ES2257040T3 - Procedimiento de conversion microbiana de fitoesteroles en androstendiona y en androstadiendiona. - Google Patents
Procedimiento de conversion microbiana de fitoesteroles en androstendiona y en androstadiendiona.Info
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Abstract
Un procedimiento de fermentación de una composición de fitosterol para producir androstendiona (androst-4-eno-3, 17-diona) y androstadiendiona (androsta- 1, 4-dieno, 3, 17-diona) que comprende: propagación de un cultivo de Mycobacterium MB 3683 (ATCC, PTA ¿352) en un medio nutriente; calentamiento de una composición de fitosterol en presencia de un agente solubilizante seleccionado entre polipropilen glicol y aceite de silicona a una temperatura en el intervalo de 100 a 130°C para formar una solución como una pasta; y colocación del cultivo y la solución en un bioreactor durante el tiempo suficiente para transformar la solución a androstendiona y androstadiendiona.
Description
Procedimiento de conversión microbiana de
fitoesteroles en androstendiona y en androstadiendiona.
La invención se refiere, en general, a
procedimientos de fermentación, y, en particular, a la bioconversión
de composiciones de fitosterol en androstendiona y/o
androstadiendiona.
La conversión microbiana de fitosteroles (en el
caso más frecuente derivados del aceite de soja) por varias cepas de
bacterias es un procedimiento muy conocido que ha sido utilizado
para la producción comercial de androstendiona (AD) y
androstadiendiona (ADD) desde mediados de la década de 1970.
En general, el procedimiento de fermentación
conocido supone la propagación de un mutante de Mycobacterium
en un medio nutriente apropiado, transferencia del cultivo a un
bioreactor que contiene los fitoesteroles, y dejar transcurrir
entonces la biotransformación a AD y/o ADD a lo largo de un período
de aproximadamente 120 horas. La recolección del caldo de
fermentación, extracción de este último con un disolvente orgánico y
subsiguiente cristalización en un disolvente orgánico proporciona
generalmente los productos AD y/o ADD en forma de polvo blanco
cristalino. Las referencias pertinentes que discuten el
procedimiento conocido y recogen los primeros estudios son las
siguientes:
S. Kraychy, y R.D. Muir, Patente
estadounidense No. 3.684.657 (1972),
W. J. Marsheck, S. Kraychy y R. D.
Muir, Appl. Microbiol., 23, 72 (1972).
A.H. Conner, M. Nagaoka, J.W.
Rowe y D. Perlman, Appl. and Environ,
Microbiol., 32, 310 (1976)
K. Kieslich, J. Basic Microbiol.,
461 (1985).
Uno de los problemas asociados con los
procedimientos de bioconversión de fitosterol conocidos (problema
que se extiende a toda la industria de esteroides) es la poca
solubilidad del substrato, en este caso una composición de
fitosterol, en el medio nutriente acuoso. Una solubilidad inadecuada
da lugar a la presencia de concentraciones solo relativamente bajas
de substratos en el medio nutriente, lo que da por resultado un
pobre contacto con el micro-organismo y conduce por
lo general a bajos rendimientos de los productos finales. Se
necesita típicamente también tiempos de fermentación largos para
conseguir un grado de bio-conversión
satisfactorio.
Otro problema asociado con el procedimiento de
bio-conversión de fitosterol conocido es que el
producto final de la bio-conversión de fitosteroles
(o composiciones de fitosteroles) contiene típicamente cantidades
significativas tanto de AD como de ADD. Dada la similar estructura
química de AD y ADD, es difícil y caro separar subsiguientemente
entre sí estos dos productos esteroides.
Otro problema asociado con el procedimiento
conocido de bio-conversión de fitosterol es que el
micro-organismo utilizado para efectuar la
bio-conversión (típicamente, un mutante de
Micobacterium) se hace crecer y propagar en medio nutriente
que típicamente es caro de producir.
La Patente
CA-A-1302923 describe que en la
bio-conversión de sitosterol a AD, el sitosterol,
como sustrato, se puede disolver en un disolvente adecuado antes de
añadir el Mycobacterium spec. NRRL B-3805 al
medio de fermentación. No se señala la ventaja de una temperatura
incrementada para la solubilización ni se describe aceite vegetal
como solubilizante. El Ejemplo 1 muestra que de 1000 mg de substrato
sitosterol (10 matraces x 100 mg), se obtuvieron 160 mg de AD (16%).
E incluso se obtenía aún un resultado más bajo en el Ejemplo 2
cuando se utilizaba Mycobacterium spec NRRL
B-3683 (para 1000 mg de substrato sitosterol,
obteniéndose 140 mg de AD (14%)).
La Patente
US-A-5516649 describe la utilización
de Mycobacterium spec NRRL B-3805 y 3683, con
iguales disolventes esencialmente que la Patente
CA-A-1302823 y no señala mayores
temperaturas. El Ejemplo 1 muestra que de 500 mg de ergosterol como
substrato se obtiene 150 mg de AD (30%) utilizando 3805. El Ejemplo
2 muestra que de 600 mg de ergosterol como substrato se obtienen
130 mg de AD (21%) utilizando 3683.
La Patente
US-A-4100027 describe la utilización
de Mycobacterium spec NRRL B3085 y 3683 con los mismos
disolventes esencialmente que la Patente
CA-A-1302923 y no señala incremento
de temperatura. El Ejemplo 1 muestra 20 g de
6-alfa-fluoro-4-colestan-2-ona
como substrato con 8,7 g de AD obtenidos (43%) utilizando 3805.
La Patente
DD-A-248144 describe una
fermentación utilizando NRRL B-3883 en la presencia
de un adsorbente. No hay indicación de la ventaja de una temperatura
incrementada para la solubilización utilizando silicona, PPG o
aceite vegetal. El procedimiento de la Patente
DD-A-248144 da por resultado
rendimientos del 34-43%.
La Patente
DD-A-248143 describe una
fermentación utilizando NRRL-B-3683
y NRRL B-3805 en presencia de un adsorbente y un
agente tensioactivo no-iónico. No hay indicación de
la ventaja de una temperatura incrementada para solubilización
utilizando silicona, PPG o aceite vegetal. El Ejemplo 7, en el que
se emplea NRRL-B-3683, muestra que
de 25 g de sisterol solamente se producen 1,6 g de AD.
El procedimiento según la invención es el
definido en la reivindicación 1.
La solución del problema de la solubilidad supone
la utilización de agentes solubilizantes adecuados seleccionados que
permiten disolver la composición de fitosterol para dar una solución
transparente, lo que permite un excelente contacto con el
microorganismo utilizado en la bio-conversión. Se ha
encontrado que los agentes solubilizantes anteriormente conocidos,
tales como aceite de girasol, solo son marginalmente eficaces. Un
aspecto de la presente invención supone el desarrollo y utilización
de agentes solubilizantes muy eficaces para la
bio-conversión de una diversidad de composiciones de
fitosterol a AD y/o ADD. Las propias composiciones de fitosterol se
pueden obtener a partir de un sub-producto del
proceso de obtención de pulpa de madera (conocido como "jabón de
tall oil") a partir de cualquiera de los aceites vegetales
comunes (incluyendo, por ejemplo, soja, colza, maíz, semilla de
algodón, girasol, oliva, linaza y salvado de arroz), o de una mezcla
de los anteriores.
Estos agentes solubilizantes adecuados
seleccionados, que incluyen miembros de la familia de glicoles y
miembros de la familia de siliconas, permiten una alta concentración
de fitosteroles disueltos en el medio nutriente. Esto proporciona un
excelente contacto con el microorganismo, reduce los tiempos de
fermentación y conduce a altos rendimientos de los productos
finales.
El Mycobacterium MB 3683 [ATCC,
PTA-352] se utiliza para efectuar la
bio-conversión de una composición de fitosterol a AD
y/o ADD. Se ha encontrado que la bio-conversión
utilizando Mycobacterium MB 3683 para fermentar las
composiciones de fitosterol a AD producen un producto final que está
significativamente libre de ADD; inversamente, las
bio-conversiones utilizando Mycobacterium MB
3683 para fermentar composiciones de fitosterol a ADD conducen a un
producto final que está significativamente libre de AD.
Según otro aspecto de la invención, los
microorganismos utilizados para efectuar la
bio-conversión se hacen crecer y propagar en un
medio nutriente que comprende melazas de refinadoras y sales
inorgánicas.
La presente invención se ilustra con los
siguientes dibujos no-limitativos, en los que:
La Figura 1 es un gráfico de barras que muestra
el porcentaje de bioconversión de fitosteroles a AD en el curso de
12 experimentos.
Según un aspecto preferido, los agentes
solubilizantes específicos pertenecen a la familia de los glicoles.
Los agentes solubilizantes de la familia de los glicoles, tales como
polipropileglicol (PPG), permiten solubilizar los fitosteroles hasta
altas concentraciones y, a su vez, su eficaz
bio-conversión en AD y/o ADD. Por ejemplo, como se
muestra en la Figura 1, han sido completadas
bio-conversiones con éxito de composiciones de
fitosterol a AD bajo diversas condiciones. En pruebas
representativas, la concentración de la composición de fitosterol ha
variado de 5 a 30 gramos por litro de medio nutriente. Para mejorar
la interacción entre la composición de fitosterol y el
microorganismo, se disuelve la composición de fitosterol en una
cantidad seleccionada de PPG (por ejemplo, 100 gramos o un
kilogramo por litro de PPG) y la conversión que conduce a AD se
determina como se muestra en la Figura 1.
De significación particular en este procedimiento
es la concentración mucho más alta de composición de fitosterol (30
gramos o más por litro de medio nutriente) que se puede convertir a
AD. La concentración normal empleada en las fermentaciones
industriales de acuerdo con el procedimiento de
bio-conversión de fitosterol conocido es de 10
gramos por litro de medio nutriente.
Los Ejemplos 1 y 3 ilustran que cuando se utiliza
PPG como agente de solubilización, el procedimiento de la invención
permite la conversión de varias composiciones de fitosteroles
derivados de fuentes diferentes. El Ejemplo 1 describe la conversión
con éxito a AD utilizando una composición de fitosterol obtenida del
"jabon de Tall oil", subproducto de la industria de pulpa y
papel, mientras que el Ejemplo 3 muestra la conversión de una
composición de fitosterol obtenida de aceite de colza.
Los Ejemplos antes señalados revelan también que
el mutante de Mycobacterium designado como MB 3683 es capaz
de convertir estas composiciones de fitosterol diferentes que varían
en las proporciones relativas de sus componentes principales (que
incluyen por ejemplo beta-sitosterol, campesterol,
estigmastanol, brassicasterol) a AD. De estos Ejemplos se deduce que
se pueden utilizar para bio-conversión a AD varias
composiciones de fitosterol derivadas de subproductos de la
industria de pulpa y papel y/o de cualquiera de los diversos aceites
vegetales comunes, todos ellos conteniendo estos fitosteroles
comunes en diferente proporción.
En otro aspecto de procedimiento preferido, como
se ilustra en el Ejemplo 2, los agentes solubilizantes específicos
son de la familia de las siliconas. Como en el caso de los agentes
solubilizantes de la familia de glicoles, los agentes solubilizantes
de la familia de las siliconas permiten la disolución de los
fitosteroles a altas concentraciones con lo que, a su vez, hay una
bio-conversión eficaz a AD y/o ADD.
En todos los ejemplos citados, el inóculo del
microorganismo crece inicialmente en un medio nutriente que
comprende melazas de refinadoras y sales inorgánicas antes de su
transferencia al bio-reactor en que se realiza la
bio-conversión.
Se alcanza una bio-conversión con
éxito cuando la composición de fitosterol se calienta en la
presencia del agente solubilizante adecuado seleccionado hasta
alcanzar una consistencia de pasta y se añade entonces esta última
al bio-reactor que contiene el microorganismo y un
medio de sales inorgánicas apropiadas.
Durante el proceso de fermentación, es importante
mantener una temperatura en el intervalo de aproximadamente
30-35ºC. El seguimiento del pH durante la
fermentación revela que el pH puede variar en el intervalo de
aproximadamente 7,0 del período inicial a aproximadamente 4,7 en el
tiempo de la recolección.
Como se muestra en la Tabla 1, el período de
fermentación puede variar de aproximadamente 6-25
días, dependiendo en parte de la cantidad de composición de
fitosterol (en gramos por litro de medio en el bioreactor) para
bio-convertirse en los productos finales.
Los rendimientos de AD producidos pueden variar
dependiendo de las condiciones de fermentación, pero se pueden
alcanzar fácilmente rendimientos de 80-90% como
muestra la Figura 1 (Experimentos Nos. 7-10). El
Experimento No. 10 es particularmente sorprendente, con un
rendimiento de 80% de AD a un nivel de 30 gramos de composición de
fitosterol por litro de medio. Como se ha señalado antes, el nivel
de la composición de fitosterol empleado en el proceso de
bio-conversión de fitosterol conocido es de 10
gramos por litro de medio.
La utilización de un aceite vegetal (por ejemplo
aceite de girasol) como agente solubilizante (Experimentos Nos. 1,
2, 5), conduce por lo general a un rendimiento mucho más bajo de AD.
Se ha encontrado que el empleo de aceite vegetal como agente
solubilizante es un factor de detrimento para el rendimiento de AD,
incluso cuando se mezcla con PPG (Experimento No. 11) como agente
solubilizante.
Los Ejemplos 1 a 5, dados a continuación,
representan específicamente pruebas de laboratorio con éxito. Sin
embargo, cada uno de ellos se puede extrapolar para aplicación a
escala industrial utilizando técnicas industriales conocidas para
poner en práctica la invención como aquí se describe.
Se prepara el inóculo de Mycobacterium MB
3683 en cuatro matraces Erlenmeyer de 2 litros de capacidad, cada
uno de los cuales contiene 500 ml del medio siguiente
(gramos/litro): melazas de refinadoras (54 ml), NaNO_{3} (5,4
gramos), NH_{4}H_{2}PO_{4} (0,6 gramos), glucosa (6,0
gramos). El pH del medio es 7,0.
Se deja crecer la mezcla durante un período de
2-3 días.
La composición de fitosterol obtenida a partir de
"jabón de tall oil" (100 gramos) en polipropilen glicol
(0,8-1 litro) se calienta a
100-130ºC hasta que se obtiene una solución en forma
de pasta cremosa. Esta solución se añadió a un
bio-reactor que contiene 15 litros de medio salino
con lo siguiente (en gramos/litro): NH_{4}NO_{3} (2 gramos),
KH_{2}PO_{4} (1 gramo), Na_{2}HPO_{4} (2 gramos), KCl (0,2
gramos), MgSO_{4} (0,2 gramos), CaCl_{2} (0,3 gramos), y los
siguientes microelementos, añadidos en la proporción de 1 ml/litro
de medio salino y sacados de la siguiente solución de reserva típica
(gramos/litro): ZnSO_{4} (11 gramos), MnSO_{4} (6 gramos).
FeSO_{4} (1 gramo), CoCl_{2} (0,3 gramos), CuSO_{4} (0,04
gramos), H_{3}BO_{3} (0,03 gramos), KI (0,001 gramo).
El contenido completo del bioreactor se
esteriliza a 120ºC y se enfría a temperatura ambiente. El inóculo
antes señalado se añade ahora a este bioreactor y se deja
transcurrir la fermentación durante 120-144 horas a
35ºC. Durante este período, el pH inicial de 7,0 varía a
4,7-5,5 en el tiempo de la recogida. GLC (véase, por
ejemplo Experimentos 6 y 7, Figura 1). La extracción de la mezcla de
fermentación con cloroformo conduce a un extracto que contiene
polipropilen glicol y una mezcla de AD/ADD en una relación que varía
de 9:1 a 7:3 respectivamente.
Se prepara el inóculo como en el Ejemplo 1, pero
con un período de crecimiento más corto (2 días) en un solo matraz
de 2 litros que contiene 500 ml del medio antes señalado. Este
inóculo se pasa entonces a un bio-reactor de 10
litros que contiene 5 litros del siguiente medio de "siembra"
(gramos/litro): melazas (54 gramos), KNO_{3} (5,4 gramos),
NH_{4}H_{2}PO_{4} (0,6 gramos), aceite de girasol (20 ml).
Después de dejar desarrollarse el crecimiento en el
bio-reactor durante un período de
12-16 horas, se añade una porción (1,5 litros) de
este inóculo a otro bio-reactor de 50 litros que
contiene la composición de fitosterol ya esterilizada como se
muestra después.
La composición de fitosterol, obtenida de aceite
de colza (100 gramos) se mezcla con silicona (1,6 litros) y se
calienta a 100-130ºC para obtener una pasta. Esta
pasta se pasa entonces a un bio-reactor de 50 litros
que contiene 15 litros de medio salino de la misma composición que
la del Ejemplo 1. El contenido completo se esteriliza a 120C y se
enfría a temperatura ambiente. La porción (1,5 litros) de inóculo,
como se ha señalado antes, se pasa ahora a este
bio-reactor y se deja transcurrir la fermentación a
35ºC durante un período de 48 horas. El seguimiento con
cromatografía GLC reveló que, en este tiempo, había tenido lugar una
bioconversión del 90% de la composición de fitosterol. El pH inicial
de 7,2 se había alterado ligeramente hasta un valor de 7,4.
La capa de silicona separada, que contenía AD, se
extrajo con acetonitrilo (3 x 0,7 litros) y el disolvente se evaporó
para dar el producto bruto. La cristalización de la AD bruta
utilizando disolventes hidrocarburo (n-pentano o
n-hexano) que contenían n-butanol
(2-5%) o isopropanol (2-5%), condujo
a una excelente recuperación (>90%) de AD pura
(pureza>96%).
El inóculo remanente (3,5 litros) preparado como
se ha señalado antes se utiliza ahora en el Ejemplo 3.
El inóculo remanente (3,5 litros) del Ejemplo 2
se utiliza ahora en este experimento a gran escala.
La composición de fitosterol obtenida del aceite
de colza (900 gramos, concentración a 30 gramos/litro) se coloca en
un bio-reactor de 50 litros, se disuelve en
polipropilen glicol (8 litros) por calentamiento a
100-130ºC y el contenido se enfría a temperatura
ambiente. Se añade el inóculo (3,5 litros) y se deja proceder la
fermentación durante un período de 18-25 días (véase
Experimento 10, Tabla 1). Como en el Experimento 1, este experimento
a gran escala revela asimismo un cambio en el pH inicial de 7,0 a
5,5 en el momento de la recolección. El seguimiento con GLC indicó
una bioconversión de 80%. La extracción de la mezcla de fermentación
con cloroformo daba un extracto que contenía polipropilen glicol y
AD.
Se prepara el inóculo de Mycobacterium MB
3683 en seis matraces Erlenmeyer de 2 litros conteniendo cada uno
500 ml del siguiente medio (gramos/litro): glucosa (10 gramos),
peptona (10 gramos), extracto de levadura (3 gramos) y extracto de
malta (20 gramos) y se dejó crecer durante 2 días, tiempo en el cual
el pH permanece en 7,0.
El inóculo (2 litros) de los matraces Erlenmeyer
se pasó entonces a un bioreactor de 30 litros que contenían 20
litros del medio melazas de refinadoras - sales inorgánicas del
Ejemplo 1 y se dejó crecer durante 16 horas. El último inóculo (20
litros) se pasó entonces a un bioreactor de 400 litros que contenía
200 litros del medio de sales inorgánicas del Ejemplo 1.
La composición de fitosterol obtenida a partir de
colza (1 kilogramo, concentración de 5 gramos por litro de medio
nutriente) se disuelve en PPG (10 litros, concentración de 100
gramos por litro) por calentamiento a 115ºC para formar una pasta.
Esta pasta se hace pasar entonces al bioreactor de 400 litros y se
deja proceder la fermentación durante un total de 115 horas bajo las
siguientes condiciones: aireación de un litro por minuto, agitación
de 200 rpm, temperatura de 35ºC. El pH variaba ligeramente de 6,45 a
6,6 en el momento de la recolección.
Con el fin de comprobar la velocidad de
bioconversión, se sacaron y analizaron partes alícuotas de la mezcla
de fermentación. Se observaron los siguientes niveles de
bio-conversión para AD: 20 horas (10%), 44 horas
(20%), 68 horas (50%), 91 horas (80%), 115 horas (90%). La
extracción con cloroformo, como en el Ejemplo 1, conduce a un
extracto que contiene PPG y AD.
Este experimento es una repetición del Ejemplo 4
excepto en que el agente solubilizante es silicona en lugar de PPG
(polipropilen glicol).
Se disolvió la composición de fitosterol (1
kilogramo) en silicona (20 litros) por calentamiento a 130ºC hasta
formar una pasta. Esta pasta se transfiere al bioreactor de 400
litros que contiene 200 litros de medio nutriente como en el Ejemplo
4. La fermentación en las condiciones mostradas en el Ejemplo 4 y
durante un período de 120 horas, completa la bioconversión a AD. La
extracción de la capa de silicona con acetonitrilo, como en el
Ejemplo 2, seguido de cristalización, condujo a AD con un
rendimiento de 90%.
Aunque los aspectos, modos de realización y
aplicaciones de la presente invención han sido presentados y
descritos, habrá de entenderse, naturalmente, que la invención no
queda limitada a ellos, ya que se pueden hacer modificaciones por
los especialistas en las tecnologías aplicables, particularmente a
la vista de la descripción que precede. Las reivindicaciones
adjuntas incluyen dentro de su ámbito tales modificaciones y
variantes de los modos de realización ejemplo de la invención aquí
descritos como quedará de manifiesto para los especialistas de las
tecnologías
aplicables.
aplicables.
| Exp. No. | Conc. de fitosteroles | Conc. de fitosteroles por volumen | Tiempo | Porcentaje de |
| (g) por litro de medio | de agente solubilizante | (días) | bioconversión n | |
| 1 | 5 | 1 Kg/litro aceite^{a} | 7 | 30 |
| 2 | 5 | 1 kg/litro aceite^{a} | 7 | 30 |
| 3 | 5 | 1 kg/litro PPG^{b} | 7 | 60 |
| 4 | 5 | micro-pulverizado-sin agente | 10 | 40 |
| 5 | 5 | 1 kg/litro aceite^{a} | 7 | 50 |
| 6 | 5 | 1 kg/litro PPG^{b} | 7 | 70 |
| 7 | 5 | 100 g/litro PPG^{b} | 7 | 90 |
| 8 | 10 | 100 kg/litro PPG^{b} | 12 | 90 |
| 9 | 5 | 50 g/litro PPG^{b} | 6 | 90 |
| 10 | 30 | 100 g/litro PPG^{b} | 25 | 80 |
| 11 | 5 | 200 g/litro PPG^{b}/l aceite^{a} | 12 | 70 |
| 12 | 5 | Vapor-sin otros aditivos | 14 | 50 |
| ^{a} aceite de girasol | ||||
| ^{b} polipropilen glicol. |
Claims (14)
1. Un procedimiento de fermentación de una
composición de fitosterol para producir androstendiona
(androst-4-eno-3,17-diona)
y androstadiendiona
(androsta-1,4-dieno,3,17-diona)
que comprende:
propagación de un cultivo de Mycobacterium
MB 3683 (ATCC, PTA –352) en un medio nutriente;
calentamiento de una composición de fitosterol en
presencia de un agente solubilizante seleccionado entre polipropilen
glicol y aceite de silicona a una temperatura en el intervalo de 100
a 130ºC para formar una solución como una pasta; y
colocación del cultivo y la solución en un
bioreactor durante el tiempo suficiente para transformar la solución
a androstendiona y androstadiendiona.
2. El procedimiento según la reivindicación 1
donde la composición de fitosterol deriva de jabón de tall oil.
3. El procedimiento según la reivindicación 1
donde la composición de fitosterol deriva de un aceite vegetal
seleccionado adecuado.
4. El procedimiento según la reivindicación 1
donde el aceite vegetal se selecciona del grupo que comprende soja,
colza, maíz, semilla de algodón, girasol, oliva, linaza o salvado de
arroz.
5. El procedimiento según la reivindicación 1
donde el agente solubilizante es polipropilen glicol.
6. El procedimiento según la reivindicación 1
donde el agente solubilizante es silicona.
7. El procedimiento según la reivindicación 1
donde el medio nutriente comprende melazas de refinadoras y sales
inorgánicas.
8. El procedimiento según la reivindicación 1
donde la fermentación se lleva a cabo aerobiamente.
9. La utilización de Mycobacterium MB 3683
(ATCC, PTA –352) en la bioconversión microbiana de fitosteroles a
androstendiona o androstadiendiona por un procedimiento según la
reivindicación 1.
10. El empleo de un miembro de la familia de los
glicoles como agente solubilizante para fitosteroles en una
bio-conversión microbiana de los fitosteroles a
androstendiona o androstadiendiona por un procedimiento según la
reivindicación 1.
11. La utilización según la reivindicación 10 en
que el glicol es polipropilen glicol.
12. La utilización de un miembro de las familias
de las siliconas como agente solubilizante para fitosteroles en una
bioconversión microbiana de los fitosteroles a androstendiona o
androstadiendiona por un procedimiento según la reivindicación
1.
13. La utilización según la reivindicación 12 en
que el miembro de la familia de las siliconas es silicona.
14. La utilización de un medio nutriente que
comprende melazas de refinadoras y sales inorgánicas para
crecimiento y propagación de un micro-organismo para
uso en la bio-conversión de fitosteroles a
androstendiona y androstadiendiona por un procedimiento según la
reivindicación 1.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US48432 | 1993-04-14 | ||
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