KR20070003907A - 혈청 노화 인자 격리 제제 및 이를 위한 용도 - Google Patents

Abstract

NADH 옥시다제의 노화 관련 이소형 (arNOX)에 의한 세포 손상으로부터 기인한 질환 및 질환의 합병증의 예방 또는 치료 방법이 기재된다. 상기 억제를 위한 제제는 가공된 각종 나르시서스 타제타 추출물, 바람직하게는 IBR-도르민®을, 단독으로 또는 코엔자임 Q와 같은 유비퀴논을 포함한 기타 억제 제제와 함께 조합하여 포함한다. 이들 제제는 arNOX와 결합하며, arNOX의 반응성 산소 종을 발생시키는 능력을 억제함으로써, arNOX의 반응성 산소 종을 발생시키는 능력을 감소시킨다. 이와 같은 제제, 및 이의 투여 방법은 노화방지 치료의 일부로서 매우 효과적이다.

NADH 옥시다제, arNOX, 나르시서스 타제타, 노화 방지

Description

혈청 노화 인자 격리 제제 및 이를 위한 용도 {Agents for Sequestering Serum Aging Factors and Uses Therefore}

본 발명은 혈청 노화 인자 격리 제제, 및 그의 사용 방법에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 NADH 옥시다제의 노화 관련 이소형 (arNOX)에 의한 세포 손상으로 인한 질환 및 질환의 합병증을 예방 또는 치료하기 위한 제제 및 그의 사용 방법에 관한 것이다.

플라즈마 멤브레인 NADH 옥시다제 (NOX)는 호르몬 및 생장 인자에 통상적으로 반응하는 히드로퀴논 (NADH) 옥시다제 및 단백질 디술피드-티올 교환 활성을 갖는 독특한 세포 표면 단백질이다. NOX (또는 CLOX)는 노화 세포와 관련된 생장 관련 단백질 계통이다. tNOX로 지정된 NOX의 호르몬 무감각 및 약물 반응성 형태가 암 세포에 특이적인 것으로 기재되었다. 예를 들어, 본원에 참고로 인용된 U.S. 특허 제5,605,810호 참조.

NADH 옥시다제의 노화 관련 이소형 (arNOX)은 단백질의 이러한 계통의 구성원이다. arNOX의 순환 형태는 특히 65세 이후, 개체의 림프구 및 인간 혈청에서 현저히 증가한다. arNOX는 죽종형성 및 기타 원격 작용 노화 현상을 포함하는 노화 관련 변화에 상당히 기여할 수 있는, 과산화물을 발생시키는 능력을 고유한 특 징으로 한다. 노화 세포 및 혈청에서 arNOX의 활성은 이전에 기재되어 왔다. 예를 들어, 본원에 그 전체가 참고로 인용된 PCT 공개 출원 WO 00/57871호 참조.

이 모델은, 노화 동안 미토콘드리아에서 증가한 반응성 활성 산소 종이 미토콘드리아 DNA 변이를 일으키고, 미토콘드리아 성분을 손상시켜 노쇠하게 된다는 노화의 미토콘드리아 이론 (Mitochondrial Theory of Aging)과 일치한다. 노화의 미토콘드리아 이론은 미토콘드리아 DNA (mtDNA)의 자발적인 체세포 변이의 축적이 mtDNA 부호화 폴리펩티드 사슬의 오류를 일으킴을 제안하고 있다 (Manczak M et al., J. Neurochem. 2005년 2월; 92(3):494-504). mtDNA 부호화 폴리펩티드 사슬에서 발생하는 이들 오류는 미토콘드리아 분화 및 세포 분화 동안 확률적 및 무작위적으로 전송된다. 이들 변화의 결과는 불완전한 산화성 포스포릴화이다. 호흡 연쇄 반응의 결함은 본래의 손상을 확대시키는 증가된 산화성 스트레스와 관련될 수 있다 (Ozawa, 1995, Biochim. Biophys. Acta 1271: 177-189; 및 Lenaz, 1998, Biochim. Biophys. Acta 1366:53-67). 이러한 관점에서, 따라서, 변이된 미토콘드리아 DNA는 인체 중 매우 소량으로 존재함에도 불구하고, 산화성 스트레스의 주요 발생자일 수 있다.

미토콘드리아 DNA (mtDNA)의 체내 변이의 축적이 불완전한 산화성 포스포릴화를 일으키는 경우, 플라즈마 멤브레인 옥시도-리덕타제 (PMOR) 시스템은 산화된 피리딘 뉴클레오티드의 재생을 통한 미토콘드리아적 불완전 세포의 증대성 생존을 제안하였다 (de Grey, 1997, BioEssays 19:161-166; de Grey, 1998, Anti-Aging Med. 1:53-66; Yoneda et al, 1995, Biochem. Biophys. Res. Comm. 209: 723-729; Schon et al., 1996, Cellular Aging and Cell Death, Wiley and Sons, New York, pp.19-34; Ozawa, 1997, Physiol. Rev. 77:425-464; 및 Lenaz, 1998, BioFactors 8:195-204). 저밀도 지질단백질 (LDL) 중 지질의 산화 및 수반성 동맥 변화와 같은, 세포밖 반응에 대한 mtDNA에서 환부의 연관 축적에 대한 모델은 rho°세포로 처음 제안되었다 (Larm et al., 1994, Biol. Chem. 269:30097-30100; Lawen et al., 1994, Mol. Aspects. Med. 15:s13-s27; de Grey, 1997, BioEssays 19:161-166; 및 de Grey, 1998, Anti-Aging Med. 1:53-66). 유사한 연구가 배양 중 형질전환된 인간 세포로 행해졌다 (Vaillant et al., 1996, Bioenerg. Biomemb. 28:531-540).

플라즈마 멤브레인 옥시도리덕타제 (PMOR)가 과발현되는 조건 하에서, 전자는 한정된 전자 전달계에 의해 NADH로부터 외부 수용체로 전이되어, 세포 표면에서 반응성 산소 종 (ROS)을 발생시킨다. 이어서, 이러한 세포 표면 발생된 ROS는 저밀도 지질단백질과 같은 순환하는 혈액 성분 뿐만 아니라 양 인접 세포에 대한 미토콘드리아 내의 기원하는 노화 캐스케이드를 증식시킬 수 있다. PCT 공개 출원 WO 00/57871호 참조.

결과적으로, 생성된 생리학적 조건, 예컨대 저밀도 지질단백질 (LDL)에서 지질의 산화 및 수반성 동맥 변화를 감소 또는 치료하기 위한 목적으로 반응성 산소 종 (ROS)을 발생시키기 위한 arNOX의 능력을 감소시키는 제제를 발견할 필요가 있다. 노화 세포의 arNOX 활성은 코엔자임 Q (유비퀴논)에 의해 억제되는 것으로 나타났다. 본원에 그 개시가 참고로 인용된 PCT 공개 출원 WO 00/57871호, WO 01/72318호, 및 WO 01/72319호 참조. 그러나, 코엔자임 Q의 사용은, 비용이 많이 들며, 쉽게 산화되어 그 효율을 손실하며, 코엔자임 Q를 함유하는 제제는 기능의 손실을 방지하기 위해 특별히 포장되어야 한다는, 몇가지 이유로 완전히 만족스럽지는 못하다. 이와 같이, arNOX 활성을 억제할 수 있는 일부 제제 및 방법이 현재 존재하지만, 여전히 과제가 남아 있다. 따라서, 기존에 개시된 제제 및 기술을 본 발명에 개시된 제제 및 기술로 보강하거나 심지어 대체하기 위한 당업계의 개선이 이루어질 것이다.

특히 피부는 반응성 산소 종에 의해 손상되기 쉽다. 피부는 몇몇 층 또는 2개의 주요층으로 이루어진다. 피부각질층 (또는 표피층)은 상부층이며, 피부에 대한 보호성 덮개를 형성하고, 피부내 및 밖에서 수분 및 물질의 흐름을 조절한다. 진피는 피부의 하부층이며, 피부에 강도, 탄성 및 두께를 제공한다. 진피의 주요 세포 종류는 콜라겐, 엘라스틴 및 글리코사미노글리칸과 같이 모든 피부 매트릭스 성분의 합성 및 분비에 대해 책임이 있는 섬유모세포이다. 콜라겐은 강도를, 엘라스틴은 탄성을, 글리코사미노글리칸은 피부의 보습 및 풍만함을 제공한다.

반응성 산소 종에 의해 손상되는 것 외에, 피부는 다양한 손상 스트레스의 요인을 받는다. 피부는 비누, 유화제 기재 화장품, 뜨거운 물, 유기 용매, 피부학적 질환, 환경적 학대 (바람, 에어컨, 중앙 난방) 또는 통상적인 노화 과정 (시간의 흐름에 의한 노화)으로 인해 학대 손상될 수 있으며, 이는 피부의 다양한 외부 스트레스 인자 (예, 광노화)에 대한 노출에 의해 가속화될 수 있다.

실질적인 노화 및 풍화된 피부의 가시적인 징후, 예컨대 주름살, 잔주름, 늘 어짐, 색소 과형성 및 노화 반점을 치료 또는 지연시키는 "노화방지" 화장품 및 의약품이 요망된다. 따라서, 효과적인 천연 피부 치료 및 예방적 조성물 및 이의 사용 방법에 대한 요구가 존재한다.

발명의 요약

본 발명은 혈청 노화 인자 격리 제제, 및 이의 사용 방법에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 NADH 옥시다제의 노화 관련 이소형 (arNOX)으로 인한 세포 손상으로부터 발생하는 질환 및 질환의 합병증을 예방 또는 치료하기 위한 제제 및 이의 사용 방법에 관한 것이다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 제제는 하나 이상의 가공된 나르시서스 타제타 (Narcissus tazzeta) 제품을 포함한다.

본원에 기재된 발명은 NADH 옥시다제의 노화 관련 이소형 (arNOX)으로 인한 세포 손상으로부터 발생하는 질환 및 질환의 합병증의 예방 또는 치료를 위한, 제약 조성물, 제약 키트 및 방법을 포함한다. 본 발명의 일부 실시양태에서, 이러한 억제를 위한 제제는 각종 식물 종으로부터 추출된 성분들을 포함한다. 하나의 실시양태는 가공된 나르시서스 타제타 제품의 사용을 포함한다. 가공된 나르시서스 타제타 제품의 바람직한 실시양태는 나르시서스 타제타 추출물을 포함하는 IBR-도르민 (IBR-DORMIN)®이다. 또다른 실시양태는 단독으로, 및 코엔자임 Q와 같은 유비퀴논, 오미자 (Shisandra Chinensis) 추출물, 인동 (Lonicera Japonica) 추출물, 및(또는) 영년생 숙근종 (Fagopyrum Cymosum) 추출물을 포함하는 다른 억제 제제와 조합된, 가공된 나르시서스 타제타 제품의 사용을 포함한다. 상기 각각의 추출물은 개별적으로, 또는 기타 활성 성분 및 비활성 성분과 조합하여 이용될 수 있다.

본 발명의 제제는 arNOX와 결합할 수 있으며, 반응성 산소 종을 발생시키는 arNOX의 능력을 억제 또는 감소시킬 수 있다. arNOX의 억제는 arNOX에 의한 반응성 산소 종의 발생을 감소시킨다. 반응성 산소 종의 감소는 상기 반응성 산소 종으로 인한 산화성 손상을 감소시킨다. 상기 제제, 및 이들의 투여 방법은 노화 방지 치료의 효과적인 부분이다. 즉, 본원에 기재된 본 발명의 하나의 실시양태는, NADH 옥시다제의 노화 특이적 이소형 (arNOX)에 의한 산화성 손상으로 인한 질환의 예방 또는 치료 방법을 포함한다.

본원에 기재된 본 발명은 혈청 중 세포 멤브레인 관련된 arNOX 및 가용성 arNOX의 검출 방법을 추가로 포함한다. 또한, 본 발명은 반응성 산소 종을 발생시키는 arNOX의 능력을 억제하기 위해, 유비퀴논과 조합하여, 가공된 나르시서스 타제타 제품, 바람직하게는, IBR-도르민®을 포함하는 제제를 사용하는 방법 뿐만 아니라, arNOX를 억제하는 제제를 분석, 스크리닝 및 확인하는 방법을 포함한다. 이들 제제는 산화성 손상으로 인한 질환의 예방 또는 치료에서 제약 조성물로 제형화될 수 있다. 본원에 기재된 발명은, 추가로 하나 이상의 가공된 나르시서스 타제타 추출물을 포함하는 제제의 특성을 포함한다. 본 발명은 하나 이상의 가공된 나르시서스 타제타 추출물을 포함하는 제제를 사용하는, arNOX의 동정 및 특성화를 개시하고 있다. IBR-도르민®을 포함하는 하나 이상의 가공된 나르시서스 타제타 추출물에 관한 추가 정보가 본원에 참고로 그 개시가 인용된 U.S. 특허 제6,635,287호 및 제6,347,254호에서 발견될 수 있다.

본 발명의 제약 조성물은 투여 양태를 다양하게 하는 것을 포함할 수 있다. 화합물의 투여 양태는 캡슐, 정제, 연질 겔, 용액제, 좌약제, 주사제, 에어로졸 또는 키트를 포함한다.

본 발명은 피부 손상 및 관련 상태를 예방 및(또는) 개선하는 활성 제제(들)을 포함하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 상기 조성물을 이용하는 방법을 포함한다.

본 발명의 바람직한 실시양태는 피부의 치료를 위한 가공된 식물로부터의 활성 제제를 제공한다. 활성 제제는 피부 손상 및 관련 상태를 예방 및(또는) 개선한다. 본 발명의 하나의 실시양태에서, 가공된 식물 제품은 arNOX 활성을 격리한다. 본 발명의 또다른 실시양태에서, 가공된 식물 제품은 라디칼 산소 종을 억제한다. 본 발명의 또다른 실시양태에서, 본 발명의 제제 및 방법은 피부의 건강을 예방 및(또는) 개선한다. 예를 들어, 제제는 피부 톤을 개선할 수 있으며, 잔주름 및 가시적인 노화의 징후의 출현을 감소시키는 것을 돕는다. 본 발명의 또다른 실시양태에서, 제제는 콜라겐 및 엘라스틴의 신체의 자연 생성에 긍정적인 영향을 미친다. 또다른 실시양태에서, 본 발명의 제제는 오염, 일광, 자유 라디칼 및 스트레스와 같은 환경적 불안의 효과를 최소화한다.

본 발명의 이들 및 기타 특징 및 장점은 하기 상세한 설명 및 첨부된 청구의 범위에 더욱 충분히 설명되거나 나타날 것이다. 이들 특징 및 장점은 첨부된 청구의 범위에서 구체적으로 지적된 장치 및 조합에 의해 수득 및 실현될 수 있다. 또한, 본 발명의 특징 및 장점은 본 발명의 실행에 의해 학습되거나, 이후 설명되는 상세한 설명으로부터 명백할 것이다.

본 발명의 상기 언급된 방법 및 기타 특징 및 장점을 수득하기 위해, 본 발명의 더욱 구체적인 설명이 첨부된 도면에 예시되어 있는 그 특정 실시양태를 참고로 행해질 것이다. 도면은 본 발명의 전형적인 실시양태만을 도시하는 것이며, 따라서 본 발명의 범주를 한정하는 것으로서 고려되어서는 안되며, 본 발명은 추가 상세한 설명 및 첨부된 도면의 사용을 통해 설명될 것임이 이해된다.

도 1은 페리사이토크롬 (ferricytochrome) c 환원의 속도의 주기적 변화를 예시한다. 90분에 걸친 페리사이토크롬 c 환원은 100세 여성의 혈청에 대한 최대치의 4개의 세트 (화살표는 24.7분 주기를 지시함)을 나타냈다. 24.7분의 주기 길이를 갖는 활성은 청년 개체의 혈청으로부터 훨씬 감소하거나 없다. 각 최대치는 이중 또는 단일 화살표로 지시된 더블릿 패턴으로 분해되었다. 더블릿 패턴은 3개의 추가 혈청 샘플, 80세 남성, 83세 남성 및 98세 여성에서 다시 나타났다.

도 2는 노인 및 청년 개체의 혈청 및 담황막에 의한 페리사이토크롬 c 환원의 속도를 예시한다. 20 내지 40세 개체 (A, B, E, F) 및 70 내지 100세 개체 (C, D, G, J, H)로부터 회수한 담황막 분획 (A-D) 및 혈청 (E-H)을 비교하였다. 속도는 SLM 아민코(Aminco), 기준으로서 540nm와 함께 550nm에서 흡수율의 증가로부터의 조작의 이중 파장 양태의 DW-2000 분광 광도계를 사용하여 1.5분의 간격으로 연속적으로 모니터링하였다. 약 25분에 의해 분리된 최대치는 단일 화살표 (C, D, G, H)에 의해 지시된다. 측정 45분 후, 과산화물 디스뮤타제 (SOD, 60㎕/60단위) 또는 에탄올 중 코엔자임 Q (30㎕/450㎍)을 곡선 화살표에서 첨가하였으며, 측정을 전체 120분 동안 계속하였다. 진동 활성은 노화된 개체의 담황막 및 혈청에 대해 독특하였으며, 과산화물 디스뮤타제 (SOD) 또는 코엔자임 Q의 첨가로 인해 기저 수준으로 감소하였다.

도 3은 노화 관련 페리사이토크롬 c 환원의 과산화물 디스뮤타제 (SOD) 억제를 예시한다. SOD는 분석의 중간 지점에서 반응 혼합물에 첨가하였다. 속도를 SOD의 첨가 전 (흑색, 실선) 및 후 (백색, 점선)에 측정하였다. 혈청은 노인 (80 내지 100세, 원) 또는 청년 (20 내지 40세, 삼각형) 피검자로부터 회수하였다. 결과는 5 내지 10 샘플의 평균 ± 표준편차이다. 완전한 억제의 결여는, 진동하는 노화 관련 옥시다제가 이들 매우 노화된 혈청으로도 전체 겉보기 활성의 약 30％만의 원인이 된다는 관찰에 의해 설명된다. 진동 활성은 SOD에 의해 완전히 억제되었다 (도 2G).

도 4는 노화 관련 페리사이토크롬 c 환원의 코엔자임 Q 억제를 예시한다. 코엔자임 Q의 지시된 양이 SOD 대신에 첨가되는 것을 제외하고는 도 2와 같다. 속도는 코엔자임 Q의 첨가 전 (흑색, 실선) 및 후 (백색, 점선)에 측정하였다. 혈청은 노인 (80 내지 100세, 원) 또는 청년 (20 내지 40세, 삼각형) 피검자로부터 회수하였다. 진동 활성은 코엔자임 Q 첨가에 의해 크게 저해되었다 (도 2H).

도 5는 돼지 간 마이크로솜의 NADH-사이토크롬 c 리덕타제 활성의 속도를 예시한다. 전체 90분에 걸쳐, 매 1.5분마다 1분 동안 측정시, 평균 속도는 반복하는 진동 패턴의 어떠한 징후 없이, 1.2±0.6μmoles/분/㎎ 단백질이었다.

도 6은 혈청으로부터의 노화 관련 NOX 단백질의 웨스턴 블롯을 예시한다. 흡수된 프로테이나제 K를 비교하는 상기 웨스턴 블롯은 청년 개체 (제1 레인, 35세 이하 여성; 제2 레인, 25세 이하 남성; 제6 레인, 36 내지 45세 여성; 제7 레인, 36 내지 45세 남성) 및 노인 개체 (제3 레인, 90세 이상 여성; 제4 레인, 75 내지 85세 남성; 제5 레인, 75 내지 85세 여성)로부터의 혈청을 이용하였다. 약 22kD에서의 단백질 밴드 (레인 3-5 화살표)가 노인 개체의 혈청에서 상승하였다. 검출은 인간 tNOX의 C-말단 아데닌 뉴클레오티드 결합 영역 (H-KQEMTGVAGASLEKRWK-OH)에 대항하여 발생된 다클론성 펩티드 항혈청에 의해서 이루어졌다.

도 7은 청년 및 노인 개체 모두의 혈청으로부터 밴드 강도 및 과산화물 형성 간의 상관관계를 예시한다. 상관관계는 약 22kD에서 면역반응성 밴드의 강도 및 전기영동 전에 동일한 샘플의 노화 관련된 페리사이토크롬 c 환원의 속도 간에 있었다. 결과는 3개의 상이한 블롯으로부터의 정보를 조합한다.

도 8은 약 22kD에서 웨스턴 블롯 상에서 면역반응성 밴드의 강도 및 피검자 연령 간의 상관관계를 예시한다. 도 6에서 예시된 혈청 샘플로부터의 3개의 독립적인 웨스턴 블롯으로부터의 데이터를 조합하였다.

도 9는 노인 환자 (80세 남성)의 혈청으로부터 약 22kD에 상응하는 겔 영역의, 40분에 걸쳐 1.5분 간격으로 평균된 노화 관련 페리사이토크롬 c 환원을 예시한다. 활성은 150μM NADH, pH 7.0의 존재 하에 100μM GSH와 함께 우선 배양함으로써 겔 슬라이스로부터 용출된 물질로 복원하여, 재접힘된다. 이어서, 과산화수소를 첨가하여, 디술피드 결합을 재형성하고 반응을 개시하였다. 전체 겔의 비교가능한 영역을 분석하였으나, 상기 분획 단독은 약 25분의 주기 길이를 갖는 이중 및 단일 화살표에 의해 나타낸 페리사이토크롬 c 환원의 진동 더블릿 패턴을 나타냈다.

도 10은 IBR-도르민® (상부 도면)에 의한 억제 및 제품 필린히브(Pilinhib) (하부 도면)에 의한 억제의 결여에 대한 노화된 수액 담황막의 arNOX에 의한 주기적 과산화물 발생의 반응을 예시한다. 밀폐된 화살표는 약 25분의 주기 길이를 갖는 활성 최대치를 나타내며, 필린히브를 갖는 제제는 어느 것도 억제되지 않은 최대치의 2개의 세트를 나타냈다. 반응은 억제제 없이 45분 동안 행해졌다. 큰 개방된 화살표에서 억제제가 참가되었으며, 반응은 억제제의 존재 하에 또다른 45분 동안 계속되었다.

도 11은 기질 1몰 당 피리딘에티오닌 2몰을 발생시키는 2-피리딜디티오 기질이 단백질 디술피드-티올 상호교환 활성의 직접적인 척도를 제공함을 예시한다.

도 12는 각 환자의 우측 팔꿈치에 적용된 비히클 크림의 적용과 관련된 각 추적 방문에서 각 환자에 대한 전체 점수 파라미터를 예시한다.

도 13은 각 환자의 좌측 팔꿈치에 대해 가공된 나르시서스 타제타 추출물로 이루어진 크림의 적용과 관련된 각 추적 방문에서 각 환자에 대한 전체 점수 파라미터를 예시한다.

도 14는 각 추적 방문에 대한 각각의 팔꿈치에 대한 점수 파라미터의 평균 ％ 감소를 예시한다.

도 15A 내지 C는 가공된 나르시서스 타제타 추출물을 포함하는 화장품 크림의 몇몇 농도의 관능 분석에 관한 그래프 통계 데이터를 도시한다. 특히, 위약, 1 ％ 가공된 나르시서스 타제타 추출물 화장품 크림 및 3％ 가공된 나르시서스 타제타 추출물 화장품 크림이 시험 피검자에게 적용되었을 때, 도 15A는 외부 공격에 대한 인지된 내성을 도시하며, 도 15B는 피부 민감도를 도시하며, 도 15C는 피부 보호를 도시한다.

도 16A 내지 C는 가공된 나르시서스 타제타 추출물을 포함하는 화장품 크림의 몇몇 농도의 관능 분석에 관한 그래프 통계 데이터를 도시한다. 특히, 위약, 1％ 가공된 나르시서스 타제타 추출물 화장품 크림 및 3％ 가공된 나르시서스 타제타 추출물 화장품 크림이 시험 피검자에게 적용되었을 때, 도 16A는 피부 자극성, 도 16B는 피부 피로감, 및 도 16C는 피부 팽팽함을 도시한다.

도 17A 내지 C는 가공된 나르시서스 타제타 추출물을 포함하는 화장품 크림의 몇몇 농도의 관능 분석에 관한 그래프 통계 데이터를 도시한다. 특히, 위약, 1％ 가공된 나르시서스 타제타 추출물 화장품 크림 및 3％ 가공된 나르시서스 타제타 추출물 화장품 크림이 시험 피검자에게 적용되었을 때, 도 17A는 피부 편안함, 도 17B는 피부 상 잔주름의 출현, 및 도 17C는 피부 유연성을 도시한다.

도 18은 위약, 1％ 가공된 나르시서스 타제타 추출물 화장품 크림 및 3％ 가공된 나르시서스 타제타 추출물 화장품 크림을 관련 환자군에게 4주간 적용한 후 몇몇 항목에 대한 정량적 관능 분석의 ％ 발전을 예시한다.

본 발명은 노화 인자 격리 제제 및 그의 사용 방법에 관한 것이다. 더욱 구체적으로, 본 발명은 NADH 옥시다제의 노화 관련 이소형 (arNOX)으로 인한 세포 손상으로부터 발생하는 질환 및 질환의 합병증을 예방 또는 치료하기 위한 제제 및 그의 사용 방법에 관한 것이다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 제제는 하나 이상의 가공된 나르시서스 타제타 제품을 포함한다. 본 발명의 하나의 실시양태는, arNOX와 결합하고, 반응성 산소 종을 발생시키는 arNOX의 능력을 억제하는 제제 뿐만 아니라, arNOX의 반응성 산소 종을 발생시키는 능력을 억제하기 위해 이들 제제를 사용하는 방법을 포함한다.

본 발명은 노화 세포에 의해 혈청으로 발산된, NADH 옥시다제의 노화 관련 이소형 (arNOX)을 표적화함으로써, 노화하는 세포의 산화성 변화로부터 발생하는 질환의 치료를 위한 제약학적 조성물, 사용 방법 및 제약학적 키트를 제공한다. 조성물은 식물로부터 추출된 제제를 함유할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 조성물은 단독으로 또는 기타 억제 제제와 함께 하나 이상의 가공된 나르시서스 타제타 제품을 포함할 수 있으며, 노화 세포에 의해 혈청으로 발산된 NADH 옥시다제의 노화 관련 이소형의 활성을 억제하며, 여기서 기타 억제 제제는 유비퀴논, 오미자 추출물, 또는 인동, 또는 영년생 숙근종 추출물을 포함할 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 가공된 나르시서스 타제타 추출물은 IBR-도르민 (IBR-DORMIN)®이다.

본원에 사용된 용어 "질환"은 임의의 불쾌, 질병, 병, 임상적 상태, 병리학적 상태, 약화된 상태, 병적인 상태, 및 임의의 비정상적 또는 바람직하지 못한 신체적 상태를 포함하는 정상적인 기능을 손상시키는, 살아있는 동물 또는 식물 신체 또는 그의 일부의 임의의 상태를 말한다.

본원에 사용된 용어 "반응성 산소 종"은 산소 대사 또는 자유 전자의 전이로부터 자유 라디칼 (예, 과산화물 또는 히드록시 라디칼)을 형성하는 산소 유도체를 말한다.

본원에 사용된 용어 "항산화제"는 반응성 산소 종의 활성을 중화시키거나, 또는 상기 반응성 종에 의해 행해진 세포 손상을 억제하는 화합물을 말한다.

본원에 사용된 용어 "제약학적으로 허용가능한 담체"는 활성 성분의 생물학적 활성의 효과와 간섭하지 않으며, 화학적으로 비활성이며, 투여될 환자에 대해 비독성인 담체 매질을 말한다.

본원에 사용된 용어 "제약학적으로 허용가능한 유도체"는 항산화제 활성을 나타내며, 피검자에 대해 비교적 비독성인, 본원에 기재된 제형에 상응하는 임의의 동족체, 유사체 또는 단편을 말한다.

용어 "치료학적 제제"는 반응성 산소 종으로 인한 질환 또는 질환의 합병증의 예방 또는 치료를 돕는 임의의 분자, 화합물 또는 치료, 바람직하게는 항산화제를 말한다.

용어 "arNOX 격리 제제"는 arNOX와 작용하여, arNOX와 다른 기질의 반응을 감소시키고, arNOX의 반응성 산소 종을 발생시키는 능력을 억제하는 임의의 분자, 화합물 또는 치료를 말한다.

본원에 정의된 항산화제, 세포 성분 및 표적 단백질은 하기와 같은 약어를 사용할 수 있다:

미토콘드리아 DNA mtDNA

니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드 NADH

단백질 디술피드-티올 이성질화 효소 활성을 갖는 세포 표면 히드로퀴논 (NADH) 옥시다제 NOX

비 암 세포에 특이적인 NOX CNOX

노화 세포에 특이적인 NOX AR-NOX

암 세포에 특이적인 NOX tNOX

저밀도 지질단백질 LDL

플라즈마 멤브레인 옥시도-리덕타제 사슬 PMOR

유비퀴논 또는 코엔자임 Q CoQ

코엔자임 Q₁₀ CoQ₁₀

반응성 산소 종 ROS

본 발명의 하기 개시는 부표제로 분류된다. 부표제의 이용은 독자의 편의를 위한 것일 뿐, 어떠한 의미로도 제한하는 것으로 구성되는 것은 아니다.

1. 플라즈마 멤브레인 히드로퀴논 ( NADH ) 옥시다제 ( NOX )

플라즈마 멤브레인 NADH 옥시다제 (NOX)는 호르몬- 및 생장 인자에 통상적으로 반응하는 히드로퀴논 (NADH) 옥시다제 및 단백질 디술피드-티올 상호교환 활성을 갖는 독특한 세포 표면 단백질이다. tNOX 지정된 활성의 호르몬 무감각 및 약물 반응성 형태는, 암 세포에 특이적인 것으로 기재되었다. 특정 조건 하에 NOX 단백질이 ROS를 생성할 수 있다는 증거가 존재한다. 예를 들어, 배양 세포에서 산화성 스트레스의 공급원으로서 자외광이 과산화물 발생을 개시하는 데 사용된다 (Morre et al., 1999, Biofactors 9:179-187) (본원에 그 전체가 참고로 인용된 U.S. 특허 제5,605,810호 참조).

2. 코엔자임 Q의 플라즈마 멤브레인 수준

플라즈마 멤브레인 유비퀴논 또는 코엔자임 Q (CoQ)는 PMOR 계통에서 중요한 작용을 한다. 유비퀴논 또는 코엔자임 Q (CoQ)는 조직을 따라 편재적으로 발생한다. 플라즈마 멤브레인의 유비퀴논 함량은 마이크로솜의 2 내지 5배이며, 미토콘드리아의 반이다. 유비퀴논은 NADH 및 숙신 데히드로제나제 및 미토콘드리아의 사이토크롬 계통 간의 전자 수송을 중재하는 그의 종래의 역할 이상의 전구- 및 항산화제 역할을 모두 하는 것으로 오랫동안 고려되어 왔다 (Emster and Daliner, 1995, Biochim. Biophys. Acta 127:195-204; 및 Crane and Barr, 1985, Coenzyme Q, John Wiley & Sons, Chichester 1-37).

CoQ는 통상적으로 세포 생합성의 생성물이며, 일 전자 전구 산화제 산소 환원의 잠재적으로 중요한 공급원을 제공한다 (Anderson et al., 1994, Biochim. Biophys. Acta 1214:79-87; Appelkvist et al., 1994, Molec. Aspects Med. 15S: 37-46). 그의 환원된 히드로퀴논 형태 (유비퀴놀)에서, 과산화물에 직접적으로, 또는 단독 또는 비타민 E (α-토코페롤)와 함께 지질 라디칼에 간접적으로 작용하는 강력한 항산화제이다 (Crane and Barr, 1985, Coenzyme Q, John Wiley & Sons, Chichester, pp.1-37; Beyer and Emster, 1990, Highlights of Ubiquinone Research, Taylor & Francis, London, pp.191-213; Beyer, 1994, J. Bioenerg. Biomemb. 26:349-358; Kagan et al., 1990, Biochem. Biophys. Res. Comm. 169:851-857; 및 Ernster et al., 1992, BioFactors 3:241-248).

유비퀴놀의 항산화 작용은 통상적으로 유비세미퀴논 라디칼을 생성한다. 후자는 미토콘드리아 내 전자 전이 사슬을 통한 재환원에 의해, 또는 플라즈마 멤브레인을 포함한 다양한 세포 구획에서 다양한 퀴논 리덕타제에 의해 유비퀴놀로 다시 전환된다 (Takahashi et al., 1995, Biochem. J. 309:883-890; Takahashi et al., 1996, J. Biochem. (Tokyo) 119:256-263; Beyer et al., 1996, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93:2528-2532; Beyer et al., 1997, Molec. Aspects Med. 18:s1S-s23; Navarro et al., 1995, Biochem. Biophys. Res. Comm. 2 12:138-143; Villalba et al., 1995, Molec. Aspects Med. 18:s7-s13; 및 Arroyo et al., 1998, Protoplasma 205:107-113). 이와 같이, 유비세미퀴논 음이온이 양성자화되는 경우, 유비퀴논은 유리한 일 전자 담체로부터 과산화물 발생자로 변형될 수 있다 (Nohl et al., 1996, Free Rad. Biol. Med. 20:207-15 213).

외인성 CoQ 첨가는 ROS 생성을 예방하며, 부수적으로 산화성 손상으로부터 세포를 보호할 수 있다. 예를 들어, 외인성 CoQ는 NOX-중재된 ROS 생성에 영향을 준다 (Valls et al., 1994, Biochem. Mol. Biol. Tnt. 33:633-642; Beyer et al., 1996, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93:2528-2532; 및 PCT 공개 출원 WO 00/5787호). 플라즈마 멤브레인에서 항산화 효과는 세포 표면에서 생성된 PMOR에 의해 ROS를 청소함으로써 LDL 산화를 개선할 수 있다 (Thomas et al., 1997, Molec. Aspects Med. 8:s85-s103).

일부 연구는 전체 CoQ 수준이 연령에 따라 감소함을 나타낸다 (Beyer et al., 1985, Mech. Aging Dev. 32:267-281; Kalen et al., 1990, Lipids 25:93-99; 및 Genova et al., 1995, Biochem. J. 311:105-109). 그러나, 높은 CoQ 수준이 노화 전체에 걸쳐 유지되는 경우, 이는 모든 조직, 특히 뇌에 대해서는 사실이 아니다 (Soderberg et al., 1990, J. Neurochem. 54:415-423 및 Battino et al., 1995, Mech. Aging Dev. 78:173-187). 이와 같이, 본 발명은 또한 과활성 또는 변종 세포 표면 PMOR 계통으로 인한 효과를 억제 또는 감소시키고, NOX 이소형을 격리하기 위한 코엔자임 Q의 특정 치료적 수준을 포함한다.

3. arNOX 의 분리 및 특성화

본 발명은 환원된 퀴논을 산화시킬 수 있는 세포 표면 NADH 옥시다제의 노화 이소형인 arNOX에 관련된 연구를 포함한다. NOX 단백질은 플라즈마 멤브레인의 외부 소엽에 고착되어 있다 (Morre, 1995, Biochem. Biophys. Acta. 1240:201-208; 및 DeHahn et al., 1997, Biochem. Biophys. Acta. 1328:99-108). NOX 활성은 세포 표면으로부터 가용성 형태로 발산되는 것으로 나타났다 (Morre et al., 1996, Biochim. Biophys. Acta 1280:197-206). 순환기에서 발산된 형태의 존재는 환자의 혈청을 분리 및 특성화 연구를 위한 NOX 단백질의 공급원으로서 사용할 기회를 제공한다. 노인 피검자 (arNOX)로부터의 혈청에 특이적인 CNOX 활성의 혈청 형태가 확인되었다 (PCT 공개 출원 WO 00/57871호).

본 발명은 환원된 퀴논을 산화시킬 수 있는 구성적인 세포 표면 NADH 옥시다제 단백질 (CNOX)인 arNOX의 확인을 기초로 한다. NOX 단백질은 플라즈마 멤브레인 전자 전달계에서 말단 옥시다제로서의 그의 역할의 결과로서, 반응성 산소 종의 세포 표면 축적에 대해 미토콘드리아 DNA 중 손상의 축적을 연결하는 것으로 가정되었다 (Morre, D.M. et al., 2000, J. Expl Biol 203:1513-1521). 기능적으로 결핍된 미토콘드리아를 갖는 세포는 혐기성 대사에 의해 특성화된다. ATP의 글리콜 생성으로부터 축적된 NADH 및 상승된 플라즈마 멤브레인 전자 수송 활성은 생존에 필수적인 NAD⁺/NADH 항상성을 유지하는 데 필수적이 된다. 이전의 발견은 플라즈마 멤브레인 전자 수송 계통의 활동항진이 반응성 산소 종의 세포 표면 발생을 가능하게 하는 NADH 옥시다제 활성을 일으킴을 증명한다 (Morre, D.J. et al., 1999, BioFactors 9:179-187). 이는 인접 세포 모두에 대해 노화 게스케이드를 전파하고, 순환하는 지질단백질을 산화하는 것을 도울 것이다.

ArNOX는 과산화물 발생 및 노화 관련 효소적 활성을 가지며, 이는 코엔자임 Q 및 가공된 나르시서스 타제타 제품의 첨가에 의해 실질적으로 환원된다. NOX 단백질의 노화 이소형의 특징은, 노화와 관련된 상기 단백질에 의한 과산화물의 발생이 가공된 나르시서스 타제타 제품 및 코엔자임 Q 모두에 의해 억제된다는 것이다. 이러한 발견은, 피부에 대한 가공된 나르시서스 타제타 제품의 노화방지 활성, 죽상경화증의 예방시 순환하는 코엔자임 Q, 및 세포 멤브레인 및 순환하는 지질단백질 중 기타 산화성 변화에 대한 합리적인 근거를 제공한다. 이와 같이, 본 발명의 하나의 실시양태는 arNOX가 세포 노화와 관련된 심장혈관 변화를 제거할 뿐만 아니라, 피부 생기를 유지하기 위한 보호를 제공하기 위해, 가공된 나르시서스 타제타 제품 및 유비퀴논 (코엔자임 Q)에 대한 분자 표적을 제공한다는 발견을 포함한다. 본 발명의 또다른 실시양태는 arNOX 단백질을 격리, 중화, 결합, 또는 저해 또는 제거하고, 반응성 산소 종을 발생시키는 그의 능력을 억제하는 제제를 이용하여, 프로그래밍된 세포 사멸, 세포자멸사를 예방한다.

일반적으로, 노화된 세포의 특징은 arNOX를 발현 및(또는) 발산하고, 노화 관련 PMOR 시스템, 반응성 산소 종을 발생시키는 능력 중 하나 이상의 특징 (이에 한정되지 않음)을 나타내며, 기능적 결핍성 미토콘드리아를 갖는 것들을 포함한다. 본 발명의 하나의 실시양태는 노화 세포의 부정적인 영향을 감소시키기 위한 제제의 이용이다.

본 발명의 또다른 실시양태는 산소 환원으로부터 단백질 디술피드 환원으로 NOX 단백질을 전환하는 제제를 이용하는 것에 관한 것이다. 예를 들어, 약물 또는 보충물이 제제로서 이용될 수 있다. 이러한 접근의 장점은 옥신에 반응하는 식물 세포로 이미 관찰되었다 (Chueh et al., 1997, Biol. Chem. 272:11221-1227).

림프구로부터의 arNOX 단백질에 대한 NOX-특이적 다클론성 항체가 제조되었다. 일단 arNOX의 아미노산 서열이 상응하는 cDNA 서열로부터 추론되면, 아미노산 서열은 노화에 대한 NOX 반응을 조사 및 개선하기 위해 arNOX에 특이적인 프로브로서 치료적 효과를 갖는 펩티트 혈청을 전략적으로 발생시키는 데 사용될 수 있다. 당업계에게 공지된 방법을 사용하여, 재조합 cDNA 라이브러리가 arNOX를 발현하는 것으로 공지된 세포로부터 제조된 RNA를 사용하여 구축될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Sambrook et al., 1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, N.Y.; 및 Current Protocols in Molecular Biology, Green Publishing Associates and Wiley Intersciences, N.Y]에 기재된 기술 참조. 대안적으로, 인간 cDNA 라이브러리는 시판 공급원, 예컨대 스트라타진(Stratagene)으로부터 수득할 수 있다. 재조합 cDNA 라이브러리는 당업자에게 공지된 다수의 상이한 기술을 사용하여 스크리닝될 수 있다.

본 발명의 또다른 실시양태에서, cDNA 라이브러리는 포유류 발현 벡터로 제조되고, 적절한 포유류 세포주로 트랜스펙션된 후, 조직 배양 상청액 중 arNOX 활성을 분석함으로써 스크리닝될 수 있다.

본 발명의 또다른 실시양태에서, 폴리머라제 사슬 반응에 의해 arNOX를 클로닝하기 위한 방법은 arNOX에 대한 cDNA 코드화를 클로닝하는 데 사용될 수 있다. 이러한 방법은 노화된 개체의 림프구로부터 제조된 RNA를 사용하여 이용될 수 있다.

대안적으로, arNOX는 시판 공급원 (예, 스트라타진)으로부터 수득한 인간 cDNA 라이브러리의 폴리머라제 사슬 반응 (PCR) 확장에 의해 클로닝될 수 있다. 또한, 유전자 발현 어레이 또는 마이크로어레이를 사용하는 유전자 발현 분석은 상이한 세포 또는 조직 종류 간의 유전자 발현 패턴에서의 변화를 확인하기 위해 유용하다 (예를 들어, 문헌 [Schena et al., 1995, Science 270:467-470; Lockhart et al., 1996, Nature Biotechnology 14:1674-1680; 및 Blanchard et al., 1996, Nature Biotechnology 14:1649] 참조). 이와 같이, 본 발명의 또다른 대안적인 실시양태에서, 상기 유전자 발현 어레이 또는 마이크로어레이는, arNOX 활성을 나타내지 않으며, 따라서 arNOX를 발현하지 않는 세포 중 mRNA 발현 패턴에 대해, arNOX 활성 (예, 본 발명의 분석법 중 하나에 의해 측정)을 나타내는 세포 중 mRNA 발현 패턴을 비교하기 위해 사용될 수 있다.

4. arNOX 의 검출 방법

본 발명은 혈청 중 세포 멤브레인 관련된 arNOX 및 가용성 arNOX를 검출하기 위한 방법을 포함한다. 예를 들어, 본원에 그 전체가 참고로 인용된 PCT 공개 출원 WO 00/57871호 참조. 본 발명은 또한 세포 및(또는) 조직에 대한 산화성 손상이 의심되는 경우, 진단 도구로서 arNOX를 사용하는 것을 고려한다. 이와 같이, 조직, 세포 또는 순환 중 arNOX가 검출될 수 있다. 실시양태는 검출가능한 시그널을 제공하는 광범위한 범위의 라벨에 결합될 수 있는, arNOX에 대해 특이적인 항체를 사용하는 것에 의한 검출을 포함한다. 예를 들어, 방사선동위원소, 효소, 형광 발광 등이 라벨로서 이용될 수 있다. 검출 기술의 예는 arNOX를 갖는 혈청이 arNOX가 없는 혈청보다 더 빠른 속도의 사이토크롬 c 환원을 나타낸다는 것을 인식하는 분석법에 기초한 검출; arNOX가 전자 수용체, 예컨대 아스코르베이트 라디칼을 환원시키기 때문에 약 265nm에서 흡광도를 측정함으로써 아스코르베이트 라디칼의 분광 광도계적 소멸을 측정하는 분석법; 당업계에 공지된 방법을 사용하는 arNOX에 의한 NADH의 환원 측정; arNOX의 독특한 진동 특성에 기초한 분석법; 건강한 세포로부터의 NOX가 레티노산에 의해 억제되며, arNOX가 레티노산에 의해 억제되지 않기 때문에 레티노산에 대한 내성에 의해 검출될 수 있는 방법; 미토콘드리아 기능이 하락하며, 결과적으로 PMOR이 과발현되는 경우, 세포를 확인하기 위해 arNOX를 사용하는 방법; 및 세포를 과발현된 arNOX의 존재로 확인할 수 있는 방법을 포함한다 (각각 그 전체가 본원에 참고로 인용된 문헌 [Morre, 1998, Plasma Membrane Redox Systems and their Role in Biological Stress and Disease 121-156; Morre et al., 1999, Mol. Cell. Biochem. 200:7-13] 참조).

5. arNOX 와 상호작용하는 제제의 확인 방법

본 발명은 arNOX를 표적으로 하는 제제에 대한 스크리닝을 위한 생체내 및 생체밖 방법에 관한 것이다. 생체밖 선택 방법의 광범위한 범주 내에서, 둘 이상의 성분 간의 결합 상호작용을 측정하는 방법; 및 상호작용 성분 중 하나 (예컨대 arNOX)인 효소의 활성을 측정하는 방법을 포함하는, 몇몇 종류의 방법이 특히 시험 제제를 스크리닝하는데 편리 및(또는) 유용하기 쉽다. 예를 들어, 그 전체가 본원에 참고로 인용된 공개 출원 WO 00/57871호 참조.

2 이상의 성분 간의 결합 상호작용은 당업계에 공지된 다양한 방법으로 측정될 수 있다. 하나의 접근은 쉽게 검출가능한 라벨을 갖는 성분의 하나를 라벨링하고, 이를 다른 성분(들)과 함께, 이들이 정상적으로 상호작용하는 조건 하에 방치하고 (예, 유비퀴논), 결합된 라벨링된 성분을 비결합된 라벨링된 성분으로부터 분리하는 분리 단계를 행한 다음, 결합된 성분의 양을 측정하는 것이다. 시험 제제는 각종 검출가능한 마커로 라벨링될 수 있으며, 이러한 접근 유형 중 분리 단계는 다양한 방법으로 성취될 수 있다. 예를 들어, 공개 출원 WO 00/57871호 참조.

본 발명은 또한 유비퀴논, 유비퀴논 유도체, 식물 추출물, 도르민, IBR-도르민® 또는 가공된 나르시서스 타제타 제품을 기본 분자로서 사용하는 조합 화학 라이브러리의 스크리닝 방법에 사용될 수 있는 생체밖 선택 방법 (본원에 그 전체가 참고로 인용된 U.S. 특허 제5,565,324호), 생체내 스크리닝 방법, 유전자 치료 접근 (본원에 그 전체가 참고로 인용된 U.S. 특허 제5,093,246호) 및 arNOX와 상호작용하는 시험 제제를 확인하기 위한 효모 2-혼성 분석법 (본원에 그 전체가 참고로 인용된 문헌 [Fields and Song, 1989, Nature 340:245-246] 참조)을 포함한다. 본 발명은 또한 본 발명에 기재된 제제에 반응성인 환자를 모니터링하는 방법을 포함한다.

6. 표적 질환

본 발명의 방법에 의해 치료될 수 있는 질환은 산화성 종이 밀접하게 관련된 임의의 임상적 상태를 포함한다. 산화성 종이 관련된 임상적 상태의 예는 하기를 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다: 허혈 재관류 상해 (예, 중풍/심근경색증 및 장기 이식), 암, 노화, 노화 관련 관절염, 노화 관련 피로감, 알코올 중독, 적혈구 결손 (예, 잠두중독증, 말라리아, 겸상적혈구 빈혈, 판코니 빈혈(Fanconi's anemia) 및 프로토포르피린 광산화), 철 과부하 (예, 영양 결핍, 단백열량부족증, 지중해빈혈증, 식이 철 과부하, 특발성 혈색소 침착증), 신장 (예, 금속 철 매개 신독성, 아미노글리코시드 신독성 및 자가면역 신장 증후군), 위장관 (예, 구강 철 중독, 내독소 간 상해, 유리 지방산 유도된 췌장염, 비스테로이드성 항염증 약물 유도된 위장관 손상, 및 알록산의 당뇨병 유발 작용), 염증성-면역 상해 (예, 류마티스성 관절염, 사구체신염, 자가면역 질환, 혈관염 및 B형간염 바이러스 감염), 뇌 (예, 파킨슨씨 병, 신경독, 알레르기성 뇌척수염, 외상의 상승작용, 고혈압 뇌혈관 손상 및 비타민 E 결핍), 심장 및 심장혈관 계통 (예, 죽상경화증, 아드리아마이신 심장독성, 케산병(Keshan disease) (셀레늄 결핍) 및 알코올 심근병증), 눈 (예, 광선 망막병증, 안구 출혈, 백내장 발생 및 퇴행성 망막 손상), 근육위축 측삭 경화증, 및 노화 관련 황반변성 (Slater, 1989, Free Rad. Res. Comm. 7:119-390; Deng et al., 1993, Science 261:1047-1051; Seddon et al., 1994, JAMA 272:1413-1420; Brown, 1995, Cell 80:687-692; 및 Jenner, 1991, Acta Neurol. Seand. 84:6-15).

본 발명은 또한 당뇨병, 죽종형성, 죽상경화증 및 관련 질병의 합병증을 예방 또는 경감시키는 것에 관한 것이다. 산화성 스트레스 및 LDL 산화는 당뇨병에서 통상적인 합병증 특징이며, 순환하는 AR-NOX는 노화, 죽종형성 및 죽상경화증에 중요한 혈액 구성성분의 산화환원 조절에 대한 기회를 제공한다 (Kennedy and Lyons, 1998, Metabolism 56;14-21).

하나의 실시양태에서, 본 발명은 환자 중 1차 질환의, arNOX에 의한 반응성 산소 종의 발생으로부터 기인한 산화성 손상으로 인한 합병증을 예방하는 방법에 관한 것이다. 방법은 1차 질환을 갖는 환자에게, 제약학적으로 허용가능한 담체 중의, arNOX를 격리하는 제제(들)을 상기 합병증을 예방하기에 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함한다.

또다른 실시양태에서, 본 발명은 arNOX에 의한 반응성 산소 종의 발생으로부터 기인하는 산화성 손상을 일으키는 1차 질환을 갖는 환자에게서 제2 질환을 예방하는 방법에 관한 것이다. 본 방법은 1차 질환을 갖는 환자에게, 제약학적으로 허용가능한 담체 중의, arNOX를 격리하는 제제(들)을 상기 2차 질환을 예방하기에 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함한다.

본 발명의 하나의 실시양태는 하기를 포함하는 피부학적 질환을 개선 및 예방하기 위한 제제 및 그의 사용 방법을 제공한다: 보통 여드름, 통증 지방증, 백색증, 탈모증, α 1-안티트립신 결핍, 대머리, 베체트(Behcet) 증후군, 모반, 버트-호그-듀브(Birt-Hogg-Dube) 증후군 (MeSH 상에서가 아님), 물집, 카페오레 반점, 연조직염, 진주종, 결합조직병, 선천성 구축거미가락증 (빌(Beal) 증후군) (MeSH 상에서 아님), 이완피부증, 욕창궤양, 더컴(Dercum) 병, 피부염, 탈락피부염, 포진피부염, 외배엽형성 이상, 습진, 엘러스-단로스(Ehlers-Danlos) 증후군, 물집표피박리증, 얕은연조직염, 다형홍반, 돌발발진, 종기증, 환상육아종, 미각발한, 헤일리-헤일리(Hailey-Hailey) 병, 모발 질환, 모발 손실, 머릿니(head lice), 화농땀샘염, 다모증, 두드러기, 땀저하증, 비늘증, 침수발병, 색소실조증, 켈로이드, 광선각화증 (MeSH 상에서 아님), 털집각화증, 지루각화증, 다리 궤양, 흑색점, 편평태선, 위축 경화태선, 지방이상증, 루푸스, 피부홍반루푸스, 전신홍반루프스, 마르판(Marfan) 증후군, 비만세포증, 흑색종, 흑색증, 혼합된 결합조직병, 손톱무릎뼈 증후군, 손톱 질환, 발톱감입, 지방층염, 유사건선, 손발톱주위염, 유사천포창, 천포창, 양성 가족성 천포창, 감광성 질환, 색소침착, 잔비늘증, 옻나무 과민증, 포도주색 반점, 가려움증, 탄력섬유거짓황색종, 건선, 과저고름피부증, 딸기코, 옴, 피부경화증, 전신피부경화증, 지루성 피부염, 쇼핑 강박증, 피부 암, 피부 및 결합조직병, 피부 질환, 감염성 피부 질환, 피부 궤양, 스티븐스-존슨(Stevens-Johnson) 증후군, 스티클러(Stickler) 증후군 (MeSH 상에서 아님), 땀샘 질환, 스위트(Sweet) 증후군, 물놀이가려움증, 어루러기, 두드러기, 백반증, 사마귀, 황색종증, 피부건조 색소침착증.

7. 가공된 나르시서스 타제타 제품

본 발명의 하나의 실시양태는 제약학적으로 활성인 양의 가공된 나르시서스 타제타 제품으로 환자를 치료하는 것을 포함한다. 가공된 제품의 바람직한 실시양태는 IBR-도르민®이다. IBR-도르민®은 나르시서스 타제타 구근의 수 추출물로 구성되며, 따라서 물에 가용성이다. 추출 공정, 예컨대 추출, 침전 및 여과는 물의 일부 뿐만 아니라 구근 물질의 일부를 제거한다. IBR-도르민®은 바람직하게는, 물, 하나 이상의 나르시서스 타제타 추출물 및 하나 이상의 보존제로 구성된다. 파라벤 에스테르 및 페녹시에탄올의 블렌드인 페노켐이 바람직한 보존제의 일례이다. 나르시서스 타제타 추출물은 포유류를 치료하는데 사용된 제제 중 다양한 양으로 존재할 수 있다. 예를 들어, 가공된 나르시서스 타제타 제품은 25 내지 49.9％, 10 내지 24.9％, 5 내지 9.9％, 1 내지 4.9％, 0.1 내지 0.99％, 및 0.1％ 미만의 전체 부피의 백분율로 측정된 양으로 존재할 수 있다. IBR-도르민®에 관한 추가 정보는 본원에 그 개시가 참고로 인용된 U.S. 특허 제6,635,287호 및 제6,347,254호에서 발견할 수 있다.

가공된 나르시서스 타제타 제품의 특징은 세포 증식을 완화시키는 그들의 능력이다. 가공된 나르시서스 타제타 제품은 다른 식물에서 가역적 휴지 상태를 유도할 수 있다. 가공된 나르시서스 타제타 제품은 또한 암과 같은 종족에 대해서 뿐만 아니라, 인간 섬유모세포 및 각질형성세포 1차 배양액의 세포 생장에 대해서도 억제 효과를 나타내었다. 이 효과는 G1 중 세포 풀의 감소를 생성하는, FACS 연구에서 나타난 바와 같은, 단계 S, G2 및 M 중 세포 주기의 감속을 통해 발생하는 것으로 여겨진다.

본 발명의 하나의 실시양태는 생장 및 분화 (예, 건선) 간의 피부 대항작용을 생성하기 위한 가공된 나르시서스 타제타 제품으로 이루어진 제제의 이용이다. 예를 들어, 크림 형태의 IBR-도르민®을 함유하는 제제는 건선의 치료에 사용될 수 있었다. IBR-도르민®의 다양한 농도가 치료의 바람직한 효능에 영향을 주기 위해 이용될 수 있다.

이론상, 가공된 나르시서스 타제타 제품은, 손톱 성장 속도 감소, 연장된 볕에 그을림, 여드름을 포함한 피부 질환의 치료, 건선의 치료, 모발 제거 치료, 탈모 및 다모의 억제, 색소침착의 감소, 양성 또는 악성 종양에 대한 고위험을 갖는 인간의 치료와 같이, 세포 증식을 감소시키는 것이 유리한 경우면 어디든 사용될 수 있다.

가공된 나르시서스 타제타 제품 중 확인된 활성 분획의 하나는 5,000달톤 미만의 분자 크기에서이다. 따라서, 추출 공정은 5,000D 절단 제거 멤브레인을 통한 초여과 단계를 포함하는 것이 바람직하다. 이 활성 분획은 열 안정적이다. 이는 120℃, 2atm에서 30분 동안 고압살균하여, 초기 활성의 99％를 유지할 수 있다. 추출물 또는 추출물을 함유하는 제제는 4 내지 24℃에서 밀폐된 용기 중에서, 바람직하게는 멸균을 유지해야 한다. 본 발명에 따른 가공된 추출물의 억제 활성은 활성의 손실 없이 2년 동안 실온에서 안정적이다.

8. 나르시서스 타제타 제품에 의한 arNOX 의 억제

가공된 나르시서스 타제타 제품은 arNOX 활성을 격리한다. arNOX의 억제는 arNOX에 의한 반응성 산소 종의 발생을 감소시킨다. 반응성 산소 종의 감소는 상기 반응성 산소 종으로부터 발생하는 산화성 손상을 감소시킨다. 예를 들어, IBR-도르민®은 노화방지 활성이 청구되고 있는 휴면중의 나르시서스 타제타 구근으로부터의 복합 혼합물이다. 제제는 혈청 및 수액 담황막의 arNOX 활성을 특이적이며 완전하게 억제한다 (도 10). 본 발명은 arNOX의 억제를 위한 IBR-도르민®의 사용을 포함한다 (도 10). 이와 같이, 가공된 나르시서스 타제타 제품 제제는 각종 영양물과 관련된 상태를 개선하기 위해 본원에 개시된 바와 같이 이용될 수 있다.

본 발명의 하나의 실시양태는 가공된 나르시서스 타제타 제품, IBR-도르민® 및(또는) 코엔자임 Q를 포함하는 제제를 단독으로 또는 arNOX의 억제를 위해 서로의 조합으로 사용하는 것을 포함한다.

본 발명의 또다른 실시양태는 가공된 나르시서스 타제타 제품, IBR-도르민® 및 코엔자임 Q 외의 억제 제제, 예컨대 오미자(Shisandra Chinensis), 인동(Lonicera Japonica), 영년생 숙근종(Fagopyrum Cymosum) 및 메틸파라벤의 사용을 포함한다.

본 발명의 제약 조성물은 arNOX를 격리하는 화합물의 다양한 투여 양태를 포함한다. 화합물의 투여 양태는 캡슐, 정제, 연질 겔, 용액제, 좌약제, 주사제, 에어로졸 또는 키트를 포함한다.

본 발명의 실시양태는 가공된 나르시서스 타제타 제품, 바람직하게는 IBR-도르민®을 억제 제제로서 사용하는, arNOX의 동정 및 특성화를 포함한다.

본 발명은 arNOX의 동정 및 정제, arNOX cDNA의 클로닝 및 arNOX 단백질의 완전한 분자적 특성화를 고려한다. 존재하는 분석법은 활성 구성성분(들)을 확인하고, 노화방지 활성의 기타 천연 제품 공급원을 분석하기 위해, 가공된 나르시서스 타제타 제품을 분별하는 데 사용될 것이다. 분자 정보에 기초하여, arNOX 발현에 대한 신속하고 비침해적인 RT-PCR (역 트랜스크립타제-폴리머라제 사슬 반응) 피부 시험이 노화 공정 중 arNOX의 필요성 및(또는) 충족을 시험하기 위한 모델과 함께 개발될 것이다.

본 발명은 피부 생기를 유지하고, 노화 관련 세포 표면 및 지질단백질 산화의 제거에 대한 접근으로서 코엔자임 Q의 경구 투여를 위한, 가공된 나르시서스 타제타 제품의 국소적 투여의 사용을 포함한다. 본 발명의 바람직한 실시양태는 피부 생기를 유지 및 향상시키기 위해 환자의 피부에 대한, IBR-도르민®을 포함하는 크림의 국소적 투여를 포함한다.

본 발명의 하나의 실시양태는 치료제, 및 하나 이상의 치료제를 포함하는 제형의 치료학적으로 효과적인 양의 투여를 포함한다. 본 발명의 치료제의 하나의 실시양태는 하나 이상의 가공된 나르시서스 타제타 제품을 포함한다. 제제는 유비퀴논을 추가로 포함할 수 있다. 제형은 반응성 산소 종의 발생으로부터 기인하는 산화성 손상에 의한 질환 또는 질환의 합병증을 갖는 환자에게 투여될 수 있다. 예를 들어, 제형은 arNOX에 의한 반응성 산소 종의 발생으로부터 기인하는 산화성 손상으로 인한 질환 또는 질환의 합병증을 갖는 환자에게 투여될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 치료제의 전체 1일 투여량은 약 1 내지 약 500㎎이다. 더욱 바람직한 실시양태에서, 전체 1일 투여량은 치료제 약 1 내지 100㎎이다.

하나의 실시양태에서, 본 발명은 본 발명에 개시된 치료제로의 처리에 반응성일 수 있는 반응성 산소 종과 관련된 질환으로부터 고통을 겪는 환자를 확인하는 데 사용된다. 이러한 반응성 환자는 과산화물 발생에 대해 혈청 또는 소변의 분석에 의해 확인될 수 있으며, 이는 본 발명의 치료제를 포함하는 치료에 대해 반응성이다. 과산화물의 발생은 이어서, 사이토크롬 c의 환원 또는 임의의 기타 적절한 생물학적 또는 화학적 방법을 행할 수 있다.

본 발명의 하나의 실시양태는 또한, 반응성 산소 종의 발생을 억제하기 위해 제약학적으로 효과적인 양의 유비퀴논으로 환자를 치료하는 것을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 유비퀴논은 인간 유도체 Q₁₀이다. 또다른 실시양태에서, 유비퀴논은 천연적으로 발생하는 유도체 Q₆, Q₇, Q₈ 및 Q₉를 포함한다. 또다른 실시양태에서, 유비퀴논은 기타 유도체 Q₁, Q₂, Q₃, Q₄, Q₅, Q₁₁ 및 Q₁₂를 포함한다. 또다른 실시양태에서, 본 발명은 상기 기재된 유비퀴논 유도체의 혼합물을 포함한다. 본 발명은 또한 체중 1㎏ 당 0.1 내지 100㎎의 범위의 유비퀴논의 투여로, arNOX 관련 질환을 갖는 환자를 치료하는 방법을 위한 상기 기재된 조성물의 모든 제약학적으로 허용가능한 유도체를 추가로 포함한다.

본 발명은 또한 본 발명의 제제에 반응성인 환자를 모니터하기 위한 방법을 포함한다. 바람직하게는, 환자는 가공된 나르시서스 타제타 제품의 투여를 포함하는 치료에 대한 반응성에 관해 모니터될 것이며, 이는 추가로 유비퀴논의 투여를 포함할 수 있다. 환자 혈청 중 순환하는 arNOX 활성을 모니터함으로써, 치료학적 투약량을 결정하고, 본 발명의 치료제로부터의 치료적 장점을 모니터하는 것이 가능해진다. 피검 조성물에 대한 반응은 본 발명의 조성물에 대해 반응성인 arNOX 활성에 대한 환자의 혈액 또는 소변을 분석함으로써 모니터될 수 있다. 상기 모니터 공정에 의해, 피검 조성물의 유효 투약량이 개별 환자의 필요조건에 따라 투여될 수 있다.

9. 제약학적 제형

본 발명에서 확인된 arNOX와 상호작용하는 제제는 산화성 종이 관련된 질환의 예방 또는 치료를 위해 포유류에 대한 투여를 위한 제약학적 제제로 제형화될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 포유류는 인간이다. 상용적인 제약학적 담체 중에 제형화된 발명의 화합물을 포함하는 조성물은 치료를 위해, 제조, 포장 및 라벨링될 수 있다. 복합체가 수용성이면, 이는 적절한 완충액, 예를 들어 포스페이트 완충된 식염수 또는 기타 생리학적으로 상용적인 용액 중에 제형화될 수 있다.

대안적으로, 생성되는 복합체가 수성 용매 중에서 불량한 용해성을 가지면, 이는 트윈(Tween) 또는 폴리에틸렌 글리콜과 같은 비이온성 계면활성제와 함께 제형화될 수 있다. 이와 같이, 화합물 및 그의 생리학적으로 허용가능한 용매화물은 (입 또는 코를 통한) 흡입 또는 통기, 또는 경구, 협측, 비경구, 직장 투여에 의한 투여를 위해 제형화될 수 있거나, 또는 종양의 경우, 고체 종양에 직접적으로 주입될 수 있다.

경구 투여의 경우, 제약학적 제제는 액체 형태, 예를 들어, 용액, 시럽 또는 현탁액일 수 있거나, 사용 전 물 또는 기타 적절한 비히클로 재구성하기 위한 약물 제품으로서 제시될 수 있다. 상기 액체 제제는 제약학적으로 허용가능한 첨가제, 예컨대 현탁화제 (예, 소르비톨 시럽, 셀룰로스 유도체 또는 수소화 식용성 지방); 유화제 (예, 레시틴 또는 아카시아); 비수용성 비히클 (예, 아몬드 오일, 오일 에스테르 또는 분별 식물성 오일); 및 보존제 (예, 메틸 또는 프로필-히드록시벤조에이트 또는 소르브산)로 종래의 방법에 의해 제조될 수 있다. 제약학적 조성물은 제약학적으로 허용가능한 부형제, 예컨대 결합제 (예, 예비젤라틴화 옥수수 전분, 폴리비닐 피롤리돈 또는 히드록시프로필 메틸셀룰로스); 충전제 (예, 락토스, 미소결정성 셀룰로스 또는 인산칼슘수소); 윤활제 (예, 마그네슘 스테아레이트, 탈크 또는 실리카); 붕해제 (예, 감자 전분 또는 나트륨 전분 글리콜레이트); 또는 습윤제 (예, 나트륨 라우릴 술페이트)로 종래의 방법에 의해 제조된 정제 또는 캡슐의 형태를 취할 수 있다. 정제는 당업계에 공지된 방법에 의해 코팅될 수 있다.

경구 투여를 위한 제제는 활성 화합물의 제어된 방출을 제공하기 위해 적절히 제형화될 수 있다. 협측 투여를 위해, 조성물은 종래의 방법으로 제형화된 정제 또는 로젠지 형태를 취할 수 있다. 흡입에 의한 투여를 위해, 본 발명에 따라 사용하기 위한 화합물은 적절한 추진제, 예컨대 디클로로디플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 또는 기타 적절한 기체의 사용으로, 가압된 팩 또는 호흡보조기로부터 에어로졸 분무 방법의 형태로 운반된다. 가압된 에어로졸의 경우, 투약 단위는 계량된 양을 운반하기 위한 밸브를 제공함으로써 측정될 수 있다. 흡입기 또는 취입기에 사용하기 위한 캡슐 또는 카트리지, 예컨대 젤라틴은 락토스 또는 전분과 같은 적절한 분말 기재 및 화합물의 분말 혼합물을 함유하도록 제형화될 수 있다.

화합물은 주입, 예컨대 큰 알약 주입 또는 연속적 주입에 의한 비경구적 투여를 위해 제형화될 수 있다. 주입을 위한 제형은 첨가된 보존제와 함께, 단위 투약 형태, 예컨대 앰플 또는 다중투여 용기 중에 제시될 수 있다. 조성물은 유성 또는 수성 비히클 중의 현탁액, 용액 또는 에멀션 형태를 취할 수 있거나, 또는 제형화 제제, 예컨대 현탁화제, 안정화제 및(또는) 분산화제를 함유할 수 있다. 대안적으로, 활성 성분은 사용 전에 적절한 비히클, 예컨대 살균 피로젠 무함유 물로 구성하기 위한 분말 형태일 수 있다.

화합물은 또한 직장 조성물, 예컨대 통상적인 좌약 기재, 예컨대 코코아 버터 또는 기타 글리세리드를 함유하는 좌약 또는 보유 관장제로 제형화될 수 있다. 화합물은 또한 국소적 적용, 예컨대 크림 또는 로션으로서 제형화될 수 있다.

상기 기재된 제형 외에, 화합물은 또한 저장 제제로서 제형화될 수 있다. 상기 장기간 작용하는 제형은 이식 (예를 들어, 피하 또는 근육내) 또는 근육내 주사에 의해 투여될 수 있다.

이와 같이, 예를 들어 화합물은 적절한 중합체 또는 소수성 물질 (예를 들어, 허용가능한 오일 중 에멀션으로서) 또는 이온 교환 수지, 또는 약하게 가용성인 유도체, 예를 들어, 약하게 가용성인 염과 함께 제형화될 수 있다. 리포좀 및 에멀션이 친수성 약물을 위한 운반 비히클 또는 담체로서 공지되어 있다.

조성물은, 포유류의 피부에 적용되기 위한 조성물로서 제형화될 수 있다. 조성물은 예를 들어, 활성 제제, 및 활성 제제를 피부의 표면으로 적용하는 것을 용이하게 하는 기타 담체 성분으로 이루어질 수 있다. 예를 들어, 조성물은 피부에 대한 적용을 위해 크림 또는 로션으로서 제형화될 수 있다.

조성물은, 원한다면 활성 성분을 함유하는 하나 이상의 단위 투약 형태를 함유할 수 있는 팩 또는 분배 장치로 제시될 수 있다. 팩은 예를 들어, 금속 또는 플라스틱 호일, 예컨대 블리스터 팩을 포함할 수 있다. 팩 또는 분배 장치는 투여를 위한 사용설명서가 첨부될 수 있다.

본 발명은 또한 본 발명의 치료적 섭생을 실시하기 위한 키트를 제공한다. 상기 키트는 제약학적으로 허용가능한 형태로 조성물의 치료적 또는 예방적 유효량을 하나 이상의 용기에 포함한다. 본 발명의 키트의 바이알 중 조성물은 제약학적으로 허용가능한 용액의 형태, 예컨대 살균식염수, 덱스트로스 용액 또는 완충 용액과 조합하여, 또는 기타 제약학적으로 허용가능한 살균 유체의 형태일 수 있다. 대안적으로, 복합체는 동결건조 또는 건조될 수 있으며, 이 경우, 키트는 임의로 용기 중에, 바람직하게는 살균된 제약학적으로 허용가능한 용액 (예, 식염수, 덱스트로스 용액 등)을 추가로 포함하여, 복합체를 재구성하여 주사 목적을 위한 용액을 형성할 수 있다.

또다른 실시양태에서, 본 발명의 키트는 복합체를 주입하기 위해, 바람직하게는 살균된 형태로 포장된 바늘 또는 주사기, 및(또는) 포장된 알코올 패드를 추가로 포함한다. 사용설명서가 임상의학자 또는 환자에 의한 조성물의 투여를 위해 임의로 포함된다.

10. 피부의 치료

본 발명은 피부 손상 및 관련 상태를 예방 및(또는) 개선하는 활성 제제(들)을 포함하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 상기 조성물을 이용하기 위한 방법을 포함한다. 피부각질층은 최상부 표면층을 형성하며, 피부의 안과 밖의 물질의 흐름 및 수분을 조절하면서 피부를 보호하는 피부의 층이다. 이 차단 기능이 파괴되면, 피부는 손상 효과로 고통을 겪으며, 이른 노화를 생성하거나 이의 원인이 된다. 피부의 이른 노화를 일으키는 이들 손상 효과는 건강, 젊은 외모 및 피부 감촉을 유지하고자 하는 많은 이들의 관심사이다. 반응성 산소 종은 세포에 잠재적으로 치명적인 다수의 파괴적인 반응에 참여한다. 반응성 산소 종은 섬유 모세포의 건강한 콜라겐 및 엘라스틴을 생성하는 능력을 손상시키는 것을 포함하는 해로운 세포 상호작용에 부분적으로 책임이 있다. 또한, 피부는 피부학적 질환, 환경적 학대 (바람, 에어컨, 중앙 난방)를 통해, 또는 통상적인 노화 공정 (시간에 따른 노화)을 통해 악화될 수 있으며, 이는 일광에 대한 피부의 노출 (광노화)에 의해 가속화될 수 있다.

본 발명의 바람직한 실시양태는 피부의 치료를 위해, 가공된 식물로부터 활성 제제를 제공한다. 활성 제제는 피부 손상 및 관련 상태를 예방 및(또는) 개선한다. 본 발명의 하나의 실시양태에서, 가공된 식물 제품이 arNOX 활성을 격리한다. 본 발명의 또다른 실시양태에서, 가공된 식물 제품은 라디칼 산소 종을 억제한다. 또다른 실시양태에서, 본 발명의 제제 및 방법은 피부의 건강을 예방 및(또는) 개선한다. 예를 들어, 제제는 피부 톤을 개선할 수 있으며, 잔주름 및 노화의 가시적인 징후의 출현을 감소시키는 것을 돕는다. 본 발명의 또다른 실시양태에서, 제제는 콜라겐 및 엘라스틴의 체내 자연 생성에 긍정적인 영향을 준다. 또다른 실시양태에서, 본 발명의 제제는 오염, 일광, 자유 라디칼 및 스트레스와 같은 환경적 불안의 효과를 최소화한다.

본 발명의 하나의 실시양태는 피부 질환 및 그의 효과를 예방 및(또는) 개선하기 위한 조성물 및 이의 사용 방법을 제공한다.

본 발명의 하나의 실시양태는 반응성 산소 종의 생성의 효과를 예방 및 감소시키기 위한 조성물 및 이의 사용 방법을 제공한다. 예를 들어, 본 발명은 arNOX 활성을 격리하기 위한 식물로부터 유도된 활성 제제의 사용을 포함한다. 또한, 본 발명은 arNOX 활성을 격리하기 위한 기타 합성 및 천연 화합물의 사용을 고려한다.

본 발명은 실질적인 노화 및 풍화된 피부의 가시적인 징후, 예컨대 주름살, 잔주름, 늘어짐, 색소 과형성 및 노화 반점을 치료 또는 지연시키는 조성물을 개시하고 있다. 본 발명은 또한 민감성, 건성 및(또는) 박편성 피부의 상태 및 출현을 감소시키고, 붉고(붉거나) 자극을 받은 피부를 진정시키고, 반점, 뾰루지, 여드름 및 기타 피부 불순을 치료한다.

본 발명은 이전에 개시되지 않은 조성물 및 이의 사용 방법을 제공함으로써 기존의 조성물을 발전시킨다. 본 발명은 노화 세포에 의해 혈청으로 발산된 NADH 옥시다제의 노화 관련 이소형 (arNOX)을 표적화함으로써, 노화를 일으키는 세포에서의 산화성 변화로 인한 질환의 치료를 위한 제약학적 조성물, 이의 사용 방법, 및 제약학적 키트를 포함한다. 조성물은 식물로부터 추출된 제제를 함유할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 조성물은 하나 이상의 가공된 나르시서스 타제타 제품을 단독으로 또는 기타 억제 제제와 함께 포함하여, 노화 세포에 의해 혈청으로 발산된 NADH 옥시다제의 노화 관련 이소형의 활성을 억제할 수 있다. 조성물은 유비퀴논, 오미자 추출물, 인동, 영년생 숙근종, 메틸파라벤, L-카르노신, 프로필파라벤, 에틸파라벤, L-에르고티오네인, 베툴린산, 토마토(Solanum Lycopersicum), 유니베스틴, 솔리프린, 코엔자임 Q₁₀ 및(또는) 보존제를 포함할 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 가공된 나르시서스 타제타 추출물은 IBR-도르민®이다. 활성 제제(들)은 피부에 적용하기에 적절한 다양한 담체로 혼입될 수 있다. 추가 요소, 예컨대 착색제, 향료 및 기타 성분, 예컨대 피부 보호제가 또한 존재할 수 있다.

하나의 실시양태에서, 이들 성분의 일부 또는 모두는 노화 방지에서 통상적으로 발견된 기타 제제와 조합되어 혈청 제형을 복구할 수 있다. 물 외의 비히클은 액체 또는 고체 피부연화제, 습윤제, 증점제 및 분말을 포함할 수 있다. 비히클은 조성물의 0.1중량％ 내지 99.9중량％, 바람직하게는 25중량％ 내지 80중량％를 구성할 수 있으며, 기타 화장품 보조제의 부재 하에 조성물의 발란스를 형성할 수 있다. 하나의 실시양태에서, 비히클은 80중량％ 이상이 물이다. 또다른 실시양태에서, 물은 조성물의 약 50중량％ 내지 85중량％를 구성한다. 또다른 실시양태에서, 물은 조성물의 약 0.1중량％ 내지 55중량％로 존재한다. 또다른 실시양태에서, 기타 비히클이 상기 언급된 농도로 사용된다.

오일 또는 유성 물질이 유화제와 함께 존재하여, 사용된 유화제의 평균 친수-친지 발란스 (HLB)에 크게 의존하는 수-중-유 또는 유-중-수 에멀션을 제공할 수 있다.

본 발명의 조성물은 또한 일광차단제를 포함할 수 있다. 일광차단제는 자외광 차단에 통상적으로 사용된 물질을 포함한다. 예시적인 화합물은 PABA, 신나메이트 및 살리실레이트의 유도체이다. 예를 들어, 옥틸 메톡시신나메이트 및 2-히드록시-4-메톡시 벤조페논 (옥시벤존이라고도 공지됨)이 사용될 수 있다. 옥틸 메톡시신나메이트 및 2-히드록시-4-메톡시 벤조페논은 각각 상표명 파르솔(Parsol) MCX 및 벤조페논(Benzophenone)-3 하에 상업적으로 구입가능하다. 에멀션에 사용된 일광차단제의 정확한 양은 태양의 UV 조사로부터 요구되는 보호의 정도에 따라 다양할 수 있다.

피부연화제가 본 발명의 화장품 조성물에 추가로 혼입될 수 있다. 이러한 피부연화제의 수준은 전체 조성물의 0.5중량％ 내지 50중량％, 바람직하게는 5중량％ 내지 30중량％일 수 있다. 피부연화제는 에스테르, 지방산 및 알코올, 폴리올 및 탄화수소와 같은 일반적인 화학적 범주 하에 분류될 수 있다.

에스테르는 모노- 또는 디에스테르일 수 있다. 지방 디-에스테르의 허용가능한 예는 디부틸 아디페이트, 디에틸 세바케이트, 디이소프로필 디머레이트 및 디옥틸 숙시네이트를 포함한다. 허용가능한 분지쇄 지방 에스테르는 2-에틸-헥실 미리스테이트, 이소프로필 스테아레이트 및 이소스테아릴 팔미테이트를 포함한다. 허용가능한 3염기산 에스테르는 트리이소프로필 트리리놀레이트 및 트리라우릴 시트레이트를 포함한다. 허용가능한 직쇄 지방 에스테르는 라우릴 팔미테이트, 미리스틸 락테이트 및 스테아릴 올레에이트를 포함한다. 바람직한 에스테르는 코코-카프릴레이트/카프레이트 (코코-카프릴레이트 및 코코-카프레이트의 블렌드), 프로필렌 글리콜 미리스틸 에테르/아세테이트, 디이소프로필 아디페이트 및 세틸 옥타노에이트를 포함한다.

적절한 지방 알콜 및 산은 10 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 화합물을 포함한다. 세틸, 미리스틸, 팔미트 및 스테아릴 알콜 및 산과 같은 화합물이 특히 바람직하다.

피부연화제로서 작용할 수 있는 폴리올은 특히 직쇄 및 분지쇄 알킬 폴리히드록실 화합물이다. 예를 들어, 프로필렌 글리콜, 소르비톨 및 글리세린이 바람직하다. 또한, 폴리-프로필렌 글리콜 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 중합체 폴리올이 유용할 수 있다. 부틸렌 및 프로필렌 글리콜이 침투 강화제로서 또한 특히 바람직하다.

피부 연화제로서 작용할 수 있는 예시적인 탄화수소는 12 내지 30개의 탄소 원자를 갖는 탄화수소 사슬이다. 특정 예는 미네랄 오일, 석유 젤리, 스쿠알렌 및 이소파라핀을 포함한다.

본 발명의 조성물의 기타 실시양태는 증점제를 포함한다. 증점제는 통상적으로 조성물의 0.1 내지 20중량％, 바람직하게는 약 0.5 내지 10중량％의 양으로 존재할 것이다. 예시적인 증점제는 비.에프. 굿리치 컴퍼니로부터 상표명 카르보폴(CARBOPOL)® 하에 구입가능한 가교결합된 폴리아크릴레이트 물질이다. 잔탄, 카라기난, 젤라틴, 카라야, 펙틴 및 구주콩나무 검과 같은 검이 사용될 수 있다. 특정 환경 하에서, 증점화 기능은 실리콘 또는 피부연화제로서 또한 작용하는 물질에 의해 수행될 수 있다. 예를 들어, 10센티스톡 초과의 실리콘 검 및 에스테르, 예컨대 글리세롤 스테아레이트가 이중 기능을 갖는다.

분말이 본 발명의 화장품 조성물에 혼입될 수 있다. 이들 분말은 초크, 탈크, 카올린, 전분, 녹점토, 화학적으로 개질된 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 유기적으로 개질된 몬모릴론석 점토, 수화된 알루미늄 실리케이트, 훈증 실리카, 알루미늄 전분 옥테닐 숙시네이트 및 이들의 혼합물을 포함한다.

기타 보조제 소량 성분이 화장품 조성물에 혼입될 수 있다. 이들 성분은 착색제, 유백화제 및 향료를 포함할 수 있다. 이들 기타 보조제 소량 성분의 양은 조성물의 0.001중량％ 내지 20중량％일 수 있다.

본 발명의 조성물은 피부를 컨디셔닝하고, 보습하고 매끄럽게 하며, 유연성 및 탄성을 증가시키고, 주름, 잔주름 또는 노화된 피부의 출현을 예방 또는 감소시키기 위한 제제로서 인간 피부에 대한 국소 적용을 위해 사용될 수 있다. 본 발명의 독특한 제형은 피부의 표면층의 수화 및 단단함을 효과적으로 상승시키기 위해 즉각적이며 연속적인 장점을 촉진하고, 피부 톤의 손실에 대한 완전한 반응을 제공하는 한편, 잔주름 및 주름살의 출현을 감소시키는 것을 돕고, 가시적인 톤 및 탄력을 회복하기 위한 기타 유리한 성분 및 항산화제로 피부의 하부층을 복구하기 위해 작용한다.

하나의 실시양태에서, 약 1 내지 1000㎖의 활성 제제로 구성된 소량의 조성물이 피부에 적용된다. 바람직한 실시양태에서, 활성 제제 약 1 내지 100㎖를 포함하는 조성물의 양이 피부에 적용된다. 이 공정은 임의의 시간의 기간 동안 1일 수회 반복될 수 있다. 바람직하게는, 조성물은 아침에 1회 및 저녁에 1회 피부에 적용된다.

본 발명의 국소적 스킨 케어 조성물은 로션, 크림 또는 겔로서 제형화될 수 있다. 조성물은 소비자에 의한 목적 용도 및 그의 점도에 맞는 적합한 용기에 포장될 수 있다. 예를 들어, 로션 또는 크림은 병, 또는 롤-볼 도포기, 또는 추진제 구동된 에어로졸 장치 또는 손가락 적용에 적절한 펌프가 장착된 용기 내에 포장될 수 있다. 조성물이 크림인 경우, 이는 비변형성 병, 또는 튜브 또는 뚜껑이 있는 단지와 같은 압착 용기에 간단히 저장될 수 있다. 본 발명은 또한 본원에 정의된 화장품으로 허용가능한 조성물을 함유하는 밀폐된 용기를 제공한다.

실시예 1: ARNOX 의 특성화

1. 담황막에 의한 과산화물 생성

과산화물에 의한 페리사이토크롬 c의 환원을 과산화물 형성의 표준 척도로서 사용하였다 (Mayo, L.A. and Cumutte, J. (1990) Meth. Enzyme. 186, 567-575. 7. Butler, J, Koppenol, W.H. and Margollash, E. (1982) J. Biol. Chem. 257, 10747). 과산화물 디스뮤타제가 첨가되어 발생되는 과산화물을 제거하는 경우, 페리사이토크롬 c의 환원이 예방되어, 분석 중 페리사이토크롬 c 환원이 과산화물로 인한 것임을 확인하였다.

담황막은 노인 개체 (70 내지 100세)로부터 회수하였으며, 페리사이토크롬 c의 환원을 진동 활성으로 관찰하였다 (도 2). 진동은 약 25분의 주기 길이로 나타났다 (화살표, 도 2C 및 2D). 이러한 사이토크롬 c의 진동 환원은 청년 개체 (20 내지 40세)로부터의 담황막 분획에는 존재하지 않았다 (도 2A 및 2B). 페리사이토크롬 c의 진동 환원은 과산화물 디스뮤타제 (SOD) (도 2C) 및 100μM 코엔자임 Q (20μM의 EC₅₀) (도 2D)에 의해 완전히 억제되었다. 코엔자임 Q 억제된 페리사이토크롬 c 환원의 속도는 80 내지 89세 개체에 비해 90 내지 94세 개체의 담황막 분획에서 7배 더 컸다 (표 1). 65세 미만의 개체의 담황막은 활성이 부족하였다.

2. 코엔자임 Q 및 과산화물 디스뮤타제 에 의한 과산화물 생성 및 억제

혈청 중 페리사이토크롬 c 환원의 분석으로 청년 (20 내지 40세) 개체로부터의 53개 샘플 및 노인 (80 내지 100세) 개체로부터의 65개 샘플을 비교하였다. 활성은 노인의 1.4±0.2nmole/분/100㎕ 혈청에 비해 청년 0.2±0.2nmole/분/100㎕ 혈청이었다. 비처리된 혈청 샘플의 경우, 과산화물 디스뮤타제 30단위/㎖의 첨가가 40±10％ 만큼 활성을 억제하였다. 코엔자임 Q 300㎍/㎖의 첨가가 40％만큼 활성을 억제하였으나, 평균상 결과는 더욱 가변적이었다.

SOD (30단위) 및 코엔자임 Q (450㎍)을 동일한 반응 혼합물에 연속적으로 첨가하고, 300초에 걸쳐 분석하였을 때, 혈청 중 페리사이토크롬 c 환원의 속도에 대한 어떠한 억제도, 코엔자임 Q를 최대 SOD 억제 후 첨가하였을 때 관찰되지 않았으며, 그 역도 마찬가지이다.

노화 관련 사이토크롬 c 환원 (ACR)의 속도의 억제는 8 내지 35단위 사이에서 SOD 농도에 비례하였다 (도 3). 45단위에 정체기에 도달하였다. 코엔자임 Q의 사용으로, 억제는 75㎍ 내지 450㎍ 사이에서는 양에 비례하였으며, 약 450㎍ 코엔자임 Q에서 정체기에 도달하였다 (도 4).

혈청에 의한 사이토크롬 c의 추가 환원이 NADH (NADH-사이토크롬 c 리덕타제)의 존재 하에 관찰되었다. 그러나, NADH-자극된 활성은 청년 및 노인 개체 모두의 혈청에 대해 약 4nmoles/분/㎖ 혈청이었다. 약 2nmoles/분/㎎ 단백질의 노화 특이적 증가가 NADH의 존재 또는 부재시 모두에서 관찰되었다. SOD 또는 코엔자임 Q 어느것도, 청년 또는 노인 개체의 혈청 중 NADH 사이토크롬 c 리덕타제의 활성을 억제하지 않았다. 또한, 코엔자임 Q의 첨가는 돼지 간 마이크로솜의 확실한 NADH 사이토크롬 c 리덕타제의 활성을 유의적으로 억제하지 않았다.

이와 같이, arNOX는 NADH-사이토크롬 c 리덕타제와 무관한 것으로 나타난다. 큰 친수성, 촉매적 영역 및 작은 소수성 멤브레인 결합 절편으로 구성된 프로테아제는 멤브레인으로부터 활성 단백질을 방출한다. NH₂ 말단 글리실 잔기는 미리스트산을 통해 멤브레인에 연결된다. 가용화는 효소적 활성의 손실 없이 효소적 흡수에 의해 성취될 수 있다. 리소좀 산 프로테아제, 예컨대 캡사이신 D 또한 활성을 방출한다. 또한, arNOX가 캡사이신 또는 (-)-에피갈로카테신 갈레이트 (EGCg)에 반응하지 않으므로, 이는 약물-반응성 tNOX 이소형의 하나가 아니다.

약 24분의 규칙적인 주기 길이를 갖는 효소적 활성의 진동 속도는 단백질의 CLOX 계통의 한정적인 특징의 하나이다. 90 내지 100세 피검자의 개별적인 혈청의 페리사이토크롬 c의 환원이 1.5분의 간격으로 1분에 걸쳐 분석된 경우, 활성은 24분이라기 보다는 25분의 주기 길이로 다시, 규칙적인 주기 길이로 진동하는 것으로 관찰되었다 (도 1). 동일한 샘플로 동시에 측정된 NADH의 산화는 노화 관련 이소형에 상응하는 약 25분의 주기 길이, 및 이전에 기록된 바와 같은 CNOX에 상응하는 24분의 주기 길이를 갖는 2개의 진동 패턴을 나타냈다. 상응하는 진동은 양성 대조구로서 돼지 간 마이크로솜의 NADH 사이토크롬 c 리덕타제의 활성으로는 관찰되지 않았다 (도 6).

페리사이토크롬 c의 환원, 노화된 개체의 혈액으로부터의 담황막에 의한 과산화물 생성 측정, 및 코엔자임 Q에 의한 억제

		페리사이토크롬 c의 환원 속도 (nmole 분-1 107 세포-1)
군	N	비첨가	+100μM Q10
35 내지 65세	5	ND	ND
80 내지 89세	6	0.25±0.02	-0.03±0.02
90 내지 94세	6	0.36±0.07	-0.07±0.07
값은 평균±표준편차임; ND, 검출되지 않음 Q10 유비퀴논-10 CoQ10 이들 실험에서, 음의 속도는 NADH 산화의 속도에서의 약한 음의 기울기를 반영한다. 통계학적으로, 속도는 0이었다.

프로테이나제 K 흡수에 대한 회수된 혈청 샘플의 페리사이토크롬 c의 환원의 속도의 반응

		페리사이토크롬 c의 환원 속도 nmole m-1 mi 혈청-1
군	N	비첨가	+프로테이나제 K
35세 미만 여성	12	0.24±0.14	0.26±0.17
35 내지 45세 남성	9	0.21±0.15	0.27±0.16
75 내지 85세 남성	10	0.7±0.35	0.72±0.14
75 내지 85세 여성	8	1.1±0.20	1.0±0.18
90세 초과 여성	10	0.8±0.11	0.94±0.24
N = 각 회수된 샘플로 나타낸 피검자의 수

프로테이나제 K로의 치료 후 노인 개체 (80 내지 98세)의 혈청 중 과산화물 생성 (페리사이토크롬 c의 환원) 및 과산화물 디스뮤타제에 대한 반응 (n=10)

	Nmole/분/mi/혈청
군	N	비첨가
프로테이나제 K 없음	0.7±0.2	0.42±0.1
프로테이나제 K 후	0.6±0.2	0.22±0.1

노인 개체의 혈청으로 사이토크롬 c 환원에 대한 전자의 공급원. NADH 산화에 대한 진동의 상응하는 패턴과 관련된 25분 주기 길이를 갖는 진동의 규칙적인 패턴은, 노인 환자의 혈청 중 및 담황막에 대한 강장제 사이토크롬 c의 과산화물 환원의 진동하는 발생에 대한 전자의 공급원이 노화 관련된 NOX 단백질임을 반영한다. 약 25분의 규칙적인 주기 길이는, 24분의 주기 길이를 가지며, 과산화물을 발생 (즉, 페리사이토크롬 c를 환원)시키지 않는 혈청의 구성적 CNOX 단백질을 포함하는 기타 단백질과 활성이 구별되었다. 노화 관련 NOX 단백질 내에서, 활성 부위 시스테인 및 결합된 구리가 전자 공급원으로서 고려되었다. 혈청 활성은 구리 킬레이터 바쏘쿠프로엔 또는 바쏘쿠프로엔디술포리에이트에 의해 영향받지 않았다. 단백질 티올 공급원은 활성이 p-클로로머큐리벤조에이트와 같은 티올 시약에 의해 억제되기 때문에, 더욱 알맞은 것으로 고려되었다.

사이토크롬 c의 환원 동안 산화된 NOX 단백질 티올을 재생시키기 위한 혈청 공급원이 또한 단백질 티올인 것으로 나타난다. NOX 단백질은 단백질 디술피드-티올 상호교환 활성을 나타내며, 외부 단백질 공급원을 희생하여 단백질 티올 산화 및 단백질 디술피드 환원을 행할 수 있다. 전자의 혈청 공급원으로서의 구리는, 첨가돤 구리가 활성을 강화시키지도 않고 구리 킬레이터를 억제하지도 않기 때문에 덜 적합하다.

단백질 티올의 혈청 수준은 반응에 연료를 공급하는데 확실히 적합하다. 엘만(Ellman) 시약을 사용하는 직접적인 분석법에 의해, 분석된 혈청은 모든 티올이 반응에 이용가능함을 가정하는, 실온에서 10일 이상, 저온에서 수개월 동안 사이토크롬 c 환원의 평균 속도를 유지하기에 충분한 티올을 함유하도록 계산된다. 단백질 SH가 희석 (0.01％) 과산화수소로 산화된 후, 촉매되어 잔여 과산화수소가 제거되는 경우, 혈청 샘플은 비활성이었다. 카탈라제 그 자체는 효과가 없었다. 또한, 낮은 GSSG 농도를 갖는 평형에 의한 단백질의 산화는 전자의 공급원이 전자 수송 경로로부터 가정되는 경우, 담황막이 아닌 혈청 활성을 불활성화시킨다. GSH의 첨가는 자극도 억제도 하지 않으나, 단백질 티올의 수준을 유지함으로써 혈청의 사이토크롬 c 환원 용량을 궁극적으로 연장시킬 수 있다. 도 3 및 4의 SOD 또는 코엔자임 Q에 의한 완전한 억제의 결여는 억제에 무감각한 기본 활성으로부터 상당히 발생한다. 도 2의 데이터에 나타난 바와 같이, 노인 환자의 혈청 중 진동 활성 성분은 SOD (도 2G) 및 코엔자임 Q (도 2H) 모두에 의해 제거된다. 기본 활성의 공급원은 특이적 효소 또는 사이토크롬 c 환원 어느 것도 포함하지 않는 것으로 나타난다. 다른 혈청 NOX 분석법에 직면시, 혈청 단백질의 공격으로 인한 광산란 변화로 인한 것으로 나타난다.

3. 프로테이나제 K 흡수

프로테이나제 K 흡수에 대한 내성은 CLOX 단백질의 매우 중요한 특징이다. 프로테이나제 K 흡수 후 arNOX의 속도에서의 어떠한 유의적인 감소도 없었다 (표 2). 노인 개체로부터의 혈청의 프로테이나제 K 흡수 후 40％에서 60％로 증가한 과산화물 디스뮤타제에 의한 억제 (표 3)는, 기저 흡광도 변화에서의 현저한 감소로 인해, 단백질 공격에 기여하였다. 혈청의 단백질 티올 함량은 프로테이나제 흡수에 의해 영향받지 않았다.

4. arNOX 에 대한 웨스턴 블롯

arNOX가 CLOX 단백질 계통의 NOX 단백질의 결과라는 것을 추가로 입증하기 위해, 미리 클로닝된 C 말단에 대한 다클론성 항혈청 및 종양 특이적 NADH 옥시다제 (tNOX)를 웨스턴 블롯에 기초하여 면역반응성을 확인하는 데 이용하였다. 배경 단백질을 감소시키기 위한 프로테이나제 K 흡수 후 혈청 샘플을 10％ SDS-PAGE에 의해 분리하고, 니트로셀룰로스 멤브레인 상에 전자블롯팅함으로써 이동하였다. 약 22kD의 분자량에서 반응성 밴드가 노인 피검자의 혈청의 샘플로부터의 레인 상에서 관찰되었다 (도 6). 농도계에 의해 측정된 밴드 강도 및 arNOX 사이에 강한 상관관계가 있었다 (도 7). 유사한 상관관계가 밴드 밀도 및 피검자의 연령 사이에서 관찰되었다 (도 8). 겔의 22kD 영역이 CLOX 단백질을 함유하였음을 증명하기 위해, SDS-PAGE 겔을 분절로 절단하고, 단백질을 용출하였다. 100μM NADH, pH 7.0을 갖는 단백질의 환원 후, 재접힘된 단백질을 재산화하기 위해 0.03°h 과산화수소의 첨가에 의해 활성이 복구되었다. 22kD의 분자량에 상응하는 겔의 영역은 페리사이토크롬 c 환원의 진동 패턴을 나타냈다 (도 9). 겔 슬라이스의 나머지는 페리사이토크롬 c 환원의 재생적 패턴이 부족하였다.

5. 노화 관련 사이토크롬 c 환원을 촉매하는 단백질의 정제

arNOX 활성을 촉매하는 단백질을 NOX 항체와 함께 면역침전법을 통해 혈청으로부터 분리하였다. 침전된 단백질을 SDS-PAGE에 의해 분리하고, 겔 중의 단백질을 PVDF 멤브레인에 이동하였다. PVDF 멤브레인 상의 단백질은 쿠마씨 블루(Coomassie blue) 염색에 의해 확인하였다. PVDF 멤브레인 상의 표적 밴드를 제거하여, N-말단 아미노산 서열화를 행하였다.

실시예 2: ARNOX 억제

다양한 화합물이 개시된 방법에 따른 arNOX 억제를 평가하기 위해 분석되었다. 화합물, 제품 코드 및 명칭 등은 하기 표에 제공된 바와 같다 (표 4):

arNOX 억제 분석법

번호	제품 코드	제품명	로트 번호	설명
1	UP566	솔리프린	E0404	유리 B-고리 플라보노이드 및 플라반
2	R44390	유니베스틴	G1702-COX-2
3	0301	IBR-도르민®	BA0303161	이베리아 반도 방울수선 구근 (일본명: 후사자키수이센 추출물)
4	0601	IBR-톰(TOM)®	BA t4006L	토마토 (일본명: 토마토 추출물)
5	855057	베툴린산	CAS No. 472-15-1	FW 456.71
6	26547	L-에르고티오네인 L-에르고(ERGO)TM	12723P CAS No. 497-30-3	MW229.3
7		에틸파라벤
8		프로필파라벤
9		메틸파라벤
10	C-9625-5G	L-카르노신	CAS No. 305-84-0	FW 226.24 (시그마)

상기 표 4에 열거된 화합물은 1:50의 희석도로 표준 arNOX 분석법에서 초기에 시험하였다. 고체를 대략 100mM의 초기 농도로 수 중에서 제조한 다음, 1:50의 희석도, 즉 2mM로 시험하였다. 모든 화합물은 86세 여성으로부터 제조한 인간 담황막을 사용하여 평가하였다. 다음과 같이 노인 환자로부터의 혈청으로 몇몇 화합물을 평가하였다: IRB-도르민® (88세 여성), IRB-톰(TOM)® (88세 여성), L-카르노신 (88세 여성, 84세 여성), L-에르고 (89세 남성). 혈청 및 담황막은 일관된 결과를 제공하였다. 1:50 희석도에서 화합물 활성은 1:500의 희석도의 담황막으로 재분석하였으며, 1:500 희석도에서 화합물 활성은 1:5000의 희석도의 담황막으로 재분석하였다

상세한 분석 프로토콜은 다음과 같다. 담황막, 림프구 및 혈소판의 혼합물을 시중 공급자로부터 구입하였다. 혈액 샘플을 회수 및 분석 전에 4℃로 유지하였다. 약 10⁷개의 세포를 각 분석에 첨가하였다. 세포 수를 혈구계산기를 사용하여 측정하였다.

과산화물 생성의 척도로서 페리사이토크롬 c 환원을 기준으로 arNOX 활성의 측정을 행하였다. 페리사이토크롬 c의 환원의 속도는 표준으로서 540nm와 함께 550nm에서 흡광도의 증가로부터 결정하였다. 이는 과산화물 발생의 측정을 위해 과산화물 디스뮤타제 억제에 커플링된 경우, 광범위하게 허용된 방법이다. 분석은 산화된 페리사이토크롬 c 용액 150㎕ (2㎎/㎖) 및 PBSG 완충액 (1000㎖ 탈이온수에 용해된 8.06g NaCl, 0.2g KCl, 0.18g Na₂HP0₄, 0.26g KH₂PO₄, 0.13g CaCl₂, 0.1g MgCl₂, 1.35g 글루코스, pH 7.4로 조정됨, 4℃에서 여과 및 저장됨) 중의 혈청 150㎕ 또는 담황막 40㎕로 이루어졌다. 매 1.5분마다 1분에 걸쳐 연속적인 측정으로 조작의 이중 파장 길이 양태로, SLM 아민코(Aminco) DW-2000 분광광도계 (밀튼 로이, 미국 뉴욕주 로체스터)를 사용하여 속도를 측정하였다. 45분 후, 시험 화합물을 첨가하고, 반응을 45분 동안 계속하였다. 19.1cm^-1의 밀리몰 흡광 계수를 환원된 페리사이토크롬 c에 대해 사용하였다 (D.M. Morre, F. Guo and D. J.Morre, 2003, Mol. Cell. Biochem. 254:1010-109).

솔리프린, 프로필파라벤 및 메틸파라벤은 1:50의 희석도에서는 활성이었으나, 1:500의 희석도에서는 불활성이었다. 사용된 담황막은 2개의 뚜렷한 arNOX 활성을 함유하였다. 메틸파라벤은 하나는 억제하였으나, 다른 것에 대해서는 효과가 없었다. 유사한 결과가 솔리프린에서 관찰되었다. 3개 arNOX 활성을 함유하는 혈청 샘플로의 하나의 실험에서, L-카르노신은 하나의 arNOX는 억제하였고, 제2 arNOX는 자극하였으며, 제3 arNOX에 대해서는 효과가 없었다. IBR-톰® 및 L-에르고는 1:50의 희석도에서 혼합된 결과를 제공하였으나, 1:500의 희석도에서는 불활성이었다. IBR-도르민®만이 1:500의 희석도에서 활성이었다.

실시예 3: IBR - 도르민 ® 가열 내성

IBR-도르민®의 뱃치를 제조하고, pH는 5.84로서 측정되었다. 그 색상은 담황색이었다 (판톤에 의해 607c). 뱃치를 고밀도 폴리에틸렌 용기 중에 실온에서 유지하였다. 하기 표에 상세히 기재된 것과 같이, 샘플을 취하여, 색상, pH 및 종자 시험에 의한 활성을 측정하였다. 색상은 판톤(Pantone) 색상 배합 가이드에 의해 정의하였다. pH는 pH 측정계 (라디오미터, 덴마크 코펜하겐)에 의해 측정하였다. 제품 pH 범위는 4.5 내지 6.5였다.

종자 시험은 다음과 같이 행하였다. 오이 종자를 28℃ 밀폐된 트레이 중의 물로 적신 여과지 상에서 밤새 발아시켰다. 1 내지 2㎜ 뿌리를 갖는 종자를 분석을 위해 취하였다. IBR-도르민® (2배 농축)을 다음과 같은 희석도로 적용하였다: 50％, 25％, 12.5％, 5％ 및 2.5％. 수도수를 대조구로서 제공하였다. 2㎖의 각 희석액을 대형 페트리디쉬 중의 여과지 상에 적용하였다. 10개의 종자를 각 페트리디쉬에 배치하였다.

48시간 후 뿌리 길이를 측정하였다. 10개 종자의 평균 길이를 계산하였다. 뿌리 길이 대 ％ 추출물의 반 대수 그래프를 도시하였다. ID₅₀ (뿌리 성장의 50％ 억제에 도달하기 위해 필요한 추출물의 비율)를 가장 알맞은 곡선의 방정식으로부터 계산하였다. 제품 ID₅₀ 범위는 9.5 내지 13.5％이다.

ID₅₀ 범위

pH	색상	종자 시험에 의한 ID50 (％)
5.86	담황색 (607c)	9.81
5.96	담황색 (607c)	10.99
5.84	담황색 (607c)	10.60
5.55	담황색 (607c)	11.34
5.59	담황색 (607c)	10.30

모든 조사된 파라미터에 의해 IBR-도르민® pH는 18개월까지 안정적인 것으로 밝혀졌다. pH 및 활성 (ID₅₀)은 명기된 범위 내였으며, 색상은 변하지 않았다.

액체 외관 및 활성에 대한 고압살균의 영향을 조사함으로써, IBR-도르민®을 열에 대한 안정성에 대해 시험하였다. IBR-도르민®의 샘플을 120℃ 및 2atm에서 30분 동안 실험실에서 고압살균하였다. 3회의 연속적인 주기의 고압살균을 행하였다. 각 주기 후, 일부를 취하여 종자 시험에 의한 최대 억제 활성을 조사하였다: 오이 종자를 28℃에서 밀폐된 트레이 중의 습식 여과지 상에서 밤새 발아시켰다. 1 내지 2㎜ 뿌리를 갖는 종자를 분석을 위해 취하였다. IBR-도르민®을 50％ 적용하였다. 수도수를 대조구로서 제공하였다. 이 희석액 2㎖을 10개 종자를 갖는 페트리디쉬 중의 여과지 상에 적용하였다. 뿌리 길이를 48시간 후 측정하였다. 10개 종자의 평균 길이를 계산하고, 억제 비율이 하기 방정식에 의해 제시된다: (1-(도르민 처리된 뿌리 길이의 평균/수 중 뿌리 길이의 평균))

열 안정성 분석의 결과는 다음과 같다. 액체 외관: 고압살균 후, 소량의 침전이 관찰될 수 있었다. 비고압 살균과 비교하여, 색상에서 미미한 변화가 고압살균된 샘플에 대해 관찰되었다. 활성: 하기 표는 오이 종자 성장에 대한 50％ IBR-도르민®의 억제 활성을 요약한다. 나타난 바와 같이, 고압살균의 3회의 연속적인 주기 후 충분한 활성이 유지되었다.

열 안정성

	뿌리 억제 (％)
비 고압살균	91.0
제1 고압살균	89.5
제2 고압살균	90.0
제3 고압살균	90.5

IBR-도르민®은 열 안정적이다. 고압살균 공정 후 관찰된 작은 침전 및 색상의 미미한 변화는 활성에 영향을 미치지 않는다.

실시예 4: IBR - 도르민 ®으로의 치료

경증 내지 중간 정도의 플라그 건선은 피부연화제와 함께, 통상적으로 국소적인 스테로이드 및 콜타르로 치료된다. 안전하고 편리한 새로운 치료 형태가 건선으로 고통을 겪는 대부분의 환자들에게 중요할 것이다. 연구는 경증 내지 중간 정도의 지속적인 건선의 치료시 5％ IBR-도르민®의 효과를 평가하기 위해 행해졌다. 이 연구에서 건선의 치료 결과는 환자의 좌측 팔꿈치 (IBR-도르민®으로 치료된 것)가 우측 팔꿈치 (비히클 크림만으로 치료된 것)에 비해 전체적인 향상을 나타내었음을 보여준다. 추가로, 어떠한 부작용도 IBR-도르민® 처리된 팔꿈치 상에 나타나지 않았다.

1. 방법

5％ IBR-도르민®의 1일 2회 적용을 무작위성 없이, 15명의 환자의 이중 맹검 제어된 연구에서 10주까지 그 비히클의 적용과 비교하였다. 연구시, 모든 환자는 하나의 팔꿈치에는 5％ IBR-도르민®을, 다른 팔꿈치에는 비히클 크림을 도포하였다.

연구에 필요한 함유 기준은 다음과 같다: 모든 환자는 16 내지 70세의 연령이었으며, 경증 내지 중간 정도의 안정적 보통 건선을 가졌다. 이 연구에서 배제 기준은 급성 가려움증, 급성 두드러기, 옴, 가려움증을 포함하는 기타 전신 질환, 마지막 개월 동안의 스테로이드 치료, 임신, 전신 레티노이드의 치료, 및 연구 시작 마지막 30일 전 내의 임의의 조사 약물의 사용을 포함하였다.

2. 결과

건선 플라그는 두께, 건조함, 박리, 홍반 및 가려움증 환부의 임상적 특징에 의해 판단하였다. 이들 기준은 0 내지 4 (0 = 치료 또는 없음, 및 4 = 심함)의 척도로 등급을 매겼다. 임상적 파라미터를 치료 섭생의 시작 후, 기준, 3주, 6주 및 10주에 평가하였다.

15명 중 2명의 환자가 연구를 완료하지 못하였으며, 이들이 상태의 추적이 상실되었다. 한명의 환자는 마지막 추적 방문 (방문 번호 4)을 행하지 않았으나, 본 연구의 결과에 포함되었다. 추적 방문시 각 환자에 대한 전체 점수 파라미터 결과는 표 7에 요약한다.

좌측 팔꿈치 ( IBR - 도르민 ®): 3명의 환자가 완전히 치료되었으며; 2명의 환자가 75 내지 99％ 치료율을 가졌으며; 4명의 환자가 50 내지 74％ 치료율을 가졌으며; 3명의 환자가 50％ 미만의 치료율을 가졌으며, 1명의 환자가 변화가 없었다 (도 13 및 14). 우측 팔꿈치 ( 대조구 ): 3명의 환자가 50 내지 74％의 치료율을 가졌으며; 7명의 환자가 50％ 미만의 치료율을 가졌으며, 3명의 환자가 변화가 없었다 (도 12 및 13).

연구가 완료되었을 때, 5％ IBR-도르민®으로 좌측 팔꿈치가 치료된 것으로 나타났으며, 우측 팔꿈치는 비히클 크림만으로 처리되었다.

이 연구에서 건선의 치료 결과는 환자의 좌측 팔꿈치 (IBR-도르민®으로 치료된 것)가 우측 팔꿈치 (비히클 크림만으로 치료된 것)에 비해 전체적으로 향상된 것으로 나타났다. 부작용은 없었다.

실시예 5: IBR - 도르민 ®으로의 치료

1. 물질 및 방법

150명의 여성 (평균 연령: 37.77±0.96세)이 연구에 참여하였다. 각각 0％ (위약), 1％ 및 3％ IBR-도르민®을 함유하는 3개의 크림을 연구를 위해 제조하였다. IBR-도르민®은 부형제를 위해 제형 중 사용된 물의 일부를 대체하기 위해 사용되었다. 연구는 4주간 지속하였다. 크림은 여성 사용자들 스스로 매일 적용하였다. 135명의 피검자가 연구를 완료하였다: 48명의 위약 군 (평균 연령: 36.71±1.53세), 44명의 1％ 크림 시험 군 (평균 연령: 37.93±1.7세) 및 3％ 크림 시험 군 (평균 연령: 38.77±1.8세).

평가 척도는 크림의 제1 투여 전에 투여 및 건내주었다. 유사한 평가 척도가 4주 시험의 말기에 투여되었다. 시험에 사용된 파라미터 또는 항목은 외부 공격에 대한 내성, 피부 민감도, 보호, 피부 자극성, 피부 피로감, 피부 팽팽함, 편안함, 잔주름 및 유연성이었다.

2. 데이터 분석

센티미터 측정을 비구조화된 눈금 10㎝ 길이로부터 수득하였다. 크림 적용 전 및 후의 평균 값을 각각 3개의 군에 대해 수득하였다. 전/후 비교는 시그마스타트(SigmaStat) 2.0 프로그램을 사용하여 적용가능한 경우, t-시험에 의해 통계학적으로 수득하였다. 순위 합 검정 (RST)을 각 시험에 사용하고, 실패 정규성 시험은 동일한 시그마스타트 2.0 프로그램을 사용하였다. 전/후 변화의 비율을 각 항목의 평균에 기초하여 계산하였다.

3. 결과: 외부 공격에 대한 내성

외부 공격에 대한 내성에 대한 연구 결과를 표 8 및 도 15A에 도시한다. 위약 및 1％ IBR-도르민® 크림에 대해 통계학적 차이가 발견되지 않았다. 3％ IBR-도르민® 크림에 대해서는 유의적인 통계학적 차이가 발견되었다.

4. 결과: 피부 민감도

피부 민감도에 대한 결과를 표 9 및 도 15B에 도시한다. 위약 및 1％ IBR-도르민® 크림에 대해 통계학적 차이가 발견되지 않았다. 3％ IBR-도르민® 크림에 대해서는 유의적인 통계학적 차이가 발견되었다.

5. 결과: 보호

보호 분석에 대한 통계학적 결과를 표 10 및 도 15C에 도시한다. 위약 및 1％ IBR-도르민® 크림에 대해 통계학적 차이가 발견되지 않았다. 3％ IBR-도르민® 크림에 대해서는 유의적인 통계학적 차이가 발견되었다.

6. 결과: 피부 자극성

피부 자극성에 대한 통계학적 결과를 표 11 및 도 16A에 도시한다. 위약 및 1％ IBR-도르민® 크림에 대해 통계학적 차이가 발견되지 않았다. 3％ IBR-도르민® 크림에 대해서는 유의적인 통계학적 차이가 발견되었다.

7. 결과: 피부 피로감

피부 피로감 조사에 대한 통계학적 결과를 표 12 및 도 16B에 도시한다. 위약 및 1％ IBR-도르민® 크림에 대해 통계학적 차이가 발견되지 않았다. 3％ IBR-도르민® 크림에 대해서는 유의적인 통계학적 차이가 발견되었다.

8. 결과: 피부 팽팽함

피부 팽팽함에 대한 통계학적 결과를 표 13 및 도 16C에 도시한다. 위약 및 1％ IBR-도르민® 크림에 대해 통계학적 차이가 발견되지 않았다. 3％ IBR-도르민® 크림에 대해서는 큰 통계학적 차이가 발견되었다.

9. 피부 편안함

피부 편안함 조사에 대한 통계학적 결과를 표 14 및 도 17A에 도시한다. 위약에 대해서는 어떠한 통계학적 차이도 발견되지 않았다. 1％ IBR-도르민® 크림에 대해 유의적인 통계학적 차이가 발견되었다. 3％ IBR-도르민® 크림에 대해, 더 높은 가망성으로, 통계학적 차이가 발견되었다.

10. 결과: 잔주름

잔주름과 관련된 통계학적 조사 정보를 표 15 및 도 17B에 도시한다. 위약, 1％ 및 3％ IBR-도르민® 크림에 대해 어떠한 통계적인 차이도 발견되지 않았다. 그러나, 연구에 참여한 여성의 상대적으로 젊은 연령 (평균 연령: 37.77세) 및 주름살을 거의 나타내지 않는 것으로 나타난 값을 주목한다. 실제 주름을 나타내는 값을 받은 여성에 의해 사용된 3％ IBR-도르민® 크림으로의 또다른 연구는 이 항목에서 개선을 나타냈다.

11. 결과: 유연성

피부 유연성과 관련된 통계학적 조사 결과는 표 16 및 도 17C에 도시한다. 통계학적 차이가 위약에서 발견되었다. 유의적인 통계학적 차이가 1％ 및 3％ 18 IBR-도르민® 크림에서 발견되었다.

12. 결과: 변화 비율

변화 비율과 관련된 통계학적 조사 데이터를 표 17 및 도 18에 도시한다.

13. 전체적 결론 및 논의

매일 사용 4주 후, 발견은, 여성 사용자들이 IBR-도르민®을 함유하는 크림을 매회 우세한 것으로서 인식할 수 있었다 (도 18). 효과는 3％ 제제를 사용한 군에 대해 더 강하였다 (표 17). 가장 주목할 만한 효과는 피부 내성 및 보호, 민감도 및 피부 자극성에 관한 것이다. 이는 성숙할수록 피부가 그 보호성 기능을 더 잘 수행할 수 있도록 한다는 가설에 무게를 둘 수 있다. 편안함, 피로감, 팽팽함 및 유연성 또한 향상되었다. 본 실험에서 주름살에 관한 어떠한 유의적인 변화도 없었다. 그러나, 이들 파라미터에 관해, 샘플 중 여성의 상대적인 젊음 (평균 연령: 37.77세) 및 연구의 시작시 주름살을 거의 나타내지 않는 값을 주목한다. 본 연구에서 수득한 결과에 따르면, 3％ 농도의 IBR-도르민®이 화장품 용도로 최적이다.

본 발명은 본원에 기재된 특정 실시양태에 의한 범주로 한정되지 않는다. 사실상, 기재된 것 외에 본 발명의 다양한 변형이 상기 상세한 설명 및 첨부된 도면으로부터 당업자에게 명백할 것이다. 이러한 변형은 첨부된 청구의 범위의 범주 내에 부합되는 것으로 의도된다. 그 개시의 전체가 참고로 인용된 다양한 공개가 본원에 인용된다.

청구하며 확보되기를 희망하는 바는 하기와 같다:

Claims (45)

1. 가공된 나르시서스 타제타 (Narcissus tazzeta) 제품을 포함하는 조성물을, arNOX에 의한 반응성 산소 종의 발생으로부터 기인한 산화성 손상을 예방하기에 효과적인 양으로 환자에게 투여하는 것을 포함하는,

   arNOX에 의한 반응성 산소 종의 발생으로부터 기인한 산화성 손상으로 인한 피부의 손상을 예방하는 방법.
2. 가공된 나르시서스 타제타 제품을 포함하는 조성물을, arNOX에 의한 반응성 산소 종의 발생으로부터 기인한 산화성 손상을 치료하기에 효과적인 양으로 환자에게 투여하는 것을 포함하는,

   arNOX에 의한 반응성 산소 종의 발생으로부터 기인한 산화성 손상으로 인해 손상된 피부를 치료하는 방법.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 조성물이 나르시서스 타제타 추출물, 보존제 및 물을 포함하는 것인 방법.
4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 가공된 나르시서스 타제타 제품의 전체 일일 투여량이 약 1 내지 약 500㎎인 방법.
5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 가공된 나르시서스 타제타 제품의 전체 일일 투여량이 약 1 내지 약 100㎎인 방법.
6. 제1항 또는 제2항에 있어서, 조성물이 추가로 유비퀴논을 포함하는 것인 방법.
7. 제6항에 있어서, 유비퀴논이 코엔자임 Q₁₀인 방법.
8. 제7항에 있어서, 코엔자임 Q₁₀이 코엔자임 Q₅, 코엔자임 Q₇, 코엔자임 Q₈ 및 코엔자임 Q₉로 이루어진 군으로부터 선택된 유비퀴논과 함께 투여되는 것인 방법.
9. 제1항 또는 제2항에 있어서, 조성물이 오미자 (Shisandra Chinensis), 인동 (Lonicera Japonica), 영년생 숙근종 (Fagopyrum Cymosum), 메틸파라벤, L-카르노신, 프로필파라벤, 에틸파라벤, L-에르고티오네인, 베툴린산, 토마토 (Solanum Lycopersicum), 유니베스틴 및 솔리프린을 포함하는 군으로부터 선택된 성분을 추가로 포함하는 것인 방법.
10. 제1항 또는 제2항에 있어서, 손상이 고령, 류마티스성 관절염, 노화와 관련된 암 관절염, 및 노화와 관련된 피로감을 포함하는 군으로부터 선택된 1차 질환의 결과인 방법.
11. 제1항 또는 제2항에 있어서, 손상이 노화된 세포의 결과인 방법.
12. 제1항 또는 제2항에 있어서, 손상이 보통 여드름, 통증 지방증, 백색증, 탈모증, α 1-안티트립신 결핍, 아토피성 피부염, 대머리, 베체트(Behcet) 증후군, 모반, 버트-호그-듀브(Birt-Hogg-Dube) 증후군, 물집, 카페오레 반점, 연조직염, 진주종, 결합조직병, 선천성 구축거미가락증, 이완피부증, 욕창궤양, 더컴(Dercum) 병, 피부염, 탈락피부염, 포진피부염, 외배엽형성 이상, 습진, 엘러스-단로스(Ehlers-Danlos) 증후군, 물집표피박리증, 얕은연조직염, 다형홍반, 돌발발진, 종기증, 환상육아종, 미각발한, 헤일리-헤일리(Hailey-Hailey) 병, 모발 질환, 모발 손실, 머릿니(head lice), 화농땀샘염, 다모증, 두드러기, 땀저하증, 비늘증, 침수발병, 색소실조증, 켈로이드, 광선각화증, 털집각화증, 지루각화증, 다리 궤양, 흑색점, 편평태선, 위축 경화태선, 지방이상증, 루푸스, 피부홍반루푸스, 전신홍반루프스, 마르판(Marfan) 증후군, 비만세포증, 흑색종, 흑색증, 혼합된 결합조직병, 손톱무릎뼈 증후군, 손톱 질환, 발톱감입, 지방층염, 유사건선, 손발톱주위염, 유사천포창, 천포창, 양성 가족성 천포창, 감광성 질환, 색소침착, 잔비늘증, 옻나무 과민증, 포도주색 반점, 가려움증, 탄력섬유거짓황색종, 건선, 과저고름피부증, 딸기코, 옴, 피부경화증, 전신피부경화증, 지루성 피부염, 쇼핑 강박증, 피부 암, 피부 및 결합조직병, 피부 질환, 감염성 피부 질환, 피부 궤양, 스티븐스-존슨 (Stevens-Johnson) 증후군, 스티클러(Stickler) 증후군, 땀샘 질환, 스위트(Sweet) 증후군, 물놀이가려움증, 어루러기, 두드러기, 백반증, 사마귀, 황색종증, 및 피부건조 색소침착증을 포함하는 군으로부터 선택된 피부학적 질환의 결과인 방법.
13. 제1항 또는 제2항에 있어서, 손상이 주름살, 잔주름, 큰 모공 크기, 여드름, 과잉 피지 생성, 콜라겐 손상, 엘라스틴 손상 및 손상된 섬유모세포를 포함하는 군으로부터 선택된 것인 방법.
14. 가공된 나르시서스 타제타 제품을 포함하는 조성물을, arNOX에 의한 반응성 산소 종의 발생으로 인한 산화성 손상으로부터 발생하는 1차 질환을 갖는 환자의 합병증을 예방하기에 효과적인 양으로 상기 1차 질환을 갖는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 상기 합병증의 예방 방법.
15. 가공된 나르시서스 타제타 제품을 포함하는 조성물을, arNOX에 의한 반응성 산소 종의 발생으로 인한 산화성 손상으로부터 발생하는 1차 질환을 갖는 환자의 2차 질환을 예방하기에 효과적인 양으로 상기 1차 질환을 갖는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 상기 2차 질환의 예방 방법.
16. 제14항 또는 제15항에 있어서, 조성물이 나르시서스 타제타 추출물, 보존제 및 물을 포함하는 것인 방법.
17. 제14항 또는 제15항에 있어서, 가공된 나르시서스 타제타 제품의 전체 일일 투여량이 약 1 내지 약 500㎎인 방법.
18. 제14항 또는 제15항에 있어서, 가공된 나르시서스 타제타 제품의 전체 일일 투여량이 약 1 내지 약 100㎎인 방법.
19. 제14항 또는 제15항에 있어서, 조성물이 유비퀴논을 추가로 포함하는 것인 방법.
20. 제19항에 있어서, 유비퀴논이 코엔자임 Q₁₀인 방법.
21. 제20항에 있어서, 코엔자임 Q₁₀이 코엔자임 Q₅, 코엔자임 Q₇, 코엔자임 Q₈ 및 코엔자임 Q₉로 이루어진 군으로부터 선택된 유비퀴논과 함께 투여되는 것인 방법.
22. 제14항 또는 제15항에 있어서, 조성물이 오미자, 인동, 영년생 숙근종, 메틸파라벤, L-카르노신, 프로필파라벤, 에틸파라벤, L-에르고티오네인, 베툴린산, 토마토, 유니베스틴 및 솔리프린을 포함하는 군으로부터 선택된 성분을 추가로 포함하는 것인 방법.
23. 제14항 또는 제15항에 있어서, 1차 질환이 고령, 류마티스성 관절염, 노화와 관련된 관절염, 또는 노화와 관련된 피로감인 방법.
24. 제14항 또는 제15항에 있어서, 1차 질환이 노화된 세포의 결과인 방법.
25. 제14항 또는 제15항에 있어서, 1차 질환이 암인 방법.
26. 제14항 또는 제15항에 있어서, 1차 질환이 심근경색증, 알코올 중독, 잠두중독증, 말라리아, 겸상적혈구 빈혈, 판코니 빈혈(Fanconi's anemia), 프로토포르피린 광산화, 영양 결핍, 단백열량부족증, 지중해빈혈증, 식이 철 과부하, 특발성 혈색소 침착증, 금속 철 매개 신독성, 아미노글리코시드 신독성, 자가면역 신장 증후군, 구강 철 중독, 내독소 간 상해, 유리 지방산 유도된 췌장염, 비스테로이드성 항염증 약물 유도된 위장관 손상, 사구체신염, 자가면역 질환, 혈관염, B형간염 바이러스 감염, 파킨슨씨 병, 신경독, 알레르기성 뇌척수염, 외상의 상승작용, 고혈압 뇌혈관 손상, 비타민 B 결핍, 아드리아마이신 심장독성, 케산병(Keshan disease), 셀레늄 결핍, 알코올 심근병증, 광선 망막병증, 안구 출혈, 백내장 발생, 퇴행성 망막 손상, 근육위축 측삭 경화증, 노화 관련 황반변성, 당뇨병, 죽종형성, 죽상경화증, 보통 여드름, 통증 지방증, 백색증, 탈모증, α 1-안티트립신 결핍, 아토피성 피부염, 대머리, 베체트 증후군, 모반, 버트-호그-듀브 증후군, 물 집, 카페오레 반점, 연조직염, 진주종, 결합조직병, 선천성 구축거미가락증, 이완피부증, 욕창궤양, 더컴 병, 피부염, 탈락피부염, 포진피부염, 외배엽형성 이상, 습진, 엘러스-단로스 증후군, 물집표피박리증, 얕은연조직염, 다형홍반, 돌발발진, 종기증, 환상육아종, 미각발한, 헤일리-헤일리 병, 모발 질환, 모발 손실, 머릿니, 화농땀샘염, 다모증, 두드러기, 땀저하증, 비늘증, 침수발병, 색소실조증, 켈로이드, 광선각화증, 털집각화증, 지루각화증, 다리 궤양, 흑색점, 편평태선, 위축 경화태선, 지방이상증, 루푸스, 피부홍반루푸스, 전신홍반루프스, 마르판 증후군, 비만세포증, 흑색종, 흑색증, 혼합된 결합조직병, 손톱무릎뼈 증후군, 손톱 질환, 발톱감입, 지방층염, 유사건선, 손발톱주위염, 유사천포창, 천포창, 양성 가족성 천포창, 감광성 질환, 색소침착, 잔비늘증, 옻나무 과민증, 포도주색 반점, 가려움증, 탄력섬유거짓황색종, 건선, 과저고름피부증, 딸기코, 옴, 피부경화증, 전신피부경화증, 지루성 피부염, 쇼핑 강박증, 피부 암, 피부 및 결합조직병, 피부 질환, 감염성 피부 질환, 피부 궤양, 스티븐스-존슨 증후군, 스티클러 증후군, 땀샘 질환, 스위트 증후군, 물놀이가려움증, 어루러기, 두드러기, 백반증, 사마귀, 황색종증 및 피부건조 색소침착증을 포함하는 군으로부터 선택된 것인 방법.
27. 가공된 나르시서스 타제타 제품, 유비퀴논, 코엔자임 Q₁₀, 코엔자임 Q₅, 코엔자임 Q₇, 코엔자임 Q₈, 코엔자임 Q₉, 오미자, 인동, 영년생 숙근종, 메틸파라벤, L-카르노신, 프로필파라벤, 에틸파라벤, L-에르고티오네인, 베툴린산, 토마토, 유니 베스틴 및 솔리프린을 포함하는 군으로부터 선택된 성분을 포함하는 조성물의 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, arNOX에 의한 반응성 산소 종의 발생을 억제하는 방법.
28. 가공된 나르시서스 타제타 제품, 유비퀴논, 코엔자임 Q₁₀, 코엔자임 Q₅, 코엔자임 Q₇, 코엔자임 Q₈, 코엔자임 Q₉, 오미자, 인동, 영년생 숙근종, 메틸파라벤, L-카르노신, 프로필파라벤, 에틸파라벤, L-에르고티오네인, 베툴린산, 토마토, 유니베스틴 및 솔리프린을 포함하는 군으로부터 선택된 성분을 포함하는 조성물의 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자의 arNOX를 격리하는 방법.
29. 오미자, 인동, 영년생 숙근종, 메틸파라벤, L-카르노신, 프로필파라벤, 에틸파라벤, L-에르고티오네인, 베툴린산, 토마토, 유니베스틴, 솔리프린, 가공된 나르시서스 타제타 제품, 유비퀴논, 코엔자임 Q₁₀, 코엔자임 Q₅, 코엔자임 Q₇, 코엔자임 Q₈ 및 코엔자임 Q₉를 포함하는 군으로부터 선택된 성분을 포함하는 조성물을, arNOX에 의한 반응성 산소 종의 발생으로 인한 산화성 손상으로부터 발생하는 1차 질환을 갖는 환자의 합병증을 예방하기에 효과적인 양으로 상기 1차 질환을 갖는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 상기 합병증의 예방 방법.
30. 오미자, 인동, 영년생 숙근종, 메틸파라벤, L-카르노신, 프로필파라벤, 에틸 파라벤, L-에르고티오네인, 베툴린산, 토마토, 유니베스틴, 솔리프린, 가공된 나르시서스 타제타 제품, 유비퀴논, 코엔자임 Q₁₀, 코엔자임 Q₅, 코엔자임 Q₇, 코엔자임 Q₈ 또는 코엔자임 Q₉를 포함하는 조성물을, arNOX에 의한 반응성 산소 종의 발생으로 인한 산화성 손상을 일으키는 1차 질환을 갖는 환자의 2차 질환을 예방하기에 효과적인 양으로 상기 1차 질환을 갖는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 상기 2차 질환의 예방 방법.
31. (a) 시험 제제가 arNOX와 결합하기에 충분한 시간 동안, arNOX를 시험 제제와 함께 배양하고;

    (b) arNOX 및 시험 제제를 포함하는 복합체의 존재를 검출하는 것

    을 포함하는, arNOX를 격리하는 제제에 대한 스크리닝 방법.
32. (a) 사이토크롬 c 환원에 충분한 시간 동안, arNOX를 시험 제제, 사이토크롬 c 및 반응성 산소 종을 발생하는 기질과 함께 배양하고;

    (b) 시험 제제의 존재 또는 부재 하에, 환원된 사이토크롬 c의 존재를 검출하는 것

    을 포함하며, 시험 제제를 포함하는 혼합물 중 환원된 사이토크롬 c의 부재가 시험 제제가 arNOX를 격리함을 나타내는 것인, arNOX를 격리하는 제제에 대한 스크리닝 방법.
33. (a) arNOX가 기질을 환원시키기에 충분한 시간 동안, arNOX를 시험 제제, 및 arNOX에 의해 환원되는 기질과 함께 배양하고;

    (b) 시험 제제의 존재 또는 부재 하에, 환원된 기질의 존재를 검출하는 것

    을 포함하며, 시험 제제를 포함하는 혼합물 중 환원된 기질의 부재가 시험 제제가 arNOX를 격리함을 나타내는 것인, arNOX를 격리하는 제제에 대한 스크리닝 방법.
34. (a) arNOX가 기질을 환원시키기에 충분한 시간 동안, arNOX를 시험 제제, 및 arNOX의 존재 하에 디술피드-티올 상호교환 활성을 진행하는 기질과 함께 배양하고;

    (b) 시험 제제의 존재 또는 부재 하에, 기질 중 디술피드-티올 상호교환의 존재를 검출하는 것

    을 포함하며, 시험 제제를 포함하는 혼합물 중 기질 중 디술피드-티올 상호교환의 부재가 시험 제제가 arNOX를 격리함을 나타내는 것인, arNOX를 격리하는 제제에 대한 스크리닝 방법.
35. 제31, 32, 33 또는 34항의 방법에 의해 확인된, arNOX를 격리하는 제제를, arNOX에 의한 반응성 산소 종의 발생으로 인한 산화성 손상으로부터 발생하는 1차 질환의 합병증을 예방하기에 효과적인 양으로 상기 1차 질환을 갖는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 상기 합병증의 예방 방법.
36. 제31, 32, 33 또는 34항의 방법에 의해 확인된, arNOX를 격리하는 제제를, arNOX에 의한 반응성 산소 종의 발생으로 인한 산화성 손상을 일으키는 1차 질환을 갖는 환자의 2차 질환을 예방하기에 효과적인 양으로 상기 1차 질환을 갖는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 상기 2차 질환의 예방 방법.
37. 가공된 나르시서스 타제타 제품을 포함하는, arNOX에 의한 반응성 산소 종의 발생으로 인한 산화성 손상으로부터 기인한 피부의 손상을 예방하기 위한 조성물.
38. 가공된 나르시서스 타제타 제품을 포함하는, arNOX에 의한 반응성 산소 종의 발생으로 인한 산화성 손상으로 인해 손상된 피부를 치료하기 위한 조성물.
39. 가공된 나르시서스 타제타 제품을 포함하는, arNOX에 의한 반응성 산소 종의 발생으로 인한 산화성 손상으로부터 기인한 1차 질환의 합병증을 환자에게서 예방하기 위한 조성물.
40. 가공된 나르시서스 타제타 제품을 포함하는, arNOX에 의한 반응성 산소 종의 발생으로 인한 산화성 손상을 일으키는 1차 질환을 갖는 환자에게서 2차 질환을 예방하기 위한 조성물.
41. 가공된 나르시서스 타제타 제품, 유비퀴논, 코엔자임 Q₁₀, 코엔자임 Q₅, 코엔자임 Q₇, 코엔자임 Q₈, 코엔자임 Q₉, 오미자, 인동, 영년생 숙근종, 메틸파라벤, L-카르노신, 프로필파라벤, 에틸파라벤, L-에르고티오네인, 베툴린산, 토마토, 유니베스틴 및 솔리프린으로 이루어진 군으로부터 선택된 성분을 포함하는, arNOX에 의한 반응성 산소 종의 발생을 억제하기 위한 조성물.
42. 가공된 나르시서스 타제타 제품, 유비퀴논, 코엔자임 Q₁₀, 코엔자임 Q₅, 코엔자임 Q₇, 코엔자임 Q₈, 코엔자임 Q₉, 오미자, 인동, 영년생 숙근종, 메틸파라벤, L-카르노신, 프로필파라벤, 에틸파라벤, L-에르고티오네인, 베툴린산, 토마토, 유니베스틴 및 솔리프린으로 이루어진 군으로부터 선택된 성분을 포함하는, 환자의 arNOX를 격리하기 위한 조성물.
43. 오미자, 인동, 영년생 숙근종, 메틸파라벤, L-카르노신, 프로필파라벤, 에틸파라벤, L-에르고티오네인, 베툴린산, 토마토, 유니베스틴, 솔리프린, 가공된 나르시서스 타제타 제품, 유비퀴논, 코엔자임 Q₁₀, 코엔자임 Q₅, 코엔자임 Q₇, 코엔자임 Q₈ 및 코엔자임 Q₉로 이루어진 군으로부터 선택된 성분을 포함하는, arNOX에 의한 반응성 산소 종의 발생으로부터 기인한 산화성 손상으로부터의 1차 질환의 합병증을 환자에게서 예방하기 위한 조성물.
44. 오미자, 인동, 영년생 숙근종, 메틸파라벤, L-카르노신, 프로필파라벤, 에틸파라벤, L-에르고티오네인, 베툴린산, 토마토, 유니베스틴, 솔리프린, 가공된 나르시서스 타제타 제품, 유비퀴논, 코엔자임 Q₁₀, 코엔자임 Q₅, 코엔자임 Q₇, 코엔자임 Q₈ 및 코엔자임 Q₉로 이루어진 군으로부터 선택된 활성 성분을 포함하는, arNOX에 의한 반응성 산소 종의 발생으로부터 기인한 산화성 손상을 일으키는 1차 질환을 갖는 환자의 2차 질환을 예방하기 위한 조성물.
45. 오미자, 인동, 영년생 숙근종, 메틸파라벤, L-카르노신, 프로필파라벤, 에틸파라벤, L-에르고티오네인, 베툴린산, 토마토, 유니베스틴, 솔리프린, 가공된 나르시서스 타제타 제품, 유비퀴논, 코엔자임 Q₁₀, 코엔자임 Q₅, 코엔자임 Q₇, 코엔자임 Q₈ 및 코엔자임 Q₉로 이루어진 군으로부터 선택된 성분으로 주로 구성된, arNOX에 의한 반응성 산소 종의 발생으로부터 기인한 산화성 손상으로 인해 손상된 피부를 치료하기 위한 조성물.

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