ES2310182T3 - 7-hidroxiepiandrosterona con actividad neuroprotectora. - Google Patents
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Abstract
El uso de 7-hidroxiepiandrosterona para la fabricación de un medicamento para protección contra daño neuronal agudo y crónico.
Description
7-hidroxiepiandrosterona con
actividad neuroprotectora.
La presente invención se refiere al uso de
ciertos compuestos de
7-hidroxi-esteroides para protección
contra la muerte de células neuronales, y que son así útiles en el
tratamiento y prevención de dolencias o secuelas de dolencias tales
como enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, discapacidad
cognitiva no demencial (CIND), ictus, trauma cerebral, lesión de la
médula espinal y lesión del nervio periférico; también es útil para
mejorar la función cognitiva.
La producción de metabolitos
7\alpha-hidroxilados de deshidroepiandrosterona
(DHEA) in vivo ha sido conocida desde 1959 con la
identificación de
7\alpha-hidroxi-DHEA en orina [J J
Schneider, M L Lewbart, Recent Prog. Horm. Res. 15 (1959)
210-230; L Starka y col, Clin. Chim Acta. 7 (1961)
309-316]. Desde entonces, se han reseñado extensa
7\alpha-hidroxilación de sustratos de
3\beta-hidroxiesteroides (que incluyen DHEA y
epiandrosterona - EPIA) en preparaciones de tejidos de muchos
órganos humanos, que incluyen hígado adulto y fetal, testículos,
epidídimo, piel, tejido mamario, próstata, células adiposas
estromales y amígdalas. La hidroxilación de DHEA en la posición 7
también se ha demostrado en hígado de rata y en numerosos tejidos y
órganos de ratón. En todos esos estudios,
7\alpha-hidroxi DHEA fue a distancia el principal
metabolito producido. Efectivamente, Doostzadeh y col [Steroids 63
(1998) 608-614] informaron de que la velocidad de
producción de
7\alpha-hidroxi-DHEA por
microsomas de hígado de ratón era más de quince veces la velocidad
de producción de
7\beta-hidroxi-DHEA.
También se ha mostrado que EPIA, DHEA y
pregnenolona son rápidamente y extensamente transformadas en sus
correspondientes metabolitos 7\alpha-hidroxi en
el cerebro de ratón [J M Guiraud y col, Steroids 34 (1979)
241-248; M Warmer y col, Endocrinology 124 (1989)
2699-2706; Y Akwa y col, Biochem. J. 288 (1992)
959-964].
El documento WO97/37664 describe el uso de
ciertos compuestos específicos, que incluyen esteriodes
7\alpha-hidroxi-sustituidos, para
tratar trastornos neuropsiquiátricos, inmunes o endocrinos. Entre
los trastornos sugeridos en WO97/37664 que se pueden tratar
mediante el uso de estos compuestos se incluye la enfermedad de
Alzheimer. Sin embargo, el mecanismo sugerido por para esta acción
es que se hace la hipótesis de que el trastorno resulta de un
déficit de esteroide
7\alpha-hidroxi-sustituido en el
cerebro y el tratamiento que se propone en WO97/37664 rectifica así
este déficit mediante la administración de esteroide
7\alpha-hidroxi-sustituido para
reemplazar el compuesto perdido. El procedimiento descrito en
WO97/37664 trata así una dolencia existente, en vez de prevenir la
dolencia o prevenir un empeoramiento de la dolencia previniendo un
daño neuronal adicional. Por lo tanto, WO97/37664 no describe un
efecto neuroprotector. Tampoco sugiere que los compuestos se puedan
usar para prevenir el daño causado por sucesos repentinos y
traumáticos tales como ictus.
Los autores de la presente invención han
descubierto sorprendentemente que
7-hidroxi-epiandrosterona, ya sea
\alpha, \beta o una mezcla, se puede usar para proteger contra
daño neuronal agudo y crónico causado por sucesos tales como ictus,
trauma cerebral e isquemia cerebral que pueden ser inducidos por
hemorragia sub-aracnoidea o que ocurren durante
cirugía de puenteo de corazón etc.
Se encuentra uso en sucesos tales como hipoxia e
isquemia prolongadas, que pueden estar asociados o no con
hipoglicemia, daño neuronal, en varios grados.
Se produce típicamente isquemia durante ataques
cardíacos, pero el daño infringido en esos momentos se limita
sustancialmente a los tejidos cardíacos, y se han desarrollado
ciertos tratamientos. Con respecto a la presente invención, los
autores se han implicado en los efectos de la isquemia sobre el
cerebro a más largo plazo, tal como ocurre con los pacientes de
ictus o como resultado de lesión encefálica. La gravedad de la
isquemia depende de la naturaleza del ictus o de la lesión, pero,
invariablemente, hay daño cerebral y es a éste al que se dirige la
presente
invención.
invención.
Se conocen en la técnica diversos agentes
neuroprotectores que intentan aliviar el problemas del daño
cerebral, pero todos los que se conocen actualmente tienden a estar
asociados con efectos laterales adversos. Por ejemplo, MK801
(maleato de dizocilpina) es una molécula bastante simple y se sabe
que proporciona un nivel de protección a pacientes isquémicos. Sin
embargo, MK801 también está asociado con "efectos psicotrópicos
alarmantes" (Martindale), así como efectos motores adversos. Los
efectos neuroprotectores se detallan en Brain Research 755 (1997)
36-46 (Pringle, A.K., y col,) que se
incorpora en este documento por referencia. Estos mismos autores
también describen los efectos neuroprotectores de conotoxina en una
comunicación anterior pero, a pesar de los efectos neuroprotectores
de este compuesto, se observan, in vivo, efectos laterales
adversos.
Así, la presente invención consiste en el uso
para la fabricación de un medicamento para protección contra daño
neuronal agudo y crónico de 7-hidroxiepiandrosterona
(7-hidroxi-EPIA),
\newpage
Este compuesto se puede representar por la
fórmula (I):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
y los isómeros 7\alpha y 7\beta
son,
respectivamente:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La invención también abarca el uso de
precursores de estos compuestos y compuestos que, in vivo,
son metabolizados para dar esos compuestos.
Los isómeros \alpha y \beta se pueden usar
solos o en mezcla y, si se usan en mezcla, se pueden presentar en
proporciones cualesquiera. Sin embargo, el isómero 7\beta parece
que muestra mayor actividad y por lo tanto se prefiere
actualmente.
Los compuestos de la presente invención se
pueden preparar mediante una diversidad de procedimientos, bien
conocidos por sí mismos, partiendo de esteroides padres. Por
ejemplo, se pueden preparar mediante los procedimientos que se
describen en la bibliografía anteriormente mencionada, que darían
una mezcla de los compuestos 7\beta y los correspondientes
7\alpha, que se pueden separar a continuación mediante técnicas
bien conocidas.
Como un ejemplo, se pueden obtener 7\alpha y/o
7\beta-hidroxi EPIA a partir de DHEA por oxidación
alílica después de protección del grupo
3\beta-hidroxi y el grupo
17-cetona usando procedimientos convencionales. El
producto se reduce a continuación con un catalizador de compuesto de
metal soluble (tal como hidruro de sodio) y se desprotegen los
grupos 3\beta-hidroxi y 17-cetona.
Los epímeros 7\alpha-hidroxi y
7\beta-hidroxi se pueden separar a continuación,
si se desea, por procedimientos convencionales, por ejemplo
cromatografía de columna, y se pueden cristalizar para purificación
7\alpha- y 7\beta-hidroxi EPIA.
Alternativamente se pueden preparar 7\alpha- y
7\beta-hidroxi-EPIA según se
ilustra en el siguiente esquema de reacción:
\vskip1.000000\baselineskip
En este esquema de reacción, se acetila DHEA
(II) para dar el correspondiente acetato de fórmula (III), que se
hace reaccionar a continuación con etilenglicol, para dar el cetal
de fórmula (IV). El cetal (IV) se oxida a continuación según se
describe en el Ejemplo 3, para dar el correspondiente compuesto
7-ceto (V), que se desacetila a continuación, para
dar el compuesto de fórmula (VI). Éste se reduce para dar
7-hidroxi-17-cetal-EPIA
de fórmula (VII), que se trata a continuación con un ácido para
eliminar el grupo cetal y dar
7-hidroxi-EPIA, que se separa
finalmente en isómeros 7\beta- y 7\alpha- por cromatografía para
dar 7\alpha- hidroxi-EPIA (IX) y
7\beta-hidroxi EPIA (X).
Los compuestos de la presente invención se
pueden aplicar a un paciente si se sospecha que está en peligro de
un suceso isquémico, especialmente un ictus o lesión encefálica, o
si se sospecha que va a desarrollar una enfermedad crónica
neurodegenerativa, tal como enfermedad de Alzheimer o CIND, que
pueda ser facilitada por isquemia cerebral crónica subumbral o por
producción reducida de energía neuronal, tal como se observa
frecuentemente en el cerebro de edad avanzada. La aplicación
profiláctica de este tipo puede ser sobradamente útil. Sin embargo,
también se ha demostrado que los compuestos de la presente invención
tienen actividad útil, aún cuando se apliquen después de un suceso
isquémico, pero se apreciará que se prefiere administrar los
compuestos lo antes posible, a fin de evitar lo más posible la
degeneración neuronal. En algunas circunstancias puede ser deseable
administrar dosis repetidas, especialmente cuando el paciente
permanece en peligro de un suceso isquémico.
Los procedimientos de administración adecuados
generalmente son por inyección, a fin de conseguir el resultado
deseado lo antes posible. Así, se prefiere particularmente la
inyección intravenosa pero, en algunas circunstancias puede ser
preferible administrar el compuesto directamente en el fluido
cefalorraquídeo.
La dosis del compuesto de la presente invención
variará dependiendo de muchos factores, que incluyen la edad, peso
corporal y estado general del paciente, así como del modo,
frecuencia y ruta de administración. Sin embargo, se recomienda
generalmente una dosis de 0,01 a 50 mg/kg de peso corporal, siendo
más preferida una dosis de 0,05 a
20 mg/kg de peso corporal. Ésta se puede administrar en una dosis sencilla o en dosis divididas.
20 mg/kg de peso corporal. Ésta se puede administrar en una dosis sencilla o en dosis divididas.
La invención se ilustra adicionalmente por los
siguientes Ejemplos no limitativos, de los que los Ejemplos 1 a 7
ilustran la preparación de compuestos de la presente invención y los
Ejemplos 8 y 9 ilustran su actividad. En los Ejemplos 1 a 7, los
números romanos se refieren a las fórmulas en los esquemas de
reacción que se han mostrado anteriormente.
Una solución de 50 ml de piridina y 50 ml de
anhídrido acético que contenía 10 g de DHEA (II) (34,72 mmol) se
calentó a reflujo durante 4 horas. Se enfrió el medio de reacción,
se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo. Se secó la
fase orgánica sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó a sequedad.
Se obtuvieron 11,0 g de
DHEA-3-acetato (III) (33,33 mmol,
96%), que se recristalizó con etanol.
Una solución de 100 ml de tolueno que contenía 5
g de DHEA-3-acetato (III) (15,15
mmol), 5 ml de etilenglicol y una cantidad catalítica de ácido
p-toluenosulfónico se calentó a reflujo con
destilación a vapor usando un aparato de Dean-Stark
durante 24 horas. El medio de reacción se vertió en 100 ml de
solución acuosa de carbonato potásico al 10% peso/volumen. Se
decantó la fase orgánica. La fase acuosa se extrajo con acetato de
etilo. Se combinaron las fases orgánicas y se evaporaron a sequedad.
Se obtuvieron 5,10 g de
17-cetal-3-DHEA-acetato
(IV) (13,64 mmol, 90%), que se recristalizó con etanol.
Una solución de 70 ml de piridina que contenía 5
g de
17-cetal-DHEA-3-acetato
(IV) (13,37 mmol) y una cantidad catalítica de rosa bengala se
irradió usando una lámpara de vapor de mercurio de presión media con
burbujeo de oxígeno. Se añadió una cantidad catalítica de acetato
de cobre al medio de reacción después de 24 horas. El medio de
reacción, después de 24 horas, se evaporó a sequedad. El residuo se
purificó por cromatografía relámpago (SiO_{2}/acetato de
etilo:ciclohexano 3/7). Se obtuvieron 3,11 g de
7-ceto-17-cetal-DHEA-3-acetato
(V) (8,02 mmol, 60%).
Una solución de 50 ml de metanol que contenía 1%
de hidróxido potásico y 1 g de
7-ceto-17-cetal-DHEA-3-acetato
(V) (2,58 mmol) se calentó a reflujo durante 2 horas. A
continuación se enfrió el medio de reacción, se neutralizó y se
extrajo a continuación con acetato de etilo. Se secó la fase
orgánica sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó a continuación a
sequedad. Se obtuvieron 802 mg de
7-ceto-17-cetal-DHEA
5 (2,32 mmol, 90%), que se recristalizó con metanol.
Se añadieron 10 g de
7-ceto-17-cetal-DHEA
(VI) (28,90 mmol) a una solución de amoníaco líquido a -33ºC que
contenía 2,65 g de sodio. Después de 4 horas, se añadió cloruro
amónico hasta que desapareció el color azul. Se añadieron a
continuación 2,65 g de sodio. Después de 4 horas, se añadió de nuevo
cloruro amónico hasta que desapareció el color azul. Se añadió agua
y se dejó evaporar el amoníaco. Se extrajo el medio de reacción con
acetato de etilo. Se secó la fase orgánica sobre sulfato sódico
anhidro y se evaporó a continuación a sequedad. Se obtuvieron 6,07 g
de
7-hidroxi-17-cetal-EPIA
(VII) (17,34 mmol, 60%).
Una solución de 100 ml de acetona que contenía 5
g de agua, 10 g de
7-hidroxi-17-cetal-EPIA
(VII) (28,57 mmol, 50%) y una cantidad catalítica de ácido
p-toluenosulfónico se calentó a reflujo durante 4
horas. Se enfrió el medio de reacción, se vertió en 100 ml de
solución acuosa de carbonato potásico al 10% peso/volumen y a
continuación se extrajo con acetato de etilo. Se secó la fase
orgánica sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó a continuación a
sequedad. El residuo se purificó por cromatografía relámpago
(SiO_{2}/acetato de etilo). Se obtuvieron 5,24 g de
7-hidroxi-EPIA (VIII) (17,14 mmol,
60%).
7-hidroxi-EPIA
(VIII) (5 g) que contenían epímeros 7\alpha y 7\beta en una
relación 65/35 se purificó por cromatografía relámpago
(Al_{2}O_{3}/CHCl_{3}). En primer lugar se obtuvo
7\beta-hidroxi-EPIA (X) (2,5 g),
antes de 7\alpha-hidroxi-EPIA (IX)
(1,34 g). 7\beta-hidroxi-EPIA (X)
y 7\alpha-hidroxi-EPIA (IX) se
recristalizaron con acetato de etilo.
Se prepararon cultivos organotípicos de rodajas
de hipocampo usando el procedimiento básico de Pringle y col
(1996, 1997) modificado como sigue:
Se decapitaron crías de rata Wistar (de
8-11 días de edad) y se hicieron rápidamente las
disecciones de los hipocampos en solución salina equilibrada de Gey
enfriada en hielo y suplementada con 4,5 mg/ml de glucosa. Se
separaron las rodajas y se extendieron en inserciones de cultivo
Millicell CM (4 por pocillo) y se mantuvieron a 37ºC/5% CO_{2}
durante 14 días. El medio de mantenimiento consistió en 25% de suero
de caballo inactivado por calor, 25% de solución salina equilibrada
de Hank (SSEH) y 50% de medio esencial mínimo al que se han añadido
sales de Earle (MEM) suplementado con glutamina 1 mM y 4,5 mg/ml de
glucosa. El medio se cambió cada 3-4 días.
Se llevó a cabo la hipoxia experimental según se
ha descrito previamente (Pringle y col., 1996; 1997). En
resumen, los cultivos se transfirieron a un medio exento de suero
(MES - 75% MEM, 25% SSEH suplementado con glutamina 1 mM y 4,5
mg/ml de glucosa) que contenía 5 \mug/ml del colorante
fluorescente de exclusión yoduro de propidium (YP). Se dejo que se
equilibraran los cultivos en MES durante 60 minutos antes del
estudio por imágenes. La fluorescencia de YP se detectó usando un
microscopio invertido Leica provisto de un juego de filtros de
rodamina. Cualquier cultivo en el que se detectó fluorescencia de YP
en esta etapa se excluyó de continuar en el estudio. Se indujo
hipoxia transfiriendo cultivos a MES (+YP) que había sido saturado
con 95%N_{2}/5%CO_{2}. Las placas de cultivo (sin tapas) se
cerraron a continuación en una cámara estanca en la se que había
saturado la atmósfera con 95%N_{2}/5%CO_{2} insuflando
continuamente a través de ella gas a 10L/min durante 10 minutos
antes de que fuera cerrada y colocada en la incubadora durante 170
minutos (el tiempo total de hipoxia fue por tanto 180 minutos). Al
final del período hipóxico los cultivos se devolvieron a MES
normóxico que contenía YP y se volvieron a colocar en la incubadora
durante 24 horas.
Se evaluó el daño neuronal en según se ha
descrito previamente (Pringle y col., 1996; 1997) usando NIH
Image 1.60 que corre en un ordenador Apple IIsi u Openlab 2.0
(Improvision) que corre en un Macintosh G4/400. Las imágenes se
capturaron usando una cámara monocroma y se guardaron en un disco
óptico para análisis por separado. Se capturaron imágenes de
transmisión de luz con anterioridad a la adición de fármacos, y las
imágenes de fluorescencia de YP se registraron al final del período
de recuperación post- hipoxia de 24 horas. A partir de la imagen de
transmisión se determinó el área de la capa celular CA1. Se midió el
área de fluorescencia de YP en CA1 usando la función de densidad de
rodaja dentro de NIH Image u Openlab, y se expresó el daño neuronal
como el porcentaje de CA1 en la que se detectó fluorescencia de YP
por encima del fondo.
Se prepararon compuestos de esteroide haciendo
una solución inicial de 1 mg/ml en etanol y diluyendo posteriormente
en MES. Se añadieron compuestos a los cultivos durante 45 minutos
antes de la hipoxia, durante el episodio hipóxico y durante el
período de recuperación post-hipóxico. Los
experimentos de control consistieron en cultivos tratados con
vehículo solo.
Experimento
1
Se llevó a cabo un experimento inicial para
determinar si 7\alphaOH-EPIA y
7\betaOH-EPIA eran neuroprotectores a una
concentración alta de 100 nM. La hipoxia produjo lesión en
25,5\pm6,4% de CA1. Este daño se redujo significativamente por
ambas 7\alphaOH-EPIA y
7\betaOH-EPIA cuando estaban presentes antes,
durante y después de la hipoxia según se muestra en la Tabla 1, a
continuación.
Experimento
2
Habiendo determinado que ambos isómeros \alpha
y \beta de 7OH-EPIA eran neuroprotectores, los
autores de la presente invención evaluaron la dependencia de la
concentración de este efecto. El control de hipoxia dio como
resultado un daño neuronal de 31,9\pm4,7% de CA1.
7\alphaOH-EPIA fue significativamente protectora
a 100 nM. Se observó una reducción pequeña, pero no significativa
estadísticamente, en daño neuronal a 10 nM, y no hubo efecto a 1
nM. En contraposición, 7\betaOH-EPIA fue
significativamente neuroprotectora a 10 nM y 100 nM, pero la
actividad se perdía si la concentración se reducía a 1 nM (véase
Tabla 2).
Se indujo isquemia cerebral por oclusión de
cuatro vasos (4VO) en ratas Wistar macho (250-280
g). Se ocluyeron ambas arterias vertebrales mediante
electrocauterización con anestesia de pentobarbital (60 mg/kg i.p.).
Se dejó que los animales se recuperaran durante 24 horas con acceso
libre al agua pero no a la comida. Al día siguiente las arterias
carótidas se expusieron bajo anestesia de 2% de halotano en 30%
oxígeno/70% óxido nitroso y se ocluyeron durante 10 minutos usando
pinzas microvasculares. Posteriormente, se retiraron ambas pinzas y
se inspeccionaron ambas arterias respecto a reperfusión inmediata.
Durante la operación y las 3 horas siguientes se mantuvo la
normotermia de los animales (37,5\pm0,5ºC) usando una manta
calefactora controlada termostáticamente conectada a un termómetro
rectal. Para control, en animales sometidos a operación ficticia se
cauterizaron ambas arterias vertebrales con anestesia de
pentobarbital y ambas arterias carótidas comunes se expusieron pero
no se pinzaron bajo anestesia de 2% de halotano en 30% oxígeno/70%
óxido nitroso al día siguiente. La herida se trató con lidocaína y
se suturó a continuación. Los animales se mantuvieron bajo una
lámpara calefactora a temperatura ambiente de 30ºC hasta que
recuperaron la consciencia.
Se investigaron siete grupos de animales:
- 1.
- (n=8) compuesto esteroideo, 7\betaOH EPIA (0,1 mg/kg, i.v. vía vena de la cola, tres inyecciones: 15 minutos antes de la inducción de la isquemia, durante la isquemia y 5 minutos después de reperfusión);
- 2.
- (n=8) compuesto esteroideo, 7\betaOH EPIA (0,3 mg/kg, i.v., tres inyecciones según se describe en 1.);
- 3.
- (n=8) compuesto esteroideo, 7\betaOH EPIA (1 mg/kg, i.v., tres inyecciones según se describe en 1.);
- 4.
- (n=8) NBQX (sal disódica, por más soluble en agua) como sustancia de referencia y control positivo (TOCRIS, Alemania, 30 mg/kg, i.p., tres inyecciones según se describe en 1.);
- 5.
- (n=8) recibieron vehículo (0,9% NaCl, que contenía 100 \mul de etanol) tres inyecciones según se describe en 1.);
- 6.
- (n=8) isquemia sola;
- 7.
- (n=8) controles operados ficticios
NBQX es
2,3-dihidroxi-6-nitro-7-sulfamoil-benzo(F)quinoxalina
y se sabe que tiene actividad neuroprotectora [Gill, R., Nordholm,
L., Lodge, D.: The neuroprotective action of
2,3-dihydroxy-6-nitro-7-sulfamoyl-benzo(F)quinoxaline
(NBQX) in a rat focal ischaemia model. Brain Res. 580,
35-43, 1992].
7\betaOH EPIA es
7\beta-hidroxiepiandrosterona, un compuesto de la
presente invención.
Las sustancias se disolvieron en 100 \mul de
etanol y finalmente se diluyeron con NaCl al 0,9%.
Después de un tiempo de supervivencia de 7 días
después de la isquemia, todos los animales fueron sometidos a
perfusión fijada transcardíacamente con paraformaldehído al 4%. Se
retiraron a continuación los cerebros cuidadosamente y se
postfijaron en el mismo fijador durante 2 horas. Después de
crioprotección en sacarosa al 30%, los cerebros se congelaron
rápidamente en isopentano y se almacenaron a -80ºC. Secciones
criostáticas de veinte micrómetros que comprendían la formación del
hipocampo se sometieron a tinción de Nissl con azul de toluidina o
fluorescencia NeuroTrace.
La gravedad del daño neuronal en la región del
hipocampo CA1 después de la isquemia se evaluó mediante el número
de neuronas supervivientes usando tinción de Nissl. Se calculó el
número medio de neuronas morfológicamente intactas por 400 \mum
de longitud en la región CA1 para cada grupo. El conteo celular se
llevó a cabo en 3-5 secciones en serie por animal y
6 veces un área de CA1 de 400 \mum por sección usando un
microscopio óptico equipado con objetivo 20x. Los datos se
analizaron estadísticamente mediante la prueba t de Student
pareada. Los datos se presentaron como media\pmSEM.
Los resultados se muestran en las Figuras 1 a 3
de los dibujos que se acompañan.
Las neuronas morfológicamente intactas del
hipocampo CA1 fueron caracterizadas mediante tinción de Nissl (azul
de toluidina y NeuroTrace, Fig. 2) con los siguientes criterios:
forma clara de perikarya neuronal, núcleo grande con nucleolo
positivo marcado, una pequeña zona de citoplasma alrededor del
núcleo con tinción de Nissl positiva, que indica el retículo
endoplasmático aproximadamente intacto con ribosomas y por lo tanto
la maquinaria de síntesis de proteína intacta.
10 minutos de isquemia global (isquemia suave) y
un tiempo de supervivencia de 7 días conducen a neurodegeneración
de células selectivamente en la región del hipocampo CA1 (Fig.
1A-1C). El número medio de células piramidales en
CA1 de animales sometidos a operación ficticia fue 121,5\pm4,3
(fijado como 100%). Por lo tanto, 60% de neuronas de CA1 murieron
después de 10 minutos de isquemia global (Fig. 1B). El número de
neuronas en el grupo de animales de isquemia e inyección i.v. de
vehículo (NaCl más 100 \mul de etanol) aplicada según se describe
en el experimento fue comparable al del grupo de isquemia sola (Fig.
1A, 1B). NBQX (30 mg/kg, i.v. tres inyecciones según se describe en
el experimento) mostró una neuroprotección significativa (p=0,03)
en células piramidales CA1 en comparación con el grupo de isquemia.
En comparación con isquemia sola NBQX conduce a 47,5% de
neuroprotección mientras que si se comparaba con los animales
sometidos a operación ficticia el efecto protector era de 68,5%. La
neuroprotección producida por NBQX estaba en conformidad con Gill y
col., 1992 y Gill 1994 demostrando la validez del modelo de
isquemia global que los autores de la presente invención han usado
en sus experimentos. 7\betaOH EPIA conduce a neuroprotección, que
depende de la concentración, de las células piramidales de
hipocampo CA1 después de 10 minutos de isquemia global y un tiempo
de supervivencia de 7 días (Fig. 1A). El análisis de la prueba t
reveló un efecto neuroprotector altamente significativo de
7\betaOH EPIA a concentraciones de 0,1 mg/kg (p=0,01) y 0,3 mg/kg
(p=0,0008). En comparación con el grupo sometido a operación
ficticia 7\betaOH EPIA mostró un efecto neuroprotector de 74,8%
(0,1 mg/kg) y un 83,9% (0,3 mg/kg) sobre células piramidales CA1,
respectivamente (Fig. 1C). 7\betaOH EPIA a una concentración de
1,0 mg/kg mostró sólo tendencia a neuroprotección, pero el efecto no
fue significativo.
En todos los experimentos con 7\betaOH EPIA
inyectada antes, durante y después de la isquemia los autores de la
presente invención nunca observaron anormalidad alguna en el
comportamiento de los animales.
Número de células piramidales de hipocampo CA1
morfológicamente intactas en ratas 7 días después de isquemia
cerebral global en ratas y bajo influencia de compuestos
diferentes.
Los datos se presentaron como número medio
\pmSEM de neuronas intactas por 400 \mum de longitud de la
región CA1.
Los datos se expresaron como porcentaje de
neuronas intactas por 400 \mum de longitud de la región CA1
comparados con los de animales sometidos a operación ficticia
fijados como 100%.
Los datos se presentaron como porcentaje
absoluto de neuroprotección cuando el número de neuronas
supervivientes en el grupo de isquemia se fijó en cero y las del
grupo sometido a operación ficticia se fijó en 100%.
Claims (6)
1. El uso de
7-hidroxiepiandrosterona para la fabricación de un
medicamento para protección contra daño neuronal agudo y
crónico.
2. El uso según la reivindicación 1, en el que
la 7-hidroxiepiandrosterona es
7\alpha-hidroxiepiandrosterona.
3. El uso según la reivindicación 1, en el que
la 7-hidroxiepiandrosterona es
7\beta-hidroxiepiandrosterona.
4. El uso según la reivindicación 1, en el que
la 7-hidroxiepiandrosterona es una mezcla de
7\alpha-hidroxiepiandrosterona y
7\beta-hidroxiepiandrosterona.
5. El uso según cualquier reivindicación
precedente, en el que el daño neuronal está producido por ictus o
trauma cerebral.
6. El uso según cualquier reivindicación
precedente, en el que el daño neuronal está producido por enfermedad
de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, discapacidad cognitiva no
demencial, lesión de la médula espinal o lesión del nervio
periférico.
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