ES2362222T3 - Método de valoración del riesgo de enfermedades cardiovasculares isquémicas usando conjugados de fosforilcolina. - Google Patents

Método de valoración del riesgo de enfermedades cardiovasculares isquémicas usando conjugados de fosforilcolina. Download PDF

Info

Publication number
ES2362222T3
ES2362222T3 ES05735991T ES05735991T ES2362222T3 ES 2362222 T3 ES2362222 T3 ES 2362222T3 ES 05735991 T ES05735991 T ES 05735991T ES 05735991 T ES05735991 T ES 05735991T ES 2362222 T3 ES2362222 T3 ES 2362222T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
phosphorylcholine
igm
patient
risk
antibodies
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES05735991T
Other languages
English (en)
Inventor
Ulf De Faire
Johan Frostegard
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Athera Biotechnologies AB
Original Assignee
Athera Biotechnologies AB
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Athera Biotechnologies AB filed Critical Athera Biotechnologies AB
Application granted granted Critical
Publication of ES2362222T3 publication Critical patent/ES2362222T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/92—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39583—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials not provided for elsewhere, e.g. haptens, coenzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/646—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the entire peptide or protein drug conjugate elicits an immune response, e.g. conjugate vaccines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/44—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/32—Cardiovascular disorders
    • G01N2800/323—Arteriosclerosis, Stenosis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/50—Determining the risk of developing a disease
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Un método para evaluar un riesgo de un paciente humano de desarrollo o progresión de enfermedad cardiovascular; en donde el método comprende (a) evaluar los niveles del paciente de anticuerpos reactivos con un conjugado de fosforilcolina en una muestra ex vivo tomada de un paciente, y (b) determinar el riesgo del paciente de desarrollo o progresión de enfermedad cardiovascular basada en los níveles evaluados de anticuerpos reactivos con un conjugado foforicolina; en donde el nivel de anticuerpos reactivos con el conjugado fosforilcolina está correlacionado negativamente con el riesgo de desarrollo o pregresion de enfermedad cardiovascular en un paciente humano sano.

Description

CAMPO DE LA INVENCIÓN
[0001] Este campo se refiere al campo de evaluación de riesgo de enfermedad cardiovascular, tal como la ateroesclorosis y las enfermedades cardiovasculares isquémicas.
DESCRIPTION DE LA TÉCNICA RELACIONADA [0002] Ateroesclorosis es una enfermedad crónica que causa un engrosamiento de la capa más interna (la íntima) de las arterias de tamaño medio y grande. Ello hace que el flujo de sangre disminuya y pueda causar isquemia y la destrucción de tejido en órganos suministrados por los vasos afectados. La ateroesclorosis es la mayor causa de enfermedad cardiovascular incluyendo infarto de miocardio, ataque de apoplejía y enfermedad arterial periférica. Es la mayor causa de mortalidad en el mundo occidental y se predice que puede llegar a liderar la causa de muerte en el mundo entero dentro de dos décadas. [0003] La enfermedad se inicializa por acumulación de lipoproteínas; primariamente lipoproteína de baja densidad (LDL)m en la matriz extracelular del vaso. Estas particulas LDL se agregan y se someten a una modificación oxidativa. LDL oxidad es proinflamartoria, tóxica y causa daño bascular. Ateroesclerosis reprensta en muchos aspectos una respuesta a este daño incluyendo inflamación y fibrosis. [0004] En 1989 Palinski y sus colegas indentificaron anticuerpos circulantes contra LDL oxidadas en humanos. Esta obeservación sugirió que la ateroesclerosis puede ser una enfermedad autoinmune causada por reaxxiones inmunes contra lipoproteínas oxidadas. En este momento, varios laboratorios empezaron la búsqueda de asociaciones entre títulos de anticuerpo contre LDL oxidadas y enfermedad cardiovascular. Sin embargo, la imagen que surgió de estos estudios fue nada Lara. Esistían anticuerpos contra un gran número de difrentes epitopos en LD oxidadas, pero la estructura de estos epitopos era desconocida. El término “anticuerpos LDL oxidados” se refería así a una mezcla desconocida de diferentes anticuerpos en lugar de un anticuerpo específico. [0005] Esta bien establecido que hay una inflamación en curso en las lesiones de aterosclerosis, caracterizada por la activación de células inmunocompetentes y la producción de citoquinas inflamatorias. Factores de riesgo establecidos como hipertensión, lípidos en sangre, diabetes y fumar es probable que promuevan esta reacción inflamatoria, pero el mecanismo por el cual esto ocurre no está bien caracterizado y existen posiblilidades diferentes que no se excluyen mutuamente, Varios autoantígenos diferentes que pueden provocar esta reactividad inmune han sido propuestos, incluyendo lipoproteina oxidada de baja densidad (oxLDL) y proteínas de choque térmico (HSP) 2,3 . Los datos disponibles en el papel de reacciones inmunes en aterosclerosis indican una relación compleja, Un ejemplo de esto es la inmunización en modelos animales para influenciar la aterogenesis. Cuando HSP es utilizado, la ateroesclerosis aumenta pero disminuye cuand oxLDL es el antígeno 4,5. [0006] El papel de aOxLDL en enfermedad en humanos parece ser complejo. En humanos ha sido previamente demostrado que aOxLDL es superior en controles de salud en hombres próximos a la hipertensión, un ejemplo de enfermedad6 cardiovasacular temprana. Estudios recientes están en linea con la observación 7,8. Por otro lado, varios autores han informado que aOxLDL se elevan en enfermedades cardiovasculares en humanos (CVD), especialmente en las últimas etapas2,3,9,10 . Un ejemplo es el lupus eritematoso sistémico (SLE) y la enfermedad autoinmune asociada con un alto riesgo de CVD. Pacientes-SLE con un historial de CVD tuvieron elevados níveles aOxLDL 11. Estos resultados hasta cierto punto contradictorios pueden depender de métodos diferentes y etapas de LDL-oxidación, dando diferencias en la antigenicidad. Es también probable que la etapa de la enfermedad y el perfil de factor riesgo estén relacionados con los niveles anticuerpo. [0007] La lipoproteína de baja densidad oxidada (oxLDL) tiene ella misma porpiedades porinflamatorias inclutendo la activación de las células T12,13, monocitos/macrófagos y células endoteliales14-16. OxLDL promueve también la inflamación en las células competentes inmunes de las lesiones ateroscleroticas17. Sin embargo, debería remarcarse que oxLDL puede disminuir las reacciones inflamatorias agudas y por ejemplo, promover una inflamaciones crónica de grado más bajo como se ve en las aterosclerosis18 . Es interesante resaltar que muchos efectos biológicos de oxLDL son causados por factores de activación en placa (PAF)- similar a lípidos en oxLDL19-21 . [0008] Fosforilcolina (PC) es un componente principal no sólo en los fosfolípidos inflamatorios similares al factor de activación en placa-PAF (donde es fundamentel para la interacción con el PAF-receptor) y en oxLDL, pero también como componentes inmunogénicos de muchas bacterias incluyendo S. Pneumoniae22. Además, PC se expresa por células2 ,23 apoptóticas. [0009] En US5455032, los conjugados de fosfocolina han sido utilizados en vacunas para inducir inmunoportección contra infecciones de muchas bacterias como Streptococcus pneumoniae. En un reciente estudio 24 por Binder et al en vacuna de pneumococcus en ratones, se muestra que la vacuna disminuyó la formación de lesión aterosclerótica. Se ha encontrado que muchos anticuerpos de oxLDL derivados de los ratones ateroscleroticos comparten la identidad estructural con anticuerpos que protegen contra patógeneos infecciosos comunes, incluyendo Streptococcus pneumoniae. El estudio, en ratones, no en humanos, no da una información específica sobre la especificidad, o que anticuerpos antifosforilcolina IgM son significantemente más importantes que los correspondientes anticuerpos IgG como un factor de protección en aterosclerosis. Además, los conjugados e fosforilcolina no han sido utilizados en la vacuna pneumococcus. [0010] En otro estudio fue mostrado25 que los niveles de de anticuerpo antifosforilcolina son elevados en humanos con enfermedades periodontales. La conclusión es que la fosforilcolina es un importante antígeno oral asociado con organismos en la flora periodontal y que el anticuerpo anti-PC es elevado como consecuencia de la enfermedad periodontal. Ninguna información es dada en referencia a los anticuerpos y la protección posible de o progresión de la aterosclerosis. [0011] Un par de documentos (p.e. WO2002080954 y WO0168119) relacionados con el tratamiento de inmunización de aterosclerosis han sido publicados pero están o bien basados en el uso de fragmentos de péptidos de apoliproteína B o anticuerpos para cadenas de un receptor de células T. Un método para detectar la placa ateros aclerostica (WO9908109) utilizando anticuerpos monoclonales para la oxidación de epítopos específicos en lipoproteína han sido descritos. Esto es diferente del método propuesto en esta invención donde un conjugado de fodforilcolina es usado para detectar anticuerpos, p.e, anticuerpos IgM or IgG, en muestras sujeto. [0012] Kearney (2000) J Clin Invest 105(12), 1683-1685 describe un aumento en anticuerpos antifosforilcolina debido a laaterosclerosis. [0013] Chyu Kuang-Yuh et al (2004) J Am Coll Cardiol 43(5) Suppl A, 499A resumen nº abstract no 1122173 describe un aumento en anticuerpos antifosforilcolina IgM y IgG debido a la aterosclerosis. [0014] WO 93/18161 describe la detección de células expresando anticuerpos antifosforilcolina por reacción con un conjugado de PC-albumina. [0015] US 5,475,100 trata de anticuerpos artificiales los cuáles tienen una región constante de cadena pesada dentro de la cuál ha sido introducido una secuencia amino acida RGDS. [0016] Shaw et al (2000) J Clin Invest 105(12), 1731-1740 describe el papel de los anticuerpos anti-PC en aterogenesis. RESUMEN DE LA INVENCIÓN [0017] El invento trata de diagnosticar la presencia o ausencia de anticuerpos, por ejemplo anticuerpos IgM
2
o IgG, relacionado con aumentar o disminuir el riesgo de desarrollo de enfermedades cardiovasculares, tal como enfermedades cardiovasculares isquémicas, o aterosclerosis. [0018] Un primer aspecto de la invención proporciona un método para evaluar un riesgo de un paciente humano de desarrollar o de progresión de enfermedad cardiovascular, en donde el método comprende -
(a)
evaluar los niveles de anticuerpos del paciente reactivos con un conjugado de fosforilcolina en una muestra ex vivo tomada de un paciente,
(b)
determinar el riesgo del paciente de desarrollo o progresión de enfermedad cardiovascular basado en los niveles evaluados de anticuerpos reactivos con un conjugado de fosforilcolina ; en donde el nivel de anticuerpos reactivos se correlaciona negativamente con el riesgo de desarrollo o progresión de enfermedad caridiovascular en un paciente humano sano. [0019] El primer aspecto de la invenciona también proporciona el uso de conjugado de fosforilcolina en un método para evaluar un riesgo del paciente humano de desarrollo o progresión de enfermedad cardiovascular, en donde el método comprende
(a)
evaluar los níveles de anticuerpos del paciente reactivos con el conjugado de fosforilcolina en una muestra ex vivo tomada del paciente, y
(b)
determinar el riesgo del paciente de desarrollo o progresión de enfermedad cardiovascular basada en los niveles de anticuerpos evaluados reactivos con el conjugado de fosforilcolina ; en donde el nivel de anticuerpos reactivos con el conjugado de fosforilcolina se correlaciona negativamente con el riesgo de desarrollo o progresión de enfermedad cardiovascular en un paciente humano sano. [0020] Composiciones farmacéuticas se describen aquí también, comprendiendo un conjugado fosforilcolina , o una preparación de anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo monoclonal, con especificidad a un conjugado de fosforilcolina , y el uso de estas composiciones en el tratamiento o prevención de ateroesclerosis, por ejemplo en el tratamiento, prevención o reducción de progresión posterior de ateroesclerosis. También describimos el uso de conjugados de fosforilcolina o dicha preparación de anticuerpo, por ejemplo anticuerpo monoclonal para producir una composición farmaceútica opcionalmente con un adyuvante. [0021] Así, también describimos el uso de una composición farmaceútica que comprende al menos un conjugado de fosforilcolina, o una preparación de anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo monoclonal, con especificidad a un conjugado de fosforilcolina, en la realización de un medicamento para inmunización y tratamiento de mamíferos, incluyendo humanos, contra ateroesclerosis o una enfermedad aterosclerotica relacionada. El medicamento está destinado para proporcionar inmunización teniendo propiedades inmunogénicas o terapéuticas contra aterosclerosis. [0022] También describimos un método para inmunización y tratamiento de un mamífero, incluyendo un
3
humano, contra ateroesclerosis o una enfermedad relacionada con ateroesclerosis, el método que comprende el paso de administrar al mamífero una composición farmacéutica que comprende al menos un conjugado de fosforilcolina , o una preparación de anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo monoclonal, con especificad a un conjugado de fosforilcolina . La composición farmacéutica está destinada a proporcionar inmunización teniendo propiedades inmunogenicas o terapeuticas contra ateroesclerosis. [0023] Por conjugado de fosforilcolina se entiende una fracción de fosforilcolina ligada a un portador, preferiblemente vía un espaciador. El elemento estructural de fosforilcolina puede comprender un derivado de fosforilcolina . Ejemplos de adecuados conjugados fosforilcolina están descritos en US 5,455,032 como se cita arriba. Por ejemplo, US 5,455,032 proporciona conjugados fosforilcolina en que la fracción de fosforilcolina está ligada por una cadena lineal alquil y un enlace amida a una variedad de portadores inmunológicos. El conjugado de fosforilcolina puede por ejemplo ser una albúmina de suero humano (HSA)-
o hemocianina de lapa californiana (KLH)- conjugado de fosforilcolina o una albúmina de suero bovino (BSA)-fosforilcolina conjugado (por ejemplo como se describió en los ejemplos). PC-BSA (Fosforilcolina Albúmina Suero Bovina) puede ser comprado de Biosearch Technologies, INC (Ca, USA). HSA-BSA- puede ser conjugado por un procedimiento químico, por ejemplo el siguiente procedimiento: [0024] O-(4-aminofenil fosforil)-colina (I) puede ser preparada de O-(4-nitrofenil-fosforil)-colina (Sigma N 5879) en rendimiento cuantitativo por reducción con gas hidrógeno a 1 atm con 10% de paladio con carbón vegetal como catalizador de acuerdo al procedimiento descrito por Chesebro, B. en Biochemistry 11, (1972)
766.
(I) puede estar acoplado a HSA por medio de EDC (1-etil-3-(3-dimetil-aminopropil)-carboimida) en buffer MES pH 4, de acuerdo al procedimiento descrito por Padilla, N.D. et al in J.Immun.. Methods 293 (2004) 1
11. El conjugado HSA puede ser aislado por diálisis contra el buffer salino a pH 7.4.
[0025] El portador puede ser, por ejemplo, una proteína, lípido o polímero. [0026] Uno o más de los conjugados de fosforilcolina como se definen arriba pueden ser usados en la realización de una composición farmacéutica, opcionalmente en combinación con un adyuvante, para inmunoterapia o terapia para el tratamiento de enfermedades cardiovasculares isquémicas. [0027] También describimos un método de tratamiento profiláctico o terapéutico de un mamífero, el cual puede ser un ser humano, sufriendo de aterosclerosis o frente al riesgo de desarrolar enfermedad cardiovascualar isquémica, según el cual se administra una cantidad efectiva terapéuticamente de al menos un conjugado de fosforilcolina o una preparación de anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo monoclonal,con especificadad a un conjugado de fosforilcolina . [0028] También describimos métodos para determinar la presencia o ausencia de anticuerpos IgM o IgG, contra fosforilcolina los cuales están relacionados con un riesgo alto o no de desarrollar enfermedades cardiovasculares isquémicas. [0029] Describimos también un método de diagnosis de presencia o ausencia de anticuerpos, por ejemplo anticuerpos IgM or IgG, relacionado con el alto riesgo o no de desarrollar enfermedades cardiovasculares isquémicas, utilizando un conjugado de fosforilcolina . [0030] Los conjugados de fosforilcolina se describen arriba. La fosforilcolina puede estar ligada a un portador vía un espaciador. El portador puede ser una protena, la cual puede ser KLH (hemocianina de lapa californiana) o albumina de serum humano human serum (HSA). El portador puede ser perlas de latex. [0031] Los niveles del paciente de anticuerpos, p.e. anticuerpos IgM o IgG, reactivos con el conjugado de foforilcolina pueden ser evaluados utilizando un ensayo inmune. Ejemplos de ensayos inmunes adecuados se describen abajo y serán en cualquier caso claros para aquellos entendidos en la técnica. [0032] IPuede ser deseable medir anticuerpos reactivos con oxLDL o MD-LDL así como medir anticuerpos,
p.e. anticuerpos IgM o IgG, reactivos con el conjugado de fosforilcolina . Puede ser alternativamente conveniente medir niveles de HSP70, HDL, TNF y/o HSP60 (como se discute en los Ejemplos) así como medir anticuerpos, p.e. anticuerpos IgM o IgG, reactivos con el conjugado fosforilcolina .
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
[0033] Los ejemplos descritos debajo son proporcionados sólo con el propósito de ilustrar la presente invención. [0034] Un ejemplo de un método para determinar la presencia o ausencia (o nivel) de anticuerpos lgM contra fosforilcolina que está relacionada con un aumento o disminución de riesgo de desarrollar enfermedades cardiovasculares isquémicas es descrito. Otros métodos conocidos en la técnica pueden ser también utilizados. Métodos similares pueden ser utilizados para determinar la presencia o ausencia (o nivel) de anticuerpos lgG contra fosforilcolina .
[0035] Los anticuerpos lgM de PC-BSA fueron determinados por un método de ensayo inmunosorbente ligado a enzima.
4
[0036] Una placa de microtitulación fue cubierta con PC-BSA (10 µg/ml; por ejemplo de Biosearch Technologies, INC (Ca, USA) en fosfato salino buffer (PBS). Después de los lavados con PBS, las placas fueron bloqueadas con una solución de 2% de BSA. Las muestras de suero fueron diluidas (1:30) en 0.2% BSA-PBS. Las placas fueron incubadas durante la noche a 40ºC y lavadas. Se añadió fosfatasa alcalina conjugado de cabra anti-humano lgM (diluida 1:7000 en una muestra buffer) a 100 µl/pocillo e incubado a 40ºC durante la noche. Después de los lavados, el color se obtuvo mediante la adición de substrato fosfatasa alcalina e incubando las placas durante 60 min a temperatura ambiente en la oscuridad. Las absorbancias fueron leídas en un espectrofotómetro a 405 nm. [0037] Diferentes portadores y espaciadores de fosforilcolina fueron probados. Los portadores ejemplificados no están limitados a estos. Otros portadores tales como proteínas, lípidos o polímeros, tales como perlas de látex que son conocidas en la técnica, pueden ser utilizados. Los portadores son discutidos en US 5,455,032, como se describió arriba. [0038] Los anticuerpos lgM o lgG detectados por tales métodos pueden unirse a la fosforilcolina (PC) presente en PC- conteniendo componentes en los que PC está expuesto, por ejemplo en lisofosfatidilcolina (lisoPC, vea por ejemplo, Kim et al, J Exp Med. 2002 Sep 2;196(5):655-65). Así, un método de invención puede detectar anticuerpos lgM o lgG que se unen a la lifosfatidilcolina.
Síntesis de conjugado de fosforilcolina y preparación de una composición farmacéutica.
[0039] Perlas de látex (0.20 µm o 0.81 µm) fueron suspendidos en PBS y mezclados durante la noche con una solución de 10 µl/ml de fosforilcolina -BSA. Las perlas fueron lavadas varias veces con una solución buffer y de saturación de 10 µg/ml de BSA. Después de otros lavados repetidos, las perlas fueron suspendidas a una concentración adecuada en un buffer adecuado y almacenadas hasta su uso.
Fosforilcolina con un lazo de unión puede ser conjugada a KLH (hemocianina de lapa californiana) vía grupo diazofenil. Más preferiblemente un p-nitrofenil-6-(O-fosfocolina)hidroxyhexanoato derivado de PC puede ser sintetizado de acuerdo a Chesebro, B. and Metzger, H. (1972) Biochem. 11:776. P-Nitrofenil-6(O-fosfocolina) hidroxihexanoato fue disuelto en acetonitrilo seco (100 mg/ml) justo antes de añadirlo en el KLH. Derivados y KLH fueron mezclados durante la noche a 4ºC y luego dializados para eliminar los espaciadores no unidos y p-nitrofenilato, que es el grupo que sale.
Inmunización con un conjugado fosforilcolina .
[0040] Un alto título de anticuerpos lgM que reconocen fosforilcolina , fue determinado en el plasma de ratones BALB/c después de la inmunización con 200 µg [p-nitrofenil-6-(O-fosforilcolina ) hidroxihexanoato-KLH] utilizando el método de ensayo inmune sugerido.
Anticuerpos monoclonales contra un conjugado de fosforilcolina .
[0041] Anticuerpos monoclonales pueden ser producidos utilizando método estándar conocido en la técnica. Vea por ejemplo “Briles DE, Forman C, Hudak S, Claflin JL. Anti-phosphorylcholine antibodies of the T15 idiotype are optimally protective against Streptococcus pneumoniae. J Exp Med. 982;156:1177-85" or "T15 PC binding monoclonal antibodies retain specificity when they switch from IgM to IgG. , Spira, Gad; Aguila, Hector L.; Scharff, Matthew D. Fac. Med., Techniton-Israel Inst. Technol., Haifa, Israel. Journal of Immunology (1988), 140(8), 2675-80.
[0042] Otros anticuerpos contra un conjugado de fosforilcolina pueden ser preparados utilizando métodos bien conocidos por los entendidos en la técnica. Por ejemplo, puede ser preparada una subfracción con una actividad aPC de una preparación de inmunoglobulina humana, por ejemplo como se describe abajo, por ejemplo por purificación por afinidad utilizando conjugado fosforilcolina . Preparaciones inmunoglobulinas intravenosas (p.e, Baxter y otros) es una preparación altamente purificada de lgG comercialmente disponible y es usada en el tratamiendo de pacientes que no tienen, o tienen pocos niveles de producción de anticuerpos. Preparaciones de inmunoglobulina incluyen aquellas que están disponibles por los fabricantes: Baxter (US) eg Gammagard®, Isiven (Antimo Naples, Italy), Omrix (Tel-Hashomer, Israel), Miles (Biological Products Division, West Heaven, CT), Sclavo (Lucca, Italy), Sandoz (Novartis, Basel, Swizerland) eg Sandoglobulin®, Biotest Diagnostic Corporation (Deville, NJ). Examples of immunoglobulin preparations are Gammagard S/D®, Gammar IV®, Gammar-P IV®, Gammimune N®, Iveegam®, Panglobulin®, Polygam S/D® Sandoglobulin®, Venoglobulin®. Preparaciones de inmunoglobulina contienen típicamente algunos lgM como también lgG. Cantidades trazas de lgM están presente en Gammagard®. Pentaglobin (Biotest) es una preparación enriquecida lgM que ha sido utilizada para tratamientos de SARS. La subfracción con actividad aPC puede comprender ambas lgG y lgM, o puede ser seleccionada para comprender principalmente lgG (por ejemplo mediante el comienzo con la preparación lgG-rica tal como Gammagard® y/o mediante selección de lgG); o principalmente lgM (por ejemplo mediante comienzo con una preparación lgM-rica tal como Pentaglobin y/o por selección de lgM).
[0043] Una preparación de anticuerpo con especificidad hacia un conjugado de fosforilcolina une a un no conjugado de fosforilcolina y puede unir a la fosforilcolina (PC) presente en PC conteniendo compuestos en que PC está expuesta, por ejemplo en lisofosfatidilcolina (lisoPC; vea, por ejemplo, Kim et al, J Exp Med. 2002 Sep 2;196(5):655-65). Así, una preparación de anticuerpo con especificidad a un conjugado de fosforilcolina puede unir a la lisfofatidilcolina.
5
Niveles de inmunoglobulina lgM en sujetos ateroscleróticos
[0044] Los niveles de anticuerpo lgM contra fosforilcolina en sujetos con hipertensión (presión diastólica >95 mmHg) fueron determinados al inicio y después de 4 años en un estudio de correlación de factores de riesgo para aterosclerosis. Los resultados están resumidos debajo.
[0045] Las placas carótidas fueron detectadas en 77 sujetos (35%) al inscribirse y en 84 sujetos (38%) a los 4 años de seguimiento. Fueron objeto de estudio un total de 218 humanos. Aumentos de espesor íntima-media (IMT) durante el seguimiento fueron menos llamativo en sujetos que tienen elevados niveles de suero de lgM a PC (percentil 75 o 90) en el momento de inscripción. Hay una diferencia significativa entre los valores medios en niveles de anticuerpo lgM anti-fosforilcolina entre los individuos con IMT alto y IMT bajo (638.8±219.6 vs 734.8±266.9. p=0.004).
[0046] Las relaciones entre anticuerpos lgM y PC y cambios en IMT fueron independientes de la edad, hábitos de fumar, tratamiento con atenolol o lacidipina y lípidos en la sangre. Anticuerpos lgM fueron independientes de los valores de lgG. [0047] Una realización de la invención es proporcionar un método de diagnosis de presencia o ausencia de anticuerpos, por ejemplo anticuerpos lgM o lgG, hacia fosforilcolina que es un factor relacionado con el alto riesgo o no de desarrollar enfermedades cardiovasculares isquémicas, utilizando un conjugado fosforilcolina . Un método preferido es un ensayo inmune. El método puede ser usado en la evaluación del riesgo del paciente de desarrollo progreso de una enfermedad cardiovascular isquémica.
Figuras:
[0048] Figura 1a : Inhibición de anticuerpo (lgM) unido a placas ELISA recubiertas con PC albúmina mediante β2GPI, PS y CL. Inhibición mediante diferentes antígenos de unión a PC albúmina-placas recubiertas. En orden de investigar la especificidad de aPC, ensayos de competencia fueron desarrollados como se describe en la sección Experimental. Los resultados están presentados como media ±SD. Figure 1b : Inhibición de anticuerpo (lgG) unido a placas ELISA recubiertas con PC albúmina mediante β2GPI, PS y CL. Inhibición mediante diferentes antígenos de unión a PC albúmina-placas recubiertas. En orden de investigar la especificidad de aPC, ensayos de competencia fueron desarrollados como se describe en la sección Experimental. Los resultados están presentados como media ±SD. Figura 2a : Inhibición de anticuerpo (lgM) unido a placas ELISA recubiertas con PC albúmina mediante oxLDL y MDA-LDL. Inhibición mediante diferentes antígenos de unión a PC albúmina-placas recubiertas. En orden de investigar la especificidad de aPC, ensayos de competencia fueron desarrollados como se describe en la sección Experimental. Los resultados están presentados como media ±SD. Figura 2b : Inhibición de anticuerpo (lgG) unido a placas ELISA recubiertas con PC albúmina mediante oxLDL y MDA-LDL. Inhibición mediante diferentes antígenos de unión a PC albúmina-placas recubiertas. En orden de investigar la especificidad de aPC, ensayos de competencia fueron desarrollados como se describe en la sección Experimental. Los resultados están presentados como media ±SD.
Figura 3: efecto en el consumo de oxLDL en macrófagos mediante aPC extraídos de IGIV
Experimentamos con dos grupos: macrófagos con oxLDL y macrófagos con oxLDL-preincubación con aPC extraídos de IVIG. Macrófago+ -oxLDL (células totales 107): Débil tinción 37/107 = 34.58% Fuerte tinción 10/107 = 9.35% Tinción total positiva 47/107 = 43.93%
Macrófago+Dil-oxLDL + aPC- grupo (156 células comprobadas): Débil tinción 37/156 = 23.72% Fuerte tinción 2/156 = 1.28% Tinción total positiva 39/156 = 25%
Figura 3A muestra el teñido con Dil-clasificado oxLDL. Figura 3B muestra el teñido con oxLDL sin clasificar. Figura 4 : Efecto de pre-incubación de suero de título anticuerpos altos en antifosfolípidos (aPLs) con inmunoglobulina Gammargard® humana cultivada en Anexina V que une las células endoteliales umbilicales humanas (HUVECs): análisis de flujo citométrico después de 24 horas de cultivo.
IVIG preincubado con suero a Intensidad fluorescencia media (MFI) de en que PC está expuesta, por ejemplo en lisofosfatidilcolina (lisoPC; vea, por ejemplo, Kim et al, J Exp Med. 2002 Sep 2;196(5):655-65). Así, una preparación de anticuerpo con especificidad a un conjugado de fosforilcolina puede unir a la lisfofatidilcolina.
Anexina V vinculante
0 mg/ml 649
2.5 mg/ml 913
5 mg/ml 1269
10 mg/ml 1382
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
Figure 5: : efecto de aPC en inducción ICAM en células endoteliales. 1 µg/ml de PAF fue añadido a cultivos de células endoteliales, con o sin preincubación con aPC lgM. Expresión de ICAM-1 fue ensayada con FACScan. La línea verde representa el efecto de PAF, mientras que la roja es PAF+aPC lgM y el control negro. Los datos indican claramente un eje a la izquierda del histograma cuando son añadidos aPC lgM.
EXPERIMENTAL Sujetos [0049] Las muestras de suero fueron obtenidas de 226 sujetos con hipertensión establecida (presión diastólica >95 mmHg) antes de su entrada en el componente Swedish de European Lacidipine Study en Atherosclerosis (ELSA)25,26. Las muestras fueron recogidas en las siguientes 4 semanas con un periodo de lavado de no medicación para minimizar los efectos de tratamiento en los parámetros de medida. Los niveles de presión sanguínea, colesterol y triglicéridos fueron determinados como se describe previamente25,26. Ciento quince de los sujetos fueron evaluados para el tratamiento con el bloqueador-β atenolol, y 111 de estos sujetos fueron evaluados para el tratamiento con la lacidipina antagonista de calcio. El estudio fue aprobado por Ethics Committee of Karolinska Hospital y fue conducido según la declaración de Helsinki. Todos los sujetos dieron su consentimiento informado.
Ultrasonido carótido.
[0050] Las determinaciones de ultrasonido carótido fueron desarrolladas y analizadas en detalle en otra parte25,26. Un total de 218 pacientes tuvieron medidas de ultrasonido válidas al comienzo y en el 4 año de seguimiento. Brevemente, las arterias carótidas derecha e izquierda fueron examinadas con el escáner Biosound 2000 ILa dúplex utilizando un transductor de matriz anular 8.0 MHz. El espesor íntima-media (I-M) fue determinado en la pared lejana cuando la distancia entre el extremo principal del eco lumen-intima y el extremo principal del eco media-adventicio. La medida obtenida como un indicador sustituto para aterosclerosis fue el cambio en la media de espesor íntima-media (IMT) de las 4 paredes extremas en las carótidas comunes distales y las bifurcaciones carótidas bilateralmente (CBMmax) a los 4 años de seguimiento. Las asociaciones entre los niveles de anticuerpo a PC en la inscripción en el estudio con un aumento o disminución de IMT a los 4 años de seguimiento fueron evaluadas. Reactivos [0051] Inmuno-placas microtítulo Polisorp F96 fueron adquiridas de Nunc (Roskilde Denmark), PC-BSA (suero albúmina fosforilcolina -bovina) fue adquirido de Bioserch Technologies, INC (USA).
[0052] Albúmina suero bovino (BSA), fosfatasa alcalino conjugado de cabra lgG(r-cadena específica) antihumana, fosfatasa alcalina conjugada de cabra lgM (u-cadena específica) anti-humana, PNPP (substrato fosfatasa alcalina), fueron obtenidos de Sigma (St. Louis, MO, USA). Cardiolipin (CL) fue adquirida de AVANTT (US, β2glicoproteina (β2GP1) fue obtenido de Calbiochem (US).
[0053] Los niveles totales de lgG y lgM fueron determinados por técnicas rutinarias como se describió6 previamente.
[0054] CRP fue analizado en suero mediante métodos altamente sensibles utilizando inmunonefelometría de partícula mejorada (Behring Nephelometer Analyzer, BN II (Dade Behring GmBH, Marburg, Germany)) con una variación antir-ensayo <4%.
Determinación de anticuerpos contra PC, oxLDL y MDA-LDL
[0055] Anticuerpos lgG y lgM de PC-BSA fueron determinados por ensayo inmunosorbente ligado a enzima (ELISA). Suero agrupado de 17 pacientes de síndrome antifosfolípido fue utilizado como un estándar y examinado en cada placa. La meseta del anticuerpo de unión fue alcanzada con la concentración de antígeno de 10 µg/ml. La placa polisorp microtítulo F96 fue recubierta con pocillo PC-BSA (10 µg/ml) 50 µg en PBS. Las placas recubiertas fueron incubadas durante la noche a 4ºC. Después de cinco lavados con PBBS, las placas fueron bloqueadas con 2% BSA-PBS durante 2h a temperatura ambiente y lavadas como se describe arriba. Las muestras fueron diluidas (1:30) en 0.2% BSA-PBS y añadidas a 50 µl/pocillo.
[0056] LDL fue aislada del plasma de los donantes sanos mediante ultra centrifugación preparativa secuencial y oxidada mediante iones cobre (OxLDL) o derivados con MDA (MDA-LDL) como se describió6.
7
[0057] OxLDL y MDA-LDL fueron determinados fundamentalmente por ELISA como se describió6. OxLDL o MDA-LDL fue diluida a 2 µg/ml en un buffer de recubrimiento (buffer carbonato-bicarbonato 50 mM pH 9.7) y 100 µl/pocillo fue usado para recubrir las placas ELISA (Costar 2581). Las placas permanecieron a 4ºC durante la noche, lavadas 4 veces con PBS, y luego se bloquearon con 20% de suero bovino adulto en PBS (20% ABS-PBS) durante 2 horas a temperatura ambiente. Se mantuvieron incubadas con µl de suero, diluido 1:30 en 20% ABS-PBS a 4ºC durante la noche.
[0058] Las placas estuvieron incubadas durante la noche a 4ºC y lavadas como se describe arriba. Fosfatasa alcalina conjugada de cabra antihumana lgG (diluida 1:9000 en la muestra buffer) y fosfatasa alcalina conjugada de cabra antihumana lgM (diluida 1:7000 en la muestra buffer) fueron añadidas a 100 µl/pocillo e incubadas a 4ºC durante la noche. Después de cinco lavados, el color se desarrolló mediante la adición de substrato fosfatasa alcalina (PNPP) a 100 µl/pocillo y se incubaron las placas durante 60 min a temperatura ambiente en la oscuridad. Las placas fueron examinadas en el espectrofotómetro Multiskan Plus ELISA a 405 nm. Todas las muestras fueron medidas en un ensayo simple y el coeficiente de variación estuvo por debajo de 10-15%.
Especificidad de anticuerpos anti-fosforilcolina -BSA
[0059] A fin de investigar la especificidad de anti-fosforilcolina -BSA, los ensayos de absorción fueron desarrollados mediante el uso de sueros de título alto mezclados. A una dilución dando al 50% de unión máxima a PC-BSA, los sueros de título alto mezclados fueron preincubados con una concentración diferente de PC-BSA. Después del vórtice, los tubos fueron incubados a 40ºC durante la noche y centrifugados a 13000 r.p.m. durante 30 min (40ºC). Los sobrenadantes fueron examinados por un anticuerpo que une a PC-BSA como se describe. El porcentaje de inhibición fue calculado como sigue:
PORCENTAJE DE INHIBICIÓN = (OD sin competidor – OD con competidor x100/OD sin competidor.
Análisis estadístico
[0060] Los niveles de anti-fosforilcolina fueron dicotomizados al percentil 75 y 90. La asociación entre antifosforilcolina (u otros anticuerpos) y la progresión de aterosclerosis durante un periodo de 4 años fueron determinadas mediante la estimación de aumento en IMT (si o no) utilizando análisis de regresión logístico y el cálculo de proporciones de fracciones (ORs) y 95% intervalo de confianza (CI), o comparación utilizando correlación Spearman como se indica. Ajustes fueron hechos para posibles factores de confusión incluyendo edad, hábitos de fumar, colesterol en suero, triglicéridos en suero y modo de tratamiento antihipertensivo (lacidipina, atenolol). Un valor p de dos colas <0.05 fue considerado como significativo.
Resultados
[0061] Las características básicas de sujetos en el momento de inscripción en el estudio han sido detalladas en otra parte (Pockley et al (2003) Hypertension 42, 235-238) y están presentes en la tabla 1.
[0062] Los estudios de competencia revelan que aPC de lgM y subclase lgG fue hecha competente mediante preincubación con PC-BSA, mientras la cardiolipina tuvo una capacidad débil y no competitiva de fosfatidilserina (Figura 1a, 1b). β2-glicoproteína 1 compitió la misma extensión con lgG vinculante a PC-BSA pero no tanto como con lgM (figura 1a, 1b). PC-BSA tuvo una baja capacidad para ser competente en la unión de otros antígenos probados (datos no mostrados). OxLDL y MDA-LDL puede competir con la unión de lgM aPC a PC-BSA, y también de IGC aPC, aunque no en la misma extensión (figura 2a, 2b).
[0063] Incrementos en IMT en seguimiento fueron menos prevalentes en sujetos que tienen niveles de suero elevados de lgM a PC (percentil 75 o 90), oxLDL y MDA-LDL (percentil 90) a la hora de inscripción, mientras CRP no está asociado con cambios IMT (Tabla 2).
[0064] El análisis de regresión logístico reveló que las relaciones entre autoanticuerpos lgM a PC oxLDL y MDA-LDL y cambios en IMT fueron independientes de la edad, hábitos de fumar, tratamiento con atenolol o lacidipina y lípidos en sangre. aPC lgM: estuvieron significativamente asociados con cambios en IMT a ambos percentil 75 y 90, mientras aOxLDL y MDA-LDL de subclase lgM sólo mostraron significancia a 90 (tabla 3a-d). Anticuerpos lgM fueron también independientes de valores lgG (datos nos mostrados). Además, niveles totales de lgG y lgM no estuvieron asociados con medidas de IMT o cambios (datos no mostrados).
[0065] Autoanticuerpos lgG a PC fueron menores en tendencia en sujetos con aumentos en IMT pero esta diferencia no alcanza la significancia estadística (tabla 2).
[0066] Había diferencias importantes entre hombres y mujeres. aPC, aMDA-LDL, y aOxLDL de subclases lgM, fueron significativamente mayor en mujeres que en hombres (p´s<0.05). Por el contrario, las mujeres tuvieron una ocurrencia significativamente menor de placas al inicio y en el seguimiento (p<0.05).
[0067] Niveles lgM aPC correlacionados negativamente con aumento en IMT (Rho 0.18, p=0.006) en contraste a los otros dos factores de protección, HDL y HSP70 que correlacionaron con los cambios IMT como medidas continuas (datos no mostrados). Poco probable aPC lgM, aOXLDL y aMDA-LDL no alcanzaron significancia en estas determinaciones (datos no mostrados).
8
[0068] No había asociaciones significativas entre niveles niveles lgM aPC y aOCLDL lgM (Rho 0.74 p<0.001) y aMDA-LDL lgM (rho 0.51, p<0.001). Igualmente aPC correlacionada con HSP60 (Rho 0.28, p<0.001), HSP70 (Rho 0.35, p<0.001), que nosotros hemos descrito como un factor de protección nuevo
5 para aterosclerosis humana en este cohorte (Pockley et al (2003) supra) y también con HDL (Rho 0.23, p<0.01). No había asociaciones entre aPC lgM, aOxLDL lgM o aOxLDL, MDA-LDL y LDL, CRP o triglicéridos (datos no mostrados).
[0069] Cuando el análisis de regresión logístico fue hecho por separado entre hombres y mujeres, controlando la edad, colesterol total, triglicéridos, fumar y fue estudiado el tratamiento lgM aPC que mostró
10 efectos protectores significativos en mujeres sólo con 90 percentil (EXP (B)=0.17, 95% CI=0.05-.68; p=0.01 y en hombres con 75 percentil estudiado EXP (B)=.18, 95% CI=0.04-.74; p=0.01, respectivamente). [0070] lgM a MDA-LDL u oxLDL diferente en este respecto, desde sólo valores para mujeres alcanzó significancia estadística independientemente. Así, cuando los análisis de regresión logísticos por separado fueron hechos por hombres y mujeres, controlando la edad, colesterol total, triglicéridos, fumar y tratamiento
15 de ambos lgM a MDA-LDL y lgM a OxLDL mostró efectos protectores en mujeres (EXP (B)=.17, 95% CI=.05-.068, p=0.01 y EXP (B)=.18, 95% CI = -04-.74, p=0.01, respectivamente), mientras que el efecto no alcanzó significancia entre hombres (EXP (B) = 60, 95% CI=.15-2.2, p=0.44, y EXP (B)=.39, 95% CI=.101.5, p=0.17 respectivamente), indicando que los títulos lgM altos a OxLDL y a MDA-LDL ídem ser específicamente protectores entre mujeres.
20 Tabla 1. Características básicas de grupo de estudio en la inscripción. Resultados están presentes como medias (SD) o porcentaje (%) y mg/dL para lípidos
Total (N=226) Atenolol (N=115) Lacidipina (N=111)
Edad (años) 57.7 (7.8) 57.6 (7.6) 57.7 (7.9
Sexo (% hombres) 50 46 53
BMI 26.7 (3.7) 26.3(3.3) 27.1 (3.9)
Colesterol total 232.4 (37.8) 233.5 (38.1) 231.4 (37.4)
HDL 55.6 (27.6) 56.5 (25.8) 54.7 (27.6)
LDL 149.4 (37.8) 149.7 (37.1) 149.2 (38.6)
Triglicéridos 131.6 (58.2) 128.6 (57.0) 134.7 (59.5)
25 Tabla 2. Predicción no ajustada de cambios en IMT con los niveles de inicio de anticuerpos lgG y lgM a la fosforilcolina (PC).
Variable Proporción fracción 75 percentil (95% CI) Menor Superior P
aPC(lgG) .60 .32 1.1 .10
aPC(lgM) .46 .25 .85 .01
aOxLDL (lgG) 1.2 .64 2.3 .57
aOxLDL (lgM) .77 .41 1.4 .40
aMDA-LDL (lgG) .80 .43 1.5 .48
aMDA-LDL (lgM) .67 .36 1.2 .18
Proteína Creactiva .80 .43 1.5 .46
90 percentil
aPC(lgG) .60 .25 1.4 2.4
aPC(lgM) .36 .15 0.87 .024
aOxLDL (lgG) .94 .38 2.31 .90
aOxLDL (lgM) .27 .11 .69 .006
aMDA-LDL (lgG) .63 .26 1.5 .30
aMDA-LDL (lgM) .27 .11 .69 .006
Proteína Creactiva .60 .24 1.4 .24
Tabla 3a: predicción de cambios en MT durante el periodo de 4 años utiizando el 75 percentil de anticuerpo aPC lgM al inicio en sujetos con hipertensión estabilizada.
9
Variable en el modelo Coeficiente (B) Proporción fracción estimada Exp (B) P 95% CI Menor Superior
Fumar -.01 .99 .95 .66 1.5
Sexo -.05 .95 .87 .54 1.4
Colesterol total .003 1.0 .45 .99 1.0
Triglicéridos en plasma -.001 .99 .63 .99 1.0
Edad (años) .01 1.0 .59 .97 1.0
Tratamiento (A”““““““““““““L) -.23 .79 .40 .45 1.4
APClgM -1.0 37 .0027 .15 .89
Tabla 3b: predicción de cambios en IMT durante 4 años utilizando 90percentil de anticuerpos aPClgM en sujetos con hipertensión estabilizada.
Variable en el modelo Coeficiente (B) Proporción fracción estimada Exp (B) P 95% CI Menor Superior
Fumar -.02 .97 .90 .65 1.5
Sexo -.005 1.0 .98 .56 1.8
Colesterol total .003 1.0 .42 .99 1.0
Triglicéridos en plasma -.001 .99 .67 .99 1.0
Edad (años) .003 1.0 .87 .97 1.0
Tratamiento (A”““““““““““““L) -.22 .80 .43 .46 1.4
APClgM -.77 .46 .017 .24 .87
Tabla 3c: Predicción de cambios de IMT durante 4 años utilizando el 90percentil con anticuerpos lgM a OxLDL y otros factores de riesgo en sujetos con hipertensión establecida.
Variable en el modelo Coeficiente (B) Proporción fracción estimada Exp (B) P 95% CI Menor Superior
Fumar -.01 .99 .95 .66 1.5
Sexo -.001 1.1 .98 .56 1.8
Colesterol total .001 1.0 .72 .99 1.1
Triglicéridos en plasma -.001 1.0 .71 .99 1.0
Edad (años) .01 1.0 .59 .97 1.0
Tratamiento (A/L) -.28 .77 .35 .44 1.3
APClgM -1.3 .26 .008 .11 .72
Tabla 3d: Predicción de cambios en IMT durante 4 años utilizando el 90percentil con anticuerpos a MDALDL y otros factores de riesgo en sujetos con hipertensión establecida.
Variable en el modelo Coeficiente (B) Proporción fracción estimada Exp (B) P 95% CI Menor Superior
10
Fumar -.07 0.93 .73 .62 1.4
Sexo -.001 .99 .99 .56 1.7
Colesterol total 0.001 1.0 .78 .99 1.0
Triglicéridos en plasma -.001 .99 .74 .99 1.1
Edad (años) 0.01 1.0 .54 .97 1.0
Tratamiento (A/L) -.27 .76 .34 .44 1.3
APClgM -1.1 .31 .01 .12 .79
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
REFERENCIAS
[0071]
1.
Frostegard J, Ulfgren AK, Nyberg P, Hedin U, Swedenborg J, Andersson U, Hansson GK. Cytokine expression in advanced human atherosclerotic plaques: dominance of pro-inflammatory (Th1) and macrophage-stimulating cytokines. Atherosclerosis. 1999;145:33-43.
2.
Binder CJ, Chang MK, Shaw PX, Miller YI, Hartvigsen K, Dewan A, Witztum JL. Innate and acquired immunity in atherogenesis. Nat Med. 2002;8:1218-26.
3.
Frostegard J. Autoimmunity, oxidized LDL and cardiovascular disease. Autoimmun Rev. 2002;1:233-7.
4.
Palinski W, Miller E, Witztum JL. Immunization of low density lipoprotein (LDL) receptor-deficient rabbits with homologous malondialdehyde-modified LDL reduces atherogenesis. Proc Natl Acad Sci USA. 1995;92:821-5.
5.
Xu Q, Dietrich H, Steiner HJ, Gown AM, School B, Mikuz G, Kaufmann SH, Wick G. Induction of arteriosclerosis in normocholesterolemic rabbits by immunization with heat shock protein 65. Arterioscler Thromb. 1992;12:789-99.
6.
Wu R, de Faire U, Lemne C, Witztum JL, Frostegard J. Autoantibodies to OxLDL are decreased in individuals with borderline hypertension. Hypertension 1999;33:53-9.
7.
Hultne J, Wiklund O, Hurt-Camejo E, Bondjers G. Autibodies to oxidized LDL in relation to carotid atherosclerosis, cell adhesion molecules, and phospholipase A(2). Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2001.21:269-74.
8.
Karvonen J, PaivansaJo M, Kesaniemi YA; Horkko S. immunoglobulin M type of autoantibodies to oxidized lowdensity lipoprotein has an inverse relation to carotid artery atherosclerosis. Circulation. 2003;108:2107-12.
9.
Bergmark C, Wu R, de Faire U, Lefvert AK, Swedenborg J. Patients with early-onset peripheral vascular disease have increased levels of autoantibodies against oxidized LDL. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 1995,15:441-5.
10.
Salonen JT, Ylä-Herttuala S, Yamamoto R, Butler S, Korpela H, Salonen R, Nyyssönen K, Palinski W, Witztum JL. Autoantibody against oxidised LDL and progression of carotid atherosclerosis. Lancet. 1992,339:883-887.
11.
Svenungsson E, Jensen-Urstad K, Heimburger M, Silveira A, Hamsten A, de Faire U, Witztum JL, Frostegard J. Risk factors for cardiovascular disease in systemic lupus erythematosus. Circulation. 2001;104:1887-93.
12.
Frostegard J, Wu R, Giscombe R, Holm G, Lefvert AK, Nilsson J. Induction of T-cell activation by oxidized low density lipoprotein. Arterioscler Thromb. 1992;12:461-7.
13.
Stemme S, Faber B, Holm J, Wiklund O, Witztum JL, Hansson GK. T lymphocytes from human atherosclerotic plaques recognize oxidized low density lipoprotein. Proc Natl Acad Sci U S A. 1995;92:3893
7.
14.
Berliner JA, Territo MC, Sevanian A, Ramin S, Kim JA, Bamshad B, Esterson M, Fogelman AM. Minimally modified low density lipoprotein stimulates monocyte endothelial interactions. J Clin Invest. 1990;85:1260-6.
15.
Frostegard J, Nilsson J, Hasgerstrand A, Hamsten A, Wigzell H, Gidlund M. Oxidized low density lipoprotein induces differentiation and adhesion of human monocytes and the monocytic cell line U937. Proc Natl Acad Sci U S A. 1990;87:904-8.
16.
Frostegard J, Haegerstrand A, Gidlund M, Nilsson J. Biologically modified LDL increases the adhesive properties of endothelial cells. Atherosclerosis. 1991;90:119-26.
17.
Fei GZ, Huang YH, Swedenborg J, Frostegard J. Oxidised LDL modulates immune-activation by an IL-12 dependent mechanism. Atherosclerosis. 2003;169:77-85.
18.
Bochkov VN, Kadl A, Huber J, Gruber F, Binder BR, Leitinger N. Protective role of phospholipid oxidation products in endotoxin-induced tissue damage. Nature. 2002;419:77-81.
19.
Frostegard J, Huang YH, Ronnelid J, Schafer-Elinder L. Platelet-activating factor and oxidized LDL induce immune activation by a common mechanism. Artsrioscler Thromb Vasc Biol. 1997;17:963-8.
11
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
20.
Heery JM, Kozah M, Stafforini DM, Jones DA, Zimmerman GA, McIntyre TM, Prescott SM. Oxidatively modified LDL contains phospholipids with platelet- activating factor-like activity and stimulates the growth of smooth muscle cells. J Clin Invest. 1995:96:2322-30.
21.
Subbanagounder G, Leitinger N, Shih PT, Faull KF, Berliner JA. Evidence that phospholipid oxidation products and/or platelet-activating factor play an important role in early atherogenesis : in vitro and In vivo inhibition by WEB 2086. Circ Res. 1999,85:311-8.
22.
Harnett W, Harnett MM. Phosphorylcholine: friend or foe of the immune system? Immunol Today. 1999;20:125-9.
23.
Shaw PX, Horkko S, Chang MK, Curtiss LK, Palinski W, Silverman GJ, Witztum JL. Natural antibodies with the T15 idiotype may act in atherosclerosis, apoptotic clearance, and protective immunity [see comments]. J Clin Invest. 2000;105:1731-40.
24.
Binder CJ, Horkko S, Dewan A, Chang MK, Kieu EP, Goodyear CS, Shaw PX, Palinski W, Witztum JL, Silverman GJ. Pneumococcal vaccination decreases atherosclerotic lesion formation: molecular mimicry between Streptococcus pneumoniae and oxidized LDL. Nat Med. 2003;9:736-43.
25.
Zanchetti A, Bond MG, Hennig M, Neiss A, Mancia G, Dal Palu C, Hansson L, Magnani B, Rahn KH, Reid J, Rodicio J, Safar M, Eckes L, Ravinetto R. Risk factors associated with alterations in carotid intima-media thickness in hypertension: baseline data from the European Lacidipine Study on Atherosclerosis. J Hypertens. 1998;16:949-61.
26.
Zanchetti A, Bond MG, Hennig M, Neiss A, Mancia G, Dal Palu C, Hansson L, Magnani B, Rahn KH, Reid JL, Rodicio J, Safar M, Eckes L, Rizzini P. Calcium antagonist lacidipine slows down progression of asymptomatic carotid atherosclerosis: principal results of the European Lacidipine Study on Atherosclerosis (ELSA), a randomized, double-blind, long-term trial. Circulation. 2002;106:2422-7.
Estudio que muestra el efecto protector de aPC
[0072] En un estudio observacional de Malmö (the Malmö Diet and Cancer Study), sobre 6000 a 30000 sujetos de la cohorte fueron inscritos por investigaciones cardiovasculares extensas, incluyendo cálculos no invasivos de aterosclerosis subclínica a través de medida de ultrasonido de las carótidas. Además, factores de riesgo cardiovasculares adicionales fueron medidos al inicio. A estos sujetos se les ha seguido durante 10 años en relación a la ocurrencia de nuevos casos de enfermedades cardiovasculares (infarto de miocardio, enfermedad cardiaca coronaria crónica, infarto aterotrombótico). A la hora de calcular los riesgos relativos (calculados como riesgos relativos) con 95% de intervalos de confianza, análisis anidado de casos y controles (3 controles por caso) fueron realizados para bajos niveles de anticuerpos contra fosforilcolina (aPC-lgM). Había un total de 145 casos CVD (principalmente infarto de miocardio (MI) e infarto isquémico) y 400 controles de edad y sexo. El nivel de corte para aPC fue 307 para el décimo percentil de niveles aPC. Había un total de 20 casos CVD con niveles de aPC debajo del décimo percentil (14%) y 34 controles (9%), correspondiente a riesgo relativo de 1.9 (95% CI1, 1-4,3). El número correspondiente de casos de hombres por debajo del décimo percentil de aPC fue 16 (19%) y 25 controles de pacientes por debajo de este nivel (11%), correspondiente a un riesgo relativo de 1.9 (95% CI 1, 1-3,5). El número de casos femeninos fue demasiado bajo para obtener una información sólida en riesgos relativos (vea tablas 1 y 2), Los resultados sugieren que bajos niveles aPC son protectores para la ocurrencia de enfermedad cardiovascular en sujetos sanos, y pueden actuar como marcadores de enfermedades cardiovasculares.
Tabla 1. Estadísticas descriptivas para aPC (<10 percentil)
Sexo Todos
Hombres Mujeres
Caso Control Caso Control Caso Control
Debajo 10 percentil
No n 68 206 57 160 125 366
% 81 89 93 95 86 92
Si N 16 25 4 9 20 34
% 19 11 7 5 14 9
Tabla 2. Análisis univariable de la influencia de aPC (<10 percentil) en CVD mediante regresión logística condicional para todos los pacientes, hombres y mujeres, respectivamente.
12
Variable p-valor Riesgo relativo 95% Riesgo relativo Límites de confianza
Todos los pacientes aPC 0.0308 1.939 1.063 3.536
Hombres aPC 0.0262 2.181 1.097 4.338
Mujeres aPC 0.6556 1.331 0.379 4.676
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
Efectos de aPC Introducción [0073] Por medio de uso de columnas las cuales son absorbidos previamente con PC-BSA, PC-KLH o la vacuna de neumococo (Statens Serum Institute, Denmark), extraemos anticuerpos con reactividad contra estos compuestos. Los niveles de aPC IGG se elevan en al menos los dos primeros de estos. Pequeñas cantidades de IgM pueden ser extraidas fuera de IVIG y entonces pasa también a través las columnas preabsorbidas con los antigenes arriba mencionados. A través de este método podemos obtener aPC humano policlonal de IgG y subclase IgM. La medición de proteina indica que los niveles aPC IgM de 0.5 mg / ml podrían ser extraidos. Usando estos anticuerpos podemos probar sus propiedades funcionales utilizando modelos in Vitro:
1.
Puede la preincubación de concentraciones crecientes de aPC IgM con LDL oxidado decrecer el vinculante y captar en linea de células monolito/macrófago, THP1? Sistemas de prueba con microscopio confocal y/o FACS pueden ser usados.
2.
Puede la preincubación de concentraciones crecientes de aPC IgM con normal IgM como control, con PAF (factor activador de las plaquetas), lisofosfatidilcolina (LPC) inhibir captación de moléculas de adhesion ICAM sobre células endoteliales por esos lipidos? También otras citoquinas pueden ser probadas utilizando un kit comercial (diversas diferentes citoquinas; BioSource). Pruebas pueden hacer uso de FACScan.
Cultivo de célula
[0074] HUVECs agrupados criopreservados en el tubo 2 fueron adquiridos de Cascade Biologics, Inc. (Portland, OR, USA). Los cultivos se mantuvieron en medio rojo-libre fenol EGMTM (Clonetics, San Diego, CA, USA), conteniedo 2% de suero bovino fetal y suplementos. Las células fueron incubadas en frascos de 75 cm2 (TPP, AG, Trasadingen, Switzerland) a 37ºC bajo condiciones humidificadas 5% CO2. Todos los experimentos fueron desarrollados en paso 3 a 4. Las células fueron plantadas a densidad 2x104 células /ml en 12 placas pocillos (NUNC, Inc, Naperville, IL, USA) para el análisis citométrico de flujo. Después de las siguientes 12-24 horas para la fijación, las células estuvieron en reposo en SFM por al menos 12 horas antes del tratamiento. La línea celular monocítica THP-1 era de AT&T (USA). Las células se mantuvieron en RPMI con 10% FCS.
Preparación de aPC
[0075] La fracción total lgM o lgG fue separada de la inmunoglobulina humana agrupada disponible comercialmente (Gammagard®) a 50 mg/ml utilizando columnas HiTrap lgM o lgG (Amersham Biosciences). Anticuerpos contra fosforilcolina (PC) fueron eluidas después de la carga de la fracción lgM o lgG en columnas NHS-Sepharosa acopladas a PC conjugadas ya sea para la proteína de lapa californiana (KLH) (1
o 5 mg/ml) o albúmina de suero bovino (BSA) (1 mg/ml), seguido de la columna con sólo BSA . PC-BSA (Fosforilcolina -Albúmia Suero Bovino) y PC-KLH fue adquirido de Biosearch Technologies, INC (Ca, USA). Fracciones eluidas fueron buffer-intercambiadas en columnas PD-10 y concentradas con dispositivos Milipore Centricone®. Procedimientos fueron desarrollados de acuerdo a las instrucciones dadas por el fabricante. La concentración de lgM aPC preparada fue típicamente 50 µg/ml, y la concentración de lgG aPC fue típicamente 30 µg/ml.
Fagocito vinculante y captación de oxLDL por macrófagos THP-1 derivados
[0076] LDL Oxidada (oxLDL) es preparada como se describe por incubación de iones cobre. Primero, oxLDL es clasificado con Dil (Dil-(1,1´-dioctadecil-3,3,3´,3´,-tetrametilindocarbocianina perclorato; Pruebas moleculares, Inc)) y diluida en buffer Salina-EDATA a 1 mg/ml. Después, 2 ml suero deficiente en lipoproteína es añadido para 1 mg de oxLDL y luego filtrado (0.45 um). 50ul Dil (3mg/ml) en DMSO es añadido para 1 mg oxLSL y la mezcla es incubada 15h, 37ºC y luego dializada contra diversos cambios de salina-EDTA durante 6h. Después, esta mezcla es 0.45 um filtrada otra vez. La captación de oxLDL es estudiada con microscopía fluorescencia/confocal. Células THP-1 como modelo para monolitos/macrófagos son cultivados durante la noche en cámara de diapositivas (medio: DNEM/10% FBS/Glu/PEST). 3 veces se lavaron con medio DMEM sin FBS. Incubadas con oxLSL-DiO 5ug/ml (medio SFM) 6h.
13
Las células se lavaron con 0.2% BSA-PBS 5 veces, PBS 1 vez. Tinción núcleo macrófago: las células fueron incubadas con 1ug/ml bisbenzimida 10´y lavada con PBS 3 X. Fijar y montar: las células fueron fijadas con 4% paraformaldehido en PBS para 30´, PBS 3X, finalmente después 1 gota de gel de montaje. Las diapositivas fueron recubiertas con un cubreobjetos.
Anexina V vinculante a células endoteliales. [0077] Plasma conservado en Heparina con alta capacidad para inhibir Anexina V vinculante fue añadido a HUVECs monocapa a concentración de 10% en SFM. Después de 24 hrs las células fueron recogidas con Cell Dissociation Solution (CDS; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) y cuidadosamente agrupadas con sobrenadantes, para excluir la pérdida selectiva de células flotantes desprendidas, seguido de centrifugación a 1200 rpm durante 7 in. Después de la resuspensión en 100 µl de anexina V vinculante buffer (Molecular Probes Inc, Eugene, OR, USA) las muestras fueron teñidas con 2µl 5 mg/ml anexina VFITC (Molecular Probes) e incubadas durante 15 min en hielo. Poco antes de la adquisición 1mg/ml de yoduro de propidio (PI; un colorante vital; R&DSystsms Europe Ltd, Abingdon, UK) fue añadido. El análisis fue desarrollado como se describe arriba.
Análisis Estadístico
[0078] Las estadísticas fueron monitorizadas usando el software Stat View; SAS Institute AB, Göteborg, Suecia. Las variables continuas inclinadas fueron transformadas logarítmicamente. Grupos de estudio fueron comparados utilizando ANOVA para variables continuas y Chi cuadrado para variables categóricas. PLSD de Fischer fue utilizada como test post hoc. Los coeficientes de correlación fueron calculados utilizando la regresión simple o por correlación de rango de Spearman con una distribución no normal de variables de. El nivel de significancia fue establecido a p<0.05.
Resultados
Medidas de Anexina V vinculante a células endoteliales.
[0079] La frecuencia de HUVECs positiva para el teñido de Anexina V fue determinada como el porcentaje de anexina V+/Pl- células en un dibujo de punto bivariable o el porcentaje de células anexina V+ basadas en un histograma. Se sabe que anexina V vinculante a HUVECs en presencia de suero disminuye la vinculación y la preincubación con IVIG fue determinada. La preincubación con IVIG puede restaurar la vinculación de anexina, indicando que los anticuerpos presentes en IVIG pueden neutralizar la vinculación (fig 4). [0080] APC-BSA y aPC-KLH fueron ambos asociados significativamente en pacientes SLE-pacientes con un historial de CVD con Anexina V vinculante a EC (r00.45; p=0.02 y r=0.42 y p=0.03 respectivamente). aPC fueron determinados como se describe arriba.
Efecto de captación de oxLDL en macrófagos mediante aPC
[0081] aPC de subclase lgM o lgG, extraída de IVIG como se indicó, fueron preincubados con oxLDL indicado (fig 3). Nosotros usamos un total de lgM como control para aPC lgM (macrófago+Dil-oxLDL + lgM) y el efecto en la captación de macrófago. El porcentaje total de células positivas teñidas es de 46.62%, indicando que lgM por sí no tiene los efectos inhibitorios que aPC tiene. lgM fue comprado de SIGMA, y es lgM humano purficado que es producido por precipitación y las técnicas de filtración de gel utilizando suero humano normal como material de inicio. La inmunoglobulina es determinada para que sea al menos 95% pura.
Efecto de aPC en inducción-ICAM en células endoteliales [0082] PAF fue incubada con EC en las concentraciones indicadas. Como se demostró en la fig 5, este lípido puede inducir un significante aumento en la expresión-ICAM. aPC de subclase lgM, extraída de IVIG como se indició fueron preincubados con estos lípidos como se indicó (fig 5).
Correlaciones entr e aO C y otros marcador es de riesgo en es tudio ELSA (2 26 individuos con hipertensión como se describió previamente).
[0083] aPC lgM fue asociado con otros dos factores de protección, HSP 70 y HDL, como indica la tabla 4. Había también una débil asociación significativa con TNF, un marcador de inflamación y citoquina proaterogénica. [0084] TNF es una importante citoquina pro-inflamatoria y los niveles TNF negativamente asociados con niveles de aPC lgM. La asociación es débil, pero significante. [0085] HSP 70 es un factor de protección novel recientemente descubierto por nosotros y otros. Hay una asociación claramente positiva. También HSP60, que es un factor de protección débil está asociado. [0086] HDL es conocido como un colesterol “bueno”, con propiedades antiinflamatorias. Está asociado significativamente con aPC lgM.
14
ANTTPCIGG ANTPCIGM
Coeficiente de correlación ANTPCIGG ro de Spearman 0.245 Sig 2 colas 0.000 N220 1.000 . 220
Coeficiente de correlación ANTPCIGM1.000 Sig 2 colas . N220 .145 .000 220
Coeficiente de correlación HDL .233 Sig. 2 colas .001 N206 .008 .906 206
Coeficiente de correlación TNFA- .136 Sig. 2 colas .044 N220 -.012 .863 220
Coeficiente de correlación HSP60.279 Sig. 2 colas .000 N209 .138 .047 209
Coeficiente de correlación HSP70.356 Sig. 2 colas .000 N213 .157 .022 213
** Correlación es significante al nivel .01 (2 colas) *Correlación es significante al nivel .05 (2 colas)
5
10
15
20
15
REFERENCIAS CITADAS EN LA DESCRIPCIÓN
Esta lista de referencias citada por el solicitante es para la conveniencia del lector unicamente. No forma parte del documento de la Patente Europea. Incluso aunque se ha tomado gran cuidado al recopilar las referencias, los errores omisiones no pueden ser excluidos y las disclaims de la EPO son liablie al respecto.
Documentos de Patentes citados en la descripción
•
US 5455032 A [0009] [0023] [0037]
•
WO 2002080954 A [0011]
•
WO 0168119 A [0011]
•
WO 9908109 A [0011]
•
WO 9318161 A [0014]
•
US 5475100 A [0015] Texto no relacionado con las patentes citado en la descripción
•
Kearney. J Clin Invest, 2000, vol. 105 (12), 1683-1685 [0012]
•
Chyu Kuang-Yuh et al. J Am Coll Cardiol, 2004, vol. 43 (5), 499A [0013]
•
Shaw et al. J Clin Invest, 2000, vol. 105 (12), 1731-1740 [0016]
•
Chesebro, B. Biochemistry, 1972, vol. 11, 766 [0024]
•
Padilla, N.D. et al. J.Immun. Methods, 2004, vol. 293, 1-11 [0024]
•
Kim et al. J Exp Med., 02 September 2002, vol. 196 (5), 655-65 [0038] [0043]
•
Chesebro, B. ; Metzger, H. Biochem., 1972, vol. 11, 776 [0039]
•
Briles DE ; Forman C ; Hudak S ; Claflin JL. Anti- phosphorylcholine antibodies of the T15 idiotype are optimally protective against Streptococcus pneumoniae. J Exp Med, 1982, vol. 156, 1177-85 [0041]
•
Spira, Gad; Aguila, Hector L. ; Scharff, Matthew D. T15 PC binding monoclonal antibodies retain specificity when they switch from IgM to IgG. Israel. Journal of Immunology, 1988, vol. 140 (8), 2675-80 [0041]
•
Pockley et al. Hypertension, 2003, vol. 42, 235-238 [0061]
•
Frosteg ard J ; Ulfgr en AK ; Nyberg P ; Hedin U ; S wedenborg J ; Andersson U ; Hansson GK. Cytokine expression in advanced human atherosclerotic plaques: dominance of pro-inflammatory (Th1) and macrophage-stimulating cytokines. Atherosclerosis., 1999, vol. 145, 33-43 [0071]
•
Binder CJ ; Chang MK ; Sha w PX ; Miller YI ; Hartvigsen K ; De wan A ; Wi tztum JL. Innate and acquired immunity in atherogenesis. Nat Med., 2002, vol. 8, 1218-26 [0071]
•
Frostegard J. Autoimmunity, oxidized LDL and cardiovascular disease. Autoimmun Rev., 2002, vol. 1, 233-7 [0071]
•
Palinski W ; Miller E ; Witz tum JL. Immunization of low density lipoprotein (LDL) receptordeficient rabbits with homologous malondialdehyde-modified LDLreduces atherogenesis. Proc Natl Acad Sci U S A.,1995, vol. 92, 821-5 [0071]
•
Xu Q; Dietrich H ; Steiner HJ ; Gown AM ; SchoelB ; Mikuz G ; Kaufmann SH ; Wick G.
Induction ofarteriosclerosis in normocholesterolemic rabbits by immunization with heat shock protein 65. Arterioscler Thromb., 1992, vol. 12, 789-99 [0071]
• Wu R; de Faire U ; Lemne C ; Witztum JL ; Frostegard J. Autoantibodies to OxLDL are decreased in individuals with borderline hypertension. Hypertension., 1999, vol. 33, 53-9
[0071]
•
Hulthe J ; Wiklund O ; Hurt-Camejo E ; Bondjers G. Antibodies to oxidized LDL in relation to carotid atherosclerosis, cell adhesion molecules, and phospholipase A(2). Arterioscler Thromb Vase Biol., 2001, vol. 21, 269-74 [0071]
•
Karv onen J ; P aivansalo M ; Kes aniemi YA ; Hor kko S. Immunoglobulin M type of autoantibodies to oxidized low-density lipoprotein has an inverse relation to carotid artery atherosclerosis. Circulation, 2003, vol. 108, 2107-12 [0071]
•
Bergmark C ; Wu R ; de Faire U ; Lefvert AK ; Swedenborg J. Patients with early-onset peripheral vascular disease have increased levels of autoantibodies against oxidized LDL. Arterioscler Thromb Vase Biol., 1995, vol. 15, 441-5 [0071]
•
Salonen J T ; Ylä-Herttuala S ; Ya mamoto R ; Butl er S ; Korpela H ; Salonen R ; Nyyssönen K ; Palinski W ; Witztum JL. Autoantibody against oxidised LDL and progression of carotid atherosclerosis. Lancet, 1992, vol. 339, 883-887 [0071]
•
Svenungsson E ; Heimburger M ; Silveira A ; Hamsten A ; de Fair e U ; Witztum JL ;
21
Frostegard J. Risk factors for cardiovascular disease in systemic lupus erythematosus. Circulation, 2001, vol. 104, 1887-93 [0071]
•
Frostegard J ; Wu R ; Giscombe R ; Holm G ; Lefvert AK ; Nilsson J. Induction of T-cell activation by oxidized low density lipoprotein. Arterioscler Thromb., 1992, vol. 12, 461-7 [0071]
•
Stemme S ; Faber B ; Holm J ; Wiklund O ; Wi tztum JL ; Hansso n GK. T lymphocytes from human atherosclerotic plaques recognize oxidized low density lipoprotein. Proc Natl Acad Sci U S A., 1995, vol. 92, 3893-7 [0071]
•
Berliner JA ; Territo MC ; Sevanian A ; Ramin S ; Kim JA ; Bamshad B ; Esterson M ; Fogelman AM. Minimally modified low density lipoprotein stimulates monocyte endothelial interactions. J Clin Invest., 1990, vol. 85, 1260-6 [0071]
• Frostegard J ; Nilsson J ; Hae gerstrand A ; Ham sten A ; Wigz ell H ; Gidlund M.
Oxidized low density lipoprotein induces differentiation and adhesion of human monocytes and the monocytic cell line U937. Proc Natl Acad Sci U S A., 1990, vol. 87, 904-8 [0071]
• Frosteg ard J ; Haeg erstrand A ; Gidlund M ; Nilsson J. Biologically modified LDL increases the adhesive properties of endothelial cells. Atherosclerosis, 1991, vol. 90, 119-26
[0071]
•
Fei GZ; Huang YH ; Swedenborg J, Frosteg ard J. Oxidised LDL modulates immuneactivation by an IL-12 dependent mechanism. Atherosclerosis, 2003, vol. 169, 77-85 [0071]
•
Bochkov VN ; Kadl A ; Huber J ; Gruber F ; Binder BR ; Leitinger N. Protective role of phospholipid oxidation products in endotoxin-induced tissue damage. Nature, 2002, vol. 419, 77-81 [0071]
•
Frostegard J ; Huang Y H ; Ronnelid J ; Schafer-Elinder L. Platelet-activating factor and oxidized LDL induce immune activation by a common mechanism. Arterioscler Thromb Vasc Biol., 1997, vol. 17, 963-8 [0071]
•
Heer y JM ; Ko zak M ; Stafforini DM ; Jone s DA ; Zimmerman GA ; McInt yre TM ; Prescott SM. Oxidatively modified LDL contains phospholipids with platelet- activating factorlike activity and stimulates the growth of smooth muscle cells. J Clin Invest., 1995, vol. 96, 2322-30 [0071]
•
Subbanag ounder G ; Leitinger N ; Shih PT ; Faull KF ; Berliner J A. Evidence that phospholipid oxidation products and”““““““““““““or platelet-activating factor play an important role in early atherogenesis : in vitro and In vivo inhibition by WEB 2086. Circ Res., 1999, vol. 85, 311-8 [0071]
•
Harnett W ; Hamett MM. Phosphorylcholine: friend or foe of the immune system?. Immunol Today, 1999, vol. 20, 125-9 [0071]
•
Shaw PX; Horkko S ; Chang MK ; Curtiss LK ; Palinski W ; Silverman GJ ; Witztum JL.
Natural antibodies with the T15 idiotype may act in atherosclerosis, apoptotic clearance, and protective immunity [see comments]. J Clin Invest., 2000, vol. 105, 1731-40 [0071]
•
Binder CJ ; Horkko S ; Dewan A ; Chang MK ; Kieu EP ; Goody ear CS ; Sha w PX ; Palinski W ; Witztum JL ; Silv erman GJ. Pneumococcal vaccination decreases atherosclerotic lesion formation: molecular mimicry between Streptococcus pneumoniae and oxidized LDL. Nat Med., 2003, vol. 9, 736-43 [0071]
•
Zanchetti A ; Bond M G ; Hennig M ; Neiss A ; M ancia G ; Dal Palu C ; Hansson L ; Magnani B ; Rahn KH ; Reid J. Risk factors associated with alterations in carotid intima-media thickness in hypertension: baseline data from the European Lacidipine Study on Atherosclerosis. J Hypertens., 1998, vol. 16, 949-61 [0071]
•
Zanchetti A ; Bond M G ; Hennig M ; Neiss A ; M ancia G ; Dal Palu C ; Hansson L ; Magnani B ; Rahn KH ; Reid JL. Calcium antagonist lacidipine slows down progression of asymptomatic carotid atherosclerosis: principal results of the European Lacidipine Study on Atherosclerosis (ELSA), a randomized, double-blind, long-term trial. Circulation, 2002, vol. 106, 2422-7 [0071]

Claims (3)

1. Un método para evaluar un riesgo de un paciente humano de desarrollo o progresión de enfermedad cardiovascular; en donde el método comprende
(a)
evaluar los niveles del paciente de anticuerpos reactivos con un conjugado de fosforilcolina en una muestra ex vivo tomada de un paciente, y
(b)
determinar el riesgo del paciente de desarrollo o progresión de enfermedad cardiovascular basada en los níveles evaluados de anticuerpos reactivos con un conjugado foforicolina; en donde el nivel de anticuerpos reactivos con el conjugado fosforilcolina está correlacionado negativamente con el riesgo de desarrollo o pregresion de enfermedad cardiovascular en un paciente humano sano.
2. Uso de un conjugado de fosforilcolina en un método para evaluar un riesgo de un paciente humano de desarrollo o progresión de enfermedad cardiovascular en donde el método comprende-
(a)
evaluar los niveles del paciente de anticuerpos reactivos con el conjugado fosforilcolina en una muestra ex vivo tomada del paciente, y
(b)
determinar el riesgo del paciente de desarrollo o progresión de enfermedad cardiovascular basada en los niveles evaluados de anticuerpos reactivos con un conjugado fosforilcolina ; en donde el nivel de anticuerpos reactivos con el conjugado de fosforilcolina esta correlacionado negativamente con el riesgo de dessarrollo o progresión de enfermedad cardiovascular en un paciente humano sano.
3.
El método de la Reivindicación 1 o uso de la Reivindicación 2 en donde la enfermedad cardiovascular es enfermedad cardiovascular isquémica.
4.
El método de la Reivindicación 1 o uso de la Reivindicación 2 en donde la enfermedad cardiovascular es aterosclerosis.
5.
El método de cualquiera de las Reivindicaciones 1, 3 o 4, o el uso de cualquiera de las Reivindicaciones 2 a 4 en donde los niveles de anticuerpos IgM del paciente reactivos con el conjugado fosforilcolina son evaludos.
6.
El método de cualquiera de las Reivindicaciones 1, 3 o 4, o el uso de cualquiera de la Reivindicaciones 2 a 4 en donde los niveles de anticuerpos IgG del paciente reactivos con el cojugado de fosforilcolina son evaluados.
7.
El método de cualquiera de la Reivindicaciones 1 o 3 a 6, o el uso de acuerdo a cualquiera de las Reivindicaciones 2 a 6 en donde la fosforilcolina es unida a un portador via un espaciador.
8.
El método de cualquiera de las Reivindicaciones 1 o 3 a 7, o el uso de acuerdo a cualquiera de las Reivindicaciones 2 a 7 en donde el conjugado fosforilcolina comprende fosforilcolina unida a un portador de proteina, opcionalmente via un espaciador.
9.
El método o uso de acuerdo a la Reivindicación 8 en donde la proteina es KLH (hemocianina de lapa californiana) o albumina de suero humano (ASH).
10.
El método de cualquiera de las Reivindicaciones 1 o 3 a 9, o el uso de acuerdo a cualquiera de las Reivindicaciones 2 a 9 en donde el ensayo es un ensayo inmune.
ES05735991T 2004-04-15 2005-04-15 Método de valoración del riesgo de enfermedades cardiovasculares isquémicas usando conjugados de fosforilcolina. Active ES2362222T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US52138404P 2004-04-15 2004-04-15
US521384P 2004-04-15

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2362222T3 true ES2362222T3 (es) 2011-06-29

Family

ID=34981497

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES05735991T Active ES2362222T3 (es) 2004-04-15 2005-04-15 Método de valoración del riesgo de enfermedades cardiovasculares isquémicas usando conjugados de fosforilcolina.
ES06077208T Active ES2357606T3 (es) 2004-04-15 2005-04-15 Anticuerpos contra conjugados de fosforilcolina.

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES06077208T Active ES2357606T3 (es) 2004-04-15 2005-04-15 Anticuerpos contra conjugados de fosforilcolina.

Country Status (15)

Country Link
US (4) US8012483B2 (es)
EP (3) EP1735349B1 (es)
JP (2) JP4891228B2 (es)
CN (4) CN105699669A (es)
AT (2) ATE463254T1 (es)
AU (2) AU2005233361B2 (es)
CA (2) CA2776927C (es)
CY (2) CY1110188T1 (es)
DE (2) DE602005020474D1 (es)
DK (2) DK1735349T3 (es)
ES (2) ES2362222T3 (es)
PL (2) PL1735349T3 (es)
PT (2) PT1735349E (es)
SI (2) SI1735349T1 (es)
WO (1) WO2005100405A2 (es)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006069072A2 (en) 2004-12-22 2006-06-29 Avon Products Inc. Method and composition for reducing the appearance of wrinkles
WO2006086288A2 (en) * 2005-02-07 2006-08-17 The Regents Of The University Of California Methods for reducing the symptoms of autoimmunity and inflammation using binding proteins against antigens exposed on dead or dying cells
JP2009544971A (ja) * 2006-07-26 2009-12-17 イノヴァ ダイアグノスティクス インコーポレイテッド 急性アテローム硬化症候群を有する患者を診断するための組成物および方法
BRPI0720215A2 (pt) * 2006-12-22 2013-12-24 Abbott Lab Painel de doença autoimune cardiovascular e métodos de usar o mesmo.
CA2703838A1 (en) * 2007-10-30 2009-05-07 Athera Biotechnologies Ab Diagnostic and therapeutic methods and compositions for cardiovascular disease
JP2011527016A (ja) * 2008-07-07 2011-10-20 アセラ・バイオテクノロジーズ・アーベー アルツハイマー病についての新規の治療および診断方法
CU23736A1 (es) 2009-05-04 2011-11-15 Centro Inmunologia Molecular Anticuerpos que reconocen sulfatidos y proteoglicanos sulfatados y su uso
EP2542580B1 (en) * 2010-03-04 2021-08-04 Athera Biotechnologies AB Antibodies against phosphorylcholine in combination therapy with biologic agents
WO2012010291A1 (en) 2010-07-21 2012-01-26 Athera Biotechnologies Ab Diagnostic and therapeutic methods and compositions for metabolic disease
JP5904553B2 (ja) * 2010-11-17 2016-04-13 国立大学法人愛媛大学 自己免疫疾患に関与するタンパク質の解析方法及び該疾患の検査方法
US9796786B2 (en) 2011-08-09 2017-10-24 Athera Biotechnologies Ab Antibodies binding to phosphorylcholine (PC) and/or PC conjugates
AU2012293646B2 (en) * 2011-08-09 2017-08-31 Athera Biotechnologies Ab New antibodies against phosphorylcholine
AU2014213631B2 (en) 2013-02-05 2018-03-08 Tpcera Ltd Phosphorylcholine conjugates and uses thereof
US10046021B2 (en) 2013-02-05 2018-08-14 Tpcera Ltd. Phosphorylcholine conjugates and uses thereof
US11065319B2 (en) * 2014-02-04 2021-07-20 3Dt Holdings, Llc Methods for diagnosing and reducing incidences of cardiac allograft rejection
US10500260B2 (en) * 2014-02-04 2019-12-10 3Dt Holdings, Llc Substances, vaccines and methods for diagnosing and reducing incidences of transplant rejection
WO2016060096A1 (ja) 2014-10-15 2016-04-21 日油株式会社 ホスホリルコリン基含有化合物およびホスホリルコリン複合体
CN105175504A (zh) * 2015-09-08 2015-12-23 苏州普罗达生物科技有限公司 血管性血友病因子抑制多肽及其应用
WO2018220224A1 (en) * 2017-06-02 2018-12-06 Medirista Biotechnologies Ab Lipid-related antigens and antibodies directed against them
GB2622559A (en) 2022-05-10 2024-03-27 Johan Frostegaard Compositions, methods and uses
WO2024028192A1 (de) 2022-08-04 2024-02-08 Pentracor Gmbh Verwendung von phosphocholin-humanserumalbumin-konjugaten zur blockade von c-reaktivem protein

Family Cites Families (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2402664A1 (fr) 1977-09-07 1979-04-06 Agronomique Inst Nat Rech Produits de couplage phosphorylcholine, composes amines procede d'obtention et applications
JPS6251699A (ja) * 1985-08-30 1987-03-06 Nichirei:Kk 単クロ−ン性抗体およびそれを用いる測定法
US5955584A (en) * 1986-03-31 1999-09-21 Charter Ventures Atherosclerotic plaque specific antigens, antibodies thereto, and uses thereof
EP0257778B1 (en) 1986-08-06 1995-03-22 Scripps Clinic And Research Foundation Apolipoprotein b-specific monoclonal antibodies produced by two novel hybridomas
JPH02188532A (ja) 1989-01-17 1990-07-24 Otsuka Pharmaceut Co Ltd リポソームワクチン
WO1990012632A1 (en) * 1989-04-19 1990-11-01 The United States Of America, Represented By The Secretary, United States Department Of Commerce Process for removing c-reactive protein and anti-phosphorylcholine antibodies from biological fluids
JP3283041B2 (ja) * 1990-07-13 2002-05-20 学校法人藤田学園 人工抗体
WO1992010203A1 (en) 1990-12-10 1992-06-25 Alving Carl R A vaccine against cholesterol to prevent hypercholesterolemia and atherosclerosis
CA2131150A1 (en) * 1992-03-03 1993-09-16 Michel C. Nussenzweig Receptor complexes with b29 (ig-beta or ig-gamma) and their uses
WO1994014454A1 (en) * 1992-12-29 1994-07-07 Entremed, Inc. Vaccines against sterols
DE69411154T2 (de) 1993-02-22 1998-10-22 Alza Corp Mittel zur oralen gabe von wirkstoffen
US5455032A (en) * 1993-07-29 1995-10-03 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Use of phosphocholine hapten conjugates in vaccines
AU1159497A (en) 1996-11-08 1998-06-03 Regents Of The University Of California, The Methods and reagents for non-invasive imaging of atherosclerotic plaque
US6375925B1 (en) 1996-11-08 2002-04-23 The Regents Of The University Of California Methods and reagents for non-invasive imaging of atherosclerotic plaque
US6225070B1 (en) 1997-08-07 2001-05-01 The Regents Of The University Of California Antibodies to oxidation-specific epitopes on lipoprotein and methods for their use in detecting, monitoring and inhibiting the growth of atheroma
US20040185039A1 (en) * 2002-08-30 2004-09-23 Heinz Kohler Therapeutic applications of noncovalent dimerizing antibodies
US6300308B1 (en) * 1997-12-31 2001-10-09 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions for inducing autoimmunity in the treatment of cancers
DE69911417T2 (de) 1998-07-03 2004-06-17 Athera Biotechnologies Ab Verfahren zur diagnose von gefässerkrankungen und früher atheriosklerose
SE9802402D0 (sv) 1998-07-03 1998-07-03 Karolinska Innovations Ab Method of diagnosing cardiovascular disease and early atherosclerosis
AU773370B2 (en) * 1999-10-26 2004-05-20 Regents Of The University Of California, The Reagents and methods for diagnosing, imaging and treating atherosclerotic disease
SE0000855D0 (sv) 2000-03-15 2000-03-15 Karolinska Innovations Ab Antigenic composition useful as a vaccine against atherosclerosis
AU2001259730A1 (en) 2000-05-12 2001-11-26 The Regents Of The University Of California Standardized oxidized ldl assay
DE10041515A1 (de) * 2000-08-24 2002-03-14 Gerold Schuler Verfahren zur Herstellung gebrauchsfertiger, Antigen-beladener oder -unbeladener, kryokonservierter reifer dendritischer Zellen
US6664230B1 (en) * 2000-08-24 2003-12-16 The Regents Of The University Of California Orally administered peptides to ameliorate atherosclerosis
US6838452B2 (en) 2000-11-24 2005-01-04 Vascular Biogenics Ltd. Methods employing and compositions containing defined oxidized phospholipids for prevention and treatment of atherosclerosis
SE0103754L (sv) 2001-04-05 2002-10-06 Forskarpatent I Syd Ab Peptider från apolipoprotein B, användning därav immunisering, diagnosmetod eller terapeutisk behandling av ischemiska kardiovaskulära sjukdomar, samt farmaceutisk komposition och vaccin innehållande sådan peptid
US6930085B2 (en) * 2002-04-05 2005-08-16 The Regents Of The University Of California G-type peptides to ameliorate atherosclerosis
US20070122419A1 (en) * 2003-04-11 2007-05-31 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for treating atherosclerosis

Also Published As

Publication number Publication date
AU2011202334A1 (en) 2011-06-09
WO2005100405A3 (en) 2006-04-13
PL1797893T3 (pl) 2010-09-30
JP5366987B2 (ja) 2013-12-11
CY1111659T1 (el) 2015-10-07
EP1735349A2 (en) 2006-12-27
CN103908669A (zh) 2014-07-09
CN105699669A (zh) 2016-06-22
AU2011202334B2 (en) 2012-12-06
EP1735349B1 (en) 2010-09-08
SI1797893T1 (sl) 2010-08-31
JP2008501636A (ja) 2008-01-24
PT1735349E (pt) 2010-12-14
CA2776927C (en) 2014-08-12
EP1797893A2 (en) 2007-06-20
EP2258728A1 (en) 2010-12-08
DK1735349T3 (da) 2010-12-06
US8012483B2 (en) 2011-09-06
CN1968965A (zh) 2007-05-23
US20160131661A1 (en) 2016-05-12
CN103908669B (zh) 2017-07-04
PT1797893E (pt) 2010-07-14
CA2776927A1 (en) 2005-10-27
AU2005233361B2 (en) 2011-02-24
CN1968965B (zh) 2015-12-16
ATE463254T1 (de) 2010-04-15
CY1110188T1 (el) 2015-01-14
CN103743898A (zh) 2014-04-23
JP2011099871A (ja) 2011-05-19
CN103743898B (zh) 2019-02-05
EP1797893A3 (en) 2007-06-27
US20140186360A1 (en) 2014-07-03
CA2562550A1 (en) 2005-10-27
CA2562550C (en) 2013-09-24
US20070286868A1 (en) 2007-12-13
PL1735349T3 (pl) 2011-03-31
EP1797893B1 (en) 2010-04-07
AU2005233361A1 (en) 2005-10-27
ES2357606T3 (es) 2011-04-28
US20120039895A1 (en) 2012-02-16
WO2005100405A2 (en) 2005-10-27
US10222382B2 (en) 2019-03-05
SI1735349T1 (sl) 2010-12-31
DE602005023428D1 (de) 2010-10-21
DK1797893T3 (da) 2010-08-02
JP4891228B2 (ja) 2012-03-07
DE602005020474D1 (de) 2010-05-20
ATE480778T1 (de) 2010-09-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2362222T3 (es) Método de valoración del riesgo de enfermedades cardiovasculares isquémicas usando conjugados de fosforilcolina.
Le Quintrec et al. Contactin-1 is a novel target antigen in membranous nephropathy associated with chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy
ES2317845T3 (es) Uso de un polipeptido para detectar un estado patologico asociado con la esclerosis en placas.
ES2709048T3 (es) Anticuerpos y vacunas para su uso en métodos terapéuticos y diagnósticos para trastornos relacionados con alfasinucleína
Carbone et al. Evidence on the pathogenic role of auto-antibodies in acute cardiovascular diseases
Grönlund et al. Higher immunoglobulin E antibody levels to recombinant Fel d 1 in cat‐allergic children with asthma compared with rhinoconjunctivitis
JP7204235B2 (ja) 活性型α－シヌクレインに結合する抗体
JP2012519190A (ja) 誤って折り畳まれたプリオンタンパク質に特異的な抗体およびエピトープ
JP6588893B2 (ja) 卵巣がんの自己抗体バイオマーカー
Blank et al. Overlapping humoral autoimmunity links rheumatic fever and the antiphospholipid syndrome
Lee et al. Dual peptide-dendrimer conjugate inhibits acetylation of transforming growth factor β-induced protein and improves survival in sepsis
ES2608002T3 (es) Métodos y composiciones para tratar y detectar enfermedades mediadas por SOD1 mal plegada
US20100278836A1 (en) Diagnostic and therapeutic methods and compositions for cardiovascular disease