ES2220140T3 - Inhibidores de la adhesion mediada de celulas por alfa 4 beta 1 (a4b1). - Google Patents

Inhibidores de la adhesion mediada de celulas por alfa 4 beta 1 (a4b1).

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ES2220140T3
ES2220140T3 ES99966584T ES99966584T ES2220140T3 ES 2220140 T3 ES2220140 T3 ES 2220140T3 ES 99966584 T ES99966584 T ES 99966584T ES 99966584 T ES99966584 T ES 99966584T ES 2220140 T3 ES2220140 T3 ES 2220140T3
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carbonyl
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Bradley R. Teegarden
Honnappa Jayakumar
Kenji Matsuki
Robert A. Chrusciel
Jed F. Fisher
Steven P. Tanis
Edward W. Thomas
James R. Blinn
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Tanabe Seiyaku Co Ltd
Pharmacia and Upjohn Co
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Tanabe Seiyaku Co Ltd
Pharmacia and Upjohn Co
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Abstract

Un compuesto de la fórmula: **(fórmula)** en el que - x se selecciona a partir de un grupo formado porhalógeno, -CF3, NO2, OH, C1-3 alcoxi, NH2 y C1-4 alquil; - Z Z1 es CH o N; - Z2 es CH o N; - n es 1, 2 ó 3; - Y es -OCH2- o -NHC(=O)-; - Rx es OH o C1-6 alcoxi; - Ra se selecciona a partir del grupo consistente en **(fórmula)**.

Description

Inhibidores de la adhesión mediada de células por \alpha 4 \beta 1 (A4B1).
Campo de la invención
La presente invención se refiere a pequeñas moléculas que son potentes inhibidores de la adhesión mediada por alfa 4 beta 1 a VCAM o a CS-1 y que pueden ser útiles en el tratamiento de enfermedades inflamatorias.
Descripción de la técnica relacionada
La matriz extracelular (ECM) es el principal componente del tejido conectivo que proporciona integridad estructural y favorece la migración y diferenciación de las células. Como parte de estas funciones, las moléculas de matriz extracelular como fibronectina, colágeno, laminina, factor von Willebrand, trombospondina, fibrinógeno y tenascina han demostrado secundar la adhesión de células in vitro. Esta interacción adhesiva es fundamental para una serie de procesos biológicos como la hemóstais, trombosis, curación de las heridas, metástasis de tumores, inmunidad e inflamación.
La fibronectina (FN) es el prototipo de molécula ECM. Se ha reproducido sintéticamente el lugar principal de fijación a la célula en la molécula de fibronectina con la secuencia de aminoácidos arginina-glicina-ácido aspártico o RGD utilizando nomenclatura de una sola letra. Los péptidos que contienen la secuencia RGD que o bien inhiben o bien favorecen la adhesión a células han sido descritos en (Patente EE UU Nº 4.589.881); 4.661.111; 4.517.686; 4.683.291; 4.578.079; 4.614.517 y 4.792.525). Cambios en el péptido tan pequeños como el intercambio de alanina por glicina o ácido glutámico por ácido aspártico que constituye la adición de un único grupo de metil o metileno al tripéptido, elimina estas actividades (Piersbacher et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:5985 (1984). Recientemente, se ha identificado un segundo dominio de unión a células FN dentro de la región alternativamente unida de la cadena A de la molécula, conocida como el segmento de conexión 1 (CS-1). El lugar de unión de células más activo dentro de esta región alternativamente unida se compone de 25 aminoácidos donde el carboxi terminal contiene la secuencia EILDVPST. La secuencia de aminoácidos EILDVPST forma un motivo de reconocimiento de FN en los receptores de superficie celular. (Wayner et al., J. Cell Biol. 109:1321 (1989); Guan et al., Cell 60:53 (1990).
Los receptores que reconocen estos lugares en FN pertenecen a una superfamilia de genes llamada integrinas que consisten en complejos heterodiméricos de subunidades alfa y beta no covalentemente asociadas. Una subunidad Beta común se combina con subunidades alfa únicas para formar un receptor de adhesión de especificidad definida. Hasta la fecha, se han identificado 8 subunidades beta que pueden dimerizar con 16 subunidades distintas alfa formando 22 integrinas distintas. La subfamilia Beta1, también conocida como familia VLA (Antígenos de Activación Muy Tardía), se une a moléculas ECM, como FN, colágeno y laminina. Para reseñas, ver, Hynes, Cell 48:549 (1987); Hemler, Annu. Rev. Immunol. 8:365 (1990). La interacción de leucocitos con FN en los dos dominios de unión espacialmente separados es mediada por dos integrinas distintas. El sitio RGD es reconocido por la integrina alfa5Beta1, mientras que EILDV es reconocido por alfa4Beta1 (Pytela et al., Cell 40:191 (1985); Wayner et al., J. Cell Biol. 109:1321 (1989); Guan et al., Cell 60:53 (1990).
Las células vasculares endoteliales forman el interfaz entre la sangre y los tejidos y controlan el paso de leucocitos así como del plasma a los tejidos. Una variedad de señales generadas en el lugar de la inflamación puede activar tanto las células endoteliales como los leucocitos en circulación de manera que se vuelven más adhesivos entre sí. Después de esta adhesión inicial, los leucocitos migran a los tejidos para realizar funciones de defensa del huésped. Se han identificado varias moléculas de adhesión que están involucradas en interacciones leucocito-endotelio.
En la subfamilia Beta1, además de la unión a la fibronectina, alfa4Beta1 interactúa con una proteína inducible por la citoquina sobre células endoteliales denominada molécula de adhesión celular vascular (VCAM). Más implicada en el proceso de adhesión leucocito-endotelio está la subfamilia de integrinas Beta2. Las integrinas Beta2 incluyen CD11a/CD18, CD11b/CD18, y CD11c/CD18. Además, la subunidad Beta7 se asocia con Alfa4 para formar un heterodímero único Alfa4Beta7 que se une a FN, a VCAM y a la Molécula de Adhesión Celular de Adresina Mucosal 1(MAdCAM) (Ruegg et al., J. Cell. Biol. 117:179 (1992); Andrew et al., J. Immunol. 153:3847 (1994); Briskin et al., Nature 363:461 (1993); Shyjan et al., J. Immunol. 156:2851 (1996). Las integrinas Alfa4 están ampliamente expresadas sobre diferentes tipos de células incluyendo progenitores hematopoiéticos, linfocitos, células asesinas naturales, monocitos, eosinófilos, basófilos y células cebadas (Helmer, M. E., Annu. Rev. Immunol. 8:365 (1990). Otras moléculas en células endoteliales que se unen a los leucocitos son ICAM-1, ICAM-2, E-selectin y P-selectin (Carlos and Harlan, Immuno. Rev. 114:1 (1990); Osborn, L., Cell 62:3 (1990); Springer T., Nature 346:425 (1990); Geng et al., Nature 347:757 (1990); Stoolman, Cell 56:907 (1989).
Una serie de estudios in vitro e in vivo indican que Alfa4Beta1 desempeña un papel crítico en la patogénesis de una variedad de enfermedades. Se han probado anticuerpos monoclonales dirigidos contra Alfa4 en una variedad de modelos de enfermedad. Los anticuerpos anti-Alfa4 bloquean la adhesión de linfocitos a células endoteliales sinoviales; esta adhesión desempeña un papel potencial en la artritis reumatoide (van Dinther-Janssen et al., J. Immunol. 147:4207 (1991). Alfa4 también ha sido implicada en la artritis reumatoide en estudios independientes (Laffon et al., J. Clin. Invest. 88:546 (1991); Morales-Ducret et al., J. Immunol. 149:1424 (1992). Un importante número de estudios han evaluado el papel del Alfa4 en la alergia y el asma. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales contra Alfa4 bloquean la adhesión de basófilos y eosinófilos a células endoteliales activadas por citoquina (Walsh et al., J. Immunol. 146:3419 (1991); Bochner et al., J. Exp. Med. 173:1553 (1991). Los anticuerpos monoclonales contra Alfa4 también fueron efectivos en varios modelos de desafío antigénico en pulmón (Abraham et al., J.Clin. Invest. 93:776 (1994); Weg et al., J. Exp. Med. 177:561 (1993). El tamarino cabeza de algodón, que sufre de colitis crónica espontánea, mostró una atenuación importante de la colitis cuando se le administró anticuerpo anti-alfa4 (Podolsky et al., J. Clin. Invest. 92:372 (1993); Bel, et al., J. Immunol. 151:4790 (1993). En un modelo de rata y ratón, la encefalomielitis autoinmune fue bloqueada por el anticuerpo anti-Alfa4 (Yednock et al., Nature 356:63 (1992); Baron et al., J. Exp. Med. 177:57 (1993). Los anticuerpos monoclonales anti-alfa4 también inhiben la insulitis y retrasan la aparición de la diabetes en el ratón diabético no obeso (Baron et al., J. Clin. Invest. 93:1700 (1994); Yang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:10494 (1993); Burkly et al., Diabetes 43:529 (1994). Alfa4 también está implicada en la aterosclerosis debida a su expresión endotelial durante la aterogénesis (Cybulsky et al., Science 251:788 (1991). La migración de leucocitos a un sitio inflamatorio también puede ser bloqueada por anticuerpos anti-alfa4. Además de bloquear la migración, los inhibidores de la adhesión endotelial de leucocitos puede bloquear las señales coestimulatorias mediadas por integrinas y por tanto inhibir la superproducción de citoquinas inflamatorias. En una serie independiente de experimentos que no utilizaron anticuerpos anti-Alfa4, los péptidos GRDGSP o EILDV fueron probados contra la respuesta de hipersensibilidad por contacto. Se descubrió que la respuesta de hipersensibilidad por contacto fue bloqueada por GRDGSP o EILDV lo que sugiere que tanto Alfa4Beta1 como Alfa5Beta1 están implicadas en esta respuesta inflamatoria.
Otras enfermedades que pueden implicar condiciones mediadas por Alfa4Beta1 son trastornos inflamatorios como la artritis reumatoide, trastornos alérgicos como el asma, colitis espontánea crónica, insulitis, respuesta de hipersensibilidad por contacto, aterosclerosis y encefalomielitis autoinmune. Estos estudios ilustran que las pequeñas moléculas que son potentes inhibidores de la adhesión mediada por Alfa4Beta1 tanto a VCAM-1 o a CS-1 pueden ser utilizadas como una forma de tratamiento en numerosas enfermedades inflamatorias. Sin embargo, estas condiciones inflamatorias podrían ampliarse para incluir el síndrome de fatiga respiratoria en adultos, SIDA, enfermedades cardiovasculares, trombosis o agregación perniciosa de plaquetas, reoclusión después de trombólisis, rechazo de aloinjerto, herida de reperfusión, psoriasis, eczema, dermatitis por contacto y otras enfermedades inflamatorias de la piel, osteoporosis, osteoartritis, aterosclerosis, enfermedades neoplásticas incluyendo metástasis de crecimiento canceroso o neoplástico, mejora de la curación de las heridas, tratamiento de ciertas enfermedades oculares como desprendimiento de retina, diabetes de Tipo I, esclerosis múltiple, lupus eritematoso sistémico (SLE), condiciones inflamatorias e inmunoinflamatorias incluyendo condiciones inflamatorias oftálmicas y enfermedades inflamatorias del intestino, colitis ulcerosa, enteritis regional y otras enfermedades autoinmunes. Por consiguiente, sería deseable un compuesto que pudiera inhibir estas condiciones.
Resumen de la invención
La presente invención está relacionada con un compuesto de la siguiente fórmula:
1
En la fórmula anterior, X se selecciona a partir del grupo compuesto de halógeno, CF_{3}, NO_{2}, OH, alcoxi C_{1-3}, NH_{2} y alquilo C_{1-4}, Z^{1} y Z^{2} son CH o N, n es 1, 2, o 3, Y es -OCH_{2}- o -NHC(=O), R^{x} es OH o alcoxi C_{1-6} y R^{a} se selecciona a partir del grupo compuesto de:
2
3
4
5
En la fórmula anterior, ... representa un enlace doble o sencillo. Igualmente, en la fórmula anterior, W1 se selecciona a partir del grupo compuesto de -CO-, -OCH_{2}CO-, -OCH(CH_{3})CO-, OC(CH_{3})_{2}CO-, SCH_{2}CO-, SCH(CH_{3})CO-, SC(CH_{3})_{2}CO-, -CH=CHCO-, OCH(C_{6}H_{5})CO- y SCH(C_{6}H_{5})CO, W^{2} es O o S, q es 5 ó 6, m es 0 ó 1, X^{1} es O, S o un enlace, Y^{1} es alquileno C_{1-3} o -CH(C_{6}H_{5}), RC es un enlace, -CH_{2}- o =CH-, y Q es un anillo de cicloalcano C_{3-10} o cicloalqueno C_{3-10}, cuyo anillo es sustituido por el grupo de R^{1} y puede ser además sustituido por 1 a 3 grupos de metilo a condición de que Q no sea un anillo de ciclopentano que es sustituido por tres grupos de metilo.
En la fórmula anterior, R^{1} se selecciona a partir del grupo compuesto de -H, -COR^{x}, -CH(OH)CH_{3}, -(alquenileno C_{2-7})COR^{x}, -NHCO(alquileno C_{1-6})COR^{x}, =CHCOR^{x},
-NHCO(alquileno C_{1-6})O(alquilo C_{1-6}), -NHCO(alquenileno C_{2-7})COR^{x},
-NHCO(alquileno C_{1-6})CO(alquilo C_{1-6}), -NHCONH (alquileno C_{1-6})COR^{x},
-alcanoil C_{2-7}, =CHCN, -(alquileno C_{1-6})COR^{x},
6
7
8
9
En la fórmula anterior, R^{2} se selecciona a partir del grupo compuesto de -CH_{2}COR^{x}, -NHCO(alquileno C_{1-6})COR^{x}, -NHCO(alquenileno C_{2-7})COR^{x}
-NHCO(alquileno C_{1-6})O(alquilo C_{1-6}), -NHCONH(alquileno C_{1-6})COR^{x},
10
11
12
13
14
En la fórmula anterior, R^{3} se selecciona a partir del grupo compuesto de -OH, -COR^{x}, -(alquenileno C_{2-7})COR^{x},
-NHCO(alquileno C_{1-6})COR^{x}, -NHCO(alquileno C_{1-6})O(alquilo C_{1-6}),
-NHCO(alquenileno C_{2-7})COR^{x}, -NHCO(alquileno C_{1-6})CO(alquilo C_{1-6}),
-NHCONH(alquileno C_{1-6})COR^{x}, -alcanoil C_{2-7},
15
16
17
18
Por último, en la fórmula anterior R^{4} se selecciona a partir del grupo compuesto de -COOH, -CH=CHCOOH y metilenodioxi, R^{5} es =CHCOR^{x} o =CHCN y R^{6} se selecciona a partir del grupo compuesto de
19
20
En otra realización, el compuesto de la presente invención se representa por la siguiente fórmula:
21
En una realización preferente de la presente invención, X es halógeno, Y es -OCH_{2}- o -NHC(=O), Z^{1} y Z^{2} son CH o N, R^{x} es OH o alcoxi C_{1-6}, y R^{a} se selecciona a partir del grupo compuesto de:
22 
\vskip1.000000\baselineskip
23
24
25 
\vskip1.000000\baselineskip
26 
\newpage
En la anterior realización preferente de la presente invención, R^{6} se selecciona a partir del grupo compuesto de:
27
28
Igualmente, en la realización preferente de la presente invención, R^{7} es
-COR^{x}, R^{8} se selecciona en el grupo compuesto de hidrógeno, -COR^{x},
-COCH_{3} y -CH(OH)CH_{3}, R^{9} es hidrógeno o metilo, R^{10} es COR^{x}, o
-(alquileno C_{1-6})COR^{x} y R^{11} se selecciona en el grupo compuesto de COR^{x}, (alquenileno C_{2-7})COR^{x}, -NHCO(alquileno C_{1-6})COR^{x},
-NHCO(alquileno C_{1-6})O(alquilo C_{1-6}), -NHCO(alquenileno C_{2-7})COR^{x},
-NHCO(alquileno C_{1-6})CO(alquilo C_{1-6}), -NHCONH(alquileno C_{1-6})COR^{x}-alcanoil C_{2-7},
29
30
31
32
33
En la realización preferente de la presente invención, R^{12} es COR^{x} o
-CN, W^{1} se selecciona del grupo compuesto de -CO-, OCH_{2}CO-,
-OCH(CH_{3})CO-, -OC(CH_{3})_{2}CO-, -SCH_{2}CO-, -SCH(CH_{3})CO-, -SC(CH_{3})_{2}CO-, -CH=CHCO-, OCH(C_{6}H_{5})CO- y -SCH(C_{6}H_{5})CO-, W^{2} es O o S, n es 1 ó 2, y m es 0 ó 1.
En otra realización de la presente invención, Y es -NHC(=O)-.
En otra realización, el compuesto de la presente invención se representa mediante la siguiente fórmula:
34
En otra realización preferente de la presente invención, R^{a} se selecciona del grupo compuesto de:
35
36
37
En otra realización preferente de la presente invención, R^{a} se selecciona del grupo compuesto de:
38
39
40
R^{6} se selecciona del grupo compuesto de:
41
42
R^{11} se selecciona del grupo compuesto de -NHCO(alquenileno C_{2-7})COR^{x}, NCO(alquileno C_{1-6})CO(alquilo C_{1-6}),
43 
\vskip1.000000\baselineskip
44 
\vskip1.000000\baselineskip
45
En una realización más preferente de la presente invención, R^{a} es
46
y R^{8} es COR^{x} o COCH_{3}.
\newpage
En otra realización más preferente de la presente invención, R^{a} es
47
Y R^{11} se selecciona del grupo compuesto de -NHCO(alquileno C_{1-6})CO(alquilo C_{1-6}),
48
49
50
51
En otra realización más preferente de la presente invención, R^{a} es
52
y R^{11} se selecciona del grupo compuesto de
53
54
En otra realización más preferente de la presente invención, R^{a} es
55
En otra realización más preferente de la presente invención, R^{a} es
56
y R^{6} se selecciona del grupo compuesto de:
57
58
Respecto a la presente invención, los grupos alquilo, alquileno y alcoxi tienen la finalidad de abarcar tanto mitades de cadena rectas como bifurcadas. Por ejemplo, un grupo alquilo C_{1-6} abarcaría mitades incluyendo pero no limitándose al metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo, hexilo, isopropilo y t-butilo.
Los compuestos deseados de la presente invención pueden existir en forma de isómeros ópticos basados en átomos de carbono asimétricos de los mismos, y la presente invención también incluye estos isómeros ópticos y mezclas de los mismos.
En una realización de la presente invención, la configuración estérica de un enlace no tiene que ser fija. Un enlace puede ser de cualquier configuración aceptable. Además, un compuesto puede ser una mezcla con varias configuraciones diferentes del mismo enlace.
El compuesto deseado de la presente invención puede ser clínicamente utilizado tanto en forma libre o en forma de sales farmacéuticamente aceptables del mismo. Sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales de adición ácida con ácido inorgánico u orgánico (por ej. hidrocloruro, sulfato, nitrato, hidrobromuro, metanosulfonato, p-toluenosulfonato, acetato), sal con base inorgánica, base orgánica o amino ácido (por ej. sal trietilamina, una sal con lisina, una sal álcali metal, una sal álcali tierra metal etc.).
El compuesto también puede ser formulado en un compuesto farmacéutico que comprenda una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto como se define más arriba y un transportador o diluyente farmacéuticamente aceptable.
El compuesto también puede ser utilizado para la preparación de un compuesto farmacéutico para tratar o evitar las condiciones mediadas por adhesión de alfa4beta1 en un mamífero como el humano. Este método puede comprender la administración a un mamífero o a un paciente humano de una cantidad efectiva del compuesto o composición como se explica más arriba.
Este método puede ser utilizado para tratar tales condiciones inflamatorias como artritis reumatoide, asma, estados de alergia, síndrome de fatiga respiratoria en adultos, SIDA, enfermedades cardiovasculares, trombosis o agregación perniciosa de plaquetas, reoclusión después de trombólisis, rechazo de aloinjerto, herida de reperfusión, psoriasis, eczema, dermatitis por contacto y otras enfermedades inflamatorias de la piel, osteoporosis, osteoartritis, aterosclerosis, enfermedades neoplásticas incluyendo metástasis de crecimiento canceroso o neoplástico, mejora de la curación de las heridas, tratamiento de ciertas enfermedades oculares como desprendimiento de retina, diabetes de Tipo I, esclerosis múltiple, lupus eritematoso sistémico (SLE), condiciones inflamatorias e inmunoinflamatorias incluyendo condiciones inflamatorias oftálmicas y enfermedades inflamatorias del intestino, colitis ulcerosa, enteritis regional y otras enfermedades autoinmunes.
El compuesto deseado de la presente invención o sales farmacéuticamente aceptables de la misma puede ser administrado tanto oral como parenteralmente y puede ser utilizado como un preparado farmacéutico adecuado, por ejemplo, un comprimido, un gránulo, una cápsula, polvo, inyección o una inhalación por un proceso convencional.
La dosis del compuesto deseado de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma varía según el método de administración, edad, peso corporal y estado del paciente, pero en general la dosis diaria es preferentemente de 0,1 a 100 mg/kg/día, y particularmente preferente de 1 a 100 mg/kg/día.
Vías preferentes de administración para asma
Es preferible que el compuesto de la presente invención se administre en forma de aerosol. Sin embargo, otras vías de administración pueden ser intravenosas, orales, intramusculares y subcutáneas.
En el caso de administración por aerosol, las composiciones que contienen los compuestos de la presente invención pueden ser preparadas para que constituyan un medio excelente para administrar en forma de aerosol para terapia de inhalación. Por consiguiente, la presente invención aportará composiciones auto-propelentes que contienen los compuestos de la invención.
Los propelentes empleados no deben ser tóxicos y tener una presión de vapor adecuada a las condiciones bajo las que se produce la administración. Estos propelentes pueden ser hidrocarburos alifáticos saturados inferiores fluorados o fluoroclorados. Los propelentes preferentes de este tipo son los alcanos halogenados que contienen no más de dos átomos de carbono y por lo menos un átomo de flúor. Ejemplos de ello son tricloromonofluorometano, diclorodifluorometano, monoclorotrifulorometano, dicloromonfluorometano y 1,2-dicloro-1,1,2,2,2,-tetrafluoroetano. Estos compuestos están disponibles en E.I. duPont de Nemours and Company bajo el nombre comercial de ``Freón''. Estos propelentes pueden ser empleados solos o en mezcla.
Además del propelente, también se puede emplear un disolvente orgánico. El disolvente orgánico debe ser no tóxico y sin efectos perjudiciales cuando se inhale en la cantidad presente en el aerosol producido. Además, el disolvente debe ser sustancialmente anhidro, completamente miscible en el propelente o mezcla de propelentes empleados y tener un punto de ebullición adecuado. Ejemplos de dichos disolventes son los alcoholes alifáticos no tóxicos como el etanol; éteres como el éter etílico y el éter vinílico; cetonas como acetona; y alcanos inferiores halogenados adecuados.
Además del disolvente orgánico, la composición puede también contener opcionalmente un glicol higroscópico no tóxico. El glicol debe ser sustancialmente miscible en el disolvente orgánico y el propelente empleado. Glicoles adecuados son el propilen-glicol, trietilen-glicol, glicerol, butilen-glicol y hexilen-glicol.
Los métodos arriba indicados de administración y formulación de composiciones de aerosol no deben ser considerados limitadores. Los compuestos de la presente invención pueden ser formulados de cualquier modo que se considere adecuado por alguien con un dominio normal de la técnica para obtener los efectos deseados.
Composiciones farmacéuticas
Como se indicó anteriormente, los compuestos de la fórmula (I) pueden ser formulados en composiciones farmacéuticas. Para determinar si un compuesto de fórmula (I) es indicado para el tratamiento de una enfermedad dada, hay que tener en cuenta la enfermedad particular en cuestión, su gravedad, así como la edad, sexo, peso y estado del sujeto a tratar, y este examen debe ser realizado por el médico que lo atiende.
Para uso médico, la cantidad de un compuesto de Fórmula (I) necesaria para lograr un efecto terapéutico variará evidentemente tanto por el compuesto en particular, la vía de administración, el paciente en tratamiento y el trastorno particular o enfermedad que se esté tratando. Una dosis diaria adecuada de un compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para un sujeto mamífero que sufra o pueda sufrir un estado descrito anteriormente es de 0,1 mg del compuesto de la fórmula I, por kilogramo de peso corporal del sujeto. En el caso de administración sistemática, la dosis puede ser de la gama de 0,5 a 500 mg del compuesto por kilogramo de peso corporal, siendo la dosis más preferente de 0,5 a 50 mg/kg de peso corporal administrada dos a tres veces diarias. En el caso de administración tópica, por ejemplo, en la piel o el ojo, una dosis adecuada puede ser de la gama de 0,1 \mug a 100 \mug del compuesto por kilogramo, normalmente de 0,1 \mug/kg. En el caso de dosificación oral, una dosis adecuada de un compuesto de Fórmula (I) o una sal fisiológicamente aceptable del mismo, puede ser como se especifica en el párrafo anterior, pero preferentemente es de 1 mg a 10 mg del compuesto por kilogramo, y la dosificación más preferente es de 1 mg a 5 mg/kg de peso corporal, por ejemplo de 1 a 2 mg/kg. Y más preferentemente aún, una dosis unitaria de una composición oralmente administrable según la presente invención contiene menos de aproximadamente 1,0 g de un compuesto de fórmula (I).
Queda entendido que la formulación, tanto para humanos como para uso veterinario, de la presente invención, puede ser presentada al mamífero para inhalación. Para lograr efecto terapéutico, la dosis puede ser de la gama de 0,5 a 500 mg del compuesto, por kg de peso corporal. La dosis más preferente es de 0,5 a 50 mg/kg de peso corporal del mamífero administrada dos a tres veces diarias.
Queda entendido que un médico o veterinario normalmente cualificado determinará y prescribirá fácilmente la cantidad efectiva de un compuesto de Fórmula I para evitar o detener el avance del estado para el que se administra el tratamiento. Al proceder así, el médico o veterinario pueden emplear dosis relativamente bajas al principio, aumentando posteriormente la dosis hasta que se obtenga la máxima respuesta.
Los compuestos y composiciones de la presente invención pueden ser administrados a pacientes que sufren de un estado enumerado en la presente invención en una cantidad que sea efectiva para aliviar completa o parcialmente síntomas no deseados del estado. Los síntomas pueden estar causados por inadecuada adhesión celular mediada por integrinas Alfa4Beta1. Dicha adhesión celular inadecuada se puede esperar que ocurra como resultado de un aumento de expresión de VCAM-1 y/o CS-1 en la superficie de células endoteliales. El aumento de expresión de VCAM-1 y/o CS-1 puede deberse a una respuesta normal de inflamación o por estados anormales inflamatorios. En cualquier caso, una dosis efectiva de un compuesto de la invención puede reducir el aumento de adhesión celular debida al aumento de expresión de VCAM-1 por células endoteliales. Reducir la adhesión observada en el estado mórbido en el 50% puede ser considerado una reducción efectiva de la adhesión. De manera más preferente, se logra una reducción de la adhesión del 90%. Y de la manera más preferente, se suprime la adhesión mediada por VCAM-1/alfa4Beta1 y/o interacción de CS-1 con una dosis efectiva. Clínicamente, en algunos casos, se pueden observar efectos del compuesto o un descenso de la infiltración de glóbulos blancos en los tejidos o una herida. Para lograr un efecto terapéutico, los compuestos o composiciones de la presente invención se administran para proporcionar una dosis efectiva que reduzca o elimine la adhesión celular inadecuada o para aliviar síntomas no deseados.
Aunque un ingrediente activo puede ser administrado solo, es preferible presentarlo como una formulación farmacéutica que comprenda un compuesto de Fórmula (I) y un transportador farmacéuticamente aceptable del mismo. Dichas formulaciones constituyen un elemento más de la presente invención.
Las formulaciones, tanto para uso médico como veterinario de la presente invención comprenden un ingrediente activo de Fórmula (I), en asociación con un transportador farmacéuticamente aceptable del mismo y opcionalmente otros ingredientes terapéuticos que son generalmente conocidos como efectivos para el tratamiento de la enfermedad o estado encontrado. El transportador debe ser "aceptable" en el sentido de ser compatible con el resto de ingredientes de las formulaciones y no perjudicial para el destinatario del mismo.
Las formulaciones incluyen aquellas en forma adecuada para administración oral, pulmonar, oftálmica, rectal, parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular e intravenosa), intra-articular, tópica, inhalación nasal (por ej. con un aerosol) o administración bucal. Dicha formulación se entiende que incluye formulaciones de efecto prolongado conocidas por la técnica.
Las formulaciones pueden ser presentadas en forma de dosis unitarias y pueden ser preparadas por uno cualquiera de los métodos bien conocidos del arte de la farmacia. Todos los métodos pueden incluir la etapa de poner el ingrediente activo en asociación con el transportador que constituye uno o más ingredientes accesorios. En general, las formulaciones se preparan poniendo el ingrediente activo en asociación con un transportador líquido o un transportador sólido finamente triturado o ambos y luego, si fuera necesario, dando al producto la forma deseada.
Las formulaciones de la presente invención adecuadas para administración oral pueden tener la forma de unidades discretas como cápsulas, comprimidos o pastillas, conteniendo cada uno una cantidad predeterminada del ingrediente activo en forma de polvo o gránulos; en la forma de una solución o suspensión en líquido acuoso. Formulaciones para otros usos pueden incluir un líquido no acuoso; en la forma de emulsión aceite en agua o emulsión agua en aceite; en forma de aerosol; o en forma de crema o ungüento o impregnado en un parche transdérmico para administrar el ingrediente activo a través de la piel a un paciente que lo necesite. El ingrediente activo de las presentes composiciones de la invención también puede ser administrado a un paciente que lo necesite en forma de bolo, jarabe o pasta.
Remitimos al profesional a ``Remington: The Science and Practice of Pharmacy'', 19ª Edición, 1995 del Philadelphia College of Pharmacy and Science, como tomo completo de preparados farmacéuticos.
Abreviaturas
DMF: Dimetilformamida
TFA: Ácido Trifluoracético
HBTU: O-Benzotriazol-1-il-N,N,N',N'-hexahidrofosfato tetrametiluronio
HOBT: 1-Hidroxibenzotriazol
DIEA: Diisopropiletilamina
THF: Tetrahidrofurano
BOC: terc-Butoxicarbonilo
Ejemplos
Los compuestos de los ejemplos 1-87 fueron preparados mediante los siguientes métodos A, B, C, D, E, F, G, H o I y purificados por cromatografía convencional sobre gel de sílice utilizando un eluente adecuado como CHCl_{3}, AcOEt, etc.
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Ejemplo 1 4-[(2,6-Diclorobenzoil)amino]-N-[[(3S)-7-hidroxi-1,2,3,4-tetrahidro-3-isoquinolil]carbonil]-L-fenilalanina
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El compuesto arriba indicado fue preparado mediante el método A (RA:(3S)-2-(terc-butoxicarbonil)-7-hidroxi-1,2,3,4-tetrahidro-3-isoquinolil). El compuesto de referencia A (300 mg) fue colocado en una columna de filtro de polipropileno 8.0 mL, provista de una llave de paso de 2 vías. La resina fue pretratada con CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL). La resina hinchada fue desprotegida a continuación con TFA/CH_{2}Cl_{2} al 50% (3 mL, 30 min). La resina fue enjuagada en el siguiente orden: CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), CH_{3}OH (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL). La resina fue hinchada con DMF (2 x 3 mL). (3S)-2-(terc-butoxicarbonil)-7-hidroxi-1,2,3,4-tetrahidro-3-ácido carboxílico de isoquinolina (258 mg) en DMF (1.0 mL) fue activado con 0,5 M HBTU/HOBT en DMF (1,6 mL) y DIEA (0,34 mL) y luego añadido a la resina hinchada. La mezcla fue agitada durante 2 horas a temperatura ambiente. La resina fue filtrada y lavada en el siguiente orden: DMF (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), CH_{3}OH (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), respectivamente. Si una prueba Kaiser (Kaiser et al., anal. Biochem. 1970, 34, 594-598) sobre una pequeña cantidad de la resina resulta positiva (azul) entonces repetir el procedimiento de acoplamiento hasta que se obtenga un resultado negativo. Después de pretratar la resina con CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), la resina hinchada fue desprotegida a continuación con TFA/CH_{2}Cl_{2} al 50% para eliminar el grupo terc-butoxicarbonilo. La resina fue aclarada en el siguiente orden: CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), CH_{3}OH (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL). La resina resultante fue secada a continuación al vacío a peso constante. La división de la resina (saponificación) se logró con LiOH/CH_{3}OH/THF (1:6:20). El material aglutinado con resina fue colocado en la columna de polipropileno y pretratado con THF (3 mL). Luego se añadió THF (4 ml), CH_{3}OH (1.0 ml) y 2N LiOH (0,390 ml). La mezcla fue agitada durante 15 minutos y filtrada en una probeta limpia y previamente pesada. La resina fue lavada a continuación con THF/5% CH_{3}OH (2 ml) y los filtrados combinados fueron evaporados. La goma resultante fue disuelta en H_{2}O (1 ml). La solución fue luego acidificada con 1N HCl al pH 2.0. El precipitado fue centrifugado, lavado con agua (2 x 5 ml) y secado al vacío para suministrar el compuesto del Ejemplo 1: ESMS (m/z) 526 (M-H).
Ejemplo 2 N-[(5-Carboxi-3-piridinil)carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina
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El compuesto arriba indicado fue preparado mediante el método B (RA:5-carboxi-3-piridinil). El compuesto de referencia A (200 mg) fue colocado en una columna de filtro de polipropileno 8.0 mL, provista de una llave de paso de 2 vías. La resina fue pretratada con CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL). La resina hinchada fue desprotegida a continuación con TFA/CH_{2}Cl_{2} al 50% (3 mL, 30 min). La resina fue enjuagada en el siguiente orden: CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), CH_{3}OH (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL). La resina fue hinchada con DMF (2 x 3 mL). 3,5-ácido dicarboxílico de piridina (138 mg) en DMF (1.0 mL) fue activado con 0,5 M HBTU/HOBT en DMF (1,6 mL) y DIEA (0,34 mL). El 3,5-ácido dicarboxílico de piridina preactivado fue añadido a continuación a la resina hinchada y la mezcla fue agitada durante 2 horas a temperatura ambiente. La resina fue filtrada y lavada en el siguiente orden: DMF (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), CH_{3}OH (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), respectivamente. Si una prueba Kaiser (Kaiser et al., anal. Biochem. 1970, 34, 594-598) sobre una pequeña cantidad de la resina resulta positiva (azul) entonces repetir el procedimiento de acoplamiento hasta que se obtenga un resultado negativo. La resina resultante fue secada a continuación al vacío a peso constante. La división de la resina (saponificación) se logró con LiOH/CH_{3}OH/THF (1:6:20). El material aglutinado con resina fue colocado en la columna de polipropileno y pretratado con THF (3 mL). Luego se añadió THF (4 ml), CH_{3}OH (1.0 ml) y 2N LiOH (0,390 ml). La mezcla fue agitada durante 15 minutos y filtrada en una probeta limpia y previamente pesada. La resina fue lavada a continuación con THF/5% CH_{3}OH (2 ml) y los filtrados combinados fueron evaporados. La goma resultante fue disuelta en H_{2}O (1 ml). La solución fue luego acidificada con 1N HCl al pH 2.0. El precipitado fue centrifugado, lavado con agua (2 x 5 ml) y secado al vacío para suministrar el compuesto del Ejemplo 2: ESMS (m/z) 501 (M-H).
Ejemplos 3, 4
Los compuestos siguientes fueron preparados de manera similar al compuesto del ejemplo 2:
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Ejemplo 5 N-(2-Carboxibenzoil)-4-[(2,6-diclorobenzoil)-amino]-L-fenilalanina
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El compuesto de título anterior fue preparado mediante el método C (RA:2-carboxifenil). El compuesto de Referencia A (150 mg) fue colocado en una columna de filtro de polipropileno 8.0 mL, provista de una llave de paso de 2 vías. La resina fue pretratada con CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL). La resina hinchada fue desprotegida a continuación con TFA/CH_{2}Cl_{2} al 50% (3 mL, 30 min). La resina fue enjuagada en el siguiente orden: CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), CH_{3}OH (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL). Se agregó anhídrido ftálico (80 mg, 0,54 mmol) en DMF (2.0 mL/DIEA (0,15 Ml). La mezcla fue agitada durante 3 días a temperatura ambiente. La resina fue filtrada y lavada en el siguiente orden: DMF (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), CH_{3}OH (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), respectivamente. Si una prueba Kaiser sobre una pequeña cantidad de la resina resulta positiva (azul) entonces repetir el procedimiento de acoplamiento hasta que se obtenga un resultado negativo. La resina resultante fue secada a continuación al vacío a peso constante. La división de la resina (saponificación) se logró con LiOH/CH_{3}OH/THF (1:6:20). El material aglutinado con resina fue colocado en la columna de polipropileno y pretratado con THF (3 mL). Luego se añadió THF (4 ml), CH_{3}OH (1.0 ml) y 2N LiOH (0,390 ml). La mezcla fue agitada durante 15 minutos y filtrada en una probeta limpia y previamente pesada. La resina fue lavada a continuación con THF/5% CH_{3}OH (2 ml) y los filtrados combinados fueron evaporados. La goma resultante fue disuelta en H_{2}O (1 ml). La solución fue luego acidificada con 1N HCl al pH 2.0. El precipitado fue centrifugado, lavado con agua (2 x 5 ml) y secado al vacío para suministrar el compuesto del Ejemplo 5: ESMS (m/z) 499 (M-H).
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Ejemplos 6-9
Los compuestos siguientes fueron preparados de manera similar al compuesto del ejemplo 5:
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Ejemplo 10 N-[[(2S)-2-Carboxi-1-pirrolodinil]carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina
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El compuesto arriba indicado fue preparado mediante el método D (RA:(2S)-2-Carboxi-1-pirrolodinil). El compuesto de Referencia A (100 mg) fue colocado en una columna de filtro de polipropileno 8.0 mL, provista de una llave de paso de 2 vías. La resina fue pretratada con CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL). La resina hinchada fue desprotegida a continuación con TFA/CH_{2}Cl_{2} al 50% (3 mL, 30 min). La resina fue enjuagada en el siguiente orden: CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), CH_{3}OH (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL). La resina fue tratada a continuación con p-nitrofenilcloroformato (130 mg) en THF/CH_{2}Cl_{2} (1,5 mL) y DIEA (100 mL). La mezcla fue agitada durante 2 horas a temperatura ambiente. La resina fue enjuagada en el siguiente orden: CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), CH_{3}OH (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL). La resina resultante fue tratada a continuación con éster metílico de L-prolina (60 mg) en DMF (2 mL) y Et_{3}N (100 mL) y la mezcla fue agitada durante 3 días a temperatura ambiente. La resina fue filtrada y lavada en el siguiente orden: DMF (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), CH_{3}OH (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), respectivamente. Si una prueba Kaiser sobre una pequeña cantidad de la resina resulta positiva (azul) entonces repetir el procedimiento de acoplamiento hasta que se obtenga un resultado negativo. La resina resultante fue secada a continuación al vacío a peso constante. La división de la resina (saponificación) se logró con LiOH/CH_{3}OH/THF (1:6:20). El material aglutinado con resina fue colocado en la columna de polipropileno y pretratado con THF (3 mL). Luego se añadió THF (4 ml), CH_{3}OH (1.0 ml) y 2N LiOH (0,390 ml). La mezcla fue agitada durante 15 minutos y filtrada en una probeta limpia y previamente pesada. La resina fue lavada a continuación con THF/5% CH_{3}OH (2 ml) y los filtrados combinados fueron evaporados. La goma resultante fue disuelta en H_{2}O (1 ml). La solución fue luego acidificada con 1N HCl al pH 2.0. El precipitado fue centrifugado, lavado con agua (2 x 5 ml) y secado al vacío para suministrar el compuesto del Ejemplo 10: ESMS (m/z) 492 (M-H).
Ejemplo 11 N-[[(2S)-2-Carboxi-1-piperidil]carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina
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El compuesto arriba indicado fue preparado de manera similar al compuesto del ejemplo 10. ESMS (m/z): 506 (M-H).
Ejemplo 12 N-[(4-Carboxifenoxi)]acetil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina
79
El compuesto arriba indicado fue preparado mediante el método E (ArX^{B}C)R^{10}R^{11}):(4-Carboxifenoxi)metil). El compuesto de Referencia A (100 mg) fue colocado en una columna de filtro de polipropileno 8.0 mL, provista de una llave de paso de 2 vías. La resina fue pretratada con CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL). La resina hinchada fue desprotegida a continuación con TFA/CH_{2}Cl_{2} al 50% (3 mL, 30 min). La resina fue enjuagada en el siguiente orden: CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), CH_{3}OH (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL). Se añadió ácido bromoacético (85 mg) y diisopropil-carbodiimida (80 mg) en DMF (2.0 Ml) y la mezcla fue agitada durante 1 hora a temperatura ambiente. La resina fue filtrada y lavada en el siguiente orden: DMF (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), CH_{3}OH (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), respectivamente. Si una prueba Kaiser sobre una pequeña cantidad de la resina resulta positiva (azul) entonces repetir el procedimiento de acoplamiento hasta que se obtenga un resultado negativo. Se pretrató p-hidroxibenzoato de metilo (91 mg) con NaH (20 mg) en THF (0,5 mL) y DMF (2 mL) durante 1,5 hr. El fenóxido resultante fue agregado a la resina y la mezcla fue agitada durante 2 hr a temperatura ambiente. La resina fue filtrada y lavada en el siguiente orden: DMF (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), CH_{3}OH (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), respectivamente. La resina resultante fue secada a continuación al vacío a peso constante. La división de la resina (saponificación) se logró con LiOH/CH_{3}OH/THF (1:6:20). El material aglutinado con resina fue colocado en la columna de polipropileno y pretratado con THF (3 mL). Luego se añadió THF (4 ml), CH_{3}OH (1.0 ml) y 2N LiOH (0,390 ml). La mezcla fue agitada durante 15 minutos y filtrada en una probeta limpia y previamente pesada. La resina fue lavada a continuación con THF/5% CH_{3}OH (2 ml) y los filtrados combinados fueron evaporados. La goma resultante fue disuelta en H_{2}O (1 ml). La solución fue luego acidificada con 1N HCl al pH 2.0. El precipitado fue centrifugado, lavado con agua (2 x 5 ml) y secado al vacío para suministrar el compuesto del Ejemplo 12: ESMS (m/z) 529 (M-H).
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Ejemplos 13-30
Los compuestos de los siguientes ejemplos fueron preparados de manera similar al Ejemplo 12:
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Ejemplo 31 4-[(2,6-Diclorobenzoil)]amino]-N-[(3-[N-metoxi-1-oxopropil)amino]benzoil]-L-fenilalanina
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El compuesto arriba indicado fue preparado mediante el método G N-[(3-[N-metoxi-1-oxopropil)amino]benzoil]. El compuesto de Referencia B1 (0,2 g) fue pretratado con CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL). La resina hinchada fue desprotegida a continuación con TFA/CH_{2} Cl_{2} al 50% (3 mL, 30 min). La resina fue enjuagada en el siguiente orden: CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), CH_{3}OH (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL). La resina fue hinchada con DMF (2 x 3 mL). El ácido 3-metoxipropiónico (81 mg) en DMF (1,0 mL) fue activado con 0,5 M HBTU/HOBT en DMF (1,6 mL) y DIEA (0,34 mL). El ácido 3-metoxi propiónico preactivado fue luego agregado a la resina hinchada y la mezcla fue agitada durante 2 horas a temperatura ambiente. La resina fue filtrada y lavada en el siguiente orden: DMF (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), CH_{3}OH (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), respectivamente. Si una prueba Kaiser sobre una pequeña cantidad de la resina resulta positiva (azul) entonces repetir el procedimiento de acoplamiento hasta que se obtenga un resultado negativo. La resina resultante fue secada a continuación al vacío a peso constante. La división de la resina (saponificación) se logró con LiOH/CH_{3}OH/THF (1:6:20). El material aglutinado con resina fue colocado en la columna de polipropileno y pretratado con THF (3 mL). Luego se añadió THF (4 ml), CH_{3}OH (1.0 ml) y 2N LiOH (0,390 ml). La mezcla fue agitada durante 15 minutos y filtrada en una probeta limpia y previamente pesada. La resina fue lavada a continuación con THF/5% CH_{3}OH (2 ml) y los filtrados combinados fueron evaporados. La goma resultante fue disuelta en H_{2}O (1 ml). La solución fue luego acidificada con 1N HCl al pH 2.0. El precipitado fue centrifugado, lavado con agua (2 x 5 ml) y secado al vacío para suministrar el compuesto del Ejemplo 31: ESMS (m/z) 556 (M-H).
Ejemplo 32 N-[(3-[N-[[(1-Carboximetil)ciclopentil]acetil]amino]benzoil]-N-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina
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El compuesto arriba indicado fue preparado mediante el método H: (3-[N-[[(1-Carboximetil)ciclopentil]acetil]amino]benzoil]. El compuesto de Referencia B1 (0,2 g) fue pretratado con CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL). La resina hinchada fue desprotegida a continuación con TFA/CH_{2}Cl_{2} al 50% (3 mL, 30 min). La resina fue enjuagada en el siguiente orden: CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), CH_{3}OH (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL). La resina fue hinchada con DMF (2 x 3 mL). Anhídrido 3,3-tetrametilenoglutárico (130 mg) disuelto en DMF (4 mL) fue añadido a la resina hinchada y agitado a 50ºC durante 2 horas. La resina fue filtrada y lavada en el siguiente orden: DMF (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), CH_{3}OH (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), respectivamente. Si una prueba Kaiser sobre una pequeña cantidad de la resina resulta positiva (azul) entonces repetir el procedimiento de acoplamiento hasta que se obtenga un resultado negativo. La resina resultante fue secada a continuación al vacío a peso constante. La división de la resina (saponificación) se logró con LiOH/CH_{3}OH/THF (1:6:20). El material aglutinado con resina fue colocado en la columna de polipropileno y pretratado con THF (3 mL). Luego se añadió THF (4 ml), CH_{3}OH (1.0 ml) y 2N LiOH (0,390 ml) a la resina hinchada. La mezcla fue agitada durante 15 minutos y filtrada en una probeta limpia y previamente pesada. La resina fue lavada a continuación con THF/5% CH_{3}OH (2 x 2 mL) y los filtrados combinados fueron evaporados. La goma resultante fue disuelta en H_{2}O (1 ml). La solución fue luego acidificada con 1N HCl al pH 2.0. El precipitado fue centrifugado, lavado con agua (2 x 5 ml) y secado al vacío para suministrar el compuesto del Ejemplo 32: ESMS (m/z) 556 (M-H).
Ejemplo 33 N-[(3-[N'-Carboximetil)ureido]benzoil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina 
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85
El compuesto arriba indicado fue preparado mediante el método I: (3-[N'-Carboximetil)ureido]benzoil]. El compuesto de Referencia B1 (0,2 g) fue pretratado con CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL). La resina hinchada fue desprotegida a continuación con TFA/CH_{2}Cl_{2} al 50% (3 mL, 30 min). La resina fue enjuagada en el siguiente orden: CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), CH_{3}OH (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL). La resina fue hinchada con DMF (2 x 3 mL). Isocianatoacetato etílico (101 mg) disuelto en DMF (3 mL) y DIEA (340 Ml) fue añadido a la resina hinchada. Esta mezcla de reacción fue agitada durante 6-8 horas a temperatura ambiente. La resina fue filtrada y lavada en el siguiente orden: DMF (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), CH_{3}OH (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), respectivamente. Si una prueba Kaiser (Kaiser et al., anal. Biochem. 1970, 34, 594-598) sobre una pequeña cantidad de la resina resulta positiva (azul) entonces repetir el procedimiento de acoplamiento hasta que se obtenga un resultado negativo. La resina resultante fue secada a continuación al vacío a peso constante. La división de la resina (saponificación) se logró con LiOH/CH_{3}OH/THF (1:6:20). El material aglutinado con resina fue colocado en la columna de polipropileno y pretratado con THF (3 mL). Luego se añadió THF (3,9 ml), CH_{3}OH (1.0 ml) y 2N LiOH (0,390 ml) a la resina hinchada. La mezcla fue agitada durante 15 minutos y filtrada en una probeta limpia y previamente pesada. La resina fue lavada a continuación con THF/5% CH_{3}OH (2 mL) y los filtrados combinados fueron evaporados. La goma resultante fue disuelta en H_{2}O (1 ml). La solución fue luego acidificada con 1N HCl al pH 2.0. El precipitado fue centrifugado, lavado con agua (2 x 5 ml) y secado al vacío para suministrar el compuesto del Ejemplo 33: ESMS (m/z)
571 (M-H).
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(Tabla pasa a página siguiente)
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Ejemplos 34-87
Los compuestos de los siguientes ejemplos fueron preparados de manera similar a la descrita anteriormente.
86
87
88
89
90
91
Ejemplos del compuesto de referencia
Compuesto de Referencia A
92
La anexión de N-terc-butoxicarbonil-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina a la resina Merrifield se realizó utilizando el método Horiki (Horiki et al., Che. Lett. 1978 (2) 165-168). En un matraz de fondo redondo de 250 mL provisto de un tubo de secado, se añadió la resina Merrifield (Biorad, 10.0 g, 13,5 mmol/g) y fluoruro de potasio anhidro (1,57 g) a una solución de N-terc-butoxicarbonil-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina (Compuesto 10, 6.13 g) en DMF seco (100 mL). La mezcla de reacción fue agitada a 80ºC en un baño de aceite durante 24 hr. La resina enfriada fue filtrada a continuación y lavada a fondo con DMF (2 x 250 mL), DMF acuoso al 50% (3 x 250 mL), metanol (3 x 250 mL), diclorometano (3 x 250 mL) y por último metanol (3 x 250 mL). La resina fue secada a continuación bajo presión reducida a peso constante para dar el Compuesto de Referencia A. La incorporación de N-terc-butoxicarbonil-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina a la resina se calculó ser de 1,3 mmol/g a partir del aumento de la masa de resina.
Compuestos de Referencia B-1, B-2, B-3 y B-4
93
94
El compuesto de Referencia A (200 mg) fue colocado en una columna de filtro de polipropileno provisto de llave de paso de 2 vías. La resina fue pretratada con CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL). La resina hinchada fue desprotegida a continuación con TFA/CH_{2}Cl_{2} al 50% (3-4 mL, 30 min) con agitación. La resina fue enjuagada en el siguiente orden: CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), CH_{3}OH (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL). La resina fue hinchada con DMF (2 x 3 mL). Ácido benzoico 3-(terc-butoxicarbonil-amino) (180 mg) en DMF (1.0 mL) fue activado con 0,5 M HBTU/HOBT en DMF (1,6 mL) y DIEA (0,34 Ml). El ácido benzoico preactivado 3-(terc-butoxicarbonil-amino fue añadido a continuación a la resina hinchada y la mezcla fue agitada durante 2 horas a temperatura ambiente. La resina fue luego lavada en el siguiente orden: DMF (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL), CH_{3}OH (2 x 3 mL), CH_{2}Cl_{2} (2 x 3 mL) y secada para dar el Compuesto de Referencia B-1. Si una prueba Kaiser sobre una pequeña cantidad de la resina resulta positiva (azul) entonces repetir el procedimiento de acoplamiento hasta que se obtenga un resultado negativo.
Compuestos de Referencia B-2, B-3 y B-4 fueron preparados de manera similar al compuesto de Referencia B-1.
Compuesto de Referencia C
Ácido benzoico 3-(terc-butoxicarbonilamino)
95
El ácido 3-aminobenzoico (10.0 g) fue disuelto en 1N NaOH (160 mL) y enfriado a 0ºC. A esta solución se añadió a gotas, con agitación, t-butil dicarbonato (17,5 g) en dioxano (100 mL). Después de la adición completa del t-butil dicarbonato, la mezcla de reacción fue calentada a temperatura ambiente y agitada vigorosamente durante 14 horas. El dioxano fue evaporado y la fase acuosa fue extraída con Et_{2}O (2 x 100 ml). La capa acuosa fue acidificada a continuación al pH = 2,0 con 1N HCl. El precipitado fue filtrado y lavado con agua, y secado al vacío para obtener ácido benzoico 3-(terc-butoxicarbonilamino) (9,25 g): ^{1}H NMR (400 MHz, DMSO-d_{6}), \delta 9,56(1H), 8,16(1H), 7,63(1H), 7,55(1H), 7,37(1H), 1,49(9H); ESMS (m/z) 238 MH^{+}.
Ejemplos 88-137
Las síntesis de los compuestos de Ejemplos 88-137 son las siguientes:
Esquema 1
96 
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Esquema 2
97 
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Esquema 3
98 
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Esquema A
99 
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Esquema B
100 
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Esquema C
101 
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Esquema D
102 
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Esquema E
103 
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Esquema F
104 
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Esquema G
105 
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Esquema H
106 
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Esquema I
107 
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Esquema J
108 
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Esquema K
109 
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Esquema L
110 
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Esquema M
111
112 
\newpage
Esquema N
113 
\newpage
Esquema O
114 
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Esquema P
115
Esquema 1
Un método para la preparación de esta estructura general 1-F, con un segmento cicloalcanoil N-sustituido, viene dado en el Esquema 1. La condensación de un ácido cicloalcanoico 1-4 R^{4}-sustituido con aminoéster 1-B da amidoéster 1-C. El nitro sustituyente de amidoéster 1-C es reducido por métodos estándar para dar el amidoéster 1-D amina-sustituido. La acilación de 1-D suministra 1-E (Y = NCO). La funcionalidad de R^{4} puede ser cambiada (como por ejemplo mediante oxidación, reducción, sustitución, epimerización y/o degradación) por métodos sintéticos estándar. La hidrólisis de 1-E da el amidoácido 1-F.
Ejemplo 88 (TR-9712)
Esquema didáctico A
El esquema didáctico A ejemplifica la práctica del Esquema 1 mostrando la síntesis del Ejemplo 88 en el que (con referencia a la estructura 1-F), R^{4} es 3-acetil, m y n igual a 1, Z_{x} y Z_{y} son CH, Y es -NHC(O)-, X es 2,6-dicloro, la estereoquímica del segmento cicloalcanoil es (1S-cis) y la estereoquímica del amidoácido es L.
(1S-cis)-3-Acetil-2,2-ácido dimetilciclobutaneacético [64396-97-0] (fórmula), A-2. Este material fue preparado como se describe en Wolk et al. (Wolk, J.L.; Goldschmidt, A.; Dunkelblum, E. Synthesis 1986, 347-348) desde (+)-\alpha-PINENE a-1: MP 67-69ºC; TLC R_{f}=0.19 (800:200:1 hexanos/EtOAc/HCO_{2}H); [\alpha]^{25}_{D} +93 (c 1.0, CHCl_{3}); ^{13}C NMR (CDCl_{3}, 75 MHz) \delta 207,87, 178,94, 54,20, 43,29, 37,71, 34,87, 30,18, 30,15, 22,79, 17,30.
(1S-cis)-N-[(3-Acetil-2,2-dimetilciclobutil)acetil]-4-nitro-L-éster metílico de fenilalanina (fórmula). A una mezcla de ácido A-2 (1,82 g, 9,88 mmol), EDC (2,00 g, 10,22 mmol), HOBt (1,40 g, 10,33 mmol), DMPA (0.362 G, 2,96 mmol) y Compuesto de amina 3 (10.22 mmol) en CH_{2}Cl_{2} a 0ºC se añade Et_{3}N (1.67 mL, 11,89 mmol). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante 40 h. Se diluye con CH_{2}Cl_{2}. La mezcla CH_{2}Cl_{2} se extrae con H_{2}O, Hcl 0,5 M acuoso, H_{2}O, NaHCO_{3} satd acuoso y H_{2}O y luego se seca y concentra hasta obtener un aceite amarillo. El aceite se purifica mediante cromatografía de sílice para dar A-3: TLC R_{f} = 0.40 (3:1 EtOAc/hexanos); ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300 mhZ) \delta 8,14(m, 2H), 7,28(m, 2H), 6,02(s, 1H), 4,90(m, 1H), 3,73(s, 3H), 3,27(m, 1H), 3,13(m, 1H), 2,88(m, 1H), 2,39-1,72(m, 5H), 2,02(s, 3H), 1,28(s, 3H), 0,82(s, 3H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}, 75 MHz) \delta 207,53, 171,57, 171,53, 147,19, 143,88, 130,14, 123,72, 54,13, 52,76, 52,64, 43,25, 38,27, 37,94, 37,23, 30,26, 30,21, 22,93, 17,50.
(1S-cis)-N-[(3-Acetil-2,2-dimetilciclobutil)acetil]-4-amino-L-éster metílico de fenilalanina (fórmula). Una mezcla de A-3 (0,80 g, 2,05 mmol) y 10% Pd/C (0,036 g) en MeOH es hidrogenada (38 psi H2, 2 h). La mezcla se filtra y concentra para dar A-4: TLC R_{f} = 0,33 (3:1 EtOAC/hexanos); ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300MHz) \delta 6,86(0, 2H), 6,61(m, 2H), 5,77(m, 1H), 4,82-4,75(m, 1H), 3,72(s, 3H), 3,62(s, 1H), 2,99(m, 2H), 2,86(m, 1H), 2,39-2,00(m, 2H), 2,03(s, 3H), 1,99-1,82(m, 2H), 1,59(m, 2H), 1,29(s, 3H), 0,84(s, 3H); MS (FAB) m/z 361 (M+H)^{+}, 203, 177, 132, 106.
(1S-cis)-N-[(3-Acetil-2,2-dimetilciclobutil)acetil]-4-[2,6-diclorobenzoil)amino]-L-éster metílico de fenilalanina
(fórmula). A-5. A una solución de 2,6-diclorobenzoil cloruro (0,28 mL, 1.98 mmol) en THF a temperatura ambiente bajo Ar se añade a gotas durante más de 15 minutos una solución de 17 (0,70 g, 1,94 mmol) en THF. La mezcla de reacción se agita durante toda la noche. Se diluye con EtOAc. La mezcla de reacción se extrae con 1M HCl aq, 1M NaOH acuoso y salmuera. Los extractos acuosos combinados se extraen de nuevo con EtOAc. Los extractos EtOAc combinados se secan y concentran para dar A-5 como sólido de color beige: TLC R_{f} = 0,14 (1:1 EtOAc/hexanos); ^{1}H NMR (CDC_{3}, 300 MHz) \delta 9,57(s, 1H), 7,57(m, 2H), 7,28-7,17(m, 3H), 6,99(m, 2H), 6,37(m, 1H), 4,77(m, 1H), 3,63(s, 3H), 3,05-2,91(m, 2H), 2,76(m, 1H), 2,28-1,72(m, 5H), 2,02(s, 3H), 1,18(s, 3H), 0,75(s, 3H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}, 75 MHz) \delta 207,63, 172,05, 171,67, 162,60, 137,18, 136,75, 132,38, 132,18, 130,40, 129,63, 127,87, 120,38, 54,12, 53,06, 52,20, 43,36, 38,34, 37,10, 36,94, 30,12, 30,05, 23,05, 17,34, MS (FAB) m/z 533 (M+H)^{+}.
(1S-cis)-N-[(3-Acetil-2,2-dimetilciclobutil)acetil]-4-[2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina (fórmula, Ejemplo 88). A una solución de éster A-5 (0,483 g, 0,90 mmol) en 5:1 THF/MeOH (23 mL) a temperatura ambiente bajo Ar se añade una solución de LiOH H_{2}O (0,088 g, 2,08 mmol) en H_{2}O (4,6 mL). La mezcla de reacción se agita durante 2 horas. Se acidifica con 1M HCl aq, diluido con H_{2}O, y se extrae con EtOAc. Los extractos EtOAc combinados se lavan con salmuera. Se secan y concentran hasta formar un sólido blanquecino. El sólido se disuelve en MeCN (15 mL), y la solución se diluye con H_{2}O (15 mL). Esta solución se congela y liofiliza para dar Ejemplo 88 como un sólido similar al algodón: mp 129-133ºC; TLC R_{f} = 0.21 (500:500:5 EtOAc/hexanos/HCO_{2}H); ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 8,97(s, 1H), 7,58(m, 2H), 7,33-7,18(m, 4H), 7,11(m, 2H), 6,11(m, 1H), 4,74(m, 1H), 3,21-3,04(m, 2H), 2,93-2,76(m, 1H), 2,48-1,74(m, 5H), 1,97(s, 3H), 1,24(s, 3H), 0,79(s, 3H); MS (FAB) m/z 519 (M+H)^{+}, Anal. C 59,41, H 5,57, Cl 13,20, N 5,31 (calculado corregido para 1,02% H_{2}O: C 60,12, H 5,43, Cl 13,65, N 5,39).
Ejemplo 89
Esquema didáctico B
El Esquema didáctico B ejemplifica la práctica del Esquema 1 mostrando la síntesis del ejemplo 89 en el que (con referencia a la estructura 1-F) R^{4} es 3-(1-hidroxietil), m y n igual a 1, Z_{x} y Z_{y} son CH, Y es -NHC(O), X es 2,6-dicloro, la estereoquímica del segmento cicloalcanoil es [1S-(1alfa, 3alfa)] y la estereoquímica del amidoácido es L. El ejemplo 89 ejemplifica un cambio en la funcionalidad de R^{4} donde el sustituyente acetil (1-E, R^{4} es acetil) es reducido (1-E, R^{4} es 1-hidroxietil) antes de la preparación de 1-F.
[1S-(1\alpha,3\alpha)]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-N-[[3-(1-hidroxietil)-2,2-dimetilciclobutil]acetil]-L-éster metílico de fenilalanina (fórmula). A una solución de A-5 (0,503 g, 0,94 mmol) en THF a 0º bajo Ar se añade NaBH_{4} sólido (0,242 g, 6,47 mmol). La mezcla de reacción se agita durante 4 horas a 0ºC. Se almacena toda la noche a -20ºC y luego se agita durante otra hora a 0ºC. La mezcla de reacción se vierte en una mezcla fría de 1M HCl aq y salmuera, y se extrae con CH_{2}Cl_{2}. Los extractos CH_{2}Cl_{2} combinados se lavan con salmuera, se secan, filtran y concentran para dar una espuma blanca. Esta espuma se purifica por cromatografía de destello de sílice para dar B-1: TLC R_{f} = 0,33 (95:5 CH_{2}Cl_{2}/MeOH); ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 9,26(s, 1H), 7,59(m, 2H); 7,33-7,21(m, 1H), 7,25(m, 2H), 7,03(m, 2H), 6,07(m, 1H), 4,85-4,74(m, 1H), 3,68(s, 3H), 3,66-3,52(m, 1H), 3,12-2,94(m, 2H), 2,24-1,95(m, 5H), 1,94-1,83(m, 1H), 1,76-1,57(m, 1H), 1,06(s, 3H), 0,97(m, 3H), 0,95(s, 3H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}, 75 MHz) \delta 172,10, 172,04, 162,61, 137,09, 136,64, 132,47, 132,18, 130,51, 129,75, 127,96, 120,39, 68,94, 52,98, 52,30, 50,26, 38,32, 37,29, 37,19, 30,88, 26,66, 21,26, 16,84; MS (FAB) m/z 535 (M+H)^{+}.
[1S-(1\alpha,3\alpha)]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-N-[[3-(1-hidroxietil)-2,2-dimetilciclobutil]acetil]-L-fenilalanina (fórmula). Ejemplo 89. El ejemplo 89 se prepara a partir de B1 como se describe para el ejemplo 88: mp 145-149ºC; TLC R_{f} = 0.49 (750:250:5 EtOAc/hexanos/HCO_{2}H); ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 9,21(s, 1H), 7,60(m, 2H), 7,27(m, 3H), 7,09(m 2H), 6,06(m, 1H), 4,72(m, 1H), 3,61(m, 1H), 3,09(m, 2H), 2,24-1,96(m, 2H), 1,99(s, 3H), 1,87(m, 1H), 1,68(m, 1H), 1,20(m, 1H), 1,05(s, 3H), 0,97(m, 3H), 0,94(s, 3H); MS (FAB) m/z 523, 521 (M+H)^{+} Anal. C 59,03, H 5,96, Cl 13,20, N 5,27 (calculado para 1.0% H_{2}O: C 59,28, H 5,85, Cl 13,46, N 5,32).
Esquema 2
Otro método para la síntesis de la estructura general 1-F se da en el Esquema 2, en el que el cambio de R^{4} puede ser realizado en el punto de estructura 1-B. La funcionalidad R^{4} de 1-B se cambia (como por oxidación, reducción, sustitución, epimerización, y/o degradación) para dar 2-C. El nitro sustituyente de estructura 2-C se reduce a la amina 2-D, que puede ser sustituida para dar 2-E que es hidrolizado a estructura 1-F.
Ejemplo 90
Esquema didáctico C
El Esquema didáctico C ejemplifica la práctica del Esquema 2 mostrando la síntesis del Ejemplo 90 en el que (con referencia a la estructura 1-F) R^{4} es 3-carboxi, m y n igual a 1, Z_{x} y Z_{y} son CH, Y es -NHC(O)-, X es 2,6-dicloro, la estereoquímica del segmento cicloalcanoil es (1S-cis) y la estereoquímica del amidoácido es L.
(1S-cis)-N-[[[3-(1 Metoxi-1-oxometil)]-2,2-dimetilciclobutil]-acetil]-4-nitro-L éster metílico de fenilalanina (fórmula). La degradación haloforme de la metil cetona se lleva a cabo como se describe en Fernández et al. (Fernández, F.; Lopez, C; Hergueta, A. R. Tetrahedron 1995, 51, 10317-10322): A una solución de 1M NaOH aq (18,4 ml) a 0º bajo Ar se añade Br_{2} a gotas (0,22 mL, 4,2 mmol). Esta mezcla se agita durante 30 minutos después de que se haya disuelto todo el Br_{2}. En este momento, se añade lentamente una solución de A-3 (0,405 g, 1,04 mmol) en dioxano (2 mL). La mezcla de reacción se agita durante una hora a 0ºC a temperatura ambiente durante 2 horas. Se enfría a 0ºC y se templa con 1M NaHSO_{3} aq. La solución se extrae con Et_{2}O, y los extractos Et_{2}O se desechan. La solución acuosa alcalina se acidifica con HCl acuoso conc y se extrae con EtOAc. Los extractos EtOAc combinados se secan, filtran y concentran en un sólido blanquecino. A este sólido, disuelto en 3:1 EtOAc/THF se añade CH_{2}N_{2} etéreo. La solución amarilla se agita durante 30 minutos a 0ºC. El exceso de CH_{2}N_{2} se elimina mediante una corriente de N_{2}. La solución resultante se concentra para dar un aceite de color amarillo pálido que es purificado por destello de sílice para dar C-1: TLC R_{f} = 0,36 (1:1 EtOA/hexanos); ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 8,15(m, 2H), 7,28 (m, 2H), 5,94(m, 1H), 4,91(m, 1H), 3,74(s, 3H), 3,65(s, 3H), 3,28(m, 1H), 3,15(m, 1H), 2,73(m, 1H), 2,37-1,84(m, 5H), 1,19(s, 3H), 0,89(s, 3H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}, 75 MHz) \delta 173,26, 171,52, 147,22, 143,88, 130,15, 123,74, 60,21, 52,77, 52,66, 51,28, 46,10, 42,62, 38,57, 37,94, 37,49, 29,96, 24,50, 17,87: MS (EI) m/z 406 (M^{+}).
(1S-cis)-N-[[3-(1 Metoxi-1-oxometil)]-2,2-dimetilciclobutil]-acetil]-4-amino-L éster metílico de fenilalanina (fórmula). Hidrogenación de C-1 como se describe para A-4 suministra C-2: TLC R_{f} = 0.17 (1:1 EtOAc/hexanos); ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300MHz) \delta 6,87(m, 2H), 6,65(m, 2H), 5,85(m, 1H), 4,79(m, 1H), 3,71(s, 3H), 3,65(s, 3H), 3,47(s, 1H), 3,07-2,89(m, 4H), 2,72(m, 1H), 2,38-1,83(m, 4H), 1,18(s, 3H), 0,88(s, 3H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}, 75 MHz) \delta 173,39, 172,29, 171,40, 144,70, 130,12, 125,99, 115,74, 53,15, 52,28, 51,23, 46,15, 42,73, 38,62, 37,51, 37,06, 29,88, 24,61, 17,89: MS (EI) m/z 376 (M^{+}).
(1S-cis)-N-[[3-(1 Metoxi-1-oxometil)]-2,2-dimetilciclobutil]-acetil]-4-[2,6-diclorobenzoil)amino]-L-éster metílico de fenilalanina (fórmula). Amina C-2 es acilada como se describe para A-5, para dar C-3 como un sólido de color beige: TLC R_{f} = 0,32 (1:1 EtOAc/hexanos); ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300MHz) \delta 9,92(s, 1H), 7,59(m, 2H), 7,27(m, 2H), 7,35-7,11(m, 1H), 7,02(m, 2H), 6,70(m, 2H), 4,70(0, 1H), 3,64(s, 3H), 3,55(s, 3H), 3,06-2,89(m, 2H), 2,62(m, 1H), 2,13-2,04(m, 3H), 1,98-1,77(m, 2H), 1,09(s, 3H), 0,82(s, 3H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}, 75 MHz) \delta 172,82, 171,70, 171,34, 162,23, 136,87, 136,45, 131,97, 131,87, 130,01, 129,23, 127,49, 119,97, 52,75, 51,78, 50,69, 45,66, 42,35, 38,31, 36,71, 29,44, 24,11, 17,33; MS (FAB) m/z 549 (MH)^{+}.
(1S-cis)-N-[(3-Carboxi-2,2-dimetilciclobutil]-acetil]-4-[2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina (fórmula), ejemplo 90. Éster C-3 es saponificado (como se describe para el ejemplo 88) para dar el Ejemplo 90 como un sólido blanquecino: mp 143-146ºC; TLC R_{f} = 0.32 (750:250:5 EtOAc/hexanos/HCO_{2}H); [\alpha]^{25}_{D}+4 (c 0.8, MeOH); ^{1}H NMR/CDCl_{3}, 300MHz) \delta 8,96(s, 1H), 7,57(m, 2H), 7,32-7,21(m, 3H), 7,12(m, 2H), 6,16(m, 2H), 4,84-4,72(m, 1H), 3,14-3,06(m, 2H), 2,72-2,61(m, 1H), 2,42-1,78(m, 5H), 1,16(s, 3H), 0,93(s, 3H); MS (FAB) m/z 521 [M+H]^{+}; Anal. C 56,55, H 5,09, Cl 13,27, N 5,03 (calculado para 1,49% H_{2}O: C 57,59, H 5,03, Cl 13,60, N 5,37).
Ejemplo 91
Esquema didáctico D
Esquema didáctico D ejemplifica la práctica del Esquema 1 mostrando la síntesis del Ejemplo 91 en el que (con referencia a la estructura 1-F) R^{4} es 3-acetil, m y n igual a 1, Z_{x} y Z_{y} son CH, Y es -NHC(O)-, X es 2,6 dicloro, la estereoquímica del segmento cicloalcanoil es (1R-cis) y la estereoquímica del aminoácido es L.
(1R-cis)-3-Acetil-2,2-dimetilciclobutano ácido acético - [52305-34-7] (fórmula). Este material fue preparado como se describe en Wolk et al. (Wolk, J.L.; Goldschmidt, Z.; Dunkelblum, E. Síntesis 1986, 347-348) de (-)-\alpha-pineno D-1.
(1R-cis)-N-[(3-Acetil-2,2-dimetilciclobutil)acetil]-4-nitro-L-éster metílico de fenilalanina (fórmula). Este compuesto se prepara a partir de D-2 y Compuesto 3 por el procedimiento mostrado para A-3: TLC R_{f} = 0.32 (1:1 EtOAc/hexanos); ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 8,15(m, 2H), 7,29(m, 2H), 5,95(m, 1H), 4,90(m, 1H), 3,74(s, 3H), 3,28(m, 1H), 3,15(m, 1H), 2,86(m, 1H), 2,39-1,83(m, 5H), 2,06(s, 3H), 1,27(s, 3H), 0,80(s, 3H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}, 75 MHz) \delta 207,50, 171,56, 175,48, 147,21, 143,89, 130,19, 123,73, 54,16, 52,73, 52,66, 43,23, 38,18, 37,97, 37,18, 30,25, 30,20, 22,98, 17,43.
(1R-cis)-N-[(3-Acetil-2,2-dimetilciclobutil)acetil]-4-amino-L-éster metílico de fenilalanina (fórmula). Este compuesto se prepara por el procedimiento mostrado para A-4: TLC R_{f} = 0.11 (1:1 EtOAc/hexanos); ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 6,86(m, 2H), 6,62(m, 2H), 5,80(m, 1H), 4,78(m, 1H), 3,71(s, 3H), 3,95-3,17(m, 2H), 3,05-2,91(m, 2H), 2,85(m, 1H), 2,27(m, 1H), 2,24-1,82(m, 4H), 2,07(s, 3H), 1,28(s, 3H), 0,82(s, 3H); MS (FAB) m/z 361 [M+H]^{+}.
(1R-cis)-N-[(3-Acetil-2,2-dimetilciclobutil)acetil]-4-[2,6-diclorobenzoil) amino]-L-éster metílico de fenilalanina (fórmula). D-5. Este compuesto se prepara por el procedimiento mostrado para D-5: TLC R_{f} = 0.16 (1:1 EtOAc/hexa-
nos) ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 9,32(s, 1H), 7,59 (d, 2H, J = 8.5), 7,32-7,20(m, 1H), 7,26(d, 2H, J = 8.4), 7,03(d, 2H, J = 8,4), 6,24(d, 1H, J = 7,9), 4,77(m, 1H), 3,67(s, 3H), 3,10-2,93(m, 2H), 2,79(dd, 1H, J = 7,9), 4,77(m, 1H), 3,67(s, 3H), 3,10-2,93(m, 2H), 2,79(dd, 1H, J = 10,1, 2,4), 2,28-1,74(m, 5H), 1,98(s, 3H), 2,21(s, 3H), 0,75(s, 3H); MS (FAB) m/z 533 [M+H]^{+}.
(1R-cis)-N-[(3-Acetil-2,2-dimetilciclobutil)acetil]-4-[2,6-diclorobenzoil) amino]-L-fenilalanina (fórmula, ejemplo 91). Este compuesto se prepara por el procedimiento mostrado para el ejemplo 88: mp 127-130ºC; TLC R_{f} = 0,21(500:500:5 EtOAc/hexanos/HCO_{2}H); ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 8,84(s, 1H), 7,58(m, 2H), 7,33-7,22(m, 1H), 7,27(m, 2H), 7,12(m, 2H), 6,10(m, 1H), 4,76(m, 1H), 3,19-3,02(m, 2H), 2,81(m, 1H), 2,30-1,78(m, 5H), 1,98(s, 3H), 1,22(s, 3H), 0,77(s, 3H); MS (FAB) m/z 519 (M+H)^{+}; Anal. C 59,65, H 5,45, Cl 13,78, N 5,23 (calculado para 0,75% H_{2}O: C 59,67, H 5,48, Cl 13,78, N 5,35).
Ejemplo 92
Esquema didáctico E
El Esquema didáctico E ejemplifica la práctica del Esquema 1 mostrando la síntesis del Ejemplo 92 en el que (con referencia a estructura 1-F) R^{4} es 3-(1-hidroxietil), m y n igual a 1, Z_{x} y Z_{y} son CH, Y es -NHC(O)-, X es 2,6 dicloro, la estereoquímica del segmento cicloalcanoil es [1R-(1alfa, 3alfa)] y la estereoquímica del amidoácido es L. El ejemplo 92 ejemplifica un cambio en la funcionalidad de R^{4} donde el acetil sustituyente (1-E, R^{4} es acetil) es reducido (1-E, R^{4} es 1-hidroxietil) antes de la preparación de 1-F.
[1R-(1alfa, 3alfa)]-[(2,6-Diclorobenzoil)amino]-N-[[3-(1-hidroxietil)-2,2-dimetilciclobutil)acetil]-L-éster metílico de fenilalanina (fórmula), E-1. Este compuesto se prepara a partir del compuesto D-5 por el procedimiento mostrado en B-1: TLC R_{f} = 0,34 (97:3 CH_{2}Cl_{2}/MeOH); ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300MHz) \delta 7,57(m, 2H), 7,52(s, 1H), 7,39-7,23(m, 4H), 7,10(m, 2H), 5,83(m, 1H), 4,89-4,82(m, 1H), 3,78-3,63(m, 4H), 7,10(m, 2H), 5,83(m, 1H), 4,89-4,82(m, 1H), 3,78-3,63(m, 1H), 3,75(s, 3H), 3,18-3,06(m, 2H), 2,24-1,86(m, 4H), 1,78-1,68(m, 1H), 1,20-1,05(m, 1H), 1,13(s, 3H), 1,02(m, 3H), 0,97 (s, 3H); MS (FAB) m/z 535 (M+H)^{+}.
[1R-(1alfa, 3alfa)]-4-[(2,6-Diclorobenzoil)amino]-N-[[3-(1-hidroxietil)-2,2-dimetilciclobutil)acetil]-L-fenilalanina (fórmula), Ejemplo 92. Este compuesto se prepara a partir del compuesto E-1 por el procedimiento mostrado para el ejemplo 88: TLC R_{f} = 0,50 (750:250:5 EtOAc/hexanos/HCO_{2}H); ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 8,87(s, 1H), 7,57(m, 2H), 7,34-7,22(m, 4H), 7,13(m, 2H), 6,02(m, 1H), 4,76(m, 1H), 3,63(m, 1H), 3,15-3,07(m, 2H), 2,25-1,83(m, 4H), 1,77-1,54(m, 1H), 1,17-1,03(m, 1H), 1,07(s, 3H), 0,98(m, 3H), 0,94(s, 3H): MS (FAB) m/z 521 (m+H)^{+}; C 59,16, H 5,95, Cl 13,25, N 5.36 (calculado para 1,48% H_{2}O: C 59,00, H 5,88, Cl 13,40, N 5,29).
Ejemplo 93
Esquema didáctico F
El Esquema didáctico F ejemplifica la práctica del Esquema 2 mostrando la síntesis del Ejemplo 93 en el que (con referencia a estructura 1-F) R^{4} es 3-carboxi, m y n igual a 1, Z_{x}, y Z_{y} son CH, Y es -NHC(O)-, X es 2,6 dicloro, la estereoquímica del segmento cicloalcanoil es (1R-cis), y la estereoquímica del amidoácido es L.
(1R-cis)-N-[[[3-(1-Metoxi-1-oxometil)]-2,2-dimetilciclobutil]-acetil]-4-nitro-L éster metílico de fenilalanina (fórmula). Este compuesto se prepara a partir del compuesto D-3 por el procedimiento mostrado para C-1: TLC R_{f} = 0.36 (1:1 EtOAc/hexanos); ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 8,15(m, 2H), 7,28(m, 2H), 5,91(m, 1H), 4,91(m, 1H), 3,74(s, 3H), 3,65(s, 3H), 3,29(m, 1H), 3,16(m, 1H), 2,73(m, 1H), 2,37-2,03(m, 4H), 1,92(m, 1H), 1,18(s, 3H), 0,83(s, 3H); MS (FAB) m/z 407 (M+H)^{+}.
(1R-cis)-N-[[3-(1 Metoxi-1-oxometil)]-2,2-dimetilciclobutil]-acetil]-4-amino-L éster metílico de fenilalanina (fórmula). Este compuesto se prepara a partir del compuesto F-1 por el procedimiento mostrado para A-4: TLC R_{f} = 0,31 (3:1 EtOAc/hexanos); ^{1}H MNR (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 6,87(m, 2H), 6,64(m, 2H), 5,81(m, 1H), 4,79(m, 1H), 3,78-3,28(m, 2H), 3,71(s, 3H), 3,65(s, 3H), 2,99(t, 2H, J = 5,6), 2,71(dd, 1H, J = 10,3, 2,3), 2,33-2,02(m, 4H), 1,91(dd, 1H. J = 11,2, 10,3), 1,18(s, 3H), 0,88(s, 3H); MS (FAB) m/z 377 (M+H)^{+}, 345, 316, 195, 177, 135, 106, 95.
(1R-cis)-N-[[3-(1 Metoxi-1-oxometil)]-2,2-dimetilciclobutil]-acetil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino-L-éster metílico de fenilalanina (fórmula). Este compuesto se prepara a partir del compuesto F-2 por el procedimiento mostrado para A-5: TLC R_{f} = 0,34 (1:1 EtOAc/hexanos); ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300MHz) \delta 7.57(m, 2H), 7,29-7,17(m, 3H), 7,01(m, 2H), 6,36(s, 1H), 4,71(m, 1H), 3,63(s, 3H), 3,54(s, 3H), 2,93(m, 2H), 2,61(m, 1H), 2,24-1,78(m, 5H), 1,16(s, 3H), 0,77(s, 3H).
(1R-cis)-N-[[3-(1 Metoxi-1-oxometil)]-2,2-dimetilciclobutil]-acetil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino-L-fenilalanina (fórmula). A una solución de diéster F-3 (0,603 g, 1,10 mmol) en 4:1 THF/MeOH (28 mL) a temperatura ambiente bajo Ar se añade una solución de LiOH. H_{2}O (0,120 g, 2,86 mmol) en H_{2}O (5,6 mL), seguida de H_{2}O_{2} aq al 30%. La reacción se agita durante 20 h. Se concentra in vacuo, y el residuo se pone en H_{2}O (45 mL). La solución acuosa se acidifica con 1M HCl aq (12 mL) y se extrae con EtOAc. Los extractos EtOAc combinados se lavan con salmuera, se secan, se concentran para dar F-4 como una espuma blanquecina: TLC R_{f} = 0,46 (750:250:5 EtOAc/hexanos/HCO_{2}H); ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 8,90(s, 1H), 7,58(m, 2H), 7,34-7,21(m, 4H), 7,12(m, 2H), 6,09(m, 1H), 4,75(m, 1H), 3,60(s, 3H), 3,22-2,98(m, 2H), 2,67(m, 1H), 2,37-1,78(m, 6H), 1,15(s, 3H), 0,83(s, 3H).
(1R-cis)-N-[(3-Carboxi-2,2-dimetilciclobutil]-acetil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino-L-fenilalanina (fórmula).
Ejemplo 93. A una solución de éster F-4 (0,569 g, 1,10 mmol) en 4:1 THF/MeOH (28.3 mL) a temperatura ambiente bajo Ar se añade una solución de LiOH. H_{2}O (0,120 g, 2,86 mmol) seguida de H_{2}O_{2} ac. al 30%. La reacción se agita durante 90 h y después se añaden porciones adicionales de LiOH. H_{2}O (0,120 g, 2,86 mmol) y H_{2}O_{2} ac. al 30%. La mezcla de reacción se agita durante 18 horas. Se concentra in vacuo y el residuo se pone en agua helada (90 g). La solución se acidifica con HCl 1M ac y se extrae con EtOAc. Los extractos EtOAc combinados se lavan con salmuera, se secan, se concentran para dar un sólido color crema. El sólido se disuelve en MeCN (15 mL), y la solución se diluye con H_{2}O (15 mL). La solución se congela y liofiliza para dar Ejemplo 93: mp 138-141ºC; TLC R_{f} = 0.29 (750:250:5 EtOAc/hexanos/HCO_{2}H); ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 9,24(s, 1H), 7,56(m, 2H), 7,31-7,19(m, 4H), 7,09(m, 2H), 6,13(m, 1H), 4,73(m, 1H), 3,17-2,96(m, 2H), 2,64(m, 1H), 3,17-2,96(m, 2H), 2,64(m, 1H), 2,34-2,03(m, 5H), 1,83(m, 1H), 1,13(s, 3H), 0,90(s, 1H); MS (FAB) m/z 523, 521 (M+H)^{+}; Anal, C 56,38, H 5,14, Cl 13,20, N 5,07 (calculado para 1,27% H_{2}O: C 58,86, H 5,11, Cl 13,43, N 5,30).
Esquema 3
Otro método para la preparación de la estructura general 1-F se da en el Esquema 3. En este esquema general un arilamidoéster (o heteroarilamidoéster) 3-A heteroátomo-sustituido (W igual a OH o NH_{2}), por métodos sintéticos estándar es alquilatado o acilatado (W igual a NH_{2}) para dar 3-B. El N-término de 3-B es desprotegido a 3-C que es acilatado con 1-A para dar 3-D. La funcionalidad de R^{4} puede ser cambiada (como por ejemplo mediante oxidación, reducción, sustitución, epimerización y /o degradación) por métodos sintéticos estándar. La hidrólisis de 3-D da el amidoácido 1-F.
Ejemplos 94 y 95
Esquema didáctico G
El Esquema didáctico G ejemplifica la práctica del Esquema 3 mostrando la síntesis de los Ejemplos 94 y 95 en el que (con referencia a la estructura 1-F) para el ejemplo 94, R^{4} es 3-carboxi, m igual a 1 y n igual a 0, Z_{x}, y Z_{y} son CH, Y es -OCH_{2}, X es 2,6-dicloro, la estereoquímica del segmento cicloalcanoil es (1S-trans) y la estereoquímica del amidoácido es L. Y para el ejemplo 95, R^{4} es 3-carboxi, m igual a 1 y n igual a 0, Z_{x} y Z_{y} son CH, Y es -OCH_{2}, X es 2,6-dicloro, la estereoquímica del segmento cicloalcanoil es (1S-cis) y la estereoquímica del amidoácido es L. Los ejemplos 94 y 95 ejemplifican los cambios en la funcionalidad R^{4}.
(1S-cis)-3-Acetil-2,2-ácido dimetilciclobutanocarboxílico (Fórmula). El compuesto G2 se prepara a partir de (-)-verbenona G-1 comercial como lo muestra Carlson et al. (Carlsen, P. H. J.; Hatsuki, T.; Martín, V.S.; Sharpless, K.B. J. Org. Chem. 1981, 46, 3936-3938; Carlsen, P.H. J.; Odden, W. Acta Chem. Scand. 1984, 38B, 501-504) and Webster et al. (Webster, F. X.; Rivas-Enterrios, J.; Silverstein, R.M. J. Org. Chem. 1987, 52, 689-691). El compuesto G-2 obtenido por estos procedimientos se purifica por cromatografía de sílice y cristaliza a partir de 4:1 hexanos/EtOAc para dar G-2 de excelente pureza enantiomérica: mp 133-134ºC; TLC (750:250:2,5 EtOAc/hexanos/HCO_{2}H) R_{f} = 0,25; [\alpha]_{D}^{25}-73,7 (c 1.0, CHCl_{3}); ^{13}C NMR (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 206,92, 177,94, 53,00, 44,99, 44,94, 30,29, 29,99, 18,81, 18,02; MS (FAB) m/z 171 [M+H]^{+}; Anal. C 63,68, H 8,32 (calculado C 63,51, H 8,29).
(1S-cis)-N-[(3-Acetil-2,2-dimetilciclobutil)carbonil]-4-[(2,6-diclorofenil)metoxi]-L-éster metílico de fenilalanina (fórmula) G-3. El compuesto G3 se obtiene del compuesto G-2 y Compuesto 7 como se muestra en la preparación del compuesto A-3: TLC (3:1 EtOAc/hexanos) R_{f} = 0,50; ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,37(m, 2H), 7,23(m, 1H), 7,05(m, 2H), 6,96(m, 2H), 5,79(m, 1H), 5,25(s, 2H), 4,87(m, 1H), 3,73(s, 3H), 3,09(m, 2H), 2,85(m, 1H), 2,64(m, 1H), 2,52(m, 1H), 2,05(s, 3H), 1,89(m, 1H), 1,42(s, 3H), 0,82(s, 3H); MS (FAB) m/z 506 [M+H]^{+}.
(1S-trans)-N-[(3-Acetil-2,2-dimetilciclobutil)carbonil]-4-[(2,6-diclorofenil)metoxi]-L-fenilalanina (fórmula) G4 y (1S-cis)-N-[(3-Acetil-2,2-dimetilciclobutil)carbonil]-4-[(2,6-diclorofenil)metoxi]-L-fenilalanina (fórmula) G5: A una solución de G-3 (1,23 mmol) en 4:1 THF/MeOH (32 mL) bajo Ar a temperatura ambiente, se añade una solución de LiOH. H_{2}O (0,121 g, 2,87 mmol) en H_{2}O (6,3 mL). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante 120 minutos. Se diluye en agua helada (55 mL) y se acidifica con HCl aq a un pH de 2-3. La mezcla resultante se extrae con EtOAc. Las porciones combinadas de EtOAc se lavan con salmuera y se secan y concentran para dar una espuma de color beige. Este material se purifica por cromatografía de sílice para separar G-4 y
G-5.
G-4: mp 84-86ºC; TLC (750:250:5 EtOAc/hexanos/HCO_{2}H) R_{f}= 0.43; ^{13}C NMR (75 MHz, 10:1 DCDl_{3}/CD_{3}
SOCD_{3}) \delta C: 207,00, 173,01, 170,52, 162,38, 136,48, 136,26, 132,60, 132,23, 44,66; CH: 130,40, 129,86, 127,80, 120,21, 52,78, 52,62, 46,18; CH_{2}: 37,05, 18,76; CH_{3}: 30,44, 29,81, 17,48; MS (FAB) m/z 492 [M+H]^{+}; Anal. C 60,79, H 5,56, Cl 13,94, N 2,81 (calculado para 0,57% H_{2}O: C 60,64, H 5,56, Cl 14,32, N 2,83).
G-5: mp 86-88ºC; TLC (750:250:5 EtOAc/hexanos/HCO_{2}H) R_{f}= 0.30; ^{13}C NMR (75 MHz, 10.1 CDCl_{3}/CD_{3}
SOCD_{3}) C: 208,12, 172,83, 171,84, 162,19, 136,64, 136,41, 132,22, 131,95, 42,42; CH: 131,87, 129,50, 128,60, 119,89, 53,13, 52,59, 46,45; CH_{2}: 36,39, 18,25; CH_{3}: 30,21, 24,93, 24,68; MS (FAB) m/z 492 [M+H]^{+}; Anal. C 60,15, H 5,76, Cl 14,40, N 2,85 (calculado para 0.84% H_{2}O: C 60,47, H 5,58, Cl 14,28, N 2,82).
(1S-trans)-N-[(3-Carboxi-2,2-dimetilciclobutil)carbonil]-4-[(2,6-diclorofenil)metoxi]-L-fenilalanina (fórmula),
Ejemplo 94: El ejemplo 94 se prepara por degradación del haloformo de G-4 como se muestra para el compuesto C-1: mp 94-96ºC; TLC (500:500:2,5 EtOAc/hexanos/HCO_{2}H) R_{f} = 0,33; [\alpha]_{D}^{25}+14 (c 0,96, MeOH); ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,34(m, 2H), 7,26-7,19(m, 2H), 7,09(m, 2H), 6,93(m, 2H), 5,81(m, 1H), 5,22(s, 2H), 4,93(m, 1H), 3,13(m, 2H), 2,93(m, 1H), 2,71(m, 1H), 2,32(m, 2H); 1,19(s, 3H), 1,14(s, 3H); MS (EI) m/z 493 (M^{+}); Anal. C 54,85, H 5,20, Cl 13,39, N 2,65 (calculado para 2,65% H_{2}O: C 55,76, H 5,26, Cl 13,96, N 2,76).
(1S-cis)-N-[(3-Carboxi-2,2-dimetilciclobutil)carbonil]-4-[(2,6-diclorofenil)metoxi]-L-fenilalanina (fórmula)
Ejemplo 95: El ejemplo 95 se prepara por degradación del haloformo de G-5 como se muestra para el compuesto C-1: mp 116-118ºC; TLC (120:40:1 EtOAc/hexanos/HCO_{2}H) R_{f} = 0,27; ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,31(m, 2H), 7,22(m, 3H), 7.09(m, 2H), 6.89(m, 2H), 6.00(s, 1H), 5.18(s, 2H), 4,71(m, 1H), 3.07(m, 2H), 2.58(m, 3H), 2.08(m, 3H), 1.28(s, 3H), 0.93(s, 3H); ^{13}C NMR (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 179,00, 178,09, 175,79, 162,48, 141,63, 136,84, 135,21, 135,18, 133,93, 133,18, 119.56, 69.88, 57,65, 51,40, 50,11, 48,62, 41,62, 35,11, 24,88, 22,71.
Ejemplo 96, 97 y 98
Esquema didáctico H
El esquema didáctico H ejemplifica la práctica del Esquema 1 mostrando la síntesis de los Ejemplos 96, 97 y 98 en el que (con referencia a la estructura 1-F), para el ejemplo 96, R^{4} es 3-acetil, m igual a 1 y n igual a 0, Z_{x} y Z_{y} son CH, Y es -NHC(O)-, X es 2,6-dicloro, la estereoquímica del segmento cicloalcanoil es (1S-trans) y la estereoquímica del amidoácido es L. Para el ejemplo 97, R^{4} es 3-acetil, m igual a 1 y n igual a 0, Z_{x} y Z_{y} son CH, Y es -NHC(O)-, X es 2,6-dicloro, la estereoquímica del segmento cicloalcanoil es (1S-cis) y la estereoquímica del amidoácido es L. Y para el ejemplo 98, R^{4} es 3-carboxi, m igual a 1 y n igual a 0, Z_{x} y Z_{y} son CH, Y es -NHC(O)-, X es 2,6-dicloro, la estereoquímica del segmento cicloalcanoil es (1S-trans y la estereoquímica del amidoácido es L.
(1S-cis)-N-[(3-Acetil-2,2-dimetilciclobutil)carbonil]-4-nitro-L-éster metílico de fenilalanina (fórmula), H-1: Compuesto G-2 y Compuesto G-3 están acoplados, como se muestra para el compuesto A-3 para dar el compuesto H-1: ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,16(m, 2H), 7,31(m, 2H), 5,94(m, 1H),4,94(m, 1H), 3,74(s, 3H), 3,28(m, 1H), 3,16(m, 1H), 2,88(m, 1H), 2,65(m, 1H), 2,51(m, 1H), 2,05(s, 3H), 1,91(m, 1H), 1,42(s, 3H), 0,79(s, 3H); ^{13}C NMR (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 206,94, 171,56, 170,91, 147,20, 143,82, 130,13, 123,74, 52,88, 52,64, 52,49, 46,47, 44,70, 38,20, 30,74, 30,11, 18,85, 17,71.
(1S-cis)-N-[(3-Acetil-2,2-dimetilciclobutil)carbonil]-4-amino-L-éster metílico de fenilalanina (fórmula), H-2. El compuesto H-2 se prepara a partir del compuesto H-1 como se muestra para la preparación del compuesto A-4: TLC (3:1 EtOAc/hexanos) R_{f} = 0,28; ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 6,89(m, 2H), 6,64(m, 2H), 5,75(m, 1H), 4,81(m, 1H), 3,71(s, 3H), 3,50(m, 2H), 2,99(m, 2H), 2,83(m, 1H), 2,62(m, 1H), 2,48(m, 1H), 2,05(s, 3H), 1,88(m, 1H), 1,41(s, 3H), 0,85(s, 3H); ^{13}C NMR (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 207,04, 172,26, 170,65, 145,12, 130,05, 125,64, 115,55, 52,98, 52,79, 52,23, 46,40, 44,87, 37,31, 30,65, 30,03, 19,05, 17,57; MS (FAB) m/z 347 [M+H]^{+}.
(1S-cis)-N-[(3-Acetil-2,2-dimetilciclobutil)carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino-L-éster metílico de fenilalanina (fórmula), H-3. El compuesto H-3 se prepara a partir del compuesto H-2 como se muestra para la preparación del compuesto A-5: TLC (3:1 EtOAc/hexanos) R_{f} = 0,36; ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,58(m, 2H), 7,50(s, 1H), 7,32(m, 3H), 7,13(m, 2H), 5,81(m, 1H), 4,88(m, 1H), 3,74(s, 3H), 3,11(m, 2H), 2,85(m, 1H), 2,63(m, 1H), 2,55(m, 1H), 2,03(s, 3H), 1,89(m, 1H), 1,42(s, 3H), 0,83(s, 3H); MS (FAB) m/z 519 [M+H]^{+}.
(1S-trans)-N-[(3-Acetil-2,2-dimetilciclobutil)carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina (fórmula),
Ejemplo 96 y (1S-cis)-N-[(3-Acetil-2,2-dimetilciclobutil)carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino-L-fenilalanina (fórmula), Ejemplo 97. La mezcla de los Ejemplos 96 y 97, preparada como se muestra para los Ejemplos G-4 y G-5 se separan y purifican por cromatografía de sílice.
Ejemplo 96
Mp 158-160ºC; TLC (750:250:5 EtOAc/hexanos/HCO_{2}H) R_{f} = 0,28; [\alpha]_{D}^{25}+43 (c 0,86, MeOH); ^{13}C NMR (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 208,12, 172,83, 171,84, 162,20, 136,64, 136,41, 132,22, 131,96, 129,98, 129,50, 127,48, 120,92, 119,89, 53,13, 52,59, 46,45, 42,42, 36,87, 30,21, 24,93, 24,68, 18,25; Anal, C 58,14, H 5,53, Cl 13,36, N 5,22 (calculado para 1,59% H_{2}O: C 58,47, H 5,28, Cl 13,81, N 5,46).
(1S-trans)-N-[(3-Carboxi-2,2-dimetilciclobutil)carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina (fórmula), Ejemplo 98.
El ejemplo 98 se prepara por degradación del haloformo del Ejemplo 96 como se muestra para el compuesto C-1: mp 159-161ºC; TLC (750:250:5 EtOAc/hexanos/HCO_{2}H) R_{f} = 0,31; [\alpha]_{D}^{25}+21 (c 0,79, MeOH); ^{13}C NMR (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 180,42, 177,94, 176,91, 167,31, 141,70, 141,47, 137,22, 137,11, 135,16, 134,68, 132,90, 132,63, 125,02, 57,62, 51,93, 50,82, 46,81, 41,82, 30,32, 29,59, 24,49; MS (FAB) m/z 507 [M+H]^{+}; Anal. C 54,59, H 4,81, Cl 13,21, N 5,30 (calculado para 1,66% H_{2}O: C 55,91, H 4,87, Cl 13,75, N 5,43).
Ejemplo 99
Esquema didáctico I
El esquema didáctico I ejemplifica la práctica del Esquema 2 mostrando la síntesis del Ejemplo 99 en el que (con referencia a la estructura 1-F), R^{4} es 3-carboxi, m igual a 1 y n igual a 0, Z_{x} y Z_{y} son CH, Y es -NHC(O)-, X es 2,6-dicloro, la estereoquímica del segmento cicloalcanoil es (1S-cis) y la estereoquímica del amidoácido es L.
(1S-cis)-N-[[3-(Metoxi-1-oxometil)-2,2-dimetilciclobutil)carbonil]-4-nitro-L-éster metílico de fenilalanina (fórmula) I-1: El compuesto H-1 está sujeto a degradación del haloformo, como se muestra para el compuesto C-1. A una solución del diácido resultante en EtOAc a 0ºC se añade una solución CH_{2}N_{2} etérea. La solución amarilla resultante se agita a 0ºC durante 15 minutos, después de lo cual el color amarillo se disipa por el paso de una corriente N_{2}. La solución se concentra para suministrar el compuesto I-1, como espuma de color beige: TLC (3:1 EtOAc/hexanos) R_{f} = 0,36; ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,11(m, 2H), 7,29(m, 2H), 6,00(m, 1H), 4,91(m, 1H), 3,70(s, 3H), 3,63(s, 3H), 3,28(m, 1H), 2,00(m, 1H), 1,28(s, 3H), 0,82(s, 3H); MS (FAB) m/z 393 [M+H]^{+}.
(1S-cis)-4-Amino-N-[[3-(1-metoxi-1-oxometil)-2,2-dimetilciclobutil)carbonil]-L-éster metílico de fenilalanina
(fórmula) I-2: El compuesto I-2 se prepara a partir del compuesto I-1 como se muestra para la preparación del compuesto A-4: TLC (3:1 EtOAc/hexanos) R_{f} = 0,17; ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 6,91(m, 2H), 6,68(m, 2H), 5,72(m, 1H), 4,82(m, 1H), 3,71(s, 3H), 3,67(s, 3H), 3,48(s, 2H), 3,01(m, 2H), 2,75(m, 1H), 2,62(m, 1H), 2,51(m, 1H), 2,02(m, 1H), 1,31(s, 3H), 0,91(s, 3H); ^{13}C NMR (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 172,64, 172,24, 170,66, 144,26, 130,10, 126,28, 115,95, 52,84, 52,25, 51,36, 46,70, 45,22, 44,32, 37,29, 30,35, 20,18, 17,95; MS (FAB) m/z 363 [M+H]^{+}.
(1S-cis)-4-[(Diclorobenzoil)amino-N-[[3-(1-metoxi-1-oxometil)-2,2-dimetilciclobutil)carbonil]-L-éster metílico
de fenilalanina (fórmula) I-3: El compuesto I-3 se prepara a partir del compuesto I-2 como se muestra para la preparación del compuesto A-5: TLC (3:1 EtOAc/hexanos) R_{f} = 0,34; ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,17(s, 1H), 7,57(m, 2H), 7,30(m, 2H), 7,07(m, 2H), 5,84(m, 1H), 4,83(m, 1H), 3,70(s, 3H), 3,62(s, 3H), 3,07(m, 2H), 2,72(m, 1H), 2,53(m, 2H), 1,28(s, 3H), 0,85(s, 3H).
(1S-cis)-N-[(3-Carboxi-2,2-dimetilciclobutil)carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina (fórmula),
Ejemplo 99: El ejemplo 99 se prepara por degradación del haloformo de I-3 como se muestra para el compuesto C-1: mp 154-156ºC; TLC (750:250:5 EtOAc/hexanos/HCO_{2}H) R_{f} = 0.26; [\alpha]_{D}^{25}+15 (c 0,85, MeOH); ^{13}C NMR (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 174,28, 173,17, 171,09, 162,56, 136,90, 136,71, 132,65, 132,37, 130,40, 129,91(2C), 127,88, 120,32, 61,29, 52,88, 46,67, 45,39, 43,84, 37,17, 30,41, 20,05, 18,05; MS (FAB) m/z 507 [M+H]^{+}; Anal, C 55,91, H 5,22, Cl 13,01, N 5,18 (calculado para 1,76% H_{2}O: C 55,82, H 4,88, Cl 13,73, N 5,42).
Ejemplo 100-103
Esquema didáctico J
El esquema didáctico J ejemplifica la práctica del Esquema 3 mostrando la síntesis de los Ejemplos 100, 101, 102 y 103 en el que (con referencia a la estructura 1-F), por ejemplo R^{4} es 3-acetil, m igual a 1 y n igual a 0, Z_{x} y Z_{y} son CH, Y es -NHC(O)-, X es 2,6-dicloro, la estereoquímica del segmento cicloalcanoil es (1R-trans) y la estereoquímica del amidoácido es L. Para el ejemplo 101 R^{4} es 3-acetil, m igual a 1 y n igual a 0, Z_{x} y Z_{y} son CH, Y es -NHC(O)-, X es 2,6-dicloro, la estereoquímica del segmento cicloalcanoil es (1R-cis) y la estereoquímica del amidoácido es L; para el ejemplo 102 R^{4} es 3-carboxi, m igual a 1 y n igual a 0, Z_{x} y Z_{y} son CH, Y es -NHC(O)-, X es 2,6-dicloro, la estereoquímica del segmento cicloalcanoil es (1R-trans) y la estereoquímica del amidoácido es L. Y para el ejemplo 103, R^{4} es 3-carboxi, m igual a 1 y n igual a 0, Z_{x} y Z_{y} son CH, Y es -NHC(O)-, X es 2,6-dicloro, la estereoquímica del segmento cicloalcanoil es (1R-cis) y la estereoquímica del amidoácido es L.
(1R)-(+)-4,6,6-Trimetilbiciclo[3.1.1]hept-3-en-2-uno [18309-32-5] (fórmula): (1R)-Verbenona fue preparado a partir de (1R)-(+)-alfa-pineno (97% ee) como lo describe Sivik et al. (Sivik, M.R.; Stanton, K. J.; Paquete, L.A. Org. Synth. 1993, 72, 57-61): TLC (10:1 hexanos/EtOAc) R_{f} = 0,23; [\alpha]_{D}^{25}+73 (c 1,01, CHCl_{3}); MS (FAB) m/z 171 [M+H]^{+}; Anal. C 63,59, H 8,26 (calculado C 63,51, H 8,29).
(1R-cis)-3-Acetil-2,2-ácido dimetilciclobutanocarboxílico [22571-78-4]: Compuesto J-2 preparado a partir de J-1 por los procedimientos citados en la preparación del compuesto G-2: mp 134-135ºC; [\alpha]_{D}^{25}+73 (c 1,01, CHCl_{3}); MS (FAB) m/z 171 [M+H]^{+}; Anal. C 63,59, H 8.26 (calculado C 63,51, H 8,29).
(1R-cis)-N-[(3-Acetil-2,2-dimetilciclobutil)carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-éster metílico de fenilalanina (fórmula) J-3): El compuesto J-3 se obtiene del compuesto J-2 y Compuesto 6 como se muestra en la preparación del compuesto A-3: TLC (3:1 EtOAc/hexanos) R_{f} = 0,50; ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 9,37(s, 1H), 7,59(m, 2H), 7,26(m, 3H), 7,05(m, 2H), 6,08(m, 1H), 4,79(m, 1H), 3,67(s, 3H), 3,06(m, 1H), 2,96(m, 1H), 2,78(m, 1H), 2,51(m, 2H), 1,98(s, 3H), 1,79(m, 1H), 1,32(s, 3H), 0,71(s, 3H); MS (EI) m/z 516 (M^{+}).
(1R-trans)-N-[(3-Acetil-2,2-dimetilciclobutil)carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina (fórmula),
Ejemplo 100 y (1R-cis)-N-[(3-Acetil-2,2-dimetilciclobutil)carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina
(fórmula), Ejemplo 101: Estos compuestos se preparan y separan como se muestra en la preparación de compuestos G-4 y G-5.
Ejemplo 100: mp 194-196ºC; TLC (750:250:5 EtOAc/hexanos/HCO_{2}H) R_{f} = 0,49; [\alpha]_{D}^{25}-18 (c 0,92, MeOH); ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 9,63(s, 1H), 7,51(m, 2H), 7,20(m, 3H), 7,06(m, 2H), 6,25(m, 1H), 4,71(m, 1H), 3,00(m, 3H), 2,42(m, 2H), 2,20(m, 1H), 2,01(m, 1H), 1,91(s, 3H), 0,98(s, 3H), 0,93(s, 3H); MS (EI) m/z 504 (M^{+}); Anal. C 58,80, H 5,14, Cl 13,05, N 5,54 (calculado para 1,46% H_{2}O: C 58,56, H 5,28, Cl 13,80, N 5,45).
Ejemplo 101: mp 208-209ºC; TLC (600:400:5 EtOAc/hexanos/HCO_{2}H) R_{f} = 0,35; [\alpha]_{D}^{25}+59 (c 0,96, MeOH); ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,89(s, 1H), 7,57(m, 2H), 7,28(m, 2H), 7,12(m, 2H), 6,01(m, 1H), 7,79(m, 1H), 3,09(m, 2H), 2,79(m, 1H), 2,55(m, 2H), 1,97(s, 3H), 1,81(m, 2H), 1,34(s, 3H), 0,76(s, 3H); MS (FAB) m/z 505 [M+H]^{+}; Anal. C 59,17, H 5,56, Cl 12,79, N 6,55 (calculado para 0,50% H_{2}O: C 59,28, H 5,50, Cl 12,96, N 6,40).
(1R-trans)-N-[(3-Carboxi-2,2-dimetilciclobutil)carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina (fórmula), Ejemplo 102: El ejemplo 100 está sujeto a degradación del haloformo, como se muestra para el compuesto C-1, para dar Ejemplo 102: TLC (750:250:5 EtOAc/hexanos/HCO_{2}H) R_{f} = 0,29; [\alpha]_{D}^{25}+2 (c 0,91, MeOH); ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 10,05(s, 1H), 7,65(m, 2H), 7,40-7,29(m, 3H), 7,19(m, 2H), 6,53(m, 1H), 4,81(m, 1H), 4,10(m, 1H), 3,10(m, 3H), 2,85(m, 1H), 2,73(m, 1H), 2,25(m, 2H), 1,16(s, 3H), 1,02(s, 3H); MS (FAB) m/z 507 [m+H]^{+} ; Anal. C 55,74, H 4,91, Cl 13,30, N 5,28 (calculado para 0,94% H_{2}O: C 56,28, H 4,83, Cl 13,84, N 5,45).
(1R-cis)-N-[(3-Carboxi-2,2-dimetilciclobutil)carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina (fórmula),
Ejemplo 103: El ejemplo 101 está sujeto a degradación del haloformo, como se muestra para el compuesto C-1, para dar Ejemplo 103: TLC (600:400:5 EtOAc/hexanos/HCO_{2}H) R_{f} = 0.24; [\alpha]_{D}^{25}+34 (c 0,90 MeOH); ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 9,53(s, 1H), 7,54(m, 2H), 7,28-7,17(m, 3H), 7,07(m, 2H), 6,13(m, 1H), 4,72(m, 1H), 4,02(m, 1H), 3,02(m, 2H), 2,66-2,35(m, 4H), 1,89(m, 1H), 1,20(s, 3H), 0,83(s, 3H); MS (FAB) m/z 507 [M+H]^{+}; Anal. C 52,81, H 4,59, Cl 12,41, N 4,85 (calculado para 2,1% H_{2}O: C 55,62, H 4,91, Cl 13,67, N 5,40).
Ejemplos 104 y 105
Esquema didáctico K
El esquema didáctico K ejemplifica la práctica del Esquema 3 mostrando la síntesis de los Ejemplos 104 y 105 en los que (con referencia a la estructura 1-F), para el ejemplo 104 R^{4} es 3-acetil, m igual a 1 y n igual a 0, Z_{x} es CH y Z_{y} es 3-NH, Y es -NHC(O)-, X es 2-cloro, la estereoquímica del segmento cicloalcanoil es (1S-trans) y la estereoquímica del amidoácido es L. Y para el ejemplo 105, R^{4} es 3-acetil, m igual a 1 y n igual a 0, Z_{x} es CH y Z_{y} es 3-NH, Y es -NHC(O)-, X es 2-cloro, la estereoquímica del segmento cicloalcanoil es (1S-cis) y la estereoquímica del 
\hbox{amidoácido es L.}
N-[(1,1-Dimetiletoxi)carbonil]-4-[[(2-cloro-3-piridinil)carbonil]amino]-L-éster metílico de fenilalanina (fórmula) K-1. A una mezcla de 2-cloro-3-ácido carboxílico de piridina (1,36 g, 8,48 mmol), EDC (1,73 g, 8,85 mmol), HOBT (1.204 g, 8,87 mmol), amina Compuesto 5 (2.60 g, 8.85 mmol) y DMAP (0,323 g, 2,6 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (55 mL) bajo N_{2} a 0ºC se añade Et_{3}N (1,44 mL, 10.22 mmol) la mezcla de reacción se agita durante 44 horas. Se añaden porciones adicionales de ácido 2-cloro-3-ácido carboxílico piridina (1,36 g, 8,48 mmol), EDC (1,73 G, 8,85 mmol), HOBT (1.204 g, 8,87 mmol) y DMAP (0,323 g, 2.6 mmol) y Et_{3}N (1,44 mL, 10,22 mmol). La reacción se agita 15 horas más. La mezcla de reacción se diluye con CH_{2}Cl_{2} y se lava con H_{2}O, NaHCO_{3} ac. al 5% y H_{2}O. Los orgánicos se secan y concentran para dar un aceite ámbar que se solidifica al reposar. El sólido se purifica por cromatografía de sílice para dar K-1: TLC R_{f} = 0,21 (1:1 EtOAc/hexano); ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 8,51(s, 1H), 8,18(m, 2H), 7,58(m, 2H), 4,41(m, 1H), 7,14(m, 2H), 5,07-4,96(m, 2H) 4,64-5,56(m, 1H), 3,73(s, 3H), 3,16-2,97(m, 2H), 1,42(s, 9H); MS (FAB) m/z 434 [M+H]^{+}, 436.
4-[[(2-cloro-3-piridinil)carbonil]amino]-L-éster metílico de fenilalanina sal cloruro de hidrógeno (fórmula) - K-2. Una solución de K-1 (3,37 g, 7,77 mmol) en 4M HCl en dioxano se agita a temperatura ambiente durante 20 horas. La mezcla de reacción se concentra in vacuo. El sólido se pone en agua y se extrae con Et_{2}O. El Et_{2}O se desecha. La solución acuosa se congela y liofiliza para dar K-2 como un sólido: ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 10,74(s, 1H), 8,64(s, 3H), 8,52(m, 1H), 8,04(m, 1H), 7,65(m, 2H), 7,55(m, 1H), 7,21(m, 2H), 4,23(m, 1H), 3,23-3,05(m, 2H); MS (EI) m/z 333 [M]^{+}.
(1S-cis)-N-[(3-Acetil-2,2-dimetilciclobutil)carbonil]-4-[[(2-cloro-3-piridinil)carbonil]amino]-L-éster metílico de fenilalanina (fórmula) K-3. El compuesto K-3 se prepara a partir de ácido G-2 y K-2 como se muestra para A-3: TLC R_{f} = 0.35 (EtOAc); ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 8,51(m, 1H), 8,20(m, 2H), 7,59(m, 2H), 7,41(m, 1H), 7,14(m, 2H), 5,83(m, 1H), 4,88(m, 1H), 3,73(s, 3H), 3,11(m, 2H), 2,64(m, 1H), 2,51(m, 1H), 2,05(s, 3H), 1,89(m, 1H), 1,42(s, 3H),0,84(s, 3H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}, 75 MHz) \delta 207,12, 172,01, 170,76, 162,55, 151,39, 146,96, 140,04, 136,26, 132,83, 131,36, 130,00, 122,99, 120,46, 52,94, 52,72, 52,46, 46,40, 44,84, 37,61, 30,70, 30,10, 18,93, 17,68; MS (FAB) m/z [M+H]^{+}.
(1S-trans)-N-[(3-Acetil-2,2-dimetilciclobutil)carbonil]-4-[[(2-cloro-3-piridinil)carbonil]amino]-L-fenilalanina
(fórmula) Ejemplo 104 y (1S-cis)-N-[(3-Acetil-2,2-dimetilciclobutil)carbonil]-4-[[(2-cloro-3-piridinil)carbonil]amino]-L-fenilalanina (fórmula) Ejemplo 105. Los ejemplos 104 y 105 se preparan y separan como se muestra para los Compuestos G-4 y G-5.
Ejemplo 104: Mp 115-117ºC; TLC R_{f} = 0,41(1000:2.5 EtOAc/HCO_{2}H); [\alpha]^{25}_{D} = +42 (c = 1,0, MeOH); ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 9,47(s, 1H), 8,41(m, 1H), 7,90(m, 1H), 7,55(m, 2H), 7,28(m, 1H), 7,09(m, 2H), 6,00(m, 1H), 4,77(m, 1H), 3,07(m, 2H), 2,46(m, 1H), 2,28(m, 1H), 2,07(m, 1H), 1,98(s, 3H), 1,14(s, 3H), 1,01(s, 3H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}, 75 MHz) \delta 208,67, 173,25, 142,22, 163,52, 150,49, 147,51, 138,58, 136,90, 132,99, 132,79, 130,01, 122,55, 120,22, 53,51, 52,93, 46,95, 42,84, 37,12, 30,71, 25,34, 25,14, 18,67; MS (ESI-) m/z 470,1 [M-H]^{-}; Anal. C 59,11, H 5.91, Cl 6.68, N 8.32 (calculado para 2,81% H_{2}O y agente de fusión: C 59,36, H 5,72, Cl 7,29, N 8,65).
Ejemplo 105: Mp 129-130ºC; TLC R_{f} = 0,31 (1000:2,5 EtOAc/HCO_{2}H); [\alpha]^{25}_{D} = -7 (c = 1,0, MeOH); ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 9,56(s, 1H), 8,39(m, 1H), 7,88(m, 1H), 7,54(m, 2H), 7,28(m, 1H), 7,08(m, 2H), 4,71(m, 1H), 3,04(m, 2H), 2,76(m, 1H), 2,49(m, 2H), 1,95(s, 3H), 1,77(m, 1H), 1,33(s, 3H), 0,77(s, 3H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}, 75 MHz) \delta 207,18, 173,21, 170,67, 163,56, 150,43, 147,53, 138,50, 136,95, 133,06, 132,74, 129,96, 122,53, 120,23, 52,92, 52,80, 46,29, 44,81, 37,21, 30,59, 30,02, 18,55, 17,65; MS (ESI-) m/z 470.1 [M-H]^{-}; Anal. C 57,17, H 5,67, Cl 7,17, N 8,55 (calculado para 2,61% H_{2}O y agente de fusión: C 59,19, H 5,70, Cl 7,28, N 8,62).
Ejemplos 106 y 107
Esquema didáctico L
El esquema didáctico L ejemplifica la práctica del Esquema 3 mostrando la síntesis de los Ejemplos 106 y 107 en los que (con referencia a la estructura 1-F), para el ejemplo 106, R^{4} es 3-acetil, m igual a 1 y n igual a 0, Z_{x} es CH y Z_{y} es 3-NH, Y es -NHC(O)-, X es 2,6-dicloro, la estereoquímica del segmento cicloalcanoil es (1S-trans) y la estereoquímica del amidoácido es L. Y para el ejemplo 107, R^{4} es 3-acetil, m igual a 1 y n igual a 0, Z_{x} es CH y Z_{y} es 3-NH, Y es -NHC(O)-, X es 2,6-dicloro, la estereoquímica del segmento cicloalcanoil es (1S-cis) y la estereoquímica del amidoácido es L.
N-[(1,1-Dimetiletoxi)carbonil]-4-[[(2,6-dicloro-3-piridinil)carbonil]amino]-L-éster metílico de fenilalanina (fórmula) L-1. Una mezcla de 2,6-dicloro-3-ácido carboxílico piridina y Compuesto 5 se acoplan por el procedimiento mostrado para A-5: TLC: R_{f} = 0.42 (1:1 EtOAc/hexanos); ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 8.14(m, 1H), 7.56(m, 2H), 7.42(m, 1H), 7.14(m, 2H), 4.99(m, 1H), 4.58(m, 1H), 3.72(s, 3H), 3.17-2.96(m, 1H), 1.41(s, 9H); MS (FAB) m/z 470, 468 [M+H]^{+}.
4-[[(2,6-dicloro-3-piridinil)carbonil]amino]-L-éster metílico de fenilalanina sal cloruro de hidrógeno (fórmula) L2. Una solución de L-1 se transforma en L-2 por el procedimiento mostrado para K-2: ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 10,84(s, 1H), 8,60(s, 3H), 8,14 (m, 1H), 7,72(m), 7,63(m, 2H), 7,22(m, 2H), 4,29-4,17(m, 1H), 3,69(s, 3H), 3,19-3,06(m, 2H); MS (ESI+) m/z 370, 368 [M+H]^{+}.
(1S-cis)-N-[(3-Acetil-2,2-dimetilciclobutil)carbonil]-4-[[(2,6-dicloro-3-piridinil)carbonil]amino]-L-éster metílico de fenilalanina (fórmula) L-3. El compuesto L-3 se prepara a partir del ácido G-2 y L-2 como se muestra para A-3: TLC R_{f} = 0,34 (3:1 EtOAc/hexanos); ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 8,26(s, 1H), 8,16(m, 1H), 7,57(m, 2H), 7,42(m, 1H), 7,13(m, 2H), 5,83(m, 1H), 4,87(m, 1H), 3,73(s, 3H), 3,11(m, 2H), 2,86(m, 1H), 2,63(m, 1H), 2,53(m, 1H), 2,05(s, 3H), 1,64(m, 1H), 1,42(s, 3H), 0,82(s, 3H).
(1S-trans)-N-[(3-Acetil-2,2-dimetilciclobutil)carbonil]-4-[[(2,6-dicloro-3-piridinil)carbonil]amino]-L-fenilalanina (fórmula) Ejemplo 106 y (1S-cis)-N-[(3-Acetil-2,2-dimetilciclobutil)carbonil]-4-[[(2,6-dicloro-3-piridinil)carbonil]amino]-L-fenilalanina (fórmula) Ejemplo 107.
Los ejemplos 106 y 107 se preparan y separan como se muestra para los Compuestos G-4 y G-5.
Ejemplo 106: mp 139-141ºC; TLC R_{f} = 0,28 (750:250:5 EtOAc/hexanos/HCO_{2}H); [\alpha]^{25}_{D} = +39 (c = 0.7, MeOH); ^{1}H NMR (CD_{3}SOCD_{3}, 300 MHz) \delta 12,55(s, 1H), 10,63(s,1H), 8,14(m, 1H), 8,01(m, 1H), 7,71(m, 1H), 7,55(m, 2H), 7,19(m, 2H), 4,45(m, 1H), 3,30(s, 1H), 3,00(m, 2H), 2,82(m, 1H), 2,08(m, 1H), 1,97(s, 3H), 1,84(m, 1H), 1,07(s, 3H), 1,00(s, 3H); MS (FAB) m/z 506 [M+H]^{+} ; Anal. C 55,88, H 5,26, Cl 13,04, N 7,92 (calculado para 2,26% H_{2}O: C 55,64, H 5,12, Cl 13,69, N 8,11).
Ejemplo 107: mp 189-191ºC TLC R_{f} = 0,21 (750:250:5 EtOAc/hexanos/HCO_{2}H); [\alpha]^{25}_{D} = -3 (c = 0,8, MeOH); ^{1}H NMR (CDL_{3}, 300 MHz) \delta 12,56(s, 1H), 10,63(s, 1H), 8,14(m, 1H), 7,78(m, 1H), 7,70(m, 1H), 7,54(m, 2H), 7,20(m, 2H), 4,42(m, 1H), 3,01(m, 1H), 2,87(m, 2H), 2,61(m, 1H), 2,36(m, 1H), 1,95(s, 3H), 1,54(m, 1H), 1,34(s, 3H), 0,64(s, 3H); MS (FAB) m/z 506 [M+H]^{+}; Anal. C 56,29, H 5,57, Cl 12,77, N 7,93 (calculado para 2,26% H_{2}O: C 55,64, H 5,21, Cl 13,69, N 8,11).
Ejemplo 108
A partir del ejemplo 107 se prepara el Ejemplo 108, en el que R^{4} es 3-carboxi, m igual a 1 y n igual a 0, Z_{x} es CH y Z_{y} es 3-NH, Y es -NHC(O)-, X es 2,6-dicloro, la estereoquímica del segmento cicloalcanoil es (1S-cis) y la estereoquímica del amidoácido es L.
(1S-cis)-N-[(3-Carboxi-2,2-dimetilciclobutil)carbonil]-4-[[(2,6-dicloro-3-piridinil)carbonil]amino]-L-fenilalanina (fórmula) Ejemplo 108. El ejemplo 108 se hace a partir del ejemplo 107 como se muestra para el Compuesto C-1: mp 154-157ºC; TLC R_{f} = 0,19 (750:250:5 EtOAc/hexanos/HCO_{2}H); [\alpha]^{25}_{D} = +15 (c = 0,9, MeOH); ^{1}H NMR (CD_{3}SOCD_{3}, 300 MHz) \delta 12,27(s, 1H), 10,56(s, 1H), 8,14(m, 1H), 7,81(m, 1H), 7,71(m, 1H), 7,55(m, 2H), 7,21(m, 2H), 4,43(m, 1H), 3,01(m, 1H), 2,84(m, 1H), 2,68(m, 1H), 2,34(m, 1H), 1,68(m, 1H), 1,23(s, 3H), 0,76(s, 3H); MS (FAB) m/z [M+H]^{+} ; Anal. C 52,49, H 4,97, Cl 12,49, N 7,62 (calculado para 2,29% H_{2}O: C 53,10, H 4,71, Cl 13,63, N 8,08).
Ejemplo 109
Esquema didáctico M
El esquema didáctico M ejemplifica la práctica del Esquema 3 mostrando la síntesis del Ejemplo 109 en el que (con referencia a la estructura 1-F), R^{4} es 3-carboxi, m igual a 1 y n igual a 0, Z_{x} es 2-NH y Z_{y} es CH, Y es -OCH_{2}-, X es 2,6-dicloro, la estereoquímica del segmento cicloalcanoil es (1S-cis) y la estereoquímica del amidoácido es L.
(+/-)-2-Cloro-3-[(2-tetrahidropiranil)oxi]-6-yodopiridina (fórmula) M-2: A una solución de 2-cloro-6-yodo-3-piridinol (Wishka, D.G., Graber, D.R.; Seest, E.P.; Dolak, L.A.; Han, F.; Watt, W.; Morris, J. J. Org. Chem. 1998, 63, 7851-7859) M-1 (1.00 g, 3,91 mmol) y dihidropirano (1.0 mL, 10,6 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (10 mL) bajo Ar a temperatura ambiente se añade cloruro de piridinio (0,050 g). La mezcla de reacción se agita durante 72 horas. Se diluye con CH_{2}Cl_{2} y se lava con NaHCO_{3} acuoso satd y salmuera. La solución CH_{2}Cl_{2} se seca y concentra en un aceite que se purifica por cromatografía de sílice: TLC (19:1 hexanos/EtOAc) R_{f} = 0,24; ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 7,55(m, 1H), 7,17(m, 1H), 5,50(m, 1H), 3,77(m, 1H), 3,61(m, 1H), 2,07-1,57(m, 6H); MS (+ESI) m/z 361,9 [M+Na]^{+}, 339,9 [M+H]^{+}.
(S)-2-Cloro-\alpha-[[(1,1-dimetiletoxi))carbonil]amino]-3-[(2-tetrahidropiranil)oxi]-6-éster metílico ácido propanoico de piridina, M-3: a un matraz amberizado que contiene polvo de Zn activado (0,349 g, 5,51 mmol) bajo Ar se añade THF (2 mL) y 1,2-dibrometano (0,018 mL, 0,21 mmol). La suspensión se pone en reflujo durante varios minutos, se enfría a aproximadamente 30ºC y se añade TMSCI (0,17 mL de solución 1M en THF). La mezcla de reacción se agita a 40 +/- 5ºC durante 30 minutos. Se añade a la suspensión una solución desgasificada de éster metílico Boc-L-yodoalanina (1.814 g, 5,51 mmol) en 11:7 dimetilacetamida/THF (9.0 mL). La mezcla de reacción se agita durante 5 horas a 45 +/- 5ºC. A continuación se enfría en un baño de hielo y se añade PdCl_{2} sólido, seguido de una solución desgasificada del yoduro M-2 (0,936 g, 2,76 mmol) en 1:1 THF/dimetilacetamida (9,4 mL). Esta mezcla de reacción se agita durante 11 horas a 45 +/- 5ºC. Luego se enfría a 0ºC, se templa con NH_{4}Cl acuoso satd y se extrae con EtOAc. Las porciones combinadas de EtOAc se lavan con NH_{4}Cl acuoso satd y salmuera y se secan y concentran para dar una espuma de color verde-amarillento que se purifica por cromatografía de sílice: TLC (7:3 hexanos/EtOAc) R_{f} = 0,21; ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 7,39(m, 1H), 7,00(m, 1H), 5,46(m, 1H), 4,61(m, 1H), 4,13(m, 1H), 3,80(s, 3H), 3,62(m, 1H), 3,20(m, 1H), 2,13-1,53(m, 6H), 1,42(s, 9H); MS (+ESI) m/z 474,0 [M+H]^{+}.
(S)-\alpha-[[(1,1-dimetiletoxi))carbonil]amino]-3-[(2-tetrahidropiranil)oxi]-6-éster metílico ácido propanoico de piridina, (fórmula) M-4: Una suspensión de Pd/CaCO_{3} pre-reducido (3,5 g) y M-3 (1,15 g, 2,77 mmol) en EtOH (40 mL) se hidrogena (30 psi H2) durante 19 horas a temperatura ambiente. La mezcla se filtra, y el filtrado se evapora para dar una espuma de color amarillo, que se purifica por cromatografía de sílice: TLC (1:1 hexanos/EtOAc) R_{f} = 0.27; ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 8,30(m, 1H), 7,29(m, 1H), 7,03(m, 1H), 5,81(m, 1H), 5,39(s, 1H), 4,65(m, 1H), 3,86(m, 1H), 3,73(s, 3H), 3,62(m, 1H), 3,21(m, 2H), 1,96-1,53(m, 6H), 1,42(s, 9H); MS (+ESI) m/z 381.1 [M+H]^{+}.
(S)-\alpha-[[(1,1-dimetiletoxi))carbonil]amino]-5-hidroxi-éster metílico ácido propanoico de piridina, (fórmula) M-5: Una solución de M-4 (0,346 g, 0,91 mmol) y piridinio p-toluenosulfonato (0,031 g, 0,12 mmol) en EtOH (8mL) se agita a 55 +/- 5ºC durante 20 horas. La mezcla de reacción se enfría a temperatura ambiente y se concentra in vacuo. El residuo se pone en EtOAc. Esta solución se lava con salmuera, se seca y se concentra en un aceite amarillo pálido que se purifica por cromatografía de sílice: TLC (1:1 hexanos/EtOAc) R_{f} = 0,18; ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 8,13(s, 1H), 7,13(m, 1H), 7,03(m, 1H), 5,71(m, 1H), 4,65(m, 1H), 3,70(s, 3H), 3,20(m, 2H), 1,39(s, 9H); MS (+ESI) m/z 297,1 [M+H]^{+}.
(S)-5-[(2,6-Diclorofenil)metoxi]-\alpha-[[(1,1-dimetiletoxi))carbonil]amino]-2-éster metílico ácido propanoico de piridina, (fórmula) M-6: A una solución de M-5 (0,126 g, 0,43 mmol), 2,6-diclorobenzilalcohol (0,075 g, 0,43 mmol) y PPh_{3} (0,113 g, 0,43 mmol) en THF seco (4 mL) a 0ºC se añade DEAD (0,068 mL). La mezcla de reacción de deja calentar a temperatura ambiente y luego se agita durante 18 horas. Se concentra y el residuo se purifica por cromatografía de sílice: TLC (7:3 hexanos/EtOAc R_{f} = 0.34; ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 8,31(m, 1H), 7,37(m, 2H), 7,25(m, 2H), 7,08(m, 1H), 5,81(m, 1H), 5,29(s, 2H), 4,65(m, 1H), 3,70(s, 3H), 3,24(m, 2H), 1,63(m, 1H), 1,43(s, 9H); ^{13}C M;R (CDCl_{3}, 75 MHz) \delta 172,47, 155,50, 153,82, 149,71, 137,33, 137,00, 131,51, 130,72, 128,56, 123,99, 122,78, 79,74, 65,64, 53,25, 52,27, 38,43, 28,33 (3C); MS (+ESI) m/z 454,9 [M+H]^{+}.
(S)-\alpha-Amino-5-[(2,6-diclorofenil)metoxi]-2-éster metílico ácido propanoico de piridina sal de cloruro de hidrógeno (fórmula) M-7: Una solución de carbamato M-6 (0,546 g, 1,20 mmol) en HCl 4M en dioxano (12 mL) se agita a temperatura ambiente bajo Ar durante 16 horas. La mezcla de reacción se concentra in vacuo. El residuo se disuelve en H_{2}O y esta solución se extrae con Et_{2}O. La solución acuosa se congela y liofiliza para dar M-7: ^{1}H NMR (CD_{3}SOCD_{3}, 300 MHz) \delta 8,75(s, 3H), 8,47(m, 1H), 7,81(m, 1H), 7,57(m, 3H), 7,48(m, 1H), 5,35(s, 2H), 4,49(m, 1H), 3,67(s, 3H), 3,42(m, 2H); ^{13}C NMR (CD_{3}SOCD_{3}, 75 MHz) \delta 169,42, 154,95, 146,54, 136,57, 134,35, 132,50, 131,30, 129,36, 126,72, 126,52, 66,40, 53,32, 51,79, 34,81.
[1S-[1\alpha(R*),3\alpha]]-\alpha-[[(3-Acetil-2,2-dimetilciclobutil))carbonil]amino]-3-[(2,6-diclorofenil)metoxi]-6-hidroxi-és-
ter metílico ácido propanoico de piridina, (fórmula) M-8: A una mezcla de ácido G-2 (0936 g, 5,50 mmol), HOAt (0,749 g, 5,50 mmol), EDC (1.055 g, 5,50 mmol), y M-7 (2,14 g, 5,00 mmol) en 4:1 CH_{2}Cl_{2}/DMF (20 mL) a 0ºC se añade N-metilmorfolina (NMM) (1,38 mL, 12,5 mmol). La solución se mantiene a 0ºC durante 40 horas, y luego se concentra. El residuo se pone en CH_{2}Cl_{2} y esta solución se lava con agua, NaHCO_{3} acuoso satd y H_{2}O. Las porciones acuosas combinadas se vuelven a extraer con CH_{2}Cl_{2}. Las porciones combinadas de CH_{2}Cl_{2} se secan y concentran para dar una espuma de color verde-marrón que luego se purifica por cromatografía de sílice: TLC R_{f} = 0,32 (3:1 EtOAc/hexanos); ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 8,32(m, 1H), 7,38(m, 2H), 7,30-7,25(m, 3H), 7,08(m, 1H), 5,31(s, 2H), 4,87(m, 1H), 3,67(s, 3H), 3,28(m, 1H), 3,20(m, 1H), 2,85(m, 1H), 2,05(s, 3H), 1,91(m, 1H), 1,46(s, 3H), 0,86(s, 3H); MS (+ESI) m/z 509,2, 507,2 [M+H]^{+}.
[1S-[1\alpha(R*),3\alpha]]-\alpha-[[(3-Carboxi-2,2-dimetilciclobutil))carbonil]amino]-3-[(2,6-diclorofenil)metoxi]-6-ácido propanoico de piridina, (fórmula) Ejemplo 109.
A una solución de NaOH ac. 1M (21,2 mL) a 0ºC se añade una porción de Br2 (0,254 mL, 4,93 mmol). La mezcla se agita durante 30 minutos hasta después del punto en que todo el Br2 se haya disuelto. En ese momento se añade una solución de M-7 (0,60 mL, 1,18 mmol) en 1:1 dioxano/THF (16.0 mL). La mezcla de reacción se agita durante 1 hora a 0ºC y durante 2,5 horas a temperatura ambiente. Se enfría a 0ºC y templa con NaHSO_{3} aq 1M (50 mL). La mezcla acuosa se extrae con Et_{2}O. La mezcla acuosa se acidifica con HCl ac. concentrado y se extrae con EtOAc. Las porciones de EtOAc combinadas se secan y concentran para dar una pasta sin color, que es purificada por cromatografía de sílice. El sólido que se obtiene por concentración de las fracciones de columna se disuelve en 1:1 MeCN/H_{2}O (40 mL). Esta solución se liofiliza para dar Ejemplo 109 como un sólido amorfo: mp 121-124ºC; TLC R_{f} = 0,11 (750:5 EtOAc/hexanos/HCO_{2}H); ^{1}H NMR (CD_{3}SOCD_{3}, 300 MHz) \delta 12,27(s, 2H), 8,27(m, 1H), 7,82(m, 1H), 7,56(m, 2H), 7,48-7,42(m, 2H), 7,23(m, 1H), 5,25(s, 2H), 4,62(m, 1H), 3,30(s, 2H), 3,14-2,97(m, 2H), 2,67-2,55(m, 2H), 2,29(m, 1H), 1,71(m, 1H), 1,21(s, 3H), 0,72(s, 3H); ^{13}C NMR (CD_{3}OD, 75 MHz) \delta C: 175,93, 174,5, 173,72, 155,6, 151,23, 132,98, 45,40; CH: 138,04, 132,30, 129,79, 125,9, 124,31, 53,6, 47,38, 46,40; CH_{2}: 66,85, 39,02, 20,96; CH_{3}: 30,54, 18,39; MS (+ESI, MeOH) m/z 497,2, 495,2 [M+H]^{+}; Anal. C 55,77, H 4,88, N 5,39 (calculado para 1,50% H_{2}O: C 54,93, H 4,98, N 5,57).
Ejemplo 110
Esquema didáctico N
7,9-Dioxaspiro[4.5]decan-8-ona (fórmula) N-1: Anhídrido N-1 se prepara a partir de 1,1-ácido ciclopentanodiácetico por métodos estándar. (Balo, M.B.; Fernández, F.; Lens, E.; Lopez, C. Nucleotides 1996, 15, 1335-1346).
N-[(1-Carboximetil)ciclopentanoacetil]-O-[(2,6-diclorofenil)metil]-L-éster metílico de tirosina (fórmula) N-2: A una mezcla de anhídrido N-1 (0,84 g, 5.0 mmol), Compuesto 8 (1,95 g, 5.0 mmol) y iPr_{2}EtN (4,4 mL, 25 mmol) en THF (15 mL) se calienta a reflujo durante 17 horas. La mezcla de reacción se enfría y se concentra in vacuo. El residuo se pone en HCl 1M acuoso (40 mL) y esta mezcla se extrae con EtOAc. Los extractos EtOAc combinados se secan y concentran y el residuo se purifica por cromatografía de sílice. Las fracciones de columna se concentran y el sólido resultante se disuelve en MeCN/H_{2}O. Esta solución se liofiliza para dar N-2: ^{13}C NMR (CDCl_{3}, 75 MHz) \delta 175,0, 172,8, 171,7, 157,9, 136,7, 131,8, 130,3, 130,0, 128,3, 127,9, 115,0, 65,0, 53,2, 52,4, 44,2, 44,1, 43,1, 38,2, 36,6, 23,5; MS (EI) m/z 523, 521; Anal. C 59,62, H 5,82, Cl 13,44, N 2,57 (calculado C 59,78, H 5,60, Cl 13,57, N 2,68).
N-[(1-Carboximetil)ciclopentanoacetil]-O-[(2,6-diclorofenil)metil]-L-tirosina (fórmula) Ejemplo 110: Una mezcla de éster N-2 (1 g, 1,90 mmol) y LiOH. H_{2}O (0,84 g, 20 mmol) en H_{2}O (12 mL) se agita a 0ºC durante 4 horas. La mezcla de reacción se acidifica con HCl 1M acuoso (24 mL) para dar un sólido blanco. El sólido se recupera por filtración. Se disuelve en 1:1 MeCN/H_{2}O (20 mL) y esta solución se liofiliza para dar Ejemplo 110: mp 108ºC (softens); ^{13}C NMR (CD_{3}SOCD_{3}, 75 MHz) \delta 175,2, 174,0, 173,0, 158,0, 132,0, 130,5, 130,3, 130,1, 128,7, 128,5, 115,0, 65,2, 53,6, 53,5, 44,2, 42,0, 25,6, 21,3; MS (EI) m/z 521; Anal. C 60,37, H 5,84, Cl 14,33, N 2,55 (calculado para 0,73% H_{2}O: C 58,59, H 5,33, Cl 14,62, N 2,73).
Ejemplo 111
Esquema didáctico O
3-Oxabiciclo[3.2.1]octano-2,4-diona [6054-16-6] (fórmula)
El Anhídrido 0-1 se prepara a partir de cis-1,3-ácido ciclopentanodicarboxílico [876-05-1] por métodos estándar (Balo, M.B.; Fernández, F.; Lens, E.; López, C. Nucleosides Nucleotides 1996, 15, 1335-1346).
N-[cis-(3-Carboxiciclopentil]carbonil]-O-[(2,6-diclorofenil)metil]-L-éster metílico de tirosina (fórmula) O-2. El Compuesto O-2 se prepara a partir del anhídrido 1 y el compuesto 8 como se muestra para el compuesto N-2: ^{13}C NMR (CDCl_{3}, 75 MHz) \delta 179,0, 178,9, 175,8, 175,7, 171,9, 157,9, 136,8, 131,9, 130,3, 130,1, 128,3, 128,1, 115,0, 114,9, 65,1, 53,1, 53,0, 52,4, 52,3, 45,4, 44,0, 43,9, 36,8, 36,7, 32,5, 32,1, 31,3, 30,8, 29,7, 26,6; Anal. C 59,27, H 5,22, Cl 14,26, N 2,78 (calculado para 0,39% H_{2}O: C 58,31, H 5,10, Cl 14,34, N 2,83).
N-[cis-(3-Carboxiciclopentil]carbonil]-O-[(2,6-diclorofenil)metil]-L-tirosina (fórmula) Ejemplo 111. El ejemplo 111 se prepara a partir del éster O-2 como se muestra para el ejemplo 110: ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 7,40-7,32(m, 2H), 7,30-7,22(m, 1H), 7,13(m, 2H), 6,93(m, 2H), 6,75-6,60(m, 1H), 5,23(s, 2H), 4,85-4,70(m, 1H), 3,25-3,00(m, 2H), 2,90-2,60(m, 2H), 2,22-1,80(m, 6H); Anal. C 56,56, H 4,76, Cl 14,66, N 2,79 (calculado para 0,90% H_{2}O: C 57,51, H 4,83, Cl 14,76, N 2,92).
Ejemplo 112
Esquema didáctico P
(+/-)-cis-1,3-éster monometílico de ácido ciclopentanodicarboxílico (fórmula) P-1. El monoéster P-1 se prepara a partir de cis-1,3-ciclopentano-ácido dicarboxílico por métodos estándar (Chenevert, T.; Martín, R. Tetrahedron: Asymmetry 1992, 3, 199-200).
4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-N-[cis-[3-(1-metoxi-1-oxometil)ciclopentil]carbonil]-L-éster metílico de tirosina
(fórmula) P-2. A una mezcla de P-1 (0,5 g, 2,9 mmol), HOBt (0,45 g, 3,3 mmol) DMAP (0,04 g, 0,32 mmol), NEt3 (1,45 mL, 10,4 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (25 mL) a 0ºC se añade Compuesto 7 (1,15 g, 2,8 mmol). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante 48 h. El CH_{2}Cl_{2} se elimina de la mezcla de reacción in vacuo, y el residuo de pone en HCl 1M acuoso (50 ml). La mezcla acuosa se extrae con CH_{2}Cl_{2}. Los extractos CH_{2}Cl_{2} combinados se lavan con NaHCO_{3} ac. satd, se secan y concentran. El residuo se purifica por cromatografía de sílice para dar una mezcla diastereomérica, P-2: MS (EI) m/z 520, 351, 350, 349, 280, 278, 175, 173, 155, 95, 67; Anal. C 57,55, H 5,03, Cl 13,62, N 5,40 (calculado para 0,11% H_{2}O: C 57,59, h 5,03, Cl 13,60, N 5,37).
N-[cis-[3-Carboxiciclopentil]carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina (fórmula) Ejemplo 112. El
ejemplo 112 se prepara como una mezcla diastereomérica, a partir de P-2 como se muestra para el ejemplo 110: MS (FAB) m/z 496, 495, 494, 493, 492, 476, 475, 337, 335, 175, 173; Anal. C 55,40, H 4,55, Cl 14,08, N 5,62 (calculado para 1,87% H_{2}O: C 56,00, H 4,50, Cl 14,37, N 5,68).
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Esquema Q
116
El esquema Q describe un método general para preparar ureas y tiureas de estructura general Q-4. Este método no es el preferido para preparar ureas que contengan un sustituyente carboxilo en la posición 2 de la cadena de piperidina o pirrolidina de estructura Q2. Se hace reaccionar un amino ácido de estructura general Q-1 con carbonildiimidazol o tiocarbonildiimidazol seguido por el amino ácido cíclico de estructura general Q-2 para suministrar el diéster intermedio Q-3. La hidrólisis de base suave suministra el diácido de estructura general Q-4.
Ejemplo 113
117
1-[[[(1S)-1-carboxi-2-[4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]fenil]etil]amino]carbonil]-4-ácido carboxílico de piperidina. A una solución enfriada (0-5ºC) de Compuesto 11 (410 mg, 0,74 mmol) en THF (23 mL) y MeOH (7,5 mL) se añadió una solución acuosa (5 ml) de hidróxido de litio monohidrato (94 mg, 2,24 mmol) a través de una jeringa durante 1 hora. Después de 1 hora adicional a 0-5ºC, se retiró el baño de hielo y la solución se agitó 2 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo y 0,1 N HCl y la capa orgánica se separó, lavó con agua y secó (Na_{2}SO_{4}), filtró y concentró in vacuo. La liofilización del residuo a partir de ácido acético glacial suministró el compuesto (360 mg) como un polvo amorfo blanco: IR (mull) 3123, 3034, 1717, 1665, 1606, 1562, 1535, 1517, 1432, 1414, 1326, 1272, 1213, 1195, 799 cm^{-1}; ^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 178.3, 176.2, 165.2, 159.4, 138.1, 137.8, 133.4,132.4, 131.0, 129.4, 121.5, 56.8, 44.6, 44.5, 42.0, 38.1, 29.2; MS (FAB) m/z (intensidad relativa) 508 (MH^{+}, 99) 511(19), 510(64), 509(36), 508(99), 391(34), 356(16), 173(20), 149(29), 128(17), 57(16); HMRS (FAB) calculado para C_{23}H_{23}Cl_{2}N_{3}O_{6} 0,25 H_{2}O: C, 53,87; H, 4,62; N, 8,19. Hallados: C, 53,85; H, 4,87; N, 8,04.
Ejemplo 114 
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118
1-[[[(1S)-1-carboxi-2-[4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]fenil]etil]amino]carbonil]-3 -ácido carboxílico de piperidina. El ejemplo 114 fue preparado como se describe en el Esquema Q a partir de (R,S)-nipecotato etílico. Las propiedades físicas son las siguientes: IR (mull) 3062, 3035, 1718, 1665, 1628, 1606, 1562, 1536, 1517, 1432, 1414, 1326, 1268, 1216, 1195 cm^{-1}; ^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,58(2H), 7,43(3H), 7,25(2H), 4,52(1H), 4,01(1H), 3,73(1H), 3,29(1H), 3,95(3H); 2,38(1H), 1,99(1H), 1,63(2H), 1,37(1H); ^{13}C NMR (75 MHz, CD_{3}OD) \delta 176.4, 169.4, 165.2, 159.4, 138.1, 137.7, 135.8, 133.4, 132.4, 131.0, 129.4, 121.5, 60.1, 56.5, 47.4, 45.7, 42.4, 38.2, 28.6, 25.5; MS (FAB) m/z (Intensidad relativa) 508 (MH^{+}, 99), 512(12), 511(18), 510(66), 509(31), 508(99), 335(10), 173(11), 130(11), 128(20), 84(11), Anál. calculado para C_{23}H_{23}Cl_{2}N_{3}O_{6} 0,5 H_{2}O: C, 53.39; H, 4.67; N, 8.12. Hallados: C, 53.56; H, 4.60; N, 7.95.
Ejemplo 115 
\vskip1.000000\baselineskip
119
1-[[[(1S)-1-carboxi-2-[4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]fenil]etil]amino]carbonil]-3-ácido carboxílico de piperidina. El ejemplo 115 fue preparado como se describe en el Esquema Q a partir de (R,S)-nipecotato etílico. Los productos diéster intermedios de estructura general Q-3 fueron separados por HPLC quiral. Los diastereómeros fueron saponificados como se describe en el Ejemplo 113 para suministrar estereoisómeros únicos de estereoquímica absoluta indeterminada. Las propiedades físicas de un estereoisómero son las siguientes: ^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,57(2H), 7,45(3H), 7,25(2H), 4,52(1H), 4,02(1H), 3,74(1H), 3,23(1H), 2,93(3H), 2,34(1H), 2,01(1H), 1,65(2H), 1,44(1H); ^{13}C NMR (75 MHz, CD_{3}OD) \delta 177,0, 176,1, 165,2, 159,4, 138,1, 137,7, 135,8, 133,4, 132,4, 131,0, 129,4, 121,5, 62,4, 56,7, 47,4, 45,6, 42,4, 38,2, 28,6, 25,5; MS (FAB) m/z (Intensidad relativa) 508 (MH^{+}, 99), 510(69), 509(32), 508(99), 173(18), 130(21), 128(29), 84(19), 57(16), 55(18), 43(17); HRMS (FAB) calculado para C_{23}H_{23}Cl_{2}N_{3}O_{6}+HI 508.1042 hallados 508.1033.
Ejemplo 116
120
1-[[[(1S)-1-carboxi-2-[4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]fenil]etil]amino]carbonil]-3-ácido carboxílico de piperidina. El ejemplo 116 es el otro estereoisómero individual relacionado con el Ejemplo 115. Las propiedades físicas son las siguientes: ^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,58(2H), 7,43(3H), 7,25(2H), 4,53(1H), 4,05(1H), 3,71(1H), 3,23(1H), 2,95(3H), 3,37(1H), 2,01(2H), 1,63(2H); ^{13}C NMR (75 MHz, CD_{3}OD) \delta 177,1, 176,1, 165,2, 159,4, 138,1, 137,7, 135,8, 133,4, 132,4, 131,0, 129,4, 121,5, 56,7, 47,2, 45,7, 42,4, 38,1, 32,9, 28,6, 25,5, 23,5; MS (FAB) m/z (rel intensidad) 508 (MH^{+}, 99), 511(19), 510(69), 509(34), 508(99), 335(15), 173(21), 130(21), 128(32), 123(18), 84(20); HRMS (FAB) calculado para C_{23}H_{23}Cl_{2}N_{3}O_{6}+HI 508.1042, hallados 508.1038.
Ejemplo 117
121
1-[[[(1S)-1-carboxi-2-[4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]fenil]etil]amino]tiocarbonil]-3-ácido carboxílico de piperidina. El ejemplo 117 fue preparado como se describe en el Esquema Q a partir de (R,S)-nipecotato etílico y tiocarbonildiimidazol como reactivos. Las propiedades físicas son las siguientes: IR (mull) 3109, 3030, 1713, 1661, 1606, 1561, 1542, 1516, 1431, 1415, 1330, 1274, 1234, 1224, 1195 cm^{-1}; ^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,57(2H), 7,42(3H), 7,24(2H), 5,34(1H), 4,60(1H), 4,24(1H), 3,23(4H), 2,48(1H), 2,06(1H), 1,64(3H); ^{1}H NMT (75 MHz, CD_{3}OD) \delta 183,1, 183,0, 176,9, 176,8, 175,7, 175,6, 165,2, 138,1, 137,7, 135,4, 133,4, 132,4, 131,0, 129,4, 121,6, 121,5, 61,1, 51,5, 51,3, 42,3, 42,2, 38,0, 28,7, 28,5, 25,5, 25,3, 20.9; MS (FAB) m/z (Intensidad relativa) 524 (MH^{+}, 99), 602(40), 600(51), 526(68), 525(42), 524(99), 188(28), 173(33), 172(67), 130(29), 128(35); HRMS (FAB) calculado para C_{23}H_{23}Cl_{2}N_{3}O_{5}S+HI 524.0814, hallados 524.0816. Anál. calculado para C_{23}H_{23}Cl_{2}N_{3}O_{5}S 0,25 H_{2}O: C, 52,23; H, 4,48; N, 7.94. Hallado: C, 52,28; H, 4,92; N, 7,81.
Preparaciones del compuesto Cont
Compuesto 3
122
4-Nitro-L-hidrocloruro éster metílico de fenilalanina (Compuesto 3). A una solución fría (0-5ºC) de HCl metanólico anhidro se añadió L-4-nitrofenilalanina (Advanced ChemTech, 100 g) en porciones durante 15 minutos. La mezcla mecánicamente agitada fue calentada con suave reflujo durante 48 horas. La mezcla se dejó enfriar y se filtró a través de un embudo de filtro de vidrio sinterizado, lavando los sólidos recogidos con MeOH caliente hasta que solo quedaron residuos insolubles. El filtrado se concentró in vacuo para suministrar el éster metilo como un sólido blanquecino ceroso que se utilizó sin más purificación.
Compuesto 4
123
N-terc-Butoxicarbonil-4-nitro-L-éster metílico de fenilalanina (Compuesto 4)
A una suspensión de éster metílico descrita arriba (87 g, 0,33 moles) en CH_{2}Cl_{2} (1500 ml) a temperatura ambiente se añadió di-t-butildicarbonato (109 g, 0,50 moles) seguido de la adición a gotas de Et_{3}N (51 ml, 0,37 moles). Después de 15 minutos adicionales, se añadió Et_{3}N (40 ml, 0,29 moles) para mantener una mezcla ligeramente básica (ca. PH 8). La mezcla de reacción se agitó 18 horas y se añadió CH_{2}Cl_{2} (1400 ml) y Et_{3}N (15 ml, 0,11 moles) adicionales. Después de 2 horas más, la mezcla de reacción fue templada por la adición lenta de MeOH (100 ml), agitada durante 1 hora y luego repartida entre CH_{2}Cl_{2} y KHSO_{4} acuoso al 10% frío. La capa orgánica fue lavada con NaHCO_{3} saturado y salmuera, secada (Na_{2}SO_{4}), filtrada y concentrada in vacuo. La purificación del residuo por cromatografía de destello utilizando hexano y un gradiente de una mezcla 1:1 de ETOAc/CH_{2}Cl_{2} (25-33%) suministró el compuesto (69 g) como un blanco sólido. Las propiedades físicas son las siguientes: ^{1}H NMR (300 MHz; CDCl_{3}) \delta 8,16(2H), 7,31(2H), 5,04(1H), 4,63(1H), 3,73(3H), 3,18(2H), 1,41(9H); MS (ES+) para C_{15}H_{20}N_{2}O_{6} m/z 325,2 (M+H)^{+}.
Compuesto 5
124
N-terc-Butoxicarbonil-4-amino-L-éster metílico de fenilalanina (Compuesto 5). Se añadió paladio soportado sobre carbono (10% c/a, 1,25 g) a un matraz de hidrogenación Parr bajo una atmósfera N_{2} y se humedeció cuidadosamente con 100 ml de MeOH/THF (1:1). Se añadió una solución del éster Boc-metilo descrita arriba (25 g, 77 mmol) en 400 ml de MeOH/THF (1:1) y la mezcla se agitó en un aparato de hidrogenación bajo una atmósfera de hidrógeno (20 psi) durante 1 hora a temperatura ambiente. La mezcla de reacción fue filtrada a través de un filtro de Celite y los sólidos se lavaron varias veces con MeOH. Los filtrados combinados se concentraron in vacuo para suministrar el compuesto que se utilizó sin más purificación. Las propiedades físicas son las siguientes: ^{1}H NMR 300 MHz, CDCl_{3}) \delta 6,89(2H), 6,61(2H), 4,96(1H), 4,50(1H), 3,69(3H), 2,95(2H), 1,41(9H); MS (ES+) para C_{15}H_{22}N_{2}O_{4} m/z 295,2 (M+H)^{+}.
Compuesto 6
125
N-terc-Butoxicarbonil-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-éster metílico de fenilalanina (Compuesto 6). A una solución enfriada (0-5ºC) de 2,6-cloruro de diclorobenzoil (11,1 ml, 77,5 mmol) en THF (125 ml) se añadió una solución del compuesto 5 (22,7 g, 77,1 mmol) y Et_{3}N (16 ml, 115 mmol) en THF (125 ml). La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura y se agitó durante 18 horas. La mezcla se diluyó con EtOAc (2 l) y lavó con HCl acuoso 1N, H_{2}O, NaOH acuoso 1N y salmuera. El extracto orgánico se secó (Na_{2}SO_{4}), filtró y concentró in vacuo para dar el producto bruto como un sólido amarillo pálido. Este material fue recristalizado a partir de acetona/hexanos para suministrar el amida como un sólido cristalino. Las propiedades físicas son las siguientes: mp 192.2-193.1º1C; IR (mull) 3305, 1747, 1736, 1690, 1665, 1609, 1548, 1512, 1433, 1414, 1325, 1277, 1219, 1171, 781 cm^{-1}; ^{1}H NMR (300 MHz; CDCl_{3}) \delta 7,57(2H), 7,34(4H), 7,14(2H), 4,98(1H), 4,60(1H), 3,74(3H), 3,11(2H), 1,42(9H); MS (ES+) para C_{22}H_{24}Cl_{2}N_{2}O_{5} m/z 467,0 (M+H)^{+}.
Compuesto 7
126
4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-hidrocloruro de éster metílico de fenilalanina (Compuesto 7). A 650 ml de HCl 4M anhidro en dioxano a temperatura ambiente se añadió compuesto 6 (30,6 g, 65,5 mmol) en porciones y la mezcla resultante se agitó hasta que todos los sólidos se disolvieron (1 hora aprox.) Los volátiles se eliminaron in vacuo para dar un sólido amarillo claro que fue repartido entre agua (500 ml) y éter (1 L). La capa de agua fue separada y concentrada in vacuo a aproximadamente 200 ml. La solución acuosa fue congelada a continuación y liofilizada para suministrar el compuesto como un sólido amarillo claro. Las propiedades físicas son las siguientes: [\alpha]^{25}_{D} = +5 (c 1, MeOH); IR (mull) 3244, 3186, 3112, 1474, 1660, 1604, 1562, 1539, 1516, 1431, 1416, 1327, 1273, 1243, 799 cm^{-1}; ^{1}H NMR (300 MHz; CD_{3}OD) \delta 7,69(2H), 7,45(3H), 7,29(2H), 4,34(1H), 3,83(3H), 3,21(2H); ^{13}C NMR (300 MHz; CD_{3}OD) \delta 169,0, 163,9, 137,8, 136,08, 131,8, 131,0, 130,3, 129,7, 127,9, 120,6, 53,8, 52,3, 35.4; MS (ES+) para C_{17}H_{16}Cl_{2}N_{2}O_{3} m/z 367,1 (M+H)^{+}.
Compuesto 8
127
O-2,6-Diclorobenzil-L-hidrocloruro de éster metílico de tirosina (Compuesto 8). A una solución enfriada (0-5ºC) de HCl metanólico anhidro (200 ml) se añadió 25 g de N-\alpha-terc-Butoxicarbonil-O-2,6-diclorobenzil-L-tirosina (Sigma) en porciones durante 15 minutos. Después de 30 minutos a 0-5ºC la mezcla se calentó a 50ºC durante 2 horas. La solución se enfrió a temperatura ambiente y los volátiles se eliminaron in vacuo. El sólido fue suspendido en éter etílico y recogido por filtrado para suministrar el compuesto que se utilizó sin más purificación. Las propiedades físicas son las siguientes: [\alpha]^{25}_{D} = +16 (c 1.00, etanol); ^{1}H NMR (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,44(2H), 7,35(1H), 7,21(2H), 7,02(2H), 5,28(2H), 4,29(1H), 3,81(3H), 3,18(2H); MS (ESI+) para C 17 H 17 Cl 2 NO 3 m/z 354.1 (M+H)^{+}; Anál. calculado para C_{17}H_{17}Cl_{2}NO_{3} HCL: C, 52,26; H, 4,64; N, 3,59. Hallados: C, 52,17; H, 4,74; N, 3,61.
Compuesto 9
4-Amino-N-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-L-fenilalanina (fórmula) Compuesto 9: Una mezcla de N-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-4-nitro-L-fenilalanina y Pd/C 10% (0,8 g) en MeOH (0,15 L) se hidrogenó (35 psi H2) a temperatura ambiente durante 2 horas. El catalizador se eliminó por filtrado y el MeOH se eliminó in vacuo para dar, después de secado en vacío, el Compuesto 9: ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 6,95(m, 2H), 6,63(m, 2H), 5,1(s, 1H), 4,4(s, 1H), 3,0(m, 2H), 1,4(s, 9H).
Compuesto 10
4-[2,6-(diclorobenzoil)amino]-N-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-L-fenilalanina (fórmula) Compuesto 10. A una mezcla de Compuesto 9 (12,0 g, 42,7 mmol), NaOH (3,4 g, 85,5 mmol) en H_{2}O (80 ml) se añade una solución de 2,6-diclorobenzoilcloruro (10,7 g, 51,3 mmol) en dioxano (24 ml). La mezcla se agita durante 24 horas a temperatura ambiente. Se concentra parcialmente para eliminar el dioxano y luego se acidifica para precipitar el producto. El precipitado se recoge por filtrado, se lava con H_{2}O fría y se seca en horno de vacío a temperatura ambiente durante la noche. El sólido se tritura con THF y el THF se descarta. El sólido se disuelve en MeCN (2 l) y la solución se concentra a un volumen de aproximadamente 300 ml. Se añade agua (150 ml). La solución se congela y liofiliza para dar el compuesto 10: MS (FAB) m/z 453, 339, 398, 397, 353, 307, 280, 278, 175, 173, 57; Anal. C 55,48; H 4,74; Cl 15,37; N 6,25 (calculado corregido para 2,68% H_{2}O: C 55,64, H 4,89, Cl 15,64, N 6,18).
Compuesto 11
128
A una solución enfriada (0-5ºC) de Compuesto 7 (0,75 g, 1,86 mmol) en THF (20 ml) se añadió Net3 (520 \mul, 3,72 mmol) y CDI (0,30 g, 1,86 mmol). Después de 60 minutos, se añadió isonipecotato y la mezcla se agitó durante otra hora a 0.5ºC. El baño de hielo se retiró y la solución se agitó durante la noche a temperatura ambiente y se diluyó con acetato etílico y HCl acuoso 0,25 N. La capa orgánica fue separada y concentrada in vacuo. La cristalización del residuo a partir el etanol acuoso suministró el compuesto anterior como un sólido incoloro: ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,60(2H), 7,32(3H), 7,10(2H), 4,70(1H), 4,13(2H), 3,78(2H), 3,74(3H), 3,12(2H), 2,89(2H), 2,48(1H), 1,88(2H), 1,63(2H), 1,23(3H); ^{13}C NMR (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 174,8, 173,4, 163,2, 156,8, 136,8, 136,3, 132,9, 132,4, 130,8, 129,9, 128,1, 120,5, 60,8, 56,8, 54,6, 52,4, 43,4, 41,0, 37,7, 27,8, 14,2; MS (ESI+) para C_{26}H_{29}Cl_{2}N_{3}O_{6} m/z 550,0 (M+H)^{+}; MS (ESI-) para C_{26}H_{29}Cl_{2}N_{3}O_{6} m/z 548,0 (M-H)^{-}; Anál. calculado para C_{26}H_{29}Cl_{2}N_{3}O_{6}: C, 56.73; H, 5.31; N, 7,63. Hallados: C, 56,42; H, 5,43; N, 7,58.
Esquema R
129
Preparación R-1-1
Esquema R, R-1, en el que R=CO_{2}tBu, R'=CH_{3}
3-Carbometoxi-2,4,4-trimetil-2-ciclohexen-1-ácido ilidenoacético, 1,1-éster dimetiletílico, (E) (C_{17}H_{26}O_{4})
130
A una solución en agitación de t-butóxido de potasio 1M en THF (44 ml) a 0ºC se añadió una solución de t-butil dietilfosfonoacetato (12,6 g, 49,8 mmol) en THF (15 ml) a gotas. Se dejó calentar la solución a temperatura ambiente y se agitó durante 30 minutos antes de volverla a enfriar a 0ºC. Se añadió a gotas una solución de la conocida cetona 3-carbometoxi-2,4,4-trimetil-2-ciclohexen-1-ona (Boulin, B; Miguel, B. Arreguy-San; D.B. Tetrahedron 1998, 54, 2753) (5,75 g, 29,3 mmol) en THF (10 ml). Se dejó que la solución se calentara lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas. La solución se evaporó in vacuo, y el residuo se particionó entre H_{2}O (250 ml) y EtOAc (250 ml). La fase acuosa se extrajo con EtOAc (250 ml). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con H_{2}O (500 ml), salmuera (500 ml), se filtraron y evaporaron in vacuo. El aceite naranja resultante fue cromatografiado sobre gel de sílice (450 g, malla 230-400, columna 70 mm OD, rellenado y eluido con EtOAc/heptano, 5:95 (2 l), luego EtOAc/heptano, 1:9, recogiendo fracciones de 270 ml) utilizando la técnica de destello. Las fracciones 5-13 fueron combinadas y evaporadas in vacuo para suministrar el diéster R-1 deseado, 6,41 g de aceite incoloro claro, (75%). ^{1}H-NMR (300 MHz., CDCl_{3}): \delta = 5,81(1), 3,80(3), 3,00-3,07(2), 1,79(3), 1,56-1,69(2), 1,50(9), 1,13(6). IR (mull) 1723, 1702, 1610, 1602,1395, 1300, 1286, 1249, 1210, 1180. 1147, 113 (), 1() 63, 982, y 864 cm^{-1}. MS (FAB) m/z (Intensidad relativa) 295 (MH^{+}, 20), 295(20), 263(1()), 24()(15), 239(99), 237(8), 221(39), 207(40), 133(9), 91(8), 57(29). Anál. calculado para C_{17}H_{26}O_{4}: C, 69.36; H, 8.90. Hallados: C, 69,02; H, 8,80.
Preparación de R-1-2
Esquema R, R-1, en el que R=CO_{2}tBu, R'=H
3-Carboxi-2,4,4-trimetil-2-ciclohexen-1-ácido ilidenoacético,1,1-éster dimetiletílico, (E) (C_{16}H_{24}O_{4}) R-1
131
A una solución en agitación de thc R-1 (6,08 g, 20,7 mmol) en DMF (75 ml) se añadió KOH (1,27 G, 22,7 mmol) y tiofenol (2,3 ml, 22,7 mmol) y la mezcla se calentó a 100ºC durante 16 horas. Se dejó enfriar la mezcla a temperatura ambiente y se evaporó in vacuo. El residuo resultante se particionó entre Et_{2}O (500 ml) y NaOH acuoso al 5% (500 ml), y la fase orgánica fue descartada. Se añadió HCl 6N acuoso a la fase acuosa hasta que el pH fue de 2-3 aproximadamente; y la mezcla se extrajo con Et_{2}O (2x500 ml). Los extractos combinados fueron lavados con salmuera (500 ml), secados (Na_{2}SO_{4}), filtrados y evaporados al vacío para suministrar el ácido carboxílico R-1 (R=CO_{2}tBu, R'=H) como un sólido color crema, 5.55 g (96%). MP 83-87ºC; ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 12.91(1), 5.70-5.77(2), 2.88-2.97(2), 1,75(3), 1,40-1,55(10), 1,09(6); IR (mull) 3488, 3389, 2584, 1683, 1604, 1303, 1283, 1262, 1230, 1218, 1150, 1132, 987, 865, y 854 cm^{-1} MS (EI) m/z (Intensidad relativa): 280 (M^{+}, 1), 224(71), 207(54), 206(95), 179(99), 178(62), 161(48), 133(52), 119(49), 111(50), 57(97). HRMS (EI) calculado para C_{16}H_{24}O_{4} 280.1764. Hallados 280.1668.
Preparación de R-2-1
Esquema R, R-2, en el que R=CO_{2}tBu, R''=CH_{3}, X=NH, Y=C=O
N-[[(3E)-3-[[(1,1-Dimetiletoxi)carbonil]metileno]-2,6,6-trimetil-1-ciclohexen-1-ilo)carbonil]-4-[(2,6-dicloroben-zoil)amino]L-éster metílico de fenilalanina
132
A una solución en agitación del ácido carboxílico R-1 (2,54 g, 9,06 mmol) en DMF (75 ml) se añadió 4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-hidrocloruro éster metílico de fenilalanina (11 g, 27,2 mmol), HATU (6,89 g, 18,1 mmol) y diisopropiletilamina (7,9 ml, 45,3 mmol). Se dejó la solución en agitación a temperatura ambiente durante 16 horas y luego se evaporó en vacío. El residuo fue particionado entre HCl acuoso 1M (500 ml) y EtOAc (500 ml) y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (500 ml). Los extractos combinados se lavaron con salmuera (500 ml), secaron (Na, SO_{4}), filtraron y evaporaron al vacío. El aceite amarillo resultante fue cromatografiado sobre gel de sílice (450 g, malla 230-400, columna 70 mm OD, rellenado y eluido con EtOAc/CH_{2}Cl_{2}, (1:9) recogiendo fracciones de 270 ml) utilizando la técnica de destello. Las fracciones 8-16 fueron combinadas y evaporadas in vacuo para suministrar el producto R-2 (R=CO_{2}tBu, R''=CH_{3}, X=NH, Y=C=O) deseado, 2,22 g de sólido blanco (39%). MP 158-160ºC; ^{1}H-NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta = 7,56-7,64(2), 7,30-7,41(3), 7,17-7,24(2), 5,74-5,83(2), 5,03-5,13(1), 3,79(3), 3.07-3.26(2), 2.95-3.05(2), 1.73(3), 1.45-1.59(12), 1.12(3), 1.05(3); IR (mull) 3259, 175(), 1707, 169(), 1671, 1639, 1910, 1548, 1515, 1432, 1332, 1279, 1216, 1151, y 1135 cm^{-1}; MS (FAB) m/z (Intensidad relativa): 629 (MN^{+}, 3), 557(32), 555(46), 349(18), 263(31), 208(18), 207(99), 175(19), 173(30), 161(18), 57(26); HRMS (FAB) calculado para C_{33}H_{38}Cl_{2}N_{2}O_{6}+HI 629.2185, hallados 629.2176.
Preparación R-2-2
Esquema R, R-2, en el que R=CO_{2}H, R''=CH_{3}, X=NH, Y=C=O
N-[[(3E)-3-Carboximetileno-2,6,6-trimetil-1-ciclohexen-1-ilo)carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]L-éster metílico de fenilalanina
133
El diéster R-2-1 (3,95 g, 6,27 mmol) fue disuelto en ácido trifluoroacético (0 ml) y la solución thc se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas. La evaporación en vacío dio un aceite viscoso, marrón claro el cual, después de trituración con Et_{2}O/heptano (1:1, 100 ml) suministró el ácido carboxílico deseado R-2-2 como un sólido blanco en polvo que fue recogido por filtrado de aspiración y secado (3,45 g, 96%). MP 163-168ºC; ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 10,65(1), 8,39(1), 7,43-7,65(5), 7,26(2), 5,72(1), 4,59-4,72(1), 3,66(3), 3,05-3,18(1), 2,75-3,02(3), 0,72-1,83(12); IR (mull) 3258, 1746, 1664, 1639, 1607, 1562, 1544, 1515, 1432, 1414, 1328, 1277, 1216, 1194, y 799 cm^{-1}; MS (FAB) m/z (Intensidad relativa): 573 (MH^{+}, 21), 573(21), 557(41), 555(59), 351(20), 349(31), 207(99), 177(65), 175(26), 173(42), 105(25); HRMS (FAB) calculado. Para C_{29}H_{30}Cl_{2}B_{2}O_{6}+HI 573.1559, hallados 573.1544.
Ejemplo 118
Esquema R, R-2, en el que R=CO_{2}H, R''=H, X=NH, Y=C=C
N-[[(3E)-3-Carboximetileno-2,6,6-trimetil-1-ciclohexen-1-ilo)carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]L-fenilalanina
134
A una solución en agitación R-2-2 (4,25 g, 7,41 mmol) en CH_{3}OH (50 ml) se añadió una solución de LiOH. H_{2}O (0,62 g, 14,8 mmol) en H_{2}O (15 ml) y 30% H_{2}O_{2} (25 gotas). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas y se evaporó in vacuo. El residuo se disolvió en H_{2}O (50 ml) y acidificó a un pH de 1-2 aproximadamente con 1Cl acuoso 1N. El sólido gelatinoso resultante fue recogido por filtración de aspiración y secado en un horno de vacío a 70ºC durante 16 horas. El sólido resultante fue triturado, lavado a fondo con H_{2}O y secado en horno de vacío a 70ºC durante 16 horas para suministrar el diácido deseado R como un sólido blanquecino y cristalino, 3,98 g ('96%). MP: 175-185ºC; ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 11.94-12.80(1), 10.64(1), 8.23(1), 7.44-7.66(5), 7.24(2), 5.71(1), 4.53-4.66(1), 3.06-3.19(1), 2.76-3.01(3), 0.61-1.87(12); IR (mull) 3257, 3195, 3128, 3067, 1712, 1663, 1606, 1563, 1540, 1517, 1432, 1415, 1329, 1275, y 1194 cm^{-1}; MS (FAB) m/z (rel intensidad): 559 (MH^{+}, 61), 559(61), 543(74), 541(98), 517(42), 515(55), 207(99), 175(46), 173(69), 161(54), 135(65); HRMS (FAB) calculado para C_{28}H_{28}Cl_{2}N_{2}O_{6}+HI 559.1043, hallados 559.1387.
Preparación R-2-3
Esquema R, R-2, en el que R=CO_{2}H, R''=CH_{3}, X=O, Y=CH_{2}
N-[[(3E)-3-[[(1,1-Dimetiletoxi)carbonil]metileno]-2,6,6-trimetil-1-ciclohexen-1-ilo]carbonil]-4-O[(2,6-diclorofenilmetil)-L-éster metílico de tirosina (C_{33}H_{39}Cl_{2}NO_{6}) R-2
135
A una solución en agitación del ácido carboxílico R-1 (1,10 g, 3,92 mmol) en DMF (30 ml) se añadió 4-O-(2,6-diclorofenilmetil)L-hidrocloruro éster metílico de tirosina (2,30 g, 5.89 mmol), HATU (1,79 g, 4,71 mmol), y diisopropiletilamina (2,7 ml, 15,7 mmol). La solución fue agitada a temperatura ambiente durante 16 horas y luego evaporada in vacuo. El residuo fue particionado entre HCl acuoso 1M (150 ml) y CH_{2}Cl_{2} (150 ml). La fase orgánica se lavó con NaHCO_{3} acuoso saturado (150 ml), salmuera (150 ml) y secada (Na_{2}SO_{4}), filtrada y evaporada in vacuo. El aceite ámbar resultante fue cromatografiado sobre gel de sílice (300 g, malla 230-400, columna 70 mm OD, rellenado y eluido con CH_{2}Cl_{2} (2 l), luego EtOAc/CH_{2}Cl_{2} (5:95), recogiendo fracciones de 270 ml) utilizando la técnica de destello. Las fracciones 16-20 fueron combinadas y evaporadas en vacío para suministrar el producto deseado R-2-3 (R=CO_{2}tBu, R''=CH_{3}, X=O, Y=CH_{2}) como un sólido amarillo claro, 0.87g (36%), ^{1}H-NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta = 7,33-7,38(2), 7,21-7,28(1), 7,10(2), 6,95(2), 5,69-5,73(2), 5,24(2), 7,21-7,28(1), 7,10(2), 6,95(2), 5,69-5,73(2), 5,24(2), 5,01(1), 3,76(3), 3,18(1), 2,94-3,07(3), 1,66-1,69(4), 1,46-1,55(10). 1,09(3), 1,00(3); IR (mull) 1746, 1705, 1636, 1611, 1586, 1512, 1439, 1301, 1277, 1241, 1196, 1179, 1152, 1134, y 1017 cm^{-1}; HRMS (EI): calculado para C_{33}H_{39}Cl_{2}NO_{6}: C, 64.28; H, 6,38; N, 2,27; Cl, 11,50. Hallados C, 63,91; H, 6,38; N, 2,52; Cl, 11,33.
Preparación R-2-4
Esquema R, R-2, en el que R=CO_{2}H, R''=CH_{3}, X=O, Y=CH_{2}
N-[[(3E)-3-Carboximetileno-2,6,6-trimetil-1-ciclohexen-1-ilo]carbonil]-4-O[(2,6-diclorofenilmetil)-L-éster metílico de tirosina (C_{29}H_{31}Cl_{2}NO_{6}) R-2
136
El diéster (0,80 g, 1,30 mmol) fue disuelto en ácido trifluoroacético (15 ml) y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La evaporación al vacío dio un aceite ámbar viscoso, después de trituración con Et_{2}O/hexanos (1:1, 100 ml) suministró el ácido carboxílico deseado R-2 como un sólido blanco en polvo que fue recogido por filtración de aspiración y secado, 0,63 g (86%). MP: 140-143ºC; ^{1}H-NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta = 7,37(2), 7,26(2), 7,11(2), 6,96(2), 5,82-5,89(2), 5,24(2), 5,05(1), 3,78(3), 2,90-3,25(4), 1,70(3), 1,54(2), 1,09(3), 1,00(3).
Ejemplo 119
Esquema R, R-2, en el que R=CO_{2}H, R''=CH_{3}, X=O, Y=CH_{2}
N-[[(3E)-3-Carboximetileno-2,6,6-trimetil-1-ciclohexen-1-ilo]carbonil]-4-O[(2,6-diclorofenilmetil)-L-tirosina. (C_{29}H_{31}Cl_{2}NO_{6}) R-2
137
La solución en agitación del éster metílico R-2 (0,59 g, 1,05 mmol) en CH_{3}OH (10 ml) fue añadida a una solución de LiOH. H_{2}O (0,09 g, 2,11 mmol) en H_{2}O (5 ml) y H_{2}O_{2} al 30% (5 gotas). La solución fue agitada a temperatura ambiente durante 16 horas y evaporada al vacío. El residuo fue disuelto en H_{2}O (50 ml) y acidificado a pH 1-2 con HCl acuoso 1N. El sólido gelatinoso resultante fue recogido por filtración de aspiración y secado en un horno de vacío a 70ºC durante 16 horas. El sólido resultante fue triturado, lavado a fondo con agua y secado en un horno de vacío a 70ºC durante 16 horas para obtener el diácido deseado R-2 (R=CO_{2}H, R''=H, X=O, Y=CH_{2}) como un sólido cristalino grisáceo, 0.47 g (82%). MP: 115-138ºC; ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 11.67-12.88(1), 8.15(1), 7.54(2), 7.40-7.48(1), 7.20(2), 6.93(2), 5.68(1), 5.16(2), 4.47-4.58(1), 3.04-3.13(1), 2.73-2.95(4), 1.33-1.65(5), 0.68-0.98(6): IR (mull) 3058, 1693, 1611, 1601, 1565, 1539, 1512, 1439, 1299, 1278, 1244, 1196, 1179, 777, y 769 cm^{-1}; HRMS (EI) calculado para C_{28}H_{29}Cl_{2}NO_{6} 545.1372, hallados 545.1377: % Agua (KF): 2.53.
Preparación R-1-4
Esquema R, R-1, en el que R=CN, R'=CH_{3}
3-Carbometoxi-2,4,4-trimetil-2-ciclohexen-1-ilidenoacetonitrilo (E) (C_{13}H_{17}NO_{2})
138 
\vskip1.000000\baselineskip
Se lavó hidruro de sodio (0,73 g de una dispersión de aceite al 60%, 18,3 mmol) con hexano (3 x 5 ml) y suspendió en THF (10 ml) y enfrió a 0ºC. A esta suspensión se añadió una solución de t-butil dietilfosfonoacetato (4,60 g, 25 mmol) en THF (10 ml) a gotas. Después de agitar a 0ºC durante 1 hora, se retiró el baño de agua helada y se añadió a gotas una solución de la cetona, 3-carbometoxi-2,4,4-trimetil-2-ciclohexen-1-ona (Boulin, B; Miguel, B. Arreguy-San; D.B. Tetrahedron 1998, 54, 2753), (3,00 g, 15,3 mmol) en THF (10 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas antes de ser evaporada en vacío. El residuo fue particionado entre agua (100 ml) y EtOAc (100 ml) y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (50 ml). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua (100 ml), salmuera (100 ml), se filtraron, y evaporaron al vacío. El aceite marrón claro resultante fue cromatografiado sobre gel de sílice (400 g, malla 230-400, columna 70 mm OD, rellenado y eluido con EtOAc/hexanos, 15:85, recogiendo fracciones de 270 ml) utilizando la técnica de destello. Las fracciones 11-18 fueron combinadas y evaporadas in vacuo para suministrar el nitrilo vinílico R-1 (R=CN, R'=CH_{3}) deseado, como una mezcla de isómeros geométricos; 3,20 g (95%) de aceite incoloro, claro. ^{1}H-NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta = 5,30(0.78), 5,19(0,22), 3,79(3), 2,74-2,80(1,56), 2,44-2,51(0,44), 2,14(0,66), 1,75(2,34), 1,60-1,67(2), 1,14(4,68), 1,13(1,32); IR (neto) 2966, 2954, 2871, 2212, 1726, 1584, 1450, 1433, 1330, 1291, 1247, 1222, 1067, 1027, 1802 cm^{-1}; MS (EI) m/z (Intensidad relativa): 219 (M^{+}, 19), 219(19), 188(12), 172(16), 161(13), 160(99), 159(13), 144(12), 133(8), 118(11), 91(9); Anál. calculado para C_{13}H_{17}NO_{2}: C, 71.21; H, 7.81; N, 6,39. Hallados: C, 71,04; H, 7,74; N, 6,37.
Preparación de R-1-5
Esquema R, R-1, en el que R=CN, R'=H
3-Carboxi-2,4,4-trimetil-2-ciclohexen-1-ilidenoacetonitrilo
139
A una solución en agitación del nitrilo R-1 (2,05 g, 9,35 mmol) en DMF (35 ml) se añadió KHO (0,58 g, 10,3 mmol) y tiofenol (1,1 ml, 10,3 mmol) y la mezcla se agitó a 100ºC durante 16 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción fue evaporada al vacío. El residuo fue particionado entre NaOH acuoso al 5% (100 ml) y Et_{2}O (100 ml) y la fase orgánica fue desechada. Luego se añadió HCl acuoso 6N a gotas a la fase acuosa hasta que se alcanzó el pH 1 y luego se extrajo con Et_{2}O (2x100 ml). Los extractos combinados fueron lavados con agua (100 ml), salmuera (100 ml), secados (Na_{2}SO_{4}), filtrados y evaporados al vacío para obtener el ácido carboxílico R-1 (R=CN, R'=H) como una mezcla de isómeros geométricos; 1,81 g (94%) como un blanco sólido. MP: 88-92ºC; ^{1}H-NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta = 8,02-9,24(1), 5,36(0,82), 5,24(0,18), 2.77-2.84(1.64), 248-2,54(0,36), 2,27(0,54), 1,88(2,46), 1,64-1,71(2), 1.22(4.92), 1.21(1.08); MS (ESI-) para C_{15}H_{15}NO_{2} m/z 204.2 (M-H).
Preparación R-2-5
Esquema R, R-2, en el que R=CN, R''=CH_{3}, X=NH, Y=C=O
N-[[(3E)-3-cianometileno-2,6,6-trimetil-1-ciclohexeno-1-il]carbonilo]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina metil éster (CH_{24}H_{29}Cl_{2}N_{3}O_{4}) R-2
140
A una solución en remoción del ácido carboxílico R-1 (R=CN, R'=H) (1,80 g, 8,77 mmol) en DMF (35 mL) se le añadió 4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina metil éster, hidrocloruro (7,08 g, 17,5 mmol); HATU (4,00 g, 10,5 mmol), y diisopropiletilamina (6,1 mL, 35,1 mmol). La solución se removió a TA durante 62 h y, después, se evaporó in vacuo. El residuo quedó dividido entre HCl 1N acuoso (250 mL) y CH_{2}Cl_{2} (250 mL), y se extrajo la fase acuosa con CH_{2}Cl_{2} (250 mL). Los extractos combinados se lavaron con NaHCO_{3} (500 mL), salmuera (500 mL), se secaron (Na_{2}SO_{4}), y fueron todos ellos filtrados y evaporados in vacuo. El aceite naranja resultante fue cromatografiado sobre gel de sílice (400 g, retícula de 230-400, columna OD de 70 mm, aglomerado y eluido con EtOAc/CH_{2}Cl_{2} (1:9), recogiendo fracciones de 260 mL), utilizando la técnica de inflamación (flash). Se combinaron fracciones de 12-25 y se evaporaron in vacuo al objeto de conseguir el producto deseado R-2 (R=CN, R''=CH_{3}, X=NH, Y=C=O) en forma de mezcla de isómeros geométricos (E:Z = 4.2:1, según se determina por ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 10,65(1), 8,48(1), 7,43, 7,62(5), 7,23(2), 5,55(0,81), 5,52(0,19), 4,58-4,69(1), 3,64(3), 3,33(3), 3,10(1), 2,81-2,92(1), 2,62(1,62), 2,37-2,45(0,38), 1,42-1,69(2); 0,68-1,05(6); IR (mull) 3292, 1745, 1665, 1642, 1605, 1580, 1562, 1536, 1517, 1431, 1414, 1325, 1270, 1217, y 799 cm^{-1}; HRMS (EI) calculado para C_{29}H_{29}Cl_{2}N_{3}O_{4} 553,1535, hallados 553,1551.
Ejemplo 120
Esquema R, R-2, en el que R=CN, R''=H, X=NH, Y=C=O
N-[[(3E)-3-cianometileno-2,6,6-trimetil-1-ciclohexeno-1-il]carbonilo]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina (CH_{28}H_{27}Cl_{2}N_{3}O_{4}) R-2
141
A una solución en remoción del metil éster R-2 (R=CN, R''=CH_{3}, X=NH, Y=C=O) (1,80 g, 3,25 mmol) en CH_{3}OH (40 mL) se le añadió una solución de LiOH H_{2}O (0,27 g, 6,50 mmol) en H_{2}O (10 mL) y 30% de H_{2}O_{2} (20 gotas). Se removió la solución a TA durante 16 h y, a continuación se evaporó in vacuo. El residuo se disolvió en H_{2}O (50 mL) y se acidificó hasta conseguir un pH aprox. de 1-2, con HCL 1N acuoso. El sólido gelatinoso resultante fue recogido mediante filtración de succión, secándose en un horno al vacío a 70ºC durante 16 h. El sólido resultante fue machacado, lavado meticulosamente con H_{2}O, secándose posteriormente en un horno al vacío a 70ºC durante 16 h al objeto de permitir que el ácido carboxílico pretendido R-2 (R=CN, R''=H, X=NH, Y=C=O) fuera un sólido cristalino, color crema, 1,43 g (81%) MP: 172-180ºC, ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 10,05-13,42(1), 10,63(1), 8,30(1), 7,42-7,61(5), 7,23(2), 5,52(1), 4,50-4,62(1), 2,34-3,55(7), 1,41-1,68(2), 0,71-1,06(6): IR (mull) 3291, 1734, 1664, 1645, 1605, 1581, 1562, 1537, 1432, 1414, 1327, 1272, 1195 y 799 cm^{-1}; MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 540 (MH^{+}), 80, 543(20), 542(57), 541(32), 540(8()), 335(17), 189(18), 188(99), 175(19), 173(30), 161(41); HRMS (FAB) calculado para C_{28}H_{27}Cl_{2}N_{3}O_{4}+HI, 540,1457, hallados 540,1436; % AGUA (kf): 3,07.
Esquema S
142 
\newpage
Preparación S-1
Esquema S, S-1
Ácido (3E)-3-carbometoxi-2,4,4-trimetil-2-ciclohexeno-1-ilideneacético (C_{13}H_{18}O_{4}) S-1
143
Una solución de ácido 3 carbometoxi-2,4,4-trimetil-2-ciclohexeno-1,1,1-dimetiletil éster, preparado tal y como se describe en el esquema R (preparado R-1-1, esquema R, R-1, en donde R=CO_{3}tBu, R'=CH_{3}) (1,82 g, 6,18 mmol) fue removida en TFA (10 mL) a TA durante 16 h y, a continuación se evaporó in vacuo. El aceite negro resultante fue cromatografiado sobre gel de sílice (150 g, retícula de 230-400, columna OD de 35 mm, aglomerado y eluido con MeOH/CH_{2}Cl_{2} 2,5:97,5, recogiendo fracciones de 260 mL), utilizando la técnica de inflamación (flash). Se combinaron fracciones de 24-56 y se evaporaron in vacuo al objeto de conseguir 0,92 kg (62%) del ácido carboxílico S-1 en forma de sólido color crema, en forma de mezcla 83:17 de isómeros geométricos E/Z. MP 115-120ºC (sublimes); TLC: R_{f} = 0,31 (MeOH/CH_{2}Cl_{2}, 7,5:92,5), ^{1}H-NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta = 5,92(0,83), 5,73(5,17)(0,81), 3,82(2,49); 3,80(0,51); 3,06(1,63), 2,43(0,37), 1,89(0,54), 1,81(2,46); 1,61(2), 1,14(1,02), 1,13(4,98); IR (mull) 1718, 1685, 1664, 1600, 1433, 1416, 1326, 1303, 1288, 1258, 1227, 1210, 1060, 1027 y 866 cm^{-1}; MS (EI) m/z (intensidad relativa) 238 (M^{+}, 30) , 238(30), 207(31), 206(33), 179(99), 178(38), 161(51), 133(63) 119(33), 91(41), 77(24); análisis calculado para C_{13}H_{18}O_{4}: C, 65.53; H, 7,61. Hallado; C, 65,32; H, 7,79.
Preparación S-2-1
Esquema S, S-2, en el que R=R1=CH_{3}
N-[(1E)-3-carbometoxi-2,4,4-trimetil-1-ciclohexeno-1-ilidenacetilo]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina metil éster (C_{30}H_{32}Cl_{2}N_{2}O_{6}) S-2
144
A una solución en remoción del ácido carboxílico S-1 (0,88 g, 3,69 nmol) en CH_{2}Cl_{2} (15 mL) se le añadió 4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina metil éster hidrocloruro (1,49 g, 3,69 mmol), EDC (0,71 g, 3,69 nmol), DMAP (0,14 g, 1,10 nmol), HOBT (0,50 g, 3,69 nmol) y trietilamina (3 mL). Se dejó remover la solución a TA durante 16 h y, a continuación se evaporó in vacuo. El residuo se dividió entre HCL 1N acuoso (150 Ml) y CH_{2}Cl_{2} (150 mL). La fase orgánica fue lavada con NaHCO_{3} (150 mL), salmuera (150 mL), secado (Na_{2}SO_{4}), filtrado y evaporado in vacuo. El sólido amarillo resultante fue cromatografiado sobre gel de sílice (400 g, retícula de 230-400, columna OD de 70 mm, aglomerado y eluido MeOH/CH_{2}Cl_{2} 5,95, recogiendo fracciones de 150 mL), utilizando la técnica de inflamación (flash). Se combinaron fracciones de 4-7 y se evaporaron in vacuo al objeto de conseguir el producto deseado S-2 (R=R'=CH_{3}) en forma de sólido amarillo: 1,31 g (60%). Se obtuvo una muestra analítica mediante recristalización a partir de CH_{2}Cl_{2}/CH_{3}OH/ Et_{2}O. MP: 193ºC, TLC: R_{f} = 0,22 (MeOH/CH_{2}Cl_{2}, 5,95); ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 10,66(1), 8,39(1), 7,52-7,61(4), 7,44-7,50(1), 7,19(2), 6,00(1), 4,51(1), 3,70(3), 3,62(3), 3,01(1), 2,78-2,91(3), 1,68(3), 1,42(2), 1,01(6); IR (mull) 1749, 1723, 1669, 1643, 1612, 1562, 1533, 1534, 1514, 1433, 1335, 1281, 1243, 1218, 782 cm^{-1}; MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 587 (MH^{+}, 13), 589(8), 587(13), 557(8), 555(12), 555(12), 222(15), 221(99), 175(14), 173(23), 161(21), 133(14); HRMS (FAB) calculado para C_{30}H_{32}Cl_{2}N_{2}O_{6}+H, 587,1715, hallados 587,1705; Análisis calculado para C_{30}H_{32}Cl_{2}N_{2}O_{6}: C, 61,33, H, 5,49; N, 4,77. Hallados C, 60,94, H, 5,42; N, 4,80.
Ejemplo 121
Esquema S, S-2, en el que R=R'=H
N-[(1E)-3-carboxi-2,4,4-trimetil-1-ciclohexeno-1-ilidenacetil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina (C_{28}H_{28}Cl_{2}N_{2}O_{6}) S-2
145
A una solución en remoción del diéster S-2 (R=R'=CH_{3}) (1,13g, 1,92 nmol) en DMF (15 mL) se le añadió KOH (0,24 g, 4,23 mmol) y triofenol (0,44 mL, 4,23 mmol), calentando la mezcla a 100ºC durante 16 h. La evaporación in vacuo dejó un residuo pardo que fue disuelto en H_{2}O (50 mL). A esta solución se le añadió HCL 1N acuoso hasta que el pH de la mezcla fue de aprox. 3, y se extrajo con MeOH/Et_{2}O (5:95), 50 mL). El extracto fue lavado con salmuera (50 mL), secado (Na_{2}SO_{4}), filtrado y evaporado in vacuo. El sólido color naranja resultante fue recristalizado a partir de EtOAc/ciclohexano para dar el diácido S-2 (R=R'=H) en forma de sólido amarillo ligero. Se retiraron los sólidos volátiles mediante calentamiento (100ºC) en un horno en vacío durante 6 h para dar 0,90 g (84%) de S-2 (R=R'=H). MP: 159ºC (descomposición); ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 12,70(1), 10,65(1), 8,23(1), 7,44-7,60(6), 7,20(2), 5,97(1), 4,46(1), 3,03(1), 2,77-2,88(3), 1,73(3), 1,41(2), 1,05(6); IR (mull) 3265, 3123, 3055, 3035, 1720, 1645, 1605, 1562, 1537, 1516, 1432, 1414, 1326, 1217 y 1196 cm^{-1}; MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 559 (MH^{+}, 27), 559(27), 543(30), 541(41), 335 18), 221(51), 207(99), 175(31), 173(48), 161(30), 133(19); HRMS (FAB) calculado para C_{28}H_{28}Cl_{2}N_{2}O_{6}+HI, 559,1403, hallados 559,1398; % agua (KF): 1,24.
Esquema T
146
Preparación T-1-1
Esquema T, T-1, en el que 3-CO_{2}CH_{3}
Ácido (E)-3-[3-hidroxi-3-oxo-1-propenil)benzoico metil éster (C_{11}H_{10}O_{4})
147
Una solución del diéster conocido ácido 3-[3-(1,1-dimetiletoxi)-3-oxo-1-propenil]benzoico metil éster (Mjalli, A.M.M.; Cao, X.; Moran, E.J., PCT Int. Appl., 89pp. CODEN: PIXXD2. WO 9708934 A2 970313. CAN 126:277769) (1,00 g 3,81 mmol) en TFA (10 mL) que se removió a TA durante 16 h. Su evaporación in vacuo dio lugar a 0,83 g (100%) del T-1 (3-CO_{2}CH_{3}) en forma de sólido blanco. MP: 186-187ºC; ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 8,16(1), 7,94(2), 7,52-7,67(2), 6,59(1), 3,85(3); IR (mull) 1730, 1678, 1634, 1438, 1346, 1329, 1297, 1227, 1201, 1079, 985, 871, 757, 721, y 670 cm^{-1}; MS (EI) m/z (intensidad relativa): 206 (M^{+}, 54), 206(54), 175(99), 174(14), 147(24), 130(14), 129(19), 102(16), 91(33), 65(16), 51(19); HRMS (EI) calculado para C_{11}H_{10}O_{4} 206,0579, hallados 206,0586.
Preparación T-1-2
Esquema T, T-1, en el que 4-CO_{2}CH_{3}
Ácido (E)-4-[3-hidroxi-3-oxo-1-propenil)benzoico metil éster (C_{11}H_{10}O_{4})
148
Una solución del diéster conocido ácido 4-[3-(1,1-dimetiletoxi)-3-oxo-1-propenil]benzoico metil éster (Mjalli, A.M.M.; Cao, X.; Moran, E.J., PCT Int. Appl., 89pp. CODEN: PIXXD2. WO 9708934 A2 970313. CAN 126:277769) (1,00 g 3,81 mmol) en TFA (10 mL) que se removió a TA durante 16 h. Su evaporación in vacuo dio lugar a 0,79 g (100%) del compuesto del título T-1 (4-CO_{2}CH_{3}) en forma de sólido blanco. ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 7,94(2), 7,80(2), 7,62(1), 6,62(1), 3,84(3); IR (mull) 1715, 1685, 1634, 1569, 1438, 1426, 1329, 1309, 1284, 1227, 1185, 1111, 992, 775, y 72 cm^{-1}; MS (EI) m/z (intensidad relativa): 206 (M^{+}, 44), 206(44), 191(19), 176(12), 175(99), 147 28), 102(12), 101(9), 91(23), 65(11), 51(10); HRMS (EI) calculado para C_{11}H_{10}O_{4} 206,0579, hallados 206,0583.
Preparación T-3-1
Esquema T, T-3, en el que 3-sustituidos, R=CH_{3} R''=CH_{3}
N-[(E)-3-(carbometoxifenil)-1-oxo-2-propenil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina metil éster T-3 (C_{28}H_{24}Cl_{2}N_{2}O_{6})
149
A una suspensión en remoción del ácido T-1 (3-CO_{2}CH_{3}) (0,73 g, 3,54 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (30 mL) se le añadió 4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina metil éster, hidrocloruro (1,43 g, 3,54 mmol), EDC (0,69 g, 3,54 mmol), DMAP (0,13 g, 1,06 mmol), y HOBT (0,48 g, 3,54 mmol). A esta mezcla se le añadió Et_{3}N por gotas hasta que todos los sólidos quedaron en solución. Tras remover durante 16 h a TA, el precipitado resultante fue recogido mediante filtración por succión, lavado con CH_{2}Cl_{2} y Et_{2}O, y secado para dar lugar a 1,26 g (64%) de T-2-1 (3-CO_{2}CH_{3}) en forma de sólido color crema. MP: 216-218ºC; ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 10,35(1), 8,58(1), 8,13(1), 7,93 (1)-7,81(1), 7,43-7,60(6), 7,21(2), 6,82(1), 4,61(1), 3,86(3), 3,64(3), 2,88-3,10(3); IR (mull): 1746, 1741, 1728, 1670, 1655, 1624, 1611, 1562, 1552, 1513, 1444, 1433, 1334, 1282 y 1207 cm^{-1}; MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 555 (MH^{+}, 68), 558(16), 557(48), 556(26), 555(68), 349(21), 189(58), 175(20), 174(99), 173(30), 103(15); HRMS (FAB) calculado para C_{28}H_{24}Cl_{2}N_{2}O_{6}+HI, 555,1089, hallados 555,1083.
Ejemplo 122
Esquema T, T-3, en el que 4-sustituidos, R=H, R''=H
N-[(E)-3-(carboxifenil)-1-oxo-2-propenil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina metil éster T-3 (C_{26}H_{20}Cl_{2}N_{2}O_{6})
150
A una suspensión en remoción del diéster (4-CO_{2}CH_{3}, R=CH_{3}, R''=CH_{3}) (0,75 g, 1,35 mmol) en MeOH/DMSO (3:1, 20 mL) se le añadió una solución de LiOH+H_{2}O (0,23 g, 5,40 mmol) en H_{2}O (5 mL). Tras remover durante 16 h a TA, la mezcla de reacción se evaporó in vacuo. El residuo fue disuelto en H_{2}O (30 mL) y se añadió HCL_{6}N acuoso hasta que el pH de la mezcla fue de aprox. 1. El precipitado resultante fue recogido mediante filtración por succión, lavado con H_{2}O y secado en un horno de vacío a 70ºC durante 16 h para dar lugar a 0,69 g (97%) del compuesto del título T-3 (4-CO_{2}H) en forma de sólido blanco. MP: 177-181ºC; ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 8,46(1), 7,93(2), 7,64(2), 7,40-7,58(6), 7,21(2), 6,82(1), 4,54(1), 2,86-3,13(2); IR (mull): 3278, 1708, 1661, 1608, 1562, 1562, 1538, 1517, 1432, 1415, 1325, 1270, 1230, 1196, 1179 y 778 cm^{-1}; MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 527 (MH^{+}, 99), 531(11), 530(20), 529(73), 528(33), 527(99), 335(11), 315(13), 175(64), 173(15), 161(45); HRMS (FAB) calculado para C_{26}H_{20}Cl_{2}N_{2}O_{6}+HI, 527,0776, hallados 527,0770.
Preparación T-3-2
Esquema T, T-3, en el que 4-sustituidos, R=CH_{3} R''=CH_{3}
N-[(E)-3-(4-carbometoxifenil)-1-oxo-2-propenil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina metil éster T-3 (C_{28}H_{24}Cl_{2}N_{2}O_{6})
151
A una suspensión en remoción del ácido T-1 (3-CO_{2}CH_{3}) (0,73 g, 3,54 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (30 mL) se le añadió el 4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina metil éster, hidrocloruro (1,45 g, 3,59 mmol), EDC (0,69 g, 3,59 mmol), DMAP (0,13 g, 1,08 mmol), y HOBT (0,48 g, 3,59 mmol). A esta mezcla se le añadió N,N-diisopropil etilamina (3 mL). Tras remover durante 16 h a TA, la mezcla de reacción se evaporó in vacuo. El residuo fue disgregado entre CH_{2}Cl_{2} (50 mL) y HCL 1N acuoso (50 mL), formándose un sólido blanco insoluble. Fue recogido mediante filtración por succión, lavado con H_{2}O, lavado con Et_{2}O, y secado para dar lugar a 1,28 g (64%) del compuesto del título T-3 (4-CO_{2}CH_{3}, R=CH_{3} R''=CH_{3}). MP: > 250ºC; ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 8,62(1), 7,96(2), 7,68(2), 7,42-7,60(6), 7,21(2), 6,81(1), 4,61(1), 3,84(3), 3,64(3), 2,89-3,10 (2); IR (mull): 3284, 3071, 1745, 1721, 1671, 1654, 1622, 1611, 1554, 1513, 1433, 1416, 1337, 1283 y 121 cm^{-1}; MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 555 (MH^{+}, 99), 558(21), 557(70), 556(35), 555(99), 349(22), 189(73), 175 19), 174(21), 173(27), 130(38); HRMS (FAB) calculado para C_{28}H_{24}Cl_{2}N_{2}O_{6}+HI, 555,1089, hallados 555,1093.
Ejemplo 123
Esquema T, T-3, en el que 4-sustituidos, R=H, R''=H
N-[(E)-3-(carboxifenil)-1-oxo-2-propenil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina metil éster T-3 (C_{26}H_{20}Cl_{2}N_{2}O_{6})
152
A una suspensión en remoción del diéster T-3 (3-sustituidos, R=H R''=H) (0,83 g, 1,50 mmol) en MeOH/DMSO (1:1, 20 mL) se le añadió una solución de LiOH+H_{2}O (0,12 g, 3,00 mmol) en H_{2}O (5 mL). Tras remover durante 16 h a TA, la mezcla de reacción se evaporó in vacuo. El residuo fue disuelto en H_{2}O (25 mL) y se añadió HCL 6M acuoso hasta que el pH de la mezcla fue de aprox. 1. El sólido gelatinoso resultante fue recogido mediante filtración por succión y secado en un horno de vacío a 70ºC durante 16 h para dar lugar a 0,33 g (42%) de T-3 (3-sustituidos, R=H R''=H) en forma de sólido amarillo ligero. MP: 165ºC; ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 10,37(1), 8,37(1), 8,12(1), 7,90(1)-7,75(1), 7,40-7,58(6), 7,21(2), 6,84(1), 4,54(1), 2,80-3,15(3); IR (mull): 3280, 3062, 1709, 1661, 1606, 1584, 1562, 1539, 1516, 1432, 1414, 1326, 1267, 1196 y 799 cm^{-1}; MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 527 (MH^{+}, 51), 530(11), 529(32), 528(17), 527(51), 225(12), 175(25), 174(99), 173(9), 123(12); HRMS (FAB) calculado para C_{26}H_{20}Cl_{2}N_{2}O_{6}+HI, 527,0776, hallados 527,0770.
Preparación T-2-1
Esquema T, T-2, en el que hay 3-CO_{2}H
Ácido (E)-3-[3-(1,1-dimetiletoxi)-3-oxo-1-propenil]-benzoico T-2 (C_{14}H_{16}O_{4})
153
A una suspensión en remoción del diéster conocido ácido 3-(3-(1,1-dimetiletoxi)-3-oxo-1-propenil]-benzoico metil éster (Mjalli, A.M.M.; Cao, X.; Moran, E.J., PCT Int. Appl., 89pp. CODEN: PIXXD2. WO 9708934 A2 970313. CAN 126:277769) (1,00 g 3,81 mmol) en CH_{3}OH (10 mL) se le añadió una solución de LiOH+H_{2}O (0,32 g, 7,62 mmol) en H_{2}O (5 mL). Tras remover durante 16 h a TA, la mezcla de reacción se evaporó in vacuo. El residuo fue disuelto en H_{2}O (25 mL) y se añadió HCL 6N acuoso hasta que el pH de la mezcla fue de aprox. 4-5. El precipitado blanco resultante fue extraído con EtOAc/THF (1:1, 2x25 mL). Los extractos combinados se lavaron con NaCl acuoso saturado (50 mL), secados (con Na_{2}SO_{4}) filtrados y evaporados in vacuo. El sólido blanco resultante fue disuelto en MeOH y cromatografiado (flash) sobre gel de sílice (300 g, retícula de 230-400, columna OD de 70 mm, aglomerado y eluido MeOH/CH_{2}Cl_{2} (1:9), recogiendo fracciones de 200 mL). Se combinaron fracciones de 4-18 y se evaporaron in vacuo al objeto de conseguir 0,42 g (44%) de T-2 (3-CO_{2}H) en forma de sólido blanco. MP: 132-136ºC; ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 8,14(1), 7,86-7,96(2), 7,59(1), 7,48 (1)-6,54(1), 1,46(9); IR (mull): 1703, 1693, 1641, 1605, 1585, 1415, 1326, 1291, 1270, 1260, 1212, 1157, 975, 755 y 664 cm^{-1}; MS (EI) m/z (intensidad relativa): 248 (MH^{+}, 8), 193(44), 192(83), 191(19), 175(80), 174(43), 157(19), 130(22), 57(99), 56(78), 55(24); HRMS (EI) calculado para C_{14}H_{16}O_{4}, 248,1048, hallados 248,1055.
\newpage
Preparación T-2-2
Esquema T, T-2, en el que hay 4-CO_{2}H
Ácido (E)-4-[3-(1,1-dimetiletoxi)-3-oxo-1-propenil]-benzoico T-2 (C_{14}H_{16}O_{4}) 
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154 
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A una suspensión en remoción del diéster conocido ácido 4-(3-(1,1-dimetiletoxi)-3-oxo-1-propenil]-benzoico metil éster (Mjalli, A.M.M.; Cao, X.; Moran, E.J., PCT Int. Appl., 89pp. CODEN: PIXXD2. WO 9708934 A2 970313. CAN 126:277769) (1,00 g 3,81 mmol) en MeOH (20 mL) se le añadió una solución de LiOH+H_{2}O (0,40 g, 9,50 mmol) en H_{2}O (5 mL). Tras remover durante 16 h a TA, la mezcla de reacción se evaporó in vacuo y se añadió HCL 6N acuoso hasta que el pH de la mezcla fue de aprox. 1. La mezcla resultante se extrajo con Et_{2}O (2x25 mL). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con NaCl acuoso saturado, secados (con Na_{2}SO_{4}) filtrados y evaporados in vacuo para dar lugar a 0,41 g (43%) del compuesto del título T-2 (4-CO_{2}H) en forma de sólido blanco. MP: sublimes; ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 7,92(2), 7,78(2), 7,58(1), 6,60(1), 1,47(9); IR (mull): 1705, 1679, 1608, 1426, 1412, 1322, 1296, 1256, 1180, 1156, 1129, 1113, 975, 966 y 781 cm^{-1}; MS (EI) m/z (intensidad relativa): 248 (MH^{+}, 11), 248(11), 193(49), 192(99), 191(39), 175(62), 147(52), 103(18), 77(15), 57(73), 56(19); Análisis calculado para C_{14}H_{16}O_{4}: C, 67,73; H, 6,50 hallados C, 67,49; H, 6,76; N, 0,22.
Preparación T-4-1
Esquema T, T-4, en el que 3-sustituidos, R=tBu, R'=CH_{3}
N-[[3-[(E)-3-(1-1-dimetiletoxi)-3-oxo-1-propenil] fenil]carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina metil éster T-4 (C_{31}H_{30}Cl_{2}N_{2}O_{6}) 
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155 
\vskip1.000000\baselineskip
A una suspensión en remoción del ácido T-2 (3-CO_{2}H) (0,36 g, 1,45 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (25 mL) se le añadió 4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina metil éster, hidrocloruro (0,59 g, 1,45 mmol), EDC (0,28 g, 1,45 mmol), DMAP (0,05 g, 0,44 mmol) y HOBT (0,20 g, 1,45 mmol). A esta mezcla se le añadió Et_{3}N a gotas hasta que la totalidad de los sólidos entraron en solución. Tras remover durante 16 h a TA, la mezcla de disgregó entre CH_{2}Cl_{2} (50 mL) y HCL 1N acuoso (50 mL). La fase orgánica fue lavada con NaHCO_{3} acuoso saturado (50 mL), NaCl acuoso saturado (50 mL), secada (Na_{2}SO_{4}), filtrada y evaporada in vacuo. El sólido blanco resultante fue cromatogafiado (flash) sobre gel de sílice (400 g, retícula de 230-400, columna OD de 70 mm, aglomerado y eluido con EtOAc/CH_{2}Cl_{2} (1:9), recogiendo fracciones de 260 mL), utilizando la técnica de inflamación (flash). Se combinaron fracciones de 275 mL). Las fracciones 18-27 fueron combinadas y se evaporaron in vacuo al objeto de conseguir 0,72 g (83%) de T-4 (3-sustituidos, R=tBu, R'=CH_{3}) en forma de sólido blanco. MP: 189-193ºC; IR (mull) 3347, 1746, 1740, 1708, 1660, 1641, 1608, 1549, 1531, 1512, 1431, 1330, 1280, 1219 y 784 cm^{-1}; ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 10,66(1), 8,90(1), 8,15(1), 7,83(2), 7,43-7,60(6), 7,26(2), 6,61(1), 4,69(1), 3,64(3), 3,01-3,20(2), 1,47(9); MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 597 (MH^{+}, 19), 597(19), 543(21), 541(31), 525(21), 523(31), 351(22), 349(32), 175(99), 173(47), 57(38); HRMS (FAB) calculado para C_{31}H_{30}Cl_{2}N_{2}O_{6}+HI, 597,1559, hallados 597,1541.
\newpage
Preparación T-4-2
Esquema T, T-4, en el que 3-sustituidos, R=H, R'=CH_{3}
N-[[3-[(E)-3-hidroxi-3-oxo-1-propenil]fenil]carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina metil éster T-4 (C_{27}H_{22}Cl_{2}N_{2}O_{6})
156
Una solución del diéster T-4 (3 sustituidos, R=tBu, R'=CH_{3}) (0,50 g, 0,84 mmol) en TFA (10 mL) que se remueve a TA durante 16 h. La evaporación in vacuo dio lugar a un sólido viscoso que, tras ser triturado con Et_{2}N dio lugar a 0,42 g (92%) del compuesto del título T-4 (3-sustituidos, R=H, R'=CH_{3}) en forma de sólido blanco fino que fue recogido mediante filtración por succión, y secado después. MP: 170-171ºC; ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 10,70(1), 8,93(1), 8,13(1), 7,83(2), 7,43-7,64(6), 7,27(2), 6,61(1); 4,67(1), 3,64(3), 3.01-3,20(2); IR (mull) 1748, 1695, 1665, 1644, 1610, 1579, 1562, 1550, 1540, 1514, 1432, 1415, 1331, 1279 y 1217 cm^{-1}; MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 541 (MH^{+}, 93), 544(20), 543(65), 542(35), 541(93), 525(20), 523(31), 351(21), 349(41), 175(99), 173(32); HRMS (FAB) calculado para C_{27}H_{22}Cl_{2}N_{2}O_{6}+HI, 541,0933, hallados 541,0938.
Ejemplo 124
Esquema T, T-4, en el que 3-sustituidos, R=H, R'=H
N-[[34(E)-3-hidroxi-3-oxo-1-propenil]fenil]carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina T-4 (C_{26}H_{20}Cl_{2}N_{2}O_{6})
157
A una solución en remoción del diéster T-4 (3 sustituidos, R=H, R'=CH_{3}) (0,38 g, 0,72 mmol) en MeOH (10 mL) se le añadió una solución de LiOH H_{2}O (0,06 g, 1,44 mmol) en H_{2}O (3 mL). Tras removerla a TA durante 16 h la mezcla de reacción fue filtrada, añadiéndose HCl 6N acuoso hasta que el pH de la mezcla fue aprox. 1. El precipitado resultante fue recogido mediante filtración por succión, lavado y posteriormente secado en el horno de vacío a 70ºC durante 16 h para conseguir 0,25 g (66%) del compuesto del título T-4 (3-sustituidos, R=H, R'=H) en forma de sólido pulvurento blanco. MP: 156-161ºC; ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 12,70(2), 10,70(1), 8,81(1), 8,14(1), 7,82(2), 7,46-7,64(6), 7,29(2), 6,62(1); 4,63(1), 2,97-3,20(2); IR (mull) 3261, 3065, 3025, 1695, 1641, 1605, 1579, 1562, 1538, 1517, 1432, 1414, 1326, 1271 y 1196 cm^{-1}; MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 527 (MH^{+}, 99), 530(23), 529(70), 528(40), 527(99), 511(42), 509(59), 337(22), 335(32), 175(90), 173(51); HRMS (FAB) calculado para C_{26}H_{20}Cl_{2}N_{2}O_{6}+HI, 527,0776, hallados 527,0786.
\newpage
Preparación T-4-3
Esquema T, T-4, en el que 4-sustituidos, R=tBu, R'=CH_{3}
N-[[4-[(E)-3-(1,1-dimetiletoxi)-3-oxo-1-propenil]fenil]carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina metil éster T-4 (C_{31}H_{30}Cl_{2}N_{2}O_{6})
158
A una solución en remoción del ácido T-2 (4-CO_{2}H) (0,52 g, 2,09 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (30 mL) se le añadió el 4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina metil éster, hidrocloruro (0,85 g, 2,09 mmol), EDC (0,40g, 2,09 mmol), DMAP (0,08 g, 0,63 mmol) y HOBT (0,28 g, 2,09 mmol). A esta mezcla se le añadió Et_{3}N a gotas hasta que la totalidad de los sólidos entraron en solución. Tras remover durante 16 h a TA, el precipitado resultante se recogió mediante filtración por succión, fue lavada con H_{2}O, lavada con CH_{2}Cl_{2} , y secada para obtener 0,86 g (69%) del compuesto del título T-4 (4-sustituidos, R=tBu, R'=CH_{3}) en forma de sólido blanco. MP: 1> 225ºC; ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 10,66(1), 8,92(1), 7,76-7,84(4), 7,43-7,59(6), 7,27(2), 6,60(1), 4,62(1), 3,64(3), 3,01-3,18(2), 1,47(9); IR (mull) 1742, 1733, 1708, 1660, 1640, 1610, 1547, 1513, 1431, 1415, 1332, 1320, 1305, 1166 y 1155 cm^{-1}; MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 597 (MH^{+}, 1), 598(12), 543(14), 541(19), 351(9), 349(13), 349(13), 176(11), 175 99), 173(31), 131(9), 57(31); HRMS (FAB) calculado para C_{31}H_{30}Cl_{2}N_{2}O_{6}+HI, 597,1559, hallados 597,1547.
Preparación T-4-4
Esquema T, T-4, en el que 4-sustituidos, R=H, R'=CH_{3}
N-[[4-[(E)-3-hidroxi-3-oxo-1-propenil]fenil]carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina metil éster T-4 (C_{27}H_{22}Cl_{2}N_{2}O_{6})
159
Una solución del diéster T-4 (4 sustituidos, R=tBu, R'=CH_{3}) (0,84 g, 1,40 mmol) en TFA (10 mL) fue removida a TA durante 16 h. La evaporación in vacuo dio lugar a 0,76 g (100%) del compuesto del título T-4 (4-sustituidos, R=H, R'=CH_{3}) en forma de sólido de color crema. MP: 80ºC (dec.); ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 10,70(1), 8,92(1), 7,75-7,82(4), 7,43-7,62(6), 7,26 (2); 6,61(1), 4,63(1), 3.64(3), 2,99-3,20(2); IR (mull) 1731, 1693, 1639, 1608, 1562, 1540, 1516, 1504, 1433, 1415, 1326, 1277, 1215, 1195 y 1172 cm^{-1}; MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 541 (MH^{+}, 99), 545(14), 544(23), 543(72), 542 37), 541(99), 351(13), 349(27), 176(12), 175(99), 173(26); HRMS (FAB): calculado para C_{27}H_{22}Cl_{2}N_{2}O_{6}+HI, 541,0933, hallados 541,0927.
\newpage
Ejemplo 125
Esquema T, T-4, en el que 4-sustituidos, R=H, R'=H
N-[[4-[(E)-3-hidroxi-3-oxo-1-propenil] fenil]carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina T-4 (C_{26}H_{20}Cl_{2}N_{2}O_{6})
160
A una solución en remoción del éster T-4 (4 sustituidos, R=H, R'=CH_{3}) (0,76 g, 1,40 mmol) en MeOH (10 mL) se le añadió una solución de LiOH H_{2}O (0,17 g, 4,20 mmol) en H_{2}O (5 mL). Tras removerla a TA durante 16 h, la mezcla de reacción fue evaporada in vacuo. El residuo fue disuelto en H_{2}O (30 mL) y se añadido HCL 6N acuoso hasta que el pH de la mezcla fue aprox. 1. La mezcla resultante fue extraída con EtOAc/THF (1:1, 50 mL). El extracto fue secado (Na_{2}SO_{4}), filtrado y evaporado in vacuo para conseguir 0,43 g (58%) del compuesto del título T-4 (4-sustituidos, R=H, R'=H) en forma de sólido blanco. MP: 161-165ºC; ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 12,70(1), 10,60(1), 7,75-7,84(4), 7,39-7,62(6), 7,28(2), 6,61(1), 4,58(1), 2,95-3,20(2); IR (mull) 3057, 1715, 1693, 1658, 1639, 1608, 1562, 1533, 1505, 1445, 1431, 1415, 1328, 1278 y 1195 cm^{-1}; MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 527 (MH^{+}, 88), 530(19), 529(63), 528(33), 527(88), 220(21), 219(20), 175(99), 173(26), 163(18), 57(44); HRMS (FAB) calculado para C_{26}H_{20}Cl_{2}N_{2}O_{6}+HI, 527,0776, hallados 527,0765.
Esquema U
161
Preparación U-1-1
Esquema U, U-1, en el que R=CH_{2}CH_{3}, R'=tBu
Ácido 4-carboetoxi-1-ciclohexilidenoacético 1,1-dimetiletil éster (C_{15}H_{24}O_{4})
162
Hidruro de sodio (0,56 g de una dispersión de aceite mineral al 60%, 14,1 mmol) fue lavado con hexanos (3 x 10 mL), suspendido en THF (10 mL), y la suspensión fue enfriada a 0ºC. A esta suspensión se le añadió una solución de Pert-butil dietil fosfonoacetato (5,0 g, 19,8 mmol) en THF (5 mL) en forma de gotas. Se dejó que se removiera la solución resultante durante 1 h a 0ºC, y entonces se añadió una solución en gotas de etil-4-oxo-ciclohexano carboxilato (Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI, catálogo nº 32062-5) (2,0 g, 11,8 mmol) en THF (5 mL). Se puso a calentar lentamente la solución a TA y se removió durante 16 h. La mezcla de reacción se evaporó in vacuo. El residuo se disgregó entre EtOAc (100 mL) y H_{2}O (100 mL, y la fase orgánica fue lavada con salmuera (100 mL), secada (Na_{2}SO_{4}), filtrada y evaporada in vacuo; el aceite amarillo resultante fue cromatografiado sobre gel de sílice (350 g, retícula de 230-400, columna OD de 70 mm, aglomerado y eluido con EtOAc/hexanos 1:9, recogiendo fracciones de 230 mL), utilizando la técnica de inflamación (flash). Se combinaron fracciones de 8-155 y se evaporaron in vacuo al objeto de conseguir 2,04 g (64%) del éster vinílogo U-1 (R=CH_{2}CH_{3}, R'=TBu) en forma de aceite incoloro. ^{1}H-NMR (300 MHz, CDCL_{3}): \delta = 5,56(1), 4,12(2), 3,58(1), 2,52(1), 2,31(1), 1,98-2,22(4); 1,57-1,76 2); 1,46(9), 1,24(3); IR (limpio.) 2979, 2939, 1732, 1710, 1650, 1384, 1368, 1314, 1307, 1264, 1249, 1206, 1162, 1140 y 1041 cm^{-1}; MS (EI) m/z (intensidad relativa): 195(30), 194(99), 167(11), 139(13), 138(18), 121(55), 120(55), 93(24), 60(8), 57(37); Anál. calculado para C_{15}H_{24}O_{4} C, 67,14; H, 9.01. hallado: C, 67,23; H, 9,00.
Preparación U-1-2
Esquema U, U-1, en el que R=H, R'=tBu
Ácido 4-carboetoxi-1-ciclohexilidenoacético 1,1-dimetiletil éster (C_{13}H_{20}O_{4})
163
A una solución en remoción del diéster U1 (R=CH_{2}CH_{3}, R'=tBu) (1,00 g, 3,73 mmol) en MeOH (20 mL) se le agregó una solución de LiOH H_{2}O (0,78 g, 18,6 mmol) en H_{2}O (5 mL). La mezcla de reacción a TA durante 16 h y, a continuación, se evaporó in vacuo. El residuo se disgregó entre H_{2}O (100 mL y CHCl_{3} (100 mL), y la fase acuosa fue neutralizada con HCl 1N acuoso. La fase orgánica fue lavada con H_{2}O (100 mL), salmuera (100 mL), secada con (Na_{2}SO_{4}), filtrada y evaporada in vacuo para conseguir 0,60 g (67%) del ácido carboxílico U-1 (R=H, R'=tBu) en forma de aceite incoloro, viscoso, el cual se cristalizó de forma continua para conseguir un sólido incoloro. MP: 63-64ºC; ^{1}H-NMR (300 MHz, CDCL_{3}): \delta = 5,57(1), 3,58(1), 2,58(1), 2,33(1), 2,02-2,23(4); 1,61-1,78 2); 1,47(9); IR (mull) 3002, 1706, 1652, 1434, 1317, 1267, 1256, 1206, 1197, 1166, 1142, 1088, 1011, 874 y 639 cm^{-1}; MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 241 (MH^{+}, 46), 481(1), 395(7), 241(46), 186(9), 185(99), 167(62), 139(14), 57(67), 41(13), 29(13); HRMS (FAB) calculado para C_{13}H_{20}O_{4}+H, 241,1440, hallado: 241,1434; Anál. calculado para C_{13}H_{20}O_{4}: C, 64,98; H, 8,39. Hallado: C, 65,16; H, 8,35.
Preparación U-2-1
Esquema U, U-2, en el que R'=tBu, R''=CH_{3}
N-[[4-[[1,1-dimetiletoxi)carbonil]metileno]ciclohexil]carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil]amino]-L-fenilalanina metil éster (C_{30}H_{34}Cl_{2}N_{2}O_{6}) U-2
164
A una solución en remoción del ácido carboxílico U-1 (R=H, R'=tBu) (0,54 g, 2,25 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (30 mL) se le añadió el 4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina metil éster, hidrocloruro (0,91 g, 2,25 mmol), EDC (0,43 g, 2,25 mmol), DMAP (0,08 g, 0,67 mmol), HOBT (0,30 g, 2,25 mmol) y diisopropil etilamina (3 mL). Para finalizar se añadió DMF (2 mL) para facilitar la disolución. Se removió la solución durante 16 h a TA, y, a continuación se evaporó in vacuo. El residuo se disgregó entre HCl 1N acuoso (150 mL) y CH_{2}Cl_{2} (150 mL). La fase orgánica fue lavada con NaHCO_{3} (150 mL), salmuera (150 mL), secada (Na_{2}SO_{4}), filtrada y evaporada in vacuo. El sólido color amarillo pálido resultante fue cromatogafiado sobre gel de sílice (350 g, retícula de 230-400, columna OD de 70 mm, aglomerado y eluido con EtOAc/CH_{2}Cl_{2} (1:4), recogiendo fracciones de 230 mL), utilizando la técnica de inflamación (flash). Se combinaron fracciones de 7-12 y se evaporaron in vacuo al objeto de conseguir el producto deseado U-2 (R'=tBu, R''=CH_{3}) en forma de un sólido blanco, 0,87 g (66%). MP: 199-200ºC; ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 10,64(1), 8,19(1), 7,44-7,59(5), 7,17(2), 5,50(1), 4,43(1), 3,60(3), 3,65-3,58(1), 3,00(1), 2,86(1), 1,64-2,46(8), 1,39(9); IR (mull) 1749, 1703, 1667, 1649, 1609, 1561, 1548, 1513, 1432, 1415, 1332, 1250, 1197, 1167 y 1140 cm^{-1}; MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 589 (MH^{+}, 25), 533(31), 517(68), 516(99), 351(37), 349(55), 175(42), 173 64), 121(45), 57(50), HRMS (FAB) calculado para CR_{30}H_{34}Cl_{2}O_{6}+H, 589,1872; hallado: 589,1846.
Preparación U-2-2
Esquema U, U-2, en el que R'=H, R''=CH_{3}
N-[[4-(carboxi-metileno)ciclohexil]carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil]amino]-L-fenilalanina metil éster (C_{26}H_{26}Cl_{2}N_{2}O_{6}) U-2 
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165
Una solución del diéster U-2 (R=tBu, R''=CH_{3}) (0,82 g, 1,39 mmol) en TFA (10 mL) fue removida a TA durante 16 h. La mezcla de reacción fue evaporada in vacuo y el residuo fue disuelto en tolueno y evaporado in vacuo (2x10 mL). El residuo se trituró con Et_{2}O, y el sólido resultante fue recogido mediante filtración por succión y secado para conseguir 0,66 g (98%) del ácido carboxílico U-2 (R'=H, R''=CH_{3})en forma de sólido blanco pulvurento. MP: 140ºC (dec.); ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 11,93(1), 10,64(1), 8,19(1), 7,52-7,60(4), 7,44-7,51(1); 7,17(1), 5,54(1), 4,43(1), 3,52-3,63(4), 3,24-3,39(1), 2,99(1), 2,79-2,91(1), 1,64-2,45(6), 1,21-1,50(2); IR (mull) 3069, 1748, 1652, 1609, 1561, 1545, 1514, 1432, 1415, 1274, 1250, 1215, 1195, y 1184 cm^{-1}; MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 541 (MH^{+}, 62), 535 40), 533(62), 517(52), 515 74), 351(48), 349 69), 349(69), 175(63), 173(99); 121(55), 93(35); HRMS (FAB) calculado para C_{26}H_{26}Cl_{2}N_{2}O_{6}+HI, 533,1246, hallados 533,1237.
Ejemplo 126
Esquema U, U-2, en el que R'=H, R''=H
N-[[4-(carboxi-metileno)ciclohexil]carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil]amino]-L-fenilalanina (C_{25}H_{24}Cl_{2}N_{2}O_{6}) U-2 
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166
A una solución en remoción del metil éster U-2 (R=H, R''=CH_{3}) (0,60 g, 1,12 mmol) en CH_{3}OH (10 mL) se le agregó una solución de LiOH H_{2}O (0,24 g, 5,6 mmol) en H_{2}O (5 mL). La solución se removió a TA durante 16 h y, a continuación, se evaporó in vacuo. El residuo se disolvió en H_{2}O (20 mL) y se acidificó hasta un pH aprox. 1-2 con HCl_{6}N acuoso. El sólido blanco resultante fue recogido mediante filtración por succión, y se lavó con H_{2}O, y se secó en un horno de vacío a 70ºC durante 16 h. El sólido resultante se aplastó, lavó meticulosamente con H_{2}O y se secó en un horno de vacío a 100ºC durante 16 h para conseguir el objetivo diácido U-2 (R'=H, R''=H) en forma de sólido blanco cristalino, 0,45 g (78%) MP: 145-148ºC; ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 12,27(1), 10,63(1), 8,04(1), 7,52-7,58(4), 7,47(1), 7,18(2), 5,53(1), 4,37(1), 3,57(1), 3,30(1), 3,01(1), 2,77-2,88(1), 1,63-2,46(6), 1,21-1,51(2); IR (mull) 3270, 3124, 3070, 1655, 1607, 1562, 1539, 1517, 1432, 1414, 1327, 1269, 1250, 1195 y 799 cm^{-1}; MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 519 (MH^{+}, 83), 521(53), 519(83), 503(62), 501(89), 335(52), 175(65), 173(99), 139(76), 121(58), 91(47); HRMS (FAB) calculado para C_{25}H_{24}Cl_{2}N_{2}O_{6}+HI 519,1089, hallado: 519,1082.
\newpage
Preparación U-1-3
Esquema U, U-1, en el que R'=CH_{2}CH_{3}, R''=H
Ácido 4-carboetoxi-1-ciclohexilidenoacético (C_{11}H_{16}O_{4})
268
El diéster U-1 (R=CH_{2}CH_{3}, R'=TBu) (0,86 g, 3,20 mmol) fue disuelto en ácido trifluoroacético (5 mL), removiéndose la solución a TA durante 4 h. La evaporación in vacuo permitió la obtención de 0,68 g (100%) del ácido carboxílico U-1 (R=CH_{2}CH_{3}, R'=H) en forma de aceite viscoso que se utilizó sin posteriores purificaciones. ^{1}H-NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta = 10,96(1), 5,68(1), 4,14(2), 3,58(1), 2,57(1), 2,40(1), 2,16-2,30(2), 2,01-2,13(2), 1,61-1,81(2), 1,26(3); IR (limpio) 2985, 2944, 2872, 1790, 1730, 1692, 1645, 1449, 1421, 1305, 1271, 1252, 1213, 1175 y 1042 cm^{-1}; MS (EI) m/z (intensidad relativa): 194 (99),139 (31), 138 (40), 121 (62), 120(93), 94(24), 93(64), 91(22), 73(23), 55(21); MS (FAB) m/z (intensidad relativa) 213 (MH^{+}, 5), 213(5), 196(12), 195(99), 194(6), 139(9), 121(12), 93(11), 39(4), 29(8), 27(6); HRMS (FAB) calculado para C_{11}H_{16}O_{4}+HI 213,1127, hallado: 213,1127.
Preparación U-3-1
Esquema U, U-3, en el que R=CH_{2}CH_{3}, R''=CH_{3}
N-[4-(carboetoxi-1-ciclohexilidenoacétil]-4-[(2,6-diclorobenzoil]amino]-L-fenilalanina metil éster (C_{28}H_{30}Cl_{2}N_{2}O_{6}) U-3
167
A una solución en remoción del ácido carboxílico U-1 (R=CH_{2}CH_{3}, R'=H) (0,70 g, 3,20 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (30 mL) se le añadió el 4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina metil éster, hidrocloruro (1,29 g, 3,20 mmol), EDC (0,61 g, 3,20 mmol), DMAP (0,12 g, 0,96 mmol), HOBT (0,43 g, 3,20 mmol) y diisopropil etilamina (4 mL). Para finalizar se añadió DMF (2 mL) para facilitar la disolución. Se removió la solución durante 16 h a TA, y, a continuación se evaporó in vacuo. El residuo se disgregó entre HCl 1N acuoso (150 mL) y CH_{2}Cl_{2} (150 mL). La fase orgánica fue lavada con NaHCO_{3} (150 mL), salmuera (150 mL), secada (Na_{2}SO_{4}), filtrada y evaporada in vacuo para dar un sólido blanco. La trituración con Et_{2}O dio el producto deseado U-3 (R=CH_{2}CH_{3}, R''=CH_{3}) en forma de un sólido blanco pulvurento, 1,08 g (60%). MP: 240ºC; ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 10,65(1), 8,22(1), 7,52-7,60(4), 7,47(1), 7,18(2), 5,64(1), 4,52(1), 3,98-4,08(2), 3,61(3), 3,46(1), 2,94-3,04(1), 2,78-2,90(1), 2,47-2,58(1), 1,78-2,19(5), 1,30-1,55(2), 1,12-1,18(3); IR (mull) 3316, 1746, 1730, 1668, 1656, 1634, 1611, 1551, 1513, 1434, 1415, 1334, 1281 y 1210 cm^{-1}; MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 561 (MH^{+}, 69), 563(47), 562(28), 561(69), 195(99), 175(31), 173(47), 121(93), 105(25), 93(24), 91(33); HRMS (FAB) calculado para C_{28}H_{30}Cl_{2}N_{2}O_{6}+HI, 561,1559; hallado: 561,1556.
Ejemplo 127
Esquema U, U-3, en el que R=H, R''=H
N-[4-carboxi-1-ciclohexilidenoacetil]-4-[(2,6-diclorobenzoil]amino]-L-fenilalanina (C_{25}H_{24}Cl_{2}N_{2}O_{6}) U-3
168
A una suspensión en remoción del diéster U-3 (R=CH_{2}CH_{3}, R''=CH_{3}) (1,00 g, 3,78 mmol) en MeOH (15 mL) se le agregó una solución de LiOH H_{2}O (0,37 g, 8,9 mmol) en H_{2}O (5 mL). Se añadieron H_{2}O (10mL) y THF (5 mL) en un intento de conseguir una solución homogénea. Se removió la mezcla grisácea a TA durante 16 h y, a continuación, se evaporó in vacuo. El residuo se disolvió en H_{2}O, y se añadió HCl 6N acuso en gotas hasta que se alcanzó un pH de aprox. 1. El precipitado resultante fue recogido mediante filtración por succión, se lavó con H_{2}O y se secó en un horno de vacío a 80ºC durante 16 h hasta obtener el diácido U-3 (R=H, R''=H) en forma de sólido blanco, 0,75 g (81%). MP: 148-155ºC; ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 12,27(1), 10,64(1), 8,06(1), 7,52-7,59(4), 7,47 (1); 7,19(2), 5,64(1), 4,40(1), 3,41-3,54(1), 3,30(1), 2,96-3,06(1); 2,75-2,87(1), 2,35-2,45(1), 1,78-2,19(5), 1,30-1,54(2); IR (mull) 3274, 3064, 1717, 1662, 1607, 1562, 1538, 1516, 1432, 1414, 1327, 1270, 1254, 1211 y 1195 cm^{-1}; MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 519 (MH^{+}, 99), 522(20), 521(67), 520(38), 519(99), 518(16), 335(23), 175(21), 173(30), 167(73), 121(36); HRMS (FAB) calculado para C_{25}H_{24}Cl_{2}N_{2}O_{6}+HI, 519,1089, hallado: 519,1104.
Esquema V
169
Preparación de
Ácido 2-carboetoxi-4,4-dimetilglutárico dietil éster (C_{14}H_{24}O_{6})
170
Un frasco de 3 cuellos secado por llama fue cargado con etanol absoluto (90 mL), y se añadió sodio (2,53 g, 110 mmol) en proporción. Una vez que se hubo disuelto completamente el sodio, se añadieron dietil oxalato (16,3 mL) y el diéster inicial (21,6 g, 100 mmol) (Iesi, A.; Zeuli, E. J. Electroanal. Chem Interfacial Electrochem. 1983, 149, 167). La suspensión resultante se removió a TA durante 16 h, y, a continuación se extrajo el etanol mediante destilación con una presión reducida. El residuo se disolvió en H_{2}O (500 mL), añadiéndose HCl _{6}N acuoso hasta que el pH de la mezcla alcanzó prácticamente 1-2. Se extrajo la mezcla con EtOAc (2 x 500 mL), y se lavaron los extractos combinados con NaHCO_{3} acuoso (500 mL), salmuera (500 mL), se secaron (Na_{2}SO_{4}), filtraron y evaporaron in vacuo. Este producto en bruto fue purificado mediante destilación con una presión reducida para conseguir el triéster en forma de aceite claro, incoloro, 18,1 g (63%), BP 100-110ºC (0,1 atm), ^{1}H-NMR (300 MHz, CDCL_{3}); \delta = 4,02-4,22(6), 2,21-2,27(2), 1,82-1,93(1), 1,19-1,30(9), 1,17(6); IR (limpio) 2983, 1753, 1733, 1477, 1448, 1390, 1369, 1302, 1251, 1232, 1178, 1148 (s), 1114, 1097 y 1030 cm^{-1}; MS (EI): m/z (intensidad relativa): 288 (M^{+}, 3), 243(49), 215(77), 197(21), 173(83), 169(20), 160(25), 142(19), 141(99), 123(49), 95(25).
Preparación de
Ácido 4,4-bis-carboetoxi-2,2-dimetil-heptano-dedioico dietil éster (C_{19}H_{32}O_{8}) 
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171
Al sodio (0,13 g, 5,80 mmol) recubierto con Et_{2}O (25 mL) se le añadió una solución de EtOH (2,4 mL) en Et_{2}O (45 mL) en gotas. Una vez consumido el sodio, el triéster V (8,39 g, 29,1 mmol) fue añadido seguido del etil acrilato (3,5 mL, 32,0 mmol). Se produjo un reflujo en la solución durante 10 h, dejando entonces que se enfriara a TA. La mezcla de la reacción se disgregó entre HOAC acuoso al 2% (500 mL) y Et_{2}O (500 mL). La fase orgánica fue lavada con H_{2}O (500 mL), salmuera (500 mL), secada (Na_{2}SO_{4}), filtrada y evaporada in vacuo. El aceite claro, incoloro resultante fue destilado a una presión reducida (0,1 atm) para obtener 8,61 g (76%) del tetraéster pretendido V+1 en forma de aceite claro, incoloro. BP 147ºC; ^{1}H-NMR (300 MHz, CDCL_{3}); \delta = 4,00-4,24(8), 2,35(2), 2,06-2,31(4), 1,17-1,30(12), 1,16(6); IR (limpio) 2982, 2929, 1735, 1479, 1448, 1391, 1368, 1298, 1266, 1250, 1180, 1143, 1113, 1097 y 1025 cm^{-1}; Anál. calculado para C_{19}H_{32}O_{8} C, 58,75; H, 8,30, hallado: C, 58,87; H, 8,15.
Preparación de
Ácido 4-carboetoxi-2,2-dimetil-heptano-dedioico dietil éster (C_{16}H_{28}O_{6}) 
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172
A una solución del tetraéster V+1 (8,55 g, 22,0 mmol) en DMSO (75 mL) se le añadió NaCl (2,62 g, 44,0 mmol) y H_{2}O (4 mL). Se recirculó la mezcla durante 16 h y después se dejó enfriar a TA. Tras su evaporación in vacuo, se disgregó la mezcla de reacción entre H_{2}O (mL) y EtOAc (500 mL). La fases orgánicas combinadas fueron lavadas con H_{2}O (500 mL), salmuera (50 mL) secadas (con Na_{2}SO_{4}), filtradas y evaporadas in vacuo al objeto de conseguir 5,0 g (72%) del triéster V+2 deseado en forma de aceite amarillo pálido, que fue utilizado sin purificación posterior. ^{1}H-NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta = 4,00-4,21(6), 1,62-2,42(7), 1,08-1,31(15); IR (limpio) 2981, 2938, 1734, 1477, 1465, 1449, 1388, 1379, 1304, 1256, 1179, 1159, 1137, 1097 y 1028 cm^{-1}; MS (FAB) m/z (intensidad relativa) 317 (MH^{+}, 59), 318(10), 317(59), 272(15), 27(99), 243(19), 197(13), 169(56), 151(16), 95(21), 29(11); HRMS (FAB) calculado para C_{16}H_{28}O_{6}+HI, 317,1964; hallado: 317,1969.
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Preparación de
Esquema V, V-1, en el que A=CO_{2}CH_{2}CH_{3}, R=CH_{2}CH_{3}
2,4-bis-carboetoxi-6,6-dimetil-ciclohexanona (C_{14}H_{22}O_{5}) V-1
173
El hidruro de sodio (0,70 m de una dispersión aceitosa al 60%, 17,5 mmol) fue lavado con hexanos (3 x 10 mL) y suspendido en THF (25 mL). A esta suspensión en remoción se le agregaron unas gotas de una solución del triéster V+2 (4,95 g + 15,6 mmol) en THF (25 mL). Se puso a recircular la mezcla durante 4 h, dejando secar a TA, y evaporándola in vacuo. La espuma de color naranja resultante fue disgregada entre EtOAc (250 mL) y H_{2}O (250 mL), y se neutralizó la fase acuosa con HCl 1N acuoso. Las fases fueron separadas y la fase orgánica fue lavada con NaHCO_{3} acuoso saturado (250 mL), salmuera (250 mL), secado (con Na_{2}SO_{4}), filtrada y evaporada in vacuo. El aceite amarillo resultante fue purificado a través de una destilación Kugelrohr para conseguir el diéster de ciclohexanona deseado V-1 (A=CO_{2}CH_{2}CH_{3}, R=CH_{2}CH_{3}) en forma de aceite claro e incoloro, 2,73 g (65%). ^{1}H-NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta = 4,05-4,24(5), 2,62(1), 2,39(1), 1,84(1), 1,66(1), 1,05-1,35(6), 1,17(6); IR (limpio) 2982, 2937, 1734, 1652, 1612, 1399, 1375, 1363, 1304, 1285, 1271, 1255, 1198, 1147 y 1033 cm^{-1}; MS (EI) m/z (intensidad relativa) 168(27), 150(28), 142(74), 141(34), 139(47), 115(31), 114(39), 97(99), 73(28), 69(90); HRMS (EI) calculado para C_{14}H_{22}O_{5}, 270,1467; hallado: 270,1488.
Preparación V-1-2
Esquema V, V-1, en el que A=H, R=H
4-carboxi-2,2-dimetil-ciclohexanona (C_{9}H_{14}O_{3}) V-1
174
Una mezcla del diéster V-1 (A=CO_{2}CH_{2}CH_{3}, R=CH_{2}CH_{3}) (1,09 g, 7,03 mmol) en HCl 6N acuoso (25 mL) se tuvo recirculando durante 12 h. Tras enfriar a TA, se agregó NaHCO_{3} a la mezcla de reacción hasta que el pH alcanzó aprox. 10. La mezcla fue extraída con Et_{2}O (50 mL), y se descartó el extracto. Se agregó HCl 1N acuoso a la fase acuosa hasta que el pH llegó al valor aprox. 4, y fue extraída con Et_{2}O (50 mL). El extracto fue lavado con salmuera (50 mL), secado (con MgSO_{4}), filtrado y evaporado in vacuo para obtener el ácido carboxílico deseado V-1 (A=H, R=H) en forma de aceite amarillo pálido, el cual se solidificó al dejarlo, 0,85 g (71%). ^{1}H-NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta = 2,94(1), 2,60(1), 2,38(1), 2,34(1), 2,03(1), 1,76-1,93(2), 1,22(3), 1,09(3); HRMS (EI) calculado para C_{9}H_{14}O_{3}, 170,0943; hallado 170,0948.
Preparación V-1-3
Esquema V, V-1, en el que A=H, R=CH_{3}
4-carboxi-metoxi-2,2-dimetil-ciclohexanona (C_{10}H_{16}O_{3}) V-1
175
A una solución en remoción del ácido carboxílico V-1 (A=H, R=H) (1,20 g, 7,05 mmol) en CH_{3}OH (40 mL) se le añadió H_{2}SO_{4} concentrado (2 mL), y se dejó recircular la mezcla durante 16 h, removiéndola después a TA durante 24 h. La mezcla de reacción fue evaporada in vacuo, y el residuo se disgregó entre EtOAc (50 mL) y NaHCO_{3} acuoso saturado (150 mL). La fase orgánica fue lavada con salmuera (150 mL), secada (Na_{2}SO_{4}), filtrada y evaporada in vacuo. El aceite amarillo resultante fue cromatografiado sobre gel de sílice (150 g, retícula de 230-400, columna OD de 35 mm, aglomerado y eluido con EtOAc/hexanos 15:85, recogiendo fracciones de 200 mL), utilizando la técnica de inflamación (flash). Se combinaron fracciones de 9-11 y se evaporaron in vacuo al objeto de conseguir el metil éster deseado V-1 (A=H, R=CH_{3}) en forma de aceite amarillo pálido, 0,65 g (50%), ^{1}H-NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta = 3,68(3), 2,83-2,96(1), 2,49-2,63(1), 2,17-2,38(2), 1,94-2,04(1), 1,71-1,92(2), 1,17(3), 1,05(3); IR (limpio) 2966, 2956, 1737, 1712, 1463, 1436, 1388, 1317, 1297, 1275, 1250, 1236, 1197, 1166 y 1125 cm^{-1}; HRMS (EI) calculado para C_{10}H_{16}O_{3} 184,1099, hallado 184,1101; Anál. calculado para C_{10}H_{16}O_{3}: C, 65,19; H, 8,75. hallado: C, 64,88; H, 8,76.
Preparación V-2-1
Esquema V, V-2, en el que R=CH_{3}, R'=tBu
Ácido (E) 4-carbometoxi-2,2-dimetil-ciclohexilidenoacético 1,1-dimetil-etil éster (C_{16}H_{26}O_{4}) 
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176 
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Fue lavado hidruro de sodio (0,25 g) de una dispersión de aceite mineral al 60% (6,19 mmol) con hexanos (3x10 mL), suspendido en THF (8 mL), y enfriado a 0ºC. A esta suspensión se le agregó una solución de tert-butil dietilfosfonoacetato (2,21 g, 8,77 mmol) en THF (3 mL) en gotas. Tras remover a 0ºC durante 1 h, se añadió una solución de la cetona V-1 (A=H, R=CH_{3}) (0,95 g, 5,16 mmol) en THF (3 mL) en gotas. La mezcla se dejó calentar lentamente a TA y se removió durante 16 h. La mezcla de reacción fue evaporada in vacuo, el residuo se disgregó entre H_{2}O (50 mL) y EtOAc (50 mL). Las fases orgánicas combinadas fueron lavadas con H_{2}O (100 mL), salmuera (100 mL), secadas (Na_{2}SO_{4}), filtradas, y evaporadas sobre gel de sílice (300 g, retícula de 230-400, columna OD de 35 mm, aglomerado y eluido con EtOAc/hexanos 1:9, recogiendo fracciones de 200 mL), utilizando la técnica de inflamación (flash). Se combinaron fracciones de 5-7 y se evaporaron in vacuo al objeto de conseguir el diéster deseado V-2 (R=CH_{3}, R'=tBu) en forma de aceite claro e incoloro, 1,26 g (86%). ^{1}H-NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta = 5,61(1), 3,76-3,89(1), 3,65(3), 2,66-2,80(1), 2,01-2,15(2), 1,72-1,82(1), 1,49-1,59(1), 1,47(9), 1,12(6); IR (limpio) 2976, 2952, 1738, 1711, 1637, 1390, 1368, 1301, 1265, 1213, 1197, 1183, 1150 y 1120 cm^{-1}; MS (EI): m/z (intensidad relativa) 209(33), 108(99), 166(15), 149(34), 148(20), 121(25), 107(23), 79(14), 57(50), 55(11); HRMS (FAB): calculado para C_{16}H_{26}O_{4}+H 283,1909, hallado 283,1316.
Preparación V-2-2
Esquema V, V-2, en el que R=CH_{3}, R'=tBu
Ácido (E) 4-carbometoxi-2,2-dimetil-ciclohexilidenoacético (C_{12}H_{18}O_{4}) 
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177 
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El diéster V-2 (R=CH_{3}, R'=tBu) (0,50 g, 1,77 mmol) fue disuelto en ácido trifluoroacético (5 mL), y la solución fue removida a TA durante 12 h. La evaporación in vacuo dio un aceite amarillo pálido viscoso que cristalizó al dejarlo, para dar lugar al ácido carboxílico V-2 (R=CH_{3}, R'=H) en forma de sólido blanco ceroso, 0,40 g (100%). MP 126-128% ^{1}H-NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta = 8,32(1), 5,76(1), 3,79-3,89(1), 3,68(3), 2,71-2,85(1), 2,05-2,24(2), 1,78-1,88(1), 1,47-1,63(2), 1,16(6); IR (mull): 3013, 2766, 1735, 1687, 1630, 1436, 1416, 1327, 1299, 1275, 1233, 1193, 1183, 1172 y 879 cm^{-1}; MS (EI): m/z (intensidad relativa) 315(99), 165(27), 105(30), 104(48), 85(21), 83(20), 71(24), 69(26), 57(44), 55(35); HRMS (FAB): calculado para C_{12}H_{18}O_{4} 226,1205, hallado 226,1193.
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Preparación V-3-1
Esquema V, V-3, en el que R=CH_{3}, R''=CH_{3}
N-[(1E)-4-carbometoxi-2,2-dimetil-1-ciclohexilidenoacétil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina metil éster (CH_{29}H_{32}Cl_{2}N_{2}O_{6}) V-3 
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178 
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A una solución en remoción del ácido carboxílico V-2 (R=CH_{3}, R'=H) (0,42 g, 1,86 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (30 mL) se le añadió 4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina metil éster, hidrocloruro (0,75 g, 1,86 mmol); EDC (0,36 g, 1,86 mmol), DMAP (0,07 g, 0,56 mmol), HOBT (0,25 g, 1,86 mmol). A esta suspensión se añadió trietilamina en gotas hasta que se consiguió una solución, dejándola en remoción a TA durante 16 h. La solución fue lavada con HCl 1N acuoso (50 mL), y la fase acuosa fue extraída con CH_{2}Cl_{2} (50 mL). Los extractos combinados fueron lavados con NaHCO_{3} acuoso saturado (50 mL), salmuera (50 mL), secados (Na_{2}SO_{4}), y todos ellos filtrados y evaporados in vacuo. El sólido de color crema resultante fue cromatografiado sobre gel de sílice (200 g, retícula de 230-400, columna OD de 35 mm, aglomerado y eluido con MeOH/CH_{2}Cl_{2} (2,5:97,5), recogiendo fracciones de 42 mL), utilizando la técnica de inflamación (flash). Se combinaron fracciones de 58-82 y se evaporaron in vacuo al objeto de conseguir el producto deseado V-3 (R=CH_{3}, R''=CH_{3}) en forma de sólido blanco, 0,44 g (41%), MP 160-163ºC; ^{1}H-NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta = 7,57(2), 7,28-7,39(3), 7,13(2), 5,90(1), 5,59(1), 4,87-4,96(1), 3,75(3), 3,61-3,71(4), 3,05-3,23(2), 2,65-2,78(1), 1,98-2,17(2), 1,72-1,82(1), 1,40-1,58(2), 1,09-1,14(6); IR (mull): 1741, 1667, 1650, 1627, 1608, 1546, 1513, 1433, 1414, 1327, 1278, 1267, 1207, 1198, y 1167 cm^{-1}; MS (FAB): m/z (intensidad relativa) 575 (MH^{+}, 86), 577(59), 576(35), 575(86), 351(20), 349 30), 209(99), 175(23), 173(39), 149(26), 107(49); HRMS (FAB): calculado para C_{29}H_{32}Cl_{2}N_{2}O_{6}+H, 575,1715, hallado 575,1706.
Ejemplo 128
Esquema V, V-3, en el que R=H, R''=H
N-[(1E)-4-carboxi-2,2-dimetil-1-ciclohexilidenoacetil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina (C_{27}H_{28}Cl_{2}N_{2}O_{6}) V-3 
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179 
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A una solución en remoción del diéster V-3 (R=CH_{3}, R''=CH_{3}) (0,31 g, 0,54 mmol) en MeOH (10 mL) se le añadió una solución de LiOH H_{2}O (0,05 g, 1,08 mmol) en H_{2}O (3 mL). La mezcla de reacción fue removida a TA durante 16 h y fue evaporada in vacuo. Se disolvió el residuo en H_{2}O (20 mL), y se añadió HCl 6N acuoso en gotas hasta que el pH de la mezcla fue aprox. 4. El precipitado resultante fue lavado con H_{2}O y secado en un horno de vacío a 70ºC durante 12 h para conseguir 0,23 g (78%) del diácido V-3 (R=H, R''=H) en forma de sólido cristalino blanco. MP: 155-162ºC; ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 11,84-12,75(1), 8,16(1), 7,52-7,60(4), 7,43-7,51(1), 7,20(2), 5,71(1), 4,34-4,45(1), 3,67-3,77(1), 2,95-3,05(1), 2,76-2,88(1), 2,51-2,65(1), 1,81-2,01(2), 1,64-1,74(1), 1,01-1,37(8); IR (mull) 3286, 3193, 3062, 1717, 1658, 1607, 1562, 1539, 1516, 1432, 1414, 1327, 1271, 1222 y 1196 cm^{-1}; MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 547 (MH^{+}, 92), 561(27), 549(61), 548(37), 547(92), 335(34), 195(99), 175(37), 173(59), 149(36), 107(35); HRMS (FAB) calculado para C_{27}H_{28}Cl_{2}N_{2}O_{6})+HI, 547,1392, % agua (KF): 3,12.
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Preparación V-2-3
Esquema V, V-2, en el que R=H, R'=tBu
Ácido (E)-4-carboxi-2,2-dimetil-ciclohexilidenoacético-1,1-dimetil-etil éster (C_{15}H_{24}O_{4}) V-3
180
A una solución en remoción del diéster V-2 (R=CH_{3}, R'=tBu) (0,65 g, 2,30 mmol) en MeOH (8 mL) se le añadió una solución de LiOH H_{2}O (0,19 g, 4,60 mmol) en H_{2}O (4 mL). La solución fue removida a TA durante 16 h y fue evaporada in vacuo. Se disolvió el residuo en H_{2}O (25 mL), y se añadió HCl 6N acuoso hasta que el pH de la mezcla fue aprox. 4. La mezcla se extrajo con CHCl_{3} (2x25 mL) y los extractos combinados fueron lavados con salmuera (50 mL), secados (MgSO_{4}), filtrados y evaporados in vacuo hasta obtener 0,61 g (99%) del ácido carboxílico V-3 (R=H, R'=tBu) en forma de aceite claro e incoloro. ^{1}H-NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta = 5,62(1), 3,78-3,91(1), 2,68-2,84(1), 2,02-2,18(2), 1,76-1,86(1), 1,51-1,62(1), 1,47(9), 1,13(3); IR (limpio): 3006, 2977, 2937, 2874, 1709, 1637, 1379, 1368, 1303, 1265, 1215, 1151, 1124, 1117 y 758 cm^{-1}; MS (EI): m/z (intensidad relativa)195 (32), 194 (99), 166(17), 149(18), 138(14), 121(21), 107(20), 79(12), 57(60), 55(13); HRMS (FAB): calculado para C_{15}H_{24}O_{4}+HI, 269,1753, hallado 269,1755.
Preparación V-4-1
Esquema V, V-4, en el que R'=tBu, R''=CH_{3}
N-[[(4E)-3,3-dimetil-4-[[1,1-dimetiletoxi]carbonil]metileno]ciclohexil]carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina metil éster (C_{32}H_{38}Cl_{2}N_{2}O_{6}) V-4
181
A una solución en remoción del ácido V-2 (R=H, R'=tBu) (0,44 g, 1,64 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (30 mL) se le añadió 4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina metil éster, hidrocloruro (0,66 g, 1,64 mmol), EDC (0,31 g, 1,64 mmol), DMAP (0,06 g, 0,49 mmol), HOBT (0,22 g, 1,64 mmol), y Et_{3}N (0,9 mL, 4,92 mmol). La mezcla de reacción fue removida a TA durante 16 h y después se evaporó in vacuo. El residuo fue disuelto en MeOH/CH_{2}Cl_{2} (50 mL), y esta solución fue lavada con HCl 1N acuoso (50 mL), con NaHCO_{3} acuoso saturado (50 mL), salmuera (50 mL), secada (Na_{2}SO_{4}), y filtrada y evaporada in vacuo. El sólido de color blanco resultante fue cromatografiado sobre gel de sílice (400 g, retícula de 230-400, columna OD de 70 mm, aglomerado y eluido con MeOH/CH_{2}Cl_{2} 3:97, recogiendo fracciones de 270 mL), utilizando la técnica de inflamación (flash). Se combinaron fracciones de 4-6 y se evaporaron in vacuo al objeto de conseguir el producto deseado V-4 (R'=tBu, R''=CH_{3}) en forma de sólido blanco, 0,82 g (81%), MP 204-208ºC; ^{1}H-NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta = 7,53-7,64(3), 7,28-7,41(3), 7,02-7,13(2), 5,91-5,98(1), 5,61(1), 4,82-4,90(1), 3,79-3,91(1), 3,75(3), 3,03-3,20(2), 2,47-2,61(1), 1,71-1,83(2), 1,38-1,70(12), 1,11(6); IR (mull): 1749, 1711, 1672, 1651, 1610, 1562, 1548, 1514, 1432, 1415, 1331, 1278, 1215, 1174 y 1152 cm^{-1}; MS (FAB): m/z (intensidad relativa) 617 (MH^{+}, 13), 545(69), 544(35), 543(99), 351(39), 349(57), 175(50), 173(50), 149(41), 121(50), 57(80); HRMS (FAB): calculado para C_{32}H_{38}Cl_{2}N_{2}O_{6}+HI, 617,2185, hallado 617,2178.
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Preparación V-4-2
Esquema V, V-4, en el que R'=H, R''=CH_{3}
N-[[[(4E)-4-carboximetileno-3,3-dimetil]ciclohexil]carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina metil éster (C_{28}H_{30}Cl_{2}N_{2}O_{6}) V-4
182
Una solución del diéster V-4 (R'=tBu, R''=CH_{3}) (0,50 g, 0,89 mmol) en ácido trifluoroacético (5 mL) fue removida a TA durante 16 h. La mezcla de reacción fue evaporada in vacuo para dar un cristal amarillo pálido. Una trituración con Et_{2} dio el ácido carboxílico deseado V-4 (R'=H, R''=CH_{3}) en forma de sólido blanco, el cual fue recogido mediante succión por filtración y secado, 0,38 g (76%). MP: 228-230ºC; ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 11,67-12,28(1), 10,67(1), 8,16-8,31(1), 7,40-7,68(5), 7,17(2), 5,54(1), 4,36-4,49(1), 3,71(1), 3,60(3), 2,91-3,07(1), 2,75-2,91(1), 2,53-2,71(1), 0,91-2,13(11); IR (mull) 1750, 1692, 1672, 1648, 1611, 1553, 1540, 1514, 1444, 1432, 1415, 1335, 1278, 1225 y 1213 cm^{-1}; MS (EI) m/z (intensidad relativa): 560 (M^{+}, 1), 351(66), 350(19), 349(99), 280(20), 278(29), 177(16), 175(64), 173(99), 107(13), 106(17); HRMS (EI) calculado para C_{28}H_{30}Cl_{2}N_{2}O_{6}), 560,1481, hallado 560,1477.
Ejemplo 129
Esquema V, V-4, en el que R'=H, R''=H
N-[[[(4E)-4-carboximetileno-3,3-dimetil]ciclohexil]carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina (C_{27}H_{28}Cl_{2}N_{2}O_{6}) V-4
183
A una solución en remoción del metil éster V-4 (R'=H, R''=CH_{3}) (0,33 g, 0,59 mmol) en MeOH (7 mL) se le añadió una solución de LiOH H_{2}O (0,05 g, 1,18 mmol) en H_{2}O (3 mL). La mezcla de reacción fue removida a TA durante 16 h y, entonces, fue evaporada in vacuo. Se disolvió el residuo en H_{2}O (20 mL), y se añadió HCl 6N acuoso en gotas hasta que el pH de la mezcla fue aprox. 1. El sólido gelatinoso resultante fue recogido mediante filtración por succión y secado en un horno de vacío a 70ºC durante 12 h. El sólido cristalino blanco resultante fue triturado, lavado meticulosamente con H_{2}O y secado en el horno de vacío a 70ºC durante 12 h para obtener 0,12 g (37%) del diácido V-4 (R'=H, R''=H). MP: 165-167ºC; ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 11,82-12,65(2), 10,65(1), 8,04-8,13(1), 7,51-7,61(4), 7,43-7,51(1), 7,17(2), 5,54(1), 4,31-4,42(1), 3,64-3,76(1), 2,95-3,06(1), 2,73-2,87(1), 2,53-2,69(1), 0,88-2,06(11); IR (mull) 3281, 3071, 3036, 1659, 1608, 1562, 1540, 1517, 1432, 1414, 1327, 1271, 1220, 1196 y 1170 cm^{-1}; MS (FAB) m/z (intensidad relativa): 547 (MH^{+}, 82), 549(54), 548(32), 547(82), 531(67), 529(99), 337(30), 335(45), 175(44), 173(70), 123(41); HRMS (FAB) calculado para C_{27}H_{28}Cl_{2}N_{2}O_{6}+HI, 547,1403, hallado 547.1417. % agua (KF): 2,51.
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Esquema W
184
Preparación W-C-1 y W-T-1
Esquema X, W-C-1 y W-T-1, en las que R=CO_{2}tBu, R'=5-CO_{2}Me
Ácido (Z)-5-carbometoxi-3,4-dihidro-1 (2H)-naftalenilidenoacético 1,1-dimetil-etil éster W-C-1 (C_{18}H_{22}O_{4}) y ácido (E)-5-carbometoxi-3,4-dihidro-1 (2H)-naftalenilidenoacético 1,1-dimetil-etil éster W-T-1 (C_{18}H_{22}O_{4})
185
A un frasco seco de 2 cuellos, de 50 mL se le vertió dietilfosfono t-butil-acetato (Aldrich, 6,4 mL, 27,2 mmol). El frasco fue irrigado con Ar/house vac (3X) y, a continuación, se añadió THF seco (10 mL). El frasco se sumergió en un baño de agua helada y, cinco minutos después, se agregó cuidadosamente aceite de NaH (60% NaH, 1,0 g, 25,0 mmol) en porciones. Tras remover durante 30 minutos, se agregó una solución de la conocida 5-carbometoxi-2-tetralona (Gerlach, U.; Wollmann, T. Tetrahedron Lett. 1992, 33, 5499) (4,62 g, 22,6 mmol) en THF seco (20 mL). La mezcla se removió durante 18 horas, calentándose lentamente a medida que el hielo se iba fundiendo (20 mL), y la mezcla fue disgregada entre agua (100 mL) y hexanos (200 mL). La capa acuosa fue extraída con hexanos (3x150 mL) y fueron lavadas las fases orgánicas combinadas con salmuera (1x100 mL), secadas (MgSO_{4}) y después evaporadas hasta quedar secas, dejando atrás un aceite pardo claro (11,0 g). El producto en bruto se purificó mediante cromatografía a través de la cromatografía de líquido a presión media (MPLC) y se eluyó con un gradiente de 0 al 4% de etil acetato/hexano. Se recogieron y aislaron dos fracciones mediante evaporación in vacuo para dar unos aceites incoloros. La primera fracción eluída (MPLC) dio 2,47 g, una obtención del 36% de la trans-olefina W-T-1. ^{1}H-NMR (CDCl_{3}): \delta = 7,77(2), 7,22(1), 6,19(1), 3,88(3), 3,11(4), 1,79(2), 1,51(9). MS (EI) m/z (intensidad relativa) 302 (M^{+}, 1), 247(16), 246(99), 229(21), 214(36), 186(12), 169(39), 142(15), 141(35), 115(21), 57(35). Anál. calculado para C_{18}H_{22}O_{4}0.3C_{3}H_{6}O: C, 71,50; H, 7,33. Hallado: C, Hallado: C, 70,89; H, 7,31... Una elución posterior dio 2,61 g (38%) de la cis-olefina W-C-1 en forma de aceite incoloro. ^{1}H-NMR (CDCl_{3}): \delta = 7,85(1), 7,65(1), 7,18(1), 5,75(1), 3,87(3), 3,17(2), 2,44(2), 1,94(2), 1,42(9). MS (EI) m/z (intensidad relativa) 302 (M^{+}, 1), 247(16), 246(99), 229(20), 214(38), 186(13), 169(43), 142(17), 141(39), 115(25), 57(35). Anál. calculado para C_{18}H_{22}O_{4}0.3C_{3}H_{6}O: C, 71,50; H, 7,33. Hallado: C, 71,58; H, 7,19.
Preparación W-C-1 y W-T-1
Esquema X, W-C-1 y W-T-1, en las que R=CO_{2}tBu, R'=6-CO_{2}Me
Ácido (Z)-5-carbometoxi-3,4-dihidro-1 (2H)-naftalenilidenoacético 1,1-dimetil-etil éster W-C-1 (C_{18}H_{22}O_{4}) y ácido (E)-6-carbometoxi-3,4-dihidro-1 (2H)-naftalenilidenoacético 1,1-dimetil-etil éster W-T-1 (C_{18}H_{22}O_{4})
186
A un frasco seco de 2 cuellos, de 50 mL se le vertió dietilfosfono t-butil-acetato (Aldrich, 7 mL, 29,8 mmol). El frasco fue irrigado con Ar/house vac (3X) y, a continuación, se añadió THF seco (10 mL). El frasco se sumergió en un baño de agua helada y, cinco minutos después, se agregó cuidadosamente aceite de NaH (60% NaH, 1,15 g, 28,8 mmol) en porciones. Transcurridos treinta minutos, se agregó una solución de la conocida 5-carbometoxi-2-tetralona (Gerlach, U.; Wollmann, T. Tetrahedron Lett. 1992, 33, 5499) (5,22 g, 25,55 mmol) en THF seco (20 mL). La mezcla se removió durante 18 horas, calentándose lentamente a medida que el hielo se iba fundiendo (20 mL). Transcurridas dos series de 36 horas, la mezcla fue disuelta añadiendo hielo (20 g) y después fue disgregada entre agua (100 mL) y hexanos (200 mL). La capa acuosa fue extraída con hexanos (3x150 mL) y fueron lavadas las fases orgánicas combinadas con salmuera (1x100 mL), y después evaporadas hasta quedar secas, dejando atrás un aceite pardo claro (12,5 g). La cristalización de los hexanos (100 mL, congelador) dio W-T-1 (6-CO_{2}CH_{3}) en forma de sólido blanco (2,37 g). El licor madre fue transferido a un aparato para cromatografías de líquidos a presión media y eluído con un gradiente de 0 a 4% de etil acetato/hexano. Se recogieron y aislaron dos fracciones mediante evaporación in vacuo para dar unos sólidos incoloros. La banda 1 (0,559 g) fue combinada con los cristales de los anteriores hexanos, con los cuales es, según espectroscopia, idéntico, para obtener un total de 2,93 (38%) de W-T-1 (6-CO_{2}CH_{3}). ^{1}H-NMR (CDCl_{3}): \delta = 7,71(2), 7,56(1), 6,22(1), 3,81(3), 3,07(2), 2,71(2), 1,75(2); IR (mull) 2133, 1935, 1718, 1700, 1618, 1438, 1296, 1275, 1260, 1236, 1201, 1181, 1152, 1144 y 1105 cm^{-1}; MS (EI) m/z (intensidad relativa) 302 (M^{+}, 1), 246(99), 231(22), 229(28), 228(21), 187(24), 169(23), 142(30), 141(48), 115(27), 57(53). Anál. calculado para C_{18}H_{22}O_{4}: C, 71,50; H, 7,33. Hallado: C, 71,03; H, 7,07.
La fracción 2 dio 2,50 g (32%) de W-C-1 en forma de sólido blanco. ^{1}H-NMR (CDCl_{3}): \delta = 7,78(2), 7,59(1), 5,79(1), 3,89(3), 2,87(2), 2,47(2), 1,95(2), 1,44 (9). IR (lic.): 2951, 2396, 1982, 1927, 1721, 1437, 1368, 1306, 1287, 1266, 1226, 1200, 1147, 1110 y 775 cm^{-1}; MS (EI) m/z (intensidad relativa) 302 (M^{+}, 1), 246(99), 231(19), 229(22), 228(20), 187(21), 169(17), 142(19), 141(29), 115(16), 57(29). Anál. calculado para C_{18}H_{22}O_{4} C, 71,50; H, 7,33. Hallado: C, 71,29; H, 7,19.
Preparación W-C-1
Esquema X, W-C-1, en el que R=CO_{2}tBu, R'=5-CO_{2}H
Ácido (Z)-5-carboxi-3,4-dihidro-1-(2H)-naftalenilidenoacético 1,1-dimetil-etil éster W-C-1 (C_{17}H_{20}O_{4})
187
Triofenóxido de sodio (5,05 g, 38 mmol) fue añadido a una mezcla removida del diéster W-C-1 (2,3 g, 7,6 mmol) en THF seco (50 mL). La mezcla se estuvo removiendo durante dos días en un baño aceitoso a 35ºC. A continuación se evaporó in vacuo la mezcla hasta quedar seca, se removió con H_{2}O (50 mL), y se filtró por un embudo de vidrio sinterizado, y la masa filtrada se aclaró con agua (4x20 mL). El filtrado fue tratado con HCl acuoso (1,2 N) hasta alcanzar un pH 6, y, a continuación, filtrado para dar un sólido blanco (1,73 g) que fue transferido a una columna cromatográfica de presión media y eluido con un gradiente de 0% a 5% CH_{3}OH/CH_{2}Cl_{2}. La franja de absorción UV fue aislada mediante evaporación del eluyente in vacuo hasta conseguir W-C-1 (R=CO_{2}tBu, R'=5-CO_{2}H) en forma de sólido blanco (1,56 g, 70% precipitado). ^{1}H-NMR (CDCl_{3}): \delta = 7,98(1), 7,82(1), 7,28(1), 6,21(1), 3,16(4), 1,82(2), 1,52(9); MS (ESI-) para C_{17}H_{20}O_{4}: M/Z 287,2 (M-H).
Preparación W-T-1
Esquema X, W-T-1, en el que R=CO_{2}tBu, R'=5-CO_{2}H
Ácido (E)-5-carboxi-3,4-dihidro-1-(2H)-naftalenilidenoacético 1,1-dimetil-etil éster W-C-1 (C_{17}H_{20}O_{4})
188
Triofenóxido de sodio (5,05 g, 38 mmol) fue añadido a una mezcla removida del diéster W-T-1 (R=CO_{2}tBu, R'=5-CO_{2}CH_{3}) (2,3 g, 7,6 mmol) en THF seco (50 mL). La mezcla se estuvo removiendo durante 36 horas a temperatura ambiente y posteriormente fue calentada durante 48 horas en un baño aceitoso a 35ºC. A continuación se evaporó in vacuo la mezcla hasta quedar seca, se removió con H_{2}O (50 mL), y se filtró por un embudo de vidrio sinterizado (aclarados con 4x20 mL de agua). El filtrado fue tratado con HCl acuoso (1,2 N) hasta alcanzar un pH 6, y, a continuación, filtrado (aclarados con 4x10 mL de agua). El sólido filtrado fue secado al aire para pasar a convertirse en un sólido blanco (1,73 g) que fue transferido a una columna cromatográfica de presión media y eluido con un gradiente de 0% a 5% CH_{3}OH/CH_{2}Cl_{2}. La franja de absorción UV fue aislada mediante evaporación del eluyente in vacuo hasta conseguir W-T-1 (R=CO_{2}tBu, R'=5-CO_{2}H) en forma de sólido blanco pulvurento (1,56 g, 70% precipitado). ^{1}H-NMR (CDCl_{3}): \delta = 7,98(1), 7,82(1), 7,28(1), 6,21(1), 3,16(4), 1,82(2), 1,52(9); MS (ESI-) para C_{17}H_{20}O_{4}: m/z 287,2 (M-H).
Preparación W-T-1
Esquema X, W-T-1, en el que R=CO_{2}tBu, R'=6-CO_{2}Na
Ácido (E)-6-carboxi-3,4-dihidro-1 (2H)-naftalenilidenoacético sal sódica de 1,1-dimetil-etil éster W-C-1 (C_{17}H_{19}O_{4}Na)
189
Se removió una solución del diéster W-T-1 (R=CO_{2}tBu, R'=6-CO_{2}Me) (0,94 g, 3,1 mmol) y triofenóxido de sodio (0,62 g, 4,69 mmol) en DMF seco (5 mL) en Ar y se calentó todo ello en un baño aceitoso a 60ºC. Tras haberse removido todo durante toda la noche, se había producido una abundante precipitación. La mezcla se extrajo del baño de aceite, se enfrió a temperatura ambiente, se mezcló con DMF seco (6 mL) y se filtró (con aclarados de DMF 4x2 mL) por un embudo de vidrio sinterizado. La masa filtrada fue secada al aire para obtener W-T-1 (6-CO_{2}Na) en forma de sólido blanco (0,72 g, 74%). ^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}): \delta = 7,52(3), 6,21(1), 3,03(2), 2,73(2), 1,72(2); 1,44(9); MS (ESI-) para C_{17}H_{19}O_{4}: m/z 287 (M-Na).
\newpage
Preparación W-C-2
Esquema X, W-C-2, en el que R=CO_{2}tBu, 5 sustituidos, R''=CH_{3}
N-[[(5Z)-7-8-dihidro-5-[[(1,1-dimetiletoxi]carbonil]metileno]-1(6H)-naftil]carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina metil éster (C_{34}H_{34}Cl_{2}N_{2}O_{6})
190
A una mezcla del W-C-1 (R=CO_{2}tBu, R'=5-CO_{2}H) (1,18 g, 4,08 mmol) en DMF seco (20 mL) en N_{2} y enfriada en un baño de agua con hielo se agregó EDC (0,86 g, 4,49 mmol), HOBT (0,61 g, 4,51 mmol), diisopropiletil amina (3,8 mL, 21,82 mmol), y 4-dimetilaminopiridina (0,05 g, 0,41 mmol). Transcurridos treinta minutos, se añadió 4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina metil éster, hidrocloruro (1,8 g., 4,46 mmol) y más cantidad de DMF seco (5 mL). Tras haber estado en remoción durante toda la noche, la mezcla se evaporó hasta quedar seca in vacuo, dando un aceite que fue disuelto en CHCl_{3} (150 mL) y lavado con agua (50 mL), HCl acuoso (1N, 2x50 mL),agua (5x50 mL, a un pH 7), evaporándolo después hasta quedar seco, dando W-C-2 (R=CO_{2}tBu, 5 sustituidos, R''=CH_{3}) en forma de polvo color amarillo pálido (2,68 g, 93%). Se recristalizó una muestra analítica a partir de tolueno/cloroformo. ^{1}H-NMR (CDCl_{3}): \delta = 7,59(4), 7,27(7), 6,20(2), 5,08(1), 3,80(3), 3,31(1), 3,13(3), 2,73(2), 1,74(2), 1,51(9); IR (Mull) 1751, 1700, 1675, 1640, 1612, 1555, 1534, 1515, 1515, 1433, 1336, 1278, 1225, 1201, 1153 y 1147 cm^{-1}; MS (FAB) m/z (intensidad relativa) 637 (MH^{+}, 38), 639(28), 637(38), 581(25), 565(24), 563(35), 271(24), 215(99), 197(29), 173(35), 57(30); Anál. calculado para C_{34}H_{34}Cl_{2}N_{2}O_{6}: C, 64,05; H, 5,38; N, 4,39. Hallado: C, 63,76; H, 5,41; N, 4,45.
Ejemplo 130
Esquema X, W-C-2, en el que R=CO_{2}H, 5 sustituidos, R''=CH_{3}
N-[[(5Z)-5-carboximetileno-7-8-dihidro-1-(6H)-naftil]carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina metil éster (C_{30}H_{26}Cl_{2}N_{2}O_{6})
191
Una solución de W-C-2 (R=CO_{2}tBu, 5 sustituidos, R''=CH_{3}) (0,244 g, 0,38 mmol) en cloruro de metileno fue enfriada en un baño de agua helada y, a continuación, se le agregó ácido trifluoroacético (1,0 mL, 13 mmol). Transcurridos 10 minutos, se extrajo del baño refrigerante. Después de cuatro días, la mezcla heterogénea fue filtrada por un embudo de cristal o vidrio sinterizado, y la masa filtrada fue lavada con cloruro de metileno (3x2 mL), y secada al aire para proporcionar un sólido blanco W-C-2 (R=CO_{2}H, 5 sustituidos, R''=CH_{3}) (0,185 g., 82%). Se preparó una muestra analítica removiendo el compuesto con NaHCO_{3} para convertirlo en su sal soluble en agua mediante una cromatografía de fase inversa (0% a 30% de acetonitrilo/agua) y acidificación. %). ^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}): \delta = 12,21(1), 10,69(1), 8,74(1), 7,51(6), 7,25(2), 7,12(2), 5,80(1), 4,69(1), 3,68(3), 3,15(1), 2,89(1), 2,41(4), 1,71(2); IR (mull) 3261, 1743, 1696, 1659, 1642, 1610, 1529, 1433, 1414, 1320, 1265, 1226, 1216, 1206 y 1195 cm^{-1}; MS (FAB) m/z (intensidad relativa) 581 (MH^{+}, 63), 583(43), 582(28), 581(63), 565(15), 563(22), 349(21), 215(99), 197(46), 175(16), 173(28); HRMS (FAB) calculado para 581,1246 de C_{30}H_{26}Cl_{2}N_{2}O_{6}+HI, hallados 581,1232.
Ejemplo 131
Esquema X, W-C-2, en el que R=CO_{2}H, 5-sustituidos, R''=H
N-[[(5Z)-5-(carboximetileno)-7,8-dihidro-1(6H)-Naftil]carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina (C_{29}H_{24}Cl_{2}N_{2}O_{6})
192
El W-C-2 (R=CO_{2}H, 5-sustituidos, R''=CH_{3}) (0,9 g, 1,5 mmol) en metanol (50mL) fue removido y enfriado en un baño de agua helada. A la solución enfriada se le añadió 0,33 g, 7,9 mmol de una solución helada de LiOH H_{2}O en H_{2}O (10 mL). Tras su remoción durante toda la noche, la mezcla se evaporó in vacuo hasta quedar totalmente seca, manteniendo siempre la temperatura del baño igual o por debajo de la temperatura ambiente para conseguir un sólido blanco. Después la mezcla fue disuelta en agua (50 mL) y se ajustó el ph aproximadamente a un 8 utilizando HCl 1N. Después la solución fue filtrada y el filtrado a su vez transferido a una columna cromatográfica (C 18) a presión media de fase inversa, y eluido con un gradiente de 0 a 30% de acetonitril/agua. La concentración in vacuo de las fracciones que contenían W-C-2 (R=CO_{2}H, 5-sustituidos, R''=CH_{3}) dio 0,337 g (35%) de W-C-2 (R=CO_{2}H, 5-sustituidos, R''=CH_{3}) en forma de sólido blanco. ^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}) \delta = 10,73(1), 8,58(1), 7,52(5), 7,18(5), 5,94(1), 4,63(1), 3,15(1), 2,86(1), 2,48-1-70(6); IR (mull) 3257, 3068, 3037, 1720, 1663, 1645, 1608, 1581, 1562, 1540, 1516, 1432, 1414, 1327 y 1196 cm^{-1}, MS (FAB) m/z (intensidad relativa) 567 (MH^{+}, 99), 570(27), 569(71), 568(57), 567(99), 566(26), 216(26), 215(89), 175(22), 173(30), 169(20); HRMS (FAB) calculado para C_{29}H_{24}Cl_{2}N_{2}O_{6}+HI 567,1089, hallado 567,1102; % agua (KF): 3,72.; Anál. calculado para C_{29}H_{24}Cl_{2}N_{2}O_{6}I 21 H_{2}O: C, 59,11; H, 4,52; N, 4,75. Hallado: C, 58,89; H 4,38; N 4,70.
Ejemplo 132
Esquema X, W-T-2, en el que R=CO_{2}tBu, 5-sustituidos, R''=CH_{3}
N-[[(5E)-7,8-dihidro-5-[[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]metileno]-1(6H)-naftil]carbonil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina metil éster (C_{34}H_{34}Cl_{2}N_{2}O_{6})
193
A una mezcla de W-T-1 (R=CO_{2}tBu, R'=5-CO_{2}H) (1,18 g, 4,08 mmol) en DMF seco (20 mL) con N_{2} y enfriada en un baño de agua helada, se le añadió EDC (0,86 g, 4,49 mmol), HOBT (0,61 g, 4,51 mmol) y diisoprofiletil amino (3,8 mL, 4,49 mmol). Transcurridos 30 minutos se le añadió 4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina metil éster hidrocloruro (1,8 g, 4,46 mmol), además de DMF seco (5 mL). Después de removerlo durante toda la noche, la mezcla se evaporó in vacuo hasta secarse completamente, obteniéndose un aceite que fue disuelto en CHCl_{3} (150 mL) y que fue lavado con agua (50 mL), HCl acuoso (1N, 2x50 mL), agua (5x50 mL con un pH 7) y que se evaporó hasta estar completamente seco, al objeto de conseguir (2,68 g, 93%) del W-T-2 (R=CO_{2}tBu, 5-sustituidos, R''=CH_{3}) en forma de polvo amarillo pálido. Se recristalizó una muestra analítica a partir de tolueno/cloroformo. ^{1}H-NMR (CDCl_{3}) \delta = 7,59(4), 7,27(7), 6,20(2), 5,08(1), 3,80(3), 3,31(1), 3,13(3), 2,73(2), 1,74(2), 1,51(9); IR (mull) 1751, 1700, 1675, 1640, 1612, 1555, 1534, 1515, 1433, 1336, 1278, 1225, 1201, 1153, y 1147 cm^{-1}; MS (FAB) m/z (intensidad relativa) 637 (MH^{+}, 38), 639(28), 197(29), 173(35), 57(30); Anál. calculado para C_{34}H_{34}Cl_{2}N_{2}O_{6}: C, 64,05; H, 5,38; N 4,39. Hallado: C, 63,76; H, 5,41; N 4,45.
Ejemplo 133
Esquema X, W-T-2 en el que R=CO_{2}, 5-sustituidos, R''=CH_{3}
N-[[(5E)-5 carboximetileno-7,8 dihidro-1(6H)-Naftil]carbonil]-4-[(2,6 diclorobenzoil)amino)-L-fenilalanina metil éster (C_{30}H_{26}Cl_{2}N_{2}O_{6})
194
A una solución de W-T-2 (R=CO_{2}, 5-sustituidos, R''=CH_{3}) (1,4 g, 2,2 mmol) en cloruro de metileno (20 mL) con N_{2} se le añadió ácido trifluoroacético (1 mL, 13 mmol). Tras remover la solución durante 2 días más, a la mezcla se le añadió tolueno (30 mL) y se evaporó in vacuo hasta lograr un secado total obteniendo la forma de un sólido amarillo. Este sólido fue mezclado con cloroformo (25 mL) y acetona (2 mL), se elevó la temperatura del mismo alcanzando los 40ºC, y luego se dejó enfriar la mezcla durante la noche a temperatura ambiente, filtrándolo luego con un embudo de cristal sinterizado. La masa filtrada obtenida fue lavada con cloroformo (3x3 mL) y fue secada al aire obteniendo 1,08 g, 84% de W-T-2 (R=CO_{2}, 5-sustituidos, R''=CH_{3}) en forma de sólido amarillo pálido; ^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}): \delta = 12,10(1), 10,69(1), 8,73(1), 7,74(1), 7,57(5), 7,18(4), 6,26(1), 4,71(1), 3,69(3), 2,97(4), 2,36(2), 1,59(2); IR (mull) 1753, 1677, 1644, 1636, 1602, 1544, 1515, 1443, 1433, 1277, 1239, 1220, 1210, 1199 y 1189 cm^{-1}; HRMS (FAB) calculado para 581,1246 C_{30}H_{26}Cl_{2}N_{2}O_{6}+HI, hallados 581,1268.
Ejemplo 134
Esquema X, W-T-2 en el que R=CO_{2}, 5-sustituidos, R''=H
N-[[(5E)-5 carboximetileno-7,8 dihidro-1(6H)-Naftil]carbonil]-4-[(2,6 diclorobenzoil)amino)-L-fenilalanina (C_{29}H_{24}Cl_{2}N_{2}O_{6})
195
Una solución de LiOH H_{2}O (0,3 g, 7,15 mmol) fue añadida a la solución W-T-2 (R=CO_{2}H, 5-sustituidos, R''=CH_{3}) (0,8 g, 1,3 mmol) en metanol (10 mL). Después de agitarlo durante toda la noche, la mezcla se evaporó in vacuo hasta quedar totalmente seca, tomando la forma de un sólido amarillo pálido que a su vez fue disuelto en 20 mL de agua y enfriado en un baño de agua helada. El pH se ajustó aproximadamente a 3 utilizando HCl 1N acuoso. Tras una hora en el baño helado, la mezcla se filtró a través de un embudo de cristal sinterizado obteniendo como resultado un sólido amarillo pálido que fue lavado con agua (3x10 mL) y secado al aire, obteniendo así 0,79 g, 96% de W-T-2 (R=CO_{2}H, 5-sustituidos, R''=H). ^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}): \delta = 12,40(1), 10,67(1), 8,57(1), 7,73(1), 7,56(5), 7,21(4), 6,26(1), 4,63(1), 2,96(4), 2,30(2), 1,57(2); IR (mull) 3258, 3193, 3123, 3066, 1660, 1608, 1584, 1562, 1539, 1516, 1432, 1414, 1327, 1273, y 1195 cm^{-1}; MS (FAB) m/z (intensidad relativa) 567 (MH^{+}, 96), 570(20), 569(65), 568(36), 567(96), 551(17), 549(31), 215(99), 197(21), 175(25), 173(46); HRMS (FAB) calculado para 567,1089 de C_{29}H_{24}Cl_{2}N_{2}O_{6}+HI, hallados 567,1802; % de agua (KF): 6,64; Anál. calculado para C_{29}H_{24}Cl_{2}N_{2}O_{6} 2.24 H_{2}O: C, 57,31; H, 4,72; N, 4,61. Hallados: C, 57,31; H, 4,43; N, 4,64.
Preparación W-T-2
Esquema X, W-T-2 en el que R=CO_{2}tBu, 6-sustituidos, R''=CH_{3}
N-[[(5E)-7,8 dihidro-5-[[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]metileno]-2(6H)-naftil]carbonil]-4-[(2,6 diclorobenzoil)amino)-L-fenilalanina metil éster (C_{34}H_{34}Cl_{2}N_{2}O_{6})
196
A una mezcla heterogénea de la sal W-T-1 (6-CO_{2}Na) (0,56 g, 2,1 mmol) mantenida en DMF en DMF (20 mL) bajo N_{2} y enfriada en un baño de agua helada se le añadieron EDC (0,45 g, 2,3 mmol), HOBT (0,31 g, 2,3 mmol), diisoprofiletil amina (2 mL, 11,5 mmol), y 4-dimetilaminopiridina (0,03 g, 0,3 mmol). Pasados 30 minutos se le añadió -4-[(2,6 diclorobenzoil)amino)-L-fenilalanina metil éster. Hidrocloruro (1,0 g, 2,48 mmol) y más DMF seco (5 mL). Tras agitar la mezcla durante 60 horas, la mezcla se evaporó in vacuo hasta quedar totalmente seca, tomando la forma de un aceite que fue disuelto en 150 mL de CHCl_{3}, y lavado con agua (50 mL), HCl acuoso (1N, 2x50 mL), agua (5x50 mL, a pH 7) y se evaporó en secado, obteniendo 1,2 g, 89% del producto W-T-2 (R=CO_{2}tBu, 6-sustituidos, R''=CH_{3}) en forma de polvo amarillo pálido. ^{1}H-NMR (CDCL_{3}): \delta = 7,67(1), 7,56(4), 7,31(4), 7,13(2), 6,62(1), 6,29(1), 5,07(1), 3,79(3), 3,25(2), 3,14(2), 2,81(2), 1,84(2), 1,51(9); MS (ESI-) para C_{34}H_{33}Cl_{2}N_{2}O_{6} m/z (M-H); IR (mull) 1748, 1705, 1664, 1641, 1608, 1561, 1546, 1536, 1513, 1441, 1429, 1329, 1203, 1148, y 1141 cm^{-1}; Anál. calculado para C_{34}H_{34}Cl_{2}N_{2}O_{6}: C, 64,05; H, 5,38; N, 4,39. Hallados: C, 63,67; H, 5,39; N, 4,38.
\newpage
Preparación W-T-2
Esquema X, W-T-2 en el que R=CO_{2}tBu, 6-sustituidos, R''=CH_{3}
N-[[(5E)-7,8 dihidro-5-[[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]metileno]-2(6H)-naftil]carbonil]-4-[(2,6 diclorobenzoil)amino)-L-fenilalanina metil metileno-4-[(2,6 diclorobenzoil)amino)-L-fenilalanina sal sódica (C_{33}H_{31}Cl_{2}N_{2}O_{6}Na)
197
A una solución agitada de W-T-2 (R=CO_{2}tBu, 6-sustituidos, R''=CH_{3}) (0,418 g, 0,66 mmol) en 20 mL de THF seco con N_{2}, se le añadió tiofenóxido de sodio. Tras agitarlo durante toda la noche, la mezcla se evaporó in vacuo hasta quedar totalmente seca, obteniendo un producto en forma de un sólido amarillo pálido que fue removido con agua (50 mL) durante 10 minutos, y después fue filtrado. El filtrado fue transferido a una columna cromatográfica de fase inversa (C-18) y eludido con agua (1L) seguido por un 20% de acetonitrilo/agua. La evaporación del solvente in vacuo dio como resultado el W-T-2 (R=CO_{2}tBu, 6-sustituidos, R''=Na) en forma de sólido blanco (0,184 g, 43%). ^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}): \delta = 10,59(1), 7,76(2), 7,48(7), 7,06(2), 6,29(1), 4,09(1), 3,15(1), 3,03(3), 2,78(2), 1,73(2), 1,45(9); IR (mull) 3392, 3297, 1704, 1664, 1605, 1562, 1535, 1517, 1485, 1431, 1411, 1402, 1393, 1321 y 1145 cm^{-1}; MS (FAB) m/z (intensidad relativa) 622 (MH^{+} 0), 669(13), 667(18), 647(13), 645(18), 331(9), 215(17), 179(9), 177(89), 57(11), 23(99); HRMS (FAB) calculado para 622,1637 de C_{33}H_{31}Cl_{2}N_{2}O_{6}Na+HI, hallados 645,1550.
Ejemplo 135
Esquema X, W-T-2, en el que R=CO_{2}Na, 6-sustituidos, R''=Na
N-[[(5E)-5 carboximetileno-7,8 dihidro-2(6H)-Naftil]carbonil]-4-[(2,6 diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina sal sódica (C_{29}H_{22}Cl_{2}N_{2}O_{6}Na_{2})
198
Una solución de ácido trifluoroacético (4 mL) y de W-T-2 (R=CO_{2}Na, 6-sustituidos, R''=Na) (0,21 g, 32 mmol) fue removida durante la noche con N_{2}. Esta reacción fue después mezclada con tolueno (50 mL) y se evaporó in vacuo hasta quedar seca, en forma de un sólido de color crema. Este sólido fue posteriormente disuelto en metano) (10 mL) y removido con NaHCO_{3} acuoso saturado (10 mL). La mezcla se evaporó in vacuo hasta quedar totalmente seca, fue disuelta en agua, filtrada y el filtrado a su vez transferido a una columna cromática de fase inversa C-18. La elución con 0 a 10% de acetonitrilo/H_{2}O dio como resultado W-T-2 (R=CO_{2}Na, 6-sustituidos, R''=Na) (0,14 g, 70%) en forma de sólido blanco después de haberse producido la evaporación del solvente in vacuo. ^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}): \delta = 7,69(1), 7,48(7), 6,49(1), 4,70(1), 3,37(1), 3,16(2), 2,98(2), 2,84(2), 1,85 (2); IR (mull) 3388, 3261, 3123, 1656, 1606, 1561, 1543, 1517, 1485, 1432, 1412, 1349, 1328, 1195, y 1114 cm^{-1}; HRMS (FAB) calculado para 611,0755 C_{29}H_{22}Cl_{2}N_{2}O_{6}Na_{2}+HI, hallados 611,0755; % agua (KF): 6,40; Anál. calculado para C_{33}H_{31}Cl_{2}N_{2}O_{6}Na 2,45 H_{2}O: C, 57,47; H, 5,25; N, 4,06. Hallados: C, 57,31; H, 5,18; N 3,97.
Esquema X
199 
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Preparación X-1
Esquema Y, X-1 en el que R=H, R'=CH_{3}
(Z)-5-carbometoxi-3,4-dihidro-1(2H)-ácido naftalenilideneacético X-1 (C_{14}H_{14}O_{4})
200
A una solución del diéster X-1 (R=tBu, R'=CH_{3}), preparada según la descripción expuesta en el esquema X (Preparación X-C-1 y X-T-1, R=CO_{2}tBu, R'=5-CO_{2}CH_{3}) (0,77 g, 2,55 mmol) en cloruro de metileno (40 mL) se le añadió ácido trifluoroacético (2 mL, 26 mmol). Después de agitarlo durante 16 horas se añadió una cantidad adicional de ácido trifluoroacético (0,5 mL, 6,5 mmol). Después de agitarlo durante otras 24 horas, la reacción fue diluida con 50 mL de tolueno y se evaporó in vacuo hasta quedar totalmente seca; en forma de un sólido amarillo pálido. El sólido obtenido fue disuelto en etil acetato (150 mL) y lavado con agua (1x100 mL) seguido de 1x30 mL de bicarbonato sódico acuoso saturado. El lavado bicarbonatado se elevó hasta alcanzar un pH 3 usando HCl 1N acuoso. La mezcla heterogénea resultante se colocó después en el congelador durante 30 minutos, realizando seguidamente un filtrado a través de un embudo de cristal sinterizado. El sólido filtrado se lavó con agua (3x30 mL) y fue secado al aire para obtener 0,308 g, 49% de producción del X-1 (R=H, R'=CH_{3}) en forma de sólido blanco. ^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}): \delta = 12,21(1), 7,72(1), 7,61(1), 7,23(1), 5,84(1), 3,81(3), 3,02(2), 2,42(2), 1,84(2).
Preparación X-2
Esquema Y, X-2 en el que R'=CH_{3}, R''=CH_{3}
N-[(1 Z)-5-carbometoxi-3,4-dihidro-1(2H)naftalenilideneacetil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina metil éster (C_{31}H_{28}Cl_{2}N_{2}O_{6})
201
Una mezcla de ácido X-1 (esquema Y, X-1, R=CO_{2}H, R'=CO_{2}CH_{3}) (0,3 g, 1,22 mmol) y de cloruro de metileno (20 mL) fue agitada en un frasco de fondo redondo introducido en agua helada. A esta mezcla se le añadieron EDC (0,26 g, 1,36 mmol), HOBT (0,19 g, 1,41 mmol), 4-dimetilaminopiridina (0,05g, 0,41 mmol) y diisoprofiletil amina (2 mL, 11,48 mmol). Después de 30 minutos se añadió 4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina metil éster, hidrocloruro (0,56 g, 1,39 mmol), y se retiró el producto del agua helada. La mezcla se dejó agitar durante 36 horas, después se añadió una cantidad adicional de EDC (0,28 g, 1,46 mmol) y diisoprofiletil amina (1 mL, 0,57 mmol). La mezcla se removió a temperatura ambiente durante 120 horas más y la reacción obtenida fue diluida con cloruro de metileno (40 mL), agitada con agua (2x20 mL), HCl 1N acuoso (1x20 mL), y agua (4x20 mL, pH 7). La capa orgánica se evaporó después in vacuo hasta secarse totalmente, obteniendo así 0,639 g, 85% de X-2 (R'=CH_{3}, R''=CH_{3}) en forma de sólido amarillo pálido. Se determino que (^{1}H-NMR) era una mezcla 1:7,5 del E- respectivo y de los isómeros Z- (deseados). ^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}): \delta = 10,68(1), 8,50(1), 7,35(9), 6,47 (0,12), 5,85(0,00), 4,56(1), 3,80(3), 3,63(3), 2,93(6), 2,27(0,88), 1,86(0,88), 1,66(0,24); IR (mull) 1742, 1723, 1664, 1642, 1605; 1547, 1529, 1513, 1433, 1413, 1330, 1280, 1246, 1213 y 1197 cm^{-1}; MS (FAB) m/z (intensidad relativa) 595 (MH^{+}, 47), 598(13), 597(34), 596(21), 595(47), 349(14), 230(15), 229(99), 175(13), 173(19), 123(45); HRMS (FAB) calculado para 595,1403 C_{31}H_{28}Cl_{2}N_{2}O_{6}+HI. Hallados 595,1401.
Ejemplo 136
Esquema Y, X-2 en el que R'=CH_{3}, R''=H
N-[(1Z)-5-carbometoxi-3,4-dihidro-1(2H)-naftalenilideneacetil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina (C_{30}H_{26}Cl_{2}N_{2}O_{6})
202
Una solución de X-2 (R'=CH_{3}, R''=CH_{3}) (0,275 g, 0,46 mmol) fue agitada con metanol (50 mL) en un frasco de fondo redondo introducido en agua helada. A esta solución enfriada se le añadió una solución de LiOH H_{2}O (0,1 g, 2,4 mmol) en 20 mL de H_{2}O. Después de haber removido la mezcla durante 16 horas, la mezcla tenía un pH 7 utilizando HCl 1N acuoso, evaporándose después in vacuo hasta secarse. El sólido resultante fue después disuelto en agua, filtrado y después el filtrado se transfirió a una columna cromatográfica de fase inversa C-18, siendo eluída con un gradiente de 0 a 28% de acetonitrilo/ 0,02% de NaHCO_{3} acuoso. Se recogieron y aislaron dos bandas absorbentes UV (250 nm) mediante la evaporación del disolvente in vacuo hasta que desapareció todo el acetonitrilo, seguido de una acidificación hasta conseguir un pH 3 mediante HCl 1N acuoso. Los precipitados blancos resultantes se aislaron mediante filtrado por succión con un embudo de cristal sinterizado. Los sólidos se lavaron con 3x5 mL de H_{2}O, secándose al aire. La banda UV 1 obtuvo 0,16 g, 60% de producción de X-2 (R'=CH_{3}, R''=H) en forma de un sólido blanco pulvurento; ^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}): \delta = 12,7(1), 10,68(1), 9,36(1), 7,52(6), 7,33(1), 7,21(2), 7,00(1), 5,86(1), 4,48(1), 3,79(3), 2,88(4), 2,35(2), 1,82(2); IR (mull) 3271, 1739, 1724, 1715, 1696, 1680, 1667, 1650, 1644,1612, 1609, 1517, 1430, 1255, y 1193 cm^{-1}; HRMS (FAB) calculado para 581,1246 de C_{30}H_{26}Cl_{2}N_{2}O_{6}+HI, hallados 581,1229.
Ejemplo 137
Esquema Y, X-2 en el que R'=CH_{3}, R''=H
N-[(1Z)-5-carboxi-3,4-dihidro-1(2H)-naftalenilideneacetil]-4-[(2,6-diclorobenzoil)amino]-L-fenilalanina (C_{29}H_{24}Cl_{2}N_{2}O_{6})
203
Una solución de X-2 (R'=CH_{3}, R''=H, 0,208 g, 0,35 mmol) en metanol (50 mL) fueron removidos en un frasco de fondo redondo introducido en agua helada. A esta solución enfriada se le añadió LiOH H_{2}O (0,1 g, 5,4 mmol) en 20 mL de H_{2}O. Después de 18 días, la solución de color amarillo pálido fue diluida en 20 mL de agua, evaporada hasta alcanzar un volumen de 30 mL, acidificada hasta un pH 5 utilizando HCl 1N acuoso, y filtrada. El filtrado incoloro alcanzó un pH 3 utilizando HCl 1N acuoso, y el precipitado resultante se aisló mediante filtración por succión. Tras el secado al aire se obtuvieron 0,092 g, 46% de producción de X-2 (R'=H, R''=H) en forma de sólido blanco pulvurento. ^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}): \delta = 12,7(1), 8,35(1), 7,54(6), 7,25(3), 6,97(1), 5,84(1), 4,50(1), 2,91(4), 2,34(2), 1,82 (2); IR (mull) 3263, 3194, 3121, 3066, 2941, 1727, 1714, 1693, 1666, 1647, 1605, 1518, 1431, 1412, y 1264 cm^{-1}; HRMS (FAB) calculado para 567,1089 C_{29}H_{24}Cl_{2}N_{2}O_{6}+HI, hallados 567, 1091. % agua (KF): 4,83; Anál. calculado para C_{29}H_{24}Cl_{2}N_{2}O_{6} 1.6H_{2}O: C, 58,42; H, 4,60; N, 4,70. Hallados: C, 58,57; H. 4,72; N, 4,87.
Ensayos biológicos Ensayo de adhesión en células endoteliales Jurkat
El siguiente ensayo estableció la actividad de los presentes compuestos a la hora de inhibir la adhesión celular mediada \beta1 en un sistema in vitro representativo. Estos ensayos miden las interacciones adhesivas de una línea de células T, las Jurkat, que se conocen porque expresan la integrina \alpha4\beta1, en monocapas endoteliales en presencia de una serie de compuestos de prueba. Los compuestos de prueba fueron agregados, aumentando las concentraciones paulatinamente, a células T y, a continuación, la mezcla de los compuestos y de células T se agregó a las monocapas de células endoteliales estimuladas IL-1. Se incubaron y lavaron las capas, y se cuantificó el porcentaje de células adjuntas. El presente ensayo demuestra directamente la actividad inhibidora de la adhesión celular y la actividad moduladora de la adhesión que tienen los compuestos.
Las células endoteliales de venas umbilicales humanas se adquirieron en Clonetics (San Diego, CA) en el número de paso 2. Las células se cultivaron en frascos con un prerecubrimiento de gelatina elaborada con piel porcina 0,5% (Sigma, St Luís, MO.), en medios EGM-UV (Clonetics, San Diego, CA), complementados con suero bovino fetal al 10%. Las células se realimentan cada 2-3 días, llegando a una confluencia entre los días 4 y 6. Se controlan las células para ver si tienen el antígeno factor VIII y los resultados nos dicen que en el paso 12, las células dan positivo con respecto a este antígeno. Las células endoteliales no se utilizan en el paso 6.
El línea Jurkat de células T se obtuvo de la American Type Tissue Culture Collection (Rockville, MD) y las células se cultivaron en RPMI con un contenido del 10% de suero de ternera fetal. Las células se lavaron dos veces en una solución salina equilibrada de Hank (HBSS) y se volvieron a suspender en los medios denominados Dulbeco's Minimal Eagle's Media (DMEM), con un contenido de albúmina extraída de suero humano (HSA) de 2,5 mg/ml. Las células Jurkat (1x106 células/ml) se tintaron con 10 ng/ml de BCECF-A, (Molecular Probes, Eugene, OR) en HBSS sin rojo fenol.
Las células se cargaron de BCECF durante 60 minutos en la oscuridad a 37ºC, se lavaron 2 veces, y se volvieron a suspender en una solución DMEM-HSA.
Las monocapas endoteliales confluentes, cultivadas en placas de cultivo de tejido con 96 compartimentos, fueron estimuladas durante 4 h a 37ºC con 0,1 ng/ml (\sim50 U/ml) de IL-1 recombinante (Amgen, Thousand Oaks, CA).
Tras esta incubación, se lavaron dos veces las monocapas con HBSS y se añadió 0,1 ml de solución DMEM-HSA. Las células Jurkat (5 x 105 células) se combinaron en la concentración adecuada del compuesto de prueba y se añadió 0,1 ml de la mezcla del compuesto celular Jurkat a las monocapas de células endoteliales. Con carácter general se probaron concentraciones de compuestos de 100, 20,5 y 1,25 \muM. Estas concentraciones se ajustan a la baja ya que se ha demostrado o se ha considerado que los análogos resultan más potentes. Las placas se pusieron en hielo durante 5 minutos para permitir el asentamiento de las células Jurkat, y las placas se incubaron a 37ºC durante 20 minutos. Tras esta incubación, se lavaron dos veces las monocapas con PBS con un contenido de 1 mM de cloruro de calcio y 1 mM de cloruro de magnesio, y las placas se leyeron utilizando un Millipore Cytofluor 2300 (Marlboro, CA). Se midió la fluorescencia en cada célula en unidades de fluorescencia arbitrarias y se ajustó la adhesión porcentual en ausencia de compuestos al 100%, calculándose el porcentaje de adhesión en presencia de compuesto. Se fijaron igualmente las monocapas en paraformaldehído al 3% y se evaluaron microscópicamente para verificar la adhesión. Este procedimiento es una modificación de un método anteriormente ya publicado (Cardarelli et al., J. Biol. Chem. 269: 18668-18673 (1994)).
Ensayo Jurkat-CS-1
El péptido derivado CS-1, C1HPGEILDVPST, y el péptido de control aleatorizado, CLHGPIELVSDPT, se sintetizaron en un sintetizador Beckman 990 haciendo uso de la metodología t-Boc. Los péptidos se inmovilizaron en placas microtiter utilizando el coadyuvante heterobifuncional ácido 3-(2-piridilditio)-propiónico N-hidroxi-succinimido éster (SPDP) según lo expresado en Pierschbacher et al., Proc. Natl. Acad. USA, 80:1224-1227 (1983). Las placas microtiter se recubrieron con 20 \mug/ml de HSA durante 2 h a temperatura ambiente, se lavaron una vez con PBS y se derivaron con 10 \mug/ml de SPDP durante 1 h. Tras el lavado, se añadieron 100 \mul de una solución péptida a 100 \mug/l con un contenido de cisteína que se había disuelto recientemente, a los depósitos o compartimentos y se dejó toda la noche a 4ºC para que interactuara con las placas. Se retiró de las placas el péptido no ligado, lavándolas con PBS. Para bloquear aquellos puntos no reaccionados, las placas se recubrieron con 100 \mul de una solución BSA de 2,5 mg/ml en PBS durante 1 h a 37ºC. Se mezclaron 100 \mul de células Jurkat (2,5 x 106 células/ml) en DMEM junto con BSA (2,5 mg/l) con una concentración adecuada del compuesto que se iba a testar y toda la mezcla fue añadida a placas recubiertas de péptidos, e incubadas durante 1 h a 37ºC. Por regla general se probaron concentraciones de compuestos de 100, 20, 5 y 1,25 \muM. Estas concentraciones se ajustan a la baja ya que los compuestos se ha demostrado o se ha considerado que resultan más potentes.
Tras esta incubación se lavaron las placas una vez con PBS y se fijaron las células adjuntas con paraformaldehído al 3% en PBS y se tintaron con azul de toluidina al 0,5% en formaldehído al 3,7%. Las células se tintaron durante la noche a una temperatura ambiente y se determinó la densidad óptica en 590 nm de las células tintadas en azul de toluidina utilizando un espectrofotómetro de vía vertical para cuantificar la adición (VMAX Lector Cinético de Microplacas, Molecular Devices, Menlo Park, CA). Este procedimiento es una modificación de un método anteriormente publicado (Cardarelli et al., J. Biol. Chem. 269: 18668-18673 (1994) y Cardarelli et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 83: 2647-2651 (1986)).
Los compuestos preferidos son aquellos que presentan unos bajos valores de IC50 en el ensayo Jurkat EC o en el ensayo Jurkat-CS-1 descritos anteriormente, o que al menos presentan una actividad moderada en ambas pruebas. Todos los compuestos de la presente invención presentan una actividad de menos de 50 \muM en el ensayo Jurkat CS-1 o menos de 500 \muM en el ensayo Jurkat EC. Los compuestos con una actividad en el ensayo Jurkat CS-1 tendrán preferiblemente valores IC50 inferiores a 1 \muM, y es mejor si son menores de 0,5 \muM, siendo lo más conveniente que presenten valores menores o iguales a 0,08 \muM. Los compuestos con una actividad en la prueba Jurkat EC tendrán preferiblemente valores IC50 inferiores a 5 \muM, y mejor si son valores inferiores o iguales a 0,8 \muM.
En el ensayo Jurkat EC, las gamas de valores IC50 (en \muM) se muestran en A, B, y C y en cuanto a lo que se refiere al ensayo Jurkat CS-1, las gamas de valores IC50 se muestran en D, E y F. Estas gamas de valores son las siguientes:
Jurkat EC: 5 \leq A < 10, 0,8 < B < 5, y C \leq 0,8
Jurkat CS-1: 0,5 \leq D < 1, 0,08 < E < 0,5, y F \leq 0,08
En la tabla siguiente se ilustran los valores IC50 de los compuestos seleccionados de la presente invención en el ensayo Jurkat EC y en el ensayo Jurkat CS-1. Las gamas de valores son las descritas anteriormente.
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(Tabla pasa a página siguiente)
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Datos biológicos in vitro
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Razonamiento para el desarrollo de un antagonista a la integrina \alpha4\beta1 para tratar enfermedades inflamatorias.
La VLA-4, un miembro de la familia de la integrina (\beta1 de moléculas de adhesión, se considera que juega un papel muy importante en diversos tipos de procesos patológicos inflamatorios ya que promueve la adhesión leucocitaria a la molécula de adhesión de las células vasculares (VCAM-1) y al dominio CS-1 de la fibronectina en matrices de tejidos extracelulares (Elices MJ, Osborn L, Takada Y, Croase C, Luhowskyj S, Hemler M, Lobb RR. La VCAM-1 en el endotelio activado interactúa con la VLA-4 de integrina leucocitaria en un punto diferente al punto de enlace de la VLA-4-fibronectina. Cell; 60: 577-584, 1990, Humphries MJ, Akiyama SK, Komoriya A, Olden K, Yamada KM. Identificación de un punto alternativamente unido en la fibronectina del plasma humano mediador en la adhesión específica según el tipo celular.
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Claims (16)

1. Un compuesto de la fórmula:
209
en el que
- x se selecciona a partir de un grupo formado porhalógeno, -CF_{3}, NO_{2}, OH, C_{1-3} alcoxi, NH_{2} y C_{1-4} alquil;
- Z^{1} es CH o N;
- Z^{2} es CH o N;
- n es 1, 2 ó 3;
- Y es -OCH_{2}- o -NHC(=O)-;
- R^{x} es OH o C_{1-6} alcoxi;
- R^{a} se selecciona a partir del grupo consistente en
210
211 
\vskip1.000000\baselineskip
212
213
el símbolo - - - - - - representa un enlace simple o doble;
W1 se selecciona a partir de un grupo formado por -CO-, OCH_{2}CO-, -OCH(CH_{3})CO-, -OC(CH_{3})_{2}CO-, -SCH_{2}CO-, -SCH(CH_{3})CO-, SC(CH_{3})_{2}CO-, -CH=CHCO-, -OCH(C_{6}H_{5})CO)- y -SCH(C_{6}H_{5})CO-;
W^{2} es O o S;
q es 5 ó 6;
m es 0 ó 1;
X^{1} es O, S o un enlace;
Y^{1} es C_{1-3} alquileno o -CH(C_{6}H_{5});
R^{c} es un enlace, -CH_{2}- o =CH-;
es un anillo de C_{3-10} cicloalcano o C_{3-10} cicloalqueno, y dicho anillo es sustituido por un grupo de R^{1} y podrá ser además sustituido por 1 a 3 grupos metilo, siempre que Q no sea un anillo de ciclopentano, el cual se sustituye por tres grupos metilo;
R^{1} se selecciona a partir de un grupo formado por -H, -COR^{x},
-CH(OH)CH_{3}, -(C_{2-7} alquenileno)COR^{x}, -NHCO(C_{1-6}alquileno)COR^{x}, =CHCOR^{x}, -NHCO(C_{1-6} alquileno)CO(C_{1-6} alquil),
-NHCO(C_{2-7} alquileno)COR^{x}, -NHCO(C_{1-6} alquileno)CO(C_{1-6} alquil),
-NHCONH(C_{1-6} alquileno)COR^{x}, -C_{2-7} alcanoil, -CHCN,
-(C_{1-6} alquileno)COR^{x},
214
215
216
217
R^{2} se selecciona a partir de un grupo formado por -CH_{2}COR^{x},
NHCO(C_{1-6} alquileno)COR^{x}, -NHCO(C_{2-7} alquenileno)COR^{x},
=NHCO(C_{1-6} alquileno)O(C_{1-6} alquil), -NHCONH(C_{1-6} alquileno)COR^{x},
218
219
220
221
222
R^{3} se selecciona a partir de un grupo formado por -OH, -COR^{x},
-(C_{2-7} alquenileno)COR^{x}, NHCO(C_{1-6} alquileno)COR^{x},
-NHCO(C_{1-6} alquileno)O(C_{1-6} alquil), -NHCO(C_{2-7} alquenileno)COR^{x},
-NHCO(C_{1-6} alquileno)CO(C_{1-6} alquil), -NHCONH(C_{1-6} alquileno)COR^{x}, -C_{2-7} alcanoil,
223
224
225
226
227
R^{4} se selecciona a partir de un grupo formado por -COOH, -CH=CHCOR^{x} y metilenodioxi;
R^{5} es =CHCOR^{x} o =CHCN; y
R^{6} se selecciona a partir de un grupo formado por
228
229
o una sal aceptable desde el punto de vista farmacológico.
2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, que tiene la fórmula:
230
3. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 2, en el que
X es halógeno;
Y es -OCH_{2}- o -NHC(=0);
Z^{1} es CH o N;
Z^{2} es CH o N;
R^{x} es OH o C_{1-6} alcoxi;
R^{a} se selecciona a partir del grupo formado por
231
232
233
234
235
R^{6} se selecciona a partir de un grupo formado por:
236
237
R^{7} es -COR^{x};
R^{B} se selecciona a partir de un grupo formado por hidrógeno, -COR^{x}, -COCH_{3} y -CH(OH)CH_{3};
R^{9} es hidrógeno o metil;
R^{10} es -COR^{x} o -(C_{1-6} alquileno)COR^{x};
R^{11} se selecciona a partir de un grupo formado por -COR^{x}, -(C_{2-7} alquenileno)COR^{x}, -NHCO(C_{1-6} alquileno)COR^{x}, NHCO(C_{1-6} alquileno)O(C_{1-6} alquil), NHCO(C_{2-7} alquenileno)COR^{x}, NHCO(C_{1-6} alquileno)CO(C_{1-6} alquil), -NHCONH(C_{1-6} alquileno)COR^{x}, C_{2-7} alcanoil,
238
239
240
241
242
R^{12} es COR^{x} o -CN;
W^{1} se selecciona a partir del grupo formado por -CO-, -OCH_{2}CO-, -OCH(CH_{3})CO-, -OC(CH_{3})_{2}CO-, -_{3}CH_{2}CO-, -SCH(CH_{3})CO-, -SC(CH_{3})_{2}CO-, -CH=CHCO-, -OCH(C_{6}H_{5})CO)- y -SCH(C_{6}H_{5})CO)-;
W^{2} es O o S;
n es 1 ó 2; y
m es 0 ó 1;
o una sal aceptable desde el punto de vista farmacológico perteneciente al mismo grupo.
4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, en el que Y es -NHC(=O)-.
5. El compuesto de conformidad con la reivindicación 3, en el que la fórmula es la siguiente:
243 
\newpage
6. El compuesto de conformidad con la reivindicación 5, en el que R^{a} se selecciona a partir de un grupo formado por:
244
245
246
7. El compuesto de conformidad con la reivindicación 6, en el que R^{a} se selecciona a partir de un grupo formado por:
247
248
249
R^{6} se selecciona a partir de un grupo formado por:
250
251
R^{11} se selecciona a partir de un grupo formado por -NHCO(C_{2-7} alquenileno)COR^{x}, -NHCO(C_{1-6} alquileno)CO(C_{1-6} alquil),
252
253
254
8. El compuesto de conformidad con la reivindicación 7, en el que R^{a} es
255
y R^{8} es COR^{x} o COCH_{3}.
9. El compuesto de acuerdo la reivindicación 7, en el que R^{a} es
256
y R^{11} se selecciona a partir de un grupo formado por -NHCO(C_{1-6} alquileno)CO(C_{1-6} alquil),
257
258
259
260
10. El compuesto de conformidad con la reivindicación 7, en el que R^{a} es
261
y R^{11} se selecciona a partir de un grupo formado por
262
263
11. El compuesto de conformidad con la reivindicación 7, en el que R^{a} es
264
12. El compuesto de conformidad con la reivindicación 7, en el que R^{a} es
265
y R^{6} se selecciona a partir de un grupo formado por:
266
267
13. (1S-trans)-N-{(3-carboxi-2,2dimetilciclobutil)carbonil)}-4-{(2,6-)amino}-L-fenilalanina,
N-{{(3E)-3-Carboximetileno-2,6,6-trimetil1-1-ciclohexeno-1-y1)carbonil}-4-{(2,6-diclorobenzoil)amino}-L-
fenilalanina,
(1S-trans)-N-{(3-acetil1-2,2-dimetilciclobutil)carbonil)}-4-{(2,6-)amino}-L-fenilalanina,
(1S-cis)-N-{(3-acetil1-2,2-dimetilciclobutil)carbonil)}-4-{(2,6-diclorobenzoil)amino}-L-fenilalanina,
(1S-cis)-N-{(3-carboxi-2,2-dimetilciclobutil)carbonil)}-4-{(2,6-diclorobenzoil)amino}-L-fenilalanina,
N-{{{1-(1;4-Dioxopentil)amino}ciclobutil}carbonil}-4-{(2,6-diclorobenzoil)amino)-L-fenilalanina,
(cis)-N-{{2-{{(5-Carboxi-3-pirazolil)carbonil}-amino)ciclonexil}carbonil}-4-{(2,6 -diclorobenzoil)amino)-L-fenilalanina,
(cis)-N-{{2-{{(5-Nitro-2-furil)carbonil)amino}ciclohexil}-carbonil}-4-{(2,6-diclorobenzoil)amino}-L-fenilalanina,
(cis)-N-{{{{(2-Tetrahidrofuril)carbonil}amino)ciclohexil}-carbonil}-4-{(2,5-diclorobenzoil)amino}-L-fenilalanina,
N-{(1E)-3-carboxi-2,4,4-trimetil-2-ciclohexeno-1-ilideneacetil}-4-{(2,6-diclorobenzoil)amino}-L-fenilalanina,
N-{{(3E)-3-cianometileno-2,6,6-trimetil-1-ciclohexeno-1-il}carbonil}-4-0-{2,6-diclorofenilmetil)-L-tirosina o sal aceptable desde el punto de vista farmacéutico aceptable o los compuestos mencionados anteriormente.
14. Una composición farmacéutica que contenga una cantidad terapéutica efectiva de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13; y un portador aceptable desde el punto de vista farmacéutico.
15. El uso de un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 13 para la preparación de una composición farmacéutica para tratar o evitar condiciones mediadas de adhesión \alpha\beta en el ser humano.
16. El uso de conformidad con la reivindicación 15; en la que la mencionada condición se selecciona a partir de un grupo formado por artritis reumatoide, asma, condiciones alérgicas, rechazo anti-injertos, soriasis, eccemas, dermatitis de contacto y otras enfermedades dermatológicas inflamatorias y condiciones inflamatorias e inmuno-inflamatorias, incluyendo condiciones inflamatorias oftálmicas, enfermedades inflamatorias del intestino grueso, arteroesclerosis y colitis ulcerosa.
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