ES2250394T3

ES2250394T3 - Preparacion de poligalacturonicos y su utilizacion como aditivos alimentarios.

Info

Publication number: ES2250394T3
Application number: ES01927891T
Authority: ES
Inventors: Christine Lang; Heike Dornenburg
Original assignee: Technische Universitaet Berlin
Current assignee: Technische Universitaet Berlin
Priority date: 2000-04-06
Filing date: 2001-04-06
Publication date: 2006-04-16
Anticipated expiration: 2021-04-06
Also published as: US6696554B2; US20040146635A1; AU5479101A; WO2001076609A1; US20030013678A1; EP1191936B1; DE50107344D1; DE10019076A1; JP2003530096A; ATE303811T1; EP1191936A1

Abstract

Uso de poligalacturonidos como aditivos de alimentos, dichos poligalacturonidos obteniéndose mediante las fases del tratamiento siguiente: a) someter el materia vegetal conteniendo pectina a un proceso de extracción de pectina en una solución acuosa, b) separar los sólidos de la suspensión obtenida en la fase a), dicha suspensión comprendiendo una fase líquida conteniendo pectina disuelta y sólidos resultantes de dicha materia vegetal, c) precipitar la pectina de la fase líquida obtenida en la fase b), d) disolver la pectina obtenida en la fase b) en un medio acuoso y cortar dicha pectina con endopoligalacturonasa purificado, e) tratar los poligalacturonidos obtenidos en la fase d) en una preparación de poligalacturonidos sin ninguna fase adicional de separación y sin hidrolizar ningún grupo éster existente.

Description

Preparación de poligalacturónidos y su utilización como aditivos alimentarios.

La invención se refiere a poligalacturonidos y a su uso. Los poligalacturonidos son oligosacáridos obtenidos por ej. por descomposición enzimática de pectinas. La pectina tiene monómeros de ácido galacturónico o monómeros de (metil)éster de ácido galacturónico como componentes más importantes. Normalmente, ambos monómeros están presentes a la vez, el nivel de esterificación de los grupos de ácido galacturónico variando del 0,5% al 70%. Los monómeros de ácido galacturónico o monómeros de éster de ácido galacturónico tienen un enlace \alpha-1,4. No obstante en partes específicas de la molécula de pectina, se insertan en la cadena monómeros de ramnosa, dando como resultado una estructura en zigzag del polímero. Los monómeros de ramnosa pueden tener cadenas secundarias que pueden ser formadas de arabanes (enlace \alpha-1,5) y arabinogalactanos (enlace \beta-1, 3-1, 6-D). Las cadenas secundarias puede también incluir otros monómeros de azúcar. Complementariamente se hace referencia a la mención "Flüssiges Obst" 6/97, p. 301. Esta referencia también describe que el uso de pectinasas para la clarificación en la producción de zumo determina la presencia de coloides indeseables que interfieren en el tratamiento adicional y deben ser extraídos o evitados. En zumos naturales no filtrados, en cambio, son sólo las pectinas más que los fragmentos de éstas las que tienen una influencia ventajosa en la viscosidad. Resulta evidente según estas consideraciones que en la producción de zumo, por ejemplo, la presencia de fragmentos de pectina es indeseable por cuestiones técnicas.

Además de los aspectos técnicos, las pectinas también conllevan aspectos fisiológicos. La referencia Cerda, J.J., Trans. Ser. Clin. Climatol. Assoc. 99:203-213 (1987), describe que la pectina de los pomelos juega un papel importante en promover la salud de los consumidores. La referencia Matsumoto, T. et al, Int. J. Immunofarmacol. 15:683-693 (1993), describe que determinados fragmentos de Bupleuran 211c, un polisacárido tipo pectina de las raíces del Bupleurum falcatum, pueden ser muy importantes en términos farmacéuticos. Los fragmentos se obtienen por reacción con la endopoligalacturonasa. Por último, la referencia Voragen, A.G.J., Trends Food Sci. Technol. 9:328-335 (1998), proporciona información de que los polisacáridos no digeribles o los oligosacáridos pueden tener varios efectos de mejora en la salud de personas que consuman los mismos.

La producción de oligosacáridos de pectinas utilizando pectinasas para objetivos farmacéuticos es conocida por la referencia US-A-5.683.991. Las pectinasas utilizadas allí son mezclas de varias enzimas que posiblemente también incluyen endopoligalacturonasa, de manera que incluso la división es efectuada en las regiones de la cadena lateral. Además, los grupos éster son hidrolizados antes de reaccionar con las pectinasas así, como resultado, se obtienen oligosacáridos comparativamente pequeños (2-4 monómeros).

Los aditivos en la industria alimenticia realizan una variedad de funciones. Las funciones esenciales se encuentran en el sector de preparación de productos alimenticios procesados, por ej. con respeto a la consistencia, durabilidad y aspecto del color.

La invención se basa en el problema técnico de suministrar un aditivo para alimentos que mejore los alimentos con respecto a que sea favorable para la salud, con respecto al sabor, y opcionalmente con respecto a la consistencia y/o otras propiedades relacionadas con el consumidor.

Para resolver dicho problema técnico, la invención provee el uso de poligalacturonidos como aditivos en los alimentos, dichos poligalacturonidos pudiéndose obtener por medio de las siguiente fases del proceso:

a): someter el materia vegetal conteniendo pectina a un proceso de extracción de pectina en una solución acuosa,

b): separar los sólidos de la suspensión obtenida en la fase a), dicha suspensión comprendiendo una fase líquida conteniendo pectina disuelta y sólidos que son el resultado de dicha materia vegetal,

c): precipitar la pectina de la fase líquida obtenida en la fase b),

d): disolver la pectina obtenida en la fase c) en un medio acuoso y cortar dicha pectina con endopoligalacturonasa purificado,

e): tratar los poligalacturonidos obtenidos en la fase d) en una preparación de poligalacturonidos sin ninguna separación adicional y sin hidrolizar ningún grupo éster existente.

En el ámbito de la invención, es esencial que no se desarrolle ninguna hidrólisis de grupos éster y que, debido al uso de endopoligalacturonasa purificada, sólo los enlaces en unidades de monómeros de ácido galacturónico no-esterificado (naturalmente) experimenten la separación. Como resultado se obtiene una cantidad mayor de oligosacáridos comparativamente grandes, por ej. con 5 a 20 unidades de monómeros (cadenas principal y opcionalmente laterales). Aquí, prácticamente todos los poligalacturonidos son poligalacturonidos saturados, menos reactivos comparados con los poligalacturonidos insaturados formados por pectina liasa o actividad de pectina liasa y en consecuencia no contribuyen al oscurecimiento no enzimático y a la formación de hidroximetilfurfural (HMF) de fructosa o glucosa. La mezcla de varias estructuras de oligosacáridos así obtenida tiene ventajas diferentes. Por una parte, fragmentos con cadenas laterales ampliamente retenidas tienen un efecto de refuerzo del sistema inmunitario en términos fisiológicos. Además, los oligosacáridos comparativamente largos de la invención asumen un efecto de alimento rico en fibras, como es el caso de otros polímeros de cadena larga. Los alimentos ricos en fibras son importantes en la profilaxis y terapia de varias enfermedades tal como el estreñimiento, la diverticulosis, el carcinoma de colon, la diabetes mellitus, y enfermedades metabólicas lipídicas. No obstante se reducirán los inconvenientes de tos alimentos ricos en fibras convencionales, es decir, la unión de nutrientes esenciales, utilizando los oligosacáridos de la invención con un intervalo de 5 a 20 unidades de monómeros. Además, en virtud de la flora bacteriana intestinal tal y como se encuentra en los organismos, los poligalacturonidos según la invención se convierten de una manera relativamente fácil en ácidos grasos de cadenas cortas tales como acetato, butirato y propionato que a su vez tienen un efecto positivo en la flora intestinal y en el valor del pH intestinal. Estos ácidos grasos pueden ser utilizados energéticamente por el organismo (contenido energético de los oligosacáridos básicos: aproximadamente 2 kcal/g), sirviendo particularmente las células de mucosa como proveedores de energía, con consecuente modulación de la proliferación. De este modo se activa la motilidad del colon y con ello también la circulación de la sangre de la mucosa. Además, los poligalacturonidos utilizados según la invención tienen un efecto antibacteriano y estabilizante de la emulsión, que es particularmente ventajoso en términos de la tecnología de los alimentos. Esto también permite el uso como substitutos de grasas, por ej. en la mayonesa y similares.

El uso según la invención puede ser efectuado con una amplia variedad de alimentos procesados, tal como comidas preparadas, alimentos para bebés, comida enlatada (incluyendo alimentos envasados en cristal), tal como verduras enlatadas y frutas enlatadas, bebidas, caramelos y pastelería (incluyendo patatas fritas y similares). Además de las propias plantas, los residuos de extracción vegetal, por ej. de la producción de zumo, al igual que cultivos de células vegetales son posibles como material vegetal de pectina.

Las plantas adecuadas para el uso como fuente de pectina pueden ser ejemplificadas a continuación:

Cualquier tipo de frutas, particularmente manzanas y cidras, verduras, particularmente remolachas azucareras, zanahorias y tomates. La extracción de pectina puede ser efectuada con un intervalo neutro (pH 6,0 - 8,0) o ácido (pH 2,0 - 3,0; Ácido: por ej. ácido sulfúrico, ácido hidroclórico, ácido fosfórico, ácido cítrico, ácido láctico, y/o ácido tartárico). Las condiciones del proceso típicas son las siguientes:

40 - 120°C, preferiblemente 90 - 100°C,

1 - 20 horas, preferiblemente 6 - 10 horas, repeticiones múltiples opcionales, por ej. dos veces.

Los sólidos pueden ser extraídos por presión y/o centrifugación (por ej. hidráulica). Antes de un proceso adicional, la solución resultante puede ser concentrada utilizando la evaporación de vacío y/o la ultrafiltración.

La precipitación de pectina puede ser efectuada de diferentes formas. Por una parte, pueden ser utilizados los solventes orgánicos (no iónicos) mezclables con agua, que eliminan la estructura de hidrato de la pectina, para causar la precipitación. Por ejemplo, la acetona y los alquilalcoholes C_{1}-C_{10} son posibles, siendo el etanol preferido desde un punto de vista de la tecnología de los alimentos. Alternativa o adicionalmente se pueden emplear sales inorgánicas tales como sulfatos y/o fosfatos de aluminio, cobre y/o calcio.

Preferiblemente, la fase d) es realizada utilizando un pH de 1,4 a 8,2, más preferiblemente de 3,5 a 5,0. La endopoligalacturonasa que es usada puede ser recuperada de plantas o de microorganismos que se encuentran en su interior, por ej. algodón/Aspergillus flavus/Aspergillus parasiticus, centeno/Claviceps purpurea, maíz/Cochliobolus carbonum/Fusarium monilifonne, nuez americana/Cryphonectria parasitica, tomate/Fusarium/oxysporum/Ralstonia (Pseudomonas) solanacearum, arroz/Rhizoctonia solan, hierba/Sclerotinia borealis, girasol/Sclerotinia sclerotiorum, y manzana/Stereum purpureum, zanahoria/Erwinia carotorova o Burkholderia (Pseudomonas) cepacia, o de microorganismos genéticamente creados por ingeniería genética para producir una endopoligalacturonasa bien definida. Estos últimos son los preferidos por su purificación comparativamente fácil. Además de los genes bien conocidos de los microorganismos arriba ejemplificados, son posibles ADNc bien conocidos o ADNc de las propias plantas que codifican estructuras de enzimas bien conocidas mediante operaciones recombinantes. Ejemplos de ADNc de plantas bien conocidos son los de la Arabidopsis thaliana, Persea americanus y Prunus persica. Ejemplos de endopoligalacturonasas de plantas bien conocidas son las de Lycopersicon esculentum, Musa acuminata, Gossypium barbadense, Gossypium hirsutum, Cucumus sativus, Phaseolus vulgaris, Citrus limon, Mangifers indica, Cucumis melo, Passiflora edulis, Prunus persica, Pyrus communis, Rubus idaeus, y Fragaria ananassa. Se prefiere utilizar una o más endopoligalacturonasas seleccionadas de las endopoligalacturonasas que pueden obtenerse de organismos del grupo consistente en Aspergillus carbonarius, Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Aspergillus tubingensis, Aspergillus ustus, Kluyveromyces marxianus, Neurospora crassa, Penicillium frequentans, y Saccharomyces cerevisiae SCPP, Lactobacillus casei, Lactobacillus plantarum, Lactococcus lactis, Bacteroides thetaiotaomicron, Piromonas communis, Neocalimastix patriciarum, o de otros microorganismos modificados con secuencias de ADN de los organismos anteriores que codifiquen las endopoligalacturonasas. La purificación puede ser efectuada utilizando por ej. la tecnología de filtración en gel que es bien conocida para los expertos en la materia. La cantidad de poligalacturonasa utilizada en la fase d) ventajosamente varia de 10 a 1000, preferiblemente de 20 a 400 U/g de pectina. La determinación de la actividad se efectúa usando el método siguiente:

10 mg/l de ácido poligalacturónico (por ej. Sigma P 7276, según las especificaciones del producto válidas en 01-03-2000) se disuelven en el tampón del sustrato (2 mM solución de ácido cítrico, 1 mM CaCl_{2}) y añaden con una cantidad definida de una solución enzimática. La incubación se efectúa durante 15 minutos a 25°C. La reacción es luego detenida añadiendo un volumen igual de 4,4 mM de solución de ácido 2-hidroxi-3,5-dinitrobenzoico, ebullindo durante 5 minutos, y enfriándose a 0°C. Por último, se determina la absorción a 540 nm, y se calcula de forma usual el rendimiento con respecto a una curva en función del tiempo. Una unidad es el rendimiento de 1 \muM de ácido galacturónico por minuto.

En una forma de realización particularmente preferida de la invención, la poligalacturonasa es inmovilizada por inclusión en reactores de membrana enzimática, por ej. reactores de membrana plana o de membrana de fibra vacía, o el enlace a un material de soporte preparado de forma convencional puede ser logrado de modo absorbente, fónico, quelante, covalente o mediante reticulación.

La inmovilización permite asegurar que el producto final quede prácticamente libre de poligalacturonasa y, de hecho, sin una separación extra. De esta manera se excluyen prácticamente las reacciones de interferencia debidas, de otra forma, a la posible inclusión de la poligalacturonasa empleada con pectinas eventualmente incluidas en los alimentos. En particular, esto es ventajoso porque una descomposición indeseable de pectinas incluida en los alimentos puede tener un efecto desfavorable en la consistencia de los alimentos, por ej. la viscosidad de los mismos. Además, el consumo de poligalacturonasa es comparativamente bajo.

La reacción con poligalacturonasa en la fase d) se efectúa preferiblemente de 4 a 80°C, más preferiblemente de 30 a 70°C, durante de 2 a 300 minutos, preferiblemente de 45 a 150 minutos. Las operaciones pueden ser realizadas en una forma continua o discontinua (por lotes). En cuanto al proceso continuo, el período de tiempo mencionado arriba se refiere al periodo medio de permanencia en un volumen de reacción conteniendo poligalacturonasa.

Los poligalacturonidos según la invención son empleados en concentraciones de 0,01 a 1,0 g/kg de alimento, preferiblemente de 0,1 a 0,5 g/kg de alimento. La concentración debería ser ajustada en relación al consumo normal de alimentos humanos para mantener la dosis de 0,5 a 50 mg, preferiblemente de 1 a 25 mg por kg de masa corporal al día.

Con referencia a los ejemplos que meramente representan formas de realización, la invención será ilustrada con más detalle a continuación.

Ejemplo 1 Aislamiento y purificación de una poligalacturonasa de tomates

1 kg de tomates, son homogeneizados en 1 I de agua, y la suspensión obtenida es ajustada a pH 3,0.

Los sólidos (residuos de células) son extraídos por centrifugado (10.000 g, 20 minutos) y lavados en agua. Los granulados son extraídos en 50 mM de acetato de sodio/1,25 mM NaCl (pH 6,0) a 4°C y agitados a 4°C durante 1 hora. Las proteínas son precipitadas mediante sulfato amónico con un 70% de saturación y extraídas por centrifugado (10.000 g, 20 minutos). El granulado de proteínas es disuelto en 0,125 M de acetato de sodio (pH 6,0) y dializado con respecto a dicho tampón. Las proteínas luego son separadas en una columna de sefarosa CM en un gradiente de 2 fases (0,45 m de acetato sódico, pH 6,0, y 1,0 m de acetato de sodio, pH 6,0). La endopoligalacturonasa eluye con la primera fase.

Ejemplo 2 Preparación y purificación de una poligalacturonasa de microorganismos creados genéticamente por ingeniería genética

Se transforma levadura (Saccharomyces cerevisiae) utilizando un plásmido de expresión incluyendo ADNc del gen de endopoligalacturonasa de Aspergillus niger bajo control de un promotor de levadura ADH1.

El plásmido además incluye el origen de replicación de la levadura y el marcador de selección de la levadura (por ej. el gen LEU2). La cepa de levadura obtenida es hecha crecer antes en un medio nutritivo (medio mínimo) y cultivada en un proceso de fermentación. La endopoligalacturonasa es excretada en el medio nutritivo.

Las células de levadura son cosechadas de 500 ml de medio (centrifugado: 6000 g, 10 minutos).

El medio claro sobrenadante es transferido en una columna de intercambio de cationes de carboximetilcelulosa y equilibrado con 10 mM de acetato de sodio (pH 4,0). Las proteínas son eluidas usando un gradiente lineal de 1 a 1,5 M de NaCl en 10 mM de acetato de sodio (pH 4,0). las fracciones comprendiendo endopoligalacturonasa pura eluyen entre 0,6 y 0,75 M NaCl.

Ejemplo 3 Aislamiento y purificación de una poligalacturonasa de una pectinasa comercialmente disponible

50 g de una mezcla de enzimas comercialmente disponibles es disuelta en 200 ml de 0,02 m de acetato sódico (pH 3,6) con agitación durante 3 horas. Los componentes sólidos son extraídos por centrifugado (25.000 g, 10 minutos). La solución es luego desalinizada usando una columna de Sefadex G-50. Las proteínas son transferidas en una columna de alginato (matriz por reticulación de alginato con epicloroidrina) y equilibradas con 0,02 m de acetato de sodio (pH 3,6). La elución es efectuada usando 0,1 m de acetato de sodio, pH 4,2, luego pH 5,6, y posteriormente usando un gradiente de NaCl lineal de 0-1 M en tampón de acetato, pH 5,6.

La endopoligalacturonasa es eluida en el gradiente salino.

Ejemplo 4 Inmovilización de una poligalacturonasa

3 g de un soporte de partículas, por ej. silicato o soporte de cristal derivado con grupos NH_{2} ligados en superficie (Solvay Enzymes, Hanover), son suspendidos en 20 ml de 0,01 m de tampón de fosfato Srensen (pH 7,0) y desgasificado. 0,2 g, por ej. 1000 U de endopoligalacturonasa del Ejemplo 3 es disuelto en 5 ml de tampón, pH 7,0, y añadido a la suspensión de soporte. Se controla con agitación el descenso de la extinción a 280 nm durante aproximadamente de 30 a 60 minutos. La solución es retirada, seguido de un lavado de 5 veces con agua, y el acoplamiento es realizado añadiendo 10 ml de solución de dialdeído glutárico (5%) y mezclando durante 30 minutos. Luego, éste es lavado 5 veces con agua, 1 hora, seguido de un lavado de 3 veces con tampón (pH 5,0). Finalmente, éste es suspendido en 50 ml de tampón, pH 5,0, para obtener endopoligalacturonasa inmovilizada covalente.

Ejemplo 5 Preparación de oligogalacturonidos de Oreja de liebre

Las raíces lavadas de Oreja de liebre (Bupleurum falcatum, Umbelliferae), 1 kg, son desmenuzadas mecánicamente y sometidas a una fase de proceso de extracción usando 30 kg de agua desionizada. La extracción es realizada dos veces durante 8 horas a 98°C y a presión atmosférica. Después del enfriamiento por debajo de los 60°C, la suspensión obtenida es centrifugada (4000 g durante 10 minutos) para eliminar los sólidos. El sobrenadante claro obtenido es concentrado a 1/10 del volumen original usando evaporación de vacío.

La pectina es precipitada añadiendo 4 partes en peso de etanol (96%) por parte en peso de solución y separada de la fase líquida mediante centrifugado (10.000 g durante 10 minutos) a 4°C, opcionalmente con diálisis posterior. La pectina obtenida es luego disuelta en un tampón de 0,1 M de acetato de sodio (pH 4,2) y hecha reaccionar con 300 U/g de pectina empleada de endopoligalacturonasa (de Aspergillus japonicus, obtenible de la Compañía Sigma bajo la designación de producto P 3304, según las especificaciones del producto válidas en 01-03-2000) durante 4 horas a 37°C, dicha reacción siendo hecha de forma discontinua. Los poligalacturonidos obtenidos son recuperados en forma sólida mediante evaporación del agua.

Ejemplo 6 Preparación de galacturonidos de trocitos de remolacha prensados

Trocitos de remolacha prensados, 1 kg, de la industria de tratamiento de la remolacha son extraídos en 15 kg de una solución acuosa ácida (ácido fosfórico, pH 1,5) durante 1 hora a 90°C. Después del enfriamiento a 20°C, la fase sólida es retirada por presión hidráulica y filtración opcional. Usando la evaporación de vacío, ésta es concentrada a 1/10 del volumen de la fase líquida. La pectina es precipitada añadiendo 2 partes en peso de isopropanol por parte en peso de concentrado. Después del centrifugado (10.000 g, 10 minutos) y secado (70°C, 1 hora), la hidrólisis enzimática se realiza añadiendo una solución acuosa de 5 g/kg agua (ajustada a un pH 4,0) de extracto de pectina con 20 U/g de pectina de endopoligalacturonasa del Ejemplo 1 y realizando la reacción durante 60 minutos a 60°C. Los poligalacturonidos obtenidos son recuperados en forma sólida a través de la evaporación del agua.

Ejemplo 7 Producción de alimentos para bebés conteniendo poligalacturonidos

Alimentos para bebés listos para comer procesados como una trituración son mezclados homogéneamente con 0,1 g/kg de trituración de poligalacturonidos del Ejemplo 6, y la trituración luego es envasada en una forma lista para la venta. La trituración demuestra estar estabilizada como emulsión.

Ejemplo 8 Producción de una bebida gaseosa conteniendo poligalacturonidos

Se obtiene un té a partir de hojas de té verde de la manera usual. Después del enfriamiento, 1 g/kg de bebida de poligalacturonidos del Ejemplo 5 es agregada al té para formar una solución. El producto listo para ser embotellado así obtenido tiene un sabor agradablemente ácido.

Ejemplo 9 Inmovilización por reticulación

500 mg de endopoligalacturonasa son disueltos en 15 ml de agua destilada. Con agitación en un baño de hielo, 30 ml de acetona helada es añadida poco a poco, seguido de la adición de 2 ml de una solución de dialdeído glutárico al 25%. Luego, se agita durante 60 minutos a 30°C y posteriormente se centrifuga. El sobrenadante es desechado, y el residuo es mezclado con 40 ml de agua destilada y homogenizado usando un Ultra Turrax. Después del centrifugado y descartando el sobrenadante, el residuo es lavado una vez más con 40 ml de agua destilada. La preparación reticulada obtenida es suspendida para hacer 100 ml.

Ejemplo 10 Fraccionamiento de los poligalacturonidos

1,5 g de los poligalacturonidos del Ejemplo 6 son disueltos en 15 ml de agua destilada. Los poligalacturonidos son separados usando cromatografía. La solución es transferida en una columna de intercambio de aniones (2,5/40 cm, BioRad AGMP 1) 150 ml en volumen, equilibrada con eluyente (0,2 m de tampón de formiato de sodio pH 4,7). Los poligalacturonidos son eluidos usando un gradiente lineal entre 0,2 y 0,7 m de tampón de formiato de sodio (pH 4,7).

La composición de las fracciones individuales es posteriormente analizada usando cromatografía en capa fina (TLC, del inglés "thin layer chromatography"). Las fracciones son transferidas en la fase estacionaria, Silicagel 60 (Merck); una mezcla de una parte de etanol y una parte de acetato (25 mM) se utiliza como fase móvil. El desarrollo es realizado a 35°C. Los poligalacturonidos individuales se han hechos visibles pulverizando con un reactivo (200 mg de naftaleno-1,3-diol en 50 ml de metanol y 50 ml (g/g ácido sulfúrico) al 20%. Las fracciones de igual composición son agrupadas, y los poligalacturonidos contenidos en estas fracciones son precipitados con el doble del volumen de acetona y separados de la acetona después del centrifugado (6000 g, 10 minutos) para obtener poligalacturonidos de tamaño bien definido.

Claims

1. Uso de poligalacturonidos como aditivos de alimentos, dichos poligalacturonidos obteniéndose mediante las fases del tratamiento siguiente:

b): separar los sólidos de la suspensión obtenida en la fase a), dicha suspensión comprendiendo una fase líquida conteniendo pectina disuelta y sólidos resultantes de dicha materia vegetal,

c): precipitar la pectina de la fase líquida obtenida en la fase b),

d): disolver la pectina obtenida en la fase b) en un medio acuoso y cortar dicha pectina con endopoligalacturonasa purificado,

e): tratar los poligalacturonidos obtenidos en la fase d) en una preparación de poligalacturonidos sin ninguna fase adicional de separación y sin hidrolizar ningún grupo éster existente.

2. Uso según la reivindicación 1, donde dicha pectina es precipitada añadiendo alquilo alcoholes C_{1}-C_{10} y/o sales inorgánicas.

3. Uso según la reivindicación 1 o 2, donde el valor de pH es ajustado de entre 1,4 y 8,2, preferiblemente entre 3,5 y 5,0, en la fase d).

4. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde dicha endopoligalacturonasa es purificada mediante la tecnología de filtración de gel.

5. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde la cantidad de poligalacturonasa utilizada en la fase d) varía entre 10 y 1000, preferiblemente entre 20 y 400 U/g de pectina.

6. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, donde dicha poligalacturonasa es inmovilizada.

7. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde la reacción con poligalacturonasa en la fase d) se realiza a una temperatura que varía entre 4 y 80ºC, preferiblemente entre 30 y 70ºC, y dura entre 2 y 300 minutos, preferiblemente entre 45 y 150 minutos.