ES2291274T3 - Composiciones de t3 estable y metodos de uso de las mismas. - Google Patents

Abstract

Una composición que comprende entre 0,01 mg/ml y 1,0 mg/ml de T 3, albúmina del suero y agua, en la que la estabilidad de T3 esta aumentada.

Description

Composiciones de T_{3} estable y métodos de uso de las mismas.

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La presente invención se refiere generalmente a una formulación acuosa estable de T_{3} que puede usarse para tratar pacientes para restaurar una función cardiaca eficaz.

Antecedentes de la invención

La albúmina del suero es una fracción proteica del suero implicada en mantener la presión osmótica de la sangre, y se usa como un sustituto del plasma en el tratamiento del choque. La albúmina del suero también contribuye a muchos procesos de transporte corporal y reguladores.

Como muchas otras sustancias, tales como N-oxitrimetil aminas, aminoácidos, aminoácidos alquilados y azúcares, la albúmina del suero se usa como una proteína protectora para estabilizar proteínas contra la desnaturalización y para preservar la actividad enzimática, así como en la formulación de productos biomédicos. La patente de Estados Unidos Nº 5.876.992 describe el uso de albúmina del suero junto con disacáridos y otros derivados para estabilizar proteínas. Se ha usado albúmina del suero para preservar la integridad de proteínas urinarias. Patente de Estados Unidos Nº 5.679.318. Además, la albúmina del suero solubiliza paclitaxel en solución acuosa. Documento WO 00/06152.

Las hormonas tiroideas incluyen las formas L de tiroxina (4-(4-hidroxi-3,5-diyodofenil)-3,5-diyodotiroxina; en lo sucesivo denominada T_{4}) y 3,5,3'-triyodotironina (T_{3}). Pueden obtenerse de fuentes naturales, tales como de glándulas tiroideas bovinas, o sintetizarse. Patente de Estados Unidos Nº 2.803.654.

Las hormonas tiroideas administradas a pacientes con compromiso cardiovascular restauran o mejoran el ritmo y la función cardiaca. Las hormonas tiroideas aumentan la frecuencia cardiaca y la fuerza del latido cardiaco aumentando, por lo tanto, el rendimiento cardiaco, y se ha descubierto que están significativamente disminuidas durante el infarto. Wortsman et al. (1987) Arch. Intern. Med. 147: 245-248. Una infusión de hormona tiroidea produce reanimación cardiaca en pacientes que sufren infarto, paro cardiaco, disociación electromecánica y diversas otras afecciones cardiacas (documento GB 2 240 474). El efecto de la hormona tiroidea es casi inmediato y se produce incluso cuando los tratamientos convencionales han fallado. Las hormonas tiroideas son terapéuticamente eficaces también en otras indicaciones cardiacas, tales como cardiomiopatías y bradiarritmias.

De las hormonas tiroideas, T_{3} se sintetiza normalmente en menores cantidades que T_{4} y está presente en la sangre y en la glándula tiroidea. Sin embargo, molecularmente, T_{3} es más potente y el comienzo de su efecto es más rápido que el de T_{4}, y se sintetiza en la glándula tiroidea y por el metabolismo de T_{4} en tejidos periféricos mediante la enzima 5' deyodinasa. T_{4} ha sido la hormona tiroidea preferida en el uso clínico actual, en gran parte debido a su disponibilidad y a su relativamente larga vida media de 6-7 días, ya que T_{4} se une con avidez a la globulina de unión a tiroxina en el suero de seres humanos y, por lo tanto, está protegida del metabolismo y de la excreción. T_{3} tiene una mayor potencia y un efecto más rápido que T_{4} para reanimar pacientes que sufren infarto. Sin embargo, T_{3} es inestable en solución acuosa, con una vida media extremadamente corta. Esta corta vida media ha limitado la aplicación de T_{3} para tratar pacientes, especialmente en situaciones de emergencia, en las que se requiere la inyección de una solución acuosa de hormona tiroidea.

Aunque una formulación estable de T_{3} es deseable y necesaria para tratar pacientes con enfermedad cardiaca, no se han hecho informes ni un uso real de una formulación acuosa estable de T_{3}. La presente invención aborda esta necesidad y deseo desde hace tiempo en la técnica.

Sumario de la invención

La invención proporciona una composición que comprende entre 0,01 mg/ml y 1,0 mg/ml de T_{3}, albúmina del suero y agua, en la que se incrementa la estabilidad de T_{3}.

La invención proporciona adicionalmente el uso de una composición de acuerdo con la invención para la fabricación de un medicamento para tratar a un paciente con infarto, o con paro eléctrico cardiaco, para restaurar una función cardiaca eficaz.

La invención incluye una composición farmacéutica acuosa estable que contiene T_{3}, albúmina del suero y agua. También se incluyen en la invención muestras en polvo para reconstitución, así como diversas preparaciones farmacéuticas.

La invención puede usarse en un método para el tratamiento de emergencia de un paciente con infarto y con paro eléctrico cardiaco, para restaurar una función cardiaca eficaz administrando al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición farmacéutica de T_{3}, albúmina del suero y agua.

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 describe el índice de mortalidad en función del nivel de hormona tiroidea durante el infarto agudo de miocardio.

La Figura 2 muestra los datos hemodinámicos, después de la desfibrilación (5 min-VF).

La Figura 3 describe los procedimientos detallados para ensayar la eficacia de T_{3a} (Protocolo 1).

La Figura 4 (A-H) muestra los efectos de inyecciones de T_{3a} sobre los niveles sanguíneos de T_{3}.

La Figura 5 muestra la presión ventricular izquierda (LV) después de la inyección de T_{3a}.

La Figura 6 proporciona resultados de diversos estudios de T_{3a} en modelos animales. En las Figuras 6G y H, el * indica los puntos en los que los datos del ECG no se correlacionan totalmente con las presiones que aparecen debajo; sólo se muestra para distinguir entre fibrilación ventricular (VF) y ritmo sinusal en este documento.

La Figura 7 (A-I) muestra los niveles séricos totales de T_{3} (ng/dl) en función del tiempo después de la inyección de T_{3a} durante la reanimación cardiaca en perros.

La Figura 8 es un gráfico que representa la T_{3} dependiente de pH y la estabilidad de T_{3a} medida durante 13 meses.

La Figura 9 es un gráfico que representa los niveles séricos de T_{3} después de la inyección de T_{3} durante la reanimación cardiaca en perros.

La Figura 10 es un gráfico que representa los niveles séricos de T_{3} después de una sola dosis de T_{3} de 5 \mug/kg.

La Figura 11 es un gráfico que representa la T_{3} en suero después de una dosis embolada de T_{3} de 100 \mug/kg.

La Figura 12 es un gráfico que representa la vida media de la T_{3} en suero después de una sola inyección.

La Figura 13 es un gráfico que representa la captación de ^{125}I-T_{3} por la fracción nuclear de miocitos de rata neonatal.

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Descripción detallada de la invención

La invención proporciona una composición líquida estable que contiene T_{3} o un análogo de la misma, albúmina del suero y agua, en la que T_{3} tiene una vida media de al menos cinco días a un intervalo de temperatura de -30ºC a 70ºC, preferiblemente de -10ºC a 50ºC y más preferiblemente de 0ºC a 30ºC. Las composiciones descritas en este documento son adecuadas para su uso en cualquier afección para la que T_{3} esté indicada. La invención puede usarse para el tratamiento de un paciente con infarto y con parada eléctrica cardiaca para restaurar una función cardiaca eficaz, comprendiendo la administración al paciente de una cantidad terapéuticamente eficaz de la composición.

En una realización de la invención, la T_{3} en la composición tiene una vida media de al menos dos semanas, preferiblemente de al menos un mes, más preferiblemente de al menos 3 meses, aún más preferiblemente de al menos 6 meses y lo más preferiblemente de al menos un año.

En otra realización de la invención, la composición tiene una proporción de T_{3} y albúmina del suero de entre 0,001 y 0,1, preferiblemente de entre 0,002 y 0,05. En otra realización de la invención, la albúmina del suero es una albúmina del suero humano o una albúmina del suero bovino. En otra realización más de la invención, T_{3} en la composición tiene una concentración de entre 0,01 mg/ml y 1,0 mg/ml, preferiblemente de entre 0,02 mg/ml y 0,8 mg/ml y más preferiblemente de entre 0,1 mg/ml y 0,5 mg/ml.

Las composiciones pueden comprender adicionalmente otras composiciones farmacéuticamente eficaces o aceptables tales como epinefrina, adrenalina y cualquier excipiente. Los excipientes farmacéuticamente aceptables son isotónicos e incluyen, sin limitación, solución salina y solución salina tamponada con fosfato.

La mayor estabilidad y solubilidad de T_{3} en condiciones fisiológicas en la composición de la presente invención permite el uso y la fabricación de una diversidad de composiciones no disponibles anteriormente. Se conocen en la técnica métodos para fabricar tales composiciones, pero no han estado disponibles anteriormente para usar con T_{3}. Se proporcionan en este documento diversas composiciones para diferentes medios de administración. Estas composiciones, incluyen, sin limitación, las adecuadas para usar en la administración por vía intravenosa, cardiaca directa, parenteral, a través de la mucosa, intranasal, por inhalación y bucal.

Las composiciones son particularmente adecuadas para su uso en la administración por inhalación. Las soluciones acuosas son mucho más eficaces en la administración de fármacos que las formulaciones en polvo, pero no se usan frecuentemente debido a la inestabilidad y a la tendencia de muchos fármacos a agregarse en solución. Se conocen en la técnica métodos para fabricar composiciones para administrar por inhalación, etc. La patente de Estados Unidos Nº 5.011.678 describe composiciones adecuadas que contienen una sustancia farmacéuticamente activa, un esteroide anfífilo biocompatible y un propulsor de carbono biocompatible. La patente de Estados Unidos Nº 5.006.343 describe composiciones adecuadas que contienen liposomas, sustancias farmacéuticamente activas y una cantidad de proteína tensioactiva alveolar para potenciar el transporte de los liposomas a través de la superficie pulmonar.

La composición puede administrarse por inyección directa en una cavidad del corazón del paciente, o por inyección parenteral directa en una vía venosa central del paciente, o se administra por inyección parenteral o por inyección parenteral intravenosa, o directamente en el sistema pulmonar del paciente, o directamente en el sistema pulmonar mediante inyección endotraqueal directa, o directamente en el sistema pulmonar por infusión a través de una vía respiratoria del paciente, o al menos mediante una inyección embolada rápida. La composición puede administrarse también mediante goteo en una vía intravenosa.

Como se usa en este documento, la expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" significa una dosificación de T_{3} preferiblemente entre 0,1 y 20 \mug/kg de peso corporal, preferiblemente entre 0,2 y 10 \mug/kg y más preferiblemente entre 0,3 y 5 \mug/kg, aunque son eficaces dosificaciones de hasta al menos 100 \mug/kg. Sorprendentemente, dosificaciones de 5 \mug/kg y 100 \mug/kg parecen dar como resultado una distribución fisiológica similar. Por lo tanto, la composición permite el uso de una baja concentración de T_{3} para conseguir un punto final terapéuticamente eficaz. También se usa una cantidad terapéuticamente eficaz para describir la cantidad requerida para tratar cualquier afección que responda a T_{3}. Preferiblemente la cantidad es suficiente para restaurar una función cardiaca eficaz en un paciente que lo
necesite.

A lo largo de la presente solicitud, T_{3a} representa una composición de T_{3} y albúmina del suero. T_{3a} tiene un intervalo de pH de 2,5 a 11,5, preferiblemente de 4,0 a 10, más preferiblemente de 6,0 a 8,0 y lo más preferiblemente de 6,5 a 7,5.

La invención también incluye combinaciones envasadas que pueden usarse para la administración por vía parenteral de una formulación líquida de T_{3} a pacientes con compromiso cardiovascular. Tales combinaciones envasadas incluyen un dispositivo adecuado para inyectar la formulación de T_{3} sola o junto con, o disuelta en, un diluyente fisiológicamente aceptable o junto con un diluyente fisiológicamente aceptable para su dilución justo antes de usar. El diluyente puede formularse para contener además diversas sustancias terapéuticamente eficaces que potencian las funciones cardiacas incluyendo, pero sin limitación, calcio y magnesio en cantidades terapéuticamente aceptables.

Es evidente a partir de los siguientes ejemplos que T_{3a} produce reanimación cardiaca en los casos en los que otros tratamientos convencionales han fallado. T_{3a} no provocó ningún síntoma de hipertiroidismo en los perros tratados. T_{3} es la hormona tiroidea preferida para su uso en seres humanos a pesar del hecho de que T_{3} no se ha usado clínicamente hasta ahora, ya que T_{3} tiene una actividad muy específica y no persiste después de la administración, de manera que disminuye o elimina la necesidad de terapia posterior con un \beta bloqueante.

Los siguientes ejemplos se proporcionan para ilustrar, pero no limitar, la invención. Los ejemplos demuestran la estabilidad de T_{3a} en comparación con T_{3} en solitario, particularmente en un medio de pH neutro, y el beneficio cardiaco de T_{3} en el periodo inmediatamente posterior a la administración del fármaco durante la reanimación cardiopulmonar.

Ejemplo 1 Hormonas tiroideas durante el infarto agudo de miocardio como indicador de mortalidad

En enfermedades graves, incluyendo enfermedad cardiaca, el sistema de hormonas tiroideas puede estar temporalmente disminuido. Este "síndrome eutiroideo enfermo" se ha considerado una respuesta adaptativa para conservar energía. Sin embargo, la hormona tiroidea también reduce la resistencia vascular sistémica, mejora la función sistólica y diastólica y tiene efectos beneficiosos sobre la función de plaquetas y lípidos. Datos experimentales recientes indican que el tratamiento con hormona tiroidea es valioso para algunos pacientes con enfermedad cardiaca.

Los valores de hormona tiroidea durante el infarto agudo de miocardio son importantes para el pronóstico. Una comparación Je los niveles de hormona tiroidea a la llegada a la UCI de 331 pacientes consecutivos (68 \pm 12 años de edad) con infarto agudo de miocardio en comparación con un control sano demuestra una regulación negativa significativa del sistema de hormona tiroidea. En un análisis multivariable considerando edad, sexo, hormonas tiroideas, CKB, infarto de miocardio previo, angina, insuficiencia cardiaca y diabetes, se identificó una concentración en suero de T_{3} inversa (rT_{3}) por encima del valor medio de 0,41 nmol/l como un factor de riesgo independiente después del infarto de miocardio. La proporción de probabilidad de muerte en el primer mes fue de 10,8 (95% de confianza en el intervalo 2,3-51,7 p 0,003) y en un año fue de 3,0 (1,2-7,3 p 0,02).

La Figura 1 muestra el porcentaje de supervivencia frente al tiempo. Por lo tanto, las concentraciones en suero aumentadas de rT_{3} en pacientes con infarto agudo de miocardio es un factor de riesgo independiente nuevo, no identificado previamente, de muerte dentro del primer año tras el suceso.

Ejemplo 2 Detalles Experimentales Anestesia

Todos los animales ayunaron durante una noche y se indujo la anestesia mediante tiopental sódico por vía intravenosa (pentotal sódico 15-25 mg/kg). Después de la intubación y de la ventilación con un ventilador (North American Dräger, Anesthesia and Ventilator, Modelo AVE-K, Nº de Serie 5033), se mantuvo la anestesia con isoflurano al 2% (Isoflurane Vaporizer, R-Vapor, R-24045) y oxígeno. Se controló continuamente el ECG (Hewlett Packard Modelo Nº 78346A) y la saturación de oxígeno. De manera pre-operatoria, se administró a todos los animales maleato de acepromazina, 0,25-0,5 mg, I.M., y se administró una solución de Ringer lactato por vía intravenosa (250 ml-350 ml/hora) durante el procedimiento.

Métodos

Se introdujo una vaina de inserción de catéter de 8,5 Fr (2,8 mm) de diámetro en la arteria femoral derecha y se conectó el brazo lateral a un transductor de fluido para la medición continua de la presión sanguínea arterial sistémica. Se hizo avanzar un Bipolar Multipurpose A-2 Electrode Catheter de 7 Fr (2,3 mm), 1 Lumelec^{TM} (Nº de lote 30395908, Nº de catálogo 528-724, Cordis, EEUU) con filtro con un transductor de presión con 2 agujeros laterales, 2 electrodos con un extremo abierto, 125 cm de longitud, y 0,038 pulgadas (0,97 mm) de diámetro, a través de la vaina de inserción de catéter y se colocó en el ventrículo izquierdo. Se obtuvo la medición continua de la presión sistémica del ventrículo izquierdo (LVP). Se obtuvieron señales análogas de los transductores de presión usando un amplificador (PM-1000, CWE Inc., Ardmore, PA).

Se introdujo una vaina de inserción de catéter de 8,5 Fr (2,8 mm) en la vena femoral derecha y se colocó un catéter de alto flujo MP A2 Multipurpose de 7 Fr (2,3 mm) (Nº de catálogo 527-742, Cordis, EEUU) con extremo abierto y agujeros laterales en el ventrículo derecho (RV) para inyecciones de T_{3a}. Se introdujo otra vaina de inserción de catéter de 7Fr (2,3 mm) en la arteria femoral izquierda y se colocó un catéter espiral (Nº de catálogo 527-654S, 110 cm, con un ángulo de 155º) de 6 Fr (2 mm) en la aorta descendente para recoger muestras de sangre aórtica después de inyecciones de T_{3a} en el ventrículo derecho. Se controló continuamente el ECG (Hewlett-Packard, Nº de Modelo 78346A, Nº de Serie 2320A00522). Se introdujo un dispositivo para controlar la temperatura (T. SIN, Japón, diseñado para termistores YSI de la serie 400), conectado con un sistema de toma de datos, en los oídos externos de todos los animales para medir continuamente la temperatura corporal.

Fibrilación

Se conectaron los dos extremos distales del Bipolar Multipurpose A-2 Electrode Catheter de 7 Fr (2,3 mm) a un transformador. El sistema eléctrico puede suministrar 15 V, 20 mA de corriente AC (alterna) a través del sistema de catéter marcapasos. Se detuvo la anestesia. Se obtuvo una muestra de sangre venosa del ventrículo derecho. Se recuperaron los reflejos palpebrales a los varios minutos.

Se comprobaron los reflejos palpebrales mediante el sistema del método del dedo y, cuando se obtuvo un parpadeo frecuente de los párpados, se realizaron los procedimientos para la fibrilación ventricular (VF o V-Fib). Se hicieron pasar 15 V, 20 mA de AC directamente a través del miocardio del ventrículo izquierdo mediante el catéter marcapasos para fibrilar el corazón. El periodo de tiempo para la inducción eléctrica de la fibrilación ventricular fue de una media de 4-5 segundos. Ocasionalmente, se necesitaron periodos más largos de entre 5 y 15 segundos de inducción eléctrica para inducir la fibrilación ventricular.

Reanimación Cardiaca usando Thumper (Reanimación Cardiopulmonar Mecánica)

Después de 4,5 minutos de fibrilación ventricular sin tratamiento y sin soporte respiratorio, se inició la reanimación cardiopulmonar (CPR) usando un equipo Michigan Instruments THUMPER® (Michigan Instruments, Grand Rapids, MI, Nº de Modelo 1004, Nº de serie 2252) para generar un máximo de presión arterial durante la compresión de al menos 60 mmHg, simulando un pulso palpable generado mediante compresión manual del tórax, realizada de acuerdo con las instrucciones de la Asociación Americana del Corazón.

La fuerza de compresión necesaria para conseguir este estado de referencia se registró y no se alteró durante el suministro posterior de compresiones en el tórax. La ventilación estaba limitada por presión (30 cm H_{2}O), proporcionando oxígeno al 100%. El índice de compresión se fijó a 60 compresiones/min con una proporción de compresión/relajación de 1:1 y una proporción de compresión/ventilación de 5:1.

La toma de datos (10 minutos más por archivo) comenzó 4 minutos después de la fibrilación ventricular para cubrir el procedimiento completo después de la fibrilación y la recuperación. Se administraron dos infusiones de bicarbonato sódico (0,5 mEq/kg) con un intervalo de 2 minutos durante la CPR con THUMPER para corregir el déficit basal.

La fase 1a se dedicó al desarrollo de la metodología básica en los experimentos iniciales, empleándose compresión manual del tórax (CPR) y un desfibrilador interno. La inducción de fibrilación y desfibrilación ventricular con los electrodos internos fue problemática debido a la diferencia de tamaño: electrodos diseñados para seres humanos usándose en un animal de menor tamaño. En experimentos posteriores, el sistema interno se sustituyó por un catéter marcapasos del LV conectado a corriente AC mediante un transformador reductor (para inducir fibrilación ventricular) y un nuevo desfibrilador externo "no invasivo". La compresión manual del tórax se sustituyó por un sistema de CPR con THUMPER.

En los experimentos, se administró T_{3a} 30 segundos antes de la desfibrilación (D-Fib o De-Fib). Preferiblemente, la inyección de T_{3}a se administró de 60 a 90 segundos después de la desfibrilación.

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En la Fase 1b, se consiguió restaurar la circulación espontánea en 7 de 8 animales con los cambios en el protocolo. Un animal (T_{3} Nº 15) sufrió una disección aórtica durante el procedimiento y, por lo tanto, se excluyó del estudio. Dos animales presentaron una recuperación de la circulación espontánea sin T_{3a}.

Se necesitan estudios experimentales crónicos de laboratorio y clínicos en seres humanos adicionales para determinar la eficacia de usar este fármaco y las nuevas técnicas de CPR.

Soporte Vital Cardiaco Avanzado usando T_{3}

A los seis minutos después de inducir V-fib, se administraron descargas desfibriladoras de acuerdo con el algoritmo de Soporte Vital Cardiaco Avanzado, comenzando con un nivel de energía inicial de 200 julios, después aumentándolo a 300 julios y, si aún no tenía éxito, hasta 360 julios. No se usó lidocaína, atropina ni epinefrina para la reanimación cardiaca.

Se usó un sistema Physio-Control Life Pack 9A (Physio-Control Inc., Medtronic, EEUU) para desfibrilar a los animales. Se conectó un cable Patient ECG (3 cables, AHA, Physio-Control PN 9-10418-02) a todos los animales para la desfibrilación síncrona o asíncrona simultánea. Se usaron cables de desfibrilación QUICK-COMBO (Physio-Control PN 806717) con electrodos de terapia EDGE SYSTEMTM conectados a todos los animales. Se colocó un electrodo (+, cable conector negro) en posición lateral izquierda al esternón del animal, con el centro del electrodo en la línea media axilar izquierda hacia el vértice del miocardio. Se colocó otro electrodo (-, cable conector rojo) en orientación apical en la porción lateral derecha del tórax del animal, en la línea media axilar derecha.

Se administraron 200 julios de contador de descarga para desfibrilar a los animales. En un animal, se necesitó un contador de descarga adicional. Se continúo con la CPR con THUMPER hasta que se recuperaba la circulación espontánea. De 60 a 90 segundos después de la desfibrilación, se inyectó una dosis embolada de T_{3a} en el ventrículo derecho. El indicador de la presión aórtica (AoP) se fijó momentáneamente a cero para indicar el tiempo de la inyección de T_{3a}. Treinta segundos después, se recogió una muestra de sangre ventricular izquierda para determinar el nivel sanguíneo de T_{3a}. Poco después de las inyecciones de T_{3a} (de 30 a 90 segundos), se consiguió restaurar la circulación espontánea en la mayoría de los casos.

La restauración de la circulación espontánea se definió como un ritmo pulsátil con una presión sistólica arterial de al menos 60 mmHg. No se realizaron intervenciones ni se administraron fármacos adicionales. Se mantuvo la infusión de fluido de Ringer lactato a aproximadamente 10 ml/kg/h. Se volvió a conectar al animal al ventilador y, después de varios minutos, se reinició la anestesia con isoflurano a una tasa del 0,5%. Se mantuvo cuidadosamente la anestesia para evitar la descompensación cardiaca. Se observó al animal durante otros 30 minutos para cualquier cambio adicional en las presiones arterial y ventricular izquierda. Se tomó otra muestra de sangre venosa después de 15 minutos de fibrilación ventricular. En las Figuras 2-6 se muestran resultados representativos.

Ejemplo 3 Preparación de triyodotironina-albúmina del suero humano (T_{3a})

Se combinaron 100 \mug de T_{3}/ml (1,5 x 10^{-4} M) con una concentración fisiológica de albúmina del suero humano al 5% (HSA, 50 mg/ml, 762 \muM) a pH 7,2. La afinidad de unión entre la T_{3} y la albúmina es baja, el complejo hormona-albúmina se disocia rápidamente. Los ejemplos proporcionados en este documento demuestran que el complejo de alta capacidad-baja afinidad de unión es ideal por su capacidad de unir concentraciones en suero de T_{3} más de 1000 veces mayores que las normales, mantener la T_{3} en solución a pH neutro y hacer que T_{3} esté rápidamente disponible para los tejidos después de la administración por vía intravenosa.

En el cuerpo, la albúmina (66 kD) une aproximadamente el 15-20% de la T_{3} en suero total. La T_{3} restante se une por otras proteínas sanguíneas incluyendo globulina de unión a tiroxina (TBG) y transtiretina, de manera que el 99% de la hormona en suero está unida a proteínas.

Las características de unión de T_{3} a albúmina en solución salina tamponada con fosfato a 37ºC proporcionan constantes de asociación de 1,0 x 10^{5} M^{-1} en el sitio 1 y de 6,9 x 10^{3} M^{-1} en los sitios 2-6. Gray (1979), Hormones in Blood, eds.; 3^{a} ed. Vol. 1 Londres: Academic, pág. 576. Como se muestra en este documento, las preparaciones de T_{3a} contienen aproximadamente el 90% de T_{3} unida a albúmina que, cuando se administra, se disocia rápidamente. Preparación de la composición de T_{3a}: combinación de albúmina del suero humano al 5% con una solución de T_{3}/hidróxido sódico (10 mg T_{3}/ml NaOH 0,05 N) produce una preparación de T_{3a} que tiene un pH neutro de 7,2 y es soluble al 100% en solución.

Ejemplo 4 Estudios de Reanimación Cardiaca con T_{3} y Biodisponibilidad de la Composición de T_{3a}

La preparación de T_{3} usada en estos estudios era una formulación de T_{3a} preparada como sigue. (1) T_{3} se disolvió en una concentración fisiológica de albúmina del suero humano (HSA) (50 mg/ml) a una concentración de 0,10 mg/ml a pH 7.4. Las muestras se almacenaron a temperatura ambiente, (2) se inyectó T_{3a} como una dosis embolada de 4 \mug/kg de peso corporal aproximadamente un minuto después de iniciarse la desfibrilación y (3) se obtuvo un valor de T_{3} en suero basal para cada animal antes de inducir la fibrilación ventricular. Se obtuvieron muestras de sangre posteriores de la circulación arterial a los 0,5 a 1,5 minutos después de la inyección embolada, y también a los 15 a 20 minutos y a los 30 minutos, respectivamente. En la Figura 7 se muestran los cambios en la concentración en suero de T_{3}, los niveles séricos totales de T_{3} (ng/dl) en función del tiempo después de la inyección.

El nivel sérico de referencia de T_{3} de 87 \pm 6 ng/dl está dentro del intervalo fisiológico para caninos, y se incrementó 100 veces un minuto después de la inyección embolada de T_{3} y se mantuvo elevado durante el periodo de 30 minutos de reanimación cardiaca.

Ejemplo 5 Inmunoensayo para T_{3a} y la determinación de parámetros hemodinámicos durante una intervención de 2 fases con fármaco de T_{3a} en procedimientos de fibrilación y desfibrilación

Antes de enviar la muestra de sangre para inmunoensayo, todas las muestras de sangre de cada experimento se recogieron en tubos separadores de suero de tapa roja. Los tubos se centrifugaron a 2500 rpm en una centrífuga de sobremesa durante 10 minutos a 4ºC para separar las células del suero. Después, las muestras de sangre se almacenaron y se congelaron a -4ºC.

La sección de resultados se dividió en las Fases Ia (n = 9) y Ib (n = 8). Los datos hemodinámicos no estaban disponibles en todos los casos de la Fase Ia ya que no se consiguió recuperación espontánea ni inducida salvo en 3 animales. El uso de T_{3a} se limitó a sólo tres perros en esta fase, aunque se usó epinefrina en 5 de ellos. Esta fase estaba dedicada al desarrollo de los parámetros de la Fase Ib.

En la Fase Ib, 2 animales mostraron recuperación espontánea. En un animal, las presiones hemodinámicas no eran estables y necesitó una inyección de epinefrina (0,1 mg/kg) para aumentar las presiones hemodinámicas reducidas. El otro animal presentó una recuperación espontánea después de 4,5 minutos de fibrilación ventricular. Las presiones eran comparativamente estables en este animal, aunque menores que los datos hemodinámicos pre-VF. En el mismo animal, se indujo una fibrilación ventricular de 6 minutos y se aplicó CPR durante dos minutos. Se desfibriló al animal y se le administró una inyección de T_{3a} después de 60 segundos. Se mantuvo al animal con CPR con Thumper durante 1-2 minutos adicionales y se reanimó completamente. Se observó al animal durante otros 30 minutos y las presiones eran completamente estables. Las presiones hemodinámicas eran mayores que los datos hemodinámicos pre-VF.

Se usó HVS-02 Fibrillator and Defibrillator en estos ensayos. Las instrucciones de funcionamiento del HVS-02 Fibrillator and Defibrillator pueden encontrarse en el Manual del HVS-02 Fibrillator and Defibrillator. Las Tablas 1 y 2 mostraban los parámetros hemodinámicos durante la intervención de dos fases con T_{3a} en procedimientos de fibrilación y desfibrilación.

TABLA 1

1

2

3

* Se produjo disección aórtica durante la manipulación a ciegas del catéter marcapasos del LV.

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En la Fase Ib, se consiguió restaurar la circulación espontánea en 7 de los 8 animales ensayados. En la Tabla 1, un animal (T_{3} Nº 15) sufrió una disección aórtica y, por lo tanto, se excluyó del procedimiento, y dos animales presentaron una recuperación de la circulación espontánea sin T_{3a}. Además, en uno de estos ocho animales, la circulación era inestable y requirió epinefrina y compresión externa para mantener la circulación. Además, en un animal, el periodo sin soporte antes de aplicar la CPR se prolongó hasta 6 minutos y este animal (T_{3} Nº 18) presentó una recuperación completa de la circulación con T_{3a}. En esta fase, es decir, la Fase Ib, T_{3a} fue claramente eficaz en la restauración de la circulación cardiopulmonar espontánea en el estudio preliminar.

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(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA 2

4

5

\bullet

\vtcortauna \text{*} Thumper no funcionó en este perro de gran tamaño y se le aplicó CPR mediante compresión manual del tórax.

\bullet

\vtcortauna \text{**} No fue posible la desfibrilación y parece que el desfibrilador no funcionaba correctamente.

\bullet

\vtcortauna \text{***} Los procedimientos de fibrilación y desfibrilación se ensayaron 3 veces en este animal para ensayar, por primera vez, el desfibrilador externo. Después de una espera de 2 minutos, se administró al animal 1 mg de epinefrina más bicarbonato sódico y CPR para desfibrilar al animal. Los mismos experimentos se realizaron con un intervalo de 3 minutos y, en este tiempo, también se usó T_{3} después de epinefrina y el perro se desfibriló con desarrollo de una presión normal. Se realizaron además los mismos experimentos con un intervalo de 4 minutos usando T_{3}. Los resultados fueron inmediatos y el animal desarrolló presión muy rápidamente. El perro se recuperó completamente

\bullet

\vtcortauna \text{****}\dagger Los electrodos para el procedimiento de desfibrilación interna se movieron parcialmente, especialmente el situado en la vena cava superior. No se consiguió inmediatamente la desfibrilación. Se administraron inyecciones de epinefrina y lidocaína. Finalmente, el animal se desfibriló (50 julios), aunque no se produjo ningún desarrollo de presión generada.

\bullet

\vtcortauna \ddagger El animal se fibriló y no se consiguió la desfibrilación mediante 920 voltios, 14 ms, resistencia de 70 ohms, y 49,2 julios de descarga. No se observó recuperación de la presión sanguínea. El animal se desfibriló 3-4 veces con una inyección de 1 ml de epinefrina para conseguir la desfibrilación. Sin embargo, no hubo recuperación espontánea. Se aplicó un masaje cardiaco comprimiendo el corazón directamente mediante apertura del tórax. El estudio con este animal terminó aquí.

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\vtcortauna \text{*****} La fibrilación duró 3 minutos. Después, se produjo la desfibrilación; pero no tenía pulso. El animal volvió a fibrilarse de nuevo y se desfibriló. La presión era baja y se aplicó el desfibrilador externo. No se recuperó la función completa. Se usó pentobarbital como anestesia para este estudio.

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\vtcortauna \text{******}\xi El animal se desfibriló varias veces, una a los 2 minutos. El animal se recuperó completamente sin ningún fármaco. A los 3 minutos se requirió epinefrina, aunque necesitó 3 descargas. El animal se fibriló pero, después de otros 3 minutos, no pudo recuperarse.

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\vtcortauna \psi Los electrodos internos se movieron varias veces durante el procedimiento de fibrilación debido a un cambio de posición del perro. El procedimiento de desfibrilación no tuvo éxito.

La Fase Ia estaba dedicada al desarrollo de la metodología básica. Se consiguió restaurar la circulación en 3 animales de 7 usando compresión manual del tórax (CPR). En 3 animales, los datos hemodinámicos después de la desfibrilación fueron menores que los datos pre-fibrilación. Se descubrió que la inducción de fibrilación ventricular (VF) con los electrodos internos era problemática y la desfibrilación era problemática debido a la diferencia de tamaño, es decir, electrodos diseñados para seres humanos usándose en un animal de menor tamaño. En los experimentos se usó un desfibrilador interno para los experimentos preliminares y se administró T_{3a} justo antes de la desfibrilación (30 segundos). Además, se usó CPR con Thumper en los dos últimos perros en lugar de CPR manual. La CPR con Thumper funcionó bien y se usó para los siguientes experimentos de T_{3a} de la Fase Ib. Se mantuvo la compresión manual del tórax durante otros 5 minutos después de la desfibrilación e inyecciones de T_{3a} o de epinefrina. Se usó una inyección embolada de epinefrina (100 \mug/kg) en 5 perros aleatorios.

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Ejemplo 6 Estudios para determinar la estabilidad de T_{3a} en comparación con T_{3} en solitario

La preparación de triyodo-L-tironina usada en estos estudios se preparó en la formulación de T_{3a} como sigue. T_{3} se disolvió en una concentración fisiológica de albúmina del suero humano (HSA) (50 mg/ml), a una concentración de 0,10 mg/ml a pH 7,4. Las muestras se almacenaron a temperatura ambiente durante periodos específicos de tiempo, como se indica en la Figura 8.

T_{3} se disolvió en NaOH 0,05 N/solución salina y se ajustó el pH a pH 7 o a pH 10 para proporcionar otras dos preparaciones de T_{3} a una concentración de 0,10 mg/ml. Estas dos preparaciones se almacenaron en condiciones similares a T_{3a} y se muestran en la Figura 8 como T_{3}-pH 10 y T_{3}-pH 7. Se determinó la concentración de T_{3} total en todas las preparaciones madre de T_{3} cuando se prepararon inicialmente y a los tiempos indicados, usando el radioinmunoensayo descrito en este documento.

Los resultados que se presentan en la Figura 8 muestran lo siguiente. La concentración de T_{3} en la formulación de T_{3a} se mantuvo sin cambios con respecto a la preparación original durante más de 13 meses de análisis. La concentración de T_{3} en solución salina a pH 10 disminuyó hasta el 71 \pm 7% de la preparación original después de 13 meses de almacenamiento a temperatura ambiente. La concentración de T_{3} en solución salina a pH 7 disminuyó hasta el 14 \pm 5% de la preparación original cuando se midió después de 2 meses de almacenamiento a temperatura ambiente. La T_{3a} almacenada a 37ºC durante 13 meses conservó el 87 \pm 5% de la concentración de T_{3} inicial.

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Ejemplo 7 Estudios para Determinar la Farmacocinética de T_{3a} in vivo La vida media y la estabilidad de T_{3} en suero después de una sola dosis embolada

La Figura 9 muestra los niveles séricos de T_{3} en el modelo de reanimación cardiaca en perro, en el que se administró a los perros 4 \mug de T_{3}/kg de peso corporal inmediatamente después de la fibrilación y del infarto. Se observó el efecto deseado, es decir, la dosificación de T_{3} en la reanimación como requerimiento para un efecto inmediato de T_{3} (en 30 minutos) en el corazón, seguido de degradación rápida de T_{3} en suero.

Los resultados demostraron que los niveles de T_{3} séricos aumentaron a más de 9000 ng/dl en 2 minutos después de la administración del fármaco. Estos niveles de T_{3} séricos se mantuvieron a este alto nivel durante 30 minutos.

Estudios farmacocinéticos en un modelo de ratón

Para estudiar adicionalmente la degradación o la disminución de T_{3} en suero después de una dosis embolada del fármaco, se realizaron los siguientes estudios. Se inyectaron por vía intramuscular dos dosis de T_{3} en ratas: 5 \mug/kg y 100 \mug/kg de peso corporal. Se recogieron muestras de sangre durante un periodo de 72 horas y se midió la T_{3} total en suero mediante radioinmunoensayo como se describe en este documento. Los resultados se muestran en las Figuras 10 y 11.

Las Figuras 10 y 11 muestran lo siguiente. El rápido aumento en los niveles séricos de T_{3} fue proporcional a la dosis embolada administrada. Se obtuvieron valores máximos 30 minutos después de la administración del fármaco. 2 horas después de la inyección del fármaco, los niveles séricos de T_{3} disminuyeron significativamente hasta el 90% y el 64% de los valores máximos, para las dosis baja y alta respectivamente. A las 24 horas después de la inyección del fármaco, los niveles séricos de T_{3} habían disminuido hasta el 10% de los valores máximos, y estaban dentro del intervalo fisiológico normal. La vida media de T_{3} en suero después de la inyección de 5 \mug/kg o de 100 \mug de T_{3}/kg peso corporal era idéntica.

La Figura 12 muestra la representación logarítmica de T_{3} en suero durante un periodo de tiempo calculado de vida media de T_{3} de siete (7) horas.

Ejemplo 8 Estudios para determinar la captación de T_{3} por el miocito cardiaco

Para entender el beneficio biológico potencial de T_{3} en el corazón después de la reanimación cardiopulmonar, es importante documentar la captación del fármaco por el miocito cardiaco en el intervalo de tiempo usado para el procedimiento de reanimación.

Se diseñaron estudios para medir el índice de captación de T_{3} por el corazón usando miocitos cardiacos cultivados purificados. La evolución temporal de la captación de T_{3} por el miocito cardiaco se siguió mediante el tratamiento de las células con T_{3} radiomarcada (^{125}I-T_{3}).

Los resultados demostraron que T_{3} se detecta en el núcleo de la célula a los 5 minutos de exposición a T_{3} a una dosis de 10^{-8} M (niveles séricos de T_{3} equivalentes a 650 ng/dl), y que la captación de T_{3} alcanzó la saturación aproximadamente a las 2 horas. Estos resultados se ilustran en la Figura 13.

Claims (16)

1. Una composición que comprende entre 0,01 mg/ml y 1,0 mg/ml de T_{3}, albúmina del suero y agua, en la que la estabilidad de T_{3} esta aumentada.

2. Una composición de acuerdo con la reivindicación 1, en la que T_{3} tiene una vida media de al menos cinco días a un intervalo c!e temperatura de aproximadamente -30ºC a 70ºC.

3. Una composición de acuerdo con la reivindicación 1, en la que T_{3} tiene una vida media de:

a) al menos un mes;

b) al menos tres meses;

c) al menos seis meses; y/o

d) al menos doce meses.

4. Una composición de acuerdo con una cualquiera de lees reivindicaciones precedentes, en la que la proporción de T_{3} y de albúmina del suero es de:

a) entre aproximadamente 0,001 y 0,1; y/o

b) entre 0,002 y 0,05.

5. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que T_{3} tiene una concentración de:

a) entre 0,02 mg/ml y 0,08 mg/ml;

b) entre 0,1 mg/ml y 0,5 mg/ml; o

c) 0,1 mg/ml.

6. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el intervalo de pH es de:

a) 2,5 a 11,5;

b) 4,0 a 10;

c) 6,0 a 8,0; o

d) 6,5 a 7,5.

7. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende adicionalmente un excipiente farmacéuticamente aceptable.

8. Una composición de acuerdo con la reivindicación 7, adecuada para su uso en:

a) la administración por vía intravenosa;

b) la administración por vía cardiaca directa;

c) la administración por vía parenteral; o

d) la administración a través de la mucosa.

9. Una composición de acuerdo con la reivindicación 8, en la que la administración por vía mucosa se selecciona de entre el grupo constituido por vía intranasal, por inhalación y bucal.

10. Una composición de acuerdo con la reivindicación 9, en la que T_{3} tiene una vida media de al menos dos semanas.

11. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que la albúmina del suero es albúmina del suero humano o albúmina del suero bovino.

12. Uso de una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, para la fabricación de un medicamento para tratar a un paciente con infarto o con paro cardiaco eléctrico, para restaurar una función cardiaca eficaz.

13. Uso de acuerdo con la reivindicación 12 en el que:

a) el infarto está causado por disociación electromecánica; o

b) el paro cardiaco eléctrico está causado por una enfermedad.

14. Uso de acuerdo con la reivindicación 12 ó 13, en el que la composición se administra:

a) por inyección directa en una cavidad del corazón del paciente;

b) por inyección por vía parenteral directa en una vía venosa central del paciente;

c) por inyección por vía parenteral o por inyección por vía parenteral intravenosa;

d) directamente en el sistema pulmonar del paciente;

e) directamente en el sistema pulmonar mediante inyección endotraqueal directa;

f) directamente en el sistema pulmonar por infusión a través de una vía respiratoria del paciente;

g) mediante goteo intravenoso; o

h) mediante administración a través de la mucosa.

15. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 12 a 14, en el que la composición se administra en al menos una inyección rápida embolada.

16. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 12 a 15, en el que la composición se administra a:

a) entre 0,1 y 20 \mug de T_{3} por kg de peso corporal;

b) entre 0,2 y 10 \mug de T_{3} por kg de peso corporal:

c) entre 0,3 y 5 \mug de T_{3} por kg de peso corporal; y/o

d) 100 \mug de T_{3} por kg de peso corporal.