ES2222517T3 - Analogos de iludina utiles como agentes antitumorales. - Google Patents

Analogos de iludina utiles como agentes antitumorales.

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ES2222517T3
ES2222517T3 ES97932586T ES97932586T ES2222517T3 ES 2222517 T3 ES2222517 T3 ES 2222517T3 ES 97932586 T ES97932586 T ES 97932586T ES 97932586 T ES97932586 T ES 97932586T ES 2222517 T3 ES2222517 T3 ES 2222517T3
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Abstract

LA PRESENTE INVENCION SUMINISTRA ANALOGOS DE ILUDINA DE FORMULA GENERAL (I), DONDE R 1 ES (CH 2 ) N - X Y O H; N ESTA ENTRE 0 Y 4; X ES O O S O N O NO ES NADA; Y ES UN ALQUILO(C 1-8 ) OPCIONALMENTE SUSTITUIDO, UN ARILO(C 610 ), UN ARILO(C 6-10 )ALQUILO(C 1-4 ) O UN ALQUILO ( C 3-6 ) CICLICO QUE COMPRENDE OPCIONALMENTE UNO O MAS HETEROATOMOS, UN MONOSACARIDO, UN RESIDUO DE AMINOACIDO, O H CUANDO N ESTA ENTRE 2 Y 4; R 2 NO ESTA PRESENTE; O R 1 Y R2 JUNTOS COMPRENDEN UN CICLO DE 5 A 7 MIEMBROS; R 3 ES ALQUILO(C 1-4 ) O H; R 4 ES H, SCH 2 CO 2 (ALQUILO (C 1-4 )), O - ARILO(C 5-12 ) O - S -ARILO(C SUB,5-12 ); R 5 ES H, OH O NO ES NADA; R 6 ES ALQUILO(C 1-4 ) O NO ES NADA; R 7 ES OH O OSI(ALQUILO(C SUB ,1-4 ) 3 , O R 6 Y R 7 SON CONJUNTAMENTE ETILENDIOXI; R 8 ES UN ALQUILO (C 1-4 ) OPCIONALMENTE SUSTIT UIDO; Y LOS ENLACES REPRESENTADOS POR -------- ESTAN PRESENTES INDIVIDUALMENTE O AUSENTES. LA PRESENTE INVENCION TAMBIEN SUMINISTRA DIMEROS QUE COMPRENDEN DICHOS ANALOGOS REPRESENTADOS POR LA FORMULA (I).

Description

Análogos de iludina útiles como agentes antitumorales.
Fundamentos de la invención
Una lista de cánceres humanos para los que la quimioterapia ha ejercido un papel predominante en el aumento de la duración de la vida, aproximándose a la esperanza de vida normal, incluye el linfoma de Burkitt, la leucemia linfocítica aguda y la enfermedad de Hodkin, junto con alrededor de otros 10-15 tipos de tumores. Por ejemplo, véase A. Golden et al., Eur. J. Cancer, 17, 129 (1981) (Tabla 1). Aunque la tasa de curación de estos cánceres ilustra el nivel de éxito de los sistemas de cribado en seleccionar los agentes antitumorales que son eficaces en el hombre, estos tumores sensibles representan sólo una pequeña fracción de los diversos tipos de cáncer, y, notablemente, hay relativamente pocos fármacos muy activos contra los tumores sólidos clínicos. Tales fármacos incluyen la ciclofosfamida, adriamicina, 5-FU, hexametilmelamina y similares. Así, los pacientes con muchos tipos de malignidades permanecen en un riesgo significativo de recaída y mortalidad.
Después de una recaída, algunos pacientes pueden ser reinducidos a remisión con su régimen de tratamiento inicial. Sin embargo, se requieren frecuentemente dosis más altas del agente quimioterapéutico inicial, o el uso de agentes adicionales, lo que indica el desarrollo de una resistencia al fármaco al menos parcial. Pruebas recientes indican que la resistencia a los fármacos puede desarrollarse simultáneamente frente a varios agentes, incluyendo unos a los que el paciente no fue expuesto. El desarrollo de tumores resistentes a fármacos múltiples (rfm) puede ser función de la masa tumoral, y constituye una causa principal del fracaso del tratamiento. Para vencer esta resistencia a los fármacos, se puede emplear quimioterapia de altas dosis, con o sin radiación, y transplante de médula ósea alogénico o autólogo. La quimioterapia de altas dosis puede emplear el(los) fármaco(s) originales, o se puede cambiar para incluir agentes adicionales. Se requiere el desarrollo de nuevos fármacos con resistencia no cruzada con fenotipos rfm para promover el potencial curativo de los regímenes actuales y para facilitar las intervenciones curativas en pacientes previamente tratados.
Recientemente, la actividad anti-tumoral in vitro de una nueva clase de productos naturales llamados iludinas fue examinada por Kelner, M. et al., Cancer Res., 47, 3186 (1987). La iludina M fue purificada y fue sometida a evaluación en el programa de cribado de fármacos in vivo de la National Cancer Institute Division of Cancer Treatment (NCI DCT). La iludina M aumentó significativamente la duración de la vida de ratas con leucemia de Dunning, pero tuvo un bajo índice terapéutico en sistemas tumorales sólidos. La extrema toxicidad de las iludinas ha impedido cualquier aplicación en la terapia de tumores humanos. Recientemente, se han desarrollado análogos sintéticos de las iludinas que exhiben una actividad antitumoral prometedora, que se incluyen en las Patentes U.S. Nos. 5.439.936 y 5.523.490, y en McMorris et al. Experientia 52 (1996) 75-80. También se han desarrollado métodos para inhibir el crecimiento de células tumorales que usan análogos de la iludina, p. ej., como se describe en los documentos WO 91/04754, WO 94/18151 y en la Patente US Nº 5.439.942.
Sin embargo, existe una continua necesidad de agentes quimioterapéuticos que inhiban el crecimiento tumoral, especialmente el crecimiento de tumores sólidos, y que tengan un índice terapéutico adecuado para ser eficaces para el tratamiento in vivo.
Sumario de la invención
La presente invención proporciona unos análogos de la iludina de la fórmula general (I):
1
en la que R_{1} es (CH_{2})_{n}-(X)-(Y); n es 0-4, X es O ó S ó NH, e Y es CH_{2}OC(O)-alquilo(C_{1}-C_{4}), alquilo(C_{1}-C_{8}) sustituido opcionalmente con 2 OH ó 1-2 halo (Cl, Br, I o F); un monosacárido, preferiblemente fructosa; CH_{2}C(O)-O-(CH_{2})_{2}-O-C(O)CH_{2}SH, (CH_{2})_{2}-O-(CH_{2})_{2}W, en el que W es halo; alquilo(C_{1}-C_{8})-O-alquilo (C_{1}-C_{8}); arilo(C_{6}-C_{10}), arilo(C_{6}-C_{10})alquilo(C_{1}-C_{4}) ó C(O)O-arilo(C_{6}-C_{10}), en el que el resto de arilo está sustituido opcionalmente con 1-2 OH, halo, alquilo(C_{1}-C_{4}) ó O-alquilo(C_{1}-C_{4}); CH_{2}CO_{2}-alquilo(C_{1}-C_{4}), CH_{2}CO_{2}H, Si(alquilo(C_{1}-C_{4}))_{3}, un residuo de aminoácido, preferiblemente alanilo; ó H, con la condición de que cuando Y es H, n es 2-4;
R_{3} es H o alquilo(C_{1}-C_{4});
R_{4} es H, SCH_{2}CO_{2}-alquilo(C_{1}-C_{4}), O-arilo(C_{5}-C_{12}) o S-arilo(C_{5}-C_{12}) donde el arilo está sustituido opcionalmente con halo, OH ó alquilo(C_{1}-C_{4});
R_{5} es H, OH o está ausente;
R_{6} es alquilo(C_{1}-C_{4}) ó H; y
R_{7} es OH ó OSi(alquilo(C_{1}-C_{4}))_{3}; o
R_{6} y R_{7}, juntos, son etilendioxi;
R_{8} es alquilo(C_{1}-C_{4}), sustituido opcionalmente con OH o halo;
El enlace representado por - - - está presente o ausente; y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Estos compuestos son útiles como agentes antineoplásicos, es decir, que inhiben el crecimiento de células tumorales in vitro o in vivo, en húespedes mamíferos, tales como seres humanos o animales domésticos, y son particularmente eficaces contra tumores sólidos y tumores resistentes a fármacos múltiples.
Así, la presente invención proporciona un método terapéutico para tratar el cáncer, es decir, para inhibir el crecimiento de células tumorales in vitro, o, preferiblemente, in vivo, por administración a un mamífero, tal como un paciente humano de cáncer, de una cantidad de un compuesto de fórmula I eficaz para inhibir el crecimiento de dichas células cancerosas, es decir, células tumorales. Los presentes compuestos pueden ser particularmente útiles para el tratamiento de tumores sólidos, para los que están disponibles relativamente pocos tratamientos. Tales tumores incluyen tumores epidermoides y mieloides, agudos (LMA) o crónicos (LMC), así como carcinomas de pulmón, ovario, mama y colon. Los presentes compuestos también pueden ser útiles contra tumores endometriales, cáncer de vejiga, cáncer pancreático, linfoma, enfermedad de Hodkin, cáncer de próstata, sarcomas y cáncer testicular, así como contra tumores del sistema nervioso central, tales como tumores cerebrales, neuroblastomas, y cánceres de células hematopoyéticas, tales como leucemia /linfomas de células B, mielomas, leucemia/linfomas de células T, y leucemia/linfomas de células pequeñas. Estos leucemia/linfomas pueden ser bien agudos (LLA) o bien crónicos (LLC).
Los presentes compuestos también pueden ser dirigidos hacia un tumor particular, uniendo el compuesto a un reactivo que es capaz de unirse a un antígeno asociado a un tumor. El antígeno puede estar localizado en un tumor o en el área de las células tumorales. Los reactivos adecuados incluyen anticuerpos policlonales y monoclonales. El complejo compuesto-reactivo puede comprender además un agente enlazante para unir el compuesto al reactivo.
La presente invención proporciona también composiciones farmaceúticas, tales como formas farmaceúticas de dosificación unitaria, que comprenden una cantidad antineoplásica eficaz de uno o más de los presentes análogos de la iludina en combinación con un excipiente farmacéuticamente aceptable.
Como se usa en la presente memoria, con respecto al presente método, el término "inhibir" significa, bien disminuir la velocidad de crecimiento de las células tumorales respecto a la velocidad que se produciría sin tratamiento, o bien causar que la masa de las células tumorales disminuya de tamaño. Inhibir también incluye causar una regresión completa del tumor. Así, los presentes análogos pueden ser bien citostáticos o bien citotóxicos para las células tumorales.
El paciente puede ser cualquier mamífero que tenga un cáncer susceptible, es decir, una población de células malignas o tumor. Los análogos son eficaces en tumores humanos in vivo, así como en líneas celulares tumorales humanas in vitro.
Breve descripción de los dibujos
La Figura 1 es un dibujo esquemático de los compuestos representativos de la invención.
Descripción detallada de la invención
La presente invención proporciona análogos de la iludina de la fórmula general (I)
2
en la que R_{1} es (CH_{2})_{n}-(X)-(Y); n es 0-4, X es O ó S ó NH, e Y es CH_{2}OC(O)-alquilo(C_{1}-C_{4}), alquilo(C_{1}-C_{8}) sustituido opcionalmente con 2 OH ó 1-2 halo; un monosacárido, preferiblemente fructosa, CH_{2}C(O)-O-(CH_{2})_{2}-O-C(O)CH_{2}SH, (CH_{2})_{2}-O-(CH_{2})_{2}W, donde W es halo; alquilo(C_{1}-C_{8})-O-alquilo (C_{1}-C_{8}), preferiblemente alquilo(C_{1}-C_{4})-O-alquilo(C_{1}-C_{4}); arilo(C_{6}-C_{10}), arilo(C_{6}-C_{10})alquilo(C_{1}-C_{4}) ó C(O)O-arilo(C_{6}-C_{10}), en el que el resto de arilo está sustituido opcionalmente con 1-2 OH, halo, alquilo(C_{1}-C_{4}) ó O-alquilo(C_{1}-C_{4}); CH_{2}CO_{2}-alquilo(C_{1}-C_{4}), CH_{2}CO_{2}H, Si(alquilo(C_{1}-C_{4}))_{3}, un residuo de aminoácido, preferiblemente alanilo; o H, con la condición de que cuando Y es H, n es 2-4;
R_{3} es H o alquilo(C_{1}-C_{4});
R_{4} es H, SCH_{2}CO_{2}-alquilo(C_{1}-C_{4}), O-arilo(C_{5}-C_{12}) o S-arilo(C_{5}-C_{12}) donde el arilo está sustituido opcionalmente con halo, OH ó alquilo(C_{1}-C_{4});
R_{5} es H, OH o está ausente;
R_{6} es alquilo(C_{1}-C_{4}) o H; y
R_{7} es OH ó O(Si(alquilo(C_{1}-C_{4}))_{3}; o
R_{6} y R_{7}, juntos, son etilendioxi;
R_{8} es alquilo(C_{1}-C_{4}), sustituido opcionalmente con OH o halo; y
el enlace representado por - - - está presente o ausente.
En una realización particularmente preferida, R_{1} es (CH_{2})_{n}-X-Y, donde n es 1, X es O ó S, e Y es alquilo(C_{1}-C_{8}) sustituido opcionalmente con 2 OH ó 1-2 halo, ó -C(CH_{3})_{2}O-alquilo(C_{1}-C_{4}); donde, preferiblemente, R_{5} está ausente; R_{3}, R_{6} y R_{8} son CH_{3}; R_{4} es H; y R_{7} es OH.
Como se usa en la presente memoria, el término "alquilo" incluye grupos alquílicos ramificados o de cadena lineal.
Como se usa en la presente memoria, el término "monosacáridos" incluye compuestos que comprenden hasta 8 carbonos, preferiblemente hasta 6 carbonos. El término incluye glucosa, fructosa y ribosa, así como desoxiazúcares tales como desoxirribosa y similares.
Los compuestos mostrados en la Figura 1 son representativos de la presente invención.
Los compuestos de la presente invención pueden ser derivados de la iludina S, 6-hidroximetilacilfulveno (HMAF, es decir, el compuesto de fórmula (I) en la que R_{1} es CH_{2}OH, R_{3} es CH_{3}, R_{4} es H, R_{5} está ausente, R_{6} es CH_{3}, R_{7} es OH y R_{8} es CH_{3}), y fulveno (es decir, un compuesto de fórmula (I) en la que R_{1} es H, R_{2} está ausente, R_{3} es CH_{3}, R_{4} es H, R_{5} está ausente, R_{6} es CH_{3}, R_{7} es OH y R_{8} es CH_{3}), las síntesis de los cuales se conocen en la técnica (véanse, p. ej., los documentos WO 91/04754, WO 94/18151).
Los siguientes compuestos de fórmula (I) donde X es S u O, se pueden preparar añadiendo el reactivo apropiado a una disolución ácida de HMAF, a no ser que se indique de otra manera.
Donde Y es alquilo(C_{1}-C_{8}), se usa un éter alquílico. Por ejemplo, el compuesto (16) (donde Y es etilo) fue preparado usando éter etílico. Donde Y es alquilo(C_{1}-C_{8}) sustituido con 2 OH ó 1-2 halógeno, se añadió el alcohol o tiol apropiado, halogenado donde se requirió. Por ejemplo, para los compuestos (19) y (20), donde X es O e Y es 2,3 dihidroxipropilo y 2-bromoetilo, se usaron glicerol y 2-bromoetanol respectivamente. Los compuestos en los que Y es CH_{2}OC(O)alquilo(C_{1}-C_{4}), se preparan haciendo reaccionar compuestos en los que R_{1} es (CH_{2})_{n}OCH_{2}OH con alquilo(C_{1}-C_{4})C(O)Cl en presencia de una base. El compuesto (53) fue formado como subproducto en la síntesis del compuesto (20). Para el compuesto (32), donde X es S e Y es 2,3 dihidroxipropilo, se empleó tioglicerol como reactivo.
Se usa el sacárido apropiado para sintetizar los compuestos de fórmula (I) donde Y es un monosacárido. Por ejemplo, el compuesto (18) fue preparado usando fructosa.
Donde Y es CH_{2}C(O)-O(CH_{2})_{2}-O-C(O)CH_{2}SH, es decir, el compuesto (51), se emplea una cantidad controlada de dimercaptoacetato de glicol como reactivo.
Donde Y es (CH_{2})_{2}-(O)-(CH_{2})_{2}W, en el que W es halo, se usa el alcohol halogenado apropiado. Por ejemplo, el compuesto (53) se obtuvo añadiendo 2-bromoetanol.
Los compuestos de fórmula (I) donde Y es alquilo(C_{1}-C_{8})-O-alquilo(C_{1}-C_{8}), donde el alquilo(C_{1}-C_{8}) es un alquilo de cadena lineal, se pueden preparar usando un método análogo al usado para preparar el compuesto (53). Donde el alquilo(C_{1}-C_{8}) es ramificado, el producto deseado se puede obtener por la adición de un alqueno apropiado a HMAF junto con una cantidad catalítica de POCl_{3}. Por ejemplo, el compuesto (21), donde Y es 2-metoxi-2-propilo, fue preparado añadiendo 2-metoxipropeno a HMAF.
Donde Y es arilo(C_{6}-C_{10}) o arilo(C_{6}-C_{10})alquilo(C_{1}-C_{4}), los compuestos se pueden preparar usando un tioaril- o arilmercaptano como reactivo. Por ejemplo, el compuesto (23), donde Y es (C_{6}-C_{4})OH, se preparó añadiendo 4-hidroxitiofenol. El compuesto (24) se preparó añadiendo bencilmercaptano a una disolución ácida de HMAF. El compuesto (26), donde X es S e Y es 4-metilbenceno, se preparó añadiendo p-tiocresol a una disolución ácida de HMAF. El compuesto (48), donde Y es 4-metilbenceno y R_{4} es tiocresol, se obtuvo como subproducto cuando se usó p-tiocresol limitado para preparar el compuesto (26). Los compuesto (49) y (50), donde n=0, X es S, Y es 4-metilbenceno y R_{4} es H o tiocresol, respectivamente, se prepararon añadiendo p-tiocresol a una disolución ácida de acilfulveno. Los compuestos donde Y es C(O)O-arilo(C_{6}-C_{10}) se pueden preparar añadiendo el cloroformiato de arilo apropiado a una disolución básica de HMAF. Por ejemplo, el compuesto (27), donde Y es fenilacetato, se preparó añadiendo cloroformiato de fenilo y piridina a una disolución de HMAF.
Los compuestos donde Y es CH_{2}CO_{2}-alquilo(C_{1}-C_{4}) y X es S se pueden preparar añadiendo el tiol apropiado a una disolución ácida de HMAF. Por ejemplo, el compuesto (25), donde Y es CH_{2}CO_{2}Me y R_{4} y R_{5} son H, se preparó añadiendo tioglicolato de metilo a una disolución ácida de HMAF en acetona.
Los compuestos (30) y (31), donde Y es CH_{2}CO_{2}Me, R_{4} es CH_{2}CO_{2}Me y R_{5} es H y OH, respectivamente, se prepararon añadiendo tioglicolato de metilo a una disolución neutra de HMAF en acetona y THF.
Los compuestos donde Y es CH_{2}CO_{2}H se pueden preparar por hidrólisis de los correspondientes ésteres. Por ejemplo, el compuesto (29) se preparó como subproducto en la síntesis del compuesto (25) descrito anteriormente. Las sales de metales alcalinos, de metales alcalinotérreos y de amina del grupo CO_{2}H también están dentro del alcance de la invención.
Donde Y es Si(alquilo(C_{1}-C_{4}))_{3}, se añade el reactivo silanante apropiado a una disolución de HMAF e imidazol. Por ejemplo, los compuestos (43) y (44), donde R_{1} es trietilsiloxilo y R_{7} es OH o trietilsiloxilo, respectivamente, se obtuvieron ambos cuando se añadió cloruro de trietilsililo a una disolución de HMAF e imidazol en DMF.
Donde Y es un residuo de aminoácido, por ejemplo, glicilo o alanilo, se puede usar el tiol apropiado que contenga el aminoácido análogo, tal como cisteína y análogos suyos. Por ejemplo, el compuesto (37), donde Y es glicilo, se preparó añadiendo cisteína a una disolución ácida de HMAF.
Los compuestos donde X es O, Y es H y n es 2-4 se pueden obtener por reducción del correspondiente aldehído o ácido con un agente reductor apropiado. Por ejemplo, el compuesto (9) se obtuvo por reducción del correspondiente compuesto aldehído con cianoborohidruro sódico y ácido acético.
Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen, donde sea aplicable, sales tales como sales de adición de aminoácido y los mono-, di- y trifosfatos de los grupos hidroxilo libres. Las sales de amina incluyen sales de ácidos inorgánicos y orgánicos, que incluyen hidrocloruros, sulfatos, fosfatos, citratos, tartratos, malatos, maleatos, bicarbonatos, y similares. Las sales de metales alcalinos, de amina o de amonio se pueden formar haciendo reaccionar los grupos hidroxiarilo con hidróxidos metálicos, aminas o amonio.
Los compuestos de la presente invención se pueden formular como composiciones farmacéuticas y administrar a un huésped mamífero, tal como un paciente humano de cáncer, en diversas formas, adaptadas a la ruta de administración elegida, es decir, por vía oral o parenteral, por rutas intravenosas, intraperitoneales, intramusculares o subcutáneas.
Así, los presentes compuestos se pueden administrar por vía oral, por ejemplo, en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable, tal como un diluyente inerte o un excipiente comestible asimilable. Se pueden encerrar en cápsulas de gelatina de cubierta dura o blanda, se pueden comprimir en comprimidos, o se pueden incorporar directamente en la comida de la dieta del paciente. Para administración terapéutica oral, el compuesto activo se puede combinar con uno o más excipientes y usar en forma de comprimidos ingeribles, comprimidos bucales, pastillas, cápsulas, elixires, suspensiones, jarabes, obleas, y similares. Tales composiciones y preparaciones deben contener al menos 0,1% de compuesto activo. El porcentaje de las composiciones y preparaciones puede, por supuesto, variarse, y puede estar, de manera conveniente, entre 2 y alrededor de 60% del peso de una forma de dosificación unitaria dada. La cantidad de compuesto activo en tales composiciones terapéuticamente útiles es tal que se obtendrá un nivel de dosificación eficaz.
Los comprimidos, pastillas, píldoras, cápsulas y similares pueden contener también lo siguiente: un agente aglutinante, tal como goma tragacanto, acacia, almidón de maíz o gelatina; excipientes, tales como fosfato dicálcico; un agente desintegrador, tal como almidón de maíz, almidón de patata, ácido algínico y similares; un lubricante, tal como estearato de magnesio; y un agente edulcorante, tal como sacarosa, lactosa, o sacarina, o se puede añadir un agente aromatizante, tal como hierbabuena, aceite de gualteria o aroma de cereza. Cuando la forma de dosificación unitaria es una cápsula, puede contener, además de los materiales de los tipos anteriores, un excipiente líquido, tal como un aceite vegetal o un polietilenglicol. Pueden estar presentes diversos otros materiales, como revestimientos o que modifiquen de otra manera la forma física de la forma de dosificación unitaria sólida. Por ejemplo, los comprimidos, pastillas o cápsulas se pueden revestir con gelatina, cera, goma laca o azúcar y similares. Un jarabe o elixir puede contener el compuesto activo, sacarosa como agente edulcorante, metil- y propilparabenos como conservantes, un colorante y un aromatizante, tal como aroma de cereza o naranja. Por supuesto, cualquier material usado en la preparación de cualquier forma de dosificación unitaria debe ser farmacéuticamente aceptable y sustancialmente no tóxico en la cantidad empleada. Además, el compuesto activo se puede incorporar en preparaciones y dispositivos de liberación sostenida.
El compuesto activo también se puede administrar de manera intravenosa o intraperitoneal por infusión o inyección. Las disoluciones del compuesto activo se pueden preparar en agua, mezclado opcionalmente con un tensioactivo no tóxico. Las dispersiones también se pueden preparar en glicerol, polietilenglicoles líquidos, triacetina, y mezclas de ellos, y en aceites. Bajo las condiciones normales de almacenamiento y uso, estas preparaciones contienen un conservante para impedir el crecimiento de microorganismos.
Las formas farmacéuticas de dosificación adecuadas para el uso en inyección o infusión pueden incluir disoluciones o dispersiones acuosas estériles, o polvos estériles que comprenden el ingrediente activo, los cuales están adaptados para la preparación extemporánea de disoluciones o dispersiones estériles inyectables o infundibles. En todos los casos, la forma última de dosificación unitaria debe ser estéril, fluida y estable bajo las condiciones de fabricación y almacenamiento. El excipiente o vehículo líquido puede ser un disolvente o un medio de dispersión líquido que comprende, por ejemplo, agua, etanol, un poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol, polietilenglicoles líquidos, y similares), aceites vegetales, ésteres glicerílicos no tóxicos, y mezclas adecuadas de ellos. La fluidez apropiada se puede mantener, por ejemplo, por la formación de liposomas, por el mantenimiento del tamaño de partículas requerido, en el caso de la dispersión, o por el uso de tensioactivos. La prevención de la acción de microorganismos puede ser efectuada por diversos agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico, timerosal, y similares. En muchos casos, será preferible incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, tampones o cloruro sódico. La absorción prolongada de las composiciones inyectables puede ser causada por el uso en las composiciones de agentes que retrasen la absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina. Las disoluciones inyectables estériles se preparan incorporando el compuesto activo, en la cantidad requerida, en el disolvente apropiado, con varios de los otros ingredientes enumerados anteriormente, como se requiera, seguido de esterilización con filtro. En el caso de polvos estériles para la preparación de disoluciones inyectables estériles, los métodos preferidos de preparación son las técnicas de secado a vacío y secado por congelación, que dan un polvo del ingrediente activo mas cualquier ingrediente deseado adicional presente en las disoluciones previamente esterilizadas por filtración.
Las dosificaciones útiles de los compuestos de la Figura (I) se pueden determinar correlacionando su actividad in vitro, y la actividad in vivo en modelos de animales, tales como modelos de múridos o perros, como se enseña para los análogos de la iludina tales como los de las Patentes U.S. Nos. 5.439.936 y 5.523.490, con la actividad en mamíferos superiores, tales como seres humanos infantiles y adultos, como se enseña, p. ej., en Borch et al. (Patente U.S. Nº 4.938.949).
La cantidad terapéuticamente eficaz del análogo varía necesariamente con el paciente y el tumor a ser tratado. Sin embargo, se ha encontrado que se pueden administrar dosis relativamente altas de los análogos debido a su menor toxicidad, comparada con la de las iludinas S y M. Una cantidad terapéutica entre 30 y 112.000 \mug por kg de peso corporal es especialmente eficaz para la administración intravenosa, mientras que es eficaz de 300 a 112.000 \mug por kg de peso corporal si se administra de manera intraperitoneal. Como un experto en la técnica reconocería, la cantidad se puede variar dependiendo del método de administración.
La invención será descrita adicionalmente con referencia a los siguientes ejemplos detallados.
Ejemplos Ejemplo 1 Síntesis de los análogos de la iludina
General
Los puntos de fusión no están corregidos. Los espectros de RMN de ^{1}H y ^{13}C se midieron a 300 y 75 MHz. Los espectros de masas de alta resolución se determinaron en el University of Minnesota Mass Spectrometry Service Laboratory. Todas las cromatografías usaron gel de sílice (Davisil malla 230-425, Fisher Scientific) y el disolvente fue acetato de etilo y hexanos, excepto los que se mencionan de manera específica. La CCF analítica se llevó a cabo en placas de gel de sílice Whatman 4420 222. Las reacciones fueron controladas de manera rutinaria por CCF.
Síntesis de la iludina S, hidroximetilacilfulveno (el HMAF y el fulveno se conocen en la técnica (véanse, p. ej., los documentos WO 91/04754, WO 94/18151).
Compuesto 23
A la disolución de 170 mg de HMAF (PM 246, 0,691 mmol) en 15 ml de acetona y disolución de H_{2}SO_{4} 1 M (1:1) se le añadieron 63 mg de 4-hidroxitiofenol (PM 126, 0,5 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante dos horas y se repartió entre acetato de etilo y agua. Los extractos orgánicos se lavaron con NaHCO_{3} saturado y suero salino respectivamente hasta neutralidad. Después de ser secada con MgSO_{4}, la disolución se concentró y se cromatografió para dar 128 mg de (23) (72,3%) como una goma amarilla: IR (KBr) 3360, 2974, 1646, 1592, 1588, 1495 cm^{-1}; RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 0,75 (m, 1H), 1,09 (m, 1H), 1,38 (m, 1H), 1,42 (s, 3H), 1,52 (m, 1H), 1,70 (s, 3H), 2,14 (s, 1H), 3,96 (q, J_{AB}= 13,2 Hz, 2H), 6,77 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,07 (s, 1H), 7,20 (d, J = 8,4 Hz, 1H); RMN ^{13}C (CDCl_{3}) \delta 197,9, 159,6, 156,7, 142,4, 138,2, 136,0, 135,9, 132,9, 131,5, 125,8, 123,6, 116,1, 115,9, 76,2, 37,6, 34,2, 27,8, 16,3, 14,2, 12,5, 9,5; EM (espectroscopía de masas) m/z 354 (M^{+}), 298, 270, 229; EMAR (espectroscopía de masas de alta resolución) para el C_{21}H_{22}O_{3}S, calculado 354,1296, encontrado 354,1286; UV \lambdamax (metanol) 332 nm (\varepsilon 7844).
Compuesto 24
A la disolución de 117 mg de HMAF (PM 246, 0,475 mmol) en 15 ml de acetona y disolución de H_{2}SO_{4} 1 M (1:1) se le añadieron 46 mg de benzilmercaptano (PM 124, 0,371 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante toda una noche y se repartió entre acetato de etilo y agua. Los extractos orgánicos se lavaron con NaHCO_{3} y suero salino respectivamente hasta neutralidad. Después de ser secada con MgSO_{4}, la disolución se concentró y cromatografió para dar 100 mg de (24) (76,6%) como una goma amarilla: IR (KBr) 3451, 2980, 1659, 1598, 1496, 1097 cm^{-1}; RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 0,64 (m, 1H), 1,02 (m, 1H), 1,29 (m, 1H), 1,33 (s, 3H), 1,46 (m, 1H), 1,91 (s, 3H), 1,98 (s, 3H), 3,62 (s, 2H), 3,71 (s, 2H), 7,06 (s, 1H), 7,29 (m, 5H); RMN ^{13}C (CDCl_{3}) \delta 197,2, 159,5, 141,8, 138,4, 137,8, 134,9, 130,1, 128,7, 128,3, 126,9, 126,0, 75,9, 37,5, 36,8, 28,6, 27,5, 15,7, 14,1, 12,8, 9,3; EM m/z 352 (M^{+}), 294, 229; EMAR para el C_{22}H_{24}O_{2}S, calculado 352,1497, encontrado 352,1488; UV \lambdamax (metanol) 332 nm (\varepsilon 8431).
Compuestos 25 y 29
A la disolución de 166 mg de HMAF (PM 246, 0,675 mmol) en 15 ml de acetona y disolución de H_{2}SO_{4} 1 M (1:1) se le añadieron 51 mg de tioglicolato de metilo (PM 106, 0,481 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante dos horas y se repartió entre acetato de etilo y agua. Los extractos orgánicos se lavaron con NaHCO_{3} saturado y suero salino respectivamente hasta neutralidad. Después de ser secada con MgSO_{4}, la disolución se concentró y se cromatografió para dar 59 mg de (25) (36,7%) y 94 mg de 39 (61,1%). El (25) es una goma amarilla: IR (KBr) 3451, 2944, 1731, 1665, 1592, 1496, 1278 cm^{-1}; RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 0,72 (m, 1H), 1,07 (m, 1H), 1,35 (m, 1H), 1,37 (s, 3H), 1,49 (m, 1H), 2,12 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 3,23 (s, 2H), 3,74 (s, 3H), 3,92 (q, J_{AB}= 12,3 Hz, 2H), 7,09 (s, 1H); RMN ^{13}C (CDCl_{3}) \delta 197,5, 170,7, 159,6, 142,5, 138,3, 134,7, 129,1, 126,5, 76,1, 52,3, 37,6, 33,2, 29,6, 27,5, 16,1, 14,2, 12,9, 9,5; UV \lambdamax (metanol) 334 nm (\varepsilon 8093). El (29) es también una goma amarilla: RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 0,73 (m, 1H), 1,09 (m, 1H), 1,32 (m, 1H), 1,37 (s, 3H), 1,50 (m, 1H), 2,12 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 3,25 (s, 2H), 3,93 (m, 2H), 7,11 (s, 1H); RMN ^{13}C (CDCl_{3}) \delta 197,8, 174,7, 159,8, 142,7, 138,2, 135,1, 129,4, 126,4, 76,1, 37,7, 33,2, 29,6, 27,6, 16,2, 14,3, 12,9, 9,5.
Compuesto 26
A la disolución de 125 mg de HMAF (PM 246, 0,508 mmol) en 20 ml de acetona y disolución de H_{2}SO_{4} 1 M (1:1) se le añadieron 59 mg de p-tiocresol (PM 124, 0,476 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 h y se repartió entre acetato de etilo y agua. Los extractos orgánicos se lavaron con NaHCO_{3} saturado y suero salino respectivamente hasta neutralidad. Después de ser secada con MgSO_{4}, la disolución se concentró y se cromatografió para dar 127 mg de (26) (75,8%) como una goma amarilla: IR (KBr) 3456, 2972, 1663, 1596, 1500, 1092 cm^{-1}; RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 0,71 (m, 1H), 1,07 (m, 1H), 1,32 (m, 1H), 1,28 (s, 3H), 1,50 (m, 1H), 1,82 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 3,97 (s, 1H), 4,04 (q, J_{AB}= 12,9 Hz, 2H), 7,05 (s, 1H), 7,07 (d, q = 8,1 Hz, 2H), 7,23 (d, q = 7,8 Hz, 2H); RMN ^{13}C (CDCl_{3}) \delta 197,3, 159,2, 142,3, 138,4, 137,3, 135,0, 132,2, 131,3, 129,8, 129,5, 126,1, 76,0, 37,5, 33,1, 27,6, 21,0, 16,1, 14,1, 12,6, 9,4; EM m/z 352 (M^{+}), 297, 250, 229; EMAR para el C_{22}H_{24}O_{2}S, calculado 352,1497, encontrado 352,1499; UV \lambdamax (metanol) 333 nm (\varepsilon 6598).
Compuesto 32
A la disolución de 195 mg de HMAF (PM 246, 0,793 mmol) en 10 ml de acetona y disolución de H_{2}SO_{4} 1 M (1:1) se le añadieron 70,2 mg de tioglicerol (PM 92, 0,763 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 20 h y se repartió entre acetato de etilo y agua. Los extractos orgánicos se lavaron con NaHCO_{3} saturado y suero salino respectivamente hasta neutralidad. Después de ser secada con MgSO_{4}, la disolución se concentró y se cromatografió para dar 147 mg de (32) (78,3%) como una goma amarilla: IR (KBr) 3385, 2908, 1658, 1586, 1495, 1284 cm^{-1}; RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 0,72 (m, 1H), 1,09 (m, 1H), 1,26 (m, 1H), 1,36 (s, 3H), 1,49 (m, 1H), 2,10 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 2,65 (m, 3H), 3,81 (m, 5H), 4,03 (s, 1H), 7,10 (s, 1H); RMN ^{13}C (CDCl_{3}) \delta 197,6, 159,6, 141,8, 138,2, 135,1, 130,4, 126,2, 76,1, 70,7, 70,6, 65,2, 37,6, 35,2, 35,1, 29,5, 29,4, 27,6, 16,3, 14,2, 13,1, 9,5; EM m/z 336 (M^{+}), 261, 229, 201; EMAR para el C_{18}H_{24}O_{4}S, calculado 336,1395, encontrado 336,1395; UV \lambdamax (metanol) 332 nm (\varepsilon 6893).
Compuesto 16
A la disolución de 22 mg de HMAF (PM 246, 0,089 mmol) en 3 ml de acetona y disolución de H_{2}SO_{4} 1 M (1:1) se le añadieron 7,5 ml de éter etílico. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 24 h y se repartió entre acetato de etilo y agua. Los extractos orgánicos se lavaron con NaHCO_{3} saturado y suero salino respectivamente hasta neutralidad. Después de ser secada con MgSO_{4}, la disolución se concentró y se cromatografió para dar 17 mg de (16) (80,2%) como una goma amarilla: IR (KBr) 3457, 2968, 1659, 1592, 1502, 1284, 1097 cm^{-1}; RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 0,72 (m, 1H), 1,08 (m, 1H), 1,23 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,33 (m, 1H), 1,38 (s, 3H), 1,48 (m, 1H), 2,11 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 3,53 (q, J = 6,9 Hz, 2H), 3,91 (s, 1H), 4,42 (q, J_{AB}= 10,7 Hz, 2H), 7,10 (s, 1H); RMN ^{13}C (CDCl_{3}) \delta 197,4, 159,5, 142,2, 138,8, 134,3, 130,0, 126,4, 75,8, 65,0, 63,5, 37,2, 27,2, 15,6, 14,8, 13,8, 12,7, 9,0; EM m/z 274 (M^{+}), 261, 228, 200, 185; EMAR para el C_{17}H_{22}O_{3}, calculado 274,1569, encontrado 274,1568; UV \lambdamax (metanol) 330 nm (\varepsilon 7225).
Compuesto 18
A la disolución de 1,5 g de HMAF (PM 246, 6,098 mmol) en 66 ml de acetona y 40 ml de disolución de H_{2}SO_{4} 1 M (1:1) se le añadieron 20 g de fructosa. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante toda una noche y se repartió entre acetato de etilo y agua. Los extractos orgánicos se lavaron con NaHCO_{3} saturado y suero salino respectivamente hasta neutralidad. Después de ser secada con MgSO_{4}, la disolución se concentró y se cromatografió (usando cloruro de metileno y metanol como disolventes) para dar 350 mg de (18) (14,1%, mezcla) como una goma amarilla (con 701 mg de HMAF reciclado): IR (KBr) 3397, 2932, 1659, 1574, 1369, 1085 cm^{-1}; EM m/z 409 (M + H), 307, 229, 203; EMAR para el C_{21}H_{28}O_{8}(M + H), calculado 409,1863, encontrado 409,1869; UV \lambdamax (metanol) 332 nm (\varepsilon 4745).
Compuesto 19
A la disolución de 110 mg de HMAF (PM 246, 0,447 mmol) en 15 ml de acetona y disolución de H_{2}SO_{4} 1 M (1:1) se le añadieron 5 ml de glicerol. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 22 h y se repartió entre acetato de etilo y agua. Los extractos orgánicos se lavaron con NaHCO_{3} saturado y suero salino respectivamente hasta neutralidad. Después de ser secada con MgSO_{4}, la disolución se concentró y se cromatografió (añadir 5% de metanol al sistema disolvente normal) para dar 79 mg de (19) (55,2%) como una goma amarilla (con 40 mg de HMAF reciclado): IR (KBr) 3415, 2926, 1659, 1586, 1103 cm^{-1}; RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 0,72 (m, 1H), 1,08 (m, 1H), 1,26 (m, 1H), 1,37 (s, 3H), 1,50 (m, 1H), 2,10 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 2,57 (s, 1H), 3,58 (m, 4H), 3,86 (m, 1H), 3,91 (s, 1H), 4,51 (q, J_{AB}= 12,9 Hz, 2H), 7,10 (s, 1H); RMN ^{13}C (CDCl_{3}) \delta 198,0, 160,1, 143,2, 138,8, 134,6, 129,4, 126,9, 76,2, 70,9, 70,6, 64,4, 63,8, 37,6, 27,4, 16,1, 14,2, 13,1, 9,4; EM m/z 320 (M^{+}), 277, 228, 185; EMAR para el C_{18}H_{24}O_{5}, calculado 320,1623, encontrado 320,1616; UV \lambdamax (metanol) 331 nm (\varepsilon 7920).
Compuestos 20 y 53
A la disolución de 188 mg de HMAF (PM 246, 0,764 mmol) en 10 ml de acetona y disolución de H_{2}SO_{4} 1 M (1:1) se le añadieron 5 ml de 2-bromoetanol. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4,5 h y se repartió entre acetato de etilo y agua. Los extractos orgánicos se lavaron con NaHCO_{3} saturado y suero salino respectivamente hasta neutralidad. Después de ser secada con MgSO_{4}, la disolución se concentró y se cromatografió para dar 179,2 mg de (20) (66,4%) como una goma amarilla: IR (KBr) 3445, 2914, 1650, 1592, 1502, 1097 cm^{-1}; RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 0,71 (m, 1H), 1,07 (m, 1H), 1,35 (m, 1H), 1,38 (s, 3H), 1,48 (m, 1H), 2,15 (s, 3H), 3,47 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,77 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,91 (s, 1H), 4,54 (q, J_{AB} = 12 Hz, 2H), 7,09 (s, 1H); RMN ^{13}C (CDCl_{3}) \delta 198,1, 160,6, 143,2, 138,9, 134,4, 129,3, 127,0, 76,3, 69,4, 64,1, 37,7, 30,6, 27,6, 16,4, 14,3, 13,2, 9,5; EM m/z 352 (M - H), 326, 228, 285; EMAR para el C_{17}H_{21}BrO_{3} (M - H), calculado 352,0674, encontrado 352,0671; UV \lambdamax (metanol) 332 nm (\varepsilon 7777). El (53) se obtuvo como subproducto, como una goma amarilla: RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 0,72 (m, 1H), 1,05 (m, 1H), 1,32 (m, 1H), 1,37 (s, 3H), 1,50 (m, 1H), 2,13 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 3,46 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 3,65 (m, 4H), 3,79 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 3,90 (s, 1H), 4,51 (q, J_{AB}= 12 Hz, 2H), 7,09 (s, 1H).
Compuesto 21
A la disolución de 260 mg de HMAF (PM 246, 1,057 mmol) en 6 ml de 2-metoxipropeno se le añadieron 2 gotas de POCl_{3}. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 6 días y se repartió entre acetato de etilo y agua. Los extractos orgánicos se lavaron con NaHCO_{3} saturado y suero salino respectivamente hasta neutralidad. Después de ser secada con MgSO_{4}, la disolución se concentró y se cromatografió para dar 133 mg de (21) (39,6%) como una goma amarilla (con 87 mg de HMAF reciclado): IR (KBr) 3457, 2980, 1665, 1598, 1502, 1091 cm^{-1}; RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 0,72 (m, 1H), 1,06 (m, 1H), 1,25 (m, 1H), 1,38 (s, 3H), 1,41 (s, 3H), 1,42 (s, 3H), 1,49 (m, 1H), 2,15 (s, 3H), 3,25 (s, 6H), 3,95 (s, 1H), 4,43 (s, 2H), 7,11 (s, 1H); RMN ^{13}C (CDCl_{3}) \delta 197,7, 159,5, 142,2, 134,9, 134,8, 130,5, 126,7, 100,3, 76,1, 54,4, 48,6, 37,4, 27,5, 24,4, 24,3, 15,9, 14,0, 13,0, 9,3; EM m/z 318 (M^{+}), 260, 229, 185, 73; EMAR para el C_{19}H_{26}O_{4}, calculado 318,1831, encontrado 318,1823; UV \lambdamax (metanol) 330 nm (\varepsilon 8728).
\newpage
Compuestos 30 y 31
A la disolución de 108 mg de HMAF (PM 246, 0,439 mmol) en 40 ml de acetona y THF (1:1) se le añadieron 1,5 ml de tioglicolato de metilo. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 días y se repartió entre acetato de etilo y agua. Los extractos orgánicos se secaron con MgSO_{4}, se concentraron y se cromatografiaron para dar 44 mg de (30) y 20 mg de (31). El (30) es una goma amarilla: RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 0,70 (m, 1H), 1,09 (m, 1H), 1,33 (s, 1H), 1,35 (m, 3H), 1,50 (m, 1H), 2,14 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 3,23 (s, 2H), 3,67 (s, 3H), 3,74 (s, 3H), 3,92 (s, 2H), 4,08 (m, 3H); EM m/z 438 (M^{+}), 424, 333, 315; EMAR para el C_{21}H_{26}O_{6}S_{2}, calculado 438,1172, encontrado 438,1188; UV \lambdamax (metanol) 372 nm (\varepsilon 10760), 243 nm (\varepsilon 14364). El (31) es una goma amarilla clara: RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 0,46 (m, 1H), 0,88 (m, 1H), 1,04 (m, 1H), 1,32 (s, 3H), 1,38 (m, 1H), 1,87 (s, 3H), 2,03 (s, 3H), 3,13 (m, 2H), 3,44 (m, 3H), 3,73 (s, 3H), 3,77 (s, 3H), 4,02 (s, 1H), 4,41 (q, 2H); EM m/z 456 (M^{+}), 425, 351, 333; EMAR para el C_{21}H_{28}O_{7}S_{2}, calculado 456,1277, encontrado 456,1288; UV \lambdamax (metanol) 263 nm (\varepsilon 17264), 204 nm (\varepsilon 8648).
Compuesto 9
A la disolución de 1 g de fulveno (PM 216, 4,63 mmol) en 5 ml de acetona y 2,5 ml de disolución de H_{2}SO_{4} 2 M se le añadieron 2,5 ml de acroleína. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 7 h y se repartió entre acetato de etilo y agua. Los extractos orgánicos se lavaron con NaHCO_{3} saturado y suero salino respectivamente hasta neutralidad. Después de ser secada con MgSO_{4}, la disolución se concentró y se cromatografió para dar 378 mg de compuesto x (30,0%). El compuesto x es un goma amarilla: 0,68 (m, 1H), 1,07 (m, 1H), 1,32 (m, 1H), 1,36 (s, 3H), 1,46 (m, 1H), 2,01 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 2,65 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 3,00 (m, 2H), 3,93 (s, 1H), 7,12 (s, 1H), 9,83 (s, 1H); RMN ^{13}C (CDCl_{3}) \delta 200,4, 196,3, 157,3, 139,4, 138,3, 135,4, 133,7, 125,3, 75,4, 43,5, 36,9, 27,0, 19,5, 15,4, 13,4, 12,4, 8,6; EM m/z 272 (M^{+}), 244, 215, 201; EMAR para el C_{17}H_{20}O_{3} calculado 272,1413, encontrado 272,1416; UV \lambdamax (metanol) 332 nm (\varepsilon 8500). A la disolución de 30 mg de compuesto x (PM 272, 0,110 mmol) en 5 ml de THF se le añadieron 5 gotas de HOAc y algo de cianoborohidruro sódico. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y se repartió entre acetato de etilo y agua. Los extractos orgánicos se lavaron con NH_{4}Cl saturado y suero salino respectivamente hasta neutralidad. Después de ser secada con MgSO_{4}, la disolución se concentró y se cromatografió para dar 21 mg de (9) (69,5%) como una goma amarilla: RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 0,67 (m, 1H), 1,06 (m, 1H), 1,26 (m, 1H), 1,36 (s, 3H), 1,46 (m, 1H), 1,73 (m, 2H), 2,06 (s, 3H), 2,07 (s, 3H), 2,74 (m, 2H), 3,70 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 3,96 (s, 1H), 7,14 (s, 1H); RMN ^{13}C (CDCl_{3}) \delta 197,0, 157,7, 139,6, 139,0, 136,6, 136,5, 128,2, 75,9, 62,0, 37,3, 33,0, 27,5, 24,0, 15,9, 13,8, 12,8, 9,0; EM m/z 274 (M^{+}), 246, 215, 187; EMAR para el C_{17}H_{22}O_{3} calculado 274,1569, encontrado 274,1557; UV \lambdamax (metanol) 330 nm (\varepsilon 6700).
Compuesto 27
A la disolución de 163 mg de HMAF (PM 246, 0,663 mmol) en 10 ml de cloruro de metileno se le añadieron 0,18 ml de piridina y 0,34 ml de cloroformiato de fenilo a 0ºC bajo argón. La mezcla se agitó durante 3 h y se repartió entre acetato de etilo y agua. Los extractos orgánicos se lavaron con suero salino. Después de ser secada con MgSO_{4}, la disolución se concentró y se cromatografió para dar 20 mg de (27) como una goma amarilla: RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 0,85 (m, 1H), 1,18 (m, 1H), 1,43 (m, 1H), 1,52 (s, 3H), 1,61 (m, 1H), 2,12 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 4,04 (s, 1H), 5,06 (q, J_{AB}= 11,1 Hz, 2H), 6,93-7,47 (m,6H).
Compuesto 28
A la disolución de 116 mg de HMAF (PM 246, 0,447 mmol) en 10 ml de dicloruro de metileno se le añadieron 0,10 ml de piridina y 0,25 ml de cloruro de bencilo bajo argón. La mezcla se concentró y se cromatografió para dar 152 mg de (28) (92,1%) como una goma amarilla (con 13 mg de HMAF reciclado): RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 0,65 (m, 1H), 1,02 (m, 1H), 1,18 (m, 1H), 1,32 (s, 3H), 1,44 (m, 1H), 2,03 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 3,86 (s, 1H), 5,28 (q, J_{AB}= 13,2 Hz, 2H), 7,06 (s, 1H).
Compuestos 43 y 44
A la disolución de 340 mg de HMAF (PM 246, 1,38 mmol) y 110 mg de imidazol (PM 68, 1,62 mmol) en 4 ml de DMF se le añadieron 0,7 ml de cloruro de trietilsililo (d 0,898, PM 360, 1,75 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una hora y media. La mezcla se repartió entre éter etílico y NaHCO_{3} saturado. El extracto de éter se lavó después con suero salino y se secó con MgSO_{4}. Después de filtración y concentración, se cromatografió para dar 30 mg de (43) y 41,7 mg de (44). El (43) es una goma amarilla: RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 0,62 (m, 10H), 0,94 (t, J = 7,5 Hz, 6H), 1,06 (m, 1H), 1,34 (m, 1H), 1,38 (s, 3H), 1,47 (m, 1H), 2,12 (s, 3H), 2,18 (s, 3H), 3,92 (s, 1H), 4,63 (q, J_{AB} = 12,6 Hz, 2H), 7,09 (s, 1H). El (44) es también una goma amarilla: RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 0,65 (m, 19H, 0,87 (t, J = 7,8 Hz, 12H)), 1,00 (m, 1H), 1,17 (m, 1H), 1,30 (d, 3H), 1,36 (m, 1H), 2,03 (d, 3H), 2,09 (s, 3H), 4,55 (q, 2H), 6,96 (s, 1H).
Compuesto 48
El 48 se formó como subproducto cuando se usó tiocompuesto limitado para preparar el (26). El (48) es una goma amarilla: RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 0,64 (m, 1H),1,05 (m, 1H), 1,26 (m, 1H), 1,37 (s, 3H), 1,48 (m, 1H), 1,84 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,32 (s, 3H), 4,04 (s, 2H), 6,87-7,27 (m, 8H); EMAR para el C_{28}H_{28}O_{2}S_{2} calculado 460,1532, encontrado 460,1504.
Compuestos 49 y 50
A una disolución de acilfulveno en acetona y disolución de H_{2}SO_{4} 1 M (1:1) se añadió p-tiocresol a temperatura ambiente. La mezcla se agitó durante toda una noche y se repartió entre EtOAc y agua. Los extractos orgánicos se lavaron con NaHCO_{3} saturado y suero salino respectivamente. Después de ser secada con MgSO_{4}, se concentró y se cromatografió para dar (49) y (50) en bajo rendimiento. El (49) es una goma amarilla: RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 0,69 (m, 1H), 0,88 (m, 1H), 1,06 (m, 1H), 1,25 (m, 1H), 1,37 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 3,90 (s, 1H), 6,90-7,30 (m, 5H). El 50 es también una goma amarilla: RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 0,63 (m, 1H), 1,06 (m, 1H), 1,25 (m, 1H), 1,37 (s, 3H), 1,45 (m, 1H), 1,83 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,32 (s, 3H), 4,04 (s, 1H), 6,87-7,30 (m, 8H).
Compuesto 52
A una disolución de HMAF en acetona y H_{2}SO_{4} 1 M (1:1) se añadió dimercaptoacetato de glicol limitado a temperatura ambiente. La mezcla se agitó durante varias horas y se manejó como usualmente para dar el (51) como una goma amarilla: RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 0,72 (m, 1H), 1,09 (m, 1H), 1,35 (m, 1H), 1,36 (s, 3H), 1,50 (m, 1H), 2,12 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 3,28 (t, J = 7,8 Hz, 4H), 3,87 (s, 1H), 3,92 (q, J_{AB}= 13,2 Hz, 2H), 4,36 (s, 4H), 7,08 (s, 1H).
Compuesto 37
A una disolución de HMAF en acetona y disolución de H_{2}SO_{4} 1 M (1:1) se añadió 1 equivalente de cisteína. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante toda una noche. Se introdujo una gran cantidad de EtOAc y la capa acuosa se separó añadiendo MgSO_{4}. También se añadió NaHCO_{3} sólido con el fin de neutralizar el ácido sulfúrico. Después se filtró la disolución, se concentró y se cromatografió para dar (37) como una goma amarilla: RMN ^{1}H (CD_{3}OD) \delta 0,78 (m, 1H), 0,89 (m, 1H), 1,06 (m, 1H), 1,31 (s, 3H), 1,43 (m, 1H), 2,15 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,91-4,02 (m, 8H), 7,04 (s, 1H).
Compuestos 56 y 58
A una disolución de HMAF en acetona y disolución de H_{2}SO_{4} 1 M (1:1) se añadió p-hidroxitiofenol equivalente. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante toda una noche. La mezcla se extrajo con EtOAc. Entonces los extractos orgánicos se lavaron con NaHCO_{3} saturado y suero salino respectivamente. Después de ser secada sobre MgSO_{4}, la disolución se concentró y se cromatografió para dar (56) y (58). El (56) es una goma amarilla: RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 0,70 (m, 1H), 0,89 (m, 1H), 1,05 (m, 1H), 1,36 (s, 3H), 1,51 (m, 1H), 2,16 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 3,92 (s, 1H), 6,74 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,94 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,25 (s, 1H); el (58) es también una goma amarilla: \delta 0,62 (m, 1H), 1,04 (m, 1H), 1,24 (m, 1H), 1,34 (s, 3H), 1,47 (m, 1H), 1,79 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 4,07 (s, 1H), 6,72 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,77 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,88 (d, J = 8,4 Hz, 1H),7,26 (d, J = 8,4 Hz, 1H).
Ejemplo II Estudios in vitro
Para evaluar los efectos citotóxicos, se añadieron diversas concentraciones de iludinas a cultivos de cultivos de células MV522 (línea celular de carcinoma de pulmón humano) y 8392 (leucemia/linfoma de células B) durante 48 horas, después se determinó el crecimiento celular/viabilidad por exclusión con azul de trypan. Como una alternativa a los estudios de exposición continua de 48 horas, se colocaron células en un cultivo líquido en 96 placas de pocillos, se expusieron a diversas concentraciones de iludinas durante 2 horas, se pulsaron con [^{3}H]-timidina durante de una a dos horas y se recogieron sobre filtros de vidrio. Los papeles de filtro se añadieron a los viales que contenían escintilación fluida y se determinó la radioactividad residual en un contador beta (de escintilación).
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Como se muestra anteriormente, los análogos de la iludina 8-32 son potentes agentes antitumorales.
Ejemplo III Estudios in vivo
Se eligieron varios análogos para estudios in vivo. El agente anticancerígeno mitomicina C se usó como control farmaceútico. La terapia con el fármaco se inició 10 días después de la inoculación en una base diaria por ruta IP (intraperitoneal) durante 5 días consecutivos. Los animales fueron controlados durante 3 semanas después del inicio de la terapia. Con respecto a todos los análogos administrados, no se alcanzó la dosis máxima tolerada (DMT).
Se obtuvieron ratones hembra BALB/c nu/nu de 4 semanas que pesaban 18-22 g de Simonsen, Inc. (Gilroy, CA) y se mantuvieron en la colonia de ratones atímicos de la Universidad de California (San Diego, CA) bajo condiciones libres de patógenos usando campanas con filtro HEPA (filtro de alta eficacia para partículas en el aire). Se les proporcionó a los animales comida y agua esterilizada ad libitum en grupos de 5 en jaulas de plástico ventiladas con cubiertas de filtro de fibra de poliéster. Todo el personal que manejaba los animales llevaba batas, guantes, máscaras faciales, y cubrezapatos y capuchas limpios, esterilizados. Todos los estudios se dirigieron de acuerdo con las directrices de la NIH "Guide for Care and Use of Animals" y fueron aprobados por el University Institutional Animal Care and Use Committee (Protocolo 3-006-2).
La línea de carcinoma de pulmón MV522 usada para estudios de xenoinjertos fue derivada como se describe por Kelner et al. (Anticancer Res., 15: 867-872; 873-878 (1995)) y se mantuvo en medio RPMI 1640 libre de antibióticos (Mediatech, Herndon, VA), suplementada con suero bovino fetal 10% y glutamina 2 mM en una incubadora de dióxido de carbono humidificada a 37ºC.
Se distribuyeron aleatoriamente los ratones en grupos de tratamiento de cinco animales cada uno para los estudios iniciales y grupos de 16-20 animales para confirmar la eficacia del análogo. Cada animal fue marcado en la oreja y seguido individualmente durante todo el tiempo de los experimentos. Los ratones recibieron inyecciones subcutáneas de la línea celular parental MV522, usando 10 millones de células/inoculación, por encima del hombro. Diez días después de la implantación subcutánea de las células MV522, cuando los tumores subcutáneos eran aproximadamente 3 \times 3 mm de tamaño, los animales recibieron el fármaco y dosificación deseados. El efecto del fármaco en la duración vital fue calculado a partir de la mediana de la supervivencia.
Aunque las células MV522 matan a los ratones por metástasis, el tumor subcutáneo primario que creció sobre el hombro fue controlado empezando por el primer día de tratamiento y a intervalos semanales después. El tamaño del tumor fue medido en dos diámetros perpendiculares. Los pesos del tumor se estimaron según la fórmula P = (anchura)^{2}
\times longitud/2. Los pesos relativos (PR) se calcularon a una variabilidad normalizada en el tamaño del tumor, entre los grupos de ensayo al inicio del tratamiento usando la fórmula PR = Pt/Pi, donde Pi es el peso del tumor para un animal dado al principio del tratamiento con el fármaco y Pt es el peso del tumor en un tiempo posterior. Se hicieron necropsias de los animales, y se examinaron los órganos buscando pruebas de metástasis.
La comparación de las curvas de supervivencia entre los grupos de animales se hizo por el método de Kaplan y Meir. Para la comparación de los pesos tumorales relativos entre grupos múltiples de animales, se realizó un ANOVA (análisis de la varianza) normal seguido de un análisis post-ANOVA de comparación múltiple Tukey-Kramer (Kelner et al., Anticancer Res., 15: 867-872, 873-878 (1995)). Los valores de probabilidad (p) menores que 0,05 se consideraron estadísticamente significativos.
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4
5
El análogo (21) parece ser más eficaz que el HMAF, particularmente a la vista del hecho de que no se alcanzó la DMT. Los análogos (16) y (32) también fueron eficaces. Laalta dosis de mitomicina C tuvo un efecto en el tamaño del tumor. La dosis, sin embargo, fue tóxica, ya que todos los animales murieron al final antes del día 31. La dosis baja de mitomicina C tuvo poco efecto.
La invención ha sido descrita con referencia a diversas realizaciones y técnicas específicas y preferidas.

Claims (21)

1. Un compuesto de la fórmula
6
en la que R_{1} es (CH_{2})_{n}-X-Y;
donde n es de 0 a 4;
X es O ó S ó NH, e
Y es -CH_{2}OC(O)alquilo(C_{1}-C_{4}), alquilo(C_{1}-C_{8}) sustituido opcionalmente con 2 OH ó 1-2 halo; un monosacárido; CH_{2}C(O)-O-(CH_{2})_{2}-O-C(O)CH_{2}SH, -(CH_{2})_{2}-O- (CH_{2})_{2}W, donde W es halo; -alquilo(C_{1}-C_{8})-O-alquilo(C_{1}-C_{8}); arilo(C_{6}-C_{10}), arilo(C_{6}-C_{10})alquilo(C_{1}-C_{4}), C(O)O-arilo(C_{6}-C_{10}), en el que el grupo arilo está sustituido opcionalmente con 1-2 OH, halo, alquilo(C_{1}-C_{4}) ó O-alquilo(C_{1}-C_{4}); -CH_{2}CO_{2}-alquilo(C_{1}-C_{4}), -CH_{2}CO_{2}H, Si((alquilo(C_{1}-C_{4}))_{3}, o un residuo de aminoácido o H;
R_{3} es H o alquilo(C_{1}-C_{4});
R_{4} es SCH_{2}CO_{2}-alquilo(C_{1}-C_{4}), O-arilo(C_{5}-C_{12}), S-arilo(C_{5}-C_{12}) donde el arilo está sustituido opcionalmente con halo, OH ó alquilo(C_{1}-C_{4}), ó H;
R_{5} es H, OH o está ausente;
R_{6} es alquilo(C_{1}-C_{4}) ó H;
R_{7} es OH ó -OSi(alquilo(C_{1}-C_{4}))_{3}; o
R_{6} y R_{7}, juntos, son etilendioxi;
R_{8} es alquilo(C_{1}-C_{4}), sustituido opcionalmente con OH o halo;
El enlace representado por - - - está presente o ausente; con la condición de que cuando Y es H, n es 2-4;
o
una sal suya farmacéuticamente aceptable.
2. Un compuesto de la reivindicación 1, en el que
Y es -CH_{2}OC(O)-alquilo(C_{1}-C_{4}), alquilo(C_{1}-C_{8}) sustituido opcionalmente con 2 OH ó 1-2 halo; un monosacárido, -CH_{2}C(O)-O-(CH_{2})_{2}-O-C(O)CH_{2}SH, (CH_{2})_{2}-O-(CH_{2})_{2}W, donde W es halo; -alquilo(C_{1}-C_{8})-O-alquilo(C_{1}-C_{8}); arilo(C_{6}-C_{10}), arilo(C_{6}-C_{10})alquilo(C_{1}-C_{4}) ó C(O)O-arilo(C_{6}-C_{10}), en el que el grupo arilo está sustituido opcionalmente con 1-2 OH, halo, alquilo(C_{1}-C_{4}) ó O-alquilo(C_{1}-C_{4}); -CH_{2}CO_{2}-alquilo(C_{1}-C_{4}), -CH_{2}CO_{2}H, Si(alquilo(C_{1}-C_{4}))_{3} o un residuo de aminoácido;
R_{4} es SCH_{2}CO_{2}-alquilo(C_{1}-C_{4}), S-arilo(C_{6}-C_{10}) sustituido opcionalmente con halo, OH ó alquilo(C_{1}-C_{4}), o H;
R_{6} es alquilo(C_{1}-C_{4});
R_{7} es OH o -OSi(alquilo(C_{1}-C_{4}))_{3}; o
R_{6} y R_{7}, juntos, son etilendioxi;
o una sal suya farmacéuticamente aceptable.
\newpage
3. Un compuesto de la reivindicación 1, en el que Y es un residuo de aminoácido; o sus sales farmacéuticamente aceptables.
4. Un compuesto de la reivindicación 1, que tiene la fórmula
7
o una sal suya farmacéuticamente aceptable.
5. Un compuesto de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que n es 1, el enlace representado por - - - está presente, y R_{5} está ausente.
6. Un compuesto de la reivindicación 5, en el que R_{3} es CH_{3}, R_{4} es H, R_{6} es CH_{3}, R_{7} es OH y R_{8} es CH_{3}.
7. Un compuesto de la reivindicación 6, en el que X es O.
8. Un compuesto de la reivindicación 7, en el que Y es CH_{2}OC(O)CH_{3}, alquilo(C_{1}-C_{4}), un alquilo(C_{1}-C_{8}) sustituido por 2 OH, fructosa, -(CH_{2})_{2}Br, -C(CH_{3})_{2}-O-alquilo(C_{1}-C_{4}), ó -C(O)-O-fenilo.
9. Un compuesto de la reivindicación 8, en el que Y es -CH_{2}CH_{3}, -CH_{2}CH(OH)CH_{2}OH, ó -C(CH_{3})_{2}-O-CH_{3}.
10. Un compuesto de la reivindicación 6, en el que X es S.
11. Un compuesto de la reivindicación 10, en el que Y es fenilo sustituido con OH ó CH_{3}, bencilo, -CH_{2}CO_{2}CH_{3}, -CH_{2}CO_{2}H, o alquilo(C_{1}-C_{8}) sustituido por 2 OH.
12. Un compuesto de la reivindicación 11, en el que Y es -CH_{2}CH(OH)CH_{2}OH.
13. Un compuesto de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que n es 1, el enlace representado por - - - está ausente, X es S; Y es CH_{2}CO_{2}CH_{3}; R_{3} es CH_{3}; R_{4} es SCH_{2}CO_{2}CH_{3}; R_{6} es CH_{3} y R_{7} es OH.
14. Un compuesto de la reivindicación 13, en el que R_{5} es H ó OH.
15. Una forma farmacéutica de dosificación unitaria, que comprende una cantidad inhibidora del crecimiento tumoral eficaz del compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 en combinación con un excipiente farmacéuticamente aceptable.
16. La forma farmacéutica de dosificación unitaria de la reivindicación 15, en la que el excipiente es un vehículo líquido.
17. La forma farmacéutica de dosificación unitaria de la reivindicación 15, en la que el excipiente está adaptado para la administración parenteral, intravenosa u oral.
18. La forma farmacéutica de dosificación unitaria de la reivindicación 15, en la que dicho excipiente está adaptado para la administración oral y dicha forma de dosificación es un comprimido o una cápsula.
19. El uso de una cantidad terapéutica del compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 en la fabricación de un medicamento para usar en un método terapéutico para inhibir el crecimiento de células tumorales en un paciente con necesidad de tal terapia.
20. El uso de acuerdo con la reivindicación 19, en el que el paciente es un paciente humano de cáncer.
21. El uso de acuerdo con la reivindicación 20, en el que el paciente está aquejado de un tumor sólido.
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