ES2306483T5 - Prote�?na inhibidora de la ruta de señalización de wnt. - Google Patents

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Abstract

Proteína inhibidora de la ruta de señalización de wnt, codificándose la proteína por el ADN de la figura 2.1, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6 ó 2.7 o por un ADN relacionado con este ADN mediante el código genético degenerado.

Description

Proteína inhibidora de la ruta de señalización de wnt.
La presente invención se refiere a una proteína inhibidora de la ruta de señalización de wnt, a un ADN que codifica para una proteína de este tipo y a un procedimiento para la producción de una proteína de este tipo. La invención se refiere además al uso del ADN y de la proteína así como a anticuerpos dirigidos frente a la proteína.
La ruta de señalización de wnt desempeña un papel importante en la regulación de la diferenciación y proliferación celulares durante el desarrollo embrionario de Drosophila, Xenopus laevis y del ratón. La ruta de señalización de wnt comprende la combinación de glicoproteínas secretoras, que están codificadas por genes wnt, por ejemplo Xwnt-8, y receptores de wnt, a los que se unen las glicoproteínas. Además, la ruta de señalización de wnt está implicada en seres humanos de manera causal en el carcinoma de mama y de colon así como en el melanoma (véase Peifer, M., Science 275, (1997), 1752-1753). Por tanto, los inhibidores de la ruta de señalización de wnt podrían representar una posibilidad de poder intervenir terapéuticamente en el caso de enfermedades tumorales.
Si bien las solicitudes de patente de prioridad estadounidenses 08/843.704 y 08/842.898, que coinciden ampliamente con la publicación PCT WO 98 46755, describen determinadas proteínas CRSP (dkk3 = hCRSP-1 = T59), lo hacen sin embargo sin ninguna función.
Por consiguiente, la presente invención se basa en el objetivo de proporcionar un agente con el que pueda inhibirse la ruta de señalización de wnt.
Esto se consigue según la invención mediante los objetos en las reivindicaciones.
Por consiguiente, es objeto de la presente invención una proteína inhibidora de la ruta de señalización de wnt según la reivindicación 1.
La presente invención se basa en el conocimiento del solicitante de que existe una proteína en animales, especialmente mamíferos, muy especialmente el ser humano, que inhibe la ruta de señalización de wnt. El solicitante ha encontrado que la expresión del gen wnt, Xwnt-8, en Xenopus laevis conduce a la formación de gemelos siameses. Esta malformación se evita cuando se expresa simultáneamente la proteína citada anteriormente. Esta proteína es una proteína secretora de aproximadamente 40 kD. Las variantes de la proteína están expuestas en forma de sus ADN en la figura 2. Además, el solicitante ha reconocido que se expresan variantes de la proteína en distintos tejidos (véase la tabla 1 y la figura 3).
En la presente invención, la proteína citada anteriormente se denomina como “inhibidor de wnt” (wnt-I).
Otro objeto de la presente invención es un ADN que codifica para (wnt-I). Éste puede ser por ejemplo un ADN genómico
o un ADNc. Éste es un ADN que comprende lo siguiente:
(a)
el ADN de la figura 2.3, 2.4, 2.5, 2.6 ó 2.7
(b)
un ADN relacionado con el ADN de (a) mediante el código genético degenerado.
El ADN de la figura 2 comprende siete ADN, que proceden de Xenopus laevis, ratón, ser humano o gallina y codifican para (wnt-I). Seis de estos ADN se depositaron en la DSMZ (“Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen”, Colección Alemana de Microorganismos y Cultivos Celulares) el 19 de septiembre de 1997 tal como sigue:
Figura 2.1
(ADN de ser humano) como phdkk-3 con DSM 11762
Figura 2.2
(ADN de gallina) tiene la denominación pcdkk-3
Figura 2.3
(ADN de ratón) como pmdkk-2 con DSM 11759
Figura 2.4
(ADN de ser humano) como phdkk-2 con DSM 11761
Figura 2.5
(ADN de ratón) como pmdkk-1 con DMS 11758
Figura 2.6
(ADN de ser humano) como phdkk-1 con DSM 11760
Figura 2.7
(ADN de Xenopus laevis) como pRNdkk-1 con DSM 11757
A continuación se describe un ADN según la invención en forma de un ADNc. Éste representa a modo de ejemplo cualquier ADN que está abarcado por la presente invención.
Para la producción de un ADNc según la invención es favorable partir de una biblioteca de ADNc de Xenopus laevis (véase Glinka, A. et al., Mechanisms Develope. 60, (1996), 221-231). A partir de los clones de ADNc individuales sesintetizan los correspondientes ARNm por medio de la ARN polimerasa. Éstos se microinyectan junto con el ARNm de genes wnt, por ejemplo Xwnt-8, en Xenopus laevis. Se examina la formación de gemelos siameses en Xenopus laevis.
Éstos se obtienen cuando el ARNm del gen wnt se microinyecta solo o junto con tal ARNm de Xenopus laevis, que no codifica para (wnt-I). Por consiguiente, la no aparición de gemelos siameses se valora como prueba de la existencia de un ARNm que codifica para (wnt-I). Un ARNm de este tipo puede reconocer directamente al correspondiente ADNc.
Un ADNc según la invención puede encontrarse en un vector o vector de expresión. El experto conoce ejemplos de éstos. En el caso de un vector de expresión para E. coli estos son por ejemplo pGEMEX, derivado de pUC, pGEX-2T, pET3b y pQE-8. Para la expresión en levadura han de mencionarse por ejemplo pY100 y Ycpad1, mientras que para la expresión en células animales se exponen por ejemplo pKCR, pEFBOS, cDM8 y pCEV4. Para la expresión en células de insecto es especialmente adecuado el vector de expresión de baculovirus pAcSGHisNT-A.
El experto conoce células adecuadas para expresar un ADNc que se encuentra en un vector de expresión según la invención. Los ejemplos de tales células comprenden las cepas de E. coli HB101, DH1, x1776, JM101, JM 109, BL21 y SG 13009, la cepa de levadura Saccharomyces cerevisiae y las células animales L, 3T3, FM3A, CHO, COS, Vero y HeLa así como las células de insecto sf9.
El experto sabe de qué manera debe insertarse un ADNc según la invención en un vector de expresión. También conoce que puede insertarse este ADNc junto con un ADN que codifica para otro péptido o proteína, de modo que el ADNc según la invención puede expresarse en forma de una proteína de fusión.
Además, el experto conoce las condiciones para cultivar células transformadas o transfectadas. También conoce procedimientos para aislar y para purificar la proteína expresada por el ADNc según la invención. Por consiguiente, una proteína de este tipo, es también objeto de la presente invención.
Otro objeto de la presente invención es un anticuerpo dirigido frente a una proteína citada anteriormente. Un anticuerpo de este tipo puede producirse mediante procedimientos habituales. Puede ser monoclonal. Para su producción es favorable inmunizar con una proteína (de fusión) citada anteriormente o fragmentos de la misma, animales, especialmente ratones para obtener un anticuerpo monoclonal. Pueden tener lugar otras “inmunizaciones de recuerdo” en los animales con la misma proteína (de fusión) o fragmentos de la misma. El anticuerpo policlonal puede obtenerse entonces a partir del suero o la yema de huevo de los animales. Para el anticuerpo monoclonal se fusionan células esplénicas de los animales con células de mieloma.
La presente invención permite estudiar y entender mejor la ruta de señalización de wnt. Con un anticuerpo según la invención puede detectarse (wnt-I) en organismos. Además puede detectarse un autoanticuerpo dirigido frente a esta proteína con un (wnt-I) según la invención. Ambas detecciones pueden tener lugar mediante procedimientos habituales, especialmente una inmunotransferencia de tipo Western, un ELISA, una inmunoprecipitación o mediante inmunofluorescencia. Además puede detectarse la expresión del gen que codifica para (wnt-I) con un ácido nucleico según la invención, especialmente un ADN y cebadores derivados del mismo. Esta detección puede tener lugar de manera habitual, especialmente en una transferencia de tipo Southern.
Por consiguiente, con la presente invención también pueden estudiarse, es decir diagnosticarse, y entenderse mejor procesos que están relacionados con la ruta de señalización de wnt. Éstos son por ejemplo la diferenciación y proliferación celulares así como enfermedades de diferente tipo. Ejemplos de las últimas son enfermedades del ojo y de los huesos así como enfermedades tumorales, especialmente carcinoma de mama y de colon así como melanoma.
Además, la presente invención es adecuada para tomar medidas para y contra la existencia de (wnt-I) en organismos. Con un anticuerpo según la invención puede inhibirse (wnt-I) en organismos. Por otro lado puede elevarse la cantidad de (wnt-I) en organismos con un (wnt-I) según la invención, especialmente tras el acoplamiento a una proteína no considerada como extraña por el cuerpo, por ejemplo transferrina o BSA. De manera correspondiente puede conseguirse también con un ácido nucleico según la invención, especialmente con un ADN, que se produce bajo el control de un promotor que puede inducirse en determinados tejidos y tras su expresión conduce a la facilitación de (wnt-I) en estos tejidos. Además, también puede utilizarse un ácido nucleico según la invención, especialmente un ADN, para la inhibición de (wnt-I). Para esto puede usarse el ácido nucleico, por ejemplo como base para la producción de oligonucleótidos antisentido para la inhibición de la expresión del gen que codifica para (wnt-I).
Por consiguiente, la presente invención proporciona también la posibilidad de intervenir activando o inhibiendo en la ruta de señalización de wnt. Lo primero podría tener lugar por ejemplo mediante la administración de un anticuerpo según la invención frente a (wnt-I). Para lo último es apropiado administrar (wnt-I) según la invención. La activación de la ruta de señalización de wnt podría ser razonable si se piensa en criar organismos para la donación de órganos. Sin embargo, la inhibición de la ruta de señalización de wnt es apropiada para poder intervenir terapéuticamente en enfermedades de huesos y del ojo así como en enfermedades tumorales, especialmente carcinomas de mama y de colon así como melanoma.
Especialmente se destaca la presente invención porque puede utilizarse de manera específica de tejido. Esto sirve tanto para el diagnóstico como para el tratamiento. Por ejemplo es adecuado un ADN según la invención, DKK-1, una proteína correspondiente o un anticuerpo frente a los mismos especialmente para tejidos tales como cerebro, corazón, vasos, huesos, cartílago, tejido conjuntivo y ojo. Además es adecuado un ADN según la invención, DKK-2, una proteína correspondiente o un anticuerpo frente a los mismos especialmente para tejidos tales como cerebro, corazón, vasos, huesos, tejido conjuntivo, riñones, testículos, bazo, ovarios, músculo, útero, cartílago, ojo y glándula mamaria.
Breve descripción de los dibujos:
La figura 1 muestra las secuencias I y II consenso de aminoácidos de un (wnt-I) según la invención. La indicación “-” significa un aminoácido, siendo variable el número de aminoácidos cuando presentan un asterisco.
La figura 2 muestra la secuencia de bases de siete ADN que codifican para (wnt-I) con la indicación de las bases que contribuyen a las secuencias consenso de aminoácidos de (wnt-I).
La figura 3 muestra la expresión de tres ADN que codifican para (wnt-I), DKK-1, DKK-2 y DKK-3, en tejidos.
La presente invención se explica mediante los ejemplos citados a continuación.
Ejemplo 1: Producción y purificación de un (wnt-I)
Para la producción de un (wnt-I) se dotó el ADN de la figura 2.6, phdkk-1 de ligadores de Bam HI, posteriormente se escindió con Bam HI y se insertó en el vector de expresión pQE-8 (Qiagen) escindido con Bam HI. Se obtuvo el plásmido de expresión pQ/wnt-I. Éste codifica para una proteína de fusión de 6 restos de histidina (componente del extremo N-terminal) y un (wnt-I) según la invención (componente del extremo C-terminal). Se usó pQ/wnt-I para la transformación de SG 13009 de E. coli (véase Gottesman, S. et al., J. Bacteriol. 148, (1981), 265-273). Se cultivaron las bacterias en un medio LB con 100 !g/ml de ampicilina y 25 !g/ml de kanamicina y se indujeron durante 4 h con isopropil-1-D-tiogalactopiranósido (IPTG) 60 !M. Mediante la adición de clorhidrato de guanidina 6 M se consiguió una lisis de las bacterias, posteriormente se realizó con el lisado una cromatografía (resina de Ni-NTA) en presencia de urea 8 M de manera correspondiente a las indicaciones del fabricante (Diagen) del material de cromatografía. Se eluyó la proteína de fusión unida en un tampón con pH 3,5. Tras su neutralización, se sometió la proteína de fusión a una electroforesis en gel de poliacrilamida-SDS al 18% y se tiñó con azul de Coomassie (véase Thomas, J.O. y Kornberg, R.D., J. Mol. Biol. 149 (1975), 709-733).
Se mostró que una proteína (de fusión) puede producirse en forma altamente pura.
Ejemplo 2: Producción y detección de un anticuerpo
Se sometió una proteína de fusión del ejemplo 1 a una electroforesis en gel de poliacrilamida-SDS al 18%. Tras la tinción del gel con acetato de sodio 4 M, se cortó una banda de aproximadamente 40 kD del gel y se incubó en disolución de cloruro de sodio tamponada con fosfato. Se sedimentaron fragmentos de gel, antes de determinar la concentración de proteína del sobrenadante mediante una electroforesis en gel de poliacrilamida-SDS, a la que le siguió una tinción con azul de Coomassie. Se inmunizaron animales con la proteína de fusión purificada en gel tal como sigue:
Protocolo de inmunización para obtener anticuerpos policlonales en conejos
Se utilizaron por inmunización 35 !g de proteína de fusión purificada en gel en 0,7 ml de PBS y 0,7 ml de adyuvante de Freund completo o incompleto.
Día 0: 1ª Inmunización (adyuvante de Freund completo)
Día 14: 2ª Inmunización (adyuvante de Freund incompleto; icFA)
Día 28: 3ª Inmunización (icFA)
Día 56: 4ª. Inmunización (icFA)
Día 80: Sangrado
Se sometió a prueba el suero del conejo en inmunotransferencia. Para esto, se sometió una proteína de fusión del ejemplo 1 a una electroforesis en gel de poliacrilamida-SDS y se transfirió a un filtro de nitrocelulosa (véase Khyse-Andersen, J., J. Biochem. Biophys. Meth. 10, (1984), 203-209). Se realizó el análisis de inmunotransferencia de tipo Western tal como se describe en Bock, C.-T. et al., Virus Genes 8, (1994), 215-229. Para esto, se incubó el filtro de nitrocelulosa durante una hora a 37ºC con un primer anticuerpo. Este anticuerpo era el suero del conejo (1:10000 en PBS). Tras varias etapas de lavado con PBS se incubó el filtro de nitrocelulosa con un segundo anticuerpo. Este anticuerpo era un anticuerpo de cabra anti-IgG de conejo monoclonal acoplado a fosfatasa alcalina (Dianova) (1:5000) en PBS. Tras una incubación de 30 minutos a 37ºC siguieron varias etapas de lavado con PBS y posteriormente la reacción de detección de la fosfatasa alcalina con revelador (fosfato de 5’-bromo-4-cloro-3-indolilo 36 !M, azul de nitrotetrazolio 400 !M, Tris-HCl 100 mM, pH 9,5, NaCl 100 mM, MgCl2 5 mM) a temperatura ambiente, hasta que fueron visibles las bandas.
Se mostró que puede producirse el anticuerpo policlonal.
Protocolo de inmunización para obtener anticuerpos policlonales en gallina
Se utilizaron por inmunización 40 !g de proteína de fusión purificada en gel en 0,8 ml de PBS y 0,8 ml de adyuvante de Freund completo o incompleto. Día O: 1ª Inmunización (adyuvante de Freund completo) 5 Día 28: 2ª Inmunización (adyuvante de Freund incompleto; icFA)
Día 50: 3ª Inmunización (icFA) Se extrajeron anticuerpos de yema de huevo y se sometieron a prueba en inmunotransferencia de tipo Western. Se detectaron anticuerpos policlonales.
Protocolo de inmunización para obtener anticuerpos monoclonales de ratón.
10 Se utilizaron por inmunización 12 !g de proteína de fusión purificada en gel en 0,25 ml de PBS y 0,25 ml de adyuvante de Freund completo o incompleto; en la 4ª inmunización la proteína de fusión estaba disuelta en 0,5 ml (sin adyuvante). Día O: 1ª Inmunización (adyuvante de Freund completo) Día 28: 2ª Inmunización (adyuvante de Freund incompleto; icFA) Día 56: 3ª Inmunización (icFA) 15 Día 84: 4ª Inmunización (PBS)
Día 87: Fusión Se sometieron a prueba sobrenadantes de hibridomas en inmunotransferencia de tipo Western. Se detectaron anticuerpos monoclonales según la invención.
Tabla 1: Expresión de ADN en embriones de ratón Dkk-1 Dkk-2 Dkk-3 Neuroepitelio
E9.5 +++ ventral +++ medial + medial diencéfalo E 12.5 telencéfalo M hipotálamo telencéfalo M
/manto /zona ventricular Ojo epitelio membrana coroidea retina
pigmentado Médula -/+ -placa del espinal techo de zona
ventricular
Mesodermo:
Corazón E10
Corazón E12 Endocardio de bulbo arterioso, Septo transverso almohadilla endocárdica
endotelio miocardio
endotelio almohadilla endocárdica
Vasos sanguíneos +++ aorta +++ arteria pulmonar +++ aorta
+arteria
pulmonar
Mesénquima del E9 S I D primordio de la extremidad
Hueso pericondrio S/mesénquima pericondrio I/mesénquima E12
Hueso centros de osificación -- E15 Urogenital cuerpo en mesénquima
metanéfrico forma de coma, cuerpo en forma de S del conducto renal Paladar +++ ++ +
Folículo piloso +++ mesénquima + +-+epitelio
Mesénquima --+++ dental Mesodermo troncal +/-+++ ++
Leyenda: Mesodermo: (D) decp (“dorsal ectoderm primordium”, primordio ectodérmico dorsal), (I) intermedio, (L) lateral, (M) medial, (S), superficial.
Nivel de expresión: (-) ausencia, (+/-) expresión muy débil, (+) media, (++) fuerte, (+++) muy fuerte.
PROTOCOLO DE SECUENCIAS
(1) DATOS GENERALES:
(i) SOLICITANTE:
5 (A) NOMBRE: Deutsches Krebsforschungszentrum (Centro alemán de investigación del cáncer)
(B)
CALLE: Im Neuenheimer Feld 280
(C)
CIUDAD: Heidelberg
(E) PA�?S: Alemania 10 (F) CÓDIGO POSTAL: 69120
(ii) T�?TULO DE LA INVENCIÓN: Proteína inhibidora de la ruta de señalización de wnt
(iii) NÚMERO DE SECUENCIAS: 7
(iv)
VERSIÓN LEGIBLE POR ORDENADOR:
(A)
SOPORTE DE DATOS: disco flexible
(B)
ORDENADOR: IBM PC compatible
(C)
SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS
(D) SOFTWARE: PatentIn Release nº 1.0, Versión nº 1.30 (EPA)
(v)
DATOS DE LA SOLICITUD PREVIA:
5 NÚMERO DE SOLICITUD: DE 19747418.7
(2)
DATOS PARA LA SEQ ID NO: 1:
(i)
CARACTER�?STICAS DE SECUENCIA:
(A) LONGITUD: 1297 Pares de base
(B)
TIPO: Nucleótido 10 (C) FORMA DE LA CADENA: Monocatenaria
(D) TOPOLOG�?A: lineal
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN genómico
(iii) HIPOTÉTICO: NO
(iv)
ANTISENTIDO: NO 15 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 1:
(2)
DATOS PARA LA SEQ ID NO: 2:
(i)
CARACTER�?STICAS DE SECUENCIA:
(A)
LONGITUD: 881 Pares de base
(B)
TIPO: Nucleótido
5 (C) FORMA DE LA CADENA: Monocatenaria D) TOPOLOG�?A: lineal
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN genómico
(iii) HIPOTÉTICO: NO
(iv)
ANTISENTIDO: NO 10 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 2:
(2)
DATOS PARA LA SEQ ID NO: 3:
(i)
CARACTER�?STICAS DE SECUENCIA:
(A)
LONGITUD: 1226 Pares de base 15 (B) TIPO: Nucleótido
(C)
FORMA DE LA CADENA: Monocatenaria
(D)
TOPOLOG�?A: lineal
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN genómico
(iii) HIPOTÉTICO: NO 20 (iv) ANTISENTIDO: NO
(xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 3: (2) DATOS PARA LA SEQ ID NO: 4:
(i) CARACTER�?STICAS DE SECUENCIA:
(A) LONGITUD: 768 Pares de base 5 (B) TIPO: Nucleótido
(C)
FORMA DE LA CADENA: Monocatenaria
(D)
TOPOLOG�?A: lineal
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN genómico
(iii) HIPOTÉTICO: NO 10 (iv) ANTISENTIDO: NO
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 4:
(2)
DATOS PARA LA SEQ ID NO: 5:
(i)
CARACTER�?STICAS DE SECUENCIA:
(A) LONGITUD: 828 Pares de base 5 (B) TIPO: Nucleótido
(C) FORMA DE LA CADENA: Monocatenaria
(D) TOPOLOG�?A: lineal
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN genómico
(iii) HIPOTÉTICO: NO 10 (iv) ANTISENTIDO: NO
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 5:
(2)
DATOS PARA LA SEQ ID NO: 6:
(i)
CARACTER�?STICAS DE SECUENCIA:
(A) LONGITUD: 432 Pares de base
(B)
TIPO: Nucleótido 5 (C) FORMA DE LA CADENA: Monocatenaria
(D) TOPOLOG�?A: lineal
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN genómico
(iii) HIPOTÉTICO: NO
(iv)
ANTISENTIDO: NO 10 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 6:
(2)
DATOS PARA LA SEQ ID NO: 7:
(i)
CARACTER�?STICAS DE SECUENCIA:
(A)
LONGITUD: 1383 Pares de base 15 (B) TIPO: Nucleótido
(C)
FORMA DE LA CADENA: Monocatenaria
(D)
TOPOLOG�?A: lineal
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN genómico
(iii) HIPOTÉTICO: NO 20 (iv) ANTISENTIDO: NO
(xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 7:

Claims (5)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Proteína inhibidora de la ruta de señalización de wnt, codificándose la proteína por el ADN de la figura 2.3, 2.4, 2.5, 2.6 ó 2.7 o por un ADN relacionado con este ADN mediante el código genético degenerado, comprendiendo la proteína al menos una de las secuencias consenso de aminoácidos I y II:
    significando la indicación “-” un aminoácido, siendo el número de aminoácidos variable cuando presentan un asterísco.
  2. 2. ADN, que codifica para la proteína según la reivindicación 1, siendo el ADN aquél de la figura 2.3, 2.4, 10 2.5, 2.6 ó 2.7 o un ADN relacionado con este ADN mediante el código genético degenerado.
  3. 3.
    Plásmido de expresión, que comprende el ADN según la reivindicación 2.
  4. 4.
    Transformante, que contiene el plásmido de expresión según la reivindicación 3.
  5. 5.
    Procedimiento para la producción de la proteína según la reivindicación 1, que comprende el cultivo del transformante según la reivindicación 4 en condiciones adecuadas.
    15 6. Anticuerpo monoclonal, dirigido frente a la proteína según la reivindicación 1.
ES98959767T 1997-10-27 1998-10-27 Prote�?na inhibidora de la ruta de señalización de wnt. Expired - Lifetime ES2306483T5 (es)

Applications Claiming Priority (3)

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DE19747418 1997-10-27
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Families Citing this family (43)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT975755E (pt) * 1997-04-16 2007-06-26 Millennium Pharm Inc Proteínas crsp (proteínas segregadas ricas em cisteínas), moléculas de ácido nucleico que as codificam e suas utilizações
US7057017B2 (en) * 1997-04-16 2006-06-06 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Human dickkopf-related protein and nucleic acid molecules and uses therefor
DE19747418C1 (de) 1997-10-27 1999-07-15 Deutsches Krebsforsch Inhibitor-Protein des wnt-Signalwegs
US7446181B2 (en) * 1998-01-15 2008-11-04 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Antibodies that bind human Dickkopf-1 proteins
US6344541B1 (en) 1998-09-25 2002-02-05 Amgen Inc. DKR polypeptides
EP1161445A2 (en) * 1999-03-05 2001-12-12 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Human dickkopf-related protein and nucleic acid molecules and uses therefor
JP2003501395A (ja) * 1999-06-08 2003-01-14 ローランティス・リミテッド 治療的使用
EP1224471B1 (en) * 2000-02-24 2003-11-26 Oxford GlycoSciences (UK) Limited Dpi-6, a therapeutic biomarker in neurological disorders
EP1222933A1 (en) * 2001-01-15 2002-07-17 Academisch Ziekenhuis Leiden h.o.d.n., Leids Universitair Medisch Centrum Generation and/or reduction of new lung tissue in an affected lung, by modulation of the Wnt-pathway
AU2002318112B2 (en) 2001-04-10 2007-12-06 Agensys, Inc. Nucleic acids and corresponding proteins useful in the detection and treatment of various cancers
US7927597B2 (en) 2001-04-10 2011-04-19 Agensys, Inc. Methods to inhibit cell growth
US7713526B2 (en) * 2001-05-01 2010-05-11 The Regents Of The University Of California Wnt and frizzled receptors as targets for immunotherapy in head and neck squamous cell carcinomas
US20040038860A1 (en) * 2002-05-17 2004-02-26 Allen Kristina M. Reagents and methods for modulating dkk-mediated interactions
IL149404A0 (en) * 2002-04-29 2002-11-10 Yissum Res Dev Co METHODS AND COMPOSITIONS FOR MODULATING β-CATENIN PHOSPHORYLATION
EP1549144A4 (en) * 2002-10-04 2010-01-06 Univ California METHODS OF TREATING CANCER BY INHIBITING WNT SIGNALING
US8637506B2 (en) * 2003-09-22 2014-01-28 Enzo Biochem, Inc. Compositions and methods for bone formation and remodeling
US9046537B2 (en) 2003-09-22 2015-06-02 Enzo Biochem, Inc. Method for treating inflammation by administering a compound which binds LDL-receptor-related protein (LRP) ligand binding domain
US8367822B2 (en) 2003-09-22 2013-02-05 Enzo Therapeutics, Inc. Compositions and methods for bone formation and remodeling
US8461155B2 (en) * 2003-09-22 2013-06-11 University Of Connecticut Sclerostin and the inhibition of WNT signaling and bone formation
WO2005049797A2 (en) 2003-11-17 2005-06-02 Merck & Co., Inc. Cynomolgus monkey dickkopf-4, nucleotides encoding same, and uses thereof
US7622553B2 (en) 2003-11-17 2009-11-24 Merck & Co., Inc. Rhesus monkey dickkopf-1, nucleotides encoding same, and uses thereof
US7867699B2 (en) * 2004-03-23 2011-01-11 Wyeth Method of synthesizing and purifying Dkk proteins and Dkk proteins obtained thereby
EP1753880A4 (en) * 2004-05-14 2010-07-14 Univ California METHODS OF TREATING CANCER USING ANTI-WNT2 MONOCLONAL ANTIBODIES AND SHORT INTERFERING RNA
US9052324B2 (en) 2004-05-19 2015-06-09 Enzo Biochem, Inc. Compounds and assays for controlling Wnt activity
US8343922B2 (en) * 2004-05-19 2013-01-01 Enzo Biochem, Inc. Compositions and methods for the stimulation or enhancement of bone formation and the self-renewal of cells
JP2008500398A (ja) * 2004-05-21 2008-01-10 ザ・レジェンツ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・カリフォルニア Ｗｎｔ阻害因子−１（ＷＩＦ−１）で癌を処置および診断するための方法
MX2007001221A (es) * 2004-08-04 2007-03-23 Amgen Inc Anticuerpos para proteina dickkopf-1 (dkk-1).
JP2008519829A (ja) * 2004-11-10 2008-06-12 ヒュブレヒト ラボラトリウム Ｎｏｔｃｈ経路活性化の阻害による腸腺腫および／または腺癌の処置
JP2008522607A (ja) * 2004-12-09 2008-07-03 ニューロ セラピューティクス エービー Ｄｉｃｋｋｏｐｆｓおよび神経発生に関係した物質および方法
EP1795198A1 (en) * 2005-12-09 2007-06-13 Hubrecht Laboratorium Treatment of Barret's esophagus
AR060017A1 (es) 2006-01-13 2008-05-21 Novartis Ag Composiciones y metodos de uso para anticuerpos de dickkopf -1
WO2008097510A1 (en) * 2007-02-08 2008-08-14 Merck & Co., Inc. Antibodies specific for dkk-1
US20090074668A1 (en) * 2007-09-14 2009-03-19 Farjo Rafal A Vldlr-/- mouse models and related methods
AR075989A1 (es) 2009-04-10 2011-05-11 Lilly Co Eli Anticuerpo dkk -1 (dickkopf-1) humano disenado por ingenieria
US20120165270A1 (en) * 2009-04-27 2012-06-28 Yeon Sook Choi Inhibition of hair follicle growth by the wnt inhibitor dkk1
SA110310369B1 (ar) 2009-05-12 2014-09-02 Pfizer أجسام مضادة تخص dkk-1 واستخداماتها
EA201391248A1 (ru) 2011-03-01 2014-05-30 Эмджен Инк. Биспецифические связывающие агенты
CN103596979B (zh) 2011-03-16 2018-01-26 阿尔金-X有限公司 针对cd70的抗体
WO2013155447A1 (en) * 2012-04-13 2013-10-17 Children's Medical Center Corporation Tiki inhibitors
UY35148A (es) 2012-11-21 2014-05-30 Amgen Inc Immunoglobulinas heterodiméricas
US10391168B1 (en) 2014-08-22 2019-08-27 University Of Bern Anti-CD70 combination therapy
GB201800649D0 (en) 2018-01-16 2018-02-28 Argenx Bvba CD70 Combination Therapy
TWI848030B (zh) 2018-12-18 2024-07-11 比利時商阿根思公司 Ｃｄ７０組合治療

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6133232A (en) * 1996-06-20 2000-10-17 The Regents Of The University Of California Endoderm, cardiac and neural inducing factors
WO1998027932A2 (en) 1996-12-20 1998-07-02 Human Genome Sciences, Inc. Cerebellum and embryo specific protein
US7057017B2 (en) * 1997-04-16 2006-06-06 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Human dickkopf-related protein and nucleic acid molecules and uses therefor
PT975755E (pt) * 1997-04-16 2007-06-26 Millennium Pharm Inc Proteínas crsp (proteínas segregadas ricas em cisteínas), moléculas de ácido nucleico que as codificam e suas utilizações
DE19747418C1 (de) 1997-10-27 1999-07-15 Deutsches Krebsforsch Inhibitor-Protein des wnt-Signalwegs
US7446181B2 (en) * 1998-01-15 2008-11-04 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Antibodies that bind human Dickkopf-1 proteins

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