细胞的大小的增加，与同样用HFD喂食的AIM+/+小鼠相比，被显著地促进；但是该AIM-/-小鼠的饲料摄入量、代谢速率以及活动性方面，与该AIM+/+小鼠大致相同。即，更加详细地确认出在上述的实施例9中被确认出的现象。
在实施例14中，示出同时实施摄取HFD和腹腔内注射rAIM的处理的AIM-/-小鼠的体重、内脏脂肪的重量以及皮下脂肪的重量的增加，与同时实施摄取HFD和腹腔内注射BSA的处理的AIM-/-小鼠相比，被显著地抑制的结果。并且，这种由AIM引起的效果还可以根据以下分析结果证实，即，随着脂解(lipolysis)的进行而减少的FSP27、Perilipin(围脂滴蛋白)以及Adipophilin(脂肪分化相关蛋白)的mRNA水平，相比于腹腔内注射BSA的AIM-/-小鼠，在腹腔内注射rAIM的AIM-/-小鼠中更低。即，如在上述的实施例10中已经理解的那样，通过相比于静脉注射可以提高脂肪组织中的局部浓度的腹腔内注射，明确地确认出由于给予AIM而抑制体重以及脂肪组织重量的增加的效果。
在实施例17中，确认出人AIM通过作用于人前脂肪细胞，抑制该人前脂肪细胞向人脂肪细胞的分化。即，确认出如同基于上述的实施例1至10中得到的见解以及与AIM分子结构及其作用机制相关的小鼠和人的同源性而已经理解的那样，小鼠AIM作用于小鼠细胞，同样地人AIM作用于人细胞。该结果加强了支持下述理解的依据，即AIM在人的机体内与在小鼠机体内同样地作用于脂肪细胞，带来前脂肪细胞的分化抑制、脂肪细胞中的脂解(lipolysis)、脂肪组织重量的增加抑制、体重的增加抑制的效果。
在实施例18中，确认出在狗以及猫中也表达，与小鼠AIM具有能够被抗小鼠AIM多克隆抗体检测出的程度的同源性的AIM。实际上，由序列表11中示出的氨基酸序列构成的狗AIM与由序列表1中示出的人AIM具有66％的同源性，并与序列表5中示出的小鼠AIM具有60％的同源性。
如上所述，得到以下见解，即AIM基于在各种哺乳动物的种间的氨基酸序列的同源性以及该AIM的作用机制的同源性，通过向生物机体给药，带来该生物机体的脂肪组织的量和/或体重的减少、增加的抑制、增加程度的降低等效果。进一步地，在作为药物的有用性以及安全性方面还得到极其令人感兴趣的见解，即AIM基于在CD36的介导下内吞进入细胞内而作用于该细胞的机制，不会改变生物机体的代谢状态，而特异性地作用于该生物机体的脂肪细胞。
Figure IPA00001496931500011
Figure IPA00001496931500021
Figure IPA00001496931500031
Figure IPA00001496931500051
Figure IPA00001496931500061
Figure IPA00001496931500071
Figure IPA00001496931500081
Figure IPA00001496931500091
Figure IPA00001496931500111

Claims (26)

1.下述的（I）的蛋白质在制备用于治疗或预防肥胖或脂肪肉瘤的药物中的应用：
（I）由序列表1或序列表5中示出的氨基酸序列构成的巨噬细胞凋亡抑制因子。
2.下述的（II）的蛋白质在制备用于治疗或预防肥胖或脂肪肉瘤的药物中的应用：
（II）由巨噬细胞凋亡抑制因子的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与所述氨基酸序列具有同源性的氨基酸序列构成，且具有抑制前脂肪细胞向成熟脂肪细胞的分化的功能和/或在成熟脂肪细胞中诱导脂滴分解的功能的蛋白质，所述巨噬细胞凋亡抑制因子由序列表1或序列表5中示出的氨基酸序列构成；
而且，所述（II）的蛋白质由下述的第一结构域、第二结构域以及第三结构域串联而构成，
所述第一结构域由（d-1）由序列表2中示出的氨基酸序列构成的SRCR1结构域的氨基酸序列；（d-2）所述SRCR1结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与所述SRCR1结构域的氨基酸序列具有80%以上的同源性的氨基酸序列；或者（d-3）所述SRCR1结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的与所述SRCR1结构域的氨基酸序列具有同源性的氨基酸序列构成，
所述第二结构域由（e-1）由序列表3中示出的氨基酸序列构成的SRCR2结构域的氨基酸序列；（e-2）所述SRCR2结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与所述SRCR2结构域的氨基酸序列具有80%以上的同源性的氨基酸序列；或者（e-3）所述SRCR2结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的与所述SRCR2结构域的氨基酸序列具有同源性的氨基酸序列构成，
所述第三结构域由（f-1）由序列表4中示出的氨基酸序列构成的SRCR3结构域的氨基酸序列；（f-2）所述SRCR3结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与所述SRCR3结构域的氨基酸序列具有80%以上的同源性的氨基酸序列；或者（f-3）所述SRCR3结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的与所述SRCR3结构域的氨基酸序列具有同源性的氨基酸序列构成。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述（II）的蛋白质由与由序列表1或序列表5中示出的氨基酸序列构成的巨噬细胞凋亡抑制因子的氨基酸序列具有80%以上的同源性的氨基酸序列构成。
4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述（II）的蛋白质由巨噬细胞凋亡抑制因子的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列构成，所述巨噬细胞凋亡抑制因子由序列表1或序列表5中示出的氨基酸序列构成。
5.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述第一结构域、所述第二结构域及所述第三结构域中的发生缺失、取代或添加的氨基酸分别位于除了共有序列以外的部分。
6.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述第一结构域、所述第二结构域以及所述第三结构域直接串联。
7.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述（II）的蛋白质包含两个以上在所述第一结构域、所述第二结构域以及所述第三结构域中的至少一种，且相同的结构域串联。
8.下述的（III）的蛋白质在制备用于治疗或预防肥胖或脂肪肉瘤的药物中的应用：
（III）由巨噬细胞凋亡抑制因子的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与所述氨基酸序列具有同源性的氨基酸序列构成，且具有抑制前脂肪细胞向成熟脂肪细胞的分化的功能和/或在成熟脂肪细胞中诱导脂滴分解的功能的蛋白质，所述巨噬细胞凋亡抑制因子由序列表1或序列表5中示出的氨基酸序列构成；
而且，所述（III）的蛋白质由下述的第一结构域、第二结构域以及第三结构域串联而构成，
所述第一结构域由（d-1）由序列表6中示出的氨基酸序列构成的SRCR1结构域的氨基酸序列；（d-2）所述SRCR1结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与所述SRCR1结构域的氨基酸序列具有80%以上的同源性的氨基酸序列；或者（d-3）所述SRCR1结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的与所述SRCR1结构域的氨基酸序列具有同源性的氨基酸序列构成，
所述第二结构域由（e-1）由序列表7中示出的氨基酸序列构成的SRCR2结构域的氨基酸序列；（e-2）所述SRCR2结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与所述SRCR2结构域的氨基酸序列具有80%以上的同源性的氨基酸序列；或者（e-3）所述SRCR2结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的与所述SRCR2结构域的氨基酸序列具有同源性的氨基酸序列构成，
所述第三结构域由（f-1）由序列表8中示出的氨基酸序列构成的SRCR3结构域的氨基酸序列；（f-2）所述SRCR3结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与所述SRCR3结构域的氨基酸序列具有80%以上的同源性的氨基酸序列；或者（f-3）所述SRCR3结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的与所述SRCR3结构域的氨基酸序列具有同源性的氨基酸序列构成。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述（III）的蛋白质由与由序列表1或序列表5中示出的氨基酸序列构成的巨噬细胞凋亡抑制因子的氨基酸序列具有80%以上的同源性的氨基酸序列构成。
10.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述（III）的蛋白质由巨噬细胞凋亡抑制因子的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列构成，所述巨噬细胞凋亡抑制因子由序列表1或序列表5中示出的氨基酸序列构成。
11.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述第一结构域、所述第二结构域以及所述第三结构域中的发生缺失、取代或添加的氨基酸分别位于除了共有序列以外的部分。
12.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述第一结构域、所述第二结构域以及所述第三结构域直接串联。
13.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述（III）的蛋白质包含两个以上在所述第一结构域、所述第二结构域以及所述第三结构域中的至少一种，且相同的结构域串联。
14.下述的（I）的蛋白质在制备用于治疗或预防肥胖的食品饮料中的应用：
（I）由序列表1或序列表5中示出的氨基酸序列构成的巨噬细胞凋亡抑制因子。
15.下述的（II）的蛋白质在制备用于治疗或预防肥胖的食品饮料中的应用：
（II）由巨噬细胞凋亡抑制因子的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与所述氨基酸序列具有同源性的氨基酸序列构成，且具有抑制前脂肪细胞向成熟脂肪细胞的分化的功能和/或在成熟脂肪细胞中诱导脂滴分解的功能的蛋白质，所述巨噬细胞凋亡抑制因子由序列表1或序列表5中示出的氨基酸序列构成；
而且，所述（II）的蛋白质由下述的第一结构域、第二结构域以及第三结构域串联而构成，
所述第一结构域由（d-1）由序列表2中示出的氨基酸序列构成的SRCR1结构域的氨基酸序列；（d-2）所述SRCR1结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与所述SRCR1结构域的氨基酸序列具有80%以上的同源性的氨基酸序列；或者（d-3）所述SRCR1结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的与所述SRCR1结构域的氨基酸序列具有同源性的氨基酸序列构成，
所述第二结构域由（e-1）由序列表3中示出的氨基酸序列构成的SRCR2结构域的氨基酸序列；（e-2）所述SRCR2结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与所述SRCR2结构域的氨基酸序列具有80%以上的同源性的氨基酸序列；或者（e-3）所述SRCR2结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的与所述SRCR2结构域的氨基酸序列具有同源性的氨基酸序列构成，
所述第三结构域由（f-1）由序列表4中示出的氨基酸序列构成的SRCR3结构域的氨基酸序列；（f-2）所述SRCR3结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与所述SRCR3结构域的氨基酸序列具有80%以上的同源性的氨基酸序列；或者（f-3）所述SRCR3结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的与所述SRCR3结构域的氨基酸序列具有同源性的氨基酸序列构成。
16.如权利要求15所述的应用，其特征在于，所述（II）的蛋白质由与由序列表1或序列表5中示出的氨基酸序列构成的巨噬细胞凋亡抑制因子的氨基酸序列具有80%以上的同源性的氨基酸序列构成。
17.如权利要求15所述的应用，其特征在于，所述（II）的蛋白质由巨噬细胞凋亡抑制因子的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列构成，所述巨噬细胞凋亡抑制因子由序列表1或序列表5中示出的氨基酸序列构成。
18.如权利要求15所述的应用，其特征在于，所述第一结构域、所述第二结构域及所述第三结构域中的发生缺失、取代或添加的氨基酸分别位于除了共有序列以外的部分。
19.如权利要求15所述的应用，其特征在于，所述第一结构域、所述第二结构域以及所述第三结构域直接串联。
20.如权利要求15所述的应用，其特征在于，所述（II）的蛋白质包含两个以上在所述第一结构域、所述第二结构域以及所述第三结构域中的至少一种，且相同的结构域串联。
21.下述的（III）的蛋白质在制备用于治疗或预防肥胖的食品饮料中的应用：
（III）由巨噬细胞凋亡抑制因子的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与所述氨基酸序列具有同源性的氨基酸序列构成，且具有抑制前脂肪细胞向成熟脂肪细胞的分化的功能和/或在成熟脂肪细胞中诱导脂滴分解的功能的蛋白质，所述巨噬细胞凋亡抑制因子由序列表1或序列表5中示出的氨基酸序列构成；
而且，所述（III）的蛋白质由下述的第一结构域、第二结构域以及第三结构域串联而构成，
所述第一结构域由（d-1）由序列表6中示出的氨基酸序列构成的SRCR1结构域的氨基酸序列；（d-2）所述SRCR1结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与所述SRCR1结构域的氨基酸序列具有80%以上的同源性的氨基酸序列；或者（d-3）所述SRCR1结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的与所述SRCR1结构域的氨基酸序列具有同源性的氨基酸序列构成，
所述第二结构域由（e-1）由序列表7中示出的氨基酸序列构成的SRCR2结构域的氨基酸序列；（e-2）所述SRCR2结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与所述SRCR2结构域的氨基酸序列具有80%以上的同源性的氨基酸序列；或者（e-3）所述SRCR2结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的与所述SRCR2结构域的氨基酸序列具有同源性的氨基酸序列构成，
所述第三结构域由（f-1）由序列表8中示出的氨基酸序列构成的SRCR3结构域的氨基酸序列；（f-2）所述SRCR3结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸的与所述SRCR3结构域的氨基酸序列具有80%以上的同源性的氨基酸序列；或者（f-3）所述SRCR3结构域的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的与所述SRCR3结构域的氨基酸序列具有同源性的氨基酸序列构成。
22.如权利要求21所述的应用，其特征在于，所述（III）的蛋白质由与由序列表1或序列表5中示出的氨基酸序列构成的巨噬细胞凋亡抑制因子的氨基酸序列具有80%以上的同源性的氨基酸序列构成。
23.如权利要求21所述的应用，其特征在于，所述（III）的蛋白质由巨噬细胞凋亡抑制因子的氨基酸序列经过缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列构成，所述巨噬细胞凋亡抑制因子由序列表1或序列表5中示出的氨基酸序列构成。
24.如权利要求21所述的应用，其特征在于，所述第一结构域、所述第二结构域以及所述第三结构域中的发生缺失、取代或添加的氨基酸分别位于除了共有序列以外的部分。
25.如权利要求21所述的应用，其特征在于，所述第一结构域、所述第二结构域以及所述第三结构域直接串联。
26.如权利要求21所述的应用，其特征在于，所述（II）的蛋白质包含两个以上在所述第一结构域、所述第二结构域以及所述第三结构域中的至少一种，且相同的结构域串联。
CN201080030813.5A 2009-06-01 2010-05-27 药物组合物、食品饮料以及与它们相关的方法 Active CN102458472B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US21334909P 2009-06-01 2009-06-01
US61/213,349 2009-06-01
PCT/JP2010/058998 WO2010140531A1 (ja) 2009-06-01 2010-05-27 医薬組成物、飲食物及びこれらに関する方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102458472A CN102458472A (zh) 2012-05-16
CN102458472B true CN102458472B (zh) 2014-04-16

Family

ID=43297667

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201080030813.5A Active CN102458472B (zh) 2009-06-01 2010-05-27 药物组合物、食品饮料以及与它们相关的方法

Country Status (5)

Country Link
US (2) US20100331244A1 (zh)
EP (1) EP2438927A4 (zh)
JP (1) JP5688659B2 (zh)
CN (1) CN102458472B (zh)
WO (1) WO2010140531A1 (zh)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011145722A1 (ja) * 2010-05-20 2011-11-24 Miyazaki Toru Aimの機能を制御する化合物のスクリーニング方法
WO2011145725A1 (ja) * 2010-05-20 2011-11-24 Miyazaki Toru Aim関連疾患の診断方法及び診断用キット
JP6143015B2 (ja) 2012-04-27 2017-06-07 宮崎　徹 肝疾患の予防または治療剤
CA2926082C (en) 2013-10-07 2022-06-14 Impax Laboratories, Inc. Muco-adhesive, controlled release formulations of levodopa and/or esters of levodopa and uses thereof
US10987313B2 (en) 2013-10-07 2021-04-27 Impax Laboratories, Llc Muco-adhesive, controlled release formulations of levodopa and/or esters of levodopa and uses thereof
CA2938944C (en) * 2014-02-07 2020-01-28 Toru Miyazaki Apoptosis inhibitor of macrophage (aim) as preventive or therapeutic agent for kidney disease
WO2016190387A1 (ja) * 2015-05-28 2016-12-01 国立大学法人東京大学 腫瘍の治療剤及びその使用
CN111315880B (zh) * 2017-11-16 2023-10-31 宫崎彻 突变型aim
JP7289033B2 (ja) * 2018-10-01 2023-06-09 徹 宮崎 神経変性疾患治療剤
US20220120762A1 (en) * 2019-01-31 2022-04-21 Sekisui Medical Co., Ltd. Immunoassay method for free aim in biological sample, and method for detecting nash in subject
US20220146529A1 (en) * 2019-01-31 2022-05-12 Sekisui Medical Co., Ltd. Immunoassay method for free aim in biological sample
US11986449B2 (en) 2020-12-22 2024-05-21 Amneal Pharmaceuticals Llc Levodopa dosing regimen

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6046314A (en) * 1997-03-06 2000-04-04 Bristol-Myers Squibb Co. Spα: a novel scavenger receptor cysteine-rich domain-containing polypeptide, and monoclonal antibodies thereto
US20030044839A1 (en) * 1997-09-17 2003-03-06 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US7588912B2 (en) * 2004-10-12 2009-09-15 Regents Of The University Of California Compositions and methods for preventing and treating anthrax diseases

Also Published As

Publication number Publication date
EP2438927A1 (en) 2012-04-11
CN102458472A (zh) 2012-05-16
US20120202747A1 (en) 2012-08-09
JPWO2010140531A1 (ja) 2012-11-15
WO2010140531A1 (ja) 2010-12-09
US8591913B2 (en) 2013-11-26
JP5688659B2 (ja) 2015-03-25
US20100331244A1 (en) 2010-12-30
EP2438927A4 (en) 2013-04-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102458472B (zh) 药物组合物、食品饮料以及与它们相关的方法
Plosker et al. Cerebrolysin: a review of its use in dementia
JP6156882B2 (ja) 患者のリソソーム酸リパーゼ欠乏症を治療するためのリソソーム酸リパーゼの使用
CN109593814A (zh) 筛选分析、鉴别药剂的方法及药物组合物
CN104039357A (zh) 胰腺β-细胞增殖的调节
CN107148275A (zh) 包含编码生长因子的外源多核苷酸的稳定的神经干细胞及其使用方法
Shen et al. Liposome-encapsulated peptide PDBSN ameliorates high-fat-diet-induced obesity and improves metabolism homeostasis
CN107375910A (zh) PTHrP在制备治疗男性性腺功能低下综合征中的应用
JPH11505836A (ja) 筋肉栄養因子
KR20140006037A (ko) 리소좀의 산 리파제 결핍을 치료하는 방법들
US20210069177A1 (en) Method for destroying cellular mechanical homeostasis and promoting regeneration and repair of tissues and organs, and use thereof
EP2886650B1 (en) Brown adipocyte differentiation-inducing agent
CN110151980B (zh) Glp-1受体激动剂融合蛋白在制备预防或治疗高血脂药物中的应用
KR20200096449A (ko) Fas 신호전달 억제용 펩티드를 포함하는 비만, 지방간 또는 지방간염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
US10342852B2 (en) Methods of reducing blood glucose or triglyceride levels by administration of METRNL protein
US20220257716A1 (en) Methods and compositions for the treatment of secretory disorders
KR101826792B1 (ko) Dlk1의 세포 외 수용성 도메인을 유효성분으로 포함하는 지방간 또는 인슐린 저항성 증후군 예방 및 치료용 조성물
Bazekin et al. Morphofunctional Assessment of the Glycyrrhizinic Acid Effect on Myocardium of Rats under Adrenaline Loading.
JP2015524808A (ja) アポリポタンパク質ａｉｖを用いたｉ型糖尿病の治療法
EP4223307A1 (en) Composition for preventing or treating neuropsychologic disease, comprising manf
CN104740606A (zh) 一种多肽在制备治疗或预防糖尿病性心肌病药物中的应用
EP3626734A1 (en) Polypeptide for regulating energy metabolism and uses thereof
KR20130136990A (ko) 환자에서 리소좀 산 리파제 결핍증의 치료를 위한 리소좀 산 리파제의 용도

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
ASS Succession or assignment of patent right

Owner name: DAINIPPON PHARMACEUTICAL CO.

Effective date: 20121207

C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20121207

Address after: Tokyo, Japan

Applicant after: Gong Qiche

Applicant after: Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd.

Address before: Tokyo, Japan

Applicant before: Gong Qiche

C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
ASS Succession or assignment of patent right

Free format text: FORMER OWNER: DAINIPPON PHARMACEUTICAL CO.

Effective date: 20140624

C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20140624

Address after: Tokyo, Japan

Patentee after: Gong Qiche

Address before: Tokyo, Japan

Patentee before: Gong Qiche

Patentee before: Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd.

CI01 Correction of invention patent gazette

Correction item: Drawings

Correct: Correct

False: Error

Number: 16

Volume: 30

CI03 Correction of invention patent

Correction item: Drawings

Correct: Correct

False: Error

Number: 16

Page: Description

Volume: 30

ERR Gazette correction

Free format text: CORRECT: FIGURE OF DESCRIPTION; FROM: ERROR TO: CORRECT

RECT Rectification