ES2292882T3 - Extracto de litchi sinensis que contiene proantocianidinas oligomericas. - Google Patents

Abstract

Procedimiento para la obtención de extractos vegetales con, al menos, un 15 % en peso de proantocianidinas oligómeras del tipo OPC A2, en el que (a) se someten las cáscaras de los frutos de Litchi sinensis a una extracción con alcoholes alifáticos inferiores, en caso dado acuosos, (b) los extractos se someten a una separación cromatográfica, en caso dado tras concentración y/o filtración, (c) la fracción rica en OPC A2, que se obtiene durante la cromatografía, se somete a una extracción líquido/líquido y (d) se separa la fase orgánica resultante.

Description

Extracto de Litchi sinensis que contiene proantocianidinas oligómeras.

Campo de la invención

La invención se refiere al campo de los productos para complementar los artículos comestibles y se refiere a procedimientos para la fabricación de extractos botánicos especiales con un elevado contenido en productos activos especiales.

Estado de la técnica

Los extractos de las cáscaras de las plantas del género Sapindaceae, especialmente de la especie Litchi sinensis (Sonn.) son conocidos por su elevado contenido en derivados de flavona, especialmente en productos de hidrogenación o en productos de oxidación del 2-fenil-4H-1-benzopirano o sus derivados, tales como, por ejemplo, los flavenos, los flavan-3-oles (catequinas, oligómeros de la catequina), flavan-3,4-dioles (leucoantocianidas), flavonas, flavonoles y flavononas. Sin embargo, la parte principal de los extractos representa taninos condensados, que se denominan "procianodoles oligómeros" (OPC). Se trata, en este caso, de oligómeros con 2 hasta 8 monómeros del tipo catequina o del tipo epicatequina, tales como, por ejemplo, las procianidinas, las proantocianidinas, el procianidoel, las oligoprocianidinas, las leucoantocianidinas, las leucodelfininas, las leucocianinas así como los antocianógenos. Los OPC, especialmente la proantocianidina A2 (OPC A2), especialmente activa, presentan propiedades, que son similares a las de la vitamina P, especialmente la inhibición de las metaloproteasas de matriz (MMP), sin embargo las MMP tienen la propiedad de atacar las macromoléculas dérmicas del tejido conjuntivo, tal como el proteoglicano, el colágeno y la elastina, de disolver los enlaces péptidos y, de este modo, contribuyen al origen de la alteración de la piel. Del mismo modo, en los procesos inflamatorios en la piel se desprenden, por los macrófagos y por los granulocitos neutrófilos polimorfonucleares, proteasas tales como, por ejemplo, la serina-proteasa elastasa o las metaloproteasas de matriz (MMP), tal como la colagenasa y otra elastasa, que degrada la elastina, que pertenece a las MMP.

En este contexto, se citará la solicitud de patente europea EP 0978274 A1 (Kibun), por la que se conocen preparaciones cosméticas para la aplicación tópica, que contienen emulsionantes del tipo esfingoglicolípidos junto con extractos de litchi, sirviendo estos últimos para la despigmentación de la piel. Además se han divulgado en la solicitud de patente europea EP 0965328 A1 (Kao) agentes cosméticos que contienen extractos de litchi junto con ésteres especiales del ácido fosfórico. Ninguna de las dos publicaciones contiene cualquier indicación relativa sobre la forma en que pueden ser preparados los extractos de litchi ni sobre si aplicación oral en el campo de los productos para el complemento de los artículos comestibles.

La memoria descriptiva de la patente US 5 650 432 A divulga un procedimiento para la obtención de oligómeros y de polímeros de proantocianidina a partir de material vegetal.

La obtención de los extractos de litchi se ha revelado difícil en la práctica. Con las técnicas usuales de extracción con diversos disolventes polares únicamente se obtienen extractos con contenidos de hasta un 15 % en peso, inclusive, de la OPC A2, lo cual es muy poco para llevar a cabo una extracción económica y para comercializar los productos bajo condiciones económicamente aceptables. La tarea de la presente invención consistía, por lo tanto, en proporcionar extractos de Litchi sinensis así como un procedimiento para su obtención, que - con relación a la substancia activa - presenten al menos un 15, preferentemente al menos un 20 y, especialmente, desde un 20 hasta un 25% en peso en proantocianidinas oligómeras del tipo OPC A2. Otra tarea de la invención consistía en desarrollar productos aditivos para los artículos comestibles, que se opusiesen, por ingestión oral, tanto al envejecimiento de la piel así como también a las apariciones de inflamación.

Descripción de la invención

Procedimientos para la obtención de extractos vegetales, que constituyen el objeto de la invención, contienen - referido al contenido en substancia activa - al menos un 15 y, de manera preferente, desde un 20 hasta un 25% en peso de proantocianidinas oligómeras del tipo OPC A2. Los extractos pueden obtenerse si

(a)

se someten las cáscaras de los frutos de Litchi sinensis a una extracción con alcoholes alifáticos inferiores, en caso dado acuosos,

(b)

los extractos se someten a una separación cromatográfica, en caso dado tras concentración y/o filtración,

(c)

la fracción rica en OPC A2, que se obtiene durante la cromatografía, se somete a una extracción líquido/líquido y

(d)

se separa la fase orgánica resultante.

De manera sorprendente, se ha encontrado, que mediante la combinación de las etapas del procedimiento que consisten en la "extracción", en la "cromatografía" y en la "extracción líquido/líquido" pueden obtenerse ahora extractos que contienen a la OPC A2 en concentraciones claramente mayores que los productos del estado de la técnica y que, de este modo, tienen un rendimiento claramente mayor en cuanto a su efecto inhibidor de las MMP y antiinflama-
torio.

Un objeto de la invención se refiere a un procedimiento para la obtención de extractos vegetales que contienen - referido al contenido en substancia activa - al menos un 15 y, preferentemente, entre un 20 y un 25% en peso de proantocianidinas oligómeras del tipo OPC A2, en el cual

(a)

se someten las cáscaras del fruto de Litchi sinensis a una extracción con alcoholes alifáticos inferiores, en caso dado acuosos,

(b)

los extractos se someten a una separación cromatográfica, en caso dado tras concentración y/o filtración,

(c)

la fracción rica en OPC A2, que se obtiene durante la cromatografía, se someten a una extracción líquido/líquido y

(d)

se separa la fase orgánica resultante.

Extracción

La obtención de los extractos puede llevarse a cabo en forma en sí conocida, es decir por ejemplo mediante extracción de las plantas o bien de las partes de las plantas o bien de las cáscaras de los frutos de litchi, acuosa, alcohólica o acuoso-alcohólica. Son adecuados todos los procedimientos de extracción tradicionales tales como, por ejemplo, la maceración, la remaceración, la digestión, la maceración con agitación, la extracción en lecho fluidificado, la extracción por medio de ultrasonidos, la extracción a contracorriente, la percolación, la repercolación, la evacolación (extracción bajo presión reducida), la diacolación o la extracción sólido-líquido con reflujo continuo. Para el empleo a escala industrial es preferente el método de la percolación. Como material de partida se tomarán, de manera preferente, las cáscaras de litchi, que pueden ser desmenuzadas mecánicamente como paso previo a la extracción. En este caso son adecuados todos los métodos para el desmenuzado, conocidos por el técnico en la materia, a título de ejemplo puede citarse la molienda por liofilización. Como disolventes para la realización de las extracciones pueden emplearse disolventes orgánicos, agua (de manera preferente agua caliente a una temperatura por encima de 80ºC y, de manera especial, por encima de 95ºC) o mezclas formadas por disolventes orgánicos y agua, de manera especial alcoholes de bajo peso molecular con un contenido en agua más o menos elevado. La extracción con metanol, con etanol así como con sus mezclas acuosas es especialmente preferente. La extracción se lleva a cabo, por regla general, entre 20 y 100ºC, de manera preferente entre 50 y 70ºC. En una forma preferente de realización, se lleva a cabo la extracción bajo atmósfera de gas inerte para evitar la oxidación de los productos activos del extracto. Esto es especialmente importante en el caso de las extracciones a temperaturas por encima de 40ºC. Los tiempos necesarios para la extracción se ajustarán por el técnico en la materia en función del material de partida, del procedimiento de extracción, de la temperatura de la extracción, de la relación entre el disolvente y la materia prima, y similares. Tras la extracción, los extractos en bruto obtenidos pueden someterse, en caso dado, a otras etapas usuales, tales como, por ejemplo, la purificación, la concentración y/o la eliminación de su color. En caso deseado los extractos preparados de este modo pueden someterse, por ejemplo, a una separación selectiva de los componentes individuales no deseados. La extracción puede llevarse a cabo hasta el grado de extracción que se quiera, sin embargo se llevará a cabo usualmente hasta el agotamiento. Los rendimientos típicos (= cantidad de substancia seca del extracto con relación a la cantidad de materia prima empleada) en la extracción de las cáscaras de litchi se encuentran en el intervalo comprendido entre un 2 y un 3% en peso referido a la OPC A2.

Cromatografía y extracción líquido/líquido

La purificación cromatográfica y la extracción líquido/líquido pueden llevarse a cabo en forma en sí conocida. Como material para la columna destinado a la cromatografía se han acreditado aquellas resinas que no porten grupos funcionales. La separación se lleva a cabo, de manera preferente, entre 15 y 30ºC, pudiendo entrar en consideración como agente eluyente, ante todo, los alcoholes alifáticos inferiores con 1 hasta 4 átomos de carbono, especialmente el metanol o el etanol. Para la extracción subsiguiente se han acreditado los disolventes no miscibles con agua, tales como, por ejemplo, el butanol o el acetato de etilo. La extracción se lleva a cabo en este caso, preferentemente, a temperaturas de 25ºC como mínimo, estando dado el límite superior por el punto de ebullición del disolvente.

Aplicación industrial

Los extractos de Litchi sinensis, en general, y los extractos enriquecidos en OPC A2, en particular, disponen de una inhibición de las MMP mayor que la de los productos del estado de la técnica y son adecuados, por ejemplo, bajo el concepto "cosmetic inside (ingredientes para cosméticos)" para la fabricación de productos para el complemento de los artículos comestibles. En una forma de administración especial se emplean los extractos en forma encapsulada, por ejemplo en forma de cápsulas de gelatina, o en forma microencapsulada. Las microcápsulas adecuadas con diámetros en el intervalo comprendido entre 0,0001 y 5 mm y los procedimientos para su fabricación pueden verse por ejemplo en las publicaciones WO 01/01926, WO 01/01927, WO 01/01928, y WO 01/01929 (Primacare).

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Otro objeto de la presente invención se refiere al empleo de los nuevos extractos, ricos en OPC-A2 para la fabricación de preparaciones cosméticas y/o farmacéuticas, en las cuales pueden estar contenidos en cantidades desde un 0,1 hasta un 10, de manera preferente desde un 0,5 hasta un 5 y, de manera especial, desde un 1 hasta un 2% en peso.

Ejemplos Ejemplo 1

Se dispusieron en un reactor de 50 litros, 3 kg de cortezas desmenuzadas de Litchi sinensis con un contenido en OPC A2 del 0,4% en peso y se extrajeron con 30 kg de metanol acuoso durante 60 minutos a 50ºC. Se obtuvieron 23 kg de un líquido con un contenido en materia sólida de 500 g, que presentaba un contenido en OPC A2 del 2% en peso. Tras concentración del extracto a un volumen de 1,5 kg se sometió al líquido a una purificación cromatográfica a 25ºC en una columna con un relleno sin grupos funcionales y mediante el empleo de etanol como agente eluyente, mediante la cual se obtuvieron 2,5 kg de extracto con un contenido en materia sólida de 80 g. El extracto se concentró de nuevo hasta un volumen de 500 g y a continuación se sometió a una cromatografía líquido/líquido, a 45ºC, con butanol acuoso. Mientras que la fase acuosa, intensamente coloreada de rojo, únicamente presentaba - con relación al contenido en substancia activa - cantidades por debajo de un 1% en peso de la OPC A2, se obtuvieron 50 g de una fase orgánica, ligeramente coloreada de rojo, que presentaba - con relación al contenido en substancia activa - un contenido en OPC A2 del 23% en peso.

Ejemplo comparativo V1

Se dispusieron, de manera análoga a la del ejemplo 1, en un reactor de 50 litros, 3 kg de cáscaras desmenuzadas de Litchi sinensis con un contenido en OPC A2 del 0,4% en peso y se extrajeron con 30 kg de metanol acuoso durante 60 minutos a 50ºC. Tras la separación del metanol se obtuvo un residuo de 500 g, que se recogió en 1,5 litros de agua destilada. A continuación se extrajo esta solución varias veces con un total de 3 litros de acetato de etilo. En este caso se obtuvo, tras la separación, una fase orgánica ligeramente coloreada de rojo, que presentó - con relación al contenido en substancia activa -, un contenido en OPC A2 del 10% en peso.

Actividad frente a las proteasas

Durante una inflamación se liberan proteasas de la piel, tal como, por ejemplo, la colagenasa, a partir de los granulocitos neutrófilos polimorfonucleares o de los macrófagos. Un proceso similar se desarrolla precisamente en la piel de los seres humanos de edad avanzada bajo el efecto de las irradiaciones UV. Las proteasas - denominadas también como metalo-proteasas de matriz (MMP) debido a su contenido en iones de cinc centrales - catalizan, tal como ya se ha citado, la fragmentación de las proteínas del tejido conjuntivo. Para llevar a cabo la investigación de las substancias de ensayo con respecto a la inhibición de la colagenasa, se empleó colagenasa bacteriana (Clostridium histolyticum) sobre gelatina como suelo nutriente natural, que se había marcado con flúorcromo (FITC, Calbiochem). El tiempo de incubación fue de 60 minutos a 20ºC, la hidrólisis del substrato se siguió mediante la fluorescencia a 393 nm (excitación a 328 nm). Los resultados se han reunido en la tabla 1. Se ha dado la inhibición de la colagenasa en %.

TABLA 1

1

Los resultados muestran que las substancias de ensayo, de conformidad con la invención, disponen de un efecto inhibidor significativo en función de la concentración.

Claims (6)

1. Procedimiento para la obtención de extractos vegetales con, al menos, un 15% en peso de proantocianidinas oligómeras del tipo OPC A2, en el que

(a)

se someten las cáscaras de los frutos de Litchi sinensis a una extracción con alcoholes alifáticos inferiores, en caso dado acuosos,

(b)

los extractos se someten a una separación cromatográfica, en caso dado tras concentración y/o filtración,

(c)

la fracción rica en OPC A2, que se obtiene durante la cromatografía, se somete a una extracción líquido/líquido y

(d)

se separa la fase orgánica resultante.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque se emplean metanol o etanol, en caso dado acuosos.

3. Procedimiento según las reivindicaciones 1 o 2, caracterizado porque la extracción se lleva a cabo a temperaturas en el intervalo comprendido entre 30 y 70ºC.

4. Procedimiento según al menos una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque la separación cromatográfica se lleva a cabo en una columna, cuya carga no presenta grupos funcionales.

5. Procedimiento según al menos una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque la separación cromatográfica se lleva a cabo con eluyentes, que se eligen entre el grupo formado por los alcoholes alifáticos con 1 hasta 4 átomos de carbono.

6. Procedimiento según al menos una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque la extracción líquido/líquido se lleva a cabo mediante el empleo de disolventes no miscibles con agua.