JPH11504026A - ウイルス性疾患治療用医薬の製造のための（ｒ）−ペンシクロビルトリホスフェートの使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 i）ヒトを包含する哺乳動物におけるＨＩＶ−１感染、またはii）ヒトを包含する哺乳動物におけるＨＢＶ感染の治療方法をであって、かかる治療を必要とするヒトに有効量の式（Ａ）の化合物のトリホスフェートの（Ｒ）−エナンチオマーまたはその医薬上許容される塩を投与することを特徴とする方法、ならびに該方法に使用される化合物。

Description

【発明の詳細な説明】 ウイルス性疾患治療用医薬の製造のための（Ｒ）−ペンシクロビルトリホスフェ ートの使用 本発明は、ヒト・免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）およびＢ型肝炎ウイルス（ＨＢ Ｖ）感染の治療に関する。 本明細書の用語「治療」は、適宜、予防を包含する。 ＥＰ−Ａ−１４１９２７（Beecham Group p.l.c.）には、ペンシクロビル（Ｐ ＣＶ）、すなわち式（Ａ）の化合物： ならびにその塩、リン酸エステルおよびアシル誘導体が、抗ウイルス剤として開 示されている。ペンシクロビルのナトリウム水和物はＥＰ−Ａ−２１６４５９（ Beecham Group p.l.c.）に開示されている。ペンシクロビルおよびその抗ウイル ス活性は、Abstracts of 14th Int.Congress of Microbiology,Manchester,Engl and 7-13 September 1986のAbstract P.V11-5の193頁（Boydら）にも開示されて いる。 式（Ａ）の化合物の経口的に活性のある生物学的前駆体は、式（Ｂ）： で示される化合物ならびにその塩および式（Ａ）で定義されたのと同様の誘導体 であり、ＸはＣ_{1 〜6}アルコキシ、ＮＨ₂または水素である。ＸがＣ_{1 〜6}アルコキ シまたはＮＨ₂である式（Ｂ）の化合物はＥＰ−Ａ−１４１９２７に開示されて おり、ＥＰ−Ａ−１８２０２４（Beecham Group p.l.c.）に開示されているＸが 水素である式（Ｂ）の化合物は好ましいプロドラッグである。化合物（Ｂ）の特 に好ましい例は、ＥＰ−Ａ−１８２０２４の実施例２に記載されている、Ｘが水 素であり、２個のＯＨ基がともにアセチル誘導体である化合物であり、以下、こ れをファムシクロビルという。 ＥＰ−Ａ−３８８０４９（Beecham Group p.l.c.）には、Ｂ型肝炎感染の治療 におけるペンシクロビル／ファムシクロビルの使用が開示されている。 Ｂ型肝炎ウイルスに対する抗ウイルス活性は、ペンシクロビルトリホスフェー ト（ＰＣＶ−ＴＰ）の細胞内生成に依存するように思われる。ＨＢＶポリメラー ゼは多くの酵素活性を有しており、ポリメラーゼとｄＧＭＰとの間の共有結合の 形成、Ｔ−Ａ−Ａ付加後のＲＮＡ指向ＤＮＡポリメラーゼ（逆転写酵素）および ＤＮＡ指向ＤＮＡ合成が包含される。 ペンシクロビルのトリホスフェート誘導体は、ヒトのＩ型免疫不全ウイルス（ ＨＩＶ−１）のＲＮＡ指向ＤＮＡポリメラーゼ（逆転写酵素）活性を阻害する。 ＨＩＶ−１の逆転写酵素は、ゲノムＲＮＡのプロウイルスｄｓ−ＤＮＡへの変換 に必須の、ウイルスによりコードされている酵素である。 ＰＣＶ−ＴＰの（Ｒ）−エナンチオマーは、ＨＢＶ ＤＮＡポリメラーゼの阻 害およびＨＩＶ−１逆転写酵素の阻害という点で（Ｓ）−エナンチオマーよりも 活性があることが示されている。 したがって、本発明は、 ｉ）ヒトを包含する哺乳動物におけるＨＩＶ−１感染；または ｉｉ）ヒトを包含する哺乳動物におけるＨＢＶ感染 の治療方法をであって、かかる治療を必要とするヒトに有効量の式（Ａ）の化合 物： のトリホスフェートの（Ｒ）−エナンチオマーまたはその医薬上許容される塩を 投与することを特徴とする方法を提供する。 （Ｒ）−ＰＣＶ−ＴＰは、細胞壁に吸収され透過することのできる生物学的前 駆体である化合物として投与される。ウイルス感染細胞、特にＨＩＶ感染細胞に 対する選択性は、ウイルスによりコードされているプロテアーゼにより優先的に 活性化される生物学的前駆体を選択することによって達成される。生物学的前駆 体は、細胞内で（Ｒ）−ＰＣＶ−ＭＰ（後に（Ｒ）−ＰＣＶ−ＴＰに変換される ）を遊離する（Ｒ）−ＰＣＶ−ＭＰの誘導体の形態であってもよい。 化合物を経口ルートでヒトに投与してもよく、化合物をシロップ、錠剤または カプセルの形態にしてもよい。錠剤の形態の場合、かかる固体調合物の処方に適 した医薬担体、例えば、ステアリン酸マグネシウム、澱粉、ラクトース、グルコ ース、米粉、小麦粉および胡粉を用いてもよい。化合物は、摂食可能カプセル形 態、例えば、化合物の入ったゼラチンカプセル、またはシロップ、溶液もしくは 懸濁液の形態であってもよい。適当な液体医薬担体は、エチルアルコール、グリ セリン、セイラインおよび水を包含し、シロップを製造するために香料または着 色料をそれらに添加してもよい。除放処方、例えば、腸溶コーティングを有する 錠剤も考えられる。 非経口投与には、化合物および滅菌担体を含有する液体の１回分の剤型を調製 する。担体および濃度に応じて化合物を懸濁または溶解することができる。通常 には、化合物を担体に溶解し、フィルター滅菌してから適当なバイアルまたはア ンプルに充填して密封することにより非経口溶液を調製する。有利には、局所麻 酔剤、保存料および緩衝剤のごときアジュバントも担体に溶解する。安定性を向 上させるために、組成物をバイアルに充填した後凍結して減圧下で水分を除去す ることができる。 化合物を担体に溶解するかわりに懸濁すること、および滅菌担体に懸濁する前 に化合物をエチレンオキシドにさらして滅菌すること以外は実質的に同じ方法で 非経口懸濁液を調製する。有利には、界面活性剤または湿潤剤を組成物に含有さ せて本発明化合物の均一な分散を容易にする。 通常の慣習であるが、関連する医学的治療における使用についての手書きまた は印刷された説明書を組成物に添付する。 適当な１回分の用量は、５０ｍｇないし１ｇ、例えば、１００ｍｇないし５０ ０ｍｇの有効成分を含有していてもよい。かかる用量を１日１回ないし４回、普 通には１日２回または３回投与してもよい。一般的には、化合物の効果的な用量 は、１日に体重１ｋｇあたり０.１ｍｇないし４０ｍｇの範囲であり、より通常 には１日に１０ｍｇないし２０ｍｇ／ｋｇである。 また本発明は、下記治療： ｉ）ヒトを包含する哺乳動物におけるＨＩＶ−１感染；または ｉｉ）ヒトを包含する哺乳動物におけるＨＢＶ感染 に用いる医薬の製造における、式（Ａ）の化合物のトリホスフェートの（Ｒ）− エナンチオマーまたはその生物学的前駆体の使用を提供する。 かかる治療を上記方法で実行してもよい。 さらに本発明は、下記治療： ｉ）ヒトを包含する哺乳動物におけるＨＩＶ−１感染；または ｉｉ）ヒトを包含する哺乳動物におけるＨＢＶ感染 に用いる医薬組成物であって、有効量の式（Ａ）の化合物のトリホスフェートの （Ｒ）−エナンチオマーまたはその生物学的前駆体、および医薬上許容される担 体を含んでなる医薬組成物を提供する。 かかる組成物を上記方法で製造してもよい。 （Ｒ）−ＰＣＶ−ＴＰの活性を説明する生物学的データは、Shawらにより、Zo ulinら'Abstracts of the 35th Interscience Cenference on Antimicrobial Agents and Chemotherapy'17-20 September 1995,H13,p182およびH36,p191によ り、およびSciniziら'Antiviral Reaearch 1995,Supplement 1,146,A304により 、また英国特許出願第９６０４９０９.３号（本願が優先権主張している）とと もに提出されたZoulinらの添付草稿およびSchinaziの文献を支持して提示された ポスターからの添付抄録にも記載されている。 下記実施例は、式（Ａ）の化合物のトリホスフェートの（Ｒ）−エナンチオマ ーの生物学的前駆体について説明する。実施例１、２および５はＨＢＶ治療にお いて潜在的に興味あるものであり、実施例３および４はＨＩＶ−１治療において 潜在的に興味あるものである。 実施例１ ＰＬ−ＡＳＯＲ誘導体 ヒドロキシル基上に保護基を有するＰＣＶ誘導体の（Ｓ）エナンチオマーをリ ン酸化し、次いで、保護基を除去して（Ｒ）−ＰＣＶ−ＭＰを得る。Drug Deliv ery 2,136,1995に記載されたような手順により（Ｒ）−ＰＣＶ−ＭＰを活性化し 、ＰＬ−ＡＳＯＲにカップリングさせる。得られた抱合体は蛋白分子１個あたり 複数の（Ｒ）−ＰＣＶ−ＭＰ残基を有しうる。 実施例２ リン脂質誘導体 （Ｒ）−ＰＣＶ−ＭＰまたはその保護形態（実施例１のごとく調製）を、アル キル化によりこの誘導体に変換するか、あるいはリン酸基を活性化し、保護形態 の脂質にカップリングさせ、次いで、脱保護する。 実施例３ （Ｒ）−ＭＰ Ｂｉｓ（ＰＯＭ）誘導体 （Ｒ）−ＰＣＶ−ＭＰまたはその保護形態（実施例１のごとく調製）を、J．P harmaceutical Sci.72,324-325,1983またはJ.Med.Chem.38,1372-1379,1995の手 順により、塩化ピバロイルオキシメチルを用いるアルキル化によりｂｉｓ（ＰＯ Ｍ）誘導体に変換し、次いで、存在する保護基を除去してもよい。 実施例４ （Ｒ）−ＭＰジフェニルエステル ヒドロキシル基上に保護基を有するＰＣＶ誘導体の（Ｓ）エナンチオマーをジ フェニルホスホロクロリデートで処理し、保護基を除去する。 実施例５ ジミリストイルグリセロールジホスフェート誘導体 （Ｒ）−ＰＣＶ−ＭＰまたはその保護形態（実施例１のごとく調製）を、活性 化形態のｓｎ−１,２−ジミリストイルグリセロールリン酸とカップリングさせ 、次いで、存在する保護基を除去してもよい。 記載例１−（Ｒ）−ＰＣＶホスフェートの調製 （Ｒ）−ペンシクロビルトリホスフェート１ａの逆合成分析（retrosynthetic analysis）によりモノ保護シントン２ａスキーム１を得る。さらなる切断を行っ てキラルフラグメント３ａおよび２−アミノ−６−クロロプリン４を得る。モネ ンシンの全合成におけるKishiらの方法²によれば、シントン３ａの合成等価物は ウレタン５ａである。類 推すると、（Ｓ）ペンシクロビルトリホスフェート１ｂの合成にはウレタン５ｂ が出発物質として必要である。ウレタン５ａおよび５ｂは、（Ｒ）−および（Ｓ ）−１−（３−ヒドロキシメチルピロリジン−１−イル）シトシンの合成³に用 いられている。 Ｒ₁およびＲ₂は適当な保護基であり、Ｘは良好な脱離基である。 ジアステレオマーであるウレタン５ａおよび５ｂは中圧カラムクロマトグラフ ィーにより分離され、両方の場合において分析用順相クロマトグラフィーにより ８６％ d.e.であることが示された。ウレタン５ａおよび５ｂのＬＡＨでの還元 により、モノ−ベンジルエーテル６ａおよび６ｂが得られた²。左旋性モノ−ベ ンジルエーテル６ａの旋光度（α_D ²²−１２.４°(ｃ＝１.００,クロロホルム)； 文献値²α_D ²²−１２.１°（ｃ＝０.６８,クロロホルム））から、すでにＳ立体 配置であることがわかっている。立体的に大きなｔ−ブチルジフェニルシリル基 を用いてモノ−ベンジルエーテル６ａおよび６ｂをシリル化して７ａおよび７ｂ を得て、後の工程において起こり得るシリル移動（silyl migration）を回避し た。まず、オレフィン７ａおよび７ｂを良好な収率でオゾン化してアルデヒド８ ａ（収率７８％）および８ｂ（収率９１％）とし、次いで、還元してＤｉｂａｌ −Ｈを有するアルコール９ａおよび９ｂとした。 （Ｒ）−ペンシクロビルトリホスフェート１ａの合成のために、アルコール９ ａを中程度の収率で臭化物１０ａに変換した（Ｂｒ₂,ＰＰｈ₃,ＤＭＦを用いて収 率４７％）。文献条件下⁴での２−アミノ−６−クロロプリン４の臭化物１０ａ を用いるアルキル化を行い、主生成物Ｎ−９アルキル化ヌクレオシド１１ａ（収 率７５％）を得て、カラムクロマトグラフィーにより不要なＮ−７異性体１２ａ （収率１４％）から分離した。付加の位置化学は、１２ａのデカップリングして いない¹³Ｃ ＮＭＲスペクトル⁵により簡単に確認された。１１ａの光学的純度は キラルＨＰＬＣによる分析には適さなかった。しかしながら、酸加水分解による １１ａのシリル保護基の除去により、クロロプリン１３ａ（収率４２％,９３％ e.e.）のみならずいくぶんかの所望グアノシンヌクレオシド１４ａ（収率２３％ ,Ｈ９４／０２２３％ e.e.）が得られ、それらは両方ともキラルＨＰＬＣ分析に 適するものであった。長時間の酸加水分解により、クロロプリン１３ａはグアノ シンヌクレオシド１４ａ（収率７５％）に円滑に変換された。リン酸化剤２−ク ロロ−４Ｈ−１,３,２−ベンゾジオキサホスホリン−４−オン（van Boom試薬） はすでにオリゴヌクレオチド合成におけるシントンとしてヌクレオシドＨ−ホス ホネートの調製に使用されている⁶。van Boom試薬、次いで、ヌクレオシドトリ ホスフェート合成⁷のための文献記載条件⁸と類似の条件を用いてヌクレオシド１ ４ａ（９０％ e.e.）のホスフィチレーションを行った。次い で、ホスフィチル化中間体をピロリン酸トリ−ｎ−ブチルアンモニウムと反応さ せ、次いで、ヨウ素を用いる酸化により粗ベンジル保護ヌクレオチドトリホスフ ェート１５ａを得た。最後に、転移水素化法（transfer hydrogenation）を用い ることにより、１５ａからのベンジル保護基の除去を可能にし、トリホスフェー ト基の完全加水分解を回避する条件が見いだされた。偶然にも、分析用アニオン 交換ＨＰＬＣにより、１５ａからのベンジル基の加水分解をモニターすることが でき、（Ｒ）−ペンシクロビルトリホスフェート１ａのみならず（Ｒ）−ジホス フェート１６ａおよび（Ｒ）−モノホスフェート１７ａが得られた。後者の２種 のペンシクロビルヌクレオチドは、転移水素化反応条件下でのトリホスフェート 基の加水分解の結果として得られた。 まずアルコール９ｂをメシレート９ｃに変換し、次いで、ヨウ化物１０ｂに変 換すること以外は（Ｒ）−トリホスフェート１ａの合成について説明した条件と 本質的に同じ条件下で（Ｓ）−トリホスフェート１ｂの合成を行った。２−アミ ノ−６−クロロプリン４の１０ｂでのアルキル化は、さらにＮ−９付加物１１ｂ を主生成物として生じ、少量の不要なＮ−７付加物１２ｂも一緒に生じた。１１ ｂの酸加水分解により少量の６−クロロプリン１３ｂ（収率６％）が得られたが 、主に所望グアノシンヌクレオシド１４ｂ（収率８５％）が得られた。 van Boom試薬での１４ｂ（９０％ e.e.）のホスフィチレーション、次いで、 ピロリン酸トリ−ｎ−ブチルアンモニウム、さらにヨウ素との反応、により粗ト リホスフェート１５ｂを得た。再び１５ｂの転移水素化を分析用アニオン交換Ｈ ＰＬＣによりモニターして所望の（Ｓ）−ペンシクロビルトリホスフェート１ｂ のみならず（Ｓ）−ジホスフェート１６ｂおよび（Ｓ）−モノホスフェート１７ ｂを得た。すべての（Ｒ）−および（Ｓ）−ペンシクロビルホスフェートの旋光 度の結果を表１に示す。各エナンチオマーのペアーについて、旋光度の強度およ び符号は本質的に等しく逆であった。このことにより、転移水素化条件下におい て前駆体１４ａおよび1４ｂからのキラル完全性はほとんど失われないか、失わ れず、両方の場合において９０％ e.e.であり、それゆえ、１ａ、１ｂ、１６ａ 、１６ｂ、１７ａおよび1７ｂの光学的純度は各場合において約９０％e.e.であ った。 方法Ａ： Spherisorbシリカ（２５０ｘ５.０ｍｍ）。バッファーＡ,ヘキサン；バッファ ーＢ,ヘキサン：塩化メチレン（１：１）；バッファーＣ,ヘキサン：エタノール （８０：２０）。イソクラチック溶離液 ４０％Ａ：５９％Ｂ：１％Ｃ,１.００ ｍｌ／分。２２０ｎｍにおけるＵ.Ｖ.検出。 保持時間 ５ａ（主ピーク９.４８分、小ピーク８.９８分）、５ｂ（主ピーク ９.２３分、小ピーク９.６９分）。 方法Ｂ： Merck RPセレクトB（１２５ｘ４ｍｍ）。バッファーＡ,水中ＴＦＡ（０.１％ ）；バッファーＢ,アセトニトリル中ＴＦＡ（０.１％）。溶離液,４０分でＢを ５％から８０％まで、次いで、Ｂを８０％として１０分。流速２.００ｍｌ／分 。２１５ｎｍにおけるＵ.Ｖ.検出。 方法Ｃ： Chiralpak AD（２５０ｘ４.６ｍｍ）。イソクラチック溶離液 ヘキサン：エ タノール（７：３）,１.００ｍｌ／分。２２０ｎｍにおけるＵ.Ｖ.検出。 方法Ｄ： Chiralpak AD（２５０ｘ４.６ｍｍ）。イソクラチック溶離液 ０.１％ＤＥＡ を含有するヘキサン：エタノール（１：１）,１.０ｍｌ／分。２４０ｎｍにおけ るＵ.Ｖ.検出。 方法Ｅ： Chiracel OB（２５０ｘ４.６ｍｍ）。イソクラチック溶離液 ヘキサン：エタ ノール（９８：２）,１.００ｍｌ／分。２２０ｎｍにおけるＵ.Ｖ.検出。 方法Ｆ： Chiracel OC（２５０ｘ４.６ｍｍ）。イソクラチック溶離液 ０.１％ＴＦＡ を含有するヘキサン：エタノール（９５：５）,１.００ｍｌ／分。２２０ｎｍに おけるＵ.Ｖ.検出。 方法Ｇ： Rainin Hydropore SAX（１００ｘ４.６ｍｍ、プレカラム付き）１２μｍ。バ ッファーＡ,リン酸アンモニウム：メタノール（９：１,１０ｍＭ,ｐＨ５.７）、 バッファーＢ,リン酸アンモニウム：メタノール（９：１,１２５ｍＭ,ｐＨ５.７ ）。グラジエント溶離液 ２５分でＢを０％から２５％まで、１.００ｍｌ／分 。２５４ｎｍにおけるＵ.Ｖ.検出。 ２−ベンジルオキシメチル−４−ペンテン−１−オール（６） アルゴン下の氷浴で冷却されているジメチルホルムアミド（５０ｍｌ）中の水 素化ナトリウム（４.７６５ｇ,１１９.１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ジメチルホ ルムアミド（７５ｍｌ）中の２−ヒドロキシメチル−４−ペンテン−１−オール⁸ （１１.０７ｇ,９５.３ｍｍｏｌ）の溶液を２０分かけて滴下した。冷浴を除去 し、１時間撹拌してから溶液を氷浴で再冷却した。ジメチルホルムアミド（７５ ｍｌ）中の臭化ベンジル（１１.３４ｍｌ,９５.３ｍｍｏｌ）の溶液を５分かけ て添加し、室温で１８時間撹拌後、反応混合物をブライン（１.５Ｌ）中に注ぎ 、ジエチルエーテル（４ｘ３００ｍｌ）で抽出した。有機フラクションを水（２ ｘ１.０Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧濃縮してうす褐 色油状物質（１７.４０ｇ）を得た。１０％ ジエチルエーテル：ヘキサンから１ ００％ジエチルエーテルまでのグラジエントを用いるシリカゲルクロマトグラフ ィーにより粗油状物質を精製して油状物質を得た（１１.３０ｇ,５７.５％）；¹ Ｈ ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ,ＣＤＣｌ₃）δ７.５３から７.３７（５Ｈ,ｍ）芳香族 ；５.９０（１Ｈ,ｄｄｔ）,５.１５（２Ｈ,ｍ）,４.６７（１Ｈ,ｄ）,４.６２（ １Ｈ,ｄ）,３.８９から３.６９（３Ｈ,ｍ）,３.６２（１Ｈ,ｄｄ）,２.３８（１ Ｈ,ｂｓ）,２.２３（２Ｈ,ｄｄｄ）,２.０９（１Ｈ,ｍ）；¹³Ｃδ（６７.８ＭＨ ｚ,ＣＤＣｌ₃）１３８.００,１３６.２６,１２８.４８,１２７.７６,１２７.６ ３,１１６.５６,７３.４７,７３.３４,６５.７３,４０.３７,３２.７９；ｍ／ｚ （ＣＩ）２０７（ＭＨ⁺）；Ｃ₁₃Ｈ₁₈Ｏ₂として計算値Ｃ ７５.６９,Ｈ ８.８０ 実測値Ｃ ７５.３０,Ｈ ８.８４。 （Ｒ）−（＋）および（Ｓ）−（−）−２−ベンジルオキシメチル−４−ペンテ ン−１−オール 窒素下のトリエチルアミン（４０ｍｌ、新たにＰ₂Ｏ₅を留去）中の（±）−２ −ベンジルオキシメチル−４−ペンテン−１−オール（８.５２ｇ,４１.３ｍｍ ｏｌ）の撹拌溶液に、（Ｒ）−（−）−１−（１−ナフチル）エチルイソシアネ ート（８.００ｇ,４０.５６ｍｍｏｌ）を添加した。１６時間後、混合物を濾過 し、固体をヘキサンで洗浄した。濾液を減圧濃縮してうす黄色物質を得た（１５ .４６ｇ）。塩化メチレン：ヘキサン：ジエチルエーテル（１０：１０： １）で溶離する徹底的なシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより、早く移動 するジアステレオマー（５ａ）（５.１５ｇ,３０.９ｇ）を得て、分析用順相Ｈ ＰＬＣ（方法Ａ）により８６％ d.e.であることが示された。おそく移動するジ アステレオマー（５ｂ）（５.４９ｇ,３２.９％）もＨＰＬＣ（方法Ａ）により ８６％ d.e.であることが示された。ジエチルエーテル（２５０ｍｌ）中の早く 移動するジアステレオマー（５ａ）（５.１５ｇ,１２.７６ｍｍｏｌ）の溶液に 、固体水素化アルミニウムリチウム（４８４ｍｇ,１２.７６ｍｍｏｌ）を添加し 、混合物を２４時間還流した。水浴で混合物を冷却し、水（０.４３ｍｌ）を添 加し、次いで、水酸化ナトリウム溶液（２.５ｍ,０.８５ｍｌ）を添加し、最後 にさらに水（１.０６ｍｌ）を添加した。室温で２０分撹拌後、混合物をセライ トで濾過し、濾液を減圧濃縮して透明油状物質（４.８９ｇ）を得た。塩化メチ レン：ヘキサン：ジエチルエーテル（５：５：１）から（５：５：２）までのグ ラジエントで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製を行って （Ｓ）−（−）−２−ベンジルオキシメチル−４−ペンテン−１−オール（６ａ ）（１.９７ｇ,７５％）を得た。同様にして、おそく移動するジアステレオマー （５ｂ）（５.４９ｇ,１３.６ｍｍｏｌ）を水素化アルミニウムリチウムで還元 して（Ｒ）−（＋）−２−ベンジルオキシメチル−４−ペンテン−１−オール（ ６ｂ）（２.５３５ｇ,９０.３％）を得た。 （Ｓ）−（−）−２−ベンジルオキシメチル−４−ペンテン−１−オール（６ａ ） ジエチルエーテル中のＴＬＣにおいて早く移動するジアステレオマー（５ａ） の水素化アルミニウムリチウム還元により得た。［α_D ²²−１２.４４°（クロロ ホルム,ｃ＝１.００）］、［文献値α_D ²²−１２.１°（ｃ＝０.６８,クロロホル ム）］。キラルＨＰＬＣ（方法Ｅ）による光学的純度、保持時間。 （Ｒ）−（＋）−２−ベンジルオキシメチル−４−ペンテン−１−オール（６ｂ ） ジエチルエーテル中のＴＬＣにおいておそく移動するジアステレオマー（５ｂ ）の水素化アルミニウムリチウム還元により得た。キラルＨＰＬＣ（方法Ｅ）に よ る光学的純度％、保持時間。上記コメント参照。 （Ｓ）−２−ベンジルオキシメチル−１−Ｏ−（１−ブチルジフェニルシリル） −４−ペンテン（７ｂ） アルゴン下のジメチルホルムアミド（２５ｍｌ）中の（Ｒ）−（＋）−アルコ ール（６ｂ）（１.６７ｇ,％ e.e.,８.１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、イミダゾー ル（１.２１３ｇ,１７.８ｍｍｏｌ）、次いで、ｔ−ブチルジフェニルクロロシ ラン（２.４４８ｇ,８.９ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で１６時間撹拌 し、次いで、希ブライン中に注ぎ、塩化メチレンで抽出した。有機フラクション を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧濃縮して無色油状物質（４.１８ｇ） を得た。ヘキサン中１％ジクロロエーテルで溶離するシリカゲルカラムクロマト グラフィーにより７ｂを透明油状物質として得た（３.４３ｇ,９５％）。 （Ｒ）−２−ベンジルオキシメチル−１−Ｏ−（ｔ−ブチルジフェニルシリル） −４−ペンテン（７ａ） 上記方法と同様にして（Ｓ）−（−）−アルコール（６ａ）（１.７１ｇ,８. ９０ｍｍｏｌ）をシリル化し、その後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーに より７ａを透明油状物質として得た（２.０７ｇ,８３％）。¹Ｈ ＮＭＲ（２００ ＭＨｚ,ＣＤＣｌ₃）δ上記参照。 （Ｒ）−２−ベンジルオキシメチル−１−Ｏ−（ｔ−ブチルジフェニルシリル） ブタン−４−アール（８ａ） −７０℃の塩化メチレン（６０ｍｌ）中のシリル保護オレフィン（１.３２ｇ, ２.９９ｍｍｏｌ）（７ａ）の溶液にオゾンガスを吹き込んだ。１０分後、ＴＬ Ｃにより、すべての出発物質が消費されたことが示され、次いで、出てくるガス にオゾンが含まれなくなるまでアルゴンを溶液に吹き込んだ。次いで、ＤＣＭ（ １０ｍｌ）中のトリフェニルホスフィン（０.９４ｇ,３.５９ｍｍｏｌ）の溶液 を添加し、放置してゆっくりと室温まで暖めた。１６時間後、混合物を減 圧濃縮してうす黄色油状物質（３.６０６ｇ）を得た。ヘキサン中２％ジエチル エーテルからヘキサン中１０％ジエチルエーテルまでのグラジエントで溶離する シリカゲルクロマトグラフィーにより標記化合物（８ａ）を油状物質として得た （１.０３ｇ,７８％）。¹Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ,ＣＤＣｌ₃）δ９.７５（１ Ｈ,ｔ）,７.６１（４Ｈ,ｂｄ）,７.４２から７.２２（１１Ｈ,ｍ）,４.４５（２ Ｈ,ｓ）,３.６７（２Ｈ,ｍ）,３.５５（１Ｈ,ｄｄ）,３.４５（１Ｈ,ｄｄ）,２. ５２（３Ｈ,ｂｓ）,１.０３（９Ｈ,ｓ）。 （Ｓ）−２−ベンジルオキシメチル−１−Ｏ−（ｔ−ブチルジフェニルシリル） −ブタン−４−アール（８ｂ） 同様の方法で、アルゴン下の内部温度−６８℃の塩化メチレン（１５０ｍｌ） 中のオレフィン（７ｂ）（３.３１５ｇ,７.４６ｍｍｏｌ）の溶液にオゾンガス を吹き込んだ。１５分後、溶液が青色になった。出てくるガスにオゾンが含まれ なくなるまでアルゴンを溶液に吹き込んだ。３０分後、ＤＣＭ（３０ｍｌ）中の トリフェニルホスフィンの溶液を添加し、放置してゆっくりと室温まで暖め、６ ４時間撹拌した。上記のごとく精製して透明油状物質として得た（３.０３ｇ,９ ０％）。 （Ｒ）−２−ベンジルオキシメチル−１−Ｏ−（ｔ−ブチルジフェニルシリル） −ブタン−１−オール（９ａ） アルゴン下の−７０℃の塩化メチレン（５０ｍｌ）中のアルデヒド（８ａ）（ ２.１３２ｇ,４.８０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、塩化メチレン中の水素化ジイソ ブチルアルミニウムの溶液（１.０Ｍ,５.３０ｍｌ）を５分かけて滴下した。− ７０℃で１時間後、ＴＬＣにより、すべての出発物質が消費されたことが示され た。次いで、酢酸エチル（１.７７ｍｌ）を添加し、さらに水（１.６ｍｌ）を添 加し、冷浴を除去し、水浴と交換した。２０分後、炭酸水素ナトリウム（６２９ ｍｇ,７.４９ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を２.５時間撹拌した。濾過により固 体を除去し、塩化メチレンで洗浄した。濾液を減圧濃縮して９ａを透明 油状物質として得て（２.２ｇ,１０３％）、これをさらに精製することなく使用 した。¹Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ,ＣＤＣｌ₃）δ７.６４（４Ｈ,ｂｍ）,７.４４ から７.２５（１１Ｈ,ｍ），４.４８（２Ｈ,ｓ），３.６５（４Ｈ,ｍ），３.６ ０（１Ｈ,ｄｄ），３.４５（１Ｈ,ｄｄ），２.７３（１Ｈ,ｂｔ），２.０２（１ Ｈ,ｍ），１.６７（２Ｈ,ｍ），１.０４（９Ｈ,ｓ）。 （Ｓ）−２−ベンジルオキシメチル−１−Ｏ−（ｔ−ブチルジフェニルシリル） −ブタン−１−オール（９ｂ） アルゴン下の−６８℃のＤＣＭ（７１ｍｌ）中の粗アルデヒドに、シリンジを 介してｄｉｂａｌ−Ｈを５分間添加した。４.２５時間後、ＴＬＣにより、すべ ての出発物質が消費されたことが示され、ＥｔＯＡｃ（２.５０ｍｌ）を添加す ることにより反応を不活性化した。冷浴を除去し、水浴と交換し、混合物をさら に０.５時間撹拌した。固体炭酸水素ナトリウム（０.８９３ｇ,１０.６３ｍｍｏ ｌ）を添加し、さらに１時間撹拌した。濾過により固体を除去し、塩化メチレン で洗浄した９ｂを粗油状物質として得て（２.８９ｇ,９５％）、さらに精製する ことなく使用した。 （Ｒ）−２−ベンジルオキシメチル−１−Ｏ−（ｔ−ブチルジフェニルシリル） −４−ブロモブタン（１０ａ） ジメチルホルムアミド中の上記アルコール（２.１４２ｇ,４.８０ｍｍｏｌ） およびトリフェニルホスフィン（１.３８６ｇ,５.２９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に 、臭素（０.２７２ｍｌ,５.２９ｍｍｏｌ）を滴下した。室温で１６時間撹拌後 、混合物を水中に注ぎ、固体を濾過し、ヘキサンで洗浄した。水性フラクション をヘキサンで洗浄し、合わせた有機フラクションを硫酸ナトリウムで乾燥し、減 圧濃縮してうす黄色油状物質（２.９８ｇ）を得た。ヘキサン中５％から２５％ までの塩化メチレンでグラジエント溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィ ーにより標記化合物（９ａ,１.１４ｇ,４６.７％）を油状物質として得た。¹ Ｈ ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ,ＣＤＣｌ₃）δ７.６５（４Ｈ,ｍ）,７.４７から ７.２４（１１Ｈ,ｍ）,４.４８（２Ｈ,ｓ）,３.６９（２Ｈ,ｍ）,３.５３（２Ｈ ,ｍ）,３.４２（２Ｈ,ｔ）,２.１２から１.９２（３Ｈ,ｍ）,１.０４（９Ｈ,ｓ ）。 （Ｒ）−２−ベンジルオキシメチル−１−Ｏ−（ｔ−ブチルジフェニルシリル） −ブタン−４−Ｏ−メタンスルホネート（９ｃ） アルゴン下の−５℃の塩化メチレンおよびトリエチルアミン（１.３５ｍｌ， ９.６８ｍｍｏｌ）中の粗アルコール（２.８９４ｇ,６.４５ｍｍｏｌ）の撹拌溶 液に、塩化メタンスルホニル（０.６ｍｌ,７.７４ｍｍｏｌ）を７分かけて滴下 した。混合物を５℃まで暖め、さらに１.５時間撹拌し、次いで、０℃まで冷却 し、希塩酸（１.２５Ｍ）を添加した。有機相を分離し、水相を塩化メチレンで 抽出した。全有機フラクションを希炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナト リウムで乾燥し、濾過し、減圧蒸発してうす黄色油状物質（３.４０ｇ）を得て 、さらに精製することなく使用した。¹Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ）δ７.６３（ ４Ｈ,ｍ）,７.４５から７.２３（１１Ｈ,ｍ）,４.４７（２Ｈ,ｓ）,４.２６（２ Ｈ,ｄｔ）,３.６８（２Ｈ,ｍ）,３.５２（２Ｈ,ｍ）,２.８８（３Ｈ,ｓ）,２.０ １（１Ｈ,ｍ）,１.８８（２Ｈ,ｍ）,１.０４（９Ｈ,ｓ）。 （Ｒ）−２−ベンジルオキシメチル−１−Ｏ−（ｔ−ブチルジフェニルシリル） −４−ヨード−ブタン（１０ｂ） アルゴン下のアセトン（６０ｍｌ）中のメシレート（９ｃ）（３.４０ｇ）（ ６.４５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ヨウ化ナトリウム（１.９３４ｇ,１２.９ｍｍ ｏｌ）を添加した。次いで、混合物を還流下で３.５時間加熱し、室温まで冷却 し、減圧濃縮した。塩化メチレンおよび水を添加し、分離させ、水相を塩化メチ レンで逆抽出した。有機相を分離し、水相をまずメタ重硫酸ナトリウムで、次い で、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧除去してうす黄 色油状物質（３.３９１ｇ）を得た。ヘキサン中２％ジエチルエーテルからヘキ サン中５％ジエチルエーテルまでのグラジエントで溶離するシリカゲルカラ ムクロマトグラフィーにより標記化合物（１０ｂ）（２.７４０ｇ,７６％）を透 明油状物質として得た。¹Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ,ＣＤＣｌ₃）δ７.６３（４ Ｈ,ｍ）,７.４５から７.２２（１１Ｈ,ｍ）,４.４７（２Ｈ,ｓ）,３.６９（２Ｈ ,ｍ）,３.５４（２Ｈ,ｍ）,３.１８（２Ｈ,ｂｒ）,１.９７（３Ｈ,ｍ）,１.０４ （９Ｈ,ｓ）。 （Ｒ）−２−ベンジルオキシメチル−１−Ｏ−（ｔ−ブチルジフェニルシリル） −４−（２−アミノ−６−クロロプリン−９−イル）−ブタン（１１ａ） アルゴン下の室温のジメチルホルムアミド（９.２０ｍｌ）および２−アミノ −６−クロロプリン（０.３４０ｇ,２.００ｍｍｏｌ）中の臭化物（１０ａ）（ １.０１７ｇ,２.００ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、炭酸カリウム（０.４１５ｇ,３. ００ｍｍｏｌ）を添加した。２２時間後、反応混合物を水中に注ぎ、塩化メチレ ン：メタノール（９９：１）で抽出した。一緒にした有機抽出物をブラインで洗 浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧濃縮して黄色油状物質（１.２８ ７ｇ）を得た。塩化メチレン中１％から３％までのメタノールのグラジエントで 溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより１１ａを油状物質（０.９ ０ｇ,７５.１％）として得た。¹Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ,ＣＤＣｌ₃）δ７.６ ２（５Ｈ,ｍ），７.４８から７.２２（１１Ｈ,ｍ），５.０４（２Ｈ,ｂｓ），４ .４７（２Ｈ,ｓ），４.１０（２Ｈ,ｔ），３.６９（２Ｈ,ｄ），３.４８（１Ｈ, ｄｄ），３.３７（１Ｈ,ｄｄ），２.０９から１.７８（３Ｈ,ｍ），１.０４（９ Ｈ,ｓ）。 （Ｓ）−２−ベンジルオキシメチル−１−Ｏ−（ｔ−ブチルジフェニルシリル） −４−（２−アミノ−６−クロロプリン−９−イル）−ブタン（１１ｂ） ジメチルホルムアミド（２２.５ｍｌ）中のヨウ化物（１０ｂ）（２.４０ｇ, ４.９０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、アルゴン下で室温において２−アミノ−６− クロロプリン（８３４ｍｇ,４.９１ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（１.０１ｇ, ７.３８ｍｍｏｌ）を添加した。３０時間後、メタノール：塩化メチレン（１： ９９,２５０ｍｌ）を添加し、混合物を水（１Ｌ）中に注いだ。水性フラクショ ンをメタノール：塩化メチレン（１：９９,３ｘ２５０ｍｌ）で逆抽出した。全 有機フラクションを硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧濃縮して油状物質（ １１.０ｇ,残存ジメチルホルムアミドを含有）を得た。油状物質を塩化メチレン （２００ｍｌ）中に取り、水（１Ｌ）で洗浄した。水相を塩化メチレン（３ｘ２ ００ｍｌ）で逆抽出した。合わせた有機相を水（１Ｌ）で再度洗浄し、硫酸ナト リウムで乾燥し、濾過し、減圧濃縮して黄色油状物質（３.１６２ｇ）を得た。 ＤＣＭ、次いでメタノール：塩化メチレン（１：９９）、最後にメタノール：塩 化メチレン（１.５：９８.５）で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィー により１１ｂ（２.５０２ｇ,８５％）を５％未満のＤＭＦを含有（¹Ｈ ＮＭＲに て）する油状物質として得た。 （Ｒ）−２−ベンジルオキシメチル−１−Ｏ−（ｔ−ブチルジフェニルシリル） −４−（２−アミノ−６−アミノ−７−イル）ブタン（１２ｂ） １１ｂのシリカゲルカラム精製のおそく溶離するフラクションとして標記化合 物を得た。得られた油状物質を酢酸エチル：ヘキサンから再結晶して白色固体（ ４５７ｍｇ,１５.６％）を得た。融点１０９〜１１０℃。ＨＰＬＣ純度（方法） ９８.０％、ｍ／ｚ ６０３（Ｍ＋Ｈ）。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ− ｄ₆）８.３３（１Ｈ,ｓ）,７.５４（４Ｈ,ｍ）,７.４８から７.２３（１１Ｈ,ｍ ）,６.６１（２Ｈ,ｂｓ）,４.４２（２Ｈ,ｔ）,４.３７から４.２７（２Ｈ,ｍ） ,３.６４（２Ｈ,ｍ）,３.５０（２Ｈ,ｍ）,１.９５（１Ｈ,ｍ）,１.８３（２Ｈ, ｍ）,０.９３（９Ｈ,ｓ）。¹³Ｃ（１００.６ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ₆）１６４.２ ５,１５９.８４,１４９.１８,１４２.０３,１３８.２８,１３４.９１,１３２.８ ６,１３２.８２,１２９.７１,１２８.１０,１２７.７３,１２７.２５,１２７.２ ２,１１４.６１,７２.０６,６９.４２,６３.６４,４４.５１,３８.８３,２９.９ ２,２６.４９,１８.６５。 （Ｓ）−２−ベンジルオキシメチル−４−（２−アミノ−６−クロロプリン−９ −イル）−ブタン−１−オール（１３ａ） テトラヒドロフラン（４.０ｍｌ）中の１１ａ（１５８ｍｇ,０.２７ｍｍｏｌ ）の撹拌溶液に、アルゴン下で室温において塩酸（２Ｍ,４.０ｍｌ）を添加した 。２４時間後、過剰の飽和炭酸ナトリウムを添加した。水相を酢酸エチルで抽出 し、次いで、クロロホルムで抽出した。全有機フラクションを硫酸ナトリウムで 乾燥し、濾過し、蒸発して透明油状物質（１３５ｍｇ）を得た。塩化メチレン中 ２％から４％までメタノールを増加させるグラジエントで溶離するシリカゲルカ ラムクロマトグラフィーにより１３ａ（６０ｍｇ,６６％）を油状物質として得 た。試料をＥｔＯＡｃ：ヘキサンから再結晶して白色固体を得た。¹Ｈ ＮＭＲ（ ４００ＭＨｚ,ＣＤＣｌ₃）δ７.７４（１Ｈ,ｓ）,７.４２から７.２８（５Ｈ,ｍ ）,５.１１（２Ｈ,ｂｓ）,４.５０（２Ｈ,ｄｄ）,４.１７（２Ｈ,ｍ）,３.７５ （２Ｈ,ｄ）,３.５６（２Ｈ,ｍ）,２.４５（１Ｈ,ｂｓ）,２.０８から１.９０（ ２Ｈ,ｍ）,１.８３（１Ｈ,ｍ）。ｍ／ｚ（ＦＡＢ）３６２（Ｍ＋Ｈ）。キラルＨ ＰＬＣ（方法Ｃ）９３.６％ e.e.。 （Ｓ）−２−ベンジルオキシメチル−４−（９−グアニニル）−ブタン−１−オ ール（１４ａ） テトラヒドロフラン（１５ｍｌ）中のクロロプリン（１３ａ）の撹拌溶液に、 塩酸（２Ｍ,１５ｍｌ）を添加し、アルゴン下で６０℃において２６時間撹拌し た。反応混合物を水浴で冷却し、水酸化ナトリウム溶液（１０Ｍ）を添加してｐ Ｈ９とした。水相をメタノール：ＥｔＯＡｃ（７：９３,４ｘ３５ｍｌ）で抽出 した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧蒸発して油状物質（１５ ０ｍｇ）を得た。放置すると水相から結晶化した白色固体を濾過し、水（３ｍｌ ）、次いでジエチルエーテルで洗浄し、減圧乾燥して標記化合物（１４ａ）（１ ７５ｍｇ,５６.８％）を得た。¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ−ｄ₆）１０ .５５（１Ｈ,ｓ）,７.６６（１Ｈ,ｓ）,７.４０から７.２２（５Ｈ,ｍ）,６.４ ４（２Ｈ,ｂｓ）,４.５１（１Ｈ,ｔ）,４,４２ （２Ｈ,ｔ）,４.００（２Ｈ,ｔ）,３.４９から３.３０（４Ｈ,ｍ）,１.７６（２ Ｈ,ｑ）,１.６４（１Ｈ,ｍ）。ＨＰＬＣ純度（方法 ）９８.３％、キラルＨＰ ＬＣ（方法Ｄ）８９.６％e.e.、保持時間 主ピーク１０.３分、小ピーク６.９ 分。（Ｃ₁₇Ｈ₂₁Ｎ₅Ｏ₃−７.７ｐｐｍ,ＮＨ₃Ｃｌ）ｍ／ｚ ３４３.１６１７。塩 化メチレン中メタノールを増加させる（８〜２２％）グラジエントで溶離するシ リカゲルカラムクロマトグラフィーにより１４ａ（８７ｍｇ,２８.２％）を油状 物質として得た。 （Ｒ）−２−ベンジルオキシメチル−４−（２−アミノ−６−クロロプリン−９ −イル）−ブタン−１−オール（１３ｂ） アルゴン下、室温のＴＨＦ（６.２２ｍｌ）中の１１ｂ（２４８ｍｇ,０.４２ ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、塩酸（２.０Ｍ,６.１ｍｍｏｌ）を添加した。２６時 間後、テトラヒドロフランを減圧除去した。水相をＥｔＯＡｃ（３ｘ３０ｍｌ） で抽出し、全有機フラクションを硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧蒸発し て油状物質を得た。クロロホルム、次いでメタノールを増加（１から４％）させ るグラジエントで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより１３ｂ（ ９６ｍｇ,６３.８％）を得た。得られた油状物質を酢酸エチル：ヘキサンから再 結晶して白色固体（８６ｍｇ,５７.２％）を得た。キラルＨＰＬＣ（方法Ｃ）８ ６.２％ e.e.。 （Ｒ）−２−ベンジルオキシメチル−４−（９−グアニニル）−ブタン−１−オ ール（１４ｂ） アルゴン下、室温のテトラヒドロフラン（５６ｍｌ）中のクロロプリン（１１ ｂ）（２.２３５ｇ,３.７１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、塩酸（２.０Ｍ,５６ｍｌ ）を添加した。混合物を６５〜７０℃の範囲で２０時間加熱し、室温まで冷却し 、水酸化ナトリウム（１２.５Ｍ、約９ｍｌ）で中和してｐＨ７とした。減圧蒸 発によりテトラヒドロフランを除去した。水相を塩化メチレン（１００ｍｌ）で 抽出し、エマルジョンを得て、濾過により固体を取った。固体を塩化メ チレン（１００ｍｌ）、次いでジエチルエーテル（５０ｍｌ）で洗浄した。水相 を塩化メチレン（１００ｍｌ、固体の洗浄液から）で逆抽出した。一緒にした有 機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧濃縮して油状物質（１.６１ ６ｇ）を得た。水層をｐＨ７に合わせ、氷浴で２時間冷却した。得られた固体を 水、次いでジエチルエーテルで洗浄し、最初のクロップと一緒にした。一緒にし た固体をメタノール中に取り、濾過し、減圧濃縮して１４ｂ（９４４ｍｇ,７４. ５％）を得た。ＨＰＬＣ純度９８.２％、キラルＨＰＬＣ（方法Ｄ）８１.４％ e .e.。試料（７５５ｍｇ）を水（約９０ｍｌ）から再結晶し、放置して室温まで ゆっくりと冷却した。得られた固体を濾過し、水洗し、減圧乾燥して１４ｂ（６ ０９ｍｇ,回収率８０.７％）を得た。キラルＨＰＬＣ（方法Ｄ）８９.９％ e.e. 。保持時間 主ピーク６.７分、小ピーク１０.４分。ＨＰＬＣ純度（方法Ｂ）９ ８.９％。Ｃ₁₇Ｈ₂Ｎ₅Ｏ₃（Ｈ₂Ｏ）_0.6として、計算値Ｃ＝５７.４３；Ｈ＝６.２ ９およびＮ＝１９.７０、実測値 Ｃ＝５７.４９；Ｈ＝６.０７およびＮ＝１９. ７２。 （Ｓ）−ペンシクロビルトリホスフェート（１ｂ）、ジホスフェート（１６ｂ） およびモノホスフェート（１７ｂ） （Ｒ）−ヌクレオシド（１４ｂ）（１７４ｍｇ,０.５１ｍｍｏｌ）の懸濁液を ピリジン（２ｘ１０ｍｌ）と共沸させた。ピリジン（１.２２ｍｌ）およびジメ チルホルムアミド（４.６２ｍｌ）中の撹拌懸濁液に、ジオキサン（１.１３ｍｌ 、さらに洗浄用に０.５ｍｌ）中の２−クロロ−４Ｈ−１,３,２−ベンゾジオキ サホスホリン−４−オン（１１３ｍｇ,０.５７ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。ヌ クレオシドは即座に溶解し始め、うす黄色が観察された。１０分後、トリ−ｎ− ブチルアミン（０.５８ｍｌ）およびジメチルホルムアミド（２.９ｍｌ）中のト リ−ｎ−ブチルアミンピロホスフェート（３３６ｍｇ）の溶液を添加した。さら に１０分後、ピリジン：水（９８：２；ｖ：ｖ；１０.２ｍｌ）中のヨウ化物（ １％ ｗ／ｖ）の溶液を添加した。ヨウ化物添加から１５分後、反応物を水（８ ０ｍｌ）に注ぎ、クロロホルム（４ｘ８０ｍｌ）で抽出した。水相を減圧濃縮し て粗ベンジル保護トリホスフェート（１５ｂ）（４６０ｍｇ）を得た。水：メタ ノール（１：１,８０ｍｌ）中の粗トリホスフェート（４６０ｍｇ）に、アルゴ ン下で撹拌しながら炭素上パラジウム触媒（Johnson-Matthey,Type487L,１７４ ｍｇ）を添加した。１５分後、セライトでの濾過により触媒を除去し、熱メタノ ール：水（１：１、９０ｍｌ）で洗浄した。アルゴン下で撹拌しながらギ酸アン モニウム（１.０ｇ）およびパラジウム触媒（２０３ｍｇ）を濾液に添加した。 ９３〜１０３℃の温度で混合物を還流状態で６時間加熱した。その間反応 が５０％未満進行して、反応終結をアニオン交換ＨＰＬＣ（方法 ）により判定 した。熱反応混合物をセライトで濾過し、触媒を熱水：メタノール（１：１,２ ００ｍｌ）で洗浄した。濾液を減圧濃縮し、水（７００ｍｌ）から凍結乾燥して 白色固体（６２０ｍｇ）を得た。この固体を転移水素化条件に再び供した。粗部 分脱保護トリホスフェート（６２０ｍｇ）の溶液に。この固体を転移水素化条件 に再び供した。水：メタノール（１：１,１６０ｍｌ）中の粗部分脱保護トリホ スフェート（６２０ｍｇ）の溶液に、アルゴン下で撹拌しながらギ酸アンモニウ ム（４８０ｍｇ）およびパラジウム触媒（５０ｍｇ）を添加した。油浴温度８０ ℃で１.５時間混合物を加熱し、その後、アニオン交換ＨＰＬＣにより判定した ところ脱保護が進行したと考えられる。熱反応混合物をセライトで濾過し、触媒 を熱水：メタノール（１：１,２００ｍｌ）で洗浄した。濾液を減圧濃縮して白 色固体（９００ｍｇ）を得て、水（１ｘ５００ｍｌ、次いで１ｘ１５０ｍｌ）か ら凍結乾燥して粗１ｂ、１６ｂおよび１７ｂ（３６７ｍｇ）を得た。 その半量を精製して以下のものを得た： ５０ｍｇ ＰＣＶ.ＴＰ ４０ｍｇ ＰＣＶ.ＤＰ １０ｍｇ ＰＣＶ.ＭＰ （Ｒ）−ペンシクロビルトリホスフェート（１ａ）、ジホスフェート（１６ａ） およびモノホスフェート（１７ａ） エナンチオマー（１５ｂ）の合成について上で説明したのと同じ条件下で（Ｓ ） −ヌクレオシド（１４ａ）（１７４ｍｇ,０.５１ｍｍｏｌ）をリン酸化し、粗ベ ンジル保護１５ａに変換した。粗ベンジル化トリホスフェート（１５ａ）を水： メタノール（１：１,８０ｍｌ）中に取り、炭素上パラジウム触媒（Type487L,１ ７５ｍｇ）とともに撹拌した。２０分後、混合物をセライトで濾過し、触媒を水 ：メタノール（１：１、８０ｍｌ）で洗浄した。濾液を転移水素化脱ベンジル化 反応に用いた。アルゴン下で撹拌しながら濾液（１６０ｍｌ）にギ酸アンモニウ ム（５３０ｍｇ）および炭素上パラジウム（１５３ｍｇ）を添加した。油浴温度 を７６〜７８℃で混合物を加熱し、アニオン交換ＨＰＬＣ（方法 ）によりモニ ターした。３.５時間後、パラジウム触媒（３０５ｍｇ）を添加し、さらに５.５ 時間後、パラジウム触媒（１４２ｍｇ）を添加した。６.５時間後、反応物をセ ライトで濾過し、触媒を熱Ｈ₂Ｏ：メタノール（１：１,２００ｍｌ）で洗浄し、 濾液を減圧濃縮した。水：メタノール（１：１,１６０ｍｌ）、ギ酸アンモニウ ム（２６５ｍｇ）およびパラジウム触媒（１５０ｍｌ）に濾液を溶解した。混合 物をアルゴン下で撹拌し、７６〜７８℃の範囲の油浴で加熱した。５.５時間後 、アニオン交換ＨＰＬＣにより脱保護が完了したと思われた（≦１％（）残存） 。熱反応混合物をセライトで濾過し、熱メタノール：水（１：１,１００ｍｌ） で触媒を洗浄した。濾液を減圧濃縮し、水（２５ｍｌ）とともに共沸させて油状 物質（８３０ｍｇ）を得た。次いで、水（１ｘ３００ｍｌ、次いで１ｘ１２５ｍ ｌ）から凍結乾燥して白色固体を得た（３７６ｍｇ）。 文献 記載例２ （Ｒ）−ＰＣＶホスフェートの調製−別法 ９−（４−ヒドロキシ−３−Ｏ−モノメトキシトリチルメチルブト−１−イル） グアニン（９−Ｓおよび９−Ｒ） ９−（４−Ｏ−イソブチリル−３−ヒドロキシメチルブト−１−イル）グアニ ン（それぞれ４−Ｒ,ピーク１または４−Ｓ,ピーク２）（０.３ｇ,０.９ｍｍｏ ｌ）を高真空下で２時間乾燥し、次いで、ＤＭＦ（３ｍｌ）に溶解した。得られ た溶液に、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（０.７５ｍｌ,５. ５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で一晩放置した。反応の進行をＵＶ により追跡した（λ＝２５４ｎｍにおける吸収極大の消失、およびλ＝３０１ｎ ｍにおける新たな吸収極大の出現、エキソアミノ保護４−Ｒまたは４−Ｓに対応 ）。反応完了後、ＤＭＦを減圧蒸発し、次いで、残渣を無水ピリジン（５ｍｌ） に溶解した。得られた溶液に、モノメトキシトリチルクロリド （０.３ｇ,０.９５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温に一晩維持し、次 いで、濃ＮＨ₄ＯＨ溶液（５ｍｌ）を添加した。全反応物を一晩放置し（λ＝３ ０１ｎｍにおける吸収極大が消失）、次いで、溶媒を減圧蒸発した。油状残渣を ＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍｌ）に溶解し、溶液をＨ₂Ｏ（３ｘ５ｍｌ）で抽出した。有 機フラクションをＭｇＳＯ₄で乾燥し、次いで、ＣＨ₂Ｃｌ₂を蒸発させた。粗９ −（４−Ｏ−イソブチリル−３−Ｏ−モノメトキシトリチルメチル−ブト−１− イル）グアニン（７）をＣＨ₂Ｃｌ₂に再溶解し、次いで、ヘキサンに滴下した。 沈殿を濾過し、減圧乾燥した。収量は、７の各異性体０.３ｇであった。化合物 ７（０.３ｇ）をＤＭＦ（７.５ｍｌ）およびＣＨ₃ＯＨ（７.５ｍｌ）に溶解し、 得られた溶液に１Ｍ ＮａＯＨ（３ｍｌ）を添加してイソブチリル保護基を除去 した。室温で３時間後、反応混合物をDowex 50Wx8（ピリジニウム型）で中和し た。樹脂を濾過し、次いで、ＣＨ₃ＯＨで洗浄した。濾液および洗浄液を一緒に し、溶媒を減圧蒸発した。溶離溶媒系としてＣＨ₂Ｃｌ₂中０％から８％までのＣ Ｈ₃ＯＨのステップワイズグラジエントを用いるシリカゲルカラムクロマトグラ フィーにより粗９を精製した。９−Ｒの収量は０.１１ｇ（２５％）であり、９ −Ｓの収量は０.２６ｇ（５５％）であった。 ９−Ｒ：ＴＬＣ（ＣＨ₂Ｃｌ₂／ＣＨ₃ＯＨ,９：１）Ｒ_f０.１２；ＵＶ（９５％Ｃ₂ Ｈ₅ＯＨ）、λ_max２３５、λ_min２２４、λ_sh２４６,２６３；９−Ｓ：ＴＬＣ （ＣＨ₂Ｃｌ₂／ＣＨ₃ＯＨ,９：１）Ｒ_f０.１２；ＵＶ（９５％Ｃ₂Ｈ₅ＯＨ）、λ_max ２３５、λ_min２２４、λ_sh２４３,２６３。 注：ＭＭＴｒＰＣＶ（９）を、グアニンエキソアミノ基保護ありおよびなしの両 方で合成した。それらの収率は同様であった。 ９−（４−ヒドロキシ−３−ヒドロキシメチル−ブト−１−イル）グアニントリ ホスフェート（１０−Ｒおよび１０−Ｓ） ９−（４−ヒドロキシ−３−Ｏ−モノメトキシトリチルメチル−ブト−１−イ ル）グアニン（９−Ｓまたは９−Ｒ）（６０ｍｇ,０.１１ｍｍｏｌ）を室温で減 圧乾燥し、次いで、撹拌棒を入れた反応フラスコ中にＤＭＦ（３.６ｍｌ）およ び無水ピリジン（１.２ｍｌ）を隔壁を通して注入した。すべての操作の間、窒 素を充填したバルーンに接続することにより、わずかに陽圧の窒素を反応容器に 維持した。新たに調製した無水ジオキサン（０.５５ｍｌ）中の２−クロロ−４ Ｈ−１,２,３−ジオキサホスホリン−４−オン（５）の１Ｍ溶液を、十分に撹拌 されている９の溶液中に注入した。１５分後、無水ＤＭＦ（１.５ｍｌ）中のビ ス（トリ−ｎ−ブチルアンモニウム）ピロホスフェート（６）の０.５Ｍ溶液、 次いで、トリ−ｎ−ブチルアミン（１ｍｌ）を素早く注入した。１５分後、反応 混合物を２つの等しい部分に分け（各３.９ｍｌ）、一方に水含有ピリジン／Ｔ ＨＦ中のヨウ素の２５％溶液を添加し、ヨウ素を過剰とした。１５分後、２〜３ 滴の５％ＮａＨＳＯ₃水溶液を添加することにより過剰のヨウ素を破壊した。残 渣をＨ₂Ｏ（５ｍｌ）に再溶解した。室温で３０分放置後、溶液を蒸発乾固させ 、次いで、８０％ ＡｃＯＨ（２５ｍｌ）を添加した。反応混合物を室温に０.５ 時間維持し、次いで、ＡｃＯＨをｎ−ＢｕＯＨとともに共沸させて乾固させた。 残渣を水（８ｍｌ）で処理し、得られた懸濁液をＣＨ₂Ｃｌ₂（３ｘ２ｍｌ）で抽 出した。生成物を含有するＨ₂Ｏフラクションを分離し、Acrodisc LC13PVDF（０ .４５μｍ,Gelman）で濾過した。HiLoad 26/10,Q Sepharose Fast Flow Pharmac iaカラムを用いるＦＰＬＣにより粗ＰＣＶＴＰを精製した。０.０５Ｍから０.７ ＭまでのＴＥＡＢバッファー（ｐＨ７.０）のグラジエント（流速１０ｍｌ／分 ）でカラムを溶離した。生成物を含むフラクションを集め、凍結乾燥した。ＰＣ Ｖトリホスフェート１０−Ｒおよび１０−Ｓの収量は、それぞれ９０Ａ₂₆₀ユニ ット（^εＰＣＶＴＰ＝１１.５ｘ１０³と仮定して約３.５ｍｇ）であった。１０ −Ｒ：ＵＶ（Ｈ₂Ｏ）λ_max２５３、λ_sh２６２；ＨＰＬＣ(カラム:４.６ｘ１０ ０ｍｍ,Rainin Hydropore SAX、グラジエント １０％ ＣＨ₃ＯＨ含有１０ｍＭ ＮＨ₄Ｋ₂ＰＯ₄から１０％ ＣＨ₃ＯＨ含有１２５ｍＭ ＮＨ₄Ｋ₂ＰＯ₄まで、１５ 分、ｐＨ５.５、流速１ｍｌ／分、検出：２５４ｎｍ）。Ｒ_t９.８；ＭＳ／ＥＳ Ｉ ４９２.０［Ｍ−Ｈ］。１０−Ｓ：ＵＶ（Ｈ₂Ｏ）λ_max２５２、λ_max２６５ ；ＨＰＬＣ（カラム：４.６ｘ１００ｍｍ,Rainin Hydropore SAX、グラジエント １０ｍＭ ＮＨ₄Ｋ₂ＰＯ₄,１０％ ＣＨ₃ＯＨから１２５ｍＭ ＮＨ₄ Ｋ₂ＰＯ₄,１０％ ＣＨ₃ＯＨまで、１５分、ｐＨ５.５、流速１ｍｌ／分、検出： ２５４ｎｍ）。Ｒ_t９.０；ＭＳ／ＥＳＩ ４９２.０［Ｍ−Ｈ］。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＪＰ，ＵＳ (72)発明者 シナジ，レイモンド・エフ アメリカ合衆国30033ジョージア州 ディ ケーター、クレアモント・ロード 1670番 エモリー・ユニバーシティ・スクール・ オブ・メディシン

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．ｉ）ヒトを包含する哺乳動物におけるＨＩＶ−１感染；または ｉｉ）ヒトを包含する哺乳動物におけるＨＢＶ感染 の治療方法をであって、かかる治療を必要とするヒトに有効量の式（Ａ）の化合 物： のトリホスフェートの（Ｒ）−エナンチオマーまたはその医薬上許容される塩を 投与することを特徴とする方法。 ２．ＨＩＶ−１感染またはＨＢＶ感染の治療用の医薬の製造における式（Ａ） の化合物： のトリホスフェートの（Ｒ）−エナンチオマーまたはその医薬上許容される塩の 使用。 ３．式（Ａ）の化合物： のトリホスフェートの（Ｒ）−エナンチオマーまたはその医薬上許容される塩； および医薬上許容される担体を含んでなる、ＨＩＶ感染またはＨＢＶ感染の治療 用の医薬組成物。 ４．（Ｒ）−ＰＣＶ−ＴＰが、細胞内で（Ｒ）−ＰＣＶ−ＭＰ（後に（Ｒ）− ＰＣＶ−ＴＰに変換される）を遊離する（Ｒ）−ＰＣＶ−ＭＰの誘導体である生 物学的前駆体の形態である、請求項１、２または３に記載の方法、組成物または 使用。 ５．請求項１、２、３または４に記載の方法、組成物または使用において用い られる（Ｒ）−ＰＣＶ−ＴＰの生物学的前駆体である化合物。 ６．（Ｒ）−ＰＣＶ−ＭＰの誘導体である（Ｒ）−ＰＣＶ−ＴＰの生物学的前 駆体である化合物。 ７．ＰＬ−ＡＳＯＲ誘導体； リン脂質誘導体； （Ｒ）−ＭＰ Ｂｉｓ（ＰＯＭ）誘導体； （Ｒ）−ＭＰジフェニルエステル誘導体； ジミリストイルグリセロールジホスフェート誘導体 から選択される請求項６記載の化合物。