ES2304376T3 - Composicion farmaceutica para la inmunomodulacion y preparacion de vacunas que comprenden un antigeno y, como adyuvantes, un oligodesoxinucleotido inmunogenico y un polpeptido policationico. - Google Patents
Composicion farmaceutica para la inmunomodulacion y preparacion de vacunas que comprenden un antigeno y, como adyuvantes, un oligodesoxinucleotido inmunogenico y un polpeptido policationico. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2304376T3 ES2304376T3 ES01903625T ES01903625T ES2304376T3 ES 2304376 T3 ES2304376 T3 ES 2304376T3 ES 01903625 T ES01903625 T ES 01903625T ES 01903625 T ES01903625 T ES 01903625T ES 2304376 T3 ES2304376 T3 ES 2304376T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- cpg
- odn
- antigen
- peptide
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55561—CpG containing adjuvants; Oligonucleotide containing adjuvants
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Composición farmacéutica que comprende: - un antígeno, - un oligodesoxinucleótido inmunogénico que contiene motivos de CpG (ODN-Cpg), y - un péptido policatiónico que contiene más del 20% de aminoácidos básicos.
Description
Composición farmacéutica para la
inmunomodulación y preparación de vacunas que comprenden un antígeno
y, como adyuvantes, un oligodesoxinucleótido inmunogénico y un
polipéptido policatiónico.
La invención se refiere a una composición
farmacéutica, por ejemplo para usar para inmunomodulación,
especialmente como vacunas.
Las vacunas pueden salvar más vidas (y recursos)
que cualquier otra intervención médica (Nossal, 1998), Debido a los
programas de vacunación mundiales, la incidencia de muchas
enfermedades mortales ha disminuido drásticamente. Aunque esto es
válido para un completo panel de enfermedades, por ejemplo
tuberculosis, difteria, pertussis, sarampión y tétanos, no existen
vacunas eficaces para numerosas enfermedades infecciosas, incluidas
la mayoría de las infecciones virales, como el SIDA. Tampoco hay
vacunas eficaces para otras enfermedades, infecciosas o no
infecciosas, que se llevan millones de vidas de millones de
pacientes al año, entre las que se incluyen la malaria o el cáncer.
Además, la rápida aparición de bacterias y microorganismos
resistentes a antibióticos requiere tratamientos alternativos,
siendo las vacunas una elección lógica. Por último, la gran
necesidad de vacunas también queda ilustrada por el hecho de que
las enfermedades infecciosas, más que los trastornos
cardiovasculares o el cáncer o las lesiones, siguen siendo la causa
más importante de muerte y discapacidad en el mundo (Bloom y Widdus,
1998).
Desde un punto de vista inmunológico, un
problema fundamental en el campo de las vacunas hoy en día es que
las vacunas tradicionales (y/o los compuestos inmunomoduladores
contenidos en estas preparaciones) están diseñadas para inducir
niveles elevados de anticuerpos (Harlow y Lane, 1988). No obstante,
los anticuerpos solos no son eficaces en la prevención de un gran
número de enfermedades, incluidas la mayoría de las enfermedades
causadas por virus, bacterias intracelulares, ciertos parásitos y el
cáncer. Ejemplos de tales enfermedades son, entre otras, el virus
del VIH mencionado antes o la especie Plasmodio en el caso de la
malaria. En numerosos sistemas experimentales, se ha mostrado que
la rama celular del sistema inmunológico, incluidas las células T,
más que la rama humoral es importante para estas indicaciones. Por
tanto, se necesitan nuevas tecnologías innovadoras para superar las
limitaciones de las vacunas convencionales. El punto de atención
deben ser las tecnologías que inducen con fiabilidad el sistema
inmunológico celular, incluidas las células T específicas de
antígeno, que reconocen moléculas expresadas en células infectadas
por patógenos. Idealmente, se diseñan vacunas que induzcan células
T que distingan las células enfermas y/o infectadas de las células
normales y, simultáneamente, anticuerpos secretados por células B
que reconocen patógenos en compartimentos extracelulares.
Diversas vacunas establecidas consisten en
organismos vivos atenuados, en las que existe el riesgo de inversión
a la cepa salvaje virulenta. En particular, esto puede ser un
escenario potencialmente mortal en los huéspedes
inmunocomprometidos. Como alternativa, las vacunas se administran
como combinación de antígenos derivados de patógenos junto con
compuestos que inducen o potencian las respuestas inmunitarias
contra estos antígenos (estos compuestos se denominan normalmente
adyuvantes), ya que estas vacunas con subunidades por sí solas
normalmente no son eficaces.
Aunque no hay duda de que las vacunas anteriores
son valiosos tratamientos médicos, existe la desventaja de que,
debido a su complejidad, se pueden provocar diversos efectos
secundarios, por ejemplo a antígenos contenidos en la vacuna que
muestran reactividad cruzada con moléculas expresadas por células de
individuos vacunados. Además, es difícil cumplir los requisitos
existentes de las autoridades reguladoras, por ejemplo la
Organización Mundial de la Salud (OMS), la Food and Drug
Administration (FDA) y sus homólogos europeos, para la
especificación exacta de la composición de la vacuna y los
mecanismos de inducción de inmunidad.
Algunas vacunas ampliamente utilizadas se
clasifican en la tabla 1.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
De (Lijeqvist y Stahl, 1999) con
modificaciones.
Las células presentadoras de antígenos
pertenecen al sistema inmunológico innato, que ha evolucionado como
primera línea de defensa del huésped que limita las infecciones
justo después de la exposición a los microorganismos (Hoffmann y
col., 1999). Las células del sistema inmunológico innato reconocen
patrones de estructuras relativamente inespecíficas expresadas en
sus dianas, en lugar de estructuras específicas más sofisticadas que
son reconocidas por el sistema inmunológico adaptativo (Hoffmann y
col., 1999). Ejemplos de células del sistema inmunológico innato
son los macrófagos y las células dendríticas, así como los
granulocitos (p. ej., neutrófilos), las células asesinas naturales
y otras. Por el contrario, las células del sistema inmunológico
adaptativo reconocen estructuras antigénicas específicas, incluidos
péptidos en el caso de las células T, y péptidos y estructuras
tridimensionales en el caso de las células B. El sistema
inmunológico adaptativo es mucho más específico y sofisticado que
el sistema inmunológico innato y mejora tras la exposición repetida
a un patógeno/antígeno dado. Filogenéticamente, el sistema
inmunológico innato es mucho más antiguo y se puede encontrar ya en
organismos muy primitivos. No obstante, el sistema inmunológico
innato es crucial durante la fase inicial de la exposición
antigénica, ya que, además de contener patógenos, las células del
sistema inmunológico innato, es decir las CPA, ceban a las células
del sistema inmunológico adaptativo y, por tanto, desencadenan
respuestas inmunológicas específicas que conducen a la eliminación
de los intrusos. En resumen, las células del sistema inmunológico
innato, y en particular las CPA, desempeñan un papel crucial durante
la fase de inducción de las respuestas inmunitarias mediante a) la
contención de infecciones por medio de un sistema primitivo de
reconocimiento de patrones y b) el cebado de las células del
sistema inmunológico adaptativo, que conduce a respuestas
inmunológicas específicas y de memoria que tienen como resultado la
eliminación de los patógenos intrusotes o de otras dianas (Roitt y
col., 1998). Estos mecanismos pueden también ser importantes para
eliminar o contener células tumorales.
Como se ha mencionado antes, las células del
sistema inmunológico innato reconocen patrones expresados en sus
dianas respectivas. Ejemplos son lipopolisacáridos (LPS) en el caso
de las bacterias gramnegativas, glucolípidos micobacterianos,
ácidos lipoteicoicos de las bacterias grampositivas, mananos de
levaduras y ARN de doble cadena de los virus (Hoffmann y col.,
1999). Además, pueden reconocer patrones tales como alteraciones en
las glucosilaciones de proteínas en las células tumorales.
Hallazgos recientes describen los ADN de los
protozoos o eucariotas inferiores como otro patrón reconocido por
el sistema inmunológico innato (aunque posiblemente también por el
adaptativo) de mamíferos (y probablemente de la mayoría, si no
todos, los vertebrados) (Krieg, 1996; Lipford y col., 1998).
El sistema inmunológico reconoce ADN de los
organismos inferiores, incluidas las bacterias, probablemente
debido a las diferencias estructurales y en el uso de secuencias
existentes entre el ADN del patógeno y del huésped. En particular,
las dianas son fragmentos cortos de ADN, derivados de no vertebrados
o en forma de cortos oligodesoxinucleótidos (ODN) que contienen
dinucleótidos no metilados de citosina-guanina (CpG)
en un cierto contexto de bases (Krieg y col., 1995). Los motivos
CpG se encuentran con la frecuencia prevista en el ADN bacteriano,
pero son mucho menos frecuentes en el ADN de vertebrados (Lipford y
col., 1998; Pisetsky, 1999). Además, los motivos de CpG en no
vertebrados (p. ej., en bacterias) no están metilados, mientras que
las secuencias CpG de vertebrados sí lo están. Estas diferencias
entre el ADN de bacterias y el ADN de vertebrados permiten que los
vertebrados reconozcan el ADN de los no vertebrados.
El ADN natural que contiene CpG, ODN, así como
ODN sustituidos con tiofosfato (intercambio de residuos de
tiofosfato por fosfato) que contienen motivos CpG
(CpG-ODN) no solo son potentes activadores de la
proliferación de células inmunitarias y de respuestas inmunológicas
humorales (Krieg y col., 1995), sino también estimulan fuertes
respuestas inmunológicas celulares (revisado en (Lipford y col.,
1998)). Los ADN/ODN que contienen motivos de CpG no metilados
pueden activar directamente las células monocíticas (células
dendríticas, macrófagos) y las células B. Es probable que las
células asesinas naturales (NK) no se activen directamente, pero sí
respondan a la IL-12 (interleucina 12) derivada de
monocitos con un marcado incremento de su producción de
IFN-\gamma (Chace y col., 1997). En consecuencia,
la inducción de monocitos y células NK por el ADN con CpG estimula
la inducción de las respuestas de tipo Th1 y el desarrollo de
células T citotóxicas.
Las células dendríticas, que representan
importantes células presentadoras de antígenos durante las
respuestas inmunológicas primarias, maduran in vitro bajo la
influencia de ODN-CpG (Hartmann y col., 1999;
Sparwasser y col., 1998) y producen cantidades grandes de
IL-12, TNF-\alpha,
IL-6 y, en menor medida IL-10
(Klinman y col., 1996; Sparwasser y col., 1998) cuando se exponen a
estos compuestos. Por tanto, un efecto característico del ADN
bacteriano y ODN-CpG es la inducción de respuestas
humorales y celulares de tipo Th1 a los antígenos proteicos, que se
caracteriza por su patrón de citocinas específico (Mosmann y col.,
1986). Los ODN que contienen motivos de CpG se han utilizado como
adyuvante de vacunas en ratones para potenciar, por ejemplo, la
respuesta de anticuerpos a una vacuna del tétanos (Krieg y col.,
1998) o estimular una fuerte respuesta de citocinas de tipo Th1
específica del antígeno en un modelo experimental de infección
vírica (Oxenius y col., 1999). El ADN con CpG también se describe
como un fuerte adyuvante de las respuestas de anticuerpos y de los
linfocitos T citotóxicos (LTC) contra los antígenos del virus de la
hepatitis B (Davis y col., 1998). La inducción de fuertes
respuestas de tipo Th1 de citocinas y de LTC indica que los
ODN-CpG también pueden ser útiles para las vacunas
contra el cáncer usando antígenos tumorales. Los primeros datos
publicados muestran que los ratones inmunizados con el idiotipo de
un linfoma B en combinación con un ODN-CpG como
adyuvante mostraron una supervivencia prolongada (Weiner y col.,
1997).
Aunque los ODN-CpG o el ADN no
metilado que contiene motivos de CpG son, potencialmente, adyuvantes
muy potentes, esta tecnología tiene un lado más siniestro
(Pisetsky, 1997). Por ejemplo, se ha comunicado que con dosis
elevadas de ADN bacteriano que contiene motivos no metilados de CpG
se puede inducir shock séptico (Sparwasser y col., 1997) en ciertas
circunstancias. Es probable que esto se deba a cantidades excesivas
de citocinas, en particular de TNF-\alpha y de
IL-6, aunque también de otras, secretadas por
células tras la exposición a ODN-CpG o a ADN
bacteriano (Spaewasser y col., 1997). El ADN y los ODN bacterianos
también pueden ser la causa de procesos inflamatorios que son una
complicación frecuente en las infecciones pulmonares (Schwartz y
col., 1997). Además, se sospecha que en los primeros estudios con
terapia génica, en los que se administró en el pulmón de pacientes
con fibrosis quística ADN plasmídico formulado o no formulado que
contiene motivos no metilados de CpG, fallaron por los fuertes
procesos inflamatorios, de los que se demostró que se debían a los
motivos de CpG (Paillard, 1999; Yew y col., 1999). Las secuencias de
CpG contenidas en el ADN plasmídico también parecen ser
responsables de las muertes de animales tras inyecciones
intravenosas de ADN plasmídico formulado con liposomas (Paillard,
1999). Por último, los animales expuestos a concentraciones elevadas
de ODN con CpG desarrollan síntomas de artritis, probablemente
debido a procesos inflamatorios causados por los ODN (Deng y col.,
1999).
En conjunto, estos informes subrayan los
inconvenientes de los ODN, que se pueden sortera si la cantidad de
ODN que se va a usar en una vacuna se puede reducir de un modo
significativo.
Se ha demostrado que los polímeros
policatiónicos, por ejemplo los polímeros de aminoácidos
policatiónicos poli-L-arginina y
poli-L-lisina, permiten una carga
muy eficiente de las células presentadoras de antígenos (CPA) con
antígenos in vitro e in vivo (Buschle y col., Gene
Ther Mol Biol 1, (1998), 309-321; Buschle y col.,
Proc Natl Acad Sci USA 94, (1997), 3256-3261;
Schmidt y col., Proc Natl Acad Sci USA 94, (1997),
3262-3267). Se piensa que este es el acontecimiento
clave para desencadenar cascadas inmunológicas que, en último
término, conducen a la inducción de células efectoras inmunológicas
específicas de antígeno que son capaces de destrozar o neutralizar
las dianas. Anteriormente se ha demostrado que una serie de
compuestos policatiónicos ejercen efectos sobre las células
inmunológicas (Buschle y col. Gene Ther Mol Biol 1, (1998),
309-321; Buschle y col., Proc Natl Acad Sci USA 94,
(1997), 3256-3261).
La co-inyección de una mezcla de
poli-L-arginina o
poli-L-lisina junto con un antígeno
adecuado como una vacuna protegen a los animales del crecimiento de
tumores en varios modelos animales (Buschle y col. Gene Ther Mol
Biol 1, (1998), 309-321; Schmidt y col. Proc Natl
Acad Sci USA 94, (1997), 3262-3267). Por tanto, una
vacuna compuesta por compuestos policatiónicos y antígeno(s)
se acepta en la técnica como una forma muy eficaz de
tratamiento.
McCluskie y Davies (Critical Reviews in
Immunology 19 (1999), 303-329) describen el uso de
ODN no metilados con CpG inmunoestimuladores para la inducción de
inmunidad mucosa. McCluskie y col. (Vaccine 18 (2000),
231-237) describen la administración a ratones del
antígeno de superficie de la hepatitis B purificado con ODN con CpG
con toxina cholene. La secuencia de aminoácidos de la toxina cholene
se describe en Dallas y col. (Nature 288 (1980),
499-501).
Es objeto de la presente invención proporcionar
una composición farmacéutica que permita una administración eficaz
a una célula diana, especialmente al sistema inmunológico celular,
aunque también a otros tipos de células con el fin de inducir
potentes respuestas inmunológicas. Otro objeto de la invención es
proporcionar medios para disminuir, o incluso eliminar, las
repuestas inmunológicas no deseadas.
Este objetivo se resuelve con una composición
farmacéutica que comprende
- -
- un antígeno o un agente inmunosupresor
- -
- un ODN inmunogénico, que contiene motivos de CpG, y
- -
- un péptido policatiónico que contiene más del 20% de aminoácidos básicos.
Sorprendentemente se ha descubierto que la
combinación de los ODN inmunogénicos, que también pueden incluir el
factor quimiotáctico o inductor de la diferenciación como sustancia
inmunoestimulante y el péptido policatiónico con un antígeno de
acuerdo con la presente invención, conduce a un efecto
inmunomodulador sinérgico para una preparación antigénica dada. La
combinación de antígeno, ODN inmunogénicos y péptido policatiónico
permitió la generación de vacunas superiores en comparación con las
vacunas compuestas por ODN inmunogénicos y antígeno o antígeno y
péptido policatiónico. De hecho, esto también se observó con
cantidades subóptimas de los ODN inmunogénicos. Aunque en la técnica
se sabe que tales ODN inmunogénicos, así como los péptido
policatiónicos (así como muchas otras sustancias para las que se ha
comunicado un efecto adyuvante) que son potentes factores en las
preparaciones antigénicas, la combinación de estas sustancias
muestra un efecto que es, con mucho, mejor que sólo la combinación
de efectos únicos aislados de los compuestos. En contraste con
otras combinaciones de diferentes clases de adyuvantes, en las que
sólo se observan, como mínimo, efectos aditivos (si se observa
alguno), la selección de los péptidos policatiónicos y ODN
inmunogénicos en una aplicación combinada junto con un antígeno, ha
mostrado un incremento imprevisible de la eficacia en la respuesta
inmunológica a un antígeno seleccionado. De un modo sinérgico, los
ODN inmunogénicos y los polímeros policatiónicos permiten una
respuesta inmunológica celular muy eficaz, así como un efecto
inmunomodulador que permite una perspectiva de vacunación
superior.
La administración de ODN con motivos de CpG
también tuvo como resultado la inducción de reacciones secundarias
adversas, especialmente en la liberación sistémica de citocinas
pro-inflamatorias, como TNF-\alpha
e IL-6. Fue muy sorprendente el hecho de que estos
efectos secundarios se pueden prevenir proporcionando un polímero
policatiónico junto con el ODN y el antígeno. Especialmente, los
polímeros policatiónicos que comprenden enlaces peptídicos muestran
una prevención casi completa de TNF-\alpha e
IL-6.
Los antígenos a usar en las composiciones
presentes no son cruciales. Una vacuna puede contener una variedad
completa de antígenos diferentes. Ejemplos de antígenos son
organismos completos muertos, tales como virus o bacterias, hongos,
protozoos o, incluso, células cancerosas inactivados. Los antígenos
también pueden constar de subfracciones de estos
organismos/tejidos, de proteínas o, en su forma más simple, de
péptidos. Los antígenos también pueden ser reconocidos por el
sistema inmunológico en forma de proteínas o péptidos glucosilados y
pueden también ser o contener polisacáridos o lípidos. Se pueden
usar péptidos cortos, ya que, por ejemplo, las células T
citotóxicas (LTC) reconocen antígenos en forma de péptidos cortos,
normalmente de una longitud de 8-11 aminoácidos,
junto con el acomplejo mayor de histocompatibilidad (MHC) (Rammensee
y col., Immunogenetics 41, (1995), 178-228). Las
células B reconocen péptidos más largos, comenzando en alrededor de
15 aminoácidos (Harlow y col., Cold Spring Harbor: Cold Spring
Harbor Laboratory, (1988)). En contraste con los epítopos de las
células T, la estructura tridimensional de los antígenos de las
células B también puede ser importante para el reconocimiento por
parte de los anticuerpos. Con el fin de obtener respuestas
inmunológicas sostenidas específicas de antígeno, los adyuvantes
pueden ayudar a desencadenar cascadas inmunológicas que implican a
todas las células del sistema inmunológico necesario.
Principalmente, los adyuvantes actúan sobre las denominadas células
presentadoras de antígeno (CPA), aunque no están restringidos en su
modo de acción. Normalmente, estas células se encuentran primero
con el(los) antígeno(s), seguido por la presentación
del antígeno procesado o sin modificar a las células efectoras
inmunológicas. También pueden estar implicados tipos de células
intermedias. En una respuesta inmunológica productiva sólo están
activadas las células efectoras con la adecuada especificidad. El
adyuvante también puede conservar antígenos localmente y coinyectar
otros factores. Además, el adyuvante puede actuar como factor
quimiotáctico para otras células inmunológicas o pueden actuar
localmente y/o sistémicamente como agente estimulante para el
sistema inmunológico.
Preferentemente, como tales antígenos (incluidos
antígenos derivados o antígenos glucosilados o lipidados o
polisacáridos o lípidos) se usan las proteínas o péptidos derivados
de un patógeno vírico o bacteriano o de hongos o parásitos. Otra
fuente preferida de antígenos son los antígenos tumorales. Los
patógenos preferidos se seleccionan del virus de inmunodeficiencia
humana (VIH), los virus de la hepatitis A y B, el virus de la
hepatitis C (VHC), el virus del sarcoma de Rous (VSR), el virus de
Epstein Barr (VEB), el virus de la gripe, el rotavirus,
Staphylococcus aureus, Chlamydia pneumoniae, Chlamydia
trachomatis, Mycobacterium tuberculosis, Streptococcus pneumoniae,
Bacillus anthracis, Vibrio cholerae, Plasmodium sp. (Pl.
falciparum, Pl. vivax, etc.), Aspergillus sp. o Candida
albicans. Los antígenos también pueden ser moléculas expresadas
por las células cancerosas (antígenos tumorales). El proceso de
derivación puede incluir la purificación de una proteína específica
del patógeno/células cancerosas, la inactivación del patógeno así
como la derivación proteolítica o química o la estabilización de
tal proteína. Del mismo modo, también los antígenos tumorales
(vacunas para el cáncer) o los antígenos autoinmunitarios se pueden
usar en la composición farmacéutica de acuerdo con la presente
invención. Con tales composiciones se puede fabricar una vacuna
tumoral o un tratamiento para enfermedades autoinmunitarias.
En el caso de antígenos peptídicos, en la
presente invención se incluye el uso
mimítopos/agonistas/superagonistas/
antagonistas peptídicos o péptidos modificados en ciertas posiciones sin que afecte a las propiedades inmunológicas o mimítopos/agonistas/superagonistas/antagonistas no peptídicos (revisado en Sparbier y Walden, 1999). Los antígenos peptídicos pueden también contener elongaciones en el extremo carboxi o en el extremo amino del antígeno peptídico, lo que facilita la interacción con el(los) compuesto(s) policatiónico(s) o el(los) compuesto(s) inmunoestimuladores. Para el tratamiento de las enfermedades autoinmunitarias se pueden aplicar antagonistas peptídicos.
antagonistas peptídicos o péptidos modificados en ciertas posiciones sin que afecte a las propiedades inmunológicas o mimítopos/agonistas/superagonistas/antagonistas no peptídicos (revisado en Sparbier y Walden, 1999). Los antígenos peptídicos pueden también contener elongaciones en el extremo carboxi o en el extremo amino del antígeno peptídico, lo que facilita la interacción con el(los) compuesto(s) policatiónico(s) o el(los) compuesto(s) inmunoestimuladores. Para el tratamiento de las enfermedades autoinmunitarias se pueden aplicar antagonistas peptídicos.
Los antígenos también pueden derivarse para
incluir moléculas que potencian la presentación antigénica y que
tengan como diana los antígenos a las células presentadoras de
antígeno.
En una forma de realización de la invención, la
composición farmacéutica sirve para conferir tolerancia a las
proteínas o fragmentos proteicos y péptidos que están implicados en
las enfermedades autoinmunitarias. Los antígenos usados en esta
forma de realización sirven para tolerar el sistema inmunológico o
regular por disminución las respuestas inmunitarias contra epítopos
implicados en los procesos autoinmunitarios.
El ODN inmunogénico de acuerdo con la presente
invención puede ser de origen procariota y eucariota. En el caso
del origen eucariota, el ADN deberá derivar de, según el árbol
filogenético, especies menos desarrolladas (p. ej., insectos,
aunque también otras especies). En una forma de realización
preferida de la invención, el ODN inmunogénico es una molécula de
ADN producida sintéticamente o mezclas de tales moléculas. También
se incluyen derivados o modificaciones de los ODN, tales como
análogos sustituidos con tiofosfato (residuos de tiofosfato
sustitutos de fosfato) como, por ejemplo, los descritos en las
patentes de EE.UU. US 5.723.335 y US 5.663.153, y otros derivados y
modificaciones, que, preferentemente, estabilizan la composición
inmunoestimuladora(s) pero no cambian sus propiedades
inmunológicas (p. ej., Sparbier y Walden, 1999). Un motivo de
secuencia preferido es un motivo de ADN de seis bases que contiene
un dinucleótido de CpG (no metilado) flanqueado por dos purinas en
5' y dos pirimidinas en 3'
(5'-Pur-Pur-C-G-Pyr-Pyr-3')
(Pisetsky, 1999). Los motivos de CpG contenidos en los ODN de
acuerdo con la presente invención son más frecuentes en el ADN
microbiano que en el de vertebrados superiores y muestran
diferencias en el patrón de mutilación. (Bird, A.P., Nature 1986,
321: 209; Pisetsky, D.S., Immunol Res 1999, 19 (1):
35-46). (Lipford y col., 1998). Sorprendentemente,
las secuencias que estimulan las CPA de ratón no son muy eficaces
en células humanas (Hartmann y col., 1999; Krieg, 1999). ODN
preferidos de acuerdo con la presente invención se describen en, p.
ej., los documentos EP 0 468.520 A2, WO 96/02555, WO 98/16247, WO
98/18810, WO 98/37919, WO 98/40100, WO 98/52581, WO 98/52962, WO
99/51259 y WO 99/56755. Aparte de estimular el sistema
inmunológico, ciertos ODN neutralizan algunas respuestas
inmunológicas (Krieg, 1999; Lipford y col., 1998). Estas secuencias
también se incluyen en la presente invención, por ejemplo para
aplicaciones para el tratamiento de enfermedades
autoinmunitarias.
autoinmunitarias.
ODN/ADN se pueden producir químicamente o de
modo recombinante, o pueden derivar de fuentes naturales. Las
fuentes naturales preferidas son los insectos. Por supuesto, también
se pueden usar mezclas de diferentes ODN de acuerdo con la presente
invención.
El(los) péptido(s)
policatiónico(s) a usar de acuerdo con la presente invención
puede ser cualquier péptido policatiónico que muestre el efecto
característico de acuerdo con el documento WO 97/30721. Los péptidos
policatiónicos preferidos se seleccionan de polipéptidos básicos,
policationes orgánicos, poliaminoácidos básicos o mezclas de los
mismos. Estos poliaminoácidos deberían tener una longitud de cadena
de al menos 4 residuos aminoacídicos (véase: Tufsin, tal y como se
describe en Goldman y col. (1983)). Especialmente preferidas son las
sustancias que contienen enlaces peptídicos, como polilisina,
poliarginina y polipéptidos que contienen más del 50% de
aminoácidos básicos en un intervalo de más de 8, especialmente más
de 20, residuos aminoacídicos o mezclas de los mismos. Otros
policationes preferidos y sus composiciones farmacéuticas se
describen en el documento WO 97/30721 (p. ej., polietilenimina) y
el documento WO 99/38528. Preferentemente, estos polipéptidos
contienen entre 20 y 500 residuos aminoacídicos, especialmente
entre 20 y 200 residuos.
Estos péptidos policatiónicos se pueden producir
químicamente o de modo recombinante, o pueden derivar de fuentes
naturales.
Los (poli)péptidos catiónicos también
pueden ser péptidos microbianos antibacterianos policatiónicos con
propiedades como se revisa en (Ganz y Lehrer, 1999; Hancock, 1999).
Estos (poli)péptidos pueden ser de origen procariótico o
animal o vegetal o puede producirse químicamente o de modo
recombinante (Andreu y Rivas, 1998; Ganz y Lehrer, 1999; Simmaco y
col., 1998). Los péptidos también pueden pertenecer a la clase de
las defensinas (Ganz, 1999; Ganc y Lehrer, 1999). Se pueden
encontrar secuencias de tales péptidos, por ejemplo, en Tossi y
col., Biopolymers (Peptide Science) 55 (2000),
4-30.
Tales péptidos de defensa del huésped, o
defensinas, también son una forma preferida del péptido
policatiónico de acuerdo con la presente invención. En general,
como péptido policatiónico se usa un compuesto que permita como
activación de producto final (o regulación por disminución) del
sistema inmunológico adaptativo, preferentemente mediado por CPA
(incluidas las células dendríticas).
Especialmente preferidas para usar como
sustancia policatiónica en la presente invención son los péptidos
antimicrobianos derivados de catelicidina o derivados de los mismos
(A 1416/2000), especialmente péptidos antimicrobianos derivados de
catelicidina de mamíferos, preferentemente de seres humanos, bovinos
o ratones.
Entre los péptidos policatiónicos derivados de
fuentes naturales se incluyen VIH-REV o
VIH-TAT (péptidos catiónicos derivados, péptidos
antenapedia, quitosano u otros derivados de quitina) u otros
péptidos derivados de estos péptidos o proteínas mediante
producción bioquímica o recombinante. Otros compuestos
policatiónicos preferidos son catelina o sustancias relacionadas o
derivadas de la catelina. Por ejemplo, la catelina de ratón es un
péptido que posee la secuencia aminoacídica
NH_{2}-RLAGLL-RKGGEKLKKIGOKIKNFFOKLVPOPE-COOH.
Las sustancias relacionadas o derivadas de catelina contienen toda
o partes de la secuencia de la catelina, con al menos
15-20 residuos aminoacídicos. Las derivaciones
pueden incluir la sustitución o modificación de los aminoácidos
naturales por aminoácidos que no están entre los 20 aminoácidos
esenciales. Además, en dichas moléculas de catelina se pueden
introducir otros residuos catiónicos. Se prefieren que estas
moléculas de catelina estén combinadas con el antígeno y el ODN
inmunogénico de acuerdo con la presente invención. No obstante,
sorprendentemente se ha descubierto que estas moléculas de catelina
so también eficaces como adyuvante para un antígeno sin la adición
de otros adyuvantes. Por tanto, es posible usar tales moléculas de
catelina como adyuvantes eficaces en formulaciones de vacunas con o
sin otras sustancias inmunoactivadoras.
Otra sustancia policatiónica preferida para usar
de acuerdo con la presente invención es un péptido sintético que
contiene al menos 2 motivos KT., K separados por un enlazador de 3 a
7 aminoácidos hidrófobos (A 1789/
2000).
2000).
Fue muy sorprendente el hecho de que con la
composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención, el
efecto inmunoestimulante fue significativamente superior al que
cabría esperar de la adición de los efectos de cada componente por
separado o, incluso, de la adición de los efectos del policatión con
el antígeno y el ODN inmunogénico con el antígeno. Además, se
descubrió que el efecto del ODN inmunogénico solo no es muy elevado
cuando se aplica un antígeno directamente con esta sustancia. Esto
es cierto particularmente si los compuestos no se administran
repetidamente. Es muy importante el hecho de que la combinación de
los compuestos permite usar menos del ODN inmunogénico que puede
ayudar a evitar los efectos secundarios (véase en lo que antecede).
Sorprendentemente, la administración combinada de antígeno, ODN y
péptido policatiónico también previene o reduce los efectos
secundarios presentes cuando se administran ODN.
De acuerdo con otro aspecto, la presente
invención también se refiere a vacunas que comprenden una
composición de acuerdo con la presente invención.
Además, la presente invención también se expone
para el uso de la composición de acuerdo con la presente invención
para fabricar una vacuna.
Las cantidades relativas de los ingredientes de
la presente composición son altamente dependientes de las
necesidades de la composición individual, por ejemplo el péptido
policatiónico a usar. En el caso de
poli-L-arginina y
poli-L-lisina, las cantidades
preferidas del antígeno/ODN inmunogénico/policatión compuesto
inmunosupresor residen en el intervalo de 1-10000
\mug de antígeno por vacunación, 1 pM-1 mM de ODN
inmunogénico por dosis y de 0,1 a 1000 \mug de policatión por
vacunación.
Se prefiere especialmente proporcionar ODN de
CpG y péptidos policatiónicos (especialmente polipéptidos
policatiónicos, tales como poli-arginina o
poli-lisina) en una proporción de cargas de entre
100:1 y 0,1:1, preferentemente entre 50:1 y 0,5:1, especialmente
entre 10:1 y 0,5:1.
Las presentes composiciones pueden aplicarse a
un paciente, por ejemplo a un candidato a vacunación, en cantidades
eficaces por ejemplo a intervalos semanales, bisemanales o
mensuales- Los pacientes a tratar con las presentes composiciones
también se pueden vacunar repetidamente o sólo una vez. Un uso
preferido de la presente invención es la inmunización activa,
especialmente de seres humanos o de animales sin protección contra
el antígeno específico.
La vía de aplicación de la presente composición
no es crucial, por ejemplo la inyección subcutánea, intramuscular,
intradérmica o transdérmica es adecuada, así como la captación oral.
El experto en la técnica puede realizar con facilidad la adaptación
de la presente composición a dicha vía de aplicación.
Asimismo, es posible aplicar la presente
composición por separado, por ejemplo inyectando el ODN inmunogénico
por separado de la composición antígeno/policatión. Por tanto, la
presente invención también está dirigida a un kit que comprende una
composición que contiene el antígeno y el péptido policatiónico como
un componente y una composición que contiene la sustancia ODN
inmunogénica como segundo componente.
\newpage
Los componentes pueden aplicarse en el mismo
sitio o a la vez, no obstante, también es posible una aplicación en
sitios diferentes o en momentos diferentes o durante un periodo de
tiempo diferente. También es posible variar las aplicaciones
sistémicas o locales de la composición o de los componentes,
respectivamente.
Otro aspecto de la presente invención se refiere
a un kit que comprende un componente que contiene un ODN
inmunogénico, un componente que contiene un péptido policatiónico
que contiene más del 20% de aminoácidos básicos y un componente que
contiene un antígeno. Preferentemente, el antígeno se proporciona ya
mezclado con el péptido policatiónico.
La invención se describe con más detalle
mediante los ejemplos siguientes y las figuras expuestas, aunque no
se restringe a estas formas de realización concretas.
Fig. 1A y 1B:
INF-\gamma-ELISPOT de la respuesta
inmunológica contra el péptido-OVA SIINFEKL;
Fig. 2:
INF-\gamma-ELISPOT de la respuesta
inmunológica contra el péptido P1A derivado de P815 de mastocitoma
de ratón (Fig. 2A), el péptido CSP SYVPSAEQI (Fig. 2B), el péptido
LLO GYKDGNEYI (Fig. 2C) y el péptido OVA ISQAVHAAHAEINE (Fig.
2D);
Fig. 3:
INF-\gamma-ELISPOT de la respuesta
inmunológica contra el péptido MC1R WGPFFLHL;
Fig. 4:
INF-\gamma-ELISPOT de la respuesta
inmunológica en diferentes sitios de inyección contra el péptido OVA
SIINFEKL; y
Fig. 5: la aplicación combinada de
ODN-CpG y
poli-L-arginina (pR 60) previene la
inducción de la producción sistémica de TNF-\alpha
e IL-6.
\vskip1.000000\baselineskip
En todos los experimentos se usaron ODN
sustituidos con tiofosfato (con residuos de tiofosfato sustituyendo
los fosfatos, en lo sucesivo denominado "oligodesoxinucleótidos
sustituidos con tiofosfato"), ya que tales ODN muestran mayor
resistencia a la nucleasa (Ballas y col., 1996; Krieg y col., 1995;
Parronchi y col., 1999).
Los ganglios linfáticos se pasaron a través de
un depurador celular de 70 \mum y se lavaron dos veces con medio
DMEM (GIBCO BRL) que contiene 5% de suero bovino fetal (FCS, SIGMA
chemicals). Las células se ajustaron a 10^{7} células/ml en
DMEM/5% FCS. Se realizaron ensayos
IFN-\gamma-ELISPOT por duplicado
tal y como se ha descrito (Miyahira y col., 1995). Este
procedimiento es un procedimiento ampliamente utilizado, que
permite la cuantificación de células T específicas de antígeno. Los
linfocitos se estimularon ex vivo por duplicado con medio
(basal), pR 60, ODN-CpG y concanavalina A (Con A).
Se contaron las manchas que representan las células T únicas
productoras de IFN-\gamma Y se restó el número de
manchas basales en todas las muestras. Se detectaron muchas manchas
tras la estimulación con Con A (datos no mostrados), lo que indica
un buen estado de los linfocitos usados.
\vskip1.000000\baselineskip
La aplicación combinada de
ODN-CpG y
poli-L-arginina (pR 60) potencia
considerablemente la inducción de células T específicas de
ovoalbúmina-péptido de un modo dependiente de la
concentración (pR 60).
- Ratones
- C57BI/6 (Harlan/Olac)
- Péptido
- OVA_{257-264}-Péptido (SIINFEKL), un epítopo restringido (H-2Kb) por MHC de clase I de ovoalbúmina de pollo (Rotzschke y col., 1991), se sintetizó usando síntesis estándar de F-moc de fase sólida, se purificó mediante HPLC y se analizó mediante espectroscopia de masas para determinar la pureza. Dosis: 300 \mug/ratón.
- Poli-L-arginina 60 (pR 60)
- Poli-L-arginina con un grado medio de polimerización de 60 residuos de arginina; SIGMA chemicals Dosis: 1000, 100 ó 10 \mug/ratón
- ODN-CpG 1668
- ODN sustituidos con tiofosfato que contienen un motivo de CpG: TCC A\underline{TG \ ACG} \underline{TT}C CTG ATG CT, sintetizado por NAPS GMBH, Göttingen. Dosis: 5 noml/ratón
- ODN sin CpG 1911
- oligonucleótidos modificados con fosfotioatos que no contienen motivo CpG: TCC AGG ACT TTC CTC AGG TT, sintetizados por NAPS GMBH, Göttingen. Dosis: 5 noml/ratón
\newpage
\global\parskip0.930000\baselineskip
Grupos experimentales (5 ratones por
grupo)
- 1.
- OVA_{257-264}-Péptido + ODN-CpG
- 2.
- OVA_{257-264}-Péptido + ODN-CpG + pR60 1000 \mug
- 3.
- OVA_{257-264}-Péptido + ODN-CpG + pR60 100 \mug
- 4.
- OVA_{257-264}-Péptido + ODN-CpG + pR60 10 \mug
- 5.
- OVA_{257-264}-Péptido + ODN-CpG
- 6.
- OVA_{257-264}-Péptido + ODN sin CpG + pR60 1000 \mug
- 7.
- OVA_{257-264}-Péptido + ODN sin CpG + pR60 100 \mug
- 8.
- OVA_{257-264}-Péptido + ODN sin CpG + pR60 10 \mug
- 9.
- OVA_{257-264}-Péptido + pR60 1000 \mug
- 10.
- OVA_{257-264}-Péptido + pR60 100 \mug
- 11.
- OVA_{257-264}-Péptido + pR60 10 \mug
\vskip1.000000\baselineskip
El día 0 se inyectó en la pata trasera de los
ratones un volumen total de 100 \mul (50 \mul por pata) que
contenía los compuestos mencionados antes. Se sacrificó a los
animales 4 días después de la inyección y se recogieron los ganglios
linfáticos poplíteos. Los ganglios linfáticos se pasaron a través
de un colador celular de 70 \mum y se lavaron dos veces con medio
DMEM (GIBCO BRL) que contiene 5% de suero bovino fetal (FCS, SIGMA
chemicals). Las células se ajustaron a 10^{7} células/ml en
DMEM/5% FCS.
Se realizaron ensayos
IFN-\gamma-ELISPOT por duplicado
tal y como se ha descrito (Miyahira y col., 1995). Este
procedimiento es un procedimiento ampliamente utilizado, que permite
la cuantificación de células T específicas de antígeno. Los
linfocitos se estimularon ex vivo por duplicado con medio
(basal), pR 60, ODN-CpG y concanavalina A (Con A).
Se contaron las manchas que representan las células T únicas
productoras de IFN-\gamma Y se restó el número de
manchas basales en todas las muestras. Se detectaron muchas manchas
tras la estimulación con Con A (datos no mostrados), lo que indica
un buen estado de los linfocitos usados.
Para cada grupo experimental de ratones, el
número de manchas/1x10^{6} células se ilustran en las Figura 1A y
1B.
Mientras que la inyección de
OVA_{257-264}-péptido con
poli-L-arginina o
ODN-CpG solo condice a cifras bajas de células
productoras de INF-\gamma específicas de péptido,
la inyección de
OVA_{257-264}-péptido con la
combinación de poli-L-arginina y
ODN-CpG potencia considerablemente la respuesta
específica de péptido. Al usar ODN-CpG no
inmunogénico en lugar de ODN sin CpG, la complicación de
poli-L-arginina no tiene un efecto
creciente sobre la respuesta inmunológica específica de péptido, que
es bastante baja.
\vskip1.000000\baselineskip
La aplicación combinada de
ODN-CpG y
poli-L-arginina potencia
considerablemente la inducción de células T específicas de un
péptido derivado de mastocitoma, un péptido derivado de
circuí-esporozoíto, un péptido derivado de listeriolisina y un
péptido derivado de ovoalbúmina restringido por MHC de clase II.
- Ratones
- DBA/2 (Harlan/Olac)
- Péptidos
- a. {}\hskip0.2cm Péptido P1A derivado de P815 de mastocitoma de ratón (LPYLGWLVF), res {}\hskip0.6cm tringido por MHC de clase I (H2-Ld)
- b.
- Péptido-CSP (SYVPSAEQI) derivado de la proteína circumesporozoíto de plasmodium yoelii (Rodrigues y col., 1992), restringido por MHC de clase I (H2-Kd).
- c.
- Péptido-LLO (GYKDGNEYI) derivado de listeriolisina O 91-99 de Listeria monocytogenes (Pamer y col., 1991), restringido por MHC de clase I (H2-Kd).
- d.
- OVA_{323-336}-Péptido (ISQAVHAAHAEINE) derivado de ovoalbúmina de pollo, restringido por MHC de clase II (I-Ad) (Shimonkevitz y col., 1984). Todos los péptidos se sintetizaron mediante síntesis convencional de F-moc de fase sólida, se purificaron mediante HPLC y se analizaron mediante espectroscopia de masas para determinar la pureza. Dosis: 300 \mug/ratón
\global\parskip1.000000\baselineskip
- Poli-L-arginina 60 (pR60)
- Poli-L-Arginina con un grado medio de polimerización de 60 residuos de arginina; SIGMA chemicals Dosis: 1000, 100 \mug/ratón
- ODN-CpG 1668
- ODN sustituidos con tiofosfato que contienen un motivo de CpG: TCC A\underline{TG \ ACG} \underline{TT}C CTG ATG CT, sintetizado por NAPS GMBH, Göttingen. Dosis: 5 nmol/ratón
- ODN sin CpG 1911
- ODN sustituidos con tiofosfato que no contienen un motivo de CpG: TCC AGG ACT TTC CTC AGG TT, sintetizado por NAPS GMBH, Göttingen. Dosis: 5 nmol/ratón
\vskip1.000000\baselineskip
Grupos experimentales (5 ratones por
grupo)
- 1.
- Péptido-P1A + ODN-CpG + pR60 100 \mug
- 2.
- Péptido-P1A + ODN sin CpG + pR60 100 \mug
- 3.
- Péptido-P1A + ODN-CpG
- 4.
- Péptido-P1A + pR60 100 \mug
- 5.
- Péptido-CSP + ODN-CpG + pR60 100 \mug
- 6.
- Péptido-CSP + ODN sin CpG + pR60 100 \mug
- 7.
- Péptido-CSP + ODN-CpG
- 8.
- Péptido-CSP + pR60 100 \mug
- 9.
- Péptido-LLO + ODN-CpG + pR60 100 \mug
- 10.
- Péptido-LLO + ODN sin CpG + pR60 100 \mug
- 11.
- Péptido-LLO + ODN-CpG
- 12.
- Péptido-LLO + pR60 100 \mug
- 13.
- Péptido-OVA + ODN-CpG + pR 60100 \mug
- 14.
- Péptido-OVA + ODN sin CpG + pR 60 100 \mug
- 15.
- Péptido-OVA + ODN-CpG
- 16.
- Péptido-OVA + pR 60 100 \mug
\vskip1.000000\baselineskip
El día 0 se inyectó en la pata trasera de los
ratones un volumen total de 100 \mul, 50 \mul por pata, que
contenía los compuestos mencionados antes. Se sacrificó a los
animales 4 días después de la inyección y se recogieron los
ganglios linfáticos poplíteos. Los ganglios linfáticos se prepararon
como se ha descrito en el ejemplo 1 (Shimonkevitz y col., 1984) y
se prepararon IFN-\gamma-ELISPOT.
Para cada grupo experimental de ratones, el número de
manchas/1x10^{6} células se ilustran en las Figura
2A-D.
Mientras que la inyección de los péptidos con
poli-L-arginina o
ODN-CpG solo conduce a cifras bajas, o ninguna, de
células productoras de INF-\gamma específicas de
péptido, la inyección de péptidos con la combinación de
poli-L-arginina y
ODN-CpG índice (p. ej., CSP) o potencia
considerablemente la respuesta específica de péptido. Al usar ODN
sin CpG no inmunogénico en lugar de ODN-CpG, la
complicación de poli-L-arginina no
tiene un efecto creciente sobre la respuesta inmunológica
específica de péptido, que es bastante baja.
\vskip1.000000\baselineskip
La aplicación combinada de
ODN-CpG y
poli-L-arginina (pR 60) potencia de
forma sinérgica la respuesta inmunitaria contra MC1R (receptor de la
hormona estimulante de melanocitos).
- Ratones
- C57B1/6 (Harlan/Olac)
- Péptido
- MC1R-Péptido (WGPFFLHL, F. Mattner, no publicado) un epítopo restringido por MHC de clase I (H-2Kb) del receptor de la hormona estimulante de los melanocitos se sintetizó mediante síntesis convencional de F-moc de fase sólida, se purificó mediante HPLC y se analizó mediante espectroscopia de masas para determinar la pureza. Dosis: 300 \mug/ratón
- Poli-L-arginina 60 (pR60)
- Poli-L-arginina con un grado medio de polimerización de 60 residuos de arginina; SIGMA chemicals Dosis: 1000, 100 ó 10 \mug/ratón
- ODN-CpG 1668
- ODN sustituidos con tiofosfato que contienen un motivo de CpG: TCC A\underline{TG \ ACG} \underline{TT}C CTG ATG CT, sintetizados por NAPS GMBH, Göttingen. Dosis: 5 nmol/ratón
\vskip1.000000\baselineskip
Grupos experimentales (3 ratones por
grupo)
- 1.
- MC1R + ODN-CpG + pR
- 2.
- MC1R + ODN-CpG
- 3.
- MC1R + pR
\vskip1.000000\baselineskip
El día 0 se inyectó en la pata trasera de los
ratones un volumen total de 100 \mul (50 \mul por pata) que
contenía los compuestos mencionados antes. Se sacrificó a los
animales 4 días después de la inyección y se recogieron los ganglios
linfáticos poplíteos. Los ganglios enfáticos y los ensayos de
IFN-\gamma-ELISPOT se prepararon
como se describe en el ejemplo 1. Para cada grupo experimental de
ratones, el número de manchas/1x10^{6} células se ilustran en la
Figura 3, se dan las desviaciones estándar de los triplicados
estimulados ex vivo.
Mientras que la inyección del
MC1R-péptido con
poli-L-arginina o
ODN-CpG solo conduce a cifras bajas de células
productoras de IFN-\gamma específicas de péptido,
la inyección de MC1R-péptido con la combinación de
poli-L-arginina y
ODN-CpG potencia considerablemente la respuesta
específica de péptido.
\vskip1.000000\baselineskip
La aplicación combinada de
ODN-CpG y
poli-L-arginina (pR 60) induce en
puntos de inyección diferentes una fuerte respuesta inmunológica
específica de antígeno contra
Ovoalbúmina-péptido.
- Ratones
- C57B1/6 (Harlan/Olac)
- Péptido
- OVA_{257-264}-Péptido (SIINFEKL), un epítopo restringido por MHC de clase I (H-2Kb) de ovoalbúmina de pollo (Rotzschke y col., 1991), se sintetizó mediante síntesis estándar de F-moc de fase sólida, se purificó mediante HPLC y se analizó mediante espectroscopia de masas para determinar la pureza. Dosis: 300 \mug/ratón
- Poli-L-arginina 60 (pR60)
- Poli-L-arginina con un grado medio de polimerización de 60 residuos de arginina; SIGMA chemicals Dosis: 1000 \mug/ratón
- ODN-CpG 1668
- ODN sustituidos con tiofosfato que contienen un motivo de CpG: TCC A\underline{TG \ ACG} \underline{TT}C CTG ATG CT, sintetizados por NAPS GMBH, Göttingen. Dosis: 5 nmol/ratón
\vskip1.000000\baselineskip
Grupos experimentales (5 ratones por
grupo) sitios de inyección:
- 1.
- Pata
- 2.
- sc/flanco
- 3.
- en el pabellón auditivo
\vskip1.000000\baselineskip
El día 0 se inyectó en la pata trasera de los
ratones un volumen total de 100 \mul (50 \mul por pata) que
contenía los compuestos mencionados antes
(Ovoalbúmina-péptido + ODN-CpG +
pR60). Se sacrificó a los animales 4 días después de la inyección y
se recogieron los ganglios linfáticos drenantes. Los ganglios
enfáticos y los ensayos de
IFN-\gamma-ELISPOT se prepararon
por triplicado (se facilita la desviación estándar) como se describe
en el ejemplo 1. Para cada grupo experimental de ratones, el número
de manchas/1x10^{6} células se ilustran en la Figura 4.
La co-aplicación de
OVA_{257-264}-péptido con
poli-L-arginina y
ODN-CpG induce en diferentes sitios de inyección una
fuerte respuesta inmunológica específica de antígeno. La inyección
en el pabellón auditivo es superior a las demás inyecciones
subcutáneas (pata, flanco).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
\newpage
La aplicación combinada de
ODN-CpG y
poli-L-arginina (pR60) previene la
inducción de TNF-\alpha y la producción de
IL-6.
\vskip1.000000\baselineskip
Grupos experimentales (4 ratones por
grupo)
- 1.
- OVA_{257-264}-péptido
- 2.
- pR60
- 3.
- CpG 1668 + OVA_{257-264}-péptido
- 4.
- CpG 1668 + pR 60 +OVA_{257-264}-péptido
\vskip1.000000\baselineskip
Se inyectó en la pata trasera de los ratones un
volumen total de 100 \mul, 50 \mul por pata, que contenía los
compuestos mencionados antes Una hora después de la inyección se
extrajo sangre de la vena de la cola y se preparó suero. Se
determinó la cantidad de citocinas proinflamatorias
(TNF-\alpha e IL-6) en suero
usando ELISA específicos de
citocinas.
citocinas.
\vskip1.000000\baselineskip
Andreu D. y Rivas L.
(1998). Animal antimicrobial peptides; an overview.
Biopolymers 47, 415-433.
Ballas, Z.K., Rasmussen, W.L. and
Krieg A.M. (1996). Induction of NK activity in murine
and human cells by CpG motifs in oligodeoxynucleotides and bacterial
DNA. J. Immunol 157, 1840-1845.
Bloom, B.R. y Widdus, R.
(1998), Vaccine visions and their global impact. Nat
Med 4, 480-484.
Chance, J.H., Hooker, N.A.,
Mildenstein, K.L., Krieg, A.M. y Cowdery, J.S.
(1997). Bacterial DNA-induced NK cell
IFN-gamma production is dependent on macrophage
secretion od IL-2. Clin Immunol Immunopathol
84, 185-193.
Davis, H.L., Weeranta, R.,
Waldschmidt, T.J., Tygrett, L., Schorr, J. y
Krieg, A.M. (1998). CpG DNA es a potent enhancer od
specific immunity in mice immunized hit recombinant hepatitis B
surface antigen. J Immunol 160, 870-876.
Deng, G.M., Nilsson, I.M.,
Verdrengh, M., Collins, L.V. y Tarkowski, A.
(1999). Intra-articularly localizad bacterial
DNA containing CpG motifs induces artritis. Nat Med 5,
702-705.
Ganz, T. (1999). Defensins and
host defense [comentario]. Science 286,
420-421.
Ganz, T. y Lehrer, R.I.
(1999). Antibiotic peptides from higher eukaryotes: biology
and applications. Mol Med Today 5,
292-297.
Hancock, R.E. (1999). Host defence
(cationic) peptides: what is their future clinical potencial?
Drugs 57, 469-473.
Harlow, E. y Lane D.
(1988). Antibodies: a laboratory manual (Cold Spring Harbor:
Cold Spring Harbor Laboratory).
Hartmann, G.., Weiner, G.J. y
Krieg, A.M. (1999). CpG DNA: A potent signal for
growth, activation and maturation of human dendritic cells. Proc
Natl Acad Sci USA 96, 9305-9310.
Hoffmann, J.A., Kafatos, F.C.,
Janeway, C.A. y Ezekowitz, R.A. (1999).
Phylogenetic perspectivas in innate immunity. Science 284,
1313-1318.
Klinman, D.M., Yi, A.K.,
Beaucage, S.L., Conover, J. y Krieg, A.M.
(1996). CpG motifs present in bacteria DNA rapidly induce
lymphocytes to secrete interleukin 6, interleukin 12 and interferon
gamma. Proc Natl Acad Sci USA 93,
2879-2883.
Krieg, A.M. (1999). CpG DNA: a
novle immunomodulator [carta]. Trends Microbiol 7,
64-5.
Krieg, A.M. (1996). An innate
immune defense mechanism based on the recognition of CpG motifs in
microbial DNA. J Lab Clin Med 128,
128-133.
Krieg, A.M., Yi, A.K.,
Matson, S., Waldschmidt, T.J., Bishop, G.A.,
Teasdale, R., Koretzky, G.A. y Klinman, D.M.
(1995). CpG motifs in bacterial DNA trigger diect
B-cell activation. Nature 374,
546-549.
Krieg, A.M., Yi, A.K.,
Schorr, J. y Davis, H.L. (1998). The role of
CpG dinucleotides in DNA vaccines. Trends Microbiol 6,
23-27.
Lethe, B., van den Eynde, B., van
Pel, A., Corradin, G. y Boon, T. (1992).
Mouse tumor rejection antigens P815A and P815B: two epitopes carried
by a single peptide. Eur J Immunol 22,
2283-2288.
Liljeqvist, S. y Stahl, S.
(1999). Production of recombinant subunit vaccines: protein
immunogens, live delivery systems and nucleic acid vaccines. J
Biotechnol 73, 1-33.
Lipford, G.B., Heeg, K. y
Wagner, H. (1998). Bacterial DNA as immune cell
activator. Trends Microbiol 6, 496-500.
Mosmann, T.R., Cherwinski, H.,
Bond, M.W., Giedlin, M.A. y Coffman, R.L.
(1986). Two types of murine helper T cell clone. I.
Definition according to profiles of lymphokine activities and
secreted proteins. J Immunol 136, 2348-2357.
Nossal, G. (1998). Living u oto
the legacy. Nat Med 4, 475-476.
Oxenius,A., Martinic, M. M.,
Hengartner. H., y Klenerman, P. (1999).
CpG-containig oligonucleotides are efficient
adjuvants for inducton of protective antiviral immune responses with
T-cell peptide vaccines. J Virol 73,4120
4126
Paillard, F. (1999). CpG: the
double-edged sword [comment]. Hum gene Ther
10, 2089
Parmer, E. G:, Harty, J.T., y
Bevan, M. J. (1991). Precise prediction of a dominant
class I MHC-resricted epitope of Listeria
monocytogenes. Nature 353, 852-855.
Parronchi, P., Brugnolo, F.,
Annunziato, F ., Manuelli, C., Sampoganro, S.,
Mavillia, C., Romagnani, S., y Maggi, E.
(1999). Phosphorothiodate oligodeoxynucleotides promote the
in vitro development of human
allergen-specific CD4+ T cells into Th1 efffectors.
J immunol 163, 5946-5953.
Pisetsky, D. S. (1997).
Immunostimulatory DNA: a clear and present danger? Nat Med 3,
829-831.
Pisetsky, D. S. (1999). The
influence of base sequence on the immunostimulatory properties of
DNA. Immunol Res 19, 35-46.
Rodrigues, M., Nussenzweig, R. S.,
Romero, P., y Zavala, F. (1992). The in
vivo cytotoxic activity of CD8+ T cell clones correlates with
their levels of expression of adhesion molecules. J Exp Med
175, 895-905.
Roitt, I., Brostoff, J., y
Male, D. (1998). Immunology (London: Mosby
International Lfd).
Rotzschke, O., Falk, K.,
Stevanovic, S., Jung, G., Walden, P., y
Rammensee, H. G. (1991). Exact prediction of a natural
T cell epitope. Eur J Immunol 21,
2891-2894.
Schwartz, D. A., Quinn, T. J.,
Thorne, P. S., Sayeed, S., YI, A. K., y
Krieg, A. M. (1997). CpG motifs in bacterial DNA cause
inflammation in the lower respiratory tract. J Clin Invest
100, 68-73.
Shimonkevitz, R., Colon, S.,
Kappler, J.W., Marrack, P., y Grey, H.M.
(1994). Antigen recongnition by H2-restrictes
T cells II. A tryptic ovalbumin peptide that substitutes for
processed antigen. J Immunol 133,
2067-2074.
Simmaco, M., Mignogna, G., y
Barra, D. (1998). Antimicrobial peptides from
amphibian skin: what do they tell us? Biopolymers 47,
435-450.
Sparbier, K.., y Walden, P.
(1999). T cell receptor specifity and mimotopes. Curr Opin
Immunol 11. 214-218.
Sparwasser, T., Koch, E. S.,
Vabulas, R, M., Heeg, K., Lipford, G.B.,
Ellwart, J. W., y Wagner, H. (1998). Bacterial
DNA and immunostimulatory CpG oligonucleotides trigger maturation
and activation of murine dentrict cells. Eur J Immunol 28,
2045-2054.
Sparwasser, T., Miethke, T.,
Lipford, G., Borschert, K., Hacker, H.,
Heeg, K., y Wagner, H. (1997). Bacterial DNA
causes septic shock [letter]. Nature 386,
336-337.
Sparwasser, T., Miethke, T.,
Lipford, G., Erdmann, A., Hacker, H.,
Heeg, K., y Wagner, H. (1997). Macrophages
sense pathogens via DNA motifs: induction of tumor necrosis
factor-alpha-mediated shock. Eur
J Immunol 27, 1671-1679.
Weigner, G. J., Liu, H. M.,
Wooldridge, J. E., Dahle, C. E., y Krieg, A. M.
(1997). Immunostimulatory
oligodeoxy-nucleotides containing the CpG motif are
effective as immune adjuvants in tumor antigen immunization. Proc
Natl Acad Sci USA 94, 10833-10837.
Yew, N.S., Wang, K.X.,
Przybylska, M., Bagley, R. G., Stedman, M.,
Marshall, J., Schedule, R.K., y Cheng, S..H.
(1999). Contribution of plasmid DNA to inflammation in the
lung after administration of cationiclipid:pDNA complexes. Hum
Gene Ther 10, 223-234.
Claims (11)
1. Composición farmacéutica que comprende:
- -
- un antígeno,
- -
- un oligodesoxinucleótido inmunogénico que contiene motivos de CpG (ODN-Cpg), y
- -
- un péptido policatiónico que contiene más del 20% de aminoácidos básicos.
2. Composición de acuerdo con la reivindicación
1, que se caracteriza porque el antígeno es una proteína
derivada de un patógeno vírico, parasítico o bacteriano.
3. Composición de acuerdo con la reivindicación
1, que se caracteriza porque el antígeno es un antígeno
tumoral.
4. Composición de acuerdo con la reivindicación
1, que se caracteriza porque el antígeno es un antígeno
autoinmunitario.
5. Composición de acuerdo con una cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 4, que se caracteriza porque el
péptido policatiónico es un polipéptido básico, un policatión
orgánico, un poliaminoácido básico o mezclas de los mismos.
6. Composición de acuerdo con una cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 5, que se caracteriza porque el
péptido policatiónico es polilisina, poliarginina, un polipéptido
que contiene más del 50% de aminoácidos básicos en un intervalo de
más de 8, especialmente de más de 20, residuos aminoacídicos o
mezclas de los mismos.
7. Composición de acuerdo con una cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 6, que se caracteriza porque el
péptido policatiónico deriva de la proteína-REV o la
proteína-TAT del VIH, quitosano u otros derivados de
quitina.
8. Composición de acuerdo con una cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 5, que se caracteriza porque el
ODN-CpG se selecciona de moléculas de ADN producidas
sintéticamente, ODN sustituidos con tiofosfato, ADN inmunogénico de
insecto, moléculas de ADN recombinante, moléculas de ADN que
contienen un dinucleótido de CpG flanqueado por dos purinas en 5' y
dos pirimidinas en 3', o mezclas de los mismos.
9. Vacuna, que comprende una composición de
acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.
10. Uso de una composición de acuerdo con una
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 para la fabricación de una
vacuna.
11. Kit que comprende
- -
- un componente que contiene un ODN-CpG inmunogénico, y
- -
- un componente que contiene un péptido policatiónico que contiene más del 20% de aminoácidos básicos, y
- -
- un componente que contiene un antígeno.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
ATA129/2000 | 2000-01-28 | ||
AT0012900A AT409085B (de) | 2000-01-28 | 2000-01-28 | Pharmazeutische zusammensetzung zur immunmodulation und herstellung von vakzinen |
PCT/EP2001/000087 WO2001054720A1 (en) | 2000-01-28 | 2001-01-05 | Pharmaceutical composition for immunomodulation and preparation of vaccines comprising an antigen and an immunogenic oligodeoxynucleotide and a polycationic polymer as adjuvants |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
ES2304376T3 true ES2304376T3 (es) | 2008-10-16 |
Family
ID=3635970
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES01903625T Expired - Lifetime ES2304376T3 (es) | 2000-01-28 | 2001-01-05 | Composicion farmaceutica para la inmunomodulacion y preparacion de vacunas que comprenden un antigeno y, como adyuvantes, un oligodesoxinucleotido inmunogenico y un polpeptido policationico. |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20020197269A1 (es) |
EP (1) | EP1251871B1 (es) |
JP (1) | JP2003520824A (es) |
AR (1) | AR026940A1 (es) |
AT (2) | AT409085B (es) |
AU (1) | AU784403B2 (es) |
CA (1) | CA2396884A1 (es) |
DE (1) | DE60133717T2 (es) |
ES (1) | ES2304376T3 (es) |
PE (1) | PE20011217A1 (es) |
UY (1) | UY26555A1 (es) |
WO (1) | WO2001054720A1 (es) |
Families Citing this family (88)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6207646B1 (en) | 1994-07-15 | 2001-03-27 | University Of Iowa Research Foundation | Immunostimulatory nucleic acid molecules |
US6977245B2 (en) | 1999-04-12 | 2005-12-20 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Oligodeoxynucleotide and its use to induce an immune response |
US20050226890A1 (en) * | 1999-08-12 | 2005-10-13 | Cohen David I | Tat-based vaccine compositions and methods of making and using same |
DE60131430T2 (de) | 2000-01-14 | 2008-10-16 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Oligodeoxynukleotide und ihre verwendung zur induktion einer immunreaktion |
US7129222B2 (en) | 2000-03-10 | 2006-10-31 | Dynavax Technologies Corporation | Immunomodulatory formulations and methods for use thereof |
US20030129251A1 (en) | 2000-03-10 | 2003-07-10 | Gary Van Nest | Biodegradable immunomodulatory formulations and methods for use thereof |
WO2005090392A1 (en) * | 2004-03-16 | 2005-09-29 | Inist Inc. | Tat-based tolerogen compositions and methods of making and using same |
WO2002013857A2 (en) * | 2000-08-17 | 2002-02-21 | Intercell Biomedizinische Forschungs- Und Entwicklungs Ag | A vaccine which comprises at least one antigen and a cathelididin derived antimicrobial peptide or a derivative thereof |
WO2002052002A2 (en) | 2000-12-27 | 2002-07-04 | Dynavax Technologies Corporation | Immunomodulatory polynucleotides and methods of using the same |
US20040081655A1 (en) * | 2001-01-05 | 2004-04-29 | Karen Lingnau | Methods and compositions comprising polycationic compounds |
CA2433794A1 (en) | 2001-01-05 | 2002-07-11 | Intercell Ag | Uses for polycationic compounds as vaccine adjuvants |
DK2423335T3 (da) | 2001-06-21 | 2014-08-18 | Dynavax Tech Corp | Kimæriske immunmodulatoriske forbindelser og fremgangsmåder til anvendelse deraf |
US7666674B2 (en) | 2001-07-27 | 2010-02-23 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Use of sterically stabilized cationic liposomes to efficiently deliver CPG oligonucleotides in vivo |
EP1420829A4 (en) | 2001-08-07 | 2006-05-17 | Dynavax Tech Corp | IMMUNOMODULATING COMPOSITIONS, FORMULATIONS AND METHOD FOR THEIR USE |
US7354909B2 (en) * | 2001-08-14 | 2008-04-08 | The United States Of America As Represented By Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Method for rapid generation of mature dendritic cells |
EP1450856B1 (en) | 2001-09-14 | 2009-11-11 | Cytos Biotechnology AG | Packaging of immunostimulatory cpg into virus-like particles: method of preparation and use |
US20030134810A1 (en) * | 2001-10-09 | 2003-07-17 | Chris Springate | Methods and compositions comprising biocompatible materials useful for the administration of therapeutic agents |
JP2005519990A (ja) * | 2001-10-12 | 2005-07-07 | ユニバーシティ オブ アイオワ リサーチ ファウンデーション | イミダゾキノリン化合物を用いて免疫応答を増強するための方法および産物 |
US8466116B2 (en) | 2001-12-20 | 2013-06-18 | The Unites States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Use of CpG oligodeoxynucleotides to induce epithelial cell growth |
AU2002366710A1 (en) | 2001-12-20 | 2003-07-09 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of | USE OF CpG OLIGODEOXYNUCLEOTIDES TO INDUCE ANGIOGENESIS |
US8088388B2 (en) | 2002-02-14 | 2012-01-03 | United Biomedical, Inc. | Stabilized synthetic immunogen delivery system |
JP4598519B2 (ja) * | 2002-06-20 | 2010-12-15 | サイトス バイオテクノロジー アーゲー | アジュバントとして使用するためのパッケージ化されたウィルス様粒子:調製法及び使用法 |
US20040053880A1 (en) | 2002-07-03 | 2004-03-18 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Nucleic acid compositions for stimulating immune responses |
US7807803B2 (en) | 2002-07-03 | 2010-10-05 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Nucleic acid compositions for stimulating immune responses |
US8263091B2 (en) | 2002-09-18 | 2012-09-11 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Method of treating and preventing infections in immunocompromised subjects with immunostimulatory CpG oligonucleotides |
WO2004035618A2 (en) | 2002-10-15 | 2004-04-29 | Intercell Ag | Nucleic acids coding for adhesion factor of group b streptococcus, adhesion factors of group b streptococcus and further uses thereof |
EP1578954A4 (en) | 2002-12-11 | 2010-08-11 | Coley Pharm Group Inc | 5'-CPG NUCLEIC ACIDS AND USE METHOD |
US8158768B2 (en) | 2002-12-23 | 2012-04-17 | Dynavax Technologies Corporation | Immunostimulatory sequence oligonucleotides and methods of using the same |
SG2011035342A (en) | 2002-12-23 | 2016-12-29 | Dynavax Tech Corp | Immunostimulatory sequence oligonucleotides and methods of using the same |
WO2004064759A2 (en) | 2003-01-21 | 2004-08-05 | Chiron Corporation | Use of tryptanthrin compounds for immune potentiation |
SI1601770T1 (sl) | 2003-03-04 | 2010-01-29 | Intercell Ag | Streptococcus pyogenes antigeni |
CA2517673C (en) * | 2003-03-24 | 2013-08-13 | Intercell Ag | Improved vaccines for preventing viral infection |
WO2004087153A2 (en) | 2003-03-28 | 2004-10-14 | Chiron Corporation | Use of organic compounds for immunopotentiation |
EP2182065A3 (en) | 2003-03-31 | 2010-09-15 | Intercell AG | Staphylococcus epidermidis antigens |
CN1774447B (zh) | 2003-04-15 | 2011-04-06 | 英特塞尔股份公司 | 肺炎链球菌抗原 |
EP2289907A3 (en) | 2003-05-07 | 2011-08-31 | Intercell AG | Streptococcus agalactiae antigens I + II |
CA2525540A1 (en) | 2003-05-30 | 2004-12-09 | Intercell Ag | Enterococcus antigens |
TWI358301B (en) * | 2003-07-11 | 2012-02-21 | Intercell Ag | Hcv vaccines |
US20050208482A1 (en) * | 2004-03-16 | 2005-09-22 | Cohen David I | Tat-based immunomodulatory compositions and methods for their discovery and use |
EP1765313A2 (en) | 2004-06-24 | 2007-03-28 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. | Compounds for immunopotentiation |
CA2571710A1 (en) | 2004-06-24 | 2006-11-02 | Nicholas Valiante | Small molecule immunopotentiators and assays for their detection |
JP5241012B2 (ja) | 2005-07-15 | 2013-07-17 | ノバルティス アーゲー | Pamps、病原体関連分子パターン |
EP1973608A1 (en) | 2005-12-14 | 2008-10-01 | Cytos Biotechnology AG | Immunostimulatory nucleic acid packaged particles for the treatment of hypersensitivity |
SG172696A1 (en) | 2006-06-12 | 2011-07-28 | Cytos Biotechnology Ag | Processes for packaging oligonucleotides into virus-like particles of rna bacteriophages |
EP2059531A1 (en) | 2006-07-07 | 2009-05-20 | Intercell AG | Small streptococcus pyogenes antigens and their use |
CN101516905A (zh) | 2006-09-15 | 2009-08-26 | 英特塞尔股份公司 | 疏螺旋体属抗原 |
EP1923069A1 (en) | 2006-11-20 | 2008-05-21 | Intercell AG | Peptides protective against S. pneumoniae and compositions, methods and uses relating thereto |
AU2007333147B2 (en) | 2006-12-12 | 2013-12-19 | Kuros Us Llc | Oligonucleotides containing high concentrations of guanine monomers |
WO2008084072A2 (en) | 2007-01-12 | 2008-07-17 | Intercell Ag | Protective proteins of s. agalactiae, combinations thereof and methods of using the same |
DK2121048T3 (en) | 2007-02-19 | 2015-11-23 | Marinepolymer Tech Inc | Hemostatic compositions and therapeutic regimens |
EP2360177A1 (en) | 2007-05-02 | 2011-08-24 | Intercell AG | Klebsiella antigens |
EP2012122A1 (en) | 2007-07-06 | 2009-01-07 | Medigene AG | Mutated parvovirus structural proteins as vaccines |
DK2158211T3 (en) | 2007-05-31 | 2016-12-05 | Medigene Ag | Mutated structural protein of a parvovirus |
AU2008265218A1 (en) | 2007-06-18 | 2008-12-24 | Intercell Ag | Chlamydia antigens |
WO2009030254A1 (en) | 2007-09-04 | 2009-03-12 | Curevac Gmbh | Complexes of rna and cationic peptides for transfection and for immunostimulation |
DE102007044093A1 (de) * | 2007-09-14 | 2009-03-19 | Phenion Gmbh & Co. Kg | Nukleinsäurehaltige kosmetische und/oder pharmazeutische Zubereitungen zur Induktion antimikrobieller Peptide in epithelialen Deckgeweben |
BRPI0909664A2 (pt) | 2008-03-17 | 2019-09-24 | Intercell Ag | peptídios protetores contra s. pneumoniae e composições, métodos e usos relacionados com os mesmos |
ES2569907T3 (es) | 2008-06-27 | 2016-05-13 | Zoetis Services Llc | Composiciones adyuvantes novedosas |
US20100233270A1 (en) | 2009-01-08 | 2010-09-16 | Northwestern University | Delivery of Oligonucleotide-Functionalized Nanoparticles |
WO2010089340A2 (en) | 2009-02-05 | 2010-08-12 | Intercell Ag | Peptides protective against e. faecalis, methods and uses relating thereto |
WO2010092176A2 (en) | 2009-02-13 | 2010-08-19 | Intercell Ag | Nontypable haemophilus influenzae antigens |
CN102405057B (zh) | 2009-03-23 | 2016-05-25 | 那尼尔科斯治疗公司 | 用免疫刺激性Hiv Tat衍生物多肽治疗癌症 |
US20110053829A1 (en) | 2009-09-03 | 2011-03-03 | Curevac Gmbh | Disulfide-linked polyethyleneglycol/peptide conjugates for the transfection of nucleic acids |
EP2308896A1 (en) | 2009-10-09 | 2011-04-13 | Sanofi-aventis | Polypeptides for binding to the "receptor for advanced glycation endproducts" as well as compositions and methods involving the same |
EP2319871A1 (en) | 2009-11-05 | 2011-05-11 | Sanofi-aventis | Polypeptides for binding to the "receptor for advanced glycation endproducts" as well as compositions and methods involving the same |
EP2486058A1 (en) | 2009-10-09 | 2012-08-15 | Sanofi | Polypeptides for binding to the "receptor for advanced glycation endproducts" as well as compositions and methods involving the same |
EA023397B1 (ru) | 2010-05-26 | 2016-05-31 | Селекта Байосайенсиз, Инк. | Комбинированные вакцины с синтетическими наноносителями |
BR112014004896B1 (pt) | 2010-09-03 | 2023-02-14 | Valneva Usa, Inc. | Polipepttdeo isolado de proteínas de toxina a e toxina b de c. difficile e usos do mesmo |
WO2012031760A1 (en) | 2010-09-08 | 2012-03-15 | Medigene Ag | Parvovirus mutated structural proteins comprising cross - protective b - cell epitopes of a hpv l2 protein as well as products and methods relating thereto |
WO2012158960A2 (en) * | 2011-05-17 | 2012-11-22 | H. Lee Moffitt Cancer Center & Research Institute, Inc. | Melanocortin 1 receptor ligands and methods of use |
AU2012290306B2 (en) * | 2011-07-29 | 2017-08-17 | Selecta Biosciences, Inc. | Synthetic nanocarriers that generate humoral and cytotoxic T lymphocyte (CTL) immune responses |
WO2013113325A1 (en) * | 2012-01-31 | 2013-08-08 | Curevac Gmbh | Negatively charged nucleic acid comprising complexes for immunostimulation |
EP3838294A1 (en) * | 2012-01-31 | 2021-06-23 | CureVac AG | Negatively charged nucleic acid comprising complexes for immunostimulation |
WO2013113326A1 (en) | 2012-01-31 | 2013-08-08 | Curevac Gmbh | Pharmaceutical composition comprising a polymeric carrier cargo complex and at least one protein or peptide antigen |
AU2014292926B2 (en) | 2013-07-25 | 2020-03-05 | Exicure Operating Company | Spherical nucleic acid-based constructs as immunostimulatory agents for prophylactic and therapeutic use |
CA2915728A1 (en) | 2013-08-21 | 2015-02-26 | Thomas Kramps | Respiratory syncytial virus (rsv) vaccine |
CA2924526A1 (en) | 2013-09-19 | 2015-03-26 | Paul Joseph Dominowski | Water-in-oil emulsions comprising immunostimulatory oligonucleotides |
US9663556B2 (en) | 2013-10-04 | 2017-05-30 | Pin Pharma, Inc. | Treatment of cancers with immunostimulatory HIV tat derivative polypeptides |
WO2015149944A2 (en) | 2014-04-01 | 2015-10-08 | Curevac Gmbh | Polymeric carrier cargo complex for use as an immunostimulating agent or as an adjuvant |
PL3164113T3 (pl) | 2014-06-04 | 2019-09-30 | Exicure, Inc. | Wielowartościowe dostarczanie modulatorów immunologicznych w liposomowych kolistych kwasach nukleinowych do zastosowań profilaktycznych lub terapeutycznych |
CA2968531A1 (en) | 2014-11-21 | 2016-05-26 | Northwestern University | The sequence-specific cellular uptake of spherical nucleic acid nanoparticle conjugates |
PL3244920T3 (pl) | 2015-01-16 | 2023-09-25 | Zoetis Services Llc | Szczepionka przeciw pryszczycy |
US11364304B2 (en) | 2016-08-25 | 2022-06-21 | Northwestern University | Crosslinked micellar spherical nucleic acids |
US11696954B2 (en) | 2017-04-28 | 2023-07-11 | Exicure Operating Company | Synthesis of spherical nucleic acids using lipophilic moieties |
EP3527223A1 (en) | 2018-02-16 | 2019-08-21 | 2A Pharma AB | Mutated parvovirus structural protein |
WO2019158636A1 (en) | 2018-02-16 | 2019-08-22 | 2A Pharma Ab | Parvovirus structural protein for the treatment of autoimmune diseases |
CN114127101A (zh) | 2019-05-20 | 2022-03-01 | 瓦尔尼瓦公司 | 用于治疗或预防呼吸道感染的亚单位疫苗 |
WO2023083964A1 (en) | 2021-11-11 | 2023-05-19 | 2A Pharma Ab | Parvovirus structural protein against beta- and gamma-hpv |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NZ221306A (en) * | 1986-08-15 | 1990-02-26 | Commw Scient Ind Res Org | 2-component immunoadjuvant comprising a mycobacterial free immunoadjuvant oil and a polycationic polyelectrolyte immunoadjuvant and vaccines thereof |
ES2267100T5 (es) * | 1994-07-15 | 2011-04-08 | The University Of Iowa Research Foundation | Oligonucleótidos inmunomoduladores. |
RS50101B (sr) * | 1996-02-24 | 2009-01-22 | Boehringer Ingelheim International Gmbh., | Farmaceutski preparati za imunomodulaciju |
JP4111403B2 (ja) * | 1996-10-11 | 2008-07-02 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ カリフォルニア | 免疫刺激ポリヌクレオチド/免疫調節分子複合体 |
JP2001526688A (ja) * | 1997-05-19 | 2001-12-18 | メルク エンド カンパニー インコーポレーテッド | オリゴヌクレオチドアジュバント |
US6589940B1 (en) * | 1997-06-06 | 2003-07-08 | Dynavax Technologies Corporation | Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof |
DE19803453A1 (de) * | 1998-01-30 | 1999-08-12 | Boehringer Ingelheim Int | Vakzine |
-
2000
- 2000-01-28 AT AT0012900A patent/AT409085B/de not_active IP Right Cessation
- 2000-12-13 AR ARP000106610A patent/AR026940A1/es unknown
-
2001
- 2001-01-05 EP EP01903625A patent/EP1251871B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-01-05 JP JP2001554703A patent/JP2003520824A/ja not_active Withdrawn
- 2001-01-05 AT AT01903625T patent/ATE392904T1/de not_active IP Right Cessation
- 2001-01-05 WO PCT/EP2001/000087 patent/WO2001054720A1/en active IP Right Grant
- 2001-01-05 AU AU31665/01A patent/AU784403B2/en not_active Ceased
- 2001-01-05 ES ES01903625T patent/ES2304376T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-01-05 CA CA002396884A patent/CA2396884A1/en not_active Abandoned
- 2001-01-05 DE DE60133717T patent/DE60133717T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-01-24 UY UY26555A patent/UY26555A1/es unknown
- 2001-01-26 PE PE2001000093A patent/PE20011217A1/es not_active Application Discontinuation
-
2002
- 2002-07-25 US US10/205,150 patent/US20020197269A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU784403B2 (en) | 2006-03-30 |
DE60133717D1 (de) | 2008-06-05 |
AT409085B (de) | 2002-05-27 |
ATE392904T1 (de) | 2008-05-15 |
AU3166501A (en) | 2001-08-07 |
PE20011217A1 (es) | 2001-12-04 |
DE60133717T2 (de) | 2009-07-02 |
EP1251871A1 (en) | 2002-10-30 |
AR026940A1 (es) | 2003-03-05 |
UY26555A1 (es) | 2001-08-27 |
WO2001054720A1 (en) | 2001-08-02 |
EP1251871B1 (en) | 2008-04-23 |
JP2003520824A (ja) | 2003-07-08 |
US20020197269A1 (en) | 2002-12-26 |
CA2396884A1 (en) | 2001-08-02 |
ATA1292000A (de) | 2001-10-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2304376T3 (es) | Composicion farmaceutica para la inmunomodulacion y preparacion de vacunas que comprenden un antigeno y, como adyuvantes, un oligodesoxinucleotido inmunogenico y un polpeptido policationico. | |
ES2206424T3 (es) | Oligodesoxinucleotidos inmunoestimulantes. | |
ES2288555T3 (es) | Moleculas de oligodesoxinucleotidos inmunoestimuladores. | |
US7148191B2 (en) | Antigenic composition | |
ES2263668T3 (es) | Composicion de vacuna que comprende un antigeno y un peptido con propiedades adyuvantes. | |
AU2001281812A1 (en) | Immunostimulatory oligodeoxynucleotides |