ES2452039T3 - Sales de derivados azoicos de pirazolona biciclo-sustituidos, procedimiento de preparación y uso de los mismos - Google Patents

Sales de derivados azoicos de pirazolona biciclo-sustituidos, procedimiento de preparación y uso de los mismos Download PDF

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Abstract

Sales farmacéuticamente aceptables de un compuesto que tiene fórmula (I): en la que: Het se selecciona entre el grupo que consiste en fenilo, furilo y tienilo; cada uno de R1, R2, R3 y R4 se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno y alquilo; n es 0, 1 ó 2; y las sales son sales de adición de bases que se seleccionan entre el grupo que consiste en sal sódica, sal de litio, sal potásica, sal cálcica, sal de magnesio, sal de arginina, sal de lisina, sal de metanamina, sal de dimetilamina, sal de trimetilamina, sal de etilamina, sal de dietilamina, sal de trietilamina, sal de etanolamina, sal de piperazina, sal de dibencil etilendiamina, sal de meglumina, sal de trometamina, sal de tetrametil amonio cuaternario, sal de tetraetil amonio cuaternario y sal colina.

Description

Sales de derivados azoicos de pirazolona biciclo-sustituidos, procedimiento de preparacion y uso de los mismos.
CAMPO
Esta divulgacion se refiere a sales farmaceuticamente aceptables de nuevos derivados azoicos de pirazolona biciclosustituidos, procedimientos para su preparacion, composiciones farmaceuticas que contienen los mismos, y su uso como un agente terapeutico, particularmente como mimeticos de trombopoyetina (TPO) y agonistas del receptor de trombopoyetina.
ANTECEDENTES
La trombopoyetina (TPO), tambien denominada factor de crecimiento y desarrollo de megacariocitos (MGDF), factor estimulante de la trombocitopoyesis (TSF), ligando de leucemia c-mieloproliferativa (c-Mpl), ligando mpl, o megapoyetina, es una glicoproteina que se ha indicado para regular la produccion de plaquetas. Veanse Wendling,
F. y col., Biotherapy 10(4): 269-77 (1998); Kuter D.J. y col., The Oncologist, 1: 98-106 (1996); Metcalf, Nature 369: 519-520 (1994). Bajo ciertas circunstancias, la actividad de la TPO es resultado de la union de la TPO con el receptor de TPO (tambien denominado Mpl). El receptor de TPO se ha clonado y su secuencia aminoacidica se ha descrito. Vease Vigon y col., Proc. Nat. Acad. Sci., 89: 5640-5644 (1992).
La TPO es un polipeptido glicosilado de 332 aminoacidos que desempefa una funcion clave en la regulacion de la megacariocitopoyesis, y en el proceso en el que las plaquetas se producen por megacariocitos de medula osea. Veanse Kuter y col., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 91: 11104-11108 (1994); Barley y col., Cell 77: 1117-1124 (1994); Kaushansky y col., Nature 369: 568-571 (1994); Wendling y col., Nature 369: 571-574 (1994); y Sauvage y col., Nature 369: 533-538 (1994). La TPO se produce en el higado pero funciona principalmente en la medula osea, donde estimula la diferenciacion de las celulas madre en los progenitores de megacariocitos, y estimula la proliferacion de megacariocitos, la poliploidizacion y, en ultima instancia, entra en las plaquetas en circulacion del cuerpo. La TPO es tambien un regulador primario en situaciones que implican trombocitopenia y en una serie de estudios que incluyen recuentos plaquetarios crecientes, el tamafo plaquetario y la incorporacion de isotopos en plaquetas de animales receptores. Vease, Metcalf Nature 369: 519-520 (1994). Especificamente, se considera que la TPO afecta a la megacariocitopoyesis de varias formas: (1) provoca un aumento del tamafo y numero de megacariocitos; (2) aumenta el contenido de ADN, las formas de poliploidia, y el numero de megacariocitos; (3) aumenta la endomitosis de megacariocitos; (4) aumenta el numero de megacariocitos maduros; (5) aumenta el porcentaje de celulas precursoras, el numero de celulas positivas pequefas de acetilcolinasterasa, el numero de celulas de medula osea. Las plaquetas son necesarias para la coagulacion de la sangre. Cuando el recuento de plaquetas es muy bajo, el paciente esta en riesgo de muerte por hemorragia catastrofica. Por lo tanto, la TPO se ha usado tanto para el diagnostico como para el tratamiento de diversos trastornos hematologicos, por ejemplo, enfermedades causadas principalmente por defectos plaquetarios. De forma analoga, La TPO puede ser util para el tratamiento de afecciones trombocitopenicas, especialmente las derivadas de la quimioterapia, radioterapia, o trasplante de medula para el tratamiento de cancer o linfoma. La lenta recuperacion de los niveles de plaquetas en los pacientes que padecen trombocitopenia es un problema grave. Es deseable proporcionar un compuesto para el tratamiento de la trombocitopenia que actue como un mimetico de TPO. Estos peptidos se disefaron para unir y activar el receptor de TPO (TPO-R) pero no tienen ninguna homologia de secuencia con la TPO natural. En los ultimos afos, se ha informado de una serie de mimeticos de TPO activos de moleculas pequefas, que incluyen derivados de poliaminas ciclicas (documento WO 00/28987), tiazol-2-il-benzamidas (documentos WO 01/07423, WO 01/53267), derivados azo-arilo (documentos WO 00/35446, WO 01/17349), 2-aril-naftimidazoles (documentos WO 01/39773, WO 01/53267), y derivados de semicarbazona (documento WO 01/34585). En sistemas basados en celulas, cada una de estas moleculas puede activar rutas de transduccion de sefales que dependen de la presencia del receptor de TPO en la membrana celular. Ciertos tipos de compuestos pueden actuar directamente sobre el propio receptor de TPO. Se descubrio que algunos de los compuestos mas preferidos de esta serie estimulan la proliferacion y diferenciacion de las lineas celulares humanas sensibles a TPO y la TPO en cultivos de medula osea humana que tiene una concentracion por debajo de 100 nM. Varias patentes cedidas a GlaxoSmithKline describieron un analogo de trombopoyetina, eltrombopag (documentos WO 2003/098992, WO 01 089457), con buena actividad. La presente divulgacion proporciona una serie de sales farmaceuticamente aceptables de derivados azoicos de pirazolona biciclo-sustituidos, que son mimeticos de TPO y agonistas del receptor de TPO mas eficaces.
La solicitud internacional N° PCT/CN2009/000001 presentada por el Solicitante de la presente invencion el 4 de enero de 2009 describio derivados azoicos de pirazolona biciclo-sustituidos novedosos y su uso como mimeticos de trombopoyetina (TPO) y agonistas del receptor de trombopoyetina. Los seis ejemplos (Ejemplo 1, Ejemplo 9, Ejemplo 15, Ejemplo 28, Ejemplo 43 y Ejemplo 52) descritos en la solicitud internacional proporcionaron los
5 compuestos respectivamente como se indica a continuacion:
acido 2'-hidroxi-3'-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]-bifenil-3-carboxilico, acido 5-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]-fenil}-furan-2-carboxilico, acido 5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}
10 fenil)-furan-2-carboxilico, acido 4-(2-hidroxi-3-[N'-(3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)hidrazino]bifenil-furan-2-carboxilico, acido 5-(3-{N'-[1-(3,3-dimetil-indan-5-il)-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}-2-hidroxi-fenil)-furan-2carboxilico,
15 acido 4-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]-fenil}-tiofeno-2-carboxilico, y los esteres de los mismos.
Estos compuestos se ensayaron para mostrar una buena actividad como agonistas del receptor de TPO. Sin embargo, la solicitud internacional N° PCT/CN2009/000001 no describio las sales farmaceuticamente aceptables de 20 los compuestos.
El inventor de la divulgacion descubrio que la forma de acido libre de los derivados azoicos de pirazolona biciclosustituidos era escasamente soluble en disolventes convencionales y, por lo tanto, desventajosa para prepararse en una forma de dosificacion medicinal, limitando su biodisponibilidad in vivo. Es necesario desarrollar nuevas formas
25 de derivados azoicos de pirazolona biciclo-sustituidos para mejorar su solubilidad y absorcion farmacocinetica, que pueden usarse en la preparacion convencional de formas de dosificacion.
RESUMEN
30 Con el fin de superar la insuficiencia de la tecnica anterior, la presente invencion proporciona sales farmaceuticamente aceptables de nuevos derivados azoicos de pirazolona biciclo-sustituidos, procedimientos para su preparacion, composiciones farmaceuticas que contienen los mismos, y su uso como agente terapeutico, particularmente como mimeticos de trombopoyetina (TPO) y agonistas del receptor de trombopoyetina. Las sales tienen buena actividad para tratar la trombocitopenia, una mejor solubilidad, buena actividad in vivo, mejor
35 biodisponibilidad, menor toxicidad y son un buen candidato en la preparacion de un medicamento para el tratamiento de la trombocitopenia.
"Los compuestos de la presente divulgacion" y "las sales de la presente divulgacion" son intercambiables, ambas de las cuales son las sales farmaceuticamente aceptables de derivados azoicos de pirazolona biciclo-sustituidos como 40 se especifica en la reivindicacion 1 y se representa por la formula (I).
en la que:
Het se selecciona entre el grupo que consiste en fenilo, furilo y tienilo; cada uno de R1, R2, R3 y R4 se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno y alquilo; n es 0, 1 o 2;
las sales son sales de adicion de bases que se seleccionan entre el grupo que consiste en sal sodica, sal de litio, sal potasica, sal calcica, sal de magnesio, sal de arginina, sal de lisina, sal de metanamina, sal de dimetilamina, sal de trimetilamina, sal de etilamina, sal de dietilamina, sal de trietilamina, sal de etanolamina, sal de piperazina, sal de dibencil etilendiamina, sal de meglumina, sal de trometamina, sal de
5 tetrametil amonio cuaternario, sal de tetraetil amonio cuaternario y sal colina.
La expresion "acido libre" se refiere a derivados azoicos de pirazolona biciclo-sustituidos que tienen la formula (I).
El equivalente se refiere a los tautomeros de los compuestos que tienen la formula (I), que se conoce bien el experto
10 en la tecnica. Los tautomeros de los compuestos que tienen la formula (I) incluyen la siguiente formula (II) y la formula (III), pero sin limitacion:
15 Todos los tautomeros de los compuestos que tienen la formula (I) se incluyen en el alcance de la presente divulgacion y cada uno de ellos se incluye en la definicion de los compuestos que tienen la formula (I).
La expresion "sal farmaceuticamente aceptable" en la presente divulgacion se refiere a sales de adicion de bases farmaceuticamente no toxicas. Las sales son las formadas entre los compuestos que tienen la formula (I) y bases 20 apropiadas, tales como hidroxido de metales alcalinos, aminoacido basico, amina o amonio cuaternario, incluyendo sal sodica, sal de litio, sal potasica, sal calcica, sal de magnesio, sal de arginina, sal de lisina, sal de metanamina, sal de dimetilamina, sal de trimetilamina, sal de etilamina, sal de dietilamina, sal de trietilamina, sal de etanolamina, sal de piperazina, sal de dibencil etilendiamina, sal de meglumina, sal de trometamina, sal de tetrametil amonio cuaternario, sal de tetraetil amonio cuaternario y sal colina, preferiblemente sal de dietilamina, sal de etanolamina,
25 sal colina, sal de piperazina, sal de meglumina y sal de trometamina, mas preferiblemente sal de etanolamina, sal colina, sal de meglumina y sal de trometamina, y mucho mas preferiblemente sal de etanolamina.
Las sales farmaceuticamente aceptables de los compuestos que tienen la formula (I) de la presente divulgacion preferiblemente incluyen, pero sin limitacion: 30
Ejemplo N°
Estructura Compuesto
1
bis-(etanolamina) del acido (Z)-2'-hidroxi-3'-[N'-(1-indan-5il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]bifenil-3-carboxilico
2
bis-(dietilamina) del acido (Z)-2'-hidroxi-3'-[N'-(-indan-5-il-3metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]-bifenil3-carboxilico
3
bis-(piperazina) del acido (Z)-2'-hidroxi-3'-[N'-(1-indan-5-il3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]bifenil-3-carboxilico
4
bis-(etanolamina) del acido (Z)-5-(3-{N'-[1-(3,3-dimetilindan-5-il)-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]hidrazino}-2-hidroxi-fenil)-furan-2-carboxilico
5
bis-(dietilamina) del acido (Z)-5-(3-{N'-[1-(3,3-dimetil-indan5-il)-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}2-hidroxi-fenil)-furan-2-carboxilico
6
bis-(piperazina) del acido (Z)-5-(3-{N'-[1-(3,3-dimetil-indan5-il)-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}2-hidroxi-fenil)-furan-2-carboxilico
7
bis-(etanolamina) del acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico
8
bis-(colina) del acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico
9
bis-(dietilamina) del acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico
10
bis-(meglumina) del acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico
11
bis-(piperazina) del acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico
12
bis-(trometamol) del acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico
13
bis-(dibenciletilendiamina) del acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2carboxilico
14
sal disodica del acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico
15
bis-(L-arginina) del acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico
16
bis-(etanolamina) del acido (Z)-5-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]fenil}-furan-2-carboxilico
17
bis-(dietilamina) del acido (Z)-5-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]fenil}-furan-2-carboxilico
18
bis-(piperazina) del acido (Z)-5-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]fenil}-furan-2-carboxilico
19
bis-(etanolamina) del acido (Z)-4-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]fenil}-tiofeno-2-carboxilico
20
bis-(dietilamina) del acido (Z)-4-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]fenil}-tiofeno-2-carboxilico
21
bis-(piperazina) del acido (Z)-4-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]fenil}-tiofeno-2-carboxilico
22
bis-(etanolamina) del acido (Z)-4-(2-Hidroxi-3-{N'-[3-metil-5oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftal-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico
23
colina del acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico
La presente divulgacion se refiere a un proceso para preparar las sales farmaceuticamente aceptables de compuestos que tienen la formula (I), que comprende las etapas de:
(a)
disolver o suspender el acido libre de la presente divulgacion (el compuesto que tiene la formula (I)) en 7
un disolvente organico, donde el disolvente organico se selecciona entre el grupo que consiste en metanol, etanol, acetona, acetato de etilo y tetrahidrofurano, preferiblemente tetrahidrofurano;
(b)
afadir una base a la mezcla con agitacion; donde la base puede ser una base organica o inorganica, tal como hidroxido de metal alcalino o hidroxido de metal alcalinoterreo, aminoacido basico, amina o amonio cuaternario;
(c)
obtener las sales farmaceuticamente aceptables del compuesto que tiene la formula (1),
donde las bases inorganicas incluyen hidroxidos de metales alcalinos que se seleccionan entre el grupo que consiste en el hidroxido sodico, hidroxido de litio, hidroxido potasico, hidroxido de calcio, hidroxido de magnesio; los aminoacidos basicos se seleccionan entre el grupo que consiste en lisina y arginina; las aminas se seleccionan entre el grupo que consiste en metanamina, dimetilamina, trimetilamina, etilamina, dietilamina, trietilamina, etanolamina, piperazina, dibencil etilendiamina, meglumina y trometamina; y los amonios cuaternarios se seleccionan entre el grupo que consiste en tetrametil amonio cuaternario, tetraetil amonio cuaternario, hidroxido de colina, preferiblemente dietilamina, etanolamina, hidroxido de colina, piperazina, meglumina y trometamina, mas preferiblemente etanolamina, hidroxido de colina, meglumina y trometamina, mucho mas preferiblemente etanolamina.
En la etapa (b), la proporcion de equivalencia del acido libre y el hidroxido de metal alcalino, aminoacido basico, amina y amonio cuaternario era preferiblemente 1:5-5:1, mas preferiblemente 1:1-1:3, y mucho mas preferiblemente 1:1-1:2.
En la etapa (c), la separacion de sales preferiblemente incluia la filtracion directa de la mezcla de reaccion, la concentracion de la mezcla de reaccion y la recristalizacion en un disolvente organico. Las sales pueden secarse en la condicion tal como secado al vacio o secado al aire de alta temperatura.
Las reacciones de formacion de sales se realizaron generalmente en condiciones de refrigeracion, temperatura ambiente o calentamiento. Sin embargo, cabe mencionar que la temperatura de la reaccion esta relacionada con la formacion de sales, que se conoce bien por el experto en la tecnica. El intervalo de las temperaturas de reaccion de la presente divulgacion es de la temperatura ambiente al punto de ebullicion del disolvente de reaccion, preferiblemente 0-40 °C. El experto en la tecnica puede determinar facilmente la temperatura de reaccion mas preferible de las reacciones de formacion de sales mediante tecnicas convencionales.
La presente divulgacion se refiere al uso de las sales farmaceuticamente aceptables de los compuestos que tienen la formula (I) en la preparacion de un agonista del receptor de trombopoyetina.
La presente divulgacion se refiere al uso de las sales farmaceuticamente aceptables de los compuestos que tienen la formula (I) como se especifica en la reivindicacion 1 en la preparacion de un medicamento para el tratamiento de trombocitopenia, donde el medicamento se co-administra con un farmaco seleccionado entre el grupo que consiste en un factor estimulador de colonias, una citocina, una quimiocina, una interleucina o agonista o antagonista del receptor de citocina, un receptor soluble, un anticuerpo agonista o antagonista de receptor, o uno o mas peptidos o compuestos de moleculas pequefas que tienen el mismo mecanismo con el farmaco.
La presente divulgacion se refiere a las sales farmaceuticamente aceptables de los compuestos que tienen la formula (I) como se especifica en la reivindicacion 1, para su uso como un medicamento para el tratamiento de trombocitopenia, donde el medicamento se co-administra con un farmaco seleccionado entre el grupo que consiste en un factor estimulador de colonias, una citocina, una quimiocina, una interleucina o agonista o antagonista del receptor de citocina, un receptor soluble, un anticuerpo agonista o antagonista de receptor, o uno o mas peptidos o compuestos de moleculas pequefas que tienen el mismo mecanismo con el farmaco, donde el medicamento esta en forma de forma de dosificacion oral, o el medicamento esta en forma de forma de dosificacion parenteral.
La presente divulgacion se refiere a composiciones farmaceuticas que comprenden una cantidad terapeuticamente eficaz de las sales farmaceuticamente aceptables de los compuestos que tienen la formula (I) como se especifica en la reivindicacion 1 y vehiculos o agentes diluyentes farmaceuticamente aceptables, donde la composicion se coadministra con un farmaco seleccionado entre el grupo que consiste en un factor estimulador de colonias, una citocina, una quimiocina, una interleucina y agonista del receptor de citocina. La presente divulgacion tambien se refiere al uso de las composiciones en la preparacion de un medicamento para el tratamiento de trombocitopenia, donde la co-administracion comprende usar los farmacos de la presente divulgacion al mismo tiempo o sucesivamente.
La presente divulgacion se refiere a un proceso para preparar las composiciones farmaceuticas que comprenden una cantidad terapeuticamente eficaz de las sales farmaceuticamente aceptables de los compuestos que tienen la formula (I) como se especifica en la reivindicacion 1 y vehiculos o agentes diluyentes farmaceuticamente aceptables, donde el proceso comprende la etapa de combinar los compuestos que tienen la formula (I) con vehiculos o agentes diluyentes farmaceuticamente aceptables.
En el proceso de preparacion de composiciones farmaceuticas, es importante preparar el farmaco de forma apropiada manejada y tratada de forma conveniente, no solo en vista a una preparacion disponible en el mercado, sino tambien en vista a una preparacion de la forma de dosificacion farmaceutica que contiene los compuestos activos.
En otro aspecto, es importante ofrecer una curva de concentracion en plasma de farmaco fiable, reproducible y constante despues de la administracion a un sujeto en el proceso de preparacion de composiciones farmaceuticas.
Otros factores importantes incluyen durabilidad quimica, estabilidad en estado solido y tiempo de almacenamiento del principio activo. Los farmacos que contienen su composicion preferiblemente pueden almacenarse relativamente durante mucho tiempo si ningun cambio obvio en el caracter fisico y quimico de sus componentes activos, tales como composicion quimica, densidad, higroscopicidad y solubilidad.
Tambien es importante proporcionar un farmaco con una quimica lo mas pura posible.
Tipicamente, un farmaco puede ofrecer las siguientes ventajas: tratamiento conveniente, preparacion de las formas de dosificacion del farmaco adecuadas y solubilidad fiable si el farmaco puede obtenerse en una forma estable, tal como una forma cristalina estable, que se conoce bien por el experto en la tecnica.
La cantidad eficaz del principio activo en una unidad de dosificacion farmaceutica como se ha descrito anteriormente sera no toxica, preferiblemente seleccionada entre el intervalo de 0,001-100 mg/kg de peso total, mas preferiblemente 0,001-50 mg/kg. Al tratar un sujeto que necesita un mimetico de TPO, la dosis seleccionada se administra preferiblemente por via oral o parenteral. Las formas parenterales preferidas incluyen formas de administracion topica, rectal, transdermica, inyeccion e infusion continua. Las unidades de dosificacion orales para administracion en seres humanos preferiblemente contienen de 0,05 a 3500 mg de principio activo, mucho mas preferiblemente de 0,5 a 1000 mg de principio activo. Se prefiere la administracion oral, que usa una dosificacion inferior. Sin embargo, tambien puede usarse la administracion parenteral, a dosis elevadas, cuando sea segura y conveniente para el paciente. Las dosificaciones anteriores se refieren a la cantidad preferida del principio activo expresada como el acido libre.
Se entendera por un experto en la tecnica que la cantidad y separacion optima de las dosis individuales del principio activo dependera de la naturaleza y extension de la afeccion que se va a tratar, la forma, ruta y sitio de administracion, y el paciente particular que se va a tratar, y tales optimos pueden determinarse mediante tecnicas convencionales. Tambien se apreciara por un experto en la tecnica que el ciclo optimo de tratamiento, es decir, el numero de dosis del principio activo dadas por dia durante un numero definido de dias, puede determinarse por los expertos en la tecnica usando pruebas de determinacion del ciclo convencional de tratamiento.
Los compuestos de la presente divulgacion pueden administrarse por via oral o parenteral, donde los compuestos pueden prepararse en comprimidos, pildoras, polvos y granulos usados en diferentes rutas de administracion. En las formas de dosificacion solidas anteriores, los componentes activos se mezclan con al menos un tipo de diluyente inerte. De acuerdo con una operacion convencional, las formas de dosificacion orales tambien incluyen otra sustancia, tal como lubricantes, emolientes y antioxidantes ademas del diluyente inerte. Si se hacen en capsulas, comprimidos y pildoras, las formas de dosificacion contienen agentes tamponantes. Los comprimidos y pildoras pueden fabricarse en formas de dosificacion de liberacion sostenida.
Aunque pueden usarse emulsiones no acuosas, las formas de dosificacion parenterales de la presente divulgacion contienen una solucion acuosa esteril y estas formas de dosificacion tambien contienen adyuvantes, por ejemplo antisepticos, agentes humectantes, agentes penetrantes, agentes tamponantes, agentes emulsionantes y dispersantes. El proceso de esterilizacion puede usar un filtro de retencion de bacterias y se afaden agentes esterilizantes a las composiciones que se irradiaron o se calentaron para su esterilizacion.
En comparacion con los acidos libres, las sales de la presente divulgacion tienen las siguientes ventajas:
(1)
Las sales de la presente divulgacion se disuelven facilmente en los disolventes convencionales, tales como agua, metanol, acido clorhidrico al 0,1% y se adaptan para preparar formas de dosificacion convencionales, donde la solubilidad de las sales de etanolamina se mejora en acido clorhidrico al 0,1%.
(2)
Las sales de la presente divulgacion tienen una mejor estabilidad.
(3)
Las sales de la presente divulgacion tienen una mejor actividad biologica in vitro.
(4)
Las sales de la presente divulgacion tienen mejores caracteristicas farmacocineticas in vivo, una mejor absorcion, mayor biodisponibilidad y mejor curva de farmacocinetica, donde la sal de etanolamina, sal colina, sal de piperazina, sal de meglumina y la sal de trometamina tienen mejores caracteristicas de la farmacocinetica, preferiblemente la sal de etanolamina.
(5)
El proceso de preparacion de las sales de la presente divulgacion tiene la ventaja de tener un alto rendimiento, una alta pureza, ser rapido, como y de bajo coste, donde la sal de etanolamina, sal colina, sal de dietilamina y sal de piperazina son mas ventajosas en rutas del proceso, aquellas que pueden
cristalizarse directamente.
En comparacion con los acidos libres, las sales de la presente divulgacion tienen mejores caracteristicas de solubilidad, estabilidad, actividad biologica in vitro y farmacocinetica, preferiblemente sal de dietilamina, sal de etanolamina, sal colina, sal de piperazina, sal de meglumina y sal de trometamina, mas preferiblemente sal de etanolamina, sal colina, sal de meglumina y sal de trometamina, mucho mas preferiblemente sal de etanolamina.
DESCRIPCION DETALLADA
A menos que se indique otra cosa, los siguientes terminos usados en la memoria descriptiva y las reivindicaciones tienen los significados que se describen a continuacion.
El termino "etanolamina" se refiere a "2-aminoetanol".
El termino "colina" se refiere a "(2-hidroxietil)trimetilamina".
El termino "meglumina" se refiere a "N-metil-D-meglumina".
La expresion "composicion farmaceutica" se refiere a una mezcla de una o mas de las sales farmaceuticamente aceptables del compuesto descrito en el presente documento o profarmacos del mismo, con otros componentes quimicos, tales como vehiculos fisiologica/farmaceuticamente aceptables. El proposito de una composicion farmaceutica es facilitar la administracion de un compuesto a un organismo.
El termino "estabilidad" se refiere a estabilidad quimica y estabilidad solida.
La expresion "estabilidad quimica" se refiere al almacenamiento de los compuestos de la presente divulgacion, incluyendo formas aisladas o formas de dosificacion mezcladas con vehiculos o diluyentes farmaceuticamente aceptables (por ejemplo dosificacion oral, tal como comprimidos, capsulas y asi sucesivamente) en condiciones convencionales con una degradacion quimica o descomposicion quimica insignificante.
La expresion "estabilidad solida" se refiere al almacenamiento de los compuestos de la presente divulgacion, incluyendo formas solidas aisladas o formas de dosificacion mezcladas con vehiculos o diluyentes farmaceuticamente aceptables en formas solidos (por ejemplo dosificacion oral, tal como comprimidos, capsulas y asi sucesivamente) en condiciones convencionales con una transformacion en estado solido insignificante (por ejemplo cristalizacion, recristalizacion, cambio de fase en estado solido, hidratacion, deshidratacion, solvatacion o eliminacion del disolvente).
Los ejemplos de la expresion "almacenado en condiciones convencionales" incluyen el intervalo de temperatura de 80 °C a +50 °C (preferiblemente de 0 °C a 40 °C, mas preferiblemente a temperatura ambiente, tal como 15 °C-30 °C), el intervalo de presion de 0,1 pa a 2 pa (preferiblemente atmosferica), el intervalo de humedad relativa del 5% al 95% (preferiblemente del 10%-60%) y/o expuesto a una luz UV/visible de 460 lux experimentando un tiempo mas prolongado (mas de o igual a seis meses).
La expresion "administracion parenteral" incluye administracion intravenosa, intramuscular, subcutanea, intranasal, intra-rectal, intravaginal o intraperitoneal, preferiblemente administracion oral.
La expresion "higroscopicidad" farmaceutica se refiere al caracter de la capacidad o grado de la sustancia para poder absorber agua bajo cierta temperatura y humedad. Las muestras de prueba son ingredientes satisfechos con el Drug Quality Control Standard. Los envases de los farmacos y las condiciones de almacenamiento pueden remitirse a los resultados de la prueba anterior.
PROCEDIMIENTO DE SiNTESIS DE LOS COMPUESTOS DESVELADOS
Con el fin de conseguir el fin de la divulgacion, la divulgacion emplea las siguientes soluciones tecnicas:
El procedimiento de sintesis del compuesto que tiene la formula (I) se refiere al ejemplo 1, ejemplo 9, ejemplo 15, ejemplo 28, ejemplo 43 y ejemplo 52 de la solicitud internacional N° PCT/CN2009/000001 presentada el 4 de enero de 2009.
El proceso para preparar las sales farmaceuticamente aceptables de los compuestos que tienen la formula (I) comprende las etapas de:
(a)
disolver o suspender el acido libre de la presente divulgacion (el compuesto que tiene la formula (I)) en un disolvente organico, donde el disolvente organico se selecciona entre el grupo que consiste en metanol, etanol, acetona, acetato de etilo y tetrahidrofurano, preferiblemente tetrahidrofurano;
(b)
afadir una base a la mezcla con agitacion; donde la base puede ser una base organica o inorganica, tal como hidroxido de metal alcalino o hidroxido de metal alcalinoterreo, aminoacido basico, amina o amonio cuaternario;
(c)
obtener las sales farmaceuticamente aceptables del compuesto que tiene la formula (I),
donde las bases inorganicas incluyen hidroxidos de metales alcalinos que se seleccionan entre el grupo que consiste en el hidroxido sodico, hidroxido de litio, hidroxido potasico, hidroxido de calcio, hidroxido de magnesio; las aminas y los amonios cuaternarios se seleccionan entre el grupo que consiste en tetrametil amonio cuaternario, tetraetil amonio cuaternario, etanolamina, colina, lisina, arginina, metanamina, dimetilamina, trimetilamina, etilamina, dietilamina, trietilamina, dibencil etilendiamina, meglumina, piperazina y trometamina; preferiblemente dietilamina, etanolamina, piperazina, hidroxido de colina, meglumina y trometamina, mas preferiblemente etanolamina, hidroxido de colina, meglumina y trometamina, mucho mas preferiblemente etanolamina.
En la etapa (b), la proporcion de equivalencia del acido libre y la base era preferiblemente 1:5-5:1, mas preferiblemente 1:1-1:3, y mucho mas preferiblemente 1:1-1:2.
En la etapa (c), la separacion de sales preferiblemente incluia la filtracion directa de la mezcla de reaccion, la concentracion de la mezcla de reaccion y la recristalizacion en un disolvente organico. Las sales pueden secarse en la condicion tal como secado al vacio o secado al aire de alta temperatura.
Las reacciones de formacion de sales se realizan generalmente en condiciones de refrigeracion, temperatura ambiente o calentamiento. Sin embargo, cabe mencionar que la temperatura de la reaccion tiene influencia sobre la reaccion de formacion de sales, que se conoce bien por el experto en la tecnica. El intervalo de las temperaturas de reaccion de la presente divulgacion es de la temperatura ambiente al punto de ebullicion del disolvente de reaccion, preferiblemente 0-40 °C. El experto en la tecnica puede determinar facilmente la temperatura de reaccion mas preferible de las reacciones de formacion de sales mediante tecnicas convencionales.
La presente divulgacion se describe adicionalmente mediante los siguientes Ejemplos.
EJEMPLOS
Las estructuras de todos los compuestos se identificaron por resonancia magnetica nuclear (1H RMN) o espectrometria de masas (EM).
La RMN se realizo en un espectrometro Bruker AVANCE-400. Los disolventes apropiados incluian metanol deuterado (CD3OD), cloroformo deuterado (CDCl3) y dimetilsulfoxido deuterado (DMSO-d6) con tetrametilsilano (TMS) como patron interno y los desplazamientos quimicos se registraron como ppm (10-6).
La EM se determino en un espectrometro de masas FINNIGAN LCQ Ad (IEN) (Thermo, Modelo: Finnigan LCQ advantage MAX).
La EC50 se determino en un NovoStar ELIASA (BMG Co. Alemania).
El gel de silice de capa fina se refiere a una placa de gel de silice Yantai Huanghai HSGF254 o Qingdao GF254. La dimension de las placas usadas en el analisis por TLC fue de 0,15 mm-0,2 mm, y la dimension de las placas usadas en la purificacion del producto fue de 0,4 mm-0,5 mm.
La cromatografia en columna uso generalmente gel de silice de malla 200-300 Yantai Huanghai como vehiculo.
El analisis por HPLC se determino en un espectrometro de cromatografia liquida de alto rendimiento Agilent 1200DAD (columna cromatografica Sunfire C18 150 x 4,6 mm) y un espectrometro de cromatografia liquida de alto rendimiento Waters 2695-2996 (columna cromatografica Gimini C18 150 x 4,6 mm).
Las reacciones de hidrogenacion a presion se realizaron con un espectrometro de hidrogenacion Parr 3916EKX y un generador de hidrogeno QL. Las reacciones por microondas se realizaron con un reactor de microondas CEM Discover-S 908860.
En las reacciones de hidrogenacion, el sistema de reaccion generalmente se dejo al vacio y se cargo con hidrogeno, y la operacion se repitio tres veces.
El material de partida conocido de la invencion puede prepararse mediante el procedimiento de sintesis convencional en la tecnica, o adquirirse en ABCR GmbH & Co. KG, Acros Organics, Aldrich Chemical Company, Accela ChemBio Inc o Dari chemical Company, etc.
A menos que se indique otra cosa, las siguientes reacciones se pusieron en una atmosfera de nitrogeno.
La expresion "atmosfera de nitrogeno" se refiere a que un matraz de reaccion esta equipado con un globo de nitrogeno de 1 l.
La expresion "atmosfera de hidrogeno" se refiere a que un matraz de reaccion esta equipado con un globo de 5 hidrogeno de 1 l.
A menos que se indique otra cosa, la solucion usada en la siguiente reaccion se refiere a una solucion acuosa.
El termino "TLC" se refiere a cromatografia de capa fina.
10 El termino "HPLC" se refiere a cromatografia liquida de alto rendimiento. Condiciones de ensayo por HPLC: tiempo de realizacion: 30 min, temperatura de la columna: 30 °C PDA: 230 nm, fase movil: acetonitrilo:agua (acido trifluoroacetico al 0,1%) = 25:75, caudal: 1,0 mU minuto. Columna cromatografica: C18, 150 x 4,6 mm Gemini.
15 Ejemplo 1: bis-(etanolamina) del acido (Z)-2'-hidroxi-3'-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)hidrazino]-bifenil-3-carboxilico
20 Etapa 1
2-Bromo-6-nitro-fenol
25 Una solucion de 60 ml de acido sulfurico concentrado diluido con 186 ml de agua se enfrio a temperatura ambiente. A la solucion se le afadio nitrato sodico (79,2 g, 0,93 mol). Se afadio gota a gota 2-bromo-fenol 1a(60 ml, 0,52 mol) a tal velocidad que la temperatura de la reaccion se mantuvo por debajo de 25 °C. La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 2 horas. El precipitado se disolvio en 320 ml de acetato de etilo. La mezcla se lavo con agua y saturada salmuera, se seco sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtro y el filtrado se concentro a
30 presion reducida. El residuo resultante se purifico por cromatografia en columna sobre gel de silice para obtener el compuesto del titulo 2-bromo-6-nitro-fenol 1b (48,2 g, rendimiento del 42,8%) en forma de un solido de color amarillo. EM m/z (IEN): 218 [M+1]1H RMN (400 MHz, CDCl3): 8 11,18 (s, 1H), 8,12-8,15 (m, 1H), 7,89-7,91 (m, 1H), 6,88-7,02 (m, 1H)
35 Etapa 2
1-Bromo-2-metoxi-3-nitro-benceno
40 Se disolvio 2-bromo-6-nitro-fenol 1b(46,55 g, 0,214 mol) en 500 ml de acetona seguido de la adicion de carbonato
potasico (35,36 g, 0,26 mol) y yodometano (20,1 ml, 0,32 mol). La mezcla de reaccion se calento a reflujo a 70 °C durante 40 horas. La mezcla de reaccion se concentro a presion reducida y se diluyo con 1300 ml de acetato de etilo y 500 ml de agua. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (300 ml x 2). Los extractos organicos combinados se lavaron con acido clorhidrico 4 M y una solucion saturada de bicarbonato sodico y despues se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtraron y el filtrado se concentro a presion reducida. El residuo resultante se purifico por cromatografia en columna sobre gel de silice para obtener el compuesto del titulo 1-bromo-2-metoxi-3-nitrobenceno 1c (44,59 g, rendimiento del 90,0%) en forma de un solido de color pardo. EM m/z (IEN): 234 [M+1]
Etapa 3
Acido 2'-metoxi-3'-nitro-bifenil-3-carboxilico
Se disolvieron 1-bromo-2-metoxi-3-nitro-benceno 1c (23,25 g, 0,10 mol), acido 3-carboxifenil-boronico (19,5 g, 117 mmol) y tetraquis(trifenilfosfina)paladio (8,86 g, 7,7 mol) en una mezcla de disolvente de 100 ml de una solucion 2 M de carbonato sodico y 500 ml de 1,4-dioxano. La mezcla de reaccion se calento a reflujo a 105 °C durante 43 horas. La mezcla se concentro a presion reducida y despues se afadieron 300 ml de acido clorhidrico 6 N y 400 ml de acetato de etilo. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (200 ml x 2). Los extractos organicos combinados se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtraron y el filtrado se concentro a presion reducida para obtener el compuesto del titulo acido 2'-metoxi-3'-nitro-bifenil-3-carboxilico 1d (53,93 g) en forma de un solido de color amarillo claro. EM m/z (IEN): 272 [M-1] 1H RMN (400 MHz, CDCl3): 8 8,11 (s, 1H), 8,02 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,90-7,92 (m, 1H), 7,82-7,84 (m, 1H), 7,21-7,75 (m, 1H), 7,63-7,67 (m, 1H), 7,42-7,46 (m, 1H), 3,45 (s, 3H)
Etapa 4
Acido 2'-metoxi-3'-amino-bifenil-3-carboxilico
Se disolvio acido 2'-metoxi-3'-nitro-bifenil-3-carboxilico 1d (0,48 g, 1,74 mmol) en 60 ml de etanol seguido de la adicion de 0,5 g de paladio sobre carbono (10%) y formiato amonico (1,1 g, 17,4 mmol). La mezcla de reaccion se calento a reflujo a 80 °C durante 20 minutos. La mezcla se filtro y el filtrado se concentro a presion reducida y se seco para obtener el compuesto del titulo acido 2'-metoxi-3'-aminobifenil-3-carboxilico 1e (0,42 g, rendimiento del 93,3%) en forma de un solido de color blanco. EM m/z (IEN): 242 [M-1]
Etapa 5
Bromhidrato del acido 3'-amino-2'-hidroxi-bifenil-3-carboxilico
Empleo de un procedimiento conocido descrito en la solicitud de patente WO 01/89457: Se disolvio acido 2'-metoxi3'-amino-bifenil-3-carboxilico 1e (2,5 g, 10,3 mmol) en 100 ml de acido bromhidrico (40%). La mezcla de reaccion se calento a reflujo a 120 °C durante una noche. La mezcla se concentro a presion reducida y el residuo resultante se purifico por cromatografia en columna sobre gel de silice para obtener el compuesto del titulo bromhidrato del acido 3'-amino-2'-hidroxi-bifenil-3-carboxilico 1f (2,4 g, 88,8%) en forma de un solido de color caqui. EM m/z (IEN): 230 [M+1]
Etapa 6
Indan-5-il-hidrazina
Se disolvio indan-5-ilamina 19 (3,59 g, 27,0 mmol) en 20 ml de acido clorhidrico concentrado tras la refrigeracion en un bafo de hielo-agua y la mezcla se agito durante 10 minutos. Se afadieron gota a gota 10 ml de una solucion de nitrito sodico (1,86 g, 27,0 mmol) y la mezcla se agito durante 15 minutos mas y se uso en la siguiente reaccion.
Despues de la refrigeracion en un bafo de hielo-sal, se disolvio cloruro de estannoso dihidrato (24,4 g, 108,0 mmol) en 10 ml de acido clorhidrico concentrado seguido de la adicion de la mezcla auxiliar que se ha mencionado anteriormente. La mezcla de reaccion se calento hasta la temperatura ambiente y se hizo reaccionar durante 1,5 horas. Despues, la mezcla se ajusto a pH 9 con una solucion al 40% de hidroxido sodico tras la refrigeracion en un bafo de hielo-agua. La mezcla se extrajo con 400 ml de acetato de etilo y los extractos organicos combinados se concentraron a presion reducida y se secaron para obtener el compuesto del titulo indan-5-il-hidrazina 1h (2,05 g, rendimiento del 51,3%) en forma de un solido de color rojizo. EM m/z (IEN): 149 [M+1]
Etapa 7
2-Indan-5-il-5-metil-2,4-dihidro-pirazol-3-ona
Se disolvio indan-5-il-hidrazina 1h (2,05 g, 13,8 mmol) en 50 ml de acido acetico seguido de la adicion de acetoacetato de etilo (1,76 ml, 13,8 mmol). La mezcla de reaccion se calento a 100 °C durante una noche. La mezcla se concentro a presion reducida y el residuo resultante se purifico por cromatografia en columna sobre gel de silice para obtener el compuesto del titulo 2-indan-5-il-5-metil-2,4-dihidro-pirazol-3-ona 1i (1,84 g, rendimiento del 62,3%) en forma de un solido de color amarillo. EM m/z (IEN): 215 [M+1] 1H RMN (400 MHz, CDCl3): 8 7,69 (s, 1H), 7,60 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,24 (d, J = 8 Hz, 1H), 3,44 (s, 2H), 2,90 2,97 (m, 4H), 3,21 (s, 3H), 2,07 2,14 (m, 2H)
Etapa 8
Acido (Z)-2'-hidroxi-3'-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]-bifenil-3-carboxilico
Despues de la refrigeracion en un bafo de hielo-agua, se disolvio el bromhidrato del acido 3'-amino-2'-hidroxi-bifenil3-carboxilico 1f (267 mg, 1,16 mmol) en 10 ml de acido clorhidrico 1 M seguido de la adicion gota a gota de 10 ml de una solucion de nitrito sodico (88 mg, 1,28 mmol) y 2-indan-5-il-5-metil-2,4-dihidro-pirazol-3-ona 1i (249 mg, 1,16 mmol). La mezcla se ajusto a pH 8 con una solucion saturada de bicarbonato sodico seguido de la adicion de 10 ml de etanol. La mezcla de reaccion se calento hasta la temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se filtro, se seco y se re-cristalizo en metanol para obtener el compuesto del titulo acido (Z)-2'-hidroxi-3'-[N'-(1-indan-5-il-3metil-5-carbonil-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]-bifenil-3-carboxilico 1j (60 mg, rendimiento del 11,4%) en forma de un solido de color amarillo. EM m/z (IEN): 453 [M-1]1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 8 13,76 (s a, 1H), 13,03 (s a, 1H), 9,66 (s a, 1H), 8,13 (s, 1H), 7,96-7,98 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,60-7,82 (m, 5H), 7,28-7,30 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,13-7,17 (m, 2H), 2,86-2,93 (m, 4H), 2,34 (s, 3H), 2,032,10 (m, 2H)
Etapa 9
bis-(Etanolamina) del acido (Z)-2'-hidroxi-3'-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]bifenil-3-carboxilico
Se disolvio el acido (Z)-2'-hidroxi-3'-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-carbonil-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]-bifenil3-carboxilico 1j (454 mg, 1,0 mmol) en 16 ml de tetrahidrofurano. La mezcla de reaccion se afadio con etanolamina (143 mg, 2,35 mmol) y se agito durante 3 horas. La mezcla se filtro, la torta de filtro se lavo con tetrahidrofurano (2 ml x 3), y el producto solido se seco al vacio para obtener el compuesto del titulo bis-(etanolamina) del acido (Z)-2'hidroxi-3'-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-carbonil-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]-bifenil-3-carboxilico 1 (553 mg, rendimiento: 96,0%) en forma de un solido de color rojo intenso. EM m/z (IEN): 453 [M-1]1H RMN (400 MHz, CD3OD): 8 8,13 (s, 1H), 7,92 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,69 (m, 3H), 7,61 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,45 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,25 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,17 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,98 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 3,65 (t, J = 5,2 Hz, 4H), 2,95 (m, 4H), 2,86 (t, J = 5,2 Hz, 4H), 2,41 (s, 3H),2,12 (m, 2H)
Ejemplo 2: bis-(dietilamina) del acido (Z)-2'-hidroxi-3'-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)hidrazino]-bifenil-3-carboxilico
Se disolvio acido (Z)-2'-hidroxi-3'-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-carbonil-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]-bifenil-3carboxilico 1j (150 mg, 0,33 mmol) en 5 ml de tetrahidrofurano para formar una solucion de color rojo intenso. La solucion se afadio gota a gota con dietilamina (48 mg, 0,66 mmol) para formar una solucion de color purpura y se agito durante 2 horas. El solido se precipito en la solucion. La mezcla se filtro, la torta de filtro se lavo con tetrahidrofurano (1 ml x 3), y el producto solido se seco al vacio para obtener el compuesto del titulo bis-(dietilamina)
del acido (Z)-2'-hidroxi-3'-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-carbonil-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]-bifenil-3carboxilico 2 (132 mg, rendimiento: 66,7%) en forma de un solido de color rojo. HPLC: 99,2% EM m/z (IEN): 452,9 [M-1]
5 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 8 8,08(m, 1H), 7,94 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,72 (m, 2H), 7,62 (m, 2H), 7,55 (m, 1H), 7,25 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,14 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,07 (m, 1H), 2,89-2,98 (m, 12H), 2,38 (s, 3H), 2,09-2,14 (m, 2H), 1,34 (m, 12H)
Ejemplo 3: bis-(piperazina) del acido (Z)-2'-hidroxi-3'-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)10 hidrazino]-bifenil-3-carboxilico
Se disolvio acido (Z)-2'-hidroxi-3'-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-carbonil-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]-bifenil-3
15 carboxilico 1j (150 mg, 0,33 mmol) en 5 ml de tetrahidrofurano para formar una suspension de color rojo intenso. La mezcla de reaccion se afadio con piperazina (57 mg, 0,66 mmol) para formar una solucion de color purpura, y se agito a temperatura ambiente durante 2 horas. El solido se precipito en la solucion, se filtro, despues la torta de filtro se lavo con tetrahidrofurano (1 ml x 3) y se seco al vacio para obtener el compuesto del titulo bis-(piperazina) del acido (Z)-2'-hidroxi-3'-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-carbonil-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]-bifenil-3-carboxilico 3
20 (130 mg, rendimiento: 62,8%) en forma de un solido de color rojo intenso. HPLC: 98,5% EM m/z (IEN): 452,8 [M-1] 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 8 8,10 (s, 1H). 7,92 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,68 (m, 3H), 7,61 (m, 1H), 7,43 (m, 1H), 7,24 (d, J = 8,0 Hz, 1H). 7,15 (m, 1H), 7,00 (m, 1H), 2,89-2,95(m, 4H), 2,84 (s, 16H), 2,39 (s, 3H), 2,09-2,12 (m, 2H)
25 Ejemplo 4: bis-(etanolamina) del acido (Z)-5-(3-{N'-[1-(3,3-dimetil-indan-5-il)-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4ilideno]-hidrazino}-2-hidroxi-fenil)-furan-2-carboxilico Etapa 1
1-(3,3-dimetil-inden-5-il)hidrazina-1,2-dicarboxilato de di-terc-butilo
Se disolvio 6-bromo-1,1-dimetil-indano (preparado usando un procedimiento ya conocido: solicitud de patente WO 2005/066115) 4a (4,32 g, 19,27 mmol) en 40 ml de tetrahidrofurano y despues se afadio gota a gota butil litio (15,67 ml, 1,6 M, 25,05 mmol) a -78 °C. Despues de que la mezcla de reaccion se hizo reaccionar durante 40 minutos, se afadio entonces una solucion de azodicarboxilato de di-terc-butilo (5,32 g, 23,12 mmol) en 30 ml de tetrahidrofurano. La mezcla de reaccion se hizo reaccionar durante 3 horas mas a -78 °C. La mezcla de reaccion se afadio con 5 ml de metanol, despues se calento hasta la temperatura ambiente y se filtro mediante gel de silice. El filtrado se concentro a presion reducida y el residuo resultante se purifico por cromatografia en columna sobre gel de silice para obtener el compuesto del titulo 1-(3,3-dimetil-1H-inden-5-il)hidrazina-1,2-dicarboxilato de di-terc-butilo 5b (2,70 g, rendimiento del 37,2%) en forma de un solido de color amarillo.
Etapa 2
2-(3,3-Dimetil-indan-5-il)-5-metil-2,4-dihidro-pirazol-3-ona
Se disolvio 1-(3,3-dimetil-1H-inden-5-il)hidrazina-1,2-dicarboxilato de di-terc-butilo 4b (2,70 g, 7,18 mmol) en 100 ml de acido acetico seguido de la adicion de 20 ml de acido trifluoroacetico. Despues de que la mezcla se hiciera reaccionar a temperatura ambiente durante 2 horas, se afadio acetoacetato de etilo (0,98 g, 7,54 mmol). Despues, la mezcla se calento a 100 °C y se hizo reaccionar durante 2 horas. La mezcla se enfrio a temperatura ambiente y se concentro a presion reducida para retirar el acido acetico. La mezcla de reaccion se neutralizo por una solucion saturada de bicarbonato sodico, y despues se extrajo con acetato de etilo. Los extractos organicos combinados se lavaron con salmuera saturada, se secaron sobre sulfato sodico anhidro, se filtraron y se concentraron a presion reducida. El residuo resultante se purifico por cromatografia en columna sobre gel de silice para obtener el compuesto del titulo 2-(3,3-dimetil-indan-5-il)-5-metil-2,4-dihidro-pirazol-3-ona 5c (1,0 g, rendimiento del 47,7%) en forma de un solido de color pardo claro. EM m/z (IEN): 243 [M+1]
Etapa 3
2-(2-Metoxi-3-nitro-fenil)-4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolano
Se disolvieron 1-bromo-2-metoxi-3-nitro-benceno 1c (67 g, 289 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi-1,3,2dioxaborolano (110 g, 433 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paladio (11,80 g, 14,44 mmol) y acetato potasico (71 g, 724 mmol) en 600 ml de eter dimetilico del acido eteroxalico. La mezcla se calento a reflujo durante 17 horas. La mezcla se concentro a presion reducida y el residuo resultante se purifico por cromatografia en columna sobre gel de silice para obtener el compuesto del titulo 2-(2-metoxi-3-nitro-fenil)-4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolano 4d (50,5 g, 61,9%) en forma de un cristal de color amarillo.
Etapa 4
Acido 5-(2-metoxi-3-nitro-fenil)furan-2-carboxilico
Se disolvieron 2-(2-metoxi-3-nitro-fenil)-4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolano 4d (10 g, 35,85 mmol), acido 5bromofuran-2-carboxilico (5,47 g, 28,66 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paladio (2,07 g, 1,79 mmol) y carbonato sodico (7,60 g, 71,66 mmol) en la mezcla de disolvente de 200 ml de 1,4-dioxano y 30 ml de agua. La mezcla de reaccion se calento a reflujo durante 2,5 horas. La mezcla se filtro y el filtrado se concentro a presion reducida. El residuo se diluyo con 150 ml de agua y se ajusto a pH 3 con acido clorhidrico 1 M. Despues, la mezcla se filtro y la torta de filtro se lavo con 50 ml de la mezcla de disolvente de n-hexano/acetato de etilo (V/V = 1:1). El residuo se seco para obtener el compuesto del titulo acido 5-(2-metoxi-3-nitrofenil) furan-2-carboxilico 4e (4,23 g, rendimiento del 56,1%) en forma de un solido de color gris. EM m/z (IEN): 262 [M-1]
Etapa 5
Acido 5-(3-amino-2-metoxi-fenil)-furan-2-carboxilico
Se disolvio acido 5-(2-metoxi-3-nitro-fenil)furan-2-carboxilico 4e (4,23 g, 16,09 mmol) en 125 ml de acetato de etilo seguido de la adicion de 423 mg de paladio sobre carbono (10%) y formiato amonico (4,054 g, 64,35 mmol). La mezcla de reaccion se calento a reflujo durante 3,5 horas. La mezcla se concentro a presion reducida y el residuo resultante se purifico por cromatografia en columna sobre gel de silice para obtener el compuesto del titulo acido 5(3-amino-2-metoxi-fenil)-furan-2-carboxilico 4f (2,79 g, rendimiento del 74,4%) en forma de un solido de color verde claro. EM m/z (IEN): 232 [M-1]
Etapa 6
Bromhidrato del acido 5-(3-amino-2-hidroxi-fenil)-furan-2-carboxilico
Se disolvio acido 5-(3-amino-2-metoxi-fenil)-furan-2-carboxilico 4f (2,79 g, 11,97 mmol) en 25 ml de diclorometano seguido de la adicion gota a gota de tribromuro de boro (23,9 ml, 2,0 M). La mezcla de reaccion se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla se concentro a presion reducida despues de afadir 5 ml de metanol. El residuo se diluyo con 100 ml de acetato de etilo y se agito durante 1 hora. Despues, la mezcla se filtro y la torta de filtro se seco para obtener el compuesto del titulo bromhidrato del acido 5-(3-amino-2-hidroxi-fenil)-furan2-carboxilico 49 (1,24 g, rendimiento del 47,2%) en forma de un solido de color amarillo. EM m/z (IEN): 218 [M-1]
Etapa 7
Acido (Z)-5-(3-{N'-[1-(3,3-dimetil-indan-5-il)-3-metil-5-oxo-1, 5-dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}-2-hidroxi-fenil)furan-2-carboxilico
Se disolvio bromhidrato del acido (Z)-5-(3-amino-2-hidroxi-fenil)-furan-2-carboxilico 49 (333 mg, 1,1 mmol) en acido clorhidrico (3,7 ml, 1 M) tras la refrigeracion en un bafo de hielo-agua seguido de la adicion gota a gota de 1,5 ml de una solucion de nitrito sodico (85 mg, 1,22 mmol). Despues de que la mezcla se hiciera reaccionar durante 20 minutos, se afadieron sucesivamente 2-(3,3-dimetil-indan-5-il)-5-metil-2,4-dihidro-pirazol-3-ona 5c (242 mg, 1,0 mmol), bicarbonato sodico (1,4 g, 16,67 mmol) y 3 ml de etanol. La mezcla de reaccion se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. La mezcla se filtro y a la torta de filtro se le afadieron 20 ml de agua. La mezcla se ajusto a pH 3 4 con acido clorhidrico concentrado. La mezcla se filtro y la torta de filtro se seco y se purifico por cromatografia en columna sobre gel de silice para obtener el compuesto del titulo acido (Z)-5-(3-{N'-[1-(3,3-dimetilindan-5-il)-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}-2-hidroxi-fenil)-furan-2-carboxilico 4h (190 mg, rendimiento del 40,3%) en forma de un solido de color rojo. EM m/z (IEN): 470,9 [M-1] 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 8 13,74(s a, 1H), 13,15(s a, 1H), 9,99(s a, 1H), 7,71 (m, 3H), 7,55 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,20 (m, 2H), 7,15 (m, 1H), 2,86 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,33 (s, 3H), 1,92 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,26 (s, 6H)
Etapa 8
bis-(etanolamina) del acido (Z)-5-(3-{N'-[1-(3,3-dimetil-indan-5-il)-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]hidrazino}-2-hidroxi-fenil)-furan-2-carboxilico
Se disolvio acido (Z)-5-(3-{N'-[1-(3,3-dimetil-indan-5-il)-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}-2hidroxi-fenil)-furan-2-carboxilico 4h (2,3 g, 4,87 mmol) en 20 ml de tetrahidrofurano. La solucion se afadio con etanolamina (594 mg, 9,75 mmol) y se agito durante 1 hora a temperatura ambiente. La mezcla se filtro, la torta de filtro se lavo con tetrahidrofurano (1 ml x 3) y se seco al vacio para obtener el compuesto del titulo bis-(etanolamina) del acido (Z)-S-(3-{N'-[1-(3,3-dimetil-indan-5-il)-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}-2-hidroxi-fenil)furan-2-carboxilico 4 (2,5 g, rendimiento: 86,4%) en forma de un solido de color negro. EM m/z (IEN): 470,8 [M-1] 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 8 7,57 (m, 4H), 7,19 (m, 1H), 7,03 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,95 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,71 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 3,73 (t, J = 5,2 Hz, 4H), 2,98 (m, 4H), 2,88 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,36 (s, 3H), 1,96 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,29 (s, 6H)
Ejemplo 5: bis-(dietilamina) del acido (Z)-5-(3-{N'-[1-(3,3-dimetil-indan-5-il)-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4ilideno]-hidrazino}-2-hidroxi-fenil)-furan-2-carboxilico
Se disolvio acido (Z)-5-(3-{N'-[1-(3,3-dimetil-indan-5-il)-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}-2hidroxi-fenil)-furan-2-carboxilico 4h (150 mg, 0,32 mmol) en 5 ml de tetrahidrofurano para formar una suspension de color rojo intenso. La mezcla de reaccion se afadio con dietilamina (46 mg, 0,63 mmol) para formar una solucion de color purpura, y se agito a temperatura ambiente durante una noche. La solucion se concentro a presion reducida, el residuo resultante se purifico por cromatografia en columna sobre gel de silice (hexano:acetato de etilo = 10:1), y el producto solido se seco al vacio para obtener el compuesto del titulo bis(dietilamina) del acido (Z)-5-(3-{N'-[1-(3,3dimetil-indan-5-il)-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}-2-hidroxi-fenil)-furan-2-carboxilico 5 (170 mg, rendimiento: 86,7%) en forma de un solido de color rojo intenso. HPLC: 94,6% EM m/z (IEN): 471,9 [M-1] 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 8 7,60 (m, 4H), 7,19 (m, 1H), 7,04 (m, 1H), 6,87 (m, 2H), 2,98 (c, J = 7,2 Hz, 8H), 2,89 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,36 (s, 3H), 1,96 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,27 (t, J = 7,2 Hz, 12H), 1,25 (s, 6H)
Ejemplo 6: bis-(piperazina) del acido (Z)-5-(3-{N'-[1-(3,3-dimetil-indan-5-il)-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4ilideno]-hidrazino}-2-hidroxi-fenil)-furan-2-carboxilico
Se disolvio acido (Z)-5-(3-{N'-[1-(3,3-dimetil-indan-5-il)-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}-2hidroxi-fenil)-furan-2-carboxilico 4h (150 mg, 0,32 mmol) en 5 ml de tetrahidrofurano para formar una suspension de color rojo intenso. La mezcla de reaccion se afadio con piperazina (55 mg, 0,64 mmol) para formar una solucion de color purpura, y se agito a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se filtro, la torta de filtro se lavo con tetrahidrofurano (1 ml x 3), y el producto solido se seco al vacio para obtener el compuesto del titulo bis-(piperazina) del acido (Z)-5-(3-{N'-[1-(3,3-dimetil-indan-5-il)-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}-2-hidroxi-fenil)furan-2-carboxilico 6 (158 mg, rendimiento: 77,1%) en forma de un solido de color rojo. HPLC: 99,28% EM m/z (IEN): 471,8 [M-1] 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 8 7,64-7,66 (m, 3H), 7,55 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,21(d, J = 8,0 Hz,1H), 7,04 (m, 1H), 6,876,88 (m, 2H), 3,01 (s, 16H), 2,90 (t, J = 7,2 Hz,2H), 2,38 (s, 3H), 1,97 (t, J = 7,2 Hz,2H), 1,29 (s, 6H) Ejemplo 7: bis-(etanolamina) del acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico
Etapa 1
(5,6,7,8-Tetrahidro-naftalen-2-il)-hidrazina
10 Se disolvio 5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-ilamina 7a (3,68 g, 25,0 mmol) en 20 ml de acido clorhidrico concentrado y la mezcla se agito durante 10 minutos tras la refrigeracion en un bafo de hielo-agua. Se afadieron gota a gota 10 ml de una solucion de nitrito sodico (1,72 g, 25,0 mmol) y la mezcla se agito durante 15 minutos mas y se uso en la siguiente reaccion.
15 Despues de la refrigeracion en un bafo de hielo-sal, se disolvio cloruro estannoso dihidrato (22,6 g, 100 mmol) en 10 ml de acido clorhidrico concentrado seguido de la adicion de la mezcla auxiliar que se ha mencionado anteriormente. La mezcla de reaccion se calento hasta la temperatura ambiente y se hizo reaccionar durante 1,5 horas. Despues, la mezcla se ajusto a pH 9 con una solucion al 40% de hidroxido sodico. La mezcla se extrajo con 400 ml de acetato de
20 etilo, despues los extractos organicos combinados se concentraron a presion reducida y se secaron para obtener el compuesto del titulo (5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-hidrazina 7b (2,19 g, rendimiento del 53,7%) en forma de un aceite de color amarillo. EM m/z (IEN): 163 [M+1]
25 Etapa 2
5-Metil-2-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-2,4-dihidro-pirazol-3-ona
Se disolvio (5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-hidrazina 7b (2,0 g, 12,3 mmol) en 50 ml de acido acetico seguido de la
30 adicion de acetoacetato de etilo (1,57 ml, 12,3 mmol). La mezcla de reaccion se calento a 100 °C durante una noche. La mezcla se concentro a presion reducida y el residuo resultante se purifico por cromatografia en columna sobre gel de silice para obtener el compuesto del titulo 5-metil-2-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-2,4-dihidro-pirazol-3-ona 7c (1,58 g, rendimiento del 56,2%) en forma de un aceite incoloro. EM m/z (IEN): 457 [2M+1]
35 1H RMN (CDCl3): 8 7,54-7,58 (m, 2H), 7,09 (d, J = 8 Hz, 1H), 3,43 (s, 2H), 2,77-2,81 (m, 4H), 2,21 (s, 3H), 1,80-1,83 (m, 4H).
Etapa 3
40 Acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}fenil)-furan-2-carboxilico
Se disolvio bromhidrato del acido 5-(3-amino-2-hidroxi-fenil)-furan-2-carboxilico 49 (292 mg, 0,98 mmol) en 3,3 ml de acido clorhidrico 1 M tras la refrigeracion en un bafo de hielo-agua seguido de la adicion gota a gota de 1,3 ml de una solucion de nitrito sodico (74 mg, 1,07 mmol). Despues de que la mezcla se agitara durante 20 minutos, se afadio 5-metil-2-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-2,4-dihidro-pirazol-3-ona 7c (200 mg, 0,88 mmol). La mezcla se ajusto a pH 8-9 mediante una adicion en lotes de una solucion de bicarbonato sodico (1,226 g, 14,6 mmol). Las burbujas generadas se inactivaron con 2 ml de etanol. La mezcla de reaccion se calento hasta la temperatura ambiente y se hizo reaccionar durante una noche. La mezcla se filtro y la torta de filtro se disolvio en 20 ml de agua. Despues de mezclarla bien, la mezcla se ajusto a pH 3-4 con acido clorhidrico concentrado, se filtro y se seco. El producto en bruto se purifico por HPLC para obtener el compuesto del titulo acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico 7d (160 mg, rendimiento del 39,8%) en forma de un solido de color rojo. EM m/z (IEN): 457 [M-1] 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 8 7,71(d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,63 (m, 2H), 7,56 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 7,22 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,13 (m, 2H), 2,75 (m, 4H), 2,33 (s, 3H),1,76 (m, 4H)
Etapa 4
bis-(etanolamina) del acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-di-hidro-pirazol4-ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico
Se disolvio acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico 7d (3,3 g, 7,2 mmol) en 15 ml de tetrahidrofurano. La solucion de reaccion se afadio gota a gota lentamente con etanolamina (0,88 g, 13 mmol), y se agito durante 1,5 horas a 15-20 °C. Una gran cantidad de solido se precipito en la solucion, se filtro, despues la torta de filtro se lavo con tetrahidrofurano (10 ml x 3) y se seco al vacio para obtener el compuesto del titulo bis-(etanolamina) del acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico 7 (3 g, rendimiento: 74%) en forma de un solido de color rojo intenso. HPLC: 99,3% EM m/z (IEN): 456,8 [M-1] 1H RMN (400 MHz, CH3OD): 87,51 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,44-7,46 (m, 3H), 6,93-6,98 (m, 2H), 6,88 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,67 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 3,61 (t, J = 5,2 Hz, 4H), 2,86 (t, J = 5,2 Hz, 4H), 2,65-2,70 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 1,70-1,72 (s, 3H)
Ejemplo 8: bis-(colina) del acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidropirazol-4-ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico
Se disolvio acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]hidrazin}l-fenil)-furan-2-carboxilico 7d (100 mg, 0,22 mmol) en 5 ml de tetrahidrofurano para formar una suspension de color rojo intenso. La mezcla de reaccion se afadio con una solucion al 45% de hidroxido de colina en metanol (45 mg, 0,44 mmol) para formar una solucion de color purpura, y se agito durante 1 hora a temperatura ambiente. El solido se precipito en una solucion, se filtro, despues la torta de filtro se lavo con tetrahidrofurano (1 ml x 3) y se seco al vacio para obtener el compuesto del titulo bis-(colina) del acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico 8 (140 mg, rendimiento: 96,6%) en forma de un solido de color rojo intenso. HPLC: 98,82% EM m/z (IEN): 457,8 [M-1] 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 87,74 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,60 (m, 3H), 7,08 (m, 3H), 6,91 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 3,96 (m, 4H), 3,45 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 3,18 (s, 18H), 2,80 (m, 4H), 2,38 (s, 3H),1,84 (m, 4H)
Ejemplo 9: bis-(dietilamina) del acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico
Se disolvio acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico 7d (100 mg, 0,22 mmol) en 5 ml de tetrahidrofurano para formar una suspension 5 de color rojo intenso. La mezcla de reaccion se afadio gota a gota con dietilamina (32 mg, 0,44 mmol) para formar una solucion de color purpura, y se agito a temperatura ambiente durante una noche. El solido se precipito en una solucion, se filtro, y la torta de filtro se lavo con tetrahidrofurano (1 ml x 3), el solido se seco al vacio para obtener el compuesto del titulo bis-(dietilamina) del acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico 9 (77 mg, rendimiento: 58,3%) en forma de un solido
10 de color rojo intenso. HPLC: 99,1% EM m/z (IEN): 457,9 [M-1] 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 8 7,59(m, 4H), 7,08 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,04 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,94 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,82 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 2,99 (c, J = 7,2 Hz, 8H), 2,79 (m, 4H), 2,36 (s, 3H), 1,82 (t, J = 3,2 Hz, 4H),1,27 (t, J =
15 7,2 Hz, 12H)
Ejemplo 10: bis-(meglumina) del acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico
Se suspendio acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico 7d (100 mg, 0,22 mmol) en 5 ml de tetrahidrofurano para formar una suspension de color rojo intenso. La mezcla de reaccion se afadio con meglumina (85 mg, 0,44 mmol), y se agito a
25 temperatura ambiente durante una noche. La solucion resultante se afadio con 4 ml de metanol y se concentro a presion reducida para obtener el compuesto del titulo bis-(meglumina) del acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-(N'-[3-metil-5-oxo1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico 10 (168 mg, rendimiento: 90,8%) en forma de un solido de color rojo intenso. HPLC: 97,7%
30 EM m/z (IEN): 457,8 [M-1] 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 8 7,56 (m, 4H), 7,06 (m, 2H), 6,98 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,75 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 4,08 (m, 2H), 3,81 (m, 2H), 3,77 (m, 2H), 3,63 (m, 6H), 3,11 (m, 4H), 2,76 (m, 4H), 2,64 (s, 6H), 2,33 (s, 3H), 1,79 (m, 4H)
Ejemplo 11: bis-(piperazina) del acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,535 dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico
Se disolvio acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico 7d (100 mg, 0,22 mmol) en 5 ml de tetrahidrofurano para formar una suspension 5 de color rojo intenso. La mezcla de reaccion se afadio con piperazina (37 mg, 0,44 mmol) para formar una solucion de color purpura, y se agito durante 2 horas a temperatura ambiente. El solido se precipito en una solucion, se filtro, despues la torta de filtro se lavo con tetrahidrofurano (1 ml x 3) y se seco al vacio para obtener el compuesto del titulo bis-(piperazina) del acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidropirazol-4-ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico 11 (120 mg, rendimiento: 87,6%) en forma de un solido de color
10 rojo intenso. HPLC: 98,8% EM m/z (IEN): 457,8 [M-1] 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 8 7,59(m, 4H), 7,08 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,04 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,87 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,82 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 3,00 (s, 16H), 2,78 (m, 4H), 2,36 (s, 3H), 1,81 (m, 4H)
15 Ejemplo 12: bis-(trometamol) del acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico
20 Se disolvio acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico 7d (100 mg, 0,22 mmol) en 5 ml de tetrahidrofurano para formar una suspension de color rojo intenso. La mezcla de reaccion se afadio con trometamol (53 mg, 0,44 mmol) para formar una solucion de color pardo, y se agito a temperatura ambiente durante una noche. El solido se precipito en una solucion, se filtro,
25 despues la torta de filtro se lavo con tetrahidrofurano (1 ml x 3) y se seco al vacio para obtener el compuesto del titulo bis-(trometamol) del acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidropirazol-4-ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico 12 (142 mg, rendimiento: 92,8%) en forma de un solido de color oscuro. HPLC: 94,0%
30 EM m/z (IEN): 457,8 [M-1] 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 8 7,58(m, 4H), 7,05 (m, 2H), 6,96 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,90 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 3,65 (s, 12H), 2,76 (m, 4H), 2,33 (s, 3H), 1,80 (m, 4H)
Ejemplo 13: bis-(dibenciletilendiamina) del acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-235 il)-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico
Se disolvio acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico 7d (100 mg, 0,22 mmol) en 5 ml de tetrahidrofurano para formar una suspension 5 de color rojo intenso. La mezcla de reaccion se afadio con dibenciletilendiamina (104 mg, 0,44 mmol) para formar una solucion de color pardo, y se agito durante 2 horas a temperatura ambiente. La solucion resultante se afadio con 4 ml de metanol y se concentro a presion reducida para obtener el compuesto del titulo bis(dibenciletilendiamina) del acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidropirazol-4-ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico 13 (167 mg, rendimiento: 81,8%) en forma de un solido de color
10 oscuro. HPLC: 96,8% EM m/z (IEN): 457,8 [M-1] 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 87,52-7,54 (m, 3H), 7,39 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,24-7,28 (m, 20H), 7,01-7,04 (m, 2H), 6,65-6,72 (m, 1H), 3,89 (s, 8H), 3,01 (s, 8H), 2,73 (m, 4H), 2,32 (s, 3H), 1,78 (m, 4H)
15 Ejemplo 14: Sal disodica del acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidropirazol-4-ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico
20 Se disolvio acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidro-piraznol-4ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico 7d (110 mg, 0,24 mmol) en 4 ml de tetrahidrofurano para formar una suspension de color rojo intenso. La mezcla de reaccion se afadio gota a gota con una solucion 1 M de hidroxido sodico (0,4 ml, 0,44 mmol) y se agito durante 2 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se filtro,
25 despues el filtrado se afadio con 4 ml de metanol y se concentro a presion reducida. El solido resultante se lavo con hexano para obtener el compuesto del titulo sal disodica del acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-di-hidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico 14 (115 mg, rendimiento: 81,8%) en forma de un solido de color oscuro. HPLC: 96,8%
30 EM m/z (IEN): 457,8 [M-1] 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 8 7,79(dd, J1 = 7,6 Hz, J2 = 1,2 Hz, 1H), 7,52 (m, 3H), 7,18 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,05 (m, 2H), 6,70 (m, 1H), 2,78 (m, 4H), 2,41 (s, 3H),1,82 (m, 4H)
Ejemplo 15: bis-(L-arginina) del acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,535 dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico
Se disolvio acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico 7d (100 mg, 0,22 mmol) en 5 ml 1 de tetrahidrofurano para formar una suspension de color rojo intenso La mezcla de reaccion se afadio con L-arginina (76 mg, 0,44 mmol) y 2 ml de agua, se agito durante 2 horas a temperatura ambiente. La solucion de reaccion se concentro a presion reducida, se afadio con 5 ml de acetato de etilo. El solido se precipito en la solucion, se filtro, despues la torta de filtro se seco al vacio para obtener el compuesto del titulo bis-(L-arginina) del acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-di-hidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico 15 (168 mg, rendimiento: 95,5%) en forma de un solido de color oscuro. HPLC: 97,5% EM m/z (IEN): 457,9 [M-1] 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 8 7,59(m, 4H), 7,06 (m, 2H), 6,98 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,92 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 3,57 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,19 (m, 4H), 2,78 (m, 4H), 2,36 (s, 3H),1,83 (m, 8H), 1,73 (m, 4H)
Ejemplo 16: bis-(etanolamina) del acido (Z)-5-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4ilideno)-hidrazino]-fenil}-furan-2-carboxilico
Etapa 1
Acido (Z)-5-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]-fenil}-furan-2carboxilico
Se disolvio bromhidrato del acido 5-(3-Amino-2-hidroxi-fenil)-furan-2-carboxilico 49 (300 mg, 1,0 mmol) en acido clorhidrico (3,4 ml, 1 M) seguido de la adicion gota a gota de 1,2 ml de una solucion de nitrito sodico (73 mg, 1,05 mmol) tras la refrigeracion en un bafo de hielo-agua. Despues de hacer reaccionar la mezcla durante 10 minutos, se afadieron sucesivamente 2-indan-5-il-5-metil-2,4-dihidro-pirazol-3-ona 1i (193 mg, 0,9 mmol), bicarbonato sodico (1,26 g, 15 mmol) y 4,4 ml de etanol. La mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 24 horas. La mezcla se filtro y la torta de filtro se lavo con 20 ml de agua y despues se disolvio en 20 ml de agua. Despues de la refrigeracion en un bafo de hielo-agua, la mezcla se ajusto a pH <5 con acido clorhidrico concentrado, se filtro y se seco para obtener el compuesto del titulo acido (Z)-5-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4
ilideno)-hidrazino]-fenil}-furan-2-carboxilico 16a (287 mg, rendimiento del 71,8%) en forma de un solido de color amarillo. EM m/z (IEN): 443 [M-1] 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 8 13,73(s a, 1H), 9,97 (s a, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,70 (m, 2H), 7,57 (m, 1H), 7,36 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,22 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,15 (m, 1H), 2,89 (m, 4H), 2,32 (s, 3H),2,03 (m, 2H)
Etapa 2
bis-(etanolamina) del acido (Z)-5-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]fenil}-furan-2-carboxilico
Se disolvio acido (Z)-5-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]-fenil}-furan2-carboxilico 16a (1,825 g, 4,11 mmol) en 20 ml de tetrahidrofurano. La mezcla de reaccion se afadio con etanolamina (501 mg, 8,22 mmol), y se agito durante 2 horas a temperatura ambiente. El solido se precipito en una solucion, se filtro, despues la torta de filtro se lavo con tetrahidrofurano (1 ml x 3) y se seco al vacio para obtener el compuesto del titulo bis-(etanolamina) del acido (Z)-5-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol4-ilideno)-hidrazino]-fenil}-furan-2-carboxilico 16 (1,615 g, rendimiento: 69,4%) en forma de un solido de color rojo intenso. EM m/z (IEN): 443 [M-1] 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 8 7,67(s, 1H), 7,53 (m, 3H), 7,21(d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,02 (m, 1H), 6,97 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,70 (m, 1H), 3,70 (m, 4H), 2,92 (m, 4H), 2,88 (m, 4H), 2,35 (s, 3H), 2,08 (m, 2H)
Ejemplo 17: bis-(dietilamina) del acido (Z)-5-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)hidrazino]-fenil}-furan-2-carboxilico
Se suspendio acido (Z)-5-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]-fenil}furan-2-carboxilico 16a (150 mg, 0,38 mmol) en 5 ml de tetrahidrofurano para formar una suspension de color rojo intenso. La mezcla de reaccion se afadio gota a gota con dietilamina (49 mg, 0,67 mmol) para formar una solucion de color purpura, y se agito durante 2 horas a temperatura ambiente. El solido se precipito en una solucion, se filtro, despues la torta de filtro se lavo con tetrahidrofurano (1 ml x 3) y se seco al vacio para obtener el compuesto del titulo bis-(dietilamina) del acido (Z)-5-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)hidrazino]-fenil}-furan-2-carboxilico 17 (163 mg, rendimiento: 81,9%) en forma de un solido de color rojo intenso. HPLC: 99,18% EM m/z (IEN): 442,7 [M-1] 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 8 7,71 (s, 1H), 7,60 (m, 3H), 7,24 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,04 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,95 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,82 (m, 1H), 3,73 (m, 2H), 2,95 (m, 8H), 2,37 (s, 3H), 2,13 (m, 2H), 1,87 (m, 2H), 1,28 (m, 12H)
Ejemplo 18: bis-(piperazina) del acido (Z)-5-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)hidrazino]-fenil}-furan-2-carboxilico Se disolvio acido (Z)-5-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]-fenil}-furan2-carboxilico 16a (150 mg, 0,38 mmol) en 5 ml de tetrahidrofurano para formar una suspension de color rojo intenso.
5 La mezcla de reaccion se afadio con piperazina (58 mg, 0,68 mmol) para formar una solucion de color purpura, y se agito durante 3 horas a temperatura ambiente. El solido se precipito en una solucion, se filtro, despues la torta de filtro se lavo con tetrahidrofurano (1 ml x 3) y se seco al vacio para obtener el compuesto del titulo bis-(piperazina) del acido (Z)-5-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]-fenil}-furan-2carboxilico 18 (185 mg, rendimiento: 88,9%) en forma de un solido de color rojo intenso.
10 HPLC: 96,52% EM m/z (IEN): 443,2 [M-1] 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 87,73 (s, 1H), 7,61-7,64 (m, 2H), 7,55 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,05 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,78-6,90 (m, 2H), 3,03 (s, 16H), 2,89-2,95 (m, 4H), 2,35 (s, 3H), 2,12 (t, J = 7,2 Hz, 4H)
15 Ejemplo 19: bis-(etanolamina) del acido (Z)-4-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4ilideno)-hidrazino]-fenil}-tiofeno-2-carboxilico
20 Etapa 1
Acido 4-(3-nitro-2-metoxi-fenil)-tiofeno-2-carboxilico
25 Se disolvieron 2-(2-metoxi-3-nitro-fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano 4d (0,81 g, 2,9 mmol), acido 4-bromotiofeno-2-carboxilico (0,3 g, 1,45 mmol), tetraquis (trifenilfosfina)paladio (80 mg, 0,073 mmol) y carbonato sodico (0,31 g, 2,9 mmol) en una mezcla de disolvente de 20 ml de 1,4-dioxano y 10 ml de agua. La reaccion se calento a
reflujo durante 0,5 horas. La mezcla se ajusto a pH 3 con acido clorhidrico 1 N y se extrajo con acetato de etilo (20 ml x 3). Los extractos organicos combinados se concentraron a presion reducida y el residuo se purifico por cromatografia en columna sobre gel de silice para obtener el compuesto del titulo acido 4-(3-nitro-2-metoxifenil)tiofeno-2-carboxilico 19a (0,54 g) en forma de un aceite de color pardo, que se uso directamente en la siguiente etapa. EM m/z (IEN): 277,6 [M-1]
Etapa 2
Acido 4-(3-amino-2-metoxi-fenil)-tiofeno-2-carboxilico
Se disolvio acido 4-(3-nitro-2-metoxi-fenil)-tiofeno-2-carboxilico 19a (400 mg, 1,45 mmol) en 30 ml de acetato de etilo seguido de la adicion de 100 mg de paladio sobre carbono (10%) y formiato amonico (360 mg, 5,8 mmol). La mezcla se calento a reflujo durante 3 horas. La mezcla se filtro y se concentro a presion reducida para obtener el compuesto del titulo acido 4-(3-amino-2-metoxi-fenil)-tiofeno-2-carboxilico 19b (410 mg) en forma de un aceite de color pardo, que se uso directamente en la siguiente etapa. EM m/z (IEN): 247,8 [M-1]
Etapa 3
Bromhidrato del acido 4-(3-amino-2-hidroxi-fenil)-tiofeno-2-carboxilico
Se disolvio bromhidrato del acido 4-(3-amino-2-metoxi-fenil)-tiofeno-2-carboxilico 19b (360 mg, 1,45 mmol) en 5 ml de diclorometano seguido de la adicion gota a gota de tribromuro de boro (2,8 ml, 5,6 mmol). La mezcla de reaccion se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 4,5 horas. La mezcla de reaccion se afadio con 5 ml de metanol y se concentro a presion reducida. El residuo se diluyo con 10 ml de acetato de etilo y se agito durante 0,5 horas. La mezcla se filtro y la torta de filtro se seco para obtener el compuesto del titulo bromhidrato del acido 4-(3-amino-2hidroxi-fenil)-tiofeno-2-carboxilico 19c (80 mg, rendimiento del 17,5%) en forma de un solido de color gris. EM m/z (IEN): 236,1 [M+1]
Etapa 4
Acido (Z)-4-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]-fenil}-tiofeno-2carboxilico
Se disolvio bromhidrato del acido 4-(3-amino-2-hidroxi-fenil)-tiofeno-2-carboxilico 19c (120 mg, 0,38 mmol) en 2,7 ml de acido clorhidrico 1 M tras la refrigeracion en un bafo de hielo-agua seguido de la adicion gota a gota de 0,45 ml de una solucion de nitrito sodico (29 mg, 0,42 mmol). Despues de que se hiciera reaccionar la mezcla durante 20 minutos, se afadio 2-indan-5-il-5-metil-2,4-dihidro-pirazol-3-ona 1i (73 mg, 0,34 mmol). La mezcla se ajusto a pH 8 con una solucion saturada de bicarbonato sodico seguido de la adicion de 2 ml de etanol. La mezcla de reaccion se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. La mezcla se filtro y la torta de filtro se afadio a 20 ml de agua. La mezcla se ajusto a pH 3-4 con acido clorhidrico concentrado y se filtro. Despues, a la torta de filtro se le afadieron 5 ml de acetato de etilo y la mezcla se agito durante 1 hora. La mezcla se filtro y la torta de filtro se seco para obtener el compuesto del titulo acido (Z)-4-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4ilideno)-hidrazino]-fenil}-tiofeno-2-carboxilico 19d (45 mg, rendimiento del 28,7%) en forma de un solido de color amarillo. EM m/z (IEN): 458,8 [M-1] 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 8 13,79 (s a, 1H), 9,68 (s a, 1H), 8,13 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 8,05 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,67 (m, 2H), 7,32 (m, 2H), 7,13 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 2,87 (m, 4H), 2,32 (s, 3H), 2,05 (m, 2H)
Etapa 5
bis-(etanolamina) del acido (Z)-4-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]fenil}-tiofeno-2-carboxilico
Se disolvio acido (Z)-4-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]-fenil}tiofeno-2-carboxilico 19d (1,3 g, 2,83 mmol) en 40 ml de tetrahidrofurano para formar una suspension de color rojo intenso. La mezcla de reaccion se afadio con etanolamina (344 mg, 5,65 mmol) para formar una solucion de color purpura, y se agito durante 2 horas a temperatura ambiente. Una gran cantidad de solido se precipito en la solucion, se filtro, despues la torta de filtro se lavo con tetrahidrofurano (1 ml x 3) y se seco al vacio para obtener el compuesto del titulo bis-(etanolamina) del acido (Z)-4-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)hidrazino]-fenil}-tiofeno-2-carboxilico 19 (1,513 g, rendimiento: 92,0%) en forma de un solido de color rojo intenso. HPLC: 98,65% EM m/z (IEN): 458,7 [M-1] 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 8 7,94 (s, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,68 (s, 1H), 7,55-7,59 (m, 2H), 7,28-7,30 (m, 1H), 7,22 (d,
J = 8,4 Hz, 1H), 6,83 (t, J = 8,0 Hz, 3H), 3,65-3,68 (m, 4H), 2,88-2,92 (m, 8H), 2,38 (s, 3H), 2,06-2,14 (m, 2H) Ejemplo 20: bis-(dietilamina) del acido (Z)-4-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)hidrazino]-fenil}-tiofeno-2-carboxilico
Se disolvio acido (Z)-4-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]-fenil}tiofeno-2-carboxilico 19d (150 mg, 0,33 mmol) en 5 ml de tetrahidrofurano para formar una suspension de color rojo intenso. La mezcla de reaccion se afadio gota a gota con dietilamina (49 mg, 0,66 mmol) para formar una solucion de color purpura, y se agito durante 2 horas a temperatura ambiente. El solido se precipito en una solucion, se filtro, despues la torta de filtro se lavo con tetrahidrofurano (1 ml x 3) y se seco al vacio para obtener el compuesto del titulo bis-(dietilamina) del acido (Z)-4-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)hidrazino]-fenil}-tiofeno-2-carboxilico 20 (157 mg, en forma de un solido de color rojo intenso). Rendimiento: 79,3%. HPLC: 98,98% EM m/z (IEN): 458,8 [M-1] 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 8 7,81(s, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,68-7,70 (m, 2H), 7,62 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,22-7,26 (m, 2H), 7,06 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 3,03 (c, J = 7,2 Hz, 8H), 2,90-2,97 (m, 4H), 2,37 (s, 3H), 2,07-2,15 (m, 2H), 1,29 (t, J = 7,2 Hz, 12H)
Ejemplo 21: bis-(piperazina) del acido (Z)-4-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)hidrazino]-fenil}-tiofeno-2-carboxilico
Se disolvio acido (Z)-4-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]-fenil}tiofeno-2-carboxilico 19d (150 mg, 0,33 mmol) en 5 ml de tetrahidrofurano para formar una suspension de color rojo intenso. La mezcla de reaccion se afadio con piperazina (56 mg, 0,65 mmol) para formar una solucion de color purpura, y se agito durante 2 horas a temperatura ambiente. El solido se precipito en una solucion, se filtro, despues la torta de filtro se lavo con tetrahidrofurano (1 ml x 3) y se seco al vacio para obtener el compuesto del titulo bis(piperazina) del acido (Z)-4-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]-fenil}tiofeno-2-carboxilico 21 (195 mg, rendimiento: 94,7%) en forma de un solido de color rojo intenso. HPLC: 98,17% EM m/z (IEN): 458,8 [M-1] 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 8 7,85 (s, 1H), 7,75 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,62 (m, 2H), 7,26 (m, 2H), 6,95 (t, 1H), 2,96 (m, 16H), 2,91 (m, 4H), 2,37 (s, 3H), 2,11 (m, 2H)
Ejemplo 22: bis-(etanolamina) del acido (Z)-4-(2-Hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftal-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico Etapa 1
Acido 4-bromo-furan-2-carboxilico
Se afadio una mezcla de acido 4,5-dibromo-furan-2-carboxilico 22a (5,5 g, 20,3 mmol) y 18 ml de hidroxido de amonio a 63 ml de agua seguido de la adicion de polvo de cinc (1,46 g, 22,33 mmol). Despues de que se completara la adicion, la mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 6 horas. La mezcla se ajusto a pH 3 con acido clorhidrico 1 M para formar una gran cantidad de precipitados. La mezcla se filtro y la torta de filtro se lavo con n-hexano (15 ml x 4) y se seco para obtener el compuesto del titulo acido 4-bromo-furan-2-carboxilico 22b (3,2 g, rendimiento del 83,1%) en forma de un solido de color blanco. EM m/z (IEN): 188,7 [M-1]
Etapa 2
Acido 4-(3-nitro-2-metoxi-fenil)-furan-2-carboxilico
Se disolvieron 2-(2-metoxi-3-nitro-fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1 ,3,2-dioxaborolano 4d (4 g, 14,34 mmol), acido 4-bromofuran-2-carboxilico 22b (2,18 g, 11,47 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paladio (829 mg, 0,717 mmol) y carbonato potasico (3,96 g, 28,68 mmol) en la mezcla de disolvente de 80 ml de 1,4-dioxano y 30 ml de agua. La mezcla de reaccion se calento a reflujo durante 2,5 horas. La mezcla se ajusto a pH 3 con acido clorhidrico 1 M y despues se extrajo con acetato de etilo (80 ml x 3). Los extractos organicos combinados se concentraron a presion reducida. El residuo se purifico por cromatografia en columna sobre gel de silice para obtener el compuesto del titulo acido 4-(3nitro-2-metoxi-fenil)-furan-2-carboxilico 22c (3,42 g, rendimiento del 90,7%) en forma de un aceite de color pardo. EM m/z (IEN): 261,8 [M-1]
Etapa 3 Acido 4-(3-amino-2-metoxi-fenil)-furan-2-carboxilico
Se disolvio acido 4-(3-nitro-2-metoxi-fenil)-furan-2-carboxilico 22c (500 mg, 1,9 mmol) en 15 ml de acetato de etilo seguido de la adicion de 100 mg de paladio sobre carbono y formiato amonico (429 mg, 7,6 mmol). La mezcla de reaccion se calento a reflujo durante 3 horas. La mezcla se filtro para retirar paladio sobre carbono y se concentro a presion reducida para obtener el compuesto del titulo acido 4-(3-amino-2-metoxi-fenil)-furan-2-carboxilico 22d (325 mg, rendimiento del 73,4%) en forma de un aceite de color amarillo. EM m/z (IEN): 231,8 [M-1]
Etapa 4
Bromhidrato del acido 4-(3-amino-2-hidroxi-fenil)-furan-2-carboxilico
Se disolvio acido 4-(3-amino-2-metoxi-fenil)-furan-2-carboxilico 22d (325 mg, 1,4 mmol) en 5 ml de diclorometano seguido de la adicion gota a gota de tribromuro de boro (2,8 ml, 5,6 mmol). La mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 4,5 horas. Se afadieron 5 ml de metanol y despues la mezcla se concentro a presion reducida. El residuo se diluyo con 10 ml de acetato de etilo y se agito durante 0,5 horas. La mezcla se filtro y la torta de filtro se seco para obtener el compuesto del titulo bromhidrato del acido 4-(3-amino-2-hidroxi-fenil)-furan-2carboxilico 22e (174 mg, rendimiento del 57,1%) en forma de un solido de color gris. EM m/z (IEN): 217,7 [M-1]
Etapa 5
Acido (Z)-4-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftal-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}fenil)-furan-2-carboxilico
Se disolvio acido 4-(3-amino-2-hidroxi-fenil)-furan-2-carboxilico 22e (170 mg, 0,57 mmol) en acido clorhidrico (1,9 ml, 1 M) tras la refrigeracion en un bafo de hielo-agua seguido de la adicion gota a gota de 0,7 ml de una solucion de nitrito sodico (43 mg, 0,63 mmol). Despues de que la mezcla se hiciera reaccionar durante 20 minutos, se afadio 5metil-2-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-2,4-dihidro-pirazol-3-ona 7c (116 mg, 0,51 mmol). La mezcla se ajusto a pH 8-9 con una solucion saturada de bicarbonato sodico seguido de la adicion de 2 ml de etanol. La mezcla se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 24 horas. La mezcla se filtro y despues a la torta de filtro se le afadieron 15 ml de agua. Despues de la refrigeracion en un bafo de hielo-agua, la mezcla se ajusto a pH 2-3 con acido clorhidrico concentrado y se filtro. La torta de filtro se lavo con acetato de etilo y se seco para obtener el compuesto del titulo acido (Z)-4-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftal-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico 22f (13 mg, rendimiento del 5,5%) en forma de un solido de color rojo. EM m/z (IEN): 456,7 [M-1] 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 8 13,75 (s a, 1H), 13,20 (s a, 1H), 9,68 (s a, 1H), 8,37 (s, 1H), 7,62-7,68 (m, 4H), 7,41-7,43 (m, 1H), 7,11-7,15 (m, 2H), 2,67-2,76 (m, 2H), 2,31 (s, 3H),1,75 (m, 4H)
Etapa 6
bis-(etanolamina) del acido (Z)-4-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftal-2-il)-1,5-di-hidro-pirazol-4ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico
Se disolvio acido (Z)-4-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftal-2-il)-1,5-di-hidro-pirazol-4-ilideno]hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico 22f (1,2 g, 2,6 mmol) en 20 ml de tetrahidrofurano para formar una suspension de color rojo intenso. La mezcla de reaccion se afadio con etanolamina (399 mg, 6,5 mmol) para formar una solucion de color purpura, y se agito durante 6 horas a temperatura ambiente. Una gran cantidad del solido se precipito en la solucion, se filtro, despues la torta de filtro se lavo con tetrahidrofurano (1 ml x 3) y se seco al vacio para obtener el compuesto del titulo bis-(etanolamina) del acido (Z)-4-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8tetrahidro-naftal-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico 22 (1,51 g, en forma de un solido de color rojo). Rendimiento del 72,8%. HPLC: 97,16% EM m/z (IEN): 456,7 [M-1] 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 8 8,20 (s, 1H), 7,51-7,56 (m, 3H), 7,31-7,35 (m, 2H), 7,07 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,89 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 3,68-3,71 (m, 4H), 2,90-2,95 (m, 4H), 2,76-2,81 (m, 4H), 2,39 (s, 3H), 1,80-1,85 (m, 4H)
Ejemplo 23: Colina del acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidropirazol-4-ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico
Se disolvio acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico (1,1 g, 2,4 mmol) en 19 ml del disolvente de la mezcla de acetato de etilo y etanol (v/v = 12:7), despues la mezcla de reaccion se calento a 40 °C y se agito durante 15 minutos para formar una suspension de color marron. La mezcla de reaccion se afadio lentamente con una solucion 1 M de colina en metanol (2,4 ml, 2,4 mmol) para formar una solucion de color negro hasta que el solido desaparecio. La solucion de reaccion se afadio con 1 ml de agua, despues se enfrio a 35 °C, se hizo reaccionar durante 3 horas y despues se agito durante 72 horas mas a temperatura ambiente. El solido de color naranja se precipito, se filtro, despues la torta de filtro se lavo con acetato de etilo (5 ml x 3) y se seco para obtener el compuesto del titulo colina del acido (Z)-5
5 (2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}-fenil)-furan-2carboxilico (620 mg, rendimiento: 46,0%) en forma de un solido de color naranja. EM m/z (IEN): 456,7 [M-1] 1H RMN (400 MHz, CD3OD): 8 7,66-7,57 (m, 4H), 7,09-7,04 (m, 3H), 6,92 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 4,03-3,99 (m, 2H), 3,51-3,48 (m, 2H), 3,22 (s, 9H), 2,81-2,75 (m, 4H), 2,33 (s, 3H), 1,83-1,81 (m, 4H).
Ejemplo 24: Composicion de los Comprimidos
La lactosa, celulosa microcristalina, almidon glicolato sodico, estearato de magnesio y el Compuesto del Ejemplo 7 se mezclan en las proporciones mostradas en la Tabla 1 que se indica a continuacion. Despues, la mezcla se 15 comprime en comprimidos.
Tabla 1
INGREDIENTE mg Compuesto del Ejemplo 7 8,45 Celulosa microcristalina 112
Lactosa 70 Almidon glicolato sodico 8 Estearato de magnesio 2
Ejemplo 25: Composicion Parenteral Inyectable
Una forma inyectable para administrar el Compuesto del Ejemplo 7 se produce agitando 5,0 mg del compuesto en 1,0 ml de solucion salina normal.
Ejemplo de Prueba 25 Ensayo de Solubilidad
De acuerdo con el procedimiento convencional para la determinacion de la solubilidad, la solubilidad de los compuestos de los Ejemplos y sus sales se ensayaron en tres sistemas diferentes: agua, acido clorhidrico al 0,1% y metanol.
La solubilidad se caracterizo por:
La expresion "muy soluble" se refiere a que 1 g (ml) de soluto puede disolverse en menos de 1 ml de
35 disolvente; La expresion "soluble libremente" se refiere a que 1 g (ml) de soluto puede disolverse en de 1 ml a 10 ml, sin incluir 10 ml de disolvente; El termino "soluble" se refiere a que 1 g (ml) de soluto puede disolverse en de 10 ml a 30 ml, sin incluir 30 ml de disolvente; La expresion "escasamente soluble" se refiere a que 1 g (ml) de soluto puede disolverse en de 30 ml a 100 ml, sin incluir 100 ml de disolvente; La expresion "ligeramente soluble" se refiere a que 1 g (ml) de soluto puede disolverse en de 100 ml a 1000 ml, sin incluir 1000 ml de disolvente; La expresion "muy ligeramente soluble" se refiere a que 1 g (ml) de soluto puede disolverse en de 1000 ml
45 a 10000 ml, sin incluir 10000 ml de disolvente; La expresion "practicamente insoluble o insoluble" se refiere a que 1 g (ml) de soluto no puede disolverse por completo en 10000 ml de disolvente.
Los resultados de la solubilidad se mostraron como se indica a continuacion: El resultado mostro que en comparacion con el compuesto del Ejemplo 1j, Ejemplo 4h, Ejemplo 7d, Ejemplo 16a y el Ejemplo 19d, la solubilidad de sus sales obviamente aumento, especialmente en agua y metanol. Especialmente, las sales del Ejemplo 4 y el Ejemplo 7 tenian relativamente mejora solubilidad en acido clorhidrico al 0,1%, y las dos sales fueron muy ligeramente solubles, mientras que las demas eran practicamente insolubles o insolubles.
Ejemplo N°
Solubilidad (mg/ml)
acido clorhidrico al 0,1%
agua metanol
1j
<0,001 <0,001 <0,001
1
<0,001 0,003 1,469
3
<0,001 2,290 1,534
4h
<0,001 <0,001 <0,001
4
0,024 2,905 19,001
6
<0,001 0,001 3,009
7d
<0,001 <0,001 <0,001
7
0,029 3,960 22,377
8
<0,001 5,049 4,595
9
<0,001 9,974 19,331
10
<0,001 3,715 3,417
11
<0,001 3,003 3,617
12
<0,001 5,945 18,823
13
<0,001 <0,001 15,432
14
<0,001 1,876 3,722
15
<0,001 0,645 3,023
16a
<0,001 <0,001 <0,001
17
<0,001 2,000 5,849
18
<0,001 2,741 6,096
19d
<0,001 <0,001 <0,001
20
<0,001 0,068 2,221
21
<0,001 0,814 2,416
23
<0,001 0,286 22,597
La estructura de los Compuestos del Ejemplo 1j, Ejemplo 4h, Ejemplo 7d, Ejemplo 16a y el Ejemplo 19d se mostro como se indica a continuacion:
Ejemplo N°
Estructura Compuesto
1j
acido (Z)-2'-hidroxi-3'-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-carbonil-1,5dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]-bifenil-3-carboxilico
4h
acido (Z)-5-(3-{N'-[1-(3,3-dimetil-indan-5-il)-3-metil-5-oxo-1,5dihidro-pirazol-4-ilideno]-hidrazino}-2-hidroxi-fenil)-furan-2carboxilico
7d
acido (Z)-5-(2-hidroxi-3-{N'-[3-metil-5-oxo-1-(5,6,7,8tetrahidro-naftalen-2-il)-1,5-dihidro-pirazol-4-ilideno]hidrazino}-fenil)-furan-2-carboxilico
16a
acido (Z)-5-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]-fenil}-furan-2-carboxilico
19d
acido (Z)-4-{2-hidroxi-3-[N'-(1-indan-5-il-3-metil-5-oxo-1,5dihidro-pirazol-4-ilideno)-hidrazino]-fenil}-tiofeno-2-carboxilico
Ensayo de Higroscopicidad
Prueba de higroscopicidad de los compuestos de la presente divulgacion despues un reposo durante 48 horas 15 Protocolo:
1. El frasco de pesadas de vidrio arido con un tapon (el diametro externo es de 50 mm, la altura es 15 mm) se puso a 25 °C ± 1 °C adecuadamente en una secadora termostatica (se puso una solucion saturada de sulfato de amonio en la parte inferior, la humedad era del 79%) el dia antes del ensayo, el peso exacto se
20 midio como (m1);
2.
El frasco de pesadas anterior se cubrio con los compuestos de la invencion (aproximadamente 1 g), y el espesor de los compuestos fue generalmente de 1 mm, el peso exacto se midio como (m2);
3.
La boca del frasco de pesadas se mantuvo abierto y se coloco con el tapon en las condiciones anteriores con temperatura y humedad constantes durante 48 horas;
5 4. Se puso el tapon de nuevo en la botella, el peso exacto se midio como (m3) m -m
3 2
Porcentaje de ganancia de peso = m2-m1 El grado de higroscopicidad se definio como se indica a continuacion: Deliquescer: Se vuelve liquido absorbiendo suficiente humedad. Alta higroscopicidad: el porcentaje de ganancia de peso por higroscopicidad no es menor del 15%.
15 Higroscopicidad: el porcentaje de ganancia de peso por higroscopicidad es menor del 15%, pero no inferior del 2%. Escasa higroscopicidad: el porcentaje de ganancia de peso por higroscopicidad es menor del 2%, pero no menor del 0,2%. Sin higroscopicidad o casi sin higroscopicidad: el porcentaje de ganancia de peso por higroscopicidad es menor del
0,2%. Los resultados de la higroscopicidad de los compuestos de la presente divulgacion se mostraron como se indica a continuacion:
Ejemplo N°
Porcentaje de ganancia de peso Higroscopicidad
7
1,2% Escasa higroscopicidad
8
13,9% Higroscopicidad
10
15,7% Alta higroscopicidad
12
2,71% Higroscopicidad
23
8,48% Higroscopicidad
Los resultados mostraron que en comparacion con las demas sales, la sal del Ejemplo 7, es decir, sal bis(etanolamina) del compuesto 7d, es menos higroscopica, y tenia mejora estabilidad en la humedad, lo que podria evitar los problemas potenciales del cambio de peso de los componentes activos durante la preparacion de capsulas
o comprimidos, es estable en gas, y es adecuada para la preparacion de una formulacion convencional y podria almacenarse a largo plazo.
ENSAYO BIOLOGICO
35 Ejemplo de Prueba 1: Efecto de la proliferacion de una serie de compuestos de TPO en una celula BAF3-TPOR.
1. Material y reactivos.
a) Medio RPMI 1640, polvo, 10 x 1 l, que contiene HEPES (Gibco, Catalogo N° 23400021). b) Suero Fetal Bovino (Gibco, Catalogo N° 10099-141). c) PENICILINA ESTREPTOMICINA SOL (Gibco, Catalogo N° 15140-122). d) Geneticina (G418) (Gibco, Catalogo N° 11811-098). e) IL-3 de raton recombinante (chemicon, Catalogo N° IL015). f) Mab de trombopoyetina R humana (TPO) (R&D, Catalogo N° MAB1016).
45 g) DMSO (AppliChem, Catalogo N° A3672). h) Kit de Mutagenesis Dirigida a Multiples Sitios QuikChange®, 10 Realizaciones (Stratagene ST200515). i) Cell Counting Kit-8 (Dojindo, Catalogo N° CK04-13) j) Celula BaF3 (Union cell culture center, Catalogo N° 0095) k) EX-EGFP-M02 (FulenGen, Catalogo N° EX- EGFP-M02 Control) l) EX-B0010-M02 (FulenGen, Catalogo N° EX-B0010-M02)
2. Proceso operativo:
55 (1) Construcciones plasmidicas: En base a la informacion de secuencia del receptor de TPO (TPOR) de Entrez (Gene ID: 4325, Refseq: NM 005373), la mutacion de sitio dual se realizo en el plasmido EX-B0010-M02 usando el Kit de Mutagenesis Dirigida a Multiples Sitios QuikChange(R) (Stratagene). La secuencia de cebadores que contenian multiples sitios de mutacion se disefo como se indica a continuacion:
5 g491 a: 5'-gggaacttcagatcagctgggaggagccg-3' g491a antisentido: 5'-cggctcctcccagctgatctgaagttccc-3'; c965t: 5'-caggaccatgctagctcccaaggcttcttct-3', c965t antisentido: 5'-agaagaagccttgggagctagcatggtcctg-3'.
10 Las celulas competentes de E. coli DH5a se transformaron con un plasmido mutado, y las colonias positivas se recogieron a traves de la seleccion de ampicilina. El resultado de la mutacion se confirmo por analisis de la secuencia.
(2) Linea celular transfectada estable BAF3-TPOR: El siguiente procedimiento se uso para construir la
15 celula BaF3 que sobreexpreso de forma estable el TPOR humana funcional. El plasmido EX-B0010-M02 mutado con exito (25 !g) que expreso el TPOR humano y el gen neomicina de deteccion se transfecto en celulas BaF3 de tipo natural (1 x 107) por electroporacion a 250 V durante 18 ms usando un generador de pulsos electrico (Electro Square Porator ECM830, BTX Division of Genetronic, Inc. Estados Unidos). Las celulas transfectadas estables BAF3-TPOR se seleccionaron con G418 (Gibco, Estados Unidos), despues
20 se incubaron en medio RPMI1640 mas FBS al 10% (Gibco, Estados Unidos), 800 ng/ml de G418, 5 ng/ml, rmIL-3 (Chemicon, Estados Unidos).
3. Ensayo de compuestos de deteccion
25 (1) Lavado de celulas por centrifugacion: Una cantidad adecuada de suspension celular se centrifugo a 1000 rpm durante 5 minutos, y el sobrenadante se desecho. Se afadieron 10 ml de medio de cultivo celular sin IL-3. Despues, la suspension celular resultante se centrifugo a 1000 rpm durante 5 minutos, y el sobrenadante se desecho.
(2) Se afadio 1 ml de medio de cultivo celular sin IL-3 para su igualacion, y se conto el numero de una 30 cantidad adecuada de suspension celular despues de la dilucion.
(3)
De acuerdo con el resultado del recuento celular, se preparo una suspension celular en una concentracion de 100.000 celulas/ml.
(4)
Se transfirieron 100 !l de suspension celular a cada pocillo de la placa de cultivo de 96 pocillos, y hubo
3 pocillos paralelos, es decir, hubo un grupo de control en blanco (B), un grupo de control negativo (N), un 35 grupo de control positivo de TPO (P) y un grupo de compuesto de prueba (S).
(5) El compuesto de prueba se disolvio en DMSO para preparar una solucion madre 10 mM, y despues la solucion se diluyo con medio RPMI 1640 en una serie de muestras de prueba a diferente concentracion: 30 !M, 10 !M, 3 !M, 1 !M, 0,3 !M, 0,1 !M, 0,03 !M, 0,01 !M, 0,003 !M, 0,001 !M.
(6)
Se transfirieron 10 !l de compuesto de prueba a cada pocillo respectivamente; al pocillo de control 40 positivo se le afadio 1 !l de rhTPO (10 !g/ml).
(7)
Las placas se incubaron en una incubadora en CO2 al 5% y a 37 °C durante 24 horas.
(8)
Despues de la incubacion, a cada pocillo se le afadieron 10 !l de solucion CCK-8 y las placas se incubaron en la incubadora durante 24 horas mas.
(9)
El valor DO se detecto a 450 nm por el lector de placas VICTOR3 (Perkin Elmer 1420-120). 45
4. Calculo Analitico
(1) La tasa de proliferacion se calculo como se indica a continuacion:
50 Tasa = [(S-B)/(P-B)] x 100%
S: Valor DO de los pocillos que contienen el compuesto de prueba.
B: Valor DO de los pocillos de control en blanco
P: Valor DO de los pocillos de control positivos 55 (2) El valor EC50 se calculo mediante el softtare Origin 7.0.
5. Resultados: EC50 de la actividad de TPO de los compuestos de la presente divulgacion
Ejemplo
EC50
Eltrombopag
299
1j
200
1
150
4h
32
4
25
Ejemplo
EC50
5
19
6
36
7d
21
7
19
8
4.4
9
14
10
16
11
21
12
14
13
20
14
19
15
16
16a
100
16
18
17
55
18
29
19d
43
19
37
20
51
21
116
22f
42
22
39
23
43
Los resultados del estudio mostraron que en comparacion con el acido libre, las sales de la presente divulgacion tenian efectos de proliferacion mas fuertes con respecto a la celula BAF3-TPOR. El orden fue como se indica a continuacion: sales de la presente divulgacion � acido libre � Eltrombopag, y la actividad de las sales de la presente
5 divulgacion eran mas activas que Eltrombopag.
ENSAYO DE LA FARMACOCIN�TICA
Ejemplo de Prueba 1: Ensayo de farmacocinetica de los compuestos de la presente divulgacion en ratas 10
1. Fin
Los compuestos de la presente divulgacion se administraron por via intragastrica a las ratas para determinar la concentracion de farmaco en plasma en diferentes puntos de tiempo por HPLC-UV. La conducta farmacocinetica de 15 los compuestos de la presente divulgacion se estudio y se evaluo en ratas.
2. Protocolo
2.1 Muestras
20 Compuestos del Ejemplo 1j, Ejemplo 1-3, Ejemplo 4h, Ejemplo 4, Ejemplo 5, Ejemplo 6, Ejemplo 7d, Ejemplo 7-15, Ejemplo 16a, Ejemplo 16-18, Ejemplo 19d, Ejemplo 19, Ejemplo 20, Ejemplo 21, Ejemplo 22f, Ejemplo 22 y Ejemplo
23.
25 2.2 Animales experimentales
Se adquirieron ratas SD adultas sanas, machos y hembras por igual, en SINO-BRITSH SIPPR/BK LAB.ANIMAL LTD., CO, Licencia numero: SCXK (Shangai) 2003-0002
30 2.3 Instrumento Cromatografo liquido de alto rendimiento Waters 2695-2996, Waters Corp., Estados Unidos;
2.4 Preparacion de compuestos de prueba
35 El compuesto de prueba se diluyo con carboximetil celulosa sodica al 1% en 5 mg/ml (calculado como la forma de acido libre) de suspension antes de su uso.
2.5 Administracion 40 Las ratas SD adultas sanas, machos y hembras por igual, se dividieron en 23 grupos. Despues del ayuno durante una noche, a las ratas se les administro por via intragastrica una dosis de 50,0 mg/kg (calculado como la forma de acido libre), a un volumen de 10 ml/kg.
2.6 Recogida de Muestras
Se tomaron muestras de sangre (0,2 ml) de la cuenca ocular en una administracion previa y 0,5, 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 8,0, 11,0, 14,0, 24,0, 36,0 y 48,0 horas despues de la administracion, que se almacenaron en tubos heparinizados y se centrifugaron durante 10 minutos a 3.500 rpm. Las muestras de plasma se almacenaron a -20 °C hasta su analisis. Las ratas se alimentaron 2 horas despues de la administracion.
2.7 Procedimientos Analiticos
Se mezclaron bien 50 !l de plasma de rata, obtenido en diversos puntos de tiempo despues de la administracion, 50 !l de solucion convencional interna y 20 !l de una mezcla de disolvente de metanol y agua (80:20, v/v), y despues se afadieron 100 !l de para dar como resultado la precipitacion de proteinas. Despues, la mezcla se mezclo durante 3 minutos usando un agitador vorticial y se centrifugo durante 10 minutos a 13.500 rpm. Se analizaron 40 !l del sobrenadante por HPLC-UV.
2.8
Calculo de los Parametros Farmacocineticos
El modelo compartimental de la farmacocinetica se ajusto para los compuestos de prueba y se calcularon los parametros farmacocineticos principales, en los que Cmax y tmax fueron los valores medidos realmente.
3.
Resultados de los Parametros Farmacocineticos
Los parametros farmacocineticos de los compuestos de la presente divulgacion se mostraron como se indica a continuacion:
Numero
Ensayo de la Farmacocinetica (50 mg/kg)
Conc. Plasma
Tiempo a Pico Area Bajo la Curva Semivida Tiempo de Residencia Medio Aclaramiento Volumen de Distribucion Aparente
Cmax (!g/ml)
Tmax (h) ABC (!g/ml x h) t1/2 (h) TRM (h) CL/F (l/h/kg) Vz/F (l/kg)
Eltrombopag
61,8 ± 18,7 5,5 ± 1,0 680 ± 255 7,82 ± 1,34 11,2 ± 2,6 0,089 ± 0,052 0,95 ± 0,42
1j
29,05 ± 11,44 4,00 ± 1,41 131 ± 47 4,21 ± 1,86 3,89 ± 1,78 0,049 ± 0,035 0,29 ± 0,18
1
90,1 ± 35,3 3,25 ± 1,5 501 ± 178 5,39 ± 0,94 4,96 ± 1,16 0,098 ± 0,072 0,45 ± 0,32
2
83,9 ± 11,2 5,0 ± 1,16 833 ± 64 9,55 ± 1,44 11,08 ± 0,76 0,06 ± 0,005 0,83 ± 0,16
3
79 ± 9,3 5,5 ± 1,0 842 ± 185 8,87 ± 0,78 13,0 ± 0,9 0,062 ± 0,013 0,78 ± 0,15
4h
1,29 ± 0,38 2,5 ± 1,0 9,5 ± 8,3 19,8 ± 16,4 31,7 ± 24,6 3,26 ± 1,93 83,4 ± 54,8
4
2,32 ± 1,80 2,25 ± 2,47 19,0 ± 12,6 27,0 ± 31,5 38,3 ± 36,5 2,42 ± 1,60 58,1 ± 47,7
5
19,8 ± 3,8 3,25 ± 1,5 255 ± 95 15,0 ± 6,2 20,8 ± 9,1 0,22 ± 0,07 4,23 ± 0,42
6
13,0 ± 6,5 2,5 ± 1,0 175 ± 41 45,0 ± 70,3 60,4 ± 90,2 0,30 ± 0,084 16,0 ± 22,8
7d
16,2 ± 3,9 2,5 ± 1,0 132 ± 124 7,42 ± 7,19 11,0 ± 8,13 8,14 ± 8,44 36,1 ± 17,9
7
74,1 ± 34,5 1,75 ± 0,5 469 ± 274 13,9 ± 6,07 13,3 ± 5,12 0,175 ± 0,169 2,48 ± 0,92
8
36,2 ± 46,2 1,38 ± 1,11 352 ± 586 10,6 ± 9,02 12,1 ± 8,23 0,926 ± 1,013 8,55 ± 9,08
9
21,2 ± 10,4 2,88 ± 2,59 146 ± 69,7 9,65 ± 2,48 10,5 ± 1,18 0,391 ± 0,145 5,15 ± 1,46
10
65,6 ± 44,5 1,63 ± 0,75 381 ± 306 12,9 ± 6,32 11,5 ± 5,72 0,494 ± 0,754 4,54 ± 4,17
11
40,2 ± 24,3 1,5 ± 0,58 270 ± 178 12,1 ± 7,19 10,0 ± 3,90 0,877 ± 1,465 5,80 ± 5,30
12
17,8 ± 10,3 1,38 ± 1,11 58,5 ± 23,8 5,1 ± 2,41 5,87 ± 1,68 1,00 ± 0,504 6,35 ± 1,38
13
8,10 ± 3,35 1,38 ± 1,11 42,8 ± 33,2 5,70 ± 2,50 8,05 ± 2,01 1,63 ± 0,83 14,9 ± 12,1
14
17,8 ± 22,6 5,25 ± 1,5 132 ± 189 4,72 ± 2,82 7,20 ± 2,13 2,40 ± 2,41 9,54 ± 8,03
15
23,3 ± 13,6 2,0 ± 1,16 168 ± 118 6,56 ± 3,80 8,92 ± 2,04 0,758 ± 0,995 3,65 ± 1,79
16a
6,81 ± 6,23 2,75 ± 0,96 15,0 ± 17,2 1,82 ± 0,68 4,03 ± 2,55 2,98 ± 2,75 11,5 ± 7,5
16
19,6 ± 16,3 2,00 ± 0,82 52,4 ± 48,0 2,08 ± 1,74 3,84 ± 1,03 1,94 ± 0,64 6,33 ± 4,57
17
21,5 ± 10,5 3,38 ± 3,04 138 ± 33 12,7 ± 14,7 14,0 ± 12,0 0,38 ± 0,093 8,16 ± 11,09
18
23,3 ± 11,6 1,63 ± 1,63 119 ± 102 3,99 ± 1,60 5,31 ± 2,64 0,63 ± 0,35 3,02 ± 1,01
19d
7,91 ± 6,84 2,50 ± 0,58 36,1 ± 36,4 1,84 ± 1,05 3,01 ± 1,99 1,44 ± 0,83 10,4 ± 8,4
19
20,8 ± 17,3 1,81 ± 2,79 89,2 ± 7,2 5,71 ± 3,68 7,85 ± 2,92 0,88 ± 0,61 5,47 ± 2,72
20
46,1 ± 15,7 4,5 ± 1,0 275 ± 116 7,24 ± 2,45 7,59 ± 1,33 0,21 ± 0,088 2,05 ± 0,68
21
61,1 ± 1,38 5,5 ± 1,0 380 ± 109 6,86 ± 0,48 8,61 ± 0,31 0,14 ± 0,04 1,37 ± 0,32
22f
8,73 ± 2,58 4,25 ± 11,26 151 ± 97 9,21 ± 1,57 11,8 ± 4,5 0,69 ± 0,55 8,49 ± 2,16
22
39,8 ± 18,2 5,0 ± 2,0 603 ± 240 9,95 ± 0,60 14,8 ± 1,0 0,24 ± 0,11 3,41 ± 1,75
23
17,2 ± 12,3 3,25 ± 3,18 123 ± 89,5 7,61 ± 1,34 11,7 ± 1,15 0,527 ± 0,24 5,52 ± 2,18
Los resultados del estudio mostraron que despues de la administracion a ratas, en comparacion con el acido libre, la farmacocinetica y la biodisponibilidad de las sales de la presente divulgacion obviamente mejoro. Los datos farmacocineticos de la sal del Ejemplo 7, es decir, las sales bi-(monoetanolamina) del Ejemplo 7d, son mejores, y tenian buenas caracteristicas farmacocineticas.
Ejemplo de Prueba 2: Ensayo de la farmacocinetica de los compuestos de la presente divulgacion en perros Beagle
1.
Fin
Los compuestos del Ejemplo 7, Ejemplo 8, Ejemplo 10 y Ejemplo 12 se administraron por via intragastrica a perros Beagle para determinar la concentracion del farmaco en plasma en diferentes puntos de tiempo por HPLC-UV. La conducta farmacocinetica de los compuestos de la presente divulgacion se estudio y se evaluo en perros Beagle.
2.
Protocolo
2.1 Muestras Compuestos del Ejemplo 7, Ejemplo 8, Ejemplo 10 y Ejemplo 12
2.2 Animales experimentales
Se adquirieron 12 perros Beagles adultos sanos, macho, en Suzhou Xishan Drug Research and Development CO., LTD. Licencia numero: SCXK(Suzhou)2007-0005.
2.3 Instrumento Cromatografo liquido de alto rendimiento Agilent 1100, Agilent Corp., Estados Unidos.
2.4 Preparacion de compuestos de prueba
El compuesto de prueba se diluyo con carboximetil celulosa sodica al 0,5% en 2,5 mg/ml (calculado como la forma de acido libre) de suspension antes de su uso.
2.5. Administracion
Los 12 perros Beagles adultos, sanos, macho, se dividieron en 4 grupos. Despues de una noche en ayuno, a los perros se les administro por via intragastrica una dosis de 5,0 mg/kg (calculado como la forma de acido libre), a un volumen de 2 ml/kg.
2.6 Recogida de Muestras
Se tomaron muestras de sangre (1,2 ml) de la vena de las patas delanteras previamente a la administracion y 0,25, 0,5, 1,0, 1,5, 2,0, 3,0, 5,0, 6,0, 8,0, 12,0, 14,0, 24,0 y 48,0 horas despues de la administracion, que se almacenaron en tubos heparinizados y se centrifugaron durante 10 minutos a 3.500 rpm. Las muestras de plasma se almacenaron a -20 °C hasta su analisis. Los perros Beagles se alimentaron 2 horas despues de la administracion.
2.7 Procedimientos Analiticos
Se afadieron 50 !l de plasma de perro Beagles, obtenido en diversos puntos de tiempo despues de la administracion, 20 !l de una solucion convencional interna y 150 !l de metanol para dar como resultado una precipitacion de proteinas. Despues, la mezcla se mezclo durante 1 minuto usando un agitador vorticial y se centrifugo durante 5 minutos a 11.000 rpm. Se analizaron 50 !l del sobrenadante por HPLC-UV.
2.8 Calculo de los Parametros Farmacocineticos
El modelo compartimental de la farmacocinetica se ajusto para los compuestos de prueba y se calcularon los parametros farmacocineticos principales, en los que Cmax y tmax fueron los valores medidos realmente.
Numero
Ensayo de la Farmacocinetica (5 mg/kg)
Conc. Plasma
Tiempo a Pico Area Bajo la Curva Semivida Tiempo de Residencia Medio Aclaramiento Volumen de Distribucion Aparente
Cmax (!g/ml)
Tmax (h) ABC (!g/ml x h) t1/2 (h) TRM (h) CL/F (l/h/kg) Vz/F (l/kg)
7
0,985 1,2 12,2 8,24 13,3 0,498 5,72
8
0,6 0,5 7,91 7,67 12,3 0,879 9,58
10
0,81 0,7 9,76 8,07 12,9 0,606 6,81
12
0,811 0,5 11,0 6,86 11,6 0,659 4,86
Los datos de las cuatro sales en el estudio actual mostraron que los compuestos del Ejemplo 7 eran obviamente superiores en la farmacocinetica.
5 En resumen, la preparacion de los compuestos de la presente divulgacion era sencilla y tenia buen rendimiento. Especialmente, las sales etanolamina, sales colina, sales dietilamina y sales piperazina tenian superioridad en el proceso de sintesis ya que pueden cristalizar directamente. En comparacion con los acidos libres, la solubilidad de las sales de la presente divulgacion obviamente aumento en los disolventes convencionales. Las sales etanolamina
10 eran menos higroscopicas y eran adecuadas para preparar una formulacion convencional y facil de conservar. La bioactividad de las sales de la presente divulgacion obviamente mejoro. La farmacocinetica obviamente tambien mejoro en las ratas y beagles y tuvo mejores caracteristicas farmacocineticas, especialmente las sales etanolamina.

Claims (14)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Sales farmaceuticamente aceptables de un compuesto que tiene formula (I):
    5 en la que:
    Het se selecciona entre el grupo que consiste en fenilo, furilo y tienilo; cada uno de R1, R2, R3 y R4 se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno y alquilo;
    10 n es 0, 1 o 2; y las sales son sales de adicion de bases que se seleccionan entre el grupo que consiste en sal sodica, sal de litio, sal potasica, sal calcica, sal de magnesio, sal de arginina, sal de lisina, sal de metanamina, sal de dimetilamina, sal de trimetilamina, sal de etilamina, sal de dietilamina, sal de trietilamina, sal de etanolamina, sal de piperazina, sal de dibencil etilendiamina, sal de meglumina, sal de trometamina, sal de
    15 tetrametil amonio cuaternario, sal de tetraetil amonio cuaternario y sal colina.
  2. 2. Las sales farmaceuticamente aceptables de acuerdo con la reivindicacion 1, en las que las sales se seleccionan entre el grupo que consiste en sal de dietilamina, sal de etanolamina, sal colina, sal de piperazina, sal de meglumina y sal de trometamina, preferiblemente sal de etanolamina, sal colina, sal de meglumina y sal de
    20 trometamina, y mucho mas preferiblemente sal de etanolamina.
  3. 3. Las sales farmaceuticamente aceptables de acuerdo con la reivindicacion 1, en las que n es 2.
  4. 4. Las sales farmaceuticamente aceptables de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, 25 en las que las sales se seleccionan entre el grupo que consiste en: 5. Proceso para preparar las sales farmaceuticamente aceptables de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, que comprende las etapas de:
    (a) disolver o suspender el compuesto que tiene la formula (I) en un disolvente organico, donde el disolvente organico se selecciona entre el grupo que consiste en metanol, etanol, acetona, acetato de etilo y
    tetrahidrofurano, preferiblemente tetrahidrofurano;
    (b)
    afadir una base a la mezcla con agitacion;
    (c)
    obtener las sales farmaceuticamente aceptables del compuesto que tiene la formula (1).
  5. 6.
    El proceso de acuerdo con la reivindicacion 5, en el que la base se selecciona entre el grupo que consiste en hidroxido sodico, hidroxido de litio, hidroxido potasico, hidroxido de calcio, hidroxido de magnesio, lisina, arginina, metanamina, dimetilamina, trimetilamina, etilamina, dietilamina, trietilamina, etanolamina, piperazina, dibencil etilendiamina, meglumina, trometamina, tetrametil amonio cuaternario, tetraetil amonio cuaternario e hidroxido de colina, preferiblemente dietilamina, etanolamina, hidroxido de colina, piperazina, meglumina y trometamina, mas preferiblemente etanolamina, hidroxido de colina, meglumina y trometamina, y mucho mas preferiblemente etanolamina.
  6. 7.
    El proceso de acuerdo con la reivindicacion 5 o la reivindicacion 6, en el que la proporcion de equivalencia del compuesto que tiene la formula (I) y la base es 1:5-5:1, preferiblemente 1:1-1:3, y mas preferiblemente 1:1-1:2.
  7. 8.
    Composicion farmaceutica que comprende una cantidad terapeuticamente eficaz de las sales farmaceuticamente aceptables de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 y vehiculos y agentes diluyentes farmaceuticamente aceptables.
  8. 9.
    La composicion farmaceutica de acuerdo con la reivindicacion 8, en la que la composicion se coadministra con una cantidad terapeuticamente eficaz de un farmaco seleccionado entre el grupo que consiste en un factor estimulador de colonias, una citocina, una quimiocina, una interleucina y un agonista del receptor de citocina.
  9. 10.
    Proceso para preparar la composicion de acuerdo con la reivindicacion 8, que comprende la etapa de combinar el compuesto de la reivindicacion 1 con los vehiculos o agentes diluyentes farmaceuticamente aceptables.
  10. 11.
    Uso de las sales farmaceuticamente aceptables del compuesto que tienen la formula (I) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 en la preparacion de un agonista del receptor de trombopoyetina.
  11. 12.
    Sales farmaceuticamente aceptables del compuesto que tiene la formula (I) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 para su uso como un medicamento para el tratamiento de la trombocitopenia.
  12. 13.
    Las sales farmaceuticamente aceptables de acuerdo con la reivindicacion 12, en las que el medicamento se co-administra con un farmaco seleccionado entre el grupo que consiste en un factor estimulador de colonias, una citocina, una quimiocina, una interleucina o agonista o antagonista del receptor de citocina, un receptor soluble, un anticuerpo agonista o antagonista de receptor, o uno o mas peptidos o compuestos de moleculas pequefas que tienen el mismo mecanismo con el farmaco.
  13. 14.
    Las sales farmaceuticamente aceptables de acuerdo con la reivindicacion 12, en las que el medicamento esta en forma de forma de dosificacion oral.
  14. 15.
    Las sales farmaceuticamente aceptables de acuerdo con la reivindicacion 12, en las que el medicamento esta en forma de forma de dosificacion parenteral.
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