WO2012062187A1 - 作为凝血酶抑制剂的脯氨酰胺衍生物、其制备方法及应用 - Google Patents

作为凝血酶抑制剂的脯氨酰胺衍生物、其制备方法及应用 Download PDF

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leucyl
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amide
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李敏
单汉滨
黄雨
袁哲东
俞雄
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Definitions

  • the present invention relates to novel pharmaceutical compounds, in particular to a process for the preparation of such compounds, to their use as medicaments and to pharmaceutical compositions containing them.
  • novel pharmaceutical compounds of the invention are useful as racemic inhibitors of tryptase serine proteases, particularly thrombin. Background technique
  • heparin must be injected and has no effect on thrombin in the blood clot, and can cause thrombocytopenia; warfarin is the only oral drug, but because there is no clear drug target, the individual anticoagulation reaction varies greatly. There are many influencing factors, and coagulation function monitoring is needed. Therefore, it is important to research and develop synthetic antibiotic drugs with oral activity.
  • Blood coagulation is the result of a complex series of enzymes, a key step in which prothrombin is activated to form thrombin.
  • Thrombin is a tryptase-like serine protease that acts to hydrolyze fibrinogen to form insoluble fibrous aggregates. Play a key role in the blood coagulation cascade. Therefore, inhibition of thrombin activity can block the formation of thrombus.
  • Direct thrombin inhibitors are expected to overcome the limitations of traditional anticoagulants because their targets are well defined and target different targets than traditional anticoagulants. It is clear that convenient therapeutic control of thrombus strokes, effective selectivity, and oral bioavailable thrombin inhibitors represent an attractive target.
  • D-Phe-Pro-Arg-H and Me-D-Phe-Pro-Arg-H tripeptide aldehyde thrombin inhibitors are as described in U.S. Patent 4,436,078.
  • D-Phe-Pro-Agmatine and its derivatives act as thrombin inhibitors.
  • W09429336 and WO9523609 a tripeptide type inhibitor was incorporated, and 4-mercaptobenzylamine was incorporated at the P1 position in place of agmatine and the like.
  • Astra discloses a class of benzoquinone analogues in W09429336, in which melagatran has potent inhibitors of thrombin activity and can be safely used for deep vein thrombosis (DVT) without significant bleeding problems, but oral bioavailability Low degree, further synthesis of its double prodrug, ximelagatran, was launched in 2004. It was the first oral anticoagulant drug in the 60 years after Warfarin, but severe liver damage was found in the clinic after the market. It was terminated in February 2006.
  • thrombin inhibitors having a unique D-diphenylglycine at the P3 position is reported in W09311152, WO9715190, and US5510369.
  • Such compounds are reported to have higher antithrombin activity than the corresponding D-phenylglycine analogs (J Med Chem, 1997, 40, 830), some of which have better oral bioavailability ( J Med Chem, 1997, 40, 3687; J Med Chem, 1997, 40, 3726).
  • a first object of the present invention is to provide a novel class of compounds of formula (I) An acceptable salt and a pharmaceutically acceptable prodrug thereof:
  • A represents alkyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, - SC ⁇ R 1 -SO3R 1 . -COR 1 , -C02R 1 , -POCOR 1 ⁇ . -R 2 -cycloalkyl, -R 2 -heterocycloalkyl, -R 2 -aryl, -R 2 S0 2 R - R 2 S0 3 R 1 , -R ⁇ OR 1 , -R 2 C0 2 R ⁇ or - R 2 PO(OR') 2 ;
  • R l represents hydrogen, alkyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, -R 3 -cycloalkyl, -R 3 -heterocycloalkyl, -R 3 -aryl, alkenyl or -NR 4 R 5 ;
  • R 2 and R 3 represent a d- 6 alkyl group
  • R 4 and R 5 independently represent hydrogen, d- 6 alkyl, cycloalkyl or heterocycloalkyl
  • the substituent on the ring may be a carboxyl group, a halogen, an alkyl group, an alkoxy group, an acyl group, a sulfonyl group, a decyl group, an alkylthio group, a cyclodecyl group, a heterocycloalkyl group, an amino group, an alkylamino group, a dialkylamino group, a cyano group.
  • F represents -NH-(C3 ⁇ 4) m - R 6 ;
  • ⁇ stands for. ⁇ 3;
  • R 7 represents hydrogen or an alkyl group.
  • A represents - 0 2 ⁇ -S0 3 RK - ⁇ ) ⁇ ⁇ -CO 1 -PO OR 1 ⁇ - R 2 -cycloalkyl, -R 2 - heterocycloalkyl, - R 2 - aryl, - SC ⁇ R 1, -R 2 S0 3 R ⁇ -R 2 COR -R 2 C0 2 R or - R 2 PO (oR ') 2;
  • R 1 represents hydrogen, alkyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, -R 3 -cycloalkyl, -R 3 -heterocycloalkyl, -R 3 -aryl, alkenyl or -NR 4 R 5 ;
  • R 2 and R 3 represent a ⁇ 6 alkyl group
  • R 4 and R 5 are hydrogen, 6 alkyl, cycloalkyl or heterocycloalkyl
  • the substituent on the ring may be carboxy, halogen, alkyl, alkoxy, acyl, sulfonyl, decyl, alkylthio, cycloalkyl, heterocycloalkyl, amino, alkylamino, dialkylamino, cyano , an ester group, a trifluoromethyl group or a fluorenyl group of CM having the above group.
  • F represents -NH-(CH 2 ) M -R 6 ;
  • R 6 represents unsubstituted
  • X, Y and Z stand alone for S, 0 or N;
  • n 0 ⁇ 3;
  • R 7 represents argon or a C 6 alkyl group.
  • A represents - SC ⁇ R ⁇ -COR 1 , -C0 2 ! .
  • R 1 represents hydrogen, alkyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, -R 3 -cycloalkyl, -R 3 -heteroaryl, -R 3 -aryl, alkenyl or -NR 4 R 5 ;
  • R 2 and R 3 represent a C 6 alkyl group
  • R 4 and R 5 independently represent hydrogen, d- 6 fluorenyl, cycloalkyl or heterocycloalkyl;
  • F is -Li-(C3 ⁇ 4) m -R 6 ;
  • n 1;
  • n stands for. ⁇ 3;
  • R 7 represents hydrazine or Ci ⁇ 6 alkyl.
  • A represents -S0 2 R', -S0 3 R -C0 2 R -PO(O ') 2 , -R 2 -cycloalkyl, -R 2 -heterocycloalkyl, -R 2 -aryl, - R 2 S0 2 R ⁇ - R ⁇ OaR 1 , - R 2 COR' , - R 2 C0 2 R or - R ⁇ OfOR 1 ⁇ ;
  • R 1 represents hydrogen, 1-6 alkyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl group, - R 3 - cycloalkyl, -R 3 - heterocycloalkyl, -R 3 - aryl group, an alkenyl group, or -NR 4 R 5 ;
  • R 2 and R 3 represent C, ⁇ 6 alkyl; wherein:
  • R 4 and R 5 independently represent hydrogen, alkyl, cycloalkyl or heterocycloalkyl
  • the substituent on the ring may be a carboxyl group, a halogen, an alkyl group, an alkoxy group, an acyl group, a sulfonyl group, a decyl group, a thiol group, a cycloalkyl group, a heterocycloalkyl group, an amino group, an alkylamino group, a dialkylamino group, a cyano group. , an ester group, a trifluoromethyl group or an alkyl group of CM having the above group.
  • F represents NH-(CH 2 ) m -R 6 ;
  • R 6 represents unsubstituted
  • X, Y and Z stand alone for S, 0 or N;
  • n stands for. ⁇ 3;
  • R 7 represents hydrogen or C! ⁇ 6 alkyl.
  • A represents -S ⁇ R ⁇ -C0 2 R', -R 2 -cycloalkyl, -R 2 -heterocycloalkyl, -R 2 -aryl, -f ⁇ SC R 1 - COR 1 or -I ⁇ CC ⁇ R 1 ;
  • R 1 represents hydrogen, d- 6 alkyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, -R 3 -cycloalkyl, -R 3 -heterocycloalkyl, -R 3 -aryl, alkenyl Or -NR 4 R 5 ;
  • R 2 and R 3 represent an alkyl group; wherein.
  • R 4 and R 5 independently represent hydrogen, -6 alkyl, cycloalkyl or heterocycloalkyl
  • n stands for. ⁇ 3;
  • R 7 represents hydrogen or C 6 alkyl.
  • X is used herein in the structural formula to characterize the bond at the point of attachment of the moiety or substituent to the core or backbone structure.
  • C ⁇ alkyl means a straight or branched chain of 1 to 6 saturated and/or unsaturated carbon and hydrogen atoms. Chain-valent residue, such as mercapto (Me), ethyl (Et), propyl, isopropyl, butyl (Bu), isobutyl, tert-butyl (t-Bu), vinyl, pentene And a propenyl, butenyl, ethynyl, propynyl, butynyl, pentynyl, hexynyl, etc., which may be unsubstituted or substituted by one or more suitable substituents as defined below Replace.
  • Cycloalkyl means a non-aromatic monovalent, monocyclic, bicyclic or tricyclic residue containing 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 or 14 carbon atoms. , each may be saturated or unsaturated, and may be unsubstituted or substituted by one or more suitable substituents as defined below, and may be fused to one or more heterocycloalkyl or aryl groups. Said heterocycloalkyl or aryl group may be unsubstituted or substituted by one or more suitable substituents as defined below.
  • Heterocycloalkyl means a non-aromatic monovalent monocyclic, bicyclic or tricyclic residue containing 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 or 14 carbon atoms. a group comprising 1, 2, 3, 4, 5 or 6 heteroatoms, the hetero atom comprising nitrogen, oxygen and sulfur, and fused to one or more heterocyclic fluorenyl or aryl groups, said hetero
  • the cycloalkyl or aryl group may be unsubstituted or substituted by one or more suitable substituents as defined below.
  • Aryl means phenyl, naphthyl, 5-6 membered aromatic heterocyclic ring containing one or two heteroatoms selected from nitrogen, oxygen and ⁇ , which may be un Substituted or substituted by one or more suitable substituents as defined below, and may be fused to one or more cycloalkyl, heterocycloalkyl or 5-6 membered aromatic heterocycles, said naphthenes
  • the benzyl, heterocycloalkyl or 5-6 membered aromatic heterocycle may itself be unsubstituted or substituted by one or more suitable substituents as defined below.
  • the "substituent group” is a hydroxyl group, a carboxyl group, a metal group, an alkyl group, an alkoxy group, an acyl group, a sulfonyl group or a fluorenyl group.
  • the 5- or 6-membered aromatic heterocyclic ring is a substituted or unsubstituted structural unit represented by the formula ( ⁇ ):
  • the substituent is a hydroxyl group, a carboxyl group, a halogen, an alkyl group, an alkoxy group, an acyl group, a sulfonyl group or a fluorenyl group.
  • the benzo-saturated or unsaturated heterogeneous is a substituted or unsubstituted structural unit represented by the formula ( ⁇ ):
  • the substituent is a hydroxyl group, a carboxyl group, a halogen, an alkyl group, an alkoxy group, an acyl group, a sulfonyl group or a fluorenyl group.
  • the invention also includes pharmaceutically acceptable salts thereof and pharmaceutically acceptable prodrugs.
  • the activity of the formula (I) of the present invention can be used to mediate the activity of a tryptase-like serine protease. More specifically, the compounds of the present invention are useful as anticoagulants and agents for modulating or inhibiting the serine protease activity of tryptase, thereby treating thrombosis and other cardiovascular diseases.
  • Pharmaceutically acceptable salts of the compounds of formula (I) include those derived from pharmaceutically acceptable inorganic and organic acids.
  • suitable acids include sulfuric acid, sulfurous acid, hydrochloric acid, acetic acid, hydrobromic acid, nitric acid, phosphoric acid, metaphosphoric acid, pyrophosphoric acid, maleic acid, fumaric acid, succinic acid, citric acid, perchloric acid, p-toluenesulfonic acid.
  • tartaric acid citric acid, acetic acid, propionic acid, heptanoic acid, oxalic acid, benzoic acid, malonic acid, succinic acid, succinic acid, maleic acid, hydroxybutyric acid, citric acid, methanesulfonic acid, benzene Sulfonic acid, lactic acid, mandelic acid.
  • the compound of the formula (I) of the present invention has one or more chiral carbon atoms in its structure, it may also exist as a racemate, a mixture of diastereomers and a pure enantiomer, all of which are Within the scope of the invention.
  • the invention further relates to pharmaceutically acceptable prodrugs of the formulae which, when administered, are capable of being metabolized to the active compound.
  • Suitable prodrugs are, for example, N-methoxycarbonyl protected derivatives of the formula or carboxylic acid protected derivatives.
  • a second object of the present invention is to provide a process for the preparation of a compound of formula (I) which comprises the step of preparing a final product starting from an amino acid protected by a protecting group at a nitrogen position.
  • the process can be prepared using existing processes.
  • the starting materials, reagents, techniques and methods used in the routes are well known and well known and understood by those of ordinary skill in the art.
  • the compounds of the invention can be prepared according to the following general procedure:
  • an amino acid is reacted with an acylating reagent and a base, and the resulting acid is coupled with a benzyl ester of an amino acid, followed by hydrogenation debenzylation, and the resulting acid is coupled to the desired amine.
  • a benzyl ester of an amino acid followed by hydrogenation debenzylation
  • the resulting acid is coupled to the desired amine.
  • Such as p-aminomethylbenzonitrile Such as p-aminomethylbenzonitrile.
  • the coupled product is further converted to hydrazine in two steps, including two steps of reaction with hydroxylamine hydrochloride and hydrogen for 4t.
  • a further alternative synthetic route is coupled to the desired amine using a nitrogen-substituted amino acid using a condensing agent such as EDCI/HOBt.
  • the coupling product is then converted to hydrazine by deprotection by hydrogenolysis.
  • amide coupling is carried out by standard peptide coupling method under an inert gas such as nitrogen, such as azide method, mixed acid anhydride method, carbodiimide (dicyclohexylcarbodiimide DCC, diisopropyl)
  • an inert gas such as nitrogen
  • azide method mixed acid anhydride method
  • carbodiimide dicyclohexylcarbodiimide DCC, diisopropyl
  • Some of these methods (especially the carbodiimide method) can be improved by the addition of 1-hydroxybenzotriazole HOBt. If necessary, the coupling reaction needs to be carried out in the presence of an acid-binding agent.
  • Suitable acid-binding agents are organic tertiary amines such as diisopropylethylamine, triethylamine, trimethylamine, pyridine, N-methylmorpholine. Etc., particularly preferably N-methylmorpholine or diisopropyl Ethylamine acts as an acid binding agent.
  • the above coupling reaction is carried out in the presence of an anhydrous solvent.
  • solvents which can be used include: dichlorodecane, tetrahydrofuran, diethyl ether, acetonitrile, dichloroacetic acid, ethyl acetate, hydrazine, hydrazine-dimercaptocarboxamide, Methyl sulfoxide.
  • the reaction temperature is usually not critical, and is preferably 0 to 30.
  • the reaction under C is 2 to 24 hours.
  • the method of removing the amino protecting group is carried out by a conventional method, for example, hydrolysis in the presence of an acid (for example, an organic acid such as trifluoroacetic acid, benzenesulfonic acid, citric acid or the like, or a mineral acid such as hydrochloric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid, etc.)
  • a base for example: an alkali metal or alkaline earth metal hydroxide, hydride, carbonate or hydrogencarbonate such as sodium hydroxide, potassium hydroxide, sodium hydride, carbonic acid clock, sodium hydrogencarbonate, etc., or organically reduced Hydrolysis in the presence of diisopropylethylamine, triethylamine, piperidine, etc., or by hydrogenolysis with hydrogen in the presence of a catalyst such as a metal catalyst such as palladium, platinum or nickel.
  • a catalyst such as a metal catalyst such as palladium, platinum or nickel.
  • Suitable methods can be found in "Protective Groups in Organic
  • the reaction can be carried out in the presence of a solvent which does not adversely influence the reaction.
  • solvents which can be used include: dichloromethane, alcohols such as decyl alcohol, ethanol, etc., tetrahydrofuran, dioxane, acetone, acetic acid, Ethyl acetate.
  • the reaction temperature is usually not critical, and is preferably 0 to 40 °C.
  • the method of removing the carboxylic acid protecting group is carried out by a conventional method, for example, in a base (for example, an alkali metal or alkaline earth metal hydroxide, hydride, carbonate or hydrogencarbonate such as sodium hydroxide, potassium hydroxide or sodium hydride).
  • a base for example, an alkali metal or alkaline earth metal hydroxide, hydride, carbonate or hydrogencarbonate such as sodium hydroxide, potassium hydroxide or sodium hydride.
  • the reaction can be carried out in the presence of a solvent which does not adversely influence the reaction.
  • solvents which can be used include: water, alcohols such as methanol, ethanol, etc., tetrahydrofuran, dioxane, acetone.
  • the reaction temperature is usually not critical, and is preferably 0 to 30 °C.
  • the alkylation reaction on N can be carried out by a reductive amination method and a nucleophilic substitution method. If using a nucleophilic substitution method.
  • Suitable nucleophilic substitution stories include, but are not limited to: alkyl bromides, alkyl iodides, alkyl chlorides, alkyl sulfonates, alkyl benzene carboxylic acid esters, decyl-p-phenylene terephthalate, alkyl sulfonate Ester or containing acid sulfate.
  • Methyl sulfate reagent Preferred are alkyl iodides or alkyl p-toluene sulfonates.
  • the nucleophilic substitution reaction needs to be carried out in the presence of an acid binding agent, and the appropriate acid binding agent may be an inorganic base (alkali metal or alkaline earth metal hydroxide, hydride, carbonate hydrogencarbonate, hydrogen phosphate, such as hydrogen peroxide).
  • an inorganic base alkali metal or alkaline earth metal hydroxide, hydride, carbonate hydrogencarbonate, hydrogen phosphate, such as hydrogen peroxide.
  • examples of sodium, sodium hydride, potassium carbonate, dipotassium hydrogen phosphate, etc. or organic bases such as diisoylethylamine, triethylamine, piperidine, etc.
  • organic tertiary amine such as diisopropylethylamine, triethylamine, trimethylamine, pyridine, N-decylmorpholine or the like, and particularly preferably dipotassium hydrogen or diisopropylethylamine as an acid binding agent.
  • solvents which can be selected include: tetrahydrofuran, dioxane, acetonitrile, acetone, N,N-dimethylformamide and the like.
  • the reaction temperature is preferably from 30 to 80. C.
  • a reductive amination method is used.
  • the reactants and corresponding aldehydes can be treated with a suitable reducing agent in a suitable solvent.
  • suitable reducing agents are well known in the art and include, but are not limited to, lithium tri-tert-butoxide, potassium borohydride, sodium borohydride, sodium triacetoxyborohydride, Raney nickel, lithium triethylborohydride, wherein Preference is given to potassium borohydride or sodium triacetoxyborohydride.
  • Suitable solvents for carrying out the reductive amination reaction are known in the art, such as decyl alcohol, ethanol, tetrahydrofuran, dichloroethane, acetonitrile, mixed solvents and the like.
  • the reaction temperature is preferably 0 to 50 ° C.
  • a third object of the present invention is to provide a compound of the formula (I) for use in inhibiting thrombin and for use in the treatment and prevention of thrombin-mediated and thrombin-related diseases.
  • the compounds of the invention are useful in the treatment and prevention of thrombin-mediated and thrombin-related diseases.
  • diseases include, but are not limited to, venous thrombosis and pulmonary embolism, arterial thrombosis such as myocardial ischemia, myocardial infarction, unstable angina, thrombosis-induced stroke and peripheral arterial formation; atherosclerotic diseases such as coronary artery disease, Cerebral arterial disease and peripheral arterial disease.
  • the compounds of the invention may also act as anticoagulants in extracorporeal blood lines.
  • Such compounds are expected to be useful in the prevention and treatment of myocardial infarction with thrombolytic agents. In addition, such compounds are expected to be useful to prevent the re-formation of thrombi after microsurgery. Such compounds have the expected utility in anticoagulant therapy for hemodialysis and disseminated intravascular coagulation. It can also be used for in vitro preservation of blood, plasma and other blood products.
  • the compounds of the invention are expected to be administered by the oral or parenteral route, such as intravenous, intramuscular, or subcutaneous injection.
  • Specific dosages for the therapeutic and prophylactic effects of the compounds administered in accordance with the present invention depend on the particular circumstances of the case, including the form of administration, the rate of administration, and the condition being treated.
  • a typical oral dose of sputum effective for administration is between about 0.01 mg/kg and about 1000 mg/kg; a typical daily dose for parenteral administration is between about 0.001 mg/kg and about 100 mg/kg.
  • the dosage may be administered in a different manner, such as a single daily dose, or 3 to 5 times a day. Such multiple doses may also be suitable. It is important to make the necessary routine adjustments to the dosage and mode of administration, depending on the age and weight of the patient and the severity of the condition being treated. The exact dose and route of administration should be determined by the attending physician.
  • a fourth object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition comprising the formula (I) The compound shown and a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the compounds of the invention may be administered in the form of a pharmaceutical composition.
  • a pharmaceutical composition for example, for oral administration, the compound is in the form of a capsule or tablet, which may contain an excipient such as a lubricant, a binder, a disintegrant or the like.
  • the compound is dissolved in a pharmaceutically acceptable vehicle such as sterile, non-pyrogenic water, physiological saline.
  • the dosage form can be a solid, semi-solid or liquid formulation made by techniques known per se.
  • the active ingredient in this composition is 0.1 °/ of the formula weight. To 99.9%.
  • the carrier, diluent or excipient used in the composition is compatible with the active ingredient and is not deleterious to the subject to be accepted.
  • the NMR instrument uses a Varian INOVA-400 nuclear magnetic resonance spectrometer with tetrakisyl silicon as the internal standard and the chemical shift ( ) in ppm.
  • Thin layer chromatography TLC, using HSG-F254 high-efficiency thin-layer chromatography silica gel prefabricated plate, Yantai Zhihuang Huangke Silica Development Test Factory
  • HPLC HPLC were used to detect the reaction and product purity.
  • the color was developed using iodine vapor or an ethanol solution irradiated with 254A and 310A UV lamps or 1% ninhydrin.
  • the reagents used were analytically pure unless otherwise specified, and the anhydrous solvents and reagents were treated in the usual manner.
  • the melting point was measured by a micro melting point tester, and the thermometer used was uncorrected.
  • HPLC Waters 1525 ; Detector: Waters 2487; Column: Phenomenex C18 (4.6x250mm, 5 ⁇ ); Detection wavelength: 220nm and 254; Column temperature: 40°C; Flow rate:
  • Mobile phase 1 A 0.1% aqueous trifluoroacetic acid solution B: acetonitrile
  • Method 1 Mobile phase A from 75% to 25%, gradient elution for 10 minutes
  • D,L-leucine (2g) was dissolved in 1.5N sodium hydroxide solution (10ml), dioxane (15ml) was added, cooling temperature control 0 ⁇ 5 °C; benzenesulfonyl chloride was slowly added dropwise (3g And 1.5N sodium hydroxide solution, maintain the pH value of 9 ⁇ 10; react at 0 degree for 2h, naturally rise to room temperature for 2h. Dilute hydrochloric acid was added dropwise under cooling to adjust the pH to 3, and then concentrated under reduced pressure to remove dioxane, and a large amount of solids was precipitated. The solid was recrystallized from ethyl acetate / petroleum ether to give 3.7 g of white solid. Content 99% (HPLC, mobile phase 1, method 2).
  • EtOAc N-Benzenesulfonyl-D,L-leucyl-L-proline benzyl ester
  • Example 2 The compound obtained in Example 1 was dissolved in acetic acid (7 ml), and acetic acid anhydride (277 mg) and 10% palladium carbon (150 mg) were added, and the mixture was reacted with hydrogen for 24 hours, filtered, and the solvent was evaporated. Place the refrigerator overnight, precipitate solids, filter dry ( 2 50mg, 66%)
  • D,L-leucine (2g) was dissolved in 1.5N sodium hydroxide solution (10ml), dioxane (15ml) was added, cooling temperature control 0 ⁇ 5 °C; benzylsulfonyl chloride was slowly added dropwise (3.2 g) and 1.5N sodium hydroxide solution, maintaining the pH value of 9 ⁇ 10; reacting at 0 degree for 2h, naturally rising to room temperature for 2h.
  • the dilute hydrochloric acid was added dropwise with stirring to adjust the pH to 3, and then concentrated under reduced pressure to remove dioxane, and a large amount of solid was precipitated; and the solid obtained was recrystallized from ethyl acetate / petroleum ether to give 3.5 g of white solid. Content 99% (HPLC, mobile phase 1, method 2).
  • N- benzylsulfonyl -D, L- leucine (4.3g), L- proline benzyl ester (4.1g) was dissolved in dichloromethane (50ml) in a nitrogen atmosphere, was added dropwise DIEA (4 cooling .7g), after completion of the addition, add HOBt (2g) and EDCI (3.8g), and naturally raise to room temperature for 4h. 2) Concentrate under reduced pressure to remove the reaction solution' Direct purification by column gave 5.3 g of a white blister solid (74.8 %), 98% (HPLC, mobile phase 1, method 1).
  • N-Benzylsulfonyl-D,L-leucyl-L-proline benzyl ester (1.2g) was dissolved in methanol (20ml), 10% palladium carbon (120mg) was added, hydrogen was passed, and reacted at room temperature for 3 hours. . Filtration and concentration under reduced pressure afforded a white solid (1 g, 99%).
  • Example 4 N-benzylsulfonyl-D, L-leucyl -L-prolyl- ⁇ [ 4 -( ⁇ '-hydroxy)methylnonylphenyl] decyl ⁇ amide acetate
  • the compound obtained in Example 3 was dissolved in acetic acid (7 ml), and acetic acid anhydride (270 mg) and 10% palladium carbon (140 mg) were added, and the mixture was reacted with hydrogen for 24 hours, filtered, and the solvent was evaporated. Place the refrigerator overnight, precipitate solids, filter dry ( 54 0mg, 62.7%)
  • D,L-leucine (2g) was dissolved in 1.5N sodium hydroxide solution (10ml), dioxane (15ml) was added, cooling temperature control 0 ⁇ 5 °C; benzoyl chloride was slowly added dropwise (2.3 g) and 1.5N sodium hydroxide solution, maintain the pH value of 9 ⁇ 10; react at 0 degree for 2h, naturally rise to room temperature for 2h. Under cooling, dilute hydrochloric acid was added dropwise to adjust the pH to 3, and concentrated under reduced pressure to remove dioxane.
  • the aqueous phase was extracted with ethyl acetate (20 ml*3), and the obtained organic phase was acid washed, alkali washed, washed with water to neutral, anhydrous sulfuric acid The sodium was dried and the filtrate was concentrated to give 2.6 g of EtOAc.
  • the content is 92% (HPLC, mobile phase 1, method 2).
  • N-benzoyl-D, L-leucine (2.3 g), L-valine benzyl ester (2.7 g) was dissolved in dichloromethane (50 ml), protected with nitrogen, and DIEA (3 g) was added dropwise under cooling. After the addition, HOBt (1.5 g) and EDCI (2.5 g) were added, and the mixture was naturally allowed to react to room temperature for 4 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure and purified by column chromatography to afford 3,3 g of pale oil (72%), 98% (HPLC, mobile phase 1, method 1).
  • the product obtained in the above step (861 mg) was dissolved in water/ethanol (20 ml / 20 ml), and then filtered with nitrogen, and the mixture was reacted with hydrogenamine, and the mixture was reacted with hydrogenamine and sodium carbonate, and the mixture was refluxed for 2 hours, and the solvent was evaporated under reduced pressure. 863mg, 94.7%).
  • Example 5 The compound obtained in Example 5 (500 mg) was dissolved in acetic acid (7 ml), and acetic acid anhydride (250 mg) and 10% palladium carbon (120 mg) were added, and the mixture was reacted with hydrogen for 24 hours, filtered, and concentrated under reduced pressure. 20ml), placed in the refrigerator overnight, precipitated solid, filtered and dried (424mg, 81%)
  • Example 9 N-carboxymethyl-D, L-leucyl-L-prolyl - ([4-(N,-hydroxy)methylnonylphenyl]methyl ⁇ amide hydrochloride
  • N-(tert-Butoxycarbonyl)decyl-N-tert-butoxycarbonyl-D,L-leucine benzyl ester (3.5 g) was dissolved in methanol (25 ml), and 10% palladium carbon (200 mg) was added. Hydrogen was reacted at room temperature for 3 hours. Filtration and concentration under reduced pressure afforded EtOAc. Directly proceed to the next step.
  • EtOAc EtOAc
  • Example 13 The compound obtained in Example 13 (500 mg) was dissolved in acetic acid (7 ml), and acetic anhydride (200 mg) and 10% palladium carbon (llOmg) were added, and the mixture was reacted with hydrogen for 24 hours, filtered, and concentrated under reduced pressure. 20ml), placed in a water tank overnight, precipitated solid, filtered and dried (321mg, 59%)
  • N-(tert-butoxycarbonyl)methyl-N-tert-butoxycarbonyl-D,L-leucine benzyl ester (1.7 g) was dissolved in methanol (25 ml), and 10% palladium carbon (200 mg) was added. Hydrogen was passed and reacted at room temperature for 3 hours. Filtration and concentration under reduced pressure afforded EtOAc m. ). Directly proceed to the next step. d) Preparation of N-(tert-butoxycarbonyl)decyl-N-tert-butoxycarbonyl-D,L-isoleucine-L-prolyl-[(4-arylphenyl)indenyl]amide
  • the product obtained in the above step (680 mg) was dissolved in water/ethanol (20 ml / 20 ml), and then filtered with nitrogen, and the mixture was reacted with hydrogenamine, and hydroxylamine hydrochloride and sodium carbonate were added thereto, and the mixture was refluxed for 2 hours, cooled, and concentrated under reduced pressure to remove solvent. 780mg, 97.8%).
  • D-leucine 13.11g was dissolved in 1.5N sodium hydroxide solution ( 80 ml) to add dioxane (80ml), cooling temperature control 0 ⁇ 5 °C; slowly add benzenesulfonyl chloride (19.8g) and 1.5N sodium hydroxide solution to maintain the pH value of 9 ⁇ 10; react at 0 degree for 2h, naturally rise to room temperature for 2h .
  • Dilute hydrochloric acid was added dropwise under cooling to adjust the pH to 3, and concentrated under reduced pressure to remove dioxane, and a large amount of solids was precipitated. The solid was recrystallized from ethyl acetate/ petroleum ether to give a white solid. Content 99% (HPLC, mobile phase 1, method 2).
  • N-Benzenesulfonyl-D-leucine (406 mg), L-prolyl-([(4-(N-benzyloxy)methalyl)methyl)amide hydrochloride (625 mg) , DIEA (426 mg) was dissolved in anhydrous dichloromethane (20 ml), EtOAc (EtOAc), EtOAc (EtOAc). The mixture was reacted for 5 hours at room temperature. The organic layer was washed successively with 5% aqueous potassium hydrogen sulfate solution, saturated sodium hydrogen carbonate solution and saturated aqueous sodium chloride solution, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure White foamy solid (707 mg, yield: 74%).
  • N-benzoyl-D-leucine ( 3 66 mg), L-prolyl- ⁇ [(4-(N-benzyloxycarbonyl)methylnonylphenyl]methyl ⁇ amide hydrochloride (626 mg) , DIEA (426 mg) was dissolved in anhydrous dichloromethane (20 ml), EtOAc (EtOAc). The reaction was carried out for 5 hours. The organic layer was washed with EtOAc EtOAc EtOAc EtOAc EtOAc. Solid (600 mg, yield: 67%).
  • D-leucine ( ) was dissolved in 1.5N sodium hydroxide solution (10ml), dioxane (15ml) was added, and the temperature was controlled by cooling to 0 ⁇ 5 °C.
  • the dyke was added with phenylacetyl chloride (2.4g).
  • 1.5N sodium hydroxide solution maintain the pH value of 9 ⁇ 10; react at 0 degree for 2h, naturally rise to room temperature for 2h.
  • the mixture was diluted with dilute hydrochloric acid under cooling to adjust the pH to 3, and concentrated under reduced pressure to remove dioxane.
  • N-Phenylacetyl-D-leucine (379 mg:), L-prolyl- ⁇ [(4-(N-benzyloxycarbonyl)nonylphenyl]decyl ⁇ amide hydrochloride (626 mg) , DIEA (426 mg) was dissolved in anhydrous dichloromethane (20 ml), EtOAc (EtOAc) (HHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHH
  • N-(tert-butoxy-reactive)methyl-D-leucine benzyl ester (3.74 g) was dissolved in dichloromethane (40 ml), DIEA (1.4 g) and di-tert-butyl dicarbonate (3.2) were added dropwise. g), 40 ° C reaction for 36h. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure and purified by chromatography to afford 3.5 g (yield:
  • N-(tert-Butoxycarbonyl)methyl-N-tert-butoxycarbonyl-D-leucine (528 mg)
  • L-prolyl- ⁇ [4-(N-benzyloxycarbonyl)carbamyl Phenyl]hydrazino ⁇ amide hydrochloride (626 mg)
  • DIEA 426 mg
  • EDCI 345 mg was stirred at 0 ° C for 20 min, then allowed to warm to room temperature and reacted for 5 hours.
  • D-isoleucine (262 mg) was dissolved in 1.5N sodium hydroxide solution (4 ml), dioxane (4 ml) was added, and the temperature was controlled to 0 to 5 ° C.
  • the benzenesulfonyl chloride (389 mg) was slowly added dropwise.
  • 1.5N sodium hydroxide solution maintain the pH value of 9 ⁇ 10; react at 0 degree for 2h, naturally rise to room temperature for 2h.
  • the mixture was diluted with EtOAc (3 mL). 434 mg of a colorless oil, solidified on standing. Content 99% (HPLC, mobile phase 1, method 2).
  • N-benzoic acid leucyl-L-proline (406 mg:), L-prolyl-([(4-(N-benzyloxyindolyl)methyl)phenyl]indolyl ⁇ amide salt
  • the acid salt (625 mg) and DIEA (426 mg) were dissolved in anhydrous dichloromethane (20 ml), EtOAc (EtOAc), EtOAc EtOAc. , naturally rise to room temperature, react for 5 hours. Use 5% potassium hydrogen sulfate solution 'saturated carbon The organic layer was washed with aq. EtOAc EtOAc (EtOAc m.
  • N-benzoic acid-D-leucyl-L-homoproline benzyl ester (lg) was dissolved in methanol (10 ml), 10% palladium on carbon (100 mg) was added, and hydrogen was reacted at room temperature for 3 hours. Filtration and concentration under reduced pressure gave a white solid (yield: ⁇ /RTI> ⁇ RTIgt; c) Preparation of N-phenylsulfonyl-D-leucyl-L-homoacyl- ⁇ [4-(N-benzyloxy)m-methylphenyl]methyl]amide
  • N-Benzenesulfonyl-D-leucyl-L-prolyl-[(5-cyano-2-thienyl)methyl]amide 500 mg was dissolved in methanol (15 ml), and 10% palladium carbon was added. (50 mg), a hydrogen-reaction reaction, 40 hrs, EtOAc (EtOAc) (EtOAc) .
  • D-leucine (1.3g) was dissolved in 1.5N sodium hydroxide solution (10ml). Add dioxane (30ml), cool and control temperature 0 ⁇ 5°C; slowly add dimethylaminosulfonyl chloride (1.4 g of) and 1.5N sodium hydroxide solution, maintaining the pH value of 9 to 10; the reaction at 0 ° 2h, warm naturally to room temperature 2 h. Adding dilute hydrochloric acid dropwise under cooling to adjust the pH to 3, and distilling under reduced pressure to remove dioxane. The aqueous phase is extracted with ethyl acetate ( 20 ml* 3 ). The obtained organic phase is acid washed, washed with alkali, washed with water until neutral. Drying over sodium sulfate, the filtrate was concentrated and purified mjjjjjj 97% (HPLC, mobile phase 1, method 2).
  • D-leucine (1.3g) was dissolved in 1.5N sodium hydroxide solution (10ml), dioxane (30ml) was added, cooling temperature control 0 ⁇ 5 °C; methanesulfonyl chloride was slowly added dropwise (l. LG) and 1.5N sodium hydroxide solution, maintaining the pH value of 9 to 10; 2h at 0 ° the reaction, the reaction was warmed to room temperature NATURAL 2 h.
  • the mixture was diluted with dilute hydrochloric acid under cooling to adjust the pH to 3, and concentrated under reduced pressure to remove dioxane.
  • N-methanesulfonyl-D-leucine 31 5 mg
  • L-prolyl- ⁇ [4-(N-benzyloxycarbonyl)nonylphenyl]indolyl ⁇ amide hydrochloride 625 mg
  • DIEA 426 mg
  • EtOAc EtOAc
  • the organic layer was washed with 5% aqueous solution of potassium hydrogencarbonate, saturated aqueous sodium hydrogen carbonate and saturated aqueous sodium chloride solution, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure.
  • White foamy solid 300 mg, yield: 47%).
  • D-leucine (1.4g) was dissolved in 1.5N sodium hydroxide solution (10ml), dioxane (10ml) was added, cooling temperature control 0 ⁇ 5 °C; ethane decanoyl chloride was slowly added dropwise (1.3 g) and 1.5N sodium hydroxide solution, maintaining the pH value of 9 ⁇ 10; reacting at 0 degree for 2h, naturally rising to room temperature for 2h.
  • the mixture was diluted with dilute hydrochloric acid under cooling to adjust the pH to 3, and concentrated under reduced pressure to remove dioxane.
  • the aqueous phase was extracted with ethyl acetate (20 ml*3), and the obtained organic phase was acid washed, washed with alkali, washed with water to neutral, anhydrous sulfuric acid The mixture was dried over sodium sulfate. Content 98% (HPLC, mobile phase 1, method 2).
  • D-leucine (1.3g) was dissolved in 1.5N sodium hydroxide solution (10ml), dioxane (10ml) was added, and the temperature was controlled by 0 ⁇ 5 °C.
  • cyclopropanesulfonyl chloride (1.4) g) and 1.5N sodium hydroxide solution, maintaining the pH value of 9 ⁇ 10; reacting at 0 degree for 2h, naturally rising to room temperature for 2h.
  • the mixture was diluted with dilute hydrochloric acid under cooling to adjust the pH to 3, and concentrated under reduced pressure to remove dioxane.
  • the aqueous phase was extracted with ethyl acetate ( 20 ml* 3 ), and the obtained organic phase was acid washed, washed with alkali, washed with water until neutral.
  • the sodium sulfate was dried and the filtrate was concentrated and purified by column to yield 658 mg of EtOAc. 98% content (HPLC, mobile phase 1, method 2).
  • N-cyclopropanesulfonyl leucine (355 mg), L-prolyl- ⁇ [(4-(N-benzyloxycarbonyl)methylmercaptophenyl] hydrazino) amide hydrochloride (625 mg), DIEA (426 mg) was dissolved in methylene chloride (20 ml), EtOAc (EtOAc) (HHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHH
  • N-tert-Butoxycarbonylleucine (349 mg), L-prolyl- ⁇ [4-(N-benzyloxycarbonyl) hydrazine Base phenyl] hydrazino ⁇ amide hydrochloride (625 mg), DIEA (426 mg) was dissolved in anhydrous dichloromethane (20 ml), EtOAc (EtOAc), EtOAc EtOAc. The mixture was stirred at 0 ° C for 20 min, naturally raised to room temperature, and reacted for 5 hours. The organic layer was washed with aq. 5% EtOAc EtOAc. EtOAc. Rate: 69%).
  • D-leucine (1.5g) was dissolved in 1.5N sodium sulphate solution (10ml), dioxane (10ml) was added, cooling temperature control 0 ⁇ 5 °C; methyl chloroformate was slowly added dropwise (lg And 1.5N sodium hydroxide solution, maintain the pH value of 9 ⁇ 10; react at 0 degree for 2h, naturally rise to room temperature for 2h.
  • the mixture was diluted with dilute hydrochloric acid under cooling to adjust the pH to 3, and concentrated under reduced pressure to remove dioxane.
  • the ice phase was extracted with ethyl acetate (20 ml*3), and the obtained organic phase was acid washed, washed with alkali, washed with water to neutral, anhydrous sulfuric acid The mixture was dried over sodium sulfate. Content 98% (HPLC, mobile phase 1, method 2).
  • N-methoxycarbonyl-D-leucine (288 mg), L-prolyl- ⁇ [(4-(N-benzyloxycarbonyl)methylnonylphenyl]methyl ⁇ amide hydrochloride (625 mg) , DIEA (426 mg) was dissolved in anhydrous dichloromethane (20 ml). The mixture was cooled to 0 ° C. The organic layer was washed with EtOAc EtOAc EtOAc EtOAc. Rate: 53%).
  • N-p-methoxyphenylacetyl-D-leucine (1.9 g), L-valyl-[(4-cyanophenyl)methyl]amide hydrochloride (2.13 g), DIEA ( 2.27 g) Dissolved in anhydrous dichloromethane (20 ml), EtOAc (EtOAc), EtOAcjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjj
  • the organic layer was washed with 5% aqueous solution of potassium hydrogen sulfate, saturated aqueous sodium hydrogen carbonate and saturated aqueous sodium chloride, and dried over anhydrous sodium sulfate. (598 mg, yield: 66%).
  • N-(tert-Butoxycarbonyl)methyl-N-tert-butoxycarbonyl-D-leucine (690 mg), L-prolyl-[(5-cyano-2-thienyl)methyl]amide Hydrochloride (543 mg), DIEA C 569 mg) was dissolved in anhydrous dichloromethane (20 ml), and then filtered and evaporated to EtOAc. EtOAc EtOAc EtOAc EtOAc After 20 min, it was naturally warmed to room temperature and reacted for 5 hours.
  • the organic layer was washed successively with a 5% aqueous solution of sodium hydrogen sulfate, a saturated aqueous solution of sodium hydrogencarbonate and a saturated aqueous solution of sodium chloride and dried over anhydrous sodium sulfate. , yield: 92%).
  • N-Benzenesulfonylleucyl-L-prolyl-[(4-carbamidophenyl)indolyl]amide hydrochloride (536 mg) was dissolved in tetrahydrofuran (20 ml), and DIEA was added dropwise with cooling. 258 mg), DMF (2 mi) was added after the dropwise addition, hexanoyl chloride (135 mg) was slowly added dropwise, and the mixture was naturally warmed to room temperature for 8 h. The reaction solution was concentrated under reduced pressure and purified directly by column to yield 300 mg of white viscous solid (50%) o
  • D-leucine (1.4g) was dissolved in 1.5N sodium hydroxide solution (10ml), dioxane (10ml) was added, and the temperature was controlled by cooling to 0 ⁇ 5 °C.
  • Base benzenesulfonyl chloride (1.9g) and 1.5N sodium hydroxide solution, maintaining the pH value of 9 ⁇ 10; reacting at 0 degree for 2h, naturally rising to room temperature for 2h.
  • the dioxane was removed, and the aqueous phase was extracted with ethyl acetate (20 ml*3). The obtained organic layer was washed with acid, and then washed with EtOAc. .
  • N-p-Mercaptobenzoyl-D-leucine (676 mg), L-prolyl- ⁇ [4-(N-benzyloxyindenyl)nonylphenyl]decyl ⁇ amide hydrochloride
  • the salt (lg), DIEA (830 mg) was dissolved in methylene chloride (40 ml), EtOAc (EtOAc) (HHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHH
  • the organic layer was washed with 5% aqueous potassium hydrogen sulfate solution, saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution and saturated aqueous sodium chloride solution, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced
  • the white foamy solid (U5g, yield: 74.9%) was purified.
  • D-leucine (1.4 g) was dissolved in 1.5 N sodium hydroxide solution (10 ml), dioxane (10 ml) was added, and the temperature was controlled to 0 to 5.
  • C slowly add p-tert-butyl sulfonyl chloride (2.3g) and 1.5N sodium hydroxide solution to maintain pH 9 ⁇ 10; react at 0 °C for 2h, naturally rise to room temperature for 2h.
  • the mixture was diluted with dilute hydrochloric acid under cooling to adjust the pH to 3, and concentrated under reduced pressure to remove dioxane.
  • N-p-tert-butylbenzenesulfonyl-D-leucine (1.8 g), L-prolyl- ⁇ [(4-(N-benzyloxycarbonyl)methylnonylphenyl]decyl ⁇ amide salt
  • the acid salt (2.5 g) and DIEA (L92g) were dissolved in methylene chloride (40 ml), EtOAc (EtOAc) (HHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHH
  • D-leucine (1.4g) was dissolved in 1.5N sodium hydroxide solution (10ml), dioxane (10ml) was added, and the temperature was controlled by cooling to 0 ⁇ 5 °C; p-fluorobenzoyl chloride was slowly added dropwise ( 1.95g) and L5N sodium hydroxide solution, maintain pH 9 ⁇ 10; react at 0 degree for 2h, naturally rise to room temperature for 2h.
  • the mixture was diluted with hydrochloric acid under cooling to adjust the pH to 3, and concentrated under reduced pressure to remove dioxane.
  • N-p-fluorobenzenesulfonyl-D-leucine ( 2 , ), L-prolyl- ⁇ [4-(N-benzyloxy)-mercaptophenyl]methyl ⁇ amide hydrochloride The salt (3.6 g) and DIEA (2.9 g) were dissolved in anhydrous dichloromethane ( 40 ml), and then filtered with nitrogen. After cooling to 0 ° C, HOBt (lg), EDCI (1.73 g) was added at 0 ° C The mixture was stirred for 20 min, and then the mixture was stirred and evaporated to dryness. EtOAc EtOAc. g, Purified by column chromatography to give a white solid (3.4 g, yield: 69.5%).
  • D-leucine (1.4 g) was dissolved in 1.5N sodium hydroxide solution (10 ml), dioxane (10 ml) was added, and the temperature was controlled to be 0 to 5 ° C.
  • the p-bromobenzoic acid chloride was slowly added dropwise ( 2.5g) and 1.5N sodium hydroxide solution, maintaining the pH value of 9 ⁇ 10; reacting at 0 degree for 2h, naturally rising to room temperature for 2h.
  • the mixture was diluted with dilute hydrochloric acid under cooling to adjust the pH to 3, and concentrated under reduced pressure to remove dioxane.
  • the aqueous phase was extracted with ethyl acetate (20 ml*3), and the obtained organic phase was acid washed, washed with alkali, washed with water to neutral, anhydrous sulfuric acid The mixture was dried over sodium sulfate.
  • N-p-bromobenzenesulfonyl-D-leucine (3.3 g), L-prolyl-[[4-( ⁇ -benzyloxycarbonyl)nonylphenyl]methyl ⁇ amide hydrochloride (4.3g), DIEA (3.1g) was dissolved in anhydrous dichloromethane (40ml), protected with nitrogen, cooled to 0 ° C, then added HOBt (1.3g), EDCI (2.2g), at 0 ° C After stirring for 20 minutes, the mixture was stirred to room temperature and reacted for 5 hours.
  • D-leucine (1.4g) was dissolved in 1.5N sodium hydroxide solution (10ml), dioxane (10ml) was added, cooling temperature control 0 ⁇ 5 °C; slow addition of para-acetamidobenzenesulfonyl chloride (2,33g) and 1.5N sodium hydroxide solution, maintaining the pH value of 9 ⁇ 10; reacting at 0 degree for 2h, naturally rising to room temperature for 2h.
  • the mixture was diluted with dilute hydrochloric acid under cooling to adjust the pH to 3, and concentrated under reduced pressure to remove dioxane.
  • the aqueous phase was extracted with ethyl acetate (20ml*3), and the organic phase was acid washed, washed with alkali, washed with water to neutral, anhydrous sulfuric acid The mixture was dried over sodium sulfate.
  • N-p-acetamidobenzenesulfonyl-D-leucine (1.64 g), L-prolyl- ⁇ [(4-(N-benzyloxycarbonyl)methylindenyl]decyl ⁇ amide hydrochloride (2.26g), DIEA (1.74g) was dissolved in anhydrous dichloromethane (40ml), EtOAc (m.), EtOAc, EtOAc, EtOAc. The organic layer was washed with 5% potassium hydrogensulfate solution, saturated sodium hydrogen carbonate solution and saturated aqueous sodium chloride solution, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure to give crude product 3 g. Column chromatography gave a white foamy solid (2.64 g, yield: 76.4 /).
  • the aqueous phase was extracted with ethyl acetate (20 ml*3), and the obtained organic phase was acid washed, washed with alkali, washed with water to neutral, anhydrous sulfuric acid The sodium was dried, and the filtrate was evaporated.
  • N- 1-Naphthalenesulfonyl-D-leucine (1.6 g), L-prolyl- ⁇ [4-(N-benzyloxycarbonyl)nonylphenyl]decyl ⁇ amide hydrochloride (2.26g), DIEA (1.47g) was dissolved in anhydrous dichloromethane (40ml), EtOAc (m.) The mixture was allowed to warm to room temperature and reacted for 5 hours. The organic layer was washed with 5% aqueous potassium hydrogen sulfate solution, saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution and brine, and dried over anhydrous sodium sulfate. Purification by chromatography gave a white solid (2.5 g, yield: 74%).
  • D-leucine (1.4 g) was dissolved in 1.5 N sodium hydroxide solution (10 ml) to add dioxane (10ml), cooling temperature control 0 ⁇ 5°C; slowly add 2-naphthalenesulfonyl chloride (2.27g) and 1.5N sodium hydroxide solution to maintain pH 9 ⁇ 10; react at 0 degree for 2h, naturally rise to The reaction was carried out for 2 h at room temperature. The mixture was diluted with dilute hydrochloric acid under cooling to adjust the pH to 3, and concentrated under reduced pressure to remove dioxane.
  • the aqueous phase was extracted with ethyl acetate (20 ml*3), and the obtained organic phase was acid washed, washed with alkali, washed with water to neutral, anhydrous sulfuric acid The mixture was dried over sodium sulfate.
  • N- 2 -Naphthalenesulfonyl-D-leucine (1,6g), L-prolyl- ⁇ [( 4- (benzyloxycarbonyl)nonylphenyl]methyl)amide hydrochloride The salt (2.26 g) and DIEA (1.47 g) were dissolved in anhydrous dichloromethane (40 ml), and then evaporated tolu. The organic layer was washed with 5% potassium hydrogensulfate solution, saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution and saturated aqueous sodium chloride solution, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure to give 3.8 g of crude product. The white solid was isolated (2.2 g, yield: 64%).
  • the sample to be tested was added to a drunken reaction system containing 0.15 U/ml of the lyophilized bovine thrombin standard purified from bovine blood, and the specific substrate S2238 was added after 15 minutes of incubation ( 0.075 ⁇ ), using a UV detector, dynamically detects changes in absorbance at 40 5 ⁇ in 4 minutes at room temperature. Calculate the inhibition rate of the enzyme activity ( ⁇ 1 ⁇ 4In ibition ) by the formula according to formula 1.
  • AAs indicates that the rate of change of the absorbance is suppressed
  • AAc indicates that the rate of change of the absorbance is not suppressed.
  • the IC 50 value (the concentration of the drug when the enzyme activity is inhibited by 50%) is the logarithm of the inhibition rate (%In ibition) to the sample concentration, and the nonlinear fitting calculation is performed by Equation 2.
  • Equation 2 which represents the Hill coefficient
  • the active ingredient refers to a compound of the formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof.
  • the following formulation examples are illustrative only and are not intended to limit the scope of the invention in any way.
  • the active ingredient refers to a compound of the formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof.
  • Example 61 Preparation of an injection Prescription:
  • An appropriate dilute acid or base or buffer salt may be added to adjust the pH to the most stable state, and may also include an antioxidant or a metal chelating agent.
  • the solution is sterilized by filtration and filled under sterile conditions in a sterile ampoule.
  • Example 62 Preparation of tablets
  • Example 63 Preparation of hard gelatin
  • the active ingredient is sieved, mixed with sodium carboxymethyl cellulose and syrup to form a homogenous paste.
  • the pigment and benzoic acid are diluted with a part of purified water, added to the paste under stirring, and then added. Water to produce the required volume.

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Description

作为凝血酶抑制剂的脯氨酰胺衍生物、 其制备方法及应用
技术领域
本发明涉及新的药用化合物， 具体涉及该类化合物的制备方法、 其作为 药物的用途以及含有它们的药用组合物。本发明的新的药用化合物可作为类 胰蛋白酶丝氨酸蛋白酶， 特别是凝血酶的竟争性抑制剂。 背景技术
世界上心脑血管疾病的死亡率一直居于第二位，其中血栓栓塞是造成高 比率心脑血管疾病发病和死亡的主要原因。尤其随着人们生活方式的变化以 及人口老龄化程度日益加剧， 这类疾病的发病率呈现出持续上升的趋势。 这 使得探索和研究有效防治此类疾病的药物显得尤为紧迫， 无论在临床应用还 是基 研究方面都具有重大意义。
目前临床使用的传统抗凝药物如肝素、华法林和水蛭素等在疗效和安全 性方面存在严重缺陷， 使其应用受到很大限制。 如肝素必须注射使用， 且对 血凝块中的凝血酶无作用， 并可引起血小板减少症状； 华法林为唯一的口服 药物， 但由于没有明确的药物靶标， 个体抗凝反应差异较大， 影响因素多， 需进行凝血功能监测。 因此研究开发人工合成的具有口服活性的新抗凝药物 十分重要。
血液凝固是复杂的系列酶作用的结果，其中关键的一步是凝血酶原活化 生成凝血酶。 凝血酶是一种类胰蛋白酶的丝氨酸蛋白酶， 主要作用是水解纤 维蛋白原生成不溶性的纤维状凝合物。 在血液凝固级联反应中起关键作用。 因此， 抑制凝血酶的活性， 就能阻断血栓的形成。 由于其靶点明确且与传统 抗凝药物的作用靶点不同， 直接凝血酶抑制剂 （DTI )有望克服传统抗凝药 的应用局限性。 很明显， 对血栓行程的方便治疗控制、 有效的选择性且具有 口服生物药效的凝血酶抑制剂代表了一个具吸引力的目标。
在过去三十多年里， 以人工合成的凝血酶抑制剂作为抗凝血活性研究取 得许多重大的进步， 大量的高活性和高选择性的小分子凝血酶抑制剂被报 导。 如在 US4346078中^ 了 D-Phe-Pro- Arg-H和 Me-D-Phe- Pro-Arg-H三 肽醛类凝血酶抑制剂。 近来， 在 US4346078 和 W09311152 中描述了 D-Phe-Pro-胍丁胺及其衍生物作为凝血酶抑制剂。 后来， 又在 W09429336 和 WO9523609中^ Ji了一种三肽型抑制剂， 在 P1位掺入 4-脒基苄胺以代 替胍丁胺等等。
在 US4101653 中， Okamoto 等公开了以 N-对曱苯磺酰基精氨酸甲酯 ( TAMA ) 为凝血酶底物， 设计合成了系列精氨酸衍生物， 发现阿加曲班 ( argatroban )具有很好的抑制凝血酶活性。经药理临床研究已于 2001年 FDA 批准作为注射剂上市， 阿加曲班是一种可逆竟争性凝血酶抑制剂， 与凝血酶 的活性部位结合而发挥作用， 对凝血酶有高度选择性。 临床用于治疗外周血 栓病和急性脑卒中 , 也可用于肝素诱发的血小板减少和血栓综合征。
同样， Stikzebecher等按 TAMA的结构，设计合成系列苯甲脒类化合物， 进一步结构改造发现 NAPAP 的抑制凝血酶活性比阿加曲班强一倍（J Med Chem, 1994, 37, 3889 X 将 NAPAP的苯曱脒改为哌啶甲脒的系列化合物 也有较高的抑制凝血酶活性， 其中 Hoffinann-La Roche 公司合成的 napsagatran活性最强， 对血纤维原蛋白酶也有作用， 曾进行 II期临床研究， 但半衰期短， 口服生物利用度差。
Astra公司在 W09429336 公开了一类苯曱脒类似物， 其中美拉加群 ( melagatran )有强效抑制凝血酶活性， 无明显出血问题可安全地用于深度 静脉血栓 ( DVT ) ，但口服生物利用度低， 进一步合成其双前体药希美拉加 群（ximelagatran ), 于 2004年上市。 是继华法林后的 60多年里第一个口服 的抗凝血药物， 但上市后在临床中发现严重肝损伤， 于 2006年 2月终止。
另外， W09311152, WO9715190、 US5510369中报道了一类在 P3位上 带有独特的 D-二苯基甘氨酸的凝血酶抑制剂。 据报道这类化合物与相应的 D-苯基甘氨酸类似物相比，抗凝血酶活性更高（ J Med Chem, 1997, 40， 830 )， 其中的一些化合物具有较好的口服生物利用率（ J Med Chem, 1997, 40, 3687; J Med Chem, 1997, 40, 3726 )。
已报道的化合物中只有少数具有适合的体内药动学和药效学性质。迄今 为止， 凝血酶抑制剂的研究仍然是目前药物化学领域中的热门研究课题之
发明内容
本发明的第一个目的是提供一类新颖的式（I ) 所示的化合物' 其药学 上可接受的盐和其药学上可接受的前体药物:
Figure imgf000005_0001
(I)
其中：
A代表 烷基、 环烷基、 杂环烷基、 芳基、 - SC^R1 -SO3R1. -COR1, -C02R1, -POCOR1^. -R2-环烷基、 -R2-杂环烷基、 -R2-芳基、 -R2S02R - R2S03R1, -R^OR1, -R2C02R^ 或 - R2PO(OR')2;
其中：
Rl代表氢、 烷基、 环烷基、 杂环烷基、 芳基、 -R3-环烷基、 -R3-杂环 烷基、 -R3-芳基、 链烯基或- NR4R5;
R2和 R3代表 d~6烷基； 其中：
R4和 R5独立的代表氢、 d~6烷基、 环烷基或杂环烷基；
Figure imgf000005_0002
其中环上的取代基可为羧基、 卤素、 烷基、 烷氧基、 酰基、 磺酰基、 巯 基、 烷硫基、 环炕基、 杂环烷基、 氨基、 烷氨基、 二烷氨基、 氰基、 酯基、 曱基或带上述基团的 CM的烷基 c
F代表 -NH-(C¾)m- R6;
其中：
m代表 0~3； 6
Figure imgf000006_0001
其中：
X、 Υ和 Ζ独立 、 N;
Figure imgf000006_0002
其中：
π代表。〜 3;
p代表 1〜8;
R7代表氢或 烷基。
根据本发明优选的方面， 式（I) 的化合物中， A代表- 02ϊίλ -S03RK - <Χ)Ελ -CO 1 -PO OR1^ - R2-环烷基、 - R2-杂环烷基、 - R2-芳基、 - SC^R1, -R2S03R^ -R2COR -R2C02R 或 - R2PO(OR')2;
其中：
R1代表氢、 烷基、 环烷基、 杂环烷基、 芳基、 -R3-环烷基、 -R3-杂环 烷基、 -R3-芳基、 链烯基或 -NR4R5;
R2和 R3代表 ~6烷基； 其中 R4和 R5 表氢、 6烷基、 环烷基或杂环烷基;
或未取代的
Figure imgf000007_0001
其中环上的取代基可为羧基、 卤素、 烷基、 烷氧基、 酰基、 磺酰基、 巯 基、 烷硫基、 环烷基、 杂环烷基、 氨基、 烷氨基、 二烷氨基、 氰基、 酯基、 三氟曱基或带上述基团的 CM的炕基。
F代表 - NH-(CH2)M-R6;
其 t :
m代表。〜 3;
R6代表未取代的
Figure imgf000007_0002
或
其中：
X、 Y和 Z独立的代表 S、 0或 N;
Figure imgf000007_0003
Figure imgf000008_0001
其中：
n代表 0~3;
p代表 1〜6;
R7代表氩或 C^6烷基。
在这些化合物中， 特别 其中 A代表- SC^R^ -COR1, -C02 !. - R2-环烷基、 - - R2-芳基、 - I^SC^R1, - R2CORi或- R2C02Rl;
其中：
R1代表氢、 烷基、 环烷基、 杂环烷基、 芳基、 -R3-环烷基、 -R3-杂环 皖基、 -R3-芳基、 链烯基或 -NR4R5;
R2和 R3代表 C 6烷基； ' 其中：
R4和 R5独立的代表氢、 d~6垸基、 环烷基或杂环烷基；
E为
Figure imgf000008_0002
、
F为-丽 -(C¾)m-R6;
其中：
m为 1;
Figure imgf000008_0003
Figure imgf000009_0001
：
n代表。〜 3;
p代表 1~6;
R7代表氪或 Ci~6烷基。
在式（I )化合物中， 更优选的化合物组为：
其中 A代表 -S02R'、 -S03R -C02R -PO(O ')2, - R2-环烷基、 - R2-杂 环烷基、 - R2-芳基、 - R2S02R^ - R^OaR1 , - R2COR' , - R2C02R 或- R^OfOR1^;
其中：
R1代表氢、 ~6烷基、 环烷基、 杂环烷基、 芳基、 - R3-环烷基、 -R3-杂环 烷基、 -R3-芳基、 链烯基或 -NR4R5;
R2和 R3代表 C,~6烷基； 其中：
R4和 R5独立的代表氢、 烷基、 环烷基或杂环烷基；
Figure imgf000009_0002
上有取代或未取代的 、
Figure imgf000009_0003
或 ； 其中环上的取代基可为羧基、 卤素、 烷基、 烷氧基、 酰基、 磺酰基、 巯 基、 炕硫基、 环烷基、 杂环烷基、 氨基、 烷氨基、 二烷氨基、 氰基、 酯基、 三氟曱基或带上述基团的 CM的烷基。
F代表 NH-(CH2)m-R6;
其中：
m代表 ( 3;
R6代表未取代的
、
X
Figure imgf000010_0001
或
其中：
X、 Y和 Z独立的代表 S、 0或 N;
Figure imgf000010_0002
或
其中：
n代表。〜 3;
p代表 1~6;
R7代表氢或 C!~6烷基。
更优选地， 在这些化合物中， 其中 A代表- S ^R^ -C02R', -R2-环烷基、 -R2-杂环烷基、 -R2-芳基、 -f^SC R1 - COR1或 -I^CC^R1;
其中：
R1代表氢、 d~6烷基、 环烷基、 杂环炕基、 芳基、 -R3-环烷基、 -R3-杂环 烷基、 -R3-芳基、 链烯基或 -NR4R5; R2和 R3代表 烷基； 其中. -
R4和 R5独立的代表氢、 〜6烷基、 环烷基或杂环烷基；
Figure imgf000011_0001
其中：
n代表。〜 3;
p代表 1〜6；
R7代表氢或 C^6烷基。
本发明中， 使用以下定义： 按照本技术领域的惯例， 这里在结构式中使用 X,用于描绘基团部分或 取代基与核心或主链结构连接点处的键。
"C^烷基"是指 1〜6个饱和和 /或不饱和碳原子和氢原子组成的直链或支 链一价残基， 例如曱基（Me )、 乙基（Et )、 丙基、 异丙基、 丁基（Bu )、 异 丁基、叔丁基（t-Bu )、 乙烯基、 戊烯基、 丙烯基、 丁烯基、 乙炔基、 丙炔基、 丁炔基、 戊炔基、 己炔基等等， 其可以是未取代的或被一个或多个适宜的如 下定义的取代基所取代。
"环烷基"是指非芳族的含有 3 , 4, 5 , 6， 7, 8, 9, 10, 11 , 12、 13或 14个碳原子的一价单环、 双环或三环残基， 每种都可以是饱和或不饱和的， 并且可以是未取代的或被一个或多个适宜的如下定义的取代基所取代， 并且 可以与一个或多个杂环烷基或芳基稠合， 所说的杂环烷基或芳基本身可以是 未取代的或被一个或多个适宜的如下定义的取代基所取代。
"杂环烷基"是指非芳族的含有 3 , 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11， 12、 13 或 14个碳原子的一价单环、 双环或三环残基， 其包括 1， 2, 3 , 4, 5或 6个杂 原子， 杂原子包括有氮、 氧和硫， 并且可以与一个或多个杂环蜆基或芳基稠 合，所说的杂环烷基或芳基本身可以是未取代的或被一个或多个适宜的如下 定义的取代基所取代。
"芳基 "是指苯基、萘基、 5-6元芳族杂环，该杂环含有一个或两个选自氮、 氧和^ ^的相同或不相同的杂原子， 其可以是未取代的或被一个或多个适宜的 如下定义的取代基所取代， 并且可以与一个或多个环烷基、 杂环烷基或 5-6 元芳族杂环稠合， 所说的环烷基、 杂环烷基或 5-6元芳族杂环本身可以是未 取代的或被一个或多个适宜的如下定义的取代基所取代。
"取代基"为羟基、 羧基、 素、 烷基、 烷氧基、 酰基、 磺酰基、 琉基。 烷硫基、 环烷基、 杂环烷基、 氨基、 烷氨基、 二炕氣基、 氰基、 酯基、 三氟 曱基或带上述基团的 d~4的烷基。
所述 5元或 6元芳族杂环为取代或未取代的式（ Π )代表的结构单元：
Figure imgf000012_0001
( II ) 其中取代基为羟基、 羧基、 卤素、 烷基、 烷氧基、 酰基、 磺酰基、 巯基。 ； t免硫基、 环烷基、 杂环烷基、 氨基、 炕氨基、 二烷氨基、 氰基、 酯基、 三氟 曱基或带上述基团的 ~4的烷基。
所述苯并饱和或不饱和杂坏为取代或未取代的式（ ΙΠ )代表的结构单元:
Figure imgf000013_0001
其中取代基为羟基、 羧基、 卤素、 烷基、 烷氧基、 酰基、 磺酰基、 琉基。 烷硫基、 环烷基、 杂环烷基、 氨基、 烷氨基、 二炕氨基、 氰基、 酯基、 三氟 甲基或带上述基团的 Cl〜4的烷基。
Figure imgf000014_0001
Figure imgf000015_0001
Figure imgf000016_0001
Figure imgf000017_0001
苯磺酰基 D-亮氨酰 L-脯氣酰
Figure imgf000018_0001
苯磺酰基 D-亮氨酰 脯氨酰 - Q H2
!^^COOCsHn 苯磺酰基 D-亮氨酰 L-月 i氨酰 苯磺酰基 D-亮氨酰 L-月 氨酰
苯磺酰基 D-亮氨酰 L-脯氨酰
NH2 对甲基苯磺 D-亮氨酰 L-脯氨酰
NH
酰基
对叔丁基苯 D-亮氨酰 L-脯氨酰
NH
碌酰基 对氟苯碩酰 D-亮氨酰 L-脯氨酰 NH 基 对溴苯磺酰 D-亮氨酰 L-脯氨酰
基
Figure imgf000018_0002
对乙酰氨基 D-亮氨酰 L-脯氨酰 NH 苯磺酰基
N-1-萘磺酰 D-亮氨酰 L-脯氨酰 NH 基 N-2-萘磺酰 D-亮氨酰 L-脯氨酰
NH
基 二甲胺基磺 D-亮氨酰 L-脯截酰
NH
酰基 曱烷磺酰基 D-亮氨酰 L-脯氛酰 NH
乙炕横酰基 D-亮氨酰 L-脯氨酰 NH
环丙烷横酰 D-亮氨酰 L-脯氨酰 NH 氯 叔丁氧欺基 D-亮氨酰 L-脯氨酰 NH
曱氧欺基 D-亮氨酰 L-脯氨酰 NH
羧基乙基 D-亮氨酰 L-脯氨酰 NH
在这些化合物中， 特别优选的化合物为：
A D E F- G
NH
苯磺酰基 D-亮氨酰 L-脯氨酰
NH
苄磺酰基 D-亮氛酰 L-脯氨酰 苯甲酰基 D-亮氨酰 L-脯義酰
苯乙酰基 D-亮氛耽 L-脯氨酰
对曱氧基苯
D-亮氨酰 L-脯氨酰
乙酰基
羧基甲基 D-亮氨酰 L-脯氨酰
Figure imgf000020_0001
NH
工 z
苯磺酰基 D-亮氨酰 L_脯氨酰 -1-NH 1 ^、 - K NILHJ2
苯磺酰基 D-亮氨酰 L-脯氨酰
Z
工工 苯磺酰基 D-亮氨酰 L-脯氨酰
苯曱酰基 D-异亮氨酰 L-月甫氨酰
Figure imgf000020_0002
NH
苄磺 基 D-亮氨酸 L-脯氨酰
苯磺酰基 D-亮氨酰 L-脯氨酰
NH2 苄磺醜基 D-亮氨酰 L-脯氨酰
NH2
Figure imgf000021_0001
Figure imgf000022_0001
乙烷磽酰基 D-亮氨酰 L-脯氨酰
Figure imgf000023_0001
环丙烷碌酰 D-亮氨酰 L-脯氨酰 NH
氯 叔丁氧羰基 D-亮氨酰 L-脯氨酰 NH
甲氧賧基 D-亮氨酰 L-脯截酰 NH
羧基乙基 D-亮氨酰 L-脯氛酰 NH
本发明还包括其药学上可接受的盐及药学可接受的前体药物。
本发明式（I ) 的可用于介导类胰蛋白酶的丝氨酸蛋白酶的活性。 更具 体的说， 本发明化合物可用作抗凝剂和用于调制或抑制类胰蛋白酶的丝氨酸 蛋白酶活性的药剂， 由此治疗血栓形成和其他心血管疾病。
除另有说明， 本发明中公开的术语和缩写具有它们标准的含义。
式 （I )化合物药学上可接受的盐包括源于药学上可接受的无机和有机 酸的盐。 适当酸的实例包括硫酸、 亚硫酸、 盐酸、 醋酸、 氢溴酸、 硝酸、 磷 酸、 偏磷酸、 焦磷酸、 马来酸、 富马酸、 琥珀酸、 柠檬酸、 高氯酸、 对甲苯 磺酸、 酒石酸、 曱酸、 乙酸、 丙酸、 庚酸、 草酸、 苯甲酸、 丙二酸、 丁二酸、 丁二酸、 顺丁烯二酸、 羟基丁酸、 枸櫞酸、 甲磺酸、 苯磺酸、 乳酸、 扁桃酸。
由于本发明式 （I )化合物的结构中具有一个或多个手性碳原子， 因此 其也可以外消旋物、 非对映体混合物和纯对映体存在， 所有这些异构体均属 本发明范围之内。
本发明还涉及通式化合物药学可接受的前体药物， 它被施用后能够代谢 成活性化合物。 合适的前体药物是例如所述通式的 N-炕氧基羰基保护的衍 生物或羧酸被酯保护的衍生物。 本发明的第二个目的是提供式 （I )化合物的制备方法， 该方法包括以 氮位由保护基保护的氨基酸为原料制得最终产物的步骤。该方法可以用现有 致的过程来制备）， 路线中所用起始原料、 试剂、 技术和方法都是众所周知 的， 并且对于本领域任何普通技术人员都是熟知的和理解的。
本发明的化合物可以按照以下大致的过程来制备：
如实施例 2举例所示 （路线一）， 将氨基酸与酰化试剂和碱反应， 将所 得的酸与氨基酸的苄酯偶合， 然后氢化脱苄， 所得的酸偶联到所需的胺上， 如对氨甲基苯腈。 再通过两步将偶联产物转化为脒， 所说的两步包括与盐酸 羟胺反应和氢 4t反应。
路线一：
Figure imgf000024_0001
另一种供选择的合成路径如路线二所示， 将保护的氛基酸如 Ν-叔丁氧 叛基 -D-异亮氨酸使用缩合剂如 EDCI/HOBt偶联至脯氨酸苄酯上。 所得二肽 用盐酸等强酸处理，除去叔丁氧羰基保护剂。所得的胺与酰化试剂和碱反应。 然后氢化脱苄， 所得的酸偶联到所需的胺上， 如对氨甲基苯腈。 再通过两步 将偶联产物转化为脒， 所说的两步包括与盐酸羟胺反应和氢化反应。
路线二：
Figure imgf000025_0001
再一种供选择的合成路径如路线三所示，将氮位取代的氨基酸使用缩合 剂如 EDCI/HOBt偶联至所需的胺上。 再通过氢解反应脱去保护基将偶联产 物转化为脒。
Figure imgf000025_0002
上述三种合成路线中， 酰胺偶联采用标准肽偶合方法在惰性气体如氮气 下进行， 如叠氮化方法， 混合酸酐方法， 碳化二亚胺（二环己基碳化二亚胺 DCC, 二异丙基碳化二亚胺 EDC ) 方法， 活性酯方法， 欺基二味唑方法， 磷试剂如 BOP-C1方法。 这些方法中有些方法（尤其是碳化二亚胺方法）可 以通过加入 1-羟基苯并三唑 HOBt被改进。 如果有需要， 偶合反应中需要在 缚酸剂存在下进行， 适当的缚酸剂的实例是有机叔胺如二异丙基乙胺、 三乙 胺、 三甲胺、 吡啶、 N-甲基吗啡啉等， 特別优选 N-甲基吗啡啉或二异丙基 乙胺作为缚酸剂。
上述偶联反应在无水溶剂存在下进行， 能够选用的溶剂实例包括： 二氯 曱烷、 四氢呋喃、 乙醚、 乙腈、 二氯乙垸、 乙酸乙酯、 Ν,Ν-二曱基甲酰胺、 二甲基亚砜。 反应温度通常不重要， 优选 0~30。C下反应 2 ~ 24小时。
除去氨基保护基的方法通过常规方法进行， 例如在酸（例如： 有机酸如 三氟乙酸、 苯磺酸、 曱酸等， 或无机酸如盐酸、 硫酸、 氢溴酸等）存在下的 水解或在碱（例如： 碱金属或碱土金属的氢氧化物、 氢化物、 碳酸盐或碳酸 氢盐， 如氢氧化钠、 氢氧化钾、 氢化钠、 碳酸钟、 碳酸氢钠等， 或有机减如 二异丙基乙胺、 三乙胺、 哌啶等）存在下的水解， 或在催化剂 （如钯、 铂、 镍等金属催化剂）存在下通过用氢气进行的氢解还原。 适宜方法可参见《有 机合成中的保护基团》， 第三版， T.W.Green和 Peter G..M.Wuts(1999)， 出版 商： John Wiley&Sons, Inc。
一般情况下， 该反应能在对反应无不利影响的溶剂存在下进行， 能过选 用的溶剂实例包括： 二氯甲烷、 醇如曱醇、 乙醇等、 四氢呋喃、 二氧六环、 丙酮、 醋酸、 乙酸乙酯。 反应温度通常不重要， 优选 0〜40°C。
除去羧酸保护基的方法通过常规方法进行， 例如在碱（例如： 碱金属或 碱土金属的氢氧化物、 氢化物、碳酸盐或碳酸氢盐， 如氢氧化钠、 氢氧化钾、 氢化钠、 碳酸钟、 碳酸氢钠等， 或有机碱如二异丙基乙胺、 三乙胺等）存在 下的水解， 或在催化剂 （如钯、 铂、 镍等金属催化剂）存在下通过用氢气进 行的还原。 适宜方法可参见《有机合成中的保护基团》， 第三版， T.W.Green 和 Peter G.M,Wuts(1999), 出版商： John Wiley&Sons, Inc。
一般情况下， 该反应能在对反应无不利影响的溶剂存在下进行， 能够选 用的溶剂实例包括： 水、 醇如甲醇、 乙醇等、 四氢呋喃、 二氧六环、 丙酮。 反应温度通常不重要， 优选 0〜30°C。
N上烷基化反应可采用还原胺化方法和亲核取代方法。如使用亲核取代 方法。 合适的亲核取代事迹包括但不限于： 烷基溴， 烷基碘， 烷基氯、 烷基 磺酸酯， 烷基苯横酸酯， 炕基对曱苯横酸酯、 烷基曱磺酸酯或含有酸式硫酸 根。 甲基硫酸根的试剂。 优选烷基碘或烷基对家苯磺酸酯。 亲核取代反应需 要在缚酸剂存在下进行， 适当的缚酸剂可以是无机碱（碱金属或碱土金属的 氢氧化物、 氢化物、 碳酸盐碳酸氢盐， 磷酸氢盐， 如氢氧化钠、、 氢化钠、 碳酸钾、 磷酸氢二钾等）， 或有机碱如二异雨基乙胺、 三乙胺、 哌啶等实例 是有机叔胺如二异丙基乙胺、 三乙胺、 三甲胺、 吡啶、 N-曱基吗啡啉等， 特 别优选 酸氢二钾或二异丙基乙胺作为縛酸剂。 能够选用的溶剂实例包括： 四氢呋喃、 二氧六环、 乙腈、 丙酮、 N，N-二甲基甲酰胺等。 反应温度优选 30〜80。C。
如使用还原胺化方法。可将反应物和相应的醛在恰当的溶剂中用适当还 原剂处理。 适当的还原剂是本领域熟知的， 包括但不限于三-叔丁氧基锂、 硼氢化钾、 硼氢化钠、 三乙酰氧基硼氢化钠、 雷尼镍、 三乙基硼氢化锂， 其 中优选硼氢化钾或三乙酰氧基硼氢化钠。进行还原胺化反应的适当溶剂是本 领域已知的， 如曱醇、 乙醇、 四氢呋喃、 二氯乙烷、 乙腈和混合溶剂等。 反 应温度优选 0〜50°C.
每个步骤的产物可以通过本领域已知方法如柱色谱和重结晶法纯化。 本发明的第三个目的是提供式 （I ) 所示的化合物在抑制凝血酶方面的 应用以及在治疗和防止凝血酶介导的和与凝血酶有关的疾病中的应用。
本发明的化合物可用于治疗和防止凝血酶介导的和与凝血酶有关的疾 病。 所述疾病包括但不限于： 静脉血栓形成和肺栓塞、 动脉血栓形成例如心 肌缺血、 心肌梗塞、 不稳定心絞痛、 血栓形成引起的中风和末梢动脉形成； 动脉粥样硬化疾病如冠状动 病、 脑动脉病和末梢动脉病。
本发明所述的化合物也可作为体外血液管路中的抗凝剂。
另外，此类化合物预期可与血栓溶解剂一起用于预防和治疔心肌梗塞形 成。 此外， 此类化合物预期可用于防止显微外科手术之后重新形成血栓。 此 类化合物在血液透析和散播性血管内凝血的抗凝血治疗方面有预期效用。 并 可用于血液、 血浆及其他血液产品的离体保存。
本发明的化合物预期可经口或非肠道途径如静脉内输注、 肌内注射、 或 皮下注射给药。 按照本发明给药的化合物获得治疗和预防效果的具体计量， 取决于该病例的特定情况， 包括给药的形式， 给药速率和所治疗的病症。 产 生效用的典型口服曰剂量在约 0.01mg/kg和约 1000mg/kg之间； 典型的非肠 道给药日剂量在约 0.001mg/kg和约 100mg/kg之间。给剂量的方式可以不同， 如可以每日单一剂量， 或者每日 3~5次这样的多剂量也可能是合适的。 需清 楚的是， 可根椐患者的年龄和体重以及所治疗疾病的严重程度， 对给药剂量 和给药方式做必要的常规调整。 准确的给药剂量和途径应有主治医师决定。
本发明的第四个目的是提供一种药物组合物， 该药物组合物包含式（I ) 所示的的化合物和药学可接受的载体。
本发明化合物可以药物组合物的方式给药。 比如为了经口给药， 把化合 物制成胶嚢或片剂形式， 其中可能含有润滑剂、 粘结剂、 崩解剂等赋形剂。 为了注射使用， 把化合物溶于一种药学上可接受的溶媒如无菌、 无热源水， 生理盐水中。
剂型可以是由本身已知的技术制成的固体、 半固体或液体制剂。 此类组 合物中活性成分占配方重量 0.1°/。至 99.9%。且组合物中所用的载体、稀释剂 或赋形剂与活性成分互相兼容， 并对被接受的对象无害。
本申请中出现的缩写如下：
Boc: 叔丁氧羰基
Cbz: 苄氧羰基
DCHA: 二环己胺
Leu: 亮氨酸
lie: 异亮氨酸
Pro: 月 i氛醜
Hpro: 高脯氨統
DIEA 二异丙基乙基胺
EDCI 1-乙基 -3- ( 3-二曱基數基丙基）碳二酰亚胺盐酸盐
HOBt 1-羟基苯并三唑
TFA: 三氟乙酸
AcOH: 乙酸
DMF: Ν,Ν'-二甲基甲酰胺。
活性测定 中,采用 S2238作为显色底物， 测定其抑制人体 α-凝血酶的活性。 并计算其 IC5。值。 具体实施方式
下列实施例将详细具体说明路线一、 二所述的具体合成方法， 并合成了 本发明的优选化合物， 但技术人员理解所述化学反应可以稍作改动， 以制备 很多本发明的其他凝血酶抑制剂。 例如， 通过本领域技术人员显而易见的改 进， 可以成功地合成本发明中非实例的化合物。 这些实施例仅用于说明， 而 不是以任何方式限制本发明范围。
检测方法：
核磁共振仪采用 Varian INOVA-400型核磁共振仪， 以四曱基硅为内标， 化学位移（ ）的单位为 ppm。 薄层层析 (TLC, 用 HSG-F254高效薄层层析硅 胶预制板， 烟台芝罘黄务硅胶开发试验厂制)和 HPLC 用于检测反应和产品 纯度。显色采用碘蒸气或在 254A及 310A紫外灯下照射或 1%茚三酮的乙醇 溶液。 所用试剂除特殊说明均为分析纯， 无水溶剂及试剂按常规方法处理。 熔点用显微熔点测定仪测定， 所用温度计未经校正。
HPLC : Waters 1525 ; 检测器： Waters 2487; 色谱柱： Phenomenex C18(4.6x250mm, 5μπι); 检测波长： 220nm及 254謹； 柱温： 40°C ; 流速：
1.0 ml/min;
流动相 1 A: 0.1%的三氟乙酸水溶液 B: 乙腈
流动相 2 A: pH2.0的磷酸三乙胺緩冲液 B: 乙腈
流动相 3 A: pH8.0的磷酸盐緩冲液 B: 乙腈
方法 1 : 流动相 A从 75%到 25%, 梯度洗脱 10分钟
方法 2: 流动相 A从 95°/。到 30%， 梯度洗脱 20分钟 实施例 1 : 合成 N-苯礒酰 -D， L-亮氨酰 -L-脯氨酰 - { [4- (Ν'-羟基)曱脒基苯基] 甲基 } 酰胺
a ) N-苯磺酰 -D, L_亮氨酸的制备
将 D,L-亮氨酸 (2g)溶于 1.5N 氢氧化钠溶液 (10ml)中， 加入二氧六环 (15ml), 冷却控温 0~5°C ; 緩慢滴加苯磺酰氯 (3g)和 1.5N 氢氧化钠溶液， 维 持 pH值 9〜10； 0度下反应 2h， 自然升至室温反应 2h。 冷却下滴加稀盐酸 调节 pH至 3 , 减压浓缩除去二氧六环， 大量固体析出； 过滤， 所得固体用 乙酸乙酯 /石油醚重结晶得 3.7g 白色固体。 含量 99% ( HPLC, 流动相 1 , 方法 2 )。
1^=0.8 展开剂正丁醇： 水： 醋酸： 乙酸乙酯 =1 : 1: 1 : 1 显色： 紫夕卜、 碘及 1%茚三酮液
1H NMR(CDC13+D20) ppm: 0.845-0.861(3 H, d)， 0.912-0.929(3 H, d), 1.514-1.562(2 H, m), 1.732-1.785(1 H, m); 3.942- 4.003(1 H， m)' 7.492-7.888(5 H, m)
1) ) ^苯磺酰-0, L-亮氨酰 -L-脯氨酸苄酯的制备
将 N-苯磺酰 -D， L-亮氨酸 (2.7g), L-脯氨酸苄酯（2.7g)溶解于二氯甲烷 (50ml)中， 氮气保护， 冷却下滴加 DIEA(3.1g ), 滴加完毕后加入 HOBt(1.4g) 和 EDCI(2.6g), 自然升至室温反应 4h。 减压浓缩除去反应液， 直接过柱纯化 3.8g白色固体 (82 % )， 含量 98% ( HPLC, 流动相 1 , 方法 1 )。
RJ 0.3 展开剂石油醚： 乙酸乙酯 =2: 1 显色： 紫外、 及 1%茚三酮 液
1H N R(CDC13+D20) ppm: 0.921-0.950(6 H, m)， 1.223-1.529(3 H， m)，
1.719-2.078(4 H5 m), 3.105-3.494(2 H, m), 3.816-3.963(1 H, m), 4.418-4.597(1 H，m), 5.122(2 H, s) , 7.281-7.854(10 H, m)
(；) ^苯磺酰-0， L-亮氨酰 -L-脯氨酸的制备
将 N-苯磺酰 -D, L-亮氨酰 -L-脯氨酸苄酯 (2g)溶于曱醇 (40ml), 加入 10% 钯碳（200mg ), 通氢， 室温反应 3小时。 过滤， 减压浓缩除去溶剂得到白色 泡状固体 (1.6g, 99%)。 直接进行下步反应。 d ) N-苯磺酰 -D, L-亮氨酰 -L-脯氨酸 _[(4-氰基苯基)甲基〗酰胺的制备 将 N-苯磺酰 -D， L-亮氨酰 -L-脯氨酸 (921mg)、 对氨曱基苯腈盐酸盐 (464mg)、 DIEA(742mg)用无水二氯甲炕 (20ml)溶解， 氮气保护， 冷却至 0°C 后， 加入 HOBt(338mg), EDCI(575mg), 在 0°C下搅拌 20min, 自然升至室 温， 反应 5小时。 用 5%硫酸氢钾溶液， 饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水溶 液依次洗涂有机层， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减压浓缩得到粗品 1.5g, 柱层 析纯化得无色油状物 （l,06g, 收率： 87%)。
R^0.4 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1:1 显色： 紫外及碘
MS: 505(M+Na+)
1H NMR (CDC13+D20) ppm: 0.860-0.922(6 H, m), 1.603-1.673(1 H, m), 1.795-1.878(1 H, m), 2.047- 2.408(4 H， m), 3.233-3.296(1 H, m), 3.373-3.418(1 H, m), 3.968-4.106(1 H, m), 4.123-4.160(1 H， m), 4.321-4.619(3 H， m)， 7.284-7.862(6 H, m)
e ) N-苯磺酰 -D, L-亮氨酰 -L-脯氨酰- { [4- (Ν'-羟基)曱脒基苯基]曱基 } 酰胺的制备
将上步所得产物 （LOlg)溶于水 /乙醇 (20ml/20ml), 氮气保护， 加入盐酸 羟胺和碳酸钠， 回流反应 2小时冷却， 减压浓缩除去溶剂， 过柱纯化得到白 色泡状固体978mg, 90.7%)„
Rf=0.1 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1:1 显色： 紫外及 1%茚三酮液
MS: 516(M+H) 实施例 2: N-苯磺酰基 -D, L-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-曱脒基苯基)曱基]酰胺醋 酸盐的制备
将实施例 1 所得的化合物溶解于醋酸 (7ml)中， 加入醋酸酐 (277mg)和 10%钯碳 (150mg)， 通氢反应 24小时， 过滤， 减压浓缩除去溶剂， 加入乙醚 (20ml), 放置；氷箱过夜， 析出固体， 过滤干燥 (250mg， 66%)
MS: 560(M+H) 实施例 3: N-苄磺酰基 -D, L-亮氨酰 -L-脯氨酰 - {[4-(N，-羟基）甲脒基苯基] 曱基 }酰胺
a) N-苄磺酰 -D, L-亮氨酸的制备
将 D,L-亮氨酸 (2g)溶于 1.5N 氢氧化钠溶液 (10ml)中， 加入二氧六环 (15ml), 冷却控温 0~5°C; 緩慢滴加苄磺酰氯 (3.2g)和 1.5N氢氧化钠溶液， 维持 pH值 9〜10； 0度下反应 2h, 自然升至室温反应 2h。 冷却下滴加稀盐 酸调节 pH至 3, 减压浓缩除去二氧六环， 大量固体析出； 过滤， 所得固体 用乙酸乙酯 /石油醚重结晶得 3.5g 白色固体。 含量 99% (HPLC, 流动相 1, 方法 2)。
RfK).8 展开剂正丁醇： 水： 醋酸： 乙酸乙酯 =1: 1: 1: 1 显色： 紫夕卜 及 1%茚三酮液
MS: 308(M+Na) b) N-苄磺酰 -D， L-亮氨酰 -L-脯氨酸苄酯的制备
将 N-苄磺酰 -D， L-亮氨酸（4.3g), L-脯氨酸苄酯（4.1g)溶解于二氯甲 烷（50ml)中， 氮气保护， 冷却下滴加 DIEA(4.7g), 滴加完毕后加入 HOBt (2g)和 EDCI (3.8g), 自然升至室温反应 4h。 2) 减压浓缩除去反应液' 直接过柱纯化得 5.3g白色泡状固体 (74.8 % ), 含量 98% ( HPLC， 流动相 1， 方法 1 )。
R^0.5 展开剂石油醚： 乙酸乙酯 =2: 1 显色： 紫外、 碘及 1%茚三酮 液
MS: 473 (M+H)
。） 1-苄磺酰"0, L-亮氨酰 -L-脯氨酸的制备
将 N-苄磺酰 - D，L-亮氨酰 -L-脯氨酸苄酯（1.2g)溶于曱醇 (20ml),加入 10% 钯碳（120mg ), 通氢， 室温反应 3小时。 过滤， 减压浓缩除去溶剂得到白色 泡状固体 (lg, 99%) 直接进行下步反应。 d ) N-苄磺酰 -D, L-亮氨酰 -L-脯氨酸 -[(4-氰基苯基)甲基]酰胺的制备 将 N-苄磺酰 -D，L-亮氨酰 -L-脯氨酸（ lg )、对氨曱基苯腈盐酸盐（ 464mg )、
DIEA ( 742mg )用无水二氯曱烷 (20ml)溶解， 氮气保护， 冷却至 0°C后， 加 入 HOBt(338mg), EDCI(575mg), 在 0°C下搅拌 20min, 自然升至室温， 反 应 5小时。 用 5%硫酸氢钾溶液， 饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水溶液依次 洗潦有机层， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减压浓缩得到粗品 1.5g, 柱层析纯化 得无色油状物 （905mg, 收率： 80%)。
Rf=0.4 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1 :1 显色： 紫外及碘
MS: 519(M+H) e ) N-苄磺酰 -D, L-亮氨酰 -L-脯氨酰- ( [4-(N，-羟基)曱脒基苯基]甲基 } 酰胺的制备
将上步所得产物 （905mg)溶于水 /乙醇 (20ml/20ml)， 氮气保护，加入盐酸 羟胺和碳酸钠， 回流反应 2小时冷却， 减压浓缩除去溶剂， 过柱纯化得到白 色泡状固体 (871 mg, 87.7%) 0
Rf=0.1 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1:1 显色： 紫外及 1%茚三酮液 MS: 530( +H) 实施例 4: N-苄磺酰基- D, L-亮氨酰 -L-脯氨酰- ί [4-(Ν'-羟基)甲脒基苯基] 曱基 }酰胺醋酸盐 将实施例 3 所得的化合物溶解于醋酸 (7ml)中， 加入醋酸酐 (270mg)和 10%钯碳 (140mg), 通氢反应 24小时， 过滤， 减压浓缩除去溶剂， 加入乙醚 (20ml), 放置冰箱过夜， 析出固体， 过滤干燥 (540mg, 62.7%)
MS: 514(M+1) 实施例 5: N-苯甲酰基 -D, L-亮氨酰 -L-脯氨酰 - { [4-(N，-羟基）曱脒基苯基] 甲基 }酰胺
a ) N-苯曱酰基 -D, L-亮氨酸的制备
将 D,L-亮氨酸 (2g)溶于 1.5N 氢氧化钠溶液 (10ml)中， 加入二氧六环 (15ml), 冷却控温 0〜5°C ; 緩慢滴加苯曱酰氯 (2.3g)和 1.5N 氢氧化钠溶液， 维持 pH值 9~10； 0度下反应 2h， 自然升至室温反应 2h。 冷却下滴加稀盐 酸调节 pH至 3 , 减压浓缩除去二氧六环， 水相用乙酸乙酯 (20ml*3)萃取， 所得有机相酸洗、碱洗、 水洗至中性， 无水硫酸钠干燥， 浓缩滤液得 2.6g无 色油状物。 含量 92% ( HPLC, 流动相 1 , 方法 2 )。
R^0.9 展开剂正丁醇： 水： 醋酸： 乙酸乙酯 =1: 1 : 1 : 1 显色： 紫夕卜 碘及 1%茚三酮液
MS: 258(M+Na) b ) N-苯曱酰基- D, L-亮氨酰 -L-脯氨酸苄酯的制备
将 N-苯甲酰基 -D， L-亮氨酸 (2.3g), L-脯氨酸苄酯（2.7g)溶解于二氯甲 烷 (50ml)中， 氮气保护， 冷却下滴加 DIEA(3g ), 滴加完毕后加入 HOBt(1.5g) 和 EDCI(2.5g), 自然升至室温反应 4h。 减压浓缩除去反应液， 直接过柱純化 得 3，3g无色油状物 （72 % ), 含量 98% ( HPLC， 流动相 1 , 方法 1 )。
Rf^0.4 展开剂石油醚： 乙酸乙酯 =2: 1 显色： 紫外、 換及 1%茚三酮液
MS: 423(M+H)
(；) 苯甲醜基-0, L-亮氨酰 -L-脯氨酸的制备
将 N-苯甲酰基 -D, L-亮氨酰 - L-脯氨酸苄酯 ( )溶于甲醇 (40ml)， 加入 10%4^A ( 200mg ), 通氢， 室温反应 3小时。 过滤， 减压浓缩除去溶剂得到 白色泡状固体 (1.5g, 98%)。 直接进行下步反应。 d ) N-苯曱酰基 -D, L-亮氨酰 -L-脯氨酸 -[(4-氰基苯基)甲基]酰胺的制备 将 N-苯曱酰基 -D, L-亮氨酰 -L-脯氨酸 (830mg；)、 对氨曱基苯腈盐酸盐
(464mg)、 DIEA(742mg)用无水二氯甲垸 (20ml)溶解， 氮气保护， 冷却至 0°C 后， 加入 HOBt(338mg), EDCI(575mg), 在 0°C下搅拌 20min， 自然升至室 温， 反应 5小时。 用 5%硫酸氢钾溶液， 饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水溶 液依次洗涤有机层， 无水^ L酸钠干燥， 过滤， 减压浓缩得到粗品 1.4g, 柱层 析纯化得无色油状物 （861mg， 收率： 77%)。
Rf^0.5 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1 :1 显色： 紫外及碘
MS: 469(M+Na) e ) N-苯甲酰基 -D, L-亮氨酰 -L-脯氨酰 - { [4-(N，-羟基)曱脒基苯基]曱基 } 酰胺的制备
将上步所得产物 （861mg)溶于水 /乙醇 (20ml/20ml), 氮气保护，加入盐酸 羟胺和碳酸钠， 回流反应 2小时冷却， 减压浓缩除去溶剂， 过柱纯化得到白 色泡状固体 (863mg, 94.7%)。
Rf 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1 :1 显色： 紫外及 1%茚三酮液
MS: 480(M+H) 实施例 6: N-苯甲酰基 -D, L-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[ (4-曱脒基苯基)甲基]酰胺醋 酸盐
将实施例 5 所得的化合物 (500mg)溶解于醋酸 (7ml)中， 加入醋酸酐 (250mg)和 10%钯碳 (120mg), 通氢反应 24小时， 过滤， 减压浓缩除去溶剂， 加入乙醚 (20ml), 放置冰箱过夜， 析出固体， 过滤干燥 (424mg， 81%)
MS: 464(M+H) 实施例 7: N-苯乙酰基- D, L-亮氨酰 -L-脯氨酰- { [4-(Ν'-羟基)甲脒基苯基] 甲基 }酰胺
a ) N-苯乙酰基 -D， L-亮氨酸的制备
将 D,L-亮氨酸 (2g)溶于 1.5N 氢氧化钠溶液 (10ml)中， 加入二氧六环 (15ml), 冷却控温 0~5°C ; 緩慢滴加苯乙酰氯 (2.4g)和 1.5N氢氧化钠溶液， 维持 pH值 9~10； 0度下反应 2h， 自然升至室温反应 2h。 冷却下滴加稀盐 酸调节 pH至 3 , 减压浓縮除去二氧六环， 水相用乙酸乙酯 (20ml*3)萃取， 所得有机相酸洗、碱洗、水洗至中性， 无水硫酸钠干燥， 浓缩滤液得 2.5g无 色油状物。 含量 90% ( HPLC, 流动相 1， 方法 2 )。
^0.9 展开剂正丁醇： 水： 醋酸： 乙酸乙酯 =1 : 1： 1: 1 显色： 紫夕卜、 碘及 1%茚三酮液
MS: 272(M+Na) b ) N-苯乙酰基 -D, L-亮氨酰 -L-脯氨酸苄酯的制备
将 N-苯乙酰基 -D， L-亮氨酸 (2.5g), L-脯氨酸苄酯（2.4g)溶解于二氯甲 烷 (50ml)中，氮气保护，冷却下滴加 DIEA(2.8g ) ,滴加完毕后加入 HOBt(1.35g) 和 EDCI(2.3g)， 自然升至室温反应 4h。 减压浓缩除去反应液， 直接过柱纯化 得 3.6g略带浅绿色油状物 （83 % ), 含量 97% ( HPLC, 流动相 1 , 方法 1 )。
Rf=0.4 展开剂石油醚： 乙酸乙酯 =2: 1 显色： 紫外、 碘及 1%茚三酮 液
MS: 437(M+H) c ) N-苯乙酰基 -D， L-亮氨酰 -L-脯氨酸的制备
将 N-苯乙酰基 -D， L-亮氨酰 -L-脯氨酸苄酯 (2g)溶于曱醇 (40ml), 加入 10%钯碳（200mg ), 通氢， 室温反应 3小时。 过滤， 减压浓缩除去溶剂得到 无色粘稠物（1.55g, 98%)。 直接进行下步反应。
(1 ) ^苯乙酰基-0, L-亮氨酰 -L-脯氨酸 -[(4-氰基笨基)甲基]酰胺的制备 将 N-苯乙酰基- D, L-亮氨酰 -L-脯氨酸 (866mg)、 对氨曱基苯腈盐酸盐 (464mg)、 DIEA(742mg)用无水二氯曱烷 (20ml)溶解， 氮气保护， 冷却至（TC 后， 加入 HOBt(338mg)， EDCI(575mg), 在 0°C下搅拌 20min, 自然升至室 温， 反应 5小时。 用 5°/½酸氢鉀溶液， 饱和碳酸氢钠溶液和 4包和食盐水溶 液依次洗涤有机层， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减压浓缩得到粗品 1.2g, 柱层 析纯化得无色油状物 （802mg， 收率： 69.6%)。
Rf=0.5 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1 :1 显色： 紫外及
MS: 483(M+Na) 1
34
e ) N-苯乙酰基 -D, L-亮氨酰 -L-脯氨酰 - { [4-(N，-羟基)甲脒基苯基]曱基 } 酰胺的制备
将上步所得产物 （802mg)溶于水 /乙醇 (20ml/20ml)， 氮气保护，加入盐酸 羟胺和碳酸钠， 回流反应 2小时冷却， 减压浓缩除去溶剂， 过柱纯化得到白 色泡状固体 (760mg, 88.5%)。
Rf=0.1 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1:1 显色： 紫外及 1%茚三酮液 MS: 494(M+H) 实施例 8: N-苯乙酰基 -D, L-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[ (4-曱脒基笨基)甲基]酰胺醋 酸盐
将实施例 9 所得的化合物 (500mg)溶解于醋酸 (7ml)中， 加入醋酸酐 (250mg)和 10%钯碳 (120mg), 通氢反应 24小时， 过滤， 减压浓缩除去溶剂， 加入乙醚 (20ml), 放置水箱过夜， 析出固体， 过滤干燥 (386mg， 71.2%) MS: 478(M+H) 实施例 9: N-羧基甲基 -D, L-亮氨酰 -L-脯氨酰 - ( [4-(N，-羟基)甲脒基苯基] 甲基 }酰胺盐酸盐
a ) N- (叔丁氧羰基)曱基 -D, L-亮氨酸苄酯的制备
将 D，L-亮氨酸苄酯盐酸盐 (4.9g)溶于 DMF(30ml)中， 加入 DIEA(15ml), 緩慢滴加溴乙酸叔丁酯 (3.7g), 40°C下反应 12h。 减压浓缩除去大量溶剂， 加 入乙酸乙酯 (30ml)， 有机相用饱和碳酸氢钠溶液 (20ml*3)、 5%KHS04溶液 (20ml*3)洗涤， 水洗至中性， 饱和食盐水 (20ml*l)洗涤， 无水^ ^酸钠千燥， 浓缩滤液得黄色油状物，过柱纯化得 3.6g 浅黄色油状物。含量 99%( HPLC, 流动相 1 , 方法 1 )。
Rf^0.5 展开剂石油醚： 乙酸乙酯 =1 : 2 显色： 紫外、 碘及 1%茚三酮 液
1H NMR(CDC13+D20) ppm: 0.913-0.942(6 H, d), 1.474(9 H, s), 1.532- 1.584(2 H, m), 1.744-1.761(1 H, m), 3.236-3.305(2 H, m), 3.372-3.408(1 H, m), 5.182(2 H, s), 7.282- 7.385(5 H， m) b ) N- (叔丁氧羰基)曱基 - N-叔丁氧羰基 -D， L-亮氨酸苄酯的制备 将 N- (叔丁氧羰基)曱基 -D, L-亮氨酸苄酯 (3.4g)溶解于二氯甲烷 (20ml ) 中， 滴加 DIEA(1.3g)和二碳酸二叔丁酯 (2.8g ), 40°C反应 36h。 减压浓缩除 去反应液， 直接过柱纯化得 4.4g无色油状物 (98 % ), 含量 98% ( HPLC, 流 动相 1 , 方法 1 )。
Rf=0.5 展开剂石油醚： 乙酸乙酯 =20: 3 显色： 紫外、 碘及 1%茚三酮 液
1H NMR(CDC13) ppm: 0.910-0.938(6 H, d), 1.480(18H, s), 1.522-1.57(2 H, m), 1.751-1.764(1 H, m), 3.321-3.342(2 H， m), 3.381-3.410(1 H, m), 5.214(2 H, s), 7.277-7.384(5 H, m) c ) N- (叔丁氧羰基)甲基 - N-叔丁氧羰基 -D, L-亮氨酸的制备
将 N- (叔丁氧齪基)曱基- N-叔丁氧羰基 -D, L-亮氨酸苄酯 (3.5g)溶于甲醇 (25ml), 加入 10%钯碳（200mg ), 通氢， 室温反应 3小时。 过滤， 减压浓缩 除去溶剂得到白色泡状固体 2.8g, 100%)。 直接进行下步反应。 d ) N- (叔丁氧羰基)甲基- N-叔丁氧羰基 -D, L-亮氨酰 -L-脯氨酸苄酯的制 备 - 将上步所得产品 （2.8g )、 L-脯氨酸苄酯盐酸盐 （2.1g )、 DIEA ( 2.4g ) 用无水二氯甲烷 (50ml)容解， 氮气保护， 冷却至 0°C后， 加入 HOBt(l.lg), EDCI(2.1g), 在 0°C下搅拌 20min， 自然升至室温， 反应 5小时。 用 5%硫酸 氢钾溶液， 饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水溶液依次洗涤有机层， 无水硫酸 钠干燥， 过滤， 减压浓缩得到粗品 4.6g, 柱层析純化得无色油状物 （3.3g, 收率： 77%)。
R^0.7 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =2:1 显色： 紫外及
MS: 555(M+Na+) e ) N- (叔丁氧羰基)甲基- N-叔丁氧羰基 -D, L-亮氨酰 -L-脯氨酸的制备 将 N- (叔丁氧羰基)曱基- N-叔丁氧羰基 -D , L-亮氨酰 -L-脯氨酸苄酯 (3.3g) 溶于甲醇 (30ml), 加入 10%钯碳（330mg ), 通氢， 室温反应 3小时。 过滤， 减压浓缩除去溶剂得到无色油状物 2.7g, 98%)。 直接进行下步反应。
Rf=0.1 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1:1 显色： 紫外及 1%茚三酮液 f) N- (叔丁氧羰基)甲基- N-叔丁氧羰基 -D, L-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-氰基 苯基)甲基]酰胺的制备
将上步所得产品（ 1.4g )、对氨甲基苯腈盐酸盐（591mg )、 DIEA( 974mg ) 用无水二氯曱烷 (50ml)溶解， 氮气保护， 冷却至 0°C后， 加入 HOBt(443mg)， EDCI(754mg), 在 0°C下搅拌 20min, 自然升至室温， 反应 5小时。 用 5%硫 酸氢钾溶液， 饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水溶液依次洗涤有机层， 无水硫 酸钠干燥， 过滤， 减压浓缩得到粗品 1.8g， 柱层析纯化得无色油状物 （1.5g, 收率： 81.7%)。
Rf^0.4 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1 :1 显色： 紫外及碘
MS: 579(M+Na+) g ) N- (叔丁氧羰基)甲基- N-叔丁氧羰基- D, L-亮氨酰 -L-脯氨酰- { [4- (Ν'- 羟基)甲脒基苯基]甲基） 酰胺的制备
将上步所得产物 （757mg)溶于水 /乙醇 (20ml/20ml), 氮气保护，加入盐酸 羟胺和碳酸钠， 回流反应 2小时冷却， 减压浓缩除去溶剂， 过柱纯化得到白 色泡状固体 (785mg, 97.7%)。
Rf^0.2 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1:1 显色： 紫外及 1%茚三酮液
MS: 612(M+Na) h ) N-羧基甲基 -D， L-亮氨酰 -L-脯氨酰- { [4- (N，-羟基)曱脒基苯基]甲基 } 酰胺盐酸盐的制备
将上步所得产物 （200mg)溶于乙酸乙酯 (2ml)， 加入 15%盐酸 /乙酸乙酯 溶液 (2ml), 室温反应 2小时， 减压浓缩得到白色泡状固体 (157mg, 99%)。
MS: 492(M+Na) 实施例 10: N-羧基甲基 -D, L-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[ (4-甲脒基苯基)甲基]酰胺 盐酸盐
将 N- (叔丁氧羰基)曱基- N-叔丁氧羰基 -D, L-亮氨酰 -L-脯氨酰- { [4- (Ν'- 羟基)甲脒基苯基]曱基 }酰胺（ 500mg )溶解于醋酸 (7ml)中，加入醋酸酐 (250mg) 和 10%钯碳 (120mg)， 通氢反应 24小时， 过滤， 减压浓缩除去溶剂， 加入乙 醚 (20ml)， 放置水箱过夜， 析出固体， 过滤干燥 (409mg, 76%) 将上步所得产物 （409mg)溶于乙酸乙酯 (4ml), 加入 15%盐酸 /乙酸乙酯 溶液 (4ml), 室温反应 2小时， 减压浓缩得到白色泡状固体 (264mg, 90%)。
MS: 440(M+Na) 实施例 11 : N-苯甲酰基- D, L-异亮氨酰- L-脯氨酰 - { [4-(N，-羟基)曱脒基苯基] 曱基） 酰胺
a ) N-叔丁氧叛基 -D， L-异亮氨酰 -L-脯氨酸苄酯的制备
将 N-叔丁氧叛基 - D， L-异亮氨酸 (8g)， L-脯氨酸苄酯 （9.17g)溶解于二 氯曱炕 (100ml)中， 氮气保护， 冷却下滴加 DIEA(10.3g ), 滴加完毕后加入 HOBt(4.7g)和 EDCI(6.6g), 自然升至室温反应 8h。 减压浓缩除去反应液， 直 接过柱纯化得 13.2g略带浅绿色油状物 （91.42 % )， 含量 97% ( HPLC, 流动 相 1， 方法 1 )。
Rf^0.5 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =10: 3 显色： 紫外、 碘及 1%茚三 酮液
MS: 441(M+Na)
1H NMR(CDC13) ppm: 0.869-0.919(3 H, m), 0.943-0.961(3 H， m), 1085-1.215(1 H, m), 1.424(9 H, s)， 1.485-1.599(1 H, m), 1.659-1.758(1 H, m)， 1.906-2.123(3 H, m) , 2.145-2.238(1 H, m) , 3.514-3.574(0.5 H, m)， 3.620-3.680(0.5 H， m) , 3.809-3.849(1 H， m) , 4.265-4.306(0.5 H, m) , 4.471-4.483(4 H, dd)， 4.567-4.601(0.5 H, m) , 5.103-5.280(3 H， m)， 7.259-7.362(5 H, m) b ) D, L-异亮氨酰- L-脯氨酸苄酯盐酸盐的制备
将 N-叔丁氧羰基 - D， L-异亮氨酰 -L-脯氨酸苄酯 (13g)溶解于乙酸乙酯
(34ml)中， 冷却下滴加 15%HC1/乙酸乙酯溶液 (25ml ), 滴加完毕后自然升至 室温反应 4h。 减压浓缩除去反应液， 油状物用异丙醇 /正己烷重结晶得 4.5g 白色固体（90 % ), 含量 94% ( HPLC, 流动相 1 , 方法 2 )。
MS: 319(M+H) c ) N-苯曱酰基 -D, L-异亮氨酰- L-脯氨酸苄酯的制备 将 D, L-异亮氨酰 -L-脯氨酸苄酯盐酸盐 (1.2g)溶于二氯甲烷 (10ml)中， 冷却至 0°C , 滴加 DIEA(860mg)和苯曱酰氯 (477mg), 自然升至室温反应 2h, 减压浓缩除去溶剂， 过柱纯化得浅黄色油状物 (l.lg, 79%)
MS: 423(M+H)
^ 1^-苯甲酰基-0， L-异亮氨酰- L-脯氨酸的制备
将 N-苯甲酰基 -D， L-异亮氨酰 -L-脯氨酸苄酯 (l.lg)溶于曱醇 (15ml), 加 入 10%钯碳 ( 120mg ), 通氢， 室温反应 3 小时。 过滤， 减压浓缩除去溶剂 得到无色粘稠物 (1.04g, 99%)。 直接进行下步反应。 e ) N-苯曱酰基 -D, L-异亮氨酰 -L-脯氨酸 -[(4-氰基苯基)甲基]酰胺的制备 将 N-苯曱酰基 -D, L-异亮氨酰 -L-脯氨酸 (1.04g)、 对氨曱基苯腈盐酸盐 (580mg)、 DIEA(929mg)用无水二氯甲烷 (20ml)溶解， 氮气保护， 冷却至 0°C 后， 加入 HOBt(423mg), EDCI(720mg), 在 0°C下搅拌 20min， 自然升至室 温， 反应 5小时。 用 5%硫酸氢钾溶液， 饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水溶 液依次洗'涤有机层， 无水硫酸钠千燥， 过滤， 减压浓缩得到粗品 1.3g, 柱层 析纯化得无色油状物 (1.15g, 收率： 82.3%)。
Rf^O.l 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =2:1 显色： 紫外及碘
MS: 447(M+H) f) N-苯曱酰基- D, L-异亮氨酰 -L-脯氨酰- { [4-(N，-羟基)甲脒基苯基]甲 基} 酰胺的制备
将上步所得产物 （824mg)溶于水 /乙醇 (20ml/20ml)， 氮气保护，加入盐酸 羟胺和碳酸钠， 回流反应 2小时冷却， 减压浓缩除去溶剂， 过柱纯化得到白 色泡状固体 (861mg, 97%)
R^=0.2 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1:1 显色： 紫外及 1%茚三酮液
MS: 480(M+H) 实施例 12: N-苯甲酰基- D, L-异亮氨酰- L-脯氨酰 -[(4-甲脒基苯基)甲基]酰胺 醋酸盐
将实施例 11 所得的化合物 (667mg)溶解于醋酸 C ml)中， 加入醋酸酐 (216mg)和 10%钯碳 (l l lmg), 通氢反应 24小时' 过滤' 减压浓缩除去溶剂， 加入乙醚 (20ml)， 放置水箱过夜， 析出固体， 过滤干燥 (454mg， 62%) MS: 464(M+H) 实施例 13: N-苯乙酰基 -D, L-异亮氨酰- L-脯氨酰 - { [4-(N，-羟基)曱脒基苯基] 曱基 }酰胺
a ) N-苯乙酰基 -D, L-异亮氨酰 -L-脯氨酸苄酯的制备
将 D， L-异亮氨酰 脯氨酸苄酯盐酸盐 (l.lg)溶于二氯甲烷 (10ml)中， 冷却至 0°C , 滴加 DIEA(776mg)和苯乙酰氯 (473mg), 自然升至室温反应 2h, 减压浓缩除去溶剂， 过柱纯化得浅黄色油状物（1.2g, 93%)
R^0.3 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =2:1 显色： 紫外及碘
MS: 437(M+H) b ) N-苯乙酰基 -D, L-异亮氨酰- L-脯氨酸的制备
将 N-苯乙酰基- D, L-异亮氨酰 -L-脯氨酸苄酯（1.2g)溶于曱醇 (15ml), 加 入 10%钯碳（120mg ), 通氢， 室温反应 3 小时。 过滤， 减压浓缩除去溶剂 得到无色粘稠物 (939mg, 97%)。 直接进行下步反应。 c ) N-苯乙酰基 -D, L-异亮氨酰- L-脯氨酸 -[(4-氰基苯基)甲基]酰胺的制备 将 N-苯乙酰基- D, L-异亮氨酰 -L-脯氨酸 (693mg)、 对氨甲基苯腈盐酸盐 (337mg)、 DIEA(581mg)用无水二氯曱烷 (20ml)溶解， 氮气保护， 冷却至 0°C 后， 加入 HOBt(270mg), EDCI(460mg), 在 0。C下搅拌 20min, 自然升至室 温， 反应 5小时。 用 5%硫酸氢钾溶液， 饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水溶 液依次洗涤有机层， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减压浓缩得到粗品 1.3g, 柱层 析纯化得无色油状物 （782mg, 收率： 85%)。
Rf=0.1 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1:1 显色： 紫外及
MS: 461(M+H) d ) N-苯乙酰基 -D, L-异亮氨酰- L-脯氨酰- U4-(N，-羟基)甲脒基苯基]曱 基}酰胺的制备
将上步所得产物 （782mg)溶于水 /乙醇 (20ml/20ml), 氮气保护，加入盐酸 羟胺和碳酸钠， 回流反应 2小时冷却， 减压浓缩除去溶剂， 过柱纯化得到白 色泡状固体 (704mg, 84%) 0
R^=0.2 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1:1 显色： 紫外及 1%茚三酮液 MS: 494(M+H) 实施例 14: N-苯乙酰基 -D， L-异亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-甲脒基苯基)甲基]酰胺 醋酸盐
将实施例 13 所得的化合物 (500mg)溶解于醋酸 (7ml)中， 加入醋酸酐 (200mg)和 10%钯碳 (llOmg), 通氢反应 24小时， 过滤， 减压浓缩除去溶剂， 加入乙醚 (20ml), 放置水箱过夜， 析出固体， 过滤干燥 (321mg, 59%)
MS: 478(M+H) 实施例 15: N-羧基曱基 -D, L-异亮氨酰- L-脯氨酰 - ί [4-(Ν'-羟基)曱脒基苯基] 甲基 }酰胺盐酸盐
a ) N- (叔丁氧羰基)甲基- D, L-异亮氨酰 -L-脯氨酸苄酯的制备
将 D,L-异亮氨酰 -L-脯氨酸苄酯盐酸盐（1.8g)溶于乙腈 (30mi)中， 加入
DIEA(1.3g), 緩 'I"曼滴加溴乙酸叔丁酯 (l.lg), 40°C下反应 24h。 减压浓缩除去 大量溶剂， 加入乙酸乙酯 (30ml) , 有机相用饱和碳酸氢钠溶液 (20ml*3)、 5%KHS04溶液 (20ml*3)洗涤， 水洗至中性， 饱和食盐水 (20ml* 1)洗涤， 无水 硫酸钠干燥， 浓缩滤液得黄色油状物， 过柱纯化得 1.7g 浅黄色油状物。 含 量 99% ( HPLC, 流动相 1， 方法 1 )。
展开剂石油醚： 乙酸乙酯 =2: 1 显色： 紫外、 及 1%茚三酮 液
MS: 455(M+Na) 1^ ) ^(叔丁氧羰基)曱基- >^叔丁氧羰基-0, L-异亮氨酰- L-脯氨酸苄酯的 制备
将 N- (叔丁氧羰基)曱基 -D, L-异亮氨酸 -L-脯氨酸苄酯 (1.7g)溶解于二氯 曱烷 (20ml ) 中， 滴加 DIEA(542mg)和二碳酸二叔丁酯（lg ), 40°C反庄 48h。 减压浓缩除去反应液， 直接过柱纯化得 1.7 浅黄绿色油状物 (81.2 °/。）， 含量 96% ( HPLC, 流动相 1 , 方法 1 )。
Rf=0.6 展开剂石油醚： 乙酸乙酯 =20: 4 显色： 紫外、 及 1%茚三酮 液
MS: 555(M+Na) c ) N- (叔丁氧羰基)甲基- N-叔丁氧羰基 -D, L-亮氨酸的制备
将 N- (叔丁氧叛基)甲基- N-叔丁氧殽基 -D, L-亮氨酸苄酯 (1.7g)溶于甲醇 (25ml), 加入 10%钯碳（200mg )， 通氢， 室温反应 3小时。 过滤， 减压浓缩 除去溶剂得到白色泡状固体 1.38g, 100°/。)。 直接进行下步反应。 d ) N- (叔丁氧羰基)曱基- N-叔丁氧羰基- D, L-异亮氨酰- L-脯氨酰 -[(4- 氛基苯基)曱基]酰胺的制备
将上步所得产品 (930mg)、 对氨甲基苯腈盐酸盐 (390mg)、 DIEA(630mg) 用无水二氯曱烷 (50ml)溶解， 氮气保护， 冷却至 0°C后， 加入 HOBt(284mg), EDCI(483mg), 在 0°C下搅拌 20min, 自然升至室温， 反应 5小时。 用 5%硫 酸氢钾溶液， 饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐氷溶液依次洗涤有机层， 无水硫 酸钠干燥， 过滤， 减压浓缩得到粗品， 柱层析纯化得无色油状物 （708mg, 收率： 60.6%)。
RJ 0.4 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1 :1 显色： 紫外及破
MS: 579(M+Na+) e ) N- (叔丁氧羰基)甲基- N-叔丁氧羰基 -D, L-异亮氨酰- L-脯氨酰- { [4- (Ν'-羟基)曱脒基苯基]甲基 }酰胺的制备
将上步所得产物 （680mg)溶于水 /乙醇 (20ml/20ml), 氮气保护，加入盐酸 羟胺和碳酸钠， 回流反应 2小时冷却， 减压浓缩除去溶剂， 过柱纯化得到白 色泡状固体 (780mg, 97.8%)。
Rf=0.2 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1:1 显色： 紫外及 1%茚三酮液
MS: 612(M+Na) h ) N-羧基曱基 -D, L-异亮氨酰 -L_脯氨酰- { [4- (Ν'-羟基)甲脒基苯基] 曱基 }酰胺盐酸盐的制备
将上步所得产物 （200mg)溶于乙酸乙酯 (2ml)， 加入 15%益^/乙酸乙酯 溶液 (2ml), 室温反应 2小时， 减压浓缩得到白色泡状固体 (145mg， 91%)。 MS: 456(M+Na) 实施例 16: N-羧基曱基 -D， L-异亮氨酰 -L-脯氨酰 -[ (4-曱脒基苯基)甲基]酰 胺盐酸盐
将 N- (叔丁氧羰基)曱基- N-叔丁氧羰基 -D， L-异亮氨酰 -L-脯氨酰- { [4- (N，-羟基)曱脒基笨基]曱基 } 酰胺（ 580mg )溶解于醋酸 (7ml)中， 加入醋酸 肝 (155mg)和 10%钯碳 (lOOmg), 通氢反应 24小时， 过滤， 减压浓缩除去溶 剂， 加入乙醚 (20ml)， 放置水箱过夜， 析出固体， 过滤干燥 (610mg, 87.5%) 将上步所得产物 （500mg)溶于乙酸乙酯 (4ml), 加入 15%盐酸 /乙酸乙酯 溶液 (4ml), 室温反应 2小时， 减压浓缩得到白色泡状固体 (294mg, 75%)。
MS: 440(M+Na) 实施例 17: N-苯磺酰基 -L-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-甲脒基苯基)曱基]酰胺盐酸 a ) N-苯碌酰 -L-亮氨酸的制备
将 L-亮氨酸 (6.5g)溶于 1.5N 氢氧化钠溶液 (40ml)中， 加入二氧六环 (40ml), 冷却控温 0~5°C; 緩慢滴加苯磺酰氯 (10g)和 1.5N氢氧化钠溶液， 维持 pH值 9~10； 0度下反应 2h, 自然升至室温反应 2h。 冷却下滴加稀盐 酸调节 pH至 3, 减压浓缩除去二氧六环， 大量固体析出； 过滤， 所得固体 用乙酸乙酯 /石油醚重结晶得 9.4g 白色固体。 含量 99% ( HPLC, 流动相 1 , 方法 2 )。
Rf^0.8 展开剂正丁醇： 水： 醋酸： 乙酸乙酯 =1 : 1: 1: 1 显色： 紫夕卜、 碘及 1%茚三酮液 b ) N-叔丁氧羰基 -L-脯氨酰 - { [ (4- (N-苄氧齪基)曱脒基苯基]甲基 }酰胺 的制备
将 N-叔丁氧羰基- L-脯氨酸 (2.2g), 4-氨曱基 -N，-苄氧羰基苯甲脒盐酸盐 ( 3.7g)溶解于 DMF(50ml)中， 氮气保护， 冷却下滴加 DIEA(4.3g ), 滴加完 毕后加入 HOBt(1.35g)和 EDCI(2.3g), 自然升至室温反应 4h。 减压浓缩除去 反应液， 直接过柱纯化得 4.6g白色泡状固体 (95.7 % ), 含量 98% ( HPLC, 流动相 1 , 方法 1 )。 R^0.6 展开剂石油醚： 乙酸乙酯 =1 : 2 显色： 紫外、 碘及 1%茚三酮液 MS: 503(M+Na) c ) L-脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧羰基)甲脒基苯基]曱基 } 酰胺盐酸盐的制备 将 N-叔丁氧羰基 -L-脯氨酰-（ [ (4- (N-苄氧狻基)曱脒基苯基]甲基 }酰胺
(4.6g)溶于异丙醇 (30ml), 冷却下加入 15% HCi/乙酸乙酯溶液（30mg ), 减压 浓缩除去溶剂， 油状物用异丙醇 /乙醚重结晶得到白色固体 (3.6g, 91%).
MS: 381(M+H) d ) N-苯磺酰基 -L-亮氨酰 -L-脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧羰基)曱脒基苯基]曱 基）酰胺的制备
将 N-苯磺酰 - L-亮氨酸 (406mg)、 L-脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧羰基)曱脒基苯 基]甲基 } 酰胺盐酸盐 (625mg)、 DIEA(426mg)用无水二氯甲烷 (20ml)溶解， 氮气保护， 冷却至 0°C后， 加入 HOBt(203mg), EDCI(345mg), 在 0°C下搅 拌 20min, 自然升至室温， 反应 5小时。 用 5%琉酸氢钾溶液， 饱和碳酸氢 钠溶液和饱和食盐水溶液依次洗涂有机层， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减压浓 缩得到粗品 905mg, 柱层析纯化得白色泡状固体 （680mg， 收率： 71%)。
Rf^0.4 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1:4 显色： 紫外及破
MS: 634(M+H) e ) N-苯磺酰基 -L-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[ (4-甲脒基苯基)曱基]酰胺盐酸盐的 制备
将上步所得产物 （450mg)溶于甲醇 (20ml)， 加入 10%钯碳 (90mg), 通氢 反应， 40°C下反应 8h， 过滤减压浓缩除去溶剂， 用甲醇 (5ml)溶解， 加入 15% HC1/乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色泡状固体 (328mg, 87%)。
MS: 500(M+H) 实施例 18: N-苯礒酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 - ( [ (4- (N-苄氧狻基)曱脒基苯基] 曱基 } 酰胺
a ) N-笨磺酰 亮氨酸的制备
将 D-亮氨酸 (13.11g)溶于 1.5N 氢氧化钠溶液 (80ml)中' 加入二氧六环 (80ml), 冷却控温 0~5°C ; 緩慢滴加苯磺酰氯 (19.8g)和 1.5N 氢氧化钠溶液， 维持 pH值 9~10； 0度下反应 2h, 自然升至室温反应 2h。 冷却下滴加稀盐 酸调节 pH至 3 , 减压浓缩除去二氧六环， 大量固体析出； 过滤， 所得固体 用乙酸乙酯 /石油醚重结晶得 22.2g 白色固体。含量 99% ( HPLC， 流动相 1 , 方法 2 )。
RfN).8 展开剂正丁醇： 水： 醋酸： 乙酸乙酯 =1: 1 : 1: 1 显色： 紫夕卜、 碘及 1%茚三酮液 b ) N-苯磺酰基- D-亮氨酰 -L-脯氨酰- ( [ (4- (N-苄氧羰基)甲脒基苯基]甲 基}酰胺的制备
将 N-苯磺酰 -D-亮氨酸 (406mg)、 L-脯氨酰- ( [ (4- (N-苄氧叛基)甲脒基苯 基]甲基 } 酰胺盐酸盐 (625mg)、 DIEA(426mg)用无水二氯曱烷 (20ml)溶解， 氮气保护， 冷却至 0°C后， 加入 HOBt(203mg)， EDCI(345mg), 在 0°C下搅 拌 20min, 自然升至室温， 反应 5小时。 用 5%硫酸氢钾溶液， 饱和碳酸氢 钠溶液和饱和食盐水溶液依次洗涤有机层， 无水^ <酸钠干燥， 过滤， 减压浓 缩得到粗品 922mg, 柱层析纯化得白色泡状固体（707mg, 收率： 74%)。
Rf^0.4 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1 :4 显色： 紫外及碘
MS: 634(M+H) 实施例 19: N-苯礒酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-甲脒基苯基)甲基]酰胺盐酸 c ) N-苯磺酰基 -D-亮氨酰 - L-脯氨酰 -〖（4-甲脒基苯基)甲基]酰胺盐酸盐的 制备
将上步所得产物 （467mg)溶于甲醇 (20ml), 加入 10%钯碳 (90mg), 通氢 反应， 40°C下反应 8h, 过滤减压浓缩除去溶剂， 用甲醇 (5ml)溶解，加入 15% HC1/乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色泡状固体 (321mg, 85%)。
MS: 500(M+H) 实施例 20: N-苄磺酰基 亮氨酰 - L-脯氨酰 -（[ (4- (N-苄氧羰基)甲脒基苯基] 甲基 }醜胺
a ) N-苄磺酰 -D-亮氨酸的制备 将 D-亮氨酸 (2g)溶于 1.5N 氢氧化钠溶液（10ml)中， 加入二氧六环 (15ml), 冷却控温 0~5°C ; 緩慢滴加苄磺酰氯 (3.2g)和 1.5N氢氧化钠溶液， 维持 pH值 9~10； 0度下反应 2h, 自然升至室温反应 2h。 冷却下滴加稀盐 酸调节 pH至 3 , 减压浓缩除去二氧六环， 大量固体析出； 过滤， 所得固体 用乙酸乙酯 /石油醚重结晶得 3.2g 白色固体。 含量 99% ( HPLC, 流动相 1 , 方法 2 )。
Rf^0.8 展开剂正丁醇： 水： 醋酸： 乙酸乙酯 =1 : 1: 1： 1 显色： 紫夕卜、 碘及 1%茚三酮液
MS: 308(M+Na) b ) N-苄磺酰基- D-亮氨酰 -L-脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧羰基)曱眯基苯基]甲 基}酰胺的制备
将 N-苄磺酰 -D-亮氨酸 (426mg)、 L-脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧羰基)甲脒基苯 基]甲基 } 酰胺盐酸盐 (625mg)、 DIEA(426mg)用无水二氯曱烷 (20ml)溶解， 氮气保护， 冷却至 0°C后， 加入 HOBt(203mg), EDCI(345mg), 在 0°C下搅 拌 20min， 自然升至室温， 反应 5小时。 用 5%硫酸氢钾溶液， 饱和碳酸氢 钠溶液和饱和食盐水溶液依次洗涂有机层， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减压浓 缩得到粗品 814mg， 柱层析纯化得白色泡状固体 （650mg， 收率： 67%)。
Rf=0.2 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1 :4 显色： 紫外及
MS: 648(M+H) 实施例 21 : N-苄磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-曱脒基苯基)曱基]酰胺盐酸 盐
c ) N-苄磺酰基- D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[ (4-曱脒基苯基)曱基]酰胺盐酸盐的 制备
将上步所得产物 （450mg)溶于曱醇 (20ml), 加入 10%钯碳 (90mg), 通氢 反应， 40。C下反应 8h, 过滤减压浓缩除去溶剂， 用甲醇 (5mi)溶解，加入 15% HC1/乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色泡状固体 (306mg, 80%)。
MS: 514(M+H) 实施例 22: N-苯曱酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-甲脒基苯基)曱基]酰胺盐酸 盐
a ) N-苯甲酰基 -D-亮氨酸的制备
将 D-亮氨酸 ( )溶于 1.SN 氢氧化钠溶液（10ml)中， 加入二氧六环 (15ml), 冷却控温 0〜5°C ; 緩慢滴加苯甲酰氯 (2.3g)和 1.5N 氢氧化钠溶液， 维持 pH值 9~10； 0度下反应 2h, 自然升至室温反应 2h。 冷却下滴加稀盐 酸调节 pH至 3， 减压浓缩除去二氧六环， 水相用乙酸乙酯 (20ml*3)萃取， 所得有机相酸洗、碱洗、水洗至中性 > 无水疏酸钠干燥， 浓缩滤液得 2.5g无 色油状物。 含量 92% ( HPLC, 流动相 1 , 方法 2 )。
Rf^0.9 展开剂正丁醇： 水： 醋酸： 乙酸乙酯 =1 : 1: 1 : 1 显色： 紫夕卜、 碘及 1%茚三酮液
MS: 258(M+Na) b ) N-苯甲酰基 -D-亮氨酰 -L_脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧羰基)曱脒基苯基]甲 基}酰胺的制备
将 N-苯曱酰基- D-亮氨酸 (366mg)、 L-脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧羰基)甲脒基 苯基]甲基 }酰胺盐酸盐 (626mg)、 DIEA(426mg)用无水二氯曱烷 (20ml)溶解， 氮气保护， 冷却至 0。C后， 加入 HOBt(203mg)， EDCI(345mg), 在 0Ό下搅 拌 20min， 自然升至室温， 反应 5小时。 用 5%硫酸氢钾溶液， 饱和碳酸氢 钠溶液和饱和食盐水溶液依次洗涂有机层， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减压浓 缩得到粗品 778mg, 柱层析纯化得白色泡状固体 （600mg, 收率： 67%)。
Rj O.3 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1:2 显色： 紫外及碘
MS: 598(M+H) c ) N-苯甲酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[ (4-甲脒基苯基)曱基]酰胺盐酸盐的 制备
将上步所得产物 （500mg)溶于甲醇 (20ml)，加入 10%钯碳 (lOOmg),通氢 反应， 40°C下反应 8h, 过滤减压浓缩除去溶剂， 用甲醇 (5ml)溶解，加入 15% HC1/乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色泡状固体 (315mg, 78.7%)。
MS: 464(M+H) 实施例 23: N-苯乙酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-曱脒基苯基)曱基]酰胺盐酸 盐
a ) N-苯乙酰基 -D-亮氨酸的制备
将 D-亮氨酸 ( )溶于 1.5N 氢氧化钠溶液（10ml)中， 加入二氧六环 (15ml), 冷却控温 0~5°C ; 緩'隄滴加苯乙酰氯 (2.4g)和 1.5N 氢氧化钠溶液， 维持 pH值 9〜10； 0度下反应 2h, 自然升至室温反应 2h。 冷却下滴加稀盐 酸调节 pH至 3, 减压浓缩除去二氧六环， 水相用乙酸乙酯 (20ml*3)萃取， 所得有机相酸洗、碱洗、 水洗至中性， 无水硫酸钠干燥， 浓缩滤液得 2.7g无 色油状物。 含量 93% ( HPLC, 流动相 1 , 方法 2 )。
Rf^0.9 展开剂正丁醇： 水： 醋酸： 乙酸乙酯 =1 : 1: 1 : 1 显色： 紫夕卜、 碘及 1%茚三酮液
MS: 272(M+Na) b ) N-苯乙酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氰酰- { [ (4- (N-苄氧羰基)曱脒基零基]甲 基}酰胺的制备
将 N-苯乙酰基 -D-亮氨酸 (379mg：)、 L-脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧羰基)曱脒基 苯基]曱基 }酰胺盐酸盐 (626mg)、 DIEA(426mg)用无水二氯甲烷 (20ml)溶解， 氮气保护， 冷却至 0°C后， 加入 HOBt(203mg), EDCI(345mg), 在 0°C下搅 拌 20min, 自然升至室温， 反应 5小时。 用 5%硫酸氢钾溶液， 饱和碳酸氢 钠溶液和饱和食盐水溶液依次洗涂有机层， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 減压浓 縮得到粗品 850mg， 柱层析纯化得白色泡状固体 （514mg, 收率： 56%)。
RfM).3 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1:4 显色： 紫外及碘
MS: 612(M+H) c ) N-苯乙酰基- D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[ (4-曱脒基笨基)甲基]酰胺盐酸盐的 制备
将上步所得产物 （500mg)溶于甲醇 (20ml) ,加入 10%钯碳 (1 OOmg) '通氢 反应， 40。C下反应 8h, 过滤减压浓缩除去溶剂， 用甲醇 (5ml)溶解，加入 15% HC1/乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色泡状固体 (180mg, 44%)。
MS: 478(M+H) 实施例 24: N-羧基甲基- D-亮氨酰 - L-脯氨酰 -[ (4-甲脒基苯基)甲基]酰胺盐酸 盐
a ) N- (叔丁氧羰基)甲基 -D-亮氨酸苄酯的制备
将 D-亮氨酸苄酯盐酸盐 (3.9g)溶于 DMF(30ml)中， 加入 DIEA(3.9g), 緩 慢滴加溴乙酸叔丁酯 (3.2g), 40°C下反应 36h。 减压浓缩除去大量溶剂， 加入 乙酸乙酯（50ml) , 有机相用饱和碳酸氢钠溶液 (50ml*3)、 5%KHS04溶液 (50ml*3)洗涤， 水洗至中性， 饱和食盐水 (50ml*l)洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓缩滤液得 5.2g黄色油状物，过柱纯化得 4.14g 浅黄绿色油状物。含量 96% ( HPLC, 流动相 1 , 方法 1 )。
RfK).5 展开剂石油醚： 乙酸乙酯 =2: 1 显色： 紫外、 碘及 1%茚三酮 液
MS: 358(M+Na) b ) N- (叔丁氧羰基)甲基- N-叔丁氧羰基 -D-亮氨酸苄酯的制备
将 N- (叔丁氧叛基)甲基 -D-亮氨酸苄酯 (3.74g)溶解于二氯甲烷 (40ml )中 , 滴加 DIEA(1.4g)和二碳酸二叔丁酯 (3.2g ), 40°C反应 36h。 减压浓缩除去反 应液， 直接过柱纯化得 3.5g无色油状物 (81.2 % ), 含量 96% ( HPLC, 流动 相 1 , 方法 1 )。
Rf ).6 展开剂石油醚： 乙酸乙酯 =10: 1 显色： 紫外、襖及 1%茚三酮 液
MS: 458(M+Na) c ) N- (叔丁氧羰基)甲基- N-叔丁氧羰基 -D-亮氨酸的制备
将 N- (叔丁氧羰基)甲基- N-叔丁氧羰基 -D-亮氨酸苄酯 (2.1g)溶于曱醇 (25ml), 加入 10%钯碳（210mg ), 通氢， 室温反应 3小时。 过滤， 减压浓缩 除去溶剂得到无色油状物 l，66g, 96%)。 直接进行下步反应。 d ) N- (叔丁氧羰基)甲基- N-叔丁氧羰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰- { [ (4- (N- 苄氧羰基)甲脒基苯基]曱基 }酰胺盐酸盐的制备
将 N- (叔丁氧锬基)甲基- N-叔丁氧羰基 -D-亮氨酸 (528mg)、 L-脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧羰基)甲脒基苯基]曱基 }酰胺盐酸盐 (626mg)、 DIEA(426mg) 用无水二氯甲烷 (20ml)溶解， 氮气保护， 冷却至 0。C后， 加入 HOBt(203mg)' EDCI(345mg), 在 0°C下搅拌 20min, 自然升至室温， 反应 5小时。 用 5%硫 酸氢钟溶液， 饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐氷溶液依次洗涂有机层， 无水硫 酸钠干燥， 过滤， 减压浓缩得到粗品 883mg, 柱层析纯化得白色泡状固体 (752mg, 收率： 71%)。
Rf=0.4 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =10: 15 显色： 紫外及換
MS: 730(M+Na) e ) N-羧基甲基 -D-亮氨酰 - L-脯氨酰 -[ (4-甲脒基苯基)曱基]酰胺盐酸盐的 制备
将上步所得产物 （500mg)溶于甲醇 (20mi)，加入 10%钯碳 (lOOmg),通氢 反应， 40°C下反应 8h, 过滤减压浓缩除去溶剂， 用曱醇 (5ml)溶解，加入 15% HC1/乙酸乙酯溶液， 反应 2h， 蒸千得白色泡状固体 (246mg， 71.4%)。
MS: 440(M+Na) 实施例 25: N-苯磺酰 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[1- (氨基亚氨基甲基) -哌啶 -4-基] 甲基酰胺盐酸盐
a ) N-苯磺酰 -D-亮氨酰 脯氨酰- ( 1-[ (N,N，-双苄氧羰基)氨基亚氨基曱 基] -哌啶 - 4-基} 甲基酰胺的制备
将 N-苯磺酰 -D-亮氨酸 (325mg)、 L-脯氨酰- { 1-[ (Ν,Ν'-双苄氧羰基)氨基 亚氨基曱基〗 -哌啶 -4-基}甲基酰胺盐酸盐 (670mg)、 DIEA(341mg)用无水二氯 曱烷 (20ml)溶解，氮气保护，冷却至 0°C后，加入 HOBt(162mg), EDCI(276mg), 在 0°C下搅拌 20min, 自然升至室温， 反应 5小时。 用 5%硫酸氢钾溶液， 饱 和碳酸氩钠溶液和饱和食盐水溶液依次洗涤有机层，无水硫酸钠干燥，过滤， 减压浓缩得到粗品 622mg, 柱层析纯化得白色泡状固体 （528mg, 收率： 56.8%)。
Ri ).4 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1:1 显色： 紫外及
MS: 776(M+H) b )N-苯磺酰 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 (氨基亚氨基甲基) -哌啶 -4-基]甲基酰 胺盐酸盐的制备
将上步所得产物 （450mg)溶于甲醇 pOml), 加入 10%钯碳 (90mg), 通氢 反应， 40°C下反应 8h, 过滤减压浓缩除去溶剂， 用甲醇 (5ml)溶解，加入 15% HC】/乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色泡状固体 (210mg, 66.7%)。
MS: 507(M+H) 实施例 26: N-苯磺酰 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[1- (氨基亚氨基曱基) -哌啶 -3-基] 曱基酰胺盐酸盐
a ) N-苯磺酰 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰- ( 1- [ (Ν,Ν'-双苄氧簸基)氨基亚氨基曱 基] -哌啶 -3-基} 甲基酰胺的制备
将 Ν-苯礒酰 亮氨酸 (325mg)、 L-脯氨酰- { 1-[ (Ν，Ν'-双苄氧凝基)氨基 亚氨基曱基] -哌啶 -3-基}甲基酰胺盐酸盐 (670mg)、 DIEA(341mg)用无水二氯 曱烷 (20ml)溶解，氮气保护，冷却至（TC后，加入 HOBt(162mg), EDCI(276mg), 在 0°C下搅拌 20min, 自然升至室温， 反应 5小时。 用 5%硫酸氢钾溶液， 饱 和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水溶液依次洗潦有机层，无水 u酸钠干燥，过滤， 减压浓缩得到粗品 597mg,柱层析纯化得白色泡状固体（495mg，收率： 51%)。
Rf^0.3 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1:1 显色： 紫外及
MS: 776(M+H) b )N-苯磺酰 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[1- (氨基亚氨基曱基) -哌啶 -3-基]曱基酰 胺盐酸盐的制备
将上步所得产物 （450mg)溶于甲醇 (20ml)， 加入 10%钯碳 (90mg), 通氢 反应， 40°C下反应 8h， 过滤减压浓缩除去溶剂， 用甲醇 (5ml)溶解，加入 15% HC1/乙酸乙酯溶液， 蒸千得白色泡状固体 (200mg, 64%)。
MS: 507(M+H) 实施例 27: N-苯瓒酰 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[1- (氨基亚氨基曱基) -吡咯 -3-基] 曱基酰胺盐酸盐
a ) N-苯横酰 _D-亮氨酰 -L-脯氨酰- { 1- [ (Ν,Ν，-双苄氧羰基)氨基亚氨基曱 基:] -吡咯 -3-基） 甲基酰胺的制备
将 Ν-苯磺酰 -D-亮氨酸 (325mg)、 L-脯氨酰- { 1- [ (Ν,Ν'-双苄氧燄基)氨基 亚氨基曱基] -哌啶 -3_基}甲基酰胺盐酸盐 (816mg)、 DIEA(341mg)用无水二氯 曱烷 (20ml)溶解，氮气保护，冷却至 0°C后，加入 HOBt(162mg), EDCI(276mg)' 在 0°C下搅拌 20min， 自然升至室温， 反应 5小时。 用 5%硫酸氢钾溶液， 饱 和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水溶液依次洗、涤有机层，无水^ ^酸钠干燥，过滤， 减压浓缩得到粗品 681mg，柱层析纯化得白色泡状固体 （554mg,收率： 48%)。
Rf^0.3 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1:1 显色： 紫外及
MS: 761(M+H) b ) N-苯磺酰 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[1- (氨基亚氨基曱基) - 吡咯 -3-基]甲基 酰胺盐酸盐的制备
将上步所得产物 （450mg)溶于曱醇 (20ml), 加入 10%钯碳 (90mg), 通氢 反应， 40°C下反应 8h, 滤减压浓缩除去溶剂， 用甲醇 (5ml)溶解，加入 15% HC1/乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色泡状固体 (257mg, 64%)。
MS: 507(M+H) 实施例 28: N-苯磺酰基 -D-异亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-甲脒基苯基)甲基]酰胺盐 酸盐
a ) N-苯磺酰 -D-异亮氨酸的制备
将 D-异亮氨酸 (262mg)溶于 1.5N 氢氧化钠溶液 (4ml)中， 加入二氧六环 (4ml), 冷却控温 0~5°C ; 緩慢滴加苯磺酰氯 (389mg)和 1.5N氢氧化钠溶液， 维持 pH值 9~10； 0度下反应 2h， 自然升至室温反应 2h。 冷却下滴加稀盐 酸调节 pH至 3 , 减压浓缩除去曱醇， 水相用乙酸乙酯萃取 (5mlx3); 合并有 机相， 无水硫酸钠干燥， 过滤减压浓缩， 所得粗品过柱纯化得 434mg无色 油状物， 静置固化。 含量 99% ( HPLC, 流动相 1 , 方法 2 )。
R^0.8 展开剂正丁醇： 水： 醋酸： 乙酸乙酯 =1: 1: 1 : 1 显色： 紫外、 及 1%茚三酮液 b ) N-苯磺酰基 -D-异亮氨酰- L-脯氨酰- { [ (4_ (N-苄氧羰基)曱脒基苯基] 曱基） 酰胺的制备
将 N-苯碌酰 亮氨酰 -L-脯氨酸 (406mg：)、 L-脯氨酰- ( [ (4- (N-苄氧齪基) 甲脒基苯基]曱基 }酰胺盐酸盐 (625mg)、 DIEA(426mg)用无水二氯曱烷 (20ml) 溶解， 氮气保护， 冷却至 0°C后， 加入 HOBt(203mg)， EDCI(345mg), 在 0°C 下搅拌 20min, 自然升至室温， 反应 5小时。 用 5%硫酸氢钾溶液' 饱和碳 酸氢钠溶液和饱和食盐水溶液依次洗涤有机层， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减 压浓缩得到粗品 894mg, 柱层析纯化得白色泡状固体（627mg, 收率： 66%)。
Rf^0.4 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1:4 显色： 紫外及
MS: 634(M+H) e ) N-苯磺酰基 -D-异亮氨酰 -L-脯氨酰- [ (4-曱脒基苯基)曱基]酰胺盐酸盐 的制备
将上步所得产物 （450mg)溶于曱醇 (20ml), 加入 10%钯破 (90mg), 通氢 反应， 40°C下反应 8h, 过滤减压浓缩除去溶剂， 用甲醇 (5ml)溶解，加入 15% HC1/乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色泡状固体 (304mg， 81%)。
MS: 500(M+H) 实施例 29: N-苄磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(5-甲脒基 -2-噻吩基)甲基]酰胺 盐酸盐
a) N-苄磺酰 -D-亮氨酰 - L-脯氨酸苄酯的制备
将 N-苄磺酰 亮氨酸（4.3g), L-脯氨酸苄酯（4.1g)溶解于二氯曱烷 (50ml) 中， 氮气保护， 冷却下滴加 DIEA (4.7g)， 滴加完毕后加入 HOBt (2g)和 EDCI (3.8g)， 自然升至室温反应 4h。 2) 减压浓缩除去反应液， 直接过柱纯化得 5g无色油状物， 静置固化 （72%), 含量 98% (HPLC, 流 动相 1, 方法 1 )。
RiN).5 展开剂石油醚： 乙酸乙酯 =2: 1 显色： 紫外、 破及 1%茚三酮 液
MS: 473(M+H) b) N-苄磺酰 亮氨酰 脯氨酸的制备
将 N-苄磺酰 亮氨酰 -L-脯氨酸苄酯 (1.2g)溶于曱醇 (20ml)，加入 10%钯 碳（120mg), 通氢， 室温反应 3小时。 过滤， 减压浓缩除去溶剂得到白色泡 状固体 (981mg, 97%)。 直接进行下步反应。 c ) N-苄磺酰 亮氨酰 -L-脯氨酸 -[(5-氰基 -2-噻 基)甲基]酰胺的制备 将 N-苄磺酰 -D-亮氨酰 脯氨酸（ lg)、 5-氨曱基噻吩 -2-曱腈盐酸盐 ( 463mg )、 DIEA ( 773mg )用无水二氯甲烷 (20ml)溶解， 氮气保护， 冷却至 0 后, 加入 HOBt(351mg), EDCI(600mg), 在 0°C下搅拌 20miti, 自然升至 室温， 反应 5小时。 用 5%硫酸氢钾溶液， 饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水 溶液依次洗潦有机层， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减压浓缩得到粗品 1.4g, 柱 层析纯化得无色油状物 （900mg, 收率： 69%)。
RfN).3 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1 :1 显色： 紫外及碓
MS: 503(M+H) d ) N-苄磺酰 亮氨酰 -L-脯氨酰- { [5-(N，-羟基)甲脒基 2-噻吩基]甲基 } 酰胺的制备
将上步所得产物 （900mg)溶于水 /乙醇 (20ml/20ml), 氮气保护，加入盐酸 羟胺和碳酸钠， 回流反应 2小时冷却， 减压浓缩除去溶剂， 过柱纯化得到白 色泡状固体 (857mg, 88.9%)。
RfK 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1 : 1 显色： 紫外及 1%茚三酮液 MS: 536(M+H) e ) N-苄磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(5-甲脒基 -2-噻吩基)甲基]酰胺盐酸 将实上步所得的化合物溶解于醋酸 (7ml)中， 加入醋酸酐 (260mg)和 10% 巴碳 (130mg)，通氢反应 24小时，过滤，减压浓缩除去溶剂，加入乙醚 (20ml), 放置水箱过夜， 析出固体， 过滤干燥 (467mg, 50.3%)
MS: 520(M+1) 实施例 30: N-苯磺酰基 -D-亮氨酰 -L-高脯氨酰- [ (4-曱脒基苯基)甲基]酰胺盐 酸盐
a ) N-苯礒酰 -D-亮氨酰 -L-高脯氨酸苄酯的制备
将 N-苯磺酰 亮氨酸 (1.4g) , L-高脯氨酸苄酯 （ 1.3g)溶解于二氯甲烷 (30ml)中，氮气保护，冷却下滴加 DIEA(l.5g ),滴加完毕后加入 HOBt(675mg) 和 EDCI(230mg), 自然升至室温反应 4h。 减压浓缩除去反应液， 直接过柱纯 化得 1.7g白色固体 (74.2 % ), 含量 98% ( HPLC, 流动相 1 , 方法 1 )。
Rf^0.3 展开剂石油醚： 乙酸乙酯 =2: 1 显色： 紫外、 破及 1%茚三酮 液
MS: 473(M+H) b ) N-苯磺酰 -D -亮氨酰 -L-高脯氨酸的制备
将 N-苯碌酰 - D -亮氨酰 -L-高脯氨酸苄酯 (lg)溶于曱醇 (10ml), 加入 10% 钯碳（100mg )， 通氢， 室温反应 3小时。 过滤， 减压浓缩除去溶剂得到白色 泡状固体 (764mg, 99%) 直接进行下步反应。 c ) N-苯磺酰基 -D-亮氨酰 -L-高脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧談基)甲脒基苯基] 甲基 }酰胺的制备
将 N-苯磺酰 -D-亮氨酰 -L-高脯氨酸 (573mg；)、 4-氨曱基 -Ν'-苄氧羰基苯甲 脒盐酸盐 （ 540mg)溶解于 DMF(IOml)中， 氮气保护， 冷却下滴加 DIEA(446mg ), 滴加完毕后加入 HOBt(203mg)和 EDCI(345mg), 自然升至室 温反应 4h。减压浓缩除去反应液，直接过柱纯化得 559mg白色泡状固体 (57.6 % ), 含量 98% ( HPLC, 流动相 1 , 方法 1 )。
Rf^0.5 展开剂石油醚： 乙酸乙酯 =1 : 2 显色： 紫外、 及 1%茚三酮 液
MS: 648(M+H) d ) N-苯磺酰基 -D-亮氨酰 -L-高脯氨酰- [ (4-曱脒基苯基)曱基]酰胺盐酸盐 的制备
将上步所得产物 （500mg)溶于曱醇 (20ml)， 加入 10%钯碳 (90mg), 通氢 反应， 40。C下反应 8h， 过滤减压浓缩除去溶剂，用曱醇 (5ml)溶解，加入 15% HCV乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色泡状固体 (318mg, 75%)。
MS: 514(M+H) 实施例 31: N-苯磺酰基 -D-亮氨酰 - (S)-氮杂环丁烷 -2_[ (4-甲脒基苯基)甲基] 酰胺盐酸盐
a ) N-苯磺酰-亮氨酰 -(S)-氮杂环丁烷- 2-羧酸苄酯的制备
将 N-苯磺酰 -D-亮氨酸 (1.4g), (S)-氮杂环丁炕 -2-羧酸苄酯（ lg)溶解于二 氯甲烷 (30ml)中， 氮气保护， 冷却下滴加 DIEA(l.5g ), 滴加完毕后加入 HOBt(675mg)和 EDCI(230mg), 自然升至室温反应 4h。减压浓缩除去反应液， 直接过柱纯化得 1.5g白色固体 (69 % ), 含量 98% ( HPLC, 流动相 1 , 方法 1 )。
R^0.2 展开剂石油醚： 乙酸乙酯 =2: 1 显色： 紫外、 換及 1%茚三酮 液
MS: 445(M+H) b ) N-苯横酰 -D -亮氨酰 --(S)-氮杂环丁烷 -2-羧酸的制备
将 N-苯磺酰 亮氨酰- (S)-氮杂环丁烷 -2-羧酸苄酯 (667mg)溶于甲醇 (10ml), 加入 10%钯碳（80mg ), 通氢， 室温反应 3小时。 过滤， 减压浓缩 除去溶剂得到白色泡状固体 (520mg, 99%)。 直接进行下步反应。 c ) N-苯磺酰—亮氨酰 -(S)-氮杂环丁烷 -2- { [ (4- (N-苄氧羰基)曱脒基苯基] 甲基 }酰胺的制备
将 N-苯磺酰 -D -亮氨酰 (S)-氮杂环丁烷 -2-羧酸 (520mg)、 4-氨曱基 -Ν'- 苄氧羰基苯甲脒盐酸盐（540mg)溶解于 DMF(lOml)中， 氮气保护， 冷却下滴 加 DIEA(446mg )， 滴加完毕后加入 HOBt(203mg)和 EDCI(345mg), 自然升 至室温反应 4h。 减压浓缩除去反应液， 直接过柱纯化得 566mg白色泡状固 体 (61 % ), 含量 98.5% ( HPLC, 流动相 1 , 方法 1 )。
Rf ).4 展开剂石油醚： 乙酸乙酯 =1: 2 显色： 紫外、 換及 1%茚三酮 液
MS: 620(M+H) d ) N-苯磺酰 亮氨酰 -(S)-氮杂环丁烷- 2- [ (4-甲脒基苯基)甲基]酰胺盐酸 盐的制备
将上步所得产物 （500mg)溶于甲醇 (20ml), 加入 10%钯碳 (90mg), 通氢 反应， 40°C下反应 8h, 过滤减压浓缩除去溶剂， 用曱醇 (5ml)溶解，加入 15% HCi/乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色泡状固体 (328mg, 78%)。
MS: 486(M+H) 实施例 32: N-苯磺酰 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[1- (氨基) -环己烷 -4-基]曱基酰胺盐 酸盐
a ) N-笨礒酰 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰- U- [ (N-苄氧齪基)氨基] -环己烷 -4-基} 曱基酰胺的制备
将 N-苯磺酰 -D-亮氨酸 L-脯氨酸 (553mg) 、 4-氨曱基 -N-苄氧羰基环己胺 盐酸盐（ 450mg)溶解于 DMF(lOml)中，氮气保护，冷却下滴加 DIEA(446mg ), 滴加完毕后加入 HOBt(203mg)和 EDCI(345mg), 自然升至室温反应 4h。 减 压浓缩除去反应液，直接过柱纯化得 542mg白色泡状固体 (59 % ),含量 98.5% ( HPLC, 流动相 1 , 方法 1 )。
RfN).6 展开剂石油醚： 乙酸乙酯 =1 : 2 显色： 紫外、 碘及 1%茚三酮 淡
MS: 613(M+H) b )N-笨瓚酰 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[1- (氨基)-环、己烷 -4-基]甲基酰胺盐酸盐 的制备
将上步所得产物 （400mg)溶于甲醇 (20ml), 加入 10%钯碳 (90mg)， 通氢 反应， 40°C下反应 8h， 过滤减压浓缩除去溶剂， 用甲醇 (5ml)溶解，加入 15% HC1/乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色泡状固体 (273mg， 81%)。
MS: 516(M+H) 实施例 33: N-苯磺酰基- D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -(4-甲脒基苯基)酰胺盐酸盐
a ) N-苯磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[ (4- (N-苄氧羰基)曱脒基苯基]酰胺 的制备
将 N-笨硪酰 -D-亮氨酸 L-脯氨酸 (553mg) 、 4-氨基 -N-苄氧談基苯甲脒盐 酸盐（460mg)溶解于 DMF(lOml)中， 氮气保护， 冷却下滴加 DIEA(446mg ), 滴加完毕后加入 HOBt(203mg)和 EDCI(345mg), 自然升至室温反应 4h。 减 压浓缩除去反应液，直接过柱纯化得 315mg白色泡状固体 (34 % ),含量 98.5% ( HPLC, 流动相 1 , 方法 1 )。
Rf ).4 展开剂石油醚： 乙酸乙酯 =1 : 2 显色： 紫外、 換及 1%茚三酮 液
MS: 620(M+H) b ) N-苯磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -(4-曱脒基苯基)酰胺盐酸盐的制备 将上步所得产物 （300mg)溶于曱醇 (15ml), 加入 10%钯碳 (50mg), 通氢 反应， 40°C下反应 8h, 过滤減压浓缩除去溶剂， 用甲醇 (5ml)溶解，加入 15%
HC1/乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色泡状固体 (201mg, 80%)。
MS: 486(M+H) 实施例 34: N-苯磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰- [ (4-曱脒基苯基）乙基]酰胺盐酸 a ) N-苯碌酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧羰基)甲脒基苯基]乙 基） 酰胺的制备
将 N-苯磺酰 -D-亮氨酸 L-脯氨酸 (553mg) 、 4-氨乙基 -N-苄氧欺基苯甲脒 盐酸盐（ 501mg)溶解于 DMF(lOml)中，氮气保护，冷却下滴加 JDIEA(446mg )， 滴加完毕后加入 HOBt(203mg)和 EDCI(345mg), 自然升至室溫反应 4h。 减 压浓缩除去反应液， 直接过柱纯化得 704mg 白色泡状固体 (72.5 % )， 含量 98.5% ( HPLC, 流动相 1 , 方法 1 )。
Rf^0.45 展开剂石油醚： 乙酸乙酯 =1 : 2 显色： 紫外、 襖及 1%茚三酮 液
MS: 648(M+H) b ) N-苯磺酰基 -D_亮氨酰 -L-脯氨酰 -[ (4-曱脒基苯基)乙基]酰胺盐酸盐的 制备
将上步所得产物 （500mg)溶于曱醇（15ml), 加入 10%钯碳 (50mg), 通氢 反应， 40°C下反应 8h， 过滤减压浓缩除去溶剂， 用曱醇 (5ml)溶解，加入 15% HC1/乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色泡状固体 (361mg, 85%)。
MS: 514(M+H) 实施例 35: N-苯磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[ (3-甲脒基苯基)甲基]酰胺盐酸 盐
a ) N-苯磺酰基- D-亮氨酰 -L-脯氨酰- { [ (3- (N-苄氧羰基)曱脒基苯基]甲 基}酰胺的制备
苯磅酰 -D-亮氨酸 L-脯氨酸 (553mg) 、 3-氨甲基 -N-苄氧欺基苯曱脒 盐酸盐（ 450mg)溶解于 DMF(lOml)中，氮气保护，冷却下滴加 DIEA(446mg )， 滴加完毕后加入 HOBt(203mg)和 EDCI(345mg), 自然升至室温反应 4h。 减 压浓缩除去反应液， 直接过柱纯化得 681mg 白色泡状固体 (71.8 % ), 含量 98.5% ( HPLC, 流动相 1 , 方法 1 )。
Rf^0.4 展开剂石油醚： 乙酸乙酯 =1 : 2 显色： 紫外、 碘及 1%茚三酮 液
MS: 634(M+H) b ) N-苯碩酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰- [ (3-曱脒基苯基)曱基]酰胺盐酸盐的 制备
将上步所得产物 （500mg)溶于曱醇 (15ml)， 加入 10%钯碳 (50mg), 通氢 反应， 40Ό下反应 8h, 过滤減压浓缩除去溶剂， 用甲醇 (5ml)溶解，加入 15% HC1/乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色泡状固体 (364mg, 86%)。
MS: 500(M+H) 实施例 36: N-苯磺酰基- D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -{[4- (Ν'-曱氧基)甲脒基苯基]甲基 } 酰胺盐酸盐
将 Ν-苯磺酰 亮氨酸 L-脯氨酸 (553mg) 、 4-氨甲基 -(Ν'-曱氧基)苯甲脒 盐酸盐（ 323mg)溶解于 DMF(lOml)中，氮气保护，冷却下滴加 DIEA(446mg ), 滴加完毕后加入 HOBt(203mg)和 EDCI(345mg), 自然升至室温反应 4h。 减 压浓缩除去反应液， 直接过柱純化得 420mg 白色泡状固体 (52.9 % ), 含量 98.5% ( HPLC, 流动相 1， 方法 1 )。
展开剂石油醚： 乙酸乙酯 =1 : 2 显色： 紫外、 及 1%茚三酮 液
MS: 530(M+H) 实施例 37: N-苯磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[ (4-氨曱基苯基)甲基]酰胺盐酸 盐
a ) N-苯磺酰 -D-亮氨酰 -L-脯氨酸- [(4-氰基苯基)甲基]酰胺的制备
将 N-苯横酰 -D-亮氨酰 -L-脯氨酸 (737mg)、对氨甲基笨腈盐酸盐 (337mg)、
DIEA(569mg)用 DMF(20ml)溶解， 氮气保护' 冷却至 0°C后， 力口入 HOBt(270mg), EDCI(460mg), 在 0°C下搅拌 20min, 自然升至室温， 反应 5 小时。 用 5%硫酸氢钾溶液， 饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水溶液依次洗涤 有机层， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减压浓缩得到粗品 l.lg, 柱层析純化得无 色油状物 （650mg, 收率： 67.3%)。
R^0.65 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1 :1 显色： 紫外及
MS: 505(M+Na+)
b ) N-苯磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[ (4-氨曱基苯基)甲基]酰胺盐酸益的 制备
将上步所得产物 （500mg)溶于甲醇（15ml)， 加入 10%钯碳 (50mg), 通氢 反应， 40°C下反应 8h, 过滤减压浓缩除去溶剂，用曱醇 (5ml)溶解，加入 15% HC1/乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色泡状固体 (455mg, 84%).
MS: 487(M+H) 实施例 38: N-苯磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(5-氨甲基 -2-噻吩基)甲基]酰胺 盐酸盐
将 N-苯磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(5-氰基 -2-噻吩基）甲基]酰胺 (500mg)溶于甲醇（15ml), 加入 10%钯碳 (50mg), 通氢反应， 40Ό下反应 8h, 过滤减压浓缩除去溶剂， 用甲醇 (5ml)溶解， 加入 15% HC1/乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色泡状固体 (383mg， 71%)。
MS: 493(M+H) 实施例 39: N-二甲胺基磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-曱脒基苯基)甲基]酰 胺盐酸盐
a ) N-二甲胺基磺酰基 -D-亮氨酸的制备
将 D-亮氨酸 (1.3g)溶于 1.5N 氢氧化钠溶液 (10ml)中' 加入二氧六环 (30ml), 冷却控温 0~5°C ; 緩慢滴加二甲胺基磺酰氯 (1.4g)和 1.5N 氢氧化钠 溶液， 维持 pH值 9~10； 0度下反应 2h, 自然升至室温反应 2h。 冷却下滴 加稀盐酸调节 pH至 3 , 减压浓缩除去二氧六环， 水相用乙酸乙酯 (20ml*3) 萃取， 所得有机相酸洗、 碱洗、 水洗至中性， 无水硫酸钠干燥， 浓缩滤液， 过柱纯化得 1.33g无色油状物。 含量 97% ( HPLC, 流动相 1， 方法 2 )。
Rf=0.8 展开剂正丁醇： 水： 醋酸： 乙酸乙酯 =1 : 1： 1: 1 显色： 碘及 b ) N-二甲胺基磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰- ( [ (4- (N-苄氧羰基)甲脒基苯 基]曱基 } 酰胺的制备
将 N-二曱胺基磺酰基 -D-亮氨酸 (357mg)、 L-脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧浆基) 甲脒基苯基]甲基）酰胺盐酸盐 (625mg)、 DIEA(426mg)用无水二氯曱烷 (20ml) 溶解， 氮气保护， 冷却至 0°C后， 加入 HOBt(203mg), EDCI(345mg), 在 0。C 下搅拌 20min, 自然升至室温， 反应 5小时。 用 5° ½¾酸氢钾溶液， 饱和碳 酸氢钠溶液和饱和食盐水溶液依次洗涤有机层， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减 压浓缩得到粗品 mg， 柱层析纯化得白色泡状固体 (316mg, 收率： 35%)。
Rf ).2 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1:4 显色： 紫外及
MS: 601(M+H) c ) N-二甲胺基磺酰基- D-亮氨酰 - L-脯氨酰 -[ (4-曱脒基苯基)甲基]酰胺盐 酸盐的制备
将上步所得产物 （300mg)溶于曱醇 (20ml), 加入 10%钯碳 (40mg), 通氢 反应， 40°C下反应 8h, 过滤减压浓缩除去溶剂， 用曱醇 (5ml)溶解，加入 15% HC1/乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色泡状固体 (154mg, 62%).
MS: 467(M+H) 实施例 40: N-甲烷磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-甲脒基苯基)甲基]酰胺盐 酸盐
a ) N-曱烷磺酰基 亮氨酸的制备
将 D-亮氨酸 (1.3g)溶于 1.5N 氢氧化钠溶液 (10ml)中， 加入二氧六环 (30ml),冷却控温 0〜5°C;緩慢滴加甲烷磺酰氯（l.lg)和 1.5N 氢氧化钠溶液， 维持 pH值 9~10； 0度下反应 2h, 自然升至室温反应 2h。 冷却下滴加稀盐 酸调节 pH至 3 , 减压浓缩除去二氧六环， 水相用乙酸乙酯 (20ml*3)萃取， 所得有机相酸洗、 碱洗、 水洗至中性， 无水硫酸钠干燥， 浓缩滤液' 过柱纯 化得 1.05g无色油状物。 含量 97% ( HPLC, 流动相 1 , 方法 2 )。
R^0.5 展开剂正丁醇： 水： 醋酸： 乙酸乙酯 =1 : 1 : 1: 1 显色： 碘及 1。/0茚三酮液 b ) N-曱烷磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧談基)曱脒基苯基] 甲基 }酰胺的制备
将 N-甲烷磺酰基 -D-亮氨酸 (315mg)、 L-脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧羰基)曱脒 基苯基]曱基 } 酰胺盐酸盐 (625mg)、 DIEA(426mg)用无水二氯甲烷 (20ml)溶 解， 氮气保护， 冷却至 0°C后， 加入 HOBt(203mg), EDCI(345mg), 在 0。C 下搅拌 20min, 自然升至室温， 反应 5小时。 用 5%A酸氢钾溶液， 饱和碳 酸氢钠溶液和饱和食盐水溶液依次洗漆有机层， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减 压浓缩得到粗品 mg, 柱层析纯化得白色泡状固体 (300mg, 收率： 47%)。
R^0.3 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1 :3 显色： 紫外及
MS: 572(M+H) c ) N-甲烷磺酰基 -D-亮氨酰 -L_脯氨酰 -[ (4-曱脒基苯基)曱基]酰胺盐酸盐 的制备
将上步所得产物 （300mg)溶于曱醇 (20ml), 加入 10%钯碳 (50mg)， 通氢 反应， 4CTC下反应 8h, 过滤减压浓缩除去溶剂， 用曱醇 (5ml)溶解，加入 15% HC1/乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色泡状固体 (127 mg, 51%)。
MS: 438(M+H) 实施例 41 : N-乙烷磺酰基 亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-曱脒基苯基)甲基]酰胺盐 酸盐
a ) N-乙烷磺酰基" D-亮氨酸的制备
将 D-亮氨酸 (1.4g)溶于 1.5N 氢氧化钠溶液 (10ml)中， 加入二氧六环 (10ml)，冷却控温 0〜5°C ;緩慢滴加乙烷磧酰氯（1.3g)和 1.5N氢氧化钠溶液， 维持 pH值 9〜10； 0度下反应 2h, 自然升至室温反应 2h。 冷却下滴加稀盐 酸调节 pH至 3 , 减压浓缩除去二氧六环， 水相用乙酸乙酯 (20ml*3)萃取， 所得有机相酸洗、 碱洗、 水洗至中性， 无水硫酸钠干燥， 浓缩滤液， 过柱纯 化得 1.17g无色油状物。 含量 98% ( HPLC, 流动相 1 , 方法 2 )。
R^0.7 展开剂正丁醇： 水： 醋酸： 乙酸乙酯 =1 : 1 : 1 : 1 显色： 碘及 1%茚三酮液 b ) N-乙烷磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧羰基)曱脒基苯基] 甲基 }酰胺的制备
将 N-乙烷磺酰基 -D-亮氨酸 (336mg)、 L-脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧羰基)曱脒 基苯基]甲基 } 酰胺盐酸盐 (625mg)、 DIEA(426mg)用无水二氯甲烷 (20ml)溶 解， 氮气保护， 冷却至 0°C后， 加入 HOBt(203mg)， EDCI(345mg), 在 0°C 下搅拌 20min, 自然升至室温， 反应 5小时。 用 5%硫酸氢钾溶液， 饱和碳 酸氢钠溶液和饱和食盐水溶液依次洗涤有机层， 无水疏酸钠干燥， 过滤， 减 压浓缩得到粗品 mg， 柱层析纯化得白色泡状固体（473mg, 收率： 54%)。
R^0.3 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1 :2 显色： 紫外及碘
MS: 586(M+H) c ) N-乙烷磺酰基 -D-亮氨酰 - L-脯氨酰 -[ (4-甲脒基苯基)甲基]酰胺盐酸盐 的制备
将上步所得产物 （320mg)溶于甲醇 (20ml), 加入 10%钯碳 (50mg)， 通氢 反应， 40°C下反应 8h, 过滤减压浓缩除去溶剂， 用曱醇 (5ml)溶解，加入 15% HCI/乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色泡状固体 (179mg, 67%)。
MS: 452(M+H) 实施例 42: N-环丙烷磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-甲脒基苯基)曱基]酰胺 盐酸盐
a ) N-环丙烷磺酰基 亮氨酸的制备
将 D-亮氨酸 (1.3g)溶于 1.5N 氢氧化钠溶液 (10ml)中， 加入二氧六环 (10ml), 冷却控温 0~5°C ; 緩慢滴加环丙烷磺酰氯 (1.4g)和 1.5N氢氧化钠溶 液， 维持 pH值 9~10； 0度下反应 2h, 自然升至室温反应 2h。 冷却下滴加 稀盐酸调节 pH至 3, 减压浓缩除去二氧六环， 水相用乙酸乙酯 (20ml*3)萃 取， 所得有机相酸洗、 碱洗、 水洗至中性， 无水硫酸钠千燥， 浓缩滤液' 过 柱纯化得 658mg无色油状物。 含量 98% ( HPLC, 流动相 1 , 方法 2 )。
Rf^O.7 展开剂正丁醇： 水： 醋酸： 乙酸乙酯 =1 : 1 : 1 : 1 显色： 碘及 1%茚三酮液 b )N-环丙烷磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -{ [ (4- (N-苄氧羰基)甲脒基苯基] ：
63
甲基） 酰胺的制备
将 N-环丙烷磺酰基 亮氨酸 (355mg)、 L-脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧羰基) 甲脒基苯基〗曱基 }酰胺盐酸盐 (625mg)、 DIEA(426mg)用无水二氯甲烷 (20ml) 溶解， 氮气保护， 冷却至 0°C后， 加入 HOBt(203mg), EDCI(345mg), 在 0。C 下搅拌 20min, 自然升至室温， 反应 5小时。 用 5%硫酸氢鉀溶液， 饱和碳 酸氢钠溶液和饱和食盐水溶液依次洗涂有机层， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减 压浓缩得到粗品 mg, 柱层析纯化得白色泡状固体（340mg, 收率： 38%)。
R^0.2 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1:2 显色： 紫外及碘
MS: 598(M+H) c ) N-环丙烷磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰- [ (4-曱脒基苯基)甲基]酰胺盐酸 盐的制备
将上步所得产物 （300mg)溶于甲醇 (20ml), 加入 10%钯碳 (40mg), 通氢 反应， 40Ό下反应 8h, 过滤减压浓缩除去溶剂， 用甲醇 (5ml)溶解，加入 15% HC1/乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色泡状固体 (110 mg, 44%)。
MS: 464(M+H) 实施例 43: N-叔丁氧羰基- D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-曱脒基苯基)曱基]酰胺盐 酸益
a ) N-叔丁氧羰基 亮氨酸的制备
将 D-亮氨酸 (1.3g)溶于 1.5N 氢氧化钠溶液 (10ml)中， 加入二氧六环 (lOml); 緩慢滴加二碳酸二叔丁酯 (2.6g), 室温反应 8h。 冷却下滴加稀盐酸 调节 pH至 3 , 减压浓缩除去二氧六环， 水相用乙酸乙酯 (20ml*3)萃取， 所 得有机相酸洗、 碱洗、 水洗至中性， 无水硫酸钠干燥， 浓缩滤液， 过柱纯化 得 1.64g无色油状物， 静置固化。 含量 98% ( HPLC, 流动相 1 , 方法 2 )。
Rf=0.8 展开剂正丁醇： 水： 醋酸： 乙酸乙酯 =1 : 1 : 1 : 1 显色： 碘及 1%茚三酮液 b ) N-叔丁氧羰基- D-亮氨酰 -L-脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧淡基)曱脒基苯基] 甲基 }酰胺的制备
将 N-叔丁氧羰基 亮氨酸 (349mg)、 L-脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧羰基)曱脒 基苯基]曱基 } 酰胺盐酸盐 (625mg)、 DIEA(426mg)用无水二氯甲烷 (20ml)溶 解， 氮气保护， 冷却至 0°C后， 加入 HOBt(203mg), EDCI(345mg), 在 0°C 下搅拌 20min， 自然升至室温， 反应 5小时。 用 5%硫酸氢钾溶液， 饱和碳 酸氢钠溶液和饱和食盐水溶液依次洗涤有机层， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减 压浓缩得到粗品 mg, 柱层析纯化得白色泡状固体（614mg, 收率： 69%)。
Ri^0.5 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1:2 显色： 紫外及碘
MS: 616(MH-Na) c ) N-叔丁氧羰基- D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[ (4-曱脒基苯基)甲基]酰胺盐酸盐 的制备
将上步所得产物 （500mg)溶于曱醇 (20ml), 加入 10%钯碳 (80mg)， 通氢 反应， 40°C下反应 8h, 过滤减压浓缩除去溶剂，用曱醇 (5ml)溶解，加入 15% HC1/乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色泡状固体（302mg, 73%)。
MS: 482(M+Na) 实施例 44: N-曱氧羰基- D-亮氨酰 脯氨酰 -[(4-曱脒基苯基)曱基]酰胺盐酸 a ) N-曱氧齪基 -D-亮氨酸的制备
将 D-亮氨酸（1.5g)溶于 1.5N 氲氧化钠溶液（10ml)中， 加入二氧六环 (10ml), 冷却控温 0~5°C ; 緩慢滴加氯甲酸甲酯（lg)和 1.5N 氢氧化钠溶液， 维持 pH值 9~10； 0度下反应 2h, 自然升至室温反应 2h。 冷却下滴加稀盐 酸调节 pH至 3 , 减压浓缩除去二氧六环， 氷相用乙酸乙酯 (20ml*3)萃取， 所得有机相酸洗、 碱洗、 水洗至中性， 无水硫酸钠干燥， 浓縮滤液， 过柱纯 化得 1.35g无色油状物。 含量 98% ( HPLC, 流动相 1 , 方法 2 )。
R^0.7 展开剂正丁醇： 水： 醋酸： 乙酸乙酯 =1: 1 : 1 : 1 显色： 破及 1%茚三酮液 b ) N-曱氧羰基- D-亮氨酰 -L-脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧羰基)曱脒基苯基]曱 基）酰胺的制备
将 N-甲氧羰基 -D-亮氨酸 (288mg)、 L-脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧羰基)甲脒基 苯基]甲基 }酰胺盐酸盐 (625mg)、 DIEA(426mg)用无水二氯曱烷 (20ml)溶解， 氮气保护， 冷却至 0°C后， 加入 HOBt(203mg), EDCI(345mg), 在 0°C下搅 拌 20min, 自然升至室温， 反应 5小时。 用 5%硫酸氢钾溶液， 饱和碳酸氢 钠溶液和饱和食盐水溶液依次洗涤有机层， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减压浓 缩得到粗品 mg, 柱层析纯化得白色泡状固体（438mg, 收率： 53%)。
R^0.4 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1:2 显色： 紫外及腆
MS: 574(M+Na) c ) N-曱氧羰基 亮氨酰 -L-脯氨酰- [ (4-甲脒基苯基)甲基]酰胺盐酸盐的 制备
将上步所得产物 （300mg)溶于曱醇 (20ml)， 加入 10%钯碳 (90mg), 通氢 反应， 40°C下反应 8h, 过滤减压浓缩除去溶剂， 用甲醇 (5ml)溶解，加入 15% HC1/乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色泡状固体（ 143mg, 58%)。
MS: 418(M+H) 实施例 45: N-羧基乙基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[ (4-曱脒基苯基)甲基]酰胺盐酸 盐
a ) N- [2- (乙氧叛基)乙基] -D-亮氨酸苄酯的制备
将 D-亮氨酸苄酯盐酸盐 (5g)溶于 DMF(30ml)中，加入 DIEA(2.6g),緩慢 滴加 3-溴丙酸乙酯 (4.1g), 60°C下反应 36h。 减压浓缩除去大量溶剂， 加入乙 酸乙酯 (20ml),有机相用饱和碳酸氢钠溶液 (50ml*3)、5%KHSO4溶液 (50ml*3) 洗涤， 水洗至中性， 饱和食盐水 (50ml* 1)洗涤， 无水硫酸钠干燥， 浓缩滤液 得 1.57g黄色油状物，过柱纯化得 2.1g 浅黄绿色油状物。含量 96% ( HPLC, ：流动 4目 1 , 方法 1 λ
R^0.5 展开剂石油醚： 乙酸乙酯 =2: 1 显色： 紫外、 碘及 1%茚三酮液 MS: 344(M+Na) b ) N-[2- (乙氧羰基)乙基] - N-叔丁氧叛基 -D-亮氨酸苄酯的制备
将 N-0 (乙氧欺基)乙基] -D-亮氨酸苄酯 (2.1g)溶解于二氯甲烷 (20ml )中， 滴加 DIEA(l.lg)和二碳酸二叔丁酯（1.8g ), 40°C反应 36h。 减压浓缩除去反 应液， 直接过柱纯化得 837mg无色油状物 (30.4 % ), 含量 96% ( HPLC, 流 动相 1 , 方法 1 )。 R^0.5 展开剂石油醚： 乙酸乙酯 =10: 1 显色： 紫外、 破及 1%茚三酮液 MS: 444(M+Na) c ) N- [2- (乙氧羰基)乙基] - N-叔丁氧羰基 -D-亮氨酸的制备
将 N-[2- (乙氧羰基)乙基] - N-叔丁氧羰基 -D-亮氨酸苄酯 (837mg)溶于甲 醇 (25ml), 加入 10%钯碳（90mg )， 通氢， 室温反应 3小时。 过滤， 减压浓 缩除去溶剂得到无色油状物 612mg, 93。/。)。 直接进行下步反应。 d ) N-P- (乙氧凝基）乙基] - N-叔丁氧賧基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰- { [ (4- (N- 苄氧羰基)甲脒基苯基]曱基） 酰胺盐酸盐的制备
将 N-P- (乙氧羰基）乙基] - N-叔丁氧欺基 -D-亮氨酸 (499mg)、 L-脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧齪基)曱脒基苯基]甲基 }酰胺盐酸盐 (626mg)、 DIEA(426mg) 用无水二氯曱烷 (20ml)溶解， 氮气保护， 冷却至 0°C后， 加入 HOBt(203mg), EDCI(345mg), 在 0°C下搅拌 20min, 自然升至室温， 反应 5小时。 用 5%硫 酸氢钾溶液， 饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水溶液依次洗涂有机层， 无水硫 酸钠干燥， 过滤， 减压浓缩得到粗品 1.06g， 柱层析纯化得白色泡状固体 (591mg, 收率： 57%)。
Rf^0.4 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =10: 15 显色： 紫外及碘
MS: 716(M+Na) e ) N-羧基乙基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰- [ (4-曱脒基苯基)甲基]酰胺盐酸盐的 制备
将上步所得产物 （500mg)溶于甲醇 (20ml),加入 10%钯碳 (lOOmg),通氢 反应， 40°C下反应 8h, 过滤减压浓缩除去溶剂， 用甲醇 (5ml)溶解， 15% HC1/ 乙酸乙酯溶液反应 lh,蒸干溶剂，用甲醇 (5ml)溶解，加入 0.5NLiOH水溶液， 反应 2h， 将反应混合物用稀盐酸调节 pH至 4, TLC纯化得白色泡状固体 ( 83mg, 24.7%)。
MS: 490(M+Na) 实施例 46: N-对曱氧基苯乙酰基 亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-甲脒基苯基)甲基] 酰胺盐酸盐 a ) N-对甲氧基苯乙酰基 -D-亮氨酸苄酯的制备
将对甲氧基苯乙酸 (1.29g)、 D-亮氨酸苄酯盐酸盐 (2g)、 DIEA(2.2g)溶于 无水二氯曱烷 (60ml)中， 氮气保护， 冷却至 0°C后， 加入 HOBt(l.lg) , EDCI(1.8g), 在 0°C下搅拌 20min, 自然升至室温， 反应 5小时。 用 5%硫酸 氢钾溶液， 饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水溶液依次洗漆有机层， 无水硫酸 钠干燥， 过滤， 减压浓缩得到粗品 4.1g, 柱层析纯化得无色油状物 （3,06g, 收率： 100%)。 含量 99°/。（HPLC, 流动相 1， 方法 1 )。
f^0.2 展开剂石油醚： 乙酸乙酯 =4: 1 显色： 紫外、 缺及 1%茚三酮液
MS: 370(M+H)
b ) N-对曱氧基苯乙酰基 -D-亮氨酸的制备
将 N-对甲氧基苯乙酰基 -D-亮氨酸苄酯 (3 g)溶于甲醇 (40ml),加入 10%钯 碳（330mg ), 通氢， 室温反应 3小时。 过滤， 减压浓缩除去溶剂得到白色泡 状物（1.9g， 91%)。 直接进行下步反应。
R^0.7 展开剂 正丁醇： 水： 醋酸： 乙酸乙酯 =1 : 1 : 1: 1 显色： 碘 及 1%茚三酮液 c ) N-对甲氧基苯乙酰基- D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-氰基苯基)甲基]酰胺的 制备
将 N-对甲氧基苯乙酰基 -D-亮氨酸 (1.9g)、 L-脯氨酰 -[(4-氰基苯基)甲基] 酰胺盐酸盐 (2.13g)、 DIEA(2.27g)用无水二氯甲烷 (20ml)溶解， 氮气保护， 冷 却至 0°C后， 加入 HOBt(1.08g)， EDCI(1.84g), 在 0°C下搅拌 20min, 自然升 至室温， 反应 5小时。 用 5%硫酸氢钾溶液， 饱和破酸氢钠溶液和饱和食盐 水溶液依次洗涤有机层， 无水硫酸钠千燥， 过滤， 减压浓缩得到粗品 4.5g， 柱层析纯化得白色泡状固体（3.15g， 收率： 80%)。
R^0.3 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1:2 显色： 紫外及碘
MS: 491(M+H) d ) N-对曱氧基苯乙酰基- D-亮氨酰 -L-脯氨酰- [ (4-甲脒基苯基)曱基]酰胺 盐酸盐
将 N-对甲氧基苯乙酰基- D-亮氨酰 -L-脯氨酰 - { [4- (N，-羟基)甲脒基笨基] 甲基 }酰胺（1.65g )溶解于曱醇 (15ml)中， 加入醋酸酐 (482mg)和 10%钯碳 (250mg), 通氢反应 24小时， 过滤， 减压浓缩除去溶剂。
将上步所得产物溶于乙酸乙酯 (4ml), 加入 15%盐酸 /乙酸乙酯溶液 (4ml), 室温反应 2小时， 减压浓缩除去溶剂， 加入乙醚 (20ml), 放置水箱过夜， 析 出固体， 过滤干燥 (529mg, 59%).
Rf^0.4 展开剂 乙酸乙酯 显色： 紫外
MS: 545(M+H) 实施例 47: N-苯磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(5-曱脒基 -2-噻吩基)曱基]酰胺 酸盐
a ) N-笨磺酰 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(5-氰基- 2-噻吩基)曱基]酰胺的制备 将 N-苯磺酰 -D-亮氨酸（542mg )、 L-脯氨酰 -[(5-氰基 -2-噻吩基)甲基]酰 胺盐酸盐（ 500mg )、 DIEA ( 540mg )用无水二氯甲烷 (20ml)溶解， 氮气保护， 冷却至 0°C后， 加入 HOBt(257mg), EDCI(437mg), 在 0°C下搅拌 20min， 自 然升至室温， 反应 5小时。 用 5%疏酸氢钾溶液， 饱和碳酸氢钠溶液和饱和 食盐水溶液依次洗涤有机层， 无水硫酸钠千燥， 过滤， 减压浓缩得到粗品 l.lg, 柱层析纯化得无色油状物 （598mg, 收率： 66%)。
Rf U 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1:1 显色： 紫外及碘
MS: 489(M+H) b ) N-苯磺酰基- D-亮氨酰 脯氨酰 - ( [ (5- (Ν' -羟基)甲脒基噻吩基 ]-2- 基} 曱基酰胺的制备
将上步所得产物 （488mg)溶于水 /乙醇 (20ml/5ml), 氮气保护， 加入盐酸 羟胺和碳酸钠， 回流反应 2小时冷却， 减压浓缩除去溶剂， 过柱纯化得到白 色泡状固体 (529mg, 100%)。
R^0.2 展开剂 乙酸乙酯 显色： 紫外及 1%茚三酮液
MS: 544(M+Na) c ) N-苯磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(5-甲脒基 -2-噻吩基)甲基〗酰胺盐酸 盐
将上步所得的化合物溶解于甲醇 (10ml)中， 加入醋酸肝 (l45mg)和 10% 钯碳 (83mg), 通氢反应 24小时， 过滤， 减压浓缩除去溶剂， 加入盐酸 /乙酸 乙酯溶液 (2ml), 加入乙醚， 放置冰箱过夜， 析出固体， 过滤干燥 (355mg， 72.8%)
MS: 506(M+H) 实施例 48: N-羧基曱基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(5-甲脒基 -2-噻吩基)曱基]酰胺 盐酸盐
a ) N- (叔丁氧锬基)曱基- N-叔丁氧羰基 -D-亮氨酰 _L-脯氨酰 - [(5-氰基噻 吩基) -2-基]曱基酰胺的制备
将 N- (叔丁氧羰基)甲基- N-叔丁氧羰基 -D-亮氨酸（690mg )、 L-脯氨酰 -[(5-氰基 -2-噻吩基)甲基]酰胺盐酸盐（543mg )、 DIEA C 569mg )用无水二氯 甲炕 (20ml)溶解，氮气保护，冷却至 0°C后，加入 HOBt(270mg), EDCI(460mg), 在 0°C下搅拌 20min， 自然升至室温， 反应 5小时。 用 5%硫酸氢钾溶液， 饱 和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水溶液依次洗涂有机层，无水硫酸钠干燥，过滤， 减压浓缩得到粗品 1.6g, 柱层析纯化得无色油状物 （lg, 收率： 92%)。
Rf^0.2 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =2:1 显色： 紫外及碘
MS: 585(M+Na) b ) N- (叔丁氧羰基)曱基 - N-叔丁氧羰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰- { [ (5- (N， -羟基)甲脒基噻吩基 ]-2-基} 甲基酰胺的制备
将上步所得产物 （887mg)溶于水 /乙醇 (20ml/5ml)， 氮气保护， 加入盐酸 羟胺和碳酸钠， 回流反应 2小时冷却， 减压浓缩除去溶剂，.过柱纯化得到白 色泡状固体 (904mg, 95%)。
RiN).4 展开剂 乙酸乙酯 显色： 紫外及 1%茚三酮液
MS; 618(M+Na) c ) N-羧基曱基 -D-亮氰酰 -L-脯氨酰 -[(5-曱脒基 -2-噻吩基)曱基]酰胺盐酸 盐
将 N- (叔丁氧羰基)甲基- N-叔丁氧羰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰- { [ (5- (Ν' - 羟基)甲脒基噻吩基 ]-2-基} 曱基酰胺（ 800mg )溶解于甲醇 (10ml)中， 加入 醋酸酐 (206mg)和 10%钯碳 (133mg)， 通氢反应 24小时， 过滤， 减压浓缩除 去溶剂， 加入乙醚 (20ml), 放置水箱过夜， 析出固体， 过滤千燥。 将上步所得产物溶于乙酸乙酯 (4ml)，加入 15%盐酸 /乙酸乙酯溶液 (4ml), 宣温反应 2小时， 减压浓缩得到白色泡状固体 (254mg, 41.2%)。
MS: 446(M+Na) 实施例 49: N-苯碩酰 - D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[- (反) -1- (氨基)-环己烷- 4-基]曱基酰 胺盐酸盐
a ) N-苯磺酰 -D-亮氨酰 - L-脯氨酰- ( - (反) -1-[ (N-苄氧羰基)氨基]-环己烷 —4-基） 甲基酰胺的制备
将 N-苯磺酰 -D-亮氨酸（1.03g) 、 L-脯氨酰- {-(反 )-1-[ (N-苄氧羰基)氨 基]-环己烷 -4-基} 甲基酰胺盐酸盐 （1.5g)溶解于二氯甲烷 (20ml)中， 氮气保 护， 冷却下滴加 DffiA(lg ), 滴加完毕后加入 HOBt(512mg)和 EDCI(872mg), 自然升至室温反应 4h。 减压浓缩除去反应液， 直接过柱纯化得 908mg白色 固体 (39 % ), 含量 98.4% ( HPLC, 流动相 1 , 方法 1 )。
Rf^0.25 展开剂石油醚： 乙酸乙酯 =1: 2 显色： 紫外、 及 1%茚三酮 液
MS: 613(M+H) b ) N-苯磺酰 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 (反) -1- (氨基)-环己垸 -4-基]曱基酰胺 盐酸盐的制备
将上步所得产物 （900mg)溶于曱醇 (20ml), 加入 10%钯碳 (90mg), 通氢 反应， 40°C下反应 8h, 过滤减压浓缩除去溶剂， 用甲醇 (5ml)溶解，加入 15% HC1/乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色泡状固体 (580mg, 75%)。
MS: 479(M+H) 实施例 50: N-苄磺酰 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰- [- (反) -1- (氨基) -环己烷 -4-基]甲基酰 胺盐酸盐
a ) N-苄磺酰 - D-亮氨酰 -L-脯氨酰- ( - (反) - 1- [ (N-苄氧羰基)氨基] -环己烷 -4-基} 曱基酰胺的制备
将 N-苄磺酰 -D-亮氨酸（856mg) 、 L-脯氨酰- { -(反 )-1-[ (N-苄氧羰基)氨 基] -环己烷- 4-基} 甲基酰胺盐酸盐 （ 1.2g)溶解于二氯曱烷 (20ml)中， 氮气保 护， 冷却下滴加 DIEA(667mg ) , 滴加完毕后加入 HOBt(405mg)和 EDCI(690mg), 自然升至室温反应 4h。 减压浓缩除去反应液， 直接过柱纯化 待 845mg白色固体 (45 % ), 含量 97.4% ( HPLC, 流动相 1 , 方法 1 )。
RfK).35 展开剂石油醚： 乙酸乙酯 =1: 2 显色： 紫外、 換及 1%茚三酮 液
MS: 628(M+H) b ) N-苄磺酰 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[-(反)- 1- (氨基) -环己烷 -4-基]曱基酰胺 盐酸盐的制备
将上步所得产物 （800mg)溶于曱醇 (20ml), 加入 10%钯碳 (80mg)， 通氢 反应， 40°C下反应 8h, 过滤减压浓缩除去溶剂， 用甲醇 (5ml)溶解，加入 15% HC】/乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色泡状固体 (350mg， 47.2%)。
MS: 493 (M+H) 实施例 51: N-苯礎酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 - { [ (4- (N， -正己酰基)曱脒基苯 基]甲基 }酰胺
将 N-苯磺酰基 亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-甲脒基苯基）曱基]酰胺盐酸盐 ( 536mg)溶解于四氢呋喃 (20ml)中， 冷却下滴加 DIEA(258mg ), 滴加完毕后 加入 DMF(2mi), 緩慢滴加己酰氯（ 135mg ), 自然升至室温反应 8h。 减压浓 缩除去反应液， 直接过柱纯化得 300mg白色粘稠固体 (50 % )o
RfN).5 展开剂石油醚： 乙酸乙酯 =1 : 3 显色： 紫外、 碘及 1%茚三酮 液
MS: 598(M+H) 实施例 52: N-苯礒酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 - ( [ (4- (N， -正戊氧羰酰基)甲脒 基苯基]甲基 }酰胺
将 N-苯磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-曱脒基苯基）曱基]酰胺盐酸盐 ( 536mg)溶解于四氢呋喃 (20ml)中， 冷却下滴加 DIEA(258mg ), 滴加完毕后 加入 DMF(2ml)， 緩慢滴加正戊氧羰酰氯（ 150mg ), 自然升至室温反应 8h。 減压浓缩除去反应液， 直接过柱纯化得 460mg白色固体 (75 % )。
R 0.6 展开剂石油醚： 乙酸乙酯 =1 : 3 显色： 紫外、 換及 1%茚三酮 液 MS: 614(M+H) 实施例 53: N-对甲基苯横酰基-D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-曱脒基苯基)甲基]酰 胺盐酸盐
a ) N-对甲基苯磺酰基- D-亮氨酸的制备
将 D-亮氨酸（1.4g)溶于 1.5N 氢氧化钠溶液 (10ml)中， 加入二氧六环 (10ml), 冷却控温 0~5°C ; 緩 'Ι"曼滴加对曱基苯磺酰氯 (1.9g)和 1.5N氢氧化钠 溶液， 维持 pH值 9~10； 0度下反应 2h， 自然升至室温反应 2h。 冷却下滴 加稀盐酸调节 pH至 3, 减压浓缩除去二氧六环， 水相用乙酸乙酯 (20ml*3) 萃取， 所得有机相酸洗、 碱洗、 水洗至中性， 无水硫酸钠干燥， 浓缩滤液， 过柱純化得 2.5g 白色固体。
RfH),7 展开剂正丁醇： 氷： 醋酸： 乙酸乙酯 =1 : 1 : 1 : 1 显色： 破及 1%茚三酮液 b ) N-对曱基苯磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧羰基)甲脒基苯 基]曱基 }酰胺的制备
将 N-对曱基苯礅酰基- D-亮氨酸 (676mg)、 L-脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧齪基) 曱脒基苯基]曱基 } 酰胺盐酸盐（lg)、 DIEA(830mg)用无水二氯甲烷 (40ml)溶 解， 氮气保护， 冷却至 0°C后， 加入 HOBt(321mg)， EDCI(547mg), 在 0°C 下搅拌 20min， 自然升至室温， 反应 5小时。 用 5%硫酸氢钾溶液， 饱和碳 酸氢钠溶液和饱和食盐水溶液依次洗涂有机层， 无水 υ酸钠干燥， 过滤， 减 压浓缩得到粗品 2.3g， 柱层析纯化得白色泡状固体（U5g， 收率： 74.9%)。
RiN).3 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1:2 显色： 紫外及碘
MS: 648(M+H) c ) N-对甲基苯磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[ (4-甲脒基苯基)曱基]酰胺盐 酸盐的制备
将上步所得产物 （lg)溶于曱醇 (20ml), 加入 10%钯碳 (lOOmg), 通氢反 应，40Ό下反应 8h,过滤减压浓縮除去溶剂，用甲醇 (Sml)溶解，加入 15% HC1/ 乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色固体 (630 mg, 76.3%)。
MS: 514(M+H) 实施例 54: N-对叔丁基苯磺酰基- D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-曱脒基苯基)曱基] 酰胺盐酸盐
a ) N-对叔丁基苯磺酰基 -D-亮氨酸的制备
将 D-亮氨酸 (1.4g)溶于 1.5N 氢氧化钠溶液 (10ml)中， 加入二氧六环 (10ml), 冷却控温 0~5。C ; 緩慢滴加对叔丁基笨磺酰氯 (2.3g)和 1.5N氢氧化 钠溶液， 维持 pH值 9~10； 0度下反应 2h, 自然升至室温反应 2h。 冷却下 滴加稀盐酸调节 pH至 3 ,减压浓缩除去二氧六环， 7J相用乙酸乙酯 (20ml*3) 萃取， 所得有机相酸洗、 碱洗、 水洗至中性， 无水 酸钠千燥， 浓缩滤液， 过柱纯化得白色固体（3g, 83.2% X
Rf=0.8 展开剂正丁醇： 水： 醋酸： 乙酸乙酯 =1 : 1 : 1 : 1 显色： 碘及 1%茚三酮液 b ) N-对叔丁基^ 酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧羰基)曱脒基 苯基]曱基 }酰胺的制备
将 N-对叔丁基苯磺酰基 -D-亮氨酸 (1.8g)、 L-脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧羰基) 甲脒基苯基]曱基 }酰胺盐酸盐 (2.5g)、 DIEA(L92g)用无水二氯甲烷 (40ml)溶 解， 氮气保护， 冷却至 CTC后， 加入 HOBt(743mg), EDCI(1.26g), 在 0°C下 搅拌 20min, 自然升至室温， 反应 5小时。 用 5%硫酸氢钾溶液， 饱和碳酸 氢钠溶液和饱和食盐水溶液依次洗涤有机层， 无水碗酸钠干燥， 过滤， 减压 浓缩得到粗品 2.7g， 柱层析纯化得白色泡状固体（2.7g, 收率： 71.2%)。
R 0.3 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1:2 显色： 紫外及換
MS: 691(M+H) c ) N-对叔丁基苯磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰- [ (4-曱脒基苯基)曱基]酰胺 盐酸盐的制备
将上步所得产物 （800mg)溶于甲醇 (20ml), 加入 10%钯碳 (80mg)， 通氢 反应， 40°C下反应 8h, 过滤减压浓缩除去溶剂， 用甲醇 (5ml)溶解，加入 15% HC1/乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色固体 (474mg, 73%)。
MS: 556(M+H) 实施例 55: N-对氟苯磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-甲脒基笨基)曱基]酰胺 盐酸盐
a ) N-对氟苯磺酰基 -D-亮氨酸的制备
将 D-亮氨酸 (1.4g)溶于 1.5N 氢氧化钠溶液 (10ml)中， 加入二氧六环 (10ml), 冷却控温 0〜5°C ; 緩慢滴加对氟苯瓚酰氯 (1.95g)和 L5N 氢氧化钠 溶液， 维持 pH值 9〜10； 0度下反应 2h, 自然升至室温反应 2h。 冷却下滴 加稀盐酸调节 pH至 3， 減压浓缩除去二氧六环， 7 相用乙酸乙酯 (20ml*3) 萃取， 所得有机相酸洗、 碱洗、 水洗至中性， 无水硫酸钠干燥， 浓缩滤液， 过柱纯化得浅黄色油状物 （2.7g, 94% )。
Rf ).6 展开剂正丁醇： 水： 醋酸： 乙酸乙酯 =1 : 1 : 1 : 1 显色： 碘及 1%茚三酮液 b )N -对氣苯磺酰基- D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -{ [ (4- (N-苄氧羰基)曱脒基苯基] 甲基 }酰胺的制备
将 N-对氟苯磺酰基 -D-亮氨酸 (2, )、 L-脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧欺基)曱脒 基苯基]甲基 }酰胺盐酸盐 (3.6g)、 DIEA(2.9g)用无水二氯甲烷 (40ml)溶解， 氮 气保护， 冷却至 0°C后， 加入 HOBt(lg), EDCI(1.73g), 在 0°C下搅拌 20min, 自然升至室温， 反应 5小时。 用 5°/。硫酸氢鉀溶液， 饱和碳酸氢钠溶液和饱 和食盐水溶液依次洗涤有机层， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减压浓缩得到粗品 3.4g, 柱层析纯化得白色泡状固体（3.4g, 收率： 69.5%)。
R^0.2 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1 :2 显色： 紫外及碘
MS: 652(M+H) c ) N-对氟苯磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[ (4-曱脉基苯基)曱基]酰胺盐酸 盐的制备
将上步所得产物 （2.8g)溶于甲醇 (20ml)，加入 10%钯碳 (280mg),通氢反 应， 40°C下反应 8h,过滤减压浓缩除去溶剂，用甲醇 (5ml)溶解，加入 15% HC1/ 乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色固体 (1.53g, 64.4%)。
MS: 518(M+H) 实施例 56: N-对溴苯磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 _[(4_甲脒基苯基)甲基]酰胺 盐酸盐
a ) N-对溴苯磺酰基 -D-亮氨酸的制备
将 D-亮氨酸 (1.4g)溶于 1.5N 氢氧化钠溶液 (10ml)中， 加入二氧六环 (10ml), 冷却控温 0〜5°C ; 緩慢滴加对溴苯碌酰氯 (2.5g)和 1.5N氢氧化钠溶 液， 维持 pH值 9~10； 0度下反应 2h, 自然升至室温反应 2h。 冷却下滴加 稀盐酸调节 pH至 3 , 減压浓缩除去二氧六环， 水相用乙酸乙酯 (20ml*3)萃 取， 所得有机相酸洗、 碱洗、 水洗至中性， 无水硫酸钠干燥， 浓缩滤液， 过 柱纯化得白色固体（2g， 96.4% )。
R^0.5 展开剂正丁醇： 水： 醋酸： 乙酸乙酯 =1 : 1 : 1 : 1 显色： 碘及 1%茚三酮液 b )N-对溴苯磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧羰基)曱脒基苯基] 曱基 } 酰胺的制备
将 N-对溴苯磺酰基 -D-亮氨酸 (3.3g)、 L-脯氨酰- ί [ (4- (Ν-苄氧羰基)曱脒 基苯基]甲基 }酰胺盐酸盐 (4.3g)、 DIEA(3.1g)用无水二氯曱烷 (40ml)溶解， 氮 气保护，冷却至 0°C后，加入 HOBt(1.3g), EDCI(2.2g),在 0°C下搅拌 20min， 自然升至室温， 反应 5小时。 用 5%硫酸氢钾溶液， 饱和碳酸氢钠溶液和饱 和食盐水溶液依次洗 '涤有机层， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减压浓缩得到粗品 5g, 柱层析纯化得白色泡状固体（4g, 收率： 59.8%)。
Κ =0.2 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1 :2 显色： 紫外及
MS: 713(M+H) c ) N-对溴苯礅酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[ (4-曱脒基苯基)甲基]酰胺盐酸 盐的制备
将上步所得产物 （2.8g)溶于曱醇 (20ml), 加入 10%4巴碳 (280mg), 通氢反 应，40°C下反应 8h，过滤减压浓缩除去溶剂，用曱醇 (5ml)溶解，加入 15% HC1/ 乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色固体 (1.65g， 67.3%)。
MS: 579(M+H) 实施例 57: N-对乙酰氨基苯磺酰基 亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-甲脒基苯基)甲基] 酰胺盐酸盐 a ) N-对乙酰氨基苯磺酰基 -D-亮氨酸的制备
将 D-亮氨酸 (1.4g)溶于 1.5N 氢氧化钠溶液 (10ml)中， 加入二氧六环 (10ml), 冷却控温 0~5°C ; 緩慢滴加对乙酰氨基苯磺酰氯 (2,33g)和 1.5N 氢 氧化钠溶液， 维持 pH值 9~10； 0度下反应 2h, 自然升至室温反应 2h。 冷 却下滴加稀盐酸调节 pH 至 3， 减压浓缩除去二氧六环， 水相用乙酸乙酯 (20ml*3)萃取， 所得有机相酸洗、 碱洗、 水洗至中性， 无水硫酸钠干燥， 浓 缩滤液， 过柱纯化得白色固体（3g， 83% )。
f^0.4 展开剂正丁醇： 水： 醋酸： 乙酸乙酯 =1 : 1 : 1 : 1 显色： 碘及 1%茚三酮液 b ) N-对乙酰氨基苯磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰- ( [ (4_ (N-苄氧羰基)甲脒 基苯基]甲基） 酰胺的制备
将 N-对乙酰氨基苯磺酰基 -D-亮氨酸 (1.64g)、 L-脯氨酰- { [ (4- (N_苄氧羰 基)甲脒基 基]曱基 }酰胺盐酸盐 (2.26g)、 DIEA(1.74g)用无水二氯甲烷 (40ml) 溶解， 氮气保护， 冷却至 0°C后， 加入 HOBt(675mg), EDCI(1.15g), 在 0°C 下搅拌 20min， 自然升至室温， 反应 5小时。 用 5%硫酸氢钾溶液， 饱和碳 酸氢钠溶液和饱和食盐水溶液依次洗涂有机层， 无水^ ·酸钠干燥， 过滤， 减 压浓缩得到粗品 3g, 柱层析纯化得白色泡状固体 (2.64g, 收率： 76.4°/。)。
R^0.5 展开剂 乙酸乙酯 显色： 紫外及碘
MS: 692(M+H) c ) N-对乙酰氨基苯磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[ (4-甲脒基苯基)甲基]酰 胺盐酸盐的制备
将上步所得产物 （2g)溶于曱醇 (20ml), 加入 10%钯碳 (200mg), 通氢反 应， 40。C下反应 8h,过滤减压浓缩除去溶剂，用曱醇 (5ml)溶解，加入 15% HC1/ 乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色固体 (1.2g, 68.4%)。
MS: 557(M+H) 实施例 58: N-l-萘磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-曱脒基苯基)曱基]酰胺盐 酸盐
a ) N-l-萘磺酰基 -D-亮氨酸的制备 将 D-亮氨酸 (1.4g)溶于 1.5N 氢氧化钠溶液 (10ml)中， 加入二氧六坏 (10ml), 冷却控温 0~5°C ; 緩慢滴加对 1-萘碩酰氯 (2.27g)和 1.5N氢氧化钠 溶液， 维持 pH值 9〜10； 0度下反应 2h, 自然升至室温反应 2h。 冷却下滴 加稀盐酸调节 pH至 3 , 减压浓缩除去二氧六环， 水相用乙酸乙酯 (20ml*3) 萃取， 所得有机相酸洗、 碱洗、 水洗至中性， 无水硫酸钠干燥， 浓缩滤液， 过柱纯化得白色固体（ 3.46g, 98% )。
Rf=0.7 展开剂正丁醇： 水： 醋酸： 乙酸乙酯 =1 : 1 : 1 : 1 显色： 碘及 1%茚三酮液 b ) N小萘磺酰基- D-亮氨酰 -L-脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧羰基)甲脒基苯基] 甲基 }酰胺的制备
将 N- 1-萘磺酰基 -D-亮氨酸 (1.6g)、 L-脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧羰基)曱脒基 苯基]曱基 }酰胺盐酸盐 (2.26g)、 DIEA(1.47g)用无水二氯曱烷 (40ml)溶解， 氮 气保护，冷却至 0 Ό后，加入 HOBt(700mg) , EDCI(1.19g) ,在 0 °C下搅拌 20min , 自然升至室温， 反应 5小时。 用 5%硫酸氢钾溶液， 饱和碳酸氢钠溶液和饱 和食盐水溶液依次洗'涤有机层， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减压浓缩得到粗品 4g, 柱层析纯化得白色泡状固体 (2.5g, 收率： 74%)。
Rf=0.5 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1:2 显色： 紫外及
MS: 685(M+H) c ) N- 1-萘磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[ (4-曱脒基苯基)曱基]酰胺盐酸盐 的制备
将上步所得产物 （2g)溶于曱醇 (20ml), 加入 10%钯碳 (200mg), 通氢反 应， 40°C下反应 8h,过滤减压浓缩除去溶剂，用曱醇 (5ml)溶解，加入 15% HC1/ 乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色固体 (967mg, 55%)。
MS: 50(M+H) 实施例 59: N-2-萘磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-曱脒基苯基)甲基]酰胺盐 酸盐
a ) N- 2-萘磺酰基 -D-亮氨酸的制备
将 D-亮氨酸（1.4g)溶于 1.5N 氢氧化钠溶液（10ml)中' 加入二氧六环 (10ml), 冷却控温 0~5°C ; 緩慢滴加对 2-萘磺酰氯 (2.27g)和 1.5N 氢氧化钠 溶液， 维持 pH值 9~10； 0度下反应 2h, 自然升至室温反应 2h。 冷却下滴 加稀盐酸调节 pH至 3 , 减压浓缩除去二氧六环， 水相用乙酸乙酯 (20ml*3) 萃取， 所得有机相酸洗、 碱洗、 水洗至中性， 无水硫酸钠干燥， 浓缩滤液， 过柱纯化得白色固体（3g, 85% )。
Rf=0.7 展开剂正丁醇： 水： 醋酸： 乙酸乙酯 =1 : 1： 1： 1 显色： 碘 及 1%茚三酮液 b ) N_2_萘磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧羰基)甲脒基苯基] 曱基 }酰胺的制备
将 N- 2-萘磺酰基 -D-亮氨酸 (l,6g)、 L-脯氨酰- { [ (4- (N-苄氧羰基)曱脒基 苯基]甲基 }酰胺盐酸盐 (2.26g)、 DIEA(1.47g)用无水二氯甲烷 (40ml)溶解， 氮 气保护，冷却至 0°C后，加入 HOBt(700mg)，EDCI(1.19g)，在 (TC下搅拌 20min， 自然升至室温， 反应 5小时。 用 5%硫酸氢钾溶液， 饱和碳酸氢钠溶液和饱 和食盐水溶液依次洗涤有机层， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减压浓缩得到粗品 3.8g, 柱层析纯化得白色固体 (2.2g, 收率： 64%)。
R^0.5 展开剂 石油醚： 乙酸乙酯 =1:2 显色： 紫外及碘
MS: 685(M+H) c ) N- 2-萘磺酰基 -D-亮氨酰 - L-脯氨酰 -[ (4-甲脒基苯基)曱基]酰胺盐酸盐 的制备
将上步所得产物 （2g)溶于甲醇 (20ml), 加入 10%钯碳 (200mg), 通氢反 应， 40°C下反应 8h,过滤减压浓缩除去溶剂，用曱醇 (5ml)溶解，加入 15% HC1/ 乙酸乙酯溶液， 蒸干得白色固体 (1.25g, 71%)。
MS: 550(M+H) 实施例 60: 抗凝血酶活性测试
在实验中， 将待测的样品加入到内含有 0.15U/ml 的从牛血中提纯得到 的冻干牛凝血酶标准品的醉反应体系中进行孵育 15分钟后加入特异性的底 物 S2238 ( 0.075μΜ ),使用紫外检测器，在室温下，动态检测 4分钟内 405ηΜ 下吸收值的变化。 依据公式 1计算样品对酶活性的抑制率（ <¼In ibition ) ,
Figure imgf000081_0001
公式 1
其中 AAs表示抑制吸光值变化率， AAc表示未抑制吸光值变化率。 IC50 值（酶活性被抑制 50%时药物的浓度）是抑制率 （％In ibition)对样品浓度 的对数值 通过公式 2进行非线性拟和计算得到的。
%Inhibiti
Figure imgf000081_0002
公式 2 其中 代表 Hill系数
在下表中， 列出了本发明部分化合物的 IC5。值 .（ nM )
Figure imgf000081_0003
以下配方实例只是举例说明， 无意以任何方式限制本发明的范围。 活性 組分是指通式（I ) 的化合物或其药物上可接受的盐或溶剂化物。 以下配方实例只是举例说明， 无意以任何方式限制本发明的范围。 活性 组分是指通式（I ) 的化合物或其药物上可接受的盐或溶剂化物。 实施例 61 : 注射剂的制备 处方:
%w/v
活 性 1
组分
生 理 100
盐水
可加入适当的稀酸或碱或緩冲盐， 将 pH调节至最稳定状态， 还可包括 抗氧化剂或金属螯合剂。 将溶液通过过滤灭菌， 在无菌条件下， 填充于无菌 安瓶中。 实施例 62: 片剂的制备
处方：
mg/片
活性组分 60
微晶纤维 35
素
羧曱基淀 4.5
粉钠
玉米淀粉 45
硬脂酸摸 0.5
滑石粉 1
将活性组分与赋形剂充分混合， 过筛， 在压片机上压片 实施例 63: 硬胶嚢剂的制备
处方：
Figure imgf000082_0001
活 性 55
组分
干 燥 43
淀粉 将活性组分过筛， 与赋形剂混合， 用适当的设备， 将混合物填充于硬明 胶股嚢中。 实施例 64: 混悬剂的制备
处方： 硬 mg/5ml
活性组分 50
旨
羧甲基纤维 75
素钠
2
糖浆 1.2ml
色素 0.05ml
苯甲酸 0.05mg
纯化水添加 5ml
至, 里
使活性组分过筛，与羧甲基纤维素钠和糖浆混合，形成一种均勾膏状物， 色素、 苯甲酸用一部分纯化水稀释， 在搅拌下添加到膏状物中， 然后添加足 够的水以产生所需要的体积。
尽管本发明已经用具体实例加以说明，但仍应读理解它可以被进一步改 进本申请将包括任何变化， 用途， 或遵循本发明一般远离并且包括背离本公 开但属于本发明领域已知或常规应用 , 并且同样使用于前面所说的基本特 征， 而且包括在所附权利要求书范围内。

Claims

1、 式 U)化合物， 其药学上可接受的盐和其药学上可接受的前体药物:
Figure imgf000084_0001
(I)
其中：
A代表 烷基、 环烷基、 杂环烷基、 芳基、 - SC^R1 -S03R!, -COR'、 -C02R1, -PC OR -R2-环烷基、 -R2-杂环烷基、 -R2-芳基、 -R2S〇2R'、 - R2S03R'、 -
Figure imgf000084_0002
其中：
R1代表氢、 d~6貌基、 环炕基、 杂环烷基、 芳基、 - R3-环梡基、 -R3-杂环 烷基、 -R3-芳基、 链烯基或 -NR4R5;
R2和 R3代表 烷基；
R4和 R5独立的代表氢、 ~6烷基、 环烷基或杂环烷基；
Figure imgf000084_0003
其中环上的取代基选自羧基、 卤素、 烷基、 烷氧基、 酰基、 磺酰基、 巯 基、 烷硫基、 环烷基、 杂环烷基、 氨基、 烷氨基、 二烷氨基、 氰基、 酯基、 三氟甲基或带上述基团的 CM的烷基； F代表 - NH-(CH2)m-R'
其
m代表 0-3;
R6代表未取代的
Figure imgf000085_0001
其中：
X、 Y和 Z独立的代表 S、 O或 N;
Figure imgf000085_0002
其中：
n代表 0-3;
p代表 1-8;
R7代表氢或 烷基。
2、 根据权利要求 1所述的式（I)化合物， 其药学上可接受的盐和其药 学上可接受的前体药物，其特征在于， A代表 -SC^R^ - SC R^ -COR^ -CC R^ -ΡΟ(Οΐ 2、 -R2-环烷基、 - R2-杂环烷基、 -R2-芳基、 -Ι 02Κλ -R^OsR1, - ^COR1、 - R2C02R1或- R^OCOR1^;
其中：
R1代表氢、 烷基、 环烷基、 杂环烷基、 芳基、 -R3-环烷基、 -R3-杂环 烷基、 -R3-芳基、 链烯基或 -NR4R5;
R2和 R3代表 Ci— 6烷基；
R4和 R5独立的代表氢、 烷基、 钚烷基或杂环烷基；
Figure imgf000086_0001
其中环上的取代基可为羧基、 1¾素、 烷基、 烷氧基、 酰基、 磺酰基、 疏 基、 烷硫基、 环烷基、 杂环烷基、 氨基、 烷氨基、 二烷氨基、 氰基、 酯基、 三氟曱基或带上述基团的 CM的烷基。
F代表 - NH-(CH2)M-R6;
其巾：
m代表 0-3; 6代表未取代的
Figure imgf000086_0002
或
其中：
X、 Y和 Z独立的代表 S、 O或 N;
Figure imgf000086_0003
、 或 其中：
n代表 0-3;
p代表 1-6;
R7代表氢或 烷基。
3、 根据权利要求 1或 2所述的式（I)化合物， 其药学上可接受的盐和其 药学上可接受的前体药物，其特征在于， A代表 -SC^R1 -COR1, - < >2Ελ -R2- 环烷基、 -R2-杂环烷基、 -R2-芳基、 -I^SC R^ - COR1或 -R2C02R1;
其中：
R1代表氢、 C 6烷基、 环烷基、 杂环烷基、 芳基、 - R3-环烷基、 - R3-杂环 烷基、 - R3-芳基、 链烯基或 -NR4R5;
R2和 R3代表 烷基；
R4和 R5独立的代表氢、 C,~6烷基、 环垸基或杂环烷基；
Figure imgf000087_0001
Figure imgf000087_0002
其中：
n代表 0-3;
p代表 1-6;
R7代表氢或 d~6烷基。
4、 居前述任一权利要求所述的式（I)化合物， 其药学上可接受的盐 和其药学上可接受的前体药物，其特征在于， A代表 -SOzR1, -S05R -C02R'. -PO OR1^ -R2-环烷基、 -R2-杂坏烷基、 -R2-芳基、 -Ι 02Κλ -R2S03R'> - R2COR'、 - I^COzR1或- r^POOR1)?;
其中：
R1代表氢、 C,~6烷基、 环烷基、 杂环烷基、 芳基、 - R3-环炕基、 -R3-杂环 烷基、 -R3-芳基、 链烯基或 -NR4R5;
R2和 R3代表 烷基；
R和 R5独立的代表氢、 d~6烷基、 环烷基或杂环烷基；
Figure imgf000088_0001
其中环上的取代基可为羧基、 卤素、 烷基、 烷氧基、 酰基、 磺酰基、 巯 基、 烷硫基、 环烷基、 '杂环烷基、 氨基、 炕氨基、 二烷氨基、 氰基、 酯基、 三氟甲基或带上述基团的 CM的烷基。
F代表 -NH-(CH2)m-R6;
其中： m代表 0-3;
： N
R6 代表未取代的
Figure imgf000089_0001
或
其中：
X、 Y和 Z独立的代表 S、 0或 N;
其中：
n代表 0-3;
p代表 1-6;
R7代表氢或 C,~6坑基。
5、 根据前述任一权利要求所述的式（I)化合物， 其药学上可接受的盐 和其药学上可接受的前体药物， 其特征在于， A代表 -SC^R -C02R'> - R2- 环烷基、 -R2-杂环烷基、 - R2-芳基、 -R2S02R^ - COR1或 - cC R1;
其 t:
R1代表氢、 <^~6烷基、 环烷基、 杂环烷基、 芳基、 -R3-环烷基、 -R3-杂环 烷基、 -R3-芳基、 链烯基或 -NR4R5;
R2和 R3代表 烷基；
R4和 R5独立的代表氢、 坑基、 环烷基或杂环烷基； E为
Figure imgf000090_0001
或
F为- NH- CH^-R6;
其中：
m为 1 ;
Figure imgf000090_0002
其中：
n代表 0-3;
p代表 1-6;
R7代表氢或 d~6烷基。
6、 根据前述任一权利要求所述的式（I )化合物， 其药学上可接受的盐 和其药学上可接受的前体药物， 其特征在于， 所述药学上可接受的盐选自源 于药学上可接受的无机和有机酸的盐。
7、 根据权利要求 6所述的式（I )化合物， 其药学上可接受的盐和其药 学上可接受的前体药物，其特征在于，所述无机和有机酸选自硫酸、亚硫酸、 盐酸、 醋酸、 氢溴酸、 硝酸、 磷酸、 偏磷酸、 焦磷酸、 马来酸、 富马酸、 琥 珀酸、 柠檬酸、 高氯酸、 对甲苯碳酸、 酒石酸、 甲酸、 乙酸、 丙酸、 庚酸、 草酸、 苯甲酸、 丙二酸、 丁二酸、 丁二酸、 顺丁烯二酸、 羟基丁酸、 枸櫞酸、 甲磺酸、 苯磺酸、 乳酸或扁桃酸。
8、 根据权利要求 6所述的式（I )化合物， 其药学上可接受的盐和其药 学上可接受的前体药物， 其特征在于， 所述无机和有机酸选自盐酸或醋酸。
9、 根据前述任一权利要求所述的式（I )化合物， 其药学上可接受的盐 和其药学上可接受的前体药物， 其特征在于， 所述药学上可接受的前体药物 选自所述通式（I )的 N-烷氧基齪基保护的衍生物或羧酸被酯保护的衍生物。
10、 根据前述任一权利要求所述的式（I )化合物， 其药学上可接受的 盐和其药学上可接受的前体药物， 其特征在于， 所述化合物选自：
N-苯磺酰基 -D, L-亮氨酰 - L-脯氨酰- [ (4-甲脒基苯基)曱基]酰胺醋酸盐； N-苯磺酰 -D, L-亮氨酰 脯氨酰 -（ [4- (Ν' -羟基)曱脒基苯基]甲基 }酰 胺；
Ν-苄磺酰基 -D, L-亮氨酰 -L-脯氨酰- ( [4- (Ν' -羟基)曱脒基苯基]甲基 } 酰胺醋酸盐；
Ν-苄磺酰基 -D, L-亮氨酰 -L-脯氨酰- { [4-(Ν' -羟基)曱脒基苯基]甲基 } 酰胺；
Ν-苯甲酰基 -D, L-亮氨酰 -L-脯氨酰- [ (4-曱脒基苯基)曱基]酰胺醋酸盐；
Ν-苯甲酰基- D, L-亮氨酰 -L-脯氨酰- { [4-(Ν， -羟基)曱脒基苯基]甲基 } 酰胺；
Ν-苯乙酰基 -D, L-亮氨酰 -L-脯氨酰- [ (4-曱脒基苯基)甲基]酰胺醋酸盐；
Ν-苯乙酰基 -D, L-亮氨酰 -L-脯氨酰- { [4-(Ν' -羟基)曱脒基苯基]曱基 } 酰胺；
Ν-羧基甲基 -D, L-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[ (4-曱脒基苯基)甲基]酰胺盐酸盐；
Ν-羧基甲基- D, L-亮氨酰 -L-脯氨酰- ( [4-(Ν' -羟基)甲脒基苯基]曱基 } 酰胺盐酸盐；
Ν-苯甲酰基 -D L-异亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-甲脒基苯基)甲基]酰胺醋酸 .
N-苯曱酰基 -D， L-异亮氨酰 -L-脯氨酰 - { [4-(Ν' -羟基)甲脒基苯基]曱基 } 酰胺；
Ν-苯乙酰基 -D , L-异亮氨酰 -L-脯氨酰 - [(4-甲眯基苯基)曱基]酰胺醋酸 盐；
Ν-苯乙酰基 -D, L-异亮氨酰 -L-脯氨酰 -（[4-(Ν' -羟基)甲脒基苯基]甲基 } 酰胺； N-羧基曱基 -D, L-异亮氨酰 -L-脯氨酰 -[ (4-曱脒基苯基)甲基]酰胺盐酸 ，
N-羧基曱基 -D , L-异亮氨酰 -L-脯氨酰- { [4-(Ν' -羟基)甲脒基苯基]曱基 } 酰胺盐酸盐；
Ν-苯磺酰基 -L-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-甲脒基苯基)甲基]酰胺盐酸盐； Ν-苯磺酰基- D-亮氨酰 -L-脯氨酰- { [ (4- (Ν-苄氧羰基)甲脒基苯基]曱基 } 酰胺；
Ν-苯磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-曱脒基笨基)甲基]酰胺盐酸盐；
Ν-苄磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰- ( [ (4- (Ν-苄氧羰基)甲脒基苯基]甲基 } 酰胺；
Ν-苄磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-甲脒基苯基)甲基]酰胺盐酸盐； Ν-苯曱酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-甲脒基苯基)曱基]酰胺盐酸盐； Ν-苯乙酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-甲脒基苯基)曱基]酰胺盐酸盐； Ν-羧基甲基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰- [ (4-甲脒基苯基)甲基]酰胺盐酸盐； Ν-苯磺酰 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰- [ 1 - (氨基亚氨基甲基)-哌啶 -4-基]曱基酰胺 盐酸盐；
Ν-苯磺酰 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[1- (氨基亚氨基甲基) -哌啶 -3-基]甲基酰胺 盐酸盐；
Ν-苯磺酰 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[1- (氨基亚氨基甲基) -吡咯 -3-基]甲基酰胺 酸盐；
N-苯甲酰基 -D-异亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-曱脒基苯基)曱基]酰胺盐酸盐； N-苄磺酰基- D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(6-甲脒基 -3-吡啶基）甲基]酰胺盐酸 ，
N-苄磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 - [(5-甲脒基 -2-噻吩基）甲基]酰胺盐酸 ，
N-苯磺酰基 -D-亮氨酰- L-高脯氨酰 -[ (4-曱脒基苯基)甲基]酰胺盐酸盐； N-苯瓚酰基 -D-亮氨酰- (S)-氮杂环丁烷 -2- [ (4-曱脒基苯基)甲基]酰胺盐 酸盐；
N-苯礒酰 亮氨酰 -L-脯氨酰 -[1- (氨基)-环己炕 -4-基]甲基酰胺盐酸盐；
N-苯磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -(4-曱脒基苯基)酰胺盐酸盐；
N-笨磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[ (4-曱眛基苯基)乙基]酰胺盐酸盐； N-苯磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[ (3-曱脒基苯基)曱基]酰胺盐酸盐； N-苯礅酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰- { [4- (Ν'-曱氧基)甲脒基苯基]甲基 }酰胺 酸盐；
N-苯磺酰基- D-亮氨酰- L-脯氨酰- [ (4-氨曱基苯基)曱基]酰胺盐酸盐；
N-苯磺酰基- D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(5-氨甲基 -2-噻吩基）曱基]酰胺盐酸
_ ¾nrL.·，
N-二曱胺基礒酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-曱脒基苯基)曱基]酰胺盐酸 .，
N-甲炕磺酰基 -D-亮氨酰 脯氨酰 -[(4-甲脒基苯基)甲基]酰胺盐酸盐； N-乙炕磺酰基- D-亮氨酰 -L-脯氨酰- [(4-甲脒基苯基)甲基]酰胺盐酸盐； N-环丙烷磺酰基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰- [(4-甲脒基苯基)甲基]酰胺盐酸盐； N-叔丁氧叛基 -D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-曱脒基苯基)曱基]酰胺盐酸盐； N-甲氧叛基 亮氨酰 -L-脯氨酰 -[(4-曱脒基苯基)甲基]酰胺盐酸盐； 或 N-羧基乙基- D-亮氨酰 -L-脯氨酰 -[ (4-甲脒基笨基)曱基]酰胺盐酸盐。
11、 权利要求 1-10任一权利要求所述的式（I )化合物， 其药学上可接 受的盐和其药学上可接受的前体药物的制备方法，该方法包括使氮位由保护 基保护的氨基酸与氨基酸的苄酯进行偶联反应的步骒。
12、 根据权利要求 11所述的制备方法， 其特征在于， 所述保护基为 N- 叔丁氧羰基或 N-苄氧叛酰基。
13、 权利要求 1-10中任一所述的式（I )化合物， 其药学上可接受的盐 和其药学上可接受的前体药物在制备抑制凝血酶的药物中的应用。
14、 权利要求 1-10中任一所述的式（I )化合物， 其药学上可接受的盐 和其药学上可接受的前体药物在制备治疗和防止凝血酶介导的和与凝血酶 有关的疾病的药物中的应用。
15、 根据权利要求 14所述的应用， 其特征在于， 所述疾病选自静脉血 栓形成和肺栓塞、 动脉血栓形成例如心肌缺血、 心肌梗塞、 不稳定心绞痛、 血栓形成引起的中风和末梢动脉形成； 动脉粥样硬化疾病如冠状动脉病、 脑 动^ c病或末柏'动^病。
16、 药物组合物， 该药物组合物包含权利要求 1-10中任一所述的式（I ) 化合物，其药学上可接受的盐和其药学上可接受的前体药物和药学可接受的 载体。
17、 根据权利要求 16所述的药物组合物， 其特征在于， 其为片剂、 胶 嚢剂、 混悬剂、 丸剂或注射剂。
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Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103833827B (zh) * 2012-11-27 2016-08-03 上海医药工业研究院 一种酰胺类化合物、其药物组合物、制备方法及应用
DK3364958T3 (da) 2015-10-23 2023-04-11 Navitor Pharm Inc Modulatorer af sestrin-gator2-interaktion og anvendelser deraf
US10912750B2 (en) 2017-04-26 2021-02-09 Navitor Pharmaceuticals, Inc. Modulators of Sestrin-GATOR2 interaction and uses thereof
KR20210003108A (ko) * 2018-04-26 2021-01-11 제리아 신야쿠 고교 가부시키 가이샤 디펩티드 및 이것을 함유하는 의약 조성물
CA3117336A1 (en) 2018-10-24 2020-04-30 Navitor Pharmaceuticals, Inc. Polymorphs of (s)-2-amino-5,5-difluoro-4,4-dimethylpentanoic acid for use in modulating mtorc1
AU2019371209A1 (en) * 2018-10-29 2021-05-27 Huahai Us Inc Novel dipeptide compounds and uses thereof
JP2022541398A (ja) 2019-07-08 2022-09-26 リゾルート，インコーポレイティド 血漿カリクレイン阻害薬の調製プロセス
CA3156436A1 (en) 2019-11-01 2021-05-06 Steven LEVENTER Methods of treatment using an mtorc1 modulator

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4101653A (en) 1974-11-08 1978-07-18 Mitsubishi Chemical Industries Limited N2 -arylsulfonyl-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
US4346078A (en) 1979-06-12 1982-08-24 Richter Gedeon Vegyeszeti Gyar Rt. Novel anticoagulant agmatine derivatives and process for the preparation thereof
WO1993011152A1 (en) 1991-12-04 1993-06-10 Aktiebolaget Astra New peptide derivatives
WO1994029336A1 (en) 1993-06-03 1994-12-22 Astra Aktiebolag New peptide derivatives
WO1995023609A1 (en) 1994-03-04 1995-09-08 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5510369A (en) 1994-07-22 1996-04-23 Merck & Co., Inc. Pyrrolidine thrombin inhibitors
CN1121068A (zh) * 1994-01-27 1996-04-24 三菱化学株式会社 脯氨酰胺衍生物
WO1997015190A1 (en) 1995-10-24 1997-05-01 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1161431A (en) * 1979-05-11 1984-01-31 Lars G. Svendsen Tripeptide derivatives
US5583146A (en) * 1992-12-02 1996-12-10 Bristol-Myers Squibb Company Heterocyclic thrombin inhibitors
JP3840668B2 (ja) * 1994-01-27 2006-11-01 三菱化学株式会社 プロリンアミド誘導体
KR100388185B1 (ko) * 1995-02-17 2003-11-28 애보트 게엠베하 운트 콤파니 카게 트롬빈 억제제로서의 신규 디펩티드 아미딘
FI105274B (fi) 1996-03-15 2000-07-14 Upm Kymmene Oy Menetelmä ei-hormonivaikutteisten, tyydyttymättömien kasvisteroidien hydraamiseksi ja käytetyn katalyytin regenerointi
BR9907112A (pt) * 1998-01-26 2000-10-24 Basf Ag Composto, medicamento, e, uso de um composto
WO2000061608A2 (de) * 1999-04-09 2000-10-19 Basf Aktiengesellschaft Niedermolekulare inhibitoren von komplementproteasen
DE10064797A1 (de) * 2000-12-22 2002-06-27 Knoll Ag Orale und parenterale pharmazeutische Formulierung, umfassend eine niedermolekulare Thrombininhibitor-Pro-Pharmakon
JP2004518688A (ja) * 2001-01-30 2004-06-24 ブリストル−マイヤーズ　スクイブ　カンパニー ファクターＸａ阻害剤のスルホンアミドラクタムおよびその方法
JP5311673B2 (ja) * 2006-12-14 2013-10-09 エグゼリクシス， インコーポレイテッド Ｍｅｋ阻害剤の使用方法

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4101653A (en) 1974-11-08 1978-07-18 Mitsubishi Chemical Industries Limited N2 -arylsulfonyl-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof
US4346078A (en) 1979-06-12 1982-08-24 Richter Gedeon Vegyeszeti Gyar Rt. Novel anticoagulant agmatine derivatives and process for the preparation thereof
WO1993011152A1 (en) 1991-12-04 1993-06-10 Aktiebolaget Astra New peptide derivatives
WO1994029336A1 (en) 1993-06-03 1994-12-22 Astra Aktiebolag New peptide derivatives
CN1127509A (zh) * 1993-06-03 1996-07-24 阿斯特拉公司 新的肽衍生物
CN1121068A (zh) * 1994-01-27 1996-04-24 三菱化学株式会社 脯氨酰胺衍生物
WO1995023609A1 (en) 1994-03-04 1995-09-08 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5510369A (en) 1994-07-22 1996-04-23 Merck & Co., Inc. Pyrrolidine thrombin inhibitors
WO1997015190A1 (en) 1995-10-24 1997-05-01 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors

Non-Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FENG D.-M. ET AL.: "Discovery of a Novel, Selective, and Orally Bioavailable Class of Thrombin Inhibitors Incorporating Aminopyridyl Moieties at the P1 Position", J. MED. CHEM., vol. 40, no. 23, 1997, pages 3726 - 3733, XP055089739 *
HANESSIAN S. ET AL.: "Structure-based organic synthesis of unnatural aeruginosin hybrids as potent inhibitors of thrombin.", BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS, vol. 17, no. 12, 27 March 2007 (2007-03-27), pages 3480 - 3485, XP022097807 *
J MED CHEM, vol. 40, 1997, pages 3687
J MED CHEM, vol. 40, 1997, pages 3726
J MED CHEM, vol. 40, 1997, pages 830
J MED CHEM., vol. 37, 1994, pages 3889
MULEY L. ET AL.: "Enhancement of Hydrophobic Interactions and Hydrogen Bond Strength by Cooperativity: Synthesis, Modeling, and Molecular Dynamics Simulations of a Congeneric Series of Thrombin Inhibitors.", J. MED. CHEM., vol. 53, no. 5, 11 February 2010 (2010-02-11), pages 2126 - 2135, XP055089735 *
See also references of EP2639230A4
SIELAFF F. ET AL.: "Development of substrate analogue inhibitors for the human airway trypsin-like protease HAT", BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS, vol. 21, no. 16, 21 June 2011 (2011-06-21), pages 4860 - 4864, XP028267764 *
T.W.GREEN; PETER G.M.WUTS: "Protective groups in organic synthesis", 1999, JOHN WILEY&SONS, INC.

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