EA029157B1 - Терапия макулярной дегенерации на основе баклофена и акампросата - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к комбинациям и способам для лечения макулярной дегенерации. В частности, изобретение относится к новым видам комбинированного лечения возрастной макулярной дегенерации на основе комбинации баклофена и акампросата.

Description

Изобретение относится к комбинациям и способам для лечения макулярной дегенерации. В частности, изобретение относится к новым видам комбинированного лечения возрастной макулярной дегенерации на основе комбинации баклофена и акампросата.

029157 Β1

029157

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к комбинациям и к способам лечения макулярной дегенерации. В частности, настоящее изобретение относится к новой комбинированной терапии макулярной дегенерации на основе комбинации баклофена и акампросата.

Предшествующий уровень техники

Возрастная макулярная дегенерация (ВМД) является основной причиной слепоты во всем мире, поражая популяции пожилых людей. Предполагается, что 80 млн людей будет поражено ВМД к 2020 г. Частота заболевания у пациентов в возрасте 66-74 лет составляет 10% и возрастает до 30% у пациентов в возрасте 75-85 лет. ВМД является дегенеративным заболеванием, характеризующимся прогрессирующим поражением желтого пятна, расположенного рядом с центром сетчатки. Желтое пятно является наиболее концентрированной областью для фоторецепторов и таким образом вовлекается в центральное зрение и зрительную активность. Существуют факторы риска, связанные с ВМД, главным из которых является увеличение возраста. Другими факторами являются глазные факторы (более темная пигментация радужной оболочки, предыдущая операция по поводу катаракты, гиперметропическая рефракция) или системные факторы (курение, ожирение, рацион, раса, стресс сетчатки (воздействие солнечного света) и сердечно-сосудистые заболевания). С ВМД связаны некоторые генетические локусы, включая элементы системы комплемента, такие как СРН, локус АКМ82/НТКА 1, С2, СРВ, С3 и СРР Гены пути холестерина ЛПВП (Ь1РС, СЕТР, и возможно, АВСА1 и ЬПЬ), пути ЛИНП (возможно, АРОЕ), экстрацеллюлярного матрикса (СОЬ10А1, СОЬ8А1, Т1МР3), глиального фибриллярного кислого белка (СРАР) и пути ангиогенеза (УЕСРА) также связаны с ВМД [1, 2].

Этиология и патогенез ВМД остаются неясными, даже если в патогенез ВМД вовлекаются многие биологические процессы, такие как старение, выявленное в пигментном эпителии сетчатки (ПЭС; слое пигментированных клеток снаружи сетчатки, питающих клетки сетчатки) с накоплением липофусцина, ишемией сосудистой оболочки, окислительным повреждением и воспалением. Также недавно было привлечено внимание к фактору роста эндотелия сосудов (УЕСР), благодаря его роли в качестве терапевтической мишени. Первыми клиническими и патологическими проявлениями ВМД являются утолщение и потеря нормального строения мембраны Бруха (самого внутреннего слоя сосудистой оболочки, сосудистого слоя, вовлеченного в обеспечение сетчатки питательными веществами), накопление липофусцина в ПЭС и повышение числа больших друз. Друзы являются экстрацеллюлярными отложениями, накапливающимися внутри мембраны Бруха и под ПЭС. Они состоят из клеточных остатков и детрита, полученного из дегенерированных ПЭС клеток, и таких белков, как гликопротеины, липидов, аполипопротеинов В и Е, фактора X, амилоидного Р компонента, амилоида-бета, иммуноглобулинов и белков, связанных с воспалением (включая белки системы комплемента, такие как С5 и С5Ъ-9 терминальные комплексы), а также регуляторов комплемента (витронектина и кластерина). Их точная роль в патогенезе ВМД остается неясной, однако в течение долгого времени они считаются признаком ВМД [1].

Присутствие множества мягких друз (больших и плохо отграниченных) в макуле характеризует раннюю ВМД вместе с нарушением пигментации ПЭС. Ранняя ВМД связана с существенным риском прогрессирования до поздней ВМД, где развивается нарушение зрения. Поздняя ВМД встречается в двух различных формах, влажной (у 1/3 пациентов) и сухой форме (у 2/3 пациентов). При влажной или неоваскулярной форме ВМД потеря зрения является следствием аномального роста кровеносных сосудов (хориоидальной неоваскуляризации) в капиллярных слоях сосудистой оболочки. Этот процесс в итоге ведет к кровотечению, пропотеванию белка и рубцеванию этих кровеносных сосудов под желтым пятном и, в конце концов, вызывает необратимое повреждение фоторецепторов и быструю потерю зрения при отсутствии лечения. Сухая форма, или географическая атрофия, характеризуется потерей клеток ПЭС, что проявляется овальными участками гипопигментации. Этот процесс приводит к дегенерации фоторецепторов, поскольку клетки ПЭС вовлекаются в их окрашивание. Сетчатка становится тоньше, что приводит к прогрессирующей потере зрения [1].

До недавнего времени лазерное лечение (фотокоагуляция) было единственным принятым лечением влажной ВМД. Эта методика нацелена на абляцию новых хориоидальных кровеносных сосудов, связанную с небольшими повреждениями окружающей ткани сетчатки. Долговременная тяжелая потеря зрения эффективно уменьшается, но это не улучшает зрение, а также существует высокая частота рецидива (50%) и 41% риск развития немедленной умеренной потери зрения. Улучшение достигается с применением фотосенсибилизирующих агентов, таких как вертепорфин, вводимый внутривенно непосредственно перед лазерным лечением, который накапливается предпочтительно в неоваскулярных мембранах [3]. Несмотря на обнадеживающие результаты, эти терапевтические варианты применяются гораздо реже, поскольку они нацелены только на конечную стадию заболевания и не действуют на его прогрессирование.

Анти-УЕСР лекарственные средства в настоящее время являются стандартной мерой воздействия на патогенез неоваскуляризации сосудистой оболочки. В настоящее время имеется несколько коммерческих ингибиторов УЕСР для применения по этим показаниям: пегаптаниб, ранибизумаб, афлиберцепт, в дополнение к бевацизумабу, обычно используемому в качестве альтернативного лечения, не указанного в инструкции по лечению (оРР-1аЪе1). Применение этих видов лечения связано со значительной стабили- 1 029157

зацией и улучшением зрения. Однако имеются две основных проблемы: необходимость интенсивного ежемесячного применения, повышение риска осложнений, таких как эндофтальмит, и долговременные проблемы безопасности ингибиторов УБОР, которые могут поступать в системную циркуляцию после введения в глаз, особенно бевацизумаб и ранибизумаб, приводя к повышению риска сосудистых осложнений. Значительные попытки были предприняты для усовершенствования протоколов анти-УЕОР лечения для снижения частоты инъекций. В качестве примера, предложена комбинация анти-УЕОР терапии вместе с фотодинамической терапией и кортикостероидами, но недавние результаты показали незначительное улучшение [4, 5].

В настоящее время нет лечения, которое останавливает или замедляет прогрессирование сухой ВМД. Многие стратегии тестировали в клинических испытаниях. Они нацелены либо на токсины сетчатки, либо на комплемент, или дополнение трофических факторов, или окислительный стресс, или воспаление.

Имеется очевидная неудовлетворенная потребность в медицине, касающаяся лечения ВМД, поскольку нет доступных полностью удовлетворительных способов лечения.

Изложение сущности изобретения

Задачей настоящего изобретения является обеспечение лечения макулярной дегенерации. В частности, настоящее изобретение относится к композициям и способам для лечения макулярной дегенерации, основанным на применении баклофена и акампросата.

Как показано в настоящей заявке, способы и композиции из настоящего изобретения обеспечивают неожиданное и значительное улучшение при нарушениях физиологии глазного яблока, вовлеченных в этиологию некоторых дегенеративных расстройств желтого пятна. В частности, авторы настоящего изобретения установили, что композиции на основе баклофена и акампросата являются эффективными против ангиогенных повреждений сетчатки и против дегенерации сетчатки.

Кроме того, баклофен и акампросат являются эффективными для снижения окислительного стресса и смягчения дисфункции митохондрий и стресса сетчатки, наблюдаемых при ВМД.

Задача настоящего изобретения, таким образом, относится к композиции, включающей баклофен и акампросат, для применения в лечении, профилактике, ингибировании или остановке прогрессирования макулярной дегенерации, и в частности, сухой или влажной возрастной макулярной дегенерации (ВМД), болезни Штаргардта, ранней или взрослой формы вителлиформной макулярной дистрофии или диабетической ретинопатии.

Задача настоящего изобретения относится к баклофену для применения в комбинации с акампросатом в лечении, профилактике, ингибировании или остановке прогрессирования макулярной дегенерации и, в частности, сухой или влажной возрастной макулярной дегенерации (ВМД), болезни Штаргардта, ранней или взрослой формы вителлиформной макулярной дистрофий или диабетической ретинопатии.

Другой задачей настоящего изобретения является применение композиции, содержащей баклофен и акампросат, для предотвращения прогрессирования до макулярной дегенерации у субъекта, у которого поставлен диагноз наличия друз или пигментных изменений сетчатки, или у которого отмечается дегенерация сетчатки или аномальный ангиогенез глаза.

Настоящее изобретение также относится к любой фармацевтической композиции как таковой, содержащей комбинацию баклофена и акампросата, как определено выше.

Композиции из настоящего изобретения, как правило, дополнительно содержат одно или несколько фармацевтически пригодных вспомогательных веществ или носителей. Кроме того, соединения, применяемые в настоящем изобретении, могут быть в форме солей, гидратов, сложных эфиров, простых эфиров, кислот, амидов, рацематов или изомеров. Они могут также быть в форме рецептур для пролонгированного высвобождения. Также могут применяться пролекарства или производные соединений. В предпочтительном варианте осуществления применяют акампросат кальция.

Как применяется в настоящей заявке, соединения в композициях из настоящего изобретения могут быть составлены в виде рецептур или применяться вместе, по отдельности или последовательно. Указанные комбинации могут быть также составлены в виде рецептур или применяться вместе, по отдельности или последовательно.

Другая задача настоящего изобретения относится к способу лечения, профилактики, ингибирования или остановки прогрессирования макулярной дегенерации у субъекта, нуждающегося в лечении, где способ включает применение у субъекта эффективного количества баклофена и акампросата.

Другая задача настоящего изобретения относится к применению баклофена и акампросата для производства медикамента для лечения, профилактики, ингибирования или остановки прогрессирования макулярной дегенерации.

Настоящее изобретение можно применять у любого млекопитающего, предпочтительно человека.

- 2 029157

Обозначения на чертежах

Фиг. 1 - эффект комбинированной терапии с баклофеном и акампросатом против 6-ΟΗΌΑиндуцированного окислительного стресса. Терапия баклофеном и акампросатом является эффективной для защиты нервных клеток. Защита возрастает пропорционально концентрации смесей. Значительный защитный эффект наблюдается с повышением выживания ТГ-нейронов на 34% с дозой 1 (16 нМ и 64 пМ соответственно), на 46% с дозой 2 (80 нМ и 144 пМ) и на 51% с дозой 3 (400 нМ и 1600 пМ) (***р<0,0001; * р<0,001: существенные отличия от 6-ΘΗΌΆ интоксицированных клеток (ΑΝΟνΑ + тест Даннета)).

Фиг. 2 - эффект комбинированной терапии баклофеном и акампросатом против Αβ_1-42 индуцированного окислительного стресса. Терапия баклофеном и акампросатом является эффективной в защите нервных клеток от окислительного стресса, как показано наблюдаемым существенным снижением уровней метионин-сульфоксида в обработанных клетках (серый столбец, -61%), по сравнению с необработанными интоксицированными клетками (черный столбец). (***р<0,0001, существенно отличается от Αβ_1-42 интоксицированных клеток (ΑΝΟνΑ + апостериорный тест Даннета)).

Фиг. 3 - эффект комбинированной терапии баклофеном и акампросатом против Αβ_1-42 индуцированной дисфункции митохондрий. Терапия баклофеном и акампросатом является эффективной в защите нервных клеток от повреждения митохондрий, как показано наблюдаемым существенным снижением цитоплазматических уровней цитохрома С в обработанных клетках (серый столбец, -31%), по сравнению с необработанными интоксицированными клетками (черный столбец). (***р<0,0001, существенно отличается от Αβι_-42 интоксицированных клеток (ΑΝΟνΑ + апостериорный тест Даннета)).

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение обеспечивает новые способы и композиции для лечения макулярной дегенерации. Изобретение раскрывает новые лекарственные композиции, обеспечивающие эффективную коррекцию таких заболеваний, которые можно применять у любого млекопитающего субъекта.

Настоящее изобретение пригодно для макулярной дегенерации, при которой повреждается пигментный эпителий сетчатки и в итоге нервные клетки сетчатки. Специфические примеры таких заболеваний включают возрастную макулярную дегенерацию (ВМД), наследственную макулярную дегенерацию, или диабетическую ретинопатию.

Возрастная макулярная дегенерация (ВМД) означает сухую или влажную ВМД, при которых основным риском является старение.

Наследственная макулярная дегенерация означает синдромы макулярной дегенерации с ранним развитием, такие как болезнь Штаргардта, или ранняя или взрослая формы вителлиформной макулярной дистрофии.

В частности, настоящее изобретение пригодно для лечения ВМД.

Как применяется в настоящей заявке, "лечение" включает терапию, предотвращение, профилактику, замедление или уменьшение симптомов, вызванных или являющихся причинами вышеуказанных заболеваний или расстройств. Термин "лечение" включает, в частности, контроль прогрессирования заболевания и связанных симптомов. Термин "лечение", в частности, включает защиту против ангиогенных повреждений, или снижение или замедление указанных повреждений, и/или ингибирование дегенерации сетчатки и атрофии ПЭС, или снижение или замедление указанной дегенерации и атрофии, у леченых субъектов. Термин "лечение" также включает остановку или замедление прогрессирования заболевания от ранней до поздней формы (т.е. влажной или сухой) ВМД.

В контексте настоящего изобретения обозначение специфического лекарства или соединения означает включение не только специфически названной молекулы, но также любой фармацевтически пригодной соли, гидрата, производного, изомера, рацемата, конъюгата, пролекарства, или его производного с любой химической чистотой.

Термин "комбинация" или "комбинированное лечение/терапия" означает лечение, в котором, по меньшей мере, баклофен и акампросат применяют совместно у субъекта для обеспечения биологического эффекта. В комбинированной терапии в соответствии с настоящим изобретением по меньшей мере два лекарства можно применять совместно или по отдельности, в одно и то же время или последовательно. Кроме того, по меньшей мере, баклофен и акампросат можно применять посредством различных путей и протоколов. В результате, хотя их можно применять в виде совместной композиции, лекарства из комбинации можно также применять в виде отдельных рецептур.

Термин "пролекарство", как применяется в настоящей заявке, относится к любым функциональным производным (или предшественникам) соединения из настоящего изобретения, которые, при применении в биологической системе, генерируют указанное соединение в результате, например, спонтанной химической реакции(й), катализируемой ферментом химической реакции(й), и/или метаболической химической реакции(й). Пролекарства обычно являются неактивными или менее активными, чем образующееся лекарство, и могут быть использованы, например, для улучшения физико-химических свойств лекарства, для направления лекарства к специфической ткани, для улучшения фармакокинетических и фармакодинамических свойств лекарства и/или для снижения нежелательных побочных эффектов. Как

- 3 029157

правило, пролекарства имеют структуру Х-лекарство, где X является инертным несущим компонентом, а лекарство является активным соединением, где пролекарство является менее активным, чем лекарство, и лекарство высвобождается с носителя ίη νίνο.

Некоторые из общих функциональных групп, пригодных для конструирования пролекарства, включают карбоксильные, гидроксильные, амино-, фосфатные/фосфонатные и карбонильные группы, но не ограничиваются ими. Как правило, пролекарства, произведенные путем модификации этих групп, включают сложные эфиры, карбонаты, карбаматы, амиды и фосфаты, но не ограничиваются ими. Специфическое техническое руководство по выбору подходящих пролекарств относится к общим знаниям [6-10]. Далее, получение пролекарства можно осуществить с помощью обычных способов, известных специалистам в данной области техники. Способы, которые можно применять для синтеза других пролекарств, описаны в многочисленных обзорах по этому предмету [7, 11-17]. Например, арбаклофен плакарбил является хорошо известным пролекарством баклофена [18, 19], которое указано в базе данных СНстГО р1и8 Айтапсе ОеЪкйе: сЬет.818.п1т.тЬ.доУсЬетМр1и8/).

Термин "производные" соединения включает любую молекулу, являющуюся функционально и/или структурно схожей с указанным соединением, такую как кислота, амид, сложный эфир, простой эфир, ацетилированный вариант, гидроксилированный вариант, или алкилированный (С₁-С₆) вариант такого соединения. Термин "производное" также включает структурно схожее соединение, не имеющее одного или нескольких заместителей, как указано выше. Например, гомотаурин является дезацетилированным производным акампросата. Предпочтительными производными соединения являются молекулы, имеющие существенную степень сходства с указанным соединением, как определено известными способами. Схожие соединения вместе с их индексом сходства с исходной молекулой можно найти в многочисленных базах данных, таких как РиЪСЬеш (кЦр://риЪскет.псЪ|.п1т.п1к.доу/5еагск/) или ЭгидВапк (кйр://№№№.ДгидЪапк.са/). В более предпочтительном варианте осуществления производные должны иметь индекс сходства Танимото больше 0,4, предпочтительно больше 0,5, более предпочтительно больше 0,6, еще более предпочтительно больше 0,7, с исходным лекарством. Индекс сходства Танимото можно подсчитать с помощью программного обеспечения, такого как 8та11 Мо1еси1е 8иЪдгарк ЭеЮсЮг [20, 21], доступный онлайн (1и1р://\у\у\у.еЪкас.ик/111от1оп-5Гу/5оП\уаге/8М8О/). Предпочтительные производные должны быть как структурно, так и функционально схожими с исходным соединением, т.е. они должны также сохранять по меньшей мере часть активности исходного лекарства, более предпочтительно должны обладать защитной активностью против ангиогенных повреждений сетчатки, или должны ингибировать дегенерацию сетчатки.

Термин "производные" также включает метаболиты лекарства, например молекулу, полученную при (биохимической) модификации(ях) или обработке указанного лекарства после применения в организме, обычно посредством специализированных ферментативных систем, и которые проявляют или сохраняют биологическую активность лекарства. Метаболиты описаны как ответственные за основную часть терапевтического действия исходного лекарства. В специфическом варианте осуществления "метаболит", как применяется в настоящей заявке, означает модифицированное или обработанное лекарство, сохраняющее по меньшей мере часть активности исходного лекарства, предпочтительно обладающее защитной активностью против ангиогенных повреждений сетчатки или ингибирующее дегенерацию сетчатки.

Термин "соль" относится к фармацевтически пригодной и относительно нетоксичной, неорганической или органической соли добавления кислоты для соединения из настоящего изобретения. Образование фармацевтической соли заключается в объединении кислой, основной или цвитгерионной лекарственной молекулы с противоионом для получения солевого варианта лекарства. Широкий ряд химических видов можно применять в реакции нейтрализации. Таким образом, фармацевтически пригодные соли из настоящего изобретения включают те, которые получены при реакции главного соединения, функционирующего в качестве основания, с неорганической или органической кислотой до образования соли, например солей уксусной кислоты, азотной кислоты, виннокаменной кислоты, соляной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты, метансульфоновой кислоты, камфорсульфоновой кислоты, щавелевой кислоты, малеиновой кислоты, янтарной кислоты или лимонной кислоты. Фармацевтически пригодные соли из настоящего изобретения также включают те соли, в которых главное соединение функционирует в качестве кислоты, и реагирует в качестве соответствующего основания с образованием, например, солей натрия, калия, кальция, магния, аммония или холина. Хотя большинство солей в данном активном соединении являются эквивалентами, некоторые могут иметь, среди прочего, повышенную растворимость или биодоступность. Выбор соли в настоящее время является обычной стандартной операцией в процессе разработке лекарства, как описано Н. 81аЫ и С.О. ХУегтШк в их учебнике [22].

В предпочтительном варианте осуществления обозначение соединения является обозначением соединения как такового, а также его фармацевтически пригодной соли, гидрата, изомера, рацемата, сложного эфира или простого эфира.

В более предпочтительном варианте осуществления обозначение соединения является обозначением соединения, специфически указанного как таковое, а также любой его фармацевтически пригодной соли.

- 4 029157

В частном варианте осуществления применяется композиция соединения для пролонгированного высвобождения.

Как обсуждалось выше, настоящее изобретение относится к новым подходам для лечения макулярной дегенерации, такой как влажная или сухая ВМД, болезнь Штаргардта или ранняя или взрослая форма вителлиформной макулярной дистрофии, или диабетическая ретинопатия. Как описано в настоящей заявке, способы и композиции из настоящего изобретения обеспечивают сильный и неожиданный эффект в отношении биологических процессов, которые приводят к макулярной дегенерации. Далее, хотя баклофен и акампросат являются эффективными по отдельности для применения в лечении ВМД, болезни Штаргардта, ранней или взрослой формы вителлиформной макулярной дистрофии и диабетической ретинопатии, настоящее изобретение раскрывает более специфические композиции, содержащие баклофен в комбинации с акампросатом, обеспечивающие существенный эффект ίη νίνο при макулярных расстройствах.

Действительно, настоящее изобретение показывает, в экспериментальной части, что комбинированная терапия с применением баклофена и акампросата позволяет существенно улучшить состояние пациентов, пораженных макулярной дегенерацией. Как показано в экспериментальной части, комбинации баклофена и акампросата проявляют сильное, неожиданное влияние на утечку, наблюдаемую при индуцированном хориоидальном ангиогенезе и при индуцированной дегенерации сетчатки. В целом, комбинации из настоящего изобретения, как установлено, также являются эффективными для снижения окислительного стресса и дисфункции митохондрий, которые являются ключевым признаком дегенерации ПЭС и сетчатки, и следовательно, компонентами патогенеза ВМД.

Таким образом, настоящее изобретение обеспечивает новую терапию макулярной дегенерации на основе баклофена и акампросата. В частности, настоящее изобретение предлагает новую терапию сухой или влажной ВМД, или болезни Штаргардта, ранней или взрослой формы вителлиформной макулярной дистрофии или диабетической ретинопатии, на основе комбинаций баклофена и акампросата.

В связи с этим, настоящее изобретение относится к композиции, содержащей баклофен и акампросат, для применения в лечении влажной или сухой ВМД.

Другая задача настоящего изобретения относится к баклофену в комбинации с акампросатом для применения в лечении влажной или сухой ВМД.

В другом варианте осуществления изобретение относится к композиции, содержащей баклофен и акампросат, для применения в лечении других видов макулярной дегенерации, таких как болезнь Штаргардта, или ранняя или взрослая форма вителлиформной макулярной дистрофии, или диабетическая ретинопатия.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению баклофена и акампросата для производства медикамента для лечения влажной или сухой ВМД, болезни Штаргардта, или ранней или взрослой формы вителлиформной макулярной дистрофии, или диабетической ретинопатии.

Иллюстративные номера САЗ для баклофена и акампросата приведены в табл. 1 ниже. Табл. 1 указывает также не ограничивающим образом общие соли, рацематы, пролекарства, метаболиты или производные этих соединений, используемых в композициях из настоящего изобретения.

Таблица 1

Лекарство	Номера СА8	Класс или индекс сходства Танимото
Акампросат и родственные соединения
Акампросат	77337-76-9; 77337-73-6	НО
Гомотаурин	3687-18-1	0,73
Этилдиметиламмонийпропансульфонат	/	0,77
Таурин	107-35-7	0,5
Баклофен и родственные соединения
Баклофен	1134-47-0; 66514-99-6; 69308-37-8; 70206-22-3; 63701-56-4; 63701-55-3	НО
3 -(п-хлорофенил)-4— гидроксимасляная кислота	/	Метаболит
Арбаклофен плакарбил	847353-30-4	Пролекарство

Специфические примеры пролекарств баклофена приведены в Напай е! а1., 2011 [23], где показаны сложные эфиры баклофена и карбаматы сложных эфиров баклофена в качестве представляющих особый интерес для таргетинга ЦНС, и соответственно они могут представлять интерес для таргетинга клеток сетчатки. Таким образом, эти пролекарства особо пригодны для композиций из настоящего изобретения. Арбаклофен плакарбил, как упомянуто выше, также является хорошо известным пролекарством, и таким образом, может применяться вместо баклофена в композициях из настоящего изобретения. Другие пролекарства для баклофена можно найти в следующих патентных заявках: ΑΘ2010102071, ИЗ2009197958, ΑΘ2009096985, ΑΘ2009061934, ΑΘ2008086492, ИЗ2009216037, ΑΘ2005066122, ИЗ2011021571, ΑΘ2003077902, ΑΘ2010120370.

- 5 029157

Пригодные лекарства для акампросата, такие как сложный эфир пантоевой кислоты, неопентилсульфонил сложные эфиры, пролекарства неопентил-сульфонил сложных эфиров или пролекарства из скрытых неопентил-сульфонил сложных эфиров для акампросата, в частности, перечислены в νθ 2009033069, νθ 2009033061, νθ 2009033054 νθ 2009052191, νθ 2009033079, И8 2009/0099253, И8 2009/0069419, И8 2009/0082464, И8 2009/0082440, и И8 2009/0076147.

В частном варианте осуществления изобретение относится к применению комбинации баклофена и акампросата для лечения, профилактики, ингибирования или остановки прогрессирования сухой и влажной ВМД у субъекта, нуждающегося в лечении.

Другой задачей настоящего изобретения является применения этой комбинации у субъекта, у которого выявлены друзы или изменения пигментации сетчатки, для предотвращения или замедления, или остановки развития макулярной дегенерации. Действительно, присутствие мягких друз в желтом пятне или разрушение пигмента ПЭС характеризует раннюю ВМД, но также диабетическую ретинопатию, при которой отмечается ангиогенное разрушение ПЭС, приводящее к ангиогенной деструкции сетчатки.

Другая задача настоящего изобретения относится к применению указанной комбинации для лечения, профилактики, ингибирования или остановки прогрессирования диабетической ретинопатии у субъекта, нуждающегося в лечении.

Как описано в примерах, лечение композициями из настоящего изобретения оказывает благоприятный эффект для защиты клеток от окислительного стресса и повреждения митохондрий, что особенно важно в этиологии ВМД. Далее, лечение композициями с применением, по меньшей мере, баклофена и акампросата обеспечивает сильный неожиданный эффект в отношении биологических процессов, участвующих в патогенезе влажной и сухой ВМД; они являются эффективными для уменьшения дегенерации сетчатки и повреждений, связанных с ангиогенезом сосудистой оболочки. Таким образом, эти комбинации представляют новые подходы для лечения макулярной дегенерации, такой как сухая или влажная ВМД, у людей.

В комбинированной терапии из настоящего изобретения соединения или лекарства могут быть представлены в рецептуре вместе или по отдельности, и применяться вместе, по отдельности или последовательно.

Другая задача настоящего изобретения относится к применению композиции, как определено выше, для производства медикамента для лечения, профилактики, ингибирования или остановки прогрессирования макулярной дегенерации, такой как сухая и влажная ВМД, болезнь Штаргардта, или ранняя или взрослая форма вителлиформной макулярной дистрофии, или диабетическая ретинопатия.

Кроме того, настоящее изобретение обеспечивает способ лечения, профилактики, ингибирования или остановки прогрессирования макулярной дегенерации, такой как сухая и влажная ВМД, болезнь Штаргардта, или ранняя или взрослая форма вителлиформной макулярной дистрофии, или диабетическая ретинопатия, включающий применение у субъекта, нуждающегося в лечении, эффективного количества композиции, как описано выше.

Другой задачей настоящего изобретения является способ лечения, профилактики, ингибирования или остановки прогрессирования макулярной дегенерации, такой как сухая и влажная ВМД, болезнь Штаргардта, или ранняя или взрослая форма вителлиформной макулярной дистрофии, или диабетическая ретинопатия, включающий одновременное, отдельное или последовательное применение у субъекта, нуждающегося в лечении, эффективного количества композиции, как описано выше.

В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения, профилактики, ингибирования или остановки прогрессирования макулярной дегенерации, такой как сухая и влажная ВМД, болезнь Штаргардта, или ранняя или взрослая форма вителлиформной макулярной дистрофии, или диабетическая ретинопатия, включающий одновременное, отдельное или последовательное применение у субъекта эффективного количества баклофена и акампросата.

Композиции из настоящего изобретения, как правило, включают один или несколько фармацевтически пригодных носителей или вспомогательных веществ. Кроме того, для применения в настоящем изобретении лекарства или соединения обычно смешивают с фармацевтически пригодными вспомогательными веществами или носителями.

В связи с этим, другой задачей настоящего изобретения является способ приготовления фармацевтической композиции, включающий смешивание вышеуказанных соединений в подходящем вспомогательном веществе или носителе.

В частном варианте осуществления способ включает смешивание баклофена и акампросата в подходящем вспомогательном веществе или носителе.

В соответствии с предпочтительными вариантами осуществления настоящего изобретения, как указано выше, соединения применяют как таковые или в форме фармацевтически пригодной соли, пролекарства, производного, или композиции для пролонгированного высвобождения.

Комбинацию баклофена и акампросата можно применять по отдельности, или можно дополнительно объединить с дополнительными соединениями.

Например, комбинированную терапию из настоящего изобретения, хотя и очень эффективную ίη νίΐτο и ίη νίνο, в зависимости от субъекта или специфического состояния, можно дополнительно применять

- 6 029157

в сочетании или в ассоциации или комбинации с дополнительными лекарствами или лечениями, благоприятными для лечения макулярной дегенерации у субъектов.

Другие виды лечения, используемые в сочетании с лекарством(ами) или комбинацией(ями) лекарств в соответствии с настоящим изобретением, могут включать одно или несколько лекарств, смягчающих симптомы ВМД, сухой или влажной. Таким образом, примерными видами лечения, которые можно применять с комбинациями из изобретения, являются пегаптаниб, ранибизумаб, афлиберцепт или бевацизумаб. Другими дополнительными видами лечения, которые можно применять, являются, например, диета с дополнением антиоксидантов и/или цинка.

В частном варианте осуществления лекарство(а) или композиции в соответствии с настоящим изобретением могут дополнительно применяться у пациентов при запланированном или проводимом лазерном лечении друз или при фотодинамической терапии с применением, факультативно, вертепорфина или другого антиангиогенного лекарства(лекарств).

Терапию в соответствии с настоящим изобретением можно проводить в домашних условиях, в кабинете врача, в клинике, в амбулаторном отделении больницы, так чтобы врач мог непосредственно наблюдать эффекты лечения, и регулировать его, если необходимо.

Продолжительность лечения зависит от стадии заболевания, которое лечат, от возраста и состояния пациента, и от того, как пациент отвечает на лечение. Дозировку, частоту и способ применения каждого компонента из комбинации можно контролировать независимо. Например, одно лекарство можно применять перорально, а второе лекарство можно применять окулярно или интраокулярно. Комбинированная терапия может назначаться периодическими циклами, которые включают периоды покоя, так чтобы организм пациента мог восстановиться после каких-либо непредусмотренных побочных эффектов. Лекарства могут быть также составлены в композициях так, чтобы применение обеспечивало доставку всех лекарств.

Применение каждого лекарства в комбинации можно осуществлять любыми подходящими средствами, которые приводят к концентрации лекарства, которое при объединении с другим компонентом способно улучшать состояние пациента или эффективно лечить заболевание или расстройство.

В то время как лекарства или комбинации лекарств можно применять в виде чистого химиката, предпочтительно, чтобы они присутствовали в виде фармацевтической композиции, также упоминаемой в данном контексте как фармацевтическая композиция. Возможные композиции включают композиции, пригодные для перорального, местного (для инсталляций в глаз), или парентерального (для интраокулярного введения) применения.

Обычно эти фармацевтические композиции предназначены для пациента в "упаковках для пациента", содержащих ряд доз лекарства или другие средства для применения, или отмеренных однократных доз для применения во время отдельного периода лечения в отдельной упаковке, обычно в блистерной упаковке. Упаковка для пациента имеет преимущество по сравнению с традиционными формами, где фармацевт отделяет дозу фармацевтического средства для пациента от основного запаса, при этом пациент всегда имеет доступ к упаковочному вкладышу, содержащемуся в упаковке для пациента, который обычно отсутствует при традиционных формах. Было показано, что включение упаковочного вкладыша улучшает соблюдение пациентом инструкций врача. Таким образом, настоящее изобретение дополнительно включает фармацевтическую композицию, как описано выше, в комбинации с упаковочным материалом, пригодным для указанных рецептур. В такой упаковке для пациента назначенное применение композиции для комбинированного лечения описано инструкциями, оборудованием, оснащением, приспособлениями, и/или другими средствами, способствующими применению композиции наиболее подходящим образом для лечения. Такие средства делают упаковку для пациента особенно пригодной и приспособленной для лечения комбинацией из настоящего изобретения.

Лекарства могут содержаться в любом подходящем количестве в любом подходящем веществе носителе. Лекарства могут присутствовать в количестве до 99 мас.% от общей массы композиции. Композиция может быть обеспечена в лекарственной форме, пригодной для перорального, парентерального (например, интраокулярного), или окулярного способа применения. Таким образом, композиция может быть в форме, например, суспензий, эмульсий, растворов, гелей, включая гидрогели, кремов, жидких форм для перорального введения, устройств для осмотической доставки, средств для инъекций, имплантатов, спреев или аэрозолей.

Фармацевтические композиции могут быть изготовлены в соответствии с обычной фармацевтической практикой (см., например, "РепипдЮп: ТЬе 8с1еисе аиб РгасЬсе о£ РЬатшасу" (20ι1ι еб.), еб. Ά.Κ. Оеипаго, Ырртсоб ^ПЬашк & ΑίΙΚίηδ. 2000 ("Ремингтон: теория и практика фармацевтики") и "Еисус1ореб1а о£ РЬатшасеиЬса1 ТесЬио1оду", ебк. I. 5>\\агЬпск апб ТС. Воу1ап, 1988-1999, Магсе1 Эеккет, №\ν Уогк ("Энциклопедия фармацевтической технологии")).

Фармацевтические композиции в соответствии с настоящим изобретением могут быть изготовлены для высвобождения активного лекарства, по существу, немедленно после применения, или в любое предварительно заданное время или период времени после применения.

Композиции для контролируемого высвобождения включают: (ί) композиции, создающие, по существу, постоянную концентрацию лекарства в организме в течение длительного периода времени; (ίί)

- 7 029157

композиции, которые после предварительно заданного времени ожидания создают, по существу, постоянную концентрацию лекарства в организме в течение длительного периода времени; (ίίί) композиции, которые поддерживают действие лекарства в течение предварительно заданного периода времени путем сохранения относительно постоянного, эффективного уровня лекарства в организме с сопутствующей минимизацией нежелательных побочных эффектов, связанных с колебаниями уровня активного лекарственного вещества в плазме; (ίν) композиции, которые локализуют действие лекарства, например, путем пространственного размещения композиции с контролируемым высвобождением в пораженной ткани или органе или рядом с ними; и (ν) композиции, которые направляют действие лекарства с помощью носителей или химических производных, для доставки лекарства к конкретному типу клеток-мишеней.

Применение лекарств в форме композиции для контролируемого высвобождения является особо предпочтительным в случаях, когда лекарство имеет: (ί) узкий терапевтический индекс (т.е. различие между концентрацией, приводящей к вредным побочным эффектам или токсическим реакциям, и концентрацией, приводящей к терапевтическому эффекту, является маленьким; как правило, терапевтический индекс, ТИ, определяют как отношение медианной летальной дозы (ЬЭ50) к медианной эффективной дозе (ΕΌ50)); (ίί) узкое окно абсорбции в желудочно-кишечном тракте или (ίίί) очень короткую биологическую полужизнь, так что необходимо частое введение препарата в течение суток для поддержки уровня в плазме на терапевтическом уровне.

Любое количество стратегий можно рассмотреть для получения контролируемого высвобождения, при котором скорость высвобождения превышает скорость метаболизма исследуемого лекарства. Контролируемое высвобождение может быть получено путем соответствующего выбора различных параметров и ингредиентов композиции, включая, например, различные типы композиций и оболочек контролируемого высвобождения. Таким образом, лекарство готовят с подходящими вспомогательными веществами в фармацевтической композиции, которая, при применении, высвобождает лекарство контролируемым образом (масляные растворы, суспензии, эмульсии, микрокапсулы, микросферы, наночастицы и липосомы).

Твердые лекарственные формы для перорального применения.

Композиции для перорального применения включают таблетки, содержащие композицию из настоящего изобретения в смеси с нетоксичными фармацевтически пригодными вспомогательными веществами. Эти вспомогательные вещества могут быть, например, инертными разбавителями или наполнителями (например, сахарозой, микрокристаллической целлюлозой, крахмалами, включая картофельный крахмал, карбонатом кальция, хлоридом натрия, фосфатом кальция, сульфатом кальция, или фосфатом натрия); гранулирующими и диспергирующими агентами (например, производными целлюлозы, включая микрокристаллическую целлюлозу, крахмалами, включая картофельный крахмал, кроскармеллозой натрия, альгинатами или альгиновой кислотой); связывающими агентами (например, аравийской камедью, альгиновой кислотой, альгинатом натрия, желатином, крахмалом, прежелатинизированным крахмалом, микрокристаллической целлюлозой, карбоксиметилцеллюлозой натрия, метилцеллюлозой, гидроксипропилметилцеллюлозой, этилцеллюлозой, поливинилпирролидоном или полиэтиленгликолем); и любрикантами, глидантами и антиадгезивными средствами (например, стеариновой кислотой, кварцем или тальком). Другими фармацевтически пригодными наполнителями могут быть красители, ароматизаторы, пластификаторы, гигроскопические вещества, буферные агенты, и тому подобные.

Таблетки могут не иметь оболочки или могут быть покрыты оболочкой с применением известных методик, факультативно для замедления дезинтеграции и абсорбции в желудочно-кишечном тракте, и таким образом, обеспечения пролонгированного действия в течение более длительного периода. Оболочка может быть приспособлена к высвобождению активного лекарственного вещества предварительно заданным образом (например, для получения композиции с контролируемым высвобождением), или она может быть приспособлена не высвобождать активное лекарственное вещество до прохождения через желудок (кишечнорастворимая оболочка). Оболочка может быть сахарной оболочкой, пленочной оболочкой (например, на основе гидроксипропилметилцеллюлозы, метилцеллюлозы, метилгидроксиэтилцеллюлозы, гидроксипропилцеллюлозы, карбоксиметилцеллюлозы, акрилатных сополимеров, полиэтиленгликолей и/или поливинилпирролидона), или кишечнорастворимой оболочкой (например, на основе сополимера метакриловой кислоты, целлюлозы ацетата фталата, гидроксипропилметилцеллюлозы фталата, гидроксипропилметилцеллюлозы ацетата сукцината, поливинилацетата фталата, шеллака и/или этилцеллюлозы). Может применяться материал для замедления, например глицерил моностеарат или глицерил дистеарат.

Композиции для твердых таблеток могут включать оболочки, приспособленные для защиты композиции от нежелательных химических изменений (например, химической деградации перед высвобождением активного лекарственного вещества). Оболочку можно наносить на твердую лекарственную форму способом, похожим на то, который описан в Энциклопедии по фармацевтической технологии.

Лекарства могут быть смешаны в таблетке, или могут быть разделены. Например, первое лекарство содержится внутри таблетки, а второе лекарство содержится на внешней части таблетки, так чтобы существенная часть второго лекарства высвобождалась перед высвобождением первого лекарства.

Композиции для перорального применения могут также быть представлены в виде жевательных

- 8 029157

таблеток, или в виде твердых желатиновых капсул, где активный ингредиент смешан с инертным твердым разбавителем (например, картофельным крахмалом, микрокристаллической целлюлозой, карбонатом кальция, фосфатом кальция или каолином), или в виде мягких желатиновых капсул, где активный ингредиент смешан с водой или масляной средой, например жидким парафином, или оливковым маслом. Порошки и грануляты могут быть приготовлены с применением ингредиентов, упомянутых для таблеток и капсул, обычным способом.

Композиции для контролируемого высвобождения для перорального применения могут, например, быть сконструированы для высвобождения активного лекарства путем контроля растворения и/или диффузии активного лекарственного вещества.

Высвобождение, контролируемое растворением или диффузией, может быть обеспечено с помощью подходящей оболочки таблетки, капсулы, пилюли или гранулярной композиции лекарств, или путем включения лекарства в подходящий матрикс. Оболочка для контролируемого высвобождения может включать одно или несколько из веществ оболочки, упомянутых выше, и/или, например, шеллак, пчелиный воск, гликовоск, гидрированное касторовое масло, карнаубский воск, стеариловый спирт, глицерил моностеарат, глицерил дистеарат, глицерин пальмитостеарат, этилцеллюлозу, акриловые смолы, ОЬполимолочную кислоту, целлюлозы ацетат бутират, поливинилхлорид, поливинилацетат, винилпирролидон, полиэтилен, полиметакрилат, метилметакрилат, 2-гидроксиметакрилат, метакрилатные гидрогели, 1,3-бутиленгликоль, этиленгликоль метакрилат, и/или полиэтиленгликоли. В рецептуре матрикса контролируемого высвобождения матриксный материал может также включать, например, гидрированную метилцеллюлозу, карнаубский воск и стеариловый спирт, карбопол 934, силикон, глицерил тристеарат, метилакрилат-метилметакрилат, поливинилхлорид, полиэтилен, и/или галогенированный фторуглерод.

Композиции для контролируемого высвобождения, содержащие одно или несколько из лекарств из заявленных комбинаций, могут также быть в форме плавучей таблетки или капсулы (т.е. таблетки или капсулы, которые при пероральном приеме всплывают наверх содержимого желудка на определенный период времени). Композицию лекарств(а) для плавучей таблетки можно приготовить путем гранулирования смеси лекарств(а) с вспомогательными веществами и 20-75 мас.% гидроколлоидов, таких как гидроксиэтилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза или гидроксипропилметилцеллюлоза. Полученные гранулы можно затем прессовать в таблетки. При контакте с желудочным соком таблетки образуют, по существу, непроницаемый для воды гелевый барьер вокруг поверхности. Этот гелевый барьер сохраняет плотность менее единицы, таким образом, позволяя таблетки оставаться плавучей в желудочном соке.

Жидкости для перорального применения.

Порошки, диспергируемые порошки или гранулы, пригодные для приготовления водной суспензии путем добавления воды, являются удобными лекарственными формами для перорального применения. Композиции в виде суспензий обеспечивают активный ингредиент в смеси с диспергирующим или увлажняющим агентом, суспендирующим агентом, и одним или несколькими консервантами. Подходящими суспендирующими агентами являются, например, натрия карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, альгинат натрия и тому подобные.

Парентеральные композиции.

Фармацевтическую композицию можно применять парентерально путем интраокулярной инъекции в лекарственных формах, композициях, или посредством подходящих доставляющих устройств, или содержащих обычные, нетоксичные фармацевтически пригодные носители и адъюванты. Композиции и приготовление таких композиций хорошо известны специалистам в области фармацевтических рецептур.

Композиции для парентерального введения могут быть выполнены в однодозовых формах (например, в однодозовых ампулах) или во флаконах, содержащих несколько доз, в которых могут быть добавлены подходящий консервант (см. ниже). Композиция может быть в форме раствора, суспензии, эмульсии, инфузионного устройства, или доставляющего устройства для имплантации, или может быть представлена в виде сухого порошка для восстановления в воде или другом подходящем растворе перед использованием. Помимо активного лекарства (лекарств), композиция может включать подходящие носители и/или вспомогательные вещества, пригодные для парентерального применения. Активное лекарство (лекарства) может быть включено в микросферы, микрокапсулы, наночастицы, липосомы или тому подобное для контролируемого высвобождения. Композиция может включать суспендирующие, солюбилизирующие, стабилизирующие, регулирующие рН агенты и/или диспергирующие агенты.

Фармацевтические композиции в соответствии с настоящим изобретением могут быть в форме, пригодной для стерильной инъекции. Для приготовления такой композиции подходящее активное лекарство(а) растворяют или суспендируют в жидком носителе, пригодном для парентерального введения. Одним из пригодных носителей и растворителей, которые можно применять, является вода, вода с подходящим рН, отрегулированным путем добавления подходящего количества соляной кислоты, гидроксида натрия или подходящего буферного соединения, 1,3-бутандиола, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Водная композиция может также содержать один или несколько консервантов (например, метил, этил или н-пропил п-гидроксибензоат). В случаях, когда одно из лекарств лишь плохо или слабо растворимо в воде, может быть добавлен агент, повышающий растворение, или солюбилизирующий агент, или растворитель может включать 10-60 мас.% пропиленгликоля или тому подобного.

- 9 029157

Парентеральные композиции контролируемого высвобождения могут быть в форме водных суспензий, микросфер, микрочастиц, магнитных микросфер, масляных растворов, масляных суспензий, или эмульсий. Альтернативно, активное лекарство(а) может быть встроено в биосовместимые носители, липосомы, наночастицы, имплантаты или инфузионные устройства. Материалами для применения в приготовлении микросфер и/или микрокапсул являются, например, биодеградируемые/биоэродируемые полимеры, такие как полигалакто- поли-(изобутил-цианоакрилат), поли(2-гидроксиэтил-Ь-глутамин). Биосовместимыми носителями, которые можно применять при получении парентеральной композиции контролируемого высвобождения, являются углеводы (например, декстраны), белки (например, альбумин), липопротеины или антитела. Материалы для применения в имплантатах могут быть небиодеградируемыми (например, полидиметилсилоксаном), или биодеградируемыми (например, поли(капролактоном), поли(молочной кислотой) или поли(ортоэфирами)).

Глазные инсталляции.

Фармацевтические композиции можно также применять местно посредством инсталляции глазных капель, в лекарственных формах или композициях, содержащих обычно нетоксичные фармацевтически пригодные носители и вспомогательные вещества, включая микросферы и липосомы. Композиции включают лосьоны, мази, гели, гидрогели, растворы, суспензии, спреи, и другие виды систем доставки лекарств. Фармацевтически пригодные носители или вспомогательные вещества могут включать эмульгирующие агенты, антиоксиданты, буферные агенты, консерванты, гигроскопические вещества, усилители пенетрации, хелатирующие агенты, гелеобразующие агенты, основы мазей, ароматизаторы, и средства защиты кожи.

Дозировки и продолжительность лечения.

Необходимо понять, что лекарства в комбинации можно применять одновременно, в одной и той же или в разных фармацевтических композициях, или последовательно. Если осуществляют последовательное применение, отсрочка в применении второго (или дополнительного) активного ингредиента не должна быть такой, чтобы терялась польза от действенного эффекта комбинации активных ингредиентов. Минимальным требованием для комбинации в соответствии с настоящим описанием является то, что комбинация должна быть предназначена для комбинированного применения с пользой от действенного эффекта комбинации активных ингредиентов. Назначенное применение комбинации может обеспечено путем оборудования, условий, приспособлений и/или других средств, способствующих применению комбинации в соответствии с настоящим изобретением.

Теоретически эффективные количества лекарств в комбинации из настоящего изобретения включают, например, количества, эффективные для снижения симптомов ВМД, остановки или замедления прогрессирования заболевания до выявления клинических проявлений, или профилактики или снижения риска развития поздней формы заболевания.

Хотя активные лекарства из настоящего заболевания можно применять в разделенных дозах, например, два или три раза в сутки, предпочтительной является единственная суточная доза каждого лекарства в комбинации, наиболее предпочтительно единственная суточная доза из всех лекарств в одной фармацевтической композиции.

Применение можно осуществлять от одного до нескольких раз в сутки, в течение от нескольких дней до нескольких лет, и даже в течение всей жизни пациента. Хроническое или, по меньшей мере, периодически повторяющееся долговременное применение показано в большинстве случаев.

Термин "однодозовые формы" означает физически дискретные единицы (такие, как капсулы или заполненные шприцы), пригодные для применения в виде отдельных доз у человеческих субъектов, где каждая единица содержит предварительно заданное количество активного материала или материалов, рассчитанных для получения необходимого терапевтического эффекта, в ассоциации с необходимым фармацевтическим носителем.

Количество каждого лекарства в предпочтительной композиции для одной дозы зависит от нескольких факторов, включая способ применения, массу тела и возраст пациента, стадию заболевания, риск потенциальных побочных эффектов, с учетом общего состояния здоровья лица, получающего лечение. Кроме того, на используемую дозировку может влиять фармакогеномная информация (влияние генотипа на фармакокинетический, фармакодинамический профиль, или профиль эффективности лекарства) для конкретного пациента.

За исключением случаев особенно сильного снижения зрения, где могут требоваться более высокие дозы, предпочтительная дозировка каждого лекарства в комбинации обычно находится в диапазоне доз, не превышающих дозу, обычно предписанную для долговременного поддерживающегося лечения, или с подтвержденной безопасностью на 3 фазе клинических испытаний.

Одним выдающимися преимуществом настоящего изобретения является то, что каждое соединение можно применять в низких дозах в комбинированной терапии, при получении, в комбинации, синергетического эффекта, обеспечивающего существенную клиническую пользу у пациента. Комбинированная терапия может действительно быть эффективной при дозах, при которых соединения по отдельности проявляют низкий эффект, или не проявляют эффекта. Соответственно частным преимуществом настоящего изобретения является способность к применению субоптимальных доз каждого соединения, т.е.

- 10 029157

доз, которые ниже обычно предписываемых терапевтических доз, предпочтительно составляющих 1/2 от

терапевтических доз, более предпочтительно 1/3, 1/4, 1/5, или еще более предпочтительно 1/10 от терапевтических доз. В частных примерах применяют дозы, составляющие 1/20, 1/30 1/50, 1/100 или даже

меньше, от терапевтических доз.

При таких субтерапевтических дозировках соединения не проявляют побочного эффекта, в то время как комбинация(и) в соответствии с настоящим изобретением является полностью эффективной в лечении ВМД или болезни Штаргардта, ранней или взрослой формы вителлиформной макулярной дистрофии, или диабетической ретинопатии.

Предпочтительная дозировка соответствует количествам от 1 до 50% от доз, обычно предписанных для долговременного поддерживающего лечения.

Наиболее предпочтительная дозировка может соответствовать количествам от 1 до 10% от доз, обычно предписанных для долговременного поддерживающего лечения.

Специфические примеры пероральных доз лекарств для применения в соответствии с настоящим изобретением приведены ниже.

Акампросат от 1 до 1000 мг/сутки, предпочтительно меньше 500 мг/сутки, более предпочтительно меньше 100 мг/сутки, еще более предпочтительно меньше 10 мг/сутки; такие дозировки особенно подходят для перорального применения.

Баклофен от 0,01 до 150 мг/сутки, предпочтительно меньше 100 мг/сутки, более предпочтительно меньше 75 мг/сутки, еще более предпочтительно меньше 50 мг/сутки; такие дозировки особенно подходят для перорального применения.

Когда композиция включает в качестве активных ингредиентов только баклофен и акампросат, эти два соединения могут присутствовать в разных отношениях, например с массовым отношением баклофен/акампросат от 0,05 до 1000 (м:м), предпочтительно от 0,05 до 500 (м:м), более предпочтительно от 0,05 до 100 (м:м), более предпочтительно от 0,05 до 50 (м:м).

Необходимо понять, что действительно применяемое количество лекарства определяет врач, с учетом существующих обстоятельств, включая состояние или состояния, подлежащие лечению, точный состав, который предполагается применять, возраст, массу тела, и ответ индивидуального пациента, тяжесть симптомов пациента, и выбранный способ применения. Таким образом, вышеуказанные диапазоны доз предназначены для обеспечения общего указания и поддержки описания, но не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения.

Следующие примеры приведены с целью иллюстрации, но не для ограничения.

Примеры

I. Влияние комбинаций в соответствии с изобретением на окислительный стресс.

Было показано, что окислительный стресс существенно связан с патогенезом ВМД. Этот феномен, как полагают, является причиной дисфункции митохондрий, что в свою очередь приводит к образованию активных форм кислорода. Как ПЭС клетки, так и нервные клетки сетчатки особо восприимчивы к окислительному повреждению [24, 25]. В экспериментах, показанных ниже, авторы настоящего изобретения установили, что композиции, содержащие баклофен и акампросат, особо эффективны для снижения окислительного стресса и дисфункции митохондрий, индуцированных 6-гидроксидофамином (6-ОНДА) или амилоидом-β, последний, как было установлено, является компонентом друз.

а. Комбинации баклофена и акампросата являются эффективными для защиты нервных клеток от химически индуцированной митохондриальной интоксикации 6-ОНДА.

6-ОНДА является нейротоксическим веществом, разрушающим нейроны путем генерации активных форм кислорода, и индуцирующим гибель митохондрий в клетках. Из-за его структурного сходства с дофамином, 6-ОНДА, как полагают, поступает специфически в дофаминергические нейроны через специфические транспортеры активного дофамина. Тем не менее, результаты внизу показывают, что комбинации из настоящего изобретения эффективны в защите нервных клеток от окислительного стресса.

Культура мезэнцефалических дофаминергических нейронов.

Дофаминергические нейроны крыс культивировали, как описано ЗсЫиеШ с1 а1. (1988) [26]. Беременных самок крыс на 15 неделе гестации умерщвляли цервикальной дислокацией (крысы линии Вистар; 1аиу1ет) и извлекали плоды из матки. Извлекали эмбриональный средний мозг, и помещали в среду Лейбовица на льду (Ы 5; РаиВЫесЬ), содержащую 2% пенициллина-стрептомицина (Р§; РаиВЫесЬ), и 1% бычий сывороточный альбумин (БСА; РаиВЫесЬ). Использовали только вентральные части среднемозгового изгиба для приготовления клеток, поскольку он является областью развивающегося головного мозга, богатой дофаминергическими нейронами. Образцы среднего мозга разделяли трипсинизацией в течение 20 мин при 37°С (Трипсин ΕΌΤΑ IX; РаиВЫесЬ). Реакцию останавливали путем добавления Дульбекко-модифицированной среды Игла (ΌΜΕΜ; РаиВЫесЬ), содержащей ДНК-азу I сорта II (0,1 мг/мл; РаиВЫесЬ), и 10% эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС; Шуйтодеи). Затем клетки механически разделяли, пропуская 3 раза через 10 мл пипетку, и центрифугируя при 180 д в течение 10 мин при 4°С на слое из БСА (3,5%) в среде Ь15. Надосадочную жидкость отделяли, и клетки из осадка повторно суспендировали в указанной культуральной среде, состоящей из №игоЪа8а1 (Зпуйгодеп) с добавлением В27 (2%; Шуйтодеи), Ь-глутамина (2 мМ; РаиВЫесй) и 2% раствора ПС и 10 нг/мл мозгового нейротро- 11 029157

фического фактора (ΒΌΝΕ, РапВЫесй) и 1 нг/мл глиального нейротрофического фактора (ΟΌΝΕ, РапВю!есй). Жизнеспособные клетки подсчитывали в цитометре №иЪаиег с применением теста освобождения трипанового синего. Клетки засевали с плотностью 40000 клеток на ячейку в 96-луночные планшеты (предварительно покрытых поли-Ь-лизином (Огетег)) и культивировали при 37°С в увлажненной атмосфере воздух (95%) СО₂ (5%). Половину среды заменяли каждые 2 дня на свежую среду. 5-6% от популяции нервных клеток были дофаминергическими нейронами.

Воздействие 6-ОНДА и опытных соединений.

На 6 день культивирования среду удаляли, и добавляли свежую среду, без добавления или с добавлением 6-ОНДА в следующих концентрациях: 20 мкМ в течение 48 ч с разбавлением в контрольной среде. Экспериментальные соединения предварительно инкубировали в течение 1 ч перед применением 6ОНДА в течение 48 ч.

Анализ в конечной точке: определение общего количества ТГ-позитивных нейронов.

Спустя 48 ч интоксикации с 6-ОНДА клетки фиксировали раствором 4% параформальдегида (§1§та) в ФБР, рН 7,3 в течение 20 мин при комнатной температуре. Клетки вновь дважды промывали ФБР, а затем увеличивали их проницаемость и блокировали неспецифические участки раствором ФБР, содержащим 0,1% сапонина (§1§та) в 1% ЭТС в течение 15 мин при комнатной температуре. Затем клетки инкубировали с мышиными моноклональными антителами к тирозингидроксилазе (ТГ, §1§та) при разведении 1/1000 в ФБР, содержащем 1% ЭТС, 0,1% сапонин, в течение 2 ч при комнатной температуре. Эти антитела выявляли с козьими антителами против 1дО мыши А1еха Р1иог 488 (Мо1еси1аг РгоЪез) при разведении 1/800 в ФБР, содержащем 1% ЭТС, 0,1% сапонин, в течение 1 ч при комнатной температуре.

Для каждого из условий получали 2x10 изображений (представляющих примерно 80% от общей площади ячейки) на ячейку, с применением 1пСе11 Апа1у/егТМ 1000 (ОЕ НеаНйсаге) с увеличением х10. Все изображения получали в одних и тех же условиях. Анализ числа ТГ-позитивных нейронов проводили с применением программного обеспечения Иеуе1орег (ОЕ НеаНБсаге).

Данные выражали в процентах от контрольных условий (без интоксикации, без 6-ОНДА = 100%) для выражения повреждения 6-ОНДА. Все показатели выражали в виде среднего значения ± СКО для 3 культур (п = 6 ячеек на условие на культуру). Статистический анализ проводили посредством ΑΝΟνΑ с последующим тестом Даннета и тестом РЬЗИ (наименьшего достоверного различия) Фишера, где это возможно, с применением программного обеспечения 81а1\эе\у, версия 5.0.

Результаты.

Результаты обобщены в табл. 2. Наблюдался нейропротективный эффект для соединений и комбинаций из настоящего изобретения в тесте выживания ТГ нейронов спустя 48 ч после 6-ОНДАповреждения дофаминергических нейронов.

Таблица 2

Ιη уйго	Дегенерация сетчатки ΐη νίνο
	Резистентность к 6-ОНДА	Уровень МетО	Уровень ЦитС	Неоваскулярные поражения	Толщина ВЯС	Амплитуда альфа-волн
Баклофен	Улучшение	-	-	НО	но	НО
Акампросат	Улучшение	-	-	но	но	НО
Баклофен и акампросат	Улучшение	—	—	Снижение	Повышение	Повышение

* ВЯС - внешний ядерный слой сетчатки;

НО - не определяется;

"-" и "—" -интенсивность снижающего эффекта композиции.

Инкубация с 6-ОНДА (20 мкМ) в течение 48 ч мезэнцефалических нейронов приводила к значительной интоксикации дофаминергических нейронов (примерно 33% ТГ нейронов) во всех экспериментах (контроль, фиг. 1).

ΒΌΝΕ использовали в качестве положительного контроля. Предварительная обработка с 1,85 нМ ΒΌΝΕ в течение 1 ч значительно защищала дофаминергические нейроны от 6-ОНДА повреждения.

Как показано на фиг. 1, баклофен и акампросат существенно защищают дофаминергические нейроны от 6-ОНДА интоксикации дозозависимым образом.

Ъ) Комбинации баклофена и акампросата эффективны в защите нервных клеток от отравления митохондрий амилоидом-β и последующего окислительного стресса.

Амилоид-β известен как митохондриальный токсин, запускающий коллапс митохондрий, а также вызывающий окислительный стресс. Интересно, что амилоид-β найден в друзах, накопление которых считается ранним признаком ВМД.

Авторы настоящего изобретения установили, что комбинации баклофена и акампросата являются эффективными в защите против индуцированного амилоидом-β окислительного стресса и интоксикации митохондрий.

Действительно, уровни метионин-сульфоксида (МетО, маркера состояния окислительного стресса в

- 12 029157

клетках) и уровни цитохрома С (высвобождение цитохрома С в цитоплазму является маркером повреждения митохондрий) являются значительно сниженными в нервных клетках, культивированных в присутствии амилоида-β, но при воздействии композиций баклофена и акампросата. Важно отметить, что ЦитС также описан в качестве потенциального маркера дегенерации клетки сетчатки при получении спектроскопических изображений в УФ/видимом спектре [27], таким образом, подчеркивая важность окислительной и митохондриальной дисфункции в ВМД.

Культура кортикальных клеток.

Кортикальные нейроны крыс культивировали, как описано 8шдег с1 а1., 1999 [28]. Вкратце, беременных самок крыс на 15 неделе гестации умерщвляли цервикальной дислокацией (крысы линии Вистар) и извлекали плоды из матки. Извлекали кортекс и помещали в среду Лейбовица на льду (Ь15), содержащую 2% пенициллина 10000 Ед/мл и 1% стрептомицина 10 мг/мл, и 1% бычий сывороточный альбумин (БСА). Кортекс разделяли трипсином (0,05%) в течение 20 мин при 37°С. Реакцию останавливали путем добавления Дульбекко-модифицированной среды Игла (ΌΜΕΜ), содержащей ДНК-азу I сорта II (0,1 мг/мл; РапВю1есЬ), и 10% эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС). Затем клетки механически разделяли, пропуская 3 раза через 10 мл пипетку. Затем клетки центрифугировали при 515 д в течение 10 мин при 10°С. Надосадочную жидкость отделяли, и клетки из осадка повторно суспендировали в указанной культуральной среде, состоящей из №игоЪа8а1 с добавлением В27 (2%), Ь-глутамина (2 мМ) и 2% раствора ПС и 10 нг/мл (ΒΌΝΕ). Жизнеспособные клетки подсчитывали в цитометре ИеиЪаиег с применением теста освобождения трипанового синего. Клетки засевали с плотностью 30000 клеток на ячейку (для анализа ЦитС) или 15000 клеток на ячейку (для анализа МетО) в 96-луночные планшеты (предварительно покрытых поли-Ь-лизином (10 мкг/мл)) и культивировали при 37°С в увлажненной атмосфере: воздух (95%)/СО₂ (5%).

Спустя 11 суток культивирования кортикальные нейроны интоксицировали человеческим амилоидβ_1-42 пептидом с 1,25 мкМ в течение 4 ч.

Интоксикация человеческим амилоид-в_1-42 пептидом.

Человеческий амилоид-в_1-42 пептид восстанавливали в определенной культивированной среде при 40 мкМ (маточный раствор) и медленно встряхивали при 37°С в течение 3 суток в темноте. Готовили контрольную среду в тех же самых условиях.

Спустя 3 дня 1,25 мкМ этого амилоидного пептида инкубировали в течение 4 ч на кортикальных нейронах, разбавляя контрольной средой.

ΒΌΝΕ при 50 нг/мл использовали в качестве положительного контроля. ΒΌΝΕ растворяли в культуральной среде и предварительно инкубировали в течение 1 ч перед нанесением амилоида-β ₁.₄₂. Экспериментальную смесь (баклофен 80 нМ и акампросат 0.32 нМ) предварительно инкубировали в течение 1 ч перед применением амилоида-β _1-42.

Анализ окислительного стресса: количественное определение МетО.

Спустя 4 ч после интоксикации, клетки фиксировали холодным раствором этанола (95%) и уксусной кислоты (5%) в течение 5 мин. Затем повышали проницаемость клеток и блокировали неспецифические участки фосфатным буферным раствором (ФБР; РапВю1есЬ), содержащим 0,1% сапонина (81дта) и 1% эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС) в течение 15 мин при комнатной температуре. Затем клетки инкубировали с моноклональными антителами к ассоциированному с микротрубочками белку-2 (МАР-2; §1дша). Эти антитела окрашивают специфически клеточные тела и нейриты нейронов. Совместное окрашивание проводили с применением поликлональных первичных антител к МетО (Еиготебех).

Эти антитела выявляли с козьими антителами к 1дС мышей А1еха Р1иог 488 (Мо1еси1аг ргоЪе) и с козьими антителами к 1дС мышей А1еха Р1иог 568 (Мо1еси1аг ргоЪе). Ядра нейронов метили флуоресцентным маркером (Раствор Хехста, 81дта).

Анализ окислительного стресса и целостности митохондрий: определение цитоплазматического Цитохрома С (ЦитоС).

Этот анализ проводили, по существу, так, как описано выше, за тем исключением, что поликлональные первичные антитела к ЦитоС (АЪеат) использовали для детекции цитоплазматического цитохрома С.

Статистический анализ.

Данные выражали в процентах от контрольных условий (без интоксикации, без амилоида = 100%), чтобы показать повреждение амилоидом. Все показатели выражали в виде среднего значения ± СКО для 3 культур (п = 6 ячеек на условие). Анализ проводили посредством ΑΝΟνΑ с последующим тестом Даннета и тестом РЬЗИ (наименьшего достоверного различия) Фишера, где это возможно (с применением программного обеспечения §1аМете, версия 5.0).

Результаты.

Результаты обобщены в табл. 2. Композиции из настоящего изобретения являются эффективными для защиты нервных клеток от окислительного стресса и дисфункции митохондрий, являющихся компонентами патогенеза ВМД.

- 13 029157

Существенное снижение (-61%) остатков метиони-сульфоксида в клетках отмечено в нервных клетках, интоксицированных Λβ_1-42, при предварительной обработке комбинацией баклофена и акампросата (фиг. 2). Это подтверждалось снижением высвобождения цитохрома С в цитоплазме обработанных интоксицированных клеток, по сравнению с необработанными интоксицированными клетками, что является признаком ингибирования повреждения митохондрий (фиг. 3). Таким образом, композиция баклофена и акампросата эффективно защищает нервные клетки от окислительного стресса и дисфункции митохондрий, наблюдаемых при ВМД.

II. Ингибирование хориоидальных ангиогенных поражений ίη νίνο.

Хориоидальная неоваскуляризация (ХНВ) является основной причиной тяжелой потери центрального зрения у пациентов с влажной ВМД. Эффект комбинаций из настоящего изобретения оценивали для влажной ВМД на мышиной модели хориоидального ангиогенеза.

На этой модели на 0 день ожоги сосудистой оболочки наносили посредством воздействия аргонным лазером на глаза крыс (6 ожогов на глаз).

Контрольное соединение и соединения и комбинации из настоящего изобретения применяли перорально за одни сутки до нанесения поражений или в 0 день.

На 14 или 21 день лечения, количественное определение пропотевания в каждом поражении проводили посредством ангиографии с флюоресцеином. Животным под анестезией подкожно вводили флюоресцеин натрия. Получали изображения с ретинальным ангиографом, и определяли интенсивность окрашивания флюоресцеином каждого поражения с применением шкалы пропотевания (0 = нет пропотевания, 3 = сильное пропотевание) (24).

На 23 день животных умерщвляли и собирали сетчатки. Объем каждого неоваскулярного поражения определяли с применением ФИТЦ-меченого изолейцина В4 (детекция с микроскопом Ζθίδδ АроТоте).

Комбинация баклофена и акампросата является эффективной для снижения пропотевания при неоваскулярных поражениях, и ограничения их степени, как показано в табл. 2.

III. Улучшение функции сетчатки и защита тканей сетчатки ίη νίνο от ретинальной дегенерации.

Синий свет, как было показано, вызывает фотохимическую реакцию с образованием свободных радикалов в ПЭС, палочках и колбочках. Считается, что продукция этих свободных радикалов в итоге приводит к засорению системы поддержки желтого пятна и к развитию сухой дегенерации желтого пятна (25).

Соединения и комбинации из настоящего изобретения тестировали на крысиной модели дегенерации сетчатки, индуцированной синим цветом. Их эффективность в защите от дегенерации сетчатки оценивали посредством электроретинографии, определяющей электрические потенциалы, создаваемые различными типами клеток в сетчатке в ответ на стимул.

Вкратце, в 0 день на адаптированных к темноте крыс линии Спраг-Доули воздействовали в течение 6 ч интенсивным синим флуоресцентным светом.

Животные получали комбинацию баклофена и акампросата перорально, от 2 дней до одного дня перед поражениями или по меньшей мере в 0 день. Дегенерацию сетчатки оценивали путем сравнения амплитуды альфа-волны при анализе ЭРГ (электроретинограммы) до и на 7 и 14 день после индукции.

На 14 день крыс умерщвляли и собирали глаза; электрофизиологическое исследование завершали путем гистологического анализа толщины внешнего ядерного слоя (ВЯС) сетчатки, которая также является маркером целостности сетчатки.

Результаты обобщены в табл. 2. У животных, леченных комбинацией баклофена и акампросата, отмечалось существенное повышение амплитуды альфа-волн на ЭРГ, полученной после воздействия синего света (7-14 дни), по сравнению с контрольными животными. Это улучшение электрофизиологических функций согласовалось с тем наблюдением, что у леченых животных ВЯС в целом был толще, чем у животных, не получавших лечения. Эти результаты показывают, что комбинации из настоящего изобретения являются эффективными в защите глаз от дегенерации сетчатки.

- 14 029157

Claims (13)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Применение комбинации, включающей баклофен и акампросат или их фармацевтически приемлемые соли, при изготовлении медикамента для лечения или профилактики макулярной дегенерации у субъекта, нуждающегося в лечении, или для ингибирования или остановки прогрессирования указанного расстройства.
2. 2. Применение по п.1, где макулярная дегенерация выбрана из сухой или влажной возрастной макулярной дегенерации (ВМД), болезни Штаргардта, ранней или взрослой формы вителлиформной макулярной дистрофии и диабетической ретинопатии.
3. 3. Применение по п.1 или 2, где у субъекта поставлен диагноз наличия друз или изменений пигментации сетчатки.
4. 4. Применение по любому из предыдущих пунктов для профилактики перехода ранней ВМД во влажную или сухую форму ВМД у пациента, нуждающегося в лечении.
5. 5. Применение по любому из предыдущих пунктов, где у субъекта наблюдается дегенерация сетчатки или аномальный ангиогенез глаза.
6. 6. Применение по любому из предыдущих пунктов, где медикамент дополнительно содержит фармацевтически пригодный носитель или вспомогательное вещество.
7. 7. Применение по любому из предшествующих пунктов, где комбинация составлена в виде состава с пролонгированным высвобождением.
8. 8. Применение по любому из предшествующих пунктов, где используют кальциевую соль акампросата.
9. 9. Способ лечения или профилактики макулярного дегенеративного расстройства у объекта, нуждающегося в этом, или для ингибирования или остановки прогрессирования указанного расстройства путем введения комбинации по п.1, где соединения в указанной комбинации вводят вместе, по отдельности или последовательно.
10. 10. Способ по п.9, где макулярное дегенеративное расстройство выбрано из сухой или влажной возрастной макулярной дегенерации (ΑΜΌ), болезни Штаргардта, ранней или взрослой формы вителлиформной макулярной дистрофии и диабетической ретинопатии.
11. 11. Способ по п.9 или 10, где указанную комбинацию вводят субъекту многократно.
12. 12. Способ по любому из пп.9-11, где используют кальциевую соль акампросата.
13. 13. Применение баклофена или его фармацевтически приемлемой соли в комбинации с акампросатом или его фармацевтически приемлемой солью при изготовлении медикамента для лечения или профилактики макулярной дегенерации у субъекта, нуждающегося в лечении, или для ингибирования или остановки прогрессирования указанного расстройства.

    Акампросат (0,32 нМ) и Баклофен (80 нМ)