ES2262753T3 - 2-(2.6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-isoindolinas substituidas y su empleo para reducir los niveles de tnfalfa. - Google Patents

Abstract

Un isómero R ó S de un compuesto seleccionado del grupo formado por (a) una 2(2, 6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-isoindolina, de fórmula: (Ver fórmula) en la cual Y es oxígeno ó H2, y cada R1, R2, R3 y R4, independientemente entre sí, es hidrógeno, halo, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alcoxilo de 1 a 4 átomos de carbono, o amino, y en donde el átomo de carbono al cual el átomo de flúor dibujado está unido, constituye un centro de quiralidad, y (b) las sales de adición ácida de dichas 2-(2, 6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-isoindolinas, las cuales contienen un átomo de nitrógeno capaz de ser protonado.

Description

2-(2.6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-isoindolinas substituidas y su empleo para reducir los niveles de TNF\alpha.

Antecedentes de la invención

El factor \alpha de necrosis tumoral ó TNF\alpha, es una citocina liberada primordialmente por los fagocitos mononucleares en respuesta a un número de inmunoestimuladores. Es una citocina proinflamatoria clave en la cascada de inflamaciones que ocasionan la producción y/o la liberación de otras citocinas y agentes. Cuando se administra a los animales o a los humanos, causa inflamación, fiebre, efectos cardiovasculares, hemorragia, coagulación, y respuestas de fase aguda similares a las que se observan en infecciones agudas y estados de shock. La producción excesiva o no regulada de TNF\alpha ha sido así implicada en un número de condiciones de enfermedad. Estas incluyen la endotoxemia y/o el síndrome del shock tóxico {Tracey et al., Nature 330, 662-664 (1987) y Hinshaw et al., Circ. Shock 30, 279-292 (1990)}; caquexia {Dezube et al., Lancet, 335 (8690), 662 (1990)} y Adult Respiratory Distress Syndrome ("Síndrome del dolor respiratorio adulto"), en donde se ha detectado una concentración de TNF\alpha con un exceso de hasta 12.000 pg/ml en aspirados pulmonares de pacientes de ARDS {Millar et al., Lancet 2(8665), 712-714 (1989)}. La infusión sistémica de TNF\alpha recombinante dio también como resultado, cambios observados típicamente en ARDS {Ferrai-Baliviera et al., Arch. Surg. 124(12), 1400-1405 (1989)}.

El TNF\alpha parece estar implicado en enfermedades de resorción de huesos, incluyendo la artritis. Cuando se activan, los leucocitos producen resorción de huesos, una actividad a la cual todos los datos sugieren que el TNF\alpha contribuye. {Bertolini et al., Nature 319, 516-518 (1986) y Johnson et al., Endocrinology 124(3), 1424-1427 (1989)}. El TNF\alpha ha demostrado también que estimula la resorción del hueso e inhibe la formación de hueso in vitro e in vivo mediante la estimulación de los osteoclastos, formación y activación combinadas con inhibición de la función de los osteoblastos. Aunque el TNF\alpha puede estar implicado en muchas enfermedades de resorción del hueso, incluyendo la artritis, la implicación más convincente con la enfermedad es la asociación entre la producción de TNF\alpha por el tumor o los tejidos anfitriones, y la hipercalcemia asociada a la malignidad {Calci. Tissue Int. (US) 46 (Suppl), S3-10 (1990)}. En Graft versus Host Reaction ("El injerto frente a la reacción del anfitrión"), mayores niveles de TNF\alpha en el suero han sido asociados con una complicación importante después de transplantes agudos de médula ósea alogénica {Holler et al., Blood, 75(4), 1011-1011-1016 (1990)}.

La malaria cerebral es un síndrome neurológico hiperagudo letal asociado con altos niveles de TNF\alpha en sangre y las más severas complicaciones que tienen lugar en los pacientes de malaria. Los niveles de TNF\alpha en suero correlacionados directamente con la severidad de la enfermedad y el pronóstico en pacientes con ataques agudos de malaria {Grau et al., N. Engl. J. Med. 320(24), 1586-1591 (1989)}.

La angiogénesis inducida por macrófagos es conocida por ser mediada por el TNF\alpha. Leibovich et al. {Nature, 329, 630-632 (1987)} demostraron que el TNF\alpha induce in vivo la formación de vasos sanguíneos capilares en la córnea de la rata y el desarrollo de membranas corialantoicas de polluelo en dosis muy bajas, y sugieren que el TNF\alpha es un candidato para la inducción de angiogénesis en la inflamación, curación de heridas y crecimiento de tumores. La producción de TNF\alpha ha sido también asociada con condiciones cancerosas, particularmente con tumores inducidos {Ching et al., Brit. J. Cancer, (1955)72, 339-343, y Koch, Progress in Medicinal Chemistry, 22, 166-242 (1985)}.

El TNF\alpha juega también un papel en el área de enfermedades inflamatorias pulmonares crónicas. La deposición de partículas de sílice conduce a la silicosis, una enfermedad de fallo respiratorio progresivo causado por una reacción fibrótica. El anticuerpo contra el TNF\alpha bloquea completamente la fibrosis de pulmón inducida por la sílice en el ratón {Pignet et al., Nature, 344, 245-247 (1990)}. Se ha demostrado la existencia de altos niveles de producción de TNF\alpha (en el suero y en macrófagos aislados) en modelos animales de fibrosis inducida por sílice y asbesto {Bissonnette et al., Inflammation 13(3), 329-339 (1989)}. Se ha demostrado también que los macrófagos alveolares de pacientes de sarcoidosis pulmonar liberan espontáneamente masivas cantidades de TNF\alpha cuando se comparan con los macrófagos de dadores normales {Baughman et al., J. Lab. Clin. Med. 115(1), 36-42 (1990)}.

El TNF\alpha está también implicado en la respuesta inflamatoria que sigue a la reperfusión, llamada lesión de reperfusión, y es una causa principal de lesión en el tejido después de la pérdida de flujo sanguíneo {Vedder et al., PNAS 87, 2643-2646 (1990)}. El TNF\alpha altera también las propiedades de las células endoteliales y tiene varias actividades procoagulantes, tales como la producción de un aumento de la actividad procoagulante del factor tejido y la supresión de la ruta de la proteína C anticoagulante así como también la regulación en disminución de la expresión de la trombomodulina {Sherry et al., J. Cell Biol. 107, 1269-1277 (1988)}. El TNF\alpha tiene actividades proinflamatorias que juntamente con su temprana producción (durante la etapa inicial de un episodio inflamatorio) lo hace un probable inductor de la lesión del tejido en varios importantes transtornos incluyendo pero sin limitarlo a, el infarto de miocardio, apoplejía y shock circulatorio. De importancia específica puede ser la expresión inducida por TNF\alpha de moléculas de adhesión tales como la molécula de adhesión intercelular (ICAM) o molécula de adhesión de leucocitos endoteliales (ELAM) sobre células endoteliales {Munro et al., Am. J. Path. 135(1), 121-132 (1989)}.

El bloqueo del TNF\alpha con anticuerpos monoclonales anti-TNF\alpha se ha demostrado que es beneficioso en la artritis reumatoide {Elliot et al., Int. J. Pharmac. 1995 17(2), 141-145}. Altos niveles de TNF\alpha están asociados con la enfermedad de Crohn {por Dullemen et al., Gastroenterology, 1995 109(1), 129-135} y se ha logrado un claro beneficio clínico con un tratamiento con el anticuerpo del TNF\alpha.

Además, se sabe actualmente que el TNF\alpha es un potente activador de la replicación de retrovirus incluyendo la activación del HIV-1. {Duh et al., Proc. Nat. Acad. Sci. 86, 5974-5978 (1989); Poll et al., Proc. Nat. Acad. Sci. 87, 782-785 (1990); Monto et al., Blood 79, 2670 (1990); Clouse et al., J. Immunol. 142, 431-438 (1989); Poll et al., AIDS Res. Hum. Retrovirus, 191-197 (1992)}. El SIDA resulta de la infección de los linfocitos T con el virus de la inmunodeficiencia humana (HIV). Por lo menos se han identificado tres tipos de cepas de HIV, a saber, HIV-1, HIV-2, y HIV-3. Como consecuencia de la infección con HIV, la inmunidad inducida por las células T se deteriora, y los individuos infectados manifiestan severas infecciones oportunistas y/o inusuales neoplasmas. La entrada del HIV en el linfocito T requiere una activación del linfocito T. Otros virus, tales como el HIV-1, HIV-2 infectan los linfocitos T después de la activación de la célula T y dicha expresión de la proteína del virus y/o replicación está inducida o mantenida por dicha activación de las células T. Una vez el linfocito T activado está infectado con el HIV, el linfocito T debe continuar manteniéndose en un estado activado que permita la expresión del gen del HIV y/o la replicación del HIV. Las citocinas, específicamente el TNF\alpha están implicadas en la expresión de la proteína del HIV inducida por la célula T activada, y/o la replicación del virus, ejerciendo el papel de mantener la activación del linfocito T. Por lo tanto, la interferencia con la actividad de la citocina como por ejemplo, mediante la prevención o inhibición de la producción de citocina, en particular de TNF\alpha, en un individuo infectado con HIV, ayuda a limitar el mantenimiento de la activación del linfocito T causado por la infección con HIV.

Los monocitos, macrófagos y células afines, tales como las células kupffer y glial, han sido también implicadas en el mantenimiento de la infección con HIV. Estas células, como las células T, son dianas para la replicación viral y el nivel de replicación vírica es dependiente del estado de activación de dichas células {Rosenberg et al., The Immunopathogenesis of HIV Infection, Advances in Immunology ("La inmunopatogénesis de la infección con HIV, Avances en Inmunología"), 57 (1989)}. Se ha demostrado que las citocinas tales como el TNF\alpha, activan la replicación del HIV en monocitos y/o macrófagos {Poli et al., Proc. Natl Acad. Sci., 87, 782-784 (1990)}, por lo cual la prevención o inhibición de la producción o actividad de las citocinas ayuda a limitar la progresión del HIV en las células T. Estudios adicionales han identificado el TNF\alpha como un factor corriente en la activación del HIV in vitro y ha proporcionado un claro mecanismo de acción mediante una proteína reguladora nuclear encontrada en el citoplasma de las células (Osborn et al., PNAS 86 2336-2340). Esta evidencia sugiere que una reducción de la síntesis de TNF\alpha puede tener un efecto antivírico en las infecciones con HIV, mediante la reducción de la transcripción y por lo tanto, de la producción de virus.

La replicación vírica del SIDA del HIV latente en la célula T y las líneas de macrófagos pueden ser inducidas mediante el TNF\alpha {Folks et al., PNAS 86, 2365-2368 (1989)}. Se sugiere un mecanismo molecular para la actividad de inducción del virus debido a la capacidad del TNF\alpha de activar una proteína reguladora del gen (NF\kappaB) encontrada en el citoplasma de las células, el cual induce la replicación del HIV mediante la unión a una secuencia génica reguladora viral (LTR) {Osborn et al., PNAS 86, 2336-2340 (1989)}. El TNF\alpha en la caquexia asociada al SIDA, se sugiere debido a un elevado TNF\alpha en suero y altos niveles de producción espontánea de TNF\alpha en los monocitos de la sangre periférica de pacientes {Wright et al., J. Immunol. 141(1). 99-104 (1998)}. El TNF\alpha ha sido implicado por jugar diferentes papeles en otras infecciones víricas, tales como el virus de la citomegalia (CMV), virus de la influenza, adenovirus, y la familia de los virus del herpes, por razones similares a las mencionadas.

El factor nuclear \kappaB (NF\kappaB) es un activador transcripcional pleiotrópico {Lenardo, et al., Cell 1989, 58, 227-29). El NF\kappaB ha sido implicado como un activador transcripcional en una variedad de enfermedades y estados inflamatorios y se cree que regula los niveles de citocinas, incluyendo, pero sin estar limitado, al TNF\alpha y también que es un activador de la transcripción del HIV (Dbaibo et al., J. Bio. Chem. 1993, 17762-66; Duh et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 1989, 86, 5974-78; Bachelerie et al., Nature 1991, 350, 709-12; Boswas et al., J. Acquired Immune Deficiency Síndrome ("Revista del síndrome de la inmunodeficiencia adquirida") 1993, 6, 778-786; Suzuki et al., Biochem. And Biophys. Res. Comm. 1993, 193, 277-83; Suzuki et al., Biochem. And Biophys. Res Comm. 1992, 189, 1709-15; Suzuki et al., Biochem. Mol. Bio. Int. 1993, 31(4), 693-700; Shakhov et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1990, 171, 35-47; y Staal et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1990, 87, 9943-47). Así, la inhibición de la unión NF\kappaB puede regular la transcripción del (de los) gen(es) y a través de esta modulación y otros mecanismos, ser de utilidad para la inhibición de una multitud de estados de enfermedad. Los compuestos descritos en la presente pueden inhibir la acción del NF\kappaB en el núcleo y así son de utilidad para el tratamiento de una variedad de enfermedades, entre las que se incluyen pero sin limitarlas, la artritis reumatoide, espondilitis reumatoide, osteoartritis, otras condiciones artríticas, shock séptico, septis, shock endotóxico, injerto versus enfermedad del anfitrión, agotamiento, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, esclerosis múltiple, lupus eritematoso sistémico, ENL de la lepra, HIV, SIDA e infecciones oportunistas en el SIDA. Los niveles de TNF\alpha y NF\kappaB están influenciados por un circuito recíproco de retroalimentación. Como se ha indicado más arriba, los compuestos de la presente invención afectan los niveles de ambos TNF\alpha y NF\kappaB.

Muchas funciones celulares están inducidas por los niveles de adenosin 3',5'-monofosfato cíclico (cAMP). Dichas funciones celulares pueden contribuir a las condiciones y enfermedades inflamatorias, incluyendo el asma, inflamación y otras condiciones, Lowe y Cheng, Drugs of the Future ("Fármacos del futuro"), 17(9), 799-807, 1992). Se ha demostrado que el aumento de cAMP en los leucocitos inflamatorios inhibe su activación y la subsiguiente liberación de mediadores inflamatorios, incluyendo el TNF\alpha y NF\kappaB. Niveles elevados de cAMP conducen también al relajamiento del músculo liso de las vías aéreas. Las fosfodiesterasas controlan el nivel de cAMP a través de la hidrólisis y se ha demostrado que los inhibidores de las fosfodiesterasas aumentan los niveles de cAMP.

Niveles decrecientes de TNF\alpha y/o niveles crecientes de cAMP constituyen por lo tanto una valiosa estrategia terapéutica para el tratamiento de muchas enfermedades inflamatorias, infecciosas, inmunológicas o malignas. Estas incluyen aunque no están limitadas a, shock séptico, sepsis, shock endotóxico, shock hemodinámico y síndrome de sepsis, lesión por reperfusión post isquémica, malaria, infección micobacteriana, meningitis, psoriasis, fallo cardíaco congestivo, enfermedad fibrótica, caquexia, rechazo de un injerto, cáncer, enfermedad autoinmunológica, infecciones oportunistas en el SIDA, artritis reumatoide, espondilitis reumatoide, osteoartritis, otras condiciones artríticas, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, esclerosis múltiple, lupus eritematoso sistémico, ENL de la lepra, lesiones por radiación, y lesión alveolar hiperóxica. Las anteriores tentativas dirigidas a la supresión de los efectos del TNF\alpha han oscilado desde la utilización de esteroides como la dexametasona y la prednisolona, hasta el empleo de los anticuerpos tanto policlonales como monoclonales {Beutler et al., Science 234, 470-474 (1985); WO 92/11383}.

Descripción detallada

La presente invención se basa sobre el descubrimiento de que ciertas clases de compuestos no polipéptidos que se describen más adelante más detalladamente, disminuyen los niveles de TNF\alpha, aumentan los niveles de cAMP e inhiben la fosfodiesterasa. La presente invención se refiere por lo tanto a las 2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-isoindolinas, al método para reducir los niveles del factor \alpha de necrosis tumoral y otras citocinas inflamatorias en un mamífero a través de la administración de dichos derivados y a las composiciones farmacéuticas que contienen dichos derivados.

En particular, la invención se refiere a

(a) una 2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-isoindolina, de fórmula

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en la cual

Y es oxígeno ó H_{2}, y

cada R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4}, independientemente entre sí, es hidrógeno, halo, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alcoxilo de 1 a 4 átomos de carbono o amino, y

(b) las sales de adición ácida de dichas 2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-isoindolinas, las cuales contienen un átomo de nitrógeno capaz de ser protonado.

A no ser que se defina otra cosa, el término alquilo significa una cadena de hidrocarburo univalente saturada ramificada o lineal, que contiene de 1 a 8 átomos de carbono. Son representativos de dichos grupos alquilo, el metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, butilo secundario y butilo terciario. Alcoxilo se refiere a un grupo alquilo unido al resto de la molécula mediante un átomo de oxígeno de un éter. Representativos de dichos grupos alcoxilo son el metoxilo, etoxilo, propoxilo, isopropoxilo, butoxilo, isobutoxilo, butoxilo secundario y butoxilo terciario.

Los compuestos de fórmula I se emplean bajo la supervisión de profesionales cualificados, para inhibir los efectos indeseables del TNF\alpha y otras citocinas inflamatorias incluyendo la IL-1, IL-6 e IL-12. Los compuestos pueden administrarse oralmente, rectalmente o parenteralmente, solos o en combinación con otros agentes terapéuticos incluyendo los antibióticos, esteroides, etc., a un mamífero en necesidad de tratamiento.

Los compuestos de la presente invención pueden también emplearse tópicamente en el tratamiento o profilaxis de estados de enfermedad tópica inducida o exacerbada por la producción excesiva de TNF\alpha, respectivamente, tales como infecciones víricas, tales como las causadas por los virus del herpes, o conjuntivitis vírica, psoriasis, dermatitis atópica, etc.

Los compuestos pueden emplearse también en tratamientos de veterinaria de mamíferos distintos a los humanos en necesidad de prevención o inhibición de la producción de TNF\alpha. Las enfermedades inducidas por el TNF\alpha para tratamiento terapéutico o profiláctico, en animales incluyen estados de enfermedad tales como los mencionados más arriba, pero en particular las infecciones víricas. Los ejemplos incluyen los virus de la inmunodeficiencia felina, virus de la anemia infecciosa equina, virus de la artritis de la cabra, virus visna y virus maedi, así como otros lentivirus.

Los compuestos de fórmula I se preparan fácilmente mediante diferentes rutas. En una primera versión, el nitrógeno del anillo de una 2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-isoindolina de fórmula II se protege con un grupo de protección de amino convencional para dar una 2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-isoindolina protegida de fórmula III. A continuación, ésta se fluora para dar una 2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-isoindolina protegida de fórmula IV, después de lo cual se obtienen los compuestos de fórmula V por eliminación del grupo protector:

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En las reacciones anteriores, cada R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{4} e Y son como se ha definido más arriba y X es el grupo protector del amino. Cuando cualquiera de los R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4} es amino, también debe ser protegido antes del paso de fluoración.

Los productos intermedios de fórmula IV pueden aislarse y purificarse antes de la eliminación del grupo protector X ó pueden convertirse directamente en los compuestos finales de fórmula V in situ.

Algunos de los compuestos de fórmula II que son utilizados aquí como productos intermedios, son ya conocidos, como por ejemplo 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-4-aminoisoindolina y 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-5-aminoisoindolina. Ver p. ej., Jönsson, Acta Pharma. Succica, 9, 521-542 (1972). Otros están descritos en la aplicación copendiente serie No. 08/701.494, la descripción de la cual se incorpora a la presente como referencia, o bien pueden prepararse por métodos análogos a los mismos.

La fluoración puede efectuarse con diferentes reactivos, como por ejemplo, N-fluorbencenosulfonimida, fluoruro de perclorilo, N-fluorbencenodisulfonimida y similares, en presencia de una base fuerte tal como el n-butil litio, hidruro de sodio, litio diisopropilamida, litio bis(trimetilsilil)amida, y similares.

En un segundo método, un diéster del ácido glutámico de fórmula VI apropiadamente substituido, se fluora para dar el correspondiente diéster del ácido fluorglutámico de fórmula VI. A continuación éste se convierte en el anhídrido del ácido glutámico fluorado de fórmula VIII, el cual a su vez es amidado para dar los compuestos de fórmula V:

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En las reacciones anteriores, cada uno de los R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{4} e Y son como se ha definido más arriba y Z y Z' son alquilo inferior. De nuevo, cuando cualquiera de los R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4} es amino, también debe ser protegido antes del paso de fluoración.

Los grupos de protección utilizados en la presente, son grupos que generalmente no se encuentran en los compuestos terapéuticos finales pero que se introducen intencionadamente en la misma etapa de la síntesis con el fin de proteger grupos que de otra manera podrían verse alterados en el transcurso de las manipulaciones químicas. Estos grupos de protección se eliminan en una etapa posterior de la síntesis y los compuestos portadores de dichos grupos de protección son por lo tanto de importancia primordial como productos intermedios químicos (aunque algunos derivados presentan también actividad biológica). En consecuencia, la precisa estructura del grupo de protección no es crítica. Se han descrito numerosas reacciones para la formación y eliminación de dichos grupos de protección en diferentes trabajos estándar, incluyendo por ejemplo, "Protective groups in Organic Chemistry" ("Grupos de protección en Química Orgánica"), Plenum Press, Londres y Nueva York, 1973; Greene, Th.W. "Protective Groups in Organic Synthesis" ("Grupos protectores en síntesis orgánica"), Wiley, Nueva York, 1981; "The Peptides" ("Los péptidos"), vol. I, Schröder y Lubke, Academic Press, Londres y Nueva York, 1965; "Methoden der organischen Chemie" ("Métodos de Química Orgánica"), Houben-Weyl, 4ª edición, vol 15/I, editorial Georg Thieme, Stuttgart 1974, las descripciones de las cuales se incorporan a la presente como referencia.

En cualquiera de las reacciones anteriores, puede emplearse un compuesto nitro convirtiéndose el grupo nitro en un grupo amino mediante hidrogenación catalítica. Alternativamente, puede escindirse un grupo amino protegido para dar el correspondiente compuesto amino. Un grupo amino puede estar protegido como amida utilizando un grupo acilo el cual puede eliminarse selectivamente en condiciones suaves, especialmente el benciloxicarbonilo, formilo o un grupo alcanoilo inferior el cual está ramificado en la posición 1- ó \alpha respecto al grupo carbonilo, particularmente alcanoilo terciario como p. ej., el pivailoilo, el grupo alcanoilo inferior el cual está substituido en la posición \alpha respecto al grupo carbonilo, como por ejemplo, trifluoracetilo.

El átomo de carbono al cual está unido el átomo de flúor citado en los compuestos de fórmula I, constituye un centro de quiralidad, con lo cual da origen a isómeros ópticos:

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Tanto los racematos de estos isómeros como los mismos isómeros individuales, así como los diastereómeros cuando está presente un segundo centro quiral, están englobados en el ámbito de la presente invención. Los racematos pueden emplearse como tales o pueden separarse mecánicamente en sus isómeros individuales así como por cromatografía empleando un absorbente quiral. Alternativamente, los isómeros individuales pueden preparase en la forma quiral o separados químicamente de la mezcla, por formación de las sales con un ácido o base quiral, tales como los enantiómeros individuales del ácido 10-canfosulfónico, ácido canfórico, ácido \alpha-bromocanfórico, ácido metoxiacético, ácido tartárico, ácido diacetiltartárico, ácido málico, ácido pirrolidon-5-carboxílico y similares, y a continuación liberando una o las dos bases desdobladas, repitiendo opcionalmente el proceso hasta obtener cada una o ambas formas substancialmente libres de la otra, es decir, en una forma con una pureza óptica > 95%.

La presente invención se refiere también a las sales de adición ácida no tóxicas fisiológicamente aceptables del compuesto de fórmula I, las cuales contienen un grupo capaz de ser protonado, p. ej., amino. Dichas sales incluyen las derivadas de ácidos orgánicos e inorgánicos, tales como, sin pretender limitarlos, el ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico, ácido metansulfónico, ácido acético, ácido tartárico, ácido láctico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido málico, ácido maleico, ácido sórbico, ácido aconítico, ácido salicílico, ácido ftálico, ácido embónico, ácido enántico y similares.

Compuestos particularmente preferidos incluyen el 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-isoindolina, 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4-aminoisoindolina, 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-5-aminoisoindolina, 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4-metilisoindolina; 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-5-metilisoindolina, 1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-5-metilisoindolina, 1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4-metilisoindolina, 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrafluorisoindolina, 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetracloroisoindolina, 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrametilisoindolina, 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrametoxiisoindolina, 1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-5-aminoisoindolina, 1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-5-isoindolina, 1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4-aminoisoindolina, 1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrafluorisoindolina, 1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetracloroisoindolina, 1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrametilisoindolina y 1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrametoxiisoindolina. De éstos, son particularmente preferidos los 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-isoindolina y 1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-il)-isoindolina.

Las formas de dosificación oral incluyen los comprimidos, cápsulas, grageas y formas farmacéuticas comprimidas de forma similar, conteniendo de 1 a 100 mg de fármaco por dosificación unitaria.

Para la administración parenteral pueden emplearse soluciones salinas isotónicas conteniendo de 20 a 100 mg/ml, las cuales incluyen rutas de administración intramuscular, intratecal, intravenosa e intraarterial. La administración rectal puede efectuarse mediante el empleo de supositorios formulados a partir de soportes convencionales tales como la manteca de coco.

Las composiciones farmacéuticas comprenden por lo tanto uno o más compuestos de fórmula I asociados con por lo menos un soporte diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. Al preparar dichas composiciones, los ingredientes activos se mezclan habitualmente con o se diluyen mediante un excipiente o se encierran dentro de un soporte que puede estar en forma de una cápsula o sobre. Cuando el excipiente sirve como diluyente, puede ser un sólido, semisólido o material líquido que actúa como un vehículo, soporte o medio para el ingrediente activo. Así, las composiciones pueden estar en forma de comprimidos, píldoras, polvos, elixires, suspensiones, emulsiones, soluciones, jarabes, cápsulas de gelatina blanda y dura, supositorios, soluciones inyectables estériles y polvos envasados estériles. Ejemplos de excipientes adecuados incluyen la lactosa, dextrosa, sucrosa, sorbitol, manitol, almidón, goma acacia, silicato de calcio, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidinona, celulosa, agua, jarabe y metil celulosa, las formulaciones pueden adicionalmente incluir agentes lubricantes tales como talco, estearato de magnesio y aceite mineral, agentes humectantes, agentes emulsionantes o dispersantes, agentes conservantes tales como los metil y propilhidroxibenzoatos, agentes edulcorantes o agentes saborizantes.

Las composiciones están formuladas de preferencia en forma de dosificación unitaria, a saber unidades físicamente discretas adecuadas como una dosificación unitaria, o una fracción predeterminada de una dosis unitaria para ser administrada en un régimen de dosificación única o múltiple a sujetos humanos y otros mamíferos, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de material activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con un excipiente farmacéuticamente adecuado. Las composiciones pueden formularse para proporcionar una liberación inmediata, una liberación continuada o una liberación con retraso, del ingrediente activo después de la administración al paciente empleando procedimientos ya bien conocidos en la técnica.

Los ensayos inmunosorbentes ligados con las enzimas para el TNF\alpha pueden efectuarse de manera convencional. Las PBMC se aislan de dadores normales mediante centrifugación Ficoll-Hypaque por densidades. Las células se cultivan en RPMI suplementado con 10% de AB+suero, 2 mM de L-glutamina, 100 U/ml de penicilina y 100 mg/ml de estreptomicina. Los compuestos se disuelven en sulfóxido de dimetilo (Sigma Chemical), y se hacen más diluciones en RPMI suplementado. La concentración final de sulfóxido de dimetilo en presencia o ausencia de fármaco en las suspensiones de PBMC es del 0,25% en peso. Los compuestos se ensayan en diluciones semilogarítmicas a partir de 50 mg/ml. Los compuestos se añaden a PBMC (10^{6} células/ml) en placas de 96 pocillos una hora antes de la adición de LPS. Las PBMC (10^{6} células/ml) en presencia o ausencia de fármaco están estimuladas por un tratamiento con 1 mg/ml de LPS de Salmonella minnesota R595 (List Biological Labs, Campbell, CA). Las células se incuban a continuación a 37ºC durante 18-20 horas. Los sobrenadantes se recogen y se analizan inmediatamente para saber los niveles de TNF\alpha ó bien se guardan congelados a -70ºC (durante no más de 4 días) hasta que se analizan. La concentración de TNF\alpha en el sobrenadante se determina mediante kits ELISA para TNF\alpha humano (ENDOGEN, Boston, MA), de acuerdo con las prescripciones del fabricante.

Los siguientes ejemplos servirán para tipificar más la naturaleza de la invención pero no deben considerarse como una limitación del ámbito de la misma, el cual ámbito se define únicamente por las reivindicaciones del apéndice.

Ejemplo 1

A una suspensión en agitación de 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)isoindolina (2,0 g, 7,75 mmoles) y dicarbonato de di-terc-butilo (1,86 g, 8,52 mmoles) en 1,4 dioxano (3,0 ml), se añade dimetilaminopiridina (1,00 mg) a temperatura ambiente. La solución se agita a temperatura ambiente durante 18 horas y el disolvente se elimina a continuación al vacío. El residuo se agita con éter (30 ml) durante 30 minutos, se filtra, y se lava con éter para dar 1,3-dioxo-2-(1-terc-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il) isoindolina.

Una obtención típica produce 2,5 g (90% de rendimiento) de 1,3 dioxo-2-(1-terc-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)isoindolina, p.f. 274,0-275,0ºC; H^{1} RMN (DMSO-d_{6}); \delta 1,47 (s, 9H, CH_{3}), 2,08-2,15 (m, IH CHH), 2,50-2,70 (m, IH, CHH), 2,69-2,82 (m, 1H CHH), 3,02-3,17 (m, 1H, CHH 5,42 (dd, J = 5,4, 12,9 Hz, 1H, NCH), 7,90-7,94 (m, 4H; Ar); C^{13} RMN (DMSO-d_{6}) \delta 21,11, 27,03; 30,69, 48,77, 86,01, 123,52, 131,16, 134,99, 148,28, 166,99, 167,55, 169,99; Análisis calculado para C_{18}H_{18}N_{2}O_{6}: C, 60,33; H, 5,06; N, 7,82. Encontrado: C, 60,01; H, 5,21; N, 7,47.

Ejemplo 2

De manera similar al procedimiento del ejemplo 1, se obtienen respectivamente del 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrafluorisoindolina, 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetracloroisoindolina, 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrametilisoindolina, 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrametoxiisoindolina, 1-oxo-2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-isoindolina, 1-oxo-2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrafluorisoindolina, 1-oxo-2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetracloroisoindolina, 1-oxo-2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrametilisoindolina, 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-4-metilisoindolina, 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-5-metilisoindolina, 1-oxo-2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-5-metilisoindolina, 1-oxo-2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-4-metilisoindolina, y 1-oxo-2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrametoxiisoindolina, los compuestos 1,3-dioxo-2-(1-terc-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrafluorisoindolina, 1,3-dioxo-2-(1-terc-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetracloroisoindolina, 1,3-dioxo-2-(1-terc-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrametilisoindolina, 1,3-dioxo-2-(1-terc-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrametoxiisoindolina, 1-oxo-2-(1-terc-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-isoindolina, 1-oxo-2-(1-terc-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrafluorisoindolina, 1-oxo-2-(1-terc-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetracloroisoindolina, 1-oxo-2-(1-terc-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrametilisoindolina, 1,3-dioxo-2-(1-terc-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-4-metilisoindolina, 1,3-dioxo-2-(1-terc-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-5-metilisoindolina, 1-oxo-2-(1-terc-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-5-metilisoindolina, 1-oxo-2-(1-terc-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-4-metilisoindolina, y 1-oxo-2-(1-terc-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrametoxiisoindolina.

De manera similar, utilizando cantidades equivalentes de 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-4-aminoisoindolina, 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-5-aminoisoindolina, 1-oxo-2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-5-aminoisoindolina y 1-oxo-2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-4-aminoisoindolina, pero utilizando 3,72 g de dicarbonato de di-terc-butilo en el procedimiento del ejemplo 1, se obtienen respectivamente la 1,3-dioxo-2-(1-terc-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-4-(1-terc-butoxicarbonilamino)-isoindolina, 1,3-dioxo-2-(1-terc-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-5-(1-terc-butoxicarbonilamino)-isoindolina, 1-oxo-2-(1-terc-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-5-(1-terc-butoxicarbonilamino)-isoindolina, y 1-oxo-2-(1-terc-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-4-(1-terc-butoxicarbonilamino)-isoindolina.

Ejemplo 3

A una solución en agitación de 1,3-dioxo-2-(1-terc-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)isoindolina (1,0 g, 2,8 mmoles) en tetrahidrofurano (10 ml), se añade n-butil litio (1,2 ml, 3,0 mmoles, 2,5 M) a -78ºC. Después de 20 minutos, se añade N-fluorbencenosulfonimida (0,8 g, 3,2 mmoles) a la mezcla. La mezcla se deja que alcance la temperatura ambiente y el disolvente se elimina a continuación al vacío. El residuo se agita con acetato de etilo (10 ml) y ácido clorhídrico 1 N (10 ml) durante una hora. Se separa la capa orgánica y el disolvente se elimina al vacío obteniéndose 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)isoindolina, la cual puede ser posteriormente purificada mediante cromatografía.

De manera similar, se añade litio bis(trimetilsilil) amida (24 ml, 24 mmoles, 1,0 M) a una solución agitada de 1,3-dioxo-2-(1-terc-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il) isoindolina (7,16 g, 20 mmoles) en tetrahidrofurano (250 ml) a -40ºC. Después de 1 hora, se añade N-fluorbencenosulfonimida (7,6 g, 24 mmoles) a la mezcla. La mezcla se deja que alcance la temperatura ambiente y se deja durante la noche. La solución se agita con acetato de etilo (200 ml), cloruro de amonio acuoso (100 ml, solución saturada), y agua (100 ml). La capa acuosa se separa y se extrae con acetato de etilo (200 ml). Las capas orgánicas reunidas se lavan con agua (100 ml) y sal muera (100 ml), y se secan con sulfato de sodio. El disolvente se elimina al vacío. El residuo se purifica por cromatografía (silica gel) para dar el producto intermedio 1,3-dioxo-2-(1-terc-butoxicarbonil-2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)isoindolina.

Una obtención típica produjo 700 mg (10% del rendimiento) de 1,3-dioxo-2-(1-terc-butoxicarbonil-2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)isoindolina, p.f. 156,0-157,0ºC; H^{1} RMN (CDCl_{3}); \delta 1,62 (s, 9H CH_{3}), 2,41-2,72 (m, 2H, CH_{2}), 2,87-3,03 (m, 1H, CHH), 3,52-3,65 (m, 1H, CHH), 7,81-7,97 (m, 4H, Ar); C^{13} RMN (CDCl_{3}) \delta 26,80 (^{2}J_{C-F} = 27 Hz), 27,39, 28,98 (^{3}J_{C-F} = 7,5 Hz), 67,15, 93,50 (J_{C-F} = 218 Hz), 124,31, 130,84, 135,29, 147,17, 161,80 (^{2}J_{C-F} = 28 Hz), 165,93, 167,57; Análisis calculado para C_{18}H_{17}N_{2}0_{6}F: C, 57,45; H, 4,55; N, 7,44; F, 5,05, Encontrado: C, 57,78; H, 4,62; N, 7,23; F, 4,94.

El producto intermedio 1,3-dioxo-2-(1-terc-butoxicarbonil-2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)isoindolina puede ser convertido en el 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)isoindolina, agitando una solución de 1,3-dioxo-2-(1-terc-butoxicarbonil-2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)isoindolina (620 mg, 1,64 mmoles) y cloruro de hidrógeno en 1,4-dioxano (15 ml, 4 M, 60 mmoles) a temperatura ambiente durante 3 días. El disolvente se elimina al vacío y el residuo se agita con éter (10 ml) durante 1 hora y se filtra obteniéndose 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)isoindolina. Una obtención típica produjo 350 mg (77% de rendimiento) de 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)isoindolina, p.f. 228,0-230,0ºC. H^{1} RMN (DMSO-d_{6}); \delta 2,44-2,61 (m, 2H, CH_{2}), 2,84-2,99 (m, 1H, CHH), 3,24-3,31 (m, 1H, CHH, 7,93 (brs, 4H, Ar), 11,49 (s, 1H, NH); C^{13} RMN (DMSO-d_{6}) \delta 26,91(^{2}J_{C-F} = 27 Hz), 28,41(^{3}J_{C-F} = 8 Hz), 93,57 (J_{C-F} = 211 Hz), 123,75, 130,91, 135,29, 164,29 (^{3}J_{C-F} = 6 Hz), 164,70 (^{3}J_{C-F} = 6 Hz), 166,21 (^{4}J_{C-F} = 1 Hz), 171,58 (^{3}J_{C-F} = 6 Hz); Análisis calculado para C_{13}H_{9}N_{2}O_{4}F + 0,2 H_{2}O: C, 55,80; H, 3,39; N, 10,01; F, 6,79: Encontrado: C, 55,74; H, 3,30; N, 9,86; F, 7,18.

Ejemplo 4

Se sigue el procedimiento del ejemplo 3, pero substituyendo por 0,76 g de N-fluorbencenodisulfonimida, los 0,8 g de N-fluorbencenosulfonimida. Se obtiene con ello la 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)isoindolina, la cual puede purificarse a continuación a través de una columna cromatográfica.

Ejemplo 5

A una solución en agitación de 1,3-dioxo-2-(1-terc-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)isoindolina (1,0 g, 2,8 mmoles) en tetrahidrofurano (10 ml) se añade litio diisopropilamida (1,5 ml, 3,0 mmoles, 2 M). Después de 30 minutos, se burbujea fluoruro de perclorilo (5 mmoles) dentro de la mezcla. Se deja que la mezcla alcance la temperatura ambiente, y a continuación se elimina el disolvente al vacío. El residuo se agita con acetato de etilo (10 ml) y ácido clorhídrico 1 N (10 ml) durante una hora. La capa orgánica se separa y el disolvente se elimina al vacío obteniéndose la 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)isoindolina, la cual puede purificarse posteriormente mediante cromatografía.

Ejemplo 6

A una solución en agitación de 1,3-dioxo-2-(1-terc-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)isoindolina (1,0 g, 2,8 mmoles) en dimetilformamida (10 ml) se añade hidruro de sodio (112 mg, 2,8 mmoles, 60%) a temperatura ambiente. Después de 30 minutos, se burbujea fluoruro de perclorilo (5 mmoles) dentro de la mezcla. La mezcla se agita con cloruro de metileno (10 ml) y ácido clorhídrico 1 N (10 ml) durante una hora. La capa orgánica se separa y el disolvente se elimina al vacío obteniéndose la 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)isoindolina, la cual puede purificarse posteriormente mediante cromatografía.

Ejemplo 7

A una solución en agitación de 1,3-dioxo-2-(1-terc-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)isoindolina (1,0 g, 2,8 mmoles) y tetrametiletilen diamina (0,5 g, 4,3 mmoles) en tetrahidrofurano (10 ml) se añade n-butil litio (1,2 ml, 3,0 mmoles, 2,5 M) a -78ºC. Después de 30 minutos, se añade N-fluorbencenosulfonimida (0,8 g, 3,2 mmoles) a la mezcla. La mezcla se deja que alcance la temperatura ambiente y el disolvente se elimina a continuación al vacío. El residuo se agita con acetato de etilo (10 ml) y ácido clorhídrico 1 N (10 ml) durante una hora. Se separa la capa orgánica y el disolvente se elimina al vacío obteniéndose la 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)isoindolina, que puede purificarse a continuación mediante una columna cromatográfica.

Ejemplo 8

A partir de cada uno de los 1,3-dioxo-3-(1-terc.-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-4-(1-terc.-butoxicar-
bonilamino)-isoindolina, 1,3-dioxo-2-(1-terc.-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-5-(1-terc.-butoxicarbonil-
amino)-isoindolina, 1,3-dioxo-2-(1-terc-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrafuorisoindolina, 1,3-dioxo-2-(1-terc.-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-i])-4,5,6,7-tetracloroisoindolina, 1,3-dioxo-2-(1-terc.-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrametilisoindolina, 1,3-dioxo-2-(1-terc.-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrametoxiisoindolina, 1-oxo-2-(1-terc.-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-5-(1-terc.-butoxicarbonilamino)-isoindolina, 1-oxo-2-(1-terc.-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-isoindolina, 1-oxo-2-(l-terc.-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-4-(1-terc.-butoxicarbonilamino)-isoindolina, 1-oxo-2{1-terc.butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-i1)-4,5,6,7-tetrafluorisoindolina, 1-oxo-2-(1-terc.-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetracloroisoindolina, 1-oxo-2-(1-terc.-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrametilisoindolina, 1,3-dioxo-2-(1-terc-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-4-metilisoindolina; 1,3-dioxo-2-(1-terc.-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-5-metilisoindolina, 1-oxo-2-(1-terc.-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-5-metilisoindolina, 1-oxo-2-(1-terc.-butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-4-metilisoindolina, y 1-oxo-2-(1-terc.butoxicarbonil-2,6-dioxopiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrametoxiisoindolina, se obtienen respectivamente siguiendo los procedimientos de los ejemplos 3, 4, 5, 6 ó 7, los siguientes compuestos 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il}-4-aminoisoindolina, 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-5-aminoisoindolina, 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrafluorisoindolina, 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetracloroisoindolina, 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrametilisoindolina, 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrametoxiisoindolina, 1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-5-aminoisoindolina, 1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-isoindolina, 1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4-aminoisoindolina, 1-oxo-2(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrafluorisoindolina, 1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetracloroisoindolina, 1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrametilisoindolina, 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4-metilisoindolina, 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-5-metilisoindolina, 1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-5-metilisoindolina, 1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4-metilisoindolina, y 1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrametoxiisoindolina.

Ejemplo 9

Parte A

Una solución de éster dimetílico del ácido L-glutámico (2,6 g, 14,8 mmoles), nitrito de isoamilo (2,13 ml, 15,9 mmoles) y ácido acético (0,22 ml) en benceno (150 ml) se calienta a reflujo durante una hora. La solución se lava con ácido sulfúrico acuoso 1 N, agua, solución saturada de bicarbonato de sodio, agua y sal muera (50 ml de cada uno). El disolvente se elimina al vacío obteniéndose el dimetil 2-diazopentano-1,5-dioato que puede purificarse a continuación mediante cromatografía de columna.

Parte B

A una solución fría de 5 ml de fluoruro de hidrógeno al 70% en piridina y 1,2 g (6,7 mmoles) de N-bromosuccinimida en 10 ml de éter, se añade una solución de dimetil 2-diazopentano-1,5-dioato (1,1 g, 5,9 mmoles) en éter (10 ml a 0ºC. La mezcla se agita a 0ºC durante 30 minutos. La solución se lava con agua (20 ml), sal muera (20 ml) y se seca con sulfato de sodio. El disolvente se elimina al vacío obteniéndose dimetil 2-bromo-2-fluorpentano-1,5-dioato que puede purificarse a continuación mediante cromatografía de columna.

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Parte C

Una mezcla de (1,0 g, 3,8 mmoles) y potasio ftalimida (0,79 g, 4,3 mmoles) en dimetilformamida (10 ml), se calienta a 80ºC durante 3 horas. El disolvente se elimina al vacío y el residuo se agita con acetato de etilo (50 ml) durante 10 minutos. La capa orgánica se lava con agua y sal muera (20 ml de cada uno) y se seca con sulfato de sodio. El disolvente se elimina al vacío obteniéndose el dimetil 2-(1,3-dioxoisoindolin-2-il)-2-fluorpenta-1,5-dioato el cual puede purificarse a continuación mediante cromatografía de columna.

Parte D

Una mezcla de dimetil 2-(1,3-dioxoisoindolin-2-il)-2-fluorpenta-1,5-dioato (1,3 g, 4,0 mmoles), metanol (10 ml) y ácido clorhídrico 4 N (10 ml) se calienta a 80ºC durante una hora. El disolvente se elimina al vacío obteniéndose el ácido 2-fluor-2-(1,3-dioxoisoindolin-2-il)-propano-1,3-dicarboxílico. Este se disuelve en anhídrido acético (20 ml) y la solución se calienta a reflujo durante 30 minutos. El disolvente se elimina al vacío obteniéndose el anhídrido 2-fluor-2-(1,3-dioxoisoindolin-2-il)-propano-1,3-dicarboxílico, el cual se mezcla con amoníaco en metanol (35 ml, 2 M) y se agita a temperatura ambiente durante 18 horas. A continuación se elimina el disolvente al vacío y el residuo se agita con cloruro de metileno (50 ml) durante 10 minutos. La capa orgánica se lava con agua y sal muera (40 ml de cada uno) y se seca con sulfato de sodio. El disolvente se elimina al vacío y el residuo se calienta a reflujo con carbonil diimidazol (0,65 g, 4 mmoles) y dimetilaminopiridina (50 mg) en tetrahidrofurano (30 ml) durante 18 horas. Se aisla el 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)isoindolina por extracción con acetato de etilo y a continuación se purifica mediante cromatografía.

Ejemplo 10

Una mezcla en agitación del éster dimetílico del ácido L-glutámico (2,0 g, 11,4 mmoles) y anhídrido ftálico (1,7 g, 11,4 mmoles)) en ácido acético (30 ml) se calienta a reflujo durante una hora. El disolvente se elimina al vacío obteniéndose el dimetil 2-(1,3-dioxoisoindoli-2-il)-pentano-1,5-dioato, el cual se purifica a continuación mediante cromatografía.

A una solución en agitación de dimetil 2-(1,3-dioxoisoindolin-2-il)-pentano-1,5-dioato (1,0 g, 3,3 mmoles) y tetrametiletilen diamina (0,5 g, 4,3 mmoles) en tetrahidrofurano (10 ml) se añade n-butil litio 2,5 M (1,6 ml, 4 mmoles) a -79ºC. Después de 30 minutos se añade N-fluorbencenosulfonamida (1 g, 3,2 mmoles) a la mezcla, la cual se deja a continuación que alcance la temperatura ambiente. El disolvente se elimina al vacío y el residuo se agita con cloruro de metileno (100 ml) durante 10 minutos. La capa orgánica se lava con agua y sal muera (30 ml de cada uno) y se seca con sulfato de sodio. El disolvente se elimina al vacío obteniéndose dimetil 2-(1,3-dioxoisoindolin-2-il)-2-fluorpentano-1,5-dioato el cual se purifica mediante cromatografía y a continuación se convierte en 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)isoindolina como se describe más arriba en la parte D del ejemplo 9.

Ejemplo 11

Una mezcla en agitación de bromofluoracetato de etilo (1,0 g, 5,4 mmoles) y ftaluro de potasio (1,0 g, 5,4 mmoles) en dimetilformamida (10 ml), se calienta a 80ºC durante 3 horas. Se agita la mezcla con éter (50 ml) y agua (50 ml) y la capa orgánica se lava a continuación con agua y sal muera (30 ml de cada uno) y se seca con sulfato de sodio. El disolvente se elimina al vacío obteniéndose el 2-(1,3-dioxoisoindolin-2-il)-2-fluoracetato de etilo, el cual se purifica a continuación mediante cromatografía.

A una solución en agitación, de 2-(1,3-dioxoisoindolin-2-il)-2-fluoracetato de etilo (0,80 g, 3,2 mmoles) en tetrahidrofurano (30 ml) se añade litio diisopropilamida (1,7 ml, 3,4 mmoles, 2 M) a -78ºC. Después de 30 minutos, se añade acrilato de t-butilo (0,42 g, 3,2 mmoles) a la mezcla, la cual se deja que alcance la temperatura ambiente. El disolvente se elimina al vacío y el residuo se agita con cloruro de metileno (50 ml) y agua (30 ml) durante 10 minutos. La capa orgánica se lava con sal muera (30 ml) y se seca con sulfato de sodio. El disolvente se elimina al vacío obteniéndose el 4-(1,3-dioxoisoindolin-2-il)-4-fluor-4-etoxicarbonilbutanoato de terc-butilo, el cual se purifica a continuación mediante cromatografía de columna.

Una solución de 4-(1,3-dioxoisoindolin-2-il)-4-fluor-4-etoxicarbonilbutanoato de terc-butilo (1,1 g, 3 mmoles) y ácido trifluoracético (5 ml) en cloruro de metileno (5 ml) se agita durante 18 horas y a continuación con cloruro de metileno (50 ml) durante 10 minutos. La capa orgánica se lava con agua y sal muera (30 ml de cada uno) y se seca con sulfato de sodio. El disolvente se elimina al vacío obteniéndose el ácido 4-(1,3-dioxoisoindolin-2-il)-4-(etoxicarbonil)-4-fluorbutanoico, el cual puede purificarse mediante cromatografía o emplearse en el próximo paso sin posterior purificación.

Una mezcla de ácido 4-(1,3-dioxoisoindolin-2-il)-4-(etoxicarbonil)-4-fluorbutanoico (0,9 g, 2,8 mmoles), carbonil diimidazol (0,46 g, 2,8 mmoles) y dimetilaminopirimidina (0,68 g, 5,6 mmoles) en tetrahidrofurano (30 ml) se calienta a reflujo durante 18 horas. El disolvente se elimina al vacío y el residuo se agita con cloruro de metileno (50 ml) durante 10 minutos. La capa orgánica se lava con agua y sal muera (40 ml de cada uno) y se seca con sulfato de sodio. El disolvente se elimina al vacío obteniéndose 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)isoindolina la cual se purifica a continuación mediante cromatografía de columna.

Ejemplo 12

Pueden prepararse comprimidos, conteniendo cada uno 50 mg de 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)isoindolina, de la siguiente manera:

\vskip1.000000\baselineskip

Constituyentes (para 1000 comprimidos)

1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)isoindolina	50,0 g
lactosa	50,7 g
almidón de trigo	7,5 g
polietilenglicol 6000	5,0 g
talco	5,0 g
estearato de magnesio	1,8 g
agua desmineralizada	c.s.

Los ingredientes sólidos se pasan en primer lugar por un tamiz de 0,6 mm de ancho de malla. El ingrediente activo, lactosa, talco, estearato de magnesio y la mitad del almidón se mezclan a continuación. La otra mitad del almidón se suspende en 40 ml de agua y esta suspensión se añade a una solución hirviendo de polietilenglicol en 100 ml de agua. La pasta resultante se añade a las substancias pulverulentas y la mezcla se granula, si es necesario, con adición de agua. El granulado se seca durante la noche a 35ºC, se pasa por un tamiz de 1,2 mm de ancho de malla y se prensa para formar comprimidos de aproximadamente 6 mm de diámetro que son cóncavos por ambos lados.

Ejemplo 13

Pueden prepararse comprimidos, conteniendo cada uno 100 mg de 1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)isoindolina, de la siguiente manera:

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Constituyentes (para 1000 comprimidos)

1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)isoindolina	100,0 g
lactosa	100,0 g
almidón de trigo	47,0 g
estearato de magnesio	3,0 g

Los ingredientes sólidos se pasan en primer lugar por un tamiz de 0,6 mm de ancho de malla. A continuación se mezclan el ingrediente activo, lactosa, estearato de magnesio y la mitad del almidón. La otra mitad del almidón se suspende en 40 ml de agua y esta suspensión se añade a 100 ml de agua hirviendo. La pasta resultante se añade a las substancias pulverulentas y la mezcla se granula, si es necesario, con adición de agua. El granulado se seca durante la noche a 35ºC, se pasa por un tamiz de 1,2 mm de ancho de malla y se prensa para formar comprimidos de aproximadamente 6 mm de diámetro que son cóncavos por ambos lados.

Ejemplo 14

Pueden prepararse comprimidos para mascar, conteniendo cada uno 75 mg de 1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)isoindolina, de la siguiente manera:

\vskip1.000000\baselineskip

Constituyentes (para 1000 comprimidos)

1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)isoindolina	75,0 g
manitol	230,0 g
lactosa	150,0 g
talco	21,0 g
glicina	12,5 g
ácido esteárico	10,0 g
sacarina	1,5 g
solución de gelatina al 5%	c.s.

Todos los ingredientes sólidos se pasan en primer lugar por un tamiz de 0,25 mm de ancho de malla. El manitol y la lactosa se mezclan, se granulan con adición de la solución de gelatina, se pasan a través de un tamiz de 2 mm de ancho de malla, se secan a 50ºC y se pasan de nuevo a través de un tamiz de 1,7 mm de ancho de malla. Se mezcla con cuidado la 1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)isoindolina, la glicina y la sacarina, se añade el manitol, el granulado de lactosa, el ácido esteárico y el talco, y el total se mezcla a fondo y se prensa para formar comprimidos de aproximadamente 10 mm de diámetro que son cóncavos por ambos lados y tienen una ranura de rotura en la cara superior.

Ejemplo 15

Pueden prepararse comprimidos, conteniendo cada uno 10 mg de 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrafluorisoindolina, de la siguiente manera:

Composición (para 1000 comprimidos)

1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrafluorisoindolina	10,0 g
lactosa	328,5 g
almidón de maíz	17,5 g
polietilenglicol 6000	5,0 g
talco	25,0 g
estearato de magnesio	4,0 g
agua desmineralizada	c.s.

Los ingredientes sólidos se pasan en primer lugar por un tamiz de 0,6 mm de ancho de malla. El ingrediente activo imida, la lactosa, talco, estearato de magnesio y la mitad del almidón se mezclan íntimamente. La otra mitad del almidón se suspende en 65 ml de agua y esta suspensión se añade a una solución hirviendo de polietilenglicol en 260 ml de agua. La pasta resultante se añade a las substancias pulverulentas y el total se mezcla y se granula, si es necesario, con adición de agua. El granulado se seca durante la noche a 35ºC, se pasa por un tamiz de 1,2 mm de ancho de malla y se prensa para formar comprimidos de aproximadamente 10 mm de diámetro que son cóncavos por ambos lados y tienen una muesca para la rotura en la cara superior.

Ejemplo 16

Pueden prepararse cápsulas de gelatina envasadas en seco, conteniendo cada una 100 mg de 1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-5-aminoisoindolina, de la siguiente manera:

Composición (para 1000 cápsulas)

1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-5-aminoisoindolina	100,0 g
celulosa microcristalina	30,0 g
lauril sulfato de sodio	2,0 g
estearato de magnesio	8,0 g

Se tamiza el lauril sulfato de sodio en el 1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-5-aminoisoindolina a través de un tamiz de 0,2 mm de ancho de malla, y los dos componentes se mezclan íntimamente durante 10 minutos. A continuación, se añade la celulosa microcristalina a través de un tamiz de un ancho de malla de 0,9 mm y el todo se mezcla de nuevo íntimamente durante 10 minutos. Finalmente, se añade el estearato de magnesio a través de un tamiz de 0,8 mm de ancho de malla, y después de mezclar durante 3 minutos más, se introduce la mezcla en porciones de 140 mg cada una, en cápsulas de gelatina de envasado en seco, del número 0 (alargadas).

Ejemplo 17

Puede prepararse, por ejemplo, una solución al 0,2% para inyección o infusión, de la siguiente manera:

hidrocloruro de 1,3-dioxo-2-2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)
-5-aminoisoindolina	5,0 g
cloruro de sodio	22,5 g
tampón de fosfato pH 7,4	300,0 g
agua desmineralizada	hasta 2500,0 ml

El hidrocloruro de 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-5-aminoisoindolina se disuelve en 1000 ml de agua y se filtra a través de un microfiltro. Se añade la solución tampón y el total se completa hasta 2500 ml con agua. Para preparar las formas de dosificación unitaria, se introducen porciones de 1,0 ó 2,5 ml según el caso, en ampollas de vidrio (cada una conteniendo respectivamente 2,0 ó 5,0 mg de imida).

Claims (26)

1. Un isómero R ó S de un compuesto seleccionado del grupo formado por

(a) una 2(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-isoindolina, de fórmula:

5

en la cual

Y es oxígeno ó H_{2}, y

cada R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4}, independientemente entre sí, es hidrógeno, halo, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alcoxilo de 1 a 4 átomos de carbono, o amino, y en donde el átomo de carbono al cual el átomo de flúor dibujado está unido, constituye un centro de quiralidad, y

(b) las sales de adición ácida de dichas 2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-isoindolinas, las cuales contienen un átomo de nitrógeno capaz de ser protonado.

2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, de fórmula

6

3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, de fórmula

7

4. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, 2 ó 3, en la cual R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4} son hidrógeno.

5. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, 2 ó 3, en la cual R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4} son las mismas y cada una es cloro, flúor, metilo o metoxilo.

6. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, 2 ó 3, en la cual R^{3} es amino, y R^{1}, R^{2} y R^{4} son hidrógeno.

7. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, 2 ó 3, en la cual R^{4} es amino, y R^{1}, R^{2} y R^{3} son hidrógeno.

8. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, 2 ó 3, en la cual R^{3} es metilo, y R^{1}, R^{2} y R^{4} son hidrógeno.

9. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, 2 ó 3, en la cual R^{4} es metilo, y R^{1}, R^{2} y R^{3} son hidrógeno.

10. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, 2 ó 3, el cual es 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-isoindolina.

11. El compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1, 2 ó 3, el cual es 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4-aminoisoindolina.

12. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, 2 ó 3, el cual es 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-5-aminoisoindolina.

13. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, 2 ó 3, el cual es 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-5-tetrafluorisoindolina.

14. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, 2 ó 3, el cual es 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetracloroisoindolina.

15. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, 2 ó 3, el cual es 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrametilisoindolina.

16. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, 2 ó 3, el cual es 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrametoxiisoindolina.

17. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, 2 ó 3, el cual es 1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-5-aminoisoindolina.

18. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, 2 ó 3, el cual es 1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-isoindolina.

19. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, 2 ó 3, el cual es 1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4-aminoisoindolina.

20. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, 2 ó 3, el cual es 1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrafluorisoindolina.

21. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, 2 ó 3, el cual es 1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetracloroisoindolina.

22. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, 2 ó 3, el cual es 1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrametilisoindolina.

23. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, 2 ó 3, el cual es 1-oxo-2-(2,6-dioxo-3-fluorpiperidin-3-il)-4,5,6,7-tetrametoxiisoindolina.

24. El empleo de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la preparación de un medicamento para la reducción o tratamiento de niveles indeseables de citocinas inflamatorias en un mamífero.

25. El empleo de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23, en la preparación de un medicamento para el tratamiento del shock séptico, sepsis, shock endotóxico, shock hemodinámico y síndrome de sepsis, lesión de la reperfusión postisquémica, malaria, infección micobacteriana, meningitis, psoriasis, fallo cardíaco congestivo, enfermedad fibrótica, caquexia, rechazo de injerto, cáncer, enfermedad autoinmunológica, infecciones oportunistas en el SIDA, artritis reumatoide, espondilitis reumatoide, osteoartritis, otras condiciones artríticas, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, esclerosis múltiple, lupus eritematoso sistémico, ENL de la lepra, lesiones por radiación y lesión alveolar hiperóxica.

26. Un producto farmacéutico que contiene una cantidad de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23, suficiente para que con la administración de un régimen de dosis únicas o múltiples, se reduzcan los niveles de las citocinas inflamatorias en un mamífero, en combinación con un soporte.