ES2256036T3 - Composiciones topicas mejoradas que contienen productos extra-celulares de bacterias probioticas y usos de las mismas. - Google Patents

Composiciones topicas mejoradas que contienen productos extra-celulares de bacterias probioticas y usos de las mismas.

Info

Publication number
ES2256036T3
ES2256036T3 ES00961363T ES00961363T ES2256036T3 ES 2256036 T3 ES2256036 T3 ES 2256036T3 ES 00961363 T ES00961363 T ES 00961363T ES 00961363 T ES00961363 T ES 00961363T ES 2256036 T3 ES2256036 T3 ES 2256036T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
bacillus coagulans
species
supernatant
composition
skin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES00961363T
Other languages
English (en)
Inventor
Sean Farmer
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ganeden Biotech Inc
Original Assignee
Ganeden Biotech Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ganeden Biotech Inc filed Critical Ganeden Biotech Inc
Application granted granted Critical
Publication of ES2256036T3 publication Critical patent/ES2256036T3/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A61K31/4178—1,3-Diazoles not condensed 1,3-diazoles and containing further heterocyclic rings, e.g. pilocarpine, nitrofurantoin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/36—Skin; Hair; Nails; Sebaceous glands; Cerumen; Epidermis; Epithelial cells; Keratinocytes; Langerhans cells; Ectodermal cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/742—Spore-forming bacteria, e.g. Bacillus coagulans, Bacillus subtilis, clostridium or Lactobacillus sporogenes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/44—Oils, fats or waxes according to two or more groups of A61K47/02-A61K47/42; Natural or modified natural oils, fats or waxes, e.g. castor oil, polyethoxylated castor oil, montan wax, lignite, shellac, rosin, beeswax or lanolin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/72—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds
    • A61K8/73—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/92—Oils, fats or waxes; Derivatives thereof, e.g. hydrogenation products thereof
    • A61K8/925—Oils, fats or waxes; Derivatives thereof, e.g. hydrogenation products thereof of animal origin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/99—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0034—Urogenital system, e.g. vagina, uterus, cervix, penis, scrotum, urethra, bladder; Personal lubricants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0046—Ear
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
    • A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
    • A61L15/36—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons containing microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/02—Local antiseptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/001—Preparations for care of the lips
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)

Abstract

Composición farmacéutica que comprende un sobrenadante de Pseudomonas lindbergii, un sobrenadante de Bacillus coagulans, un agente antifúngico y aceite de emu en un portador farmacéuticamente aceptable que resulte adecuado para la aplicación tópica sobre la piel o una membrana mucosa de un mamífero.

Description

Composiciones tópicas mejoradas que contienen productos extracelulares de bacterias probióticas y usos de las mismas.
La presente invención se refiere a la reivindicación 1 y a su utilización para la prevención y/o control de las infecciones causadas por bacterias, hongos, levaduras y virus, y las combinaciones de los mismos.
Los microorganismos probióticos son aquellos que proporcionan un beneficio cuando se cultivan en un ambiente particular, con frecuencia por la inhibición del crecimiento de otros organismos biológicos en el mismo ambiente. Entre los ejemplos de organismos probióticos se incluyen bacterias y bacteriófagos que poseen la capacidad de crecer dentro del tracto gastrointestinal, por lo menos temporalmente, desplazando o destruyendo los organismos patogénicos, así como proporcionando otros beneficios al huésped. Ver, por ejemplo, Salminen et al., Antonie Van Leeuwenhoek 70:347-358, 1996; Elmer et al., JAMA 275:870-876, 1996; Rafter, Scand. J. Gastroenterol. 30:497-502, 1995; Perdigon et al., J. Dairy Sci. 78:1597-1606, 1995; Gandi, Townsend Lett. Doctors & Patients, páginas 108-110, enero de 1994; Lidbeck et al., Eur. J. Cancer Prev. 1:341-353, 1992.
La mayor parte de los estudios de la técnica anterior sobre la probiosis han sido de naturaleza observacional y no mecanística, y de esta manera todavía no se han elucidado de manera cuantitativa los procesos responsables de muchos fenómenos probióticos. Algunos probióticos son miembros de la microflora normal del colon y no se consideran abiertamente patogénicos. Sin embargo, estos organismos ocasionalmente provocan infecciones (por ejemplo bacteremia) en individuos que, por ejemplo, se encuentran inmunocomprometidos. Ver, por ejemplo, Sussman, J. et al., Rev. Infect. Dis. 8:771-776, 1986; Hata, D. et al., Pediatr. Infect. Dis. 7:669-671, 1988.
Por ejemplo, las bacterias probióticas que se encuentran en la leche agria se han utilizado desde tiempos antiguos (es decir, mucho antes del descubrimiento de las bacterias) como tratamiento terapéutico de la disentería y de enfermedades gastrointestinales relacionadas. Más recientemente, a principios del siglo veinte, se han evaluado sistemáticamente preparaciones probióticas para sus efectos sobre la salud y la longevidad (ver, por ejemplo, Metchinikoff, E., Prolongation of Life, Willaim Heinermann, London 1910), aunque su utilización ha sido muy limitada desde la aparición de los antibióticos en los años cincuenta para el tratamiento de los microbios patológicos. Ver, por ejemplo, Winberg et al., Pediatr. Nephrol. 7:509-514, 1993; Malin et al., Ann. Nutr. Metab. 40:137-145 y la patente U.S. No. 5.176.911. De manera similar, las bacterias productoras de ácido láctico (por ejemplo las especies de Bacillus, Lactobacillus y Streptococcus) se han utilizado como aditivos alimentarios y se ha reivindicado que proporcionan un valor nutricional y/o terapéutico. Ver, por ejemplo, Gorbach, Ann. Med. 22:37-41, 1990; Reid et al., Clin. Microbiol. Rev. 3:335-344, 1990.
Los probióticos mejor conocidos son las bacterias productoras de ácido láctico (es decir, los lactobacilos) y las bifidobacterias, que se utilizan ampliamente en yogures y en otros productos lácteos. Estos organismos probióticos son no patogénicos y no toxigénicos, conservan su viabilidad durante el almacenamiento y poseen la capacidad de sobrevivir al paso por el estómago y por el intestino delgado. Debido a que los probióticos no colonizan permanentemente el huésped, necesitan ingerirse o aplicarse regularmente para que persista alguna propiedad promotora de la salud. Las preparaciones probióticas comerciales generalmente comprenden mezclas de lactobacilos y bifidobacterias, aunque también se han utilizado levaduras tales como Saccharomyces.
La utilización quizá mejor caracterizada de los microorganismos probióticos es en el mantenimiento de la microflora gastrointestinal. Se ha demostrado que la microflora gastrointestinal desempeña varios papeles vitales en el mantenimiento de la función del tracto gastrointestinal y en la salud fisiológica general. Por ejemplo, el crecimiento y metabolismo de las muchas especies bacterianas individuales que habitan en el tracto gastrointestinal depende principalmente de los sustratos disponibles para ellas, la mayor parte de los cuales se derivan de la dieta. Ver, por ejemplo, Gibson, G.R. et al., Gastroenterology 106:975-982, 1995; Christl, S.U. et al., Gut 33:1234-1238, 1992. Estos resultados han llevado a intentar modificar la estructura y actividades metabólicas de la comunidad a través de la dieta, principalmente con probióticos que son suplementos alimentarios microbianos vivos.
Aunque la unión de los probióticos al epitelio gastrointestinal es un determinante importante de su capacidad de modificar la reactividad inmunológica del huésped, ésta no es una propiedad universal de los lactobacilos o de las bifidobacterias, ni resulta esencial para una probiosis exitosa. Ver, por ejemplo, Fuller, R., J. Appl. Bacteriol. 66:365-378, 1989. Por ejemplo, la adherencia de Lactobacillus acidophilus y de algunas bifidobacterias a las células CACO-2 humanas similares a enterocitos se ha demostrado que previene la unión de Escherichia coli enterotoxigénica y enteropatogénica, así como de Salmonella typhimurium y Yersinia pseudotuberculosis. Ver, por ejemplo, Bernet, M.F. et al., Gut 35:483-489, 1994; Bernet, M.F. et al., Appl. Environ. Microbiol. 59:4121-4128, 1993.
Aunque la microflora gastrointestinal presenta una barrera basada en microbios a los organismos invasores, con frecuencia los patógenos se establecen cuando resulta perjudicada la integridad de la microbiota por estrés, enfermedad, tratamiento antibiótico, cambios de la dieta o alteraciones fisiológicas en el tracto gastrointestinal. Por ejemplo, es conocido que las bifidobacterias están implicadas en la resistencia a la colonización de patógenos en el intestino grueso. Ver, por ejemplo, Yamazaki, S. et al., Bifidobacteria and Microflora 1:55-60, 1982. De manera similar, la administración de Bifidobacteria breve a niños con gastroenteritis erradica las bacterias patogénicas causativas (es decir, Campylobacter jejuni) de sus heces (ver, por ejemplo, Tojo, M., Acta Pediatr. Jpn. 29:160-167, 1987) y la suplementación de la leche de fórmula infantil con Bifidobacteria bifidum y con Streptococcus thermophilus se ha descubierto que reduce la expulsión de rotavirus y los episodios de diarrea en niños que habían sido hospitalizados (ver, por ejemplo, Saavedra, J.M. The Lancet 344:1046-109, 1994).
Además, algunas bacterias productoras de ácido láctico también producen bacteriocinas, que son metabolitos inhibitorios responsables de los efectos antimicrobianos de las bacterias. Ver, por ejemplo, Klaenhammer, FEMS Microbiol. Rev. 12:39-85, 1993; Barefoot et al., J. Diary Sci. 76:2366-2379, 1993. Por ejemplo, algunas cepas seleccionadas de Lactobacillus productoras de antibióticos han demostrado ser igual de efectivas para el tratamiento de infecciones, sinusitis, hemorroides, inflamaciones dentales y diversas otras condiciones inflamatorias. Ver, por ejemplo, la patente U.S. No. 5.439.995. Además, Lactobacillus reuteri se ha demostrado que produce antibióticos con actividad antimicrobiana contra las bacterias Gram negativas y Gram positivas, levaduras y diversos protozoos. Ver, por ejemplo, la patente U.S. Nos. 5.413.960 y 5.439.678.
También se ha demostrado que los probióticos poseen propiedades antimutagénicas. Por ejemplo, se ha demostrado que las bacterias Gram positivas y Gram negativas se unen a los pirolisados mutagénicos que se producen durante la cocción a temperatura elevada. Los estudios llevados a cabo con bacterias productoras de ácido láctico han demostrado que estas bacterias pueden encontrarse vivas o muertas, debido al hecho de que el proceso se produce mediante adsorción de los pirolisados mutagénicos a los polímeros de carbohidrato presentes en la pared celular bacteriana. Ver, por ejemplo, Zang, X., Bacillus et al., J. Dairy Sci. 73:2702-2710, 1990. También se ha demostrado que los lactobacilos poseen la capacidad de degradar los carcinógenos (por ejemplo las N-nitrosaminas), lo que puede presentar un papel importante si posteriormente se descubre que el proceso ocurre a nivel de la superficie mucosal. Ver, por ejemplo, Rowland, I.R. y Grasso, P., Appl. Microbiol. 29:7-12. Además, la coadministración de lactulosa y
Bifidobacteria longum a ratas inyectadas con el carcinógeno azoximetano se ha demostrado que reduce los focos de criptas aberrantes intestinales, que generalmente se consideran marcadores preneoplásicos. Ver, por ejemplo, Challa, A. et al., Carcinogenesis 18:5175-21, 1997. Los purificados de paredes celulares de Bifidobacteria también podrían poseer actividades antitumorigénicas en el aspecto de que la pared celular de Bifidobacteria infantis induce la activación de los fagocitos para destruir las células tumorales en crecimiento. Ver, por ejemplo, Sekine, K. et al., Bifidobacteria and Microflora 13:65-77, 1994. También se ha demostrado que los probióticos de bifidobacterias reducen la carcinogénesis de colon inducida por 1,2-dimetilhidracina en ratones cuando se administran concomitantemente con fructooligosacáridos (FOS; ver, por ejemplo, Koo y Rao, Nutrit. Rev. 51:137-146, 1991), inhibiendo asimismo los tumores hepáticos y mamarios en ratas (ver, por ejemplo, Reddy y Rivenson, Cancer Res. 53:3914-3918, 1993).
También se ha demostrado que la microbiota del tracto gastrointestinal afecta a la inmunidad tanto mucosal como sistémica en el huésped. Ver, por ejemplo, Famularo, G. et al., Stimulation of Immunity by Probiotics, en: Probiotics: Therapeutic and Other Beneficial Effects, páginas 133-161 (Fuller, R., editor, Chapman and Hall, 1997). Las células epiteliales intestinales, leucocitos sanguíneos, linfocitos B y T, y células accesorias del sistema inmunológico han sido relacionadas con la inmunidad anteriormente indicada. Ver, por ejemplo, Schiffrin, E.J. et al., Am. J. Clin. Nutr. 66:5-20S, 1997. Entre otros productos metabólicos bacterianos que poseen propiedades inmunomoduladoras se incluyen: lipopolisacárido endotóxico, peptidoglicanos y ácidos lipoteicoicos. Ver, por ejemplo, Standiford, T.K., Infect. Linmun. 62:119-125, 1994. De acuerdo con lo anteriormente expuesto, los organismos probióticos se considera que interaccionan con el sistema inmunológico a muchos niveles, incluyendo, aunque sin limitarse a ellos: producción de citoquinas, proliferación de células mononucleares, fagocitosis y eliminación macrofágica, modulación de la autoinmunidad, inmunidad frente a patógenos bacterianos y protozoáricos, y similares. Ver, por ejemplo, Matsumara, K. et al., Animal Sci. Technol. (Jpn) 63:1157-1159, 1992; Solis-Pereyra, B. y Lemmonier, D., Nutr. Res. 13:1127-1140, 1993. También se ha descubierto que las cepas de Lactobacillus provocan efectos marcados en las respuestas inflamatorias e inmunológicas, incluyendo, aunque sin limitarse a ellas, una reducción en la infiltración inflamatoria colónica sin producir una reducción similar en el número de linfocitos B y T. Ver, por ejemplo, De Simone, C. et al., Immunopharmacol. Immunotoxicol. 14:331-340, 1992.
Los antibióticos se utilizan ampliamente para controlar los microorganismos patogénicos tanto en el ser humano como en animales. Por desgracia, la utilización generalizada de los agentes antimicrobianos, especialmente los antibióticos de amplio espectro, ha resultado en una serie de consecuencias clínicas graves. Por ejemplo, la utilización indiscriminada de estos compuestos químicos ha resultado en la generación de múltiples patógenos resistentes a antibióticos. Ver, por ejemplo, Mitchell, P., The Lancet 352:462-463, 1998; Shannon, K., The Lancet 352:490-491, 1998. Las informaciones iniciales sobre las infecciones por Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA) se han visto enmascaradas por los brotes recientes de enterococos resistentes a vancomicina (VRE). El desarrollo de estas resistencias ha llevado a numerosas informaciones sobre infecciones sistémicas que siguen intratables con las terapias antibióticas convencionales. Recientemente, una cepa de Staphylococcus aureus resistente a la vancomicina (considerada
generalmente el antibiótico de último recurso) fue la causante de más de 50 muertes en un solo hospital australiano.
Los enterococos en la actualidad constituyen patógenos nosocomiales importantes y es probable que sigan siéndolo durante un largo periodo de tiempo. Los enterococos, así como otros microbios, obtienen los genes de resistencia antibiótica de varias maneras diferentes. Por ejemplo, los enterococos emiten feromonas que provocan que se conviertan en "pegajosos" y se agreguen, facilitando de esta manera el intercambio de material genético, tal como plásmidos (ADN circular de replicación autónoma que con frecuencia porta los genes de resistencia a antibióticos). Además, algunos enterococos también poseen "trasposones conjugadores", que son secuencias de ADN que les permiten transferir directamente genes de resistencia sin intermediario plásmido. Se cree que la resistencia a la penicilina se ha transferido de los enterococos a los estreptococos y de estos a los estafilococos mediante este último mecanismo.
Además, los antibióticos con frecuencia eliminan microorganismos no patogénicos beneficiosos (es decir, flora) en el tracto gastrointestinal, contribuyendo a la función digestiva y a la salud. De acuerdo con ello, la recaída (el retorno de las infecciones y sus síntomas asociados) y las infecciones oportunistas secundarias con frecuencia resultan de la reducción de la flora productora de ácido láctico y de otra flora beneficiosa en el tracto gastrointestinal. La mayoría, si no todas, las bacterias productoras de ácido láctico o bacterias probióticas resultan extremadamente sensibles a los compuestos antibióticos habituales. Durante un curso normal de terapia antibiótica, muchos individuos desarrollan varios efectos secundarios fisiológicos deletéreos, entre ellos: diarrea, espasmos intestinales y en ocasiones estreñimiento. Estos efectos secundarios se deben principalmente a la acción no selectiva de los antibióticos, debido a que estos no poseen la capacidad de discriminar entre las bacterias beneficiosas no patogénicas y las patogénicas, ambos tipos bacterianos resultan eliminados por estos agentes. De esta manera, los individuos que se administran antibióticos con frecuencia padecen de problemas gastrointestinales como resultado de la eliminación o atenuación severa de los microorganismos beneficiosos (es decir, la flora intestinal) que normalmente colonizan el tracto gastrointestinal. El cambio resultante de la composición de la flora intestinal puede resultar en deficiencias vitamínicas cuando las bacterias intestinales productoras de vitaminas resultan eliminadas, en diarrea y en deshidratación, y más gravemente, en una enfermedad, caso de que un organismo patogénico se multiplique en exceso y sustituya a las bacterias gastrointestinales beneficiosas que queden.
Además de la microflora gastrointestinal, algunos microorganismos beneficiosos y/o patológicos pueden habitar en la cavidad oral, en el área genital y en la vagina (ver, por ejemplo, Thomason et al., Am. J. Obstet. Gynecol. 165:1210-1217, 1991; Marsh, Caries Res. 27:72-76, 1993; Lehner, Vaccine 3:65-68, 1985; Hill y Embil, Can. Med. Assoc. J. 134:321-331, 1986). De manera similar, la utilización de fármacos antimicrobianos puede provocar un desequilibrio en dichos microorganismos y se ha dado a conocer la utilización terapéutica de bacterias probióticas, especialmente cepas de Lactobacillus, que colonizan aquellas áreas (ver, por ejemplo, Winberg et al., Pediatr. Nephrol. 7:509-514, 1993; Malm et al., Ann. Mar. Metab. 40:137-145, 1996; patente U.S. No. 5.176.911). Un número creciente de microorganismos patogénicos ha desarrollado resistencia a antibióticos, requiriendo el desarrollo y utilización de antibióticos de segunda y de tercera generación. También se han desarrollado microorganismos que son resistentes a múltiples fármacos, con frecuencia extendiéndose la resistencia a múltiples fármacos entre especies, conduciendo a infecciones graves que no pueden controlarse mediante la utilización de antibióticos.
Además, las infecciones microbianas oportunistas con frecuencia se producen en individuos inmunodeficientes. Los individuos inmunodeficientes presentan una inmunidad natural alterada, permitiendo que los microorganismos patogénicos sobrevivan y crezcan, sea interna o externamente, debido a la respuesta inmunológica reducida del individuo frente al patógeno. La inmunodeficiencia puede resultar de condiciones genéticas, de enfermedades tales como el SIDA, o de tratamientos terapéuticos, tales como la terapia del cáncer (quimioterapia o tratamiento de radiación) y la inmunosupresión mediada farmacológicamente tras el trasplante de órganos. La inhibición de los microorganismos patogénicos por los probióticos resulta útil para prevenir o tratar las infecciones oportunistas, particularmente en individuos inmunodeficientes.
De acuerdo con lo anteriormente expuesto, existe una necesidad de agentes preventivos y terapéuticos que puedan controlar el crecimiento de los microorganismos patogénicos sin la utilización de compuestos químicos antibióticos a los que los microorganismos ya son resistentes o a los que pueden adquirir resistencia posteriormente. Los probióticos pueden aplicarse interna o externamente con el fin de restaurar el equilibrio entre microorganismos beneficiosos y patógenos, sin contribuir concomitantemente a la evolución de patógenos resistentes a fármacos. Las bacterias productoras de ácido láctico (por ejemplo las especies de Bacillus, Lactobacillus y Streptococcus) se han utilizado como aditivos alimentarios, y se ha reivindicado algunas veces que presentan un valor nutricional y terapéutico (ver, por ejemplo, Gorbach, Ann. Med. 22:27-41, 1990; Reid et al., Clin. Microbiol. Rev. 3:335-344,
1990).
Además, algunas bacterias productoras de ácido láctico (por ejemplo aquéllas utilizadas para preparar yogur) se ha sugerido que presentan propiedades antimutagénicas y anticarcinogénicas útiles en la prevención de los tumores en el ser humano (ver, por ejemplo, Pool-Zobel et al., Nutr. Cancer 20:261-270, 1993; patente U.S. No. 4.347.240). Algunas bacterias productoras de ácido láctico también se ha demostrado que producen bacteriocinas, que son metabolitos inhibidores responsables de los efectos antimicrobianos de las bacterias (Klaenhammer, FEMS Microbiol. Rev. 12:39-85, 1993; Barefoot y Nettles, J. Dairy Sci. 76:2366-2379, 1993). Se ha dado a conocer que cepas seleccionadas de Lactobacillus que producen antibióticos son igual de efectivas para el tratamiento de infecciones, sinusitis, hemorroides, inflamaciones dentales y otras condiciones inflamatorias (ver la patente U.S. No. 4.314.995). De manera similar, Lactobacillus reuteri se ha demostrado que produce antibióticos con actividad contra las bacterias Gram negativas y Gram positivas, contra las levaduras y contra un protozoo (ver las patentes U.S. Nos. 5.413.960 y
5.439.678). Lactobacillus casei asp. rhamnosus cepa LC-705, DSM 7061, sola o en combinación con una especie de Propionibacterium, en un caldo de fermentación, se ha demostrado que inhibe las levaduras y mohos en alimentos y en el ensilaje (patente U.S. No. 5.378.458). Además, se han añadido especies antifúngicas de Serratia a forraje animal y/o a ensilaje con el fin de conservar el pienso animal, particularmente Serratia rubidaea FB299, sola o combinada con un Bacillus subtilis antifúngico (cepa P3260). Ver la patente U.S. No. 5.371.011.
Bacillus coagulans es una bacteria Gram positiva no patogénica formadora de esporas que produce ácido L(+)-láctico (dextrorrotatorio) en homofermentación. Este microorganismo ha sido aislado a partir de fuentes naturales, tales como muestras de suelo tratadas por calor inoculadas en medio nutritivo (ver, por ejemplo, Bergey's Manual of Systemic Bacteriology, vol. 2, Sneath, P.H.A. et al., editores, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 1986). Las cepas purificadas de Bacillus coagulans han servido como fuente de diversos enzimas, incluyendo, aunque sin limitarse a ellas: endonucleasas de restricción (ver la patente U.S. No. 5.200.336); amilasas (ver la patente U.S. No. 4.980.180); lactasa (ver la patente U.S. No. 4.323.651); y la ciclo-malto-dextrín glucano-transferasa (ver la patente U.S. No. 5.102.800). Bacillus coagulans se ha utilizado para producir ácido láctico (ver la patente U.S. No. 5.079.164). Además, se ha combinado una cepa de Bacillus coagulans (denominada Lactobacillus sporogenes, Sakaguti y Nakayama (ATCC 31284)) con otras bacterias productoras de ácido láctico y Bacillus natto con el fin de producir un producto alimentario fermentado a partir de soja vaporizada (ver la patente U.S. No. 4.110.477). También se han utilizado cepas de Bacillus coagulans como aditivos de pienso animal para aves de corral y ganado con el fin de reducir las enfermedades y mejorar la utilización del pienso y, por lo tanto, con el fin de incrementar la tasa de crecimiento de los animales (ver las solicitudes de patentes internacionales Nos. WO-9314187 y WO-9411492).
De acuerdo con lo anteriormente expuesto, sigue existiendo una necesidad de una terapia biorracional altamente eficaz que funciona mitigando los patógenos digestivos, tanto en el ser humano como en animales, mediante la colonización (o recolonización) del tracto gastrointestinal con microorganismos probióticos, tras la administración de agentes antibióticos, antifúngicos, antivíricos y similares.
Las infecciones dérmicas, especialmente aquéllas causadas por patógenos micóticos, constituyen un porcentaje considerable de la venta de medicamentos de prescripción y de libre disposición comercializados anualmente en todo el mundo. Según el Center for Disease Control and Prevention (CDCP), en la actualidad se está produciendo un incremento drástico del número de infecciones micóticas y bacterianas declaradas de la piel. Las ventas anuales de agentes antifúngicos dérmicos y cutáneos en la actualidad exceden los dos mil millones de dólares U.S. cada año. Además, la enfermedad micótica dérmica recientemente se ha demostrado que se incrementa a una tasa de entre aproximadamente 9% y 15% al año, dependiendo del patógeno y la enfermedad específicos. Uno de los factores principales responsables del crecimiento de estos mercados es el hecho de que cada año más patógenos fúngicos adquieren resistencia a los agentes antifúngicos utilizados habitualmente. Entre los ejemplos de agentes antifúngicos utilizados habitualmente se incluyen, aunque sin limitarse a ellos: fluconazol (Diflucan®; Pzifer Pharmaceutical), Intraconazol (Sporonox®; Janssen Pharmaceutical), nitrato de miconazol, cetoconazol, tolnaftato, lamasil, griseofulvina, anfotericina B y otros compuestos y las formulaciones de los mismos.
Nuevas generaciones de fármacos antifúngicos y antibacterianos y las preparaciones están siendo desarrolladas cada año para sustituir aquellos medicamentos a los que los patógenos se han vuelto resistentes. A medida que continúa la búsqueda de agentes antimicrobianos más efectivos, igualmente continúa la búsqueda de "agentes portadores" utilizados para dispersar y facilitar la penetración de estos medicamentos a través de diversas membranas dérmicas y cutáneas y tejidos. Sin embargo, hasta la fecha ha tenido poco éxito la búsqueda de un agente capaz de penetrar material cutáneo denso, tal como las uñas de pies y manos y las pezuñas de animales.
Entre las enfermedades más frecuentes de las membranas dérmicas y cutáneas humanas se incluyen: (i) la candidiasis (por ejemplo provocada por Candida albicans, Candida tropicalis, Candida golbratta, Candida parapsilosis); (ii) las enfermedades tineales, también conocidas como pie de atleta (Tinea pedis), prurito de la ingle (Tinea cruris), infección del cuero cabelludo (Tinea capitis), tiña e infecciones de la barba (Tinea barbae), todas producidas por especies de Trichophyton, incluyendo, aunque sin limitarse a ellas: Trichophyton mentagrophytes; (iii) las enfermedades provocadas por patógenos bacterianos, incluyendo, aunque sin limitarse a ellas: Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidus y Propionibacterium acnes; y (iv) enfermedades provocadas por patógenos víricos, incluyendo, aunque sin limitarse a ellas: Herpes simplex I y II, y Herpes zóster. Quizás una de las enfermedades más difíciles de tratar de etiología fúngica son las infecciones fúngicas de las uñas de los pies o de las manos (es decir, la onicomicosis) debido a la incapacidad de las composiciones terapéuticas disponibles en la actualidad de penetrar la dermis o el cutis. El patógeno asociado más habitualmente con esta enfermedad muy difícil de tratar es Trichophyton rubrum.
En los animales, la enfermedad fúngica dérmica más frecuente es la tiña. En las pezuñas de los animales, especialmente de los caballos de competición, existen varias enfermedades de la pezuña que resultan potencialmente bastante graves y difíciles de tratar, incluyendo la enfermedad de la línea blanca (también conocida como "hormiguillo"), candidiasis de la pezuña (otra enfermedad relacionada con una levadura o con Candida), y drop sole. Además, el pie varo es otra enfermedad dérmica fúngica de impacto significativo en la industria equina.
La presente invención da a conocer que las especies de Bacillus coagulans poseen la capacidad de mostrar actividad probiótica en condiciones aeróbicas, tal como sobre la piel o en tejidos de membrana mucosa y de esta manera tratan, controlan y/o inhiben numerosas condiciones causadas por infección bacteriana, fúngica, de levadura y vírica, o combinaciones de las mismas. La presente invención da a conocer composiciones terapéuticas, productos manufacturados y procedimientos de utilización para inhibir diversas infecciones microbianas causadas por bacterias, levaduras, hongos o virus, haciendo uso de aislados de especies de Bacillus coagulans y de cepas de Pseudomonas lindbergii.
En un primer aspecto de la invención se proporciona una composición farmacéutica que comprende un sobrenadante de Pseudomonas lindbergii, un sobrenadante de Bacillus coagulans, un agente antifúngico y aceite de emu en un portador farmacéuticamente aceptable que resulta adecuado para la aplicación tópica sobre la piel o sobre una membrana mucosa de un mamífero. En estas composiciones anteriormente indicadas, el portador puede ser una emulsión, crema, loción, pasta, gel, aceite, pomada, suspensión, pulverizador de aerosol, polvos, aerosol en polvo o una formulación semisólida.
Según un segundo aspecto de la invención se proporciona la utilización de una composición que comprende un sobrenadante de Pseudomonas lindbergii, un sobrenadante de Bacillus coagulans, un agente antifúngico y aceite de emu para la preparación de un medicamento para inhibir el crecimiento de bacterias, levaduras, hongos, virus o una combinación de los mismos, que comprende aplicar tópicamente sobre la piel, o sobre una membrana mucosa de un mamífero, dicha composición y permitir que la composición se encuentre presente durante suficiente tiempo para inhibir el crecimiento de bacterias, levaduras, hongos, virus o cualquier combinación de los mismos.
Según otro aspecto de la invención se proporciona una composición que comprende un sobrenadante de Bacillus coagulans, un sobrenadante de Pseudomonas lindbergii, un agente antifúngico y aceite de emu para la utilización en la inhibición del crecimiento de bacterias, levaduras, hongos o virus.
Una forma de realización incluye además las etapas de proporcionar esporas de las especies de Bacillus coagulans en la composición probiótica, y permitir que las esporas germinen tras la etapa de aplicación. En todavía otra forma de realización, la etapa de permitir el crecimiento de las especies de Bacillus coagulans inhibe el crecimiento de una o más especies de microbios seleccionadas de entre el grupo que consiste en especies de Staphylococcus, especies de Streptococcus, especies de Pseudomonas, Escherichia coli, Gardnerella vaginalis, Propionibacterium acnes, especies de Blastomyces, Pneumocystis carinii, Aeromonas hydrophilia, especies de Trichosporon, especies de
Aspergillus, especies de Proteus, especies de Acremonium, Cryptococcus neoformans, especies de Microsporum, especies de Aerobacter, especies de Clostridium, especies de Klebsiella, especies de Candida y especies de Trichophyton. También resultan inhibidas determinadas especies de virus (por ejemplo Herpes simplex I y II, y Herpes zóster). En todavía otra forma de realización, la etapa de aplicación consiste en aplicar una composición probiótica en forma de una crema, loción, gel, aceite, pomada, suspensión, pulverizador de aerosol, polvos, aerosol en polvo o formulación semisólida.
Según un tercer aspecto de la invención, se proporciona un producto manufacturado que comprende un producto flexible y una cantidad efectiva de un producto extracelular que es un sobrenadante o un filtrado de un cultivo de una cepa de Pseudomonas lindbergii, un producto extracelular que es un sobrenadante o un filtrado de un cultivo de una cepa de Bacillus coagulans, un agente antifúngico y aceite de emu aplicado sobre dicho producto flexible, en el que dicho producto flexible está destinado a ser llevado o a encontrarse unido a la piel o a una membrana mucosa de un mamífero de manera que permita que la actividad microbiana del producto extracelular se produzca contiguamente o directamente sobre la piel o membrana mucosa.
En una forma de realización, la etapa de aplicación incluye aplicar la composición en un pañal, material flexible para limpiar la piel o una membrana mucosa, parche dérmico, cinta adhesiva, almohadilla absorbente, tampón o prenda de ropa. En otra forma de realización, la etapa de aplicación incluye impregnar la composición en una matriz sólida fibrosa o no fibrosa.
De acuerdo con lo anteriormente expuesto, en un cuarto aspecto de la invención se proporciona un sistema terapéutico para inhibir el crecimiento de bacterias, levaduras, hongos, virus o una combinación de los mismos que comprende un recipiente que comprende una etiqueta y una composición que comprende un sobrenadante de Bacillus coagulans, un sobrenadante de Pseudomonas lindbergii, un agente antifúngico y aceite de emu, en el que dicha etiqueta comprende instrucciones para la utilización de la composición para inhibir dicho crecimiento.
La presente invención proporciona varias ventajas. En particular, en tanto la utilización de antibióticos implica un efecto perjudicial debido al potencial de producción de especies microbianas resistentes a los antibióticos, resulta deseable disponer de una terapia antimicrobiana que no utilice reactivos antimicrobianos convencionales. La presente invención no contribuye a la producción de una futura generación de patógenos resistentes a los antibióticos.
Debe apreciarse que tanto la descripción general anterior como la descripción detallada a continuación se proporcionan únicamente a título de ejemplo y de explicación y no son limitativas de la invención según las reivindicaciones.
Fig. 1: ilustra diversas actividades metabólicas y la respuesta bioquímica o fisiológica característica asociada en Bacillus coagulans.
Fig. 2: ilustra los diversos patógenos, que pueden tratarse mediante la utilización de las composiciones terapéuticas de la presente invención, y sus trastornos asociados.
Fig. 3: indica las cepas fúngicas sometidas a ensayo de especies de Trichophyton (disponibles de la American Type Culture Collection (ATCC; Rockville, Maryland)), sus números de acceso ATCC, y los resultados de la inhibición in vitro por Bacillus coagulans.
Fig. 4: indica las cepas de levadura sometidas a ensayo de especies de Candida (disponibles de la American Type Culture Collection (ATCC; Rockville, Maryland)), sus números de acceso ATCC respectivos, y los resultados de la inhibición in vitro por Bacillus coagulans.
Fig. 5: ilustra un escaneo de longitudes de onda de sobrenadantes de Bacillus coagulans (panel A) y de
Pseudomonas lindbergii (panel B) con un blanco de agua.
Fig. 6: ilustra un escaneo de longitudes de onda de sobrenadantes de Bacillus coagulans (panel A) y de
Pseudomonas lindbergii (panel B) con un blanco de caldo LB.
Fig. 7: ilustra un SDS PAGE de acrilamida al 12% de proteínas de Pseudomonas lindbergii. La pista izquierda son marcadores de peso molecular.
Fig. 8: ilustra un SDS PAGE de acrilamida al 12% de proteínas de Bacillus coagulans. La pista izquierda son marcadores de peso molecular.
Fig. 9: ilustra un HPLC de fase inversa de sobrenadante de Pseudomonas lindbergii extraído con acetonitrilo.
Fig. 10: ilustra un HPLC de fase inversa de sobrenadante de Bacillus coagulans extraído con acetonitrilo.
Fig. 11: ilustra, en forma de tabla, una comparación entre fluconazol antimitótico y sobrenadantes de Bacillus coagulans y de Pseudomonas lindbergii (denominados genéricamente "sobrenadante Ganeden") en la inhibición de diversas especies bacterianas, fúngicas y de levaduras.
Se proporcionan los detalles de una o más formas de realización de la invención en la descripción adjunta a continuación. Aunque cualquier procedimiento y material similar o equivalente a aquellos descritos en la presente memoria puede utilizarse en la práctica o ensayo de la presente invención, los procedimientos y materiales preferentes se describen a continuación. Otras características, objetivos y ventajas de la invención resultarán evidentes a partir de la descripción y de las reivindicaciones. En la especificación y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares incluyen referentes plurales a menos que el contexto indique claramente lo contrario. A menos que se indique lo contrario, todos los términos técnicos y científicos utilizados en la presente memoria presentan el mismo significado entendido habitualmente por un experto ordinario en la materia a la que pertenece la presente invención. A menos que se indique expresamente lo contrario, las técnicas utilizadas o contempladas en la presente invención son metodologías estándar bien conocidas para un experto ordinario en la materia. Los ejemplos de las formas de realización se proporcionan únicamente a título ilustrativo.
Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "probiótico" se refiere a microorganismos (por ejemplo bacterias, levaduras, virus y/o hongos) que forman, como mínimo, una parte de la flora transitoria o endógena y, de esta manera, presentan un efecto beneficioso profiláctico y/o terapéutico sobre el organismo huésped. Es conocido generalmente por los expertos en la materia que los probióticos son clínicamente seguros (es decir, no patogénicos). Aunque sin que los presentes solicitantes deseen restringirse a ningún mecanismo en particular, la actividad probiótica de las especies de Bacillus se cree que es el resultado de la inhibición competitiva del crecimiento de los patógenos debido a su superior colonización, al parasitismo de los microorganismos no deseables, a la producción de ácido láctico y/o de otros productos extracelulares que presentan actividad antimicrobiana, o a la combinación de los
mismos.
Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "microbiano" se refiere a bacterias, levaduras, hongos y/o virus.
La presente invención da a conocer la capacidad de utilizar especies de Bacillus en composiciones terapéuticas como probiótico, para la prevención y/o control de infecciones causadas por patógenos, incluyendo, aunque sin limitarse a ellos, las infecciones microbianas, de levaduras, fúngicas o víricas. Tal como se comentará posteriormente, estas composiciones pueden formularse en una diversidad de configuraciones, debido al hecho de que la bacteria se presenta como un organismo viable, sea como célula vegetativa o como espora, y coloniza el tejido de interés. Específicamente las células/esporas pueden presentarse en composiciones terapéuticas adecuadas para la aplicación tópica sobre un tejido, o en suspensiones, tales como un baño o sobre materiales flexibles, tales como pañales, tiritas, tampones y artículos personales similares, la totalidad de los cuales se destinan al fin de introducir las bacterias tópicamente en la piel o en un tejido de membrana mucosa.
A título de ejemplo, y sin limitarse a ningún mecanismo particular, el efecto profiláctico y/o terapéutico de una bacteria productora de ácido láctico de la presente invención resulta, en parte, de una inhibición competitiva del crecimiento de patógenos debida a: (i) su superior capacidad colonizadora; (ii) el parasitismo de los microorganismos no deseables; (iii) la producción de ácido láctico y/o de otros productos extracelulares con actividad antimicrobiana; o (iv) diversas combinaciones de los mismos. Debe indicarse que los productos y actividades anteriormente indicados del Bacillus productor de ácido láctico de la presente invención actúan sinérgicamente para producir el efecto probiótico beneficioso que se da a conocer en la presente memoria.
Una bacteria probiótica que resulta adecuada para la utilización en los procedimientos y composiciones de la presente invención: (i) posee la capacidad de producir ácido láctico; (ii) demuestra una función beneficiosa; y (iii) no es patogénica. A título de ejemplo no limitativo, se han identificado bacterias adecuadas y se describen en la presente memoria, aunque debe indicarse que la presente invención no se encuentra limitada a las especies de bacterias clasificadas en la actualidad en la medida de los fines y objetivos que se dan a conocer. Los resultados fisicoquímicos de la producción in vivo de ácido láctico son cruciales para la efectividad de las bacterias probióticas productoras de ácido láctico de la presente invención. La producción de ácido láctico reduce marcadamente el pH (es decir, incrementa la acidez) localmente en el ambiente de la microflora y no contribuye al crecimiento de muchas bacterias, hongos y virus no deseables y fisiológicamente perjudiciales. De esta manera, mediante el mecanismo de la producción de ácido láctico, el probiótico inhibe el crecimiento de las bacterias patogénicas competidoras.
Las bacterias productoras de ácido láctico típicas que resultan útiles como probiótico de la presente invención son productores eficientes de ácido láctico que incluyen miembros no patogénicos de las especies de Bacillus coagulans que producen bacteriocinas u otros compuestos que inhiben el crecimiento de los organismos patogénicos. Entre las especies ejemplares de Bacillus coagulans productoras de ácido láctico y no patogénicas se incluyen, aunque sin limitarse a ellas: Bacillus coagulans, Bacillus coagulans Hammer, y Bacillus brevis subespecie coagulans.
Las especies de Bacillus utilizadas en la práctica de la presente invención comprenden: especies de Bacillus coagulans que presentan la capacidad de formar esporas y pueden colonizar tejidos aeróbicamente. Existe una diversidad de diferentes especies de Bacillus coagulans, incluyendo, aunque sin limitarse a ellas, muchas diferentes cepas disponibles de fuentes comerciales y públicas, tales como la American Tissue Culture Collection (ATCC). Por ejemplo, las cepas de Bacillus coagulans se encuentran disponibles como los números de acceso ATCC 15949, 8038, 35670, 11369, 23498, 51232, 11014, 31284, 12245, 10545 y 7050.
Una especie de Bacillus coagulans resulta particularmente adecuada para la presente invención debido a las propiedades que presentan en común las especies del género Bacillus, incluyendo, aunque sin limitarse a ellas, la capacidad de formar esporas que son relativamente resistentes al calor y a otras condiciones, convirtiéndolas en ideales para el almacenamiento (vida de almacenamiento) en las formulaciones de producto, e ideales para la supervivencia y colonización de los tejidos bajo condiciones de pH, salinidad y similares en tejidos sometidos a infección microbiana. El probiótico Bacillus coagulans no es patogénico y generalmente es considerado seguro (es decir, de clasificación GRAS) por la U.S. Federal Drug Administration (FDA) y el U.S. Department of Agriculture (USDA) y por los expertos en la materia. Entre las características útiles adicionales de las especies de Bacillus se incluyen, aunque sin limitarse a ellas: ausencia de patogenicidad, son aeróbicas, facultativas y heterotróficas, haciendo de esta manera que estas especies sean seguras y capaces de colonizar piel, tejidos de membrana mucosa y diversos otros tejidos de interés.
Debido a que las especies de Bacillus coagulans poseen la capacidad de producir esporas resistentes al calor, resulta particularmente útil para preparar composiciones farmacéuticas que requieren calor y presión en su preparación. De acuerdo con ello, las formulaciones que incluyen la utilización de esporas viables de Bacillus en un portador farmacéuticamente aceptable resultan particularmente preferentes para preparar y utilizar las composiciones dadas a conocer en la presente invención. El cultivo de estas diversas especies de Bacillus para formar cultivos celulares, pastas celulares y preparaciones de esporas es generalmente bien conocido en la técnica.
En la práctica de la presente invención se utilizan cultivos purificados de Bacillus coagulans como probiótico para el control biológico de diversos patógenos microbianos. Debido a que Bacillus coagulans forma esporas resistentes al calor, resulta particularmente útil para preparar composiciones farmacéuticas para tratar infecciones microbianas. Las formulaciones tópicas que incluyen esporas viables de Bacillus coagulans en un portador farmacéuticamente aceptable resultan particularmente preferentes para preparar y utilizar composiciones preventivas y terapéuticas de la presente invención. El término "tópico" se utiliza ampliamente en la presente invención para incluir superficies epidérmicas y/o de la piel, así como superficies mucosales del cuerpo.
Los bacilos Gram-positivos de Bacillus coagulans presentan un diámetro celular superior a 1,0 \mum con hinchado variable del esporangio, sin producción de cristales parasporales. Bacillus coagulans es una bacteria formadora de esporas Gram-positiva no patogénica que produce ácido L(+)-láctico (dextrorrotatorio) bajo condiciones de homofermentación. Se ha aislado a partir de fuentes naturales, tales como muestras de suelo tratadas por calor inoculadas en medio nutritivo (ver, por ejemplo, Bergey's Manual of Systemic Bacteriology, vol. 2, Sneath, P.H.A. et al., editores William & Wilkins, Baltimore, MD, 1986). Las cepas purificadas de Bacillus coagulans han servido como fuente de enzimas, incluyendo endonucleasas (por ejemplo la patente U.S. No. 5.200.336), amilasa (patente U.S. No. 4.980.180), lactasa (patente U.S. No. 4.323.651) y ciclo-maltodextrina glucanotransferasa (patente U.S. No. 5.102.800). Bacillus coagulans también se ha utilizado para producir ácido láctico (patente U.S. No. 5.079.164). Se ha combinado una cepa de Bacillus coagulans (también denominada Lactobacillus sporogenes; Sakaguti y Nakayama, ATCC No. 31284) con otras bacterias productoras de ácido láctico y Bacillus natto con el fin de producir un producto alimentario fermentado a partir de soja vaporizada (patente U.S. No. 4.110.477). Las cepas de Bacillus coagulans también se han utilizado como aditivos de pienso animal para aves de corral y ganado con el fin de reducir las enfermedades y mejorar la utilización del pienso y, por lo tanto, para incrementar la tasa de crecimiento de los animales (solicitud de patente internacional PCT Nos. WO-9314187 y WO-9411492). En particular, se han utilizado las cepas de Bacillus coagulans como suplementos y agentes nutricionales generales para controlar el estreñimiento y la diarrea en el ser humano y en animales.
Las bacterias purificadas de Bacillus coagulans utilizadas en la presente invención se encuentran disponibles de la American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD) utilizando los números de acceso siguientes: Bacillus coagulans Hammer NRS 727 (ATCC No. 11014), Bacillus coagulans Hammer cepa C (ATTC No. 11369); Bacillus coagulans Hammer (ATCC No. 31284) y Bacillus coagulans Hammer NCA 4259 (ATCC No. 15949). Las bacterias purificadas de Bacillus coagulans también se encuentran disponibles de Deutsche Sarumlung von Mikroorganismen und Zellkuturen GmbH (Braunschweig, Alemania) utilizando los números de acceso siguientes: Bacillus coagulans Hammer 1915 (DSM No. 2356); Bacillus coagulans Hammer 1915 (DSM No. 2383, correspondiente a ATCC No. 11014); Bacillus coagulans Hammer (DSM No. 2384, correspondiente a ATCC No. 11369); y Bacillus coagulans Hammer (DSM No. 2385, correspondiente a ATCC No. 15949). Las bacterias Bacillus coagulans también pueden obtenerse de proveedores comerciales, tales como Sabinsa Corporation (Piscataway, NJ) o K.K. Fermentation (Kyoto, Japón).
Las cepas de Bacillus coagulans y sus requisitos de crecimiento han sido descritos con anterioridad (ver, por ejemplo, Baker, D. et al., Can. J. Microbiol. 6:557-563, 1960; Nakamura, H. et al., Int. J. Syst. Bacteriol. 38:63-73, 1988). Además, también pueden aislarse diversas cepas de Bacillus coagulans de fuentes naturales (por ejemplo muestras de suelo tratadas por calor) utilizando procedimientos bien conocidos (ver, por ejemplo, Bergey's Manual of Systemic Bacteriology, vol. 2, página 1117, Sneath, P.H.A. et al., editores, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 1986).
Debe indicarse que Bacillus coagulans anteriormente había sido mal caracterizada como un Lactobacillus, en vista del hecho de que, tal como se describió originalmente, esta bacteria se denominó Lactobacillus sporogenes (ver Nakamura et al., Int. J. Syst. Bacteriol. 38:63-73, 1988). Sin embargo, la clasificación inicial era incorrecta debido al hecho de que Bacillus coagulans produce esporas y a través de su metabolismo excreta ácido L(+)-láctico, ambos aspectos que proporcionan características clave para su utilidad. Por el contrario, estos aspectos de desarrollo y metabólicos requerían que la bacteria se clasificase como un Bacillus del ácido láctico, y por lo tanto recibió una nueva denominación. Además, no se aprecia generalmente que las especies clásicas de Lactobacillus no resultan adecuadas para la colonización del tracto digestivo debido a su inestabilidad en el difícil ambiente de pH (es decir, ácido) de la bilis, particularmente de la bilis humana. Por el contrario, Bacillus coagulans puede sobrevivir y colonizar el tracto gastrointestinal en el ambiente de la bilis e incluso crecer en estos intervalos de pH bajo. En particular, el ambiente de la bilis humana es diferente del ambiente de la bilis de los modelos animales, y hasta el momento no se ha dado a conocer ninguna descripción exacta del crecimiento de Bacillus coagulans en modelos del tracto gastrointestinal humano.
Bacillus coagulans es aeróbico y facultativo, se cultiva típicamente en caldo nutritivo, pH 5,7 a 6,8, que contiene hasta el 2% (en peso) de NaCl, aunque ni NaCl ni KCl son un requisito absoluto para el crecimiento. Un valor de pH comprendido entre aproximadamente pH 4 y pH 6 resulta óptimo para el inicio de la esporulación. Se cultiva óptimamente a una temperatura comprendida entre aproximadamente 30ºC y aproximadamente 55ºC, y las esporas pueden resistir la pasteurización. Muestra un crecimiento facultativo y heterotrófico al utilizar una fuente de nitrato o de sulfato. Se resumen en la Fig. 1 características metabólicas adicionales de Bacillus coagulans.
Bacillus coagulans puede cultivarse en una diversidad de medios, aunque se ha descubierto que determinadas condiciones de cultivo producen un cultivo que rinde un nivel elevado de esporulación. Por ejemplo, la esporulación se ve incrementada si el medio de cultivo incluye 10 mg/litro de sulfato de manganeso, rindiendo una proporción de esporas a células vegetativas de aproximadamente 80:20. Además, determinadas condiciones de crecimiento producen una espora bacteriana que contiene un espectro de enzimas metabólicos particularmente adecuados para la presente invención (es decir, el control de las infecciones microbianas). Aunque las esporas producidas en estas particulares condiciones de cultivo resultan preferentes, las esporas producidas mediante cualquier condición de crecimiento compatible resultan adecuadas para producir un Bacillus coagulans útil en la presente invención. También debe indicarse que la forma de realización más preferente de la presente invención utiliza Bacillus coagulans en forma de espora, y no en la forma bacteriana vegetativa.
La preparación de bacterias vegetativas y esporas de Bacillus coagulans se describe más completamente en la sección de Ejemplos específicos, posteriormente.
Los cultivos de Bacillus coagulans contienen productos secretados que poseen actividad antimicrobiana. Estos productos secretados resultan útiles en las composiciones terapéuticas según la presente invención. Los cultivos celulares se recogen tal como se ha descrito anteriormente, y los sobrenadantes de cultivo se recogen mediante filtración o centrifugación, o ambos, y el sobrenadante resultante contiene actividad antimicrobiana útil en las composiciones terapéuticas de la presente invención.
La preparación de productos extracelulares de Bacillus coagulans se describe más completamente en la sección de Ejemplos específicos, posteriormente.
Está bien documentado clínicamente que muchas especies de patógenos bacterianos, micóticos y de levaduras poseen la capacidad de provocar una diversidad de trastornos. Por lo tanto, la utilización de las composiciones que contienen microorganismos probióticos de la presente invención inhibe estos patógenos y resulta útil en el tratamiento profiláctico o terapéutico de las condiciones asociadas con la infección por estos patógenos anteriormente indicados.
Las bacterias patógenas inhibidas por la actividad de Bacillus coagulans incluyen, por ejemplo, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidus, Streptococcus pyrogenes, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli (es decir, especies enterohemorrágicas), numerosas especies de Clostridium (por ejemplo Clostridum perfringens, Clostridium botulinum, Clostridium tributrycum, Clostridium sporogenes, y similares); Gardnereia vaginalis; Proponbacterium acnes; Aeromonas hydrophia; especies de Aspergillus; especies de Proteus y especies de Klebsiella.
\newpage
Entre las levaduras y otros hongos patogénicos que resultan inhibidos por la actividad de Bacillus coagulans se
incluyen Candida albicans, Candida tropicalis y Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton interdigitale,
Trichophyton rubrum y Trichophyton yaoundei.
También se ha demostrado que Bacillus coagulans inhibe las infecciones por virus Herpes simplex I (HSV-I, úlceras orales y eccema herpético) y por virus Herpes simplex II (HSV-II, herpes genital) y por Herpes zóster (culebrilla).
Los patógenos anteriormente indicados se han asociado a una diversidad de trastornos, incluyendo, aunque sin limitarse a ellos: irritación de pañal, infecciones por levadura orales, genitales, cervicales y vaginales; síndrome del shock tóxico; candidiasis mucocutánea crónica; dermatofitosis; vaginosis bacteriana; infecciones fúngicas tineales (por ejemplo, tiña, pie de atleta y prurito del jinete); infecciones fúngicas del cuero cabelludo y de las uñas; trastornos superficiales de la piel (por ejemplo erisipelas, infecciones de heridas abiertas, acne, abscesos, ampollas, eccema, dermatitis, dermatitis de contacto, hipersensitinitis, lesiones de contacto, úlceras por presión y lesiones diabéticas); infecciones oportunistas varias; lesiones víricas orales y genitales, y condiciones similares, como son bien conocidas en la técnica. Por lo tanto, la utilización tópica de las composiciones que contienen los agentes activos de Bacillus coagulans que inhiben estos patógenos resultan útiles en la prevención o tratamiento de estas condiciones.
Los diversos patógenos, que pueden tratarse mediante la utilización de las composiciones terapéuticas de la presente invención y sus trastornos asociados se ilustran en la Fig. 2. Sin embargo, debe indicarse que los patógenos indicados en la fig. 2 se proporcionan únicamente a título de ejemplo, y no pretender ser limitativos de los tipos de organismos que pueden tratarse mediante la utilización de los procedimientos o composiciones de la presente invención. De acuerdo con ello, también pueden tratarse diversos otros microbios y dermatofitos infecciosos de la piel y de otras membranas mucosas mediante la utilización de las presentes composiciones y procedimientos dados a conocer en la presente memoria.
La actividad antimicrobiana anteriormente indicada de una composición terapéutica de la presente invención se describe más completamente en la sección de Ejemplos específicos, posteriormente.
Los oligosacáridos bifidogénicos, tal como se denominan en la presente memoria, son una clase de carbohidratos particularmente útiles para promover preferentemente el crecimiento de una bacteria productora de ácido láctico de la presente invención. Entre estos oligosacáridos se incluyen, aunque sin limitarse a los mismos, fructooligosacáridos (FOS); glucooligosacáridos (GOS), otros polímeros oligosacáridos de cadena larga de fructosa y/o glucosa, y el trisacárido rafinosa. Todos los carbohidratos anteriormente indicados no resultan digeridos con facilidad por las bacterias patogénicas. De esta manera, el crecimiento preferencial de las bacterias productoras de ácido láctico resulta promovido por la utilización de estos oligosacáridos bifidogénicos debido a los requisitos nutricionales de esta clase de bacteria, en comparación con las bacterias patogénicas.
Los oligosacáridos bifidogénicos son polímeros de cadena larga utilizados casi exclusivamente por \hbox{Bifidobacteria} y Lactobacillus autóctonos del tracto intestinal y de manera similar pueden resultar utilizados por Bacillus. Por el contrario, las bacterias fisiológicamente perjudiciales, tales como Clostridium, Staphylococcus, Salmonella y Escherichia coli no pueden metabolizar los FOS u otros oligosacáridos bifidogénicos, y por lo tanto la utilización de estos oligosacáridos bifidogénicos en combinación con una bacteria productora de ácido láctico de la presente invención, preferentemente Bacillus coagulans, permite que estas bacterias probióticas beneficiosas crezcan y compitan efectivamente, y finalmente sustituyan, a cualquier microorganismo patógeno presente en el tracto gastrointestinal.
La utilización de oligosacáridos bifidogénicos en las composiciones de la presente invención proporciona un efecto sinérgico por el que se incrementa la efectividad de las composiciones que contienen probióticos dadas a conocer en la presente memoria. Esta sinergia se manifiesta incrementando selectivamente la capacidad de la bacteria probiótica de crecer, incrementando, por ejemplo, el nivel de suplementación nutricional que selecciona preferentemente el crecimiento de las bacterias probióticas sobre muchas otras especies bacterianas en el tejido infectado.
Además, se entiende fácilmente que Bifidobacteria y Lactobacillus también son productores de ácido láctico. Los oligosacáridos bifidogénicos permiten que los organismos probióticos anteriormente indicados proliferen preferentemente sobre las bacterias no deseables en el tracto gastrointestinal, incrementando de esta manera el estado probiótico del cuerpo mediante el incremento adicional de la solubilidad de estos nutrientes (sean de origen alimentario o como resultado del incremento de la suplementación nutricional). De esta manera, la presencia de los oligosacáridos bifidogénicos en las composiciones de la presente invención permite una inhibición microbiana más efectiva mediante el incremento de la capacidad de toda la diversidad de bacterias probióticas de crecer, y por lo tanto de proporcionar, dicho beneficio.
Los oligosacáridos bifidogénicos de la presente invención pueden utilizarse solos o en combinación con un microorganismo productor de ácido láctico en una composición terapéutica. Más específicamente, debido a la actividad promotora del crecimiento de los oligosacáridos bifidogénicos, la presente invención contempla una composición que comprende un oligosacárido bifidogénico presente a una concentración suficiente para promover el crecimiento de los microorganismos productores de ácido láctico. Tal como se muestra en la presente memoria, estas concentraciones pueden variar ampliamente, debido a que los microorganismos probióticos responden a cualquier cantidad metabólica de nutriente oligosacárido, y por lo tanto la presente invención no se encuentra limitada de esta manera.
Un oligosacárido bifidogénico ejemplar y preferente es el fructooligosacárido (FOS), aunque también pueden utilizarse otros carbohidratos, sea solos o en combinación. Puede obtenerse FOS a partir de una diversidad de fuentes naturales, entre ellas los proveedores comerciales. Como producto aislado de fuentes naturales, los componentes pueden variar ampliamente y todavía proporcionar el agente beneficioso, es decir FOS. FOS típicamente presenta una longitud de cadena de polímero comprendida entre aproximadamente 4 y 200 unidades de azúcar, siendo preferentes las longitudes mayores. Por ejemplo, el grado de pureza puede variar ampliamente con la condición de que se encuentre presente FOS biológicamente funcional en la formulación final. Las formulaciones preferentes de FOS contienen por lo menos 50% en peso de fructooligosacáridos frente a azúcares simples (monosacáridos o disacáridos), tales como glucosa, fructosa o sacarosa, preferentemente por lo menos 80% de fructooligosacáridos (FOS), más preferentemente por lo menos 90% y todavía más preferentemente por lo menos 95% de FOS. El contenido y composición de azúcares puede determinarse mediante cualquiera de una diversidad de procedimientos de detección analítica de carbohidratos complejos, como es bien conocido. Entre las fuentes preferentes de FOS se incluyen, aunque sin limitarse a ellas, Frutafit IQ^{TM} (Imperial Suiker Unie; Sugar Land, Texas); NutraFlora^{TM} (Americal Ingredients, Inc.; Anaheim, CA); y Fruittrimfat Replacers and Sweeteners (Emeryville, CA). Los oligosacáridos bifidogénicos, tales como GOS y otros oligosacáridos de cadena larga también se encuentran disponibles de vendedores
comerciales.
Las composiciones de la presente invención que resultan adecuadas para la utilización en la prevención, tratamiento y/o control de las infecciones microbianas comprenden como ingrediente activo, específicamente: (i) células vegetativas o esporas de Bacillus coagulans; (ii) metabolitos antimicrobianos o antibióticos extracelulares de \hbox{Bacillus} coagulans; o (iii) combinaciones de los mismos en diversas formulaciones. También pueden comprender otras especies de células (por ejemplo de célula vegetativa) o de esporas de bacteria Bacillus.
Los ingredientes activos de Bacillus comprende entre aproximadamente 0,1% y aproximadamente 50% en peso de la composición final, preferentemente entre 1% y 10% en peso, en una formulación adecuada para la administración tópica.
La formulación para una composición terapéutica de la presente invención puede incluir otros agentes o nutrientes probióticos para promover la germinación de esporas y/o el crecimiento de Bacillus. Las composiciones incluyen un agente antifúngico y también pueden incluir agentes conocidos antimicrobianos, antivíricos o antilevadura, todos los cuales deben ser compatibles con el mantenimiento de la viabilidad del agente activo específico de Bacillus, cuando se utilizan organismos o esporas de Bacillus como el agente activo. Los diversos agentes adicionales en las composiciones terapéuticas de la presente invención pueden ser agentes sinérgicos o activos. En una forma de realización preferente, los agentes conocidos antimicrobianos, antivíricos, antilevadura y/o antifúngicos son agentes probióticos compatibles con Bacillus. Las composiciones terapéuticas también pueden incluir, aunque sin limitación: antioxidantes conocidos (por ejemplo vitamina E), agentes tamponadores, lubricantes (por ejemplo cera de abejas sintética o natural), pantallas solares (por ejemplo ácido paraaminobenzoico), y otros agentes cosméticos (por ejemplo agentes colorantes, fragancias, aceites, aceites esenciales, hidratantes o agentes de secado). Los agentes espesantes (por ejemplo polivinilpirrolidona, polietilenglicol o carboximetilcelulosa) también pueden añadirse a las
composiciones.
Las fragancias y aceites esenciales resultan particularmente adecuados para las composiciones utilizadas en los productos y procedimientos de higiene personal, y pueden incluir sales marinas, hierbas o extractos de hierbas, aceites de fragancia de una gran diversidad de plantas o animales, y fragancias de una gran diversidad de plantas o animales, como es bien conocido. Entre las fragancias preferentes que resultan útiles en una composición de la presente invención se incluyen la violeta africana, franquincienso y mirra, lavanda, vainilla, gardenia, madreselva, sándalo, almizcle, jazmín, loto, azahar de naranja, pachuli, brezo, magnolia, ámbar, rosa y fragancias similares. El aceite de emu se utiliza en las composiciones terapéuticas de la presente invención administradas tópicamente y generalmente se utiliza a una concentración de entre aproximadamente el 1% y el 75% en peso. La utilización de aceite de emu en las composiciones terapéuticas de la presente invención se comenta más completamente después. Entre los aceites preferentes, que pueden utilizarse adicionalmente, incluyendo aceites esenciales o fragrantes, se incluyen el aceite de almendra, aloe, ámbar, manzana, albaricoque, mirica cerifera, bencion, flor de cactus, clavel, carragenano, madera de cedro, canela, clavo, coco, cedro, copal, eucalipto, frangipani, franquincienso y mirra, gardenia, pomelo, brezo, hierbas, madreselva, jazmín, jojoba, quelpo, lavanda, limón, lila, loto, magnolia, mora, almizcle, mirra, narciso, azahar de naranja, pachuli, melocotón, pino piñonero, plumeria, rosa, romero, azafrán, salvia, sándalo, espirulina, fresa, vainilla, violeta, wisteria y aceites similares.
Además, las fragancias y aceites esenciales pueden proporcionarse en diversas composiciones tanto de sales de baño como de jabón de baño. Las sales y jabones también son bien conocidos de la técnica y pueden incluir sales marinas, sales del desierto, sales minerales, sesquicarbonato sódico, sulfato de magnesio y similares sales de baño utilizadas habitualmente.
Las fragancias, aceites y sales son bien conocidos de la técnica, pueden obtenerse a partir de una diversidad de fuentes naturales y comerciales y no se consideran limitativas de la presente invención. Entre las fuentes comerciales ejemplares se incluyen: Innovative Body Science (Carlsbad, CA); Scents of Paradise -SunBurst Technology, Inc. (Salem, OR); Intercontinental Fragrances, Inc. (Houston, TX'); Scentastics, Inc. (Ft. Lauderdale, FL); y Michael Giordano International, Inc. (North Miami, FL).
Los compuestos químicos utilizados en las presentes composiciones pueden utilizarse a partir de una diversidad de fuentes comerciales, incluyendo Spectrum Quality Products, Inc. (Gardena, CA); Seltzer Chemicals, Inc. (Carlsbad, CA) y Jarchern Industries, Inc. (Newark, NJ).
En las composiciones terapéuticas de la presente invención, los agentes activos se combinan con un "portador" que es fisiológicamente compatible con la piel, membrana o tejido mucosal de un ser humano o animal al que se administra por vía tópica. Específicamente, en la forma de realización preferente, el portador es sustancialmente inactivo, con la excepción de sus propiedades surfactantes intrínsecas, que se utilizan en la producción de una suspensión de los ingredientes activos. Las composiciones pueden incluir otros constituyentes fisiológicamente activos que no interfieren con la eficacia de los agentes activos en la composición.
Una composición terapéutica típica de la presente invención contendrá en un gramo de formulación de dosificación, entre aproximadamente 1 x 10^{3} y 1 x 10^{12}, y con preferencia entre aproximadamente 2 x 10^{5} y 1 x 10^{10} unidades formadoras de colonia (UFC) de bacterias viables (es decir, bacterias vegetativas) o esporas bacterianas de Bacillus. En una forma de realización preferente, la composición terapéutica de la presente invención también puede incluir entre aproximadamente 10 mg y un gramo de un oligosacárido bifidogénico (por ejemplo un fructooligosacárido). La formulación puede completarse en peso total mediante la utilización de cualquiera de una diversidad de portadores y/o ligantes. Por ejemplo, un portador preferente es la celulosa microcristalina (CMC), que se añade a una concentración suficiente para completar el peso total típico de un gramo de dosificación. Las formulaciones particularmente preferentes de la composición terapéutica de la presente invención se describirán completamente en la sección de Ejemplos específicos, posteriormente.
Los portadores utilizados en las composiciones terapéuticas de la presente invención pueden ser materiales secos de base sólida para la utilización en formulaciones en polvo, o alternativamente, pueden ser materiales líquidos o de base gel para la utilización en formulaciones líquidos o de gel. Las formulaciones específicas dependen en parte de las vías o modos de administración.
Entre los portadores típicos para las formulaciones secas se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, trehalosa, maltodextrina, harina de arroz, celulosa microcristalina (CMC), estearato de magnesio, inositol, fructooligosacáridos (FOS), glucooligosacáridos (GOS), dextrosa, sacarosa, talco y portadores similares. En el caso de que la composición sea seca e incluya aceites evaporados con una tendencia a que la composición se apelmace (es decir, a la adherencia de los componentes esporas, sales, polvos y aceites), resulta preferente incluir rellenos secos que distribuyan los componentes y eviten el apelmazamiento. Entre los agentes antiapelmazantes ejemplares se incluyen CMC, talco, tierra diatomácea, sílice amorfo y similares, típicamente añadidos a una concentración entre aproximadamente 1% y 95% en peso.
Los portadores líquidos o de base gel adecuados son bien conocidos de la técnica (por ejemplo agua, soluciones salinas fisiológicas, urea, metanol, etanol, propanol, butanol, etilenglicol y propilenglicol y similares). Preferentemente los portadores de base agua presentan un pH aproximadamente neutro.
Entre los portadores adecuados se incluyen los portadores acuosos y oleaginosos tales como, por ejemplo, petrolato blanco, miristato de isopropilo, lanolina o alcoholes de lanolina, aceite mineral, aceite fragrante o esencial, aceite extracto de Nasturtium, monooleato de sorbitán, propilenglicol, alcohol cetilestearílico (conjuntamente o en diversas combinaciones), hidroxipropilcelulosa (PM = 100.000 a 1.000.000), detergentes (por ejemplo estearato de polioxil o lauril sulfato sódico) y mezclados con agua formando una loción, gel, crema o composición semisólida. Otros portadores adecuados comprenden emulsiones y mezclas agua-en-aceite o aceite-en-agua de emulsionantes y emolientes con disolventes, tales como estearato de sacarosa, cocoato de sacarosa, diestearato de sacarosa, aceite mineral, propilenglicol, 2-etil-1,3-hexanodiol, polioxipropilén-15-estearil éter y agua. Por ejemplo, las emulsiones que contienen agua, estearato de glicerol, glicerina, aceite mineral, espermaceti sintético, alcohol cetílico, butilparabén, propilparabén y metilparabén se encuentran comercialmente disponibles. También pueden incluirse conservantes en el portador, incluyendo metilparabén, propilparabén, alcohol bencílico y sales de tetraacetato de etilendiamina. También pueden incluirse en el portador saborizantes y/o colorantes bien conocidos. La composición también puede incluir un plastificador, tal como glicerol o polietilenglicol (PM entre 400 y 20.000). La composición del portador puede variarse con la condición de que no interfiera significativamente con la actividad farmacológica de los ingredientes activos o de la viabilidad de las células o esporas de Bacillus.
Puede formularse una composición terapéutica de la presente invención para que resulte adecuada para la aplicación de una diversidad de maneras, por ejemplo en una crema para la aplicación tópica sobre la piel (por ejemplo para la tiña o para el pie de atleta), en un lavado para la boca (por ejemplo para la candidiasis oral), en una ducha para la aplicación vaginal (por ejemplo para la vaginitis), en polvos para rozamientos (por ejemplo para dermatitis), en un líquido para las uñas de los pies (por ejemplo para el pie de atleta), en sales de baño o polvos de baño para tratar las infecciones genitales, de los pies o de otros tejidos en un baño, y similares. Otras formulaciones resultarán claramente evidentes a un experto en la materia y se comentarán más en detalle en la sección de Ejemplos específicos, posteriormente.
La presente invención proporciona medios para tratar, reducir y/o controlar las infecciones microbianas en una diversidad de tejidos de piel y membrana mucosal utilizando una composición terapéutica o producto manufacturado terapéutico de la presente invención. Óptimamente las composiciones reducen efectivamente el título bacteriano, de levaduras, fúngico y/o vírico en el individuo tratado, particularmente en el sitio de aplicación de la composición tópica. Por ejemplo, el título microbiano patogénico en lesiones se ha demostrado que se reduce significativamente tras la administración tópica de la composición terapéutica de la presente invención en el área o áreas afectadas de la piel o de membrana mucosa. Los procedimientos de tratamiento dados a conocer también reducen los síntomas de la infección microbiana patogénica (por ejemplo el dolor asociado con las lesiones infectadas o causadas por microbios) y promueven una curación más rápida de la que resultaría sin el tratamiento con Bacillus.
Se describe en la presente memoria la administración de una composición que contiene el ingrediente activo de Bacillus a un ser humano o animal para tratar o prevenir la infección microbiana (es decir, la infección bacteriana, de levaduras, fúngica o vírica). La administración preferentemente es en la piel o en una membrana mucosa utilizando una crema, loción, gel, aceite, pomada, suspensión, pulverizador de aerosol, polvos, formulación semisólida (por ejemplo un supositorio), o producto manufacturado, todos formulados de manera que contengan una composición terapéutica de la presente invención utilizando procedimientos bien conocidos de la técnica.
La aplicación de la composición terapéutica de la presente invención, que contiene el agente activo de Bacillus efectivo en la prevención o tratamiento de una infección microbiana, generalmente consiste en una a diez aplicaciones de una concentración de 10 mg a 10 g de una composición por aplicación, durante un periodo de tiempo de un día a un mes. Las aplicaciones son de generalmente una vez cada doce horas y de una vez cada cuatro horas. Preferentemente de dos a cuatro aplicaciones de la composición terapéutica al día, de aproximadamente 0,1 g a 5 g de concentración por aplicación, durante uno a siete días resultan suficientes para prevenir o tratar una infección microbiana. Para las aplicaciones tópicas, las composiciones terapéuticas preferentemente se aplican a las lesiones diariamente en cuanto se detecta sintomatología (por ejemplo dolor, hinchazón o inflamación). La vía, dosificación y programación específicos de la administración dependerán, en parte, del patógeno particular y/o de la condición a tratar, así como del estadio de la condición.
Una utilización preferente implica la aplicación de entre aproximadamente 1 x 10^{3} y 1 x 10^{12} bacterias o esporas viables al día, preferentemente entre aproximadamente 1 x 10^{5} y 1 x 10^{10} bacterias o esporas viables al día, y más preferentemente entre aproximadamente 5 x 10^{8} y 1 x 10^{9} bacterias o esporas viables al día. Además, un procedimiento preferente opcionalmente comprende la aplicación de una composición terapéutica que además contiene entre aproximadamente 10 mg y 20 g de fructooligosacárido (FOS) al día, preferentemente entre aproximadamente 50 mg y 10 g de FOS al día, y más preferentemente entre aproximadamente 150 mg y 5 g de FOS al día, de manera que se promueva el crecimiento de la especie probiótica de Bacillus sobre el crecimiento del microbio patogénico.
Con respecto al baño terapéutico, una forma de realización de la presente invención da a conocer la adición y mezcla de una composición de esporas secas de Bacillus (que adicionalmente pueden contener componentes de baño, tales como jabones, aceites, fragancias, sales y componentes de baño similares) a un baño preparado, seguido de la puesta en contacto del tejido o tejidos infectados con el agua de baño, tal como mediante la "toma de un baño" en el sentido convencional. En la presente forma de realización, las esporas probióticas terapéuticas de Bacillus pueden empaquetarse en un sistema con instrucciones tal como se describe en el presente memoria. Un baño típico proporcionaría entre aproximadamente 1 x 10^{8} y 1 x 10^{10} UFC de células bacterianas o esporas por baño, y preferentemente entre aproximadamente 1 x 10^{9} y 5 x 10^{9} UFC de células bacterianas o esporas por baño.
Los medios específicos utilizados para el tratamiento de las infecciones microbianas se describirán en más detalle en la sección de Ejemplos específicos, posteriormente, e incluyen, aunque sin limitarse a ellos, el tratamiento de la irritación de pañal, la infección vaginal por levadura, la infección oportunista de la piel, la infección de hongos de la harina, la infección superficial de la piel, acne, úlceras del herpes, lesiones genitales herpéticas, eccema herpético, culebrilla, pie de atleta, y similares.
La presente invención da a conocer asimismo un sistema terapéutico para tratar, reducir y/o controlar las infecciones microbianas, que comprende un recipiente que contiene una etiqueta y una composición terapéutica de la presente invención, en la que dicha etiqueta comprende instrucciones para la utilización de la composición terapéutica para el tratamiento de la infección. Por ejemplo, el sistema terapéutico puede comprender una o más dosis unitarias de una composición terapéutica de la presente invención. Alternativamente, el sistema puede contener cantidades en masa de la composición terapéutica. La etiqueta contiene instrucciones para utilizar la composición terapéutica en dosis unitaria o en forma en masa según resulte apropiado, y puede incluir información respecto al almacenamiento de la composición, indicaciones de enfermedades, dosis, vías y modos de administración e información similar.
Además, dependiendo de la utilización particular contemplada, el sistema opcionalmente puede contener paquetes combinados o separados de uno o más de los componentes siguientes: FOS, sales de baño, jabones y aceites (para el baño) y componentes similares. Un sistema particularmente preferente comprende paquetes de dosis unitaria de esporas de Bacillus para la utilización en combinación con una sal de baño o producto de jabón de baño convencional, junto con instrucciones para utilizar el probiótico Bacillus en un procedimiento terapéutico.
Se han examinado varios lípidos de derivación animal para la utilización como "agentes portadores", que se utilizan para dispersar y facilitar la penetración de estas composiciones terapéuticas a través de las diversas membranas y tejidos dérmicos y cutáneos. Sin embargo, previamente a la exposición contenida en la presente memoria, ha tenido poco éxito la búsqueda de un agente capaz de penetrar el material cutáneo denso, tal como las uñas de manos y pies y las pezuñas de animales.
Se da a conocer en la presente memoria la utilización de un lípido de derivación animal, el aceite de emu, como un "agente portador" para facilitar la dispersión y penetración de las composiciones terapéuticas de la presente invención a través de las diversas membranas y tejidos dérmicos y cutáneos, y se ha demostrado que incrementa marcadamente la eficacia de las terapias antimicrobianas y antifúngicas. Este material lipídico se extrae del emu (Dromais novae-hollandiae), un ave indígena de Australia y Nueva Zelanda. Aunque el aceite de emu ha sido descrito con anterioridad, las utilizaciones que se detallan en estos documentos detallan únicamente sus beneficios como agente antiinflamatorio para la artrititis y sus utilizaciones para la salud cardiovascular cuando se ingiere, de manera similar a la utilización de los aceites de pescado Omega-3 para mejorar los niveles de colesterol-lipoproteína de alta densidad (HDL).
De acuerdo con ello, pueden mitigarse o aliviarse enfermedades dérmicas tanto humanas como animales causadas por dermatofitos bacterianos y/o micóticos, manteniendo concomitantemente la salud dérmica y cutánea, mediante la utilización de una combinación de agentes activos en una composición terapéutica que incluye agentes antifúngicos/antibacterianos (por ejemplo moléculas orgánicas, proteínas y carbohidratos y/o productos de fermentación bacteriana) en combinación con aceite de emu. En una forma de realización preferente de la presente invención, se combina una concentración terapéuticamente efectiva de aceite de emu con los productos de fermentación de bacterias que se ha demostrado que producen metabolitos inhibitorios (por ejemplo Bacillus coagulans) con un agente antifúngico y, opcionalmente, con otro agente antimicrobiano (por ejemplo un antibiótico), en un portador farmacéuticamente aceptable adecuado para la administración en las membranas dérmicas y/o cutáneas de un animal.
En una forma de realización de la composición sobrenadante bacteriana, pueden utilizarse cepas bacterianas adicionales, por ejemplo un miembro del genero Lactobacillus, incluyendo, aunque sin limitarse a ellos, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus delbrukil, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus gaserli, Lactobacillus jensenii y Lactobacillus sporogenes. En otra forma de realización, la cepa bacteriana adicional es un miembro del género Enterococcus, que incluye, pero sin limitarse a ellos, Bacillus facium y Enterococcus thermophilus. En otra forma de realización, la cepa bacteriana adicional es un miembro del género Bifidobacterium, que incluye, aunque sin limitarse a ellos, Bacillus longum, Bacillus \hbox{infantis}, Bacillus \hbox{bifidus} y Bacillus bifidum. En otra forma de realización, la cepa bacteriana adicional es un miembro del género \hbox{Bacillus}, que incluye, aunque sin limitarse a ellos, Bacillus thermophilus, Bacillus laterosporus, Bacillus subtilis, Bacillus megaterium, Bacillus licheniformis, Bacillus mycoides, Bacillus pumilus, Bacillus lentus, Bacillus \hbox{uniflagellatus}, Bacillus cereus y Bacillus circulans. En otra forma de realización, la cepa bacteriana adicional es un miembro del género \hbox{Pseudomonas}, que incluye, aunque sin limitarse a ellos, Pseudomonas aeruginosa, \hbox{Pseudomonas} putida, Pseudomonas cepacia, Pseudomonas florescenes y Pseudomonas 679-2. En otra forma de realización de la presente invención, la cepa adicional es un miembro del género Sporolactobacillus, Micrococcus, Berkholderia, Rhodococcus y cualquiera de entre otras bacterias que poseen la capacidad de producir un metabolito que presenta actividad antibacteriana, antimicótica o antivírica.
En la presente invención, las composiciones sobrenadantes bacterianas anteriormente indicadas se combinan con un agente antifúngico. Éste, y cualquier agente antimicrobiano adicional, pueden ser compuestos no derivados microbianamente. Estos compuestos antimicrobianos derivados no microbianamente pueden incluir, aunque sin limitarse a ellos, un cloruro de amonio cuaternario, un compuesto de yodo o yodífero (por ejemplo Betadine®), una compuesto fenólico, un compuesto o tintura de alcohol (por ejemplo etanol, isopropilo y similares). En otras formas de realización, el compuesto antimicrobiano no derivado microbianamente es un compuesto antifúngico sistémico, incluyendo, aunque sin limitarse a ellos, anfotericina B, dapsona, fluconazol, flucitosina, griseofulvina, itraconazol, cietoconazol o miconazol KI. En otras formas de realización, el compuesto antimicrobiano no derivado microbianamente es un compuesto antifúngico tópico, incluyendo, aunque sin limitarse a ellos, anfotericina B, carbol-fucsina, ciclopirox, clomtrizol, econazol, haloprogina, cetoconazol, mafenida, miconazol, naftifina, nistatina, oxiconazol, sulfadiacina de plata, sulconazol, terbinafina, tioconazol, tolnaftato o ácido undecilénico. En otras formas de realización, el compuesto antimicrobiano no derivado microbianamente es un compuesto antifúngico vaginal, incluyendo, aunque sin limitarse a ellos, butoconazol, clotrimazol, econazol, violeta de genciana, miconazol, nistatina, terconazol o tioconazol.
Típicamente los agentes que poseen un pH bajo resultan extremadamente difíciles de mezclar en composiciones solubles con agentes lipofílicos, tales como aceite de emu. Los productos extracelulares derivados de Bacillus coagulans y de Pseudomonas lindbergii dados a conocer en la presente invención no son lipofílicos. Los productos extracelulares hidrofílicos poseen un pH muy bajo (es decir, ácido). Las mezclas estables de estos productos extracelulares y aceite de emu resultan difíciles de preparar. Las mezclas descritas en la presente memoria se producen mezclando los productos extracelulares y aceite de emu y calentando la mezcla para conseguir una emulsión estable.
La presente invención también da a conocer diversos productos manufacturados que utilizan los aspectos beneficiosos de la presente invención mediante combinación de la composición terapéutica con diversos dispositivos de higiene médica o personal de manera que se reducen o previenen las infecciones asociadas con la utilización de estos dispositivos. La invención comprende composiciones de un agente activo aislado de Bacillus coagulans y opcionalmente otro agente activo de Bacillus aplicado sobre una superficie sólida o impregnado en una matriz sólida de cualquier dispositivo o producto manufacturado destinado a estar en contacto con la piel o con una membrana mucosa. Preferentemente la superficie sólida es un producto flexible que puede llevarse como prenda de ropa o aplicarse sobre la piel o membrana mucosa. Más preferentemente, cuando el elemento flexible que porta el agente activo de Bacillus está destinado a llevarse sobre la piel incluye un medio para unir el producto a la piel, tal como, por ejemplo, una capa adhesiva, conectores de gancho y bucle enganchables entre sí (Velcro®) u otros medios bien conocidos de unión, tales como bridas, cierres de broche, elásticos, botones y similares.
Las formas de realización específicas que incluyen un agente aislado de Bacillus coagulans y opcionalmente otro agente activo de otro Bacillus son pañales, toallitas (por ejemplo toallitas para bebés o toallitas para la higiene femenina), tampones, parches dérmicos, cinta adhesiva, almohadillas absorbentes, prendas de ropa (por ejemplo ropa interior, ropa de dormir), toallas de baño, toallas de lavado y similares. El producto puede realizarse en materiales fibrosos tejidos, cosidos o no tejidos, películas o membranas oclusivas o no exclusivas, fibras, películas, membranas y espumas sintéticas de polímero (por ejemplo nilón, politetrafluoroetileno (PTFE, tal como Teflon® o Gore-Tex®), poliestireno, policarbonato, cloruro de polivinilo y polisulfona). Todas estas formas son bien conocidas en la técnica e incluyen, por ejemplo, telas cosidas o tejidas, telas no tejidas, tal como terciopelo y tela batting.
El agente activo aislado de Bacillus coagulans y opcionalmente el otro agente activo de Bacillus pueden aplicarse sobre la superficie sólida utilizando cualquiera de una diversidad de procedimientos conocidos, incluyendo, por ejemplo, aplicar unos polvos, secar por pulverización el probiótico sobre el material o empapar el material en una solución que contiene el probiótico y seguidamente utilizar el material humedecido o secar el material a utilizar. El material poroso puede contener el agente o agentes activos de Bacillus en los poros o intersticios del material sólido. El agente o agentes activos de Bacillus pueden unirse mediante adhesión, tal como mediante unión a una capa adhesiva que seguidamente se aplica en la piel (por ejemplo en un vendaje o parche dérmico). El agente o agentes activos de Bacillus pueden impregnarse en un material sólido durante el procedimiento de manufacturación del producto flexible (por ejemplo añadido a una composición sintética antes o durante el procedimiento de polimerización). La resistencia a la presión y al calor de las esporas de Bacillus hacen que sean particularmente adecuadas para la incorporación en el material durante la preparación. Cualquiera de los materiales sólidos que portan el agente o agentes activos de Bacillus también pueden empaquetarse individualmente o en grupos, adecuados para contener el material tratado utilizando materiales de empaquetamiento estándar (por ejemplo en un envoltorio retractilado al calor, paquete sellado, envoltorio protector o recipiente dispensador adecuado para contener materiales secos o húmedos). El producto manufacturado puede presentar, aplicado sobre el mismo, cualquiera de los componentes adicionales/opcionales de una composición terapéutica de la presente invención, incluyendo portadores, sales, FOS, fragancias y similares.
Puede utilizarse cualquiera de entre una diversidad de procedimientos para aplicar la composición terapéutica sobre un producto, y por lo tanto la invención no se encuentra limitada de esta manera. Sin embargo, entre los procedimientos preferentes se incluyen un procedimiento de "secado por pulverización" en el que el material se expone en una cámara de humedad baja en una mezcla atomizada que contiene una composición líquida, en la que la cámara seguidamente se expone a una temperatura de entre aproximadamente 80ºF y 110ºF con el fin de secar el líquido, impregnando de esta manera el material del producto con los componentes de la composición.
Una concentración típica se encuentra comprendida entre aproximadamente 1 x 10^{5} y 1 x 10^{9} UFC de bacterias o esporas viables/pulgada^{2} de superficie externa de portador fibroso/material de producto. Tras el secado, el producto se encuentra listo para su almacenamiento en un paquete estéril o para la utilización directa.
Ejemplos
Los ejemplos siguientes referentes a la presente invención son ilustrativos y no deben interpretarse como específicamente limitativos de la misma. Además, las variaciones de la invención conocidas en la actualidad o desarrolladas en el futuro que se encontrarían dentro de los conocimientos del experto en la materia, deben considerarse dentro del alcance de la presente invención según las reivindicaciones adjuntas.
Actividad probiótica de Bacillus coagulans (A) Actividad probiótica antimicótica de Bacillus coagulans
La capacidad de Bacillus coagulans de inhibir diversos patógenos fúngicos se demostró utilizando un ensayo in vitro. En el ensayo, se prepararon placas de patata-dextrosa (DIFCO®, Detroit, MI) utilizando procedimientos estándar y se inocularon individualmente con un lecho confluyente (aproximadamente 1,7 x 10^{6}) de diversas especies del hongo Trichophyton. Las cepas fúngicas ensayas de especies de Trichophyton (disponibles de la American Type Culture Collection (ATCC; Rockville, Maryland)) y sus números de acceso ATCC, así como los resultados de la inhibición in vitro por Bacillus coagulans, se ilustran en la fig. 3.
La inhibición por Bacillus coagulans se estableció sembrando en la placa aproximadamente 1,5 x 10^{6} unidades formadoras de colonia (UFC) en 10 \mul de caldo o tampón, sembradas directamente en el centro de la placa de ágar patata-dextrosa, con un locus de ensayo por placa. El tamaño de cada locus de ensayo era de aproximadamente 8 mm de diámetro y se llevó a cabo un mínimo de tres ensayos para cada ensayo de inhibición. El control negativo consistía en un volumen de 10 ml de solución salina estéril, mientras que el control positivo consistía en un volumen de 10 ml de miconazol al 2% (1-[2-(2,4-diclorofenil)-2-[(2,4-diclorofenil)metoxilmetil-1,1]-imidazol en una crema
inerte.
A continuación, las placas se incubaron durante aproximadamente 18 horas a 30ºC, después de lo cual se midieron las zonas de inhibición. Tal como se utiliza en la presente memoria, la expresión "inhibición excelente" se refiere a que la zona era de 10 mm o más de diámetro; y "inhibición buena" se refiere a que la zona era de más de 2 mm de diámetro, pero de menos de 10 mm de diámetro.
Los resultados de la inhibición in vitro por Bacillus coagulans se ilustran en la fig. 3. Para cada especie de \hbox{Trichophyton} ensayada, se indica la condición de enfermedad asociada con una infección en la columna 2 de la fig. 3. Para la comparación, no se observó ninguna zona de inhibición con el control negativo, mientras que se observó una inhibición buena (aproximadamente 8,5 mm de diámetro, media de tres ensayos) con el control positivo.
(B) Inhibición probiótica de levadura por Bacillus coagulans
De manera similar, la capacidad de Bacillus coagulans de inhibir diversas levaduras patógenas se demostró in vitro para cuatro especies de Candida, todas las cuales se encuentran disponibles de la American Type Culture Collection (ATCC; Rockville, Maryland). Cada uno de las levaduras patógenas y sus números de acceso ATCC se ilustra en la fig. 4.
En el ensayo de inhibición in vitro, las placas de ágar de patata-dextrosa (DIFCO®, Detroit, MI) se prepararon utilizando procedimientos estándar y se inocularon individualmente con un lecho confluyente de aproximadamente 1,7 x 10^{6} de las cuatro especies de Candida. La inhibición por Bacillus coagulans se ensayó sembrando en la placa aproximadamente 1,5 x 10^{6} unidades formadoras de colonia (UFC) en 10 \mul de caldo o tampón sembrado directamente en el centro de la placa de ágar de patata-dextrosa con un locus de ensayo de aproximadamente 8 mm de diámetro por placa. Se llevó a cabo un mínimo de tres ensayos por cada ensayo de inhibición. El control negativo consistía en un volumen de 10 \mul de una solución salina estéril, mientras que el control positivo consistía en un volumen de 1 \mul de crema de miconazol.
A continuación, las placas se incubaron durante aproximadamente 18 horas a 30ºC, después de lo cual se midieron las zonas de inhibición. Tal como se utiliza en la presente memoria, "inhibición excelente" se refiere a que la zona era de 10 mm o más de diámetro, e "inhibición buena" se refiere a que la zona era mayor de 2 mm de diámetro, pero menor de 10 mm de diámetro.
Los resultados de los ensayos in vitro se muestran en la fig. 4, mostrando las condiciones patológicas en el ser humano asociadas con la infección por especies de Candida en la columna 2. Tal como se esperaba, no se observó inhibición con el control negativo y se observó una inhibición buena (aproximadamente 8,7 mm de diámetro; media de tres ensayos) con el control positivo.
(C) Actividad probiótica antimicrobiana de Bacillus coagulans
La capacidad de Bacillus coagulans de inhibir diversos patógenos bacterianos oportunistas se estableció cuantitativamente mediante la utilización de un ensayo in vitro. Este ensayo es parte de un cribado estandarizado de patógenos bacterianos (desarrollado por la U.S. Food and Drug Administration (FDA)) y se encuentra disponible comercialmente en discos de soporte sólido (conjunto de discos DIFCO® BACTROL®). Con el fin de llevar a cabo el ensayo, las placas de ágar de patata-dextrosa (DIFCO®) se prepararon inicialmente utilizando procedimientos estándar. A continuación, las placas se inocularon individualmente con cada una de las bacterias (aproximadamente 1,5 x 10^{6} UFC) a ensayar, de manera que formasen un lecho bacteriano confluyente.
Posteriormente se estableció la inhibición por Bacillus coagulans sembrando aproximadamente 1,5 x 10^{6} UFC de Bacillus coagulans en 10 \mul de caldo o tampón, directamente en el centro de la placa de patata-dextrosa, siendo un locus de ensayo de aproximadamente 8 mm de diámetro por placa. Para cada ensayo se utilizó un mínimo de tres loci de ensayo. El control negativo consistía en un volumen de 10 \mul de solución salina estéril, mientras que el control positivo consistía en un volumen de 10 \mul de glutaraldehído. A continuación, se incubaron las placas durante aproximadamente 18 horas a 30ºC, después de lo cual se midieron las zonas de inhibición. En la presente memoria la expresión "inhibición excelente" se refiere a que la zona presentaba un diámetro igual o superior a 10 mm, e "inhibición buena" se refiere a que la zona presentaba un diámetro superior a 2 mm pero inferior a 10 mm.
Tal como se esperaba, no se observó "inhibición" con el control negativo de solución salina, y se observó "inhibición" excelente (aproximadamente 16,2 mm de diámetro; media de tres ensayos) con el control positivo de glutaraldehído. Para los microorganismos entéricos ensayados, se observó la inhibición siguiente por Bacillus coagulans: (i) especies de Clostridium - inhibición excelente; (ii) Escherichia coli - inhibición excelente; (iii) especies de \hbox{Clostridium} - inhibición excelente, donde la zona de inhibición presentaba un diámetro consistentemente superior a 15 mm. De manera similar, también se observó inhibición excelente de los patógenos oportunistas Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aereus.
En resumen, las bacterias entéricas patogénicas que se demostró que resultaban inhibidas por la actividad de
Bacillus coagulans incluyen, aunque sin limitarse a ellas, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidus, Streptococcus pyrogenes, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli (especies enterohemorrágicas), numerosas especies de Clostridium (por ejemplo Clostridium perfringens, Clostridium botulinum, Clostridium tributrycum, Clostridium sporogenes, y similares), Gardnereia vaginalis, Proponbacterium aenes, Aeromonas hydrophia, especies de Aspergillus, especies de Proteus y especies de Klebsiella.
Formulaciones de composición terapéutica
(A) Formulación 1
Formulación de baño (por baño/dosis)
Bacillus coagulans 2,5 x 10^{8} esporas (aprox. 18 mg)
Sales de baño (sales marinas y minerales) 10 g
Fructooligosacáridos (FOS) 1 g
Celulosa microcristalina (CMC) 5 g
Fragancia Trazas 
\vskip1.000000\baselineskip
(B) Formulación 2
Pomada tópica (por ml)
Extracto de Bacillus coagulans 100 \mul (ver el Ejemplo específico C(ii))
Lanolina 780 \mul
Aceite de emu 100 \mul
Aceite esencial de geranio 20 \mul
Fragancia Trazas 
\vskip1.000000\baselineskip
(C) Formulación 3
Líquido tópico para aplicación con cuentagotas (por ml)
Extracto de Bacillus coagulans 500 \mul (ver el Ejemplo específico C(ii))
Aceite de emu 450 \mul
Aceite esencial de geranio 20 \mul
Detergente Tween-80 30 \mul
Fragancia Trazas 
\vskip1.000000\baselineskip
(D) Formulación 4
Polvos (por gramo)
Bacillus coagulans 1 x 10^{8} esporas (aprox. 8 mg)
Talco 992 mg
Fragancia de lavanda en polvo Trazas
Cultivo de Bacillus coagulans (A) Cultivo de células vegetativas de Bacillus coagulans
Bacillus coagulans es aeróbico y facultativo, y típicamente se cultiva a un pH entre 5,7 y 6,8, en un caldo nutritivo que contiene hasta 2% (en peso) de NaCl, aunque ni NaCl ni KCl resultan imprescindibles para el crecimiento. Un pH de entre aproximadamente 4,0 y aproximadamente 7,5 resulta óptimo para el inicio de la esporulación (es decir, la formación de esporas). Las bacterias se cultivan óptimamente a una temperatura comprendida entre 30ºC y 45ºC, y las esporas pueden resistir la pasteurización. Además, las bacterias muestran un crecimiento facultativo y heterotrófico mediante la utilización de una fuente de nitrato o de sulfato.
Bacillus coagulans puede cultivarse en una diversidad de medios, aunque se ha demostrado que determinadas condiciones de cultivo resultan más eficaces para producir un cultivo que rinda un nivel elevado de esporulación. Por ejemplo, se ha demostrado que la esporulación se intensifica si el medio de cultivo incluye 10 mg/l de sulfato MgSO_{4}, dando lugar a una proporción de esporas a células vegetativas de aproximadamente 80:20. Además, determinadas condiciones de cultivo producen una espora bacteriana que contiene un espectro de enzimas metabólicos particularmente adecuados para la presente invención (es decir, la producción de ácido láctico y de enzimas para la actividad probiótica y biodegradación incrementadas). Aunque las esporas producidas mediante estas condiciones de cultivo anteriormente indicadas resultan preferentes, pueden utilizarse diversas otras condiciones de cultivo compatibles que producen esporas viables de Bacillus coagulans en la práctica de la presente invención.
Entre los medios adecuados para el cultivo de Bacillus coagulans se incluyen, aunque sin limitarse a ellos: PDB (caldo de patata-dextrosa), TSB (caldo de soja tríptica) y NB (caldo nutritivo), todos los cuales son bien conocidos de la técnica y se encuentran disponibles de una diversidad de fuentes. En una forma de realización de la presente invención, resultan particularmente preferentes los suplementos de medio que contienen digeridos enzimáticos de aves de corral y/o de tejido de pescado y que contienen levadura de alimento. Un suplemento preferente produce un medio que contiene por lo menos el 60% de proteína y aproximadamente el 20% de carbohidratos complejos y 6% de lípidos. Los medios pueden obtenerse de una diversidad de fuentes comerciales, notablemente DIFCO (Newark, NJ), BBL (Cockeyesville, MD), Advanced Microbial Systems (Shakopee, MN), y Troy Biologicals (Troy, MD). Opcionalmente el medio de cultivo para Bacillus coagulans comprende un medio de glucosa y extracto de levadura que incluye los componentes siguientes:
Extracto de levadura en polvo (Difco) 5,0 g
Casitona/peptona (Difco) 5,0 g
D-glucosa (Difco) 3,0 g
Hidrogenofosfato de dipotasio 0,5 g
Dihidrogenofosfato de potasio 0,5 g
Sulfato de magnesio 0,3 g
Solución mineral traza 1,0 ml (ver posteriormente)
Agua destilada 1.000 ml
Ágar (a añadir tras el ajuste del pH) 15,0 g
A continuación, se ajustó el pH del medio a aproximadamente 6,3 seguido de esterilización con vapor a 1,2 kg/cm^{2} de presión a 120ºC durante 15 minutos.
La solución mineral traza utilizada para el análisis de la cepa bacteriana de Bacillus coagulans de la presente invención se preparó con la composición siguiente:
NaCl 500,0 mg
MnSO_{4}\cdot5H_{2}O 500,0 mg
ZnSO_{4}\cdot7H_{2}O 80,0 mg
CuSO_{4}\cdot5H_{2}O 80,0 mg
CoSO_{4}\cdot7H_{2}O 80,0 mg
Agua destilada 50,0 ml
La cantidad requerida de sales se pesó con exactitud y se añadió una pequeña cantidad de agua destilada para facilitar la disolución. A continuación el volumen se enrasó a 50 ml en total en un matraz volumétrico. La solución final adquirió un color rosado y puede almacenarse a 4ºC para hasta un total de 2 meses.
En una forma de realización preferente de la presente invención, se inoculó un cultivo de bacterias Bacillus \hbox{coagulans} Hammer (ATCC nº 31284) y se cultivó a una densidad celular aproximada de entre 1 x 10^{8} y 1 x 10^{9} células/ml en el medio de cultivo de glucosa/extracto de levadura anteriormente indicado. Las bacterias se cultivaron utilizando un recipiente aeroelevado estándar de fermentación a 30ºC. En caso de requerir la esporulación, se descubrió que el intervalo aceptable de MnSO_{4} estaba comprendido entre 1,0 mg/l y 1,0 g/l. Las células bacterianas vegetativas pueden reproducirse activamente hasta 65ºC, y las esporas son estables hasta 90ºC.
Tras el cultivo, las células o esporas bacterianas de Bacillus coagulans Hammer se recogieron mediante procedimientos estándar (por ejemplo filtración, centrifugación) y las células y esporas recogidas seguidamente se liofilizaron, se secaron por pulverización, se secaron al aire o se congelaron. Tal como se describe en la presente memoria, el sobrenadante del cultivo celular puede recogerse y utilizarse como agente extracelular secretado por Bacillus coagulans que posee actividad antimicrobiana útil en una formulación de la presente invención.
Un rendimiento típico obtenido a partir de la metodología de cultivo anteriormente indicada se encuentra comprendido en el intervalo entre 10^{9} y 10^{13} esporas viables y, más típicamente, de aproximadamente 10 a 15 x 10^{10} células/esporas por gramo previamente a su secado. También debe indicarse que las esporas de Bacillus coagulans, tras una etapa de secado, mantienen una viabilidad de por lo menos el 90% durante hasta 7 años cuando se almacenan a temperatura ambiente. Por lo tanto, la vida de almacenamiento efectiva de una composición que contiene esporas de Bacillus coagulans Hammer a temperatura ambiente es de aproximadamente 10 años.
(B) Preparación de esporas de Bacillus coagulans
Puede prepararse un cultivo de bacterias secadas de Bacillus coagulans Hammer (ATCC No. 31284) de la manera siguiente. Se inocularon aproximadamente 1 x 10^{7} esporas en un litro de medio de cultivo que contenía: 24 g (p/v) de caldo de patata-dextrosa, 10 g de un digerido enzimático de aves de corral y tejido de pescado, 5 g de fructooligosacáridos (FOS) y 10 g de MnSO_{4}. El cultivo se mantuvo durante 72 horas bajo un ambiente rico en oxígeno a 37ºC para producir un cultivo que presentase aproximadamente 15 x 10^{10} células/gramo de cultivo. A continuación, el cultivo se filtró con el fin de retirar el medio líquido de cultivo y el pellet bacteriano resultante se resuspendió en agua y se liofilizó. Las bacterias liofilizadas se molieron para formar "polvos" finos utilizando procedimientos estándar de buenas prácticas de fabricación (GMP). Seguidamente los polvos se combinaron con la Formulación 1 o la Formulación 4 según se describe en el Ejemplo específico 7.2 para formar composiciones de polvos secos.
Debe indicarse también que las formas de realización más preferentes de la presente invención utilizan Bacillus coagulans en la forma bacteriana de espora y no de célula vegetativa.
Preparación de productos extracelulares de B. coagulans y de P. lindbergii
Se prepararon medios de cultivo de un litro de Bacillus coagulans y de Pseudomonas lindbergii de la manera siguiente: (i) se prepararon cultivos de Bacillus coagulans tal como se describe en el Ejemplo 7.3 utilizando un medio de glucosa/extracto de levadura e (ii) se cultivaron cultivos de Pseudomonas lindbergii utilizando un medio de patata-dextrosa. En ambos casos se omitió la adición inicial de fructooligosacárido (FOS) al medio de cultivo. El cultivo se mantuvo durante 5 días tal como se ha descrito, después de lo cual se añadió FOS a una concentración de 5 g/litro y se continuó con el cultivo. Posteriormente, se añadieron 20 ml de pulpa de zanahoria en el día 7, y el cultivo se recolectó al saturarse (es decir, sustancialmente ninguna división celular).
El cultivo en primer lugar se autoclavó durante 30 minutos a 250ºF y después se centrifugó a 4.000 r.p.m. durante 15 minutos. El sobrenadante resultante se recogió y se sometió a submicrofiltración, inicialmente con un embudo de Buchner a través de un filtro de 0,8 \mum. El filtrado se recogió y se filtró adicionalmente a través de un filtro de vacío Nalge de 0,2 \mum. El filtrado resultante final seguidamente se recogió (un volumen aproximado de 900 ml) dando lugar a un líquido que contenía un producto extracelular para su análisis cuantitativo y utilización en los estudios posteriores de inhibición.
Se aplicaron los procedimientos siguientes para caracterizar y/o purificar el sobrenadante.
Cromatografía líquida de proteínas: se cargaron 20 ml de sobrenadante de cultivo en una columna de cromatografía analítica Mono 9 (Pharmacia) equilibrada en tampón A (Tris HCl 0,25 M, pH 8,0) utilizando un sistema de cromatografía BioCAD Sprint (Perseptive Biosystems, Inc.) a un caudal de 2 ml/min. La columna de lavó con 15 ml de tampón A y se eluyó con un gradiente lineal entre 0% de B (es decir, el tampón B es una solución acuosa de NaCl 3 M) y 40% de B a lo largo de 12 minutos. A continuación, la columna se lavó con 100% de B durante 5 minutos. Seguidamente, la columna se reequilibró con tampón A. Se realizó un seguimiento de la absorbancia a 280 nm con el fin de detectar la elución de los aminoácidos aromáticos (es decir, tirosina) presentes en las proteínas bacterianas.
Los resultados demuestran una mezcla de proteínas, la mayoría de las cuales eluyen entre 0,1 M y 0,8 M de NaCl, y una fracción menor de material que eluye a una concentración de NaCl de 3,0 M. Las fracciones se recogieron y se guardaron, dializando en membranas de diálisis Spectrapor (PM "de corte" de aproximadamente 1.000 daltons) frente a agua, con el fin de facilitar el análisis posterior.
Espectroscopía de ultravioleta y de visible: se determinaron los espectros diferenciales de absorbancia entre las longitudes de onda de 200 y 600 nm en cubetas de cuarzo de 1 cm utilizando un espectrofotómetro de escaneo Uvikon 930 (Kontron Instruments). Se determinó la línea base con agua o con caldo LB de medio de cultivo (DIFCO).
Los resultados con un blanco de agua muestran un pico de absorbancia de entre 290 nm y 305 nm para Bacillus coagulans (ver la fig. 5; panel A) y para Pseudomonas lindbergii (ver la fig. 5; panel B) con una cantidad significativa de material absorbente adicional de entre 210 nm y 400 nm. También se demostró la existencia de una absorbancia significativa en las longitudes de onda de UV, principalmente debido a la presencia de proteína. Los resultados con caldo LB (ver la fig. 6) muestran una reducción marcada en el material absorbente en el intervalo entre 300 nm y 440 nm, pero un incremento en las longitudes de onda más elevadas, mostrando de esta manera un incremento en los compuestos orgánicos altamente conjugados (es decir, proteínas) con un consumo de los más simples (es decir, los aminoácidos).
El hecho de que se produjeran pocos cambios en las longitudes de onda en las que absorben específicamente las proteínas se debe al hecho de que LB ya contiene 10 gramos de hidrolizado de caseína (ácidos caseínicos, DIFCO).
Electroforesis en gel de SDS poliacrilamida. Se llevó a cabo electroforesis mediante el procedimiento de Laemmli (ver Laemmli, Nature 227:680-685, 1970) y los geles de acrilamida se vertieron en cassettes de 1 mm (Novex) y se corrieron según las recomendaciones del suministrador comercial (es decir, 120 voltios durante 90 minutos [gel al 12%] y durante 2 horas [al 16%]). A continuación, los geles se tiñeron con plata siguiendo el procedimiento de Blum et al. (ver Blum et al., Electrophoresis 8:93-99, 1987). Se descubrió que un gel de acrilamida al 12% resolvía mejor las proteínas de Pseudomonas lindbergii (ver la fig. 7), mientras que un gel al 16% resolvía mejor las proteínas de Bacillus coagulans (ver la fig. 8). Todas las muestras se dializaron frente a agua previamente a la preparación para electroforesis con el fin de reducir los artefactos electroforéticos asociados a las sales. Se utilizaron marcadores de proteína de amplio rango (BioRad) para la determinación del peso molecular de las proteínas.
Los resultados electroforéticos demostraron la presencia de un número significativo de bandas proteináceas en el intervalo comprendido entre menos de 4.000 y 90.000 daltons para Pseudomonas lindbergii y en el intervalo comprendido entre menos de 4.000 y 30.000 daltons para Bacillus coagulans.
Cromatografía líquida de alta presión. Se extrajeron cinco ml de sobrenadantes de cultivo con 2 ml de acetonitrilo, benceno o 24:1 (v:v) de cloroformo: alcohol isoamílico durante aproximadamente dos horas. Se permitió que se separasen las fases durante cuatro horas y se separaron adicionalmente mediante centrifugación a 5.000 x g durante 10 minutos. A continuación, la fase orgánica se pasó a través de filtros de 0,2 \mum PVDF (Gehnan Acrodisc LC-13) y se cargó en una columna de HPLC Econosil C-18 10U (Altech) en una fase móvil de Tris-HCl 20 mM (pH 7,5). La elución se inició tras un total de 5 minutos, en un gradiente lineal de 15 minutos hasta 60% de acetonitrilo (ACN) en agua. La elución se continuó durante 5 minutos en ACN al 60% y seguidamente se lavó la columna y se reequilibró en Tris-HCl 20 mM (pH 7,5).
Los resultados de la HPLC de fase inversa de Bacillus coagulans y Pseudomonas lindbergii extraídos con ACN se ilustran en la fig. 9 y en la fig. 10, respectivamente, y demuestran que el incremento del carácter orgánico del disolvente condujo crecientemente a "perfiles orgánicos" en la HPLC (es decir, a un incremento del material que eluía a un porcentaje más elevado de ACN) y a un incremento en la captura de las moléculas pigmentadas (es decir, las moléculas que absorben luz visible). Las moléculas anteriormente indicadas se aislaron y se caracterizaron adicionalmente.
Los resultados de los procedimientos analíticos anteriormente indicados demostró que los sobrenadantes de cultivos tanto de Bacillus coagulans como de Pseudomonas lindbergii son de naturaleza muy heterogénea, y contienen una pluralidad de moléculas proteináceas y orgánicas. Sin embargo, las moléculas que predominan son las proteínas, de las que hay un total de 20 especies diferentes en cada una de las muestras. Estas especies de proteínas pueden fraccionarse adicionalmente mediante la utilización de cromatografía de intercambio iónico, permitiendo de esta manera una caracterización adicional. Además, también había numerosas moléculas pigmentadas (es decir, moléculas que absorben la luz visible) que se encontraban altamente conjugadas (según su absorbancia a longitudes de onda elevadas) y que eran hidrofóbicas (según su preferencia por disolventes no polares y la retención en la columna C-18 de HPLC).
Tras los análisis y caracterización anteriormente indicados, el ensayo inicialmente descrito en el Ejemplo específico A(i) utilizando Candida albicans, se añadió 1 ml del producto extracelular anteriormente indicado a la placa de ensayo en lugar de la bacteria. Tras un tiempo de cultivo idéntico, se observó una zona de inhibición de aproximadamente 10 a 25 mm de diámetro. Estos resultados ilustran la potente actividad antimicrobiana de los productos extracelulares de Bacillus coagulans, que es de calidad "excelente", utilizando la terminología indicada en los Ejemplos específicos A(i)-(iii).
En un ensayo adicional, se llevó a cabo una comparación entre el antimicótico fluconazol y el sobrenadante de Bacillus coagulans en la inhibición de diversas especies bacterianas, fúngicas y de levadura. Tal como se ilustra en la fig. 11, estos sobrenadantes resultaron efectivos en la inhibición de una mayoría de los organismos contra los que se ensayaron. Se llevaron a cabo diluciones seriadas del sobrenadante de Bacillus coagulans con medio RPMI y se determinó la inhibición al 80% según la norma NCCLS para susceptibilidad antifúngica.
Específicamente los resultados demostraron que T. rubrum resultaba totalmente inhibida por el sobrenadante no diluido, y por las diluciones seriadas 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64, 1:128 y 1:256, y que el organismo resultaba inhibido al 80% por el compuesto diluido 1:512 con medio RPMI. T. mentagrophytes resultaba totalmente inhibido por el sobrenadante no diluido y por las diluciones seriadas 1:2, 1:4, 1:8 y 1:16, y el organismo resultaba inhibido al 80% por el sobrenadante diluido 1:32 con medio RPMI. C. parapsilosis resultaba totalmente inhibido por el sobrenadante no diluido y por las diluciones seriadas 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64, 1:128 y 1:256, y el organismo resultaba inhibido al 80% por el sobrenadante diluido 1:16 con medio RPMI. C. albicans resultaba totalmente inhibida por el sobrenadante no diluido y por una dilución 1:2, y el organismo resultaba inhibido al 80% por el sobrenadante diluido 1:4 con medio RPMI. Acremonium sp. resultaba totalmente inhibida por el sobrenadante no diluido e inhibido al 80% por el sobrenadante diluido al 1:2 con medio RPMI. Scopulariopsis sp. resultaba inhibido al 80% por el sobrenadante no diluido, pero no resultaba inhibido por las diluciones seriadas del sobrenadante. El sobrenadante no mostró actividad inhibidora contra C. glabrata, C. krusel o las dos especies de Aspergillus. De esta manera, se demostró que el sobrenadante posee una actividad inhibidora marcada, en una amplia diversidad de diluciones contra una mayoría de los organismos ensayados. Además, el sobrenadante de Bacillus coagulans aparentemente resultó extremadamente efectivo contra los dermatofitos (por ejemplo Trichophyton sp.), que son organismos causativos en muchas enfermedades dérmicas de los mamíferos.
En una forma de realización preferente de la presente invención, el líquido que contiene el producto extracelular se formuló en una composición de pomada líquida para la utilización en la aplicación directa sobre un tejido utilizando un cuentagotas, de manera conveniente para tratar una infección fúngica de las uñas de los pies. Esta pomada líquida se preparó combinando el producto extracelular líquido producido anteriormente con aceite esencial de emu en una proporción de aproximadamente 8:2, y se añadieron fragancias en cantidades traza para producir un componente estético.
Alternativamente, puede utilizarse cualquier componente de administración transdérmico liposómico o basado en aceite en lugar del aceite de emu. La proporción típica de producto extracelular probiótico a portador o a componente de administración se encuentra comprendida en un intervalo entre aproximadamente 1% y 90% de probiótico, y preferentemente es de entre aproximadamente 10% y 75% probiótico.
Aplicación tópica preventiva de la irritación de pañal
El consumidor aplica a los pañales antes de su utilización polvos, líquido de pulverización de aerosol o polvos de pulverización de aerosol que contenían agente activo de Bacillus coagulans, preferentemente esporas de Bacillus coagulans. Alternativamente, los pañales desechables suministrados por el fabricante pueden contener agente activo de Bacillus coagulans, preferentemente esporas de Bacillus coagulans, impregnadas en el material del pañal donde se encontraría en contacto con la piel del niño durante la utilización. Cuando el pañal se moja con orina y/o material fecal, se activan las esporas, habitualmente en menos de aproximadamente veinte minutos. La germinación de las esporas de Bacillus coagulans y el crecimiento de Bacillus coagulans tras la germinación de éstas produce suficiente actividad antifúngica, incluyendo actividad antilevadura, para inhibir el crecimiento de los organismos de levadura y fúngicos en los pañales y sobre la piel del niño, evitando de esta manera la irritación de pañal y otras infecciones oportunistas asociadas con el pañal.
Alternativamente o además del tratamiento de los pañales con Bacillus coagulans, la piel del niño en el área del pañal puede tratarse con una toallita húmeda saturada, polvos, líquido de pulverización de aerosol, polvos de pulverización de aerosol, loción, crema o pomada que contiene agente activo de Bacillus coagulans. Preferentemente la formulación de Bacillus coagulans se aplica sobre la piel del niño tras el baño y/o cuando se cambia el pañal.
Entre las formulaciones adecuadas se incluyen unos polvos de talco y opcionalmente fragancia 10 que contiene aproximadamente entre 1 x 10^{5} y 1 x 10^{10} esporas de Bacillus coagulans por gramo. Otras formulaciones adecuadas de polvos contienen talco, aceite mineral, carbonato de magnesio, DMDM, hidantoína y aproximadamente entre 1 x 10^{5} y 1 x 10^{10} esporas de Bacillus coagulans por gramo de un almidón de maíz y polvos de carbonato de calcio. También resulta adecuado unos polvos de aerosol que incluyan un isobutano u otro propelente bien conocido preparado utilizando procedimientos estándar. Puede formularse un pulverizador de aerosol combinando aproximadamente 1 x 10^{6} a 1 x 10^{11} esporas de Bacillus coagulans por gramo en miristato de isopropilo, aproximadamente 60% (p/p) de alcohol SD 40-B e isobutano como el propelente utilizando procedimientos estándar. También resulta adecuado un pulverizador de bomba manual que contenga 1 x 10^{6} a 1 x 10^{11} esporas de Bacillus coagulans por gramo de una solución acuosa neutra sin propelente químico. Una formulación de pulverizador adecuada incluye alcohol, glicerina, agua purificada y metilparabén además del probiótico de Bacillus coagulans. Una formulación de crema incluye gel de aloe vera, miristato de isopropilo, metilparabén, polisorbato 60, propilparabén, agua purificada, monoestearato de sorbitán, solución de sorbitol, ácido esteárico y aproximadamente 1 x 10^{5} a 1 x 10^{10} esporas de Bacillus coagulans por gramo. Otra crema protectora contiene vitaminas A y D equivalentes a la concentración encontrada en el aceite de hígado de bacalao, cetilpalmitato, aceite de semilla de algodón, glicerina, monoestearato de glicerol, fragancia opcional, metilparabén, aceite mineral, estearato de potasio, propilparabén y aproximadamente 1 x 10^{5} a 1 x 10^{10} esporas de Bacillus coagulans por gramo. Una pomada contiene aceite de hígado de bacalao, aceite de lanolina, metilparabén, propilparabén, talco, fragancia opcional y aproximadamente 1 x 10^{5} a 1 x 10^{10} esporas de Bacillus coagulans por gramo. Otra formulación de pomada incluye petrolato, agua, parafina, propilenglicol, proteína láctea, aceite de hígado de bacalao, gel de aloe vera, fragancia opcional, hidróxido de potasio, metilparabén, propilparabén, vitaminas A, D y E y aproximadamente 1 x 10^{5} a 1 x 10^{10} esporas de Bacillus coagulans por gramo. Se empapa una almohadilla de tejido suave (es decir, una toallita para bebé) en una solución acuosa (por ejemplo agua, anfótero 2, gel de aloe vera, DMDM, hidantoína o una solución acuosa entre el 30% y el 70% de alcohol) y aproximadamente 1 x 10^{5} a 1 x 10^{10} esporas de Bacillus coagulans por gramo.
Tratamiento tópico de la infección vaginal por levadura (A) Microecología vaginal
Es conocido habitualmente por los expertos en las materias relevantes que los microorganismos productores de ácido láctico (por ejemplo Lactobacillus) desempeñan un papel importante en el mantenimiento de una ecología vaginal sana. Sin embargo, los procedimientos tradicionales utilizados para la administración de estos materiales bioracionales no tratan los numerosos modos de infección de las especies de Candida y de Gardnerella, que pueden provocar enfermedades graves.
La amplia mayoría de los ginecólogos son firmes respecto a los riesgos de las infecciones vaginales como resultado del baño frecuente. De acuerdo con ello, los ginecólogos recomiendan ducharse con preferencia al baño por inmersión, con el fin de mitigar la probabilidad de desarrollar infecciones vaginales posteriores debido a las perturbaciones asociadas de la flora vaginal "normal" productora de ácido láctico.
(B) Infecciones vaginales mediadas por levaduras
Las infecciones por levadura o candidiasis vulvovaginal (CVV) son causadas por diversas especies de Candida (por ejemplo principalmente Candida albicans). Más del 85% de las mujeres, en un momento u otro sufren de candidiasis vulvovaginal. Por ejemplo, el mercado en los Estados Unidos para los compuestos antifúngicos que pueden administrarse para aliviar esta enfermedad suponen más de 700 millones de dólares al año, con una tasa de crecimiento de 9 a 11% por año. Además, cada año más cepas de los patógenos micóticos anteriormente indicados se convierten en resistentes a los compuestos antifúngicos utilizados habitualmente (por ejemplo cetoconazol, miconazol, fluconazol y similares).
La ecología vaginal sana depende principalmente de la presencia de microorganismos autóctonos específicos productores de ácido láctico (por ejemplo lactobacilos). Por lo tanto, se ha intentado numerosas veces en la técnica anterior desarrollar productos y/o metodologías para potenciar y/o reestablecer estas bacterias productoras de ácido láctico. Por ejemplo, un producto intentaba utilizar los Lactobacilos productores de peróxido de hidrógeno (H_{2}O_{2}) como terapia de supositorio vaginal para el alivio de las infecciones vaginales por levadura.
La viabilidad de los microorganismos continúa siendo la dificultad principal en la utilización de lactobacilos para la suplementación vaginal, aunque muchas compañías que comercializan supositorios vaginales de lactobaciloshan sugerido que prácticamente cualquier cepa bacteria resulta suficiente para conseguir la mitigación micótica dentro de la vagina. Sin embargo, dichas compañías basan su lógica y afirmaciones siguientes principalmente en el hecho de que existen cepas de Lactobacillus que son capaces de colonizar la vagina y que, al ser su cepa un miembro del género Lactobacillus, debería resultar eficaz. Por desgracia, la suposición o deducción no podría ser más errónea. En un estudio reciente se examinaron las diversas especies y cepas autóctonas de Lactobacilos que colonizaban las vaginas de 100 mujeres sanas. Los resultados demostraron que Lactobacillus acidophilus no era la especie más frecuente de Lactobacillus aislada de las vaginas de estas mujeres, sino que las cepas más frecuentes eran: Lactobacillus jensenii, Lactobacillus gasserii, Lactobacillus salivarius y Lactobacillus casei.
La información anteriormente proporcionada, en combinación con pruebas recientes que establece que el peróxido de hidrógeno (H_{2}O_{2}) es un subproducto metabólico necesario para la biopotenciación efectiva, refuta la creencia anterior de que cualquier cepa de Lactobacillus resulta igualmente eficaz en la utilización en un formato de administración basado en el supositorio. De esta manera, estos hechos demuestran la necesidad continuada de desarrollar un producto para la suplementación vaginal en combinación con un procedimiento eficaz de administración que alivie los potenciales problemas fisiológicos asociados a la utilización de tanto los productos para baño como el baño mismo, en general. Más específicamente, este producto debe contener una cepa de bacterias productoras de ácido láctico que posea características tales como: (i) una vida de almacenamiento de largo plazo, (ii) una tasa de crecimiento elevada (es decir, un tiempo de duplicación corto); e (iv) una producción altamente eficaz de ácido láctico, con el fin de producir un ambiente ácido dentro de la vagina.
(C) Infecciones vaginales mediadas por bacterias
A pesar de las convincentes pruebas de que las infecciones del tracto reproductivo inferior poseen la capacidad de migrar al tracto reproductivo superior y producir inflamación, estimular el parto prematuro y similares, algunos médicos todavía sostienen que las infecciones del tracto reproductivo inferior y la vaginosis bacteriana son meramente "marcadores" de las infecciones del tracto reproductivo superior.
Debe indicarse que la vaginosis bacteriana no es realmente una infección mediada por microorganismos, sino una condición microecológica caracterizada por alteraciones drásticas de la microflora vaginal endógena. Específicamente, la vaginosis bacteriana implica una reducción del número total de cepas bacterianas productoras de ácido láctico, con un incremento poblacional multilogarítmico concomitante de un conjunto característico de la microflora, incluyendo, aunque sin limitarse a ellos, Gardnerella vaginalis, anaerobios genitales y micoplasmas. Resulta interesante que estos últimos microorganismos, junto con estreptococos y coliformes son las mismas especies que las encontradas en la corioamnionitis.
Además, la vaginosis bacteriana también se asocia con concentraciones incrementadas de endotoxina bacteriana, proteasas, mucinasas, sialidasas, proteasas IgA y fosfolipasas A2 y C en el tracto reproductivo inferior. Estudios tanto observacionales como de intervención han demostrado que la presencia de vaginosis bacteriana en los primeros estadios del embarazo se asocia con el parto pretérmino y, en estadio posteriores de la gestación, en abortos. Estos estudios sugieren que la vaginosis bacteriana es una causa directa de resultados clínicos adversos en el embarazo, más que simplemente un marcador indirecto. Los estudios sugieren que la ascensión de la infección o una microflora anormal del tracto reproductivo inferior median en los resultados clínicos adversos del embarazo. Se producen interacciones microbio-huésped similares en la enfermedad periodontal.
Las infecciones de vaginosis bacteriana también pueden aliviarse mediante la producción de ácido láctico (es decir, con organismos probióticos). Tal como se ha comentado anteriormente, la relación causa-efecto en la vaginosis bacteriana se debe a la reducción de las cepas bacterianas productoras de ácido láctico con los incrementos multilogarítmicos resultantes de los microorganismos anaeróbicos, incluyendo, aunque sin limitarse a ellos, Gardnerella vaginalis. Sin embargo, los resultados de un reciente estudio de 3.900 mujeres llevado a cabo en Dinamarca demuestra que la ausencia de vaginosis bacteriana se asociaba directamente con una colonización vaginal suficiente de organismos aeróbicos productores de ácido láctico. De acuerdo con ello, la suplementación vaginal con una especie bacteriana eficaz productora de ácido láctico servirá para tratar el desequilibrio entre los organismos aeróbicos productores de ácido láctico y las especies anaeróbicas implicadas en la etiología de la vaginosis bacteriana. Esta suplementación vaginal puede utilizarse tanto profilácticamente como terapéuticamente.
Ahora se ha demostrado que determinadas especies de bacterias productoras de ácido láctico pueden incorporarse en composiciones altamente alcalinas de producto de baño. Estas composiciones demostrarían ser letales para casi todas las demás especies de bacterias productoras de ácido láctico, incluyendo, aunque sin limitarse a ellas,
Lactobacillus, Bifidiobacterium, Enterococcus y diversas otras cepas de bacterias de células vegetativas.
La administración sigue siendo el principal problema de la suplementación vaginal y, previamente a la presente invención, existía una necesidad sentida desde hacía mucho tiempo de una estrategia de inoculación que facilitase la suplementación vaginal de ácido láctico. La administración de una dosis adecuada de un organismo efectivo del ácido láctico en un producto para baño o ducha resuelve de esta manera algunos de los problemas vaginales asociados con el baño frecuente e incluso con el baño ocasional; la aromaterapia, las sales marinas, polvos de baño, geles de baño, aceites de baño y similares podrían contener un inóculo efectivo de bacterias del ácido láctico para una aplicación vaginal.
Los mecanismos de este tipo de administración pueden explicarse de la manera siguiente. Tras preparar un baño caliente, la mujer debe añadir al agua de 1 a 4 onzas del producto para baño propuesto que contiene entre aproximadamente 1 x 10^{9} y 2,5 x 10^{10} células bacterianas vegetativas (o esporas, dependiendo de la cepa bacteriana específica que se utilice). La mujer se sienta en el baño, moviendo las piernas para facilitar la inoculación vaginal durante un total de aproximadamente 20 minutos. Después, este tratamiento puede repetirse al tercer día (por ejemplo en casos de candidiasis vulvovaginal (CVV) aguda o de vaginitis bacteriana (VB)), o "de manera regular" (es decir, por lo menos mensualmente) con el fin de promover la estabilidad continuada de la ecología y microflora vaginales. Además, este método también demostrará ser útil para promover la salud dérmica general, debido a que algunas especies de bacterias productoras de ácido láctico resultan útiles en la promoción de una piel sana.
Entre otras cepas de bacterias que pueden utilizarse en productos para baño o ducha se incluyen Bacillus subtilis, Bacillus laterosporus, Bacillus uniflagellatus, Bacillus pumilus, Bacillus sterothermophilus, Bacillus lentus, Baicllus mycoides, Sporolactobacillus sp., Bacillus licheniformis o cualquier otra especie de Bacillus que sea superior competitivamente a los patógenos o que se haya demostrado que produce subproductos metabólicos que inhiben los patógenos micóticos o bacterianos. Entre otros atributos que influirían sobre la eficacia de un producto para baño o ducha se incluyen la barotolerancia (es decir, la tolerancia a la presión), la halotolerancia (es decir, la tolerancia al carácter alcalino) y la termotolerancia (es decir, la tolerancia al calor) del organismo probiótico específico que se
utilice.
A continuación se presenta un ejemplo de formulación de Sal de Baño (por dosis) de la presente invención:
Bacillus coagulans 250.000.000 esporas (aprox. 18 mg)
Sales de baño (sales marinas y minerales) 10 g
Fructooligosacáridos (FOS) 1 g
Celulosa microcristalina (CMC) 5 g
Fragancia Trazas
Los productos para baño, incluidos los productos granulados o en polvo para baño de burbujas, cristales de baño, sales de baño, aceites de baño, polvos, micropartículas de aerosol y similares, para el tratamiento de las infecciones vaginales por Candida albicans y/o Candida tropicalis pueden producirse en una diversidad de formulaciones que contienen bacterias vegetativas o (preferentemente) esporas de Bacillus coagulans. En una forma de realización preferente, en la que se introducen en agua de baño un producto para baño de burbujas, sales de baño, aceites de baño y similares, aproximadamente 1 x 10^{9} esporas de Bacillus coagulans por ml de una formulación de base aceite, tal como aceite mineral, laureth-4, quaternium-18, hectorita y fenilcarbinol. En un baño típico (aproximadamente 30 a 100 galones de volumen total) se utiliza un total de aproximadamente 5 x 10^{9} esporas de Bacillus coagulans. Las formulaciones naturales basadas en aceite, con o sin fragancia, que contienen aproximadamente 1 x 10^{9} esporas de Bacillus coagulans por ml de un aceite que incluye, aunque sin limitarse a ellos, aceite de oliva, aceite de semilla de uva, aceite dulce de almendra, aceite de geranio, aceite de pomelo, aceite de mandarina, aceite de menta, diversos aceites esenciales (por ejemplo romero, limón, geranio, Ylang Ylang, naranja, pomelo, abeto, nuez moscada, bálsamo, lima, menta, vainilla, lavanda, eucalipto, almendra, rosa, palmarosa, olbas, nuez de Kukui, olibanum y similares), así como otros aceites, hierbas y materiales bien conocidos para las aplicaciones de aromaterapia.
En otra forma de realización preferente, un limpiador emoliente no jabonoso incluye solución de octoxinol-2-etano sódico en agua, petrolato, octoxinol-3, aceite mineral o aceite de lanolina, cocamida MEA, fragancia opcional, imidazolidinil urea, benzoato sódico, EDTA tetrasódico, metilcelulosa, ajustado a pH 6,5 a 7,5, aproximadamente 1 x 10^{7} a 1 x 10^{10} esporas de Bacillus coagulans por gramo. Entre otros limpiadores adecuados se incluyen formulaciones bien conocidas basadas en agua, en glicerina y el oleato sódico, ajustadas a pH neutro 7,0, y que contienen aproximadamente entre 1 x 10^{7} y 1 x 10^{10} esporas de Bacillus coagulans por gramo, debido al hecho de que las esporas pueden resistir la presión y el calor necesarios para la fabricación de jabón.
En todavía otra forma de realización preferente, para una composición de base en polvo, se utilizan aproximadamente 1 x 10^{9} esporas de Bacillus coagulans por gramo de talco, harina de avena en polvo, almidón de maíz o sustancia en polvo similar.
En todavía otra forma de realización preferente, puede utilizarse una toallita de tejido suave en una solución de agua, sorbato de potasio, EDTA disódico y que contiene aproximadamente 1 x 10^{6} a 1 x 10^{9} esporas de Bacillus coagulans por toallita para lavar el área vaginal externa. Entre los componentes adicionales de la formulación anteriormente indicada pueden incluirse DMDM hidantoína, miristato de isopropilo, metilparabén, polisorbato 60, propilenglicol, propilparabén o estearato de sorbitán. La toallita desechable se utiliza para limpiar suavemente el área perivaginal y después se desecha.
En otra forma de realización preferente, se utilizan supositorios e inserciones vaginales sólidos que contienen aproximadamente 1 x 10^{8} Bacillus coagulans por inserción para el tratamiento mucosal de las infecciones por Candida albicans y/o Candida tropicalis. Estas formulaciones pueden prepararse, por ejemplo, a partir de un combinación de almidón de maíz, lactosa, estearato de metal (por ejemplo estearato de magnesio) y povidona. Típicamente deben utilizarse una a tres inserciones sólidas al día mientras se detecten síntomas (por ejemplo picor vaginal y/o descarga blanquecina). Óptimamente se utiliza una inserción al día durante un total de tres a siete días, preferentemente a la hora de dormir.
En todavía otra forma de realización preferente, para una administración basada en aerosol de microparticulados, puede formularse un pulverizador de aerosol combinando aproximadamente 1 x 10^{6} a 1 x 10^{11} esporas de Bacillus coagulans por gramo de una mezcla portadora que comprende miristato de isopropilo, aproximadamente 60% (p/p) de alcohol SD 40-B e isobutano como propelente. También puede utilizarse un pulverizador de bomba manual no de aerosol que contenga aproximadamente 1 x 10^{5} a 1 x 10^{11} esporas de Bacillus coagulans por gramo de una solución acuosa neutra. Una formulación de pulverizador adecuada incluye alcohol, glicerina, agua purificada y metilparabén, además del microorganismo probiótico Bacillus coagulans.
También debe indicarse que, aunque la mitigación de las infecciones por levadura es la utilización de base vaginal principal de las composiciones terapéuticas de Bacillus coagulans, también se ha demostrado que estas composiciones resultan altamente efectivas en el tratamiento de la dermatitis no específica no patogénica. La inmersión en las composiciones terapéuticas de baño de la presente invención permite el establecimiento del probiótico Bacillus coagulans sobre la piel o membranas mucosales, lo que tiende a mitigar la dermatitis de etiología desconocida.
Prevención y/o tratamiento de las infecciones oportunistas de la piel
Las infecciones oportunistas de la piel con especies de Pseudomonas y/o de Staphylococcus (es decir, típicamente Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus epidermidus, Staphylococcus aureus y similares) con frecuencia se produce concomitantemente a las alergias de la piel (por ejemplo reacciones alérgicas a irritantes vegetales, tales como la hiedra venenosa), úlceras por presión, lesiones diabéticas u otros tipos de lesiones de la piel. Las formulaciones probióticas que contienen esporas de Bacillus coagulans (es decir, aproximadamente 1 x 10^{5} a 1 x 10^{10}/ml dependiendo de la formulación y aplicación específicas) y/o sobrenadante o filtrado que contiene bacteriocinas extracelulares producidas por cepas de Bacillus coagulans o Pseudomonas lindbergii resultan altamente útiles en la prevención o tratamiento de los patógenos oportunistas de la piel. Además, las formulaciones probióticas de Bacillus coagulans resultan útiles en la prevención de la infección con Staphylococcus aureus resistente a la meticilina (MRSA), particularmente tras una lesión o procedimientos quirúrgicos invasivos. Se utiliza una emulsión de agua en aceite o de aceite en agua, crema, loción, polvos, polvos de aerosol, o pulverizador de aerosol que contiene aproximadamente 1 x 10^{6} a 1 x 10^{10} esporas de Bacillus coagulans/ml. Se han descrito diversos portadores adecuados anteriormente en la presente memoria, y otros son bien conocidos de la técnica.
En la práctica de la presente forma de realización de la presente invención, la piel inicialmente se limpia con jabón y agua y se seca concienzudamente. La composición terapéutica que contiene Bacillus coagulans seguidamente se aplica a la piel, asegurando que la composición se aplica en las áreas entre los dedos de los pies, bajo los pechos, bajo los brazos o en cualquier otro área en la que la piel puede humedecerse o mostrar irritación por rozamiento o
abrasión.
Además de tratar la piel tópicamente con una emulsión, crema, loción, polvos, polvos de aerosol o pulverizador de aerosol que contiene probiótico de Bacillus coagulans, la piel puede limpiarse con una formulación probiótica, tal como se describe en la presente memoria.
Tratamiento de las infecciones fúngicas tineales
La tiña (Tinea versicolor) está causada por infecciones localizadas de la piel del tronco y del cuello por hongos dermatofitos que colonizan la capa externa de la piel, resultando en manchas generalmente circulares de escamas blancas, marrones o rosas de la piel que con frecuencia provocan prurito. Tras la detección de la tiña, el área afectada y un área circundante de aproximadamente 1 a 10 cm^{2} se trata dos veces al día con una crema o loción que contiene 10% en peso de esporas de Bacillus coagulans. Los portadores adecuados se describen en la presente memoria, y contienen con preferencia aproximadamente 1 x 10^{5} a 1 x 10^{10} esporas de Bacillus coagulans/ml de portador.
Para el tratamiento del trastorno relacionado, Tinea cruris (es decir, el "prurito de la ingle"), se aplican polvos que contienen aproximadamente 1 x 10^{7} a 1 x 10^{9} esporas de Bacillus coagulans/ml de dióxido de silicio coloidal, miristato de isopropilo, talco y fragrancia opcional en el área de la ingle para proporcionar un alivio del picor, los rozamientos, el sarpullido con sensación de quemazón y la irritación. El tratamiento es dos veces al día, generalmente tras el baño y a la hora de dormir, hasta que ya no se detecten síntomas.
La ropa, particularmente la ropa interior y la ropa de noche que entra en contacto con el tronco y el cuello se pulverizan con un aerosol que contiene entre aproximadamente 1% y aproximadamente 20% de agente activo de Bacillus coagulans en un portador adecuado tal como se describe en la presente memoria, de manera que se reduce la extensión de la infección hacia áreas adicionales del cuerpo.
Tratamiento de las infecciones bacterianas y fúngicas de la dermis y el cutis
Tal como se ha comentado anteriormente, se ha demostrado que diversas bacterias productoras de ácido láctico (por ejemplo Bacillus coagulans y Pseudomonas lindbergii) producen productos extracelulares que son de naturaleza antifúngica, aunque no todos los productos procedentes de estas bacterias son el resultado de la pruificación de un análogo activo específico, tal como una proteína, carbohidrato o molécula orgánica para formar un nuevo compuesto antifúngico. Se ha sugerido que la utilización de un solo agente activo contribuye a las especies resistentes de hongos patogénicos y como resultado deben descubrirse nuevas generaciones de compuestos antifúngicos con el fin de controlar estas nuevas especies en desarrollo. Sin embargo, la utilización de un sobrenadante bacteriano en su estado crudo o semirrefinado podría resultar más efectiva en aplicaciones tópicas y puede, de hecho, reducir la tasa de resistencia antifúngica proporcionando un mecanismo de eliminación más complejo que resulte más difícil de superar que un solo agente o análogo químico.
La utilización de aceite de emu como "portador" en las composiciones terapéuticas de la presente invención mejora marcadamente la eficacia en la prevención y/o tratamiento de las infecciones fúngicas o bacterianas de la dermis y del cutis tanto en el ser humano como en animales. Estas composiciones terapéuticas comprenden productos de fermentación de cepas bacterianas específicas, un agente antifúngico y, opcionalmente, un antibiótico disponible comercialmente en combinación con una cantidad efectiva de aceite de emu en un portador farmacéuticamente aceptable adecuado para la administración en las membranas dérmicas y/o cutáneas de un ser humano o de un animal.
En diversas formas de realización de la presente invención, la forma final de la composición terapéutica puede incluir, aunque sin limitarse a ellos, un gel estabilizado, una loción, una crema, una barra roll-on semisólida, un fluido, un aerosol, un aerosol en polvo o una emulsión.
La eficacia global de las composiciones terapéuticas de la presente invención es relativa a la concentración de aceite de emu que se utilice en la formulación. Específicamente, se ha observado que los porcentajes más elevados de aceite de emu resultan más efectivos que los porcentajes más bajos. Sin pretender limitarse a ningún porcentaje eficaz, el intervalo de porcentajes de aceite de emu utilizados en una composición terapéutica tópica de la presente invención se encuentra comprendida entre aproximadamente 0,5% y 99,9%, con un intervalo más preferente entre aproximadamente 10% y 75%, y todavía más preferente entre aproximadamente 25% y 60%. El intervalo efectivo último de 0,5% a 99,9% para la concentración de aceite de emu se debe a las concentraciones muy reducidas de compuestos antimicrobianos que se utilizan típicamente en las composiciones terapéuticas de la presente invención. Por ejemplo, en una aplicación dérmica, el agente antifúngico nitrato de miconazol comprende generalmente sólo 2% de la formulación total. A continuación se proporcionan ejemplos de composiciones terapéuticas que se ha demostrado que resultan efectivas en la mitigación de las enfermedades bacterianas y micóticas de la dermis y de la cutis.
Composición terapéutica nº 1
Nitrato de miconazol, fluconazol, tolnaftato,
cetoconazol o intraconazol 2%
Aceite de emu o fracción del mismo 90%
Emulsionante 5%
Fragancia 3%
Composición terapéutica nº 2
Cloruro de amonio cuaternario, yodo,
alcohol o compuestos fenólicos 10%
Aceite de emu o fracción del mismo 80%
Emulsionante 7%
Fragancia 3%
Composición terapéutica nº 3
Productos de fermentación de composición
sobrenadante bacteriana 50%
Aceite de emu o fracción del mismo 40%
Emulsionante 7%
Fragancia 3%
Composición terapéutica nº 4
Productos de fermentación de composición
sobrenadante bacteriana 50%
Aceite de emu o fracción del mismo 25%
Aceite de lavanda 2%
Aceite Hydrosperse 20%
Agentes emulsionantes 3%
Tal como se ha comentado anteriormente, dichas composiciones terapéuticas anteriormente indicadas de la presente invención también pueden utilizarse en combinación con otros agentes antifúngicos, incluyendo, aunque sin limitarse a ellos, fluconazol, intraconazol, cetoconazol, tolnaftato, lamasil, cloruros de amonio cuaternario, fenólicos, yodíferos y similares. Además, también pueden utilizarse diversos otros materiales (por ejemplo óxido de titanio) para mejorar el emblanquecimiento de la uña de los dedos del pie o de la mano.
En un ejemplo específico, se utilizó una composición terapéutica de la presente invención que contenía el sobrenadante bacteriano derivado de Bacillus coagulans para mitigar la infección fúngica humana, onicomicosis. Se aplicó un ml de la composición terapéutica anteriormente indicada tras bañar cada uña infectada. El tratamiento resultó en un cambio en el color verde a amarillo de la uña dentro de los 10 días en todos los individuos estudiados. Además, dentro de los primeros 7 días, el detritus bajo la uña se desprendió y empezó a reducirse el grosor de la uña (una de las manifestaciones clínicas de la enfermedad). Aunque el tiempo total requerido para el alivio de esta enfermedad varió entre sujetos, el tiempo medio requerido se encontraba comprendido entre un mes para las infecciones superficiales y seis meses para las onicomicosis más pronunciadas. Además, debe tenerse en cuenta que la apariencia cosmética es un aspecto de esta enfermedad independiente de la patología del lecho de la uña.
Se ha demostrado que la acción antifúngica simultánea del sobrenadante del cultivo bacteriano en combinación con los aspectos de penetración en la dermis y curativos del aceite de emu trabajan de manera sinérgica para mejorar la infección fúngica. Se conoce generalmente que el aceite de emu posee la capacidad de rehidratar las células de la piel de una manera que promueve el crecimiento de nuevas células. De manera similar, resulta bastante posible que el aceite de emu actúa de una manera similar en los tejidos de la uña humana y tejidos cutáneos.
En otros ejemplos específicos, también se utiliza una composición terapéutica de la presente invención que contiene sobrenadante bacteriano derivado de Bacillus coagulans para tratar los casos de irritación de pañal complicados con infecciones bacterianas o fúngicas. Se consiguió el alivio inmediato (es decir, en aproximadamente 18 horas) de la inflamación y rojez inflamatorias y se eliminaron completamente todas las infecciones dentro de las 48 horas. Se han observado resultados similares en la utilización de estas composiciones terapéuticas en el tratamiento del prurito de la ingle (Tinea cruris), tiña, pie de atleta (Tinea pedis), infecciones del cuero cabelludo (Tinea capitis), infecciones de la barba (Tinea barbae), candidiasis de la dermis, dedos de los pies, uñas de los dedos y vulva, y otras enfermedades dérmicas y cutáneas.
Diversas enfermedades de la pezuña equina (por ejemplo la enfermedad de la línea blanca, candidiasis de la pezuña, drop sole e incluso pie equino varo) también han respondido a la utilización de las composiciones terapéuticas de la presente invención, que contienen sobrenadante bacteriano derivado de Bacillus coagulans de la misma manera que la onicomicosis en el ser humano. Además, de manera similar a su actividad fisiológica en el ser humano, el aceite de emu también funciona rehidratando y estimulando el nuevo crecimiento celular dentro de las pezuñas animales y de otros materiales cutáneos.
Tratamiento de las infecciones superficiales de la piel
Las infecciones superficiales por especies de Staphylococcus (por ejemplo Staphylococcus aureus y \hbox{Staphylococcus} epidermidis) de una glándula sudorípara o sebácea bloqueada provocan pústulas, ampollas, abscesos, orzuelos o carbunclos. Estas infecciones superficiales de la piel también pueden verse acompañadas por un sarpullido con formación de ampollas (particularmente en bebés) debido a las toxinas bacterianas liberadas por las especies de Staphylococcus.
Puede utilizarse una emulsión de agua-en-aceite o de aceite-en-agua, crema, loción o gel que contenga aproximadamente 1 x 10^{6} a 1 x 10^{9} esporas de Bacillus coagulans/ml. Se prepara un gel tópico ejemplar mediante la mezcla de volúmenes iguales de propilenglicol y agua, 1% en peso de hidroxipropilcelulosa (PM de 100.000 a 1.000.000 daltons) y un cultivo liofilizado de Bacillus coagulans a una concentración final de aproximadamente 1 x 10^{6} a 1 x 10^{9} esporas de Bacillus coagulans/ml de la combinación, y dejando reposar la mezcla agitada durante 3 a 5 días para que forme un gel. También se presentan en la presente memoria otras formulaciones.
La emulsión, crema, loción o gel que contiene Bacillus coagulans se aplica en el área de la piel que muestra infecciones superficiales de la misma (por ejemplo pústulas, ampollas, abscesos, orzuelos o carbunclos) o prurito y se frota suavemente en la piel y se deja que se seque al aire. Las aplicaciones son de por lo menos una vez al día y preferentemente dos a tres veces al día (por ejemplo mañana y noche) o tras cada lavado del área infectada para aquellas áreas que se lavan con frecuencia (por ejemplo las manos o el área de pañal). Se continúa con las aplicaciones hasta que ha remitido la inflamación de la piel y la piel presenta un aspecto normal al observador. En los casos en los que se ha formado una costra en el área infectada, se continúa con las aplicaciones diarias hasta que hayan desaparecido las costras.
Tratamiento del acné
Para el tratamiento o prevención del acné vulgar, se aplica diariamente como producto de cuidado de la piel un limpiador que contiene ingrediente activo de Bacillus coagulans obtenido a partir de un sobrenadante de cultivo bacteriano para la limpieza de suciedad y grasa y para prevenir las infecciones oportunistas de la piel. Un limpiador adecuado incluye bentonita, cocanfodipropionato, fragancia opcional, glicerina, óxidos de hierro, silicato de magnesio, borohidruro sódico, cloruro sódico, cocoato sódico, seboato sódico, talco, EDTA tetrasódico, dióxido de titanio, EDTA trisódico, agua y entre aproximadamente 1% y aproximadamente 20% (v/v) de un sobrenadante o filtrado acuoso de un cultivo de Bacillus coagulans cultivado hasta la saturación.
Un limpiador similar, particularmente para la piel sensible, incluye aproximadamente 30% a 50% de harina de avena coloidal suspendida en una base de agua, glicerina, cloruro de diestearildimonio, petrolato, palmitato de isopropilo, alcohol cetílico, dimeticona, cloruro sódico, ajustado a un pH de aproximadamente 7,0 y que contiene entre aproximadamente 5% y aproximadamente 50% (v/v) de un sobrenadante o filtrado acuoso de un cultivo de Bacillus coagulans cultivado hasta la saturación.
Alternativamente, la piel puede limpiarse utilizando cualquier limpiador bien conocido y después aplicarse una crema que contenga un ingrediente activo derivado de un sobrenadante o filtrado de cultivo de Bacillus coagulans o de Pseudomonas lindbergii sobre la piel en una película fina aproximadamente una vez cada dos días a tres veces al día según necesidad. Una crema adecuada incluye aproximadamente 10% a 12% de alcohol (v/v), bentonita, fragancia opcional, óxidos de hierro, hidróxido de potasio, propilenglicol, dióxido de titanio, agua purificada y aproximadamente 0,5% a 60% (v/v) de un sobrenadante o filtrado acuoso de un cultivo de Bacillus coagulans o de Pseudomonas lindbergii cultivado hasta la saturación.
La formulación anteriormente indicada resulta adecuada para tratar acné causado por Propionibacterium acne y por Staphylococcus epidermidis.
Tratamiento de infecciones por Herpes simplex I y II y por Herpes zóster
Las úlceras herpéticas (que generalmente se observan dentro o alrededor de la boca) son causadas por el virus Herpes simplex I, mientras que lesiones similares observadas alrededor de los genitales son causadas por Herpes simplex II. Las infecciones víricas por Herpes simplex también provocan inflamaciones dolorosas de dedos de pies y manos (es decir, eccema herpético). Ambos tipos de lesiones por Herpes simplex o eccema pueden tratarse con una crema, loción o pomada en gel que contiene aproximadamente 1 x 10^{7} a 1 x 10^{10} esporas de Bacillus coagulans/ml.
Para las úlceras orales, un bálsamo labial emoliente calmante contiene alantoína, petrolato, dióxido de titanio a niveles cosméticamente aceptables, y aproximadamente 1 x 10^{7} a 1 x 10^{10} esporas de Bacillus coagulans/ml. El bálsamo labial puede incluir además una pantalla solar (por ejemplo padimato O). Un bálsamo labial emoliente alternativo contiene los mismos ingredientes de base mezclados para formar una emulsión con aproximadamente 0,5% a 20% (v/v) de un sobrenadante o filtrado acuoso de un cultivo de Bacillus coagulans cultivado hasta la saturación. El bálsamo labial seguidamente se aplica sobre los labios y área afectada formando una película fina de manera profiláctica al sentir los síntomas prodrómicos (por ejemplo cosquilleo, picor, quemazón) o cuando resulte visible una lesión. El bálsamo labial debe aplicarse con la frecuencia requerida (por ejemplo cada hora cuando se encuentre presente una lesión) y generalmente una vez al día a la hora de dormir.
Para las úlceras orales, las esporas o agente extracelular de Bacillus coagulans en el sobrenadante o filtrado de cultivo pueden formularse en un bálsamo labial semisólido que contiene aproximadamente 20% a 40% de petrolato blanco, cera parafina, aceite mineral, lanolato de isopropilo, canfor, lanolina, miristato de isopropilo, alcohol cetílico, cera carnuba, metilparabén, propilparabén, dióxido de titanio y opcionalmente fragancia y agentes colorantes.
Para las lesiones herpéticas genitales, se formula una crema o pomada utilizando procedimientos estándar tal como los descritos en la presente memoria, que contienen aproximadamente 1 x 10^{7} a 1 x 10^{10} esporas de Bacillus coagulans/ml y/o aproximadamente 0,5% a 20% (v/v) de un sobrenadante o filtrado acuoso de un cultivo de Bacillus coagulans cultivado hasta la saturación. La crema o pomada se aplica por lo menos dos veces al día según necesidad.
Para las lesiones causadas por Herpes zóster (por ejemplo la culebrilla), se formula una crema o pomada utilizando procedimientos estándar tal como se describen en la presente memoria, que contiene aproximadamente 1 x 10^{7} a 1 x 10^{10} esporas de Bacillus coagulans/ml y/o aproximadamente 0,5% a 20% (v/v) de un sobrenadante o filtrado acuoso de un cultivo de Bacillus coagulans o de Pseudomonas lindbergii cultivado hasta la saturación. La crema o pomada se aplica por lo menos dos veces al día según necesidad.
\newpage
Gotas para los oídos o solución de lavado de oídos que contiene esporas de Bacillus coagulans
Para la prevención o tratamiento de las infecciones del canal externo del oído se utiliza una formulación acuosa que incluye aproximadamente 1 x 10^{5} a 1 x 10^{8} esporas de Bacillus coagulans/ml y/o aproximadamente 0,1% a 15% (v/v) de un sobrenadante o filtrado acuoso de un cultivo de Bacillus coagulans o de Pseudomonas lindbergii cultivado hasta la saturación. Las esporas y/o sobrenadante se añaden a una solución acuosa estéril que contiene aproximadamente 5% a 50% de glicerina (v/v), aproximadamente 0,1% a 5% de propilenglicol (v/v) y estanato sódico o cloruro sódico. Una formulación alternativa incluye aproximadamente 1 x 10^{5} a 1 x 10^{8} de esporas de Bacillus coagulans/ml y/o aproximadamente 0,1% a 15% (v/v) de un sobrenadante o filtrado acuoso de un cultivo de Bacillus coagulans o de Pseudomonas lindbergii cultivado hasta la saturación en una solución acuosa estéril de aproximadamente 0,5% a 25% de glicerina (v/v), aproximadamente 5% a 10% de alcohol (v/v) y polisorbato 20.
Para aplicar la formulación, el usuario inclina la cabeza lateralmente y se introducen de 3 a 10 gotas de la formulación para oído anteriormente indicada en el oído utilizando un aplicador cuentagotas estándar, sin que el aplicador entre en el canal externo del oído. Se mantiene inclinada la cabeza durante varios minutos o, alternativamente, puede aplicarse suavemente un tapón de algodón en el oído para impedir que la solución salga del oído durante 15 minutos como máximo. A continuación la cabeza se inclina dejando que el exceso de solución salga del oído. También puede realizarse un lavado suave con una jeringa para oído que contenga agua templada para eliminar el exceso de formulación. La solución de probiótico puede aplicarse ocasionalmente o diariamente hasta aproximadamente cinco días en total. Las instrucciones adjuntas indican que debe consultarse un médico si se produce drenaje, descarga, sarpullido, irritación severa en el oído o si el paciente experimenta mareos.
Tratamiento profiláctico o terapéutico del pie de atleta
Para la prevención o tratamiento terapéutico del pie de atleta (es decir, la infección fúngica tineal), los pies se lavan con jabón y agua, se secan concienzudamente y se aplican polvos, crema, loción, pomada o gel, tales como los descritos en los ejemplos anteriores, en el área entera del pie. Preferentemente, la formulación incluye aproximadamente 1 x 10^{5} a 1 x 10^{8} esporas de Bacillus coagulans/ml y/o aproximadamente 0,5% a 20% de sobrenadante o filtrado de Bacillus coagulans de un cultivo de Bacillus coagulans o de Pseudomonas lindbergii cultivado hasta la saturación. Se continuaron los tratamientos diarios según necesidad.
Además, el pie de atleta puede prevenirse o tratarse mediante la utilización de una plantilla estándar (por ejemplo una tela, fibra o espuma sintética) en la que se haya pulverizado o impregnado sobre su superficie el probiótico Bacillus coagulans o el producto antifúngico extracelular. Estas plantillas tratadas pueden llevarse diariamente durante hasta dos a tres meses, después de los cuales se descartan y se sustituyen con plantillas recién tratadas.

Claims (20)

1. Composición farmacéutica que comprende un sobrenadante de Pseudomonas lindbergii, un sobrenadante de Bacillus coagulans, un agente antifúngico y aceite de emu en un portador farmacéuticamente aceptable que resulte adecuado para la aplicación tópica sobre la piel o una membrana mucosa de un mamífero.
2. Utilización de una composición que comprende un sobrenadante de Pseudomonas lindbergii, un sobrenadante de Bacillus coagulans, un agente antifúngico y aceite de emu para la fabricación de un medicamento para inhibir el crecimiento de bacterias, levaduras, hongos, virus o una combinación de los mismos, en el que dicha composición se aplica tópicamente sobre la piel o una membrana mucosa de un mamífero y se deja suficiente tiempo para que inhiba el crecimiento de bacterias, levaduras, hongos, virus o una combinación de los mismos.
3. Utilización según la reivindicación 2, que comprende:
a)
aplicar una composición que comprende un sobrenadante de Pseudomonas lindbergii, un sobrenadante de Bacillus coagulans, un agente antifúngico y aceite de emu sobre una superficie sólida;
b)
en la que la superficie sólida sobre la que se ha aplicado el sobrenadante de Pseudomonas lindbergii, el sobrenadante de Bacillus coagulans, un agente antifúngico y aceite de emu se pone en contacto con la piel o con una membrana mucosa de un mamífero; y
c)
se deja en contacto con la piel o membrana mucosa durante tiempo suficiente para permitir el inicio de la actividad probiótica del sobrenadante aislado de Pseudomonas lindbergii, el sobrenadante de Bacillus coagulans, el agente antifúngico y el aceite de emu de manera que inhiba el crecimiento de bacterias, levaduras, hongos, virus o una combinación de los mismos, situado contiguamente o sobre la piel o la membrana mucosa de dicho mamífero.
4. Utilización según la reivindicación 3, en la que el sobrenadante de Pseudomonas lindbergii se incluye en la composición en forma de un producto extracelular que comprende un sobrenadante o filtrado hidrofílico de un cultivo de una cepa de Pseudomonas lindbergii fraccionada utilizando un procedimiento seleccionado de entre el grupo que consiste en la filtración submicrométrica, cromatografía de intercambio iónico y cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC), en un portador farmacéuticamente aceptable que resulta adecuado para la aplicación tópica sobre la piel o una membrana mucosa de un mamífero.
5. Producto manufacturado que comprende un producto flexible y una cantidad efectiva de un producto extracelular que es un sobrenadante o filtrado de un cultivo de una cepa de Pseudomonas lindbergii, un producto extracelular que es un sobrenadante o filtrado de un cultivo de una cepa de Bacillus coagulans, un agente antifúngico y aceite de emu aplicados sobre dicho producto flexible, en el que dicho producto flexible está destinado a vestirse o a unirse a la piel o a una membrana mucosa de un mamífero de manera que permita que la actividad antimicrobiana del producto extracelular se produzca contiguamente o sobre la piel o membrana mucosa.
6. Producto manufacturado según la reivindicación 5, en el que dicho producto se selecciona de entre el grupo que comprende un vendaje, un tampón, una compresa higiénica femenina o una prenda de ropa.
7. Producto según la reivindicación 5, en el que la etapa de vestir o unir el sobrenadante o filtrado del cultivo de la cepa de Bacillus coagulans, dicho producto extracelular de una cepa de Pseudomonas lindbergii, un agente antifúngico y aceite de emu sobre la piel o una membrana mucosa, inhibe el crecimiento de uno o más microbios seleccionados de entre el grupo que comprende especies de Staphylococcus, especies de Pseudomonas, especies de Clostridium, Escherichia coli, especies de Proteus, especies de Klebsiella, Gardnereia vaginalis, Proponbacterium acnes, Aeromonas hydrophia, especies de Candida, especies de Trichophyton, especies de Aspergillus, especies de Acremonium, especies de Scopulariopis, Herpes simplex I, Herpes simplex II y Herpes zóster.
8. Composición según la reivindicación 1, utilización según cualquiera de las reivindicaciones 2 ó 4, o producto según cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7, que comprende adicionalmente una cantidad efectiva de un oligosacárido bifidogénico.
9. Composición, utilización o producto según la reivindicación 8, en el que dicho oligosacárido bifidogénico es un fructooligosacárido (FOS).
10. Composición, utilización o producto según la reivindicación 9, en el que dicho fructooligosacárido se encuentra presente a una concentración comprendida entre aproximadamente 10 miligramos y 1.000 miligramos por gramo de composición.
11. Composición, utilización o producto según la reivindicación 10, en el que dicho fructooligosacárido se encuentra presente a una concentración comprendida entre aproximadamente 100 miligramos y 500 miligramos por gramo de composición.
12. Composición según la reivindicación 1 o producto según la reivindicación 5, en el que dicho portador se selecciona de entre el grupo que consiste en: una emulsión, crema, loción, gel, aceite, pomada, suspensión, pulverizador de aerosol o formulación semisólida.
13. Utilización según la reivindicación 2, en la que la etapa de aplicación comprende aplicar la composición en la forma de una crema, loción, gel, aceite, pomada, suspensión, pulverizador de aerosol, polvos, aerosol en polvo o formulación semisólida.
14. Producto según la reivindicación 5, en el que la etapa de vestir o unir dicho producto extracelular de una cepa de Bacillus coagulans, dicho sobrenadante o filtrado de una cepa de Pseudomonas lindbergii, dicho agente antifúngico y aceite de emu sobre la piel o una membrana mucosa inhibe el crecimiento de uno o más microbios seleccionados de entre el grupo que comprende: especies de Staphylococcus, especies de Pseudomonas, especies de Clostridium, Escherichia coli, especies de Proteus, especies de Klebsiella, Gardnereia vaginalis, Proponbacterium acnes, Aeromonas hydrophia, especies de Candida, especies de Trichophyton, especies de Aspergillus, especies de Acremonium, especies de Scopulariopis, Herpes simplex I, Herpes simplex II y Herpes zóster.
15. Utilización según la reivindicación 3, en la que la superficie sólida comprende un producto flexible seleccionado de entre el grupo que consiste en un pañal, un material flexible para limpiar la piel o una membrana mucosa, un parche dérmico, cinta adhesiva, una almohadilla absorbente, un tampón o una prenda de ropa.
16. Utilización según la reivindicación 3, en la que la etapa de aplicación comprende impregnar dicha composición sobre una matriz sólida fibrosa o no fibrosa.
17. Sistema terapéutico para inhibir el crecimiento de bacterias, levaduras, hongos, virus o una combinación de los mismos, que comprende un recipiente que consta de una etiqueta y de una composición que comprende:
un sobrenadante de Bacillus coagulans, un sobrenadante de Pseudomonas lindbergii, un agente antifúngico y aceite de emu, en la que dicha etiqueta comprende instrucciones para la utilización de la composición para la inhibición de dicho crecimiento.
18. Composición que comprende un sobrenadante de Bacillus coagulans, un sobrenadante de Pseudomonas lindbergii, un agente antifúngico y aceite de emu para la utilización en la inhibición del crecimiento de bacterias, levaduras, hongos o virus.
19. Composición según la reivindicación 1 ó 18, utilización según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 6, producto según cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7 o sistema según la reivindicación 17, en la que dicho agente antifúngico se selecciona de entre el grupo que consiste en nitrato de miconazol, fluconazol, tolnaftato, cetoconazol, anfotericina B, carbol-fucsina, ciclopirox, clotrimazol, econazol, haloprogin, mafenida, miconazol, naftifina, nistatina, oxiconazol, sulfadiacina de plata, sulconazol, terbinafina, tioconazol, ácido undecilénico, butoconazol, violeta gentiana, terconazol, griseofulvina, intraconazol, lamasil, cloruros de amonio cuaternario, fenólicos, yodíferos, dapson, flucitosina y miconazol KI.
20. Composición según la reivindicación 1 ó 18, utilización según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, producto según cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7 o sistema según la reivindicación 17, en la que dicho agente antifúngico se selecciona de entre el grupo que consiste en anfotericina B, carbol-fucsina, ciclopirox, clotrimazol, econazol, haloprogin, cetoconazol, mafenida, miconazol, naftifina, nistatina, oxiconazol, sulfadiacina de plata, sulconazol, terbinafina, tioconazol, tolnaftato y ácido undecilénico.
ES00961363T 1999-08-26 2000-08-25 Composiciones topicas mejoradas que contienen productos extra-celulares de bacterias probioticas y usos de las mismas. Expired - Lifetime ES2256036T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US09/383,975 US6645506B1 (en) 1997-04-18 1999-08-26 Topical compositions containing extracellular products of Pseudomonas lindbergii and Emu oil
US383975 1999-08-26

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2256036T3 true ES2256036T3 (es) 2006-07-16

Family

ID=23515538

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES00961363T Expired - Lifetime ES2256036T3 (es) 1999-08-26 2000-08-25 Composiciones topicas mejoradas que contienen productos extra-celulares de bacterias probioticas y usos de las mismas.

Country Status (9)

Country Link
US (6) US6645506B1 (es)
EP (2) EP1632239A1 (es)
JP (1) JP2003507428A (es)
AT (1) ATE308988T1 (es)
AU (1) AU783418B2 (es)
CA (1) CA2382840C (es)
DE (1) DE60023919T2 (es)
ES (1) ES2256036T3 (es)
WO (1) WO2001013927A2 (es)

Families Citing this family (152)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2020959C1 (ru) * 1991-10-21 1994-10-15 Игорь Дмитриевич Поляков Вакцина поливак-тм для профилактики и лечения дерматофитозов животных
US6645506B1 (en) * 1997-04-18 2003-11-11 Ganeden Biotech, Inc. Topical compositions containing extracellular products of Pseudomonas lindbergii and Emu oil
CA2287451C (en) * 1997-04-18 2014-06-10 Sean Farmer Topical use of probiotic bacillus spores to prevent or control microbial infections
US6716435B1 (en) * 1997-04-18 2004-04-06 Ganeden Biotech, Inc. Absorbent product containing absorbent structure and Bacillus coagulans
US7767203B2 (en) 1998-08-07 2010-08-03 Ganeden Biotech, Inc. Methods for the dietary management of irritable bowel syndrome and carbohydrate malabsorption
US6461607B1 (en) * 1998-08-24 2002-10-08 Ganeden Biotech, Inc. Probiotic, lactic acid-producing bacteria and uses thereof
AU783905B2 (en) * 1999-08-26 2005-12-22 Ganeden Biotech, Inc. Use of emu oil carrier for antifungal, antibacterial, and antiviral medications
WO2001013956A2 (en) * 1999-08-26 2001-03-01 Ganeden Biotech, Inc. Use of emu oil a carrier for antifungal, antibacterial, and antiviral medications
US6849256B1 (en) 1999-11-08 2005-02-01 Ganeden Biotech Incorporated Inhibition of pathogens by probiotic bacteria
EP1110555A1 (fr) * 1999-12-22 2001-06-27 Societe Des Produits Nestle S.A. Agent anti-adhesion de la flore pathogene de la peau
DE60143616D1 (de) * 2000-10-06 2011-01-20 Oreal Verwendung von probiotischen milchsäure-produzierende bakterien zur zum schutz der haut gegen uv-induzierter allergischen reaktionen und entzündungskrankheiten oder immunsuppression
AU2002245181B2 (en) 2000-12-21 2006-06-29 Nektar Therapeutics Pulmonary delivery of polyene antifungal agents
US20070190591A1 (en) * 2001-05-02 2007-08-16 Grech Nigel M Microbial compositions and methods of use in water
EP1450610A4 (en) * 2001-11-05 2006-03-29 Ganeden Biotech Inc PROBIOTIC COMPOSITIONS
US6878373B2 (en) * 2001-12-03 2005-04-12 Micropure Technologies, Inc. Probiotic composition containing Bacillus cereus RRRL B-30535
US7182943B2 (en) * 2002-05-15 2007-02-27 UNIVERSITé LAVAL Method and system for modulation of microbial cell characteristics
US7632525B2 (en) * 2002-06-25 2009-12-15 Wm. Wrigley Jr. Company Breath freshening and oral cleansing product with magnolia bark extract in combination with surface active agents
US7595065B2 (en) * 2002-06-25 2009-09-29 Wm. Wrigley Jr. Company Breath freshening and oral cleansing products with synergistic combinations of magnolia bark extract and essential oils
US7347985B2 (en) * 2002-06-25 2008-03-25 Wm. Wrigley Jr. Company Breath freshening and oral cleansing product with magnolia bark extract
WO2004006957A1 (en) * 2002-07-15 2004-01-22 Alcon, Inc. Pharmaceutical compositions for otic use
ATE513551T1 (de) * 2003-01-24 2011-07-15 Flora Technology Inc Zusammensetzungen und verfahren zur wiederherstellung der bakterienflora
US7052715B2 (en) * 2003-04-11 2006-05-30 All Natural Fmg, Inc. Alcohol-free transdermal analgesic composition and processes for manufacture and use thereof
US20050019379A1 (en) 2003-07-22 2005-01-27 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Wipe and methods for improving skin health
US8192733B2 (en) * 2003-08-29 2012-06-05 Cobb & Associates Probiotic composition useful for dietary augmentation and/or combating disease states and adverse physiological conditions
US7759105B2 (en) * 2003-08-29 2010-07-20 Cobb & Company, Llp Probiotic composition useful for dietary augmentation and/or combating disease states and adverse physiological conditions
US7749509B2 (en) * 2003-08-29 2010-07-06 Cobb And Company, Llp Treatment of autism using probiotic composition
US7731976B2 (en) * 2003-08-29 2010-06-08 Cobb And Company, Llp Treatment of irritable bowel syndrome using probiotic composition
ATE289514T1 (de) * 2003-11-03 2005-03-15 Peter-Hansen Volkmann Vaginalpflegezusammensetzung
CN101829319A (zh) 2003-12-08 2010-09-15 Cpex药品公司 用于胰岛素治疗的药用组合物及方法
US20050226947A1 (en) * 2004-02-04 2005-10-13 Dale Kern Agents for sequestering serum aging factors and uses therefore
US7510734B2 (en) * 2004-03-04 2009-03-31 E-L Management Corporation Skin treatment method with Lactobacillus extract
CA2559905A1 (en) * 2004-03-10 2005-09-22 Jeff Hudnall Antimicrobial wax composition for wax therapy
WO2006113925A2 (en) * 2005-04-20 2006-10-26 Health Enhancement Products, Inc. Composition and use of phyto-percolate for treatment of disease
US20050244402A1 (en) * 2004-04-30 2005-11-03 Villanueva Julie M Absorption of pain-causing agents
US7854927B2 (en) * 2004-05-11 2010-12-21 Ganeden Biotech, Inc. Methods and compositions for the dietary management of autoimmune disorders
US7446904B2 (en) * 2004-05-28 2008-11-04 Infoprint Solutions Company, Llc Methods and apparatus for generating dither mask through interpolation between preferred patterns
US7252846B2 (en) * 2004-05-28 2007-08-07 Raied Dinno Topical composition and method for the treatment and prophylaxis of dermal irritations
FR2872047B1 (fr) * 2004-06-23 2007-06-15 Oreal Composition pour peaux sensibles associant cation mineral et probiotique(s)
JP2008503563A (ja) * 2004-06-23 2008-02-07 ロレアル 敏感及び／又は乾燥肌の予防及び／又は処置に有用な方法及び組成物
US7704522B2 (en) * 2004-09-08 2010-04-27 Clyde Morgan Topical medicament
AU2005291098B2 (en) * 2004-10-04 2011-11-24 L'oreal Cosmetic and/or dermatological composition for sensitive skins
US8092793B2 (en) * 2004-12-15 2012-01-10 Qingdao East Sea Pharmaceuticals, Ltd. Treating inflammatory bowel disease with live bacteria
WO2006076780A1 (en) * 2004-12-17 2006-07-27 Gielen Cornelis Use of non-pathogenic bacterial strains in cleaning and milking an animal
US20060147507A1 (en) * 2005-01-04 2006-07-06 Marie Cammarata Hot flash treatment system
EP1894995B1 (de) * 2005-04-28 2010-10-27 Vasilieva, Elena Aleksandrovna Irilis-biopräparation auf der basis von darin enthaltenen bacillus-bakterienstämmen bacillus subtilis und bacillus licheniformis
DE102005020457A1 (de) * 2005-04-29 2006-11-02 Westfaliasurge Gmbh Verwendung nicht-pathogener, sporenbildender Bakterien
FR2889057B1 (fr) * 2005-08-01 2008-07-18 Oreal Composition cosmetique et/ou dermatologique pour la prevention et/ou le traitement des peaux sensibles ou seches
US8246946B2 (en) * 2005-09-27 2012-08-21 Cobb & Associates Treatment of bipolar disorder utilizing anti-fungal compositions
MX2008005319A (es) * 2005-10-24 2008-11-04 Staval Pharma Ltd Metodo para el tratamiento/control/exterminio de hongos y bacterias.
US20080220103A1 (en) * 2005-10-24 2008-09-11 Jay Birnbaum Method for treating/controlling/killing fungi and bacteria on living animals
AU2007204037B2 (en) * 2006-01-04 2013-01-10 Annica Almstahl Probiotic oral health promoting product
WO2007139601A2 (en) * 2006-02-21 2007-12-06 Bcr Diagnostics, Inc. Phenotypic engineering of spore
CN101095698B (zh) * 2006-06-26 2010-12-01 青岛东海药业有限公司 酪酸梭菌防治便臭毒素引起的相关症状和疾病的用途
US20080031979A1 (en) * 2006-08-04 2008-02-07 Claude Saliou Use of extracts for the treatment of viral disorders
JP5394922B2 (ja) 2006-08-11 2014-01-22 ノボザイムス バイオロジカルズ，インコーポレイティド 菌培養液及び菌培養液含有組成物
US7858126B2 (en) 2006-08-31 2010-12-28 Trinity Laboratories Inc. Derivatives of sandalwood oil and santalols for treating cold sores and herpes
US20080075680A1 (en) * 2006-09-27 2008-03-27 Chen Jonathan Y Culture of microorganisms endogenous to plants and products thereof
US20080107699A1 (en) * 2006-10-25 2008-05-08 Mark Spigelman Method of using topical probiotics for the inhibition of surface contamination by a pathogenic microorganism and composition therefor
CN101134052A (zh) * 2006-11-17 2008-03-05 青岛东海药业有限公司 酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌、双歧杆菌在制备防治口腔溃疡药物中的应用
EP2097074A4 (en) * 2006-12-04 2013-05-01 Glaxosmithkline Llc TOPICAL PHARMACEUTICAL COMPOSITION
FR2914189A1 (fr) * 2007-03-26 2008-10-03 Oreal Utilisation d'une fraction lipopolysaccharidique de vitreoscilla filiformis comme agent stimulant la synthese de peptides antimicrobiens de la peau.
EP2455134B1 (en) 2007-04-19 2016-05-11 Mary Kay, Inc. Magnolia extract containing compositions
FR2915388B1 (fr) * 2007-04-27 2010-12-24 Oreal Film hydrosoluble cosmetique
TW200904340A (en) 2007-05-11 2009-02-01 Mannatech Inc Processing of natural polysaccharides by selected non-pathogenic microorganisms and methods of making and using the same
WO2008153377A1 (en) * 2007-06-15 2008-12-18 N.V. Nutricia Nutrition with non-viable bifidobacterium and non-digestible oligosaccharide
FR2919501B1 (fr) * 2007-08-02 2010-12-31 Oreal Utilisation d'hesperidine ou de l'un de ses derives pour la prevention et/ou le traitement des peaux relachees
LT2211626T (lt) 2007-08-29 2019-11-11 Ganeden Biotech Inc Kepiniai
FR2920305B1 (fr) 2007-09-04 2010-07-30 Oreal Utilisation d'un lysat de bifidobacterium species pour le traitement de peaux sensibles.
FR2920304B1 (fr) * 2007-09-04 2010-06-25 Oreal Utilisation cosmetique de lysat bifidobacterium species pour le traitement de la secheresse.
BRPI0816214B8 (pt) * 2007-09-04 2017-12-26 Oreal uso cosmético, composição cosmética e/ou dermatológica, e, métodos para o tratamento cosmético da pele, para o tratamento cosmético de sinais cutâneos de envelhecimento e/ou fotoenvelhecimento e para o tratamento cosmético para prevenir e/ou tratar substâncias queratinosas secas
PT2217083T (pt) * 2007-10-16 2018-12-12 Ganeden Biotech Inc Composições para bebidas
US20090107007A1 (en) * 2007-10-31 2009-04-30 Mitchellace, Inc. Insole with included aloe extract
US9314524B2 (en) * 2007-12-31 2016-04-19 Calla Therapeutics Llc Topical formulations of Flucytosine
US20090305387A1 (en) * 2008-01-30 2009-12-10 Ganeden Biotech, Inc. Compositions and methods for cleaning surfaces
US20090246153A1 (en) * 2008-03-28 2009-10-01 Nu Skin International, Inc. Cosmetic compositions for the inhibition of reactive oxygen species
US20090246152A1 (en) * 2008-03-28 2009-10-01 Nu Skin International, Inc. Naractin compositions for the inhibition of reactive oxygen species
US7788209B2 (en) * 2008-05-05 2010-08-31 United Technologies Corporation Hybrid fault reasoning and guided troubleshooting system that uses case-based reasoning and model-based reasoning
FR2938437B1 (fr) * 2008-11-19 2020-03-27 Société des Produits Nestlé S.A. Utilisation cosmetique de microorganisme pour le traitement des peaux grasses
KR101764592B1 (ko) * 2008-09-24 2017-08-23 레실럭스 내열성 및/또는 내압성 유기체의 물질 내로의 함입
WO2010045367A1 (en) * 2008-10-14 2010-04-22 Dr Pepper/Seven Up, Inc. Shelf-stable consumable compositions containing probiotic-mimicking elements and methods of preparing and using the same
DK2348888T3 (en) 2008-10-16 2016-09-12 Ganeden Biotech Inc PROBIOTIC CORN-BASED COMPOSITIONS
FR2942719B1 (fr) 2009-03-04 2011-08-19 Oreal Utilisation de microorganismes probiotiques pour limiter les irritations cutanees
US8568743B2 (en) * 2009-04-29 2013-10-29 Ganeden Biotech, Inc. Inactivated bacterial cell formulation
WO2011003062A2 (en) * 2009-07-03 2011-01-06 James Madison University Probiotic compositions and processes thereof
FR2954140A1 (fr) * 2009-12-17 2011-06-24 Oreal Compositions cosmetiques ou dermatologiques a base de bacteriocines et de prebiotiques
EP2338331A1 (en) * 2009-12-22 2011-06-29 Research Center Pharmaceutical Engineering GmbH Methods and compositions for biologically controlling microbial growth on clean room equipment
US20110229446A1 (en) * 2010-03-02 2011-09-22 Roman Stephen B Method and composition to relieve sexual discomfort and improve vaginal health
CN103037877A (zh) * 2010-03-12 2013-04-10 可尔必思株式会社 用于在大肠中增加双歧杆菌和抑制双歧杆菌减少的试剂
US9301982B2 (en) 2010-04-14 2016-04-05 Ganeden Biotech, Inc. Probiotic confection and lipid compositions
EP2585036A2 (en) * 2010-06-24 2013-05-01 Novozymes Biologicals Inc. Methods and compositions for reducing body odor
EP2608678A1 (en) * 2010-08-25 2013-07-03 Tate & Lyle Ingredients Americas LLC Synbiotic product
US9011909B2 (en) 2010-09-03 2015-04-21 Wisconsin Pharmacal Company, Llc Prebiotic suppositories
FR2968991B1 (fr) * 2010-12-17 2013-01-11 Oreal " utilisation de population microbienne stable pour prevenir et/ou traiter les desordres des levres fragilisees ou endommagees"
EP2654432B1 (en) * 2010-12-22 2017-02-08 Roombiotic GmbH Volatile organic compounds from bacterial antagonists for controlling microbial growth
WO2012112718A1 (en) 2011-02-15 2012-08-23 Novozymes Biologicals, Inc. Mitigation of odor in cleaning machines and cleaning processes
US11235008B2 (en) 2011-03-31 2022-02-01 Ganeden Biotech, Inc. Probiotic sports nutrition compositions
US20120255334A1 (en) * 2011-04-08 2012-10-11 Stephen Gans Soluble organic fertilizer
US20120308490A1 (en) * 2011-06-06 2012-12-06 Abr Consulting S.R.L. Method of obtaining a preparation of biological origin for oral hygiene to prevent the onset of tooth decay
US9004374B1 (en) * 2011-07-20 2015-04-14 Stephen Gans Irrigation method using thixotropic materials
CN103468684B (zh) * 2012-01-05 2016-04-06 集美大学 嗜水气单胞菌适体及其筛选方法与应用
CA2870674C (en) 2012-04-20 2022-05-03 Hennepin Life Sciences Compositions for topical treatment of microbial infections
GB201312713D0 (en) 2013-03-22 2013-08-28 Weaver Connie M Uses of soluble corn fibre for increasing colonic bacteria populations and increasing mineral absorption
US9390312B2 (en) 2013-08-23 2016-07-12 Elwha Llc Systems, methods, and devices for assessing microbiota of skin
US9557331B2 (en) 2013-08-23 2017-01-31 Elwha Llc Systems, methods, and devices for assessing microbiota of skin
US10010704B2 (en) 2013-08-23 2018-07-03 Elwha Llc Systems, methods, and devices for delivering treatment to a skin surface
US9805171B2 (en) 2013-08-23 2017-10-31 Elwha Llc Modifying a cosmetic product based on a microbe profile
US9811641B2 (en) 2013-08-23 2017-11-07 Elwha Llc Modifying a cosmetic product based on a microbe profile
US9456777B2 (en) 2013-08-23 2016-10-04 Elwha Llc Systems, methods, and devices for assessing microbiota of skin
US10152529B2 (en) 2013-08-23 2018-12-11 Elwha Llc Systems and methods for generating a treatment map
US8883747B1 (en) * 2013-10-09 2014-11-11 Craig W. Carver Topical antifungal compositions and methods of use thereof
US9596861B2 (en) * 2013-12-24 2017-03-21 Sami Labs Limited Method of producing partially purified extracellular metabolite products from Bacillus coagulans and biological applications thereof
KR102447417B1 (ko) * 2014-03-31 2022-09-23 루브리졸 어드밴스드 머티어리얼스, 인코포레이티드 아디포넥틴 수준의 증가를 위한 박테리아 균주의 발효 추출물
CN104946550A (zh) * 2014-05-12 2015-09-30 山东黎昊源生物工程有限公司 一种保叶生物菌株修复剂
US10357046B2 (en) 2014-05-13 2019-07-23 Microbial Discovery Group, Llc Direct-fed microbials and methods of their use
US10004768B2 (en) * 2014-09-25 2018-06-26 Iryohojin Kiyokai Treatment of atopic dermatitis and infectious dermatitis with biological spa therapy
EA027597B1 (ru) * 2014-10-09 2017-08-31 Александр Владимирович Синица Композиция с пробиотической, гепатопротекторной, антиоксидантной и иммуномодулирующей активностью
EP3294308A4 (en) 2015-05-14 2019-03-06 University of Puerto Rico PROCESS FOR RECOVERING THE BIOZOOSE OF NEWBORN
CN105132307B (zh) * 2015-07-22 2017-12-12 江南大学 一种应用于观赏鱼的复合芽孢杆菌微生物净水剂及其应用
DE102015010874B4 (de) * 2015-08-25 2017-06-14 Fritz Stephan Gmbh Medizintechnik Anzug für ein Neugeborenes, insbesondere ein Frühgeborenes
CA3002788A1 (en) * 2015-10-30 2017-05-04 Z Probiotics Inc. Dba Z Bioscience Inc. Probiotic compositions and uses thereof
US11564667B2 (en) 2015-12-28 2023-01-31 New York University Device and method of restoring microbiota of newborns
MX2018010428A (es) 2016-02-29 2018-11-29 Microbial Discovery Group Llc Productos microbianos alimentados en directo.
EP3436028A1 (en) * 2016-03-31 2019-02-06 Gojo Industries, Inc. Topical composition for reducing pathogen binding
JP2019510036A (ja) 2016-03-31 2019-04-11 ゴジョ・インダストリーズ・インコーポレイテッド プロバイオティクス／プレバイオティクス有効成分を含む清浄剤組成物
US10806769B2 (en) 2016-03-31 2020-10-20 Gojo Industries, Inc. Antimicrobial peptide stimulating cleansing composition
SG11201809100QA (en) * 2016-04-19 2018-11-29 Us Health Use of gram negative species to treat atopic dermatitis
AR108659A1 (es) * 2016-06-03 2018-09-12 Valent Biosciences Llc Composiciones no acuosas, no oleosas con bacillus amyloliquefaciens
CN110234228A (zh) * 2016-09-14 2019-09-13 格雷斯培育有限公司 包含非-致病细菌的组合物及保护植物和动物宿主免于真菌、细菌和病毒疾病的方法
BE1024189B1 (nl) * 2016-10-28 2017-12-05 Yun NV Spuitbus met bacteriële species
AU2017365019A1 (en) 2016-11-23 2019-07-11 Gojo Industries, Inc. Sanitizer composition with probiotic/prebiotic active ingredient
IT201700005552A1 (it) * 2017-01-19 2018-07-19 Copma S C A R L Prodotto eutrofizzante per uso cosmetico
JP7150753B2 (ja) * 2017-06-06 2022-10-11 サミ－サビンサ グループ リミテッド バチルス・コアグランス由来の細胞外代謝産物調製物を含むヘアケア組成物
EP3634375B1 (en) * 2017-06-06 2024-03-13 Sami-Sabinsa Group Limited Anti-aging potential of extracellular metabolite isolated from bacillus coagulans mtcc5856
CN111093622A (zh) * 2017-06-06 2020-05-01 萨米莱布斯有限公司 来自凝结芽孢杆菌的胞外代谢物的皮肤护理应用
US11253466B2 (en) * 2017-07-28 2022-02-22 Davincia Inc. Topical composition for rejuvenating and/or repairing skin, methods, uses and kits thereof
US11633434B2 (en) 2017-09-07 2023-04-25 Technion Research & Development Foundation Limited Topical kits and compositions and use thereof
US20200338139A1 (en) * 2017-12-04 2020-10-29 Sami Labs Limited Compositions for microbial anti-adhesion
MX2020005875A (es) 2017-12-05 2020-10-08 Bioplx Inc Métodos y composiciones para prevenir la infección microbiana.
US11446338B2 (en) * 2018-05-04 2022-09-20 Boris Farber Food, cosmetic and pharmaceutical formulation with an immunomodulatory and protective anti-viral effect
FR3085687B1 (fr) * 2018-09-07 2021-05-14 Nolivade Composition et procede de conservation
WO2020072578A1 (en) 2018-10-02 2020-04-09 Microbial Discovery Group, Llc Microbials for animals
US20210378261A1 (en) * 2018-10-02 2021-12-09 Nutech Ventures Novel gras probiotic bacterial strain to inhibit acidosis and liver abscesses in cattle
CN113543641A (zh) * 2018-12-05 2021-10-22 赛里斯治疗公司 用于稳定细菌的组合物及其用途
EP3897580A4 (en) * 2018-12-19 2022-11-30 Healthy Cow Corporation READY-TO-USE PROBIOTIC COMPOSITIONS AND THEIR USES
WO2020150329A1 (en) * 2019-01-15 2020-07-23 Microbiome Labs, Llc Spore-based probiotic composition for modulation of dermal and sub-dermal properties
CN109464313A (zh) * 2019-01-22 2019-03-15 杭州百芮生物科技有限公司 一种皮肤外用精华液的制备方法及生物纤维素膜片
EP3941213A4 (en) * 2019-03-19 2022-12-21 Microbial Discovery Group, LLC MICROBIAL STRAIN FOR VIRUS INHIBITION
EP3952848A1 (en) 2019-04-09 2022-02-16 Dermbiont, Inc. Compositions and methods for improving skin health and for the treatment and prevention of diseases, disorders and conditions associated with pathogenic microbes
CN113699085B (zh) * 2021-11-01 2022-02-08 渤海水产科技(滨州)有限公司 拮抗菌ed5及其应用
CN114767936B (zh) * 2022-05-10 2023-04-18 武汉理工大学 复合干酪乳杆菌的皮肤损伤修复支架材料制备方法
CN115074286B (zh) * 2022-07-01 2023-06-06 安徽农业大学 一株拮抗足癣病原真菌的短小芽孢杆菌及其应用
CN116064330B (zh) * 2023-01-10 2024-05-03 北京工商大学 凝结芽孢杆菌及其应用

Family Cites Families (41)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL7401939A (nl) * 1974-02-13 1975-08-15 Philips Nv Ladingsgekoppelde inrichting.
US4062943A (en) * 1974-11-20 1977-12-13 Board Of Supervisors Louisiana State University A & M Antibiotic produced from the microorganism (Pseudomonas lindbergii), its preparation and method of use
US4323651A (en) * 1974-12-04 1982-04-06 R. J. Reynolds Tobacco Company Thermostable lactase derived from bacillus
JPS52102419A (en) * 1976-02-23 1977-08-27 Seikenkai Lactic acid producing bacillus preparation
US4110477A (en) 1977-05-13 1978-08-29 Kabushiki Kaisha Naruse Fermentation Laboratory Method for producing natto containing lactic acid bacteria
JPS55113718A (en) * 1979-02-27 1980-09-02 Yakult Honsha Co Ltd Antitumor agent
IE59628B1 (en) * 1986-06-26 1994-03-09 Beecham Group Plc Treatment of fungal infections
US5413960A (en) 1987-05-01 1995-05-09 Biogaia Ab Antibiotic reuterin
JPH01199575A (ja) * 1988-02-04 1989-08-10 Rikagaku Kenkyusho 新規なサイクロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼ及びその製造法
IT1227154B (it) 1988-08-05 1991-03-19 A Tosi Farmaceutici S R L Nova Composizioni farmaceutiche per uso ginecologico a base di lattobacilli
AT391323B (de) 1989-03-10 1990-09-25 Jungbunzlauer Ag Mikroorganismus der species bacillus coagulans sowie ein verfahren zur herstellung von optisch reiner l(+)-milchsaeure
US5371011A (en) * 1989-07-10 1994-12-06 Zeneca Corp. Mold control in forage
FR2656314B1 (fr) * 1989-12-22 1992-04-17 Bp Chemicals Snc Catalyseur a base de zirconium supporte sur du chlorure de magnesium, procede de preparation et utilisation du catalyseur dans la polymerisation des olefines.
DE4001611C1 (es) * 1990-01-20 1991-02-28 Skw Trostberg Ag, 8223 Trostberg, De
US5200336A (en) * 1990-07-02 1993-04-06 New England Biolabs, Inc. Restriction endonuclease obtainable foam bacillus coagulans and a process for producing the same
EP0560806A4 (en) * 1990-11-14 1993-11-18 Emu Products Western Australia Pty. Ltd. Anti-inflammatory composition derived from emu oil
IT1262927B (it) 1992-01-14 1996-07-22 Consiglio Nazionale Ricerche Batteri sporgenti e loro impiego come probiotici
FI92498C (fi) * 1992-06-10 1994-11-25 Valio Meijerien Uusi mikro-organismikanta, sitä sisältävät bakteerivalmisteet ja näiden käyttö hiivojen ja homeiden torjuntaan
JPH06166623A (ja) * 1992-09-25 1994-06-14 Toyama Chem Co Ltd 抗菌性組成物
WO1994011492A1 (en) 1992-11-12 1994-05-26 Chr. Hansen's Laboratory, Inc. Method of favorably modifying poultry intestinal microflora
US6103246A (en) * 1993-06-03 2000-08-15 Tisdale; Carrie J. Creams and lotions containing emu oil
US5540920A (en) * 1994-11-22 1996-07-30 Olin Corporation Synergistic biocide composition containing pyrithione plus an additive
US5472713A (en) * 1994-11-23 1995-12-05 Elf Resources, Inc. Therapeutic uses of emu oil
SE9502588L (sv) 1995-07-13 1997-01-14 Moelnlycke Ab Hämning av tillväxten av bakterier i samband med absorberande alster med hjälp av tillsats av andra bakterier
US5698227A (en) * 1996-07-23 1997-12-16 Rivlin; Daniel Compositions comprising lidocaine and emu oil and methods of use thereof
US6645506B1 (en) * 1997-04-18 2003-11-11 Ganeden Biotech, Inc. Topical compositions containing extracellular products of Pseudomonas lindbergii and Emu oil
CA2287451C (en) 1997-04-18 2014-06-10 Sean Farmer Topical use of probiotic bacillus spores to prevent or control microbial infections
AU750136B2 (en) * 1997-06-03 2002-07-11 Ganeden Biotech, Inc. Probiotic lactic acid bacterium to treat bacterial infections associated with SIDS
US7374753B1 (en) * 1997-06-03 2008-05-20 Ganeden Biotech, Inc. Probiotic lactic acid bacterium to treat bacterial infections associated with SIDS
US6261577B1 (en) * 1997-07-16 2001-07-17 Symbollon Corporation Non-staining topical iodine composition and method
US6312703B1 (en) * 1998-02-06 2001-11-06 Lecigel, Llc Compressed lecithin preparations
US6811786B1 (en) * 1999-04-01 2004-11-02 Ganeden Biotech, Inc. Methods for reducing cholesterol using Bacillus coagulans spores, systems and compositions
CA2339643A1 (en) 1998-08-07 2000-02-17 Ganeden Biotech, Inc. Methods for increasing the solubility of nutritional materials using probiotic lactic acid-producing bacteria
US6461607B1 (en) * 1998-08-24 2002-10-08 Ganeden Biotech, Inc. Probiotic, lactic acid-producing bacteria and uses thereof
JP2002540900A (ja) 1999-04-14 2002-12-03 ガネデン バイオテック， インコーポレイテッド 衛生製品に関連する微生物感染の阻害方法
WO2001013956A2 (en) * 1999-08-26 2001-03-01 Ganeden Biotech, Inc. Use of emu oil a carrier for antifungal, antibacterial, and antiviral medications
US6849256B1 (en) * 1999-11-08 2005-02-01 Ganeden Biotech Incorporated Inhibition of pathogens by probiotic bacteria
US6416772B1 (en) * 2001-01-12 2002-07-09 H. Wayne Van Engelen Topical dermal anaesthetic
EP1450610A4 (en) * 2001-11-05 2006-03-29 Ganeden Biotech Inc PROBIOTIC COMPOSITIONS
US20030143262A1 (en) * 2001-12-13 2003-07-31 Brusk Ulla Forsgren Hygiene tissue
US6579543B1 (en) * 2002-02-22 2003-06-17 Jackie H. McClung Composition for topical application to skin

Also Published As

Publication number Publication date
EP1212069A2 (en) 2002-06-12
US7541042B2 (en) 2009-06-02
DE60023919T2 (de) 2006-08-10
WO2001013927A2 (en) 2001-03-01
US6645506B1 (en) 2003-11-11
US6905692B2 (en) 2005-06-14
AU783418B2 (en) 2005-10-27
EP1212069B1 (en) 2005-11-09
WO2001013927A3 (en) 2001-08-30
EP1632239A1 (en) 2006-03-08
AU7332400A (en) 2001-03-19
DE60023919D1 (de) 2005-12-15
JP2003507428A (ja) 2003-02-25
US7807185B2 (en) 2010-10-05
US6723326B1 (en) 2004-04-20
US20030003107A1 (en) 2003-01-02
WO2001013927A9 (en) 2002-07-11
US20080089963A1 (en) 2008-04-17
US7544363B2 (en) 2009-06-09
CA2382840A1 (en) 2001-03-01
CA2382840C (en) 2011-05-24
US20050271758A1 (en) 2005-12-08
ATE308988T1 (de) 2005-11-15
US20090238907A1 (en) 2009-09-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2256036T3 (es) Composiciones topicas mejoradas que contienen productos extra-celulares de bacterias probioticas y usos de las mismas.
ES2255730T3 (es) Utilizacion topica de esporas de bacilos probioticos para prevenir o tratar las infecciones microbianas.
ES2221624T3 (es) Uso de aceite de emu como vehiculo para mediaciones antifungicas, antibacterianas y antiviricas.
US7507402B1 (en) Topical use of probiotic Bacillus spores to prevent or control microbial infections
AU2006201179B2 (en) Use of Emu Oil Carrier for Antifungal, Antibacterial, and Antiviral Medications