WO2008012476A2 - Utilisation de carboxypeptidases dans le domaine cosmetique et therapeutique - Google Patents

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WO2008012476A2
WO2008012476A2 PCT/FR2007/051732 FR2007051732W WO2008012476A2 WO 2008012476 A2 WO2008012476 A2 WO 2008012476A2 FR 2007051732 W FR2007051732 W FR 2007051732W WO 2008012476 A2 WO2008012476 A2 WO 2008012476A2
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skin
nucleic acid
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    • G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)

Definitions

  • the subject of the present invention is the use, in cosmetics and in therapeutics, of a protein of the protease type belonging to the carboxypeptidase family, carboxypeptidase A4, or of polypeptides derived from this protein, in particular for the treatment of cutaneous disorders or of the scalp, in particular related to a dysfunction of proliferation and / or differentiation and / or migration of epidermal cells.
  • the invention also relates to cosmetic or pharmaceutical compositions comprising at least carboxypeptidase A4 (CP A4), a polypeptide derived from it, or a compound capable of modulating the biological activity and / or expression thereof, to the treatment of skin disorders or scalp.
  • CP A4 carboxypeptidase A4
  • a polypeptide derived from it or a compound capable of modulating the biological activity and / or expression thereof, to the treatment of skin disorders or scalp.
  • the epidermis is conventionally divided into a basal layer of keratinocytes constituting the germinal layer of the epidermis, a so-called spinous layer consisting of several layers of polyhedral cells and finally, a set of upper layers called horny layers (or stratum corneum), constituted keratinocytes at the end stage of their differentiation called corneocytes.
  • a basal layer of keratinocytes constituting the germinal layer of the epidermis
  • spinous layer consisting of several layers of polyhedral cells
  • horny layers or stratum corneum
  • human skin consisting of the dermis and the epidermis, forms a natural and effective barrier against external aggressions, in particular chemical, mechanical or infectious, and as such a number of defense reactions against environmental factors ( climate, ultraviolet rays, tobacco, ...) and / or xenobiotics, such as micro-organisms, occur at its level.
  • barrier function This property, called a barrier function, is provided mainly by the most superficial layer of the epidermis, namely the stratum corneum. It is clear that the quality of the cutaneous barrier and mucous membranes is dependent on complex endogenous biological mechanisms involving many growth factors, adhesion molecules, hormones and lipid metabolism enzymes.
  • new keratinocytes are produced continuously to compensate for the continuous loss of epidermal cells at the level of the stratum corneum according to a mechanism called desquamation.
  • An imbalance between the production of the cells at the level of the basal layer and the rate of desquamation can, in particular, lead to scaly formations on the surface of the skin.
  • many skin disorders may be characterized by a dysfunction of proliferation and / or differentiation and / or epidermal cell migration, and in particular keratinocytes.
  • proliferative disorders may result in the production of a thickened horny layer and abnormal desquamation, i.e. hyperkeratosis, which may or may not be pathologic depending on its intensity.
  • These disorders may be, in particular, xerosis (or dry skin), ichthyosis, psoriasis, certain benign or malignant tumor lesions, and hyperkeratosis reaction.
  • certain disorders cause a thinning of the epidermis and more particularly of the stratum corneum. This type of manifestation then results in excessive fragility of the skin.
  • compositions that can be used in cutaneous disorders or scalp resulting from the aforementioned dysfunctions.
  • the object of the present invention is to satisfy these needs.
  • the present invention relates, in one of its aspects, to a cosmetic or pharmaceutical composition, comprising in a physiologically acceptable medium, at least one amino acid sequence polypeptide encoded by a nucleic acid sequence represented in whole or in part by a sequence chosen from SEQ ID NO: 1
  • the present invention relates to a cosmetic or pharmaceutical composition, comprising in a physiologically acceptable medium, at least one nucleic acid sequence encoding a polypeptide according to the invention, or a sense sequence, antisense or interferential corresponding to said sequence.
  • the present invention relates to the use of at least one polypeptide according to the invention or of at least one nucleic acid sequence coding for said polypeptide for the preparation of a pharmaceutical composition intended for treatment and / or prevention of a skin disorder or scalp.
  • the present invention relates to the cosmetic use of at least one polypeptide according to the invention or at least one nucleic acid sequence encoding said polypeptide as an active agent to prevent and / or treat the signs of skin aging.
  • the present invention relates to the cosmetic use of at least one polypeptide according to the invention or at least one nucleic acid sequence encoding said polypeptide as an active agent to prevent a decrease and / or strengthen the barrier function of the skin.
  • the present invention relates to the cosmetic use of at least one polypeptide according to the invention or at least one nucleic acid sequence encoding said polypeptide as an active agent to enhance the hydration state of the skin.
  • the present invention rests, more particularly, on the identification, by the inventors, of carboxypeptidase A4 as agent and / or cosmetic or pharmaceutical target potential in the stratum corneum of the epidermis, as well as 'at the level of the hair follicle.
  • this identification results from the observation that the CPA4 was specifically expressed during the late differentiation of keratinocytes, and present in the stratum corneum of the epidermis healthy and young skin.
  • the inventors have characterized the expression of the mRNA of the protein CPA4, whose amino acid sequence is represented by the sequence SEQ ID NO: 8, in a large number of of human biological tissues, such as the brain, colon, esophagus, heart, placenta, skin, small intestine, stomach and tongue, resulting in this mRNA being more particularly expressed in level of the epidermis.
  • the inventors have also, for the first time, demonstrated the presence of CP A4 at the level of hair follicles.
  • CCA4 carboxypeptidase A4
  • protease A4 is a protease belonging to the family of metallo-carboxypeptidases and, in particular, to subfamily A.
  • Proteases are hydrolytic enzymes capable of cleaving peptide bonds. A number of them are now recognized as having a vital role in the balance and physiology of the epidermis.
  • proteases have in particular been involved in the control of proliferation and / or epidermal differentiation, the deregulation of which may lead, for example, to abnormal desquamation.
  • the metallo-carboxypeptidases are hydrolase enzymes, which cleave the peptide bond of the protein chains in the presence of water and certain metal ions such as zinc, cobalt or manganese.
  • Carboxypeptidase A4 was initially identified by HUANG et al. (Cancer Res., 1999, 59: 2981-2988) from a cell line derived from a prostate tumor.
  • CP A4 is synthesized in the form of a preproprotein of 421 amino acids (SEQ ID NO: 6) containing two "zinc-binding" domains, signature of metallo-carboxypeptidases, a signal peptide of 16 amino acids at the N-terminus - terminal (SEQ ID NO: 9) and a propeptide peptide (SEQ ID NO: 10) (EC 3.4.17, SwissProt: Q9UI42). Removal of the signal peptide leads to the generation of a proprotein (SEQ ID NO: 7), whose cleavage of the 97 amino acids (propeptide SEQ ID NO: 10) at the N-terminus leads to the formation of an active enzyme (SEQ ID NO: 8).
  • the present invention relates to the use of at least one polypeptide according to the invention, or at least one nucleic acid sequence coding for said polypeptide, as a tool for screening for biological or chemical compounds capable of modulating the biological activity and / or expression of said polypeptide or nucleic acid sequence.
  • the present invention relates to the use of at least one chemical or biological compound, capable of modulating the biological activity and / or the expression of at least one polypeptide according to the invention, for the preparation of a cosmetic or pharmaceutical composition for the treatment and / or prevention of a skin disorder or scalp.
  • CP A4 carboxypeptidase A4
  • polypeptides, the nucleic acid sequences and the biological or chemical modulator compounds according to the invention may be more particularly dedicated to an implementation as a cosmetic active agent for the care of the skin.
  • active agents according to the invention can be dedicated to the treatment and / or the prevention and / or cosmetic reversion, in particular aesthetic, of cutaneous signs, in particular coinciding with the previously indicated disorders.
  • treatment and / or cosmetic or cosmetic prevention of a skin is understood to mean acting on the appearance of this skin regardless of any effect on the causes likely to be present. origin of an alteration of this skin.
  • the present invention relates to the use of at least one polypeptide according to the invention, or at least one nucleic acid sequence coding for said polypeptide, as an evaluation tool. of a condition of the epidermis or scalp.
  • the state of the epidemic may be indicative of a skin disorder or scalp.
  • the present invention makes it possible to provide a simple and rapid tool for diagnosing a state of the skin, for example by measuring a CP A4 content and / or a CPA4 type activity, in a cutaneous sample. and in particular stratum corneum.
  • the present invention relates to the use of at least one polypeptide according to the invention, or of at least one nucleic acid sequence coding for said polypeptide, for the preparation of an isolated reconstructed skin.
  • the present invention relates to a cosmetic treatment method, comprising at least one step of applying to at least a portion of the skin, mucous membranes and / or keratinous fibers, at least one cosmetic composition. according to the invention.
  • the present invention relates to a method, non-therapeutic, for demonstrating an effect of a treatment likely to regress a skin disorder or scalp in an individual, comprising at least the steps comprising: a) performing, prior to the treatment, at least a first determination, in a first skin sample or scalp taken from said individual, of a biological activity and / or the expression of a polypeptide conforming to the invention, or a nucleic acid sequence encoding said polypeptide, b) performing, after the treatment, at least a second determination, in a second skin sample or scalp taken from said individual, of said biological activity and or of said expression of said polypeptide or said nucleic acid sequence determined in step a), and c) comparing the first and second determinations, in particular in order to n deduce information relating to at least one effect of the treatment.
  • Such a treatment can in particular be a cosmetic treatment.
  • a polypeptide that is suitable for the invention may have an amino acid sequence encoded by a nucleic acid sequence represented in whole or in part by a sequence chosen from SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO:
  • SEQ ID NO: 2 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, or SEQ ID NO: 5 or an analogue thereof, or a fragment of it.
  • a polypeptide that is suitable for the invention may have an amino acid sequence represented in whole or in part by a sequence chosen from SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, or SEQ ID NO: 13, or an analogue thereof, or a fragment thereof.
  • polypeptide analogue is intended to denote any polypeptide having a sequence homology, in particular with respect to one of the characteristic sequences of said polypeptide, as well as a biological activity of the same nature.
  • the homology can be at least 85%, for example at least 90%, and for example at least 95%.
  • sequence homology can result from modifications resulting from mutation or variation in the sequences of the peptides according to the invention, originating either from the deletion of one or more amino acids or from the insertion of one or more amino acids. or else the substitution of one or more amino acids in the characteristic sequences of the polypeptides according to the invention.
  • characteristic sequence of the polypeptide is intended to refer, in particular with respect to CPA4, the propeptide sequence consisting of the N-terminal amino acids 17 to 113 (SEQ ID NO: 10), the active site in position 182, comprising the case the amino acids surrounding this active site, for example, at the rate of, for example, 1, or even 2 or even 3 or even 4 or even 5 or even 6 or even 7, or even 8 amino acids on the one hand and else of the active site, the zinc binding sites in position 181, 184, and 308, including where appropriate the amino acids on either side of these binding sites, at the rate of, for example, 1, even 2, even 4 or even 8 amino acids on either side of the zinc binding sites, as well as the sequences SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, and SEQ ID NO: 10
  • polypeptide analogs may comprise conservative substitutions with respect to the amino acid sequence of the native polypeptide. Many of these changes can be combined.
  • mutations that may be considered in the present invention, it may be mentioned the replacement of one or more acid residues amines with amino acid residues having a similar hydropathic index without substantially affecting the biological properties of the polypeptide, and in particular its biological activity such as its carboxypeptidase activity.
  • the hydropathic index is an index attributed to amino acids as a function of their hydrophobicity and charge (Kyte et al (1982), J. Mol Biol, 157: 105).
  • a polypeptide or the like also targeted by the present invention may be a polypeptide having undergone one or more post-translational modification (s).
  • post-translational modification is intended to encompass all the modifications that a peptide or a protein is likely to undergo as a result of its synthesis in a cell, such as for example one or phosphorylation (s), glycosylation (s), lipidation (s), such as farnesylation or palmitoylation, disulfide bond-like structural rearrangement and / or cleavage within the peptide sequence.
  • the analogue may, moreover, have substantially the same biological activity as the natural polypeptide.
  • a polypeptide suitable for the implementation of the invention may also be a natural or synthetic polypeptide, optionally capable of being obtained after proteolysis of carboxypeptidase A4 by proteases or by chemical or biological synthesis or by extraction from a biological tissue, such as the skin, expressing naturally or after transduction this polypeptide, as well as the various post-translational forms thereof, or any natural or synthetic polypeptide whose sequence comprises totally or partially (in whole or in part) a aforementioned amino acid sequence, for example variants, analogs and fragments.
  • a polypeptide suitable for the implementation of the invention may also be a polypeptide as defined above in which at least one residue has been replaced by an amino acid residue of similar hydropathic index, as defined previously.
  • a polypeptide suitable for the implementation of the invention may also be a polypeptide as defined previously fused with another polypeptide, a hydrophilic or hydrophobic targeting agent, a bioconversion precursor, a labeling agent, for example, luminescent, or radioactive.
  • a labeling agent for example, luminescent, or radioactive.
  • examples of compounds that may be coupled with a polypeptide according to the invention include fluorescent proteins such as the "Green Fluorescent Protein", fluorescent chemical compounds such as rhodamine, fluorescein, or Texas Red, phosphorescent compounds, radioactive elements, such as 3 H, 35 S, 121 I or 125 I.
  • a polypeptide suitable for the invention may consist of an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, or SEQ ID NO: 13, or a fragment thereof.
  • the present invention also relates to a cosmetic or pharmaceutical composition, comprising, in a physiologically acceptable medium, at least one nucleic acid sequence coding for a polypeptide according to the invention, or an antisense sequence. -sens or interferential corresponding to said sequence.
  • the present invention also relates to the use of sequences or fragments of nucleic acid sequences, especially deoxyribonucleic acids, or ribonucleic acids encoding a polypeptide according to the invention.
  • nucleic acid sequence fragment is intended to mean a nucleic acid sequence encoding all or part of a polypeptide according to the invention, or an analogue thereof, and in particular a nucleic acid sequence selected from SEQ ID NO: 1 representing the sequence of CP A4 mRNA including non-coding regions such as the polyA + region, SEQ ID NO: 2 (coding for the preproprotein form), SEQ ID NO: 3 (coding for the proprotein form), SEQ ID NO: 4 (encoding the protein) or SEQ ID NO: 5 (coding for the propeptide), or an analogue thereof.
  • nucleic acid sequence analogue is meant any nucleic acid sequence, possibly resulting from the degeneracy of the code of nucleic acids. nucleic acids, and encoding a sequence of a polypeptide identical or analogous to the polypeptide sequence encoded by said nucleic acid sequence.
  • the nucleic acid sequences can come from all possible origins, namely either animal, in particular mammalian and even more particularly human, or plant, or microorganisms (viruses, phages, bacteria among others) or fungi , without prejudging the fact that they are present naturally or not in said original organism.
  • the invention also relates to the use of isolated and purified nucleic acid fragments encoding the claimed polypeptides.
  • the nucleic acid sequences according to the invention can in particular be used to prepare corresponding sense or antisense ribonucleic acid sequences.
  • the subject of the invention is also the use of any polynucleotide, of ribonucleic or deoxyribonucleic acid sequence, sense or antisense, in particular "small interfere RNA", corresponding at least to the coding nucleic acid sequence SEQ ID NO: 1 , SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, or SEQ ID NO:
  • a nucleic acid sequence that is suitable for the invention may consist of a sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, or SEQ. ID NO: 5 or a fragment thereof.
  • the present invention relates to the use of at least one chemical or biological compound capable of modulating the biological activity and / or the expression of at least one polypeptide according to the invention, for the preparation of a cosmetic or pharmaceutical composition for the treatment and / or prevention of a skin disorder or scalp.
  • the expression "chemical or biological compound capable of modulating biological activity and / or expression” is intended to mean any compound capable of acting, directly or indirectly, on at least one polypeptide conforming to the present invention.
  • invention or a nucleic acid sequence encoding it, or an element of an intra- or extracellular signaling pathway, or a metabolic pathway, involving said polypeptide, or an element involved in the regulation of transcription and / or translation of a nucleic acid sequence encoding said polypeptide.
  • biological activity is meant in particular in relation to the
  • CP A4 the biological activity of the propeptide (SEQ ID NO: 10), if appropriate in combination with the signal peptide, aimed at inhibiting the enzymatic activity of CPA4
  • proprotein pro-CPA4 capable of giving an active CP A4 protein (SEQ ID NO: 8) by cleavage of the sequence (s) propeptide (s) ) required, as well as the immunogenic properties of the epitopes identified by the sequences SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 13.
  • a chemical or biological compound suitable for use according to the invention may be an inhibitor of the biological activity and / or the expression of a polypeptide according to the invention.
  • an inhibitor may be chosen from a protease, lekein and its analogues, heparin and its derivatives, heparan sulfate and its derivatives, an antibody, an amino acid sequence polypeptide represented in all or part thereof by SEQ ID NO: 10 or an analogue thereof.
  • the primary amino acid sequence of a polypeptide or protein can determine sites specifically recognized by one or more proteases that, once recognition of these sites is performed, can induce its cleavage by proteolysis.
  • Such cleavage may lead to activation or inhibition of the biological activity of the polypeptide or protein of interest.
  • inhibitory protease suitable for the implementation of the invention may have a specific site for recognition and / or fixation and cleavage within the amino acid sequence of a polypeptide according to the invention.
  • Such a protease can easily be identified by any enzymatic protocol known to those skilled in the art.
  • Latexin an endogenous specific inhibitor of zinc-dependent metallo-carboxypeptidases, heparin and its derivatives, and heparan sulfate and its derivatives, can interact with CPA4 to form inactive complexes.
  • sirolib an endogenous specific inhibitor of zinc-dependent metallo-carboxypeptidases, heparin and its derivatives, and heparan sulfate and its derivatives
  • heparin analog, or derivative of heparin, or heparan sulphate is intended to target active fragments of these proteins or glycosaminoglycans, and in particular fragments capable of interacting with a polypeptide conforming to invention and to inhibit its biological activity.
  • it can be envisaged the use of low molecular weight heparans or high molecular weight heparans, the method of preparation of which is well known to the man of the invention. 'art.
  • an antibody that can be used as an inhibitor of the biological activity and / or the expression of a polypeptide according to the invention can be obtained by any method known to those skilled in the art, such as as described in "Antibodies: A
  • antibody is generally meant monoclonal or polyclonal antibodies, as well as immunoglobulin fragments capable of binding an antigen and recombinant antibodies. These antibodies can be produced by any genetic engineering technique known to those skilled in the art or by enzymatic or chemical cleavage of intact antibodies.
  • the invention also relates to an antibody specifically recognizing at least one polypeptide whose amino acid sequence may be represented in whole or in part by at least one sequence selected from SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, or SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, or SEQ ID NO: 13 or an analogue thereof, and being an inhibitor of the biological activity of a conforming polypeptide to the invention.
  • an antibody according to the invention can specifically recognize an immunogenic epitope selected from SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, or SEQ ID NO: 13, or an analogue thereof.
  • a biological or chemical compound that is suitable for the invention may be an activator of the biological activity and / or the expression of a polypeptide according to the invention.
  • an activator suitable for the implementation of the present invention mention may be made, in a non-exhaustive manner, of an activator chosen from a protease, an antibody, a histone deacetylase inhibitor, for example a salt of butyrate.
  • an activator chosen from a protease, an antibody, a histone deacetylase inhibitor, for example a salt of butyrate.
  • carboxypeptidase A4 can be activated by thrombin, trypsin, kallikreins 1 and 2, furin, proprotein convertases 1, 2, 4, 5 and 7, ADAM 17, stromelysin, yapsin .
  • an activating protease suitable for the invention may be chosen, for example, from the abovementioned enzymes.
  • An activating antibody suitable for the present invention may be of a type as defined above and obtained by any method known to those skilled in the art.
  • butyrate salt suitable for the present invention mention may be made, but not limited to, of sodium butyrate.
  • physiologically acceptable medium is intended to mean a medium that is suitable for applying a composition to a keratin material, such as the skin, the scalp, the lips, the mucous membranes and the skin.
  • keratinous fibers such as hair, nails and hair.
  • the invention also relates to the use of at least one polypeptide according to the invention or at least one nucleic acid sequence coding for said polypeptide, for the preparation of a pharmaceutical composition intended for the treatment and / or prevention of a skin disorder or scalp.
  • the term "pharmaceutical” is intended to mean a composition that can be used in the context of a prophylactic and / or curative treatment, or a method for diagnosing a skin disorder or the scalp. .
  • a cosmetic or pharmaceutical composition according to the invention may comprise, in addition, at least one cosmetic and / or therapeutic active agent.
  • active agents such as cosmetic oils, such as silicone oils, vegetable oils of triglyceride type, hydrocarbon oils such as sesam oil and esters of fatty acids and fatty alcohol.
  • skin-improving actives such as moisturizing actives or active agents to enhance the natural lipid barrier, such as ceramides, cholesterol sulfates, and the like. or fatty acids and mixtures thereof.
  • enzymes having an activity on the skin such as other proteases than CP A4, as for example, and non-exhaustively, lipases, glycosidases, amidases, cerebrosidases and or melanases, and mixtures thereof.
  • active agents include: analgesic active agents, anti-yeast active agents, anti-dermatitis active agents, anti-irritant active agents, immunomodulatory active agents, active agents for the treatment dry skin, antiperspirant active ingredients, anti-psoriatic active ingredients, anti-UV active ingredients, anti-histamine active ingredients, healing active ingredients, self-brightening active ingredients, antioxidants such as green tea or fractions active ingredients thereof, glycerin, laponite, caffeine, aromatic essential oils, dyes, depigmenting actives, liporegulators, softening, refreshing, deodorant, sensitizing, whitening, nourishing, and mixtures thereof.
  • analgesic active agents include: analgesic active agents, anti-yeast active agents, anti-dermatitis active agents, anti-irritant active agents, immunomodulatory active agents, active agents for the treatment dry skin, antiperspirant active ingredients, anti-psoriatic active ingredients, anti-UV active ingredients, anti-histamine active ingredients, healing active ingredients, self-brightening active
  • active agents decreasing skin differentiation and / or proliferation and / or pigmentation such as retinoic acid and its isomers, retinol and its esters, vitamin D and its derivatives, estrogens such as estradiol, kojic acid or hydroquinone; antibacterial active agents such as clindamycin phosphate, erythromycin or antibiotics of the tetracycline class; antiparasitic agents, particularly metronidazole, crotamiton or pyrethroids; antifungal actives, in particular compounds belonging to the class of imidazoles such as econazole, ketoconazole or miconazole or their salts, polyene compounds, such as amphotericin B, compounds of the allylamine family, such as terbinafine, or octopirox; antiviral assets such as acyclovir; steroidal anti-inflammatory active agents, such as hydrocortisone, betamethasone valerate or clo
  • anesthetic agents such as lidocaine hydrochloride and its derivatives; antipruritic active agents such as thenaldine, trimeprazine or cyproheptadine; keratolytic active agents such as ⁇ - and ⁇ -hydroxycarboxylic acids or ⁇ -keto carboxylic acids, their salts, amides or esters, and more particularly hydroxy acids such as glycolic acid, lactic acid, salicylic acid, acid, citric and generally fruit acids, and n-octanoyl-5-salicylic acid;
  • anti-free radical active agents such as ⁇ -tocopherol or its esters, superoxide dismutases, certain metal chelators or ascorbic acid and its esters;
  • antiseborrhoeic active agents such as progesterone; anti-dandruff active agents such as octopirox or zinc pyrithione; anti-acne active agents such as retinoic acid or benzoyl peroxide, octopirox, dextrorotatory and levorotatory sulfur-containing amino acids, their salts and N-acetylated derivatives such as N-acetylcysteine, active agents aimed at preventing the aging of the skin and / or improve its condition, and
  • any composition of the invention can be applied to the skin (on any cutaneous zone of the body) or on the mucous membranes (oral, jugal, gingival, genital, conjunctival, ).
  • a composition may have the form in particular of aqueous or oily solutions or of dispersions of the lotion or serum type, of emulsions of liquid or semi-liquid consistency of the milk type, obtained by dispersion of a phase fatty in an aqueous phase (O / W) or conversely (W / O), suspensions or emulsions of soft consistency of the cream or gel type aqueous or anhydrous, or microcapsules or microparticles, or vesicular dispersions ionic type and / or not ionic, moss, or even consisted of a solid preparation.
  • compositions are prepared according to the usual methods.
  • the amounts of the various constituents of the compositions according to the invention are those conventionally used in the fields under consideration.
  • a composition may constitute in particular a cream for cleaning, protecting, treating or caring for the face, for the body (for example, day creams, night creams, make-up remover creams, background creams). complexion, sunscreen creams), a fluid foundation, a cleansing milk, a protective or care body milk, a sunscreen, a lotion, a gel or a mousse for the care of the skin, as a cleaning lotion: a composition for the care of the scalp, for example a shampoo.
  • a cosmetic composition may also contain adjuvants customary in the cosmetic field, such as hydrophilic or lipophilic gelling agents, hydrophilic or lipophilic additives, preservatives, antioxidants, solvents, perfumes, fillers, filters, odor absorbers and dyestuffs.
  • adjuvants customary in the cosmetic field such as hydrophilic or lipophilic gelling agents, hydrophilic or lipophilic additives, preservatives, antioxidants, solvents, perfumes, fillers, filters, odor absorbers and dyestuffs.
  • the amount of chemical or biological compound or polypeptide or nucleic acid sequence contained in a composition according to the invention also known as the "effective amount" is, of course, a function of the nature of the compound and of the desired effect and can therefore vary to a large extent.
  • Effective amount means the minimum amount necessary to observe the expected effect, namely a cosmetic effect or a therapeutic effect, it being understood that the effective amounts necessary to obtain a cosmetic effect or a therapeutic effect may be, where appropriate, identical or different.
  • a composition may contain a chemical or biological compound or a polypeptide in an amount of 0.00001% to
  • the cutaneous or scalp disorders targeted by the present invention may be disorders related to a dysfunction of the proliferation and / or differentiation of epidermal cells such as keratinocytes, melanocytes, Langerhans cells, sebocytes and / or the adipocytes.
  • a cosmetic or pharmaceutical composition according to the present invention may be more particularly intended for the treatment of a skin disorder such as cutaneous aging, a rehydration disorder of the skin, an abnormal desquamation, a disorder of melanogenesis or of sebogenesis, alopecia, hirsutism, healing disorder, parakeratosis, hyperkeratosis, ichthyosis, psoriasis, eczema, rosacea, lichen, pruritus, skin pathology having an inflammatory component or resulting from an alteration of the immune response or involving phenomena of secretion and cellular invasion process, especially in the context of malignant or benign neoplasias.
  • a skin disorder such as cutaneous aging, a rehydration disorder of the skin, an abnormal desquamation, a disorder of melanogenesis or of sebogenesis, alopecia, hirsutism, healing disorder, parakeratosis, hyperkerato
  • a composition according to the invention may also be used for scrubbing or peeling, depilation or treatment of the growth or the moderate fall of hair or hair.
  • a composition according to the invention may be of interest in the following fields: for treating skin disorders related to a disorder of keratinization relating to differentiation, proliferation and cell migration, in particular for treating vulgar, comedonal, polymorphic, rosacea, nodulocystic acne, conglobata acne, senile acne, secondary acne such as solar acne, medicinal or professional acne, to treat skin disorders resulting or involving disorders of keratinization, including keratosis, parakeratosis, ichthyosis, ichthyosiform condition, Darrier's disease, palmoplantar keratoderma, leukoplakia and leukoplasiform states, cutaneous or mucosal lichen (buccal), to treat other skin disorders related to or involving a disorder keratinization with an inflammatory and / or immunoallergic component and in particular, all forms of psoriasis, be it cutaneous, mucous or nail-like, and even psoriatic arthritis
  • the skin disorders more particularly targeted by the present invention are those related to a dysfunction of the proliferation and / or differentiation of keratinocytes.
  • the present invention relates to the use of a polypeptide according to the invention, or a nucleic acid sequence coding for said polypeptide, as a tool for screening biological or chemical compounds capable of modulating the biological activity and / or the expression of said polypeptide, and in particular of carboxypeptidase A4, or of said nucleic acid sequence.
  • the present invention relates to a method for screening biological or chemical compounds capable of modulating the biological activity of a polypeptide according to the invention comprising at least the steps of: a) contacting, with at least a chemical or biological compound to be tested, at least one polypeptide according to the invention under conditions conducive to a manifestation of its biological activity, and b) to determine the biological activity of said polypeptide.
  • the biological activity of the polypeptide in particular the carboxypeptidase activity, may, for example, be determined by any method known to those skilled in the art.
  • the biological activity of the polypeptide can be compared to a reference value.
  • a reference value can be obtained by carrying out a process according to the invention in the absence of any biological or chemical compound to be tested.
  • the determination of the property of a chemical or biological compound to modulate the biological activity of a polypeptide according to the invention can also be determined by determining the capacity of said compound to modulate the binding of said polypeptide to a substrate.
  • the screening of a biological or chemical compound capable of modulating the activity of a polypeptide according to the invention can be done either by measuring a direct interaction with said polypeptide as indicated above, or by measuring the biological activity or the expression of a target molecule belonging to the signaling or metabolism pathways in which said polypeptide may be involved.
  • a method according to the invention can be carried out on a cell sample, obtained either from a skin biopsy, or from cells in culture, or any other method of noninvasive sampling of the stratum corneum, such as for example by stripping varnish or by means of an D'Squam TM marketed by Cuderm, or on an acellular sample, for example a cell lysate.
  • a cell sample there may be mentioned differentiated keratinocytes.
  • a polypeptide used in a process according to the present invention may be the CPA4 protein.
  • the present invention also relates to a method for screening biological or chemical compounds capable of modulating the expression of a polypeptide according to the invention comprising at least the steps of: a) bringing into contact with at least one chemical compound or biological test, at least one nucleic acid sequence encoding a polypeptide according to the invention under conditions conducive to the expression of said sequence, and b) determine the expression of said sequence.
  • nucleic acid sequence can be determined, for example, by means of oligonucleotide probes, by protocols known to those skilled in the art.
  • the expression of a nucleic acid sequence according to the invention may be compared with a reference value obtained, for example, by carrying out a process according to the invention in the absence of test compound.
  • the present invention also relates to the use of at least one polypeptide according to the invention, or at least one nucleic acid sequence coding for said polypeptide, as a tool for evaluation of a condition of the epidermis or scalp.
  • the present invention relates to a method for evaluating a state of the epidermis comprising at least the steps of: a) determining a content of a polypeptide according to the invention, or nucleic acids encoding said polypeptide, in an epidermis sample, and b) comparing said content determined in step a) with a reference value.
  • the comparison made in step b) can make it possible to draw information concerning a possible skin disorder.
  • a method according to the invention can be carried out on a sample of epidermis taken from an individual.
  • a method according to the invention may also be performed on a skin sample taken from a reconstructed skin in order to qualify the state.
  • An epidermis sample may be taken by any method known to those skilled in the art, and especially as indicated above.
  • a method according to the invention can be carried out in vitro or ex vivo.
  • a reference value may be, for example, a polypeptide or nucleic acid sequence content determined on an epidermis sample taken from healthy skin or a reconstructed reference epidermis.
  • the skin disorders targeted by the present invention may be those resulting from a deficiency or overexpression of the CPA4 protein.
  • a polypeptide suitable for implementing a method according to the invention may advantageously be the CPA4 protein.
  • a nucleic acid sequence suitable for carrying out a method according to the invention may advantageously be a nucleic acid sequence coding for CP A4, for example of the mRNA type.
  • the determination of a content of polypeptide according to the invention or of nucleic acids according to the invention in an epidermis sample may be carried out by any protocol known to those skilled in the art.
  • ELISA Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay
  • Such an antibody may be as defined above.
  • such an antibody can be labeled by means of a substance detectable directly or detectable by reaction with another reagent.
  • nucleic acid detection methods mention may be made of Southern Blot, RT-PCR, Northern Blot and Q-PCR.
  • agents suitable for the detection of nucleic acids, and in particular mRNA mention may be made of labeled nucleic acid probes capable of hybridizing to the nucleic acid sequences.
  • Such a nucleic acid probe can be easily obtained by any method known to those skilled in the art.
  • nucleic acid sequences in accordance with the invention can thus be used to produce sense and / or antisense oligonucleotide primers, which hybridise under conditions of high stringency to the sequence SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 , SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, or SEQ ID NO: 5 or an analogue thereof.
  • the present invention relates to a method for evaluating a state of an epidermis comprising at least the steps of: a) determining a value of the biological activity of a polypeptide according to the invention in a sample of epidermis, and b) comparing said value determined in step a) with a reference value.
  • the comparison made in step b) may make it possible to draw information indicative of a possible skin disorder.
  • the biological activity whose value is determined may be the enzymatic activity of carboxypeptidase A4. Any method of measuring an enzymatic activity known to those skilled in the art can be implemented in a process according to the invention.
  • a method for evaluating a state of an epidermis according to the invention can be implemented in a method for diagnosing a skin disorder or the scalp.
  • the present invention relates to a cosmetic treatment method comprising at least one step of applying to at least part of the skin, mucous membranes and / or keratinous fibers, at least one cosmetic composition according to the invention. 'invention.
  • the present invention also relates to a non-therapeutic method for demonstrating an effect of a treatment capable of regressing a skin disorder or scalp in an individual, comprising at least the steps of: a ) perform, prior to the treatment, at least a first determination, in a first skin sample or scalp taken from said individual, of a biological activity and / or the expression of a polypeptide according to the invention, or of a nucleic acid sequence encoding said polypeptide; b) performing, after the treatment, at least one second determination, in a second skin sample or scalp taken from said individual, of said biological activity and / or said expressing said polypeptide or said nucleic acid sequence determined in step a), and c) comparing the first and second determinations, in order
  • the biological activity and the expression of a polypeptide can be determined as indicated above.
  • the present invention also relates to the use of at least one polypeptide according to the invention, or a nucleic acid sequence encoding said polypeptide, for the preparation of an isolated reconstructed skin.
  • the present invention relates to a method for preparing an isolated reconstructed skin comprising at least the step of contacting at least one polypeptide according to the invention, or a nucleic acid sequence encoding said polypeptide, with cells capable of generating isolated reconstructed skin, and in particular keratinocytes
  • FIGURES - Figure 1 Gel obtained according to Example IA illustrating the detection by RT-PCR of the expression of the CP A4 in different tissue samples (1: brain, 2: colon; 3: esophagus; 4: heart; 5: placenta, 6: skin, 7: small intestine, 8: stomach, 9: tongue)
  • Figure 2 Gel obtained according to Example IB, illustrating the detection by RT-PCR of the expression of CP A4 at different days emersion (J1, J3, J8, J10, J13, J15 and J18) of a reconstructed skin.
  • Human cDNA from different organs (brain, colon, esophagus, heart, placenta, skin, small intestine, stomach and tongue) is obtained from Biochain (C 8234501 and C 8234502 DNA panel human tissue). The DNA concentration was adjusted to 2.5 ⁇ g / ml.
  • Each PCR is carried out according to the following protocol: 1 ⁇ l cDNA + 5 ⁇ l 1OX buffer + 1 ⁇ l dATP at 10 ⁇ M + 1 ⁇ l of each 50 ⁇ M primer + 1 ⁇ l of TAQ polymerase ACCU + 40 ⁇ l of water.
  • the hybridization temperature of the primers was set at 45 ° C.
  • the strand separation and elongation temperatures were set at 94 ° C. and 72 ° C.
  • PCR product was analyzed on 1% agarose gel by diluting a PCR aliquot with loading buffer. The gel is then visualized under a UV lamp (Gel Doc, Biorad), after labeling with a GelStar ® nucleic acid fluorescent marker (Tebu-Bio, 50535 BMA).
  • the epidermal cDNA is obtained after extraction of the keratinocyte nRNA in culture at different days of emergence (from J1 to J18) using the RNeasy (Qiagen) and First-Strand cDNA synthesis kits (Amersham Pharmacia). Biotech).
  • FIG. 1B demonstrates the expression of CP4 A4NA on DNA extracts of keratinocytes at different stages of differentiation.
  • a 490 bp band is amplified by primer pair SC258 / SC259 (SEQ ID NO: 13 and SEQ ID NO: 14).
  • the sequence of this amplicon has been confirmed.
  • the loss of the signal from Jl 3 could correspond to a beginning of degeneration of the surviving keratinocytes of fewer and fewer.
  • Example II Preparation of Carboxypeptidase 4 Specific Antibodies The following immunogenic peptide sequences of carboxypeptidase A4 were identified.
  • synthesized peptides were coupled on keyhole limpet hemocyanin (KLH). Two rabbits were immunized by administering the peptides thus prepared.
  • KLH keyhole limpet hemocyanin
  • the antibodies were immuno-purified after sampling on D74.
  • the resulting antibodies were used to mark sections of hair follicles.
  • the tagging protocol was performed as follows. The tissue sample was placed in a Coplin Bowl, and fixed during
  • the sample is successively rinsed with a PBS buffer for 15 minutes, then a 1% PBS-milk buffer for 15 minutes, then a 0.05% PBS-tween buffer.
  • the primary antibodies were then incubated with the samples during
  • the anti-CBP4 II antibody was diluted 1:50 and the anti-CBP4 III antibody was diluted 1/10 in 0.05% PBS-tween buffer and 10% goat serum.
  • the samples were rinsed three times with 0.05% PBS-tween buffer and then incubated in the presence of a FITC-conjugated goat anti-rabbit secondary antibody (fluoroisothiocyanate) diluted 1/80 in PBS-tween 0.05. % for 30 minutes at room temperature.
  • a FITC-conjugated goat anti-rabbit secondary antibody fluoroisothiocyanate

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Abstract

L'invention concerne une composition cosmétique ou pharmaceutique, comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un polypeptide de séquence d'acides aminés codée par une séquence d'acides nucléiques représentée en tout ou partie par une séquence choisie parmi SEQ ID NO :1, des analogues de celle-ci, ou un fragment de celle-ci.

Description

Utilisation de carboxypeptidases dans le domaine cosmétique et thérapeutique
La présente invention a pour objet l'utilisation, en cosmétique et en thérapeutique, d'une protéine de type protéase appartenant à la famille des carboxypeptidases, la carboxypeptidase A4, ou de polypeptides dérivés de cette protéine, notamment pour le traitement de troubles cutanés ou du cuir chevelu, en particulier liés à un dysfonctionnement de la prolifération et/ou de la différenciation et/ou de la migration de cellules épidermiques.
L'invention a également pour objet des compositions cosmétiques ou pharmaceutiques comprenant au moins la carboxypeptidase A4 (CP A4), un polypeptide dérivé de celle-ci, ou un composé apte à en moduler l'activité biologique et/ou l'expression, destinées au traitement de troubles cutanés ou du cuir chevelu.
L'épiderme est conventionnellement divisé en une couche basale de kératinocytes constituant la couche germinative de l'épiderme, une couche dite épineuse constituée de plusieurs couches de cellules polyédriques et enfin, un ensemble de couches supérieures appelées couches cornées (ou stratum corneum), constituées de kératinocytes au stade terminal de leur différenciation appelés cornéocytes.
On sait que la peau humaine, constituée du derme et de l'épiderme, forme une barrière naturelle et efficace contre les agressions extérieures, notamment chimiques, mécaniques ou infectieuses, et à ce titre un certain nombre de réactions de défense contre les facteurs environnementaux (climat, rayons ultraviolets, tabac, ...) et/ou les xénobiotiques, comme par exemple les micro-organismes, se produisent à son niveau.
Cette propriété, appelée fonction barrière, est précisément assurée principalement par la couche la plus superficielle de l'épiderme, à savoir le stratum corneum. II est manifeste que la qualité de la barrière cutanée et des muqueuses est dépendante de mécanismes biologiques endogènes complexes faisant intervenir de nombreux facteurs de croissance, des molécules d'adhésion, des hormones et des enzymes du métabolisme lipidique.
Par ailleurs on sait également que de nouveaux kératinocytes sont produits en permanence pour compenser la perte en continu de cellules épidermiques au niveau de la couche cornée selon un mécanisme dénommé desquamation. Un déséquilibre entre la production des cellules au niveau de la couche basale et le taux de desquamation peut, notamment, conduire à des formations d'écaillés à la surface de la peau.
Ainsi, de nombreux troubles cutanés peuvent se caractériser par un dysfonctionnement de la prolifération et/ou de la différenciation et/ou de la migration cellulaire épidermique, et notamment des kératinocytes. Par exemple, des troubles de la prolifération peuvent résulter en la production d'une couche cornée épaissie et par une desquamation anormale, c'est-à-dire par une hyperkératose, qui peut relever ou non d'une pathologie selon son intensité. Ces troubles peuvent être, notamment, la xérose (ou sécheresse cutanée), les ichtyoses, le psoriasis, certaines lésions tumorales bénignes ou malignes, et les hyperkératoses réactionnelles. A l'inverse, certains troubles entraînent un amincissement de l'épiderme et plus particulièrement de la couche cornée. Ce type de manifestations se traduit alors par une fragilité excessive du revêtement cutané. A titre représentatif, et non limitatif, de ces troubles, on peut notamment citer des réactions d'origine immunitaire généralement induites par la mise en présence ou en contact avec un ou plusieurs agents exogènes. Ainsi, il existe un besoin de disposer de compositions utilisables dans des troubles cutanés ou du cuir chevelu résultant des dysfonctionnements précités.
Il existe également un besoin de disposer de nouvelles cibles cosmétiques ou thérapeutiques.
Il existe également un besoin de disposer de nouveaux outils de criblage de molécules utilisables en cosmétique ou dans le traitement et/ou l'amélioration des symptômes de troubles cutanés ou du cuir chevelu, comme ceux précités.
La présente invention a pour objet de satisfaire ces besoins.
Ainsi, la présente invention concerne, selon un de ses aspects, une composition cosmétique ou pharmaceutique, comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un polypeptide de séquence d'acides aminés codée par une séquence d'acides nucléiques représentée en tout ou partie par une séquence choisie parmi SEQ ID
NO : 1 , des analogues de celle-ci, ou un fragment de celle-ci.
Selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne une composition cosmétique ou pharmaceutique, comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour une polypeptide conforme à l'invention, ou une séquence sens, anti-sens ou interférentielle correspondant à ladite séquence. Selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne l'utilisation d'au moins un polypeptide conforme à l'invention ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement et/ou à la prévention d'un trouble cutané ou du cuir chevelu.
Selon un autre aspect, la présente invention concerne l'utilisation cosmétique d'au moins un polypeptide conforme à l'invention ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide à titre d'agent actif pour prévenir et/ou traiter les signes du vieillissement cutanée. Selon un autre aspect, la présente invention concerne l'utilisation cosmétique d'au moins un polypeptide conforme à l'invention ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide à titre d'agent actif pour prévenir une diminution et/ou renforcer la fonction barrière de la peau.
Selon encore un autre aspect, la présente invention concerne l'utilisation cosmétique d'au moins un polypeptide conforme à l'invention ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide à titre d'agent actif pour améliorer l'état d'hydratation de la peau.
Ainsi, la présente invention repose, plus particulièrement, sur l'identification, par les inventeurs, de la carboxypeptidase A4 à titre de d'agent et/ou de cible cosmétique ou pharmaceutique potentielle au niveau du stratum corneum de l'épiderme, ainsi qu'au niveau du follicule pileux.
En particulier, cette identification résulte de l'observation selon laquelle la CPA4 était spécifiquement exprimée au cours de la différenciation tardive des kératinocytes, et présente au niveau du stratum corneum de l'épiderme de peau saine et jeune.
Ainsi, comme il ressort des exemples présentés ci-après, les inventeurs ont caractérisé l'expression de l'ARNm de la protéine CPA4, dont la séquence d'acides aminés est représentée par la séquence SEQ ID NO : 8, dans un grand nombre de tissus biologiques humains, tels que le cerveau, le colon, l'œsophage, le cœur, le placenta, la peau, le petit intestin, l'estomac et la langue, d'où il résulte que cet ARNm est plus particulièrement exprimé au niveau de l'épiderme. Les inventeurs ont également, pour la première fois, mis en évidence la présence de la CP A4 au niveau de follicules pileux.
Plus précisément, la carboxypeptidase A4 (CPA4) est une protéase appartenant à la famille des métallo-carboxypeptidases et, notamment, à la sous-famille A. Les protéases sont des enzymes hydrolytiques capables de couper des liaisons peptidiques. Un certain nombre d'entre elles sont aujourd'hui reconnues comme ayant un rôle essentiel au niveau de l'équilibre et de la physiologie de l'épiderme.
Leurs rôles multiples couvrent aussi bien des fonctions de dégradation de protéines usagées que celui d'activation d'enzymes ou de protéines, par excision de séquences peptidiques précises, ou encore que celui de régulation de l'homéostasie épidermique par libération des cornéocytes.
A titre d'exemple, des protéases ont notamment été impliquées dans le contrôle de la prolifération et/ou la différenciation épidermique, dont la dérégularisation peut conduire, par exemple, à une desquamation anormale. Plus particulièrement, les métallo-carboxypeptidases sont des enzymes de type hydrolase, qui clivent la liaison peptidique des chaînes protéiques en présence d'eau et de certains ions métalliques tels que le zinc, le cobalt ou le manganèse.
La carboxypeptidase A4 a été initialement identifiée par HUANG et al. (Cancer Res., 1999, 59:2981-2988) à partir d'une lignée de cellules issues d'une tumeur de la prostate.
La CP A4 est synthétisée sous la forme d'une préproprotéine de 421 acides aminés (SEQ ID NO : 6) contenant deux domaines « zinc-binding », signature des métallo-carboxypeptidases, un peptide signal de 16 acides aminés à l'extrémité N- terminale (SEQ ID NO : 9) et un peptide propeptide (SEQ ID NO : 10) (EC 3.4.17, SwissProt : Q9UI42). L'élimination du peptide signal conduit à la génération d'une proprotéine (SEQ ID NO : 7), dont le clivage des 97 acides aminés (propeptide SEQ ID NO : 10) à l'extrémité N-terminale conduit à la formation d'une enzyme active (SEQ ID NO : 8).
Au sens de la présente invention, on entend désigner de manière générale, sauf indications contraires, par CP A4, la forme préproprotéine (SEQ ID NO : 6), la forme proprotéine (SEQ ID NO : 7) et la forme protéine (SEQ ID NO : 8). Selon un autre de ses aspects, la présente invention se rapporte à l'utilisation d'au moins un polypeptide conforme à l'invention, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, à titre d'outil de criblage de composés biologiques ou chimiques susceptibles de moduler l'activité biologique et/ou l'expression dudit polypeptide ou de ladite séquence d'acides nucléiques.
Selon encore un autre de ses aspects, la présente invention concerne l'utilisation d'au moins un composé chimique ou biologique, apte à moduler l'activité biologique et/ou l'expression d'au moins un polypeptide conforme à l'invention, pour la préparation d'une composition cosmétique ou pharmaceutique destinée au traitement et/ou à la prévention d'un trouble cutané ou du cuir chevelu.
De manière inattendue, les inventeurs ont en effet constaté qu'il était possible d'utiliser un modulateur de l'activité biologique et/ou de l'expression d'une protéase spécifique, à savoir la carboxypeptidase A4 (CP A4) pour la préparation de compositions cosmétiques ou pharmaceutiques destinées à traiter des affections touchant l'épiderme, et notamment des troubles cutanés ou du cuir chevelu impliquant un dysfonctionnement des processus de prolifération et/ou différenciation et/ou migration des cellules entrant dans la structure de l'épiderme, et notamment des kératinocytes.
En particulier, les polypeptides, les séquences d'acide nucléique et les composés biologiques ou chimiques modulateurs selon l'invention peuvent être plus particulièrement dédiés à une mise en œuvre à titre d'agent actif cosmétique pour le soin de la peau.
Ces agents actifs selon l'invention peuvent être dédiés au traitement et/ou la prévention et/ou la réversion cosmétique, en particulier esthétique, de signes cutanés, notamment coïncidant avec les désordres précédemment indiqués. Au sens de l'invention, on entend par traitement et/ou prévention cosmétique ou esthétique d'une peau, le fait d'exercer une action sur l'apparence de cette peau indépendamment de tout effet sur les causes susceptibles d'être à l'origine d'une altération de cette peau.
Selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne l'utilisation d'au moins un polypeptide conforme à l'invention, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, à titre d'outil d'évaluation d'un état de l'épiderme ou du cuir chevelu. L'état de l'épidémie peut être indicatif d'un trouble cutané ou du cuir chevelu.
Ainsi, la présente invention permet de fournir un outil simple et rapide de diagnostic d'un état de la peau, par exemple par mesure d'une teneur en CP A4 et/ou d'une activité de type CPA4, dans un échantillon cutané, et notamment de stratum corneum. Selon encore un autre de ses aspects, la présente invention se rapporte à l'utilisation d'au moins un polypeptide conforme à l'invention, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, pour la préparation d'une peau reconstruite isolée.
Selon un autre de ses aspects, la présente invention se rapporte à un procédé de traitement cosmétique, comprenant au moins une étape consistant à appliquer sur au moins une partie de la peau, des muqueuses et/ou des fibres kératiniques, au moins une composition cosmétique conforme à l'invention.
Selon encore un autre de ses aspects, la présente invention se rapporte à un procédé, non thérapeutique, pour mettre en évidence un effet d'un traitement susceptible de faire régresser un trouble cutané ou du cuir chevelu chez un individu, comprenant au moins les étapes consistant à: a) effectuer, avant le traitement, au moins une première détermination, dans un premier échantillon cutané ou du cuir chevelu prélevé chez ledit individu, d'une activité biologique et/ou de l'expression d'un polypeptide conforme à l'invention, ou d'une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, b) effectuer, après le traitement, au moins une seconde détermination, dans un second échantillon cutané ou du cuir chevelu prélevé chez ledit individu, de ladite activité biologique et/ou de ladite expression dudit polypeptide ou ladite séquence d'acides nucléiques déterminés à l'étape a), et c) comparer les première et deuxième déterminations, notamment afin d'en déduire une information relative à un effet au moins du traitement.
Un tel traitement peut en particulier être un traitement cosmétique.
Selon un mode de réalisation, un polypeptide convenant à l'invention peut avoir une séquence d'acides aminés codée par une séquence d'acides nucléiques représentée en tout ou partie par une séquence choisie parmi SEQ ID NO : 1, SEQ ID
NO : 2, SEQ ID NO : 3, SEQ ID NO : 4, ou SEQ ID NO : 5 ou un analogue de celle-ci, ou un fragment de celle-ci.
Selon un autre mode de réalisation, un polypeptide convenant à l'invention peut avoir une séquence d'acides aminés représentée en tout ou partie par une séquence choisie parmi SEQ ID NO : 6, SEQ ID NO : 7, SEQ ID NO : 8, SEQ ID NO : 10, SEQ ID NO : 11, SEQ ID NO : 12, ou SEQ ID NO : 13, ou un analogue de celle-ci, ou un fragment de celle-ci.
Par « analogue d'un polypeptide », on entend désigner tout polypeptide présentant une homologie de séquence, en particulier vis-à-vis d'une des séquences caractéristiques dudit polypeptide, ainsi qu'une activité biologique de même nature. L'homologie peut être d'au moins 85 %, par exemple d'au moins 90 %, et par exemple d'au moins 95 %.
L'homologie de séquence peut résulter de modifications issues de mutation ou de variation dans les séquences des peptides selon l'invention, provenant soit de la délétion d'un ou plusieurs acides aminés, soit de l'insertion d'un ou plusieurs acides aminés, soit encore de la substitution d'un ou plusieurs acides aminés dans les séquences caractéristiques des polypeptides selon l'invention.
Par « séquence caractéristique du polypeptide », on entend viser notamment au regard de la CPA4, la séquence propeptidique constituée par les acides aminés N- terminaux 17 à 113 (SEQ ID NO : 10), le site actif en position 182, comprenant le cas échéant les acides aminés entourant ce site actif, à raison, par exemple, de 1, voire de 2, voire de 3, voire de 4, voire de 5, voire de 6, voire de 7, voire de 8 acides aminés de part et d'autre du site actif, les sites de liaison du zinc en position 181, 184, et 308, comprenant le cas échéant les acides aminés de part et d'autre de ces sites de liaison, à raison, par exemple, de 1, voire de 2, voire de 4, voire de 8 acides aminés de part et d'autre des sites de liaison du zinc, ainsi que les séquences SEQ ID NO : 11, SEQ ID NO : 12, et SEQ ID
NO : 13 représentant des épitopes dérivés de la CPA4.
De manière générale, les analogues polypeptidiques peuvent comprendre des substitutions conservatrices par rapport à la séquence d'acides aminés du polypeptide naturel. Plusieurs de ces modifications peuvent être combinées.
A titre d'exemple de mutations que l'on peut considérer dans la présente invention, il peut être mentionné le remplacement d'un ou plusieurs résidus d'acides aminés par des résidus d'acides aminés ayant un indice hydropathique similaire sans pour autant affecter de manière sensible les propriétés biologiques du polypeptide, et notamment son activité biologique telle que son activité carboxypeptidase.
L'indice hydropathique est un indice attribué aux acides aminés en fonction de leur hydrophobicité et de leur charge (Kyte et al. (1982), J. Mol. Biol, 157 : 105).
Un polypeptide ou analogue également visé par la présente invention peut être un polypeptide ayant subi une ou plusieurs modification(s) post-traductionnelle(s).
Par « modification(s) post-traductionnelle(s) », on entend englober l'ensemble des modifications qu'un peptide ou une protéine est susceptible de subir à l'issu de sa synthèse dans une cellule, telle que par exemple une ou des phosphorylation(s), une ou des glycosylation(s), une ou des lipidation(s), telles qu'une farnésylation ou une palmitoylation, un réarrangement structural de type formation de ponts disulfures et/ou clivage à l'intérieur de la séquence peptidique.
L'analogue peut, par ailleurs, présenter sensiblement la même activité biologique que le polypeptide naturel.
Selon un mode de réalisation un polypeptide convenant à la mise en place de l'invention peut également être un polypeptide naturel ou synthétique, le cas échéant susceptible d'être obtenu après protéolyse de la carboxypeptidase A4 par des protéases ou par synthèse chimique ou biologique ou par extraction à partir d'un tissu biologique, comme par exemple la peau, exprimant naturellement ou après transduction ce polypeptide, ainsi que les différentes formes post-traductionnelles de celui-ci, ou encore tout polypeptide naturel ou synthétique dont la séquence comprend totalement ou partiellement (en tout ou partie) une séquence d'acides aminés précitée, par exemple les variants, les analogues et les fragments. Selon un autre mode de réalisation, un polypeptide convenant à la mise en œuvre de l'invention peut également être un polypeptide tel que défini précédemment dans lequel un résidu au moins a été remplacé par un résidu d'acide aminé d'indice hydropathique similaire, comme défini précédemment.
Selon un autre mode de réalisation, un polypeptide convenant à la mise de l'invention peut également être un polypeptide tel que défini précédemment fusionné avec un autre polypeptide, un agent de ciblage hydrophile ou hydrophobe, un précurseur de bioconversion, un agent de marquage, par exemple, luminescent, ou radioactif. De manière non limitative, on peut citer comme exemple de composés susceptibles d'être couplés avec un polypeptide conforme à l'invention des protéines fluorescentes comme la « Green Fluorescent Protein », des composés chimiques fluorescents tels que la rhodamine, la fluorescéine, ou le Texas Red, des composés phosphorescents, des éléments radioactifs, tels que 3H, 35S, 121I ou 125I.
Selon la nature des composés susceptibles d'être couplés avec un polypeptide conforme à l'invention, le couplage peut être opéré par des procédés chimiques, notamment au moyen de fonctions chimiques réactives ou par des procédés de biologies moléculaires connus de l'homme de l'art. Selon un mode de réalisation, un polypeptide convenant à l'invention peut consister en une séquence d'acide aminé représentée par SEQ ID NO : 6, SEQ ID NO : 7, SEQ ID NO : 8, SEQ ID NO : 10, SEQ ID NO : 11, SEQ ID NO : 12, ou SEQ ID NO : 13, ou un fragment de celle-ci.
Selon un autre mode de réalisation, la présente invention concerne également une composition cosmétique ou pharmaceutique, comprenant dans un milieu physio logiquement acceptable, au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour un polypeptide conforme à l'invention, ou une séquence sens, anti-sens ou interférentielle correspondant à ladite séquence.
Ainsi, la présente invention se rapporte également à l'utilisation de séquences ou de fragments de séquences d'acides nucléiques, notamment d'acides désoxyribonucléiques, ou d'acides ribonucléiques codant pour un polypeptide conforme à l'invention.
Au sens de la présente invention, on entend désigner par « fragment de séquence d'acides nucléiques », une séquence d'acides nucléiques codant pour tout ou partie d'un polypeptide conforme à l'invention, ou un analogue de celui-ci, et en particulier une séquence d'acides nucléiques choisie parmi SEQ ID NO : 1 représentant la séquence de l'ARNm de la CP A4 incluant les régions non codantes comme la région polyA+, SEQ ID NO : 2 (codant pour la forme préproprotéine), SEQ ID NO : 3 (codant pour la forme proprotéine), SEQ ID NO : 4 (codant pour la protéine) ou SEQ ID NO : 5 (codant pour le propeptide), ou un analogue de celle-ci.
Par « analogue d'une séquence d'acides nucléiques », on entend désigner toute séquence d'acides nucléiques, éventuellement résultant de la dégénérescence du code des acides nucléiques, et codant pour une séquence d'un polypeptide identique ou analogue à la séquence du polypeptide codée par ladite séquence d'acides nucléiques.
Les séquences d'acides nucléiques peuvent être issues de toutes origines possibles, à savoir soit animale, en particulier de mammifères et encore plus particulièrement humaine, soit végétale, soit de micro-organismes (virus, phages, bactéries entre autres) ou encore de champignons, sans préjuger du fait qu'elles soient présentes de manière naturelle ou non dans ledit organisme d'origine.
En l'occurrence, l'invention se rapporte également à l'utilisation de fragments d'acides nucléiques isolés et purifiés codant les polypeptides revendiqués. Les séquences d'acides nucléiques selon l'invention peuvent notamment être utilisées pour préparer des séquences d'acides ribonucléiques correspondantes sens ou antisens.
L'invention a également pour objet l'utilisation de tout polynucléotide, de séquence d'acides ribonucléiques ou désoxyribonucléiques, sens ou antisens, notamment « Small interfèrent RNA », correspondants au moins à la séquence d'acides nucléiques codante SEQ ID NO : 1, SEQ ID NO : 2, SEQ ID NO : 3, SEQ ID NO : 4, ou SEQ ID
NO : 5 et des analogues de celle-ci.
Selon un mode de réalisation, une séquence d'acide nucléique convenant à l'invention peut consister en une séquence représentée par SEQ ID NO : 1, SEQ ID NO : 2, SEQ ID NO : 3, SEQ ID NO : 4, ou SEQ ID NO : 5 ou un fragment de celle-ci.
Selon un autre aspect la présente invention concerne l'utilisation d'au moins un composé chimique ou biologique apte à moduler l'activité biologique et/ou l'expression d'au moins un polypeptide conforme à l'invention, pour la préparation d'une composition cosmétique ou pharmaceutique destinée au traitement et/ou à la prévention d'un trouble cutané ou du cuir chevelu.
Au sens de la présente invention, on entend par l'expression « composé chimique ou biologique apte à moduler l'activité biologique et/ou l'expression » tout composé apte à agir, directement ou indirectement, sur au moins un polypeptide conforme à l'invention, ou une séquence d'acides nucléiques codant pour celui-ci, ou sur un élément d'une voie de signalisation intra ou extra-cellulaire, ou d'une voie métabolique, impliquant ledit polypeptide, ou sur un élément impliqué dans la régulation de la transcription et/ou la traduction d'une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide.
Par « activité biologique », on entend désigner notamment au regard de la
CP A4, l'activité biologique du propeptide (SEQ ID NO : 10), le cas échéant en combinaison avec le peptide signal, visant à inhiber l'activité enzymatique de la CPA4
(SEQ ID NO : 9), l'activité biologique de la protéine CP A4 se traduisant par une activité protéolytique, ainsi que l'activité biologique potentielle de la préproprotéine préproCPA4
(SEQ ID NO : 6) ou de la proprotéine pro-CPA4 (SEQ ID NO : 7), susceptible de donner une protéine CP A4 active (SEQ ID NO : 8) par clivage de la ou des séquence(s) propeptidique(s) requise(s), ainsi que les propriétés immunogènes des épitopes identifiés par les séquences SEQ ID NO : 11, SEQ ID NO : 12 et SEQ ID NO : 13.
Selon un mode de réalisation, un composé chimique ou biologique convenant à une utilisation selon l'invention, peut être un inhibiteur de l'activité biologique et/ou de l'expression d'un polypeptide conforme à l'invention. Selon un mode de réalisation, un inhibiteur peut être choisi parmi une protéase, la latéxine et ses analogues, l'héparine et ses dérivés, l'héparane sulfate et ses dérivés, un anticorps, un polypeptide de séquence d'acides aminés représentée en tout ou partie par SEQ ID NO : 10 ou un analogue de celle-ci.
La séquence primaire en acides aminés d'un polypeptide ou d'une protéine peut déterminer des sites spécifiquement reconnus par une ou des protéases qui, une fois la reconnaissance de ces sites effectuée, peuvent induire son clivage par protéolyse.
Un tel clivage peut conduire à une activation ou une inhibition de l'activité biologique du polypeptide ou de la protéine considérée.
Une protéase dite inhibitrice convenant à la mise en œuvre de l'invention peut présenter un site spécifique de reconnaissance et/ou de fixation et de coupure au sein de la séquence d'acides aminés d'un polypeptide conforme à l'invention.
Une telle protéase peut aisément être identifiée par tout protocole enzymatique connu de l'homme de l'art.
La latéxine, inhibiteur endogène spécifique des métallo-carboxypeptidases zinc-dépendantes, l'héparine et ses dérivés, et l'héparane sulfate et ses dérivés, peuvent interagir avec la CPA4 afin de former des complexes inactifs. Par « analogue de la latéxine, ou dérivé de l'héparine, ou de l'héparane sulfate », on entend viser des fragments actifs de ces protéines ou glycosaminoglycanes, et en particulier des fragments susceptibles d'interagir avec un polypeptide conforme à l'invention et d'inhiber son activité biologique. Par exemple, pour la mise en œuvre de l'invention, il peut être envisagé l'utilisation d'héparanes de bas poids moléculaire ou d'héparanes de haut poids moléculaire, dont le mode de préparation est bien connu de l'homme de l'art.
Un anticorps susceptible d'être utilisé à titre d'inhibiteur de l'activité biologique et/ou de l'expression d'un polypeptide conforme à l'invention peut être obtenu par tout procédé connu de l'homme de l'art, tel que décrit dans « Antibodies: A
Laboratory Manual », CoId Spring Harbor Laboratory Press, CoId Spring Harbor, N.Y.
(1990).
Par anticorps, on entend désigner de manière générale des anticorps monoclonaux ou polyclonaux, ainsi que des fragments d'immunoglobuline susceptibles de lier un antigène et des anticorps recombinants. Ces anticorps peuvent être produits par toute technique de génie génétique connue de l'homme de l'art ou par coupure enzymatique ou chimique d'anticorps intacts.
Ainsi, l'invention concerne également un anticorps reconnaissant spécifiquement au moins un polypeptide dont la séquence d'acides aminés peut être représentée en tout ou partie par au moins une séquence choisie parmi SEQ ID NO : 6, SEQ ID NO : 7, SEQ ID NO : 8, ou SEQ ID NO : 10, SEQ ID NO : 11, SEQ ID NO : 12, ou SEQ ID NO : 13 ou un analogue de celle-ci, et étant inhibiteur de l'activité biologique d'un polypeptide conforme à l'invention.
Selon un mode de réalisation, un anticorps selon l'invention peut reconnaître spécifiquement un épitope immunogène choisi parmi SEQ ID NO : 11, SEQ ID NO : 12, ou SEQ ID NO : 13, ou un analogue de celui-ci.
Selon un autre mode de réalisation, un composé biologique ou chimique convenant à l'invention peut être un activateur de l'activité biologique et/ou de l'expression d'un polypeptide conforme à l'invention. A titre d'exemple d' activateur convenant à la mise en œuvre de la présente invention, on peut mentionner, de manière non exhaustive, un activateur choisi parmi une protéase, un anticorps, un inhibiteur d'histone déacétylase, par exemple un sel de butyrate. Comme indiqué précédemment l'identification de protéases dites activatrices convenant à la mise en œuvre relève de la pratique de routine de l'homme de l'art.
Ainsi, il a été observé que la carboxypeptidase A4 pouvait être activée par la thrombine, la trypsine, les kallikréines 1 et 2, la furine, les proprotéines convertases 1, 2, 4, 5 et 7, ADAM 17, la stromélysine, la yapsine.
Ainsi, une protéase activatrice convenant à l'invention peut être choisie, par exemple, parmi les enzymes précitées.
Un anticorps activateur convenant à la présente invention peut être d'un type tel que défini précédemment et obtenu par tout procédé connu de l'homme de l'art. A titre d'exemple de sel de butyrate convenant à la présente invention, il peut être fait mention, de manière non limitative, du butyrate de sodium.
Il est entendu que l'ensemble des compositions cosmétiques ou pharmaceutiques considérées selon l'invention, mettent en œuvre un milieu physiologique acceptable.
Au sens de la présente invention, on entend désigner par « milieu physio logiquement acceptable », un milieu convenant à l'application d'une composition sur une matière kératinique, telle que la peau, le cuir chevelu, les lèvres, les muqueuses et les fibres kératiniques comme les cheveux, les ongles et les poils. L'invention concerne également l'utilisation d'au moins un polypeptide conforme à l'invention ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement et/ou à la prévention d'un trouble cutané ou du cuir chevelu.
Au sens de la présente invention, on entend désigner par « pharmaceutique » une composition pouvant être mise en œuvre dans le cadre d'un traitement prophylactique et/ou curatif, ou d'une méthode de diagnostic d'un trouble cutané ou du cuir chevelu.
Selon un autre mode de réalisation, une composition cosmétique ou pharmaceutique conforme à l'invention peut comprendre, en outre, au moins un agent actif cosmétique et/ou thérapeutique. Comme exemples d'agents actifs utilisables dans le cadre de la présente invention, il peut être fait mention d'huiles cosmétiques, telles que les huiles de silicone, les huiles végétales de type triglycérides, les huiles hydrocarbonées telles que l'huile de parleam et les esters d'acides gras et d'alcool gras.
Il peut également être possible d'utiliser d'actifs permettant d'améliorer l'état de la peau, tels que des actifs hydratants ou des agents actifs permettant d'améliorer la barrière lipidique naturelle, tels que des céramides, des sulfates de cholestérol et/ou des acides gras et leurs mélanges.
Il peut également être possible d'utiliser des enzymes ayant une activité sur la peau, telles que d'autres protéases que la CP A4, comme par exemple, et de manière non exhaustive, des lipases, des glycosidases, des amidases, des cérébrosidases et/ou des mélanases, et leurs mélanges.
Comme autres exemples d'agents actifs convenant à la mise en œuvre de la présente invention figurent : des actifs analgésiques, des actifs anti-levures, des actifs anti- dermatites, des actifs anti-irritants, des actifs immunomodulateurs, des actifs pour le traitement de la peau sèche, des actifs anti-transpirants, des actifs anti-psoriatiques, des actifs protecteurs contre les UV, des actifs anti-histaminiques, des actifs cicatrisants, des actifs auto -bronzants, des antioxydants tels que le thé vert ou des fractions actives de celui-ci, la glycérine, la laponite, la caféine, des huiles essentielles aromatiques, des colorants, des actifs dépigmentants, des liporégulateurs, des actifs adoucissants, rafraîchissants, déodorants, insensibilisants, blanchissants, nourrissants, et leurs mélanges. II est également possible de mentionner les agents actifs suivants : des actifs diminuant la différenciation et/ou la prolifération et/ou la pigmentation cutanée tels que l'acide rétinoïque et ses isomères, le rétinol et ses esters, la vitamine D et ses dérivés, les œstrogènes tels que l'œstradiol, l'acide kojique ou l'hydroquinone ; - des actifs antibactériens tels que le phosphate de clindamycine, l'érythromycine ou les antibiotiques de la classe des tétracyclines ; des actifs antiparasitaires, en particulier le métronidazole, le crotamiton ou les pyréthrinoïdes ; des actifs antifongiques, en particulier les composés appartenant à la classe des imidazoles tels que l'éconazole, kétoconazole ou le miconazole ou leurs sels, les composés polyènes, tels que l'amphotéricine B, les composés de la famille des allylamines, tels que la terbinafine, ou encore l'octopirox ; des actifs antiviraux tels que l'acyclovir ; des actifs anti-inflammatoires stéroïdiens, tels que l'hydrocortisone, le valérate de bétaméthasone ou le propionate de clobétasol, ou les agents anti- inflammatoires non-stéroïdiens comme par exemple l'ibuprofène et ses sels, le diclofénac et ses sels, l'acide acétylsalicylique, l'acétaminophène ou l'acide glycyrrhizique ;
- des actifs anesthésiques tels que le chlorhydrate de lidocaïne et ses dérivés ; des actifs antiprurigineux comme la thénaldine, la triméprazine ou la cyproheptadine ; - des actifs kératolytiques tels que les acides α- et β-hydroxycarboxyliques ou β-cétocarboxyliques, leurs sels, amides ou esters et plus particulièrement les hydroxyacides tels que l'acide glycolique, l'acide lactique, l'acide salicylique, l'acide citrique et de manière générale les acides de fruits, et l'acide n-octanoyl-5-salicylique ;
- des actifs anti-radicaux libres, tels que l'α-tocophérol ou ses esters, les superoxydes dismutases, certains chélatants de métaux ou l'acide ascorbique et ses esters ;
- des actifs antiséborrhéiques tels que la progestérone ; des actifs antipelliculaires comme l'octopirox ou la pyrithione de zinc ; des actifs antiacnéiques comme l'acide rétinoïque ou le peroxyde de benzoyle, l'octopirox, les acides aminés soufrés dextrogyres et lévogyres, leurs sels et leurs dérivés N-acétylé tels que la N-acétylcystéine, des actifs visant à prévenir le vieillissement de la peau et/ou à améliorer son état, et
- leurs mélanges.
D'une manière générale, toute composition de l'invention peut être appliquée sur la peau (sur toute zone cutanée du corps) ou sur les muqueuses (buccale, jugale, gingivale, génitale, conjonctivale, ...).
Pour une application topique sur la peau, une composition peut avoir la forme notamment de solutions aqueuses ou huileuses ou de dispersions du type lotion ou sérum, d'émulsions de consistance liquide ou semi-liquide du type lait, obtenues par dispersion d'une phase grasse dans une phase aqueuse (H/E) ou inversement (E/H), de suspensions ou émulsions de consistance molle du type crème ou gel aqueux ou anhydres, ou encore de microcapsules ou microparticules, ou de dispersions vésiculaires de type ionique et/ou non ionique, de mousses, ou encore consisté en une préparation solide.
Ces compositions sont préparées selon les méthodes usuelles. Les quantités des différents constituants des compositions selon l'invention sont celles classiquement utilisées dans les domaines considérés. Dans le domaine de la cosmétique, une composition peut constituer notamment une crème de nettoyage, de protection, de traitement ou de soin pour le visage, pour le corps (par exemple crèmes de jour, crèmes de nuit, crèmes de démaquillage, crèmes de fond de teint, crèmes anti-solaires), un fond de teint fluides, un lait de démaquillage, un lait corporel de protection ou de soin, un lait anti-solaire, une lotion, un gel ou une mousse pour le soin de la peau, comme une lotion de nettoyage : une composition pour les soins du cuir chevelu, par exemple un shampoing.
De façon connue, une composition cosmétique peut contenir également des adjuvants habituels dans le domaine cosmétique, tels que des gélifiants hydrophiles ou lipophiles, des additifs hydrophiles ou lipophiles, des conservateurs, des antioxydants, des solvants, des parfums, des charges, des filtres, des absorbeurs d'odeurs et des matières colorantes.
La quantité de composé chimique ou biologique ou de polypeptide ou de séquence d'acides nucléiques contenue dans une composition selon l'invention, encore dite « quantité efficace » est, bien entendu, fonction de la nature du composé et de l'effet recherché et peut donc varier dans une large mesure.
Au sens de la présente invention, on entend désigner par l'expression
« quantité efficace » la quantité minimale nécessaire à l'observation de l'effet attendu, à savoir un effet cosmétique ou un effet thérapeutique, étant entendu que les quantités efficaces nécessaires à l'obtention d'un effet cosmétique ou d'un effet thérapeutique peuvent être, le cas échéant, identiques ou différentes.
Pour donner un ordre de grandeur, une composition peut contenir un composé chimique ou biologique ou un polypeptide en une quantité représentant de 0,00001 % à
50 % du poids total de la composition, en particulier en une quantité représentant de 0,001 % à 10 % du poids total de la composition, et plus particulièrement en une quantité représentant de 0,1 % à 1 % du poids total de la composition. Les troubles cutanés ou du cuir chevelu visés par la présente invention peuvent être des troubles liés à un dysfonctionnement de la prolifération et/ou de la différentiation des cellules épidermiques telles que les kératinocytes, les mélanocytes, les cellules de Langerhans, les sébocytes et/ou les adipocytes. Ainsi, une composition cosmétique ou pharmaceutique conforme à la présente invention peut être plus particulièrement destinée au traitement d'un trouble cutané tel que le vieillissement cutané, un trouble de la réhydratation de la peau, une desquamation anormale, un dérèglement de la mélanogénèse ou de la sébogenèse, une alopécie, l'hirsutisme, un trouble de la cicatrisation, une parakératose, une hyperkératose, une ichtyose, un psoriasis, un eczéma, une rosacée, un lichen, un prurit, une pathologie cutanée ayant une composante inflammatoire ou résultant d'une altération de la réponse immunitaire ou impliquant des phénomènes de sécrétion et de processus d'invasion cellulaire, notamment dans le cadre de néoplasies malignes ou bénignes.
Une composition conforme à l'invention peut également être utilisée à des fins de gommage ou de peeling, de dépilation ou de traitement de la pousse ou de la chute modérée des cheveux ou des poils.
D'une manière plus précise, une composition selon l'invention peut s'avérer intéressante dans les domaines suivants : pour traiter des troubles cutanés liés à un désordre de la kératinisation portant sur la différenciation, la prolifération et la migration cellulaire, notamment pour traiter les acnés vulgaires, comédoniennes, polymorphes, rosacées, les acnés nodulokystiques, conglobata, les acnés séniles, les acnés secondaires telles que l'acné solaire, médicamenteuse ou professionnelle, pour traiter des troubles cutanés résultant ou impliquant des troubles de la kératinisation, notamment les kératoses, les parakératoses, les ichtyoses, les état ichtyosiformes, la maladie de Darrier, les kératodermies palmoplantaires, les leucoplasies et les états leucoplasiformes, le lichen cutané ou muqueux (buccal), pour traiter d'autres troubles cutanés liés à ou impliquant un trouble de la kératinisation avec une composante inflammatoire et/ou immuno-allergique et notamment toutes les formes de psoriasis qu'il soit cutané, muqueux ou unguéal, et même le rhumatisme psoriatique, ou encore l'atopie cutanée telle que l'eczéma, ou l'urticaire ou encore l'hypertrophie gingivale ; les composés peuvent également être utilisés dans certaines affections inflammatoires ne présentant pas de trouble de la kératinisation, pour traiter toutes les proliférations ou néoplasies dermiques ou épidermiques qu'elles soient bénignes ou malignes, qu'elles soient ou non d'origine virale telles que verrues vulgaires, les verrues planes et l'épidermodysplasie verruciforme, les papillomatoses orales ou fiorides et les proliférations pouvant être induites par les ultraviolets notamment dans le cas des épithélioma baso- et spino-cellulaires, pour traiter d'autres troubles cutanés tels que les dermatoses bulleuses et les maladies du collagène, pour réparer ou lutter contre le vieillissement de la peau, qu'il soit photoinduit ou chronologique ou pour réduire les pigmentations et les kératoses actiniques, ou toutes pathologies associées au vieillissement chronologique ou actinique, pour prévenir ou guérir les stigmates de l'atrophie épidermique et/ou dermique induite par les corticostéroïdes locaux ou systématiques, ou toute autre forme d'atrophie cutanée, - pour prévenir ou traiter les troubles de la cicatrisation ou pour prévenir ou pour réparer les vergetures, pour lutter contre les troubles de la fonction sébacée tels que l'hyperséborrhée de l'acné ou la séborrhée simple, pour conférer un aspect améliorer à la peau, notamment en améliorant son hydratation, pour traiter les troubles de l'alopécie, de la dépilation, de l'hypertrichose, de l'hirsutisme, et pour éliminer les callosités, pour traiter les effets inesthétiques sur la peau des troubles tels qu'indiqués ci-dessus
Les troubles cutanés plus particulièrement visés par la présente invention sont ceux liés à un dysfonctionnement de la prolifération et/ou de la différentiation des kératinocytes.
Selon un autre aspect, la présente invention concerne l'utilisation d'un polypeptide conforme à l'invention, ou d'une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, à titre d'outil de criblage de composés biologiques ou chimiques susceptibles de moduler l'activité biologique et/ou l'expression dudit polypeptide, et en particulier de la carboxypeptidase A4, ou de ladite séquence d'acides nucléiques.
En particulier la présente invention se rapporte à un procédé de criblage de composés biologiques ou chimiques susceptibles de moduler l'activité biologique d'un polypeptide conforme à l'invention comprenant au moins les étapes consistant à : a) mettre en contact, avec au moins un composé chimique ou biologique à tester, au moins un polypeptide conforme à l'invention dans des conditions propices à une manifestation de son activité biologique, et b) déterminer l'activité biologique dudit polypeptide.
Dans un tel procédé, l'activité biologique du polypeptide, en particulier l'activité carboxypeptidase, peut, par exemple, être déterminée par tout procédé connu de l'homme de l'art.
Selon un mode de réalisation, l'activité biologique du polypeptide peut être comparée à une valeur de référence.
Une valeur de référence peut être obtenue en effectuant un procédé conforme à l'invention en absence de tout composé biologique ou chimique à tester.
Selon un autre mode de réalisation, la détermination de la propriété d'un composé chimique ou biologique à moduler l'activité biologique d'un polypeptide conforme à l'invention peut également être déterminée par détermination de la capacité dudit composé à moduler la liaison dudit polypeptide à un substrat.
Selon un autre mode de réalisation, le criblage d'un composé biologique ou chimique susceptible de moduler l'activité d'un polypeptide conforme à l'invention peut se faire soit par mesure d'une interaction directe avec ledit polypeptide comme indiqué précédemment, soit par mesure de l'activité biologique ou de l'expression d'une molécule cible appartenant aux voies de signalisation ou de métabolisme dans lesquelles peut être impliqué ledit polypeptide.
Un procédé conforme à l'invention peut être effectué sur un échantillon cellulaire, obtenu soit d'une biopsie cutanée, soit à partir de cellules en culture, ou tout autre méthode de prélèvement non invasive du stratum corneum, comme par exemple par stripping vernis ou au moyen d'un D'Squam™ commercialisé par la société Cuderm, ou sur un échantillon acellulaire, par exemple un lysat cellulaire. Avantageusement, à titre d'échantillon cellulaire, on peut mentionner les kératinocytes différenciées.
Avantageusement, un polypeptide mis en œuvre dans un procédé selon la présente invention peut être la protéine CPA4. La présente invention concerne également un procédé de criblage de composés biologiques ou chimiques susceptibles de moduler l'expression d'un polypeptide conforme à l'invention comprenant au moins les étapes consistant à : a) mettre en contact, avec au moins un composé chimique ou biologique à tester, au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour un polypeptide conforme à l'invention dans des conditions propices à l'expression de ladite séquence, et b) déterminer l'expression de ladite séquence.
L'expression d'une séquence d'acide nucléique peut être déterminée, par exemple, au moyen de sondes oligonucléotidiques, par des protocoles connus de l'homme de l'art. L'expression d'une séquence d'acide nucléique conforme à l'invention peut être comparée à une valeur de référence obtenue, par exemple, en effectuant un procédé conforme à l'invention en absence de composé à tester.
Selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne également l'utilisation d'au moins un polypeptide conforme à l'invention, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, à titre d'outil d'évaluation d'un état de l'épiderme ou du cuir chevelu.
En particulier, la présente invention concerne un procédé d'évaluation d'un état de l'épiderme comprenant au moins les étapes consistant à : a) déterminer une teneur d'un polypeptide conforme à l'invention, ou d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, dans un échantillon d'épiderme, et b) comparer ladite teneur déterminée à l'étape a) à une valeur de référence. La comparaison effectuée à l'étape b) peut permettre de tirer une information concernant un éventuel trouble cutané. Selon un mode de réalisation, un procédé selon l'invention peut être effectué sur un échantillon d'épiderme prélevé chez un individu. Un procédé selon l'invention peut également être effectué sur un échantillon d'épiderme prélevé sur une peau reconstruite afin d'en qualifier l'état.
Un échantillon d'épiderme peut être prélevé par toute méthode connue de l'homme de l'art, et notamment comme indiqué précédemment. Un procédé selon l'invention peut être effectué in vitro ou ex vivo.
Une valeur de référence peut être, par exemple, une teneur en polypeptide ou en séquence d'acides nucléiques déterminée sur un échantillon d'épiderme prélevé sur une peau saine ou un épiderme reconstruit de référence.
L'expression « peau saine » doit s'entendre dans le sens habituellement utilisé par l'homme de l'art dans le domaine.
En particulier les troubles cutanés visés par la présente invention peuvent être ceux résultant d'une déficience ou d'une surexpression de la protéine CPA4.
Un polypeptide convenant à la mise en œuvre d'un procédé selon l'invention peut être avantageusement la protéine CPA4. Une séquence d'acide nucléique convenant à la mise en œuvre d'un procédé selon l'invention peut être avantageusement une séquence d'acides nucléiques codant pour la CP A4, par exemple de type ARNm.
La détermination d'une teneur en polypeptide conforme à l'invention ou en acides nucléiques conforme à l'invention dans un échantillon d'épiderme peut être effectuée par tout protocole connu de l'homme de l'art.
A titre de méthodes de détection d'un polypeptide, il peut être fait mention du procédé ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay), du Western Blot, de l'immuno- précipitation ou de l' immuno fluorescence.
Ainsi, il peut être envisagé de détecter la présence d'un polypeptide conforme à l'invention au moyen d'un anticorps, le cas échéant sous une forme marquée
Un tel anticorps peut être tel que défini précédemment.
Avantageusement, un tel anticorps peut être marqué au moyen d'une substance détectable directement ou détectable par réaction avec un autre réactif.
A titre d'exemple de méthodes de détection d'acides nucléiques, il peut être fait mention du Southern Blot, de RT-PCR, de Northern-Blot et de Q-PCR. A titre d'exemple d'agents convenant à la détection d'acides nucléiques, et en particulier d'ARNm, il peut être fait mention de sondes d'acides nucléiques marquées pouvant s'hybrider aux séquences d'acides nucléiques.
Une telle sonde d'acide nucléique peut être aisément obtenue par toute méthode connue de l'homme de l'art.
Les séquences d'acides nucléiques conformes à l'invention peuvent ainsi être utilisées pour réaliser des amorces oligonucléotidiques sens et/ou antisens, qui s'hybrident dans des conditions de forte stringence à la séquence SEQ ID NO : 1, SEQ ID NO : 2, SEQ ID NO : 3, SEQ ID NO : 4, ou SEQ ID NO : 5 ou un analogue de celle-ci.
Selon une variante de réalisation, la présente invention concerne un procédé d'évaluation d'un état d'un épiderme comprenant au moins les étapes consistant à : a) déterminer une valeur de l'activité biologique d'un polypeptide conforme à l'invention dans un échantillon d'épiderme, et b) comparer ladite valeur déterminée à l'étape a) à une valeur de référence.
La comparaison effectuée à l'étape b) peut permettre de tirer une information indicative d'un éventuel trouble cutané.
Avantageusement, l'activité biologique dont la valeur est déterminée peut être l'activité enzymatique de la carboxypeptidase A4. Toute méthode de mesure d'une activité enzymatique connue de l'homme de l'art peut être mise en œuvre dans un procédé conforme à l'invention.
Par exemple, il peut être utilisé une méthode mettant en œuvre une mesure de l'hydrolyse d'un substrat.
Ainsi, un procédé d'évaluation d'un état d'un épiderme selon l'invention peut être mis en œuvre dans un procédé de diagnostic d'un trouble cutané ou du cuir chevelu.
Selon un autre aspect, la présente invention se rapporte à un procédé de traitement cosmétique comprenant au moins une étape consistant à appliquer sur une partie au moins de la peau, des muqueuses et/ou des fibres kératiniques, au moins une composition cosmétique conforme à l'invention. Selon un autre aspect, la présente invention concerne également un procédé, non thérapeutique, pour mettre en évidence un effet d'un traitement susceptible de faire régresser un trouble cutané ou du cuir chevelu chez un individu, comprenant au moins les étapes consistant à : a) effectuer, avant le traitement, au moins une première détermination, dans un premier échantillon cutané ou du cuir chevelu prélevé chez ledit individu, d'une activité biologique et/ou de l'expression d'un polypeptide conforme à l'invention, ou d'une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, b) effectuer, après le traitement, au moins une seconde détermination, dans un second échantillon cutané ou du cuir chevelu prélevé chez ledit individu, de ladite activité biologique et/ou de ladite expression dudit polypeptide ou de ladite séquence d'acides nucléiques déterminés à l'étape a), et c) comparer les première et deuxième déterminations, afin d'en déduire une information relative à un effet au moins du traitement. En particulier, le traitement dont l'effet est à évaluer peut être un traitement destiné à un trouble cutané ou du cuir chevelu lié à un dysfonctionnement de la prolifération et/ou de la différenciation des kératinocytes.
L'activité biologique et l'expression d'un polypeptide peuvent être déterminées comme indiqué précédemment.
La présente invention concerne également l'utilisation d'au moins un polypeptide conforme à l'invention, ou d'une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, pour la préparation d'une peau reconstruite isolée.
En particulier la présente invention concerne un procédé de préparation d'une peau reconstruite isolée comprenant au moins l'étape consistant à mettre en contact au moins un polypeptide conforme à l'invention, ou une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, avec des cellules susceptibles de générer une peau reconstruite isolée, et notamment des kératinocytes
Au sens de la présente invention, « un » doit se comprendre, sauf indication contraire, au sens de « au moins un ». Les exemples figurant ci-après sont présentés à titre illustratif et non limitatif de l'invention.
FIGURES - Figure 1 : Gel obtenu selon l'exemple IA illustrant la détection par RT-PCR de l'expression de la CP A4 dans différents échantillons tissulaires (1 : cerveau ; 2 : colon ; 3 : œsophage ; 4 : cœur ; 5 : placenta ; 6 : peau ; 7 : petit intestin ; 8 : estomac ; 9 : langue) - Figure 2 : Gel obtenu selon l'exemple IB, illustrant la détection par RT-PCR de l'expression de la CP A4 à différents jours d'émersion (Jl, J3, J8, JlO, J13, J15 et J18) d'une peau reconstruite.
EXEMPLES
Exemple I- Evaluation de l'expression de la carboxypeptidase A4 dans différents échantillons tissulaires A- Evaluation de l'expression de la carboxypeptidase A4 dans différents tissus humains par RT-PCR (reverse transcriptase-polymerase chain reaction)
De l'ADNc humain de différents organes (cerveau, colon, œsophage, cœur, placenta, peau, petit intestin, estomac et langue) est obtenu auprès de Biochain (C 8234501 et C 8234502 DNA panel human tissue). La concentration en ADN a été ajustée à 2,5 μg/ml.
Des amorces spécifiques de la CP A4 ont été synthétisées à façon (SC258 : 5' TGTTGCCTGTGGCCAA 3' (SEQ ID NO : 14) et SC259 : 5' AGCCATAGGTCCCGGTA 3' (SEQ ID NO : 15), par la société PROLIGO).
Chaque PCR est réalisée selon le protocole suivant : 1 μl ADNc + 5 μl tampon 1OX + 1 μl dATP à 10 μM+ 1 μl de chaque amorce à 50 μM + 1 μl de TAQ polymérase ACCU + 40 μl d'eau.
La température d'hybridation des amorces a été fixée à 45 0C. Les températures de séparation des brins et d'élongation ont été fixées à 94 0C et 72 0C.
Chaque produit de PCR a été analysé sur gel d'agarose à 1 % en diluant un aliquot de PCR avec du tampon de charge. Le gel est ensuite visualisé sous une lampe UV (Gel Doc, Biorad), après marquage au moyen d'un marqueur fluorescent d'acide nucléique GelStar® (Tebu-Bio, réf. 50535 BMA).
Les résultats de la figure IA révèlent que l'ARNm de la CPA4 n'est pas exprimé dans le colon, le cœur, le placenta, le petit intestin, l'estomac et la langue. Par contre, une forte expression de l'ARNm est observée dans la peau et de façon moindre dans l'oesophage.
B- Evaluation de l'expression de la CP A4 au cours de la reconstruction épidermique par RT-PCR
L'ADNc d'épiderme est obtenu après extraction de l'ARNn de kératinocytes en culture à différents jours d'émersion (de Jl à Jl 8) à l'aide des kits RNeasy (Qiagen) et First-Strand cDNA synthesis (Amersham Pharmacia Biotech).
Les conditions de PCR sont celles décrites à l'exemple IA. La figure IB met en évidence l'expression de l'ARNn de la CP A4 sur des extraits d'ADN de kératinocytes à différents stades de différenciation.
Une bande de 490 pb est amplifiée par le couple d'amorces SC258/SC259 (SEQ ID NO : 13 et SEQ ID NO : 14).
La séquence de cet amplicon a été confirmée. La perte du signal à partir de Jl 3 pourrait correspondre à un début de dégénération des kératinocytes survivants de moins en moins nombreux.
L'induction de l'expression de la carboxypeptidase visible de Jl à J3 pourrait être concomitante au début de stratification des kératinocytes et impliquer la CP A4 dans le phénomène de migration de ces cellules.
Exemple II- Préparation d'anticorps spécifiques de la carboxypeptidase 4 Les séquences peptides immunogènes suivantes de la carboxypeptidase A4 ont été identifiées.
CBP4-I (SEQ ID NO : 11) ED DEM QHN EGQ ERS CBP4-II (SEQ ID NO : 12) NI AAD FPD LAR RVK
CBP4-III (SEQ ID NO : 13) YS VKK APD AEE LDK Une cystéine a été rajoutée en N-terminal des peptides naturels afin de favoriser le couplage sur l'adjuvant immunogène.
Ainsi, les peptides synthétisés ont été couplés sur l'hémocyanine de la patelle (Keyhole Limpet Hemocyanine, KLH). Deux lapins ont été immunisés par administration des peptides ainsi préparés.
Les anticorps ont été immuno -purifiés après prélèvement à J74.
Les anticorps obtenus ont été utilisés pour marquer des coupes de follicules pileux.
Le protocole de marquage a été effectué comme suit. L'échantillon tissulaire a été placé dans une cuvette de Coplin, et fixé pendant
10 minutes dans de l'acétone à - 20 0C.
Puis l'échantillon est successivement rincé par un tampon PBS pendant 15 minutes, puis un tampon PBS-lait 1 % pendant 15 minutes, puis un tampon PBS-tween 0,05 %. Les anticorps primaires ont ensuite été incubés avec les échantillons pendant
30 minutes à température ambiante.
L'anticorps anti-CBP4 II a été dilué au 1/50 et l'anticorps anti-CBP4 III a été dilué au 1/10 dans un tampon PBS-tween 0,05 % et sérum de chèvre à 10 %.
Les échantillons ont été rincés trois fois par un tampon PBS-tween 0,05 %, puis incubés en présence d'un anticorps secondaire de chèvre anti-lapin couplé FITC (fluoroisothiocyanate) dilué au 1/80 dans du PBS-tween 0,05 % pendant 30 minutes à température ambiante.
Puis les échantillons ont été lavés trois fois avec un tampon PBS-tween.
Les résultats, validés par observation en microscopie par fluorescence, indiquent la présence de CP A4 au niveau du follicule pileux.

Claims

REVENDICATIONS
1. Composition cosmétique ou pharmaceutique, comprenant dans un milieu physio logiquement acceptable, au moins un polypeptide de séquence d'acides aminés codée par une séquence d'acides nucléiques représentée en tout ou partie par une séquence choisie parmi SEQ ID NO : 1, des analogues de celle-ci, ou un fragment de celle-ci.
2. Composition selon la revendication précédente, dans laquelle ledit polypeptide a une séquence d'acides aminées codée par une séquence d'acides nucléiques représentée en tout ou partie par une séquence choisie parmi SEQ ID NO : 1 , SEQ ID NO : 2, SEQ ID NO : 3, SEQ ID NO : 4, ou SEQ ID NO : 5 ou un analogue de celle-ci.
3. Composition selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle ledit polypeptide a une séquence d'acides aminés représentée en tout ou partie par une séquence choisie parmi SEQ ID NO : 6, SEQ ID NO : 7, SEQ ID NO : 8, SEQ ID NO : 10, SEQ ID NO : 11, SEQ ID NO : 12, ou SEQ ID NO : 13 ou un analogue de celle-ci.
4. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle ledit polypeptide est fusionné avec un autre polypeptide, un agent de criblage hydrophile ou hydrophobe, un précurseur de bioconversion, un agent de marquage luminescent ou radioactif.
5. Composition cosmétique ou pharmaceutique, comprenant dans un milieu physio logiquement acceptable, au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour une polypeptide tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, ou une séquence sens, anti-sens ou interférentielle correspondant à ladite séquence.
6. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, comprenant en outre au moins un agent actif cosmétique et/ou thérapeutique.
7. Utilisation d'au moins un polypeptide tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques, codant pour le polypeptide, pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement et/ou à la prévention d'un trouble cutané ou du cuir chevelu.
8. Utilisation cosmétique d'au moins un polypeptide tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour le polypeptide, à titre d'agent actif pour prévenir et/ou traiter les signes du vieillissement cutanée.
9. Utilisation cosmétique d'au moins un polypeptide tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour le polypeptide, à titre d'agent actif pour prévenir une diminution et/ou renforcer la fonction barrière de la peau.
10. Utilisation cosmétique d'au moins un polypeptide tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, à titre d'agent actif pour améliorer l'état d'hydratation de la peau.
11. Utilisation d'au moins un composé chimique ou biologique apte à moduler l'activité biologique et/ou l'expression d'au moins un polypeptide tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, pour la préparation d'une composition cosmétique ou pharmaceutique destinée au traitement et/ou à la prévention d'un trouble cutané ou du cuir chevelu.
12. Utilisation selon la revendication précédente, dans laquelle ledit composé est un inhibiteur de l'activité biologique et/ou de l'expression dudit polypeptide.
13. Utilisation selon la revendication précédente, dans laquelle ledit inhibiteur est choisi parmi une protéase, la latéxine et ses analogues, l'héparine et ses dérivés, l'héparane sulfate et ses dérivés, un anticorps, un polypeptide de séquence d'acides aminés représentée en tout ou partie par la séquence SEQ ID NO : 10 ou un analogue de celle-ci.
14. Utilisation selon la revendication 8, dans laquelle ledit composé est un activateur de l'activité biologique et/ou de l'expression dudit polypeptide.
15. Utilisation selon la revendication précédente, dans laquelle l' activateur est choisi parmi une protéase, un anticorps, un inhibiteur d'histone déacétylase.
16. Utilisation selon la revendication précédente, dans laquelle la protéase est choisie parmi la thrombine, la trypsine, les kallikréines 1 et 2, la furine, les proprotéines convertases 1, 2, 4, 5 et 7, ADAM 17, la stromélysine, et la yapsine.
17. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 7 à 13, dans laquelle le trouble cutané est un trouble lié au dysfonctionnement de la différenciation et/ou de la prolifération de cellules épidermiques, et notamment des kératinocytes.
18. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 7 à 14, dans laquelle le trouble cutané est un vieillissement cutané, un trouble de la réhydratation de la peau, une desquamation anormale, un dérèglement de la mélanogénèse ou de la sébogénèse, une ichtyose, un psoriasis, un eczéma, une rosacée, un lichen, un prurit, une alopécie, l'hirsutisme, un trouble de la cicatrisation, une hyperkératose, une parakératose, une pathologie cutanée ayant une composante inflammatoire, ou résultant d'une altération de la réponse immunitaire ou impliquant des phénomènes de sécrétion et de processus d'invasion cellulaire.
19. Utilisation d'au moins un polypeptide tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, à titre d'outil de criblage de composés biologiques ou chimiques susceptibles de moduler l'activité biologique et/ou l'expression dudit polypeptide ou de ladite séquence d'acides nucléiques.
20. Utilisation d'au moins un polypeptide tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, à titre d'outil d'évaluation d'un état de l'épiderme ou du cuir chevelu.
21. Utilisation selon la revendication précédente, dans laquelle l'état de l'épiderme est indicatif d'un trouble cutané lié au dysfonctionnement de la différenciation et/ou de la prolifération de cellules épidermiques, et notamment de kératinocytes.
22. Utilisation d'au moins un polypeptide tel que défini selon l'une quelconque des revendication 1 à 4, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, pour la préparation d'une peau reconstruite isolée.
23. Procédé de préparation d'une peau reconstruite isolée comprenant au moins l'étape consistant à mettre en contact au moins un polypeptide tel que défini selon l'une quelconque des revendication 1 à 4, ou d'une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, avec des cellules susceptibles de générer une peau reconstruite isolée, et notamment des kératinocytes.
24. Procédé, non thérapeutique, pour mettre en évidence un effet d'un traitement susceptible de faire régresser un trouble cutané ou du cuir chevelu chez un individu, comprenant au moins les étapes consistant à : a) effectuer, avant le traitement, au moins une première détermination, dans un premier échantillon cutané ou du cuir chevelu prélevé chez ledit individu, d'une activité biologique et/ou de l'expression d'un polypeptide tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, ou d'une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, b) effectuer, après le traitement, au moins une seconde détermination, dans un second échantillon cutané ou du cuir chevelu prélevé chez ledit individu, de ladite activité biologique et/ou de ladite expression dudit polypeptide ou de ladite séquence d'acides nucléiques déterminés à l'étape a), et c) comparer les première et deuxième déterminations, notamment afin d'en déduire une information relative à un effet au moins du traitement.
25. Procédé de traitement cosmétique, comprenant au moins une étape consistant à appliquer au moins sur une partie de la peau, des muqueuses, et/ou des fibres kératiniques, au moins une composition cosmétique telle que définie selon l'une quelconque des revendications 1 à 6.
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