ES2419007T3 - Ciertas entidades químicas, composiciones y procedimientos - Google Patents

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Alex Muci
Pu-Ping Lu
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Abstract

Al menos una entidad química elegida de los siguientes compuestos: [(3-{[4-(azetidinilsulfonil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)amino]-N-(6-metil(3-piridil))carboxamida; 1-(3-((4-(azetidin-1-ilsulfonil)piperazin-1-il)metil)-2-fluorofenil)-3-(piridin-3-il)urea; N-(3-{[4-(azetidinilcarbonil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)(4-piridilamino)carboxamida; N-(3-{[4-(azetidinilcarbonil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(2-metil(4-piridil))amino]carboxamida; N-(3-{[4-(azetidinilsulfonil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)(4-piridilamino)carboxamida; N-(3-{[4-((1Z)-1-azetidinil-2-ciano-2-azavinil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida; N-(3-{[4-(azetidinilcarbonil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida; N-(3-{[4-((1Z)-1-azetidinil-2-ciano-2-azavinil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(2-metil(4-piridil))amino]carboxamida; N-(3-{[(3R)-4-(azetidinilsulfonil)-3-metilpiperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida; (2S)-2-(azetidinilcarbonil)-4-[(2-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo; N-(3-{[(3R)-4-(azetidinilcarbonil)-3-metilpiperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida; N-(3-{[(3S)-4-(azetidinilcarbonil)-3-metilpiperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida; N-(3-{[(3S)-4-(azetidinilcarbonil)-3-(metoximetil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida; N-(3-{[(3S)-4-(azetidinilsulfonil)-3-(metoximetil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-20 piridil))amino]carboxamida; y (R)-1-(3-((4-(azetidin-1-carbonil)-3-metilpiperazin-1-il)metil)-2-fluorofenil)-3-(6-metilpiridin-3-il)urea; y sales farmacéuticamente aceptables, quelatos, complejos no covalentes, profármacos y mezclas de los mismos; en la que el término "quelato" se refiere a la entidad química formada por la coordinación del compuesto con un ión metálico en dos o más puntos; el término "complejo no covalente" se refiere a la entidad química formada por la interacción del compuesto y otra molécula en la que un enlace covalente no se forma entre el compuesto y la molécula; y el término "profármaco" se refiere a un derivado de éster o amida del compuesto que se convierte en el compuesto tras el procesamiento metabólico del profármaco

Description

Ciertas entidades químicas, composiciones y procedimientos.
La presente solicitud reivindica el beneficio de las solicitudes de patente provisional de EE.UU. nº 60/751.400 presentada el 15 de diciembre de 2005, 60/756.356 presentada el 4 de enero de 2006 y 60/817.975 presentada el 29 de junio de 2006.
La invención se refiere a derivados de urea sustituidos, particularmente a entidades químicas que modulan selectivamente el sarcómero cardíaco, y específicamente a entidades químicas, composiciones farmacéuticas y procedimientos de tratamiento para enfermedad cardíaca.
El “sarcómero” es una estructura celular elegantemente organizada encontrada en músculo cardíaco y esquelético constituida de filamentos delgados y gruesos interdigitantes; comprende casi el 60% del volumen de las células cardíacas. Los filamentos gruesos están compuestos por “miosina”, la proteína responsable de transducir la energía química (hidrólisis de ATP) en fuerza y movimiento dirigido. La miosina y sus primos funcionalmente relacionados se llaman proteínas motoras. Los filamentos delgados están compuestos por un complejo de proteínas. Una de estas proteínas, la “actina” (un polímero filamentoso), es el sustrato sobre el que la miosina se arrastra durante la generación de fuerza. Unido a la actina están un conjunto de proteínas reguladoras, el “complejo de troponina” y “tropomiosina” que hacen la interacción actina-miosina dependiente de cambios en niveles de Ca2+ intracelular. Con cada latido del corazón, los niveles de Ca2+ suben y bajan, iniciando la contracción del músculo cardíaco y luego la relajación del músculo cardíaco. Cada uno de los componentes del sarcómero contribuye a su respuesta contráctil.
La miosina es la más ampliamente estudiada de todas las proteínas motoras. De las tres clases distintas de miosina en células humanas, la clase de miosina II es responsable de la contracción de músculo esquelético, cardíaco y liso. Esta clase de miosina es significativamente diferente en la composición de aminoácidos y en la estructura global de la miosina en las otras doce clases distintas. La miosina II consiste en dos dominios cabeza globulares ligados juntos por una larga cola de bobina en espiral de hélice alfa que se parece a otras miosinas II para formar el núcleo del filamento grueso del sarcómero. Las cabezas globulares tienen un dominio catalítico en el que tienen lugar las funciones de unión a actina y de ATP de la miosina. Una vez unido a un filamento de actina, la liberación de fosfato (véase ATP a ADP) conduce a un cambio en la conformación estructural del dominio catalítico, que a su vez altera la orientación del dominio de brazo de palanca de unión de la cadena ligera que se extiende desde la cabeza globular; este movimiento se llama la descarga eléctrica. Este cambio en la orientación de la cabeza de miosina en relación con actina hace que el filamento grueso del que es una parte se mueva con respecto al filamento de actina delgado al que está unido. La desvinculación de la cabeza globular del filamento de actina (también modulado por Ca2+) acoplada al regreso del dominio catalítico y la cadena ligera a su conformación/orientación inicial completa el ciclo de contracción y relajación.
El músculo de corazón de mamífero consiste en dos formas de miosina cardíaca, alfa y beta, y están bien caracterizadas. La forma beta es la forma predominante (> 90 por ciento) en músculo cardíaco humano adulto. Se ha observado que ambas se regulan en condiciones de insuficiencia cardíaca humana a niveles tanto transcripcionales como traduccionales, estando la forma alfa regulada por disminución en insuficiencia cardíaca.
Se han determinado las secuencias de todas las miosinas de músculo esquelético, cardíaco y liso humano. Mientras que las miosinas alfa y beta cardíacas son muy similares (93% de identidad), ambas son considerablemente diferentes del músculo liso humano (42% de identidad) y están más estrechamente relacionadas con miosinas esqueléticas (80% de identidad). Convenientemente, las miosinas de músculo cardíaco se conservan increíblemente a través de las especies de mamífero. Por ejemplo, las miosinas cardíacas tanto alfa como beta están conservadas > 96% entre seres humanos y ratas, y la secuencia de 250 residuos disponible de miosina beta cardíaca porcina está conservada el 100% con la secuencia de miosina beta cardíaca humana correspondiente. Tal conservación de secuencias contribuye a la predictibilidad de estudiar agentes terapéuticos basados en miosina en modelos basados en animales de insuficiencia cardíaca.
Los componentes del sarcómero cardíaco presentan dianas para el tratamiento de insuficiencia cardíaca, por ejemplo, aumentando la contractilidad o facilitando la relajación completa para modular la función sistólica y diastólica, respectivamente.
La insuficiencia cardíaca congestiva (“ICG”) no es una enfermedad específica, sino una constelación de signos y síntomas, todos los cuales se producen por una incapacidad del corazón para responder adecuadamente a esfuerzo por gasto cardíaco creciente. La patofisiología dominante asociada a ICG es la disfunción sistólica, una alteración de la contractilidad cardíaca (con una reducción consecuente en la cantidad de sangre expulsada con cada latido). La disfunción sistólica con dilatación compensatoria de las cavidades ventriculares produce la forma más común de insuficiencia cardíaca, la “cardiomiopatía dilatada”, que se considera frecuentemente que es una igual a ICG. El contrapunto a la disfunción sistólica es la disfunción diastólica, una alteración de la capacidad para llenar los ventrículos con sangre, que también puede producir insuficiencia cardíaca incluso con función ventricular izquierda preservada. La insuficiencia cardíaca congestiva se asocia por último lugar a la inapropiada función del propio miocito cardíaco, que implica una disminución en su capacidad para contraerse y relajarse.
Muchas de las mismas condiciones subyacentes pueden dar lugar a disfunción sistólica y/o diastólica, tal como aterosclerosis, hipertensión, infección vírica, disfunción valvular y trastornos genéticos. Pacientes con estas afecciones normalmente presentan los mismos síntomas clásicos: disnea, edema y fatiga aplastante. En aproximadamente la mitad de los pacientes con cardiomiopatía dilatada, la causa de su disfunción cardíaca es enfermedad cardíaca isquémica debido a aterosclerosis coronaria. Estos pacientes han tenido tanto un único infarto de miocardio como múltiples infartos de miocardio; aquí, la consiguiente cicatrización y remodelación produce el desarrollo de un corazón dilatado e hipocontráctil. En momentos en los que el agente causante no puede identificarse, entonces la enfermedad se denomina “cardiomiopatía dilatada idiopática”. Independientemente del origen isquémico u otro origen, los pacientes con cardiomiopatía dilatada comparten un pronóstico pésimo, morbilidad excesiva y alta mortalidad.
La prevalencia de ICG ha crecido a proporciones epidémicas a medida que la población envejece y a medida que los cardiólogos han tenido más éxito en reducir la mortalidad de enfermedad cardíaca isquémica, el preludio más común a ICG. Aproximadamente 4,6 millones de personas en los Estados Unidos han sido diagnosticadas con ICG; la incidencia de tal diagnóstico se está aproximando al 10 por 1000 después de 65 años de edad. La hospitalización para ICG es normalmente el resultado de la inadecuada terapia ambulatoria. Las altas hospitalarias para ICG aumentaron de 377.000 (en 1979) a 970.000 (en 2002), haciendo que la ICG sea el diagnóstico de alta más común en personas de 65 años de edad y más. La mortalidad a cinco años de ICG se aproxima al 50%. Por tanto, mientras que las terapias para enfermedad cardíaca han mejorado enormemente y las esperanzas de vida se han prolongado durante los últimos varios años, continúan buscándose nuevas y mejores terapias, particularmente para ICG.
La insuficiencia cardíaca congestiva “aguda” (también conocida como insuficiencia cardíaca “descompensada” aguda) implica un fuerte descenso en la función cardíaca resultante de una variedad de causas. Por ejemplo, en un paciente que ya tiene insuficiencia cardíaca congestiva, un nuevo infarto de miocardio, retirada de medicaciones e indiscreciones dietéticas pueden todos conducir a una acumulación de fluido de edema e insuficiencia metabólica incluso en el estado en reposo. Un agente terapéutico que aumenta la función cardíaca durante un episodio agudo tal podría ayudar a aliviar esta insuficiencia metabólica y acelerar la eliminación de edema, facilitando el retorno al estado de insuficiencia cardíaca congestiva “compensada” más estable. Los pacientes con insuficiencia cardíaca congestiva muy avanzada, particularmente aquellos en la etapa final de la enfermedad, también podrían beneficiarse de un agente terapéutico que aumentara la función cardíaca, por ejemplo, para la estabilización mientras que se espera un trasplante de corazón. Otros posibles beneficios podrían proporcionarse a pacientes a los que se les quita una bomba de derivación, por ejemplo, por administración de un agente que ayuda al corazón parado o ralentizado a reanudar la función normal. Los pacientes que tienen disfunción diastólica (relajación insuficiente del músculo cardíaco) podrían beneficiarse de un agente terapéutico que modulara la relajación.
Los inótropos son fármacos que aumentan la capacidad contráctil del corazón. Como grupo, todos los presentes inótropos han fracasado en cumplir el estándar de oro para la terapia de insuficiencia cardíaca, es decir, para prolongar la supervivencia del paciente. Además, los presentes agentes son escasamente selectivos para tejido cardíaco, conduciendo en parte a efectos adversos reconocidos que limitan su uso. A pesar de este hecho, los inótropos intravenosos continúan siendo ampliamente usados en insuficiencia cardíaca aguda (por ejemplo, para permitir la reinstitución de medicaciones orales o para servir de puente a pacientes para trasplante de corazón) mientras que en insuficiencia cardíaca crónica, la digoxina administrada por vía oral se usa como inótropo para aliviar síntomas del paciente, mejorar la calidad de vida y reducir hospitalizaciones.
Las presentes terapias inotrópicas mejoran la contractilidad, aumentando el transitorio de calcio por la ruta de la adenil ciclasa, o retrasando la degradación de cAMP mediante la inhibición de fosfodiesterasa (PDE), que puede ser perjudicial para pacientes con insuficiencia cardíaca.
Dadas las limitaciones de los presentes agentes, se necesitan nuevos enfoques para mejorar la función cardíaca en insuficiencia cardíaca congestiva. El agente intravenoso a corto plazo más recientemente aprobado, milrinona, tiene más de quince años. El único fármaco oral disponible, digoxina, tiene más de 200 años. Sigue existiendo una gran necesidad de agentes que exploten nuevos mecanismos de acción y puedan tener mejores desenlaces en términos de alivio de síntomas, seguridad y mortalidad del paciente, tanto a corto plazo como a largo plazo. Nuevos agentes con un índice terapéutico mejorado con respecto a los presentes agentes proporcionarán un medio para lograr estos desenlaces clínicos.
El documento US2005/159416 desvela compuestos con la siguiente estructura: (heterociclo - ligador de O o S) – fenilo o piridina-urea y arilo, arilalquilo, cicloalquilo o heterocicloalquilo que son útiles para potenciar la actividad de miosina cardíaca modulando el sarcómero cardíaco. Pueden aumentar la fuerza contráctil en fibra muscular cardíaca (véase la página 22, párrafo 0541) y son activos, tanto como compuestos y como composiciones, contra insuficiencia cardíaca congestiva y disfunción cardíaca sistólica (página 22, párrafo 0542).
El documento US2003/130309 desvela en las reivindicaciones 1, 15-17 compuestos con un resto heteroaromático ligado a una urea, luego ligado a un grupo fenilo con un ligador C1-10 a piperidina, pero esta piperidina no está
sustituida por sulfonil- o carbonil-azetidina. Este compuestos se usan contra insuficiencia cardíaca congestiva. Compuestos muy similares se desvelan en la reivindicación 1 del documento WO03/068228, que se desvela en la página 19, línea 30, como activos contra insuficiencia cardíaca congestiva.
La selectividad de agentes dirigidos al sarcómero cardíaco (por ejemplo, eligiendo como diana miosina beta cardíaca) se ha identificado como un medio importante para lograr este índice terapéutico mejorado. La presente invención proporciona tales agentes (particularmente agentes de activación de sarcómero) y también se desvelan procedimientos para su identificación y uso.
Otro enfoque puede ser activar directamente la miosina cardíaca sin cambiar el transitorio de calcio para mejorar la contractilidad cardíaca. La presente invención proporciona tales agentes (particularmente agentes de activación de miosina) y se desvelan procedimientos para su identificación y uso.
En el presente documento se desvela el uso de al menos una entidad química descrita en el presente documento en un procedimiento de aumentar el grado, pero no la velocidad, de contracción cardíaca. También se proporciona un procedimiento para tratar enfermedad cardíaca en un mamífero que comprende administrar a un mamífero en necesidad del mismo, en una cantidad eficaz para aumentar el grado, pero no la velocidad de contracción cardíaca, al menos una entidad química descrita en el presente documento. También se desvela el uso de una entidad química descrita en el presente documento en un procedimiento de aumentar el grado de contracción, pero no ± dP/dt. También se desvela el uso de una entidad química descrita en el presente documento en un procedimiento para tratar enfermedad cardíaca en un mamífero, en una cantidad eficaz para aumentar el grado de contracción, pero no ± dP/dt, al menos una entidad química descrita en el presente documento.
También se desvelan ciertas entidades químicas que incluyen, por ejemplo, al menos una entidad química elegida de compuestos de fórmula I
Fórmula I
y sales farmacéuticamente aceptables, quelatos, complejos no covalentes, profármacos y mezclas de los mismos, en la que
W, X, Y y Z son independientemente -C= o -N=, a condición de que no más de dos de W, X, Y y Z sean -N=; n es uno, dos o tres; R1 es amino opcionalmente sustituido o heterocicloalquilo opcionalmente sustituido; R2 es arilo opcionalmente sustituido, aralquilo opcionalmente sustituido; cicloalquilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, heteroaralquilo opcionalmente sustituido o heterocicloalquilo opcionalmente sustituido, R3 es hidrógeno, halógeno, ciano, alquilo opcionalmente sustituido, alcoxi opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido cuando W es -C=, y R3 está ausente cuando W es -N=; R4 es hidrógeno, halógeno, ciano, alquilo opcionalmente sustituido, alcoxi opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido cuando Y es -C=, y R4 está ausente cuando Y es -N=; y R5 es hidrógeno, halógeno, ciano, alquilo opcionalmente sustituido, alcoxi opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido cuando X es -C=, y R5 está ausente cuando X es -N=; R13 es hidrógeno, halógeno, ciano, hidroxilo, alquilo opcionalmente sustituido, alcoxi opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido cuando Z es -C=, y R13 está ausente cuando Z es -N=; R6 y R7 son independientemente hidrógeno, aminocarbonilo, alcoxicarbonilo, alquilo opcionalmente sustituido o alcoxi opcionalmente sustituido, o R6 y R7, tomados conjuntamente con el carbono al que están unidos, forman un anillo de 3 a 7 miembros opcionalmente sustituido que opcionalmente incorpora uno o dos heteroátomos adicionales, seleccionados de N, O y S en el anillo; y R18 y R19 se eligen independientemente de hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido, a condición de que al menos uno de R18 y R19 no sea hidrógeno.
Como se usa en la presente memoria descriptiva, las siguiente palabras y términos están generalmente previstos para tener los significados que se exponen a continuación, excepto hasta el punto que el contexto en el que se usan indique de otro modo. Las siguientes abreviaturas y términos tienen los significados indicados en todo el documento:
Ac = acetilo Boc = t-butiloxicarbonilo c-= ciclo CBZ = carbobenzoxi = benciloxicarbonilo DCM = diclorometano = cloruro de metileno = CH2Cl2 DIBAL-H = hidruro de diisobutilaluminio DIEA o DIPEA = N,N-diisopropiletilamina DMF = N,N-dimetilformamida DMSO = sulfóxido de dimetilo eq = equivalente Et = etilo EtOAc = acetato de etilo EtOH = etanol g = gramo CG = cromatografía de gases h = hora u horas Me = metilo min = minuto ml = mililitro mmol = milimol Ph = fenilo PyBroP = hexafluorofosfato de bromo-tris-pirrolidinofosfonio TA = temperatura ambiente s-= secundario t-= terciario TFA = ácido trifluoroacético THF = tetrahidrofurano CCF = cromatografía en capa fina volumen = ml/g de material basado en el reactivo limitante, a menos que se especifique lo contrario
Como se usa en la presente memoria descriptiva, las siguiente palabras y términos están generalmente previstos para tener los significados que se exponen a continuación, excepto hasta el punto que el contexto en el que se usan indique de otro modo.
Como se usa en el presente documento, cuando cualquier variable se produce más de una vez en una fórmula química, su definición en cada manifestación es independiente de su definición en cualquier otra manifestación.
Un guión (“-”) que no está entre dos letras o símbolos se usa para indicar un punto de unión para un sustituyente. Por ejemplo, -CONH2 está unido mediante el átomo de carbono.
Por “opcional” u “opcionalmente” se indica que el evento o circunstancia posteriormente descrito puede o puede no producirse, y que la descripción incluye casos en los que el evento o circunstancia se produce y casos en los que no. Por ejemplo, “alquilo opcionalmente sustituido” engloba tanto “alquilo” como “alquilo sustituido”, como se define más adelante. Se entenderá por aquellos expertos en la materia, con respecto a cualquier grupo que contiene uno o más sustituyentes, que tales grupos no pretenden introducir ninguna sustitución o patrones de sustitución que sean estéricamente poco prácticos, sintéticamente no factibles y/o inherentemente inestables.
“Alquilo” engloba cadena lineal y cadena ramificada que tiene el número indicado de átomos de carbono. Grupos alquilo generalmente son aquellos de C20 o menos, tales como C13 o menos, por ejemplo, C6 o menos. Por ejemplo alquilo C1-C6 engloba alquilo tanto de cadena lineal como ramificada de 1 a 6 átomos de carbono. Ejemplos de grupos alquilo incluyen metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, terc-butilo, pentilo, 2-pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, 2-hexilo, 3-hexilo, 3-metilpentilo y similares. Alquileno es otro subconjunto de alquilo, con referencia a los mismos residuos que alquilo, pero que tiene dos puntos de unión. Por ejemplo, alquileno C0 indica un enlace covalente y alquileno C1 es un grupo metileno. Cuando se nombra un residuo alquilo que tiene un número específico de carbonos, todos los isómeros geométricos que tienen ese número de carbonos pretende estar englobado; por tanto, por ejemplo, “butilo” pretende incluir n-butilo, sec-butilo, isobutilo y t-butilo; “propilo” incluye npropilo y isopropilo. “Alquilo inferior” se refiere a grupos alquilo que tienen uno a cuatro carbonos.
“Cicloalquilo” indica un anillo de hidrocarburo saturado o anillo bicíclico fusionado que tiene el número especificado de átomos de carbono, normalmente de 3 a 12 átomos de carbono de anillo, más normalmente 3 a 10, o 3 a 7. Ejemplos de grupos cicloalquilo incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo, además de grupos de anillo saturados unidos por puentes y enjaulados tales como norbornano. Ejemplos de anillos bicíclicos fusionados incluyen octahidro-1H-indeno, octahidropentaleno, 1,2,3,3a,4,5-hexahidropentaleno, 1,2,4,5,6,7,7a-heptahidro-2Hindeno, 4,5,6,7-tetrahidro-2H-indeno y similares.
Por “alcoxi” se indica un grupo alquilo unido mediante un puente de oxígeno tal como, por ejemplo, metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, n-butoxi, sec-butoxi, terc-butoxi, pentoxi, 2-pentiloxi, isopentoxi, neopentoxi, hexoxi, 2-hexoxi, 3hexoxi, 3-metilpentoxi y similares. El grupo alquilo de un grupo alcoxi generalmente es de C20 o menos, tal como C13
o menos, por ejemplo, C6 o menos. “Alcoxi inferior” se refiere a grupos alcoxi que tienen uno a cuatro carbonos.
Por “cicloalcoxi” se indica un grupo cicloalquilo unido mediante un puente de oxígeno tal como, por ejemplo, ciclopropoxi, ciclobutoxi, ciclopentoxi, ciclohexoxi, cicloheptoxi y similares. El grupo cicloalquilo de un grupo cicloalcoxi generalmente es C20 o menos, tal como C13 o menos, por ejemplo, C6 o menos.
“Acilo” se refiere a los grupos (alquil)-C(O)-; (cicloalquil)-C(O)-; (aril)-C(O)-; (heteroaril)-C(O)-; y (heterocicloalquil)-C(O)- en los que el grupo está unido a la estructura parental mediante la funcionalidad carbonilo y en los que alquilo, cicloalquilo, arilo, heteroarilo y heterocicloalquilo son como se describen en el presente documento. Grupos acilo tienen el número indicado de átomos de carbono, estando el carbono del grupo ceto incluido en los átomos de carbono numerados. Por ejemplo, un grupo acilo C2 es un grupo acetilo que tiene la fórmula CH3(C=O)-.
Por “alcoxicarbonilo” se indica un grupo éster de fórmula (alcoxi)(C=O)- unido mediante el carbono del carbonilo en el que el grupo alcoxi tiene el número indicado de átomos de carbono. Por tanto, un grupo alcoxi C1-C6-carbonilo es un grupo alcoxi que tiene de 1 a 6 átomos de carbono unidos mediante su oxígeno a un ligador de carbonilo.
Por “amino” se indica el grupo -NH2.
El término “aminocarbonilo” se refiere al grupo -CONRbRc en el que
Rb se elige de hidrógeno, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido; y Rc se elige de hidrógeno y alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido; o Rb y Rc, tomados conjuntamente con el nitrógeno al que están unidos, forman un heterocicloalquilo que contiene nitrógeno de 5 a 7 miembros opcionalmente sustituido que opcionalmente incluye 1 ó 2 heteroátomos adicionales seleccionados de O, N y S en el anillo heterocicloalquilo; en el que cada grupo sustituido está independientemente sustituido con uno o más sustituyentes independientemente seleccionados de alquilo C1-C4, arilo, heteroarilo, arilalquil C1-C4-, heteroarilalquil C1-C4-, haloalquilo C1-C4, -O-alquilo C1-C4, -O-alquil C1-C4-fenilo, -alquil C1-C4-OH, -O-haloalquilo C1-C4, halógeno, -OH, -NH2, -alquil C1-C4-NH2, -N(alquil C1-C4)(alquilo C1-C4), -NH(alquilo C1-C4), -N(alquil C1-C4)(alquil C1-C4-fenilo), NH(alquil C1-C4-fenilo), ciano, nitro, oxo (como sustituyente para cicloalquilo, heterocicloalquilo o heteroarilo), -CO2H, -C(O)O-alquilo C1-C4, -CON(alquil C1-C4)(alquilo C1-C4), -CONH(alquilo C1-C4), -CONH2, -NHC(O)(alquilo C1-C4), NHC(O)(fenilo), -N(alquil C1-C4)C(O)(alquilo C1-C4), -N(alquil C1-C4)C(O)(fenilo), -C(O)-alquilo C1-C4, -C(O)C1-C4fenilo, -C(O)-haloalquilo C1-C4, -OC(O)-alquilo C1-C4, -SO2(alquilo C1-C4), - SO2(fenilo), -SO2(haloalquilo C1-C4), -SO2NH2, -SO2NH(alquilo C1-C4), -SO2NH(fenilo), -NHSO2(alquilo C1-C4), -NHSO2(fenilo) y -NHSO2(haloalquilo C1-C4).
“Arilo” engloba: anillos aromáticos carbocíclicos de 5 y de 6 miembros, por ejemplo, benceno; sistemas de anillo bicíclicos en los que al menos un anillo es carbocíclico y aromático, por ejemplo, naftaleno, indano y tetralina; y sistemas de anillo tricíclicos en los que al menos un anillo es carbocíclico y aromático, por ejemplo, fluoreno.
Por ejemplo, arilo incluye anillos aromáticos carbocíclicos de 5 y de 6 miembros fusionados con un anillo de heterocicloalquilo de 5 a 7 miembros que contiene 1 o más heteroátomos elegido de N, O y S. Para tales sistemas de anillos bicíclicos fusionados en los que sólo uno de los anillos es un anillo aromático carbocíclico, el punto de unión puede estar en el anillo aromático carbocíclico o el anillo de heterocicloalquilo. Radicales bivalentes formados a partir de derivados de benceno sustituidos y que tiene las valencias libres en átomos de anillo se nombran como radicales fenileno sustituidos. Radicales bivalentes derivados de radicales de hidrocarburo policíclicos univalentes cuyos nombres terminal en “-ilo” por eliminación de un átomo de hidrógeno del átomo de carbono con la valencia libre se nombran añadiendo “-ideno” al nombre del radical univalente correspondiente, por ejemplo, un grupo naftilo con dos puntos de unión se llama naftilideno. Sin embargo, arilo no engloba o se solapa de forma alguna con heteroarilo, definido por separado más adelante. De ahí que, si uno o más anillos aromáticos carbocíclicos están fusionados con un anillo aromático de heterocicloalquilo, el sistema de anillo resultante es heteroarilo, no arilo, como se define en el presente documento.
El término “ariloxi” se refiere al grupo -O-arilo.
En el término “arilalquilo” o “aralquilo”, arilo y alquilo son como se definen en el presente documento, y el punto de unión está sobre el grupo alquilo. Este término engloba, pero no se limita a, bencilo, fenetilo, fenilvinilo, fenilalilo y similares.
El término “halo” incluye flúor, cloro, bromo y yodo, y el término “halógeno” incluye flúor, cloro, bromo y yodo.
“Haloalquilo” indica alquilo como se define anteriormente que tiene el número especificado de átomos de carbono, sustituidos con 1 o más átomos de halógeno, generalmente hasta el máximo número permisible de átomos de halógeno. Ejemplos de haloalquilo incluyen, pero no se limitan a, trifluorometilo, difluorometilo, 2-fluoroetilo y pentafluoroetilo.
“Heteroarilo” engloba: anillos monocíclicos aromático de 5 a 7 miembros que contienen uno o más, por ejemplo, de 1 a 4, o en ciertas realizaciones, de 1 a 3, heteroátomos elegidos de N, O y S, siendo el resto de los átomos de anillo carbono; y anillos de heterocicloalquilo bicíclicos que contienen uno o más, por ejemplo, de 1 a 4, o en ciertas realizaciones, de 1 a 3, heteroátomos elegidos de N, O y S, siendo el resto de los átomos de anillo carbono y en el que al menos un heteroátomo está presente en un anillo aromático.
Por ejemplo, heteroarilo incluye un anillo aromático de heterocicloalquilo de 5 a 7 miembros fusionado con un anillo de cicloalquilo de 5 a 7 miembros. Para tales sistemas de anillo de heteroarilo bicíclicos en los que sólo uno de los anillos contiene uno o más heteroátomos, el punto de unión puede estar en el anillo heteroaromático o el anillo de cicloalquilo. Si el número total de átomos de S y O en el grupo heteroarilo supera 1, aquellos heteroátomos no son adyacentes entre sí. En ciertas realizaciones, el número total de átomos de S y O en el grupo heteroarilo es no superior a 2. En ciertas realizaciones, el número total de átomos de S y O en el heterociclo aromático es no superior a 1. También están incluidos dentro de la definición de heteroarilo derivados de óxido, por ejemplo N-óxidos de nitrógeno que contienen grupos arilo, tales como 1-óxido de piridina, o derivados de >S(O) y >S(O)2 de grupos que contienen azufre. Ejemplos de grupos heteroarilo incluyen, pero no se limitan a, sistemas (como se enumera a partir de la posición de enlace asignada con la prioridad 1) tales como 2-piridilo, 3-piridilo, 4-piridilo, 2,3-pirazinilo, 3,4pirazinilo, 2,4-pirimidinilo, 3,5-pirimidinilo, 2,3-pirazolinilo, 2,4-imidazolinilo, isoxazolinilo, oxazolinilo, tiazolinilo, tiadiazolinilo, tetrazolilo, tienilo, benzotiofenilo, furanilo, benzofuranilo, benzoimidazolinilo, indolinilo, piridizinilo, triazolilo, quinolinilo, pirazolilo y 5,6,7,8-tetrahidroisoquinolina. Radicales bivalentes derivados de radicales heteroarilo univalentes cuyos nombres terminan en “-ilo” por eliminación de un átomo de hidrógeno del átomo con la valencia libre se nombran añadiendo “-ideno” al nombre del radical univalente correspondiente, por ejemplo, un grupo piridilo con dos puntos de unión es un piridilideno. Heteroarilo no engloba o se solapa con arilo como se define anteriormente.
En el término “heteroarilalquilo” o “heteroaralquilo”, heteroarilo y alquilo son como se definen en el presente documento, y el punto de unión está sobre el grupo alquilo. Este término engloba, pero no se limita a, piridilmetilo, tiofenilmetilo y (pirrolil)1-etilo.
Por “heterocicloalquilo” se indica un residuo cicloalquilo en el que uno a cuatro de los átomos de carbono están sustituidos por un heteroátomo tal como oxígeno, nitrógeno o azufre. Grupos heterocicloalquilo adecuados incluyen, por ejemplo (como se enumera a partir de la posición de enlace asignada con la prioridad 1), 2-pirrolinilo, 2,4imidazolidinilo, 2,3-pirazolidinilo, 2-piperidilo, 3-piperidilo, 4-piperidilo y 2,5-piperazinilo. También se contemplan grupos morfolinilo, que incluyen 2-morfolinilo y 3-morfolinilo (numerados donde al oxígeno se le asigna la prioridad 1).
Como se usa en el presente documento, “modulación” se refiere a un cambio en la actividad de miosina o sarcómero como una respuesta directa o indirecta a la presencia de al menos una entidad química descrita en el presente documento, con respecto a la actividad de la miosina o sarcómero en ausencia del compuesto. El cambio puede ser un aumento en la actividad o una disminución en la actividad, y puede ser debido a la interacción directa del compuesto con miosina o el sarcómero, o debido a la interacción del compuesto con uno o varios de otros factores que a su vez afectan la actividad de miosina o sarcómero.
El término “sulfanilo” incluye los grupos: -S-(alquilo opcionalmente sustituido), -S-(arilo opcionalmente sustituido), -S(heteroarilo opcionalmente sustituido) y -S-(heterocicloalquilo opcionalmente sustituido). Por tanto, sulfanilo incluye el grupo alquil C1-C6-sulfanilo.
El término “sulfinilo” incluye los grupos: -S(O)-H, -S(O)-(alquilo opcionalmente sustituido), -S(O)-(arilo opcionalmente sustituido), -S(O)-(heteroarilo opcionalmente sustituido), -S(O)-(heterocicloalquilo opcionalmente sustituido); y -S(O)(amino opcionalmente sustituido).
El término “sulfonilo” incluye los grupos: -S(O2)-H, -S(O2)-(alquilo opcionalmente sustituido), -S(O2)-(arilo opcionalmente sustituido), -S(O2)-(heteroarilo opcionalmente sustituido), -S(O2)-(heterocicloalquilo opcionalmente sustituido), -S(O2)-(alcoxi opcionalmente sustituido), -S(O2)-(ariloxi opcionalmente sustituido), -S(O2)-(heteroariloxi opcionalmente sustituido), -S(O2)-(heterocicloalquiloxi opcionalmente sustituido); y -S(O2)-(amino opcionalmente sustituido).
El término “sustituido”, como se usa en el presente documento, significa que uno cualquiera o más hidrógenos sobre el átomo o grupo diseñado se sustituye con una selección del grupo indicado, a condición de que no se supere la valencia normal del átomo diseñado. Si un sustituyente es oxo (es decir, =O), entonces se sustituyen 2 hidrógenos sobre el átomo. Combinaciones de sustituyentes y/o variables son permisibles sólo si tales combinaciones producen compuestos estables o productos intermedios sintéticos útiles. Un compuesto estable o estructura estable pretende implicar un compuesto que es suficientemente robusto para sobrevivir al aislamiento de una mezcla de reacción y posterior formulación como agente que tiene al menos utilidad práctica. A menos que se especifique de otro modo, los sustituyentes se nombran en la estructura de núcleo. Por ejemplo, debe entenderse que cuando (cicloalquil)alquilo se enumera como un posible sustituyente, el punto de unión de este sustituyente con la estructura de núcleo está en la porción de alquilo.
Los términos alquilo, cicloalquilo, arilo, heterocicloalquilo y heteroarilo “sustituido”, a menos que se defina expresamente de otro modo, se refieren respectivamente a alquilo, cicloalquilo, arilo, heterocicloalquilo y heteroarilo en los que uno o más (hasta 5, tal como hasta 3) átomos de hidrógeno están sustituidos con un sustituyente independientemente elegido de:
-
Ra, -ORb, -O(alquil C1-C2)O- (por ejemplo, metilendioxi-), -SRb, guanidina, guanidina en la que uno o más de los hidrógenos de la guanidina están sustituidos con un grupo alquilo inferior, -NRbRc, halógeno, ciano, nitro, -CORb, -CO2Rb, -CONRbRc, -OCORb, -OCO2Ra, -OCONRbRc, -NRcCORb, -NRcCO2Ra, -NRcCONRbRc, -SORa, -SO2Ra, -SO2NRbRc y -NRcSO2Ra, en las que Ra se elige de alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido; Rb se elige de hidrógeno, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido; y Rc se elige de hidrógeno y alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido; o Rb y Rc, tomados conjuntamente con el nitrógeno al que están unidos, forman un heterocicloalquilo que contiene nitrógeno de 5 a 7 miembros opcionalmente sustituido que opcionalmente incluye 1 ó 2 heteroátomos adicionales seleccionados de O, N y S en el anillo heterocicloalquilo;
en el que cada grupo opcionalmente sustituido está sin sustituir o independientemente sustituido con uno o más, tales como uno, dos o tres sustituyentes independientemente seleccionados de alquilo C1-C4, arilo, heteroarilo, arilalquil C1-C4-, heteroarilalquil C1-C4-, haloalquil C1-C4-, -O-alquilo C1-C4, -O-alquil C1-C4-fenilo, -alquil C1-C4-OH, O-haloalquilo C1-C4, halógeno, -OH, -NH2, -alquil C1-C4-NH2, -N(alquil C1-C4)(alquilo C1-C4), -NH(alquilo C1-C4), N(alquil C1-C4)(alquil C1-C4-fenilo), -NH(alquil C1-C4-fenilo), ciano, nitro, oxo (como un sustituyente para cicloalquilo, heterocicloalquilo o heteroarilo), -CO2H, -C(O)O-alquilo C1-C4, -CON(alquil C1-C4)(alquilo C1-C4), -CONH(alquilo C1-C4), -CONH2, -NHC(O)(alquilo C1-C4), -NHC(O)(fenilo), -N(alquil C1-C4)C(O)(alquilo C1-C4), -N(alquil C1C4)C(O)(fenilo), -C(O)-alquilo C1-C4, -C(O)C1-C4-fenilo, -C(O)-haloalquilo C1-C4, -OC(O)-alquilo C1-C4, -SO2(alquilo C1-C4), -SO2(fenilo), -SO2(haloalquilo C1-C4), -SO2NH2, -SO2NH(alquilo C1-C4), -SO2NH(fenilo), -NHSO2(alquilo C1-C4), -NHSO2(fenilo) y -NHSO2(haloalquilo C1-C4).
Los términos cicloalquilo, arilo, heterocicloalquilo y heteroarilo “sustituido” también incluyen sustituyentes oxo (=O) y óxido (-O-), por ejemplo, N-óxidos de nitrógeno que contienen grupos arilo, tales como 1-óxido de piridina, o derivados de >S(O) y >S(O)2 de grupos que contienen azufre.
El término “acilo sustituido” se refiere a los grupos (alquil sustituido)-C(O)-; (cicloalquil sustituido)-C(O)-; (aril sustituido)-C(O)-; (heteroaril sustituido)-C(O)-; y (heterocicloalquil sustituido)-C(O)- en los que el grupo está unido a la estructura parental mediante la funcionalidad carbonilo y en los que alquilo, cicloalquilo, arilo, heteroarilo y heterocicloalquilo sustituido se refieren respectivamente a alquilo, cicloalquilo, arilo, heteroarilo y heterocicloalquilo en los que uno o más (hasta 5, tal como hasta 3) átomos de hidrógeno están sustituidos con un sustituyente independientemente elegido de:
-
Ra, -ORb, -O(alquil C1-C2)O- (por ejemplo, metilendioxi-), -SRb, guanidina, guanidina en la que uno o más de los hidrógenos de la guanidina están sustituidos con un grupo alquilo inferior, -NRbRc, halógeno, ciano, nitro, -CORb, -CO2Rb, -CONRbRc, -OCORb, -OCO2Ra, -OCONRbRc, -NRcCORb, -NRcCO2Ra, -NRcCONRbRc, -CO2Rb, -CONRbRc, -NRcCORb, -SORa, -SO2Ra, -SO2NRbRc y -NRcSO2Ra, en las que Ra se elige de alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido; Rb se elige de H, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido; y Rc se elige de hidrógeno y alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido; o Rb y Rc, tomados conjuntamente con el nitrógeno al que están unidos, forman un heterocicloalquilo que contiene nitrógeno de 5 a 7 miembros opcionalmente sustituido que opcionalmente incluye 1 ó 2 heteroátomos adicionales seleccionados de O, N y S en el anillo heterocicloalquilo;
en los que cada grupo opcionalmente sustituido está sin sustituir o independientemente sustituido con uno o más, tales como uno, dos o tres sustituyentes independientemente seleccionados de alquilo C1-C4, arilo, heteroarilo, arilalquil C1-C4-, heteroaril-alquil C1-C4-, haloalquil C1-C4-, -O-alquilo C1-C4, -O-alquil C1-C4-fenilo, -alquil C1-C4-OH, -Ohaloalquilo C1-C4, halógeno, -OH, -NH2, -alquil C1-C4-NH2, -N(alquil C1-C4)(alquilo C1-C4), -NH(alquilo C1-C4), N(alquil C1-C4)(alquil C1-C4-fenilo), -NH(alquil C1-C4-fenilo), ciano, nitro, oxo (como un sustituyente para cicloalquilo, heterocicloalquilo o heteroarilo), -CO2H, -C(O)O-alquilo C1-C4, -CON(alquil C1-C4)(alquilo C1-C4), -CONH(alquilo C1-C4), -CONH2, -NHC(O)(alquilo C1-C4), -NHC(O)(fenilo), -N(alquil C1-C4)C(O)(alquilo C1-C4), -N(alquil C1C4)C(O)(fenilo), -C(O)alquilo C1-C4, -C(O)C1-C4-fenilo, -C(O)-haloalquilo C1-C4, -OC(O)alquilo C1-C4, - SO2(alquilo C1-C4), -SO2(fenilo), -SO2(haloalquilo C1-C4), -SO2NH2, -SO2NH(alquilo C1-C4), -SO2NH(fenilo), -NHSO2(alquilo C1-C4), -NHSO2(fenilo) y -NHSO2(haloalquilo C1-C4). Uno o más carbonos en el residuo de acilo sustituido pueden sustituirse con nitrógeno, oxígeno o azufre en tanto que el punto de unión al parental esté en el carbonilo.
El término “alcoxi sustituido” se refiere a alcoxi en el que el constituyente de alquilo está sustituido (es decir, -O(alquilo sustituido)) en el que “alquilo sustituido” se refiere a alquilo en el que uno o más (hasta 5, tal como hasta 3) átomos de hidrógeno están sustituidos con un sustituyente independientemente elegido de:
-
Ra, -ORb, -O(alquil C1-C2)O- (por ejemplo, metilendioxi-), -SRb, guanidina, guanidina en la que uno o más de los hidrógenos de la guanidina están sustituidos con un grupo alquilo inferior, -NRbRc, halógeno, ciano, nitro, -CORb, -CO2Rb, -CONRbRc, -OCORb, -OCO2Ra, -OCONRbRc, -NRcCORb, -NRcCO2Ra, -NRcCONRbRc, -SORa, -SO2Ra, -SO2NRbRc y -NRcSO2Ra, en las que Ra se elige de alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido; Rb se elige de H, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido; y Rc se elige de hidrógeno y alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido; en el que cada grupo opcionalmente sustituido está sin sustituir o independientemente sustituido con uno o más tales como uno, dos o tres sustituyentes independientemente seleccionados de alquilo C1-C4, arilo, heteroarilo, aril-alquil C1-C4-, heteroaril-alquil C1-C4-, haloalquil C1-C4-, -O-alquilo C1-C4, -O-alquil C1-C4-fenilo, -alquil C1-C4-OH, -Ohaloalquilo C1-C4, halógeno, -OH, -NH2, -alquil C1-C4-NH2, -N(alquil C1-C4)(alquilo C1-C4), -NH(alquilo C1-C4), N(alquil C1-C4)(alquil C1-C4-fenilo), -NH(alquil C1-C4-fenilo), ciano, nitro, oxo (como un sustituyente para cicloalquilo, heterocicloalquilo o heteroarilo), -CO2H, -C(O)O-alquilo C1-C4, -CON(alquil C1-C4)(alquilo C1-C4), CONH(alquilo C1-C4), -CONH2, -NHC(O)(alquilo C1-C4), -NHC(O)(fenilo), -N(alquil C1-C4)C(O)(alquilo C1-C4), N(alquil C1-C4)C(O)(fenilo), -C(O)alquilo C1-C4, -C(O)C1-C4-fenilo, -C(O)-haloalquilo C1-C4, -OC(O)alquilo C1-C4, -SO2(alquilo C1-C4), -SO2(fenilo), -SO2(haloalquilo C1-C4), -SO2NH2, -SO2NH(alquilo C1-C4), -SO2NH(fenilo), NHSO2(alquilo C1-C4), -NHSO2(fenilo) y -NHSO2(haloalquilo C1-C4). En algunas realizaciones, un grupo alcoxi sustituido es “polialcoxi” o -O-(alquileno opcionalmente sustituido)-(alcoxi opcionalmente sustituido), e incluye grupos tales como -OCH2CH2OCH3, y residuos de éteres de glicol tales como polietilenglicol, y O(CH2CH2O)xCH3 en la que x es un número entero de 2-20, tal como 2-10, y por ejemplo, 2-5. Otro grupo alcoxi sustituido es hidroxialcoxi o -OCH2(CH2)yOH en la que y es un número entero de 1-10, tal como 1-4.
El término “alcoxicarbonilo sustituido” se refiere al grupo (alquil sustituido)-O-C(O)- en el que el grupo está unido a la estructura parental mediante la funcionalidad carbonilo y en el que sustituido se refiere a alquilo en el que uno o más (hasta 5, tal como hasta 3) átomos de hidrógeno están sustituidos con un sustituyente independientemente elegido de:
-
Ra, -ORb, -O(alquil C1-C2)O- (por ejemplo, metilendioxi-), -SRb, guanidina, guanidina en la que uno o más de los hidrógenos de la guanidina están sustituidos con un grupo alquilo inferior, -NRbRc, halógeno, ciano, nitro, -CORb, -CO2Rb, -CONRbRc, -OCORb, -OCO2Ra, -OCONRbRc, -NRcCORb, -NRcCO2Ra, -NRcCONRbRc, -CO2Rb, -CONRbRc, -NRcCORb, -SORa, -SO2Ra, -SO2NRbRc y -NRcSO2Ra, en las que Ra se elige de alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido; Rb se elige de H, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido; y Rc se elige de hidrógeno y alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido; o Rb y Rc, tomados conjuntamente con el nitrógeno al que están unidos, forman un heterocicloalquilo que contiene nitrógeno de 5 a 7 miembros opcionalmente sustituido que opcionalmente incluye 1 ó 2 heteroátomos adicionales seleccionados de O, N y S en el anillo heterocicloalquilo;
en el que cada grupo opcionalmente sustituido está sin sustituir o independientemente sustituido con uno o más, tales como uno, dos o tres sustituyentes independientemente seleccionados de alquilo C1-C4, arilo, heteroarilo, arilalquil C1-C4-, heteroaril-alquil C1-C4-, haloalquil C1-C4-, -O-alquilo C1-C4, -O-alquil C1-C4-fenilo, -alquil C1-C4-OH, -Ohaloalquilo C1-C4, halógeno, -OH, -NH2, -alquil C1-C4-NH2, -N(alquil C1-C4)(alquilo C1-C4), -NH(alquilo C1-C4), N(alquil C1-C4)(alquil C1-C4-fenilo), -NH(alquil C1-C4-fenilo), ciano, nitro, oxo (como un sustituyente para cicloalquilo, heterocicloalquilo o heteroarilo), -CO2H, -C(O)O-alquilo C1-C4, -CON(alquil C1-C4)(alquilo C1-C4), -CONH(alquilo C1-C4), -CONH2, -NHC(O)(alquilo C1-C4), -NHC(O)(fenilo), -N(alquil C1-C4)C(O)(alquilo C1-C4), -N(alquil C1C4)C(O)(fenilo), -C(O)alquilo C1-C4, -C(O)C1-C4-fenilo, -C(O)-haloalquilo C1-C4, -OC(O)alquilo C1-C4, - SO2(alquilo C1-C4), -SO2(fenilo), -SO2(haloalquilo C1-C4), -SO2NH2, -SO2NH(alquilo C1-C4), -SO2NH(fenilo), -NHSO2(alquilo C1-C4), -NHSO2(fenilo) y -NHSO2(haloalquilo C1-C4).
El término “amino sustituido” se refiere al grupo -NHRd o -NRdRd en los que cada Rd se elige independientemente de: alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, acilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo opcionalmente sustituido, alcoxicarbonilo, sulfinilo y sulfonilo, en los que alquilo, cicloalquilo, arilo, heterocicloalquilo y heteroarilo sustituido se refieren respectivamente a alquilo, cicloalquilo, arilo, heterocicloalquilo y heteroarilo en los que uno o más (hasta 5, tal como hasta 3) átomos de hidrógeno están sustituidos con un sustituyente independientemente elegido de:
-
Ra, -ORb, -O(alquil C1-C2)O- (por ejemplo, metilendioxi-), -SRb, guanidina, guanidina en la que uno o más de los hidrógenos de la guanidina están sustituidos con un grupo alquilo inferior, -NRbRc, halógeno, ciano, nitro, -CORb, -CO2Rb, -CONRbRc, -OCORb, -OCO2Ra, -OCONRbRc, -NRcCORb, -NRcCO2Ra, -NRcCONRbRc, -CO2Rb, -CONRbRc, -NRcCORb, -SORa, -SO2Ra, -SO2NRbRc y -NRcSO2Ra, en las que Ra se elige de alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido; Rb se elige de H, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y heteroarilo opcionalmente sustituido; y Rc se elige de hidrógeno y alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido; o Rb y Rc, tomados conjuntamente con el nitrógeno al que están unidos, forman un heterocicloalquilo que contiene nitrógeno de 5 a 7 miembros opcionalmente sustituido que opcionalmente incluye 1 ó 2 heteroátomos adicionales seleccionados de O, N y S en el anillo heterocicloalquilo;
en el que cada grupo opcionalmente sustituido está sin sustituir o independientemente sustituido con uno o más, tales como uno, dos o tres sustituyentes independientemente seleccionados de alquilo C1-C4, arilo, heteroarilo, arilalquil C1-C4-, heteroaril-alquil C1-C4-, haloalquil C1-C4-, -O-alquilo C1-C4, -O-alquil C1-C4-fenilo, -alquil C1-C4-OH, -Ohaloalquilo C1-C4, halógeno, -OH, -NH2, -alquil C1-C4-NH2, -N(alquil C1-C4)(alquilo C1-C4), -NH(alquilo C1-C4), N(alquil C1-C4)(alquil C1-C4-fenilo), -NH(alquil C1-C4-fenilo), ciano, nitro, oxo (como un sustituyente para cicloalquilo, heterocicloalquilo o heteroarilo), -CO2H, -C(O)O-alquilo C1-C4, -CON(alquil C1-C4)(alquilo C1-C4), -CONH(alquilo C1-C4), -CONH2, -NHC(O)(alquilo C1-C4), -NHC(O)(fenilo), -N(alquil C1-C4)C(O)(alquilo C1-C4), -N(alquil C1C4)C(O)(fenilo), -C(O)alquilo C1-C4, -C(O)C1-C4-fenilo, -C(O)-haloalquilo C1-C4, -OC(O)alquilo C1-C4, - SO2(alquilo C1-C4), -SO2(fenilo), -SO2(haloalquilo C1-C4), -SO2NH2, -SO2NH(alquilo C1-C4), -SO2NH(fenilo), -NHSO2(alquilo C1-C4), -NHSO2(fenilo) y -NHSO2(haloalquilo C1-C4), y en los que acilo opcionalmente sustituido, alcoxicarbonilo, sulfinilo y sulfonilo son como se definen en el presente documento.
Compuestos de fórmula I incluyen, pero no se limitan a, isómeros ópticos de compuestos de fórmula I, racematos y otras mezclas de los mismos. Además, los compuestos de fórmula I incluyen formas Z y E (o formas cis y trans) de compuestos con dobles enlaces carbono-carbono. En aquellas situaciones, los enantiómeros o diaestereómeros individuales, es decir, formas ópticamente activas, pueden obtenerse por síntesis asimétrica o por resolución de los racematos. La resolución de los racematos puede llevarse a cabo, por ejemplo, mediante procedimientos convencionales tales como cristalización en presencia de un agente de resolución, o cromatografía, usando, por ejemplo, una columna de cromatografía de líquidos de alta presión quiral (HPLC). Cuando los compuestos de fórmula I existen en diversas formas tautómeras, las entidades químicas de la presente invención incluyen todas las formas tautómeras del compuesto.
Los compuestos de fórmula I también incluyen formas cristalinas y amorfas de los compuestos que incluyen, por ejemplo, polimorfos, pseudopolimorfos, solvatos, hidratos, polimorfos sin solvatar (incluyendo anhidratos), polimorfos conformacionales y formas amorfas de los compuestos, además de mezclas de los mismos. “Forma cristalina”, “polimorfo” y “forma novedosa” pueden usarse indistintamente en el presente documento, y pretenden incluir todas las formas cristalinas y amorfas del compuesto que incluyen, por ejemplo, polimorfos, pseudopolimorfos, solvatos, hidratos, polimorfos sin solvatar (incluyendo anhidratos), polimorfos conformacionales y formas amorfas, además de mezclas de los mismos, a menos que se refiera a una forma cristalina o amorfa particular.
Las entidades químicas desveladas en el presente documento incluyen, pero no se limitan a, compuestos de fórmula I y todas las formas farmacéuticamente aceptables de los mismos. Formas farmacéuticamente aceptables de los compuestos enumerados en el presente documento incluyen sales farmacéuticamente aceptables, quelatos, complejos no covalentes, profármacos, y mezclas de los mismos. En ciertas realizaciones, los compuestos descritos en el presente documento están en forma de sales farmacéuticamente aceptables. Por tanto, los términos “entidad química” y “entidades químicas” también engloban sales farmacéuticamente aceptables, quelatos, complejos no covalentes, profármacos y mezclas.
“Sales farmacéuticamente aceptables” incluyen, pero no se limitan a, sales con ácidos inorgánicos tales como clorhidrato, fosfato, difosfato, bromhidrato, sulfato, sulfinato, nitrato y sales similares; además de sales con un ácido orgánico tal como malato, maleato, fumarato, tartrato, succinato, citrato, acetato, lactato, metanosulfonato, ptoluenosulfonato, 2-hidroxietilsulfonato, benzoato, salicilato, estearato y alcanoato tal como acetato, HOOC-(CH2)n-COOH en la que n es 0-4, y sales similares. Similarmente, cationes farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, sodio, potasio, calcio, aluminio, litio y amonio.
Además, si el compuesto de fórmula I se obtiene como una sal de adición de ácido, la base libre puede obtenerse basificando una disolución de la sal de ácido. En cambio, si el producto es una base libre, una sal de adición, particularmente una sal de adición farmacéuticamente aceptable, puede producirse disolviendo la base libre en un
disolvente orgánico adecuado y tratando la disolución con un ácido, según procedimientos convencionales para preparar sales de adición de ácido a partir de compuestos de base. Aquellos expertos en la materia reconocerán diversas metodologías sintéticas que pueden usarse para preparar sales de adición farmacéuticamente aceptables no tóxicas.
Como se observa anteriormente, los profármacos también se encuentran dentro del alcance de las entidades químicas, por ejemplo, derivados de éster o amida de los compuestos de fórmula I. El término “profármacos” incluye cualquier compuesto que se convierta en compuestos de fórmula I cuando se administran a un paciente, por ejemplo, tras el procesamiento metabólico del profármaco. Ejemplos de profármacos incluyen, pero no se limitan a, acetato, formiato y benzoato y derivados similares de grupos funcionales (tales como grupos alcohol o amina) en los compuestos de fórmula I.
El término “solvato” se refiere a la entidad química formada por la interacción de un disolvente y un compuesto. Solvatos adecuados son solvatos farmacéuticamente aceptables, tales como hidratos, que incluyen, por ejemplo, hemi-hidratos, monohidratos, dihidratos, trihidratos, etc.
El término “quelato” se refiere a la entidad química formada por la coordinación de un compuesto con un ión metálico en dos (o más) puntos.
El término “complejo no covalente” se refiere a la entidad química formada por la interacción de un compuesto y otra molécula en la que un enlace covalente no se forma entre el compuesto y la molécula. Por ejemplo, la complejación puede producirse mediante interacciones de van der Waals, enlace de hidrógeno e interacciones electrostáticas (también llamado enlace iónico).
El término “agente activo” se usa para indicar una entidad química que tiene actividad biológica. En ciertas realizaciones, un “agente activo” es un compuesto que tiene utilidad farmacéutica.
El término “cantidad terapéuticamente eficaz” de una entidad química de la presente invención significa una cantidad eficaz cuando se administra a un paciente humano o no humano, para tratar una enfermedad, por ejemplo, una cantidad terapéuticamente eficaz puede ser una cantidad suficiente para tratar una enfermedad o trastorno sensible a la activación de miosina. La cantidad terapéuticamente eficaz puede determinarse experimentalmente, por ejemplo, ensayando la concentración en sangre de la entidad química, o teóricamente, calculando la biodisponibilidad.
Por “significativo” se indica cualquier cambio detectable que sea estadísticamente significativo en una prueba paramétrica estándar de significancia estadística tal como la prueba de la t de Student en la que p < 0,05.
“Paciente” se refiere a un animal, tal como un mamífero, por ejemplo, un ser humano, que ha sido o será el objeto del tratamiento, observación o experimento. Los procedimientos de la invención pueden ser útiles en aplicaciones tanto de terapia humana como veterinarias. En algunas realizaciones, el paciente es un mamífero, y en algunas realizaciones el paciente es humano.
“Tratamiento” o “tratar” significa cualquier tratamiento de una enfermedad en un paciente, que incluye:
a) prevenir la enfermedad, es decir, hacer que no se desarrollen los síntomas clínicos de la enfermedad;
b) inhibir la enfermedad;
c) ralentizar o detener el desarrollo de síntomas clínicos; y/o
d) aliviar la enfermedad, es decir, provocar la regresión de síntomas clínicos.
Los compuestos de fórmula I pueden nombrarse y numerarse (por ejemplo, usando NamExpert™ disponible de Cheminnovation o la función automática de asignación de nombres ChemDraw Ultra versión 9.0 de Cambridge Soft Corporation) como se describe más adelante. Por ejemplo, el compuesto:
es decir, el compuesto según la fórmula I en la que W, X, Y y Z son -C=, n es uno, R1 es piperazinilo sustituido, R2 es 6-metil-piridin-3-ilo, R18 es hidrógeno, R19 es hidrógeno, R3 es hidrógeno, R4 es hidrógeno, R5 es hidrógeno, R6 es hidrógeno, R7 es hidrógeno y R13 es hidrógeno puede llamarse 4-[(3-{[(6-metil-3piridil)amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo.
Asimismo, el compuesto:
es decir, el compuesto según la fórmula I en la que W, X, Y y Z son -C=, n es uno, R1 es piperazinilo sustituido, R2 es 6-metil-piridin-3-ilo, R18 es hidrógeno, R19 es hidrógeno, R3 es hidrógeno, R4 es hidrógeno, R5 es hidrógeno, R6 es hidrógeno, R7 es hidrógeno y R13 es flúor puede llamarse N-{3-[(1S)-1-(4-acetilpiperazinil)etil]-2-fluorofenil}[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida.
Asimismo, el compuesto
es decir, el compuesto según la fórmula I en la que W, X, Y y Z son -C=, n es uno, R1 es piperazinilo sustituido, R2 es 6-metil-piridin-3-ilo, R18 es hidrógeno, R19 es hidrógeno, R3 es hidrógeno, R4 es hidrógeno, R5 es hidrógeno, R6 es hidrógeno, R7 es hidrógeno y R13 es flúor puede llamarse éster metílico de ácido [3-fluoro-5-(3-piridin-3-il-ureido)bencil]-metil-carbámico o 4-[(2-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo.
Las entidades químicas descritas en el presente documento pueden sintetizarse utilizando técnicas muy conocidas en la técnica, por ejemplo, como se ilustra más adelante con referencia a los esquemas de reacción.
A menos que se especifique lo contrario, las reacciones descritas en el presente documento tienen lugar a presión atmosférica, generalmente dentro de un intervalo de temperatura de -10ºC a 110ºC. Además, excepto como se emplea en los ejemplos o como se especifica de otro modo, tiempos y condiciones de reacción pretenden ser aproximadas, por ejemplo, teniendo lugar a aproximadamente presión atmosférica dentro de un intervalo de temperatura de aproximadamente -10ºC a aproximadamente 110ºC durante un periodo de aproximadamente 1 a aproximadamente 24 horas; las reacciones que se deja que transcurran durante la noche promedian un periodo de aproximadamente 16 horas.
Los términos “disolvente”, “disolvente orgánico” o “disolvente inerte” significan cada uno un disolvente inerte en las condiciones de la reacción que se describen conjuntamente con los mismos [que incluyen, por ejemplo, benceno, tolueno, acetonitrilo, tetrahidrofurano (“THF”), dimetilformamida (“DMF”), cloroformo, cloruro de metileno (o diclorometano), éter dietílico, metanol, piridina y similares]. A menos que se especifique lo contrario, los disolventes usados en las reacciones de la presente invención son disolventes orgánicos inertes.
El aislamiento y purificación de las entidades químicas y productos intermedios descritos en el presente documento pueden efectuarse, si se desea, por cualquier procedimiento de separación o de purificación adecuado tal como, por ejemplo, filtración, extracción, cristalización, cromatografía en columna, cromatografía en capa fina o cromatografía en capa gruesa, o una combinación de estos procedimientos. Ilustraciones específicas de procedimientos de separación y aislamiento adecuados pueden ser tenidos por referencia para los ejemplos en el presente documento más adelante. Sin embargo, también pueden usarse otros procedimientos de separación o aislamiento equivalentes.
Si se desea, los isómeros (R) y (S) pueden resolverse mediante procedimientos conocidos para aquellos expertos en la materia, por ejemplo, por formación de sales o complejos diaestereoisoméricos que pueden separarse, por ejemplo, por cristalización; mediante formación de derivados diaestereoisoméricos que pueden separarse, por ejemplo, por cristalización, cromatografía de gas-líquido o de líquidos; reacción selectiva de un enantiómero con un reactivo específico para enantiómero, por ejemplo, oxidación o reducción enzimática, seguido de separación de los enantiómeros modificados y sin modificar; o cromatografía gas-líquido o de líquidos en un entorno quiral, por ejemplo, sobre un soporte quiral, tal como sílice con un ligando quiral unido o en presencia de un disolvente quiral. Alternativamente, un enantiómero específico puede sintetizarse por síntesis asimétrica usando reactivos, sustratos, catalizadores o disolventes ópticamente activos, o convirtiendo un enantiómero en el otro por transformación asimétrica.
Muchos de los compuestos de partida opcionalmente sustituidos 101, 103, 201, 301 y otros reactivos están comercialmente disponibles, por ejemplo, de Aldrich Chemical Company (Milwaukee, WI), o pueden prepararse fácilmente por aquellos expertos en la materia usando metodología sintética comúnmente empleada.
Esquema de reacción 1
Preparación de compuestos de Fórmula I Con referencia al Esquema de reacción 1, un matraz equipado con un agitador magnético, condensador de reflujo y pozo térmico, bajo nitrógeno, se carga con fosgeno o un equivalente de fosgeno (normalmente trifosgeno) y un disolvente aprótico no polar tal como diclorometano o tetrahidrofurano. 10 Una disolución de un compuesto de fórmula 101 en un disolvente aprótico no polar tal como diclorometano o tetrahidrofurano se añade gota a gota durante aproximadamente 10-60 minutos, y la disolución se deja en agitación entre 1 a 15 h. Un compuesto de fórmula 103 se añade en porciones, y la disolución se agita durante aproximadamente 10-60 min. Una base, tal como DIEA, se añade gota a gota durante aproximadamente una hora, y la disolución se deja en agitación durante aproximadamente 1-15 h. El producto, un compuesto de fórmula 105, se
15 aísla y se purifica.
Esquema de reacción 2
20 El Esquema de reacción 2 ilustra una síntesis alternativa de compuestos de fórmula 105. El isocianato de fórmula 201a puede formarse y aislarse independientemente de cualquier amina correspondiente (es decir, Rb-NH2) usando fosgeno o un equivalente de fosgeno o del ácido carboxílico correspondiente (es decir, Rb-COOH) usando una transposición de Curtius o Hoffman. Alternativamente, el compuesto en fórmula 210b en la que X es igual a un grupo saliente tal como p-nitrofenol puede prepararse in situ (por ejemplo, Referencia de síntesis aquí). Una mezcla de
25 compuestos de fórmula 101 y 201 en un disolvente aprótico tal como diclorometano o tetrahidrofurano de -40ºC a 110ºC se deja en agitación de 1 a 15 h. El producto, un compuesto de fórmula 105, se aísla y se purifica.
Esquema de reacción 3
Con referencia al Esquema de reacción 3, el alcohol bencílico de fórmula 301 se convierte en un grupo saliente (“Lv” tal como halógeno, mesilato o triflato) para formar 302 usando metodología sintética comúnmente empleada (por ejemplo, véase: “Comprehensive Organic Transformation” LaRock, Richard C., 1989, VCH publishers, Inc. pág. 353365).
Una mezcla de un compuesto de fórmula 302 y amina de fórmula HNR8R9 en un disolvente aprótico tal como diclorometano o DMF de -40ºC a 110ºC se deja en agitación de 1 a 15 h. El producto, un compuesto de fórmula 202, se aísla y se purifica. Alternativamente, el alcohol bencílico de fórmula 301 se oxida al aldehído de fórmula 303 usando metodología sintética comúnmente empleada (por ejemplo, véase: “Comprehensive Organic Transformation” LaRock, Richard C., 1989, VCH publishers, Inc. pág. 604-615).
Una mezcla de un compuesto de fórmula 303 y amina de fórmula HNR8R9 en un disolvente tal como diclorometano con un agente reductor tal como triacetoxiborohidruro con o sin un ácido tal como ácido acético de -40ºC a 110ºC se deja en agitación durante entre 1 a 36 h. El producto, un compuesto de fórmula 202, se aísla y se purifica. Alternativamente, el ácido carboxílico de fórmula 304 se acopla a una amina usando metodología sintética comúnmente empleada (por ejemplo, véase: “Comprehensive Organic Transformation” LaRock, Richard C., 1989, VCH publishers, Inc. pág. 972-76) para formar la amida 305. La amida 305 se reduce a un compuesto de fórmula 202 usando metodología sintética comúnmente empleada tal como tratando 305 con borano-sulfuro de dimetilo en THF de -40ºC a reflujo durante 1 a 96 h.
Un compuesto de fórmula 202 en la que Q es bromo, cloro, nitro, amino, o un amino protegido puede conferirse a un compuesto de fórmula 101 usando metodología sintética comúnmente empleada. Adicionalmente, Q es ciano, CR6R7-bromo, -CR6R7-cloro, -CR6R7-nitro, -CR6R7-ciano, -CR6R7-amino, o un -CR6R7-amino protegido puede conferirse a un compuesto de fórmula 101 usando metodología sintética comúnmente empleada. Por ejemplo, si Q es nitro, puede reducirse a la amina correspondiente usando hidrógeno con un catalizador de Pd/C.
Esquema de reacción 4
Con referencia al Esquema de reacción 4, Etapa 1, a una disolución de un compuesto de fórmula 400 en NMP se añade un exceso (tal como aproximadamente al menos 2 equivalentes) de cianuro de sodio y un exceso (tal como al
10 menos 1 equivalente, por ejemplo, 1,35 equivalentes) de bromuro de níquel (II). Se añade NMP adicional, y la disolución se calienta suavemente a aproximadamente 200ºC y se agita durante aproximadamente 4 días. El producto, un compuesto de fórmula 401, se aísla y se purifica opcionalmente.
0ºC de un compuesto de fórmula 401 en un disolvente inerte tal como diclorometano se añade
׽ A una disolución a
15 un exceso (tal como dos o más equivalentes) de un agente reductor, tal como DIBAL-H (tal como una disolución 1 M
ºC. El producto, ≤ 03,5 horas, manteniendo una temperatura de reacción interna
׽ de DIBAL-H) gota a gota durante
una mezcla de compuestos de fórmula 402A y 402B, se aísla y se purifica opcionalmente.
Con referencia al Esquema de reacción 4, Etapa 3, a una disolución de una mezcla de compuestos de fórmula 402A
20 y 402B en un disolvente inerte tal como THF se añade un exceso (tal como aproximadamente 1,05 equivalentes) de un compuesto de fórmula R1-H en la que R1 es amino opcionalmente sustituido o heterocicloalquilo opcionalmente sustituido y un exceso (tal como aproximadamente 1,5 equivalentes) de un agente reductor tal como triacetoxiborohidruro en porciones durante -40 min, manteniendo una temperatura de reacción interna por debajo de aproximadamente 45ºC. El producto, un compuesto de fórmula 403, se aísla y se purifica opcionalmente.
25 Con referencia al Esquema de reacción 4, Etapa 4, a una disolución de un compuesto de fórmula 403 en un disolvente tal como acetona se añade aproximadamente un equivalente de un compuesto de fórmula R2-NCO gota a gota. La reacción se agita durante aproximadamente una hora y opcionalmente se calienta a reflujo. El producto, un compuesto de fórmula 405, se aísla y se purifica opcionalmente.
Una mezcla racémica se dispone opcionalmente sobre una columna de cromatografía y se separa en enantiómeros
(R) y (S).
Un compuesto de fórmula I se pone opcionalmente en contacto con un ácido farmacéuticamente aceptable para formar la sal de adición de ácido correspondiente.
Una sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable de fórmula I se pone opcionalmente en contacto con una base para formar la base libre correspondiente de Fórmula I.
La presente invención proporciona al menos una entidad química elegida de los siguientes compuestos:
[(3-{[4-(azetidinilsulfonil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)amino]-N-(6-metil(3-piridil))carboxamida; 1-(3-((4-(azetidin-1-ilsulfonil)piperazin-1-il)metil)-2-fluorofenil)-3-(piridin-3-il)urea; N-(3-{[4-(azetidinilcarbonil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)(4-piridilamino)carboxamida; N-(3-{[4-(azetidinilcarbonil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(2-metil(4-piridil))amino]carboxamida; N-(3-{ [4-(azetidinilsulfonil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)(4-piridilamino)carboxamida; N-(3-{[4-((1Z)-1-azetidinil-2-ciano-2-azavinil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida; N-(3-{[4-(azetidinilcarbonil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida; N-(3-{[4-((1Z)-1-azetidinil-2-ciano-2-azavinil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(2-metil(4-piridil))amino]carboxamida; N-(3-{[(3R)-4-(azetidinilsulfonil)-3-metilpiperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida; (2S)-2-(azetidinilcarbonil)-4-[(2-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo; N-(3-{ [(3R)-4-(azetidinilcarbonil)-3-metilpiperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida; N-(3-{[(3S)-4-(azetidinilcarbonil)-3-metilpiperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida; N-(3-{[(3S)-4-(azetidinilcarbonil)-3-(metoximetil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino] carboxamida; N-(3-{[(3S)-4-(azetidinilsulfonil)-3-(metoximetil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-iridil))amino] carboxamida; y (R)-1-(3-((4-(azetidin-1-carbonil)-3-metilpiperazin-1-il)metil)-2-fluorofenil)-3-(6-metilpiridin-3-il)urea;
y sales, quelatos, complejos no covalentes, profármacos y mezclas farmacéuticamente aceptables de los mismos; en la que el término “quelato” se refiere a la entidad química formada por la coordinación del compuesto con un ión metálico en dos o más puntos; el término “complejo no covalente” se refiere a la entidad química formada por la interacción del compuesto y otra molécula en la que un enlace covalente no se forma entre el compuesto y la molécula; y el término “profármaco” se refiere a un derivado de éster o amida del compuesto que se convierte en el compuesto tras el procesamiento metabólico del profármaco.
Las entidades químicas descritas en el presente documento son selectivas y modulan el sarcómero cardíaco, y son útiles para unirse a y/o potenciar la actividad de miosina cardíaca, aumentando la tasa a la que la miosina hidroliza ATP. Como se usa en este contexto, “modular” significa tanto aumentar como disminuir la actividad de miosina, mientras que “potenciar” significa aumentar la actividad. También se ha determinado en el ensayo de compuestos representativos de la invención que su administración también puede aumentar la fuerza contráctil en fibra muscular cardíaca.
Las entidades químicas, composiciones farmacéuticas y procedimientos de la invención se usan para tratar enfermedad cardíaca que incluye, pero no se limita a: insuficiencia cardíaca congestiva aguda (o descompensada), e insuficiencia cardíaca crónica congestiva; particularmente enfermedades asociadas a disfunción cardíaca sistólica. Utilidades terapéuticas adicionales incluyen administración para estabilizar la función cardíaca en pacientes que esperan un trasplante de corazón, y para ayudar a un corazón parado o ralentizado a reanudar la función normal tras el uso de una bomba de derivación. Las entidades químicas, composiciones farmacéuticas y procedimientos también pueden usarse para aumentar el grado, pero no la velocidad, de contracción cardíaca, para aumentar el grado de contracción, pero no ± dP/dt, para modular el sarcómero cardíaco, o para potenciar miosina cardíaca.
La hidrólisis de ATP es empleada por la miosina en el sarcómero para producir fuerza. Por tanto, un aumento en la hidrólisis de ATP se correspondería con un aumento en la fuerza o velocidad de contracción de músculo. En presencia de actina, la actividad de miosina ATPasa se estimula >100 veces. Por tanto, la hidrólisis de ATP no sólo mide la actividad de miosina enzimática, sino también su interacción con el filamento de actina. Un compuesto que modula el sarcómero cardíaco puede identificarse por un aumento o disminución en la tasa de hidrólisis de ATP por miosina, en ciertas realizaciones, presentando un aumento de 1,4 veces a concentraciones inferiores a 10 µM (tal como inferiores a 1 µM). Ensayos para tal actividad pueden emplear miosina de una fuente humana, aunque normalmente se usa la miosina de otros organismos. También se usan sistemas que modelan la función reguladora de calcio en la unión de miosina al filamento delgado decorado.
Alternativamente, una preparación de sarcómero bioquímicamente funcional puede usarse para determinar actividad de ATPasa in vitro, por ejemplo, como se describe en el número de serie de EE.UU. 09/539.164 presentado el 29 de marzo de 2000. El comportamiento bioquímico funcional del sarcómero, que incluye sensibilidad al calcio de la hidrólisis de ATPasa, puede reconstituirse combinando sus componentes individuales purificados (que particularmente incluyen sus componentes reguladores y miosina). Otra preparación funcional es el ensayo de motilidad in vitro. Puede realizarse añadiendo compuesto de prueba a un portaobjetos unido a miosina y observando la velocidad de filamentos de actina que se deslizan sobre la superficie de vidrio cubierta de miosina (Kron SJ. (1991) Methods Enzymol 196:399-416).
La tasa in vitro de hidrólisis de ATP establece una correlación entre actividad potenciadora de miosina, que puede determinarse monitorizando la producción de tanto ADP como fosfato, por ejemplo, como se describe en nº de serie 09/314.464 presentada el 18 de mayo de 1999. La producción de ADP también puede monitorizarse acoplando la producción de ADP a oxidación de NADH (usando las enzimas piruvato cinasa y lactato deshidrogenasa) y monitorizando el nivel de NADH tanto por absorbancia como fluorescencia (Greengard, P., Nature 178 (Parte 4534): 632-634 (1956); Mol Pharmacol 1970 Jan;6(1):31-40). La producción de fosfato puede monitorizarse usando purina nucleósido fosforilasa para acoplar la producción de fosfato a la escisión de un análogo de purina, que produce tanto un cambio en la absorbancia (Proc Natl Acad Sci U S A 1992 Jun 1;89(11):4884-7) como fluorescencia (Biochem J 1990 Mar 1;266(2):611-4). Aunque puede emplearse una única medición, generalmente se tomarán múltiples mediciones de la misma muestra en momentos diferentes para determinar la tasa absoluta de la actividad de proteína; tales mediciones tienen mayor especificidad, particularmente en presencia de compuestos de prueba que tienen propiedades de absorbancia o fluorescencia similares a las de la lectura enzimática.
Los compuestos de prueba pueden ensayarse en un modo altamente paralelo usando placas de multipocillos disponiendo los compuestos tanto individualmente en pocillos como probándolos en mezclas. Los componentes de ensayo que incluyen el complejo de proteína diana, enzimas de acoplamiento y sustratos y ATP pueden entonces añadirse a los pocillos y la absorbancia o fluorescencia de cada pocillo de la placa puede medirse con un lector de placas.
Un procedimiento usa un formato de placa de 384 pocillos y un volumen de reacción de 25 µl. Se usa un sistema de enzimas acopladas de piruvato cinasa/lactato deshidrogenasa (Huang TG y Hackney DD. (1994) J Biol Chem 269(23):16493-16501) para medir la tasa de hidrólisis de ATP en cada pocillo. Como será apreciado por aquellos en la materia, los componentes de ensayo se añaden en tampones y reactivos. Como los procedimientos explicados brevemente en el presente documento permiten mediciones cinéticas, los periodos de incubación se optimizan para dar señales de detección adecuadas con respecto al fondo. El ensayo se hace en tiempo real dando la cinética de hidrólisis de ATP, que aumenta la relación de señal con respecto al ruido del ensayo.
La modulación de ATPasa de fibra muscular cardíaca y/o fuerza contráctil también puede medirse usando fibras cardíacas permeabilizadas con detergente (también se denominan fibras cardíacas sin membrana) o miofibrillas (fragmentos de músculo subcelular), por ejemplo, como se describe por Haikala H, y col. (1995) J Cardiovasc Pharmacol 25(5):794-801. Las fibras cardíacas sin membrana retienen su organización sarcomérica intrínseca, pero no retienen todos los aspectos del ciclo de calcio celular, este modelo ofrece dos ventajas: primera, la membrana celular no es una barrera a la penetración de compuestos y segunda, la concentración de calcio está controlada. Por tanto, cualquier aumento en la ATPasa o fuerza contráctil es una medida directa del efecto del compuesto de prueba sobre proteínas sarcoméricas. Las mediciones de ATPasa se hacen usando procedimientos como se ha descrito anteriormente. Las mediciones de tensión se hacen montando un extremo de la fibra muscular a un poste estacionario y el otro extremo a un transductor que puede medir fuerza. Después de estirar la fibra para eliminar la distensión, el transductor de fuerza registra tensión elevada a medida que la fibra empieza a contraerse. Esta medición se llama tensión isométrica, ya no se permite que la fibra se acorte. La activación de la fibra muscular permeabilizada se lleva a cabo disponiéndola en una disolución de calcio tamponada, seguido de la adición de compuesto de prueba o control. Cuando se prueba de este modo, entidades químicas descritas en el presente documento produjeron un aumento en la fuerza a concentraciones de calcio asociadas a actividad contráctil fisiológica, pero muy poco aumento de fuerza en tampón de relajación a bajas concentraciones de calcio o en ausencia de calcio (punto de datos de EGTA).
La selectividad para el sarcómero cardíaco y la miosina cardíaca pueden determinarse sustituyendo componentes cardíacos de no sarcómero y miosina en uno o más de los ensayos anteriormente descritos y comparando los resultados obtenidos contra aquellos obtenidos usando los equivalentes cardíacos.
Una capacidad de la entidad química para aumentar la tasa de ATPasa observada en un ensayo de sarcómero reconstituido in vitro o miofibrilla podría resultar del aumento de la tasa de renovación de S1-miosina o, alternativamente, elevada sensibilidad de un filamento de actina decorado a la activación de Ca++. Para distinguir entre estos dos posibles modos de acción, inicialmente se mide el efecto de la entidad química sobre la actividad de ATPasa de S1 con filamentos de actina sin decorar. Si se observa un aumento de la actividad, podría refutarse el efecto de la entidad química sobre el aparato regulador sensible al Ca. Un segundo ensayo más sensible puede emplearse para identificar entidades químicas cuyo efecto activante sobre la S1-miosina se potencia en presencia de una actina decorada (en comparación con filamentos de actina puros). En este segundo ensayo se comparan las actividades de S1 cardíaca y S1 esquelética sobre filamentos de actina regulados cardíacos y esqueléticos (en las 4 permutaciones).
La evaluación inicial de la actividad in vivo puede determinarse en modelos celulares de contractilidad de miocitos, por ejemplo, como se describe por Popping S y col. ((1996) Am. J. Physiol. 271: H357-H364) y Wolska BM y col. ((1996) Am. J. Physiol. 39:H24-H32). Una ventaja del modelo de miocitos es que los sistemas de componentes que producen cambios en la contractilidad pueden aislarse y se determinan el (los) principal(es) sitio(s) de acción. Las entidades químicas con actividad celular (por ejemplo, entidades químicas de selección que tienen el siguiente perfil: > 120% de aumento en el acortamiento fraccional con respecto al basal a 2 µM, o producen cambios en la longitud diastólica (< 5% de cambio)) pueden entonces evaluarse en modelos de órganos completos tal como el modelo de corazón aislado (Langendorff) de función cardíaca, usando ecocardiografía in vivo o medidas hemodinámicas invasivas y en modelos de insuficiencia cardíaca basados en animales tales como el modelo de oclusión de la arteria coronaria izquierda de ratas. Por último lugar, la actividad para tratar enfermedad cardíaca se demuestra en ensayos clínicos humanos controlados por placebo ciegos.
Las entidades químicas descritas en el presente documento se administran a una dosificación terapéuticamente eficaz, por ejemplo, una dosificación suficiente proporcionando tratamiento para los estados de enfermedad previamente descritos. Aunque los niveles de dosificación humana tienen todavía que optimizarse para las entidades químicas descritas en el presente documento, generalmente, una dosis diaria es de aproximadamente 0,05 a 100 mg/kg de peso corporal; en ciertas realizaciones, aproximadamente 0,10 a 10,0 mg/kg de peso corporal, y en ciertas realizaciones, aproximadamente 0,15 a 1,0 mg/kg de peso corporal. Por tanto, para administración a una persona de 70 kg, en ciertas realizaciones, el intervalo de dosificación sería aproximadamente 3,5 a 7000 mg por día; en ciertas realizaciones, aproximadamente 7,0 a 700,0 mg por día, y en ciertas realizaciones, aproximadamente 10,0 a 100,0 mg por día. La cantidad de entidad química administrada dependerá, por supuesto, del sujeto y estado de enfermedad que está tratándose, la gravedad de la aflicción, el modo y programa de administración y el juicio del médico prescriptor; por ejemplo, un intervalo de dosis probable para administración por vía oral sería aproximadamente 70 a 700 mg por día, mientras que para administración intravenosa un intervalo de dosis probable sería aproximadamente 70 a 700 mg por día dependiendo de la farmacocinética del compuesto.
La administración de las entidades químicas descritas en el presente documento puede ser por cualquiera de los modos aceptados de administración para agentes que sirven para utilidades similares que incluyen, pero no se limitan a, por vía oral, sublingualmente, subcutáneamente, intravenosamente, intranasalmente, tópicamente, transdérmicamente, intraperitonealmente, intramuscularmente, intrapulmonarmente, vaginalmente, rectalmente o intraocularmente. La administración por vía oral y parenteral son habituales en el tratamiento de las indicaciones que son el objeto de la presente invención.
Composiciones farmacéuticamente aceptables incluyen formas de dosificación sólidas, semi-sólidas, líquidas y de aerosol tales como, por ejemplo, comprimidos, cápsulas, polvos, líquidos, suspensiones, supositorios, aerosoles o similares. Las entidades químicas también pueden administrarse en formas de dosificación de liberación sostenida o controlada, que incluyen inyecciones de liberación controlada, bombas osmóticas, píldoras, parches transdérmicos (incluyendo electrotransporte), y similares, para administración pulsada prolongada y/o controlada a una tasa predeterminada. En ciertas realizaciones, las composiciones se proporcionan en formas de dosificación unitaria adecuadas para una única administración de una dosis precisa.
Las entidades químicas descritas en el presente documento pueden administrarse tanto solas como más normalmente en combinación con un vehículo, excipiente farmacéutico convencional o similares (por ejemplo, manitol, lactosa, almidón, estearato de magnesio, sacarina sódica, talco, celulosa, croscarmelosa de sodio, glucosa, gelatina, sacarosa, carbonato de magnesio y similares). Si se desea, la composición farmacéutica también puede contener cantidades menores de sustancias auxiliares no tóxicas tales como agentes humectantes, agentes emulsionantes, agentes solubilizantes, agentes de tamponamiento del pH y similares (por ejemplo, acetato sódico, citrato de sodio, derivados de ciclodextrina, monolaurato de sorbitano, acetato de trietanolamina, oleato de trietanolamina, y similares). Generalmente, dependiendo del modo previsto de administración, la composición farmacéutica contendrá aproximadamente del 0,005% al 95%; en ciertas realizaciones, aproximadamente del 0,5% al 50% en peso de una entidad química. Procedimientos actuales de preparación de tales formas de dosificación son conocidos, o serán evidentes para aquellos expertos en esta materia; por ejemplo, véase Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pensilvania.
Además, las entidades químicas descritas en el presente documento pueden co-administrarse con, y las composiciones farmacéuticas pueden incluir, otros agentes medicinales, agentes farmacéuticos, adyuvantes y similares. Agentes activos adicionales adecuados incluyen, por ejemplo: terapias que retardan la progresión de insuficiencia cardíaca regulando por disminución la estimulación neurohormonal del corazón e intentan prevenir la remodelación cardíaca (por ejemplo, inhibidores de ACE o β-bloqueante); terapias que mejoran la función cardíaca estimulando la contractilidad cardíaca (por ejemplo, agentes inotrópicos positivos tales como el agonista βadrenérgico dobutamina o el inhibidor de fosfodiesterasa milrinona); y terapias que reducen la precarga cardíaca
(por ejemplo, diuréticos tales como furosemida). Otros agentes activos adicionales adecuados incluyen vasodilatadores, digitoxina, anticoagulantes, antagonistas de mineralocorticoides, bloqueantes de receptores de angiotensina, nitroglicerina, otros inótropos, y cualquier otra terapia usada en el tratamiento de insuficiencia cardíaca.
En ciertas realizaciones, las composiciones tomarán la forma de una píldora o comprimido y, por tanto, la composición contendrá, junto con el principio activo, un diluyente tal como lactosa, sacarosa, fosfato de dicalcio o similares; un lubricante tal como estearato de magnesio o similares; y un aglutinante tal como almidón, goma arábiga, polivinilpirrolidina, gelatina, celulosa, derivados de celulosa o similares. En otra forma de dosificación sólida, un polvo, maruma, disolución o suspensión (por ejemplo, en carbonato de propileno, aceites vegetales o triglicéridos) está encapsulado en una cápsula de gelatina.
Composiciones líquidas farmacéuticamente administrables pueden prepararse, por ejemplo, disolviendo, dispersando, etc., al menos una entidad química y adyuvantes farmacéuticos opcionales en un vehículo (por ejemplo, agua, solución salina, dextrosa acuosa, glicerol, glicoles, etanol o similares) para formar una disolución o suspensión. Los inyectables pueden prepararse en formas convencionales, tanto como disoluciones líquidas o suspensiones como emulsiones, o en formas sólidas adecuadas para disolución o suspensión en líquido antes de inyección. El porcentaje de entidades químicas contenido en tales composiciones parenterales es altamente dependiente de la naturaleza específica de las mismas, además de la actividad de las entidades químicas y las necesidades del sujeto. Sin embargo, los porcentajes de principio activo del 0,01% al 10% en disolución son empleables, y serán mayores si la composición es un sólido que se diluirá posteriormente a los porcentajes anteriores. En ciertas realizaciones, la composición comprenderá el 0,2-2% del agente activo en disolución.
Las composiciones farmacéuticas de las entidades químicas descritas en el presente documento también pueden administrarse al tracto respiratorio como un aerosol o disolución para un nebulizador, o como un polvo microfino para insuflación, solo o en combinación con un vehículo inerte tal como lactosa. En un caso tal, las partículas de la composición farmacéutica tienen diámetros inferiores a 50 micrómetros, en ciertas realizaciones, inferiores a 10 micrómetros.
Generalmente, para emplear las entidades químicas descritas en el presente documento en un procedimiento de selección para la unión a miosina, la miosina se une a un soporte y un compuesto de la invención se añade al ensayo. Alternativamente, las entidades químicas descritas en el presente documento pueden unirse al soporte y añadirse la miosina. Clases de compuestos entre los cuales pueden encontrarse agentes de unión novedosos incluyen anticuerpos específicos, aglutinantes no naturales identificados en selecciones de bibliotecas químicas, análogos de péptidos, etc. De particular interés son los ensayos de cribado para agentes candidatos que tienen una baja toxicidad para células humanas. Puede usarse una amplia variedad de ensayos para este fin, que incluyen ensayos de unión proteína-proteína in vitro marcada, ensayos de desplazamiento de movilidad electroforética, inmunoensayos para la unión a proteína, ensayos funcionales (ensayos de fosforilación, etc.) y similares. Véase, por ejemplo, la patente de EE.UU. nº 6.495.337.
Los siguientes ejemplos sirven para describir más completamente el modo de uso de la invención anteriormente descrita. Se entiende que estos ejemplos no sirven de ninguna forma para limitar el verdadero alcance de la presente invención, sino que se presentan para fines ilustrativos.
Ejemplo 1 Etapa 1
A una disolución de 1,0 eq de 1A en DMF seca (0,37 M) se añadió Zn(CN)2 (0,92 eq) y Pd(PPh3)4 (0,058 eq). La mezcla de reacción se purgó con nitrógeno y se calentó a 80ºC durante la noche. Entonces se añadió 0,023 eq adicionales de Pd(PPh3)4 y la reacción se calentó durante otras 6 h. Entonces, la mezcla de reacción se enfrió hasta ta, se diluyó con 15 volúmenes de EtOAc (basado en 1A) y la fase orgánica se lavó 3 veces con agua y una vez con salmuera. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice usando 10% de Et2O/hexano como eluyente proporcionó 1B como un sólido (90%).
Ejemplo 1 Etapa 2
5 A una disolución de 1,0 eq de 1B en Et2O seco (0,06 M) a 0ºC se añadió gota a gota una disolución de hidruro de diisobutil-litio-aluminio (1,1 eq, 1,0 M en hexanos) por jeringuilla. La disolución resultante se mantuvo a 0ºC durante la noche. La mezcla de reacción se añadió a una mezcla de hielo y ácido acético glacial. Entonces, la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo, y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo dos veces adicionales. Las fases orgánicas combinadas se lavaron dos veces con bicarbonato sódico saturado y una vez con salmuera. Las
10 fases orgánicas se secaron entonces sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a vacío. La purificación sobre gel de sílice usando 10% de EtOAc/hexanos como eluyente proporcionó un sólido amarillo (100%) como una mezcla 80:20 de 1C:1B.
Ejemplo 1 Etapa 3
A suspensión enfriada (0ºC) de una mezcla 80:20 de 1C:1B (1,0 eq) y boc-piperazina (aproximadamente 2 eq) en una mezcla de HOAc y DCM (boc-piperazina 4,8 M en 1:1,4 v/v de HOAc/DCM) se añadió triacetoxiborohidruro de 20 sodio como un sólido durante aproximadamente 5 minutos. La reacción se dejó calentar hasta TA y se agitó durante dos horas. La mezcla de reacción se inactivó con bicarbonato sódico saturado y se diluyó con acetato de etilo. Las fases se separaron y la fase acuosa se lavó tres veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas se combinaron y se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron a vacío. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice usando 50% de acetato de etilo/hexanos como eluyente proporcionó 1D (67,7%) como un aceite
25 amarillo.
Ejemplo 1 Etapa 4
30 Una mezcla de 1,0 eq de 1D y una cantidad catalítica de 10% de Pd/C (aproximadamente 10% en peso/peso) en MeOH (1D aproximadamente 0,6 M en MeOH) se agitó durante una atmósfera de 50 psi de H2 durante 45 min. Después de la sustitución de la atmósfera de H2 con N2, la mezcla de reacción se filtró a través de tierra de diatomeas y la tierra de diatomeas se lavó con MeOH. La concentración del MeOH produjo el aislamiento de 1E.
Ejemplo 1 Etapa 5
40 A una disolución de anilina 1E (1,0 eq) en DCM seco (1E aproximadamente 0,1 M en DCM) a TA bajo atmósfera de N2 se añadió 2-metil-5-isocianatopiridina (ligero exceso, aproximadamente 1,2 eq) por jeringuilla. La mezcla se agitó durante 1 hora. A la mezcla de reacción se añadió secuencialmente bicarbonato sódico acuoso saturado y acetato de etilo. Las fases se separaron y la fase orgánica se lavó dos veces con NaHCO3 sat. y una vez con salmuera. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a vacío. La purificación por cromatografía sobre
45 gel de sílice usando 5% de metanol/DCM como eluyente proporcionó 1F.
Ejemplo 1 Etapas 6 y 7
A una disolución de 1,0 eq de 1F en CH2Cl2 (1F aproximadamente 0,14 M en DCM) se añadieron aproximadamente 200 eq de ácido trifluoroacético (TFA). La mezcla de reacción se agitó durante 30 min y se concentró. El residuo resultante se disolvió en EtOAc (aproximadamente 1,6 veces el volumen de la mezcla de reacción) y se lavó
10 secuencialmente con NaOH 3 N (2 veces) y salmuera. La fase orgánica se secó (NaSO4) y se concentró proporcionando la base libre deseada que se usó sin más purificación.
A una disolución de la base libre anterior (1,0 eq) y DIPEA (1,2 eq) en THF seco (base libre aproximadamente 0,2 M en THF) se añadió cloroformiato de metilo (1,1 eq) por jeringuilla y la mezcla resultante se agitó durante 1 h. A la 15 mezcla se añadió bicarbonato sódico acuoso seguido de acetato de etilo. La fase orgánica se separó y se lavó dos veces con bicarbonato sódico acuoso y una vez con salmuera. Las fases acuosas combinadas se extrajeron una vez con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a vacío. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice usando 5% de MeOH/DCM como eluyente proporcionó 4-(3-fluoro-5-(3-(6-metilpiridin-3-il)ureido)bencil)-piperazina-1-carboxilato de metilo. EM 402
20 (M+H).
A una disolución de la base libre anterior (1,0 eq) y DIPEA (1,2 eq) en THF seco (base libre aproximadamente 0,2 M en THF) se añadió cloruro de dimetilsulfamoílo (1,1 eq) por jeringuilla. Después de algunas horas, la reacción se completó. La mezcla se inactivó con bicarbonato sódico acuoso, se diluyó con acetato de etilo y se lavó dos veces
25 con bicarb y una vez con salmuera. Las fases acuosas combinadas se extrajeron una vez con acetato de etilo, y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a vacío. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice usando 5% de MeOH/DCM como eluyente proporcionó 4-(3-fluoro-5-(3-(6metilpiridin-3-il)ureido)bencil)-N,N-dimetilpiperazina-1-sulfonamida. EM 451 (M+H).
30 Ejemplo 2 Etapa 1
A 1,0 eq de (4-fluoro-3-nitro-fenil)-metanol (2A) en THF (2A aproximadamente 1 M en THF) y (aproximadamente 1,1
35 eq) de piridina se añadieron aproximadamente 1,1 eq de cloruro de metanosulfonilo. La mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente, luego se concentró. El residuo se purificó usando cromatografía ultrarrápida sobre sílice con 10%-50% de EtOAc/hexanos como eluyente dando éster 4-fluoro-3-nitro-bencílico de ácido metanosulfónico (2B) (57%).
40 Ejemplo 2 Etapa 2
A 1,0 eq de éster 4-fluoro-3-nitro-bencílico de ácido metanosulfónico (2B) en DMF (2B aproximadamente 0,6 M en
45 DMF) se añadieron aproximadamente 1,05 eq de TEA y aproximadamente 1,0 eq de piperazina-1-carboxilato de tbutilo. La mezcla se agitó durante 30 min a temperatura ambiente, se diluyó con EtOAc, se lavó con disolución de NH4Cl, se secó (Na2SO4) y se evaporó. La purificación por cromatografía ultrarrápida sobre sílice con 50% de EtOAc/hexanos como eluyente proporcionó éster terc-butílico de ácido 4-(4-fluoro-3-nitro-bencil)-piperazina-1
carboxílico (2C). Ejemplo 2 Etapa 3
Se trató éster terc-butílico de ácido 4-(4-fluoro-3-nitro-bencil)-piperazina-1-carboxílico (2C, 1,0 eq) en metanol (2C aproximadamente 0,2 M en MeOH) con Pd(OH)2/C catalítico bajo hidrógeno a 60 psi durante la noche. La mezcla se filtró a través de tierra de diatomeas y se concentró dando un aceite. Este aceite se disolvió en THF y se trató con
10 aproximadamente 1,05 eq de 6-metilpiridina-3-isocianato. Después de agitar a 50ºC durante 30 min, la mezcla se concentró. El residuo se purificó por HPLC de fase inversa dando éster terc-butílico de ácido 4-{4-fluoro-3-[3-(6-metilpiridin-3-il)-ureido]-bencil}-piperazina-1-carboxílico (2D).
Ejemplo 2, Etapas 4 y 5
20 A 1,0 eq de éster terc-butílico de ácido 4-{4-fluoro-3-[3-(6-metil-piridin-3-il)-ureido]-bencil}-piperazina-1-carboxílico (2D) en MeOH (2D aproximadamente 0,1 M en MeOH) se añadieron 2 volúmenes de HCl en dioxano (4 N) y la mezcla de reacción se agitó a 50ºC durante 15 min y se evaporó dando un sólido. El sólido se combinó con DCM y se trató con aproximadamente 5 eq de TEA y se fraccionó en 3 porciones iguales de mezcla de reacción A. Una porción de la mezcla de reacción A se trató con 1,2 eq de cloruro de metilcarbonilo y se agitó durante la noche. La
25 mezcla resultante se concentró y se purificó por HPLC de fase inversa proporcionando éster metílico de ácido 4-{4fluoro-3-[3-(6-metil-piridin-3-il)-ureido]-bencil}-piperazina-1-carboxílico. EM 402 (M+H). Una segunda porción de la mezcla de reacción A se trató con 1,2 eq de cloruro de dimetilsulfamoílo y se agitó durante la noche. La mezcla resultante se concentró y se purificó por HPLC de fase inversa proporcionando dimetilamida de ácido 4-{4-fluoro-3[3-(6-metil-piridin-3-il)-ureido]-bencil}-piperazina-1-sulfónico. EM 451 (M+H).
Ejemplo 3 Etapa 1
35 Un matraz redondo se cargó con 1 eq de 3-cloro-2-fluoroanilina (3A), 1-metil-2-pirrolidinona (3A aproximadamente 1,5 M en NMP), 2,2 eq de cianuro de sodio y 1,35 eq de bromuro de níquel (II) a TA bajo N2. La concentración se dividió a la mitad por la introducción de NMP adicional bajo N2 y la disolución se calentó suavemente a 200± 5ºC y se agitó durante 4 días bajo N2. La mezcla de reacción se dejó enfriar hasta temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con 30 volúmenes de éter terc-butilmetílico (MTBE) y se filtró a través de Celite. Entonces, la
40 almohadilla de Celite se aclaró con 10 volúmenes de MTBE. Los extractos orgánicos se lavaron con 40 volúmenes de salmuera, 2 x 40 volúmenes de agua y 40 volúmenes de salmuera. Los extractos orgánicos combinados se
30 en Hg)
׽ secaron sobre sulfato de sodio yse concentraron proporcionando un sólido marrón, que se secó a vacío (
a 40ºC durante 8 horas proporcionando el compuesto de fórmula 3B (rendimiento del 71%).
Ejemplo 3 Etapa 2
Una disolución de 3B en diclorometano (3B aproximadamente 1,5 M en DCM) a TA bajo mezcla de nitrógeno se
0ºC, y 2,0 eq de hidruro de diisobutil-litio-aluminio 1 M (DIBAIH) en DCM se añadieron gota a gota durante
׽ enfrió a ºC. Tras completarse la adicióndeDiBAIH, la ≤ 03,5 horas, manteniendo una temperatura de reacción interna
׽ 0ºC) de 40 volúmenes
׽ mezcla de reacción se añadió gota a gota con agitación vigorosa a una disolución enfriada (
de 15% de sal de Rochelle y 10 volúmenes de DCM, manteniendo una temperatura de reacción interna por debajo de 10ºC. El matraz se aclaró con 10 volúmenes de DCM y la mezcla se dejó calentar hasta temperatura ambiente y se agitó durante 4 horas. Las fases se separaron, y las fases acuosas se retroextrajeron con 20 volúmenes de DCM. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con 20 volúmenes de agua. La fase orgánica se secó sobre sulfato de
3C30 en Hg) a TAproporcionando
׽ sodio yse concentró proporcionandouna espuma marrón,que se secó a vacío (
(rendimiento del 92%).
Ejemplo 3 Etapa 3
Etapas 3A/B:
Una disolución de 1 eq de 3C, tetrahidrofurano (3C aproximadamente 1,4 M en THF) y 1,05 eq de piperazina-1carboxilato de metilo y se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 3 horas. A la mezcla de reacción se
40 min,manteniendo una temperatura de
׽ añadieron 1,5 eqde triacetoxiborohidruro de sodioen porciones durante
reacción interna por debajo de 45ºC. La mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. A la
25 mezcla de reacción se añadieron 5 volúmenes de agua gota a gota, durante 1 hora, manteniendo una temperatura de reacción interna por debajo de 30ºC. Entonces se añadió acetato de etilo (EtOAc, 5 volúmenes) y las fases se separaron. Las fases acuosas se retroextrajeron con 5 volúmenes de EtOAc. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con bicarbonato sódico saturado y se añadió bicarbonato sódico sólido según se necesitara para llevar el pH a 8 (papeles pHydrion). Las fases se separaron, y la fase orgánica se lavó con 5 volúmenes de salmuera. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio y se añadió carbono activo en la etapa de secado. Los extractos orgánicos se filtraron a través de Celite y la almohadilla de Celite se aclaró 4 veces con EtOAc. Los extractos orgánicos se
30 en Hg a TA) proporcionando un aceite marrón
׽ concentraron yse secaron durante la noche en el rotavapor (
ámbar.
35 Etapa 3C:
Todos los cálculos se basan en la cantidad de 3C (R= O).
A 3 volúmenes de metanol (basado en 3C, R=O) bajo N2 sobre un baño de hielo/salmuera/acetona se añadieron 3 eq de cloruro de acetilo gota a gota durante 3 horas, manteniendo una temperatura de reacción interna por debajo de 0ºC. La disolución se agitó entonces durante 1 hora adicional por debajo de 0ºC. Una disolución de 1,0 eq de 3D sin purificar (de la etapa 3A/3B anterior) en MeOH (aproximadamente 3,6 M basado en 3C, R=O) se añadió gota a gota durante 30 min, manteniendo una temperatura de reacción interna por debajo de 15ºC. La reacción se dejó calentar hasta temperatura ambiente durante la noche. Los sólidos se filtraron al día siguiente y se aclararon con 2x
45 0,5 volúmenes de MeOH, 5 volúmenes de 1:1 de éter terc-butilmetílico (MTBE):MeOH y 5 volúmenes de MTBE.
Los sólidos se recogieron entonces en 5 volúmenes de EtOAc y se añadieron bicarbonato sódico saturado y bicarbonato sódico sólido según se necesitara para llevar el pH de la fase acuosa a 8 (papeles pHydrion). Las fases se separaron, y la fase acuosa se extrajo con 5 volúmenes de EtOAc. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con 5 volúmenes de salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron proporcionando un sólido
(rendimiento del 50%). 3D40ºC proporcionando
׽ 30 en Hg) a
׽ naranja pálido que se secó a vacío (
Ejemplo 3 Etapa 4
piperazina-1-carboxilato de metilo
A una disolución de 3D en acetona (3D aproximadamente 2,7 M en acetona) se añadió 1,0 eq de 5-isocianato-2metilpiridina gota a gota durante 9 min. Un precipitado voluminoso se formó durante la adición, y la reacción se agitó durante una hora. La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 2 horas y se enfrió hasta ta durante 2,5 horas. La reacción se calentó entonces a reflujo durante 1 h y se enfrió hasta ta durante la noche. La reacción se filtró y se aclaró con 1 volumen de acetona, luego tres veces con 2 volúmenes de acetato de etilo. Los sólidos se secaron a
30 en Hg) a 60ºC durante la noche proporcionandoun polvo blanco (rendimiento del 86%) de 4-(2-fluoro-3-
׽ vacío (
(3-(6-metilpiridin-3-il)ureido)bencil)piperazina-1-carboxilato de metilo. El material se reprocesó del siguiente modo:
El 4-(2-fluoro-3-(3-(6-metilpiridin-3-il)ureido)bencil)piperazina-1-carboxilato de metilo de antes se disolvió en acetona (aproximadamente 0,2 M) bajo N2. La reacción se calentó entonces a reflujo durante 2,5 h y se enfrió hasta ta durante la noche. La reacción se filtró y se aclaró con 1 volumen de acetona, luego tres veces con 2 volúmenes de
30 en Hg) a 60ºC durante la nocheproporcionando 4-(2-fluoro-3-
׽ acetato de etilo. Los sólidos se secaron a vacío (
(3-(6-metilpiridin-3-il)ureido)bencil)piperazina-1-carboxilato de metilo como un polvo blanco (rendimiento del 79%). El material se reprocesó del siguiente modo:
El 4-(2-fluoro-3-(3-(6-metilpiridin-3-il)ureido)bencil)piperazina-1-carboxilato de metilo de antes se disolvió en acetona (aproximadamente 0,2 M) bajo N2. La reacción se calentó entonces a reflujo y se enfrió hasta ta durante la noche. La reacción se filtró y se aclaró con 1 volumen de acetona, luego tres veces más con 2 volúmenes de acetato de etilo.
30 en Hg) a 60ºC durante la noche proporcionando 4-(2-fluoro-3-(3-(6-metilpiridin-
׽ Los sólidos se secaron a vacío (
3-il)ureido)bencil)piperazina-1-carboxilato de metilo como un polvo blanco (rendimiento del 73%). EM 402 (M+H).
Ejemplo 4 Etapa 1
Un matraz redondo de 3 bocas se purgó con nitrógeno durante al menos diez minutos. El matraz se cargó con 1,0 eq de 4A, CH2Cl2 (4A aproximadamente 1,2 M en DCM) y aproximadamente 1,1 eq de DIPEA. El matraz se enfrió entonces a 10 ± 5ºC. Mientras que el matraz se fue enfriando, 1,2 eq de piperazina-1-carboxilato de metilo se recogieron en CH2Cl2 (aproximadamente 5,3 M). El material no se disolvió, de manera que se añadieron 0,05 eq adicionales de DIPEA en DCM (aproximadamente 0,3 M). El material no se disolvió, y entonces la suspensión se añadió gota a gota durante 50 min, manteniendo una temperatura de reacción interna ≤ 30ºC. El baño de refrigeración se quitó y la mezcla de reacción se calentó a reflujo. La mezcla de reacción se mantuvo a reflujo durante 19 horas. Se añadieron 0,05 eq adicionales de piperazina-1-carboxilato de metilo, y la reacción se sometió a reflujo durante otras 2,5 horas. La reacción se enfrió hasta ta y se lavó con 5 volúmenes de agua. La fase de agua se retroextrajo con 5 volúmenes de CH2Cl2. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con 5 volúmenes de 10% de AcOH/agua. La fase orgánica se lavó entonces con 5 volúmenes de bicarbonato sódico saturado y 5 volúmenes de salmuera. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró mediante rotavapor a 30±5ºC dando un residuo. Se cargó MTBE al matraz del rotavapor a 20±5ºC y el matraz se rotó hasta que se consiguió una disolución. Se cargó hexano en el matraz y la disolución se agitó durante 2,5 horas a 20±5ºC. Los sólidos se filtraron y se aclararon con hexanos. Los sólidos se secaron a ≤40ºC bajo vacío máximo hasta que se alcanzó masa
como un sólido amarillo pálido (rendimiento del 66%). 4B22 horas) proporcionando
׽ constante (
Ejemplo 4 Etapa 2
Un reactor de alta presión se cargó con una suspensión de 25% en peso de Pt/C con respecto a 4B en 8 volúmenes de THF (con respecto a Pt/C), seguido de una suspensión de 1,5 eq de K2CO3 en THF (aproximadamente 0,67 M), luego una disolución de 1,0 eq de 4B en THF (aproximadamente 0,47 M). La camisa del reactor se fijó a 10ºC, y el reactor se cargó con 50 psi de H2 mientras que se mantenía a una temperatura de reacción interna ≤30ºC. La
reacción se agitó durante 9 horas, luego se agitó 45 min durante otras 3,5 horas. La reacción se filtró. El matraz de reacción y los filtros se aclararon con 9 volúmenes de MeOH (con respecto a 4B) y se concentraron mediante rotavapor a ≤50ºC. El residuo se disolvió en 4 volúmenes de EtOAc y se lavó con 4 volúmenes de agua. La fase de agua se retroextrajo con 4 volúmenes de EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con 4 volúmenes de salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron mediante rotavapor a ≤50ºC proporcionando un residuo. Una vez el disolvente había parado de salir del rotavapor, el residuo se cargó con 2 volúmenes de MTBE y la disolución se concentró mediante rotavapor a ≤50ºC, proporcionando un residuo. Una vez el disolvente había parado de salir del rotavapor, el material se mantuvo en el rotavapor bajo vacío máximo durante 15 horas. Entonces se cargó MTBE (2 volúmenes) para triturar el material y el matraz se rotó durante 2 horas. Los sólidos se filtraron y se aclararon con 0,5 volúmenes de MTBE. Los sólidos se secaron a ≤50ºC bajo vacío máximo
como un sólido amarillo pálido (rendimiento del 4C22 horas) proporcionando
׽ hasta quese logró masa constante (
87%).
Ejemplo 4 Etapa 3
Un matraz redondo de 3 bocas se purgó con nitrógeno durante al menos diez minutos. El matraz se cargó entonces con 1,0 eq de 4C en acetona (aproximadamente 0,56 M). El matraz se calentó a 27ºC para formar una disolución. Aproximadamente 1 eq de 5-isocianato-2-piridina se añadió gota a gota durante 68 min, controlando la tasa de adición para mantener la temperatura interna ≤ 45ºC. Después de la adición, la mezcla de reacción se mantuvo ≤ 45ºC durante aproximadamente 5 horas. La reacción se calentó entonces hasta un reflujo suave durante 35 min, luego se enfrió de nuevo hasta temperatura ambiente durante la noche (15 h). Los sólidos se filtraron y se aclararon con 0,45 volúmenes de acetona y 1,7 volúmenes de EtOAc. Los sólidos se secaron en un horno a vacío ≤ 50ºC proporcionando 4D, 4-(3-(3-(6-metilpiridin-3-il)ureido)bencil)piperazina-1-carboxilato de metilo (rendimiento del 89%). EM 384 (M+H).
Ejemplo 5 Etapa 1
A una mezcla de 1,0 eq de 2-fluoro-3-bromo-nitrobenceno (5A), 1,0 eq de cloruro de tetrabutilamonio, 1,5 eq de NaHCO3 y 2,0 eq de alcohol alílico en DMF (alcohol alílico aproximadamente 1 M en DMF) bajo atmósfera de N2 se añadieron 0,4 eq de PdCl2. La mezcla de reacción se calentó hasta 60ºC y se agitó bajo N2 durante 16 h. La temperatura se elevó a 70ºC y la mezcla de reacción se agitó 4 h adicionales. Se añadieron alícuotas adicionales de 1 eq de alcohol alílico y 0,1 eq de PdCl2 y la mezcla de reacción se agitó bajo N2 durante 6 h. La mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se diluyó con EtOAc. La mezcla se lavó secuencialmente con agua, HCl 1 N y salmuera. La fase orgánica se secó y se concentró dando un residuo. La purificación sobre gel de sílice usando 10% de EtOAc/hexano al 60% de EtOAc/hexano como eluyente en gradiente proporcionó 5B.
Ejemplo 5 Etapa 2
A una disolución de 1,0 eq de 5B en CH2Cl2 (aproximadamente 0,04 M) bajo atmósfera de N2 se añadieron 1,3 eq de sal de HCl de piperazina-1-carboxilato de metilo, seguido de 1,2 eq de triacetoxiborohidruro de sodio. La mezcla de reacción se agitó a TA durante la noche. Se añadieron 0,5 eq adicionales de sal de HCl de piperazina-1-carboxilato de metilo, seguido de añadir 2 eq de triacetoxiborohidruro de sodio a la mezcla de reacción y la mezcla se agitó a TA durante 4 h. La mezcla de reacción se diluyó con CH2Cl2 y se lavó secuencialmente con agua y salmuera. La fase orgánica se secó y se concentró dando un residuo. La purificación sobre gel de sílice usando 2:1 de EtOAc/hexano como eluyente proporcionó 5C.
Ejemplo 5 Etapa 3
5 Una mezcla de 1 eq de 5C y 50 eq. en peso de 10% de Pd/C en MeOH (5C 0,06 M en MeOH) se agitó sobre una atmósfera de 30 psi de H2 durante 2 h. Después de la sustitución de la atmósfera de H2 con N2, la mezcla de reacción se filtró a través de tierra de diatomeas y la tierra de diatomeas se lavó con MeOH. La concentración de MeOH produjo el aislamiento de 5D en rendimiento casi cuantitativo.
10 Ejemplo 5 Etapa 4
15 A una disolución de 1 eq de 5D en CH2Cl2 (aproximadamente 0,1 M) bajo atmósfera de N2 a TA se añadió 1 eq de 5isocianato-2-piridina y la mezcla resultante se agitó a TA durante 12 h. La mezcla de reacción se diluyó con CH2Cl2 y se lavó secuencialmente con agua y salmuera. La fase orgánica se secó y se concentró dando un residuo. La purificación por HPLC de fase inversa preparativa (columna C-18) usando 10% de CH3CN/agua al 100% de CH3CN como eluyente en gradiente proporcionó 4-(3-(2-fluoro-3-(3-(6-metilpiridin-3-il)ureido)fenil)propil)piperazina-1
20 carboxilato de metilo. EM 430 (M+H).
Ejemplo 6 Etapas 1 y 2
25 Se añadió PdCl2(PPh3)2 (0,05 eq) a una mezcla de 1,0 eq de 6A, 1,0 eq de tributil(1-etoxivinil)-estaño en dioxano (aproximadamente 0,4 M) bajo N2. La mezcla se calentó a 95ºC durante 4 horas bajo N2. Una mezcla de 1:1 v/v de disolución de EtOAc/ (KF 1 M) se añadió a la mezcla de reacción y la mezcla se agitó durante 1 hora. El precipitado se separó por filtración. La fase orgánica se secó y se concentró dando 6B, que se usó sin más purificación.
30 A una mezcla de 6B en THF (0,8 M con respecto a 6A) se añadieron aproximadamente 2,3 volúmenes de HCl 2 N y la mezcla se agitó a TA durante 1 h. Se añadió NaHCO3 saturado a la mezcla de reacción. La mezcla de reacción se concentró para eliminar THF y a la mezcla resultante se añadió un volumen de éter aproximadamente 3 veces el del volumen de la mezcla de reacción. La fase orgánica se secó y se concentró dando un residuo. El residuo se purificó
35 sobre gel de sílice para obtener 6C (87% en 2 etapas).
Ejemplo 6 Etapa 3
40 A una mezcla de 0,1 a 0,15 eq de (S)-1-metil-3,3-difenil-hexahidropirrolo[1,2-c][1,3,2]oxazaborol en tolueno (1 - 1,5 M) y tolueno (un volumen aproximadamente 10 veces el del oxazaborol en tolueno) bajo N2 a 20ºC se añadieron 1,05 eq de Et2NPh-BH3. A esta mezcla de reacción se añadió gota a gota 1,0 eq de 6C en tolueno (aproximadamente 0,4 M) durante 1,5 horas. Entonces, la mezcla de reacción se agitó durante 1 hora adicional a TA.
45 A la mezcla de reacción se añadieron aproximadamente 1,9 volúmenes de MeOH, seguido de aproximadamente 3,4 volúmenes de HCl 1 N. La mezcla se agitó durante 20 min. A la mezcla de reacción se añadieron aproximadamente 7,8 volúmenes de éter y aproximadamente 7,8 volúmenes de salmuera. La fase orgánica se separó, se secó y se concentró dando un residuo. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice proporcionando 6D (79%).
Ejemplo 6 Etapa 4
5 A 1,0 eq de 6D en éter (aproximadamente 0,55 M) y 1,2 eq de Et3N se añadieron aproximadamente 1,1 eq de cloruro de metanosulfonilo gota a gota a 0ºC. La mezcla se agitó a TA durante 30 min. La mezcla de reacción se filtró y se concentró dando un residuo. El residuo se disolvió en aproximadamente 5,9 volúmenes de DMF y 1,2 eq de sal de HCl de piperazina-1-carboxilato de metilo y se añadieron 4 eq de K2CO3. La mezcla de reacción se calentó a 50ºC durante 16 horas. La mezcla de reacción se enfrió hasta ta y se añadieron aproximadamente 29 volúmenes
10 de EtOAc y 29 volúmenes de NH4Cl sat. La fase orgánica se separó, se secó, y se concentró. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice dando 6E.
Ejemplo 6 Etapa 5
Una mezcla de 1 eq de 6E, y 10 eq en peso de 10% de Pd/C en MeOH se agitó bajo una atmósfera de 45 psi de H2 durante 0,5 h. Después de la sustitución de la atmósfera de H2 con N2, la mezcla de reacción se filtró a través de tierra de diatomeas y la tierra de diatomeas se lavó con MeOH. La concentración del MeOH produjo el aislamiento
20 de 6F.
Ejemplo 6 Etapa 6
25 A una disolución de 1,0 eq de 6F en CH2Cl2 (a aproximadamente 0,3 M) bajo atmósfera de N2 a TA se añadió 1,0 eq de 5-isocianato-2-metilpiridina y la mezcla resultante se agitó a TA durante 0,5 h. La mezcla de reacción se concentró dando un residuo. La purificación por HLPC en fase inversa (columna de C-18) proporcionó (S)-metil-4-(1(2-fluoro-3-(3-(6-metilpiridin-3-il)ureido)fenil)etil)-piperazina-1-carboxilato como un sólido blanco. EM 416 (M+H).
Ejemplo 7 Etapa 1
35 Un matraz redondo secado en horno se cargó con piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (1,1 eq), ácido 3nitrofenilacético (7A, 1,0 eq), EDC (1,2 eq) y HOBT (1,2 eq). El matraz se lavó con nitrógeno y se añadieron N,Ndimetilformamida (7A aproximadamente 0,5 M en DMF) y trietilamina (2,0 eq) por jeringuilla. La mezcla de reacción resultante se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Entonces, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y
40 se lavó 4 veces con H2O, dos veces con KHSO4 ac. 1 N, una vez con NaHCO3 saturado y una vez con salmuera. La fase orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a vacío. Se aisló 4-(2-(3-nitrofenil)acetil)piperazina-1carboxilato de terc-butilo (7B) como un sólido (80%) y se usó sin más purificación.
Ejemplo 7 Etapa 2
A una disolución de 4-(2-(3-nitrofenil)acetil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (7B, 1,0 eq) en THF (7B aproximadamente 0,5 M en THF)) se añadió borano-THF (2,0 eq) por jeringuilla. La mezcla de reacción resultante se calentó a reflujo durante 2 h. La mezcla de reacción se enfrió bajo un baño de hielo/agua y se añadió 10% de HOAc ac., lentamente. La mezcla se concentró a vacío y el residuo se disolvió en EtOAc. La fase orgánica se repartió con agua, y la fase acuosa se basificó (pH - 9) mediante la adición de 50% de NaOH. La fase orgánica se lavó entonces dos veces con NaHCO3 ac. saturado y una vez con salmuera. La fase orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a vacío. El 4-(3-nitrofenetil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo resultante (7C, cuant.) se usó sin más purificación.
Ejemplo 7 Etapa 3
Una camisa de vidrio de Parr se cargó con 4-(3-nitrofenetil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (7C, 1,0 eq) y metanol (7C aproximadamente 0,2 M en MeOH). A esta disolución se añadió una suspensión de 12,5 eq en peso de 10% de Pd/C en metanol. La mezcla de reacción se impermeabilizó en un recipiente de hidrogenación de Parr y se sometió a 3 ciclos de presurización/ventilación con H2. La mezcla de reacción se dejó avanzar a temperatura ambiente y 45 psi de H2 durante 2,5 h. Entonces, la mezcla de reacción se cargó con 12,5 eq en peso de Pd(OH)2/C y el recipiente se represurizó con hidrógeno (45 psi). Después de 1 h, la mezcla de reacción se filtró a través de una almohadilla de tierra de diatomeas, la tierra de diatomeas se lavó con MeOH y las fases orgánicas combinadas se concentraron a vacío proporcionando el 4-(3-aminofenetil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo deseado (7D, 63%), que se usó sin más purificación.
Ejemplo 7 Etapa 4
A una disolución de 4-(3-aminofenetil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (7D, 1,0 eq) en THF (7D aproximadamente 0,3 M en THF) se añadió 5-isocianato-2-metilpiridina (1,0 eq) gota a gota. La mezcla de reacción resultante se agitó durante 2 h. A la mezcla de reacción se añadió NaHCO3 ac saturado. La mezcla se diluyó con EtOAc, y las fases se separaron. La fase orgánica se lavó dos veces con NaHCO3 ac. saturado y una vez con salmuera. La fase orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a vacío. La purificación sobre gel de sílice usando 5 -12% de MeOH/CH2Cl2 como eluyente en gradiente proporcionó 4-(3-(3-(6-metilpiridin-3il)ureido)fenetil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (7E, 63%).
Ejemplo 7 Etapa 5
A una disolución de 4-(3-(3-(6-metilpiridin-3-il)ureido)fenetil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (7E, 1,0 eq) en MeOH (7E aproximadamente 0,2 M en MeOH)) se añadió una disolución de HCl 2 M en dioxano (aproximadamente 12 eq). Después de 70 min la mezcla de reacción se concentró a vacío y se usó sin purificación para acilaciones posteriores. EM 398 (M+H).
La sal de HCl resultante (1,0 eq) de la etapa precedente se suspendió en THF (sal aproximadamente 0,15 M en THF) y se añadió trietilamina (4,0 eq). La mezcla de reacción se enfrió a 0ºC, y se añadió gota a gota cloroformiato de metilo (1,05 eq) y la mezcla resultante se agitó durante 5 min a TA. A la mezcla de reacción se añadió NaHCO3 ac. saturado seguido de EtOAc. Las fases se separaron, y la fase orgánica se lavó una vez con NaHCO3 ac. saturado, una vez con salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a vacío. La purificación sobre gel de sílice usando 2 -10% de MeOH/CH2Cl2 como eluyente en gradiente proporcionó 4-(3-(3-(6-metilpiridin-3il)ureido)fenetil)piperazina-1-carboxilato de metilo.
Ejemplo 8
10 A una disolución de 1,0 eq de 8A en MeOH (aproximadamente 0,07 M) se añadió una disolución de HCl 2 M en dioxano (aproximadamente 30 eq)). Después de 70 min la mezcla de reacción se concentró a vacío y se usó sin purificación para acilaciones posteriores.
La sal de HCl resultante de la etapa precedente se suspendió en THF (aproximadamente 0,05 M) y se añadieron
15 aproximadamente 18 eq de diisopropiletilamina. La mezcla de reacción se enfrió a 0ºC, y se añadió gota a gota aproximadamente 1 eq de cloruro de etanosulfonilo. La mezcla resultante se agitó durante 5 min a TA. A la mezcla de reacción se añadió NaHCO3 ac. saturado seguido de EtOAc. Las fases se separaron, y la fase orgánica se lavó una vez con NaHCO3 ac. saturado, una vez con salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a vacío. La purificación sobre gel de sílice usando 1 - 10% de MeOH/CH2Cl2 como eluyente en gradiente seguido de trituración
20 en 1:1 de acetona/éter proporcionó 1-(3-((4-(etilsulfonil)piperazin-1-il)metil)-2-fluorofenil)-3-(6-metilpiridin-3-il)urea de metilo. EM 436 (M+H).
Ejemplo 9
A una disolución de aproximadamente ,4 eq de trifosgeno en THF (aproximadamente 0,04 M) a TA bajo atmósfera de N2 se añadió 1 eq de 5-metilisoxazol-3-amina y 2 eq de diisopropiletilamina en THF (amina aproximadamente 0,2 M en THF). La mezcla de reacción se agitó durante 15 min. A esta mezcla se añadió 1,0 eq de 9A en THF (9A
30 aproximadamente 0,2 mM en THF). La mezcla resultante se agitó durante 10 min. A la mezcla de reacción se añadió NaHCO3 ac. saturado seguido de EtOAc. Las fases se separaron, y la fase orgánica se lavó una vez con NaHCO3 ac. saturado, una vez con salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a vacío. La purificación sobre gel de sílice usando 1 - 10% de MeOH/CH2Cl2 como eluyente en gradiente proporcionó 4-(4-fluoro-3-(3-(5-metilisoxazol3-il)ureido)bencil)piperazina-1-carboxilato de metilo. EM 392 (M+H).
Ejemplo 10
40 2,6-Difluoro-3-metilbenzoato de metilo. A una disolución a 0ºC de ácido 2,6-difluoro-3-metilbenzoico (10,0 g, 58,1 mmoles, 1,0 equiv) en metanol seco (100 ml) se añadió gota a gota cloruro de tionilo (4,64 ml, 63,9 mmoles, 1,1 equiv). La disolución resultante se sometió a reflujo durante la noche. Después de dejarse enfriar la mezcla de reacción a temperatura ambiente, el disolvente se eliminó a vacío. El producto se disolvió en acetato de etilo y se lavó con NaHCO3 saturado ac. La fase de EtOAc se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a vacío
45 proporcionando el éster deseado (9,35 g, 86%).
3-(Bromometil)-2,6-difluorobenzoato de metilo. A una disolución a temperatura ambiente de 2,6-difluoro-3metilbenzoato de metilo (9,35 g, 50,2 mmoles, 1,0 equiv) y N-bromosuccinimida (11,6 g, 65,3 mmoles, 1,3 equiv) en
200 mg) como un sólido enuna porción. La mezcla de
׽ tetracloruro de carbono (230 ml) se añadió AIBN catalítico (
reacción resultante se calentó a reflujo durante la noche. Después de dejarse enfriar la mezcla de reacción a temperatura ambiente, se lavó con NaHCO3 saturado ac. La fase acuosa se extrajo con diclorometano y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a vacío proporcionando 14,24 g (>100% de recuperación de masa) de bromuro sin purificar, que se tomó para la siguiente etapa sin purificación.
4-(2,4-Difluoro-3-(metoxicarbonil)bencil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo. A una disolución a temperatura ambiente de 3-(bromometil)-2,6-difluorobenzoato de metilo (14,24 g, nominalmente 51,2 mmoles, 1,0 equiv) y piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (9,1 g, 50,24 mmoles, 1,0 equiv) en DMF (50 ml) se añadió K2CO3 (27,8 g, 201 mmoles, 4,0 equiv) como un sólido. La mezcla resultante se dejó en agitación durante la noche. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó repetidamente con H2O. Las fases acuosas combinadas se lavaron una vez con EtOAc, y las fases orgánicas combinadas se lavaron una vez con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a vacío. La cromatografía en gel de sílice (10% - 60% de EtOAc/hexanos) proporcionó 4-(2,4-difluoro-3-(metoxicarbonil)bencil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (7,70 g, 41,4% durante dos etapas). EM/CL m/z (APCI) = 371,2 (M+H).
4-(3-(Azidocarbonil)-2,4-difluorobencil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo. A una disolución a temperatura ambiente de 4-(2,4-difluoro-3-(metoxicarbonil)bencil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (2,0 g, 5,4 mmoles, 1,0 equiv) en THF (5,0 ml) se añadió una disolución de LiOH (249 mg, 5,94 mmoles, 1,1 equiv) en agua (5 ml). La mezcla resultante se agitó durante la noche. La sal de carboxilato de litio resultante se concentró a vacío y se usó en la siguiente etapa sin purificación. La sal de litio se suspendió en dioxano (50 ml) y se añadieron Nhidroxisuccinimida (652 mg, 5,67 mmoles, 1,05 equiv) y DCC (1,28 g, 6,21 mmoles, 1,15 equiv) como sólidos. Después de agitar la mezcla de reacción durante 2 días, se cargó con azida de sodio (340 mg, 5,4 mmoles, 1,0 equiv) y luego se agitó durante la noche. El sólido resultante se filtró y se lavó con DCM. La fase orgánica se pasó a través de un tapón de gel de sílice y se concentró a vacío proporcionando 4-(3-(azidocarbonil)-2,4difluorobenil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (2,52 g bruto) que se tomó para la siguiente etapa sin purificación.
4-(2,4-Difluoro-3-(3-(6-metilpiridin-3-il)ureido)bencil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo. Una disolución de 4-(3-(azidocarbonil)-2,4-difluorobencil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (2,52 g, nominalmente 5,4 mmoles, 1,0 equiv) y 6-metilpiridin-3-amina (389 mg, 3,6 mmoles, 0,66 equiv) en 7 ml de DMF se agitó a temperatura ambiente durante 72 h, después de lo cual la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó repetidamente con agua. Después de lavarse la fase de EtOAc con NaHCO3 saturado ac. y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a vacío. La cromatografía de fase inversa proporcionó 4-(2,4-difluoro-3-(3-(6-metilpiridin-3il)ureido)bencil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (800 mg, 32% durante 4 etapas). EM/CL m/z (APCI) = 462,2 (M+H).
4-(2,4-Difluoro-3-(3-(6-metilpiridin-3-il)ureido)bencil)piperazina-1-carboxilato de metilo. A una disolución de 4
(2,4-difluoro-3-(3-(6-metilpiridin-3-il)ureido)bencil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (790 mg, 1,71 mmoles, 1,0
5 equiv) en MeOH (5 ml) se añadió por jeringuilla HCl (4,0 M en dioxano, 4,5 ml, 17 mmoles, 10 equiv). Después de 30
minutos, la mezcla de reacción se concentró a vacío. El sólido resultante se suspendió luego en DCM (20 ml) y se
añadieron cloroformiato de metilo (158 µl, 2,05 mmoles, 1,2 equiv) y Et3N (716 µl, 5,13 mmoles, 3,0 equiv) por
jeringuilla. La mezcla de reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 1,5 h y luego se extinguió
mediante la adición de NaHCO3 saturado ac. La fase orgánica se separó, se secó sobre sulfato de sodio y se purificó 10 por cromatografía preparativa en capa fina (10% de MeOH/DCM) proporcionando 4-(2,4-difluoro-3-(3-(6-metilpiridin
3-il)ureido)bencil)piperazina-1-carboxilato de metilo (275 mg, 38%). EM/CL m/z (APCI) = 420,2 (M+H).
Ejemplo 11
1-(2-Fluoro-3-((4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)metil)fenil)-3-(6-metilpiridin-3-il)urea. A una disolución de 4-(2
fluoro-3-(3-(6-metilpiridin-3-il)ureido)bencil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (1,3 g, 2,9 mmoles, 1,0 equiv) en 20 MeOH (10 ml) se añadió por jeringuilla HCl (4,0 M en dioxano, 10 ml, 40 mmoles, 13,8 equiv). Después de 30
minutos, la mezcla de reacción se concentró a vacío. El sólido resultante se suspendió entonces en THF (10 ml) y se
añadieron cloruro de metanosulfonilo (220 µl, 2,9 mmoles, 1,0 equiv) y DIPEA (2,0 ml, 11,5 mmoles, 4,0 equiv) por
jeringuilla. La mezcla de reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 0,5 h y luego se extinguió
mediante la adición de NaHCO3 saturado ac. La fase orgánica se separó, se secó sobre sulfato de sodio y se purificó 25 por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (1%-10% de MeOH/DCM) proporcionando 1-(2-fluoro-3-((4
(metilsulfonil)piperazin-1-il)metil)fenil)-3-(6-metilpiridin-3-il)urea (930 mg, 76%). EM/CL m/z (APCI) = 422,2 (M+H).
Ejemplo 12
4-(2-Fluoro-3-(3-(2-metilpiridin-4-il)ureido)bencil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo. A una disolución a 0ºC
de trifosgeno (959 mg, 3,24 mmoles, 0,35 equiv) en THF (45 ml) se añadió lentamente mediante cánula una 35 disolución de 4-(3-amino-2-fluorobencil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (2,86 g, 9,25 mmoles, 1,0 equiv) y
DIPEA (3,2 ml, 18,5 mmoles, 2,0 equiv) en THF (25 ml) durante aproximadamente 20 minutos. La disolución se agitó
durante 15 min adicionales a 0ºC, y luego se añadió 4-amino-2-metilpiridina. Después de agitar a temperatura
ambiente durante 72 h, la reacción se diluyó con EtOAc, se lavó con NaHCO3 saturado ac. y salmuera, se secó
sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a vacío. La purificación por HPLC preparativa de fase inversa 40 proporcionó 4-(2-fluoro-3-(3-(2-metilpiridin-4-il)ureido)bencil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (1,77 g, 43%).
EM/CL m/z (APCI) = 444,3 (M+H).
1-(3-((4-Etilsulfonil)piperazin-1-il)metil)-2-fluorofenil)-3-(2-metilpiridin-4-il)urea. A una disolución de 4-(2-fluoro3-(3-(2-metilpiridin-4-il)ureido)bencil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (600 mg, 1,35 mmoles, 1,0 equiv) en 5 MeOH (3 ml) se añadió HCl (4 N en dioxano, 3 ml, 12 mmoles, 8,9 equiv). Después de 1 h, el disolvente se eliminó a vacío. A este residuo se añadió DCM (10 ml) y Et3N (875 µl, 6,28 mmoles, 4,65 equiv), y la disolución resultante se dividió en dos partes iguales. A la disolución resultante se añadió cloruro de etanosulfonilo (90 µl, 0,95 mmoles, 1,4 equiv) gota a gota por jeringuilla. Después de 30 min, la reacción se inactivó mediante la adición de NaHCO3 saturado ac. La reacción se diluyó con EtOAc, y se lavó dos veces con NaHCO3 saturado ac. y una vez con
10 salmuera. La disolución se secó entonces sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a vacío. La purificación por HPLC preparativa de fase inversa proporcionó 1-(3-((4-(etilsulfonil)piperazin-1-il)metil)-2-fluorofenil)-3-(2-metilpiridin4-il)urea (267 mg, 90%). EM/CL m/z (APCI) = 436,2 (M+H).
Ejemplo 13
4-(2-Fluoro-3-(3-(2-metilpiridin-4-il)ureido)bencil)piperazina-1-carboxilato. A una disolución de 4-(2-fluoro-3-(3
20 (2-metilpiridin-4-il)ureido)bencil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (600 mg, 1,35 mmoles, 1,0 equiv) en MeOH (3 ml) se añadió HCl (4 N en dioxano, 3 ml, 12 mmoles, 8,9 equiv). Después de 1 h, el disolvente se eliminó a vacío. A este residuo se añadió DCM (10 ml) y Et3N (875 µl, 6,28 mmoles, 4,65 equiv) y la disolución resultante se dividió en dos partes iguales. A la disolución resultante se añadió cloroformiato de metilo (75 µl, 0,95 mmoles, 1,4 equiv) gota a gota por jeringuilla. Después de 30 min, la reacción se inactivó mediante la adición de NaHCO3 saturado ac. La
25 reacción se diluyó con EtOAc, y se lavó dos veces con NaHCO3 saturado ac. y una vez con salmuera. La disolución se secó entonces sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a vacío. La purificación por HPLC preparativa de fase inversa proporcionó 4-(2-fluoro-3-(3-(2-metilpiridin-4-il)ureido)bencil)piperazina-1-carboxilato de metilo (201,3 mg, 77%). EM/CL m/z (APCI) = 402,2 (M+H). EM/CL m/z (APCI) = 402,2 (M+H).
30 Ejemplo 14
35 4-(2-Fluoro-3-(3-(6-metilpiridin-3-il)ureido)bencil)piperazina-1-carboxilato de tetrahidro-2H-piran-4-ilo. A una disolución de 4-(2-fluoro-3-(3-(2-metilpiridin-4-il)ureido)bencil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (1,0 g, 2,26 mmoles, 1,0 equiv) en MeOH (10 ml) se añadió HCl (4 N en dioxano, 10 ml, 40 mmoles, 17,7 equiv). La mezcla se agitó durante 30 min, y el disolvente se eliminó entonces a vacío. El residuo se suspendió en DCM seco (20 ml) y Et3N (1,64 ml, 11,79 mmoles, 5,2 equiv). A la mezcla resultante se añadió 4-nitrofenilcloroformiato (500 mg, 2,49
40 mmoles, 1,1 equiv). La disolución resultante se agitó durante 30 min, se diluyó con DCM, se lavó con NH4Cl ac. y salmuera y se concentró a vacío. El residuo resultante se dividió en tres porciones iguales para la posterior
derivatización. A una disolución de 4-hidroxitetrahidropirano (190 µl, 2 mmoles, 2,65 equiv) se añadió NaH (120 mg de dispersión al 60% en aceite mineral, 3,0 mmoles, 4 equiv) después de agitar durante 10 minutos, se añadió el carbamato activado a la mezcla de reacción y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El NaH en exceso se inactivó por la cuidadosa adición de agua, y la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó repetidamente con agua y una vez con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró a vacío. La purificación por HPLC preparativa de fase inversa proporcionó 4-(2-fluoro-3-(3-(6-metilpiridin3-il)ureido)bencil)piperazina-1-carboxilato de tetrahidro-2H-piran-4-ilo (140 mg, 39%). EM/CL m/z (APCI) = 472,2 (M+H).
Ejemplo 15
2-Metilpiperazina-1-carboxilato de (R)-bencilo. A una disolución a 0ºC de (R)-2-metilpiperazina (5,0 g, 50 mmoles, 1,0 equiv) en DCM seco (200 ml) se añadió trietilamina (21 ml, 150 mmoles, 3 equiv) por jeringuilla. Una disolución de Boc2O (10,4 g, 47,4 mmoles, 0,95 equiv) se añadió entonces como una disolución en DCM seco (100 ml) durante el transcurso de una hora. Después de agitar durante 15 min adicionales a 0ºC, la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Entonces, la mezcla de reacción se lavó con NaHCO3 saturado ac. y salmuera. La disolución de DCM resultante se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a vacío, y se usó en la siguiente etapa sin más purificación. El residuo se disolvió en DCM seco (50 ml), y se añadió Et3N (21 ml, 150 mmoles, 3 equiv) por jeringuilla. A esta disolución a temperatura ambiente se añadió CbzCl (8,4 ml, 60 mmoles, 1,2 equiv) gota a gota por jeringuilla. Después de agitar a temperatura ambiente durante 30 minutos, la mezcla se inactivó mediante la adición de NaHCO3 saturado ac. La disolución se lavó un tiempo adicional con NaHCO3 saturado ac., dos veces con KHSO4 ac. 1 N y dos veces con salmuera. La fase de DCM se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a vacío. El residuo resultante se disolvió en MeOH (100 ml), y se añadió gota a gota HCl (4 N en dioxano, 150 ml, 600 mmoles, 12 equiv) por jeringuilla. Después de 2 h, la mezcla de reacción se concentró a vacío. Al sólido resultante se añadió EtOAc y NaOH 1 N. La fase acuosa se extrajo dos veces con EtOAc, y las fases orgánicas se combinaron y se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a vacío proporcionando 2-metilpiperazina-1-carboxilato de (R)-bencilo (5,3 g, 45%).
4-(3-Amino-2-fluorobencil)-2-metilpiperazina-1-carboxilato de (R)-bencilo. A una disolución a temperatura ambiente de 2-metilpiperazina-1-carboxilato de (R)-bencilo (1,7 g, 7,2 mmoles, 1,0 equiv) y 3-amino-2fluorobenzaldehído (1,0 g, 7,2 mmoles, 1,0 equiv) en THF (10 ml) se añadió NaHB(OAc)3 (3,84 g, 18,1 mmoles, 2,5 equiv) como un sólido en una porción. Después de agitar a temperatura ambiente durante 1,5 h, la reacción se completó, como se ha determinado por EM/CL. El reactivo reductor restante se inactivó por la cuidadosa adición de NaHCO3 saturado ac., y la mezcla se diluyó con EtOAc. Las fases se separaron y la fase orgánica se lavó con NaHCO3 saturado ac. y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró a vacío proporcionando 4-(3-amino2-fluorobencil)-2-metilpiperazina-1-carboxilato de (R)-bencilo (2,8 g, >100% de recuperación de masa). El material se usó sin más purificación. EM/CL m/z (APCI) = 358,5 (M+H).
4-(2-fluoro-3-(3-(6-metilpiridin-3-il)ureido)bencil)-2-metilpiperazina-1-carboxilato de (R)-bencilo. A una disolución a temperatura ambiente de 4-(3-amino-2-fluorobencil)-2-metilpiperazina-1-carboxilato de (R)-bencilo (250 5
mg, 0,70 mmoles, 1,0 equiv) en THF seco (3 ml) se añadió 5-isocianato-2-metilpiridina (94 mg, 0,70 mmoles, 1,0 equiv). Después de 1 h, la reacción se completó, como se ha determinado por EM/CL. La reacción se lavó con NaHCO3 saturado ac. y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró a vacío. La cromatografía ultrarrápida (2% -10% de MeOH/DCM) proporcionó 4-(2-fluoro-3-(3-(6-metilpiridin-3-il)ureido)bencil)-2metilpiperazina-1-carboxilato de (R)-bencilo (244 mg, 71%). EM/CL m/z (APCI) = 492,2 (M+H).
(R)-1-(3-((4-(azetidin-1-carbonil)-3-metilpiperazin-1-il)metil)-2-fluorofenil)-3-(6-metilpiridin-3-il)urea. A una disolución de 4-(2-fluoro-3-(3-(6-metilpiridin-3-il)ureido)bencil)-2-metilpiperazina-1-carboxilato de (R)-bencilo (7,0 g, 14,3 mmoles, 1,0 equiv) en MeOH (50 ml) se añadió 10% de Pd/C (aprox. 5 g). La suspensión resultante se agitó y se burbujeó con gas hidrógeno usando un globo y aguja. Después de 1 h, la reacción se completó, como se ha determinado por EM/CL. La mezcla se filtró a través de una almohadilla de Celite, y la almohadilla de Celite se lavó con metanol adicional. La mezcla se concentró a vacío, y 2,55 g (7,14 mmoles) del residuo resultante se disolvieron en THF seco (35 ml). A esta disolución a temperatura ambiente se añadió Et3N (4,0 ml, 28,6 mmoles, 4,0 equiv), seguido de cloroformiato de 4-nitrofenilo (1,58 g, 7,85 mmoles, 1,1 equiv). Después de 15 min, la reacción se completó, como se juzga por EM/CL. Se añadió azetidina (530 µl, 7,85 mmoles, 1,1 equiv) por jeringuilla. Después de 1 h se añadieron azetidina adicional (265 µl, 3,9 mmoles, 0,5 equiv) y Et3N (500 µl, 3,6 mmoles, 0,5 equiv) por jeringuilla, y la mezcla de reacción se calentó a 60ºC durante la noche. La reacción se dejó enfriar hasta temperatura ambiente, y el disolvente se eliminó a vacío. El residuo se disolvió en EtOAc y se lavó tres veces con NaOH 1 N, y una vez con salmuera. La fase orgánica se secó entonces sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a vacío. La cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (20% de MeOH/DCM) proporcionó (R)-1-(3-((4-(azetidin-1-carbonil)-3metilpiperazin-1-il)metil)-2-fluorofenil)-3-(6-metilpiridin-3-il)urea como una espuma blanca (885 mg, 28%). EM/CL m/z (APCI) = 441,2 (M+H).
Ejemplo 16
4-(2-Fluoro-3-(3-(2-metilpiridin-4-il)ureido)bencil)-2-metilpiperazina-1-carboxilato de (R)-bencilo. A una disolución a 0ºC de trifosgeno (150 mg, 0,50 mmoles, 0,35 equiv) en THF (15 ml) se añadió lentamente mediante cánula una disolución de 4-(3-amino-2-fluorobencil)-2-metilpiperazina-1-carboxilato de (R)-bencilo (500 mg, 1,4 mmoles, 1,0 equiv) y DIPEA (485 µl, 18,5 mmoles, 2,0 equiv) en THF (15 ml) durante aproximadamente 15 minutos. La disolución se agitó durante 20 min adicionales a 0ºC, y entonces se añadió 4-amino-2-metilpiridina. Después de agitar a temperatura ambiente durante la noche, la reacción se diluyó con EtOAc. Se lavó con NaHCO3 saturado ac. y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a vacío. La purificación por HPLC preparativa de fase inversa proporcionó 4-(2-fluoro-3-(3-(2-metilpiridin-4-il)ureido)bencil)-2-metilpiperazina-1-carboxilato de (R)bencilo (180 mg, 27%). EM/CL m/z (APCI) = 492,3 (M+H).
4-(2-Fluoro-3-(3-(2-metilpiridin-4-il)ureido)bencil)-2-metilpiperazina-1-carboxilato de (R)-metilo. A una disolución de 4-(2-fluoro-3-(3-(6-metilpiridin-4-il)ureido)bencil)-2-metilpiperazina-1-carboxilato de (R)-bencilo (190 mg, 0,39 mmoles, 1,0 equiv) en MeOH (20 ml) se añadió 10% de Pd/C (aprox. 100 mg). La suspensión resultante se agitó y se burbujeó con gas hidrógeno usando un globo y aguja. Después de 1 h, la reacción se completó, como se ha determinado por EM/CL. La mezcla se filtró a través de una almohadilla de Celite, y la almohadilla de Celite se lavó con metanol adicional. La mezcla se concentró a vacío, y el residuo resultante se disolvió en DCM seco (10 ml).
A esta disolución a temperatura ambiente se añadió Et3N (167 µl, 1,2 mmoles, 3,0 equiv), seguido de la adición de cloroformiato de metilo (46 µl, 0,60 mmoles, 1,5 equiv) por jeringuilla. Después de 10 minutos la mezcla de reacción se inactivó mediante la adición de metanol. El disolvente se eliminó a vacío, y la mezcla se purificó por CCF preparativa (0,5% de Et3N/7% de MeOH/92,5% de DCM) proporcionando 4-(2-fluoro-3-(3-(2-metilpiridin-4
5 il)ureido)bencil)-2-metilpiperazina-1-carboxilato de (R)-metilo (85,9 mg, 50%). EM/CL m/z (APCI) = 416,3 (M+H).
Ejemplo 17
Los siguientes compuestos se sintetizaron de un modo similar a los compuestos representativos a anteriores: 10
Datos de espectro de masas
Nombre el compuesto
347 (M+H)
N-[(3-fluoro-5-{[(6-metil(3-piridil))amino]carboxilamino}fenil)metil]metoxi-N-metilcarboxamida
382 (M+H)
N-[3-({[(dimetilamino)sulfonil]metilamino}metil)-5-fluorofenil](3-piridilamino)carboxamida
396 (M+H)
N-[3-({([(dimetilamino)sulfonil]metilamino}metil)-5-fluorofenil][(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
381 (M+H)
N-(3-{[(etilsulfonil)metilamino]metil}-5-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
388 (M+H)
4-({3-fluoro-5-[(3-piridilamino)carbonilamino]fenil}metil)piperazinacarboxilato de metilo
422 (M+H)
N-(3-{[4-(etilsulfonil)piperazinil]metil}-5-fluorofenil)(3-piridilamino)carboxamida
402 (M+H)
4-[(3-fluoro-5-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
436 (M+H)
N-(3-{[4-(etilsulfonil)piperazinil]metil}-5-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
451 (M+H)
N-[3-({4-[(dimetilamino)sulfonil]piperazinil)metil)-5-fluorofenil][(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
437 (M+H)
N-[3-({4-[(dimetilamino)sulfonil]piperazinil}metil)-5-fluorofenil](3-piridilamino)carboxamida
454 (M+H)
N-[3-({4-[(dimetilamino)sulfonil]piperazinil}metil)-5-fluorofenil][(4-fluorofenil)amino]carboxamida
405 (M+H)
4-[(3-fluoro-5-{[(4-fluorofenil)amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
439 (M+H)
N-(3-[4-(etilsulfonil)piperazinil]metil}-5-fluorofenil)[(4-fluorofenil)amino]carboxamida
388 (M+H)
4-({4-fluoro-3-[(3-piridilamino)carbonilamino]fenil}metil)piperazinacarboxilato de metilo
437 (M+H)
N-[5-({4-[(dimetilamino)sulfonil]piperazinil}metil)-2-fluorofenil](3-piridilamino)carboxamida
436 (M+H)
N-(5-{[4-(etilsulfonil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
422 (M+H)
N-(5-{[4-(etilsulfonil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)(3-piridilamino)carboxamida
451 (M+H)
N-[5-({4-[(dimetilamino)sulfonil]piperazinil}metil)-2-fluorofenil][(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
402 (M+H)
4-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
386 (M+H)
N-{3-[(4-acetilpiperazinil)metil]-5-fluorofenil}[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
422 (M+H)
N-(5-fluoro-3-{[4-(metilsulfonil)piperazinil]metil}fenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
450 (M+H)
N-[5-fluoro-3-({4-[(metiletil)sulfonil]piperazinil}metil)fenil][(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
416 (M+H)
N-(5-fluoro-3-{[4-(2-metoxiacetil)piperazinil]metil}fenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
50 (M+H)
N-(5-fluoro-3-{[4-(propilsulfonil)piperazinil]metil}fenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
439 (M+H)
N-[3-((4-[(1E)-1-(dimetilamino)-2-ciano-2-azavinil]piperazinil}metil)-5-fluorofenil][(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
380 (M+H)
N-{5-fluoro-3-[(5-metil-1,1-dioxo(1,2,5-tiadiazolidin-2-il))metil]fenil}(3-piridilamino)carboxamida
394 (M+H)
N-{5-fluoro-3-[(5-metil-1,1-dioxo(1,2,5-tiadiazolidin-2-il))metil]fenil}[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
397 (M+H)
N-{5-fluoro-3-[(5-metil-1,1-dioxo(1,2,5-tiadiazolidin-2-il))metil]fenil}[(4-fluorofenil)amino]carboxamida
402 (M+H)
4-[(2-fluoro-5-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
436 (M+H)
N-(3-{[4-(etilsulfonil)piperazinil]metil}-4-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
451 (M+H)
N-[3-({4-[(dimetilamino)sulfonil]piperazinil}metil)-4-fluorofenil][(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
388 (M+H)
4-({2-fluoro-5-[(3-piridilamino)carbonilamino]fenil}metil)piperazinacarboxilato de metilo
422 (M+H)
N-(3-{[4-(etilsulfonil)piperazinil]metil}-4-fluorofenil)(3-piridilamino)carboxamida
437 (M+H)
N-[3-({4-[(dimetilamino)sulfonil]piperazinil}metil)-4-fluorofenil](3-piridilamino)carboxamida
370 (M+H)
4-({3-[(3-piridilamino)carbonilamino]fenil}metil)piperazinacarboxilato de metilo
404 (M+H)
N-(3-{[4-(etilsulfonil)piperazinil]metil}fenil)(3-piridilamino)carboxamida
418 (M+H)
N-(3-{[4-(etilsulfonil)piperazinil]metil}fenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
384 (M+H)
4-[(3-{[(6-metil-3-piridil)amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
419 (M+H)
N-[3-({4-[(dimetilamino)sulfonil]piperazinil}metil)fenil](3-piridilamino)carboxamida
433 (M+H)
N-[3-({4-[(dimetilamino)sulfonil]piperazinil)metil)fenil][(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
341 (M+H)
N-{5-fluoro-3-[(3-metil-2-oxoimidazolidinil)metil]fenil}(3-piridilamino)carboxamida
355 (M+H)
N-{5-fluoro-3-[(3-metil-2-oxoimidazolidinil)metil]fenil}[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
358 (M+H)
N-{5-fluoro-3-[(4-metil-3-oxopiperazinil)metil]fenil}(3-piridil))amino]carboxamida
343 (M+H+)
N-[3-fluoro-5-(piperidilmetil)fenil][(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
329 (M+H+)
N-[3-fluoro-5-(piperidilmetil)fenil](3-piridilamino)carboxamida
Datos de espectro de masas
Nombre el compuesto
481(M+H+)
N-[3-({(3S)-4-[(dimetilamino)sulfonil]-3-(metoximetil)piperazinil}metil)-5-fluorofenil](3piridilamino)carboxamida
466 (M+H)
N-(3-{[(3S)-4-(etilsulfonil)-3-(metoximetil)piperazinil]metil}-5-fluorofenil)(3-piridilamino)carboxamida
432 (M+H)
(2S)-4-({5-fluoro-3-[(3-piridilamino)carbonilamino]fenil}metil)-2-(metoximetil)piperazinacarboxilato de metilo
495 (M+H)
N-[3-({(3S)-4-[(dimetilamino)sulfonil]-3-(metoximetil)piperazinil}metil)-5-fluorofenil][(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
480(M+H)
N-(3-{[(3S)-4-(etilsulfonil)-3-(metoximetil)piperazinil]metil}-5-fluorofenil)[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
446 (M+H)
(2S)-4-[(S-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]-2- de metilo
345 (M+H)
N-[5-fluoro-3-(morfolin-4-ilmetil)fenil][(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
331 (M+H)
N-[5-fluoro-3-(morfolin-4-ilmetil)fenil](3-piridilamino)carboxamida
393 (M+H)
N-{3-[(1,1-dioxo(1,4-tiazaperhidroin-4-il))metil]-5-fluorofenil}[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
379 (M+H)
N-{3-[(1,1-dioxo(1,4-tiazaperhidroin-4-il))metil]-5-fluorofenil}(3-piridilamino)carboxamida
358 (M+H)
N-{5-fluoro-3-[(4-metilpiperazinil)metil]fenil}[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
344 (M+H)
N-{5-fluoro-3-[(4-metilpiperazinil)metil]fenil}(3-piridilamino)carboxamida
151 (M+H)
N-{3-[((35)-3-{[(dimetilamino)sulfonil]metilamino}pirrolidinil)metil]-5-fluorofenil}(3piridilamino)carboxamida
436 (M+H)
N-[3-({(3S)-3-[(etilsulfonil)metilamino]pirrolidinil}metil)-5-fluorofenil](3-piridilamino)carboxamida
402 (M+H)
N-[(3S)-1-({3-fluoro-5-[(3-piridilamino)carbonilamino]fenil}metil)pirrolidin-3-il]metoxi-Nmetilcarboxamida
465 (M+H)
N-{3-[((3S)-3-{[(dimetilamino)sulfonil]metilamino}pirrolidinil)metil]-5-fluorofenil}[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
450 (M+H)
N-[3-({(3S)-3-[(etilsulfonil)metilamino]pirrolidinil}metil)-5-fluorofenil][(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
416 (M+H)
N-{(3S)-1-[(3-fluoro-5-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]pirrolidin-3-il}metoxi-Nmetilcarboxamida
421 (M+H+)
N-(5-fluoro-3-{[4-(metilsulfonil)piperidil]metil}fenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
407 (M+H+)
N-(5-fluoro-3-{[4-(metilsulfonil)piperidil]metil}fenol)(3-piridilamino)carboxamida
423 (M+H)
N-(3-{[4-(etilsulfonil)piperazinil]metil}-5-fluorofenil)(pirimidin-5-ilamino)carboxamida
438 (M+H)
N-[3-({4-[(dimetilamino)sulfonil]piperazinil)metil)-5-fluorofenil](pirimidin-5-ilamino)carboxamida
401 (M+H)
1-[(3-fluoro-5-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperidina-4-carboxilato de metilo
387 (M+H)
1-({3-fluoro-5-[(3-piridilamino)carbonilamino]fenil}metil)piperidina-4-carboxilato de metilo
392 (M+H)
4-[(3-fluoro-5-{[(5-metilisoxazol-3-il)amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
441 (M+H)
N-[3-({4-[(dimetilamino)sulfonil]piperazinil}metil)-5-fluorofenil][(5-metilisoxazol-3il)amino]carboxamida
426 (M+H)
N-(3-{[4-(etilsulfonil)piperazinil]metil}-5-fluorofenil)[(5-metilisoxazol-3-il)amino]carboxamida
465 (M+H)
({5-[((3R)-3-{[(dimetilamino)sulfonil]metilamino}piperidil)metil]-3-fluorofenil}amino)-N-(3piridil)carboxamida
450 (M+H)
{[5-({(3R)-3-[(etilsulfonil)metilamino]piperidil}metil)-3-fluorofenil]amino}-N-(3-piridil)carboxamida
416 (M+H)
N-[(3R)-1-({5-fluoro-3-[(N-(3-piridil)carbamoil)amino]fenil}metil)(3-piperidil)]metoxi-Nmetilcarboxamida
479 (M+H)
({5-[((3R)-3-{[(dimetilamino)sulfonil]metilamino}piperidil)metil]-3-fluorofenil}amino)-N-(6-metil(3piridil))carboxamida
464 (M+H)
{[5-({(3R)-3-[(etilsulfonil)metilamino]piperidil}metil)-3-fluorofenil]amino}-N-(6-metil(3piridil))carboxamida
430 (M+H)
N-{(3R)-1-[(5-fluoro-3-{[N-(6-metil(3-piridil))carbamoil]amino}fenil)metil](3-piperidil)}metoxi-Nmetilcarboxamida
378 (M+H)
4-({3-fluoro-5-[(isoxazol-3-ilamino)carbonilamino]fenil}metil)piperazinacarboxilato de metilo
412 (M+H)
N-(3-{[4-(etilsulfonil)piperazinil]metil}-5-fluorofenil)(isoxazol-3-ilamino)carboxamida
427 (M+H)
N-[3-({4-[(dimetilamino)sulfonil]piperazinil}metil)-5-fluorophen-il](isoxazol-3-ilamino)carboxamida
450 (M+H)
N-[5-fluoro-3-({4-[metil(metilsulfonil)amino]piperidil}metil)fenil][(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
462 (M-H)
N-[3-({4-[(etilsulfonil)metilamino]piperidil}metil)-5-fluorofenil][(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
479 (M+H)
N-{(3-[(4-{[(dimetilamino)sulfonil]metilamino}piperidil)metil]-5-fluorofenil}[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
430 (M+H)
N-{1-[(3-fluoro-5-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil](4-piperidil)}metoxi-Nmetilcarboxamida
414 (M+H)
N-{1-[(3-fluoro-5-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil](4-piperidil)}-N-metilacetamida
403 (M+H)
4-[(3-fluoro-5-{[(2-metilpirimidin-5-il)amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
Datos de espectro de masas
Nombre el compuesto
436 (M+H)
N-[5-fluoro-3-({4-[metil(metilsulfonil)amino]piperidil}metil)fenil](3-piridilamino)carboxamida
448 (M+H)
N-[3-({4-[(etilsulfonil)metilamino]piperidil}metil)-5-fluorofenil](3-piridilamino)carboxamida
465 (M+H)
N-{3-[(4-{[(dimetilamino)sulfonil]metilamino}piperidil)metil]-5-fluorofenil)(3-piridilamino)carboxamida
416 (M+H)
N-[1-({3-fluoro-5-[(3-piridilamino)carbonilamino]fenil}metil)(4-piperidil)]metoxi-N-metilcarboxamida
400 (M+H)
N-[1-({3-fluoro-5-[(3-piridilamino)carbonilamino]fenil}metil)(4-piperidil)]-N-metilacetamida
453 (M+H)
N-[5-fluoro-3-({4-[metil(metilsulfonil)amino]piperidil}metil)fenil][(4-fluorofenil)amino]carboxamida
467 (M+H)
N-[3-({4-[(etilsulfonil)metilamino]piperidil}metil)-5-fluorofenil][(4-fluorofenil)amino]carboxamida
482 (M+H)
N-{3-[(4-{[(dimetilamino)sulfonil]metilamino}piperidil)metil]-5-fluorofenil}[(4fluorofenil)amino]carboxamida
433 (M+H)
N-{1-[(3-fluoro-5-{[(4-fluorofenil)amino]carbonilamino}fenil)metil](4-piperidil)}metoxi-Nmetilcarboxamida
417 (M+H)
N-{1-[(3-fluoro-5-{[(4-fluorofenil)amino]carbonilamino}fenil)metil](4-piperidil)}-N-metilacetamida
472 (M+H)
(terc-butoxi)-N-{1-[(3-fluoro-5-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil](4-piperidil)}-Nmetilcarboxamida
458 (M+H)
(terc-butoxi)-N-[1-({3-fluoro-5-[(3-piridilamino)carbonilamino]fenil}metil)(4-piperidil)]-Nmetilcarboxamida
475 (M+H)
(terc-butoxi)-N-{1-[(3-fluoro-5-{[(4-fluorofenil)amino]carbonilamino}fenil)metil](4-piperidil)}-Nmetilcarboxamida
371 (M+H)
N-(5-fluoro-3-{[4-(metilamino)piperidil]metil}fenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
356 (M+H)
N-(5-fluoro-3-{[4-(metilamino)piperidil]metil}fenil)(3-piridilamino)carboxamida
378 (M+H)
4-({4-fluoro-3-[(1,3-oxazol-2-ilamino)carbonilamino]fenil}metil)piperazinacarboxilato de metilo
392 (M+H)
4-[(4-fluoro-3-{[(5-metilisoxazol-3-il)amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
403 (M+H)
4-[(4-fluoro-3-{[(2-metilpirimidin-5-il)amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
391 (M+H)
4-[(4-fluoro-3-{[(1-metilpirazol-3-il)amino]carbonilammo}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
391 (M-H)
ácido 1-[(3-fluoro-5-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperidina-4-carboxílico
379 (M-H)
ácido 1-({3-fluoro-5-[(3-piridilamino)carbonilamino]fenil}metil)piperidina-4-carboxílico
345 (M+H)
N-[2-fluoro-5-(morfolin-4-ilmetil)fenil][(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
339 (M+H)
4-({4-fluoro-3-[(pirimidin-5-ilamino)carbonilamino]fenil}metil)piperazinacarboxilato de metilo
430 (M+H)
N-{(3R)-1-[(4-fluoro-3-{[N-(6-metil(3-piridil))carbamoil]amino}fenil)metil](3-piperidil)}metoxi-Nmetilcarboxamida
444 (M+H)
N-{(3R)-1-[(4-fluoro-3-{[N-(6-metil(3-piridil))carbamoil]amino}fenil)metil](3-piperidil)}etoxi-Nmetilcarboxamida
458 (M+H)
N-{(3R)-1-[(4-fluoro-3-{[N-(6-metil(3-piridil))carbamoil]amino}fenil)metil](3-piperidil)}-Nmetil(metiletoxi)carboxamida
414 (M+H)
N-{(3R)-1-[(4-fluoro-3-{[N-(6-metil(3-piridil))carbamoil]amino}fenil)metil](3-piperidil)}-Nmetilacetamida
428 (M+H)
N-{(3R)-1-[(4-fluoro-3-{[N-(6-metil(3-piridil))carbamoil]amino}fenil)metil](3-piperidil)}-Nmetilpropanamida
442 (M+H)
N-{(3R)-1-[(4-fluoro-3-{[N-(6-metil(3-piridil))carbamoil]amino}fenil)metil](3-piperidil)}-2-metil-Nmetilpropanamida
393 (M+H)
4-[(4-fluoro-3-{[(5-metil(1,3,4-oxadiazol-2-il)amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
392 (M+H)
4-[(4-fluoro-3-{[(4-metil(1,3-oxazol-2-il)amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
418 (M+H)
4-[(4-cloro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
416 (M+H)
4-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de etilo
430 (M+H)
4-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de etilmetilo
386 (M+I)
N-{5-[(4-acetilpiperazinil)metil]-2-fluorofenil}[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
400 (M+H)
N-{2-fluoro-5-[(4-propanoilpiperazinil)metil]fenil}[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
414 (M+H)
N-(2-fluoro-5-{[4-(2-metilpropanoil)piperazinil]metil}fenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
458 (M+H)
N-[5-({(3R)-3-[(terc-butoxi)-N-metilcarbonilamino]pirrolidiny]}metil)-2-fluorofenil][(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
358 (M+H)
N-(5-({[(3R)-3-(metilamino)pirrolidinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
416 (M+H)
N-(5-{[(3R)-3-(metoxi-N-metilcarbonilamino)pirrolidinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-methtil(3piridil))amino]carboxamida
430 (M+H)
N-(5-{[(3R)-3-(etoxi-N-metilcarbonilamino)pirrolidinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
444 (M+H)
N-[5-({(3R)-3-[N-metil(metiletoxi)carbonilamino]pirrolidinil}metil)-2-fluorofenil][(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
400 (M+H)
N-{(3R)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]pirrolidin-3-il}-Nmetilacetamida
Datos de espectro de masas
Nombre el compuesto
414 (M+H)
N-(5-{[4-(N,N-dimetilcarbamoil)piperidil]metil}-3-fluorofenil)[(6metil(3-piridil))amino]carboxamida
400 (M+H)
N-(3-fluoro-5-{[4-(N-metilcarbamoil)piperidil]metil}fenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
472 (M+H)
N-{(3S)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil](3-piperidil)}(terc-butoxi)-Nmetilcarboxamida
398 (M+H)
4-[(4-metil-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
488 (M+H)
(2S)-4-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]-2(metoximetil)piperazinacarboxilato de terc-butilo
446 (M+H)
(2S)-4-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]-2(metoximetil)piperazinacarboxilato de metilo
460 (M+H)
(2S)-4-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]-2(metoximetil)piperazinacarboxilato de etilo
474 (M+H)
(2S)-4-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]-2(metoximetil)piperazinacarboxilato de metiletilo
430 (M+H)
N-(5-{[(3S)-4-acetil-3-(metoximetil)piperazinil]metil)-2-fluorofenil)[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
444 (M+H)
N-(S-{[(3S)-3-(metoximetil)-4-propanoilpiperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
458 (M+H)
N-(5-{[(3S)-3-(metoximetil)-4-(2-metilpropanoil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
416 (M+H)
N-(5-{[(3S)-3-(metoxi-N-metilcarbonilamino)pirrolidinil]metil}-2-Fluorofenil)[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
430 (M+H)
N-(5-{[(3S)-3-(etoxi-N-metilcarbonilamino)pirrolidinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
444 (M+H)
N-[5-({(3S)-3-[N-metil(metiletoxi)carbonilamino]pirrolidinil}metil)-2-fluorofenil][(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
400 (M+H)
N-{(3S)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]pirrolidin-3-il}-Nmetilacetamida
414 (M+H)
N-{(3S)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]pirrolidin-3-il}-Nmetilpropanamida
428 (M+H)
N-{(3S)-1-[(4-fluoro-3-([(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]pirrolidin-3-il}-2-metil-Nmetilpropanamida
430 (M+H)
N-(2-fluoro-5-{[4-(metoxi-N-metilcarbonilamino)piperidil]metil}fenil)[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
444 (M+H)
N-(5-{[4-(etoxi-N-metilcarbonilamino)piperidil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
458 (M+H)
N-[2-fluoro-5-({4-[N-metil(metiletoxi)carbonilamino]piperidil}metil)fenil][(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
414 (M+H)
N-{1-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil](4-piperidil)}-N-metilacetamida
428 (M+H)
N-{1-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil](4-piperidil)}-N-metilpropanamida
442 (M+H)
N-{1-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil](4-piperidil)}-2-metil-Nmetilpropanamida
414 (M+H)
N-{(3R)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]pirrolidin-3-il}-Nmetilpropanamida
428 (M+H)
N-{(3R)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]pirrolidin-3-il}-2-metil-Nmetilpropanamida
373 (M+H)
N-{5-[((3S,SR)-3,5-dimetilmorfolin-4-il)metil]-2-fluorofenil}[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
430 (M+H)
N-{(3S)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil](3-piperidil)}metoxi-Nmetilcarboxamida
444 (M+H)
N-{(3S)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil)amino]carbonilamino}fenil)metil](3-piperidil)}etoxi-Nmetilcarboxamida
458 (M+H)
N-{(3S)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil](3-piperidil)}-Nmetil(metiletoxi)carboxamida
444 (M+H)
4-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de terc-butilo
414 (M+H)
N-{(3S)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil](3-piperidil)}-N-metil acetamida
344 (M+H)
N-[2-fluoro-5-(piperazinilmetil)fenil][(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
446 (M+H)
(2R)-4-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]-2(metoximetil)piperazinacarboxilato de metilo
1430 (M+H)
N-(5-{[(3R)-4-acetil-3-(metoximetil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
Datos de espectro de masas
Nombre el compuesto
460 (M+H)
(2R)-4-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]-2(metoximetil)piperazinacarboxilato de etilo
474 (M+H)
(2R)-4-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]-2(metoximetil)piperazinacarboxilato de metiletilo
466 (M+H)
N-(5-{[(3R)-3-(metoximetil)-4-(metilsulfonil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
372 (M+H)
N-(5-{[(3S)-3-(metilamino)piperidil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3
428 (M+H)
N-{(3S)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil](3-piperidil)}-Nmetilpropanamida
442 (M+H)
N-{{(3S)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil](3-piperidil)}-2-metil-Nmetilpropanamida
458 (M+H)
4-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]-1,4-diazaperhidroepinocarboxilato de terc-butilo
400 (M+H)
N-(3-{[4-(N,N-dimetilcarbamoil)piperidil]metil}-5-fluorofenil)(3-piridilamino)carboxamida
389 (M+H)
4-({4-fluoro-3-[(pyridazin-4-ilamino)carbonilamino]fenil}metil)piperazinacarboxilato de metilo
480(M+H)
N-(5-{[(3R)-4-(etilsulfonil)-3-(metoximetil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
386 (M+H)
N-(5-fluoro-3-{([4-(N-metilcarbamoil)piperidil]metil}fenil)(3-piridilamino)carboxamida
378 (M+H)
4-({4-fluoro-3-((isoxazol-3-ilamino)carbonilamino]fenil}metil)piperazinacarboxilato de metilo
400 (M+H)
N-{3-[((1S)-7-oxo-8-oxa-3,6-diazabiciclo[4.3.0]non-3-il)metil]-5-fluorofenil}[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
400 (M+H)
N-{5-[((1S)-7-oxo-8-oxa-3,6-diazabiciclo[4.3.0]non-3-il)metil]-2-fluorofenil}[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
416 (M+H)
4-[(5-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)etil]piperazinacarboxilato de metilo
430 (M+H)
4-[(5-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)etil]piperazinacarboxilato de etilo
400 (M+H)
N-{3-[(4-acetilpiperazinil)etil]-5-fluorofenil}[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
358 (M+H)
N-[5-(1,4-diazaperhidroepinilmetil)-2-fluorofenil][(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
416 (M+H)
4-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]-1,4-diazaperhidroepinocarboxilato de metilo
430 (M+H)
4-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]-1,4-diazaperhidroepinocarboxilato de etilo
444 (M+H)
4-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]-1,4-diazaperhidroepinocarboxilato de metiletilo
400 (M+H)
N-{5-[(4-acetil(1,4-diazaperhidroepinil))metil]-2-fluorofenil}[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
401 (M+H)
N-{5-[(1,4-dioxa-8-azaespiro[4.5]dec-8-il)metil]-2-fluorofenil}[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
373 (M+H)
N-{2-fluoro-5-[(4-metoxipiperidil)metil]fenil}[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
357 (M+H)
N-[5-(azaperhidroepinilmetil)-2-fluorofenil][(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
426 (M+H)
N-{2-fluoro-5-[(4-piperidilpiperidil)metil]fenil}[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
455 (M+H)
N-(5-{[4-(ciclohexilmetoxi)piperidil)metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
375 (M+H)
N-(2-fluoro-5-[2-(hidroximetil)morfolin-4-il]metil}fenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
389 (M+H)
N-(2-fluoro-5-{[2-(metoximetil)morfolin-4-il]metil}fenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
620 (M+H)
4-[(2,4-difluoro-5-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
401 (M+H)
N-{2-fluoro-5-[(4-propoxipiperidil)metil]fenil}[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
357 (M+H)
N-{2-fluoro-5-[(4-metilpiperidil)metil]fenil}[(6-metil(3-piridil))aminolcarboxamida
465 (M+H)
N-[5-({4-[(dimetilamino)sulfonil](1,4-diazaperhidroepinil)}metil)-2-fluorofenil][(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
444 (M+H)
4-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]-1,4-diazaperhidroepinocarboxilato de propilo
400 (M+H)
N-{3-[((1R)-7-oxo-8-oxa-3,6-diazabiciclo[4.3.0]non-3-il)metil]-5-fluorofenil}[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
436 (M+H)
N-(2-fluoro-5-{[4-(metilsulfonil)(1,4-diazaperhidroepinil)](metil}fenil)[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
449 (M+H)
N-{3-[((1R)-8-metil-7,7-dioxo-7-tia-3,6,8-triazabiciclo[4.3.0]non-3-il)metil]-5-fluorofenil}[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
450 (M+H)
N-(5-{[4-(etilsulfonil)(1,4-diazaperhidroepinil)]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
449 (M+H)
N-{5-[((1R)-8-metil-7,7-dioxo-7-tia-3,6,8-triazabiciclo[4.3.0]non-3-il)metil]-2-fluorofenil)}[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
465 (M+H)
N-[2-fluoro-5-({4-[(metiletil)sulfonil](1,4-diazaperhidroepinil)}metil)fenil][(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
Datos de espectro de masas
Nombre el compuesto
449 (M+H)
N-{3-[((1S)-8-metil-7,7-dioxo-7-tia-3,6,8-triazabiciclo[4.3.0]non-3-il)metil]-5-fluorofenil}[(6-metil(3piridil))ammo]carboxamida
449 (M+H)
N-{5-[((1S)-8-metil-7,7-dioxo-7-tia-3,6,8-triazabiciclo[4.3.0]non-3-il)metil]-2-fluorofenil}[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
400 (M+H)
N-{5-[((1R)-7-oxo-8-oxa-3,6-diazabiciclo[4.3.0]non-3-il)metil]-2-fluorofenil}[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
418 (M+H)
4-[(4-fluoro-3-{[(6-metoxi(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
402 (M+H)
N-{5-[((1R)-7-oxo-8-oxa-3,6-diazabiciclo[4.3.0]non-3-il)metil]-2-fluorofenil}[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
438 (M+H)
4-[(2,4,5-trifluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
451 (M+H)
N-[2-fluoro-5-({4-[metil(metilsulfonil)amino]piperidil}metil)fenil][(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
414 (M+H)
N-{3-[3-(4-acetilpiperazinil)propil]-5-fluorofenil}[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
430 (M+H)
4-[3-(3-fluoro-5-[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)propil]piperazinacarboxilato de metilo
475 (M+H)
(terc-butoxi)-N-{1-[(4-fluoro-3-{[(4-fluorofenil)amino]carbonilamino}fenil)metil](4-piperidil)}-Nmetilcarboxamida
475 (M+H)
N-(2-fluoro-5-{[4-(metilamino)piperidil]metil)fenil)[(4-fluorofenil)amino]carboxamida
413 (M+H)
4-[(3-{((6-ciano(3-piridil))amino]carbonilamino}-5-fluorofenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
427 (M+H)
4-[(3-{[(6-ciano(3-piridil))amino]carbonilamino}-5-fluorofenil)metil]piperazinacarboxilato de etilo
441 (M+H)
4-[(3-{[(6-ciano(3-piridil))amino]carbonilamino)-5-fluorofenil)metil]piperazinacarboxilato de metiletilo
397 (M+H)
N-{3-[(4-acetilpiperazinil)metil]-5-fluorofenil}[(6-ciano(3-piridil))amino]carboxamida
462 (M+H)
N-[3-({4-[(dimetilamino)sulfonil]piperazinil}metil)-5-fluorofenil][(6-ciano(3-piridil))amino]carboxamida
447 (M+H)
[(6-ciano(3-piridil))amino]-N-(3-{[4-(etilsulfonil)piperazinil]metil}-5-fluorofenil)carboxamida
453 (M+H)
N-[2-fluoro-5-({4-[metil(metilsulfonil)amino]piperidil}metil)fenil][(4-fluorofenil)amino]carboxamida
467 (M+H)
N-[5-({4-[(etilsulfonil)metilamino]piperidil}metil)-2-fluorofenil][(4-fluorofenil)amino]carboxamida
458 (M+H)
(3S)-3-{[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]metilamino}pirrolidincarboxilato de terc-butilo
416 (M+H)
(3S)-3-{[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]metilamino}pirrolidincarboxilato de metilo
416 (M+H)
(3R)-3-{[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]metilamino} pirrolidincarboxilato de metilo
398 (M+H)
4-[(2-metil-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
418 (M+H)
4-[(2-cloro-5-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
429 (M+H)
2-{4-[(3-fluoro-5-{([(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinil}-N,Ndimetilacetamida
444 (M+H)
4-[(3-{[(6-acetil(3-piridil))amino]carbonilamino}-5-fluorofenil)metil]piperazinacarboxilato de etilo
400 (M+H)
N-{3-[3-(4-acetilpiperazinil)propil]-5-fluorofenil}(3-piridilamino)carboxamida
416 (M+H)
4-(3-{3-fluoro-5-[(3-piridilamino)carbonilamino]fenil}propil)piperazinacarboxilato de metilo
450 (M+H)
N-(3-{3-[4-(etilsulfonil)piperazinil]propil}-5-fluorofenil)(3-piridilamino)carboxamida
444 (M+H)
4-[3-(3-fluoro-5-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)propil]piperazinacarboxilato de etilo
458 (M+H)
4-[3-(3-fluoro-5-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)propil]piperazinacarboxilato de metiletilo
464 (M+H)
N-(3-{3-[4-(etilsulfonil)piperazinil]propil}-5-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
479 (M+H)
N-[3-(3-{4-[(dimetilamino)sulfonil]piperazinil}propil)-5-fluorofenil][(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
430 (M+H)
-{3-[3-(4-acetilpiperazinil)propil]-5-fluorofenil}[(6-metoxi(3-piridil))amino]carboxamida
446 (M+H)
4-[3-(3-fluoro-5-{[(6-metoxi(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)propil]piperazinacarboxilato de metilo
480 (M+H)
N-(3-{3-[4-(etilsulfonil)piperazinil]propil}-5-fluorofenil)[(6-metoxi(3-piridil)amino]carboxamida
430 (M+H)
4-[(3-{[(6-acetil(3-piridil))ammo]carbonilamino}-5-fluorofenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
358 (M+H)
N-(5-{[((3S)pirrolidin-3-il)metilamino]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
458 (M+H)
(3R)-3-{[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]metilamino}pirrolidincarboxilato de terc-butilo
358 (M+H)
N-(5-{[((3R)pirrolidin-3-il)metilamino]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
444 (M+H)
N-etil-N-{(1-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil](4piperidil)}metoxicarboxamida
458 (M+H)
etoxi-N-etil-N-{1-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil](4piperidil)}carboxamida
478 (M+H)
N-[5-({4-[etil(etilsulfonil)amino]piperidil}metil)-2-fluorofenil][(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
428 (M+H)
N-etil-N-{1-[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil](4-piperidil)}acetamida
413 (M+H)
4-[(3-{[(6-ciano(3-piridil))amino]carbonilamino}-4-fluorofenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
Datos de espectro de masas
Nombre el compuesto
427 (M+H)
4-[(3-{[(6-ciano(3-piridil))amino]carbonilamino}-4-fluorofenil)metil]piperazinacarboxilato de etilo
441 (M+H)
4-[(3-{[(6-ciano(3-piridil))amino]carbonilamino}-4-fluorofenil)metil]piperazinacarboxilato de metiletilo
397 (M+H)
N-{5-[(4-acetilpiperazinil)metil]-2-fluorofenil}[(6-ciano(3-piridil))amino]carboxamida
452 (M+H)
4-[(3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}-5-(trifluorometil)fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
398 (M+H)
4-[(2-metil-5-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
420 (M+H)
4-[(2,6-difluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
436 (M+H)
4-[(4-cloro-2-fluoro-5-[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
458 (M+H)
4-[(1R)-1-(5-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)etil]piperazinacarboxilato de tercbutilo
416 (M+H)
4-[(1R)-1-(5-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)etil]piperazinacarboxilato de metilo
430 (M+H)
4-[(1R)-1-(5-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)etil]piperazinacarboxilato de etilo
444 (M+H)
4-[(3-{[(6-acetil(3-piridil))amino]carbonilamino}-4-fluorofenil)metil]piperazinacarboxilato de etilo
458 (M+H)
4-[(3-{[(6-acetil(3-piridil))amino]carbonilamino}-4-fluorofenil)metil]piperazinacarboxilato de metiletilo
414 (M+H)
[(6-acetil(3-piridil))amino]-N-{5-[(4-acetilpiperazinil)metil]-2-fluorofenil}carboxamida
430 (M+H)
4-{[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]metilamino}piperidincarboxilato de metilo
414 (M+H)
N-(5-{[(1-acetil(4-piperidil))metilamino]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
464 (M+H)
N-[5-({[1-(etilsulfonil)(4-piperidil)]metilamino}metil)-2-fluorofenil][(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
446 (M+H)
N-{5-[({2-[(terc-butoxi)-N-metilcarbonilamino]etil}metilamino)metil]-2-fluorofenil}[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
449 (M+H)
N-{5-[({2-[(terc-butoxi)-N-metilcarbonilamino]etil}metilamino)metil]-2-fluorofenil}[(4fluorofenil)amino]carboxamida
418(M+H)
4-[(2-cloro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
452 (M+H)
4-[(3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}-4-(trifluorometil)fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
458 (M+H)
4-[(1S)-1-(5-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)etil]piperazinacarboxilato de tercbutilo
416 (M+H)
4-[(1S)-1-(5-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)etil]piperazinacarboxilato de metilo
430 (M+H)
4-[(1S)-1-(5-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)etil]piperazinacarboxilato de etilo
430 (M+H)
4-[(3-{[(6-acetil(3-piridil))amino]carbonilamino}-4-fluorofenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
348 (M+H)
N-[2-fluoro-5-(morfolin-4-ilmetil)fenil][(4-fluorofenil)amino]carboxamida
346 (M+H)
N-[2-fluoro-5-({metil[2-(metilamino)etil]amino}metil)fenil][(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
349 (M+H)
N-[2-fluoro-5-({metil[2-(metilamino)etil]amino}metil)fenil][(4-fluorofenil)amino]carboxamida
407 (M+H)
N-(2-{[(4-fluoro-3-{[(4-fluorofenil)amino]carbonilamino}fenil)metil]metilamino}etil)metoxi-Nmetilcarboxamida
391(M+H)
N-(2-{[(4-fluoro-3-{[(4-fluorofenil)amino]carbonilamino}fenil)metil]metilamino}etil)-N-metilacetamida
409 (M+H)
4-[(2-ciano-5-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
420 (M+H)
4-[(3,4-difluoro-5-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de etilo
427 (M+H)
N-{2-fluoro-5-[(metil{2-[metil(metilsulfonil)amino]etil}amino)metil]fenil}[(4fluorofenil)amino]carboxamida
441(M+H)
N-{5-[({2-[(etilsulfonil)metilamino]etil}metilamino)metil]-2-fluorofenil}[(4fluorofenil)amino]carboxamida
348 (M+H)
N-[5-fluoro-3-(morfolin-4-ilmetil)fenil][(4-fluorofenil)amino]carboxamida
404 (M+H)
N-(2-{[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]metilamino}etil)metoxi-Nmetilcarboxamida
388 (M+H)
N-(2-{[(4-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]metilamino}etil)-Nmetilacetamida
440 (M+H)
4-[(1S)-1-(3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)etil]piperazinacarboxilato de terc-butilo
340 (M+H)
N-[3-((1S)-1-piperaziniletil)fenil][(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
398 (M+H)
4-[(1S)-1-(3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)etil]piperazinacarboxilato de metilo
412 (M+H)
4-[(1S)-1-(3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)etil]piperazinacarboxilato de etilo
432 (M+H)
N-(3-{(1S)-1-[4-(etilsulfonil)piperazinil]etil}fenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
382 (M+H)
N-{3-[(1S)-1-(4-acetilpiperazinil)etil]fenil}[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
424 (M+H)
N-{2-fluoro-5-[(metil{2-[metil(metilsulfonil)amino]etil}amino)metil]fenil}[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
438 (M+H)
N-{5-[({2-[(etilsulfonil)metilamino]etil}metilamino)metil]-2-fluorofenil}[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
Datos de espectro de masas
Nombre el compuesto
398 (M+H)
4-[(1R)-1-(3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)etil]piperazinacarboxilato de metilo
412 (M+H)
4-[(1R)-1-(3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)etil]piperazinacarboxilato de etilo
416 (M+H)
4-[(1S)-1-(2-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)etil]piperazinacarboxilato de metilo
430 (M+H)
4-[(1S)-1-(2-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)etil]piperazinacarboxilato de etilo
400 (M+H)
N-{3-[(1S)-1-(4-acetilpiperazinil)etil]-2-fluorofenil}[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
420 (M+H)
4-[(2,4-difluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
420(M+H)
4-[(2,5-difluoro-3-{[(6-metil(3-pyndyi))amino]carbonilammo}fenil)metil]piperazmecarboxilato de metilo
398 (M+H)
4-[2-(3-{[(6-metil-3-piridil)amino]carbonilamino}fenil)etil]piperazinacarboxilato de metilo
412 (M+H)
4-[2-(3-{[(6-metil-3-piridil)amino]carbonilamino}fenil)etil]piperazinacarboxilato de etilo
432 (M+H)
N-(3-{2-[4-(etilsulfonil)piperazinil]etil}fenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
430 (M+H)
4-[3-(2-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)propil]piperazinacarboxilato de metilo
472 (M+H)
4-[3-(2-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)propil]piperazinacarboxilato de tercbutilo
400 (M+H)
4-[(2-hidroxi-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
434 (M+H)
N-(3-{[4-(etilsulfonil)piperazinil]metil}-2-hidroxifenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
411 (M+H)
N-(3-{2-[4-(N,N-dimetilcarbamoil)piperazinil]etil}fenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
447 (M+H)
N-[3-(2-{4-[(dimetilamino)sulfonil]piperazinil}etil)fenil][(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
418 (M+H)
[(6-metil(3-piridil))amino]-N-(3-{2-[4-(metilsulfonil)piperazinil]etil} fenil)carboxamida
414 (M+H)
4-[(2-hidroxi-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de etilo
420 (M+H)
N-(2-hidroxi-3-{[4-(metilsulfonil)piperazinil]metil} fenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
382 (M+H)
N-{3-[2-(4-acetilpiperazinil)etil]fenil} [(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
372 (M+H)
N-[2-fluoro-3-(3-piperazinilpropil)fenil] [(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
464 (M+H)
N-(3-{3-[4-(etilsulfonil)piperazinil]propil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
414 (M+H)
N-{3-[3-(4-acetilpiperazinil)propil]-2-fluorofenil}[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
444 (M+H)
4-[3-(2-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)propil]piperazinacarboxilato de etilo
416 (M+H)
4-[(3-{[(1-hidroxi-6-metil-3-piridil)amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
434 (M+H)
4-[(2-fluoro-3-{[(1-hidroxi-6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
506 (M+H)
(2S,6R)-4-[(2-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]-2,6dimetilpiperazinacarboxilato de fenilmetilo
414 (M+H)
N-{3-[((3S,5R)-4-acetil-3,5-dimetilpiperazinil)metil]-2-fluorofenil}[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
444 (M+H)
4-[(2-fluoro-3-{[N-(6-metil(3-piridil))carbamoil]amino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de terc-butilo
416 (M+H)
4-[(2-fluoro-3-{[N-(6-metil(3-piridil))carbamoil]amino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de etilo
386 (M+H)
({3-[(4-acetilpiperazinil)metil]-2-fluorofenil}amino)-N-(6-metil(3-piridil))carboxamida
451 (M+H)
{[3-({4-[(dimetilamino)sulfonil]piperazinil}metil)-2-fluorofenil]amino}-N-(6-metil(3-piridil))carboxamida
415 (M+H)
[(3-{[4-(N,N-dimetilcarbamoil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)amino]-N-(6-metil(3-piridil))carboxamida
436 (M+H)
[(3-{[4-(etilsulfonil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)amino]-N-(6-metil(3-piridil))carboxamida
422 (M+H)
[(2-fluoro-3-{[4-(metilsulfonil)piperazinil]metil}fenil)amino]-N-(6-metil(3-piridil))carboxamida
430 (M+H)
(2S,6R)-4-[(2-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]-2,6dimetilpiperazinacarboxilato de metilo
372 (M+H)
N-{3-[((3S,5R)-3,5-dimetilpiperazinil)metil]-2-fluorofenil}[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
392 (M+H)
4-[(2-fluoro-3-{[(5-metilisoxazol-3-il)amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
405 (M+H)
4-[(2-fluoro-3-{[(4-fluorofenil)amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
413 (M+H)
4-[(3-{[N-(6-ciano(3-piridil))carbamoil]amino}-2-fluorofenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
430 (M+H)
4-[(3-{[N-(6-acetil(3-piridil))carbamoil]amino}-2-fluorofenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
456 (M+H)
4-{[2-fluoro-3-({N-[6-(trifluorometil)(3-piridil)]carbamoil}amino)fenil]metil}piperazinacarboxilato de metilo
388 (M+H)
4-({2-fluoro-3-[(N-(4-piridil)carbamoil)amino]fenil}metil)piperazinacarboxilato de metilo
463 (M+H)
[(3-{[4-(azetidinilsulfonil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)amino]-N-(6-metil(3-piridil))carboxamida
472 (M+H)
(5S,3R)-4-[(2-fluoro-3-{[N-(6-metil(3-piridil))carbamoil]amino}fenil)metil]-3,5dimetilpiperazinacarboxilato de terc-butilo
430 (M+H)
(5S,3R)-4-[(2-fluoro-3-{[N-(6-metil(3-piridil))carbamoil]amino}fenil)metil]-3,5dimetilpiperazinacarboxilato de metilo
414 (M+H)
({3-[((6S,2R)-4-acetil-2,6-dimetilpiperazinil)metil]-2-fluorofenil}amino)-N-(6-metil(3piridil))carboxamida
443 (M+H)
{(5S,3R)-4-[(2-fluoro-3-{[N-(6-metil(3-piridil))carbamoil]amino}fenil)metil]-3,5-dimetilpiperazinil}-N,Ndimetilcarboxamida
464 (M+H)
[(3-{[(6S,2R)-4-(etilsulfonil)-2,6-dimetilpiperazinil]metil}-2-fluorofenil)amino]-N-(6-metil(3piridil))carboxamida
Datos de espectro de masas
Nombre el compuesto
479 (M+H)
{[3-({(6S,2R)-4-[(dimetilamino)sulfonil]-2,6-dimetilpiperazinil}metil)-2-fluorofenil]amino}-N-(6-metil(3piridil))carboxamida
382 (M+H)
N-[2-fluoro-3-(1,2,4-triazolo[3,4-c]piperazin-7-ilmetil)fenil][(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
396 (M+H)
N-{2-fluoro-3-[(3-metil(1,2,4-triazolo[3,4-c]piperazin-7-il))metil]fenil}[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
410 (M+H)
N-{3-[(3-etil(1,2,4-triazolo[3,4-c]piperazin-7-il))metil]-2-fluorofenil[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
408 (M+H)
N-(2-fluoro-3-{[4-(metilsulfonil)piperazinil]metil}fenil)(4-piridilamino)carboxamida
422 (M+H)
N-(3-{[4-(etilsulfonil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)(4-piridilamino)carboxamida
402 (M+H)
4-[(2-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
601,2
N-[2-fluoro-3-({4-[(2-fluoro-3-{[(6-metil(3piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinil}metil)fenil][(6-metil(3-Dyridil))amino]carboxamida
402,2
4-[(2-fluoro-3-{[(2-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo
488,2
(2R)-4-[(2-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]-2(metoximetil)piperazinacarboxilato de terc-butilo
451,1
N-[3-({(3R)-3-metil-4-[(metilamino)sulfonil]piperazinil}metil)-2-fluorofenil][(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
430,2
N-(3-{[(3S)-4-acetil-3-(metoximetil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
400,2
N-{3-[((1S)-7-oxo-8-oxa-3,6-diazabiciclo[4.3.0]non-3-il)metil]-2-fluorofenil}[(6
440,1
N-(3-{[(3R)-3-metil-4-(2,2,2-trifluoroetil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
416,2
N-(3-{[(3R)-4-(2-metoxietil)-3-metilpiperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
441,2
N-(3-{[(3R)-4-(azetidinilcarbonil)-3-metilpiperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
388,2
N-(3-{[(3R)-3-(metoximetil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida
446,2
(2R)-4-[(2-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]-2(metoximetil)piperazinacarboxilato de metilo
473,1
N-[3-({(3S)-3-metil-4-[(metilamino)sulfonil]piperazinil}metil)-2-fluorofenil][(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
441,2
N-(3-{[(3S)-4-(azetidinilcarbonil)-3-metilpiperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
480,1
N-(3-{[(3S)-4-(etilsulfonil)-3-(metoximetil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
460,2
(2S)-4-[(2-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]-2(metoximetil)piperazinacarboxilato de etilo
495,2
N-[3-({(3R)-4-[(dimetilamino)sulfonil]-3-(metoximetil)piperazinil}metil)-2-fluorofenil][(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
466,1
N-(3-{[(3R)-3-(metoximetil)-4-(metilsulfonil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
471,2
N-(3-{[(3S)-4-(azetidinilcarbonil)-3-(metoximetil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
507,1
N-(3-{[(3S)-4-(azetidinilsulfonil)-3-(metoximetil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
492,2
N-(3-{[(3S)-4-(ciclopropilsulfonil)-3-(metoximetil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
428,1
N-{3-[((1S)-9,9-dimetil-7-oxo-8-oxa-3,6-diazabiciclo[4.3.0]non-3-il)metil]-2-fluorofenil}[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
432,1
(2S)-4-[(2-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]-2(hidroximetil)piperazinacarboxilato de metilo
446,1
(2S)-4-[(2-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]-2(hidroximetil)piperazinacarboxilato de etilo
466,1
N-(3-{[(3S)-4-(etilsulfonil)-3-(hidroximetil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
455,2
N-(3-{[(3R)-3-metil-4-(pirrolidinilcarbonil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
469,2
N-(3-{[(3R)-3-metil-4-(piperidilcarbonil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
471,2
N-(3-{[(3R)-3-metil-4-(morfolin-4-ilcarbonil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
Datos de espectro de masas
Nombre el compuesto
487,3
ácido 4-({(2R)-4-[(2-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]-2metilpiperazinil}carbonilamino)butanoico
473,1
ácido 3-({(2R)-4-[(2-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]-2metilpiperazinil}carbonilamino)propanoico
459,2
{(2R)-4-[(2-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]-2-metilpiperazinil}-N-(3hidroxipropil)carboxamida
473,3
{(2R)-4-[(2-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]-2-metilpiperazinil}-N-(4hidroxibutil)carboxamida
428,1
N-{3-[((1R)-9,9-dimetil-7-oxo-8-oxa-3,6-diazabiciclo[4.3.0]non-3-il)metil]-2-fluorofenil}[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
587,2
N-{3-[(4-{[7-(dietilamino)-2-oxochromen-3-il]carbonil}piperazinil)metil]-2-fluorofenil}[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
402,2
(2R)-4-({2-fluoro-3-[(3-piridilamino)carbonilamino]fenil}metil)-2-metilpiperazinacarboxilato de metilo
416,3
(2R)-4-[(2-fluoro-3-{[(2-metil(4-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]-2-metilpiperazinacarboxilato de metilo
416,3
(2R)-4-[(3-fluoro-5-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]-2-metilpiperazinacarboxilato de metilo
402,2
(2R)-4-({3-fluoro-5-[(3-piridilamino)carbonilamino]fenil}metil)-2-metilpiperazinacarboxilato de metilo
416,2
(2R)-4-[(3-fluoro-5-{[(2-metil(4-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]-2-metilpiperazinacarboxilato de metilo
571,3
[(4-clorofenil)amino]-N-{2-fluoro-3-[(4-{[3(fenilcarbonil)fenil]carbonil}piperazinil)metil]fenil}carboxamida
572,3
[(6-cloro(3-piridil))amino]-N-{2-fluoro-3-[(4-{[3(fenilcarbonil)fenil]carbonil}piperazinil)metil]fenil}carboxamida
442,3
N-{3-[(1S)-1-((1S)-9,9-dimetil-7-oxo-8-oxa-3,6-diazabiciclo[4.3.0]non-3-il)etil]-2-fluorofenil}[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida
442,3
N-{3-[(1R)-1-((1S)-9,9-dimetil-7-oxo-8-oxa-3,6-diazabiciclo[4.3.0]non-3-il)etil]-2-fluorofenil}[(6metil(3-piridil))amino]carboxamida
Ejemplo 18
Ensayos de identificación de dianas
5 Ensayos de especificidad: La especificidad hacia miosina cardíaca se evalúa comparando el efecto de la entidad química en una ATPasa estimulada con actina de un panel de isoformas de miosina: músculo cardíaco, esquelético y liso, a una única concentración 50 µM o a múltiples concentraciones de la entidad química.
10 Ejemplo 19
Modelos in vitro de modulación de ATPasa de miosina cardíaca dependiente de dosis
Ensayo de sarcómero cardíaco reconstituido: Las respuestas a dosis se miden usando un ensayo de ATPasa
15 acoplada a piruvato cinasa y lactato deshidrogenasa tamponada con calcio que contiene los siguientes reactivos (las concentraciones expresadas son concentraciones de ensayo final): PIPES de potasio (12 mM), MgCl2 (2 mM), ATP (1 mM), DTT (1 mM), BSA (0,1 mg/ml), NADH (0,5 mM), PEP (1,5 mM), piruvato cinasa (4 U/ml), lactato deshidrogenasa (8 U/ml) y antiespumante (90 ppm). El pH se ajusta a 6,80 a 22ºC mediante la adición de hidróxido potásico. Los niveles de calcio son controlados por un sistema de tamponamiento que contiene EGTA 0,6 mM y
20 concentraciones variables de calcio, para lograr una concentración de calcio libre de 1x10-4 M a 1x10-8 M.
Los componentes de proteína específicos para este ensayo son subfragmento-1 de miosina cardíaca bovina (normalmente 0,5 µM), actina cardíaca bovina (14 µM), tropomiosina cardíaca bovina (normalmente 3 µM) y troponina cardíaca bovina (normalmente 3-8 µM). Las concentraciones exactas de tropomiosina y troponina se
25 determinan empíricamente por valoración para lograr la máxima diferencia en la actividad de ATPasa cuando se MIDE en presencia de EGTA 2 mM frente a la medida en presencia de CaCl2 0,1 mM. La concentración exacta de miosina en el ensayo también se determina empíricamente por valoración para lograr una tasa deseada de hidrólisis de ATP. Esto varía entre preparaciones de proteína, debido a variaciones en la fracción de moléculas activas en cada preparación.
30 Las respuestas a dosis se miden normalmente a la concentración de calcio correspondiente al 25% o 50% de la máxima actividad de ATPasa (pCa25 o pCa50), así se realiza un experimento preliminar para probar la respuesta de la actividad de ATPasa a concentración de calcio libre en el intervalo de 1x10-4 M a 1x10-8 M. Posteriormente, la mezcla de ensayo se ajusta a la pCa50 (normalmente 3x10-7 M). Los ensayos se realizan preparando primero una serie de dilución de compuesto de prueba, cada uno con una mezcla de ensayo que contiene Pipes de potasio, MgCl2, BSA, DTT, piruvato cinasa, lactato deshidrogenasa, subfragmento-1 de miosina, antiespumante, EGTA, CaCl2 y agua. El ensayo se inicia añadiendo un volumen igual de disolución que contiene Pipes de potasio, MgCl2, BSA, DTT, ATP, NADH, PEP, actina, tropomiosina, troponina, antiespumante y agua. La hidrólisis de ATP se monitoriza por absorbancia a 340 nm. La curva de respuesta a dosis resultante se ajusta por la ecuación de 4 parámetros y = Parte inferior + ((Parte superior-Parte inferior)/(1+((EC50/X)^Colina))). AC1,4 se define como la concentración a la que la actividad de ATPasa es 1,4 veces superior a la parte inferior de la curva de dosis.
Ensayo de miofibrillas cardíacas: Para evaluar el efecto de entidades químicas sobre la actividad de ATPasa de miosina cardíaca de longitud completa en el contexto de sarcómero nativo se realizan ensayos de miofibrillas sin membrana. Las miofibrillas cardíacas se obtienen homogeneizando tejido cardíaco en presencia de un detergente no iónico. Tal tratamiento elimina membranas y la mayoría de las proteínas citoplásmicas solubles, pero deja intacto el aparato de acto-miosina sarcomérico cardíaco. Las preparaciones de miofibrillas retienen la capacidad para hidrolizar ATP en un modo controlado por Ca++. Las actividades de ATPasa de tales preparaciones de miofibrillas en presencia y ausencia de entidades químicas se ensayan a concentraciones de Ca++ a través del intervalo entero de respuesta a calcio, pero con concentraciones de calcio preferidas que dan el 25%, 50% y el 100% de una tasa máxima.
Las miofibrillas pueden prepararse a partir de tanto tejido fresco como ultracongelado que se ha descongelado rápidamente. El tejido se pica finamente y se resuspende en un tampón de relajación que contiene los siguientes reactivos (las concentraciones expresadas son concentraciones de disolución final): Tris-HCl (10 mM), MgCl2 (2 mM), KCl (75 mM), EGTA (2 mM), NaN3 (1 mM), ATP (1 mM), fosfocreatina (4 mM), BDM (50 mM), DTT (1 mM), benzamidina (1 mM), PMSF (0,1 mM), leupeptina (1 ug/ml), pepstatina (1 ug/ml) y Triton X-100 (1%). El pH se ajusta a 7,2 a 4ºC mediante la adición de HCl. Después de la adición de EDTA a 10 mM, el tejido se pica a mano a 4ºC en una sala fría y se homogeneíza usando un gran homogeneizador de rotor-estator (Omni Mixer). Después de mezclar durante 10 s, el material se sedimenta por centrifugación (5 minutos, 2000 x g máx, 4ºC). Las miofibrillas se resuspenden entonces en un tampón estándar que contiene los siguientes reactivos (las concentraciones expresadas son las concentraciones en disolución final): Tris-HCl (10 mM) pH 7,2 a 4ºC, MgCl2 (2 mM), KCl (75 mM), EGTA (2 mM), NaN3 (1 mM), Triton X-100 (1%), usando un molinillo de tejido vidrio-vidrio (Kontes) hasta emboladas suaves, normalmente 4-5. Los sedimentos de miofibrillas se lavan varias veces por breve homogenización, usando el homogeneizador de rotor-estator en 10 volúmenes de tampón estándar, seguido de centrifugación. Para eliminar el detergente, las miofibrillas se lavan varias veces más con tampón estándar que carece de Triton X-100. Entonces, las miofibrillas se someten a tres rondas de filtración a gravedad usando malla de nailon de 600, 300 y finalmente 100 µm (Spectrum Lab Products) para generar mezclas homogéneas y sedimentar. Finalmente, las miofibrillas se resuspenden en un tampón de almacenamiento que contiene los siguientes reactivos (las concentraciones expresadas son concentraciones de disolución final): Pipes de potasio (12 mM), MgCl2 (2 mM) y DTT (1 mM). Se añade sacarosa sólida mientras que se agita al 10% (peso/volumen) antes de congelar por goteo en nitrógeno líquido y almacenamiento a -80ºC.
Las respuestas a dosis se miden usando un ensayo de ATPasa acoplada a piruvato cinasa y lactato deshidrogenasa tamponada con calcio que contiene los siguientes reactivos ((las concentraciones expresadas son concentraciones de ensayo final): Pipes de potasio (12 mM), MgCl2 (2 mM), ATP (0,05 mM), DTT (1 mM), BSA (0,1 mg/ml), NADH (0,5 mM), PEP (1,5 mM), piruvato cinasa (4 U/ml), lactato deshidrogenasa (8 U/ml) y antiespumante (90 ppm). El pH se ajusta a 6,80 a 22ºC mediante la adición de hidróxido potásico. Los niveles de calcio son controlados por un sistema de tamponamiento que contiene EGTA 0,6 mM y concentraciones variables de calcio, para lograr una concentración de calcio libre de 1x10-4 M a 1x10-8 M. La concentración de miofibrillas en el ensayo final es normalmente 0,2 a 1 mg/ml.
Las respuestas a dosis se miden normalmente a la concentración de calcio correspondiente al 25%, 50%, o al 100% de la máxima actividad de ATPasa (pCa25, pCa50, pCa100), así se realiza un experimento preliminar para probar la respuesta de la actividad de ATPasa a concentraciones de calcio libre en el intervalo de 1x10-4 M a 1x10-8 M. Posteriormente, la mezcla de ensayo se ajusta a la pCa50 (normalmente 3x10-7 M). Los ensayos se realizan preparando primero una serie de dilución de compuesto de prueba, cada uno con una mezcla de ensayo que contiene Pipes de potasio, MgCl2, BSA, DTT, piruvato cinasa, lactato deshidrogenasa, miofibrillas cardíacas, antiespumante, EGTA, CaCl2 y agua. El ensayo se inicia añadiendo UN volumen igual de disolución que contiene Pipes de potasio, MgCl2, BSA, DTT, ATP, NADH, PEP, antiespumante y agua. La hidrólisis de ATP se monitoriza por absorbancia a 340 nm. La curva de respuesta a dosis resultante se ajusta por la ecuación de 4 parámetros y = Parte inferior + ((Parte superior-Parte inferior)/(1+((EC50/X)^Colina))). AC1,4 se define como la concentración a la que la actividad de ATPasa es 1,4 veces superior a la parte inferior de la curva de dosis.
Ejemplo 20
Ensayos de miocitos
PREPARACIÓN DE MIOCITOS DE RATA VENTRICULARES CARDÍACOS ADULTOS. Ratas Sprague-Dawley macho adultas se anestesian con una mezcla de gas isoflurano y oxígeno. Los corazones se extirpan rápidamente, se aclaran y se canula la aorta ascendente. La perfusión retrógrada continua se inicia en los corazones a una presión de perfusión de 60 cm de H2O. Los corazones se perfunden primero con una disolución de Krebs nominalmente libre de Ca2+ de la siguiente composición: NaCl 110 mM, KCl 2,6 mM, KH2PO4 ·7 H2O 1,2 mM, MgSO4 1,2 mM, NaHCO3 2,1 mM, glucosa 11 mM y HEPES 4 mM (todos de Sigma). Este medio no se recircula y se gasifica continuamente con O2. Después de aproximadamente 3 minutos el corazón se perfunde con tampón de Krebs modificado complementado con 3,3% de colagenasa (169 µ/mg de actividad, clase II, Worthington Biochemical Corp., Freehold, NJ) y concentración de calcio final 25 µM hasta que el corazón palidece suficientemente y se vuelve blando. El corazón se saca de la cánula, los atrios y vasos se desechan y los ventrículos se cortan en trozos pequeños. Los miocitos se dispersan por agitación suave del tejido ventricular en colagenasa fresca que contiene Krebs antes de obligarse suavemente a pasar a través de una malla de nailon de 200 µm en un tubo de 50 cc. Los miocitos resultantes se resuspenden en disolución de Krebs modificada que contiene 25 µM de calcio. Los miocitos se vuelven tolerantes al calcio mediante la adición de una disolución de calcio (disolución madre 100 mM) a intervalos de 10 minutos hasta que se logra calcio 100 µM. Después de 30 minutos el sobrenadante se desecha y 30 - 50 ml de tampón Tyrode (NaCl 137 mM, KCl 3,7 mM, MgCl 0,5 mM, glucosa 11 mM, HEPES 4 mM y CaCl2 1,2 mM, pH 7,4) se añaden a las células. Las células se mantienen durante 60 min a 37ºC antes de iniciarse los experimentos y se usan en el plazo de 5 h de aislamiento. Las preparaciones de células se usan sólo si las células pasaron primero los criterios de CC respondiendo a un patrón (>150% de basal) e isoproterenol (ISO; > 250% de basal). Adicionalmente, sólo las células cuya contractilidad basal está entre el 3 y el 8% se usan en los siguientes experimentos.
EXPERIMENTOS DE CONTRACTILIDAD DE MIOCITOS VENTRICULARES ADULTOS. Miocitos que contienen alícuotas de tampón Tyrode se colocan en cámaras de perfusión (serie 20 RC-27NE; Warner Instruments) completas con plataformas de calentamiento. Se deja que los miocitos se unan, las cámaras se calientan a 37ºC y las células se perfunden entonces con tampón Tyrode a 37ºC. Los miocitos se estimulan por campo a 1 Hz con electrodos de platino (20% por encima del umbral). Sólo las células que tienen estriaciones claras, y son quiescentes antes de la ritmicidad se usan para experimentos de contractilidad. Para determinar la contractilidad basal, los miocitos se someten a obtención de imágenes mediante un objetivo de 40x y usando una cámara de dispositivo de carga acoplada de velocidad de trama variable (60-240 Hz) las imágenes se digitalizan y se muestran en una pantalla de ordenador a una velocidad de muestreo de 240 Hz [registrador visualizador de tramas, MyoPacer, software de adquisición y análisis para la contractilidad de células están disponibles de IonOptix (Milton, MA).] Después de un mínimo de 5 minutos de periodo de contractilidad basal, los compuestos de prueba (0,01 - 15 µM) se perfunden en los miocitos durante 5 minutos. Después de este tiempo, tampón Tyrode fresco se perfunde para determinar las características de lavado del compuesto. Usando estrategia de detección de bordes, la contractilidad de los miocitos y las velocidades de contracción y relajación se registran continuamente.
ANÁLISIS DE CONTRACTILIDAD: Tres o más miocitos individuales se prueban por entidad química, usando dos o más preparaciones de miocitos diferentes. Para cada célula, veinte o más transitorios de contractilidades al nivel basal (definido como 1 min antes de infusión de la entidad química) y después de la adición de la entidad química se promedian y se comparan. Estos transitorios promedio se analizan para determinar cambios en la longitud diastólica, y usando el programa de análisis Ionwizard (IonOptix) se determinan el acortamiento fraccional (% de disminución en la longitud diastólica) y las velocidades de contracción y relajación máximas (um/s). Se combinan los análisis de células individuales. El aumento en el acortamiento fraccional con respecto al basal indica la potenciación de la contractilidad de miocitos.
ANÁLISIS DE TRANSITORIOS DE CALCIO: Carga de Fura: Célula permeable Fura-2 (Molecular Probes) se disuelve en cantidades iguales de Pluronic (Mol Probes) y FBS durante 10 min a TA. Se prepara una disolución madre de Fura 1 µM en tampón Tyrode que contiene probenecid 500 mM (Sigma). Para cargar las células, esta disolución se añade a miocitos a TA. Después de 10 min, el tampón se elimina, las células se lavan con Tyrode que contiene probenecid y se incuban a TA durante 10 min. Este lavado e incubación se repite. Las mediciones de contractilidad y calcio simultáneas se determinan en el plazo de 40 min de carga.
Obtención de imágenes: Un compuesto de prueba se perfunde sobre células. Las relaciones de transitorios de contractilidad y calcio simultáneas se determinan en el nivel inicial y después de la adición del compuesto. Se obtienen imágenes digitales de las células y la contractilidad se determina como se ha descrito anteriormente, usando un filtro rojo en la trayectoria de la luz para evitar la interferencia con las mediciones de calcio fluorescentes. El software y hardware de adquisición y análisis para el análisis de transitorios de calcio se obtienen de IonOptix. La instrumentación para la medición de la fluorescencia incluye una lámpara de arco de xenón y una fuente de luz de excitación dual Hiperswitch que alterna entre longitudes de onda de 340 y 380 a 100 Hz por un espejo accionado por galvanómetro. Una guía de luz llena de líquido emite la luz de excitación dual al microscopio y la fluorescencia de emisión se determina usando un tubo fotomultiplicador (PMT). La interfaz del sistema de fluorescencia enruta la señal del PMT y las relaciones se registran usando el programa de adquisición IonWizard.
Análisis: Para cada célula, diez o más transitorios de relación de contractilidad y calcio en el nivel basal y después de la adición del compuesto se promediaron y se compararon. Los transitorios promedio de contractilidad se analizan usando el programa de análisis Ionwizard para determinar cambios en longitud diastólica, y acortamiento fraccional (% de disminución en la longitud diastólica). Los transitorios de la relación de calcio promediada se analizan usando el programa de análisis Ionwizard para determinar cambios en relaciones diastólicas y sistólicas y el 75% de tiempo con respecto al nivel de inicial (T75).
DURABILIDAD: Para determinar la durabilidad de la respuesta, los miocitos se exponen a un compuesto de prueba durante 25 minutos seguido de un periodo de lavado de 2 min. La respuesta de contractilidad se compara 5 y 25 min tras la infusión del compuesto.
POTENCIAL UMBRAL: Los miocitos se estimulan con campo a un voltaje de aproximadamente el 20% por encima del umbral. En estos experimentos, el voltaje umbral (voltaje mínimo para la ritmicidad de la célula) se determina empíricamente, se modera el ritmo de la célula a ese umbral y luego se infunde el compuesto de prueba. Después de que la actividad esté en estado estacionario, el voltaje se disminuye durante 20 segundos y luego se reinicia. La alteración de los canales de iones se corresponde con el aumento o la reducción del potencial de acción umbral.
FRECUENCIA Hz: La contractilidad de miocitos se determina a 3 Hz del siguiente modo: un momento de tiempo basal de 1 min seguido de perfusión del compuesto de prueba durante 5 min, seguido de un lavado de 2 min. Después de que la contractilidad de la célula haya vuelto completamente al nivel inicial, la Hz se disminuye a 1. Después de un periodo de aclimatación inicial, la célula se expone al mismo compuesto. Al igual que esta especie, la rata presenta una frecuencia de fuerza negativa a 1 Hz, a 3 Hz el AF de la célula debe ser inferior, pero la célula todavía debe responder aumentando su acortamiento fraccional en presencia del compuesto.
ADITIVO CON ISOPROTERENOL: Para demostrar que un compuesto actúa mediante un mecanismo diferente al estimulante adrenérgico isoproterenol, las células se cargan con fura-2 y la medición simultánea de las relaciones de contractilidad y de calcio se determinan. Los miocitos se exponen secuencialmente a 5 µm o menos de un compuesto de prueba, tampón, isoproterenol 2 nM, tampón y una combinación de un compuesto de prueba e isoproterenol.
Ejemplo 21
Modelo in vitro de modulación de ATPasa de miosina cardíaca dependiente de dosis
Miosinas cardíacas bovinas y de rata se purifican a partir de los tejidos cardíacos respectivos. Las miosinas de músculo esquelético y liso usadas en los estudios de especificidad se purifican a partir de músculo esquelético de conejo y mollejas de pollo, respectivamente. Todas las miosinas usadas en los ensayos se convierten en una forma soluble de una sola cabeza (S1) por una proteólisis limitada con quimotripsina. Otros componentes sarcoméricos: complejo de troponina, tropomiosina y actina se purifican de corazones bovinos (sarcómero cardíaco) o músculo pectoral de pollo (sarcómero esquelético).
La actividad de miosinas se monitoriza midiendo las tasas de hidrólisis de ATP. La ATPasa de miosina es activada muy significativamente por filamentos de actina. La renovación de ATP se detecta en un ensayo enzimático acoplado usando piruvato cinasa (PK) y lactato deshidrogenasa (LDH). En este ensayo, cada ADP producido como resultado de la hidrólisis de ATP se recircula a ATP por PK con una oxidación simultánea de molécula de NADH por LDH. La oxidación de NADH puede monitorizarse convenientemente por disminución en la absorbancia a 340 nm de la longitud de onda.
Las respuestas a dosis se miden usando un ensayo de ATPasa acoplada a piruvato cinasa y lactato deshidrogenasa tamponada con calcio que contiene los siguientes reactivos (las concentraciones expresadas son concentraciones de ensayo final): Pipes de potasio (12 mM), MgCl2 (2 mM), ATP (1 mM), DTT (1 mM), BSA (0,1 mg/ml), NADH (0,5 mM), PEP (1,5 mM), piruvato cinasa (4 U/ml), lactato deshidrogenasa (8 U/ml) y antiespumante (90 ppm). El pH se ajusta a 6,80 a 22ºC mediante la adición de hidróxido potásico. Los niveles de calcio son controlados por un sistema de tamponamiento que contiene EGTA 0,6 mM y concentraciones variables de calcio, para lograr una concentración de calcio libre de 1x10-4 M a 1x10-8 M.
Los componentes de proteína específicos para este ensayo son subfragmento-1 de miosina cardíaca bovina (normalmente 0,5 µM), actina cardíaca bovina (14 µM), tropomiosina cardíaca bovina (normalmente 3 µM) y troponina cardíaca bovina (normalmente 3-8 µM). Las concentraciones exactas de tropomiosina y troponina se determinan empíricamente por valoración para lograr la máxima diferencia en la actividad de ATPasa cuando se mide en presencia de EGTA 1 mM frente a la medida en presencia de CaCl2 0,2 mM. La concentración exacta de miosina en el ensayo también se determina empíricamente por valoración para lograr una tasa deseada de hidrólisis de ATP. Esto varía entre preparaciones de proteína, debido a variaciones en la fracción de moléculas activas en cada preparación.
Las respuestas a dosis del compuesto se miden normalmente a la concentración de calcio correspondiente al 50% de la máxima actividad de ATPasa (pCa50), así se realiza un experimento preliminar para probar la respuesta de la actividad de ATPasa a concentraciones de calcio libre en el intervalo de 1x10-4 M a 1x10-8 M. Posteriormente, la mezcla de ensayo se ajusta a la pCa50 (normalmente 3x10-7 M). Los ensayos se realizan preparando primero una serie de dilución de compuesto de prueba, cada uno con un mezcla de ensayo que contiene Pipes de potasio, MgCl2, BSA, DTT, piruvato cinasa, lactato deshidrogenasa, subfragmento-1 de miosina, antiespumante, EGTA, CaCl2 y agua. El ensayo se inicia añadiendo un volumen igual de disolución que contiene Pipes de potasio, MgCl2, BSA, DTT, ATP, NADH, PEP, actina, tropomiosina, troponina, antiespumante y agua. La hidrólisis de ATP se monitoriza por absorbancia a 340 nm. La curva de respuesta a dosis resultante se ajusta por la ecuación de 4 parámetros y = Parte inferior + ((Parte superior-Parte inferior)/(1+((EC50/X)^Colina))). AC1,4 se define como la concentración a la que la actividad de ATPasa es 1,4 veces superior a la parte inferior de la curva de dosis.
La capacidad de un compuesto para activar miosina cardíaca se evalúa por el efecto del compuesto sobre la ATPasa estimulada con actina del subfragmento S1. Los filamentos de actina en el ensayo están decorados con troponina y tropomiosina y la concentración de Ca++ se ajusta a un valor que produciría el 50% de activación máxima. La ATPasa de S1 se mide en presencia de una serie de dilución del compuesto. La concentración de compuesto requerida para el 40% de la activación por encima de la tasa de ATPasa medida en presencia de control (volumen equivalente de DMSO) se informa como AC40.
Ejemplo 22
Ensayo de acortamiento fraccional in vivo
ANIMALES Ratas Sprague-Dawley macho de Charles River Laboratories (275 - 350 g) se usan para los estudios de eficacia e infusión en bolo. Los animales con insuficiencia cardíaca se describen más adelante. Se alojan dos por jaula y tienen acceso a comida y agua a voluntad. Hay un periodo de aclimatación mínimo de tres días antes de los experimentos.
ECOCARDIOGRAFÍA Los animales se anestesian con isoflurano y se mantienen dentro de un plano quirúrgico durante todo el procedimiento. La temperatura media corporal se mantiene a 37ºC usando una almohadilla calefactora. Una vez anestesiados, los animales se afeitan y se aplica un depilatorio para eliminar todas las trazas de pelo del área del pecho. El área del pecho se prepara adicionalmente con 70% de EtOH y se aplica gel de ultrasonidos. Usando un sistema de ultrasonidos GE System Vingmed (General Electric Medical Systems), una sonda de 10 MHz se coloca sobre la pared del pecho y las imágenes se adquieren en la vista del eje corto al nivel de los músculos papilares. Las imágenes en modo M 2-D del ventrículo izquierdo se toman antes de, y después, de la inyección en bolo del compuesto o infusión. El acortamiento fraccional in vivo ((diámetro diastólico final - diámetro sistólico final)/ diámetro diastólico final x 100) se determina por análisis de las imágenes en modo M usando el programa de software GE EchoPak.
EFICACIA DEL BOLO E INFUSIÓN Para los protocolos de bolo e infusión, el acortamiento fraccional se determina usando ecocardiografía como se ha descrito anteriormente. Para los protocolos de bolo e infusión, cinco imágenes en modo M de pre-dosis se toman a intervalos de 30 segundos antes de la inyección en bolo o infusión de compuestos. Después de la inyección, las imágenes en modo M se toman a intervalos de 1 min y a cinco minutos después hasta 30 min. La inyección en bolo (0,5-5 mg/kg) o infusión es mediante un catéter de la vena de la cola. Los parámetros de infusión se determinan a partir de perfiles farmacocinéticos de los compuestos. Para infusión, los animales recibieron una dosis de carga de 1 minuto inmediatamente seguido de una dosis de infusión de 29 minutos por el catéter de la vena de la cola. La dosis de carga se calcula determinando la concentración diana x volumen de distribución en estado estacionario. La concentración de la dosis de mantenimiento se determina tomando la concentración diana x la eliminación. Los compuestos se formulan en 25% de vehículo Cavitron para protocolos de bolo e infusión. Se toman muestras de sangre para determinar la concentración en plasma de los compuestos.
Ejemplo 23
Hemodinámica en animales normales y con insuficiencia cardíaca
Los animales se anestesian con isoflurano, se mantienen dentro de un plano quirúrgico y luego se afeitan en preparación para la cateterización. Se hace una incisión en la región del cuello y la arteria carótida derecha se despeja y se aísla. Un catéter de presión Micro-tip de calibre 2 French de Millar (Millar Instruments, Houston, TX) se canula en la arteria carótida derecha y se enhebra la aorta y en el ventrículo izquierdo. Las lecturas de presión diastólica final, máx + / - dp/dt, presiones sistólicas y la frecuencia cardíaca se determinan continuamente mientras que el compuesto o vehículo se infunde. Las mediciones se registran y se analizan usando un programa de software PowerLab y the Chart 4 (ADInstruments, Mountain View, CA). Las mediciones hemodinámicas se realizan a una concentración de infusión seleccionada. Se toman muestras de sangre para determinar la concentración en plasma de los compuestos.
Ejemplo 24
Modelo de oclusión de la arteria coronaria izquierda de insuficiencia cardíaca congestiva
ANIMALES En este experimentos se usan ratas Sprague-Dawley CD (220-225 g; Charles River) macho. A los animales se les permite acceso libre a agua y dieta para roedores comercial bajo condiciones de laboratorio convencionales. La temperatura ambiente se mantiene a 20-23ºC y la iluminación de la habitación es un ciclo de luz/oscuridad de 12/12 horas. Los animales se aclimatan al entorno de laboratorio 5 a 7 días antes del estudio. Los animales ayunan durante la noche antes de la cirugía.
PROCEDIMIENTO DE OCLUSIÓN Los animales se anestesian con ketamina/xilazina (95 mg/kg y 5 mg/kg) y se entuban con un catéter intravenoso modificado de 14-16 de calibre. El nivel de anestesia se comprueba por punción en el dedo del pie. La temperatura media corporal se mantiene a 37ºC usando una manta calefactora. El área quirúrgica se sujeta con clips y se lava. El animal se coloca en recumbencia lateral derecha e inicialmente se conecta a un respirador con una presión inspiratoria pico de 10-15 cm de H2O y frecuencia respiratoria de 60-110 respiraciones/min. Se administra 100% de O2 a los animales por el respirador. El sitio quirúrgico se frota con lavado quirúrgico y alcohol. Se hace una incisión sobre la jaula torácica en el 4º-5º espacio intercostal. Los músculos subyacentes se diseccionan con cuidado para evitar la vena torácica lateral, para exponer los músculos intercostales. Se entra en la cavidad torácica por el 4º-5º espacio intercostal, y la incisión se expande para permitir la visualización del corazón. Se abre el pericardio para exponer el corazón. Una sutura con seda de 6-0 con una aguja afilada se pasa alrededor de la arteria coronaria izquierda próxima a su origen, que se encuentra en contacto con el margen izquierdo del cono pulmonar, a aproximadamente 1 mm de la inserción de la orejuela auricular izquierda. La arteria coronaria izquierda se liga atando la sutura alrededor de la arteria (“LCL”). Los animales de referencia se tratan igual, excepto que la sutura no se ata. La incisión se cierra en tres capas. La rata se ventila hasta que puede ventilarse por sí misma. Las ratas se extuban y se deja que se recuperen sobre una almohadilla calefactora. Los animales reciben buprenorfina (0,01-0,05 mg/kg SQ) para analgesia posoperatoria. Una vez despiertas se devuelven a su jaula. Los animales se monitorizan diariamente para signos de infección o dolor. Los animales infectados o moribundos se sacrifican. Los animales se pesan una vez a la semana.
ANÁLISIS DE EFICACIA Aproximadamente ocho semanas después de la cirugía del infarto, las ratas se analizan para signos de infarto de miocardio usando ecocardiografía. Sólo aquellos animales con disminución del acortamiento fraccional en comparación con ratas de referencia se utilizan adicionalmente en experimentos de eficacia. En todos los experimentos hay cuatro grupos, referencia + vehículo, referencia + compuesto, LCL + vehículo y LCL + compuesto. 10 - 12 semanas después de LCL, las ratas se infunden a una concentración de infusión seleccionada. Como antes, se toman cinco imágenes en modo M pre-dosis a intervalos de 30 segundos antes de la infusión de compuestos y las imágenes en modo M se toman a intervalos de 30 segundos hasta 10 minutos y cada minuto o a intervalos de cinco minutos después. El acortamiento fraccional se determina a partir de las imágenes en modo M. Las comparaciones entre el acortamiento fraccional pre-dosis y el tratamiento con compuesto se realizan por ANOVA y Student - Newman - Keuls a posteriori. Se deja que los animales se recuperen y en el plazo de 7-10 días los animales se infunden de nuevo con los compuestos usando el protocolo de hemodinámica para determinar cambios hemodinámicos de los compuestos en animales con insuficiencia cardíaca. Al final de la infusión, las ratas se sacrifican y se determinan los pesos de los corazones.
Cuando se prueban como se ha descrito, se muestra que las entidades químicas descritas en el presente documento tienen la actividad deseada.
Ejemplo 25
Contractilidad cardíaca in vitro e in vivo en un modelo de rata de insuficiencia cardíaca
Se usa un ensayo de miofibrillas para identificar compuestos (activadores de miosina) que activan directamente la ATPasa de miosina cardíaca. Entonces se determina el mecanismo de acción celular, la función cardíaca in vivo en ratas Sprague-Dawley (SD) y la eficacia en ratas SD con insuficiencia cardíaca definida para el compuesto activo. La contractilidad celular se cuantificó usando una estrategia de detección de bordes y transitorio de calcio medido usando miocitos cardíacos de rata adulta cargados con fura-2. La contractilidad celular aumentó con respecto al nivel inicial en el plazo de 5 minutos desde la exposición a un compuesto activo (0,2 µM) sin alterar el transitorio de calcio. La combinación de compuesto activo con isoproterenol sólo debería producir un aumento aditivo en la contractilidad sin cambiar adicionalmente el transitorio de calcio, que demuestra que el compuesto activo no estaba inhibiendo la ruta de PDE. La función contráctil in vivo en ratas SD anestesiadas se cuantifica usando ecocardiografía (modo M) y mediciones de presión simultáneas. Ratas SD se infunden con vehículo o compuesto activo a 0,25 - 2,5 mg/kg/h. El compuesto activo debe aumentar el acortamiento fraccional (AF) y la fracción de eyección (FE) de un modo dependiente de la dosis sin cambio significativo en las tensiones arteriales periféricas o frecuencia cardíaca, excepto a la mayor dosis. Ratas con insuficiencia cardíaca definida inducida por ligación coronaria izquierda, o ratas tratadas con referencia, pueden tener aumentos similares y significativos en AF y FE cuando se trataron con 0,7 - 1,2 mg/kg/h de compuesto activo. En resumen, el compuesto activo aumentó la contractilidad cardíaca sin aumentar el transitorio de calcio y fue eficaz en un modelo de rata de insuficiencia cardíaca, que indica que el compuesto activo puede ser un terapéutico útil en el tratamiento de insuficiencia cardíaca humana.
Ejemplo 26
Se realizó un ensayo clínico de fase I primero en seres humanos que evalúa una entidad química descrita en el presente documento, administrada intravenosamente. El ensayo clínico se diseñó como un ensayo de aumento de dosis, controlado por placebo, aleatorizado, de doble ciego realizado para investigar la seguridad, tolerabilidad, farmacocinética y perfil farmacocinético de una infusión de seis horas de esa entidad química en voluntarios sanos.
En ese ensayo clínico de fase I se determinó que la dosis máxima tolerada (DMT) era 0,5 mg/kg/h para la infusión de seis horas en voluntarios sanos. A esta dosis, la infusión de seis horas produjo un aumento estadísticamente significativo y clínicamente relevante en la fracción de eyección y el acortamiento fraccional, como se mide desde el nivel inicial hasta el final de la infusión en comparación con placebo; estos aumentos clínicamente relevantes en la función cardíaca se asociaron a una prolongación estadísticamente significativa del tiempo de eyección sistólica. A la DMT, la entidad química fue bien tolerada cuando se comparó con placebo. A través de los niveles de dosificación evaluados en este ensayo clínico, las infusiones de la entidad química se caracterizaron por farmacocinética lineal proporcional a la dosis y produjeron efectos farmacodinámicos dependientes de la dosis.
La actividad clínica de la fase I de esa entidad química está de acuerdo con resultados de modelos preclínicos que evaluaron esa entidad química en perros tanto normales como con insuficiencia cardíaca. En aquellos modelos, subyaciendo al aumento en la fracción de eyección y el acortamiento fraccional, estaba un aumento relacionado con la dosis en el tiempo de eyección sistólica, que ahora también se ha observado en seres humanos. Los datos que surgen de un modelo de perro con insuficiencia cardíaca demostraron que esa entidad química administrada como un bolo de 0,5 mg/kg seguido de una infusión de 3-4 horas a 0,5 mg/kg/h aumentó la contractilidad cardíaca y el gasto cardíaco sin aumentar el consumo de oxígeno miocárdico. Estudios preclínicos también han demostrado efectos más pronunciados de esa entidad química sobre índices de la función cardíaca con respecto a niveles iniciales en modelos caninos de insuficiencia cardíaca en comparación con efectos relativos alcanzados en perros normales.
En el ensayo clínico de fase I de esa entidad química, las dosis que superaron la DMT de esa entidad química se asociaron a prolongaciones más largas del tiempo de eyección sistólica y aumentos mayores en la fracción de eyección y el acortamiento fraccional que aquellos que se observaron con dosis en o por debajo de la DMT . Los efectos adversos correspondientes a los mayores niveles de dosis en seres humanos parecen similares a los hallazgos adversos observados en los estudios de seguridad preclínica que se produjeron a concentraciones similares en plasma. Se cree que estos efectos están relacionados con un estado hipercontráctil del miocardio y se resolvieron rápidamente con retirada de las infusiones de esa entidad química.
Ejemplo 27
Farmacología
La farmacología de al menos una entidad química descrita en el presente documento se investiga en miocitos cardíacos de ratas adultas aislados, ratas anestesiadas y en un modelo canino crónicamente instrumentado de insuficiencia cardíaca inducida por infarto de miocardio combinado con ritmicidad ventricular rápida. El compuesto activo aumenta la contractilidad de miocitos cardíacos (EC20 = 0,2 µM), pero no aumenta la magnitud o cambia la cinética del transitorio de calcio a concentraciones hasta 10 µM en miocitos cargados con Fura-2. El compuesto activo (30 µM) no inhibe tipo 3 de fosfodiesterasa.
En ratas anestesiadas, el compuesto activo aumenta el acortamiento fraccional ecocardiográfico del 45±5,1% al 56±4,6% después de una infusión de 30 minutos a 1,5 mg/kg/h (n=6, p < 0,01).
En perros conscientes con insuficiencia cardíaca, el compuesto activo (0,5 mg/kg de bolo, luego 0,5 mg/kg/h i.v. durante 6-8 horas) aumenta el acortamiento fraccional el 74±7%, el gasto cardíaco el 45±9% y el volumen sistólico el 101±19%. La frecuencia cardíaca disminuye el 27±4% y la tensión auricular izquierda disminuye de 22±2 mm de Hg a 10±2 mm de Hg (p < 0,05 para todos). Además, ni la tensión arterial media ni la circulación sanguínea coronaria cambian significativamente. La función diastólica no se altera a esta dosis. No hay cambios significativos en un grupo tratado con vehículo. El compuesto activo mejoró la función cardíaca de un modo que sugiere que los compuestos de esta clase pueden ser beneficiosos en pacientes con insuficiencia cardíaca.
Ejemplo 28
Composición farmacéutica
Una composición farmacéutica para administración intravenosa se prepara del siguiente modo.
1 mg/ml (como base libre) de disolución IV siendo el vehículo ácido cítrico 50 mM, pH ajustado a 5,0 con NaOH:
Composición
Fórmula unitaria (mg/ml)
Agente activo
1,00
Ácido cítrico
10,51
Hidróxido sódico
c.s.p. hasta pH 5,0
Agua para inyección (API)
c.s.p. hasta 1 ml
*Todos los componentes distintos del compuesto activo son conformes a USP / Ph. Eur.
Un recipiente de combinación adecuado se llena con API hasta aproximadamente el 5% del volumen de disolución a granel. El ácido cítrico (10,51 g) se pesa, se añade al recipiente de combinación y se agita para producir ácido cítrico 1 M. El agente activo (1,00 g) se pesa y se disuelve en la disolución de ácido cítrico 1 M. La disolución resultante se transfiere a un recipiente de combinación adecuado más grande y se añade API a aproximadamente el 85% del volumen de disolución a granel. El pH de la disolución a granel se mide y se ajusta a 5,0 con NaOH 1 N. La disolución se lleva a su volumen final (1 litro) con API.
Ejemplo 29
Antecedentes: Los presentes inótropos aumentan la contractilidad elevando el Ca+2 intracelular, un mecanismo pleiotrópico que aumenta la frecuencia cardíaca y el consumo de oxígeno, es arritmogénico y puede reducir la tensión arterial. El activar directamente la miosina cardíaca puede tratar estas cargas. El agente activo es un activador de miosina cardíaca de molécula pequeña selectivo que aumenta la contractilidad en miocitos cardíacos sin afectar el transitorio de Ca+2. En perros con insuficiencia cardíaca, el agente activo aumenta la función sistólica,pero no la demanda de oxígeno miocárdico. Únicamente aumenta el grado de contracción, pero no ± dP/dt.
Procedimientos: Cohortes de hombres sanos reciben infusiones de doble ciego de 6 h x 4: 3 dosis ascendentes de un agente activo, y placebo aleatorizado. Los ecocardiogramas transtorácicos obtenidos en el nivel inicial, durante y después de las infusiones se leen centralmente sin conocimiento del tiempo o tratamiento.
Resultados: Se estudian dosis de 5, 15, 25, 62,5 y 125 mcg/kg/h del agente activo. Una dosificación de 125 mcg/kg/h aumenta la fracción de eyección desde el nivel inicial hasta 6 h frente al placebo (tabla, ± DE; n = 6; análisis de otras dosis y tiempos pendientes). A diferencia de los inótropos dependientes de Ca+2, la administración del agente activo no disminuye los tiempos isovolúmicos ni aumenta la velocidad de tejido sistólico. Los parámetros diastólicos no son afectados. No hay efectos coherentes sobre las constantes vitales, análisis o ECG.
Parámetro
Diferencia frente a placebo Valor de p (prueba de la t para datos emparejados)
Fracción de eyección (%)
5,8 ± 4,3 0,02
Índice de volumen sistólico LV (ml/m2)
5,3 ± 6,4 0,10
Tiempo de contracción isovolúmica LV (ms)
4,4 ± 6,2 0,14
Tiempo de relajación isovolúmica LV (ms)
2,3 ± 9,3 0,57
Velocidad sistólica pico del Doppler de tejido (cm/s)
-0,7 ± 3,3 0,64
E/E' (sin unidades)
-3,2 ± 9,5 0,44
Conclusiones: La administración del agente activo aumenta el grado, pero no la velocidad de contracción cardíaca, de acuerdo con los datos de modelos preclínicos.
Aunque la anterior invención se ha descrito en algún detalle para fines de claridad y entendimiento, estas realizaciones particulares deben considerarse como ilustrativas y no restrictivas. Se apreciará por un experto en la materia de una lectura de esta divulgación que diversos cambios en forma y detalle pueden hacerse sin apartarse del alcance verdadero de la invención, que va a definirse por las reivindicaciones adjuntas en vez de por las realizaciones específicas.
La patente y bibliografía científica denominada en el presente documento establece conocimiento que está disponible para aquellos expertos en la materia. A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos usados en el presente documento tienen el mismo significado que comúnmente es entendido por un experto habitual en la materia a la que pertenece la presente invención. En el caso de incoherencias controlará la presente divulgación, que incluye definiciones.

Claims (24)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Al menos una entidad química elegida de los siguientes compuestos:
    [(3-{[4-(azetidinilsulfonil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)amino]-N-(6-metil(3-piridil))carboxamida; 1-(3-((4-(azetidin-1-ilsulfonil)piperazin-1-il)metil)-2-fluorofenil)-3-(piridin-3-il)urea; N-(3-{[4-(azetidinilcarbonil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)(4-piridilamino)carboxamida; N-(3-{[4-(azetidinilcarbonil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(2-metil(4-piridil))amino]carboxamida; N-(3-{[4-(azetidinilsulfonil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)(4-piridilamino)carboxamida; N-(3-{[4-((1Z)-1-azetidinil-2-ciano-2-azavinil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida; N-(3-{[4-(azetidinilcarbonil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida; N-(3-{[4-((1Z)-1-azetidinil-2-ciano-2-azavinil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(2-metil(4-piridil))amino]carboxamida; N-(3-{[(3R)-4-(azetidinilsulfonil)-3-metilpiperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida; (2S)-2-(azetidinilcarbonil)-4-[(2-fluoro-3-{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo; N-(3-{[(3R)-4-(azetidinilcarbonil)-3-metilpiperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida; N-(3-{[(3S)-4-(azetidinilcarbonil)-3-metilpiperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida; N-(3-{[(3S)-4-(azetidinilcarbonil)-3-(metoximetil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida; N-(3-{[(3S)-4-(azetidinilsulfonil)-3-(metoximetil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3piridil))amino]carboxamida; y (R)-1-(3-((4-(azetidin-1-carbonil)-3-metilpiperazin-1-il)metil)-2-fluorofenil)-3-(6-metilpiridin-3-il)urea;
    y sales farmacéuticamente aceptables, quelatos, complejos no covalentes, profármacos y mezclas de los mismos; en la que el término “quelato” se refiere a la entidad química formada por la coordinación del compuesto con un ión metálico en dos o más puntos; el término “complejo no covalente” se refiere a la entidad química formada por la interacción del compuesto y otra molécula en la que un enlace covalente no se forma entre el compuesto y la molécula; y el término “profármaco” se refiere a un derivado de éster o amida del compuesto que se convierte en el compuesto tras el procesamiento metabólico del profármaco.
  2. 2.
    Al menos una entidad química de la reivindicación 1 seleccionada de [(3-{[4-(azetidinilsulfonil)piperazinil]metil}-2fluorofenil)amino]-N-(6-metil(3-piridil))carboxamida y sales farmacéuticamente aceptables de la misma.
  3. 3.
    Al menos una entidad química de la reivindicación 1 seleccionada de 1-(3-((4-(azetidin-1-ilsulfonil)piperazin-1il)metil)-2-fluorofenil)-3-(piridin-3-il)urea y sales farmacéuticamente aceptables de la misma.
  4. 4.
    Al menos una entidad química de la reivindicación 1 seleccionada de N-(3-{[4-(azetidinilcarbonil)piperazinil]metil}2-fluorofenil)(4-piridilamino)carboxamida y sales farmacéuticamente aceptables de la misma.
  5. 5.
    Al menos una entidad química de la reivindicación 1 seleccionada de N-(3-{[4-(azetidinilcarbonil)piperazinil]metil}2-fluorofenil)[(2-metil(4-piridil))amino]carboxamida y sales farmacéuticamente aceptables de la misma.
  6. 6.
    Al menos una entidad química de la reivindicación 1 seleccionada de N-(3-{[4-(azetidinilsulfonil)piperazinil]metil}2-fluorofenil)(4-piridilamino)carboxamida y sales farmacéuticamente aceptables de la misma.
  7. 7.
    Al menos una entidad química de la reivindicación 1 seleccionada de N-(3-{[4-((1Z)-1-azetidinil-2-ciano-2azavinil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida y sales farmacéuticamente aceptables de la misma.
  8. 8.
    Al menos una entidad química de la reivindicación 1 seleccionada de N-(3-{[4-(azetidinilcarbonil)piperazinil}metil}2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida y sales farmacéuticamente aceptables de la misma.
  9. 9.
    Al menos una entidad química de la reivindicación 1 seleccionada de N-(3-{[4-((1Z)-1-azetidinil-2-ciano-2azavinil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(2-metil(4-piridil))amino]carboxamida y sales farmacéuticamente aceptables de la misma.
  10. 10.
    Al menos una entidad química de la reivindicación 1 seleccionada de N-(3-{[(3R)-4-(azetidinilsulfonil)-3metilpiperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida y sales farmacéuticamente aceptables de la misma.
  11. 11.
    Al menos una entidad química de la reivindicación 1 seleccionada de (2S)-2-(azetidinilcarbonil)-4-[(2-fluoro-3{[(6-metil(3-piridil))amino]carbonilamino}-fenil)metil]piperazinacarboxilato de metilo y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
  12. 12.
    Al menos una entidad química de la reivindicación 1 seleccionada de N-(3-{[(3R)-4-(azetidinilcarbonil)-3metilpiperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida y sales farmacéuticamente aceptables de la
    misma.
  13. 13.
    Al menos una entidad química de la reivindicación 1 seleccionada de N-(3-{[(3S)-4-(azetidinilcarbonil)-3metilpiperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida y sales farmacéuticamente aceptables de la misma.
  14. 14.
    Al menos una entidad química de la reivindicación 1 seleccionada de N-(3-{[(3S)-4-(azetidinilcarbonil)-3(metoximetil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida y sales farmacéuticamente aceptables de la misma.
  15. 15.
    Al menos una entidad química de la reivindicación 1 seleccionada de N-(3-{[(3S)-4-(azetidinilsulfonil)-3(metoximetil)piperazinil]metil}-2-fluorofenil)[(6-metil(3-piridil))amino]carboxamida y sales farmacéuticamente aceptables de la misma.
  16. 16.
    Al menos una entidad química de la reivindicación 1 seleccionada de (R)-1-(3-((4-(azetidina-1-carbonil)-3metilpiperazin-1-il)metil)-2-fluorofenil)-3-(6-metilpiridin-3-il)urea y sales farmacéuticamente aceptables de la misma.
  17. 17.
    Una composición farmacéutica que comprende un excipiente, vehículo o adyuvante farmacéuticamente aceptable y al menos una entidad química de cualquiera de las reivindicaciones 1-16.
  18. 18.
    Una composición farmacéutica de la reivindicación 17, en la que la composición se formula en una forma elegida de fluidos inyectables, aerosoles, comprimidos, píldoras, cápsulas, jarabes, cremas, geles y parches transdérmicos.
  19. 19.
    Una composición farmacéutica envasada que comprende una composición farmacéutica de la reivindicación 17 ó 18 e instrucciones para usar la composición para tratar un paciente que padece una enfermedad cardíaca.
  20. 20.
    La composición farmacéutica envasada de la reivindicación 19, en la que la enfermedad cardíaca es insuficiencia cardíaca.
  21. 21.
    Al menos una entidad química de cualquiera de las reivindicaciones 1-16 o una composición farmacéutica de las mismas para su uso en un procedimiento para tratar enfermedad cardíaca en un mamífero.
  22. 22.
    El uso, en la fabricación de un medicamento para tratar enfermedad cardíaca, de una entidad química según cualquiera de las reivindicaciones 1-16.
  23. 23.
    La al menos una entidad química o una composición farmacéutica de la misma para su uso según la reivindicación 21, o el uso como se define en la reivindicación 22, en la que la enfermedad cardíaca es insuficiencia cardíaca.
  24. 24.
    La al menos una entidad química o una composición farmacéutica de la misma para su uso según la reivindicación 23, o el uso como se define en la reivindicación 23, en la que la insuficiencia cardíaca es
    a) insuficiencia cardíaca congestiva; o b) insuficiencia cardíaca sistólica.
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