ES2244751T3 - Oxindoles inhibidores de cdk-1 y su aplicacion en terapia. - Google Patents

Oxindoles inhibidores de cdk-1 y su aplicacion en terapia.

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ES2244751T3
ES2244751T3 ES02704891T ES02704891T ES2244751T3 ES 2244751 T3 ES2244751 T3 ES 2244751T3 ES 02704891 T ES02704891 T ES 02704891T ES 02704891 T ES02704891 T ES 02704891T ES 2244751 T3 ES2244751 T3 ES 2244751T3
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Jean-Francois Riou
Michel Maratrat
Lucile Grondard
Fabienne Thompson
Odile Petitgenet
Patrick Mailliet
Jacques Lavayre
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Abstract

Un compuesto de la fórmula (I) : en la que R5 se selecciona entre los grupos 3-piridinilo, 5- pirimidinilo, -CONH-alquilo C1-C4, -NHCO-alquilo C1-C4, CO2R donde R puede ser hidrógeno o alquilo C1-C4, -SO2NH2, NO2, CF3, en la que Ar se selecciona entre los grupos 5-imidazolilo, 2-pirrolilo eventualmente sustituidos con un radical alquilo C1-C4, 2-furilo, o 2-tiazolilo, bajo la forma E, Z o una mezcla de las dos formas de isómeros.

Description

Oxindoles inhibidores de CDK-1 y su aplicación en terapia.
La presente invención se refiere a una familia de oxindoles que son inhibidores químicos del complejo enzimático Cdc2/ciclina B (CDK-1) y a su aplicación en terapéutica.
Como es bien conocido, el ciclo celular de una célula eucariota consta de diferentes etapas (véase la figura 1):
Después de la fase M, que se compone de una división nuclear (mitosis) y de una división citoplásmica (citodiéresis), las células hijas comienzan la interfase de un nuevo ciclo. Esta interfase comienza con la fase G1 durante la cual se observa un aumento de la reanudación de las actividades de biosíntesis de la célula. La fase S comienza cuando arranca la síntesis del DNA y se termina cuando se han replicado los cromosomas (cada cromosoma está entonces compuesto de dos cromátidos hermanos idénticos). La célula entra después en la fase G2 (la última fase de la interfase) que se continúa hasta el principio de la mitosis, iniciando la fase M. A lo largo de esta fase, los cromátidos hermanos se separan, se forman dos nuevos núcleos y se divide el citoplasma se para dar dos células hijas dotadas cada una de un núcleo. La citodiéresis termina la fase M y marca el principio de la interfase del siguiente ciclo celular.
La maquinaria molecular del ciclo celular está compuesta de factores de regulación que controlan el progreso del ciclo celular. El paso de una fase a otra en un ciclo está bajo el control de una familia de proteínas serina/treonina-quinasas de pequeño tamaño, dependiendo las quinasas de las ciclinas (CDK) que regulan la actividad de las proteínas por fosforilación. La tasa de expresión de las CDK es casi constante a lo largo del ciclo celular, pero estas proteínas-quinasas son inactivas por sí mismas y deben ser activadas para adquirir una actividad quinásica. La actividad enzimática y la especificidad de las CDK dependen de su asociación con una subunidad reguladora que pertenece a la familia de las ciclinas.
La entrada en mitosis, en particular, está bajo el control de un factor promotor de la fase M (o MPF) que está constituido por el ensamblaje de una molécula de (CDK1 p34cdc2) y de una molécula de ciclina B. El complejo ciclina B-CDK1 activado permite la transición G2/M al fosforilar numerosos sustratos.
Así, la modulación de la actividad del complejo ciclina B-CDK1 es un mecanismo clave de detención de la proliferación celular y las CDK constituyen blancos moleculares privilegiados en la búsqueda de inhibidores selectivos de la proliferación celular. En efecto, ciertas propiedades de las CDK (en particular las alteraciones más frecuentes, en los tumores humanos, de las CDK y de sus reguladores) y de sus inhibidores proteicos naturales han estimulado la búsqueda de inhibidores químicos de CDK a la vista de las aplicaciones antitumorales.
Por tanto numerosos compuestos han sido ensayados y reconocidos como inhibidores de CDK: las purinas, los paullones, el flavopiridol, las indirrubinas, la olomucina, la roscovitina, la butirolactona-1, la toyocamicina y otros. Los inhibidores químicos que son más particularmente activos sobre el complejo ciclina B/CDK1 impiden de hecho la fosforilación de sustratos tales como la histona H1, las sub-unidades \gamma y \delta del factor de elongación o la vimentina.
Así, los primeros inhibidores químicos de CDK presentan propiedades interesantes que justifican su evaluación como productos anticancerosos potenciales y el seguimiento de la búsqueda de nuevas moléculas más eficaces.
La solicitud de patente WO 96/40116 describe los oxindoles utilizados con el fin de modular la señal de transducción de la proteína tirosina-quinasa (PTK).
En esta solicitud se ha descubierto una familia de compuestos de la familia de los oxindoles que tienen una acción marcada sobre la proliferación celular y sobre la CDK-1.
La invención tiene por objetivo nuevos compuestos de la familia de los oxindoles.
Otro objetivo está constituido por su aplicación como medicamento.
Otros objetivos aparecerán a la luz de la descripción y de los ejemplos que siguen.
La presente invención tiene por tanto como objetivos los compuestos que responden a la fórmula (I):
1
en la que R5 se selecciona entre los grupos 3-piridinilo, 5-pirimidinilo, -CONH-alquilo C_{1}-C_{4}, -NHCO-alquilo C_{1}-C_{4}, CO_{2}R donde R puede ser hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4}, -SO_{2}NH_{2}, CF_{3},
2 
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en la que Ar se selecciona entre los grupos 5-imidazolilo, 2-pirrolilo eventualmente sustituidos con un radical alquilo C_{1}-C_{4}, 2-furilo, o 2-tiazolilo, bajo la forma E, Z o una mezcla de las dos formas de isómeros.
En los compuestos de la fórmula (1), R5 indica preferiblemente un grupo 3-piridinilo o -CONH-metilo o -NHCO-metilo y Ar indica preferiblemente un grupo 5-imidazolilo o un 5-(4-metil-imidazolilo).
La presente invención tiene muy particularmente por objeto los compuestos de la fórmula (I) tal como se ha definido antes, que responde a las siguientes fórmulas:
3-(imidazol-4-metilidenil)-5-(piridin-3-il)-indolin-2-ona,
3-(pirrol-2-metilidenil)-5-(piridin-3-il)-indolin-2-ona,
3-(imidazol-4-metilidenil)-5-N-metilcarboxamido-indolin-2-ona,
3-(imidazol-4-metilidenil)-5-acetilamino-indolin-2-ona.
Los compuestos de la fórmula general (I), en los cuales R5 y Ar tienen los significados citados antes, se pueden obtener por acoplamiento de una indolin-2-ona de la fórmula general (II) en la que R5 tiene el significado citado antes, con un aldehído aromático de la fórmula general (III), en la que Ar tiene el significado citado antes, según el esquema que sigue:
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3 
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La reacción de acoplamiento se efectúa generalmente en las condiciones descritas por E. Knoevenagel (Chem. Ber. 1900, 23, 172), a saber, en un disolvente prótico tal como metanol o etanol, en presencia de una cantidad catalítica de una base orgánica tal como la piperidina, a una temperatura comprendida entre 20ºC y la temperatura de reflujo del disolvente utilizado.
Las indolin-2-onas de la fórmula general (II) y los aldehídos aromáticos de la fórmula (III), en las cuales R5 y Ar tienen respectivamente los significados citados antes, o bien están comercializados o bien se preparan según las condiciones descritas en la bibliografía.
Más adelante se describen ejemplos de preparación.
En esta solicitud se ha descubierto que los compuestos de la fórmula (I) según la invención tienen propiedades inhibidoras de las proteínas-quinasas (CDK). Estas proteínas desempeñan un papel clave en la iniciación, desarrollo y terminación de los acontecimientos del ciclo celular. Así, las moléculas inhibidoras de CDK son susceptibles de limitar las proliferaciones celulares inoportunas tales como las observadas en los cánceres.
La proteína-quinasa CDK1 es particularmente sensible a los efectos inhibidores de los compuestos de la presente invención.
Los productos de la presente invención poseen además de sus propiedades inhibidoras específicas de la proteína-quinasa CDK-1, efectos celulares tales como propiedades antiproliferativas por el bloqueo de la división celular a lo largo del ciclo y propiedades apoptóticas por la inducción de la apoptosis celular.
Los compuestos según la invención son notablemente útiles en el marco de la terapia de tumores primarios y de las localizaciones secundarias de los cánceres.
Por tanto, la invención tiene por objeto su utilización como medicamentos que pueden ser utilizados solos o en combinación con tratamientos tales como la quimioterapia, la radioterapia o los tratamientos anti-angiogénicos que utilizan eventualmente otras sustancias activas. La invención se extiende a las composiciones farmacéuticas que contienen como principio activo uno al menos de los compuestos de la fórmula (I) tal como se ha definido antes en un medio farmacéuticamente aceptable.
Estas composiciones farmacéuticas se pueden administrar por vía bucal, por vía parenteral o por vía local en aplicación tópica sobre la piel y las mucosas o por inyección por vía intravenosa o intramuscular. Estas composiciones pueden ser sólidas o líquidas y se pueden presentar en todas las formas farmacéuticas corrientemente utilizadas en medicina humana como, por ejemplo, comprimidos simples o grageados, píldoras, tabletas, cápsulas duras, gotas, granulados, preparaciones inyectables, pomadas, cremas o geles. Todas se preparan según los métodos habituales. El principio activo puede incorporarse a los excipientes empleados habitualmente en estas composiciones farmacéuticas, tales como talco, goma arábiga, lactosa, almidón, estearato de magnesio, manteca de cacao, vehículos acuosos o no, grasas de origen animal o vegetal, derivados parafínicos, glicoles, diversos agentes humectantes, dispersantes. o emulsionantes y conservantes.
La posología usual, variable según el producto utilizado y el sujeto tratado puede ser, por ejemplo, de 0,05 a 5 gramos al día en el adulto.
Los ejemplos siguientes sirven para ilustrar la invención pero sin limitarla.
Ejemplo 1 3-(Imidazol-4-metilidenil)-5-(piridin-3-il)-indolin-2-ona
A una solución de 0,61 g (3 mmoles) de 5-(piridin-3-il)-indolin-2-ona en 75 ml de etanol conteniendo 0,02 ml de piperidina, se añaden 0,28 g (3 mmoles) de imidazol-4-carboxaldehído. El medio de reacción se lleva a reflujo durante 4 horas. Después de enfriamiento, se escurre el precipitado formado, se lava 2 veces con 5 ml de etanol helado y se seca bajo presión reducida. Se obtienen así 0,62 g (75%) de 3-(imidazol-4-metilidenil)-5-(piridin-3-il)-indolin-2-ona, bajo la forma de un sólido amarillo limón cuya característica es la siguiente: punto de fusión =
310ºC.
Ejemplo 2 3-(pirrol-2-metilidenil)-5-(piridin-3-il)-indolin-2-ona
Operando como en el ejemplo 1, pero a partir de 2,1 g (10 mmoles) de 5-(piridin-3-il)-indolin-2-ona en 150 ml de etanol y de 0,99 g (10 mmoles) de pirrol-2-carboxaldehído, se obtienen 2,66 g (92,5%) de 3-(pirrol-2-metilidenil)-5-(piridin-3-il)indolin-2-ona, bajo la forma de un sólido naranja cuya característica es la siguiente: punto de fusión = 225ºC.
Ejemplo 3 3-(imidazol-4-metilidenil)-5-N-metilcarbaxamido-indolin-2-ona
Operando como en el ejemplo 1, pero a partir de 0,2 g (1,05 mmoles) de 5-metilcarboxamido-indolin-2-ona en 25 ml de etanol y de 0,1 g (1,04 mmoles) de imidazol-5-carboxaldehído, se obtienen 0,21 g (84%) de 3-(imidazol-4-metilidenil)-5-N-metilcarboxamido-indolin-2-ona, bajo la forma de un sólido naranja cuya característica es la siguiente: punto de fusión > 260ºC.
Ejemplo 4 3-(imidazol-4-metilidenil)-5-N-acetilamino-indolin-2-ona
Operando como en el ejemplo 1, pero a partir de 0,4 g (2,1 mmoles) de 5-acetilamino-indolin-2-ona en 50 ml de etanol y de 0,2 g (2 mmoles) de imidazol-4-carboxaldehído, se obtienen 0,31 g (58%) de 3-(imidazol-4-metilidenil)-5-acetilamino-indolin-2-ona, bajo la forma de un sólido naranja cuya característica es la siguiente: punto de fusión > 260ºC.
Ejemplo 5 Síntesis en paralelo de 3-(aril)metilidenil-indolin-2-ona de la fórmula general (I)
En un reactor magnético calentado con un condensador Zymark, de tipo STEM RS2050 que contiene 25 pocillos en paralelo provistos cada uno de un tubo de vidrio de 50 ml, se introducen 0,5 mmol de indolil-2-ona de la fórmula general (II), 0,5 mmol de un aldehído aromático de la fórmula general (III), 5 ml de etanol y 1 gota de piperidina. El medio de reacción se lleva a reflujo durante una noche. Después de enfriamiento, y dilución con 5 ml de agua, se escurre el precipitado formado y se seca a presión reducida. Se obtienen así las 3-(aril)metilidenil-indolin-2-onas de la fórmula general (I), representadas por ejemplo y de forma no limitante por los compuestos 5-1 a
5-14.
Ejemplo 6 Determinación de la inhibición de la actividad de p34cdc2/ciclina B por los compuestos según la invención
La inhibición de la actividad de p34cdc2/ciclina B (CDK1/ciclina B) se determina por un protocolo que permite medir la actividad de transferencia por la enzima, de un grupo ^{32}P, a partir de ATP[\gamma^{32}P] sobre un sustrato, la histona H1.
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100 
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Las preparaciones de enzimas utilizadas corresponden o bien a la enzima p34^{cdc2}/ciclina B de la estrella de mar (suministrada por L. Meijer, CNRS, Station Biologique, Roscoff, France), o bien a la enzima p34^{cdc2}/ciclina B humana recombinante (suministrada por New England Biolabs, Inc., Beverly, MA0191S, USA). La proteína histona H1 (tipo III-S) se obtiene de Sigma.
El tampón C contiene \beta-glicerofosfato 60 mM, nitrofenilfosfato 30 mM, MOPS 25 mM pH 7,0, EGTA 5 mM, MgCl_{2} 15 mM, ditiotreitol 1 mM y ortovanadato 0,1 mM. La solución de ATP se prepara mezclando 20 \mul de
ATP[\gamma^{32}P] a (3000 Ci/mmol) y 90 \mul de ATP no radioactivo a 1 mM en 890 \mul de tampón C.
El medio de reacción se prepara según la siguiente composición:
Se añaden 10 \mul de preparación enzimática a 5 \mul de histona H1 (5 mg/ml en el tampón C) y a 7 \mul de tampón C y se mezclan. Se reparten 17,5 \mul de la mezcla en los tubos justo antes del ensayo. Se añaden a cada tubo 3 \mul del agente inhibidor a ensayar.
Se inicia la reacción por la adición de 5 \mul de la solución de ATP seguida de una incubación de 15 minutos a 30ºC. Se para la reacción por la adición de 0,5 volúmenes de tampón Laemli 3X. Después de calentamiento de la muestra durante 5 minutos a 90ºC, se analizan seguidamente las muestras por electroforesis en gel de proteína con el 10% de acrilamida durante 1 hora bajo una tensión de 200 voltios con la ayuda de un sistema de electroforesis Novex. Los geles de acrilamida se secan después sobre una hoja de papel whatmann 3 MM a 80ºC durante 1 hora.
El análisis y la cuantificación de la fosforilación de la histona H1 se efectúan con ayuda de un aparato Instant-Imager (Packard). Para cada concentración de compuesto ensayada, se expresan los resultados en porcentaje de inhibición de la reacción y se calculan a partir del control enzimático sin tratar.
La concentración de compuesto que induce una inhibición del 50% de la reacción de fosforilación de p34^{cdc2}/ciclina B (IC50) se determina con la ayuda de una representación gráfica semi-logarítmica de los valores de inhibición obtenidos en función de cada una de las concentraciones de compuesto analizadas.
Inhibición de CDK1 por los compuestos de la invención según la fórmula (I) 
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4
5
6
Se considera que un compuesto es activo como agente anti- p34^{cdc2}/ciclina B cuando la CI50 es inferior a 5 \muM (5000 nM según las unidades de medida utilizadas en la tabla). Varios compuestos pueden ser considerados por tanto como inhibidores del complejo CDK1/ciclina B y en particular el nº 1.
Ejemplo 7 Determinación de la inhibición de clonogenicidad
Las líneas de células humanas KB, HCT-116, HT-29, HCT-8, Lovo, PC-3, PC-14, HLF y HLE así como la línea de tumor de rata C6 proceden de la ATCC (American Type Culture Collection, Rockville USA). La línea de tumor humano Calc18 es una donación del Professeur G. Riou (lnstitut Gustave Roussy, Villejuif, France). Las células HCT-8, Lovo, PC-3, PC-14, HLF y HLE se cultivan en capa en frascos de cultivo en el medio RPMI 1640, L-glutamina 2 mM, penicilina 200 U/ml, estreptomicina 200 \mug/ml y con la adición de 10% de suero fetal de ternera inactivado por el calor. Las células HCT-116, HT-29, KB, C6 et Calc18 se cultivan en capa en frascos de cultivo en el medio de Dulbeco's que contiene L-glutamina 2 mM, penicilina 200 U/ml, estreptomicina 200 \mug/ml y con la adición de 10% de suero fetal de ternera inactivado por el calor.
Las células en fase exponencial de crecimiento se someten a tripsinación, se lavan con PBS 1X y se diluyen hasta una concentración final de 5000 células/ml en el medio completo. Los productos a ensayar (en un volumen de 50 \mul) se añaden a 2,5 ml de la suspensión. A continuación, se añaden a las células 0,4 ml de Agar Noble Difco a 2,4% mantenido a una temperatura de 45ºC. Después se vierte inmediatamente la mezcla en las placas de Petri y se dejan a +4ºC durante 5 minutos para solidificar la gelosa. El número de clones celulares (>60 células) se mide después de 12 días de incubación a 37ºC en atmósfera con 5% de CO_{2}.
El compuesto nº 1 se ensaya a las concentraciones de 10, 1, 0,1, 0,01 \muM en duplicados. Los resultados se expresan en porcentaje de inhibición de la clonogenicidad con relación a los controles. La CI50 se determina gráficamente, a partir de los resultados medios determinados para cada concentración de compuesto.
Inhibición de la clonogenicidad en agar por el compuesto nº 1 sobre líneas celulares tumorales
Línea celular Tejido de origen CI50 (\muM)
HCT-116 colon 0,28
HT-29 colon 1,42
HCT-8 colon 1,04
Lovo colon 0,9
Calc18 mama 1,06
PC-3 próstata 0,19
PC-14 pulmón 1,1
HLF hígado 1,1
HLE hígado 1,2
C6 glioblastoma 10,8
Se considera que un compuesto es activo como agente citotóxico si la CI50 es inferior a 10 \muM, lo que es el caso para todas las líneas celulares ensayadas con el compuesto nº 1 (con la excepción del glioblastoma de rata C6).
Ejemplo 8 Medida de la inhibición de la proliferación por los compuestos nº 1 o nº 2
Se cultivan las células HT-116 en capa en frascos de cultivo en el medio de Dulbeco's que contiene L-glutamina 2 mM, penicilina 200 U/ml, estreptomicina 200 \mug/ml y con la adición de 10% de suero fetal de ternera inactivado por el calor.
Las células HCT-116 en fase exponencial de crecimiento, se someten a tripsinación, se lavan con PBS 1X y se siembran en microplacas de 96 pocillos (Costar) a razón de 4x104 células/ml y de 1,5x104 células/ml (0,2 ml/pocillo), se incuban después durante 96 horas en presencia de concentraciones variables del producto a estudiar (10, 1, 0,1 y 0,01 \mug/ml, cada punto por cuadruplicado). Dieciseis horas antes del final de la incubación, se añade a cada pocillo el 0,02% final de rojo neutro. Al final de la incubación, se lavan las células con PBS 1X y se lisan con laurilsulfato de sodio al 1%. La incorporación celular del colorante, que refleja el crecimiento celular, se evalúa por espectrofotometría a una longitud de onda de 540 nm para cada muestra con la ayuda de un equipo de lectura Dynatech
MR5000.
Para cada concentración de compuesto ensayada, se expresan los resultados en porcentaje de inhibición del crecimiento celular y se calculan a partir del control sin tratar y del medio de cultivo sin células (blanco) según la siguiente fórmula:
(Valor del compuesto - valor del blanco/Valor de las células control - valor del blanco) x 100.
La concentración de compuesto que induce una inhibición del 50% del crecimiento (IC50) se determina con la ayuda de una representación gráfica semi-logarítmica de los valores de inhibición obtenidos en función de cada una de las concentraciones de compuesto analizadas.
Inhibición de la proliferación de las células HCT-116 por los compuestos 1 ó 2 
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7 
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Se considera que un compuesto es activo como agente citotóxico si en uno u otro de los métodos, la CI50 es inferior a 10 \muM, lo que es el caso para los dos compuestos ensayados en este experimento.
Ejemplo 9 Determinación de la actividad pro-apoptótica y de bloqueo mitótico bajo la acción del compuesto nº 1
Después de la exposición durante 48 horas de las células HCT-8 al compuesto nº 1, las células en cultivo se someten a tripsinación, se lavan con PBS 1X y se depositan entre láminas y laminillas en presencia de Hoechst 33342 a una concentración de 1 \mug/ml. El porcentaje de células mitóticas y de células que tienen cuerpos nucleares apoptóticos se determina por examen y contaje de una muestra de al menos 300 células repartidas en varios lados de la lámina con ayuda de un microscopio de fluorescencia.
Inducción de la apoptosis y bloqueo mitótico inducido por el compuesto nº 1 sobre la línea HCT-8
Concentración ensayada del Células apoptóticas Factor/testigo Células mitóticas Factor/testigo
compuesto nº 1 (%) (%)
0 \mug/ml (Control) 2,4 1 6,9 1
0,1 \mug/ml 8,5 3,5 2,8 0,4
1 \mug/ml 16 6,6 0,7 0,1
10 \mug/ml 42,5 17,7 0,4 0,06
El ejemplo anterior muestra una correlación neta entre la dosis del compuesto nº 1 ensayado y
- la disminución de células en el estado de mitosis
- el aumento de células en la apoptosis.
Ejemplo 10 Influencia de la acción del compuesto nº 1 sobre las etapas del ciclo celular
El análisis por citometría de flujo permite poner en evidencia un bloqueo en una fase particular del ciclo celular después de tratamiento con un compuesto.
Las células HCT-116 se siembran en placas de 6 pocillos Nunc. El compuesto nº 1 con una concentración de 1 \mug/ml se pone en contacto con las células durante 4 horas, 1 día, 2 días y 3 días antes del análisis.
El análisis se efectúa con ayuda de una prueba de BrDU: (Dolbeare F. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1983, 80, p. 5573-5577). Se tratan las células con la BrDU a 30 \muM durante 30 minutos, y después se someten a tripsinación. Después de fijación de las células en paraformaldehído al 1% durante 16 horas, se digieren éstas en pepsina clorhídrica, y después se lavan con PBS 1X. Se realiza un marcaje inmunológico con un anticuerpo primario anti-BrDU (Becton Dickinson) y un anticuerpo secundario GAM-FITC (Coulter). El DNA se marca a continuación con yoduro de propidio en PBS que contiene 1 mg/ml de suspensión de RNAsa. Este método permite contabilizar las células en fase G1, S y G2M.
Estudio por citometría de flujo de modificaciones del ciclo celular inducidas por el compuesto nº 1 sobre la línea HCT-116
Tiempo de contacto Células en fase G1 Células en fase S Células en fase G2-M
HCT-116 (%) (%) (%)
4 h 70,8 16,7 10,8
Células no tratadas 24 h 65,6 19,3 13,8
48 h 65,0 19,9 13,5
72 h 65,8 20,1 12,8
4 h 62,2 20,1 16,4
\begin{minipage}{36mm} Células tratadas (1 \mu g/ml del compuesto n^{o} 1) \end{minipage} 24 h 26,8 39,5 31,4
48 h 7,9 30,9 58,9
72 h 7,8 5,1 82,4
En las células no tratadas, la proporción de células en transición G2/M es del orden de 10 a 14% mientras que en las células previamente puestas en contacto con el compuesto nº 1, esa tasa aumenta hasta alcanzar más del 80% al cabo de 72 horas. Así, en este experimento, casi todas las células se paran en la fase G2/M por la acción del compuesto nº 1.

Claims (14)

1. Un compuesto de la fórmula (I):
8
en la que R5 se selecciona entre los grupos 3-piridinilo, 5-pirimidinilo, -CONH-alquilo C_{1}-C_{4}, -NHCO-alquilo C_{1}-C_{4}, CO_{2}R donde R puede ser hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4}, -SO_{2}NH_{2}, NO_{2}, CF_{3},
9
en la que Ar se selecciona entre los grupos 5-imidazolilo, 2-pirrolilo eventualmente sustituidos con un radical alquilo C_{1}-C_{4}, 2-furilo, o 2-tiazolilo, bajo la forma E, Z o una mezcla de las dos formas de isómeros.
2. El compuesto según la reivindicación 1, caracterizado porque R5 es un grupo 3-piridinilo o -CONH-metilo o -NHCO-metilo.
3. El compuesto según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque Ar es un grupo 5-imidazolilo o un 5-(4-metil-imidazolilo) o un 2-pirrolilo.
4. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque se selecciona entre:
3-(imidazol-4-metilidenil)-5-(piridin-3-il)-indolin-2-ona,
3-(pirrol-2-metilidenil)-5-(piridin-3-il)-indolin-2-ona,
3-(imidazol-4-metilidenil)-5-N-metilcarboxamido-indolin-2-ona,
3-(imidazol-4-metilidenil)-5-acetilamino-indolin-2-ona.
5. Un procedimiento de preparación de los compuestos de la fórmula (I), caracterizado porque el compuesto de la fórmula (II):
10
en la que R5 es un grupo seleccionado entre 3-piridinilo, 5-pirimidinilo, -CONH-alquilo C_{1}-C_{4}, -NHCO-alquilo C_{1}-C_{4}, -CO_{2}R donde R puede ser hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4}, -SO_{2}NH_{2}, _{-}NO_{2}, -CF_{3},
11
se somete a una reacción con un compuesto de la fórmula (III):
12
en la que Ar se selecciona entre los grupos 5-imidazolilo, 2-pirrolilo eventualmente sustituidos con un radical alquilo C_{1}-C_{4}, 2-furilo, o 2-tiazolilo.
6. El procedimiento según la reivindicación 5, caracterizado porque la reacción se efectúa en presencia de piperidina y etanol a reflujo.
7. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para su aplicación como medicamento.
8. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende en un medio farmacéuticamente aceptable, un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.
9. Un medicamento caracterizado porque contiene al menos un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para el tratamiento de las enfermedades asociadas a una desrregulación de un complejo enzimático responsable de la transición G2/M en el ciclo celular.
10. El medicamento según la reivindicación 9, para su aplicación terapéutica en el tratamiento de los tumores primarios y secundarios de los cánceres.
11. El medicamento según la reivindicación 9, para su aplicación terapéutica en el tratamiento del cáncer por la acción inhibidora sobre las quinasas dependientes de las ciclinas (CDK).
12. El medicamento según la reivindicación 9, para su aplicación terapéutica en el tratamiento del cáncer por la acción inhibidora sobre la CDK-1.
13. La utilización de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento del cáncer.
14. La utilización de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento del cáncer en combinación con un tratamiento por quimioterapia, radioterapia o un tratamiento anti-angiogénico.
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