ES2306483T3 - Proteina inhibidora de la ruta de señalizacion de wnt. - Google Patents
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Abstract
Proteína inhibidora de la ruta de señalización de wnt, codificándose la proteína por el ADN de la figura 2.1, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6 ó 2.7 o por un ADN relacionado con este ADN mediante el código genético degenerado.
Description
Proteína inhibidora de la ruta de señalización
de wnt.
La presente invención se refiere a una proteína
inhibidora de la ruta de señalización de wnt, a un ADN que codifica
para una proteína de este tipo y a un procedimiento para la
producción de una proteína de este tipo. La invención se refiere
además al uso del ADN y de la proteína así como a anticuerpos
dirigidos frente a la proteína.
La ruta de señalización de wnt desempeña un
papel importante en la regulación de la diferenciación y
proliferación celulares durante el desarrollo embrionario de
Drosophila, Xenopus laevis y del ratón. La ruta de
señalización de wnt comprende la combinación de glicoproteínas
secretoras, que están codificadas por genes wnt, por ejemplo
Xwnt-8, y receptores de wnt, a los que se unen las
glicoproteínas. Además, la ruta de señalización de wnt está
implicada en seres humanos de manera causal en el carcinoma de mama
y de colon así como en el melanoma (véase Peifer, M., Science 275,
(1997), 1752-1753). Por tanto, los inhibidores de la
ruta de señalización de wnt podrían representar una posibilidad de
poder intervenir terapéuticamente en el caso de enfermedades
tumorales.
Si bien las solicitudes de patente de prioridad
estadounidenses 08/843.704 y 08/842.898, que coinciden ampliamente
con la publicación PCT WO 98 46755, describen determinadas proteínas
CRSP (dkk3 = hCRSP-1 = T59), lo hacen sin embargo
sin ninguna función.
Por consiguiente, la presente invención se basa
en el objetivo de proporcionar un agente con el que pueda inhibirse
la ruta de señalización de wnt.
Esto se consigue según la invención mediante los
objetos en las reivindicaciones.
Por consiguiente, es objeto de la presente
invención una proteína inhibidora de la ruta de señalización de
wnt, codificándose la proteína por el ADN de la figura 2.1, 2.3,
2.4, 2.5, 2.6 ó 2.7 o por un ADN relacionado con este ADN mediante
el código genético degenerado.
La presente invención se basa en el conocimiento
del solicitante de que existe una proteína en animales,
especialmente mamíferos, muy especialmente el ser humano, que
inhibe la ruta de señalización de wnt. El solicitante ha encontrado
que la expresión del gen wnt, Xwnt-8, en Xenopus
laevis conduce a la formación de gemelos siameses. Esta
malformación se evita cuando se expresa simultáneamente la proteína
citada anteriormente. Esta proteína es una proteína secretora de
aproximadamente 40 kD. Las variantes de la proteína están expuestas
en forma de sus ADN en la figura 2. Además, el solicitante ha
reconocido que se expresan variantes de la proteína en distintos
tejidos (véase la tabla 1 y la figura 3).
En la presente invención, la proteína citada
anteriormente se denomina como "inhibidor de wnt"
(wnt-I).
Otro objeto de la presente invención es un ADN
que codifica para (wnt-I). Éste puede ser por
ejemplo un ADN genómico o un ADNc. Éste es un ADN que comprende lo
siguiente:
(a) el ADN de la figura 2.1, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6
ó 2.7
(b) un ADN relacionado con el ADN de (a)
mediante el código genético degenerado.
El ADN de la figura 2 comprende siete ADN, que
proceden de Xenopus laevis, ratón, ser humano o gallina y
codifican para (wnt-I). Seis de estos ADN se
depositaron en la DSMZ ("Deutsche Sammlung von Mikroorganismen
und Zellkulturen", Colección Alemana de Microorganismos y
Cultivos Celulares) el 19 de septiembre de 1997 tal como sigue:
Figura 2.1 (ADN de ser humano) como
phdkk-3 con DSM 11762
Figura 2.2 (ADN de gallina) tiene la
denominación pcdkk-3
Figura 2.3 (ADN de ratón) como
pmdkk-2 con DSM 11759
Figura 2.4 (ADN de ser humano) como
phdkk-2 con DSM 11761
Figura 2.5 (ADN de ratón) como
pmdkk-1 con DMS 11758
Figura 2.6 (ADN de ser humano) como
phdkk-1 con DSM 11760
Figura 2.7 (ADN de Xenopus laevis) como
pRNdkk-1 con DSM 11757
A continuación se describe un ADN según la
invención en forma de un ADNc. Éste representa a modo de ejemplo
cualquier ADN que está abarcado por la presente invención.
Para la producción de un ADNc según la invención
es favorable partir de una biblioteca de ADNc de Xenopus
laevis (véase Glinka, A. et al., Mechanisms Develope. 60,
(1996), 221-231). A partir de los clones de ADNc
individuales se sintetizan los correspondientes ARNm por medio de la
ARN polimerasa. Éstos se microinyectan junto con el ARNm de genes
wnt, por ejemplo Xwnt-8, en Xenopus laevis.
Se examina la formación de gemelos siameses en Xenopus
laevis. Éstos se obtienen cuando el ARNm del gen wnt se
microinyecta solo o junto con tal ARNm de Xenopus laevis,
que no codifica para (wnt-I). Por consiguiente, la
no aparición de gemelos siameses se valora como prueba de la
existencia de un ARNm que codifica para (wnt-I). Un
ARNm de este tipo puede reconocer directamente al correspondiente
ADNc.
Un ADNc según la invención puede encontrarse en
un vector o vector de expresión. El experto conoce ejemplos de
éstos. En el caso de un vector de expresión para E. coli
estos son por ejemplo pGEMEX, derivado de pUC,
pGEX-2T, pET3b y pQE-8. Para la
expresión en levadura han de mencionarse por ejemplo pY100 y Ycpad1,
mientras que para la expresión en células animales se exponen por
ejemplo pKCR, pEFBOS, cDM8 y pCEV4. Para la expresión en células de
insecto es especialmente adecuado el vector de expresión de
baculovirus pAcSGHisNT-A.
El experto conoce células adecuadas para
expresar un ADNc que se encuentra en un vector de expresión según
la invención. Los ejemplos de tales células comprenden las cepas de
E. coli HB101, DH1, x1776, JM101, JM 109, BL21 y SG 13009,
la cepa de levadura Saccharomyces cerevisiae y las células
animales L, 3T3, FM3A, CHO, COS, Vero y HeLa así como las células de
insecto sf9.
El experto sabe de qué manera debe insertarse un
ADNc según la invención en un vector de expresión. También conoce
que puede insertarse este ADNc junto con un ADN que codifica para
otro péptido o proteína, de modo que el ADNc según la invención
puede expresarse en forma de una proteína de fusión.
Además, el experto conoce las condiciones para
cultivar células transformadas o transfectadas. También conoce
procedimientos para aislar y para purificar la proteína expresada
por el ADNc según la invención. Por consiguiente, una proteína de
este tipo, que también puede ser una proteína de fusión, es también
objeto de la presente invención.
Otro objeto de la presente invención es un
anticuerpo dirigido frente a una proteína o proteína de fusión
citada anteriormente. Un anticuerpo de este tipo puede producirse
mediante procedimientos habituales. Puede ser monoclonal o
policlonal. Para su producción es favorable inmunizar con una
proteína (de fusión) citada anteriormente o fragmentos de la misma,
animales, especialmente conejos o gallinas para obtener un
anticuerpo policlonal y ratones para obtener un anticuerpo
monoclonal. Pueden tener lugar otras "inmunizaciones de
recuerdo" en los animales con la misma proteína (de fusión) o
fragmentos de la misma. El anticuerpo policlonal puede obtenerse
entonces a partir del suero o la yema de huevo de los animales. Para
el anticuerpo monoclonal se fusionan células esplénicas de los
animales con células de mieloma.
La presente invención permite estudiar y
entender mejor la ruta de señalización de wnt. Con un anticuerpo
según la invención puede detectarse (wnt-I) en
organismos. Además puede detectarse un autoanticuerpo dirigido
frente a esta proteína con un (wnt-I) según la
invención. Ambas detecciones pueden tener lugar mediante
procedimientos habituales, especialmente una inmunotransferencia de
tipo Western, un ELISA, una inmunoprecipitación o mediante
inmunofluorescencia. Además puede detectarse la expresión del gen
que codifica para (wnt-I) con un ácido nucleico
según la invención, especialmente un ADN y cebadores derivados del
mismo. Esta detección puede tener lugar de manera habitual,
especialmente en una transferencia de tipo Southern.
Por consiguiente, con la presente invención
también pueden estudiarse, es decir diagnosticarse, y entenderse
mejor procesos que están relacionados con la ruta de señalización de
wnt. Éstos son por ejemplo la diferenciación y proliferación
celulares así como enfermedades de diferente tipo. Ejemplos de las
últimas son enfermedades del ojo y de los huesos así como
enfermedades tumorales, especialmente carcinoma de mama y de colon
así como melanoma.
Además, la presente invención es adecuada para
tomar medidas para y contra la existencia de (wnt-I)
en organismos. Con un anticuerpo según la invención puede inhibirse
(wnt-I) en organismos. Por otro lado puede elevarse
la cantidad de (wnt-I) en organismos con un
(wnt-I) según la invención, especialmente tras el
acoplamiento a una proteína no considerada como extraña por el
cuerpo, por ejemplo transferrina o BSA. De manera correspondiente
puede conseguirse también con un ácido nucleico según la invención,
especialmente con un ADN, que se produce bajo el control de un
promotor que puede inducirse en determinados tejidos y tras su
expresión conduce a la facilitación de (wnt-I) en
estos tejidos. Además, también puede utilizarse un ácido nucleico
según la invención, especialmente un ADN, para la inhibición de
(wnt-I). Para esto puede usarse el ácido nucleico,
por ejemplo como base para la producción de oligonucleótidos
antisentido para la inhibición de la expresión del gen que codifica
para (wnt-I).
Por consiguiente, la presente invención
proporciona también la posibilidad de intervenir activando o
inhibiendo en la ruta de señalización de wnt. Lo primero podría
tener lugar por ejemplo mediante la administración de un anticuerpo
según la invención frente a (wnt-I). Para lo último
es apropiado administrar (wnt-I) según la
invención. La activación de la ruta de señalización de wnt podría
ser razonable si se piensa en criar organismos para la donación de
órganos. Sin embargo, la inhibición de la ruta de señalización de
wnt es apropiada para poder intervenir terapéuticamente en
enfermedades de huesos y del ojo así como en enfermedades tumorales,
especialmente carcinomas de mama y de colon así como melanoma.
Especialmente se destaca la presente invención
porque puede utilizarse de manera específica de tejido. Esto sirve
tanto para el diagnóstico como para el tratamiento. Por ejemplo es
adecuado un ADN según la invención, DKK-1, una
proteína correspondiente o un anticuerpo frente a los mismos
especialmente para tejidos tales como cerebro, corazón, vasos,
huesos, cartílago, tejido conjuntivo y ojo. Además es adecuado un
ADN según la invención, DKK-2, una proteína
correspondiente o un anticuerpo frente a los mismos especialmente
para tejidos tales como cerebro, corazón, vasos, huesos, tejido
conjuntivo, riñones, testículos, bazo, ovarios, músculo, útero,
cartílago, ojo y glándula mamaria. Además es adecuado un ADN según
la invención, DKK-3, una proteína correspondiente o
un anticuerpo frente a los mismos, especialmente para tejidos tales
como cerebro, corazón, vasos, huesos, cartílago, ojo, tejido
conjuntivo, pulmón, ovarios, músculo y glándula mamaria.
\vskip1.000000\baselineskip
La figura 1 muestra las secuencias I y II
consenso de aminoácidos de un (wnt-I) según la
invención. La indicación "-" significa un aminoácido, siendo
variable el número de aminoácidos cuando presentan un asterisco.
La figura 2 muestra la secuencia de bases de
siete ADN que codifican para (wnt-I) con la
indicación de las bases que contribuyen a las secuencias consenso
de aminoácidos de (wnt-I).
La figura 3 muestra la expresión de tres ADN que
codifican para (wnt-I), DKK-1,
DKK-2 y DKK-3, en tejidos.
La presente invención se explica mediante los
ejemplos citados a continuación.
Para la producción de un (wnt-I)
según la invención se dotó el ADN de la figura 2.6,
phdkk-1 de ligadores de Bam HI, posteriormente se
escindió con Bam HI y se insertó en el vector de expresión
pQE-8 (Qiagen) escindido con Bam HI. Se obtuvo el
plásmido de expresión pQ/wnt-I. Éste codifica para
una proteína de fusión de 6 restos de histidina (componente del
extremo N-terminal) y un (wnt-I)
según la invención (componente del extremo
C-terminal). Se usó pQ/wnt-I para
la transformación de SG 13009 de E. coli (véase Gottesman, S.
et al., J. Bacteriol. 148, (1981), 265-273).
Se cultivaron las bacterias en un medio LB con 100 \mug/ml de
ampicilina y 25 \mug/ml de kanamicina y se indujeron durante 4 h
con
isopropil-\beta-D-tiogalactopiranósido
(IPTG) 60 \muM. Mediante la adición de clorhidrato de guanidina 6
M se consiguió una lisis de las bacterias, posteriormente se realizó
con el lisado una cromatografía (resina de Ni-NTA)
en presencia de urea 8 M de manera correspondiente a las
indicaciones del fabricante (Diagen) del material de cromatografía.
Se eluyó la proteína de fusión unida en un tampón con pH 3,5. Tras
su neutralización, se sometió la proteína de fusión a una
electroforesis en gel de poliacrilamida-SDS al 18%
y se tiñó con azul de Coomassie (véase Thomas, J.O. y Kornberg,
R.D., J. Mol. Biol. 149 (1975), 709-733).
Se mostró que una proteína (de fusión) según la
invención puede producirse en forma altamente pura.
Se sometió una proteína de fusión según la
invención del ejemplo 1 a una electroforesis en gel de
poliacrilamida-SDS al 18%. Tras la tinción del gel
con acetato de sodio 4 M, se cortó una banda de aproximadamente 40
kD del gel y se incubó en disolución de cloruro de sodio tamponada
con fosfato. Se sedimentaron fragmentos de gel, antes de determinar
la concentración de proteína del sobrenadante mediante una
electroforesis en gel de poliacrilamida-SDS, a la
que le siguió una tinción con azul de Coomassie. Se inmunizaron
animales con la proteína de fusión purificada en gel tal como
sigue:
Se utilizaron por inmunización 35 \mug de
proteína de fusión purificada en gel en 0,7 ml de PBS y 0,7 ml de
adyuvante de Freund completo o incompleto.
- Día 0:
- 1ª Inmunización (adyuvante de Freund completo)
- Día 14:
- 2ª Inmunización (adyuvante de Freund incompleto; icFA)
- Día 28:
- 3ª Inmunización (icFA)
- Día 56:
- 4ª. Inmunización (icFA)
- Día 80:
- Sangrado
Se sometió a prueba el suero del conejo en
inmunotransferencia. Para esto, se sometió una proteína de fusión
según la invención del ejemplo 1 a una electroforesis en gel de
poliacrilamida-SDS y se transfirió a un filtro de
nitrocelulosa (véase Khyse-Andersen, J., J. Biochem.
Biophys. Meth. 10, (1984), 203-209). Se realizó el
análisis de inmunotransferencia de tipo Western tal como se describe
en Bock, C.-T. et al., Virus Genes 8, (1994),
215-229. Para esto, se incubó el filtro de
nitrocelulosa durante una hora a 37ºC con un primer anticuerpo.
Este anticuerpo era el suero del conejo (1:10000 en PBS). Tras
varias etapas de lavado con PBS se incubó el filtro de
nitrocelulosa con un segundo anticuerpo. Este anticuerpo era un
anticuerpo de cabra anti-IgG de conejo monoclonal
acoplado a fosfatasa alcalina (Dianova) (1:5000) en PBS. Tras una
incubación de 30 minutos a 37ºC siguieron varias etapas de lavado
con PBS y posteriormente la reacción de detección de la fosfatasa
alcalina con revelador (fosfato de
5'-bromo-4-cloro-3-indolilo
36 \muM, azul de nitrotetrazolio 400 \muM,
Tris-HCl 100 mM, pH 9,5, NaCl 100 mM, MgCl_{2} 5
mM) a temperatura ambiente, hasta que fueron visibles las
bandas.
Se mostró que puede producirse el anticuerpo
policlonal según la invención.
\vskip1.000000\baselineskip
Se utilizaron por inmunización 40 \mug de
proteína de fusión purificada en gel en 0,8 ml de PBS y 0,8 ml de
adyuvante de Freund completo o incompleto.
- Día 0:
- 1ª Inmunización (adyuvante de Freund completo)
- Día 28:
- 2ª Inmunización (adyuvante de Freund incompleto; icFA)
- Día 50:
- 3ª Inmunización (icFA)
\vskip1.000000\baselineskip
Se extrajeron anticuerpos de yema de huevo y se
sometieron a prueba en inmunotransferencia de tipo Western. Se
detectaron anticuerpos policlonales según la invención.
\vskip1.000000\baselineskip
Se utilizaron por inmunización 12 \mug de
proteína de fusión purificada en gel en 0,25 ml de PBS y 0,25 ml de
adyuvante de Freund completo o incompleto; en la 4ª inmunización la
proteína de fusión estaba disuelta en 0,5 ml (sin adyuvante).
- Día 0:
- 1ª Inmunización (adyuvante de Freund completo)
- Día 28:
- 2ª Inmunización (adyuvante de Freund incompleto; icFA)
- Día 56:
- 3ª Inmunización (icFA)
- Día 84:
- 4ª Inmunización (PBS)
- Día 87:
- Fusión
\vskip1.000000\baselineskip
Se sometieron a prueba sobrenadantes de
hibridomas en inmunotransferencia de tipo Western. Se detectaron
anticuerpos monoclonales según la invención.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
(1) DATOS GENERALES:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- SOLICITANTE:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: Deutsches Krebsforschungszentrum (Centro alemán de investigación del cáncer)
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- CALLE: Im Neuenheimer Feld 280
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: Heidelberg
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: Alemania
\vskip0.500000\baselineskip
- (F)
- CÓDIGO POSTAL: 69120
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TÍTULO DE LA INVENCIÓN: Proteína inhibidora de la ruta de señalización de wnt
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- NÚMERO DE SECUENCIAS: 7
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- VERSIÓN LEGIBLE POR ORDENADOR:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- SOPORTE DE DATOS: disco flexible
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- ORDENADOR: IBM PC compatible
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- SOFTWARE: PatentIn Release nº 1.0, Versión nº 1.30 (EPA)
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- DATOS DE LA SOLICITUD PREVIA:
\vskip0.800000\baselineskip
- NÚMERO DE SOLICITUD: DE 19747418.7
\vskip1.000000\baselineskip
(2) DATOS PARA LA SEQ ID NO: 1:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1297 Pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Nucleótido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE LA CADENA: Monocatenaria
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN genómico
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 1:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) DATOS PARA LA SEQ ID NO: 2:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 881 Pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Nucleótido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE LA CADENA: Monocatenaria
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN genómico
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 2:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) DATOS PARA LA SEQ ID NO: 3:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1226 Pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Nucleótido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE LA CADENA: Monocatenaria
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN genómico
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 3:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) DATOS PARA LA SEQ ID NO: 4:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 768 Pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Nucleótido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE LA CADENA: Monocatenaria
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN genómico
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 4:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) DATOS PARA LA SEQ ID NO: 5:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 828 Pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Nucleótido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE LA CADENA: Monocatenaria
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN genómico
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 5:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) DATOS PARA LA SEQ ID NO: 6:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 432 Pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Nucleótido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE LA CADENA: Monocatenaria
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN genómico
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 6:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(2) DATOS PARA LA SEQ ID NO: 7:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1383 Pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Nucleótido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE LA CADENA: Monocatenaria
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN genómico
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 7:
\vskip1.000000\baselineskip
Claims (6)
1. Proteína inhibidora de la ruta de
señalización de wnt, codificándose la proteína por el ADN de la
figura 2.1, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6 ó 2.7 o por un ADN relacionado con
este ADN mediante el código genético degenerado.
2. ADN, que codifica para la proteína según la
reivindicación 1, siendo el ADN aquél de la figura 2.1, 2.3, 2.4,
2.5, 2.6 ó 2.7 o un ADN relacionado con este ADN mediante el código
genético degenerado.
3. Plásmido de expresión, que comprende el ADN
según la reivindicación 2.
4. Transformante, que contiene el plásmido de
expresión según la reivindicación 3.
5. Procedimiento para la producción de la
proteína según la reivindicación 1, que comprende el cultivo del
transformante según la reivindicación 4 en condiciones
adecuadas.
6. Anticuerpo monoclonal, dirigido frente a la
proteína según la reivindicación 1.
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