JP2001509667A

JP2001509667A - Ｓｒｃｒドメイン含有タンパク質

Info

Publication number: JP2001509667A
Application number: JP53046998A
Authority: JP
Inventors: モレンハウアー，ヤン; プーストカ，アンネマリー
Original assignee: ドイチェスクレブスフォルシュンクスツェントルムスチフトゥングデスエッフェントリヒェンレヒツ
Priority date: 1997-01-09
Filing date: 1998-01-09
Publication date: 2001-07-24
Also published as: EP1015583A2; WO1998030687A2; DE59813125D1; ATE307201T1; EP1015583B1; WO1998030687A3; US6346606B1

Abstract

(57)【要約】本発明は、ＳＲＣＲドメイン含有タンパク質、かかるタンパク質をコードする核酸および該タンパク質を生産する方法に関する。さらに、本発明は、該核酸およびタンパク質ならびに該タンパク質に対する抗体の使用に関する。

Description

【発明の詳細な説明】ＳＲＣＲドメイン含有タンパク質本発明は、ＳＲＣＲドメイン含有タンパク質、かかるタンパク質をコードする核酸および該タンパク質を生産する方法に関する。さらに、本発明は、該核酸およびタンパク質ならびに該タンパク質に対する抗体の使用に関する。「ＳＲＣＲ」ドメインの語は、「スカベンジャーレセプターシステインリッチ（ｓｃａｖｅｎｇｅｒｒｅｃｅｐｔｏｒｃｙｓｔｅｉｎｒｉｃｈ）」ドメインを意味する。かかるドメインは、約１１０アミノ酸を含有し、例えば、細胞分化または細胞−細胞接触の細胞の本質的なプロセスに関与する多くのタンパク質に見出される。それにもかかわらず、これらのプロセスは、未だに詳細に理解されていなかった。したがって、本発明の目的は、細胞の本質的なプロセスを研究し、任意に妨害することが可能な手段による産物を提供することにある。本発明によれば、これは、請求項に規定された主題により達成される。したがって、本発明の主題は、図１のアミノ酸配列またはそれとは１もしくは複数のアミノ酸が異なるアミノ酸配列を含有する、ＳＲＣＲドメイン含有タンパク質に関する。本発明は、動物、具体的には、哺乳類、より具体的には、ヒトにおいて、ＳＲＣＲドメインを含有する公知のタンパク質に対してホモロジーを有するが、これらのタンパク質とは、慣用の条件下のハイブリダイゼーションによりＤＮＡレベルで異なる、ＳＲＣＲドメイン含有タンパク質が存在するという出願人の発見に基づく。かかるタンパク質は、図１のアミノ酸配列またはそれとは１もしくは複数のアミノ酸が異なるアミノ酸配列を含有する。さらに、本出願人は、該タンパク質が約１１０アミノ酸も含有するＣＵＢドメインも含むことを認識した。さらに、本出願人は、該タンパク質が正常細胞に存在する以外の型で腫瘍細胞に存在しうることを見出した。改変型は、１もしくは複数のアミノ酸の付加、置換、逆位および／または欠失として存在しうる。具体的には、該出願人は、該タンパク質が、髄芽細胞腫および膠芽細胞腫ならびに乳癌の場合において１もしくは複数のアミノ酸の欠失を有していてもよい。本発明は、前記タンパク質を「ＳＲＣＲドメイン含有タンパク質」（ＳＲＣＲタンパク質）という。さらに本発明の主題は、（ＳＲＣＲタンパク質）をコードする核酸に関する。該核酸は、ＲＮＡまたはＤＮＡであってよい。後者は、例えば、ゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡであってもよい。下記：（ａ）図１のＤＮＡまたはそれとは１もしくは複数の塩基対が異なるＤＮＡ、（ｂ）（ａ）のＤＮＡとハイブリダイズするＤＮＡ、または（ｃ）縮重遺伝子コードを介して（ａ）もしくは（ｂ）のＤＮＡに関連するＤＮＡを含有するＤＮＡが好ましい。「ハイブリダイズするＤＮＡ」の語は、（ａ）のＤＮＡと、慣用条件下、具体的には該ＤＮＡの融解温度よりも２０℃低い温度でハイブリダイズするＤＮＡをいう。図１のＤＮＡは、ＤＳＭ１１２８１のもと１９９６年１１月８日にＨＦＬ２として、ＤＳＭＺ〔ドイチェザンムルングフォンミクロオーガニズメンウントツェルクルチューレン〕に寄託された。本発明の核酸は、ＤＮＡの型、具体的にはｃＤＮＡの型で下記に記載される。それは、本発明に入るあらゆる核酸、具体的にはＤＮＡの例示である。本発明のｃＤＮＡの生産のために、基本として、ヒト胎児肺由来のｍＲＮＡを使用することが好ましい。かかるｍＲＮＡは公知であり、それは、例えば、クローンテック社より購入されうる。全長ｃＤＮＡは、例えば、Ｃａｐ−スナッチングと組み合わせてオリゴｄＴ−プライミングを介して、ｍＲＮＡから生成される。当業者は、その方法および条件に精通している。例えば、クローンテック社のマラソン（ｍａｒａｔｈｏｎ）キット由来のｃＤＮＡアダプターを平滑末端型の全長ｃＤＮＡに連結する。ついで、該ｃＤＮＡを、一方のプライマーがｃＤＮＡアダプターに特異的であり、もう一方のプライマーがＳＲＣＲドメインを含有する公知のタンパク質由来のＤＮＡ配列に特異的であるプライマー対を用いるＰＣＲ法に供する。後者のプライマーの例は：５’方向のｃｕｂｆｌ５’−ＴＧＣＡＣＡＴＣＴＣＴＧＡＡＧＡＣＣＡＣＡＧ−３’ および３’方向の４１ｎｒｌ５’−ＧＴＧＧＴＣＴＧＣＡＧＧＣＡＧＣＴＧ−３’ である。該４１ｎｒ１プライマーは、ＳＲＣＲドメインの強く保存された領域または保存領域に位置され、該ｃｕｂｆｌプライマーは、ＣＵＢドメインの強く保存された領域に位置される。プライマーの組み合わせにしたがって、それぞれ５’方向および３’方向で増幅された増幅ｃＤＮＡを得る。該増幅ｃＤＮＡは、本発明の核酸に特異的な標識ＤＮＡプローブとハイブリダイズする。かかるＤＮＡプローブは、例えば、下記ＤＮＡプローブａｉｍｅ２ｅ４ｆ１およびａ６０ｋｅｘｆ２：ＤＮＡプローブａｉｍｅ２ｅ４ｆ１：５’−ＡＧＧＣＣＡＧＡＴＡＣＴＴＧＧＣＴＧＡＣ−３’ ＤＮＡプローブａ６０ｋｅｘｆ２：５’−ＣＴＴＣＡＧＡＴＴＡＣＴＧＡＡＧＣＣＣＡＧＧ−３’ である。ＤＮＡプローブａｉｍｅ２ｅ４ｆ１とハイブリダイズし、かつ５’方向で増幅されたｃＤＮＡを、３’方向で増幅され、かつＤＮＡプローブａ６０ｋｅｘｆ２とハイブリダイズするｃＤＮＡに連結する。連結産物は、本発明のｃＤＮＡである。本発明のｃＤＮＡは、ベクターおよび発現ベクターのそれぞれに存在しうる。当業者は、その例示に精通している。大腸菌の発現ベクターの場合、これらは、例えば、ｐＧＥＭＥＸ、ｐＵＣ誘導体、ｐＧＥＸ−２Ｔ、ｐＥＴ３ｂおよびｐＱＥ−８などであり、後者が好ましい。酵母における発現に関しては、例えば、ｐＹ１００、Ｙｃｐａｄ１を挙げるべきであり、一方、例えば、ｐＫＣＲ、ｐＥＦＢＯＳ、ｃＤＭ８およびｐＣＥＶ４が動物細胞における発現に関して示されるべきである。バキュロウイルス発現ベクターｐＡｃＳＧＨｉｓＮＴ−Ａは、昆虫細胞における発現に特に好適である。当業者は、発現ベクター中に存在する本発明のｃＤＮＡを発現するための適切な細胞に精通している。かかる細胞の例示としては、大腸菌株であるＨＢ１０１、ＤＨ１、ｘ１７７６、ＪＭ１０１、ＪＭ１０９、ＢＬ２１およびＳＧ１３００９、後者が好ましく、酵母株であるサッカロミセス・セルビジエ、動物細胞であるＬ、３Ｔ３、ＦＭ３Ａ、ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＶｅｒｏおよびＨｅＬａならびに昆虫細胞であるｓｆ９を含む。当業者は、本発明のｃＤＮＡが、どのようにして発現ベクターに挿入されるべきかを知っている。さらに当業者は、該ＤＮＡを、他のタンパク質およびペプチドのそれぞれをコードするＤＮＡと組み合わせて、本発明のｃＤＮＡが融合タンパク質の型で発現されうるように挿入できるという事実に精通している。さらに、当業者は、形質転換細胞およびトランスフェクト細胞のそれぞれを培養する条件を知っている。また、当業者は、本発明のｃＤＮＡにより発現されたタンパク質を単離し、精製する方法にも精通している。したがって、融合タンパク質であってもよいかかるタンパク質も本発明の主題である。本発明のさらなる主題は、前記タンパク質および融合タンパク質のそれぞれに対する抗体に関する。かかる抗体は、常法により調製されうる。それは、ポリクローナルおよびモノクローナルのそれぞれであってもよい。その調製のために、動物−具体的にはポリクローナル抗体のためにはウサギまたはニワトリを、モノクローナル抗体のためにはマウス−を、前記（融合）タンパク質でまたはその断片で免疫させることが好ましい。さらに、動物の「ブースター」は、同じ（融合）タンパク質またはその断片によりもたらされうる。ついで、該ポリクローナル抗体を、動物血清および卵黄のそれぞれから得てもよい。モノクローナル抗体の調製のために、動物脾臓細胞をミエローマ細胞と融合する。本発明は、細胞の本質的なプロセスを研究することを可能にする。本発明の核酸、具体的にはＤＮＡ、およびそれから得られたプライマーにより、哺乳類、具体的にはヒトにおいて、（ＳＲＣＲタンパク質）をコードする遺伝子を含むおよび／または発現するかどうかを決定しうる。どのような型で（ＳＲＣＲタンパク質）が存在するかならびに個々の型が細胞およびそのプロセスにどのような重要性を有するかをそれぞれ決定することもできる。例えば、出願人は、髄芽細胞腫および膠芽細胞腫ならびに乳癌において、該（ＳＲＣＲタンパク質）が欠失を含むことを発見した。この欠失は、ゲノムレベルにおいても同定されうる。正常細胞に存在するが、腫瘍細胞、具体的には髄芽細胞腫、膠芽細胞腫または乳癌の細胞における両方の対立遺伝子での欠失を有する、５’→３’の列挙順にＤＮＡ領域（図３、４および５を参照のこと）を示す、ゲノムＤＮＡクローンｐＢａ１１２、ｐＢａ７４、ｐＢａ３６、ｐＢａ４１、ＰＧ１４１ＢＦ１７、ＰＧ１４１ＢＡ１０、ｐＢａ６０、ｐＢａ１０１およびｐＢａ１３１が提供される。該ＤＮＡクローンも本発明の主題を示す。さらに、それらは、ＤＳＭＺに寄託された：ＤＳＭ１１２８０のもとｐＢａ７４、ＤＳＭ１１２７２のもとｐＢａ３６、ＤＳＭ１１２７８のもとｐＢａ４１およびＤＳＭ１１２７９のもとｐＢａ６０、それぞれ１９９６年１１月８日；ならびにＤＳＭ１１６４９のもとＰＧ１４１ＢＦ１７、ＤＳＭ１１６４８のもとＰＧ１４１ＢＡ１０、ＤＳＭ１１６４６のもとｐＢａ１０１およびＤＳＭ１１６４７のもとｐＢａ１３１、それぞれ１９９７年７月４日。ゲノムクローンは、コード配列に加え、イントロン配列を提供する。該配列は、例えば、該配列から得られたハイブリダイゼーションプローブとしてまたはプライマーを用いた、腫瘍における変異解析に好適である。したがって、ゲノムクローンは、診断薬を提供する。前記研究を行なうため、逆転写、ＰＣＲ反応、ハイブリダイゼーションおよびシークエンシングなどの慣用の方法が用いられうる。本発明によれば、前記核酸、具体的にはＤＮＡ、および／またはそれから得られたプライマーならびに担体および慣用の助剤を含むキットをも提供する。さらに、診断ステップは本発明の（ＳＲＣＲタンパク質）で行われうる。具体的には、かかるタンパク質に対して自己抗体が存在するかどうかを決定しうる。さらに、本発明は、細胞の本質的なプロセスを妨害することに好適である。（ＳＲＣＲタンパク質）は、哺乳類、具体的にはヒトに挿入されうる。この目的のために、該（ＳＲＣＲタンパク質）を、個体により外来とは見なされないタンパク質、例えば、トランスフェリンまたはＢＳＡに結合させることが好ましいであろう。本発明の核酸、具体的にはＤＮＡも、哺乳類、具体的にはヒトに挿入され、発現されうる。この目的のために、組織特異的プロモーターにより本発明の核酸の発現を制御することが好ましいであろう。（ＳＲＣＲタンパク質）の発現は、本発明の抗体により制御され、調節されうる。したがって、本発明は、細胞の本質的なプロセスの診断および治療目的の検出に多大な寄与を示す。とりわけ、腫瘍疾患、具体的には中枢神経系の腫瘍疾患、例えば髄芽細胞腫または膠芽細胞腫、ならびに胸部の腫瘍疾患を遺伝子レベルで診断することができ、処置をそれに対して取りうる。細胞の本質的なプロセスの診断目的の検出は、この点に関して、生後だけでなく、既に生前にもなされうる。図面の簡単な説明図１は、本発明の（ＳＲＣＲタンパク質）の、塩基配列およびそれから得られたアミン酸配列を示す、図２は、本発明の（ＳＲＣＲタンパク質）により含有され、塩基配列およびそれから得られたアミノ酸配列を示し、前記図１は図２の部分（ヌクレオチド２９５８〜４９５７）を示す、図３は、ゲノムクローンｐＢＡ７４、ｐＢａ３６、ｐＢａ４１、ＰＧ１４１ＢＦ１７、ＰＧ１４１ＢＡ１０、ｐＢａ６０、ｐＢａ１０１およびｐＢａ１３１の互いに関する制限地図および相関関係を示す、図４は、ゲノムクローンｐＢａ１１２、ｐＢＡ７４、ｐＢａ３６、ｐＢａ４１、ＰＧ１４１ＢＦ１７、ＰＧ１４１ＢＡ１０、ｐＢａ６０、ｐＢａ１０１およびｐＢａ１３１の互いに関する制限地図および相関関係を示す。さらに、これらのクローンにより含有される配列領域ＳＣ１、ＳＣ２、ＳＣ３およびＳＣ４を示す、ならびに図５は、配列領域ＳＣ１、ＳＣ２、ＳＣ３およびＳＣ４〔図５（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）〕の配列を示す。さらに領域は、ＳＣ４中、下線により印され、それは、膜貫通ドメインをコードする。本発明を下記実施例により説明する。実施例１：本発明の（ＳＲＣＲタンパク質）の調製および精製本発明の（ＳＲＣＲタンパク質）の調製のため、ヒト胎児肺（クローンテック）由来のｍＲＮＡを用いた。全長ｃＤＮＡを、ｍＲＮＡ、「Ｃａｐスナッチングと組み合わせて行なわれるオリゴｄＴプライミングから調製した。クローンテック社のマラソンキット由来のｃＤＮＡアダプターを平滑末端型の全長ｃＤＮＡに連結した。ついで該ｃＤＮＡをＰＣＲ法に供した。使用したプライマー対は、それぞれ：５’方向のｃｕｂｆｌ５’−ＴＧＣＡＣＡＴＣＴＣＴＧＡＡＧＡＣＣＡＣＡＧ−３’ および３’方向の４１ｎｒｌ５’−ＧＴＧＧＴＣＴＧＣＡＧＧＣＡＧＣＴＧ−３’ であり、それぞれｃＤＮＡアダプターに特異的なプライマーとの組み合わせであった。ＰＣＲバッチおよびＰＣＲ条件を各々以下のようにした：ＰＣＲバッチ鋳型ＤＮＡ：１μｌ＝１０ｎｇ 10×タカラ long-range PCR緩衝液：２．５μｌＭｇＣｌ₂（２５ｍＭ）：２．５μｌ Taq/Pfuポリメラーゼ混合物(19:1) ：０．２５μｌｄＮＴＰ混合物（各１０ｍＭ）：１μｌオリゴヌクレオチド（１０ｐｍｏｌ／μｌ）：１μｌＨ₂Ｏビッディスト(bidist) ：２５μｌまでＰＣＲ条件９５℃ ３分間１サイクル９４℃ １５秒間６０℃ １０秒間６８℃ ４分間１５サイクル９４℃ １５秒間６０℃ １０秒間６８℃ ４分間１サイクルにつき、６８℃ステップの１０秒間ずつの延長を有する１０サイクル増幅ｃＤＮＡを、上記に示したＤＮＡプローブａｉｍｅ２ｅ４ｆ１およびａ６０ｋｅｘｆ２とのハイブリダイゼーションに供した。これらの配列は、前記ゲノムＤＮＡクローンｐＢａ６０に特異的である。該ＤＮＡプローブとハイブリダイズしたｃＤＮＡが同定された。このｃＤＮＡは、それぞれ５’方向および３’方向で増幅されていた。該ｃＤＮＡをアガロースゲル電気泳動にかけて精製し、ＳｗａＩで切断した。さらなるアガロースゲル電気泳動後、５’方向に増幅されたｃＤＮＡを３’方向に増幅されたｃＤＮＡと連結した。連結産物をシークエンスした。該産物は図１のＤＮＡを含有した。該連結産物をＮｏｔＩで切断し、Ｎｏｔｌで切断した発現ベクターｐＱＥ−３０ＮＳＴ（キアジェンカンパニー）に挿入した。発現プラスミドｐＱ／ＳＲＣＲ−Ｐｒｏｔｅｉｎを得た。かかるタンパク質は６ヒスチジン残基（Ｎ末端パートナー）および本発明の（ＳＲＣＲタンパク質）（Ｃ末端パートナー）由来の融合タンパク質をコードする。大腸菌ＳＧ１３００９を形質転換するためにｐＱ／ＳＲＣＲ−Ｐｒｏｔｅｉｎを用いた〔ゴッテスマン(Gottesman)，Ｓ．ら，J．bacteriol．148，(1981)，265-273を参照のこと〕。細菌を１００μｇ／ｍｌのアンピシリンと２５μｇ／ｍｌのカナマイシンを有するＬＢ培地中で培養し、６０μＭイソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）で４時間誘導した。６Ｍ塩酸グアニジンを添加により、細菌の溶菌を達成し、ついで、クロマトグラフィーマテリアルの製造者（ダイアゲンカンパニー）による説明書に従って、８Ｍ尿素の存在下でライゼートを用いてクロマトグラフィー（Ｎｉ−ＮＴＡ樹脂）を行なった。結合した融合タンパク質をｐＨ３．５の緩衝液で溶出した。それの中和後、融合タンパク質を１８％ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動に供し、クーマシーブルーで染色した〔トーマス(Thomas)，J.O．とコーンベルグ(Kornberg)，R.D.，J．Mol．Bio l. 149(1975)，709-733を参照のこと〕。本発明の（融合）タンパク質は、高純度の型で調製され得ることが示された。実施例２：本発明の抗体の調製および検出本発明の実施例１の融合タンパク質を１８％ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動に供した。ゲルを４Ｍ酢酸ナトリウムで染色した後、約２６０ｋＤのバンドをゲルから切り出し、リン酸緩衝化した慣用の塩溶液中でインキュベートした。ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動し、ついでゲル片を沈降させ、クーマシーブルー染色して上清のタンパク質濃度を決定した。ゲル精製した融合タンパク質を用いて以下のように動物を免疫した：ウサギ中でのポリクローナル抗体用免疫プロトコール０．７ｍｌのＰＢＳ中３５μｇのゲル精製した融合タンパク質と０．７ｍｌの完全フロイントアジュバントおよび不完全フロイントアジュバントのそれぞれとを免疫ごとに用いた：０日目：１次免疫（完全フロイントアジュバント）１４日目：２次免疫（不完全フロイントアジュバント；ｉｃＦＡ）２８日目：３次免疫（ｉｃＦＡ）５６日目：４次免疫（ｉｃＦＡ）８０日目：出血により致死。ウサギ血清を免疫ブロット中で試験した。この目的のために、本発明の実施例１の融合タンパク質をＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動に供し、ニトロセルロースフィルターに転写した〔クイセ−アンダーセン(Khyse-Andersen)，J.,J ．Biochem．Biophys．Meth．10(1984)、203-209を参照のこと。ボック(Bock)，C .-T．ら、Virus Genes 8，(1994)，215-229に記載のように、ウエスタンブロット分析を行った。この目的のために、該ニトロセルロースフィルターを１次抗体と３７℃で１時間インキュベートした。この抗体はウサギ血清（ＰＢＳ中に１：１００００）であった。ＰＢＳを用いた数回の洗浄工程の後、該ニトロセルロースフィルターを２次抗体を用いてインキュベートした。この抗体は、ＰＢＳ中アルカリホスファターゼー結合モノクローナルヤギ抗ウサギＩｇＧ抗体（ダイアノバカンパニー）（１：５０００）であった。３７℃で３０分間インキュベートした後、ＰＢＳを用いて数回の洗浄工程を行ない、次いで、室温でバンドが見えるまで、発色溶液（３６μＭ５’−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート、４００μＭニトロブルーテトラゾリウム、１００ｍＭＴｒｉｓ− ＨＣｌ、ｐＨ９．５、１００ｍＭＮａＣｌ、５ｍＭＭｇＣｌ₂）でのアルカリホスファターゼ検出反応を行った。本発明のポリクローナル抗体が調製できることが示された。ニワトリ中でのポリクローナル抗体用免疫プロトコール０．８ｍｌのＰＢＳ中４０μｇのゲル精製した融合タンパク質と０．８ｍｌの完全フロイントアジュバントおよび不完全フロイントアジュバントのそれぞれとを免疫ごとに用いた。０日目：１次免疫（完全フロイントアジュバント）２８日目：２次免疫（不完全フロイントアジュバント；ｉｃＦＡ）５０日目：３次免疫（ｉｃＦＡ）抗体を卵黄から抽出し、ウエスタンブロットで試験した。本発明のポリクローナル抗体を検出した。マウス中でのモノクローナル抗体用免疫プロトコール０．２５ｍｌのＰＢＳ中１２μｇのゲル精製融合タンパク質と０．２５ｍｌの完全フロイントアジュバントおよび不完全フロイントアジュバントのそれぞれとを免疫ごとに用いた。４次免疫において融合タンパク質を０．５ｍｌ（アジュバントなし）中に溶解した。０日目：１次免疫（完全フロイントアジュバント）２８日目：２次免疫（不完全フロイントアジュバント；ｉｃＦＡ）５６日目：３次免疫（ｉｃＦＡ）８４日目：４次免疫（ＰＢＳ）８７日目：融合。ハイブリドーマの上清をウエスタンブロットで試験した。本発明のモノクローナル抗体を検出した。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】平成１０年１０月２８日（１９９８．１０．２８）【補正内容】請求の範囲１．少なくとも図１のアミノ酸配列またはそれとは１もしくは複数のアミノ酸が異なるアミノ酸配列を含有してなり、後者のアミノ酸配列を有するタンパク質がＤＮＡレベルで図１のＤＮＡと該ＤＮＡの融解温度よりも２０℃低い温度でハイブリダイズする、ＳＲＣＲドメイン含有タンパク質。２．該タンパク質が図２のアミノ酸配列またはそれとは１もしくは複数のアミノ酸が異なるアミノ酸配列を含んでなり、後者のアミノ酸配列を有するタンパク質がＤＮＡレベルで図２のＤＮＡと該ＤＮＡの融解温度よりも２０℃低い温度でハイブリダイズする、請求項１記載のＳＲＣＲドメイン含有タンパク質。３．請求項１記載のタンパク質をコードする核酸。４．請求項２記載のタンパク質をコードする核酸。５．該核酸がＤＮＡである、請求項３また４記載の核酸。６．該ＤＮＡが（ａ）図１もしくは２記載のＤＮＡまたはそれとは１もしくは複数の塩基対が異なるＤＮＡ、後者のＤＮＡは、図１または２のＤＮＡと該ＤＮＡの融解温度よりも２０℃低い温度でハイブリダイズする、または（ｂ）縮重遺伝子コードを介して（ａ）のＤＮＡに関連するＤＮＡを含有してなる、請求項５記載のＤＮＡ。７．請求項５または６記載のＤＮＡを含有してなるベクター。８．該ベクターが発現ベクターである、請求項７記載のベクター。９．請求項７記載のベクターを含む形質転換体。１０．請求項８記載の発現ベクターを含んでなる形質転換体。１１．請求項１０記載の形質転換体を適した条件下に培養することを含む、請求項１または２記載のタンパク質を生産する方法。１２．請求項１または２記載のタンパク質に対する抗体。１３．腫瘍疾患を診断および／または治療するための試薬としての、請求項１または２記載のタンパク質の使用。１４．腫瘍疾患を診断および／または治療するための試薬としての、請求項３〜６いずれか記載の核酸の使用。１５．腫瘍疾患が中枢神経系または胸部を冒す、請求項１３または１４記載の使用。１６．腫瘍疾患が髄芽細胞腫、膠芽細胞腫または乳癌である、請求項１５記載の使用。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｎ 1/21 1/19 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 1/21 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 5/10 Ｇ０１Ｎ 33/53 ＤＣ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡＣ１２Ｑ 1/68 5/00 ＡＧ０１Ｎ 33/53 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＪＰ，ＵＳ

Claims

【特許請求の範囲】１．少なくとも図１のアミノ酸配列またはそれとは１もしくは複数のアミノ酸が異なるアミノ酸配列を含有してなる、ＳＲＣＲドメイン含有タンパク質。２．該タンパク質が図２のアミノ酸配列またはそれとは１もしくは複数のアミノ酸が異なるアミノ酸配列を含む、請求項１記載のＳＲＣＲドメイン含有タンパク質。３．請求項１記載のタンパク質をコードする核酸。４．請求項２記載のタンパク質をコードする核酸。５．該核酸がＤＮＡである、請求項３また４記載の核酸。６．該ＤＮＡが（ａ）図１もしくは２記載のＤＮＡまたはそれとは１もしくは複数の塩基対が異なるＤＮＡ、（ｂ）（ａ）のＤＮＡにハイブリダイズするＤＮＡ、または（ｃ）縮重遺伝子コードを介して（ａ）または（ｂ）のＤＮＡに関連するＤＮＡを含有してなる、請求項５記載のＤＮＡ。７．請求項５または６記載のＤＮＡを含有してなるベクター。８．該ベクターが発現ベクターである、請求項７記載のベクター。９．請求項７記載のベクターを含む形質転換体。１０．請求項８記載の発現ベクターを含んでなる形質転換体。１１．請求項１０記載の形質転換体を適した条件下に培養することを含む、請求項１または２記載のタンパク質を生産する方法。１２．請求項１または２記載のタンパク質に対する抗体。１３．腫瘍疾患を診断および／または治療するための試薬としての、請求項１または２記載のタンパク質の使用。１４．腫瘍疾患を診断および／または治療するための試薬としての、請求項３〜６いずれか記載の核酸の使用。１５．腫瘍疾患が中枢神経系または胸部を冒す、請求項１３または１４記載の使用。１６．腫瘍疾患が髄芽細胞腫、膠芽細胞腫または乳癌である、請求項１５記載の使用。