ES2203692T3 - Uso de trifosfato de (r)-penciclovir para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de enfermedades viricas. - Google Patents
Uso de trifosfato de (r)-penciclovir para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de enfermedades viricas.Info
- Publication number
- ES2203692T3 ES2203692T3 ES96914109T ES96914109T ES2203692T3 ES 2203692 T3 ES2203692 T3 ES 2203692T3 ES 96914109 T ES96914109 T ES 96914109T ES 96914109 T ES96914109 T ES 96914109T ES 2203692 T3 ES2203692 T3 ES 2203692T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- pcv
- formula
- derivative
- mmol
- added
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
- A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
- A61K31/52—Purines, e.g. adenine
- A61K31/522—Purines, e.g. adenine having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. hypoxanthine, guanine, acyclovir
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/66—Phosphorus compounds
- A61K31/661—Phosphorus acids or esters thereof not having P—C bonds, e.g. fosfosal, dichlorvos, malathion or mevinphos
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
SE DESCRIBE UN METODO PARA EL TRATAMIENTO DE: I) INFECCIONES POR HIV IONES POR HBV EN MAMIFEROS, INCLUYENDO HUMANOS; EL CUAL METODO COMPRENDE LA ADMINISTRACION AL SER HUMANO QUE NECESITE DICHO TRATAMIENTO DE UNA CANTIDAD EFECTIVA DEL ENANTIOMERO (R) DEL TRIFOSFATO DE UN COMPUESTO DE FORMULA (A) O UNA SAL FARMACEUTICAMENTE ACEPTABLE DEL MISMO; Y COMPUESTOS PARA SER UTILIZADOS EN EL METODO.
Description
Uso de trifosfato de
(R)-penciclovir para la fabricación de un
medicamento para el tratamiento de enfermedades víricas.
Esta invención se refiere a la fabricación de un
medicamento para el tratamiento de infecciones por el virus de la
inmunodeficiencia humana (VIH) y por el virus de la hepatitis B
(VHB).
Cuando se usa en este documento,
"tratamiento" incluye la profilaxis cuando sea apropiado.
El documento
EP-A-141927 (Beecham Group p.l.c.)
describe el penciclovir (PCV), el compuesto de fórmula (A):
y las sales, ésteres de fosfato y derivados de
acilo del mismo, como agentes antivirales. En el documento
EP-A-216459 (Beecham Group p.l.c.)
se describe la sal sódica hidratada de penciclovir. También se
describen el penciclovir y su actividad antiviral en Abstract P. V
11-5, pág 193 de "Abstracts of 14th. Int.
Congress. of Microbiology", Manchester, Inglaterra,
7-13 de septiembre de 1986 (Boyd et
al.).
Los bioprecursores activos por vía oral del
compuesto de fórmula (A) son de fórmula (B):
y sales y derivados de los mismos como se definen
por la fórmula (A); donde X es alcoxi con 1 a 6 átomos de carbono,
NH_{2} o hidrógeno. Los compuestos de fórmula (B) en la que X es
alcoxi con 1 a 6 átomos de carbono o NH_{2} se describen en el
documento EP-A-141927 y los
compuestos de fórmula (B) en la que X es hidrógeno, descritos en el
documento EP-A-182024 (Beecham Group
p.l.c.) son profármacos preferidos. Un ejemplo particularmente
preferido de un compuesto de fórmula (B) es aquel en el que X es
hidrógeno y en el que los dos grupos OH están en forma del acetil
derivado, descrito en el ejemplo 2 del documento
EP-A-182024, denominado en lo
sucesivo
famciclovir.
El documento
EP-A-388049 (Beecham Group p.l.c.)
describe el uso de penciclovir/famciclovir en el tratamiento de la
infección por virus de la hepatitis B.
La actividad antiviral contra el virus de la
hepatitis B parece depender de la formación intracelular de
trifosfato de penciclovir (PCV-TP). La polimerasa de
VHB tiene muchas actividades enzimáticas, incluyendo la formación
de un enlace covalente entre la polimerasa y dGMP, además de
T-A-A, seguido de la polimerasa de
ADN dirigida por ARN (transcriptasa inversa) y de la síntesis de
ADN dirigida por ADN.
El derivado trifosfato de penciclovir inhibe la
actividad polimerasa de ADN dirigida por ARN (transcriptasa
inversa) del virus de la inmunodeficiencia humana de tipo 1
(VIH-1). La transcriptasa inversa de
VIH-1 es un enzima codificado por virus esencial
para la conversión del ARN genómico en ADN bicatenario
proviral.
Ahora se ha demostrado que el enantiómero (R) de
PCV-TP es más activo que el enantiómero (S) con
respecto a la inhibición de las polimerasas de ADN de VHB y con
respecto a la inhibición de la transcriptasa inversa de
VIH-1.
Por consiguiente, la presente invención
proporciona el uso de un bioprecursor del enantiómero (R) del
trifosfato de un compuesto de fórmula (A)
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,
es decir, (R)-PCV-TP, en la
fabricación de un medicamento para el tratamiento de infecciones por
VIH-1 o infecciones por VHB, siendo el bioprecursor
un derivado de (R)-PCV-monofosfato
que libera intracelularmente (R)-PCV- monofosfato
que, a su vez, se convierte en
(R)-PCV-TP.
El (R)-PCV-TP se
administra en forma de un compuesto que es un bioprecursor para
permitir la absorción y la penetración a través de la pared celular.
La selectividad por la célula infectada por el virus, especialmente
por las células infectadas por VIH, puede conseguirse seleccionando
un bioprecursor que se active preferentemente por la proteasa
codificada por el virus. El bioprecursor puede estar en forma de un
derivado de (R)-PCV-MP que libera
intracelularmente (R)-PCV-MP que, a
su vez, se convierte en
(R)-PCV-TP.
El compuesto puede administrarse por vía oral a
los seres humanos y puede componerse en forma de un jarabe,
comprimidos o cápsulas. Cuando se prepara en forma de un
comprimido, puede usarse cualquier vehículo farmacéutico adecuado
para la formulación de tales composiciones sólidas, por ejemplo
estearato de magnesio, almidón, lactosa, glucosa, arroz, harina y
carbonato cálcico. El compuesto también puede estar en forma de una
cápsula ingerible, por ejemplo de gelatina, para contener el
compuesto, o en forma de un jarabe, una solución o una suspensión.
Los vehículos farmacéuticos líquidos adecuados incluyen alcohol
etílico, glicerina, solución salina y agua, a los que pueden
añadirse agentes aromatizantes o colorantes para formar jarabes.
También se prevén formulaciones de liberación sostenida, por
ejemplo, comprimidos que contienen un recubrimiento entérico.
Para la administración parenteral, se preparan
formas de dosificación unitaria líquidas que contienen el compuesto
y un vehículo estéril. El compuesto, dependiendo del vehículo y de
la concentración, puede suspenderse o disolverse. Las soluciones
parenterales normalmente se preparan disolviendo el compuesto en un
vehículo y esterilizándolo a través de un filtro antes de
introducirlo en un vial o ampolla adecuada y de sellar dicho vial o
ampolla. Ventajosamente, en el vehículo también se disuelven
adyuvantes tales como anestésicos locales, conservantes y agentes
tamponantes. Para aumentar la estabilidad, la composición puede
congelarse después introducirse en el vial, retirándose el agua al
vacío.
Las suspensiones parenterales se preparan
substancialmente de la misma manera con la excepción de que el
compuesto se suspende en el vehículo en lugar de disolverse y
esterilizarse por exposición a óxido de etileno antes de suspenderse
en el vehículo estéril. Ventajosamente, en la composición se
incluye un tensioactivo o agente humectante para facilitar la
distribución uniforme del compuesto de la invención.
Como es común en la práctica, las composiciones
normalmente irán acompañadas de instrucciones escritas o impresas
para uso en el tratamiento médico pertinente.
Una unidad de dosificación adecuada podría
contener de 50 mg a 1 g de ingrediente activo, por ejemplo de 100 a
500 mg. Tales dosis pueden administrarse de 1 a 4 veces al día o,
más habitualmente, 2 ó 3 veces al día. La dosis eficaz de compuesto,
en general, estará en el intervalo de 0,2 a 40 mg por kilogramo de
peso corporal por día o, más habitualmente, de 10 a 20 mg/kg por
día.
La presente invención también proporciona el uso
del enantiómero (R) del trifosfato de un compuesto de fórmula (A) o
un bioprecursor del mismo, en la preparación de un medicamento para
uso en el tratamiento de:
- i)
- infecciones por VIH-1 en mamíferos, incluyendo seres humanos; o
- ii)
- infecciones por VHB en mamíferos, incluyendo seres humanos.
Tal tratamiento puede realizarse de la manera
descrita anteriormente en este documento.
La presente invención también proporciona una
composición farmacéutica para uso en el tratamiento de:
- i)
- infecciones por VIH-1 en mamíferos, incluyendo seres humanos; o
- ii)
- infecciones por VHB en mamíferos, incluyendo seres humanos;
que comprende una cantidad eficaz del enantiómero
(R) del trifosfato de un compuesto de fórmula (A), o un
bioprecursor del mismo, y un vehículo farmacéuticamente
aceptable.
Tales composiciones pueden prepararse de la
manera descrita anteriormente en este documento.
Los datos biológicos que describen la actividad
de (R)-PCV-TP se describen por Shaw
et al, Zoulim et al en "Abstracts of the 35th
Interscience Conference on Antimicrobial Agents and
Chemotherapy" 17-20 de septiembre de 1995, H13,
pág 182 y H36, pág 191 y Schinazi et al en "Antiviral
Research" 1995, Suplemento 1, 146, A304, y también en el borrador
adjunto manuscrito por Zoulim y el extracto adjunto del cartel
presentado en apoyo de la referencia de Schinazi, presentados con la
Solicitud de Patente británica 9604909.3, de la que la presente
solicitud reivindica la prioridad de convención.
Los siguientes ejemplos ilustran bioprecursores
del enantiómero (R) del trifosfato de un compuesto de fórmula (A).
Los ejemplos 1, 2 y 5 tienen un interés potencial en el tratamiento
de VHB y los ejemplos 3 y 4 tienen un interés potencial en el
tratamiento de VIH-1.
El enantiómero (S) de un derivado de PCV con un
grupo protector sobre un grupo hidroxilo se fosforila y después el
grupo protector se retira para producir
(R)-PCV-MP. El
(R)-PCV-MP se activa y se acopla a
PL-ASOR mediante un procedimiento tal como el
descrito en Drug Delivery 2, 136, 1995. El conjugado resultante
puede tener múltiples restos
(R)-PCV-MP por molécula de
proteína.
El (R)-PCV-MP o
una forma protegida del mismo (preparada como en el ejemplo 1) se
convierte en este derivado por alquilación, o el grupo fosfato se
activa y se acopla a una forma protegida del lípido, seguido de
desprotección.
El (R)-PCV-MP o
una forma protegida del mismo (preparada como en el ejemplo 1) se
convierte en el derivado de bis(POM) por alquilación con
cloruro de pivaliloximetilo mediante el procedimiento de J.
Pharmaceutical Sci. 72, 324-5, 1983 o de J. Med.
Chem. 38, 1372-9, 1995 y el grupo protector
presente opcionalmente se retira.
El enantiómero (S) de un derivado de PCV con un
grupo protector sobre un grupo hidroxilo se trata con
fosforocloridato de difenilo y el grupo protector se retira.
El (R)-PCV-MP o
una forma protegida del mismo (preparada como en el ejemplo 1) se
acopla con una forma activada de fosfato de
sn-1,2-dimiristoilglicerol y el grupo
protector presente opcionalmente se retira.
Descripción
1
El análisis retrosintético de trifosfato de
(R)-penciclovir 1a produce el sintón
mono-protegido 2a, esquema 1. La desconexión
adicional produce el fragmento quiral 3a y
2-amino-6-cloropurina
4. El equivalente sintético del sintón 3a es el uretano 5a usado por
Kishi et al en la síntesis total de monensina^{2}. Por
analogía, para la síntesis de trifosfato de
(S)-penciclovir 1b se requiere el uretano 5b como
material de partida. Los uretanos 5a y 5b también se han empleado en
la síntesis de (R)- y
(S)-1-(3-hidroximetilpirrolidin-1-il)citosina^{3}.
Donde: R_{1} y R_{2} son grupos protectores
ortogonales y X = grupo saliente adecuado.
Los uretanos diastereoméricos 5a y 5b se
separaron por cromatografía en columna a media presión y por
cromatografía analítica de fase normal se demostró que tenían un
d.e. del 86%. La reducción de los uretanos 5a y 5b con LAH dio los
mono-bencil éteres 6a y 6b^{2}. La rotación óptica
del mono-bencil éter levorrotatorio 6a
(\alpha_{D}^{22} - 12,4ºC (c = 1,00, cloroformo)); lit.^{2}
\alpha_{D}^{22} - 12,1ºC (c = 0,68, cloroformo)) se había
establecido previamente como que poseía la configuración S. Los
mono-bencil éteres 6a y 6b se sililaron con el grupo
t-butildifenilsililo voluminoso desde el punto de
vista estérico para dar 7a y 7b con el fin de evitar la posible
migración del sililo en etapas posteriores. Las olefinas 7a y 7b se
ozonizaron primero con un buen rendimiento para dar los aldehídos 8a
(78%) y 8b (91%) y después se redujeron para dar los alcoholes 9a y
9b con Dibal-H.
Para la síntesis de trifosfato de
(R)-penciclovir 1a, el alcohol 9a se convirtió en
el bromuro 10a (Br_{2}, PPh_{3}, DMF, 47%) con un rendimiento
moderado. La alquilación de
2-amino-6-cloropurina
4 con el bromuro 10a, en condiciones bibliográficas^{4},
dio como el producto mayoritario el nucleósido
N-9 alquilado 11a (75%) que se separó del isómero
N-7 indeseado 12a (14%) por cromatografía en
columna. La regioquímica de la adición se confirmó simplemente a
partir del espectro de ^{13}C RMN no desacoplado de
(12a)^{5}. La pureza óptica de 11a no pudo analizarse por
HPLC quiral. Sin embargo, la retirada del grupo protector sililo de
11a por hidrólisis ácida dio no sólo la cloropurina 13a (42%, e.e
del 93%) sino también algo del nucleósido de guanosina deseado 14a
(23%, H94/e.e del 0223%), los cuales pudieron analizarse por HPLC
quiral. La hidrólisis ácida prolongada convirtió sin problemas la
cloropurina 13a en el nucleósido de guanosina 14a (75%). El agente
fosfitilante
2-cloro-4H-1,3,2-benzodioxafosforin-4-ona
(reactivo de van Boom) se había usado previamente para la
preparación de H-fosfonatos de nucleósido como
sintones en la síntesis de oligonucleótidos^{6}. La fosfitilación
del nucleósido 14a (e.e del 90%) se realizó usando el reactivo de
van Boom utilizando condiciones similares a las
bibliográficas^{8} para la síntesis de trifosfatos de
nucleósidos^{7}. Después, el intermedio fosfitilado se hizo
reaccionar con pirofosfato de n-butilamonio seguido
de oxidación con yodo para dar el trifosfato de nucleótido
protegido con bencilo bruto 15a. Eventualmente, las condiciones que
permiten la retirada del grupo protector de bencilo de 15a y que
evitan la hidrólisis completa del grupo trifosfato se descubrieron
usando un procedimiento de hidrogenación por transferencia.
Casualmente, la hidrogenolisis del grupo bencilo de 15a pudo
controlarse por HPLC analítica de intercambio aniónico que produjo,
no sólo trifosfato de (R)-penciclovir 1a, sino
también el (R)-difosfato 16a y el
(R)-monofosfato 17a. Los dos últimos nucleótidos de
penciclovir se formaron como resultado de la hidrólisis del grupo
trifosfato en condiciones de reacción de hidrogenación por
transferencia.
La síntesis del (S)-trifosfato 1b
se realizó en condiciones esencialmente idénticas a las descritas
para la síntesis del (R)-trifosfato 1a, con la
excepción de que el alcohol 9b se convirtió en primer lugar en el
mesilato 9c y después en el yoduro 10b. La alquilación de
2-amino-6-cloropurina
4 con 10b produjo de nuevo el aducto N-9 11b como
el producto mayoritario junto con una pequeña cantidad del aducto
N-7 indeseado 12b. La hidrólisis ácida de 11b
produjo una pequeña cantidad de la 6- cloropurina 13b (6%), pero
principalmente el nucleósido de guanosina deseado 14b (85%).
La fosfitilación de 14b (e.e del 90%) con el
reactivo de van Boom, seguido de la reacción con pirofosfato de
tri-n-butilamonio y después yodo dio
el trifosfato bruto 15b. De nuevo, la hidrogenación por
transferencia de 15b se controló por HPLC analítica de intercambio
aniónico para producir no sólo el trifosfato de
(S)-penciclovir deseado 1b sino también el
(S)-difosfato 16b y el
(S)-monofosfato 17b. La rotación óptica producida de
todos los fosfatos de (R)- y (S)-penciclovir se
muestra en la Tabla 1. Para cada par enantiomérico la magnitud y la
señal de las rotaciones ópticas es esencialmente igual y opuesta.
Esto sugiere que ha habido una pérdida de integridad quiral muy
pequeña o nula de los precursores 14a y 14b, e.e del 90% en ambos
casos, durante las condiciones de hidrogenación por transferencia y
por lo tanto la pureza óptica de 1a, 1b, 16a, 16b, 17a y 17b es de
aproximadamente un e.e del 90% en cada caso.
Sílice Spherisorb (250 x 5,0 mm). Tampón A,
hexano; tampón B, hexano:cloruro de metileno (1:1); tampón C,
hexano:etanol (80:20. Eluyente isocrático 40%A: 59%: 1%C, 1,00
ml/min. Detección U.V. 220 n.m. Tiempo de retención 5a (principal
9,48 min., minoritario 8,98 min.), 5b (principal 9,23 min.,
minoritario 9,69 min.).
Merck RP tipo B (125 x 4 mm) uM. Tampón A, TFA
(0,1%) en agua, tampón B TFA (0,1%) en acetonitrilo. Eluyente,
gradiente variando del 5% al 80%B durante 40 minutos, después 10
minutos a 80%B. Flujo 2,0 ml/min. Detección U.V. a 215 n.m.
Chiralpak AD (250 x 4,6 m). Eluyente isocrático
hexano:etanol (7:3), 1,00 ml/min, detección u.v. a 220 n.m.
\newpage
Chiralpak AD (250 x 4,6 mm). Eluyente isocrático
hexano:etanol (1:1) que contiene DEA al 0,1%, 1,0 ml/min. Detección
U.V. a 240 n.m.
Chiracel OB (250 x 4,6 mm). Eluyente isocrático
hexano:etanol (98:2), 1,00 ml/min. Detección U.V. 220 n.m.
Chiracel OC (250 x 4,6 mm). Isocrático
hexano:etanol (95:5) que contiene DEA al 0,1%, 1,00 ml/min.
Detección U.V. a 220 n.m.
Rainin Hydropore SAX (100 x 4,6 mm más
precolumna) 12 \mum. Tampón A, fosfato amónico:metanol (9:1, 10
mM, pH 5,7), tampón B, fosfato amónico:metanol (9:1, 125 mM, pH
5,7). Gradiente de elución del 0% al 100%B durante 25 minutos, 1,00
ml/min. Detección U.V. 254 n.m.
A una solución agitada de hidruro sódico (4,765
g, 119,1 mmol) en dimetilformamida (50 ml) en una atmósfera de
argón con refrigeración en un baño de hielo se le añadió gota a
gota una solución de
2-hidroximetil-4-penten-1-ol^{8}
(11,07 g, 95,3 mmol) en dimetilformamida (75 ml) durante 20
minutos. El baño de refrigeración se retiró y se agitó durante 1 h
antes de enfriar de nuevo la solución en un baño de hielo. Se
añadió una solución de bromuro de bencilo (11,34 ml, 95,3 mmol) en
dimetilformamida (75 ml) durante 5 minutos, y después de agitar
durante 18 horas a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se
vertió en salmuera (1,5 l) y se extrajo con éter dietílico (4 x 300
ml). La fracción orgánica se lavó con agua (2 x 1,0l), se secó
sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró al vacío para
producir un aceite pardo claro (17,40g). El aceite bruto en gel de
sílice (500g) se purificó por cromatografía en columna usando un
gradiente en incremento de éter dietílico al 10%:hexano a éter
dietílico al 100% para producir (11,30 g, 57,5%) en forma de un
aceite. ^{1}H RMN (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,53 a 7,37 (5H,
m) aromático, 5,90 (1H, ddt), 5,15 (2H, m), 4,67 (1H, d), 4,62
(1H, d), 3,89 a 3,69 (3H, m), 3,62 (1H, dd), 2,38 (1H, s a), 2,23
(2H, ddd), 2,09 (1H, m); ^{13}(\delta (67,8 MHz,
CDCl_{3}) 138,00, 136,26, 128,48, 127,76, 127,63, 116,56, 73,47,
73,34, 65,73, 40,37,32,79; m/z (Cl) 207 (MH^{+});
C_{13}H_{18}O_{2} requiere C 75,69, H 8,80 encontrado^{c}
75,30, H 8,84.
A una solución agitada de
(\pm)-2-benciloximetil-4-penten-1-ol
(8,52 g, 41,3 mmol) en trietilamina (40 ml, P_{2}O_{5} recién
retirado por destilación) en una atmósfera de nitrógeno se le
añadió isocianato de
(R)-(-)-1-(1-naftil)etilo
(8,00 g, 40,56 mmol). Después de 16 horas, la mezcla se filtró y el
sólido se lavó con hexano. El filtrado se concentró al vacío para
producir 15,46 g en forma de un producto amarillo pálido. La
cromatografía en columna exhaustiva sobre gel de sílice eluyendo con
cloruro de metileno:hexano:éter dietílico (10:10:1) dio el
diastereómero de elución más rápida (5a) (5,15 g, 30,9%) que mostró
por HPLC analítica de fase normal (Método A) que tenía un d.e. del
86%. El diastereómero de elución más lenta (5b) (5,49 g, 32,9%)
también mostró que tenía un d.e. del 86% por HPLC (Método A). A una
solución del diastereómero de elución más rápida (5a) (5,15 g, 12,76
mmol) en éter dietílico (250 ml) se le añadió hidruro de litio y
aluminio sólido (484 mg, 12,76 mmol) y la mezcla se calentó a
reflujo durante 24 h. La mezcla se enfrió en un baño de agua y se
añadió agua (0,43 ml), después una solución de hidróxido sódico
(2,5 M, 0,85 ml) y finalmente más agua (1,06 ml). Después de agitar
a temperatura ambiente durante 20 minutos, la mezcla se filtró a
través de celite y el filtrado se concentró al vacío para producir
un aceite transparente (4,89 g). La purificación por cromatografía
en columna sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de cloruro
de metileno:hexano:éter dietílico (5:5:1) a (5:5:2) para producir
(S)-(-)-2-benciloximetil-4-penten-1-ol
(6a) (1,97 g, 75%). De una manera similar se redujo el diastereómero
más lento (5b) (5,49 g, 13,6 mmol) con hidruro de litio y aluminio
para producir
R-(+)-2-benciloximetil-4-penten-1-ol
(6b) (2,535 g, 90,3%).
Se produjo a partir de la reducción con hidruro
de litio y aluminio del diastereómero de elución más rápida (5a)
por TLC en éter dietílico. [\delta^{22}_{D} - 12,44ºC
(cloroformo, c = 1,00)], [bibliográf. \alpha^{22}_{D} -12,1ºC
(c = 0,68, cloroformo)]. Pureza óptica por HPLC quiral (Método E),
tiempo de retención.
Se produjo a partir de la reducción con hidruro
de litio y aluminio del diastereómero de elución más lenta (5b) por
TLC en éter dietílico. Pureza óptica por HPLC quiral (Método E) %
tiempo de retención. Véanse los comentarios anteriores.
A una solución agitada del
(R)-(+)-alcohol (1,67 g, e.e del %, 8,1 mmol), en
una atmósfera de argón, en dimetilformamida (25 ml) se le añadió
imidazol (1,213 g, 17,8 mmol) y después
t-butildifenilclorosilano (2,448 g, 8,9 mmol). La
mezcla se agitó a T.A. durante 16 h y después se vertió en salmuera
diluida y se extrajo con cloruro de metileno. La fracción orgánica
se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró al vacío
para producir un aceite incoloro (4,18 g). La cromatografía en
columna sobre gel de sílice eluyendo con éter dietílico al 1% en
hexano produjo (7b) (3,43 g, 95%) en forma de un aceite
transparente.
Mediante un procedimiento similar al descrito
anteriormente, se sililó el (S)-(-)-alcohol (6a)
(1,71 g, 8,90 mmol) que después de la cromatografía en columna sobre
gel de sílice produjo (7a) (2,07 g, 83%) en forma de un aceite
transparente. ^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta véase
anteriormente.
A una solución de la olefina protegida con sililo
(1,32 g, 2,99 mmol) (7a) en cloruro de metileno (60 ml) a -70ºC se
le burbujeó gas ozono. Después de 10 minutos, la TLC indicó que
todo el material de partida se había consumido y se burbujeó argón a
través de la solución hasta que el gas de salida no tenía ozono.
Después se añadió una solución de trifenilfosfina (0,94 g, 3,59
mmol) en DCM (10 ml) y se dejó calentar lentamente a T.A. Después
de 16 h, la mezcla se concentró al vacío para producir un aceite
amarillo pálido (3,606 g). La cromatografía sobre gel de sílice
eluyendo con un gradiente de éter dietílico al 2% en hexano a éter
dietílico al 10% en hexano produjo el compuesto del título (8a)
(1,03 g, 78%) en forma de un aceite. ^{1}H RMN (200 MHz,
CDCl_{3}) \delta 9,75 (1H, t), 7,61 (4H, d a), 7,42 a 7,22
(11H, m), 4,45 (2H, s), 3,67 (2H, m), 3,55 (1H, dd), 3,45 (1H, dd),
2,52 (3H, s a), 1,03 (9H, s).
Mediante un método similar, a una solución de la
olefina (7b) (3,315 g, 7,46 mmol) en 150 ml de cloruro de metileno
en una atmósfera de argón, temperatura interna de -68ºC, se le
burbujeó gas ozono. Después de 15 minutos la solución se volvió
azul. Se burbujeó argón hasta que el gas de salida no tenía ozono.
Después de 30 min, se añadió una solución de trifenilfosfina en DCM
(30 ml), se dejó calentar lentamente a T.A. y se agitó durante 64
h. Se purificó como se ha indicado anteriormente para producir
(3,03g, 90%) en forma de un aceite transparente.
A una solución agitada del aldehído (8a) (2,132
g, 4,80 mmol) en cloruro de metileno (50 ml) en una atmósfera de
argón a -70ºC se le añadió gota a gota una solución de hidruro de
diisobutilaluminio en cloruro de metileno (1,0 M, 5,30 ml) durante 5
minutos. Después de 1 h a -70ºC, la TLC indicó que todo el material
de partida se había consumido. Después, se añadió acetato de etilo
(1,77 ml), seguido de agua (1,6 ml) y el baño de refrigeración se
retiró y se reemplazó con un baño de agua. Después de 20 minutos
se añadió hidrogenocarbonato sódico (629 mg, 7,49 mmol) y la mezcla
se agitó durante 2,5 h. El sólido se retiró por filtración y se
lavó con cloruro de metileno. El filtrado se concentró al vacío
para producir un aceite transparente (9a) (2,2 g, 103%) que se usó
sin purificación adicional. ^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3})
\delta 7,64(4H, m a), 7,44 a 7,25 (11H, m), 4,48 (2H, s),
3,65 (4H, m), 3,60 (1H, dd), 3,45(1H, dd), 2,73 (1H, t a),
2,02 (1H, m), 1,67 (2H, m), 1,04 (9H, s).
A una solución del aldehído bruto en DCM (71 ml)
a -68ºC en una atmósfera de argón se le añadió
dibal-H mediante una jeringa durante 5 minutos.
Después de 4,25 h, la TLC indicó que todo el material de partida se
había consumido y se inactivó mediante la adición de EtOAc (2,50
ml). El baño de refrigeración se retiró y se reemplazó con un baño
de agua y la mezcla se agitó durante 0,5 h. Después, se añadió
hidrogenocarbonato sódico sólido (0,892 g, 10,63 mmol) y se agitó
durante 1 h más. El sólido se retiró por filtración y se lavó con
cloruro de metileno para producir (9b) en forma de un aceite bruto
(2,89 g, 95%) que se usó sin purificación adicional.
A una solución agitada del alcohol (2,142 g, 4,80
mmol) y trifenilfosfina (1,386, 5,29 mmol) en dimetilformamida se
le añadió gota a gota bromo (0,272 ml, 5,29 mmol). Después de
agitar durante 16 h a T.A., la mezcla se vertió en agua, el sólido
se filtró y se lavó con hexano. La fracción acuosa se lavó con
hexano y las fracciones orgánicas combinadas se secaron sobre
sulfato sódico y se concentraron al vacío para dar un aceite
amarillo pálido (2,98 g). La cromatografía en columna sobre gel de
sílice eluyendo con un gradiente de cloruro de metileno del 5% al
25% en hexano produjo el compuesto del título (9a, 1,14 g,46,7%) en
forma de un aceite. ^{1}H RMN (250 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,65
(4H, m), 7,47 a 7,24 (11H, m), 4,48 (2H, s), 3,69 (2H, m), 3,53 (2H,
m), 3,42 (2H, t), 2,12 a 1,92 (3H, m), 1,04
(9H, s).
(9H, s).
A una solución agitada del alcohol bruto ( )
(2,894 g, 6,45 mmol) en cloruro de metileno y trietilamina (1,35
ml, 9,68 mmol) en una atmósfera de argón a -5ºC se le añadió gota a
gota cloruro de metanosulfonilo (0,6 ml, 7,74 mmol) durante 7
minutos. La mezcla se calentó a 5ºC, se agitó durante 1,5 h más, se
enfrió a 0ºC y se le añadió ácido clorhídrico diluido (1,25 M). La
fase orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con cloruro de
metileno. La fracción orgánica completa se lavó con una solución
diluida de hidrogenocarbonato sódico, se secó sobre sulfato sódico,
se filtró y se evaporó al vacío para producir un aceite amarillo
pálido (3,40 g) que se usó sin purificación adicional. ^{1}H RMN
(200 MHz) \delta 7,63 (4H, m), 7,45 a 7,23 (11H, m), 4,47 (2H, s),
4,26 (2H, dt), 3,68 (2H, m), 3,52 (2H, m), 2,88 (3H, s),
2,01(1H, m), 1,88 (2H, m), 1,04 (9H, s).
A una solución agitada del mesilato (9c) (3,40 g)
(6,45 mmol) en acetona (60 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se
le añadió yoduro sódico (1,934 g, 12,9 mmol). Después, la mezcla se
calentó a reflujo durante 3,5 h, se enfrió a T.A. y se concentró al
vacío. Se añadieron cloruro de metileno y agua, se separó y la fase
acuosa se extrajo de nuevo con cloruro de metileno. La fase orgánica
se separó y la fase acuosa se lavó primero con metabisulfito sódico
y después con salmuera y se secó sobre sulfato sódico. El
disolvente se retiró al vacío para producir un aceite amarillo
pálido (3,391 g). La cromatografía en columna sobre gel de sílice
eluyendo con un gradiente de éter dietílico al 2% en hexano a éter
dietílico al 5% en hexano produjo el compuesto del título (10b)
(2,740 g, 76%) en forma de un aceite transparente. ^{1}H RMN (200
MHz, CDCl_{3}) \delta 7,63 (4H, m), 7,45 a 7,22 (1H, m), 4,47
(2H, s), 3,69 (2H, m), 3,54 (2H,m), 3,18 (2H, a), 1,97 (3H, m),1,04
(9H, s).
A una solución agitada del bromuro (10a) (1,017
g, 2,00 mmol) en dimetilformamida (9,20 ml) y
2-amino-6-cloropurina
(0,340 g, 2,00 mmol) a T.A. en una atmósfera de argón se le añadió
carbonato potásico (0,415 g, 3,00 mmol). Después de 22 h, la mezcla
de reacción se vertió en agua y se extrajo con cloruro de
metileno:metanol (99:1). Los extractos orgánicos combinados se
lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron
y se concentraron al vacío para dar un aceite amarillo (1,287 g).
La cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con un
gradiente de metanol del 1% al 3% en cloruro de metileno produjo
(11a) en forma de un aceite (0,90 g, 75,1%). ^{1}H RMN (200 MHz,
CDCl_{3}) \delta 7,62 (5H, m), 7,48 a 7,22 (11H, m), 5,04 (2H, s
a), 4,47 (2H, s), 4,10 (2H, t), 3,69 (2H, d), 3,48 (1H, dd), 3,37
(1H,dd), 2,09 a 1,78 (3H, m), 1,04 (9H, s).
A una solución agitada del yoduro (10b) (2,40 g,
4,90 mmol) en dimetilformamida (22,5 ml) se le añadieron
2-amino-6-cloropurina
(834 mg, 4,91 mmol) y carbonato potásico (1,01 g, 7,38 mmol) en una
atmósfera de argón a T.A. Después de 30 h se añadió metanol:cloruro
de metileno (1:99, 250 ml) y la mezcla se vertió en agua (1 l). La
fracción acuosa se extrajo de nuevo con metanol:cloruro de metileno
(1:99, 3 x 250 ml). La fracción orgánica completa se secó sobre
sulfato sódico, se filtró y se concentró al vacío para dar un
aceite (11,0 g, que contenía dimetilformamida residual). El aceite
se recogió en cloruro de metileno (200 ml) y se lavó con agua (1
l). La fase acuosa se extrajo de nuevo con cloruro de metileno (3 x
200 ml). La fase orgánica combinada se lavó de nuevo con agua (1 l),
se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró al vacío
para dar un aceite amarillo (3,162 g). La cromatografía en columna
sobre gel de sílice eluyendo con DCM, metanol:cloruro de metileno
(1:99) y finalmente con metanol:cloruro de metileno (1,5:98,5) dio
(11b) (2502 g, 85%) en forma de un aceite que contenía \sim5% de
DMF por ^{1}H RMN.
El compuesto del título se obtuvo en forma de una
fracción de elución tardía a partir de la purificación en columna
sobre gel de sílice de (11b). El aceite resultante se recristalizó
en acetato de etilo:hexano para dar un sólido blanco (457 mg, 15,6%)
p.f. 109-110ºC, pureza por HPLC (Método) 98,0%, m/z
603 (M+H). ^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 8,33 (1H, s), 7,54 (4H, m), 7,48 a 7,23 (11H,m), 6,61 (2H,
s a), 4,42 (2H, t), 4,37 a 4,27 (2H, m), 3,64 (2H, m), 3,50 (2H,m),
1,95 (1H, m), 1,83 (2H, m), 0,93 (9H, s), ^{13}C (100,6 MHz,
DMSO-d_{6}) 164,25, 159,84, 149,18, 1,42,03,
138,28, 134,91, 132,86, 132,82,129,71, 128,10, 127,73, 127,25,
127,22, 114,61, 72,06, 69,42, 63,64, 44,51, 38,83, 29,92, 26,49,
18,65.
A una solución agitada de (11a) (158 mg, 0,27
mmol) en tetrahidrofurano (4,0 ml) se le añadió ácido clorhídrico
(2 M, 4,0 ml) en una atmósfera de argón a T.A. Después de 24 h, se
añadió exceso de carbonato sódico saturado. La fase acuosa se
extrajo con acetato de etilo y después con cloroformo. La fracción
orgánica completa se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se
evaporó para dar un aceite transparente (135 mg). La cromatografía
en columna sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente en
incremento de metanol al 2% a metanol al 4% en cloruro de metileno
produjo (13a) (60 mg, 66%) en forma de un aceite. Una muestra se
recristalizó en acetato de etilo:hexano para producir un sólido
blanco. ^{1}H RMN (400 Mhz,CDCl_{3}) \delta 7,74 (1H, s),
7,42 a 7,28 (5H, m), 5,11 (2H, s a), 4,50 (2H, dd), 4,17 (2H, m),
3,75 (2H, d), 3,56 (2H, m), 2,45 (1H, s a), 2,08 a 1,90 (2H, m),
1,83 (1H, m), m/z (FAB) 362 (M+H).e.e pos HPLC quiral (Método C)
del 93,6%.
A una solución agitada de la cloropurina (13a)
(325 mg, 0,9 mmol) en tetrahidrofurano (15 ml) se le añadió ácido
clorhídrico (2 M, 15 ml) y se agitó a 60ºC en una atmósfera de
argón durante 26 h. La mezcla de reacción se enfrió en un baño de
agua y se le añadió una solución de hidróxido sódico (10 M) hasta
pH 9. La fase acuosa se extrajo con metanol:acetato de etilo (7:93,
4 x 35 ml). La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico, se
filtró y se evaporó al vacío para dar un aceite (150 mg). Tras un
periodo de reposo cristalizó un sólido blanco a partir de la fase
acuosa, que se retiró por filtración, se lavó con agua (5 ml) y
éter dietílico y se secó al vacío para dar el compuesto del título
(14a) (175 mg, 56,8%). ^{1}H RMN (400
MHz,DMSO-d_{6}) 10,55 (1H, s), 7,66 (1H, s), 7,40
a 7,22 (5H, m), 6,44 (2H, s a), 4,51 (1H, t), 4,42 (2H, t), 4,00
(2H, t), 3,49 a 3,30 (4H, m), 1,76 (2H, c), 1,64 (1H, m). Pureza por
HPLC (Método) del 98,3%, e.e por HPLC quiral (Método D) del 89,6%,
tiempo de retención: pico mayor 10,3 min, pico menor 6,9 minutos.
(C_{17}H_{21}N_{5}O_{3}, -7,7 ppm, NH_{3}Cl) m/z 343,1617.
El aceite se purificó por cromatografía en columna sobre gel de
sílice eluyendo con un gradiente en incremento de metanol
(8-22%) en cloruro de metileno para producir (14a)
(87 mg, 28,2%) en forma de un aceite.
A una solución agitada de (11b) (248 mg, 0,42
mmol) en THF (6,22 ml), a T.A. en una atmósfera de argón, se le
añadió ácido clorhídrico (2,0 M, 6,2 ml). Después de 26 h, el
tetrahidrofurano se retiró al vacío. La fase acuosa se extrajo con
acetato de etilo (3 x 30 ml) y la fracción orgánica completa se
secó sobre sulfato sódico, se filtró y se evaporó al vacío para dar
un aceite. La cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo
con cloroformo y después con un gradiente en incremento de metanol
(del 1 al 4%) dio (13b) (96 mg, 63,8%). El aceite resultante se
recristalizó en acetato de etilo:hexano para dar un sólido blanco
(86 mg, 57,2%). e.e por HPLC quiral (Método C) del 86,2%.
A una solución agitada de la cloropurina (11b)
(2,235 g, 3,71 mmol) en tetrahidrofurano (56 ml), en una atmósfera
de argón a T.A., se le añadió ácido clorhídrico (2,0 M, 56 ml). La
mezcla se calentó a una temperatura de 65-70ºC
durante 20 horas, se enfrió a T.A. y se neutralizó con hidróxido
sódico (12,5 M, aprox. 9 ml) hasta pH 7. El tetrahidrofurano se
retiró por evaporación al vacío. La fase acuosa se extrajo con
cloruro de metileno (100 ml) produciendo una emulsión y el sólido se
retiró por filtración. El sólido se lavó con cloruro de metileno
(100 ml, de un lavado sólido). Los extractos orgánicos combinados
se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron al
vacío para dar un aceite (1,616 g). La fase acuosa se ajustó de
nuevo a pH 7 y se enfrió en un baño de hielo durante 2 h. El sólido
resultante se lavó con agua y éter dietílico y se combinó con la
primera extracción. El sólido combinado se recogió en metanol, se
filtró y se concentró al vacío para dar (14b) (944 mg, 74,5%).
Pureza por HPLC del 98,2%, e.e por HPLC quiral (Método D) del
81,4%. Una muestra (755 mg) se recristalizó en agua (aprox. 90 ml)
y se dejó enfriar lentamente a T.A. El sólido resultante se filtró,
se lavó con agua y se secó al vacío para dar (14b) (609 mg,80,7% de
recuperación). e.e por HPLC quiral (Método D) del 89,9%. Tiempo de
retención: pico mayor 6,7 min, pico menor 10,4 min. Pureza por HPLC
(Método B) del 98,9%.
C_{17}H_{21}N_{5}O_{3}(H_{2}O)_{0,6}
requiere c = 57,43; h = 6,29 y N = 19,70 encontrado C = 57,49, H
6,07 y N = 19,72.
Una suspensión del (R)-nucleósido
(14b) (174 mg, 0,51 mmol) se destiló azeotrópicamente con piridina
(2 x 10 ml). A una suspensión agitada de ( ) en piridina (1,22 ml) y
dimetilformamida (4,62 ml) se le añadió una solución de
2-cloro-4H-1,3,2-benzodioxafosforin-4-ona
(113 mg, 0,57 mmol) en dioxano (1,13 ml, más 0,5 ml de lavado). El
nucleósido empezó a disolverse inmediatamente y se observó un color
ligeramente amarillo. Después de 10 minutos, se añadió una solución
de pirofosfato de tri-n-butilamina
(336 mg) en tri-n-butilamina (0,58
ml) y dimetilformamida (2,9 ml). Después de 10 minutos más se
añadió una solución de yodo (al 1% p:v) en piridina:agua (98:2; v:v;
10,2 ml). Quince minutos después de la adición del yodo la reacción
se vertió en agua (80 ml) y se extrajo con cloroformo (4 x 80 ml).
La fase acuosa se concentró al vacío para dar el trifosfato
protegido con bencilo bruto (15b) (460 mg). A una solución del
trifosfato bruto ( ) (460 mg) en agua:metanol (1:1, 80 ml) se le
añadió catalizador de paladio sobre carbono
(Johnson-Matthey, Tipo 4878L, 174 mg) con agitación
en una atmósfera de argón. Después de 15 minutos, el catalizador se
retiró por filtración sobre celite y se lavó con metanol:agua
caliente (1:1, 90 ml). Al filtrado se le añadieron formiato amónico
(1,0 g) y catalizador de paladio (203 mg) con agitación en una
atmósfera de argón. La mezcla se calentó a reflujo, a una
temperatura de 93-10ºC, durante 6 h. En este
momento la reacción se había completado sólo al \sim50% como se
juzgó por HPLC de intercambio aniónico (método). La mezcla de
reacción caliente se filtró a través de celite y el catalizador se
lavó con caliente:metanol caliente (1:1, 200 ml). El filtrado se
concentró al vacío y se liofilizó en agua (700 ml) para dar un
sólido blanco (620 mg). Este sólido se sometió de nuevo a las
condiciones de hidrogenación por transferencia. A una solución del
trifosfato parcialmente desprotegido bruto (620 mg). Este sólido se
sometió de nuevo a las condiciones de hidrogenación por
transferencia. A una solución del trifosfato parcialmente
desprotegido bruto (620 mg) en agua:metanol (1:1, 160 ml) se le
añadieron formiato amónico (480 mg) y catalizador de paladio (50
mg) con agitación en una atmósfera de argón. La mezcla se calentó a
una temperatura del baño de aceite de 80ºC durante 1,5 h, tiempo
después del cual se consideró que la desprotección se había
completado, \leq1% ( ) restante, como se juzgó por HPLC de
intercambio aniónico. La mezcla de reacción caliente se filtró a
través de celite y el catalizador se lavó con agua:metanol caliente
(1:1, 200 ml). El filtrado se concentró al vacío para dar un sólido
blanco (900 mg) que se liofilizó en agua (1 x 500 ml y 1 x 150 ml)
para dar (1b), (16b) y (17b) brutos (367 mg).
La mitad de esto se purificó para dar:
50 mg de PCV.TP
40 mg de PCB.DT
10 mg de PCV.MP
El (S)-nucleósido (14a) (174 mg,
0,51 mmol) se fosfeniló y se convirtió en el (15a) protegido con
bencilo en condiciones idénticas a las descritas para la síntesis
del enantiómero (15b) anterior. El trifosfato bencilado bruto (15a)
se recogió en agua:metanol (1:1, 80 ml) y se agitó con catalizador
de paladio sobre carbono (Tipo 487L, 175 mg). Después de 20 minutos
la mezcla se filtró a través de celite y el catalizador se lavó con
agua:metanol (1:1, 80 ml). El filtrado se usó para la reacción de
desbencilación por hidrogenación por transferencia. Al filtrado (160
ml) se le añadieron formiato amónico (530 mg) y catalizador de
paladio sobre carbono (153 mg) y se agitó en una atmósfera de argón.
La mezcla se calentó a una temperatura del baño de aceite de
76-88ºC, y se controló por HPLC de intercambio
aniónico (Método). Después de 3,5 h se añadió catalizador de
paladio (305 mg) y después de 5,5 h se añadió más catalizador de
paladio (142 mg). Después de 6,5 h la reacción se filtró a través
de celite y el catalizador se lavó con agua:metanol caliente (1:1,
200 ml) y el filtrado se concentró al vacío. El filtrado se disolvió
en agua:metanol (1:1, 160 ml), formiato amónico (265 mg) y
catalizador de paladio (105 mg). La mezcla se agitó en una
atmósfera de argón y se calentó en un baño de aceite a una
temperatura de 76-80ºC. Después de 5,5 h, se
consideró que la desprotección se había completado según mostró el
análisis por HPLC de intercambio aniónico, \leq1% () restante. La
mezcla de reacción caliente se filtró a través de celite y el
catalizador se lavó con metanol:agua caliente (1:1, 100 ml). El
filtrado se concentró al vacío y se destiló azeotrópicamente con
agua (25 ml) para dar un aceite (830 mg). Después, se liofilizó en
agua (1 x 300 ml y 1 x 125 ml) para dar un sólido blando (376
mg).
1. Sime, J. T., Barnes, R. D.,
Elson, S. W., Jarvest, R. L. y O'Toole, K.J.,
J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1, 1992,
1653-1658; Hannah, J., Tolman, R. L.,
Karkas, J. D. Liou, R., Perry, H. C. y
Field, A. K., J. Heterocyclic Chem., 1989,
26, 1261-1276.
2. Furuyama, T., Wang, C.-L. J. y
Kishi, J. Am. Chem. Soc., 1979, 101,
260-262.
3. Harnden, M. R. y Jarvest, R. L.,
J. Chem. Soc. Perkin Trans 1, 1991,
2071-2079.
4. Harnden, M. R., Jarvest, R. L.,
Bacon, T. H. y Boyd, M R., J. Med.Chem.,
1987, 30, 1636-1642; Geen, G.
R., Grinter, T. J., Kincey, P. M. y Jarvest, R.
L., Tetrahedron, 1990, 46,
6903-6914.
5. En la ^{13}C RMN
infra-acoplada de ( ) la purina C-5
(114,53 ppm) está acoplada a la purina H-8 y al
grupo metileno (C-4) del cambio lateral de butilo y
aparece como un cuadruplete. En cuanto a la purina
C-4 (164,12 ppm), aparece como un doblete ya que
sólo está acoplada al protón en C-8 de la
purina.
6. Marugg, J. E., Tromp, M.,
Kuyl-Yeheskiel, E., van der Marel, G.
A. y Van Boom, J. H., Tetrahedron Lett., 1986,
27, 2661-2664.
7. Ludwig, J. y Eckstein, F., J.
Org. Chem., 1989, 54,
631-635.
8. Wasson, B. K., Gleason, C. H.,
Levi, I, Parker, J. M., Thompson, L. M. y
Yates, C. H., Can. J. Chem 1961, 39,
923-932.
Descripción
2
Se secó
9-(4-O-isobutiril-3-hidroximetilbut-1-il)guanina
(4-R, pico 1 o 4-S, pico 2, respectivamente) (0,3 g,
0,9 mmol) a alto vacío durante 2 h y después se disolvió en DMF (3
ml). A la solución resultante se le añadió
N,N-dimetilformamida dimetilacetal (0,75 ml, 5,5
mmol). La mezcla de reacción se dejó durante una noche a
temperatura ambiente. El progreso de la reacción se siguió por UV
(desaparición del máximo a \lambda = 254 nm, y aparición de un
nuevo máximo a \lambda = 301 nm, correspondiente al 4-R o
4-S protegido con exoamino). Después de que se completase la
reacción, la DMF se evaporó a presión reducida y después el residuo
se disolvió en piridina anhidra (5 ml). A la solución resultante se
le añadió cloruro de monometoxitritilo (0,3 g, 0,95 mmol). La mezcla
de reacción se mantuvo a temperatura ambiente durante una noche y
después se le añadió una solución concentrada de NH_{4}OH (5 ml).
Todo el conjunto se dejó durante una noche (el máximo en \lambda
= 301 desapareció) y los disolventes se evaporaron a presión
reducida. El residuo oleoso se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (10 ml)
y la solución se extrajo con H_{2}O (3 x 5 ml). La fracción
orgánica se secó sobre MgSO_{4} y después se evaporó el
CH_{2}Cl_{2}. Se disolvió de nuevo la
9-(4-O-isobutiril-3-O-monometoxitritilmetil-but-1-il)guanina
bruta (7) en CH_{2}Cl_{2} y después se añadió gota a gota a
hexano. El precipitado se filtró y se secó a presión reducida. El
rendimiento fue de 0,3 g de cada isómero de 7. El compuesto 7 (0,3
g) se disolvió en DMF (7,5 ml) y CH_{3}OH (7,5 ml) y después a la
solución resultante se le añadió NaOH 1 M (3 ml) para retirar la
protección de isobutirilo. Después de 3 h a temperatura ambiente,
la mezcla de reacción se neutralizó con Dowex 50W x 8 (en forma de
piridinio). La resina se filtró y después se lavó con CH_{3}OH.
El filtrado y los lavados se combinaron y los disolventes se
evaporaron a presión reducida. El 9 bruto se purificó por
cromatografía en columna sobre gel de sílice usando un gradiente
por etapas de CH_{3}OH en CH_{2}Cl_{2} del 0 al 8% como
sistema de disolventes de elución. El rendimiento de 9-R
fue de 0,11 g (25%) y el de 9-S de 0,26 g (55%). 9-R:
TLC (CH_{2}Cl_{2}/CH_{3}OH, 9:1) R_{f} 0,12; UV
(C_{2}H_{5}OH al 95%), \lambda_{max} 235, \lambda_{min} 224,
\lambda_{sh} 246, 263; 9-S: TLC
(CH_{2}Cl_{2}/CH_{3}OH, 9:1) R_{f} 0,12; UV
(C_{2}H_{5}OH al 95%), \lambda_{max} 235, \lambda_{min} 223,
\lambda_{sh} 243, 263. Nota: El MMTrPCV (9) se sintetizó con y
sin protección del grupo guanina exoamino. Los rendimientos son
comparables.
Se secó
9-(4-hidroxi-3-O-monometoxitritilmetil-but-1-il)guanina
(9-S o 9-R) (60 mg, 0,11 mmol) al vacío durante una
noche a temperatura ambiente y después se inyectaron DMF (3,6 ml) y
piridina anhidra (1,2 ml) a través del tabique en el matraz de
reacción con barra agitadora. Durante todas las manipulaciones se
mantuvo una pequeña presión positiva de nitrógeno en el recipiente
de reacción conectándolo con una globo cargado de nitrógeno. Se
inyectó una solución 1 M preparada recientemente de
2-cloro-4H-1,2,3-dioxafosforin-4-ona
(5) en dioxano anhidro (0,55 ml) en la solución bien agitada de 9.
Después de 15 min se inyectó rápidamente una solución 0,5 M de
bis(tri-n-butilamonio)pirofosfato (6) en DMF
anhidra (1,5 ml) seguido de tri-n-butilamina (1 ml). Después
de 15 min, la mezcla de reacción se dividió en dos partes iguales
(de 3,9 ml cada una) y se añadieron a una solución al 25% de yodo en
piridina/THF que contenía agua hasta que se alcanzó un exceso de
yodo. El exceso de yodo se destruyó después de 15 min mediante la
adición de unas gotas de una solución acuosa al 5% de NaHSO_{3} y
la mezcla de reacción se evaporó a sequedad. El residuo se
disolvió de nuevo en H_{2}O (5 ml). Después del reposo durante 30
min a temperatura ambiente, la solución se evaporó a sequedad y
después se añadió AcOH al 80% (25 ml). La mezcla de reacción se
mantuvo a temperatura ambiente durante 0,5 h y después el AcOH se
coevaporó a sequedad con n-BuOH. El residuo se trató con
H_{2}O (8 ml) y después la suspensión resultante se extrajo con
CH_{2}Cl_{2}(3 x 2 ml). La fracción de H_{2}O que
contenía el producto se separó y se filtró a través de Acrodisc LC
13 PVDF (0,45 \mum, Gelman). El PCVTP bruto se purificó por FPLC
usando HiLoad 26/10, columna Q Sepharose Fast Flow Pharmacia. La
columna se eluyó con un gradiente de tampón TEAB (pH 7,0) de 0,05 a
0,7 M, a un caudal de 10 ml/min. Las fracciones que contenían el
producto se recogieron y se liofilizaron. El rendimiento del
trifosfato de PCV 10-R y 10-S fue de 90 A_{260}
unidades cada uno (aprox. 3,5 mg asumiendo
\varepsilon_{PCVTP}= 11,5 X 10^{3}). 10-R: UV
(H_{2}O) \lambda_{máx} 253, \lambda_{sh} 262; HPLC (columna:
4,6 x 100 mm, Rainin Hydropore SAX, gradiente: de
NH_{4}K_{2}PO_{4} 10 mM al 10% que contenía CH_{3}OH al 10%
a NH_{4}K_{2}PO_{4} 125 mM que contenía CH_{3}OH al 10% en
15 min, pH 5,5, caudal de 1 ml/min, detección: 254 nM) R_{t} 9,8;
MS/ESI 492,0 [M - H]. 10-S: UV (H_{2}O) \lambda_{máx}
252, \lambda_{máx} 265; HPLC (columna: 4,6 x 100 mm, Rainin
Hydropore SAX, gradiente: de NH_{4}K_{2}PO_{4} 10 mM al 10%,
CH_{3}OH al 10% a NH_{4}K_{2}PO_{4} 125 mM, CH_{3}OH al
10% en 15 min, pH 5,5; caudal de 1 ml/min, detección: 254 nm)
R_{t} 9,0; MS/ESI 492,0 [M - H].
Claims (8)
1. Uso de un bioprecursor del enantiómero (R) del
trifosfato del compuesto de fórmula
es decir,
(R)-PCV-TP, o una sal
farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un
medicamento para el tratamiento de infecciones por
VIH-1 o
VHB,
donde el bioprecursor es un derivado de
(R)-PCV-monofosfato que libera
(R)-PCV- monofosfato intracelularmente, que a su vez
se convierte en (R)-PCV-TP.
2. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, donde
el derivado se selecciona entre
- un conjugado de
(R)-PCV-monofosfato acoplado a
PL-ASOR, de fórmula
donde el conjugado puede tener múltiples restos
de (R)-PCV-monofosfato por molécula
de
proteína;
- el derivado de fosfolípido de fórmula
- el derivado de
(R)-MP-bis(POM) de
fórmula
- y el derivado de
(R)-MP-difenil éster de fórmula
3. Uso de un bioprecursor del enantiómero (R) del
trifosfato del compuesto de fórmula (A)
es decir,
(R)-PCV-TP, o una sal
farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un
medicamento para el tratamiento de infecciones por
VIH-1 o infecciones por
VHB,
donde el bioprecursor es un derivado de difosfato
de dimiristoilglicerol de fórmula
que libera
(R)-PCV-monofosfato
intracelularmente, que a su vez se convierte en
(R)-PCV-TP.
4. Un conjugado de
(R)-PCV-monofosfato acoplado a
PL-ASOR, de fórmula
donde el conjugado puede tener múltiples restos
de (R)-PCV-monofosfato por molécula
de
proteína.
5. El derivado de fosfolípido de fórmula
6. El derivado de
(R)-MP-bis(POM) de
fórmula
7. El derivado de
(R)-MP-difenil éster de fórmula
8. El derivado de difosfato de
dimiristoilglicerol de fórmula
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GBGB9508237.6A GB9508237D0 (en) | 1995-04-24 | 1995-04-24 | Pharmaceuticals |
GB9508237 | 1995-04-24 | ||
GBGB9604909.3A GB9604909D0 (en) | 1996-03-08 | 1996-03-08 | Pharmaceuticals |
GB9604909 | 1996-03-08 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
ES2203692T3 true ES2203692T3 (es) | 2004-04-16 |
Family
ID=26306919
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES96914109T Expired - Lifetime ES2203692T3 (es) | 1995-04-24 | 1996-04-23 | Uso de trifosfato de (r)-penciclovir para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de enfermedades viricas. |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US7045525B1 (es) |
EP (1) | EP0822817B1 (es) |
JP (1) | JPH11504026A (es) |
DE (1) | DE69629188T2 (es) |
ES (1) | ES2203692T3 (es) |
WO (1) | WO1996033720A1 (es) |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4845084A (en) * | 1984-01-26 | 1989-07-04 | Merck & Co., Inc. | Phosphate derivatives of substituted butyl guanines, antiviral compositions containing them, and methods of treating viral infections with them |
GB8904855D0 (en) | 1989-03-03 | 1989-04-12 | Beecham Group Plc | Pharmaceutical treatment |
GB9015051D0 (en) * | 1990-07-07 | 1990-08-29 | Beecham Group Plc | Pharmaceutical treatment |
-
1996
- 1996-04-23 ES ES96914109T patent/ES2203692T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-04-23 JP JP8532161A patent/JPH11504026A/ja active Pending
- 1996-04-23 US US08/945,249 patent/US7045525B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-04-23 WO PCT/EP1996/001706 patent/WO1996033720A1/en active IP Right Grant
- 1996-04-23 DE DE69629188T patent/DE69629188T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-04-23 EP EP96914109A patent/EP0822817B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2005
- 2005-12-13 US US11/231,115 patent/US20060069108A1/en not_active Abandoned
-
2010
- 2010-12-22 US US12/976,599 patent/US20110092458A1/en not_active Abandoned
-
2013
- 2013-06-19 US US13/921,233 patent/US20130281470A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP0822817A1 (en) | 1998-02-11 |
DE69629188T2 (de) | 2004-04-22 |
WO1996033720A1 (en) | 1996-10-31 |
DE69629188D1 (de) | 2003-08-28 |
US20130281470A1 (en) | 2013-10-24 |
EP0822817B1 (en) | 2003-07-23 |
US20060069108A1 (en) | 2006-03-30 |
JPH11504026A (ja) | 1999-04-06 |
US7045525B1 (en) | 2006-05-16 |
US20110092458A1 (en) | 2011-04-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2605625T3 (es) | Moduladores de ciclopropilo del receptor P2Y12 | |
EP0781138B1 (en) | Lipid analogs for treating viral infections | |
CA2623522C (en) | Modified 4'-nucleosides as antiviral agents | |
ES2255295T3 (es) | 2'-deoxi-beta-l-nucleosidos para el tratamiento de la hepatitis b. | |
KR100242454B1 (ko) | 1,3-옥사티올란누클레오시드유사체 | |
TWI362934B (en) | Phosphonate analogs of hiv inhibitor compounds | |
ES2224547T3 (es) | Actividad antiviral y resolucion del 2-hidroximetil-5-(5-fluorocitosin-1-il)-1,3-oxatiolano. | |
DK166805B1 (da) | Threo-isomeren af 3'-azido-3'-deoxythymidin til anvendelse ved behandling af eller profylakse for humane retrovirusinfektioner, anvendelse af forbindelsen til fremstilling af et laegemiddel med naevnte indikation og farmaceutisk praeparat indeholdende forbindelsen | |
DE60002986T2 (de) | Phosphoramidat-, mono-, di-, und triphosphatester von (1r, cis)-4-(6-amino-9h-purin-9-yl)-2-cyclopentene-1-methanol als antivirale mittel | |
CZ283721B6 (cs) | Purinové deriváty a jejich farmaceutické použití | |
JPS63239294A (ja) | 新規アデノシン誘導体及び該化合物を有効成分として含有する医薬組成物 | |
JPH08507286A (ja) | 選択的な抗B型肝炎ウイルス活性を有する鏡像体的に純粋なβ−D−ジオキソランヌクレオシド | |
JPH05506436A (ja) | 冠状血管拡張剤および抗高血圧症剤としての2―アラルコキシおよび2―アルコキシアデノシン誘導体類 | |
PT707481E (pt) | Analogos de l-2',3'-didesoxinucleosido como agentes anti-hepatite b (hbv) e anti-hiv | |
PT89482B (pt) | Processo para a preparacao de derivados de nucleosidos disesoxi-didesidro-carboxilico | |
CN110845560B (zh) | 苯丙氨酸酰胺化的核苷酸衍生物及其制备方法与应用 | |
WO2016138026A1 (en) | Gemcitabine derivatives | |
JPS6087298A (ja) | プリン及びピリミジン非環式ヌクレオシドの環状ピロホスフエート | |
EA001920B1 (ru) | Синтез 1,3-оксаселеноланнуклеозидов, их активность против вируса иммунодефицита человека и против вируса гепатита-b | |
EP1382343B1 (en) | Combination therapy to treat hepatitis B virus | |
JPH07502740A (ja) | 治療用ヌクレオシド | |
JPH07504666A (ja) | プリン類似化合物の抗ウイルス性ホスホン酸誘導体 | |
CN111918870B (zh) | 氘代的低聚核苷酸及前体药物 | |
ES2203692T3 (es) | Uso de trifosfato de (r)-penciclovir para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de enfermedades viricas. | |
ES2928666T3 (es) | Piridinetionas, sus composiciones farmacéuticas y su uso terapéutico para el tratamiento de enfermedades proliferativas, inflamatorias, neurodegenerativas o inmunomediadas |