CZ200377A3 - 7-Hydroxyepiandrosteron s neuroprotektivním účinkem - Google Patents
7-Hydroxyepiandrosteron s neuroprotektivním účinkem Download PDFInfo
- Publication number
- CZ200377A3 CZ200377A3 CZ200377A CZ200377A CZ200377A3 CZ 200377 A3 CZ200377 A3 CZ 200377A3 CZ 200377 A CZ200377 A CZ 200377A CZ 200377 A CZ200377 A CZ 200377A CZ 200377 A3 CZ200377 A3 CZ 200377A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- hydroxyepiandrosterone
- ischemia
- brain
- hypoxia
- animals
- Prior art date
Links
- 230000000324 neuroprotective effect Effects 0.000 title description 14
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 title 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 230000004224 protection Effects 0.000 claims abstract description 5
- VFPMCLQMAUVEHD-UHFFFAOYSA-N 7alpha hydroxy isoandrosterone Natural products C1C(O)CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3C(O)CC21 VFPMCLQMAUVEHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- VFPMCLQMAUVEHD-UCPSWNCLSA-N 7beta-hydroxyepiandrosterone Chemical group C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3[C@@H](O)C[C@H]21 VFPMCLQMAUVEHD-UCPSWNCLSA-N 0.000 claims description 18
- VFPMCLQMAUVEHD-KMQZSKAMSA-N (3beta,5alpha,7alpha)-3,7-dihydroxyandrostan-17-one Chemical group C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3[C@H](O)C[C@H]21 VFPMCLQMAUVEHD-KMQZSKAMSA-N 0.000 claims description 15
- 208000029028 brain injury Diseases 0.000 claims description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000007102 Chronic Brain Damage Diseases 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 4
- 208000030886 Traumatic Brain injury Diseases 0.000 claims description 3
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 claims description 2
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 claims description 2
- 210000000578 peripheral nerve Anatomy 0.000 claims description 2
- 208000020431 spinal cord injury Diseases 0.000 claims description 2
- 208000028698 Cognitive impairment Diseases 0.000 claims 1
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 claims 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000003961 neuronal insult Effects 0.000 abstract description 2
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 22
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 20
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 20
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 18
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- UQNAFPHGVPVTAL-UHFFFAOYSA-N 2,3-Dihydroxy-6-nitro-7-sulfamoyl-benzo(f)quinoxaline Chemical compound N1C(=O)C(=O)NC2=C1C=C([N+]([O-])=O)C1=C2C=CC=C1S(=O)(=O)N UQNAFPHGVPVTAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 8
- FMGSKLZLMKYGDP-USOAJAOKSA-N dehydroepiandrosterone Chemical class C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC=C21 FMGSKLZLMKYGDP-USOAJAOKSA-N 0.000 description 8
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 8
- FMGSKLZLMKYGDP-UHFFFAOYSA-N Dehydroepiandrosterone Natural products C1C(O)CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CC=C21 FMGSKLZLMKYGDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 229960002847 prasterone Drugs 0.000 description 7
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 6
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 230000004112 neuroprotection Effects 0.000 description 6
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 6
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- -1 sodium hydride Chemical class 0.000 description 6
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 6
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 230000006931 brain damage Effects 0.000 description 5
- 231100000874 brain damage Toxicity 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 5
- 201000006474 Brain Ischemia Diseases 0.000 description 4
- 206010008120 Cerebral ischaemia Diseases 0.000 description 4
- GQPLMRYTRLFLPF-UHFFFAOYSA-N Nitrous Oxide Chemical compound [O-][N+]#N GQPLMRYTRLFLPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 4
- 206010008118 cerebral infarction Diseases 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 210000002763 pyramidal cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 4
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- OLPSAOWBSPXZEA-JIEICEMKSA-N 7alpha-hydroxydehydroepiandrosterone Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3[C@H](O)C=C21 OLPSAOWBSPXZEA-JIEICEMKSA-N 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 238000010826 Nissl staining Methods 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 3
- 206010019196 Head injury Diseases 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 2
- 229910004298 SiO 2 Inorganic materials 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 230000019771 cognition Effects 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BCQZXOMGPXTTIC-UHFFFAOYSA-N halothane Chemical compound FC(F)(F)C(Cl)Br BCQZXOMGPXTTIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003132 halothane Drugs 0.000 description 2
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- QWTDNUCVQCZILF-UHFFFAOYSA-N isopentane Chemical compound CCC(C)C QWTDNUCVQCZILF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 2
- 239000001272 nitrous oxide Substances 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- DDBREPKUVSBGFI-UHFFFAOYSA-N phenobarbital Chemical compound C=1C=CC=CC=1C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O DDBREPKUVSBGFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002695 phenobarbital Drugs 0.000 description 2
- NCMZQTLCXHGLOK-ZKHIMWLXSA-N prasterone acetate Chemical compound C([C@@H]12)C[C@]3(C)C(=O)CC[C@H]3[C@@H]1CC=C1[C@]2(C)CC[C@H](OC(=O)C)C1 NCMZQTLCXHGLOK-ZKHIMWLXSA-N 0.000 description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 229950003937 tolonium Drugs 0.000 description 2
- HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M tolonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(C)C(N)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000002385 vertebral artery Anatomy 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910018072 Al 2 O 3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000002381 Brain Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical class [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000017701 Endocrine disease Diseases 0.000 description 1
- QGXBDMJGAMFCBF-UHFFFAOYSA-N Etiocholanolone Natural products C1C(O)CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC21 QGXBDMJGAMFCBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000013016 Hypoglycemia Diseases 0.000 description 1
- NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N Lidocaine Chemical compound CCN(CC)CC(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000019430 Motor disease Diseases 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- ORNBQBCIOKFOEO-YQUGOWONSA-N Pregnenolone Natural products O=C(C)[C@@H]1[C@@]2(C)[C@H]([C@H]3[C@@H]([C@]4(C)C(=CC3)C[C@@H](O)CC4)CC2)CC1 ORNBQBCIOKFOEO-YQUGOWONSA-N 0.000 description 1
- 241000220304 Prunus dulcis Species 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 208000032851 Subarachnoid Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 206010053648 Vascular occlusion Diseases 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 125000000746 allylic group Chemical group 0.000 description 1
- 235000020224 almond Nutrition 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 238000007630 basic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N benzyl benzoate Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)OCC1=CC=CC=C1 SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 210000004958 brain cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 201000004559 cerebral degeneration Diseases 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 108050003126 conotoxin Proteins 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- OPQARKPSCNTWTJ-UHFFFAOYSA-L copper(ii) acetate Chemical compound [Cu+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O OPQARKPSCNTWTJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- AFABGHUZZDYHJO-UHFFFAOYSA-N dimethyl butane Natural products CCCC(C)C AFABGHUZZDYHJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QLTXKCWMEZIHBJ-PJGJYSAQSA-N dizocilpine maleate Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O.C12=CC=CC=C2[C@]2(C)C3=CC=CC=C3C[C@H]1N2 QLTXKCWMEZIHBJ-PJGJYSAQSA-N 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000003438 effect on compound Effects 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- QGXBDMJGAMFCBF-LUJOEAJASA-N epiandrosterone Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC[C@H]21 QGXBDMJGAMFCBF-LUJOEAJASA-N 0.000 description 1
- 210000000918 epididymis Anatomy 0.000 description 1
- 201000010063 epididymitis Diseases 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 210000005003 heart tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 210000001879 hippocampal ca1 region Anatomy 0.000 description 1
- 230000000971 hippocampal effect Effects 0.000 description 1
- 210000004295 hippocampal neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000033444 hydroxylation Effects 0.000 description 1
- 230000001146 hypoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000013383 initial experiment Methods 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 229960004194 lidocaine Drugs 0.000 description 1
- 210000001853 liver microsome Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 150000002736 metal compounds Chemical class 0.000 description 1
- FJQXCDYVZAHXNS-UHFFFAOYSA-N methadone hydrochloride Chemical compound Cl.C=1C=CC=CC=1C(CC(C)N(C)C)(C(=O)CC)C1=CC=CC=C1 FJQXCDYVZAHXNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 239000004090 neuroprotective agent Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M potassium hydrogencarbonate Chemical compound [K+].OC([O-])=O TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- ORNBQBCIOKFOEO-QGVNFLHTSA-N pregnenolone Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 ORNBQBCIOKFOEO-QGVNFLHTSA-N 0.000 description 1
- 229960000249 pregnenolone Drugs 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000000506 psychotropic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010926 purge Methods 0.000 description 1
- 239000013643 reference control Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012312 sodium hydride Substances 0.000 description 1
- 229910000104 sodium hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001256 steam distillation Methods 0.000 description 1
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 208000021331 vascular occlusion disease Diseases 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
- A61K31/565—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol
- A61K31/568—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol substituted in positions 10 and 13 by a chain having at least one carbon atom, e.g. androstanes, e.g. testosterone
- A61K31/5685—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol substituted in positions 10 and 13 by a chain having at least one carbon atom, e.g. androstanes, e.g. testosterone having an oxo group in position 17, e.g. androsterone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
- A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Psychology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
Vynález se týká použití řady 7-hydroxysteroidních sloučenin pro ochranu před smrtí mozkových buněk, které jsou tak užitečné při léčbě a prevenci stavůjako Alzheimerova choroba, Parkinsonova choroba, zhoršení kognice, které není demencí (CIND), mrtvice, mozkové trauma, poranění páteřní míchy a periferních nervů nebo následků těchto stavů; jsou též užitečné pro zlepšení kognice.
Dosavadní stav techniky
Produkce 7a-hydroxylovaných metabolitů dehydroepiandrosteronu (DHEA) in vivo je známa od roku 1959, kdy byl identifikován 7a-hydroxydehydroepiandrosteron v moči (Schneider, J.J.; Lewbart, M.L.: Recent Progr. Horm. Res. 15 (1959), 201-230; Starka, L. et al: Clin. Chim. Acta 7 (1961) 309-316). Od té doby byla publikována řada zpráv o rozsáhlé 7a-hydroxylaci 3P-hydroxysteroidních substrátů (včetně DHEA a epiandrosteronu - ΕΡΙΑ) ve tkáňových preparátech mnoha lidských orgánů, včetně jater dospělých i plodu, varlat, nadvarlat, pokožky, savčí tkáně, prostaty, tukových stromálních buněk a mandlí. Hydroxylace DHEA v poloze 7 byla též doložena v krysích játrech a v řadě myších tkání a orgánů. Ve všech těchto studiích byl 7a-hydroxydehydroepiandrosteiOn zdaleka nevíce produkovaným metabolitem např. Doostzadech et al (Steroids 63 (1998) 608-614) uvedli, že rychlost produkce 7a-hydroxydehydroepiandrosteronu mikrosomy myších jater byla více než 15krát vyšší než rychlost produkce 7(i-hydroxyanalogu.
Bylo též doloženo, že ΕΡΙΑ, DHEA a pregnenolon jsou v krysím mozku rychle a rozsáhle transformovány na odpovídající 7a-hydroxymetabolity (Guiraud, J.M. et al: Steroids 34 (1979) 241-248; Warner, M. et al: Endocrinology 124 (1989) 2699-2706; Akwa, Y. et al: Biochem. J. 288 (1992) 959-964).
• 0
0 0 0 0 0 • 00 · · • β · · · 0 • 0 0 0 0
0000 00 00
Dokument WO 97/37664 popisuje použití řady sloučenin včetně
7a-hydroxysubstituovaných steroidů v léčbě neuropsychiatrických, imunitních nebo endokrinních poruch. Mezi poruchami, které lze podle dokumentu WO 97/37664 těmito sloučeninami léčit, je Alzheimerova choroba. Mechanismus těchto poruch však podle dokumentu WO 97/37664 spočívá v nedostatku 7a-hydroxysubstituovaných steroidů v mozku, a léčba tedy zahrnuje podávání 7a-hydroxysubstituováných steroidů, aby byl tento předpokládaný deficit doplněn. Postup popsaný v dokumentu WO 97/37664 léčí již existující stav, spíše než by se snažil předcházet jeho vzniku nebo zhoršení prevencí dalšího mozkového poškození. Dokument WO 97/37664 tedy nepopisuje neuroprotektivní účinek. Nenaznačuje ani, že tyto sloučeniny lze použít pro prevenci poškození způsobených náhlými a traumatickými příhodami, jako je mrtvice.
S překvapením jsme zjistili, že 7-hydroxyepiandrosteron, ať už α, β nebo jejich směs, lze použít při ochraně proti akutním a chronickým mozkovým poškozením způsobeným např. mrtvicí, mozkovým traumatem a mozkovou ischémii vyvolanými např. subarachnoidálním krvácením nebo vznikajícími při zavedení srdečního bypassu.
Při stavech jako prodloužená hypoxie nebo ischémie, které mohou a nemusejí souviset s hypoglykémií, dochází někdy k mozkovému poškození v různém rozsahu.
K ischémii dochází typicky při srdečních infarktech, avšak poškození, které v těchto případech vzniká, je omezeno v podstatě na srdeční tkáně; kromě toho byly již vyvinuty určité způsoby léčby. Tento vynález se týká spíše krátkodobé i dlouhodobé ischémie mozku, která vzniká jako důsledek mrtvice nebo poranění hlavy. Vážnost ischemického stavu závisí na charakteru mrtvice nebo poranění, jde však vždy o poškození mozku, kterého se týká tento vynález.
V dosavadním stavu techniky jsou známa různá neuroprotektivní činidla, která mají zmírňovat problém mozkového poškození, jsou však většinou spojena s vážnými vedlejšími účinky. Např. MK801 (maleát dizocilpinu) je poměrně jednoduchá molekula, která prokazatelně poskytuje určitou úroveň neuroprotekce ischemickým pacientům. Je však spojena též s „alarmujícími psychotropními účinky“ (Martindale) a vážnými motorickými poruchami. Neuroprotektivní účinky jsou detailně popsány v Brain Research 755 (1997) 36-46 (Pringle, A.K.
• 9 • 9
9 · 9
et alj, citovaném zde tímto jako odkaz. Tíž autoři dříve popsali i neuroprotektivní účinky konotoxinu; také u této sloučeniny byly nicméně pozorovány vážné vedlejší účinky in vivo.
Podstata vynálezu
Vynález se týká použití 7-hydroxyepiandrosteronu (7-hydroxy-EPIA) pro přípravu léčiva pro ochranu před akutním nebo chronickým mozkovým poškozením.
Tato sloučenina je znázorněna vzorcem I
ajejí7aa7p isomery jsou znázorněny vzorci Ia a lb (v tomto pořadí)
HO1
······ · ♦ · · · ······ · 9 9 · ···· ·· ·· ···· 99 99
Vynález též zahrnuje použití prekurzorů těchto sloučenin a sloučenin, které vznikají metabolizací těchto sloučenin in vivo.
Isomery a a β lze použít samostatně nebo ve směsi a v případě směsi v jakémkoli poměru. Isomer 7β má však, jak se zdá, větší aktivitu, a proto je výhodnější.
Sloučeniny podle vynálezu lze připravit různými postupy, v podstatě známými, které vycházejí z příslušných steroidů. Lze např. použít postup popsaný v literatuře, který je uveden výše, kdy vznikne směs odpovídajících sloučenin 7β a 7a, dále separovatelných známými technikami.
Např. 7a-hydroxyepiandrosteron a/ nebo 7β-hydroxyepiandrosteron lze připravit z dehydroepiandrosteronu allylickou oxidací po protekci 3β-1ιγάΓθχγ8^ρίηγ a 17-ketoskupiny běžnými postupy. Produkt je pak zredukován rozpustnou kovovou sloučeninou, jako je hydrid sodný, a 3β-1^ΐΌχγδ^ιρϊη3 a 17-ketoskupina jsou deprotektovány. 7a-Hydroxy- a 7β-1^Γθχγepimery jsou pak podle potřeby separovány běžnými postupy, např. sloupcovou chromatografií, a lze je krystalizovat za vzniku čistých látek.
Alternativní syntetický postup je popsán ve schématu I • · • · · ·
V reakčním schématu I je dehydroepiandrosteron II acetylován za vzniku acetátu III, který dále reaguje s ethylenglykolem za vzniku ketalu IV. Ten je oxidován, jak je popsáno v příkladu 3, za vzniku 7-ketosloučeniny V, která je deacetylována za vzniku sloučeniny VI, která dá redukcí vznik 7-hydroxy-17-ketalepiandrosťeronu VII. Ketal je odstraněn reakcí s kyselinou a vzniká • · · *
7-hydroxyepiandrosteron VIII, který je následně chromatograficky separován na 7β- a 7cc-isomery za vzniku 7a-hydroxyepiandrosteronu IX a 7p-hydroxyepiandrosteronu X.
Sloučeniny podle vynálezu lze podávat pacientům, u nichž je podezření na riziko vzniku ischemické příhody, zvláště mrtvice nebo poranění hlavy, nebo u nichž je podezření na vývoj chronického degenerativního onemocnění, např. Alzheimerovy choroby nebo CIDN, jejichž vznik může být stimulován chronickými podprahovými hodnotami ischémie a/ nebo sníženou produkcí energie neuronů - jevy často pozorovanými ve stárnoucím mozku. Taková profylaxe může mít velmi významné účinky. Bylo však doloženo, že sloučeniny podle vynálezu jsou účinné i při podání po ischemické příhodě, je však výhodné podávat tyto sloučeniny co nejdříve, aby se maximálně zabránilo mozkové degeneraci. Za některých okolností je žádoucí podávat sloučeniny opakovaně, zvláště pokud riziko ischemické příhody u pacienta přetrvává.
Vhodným způsobem podávání jsou obecně injekce, které umožňují dosažení požadovaného účinku v nejkratší možné době. Zvláště výhodná je pak intravenózní injekce, v některých případech může být však vhodnější aplikace přímo do mozkomíšní tekutiny.
Dávka sloučeniny podle vynálezu závisí na mnoha faktorech, jako je věk, tělesná hmotnost a celkový stav pacienta, dále způsob, častost a forma podávání. Obecně se však doporučuje dávka 0,01 až 50 mg/kg tělesné hmotnosti, s výhodou dávka 0,05 až 20 mg/kg tělesné hmotnosti. Toto množství lze podávat najednou nebo v několika dávkách.
Vynález je dále ilustrován následujícími neomezujícími příklady, z nichž příklady 1 až 7 ilustrují přípravu sloučenin podle vynálezu a příklady 8 a 9 ilustrují jejich účinek. V příkladech 1 až 7 se římské číslice vztahují na vzorce v reakčních schématech uvedených výše.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1: dehydroepiandiOsteron-3-acetát III
Roztok 50 ml pyridinu a 50 ml acetanhydridu obsahující 10 g dehydroepiandrosteronu II (34,72 mmol) byl zahříván pod zpětným chladičem po dobu 4 hodin. Reakční médium bylo ochlazeno, vlito do vody a extrahováno ethyl-acetátem. Organická fáze byla usušena nad bezvodým síranem sodným a odpařena do sucha. Bylo získáno 11,0 g (33,33 mmol, 96 hmotn. %) dehydroepiandrosteron-3-acetátu III, který byl rekrystalizován z ethanolu.
Příklad 2: 17-ketaldehydroepiandrosteron-3-acetát IV
Roztok 100 ml toluenu obsahující 5 g dehydroepiandrosteron-3-acetátu III (15,15 mmol), 5 ml ethylenglykolu a katalytické množství /?-toluensulfonové kyseliny byl zahříván pod zpětným chladičem při destilaci s vodní parou za použití Dean-Starkovy aparatury po dobu 24 hodin. Reakční médium bylo pak vlito do 100 ml 10 obj. % roztoku uhličitanu draselného ve vodě. Organická fáze byla dekantována. Vodná fáze byla extrahována ethyl-acetátem. Organické fáze byly spojeny a odpařeny do sucha. Bylo získáno 5,10 g (13,64 mmol, 90 hmotn. %) 17-ketaldehydroepiandrosteron-3-acetátu IV, který byl rekrystalizován z ethanolu.
Příklad 3: 7-keto-17-ketaldehydroepiandrosteron-3-acetát V
Roztok 70 ml pyridinu obsahující 5 g 17-ketaldehydroepiandrosteron-3-acetátu IV (13,37 mmol) a katalytické množství bengálské červeně byl ozařováno střednětlakou rtuťovou výbojkou s kyslíkovým výstřelkováním. Po 24 hodinách bylo do reakčního média přidáno katalytické množství acetátu měďnatého. Po 24 hodinách bylo reakční médium odpařeno do sucha. Odparek byl purifikován sloupcovou chromatografií na silikagelu (SiO2/ethyl-acetát:cyklohexan 3/7). Bylo získáno 3,11 g (8,02 mmol, 60 hmotn. %) 7-keto-l 7-ketaldehydroepiandrosteron-3-acetátu V.
Příklad 4: 7-keto-l7-ketaldehydroepiandrosteron VI
Roztok 50 ml methanolu obsahující 1 hmotn. % hydroxidu draselného a 1 g 7-keto-l7-ketaldehydroepiandrosteron-3-acetátu V (2,58 mmol) byl zahříván pod zpětným chladičem po dobu 2 hodin. Reakční médium bylo pak ochlazeno, neutralizováno a extrahováno
9
9 9 ethyl-acetátem. Organická fáze byla usušena nad bezvodým síranem sodným a pak odpařena do sucha. Bylo získáno 802 mg (2,32 mmol, 90 hmotn. %) 7-keto-17-ketaldehydroepiandrosteronu VI, který byl rekrystalizován z methanolu.
Příklad 5: 7-hydroxy-17-ketalepiandrosteron Vil g 7-keto-17-ketaldehydroepiandrosteronu VI (28,90 mmol) bylo při -33 °C přidáno ke kapalnému roztoku amoniaku obsahujícímu 2,65 g sodíku. Po 4 hodinách byl přidáván chlorid amonný, dokud nezmizelo modré zabarvení roztoku. Pak bylo přidáno 2,65 g sodíku a po 4 hodinách byl opět přidáván chlorid amonný, dokud nezmizelo modré zabarvení roztoku. Pak byla přidána voda a amoniak byl odpařen. Reakční médium bylo extrahováno ethyl-acetátem. Organická fáze byla usušena nad bezvodým síranem sodným a pak odpařena do sucha. Bylo získáno 6,07 g (17,34 mmol, 60 hmotn. %) 7-hydroxy-17-ketalepiandrosteronu VII.
Příklad 6: 7-hydroxyepiandrosteron VIII
Roztok 100 ml acetonu obsahující 5 ml vody, 10 g 7-hydroxy-17-ketalepiandrosteronu VII (28,57 mmol, 50 hmotn. %) a katalytické množství p-toluensulfonové kyseliny byl zahříván pod zpětným chladičem po dobu 4 hodin. Reakční médium bylo pak ochlazeno, vlito do 100 ml 10 obj. % roztoku uhličitanu sodného ve vodě a extrahováno ethyl-acetátem. Organická fáze byla usušena nad bezvodým síranem sodným a pak odpařena do sucha. Odparek byl purifikován sloupcovou chromatografíí na silikagelu (SiO2/ethyl-acetát). Bylo získáno 5,24 g (17,14 mmol, 60 hmotn. %) 7-hydroxyepiandrosteronu VIII.
Příklad 7: 7a-hydroxyepiandrosteron IX a 7p-hydroxyepiandrosteron X
7-hydroxyepiandrosteron VIII (5 g) obsahující epimery 7a a 7β v poměru 65/35 byl purifikován sloupcovou chromatografíí na silikagelu (AI2O3/CHCI3). Nejdříve byl získán ♦ · • « · • « «
7p-hydroxyepiandrosteron X (2,5 g), pak 7a-hydroxyepiandrosteron IX (1,34 g).
7a-Hydroxyepiandrosteron X a 7p-hydroxyepiandrosteron IX byly rekrystalizovány z ethyl-acetátu.
Příklad 8; Protokol pro studium hypoxického mozkového poškození
Organotypické kultury řezů hippocampu byly připraveny základním postupem podle Pringle et al (1996, 1997) a modifikovány následujícím způsobem:
Mláďata krysy kmene Wistar (8-11 dní stará) byla zabita a hippocampus byl rychle oddělen do ledového Geyova rovnovážného solného roztoku obsahujícího glukosu v množství 4,5 mg/ml. Řezy byly separovány, vloženy do insertů kultury Millicell CM (4 na misku) a udržovány po dobu 14 dní za podmínek 37 °C/ 5 % CO2. Médium mělo složení 25 % tepelně inaktivovaného koňského séra, 25 % Hankova rovnovážného solného roztoku (HBSS) a 50 % minimálního základního média s přídavkem Earlových solí (MEM) s 1 mM glutaminu a 4,5 mg/ml glukosy. Médium bylo vyměňováno každé 3-4 dny.
Experimentální hypoxie byla provedena, jak bylo dříve popsáno (Pringle et al, 1996, 1997). Stručně shrnuto, kultury byly převedeny do média neobsahujícího sérum (SFM - 75 % MEM, 25 % HBSS s 1 mM glutaminu a 4,5 mg/ml glukosy) obsahujícího 5 pg/ml fluorescenčního exkluzního barviva propidiumjodidu (PI). Kultury byly před měřením fluorescence ekvilibrovány v tomto médiu po dobu 60 minut. Fluorescence PI byla stanovena invertovaným mikroskopem Leica se sadou rhodaminových filtrů. Všechny kultury, u nichž byla v tomto stadiu naměřena fluorescence PI, byly z dalších experimentů vyloučeny. Hypoxie byla indukována převedením kultur do SFM (+ PI), které bylo nasyceno 95% N2/ 5 % CO2. Misky s kulturami byly pak umístěny do vzduchotěsné komory, v níž byla atmosféra nasycena 95% N2/ 5 % CO2 kontinuálním profukováním plynem rychlostí 10 1/min po dobu 10 minut před uzavřením, a inkubovány po dobu 170 minut (celková doba hypoxie byla tedy 180 minut). Nakonec byly hypoxické kultury vráceny do SFM s PI v normální atmosféře a inkubovány po dobu dalších 24 hodin.
• · · · 00
Mozkové poškození bylo stanoveno, jak bylo popsáno dříve (Pringle et al, 1996, 1997), za použití bud’ N1H Image 1.60 na počítači Apple Ilsi, nebo OpenLab 2.1 (Improvision) na počítači Macintosh G4/400. K zobrazení byla použita monochromní kamera a zobrazení byla uložena na optický disk pro pozdější analýzu. Zobrazení přenosu světla byla zachycena bezprostředně před přídavkem léčiv a zobrazení fluorescence Pl byla naměřena na konci dvacetičtyřhodinového posthypoxického zotavovacího období. Oblast buněčné vrstvy CA1 byla určena ze zobrazení přenosu světla. Oblast fluorescence Pl v CA1 byla změřena za použití funkce hustoty řezu, která je součástí NI11 Image nebo OpenLab, a mozkové poškození bylo stanoveno jako podíl CA1, kde byla fluorescence Pl detekována vyšší než pozadí.
Steroidní sloučeniny byly připraveny tak, že výchozí roztok v ethanolu o koncentraci 1 mg/ml byl dále rozředěn SMF. Sloučeniny byly přidány ke kulturám 45 minut před hypoxií, během hypoxie a posthypoxického zotavovacího období. Kontrolní pokusy představovaly kultury ošetřené pouze vehikulem.
Výsledky
Pokus 1
Účelem výchozího pokusu bylo určit, zda jsou 7a-hydroxyepiandrosteron a 7p-hydroxyepiandrosteron neuroprotektivní při vysoké koncentraci 100 nM. Hypoxií vznikla léze ve 25,5±6,4 % CA1. Toto poškození bylo značně sníženo 7a-hydroxyepiandrosteronem i 7p-hydroxyepiandrosteronem podávanými před hypoxií, během ní i po ní (viz tab. 1).
Tabulka 1
| Sloučenina | N | Podíl poškození CA1 (%) |
| Kontrolní hypoxie | 17 | 25,5±6,4 |
| Hypoxie + 100 nM 7a-hydroxyepiandrosteronu | 16 | 4,0±2,9” |
| I-Iypoxie + 100 nM 7p-hydroxyepiandrosteronu | 16 | 9,0±4,7’ |
• tttt· • tttt · · tt · tttt· · • · · tttt tttttttt tttt tttt
Pokus 2
Po potvrzení neuroprotektivního účinku 7a-hydroxyepiandrosteronu i 7p-hydroxyepiandrosteronu byla stanovena závislost tohoto účinku na koncentraci sloučenin. Kontrolní hypoxie způsobila mozkové poškození 31,9±4,7 % CA1. 7a-Hydroxyepiandrosteron byl významně neuroprotektivní při koncentraci 100 nM. Malé, ale nestatisticky významné snížení poškození neuronů bylo pozorováno při koncentraci 10 nM a při koncentraci 1 nM nebyl pozorován žádný účinek. Naproti tomu 7P-hydroxyepiandrosteron byl významně neuroprotektivní při koncentraci 10 nM a 100 nM, ale jeho účinek se ztratil, pokud koncentrace klesla na 1 nM, jak dokládá tabulka 2.
Tabulka 2
| Sloučenina | N | Podíl poškození CA1 (%) |
| Kontrolní hypoxie | 29 | 31,9+4,7 |
| Hypoxie + 1 nM 7a-hydroxyepiandrosteronu | 14 | 28,8±5,8 |
| Hypoxie + 10 nM 7a-hydroxyepiandrosteronu | 15 | 21,9±8,1 |
| Hypoxie + 100 nM 7a-hydroxyepiandrosteronu | 16 | 11,8±2,8** |
| Hypoxie + 1 nM 7β-hydroxyepiandrosteronu | 15 | 20,6±7,2 |
| Hypoxie + 10 nM 7p-hydroxyepiandrosteronu | 12 | 11,9±4,7* |
| Plypoxie + 100 nM 7p-hydroxyepiandrosteronu | 13 | 14,3±5,0’ |
Příklad 9: Celková mozková ischémie krys (4 cévní okluze)
Mozková ischémie byla vyvolána 4 cévními olduzemi (4VO) u samce krysy kmene Wistar (250-280 g). Vertebrální artérie byly uzavřeny elektrokauterizací při fenobarbitalní anestézii (60 mg/kg intraperitoneálně). Zvířata byla ponechána 24 hodit se zotavit, přičemž měla volný přístup k vodě, ne však k potravě. Další den byly krční artérie vystaveny anastézii 2% halotanu v 30 % kyslíku/ 70 % oxidu dusného a uzavřeny na dobu 10 minut pomocí mikrovaskulárních svorek. Pak byly svorky odstraněny a u artérií byla zkoumána okamžitá reperfúze. Během operace a 3 hodiny po ní byla normální tělesná teplota zvířat (37,5±0,5 °C) udržována termostaticky kontrolovanou vyhřívanou přikrývkou připojenou k rektálnímu teploměru. U jedné • · skupiny kontrolních zvířat byly vertebrální artérie též kauterizovány při fenobarbitalní anestézii a pak byly následující den vystaveny anastézii 2% halotanu v 30 % kyslíku/ 70 % oxidu dusného, ovšem bez uzavření svorkami. Zranění bylo ošetřeno lidokainovým gelem a sešito. Zvířata byla umístěna pod zahřívací lampu při 30 °C, dokud nenabyla vědomí.
Bylo studováno 7 skupin zvířat:
1. (8 zvířat) steroidní sloučenina, 7β-hydroxyepiandrosteron (0,1 mg/kg intravenózně ocasní žilou, 3 injekce: 15 minut před vyvoláním ischémie, během ischémie a 5 minut po reperfúzi)
2. (8 zvířat) steroidní sloučenina, 7β-hydroxyepiandrostelΌn (0,3 mg/kg intravenózně ocasní žílou, 3 injekce: 15 minut před vyvoláním ischémie, během ischémie a 5 minut po reperfúzi)
3. (8 zvířat) steroidní sloučenina, Ζβ-ΙιγάΓοχγερίβιιάΐΌΒίβΓοη (1 mg/kg intravenózně ocasní žilou, 3 injekce: 15 minut před vyvoláním ischémie, během ischémie a 5 miut po reperfúzi)
4. (8 zvířat) NBQX (disodná sůl z důvodu lepší rozpustnosti ve vodě) jako referenční látka a pozitivní kontrola (TOCRIS, SRN, 30 mg/kg intraperitoneálně, 3 injekce, jak je popsáno výše)
5. (8 zvířat) vehikulum (0,9% NaCl s obsahem 100 μΐ ethanolu), 3 injekce, jak je popsáno výše
6. (8 zvířat) pouze ischémie
7. (8 zvířat) operovaná kontrolní zvířata.
NBQX je 2,3-dihydroxy-6-nitro-7-sulfamoylbenzo(F)chinoxalin, což je látka s prokázanou neuroprotektivní aktivitou (Gill, R.; Nordholm, L.; Lodge, D.: The neuroprotective action of 2,3-dihydroxy-6-nitro-7-sulfamoylbenzo(F)quinoxaline (NBQX) in a rat focal ischaemia model. Brain Res. 580, 35-43, 1992).
Látky byly rozpuštěny ve 100 μΐ ethanolu a pak zředěny 0,9% NaCl.
Po přežití 7 dní po ischémii byla zvířatům fixována perfúze 4% paraformaldehydem do srdce. Mozky byly opatrně vyjmuty a fixovány v témž médiu po dobu 2 hodin. Po kryoprotekci v 30% sacharose byly mozky rychle zmraženy v isopentanu a uchovávány při -80 °C. Dvacetimikrometrové kryostatické řezy obsahující útvar hippocampu byly obarveny Nisslovou metodou toluidinovou modří nebo fluorescencí NeuroTrace.
• « ·♦ ·* ·*
9 9 9 9
99 9 9 * • · 9 9 9 9 9
9 9 9 9 ·
99 9 99 9 9 99 9 9
Analýza dat
Vážnost mozkového poškození v oblasti CA1 hippocampu po ischémii byla vyhodnocena počtem přeživších neuronů detekovaných Nisslovým barvením. Pro každou skupinu byl v CA1 oblasti stanoven střední počet morfologicky nepoškozených neuronů na délku 400 pm. Spočítání buněk bylo provedeno v 3-5 sériových řezech u každého zvířete a v šesti 400pm oblastech CA1 v každém řezu pomocí světelného mikroskopu s objektivem 20x. Data byla statisticky vyhodnocena Studentovým T-testem a udána jako střední hodnota ± odchylka.
Výsledky a diskuse
Výsledky znázorňují obrázky 1 až 3.
Morfologicky nepoškozené neurony CA1 hippocampu byly charakterizovány Nisslovým barvením (toluidinová modř nebo fluorescence NeuroTrace, obr, 2) podle následujících kritérií: jasný tvar perikarya neuronu, velké jádro s pozitivně obarveným jadérkem, malá oblast cytoplasmy okolo jádra s pozitivním Nisslovým obarvením, označující přítomnost neporušeného hrubého endoplasmatického retikula s ribosomy, což signalizuje neporušenou schopnost syntézy proteinů.
minut celkové ischémie (mírná ischémie) a doba přežití 7 dní vedou k neurodegeneraci pyramidálních buněk výlučně v oblasti CA1 hippocampu (obr. 1A-1C). Střední počet pyramidálních buněk v CA1 kontrolních operovaných zvířat byl 121,5±4,3 (uvažováno jako 100 %). Po 10 minutách celkové ischémie zahynulo 60 % neuronů CA1 (obr. IB). Počet neuronů u zvířat ve skupině vystavené ischémii a intravenózní injekci vehikula (NaCI + 100 μΐ ethanolu) aplikované, jak je popsáno výše, bylo srovnatelné se skupinou vystavenou pouze ischémii (obr. ΙΑ, IB). NBQX (30 mg/kg, 3 intravenózní injekce, jak je popsáno výše) vykazoval signifikantní neuroprotekci (p=0,03) pyramidálních buněk CA1 ve srovnání s ischemickou skupinou. V porovnání s čistě ischemickou skupinou vyvolává NBQX 47,5% neuroprotekci, zatímco ve srovnání s operovanými kontrolními zvířaty byl jeho neuroprotektivní účinek 68,5 %.
• · · ·
Neuroprotekce vyvolaná NBQX byla v souladu s Gill et al, 1992, a Gill, 1994, kde byla demonstrována platnost modelu celkové ischémie použitého v našich experimentech. 7p-HydiOxyepiandrosteron má neuroprotektivní účinek na pyramidální buňky CA1 hippocampu po 10 minutách celkové ischémie a 7 dnech přežití, který je závislý na koncentraci (obr. IA). Analýza ϊ-testem odhalila vysoce signifikantní neuroprotektivní účinek 7p~hydroxyepiandrosteronu v koncentracích 0,1 mg/kg (p=0,01) a 0,3 mg/kg (p=0,000 8). Ve srovnání s operovanými kontrolními zvířaty byl neuroprotektivní účinek 7p-hydiOxyepiandrosteronu na pyramidální buňky CA1 74,8 % (pro 0,1 mg/kg) a 83,9 % (pro 0,3 mg/kg) (obr. 1C). 7(j-llydroxyepiandrosteron v koncentraci 1,0 mg/kg vykazoval pouze tendenci neuroprotekce, ale jeho účinek nebyl signifikantní.
V žádném z experimentů s 73-hydroxyepiandrosteronem injikovaném před ischémií, během ní i po ní nebyly pozorovány žádné abnormality v chování zvířat.
Vysvětlivky k obrázkům:
Počet morfologicky nepoškozených pyramidálních buněk CA1 hippocampu u krys po 7 dnech po celkové mozkové ischémií při vlivu různých sloučenin.
Data byla uvedena jako střední počet ± odchylka nepoškozených neuronů na 400 pm délky oblasti CA1.
Data jsou vyjádřena jako podíl nepoškozených neuronů na 400 pm délky oblasti CA1 ve srovnání s operovanými kontrolními zvířaty (100 %).
Data byla vyhodnocena jako absolutní procento neuroprotekce, když byl počet přeživších neuronů v ischemické skupině považován za 0 % a počet přeživších neuronů ve skupině operovaných kontrolních zvířat považován za 100 %.
• 9 · 9
Průmyslová využitelnost
Vynález se týká použití 7-hydroxyepiandrosteronu (7-hydroxy-EPIA) pro přípravu léčiva pro ochranu před akutním nebo chronickým mozkovým poškozením.
Claims (6)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Použití 7-hydroxyepiandrosteronu pro přípravu léčiva pro ochranu před akutním nebo chronickým mozkovým poškozením.
- 2. Použití podle nároku 1, kde 7-hydroxyepiandrosteron je 7a-hydroxyepiandrosteron.
- 3. Použití podle nároku 1, kde 7-hydroxyepiandrosteron je 7p-hydroxyepiandrosteron.
- 4. Použití podle nároku 1, kde 7-hydroxyepiandrosteron je směs 7a-hydroxyepiandrosteronu a 7p-hydroxyepiandrosteronu.
- 5. Použití podle kteréhokoli z nároků 1 až 4, kde je mozkové poškození způsobeno mrtvicí nebo mozkovým traumatem.
- 6. Použití podle kteréhokoli z nároků 1 až 5, kde je mozkové poškození způsobeno Alzheimerovou chorobou, Parkinsonovou chorobou, zhoršením kognice, které není demencí, poraněním páteřní míchy nebo periferních nervů.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB0016022A GB2363983A (en) | 2000-06-29 | 2000-06-29 | Protection against neuronal damage using 7-hydroxyepiandrosterone |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ200377A3 true CZ200377A3 (cs) | 2003-06-18 |
| CZ299676B6 CZ299676B6 (cs) | 2008-10-15 |
Family
ID=9894707
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20030077A CZ299676B6 (cs) | 2000-06-29 | 2001-06-29 | 7-Hydroxyepiandrosteron s neuroprotektivním úcinkem |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US7718639B2 (cs) |
| EP (1) | EP1294382B1 (cs) |
| JP (1) | JP4942905B2 (cs) |
| KR (1) | KR100786284B1 (cs) |
| CN (1) | CN100459980C (cs) |
| AT (1) | ATE401897T1 (cs) |
| AU (2) | AU2001267709B2 (cs) |
| CA (1) | CA2414584C (cs) |
| CY (1) | CY1108773T1 (cs) |
| CZ (1) | CZ299676B6 (cs) |
| DE (1) | DE60134979D1 (cs) |
| DK (1) | DK1294382T3 (cs) |
| ES (1) | ES2310182T3 (cs) |
| GB (1) | GB2363983A (cs) |
| HK (1) | HK1052300B (cs) |
| HU (1) | HU227152B1 (cs) |
| IL (2) | IL153541A0 (cs) |
| NO (1) | NO327959B1 (cs) |
| PL (1) | PL200699B1 (cs) |
| PT (1) | PT1294382E (cs) |
| RU (1) | RU2307654C2 (cs) |
| SI (1) | SI1294382T1 (cs) |
| WO (1) | WO2002000225A1 (cs) |
| ZA (1) | ZA200300085B (cs) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2363984A (en) * | 2000-06-29 | 2002-01-16 | Hunter Fleming Ltd | Protection against neuronal damage using 3-hydroxy-7 -hydroxy steroids and 3-oxo-7 -hydroxy steroids |
| GB2378898A (en) * | 2001-08-14 | 2003-02-26 | Hunter Fleming Ltd | Prophylactic and therapeutic use of hydroxysteroids |
| JP2006506445A (ja) | 2002-08-28 | 2006-02-23 | ホリス − イーデン ファーマスーティカルズ、 インコーポレイテッド | 治療処置の方法 |
| GB0409498D0 (en) * | 2004-04-28 | 2004-06-02 | Hunter Fleming Ltd | Transdermal steroid formulation |
| DK2097437T3 (en) * | 2006-11-21 | 2015-06-29 | Umecrine Cognition Ab | THE USE OF PREGNANCY AND ANDROSTANOSTEROIDS FOR THE PREPARATION OF A PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR THE TREATMENT OF CNS DISEASES |
| GB0623971D0 (en) * | 2006-11-30 | 2007-01-10 | Hunter Fleming Ltd | Modulation of prostaglandin/cyclooxygenase metabolic pathways |
| PL2097079T3 (pl) | 2006-11-30 | 2012-11-30 | Hunter Fleming Ltd | Modulowanie szlaków metabolicznych prostaglandyna/cyklooksygenaza |
Family Cites Families (33)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| YU243975A (en) | 1974-10-14 | 1982-06-30 | Schering Ag | Process for obtaining 7-hydroxyestradiols |
| US5292730A (en) * | 1990-08-29 | 1994-03-08 | Humanetics Corporation | Modulation of immune system with Δ5-androstenes |
| US5707983A (en) | 1990-08-29 | 1998-01-13 | Humanetics Corporation | Treatment of alzheimer's disease and modulation of immune system with Δ5-androstenes |
| US5212167A (en) * | 1991-09-12 | 1993-05-18 | Trustees Of Boston University | Modulation of receptor-mediated ion transport |
| FR2696934B1 (fr) * | 1992-10-20 | 1995-06-02 | Conservatoire Nal Arts Metiers | Dérivés de stéroïdes naturels 3B hydroxyles ayant des propriétés de déclenchement et de stimulation de l'immunité, composition les contenant et procédé pour les obtenir. |
| US5846963A (en) | 1995-06-07 | 1998-12-08 | University Of Utah Research Foundation | Methods for preventing progressive tissue necrosis, reperfusion injury, bacterial translocation and adult respiratory distress syndrome |
| CZ193495A3 (en) | 1993-03-09 | 1996-04-17 | Univ Utah Res Found | The use of dehydroepiandrosterone derivatives for the preparation of a pharmaceutical preparation and pharmaceutical composition containing the derivative |
| US5387583A (en) * | 1993-04-20 | 1995-02-07 | Loria; Roger M. | Compositions containing corticosteroids or analogues thereof and corticosteroid buffering effective amounts of 5-androstene 3B, 17B or 5-androstene 3B, 7B, 17B triol or analogues thereof |
| US5554601A (en) | 1993-11-05 | 1996-09-10 | University Of Florida | Methods for neuroprotection |
| US5877169A (en) | 1993-11-05 | 1999-03-02 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Methods of treatment of ischemic damage |
| US5976850A (en) | 1994-10-19 | 1999-11-02 | University Of Edinburgh | Hippocampus-associated proteins; DNA sequences coding therefor and uses thereof |
| US5556847A (en) * | 1994-10-27 | 1996-09-17 | Duquesne University Of The Holy Ghost | Methods of effecting memory enhancement mediated by steroid sulfatase inhibitors |
| CZ394197A3 (cs) | 1995-06-06 | 1998-06-17 | Cocensys, Inc. | Neuroaktivní steroidy androstanové a pregnanové řady |
| WO1997003677A1 (en) | 1995-07-24 | 1997-02-06 | Trustees Of Boston University | Inhibition of nmda receptor activity by pregnenolone sulfate derivatives |
| GB2317826B (en) * | 1995-08-29 | 1999-12-15 | Univ Edinburgh | Regulation of intracellular glucocorticoid concentrations |
| US5985242A (en) | 1995-10-27 | 1999-11-16 | Praecis Pharmaceuticals, Inc. | Modulators of β-amyloid peptide aggregation comprising D-amino acids |
| JP2000511404A (ja) | 1996-04-09 | 2000-09-05 | ビー・テイー・ジー・インターナシヨナル・リミテツド | 神経精神、免疫又は内分泌障害を治療するための７α置換ステロイドの使用 |
| DE69733655T2 (de) | 1996-08-27 | 2006-04-27 | Praecis Pharmaceuticals, Inc., Cambridge | beta-AMYLOID PEPTIDAGGREGATION REGULIERENDE PEPTIDE MIT D-AMINOSÄUREN |
| FR2760362B1 (fr) | 1997-03-10 | 2000-08-11 | Vitasterol | Utilisation cosmetique ou dermatologique de steroides 7-hydroxyles |
| WO1998043647A1 (en) * | 1997-03-28 | 1998-10-08 | Massachusetts Institute Of Technology, Inc. | Regulation of amyloid precursor protein (app) expression by estrogenic compounds |
| GB9708716D0 (en) * | 1997-04-29 | 1997-06-18 | Imperial College | Chronic heart failure |
| WO1999015179A1 (en) * | 1997-09-25 | 1999-04-01 | Regents Of The University Of Minnesota | Methods of limiting apoptosis of cells |
| AU1387399A (en) | 1997-11-10 | 1999-05-31 | Vyrex Corporation | Probucol esters and uses thereof |
| AU747807B2 (en) * | 1997-11-24 | 2002-05-23 | Apollo Biopharmaceutics Inc. | Testosterone inhibitors and use for the protection of neurons |
| GB9726569D0 (en) | 1997-12-16 | 1998-02-11 | Univ Southampton | Neuroprotective agents |
| WO1999052532A1 (en) * | 1998-04-14 | 1999-10-21 | Pharmadigm, Inc. | Method for reducing central nervous system impairment |
| FR2786102B1 (fr) * | 1998-11-20 | 2001-02-16 | Monique Vincens | Utilisation de sulfate de dehydroepiandrosterone pour augmenter le nombre de recepteurs nmda chez un mammifere |
| US20030083231A1 (en) | 1998-11-24 | 2003-05-01 | Ahlem Clarence N. | Blood cell deficiency treatment method |
| US6667299B1 (en) | 2000-03-16 | 2003-12-23 | Hollis-Eden Pharmaceuticals, Inc. | Pharmaceutical compositions and treatment methods |
| DK1226155T3 (da) | 1999-11-02 | 2007-09-10 | Bayer Schering Pharma Ag | 18-nor-steroider som selektivt virksomme östrogener |
| GB0003524D0 (en) | 2000-02-15 | 2000-04-05 | Btg Int Ltd | Cytoprotective steroids (II) |
| GB2363984A (en) | 2000-06-29 | 2002-01-16 | Hunter Fleming Ltd | Protection against neuronal damage using 3-hydroxy-7 -hydroxy steroids and 3-oxo-7 -hydroxy steroids |
| EP1557166A1 (en) * | 2004-01-21 | 2005-07-27 | Newron Pharmaceuticals S.p.A. | Alpha-aminoamide derivatives useful in the treatment of lower urinary tract disorders |
-
2000
- 2000-06-29 GB GB0016022A patent/GB2363983A/en not_active Withdrawn
-
2001
- 2001-06-29 PL PL359108A patent/PL200699B1/pl not_active IP Right Cessation
- 2001-06-29 EP EP01945494A patent/EP1294382B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-29 CA CA002414584A patent/CA2414584C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-06-29 JP JP2002505007A patent/JP4942905B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-06-29 IL IL15354101A patent/IL153541A0/xx active IP Right Grant
- 2001-06-29 PT PT01945494T patent/PT1294382E/pt unknown
- 2001-06-29 AU AU2001267709A patent/AU2001267709B2/en not_active Ceased
- 2001-06-29 RU RU2003102437/15A patent/RU2307654C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-06-29 US US10/312,533 patent/US7718639B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-06-29 CN CNB018121098A patent/CN100459980C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-06-29 AT AT01945494T patent/ATE401897T1/de active
- 2001-06-29 DE DE60134979T patent/DE60134979D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-29 DK DK01945494T patent/DK1294382T3/da active
- 2001-06-29 KR KR1020027017898A patent/KR100786284B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2001-06-29 ES ES01945494T patent/ES2310182T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-29 CZ CZ20030077A patent/CZ299676B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-06-29 WO PCT/GB2001/002937 patent/WO2002000225A1/en active IP Right Grant
- 2001-06-29 HU HU0301134A patent/HU227152B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2001-06-29 SI SI200130866T patent/SI1294382T1/sl unknown
- 2001-06-29 AU AU6770901A patent/AU6770901A/xx active Pending
-
2002
- 2002-12-19 IL IL153541A patent/IL153541A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-12-27 NO NO20026243A patent/NO327959B1/no not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-01-03 ZA ZA200300085A patent/ZA200300085B/en unknown
- 2003-06-26 HK HK03104578.9A patent/HK1052300B/zh not_active IP Right Cessation
-
2008
- 2008-10-20 CY CY20081101165T patent/CY1108773T1/el unknown
-
2009
- 2009-12-16 US US12/639,708 patent/US20100173883A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2018150361A (ja) | 皮膚の炎症を処置するためのｐｕｆａの使用 | |
| US20100130459A1 (en) | Neuroprotective 7-beta-hydroxysteroids | |
| US20100173883A1 (en) | 7-hydroxyepiandrosterone having neuroprotective activity | |
| US20030069217A1 (en) | Methods of prevention and treatment of ischemic damage | |
| WO2017165315A1 (en) | Onapristone metabolite compositions and methods | |
| AU2001267705A1 (en) | Neuroprotective 7-beta-hydroxysteroids | |
| AU2001267709A1 (en) | 7-hydroxyepiandrosterone having neuroprotective activity | |
| FR2859910A1 (fr) | Utilisation du 1-alpha-fluoro-25-hydroxy-16,23e-diene-26,27- bishomo-20-epi-cholecalciferol pour le traitement de l'hyperplasie benigne de la prostate | |
| DK2399583T3 (en) | The use of insulin-sensitizing agents administered vaginally | |
| JP2022511400A (ja) | ヒドロキシエチルケルセチングルクロニドを含む医薬組成物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20090629 |