EP2073787A2 - Utilisation d'un principe actif issu de lin agissant sur le derme papillaire, pour son action anti-age - Google Patents

Utilisation d'un principe actif issu de lin agissant sur le derme papillaire, pour son action anti-age

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EP2073787A2
EP2073787A2 EP07858517A EP07858517A EP2073787A2 EP 2073787 A2 EP2073787 A2 EP 2073787A2 EP 07858517 A EP07858517 A EP 07858517A EP 07858517 A EP07858517 A EP 07858517A EP 2073787 A2 EP2073787 A2 EP 2073787A2
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EP
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lin
cosmetic
dermis
active ingredient
derived
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Societe Industrielle Limousine dApplication Biologique SA SILAB
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    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations

Definitions

  • the present invention relates to the cosmetic use of an active ingredient derived from
  • the invention also relates to anti-aging compositions comprising at least one active ingredient derived from Lin acting on specific markers of the popular dermis, and to a process for obtaining an active ingredient derived from Lin acting on the dermis. popular and obtained active ingredient.
  • the objective of the present invention is to provide products capable of effectively fighting against skin aging, to help rejuvenate and revitalize the skin by considering the aspects of aging of the skin on the different skin layers.
  • the skin consists of two tissues closely connected to each other: the epidermis on the surface, and the underlying dermis, in which we distinguish the popular dermis, adjacent to the dermal-epidermal junction, rich in fibroblasts, and the reticular dermis.
  • the dermis constitutes the solid support of the skin. It is composed of fibroblasts and a microfibrary network, the extracellular matrix, rich in collagens, el ⁇ stine, glycoproteins and proteoglycans that provide support, extensibility and resistance.
  • the popular dermis derives its name from its papillae surface, which form projections alternating with epidermal prolongations. It has a very fine fibrous structure, rich in cells, blood capillaries, nerve fibers and tactile corpuscles.
  • the popular dermis notably contains oxytalan fibers which form a perpendicular network which seems anchored in the basement membrane. These fibers play an important role in the mechanical strength of the skin. An increase in the synthesis of these fibers makes it possible to reinforce the perpendicular network and thus to consolidate the mechanical strength of the skin.
  • Collagen XVI is expressed both by keratinocytes and fibroblasts of the dermis. It contributes to the structural integrity of the popular dermis area. An increase in collagen synthesis XVI contributes to improving the structural integrity of the dermis.
  • the extracellular matrix With age and external aggressions, the extracellular matrix is disorganized and impoverished in components: the skin becomes thinner, more fragile, drier and loses its elasticity, which causes the appearance of wrinkles, the loss brightness of the complexion and sagging skin.
  • the present invention aims to act both on the thickness, elasticity and structural organization of the dermis popular, using at least one active ingredient derived from Lin, able to act on the synthesis of at least one fiber molecule specific for the popular dermis, for the preparation of a cosmetic and / or dermopharmaceutical composition intended to combat cutaneous aging.
  • the present invention proposes to use at least one active principle derived from Lin, capable of acting on the synthesis of molecules specific to the popular dermis, in particular collagen XVI and / or oxytalan fibers.
  • the active ingredient according to the invention may also act on the synthesis of other collagens of the popular dermis: collagen I, collagen VI and collagen XII, as well as on the synthesis of fibrinin in the popular dermis.
  • the use according to the present invention makes it possible to combat cutaneous aging by acting on the popular dermis, in particular:
  • oxytalan fibers a fiber specific for the popular dermis, which plays an important role in the mechanical strength and elasticity of the skin.
  • the use according to the present invention may also make it possible: to increase the density of the dermis by synthesis of collagens I, VI and XII, and / or
  • the use of at least one active ingredient derived from Lin according to the invention makes it possible to combat the appearance of wrinkles, the loss of luminosity of the complexion and / or the sagging skin associated with the aging of the skin.
  • the active ingredient derived from Lin capable of acting on the dermis that is popular according to the present invention is an active ingredient obtained by a process comprising at least one hydrolysis.
  • the active ingredient derived from Lin capable of acting on the dermis according to the invention is intended to be incorporated into cosmetic and / or dermopharmaceutical compositions.
  • the cosmetic composition according to the invention may contain from 0.01 to 20% of at least one active ingredient derived from Lin capable of acting on the dermis.
  • the administration of a cosmetic composition containing at least one active ingredient derived from Lin according to the invention, capable of acting on the popular dermis, is preferably carried out topically.
  • composition according to the invention may be in the form of creams, oil-in-water emulsions, water-in-oil or multiple emulsions, solutions, suspensions or powders.
  • the invention also relates to a process for obtaining an active ingredient derived from Lin capable of acting on the dermis, as well as the active ingredient obtained.
  • the active ingredient derived from Lin capable of acting on the popular dermis which is useful according to the invention, can be obtained by a process comprising at least one hydrolysis. Preferably, it is obtained by a process comprising the following steps:
  • “Flax” is understood to mean flaxseed of the Linum usitatissimum variety, reduced to powder form, in the form of flour or semolina, or flaxseed meal of the Linum usitatissimum variety obtained after extraction of the oily part. by pressing the seeds.
  • the solids content is measured by passing the oven at 105 ° C. in the presence of sand of a sample of initial weight given until a constant weight is obtained.
  • the solids content of an active ingredient derived from Lin according to the invention is between 5 and 200 g / l, more particularly between 15 and 60 g / l. 2-2 / pH measurement:
  • the pH measured by the potentiometric method at room temperature leads to values between 3 and 7, more particularly between 3 and 5.
  • the total protein content is determined by the LOWRY method.
  • the level of proteins of an active principle derived from Lin according to the invention is between 1 and 65 g / l, more particularly between 3 and 20 g / l. 2-4 / Characterization of the protein fraction
  • FPLC Fast Protein Liquid Chromatography
  • the chromatogram shows that an active ingredient derived from Lin according to the invention is mainly composed of peptides with a molecular weight of less than 5000 Daltons. 2-5 / Determination of total sugar content
  • the total sugar content of an active principle derived from Lin according to the invention is between 2 and 100 g / l, preferably between 5 and 30 g / l.
  • the characterization of the monomeric sugars of an active principle derived from Lin according to the invention is carried out by high performance liquid chromatography (HPLC).
  • an active ingredient derived from Lin according to the invention is composed, in descending order, of mannose, glucose, xylose and rhamnose.
  • its carbohydrate fraction comprises at least 50% of mannose.
  • Uronic acids form furan derivatives, by cycloaddition under the action of strong mineral acids.
  • the furan derivatives thus formed are capable of condensing with different reagents by forming characteristic coloring complexes: the chromophores, product of the reaction, of variable color depending on the nature of the ose.
  • Linen according to the invention is produced by high performance liquid chromatography.
  • the chromatogram obtained shows the presence of about 74% of monosaccharides with a molecular mass of less than 180 Da, about 17% of oligosaccharides with a molar mass of between 180 and 2500 Da and about 9% of polysaccharides with a molar mass greater than 5000 Da. .
  • the objective of this study is to evaluate the effect of an active ingredient derived from Lin according to the invention on the expression of mRNAs (messenger ribonucleic acids) encoding collagen I on aged fibroblasts derived from popular dermas in comparison with young fibroblasts from popular dermes.
  • mRNAs messenger ribonucleic acids
  • PCk Polymerase Chain Amplification
  • the cells are cultured in the presence of an active ingredient derived from Lin according to the invention at 1%. Untreated cells that serve as a control are also preserved.
  • RNAs are reverse-transcripts and DNAs (Acid
  • the objective of this study is to evaluate the effect of an active ingredient derived from Lin according to the invention on the synthesis of collagen I on young and aged fibroblasts from popular dermas.
  • the ELISA assay is performed with the following means:
  • the active ingredient according to the invention derived from Lin acts by increasing the synthesis of collagen I in cultures of young human fibroblasts from popular dermas.
  • the active ingredient according to the invention derived from Lin also acts by increasing the synthesis of collagen I in aged human fibroblast cultures derived from popular dermas.
  • the objective of this study is to evaluate the effect of an active ingredient derived from Lin according to the invention on the expression of mRNAs encoding collagen VI on aged fibroblasts derived from popular dermas in comparison with young fibroblasts from of popular dermes.
  • RNAs are reverse-transcripts and DNAs (Acid
  • Deoxyribonucleic acid obtained are analyzed by quantitative PCR.
  • the objective of this study is to evaluate the effect of an active ingredient derived from Lin according to the invention on the expression of mRNA encoding collagen XII on aged fibroblasts derived from popular dermas in comparison with young human fibroblasts from popular dermes.
  • RNAs are reverse-transcripts and DNAs (Acid
  • Deoxyribonucleic acid obtained are analyzed by quantitative PCR.
  • the objective of this study is to evaluate the effect of an active ingredient derived from Lin according to the invention on the expression of mRNAs encoding collagen XVI on aged fibroblasts derived from popular dermas in comparison with young human fibroblasts from of popular dermes.
  • RNAs are reverse-transcripts and DNAs (Acid
  • Deoxyribonucleic acid obtained are analyzed by quantitative PCk.
  • Fibrillin I is a glycoprotein essential in the formation of elastic fibers present in oxytalan fibers.
  • the objective of this study is to evaluate the effect of an active ingredient derived from flax according to the invention on the expression of mRNAs encoding fibrillin I on aged fibroblasts derived from popular dermas in comparison with young human fibroblasts from popular dermes.
  • the study is carried out by PCR (Polymerase Chain Amplification) according to the operating protocol below.
  • the young and aged human fibroblasts are inoculated and incubated.
  • the cells are cultured in the presence of an active ingredient derived from Lin according to the invention at 1%. Untreated cells that serve as a control are also preserved.
  • RNAs are reverse-transcripts and DNAs (Acid
  • Deoxyribonucleic acid obtained are analyzed by quantitative PCR.
  • the objective of this study is to show the in vivo efficacy of the active ingredient from Lin according to the invention formulated at 4% emulsion versus placebo on the biomechanical properties of the skin, at the level of the lower face.
  • the study is conducted on 18 healthy female volunteers. The measurements are made at the level of the lower face using a Cutometer: the skin is sucked by a constant vacuum probe for a constant duration. The penetration depth of the skin in the probe is measured by two optical prisms, which allows to obtain curves from which it is possible to calculate various characteristic parameters of the mechanical properties of the skin. Among these parameters, the present study consists in observing the following parameters:
  • two symmetrical cutaneous zones are determined at the level of the lower face and the biomechanical properties of the skin are measured on these two zones.
  • the active ingredient derived from Lin according to the invention makes it possible to increase the skin firmness by 10%, the cutaneous tonicity by 14% and the elasticity by 8%. In addition, it is found that twice-daily applications of the active ingredient derived from Lin according to the invention for 56 days make it possible to reduce skin fatigue by 16% compared with placebo.
  • the present invention also covers cosmetic and / or dermopharmaceutical compositions including at least one active ingredient derived from Lin capable of acting on the dermis popular according to the present invention in different galenic forms, adapted for topical administration to the skin.
  • compositions may especially be in the form of creams, oil-in-water emulsions, water-in-oil emulsions, multiple emulsions, solutions, suspensions or powders. They can be more or less fluid and have the appearance of a cream, a lotion, a milk, a serum, an ointment, a gel, a paste or a foam, or in solid form.
  • compositions contain between 0.01 and 20% by weight of active principle (s) derived from Lin capable (s) act on the dermis popular according to the present invention.
  • composition examples are obtained by mixing the various components. The quantities indicated are given as a percentage of weight. 4.1
  • Cetearyl alcohol / Cetearyl glucoside 2.0%

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Abstract

L'objet de l'invention est l'utilisation d'au moins un principe actif issu de Lin capable d'agir sur le derme papillaire, pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou dermopharmaceutique destinée à lutter contre le vieillissement cutané.

Description

UTILISATION D'UN PRINCIPE ACTIF ISSU DE LIN AGISSANT SUR LE DERME PAPILLAIRE, POUR SON ACTION ANTI- AGE
La présente invention concerne l'utilisation cosmétique d'un principe actif issu de
Lin agissant sur des marqueurs spécifiques du derme populaire, pour lutter contre le vieillissement cutané.
L'invention se rapporte également aux compositions anti-âges comprenant au moins un principe actif issu de Lin agissant sur des marqueurs spécifiques du derme populaire, ainsi qu'à un procédé d'obtention d'un principe actif issu de Lin agissant sur le derme populaire et au principe actif obtenu.
Dans nos sociétés, l'esthétisme et l'apparence prennent une place de plus en plus importante. Pour améliorer leur image, beaucoup de gens ont tendance à vouloir paraîti jeunes le plus longtemps possible et cherchent à estomper les manifestations visibles du vieillissement de la peau.
C'est pourquoi l'objectif de la présente invention est de proposer des produits capables de lutter efficacement contre le vieillissement cutané, pour aider à rajeunir et à revitaliser la peau en considérant les aspects du vieillissement de la peau sur les différentes couches cutanées.
La peau est constituée de deux tissus étroitement reliés l'un à l'autre : l'épiderme situé en surface, et le derme, sous-jacent, au sein duquel on distingue le derme populaire, jouxtée à la jonction dermo-épidermique, riche en fibroblastes, et le derme réticulaire.
Le derme constitue le support solide de la peau. Il est composé de fibroblastes et d'un réseau microf ibrillaire, la matrice extracellulaire, riche en collagènes, en élαstine, en glycoprotéines et en protéoglycαnes qui assurent soutien, extensibilité et résistance.
Le derme populaire tient son nom de sa surface en papilles qui forment des saillies alternant avec des prolongements épidermiques. Il a une structure fibreuse très fine, riche en cellules, en capillaires sanguins, en fibres nerveuses et corpuscules tactiles.
Le derme populaire contient notamment des fibres oxytalan qui forment un réseau perpendiculaire qui semble ancré dans la membrane basale. Ces fibres jouent un rôle important dans la résistance mécanique de la peau. Une augmentation de la synthèse de ces fibres permet de conforter le réseau perpendiculaire et donc de consolider la résistance mécanique de la peau.
Le collagène XVI est exprimé à la fois par les kératinocytes et les fibroblastes du derme populaire. Il contribue à l'intégrité structurelle de la zone du derme populaire. Une augmentation de la synthèse de collagène XVI participe à l'amélioration de l'intégrité structurelle du derme populaire.
Avec l'âge et les agressions extérieures, la matrice extracellulaire se désorganise et s'appauvrit en éléments constitutifs : la peau devient plus fine, plus fragile, plus sèche et perd de son élasticité, ce qui entraîne l'apparition de rides, la perte de luminosité du teint et le relâchement cutané.
Aussi, pour répondre à son objectif, la présente invention vise à agir à la fois sur l'épaisseur, l'élasticité et l'organisation structurelle du derme populaire, en utilisant au moins un principe actif issu de Lin, capable d'agir sur la synthèse d'au moins une molécule fibreuse spécifique du derme populaire, pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou dermopharmaceutique destinée à lutter contre le vieillissement cutané.
En particulier, la présente invention se propose d'utiliser au moins un principe actif issu de Lin, capable d'agir sur la synthèse de molécules spécifiques du derme populaire, notamment le collagène XVI et/ou les fibres oxytalan. Le principe actif selon l'invention peut également agir sur la synthèse d'autres collagènes du derme populaire : le collagène I, le collagène VI et le collagène XII, ainsi que sur la synthèse de f ibrilline dans le derme populaire. L'utilisation selon la présente invention permet de lutter contre le vieillissement cutané en agissant sur le derme populaire, en particulier :
- en augmentant la densité du derme populaire, donc la densité de la peau, par stimulation de la synthèse du collagène XVI, et/ou
- en augmentant l'élasticité de la peau par stimulation de la synthèse des fibres d'oxytalan, fibre spécifique du derme populaire jouant un rôle important dans la résistance mécanique et l'élasticité de la peau.
L'utilisation selon la présente invention peut également permettre : d'augmenter la densité du derme par synthèse des collagènes I, VI et XII, et/ou
- d'augmenter l'élasticité de la peau par stimulation de la synthèse de la fibrilline, molécule présente dans les fibres d'oxytalan.
Avantageusement, l'utilisation d'au moins un principe actif issu de Lin selon l'invention permet de lutter contre l'apparition des rides, la perte de luminosité du teint et/ou le relâchement cutané lié au vieillissement de la peau.
De manière préférentielle le principe actif issu de Lin capable d'agir sur le derme populaire selon la présente invention est un principe actif obtenu par un procédé comprenant au moins une hydrolyse.
Le principe actif issu de Lin capable d'agir sur le derme populaire selon l'invention est destiné à être incorporé au sein de compositions cosmétiques et/ou dermopharmaceutiques.
La composition cosmétique selon l'invention peut contenir de 0,01 à 20 % d'au moins un principe actif issu de Lin capable d'agir sur le derme populaire. L'administration d'une composition cosmétique contenant au moins principe actif issu de Lin selon l'invention, capable d'agir sur le derme populaire, est de préférence effectuée par voie topique.
La composition selon l'invention peut se présenter sous forme de crèmes, émulsions huile-dans-eau, eau-dans-huile ou émulsions multiples, solutions, suspensions ou encore poudres.
Selon un autre aspect, l'invention vise également un procédé d'obtention d'un principe actif issu de Lin capable d'agir sur le derme populaire, ainsi que le principe actif obtenu.
La présente invention est maintenant décrite en détail en s'appuyant sur des résultats de tests.
1/ PROCEDE D'OBTENTION E>'UN PRINCIPE ACTIF SELON L 'INVENTION : Le principe actif issu de Lin capable d'agir sur le derme populaire, utile selon l'invention, peut être obtenu par un procédé comprenant au moins une hydrolyse. Préférentiellement, il est obtenu par un procédé comprenant les étapes suivantes :
- solubilisation de Lin dans l'eau,
- hydrolyse(s) chimique et/ou enzymatique(s) successive(s) et/ou simultanée(s),
- séparation des phases soluble et insoluble,
- inactivation de ou des activité(s) enzymatique(s) résiduelle(s), de préférence par traitement thermique,
- purification de la fraction active par séparation décantation, f iltration, centrifugation,
- concentration par f iltration.
Des étapes supplémentaires peuvent également être ajoutées pour décolorer et/ou stabiliser le produit obtenu. Préférentiel lement, on entend par « Lin » des graines de lin de la variété Linum usitatissimum, réduites en poudre, sous forme de farine ou de semoule, ou des tourteaux de graines de lin de la variété Linum usitatissimum obtenus après extraction de la partie huileuse par pressage des graines.
2/ CARACTERISATION E>'UN PRINCIPE ACTIF SELON L'INVENTION : 2-1/ Matières sèches :
On mesure le taux de matières sèches par passage à l'étuve à 1050C en présence de sable d'un échantillon de poids initial donné jusqu'à obtention d'un poids constant.
Le taux de matières sèches d'un principe actif issu de Lin selon l'invention est compris entre 5 et 200 g/1, plus particulièrement entre 15 et 60 g/1. 2-2/ Mesure du pH :
Le pH mesuré par la méthode potentiométrique à température ambiante conduit à des valeurs comprises entre 3 et 7, plus particulièrement entre 3 et 5.
2-3/ Détermination de la teneur en protéines
La teneur en protéines totales est déterminée par la méthode de LOWRY. Le taux de protéines d'un principe actif issu de Lin selon l'invention est compris entre 1 et 65 g/1, plus particulièrement entre 3 à 20 g/1. 2-4/ Caracterisation de la fraction protéique
La caracterisation de la fraction protéique sont réalisées par FPLC (Fast Protein Liquid Chromatography).
Le chromatogramme montre qu'un principe actif issu de Lin selon l'invention est composé majoritairement de peptides de poids moléculaire inférieur à 5000 Daltons. 2-5/ Détermination de la teneur en sucres totaux
On utilise la méthode de DUBOIS. En présence d'acide suif urique concentré et de phénol, les sucres réducteurs donnent un composé jaune orangé. A partir d'une gamme étalon, on peut déterminer le taux de sucres totaux d'un échantillon.
Le taux de sucres totaux d'un principe actif issu de Lin selon l'invention est compris entre 2 et 100g/l, préférentiellement entre 5 et 30g/l.
2-6/ Caractérisation des sucres monomères
La caractérisation des sucres monomères d'un principe actif issu de Lin selon l'invention est réalisée par chromatographie liquide haute performance (CLHP).
Les résultats obtenus montrent qu'un principe actif issu de Lin selon l'invention est composé, en ordre décroissant, de mannose, de glucose, de xylose et de rhamnose. En particulier sa fraction glucidique comprend au moins 50% de mannose.
2-7/ Détermination des acides uroniques
Les acides uroniques forment des dérivés furaniques, par cycloaddition sous l'action des acides minéraux forts. Les dérivés furaniques ainsi formés sont susceptibles de condenser avec différents réactifs en formant des complexes de coloration caractéristique : les chromophores, produit de la réaction, de couleur variable selon la nature de l'ose.
La réaction de l'acide galacturonique avec le Borax donne en présence du métahydroxydiphényl, une coloration rosé permettant le dosage au spectrophotomètre à 520nm.
Cette analyse montre que le principe actif issu de Lin selon l'invention contient des acides uroniques. 2-8/ Cαrαctérisαtion des cαrbohydrαtes
La détermination de la taille des carbohydrates d'un principe actif issu de
Lin selon l'invention est réalisée par chromatographie liquide haute performance.
Le chromatogramme obtenu montre la présence d'environ 74% de monosaccharides de masse moléculaire inférieure à 180Da, d'environ 17% d'oligosaccharides de masse molaire comprise entre 180 et 2500Da et d'environ 9% de polysaccharides de masse molaire supérieure à 5000Da.
3. EVALUATION E>E L'EFFET DU PRINCIPE ACTIF ISSU E>E LIN SELON L'INVENTION
3.1 Evaluation de l'effet sur la densité du derme populaire a - Evaluation in vitro de l'expression des ARNm codant le collaqène I par des fibroblastes vieillis issus de dermes populaires
L'objectif de cette étude est d'évaluer l'effet d'un principe actif issu de Lin selon l'invention sur l'expression des ARNm (Acides Ribonucléiques messagers) codant le collagène I sur des fibroblastes vieillis issus de dermes populaires en comparaison avec des fibroblastes jeunes issus de dermes populaires.
L'étude est réalisée par PCk (Amplification en Chaîne par Polymérase) selon le protocole opératoire ci-dessous.
A Jl, les fibroblastes humains jeunes et vieillis sont ensemencés et incubés.
A J3, les cellules sont cultivées en présence d'un principe actif issu de Lin selon l'invention à 1%. On conserve également des cellules non traitées qui servent de témoin.
A J4, les cellules sont récupérées et les ARN (Acide Ribonucléique) totaux sont extraits. Les ARN sont reverse-transcripts et les ADN (Acide
Désoxyribonucléique) complémentaires obtenus sont analysés par PCk quantitative. Les résultats obtenus en pourcentage d'ARNm de collagène I exprimés, sont présentés dans le tableau suivant :
On constate que les fibroblastes humains vieillis perdent 51% de leur capacité d'expression des ARNm codant le collagène I par rapport à des fibroblastes humains jeunes. Le principe actif issu de Lin selon l'invention permet de récupérer la capacité d'expression des ARNm codant le collagène I des fibroblastes vieillis issus de dermes populaires. b - Evaluation in vitro de la synthèse de collaqène I par des fibroblastes jeunes et des fibroblastes vieillis issus de dermes populaires.
L'objectif de cette étude est d'évaluer l'effet d'un principe actif issu de Lin selon l'invention sur la synthèse de collagène I sur des fibroblastes jeunes et vieillis issus de dermes populaires.
L'étude est réalisée par technique ELISA selon le protocole opératoire ci- dessous.
A Jl, les fibroblastes humains jeunes et viellis sont ensemencés et incubés. A J2, les cellules sont cultivées en présence d'un principe actif issu de Lin selon l'invention à 1%. On conserve également des cellules non traitées qui servent de témoin.
A J3, les surnageants sont récupérés, puis dosés par technique ELISA. Le dosage ELISA est réalisé avec les moyens suivants :
- anticorps primaire : anticorps monoclonal de souris anti-collagène I
- anticorps secondaire : anticorps anti-IgG de souris
- système de révélation : peroxydase et substrat TMB Les résultats obtenus en pourcentage de collagène I exprimés sont présentés dans le tableau suivant :
On constate que le principe actif selon l'invention issu de Lin agit en augmentant la synthèse de collagène I dans des cultures de fibroblastes humains jeunes issus de dermes populaires.
On constate que le principe actif selon l'invention issu de Lin agit également en augmentant la synthèse de collagène I dans des cultures de fibroblastes humains vieillis issus de dermes populaires. c- Evaluation in vitro de l'expression des ARNm codant le collaqène VI par des fibroblastes vieillis issus de dermes populaires
L'objectif de cette étude est d'évaluer l'effet d'un principe actif issu de Lin selon l'invention sur l'expression des ARNm codant le collagène VI sur des fibroblastes vieillis issus de dermes populaires en comparaison avec des fibroblastes jeunes issus de dermes populaires.
L'étude est réalisée par PCR (Amplification en Chaîne par Polymérase) selon le protocole opératoire ci-dessous.
A Jl, les fibroblastes humains jeunes et vieillis sont ensemencés et incubés. A J3, les cellules sont cultivées en présence d'un principe actif issu de Lin selon l'invention à 1%. On conserve également des cellules non traitées qui servent de témoin.
A J4, les cellules sont récupérées et les ARN (Acide Ribonucléique) totaux sont extraits. Les ARN sont reverse-transcripts et les ADN (Acide
Désoxyribonucléique) complémentaires obtenus sont analysés par PCR quantitative.
Les résultats obtenus en pourcentage d'ARNm (ARN messagers) de collagène VI exprimés, sont présentés dans le tableau suivant :
On constate que les fibroblastes humains vieillis perdent 60% de leur capacité d'expression des ARNm de collagène VI. Le principe actif issu de Lin selon l'invention permet d'améliorer la capacité d'expression des ARNm codant le collagène VI des fibroblastes vieillis issus de dermes populaires. d - Evaluation in vitro de l'expression des ARNm codant le de collaqène XII par des fibroblastes vieillis issus de dermes populaires
L'objectif de cette étude est d'évaluer l'effet d'un principe actif issu de Lin selon l'invention sur l'expression des ARNm codant le collagène XII sur des fibroblastes vieillis issus de dermes populaires en comparaison avec des fibroblastes humains jeunes issus de dermes populaires.
L'étude est réalisée par PCR (Amplification en Chaîne par Polymérase) selon le protocole opératoire ci-dessous.
A Jl, les fibroblastes humains jeunes et vieillis sont ensemencés et incubés. A J3, les cellules sont cultivées en présence d'un principe actif issu de Lin selon l'invention à 1%. On conserve également des cellules non traitées qui servent de témoin.
A J4, les cellules sont récupérées et les ARN (Acide Ribonucléique) totaux sont extraits. Les ARN sont reverse-transcripts et les ADN (Acide
Désoxyribonucléique) complémentaires obtenus sont analysés par PCR quantitative.
Les résultats obtenus en pourcentage d'ARNm (ARN messagers) de collagène
XII exprimés, sont présentés dans le tableau suivant :
On constate que les fibroblastes humains vieillis perdent 65% de leur capacité d'expression des ARNm de collagène XII. Le principe actif issu de Lin selon l'invention permet de récupérer la capacité d'expression des ARNm codant le collagène XII des fibroblastes issus de dermes populaires vieillis. e - Evaluation in vitro de l'expression des ARNm codant le collaqène XVI par des fibroblastes vieillis issus de dermes populaires
L'objectif de cette étude est d'évaluer l'effet d'un principe actif issu de Lin selon l'invention sur l'expression des ARNm codant le collagène XVI sur des fibroblastes vieillis issus de dermes populaires en comparaison de fibroblastes humains jeunes issus de dermes populaires.
L'étude est réalisée par PCR (Amplification en Chaîne par Polymérase) selon le protocole opératoire ci-dessous.
A Jl, les fibroblastes humains jeunes et vieillis sont ensemencés et incubés. A J3, les cellules sont cultivées en présence d'un principe actif issu de Lin selon l'invention à 1%. On conserve également des cellules non traitées qui servent de témoin.
A J4, les cellules sont récupérées et les ARN (Acide Ribonucléique) totaux sont extraits. Les ARN sont reverse-transcripts et les ADN (Acide
Désoxyribonucléique) complémentaires obtenus sont analysés par PCk quantitative.
Les résultats obtenus en pourcentage d'ARNm de collagène XVI exprimés, sont présentés dans le tableau suivant :
On constate que les fibroblastes humains vieillis perdent 57% de leur capacité d'expression des ARNm de collagène XVI. Le principe actif issu de Lin selon l'invention permet de récupérer la capacité d'expression des ARNm codant le collagène XVI des fibroblastes issus de dermes populaires vieillis.
3.2 Evaluation de l'effet sur l'élasticité du derme populaire - Evaluation in vitro de l'effet sur les fibres oxytalan
La fibrilline I est une glycoprotéine essentielle dans la formation des fibres élastiques, présentes dans les fibres oxytalan.
L'objectif de cette étude est d'évaluer l'effet d'un principe actif issu de lin selon l'invention sur l'expression des ARNm codant la fibrilline I sur des fibroblastes vieillis issus de dermes populaires en comparaison avec des fibroblastes humains jeunes issus de dermes populaires. L'étude est réalisée par PCR (Amplification en Chaîne par Polymérase) selon le protocole opératoire ci-dessous.
A Jl, les f ibroblastes humains jeunes et vieillis sont ensemencés et incubés.
A J3, les cellules sont cultivées en présence d'un principe actif issu de Lin selon l'invention à 1%. On conserve également des cellules non traitées qui servent de témoin.
A J4, les cellules sont récupérées et les ARN (Acide Ribonucléique) totaux sont extraits. Les ARN sont reverse-transcripts et les ADN (Acide
Désoxyribonucléique) complémentaires obtenus sont analysés par PCR quantitative.
Les résultats obtenus en pourcentage d'ARNm de fibrilline I exprimés, sont présentés dans le tableau suivant :
L'études est réalisée
On constate que les fibroblastes humains vieillis perdent 65% de leur capacité à exprimer les ARNm de fibrilline I par rapport aux fibroblastes humains jeunes issus de dermes populaires. Le principe actif issu de Lin selon l'invention permet d'améliorer la capacité d'expression des ARNm de fibrilline I sur des cultures de fibroblastes humains vieillis issus de dermes populaires. 3.3 Evaluation de l'effet in vivo de l'effet raffermissant
L'objectif de cette étude est de montrer l'efficacité in vivo du principe actif issu de Lin selon l'invention formulé à 4% en émulsion contre placebo sur les propriétés biomécaniques de la peau, au niveau du bas du visage. L'étude est réalisée sur 18 volontaires sains de sexe féminin. Les mesures sont réalisées au niveau du bas du visage à l'aide d'un Cutomètre : la peau est aspirée par une sonde à dépression constante pendant une durée constante. La profondeur de pénétration de la peau dans la sonde est mesurée par deux prismes optiques, ce qui permet d'obtenir des courbes à partir desquelles il est possible de calculer divers paramètres caractéristiques des propriétés mécaniques de la peau. Parmi ces paramètres, la présente étude consiste à observer les paramètres suivants :
- X qui représente la tonicité de la peau (si X augmente, la tonicité augmente),
- RO qui représente la fermeté de la peau, (si RO augmente, la peau est plus ferme)
- R9 qui représente la fatigabilité de la peau, (si R9 diminue, « l'effet fatigue » de la peau est moins important), et
- R2 qui représente l'élasticité (si R2 augmente, l'élasticité de la peau augmente).
Le protocole de l'étude est exposé en suivant.
Entre J-15 et JO, les volontaires arrêtent d'appliquer tout produit cosmétique sur le visage.
A JO, on détermine deux zones cutanées symétriques au niveau du bas du visage et on mesure les propriétés biomécaniques de la peau sur ces deux zones.
Entre JO et J27, les volontaires appliquent bi-quotidiennement le placebo et le produit contenant le principe actif issu de Lin selon l'invention et le placebo.
A J28, on effectue des mesures des propriétés biomécaniques de la peau sur les deux zones du visage étudiées.
Entre J28 et J55, les volontaires appliquent bi-quotidiennement le placebo et le produit contenant le principe actif issu de Lin selon l'invention.
A J56, on effectue des mesures des propriétés biomécaniques de la peau sur les deux zones du visage étudiées. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau ci-dessous
Le principe actif issu de Lin selon l'invention permet d'augmenter la fermeté cutanée de 10%, la tonicité cutanée de 14% et l'élasticité de 8%. De plus, on constate que des applications biquotidiennes du principe actif issu de Lin selon l'invention pendant 56 jours permettent de diminuer la fatigue de la peau de 16% par rapport au placebo.
4. EXEMPLES E>E COMPOSITION
La présente invention couvre aussi les compositions cosmétiques et/ou dermopharmaceutiques incluant au moins un principe actif issu de Lin capable d'agir sur le derme populaire selon la présente invention dans différentes formes galéniques, adaptées à l'administration par voie topique cutanée.
Ces compositions peuvent se présenter notamment sous forme de crèmes, émulsions huile-dans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples, solutions, suspensions ou poudres. Elles peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse, ou sous forme solide.
Ces compositions contiennent entre 0,01 et 20% en poids de principe(s) actif(s) issu(s) de Lin capable(s) d'agir sur le derme populaire selon la présente invention.
Les exemples de composition qui suivent sont obtenus par mélange des différents composants. Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. 4.1 Exemple d'une composition anti-rides destinée aux femmes
La formulation est la suivante :
- Principe actif selon l'invention : 4,0%
- Isononyl isononanoate : 5,0%
- Cetearyl octonoate : 5,0%
- Cetyl alcool : 4,0%
- Arachidyl alcool/Behenyl Alcool/
Arachidyl glucoside : 3,0%
- PEG-IOO stéarate glycery I stéarate : 2,0%
- Glycerol : 2,0%
- Glycol palmitate : 1,0%
- Myreth-3 myristate : 1,0%
- Shea butter : 1,0%
- Polyacrilamide/C13-C14 paraffine/
Laureth7 : 0,75%
- Phenonip : 0,7%
- Eau : 70,55%
4.2 Exemple d'une composition anti-rides destinée aux hommes
La formulation est la suivante :
- Principe actif selon l'invention : 4,0%
- Acide stéarique : 7,0%
- Myristate isopropyl : 7,0%
- Stearyl alcool / Ceteareth 20 : 3,0%
- Stearyl stéarate : 1,0%
- Huile minérale/Dibutyl lauryl glutamide : 1,0%
- Phenoxyethanol / parbenes : 0,7%
- Triethanolamine : 0,3%
- Eau : 76% 4.3 Exemple d'une composition raffermissante
La formulation est la suivante :
- Principe actif selon l'invention : 4,0%
- Isononyl isononanoate : 5,0%
- Arachidyl alcool/Behenyl Alcool/
Arachidyl glucoside : 3,0%
- Cetearyl alcool / Cetearyl glucoside : 2,0%
- Polyacrylamide / C13-14 Isoparaff in
Laureth-7 : 2,0%
- Phenonip : 0,7%
- Eau : 83,3%

Claims

REVENDICATIONS
1. Utilisation d'au moins un principe actif issu de Lin agissant sur la synthèse d'au moins une molécule fibreuse spécifique du derme populaire, pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou dermopharmaceutique destinée à lutter contre le vieillissement cutané.
2. Utilisation d'au moins un principe actif issu de Lin pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou dermopharmaceutique selon la revendication 1, caractérisée en ce que ledit principe actif agit sur la synthèse du collagène XVI et/ou des fibres oxytalan du derme populaire.
3. Utilisation d'au moins un principe actif issu de Lin pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou dermopharmaceutique selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que ledit principe actif agit également sur la synthèse par le derme populaire, du collagène I et/ou du collagène VI et/ou du collagène XII.
4. Utilisation d'au moins un principe actif issu de Lin pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou dermopharmaceutique selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que ledit principe actif agit également sur la synthèse de la f ibrilline dans le derme populaire.
5. Utilisation d'au moins un principe actif issu de Lin pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou dermopharmaceutique selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que la composition cosmétique et/ou dermopharmaceutique est destinée à lutter contre l'apparition des rides et/ou la perte de luminosité du teint et/ou le relâchement cutané, lié(s) au vieillissement de la peau.
6. Utilisation d'au moins un principe actif issu de Lin pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou dermopharmaceutique selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que la composition cosmétique et/ou dermopharmaceutique est destinée à augmenter la densité du derme populaire.
7. Utilisation d'au moins un principe actif issu de Lin pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou dermopharmaceutique selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce la composition cosmétique et/ou dermopharmaceutique est destinée à augmenter l'élasticité de la peau.
8. Procédé d'obtention d'un principe actif issu de Lin agissant sur la synthèse d'au moins une molécule fibreuse spécifique du derme populaire, adapté pour l'utilisation selon l'une quelconque des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'il comprend au moins une étape d'hydrolyse.
9. Procédé d'obtention selon la revendication 8, caractérisé en ce qu'il comprend au moins les étapes suivantes :
- solubilisation de Lin dans l'eau,
- hydrolyse(s) chimique(s) et/ou enzymatique(s) successive(s) et/ou simultanée(s),
- séparation des phases soluble et insoluble,
- inactivation de ou des activité(s) enzymatique(s) résiduelle(s), de préférence par traitement thermique,
- purification de la fraction active par séparation décantation, filtration, centrifugation,
- concentration par filtration.
10. Principe actif issu de Lin agissant sur la synthèse d'au moins une molécule fibreuse spécifique du derme populaire, obtenu par la mise en oeuvre du procédé selon la revendication 8 ou 9, caractérisé par : un taux de matières sèches compris entre 5 et 200 g/1, un pH compris entre 3 et 7, une teneur en protéines comprise entre 1 et 65 g/1, une teneur en sucres totaux comprise entre 2 et 100g/l.
11. Principe actif issu de Lin agissant sur la synthèse d'au moins une molécule fibreuse spécifique du derme populaire selon la revendication 10, caractérisé par : un taux de matières sèches compris entre 15 et 60 g/1, un pH compris entre 3 et 5, une teneur en protéines comprise entre 3 et 20 g/1, une teneur en sucres totaux comprise entre 5 et 30g/l, la présence d'acides uroniques, et la présence de carbohydrates sous forme de monosaccharides, d'oligosaccharides et de polysaccharides.
12. Composition cosmétique et/ou dermopharmaceutique destinée à lutter contre le vieillissement cutané, adaptée pour l'utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisée en ce qu'elle contient entre 0,01% et 20% d'au moins un principe actif issu de Lin agissant sur la synthèse d'au moins une molécule fibreuse spécifique du derme populaire.
13. Composition cosmétique et/ou dermopharmaceutique selon la revendication 12, caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme de crème, émulsion huile-dans-eau, émulsion eau-dans-huile, émulsions multiples, solution, suspension ou poudre.
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