ES2349717T3 - Uso de material paramagnético en la purificación y manipulación de ácidos nucleicos. - Google Patents
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Abstract
Uso de al menos una partícula de unión a ácido nucleico que consiste sólo en material paramagnético en una solución ácida para enlazar electrostáticamente de manera reversible directamente al menos una molécula de ácido nucleico en la solución ácida.
Description
Uso de material paramagnético en la purificación
y manipulación de ácidos nucleicos.
El acceso a los componentes celulares como
ácidos nucleicos es imperativo para una diversidad de metodologías
de biología molecular. Estas metodologías incluyen el secuenciado de
ácido nucleicos, detección directa de secuencias particulares de
ácidos nucleicos por hibridación de ácidos nucleicos y técnicas de
amplificación de secuencias de ácidos nucleicos.
La preparación y purificación de ADN plásmido de
doble cadena (ds) de pureza elevada, ADN de fago de cadena única
(ss), ADN cromosomal, fragmentos de ADN purificado por gel de
agarosa y ARN es de importancia crítica en biología molecular. De
forma ideal, un método para purificar ácidos nucleicos debe ser
sencillo, rápido y requerir poca o ninguna manipulación adicional
de muestras. Los ácidos nucleicos producidos por este método deben
ser inmediatamente utilizables para transformación, análisis de
restricción, ligado o secuenciado. Un método con todas estas
características será extremadamente atractivo en la automatización
de la preparación de muestras de ácidos nucleicos, un objetivo de
los laboratorios de investigación y diagnóstico.
Normalmente, la preparación de ADN de plásmido a
partir de precipitados en alcohol en bruto es laboriosa, muy a
menudo utilizando gradientes de CsCl, filtración por gel,
cromatografía de intercambio iónico o RNasa, proteinasa K y etapas
repetidas de precipitación en alcohol. Estos métodos requieren
también una considerable preparación de muestras posteriores para
separar CsCl y otras sales, bromuro de etidio y alcohol. Se ofrecen
argumentos similares cuando se usa cualquiera de estos métodos para
purificar fragmentos de ADN. Un problema adicional con estos
métodos es que con el ADN se pueden purificar conjuntamente
componentes celulares pequeños con carga negativa. Por tanto, el
ADN puede tener un nivel no deseable de contaminación.
Los ácidos nucleicos pueden ser purificados
también usando fases sólidas. Las técnicas convencionales de
extracción de fases sólidas han utilizado superficies que (1) no
consiguen atraer ni mantener suficientes cantidades de moléculas de
ácidos nucleicos debido a que el diseño de la superficie permite una
fácil recuperación de las moléculas de ácidos nucleicos durante la
elución, o bien (2) adhieren excesivamente moléculas de ácidos
nucleicos a la superficie, obstaculizando así la recuperación de
moléculas de ácidos nucleicos durante la elución. Las superficies
metálicas convencionales que provocan estos problemas cuando son
utilizadas en una extracción en fase sólida incluyen ciertas
superficies de sílice como vidrio y Celite. La unión adecuada a
ácidos nucleicos de estos tipos de superficies puede ser conseguida
solamente utilizando concentraciones elevadas de caotropos o
alcoholes que son generalmente tóxicos, cáusticos y/o caros. Por
ejemplo, es conocido que el ADN se une a polvos de vidrio triturado
y a filtros de fibra de vidrio en presencia de caotropos. Los iones
caotrópicos normalmente son separados por lavado con alcohol, y los
ADN son eluidos con soluciones de baja concentración salina o agua.
De forma importante, el ARN o la proteína no se unen. Sin embargo,
un inconveniente grave del uso de polvo de vidrio triturado es que
su capacidad de unión es baja. Además, los polvos de vidrio a
menudo adolecen de una recuperación inconsistente, incompatibilidad
con tampones de boratos y tendencia a mellar ADN grandes. Otras
sílices, como el gel de sílice y gránulos de sílice, no son
adecuadas para la unión y recuperación de ADN. Actualmente, la fase
sólida de elección para la extracción de la fase sólida de ADN es
Celite como la encontrada en
Prep-A-Gene® y Laboratorios
Bio-Rad. Como con los polvos de vidrio triturado,
son necesarias concentraciones elevadas de caotropos para una unión
adecuada del ADN a la
Celite.
Celite.
Sin embargo, la hidratación de sustancias de
sílice ha dado lugar en algunos casos a la eliminación de la
necesidad de estas concentraciones elevadas de caotropos para eluir
el ADN unido de la sustancia de sílice es expuesta en referencias
como los documentos EP 0512767, EP 0585660, US 5.674.997 y EP
0832897.
Hay numerosos protocolos para purificar ADN. Por
ejemplo, la patente de EE.UU. 4.923.978 describe un procedimiento
para purificar ADN en el que una solución de proteína y ADN se hace
pasar sobre un soporte hidroxilado y seguidamente la proteína es
unida y el ADN es eluido. La patente de EE.UU. 4.935.342 describe la
purificación de ADN mediante la unión selectiva de ADN a
intercambiadores aniónicos y posterior elución. La patente de EE.UU.
4.946.952 describe el aislamiento de ADN por precipitación con
cetonas solubles en agua. Un procedimiento de purificación de ADN
usando caotropos y ADN dializado es descrito en la patente de EE.UU.
4.900.677.
Se han utilizado también diátomos para la
purificación de ácidos nucleicos, como evidencia la patente de
EE.UU. nº 5.234.809 de Boom y cols. y la patente de EE.UU. nº
5.075.430 de Little y cols.
Todavía, una técnica adicional utilizada para la
purificación de ácidos nucleicos es la unión a partículas
paramagnéticas específicamente adaptadas. Ejemplos de estas técnicas
se pueden encontrar en referencias como la memoria descriptiva
europea EP 0446260 B1 y patente de EE.UU. 5.512.439 (Homes y cols.)
que describen partículas superparamagnéticas monodispersas que
tienen una desviación típica del tamaño de partículas de menos de
5%. Cada partícula porta una pluralidad de moléculas de un
oligonucleótido, en la que cada oligonucleótido tiene una sección
que sirve como una sonda para una molécula de ácido nucleico diana
de interés.
\newpage
La patente de EE.UU. nº 4.672.040 (Josephson) y
la patente de EE.UU. nº 4.695.393 (Whitehead y cols.) describen
partículas magnéticamente sensibles para ser usadas en sistemas para
separar ciertas moléculas. Las partículas tienen un núcleo de óxido
metálico rodeado por un revestimiento de silicona estable al que
pueden estar acopladas moléculas orgánicas y/o biológicas.
El documento EP 0818461 describe un método para
el aislamiento de ácido ribonucleico, que comprende disolver una
muestra biológica en una solución ácida que contiene una sal de
litio y un agente caotrópico, y poner en contacto la muestra
biológica disuelta con partículas complejas hechas de un portador de
unión a ácido nucleico, como sílice, y un material magnético.
El documento US 5.523.231 describe la
precipitación de moléculas de ácidos nucleicos de una solución
mediante la agregación alrededor de gránulos paramagnéticos.
La patente de EE.UU. nº 3.970.518 (Giaever)
describe un método para clasificar y separar una población de
células seleccionadas de una población de células mezcladas. El
método utiliza partículas magnéticas pequeñas que están revestidas
con un anticuerpo a las poblaciones de células seleccionadas.
La patente de EE.UU. nº 4.141.687 (Forrest y
cols.) describe un aparato automático y un método para ensayar
muestras de fluidos. El aparato utiliza un material en forma de
partículas con un reactivo unido al mismo. El material en forma de
partículas es magnético, y el reactivo es una sustancia que toma
parte en una reacción en la mezcla de reacción.
La patente de EE.UU. nº 4.230.685 (Senyei y
cols.) describe un método para la separación magnética de células.
El método utiliza microesferas magnéticamente sensibles que están
revestidas con Proteína A de estafilococos a la que está unido un
anticuerpo.
La patente de EE.UU. nº 4.774.265 (Ugelstad y
cols.) describe un procedimiento para preparar partículas polímeras
magnéticas. Las partículas son partículas de polímero compactas o
porosas tratadas con una solución de sales de hierro.
La patente de EE.UU. nº 5.232.782 (Charmot)
describe microesferas magnetizables de
"núcleo-corteza" que tienen un núcleo de
relleno magnetizable un una corteza de organopolisiloxano
reticulado.
La patente de EE.UU. nº 5.395.688 (Wang y cols.)
describe partículas polímeras fluorescentes magnéticamente sensibles
que tienen un núcleo polímero revestido uniformemente con una capa
de óxido metálico magnéticamente sensible que contiene polímero.
La patente de EE.UU. nº 5.491.068 y la patente
de EE.UU. nº 5.695.946 (Benjamin y cols.) describen un método de
ensayo para detectar la presencia de bacterias usando gránulos
magnéticos con anticuerpos específicos inmovilizados en los
mismos.
La patente de EE.UU. nº 5.536.644 (Ullman y
cols.) describe un método de separación de partículas. El método
utiliza partículas magnéticas con grupos funcionales superficiales
y, opcionalmente, un revestimiento superficial adicional.
La memoria descriptiva de la patente europea EP
0444120 B1 (Hornes y cols.) describe un método para la detección de
ARN o ADN diana. El método utiliza partículas magnéticas que portan
una sonda de ADN unida en 5' de cadena única capaz de unirse a ARN o
ADN diana.
La publicación internacional nº WO 96/18731
(Deggerdal y cols.) describe un método para aislar ácido nucleico de
una muestra usando un soporte sólido en forma de partículas y un
detergente aniónico.
La patente de EE.UU. nº 5.705.628 (Hawkins)
describe un método para la purificación y aislamiento de ADN usando
partículas magnéticas con superficies revestidas con grupos
funcionales.
Con el fin de proporcionar una técnica más
efectiva y eficiente para la purificación y manipulación de ácidos
nucleicos, la presente invención se refiere al uso de una partícula
que consiste sólo en material paramagnético en una solución ácida
para enlazar electrostáticamente de manera reversible directamente
una molécula de ácido nucleico. El material paramagnético está en
forma de partícula paramagnética que consiste sólo en material
paramagnético.
La partícula paramagnética usada en la presente
invención consiste sólo en material paramagnético. La partícula
paramagnética está en una solución ácida, esto es, una solución que
tiene un pH inferior a aproximadamente 7,0.
Los solicitantes encontraron que, cuando están
en un entorno ácido, las partículas paramagnéticas se unirán
reversiblemente a las moléculas de ácidos nucleicos sin necesidad de
un detergente aniónico, como se expone en la publicación
internacional nº WO 96/18731. Aunque no se desean vinculaciones
particulares de carácter teórico, los solicitantes creen que un
entorno ácido aumenta la naturaleza electropositiva de la parte de
hierro de las moléculas, y por tanto aumenta la unión de las
moléculas a la parte electronegativa de fosfato de una molécula de
ácido nucleico.
Como se usa en la presente memoria descriptiva,
la expresión "partículas paramagnéticas" significa partículas
que son capaces de tener un momento magnético conferido a las mismas
cuando se colocan en un campo magnético. Por lo tanto, estas
partículas paramagnéticas, cuando están en este campo magnético, son
desplazables bajo la acción de este campo. Este movimiento es útil
para desplazar las moléculas de ácidos nucleicos unidas para
diferentes aspectos del protocolo de tratamiento de las muestras u
otras manipulaciones. Por tanto, las moléculas de ácidos nucleicos
unidas a las partículas paramagnéticas pueden ser desplazadas a
diferentes zonas para ser expuestas a diferentes reactivos y/o
estados con un contacto directo mínimo debido a la aplicación de una
fuerza magnética.
Los solicitantes han encontrado que las
partículas paramagnéticas útiles en la presente invención no es
necesario que sean estructuras complicadas. Por tanto, las
partículas de hierro son útiles en la presente invención, y el
hierro puede ser óxido de hierro de formas como hidróxido férrico y
óxido ferroso-férrico, que tienen una baja
solubilidad en un entorno acuoso. Otras partículas de hierro como el
sulfuro de hierro y el cloruro de hierro pueden ser también
adecuadas para la unión y extracción de ácidos nucleicos usando las
condiciones descritas en la presente memoria descriptiva.
Análogamente, la forma de las partículas
paramagnéticas no es crítica para la presente invención. Por tanto,
las partículas paramagnéticas pueden ser de diversas formas,
incluidas, por ejemplo, esferas, cubos, oval, en forma de cápsulas,
en forma de comprimidos, en formas al azar no descritas, etc., y
pueden ser de forma uniforme o de formas no uniformes. Cualquiera
que sea la forma de una partícula paramagnética, su diámetro en su
punto más ancho está generalmente en el intervalo de aproximadamente
0,5 \mum a aproximadamente 20 \mum.
El entorno ácido en el que las partículas se
unen de forma efectiva y reversible a las moléculas de ácidos
nucleicos puede ser proporcionado a través de una diversidad de
medio. Por ejemplo, las partículas paramagnéticas pueden ser
añadidas a una solución ácida, o puede ser añadida una solución
ácida a las partículas. Alternativamente, una solución o entorno en
el que están colocadas las partículas paramagnéticas puede ser
acidificado mediante la adición de un agente acidificante como ácido
clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido acético y ácido cítrico.
Con la condición de que el entorno en que están
colocadas las partículas paramagnéticas sea de un pH menor que
aproximadamente 7,0, las partículas se unirán reversiblemente a las
moléculas de ácidos nucleicos. Además de ello, los solicitantes han
encontrado que la capacidad de unión a ácido nucleico de las
partículas paramagnéticas aumenta a medida que disminuye el pH.
Se cree que para las partículas paramagnéticas
útiles en la presente invención el entorno ácido permite eliminar
la necesidad de detergentes, como se expone en ciertas referencias
como la solicitud internacional nº WO 96/18731. Aunque no se desean
vinculaciones de carácter teórico, el solicitante cree que no son
necesarios detergentes para la presente invención, porque la
solución ácida de la presente invención favorece la unión de
partículas paramagnéticas electropositivas a las moléculas de
ácidos nucleicos electronegativas, de forma preferente sobre otras
sustancias en una muestra, como en inhibidores de hibridación y
amplificación de ácidos nucleicos. Por el contrario, la utilización
de detergentes, como se expone en referencias como la publicación
internacional nº WO 96/18731, es para solubilizar inhibidores de
hibridación y amplificación de ácidos nucleicos con el fin de que
estos inhibidores no interfieran con la unión de las moléculas de
ácidos nucleicos a partículas paramagnéticas.
Como se estableció anteriormente, en un entorno
ácido, las partículas paramagnéticas electropositivas, como las
partículas de óxido férrico, se unirán a moléculas electronegativas
de ácidos nucleicos. Por tanto, otros materiales en el entorno,
como inhibidores de hibridación y amplificación de ácidos nucleicos,
pueden ser separados de las moléculas unidas de ácidos nucleicos.
Esta separación se puede realizar por medios conocidos por los
expertos en la técnica, como centrifugación, filtración o aplicación
de una fuerza magnética.
Las moléculas unidas de ácido nucleico pueden
ser seguidamente eluidas en un tampón apropiado para una
manipulación adicional, como reacciones de hibridación o
amplificación. Esta elución se puede realizar calentando el entorno
de las partículas con ácidos nucleicos unidos y/o elevando el pH de
este entorno. Los agentes que pueden ser usados para ayudar a la
elución de ácidos nucleicos de partículas paramagnéticas incluyen
soluciones básicas como hidróxido de potasio, hidróxido de sodio o
cualquier compuesto que aumente el pH del entorno hasta un alcance
suficiente para que el ácido nucleico electronegativo sea desplazado
de las partículas.
Los siguientes ejemplos ilustran realizaciones
específicas de la invención descrita en este documento.
Este ejemplo fue diseñado para comparar la unión
de ácidos nucleicos con óxido de hierro para unir un ácido nucleico
con circonio a tres niveles dianas de aportación.
Se usaron los siguientes materiales en este
ejemplo.
- una preparación de Chlamydia
trachomatis
- tampón de fosfato
- tampón para muestras para el sistema
BDProbeTec® ET
- partículas de óxido de hiero hidratado
FeO(OH) (malla 30 = 300-1200 micrómetros)
- óxido de circonio hidratado
- glicina HCl
- pocillos de cebado y amplificación de
Chlamydia trachomatis para el sistema BDProbeTec® ET
- alcohol etílico.
El procedimiento seguido para los ejemplos fue
como sigue.
Se prepararon soluciones de Chlamydia
trachomatis a 5.000 estructuras elementales (EB)/ml, 1.000
EB/ml, 500 EB/ml y 0 EB/ml en tampón de fosfato y cada solución fue
transferida a doce tubos de centrifugadora/nivel punteado. Los tubos
fueron calentados a 105ºC durante 30 minutos. Partículas de óxido de
hierro hidratado con DiH_{2}O fueron suministradas por gravedad a
seis tubos a cada uno de los niveles punteados de Chlamydia
trachomatis a 10 mg/tubo. Se suministraron partículas de
circonio hidratado en tres tubos que contenía cada nivel punteado de
Chlamydia trachomatis a 10 mg/tubo. No se añadieron
partículas a los tres tubos de cada nivel. Se suministraron 30
\mul de glicina-HCl 3 M a cada tubo anteriormente
descrito, y los tubos se colocaron en un dispositivo basculador de
extremo sobre extremo durante 30 minutos. Tres tubos/nivel punteado
de los tubos de óxido de hierro, los tubos de circonio hidratado y
los tubos que no contenían partículas fueron centrifugados para
separar, y fueron lavados una vez con 1 ml/tubo de EtOH al 95%, una
vez con 1 ml/tubo de DiH_{2}O y se volvieron a poner en suspensión
con 1 ml/tubo de tampón para muestras. Los otros tres tubos/nivel
punteado que contenían óxido de hierro fueron magnéticamente
separados colocando un imán adyacente al tubo, las muestras se
extrajeron y los tubos se lavaron con 1,0 ml de EtOH/tubo. La
solución se separó magnéticamente durante 3,0 minutos y se añadió
1,0 ml de DiH_{2}O a cada tubo. La solución se separó
magnéticamente durante 3,0 minutos y se añadió 1,0 ml de tampón para
muestras a cada tubo. Los tubos se calentaron durante 30 minutos a
105ºC y se amplificaron en el sistema de Chlamydia
trachomatis BDProbeTec® ET. El sistema BDProbeTec® ET es un
sistema semi-automatizado, públicamente descrito
para la amplificación homogénea y la detección en tiempo real de
moléculas dianas de ácidos nucleicos.
Los resultados de este ejemplo fueron como
sigue.
\vskip1.000000\baselineskip
Las conclusiones extraídas a partir de los
resultados fueron como sigue.
Los valores MOTA (suma de unidades individuales
de medición a lo largo del tiempo) son una unidad interna
fluorescente de Becton Dickinson con un nivel de corte establecido
para positividad a 1.000 MOTA. El óxido de hierro magnéticamente
separado produjo la misma positividad que las partículas de circonio
hidratado. Los tubos que no contenían partículas no produjeron
resultados apreciables incluso al nivel de 5.000 EB/ml. Este
experimento demostró que el óxido de hierro hidratado se une al ADN
bajo condiciones ácidas.
\vskip1.000000\baselineskip
Este ejemplo se realizó para determinar si el
ADN podría ser eluido y desnaturalizado usando hidróxido de potasio
(KOH) solo sin calor. Además, el ejemplo se realizó para determinar
que tampón de neutralización/muestra produce valores óptimos de
MOTA.
Los materiales usados en este ejemplo fueron
como sigue.
- una solución de KOH 70 mM
- un tampón para muestras de Chlamydia
trachomatis, Bicine 2X 100 mM (20% DMSO, 18% glicerol, 0,06%
Proclina, Tween 20 0,013 mM y KPO_{4} 60 mM)
- un tampón para muestras de Chlamydia
trachomatis, Bicine 2X 200 mM
- un tampón para muestras de Chlamydia
trachomatis, Bicine 2X 300 mM
- un tampón para muestras de Chlamydia
trachomatis (10% DMSO, 9% glicerol, 0,03% Proclina, Tween 20
0,065 mM y KPO_{4} 30 mM)
- partículas de circonio hidratado
- partículas de óxido de hierro hidratado
- una preparación de Chlamydia
trachomatis
- alcohol etílico (EtOH) al 95%
- tampón de fosfato.
\vskip1.000000\baselineskip
El procedimiento seguido para este ejemplo fue
como sigue.
\newpage
Se prepararon soluciones de Chlamydia
trachomatis a 1.000 EB/ml y 5.000 EB/ml en tampón de fosfato y
se suministraron a 32 tubos de centrifugadora de 2 ml/nivel punteado
a 1,0 ml/tubo. Se suministró óxido de hierro hidratado a 16
tubos/nivel punteado a 10 mg/tubo y se añadieron a cada tubo 60
\mul de glicina-HCl 3 M. Se suministraron
partículas de circonio hidratado a 16 tubos/nivel punteado a 10
mg/tubo y se añadieron a cada tubo 30 \mul de
glicina-HCl 3 M. Los tubos se mantuvieron en un
dispositivo rotatorio de extremo sobre extremo durante 30 minutos.
Los tubos de óxido de hierro se separaron magnéticamente y
seguidamente se lavaron con 1,0 ml de EtOH y seguidamente 1,0 ml de
DiH_{2}O. Los tubos de partículas de circonio se
centrifugaron-lavaron una vez con un ml de EtOH y
seguidamente con un ml de DiH_{2}O. A doce tubos de cada tipo de
partículas y nivel punteado se añadieron 500 \mul de KOH 70 mM
durante 15 minutos. De los doce tubos, a cuatro tubos de ambos tipos
de partículas y nivel punteado se añadieron tampón para muestras de
Chlamydia trachomatis 2X 100 mM (agua/fosfato) a cada tubo a
500 \mul. De los doce tubos, a cuatro tubos de ambos tipos de
partículas y nivel punteado se añadieron tampón para muestras de
Chlamydia trachomatis 2X 200 mM (agua/fosfato) a cada tubo a
500 \mul. De los doce tubos, a cuatro tubos de ambos tipos de
partículas y nivel punteado se añadieron tampón para muestras de
Chlamydia trachomatis 2X 300 mM (agua/fosfato) a cada tubo a
500 \mul. A los cuatro tubos restantes se añadió 1,0 ml de tampón
para muestras. Dos tubos de cada tipo de partículas, nivel punteado
y tipo de tampón se colocaron en un gaño de agua en ebullición
durante cinco minutos. El fluido de la muestra fue seguidamente
amplificado de forma inmediata en el sistema BDProbeTec® ET para
Chlamydia trachomatis.
Los resultados de este ejemplo fueron como
sigue.
\vskip1.000000\baselineskip
Las conclusiones extraídas a partir de estos
resultados fueron como sigue.
Los resultados indican que el ADN pudo ser
eluido y desnaturalizado a partir de partículas de óxido de hierro
hidratado y óxido de circonio hidratado con KOH solo (sin calor) y
que los tampones de neutralización que produjeron valores MOTA
óptimos fueron los tampones de neutralización Bicine 2X 200 y 300
mM.
\vskip1.000000\baselineskip
Este ejemplo se realizó para determinar si el
óxido de hierro hidratado a pH bajo puede ser usado para extraer ADN
de Chlamydia trachomatis a partir de muestras de orina
punteadas.
Los materiales usados en este ejemplo fueron
como sigue.
- muestras de orina
- preparaciones de Chlamydia
trachomatis
- tampón para muestras
- partículas de circonio hidratado
- partículas de óxido de hierro hidratado
- alcohol etílico (EtOH) al 95%
- glicina HCl
- pocillos de amplificación y pocillos de
cebador de sistema BDProbeTec® ET de Chlamydia
trachomatis.
\vskip1.000000\baselineskip
El procedimiento seguido para este ejemplo fue
como sigue.
Cada una de diez muestras de orina fue dividida
en dos tres partes alícuotas de 2 ml y las muestras de orina fueron
punteadas con preparación de Chlamydia trachomatis a 1.000
EB/ml, 2.500 EB/ml y 5.000 EB/ml. Las muestras de orina se
dividieron en volúmenes de 1,0 ml en tubos de centrifugadora de 2
ml. Seguidamente se suministraron 10 mg de partículas de óxido de
hierro hidratado en un tubo a cada nivel punteado para cada muestra.
Se añadieron 60 \mul de glicina-HCl 3 M a cada
tubo de óxido de hierro. Los tubos se mantuvieron en un dispositivo
rotatorio de extremo sobre extremo durante 30 minutos. Además, se
suministraron 10 mg de partículas de circonio hidratado en un tubo a
cada nivel punteado para cada muestra. SE añadieron 30 \mul de
glicina-HCl 3 M a cada tubo que contenía circonio
hidratado. Los tubos se mantuvieron en un dispositivo rotatorio de
extremo sobre extremo durante 30 minutos. Los tubos que contenían
partículas de circonio hidratado fueron
lavados-centrifugados a 10.000 g usando 1 ml de EtOH
y seguidamente 1 ml de DiH_{2}O. Los tubos se volvieron a poner en
suspensión con 1,0 ml de tampón para muestras. Los tubos que
contenían partículas de óxido de hierro fueron magnéticamente
separados, y seguidamente lavados usando 1 ml de EtOH y seguidamente
1,0 ml de DiH_{2}O y los tubos se volvieron a poner en suspensión
con 1,0 ml de tampón para muestras. El fluido de muestra de cada
tubo se llevó a ebullición durante 5 minutos y seguidamente se
amplificó usando el sistema BDProbeTec® ET para Chlamydia
trachomatis.
Los resultados de este ejemplo fueron como
sigue.
\vskip1.000000\baselineskip
Las conclusiones extraídas a partir de los
resultados anteriores fueron como sigue.
La velocidad de positividad detectable cae al
mismo nivel con las partículas de circonio hidratado que con las
partículas de óxido de hierro hidratado. Esto indica un rendimiento
similar con los dos tipos de partículas. El óxido de hierro a un pH
bajo puede extraer ADN de muestras de orina.
\vskip1.000000\baselineskip
Este ejemplo se realizó para determinar si el
óxido de hierro hidratado a un pH bajo puede ser usado para extraer
ADN de Chlamydia trachomatis a partir de muestras de plasma
punteadas. Además, este ejemplo se realizó para comparar un método
de extracción de ADN de plasma usando partículas de circonio
hidratado con un método de extracción de ADN de plasma usando
partículas de óxido de hierro hidratado.
Los materiales usados para este ejemplo fueron
como sigue.
- tampón para muestras de Chlamydia
trachomatis, Bicine 2X 300 mM
- partículas de óxido de hierro hidratado
- partículas de óxido de circonio hidratado
- isotiocianato de guanidina
- preparación madre de Chlamydia
trachomatis
- pocillos de amplificación y pocillos de
cebador BDProbeTec® ET de Chlamydia trachomatis
- pocillos de cebador BDProbeTec® ET testigo de
amplificación interno (IAC) y pocillos de amplificación
- KOH 150 mM
- muestras de plasma
- alcohol etílico al 95%.
\vskip1.000000\baselineskip
Los procedimientos seguidos para este ejemplo
fueron como sigue.
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadió 1 ml de DiH_{2}O a ocho tubos de
centrifugadora de 2 ml que contenían 40 mg de partículas de óxido de
hierro hidratado. Las muestras de plasma fueron punteadas con
preparación de Chlamydia trachomatis a 9.000 EB/300 \mul,
6.000 EB/300 \mul, 3.000 EB/300 \mul y 1.500 EB/300 \mul.
Seguidamente se añadieron 300 \mul de cada muestra de plasma
punteadas a los tubos que contenían partículas de óxido de hierro
hidratado. Los tubos se calentaron a 105ºC durante 30 minutos.
Seguidamente se añadieron 80 \mul de ácido acético glacial a cada
tubo, y los tubos se colocaron en un dispositivo rotatorio de
extremo sobre extremo durante 30 minutos. Los tubos se colocaron
seguidamente en una estantería de tubos magnéticos y se retiró el
fluido de muestra tratada. Los tubos fueron magnéticamente separados
y seguidamente se lavaron con 1,0 ml de ácido acético 25 mM dos
veces. El ADN fue eluido a partir de las partículas de óxido de
hierro hidratado con 500 \mul de KOH 150 mM durante 15 minutos.
Las soluciones se neutralizaron con 500 \mul de tampón 2X 300 mM.
Las muestras se colocaron en un baño de agua en ebullición durante
15 minutos. Las muestras fueron seguidamente amplificadas usando el
sistema BDProbeTec® ET para Chlamydia trachomatis.
\vskip1.000000\baselineskip
Las dos mismas muestras de plasma del
procedimiento de óxido de hierro anterior fueron suministradas a 300
\mul/tubo en cuatro tubos de centrifugadora de 2,0 ml para cada
muestra de plasma. Se añadió isotiocianato de guanidina (GITC) 5
molar a cada tubo a 700 \mul. Los cuatro tubos de cada muestra
fueron punteados con preparación de Chlamydia trachomatis a
9.000 EB/300 \mul, 6.000 EB/300 \mul, 3.000 EB/300 \mul y
1.500 EB/300 \mul, respectivamente, y los tubos se mantuvieron a
temperatura ambiente durante 15 minutos. Se preparó una suspensión
de partículas de óxido de circonio hidratado combinando 10 mg de
partículas de óxido de circonio con 30 \mul de
glicina-HCl 3 M. Treinta \mul de esta suspensión
fueron añadidos a cada tubo y los tubos se colocaron en un
dispositivo rotatorio de extremo sobre extremo durante 30 minutos.
Los tubos se centrifugaron a 10.000 g durante 3,0 minutos, la
materia sobrenadante se separó y se añadió 1,0 ml de GITC 2 M a cada
tubo. Los tubos se centrifugaron a 10.000 g durante 3,0 minutos, la
materia sobrenadante se separó y se añadió 1,0 ml de 80% de alcohol
etílico/20% de tampón Tris 50 mM a cada tubo. Los tubos se lavaron
dos veces adicionales centrifugando a 10.000 g durante 3,0 minutos,
extrayendo la materia sobrenadante y añadiendo 1,0 ml de DiH_{2}O.
El ADN se eluyó en 1,0 ml de KOH 150 mM/tampón para muestras Bicine
2X 300 mM. Las muestras se colocaron en un baño de agua en
ebullición durante cinco minutos. Las muestras se centrifugaron a
3.200 g y se amplificaron usando el sistema BDProbeTec® ET para
Chlamydia trachomatis.
\vskip1.000000\baselineskip
Se punteó tampón para muestras con preparación
de Chlamydia trachomatis a 9.000 EB/300 \mul, 6.000 EB/300
\mul, 3.000 EB/300 \mul y 1.000 EB/300 \mul. Las muestras se
colocaron en un baño de agua en ebullición durante cinco minutos y
se amplificaron usando el sistema BDProbeTec® ET para Chlamydia
trachomatis.
Los resultados de este ejemplo fueron como
sigue.
Las conclusiones extraídas a partir de los
resultados anteriores fueron como sigue.
Usando un valor de positividad MOTA de 1.000, el
óxido de hierro hidratado fue capaz de extraer ADN de muestras de
plasma hasta 3.000 EB/300 \mul.
\vskip1.000000\baselineskip
Este ejemplo fue diseñado para comparar dos
partículas de captura de ácidos nucleicos: hidróxido férrico (óxido
férrico hidratado) y óxido ferroso-férrico bajo
condiciones de unión neutras y ácidas.
Los materiales usados para este ejemplo fueron
como sigue.
- tampón de fosfato
- partículas de hidróxido férrico
(FeOH(OH))
- partículas de óxido
ferroso-férrico (Fe_{3}O_{4})
- preparación de Chlamydia
trachomatis
- pocillos de amplificación y pocillos de
cebador BDProbeTec® ET de Chlamydia trachomatis
- pocillos de cebador BDProbeTec® ET testigo de
amplificación interno (IAC) y pocillos de amplificación
- ácido acético
- KOH 150 mM
- tampón para muestras de Chlamydia
trachomatis, Bicine 2X 300 mM.
\vskip1.000000\baselineskip
El procedimiento seguido para este ejemplo fue
como sigue.
Se preparó polvo de hidróxido férrico
(FeO(OH)) triturando con un dispositivo molcajete un material
de malla 30-50 hasta dar un polvo fino. El polvo se
dejó sedimentar en una solución acuosa durante cuatro minutos. La
materia sobrenadante se extrajo y el material se dejó sedimentar
durante cincuenta minutos adicionales. Seguidamente el material
sedimentado fue magnéticamente separado y fue magnéticamente lavado
con DiH_{2}O. El material fue seguidamente filtrado en papel de
filtro de 20 \mum y se secó durante una noche a 37ºC. Seguidamente
se transfirieron 60 \mug del material a un tubo que contenía 480
\mul de DiH_{2}O. Esta suspensión fue dispersada en seis tubos
de centrifugadora de 2 ml. También se transfirieron 240 \mug de
material de FeO(OH) seco a un tubo que contenía 480 \mul de
DiH_{2}O. La suspensión creada se transfirió a seis tubos de
centrifugadora de 2 ml.
Además, se transfirieron 60 \mug de
Fe_{3}O_{4} (dimensionados a 88-92% de paso por
un tamiz 325) a un tubo que contenía 480 \mul de DiH_{2}O. La
suspensión creada fue suministrada a seis tubos de centrifugadora de
2 ml. Se creó otra suspensión transfiriendo 240 mg de material de
Fe_{3}O_{4} seco a un tubo que contenía 480 \mul de
DiH_{2}O. Esta suspensión fue seguidamente transferida a seis
tubos de centrifugadora de 2 ml. Se prepararon soluciones de
Chlamydia trachomatis a 0 EB/ml, 1.000 EB/ml y 4.000 EB/ml en
tampón de fosfato. Cada concentración de solución ce Chlamydia
trachomatis fue suministrada a dos tubos de cada tipo de
partículas. Los tubos se calentaron a 105ºC durante 30 minutos. Se
añadió una parte alícuota de 80 \mul de ácido acético a un tubo de
cada tipo de partículas, y los tubos se mantuvieron en un
dispositivo rotatorio de extremo sobre extremo durante 30 minutos.
Seguidamente los tubos fueron magnéticamente separados y lavados con
1.0 ml de ácido acético 25 mM/lavado dos veces. Se añadió una parte
alícuota de KOH 150 mM a cada tubo a 500 \mul/tubo durante 15
minutos y se añadieron 500 \mul de tampón para muestras Bicine 2X
300 mM a cada tubo y los tubos se colocaron en un baño de agua en
ebullición durante cinco minutos. El fluido de muestra fue
amplificado usando el sistema BDProbeTec® ET para Chlamydia
trachomatis.
Los resultados a partir de este ejemplo fueron
como sigue.
\vskip1.000000\baselineskip
Las conclusiones extraídas a partir de los
resultados anteriores fueron como sigue.
Usando un valor de positividad MOTA de 1.000, El
Fe_{3}O_{4} puede extraer ácido nucleico de 1.000 EB/ml, que es
comparable a la capacidad de extracción de FeO(OH) con ambas
masas. Un volumen de ácido negativo ejerció un impacto negativo
tanto sobre el número de valores positivos al nivel inferior de
1.000 EB/ml como sobre los valores MOTA.
Claims (4)
1. Uso de al menos una partícula de unión a
ácido nucleico que consiste sólo en material paramagnético en una
solución ácida para enlazar electrostáticamente de manera reversible
directamente al menos una molécula de ácido nucleico en la solución
ácida.
2. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el
que el material paramagnético comprende hierro.
3. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el
que el material paramagnético se selecciona del grupo que consiste
en óxido de hierro, sulfuro de hierro y cloruro de hierro.
4. Uso de acuerdo con la reivindicación 3, en el
que el óxido de hierro es hidróxido férrico u óxido
ferroso-férrico.
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Families Citing this family (94)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6884357B2 (en) | 1995-02-21 | 2005-04-26 | Iqbal Waheed Siddiqi | Apparatus and method for processing magnetic particles |
| US6048734A (en) | 1995-09-15 | 2000-04-11 | The Regents Of The University Of Michigan | Thermal microvalves in a fluid flow method |
| US6872527B2 (en) * | 1997-04-16 | 2005-03-29 | Xtrana, Inc. | Nucleic acid archiving |
| WO1999040098A1 (de) * | 1998-02-04 | 1999-08-12 | Merck Patent Gmbh | Verfahren zur isolierung und aufreinigung von nucleinsäuren |
| JP4457425B2 (ja) * | 1998-09-08 | 2010-04-28 | アイシン精機株式会社 | モータの電機子コアとその電機子コアを用いたブラシ付直流モータ |
| US5973138A (en) * | 1998-10-30 | 1999-10-26 | Becton Dickinson And Company | Method for purification and manipulation of nucleic acids using paramagnetic particles |
| US20040005673A1 (en) | 2001-06-29 | 2004-01-08 | Kevin Jarrell | System for manipulating nucleic acids |
| US6936414B2 (en) * | 1999-12-22 | 2005-08-30 | Abbott Laboratories | Nucleic acid isolation method and kit |
| DE60137323D1 (de) * | 2000-05-19 | 2009-02-26 | Becton Dickinson Co | System und verfahren zur behandlung von magnetpartikeln in test-flüssigkeiten zum sammeln von dna und rna |
| US6672458B2 (en) * | 2000-05-19 | 2004-01-06 | Becton, Dickinson And Company | System and method for manipulating magnetically responsive particles fluid samples to collect DNA or RNA from a sample |
| US20050272085A1 (en) * | 2000-09-06 | 2005-12-08 | Hodge Timothy A | Methods for forensic and congenic screening |
| US20050239125A1 (en) * | 2000-09-06 | 2005-10-27 | Hodge Timothy A | Methods for genotype screening |
| US20050266494A1 (en) * | 2000-09-06 | 2005-12-01 | Hodge Timothy A | System and method for computer network ordering of biological testing |
| US7494817B2 (en) * | 2000-09-06 | 2009-02-24 | Transnet Yx, Inc. | Methods for genotype screening using magnetic particles |
| EP1978110B1 (en) * | 2000-09-06 | 2010-05-26 | Transnetyx, Inc. | Computer-based method and system for screening genomic DNA |
| US6692700B2 (en) | 2001-02-14 | 2004-02-17 | Handylab, Inc. | Heat-reduction methods and systems related to microfluidic devices |
| US6852287B2 (en) | 2001-09-12 | 2005-02-08 | Handylab, Inc. | Microfluidic devices having a reduced number of input and output connections |
| US7323140B2 (en) | 2001-03-28 | 2008-01-29 | Handylab, Inc. | Moving microdroplets in a microfluidic device |
| US8895311B1 (en) | 2001-03-28 | 2014-11-25 | Handylab, Inc. | Methods and systems for control of general purpose microfluidic devices |
| US7829025B2 (en) | 2001-03-28 | 2010-11-09 | Venture Lending & Leasing Iv, Inc. | Systems and methods for thermal actuation of microfluidic devices |
| US7010391B2 (en) | 2001-03-28 | 2006-03-07 | Handylab, Inc. | Methods and systems for control of microfluidic devices |
| US20030092029A1 (en) * | 2001-06-06 | 2003-05-15 | Lee Josephson | Magneitc-nanoparticle conjugates and methods of use |
| US20030040129A1 (en) * | 2001-08-20 | 2003-02-27 | Shah Haresh P. | Binding assays using magnetically immobilized arrays |
| BRPI0310060B8 (pt) | 2002-05-17 | 2021-07-27 | Becton Dickinson Co | sistema automatizado para isolar, amplificar e detectar uma seqüência de ácido nucléico alvo ou uma proteína |
| US20040157219A1 (en) * | 2003-02-06 | 2004-08-12 | Jianrong Lou | Chemical treatment of biological samples for nucleic acid extraction and kits therefor |
| US7601491B2 (en) | 2003-02-06 | 2009-10-13 | Becton, Dickinson And Company | Pretreatment method for extraction of nucleic acid from biological samples and kits therefor |
| WO2005011867A2 (en) | 2003-07-31 | 2005-02-10 | Handylab, Inc. | Processing particle-containing samples |
| JP2007504835A (ja) * | 2003-09-12 | 2007-03-08 | バイオコントロール システムズ，インコーポレイティド | 微生物の濃縮、および検出のための方法、組成物、ならびにキット |
| US20080305048A1 (en) * | 2003-12-10 | 2008-12-11 | The General Hospital Corporation | Self-Assembling Nanoparticle Conjugates |
| DE10358137A1 (de) * | 2003-12-12 | 2005-07-07 | Merck Patent Gmbh | Verfahren und Kit zur Isolierung von RNA |
| WO2005093065A1 (en) * | 2004-03-16 | 2005-10-06 | Roche Diagnostics Gmbh | Improved method of isolating nucleic acids |
| US20050239091A1 (en) * | 2004-04-23 | 2005-10-27 | Collis Matthew P | Extraction of nucleic acids using small diameter magnetically-responsive particles |
| CA2502549C (en) | 2004-04-23 | 2016-02-16 | Becton, Dickinson And Company | Use of an extraction control in a method of extracting nucleic acids |
| CA2994321C (en) | 2004-05-03 | 2023-08-08 | Handylab, Inc. | A microfluidic device and methods for processing polynucleotide-containing samples |
| US8852862B2 (en) | 2004-05-03 | 2014-10-07 | Handylab, Inc. | Method for processing polynucleotide-containing samples |
| US9267167B2 (en) | 2004-06-28 | 2016-02-23 | Becton, Dickinson And Company | Dissolvable films and methods including the same |
| JP4476050B2 (ja) * | 2004-06-30 | 2010-06-09 | 株式会社ニデック | 視野計 |
| US20060024776A1 (en) * | 2004-08-02 | 2006-02-02 | Mcmillian Ray | Magnetic particle capture of whole intact organisms from clinical samples |
| EP2333561A3 (en) * | 2005-03-10 | 2014-06-11 | Gen-Probe Incorporated | System for performing multi-formatted assays |
| US20060234251A1 (en) * | 2005-04-19 | 2006-10-19 | Lumigen, Inc. | Methods of enhancing isolation of RNA from biological samples |
| WO2007027843A2 (en) | 2005-08-31 | 2007-03-08 | T2 Biosystems, Inc. | Nmr device for detection of analytes involving magnetic particles |
| US20070190526A1 (en) * | 2006-02-16 | 2007-08-16 | Nexgen Diagnostics Llc | Methods of extracting nucleic acids |
| US7998708B2 (en) | 2006-03-24 | 2011-08-16 | Handylab, Inc. | Microfluidic system for amplifying and detecting polynucleotides in parallel |
| US10900066B2 (en) | 2006-03-24 | 2021-01-26 | Handylab, Inc. | Microfluidic system for amplifying and detecting polynucleotides in parallel |
| US8883490B2 (en) | 2006-03-24 | 2014-11-11 | Handylab, Inc. | Fluorescence detector for microfluidic diagnostic system |
| DK3088083T3 (en) | 2006-03-24 | 2018-11-26 | Handylab Inc | Method of carrying out PCR down a multi-track cartridge |
| US11806718B2 (en) | 2006-03-24 | 2023-11-07 | Handylab, Inc. | Fluorescence detector for microfluidic diagnostic system |
| EP2091647A2 (en) | 2006-11-14 | 2009-08-26 | Handylab, Inc. | Microfluidic system for amplifying and detecting polynucleotides in parallel |
| WO2009006417A2 (en) * | 2007-06-29 | 2009-01-08 | Becton, Dickinson And Company | Methods for extraction and purification of components of biological samples |
| US8182763B2 (en) | 2007-07-13 | 2012-05-22 | Handylab, Inc. | Rack for sample tubes and reagent holders |
| US8324372B2 (en) | 2007-07-13 | 2012-12-04 | Handylab, Inc. | Polynucleotide capture materials, and methods of using same |
| US9618139B2 (en) | 2007-07-13 | 2017-04-11 | Handylab, Inc. | Integrated heater and magnetic separator |
| US20090136385A1 (en) | 2007-07-13 | 2009-05-28 | Handylab, Inc. | Reagent Tube |
| US9186677B2 (en) | 2007-07-13 | 2015-11-17 | Handylab, Inc. | Integrated apparatus for performing nucleic acid extraction and diagnostic testing on multiple biological samples |
| USD621060S1 (en) | 2008-07-14 | 2010-08-03 | Handylab, Inc. | Microfluidic cartridge |
| US8287820B2 (en) | 2007-07-13 | 2012-10-16 | Handylab, Inc. | Automated pipetting apparatus having a combined liquid pump and pipette head system |
| US8133671B2 (en) | 2007-07-13 | 2012-03-13 | Handylab, Inc. | Integrated apparatus for performing nucleic acid extraction and diagnostic testing on multiple biological samples |
| US8105783B2 (en) | 2007-07-13 | 2012-01-31 | Handylab, Inc. | Microfluidic cartridge |
| US9097644B2 (en) * | 2007-08-17 | 2015-08-04 | Massachusetts Institute Of Technology | Magnetic resonance-based viscometers and methods |
| US20090088560A1 (en) * | 2007-10-02 | 2009-04-02 | Hong Shen | Process for Nucleic Acid Purification |
| WO2009129236A2 (en) * | 2008-04-14 | 2009-10-22 | Integrated Nano-Technologies Llc | Method for manipulating samples with magnetic nucleation nanoparticles |
| USD618820S1 (en) | 2008-07-11 | 2010-06-29 | Handylab, Inc. | Reagent holder |
| USD787087S1 (en) | 2008-07-14 | 2017-05-16 | Handylab, Inc. | Housing |
| EP2192186B1 (en) * | 2008-11-28 | 2016-03-09 | F. Hoffmann-La Roche AG | System and method for the automated extraction of nucleic acids |
| EP2191900B1 (en) * | 2008-11-28 | 2016-03-30 | F. Hoffmann-La Roche AG | System and method for nucleic acids containing fluid processing |
| CN102427885B (zh) | 2009-05-15 | 2016-10-19 | 简·探针公司 | 用于在执行磁性分离工序的仪器中实现磁体的自动移动的方法和设备 |
| US8222397B2 (en) | 2009-08-28 | 2012-07-17 | Promega Corporation | Methods of optimal purification of nucleic acids and kit for use in performing such methods |
| US8039613B2 (en) | 2009-08-28 | 2011-10-18 | Promega Corporation | Methods of purifying a nucleic acid and formulation and kit for use in performing such methods |
| EP2473595A4 (en) | 2009-08-31 | 2013-04-24 | Mbio Diagnostics Inc | INTEGRATED SAMPLE PREPARATION AND ANALYTE IDENTIFICATION |
| EP2547767A4 (en) * | 2010-03-16 | 2013-12-25 | Becton Dickinson Co | USE OF ACHROMOPEPTIDASE FOR AMBIENT TEMPERATURE LYSIS |
| ES2617778T3 (es) * | 2010-09-02 | 2017-06-19 | Qiagen Gmbh | Método para aislar un ácido nucleico diana que incluye ácidos nucleicos diana pequeños, con alto rendimiento |
| US8563298B2 (en) | 2010-10-22 | 2013-10-22 | T2 Biosystems, Inc. | NMR systems and methods for the rapid detection of analytes |
| US8409807B2 (en) | 2010-10-22 | 2013-04-02 | T2 Biosystems, Inc. | NMR systems and methods for the rapid detection of analytes |
| ES2576927T3 (es) | 2010-10-22 | 2016-07-12 | T2 Biosystems, Inc. | Sistemas de RMN y métodos para la detección rápida de analitos |
| BR112013026451B1 (pt) | 2011-04-15 | 2021-02-09 | Becton, Dickinson And Company | sistema e método para realizar ensaios de diagnóstico molecular em várias amostras em paralelo e simultaneamente amplificação em tempo real em pluralidade de câmaras de reação de amplificação |
| JP6117217B2 (ja) | 2011-09-30 | 2017-04-19 | ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニーＢｅｃｔｏｎ， Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ | ユニット化された試薬ストリップ |
| USD692162S1 (en) | 2011-09-30 | 2013-10-22 | Becton, Dickinson And Company | Single piece reagent holder |
| EP2773892B1 (en) | 2011-11-04 | 2020-10-07 | Handylab, Inc. | Polynucleotide sample preparation device |
| US9551643B2 (en) | 2011-12-21 | 2017-01-24 | Becton, Dickinson And Company | Flow cytometric systems for sterile separation of magnetically labeled sample components |
| US10822644B2 (en) | 2012-02-03 | 2020-11-03 | Becton, Dickinson And Company | External files for distribution of molecular diagnostic tests and determination of compatibility between tests |
| WO2013158281A1 (en) | 2012-04-20 | 2013-10-24 | T2 Biosystems, Inc. | Compositions and methods for detection of candida species |
| US20140322706A1 (en) | 2012-10-24 | 2014-10-30 | Jon Faiz Kayyem | Integrated multipelx target analysis |
| EP3427830B1 (en) | 2012-10-24 | 2021-06-23 | Genmark Diagnostics Inc. | Integrated multiplex target analysis |
| AU2013202805B2 (en) | 2013-03-14 | 2015-07-16 | Gen-Probe Incorporated | System and method for extending the capabilities of a diagnostic analyzer |
| US9222623B2 (en) | 2013-03-15 | 2015-12-29 | Genmark Diagnostics, Inc. | Devices and methods for manipulating deformable fluid vessels |
| US9498778B2 (en) | 2014-11-11 | 2016-11-22 | Genmark Diagnostics, Inc. | Instrument for processing cartridge for performing assays in a closed sample preparation and reaction system |
| USD881409S1 (en) | 2013-10-24 | 2020-04-14 | Genmark Diagnostics, Inc. | Biochip cartridge |
| EP3210216A1 (en) | 2014-10-23 | 2017-08-30 | Corning Incorporated | Polymer-encapsulated magnetic nanoparticles |
| US9598722B2 (en) | 2014-11-11 | 2017-03-21 | Genmark Diagnostics, Inc. | Cartridge for performing assays in a closed sample preparation and reaction system |
| US10005080B2 (en) | 2014-11-11 | 2018-06-26 | Genmark Diagnostics, Inc. | Instrument and cartridge for performing assays in a closed sample preparation and reaction system employing electrowetting fluid manipulation |
| WO2016077294A1 (en) | 2014-11-14 | 2016-05-19 | Corning Incorporated | Methods and kits for post-ivt rna purification |
| FR3031063B1 (fr) | 2014-12-30 | 2017-02-10 | Biomerieux Sa | Complexe multicouches, procede de fabrication et utilisation du complexe |
| WO2017127731A1 (en) | 2016-01-21 | 2017-07-27 | T2 Biosystems, Inc. | Nmr methods and systems for the rapid detection of bacteria |
| GB2591406B (en) | 2018-09-05 | 2023-03-01 | Ihsan Dogramaci Bilkent Univ | Enrichment of samples inside the microchannels by using magnetic particles |
Family Cites Families (44)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US280130A (en) | 1883-06-26 | Method of and apparatus for separating | ||
| US3985649A (en) | 1974-11-25 | 1976-10-12 | Eddelman Roy T | Ferromagnetic separation process and material |
| US4018886A (en) | 1975-07-01 | 1977-04-19 | General Electric Company | Diagnostic method and device employing protein-coated magnetic particles |
| US3970518A (en) * | 1975-07-01 | 1976-07-20 | General Electric Company | Magnetic separation of biological particles |
| GB1575805A (en) * | 1976-03-12 | 1980-10-01 | Technicon Instr | Automatic diagnostic apparatus |
| US4272510A (en) | 1976-04-26 | 1981-06-09 | Smith Kendall O | Magnetic attraction transfer process for use in solid phase radioimmunoassays and in other assay methods |
| US4230685A (en) * | 1979-02-28 | 1980-10-28 | Northwestern University | Method of magnetic separation of cells and the like, and microspheres for use therein |
| EP0030086B2 (en) | 1979-11-13 | 1990-03-14 | TECHNICON INSTRUMENTS CORPORATION (a New York corporation) | Test-tube assembly, kit for making it and method of manual immunoassay |
| NO155316C (no) * | 1982-04-23 | 1987-03-11 | Sintef | Fremgangsmaate for fremstilling av magnetiske polymerpartikler. |
| US4695393A (en) * | 1983-05-12 | 1987-09-22 | Advanced Magnetics Inc. | Magnetic particles for use in separations |
| US4672040A (en) * | 1983-05-12 | 1987-06-09 | Advanced Magnetics, Inc. | Magnetic particles for use in separations |
| CH663476A5 (fr) | 1985-07-08 | 1987-12-15 | Serono Diagnostics Ltd | Enceinte pour le dosage d'anticorps ou d'antigenes dans un liquide biologique. |
| US5076950A (en) * | 1985-12-20 | 1991-12-31 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Magnetic composition for particle separation |
| US4900677A (en) * | 1986-09-26 | 1990-02-13 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Process for rapid isolation of high molecular weight DNA |
| ZA877772B (en) * | 1986-10-23 | 1988-04-20 | Amoco Corporation | Target and background capture methods and apparatus for affinity assays |
| US4935342A (en) * | 1986-12-01 | 1990-06-19 | Syngene, Inc. | Method of isolating and purifying nucleic acids from biological samples |
| CA1297431C (en) * | 1987-04-24 | 1992-03-17 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Process for the isolation of nucleic acids |
| US5395688A (en) * | 1987-10-26 | 1995-03-07 | Baxter Diagnostics Inc. | Magnetically responsive fluorescent polymer particles |
| US4923978A (en) * | 1987-12-28 | 1990-05-08 | E. I. Du Pont De Nemours & Company | Process for purifying nucleic acids |
| DE68913555T2 (de) * | 1988-11-21 | 1994-07-07 | Dynal As | Sonden aus nukleinsäuren. |
| US5512439A (en) * | 1988-11-21 | 1996-04-30 | Dynal As | Oligonucleotide-linked magnetic particles and uses thereof |
| GB8827160D0 (en) * | 1988-11-21 | 1988-12-29 | Apothekernes Lab | Detection & quantitative determination of rna & dna |
| US5075430A (en) * | 1988-12-12 | 1991-12-24 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Process for the purification of DNA on diatomaceous earth |
| US5234809A (en) * | 1989-03-23 | 1993-08-10 | Akzo N.V. | Process for isolating nucleic acid |
| US5279936A (en) * | 1989-12-22 | 1994-01-18 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Method of separation employing magnetic particles and second medium |
| FR2656318B1 (fr) * | 1989-12-27 | 1994-02-04 | Rhone Poulenc Chimie | Microspheres "core-shell" magnetisables a base d'organopolysiloxane reticule, leur procede de preparation et leur application en biologie. |
| US5523231A (en) | 1990-02-13 | 1996-06-04 | Amersham International Plc | Method to isolate macromolecules using magnetically attractable beads which do not specifically bind the macromolecules |
| US5129936A (en) * | 1990-07-30 | 1992-07-14 | Wilson Harold W | Processes for the preparation of acid fortified paramagnetic iron sulfate salt compounds for use in the treatment of agricultural soils |
| US5491068A (en) * | 1991-02-14 | 1996-02-13 | Vicam, L.P. | Assay method for detecting the presence of bacteria |
| DE69329135T2 (de) * | 1992-09-24 | 2001-01-11 | Amersham Pharm Biotech Uk Ltd | Verfahren und Vorrichtung zur magnetischen Abscheidung |
| FI932866A0 (fi) * | 1993-06-21 | 1993-06-21 | Labsystems Oy | Separeringsfoerfarande |
| DE59403734D1 (de) * | 1993-03-17 | 1997-09-18 | Silica Gel Gmbh | Superparamagnetische teilchen, verfahren zu ihrer herstellung und verwendung derselben |
| GB9323305D0 (en) | 1993-11-11 | 1994-01-05 | Medinnova Sf | Isoaltion of nucleic acid |
| US5602042A (en) | 1994-04-14 | 1997-02-11 | Cytyc Corporation | Method and apparatus for magnetically separating biological particles from a mixture |
| WO1996003653A1 (de) | 1994-07-27 | 1996-02-08 | Silica Gel Ges.Mbh Absorptionstechnik, Apparatebau | Superparamagnetische teilchen, verfahren zur herstellung und deren verwendung |
| US5705628A (en) * | 1994-09-20 | 1998-01-06 | Whitehead Institute For Biomedical Research | DNA purification and isolation using magnetic particles |
| GB9425138D0 (en) * | 1994-12-12 | 1995-02-08 | Dynal As | Isolation of nucleic acid |
| FR2732116B1 (fr) | 1995-03-21 | 1997-05-09 | Bio Merieux | Procede et dispositif pour la determination qualitative et/ou quantitative d'un analyte, notamment d'une bacterie, dans un echantillon, par voie magnetique |
| DE19520398B4 (de) * | 1995-06-08 | 2009-04-16 | Roche Diagnostics Gmbh | Magnetisches Pigment |
| JP3940935B2 (ja) * | 1996-06-11 | 2007-07-04 | 東洋紡績株式会社 | プラスミドｄｎａの抽出精製方法 |
| JPH09327291A (ja) * | 1996-06-11 | 1997-12-22 | Toyobo Co Ltd | Ｒｎａの抽出精製方法 |
| US5990302A (en) * | 1996-07-12 | 1999-11-23 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | Method for isolating ribonucleic acid |
| US6027945A (en) * | 1997-01-21 | 2000-02-22 | Promega Corporation | Methods of isolating biological target materials using silica magnetic particles |
| US5973138A (en) * | 1998-10-30 | 1999-10-26 | Becton Dickinson And Company | Method for purification and manipulation of nucleic acids using paramagnetic particles |
-
1998
- 1998-10-30 US US09/183,127 patent/US5973138A/en not_active Expired - Lifetime
-
1999
- 1999-09-20 EP EP99118529A patent/EP1002860B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-09-20 ES ES99118529T patent/ES2270556T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-09-20 EP EP05112446A patent/EP1674571B1/en not_active Expired - Lifetime
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| Publication number | Publication date |
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