ES2343184T3

ES2343184T3 - Medidor para usar en un metodo de reduccion de interferencias en un sensor electroquimico usando dos potenciales diferentes aplicados.

Info

Publication number: ES2343184T3
Application number: ES04791630T
Authority: ES
Inventors: Oliver William Hardwicke Davies
Original assignee: LifeScan Scotland Ltd
Current assignee: LifeScan Scotland Ltd
Priority date: 2003-10-31
Filing date: 2004-10-29
Publication date: 2010-07-26
Anticipated expiration: 2024-10-29
Also published as: EP1685393B1; EP1678491B1; KR101092350B1; US20070276621A1; JP2007514930A; WO2005045416A1; KR101201245B1; AU2004288008A1; ES2282898T3; ATE460661T1; HK1091898A1; AU2004288014A1; PL1678489T3; US7618522B2; EP1678489B1; CA2551058C; CA2551058A1; IL175322A0; US20050139469A1; IL175324A0

Abstract

Un medidor (500) para usar en la detección de analitos, comprendiendo dicho medidor (500): un primer conector (101) para conectar dicho medidor a un primer electrodo de trabajo (12) en una tira de ensayo (600); un segundo conector (102) para conectar dicho medidor a un segundo electrodo de trabajo (14) en dicha tira de ensayo (600); un conector común (100) para conectar dicho medidor a un electrodo de referencia (10) en dicha tira de ensayo; una primera fuente de voltaje (103) conectada entre dicho primer conector y dicho conector común una segunda fuente de voltaje (104) conectada entre dicho segundo conector y dicho conector común; en el que dichas primera y segunda fuentes de voltaje generan un primer potencial en dicho primer conector y un segundo potencial de dicho segundo conector cuando se inserta una tira de ensayo en dicho medidor y se aplica una muestra a dicha tira de ensayo, en el que dicho primer y segundo voltaje tienen la misma polaridad y dicho segundo potencial tiene una magnitud superior a la de dicho primer potencial; y en el que dicho medidor mide un primer valor de corriente en dicho primer conector y un segundo valor de corriente en dicho segundo conector a un tiempo predeterminado después de que dicha tira de ensayo se inserte y se aplique la muestra; caracterizado por que dicho medidor se adapta para calcular un valor corregido de la corriente del analito usando la siguiente fórmula: **(Ver fórmula)** en la que: A1, es dicha corriente del analito corregida; W1, es la corriente en dicho primer conector medida en dicho tiempo determinado; W2 es la corriente medida en dicho segundo conector a dicho tiempo predeterminado; X es un factor del efecto de voltaje dependiente del analito; e Y es un factor del efecto de voltaje dependiente del compuesto de interferencia.

Description

Medidor para usar en un método de reducción de interferencias en un sensor electroquímico usando dos potenciales diferentes aplicados.

Antecedentes de la invención

Las tiras de ensayo electroquímico para la determinación de glucosa, tales como las usadas en el kit de ensayo de sangre completa OneTouch® Ultra®, que está disponible en LifeScan, Inc., están diseñadas para medir la concentración de glucosa en una muestra de sangre de pacientes con diabetes. La medición de la glucosa se basa en la oxidación específica de la glucosa por la flavo-enzima glucosa oxidasa. Durante esta reacción, la enzima se reduce. La enzima se re-oxida por reacción con el mediador ferricianuro, el cual se reduce en el transcurso de la reacción. Estas reacciones se resumen a continuación.

D-Glucosa + GOx_{(OX)}\rightarrowAcido Glucónico + GOx_{(RED)}

GOx_{(RED)} + 2 Fe(CN)_{6}^{3-}\rightarrowGOx_{(OX)} + 2 Fe(CN)_{6}^{4-}

Cuando la reacción establecida anteriormente se realiza con un potencial aplicado entre dos electrodos, puede crearse una corriente eléctrica por la re-oxidación electroquímica del ión mediador reducido (ferrocianuro) en la superficie del electrodo. Por tanto, dado que, en un ambiente ideal, la cantidad de ferrocianuro creada durante la reacción química descrita anteriormente es directamente proporcional a la cantidad de glucosa en la muestra colocada entre los electrodos, la corriente generada sería proporcional al contenido de glucosa de la muestra. Un mediador redox, tal como ferricianuro es un compuesto que intercambia electrones entre una enzima redox tal como glucosa oxidasa y un electrodo. Dado que la concentración de glucosa en la muestra aumenta, la cantidad de mediador reducido formado también aumenta, por tanto, existe una relación directa entre la corriente resultante de la re-oxidación del mediador reducido y la concentración de glucosa. En particular, la transferencia de electrones a través de la interfaz eléctrica da como resultado un flujo de corriente (2 moles de electrones por cada mol de glucosa que se oxida). La corriente resultante de la introducción de glucosa puede, por lo tanto, referirse como la corriente de glucosa.

Dado que puede ser muy importante conocer la concentración de glucosa en sangre, particularmente en personas que padecen diabetes, se han desarrollado medidores que usan las identidades establecidas anteriormente para permitir a cualquier persona tomar muestras y ensayar su sangre para determinar la concentración de glucosa en cualquier momento dado. El medidor controla la Corriente de Glucosa generada y la convierte en una lectura de concentración de glucosa usando un algoritmo programado que relaciona la corriente con la concentración de glucosa mediante una simple fórmula matemática. En general, los medidores, trabajan junto con una tira desechable que incluye una cámara de muestra y al menos dos electrodos dispuestos dentro de la cámara de muestra, además de la enzima (por ejemplo glucosa oxidasa) y el mediador (por ejemplo ferricianuro). Durante el uso, el usuario pincha su dedo u otro lugar conveniente para inducir el sangrado e introduce una muestra de sangre en la cámara de muestra, comenzando así la reacción química indicada anteriormente.

En términos electroquímicos, la función del medidor es doble. En primer lugar, proporciona un voltaje de polarización (de aproximadamente 0,4 V en el caso de OneTouch® Ultra®) que polariza la interfaz eléctrica y permite que la corriente fluya a la superficie de carbón del electrodo de trabajo. En segundo lugar, mide la corriente que fluye en el circuito exterior entre el ánodo (electrodo de trabajo) y el cátodo (electrodo de referencia). Se puede considerar que el medidor es, por lo tanto, un sistema electroquímico simple que funciona en modo de dos electrodos, sin embargo, en la práctica, pueden usarse tres, e incluso cuatro electrodos para facilitar la medición de glucosa y/o realizar otras funciones en el medidor.

En la mayoría de las situaciones, se considera que la ecuación indicada anteriormente es una aproximación suficiente de la reacción química que tiene lugar en la tira de ensayo y la lectura del medidor una representación suficientemente precisa del contenido de glucosa de la muestra de sangre. Sin embargo, en determinadas circunstancias y para determinados propósitos, puede ser ventajoso mejorar la precisión de la medición. Por ejemplo, cuando una parte de la corriente medida en el electrodo es el resultado de la presencia de otras sustancias químicas o compuestos en la muestra. Cuando dichas sustancias químicas o compuestos adicionales están presentes, pueden referirse como compuestos de interferencia y la corriente resultante adicional puede referirse como Corrientes de Interferencia.

Ejemplos de compuestos químicos potencialmente de interferencia (es decir, compuestos observados en fluidos fisiológicos, tales como sangre que pueden generar Corrientes de Interferencia en presencia de un campo eléctrico) incluyen ascorbato, urato y acetaminofen (Tylenol^{TM} o paracetamol). Un mecanismo para generar Corrientes de Interferencia en un medidor electroquímico para la medición de la concentración de un analito en un fluido fisiológico (por ejemplo, un glucómetro) implica la oxidación de uno o más compuestos de interferencia por reducción de la enzima (por ejemplo glucosa oxidasa). Un mecanismo adicional para generar Corrientes de Interferencia en dicho medidor implica la oxidación de uno o más compuestos de interferencia por reducción del mediador (por ejemplo ferricianuro). Un mecanismo adicional para generar Corrientes de Interferencia en dicho medidor implica la oxidación de uno o más compuestos de interferencia en el electrodo de trabajo. Por tanto, la corriente total medida en el electrodo de trabajo es la superposición de la corriente generada por la oxidación del analito y la corriente generada por la oxidación de los compuestos de interferencia. La oxidación de los compuestos de interferencia puede ser un resultado de la interacción con la enzima, el mediador o puede ocurrir directamente en el electrodo de trabajo.

En general, los compuestos de interferencia potencialmente pueden oxidarse en la superficie del electrodo y/o por un mediador redox. Esta oxidación del compuesto de interferencia en un sistema de medición de glucosa provoca que la corriente de oxidación medida sea dependiente tanto de la glucosa como del compuesto de interferencia. Por lo tanto, si la concentración del compuesto de interferencia se oxida tan eficazmente como la glucosa y/o la concentración del compuesto de interferencia es significativamente alta con respecto a la concentración de glucosa, puede afectar a la concentración de glucosa medida.

La co-oxidación del analito (por ejemplo glucosa) con los compuestos de interferencia es especialmente problemática cuando el potencial convencional (es decir, el potencial al cual se oxida un compuesto) del compuesto de interferencia es similar en magnitud al potencial convencional del mediador redox, dando como resultado una parte significativa de la Corriente de Interferencia que se genera por la oxidación de los compuestos de interferencia en el electrodo de trabajo. La corriente eléctrica resultante de la oxidación de los compuestos de interferencia en el electrodo de trabajo puede referirse como la corriente de interferencia Directa. Por tanto, sería ventajoso reducir o minimizar el efecto de la corriente de interferencia directa en la medición de la concentración del analito. Métodos previos de reducción o eliminación de la corriente de interferencia directa incluyen diseñar tiras de ensayo que impidan que los compuestos de interferencia alcancen el electrodo de trabajo, reduciendo o eliminando de esta manera la corriente de interferencia directa atribuible a los compuestos excluidos.

Una estrategia para reducir los efectos de los compuestos de interferencia que generan corriente de interferencia Directa es colocar una membrana cargada negativamente en la parte superior del electrodo de trabajo. Como un ejemplo, puede colocarse un fluoropolímero sulfonatado tal como NAFION^{TM} sobre el electrodo de trabajo para repeler todos los productos químicos cargados negativamente. En general, muchos compuestos de interferencia, incluyendo el ascorbato y el urato, tienen una carga negativa, y por tanto, no se oxidan en el electrodo de trabajo cuando la superficie del electrodo de trabajo se cubre con una membrana cargada negativamente. Sin embargo, como algunos compuestos de interferencia, tales como el acetaminofen, no están cargados negativamente, y por tanto, pueden pasar a través de la membrana cargada negativamente, el uso de una membrana cargada negativamente no eliminará la corriente de interferencia Directa. Otra desventaja de cubrir el electrodo de trabajo con una membrana cargada negativamente es que los mediadores redox normalmente usados, tales como ferricianuro, están cargados negativamente y no pueden pasar a través de la membrana para intercambiar electrones con el electrodo. Una desventaja adicional de usar una membrana cargada negativamente sobre el electrodo de trabajo es la posibilidad de ralentizar la difusión del mediador reducido en el electrodo de trabajo, aumentando de esta manera el tiempo del ensayo. Una desventaja adicional del uso de una membrana cargada negativamente sobre el electrodo de trabajo es la complejidad y el coste de fabricación aumentados de tiras de ensayo con una membrana cargada negativamente.

Otra estrategia que puede usarse para disminuir los efectos de las Corrientes de Interferencia Directa es colocar una membrana selectiva de tamaño sobre la parte superior del electrodo de trabajo. Como un ejemplo, sobre el electrodo de trabajo puede colocarse una membrana de exclusión de tamaño de 100 Dalton tal como de acetato de celulosa para excluir compuestos con un peso molecular superior a 100 Daltons. En esta realización, la enzima redox, tal como la glucosa oxidasa, se coloca sobre la membrana de exclusión de tamaño. La glucosa oxidasa genera peróxido de hidrógeno, en presencia de glucosa y oxígeno, en una cantidad proporcional a la concentración de glucosa. Debe observarse que la glucosa y la mayoría de los mediadores redox tienen un peso molecular superior a 100 Daltons, y por tanto, no pueden atravesar la membrana selectiva de tamaño. Sin embargo, el peróxido de hidrógeno, tiene un peso molecular de 34 Daltons, y por tanto, puede atravesar la membrana selectiva de tamaño. En general, la mayoría de los compuestos de interferencia tienen un peso molecular superior a 100 Daltons, y por tanto, no se oxidan en la superficie del electrodo. Como algunos compuestos de interferencia tienen pesos moleculares más pequeños, y por tanto, puede pasar a través de la membrana selectiva de tamaño, el uso de una membrana selectiva de tamaño no eliminará la corriente de interferencia Directa. Una desventaja adicional de usar una membrana selectiva de tamaño sobre el electrodo de trabajo es la complejidad y el coste de fabricación aumentados de tiras de ensayo con una membrana selectiva de tamaño.

Otra estrategia que puede usarse para disminuir los efectos de las de la corrientes de interferencia Directa es usar un mediador redox con un potencial redox bajo, por ejemplo, un potencial redox de entre aproximadamente -300 mV a +100 mV (frente a un electrodo de calomel saturado). Esto permite que el potencial aplicado en el electrodo de trabajo sea relativamente bajo lo que, a su vez, disminuye la velocidad a la cual el electrodo de trabajo oxida los compuestos de interferencia. Ejemplos de mediadores redox que tienen un potencial redox relativamente bajo incluyen complejos bipiridil-osmio, derivados de ferroceno, y derivados quinona. Sin embargo, los mediadores redox que tienen un potencial relativamente bajo a menudo son difíciles de sintetizar, relativamente inestables y relativamente insolubles.

Otra estrategia que puede usarse para disminuir los efectos de los compuestos de interferencia es usar un electrodo simulado junto con el electrodo de trabajo. La corriente medida en el electrodo simulado puede después restarse de la corriente medida en el electrodo de trabajo para compensar el efecto de los compuestos de interferencia. Si el electrodo simulado está desnudo (es decir, no cubierto por una enzima o un mediador), entonces la corriente medida en el electrodo simulado será proporcional a la corriente de interferencia Directa y restando la corriente medida en el electrodo simulado de la corriente medida en el electrodo de trabajo se reducirá o eliminará el efecto de la oxidación directa de los compuestos de interferencia en el electrodo de trabajo. Si el electrodo simulado se recubre con un mediador redox entonces la corriente medida en el electrodo simulado será una combinación de la corriente de interferencia Directa y la corriente de interferencia resultante de la reducción del mediador redox por un compuesto de interferencia. Por tanto, restando la corriente medida en el electrodo simulado recubierto con un mediador redox de la corriente medida en el electrodo de trabajo se reducirá o eliminará el efecto de la oxidación directa de los compuestos de interferencia y el efecto de la interferencia resultante de la reducción del mediador redox por un compuesto de interferencia en el electrodo de trabajo. En algunos casos el electrodo simulado también puede recubrirse con una proteína inerte o una enzima redox desactivada para simular el efecto del mediador redox y la enzima en difusión. Como es preferible que las tiras de ensayo tengan una cámara de muestra pequeña para que los diabéticos no tengan que extraer una gran cantidad de muestra de sangre, puede no ser ventajoso incluir un electrodo extra que incremente de manera sustancial el volumen de la cámara de muestra donde el electrodo extra no se usa para medir el analito (por ejemplo, glucosa). Adicionalmente, puede ser difícil correlacionar directamente la corriente medida en el electrodo simulado con las corrientes de interferencia en el electrodo de trabajo. Finalmente, como el electrodo de trabajo puede recubrirse con un material o materiales (por ejemplo mediador redox), que difieren de los materiales usados para cubrir el electrodo de trabajo (por ejemplo, mediador redox y enzima), las tiras de ensayo que usan electrodos simulados como un método para reducir o eliminar el efecto de los compuestos de interferencia en un sistema múltiple de electrodos de trabajo pueden aumentar el coste y la complejidad de la fabricación de las muestras de ensayo.

La patente de Estados Unidos 5.830.343 proporciona un iostat multipotente para el análisis electroquímico de compuestos de soluciones.

El documento intermedio WO 2004/029605 proporciona un aparato y un método para determinar si un biosensor que comprende dos electrodos de trabajo y un electrodo de referencia está o no bien fabricado y para cuantificar de manera rápida y precisa una sustancia específica contenida en una muestra biológica.

Del documento US 4655880 se conoce un sistema con dos electrodos de trabajo, cuyas señales se restan para eliminar la interferencia de fondo.

Determinados diseños de tiras de ensayo que utilizan electrodos de trabajo múltiples para medir analitos, tales como el sistema usado en el sistema de medición de glucosa OneTouch Ultra son ventajosos debido al uso de dos electrodos de trabajo. En dichos sistemas, por tanto, sería ventajoso desarrollar un medidor para usar con dichas tiras de ensayo en la reducción o eliminación del efecto de los compuestos de interferencia. Más particularmente, sería ventajoso desarrollar un medidor para usar con dichas tiras en la reducción o eliminación del efecto de los compuestos de interferencia sin utilizar un electrodo simulado, una membrana intermedia o un mediador redox con un bajo potencial redox.

Sumario de la invención

La presente invención se refiere a un medidor para usar en un método de reducción de los efectos de los compuestos de interferencia en la medición de analitos y, más particularmente a un método de reducción de los efectos de los compuestos de interferencia en un sistema en el que las tiras de ensayo utilizan dos o más electrodos de trabajo. El medidor se adapta para medir un analito usando un método en el que se aplica un primer potencial a un primer electrodo de trabajo y un segundo potencial, que tiene la misma polaridad pero una mayor magnitud que la del primer potencial, se aplica a un segundo electrodo de trabajo. La magnitud del segundo potencial también puede ser menor que la del primer potencial para una realización en la que se usa una corriente de reducción para medir la concentración del analito. El primer electrodo de trabajo y el segundo electrodo de trabajo pueden recubrirse con un reactivo enzimático y un mediador redox que es específico del analito. El primer potencial aplicado en el primer electrodo de trabajo se selecciona de manera que sea suficiente para oxidar el mediador redox reducido en una manera limitada de difusión mientras que el segundo potencial se selecciona para tener una magnitud (es decir, valor absoluto) superior a la magnitud del primer potencial, dando como resultado una oxidación más eficaz del segundo electrodo de trabajo. La corriente medida por el medidor en el primer electrodo de trabajo incluye una corriente de analito y una corriente del compuesto de interferencia mientras que la corriente medida en el segundo electrodo de trabajo incluye una corriente sobrepotencial del analito y una corriente sobrepotencial del compuesto de interferencia. Debe observarse que tanto la corriente del analito como la corriente sobrepotencial del analito se refieren a una corriente que se corresponde con la concentración del analito y que la corriente es un resultado de una oxidación del mediador reducido. La relación entre las corrientes en el primer electrodo de trabajo y en el segundo electrodo de trabajo se define por la siguiente ecuación,

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en la que A_{1} es la corriente del analito en el primer electrodo de trabajo, W_{1} es la corriente medida en el primer electrodo de trabajo, W_{2} es la corriente medida en el segundo electrodo de trabajo, X es un factor del efecto de voltaje dependiente del analito e Y es un factor del efecto de voltaje dependiente del compuesto de interferencia. Usando la ecuación indicada anteriormente, en un medidor de acuerdo con la presente invención, es posible reducir el efecto de las corrientes de oxidación resultantes de la presencia de compuestos de interferencia y calcular un valor de corriente corregido que es más representativo de la concentración del analito en la muestra a medir.

La concentración de glucosa en una muestra colocada en una tira de ensayo puede calcularse colocando la muestra en una tira de ensayo que está insertada en un medidor de acuerdo con la presente invención. La tira de ensayo tiene un primer electrodo de trabajo y un segundo electrodo de trabajo y un electrodo de referencia, recubriéndose al menos el primer electrodo de trabajo y el segundo electrodo de trabajo con compuestos químicos (por ejemplo, una enzima y un mediador redox), adaptados para facilitar la oxidación de la glucosa y la transferencia de electrones de la glucosa oxidada al primer electrodo de trabajo y el segundo electrodo de trabajo cuando un medidor de acuerdo con la presente invención aplica un potencial, entre el primer electrodo de trabajo y el electrodo de referencia, y el segundo electrodo de trabajo y el electrodo de referencia. De acuerdo con la presente invención, el medidor aplica un primer potencial entre el primer electrodo de trabajo y el electrodo de referencia, seleccionándose el primer potencial para tener una magnitud suficiente para garantizar que la magnitud de la corriente generada por la oxidación de la glucosa en la muestra esté únicamente limitada por factores distintos al voltaje aplicado (por ejemplo, difusión). De acuerdo con la presente invención, el medidor aplica un segundo potencial entre el segundo electrodo de trabajo y el electrodo de referencia, siendo el segundo potencial superior en magnitud al del primer potencial y seleccionándose el segundo potencial para aumentar la oxidación de los compuestos de interferencia en el segundo electrodo de trabajo. El medidor se programa para usar la siguiente ecuación para reducir el efecto de la corriente de oxidación resultante de la presencia de compuestos de interferencia en la corriente usada para calcular la concentración de glucosa en la muestra. La concentración de glucosa se obtiene usando una corriente calculada A_{1G} en la que:

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en la que A_{1G} es una corriente de glucosa, W_{1} es la corriente medida en el primer electrodo de trabajo, W_{2} es la corriente medida en el segundo electrodo de trabajo, X_{G} es un factor del efecto de voltaje dependiente de glucosa e Y es un factor del efecto de voltaje dependiente del compuesto de interferencia.

Breve descripción de los dibujos

Se establecen características novedosas de la invención con la particularidad en las reivindicaciones adjuntas. Un mejor entendimiento de las características y ventajas de la primera invención se obtendrán con referencia a la siguiente descripción detallada que establece realizaciones ilustrativas, en las que se utilizan los principios de la invención y los dibujos adjuntos en los que:

La Figura 1 es una vista en perspectiva despiezada de una tira de ensayo de la realización para usar en la presente invención.

La Figura 2 es una vista esquemática de un medidor y una tira para usar en la presente invención.

La Figura 3 es un voltamograma hidrodinámico que ilustra la dependencia del voltaje aplicado con la corriente medida.

Descripción detallada de la invención

La presente invención se refiere a un medidor para usar con una tira de ensayo que utiliza el método descrito en este documento para medir analitos y, más particularmente, a un medidor como se ilustra en la figura 2, que se programa de acuerdo con el método descrito en este documento.

Aunque la presente invención está particularmente adaptada a la medición de la concentración de glucosa en sangre, será evidente para los expertos en la materia que el método descrito en este documento puede adaptarse para mejorar selectivamente otros sistemas usados para la medición electroquímica de analitos en fluidos fisiológicos. Ejemplos de sistemas que pueden adaptarse para mejorar selectivamente usando el método de acuerdo con la presente invención incluyen sensores electroquímicos usados para medir la concentración de lactato, alcohol, colesterol, aminoácidos, colina, y fructosamina en fluidos fisiológicos. Ejemplos de fluidos fisiológicos que pueden contener dichos analitos incluyen sangre, plasma, suero, orina y fluido intersticial. Adicionalmente, se entenderá que, aunque el método se describe en un sistema electroquímico en el que la corriente medida se produce por oxidación, la invención sería igualmente aplicable a un sistema en el que la corriente medida se produce por reducción.

La presente invención se usa en un método para mejorar la selectividad de un sistema de medición electroquímico que está particularmente adaptado para usar en un sistema de medición de glucosa en sangre. Más particularmente, la presente invención se usa en un método para mejorar la selectividad de un sistema de medición de glucosa en sangre corrigiendo parcial o totalmente el efecto de la corriente de interferencia directa. Siendo la selectividad en dichos sistemas una medida de la capacidad del sistema para medir de forma precisa la concentración de glucosa en una muestra de fluido fisiológico que incluye uno o más compuestos que crean una corriente de interferencia. La mejora de la selectividad por tanto reduce la corriente generada en el electrodo de trabajo por la presencia de compuestos de interferencia (es decir, compuestos distintos a la glucosa que se oxidan para generar corriente de interferencia) y hace que la corriente medida sea más representativa de la concentración de glucosa. En particular, la corriente medida puede ser una función de la oxidación de los compuestos de interferencia habitualmente observados en fluidos fisiológicos tales como, por ejemplo, acetaminofen (Tylenol^{TM} o Paracetamol), ácido ascórbico, bilirrubina, dopamina, ácido gentísico, glutatión, levodopa, metildopa, tolacimide, tolbutamida y ácido úrico. Dichos compuestos de interferencia pueden oxidarse, por ejemplo, por reacción química con el mediador redox o por oxidación en la superficie del electrodo.

En un sistema perfectamente selectivo, no habría corriente de oxidación generada por ningún compuesto de interferencia y toda la corriente de oxidación se generaría por la oxidación de la glucosa. Sin embargo, como la oxidación de los compuestos de interferencia y la corriente de oxidación resultante no puede evitarse la presente invención describe eliminar parte o todo el efecto de los compuestos de interferencia cuantificando la proporción de la corriente de oxidación global generada por los compuestos de interferencia y restando esta cantidad de la corriente de oxidación global. En particular, usando una tira de ensayo que incluye un primer electrodo de trabajo y un segundo electrodo de trabajo, se aplican dos potenciales diferentes y la corriente de oxidación generada en cada uno de los electrodos de trabajo se mide y se usa para estimar las proporciones de la corriente de oxidación respectivas tanto para la glucosa como para los compuestos de interferencia.

En una realización, se usa una tira de ensayo que incluye una cámara de muestra que contiene un primer electrodo de trabajo, un segundo electrodo de trabajo, y un electrodo de referencia. El primer electrodo de trabajo, el segundo electrodo de trabajo y el electrodo de referencia se cubren con glucosa oxidasa (la enzima) y un Ferricianuro (el mediador redox). Cuando una muestra de sangre (el fluido fisiológico) se coloca en la cámara de muestra, la glucosa reduce la glucosa oxidasa en la muestra de sangre generando ácido glucónico. El ácido glucónico después se oxida por reducción del Ferricianuro a Ferrocianuro, produciendo un mediador redox reducido con una concentración proporcional a la concentración de glucosa. Un ejemplo de una tira de ensayo que puede ser adecuado para usar en un método de acuerdo con la presente invención es la tira de ensayo OneTouch® Ultra® comercializada por LifeScan, Inc., de Milpitas, California. En la publicación internacional WO 01/67099A1 y WO 01/73124A2 se describen otras tiras adecuadas.

En una realización se aplica un primer potencial a un primer electrodo de trabajo y un segundo potencial se aplica al segundo electrodo de trabajo. En esta realización, el primer potencial se selecciona para estar en un intervalo en el que la respuesta de la corriente de glucosa es relativamente insensible al potencial aplicado y por tanto la magnitud de la corriente de glucosa en el primer electrodo de trabajo está limitada por la cantidad de mediador redox reducido que se difunde al primer electrodo de trabajo. Debe observarse que la glucosa no se oxida directamente en el electrodo de trabajo, sino que se oxida indirectamente mediante el uso de una enzima redox y un mediador redox. La corriente de la glucosa se refiere a una oxidación de mediador redox reducido que se correlaciona con la concentración de glucosa. Cuando el mediador redox es ferri/ferrocianuro y el carbón es el electrodo de trabajo, el primer potencial puede variar de aproximadamente 0 milivoltios a aproximadamente 500 milivoltios, y más preferentemente de aproximadamente 385 milivoltios a aproximadamente 415 milivoltios, y aún incluso más preferiblemente puede variar de aproximadamente 395 a 405 mV. Un segundo potencial se aplica a un segundo electrodo de trabajo de manera que el segundo potencial es superior al primer potencial. Cuando el potencial aplicado es superior al potencial necesario para oxidar la glucosa. Cuando el ferri/ferrocianuro es el mediador redox y el carbón es el electrodo de trabajo, el segundo potencial puede variar de aproximadamente 50 milivoltios a aproximadamente 1000 milivoltios, y más preferentemente de aproximadamente 420 milivoltios a aproximadamente 1000 milivoltios.

Como la corriente de glucosa no aumenta o solo aumenta mínimamente con el aumento del potencial, la corriente de glucosa en el segundo electrodo de trabajo debería ser sustancialmente igual a la corriente de glucosa en el primer electrodo de trabajo, a pesar de que el potencial en el segundo electrodo de trabajo es superior al potencial en el primer electrodo. Por tanto, cualquier corriente adicional medida en el segundo electrodo de trabajo puede atribuirse a la oxidación de los compuestos de interferencia. En otras palabras, el mayor potencial en el segundo electrodo de trabajo debe causar una corriente sobrepotencial de glucosa que debe medirse en el segundo electrodo de trabajo que es igual o sustancialmente igual en magnitud a la corriente de glucosa en el primer electrodo de trabajo porque el primer potencial y el segundo potencial están en un intervalo de corriente de glucosa limitante que es insensible a cambios en el potencial aplicado. Sin embargo, en la práctica, otros parámetros pueden tener un impacto sobre la corriente medida, por ejemplo, cuando se aplica un mayor potencial en el segundo electrodo de trabajo, a menudo es un ligero aumento en la corriente global en el segundo electrodo de trabajo como un resultado de una caída de IR o efectos capacitivos. Cuando una caída de IR (es decir, la resistencia descompensada) está presente en el sistema, un mayor potencial aplicado causa un aumento en la magnitud de la corriente medida. Ejemplos de caídas de IR pueden ser la resistencia nominal del primer electrodo de trabajo, segundo electrodo de trabajo, el electrodo de referencia, el fluido fisiológico entre el electrodo de trabajo y el electrodo de referencia. Además, la aplicación de un mayor potencial da como resultado la formación de una doble capa iónica mayor que se forma en la interfaz electrodo/líquido, aumentando la capacitancia iónica y la corriente resultante o bien en el primer electrodo de trabajo o en el segundo electrodo de trabajo.

Para determinar la relación real entre la corriente de glucosa medida en el primer electrodo de trabajo y el segundo electrodo de trabajo, es necesario desarrollar una ecuación adecuada. Debe observarse que la corriente de glucosa en el segundo electrodo de trabajo también puede referirse como la corriente sobrepotencial de glucosa. Una relación directamente proporcional entre la corriente de glucosa y la corriente de sobrepotencial de glucosa puede describirse mediante la siguiente ecuación.

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en la que X_{G} es un factor del efecto de voltaje dependiente de glucosa, A_{1G} es la corriente de glucosa en el primer electrodo de trabajo y A_{2G} es la corriente de glucosa en el segundo electrodo de trabajo

Cuando el ferri/ferrocianuro es el mediador redox y el carbón es el electrodo de trabajo, el factor del efecto de voltaje X_{G} para la glucosa puede esperarse que esté entre aproximadamente 0,95 a aproximadamente 1,1. En esta realización, potenciales mayores no tienen un impacto significativo en la corriente de oxidación de glucosa porque el mediador redox (ferrocianuro) tiene una rápida cinética de transferencia de electrones y características reversibles de transferencia de electrones con el electrodo de trabajo. Como la corriente de glucosa no aumenta con el aumento de potencial después de un determinado punto, puede decirse que la corriente de glucosa está saturada o en un régimen de difusión limitado.

La glucosa se mide indirectamente por oxidación del ferrocianuro en el electrodo de trabajo y en la que concentración de ferrocianuro es directamente proporcional a la concentración de glucosa. El valor del potencial convencional (Eº) para un compuesto electroquímico particular es una medida de la capacidad del compuesto para intercambiar electrones con otros compuestos de químicos. En el método de acuerdo con la presente invención, el potencial en el primer electrodo de trabajo se selecciona para ser superior al del potencial convencional (Eº) del mediador redox. Como el primer potencial se selecciona de manera que sea lo suficientemente superior al valor Eº de la pareja redox, la velocidad de oxidación no aumenta sustancialmente a medida que el potencial aplicado aumenta. Por tanto, aplicando un mayor potencial en el segundo electrodo de trabajo no aumentará la oxidación en el segundo electrodo de trabajo y cualquier corriente aumentada medida en el electrodo de mayor potencial debe ser a causa de otros factores, tales como, por ejemplo, oxidación de los compuestos de interferencia.

La Figura 3 es un voltamograma hidrodinámico que ilustra la dependencia del voltaje aplicado con corriente medida cuando el ferri/ferrocianuro es el mediador redox y el carbón es el electrodo de trabajo. Cada punto de datos sobre el gráfico representa al menos un experimento en el que se mide una corriente 5 segundos después de aplicar un voltaje a través de un electrodo de trabajo y un electrodo de referencia. La Figura 3 muestra que la corriente forma un inicio de una región en meseta a aproximadamente 400 mV, porque el voltaje aplicado es suficientemente superior al valor Eº del ferrocianuro. Por tanto, como se ilustra en la Figura 3, a medida que el potencial alcanza aproximadamente 400 mV, la corriente de glucosa se satura porque la oxidación del ferrocianuro limita la difusión (es decir, la difusión del ferrocianuro en el electrodo de trabajo limita la magnitud de la corriente medida y no está limitada por la velocidad de transferencia de electrones entre el ferrocianuro y el electrodo).

En general, la corriente generada por la oxidación de los compuestos de interferencia no se satura aumentando el voltaje aplicado y muestra una dependencia mucho mas fuerte sobre el potencial aplicado que la corriente generada por la oxidación del ferrocianuro (habiéndose generado el ferrocianuro de la interacción de la glucosa con la enzima y la enzima con ferrocianuro). Típicamente, los compuestos de interferencia tienen una cinética de transferencia de electrones más lenta que la de los mediadores redox (es decir, ferrocianuro). Esta diferencia se adscribe al hecho de que la mayoría de los compuestos de interferencia experimentan una ruta de transferencia de electrones en la esfera interna a diferencia de la ruta de transferencia de electrones en la esfera externa más rápida del ferrocianuro. Una transferencia típica de electrones en la esfera interna requiere que se produzca una reacción química, tal como una transferencia de hidruro, antes de la transferencia de un electrón. A diferencia, una transferencia de electrones en la esfera externa no requiere una reacción química antes de la transferencia de un electrón. Por lo tanto, la velocidad de transferencia de electrones en la esfera interna es típicamente más lenta que la transferencia de electrones en la esfera externa porque requiere una etapa de reacción química adicional. La oxidación del ascorbato a dehidroascorbato es un ejemplo de una oxidación en la esfera interna que requiere la liberación de dos restos de hidruro. La oxidación del ferrocianuro a ferricianuro es un ejemplo de una transferencia de electrones en la esfera externa. Por lo tanto, la corriente generada por los compuestos de interferencia generalmente aumenta cuando se ensaya a un mayor potencial.

La siguiente ecuación puede describir una relación entre una corriente de un compuesto de interferencia en el primer electrodo de trabajo y una corriente sobrepotencial de un compuesto de interferencia en el segundo electrodo de trabajo

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en la que Y es un factor del efecto de voltaje dependiente del compuesto de interferencia I_{1} es la corriente del compuesto de interferencia e I_{2} es la corriente sobrepotencial del compuesto de interferencia. Como el factor del efecto de voltaje del compuesto de interferencia Y depende de numerosos factores, incluyendo, en particular el compuesto o los compuestos de interferencia en cuestión y del material usado para los electrodos de trabajo, el cálculo de un factor del efecto de voltaje dependiente del compuesto de interferencia particular para un sistema, tira de ensayo, analito y compuesto o compuestos de interferencia en particular pueden requerir experimentación para optimizar el factor del efecto de voltaje para estos criterios. De manera alternativa, en determinadas circunstancias, los factores del efecto de voltaje apropiados pueden obtenerse o describirse matemáticamente.

Cuando el ferri/ferrocianuro es el mediador redox y el carbón es el electrodo de trabajo, el factor del efecto de voltaje dependiente del compuesto de interferencia Y podría describirse matemáticamente usando la ecuación de Tafel para I_{1} e I_{2},

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en la que \eta_{1}=E_{1}-E^{0}, \eta_{2}=E_{2} - Eº, b' es una constante que depende del compuesto de interferencia electroactivo específico, E_{1} es el primer potencial, y E_{2} es el segundo potencial. El valor de Eº (el potencial convencional de un compuesto de interferencia específico) no es importante porque se cancela en el cálculo de \Delta_{\eta}. Las ecuaciones 2, 2a, 2b pueden combinarse y reordenarse para producir la siguiente ecuación.

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en la que \Delta_{\eta}=E_{1}-E_{2}. La ecuación 2c proporciona una relación matemática que describe la relación entre \Delta_{\eta} (es decir, la diferencia entre el primer potencial y el segundo potencial) y el factor del efecto de voltaje dependiente del compuesto de interferencia Y. Y puede variar de aproximadamente 1 a aproximadamente 100, y más preferiblemente entre aproximadamente 1 y 10. El factor del efecto de voltaje dependiente del compuesto de interferencia Y puede determinarse experimentalmente para un compuesto de interferencia específico o combinación de compuestos de interferencia. Debe observarse que el factor del efecto de voltaje dependiente del compuesto de interferencia Y para los compuestos de interferencia es normalmente superior al factor del efecto voltaje X_{G} para la glucosa. Como se describirá en las siguientes secciones, la relación matemática de a) la corriente del compuesto de interferencia I_{1} y la corriente sobrepotencial del compuesto de interferencia I_{2}; y b) la corriente de glucosa A_{1G} y la corriente de sobrepotencial de glucosa A_{2G} permitirá proponer un algoritmo de glucosa que reducirá el efecto de los compuestos de interferencia para la medición de glucosa.

Para calcular una corriente de glucosa corregida (es decir, A_{1G} y A_{2G}), se desarrolló un algoritmo que es independiente de las interferencias. Después de dosificar una muestra sobre una tira de ensayo, se aplica un primer potencial en el primer electrodo de trabajo y un segundo potencial se aplica en el segundo electrodo de trabajo. En el primer electrodo de trabajo, se mide una primera corriente que puede describirse mediante la siguiente ecuación,

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en la que W_{1} es la primera corriente en el primer electrodo de trabajo. En otras palabras, la primera corriente incluye una superposición de la corriente de glucosa A_{1G} y la corriente del compuesto de interferencia I_{1}. Más específicamente, la corriente del compuesto de interferencia puede ser una corriente de interferencia directa que se ha descrito anteriormente en este documento. En el segundo electrodo de trabajo, se mide una segunda corriente en el segundo potencial o sobrepotencial que puede describirse mediante la siguiente ecuación,

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en la que W_{2} es la segunda corriente en el segundo electrodo de trabajo, A_{2G} es la corriente de sobrepotencial de glucosa medida en el segundo potencial e I_{2} es la corriente de sobrepotencial del compuesto de interferencia medida en el segundo potencial. Más específicamente, la corriente de sobrepotencial del compuesto de interferencia puede ser una Corriente Directa del compuesto de interferencia que se ha descrito anteriormente en este documento. Usando las 4 ecuaciones descritas anteriormente (ecuaciones de 1 a 4) que contienen 4 incógnitas (A_{1G}, A_{2G}, I_{1} e I_{2}), ahora es posible calcular una ecuación de corriente de glucosa corregida que es independiente de los compuestos de interferencia.

Como en la primera etapa en la derivación, A_{2G} de la ec 1 e I_{2} de la ec 2 pueden sustituirse en la ecuación 4 para dar el siguiente ec 5.

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A continuación, la ecuación 3 se multiplica por el factor del efecto de voltaje dependiente del compuesto de interferencia Y para los compuestos de interferencia para dar la ec 6.

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Ahora la ecuación 5 puede restarse de la ecuación 6 para dar la siguiente forma mostrada en la ecuación 7

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Ahora la ecuación 7 puede reorganizarse para resolver la corriente de glucosa corregida A_{1G} medida en el primer potencial como se muestra en la ecuación 8.

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La ecuación 8 produce una corriente de glucosa corregida A_{1G}, que elimina los efectos de las interferencias que tan solo requiere la producción de corriente del primer electrodo de trabajo y del segundo electrodo de trabajo (por ejemplo, W_{1} y W_{2}), los factores del efecto de voltaje dependientes de glucosa X_{G}, y el factor de efecto de voltaje dependiente del compuesto de interferencia Y para los compuestos de interferencia.

Un glucómetro que contiene componentes electrónicos se conecta eléctricamente con una tira de ensayo de glucosa para medir la corriente de W_{1} y W_{2}. X_{G} e Y pueden programarse en el glucómetro para leer únicamente la memoria o X_{G} e Y pueden transferirse al medidor mediante un chip de código de calibración. El chip de código de calibración tendría en su memoria un ajuste particular de valores para X_{G} e Y que se calibrarían para un lote particular de tiras de ensayo. Para la tira de ensayo esto representaría variaciones lote a lote que pueden suceder en X_{G} e Y.

En otra realización, la corriente de glucosa corregida en la ecuación 8 puede usarse en el medidor únicamente cuando se supera un determinado umbral. Por ejemplo, si W_{2} es aproximadamente el 10% o superior a W_{1} entonces el medidor usaría la ecuación 8 para corregir el rendimiento de corriente. Sin embargo, si W_{2} es aproximadamente el 10% o inferior a W_{1}, la concentración del compuesto de interferencia es baja y por tanto el medidor puede tomar simplemente un valor promedio de corriente entre W_{1} y W_{2} para potenciar la exactitud y la precisión de la medición. En lugar de realizar simplemente un promedio de corriente de W_{1} y W_{2}, puede realizarse un enfoque más exacto para el promedio de W_{1} con \frac{W_{2}}{X_{G}} en el que se tiene en cuenta el factor delefecto de voltaje dependiente de glucosa X_{G} (obsérvese que \frac{W_{2}}{X_{G}} es aproximadamente igual a A_{1G} de acuerdo con la ecuación 1 y 4 cuando I_{2} es bajo). La estrategia del uso de la ecuación 8 únicamente en determinadas situaciones en las que es probable que en la muestra haya un nivel significativo de interferencias mitiga el riesgo de sobrecorregir la corriente de glucosa medida. Debe observarse que cuando W_{2} es suficientemente mayor que W_{1} por una gran cantidad (por ejemplo, aproximadamente 100% o más), esto es un indicador de que tiene una concentración elevada inusual de interferencias. En este caso, puede ser deseable producir un mensaje de error en lugar de un valor de glucosa porque un nivel muy alto de compuestos de interferencia puede causar una degradación en la exactitud de la ecuación 8.

Las siguientes secciones describirán una posible realización de la tira de ensayo que puede usarse con el algoritmo propuesto de la presente invención, como se muestra en la ecuación 8. La Figura 1 es una vista en perspectiva despiezada de una tira de ensayo que puede usarse en la presente invención. La tira de ensayo 600 incluye seis capas dispuestas sobre un sustrato de base 5. Estas seis capas son una capa conductora 50, una capa aislante 16, una capa reactiva 22, una capa adhesiva 60, una capa hidrófila 70, y una capa superior 80. La tira de ensayo 600 puede fabricarse en una serie de etapas en la que la capa conductora 50, la capa aislante 16, la capa reactiva 22, la capa adhesiva 60 se depositan sobre un sustrato de base 5, usando, por ejemplo, un proceso de serigrafía. Toda la capa hidrófila 70 y la capa superior 80 pueden deponerse a partir de un depósito de rodillo y laminarse sobre el sustrato de base 5. La tira de ensayo totalmente ensamblada 600 forma una cámara receptora de muestras que puede recibir una muestra de sangre de manera que se pueda analizar.

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La capa conductora 50 incluye el electrodo de referencia 10, el primer electrodo de trabajo 12, el segundo electrodo de trabajo 14, un primer contacto 13, un segundo contacto 15, un contacto de referencia 11, y una barra detectora de la tira 17. Los materiales adecuados que pueden usarse para la capa conductora son Au, Pd, Ir, Pt, Rh, acero inoxidable, óxido de estaño dopado, carbón, y similares. Preferiblemente, el material para la capa conductora puede ser una tinta de carbón tal como la descrita en el documento US5653918.

La capa aislante 16 incluye un corte 18, que expone una parte del electrodo de referencia 10, del primer electrodo de trabajo 12, y del segundo electrodo de trabajo 14, que una muestra líquida puede mojar. Como ejemplo no limitativo, la capa aislante (16 o 160) puede ser Ercon E6110-116 Jet Black Insulayer Ink que puede adquirirse en Ercon, Inc.

La capa reactiva 22 puede disponerse sobre una parte de la capa conductora 50 y la capa aislante 16. En una realización de la presente invención, la capa reactiva 22 puede incluir compuestos químicos tales como una enzima redox y un mediador redox que reaccionan selectivamente con la glucosa. Durante esta reacción, puede generase una cantidad proporcional de un mediador redox reducido que después puede medirse electroquímicamente para poder calcular una concentración de glucosa. Ejemplos de formulaciones o tintas reactivas adecuadas para usar en la presente invención pueden encontrarse en las patentes de Estados Unidos 5.708.247 y 6.046.051; en las solicitudes internacionales publicadas WO01/67099 y WO01/73124.

La capa adhesiva 60 incluye una primera almohadilla adhesiva 24, una segunda almohadilla adhesiva 26, y tercera almohadilla adhesiva 28. Cada uno de los bordes laterales de la primera almohadilla adhesiva 24 y la segunda almohadilla adhesiva 26 localizados adyacentes a la capa reactiva 22 definen una pared de una cámara receptora de la muestra. En una realización de la presente invención, la capa adhesiva puede comprender un adhesivo sensible a presión de copolímero acrílico basado en agua, disponible en el mercado de Tape Specialties LTD in Tring, Herts, United Kingdom (part#A6435).

La capa hidrófila 70, incluye una almohadilla distal hidrófila 32 y una almohadilla proximal hidrófila 34. Como ejemplo no limitativo, la capa hidrófila 70 puede ser un poliéster que tiene una superficie hidrófila tal como un recubrimiento anti-niebla, disponible en el mercado de 3M. Debe observarse que tanto la película hidrófila distal 32 como la película hidrófila proximal 34 son visiblemente transparentes permitiendo al usuario observar una muestra líquida cargándose en la cámara receptora de la muestra.

La capa de superior 80 incluye una parte transparente 36 y una parte opaca 38. La capa superior 80 está dispuesta sobre y adherida a la capa hidrófila 70. Como un ejemplo no limitativo, la capa superior 80 puede ser un poliéster. Debe observarse que la parte transparente 36 solapa sustancialmente con la almohadilla proximal hidrófila 32 que permite confirmar visualmente al usuario que la cámara receptora de la muestra está suficientemente llena. La parte opaca 38 ayuda al usuario a observar un alto grado de contraste entre un fluido coloreado tal, por ejemplo, sangre dentro de la cámara receptora de la muestra y la sección opaca de la película superior.

La figura 2 es una vista esquemática simplificada que muestra un medidor 500 en interfaz con una tira de ensayo 600. El medidor 500 tiene tres contactos eléctricos que forman una conexión eléctrica con el primer electrodo de trabajo 12, segundo electrodo de trabajo 14, y electrodo de referencia 10. Un conector particular 101 conecta la fuente de voltaje 103 con el primer electro de trabajo 12, el conector 102 conecta la fuente de voltaje 104 al segundo electrodo de trabajo 14 y un conector común 100 conecta la fuente de voltaje 103 y 104 al electrodo de referencia 10. Cuando se realiza un ensayo, la fuente de voltaje 103 en el medidor 500 aplica un primer potencial E_{1} entre el primer electrodo de trabajo 12 y el electrodo de referencia 10 y la fuente de voltaje 104 aplica un segundo potencial E_{2} entre el segundo electrodo de trabajo 14 y electrodo de referencia 10. Se aplica una muestra de sangre de tal manera que el primer electrodo de trabajo 12, el segundo electrodo de trabajo 14, y el electrodo de referencia 10 se cubren con sangre. Esto causa que la capa reactiva 22 se hidrate, lo que genera ferrocianuro en una cantidad proporcional a la glucosa y/o a la concentración del compuesto de interferencia presente en la muestra. Después de aproximadamente 5 segundos desde la aplicación de la muestra, el medidor 500 mide una corriente de oxidación tanto para el primer electrodo de trabajo 12 como para el segundo electrodo de trabajo 14. En un medidor de acuerdo con la presente invención, los valores de E_{1} y E_{2} se determinan de acuerdo con el método descrito anteriormente y los algoritmos descritos en este documento pueden usarse para calcular una corriente del analito de acuerdo con un método de acuerdo con la presente invención.

En las tiras de ensayo previamente descritas, el primer electrodo de trabajo 12 y el segundo electrodo de trabajo 14 tenían el mismo área. Debe observarse que la presente invención no se limita a tiras de ensayo que tienen áreas iguales. Para realizaciones alternativas a las tiras descritas anteriormente en las que las áreas son diferentes, el resultado de la corriente para cada electrodo de trabajo debe normalizarse para el área. Como el resultado de la corriente es directamente proporcional al área, los términos dentro de la ecuación 1 a la ecuación 8 puede ser en unidades de amperios (corriente) o en amperios por unidad de área (es decir, densidad de corriente).

Claims

1. Un medidor (500) para usar en la detección de analitos, comprendiendo dicho medidor (500):

: un primer conector (101) para conectar dicho medidor a un primer electrodo de trabajo (12) en una tira de ensayo (600);

: un segundo conector (102) para conectar dicho medidor a un segundo electrodo de trabajo (14) en dicha tira de ensayo (600);

: un conector común (100) para conectar dicho medidor a un electrodo de referencia (10) en dicha tira de ensayo;

: una primera fuente de voltaje (103) conectada entre dicho primer conector y dicho conector común

: una segunda fuente de voltaje (104) conectada entre dicho segundo conector y dicho conector común;

en el que dichas primera y segunda fuentes de voltaje generan un primer potencial en dicho primer conector y un segundo potencial de dicho segundo conector cuando se inserta una tira de ensayo en dicho medidor y se aplica una muestra a dicha tira de ensayo, en el que dicho primer y segundo voltaje tienen la misma polaridad y dicho segundo potencial tiene una magnitud superior a la de dicho primer potencial; y

en el que dicho medidor mide un primer valor de corriente en dicho primer conector y un segundo valor de corriente en dicho segundo conector a un tiempo predeterminado después de que dicha tira de ensayo se inserte y se aplique la muestra;

caracterizado por que dicho medidor se adapta para calcular un valor corregido de la corriente del analito usando la siguiente fórmula:

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en la que: A_{1}, es dicha corriente del analito corregida; W_{1}, es la corriente en dicho primer conector medida en dicho tiempo determinado; W_{2} es la corriente medida en dicho segundo conector a dicho tiempo predeterminado; X es un factor del efecto de voltaje dependiente del analito; e Y es un factor del efecto de voltaje dependiente del compuesto de interferencia.