ES2269775T3 - Peptidos eficaces en el tratamiento de tumores y otras afeccdiones que requieren la eliminacion o destruccion de celulas. - Google Patents

Abstract

Un péptido NTP consiste en una secuencia de amino ácido seleccionado de un grupo que consiste en: SEQ ID N''- 9 (Met-Met-Val-Cys-Trp-Asn-Arg-Phe-Gly-Lys-Trp-Val-Tyr-Phe-Ile); SEQ ID N° 10 (Ser-Ala-Ile-Phe-Asn-Phe-Gly-Pro-Arg-Tyr-Leu-Tyr-His-GIy-Val); SEQ ID N2 11 (Pro-Phe-Tyr-Phe-Leu-Ile-Leu-Val-Arg-Ile-ile-Ser-Phe-Leu-IIe); SEQ ID N° 12 (GIy-Asp-Met-Glu-Asp-Val-Leu-Leu-Asn-Cys-Thr-Leu-Leu-Lys-Arg); SEQ ID N° 13 (Ser-Ser-Arg-Phe-Arg-Phe-Trp-GIy-Ala-Leu-Val-Cys-Ser-Met-Asp); SEQ ID N° 14 (Ser-Cys-Arg-Phe-Ser-Arg-Val-Ala-Val-Thr-Tyr-Arg-Phe-IIe-Thr) y SEQ ID N° 15 (Leu-Leu-Asn-IIe-Pro-Ser-Pro-Ala-Val-Trp-Met-Ala-Arg-Asn-Thr).

Description

Péptidos eficaces en el tratamiento de tumores y otras afecciones que requieren la eliminación o destrucción de células.

Antecedentes de la invención 1. Campo de la invención

La presente invención se dirige al uso de péptidos-NTP que consisten en la SEQ 10 Nº 9-15 para tratar afecciones que requieren la eliminación o destrucción de elementos celulares, tales como tumores benignos y malignos en seres humanos.

2. Descripción de la técnica relacionada

La esencia de muchos tratamientos y procedimientos médicos implican la eliminación o destrucción del tejido perjudicial y no deseado. Ejemplos de dichos tratamientos importantes incluyen la eliminación quirúrgica del crecimiento canceroso, la destrucción de tumores metastáticos a través de quimioterapia, y la reducción de la hiperplasia glandular (por ejemplo la próstata). Otros ejemplos incluyen la eliminación de pelo facial no deseado, la eliminación de verrugas, y la eliminación del tejido graso no deseado.

Hay una necesidad obvia de disponer de un agente efectivo que pueda destruir y por lo tanto facilita la eliminación o inhibición del crecimiento adicional de células y tejidos perjudiciales o no deseados pero que tenga principalmente efectos locales toxicidad sistémica ausente o mínima.

Las proteínas de filamento neural y sus moléculas relacionadas son una clase de dichos agentes, según se describió en el documento 2003/0054990 de Estados Unidos titulado: Methods of Treating Tumors and Related Conditions Using Neural Thread Proteins. Ciertos fragmentos de proteínas de filamento neural y proteínas relacionadas se describen como útiles en el tratamiento de tumores y otras afecciones que requieren la eliminación o destrucción de las células en el documento 2003/0096350 de Estados Unidos, titulada: Peptides Effective In The Treatment Of Tumors And Other Conditions Requiring The Renoval Or Destruction Of Cells; el documento 2003/0093756 de Estados Unidos titulado; Peptides Effective In The Treatment Of Tumors And Other Conditions Requiring The Renoval Or Destruction Of Cells; y el documento 2003/0109437 de Estados Unidos, titulado: Peptides Effective In The Treatment Of Tumor And Other Conditions Requiring The Renoval Or Destruction Of Cells.

Como se describe en el presente documento son ciertos otros fragmentos de proteínas de filamenteo neural que también son útiles en el tratamiento de tumores y otras afecciones que requieren eliminación o destrucción de célu-
las.

El cáncer es una anormalidad en los mecanismos reguladores internos de las células que resultan en el crecimiento y reproducción incontrolados de la célula. Las células normales hacen los tejidos, y cuando esas células pierden su capacidad para comportarse como una unidad específica, controlada y coordinada (de diferenciación), el defecto conduce a un desorden entre la población de la célula. Cuando esto ocurre, se forma un tumor.

Los sobrecrecimientos benignos de tejidos son anormalidades en las cuales es deseable para eliminar células de un organismo. Los tumores benignos son proliferaciones celulares no metastáticos por todo el cuerpo pero tienen, sin embargo, síntomas que causan la enfermedad. Dichos tumores pueden ser letales si se localizan en áreas inaccesibles en órganos tales como el cerebro. Hay tumores benignos de órganos que incluyen pulmón, cerebro, piel, pituitaria, tiroides, medula y corteza suprarrenal, ovario, útero, testículos, tejido conectivo, músculo, intestinos, oreja, nariz, garganta, amígdala, boca, hígado, vesícula biliar, páncreas, próstata, corazón, y otros órganos.

A menudo la cirugía es la primera etapa en el tratamiento del cáncer. El objetivo de la cirugía varía. Algunas veces se usa para eliminar la evidencia del tumor tanto como sea posible, o al menos "debulk" (eliminar la mayor

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de tumor para que haya una menor necesidad de ser tratado por otros medios). Dependiendo del tipo de cáncer y la ubicación, la cirugía también puede proporcionar algún alivio sintomático al paciente. Por ejemplo, si un cirujano puede eliminar una gran parte de un tumor cerebral extendido, la presión disminuiría en el interior del cráneo, llevando a cabo una mejora en los síntomas del paciente.

No todos los tumores son susceptibles de cirugía. Algunos se localizan en partes del cuerpo que hace que sea imposible su eliminación completa. Ejemplos de estos sería los tumores en el tronco del encéfalo (una parte del cerebro que controla la respiración) o un mayor crecimiento alrededor de los vasos sanguíneos. En estos casos, el papel de la cirugía se limita debido al alto riesgo asociado con la eliminación del tumor.

En algunos casos, no se usa la cirugía para eliminar el tumor porque simplemente no es necesario. Un ejemplo es el linfoma de Hodgkin, un cáncer de los nódulos linfáticos que responden muy bien a las combinaciones de quimioterapia y terapia de radiación. En el linfoma de Hodgkin, la cirugía es raramente necesaria para lograr la cura, pero casi siempre se usa para establecer un diagnostico.

La quimioterapia es otra forma común de tratamiento del cáncer. Esencialmente, implica el uso de medicamentos (normalmente administrados por la boca o por inyección) que específicamente ataca rápidamente a la división de las células (tal como se encuentran en el tumor) por todo el cuerpo. Esto hace útil la quimioterapia en el tratamiento de los cánceres que ya tienen metástasis, así como los tumores que tienen una alta posibilidad de propagación a través de la sangre y los sistemas linfáticos pero no son evidentes más allá del tumor primario. La quimioterapia también se puede usar para aumentar la respuesta para tumores localizados para cirugía y terapia de radiación. Este es el caso, por ejemplo, para algunos cánceres de la cabeza y cuello.

Desafortunadamente, otras células en el cuerpo humano que tienen normalmente una rápida división (tal como el recubrimiento del estomago y cabello) también están afectadas por quimioterapia. Por esta razón, muchos agentes de quimioterapia provocan efectos secundarios indeseables tales como nauseas, vómitos, anemia, pérdida de pelo u otros síntomas. Estos efectos secundarios son temporales, y existen medicamentos que pueden ayudar a aliviar muchos de estos efectos secundarios. Como nuestro conocimiento continua creciendo, los investigadores han ideado nuevos agentes quimioterapéuticos que no sólo son mejores para la muerte de las células del cáncer, sino que también tienen pocos efectos secundarios para el paciente.

La quimioterapia se administra a pacientes en una variedad de formas. Algunas incluyen píldoras y otras que se administran mediante una inyección intravenosa u otra. Para quimioterapia inyectable, un paciente va a la consulta del médico o al hospital para el tratamiento. Otros agentes quimioterapéuticos requieren una solución intravenosa continua en la corriente sanguínea, 24 horas al día. Para estos tipos de quimioterapia, un procedimiento quirúrgico leve se lleva a cabo para implantar una pequeña bomba usada por el paciente. Entonces la bomba administra lentamente la medicación. En muchos casos, un implante permanente se coloca en la vena del paciente para eliminar el requisito de repetidos pinchazos con aguja. La terapia de radiación es otra terapia comúnmente usada como arma en la lucha contra el cáncer. La radiación mata el cáncer dañando el ADN dentro de las células tumorales. La radiación se desarrolla por diferentes vías. La más común implica hacer incidir un haz de radiación al paciente de una manera altamente precisa, enfocando sobre el tumor. Para hacer esto, un paciente se tumba sobre una mesa y el haz se mueve alrededor de él/ella. El procedimiento dura minutos, pero puede hacerse diariamente durante varias semanas (dependiendo del tipo de tumor), para lograr una particular dosis prescrita total.

Otro procedimiento de radiación empleado algunas veces, llamado braquiterapia, implica tomar gránulos radiactivos (semillas) o alambres e implantarlos en el cuerpo en el área del tumor. Los implantes pueden ser temporales o permanentes. Para los implantes permanentes, la radiación en las semillas se desintegra durante un periodo de días o semanas de modo que el paciente no es radiactivo. Para implantes temporales, las dosis entera de radiación se desarrolla normalmente en pocos días, y el paciente debe quedarse en el hospital durante ese tiempo. Para ambos tipos de braquiterapia, la radiación se desarrolla generalmente en un área orientada a obtener un control local del cáncer (tan opuesto para tratar el cuerpo entero, como hacer quimioterapia).

Algunos pacientes muy bien escogidos pueden ser referidos para trasplantes de médula ósea. Este procedimiento normalmente se realiza o porque un paciente tiene un cáncer que es particularmente agresivo o porque tienen un cáncer que ha recaído después de ser tratado con la terapia convencional. El trasplante de médula ósea es un procedimiento complicado. Hay muchos tipos, y varían en su potencial para causar efectos secundarios y curar. Más trasplantes se realizan en centros especiales, y en muchos casos, su uso es considerado de investigación.

Un número de otras terapias existen, aunque muchos de ellos todavía son explorados en ensayos clínicos y aún no han llegado a ser de cuidado estándar. Los ejemplos incluyen el uso de inmunoterapia, anticuerpos monoclonales, factores anti-angiogénesis y terapia de gen.

Inmunoterapia: Hay varias técnicas diseñadas para ayudar al sistema inmune propio del paciente en la lucha contra el cáncer, bastante separado de la radiación o quimioterapia. A menudo, para lograr el objetivo de los investigadores se inyecta al paciente con una vacuna derivada especialmente.

Anticuerpos monoclonales: Estos son anticuerpos diseñados para atacar a las células cancerosas (y no a las células normales) para tomar ventaja de las diferencias entre las células cancerosas y no cancerosas en sus antígenos y/o otras características. Los anticuerpos se pueden administrar al paciente sólo o conjugado a varios compuestos citotóxicos o en forma radioactiva, tal que el anticuerpo que origina preferentemente las células cancerosas, de ese modo desarrolle el agente tóxico o radioactividad para las células deseadas.

Factores anti-angiogénesis: Tan rápidamente como las células de cáncer se dividen y los tumores crecen, hace que pronto los suministros de sangre sean pequeños. Para compensar esto, algunos tumores secretan una sustancia creada para ayudar a inducir el crecimiento de los vasos sanguíneos en sus proximidades, así proporcionan las células de cáncer con una fuente vascular de nutrientes. Las terapias experimentales se han diseñado para frenar el crecimiento de los vasos sanguíneos a tumores.

Terapia de gen: El cáncer es el producto de unas series de mutaciones que últimamente se dirige a la producción de una célula de cáncer y su excesiva proliferación. Los cánceres se pueden tratar mediante la introducción de genes a las células de cáncer que actúa o para comprobar o parar la proliferación del cáncer, apagar los mecanismos de células programadas de células para destruir la célula, aumentar el reconocimiento inmune de la célula, o expresar un pro-fármaco que convierte a un metabolito tóxico o una citoquina que inhibe el crecimiento del tumor.

También se pueden tratar los tumores benignos y malformaciones mediante una variedad de procedimientos que incluyen cirugía, radioterapia, terapia de fármaco, ablación térmica o eléctrica, crioterapia, y otros. Aunque los tumores benignos no se metastatizan, pueden crecer grande y pueden repetirse. La extirpación quirúrgica de los tumores benignos tiene todas las dificultades y efectos secundarios de la cirugía en general y a menudo se puede realizarse repetidamente para algunos tumores benignos, tal como para adenomas de pituitaria, meningeomas del cerebro, hiperplasia prostática y otros.

Otras afecciones implican elementos celulares no deseados que existen donde se desea la eliminación celular. Por ejemplo, la enfermedad del corazón y apoplejías comúnmente se provocan por aterosclerosis, la cual es una lesión proliferativa de fibrograsa y modifican los músculos de la boca elementos que deforman la pared de los vasos sanguíneos, estrechan el lumen, estrangulan el riego sanguíneo, predisponen para coágulos de sangre focal, y últimamente se dirige a bloqueo e infarto. Hay varios tratamientos para la aterosclerosis tales como injertos de bypass; injertos artificiales; angioplastia con recanalización, legrado, radiación, láser u otra eliminación; la farmacoterapia inhibe la aterosclerosis a través de la reducción de los lípidos; terapias anti-coagulantes, y medidas generales de dieta, ejercicio, y estilo de vida. Es necesario un procedimiento para eliminar las lesiones ateroscleróticas sin el riesgo y efectos secundarios de los procedimientos quirúrgicos.

Otros ejemplos de elementos celulares no deseados donde se desea la eliminación celular selectiva incluye el crecimiento vírico inducido, tales como las verrugas. Otro ejemplo es la masa inflamatoria hipertrófica encontrada en afecciones inflamatorias, y cicatrices hipertróficas o queloides. Todavía otros ejemplos se encuentran en los contextos de cosmética tales como la eliminación del pelo no deseado, por ejemplo, pelo de la cara, o para la constricción de áreas de tejido no deseado para fines cosméticos, tales como en la dermis facial y los tejidos conectivos o en los tejidos de dermis y conectivos de las extremidades.

Otros ejemplos de los elementos celulares no deseados donde se desea la eliminación celular selectiva o la inhibición de la proliferación celular incluye estenosis y reestenosis de algunas arterias, válvulas o canales en el sistema circulatorio incluyendo, pero no se limita a, válvulas (por ejemplo, estenosis aórtica que implica estrechamiento del orificio de la válvula aórtica), arterias coronarias (por ejemplo, esclerosis ostial coronaria que implica el estrechamiento de las bocas de las arterias coronarias), arterias carótidas y arterias renales. Otros ejemplos incluyen la inhibición o eliminación de l crecimiento celular no deseado o la acumulación causando la oclusión parcial o completa de los instrumentos médicos tales como los stents ocupados o implantados dentro de los vasos sanguíneos para tratar la estenosis, constricción o aneurismas en esto o dentro del tracto urinario y en los canales biliares,

Otros, ejemplos más serán obvios para los expertos con habilidad habitual en la técnica. En todos o en la mayor parte de estos ejemplos hay una necesidad de tratamientos en los que se pueden eliminar o destruir los elementos celulares no deseados sin los riegos y efectos secundarios de las terapias convencionales o eliminar los elementos celulares no deseados con mayor precisión.

Las proteínas de filamentos neurales (NTP) son una familia de proteínas del cerebro caracterizadas recientemente. Un miembro de esta familia, AD7c-NTD, es un membrana \sim41 kD asociada a una fosfoproteína con funciones asociadas con brotes neuróticos (de la Monte y col., J. Clin. Invest., 100:3093-3104 (1997); de la Monte y col., Alz. Rep., 2:327-332 (1999); de la Monte SM and Wands JR, Journal of Alzheimer's Disease, 3:345-353 (2001)). Se ha identificado y descrito el gen que codifica la AD/c-NTP y predice la secuencia de la proteína para AD7c-NTD (de la Monte y col., J. Clin. Invest., 100:3093-3104 (1997)). Además de las especies \sim41 kD, se han identificado y asociado otras especies de proteínas de filamentos neurales (\sim26 kD,\sim21 kD, \sim17 kD, y \sim15 kD) con tumores neuroectodérmico, astrocitomas, y glioblastomas y con lesión debida a hipoxia, esquema, o infarto cerebral (Xu y col., Cancer Research, 53:3823-3829 (1993); de la Monte y col. J. Neuropathol. Exp. Neurol., 55(10):1038-50 (1996), de la Monte y col., J. Neurol. Sci., 138(1-2):26-53 (1996); de la Monte y col., J. Neurol. Sci., 135(2):118-52 (1996); de la Monte y col., J. Clin. invest., 100:3093-3104 (1997); y de la Monte y col., Alz. Rep., 2:327-332 (2999)).

Las especies de la proteína filamento neural se ha descrito y reivindicado en la Patente de Estados Unidos número 5.948.634; 5.948.888; y 5.830.670, todo para "Neural Thread Protein Genen Expresión and Detecction of Alzheimer's Disease" y la Patente de Estados Unidos número 6,071,705 para "Method of Detecting Neurological Disease or Dysfunction". Como se describe en el presente documento, la NTP se regulariza por incremento y se produce durante la muerte de la célula. Así, las células muertas y agonizantes del nervio se describen como sobreproducción de la NTP, y por consiguiente, su presencia indica la muerte de las células del nervio y el comienzo de la enfermedad del Alzheimer (AD).

Otras especies de la proteína de filamento neural se ha identificado según otros productos del gen AD7c-NTP (por ejemplo, un aminoácido 112 proteíco descrita en el número de acceso a la base de datos de proteínas a través de ENTREZ del NUBIL XP_032307 PID g15928971) o ser parecida a las proteínas neurales tratadas (por ejemplo amino ácido 106 proteíco descrita en el número de acceso a la base de datos de proteínas a través de ENTREZ del NUBIL AAH14951 PID g15928971), y un aminoácido 61 proteíco descrita en el número de acceso a la base de datos de proteínas a través de ENTREZ del NUBIL AAH02534 PID g12803412).

La proteína de filamento neural está asociada con AD y la NTP está regulada por incremento en la asociación con la muerte de la célula en AD. La AD7c-NTP mRNA se regula por incremento en el cerebro AD comparado para controles, los niveles de proteína de AD7c-NTP en el cerebro en CSF son más altos en AD que en los controles; y la inmunoreactividad de AD7c-NTP se encuentra en las placas seniles, en las marañas neofibrilares (NFT), en las neuronas degenerativas, filamentos de neuropilema, y brotes neurótico distrófico en cerebros en AD y Síndrome de Down (Ozturk y col., prox. Natl. Acad. Sci. USA, 86:419-423 (1989); de la Monte y col., J. Clin. Invest., 86(3):1004-13 (1990); de la Monte y col., J. Neurol. Sci., 113(2):152-64 (1992); de la Monte y col., Ann. Neurol., 32 (6):733-42 (1992); de la Monte y col., J. Neuropathol. Exp. Neurol., 55(10):1038-50 (1996); de la Monte y col., J. Neurol. Sci., 138(1-2):26-35 (1996); de la Monte y col., J. Neurol. Sci.,135(2):118-25 (1996); de la Monte y col., J. Clin. Invest., 100:3093-3104 (1997); y de la Monte y col., Alz. Rep., 2:327-332 (1999)). La NTP se localiza dentro de las células, dentro de los buenos procedimientos dentro de la neuropilema, o es extracelular en ambos cerebros AD y Síndrome de Down. De la Monte y col., Ann. Neurol., 32(6):733-42 (1992).

Se han encontrado niveles elevados de la proteína AD7c-NTP en ambos pacientes de CSF y orina de la AD (de la Monte and Wands, Front Biosci 7:989-96 (2002); de la Monte and Wands, Journal of Alzhiemer's Disease 3:345-353 (2001); Munzar y col., Alzheimer's Reports 4:61-65 (2001); Kahle y col., Neurology 54:1498-1504 (2000); Munzar y col., Alzheimer Reports 3:155-159 (2000); de la Monte y col., Alzheimer's Reports 2:327-332 (1999); y de la Monte y col., J. Clin. Invest. 100:3093-3104 (1997).

La sobre expresión de la NTP también se ha unido al procedimiento de la muerte de la célula en la enfermedad del Alzheimer (de la Monte and Wands, J. Neuropathol. Exp. Neurol., 60:195-207 (2001); de la Monte and Wands, Cell Mol Life Sci. 58:844-49 (2001). También se ha identificado la AD7c-NTP en el tejido cerebral del Síndrome de Down (Wands y col., Internacional Patent Publication No. WO 90/06993; de la Monte y col., J. Neurol. Sci. 135:118-25 (1996); de la Monte y col., Alz. Rep., 2:327-332 (1999)). Hay alguna evidencia de que la sobre expresión de NTP también puede asociarse con glaucoma de tensión normal. (Golubnitschaja-Labudova y col., Curr. Eye. Res. 21: 867-76 (2000)).

La NTP se ha probado para ser un agente efectivo para causan la muerte de la célula tanto en cultivos de células de glioma y neuroblastoma in Vitro y tejidos de músculo de un roedor normal in vivo, tejidos conectivos subcutáneos, y dermis, y en una variedad de diferente tumores de origen humano y no-humano, incluyendo carcinoma mamario, carcinoma de piel y papiloma, carcinoma de colon, glioma de cerebro, y otros modelos en roedores. Véase el documento 2003/0054990 de Estados Unidos titulado Methods of Treating Tumors and Related Conditions Using Neural Thread Proteins.

Ciertas secuencias de péptidos y fragmentos de AD7c-NTP y otras especies de la NTP también se han probado para que sean agentes efectivos para causar la muerte de la célula tanto en los cultivos de célula en glioma y neuroblastoma in Vitro y/o tejido de músculo de roedor normal in vivo, tejido conectivo subcutáneo, dermis y otro tejido. Véase el documento 2003/0096350 de Estados Unidos titulado: Peptides Effective In The Treatment Of Tumors And Other Conditions Requiring The Renoval Or Destruction Of Cells; el documento 2003/0096756 de Estados Unidos titulado: Peptides Effective In The Treatment Of Tumors And Other Conditions Requiring The Removal Or Destrucion Of Cells; el documento 2003/0109437 de Estados Unidos titulado: Peptides Effective In The Treatment Of Tumors And Other Conditions Requiring The Removal Or Destruction Of Cells.

El documento 5.948.634 de Estados Unidos descrito en la proteina de filamento neural 122-mer tan bien como las moléculas y fragmentos del mismo para tratamiento de un tipo de Alzheimer de degeneración neuronal.

Allí permanece una necesidad en la técnica para nuevos tratamientos menos tóxicos para tratar los elementos celulares no deseados. Esta invención satisface esta necesidad.

Sumario de la invención

Esta invención se presupone en parte en el descubrimiento que contiene péptidos de secuencias de aminoácidos correspondientes a la parte de la secuencias de aminoácidos de otras especies de otras proteínas de filamento neural a parte d AD7c-NTP son capaces de tratar y/o matar las proliferaciones celulares no deseadas. Estas proliferaciones celulares no deseadas incluyen, entre otras cosas, tumores benignos y malignos, hiperplasia glandular (por ejemplo próstata), pelo facial no deseado, verrugas, y tejido graso no deseado.

La presente invención se dirige a péptidos-NTP que constituidos de secuencias de aminoácidos SEQ ID Nº S9-15 y el uso de tales péptidos para tratar las proliferaciones celulares no deseadas, (tumores benignos y malignos, hiperplasia glandular (por ejemplo próstata) pelo facial no deseado, verrugas, y tejido graso no deseado).

Dicho péptido ("péptido NTP") se puede administrar sólo o conjugado a un vehículo o un anticuerpo. El péptido NTP puede administrarse intramuscularmente, oralmente, intravenosamente, intraperitonealmente, intracerebralmente (intraparenquimalmente), intracerebroventricularmente, intratumoralmente, intralesionalmente, intradérmicamente, intratecalmente, intranasalmente, intraoculamente, intraarterialmente, topicalmente, transdermicamente, mediante un aerosol, infusión, inyección de píldoras, instrumento de implantación, sistema de liberación sostenida, etc, o sólo o conjugado a un vehículo.

Además, el péptido NTP puede usarse en conjunción con otras terapias para tratar tumores malignos y benignos y crecimiento celular perjudicial y no deseado.

Breve descripción de las figuras

Figura 1: Muestra las secuencias de aminoácido completa de los 122 aminoácido de la proteína de filamento neural (Secuencia 40 de la Patente de Estados Unidos Números 5,830,670, 5,948,634, y 5,948,888; número de acceso a la base de datos de la proteína a través de Entrez del NCBI AAE25447 PID g10048540) [SEQ ID Nº 1].

Figura 2: Muestra las secuencias de aminoácido completa de los 122 aminoácidos de proteína de filamento neural (número de acceso a la base de datos de la proteína a través de Entrez del NCBI XP_032307 PID g15928971) [SEQ ID Nº 2].

Figura 3: Muestra las secuencias de aminoácido completa de los 106 aminoácidos de proteína de filamento neural como proteína (número de acceso a la base de datos de la proteína a través de Entrez del NCBI AAH14951 PID g15928971) [SEQ ID Nº 3].

Figura 4: Muestra las secuencias de aminoácido completa de los 98 aminoácido de proteína de filamento neural (Secuencia 30 de la Patente de Estados Unidos Números 5,830,670, 5,948,634, y 5,948,888; número de acceso a la base de datos de la proteína a través de Entrez del NCBI AAE25445 PID g10048538) [SEQ ID Nº 4].

Figura 5: Muestra las secuencias de aminoácido completa de los 75 aminoácidos de proteína de filamento neural (Secuencia 48 de la Patente de Estados Unidos Números 5,830,670, 5,948,634, y 5,948,888; número de acceso a la base de datos de la proteína a través de Entrez del NCBI AAE25448 PID g10048541) [SEQ ID Nº 5].

Figura 6: Muestra las secuencias de aminoácido completa de los 68 aminoácidos de proteína de filamento neural (Secuencia de 36 de la Patente de Estados Unidos Números 5,830,670, 5,948,634, y 5,948,888; número de acceso a la base de datos de la proteína a través de Entrez del NCBI AAE25446 PID g10048541) [SEQ ID Nº 6].

Figura 7: Muestra las secuencias de aminoácido completa de los 61 aminoácidos de la proteína de filamento neural como proteína (número de acceso a la base de datos de la proteína a través de Entrez del NCBI AAH02534, PID g12803421) [SEQ ID Nº 7].

Descripción detallada de las realizaciones preferidas

Los términos y frases usadas en el presente documento se definen tal como se exponen a continuación al menos de un modo específico.

A lo largo de esta descripción, las formas en singular "un", "un", y "el" incluye la referencia en plural a menos que el contexto lo dicte claramente de otro modo. Así, por ejemplo, una referencia a "un célula huésped" incluye una pluralidad de tales células huésped, y una referencia a "un anticuerpo" es una referencia a uno o más anticuerpos y equivalentes del mismo conocidos por los expertos en la técnica, y así sucesivamente.

El término "AD7c-NTP" se refiere a la proteína \sim41 kD y el gen y la secuencias de ácido nucleíco codificado para ser descrito en de la Monte y col., J. Clin. Invest., 100:3039-104 (1997), en Secuencias de 120 y 121 de la Patente de Estados Unidos Números 5,948,634, 5,948,888, y 5,830,670.

El término "NTP" se refiere a las proteínas de filamento neural y las moléculas relacionadas (incluyendo la proteína de filamento pancreático) de otra manera que AD7c-NTP se describe en la Patente de Estados Unidos números 5,948,634, 5,948,888, 5,830,670 y 6,071,705 y en de la Monte y col. J. Neuropathol. Exp. Neural., 55(10)1038-50 (1996), de la Monte y col., J. Neural. Sci., 138 (1-2):26-35 (1996); de la Monte y col., J. Neural. Sci., 135(2). 118-25 (1996), de la Monte y col., J.Clin. Invest., 100:3093-3104 (1997) y de la Monte y col., Alz. Rep., 2:327-332 (1999). El término "NTD" incluye, pero no se limita a:

(a) las especies \sim42, \sim26, \sim21, \sim17, \sim14, y \sim8 kD de proteína de filamento neural tan descrito en la Patente de Estados Unidos números 5,948,634, 5,948,888, 5,830,670, y 6,071,705 y en de la Monte y col., J. Neuropathol. Exp. Neurol., 55(10):1038-50 (1996), de la Monte y col., J. Neurol. Sci., 135(2):118-25 (1996), de la Monte y col., J. Clin. Invest., 100:3093-3104 (1997) y de la Monte y col., Alz. Rep., 2:327-332 (1999);

(b) las proteínas específicamente reconocidas por anticuerpos monoclonales #2 en deposito con la American Type Culture Collection, Manassas, Va., bajo un número de acceso HB-12545 o un anticuerpo monoclonal #5 en deposito con the American Type Culture Collection, Manassas, Va., bajo un número de acceso HB-12545.

(c) proteínas codificadas por el gen AD7c-NTP, incluyendo las variantes de empalme.

(d) la proteína de filamento neural de 122 aminoácidos en la secuencia 40 de la Patente de Estados Unidos Números 5,830,670, 5,948,634, y 5,948,888 y se enumeró en el número de acceso a la base de datos de proteínas a través de Entrez del NCBI AAE25447 PID g110048540, las secuencias de aminoácidos par las cuales se ilustra en la Figura 1 ("NTP[122]".

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(e) la proteína de filamento neural de 112 aminoácidos y se enumeró en el número de acceso a la base de datos de proteínas a través de Entrez del NCBI XP_032307 PID g14725132, las secuencias de aminoácidos par las cuales se ilustra en la Figura 2 ("NTP[112]".

(f) la proteína de filamento neural de 106 aminoácidos como proteína se enumeró en el número de acceso a la base de datos de proteínas a través de Entrez del NCBI AAH14951 PID g15928971, las secuencias de aminoácidos par las cuales se ilustra en la Figura 3 ("NTP[106]".

(g) la proteína de filamento neural de 98 aminoácidos en la secuencia 30 de la Patente de Estados Unidos Números 5,830,670, 5,948,634, y 5,948,888 y se enumeró en el número de acceso a la base de datos de proteínas a través de Entrez del NCBI AAE25445 PID g10048538, las secuencias de aminoácidos par las cuales se ilustra en la Figura 4 ("NTP[98]".

(h) la proteína de filamento neural de 75 aminoácidos en la secuencia 48 de la Patente de Estados Unidos Números 5,830,670, 5,948,634, y 5,948,888 y se enumeró en el número de acceso a la base de datos de proteínas a través de Entrez del NCBI AAE25448 PID g10048541, las secuencias de aminoácidos par las cuales se ilustra en la Figura 5 ("NTP[75]".

(i) la proteína de filamento neural de 68 aminoácidos en la secuencia 36 de la Patente de Estados Unidos Números 5,830,670, 5,948,634, y 5,948,888 y se enumeró en el número de acceso a la base de datos de proteínas a través de Entrez del NCBI AAE25446 PID g10048539, las secuencias de aminoácidos par las cuales se ilustra en la Figura 6 ("NTP[68]".

(j) la proteina de filamento neural de 61 aminoácidos como se enumeró en el número de acceso a la base de datos de proteínas a través de Entrez del NCBI AAH03534 PID g12803421, las secuencias de aminoácidos par las cuales se ilustra en la Figura 7 ("NTP[61]".

(k) proteína de filamento pancreático;

(l) la proteína de filamento pancreático neural (nPTP) descrita en la Patente de Estados Unidos Número 6,071,705; y

(m) las proteínas se reconocen específicamente por los anticuerpos producidos por un hibridoma del grupo que consiste de HB 9934, HB 9935, y HB 9936 depositado en la American Type Culture Collection.

Una "composición" como se usa en el presente documento, se refiere ampliamente a cualquier composición que contiene un péptido mostrado o una secuencia de aminoácido. La composición puede comprender una formulación seca, una solución acuosa, o una composición estéril. Las composiciones que comprenden los péptidos NTP pueden emplearse como una sonda de hibridación. Las sondas pueden guardarse en forma de hielo seco y pueden asociarse con un agente estabilizante tal como un carbohidrato. En hibridaciones, la sonda puede desarrollarse en sales contenidas en una polución acuosa, por ejemplo, NaCl, detergentes, por ejemplo, sulfato de dodecilo de sodio (SDS), y otros componentes, por ejemplo, solución de Denhardt, leche seca, ADN de esperma de salmón, etc.

Los aminoácidos y residuos de aminoácidos aquí descritos puede denominarse según se acepte un código de una o tres letras proporcionadas en la tabla dada más abajo. A menos que se especifique lo contrario, estos aminoácidos o residuos son de forma de estereoisómero L que existe en la naturaleza.

TABLA 1

Aminoácido	Símbolo una-letra	Símbolo tres-letras
Alanina	A	Ala
Arginina	R	Arg
Asparagina	N	Asn
Acido aspártico	D	Asp
Cisterna	C	Cys
Glutamina	Q	Gln
Acido glutámico	E	Glu
Glicina	G	Gly
Histidina	H	His
Isoleucina	I	Lle
Leucina	L	Leu
Lisina	K	Lys
Metionina	M	Met

TABLA 1 (continuación)

Aminoácido	Símbolo una-letra	Símbolo tres-letras
Fenilalanina	F	Phe
Prolina	P	Pro
Serina	S	Ser
Treonina	T	Thr
Triptofano	W	Trp
Tirosina	Y	Tyr
Valina	V	Val

La presente invención se dirige a una composición que comprende péptidos de la NTP tan definido arriba en esta invención.

Los péptidos de la NTP de esta invención contiene secuencias de aminoácidos que corresponden a parte del la secuencia del aminoácido par NTP[122] e incluye:

NTP[122] péptido# 2 [SEQ ID Nº9], NTP[122] P1-15

MMVCMNRFGKWVYFI

Met-Met-Val-Cys-Trp-Asn-Arg-Phe-Gly-Lys-Trp-Val-Tyr-Phe-Ile

\vskip1.000000\baselineskip

NTP[122] péptido# 3 [SEQ ID Nº10], NTP[122] P16-30

SAIFNFGPRYLYHGV

Ser-Ala-Ile-Phe-Asn-Phe-Gly-Pro-Arg-Tyr-Leu-Tyr-His-Gly-Val

\vskip1.000000\baselineskip

NTP[122] péptido# 4 [SEQ ID Nº11], NTP[122] P31-45

PFYFLILVRIISFLI

Pro-Phe-Tyr-Phe-Leu-ne-Val-Arg-ne-Ile-Ser-Phe-Leu-ne

\vskip1.000000\baselineskip

NTP[122] péptido# 5 [SEQ ID Nº12], NTP[122] P46-60

GDMEDVILLNCTLLKR

Gly-Asp-Met-Glu-Asp-Val-Leu-Leu-Asn-Cys-Thr-Leu-Leu-Lys-Arg

\vskip1.000000\baselineskip

NTP[122] péptido# 6 [SEQ ID Nº13], NTP[122] P60-75

SSRFRFWGALVCSMD

Ser-Ser-Arg-Phe-Arg-Phe-Trp-Gly-Ala-Leu-Val-Cys-Ser-Met-Asp

\vskip1.000000\baselineskip

NTP[122] péptido# 7 [SEQ ID Nº14], NTP[122] P76-90

SCRFSRVAVTYRFIT

Ser-Cys-Arg-Phe-Ser-Arg-Val-Ala-Val-Thr-Tyr-Arg-Phe-Ile-Thr

\vskip1.000000\baselineskip

NTP[122] péptido# 8 [SEQ ID Nº15], NTP[122] P91-105

LLNIPSPAVWMARNT

Leu-Leu-Asn-Ile-Pro-Ser-Pro-Ala-Val-Trp-Met-Ala-Arg-Asn-Thr

\vskip1.000000\baselineskip

Hasta el punto de que un péptido de la NTP tiene la actividad biológica deseada, implica que dos de tales péptidos de la NTP también poseerían la actividad biológica deseada, incluso si estos segmentos no son contiguos dentro de la secuencia de aminoácidos de la especie(s) de la NTP de la cual derivan los péptidos NTP.

Los péptidos NTP de esta invención pueden preparase usando procedimientos conocidos por los expertos en la técnica, tal como la tecnología de recombinación de ADN, síntesis de proteínas y el aislamiento de los péptidos NTP que existen en la naturaleza, proteínas NTP o proteína AD7c-NTP y fragmentos, variantes, derivados y homólogos de los mismos.

Los péptidos NTP pueden prepararse por el uso de proteasas para dividir el péptido NTP, proteína NTP o proteína AD7c-NTP en el péptido NTP deseado.

Un péptido NTP puede prepararse usando los procedimientos de recombinación de ADN bien conocidos tal como se expone a continuación en Sambrook y col. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Sprong Harbor Laboratoy Press, Cold Spromg Harbor, N.Y. [1989] y/o Ausubel y col., eds., Current Protocols in Molecular Biology, Green Publishers Inc. and Wiley and Sons, N.Y. [1994].

Un gen o cADN codifica un péptido puede obtenerse por ejemplo sometiéndolo a un genoteca genómica o cADN, o por amplificación de PCR. Sondas y cebadores son útiles para someter a la genoteca que puede generarse basándose en la secuencia de información para otros genes conocidos o fragmentos de gen de la misma o una familia relacionada de genes, tal como, por ejemplo, se conservan los motivos encontrados en otros péptidos NTP. Además, donde un gen codifica un péptido NTP se ha identificado a partir de unas especies, todas o una porción de ese gen puede usarse como una sonda para identificar genes homólogos a partir de otras especies. Las sondas o cebadores pueden usarse para someterse a bibliotecas de cADN de varias fuentes de tejidos pensado para expresar un gen de péptido de NTP. Normalmente, las afecciones de alto rigor se emplearía para someterlo para minimizar el número de falsos positivos obtenidos de la pantalla.

Otro medio para preparar un gen codificado en péptido NTP es emplear la síntesis química usando procedimientos conocidos por los expertos en la técnica, tal como se describe por Engels y col., en Chem Intl. Ed., 28:716:734 [1989]. Estos procedimientos incluyen, entre otros, los procedimientos de fosfotriester, fosforamidita y H-fosfonato para la síntesis de los ácidos nucléicos. Un procedimiento preferido para dicha síntesis química es la síntesis de un polimero-sostenido usando la química estándar de la fosforamidita. Normalmente, el DNA que codifica un péptido NTP sería de varios cientos de nucleótidos en longitud. Los ácidos nucléicos grandes de aproximadamente 100 nucleótidos pueden sintetizarse como varios fragmentos usando estos procedimientos. Luego los fragmentos pueden unirse juntos para formar la longitud del péptido NTP. Normalmente, el fragmento de ADN que codifica el amino terminal de la proteína tendría un ATG, el cual codifica un residuo de metionina. Esta metionina puede o no puede estar presente en la forma madura del péptido NTP, dependiendo de si la proteína producida en la célula huésped se diseña para secretarse a esa célula.

El gen, cDNA, o fragmento del mismo que codifica el péptido NTP se puede insertar en una expresión adecuada o vector de amplificación usando las técnicas de unión estándar. El vectores se selecciona normalmente para ser funcional en el empleo de la célula huésped particular (es decir, el vector es compatible con el sistema de la célula huésped tal que la amplificación del gen y/o expresión del gen pueda ocurrir). El gen, cDNA o fragmento del mismo que codifica el péptido NTP puede amplificarse/expresarse en células huésped procarióticas, levadura, insecto (sistemas de baculovirus) y/o eucarióticas. La selección de las células huésped dependería en parte de si el péptido NTP está para ser glicosilatado y/o fosforilatado. Si es así, se prefieren células huésped de levadura, insectos, o mamíferos.

Normalmente, los vectores usados en cualquiera de las células huésped contarían al menos una secuencia de 5' flacos (también referido como un promotor) y otros elementos regulatorios tan bien como un amplificador(s), un elemento de replicación original, un elemento de terminación transcripcional, un secuencia de intrón completa que contiene un sitio de unión aceptor y donador, una secuencia de señal péptida, elemento de sitio de unión de ribosoma, una secuencia de poliadenilación, una región de poliligador para insertar el ácido nucléico codificando el polipéptido para ser expresado, y un elemento marcador seleccionable. Cada uno de estos elementos se discute más abajo. Opcionalmente, el vector puede contar con una secuencia de etiqueta, es decir, una molécula de oligonucleótido localizado en el 5'o 3' del final de la secuencia codificada del péptido NTP; la molécula de oligonucleotido codifica poliHis (tal como hexaHis), u otras etiquetas tales como FLAG, HA (virus influenza hemaglutina) o myc para la cual existen anticuerpos adecuados comercialmente. Estas etiquetas se fusionan normalmente al polipéptido en la expresión del polipéptido, y puede servir como medio para la afinidad purificadora del péptido NTP de la célula huésped. La afinidad purificadora puede acoplarse, por ejemplo, mediante una columna de cromatografía usando anticuerpos contra las etiquetas como una matriz de afinidad, opcionalmente, la etiqueta puede seguidamente removerse desde la proteína NTP purificada o el péptido NTP por varios medios tales como usar ciertas peptidasas.

La bisagra de inmunoglobulina humana y la región Fc se fusionarían junto al la N-terminal o C-terminal del péptido NTP por uno de los expertos en la técnica. La siguiente proteína de fusión Fc se purificaría por el uso de una columna de afinidad de proteína A. La Fc se conoce por exhibir una semivida de farmacocinética larga in vivo y se han encontrado que las proteínas fusionadas para Fc se exhiben en una semivida más mayor sustancialmente in vivo que el no fusionado homólogo. También, la fusión a la región Fc seguida de dimerización/multimerización de la molécula que puede ser útil para la bioactividad de algunas moléculas.

La secuencia de extremo 5'puede ser homóloga (es decir, a partir de las mismas especies y/o cepa de la célula huésped), heteróloga (es decir, a partir de otras especies que las de las especies o cepas de la célula huésped), híbrido (es decir, una combinación de la secuencia de extremo 5'a partir de más de un origen), sintético o puede ser el gen de péptido NTP nativo de la secuencia de extremo 5'. Así, como el origen de la secuencia de extremo 5'puede ser cualquier organismo procariótico o eucariótico unicelular, cualquier organismo vertebrado o invertebrado, o cualquier planta, siempre que la secuencia de extremo 5'sea funcional en, y se pueda activar por, la maquinaria de la célula huésped.

La secuencia de extremo 5' útil en los vectores se puede obtener por cualquiera de los varios procedimientos conocidos en la técnica. Normalmente las secuencias de extremo 5'útiles en el presente documento aparte de la secuencia de extremo del gen del péptido NTP se identificaría previamente por la digestión de endonucleasa de cartografía y/o restricción, y así puede ser aislado desde la fuente de tejido propia usando las endonucleasas de restricción adecuadas. En algunos casos, puede conocerse la secuencia de nucleótidos completa de la secuencia de extremo 5'. Aquí, la secuencia de extremo 5' se puede sintetizar usándolos procedimientos descritos arriba para la síntesis de ácido nucleico o un clon.

Donde se conocen todos o solamente una porción de la secuencia de extremo de 5', puede obtenerse usando PCR y/o por exploración de la genoteca genómica con aligonucleotidos adecuados y/o fragmentos de la secuencia de extremo 5' de la misma u otras especies.

Cuando la secuencia de extremo 5' no se conoce, un fragmento de ADN contiene una secuencia de extremo de 5' puede aislarse a partir de una pieza grande de de ADN que puede contener, por ejemplo, una secuencia de codificación o incluso otro gen o genes. El aislamiento puede acoplarse por digestión de endonucleasa de restricción usando uno o más enzimas seleccionada cuidadosamente para aislar el propio fragmento de ADN. Después de la digestión, el fragmento deseado puede aislarse por purificación de gel de agarosa, columna de Qiagen®, u otros procedimientos conocidos por los expertos artesanos. La selección de las enzimas adecuadas para acoplarse a este propósito sería aparentemente fácil para un experto habitual en la técnica.

El origen del elemento replicación es normalmente una parte de los vectores de expresión procariótica comprados comercialmente, y ayuda en la amplificación del vector en la célula huésped. La amplificación del vector para un número de copia seguro puede, en algunos caso ser importante para la expresión óptima del péptido NTP. Si el vector elegido no contiene un lugar de origen de replicación uno se puede sintetizarse químicamente basándose en la secuencia conocida, y unirse en el vector. El elemento de terminación de trascripción del péptido NTP se localiza normalmente en el 3' del final del péptido NTP codificando la secuencia y sirve par la trascripción terminal del péptido NTP. Normalmente, el elemento de terminación de trascripción en las células procarióticas es u es un fragmento rico en G-C seguido por la secuencia poliT. Mientras el elemento puede clonarse a partir de una biblioteca o comprado comercialmente como parte de un vector, también se puede sintetizar fácilmente usando procedimientos para la síntesis de ácido nucleico tales como estos descritos más arriba.

Un gen marcado seleccionable codifica una proteína necesaria para la supervivencia y crecimiento del crecimiento de una célula huésped en un medio de cultura selectiva. Los genes típicos del marcador de selección codifican las proteínas que (a) otorgan resistencia a los antibióticos u otras toxinas, por ejemplo, ampicilina, tetraciclina, o kanamicina para las células huésped procarióticas, (b) complemento autotrófico de las deficiencias de la célula, (c) suministra nutrientes críticos no adecuados a partir de la media del complejo. Los marcadores seleccionables preferidos son el gen de la resistencia de kanamicina, el gen de resistencia de a la ampicilina, y el gen de resistencia a la tetracicllina. El elemento de unión del ribosoma, comúnmente llamado secuencia Shine-Dalgarno (procariotas) o secuencia Kozal (eucariota), normalmente es necesario para la iniciación de la traslación de mARN. El elemento se localiza típicamente en 3' al promotor y 5' a la secuencia de codificación del péptido para sintetizarse. La secuencia Shine-Dalgarno varía pero es típicamente una polipurina (es decir, tienen un alto contenido en A-G). Muchas secuencias de Shine-Dalgarno se han identificado cada una de las cuales pueden ser sintetizadas fácilmente usando un conjunto de procedimiento y así sucesivamente arriba y se usó un vector procariotico.

En estos casos donde se desea que el péptido NTP sea secretado a partir de la célula huésped, se puede usar una secuencia de señal para dirigir el péptido NTP fuera de la célula huésped donde se sintetiza, y la parte terminal carboxilo de la región de la proteína se puede suprimir para prevenir el anclaje de la membra. Típicamente, la secuencia de señal se posiciona en la región codificada del gen del péptido NTP o cADN, o directamente al 5' del final del gen péptido NTP que codifica la región. Muchas secuencias de señal se han identificado, y cualquiera de ellas es funcional en la célula huésped seleccionado se puede usar en conjunción con el gen del péptido NTP o cDNA. Así mismo, la secuencia de señal puede ser homologa o heteróloga al gen del péptido NTP o cADN, y puede ser homólogo o heterólogo al gen del péptido NTP o cADN. Adicionalmente, la secuencia de la señal se puede sintetizar químicamente usando el conjunto de procedimientos de arriba y así sucesivamente. En más casos, la secreción del polipéptido a partir de la célula huésped mediante la presencia de un péptido de señal resultaría en la eliminación de la metionina terminal de amino del polipéptido.

En muchos casos, la trascripción del gen de péptido de NTP o cADN se aumente por la presencia de uno o más intrones en el vector. Esto es particularmente cierto donde el péptido de NTP se produce en células huésped eucarióticas, especialmente en células huésped de mamíferos. Los intrones usados pueden ser naturalmente pueden ocurrir dentro del gen de péptido de la NTP, especialmente donde el gen usado es una secuencia genomita de longitud completa o un fragmento del mismo. Donde el intrón no ocurre naturalmente dentro del gen (como para más cADNs), el intrón(s) se puede obtener a partir de otra fuente. La posición del intrón con respecto a la secuencia de extremo y el gen de péptido de la NTP generalmente, es importante, como el intrón debe transcribirse para ser efectivo. Como tal, donde el gen del péptido NTP se insertó en la expresión del vector es una molécula de cADN., la posición preferida para el intrón es 3' al lugar del comienzo de la trascripción, y 5' a la secuencia de terminación de trascripción del poli A. Preferiblemente para el péptido NTP cADN, el intrón o intrones se localiza en un lado o el otro (es decir, 5' o 3') del cADN tal que no interrumpe esta secuencia de de codificación. Cualquier intrón a partir de cualquier fuente, incluyendo cualquier vírico, organismos procariotico o eucariotico (planta o animal) pueden usarse para la práctica de esta invención, siempre que sea compatible con la célula(s) huésped en la que se inserta. También se incluye en la presente memoria intrónes sintéticos. Opcionalmente, más de un intrón se puede usar en el vector.

Cuando uno o más de los del conjunto de electos de arriba ya no está presente en el vector que va a usarse, se pueden obtener individualmente y ligados en el vector. Los procedimientos usados para obtener cada uno de los elementos son bien conocidos por los expertos artesanos y son comparables al conjunto de procedimientos de arriba (es decir, la síntesis del ADN, exploración de la biblioteca, y similares).

Los vectores finales usados para practicar esta invención se pueden construir a partir de los vectores de partida tales como un vector adecuado comercialmente. Tales vectores pueden o no pueden contener alguno de los elementos que se incluyen en el vector completado. Si ninguno de los elementos deseados están presentes en el vector de partida, cada uno de los elementos puede ser individualmente ligado al vector mediante el vector de corte con la endonucleasa(s)
de restricción adecuadas así como los finales del elemento está ligado junto para obtener un unión satisfactoria. El despuntamiento se acopla mediante el primer relleno en "finales pegajosos" usando polimerasa Klenow ADN o polimerasa T4 ADN en la presencia de los cuatro nucleotidos. Este procedimiento es bien conocido en la técnica y se describe por ejemplo en Sambrook y col., supra. Alternativamente, dos o mas de los electos que se insertan en el vector puede primero ligarse junto (si están para posicionarse junto a cada uno de los otros) y luego ligados al vector.

Un procedimiento adicional par construir el vector es dirigir todos los ligandos de varios elementos simultáneamente en una mezcla de reacción. Aquí, muchos vectores sin sentido o no funcionales se generarían debido a la ligadura incorrecta o inserción de los elementos, sin embargo el vector funcional se puede identificar y seleccionar por restricción de la digestión de la endonucleasa.

Los vectores preferidos para practicar esta invención son esos que son compatibles con las células huésped de las bacterias, insectos y mamíferos. Tales vectores incluyen, entre otras cosas, pCRII, pCR\cdot y pADN3.1 (Invitrogen Company, San Diego, Calif.), pBSII (Stratagene Companym La Jolla, Calif.), pET15b (Novagen, Madison, Wis), PGEX (Pharmacia Biotech, Piscataway, N.J.), pEGFP-N2 (Clontech, Palo Alto, Calif.) pETL (BlueBacll; Invitrogen), and pFastBacDual (Gibco/BRL, Grand Island, N.Y.)

Después el vector se construye y una molécula de ácido nucleico que codifica al péptido NTP se inserta en el propio sitio del vector, el vector completado se puede insertar en una célula huésped adecuada para la amplificación y/o expresión del polipéptido. Las células huésped puede ser células huésped procarióticas (tal como E. coli) o células huésped eucariótica (tal como una célula de levadura, una célula de insecto o una célula de vertebrado). La célula huésped, cuando se cultiva bajo afecciones adecuadas, se puede sintetizar el péptido de la NTP que puede seguidamente enfriarse a partir del medio de cultivo (si la célula huésped lo secreta en el medio) o directamente desde la producción de la célula huésped (si no es secretada)

Después de la colección, el péptido NTP puede purificarse usando procedimiento tales como cromatografía de malla molecular, cromatografía de afinidad, y similares. La selección de la célula huésped para la producción del péptido NTP dependería en parte si el péptido NTP es para ser glicosilatado o fosforilatado (en cuyo caso se prefieren las células eucarióticas), y la manera en la cual la célula huésped es capaz de plegarse la proteína en su estructura terciaria nativa (por ejemplo, la orientación propia de puentes de bisulfuro, etc.) así que la proteína activa biológicamente se prepara mediante el péptido NTP que tiene actividad biológica, el péptido NTP se puede plegar después de la síntesis usando las afecciones químicas adecuadas tan discutidas arriba. Las células apropiadas o líneas de células pueden ser células de mamíferos, tales como células de ovario de un hamster chino (CHO), riñón embriónico humano (HEK) 293, células 293T o células 3T3. La selección de células huésped de mamíferos apropiados u los procedimientos para la transformación, cultivo, amplificación, exploración y productos de producción y purificación conocidos en la técnica. Otras líneas de células de mamíferos apropiadas, son la del mono COS-1 y la líneas de célula COS-7, y la línea de célula CV-1. Además un ejemplo de líneas de célula de mamífero incluye líneas de célula de primate y líneas de célula de roedores, incluyendo líneas de célula trasformada. Son también apropiadas Células diplides normales, derivadas de ramas de células de un cultivo in Vitro de tejido primario, tan bien como explantes primario. Las células candidatas pueden ser genotípicamente deficiente en la selección del gen, o puede contener un gen de selección interino dominantemente. Otras líneas de célula de mamífero apropiado incluye, pero no limita a, células N2A nueroblastoma de ratón, HeLa, células L-929 de ratón, líneas 3T3 derivada de Swiss, ratones Balc o NIHm líneas de células de hamster BHK o HaK.

Igualmente útiles células huésped apropiadas para la presente invención son las células bacterianas. Por ejemplo, las ramas variadas de E. coli (es decir., HB101,DH5,alpha., DH10, y MC1061) son bien conocidas como células huésped en el campo de la biotecnología. Ramas variadas de B. subtilis, Pseudomonas spp., otra Bacillus spp., Sreptomyces spp., y similares también pueden ser empleadas en este procedimiento. Muchas ramas de las células de levadura conocidas por los expertos en la técnica también son adecuadas como células huésped para la expresión de los polipéptidos de la presente invención.

Adicionalmente, los sistemas de células de insectos se pueden utilizar donde se desee en los procedimientos de la presente invención. Tales sistemas se describen por ejemplo en Kitts y col. (Biotechiques, 14:810-817 [1993]), Lucklow (Curr. Opin. Biotechnol., 4:564-572 [1993]) y Lucklow y col. (J. Virol., 67:4566-4579 [1993]) las células de insectos preferidos son Sf-9 y Hi5 (Invitrogen, Carlsbad, Calif.).

La inserción (también referida como transformación o trasfección) del vector en la célula huésped seleccionado se puede acoplar usando dichos procedimientos como cloruro de calcio, electroporación, microinyección, lipofección o el procedimiento de DEAE-dextrano. El procedimiento seleccionado en parte sería una función del tipo de célula huésped para ser usada. Estos procedimientos y otros procedimientos apropiados son bien conocidos por los expertos artesanos, y se exponen, por ejemplo, en Sambrook y col., supra.

Las células huésped que contiene el vector (es decir, transformada o trasfectada) se puede usar cultivada usando la media estándar bien conocida por los expertos artesanos. La media normalmente contiene todos los nutrientes necesarios para el crecimiento y supervivencia de las células. La media adecuada para el cultivo de las células E. coli son por ejemplo, Luria Broth (LB) y/o Terrific Broth (TB). La media adecuada para el cultivo de las células eucarióticas son RPMI 1640, Mem, DMEM, todos los que pueden suplementarse con serúm y/o los factores de crecimiento como se requiere por la línea de célula particular que se cultiva. Un medio adecuado para los cultivos es un medio de Grace suplementado con yeastolato, hidrolisato de lactalbumina y/o suero de cría fetal como necesarios. Típicamente, un antibiótico u otro compuesto útil para el crecimiento selectivo de las células transformadas solamente se añade como un suplemento a la media. El compuesto para usarse sería dictado por el elemento de marcador seleccionable presente en el plasmado con el que se transforma la célula huésped. Por ejemplo, donde es elemento de marcador seleccionable es la resistencia de kanamicina, el compuesto añadido al medio de cultivo sería kanamicina.

La cantidad del péptido NTP producido en la célula huésped se puede evaluar usando los procedimientos estándar conocidos en la técnica. Tales procedimientos incluyen, sin limitación, análisis de mancha de Western, electroforesis de gel de SS-poliacrilamida, electroforesis de gel no desnaturalizante, separación HPLC, espectroscopia de masa, inmunoprecipitación, y/o ensayos de actividad tal como ensayo de cambio de gel de unión de ADN.

Si el péptido NTP se ha diseñado para se secretado a partir de las células huésped, la mayoría de los péptido NTP se puede encontrar en el medio de cultivo de la célula. Las proteínas preparadas de esta forma típicamente no poseerían una amino de metionina terminal, según se elimina durante la secreción a partir de la célula. Si además, el péptido NTP no se secreta a partir de la célula huésped, estaría presente en el citoplasma y/o el núcleo (para células huésped eucarióticas) o en el citosol (para células huésped de bacteria gram negativa) y pueden tener un amino de metionina terminal.

Para el péptido NTP situado en el citoplasma de la célula huésped y/o núcleo, las células huésped típicamente son primero interrumpidas mecánicamente o con detergente para la liberación del contenido intra celular en una solución neutralizada. Luego el péptido NTP puede aislarse a partir de esta solución.

La purificación del péptido NTP a partir de la solución puede acoplarse usando una variedad de técnicas. Si la proteína se ha sintetizado tal que contiene un etiqueta tal como hexaHistidina(por ejemplo péptido NTP/hexaHis) u otro pequeño péptido como FLAg (Sigma-Aldritch, St. Louis, MI) o un péptido unido a calmodulina (Stratagene, La Jolla, CA) o su carboxilo o amino terminal, puede esencialmente purificarse en un procedimiento de una etapa por el paso de la solución a través de una columna de afinidad donde la matriz de la columna tiene una alta afinidad para la etiqueta o para la proteína directamente (es decir, un anticuerpo monoclonal especialmente reconocido del péptido NTP). Por ejemplo, la unión de polihistidina con una gran afinidad y especificidad para níquel, cinc y cobalto; así la cromatografía de afinidad de ion metálico inmovilizado que emplea una resina de afinidad basada en níquel (tan usada en BD BiosciencesCLONTECH's Talon System) puede usarse para la purificación de péptido NTP/poliHis. (Véase, por ejemplo, Ausubel y col., eds., Current Protocols in Molecular Biology, Section 10.11.8, John Wiley & Sons, New York [1993]).

Cuando el péptido NTP se prepara sin una etiqueta adjunta, y los anticuerpos no so adecuados, otros procedimientos bien conocidos se pueden usar para la purificación. Tales procedimientos incluyen, sin limitación, la cromatografía de ión intercambiable, cromatografía hidroxiapatita, cromatografía de interacción hidrofóbica, cromatografía de malla molecular, HPLC, electroforesis de gel nativo en combinación con el gel de elección, y enfoque isoeléctrico preparativo (Isoprime machina/technique, Hoefer Scientific). En algunos caso, dos o mas de estas técnicas se pueden combinar para logra aumentar la pureza.

Si se anticipa lo anterior el péptido NTP se encontraría intracelularmente primariamente, el materia intracelular (incluye los cuerpos de inclusión para la bacteria gram-negativa) se puede extraer a partir de la célula huésped usando cualquiera de las técnicas estándar conocidas por los expertos artesanos. Por ejemplo, las células huésped pueden estar lisadas para la liberación de los contenidos del periplasma/citoplasma por prensa French, homogenización, y/o sonicación seguida por centrifugación. Si el péptido NTP ha formado cuerpos de inclusión en el citosol, los cuerpos de inclusión pueden a menudo unirse las membranas celulares internas y/o externas y así encontraría primeramente en la centrifugación después del material de sedimentación. Luego el material de sedimentación puede tratarse a pH extremos o con agente caotrópico tal como detergente, guanidina, derivados de guanidina, urea, o derivados de urea en presencia de un agente reductor tal como ditiotreitol a pH alcalino o tris carboxietilo de fosfina a pH ácido par la liberación, a parte de la rotura, y solubilizar los cuerpos de inclusión. El péptido NTP ahora en su forma soluble luego se puede analizar usando gel de electroforesis, inmunoprecipitación o similares. Si se desea para aislar el péptido NTP, el aislamiento se puede acoplar usando un procedimiento estándar tal como estos exponen arriba y en Marston y col. Meth. Enz., 182:264-275 [1990].

En algunos casos, el péptido NTP no puede estar activado biológicamente sobre el aislamiento. Varios procedimientos para plegar de nuevo o convertir el polipéptido a su estructura terciaria y generar enlaces bisulfuro, pueden usarse para restaurar la actividad biológica. Tales procedimientos incluye la exposición al polipéptido solubilizado a un pH normalmente sobre 7 y en presencia de una concentración particular de un caotropo. La selección de un caotropo es muy parecido a la elección usado para la solubilización del cuerpo pero normalmente a una concentración mas baja y no es necesariamente el mismo caotropo tan usado en la solubilización. En más casos la solución que se vuelve a plegar/oxidación también contaría un agente de deducción o la reducción de un agente positivo la forma oxidad en una relación especifica para generar un potencial redox particular permite arrastrar el bisulfuro para que se produzca en la formación de la cisteina de proteína puente(s). Algunas de las uniones redox usadas comúnmente incluye cisteina/cistamina, glutationa(GSH)/ditiobis GSH, cloruro cúprico, ditiotreitol (DTT)/ditiano DTT, 2-mercaptoetanol (bME)/ditio-b(ME). En muchos casos en cosolvente es necesario para aumentar la eficiencia de volver a plegarse y los reactivos mas comunes usados para este propósito incluye glicerol, polietilenglicol de varias peso moleculares y arginina.

Si los cuerpos de inclusión del péptido NTP no están formados para un grado significativo en la célula huésped, el péptido NTP se encontraría principalmente en el sobrenadante después de la centrifugación de la homogeneización de la célula, y el péptido NTP se puede aislar a partir del sobrenadante usando procedimientos tales como los que se exponen arriba.

En estas situaciones donde se prefiere aislar parcial o completamente el péptido NTP, la purificación se puede acoplar usando los procedimientos estándar bien conocidos por los expertos artesano. Tales procedimientos incluyen, sin limitación, la separación por electroforesis seguida por electroelucción, varios tipos de cromatografía (inmunoafinidad, malla molecular, y/o ion intercambiable), y/o cromatografía liquida de alta presión. En algunos casos, se puede preferir usar más de uno de estos procedimientos para la completa purificación.

Además para preparar y purificar péptidos NTP usando técnicas de recombinación de ADN, los péptidos NTP pueden prepararse por procedimientos de síntesis química (tal como síntesis de péptido en fase sólida) usando las técnicas conocidas en la técnica tal como aquellas que se exponen en Merrifield y col., J. Am. Chem. Soc., 85:2149 [1963], Houghten y col. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82.5132 [1985], y Stewart and Young, Solid Phase Peptide Síntesis, Pierce Chemical Co., Rockford, III. [1984]. Dichos polipéptidos pueden sintetizarse con o sin una metionina en el amino terminal. Las proteínas NTP químicamente sintetizadas o los péptidos NTP pueden oxidarse usando los procedimientos que se exponen en estas referencias para formar puentes de bisulfuro. Las proteínas NTP o los péptidos NTP se supone que tienen una actividad biológica comparable a las proteínas NTP o a los péptidos NTP producidos por recombinación o purificados a partir de fuentes naturales y así puede usarse intercambiablemente con recombinación o proteína NTP natural o péptido NTP.

Los péptidos NTP, y las sales del mismo también se pueden hacer usando las técnicas de síntesis de péptidos convencionales conocidas por los expertos artesanos. Estas técnicas incluyen los procedimientos de acoplamiento (cf. Wunsch, E: "Methoden der organische Chemie", Volume 15, Band 1+2, Synthese von Peptiden, Thieme Verlag, Stuttgart (1974), and Barrany, G.: Marrifield r.B.: "The Peptides", eds. E. Gross, J. Meienhofer, Volume 2, Chapter 1, pp. 1-284, Academia Press (1980)), procedimiento de acoplamiento enzimatico (cf. Widmer, F. Johansen, J.T., Carlsberg Res. Común., Vol. 44, pp. 37-46 (1979); Kullmann, W.: "Enzymatic Peptide Síntesis", CRC Press Inc. Boca Raton, Fla (1987); and Widmer, F., Johansen, J.T. in "Synthetic Peptides in Biology and Medicines" eds. Alitalo, K., Partanen, P., Vatieri, A., pp. 79-86, Elservier, Amsterdam (1985)), o una combinación de procedimientos químicos y enzimáticos si esto es ventajoso para el diseño y economía de los procedimientos.

Existe hoy un número de organizaciones que son capaces de sintetizar los péptidos NTP descritos aquí. Por ejemplo, dar la secuencia de un péptido NTP, la organización puede sintetizar el péptido y más adelante el péptido sintetizado con el acompañamiento de la documentación y la prueba de identidad del péptido.

Los péptidos NTP de la invención son útiles para tratar las afecciones requeridas para la eliminación de las células, tales como tumores malignos y benignos, hiperplasia glandular (por ejemplo próstata), pelo facial no deseado, verrugas, y tejido graso no deseado, o la inhibición o prevención de la proliferación celular no deseada, tal como la estenosis con stent.

Las afecciones pueden ser, por ejemplo, tumores de pulmón, mama, estómago, páncreas, próstata, vesícula, hueso, ovario, piel, riñón, seno, colon, intestino, estomago, recto, esófago, sangre, cerebro y sus coberturas, columna vertebral y sus coberturas, músculo, tejido conectivo, suprarrenal, paratiroide, tiroide, útero, testículo, pituitaria, órganos reproductivos, hígado, vesícula biliar, ojo, oreja, nariz, garganta, amígdala, boca, nódulos linfáticos, y sistema linfático y otros órganos.

Como se usa en el presente documento, el termino "tumor maligno" pretende abarca todas las formas de carcinomas humanos, sarcomas y melanomas el cual puede suceder en las formas pobremente diferenciada, moderadamente diferenciada y bien diferenciada.

Esta invención satisface una necesidad en la técnica para tratamientos que pueden eliminar tumores benignos con menor riesgo y menos efectos secundarios indeseables en cirugía. Es particularmente necesario un procedimiento para eliminar los tumores benignos en áreas peligrosas quirúrgicamente tales como en localizaciones profundas en el cuerpo (por ejemplo, cerebro, corazón, pulmones y otros).

El tratamiento de las afecciones donde las células que deben eliminarse se pueden usar en conjunción con los procedimientos convencionales para tratar tales afecciones, tal como la escisión quirúrgica, quimioterapia, y radiación. Los péptidos NTP se pueden administrar antes, durante, o después de tales tratamientos convencionales.

La afección a tratar puede ser también un hiperplasia, hipertrofia o sobrecrecimiento de un tejido seleccionado del grupo que consiste de pulmón, mama, estómago, páncreas, próstata, vesícula, hueso, ovario, piel, riñón, seno, colon, intestino, estomago, recto, esófago, sangre, cerebro y sus coberturas, columna vertebral y sus coberturas, músculo, tejido conectivo, suprarrenal, paratiroide, tiroide, útero, testículo, pituitaria, órganos reproductivos, hígado, vesícula biliar, ojo, oreja, nariz, garganta, amígdala, boca, nódulos linfáticos, y sistema linfático.

Otras afecciones que pueden tratarse usando el procedimiento de la invención son tejidos alterados viralmente, bacterialmente o parasiticalmente seleccionado del grupo que consiste de pulmón, mama, estómago, páncreas, próstata, vesícula, hueso, ovario, piel, riñón, seno, colon, intestino, estomago, recto, esófago, sangre, cerebro y sus coberturas, columna vertebral y sus coberturas, músculo, tejido conectivo, suprarrenal, paratiroide, tiroide, útero, testículo, pituitaria, órganos reproductivos, hígado, vesícula biliar, ojo, oreja, nariz, garganta, amígdala, boca, nódulos linfáticos, y sistema linfático.

La afección para ser tratada también puede ser una malformación o desorden de un tejido seleccionado del grupo que consiste en estomago, páncreas, próstata, vesícula, hueso, ovario, piel, riñón, seno, colon, intestino, estomago, recto, esófago, sangre, cerebro y sus coberturas, columna vertebral y sus coberturas, músculo, tejido conectivo, suprarrenal, paratiroide, tiroide, útero, testículo, pituitaria, órganos reproductivos, hígado, vesícula biliar, ojo, oreja, nariz, garganta, amígdala, boca, nódulos linfáticos, y sistema linfático.

En particular, la afección a tratar puede ser hipertrofia amigdalina, hiperplasia prostática, soriasis, eczema, dermatosis o hemorroides. La afección a tratar puede ser un a enfermedad vascular, tal como aterosclerosis o arteriosclerosis, o un desorden vascular, tal como las venas varicosas, estenosis o restenosis de una arteria o un stent. La afección a tratar también puede ser una modificación cosmética par un tejido, tal como piel, ojo, oreja, nariz, garganta, boca, músculo, tejido conectivo, pelo, o tejido de pecho.

Las composiciones terapéuticas de los péptidos de NTP también se contemplan en la presente invención. Tales composiciones pueden comprender una cantidad efectiva terapéuticamente de un péptido NTP en la mezcla con un vehículo farmacéuticamente aceptable. El material del vehículo puede ser agua para la inyección, preferiblemente suplementada con otros materiales comunes en soluciones para la administración a mamíferos. Típicamente, un péptido NTP para el uso terapéutico se administraría en la forma de composiciones que comprende el péptido NTP purificado en conjunción con uno o más vehículos psicológicamente aceptables, excipientes, o diluyentes. Salina neutralizada neutral o salina mezclada con suero de albúmina son ejemplos adecuados de vehículos. Preferiblemente, el producto se formula como un liofilizado usando excipientes adecuados (por ejemplo, sacarosa). Otros vehículos estándar, diluyentes, y los excipientes se pueden incluir como se desea. Las composiciones de la invención también pueden comprender neutralizadores conocidos por aquellos expertos habituales en la técnica con un adecuado intervalo de valores de pH, incluyendo un neutralizador Tris de aproximadamente pH 7,0-8,5, o un neutralizador de acetato de aproximadamente pH 4,0-5,5, el cual puede además incluir sorbito o un sustituto adecuado del mismo.

Los péptidos NTP se pueden emplear solos, juntos, o en combinación con otras composiciones farmacéuticas, tales como citoquinas, factores de crecimiento, antibióticos, agentes de inducción apoptósica, antiinflamatorios, y/o agentes quimioterapeuticos como los son adecuados para la indicación que se va a tratar.

Esta invención también abarca las composiciones terapéuticas de los péptido NTP empleando dendrímeros, fullerenos, y otras moléculas sintéticas, polímeros y macromoléculas donde el péptido NTP se encierra en la molécula, polímero o macromolécula, o mediante el mismo o en conjunción con otras especies de moléculas tales como un marcador especifico de tumor. Por ejemplo, en la Patente de Estados Unidos Número 5,714,166, Bioactive and/or Targeted Dendinier Conjugates, proporciona un procedimiento de preparación y uso, entre otras cosas, compuesto de polímeros conjugados dendríticos de al menos un dendrimero con un target director (s) y al menos un agente bioactivo conjugado a él. El descubrimiento de la Patente de Estados Unidos Número 5,714,166 se incorpora mediante referencia en el presente documento enteramente.

Las formas de dosificación para la administración oral incluye pero no limita a, cápsulas, pastillas, píldoras, polvos y gránulos. En las formas de dosificación sólida, el compuesto activo se mezcla con al menos uno de los siguientes: (a) uno o mas excipientes inertes (o vehículos), tales como citrato de sodio o fosfato de dicalcio; (b) rellenos o diluyentes, tales como almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manito, y ácido silicio; (c) aglutinantes, tales como carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarosa y goma arábiga; (d) humectantes, tales como glicerol; (e) agentes desintegrantes, tales como el agar-agar, carbonato de calcio, almidón de patata o tapioca, ácido alginico, cierto silicatos complejos, y carbonato de sodio; (f) solución retardada, tal como parafina; (g) aceleradores de absorción, tal como, compuestos de amonio cuaternario; (h) agentes humectantes, tales como alcohol de acetilo y monostereato de glicerol; (i) adsorbentes, tal como kaolin y bentonita; y (j) lubricantes, tales como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, glicoles de polietileno sólido, sulfato lauril de sodio, o mezclas de los mismos. Para cápsulas, pastillas y píldoras, las formas de dosificación también pueden comprender agentes de neutralización.

Las formas de dosificación liquida para la administración oral incluye emulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmacéuticamente aceptables. Además a los compuestos activos, las formas de dosificación liquida puede comprender los diluyentes inertes comúnmente usados en la técnica, tales como agua u otros solventes, agentes solubilizantes y emulsificadores. Los ejemplos de emulsificadores son el alcohol etílico, alcohol isopropilo, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol benzilo, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butienglicol, dimetilformamida, aceites, tales como el aceite de semilla de algodón, aceite de cacahuete, aceite de germen de maíz, aceite de oliva, aceite de ricino, y aceite de sésamo, glicerol, alcohol de tetrahidrofurfurilo, polientilenglicoles, ésteres de ácidos grasos de sorbitan, o mezclas de esas sustancias, y similares.

Además de dichos diluyentes inerte, la composición también puede incluir adyuvantes, tales como agentes humectantes, agentes emulsificantes y suspensotes, dulcificantes, aromatizantes y agentes perfumantes.

Los niveles de dosis actual de los ingredientes activos en las composiciones de la invención se puede variar para obtener una cantidad de péptido NTP que es efectiva para obtener una respuesta terapéutica deseada para una composición particular y un procedimiento de administración. El nivel de dosificación seleccionada por tanto cuenta con los efectos terapéuticos deseados, la vía de administración, la duración deseada de tratamiento, y otros factores.

Con los mamíferos, incluidos los humanos, las cantidades efectivas pueden administrarse sobre la base del área de superficie del cuerpo. La interrelación de las dosificaciones para los animales de varios tamaños, especies y humanos (basado en mg/M^{2} de la superficie del cuerpo) se describe por E. J. Freireich y col., Cancer Chemother. Rep., 50 (4):21+ (1996). El área de superficie del cuerpo se puede determinar aproximadamente a partir de la altura y peso de un individuo (véase por ejemplo, Scientific Tables, Geigy Phamaceuticals Ardsley, N.Y. pp. 537-538 (1970)).

La dosis diaria total del péptido NTP administrado a un huésped puede ser una dosis sencilla o dividida. Las composiciones de unidad de dosificación pueden contener tales cantidades de tales submultiplos del mismo como puede usarse para compensar la dosis diaria. Se entendería, sin embargo, que el nivel de dosis específico para cualquier paciente particular contaría con una variedad de factores incluyendo el peso del cuerpo, la salud general, sexo, dieta, tiempo y vía de administración, potencia del fármaco administrado, índice de absorción y excreción, combinación con otros fármacos y la severidad de la enfermedad que va a ser tratada.

La composición del péptido NTP según la invención se puede administrar intramuscularmente, oralmente, intravenosamente, intraperitonealmente, intracerebalmente (intraparenquimalmente), intracerbroventricularmente, intratumoralmente, intralesionalmente, intradermalmente, intratecalmente, intranasalmente, intraocularmente, intraarterialmente, intranasalmente, intraocularmente, intraarterialmente, topicalmente, transdermicamente, mediante un aerosol, infusión, eyección en bolo, aparato de de implantación, sistema de liberación sostenida, etc.

El péptido NTP de la invención también puede ser administrado por un vía transdermal o transcutánea. Un ejemplo de dicha realización es el uso de un parche. En particular, un parche puede prepararse con una fina suspensión de péptido NTP en, por ejemplo, dimetilsufóxido (DMSO), o una mezcla de DMSO con aceite de semilla de algodón y provocar en contacto con la piel del tumor llevado en mamíferos desde el lado de la localización del tumor al lado de una bolsa de piel. Otros medios o mezclas del mismo con otros solventes y soportes sólidos trabajarían igualmente bien. Los parches pueden contener un compuesto del péptido NTP en la forma de una solución o una suspensión. El parche luego se puede aplicar a la piel del paciente, por ejemplo, por medios de inserción en una bolsa de piel del paciente formado por doblar y fijar la piel junta mediante medios de sutura, clips u otros aparatos de sujeción. Estas bolsas se emplearían de tal manera que para contactos continuos con la piel se asegura sin la interferencia de mamíferos. Además de utilizar una bolsa de piel, cualquier instrumento se puede utilizar el cual asegura la colocación firme del parche
en contacto con la piel. Por ejemplo, una venda adhesiva se usaría para fijar el parche en el lugar sobre la piel.

El péptido NTP se administraría en una formulación o preparación de liberación sostenida. Ejemplos adecuados de las preparaciones de liberación sostenida incluye matrices de polímero semipermeables en la forma de cosas formadas, por ejemplo películas o microcápsulas. Las matrices de liberación sostenida incluyen poliésteres, hidrogeles, poliactidas (U.S. 3,773,919, EP 58,481), copolímeros de ácido L-glutámico y gama etil-L-glutamato (Sidman y col., Biopolymers, 22:547-556 [1983], poli(2-hidroxietil-metacrilato) (Langer y col., J. Biomed. Mater. Res., 15:167-277 [1981] y Langer, Chem. Tech., 12:98-105[1982]), etilenvinilacetato (Langer y col., supra) o ácido poli-D(-)-3-hidroxibutirico (EP 133,988). Las composiciones de liberación sostenida también pueden incluir liposomas, los cuales se pueden preparar mediante cualquiera de los diversos procedimientos conocidos en el arte (por ejemplo, Eppstein y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82:3688-3692 [1985]; EP 36,676; EP 88,046; EP 143,949).

Otra vía de administración para un péptido NTP de la invención es mediante infusión directa o indirecta del péptido NTP en el tumor u otro tejido para ser tratado. Un ejemplo de dicha realización es la inyección directa del péptido NTP en el tumor u otro tejido para ser tratado. El tratamiento puede consistir de una inyección sencilla, inyecciones múltiple en una ocasión o unas series de inyecciones durante un periodo de horas, días o meses con la regresión o destrucción del tumor u otro tejido para ser tratando ser supervisada por medios de biopsia, formación de imágenes u otros procedimientos de para supervisar el crecimiento del tejido. La inyección en el tumor u otro tejido que se trata puede ser mediante un instrumento insertado en un orificio tal como la nariz, la boca, oreja, vagina, recto o uretra o a través de una incisión según el alcance del tumor o tejido in vivo y puede realizarse en conjunción con un sistema de formación de imágenes u óptico tal como ultrasonido o fibra óptica escape según se identifica el sitio adecuado para la inyección(s). Otro ejemplo de dicha realización es el uso de un instrumento que puede proporcionar una infusión constante del péptido NTP al tejido sobre el tiempo.

Otra vía de administración para un péptido NTP de la invención es una conjunción con una cirugía o procedimiento similar empleado para extirparlo fisicamente, ablación o de lo contrario matar o destruir el tumor u otro tejido o elementos celulares no requeridos o deseados par eliminarse o destruirse en el que un péptido NTP de la invención se administra al área(s) inmediata circundante del área(s) donde el tumor u otro tejido se elimina según se destruye o impide el crecimiento de cualquiera de las células u otros elementos celulares no eliminados o destruidos mediante el procedimiento.

Otra vía de administración para un péptido NTP de la invención es mediante la implantación de un instrumento dentro del tumor u otro tejido para ser tratado. Un ejemplo de dicha realización es la implantación de un sello que contiene un péptido en el tumor u otro tejido para ser tratado. El sello libera una dosis terapéutica del péptido NTP en el tejido sobre el tiempo. Alternativamente o adicionalmente, la composición se puede administrar localmente mediante implantación sobre el área afectada de una membrana, esponja, u otro material adecuado en el que el péptido NTP se ha absorbido. Donde se usa un instrumento de implantación, el instrumento se implanta sobre cualquier tejido adecuado u órgano, y la entrega del péptido NTP puede ser directamente a través del instrumento mediante bolo, o mediante administración continua, o mediante catéter usando infusión continua.

Ejemplo 1

(Sólo comparación)

El propósito de este ejemplo determinó el efecto de péptido NTP[122]# en tejido a sitios de la inyección.

Las ratas Sprague-Dawley macho (300 g de rango de peso) se anestesiaron con éter y se administró péptido NTP[122]#1 mediante la infusión intraprostática después de abrir la visualización quirúrgica de la próstata. Las inyecciones consisten en 300 \mul de péptido NTP[122]#1, 1 mg/ml en PBs pH 7,4 (1,0 mg/kg) (n=8), inyecciones de control de solo PBS (n=6), y controles controles con no inyección (n=2). Las ratas se sacrificaron sin causar dolor después de 72 horas. Las glándulas de próstata se diseccionaron, fijaron en 10% de formalin neutralizado durante 24 horas, incrustado en parafina, secionado, y teñida con H & E. Para cada uno de los animales las glándulas de próstata entera se incrustaron y seccionaron. Todas las secciones teñidas se examinaron histológicamente y se midieron. Para cada próstata al menos se examinaron 4 secciones histológicas, y para cada sección histológica dos diámetros transversales (D) a 90º se midió para cada uno. (total de \geq 8 medidas por próstata). El diámetro medio de estas mediciones para cada próstata se uso para estimar el volumen según

V = \frac{4}{3}\left(\frac{D}{2}\right)^{3}

Resultados

La reducción en el volumen de la próstata en el péptido NTP [122] #1 inyectado en ratas se estimó para ser un media de 45% comparada con los controles (había un diferencia no discernible entre inyecciones de control de PBS sólo, y controles con no inyecciones). La rata tratada de próstata mostró una menor extensión de glandular epiteliar, achatamiento y atrofia. El péptido NTP[122]#1 en PBS pH 7,4 empiezan las infusiones de 1,0 mg/kg en la próstata de la rata producida en la reducción del volumen de próstata estimado de > 40% comparado con la no tratada o los controles tratados de PBS, a 72 horas.

Ejemplo 2

(Sólo comparación)

El propósito de este ejemplo era determinar el efecto del péptido NTP [122]#1 en el tejido en el lugar de la inyección.

El ratas Sprague-Dawley macho (300 g de rango de peso) se anestesiaron con éter y se administró péptido NTP[122]#1 mediante la infusión intraprostática después de abrir la visualización quirúrgica de la próstata. Las inyecciones consisten en 300 \mul de péptido NTP[122]#1, 1mg/ml en PBs pH 7,4 (1,0 mg/kg) (n=4), inyecciones de control de solo PBS (n=3), y controles controles con no inyección (n=1). Las ratas se sacrificaron sin causar dolor después de 72 horas. Las glándulas de próstata se diseccionaron, fijaron en 10% de formalín neutralizado durante 24 horas, incrustado en parafina, seccionado, y teñida con H & E. Para cada uno de los animales las glándulas de próstata entera se incrustaron y seccionaron. Todas las secciones teñidas se examinaron histológicamente y se midieron. Para cada próstata al menos se examinaron 4 secciones histológicas, y para cada sección histológica dos diámetros transversales (D) a 90º se midió para cada uno (total de \geq 8 medidas por próstata). El diámetro medio de estas mediciones para cada próstata se uso para estimar el volumen según

V = \frac{4}{3}\left(\frac{D}{2}\right)^{3}

Los controles fueron los mismos que en el Ejemplo 1

Resultados

Como en el Ejemplo 1 de arriba, la inyección del péptido NTP[112]#1 produce menos células significantes y atrofia en la próstata a la 72 horas. Los controles mostraron los cambios mínimos y ausentes, que consiste en la inflamación focal leve, a partir de la aguja:

Ejemplo 3

El propósito de este ejemplo era determinar el efecto de los péptido NTP descritos arriba sobre el tejido en el lugar de la inyección.

El péptido NTP [122] 1 se citó por comparación sólo.

Ocho ratas normales se inyectaron en la piel y subcutáneamente, cada una en cuatro focos diferentes y en la extremidad del esqueleto muscular, cada uno en dos focos diferentes, con los péptidos NTP[122] 1-8, péptidos NTP[112] 1-7, descrito arriba en salino en cantidades de 100 a 400 ml a concentraciones de 0,1-1 mg/ml entregado a partir de jeringuilla a través de 26 agujas de ancho de acero inoxidable.

Los animales se observaron a 24 horas y se sacrificaron sin dolor a las 24 horas. El foco individual de infiltración se extirpó, fijó en formalin al 10%, incrustado en parafina, y se manchó y examinó mediante procedimientos de histopatología estándar.

Los grupos similares de ratas de control se inyectaron con (1) albumina de suero bovino, (2) suero humano normal, (3) salino fisiológico, (4) proteína de bacterias no infecciosas, y (5) péptido de control y purificaron y luego examinaron y sacrificaron como mas arriba, con el foco extirpado de inyección tratado como mas arriba.

Resultados

La inyección de los péptidos NTP[122] 1-8, péptidos NTP[122] 1-7, péptidos NTP[106] 1-7, péptidos NTP[98] 1-6, péptidos NTP[75] 1-5, péptidos NTP[68] 1-4, péptidos NTP[61] 1-4 en todos los ejemplos se produjo una necrosis aguda abundante del tejido a los lugares de la inyección. La necrosis es evidente en el tejido muscular, tejido conectivo subcutáneo y dermis a los lugares donde el péptido NTP se inyectó. A las 24 horas, las células aparecen pálidas, encogidas y necróticas, y hay filtración con células inflamatorias. La necrosis se correlaciona con las áreas de inyección y no aparece para esparcir mas alla del sitio de la inyección.

Aparte de las áreas leves de la inflamación, los controles mostrados no son una prueba de necrosis o pérdida de célula. En contraste con las inyecciones del péptido NTP donde los campos enteros de capas de fibra muscular son necróticas, los controles muestran cambios musculares mínimo o ausentes. Las inyecciones de control tienen una leve inflamación aguda mínima a los sitios de inyección y microhemorragias focales a partir de las agujas.

<110> NYMOX CORPORATION

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AVERBACK, PAUL

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GEMMEL, JACK

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<120> PÉPTIDOS EFECTIVOS EN EL TRATAMIENTO DE TUMORES Y OTRAS AFECCIONES QUE REQUIEREN LA ELIMINACIÓN O DESTRUCCIÓN DE CÉLULAS

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<130> 10107-52

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<140> PCT/CA02/01757

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<141> 2002-11-18

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<150> US 60/331,447

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<151> 2001-11-16

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<160> 49

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<170> PatentIn versión 3.2

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<210> 1

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<211> 122

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<212> PRT

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<213> Homo sapiens

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\vskip0.400000\baselineskip

<211> 61

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 7

\vskip1.000000\baselineskip

7

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 8

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 17

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 8

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Ile Asp Gln Gln Val Leu Ser Arg Ile Lys Leu Glu Ile Lys Arg Cys}

\sac{Leu}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 9

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 9

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Met Met Val Cys Trp Asn Arg Phe Gly Lys Trp Val Tyr Phe Ile}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 10

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 10

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Ser Ala Ile Phe Asn Phe Gly Pro Arg Tyr Leu Tyr HIs Gly Val}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 11

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 11

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Pro Phe Tyr Phe Leu Ile Leu Val Arg Ile Ile Ser Phe Leu Ile}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 12

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 12

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Gly Asp Met Glu Asp Val Leu Leu Asn Cys Thr Leu Leu Lys Arg}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 13

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 13

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Ser Ser Arg Phe Arg Phe Trp Gly Ala Leu Val Cys Ser Met Asp}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 14

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 14

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Ser Cys Arg Phe Ser Arg Val Ala Val Thr Tyr Arg Phe Ile Thr}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 15

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Leu Leu Asn Ile Pro Ser Pro Ala Val Trp Met Ala Arg Asn Thr}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 16

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 16

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Met Ala Gln Ser Arg Leu Thr Ala Thr Ser Ala Ser Arg Val Gln}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 17

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 17

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Ala Ile Leu Leu Ser Gln Pro Pro Lys Gln Leu Gly Leu Arg Ala}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 18

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 18

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Pro Ala Asn Thr Pro Leu Ile Phe Val Phe Ser Leu Glu Ala Gly}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 19

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 19

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Phe His His Ile Cys Gln Ala Gly Leu Lys Leu Leu Thr Ser Gly}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 20

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

<212-> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 20

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Asp Pro Pro Ala Ser Ala Phe Gln Ser Ala Gly Ile Thr Gly Val}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 21

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 21

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Ser His Leu Thr Gln Pro Ala Asn Leu Asp Lys Lys Ile Cys Ser}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 22

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 22

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 22

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Asn Gly Gly Ser Cys Tyr Val Ala Gln Ala Gly Leu Lys Leu Leu Ala}

\sac{Ser Cys Asn Pro Ser Lys}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 23

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 23

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Met Trp Thr Leu Lys Ser Ser Leu Val Leu Leu Leu Cys Leu Thr}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 24

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 24

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Cys Ser Tyr Ala Phe Met Phe Ser Ser Leu Arg Gln Lys Thr Ser}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 25

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 25

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Glu Pro Gln Gly Lys Val Pro Cys Gly Glu His Phe Arg Ile Arg}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 26

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 26

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Gln Asn Leu Pro Glu His Thr Gln Gly Trp Leu Gly Ser Lys Trp}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 27

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\newpage

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 27

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Leu Trp Leu Leu Phe Ala Val Val Pro Phe Val Ile Leu Lys Cys}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 28

\vskip0.400000\baselineskip

<211>15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 28

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Gln Arg Asp Ser Glu Lys Asn Lys Val Arg Met Ala Pro Phe Phe}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 29

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 6

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 29

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Leu His His Ile Asp Ser Ile Ser Gly Val Ser Gly Lys Arg Met Phe}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 30

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 30

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Glu Ala Tyr Tyr Thr Met Leu His Leu Pro Thr Thr Asn Arg Pro}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 31

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 31

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Lys Ile Ala His Cys Ile Leu Phe Asn Gln Pro His Ser Pro Arg}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 32

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 32

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Ser Asn Ser His Ser His Pro Asn Pro Leu Lys Leu His Arg Arg}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 33

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 33

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Ser His Ser His Asn Arg Pro Arg Ala Tyr Ile Leu Ile Thr Ile}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 34

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 34

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Leu Pro Ser Lys Leu Lys Leu Arg Thr His Ser Gln Ser His His}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 35

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 23

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 35

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Asn Pro Leu Ser Arg Thr Ser Asn Ser Thr Pro Thr Asn Ser Phe Leu}

\sac{Met Thr Ser Ser Lys Pro Arg}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 36

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 36

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Ser Ser Ser Leu Gly Leu Pro Lys Cys Trp Asp Tyr Arg His Glu}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 37

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 37

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Leu Leu Ser Leu Ala Leu Met Ile Asn Phe Arg Val Met Ala Cys}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 38

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 38

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Thr Phe Lys Gln His Ile Glu Leu Arg Gln Lys Ile Ser Ile Val}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 39

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 39

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Pro Arg Lys Leu Cys Cys Met Gly Pro Val Cys Pro Val Lys Ile}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 40

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 40

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Ala Leu Leu Thr Ile Asn Gly His Cys Thr Trp Leu Pro Ala Ser}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 41

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 41

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Met Phe Val Phe Cys Leu Ile Leu Asn Arg Glu Lys Ile Lys Gly}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 42

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 42

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Gly Asn Ser Ser Phe Phe Leu Leu Ser Phe Phe Phe Ser Phe Gln}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 43

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 43

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Asn Cys Cys Gln Cys Phe Gln Cys Arg Thr Thr Glu Gly Tyr Ala}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 44

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 23

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 44

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Val Glu Cys Phe Tyr Cys Leu Val Asp Lys Ala Ala Phe Glu Cys Trp}

\sac{Trp Phe Tyr Ser Phe Asp Thr}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 45

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 45

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Met Glu Pro His Thr Val Ala Gln Ala Gly Val Pro Gln His Asp}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 46

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 46

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Leu Gly Ser Leu Gln Ser Leu Leu Pro Arg Phe Lys Arg Phe Ser}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 47

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 15

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 47

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Cys Leu Ile Leu Pro Lys Ile Trp Asp Tyr Arg Asn Met Asn Thr}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 48

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 16

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 48

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Ala Leu Ile Lys Arg Asn Arg Tyr Thr Pro Glu Thr Gly Arg Lys Ser}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 49

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 5

\vskip0.400000\baselineskip

<212> PRT

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Homo sapiens

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 49

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Glu Thr Glu Ser His}

\vskip1.000000\baselineskip

Claims (3)

1. Un péptido NTP consiste en una secuencia de amino ácido seleccionado de un grupo que consiste en:

8

2. Un péptido NTP según la reivindicación 1 para su uso como medicamento.

3. Una composición que comprende un péptido NTP según la reivindicación 1 y un vehículo para el mismo.