ES2209987T3 - Inhibidores de serina-proteasas de azacicloalcanona. - Google Patents

Abstract

Un compuesto que tiene la **fórmula** o una de sus sales farmacéuticamente aceptables; en la que Q es (a) 4-(t-butil)fenilo o 4-(t-amil)fenilo; o (b) arilo(C6-C14), ar(C6-C14)alquilo(C1-C4), ar(C6-C14)alquenilo(C2-C4), piridilo, tienilo, indolilo, quinolinilo, benzotienilo o imidazolilo; todos los cuales pueden incluir uno o más sustituyentes opcionales, seleccionados independientemente entre halo, trifluorometilo, hidroxi, amino, nitro, ciano, alcoxi(C1- C3), alquilo(C1-C3), metilendioxi, carboxiamino, alcoxi(C1- C4)carbonilamino, ariloxi(C6-C10)carbonilamino, aralcoxi(C7- C11)carbonilamino, aminocarbonilo, mono- o di-alquil(C1- C4)aminocarbonilo, acetamido, amidino, piridilo, naftilo, pirimidinilo, alquenilo, mono- o di-alquil(C1-C4)amino, o sus combinaciones; X es metileno, carbonilo o sulfonilo; R1 es hidrógeno o alquilo(C1-C3); n es 1, 2 ó 3; m es 1-4; R2 es hidrógeno o alquilo(C1-C3); R3 es hidrógeno o alquilo(C1-C3); y R4, R5 y R6 son independientemente hidrógeno, hidroxi, alquilo(C1-C6), alcoxi(C1-C6), ciano o -CO2Rw, en donde Rw, en cada caso, es preferiblemente uno de los sustituyentes alquilo(C1-C4), cicloalquilo(C4-C7) y bencilo, o Rw es uno de los sustituyentes en los que Rd, Re y Rg son hidrógeno cada uno de ellos, Rf es metilo, y Rh es bencilo o ter-butilo.

Description

Inhibidores de serina-proteasas de azacicloalcanona.

Antecedentes del invento Campo del invento

El presente invento se refiere a nuevos compuestos que actúan como inhibidores de enzimas proteolíticas y en particular a una nueva clase de inhibidores de la producción de trombina a través del factor de inhibición Xa, sus salesfarmacéuticamente aceptables, y sus composiciones farmacéuticamente aceptables.

Técnica relacionada

Las proteasas son enzimas que escinden proteínas en enlaces peptídicos únicos y específicos. Las proteasas pueden clasificarse en cuatro clases genéricas: serina-proteasas, tiol- o cisteinil-proteasas, ácido- o aspartil-proteasas y metaloproteasas (Cuypers y col., J. Biol. Chem., 257:7086 (1982)). Las proteasas son esenciales para diversas actividades biológicas, tales como la digestión, formación y disolución de coágulos de sangre, reproducción e inmunoreacción frente a células y organismos extraños. Una proteolisis aberrante está asociada con varios estados patológicos en el hombre y en otros mamíferos. A las proteasas de los nutrófilos humanos, elastasa y catepsina G, se las ha implicado en la contribución a estados patológicos caracterizados por destrucción tisular. Estos estados patológicos incluyen enfisema, artritis reumatoide, úlceras corneales y nefritis glomerular (Barret, en Enzyme Inhibitors as Drugs, Sandler, ed., University Park Press, Baltimore (1980)). Proteasas adicionales, tales como plasmina, C-1-esterasa, C-3-convertasa, uroquinasa, activador de plasminógeno, acrosina y calicreínas, desempeñan papeles clave en las funciones biológicas normales de mamíferos. En muchos casos, es beneficioso alterar la función de una o más enzimas proteolíticas en el transcurso de un tratamiento terapéutico a un mamífero.

Las serina-proteasas incluyen enzimas tales como elastasa (leucocitos humanos), catepsina G, plasmina, C-1- esterasa, C-3-convertasa, uroquinasa, activador de plasminógeno, acrosina, quimotripsina, tripsina, trombina, factor Xa y calicreínas.

La elastasa de leucocitos humanos es liberada por leucocitos polimorfonucleares en lugares de inflamación y por ello es causa contribuyente de varios estados patológicos. La catepsina G es otra serina-proteasa de neutrófilos humanos. Los compuestos que tienen la capacidad de inhibir la actividad de estas enzimas se espera que presenten un efecto antiinflamatorio útil en el tratamiento de lagota, artritis reumatoide y otras enfermedades inflamatorias, y en el tratamiento del enfisema. La quimotripsina y la tripsina son enzimas digestivas. Los inhibidores de estas enzimas son útiles en el tratamiento de la pancreatitis. Los inhibidores de uroquinasa y del activador de plasminógeno son útiles en el tratamiento de estados patológicos que conllevan un crecimiento celular excesivo, tales como la hipertrofia prostática benigna, el carcinoma prostático y la psoriasis.

La serina-proteasa trombina ocupa un papel fundamental en la hemostasia y en la trombosis, y como proteína multifactorial, induce varios efectos sobre las plaquetas, células endoteliales, células de músculo liso, leucocitos, corazón y neuronas. La activación de la cascada de la coagulación, ya sea a través de la ruta intrínseca (activación por contacto) o de la ruta extrínseca (activación por exposición del plasma a una superficie no endotelial, por un daño a paredes de los vasos o por liberación de un factor tisular), conduce a una serie de eventos bioquímicos que convergen en la trombina. La trombina escinde el fibrinógeno conduciendo finalmente ala formación de un tapón hemostásico (formación del coágulo), activa potentemente a las plaquetas a través de una escisión proteolítica única del receptor de superficie celular de la trombina (Coughlin, Seminars in Hematology 31(4):270-277 (1994)), y automultiplica su propia producción a través de un mecanismo de retroalimentación. Por lo tanto, los inhibidores de la función de la trombina poseen un potencial terapéutico en muchas enfermedades cardiovasculares y no cardiovasculares.

El factor Xa es otra serina-proteasa de la ruta de la coagulación. El factor Xa se asocia con en factor Va y con calcio sobre una membrana fosfolipídica formando con ello un complejo de protrombinasa. Este complejo de protrombinasa convierte luego la protrombina en trombina (Claeson, Blood Coagulation and Fibrinolysis 5:411-436 (1994). Harker, Blood Coagulation and Fibrinolysis 5 (Suppl 1):S47-S58 (1994)). Se piensa que los inhibidores del factor Xa ofrecen una ventaja sobre los agentes que inhiben la trombina de manera directa, ya que los inhibidores directos de la trombina a pesar de ello permiten una generación importante de trombina nueva (Lefkovits y Topol. Circulation 90(3):1522-1536 (1994)); Harker, Blood Coagulation and Fibrinolysis 5 (Suppl 1):S47-S58 (1994)).

Recientemente se han identificado inhibidores directos de la trombina pertenecientes a distintas clases estructurales (Tapparelli y col., Trends in Pharmacological Sciences 14:366-376 (1993); Claeson, Blood Coagulation and Fibrinolysis 5:411-436 (1994)); Lefkovits y Topol, Circulation 90(3):1522-1536 (1994)). Compuestos representativos que actúan inhibiendo el centro activo de la trombina incluyen la \alpha-clorocetona, D-fenilalanil-L-prolil-L-arginil-clorometilcetona (PPACK) (del inglés, "D-Phenylalanyl- L-Prolyl- L-Arginyl Chloromethyl Ketone"), la boro-arginina DUP714, el péptido arginal GYK114766, los péptidos cíclicos cicloteonamidas A y B, la benzamidina NAPAP y la arilsulfonilarginina argatrobán. Los péptidos inhibidores de trombina hirudina e hirulogos de manera adicional alcanzan a los dominios del centro activo y del exocentro de la trombina. El péptido hirugen y aptámeros de DNA monocatenario inhiben la trombina a través de la ocupación del exocentro. Estas clases de agentes antitrombóticos adolecen todavía de una o más de lossiguientes inconvenientes: (1) escasa biodisponibilidad oral debido a la naturalezapeptídica u oligonucleotídica de estos agentes, o al elevado peso molecular o a la naturaleza con carga de estos agentes; (2) excesivas complicaciones hemorrágicas; (3) una escasa selectividad para la trombina frente a otras serina-proteasas (lo que puede producir una hipotensión y depresión respiratoria grave y a veces mortal en modelos animales); (4) toxicidad hepática; o (5) falta de rentabilidad.

Una estrategia alternativa para inhibir la función de la trombina es inhibir el factor Xa. El factor Xa se asocia con el factor Va y con calcio sobre una membrana fosfolipídica formando con ello un complejo de protrombinasa. Este complejo de protrombinasa convierte luego la protrombina en trombina (Claeson, Blood Coagulation and Fibrinolysis 5:411-436 (1994); Harker, Blood Coagulation and Fibrinolysis 5(Suppl. 1):S47-S58 (1994)). Se piensa que los inhibidores del factor Xa ofrecen una ventaja sobre los agentes que inhiben la trombina de manera directa ya que los inhibidores directos de la trombina a pesar de ello permiten una generación importante de trombina nueva (Lefkovits y Topol, Circulation 90(3):1522-1536 (1994); Harker, Blood Coagulation and Fibrinolysis 5(Suppl. 1):S47-S58 (1994)). Realmente, se piensa que la generación continua de trombina nueva, más que la reexposición de trombina preformada unida al coágulo, es en parte la responsable del fenómeno de reoclusión ya que se ha encontrado que marcadores de la generación de trombina aumentan antes y después del tratamiento trombolítico del infarto de miocardio. Por lo tanto, actualmente se piensa que la actividad aumentada de la trombina asociada con una trombolisis es debida al menos en parte a la generación de trombina nueva.

Inhibidores específicos de la proteína factor Xa, tales como la proteína antiestasina de 119 aminoácidos, derivada de sanguijuela, y la derivada de garrapatas, TAP (del inglés, "Tick Anticoagulant Peptide") (péptido anticoagulante de garrapatas), aceleraron la lisis de coágulos y previnieron la reoclusión cuando se administraron como compuestos auxiliares para una trombolisis) (Mellott y col., Circulation Research 70:1152-1160 (1992); Sitko y col., Circulation 85:805-815 (1992)). La Patente de EE.UU. No. 5.385.885, expedida el 31 de Enero de 1995, describe la actividad inhibidora de la proliferación de células de músculo liso tanto de la TAP como de la antiestasina. De manera adicional, se ha demostrado que la TAP y la antiestasina disminuyen la reestenosis experimental. Estos resultados sugieren que el factor Xa puede desempeñar un papel en el proceso de reestenosis a través de sus efectos sobre la formación del trombo o a través de su potencial mitogénico (Ragosta y col., Circulation 89:1262-1271 (1994)). El péptido ecotina es otro inhibidor del factor Xa, selectivo, reversible y de fuerte unión, que exhibe una potente actividad anticoagulante (Seymour y col., Biochemistry 33:3949-3959 (1994); solicitud de PCT publicada, documento WO 94/20535, publicada el 14 de Septiembre de 1994). Ixodidae, argasina y anciloestomatina son otros inhibidores del factor Xa, peptídicos y representativos, aislados en animales que se alimentan de sangre (Markwardt, Thrombosis and Hemostasis 72:477-479 (1994)).

Derivados diamidino no peptídicos, tales como el hidrocloruro del ácido (+)-(2S)-2-[4-[[(3S)-1-acetimidoil-3-pirrolidinil]oxi]fenil]-3-[7-amidino- 2-naftil]propanoico, forma pentahidrato, (DX-9065a), exhiben actividad anticoagulante (Tidwell y col., Thrombosis Research 19:339-349 (1980); Yamazaki y col., Thrombosis and Hemostasis 72:393-395 (1994); Hara y col., Thrombosis and Hemostasis 71:314-319 (1994); Nagahara y col., Journal of Medicinal Chemistry 37:1200-1207 (1994)). Los derivados amidino sintéticos de fenilalanina y cicloheptanona también han mostrado una potente inhibición del factor Xa (Sturzebecher y col., Thrombosis Research 54 :245-252
(1989)).

Se siguen necesitando compuestos no peptídicos que sean inhibidores de proteasas potentes y selectivos, y que posean una mayor biodisponibilidad y menos efectos secundarios que los inhibidores de proteasas actualmente disponibles. Por consiguiente, las nuevas clases de inhibidores de proteasas potentes, caracterizados por una potente capacidad inhibidora y por una baja toxicidad en mamíferos, son agentes terapéuticos potencialmente valiosos para diversos estados, que incluyen el tratamiento de varias enfermedades proteolíticas de mamíferos.

Sumario del invento

El presente invento está dirigido a compuestos nuevos que tienen la Fórmula I (más adelante).

También se proporcionan procedimientos para preparar compuestos de la Fórmula I.

Los nuevos compuestos del presente invento son potentes inhibidores de proteasas, en especial de serina-proteasas similares a la tripsina, tales como la quimotripsina, tripsina, trombina, plasmina y factor Xa. Algunos de los compuestos exhiben una actividad antitrombótica directa a través de la inhibición selectiva del factor Xa, o son intermediarios útiles para la formación de compuestos que tienen actividad antitrombótica. También se proporcionan métodos para inhibir o tratar una proteolisis aberrante en un mamífero y métodos para tratar trombosis, isquemia, apoplejía, reestenosis o inflamación en un mamífero, administrando una cantidad efectiva de un compuesto de la Fórmula I.

El invento incluye una composición para tratar trombosis, isquemia, apoplejía, reestenosis o inflamación, que comprende un compuesto del invento y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Estas composiciones pueden incluir opcionalmente anticoagulantes, agentes antiplaquetarios y agentes trombolíticos. Los compuestos pueden añadirse a la sangre, a preparados hemoderivados o a órganos de mamíferos con el fin de efectuar las inhibiciones deseadas.

Descripción detallada de las realizaciones preferidas

Un primer aspecto del invento lo constituyen los nuevos compuestos de la Fórmula I:

1

o sus sales farmacéuticamente aceptables; en la que

Q es un arilo(C_{6}-C_{14}), ar(C_{6}-C_{14})alquilo(C_{1}-C_{4}), ar(C_{6}- C_{14})alquenilo(C_{2}-C_{4}), piridilo, tienilo, indolilo, quinolinilo, benzotienilo o imidazolilo; todos los cuales pueden incluir uno o más sustituyentes opcionales, seleccionados independientemente entre halo, trifluorometilo, hidroxi, amino, nitro, ciano, alcoxi(C_{1}-C_{3}), alquilo(C_{1}-C_{3}), metilendioxi, carboxiamino, alcoxi(C_{1}-C_{4})carbonilamino, ariloxi(C_{6}-C_{10})carbonilamino, aralcoxi(C_{7}-C_{11})carbonilamino, aminocarbonilo, mono- o di-alquil(C_{1}-C_{4})aminocarbonilo, acetamido, amidino, piridilo, naftilo, pirimidinilo, alquenilo, mono- o di-alquil(C_{1}-C_{4})amino, o sus combinaciones;

X es metileno, carbonilo o sulfonilo;

R^{1} es hidrógeno o alquilo(C_{1}-C_{3});

n es 1, 2 ó 3;

m es 1-4, preferiblemente 1 ó 2;

R^{2} es hidrógeno o alquilo(C_{1}-C_{3});

R^{3} es hidrógeno o alquilo(C_{1}-C_{3}); y

R^{4}, R^{5} y R^{6} son independientemente hidrógeno, hidroxi, alquilo(C_{1}-C_{6}), alcoxi(C_{1}-C_{6}), ciano o -CO_{2}R^{w}, en donde R^{w}, en cada caso, es preferiblemente uno de los sustituyentes alquilo(C_{1}-C_{4}), cicloalquilo(C_{4}-C_{7}), bencilo, o R^{w} es uno de los sustituyentes

2

en los que R^{d}, R^{e} y R^{g} son hidrógeno cada uno de ellos, R^{f} es metilo, y R^{h} es bencilo o ter-butilo.

Los valores preferidos de Q incluyen un arilo tal como fenilo, bifenilo o naftilo; o un aralquilo tal como bencilo, fenetilo o naftilmetilo; o tienilo. Cualquiera de estos grupos puede estar opcionalmente sustituido según se ha definido anteriormente.

Los valores adecuados incluyen naft-1-ilo, naft-2-ilo, 5-dimetilaminonaftilo, 6-cloronaft-2-ilo, 6-bromonaft-2-ilo, bencilo, 2-nitrobencilo, fenilo, 2-metilfenilo, 3-metilfenilo, 4-(n-propil)fenilo, 4-(t-butil)fenilo, 4-(t-amil)fenilo, 4-metoxifenilo, 4-yodofenilo, 4-fluorofenilo, 4-clorofenilo, 3,4-diclorofenilo, 4-nitrofenilo, 4-metilfenilo, 4-etilfenilo, 4-etenilfenilo, 3,4-dimetoxifenilo y 2-feniletenilo.

Valores adecuados adicionales incluyen 4-(2-metilfenil)fenilo, 4-(2-metoxifenil)fenilo, 4-(3-clorofenil)fenilo, 4-(3-fluorofenil)fenilo, 4-(3-metoxifenil)fenilo, 4-(4-fluorofenil)fenilo, 4-(4-metilfenil)fenilo, 4-(4-metoxifenil)fenilo, 4-(2,4-difluorofenil)fenilo, 4-(3,4-diclorofenil)fenilo, 4-(3,4-dimetoxifenil)fenilo, 4-naft-2-ilfenilo, 4-pirid-4-ilfenilo,4-pirid-2-ilfenilo, bifenil{(4-fenil)fenilo}, 4-(4-clorofenil)fenilo, 4-pirimidin-5-ilfenilo y 5-(pirid-5-il)tien-2-ilo.

Los valores preferidos de n son 1 y 2.

Los valores preferidos de X son SO_{2} o C(O), más preferiblemente SO_{2}.

Los valores preferidos de m incluyen 1 ó 2, más preferiblemente 1.

Los valores adecuados para R^{1}, R^{2} y R^{3} incluyen hidrógeno, metilo, etilo, n-propilo e isopropilo. Más preferiblemente, cada uno de R^{1}, R^{2} y R^{3} es hidrógeno.

Los valores adecuados de R^{4}, R^{5} y R^{6} incluyen hidrógeno, metilo, etilo, propilo, n-butilo, hidroxi, metoxi, etoxi, ciano, -CO_{2}CH_{3}, -CO_{2}CH_{2}CH_{3} y -CO_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{3}. En las realizaciones más preferidas, R^{4}, R^{5} y R^{6} son hidrógeno cada uno de ellos.

Un subgénero preferido de compuestos del presente invento son aquellos compuestos de la fórmula I en la que:

Q es fenilo, bifenililo, naftilbencilo, fenetilo, naftilmetilo, o tienilo, más preferiblemente fenilo o bifenilo, estando cualquiera de estos grupos opcionalmente sustituido con de uno a tres sustituyentes adicionales, seleccionados independientemente entre halo, trifluorometilo, hidroxi, amino, nitro, ciano, alcoxi(C_{1}-C_{3}, alquilo(C_{1}-C_{3}), metilendioxi, carboxiamino, alcoxi(C_{1}-C_{4})carbonilamino, ariloxi(C_{6}-C_{10})carbonilamino, aralcoxi(C_{7}-C_{11})carbonilamino, aminocarbonilo, mono- o di-alquil(C_{1}-C_{4})aminocarbonilo, acetamido, amidino, piridilo, naftilo, pirimidinilo, alquenilo, mono- o di-alquil(C_{1}-C_{4})amino;

X es carbonilo o sulfonilo, más preferiblemente sulfonilo;

n es 1 ó 2;

m es 1 ó 2, más preferiblemente 1;

R^{1}, R^{2} y R^{3} son hidrógeno; y

R^{4}, R^{5} y R^{6} son independientemente hidrógeno, hidroxi, alquilo(C_{1}-C_{6}), alcoxi(C_{1}-C_{6}), ciano o -CO_{2}R^{w}, en donde R^{w}, en cada caso, es preferiblemente uno de los sustituyentes alquilo(C_{1}-C_{4}), cicloalquilo(C_{4}-C_{7}), bencilo, o R^{w} es uno de los sustituyentes

3

en los que R^{d}, R^{e} y R^{g} son hidrógeno cada uno de ellos, R^{f} es metilo y R^{h} es bencilo o ter-butilo.

En los Ejemplos se describen compuestos incluidos en el alcance del invento.

Debe entenderse también que el presente invento se considera que incluye estereoisómeros así como isómeros ópticos, p. ej., mezclas de enantiómeros así como los enantiómeros y diastómeros individuales, que se originan como consecuencia de la asimetría estructural de los compuestos seleccionados de la presente serie.

Los compuestos de la Fórmula I también pueden estar solvatados, especialmente, hidratados. La hidratación puede tener lugar durante la fabricación de los compuestos o de las composiciones que comprenden los compuestos, o la hidratación puede tener lugar a lo largo del tiempo debido a la naturaleza higroscópica de los compuestos.

Algunos compuestos incluidos en el alcance de la Fórmula I son derivados denominados profármacos. La expresión "profármaco" indica un derivado de un fármaco conocido de acción directa, derivado que posee características de suministro y un valor terapéutico aumentados comparados con los del fármaco, y que se transforma en el fármaco activo mediante un procedimiento enzimático o químico. Los profármacos útiles son aquellos en los que R^{4}, R^{5} y/o R^{6} son -CO_{2}R^{w}, en donde R^{w} se ha definido anteriormente.

Cuando cualquiera de las variables se presenta más de una vez en cualquiera de los constituyentes o en la Fórmula I, su definición en cada una de las presentaciones es independiente de su definición cualquiera de las otras presentaciones. Asimismo, las combinaciones de sustituyentes y/o de variables son permisibles solamente si esas combinaciones producen compuestos estables.

El término "alquilo" según aquí se emplea ya sea solo o como parte de otro grupo, se refiere a radicales tanto de cadena normal como de cadena ramificada, de 10 carbonos como máximo, salvo que la longitud de la cadena esté además limitada, tales como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, t-butilo, isobutilo, pentilo, hexilo, isohexilo, heptilo, 4,4-dimetilpentilo, octilo, 2,2,4-trimetilpentilo, nonilo o decilo.

El término "alquenilo" se usa aquí para indicar un radical de cadena lineal o ramificada, de 2 a 10 átomos de carbono, salvo que la longitud de la cadena esté además limitada, que incluyen, pero no se limitan a ellos, etenilo, 1-propenilo, 2-propenilo, 2-metil-1-propenilo, 1-butenilo, 2-butenilo y radicales similares. Preferiblemente, la cadena de alquenilo tiene una longitud de 2 a 8 átomos de carbono, más preferiblemente tiene una longitud de 2 a 4 átomos de carbono.

El término "alquinilo" se usa aquí para indicar un radical, de cadena lineal o ramificada, de 2 a 10 átomos de carbono, salvo que la longitud de la cadena esté además limitada, en el que existe al menos un triple enlace entre dos de los átomos de carbono de la cadena, que incluyen, pero no se limitan a ellos, acetileno, 1-propileno, 2-propileno y radicales similares. Preferiblemente, la cadena de alquinilo tiene una longitud de 2 a 8 átomos de carbono, más preferible tiene una longitud de 2 a 4 átomos de carbono.

En todos los casos aquí contemplados en los que existe un resto de alquenilo o alquinilo como grupo sustituyente, el enlace insaturado, es decir, el enlace vinileno o acetileno preferiblemente no está unido directamente a un resto de nitrógeno, oxígeno o azufre.

El término "alcoxi" se refiere a cualquiera de los anteriores grupos alquilo enlazados a un átomo de oxígeno.

El término "arilo" según aquí se utiliza ya sea solo o como parte de otro grupo, se refiere a grupos aromáticos monocíclicos o bicíclicos, que contienen de 6 a 12 carbonos en la parte correspondiente al anillo, preferiblemente de 6 a 10 carbonos en la parte correspondiente al anillo, tales como fenilo, bifenilo, naftilo o tetrahidronaftilo.

El término "aralquilo" o "arilalquilo" según aquí se utiliza ya sea solo o como parte de otro grupo, se refiere a grupos alquilo(C_{1}-C_{6}) como los anteriormente comentados, que llevan un sustituyente arilo, tales como bencilo, feniletilo o 2-naftilmetilo.

El término "heteroarilo" según aquí se utiliza, se refiere a grupos que tienen de 5 a 14 átomos en el anillo; 6, 10 ó 14 electrones \pi compartidos en un ordenamiento cíclico; y que contienen átomos de carbono y 1, 2 ó 3 heteroátomos de oxígeno, nitrógeno o azufre (siendo ejemplos de grupos heteroarilo los grupos: tienilo, benzo[b]tienilo, nafto[2,3-b]tienilo, tiantrenilo, furilo, piranilo, isobenzofuranilo, benzoxazolilo, cromenilo, xantenilo, fenoxatiinilo, 2H-pirrolilo, pirrolilo, imidazolilo, pirazolilo, piridilo, piracinilo, pirimidinilo, piridacinilo, indolicinilo, isoindolilo, 3H-indolilo, indolilo, indazolilo, purinilo, 4H-quinolicinilo, isoquinolilo, quinolilo, ftalacinilo, naftiridinilo, quinazolinilo, cinolinilo, pteridinilo, 4\alphaH-carbazolilo, carbazolilo, \beta-carbolinilo, fenantridinilo, acridinilo, perimidinilo, fenantrolinilo, fenacinilo, isotiazolilo, fenotiacinilo, isoxazolilo, furazanilo y fenoxacinilo).

El término "cicloalquilo" según aquí se utiliza ya sea solo o como parte de otro grupo, se refiere a grupos cicloalquilo que contienen de 3 a 9 átomos de carbono. Ejemplos típicos son los grupos ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, ciclooctilo y ciclonolilo.

El término "halógeno" o "halo" según aquí se utiliza ya sea solo o como parte de otro grupo, se refiere al cloro, bromo, flúor o yodo, siendo preferido el cloro.

El término "monoalquiamina" según aquí se utiliza ya sea solo o como parte de otro grupo, se refiere a un grupo amino que está sustituido con un único grupo alquilo que tiene de 1 a 6 átomos de carbono.

El término "dialquiamina" según aquí se utiliza ya sea solo o como parte de otro grupo, se refiere a un grupo amino que está sustituido con dos grupos alquilo, que tienen cada uno de ellos de 1 a 6 átomos de carbono.

El término "hidroxialquilo" según aquí se utiliza, se refiere a cualquiera de los anteriores grupos alquilo sustituidos con uno o más restos hidroxilo.

El término "carboxialquilo" según aquí se utiliza, se refiere a cualquiera de los anteriores grupos alquilo sustituidos con uno o más restos de ácido carboxílico.

El término "heteroátomo" se utiliza aquí para indicar un átomo de oxígeno ("O"), un átomo de azufre ("S") o un átomo de nitrógeno ("N"). Se reconocerá que cuando el heteroátomo es nitrógeno, puede formar un resto NR^{a}R^{b}, en el que R^{a} y R^{b} son, independientemente uno de otro, hidrógeno o un alquilo(C_{1}-C_{8}), o junto con el nitrógeno al que están unidos forman un anillo saturado o insaturado de 5, 6 ó 7 miembros.

La abreviatura "t-Am" aquí utilizada, se refiere a un resto amilo activo que tiene la estructura CH_{3}CH_{2}(CH_{3})_{2}C-.

Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la Fórmula I (en forma de productos solubles o dispersables en agua o aceite) incluyen las sales no tóxicas convencionales o las sales de amonio cuaternarias que se forman, p. ej., a partir de ácidos o bases inorgánicos u orgánicos. Ejemplos de esas sales de adición de ácido incluyen acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, bencenosulfonato, bisulfato, butirato, citrato, canforato, canforsulfonato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, fumarato, glucoheptanoato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, hidrocloruro, hidrobromuro, hidroyoduro, 2-hidroxietano-sulfonato, lactato, maleato, metanosulfonato, 2-naftalén-sulfonato, nicotinato, nitrato, oxalato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, sulfato, tartrato, tiocianato, tosilato y undecanoato. Las sales de bases incluyen sales de amonio, sales de metales alcalinos tales como sales de sodio y potasio, sales de metales alcalinotérreos tales como sales de calcio y magnesio, sales con bases orgánicas tales como las sales de diciclohexilamina, N-metil-D-glucamina y sales con aminoácidos tales como arginina, lisina, etc. Asimismo, los grupos básicos que contienen nitrógeno pueden formar sales cuaternarias con agentes tales como haluros de alquilo inferior tales como cloruros, bromuros y yoduros de metilo, etilo, propilo y butilo; sulfatos de dialquilo tales como sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo y diamilo; haluros de cadena larga tales como cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, miristilo y estearilo, haluros de aralquilo tales como los bromuros de bencilo y fenetilo y otros. Los ácidos preferidos para formar sales de adición de ácidos incluyen HCl, ácido acético, ácido trifluoroacético y ácido fumárico.

Un segundo aspecto del presente invento está dirigido al uso de los presentes compuestos en la fabricación de compuestos para el tratamiento de trombosis, isquemia, apoplejía, reestenosis o inflamación, que comprende administrar a un mamífero que necesita dicho tratamiento una cantidad terapéutica y profilácticamente efectiva de un compuesto de la Fórmula I.

Los compuestos del presente invento representan una nueva clase de potentes inhibidores de metalo-proteasas, ácido-proteasas, tiol-proteasas y serina-proteasas. Ejemplos de las serina-proteasas inhibidas por compuestos que están dentro del alcance del invento incluyen la elastasa de leucocitos neutrófilos, enzima proteolítica implicada en la patogénesis del enfisema; quimotripsina y tripsina, enzimas digestivas; elastasa pancreática y catepsina G, una proteasa similar a la quimotripsina también asociada con los leucocitos; trombina y factor Xa, enzimas proteolíticas de la ruta de coagulación de la sangre. La inhibición de la termolisina, una metaloproteasa, y de la pepsina, una ácido-proteasa, son usos también contemplados de compuestos del presente invento. Los compuestos del presente invento se emplean preferiblemente para inhibir proteasas similares a la tripsina.

Los compuestos del presente invento se distinguen por su capacidad para inhibir de manera preferencial al factor Xa en comparación con la trombina y/o plasmina. Como inhibidores del factor Xa, los compuestos del presente invento inhiben la producción de trombina. Por lo tanto, los compuestos son útiles para el tratamiento o profilaxis de estados caracterizados por una trombosis venosa o arterial anormal, que implican la producción o la acción de la trombina. Estos estados incluyen, pero sin limitarse a ellos: trombosis venosa profunda, coagulopatía intravascular diseminada que ocurre durante un choque septicémico, infecciones víricas y cáncer; infarto de miocardio; apoplejía; bypass aortocoronario; artroplastia de cadera; y formación de trombos resultante de una terapia trombolítica o de una angioplastia coronaria transluminal percutánea (PCTA). Los compuestos del presente invento también pueden utilizarse como anticoagulante en circuitos extracorpóreos de circulación sanguínea. En virtud de los efectos del factor Xa y de la trombina sobre una multitud de tipos celulares, tales como células de músculo liso, células endoteliales y neutrófilos, los compuestos del presente invento encuentran un uso adicional en el tratamiento o profilaxis del síndrome disneico agudo del adulto; respuestas inflamatorias, tales como edema; daño ocasionado por reperfusión; ateroesclerosis; y reestenosis posterior a un daño tal como una angioplastia con balón, aterectomía y colocación de una endoprótesis arterial.

Los compuestos del presente invento pueden ser útiles en el tratamiento de neoplasias y metástasis, así como en el de enfermedades neurodegenerativas, tales como la enfermedad de Alzheimer y la enfermedad de Parkinson.

Los compuestos del presente invento pueden utilizarse en combinación con agentes trombolíticos, tales como el activador del plasminógeno tisular, estreptoquinasa y uroquinasa. De manera adicional, los compuestos del presente invento pueden usarse en combinación con otros fármacos antitrombóticos o anticoagulantes tales como, sin limitarse a ellos, antagonistas de fibrinógeno y antagonistas de receptores de tromboxanos.

Los compuestos del presente invento que se distinguen por su capacidad para inhibir a la trombina pueden utilizarse para diversos fines terapéuticos. Como inhibidores de la trombina, los compuestos del presente invento inhiben la producción de trombina. Por lo tanto, estos compuestos son útiles para el tratamiento o profilaxis de estados caracterizados por una trombosis venosa o arterial anormal, en los que está implicada la producción o la acción de la trombina. Estos estados incluyen, pero no se limitan a ellos, la trombosis venosa profunda; coagulopatía intravascular diseminada que tiene lugar durante un choque septicémico, infecciones víricas y cáncer; infarto de miocardio; apoplejía; bypass aortocoronario; formación de fibrina en el ojo; artroplastia de cadera; y formación de trombos resultante o de una terapia trombolítica o de una angioplastia coronaria transluminal percutánea (PCTA). Otros usos incluyen el uso de dichos inhibidores de trombina como anticoagulantes ya sea incluidos en, o unidos físicamente a, materiales usados en la fabricación de dispositivos usados en la recogida de sangre, circulación de la sangre, y almacenamiento de sangre, tales como catéteres, máquinas para diálisis de sangre, jeringas y tubos para la recogida de sangre, y vías vasculares. Los compuestos del presente invento también pueden utilizarse como anticoagulante en circuitos extracorpóreos de circulación sanguínea.

En virtud de los efectos de la trombina sobre una multitud de tipos celulares, tales como células de músculo liso, células endoteliales y neutrófilos, los compuestos del presente invento encuentran un uso adicional en el tratamiento o profilaxis del síndrome disneico agudo del adulto; respuestas inflamatorias; cicatrización de heridas; daño ocasionado por reperfusión; ateroesclerosis; y reestenosis posterior a un daño tal como una angioplastia con balón, aterectomía y colocación de una endoprótesis arterial.

Los compuestos del presente invento pueden ser útiles en el tratamiento de neoplasias y metástasis, así como de enfermedades neurodegenerativas, tales como la enfermedad de Alzheimer y la enfermedad de Parkinson.

Cuando se utilizan como inhibidores del factor Xa, los compuestos del presente invento pueden administrarse en una cantidad efectiva dentro del intervalo de dosificación desde aproximadamente 0,1 mg/kg hasta aproximadamente 500 mg/kg, preferiblemente entre de 0,1 a 10 mg/kg de peso corporal, o en una pauta posológica de una dosis única o de 2-4 dosis repartidas en el día.

Las composiciones farmacéuticas del invento pueden administrase a cualquier animal que sea capaz de experimentar los efectos beneficiosos de los compuestos del invento. Los primeros entre esos animales son los seres humanos, aunque el invento no tiene intención de estar limitado a ellos.

Las composiciones farmacéuticas del presente invento pueden administrase por cualquier medio que consiga el propósito buscado. Por ejemplo, la administración puede ser por vía parenteral, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraperitonal, transdérmica, bucal u ocular. Como alternativa, o de manera concurrente, la administración puede ser por vía oral. La dosificación administrada será dependiente de la edad, salud y peso del receptor, de la clase de tratamiento concurrente, si existe, de la frecuencia del tratamiento y de la naturaleza del efecto deseado.

Además de los compuestos farmacológicamente activos, las nuevas preparaciones farmacéuticas pueden contener vehículos farmacéuticamente aceptables, que comprenden excipientes y agentes auxiliares que facilitan el procesamiento de los compuestos activos en forma de preparaciones que pueden ser utilizadas farmacéuticamente.

Las preparaciones farmacéuticas del presente invento se fabrican de una manera que es en sí conocida, por ejemplo, por medio de procedimientos convencionales de mezcla, granulación, fabricación de grageas, disolución o liofilización. Así, las preparaciones farmacéuticas para uso oral pueden obtenerse mezclando los principios activos con excipientes sólidos, triturando opcionalmente la mezcla resultante y procesando la mezcla de gránulos, después de añadir agentes auxiliares adecuados, si conviene o se necesita, para obtener comprimidos o los núcleos de las grageas.

Los excipientes adecuados son, en particular, agentes de relleno tales como sacáridos; por ejemplo, lactosa o sacarosa, manitol o sorbitol, preparaciones de celulosa y/o fosfatos cálcicos, por ejemplo, fosfato tricálcico, hidrógeno fosfato cálcico, así como aglomerantes, tales como pasta de almidón, usando por ejemplo, almidón de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz, almidón de patata, gelatina, tragacanto, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetil-celulosa sódica y/o poli(vinilpirrolidona). Si se desea, pueden añadirse agentes de desintegración, tales como los almidones anteriormente mencionados y también carboximetil-almidón, poli(vinilpirrolidona) reticulada, agar o ácido algínico o una de sus sales, tales como alginato sódico. Los agentes auxiliares son, sobre todo los agentes reguladores de flujo y los lubricantes, por ejemplo, sílice, talco, ácido esteárico o sus sales, tales como estearato de magnesio o estearato de calcio, y/o polietilenglicol. Los núcleos de las grageas se proporcionan con recubrimientos adecuados que, si se desea, son resistentes a los jugos gástricos. Para este fin, pueden utilizarse disoluciones concentradas de sacáridos que pueden contener opcionalmente goma arábiga, talco, poli(vinilpirrolidona), polietilenglicol, y/o dióxido de titanio, disoluciones de laca y disolventes orgánicos adecuados o mezclas de disolventes. Con el fin de producir recubrimientos resistentes a los jugos gástricos, se utilizan disoluciones de preparaciones adecuadas de celulosa, tales como ftalato de acetilcelulosa o ftalato de hidroxipropilmetilcelulosa. A los comprimidos o a los recubrimientos de las grageas pueden añadirse materiales de coloración o pigmentos, por ejemplo para su identificación o con el fin de distinguir las mezclas de las dosis de los principios activos.

Otras preparaciones farmacéuticas que pueden utilizarse por vía oral incluyen cápsulas hechas de gelatina, formadas por dos partes que se cierran encajando una sobre otra, así como cápsulas blandas, cerradas, fabricadas con gelatina y un plastificante, tal como glicerol o sorbitol. Las cápsulas formadas por dos partes que se cierran encajando una sobre otra pueden contener los principios activos en forma de gránulos que pueden ir mezclados con agentes de relleno tales como lactosa, con aglomerantes tales como almidones, y/o con lubricantes tales como talco o estearato de magnesio, y opcionalmente, con estabilizantes. En las cápsulas blandas, los principios activos se encuentran preferiblemente disueltos o suspendidos en líquidos apropiados, tales como, aceites grasos o parafina líquida. Además, pueden añadirse estabilizantes.

Las formulaciones adecuadas para administración parenteral incluyen disoluciones acuosas de los principios activos en una forma hidrosoluble, por ejemplo, sales hidrosolubles, disoluciones alcalinas y complejos de inclusión de ciclodextrinas. Las sales alcalinas especialmente preferidas son sales de amonio preparadas, por ejemplo, con Tris, hidróxido de colina, Bis-Tris propano, N-metil-glucamina o arginina. Una o más ciclodextrinas modificadas o no modificadas pueden emplearse para estabilizar y aumentar la solubilidad en agua de los compuestos del presente invento. Ciclodextrinas útiles para este propósito se encuentran descritas en las Patentes de EE.UU. Nos. 4.727.064, 4.764.604 y 5.024.998.

Además, pueden administrarse suspensiones de los principios activos en forma de suspensiones oleosas apropiadas para inyección. Los disolventes o vehículos lipófilos adecuados incluyen aceites grasos, por ejemplo, aceite de sésamo o ésteres sintéticos de ácidos grasos, por ejemplo, oleato de etilo o triglicéridos o polietilenglicol-400 (estos compuestos son solubles en PEG-400). Las suspensiones acuosas para inyección pueden contener sustancias que aumentan la viscosidad de la suspensión, por ejemplo, carboximetilcelulosa sódica, sorbitol y/o dextrano. Opcionalmente, la suspensión puede también contener estabilizantes.

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El presente invento está también dirigido a métodos para elaborar compuestos de la Fórmula I, que comprenden:

acoplar o condensar un compuesto de la Fórmula II:

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o una de sus sales, en la que R^{4}, R^{5} y R^{6} son como aquí se han definido o están opcionalmente protegidos, y m es como aquí se ha definido,

con un compuesto de la Fórmula III:

5

en la que R^{51} es H o Q-H, siendo Q, X, R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{4}, R^{5} y R^{6} como aquí se han definido. En general, los grupos R^{4}, R^{5} y R^{6} pueden ser o hidrógeno o un grupo protector amino.

Los compuestos del presente invento pueden sintetizarse conforme a los siguientes esquemas.

Los reactivos y materiales de partida utilizados en los siguientes métodos se encuentran comercialmente disponibles procedentes de vendedores de productos químicos, que incluyen Aldrich, Advanced ChemTech, Bachem, Sigma, Fluka, y vendedores similares. Durante la síntesis de estos compuestos, los grupos funcionales se protegen con grupos bloqueadores para prevenir reacciones cruzadas. Ejemplos de grupos bloqueadores adecuados y sus usos se encuentran descritos en Green, T.W. y Wuts, P.G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, segunda edición, John Wiley and Sons, Nueva York, NY (1991). Los grupos bloqueadores en este documento también se denominan grupos
protectores.

El Esquema 1 detalla las etapas de síntesis para producir materiales de partida de aminoalcoxiguanidina de la Fórmula II. La variable "m" en estos esquemas tiene un valor de 1 a 8, preferiblemente 1 ó 2. Las etapas de síntesis en este esquema se describen con más detalle y se ilustran en los Ejemplos 1 y 2 de la solicitud de PCT publicada y cedida comúnmente, documento WO99/26926, publicada el 3 de Junio de 1.999.

Esquema I

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La preparación de los materiales de partida de la Fórmula III \gamma-lactama y \delta-lactama que llevan un grupo carboximetilo en la posición 1 y un grupo amino que posee un grupo protector P^{b} adecuado en la posición 3, han sido descritos previamente por Freidinger y col., J. Org. Chem. 47:104-109 (1982). El anillo de lactama análogo de 7 miembros también ha sido descrito (Semple, J. E. y col., J. Med. Chem. 39:4531-4536 (1966). Como alternativa, la \delta-lactama puede sintetizarse mediante ciclación de una ornitina que lleva un grupo protector adecuado en el grupo \alpha-amino, usando un reactivo de acoplamiento con amida tal como el hidrocloruro de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimida. El grupo carboximetilo puede luego ser instalado mediante alquilación con un éster del ácido \alpha-bromoacético usando una base tal como la bis(trimetilsilil)amiduro de litio en un disolvente tal como tetrahidrofurano o N,N-dimetilformamida, seguido de saponificación con hidróxido metanólico acuoso. El análogo \gamma-lactama también puede sintetizarse mediante una transposición modificada del tipo de la de Curtius en el grupo \gamma-carboxilo de un ácido glutámico que lleva grupos protectores adecuados en los grupos \alpha-amino y \alpha-carboxi similares a los descritos por Scholtz y Bartlett, Synthesis:542-544 (1989). La ciclación espontánea se efectúa luego mediante la retirada del grupo protector \gamma-amino resultante y la conversión en la base libre (si fuera necesario). La introducción de la cadena lateral de carboximetilo puede luego llevarse a cabo de la manera descrita previamente.

Esquema 2

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El esquema 2 ilustra el acoplamiento de la síntesis de compuestos del invento, que comienza con el acoplamiento de los materiales de partida de las Fórmula II y III. Los materiales de partida pueden acoplarse utilizando agentes de acoplamiento estándar tales como N,N-diciclohexilcarbodiimida y otros agentes muy conocidos descritos en The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology. Gras. E. y col., eds. Academic Press, Nueva York, N.Y. (1979-1987), Volúmenes del 1 al 8. El grupo protector P^{b} puede después retirarse utilizando las condiciones descritas en Green, T.W. y Wuts, P.G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, segunda edición, John Wiley and Sons, Nueva York, NY (1991). La amina resultante puede luego acilarse con un cloruro de sulfonilo en un disolvente inerte, tal como cloruro de metileno, preferiblemente en presencia de una base orgánica tal como piridina, trietilamina, y bases orgánicas similares. La retirada de los grupos protectores R^{5} y R^{6} puede realizarse usando los métodos descritos en Green, T.W. y Wuts, P.G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, segunda edición, John Wiley and Sons, Nueva York, N.Y. (1991) para obtener el compuesto final.

Los siguientes ejemplos son ilustrativos pero no limitativos, del método y de las composiciones del presente invento. Otras modificaciones y adaptaciones adecuadas de las diversas condiciones y parámetros normalmente encontrados y que son obvios para los expertos en la técnica, están dentro del espíritu y alcance del invento.

Ejemplo 1 2-{(3S)-3-[(2-Naftilsulfonil)amino]-2-oxopiperidil}-N-[2-(amidinoaminooxi)etil]acetamida

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1. N-((3S)-2-Oxo(3-piperidil)(fenilmetoxi)carboxamida

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Se añadió de una sola vez hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (7,2 g, 37,6 mmoles) a una disolución de N^{\alpha}-benciloxicarbonil-L-ornitina (10 g, 37,6 mmoles), 4-metilmorfolina (4,1 ml, 37,6 mmoles) y 1-hidroxibenzotriazol (5,1 g, 37,6 mmoles) en acetonitrilo (200 ml). Después de agitar durante la noche, el sólido blanco no disuelto se separó por filtración y se desechó. El filtrado se concentró al vacío y el residuo se disolvió en cloruro de metileno y se lavó por orden con HCl acuoso diluido y con NaHCO_{3} acuoso diluido. La capa orgánica separada se secó (MgSO_{4}), se filtró y se concentró al vacío para obtener un sólido blanco (7,0 g, 75%). ^{1}H-NMR (300 MHz, CDCl_{3}), \delta 7,34(m, 5H), 6,20(bs, 1H), 5,76(bs, 1H), 5,11(s, 2H), 4,10(m, 1H), 3,32(m, 1H), 2,50(m, 1H), 1,92(m, 2H), 1,61(m, 1H).

2. Ácido 2-{(3S)-2-oxo-3-[(fenilmetoxi)carbonilamino]piperidil}acético

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Bis(Trimetilsilil)amiduro de litio (20,8 ml, 1,0 M en tetrahidrofurano) se vertió gota a gota en una disolución del producto resultante del experimento anterior (4,7 g, 18,9 mmoles) en tetrahidrofurano (20 ml). Completada la adición, en la mezcla se vertió gota a gota bromoacetato de etilo (15,8 g, 94,5 mmoles). Después de agitar durante 30 minutos, se añadió etilendiamina (10 ml) y la agitación se continuó durante 30 minutos adicionales. La mezcla se concentró al vacío y el residuo se disolvió en cloruro de metileno y se lavó con HCl acuoso diluido. La capa orgánica separada se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró al vacío. El producto en crudo se disolvió en metanol (25 ml), seguido de la adición de NaOH 1,0 M (50 ml). Después de agitar durante 30 minutos, el metanol se evaporó al vacío y la disolución acuosa básica resultante se extrajo con cloruro de metileno (3 x 100 ml). La capa acuosa se acidificó luego con HCl 1,0 N hasta alcanzar un pH de 1 y se extrajo con cloruro de metileno. Los extractos orgánicos se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron al vacío para obtener el compuesto del epígrafe (5,7 g, 98%). No fue necesaria otra purificación posterior.

3. 3-{[2-(2-{(3S)-2-Oxo-3-[(fenilmetoxi)carbonilamino]piperidil}acetilamino)etoxi]-amino}-2-aza-3-[(ter-butoxi)carbonilamino]prop-2-enoato de ter-butilo

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Hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitris (dimetilamino)fosfonio (5,25 g, 12 mmoles) se añadió de una sola vez a una disolución del producto resultante del experimento anterior (3,0, 9,9 mmoles), 3-[(2-aminoetoxi)amino]-2-aza-3-[(ter-butoxi)carbonilamino]prop-2-enoato de ter-butilo (3,5 g, 9,9 mmoles) y N,N-diisopropiletilamina (3,45 ml, 19,8 mmoles) en N,N-dimetilformamida (40 ml). Después de ser agitada durante la noche, la mezcla se diluyó con cloruro de metileno y se lavó por orden con HCl acuoso diluido y con NaHCO_{3} acuoso diluido. La capa orgánica separada se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró al vacío para obtener el compuesto del epígrafe en forma de un material impuro (7,0 g) que se usó en crudo en la etapa siguiente.

4. 3-([2-[2-((3S)-3-Amino-2-oxopiperidil)acetilamino]etoxi}amino)-2-aza-3-[(ter-butoxi)carbonilamino]prop-2-enoatode ter-butilo

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Una disolución del producto en crudo resultante del experimento anterior (7,0 g) y paladio al 10% sobre carbono (800 mg) en metanol (100 ml) se agitó en presencia de 1 atmósfera de hidrógeno durante 2 horas. La mezcla se filtró a través de tierra de diatomeas y el filtrado se concentró al vacío. El residuo se repartió entre cloruro de metileno y HCl acuoso diluido. La fase acuosa se extrajo dos veces más con cloruro de metileno y estos extractos se desecharon. La capa acuosa se basificó con NaOH 1 M y se extrajo con cloruro de metileno. Los extractos orgánicos separados se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron al vacío para obtener el compuesto del epígrafe (2,0 g, 40% con respecto a las etapas 3 y 4) para el que no fue necesaria una purificación posterior.

5. 2-{(3S)-3[(2-Naftilsullfonil)amino]-2-oxopiperidil}-N-[2-(amidinoaminoxi)etil]acetamida

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Cloruro de 2-naftalenosulfonilo (48 mg, 0,21mmoles) se añadió de una sola vez a una disolución del producto resultante del experimento anterior (100 mg, 0,21 mmoles) y dimetilaminopiridina en poliestireno (250 mg = 2 mmoles de dimetilaminopiridina/g de resina) en cloruro de metileno (3 ml). Después de ser agitada durante la noche, la mezcla se diluyó con acetonitrilo (3 ml), seguido de la adición de resina de aminometilo (250 mg = 1,1 mmoles/g de resina). Después de agitar durante 30 minutos, las resinas se separaron por filtración y el filtrado se concentró al vacío. El residuo se disolvió en cloruro de metileno (2 ml) y ácido trifluoroacético (2 ml), y se agitó durante 30 minutos. La mezcla se concentró luego al vacío y se cromatografió en una columna de 10 g de sílice SPE usando metanol al 10%/cloruro de metileno saturado con amoníaco. Después de concentrar las fracciones deseadas, el producto se agitó en metanol con 1 equivalente de ácido fumárico, y se concentró al vacío para obtener el compuesto del epígrafe en forma de un sólido blanco (32 mg, 26%). MS: m/z=463(M+1).

El 3-[(2-aminoetoxi)amino]-2-aza-3-[(ter-butoxi)carbonilamino]prop-2-enoato de ter-butilo se preparó de la siguiente manera:

a. N-(2-Hidroxietil)(fenilmetoxi)carboxamida

19

Cloroformiato de bencilo (63 ml, 443 mmoles) se añadió gota a gota a una disolución de etanolamina (60 g, 984 mmoles) en tetrahidrofurano (300 ml). Después de ser agitada durante la noche, la mezcla se concentró al vacío, y se repartió entre cloruro de metileno y HCl acuoso diluido. La capa orgánica separada se lavó con NaHCO_{3} acuoso diluido, se secó (MgSO_{4}), se filtró y se concentró al vacío para obtener el compuesto del epígrafe (36 g) que se utilizó en la etapa siguiente sin posterior purificación.

b. N-[2-(1,3-Dioxoisoindolil-2-iloxi])etil](fenilmetoxi)carboxamida

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Se añadió azodicarboxilato de etilo (5,2 g, 30 mmoles) a una disolución del producto resultante del experimento anterior (5,9 g, 30 mmoles), N-hidroxiftalimida (4,9 g, 30 mmoles), y trifenilfosfina (7,9 g, 30 mmoles) en tetrahidrofurano (100 ml). Después de ser agitada durante la noche, la mezcla se diluyó con acetato de etilo (200 ml), y se lavó con NaHCO_{3} acuoso saturado (2 x 100 ml) y salmuera (100 ml). La capa orgánica separada se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró al vacío. El residuo se cromatografió (SiO_{2}) usando una elución en gradiente con acetato de etilo desde 0% hasta 4% en cloruro de metileno para obtener el compuesto del epígrafe en forma de un sólido blanco (9,3 g, 91%.). ^{1}H-NMR (300 MHz, CDCl_{3}), \delta 7,84(m, 2H), 7,78(m, 2H), 7,37(m, 5H), 5,97(bs, 1H), 5,14(s, 2H), 4,27(t,J=4,9 Hz, 2H), 3,51(q,J=5,2 Hz, 2H).

c. N-[2-(aminooxi)etil](fenilmetoxi)carboxamida

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Se añadió metilamina (disolución al 40% en peso en H_{2}O, 2 ml, 25 mmoles) a una disolución del producto resultante del experimento anterior (1,36 g, 4,0 mmoles) en etanol (20 ml) y tetrahidrofurano (20 ml). Después de ser agitada durante 1 hora, la mezcla se concentró al vacío, y el residuo resultante se cromatografió (SiO_{2}) usando una elución en gradiente con acetato de etilo desde 75% hasta 100% en hexano, para obtener el compuesto del epígrafe en forma de un sólido blanco (800 mg, 95%.). ^{1}H-NMR (300 MHz, CDCl_{3}), \delta 7,36(m, 5H), 5,47(bs, 2H), 5,21(bs, 1H), 5,10(s, 2H), 3,72(t,J=5,0 Hz, 2H), 3,44(q,J=5,0 Hz, 2H).

d. 2-aza-3-[(ter-butoxi)carbonilamino]-3-({2-[(fenilmetoxi)carbonilamino]etoxi}amino}prop-2-enoato de ter-butilo

22

Una disolución del producto resultante del experimento anterior (780 mg, 3,7 mmoles) y N,N'-di(ter-butoxicarbonil)amidinopirazol (1,25 g, 4,0 mmoles) en N,N-dimetilformamida (20 ml) se agitó durante la noche. La mezcla se concentró al vacío, y el residuo resultante se cromatografió (SiO_{2}) usando una elución en gradiente con acetato de etilo desde 0% hasta 5% en cloruro de metileno, para obtener el compuesto del epígrafe en forma de un aceite incoloro (1,55 g, 93%). ^{1}H-NMR (300 MHz, CDCl_{3}), \delta 9,08(s, 1H), 7,67(s, 1H), 7,33(m, 5H), 6,21(bs, 1H), 5,21(bs, 1H), 5,11(s, 2H), 4,12(t,J=4,8 Hz, 2H), 3,54(q,J=4,9 Hz, 2H), 1,49(s, 9H), 1,46(s, 9H).

e. 3-[(2-Aminoetoxi)amino]-2-aza-3-[(ter-butoxi)carbonilamino]prop-2-enoato de ter-butilo

23

Una disolución del producto resultante del experimento anterior (730 mg, 1,5 mmoles) y paladio al 10% sobre carbono (70 mg) en etanol (20 ml) y tetrahidrofurano (20 ml), se agitó en condiciones de 1 atmósfera de hidrógeno durante 30 min. La mezcla se filtró a través de tierra de diatomeas, y el filtrado se concentró al vacío. El residuo se cromatografió en una columna de 10 g de sílice SPE usando metanol al 5%/cloruro de metileno saturado con amoníaco, para obtener el compuesto del epígrafe en forma de un aceite incoloro (290 mg, 61%). ^{1}H-NMR (300 MHz, CDCl_{3}), \delta 9,08(bs, 1H), 4,08(t,J=5,2 Hz, 2H), 2,99(q,J=5,1 Hz, 2H), 1,50(s, 9H), 1,48(s, 9H).

Los compuestos que se describen en la Tabla 1 que viene a continuación se sintetizaron de la misma manera que en el Ejemplo 1. Todos estos compuestos se sintetizaron en forma de fumaratos.

TABLA 1

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28

Ejemplo 28 2-[(3S)-3-({[4-(4-Clorofenil)fenil]sulfonil}amino)-2-oxopiperidil]-N-[2-amidinoaminooxi)etil]acetamida 1. 3-({2-[2-((3S)-3-{[(4-yodofenil)sulfonil)amino}-2-oxopiperidil)acetilamino]etoxi}amino)-2-aza-3-[(ter-butoxi)carbonilamino]prop-2-enoato de ter-butilo

29

Se añadió cloruro de pepsilo (1,77 g, 5,8 mmoles) a una disolución del producto resultante del Ejemplo 1.4 (2,50 g, 5,3 mmoles) y trietilamina (0,89 ml, 6,4 mmoles) en cloruro de metileno (20 ml). Después de ser agitada durante la noche, la mezcla se diluyó con acetonitrilo (20 ml) seguido de la adición de una resina de aminometilo (1 g = 1,1 mmoles/g de resina. La resina se separó por filtración y el filtrado se concentró al vacío para obtener el compuesto del epígrafe (2,48 g, 87%) que se utilizó sin purificar en la etapa siguiente.

2. 2-[(3S)-3-({[4-(4-Clorofenil)fenil]sulfonil}amino)-2-oxopiperidil]-N-[2-amidinoaminooxi)etil]acetamida

30

El producto resultante del experimento anterior (100 mg, 0,14 mmoles) se disolvió en tolueno (1 ml) y se añadió a un vial que contenía ácido 4-clorofenilborónico (31 mg, 0,2 mmoles) y diclorobis(trifenilfosfina)-paladio(II) (10 mg). Esta mezcla se diluyó luego con etanol (0,25 ml) y bicarbonato sódico acuoso saturado (0,25 ml), se tapó, y se calentó en un baño de arena a 80ºC hasta que el color tornó a negro (en aproximadamente 30 minutos). La mezcla se aplicó directamente a una columna de 10 g de sílice SPE y se cromatografió utilizando acetato de etilo como eluyente. Las fracciones deseadas se concentraron al vacío y el residuo se disolvió en ácido trifluoroacético/cloruro de metileno (1:1, 4 ml). Después de ser agitada durante 30 minutos, la mezcla se concentró al vacío y el residuo se cromatografió en una columna de 10 g de sílice SPE usando metanol al 10%/cloruro de metileno saturado con amoníaco. Las fracciones deseadas se concentraron y se disolvieron en metanol que contenía un equivalente de ácido fumárico para obtener el compuesto del epígrafe en forma de una sal fumarato (15 mg, 17%). MS: m/z=523(M+1).

Ejemplo 29 2-((3S)-2-Oxo-3-{[(4-pirimidín-5-ilfenil)sulfonil]amino}piperidil)-N-[2-(amidinoaminooxi)etil]acetamida

31

El producto resultante del Ejemplo 29.1 (100 mg, 0,14 mmoles), cloruro de litio (25 mg, 0,60 mmoles), yoduro de cobre(I) (3 mg), diclorobis(trifenilfosfina)paladio(II) (7 mg), y 5-tributilestanilpirimidina se mezclaron en un vial, se disolvieron/suspendieron en tolueno (1 ml), se taparon y se calentaron en un baño de arena a 80ºC hasta que el color se tornó negro (aproximadamente en 30 minutos). La mezcla se aplicó directamente a una columna de 10 g de sílice SPE y se cromatografió utilizando acetato de etilo como eluyente. Las fracciones deseadas se concentraron al vacío y el residuo se disolvió en ácido trifluoroacético/cloruro de metileno (1:1, 4 ml). Después de ser agitada durante 30 minutos, la mezcla se concentró al vacío y el residuo se cromatografió en una columna de 10 g de sílice SPE usando metanol al 10%/cloruro de metileno saturado con amoníaco. Las fracciones deseadas se concentraron y se disolvieron en metanol que contenía un equivalente de ácido fumárico para obtener el compuesto del epígrafe en forma de una sal fumarato (13 mg, 15%). MS: m/z=491(M+1).

Los compuestos descritos en la Tabla 2 que viene a continuación, se sintetizaron de la misma manera que en el ejemplo 28, excepto en el Ejemplo 44 en el que se sintetizaron de la misma manera que en el ejemplo 29. Todos estos compuestos se sintetizaron en forma de fumaratos.

TABLA 2

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Ejemplo 45 2-((3S)-3-{[(6-Bromo(2-naftil)sulfonil]amino}-2-oxopirroli-dinil)-N-[2-(amidinoaminooxi)etil]acetamida 1. N-((3S)-2-Oxopirrolidin-3-il)(fenilmetoxi)carboxamida

34

Difenilfosforil azida (11,1 ml, 51,3 mmoles) se vertió gota a gota en una disolución del éster \alpha-metílico del ácido N-benciloxicarbonil-L-glutámico (13,8 g, 46,7 mmoles) y trietilamina (7,2 ml, 51,3 mmoles) en ter-butanol. Después de agitarse toda la noche a 95ºC, la mezcla se concentró al vacío, se disolvió en cloruro de metileno, y se lavó por orden con HCl acuoso diluido y con NaHCO_{3} acuoso diluido. La capa orgánica separada se secó (MgSO_{4}), se filtró y se concentró al vacío. La adición de dietil-éter dio como resultado la formación de un precipitado que se separó por filtración para obtener el (6S)-6-(metoxicarbonil)-2-oxo-1,3- diazaperhidroinecarboxilato de fenilmetilo en forma de un sólido blanco (4,0 g, 29%). ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}), \delta 7,37(m, 6H), 5,18(s, 2H), 4,83(t,J=5,2 Hz, 1H), 3,65(s, 3H), 3,10(m, 1H), 2,95(m, 1H), 2,16(m, 1H), 2,03(m, 1H). El filtrado se concentró al vacío y el residuo se disolvió en cloruro de metileno (50 ml) seguido de la adición de ácido trifluoroacético (50 ml). Después de ser agitada durante 30 minutos, la mezcla se concentró al vacío y el residuo se repartió entre cloruro de metileno e hidróxido sódico acuoso diluido. La capa orgánica separada se secó (MgSO_{4}), se filtró y se concentró al vacío. La adición de dietil-éter dio como resultado la formación de un precipitado que se separó por filtración para obtener el compuesto del epígrafe en forma de un sólido blanco (30 g, 28%). ^{1}H-NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}), \delta 7,78(bs, 1H), 7,51(d,J=8,8 Hz, 1H), 7,36(m, 5H), 5,03(s, 2H), 4,09(m, 1H), 3,14(m, 2H), 2,26(m, 1H), 1,85(m, 1H).

2. Ácido 2-{(3S)-2-oxo-3-{(fenilmetoxi)carbonilamino]pirrolidinil}acético

35

Bis(trimetilsilil)amiduro de litio (13 ml, 1,0 M en tetrahidrofurano) se vertió gota a gota en una disolución enfriada en hielo del producto resultante del experimento anterior (2,77 g, 11,8 mmoles) en tetrahidrofurano (60 ml). Una vez completada la adición, en la mezcla se vertió gota a gota bromoacetato de etilo (2,6 ml, 23,7 mmoles). Después de agitar durante 30 minutos, se añadió etilendiamina (1,2 ml) y la agitación continuó durante 30 minutos adicionales. La mezcla se concentró al vacío, el residuo se disolvió en cloruro de metileno, y se lavó por orden con HCl acuoso diluido y con NaHCO_{3} acuoso diluido. La capa orgánica separada se secó (MgSO_{4}), se filtró y se concentró al vacío. El producto en crudo (3,5 g) se disolvió en metanol (60 ml) seguido de la adición de NaOH 1,0 M (40 ml). Después de ser agitada durante la noche, el metanol se evaporó al vacío y la disolución acuosa básica resultante se extrajo dos veces con cloruro de metileno (que se desechó). La capa acuosa se acidificó luego con HCl 1,0 N hasta alcanzar un pH de 1-2 y se extrajo con cloruro de metileno. La capa acuosa se saturó después con cloruro sódico (sólido), y se extrajo de nuevo con acetato de etilo. Los extractos orgánicos mezclados se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron al vacío. La adición de dietil-éter dio como resultado la formación de un precipitado que se separó por filtración para obtener el compuesto del epígrafe en forma de un sólido blanco (3,0 g, 86%). No fue necesaria purificación posterior.

3. 3-{[2-(2-{(3S)-2-oxo-3-[(fenilmetoxi)carbonilamino]pirrolidinil}acetilamino)etoxi]amino}-2-aza-3-[(ter-butoxi)carbonilamino]prop-2-enoato de ter-butilo

36

Hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitris (dimetilamino)fosfonio (4,8 g, 10,8 mmoles) se añadió de una sola vez a una disolución del producto resultante del experimento anterior (2,9 g, 9,8 mmoles), 3-[(2-aminoetoxi)amino]-2-aza-3-[(ter-butoxi)carbonilamino]prop-2-enoato de ter-butilo (3,4 g, 10,8 mmoles) y N,N-diisopropiletilamina (1,9 ml, 10,8 mmoles) en N,N-dimetilformamida (80 ml). Después de ser agitada durante la noche, la mezcla se concentró al vacío, se diluyó con cloruro de metileno, y se lavó por orden con HCl acuoso diluido y con NaHCO_{3} acuoso diluido. La capa orgánica separada se secó (MgSO_{4}), se filtró, y se concentró al vacío para obtener el compuesto del epígrafe en forma de un producto en crudo (7,5 g) que se utilizó sin purificar en la etapa siguiente.

4. 3-({2-[2-((3S)-3-amino-2-oxopirrolidinil)acetilamino]etoxi}amino-2-aza-3-[(ter-butoxi)carbonilamino]prop-2-enoato de ter-butilo

37

Una disolución del producto resultante del experimento anterior (7,5 g, en crudo) y paladio al 10% sobre carbono (750 mg) en etanol (100 ml) y cloroformo (7 ml), se agitó toda la noche en condiciones de 1 atmósfera de hidrógeno. La mezcla se filtró a través de tierra de diatomeas y el filtrado se concentró al vacío. El residuo se repartió entre cloruro de metileno y HCl 0,1 N. La capa acuosa se extrajo una segunda vez con cloruro de metileno y estos extractos se desecharon. La capa acuosa se basificó con NaOH 1,0 M hasta alcanzar un pH de 10-11, y se extrajo con cloruro de metileno. La capa orgánica separada se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró, y se concentró al vacío para obtener el compuesto del epígrafe en forma de un aceite incoloro (1,0 g, 22% con respecto a las etapas 3 y 4). No fue necesaria una purificación posterior.

5. 2-((3S)-3-{[(6-Bromo(2-naftil))sulfonil]amino}-2-oxopirrolidinil}-N-[2- (amidinoaminooxi)etil]acetamida

38

Cloruro de 6-bromo-2-naftalensulfonilo (73 mg, 0,24 mmoles) se añadió de una sola vez a una disolución del producto resultante del experimento anterior (100 mg, 0,21 mmoles) y dimetilaminopiridina en poliestireno (220 mg = 2 mmoles de dimetilaminopiridina/g de resina) en cloruro de metileno (3 ml). Después de ser agitada durante la noche, la mezcla se diluyó con acetonitrilo (3 ml), seguido de la adición de resina de aminometilo (250 mg = 1,1 mmoles/g de resina). Después de agitar durante 30 minutos, las resinas se separaron por filtración y el filtrado se concentró al vacío. El residuo se disolvió en cloruro de metileno (2 ml) y ácido trifluoroacético (1 ml), y se agitó durante 30 minutos. La mezcla se concentró luego al vacío y se cromatografió en una columna de 10 g de sílice SPE usando metanol al 10%/cloruro de metileno saturado con amoníaco. Después de concentrar las fracciones deseadas, el producto se agitó en metanol con 1 equivalente de ácido fumárico, y se concentró al vacío para obtener el compuesto del epígrafe en forma de un sólido blanco (64 mg, 42%). MS: m/z=527/529(M+1).

Los compuestos que se describen en la Tabla 3 que viene a continuación se sintetizaron de la misma manera que en el Ejemplo 28, excepto que como material de partida se utilizó el compuesto resultante del ejemplo 45.4. Todos estos compuestos se sintetizaron en forma de fumaratos.

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(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA 3

39

Ejemplo 51 Preparación de comprimidos

Los comprimidos que contienen respectivamente 25,0, 50,0 y 100,0 mg de los siguientes compuestos activos se preparan como se ilustra a continuación:

a. 2-{(3S)-3-[(2-Naftilsulfonil)amino]-2-oxopiperidil}-N-[2-(amidinoaminooxi)etil)acetamida; y b. 2-((3S)-3-{[(6-Bromo(2-naftil)sulfonil)amino)-2-oxopirrolidinil)-N-[2-(amidinoaminooxi)etil]acetamida.

Ccomprimido para dosis que contienen 25-100 mg del principio activo
	Cantidad en mg
Principio activo	25,0	50,0	100,0
Celulosa microcristalina	37,25	100,0	200,0
Almidón de maíz alimentario modificado	37,25	4,25	8,5
Estearato de magnesio	0,50	0,75	1,5

El principio activo, la celulosa, y una parte del almidón de maíz se mezclan y se granulan hasta formar una pasta que contiene almidón de maíz al 10%. La granulación resultante se pasa por un tamiz, se seca y se mezcla con el resto de almidón de maíz y el estearato de magnesio. La granulación resultante se comprime luego en forma de comprimidos, que contienen respectivamente 25,0, 50,0 y 100,0 mg del principio activo por comprimido.

Ejemplo 52 Preparación de una disolución intravenosa

Una forma de preparación intravenosa de los principios activos anteriormente indicados se prepara de la siguiente manera:

Principio activo	0,5-10,0 mg
Citrato sódico	5-50 mg
Ácido cítrico	1-15 mg
Cloruro sódico	1-8 mg
Agua para inyección (USP)	c.s.p. 1 ml

Utilizando las anteriores cantidades, el principio activo 2-{(3S)-3-[(2-naftilsulfonil)amino]-2-oxopipe-ridil}-N-[2-(amidinoaminooxi)etil)acetamida se disuelve a temperatura ambiente en una disolución previamente preparadas de cloruro sódico, ácido cítrico y citrato sódico en Agua para inyección (USP, véase la página 1.636 del United States Pharmacopeia/National Formulary de 1.995, publicado por la United States Pharmacopeia Convention, Inc., Rockville, Maryland (1994).

Ejemplo 53 Inhibición in vitro de enzimas purificadas Reactivos

Todas las sales de los tampones se obtuvieron procedentes de Sigma Chemical Company (St. Louis, MO), y eran de la mayor pureza disponible. Los sustratos de las enzimas, N-benzoil-Phe-Val-Arg-p-nitroanilida (Sigma B7632), hidrocloruro de N-benzoil-Ile-Glu-Gly-Arg-p-nitroanilida (Sigma B2291), N-p-tosil-Gly-Pro-Lys-p-nitroanilida (Sigma T6140), N-succinil-Ala-Ala-Pro-Phe-p-nitroanilida (Sigma S7388) y N-CBZ-Val-Gly-Arg-p-nitroanilida (Sigma C7271) se obtuvieron procedentes de Sigma. N-succinil-Ala-Ala-Pro-Arg-p-nitroanilida (BACHEM L-1720) y N-succinil-Ala-Pro-Val-p-nitroanilida (BACHEM L-1770) se obtuvieron procedentes de BACHEM (King of Prussia, PA).

La \alpha-trombina humana y el factor Xa humano se obtuvieron procedentes de Enzyme Research Laboratories (South Bend, Indiana). La \alpha-quimotripsina bovina (Sigma C4129), tripsina bovina (Sigma T8642) y la uroquinasa de células de riñón humanas (Sigma U5004) se obtuvieron procedentes de Sigma. La elastasa de leucocitos humanos se obtuvo procedente de Elastin Products (Pacific, MO).

Determinaciones de Ki

Todos los ensayos se basan en la disponibilidad del compuesto que se ensaya para inhibir la hidrólisis de un péptido-p-nitroanilida sustrato, catalizada por enzimas. En una determinación de Ki típica, el sustrato se prepara en DMSO, y se diluye en un tampón del ensayo constituido por HEPES 50 mM, NaCl 200 mM, pH 7,5. Las concentraciones finales de cada uno de los sustratos aparecen listadas más adelante. En general, las concentraciones de los sustratos son inferiores que el valor de Km determinado experimentalmente. Los compuestos que se ensayan se preparan en forma de una disolución de 1,0 mg/ml en DMSO. Las diluciones se preparan en DMSO obteniéndose 8 concentraciones finales que abarcan un intervalo de concentraciones de 200 veces. Las disoluciones enzimáticas se preparan en las concentraciones que aparecen listadas más adelante en el tampón de ensayo.

En una determinación de Ki típica, en cada pocillo de una placa de 96 pocillos se pipetean 280 ml de la disolución sustrato, 10 ml de la disolución del compuesto que se ensaya, y se deja que la placa se equilibre térmicamente a 37ºC en un lector para placas de Molecular Devices durante >15 minutos. Las reacciones se iniciaron mediante la adición de una parte alícuota de 10 ml de enzima y el aumento de la absorbancia a 405 nm se registra durante 15 minutos. Los datos correspondientes a una hidrólisis menor que el 10% de hidrólisis total del sustrato se utilizaron en los cálculos. La relación de la velocidad (ritmo del cambio en absorbancia en función del tiempo) de una muestra que no contiene compuesto del ensayo se divide por la velocidad de una muestra que contiene compuesto de ensayo y se representa gráficamente como una función de la concentración del compuesto que se ensaya. Los datos se ajustan a una regresión lineal y se calcula el valor de la pendiente de la línea. El valor inverso de la pendiente es el valor de Ki determinado experimentalmente.

Trombina

La actividad de la trombina se estableció como la capacidad para hidrolizar el sustrato N-succinil-Ala-Ala-Pro-Arg-p-nitroanilida. Las disoluciones del sustrato se prepararon en una concentración 32 mM (32 mM << Km=180 mM) en el tampón del ensayo. La concentración final de DMSO fue 4,3%. La \alpha-trombina humana purificada se diluyó en tampón del ensayo hasta alcanzar una concentración 15 nM. Las concentraciones finales de los reactivos fueron: [trombina]= 0,5 nM, [sustrato N-succinil-Ala-Ala-Pro-Arg-p-nitroanilida] = 32 mM.

Factor Xa [FXa]

La actividad del FXa se estableció como la capacidad para hidrolizar el sustrato hidrocloruro de N-benzoil-Ile-Glu-Gly-Arg-p-nitroanilida. Las disoluciones del sustrato se prepararon en concentración 51 mM (51 mM, Km = 1,3 mM) en el tampón del ensayo. La concentración final de DMSO fue 4,3%. El Factor X humano activado y purificado se diluyó en tampón del ensayo hasta alcanzar una concentración 300 nM. Las concentraciones finales de los reactivos fueron: [FXa]= 10 nM, [hidrocloruro de N-benzoil-Ile-Glu-Gly-Arg-p-nitroanilida] = 51 mM.

En general, los compuestos del invento demostraron una actividad estadísticamente significativa con respecto a la trombina y/o al factor Xa. Los valores de Ki medidos para cada uno de los compuestos de los ejemplos, correspondientes a una o ambas de estas enzimas fueron menores que 10 \muM. Por ejemplo, se encontró que el compuesto descrito en el Ejemplo 2 presentaba una Ki 0,70 \muM con respecto a la trombina y que no presentaba actividad a una concentración 10 \muM frente al factor Xa. El compuesto del Ejemplo 11 se encontró que presentaba una Ki 1,2 \muM con respecto a la trombina y una Ki 2,1 \muM con respecto al factor Xa. El compuesto del Ejemplo 42 se encontró que presentaba una Ki 6,4 \muM con respecto a la trombina y una Ki 0,36 \muM con respecto al factor Xa.

Habiendo ya descrito este invento en su totalidad, las personas con una experiencia ordinaria en la técnica entenderán que el mismo puede ser practicado dentro de un intervalo amplio y equivalente de condiciones, formulaciones y demás parámetros, sin que se afecte el alcance del invento o de cualquiera de sus realizaciones. Todas las patentes y publicaciones aquí citadas se incorporan enteramente como referencia en su totalidad.

Claims (25)

1. Un compuesto que tiene la Fórmula I:

40

o una de sus sales farmacéuticamente aceptables; en la que

Q es (a) 4-(t-butil)fenilo o 4-(t-amil)fenilo; o

(b) arilo(C_{6}-C_{14}), ar(C_{6}-C_{14})alquilo(C_{1}-C_{4}), ar(C_{6}-C_{14})alquenilo(C_{2}-C_{4}), piridilo, tienilo, indolilo, quinolinilo, benzotienilo o imidazolilo; todos los cuales pueden incluir uno o más sustituyentes opcionales, seleccionados independientemente entre halo, trifluorometilo, hidroxi, amino, nitro, ciano, alcoxi(C_{1}-C_{3}), alquilo(C_{1}-C_{3}), metilendioxi, carboxiamino, alcoxi(C_{1}-C_{4})carbonilamino, ariloxi(C_{6}-C_{10})carbonilamino, aralcoxi(C_{7}-C_{11})carbonilamino, aminocarbonilo, mono- o di-alquil(C_{1}-C_{4})aminocarbonilo, acetamido, amidino, piridilo, naftilo, pirimidinilo, alquenilo, mono- o di-alquil(C_{1}-C_{4})amino, o sus combinaciones;

X es metileno, carbonilo o sulfonilo;

R^{1} es hidrógeno o alquilo(C_{1}-C_{3});

n es 1, 2 ó 3;

m es 1-4;

R^{2} es hidrógeno o alquilo(C_{1}-C_{3});

R^{3} es hidrógeno o alquilo(C_{1}-C_{3}); y

R^{4}, R^{5} y R^{6} son independientemente hidrógeno, hidroxi, alquilo(C_{1}-C_{6}), alcoxi(C_{1}-C_{6}), ciano o -CO_{2}R^{w}, en donde R^{w}, en cada caso, es preferiblemente uno de los sustituyentes alquilo(C_{1}-C_{4}), cicloalquilo(C_{4}-C_{7}) y bencilo, o R^{w} es uno de los sustituyentes

41

en los que R^{d}, R^{e} y R^{g} son hidrógeno cada uno de ellos, R^{f} es metilo, y R^{h} es bencilo o ter-butilo.

2. El compuesto de la reivindicación 1, en el que Q es arilo, aralquilo o tienilo, cualquiera de los cuales puede incluir uno o más sustituyentes opcionales, seleccionados de manera independiente entre el grupo constituido por halo, trifluorometilo, hidroxi, amino, nitro, ciano, alcoxi(C_{1}-C_{3}), alquilo(C_{1}-C_{3}), t-butilo, t-amilo, metilendioxi, carboxiamino, alcoxi(C_{1}-C_{4})carbonilamino, ariloxi(C_{6}-C_{10})carbonilamino, aralcoxi(C_{7}-C_{11})carbonilamino, aminocarbonilo, mono- o di-alquil(C_{1}-C_{4})aminocarbonilo, acetamido, amidino, piridilo, naftilo, pirimidinilo, alquenilo, mono- o di-alquil(C_{1}-C_{4})amino, y sus combinaciones.

3. El compuesto de la reivindicación 2, en el que Q es fenilo o bifenilo, cualquiera de los cuales puede incluir uno a más sustituyentes opcionales, seleccionados independientemente entre el grupo constituido por halo, trifluorometilo, hidroxi, amino, nitro, ciano, alcoxi(C_{1}-C_{3}), alquilo(C_{1}-C_{3}), metilendioxi, carboxiamino, alcoxi(C_{1}-C_{4})carbonilamino, ariloxi(C_{6}-C_{10})carbonilamino, aralcoxi(C_{7}-C_{11})carbonilamino, aminocarbonilo, mono- o di-alquil(C_{1}-C_{4})aminocarbonilo, acetamido, amidino, piridilo, naftilo, pirimidinilo, alquenilo, mono- o di-alquil(C_{1}-C_{4})amino, y sus combinaciones.

4. El compuesto de la reivindicación 1, en el que Q es naft-1-ilo, naft-2-ilo, 5-dimetilaminonaft-1-ilo, 6-cloronaft-2-ilo, 6-bromonaft-2-ilo, bencilo, 2-nitroben-cilo, fenilo, 2-metilfenilo, 3-metilfenilo, 4-(n-propil)fenilo, 4-(t-butil)fenilo, 4-(t-amil)fenilo, 4-metoxifenilo, 4-yodofenilo, 4-fluorofenilo, 4-clorofenilo, 3,4-diclorofenilo, 4-nitrofenilo, 4-metilfenilo, 4-etil-fenilo, 4-etenilfenilo, 3,4-dimetoxifenilo o 2-fenil-etenilo.

5. El compuesto de la reivindicación 2, en el que Q es 4-(2-metilfenil)fenilo, 4-(2-metoxifenil)fenilo, 4-(3-clorofenil)fenilo, 4-(3-fluorofenil)fenilo, 4-(3-metoxifenil)fenilo, 4-(4-fluorofenil)fenilo, 4-(4-metilfenil)fenilo, 4-(4-metoxifenil)fenilo, 4-(2,4-difluorofenil)fenilo, 4-(3,4-diclorofenil)fenilo, 4-(3,4-dimetoxifenil)fenilo, 4-naft-2-ilfenilo, 4-pirid-4-ilfenilo, 4-pirid-2-ilfenilo, bifenilo, 4-(4-clorofenil)fenilo, 4-pirimidin-5-ilfenilo o 5-(pirid-5-il)tien-2-ilo.

6. El compuesto de la reivindicación 4, en el que n es 1 ó 2.

7. El compuesto de la reivindicación 5, en el que X es SO_{2}.

8. El compuesto de la reivindicación 4, en el que m es 1 ó 2.

9. El compuesto de la reivindicación 4, en el que m es 1.

10. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R^{1}, R^{2} y R^{3} se seleccionan independientemente entre el grupo constituido por hidrógeno, metilo, etilo, n-propilo e isopropilo.

11. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R^{1}, R^{2} y R^{3} son hidrógeno.

12. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R^{4}, R^{5} y R^{6} se seleccionan independientemente entre el grupo constituido por hidrógeno, metilo, etilo, propilo, n-butilo, hidroxi, metoxi, etoxi, ciano, -CO_{2}CH_{3}, -CO_{2}CH_{2}CH_{3} y -CO_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{3}.

13. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R^{4}, R^{5} y R^{6} son hidrógeno cada uno de ellos.

14. El compuesto de la reivindicación 1, en el que:

Q es fenilo, bifenilo, naftilbencilo, fenetilo, naftilmetilo o tienilo, estando cualquiera de estos grupos opcionalmente sustituido con de uno a tres sustituyentes opcionales, seleccionados independientemente entre halo, trifluorometilo, hidroxi, amino, nitro, ciano, alcoxi(C_{1}-C_{3}), alquilo(C_{1}-C_{3}), metilendioxi, carboxiamino, alcoxi(C_{1}-C_{4})carbonilamino, ariloxi(C_{6}-C_{10})carbonilamino, aralcoxi(C_{7}-C_{11})carbonilamino, aminocarbonilo, mono- o di-alquil(C_{1}-C_{4})aminocarbonilo, acetamido, amidino, piridilo, naftilo, pirimidinilo, alquenilo, mono- o di-alquil(C_{1}-C_{4})amino;

X es carbonilo o sulfonilo;

n es 2;

m es 1 ó 2;

R^{1}, R^{2} y R^{3} son hidrógeno; y

R^{4}, R^{5} y R^{6} son independientemente hidrógeno, hidroxi, alquilo(C_{1}-C_{6}), alcoxi(C_{1}-C_{6}), ciano o -CO_{2}R^{w}, en donde R^{w}, en cada caso, es preferiblemente uno de los sustituyentes alquilo(C_{1}-C_{4}), cicloalquilo(C_{4}-C_{7}), bencilo, o R^{w} es uno de los sustituyentes

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en los que R^{d}, R^{e} y R^{g} son hidrógeno cada uno de ellos, R^{f} es metilo y R^{h} es bencilo o ter-butilo.

15. El compuesto de la reivindicación 1, en el que m es 1 ó 2.

16. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R^{w} es alquilo(C_{1}-C_{4}), cicloalquilo(C_{4}-C_{7}) o bencilo.

17. El compuesto de la reivindicación 14, en el que Q es fenilo o bifenilo.

18. El compuesto de la reivindicación 14, en el que m es 1.

19. El compuesto de la reivindicación 14, en el que X es sulfonilo.

20. El compuesto de la reivindicación 14, en el que R^{w} es alquilo(C_{1}-C_{4}), cicloalquilo(C_{4}-C_{7}) o bencilo.

21. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la reivindicación 1, y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.

22. Un método in vitro para inhibir el factor Xa, que comprende poner en contacto el factor Xa con un compuesto de la reivindicación 1.

23. El uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1-20, en la fabricación de un medicamento para tratar un estado mediado por el factor Xa en un mamífero.

24. El uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1-20, en la fabricación de un medicamento para tratar trombosis, isquemia, apoplejía, reestenosis o inflamación en un mamífero.

25. Un método para elaborar un compuesto de la reivindicación 1, que comprende:

acoplar o condensar un compuesto de la Fórmula II:

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o una de sus sales, en la que R^{4}, R^{5} y R^{6} son como se han definido en la reivindicación 1 o están opcionalmente protegidos, y m es como se ha definido en la reivindicación 1, con un compuesto de la Fórmula III:

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en la que R^{51} es H o Q-X, siendo Q, X, R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{4}, R^{5}, R^{6} y n como se han definido en la reivindicación 1.