FR2904223A1 - Utilisation de carboxypeptidases dans le domaine cosmetique et therapeutique - Google Patents

Abstract

L'invention concerne une composition cosmétique ou pharmaceutique, comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un polypeptide de séquence d'acides aminés codée par une séquence d'acides nucléiques représentée en tout ou partie par une séquence choisie parmi SEQ ID NO 1, des analogues de celle-ci, ou un fragment de celle-ci.

Description

1 La présente invention a pour objet l'utilisation, en cosmétique et en

thérapeutique, d'une protéine de type protéase appartenant à la famille des carboxypeptidases, la carboxypeptidase A4, ou de polypeptides dérivés de cette protéine, notamment pour le traitement de troubles cutanés ou du cuir chevelu, en particulier liés à un dysfonctionnement de la prolifération et/ou de la différenciation et/ou de la migration de cellules épidermiques. L'invention a également pour objet des compositions cosmétiques ou pharmaceutiques comprenant au moins la carboxypeptidase A4 (CPA4), un polypeptide dérivé de celle-ci, ou un composé apte à en moduler l'activité biologique et/ou l'expression, destinées au traitement de troubles cutanés ou du cuir chevelu. L'épiderme est conventionnellement divisé en une couche basale de kératinocytes constituant la couche germinative de l'épiderme, une couche dite épineuse constituée de plusieurs couches de cellules polyédriques et enfin, un ensemble de couches supérieures appelées couches cornées (ou stratum corneum), constituées de kératinocytes au stade terminal de leur différenciation appelés cornéocytes. En permanence, de nouveaux kératinocytes sont produits pour compenser la perte en continu de cellules épidermiques au niveau de la couche cornée selon un mécanisme dénommé desquamation. Un déséquilibre entre la production des cellules au niveau de la couche basale et le taux de desquamation peut, notamment, conduire à des formations d'écailles à la surface de la peau. De nombreux troubles ou pathologies cutanées peuvent se caractériser par un dysfonctionnement de la prolifération et/ou de la différenciation et/ou de la migration cellulaire épidermique, et notamment des kératinocytes. Par exemple, des troubles de la prolifération peuvent résulter en la production d'une couche cornée épaissie et par une desquamation anormale, c'est-à-dire par une hyperkératose. Ces troubles peuvent être, notamment, la xérose (ou sécheresse cutanée), les ichtyoses, le psoriasis, certaines lésions tumorales bénignes ou malignes, et les hyperkératoses réactionnelles. A l'inverse, certaines manifestations pathologiques entraînent un amincissement de l'épiderme et plus particulièrement de la couche cornée. Ce type de manifestations se traduit alors par une fragilité excessive du revêtement cutané. A titre représentatif, et non limitatif, de ces troubles, on peut notamment citer des réactions 2904223 2 d'origine immunitaire généralement induites par la mise en présence ou en contact avec un ou plusieurs agents exogènes. Ainsi, il existe un besoin de disposer de compositions utilisables dans des troubles cutanés ou du cuir chevelu résultant des dysfonctionnements précités. 5 Il existe également un besoin de disposer de nouvelles cibles cosmétiques ou thérapeutiques. Il existe également un besoin de disposer de nouveaux outils de criblage de molécules utilisables en cosmétique ou dans le traitement et/ou l'amélioration des symptômes de troubles cutanés ou du cuir chevelu, comme ceux précités. 10 La présente invention a pour objet de satisfaire ces besoins. Ainsi, la présente invention concerne, selon un de ses aspects, une composition cosmétique ou pharmaceutique, comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un polypeptide de séquence d'acides aminés codée par une séquence d'acides nucléiques représentée en tout ou partie par une séquence choisie parmi SEQ ID 15 NO 1, des analogues de celle-ci, ou un fragment de celle-ci. Selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne une composition cosmétique ou pharmaceutique, comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour une polypeptide conforme à l'invention, ou une séquence sens, anti-sens ou interférentielle correspondant à 20 ladite séquence. Selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne l'utilisation d'au moins un polypeptide conforme à l'invention ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement et/ou à la prévention d'un trouble cutané ou du cuir 25 chevelu. Ainsi, la présente invention repose, plus particulièrement, sur l'identification, par les inventeurs, de la carboxypeptidase A4 à titre de d'agent et/ou de cible cosmétique ou pharmaceutique potentielle au niveau du stratum corneum de l'épiderme, ainsi qu'au niveau du follicule pileux. 30 En particulier, cette identification résulte de l'observation selon laquelle la CPA4 était spécifiquement exprimée au cours de la différenciation tardive des 2904223 3 kératinocytes, et présente au niveau du stratum corneum de l'épiderme de peau saine et jeune. Ainsi, comme il ressort des exemples présentés ci-après, les inventeurs ont caractérisé l'expression de l'ARNm de la protéine CPA4, dont la séquence d'acides 5 aminés est représentée par la séquence SEQ ID NO 8, dans un grand nombre de tissus biologiques humains, tels que le cerveau, le colon, l'oesophage, le coeur, le placenta, la peau, le petit intestin, l'estomac et la langue, d'où il résulte que cet ARNm est plus particulièrement exprimé au niveau de l'épiderme. Les inventeurs ont également, pour la première fois, mis en évidence la 10 présence de la CPA4 au niveau de follicules pileux. Plus précisément, la carboxypeptidase A4 (CPA4) est une protéase appartenant à la famille des métallo-carboxypeptidases et, notamment, à la sous-famille A. Les protéases sont des enzymes hydrolytiques capables de couper des liaisons peptidiques. Un certain nombre d'entre elles sont aujourd'hui reconnues comme ayant un 15 rôle essentiel au niveau de l'équilibre et de la physiologie de l'épiderme. Leurs rôles multiples couvrent aussi bien des fonctions de dégradation de protéines usagées que celui d'activation d'enzymes ou de protéines, par excision de séquences peptidiques précises, ou encore que celui de régulation de l'homéostasie épidermique par libération des cornéocytes. 20 A titre d'exemple, des protéases ont notamment été impliquées dans le contrôle de la prolifération et/ou la différenciation épidermique, dont la dérégularisation peut conduire, par exemple, à une desquamation anormale. Plus particulièrement, les métallo-carboxypeptidases sont des enzymes de type hydrolase, qui clivent la liaison peptidique des chaînes protéiques en présence d'eau et de 25 certains ions métalliques tels que le zinc, le cobalt ou le manganèse. La carboxypeptidase A4 a été initialement identifiée par HUANG et al. (Cancer Res., 1999, 59:2981-2988) à partir d'une lignée de cellules issues d'une tumeur de la prostate. La CPA4 est synthétisée sous la forme d'une préproprotéine de 421 acides 30 aminés (SEQ ID NO 6) contenant deux domaines zinc-binding , signature des métallo- carboxypeptidases, un peptide signal de 16 acides aminés à l'extrémité N-terminale (SEQ ID NO 9) et un peptide propeptide (SEQ ID NO 10) (EC 3.4.17, SwissProt : Q9UI42). 2904223 4 L'élimination du peptide signal conduit à la génération d'une proprotéine (SEQ ID NO 7), dont le clivage des 97 acides aminés (propeptide SEQ ID NO 10) à l'extrémité N-terminale conduit à la formation d'une enzyme active (SEQ ID NO 8). Au sens de la présente invention, on entend désigner de manière générale, sauf 5 indications contraires, par CPA4, la forme préproprotéine (SEQ ID NO 6), la forme proprotéine (SEQ ID NO 7) et la forme protéine (SEQ ID NO 8). Selon un autre de ses aspects, la présente invention se rapporte à l'utilisation d'au moins un polypeptide conforme à l'invention, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, à titre d'outil de criblage de composés 10 biologiques ou chimiques susceptibles de moduler l'activité biologique et/ou l'expression dudit polypeptide ou de ladite séquence d'acides nucléiques. Selon encore un autre de ses aspects, la présente invention concerne l'utilisation d'au moins un composé chimique ou biologique, apte à moduler l'activité biologique et/ou l'expression d'au moins un polypeptide conforme à l'invention, pour la 15 préparation d'une composition cosmétique ou pharmaceutique destinée au traitement et/ou à la prévention d'un trouble cutané ou du cuir chevelu. De manière inattendue, les inventeurs ont en effet constaté qu'il était possible d'utiliser un modulateur de l'activité biologique et/ou de l'expression d'une protéase spécifique, à savoir la carboxypeptidase A4 (CPA4) pour la préparation de compositions 20 cosmétiques ou pharmaceutiques destinées à traiter des affections touchant l'épiderme, et notamment des troubles cutanés ou du cuir chevelu impliquant un dysfonctionnement des processus de prolifération et/ou différenciation et/ou migration des cellules entrant dans la structure de l'épiderme, et notamment des kératinocytes. Selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne l'utilisation d'au 25 moins un polypeptide conforme à l'invention, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, à titre d'outil d'évaluation d'un état de l'épiderme ou du cuir chevelu. L'état de l'épiderme peut être indicatif d'un trouble cutané ou du cuir chevelu. Ainsi, la présente invention permet de fournir un outil simple et rapide de 30 diagnostic d'un état de la peau, par exemple par mesure d'une teneur en CPA4 et/ou d'une activité de type CPA4, dans un échantillon cutané, et notamment de stratum corneum. Selon encore un autre de ses aspects, la présente invention se rapporte à 2904223 5 l'utilisation d'au moins un polypeptide conforme à l'invention, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, pour la préparation d'une peau reconstruite isolée. Selon un autre de ses aspects, la présente invention se rapporte à un procédé de 5 traitement cosmétique, comprenant au moins une étape consistant à appliquer sur au moins une partie de la peau, des muqueuses et/ou des fibres kératiniques, au moins une composition cosmétique conforme à l'invention. Selon encore un autre de ses aspects, la présente invention se rapporte à un procédé, non thérapeutique, pour mettre en évidence un effet d'un traitement susceptible 10 de faire régresser un trouble cutané ou du cuir chevelu chez un individu, comprenant au moins les étapes consistant à: a) effectuer, avant le traitement, au moins une première détermination, dans un premier échantillon cutané ou du cuir chevelu prélevé chez ledit individu, d'une activité biologique et/ou de l'expression d'un polypeptide conforme à l'invention, ou 15 d'une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, b) effectuer, après le traitement, au moins une seconde détermination, dans un second échantillon cutané ou du cuir chevelu prélevé chez ledit individu, de ladite activité biologique et/ou de ladite expression dudit polypeptide ou ladite séquence d'acides nucléiques déterminés à l'étape a), et 20 c)comparer les première et deuxième déterminations, notamment afin d'en déduire une information relative à un effet au moins du traitement. Un tel traitement peut en particulier être un traitement cosmétique. Selon un mode de réalisation, un polypeptide convenant à l'invention peut 25 avoir une séquence d'acides aminés codée par une séquence d'acides nucléiques représentée en tout ou partie par une séquence choisie parmi SEQ ID NO 1, SEQ ID NO 2, SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 4, ou SEQ ID NO 5 ou un analogue de celle-ci, ou un fragment de celle-ci. Selon un autre mode de réalisation, un polypeptide convenant à l'invention 30 peut avoir une séquence d'acides aminés représentée en tout ou partie par une séquence choisie parmi SEQ ID NO 6, SEQ ID NO 7, SEQ ID NO 8, SEQ ID NO 10, SEQ ID NO 11, SEQ ID NO 12, ou SEQ ID NO 13, ou un analogue de celle-ci, ou un fragment de 2904223 celle-ci. Par analogue d'un polypeptide , on entend désigner tout polypeptide présentant une homologie de séquence, en particulier vis-à-vis d'une des séquences caractéristiques dudit polypeptide, ainsi qu'une activité biologique de même nature. 5 L'homologie peut être d'au moins 85 %, par exemple d'au moins 90 %, et par exemple d'au moins 95 %. L'homologie de séquence peut résulter de modifications issues de mutation ou de variation dans les séquences des peptides selon l'invention, provenant soit de la délétion d'un ou plusieurs acides aminés, soit de l'insertion d'un ou plusieurs acides 10 aminés, soit encore de la substitution d'un ou plusieurs acides aminés dans les séquences caractéristiques des polypeptides selon l'invention. Par séquence caractéristique du polypeptide , on entend viser notamment au regard de la CPA4, la séquence propeptidique constituée par les acides aminés N-terminaux 17 à 113 (SEQ ID NO 10), le site actif en position 182, comprenant le cas 15 échéant les acides aminés entourant ce site actif, à raison, par exemple, de 1, voire de 2, voire de 3, voire de 4, voire de 5, voire de 6, voire de 7, voire de 8 acides aminés de part et d'autre du site actif, les sites de liaison du zinc en position 181, 184, et 308, comprenant le cas échéant les acides aminés de part et d'autre de ces sites de liaison, à raison, par exemple, de 1, voire de 2, voire de 4, voire de 8 acides aminés de part et d'autre des sites 20 de liaison du zinc, ainsi que les séquences SEQ ID NO 11, SEQ ID NO 12, et SEQ ID NO 13 représentant des épitopes dérivés de la CPA4. De manière générale, les analogues polypeptidiques peuvent comprendre des substitutions conservatrices par rapport à la séquence d'acides aminés du polypeptide naturel. 25 Plusieurs de ces modifications peuvent être combinées. A titre d'exemple de mutations que l'on peut considérer dans la présente invention, il peut être mentionné le remplacement d'un ou plusieurs résidus d'acides aminés par des résidus d'acides aminés ayant un indice hydropathique similaire sans pour autant affecter de manière sensible les propriétés biologiques du polypeptide, et 30 notamment son activité biologique telle que son activité carboxypeptidase. L'indice hydropathique est un indice attribué aux acides aminés en fonction de leur hydrophobicité et de leur charge (Kyte et al. (1982), J. Mol. Biol., 157 : 105). 6 2904223 7 Un polypeptide ou analogue également visé par la présente invention peut être un polypeptide ayant subi une ou plusieurs modification(s) post-traductionnelle(s). Par modification(s) post-traductionnelle(s) , on entend englober l'ensemble des modifications qu'un peptide ou une protéine est susceptible de subir à l'issu de sa 5 synthèse dans une cellule, telle que par exemple une ou des phosphorylation(s), une ou des glycosylation(s), une ou des lipidation(s), telles qu'une farnésylation ou une palmitoylation, un réarrangement structural de type formation de ponts disulfures et/ou clivage à l'intérieur de la séquence peptidique. L'analogue peut, par ailleurs, présenter sensiblement la même activité 10 biologique que le polypeptide naturel. Selon un mode de réalisation un polypeptide convenant à la mise en place de l'invention peut également être un polypeptide naturel ou synthétique, le cas échéant susceptible d'être obtenu après protéolyse de la carboxypeptidase A4 par des protéases ou par synthèse chimique ou biologique ou par extraction à partir d'un tissu biologique, 15 comme par exemple la peau, exprimant naturellement ou après transduction ce polypeptide, ainsi que les différentes formes post-traductionnelles de celui-ci, ou encore tout polypeptide naturel ou synthétique dont la séquence comprend totalement ou partiellement (en tout ou partie) une séquence d'acides aminés précitée, par exemple les variants, les analogues et les fragments. 20 Selon un autre mode de réalisation, un polypeptide convenant à la mise en oeuvre de l'invention peut également être un polypeptide tel que défini précédemment dans lequel un résidu au moins a été remplacé par un résidu d'acide aminé d'indice hydropathique similaire, comme défini précédemment. Selon un autre mode de réalisation, un polypeptide convenant à la mise de 25 l'invention peut également être un polypeptide tel que défini précédemment fusionné avec un autre polypeptide, un agent de ciblage hydrophile ou hydrophobe, un précurseur de bioconversion, un agent de marquage, par exemple, luminescent, ou radioactif. De manière non limitative, on peut citer comme exemple de composés susceptibles d'être couplés avec un polypeptide conforme à l'invention des protéines 30 fluorescentes comme la Green Fluorescent Protein , des composés chimiques fluorescents tels que la rhodamine, la fluorescéine, ou le Texas Red, des composés phosphorescents, des éléments radioactifs, tels que 3H, 35S 1211 ou 125I. 2904223 8 Selon la nature des composés susceptibles d'être couplés avec un polypeptide conforme à l'invention, le couplage peut être opéré par des procédés chimiques, notamment au moyen de fonctions chimiques réactives ou par des procédés de biologies moléculaires connus de l'homme de l'art. 5 Selon un autre mode de réalisation, la présente invention concerne également une composition cosmétique ou pharmaceutique, comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour un polypeptide conforme à l'invention, ou une séquence sens, anti-sens ou interférentielle 10 correspondant à ladite séquence. Ainsi, la présente invention se rapporte également à l'utilisation de séquences ou de fragments de séquences d'acides nucléiques, notamment d'acides désoxyribonucléiques, ou d'acides ribonucléiques codant pour un polypeptide conforme à l'invention. 15 Au sens de la présente invention, on entend désigner par fragment de séquence d'acides nucléiques , une séquence d'acides nucléiques codant pour tout ou partie d'un polypeptide conforme à l'invention, ou un analogue de celui-ci, et en particulier une séquence d'acides nucléiques choisie parmi SEQ ID NO 1 représentant la séquence de l'ARNm de la CPA4 incluant les régions non codantes comme la région 20 polyA+, SEQ ID NO 2 (codant pour la forme préproprotéine), SEQ ID NO 3 (codant pour la forme proprotéine), SEQ ID NO 4 (codant pour la protéine) ou SEQ ID NO 5 (codant pour le propeptide), ou un analogue de celle-ci. Par analogue d'une séquence d'acides nucléiques , on entend désigner toute séquence d'acides nucléiques, éventuellement résultant de la dégénérescence du code des 25 acides nucléiques, et codant pour une séquence d'un polypeptide identique ou analogue à la séquence du polypeptide codée par ladite séquence d'acides nucléiques. Les séquences d'acides nucléiques peuvent être issues de toutes origines possibles, à savoir soit animale, en particulier de mammifères et encore plus particulièrement humaine, soit végétale, soit de micro-organismes (virus, phages, bactéries 30 entre autres) ou encore de champignons, sans préjuger du fait qu'elles soient présentes de manière naturelle ou non dans ledit organisme d'origine. En l'occurrence, l'invention se rapporte également à l'utilisation de fragments 2904223 9 d'acides nucléiques isolés et purifiés codant les polypeptides revendiqués. Les séquences d'acides nucléiques selon l'invention peuvent notamment être utilisées pour préparer des séquences d'acides ribonucléiques correspondantes sens ou antisens. 5 L'invention a également pour objet l'utilisation de tout polynucléotide, de séquence d'acides ribonucléiques ou désoxyribonucléiques, sens ou antisens, notamment Small interferent RNA , correspondants au moins à la séquence d'acides nucléiques codante SEQ ID NO : 1, SEQ ID NO : 2, SEQ ID NO : 3, SEQ ID NO : 4, ou SEQ ID NO 5 et des analogues de celle-ci. 10 Selon un autre aspect la présente invention concerne l'utilisation d'au moins un composé chimique ou biologique apte à moduler l'activité biologique et/ou l'expression d'au moins un polypeptide conforme à l'invention, pour la préparation d'une composition cosmétique ou pharmaceutique destinée au traitement et/ou à la prévention 15 d'un trouble cutané ou du cuir chevelu. Au sens de la présente invention, on entend par l'expression composé chimique ou biologique apte à moduler l'activité biologique et/ou l'expression tout composé apte à agir, directement ou indirectement, sur au moins un polypeptide conforme à l'invention, ou une séquence d'acides nucléiques codant pour celui-ci, ou sur un élément 20 d'une voie de signalisation intra ou extra-cellulaire, ou d'une voie métabolique, impliquant ledit polypeptide, ou sur un élément impliqué dans la régulation de la transcription et/ou la traduction d'une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide. Par activité biologique , on entend désigner notamment au regard de la 25 CPA4, l'activité biologique du propeptide (SEQ ID NO 10), le cas échéant en combinaison avec le peptide signal, visant à inhiber l'activité enzymatique de la CPA4 (SEQ ID NO 9), l'activité biologique de la protéine CPA4 se traduisant par une activité protéolytique, ainsi que l'activité biologique potentielle de la préproprotéine préproCPA4 (SEQ ID NO 6) ou de la proprotéine pro-CPA4 (SEQ ID NO 7), susceptible de donner une 30 protéine CPA4 active (SEQ ID NO 8) par clivage de la ou des séquence(s) propeptidique(s) requise(s), ainsi que les propriétés immunogènes des épitopes identifiés par les séquences SEQ ID NO 11, SEQ ID NO 12 et SEQ ID NO 13. 2904223 10 Selon un mode de réalisation, un composé chimique ou biologique convenant à une utilisation selon l'invention, peut être un inhibiteur de l'activité biologique et/ou de l'expression d'un polypeptide conforme à l'invention. Selon un mode de réalisation, un inhibiteur peut être choisi parmi une 5 protéase, la latéxine et ses analogues, l'héparine et ses dérivés, l'héparane sulfate et ses dérivés, un anticorps, un polypeptide de séquence d'acides aminés représentée en tout ou partie par SEQ ID NO 10 ou un analogue de celle-ci. La séquence primaire en acides aminés d'un polypeptide ou d'une protéine peut déterminer des sites spécifiquement reconnus par une ou des protéases qui, une fois la 10 reconnaissance de ces sites effectuée, peuvent induire son clivage par protéolyse. Un tel clivage peut conduire à une activation ou une inhibition de l'activité biologique du polypeptide ou de la protéine considérée. Une protéase dite inhibitrice convenant à la mise en oeuvre de l'invention peut présenter un site spécifique de reconnaissance et/ou de fixation et de coupure au sein de la 15 séquence d'acides aminés d'un polypeptide conforme à l'invention. Une telle protéase peut aisément être identifiée par tout protocole enzymatique connu de l'homme de l'art. La latéxine, inhibiteur endogène spécifique des métallo-carboxypeptidases zinc-dépendantes, l'héparine et ses dérivés, et l'héparane sulfate et ses dérivés, peuvent 20 interagir avec la CPA4 afin de former des complexes inactifs. Par analogue de la latéxine, ou dérivé de l'héparine, ou de l'héparane sulfate , on entend viser des fragments actifs de ces protéines ou glycosaminoglycanes, et en particulier des fragments susceptibles d'interagir avec un polypeptide conforme à l'invention et d'inhiber son activité biologique. 25 Par exemple, pour la mise en oeuvre de l'invention, il peut être envisagé l'utilisation d'héparanes de bas poids moléculaire ou d'héparanes de haut poids moléculaire, dont le mode de préparation est bien connu de l'homme de l'art. Un anticorps susceptible d'être utilisé à titre d'inhibiteur de l'activité biologique et/ou de l'expression d'un polypeptide conforme à l'invention peut être obtenu 30 par tout procédé connu de l'homme de l'art, tel que décrit dans Antibodies: A Laboratory Manual , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1990). 2904223 11 Par anticorps, on entend désigner de manière générale des anticorps monoclonaux ou polyclonaux, ainsi que des fragments d'immunoglobuline susceptibles de lier un antigène et des anticorps recombinants. Ces anticorps peuvent être produits par toute technique de génie génétique connue de l'homme de l'art ou par coupure 5 enzymatique ou chimique d'anticorps intacts. Ainsi, l'invention concerne également un anticorps reconnaissant spécifiquement au moins un polypeptide dont la séquence d'acides aminés peut être représentée en tout ou partie par au moins une séquence choisie parmi SEQ ID NO : 6, SEQ ID NO : 7, SEQ ID NO : 8, ou SEQ ID NO : 10, SEQ ID NO : 1l, SEQ ID NO : 12, 10 ou SEQ ID NO : 13 ou un analogue de celle-ci, et étant inhibiteur de l'activité biologique d'un polypeptide conforme à l'invention. Selon un mode de réalisation, un anticorps selon l'invention peut reconnaître spécifiquement un épitope immunogène choisi parmi SEQ ID NO : 1l, SEQ ID NO : 12, ou SEQ ID NO : 13, ou un analogue de celui-ci. 15 Selon un autre mode de réalisation, un composé biologique ou chimique convenant à l'invention peut être un activateur de l'activité biologique et/ou de l'expression d'un polypeptide conforme à l'invention. A titre d'exemple d' activateur convenant à la mise en oeuvre de la présente invention, on peut mentionner, de manière non exhaustive, un activateur choisi parmi une 20 protéase, un anticorps, un inhibiteur d'histone déacétylase, par exemple un sel de butyrate. Comme indiqué précédemment l'identification de protéases dites activatrices convenant à la mise en oeuvre relève de la pratique de routine de l'homme de l'art. Ainsi, il a été observé que la carboxypeptidase A4 pouvait être activée par la thrombine, la trypsine, les kallikréines 1 et 2, la furine, les proprotéines convertases 1, 2, 25 4, 5 et 7, ADAM 17, la stromélysine, la yapsine. Ainsi, une protéase activatrice convenant à l'invention peut être choisie, par exemple, parmi les enzymes précitées. Un anticorps activateur convenant à la présente invention peut être d'un type tel que défini précédemment et obtenu par tout procédé connu de l'homme de l'art. 30 A titre d'exemple de sel de butyrate convenant à la présente invention, il peut être fait mention, de manière non limitative, du butyrate de sodium. 2904223 12 Il est entendu que l'ensemble des compositions cosmétiques ou pharmaceutiques considérées selon l'invention, mettent en oeuvre un milieu physiologique acceptable. Au sens de la présente invention, on entend désigner par milieu 5 physiologiquement acceptable , un milieu convenant à l'application d'une composition sur une matière kératinique, telle que la peau, le cuir chevelu, les lèvres, les muqueuses et les fibres kératiniques comme les cheveux, les ongles et les poils. L'invention concerne également l'utilisation d'au moins un polypeptide conforme à l'invention ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit 10 polypeptide, pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement et/ou à la prévention d'un trouble cutané ou du cuir chevelu. Au sens de la présente invention, on entend désigner par pharmaceutique une composition pouvant être mise en oeuvre dans le cadre d'un traitement prophylactique et/ou curatif, ou d'une méthode de diagnostic d'un trouble cutané ou du cuir chevelu. 15 Selon un autre mode de réalisation, une composition cosmétique ou pharmaceutique conforme à l'invention peut comprendre, en outre, au moins un agent actif cosmétique et/ou thérapeutique. Comme exemples d'agents actifs utilisables dans le cadre de la présente invention, il peut être fait mention d'huiles cosmétiques, telles que les huiles de silicone, 20 les huiles végétales de type triglycérides, les huiles hydrocarbonées telles que l'huile de parleam et les esters d'acides gras et d'alcool gras. Il peut également être possible d'utiliser d'actifs permettant d'améliorer l'état de la peau, tels que des actifs hydratants ou des agents actifs permettantd'améliorer la barrière lipidique naturelle, tels que des céramides, des sulfates de cholestérol et/ou des 25 acides gras et leurs mélanges. Il peut également être possible d'utiliser des enzymes ayant une activité sur la peau, telles que d'autres protéases que la CPA4, comme par exemple, et de manière non exhaustive, des lipases, des glycosidases, des amidases, des cérébrosidases et/ou des mélanases, et leurs mélanges. 30 Comme autres exemples d'agents actifs convenant à la mise en oeuvre de la présente invention figurent : des actifs analgésiques, des actifs anti-levures, des actifs antidermatites, des actifs anti-irritants, des actifs immunomodulateurs, des actifs pour le 2904223 13 traitement de la peau sèche, des actifs anti-transpirants, des actifs anti-psoriatiques, des actifs protecteurs contre les UV, des actifs anti-histaminiques, des actifs cicatrisants, des actifs auto-bronzants, des antioxydants tels que le thé vert ou des fractions actives de celui-ci, la glycérine, la laponite, la caféine, des huiles essentielles aromatiques, des 5 colorants, des actifs dépigmentants, des liporégulateurs, des actifs adoucissants, rafraîchissants, déodorants, insensibilisants, blanchissants, nourrissants, et leurs mélanges. Il est également possible de mentionner les agents actifs suivants : - des actifs diminuant la différenciation et/ou la prolifération et/ou la pigmentation cutanée tels que l'acide rétinoïque et ses isomères, le rétinol et ses esters, la 10 vitamine D et ses dérivés, les oestrogènes tels que l'oestradiol, l'acide kojique ou l'hydroquinone ; - des actifs antibactériens tels que le phosphate de clindamycine, l'érythromycine ou les antibiotiques de la classe des tétracyclines ; - des actifs antiparasitaires, en particulier le métronidazole, le 15 crotamiton ou les pyréthrinoïdes ; - des actifs antifongiques, en particulier les composés appartenant à la classe des imidazoles tels que l'éconazole, kétoconazole ou le miconazole ou leurs sels, les composés polyènes, tels que l'amphotéricine B, les composés de la famille des allylamines, tels que la terbinafine, ou encore l'octopirox ; 20 des actifs antiviraux tels que l'acyclovir ; des actifs anti-inflammatoires stéroïdiens, tels que l'hydrocortisone, le valérate de bétaméthasone ou le propionate de clobétasol, ou les agents anti-inflammatoires non-stéroïdiens comme par exemple l'ibuprofène et ses sels, le diclofénac et ses sels, l'acide acétylsalicylique, l'acétaminophène ou l'acide glycyrrhizique ; 25 - des actifs anesthésiques tels que le chlorhydrate de lidocaïne et ses dérivés ; - des actifs antiprurigineux comme la thénaldine, la triméprazine ou la cyproheptadine ; - des actifs kératolytiques tels que les acides a- et f3hydroxycarboxyliques ou f3-cétocarboxyliques, leurs sels, amides ou esters et plus particulièrement les hydroxyacides tels que l'acide glycolique, l'acide lactique, l'acide salicylique, l'acide citrique et de manière générale les acides de fruits, et l'acide n- 2904223 14 octanoyl-5-salicylique ; - des actifs anti-radicaux libres, tels que l'a-tocophérol ou ses esters, les superoxydes dismutases, certains chélatants de métaux ou l'acide ascorbique et ses esters ; 5 - des actifs antiséborrhéiques tels que la progestérone ; - des actifs antipelliculaires comme l'octopirox ou la pyrithione de zinc ; - des actifs antiacnéiques comme l'acide rétinoïque ou le peroxyde de benzoyle, l'octopirox, les acides aminés soufrés dextrogyres et lévogyres, leurs sels et 10 leurs dérivés N-acétylé tels que la N-acétylcystéine, - des actifs visant à prévenir le vieillissement de la peau et/ou à améliorer son état, et - leurs mélanges. D'une manière générale, toute composition de l'invention peut être appliquée 15 sur la peau (sur toute zone cutanée du corps) ou sur les muqueuses (buccale, jugale, gingivale, génitale, conjonctivale, ...). Pour une application topique sur la peau, une composition peut avoir la forme notamment de solutions aqueuses ou huileuses ou de dispersions du type lotion ou sérum, d'émulsions de consistance liquide ou semi-liquide du type lait, obtenues par dispersion 20 d'une phase grasse dans une phase aqueuse (H/E) ou inversement (E/H), de suspensions ou émulsions de consistance molle du type crème ou gel aqueux ou anhydres, ou encore de microcapsules ou microparticules, ou de dispersions vésiculaires de type ionique et/ou non ionique, de mousses, ou encore consisté en une préparation solide. Ces compositions sont préparées selon les méthodes usuelles. 25 Les quantités des différents constituants des compositions selon l'invention sont celles classiquement utilisées dans les domaines considérés. Dans le domaine de la cosmétique, une composition peut constituer notamment une crème de nettoyage, de protection, de traitement ou de soin pour le visage, pour le corps (par exemple crèmes de jour, crèmes de nuit, crèmes de démaquillage, 30 crèmes de fond de teint, crèmes anti-solaires), un fond de teint fluides, un lait de démaquillage, un lait corporel de protection ou de soin, un lait anti-solaire, une lotion, un gel ou une mousse pour le soin de la peau, comme une lotion de nettoyage : 2904223 15 une composition pour les soins du cuir chevelu, par exemple un shampoing. De façon connue, une composition cosmétique peut contenir également des adjuvants habituels dans le domaine cosmétique, tels que des gélifiants hydrophiles ou 5 lipophiles, des additifs hydrophiles ou lipophiles, des conservateurs, des antioxydants, des solvants, des parfums, des charges, des filtres, des absorbeurs d'odeurs et des matières colorantes. La quantité de composé chimique ou biologique ou de polypeptide ou de séquence d'acides nucléiques contenue dans une composition selon l'invention, encore 10 dite quantité efficace est, bien entendu, fonction de la nature du composé et de l'effet recherché et peut donc varier dans une large mesure. Au sens de la présente invention, on entend désigner par l'expression quantité efficace la quantité minimale nécessaire à l'observation de l'effet attendu, à savoir un effet cosmétique ou un effet thérapeutique, étant entendu que les quantités 15 efficaces nécessaires à l'obtention d'un effet cosmétique ou d'un effet thérapeutique peuvent être, le cas échéant, identiques ou différentes. Pour donner un ordre de grandeur, une composition peut contenir un composé chimique ou biologique ou un polypeptide en une quantité représentant de 0,00001 % à 50 % du poids total de la composition, en particulier en une quantité représentant de 20 0,001 % à 10 % du poids total de la composition, et plus particulièrement en une quantité représentant de 0,1 % à 1 % du poids total de la composition. Les troubles cutanés ou du cuir chevelu visés par la présente invention peuvent être des troubles liés à un dysfonctionnement de la prolifération et/ou de la différentiation 25 des cellules épidermiques telles que les kératinocytes, les mélanocytes, les cellules de Langerhans, les sébocytes et/ou les adipocytes. Ainsi, une composition cosmétique ou pharmaceutique conforme à la présente invention peut être plus particulièrement destinée au traitement d'un trouble cutané tel que le vieillissement cutané, un trouble de la réhydratation de la peau, une desquamation 30 anormale, un dérèglement de la mélanogénèse ou de la sébogenèse, une alopécie, l'hirsutisme, un trouble de la cicatrisation, une parakératose, une hyperkératose, une ichtyose, un psoriasis, un eczéma, une rosacée, un lichen, un prurit, une pathologie 2904223 16 cutanée ayant une composante inflammatoire ou résultant d'une altération de la réponse immunitaire ou impliquant des phénomènes de sécrétion et de processus d'invasion cellulaire, notamment dans le cadre de néoplasies malignes ou bénignes. Une composition conforme à l'invention peut également être utilisée à des fins 5 de gommage ou de peeling, de dépilation ou de traitement de la pousse ou de la chute modérée des cheveux ou des poils. D'une manière plus précise, une composition selon l'invention peut s'avérer intéressante dans les domaines suivants : - pour traiter des troubles cutanés liés à un désordre de la 10 kératinisation portant sur la différenciation, la prolifération et la migration cellulaire, notamment pour traiter les acnés vulgaires, comédoniennes, polymorphes, rosacées, les acnés nodulokystiques, conglobata, les acnés séniles, les acnés secondaires telles que l'acné solaire, médicamenteuse ou professionnelle, - pour traiter des troubles cutanés résultant ou impliquant des troubles 15 de la kératinisation, notamment les kératoses, les parakératoses, les ichtyoses, les état ichtyosiformes, la maladie de Darrier, les kératodermies palmoplantaires, les leucoplasies et les états leucoplasiformes, le lichen cutané ou muqueux (buccal), - pour traiter d'autres troubles cutanés liés à ou impliquant un trouble de la kératinisation avec une composante inflammatoire et/ou immuno-allergique et 20 notamment toutes les formes de psoriasis qu'il soit cutané, muqueux ou unguéal, et même le rhumatisme psoriatique, ou encore l'atopie cutanée telle que l'eczéma, ou l'urticaire ou encore l'hypertrophie gingivale ; les composés peuvent également être utilisés dans certaines affections inflammatoires ne présentant pas de trouble de la kératinisation, - pour traiter toutes les proliférations ou néoplasies dermiques ou 25 épidermiques qu'elles soient bénignes ou malignes, qu'elles soient ou non d'origine virale telles que verrues vulgaires, les verrues planes et l'épidermodysplasie verruciforme, les papillomatoses orales ou florides et les proliférations pouvant être induites par les ultra-violets notamment dans le cas des épithélioma baso- et spino-cellulaires, pour traiter d'autres troubles cutanés tels que les dermatoses 30 bulleuses et les maladies du collagène, - pour réparer ou lutter contre le vieillissement de la peau, qu'il soit photoinduit ou chronologique ou pour réduire les pigmentations et les kératoses 2904223 17 actiniques, ou toutes pathologies associées au vieillissement chronologique ou actinique, - pour prévenir ou guérir les stigmates de l'atrophie épidermique et/ou dermique induite par les corticostéroïdes locaux ou systématiques, ou toute autre forme d'atrophie cutanée, 5 - pour prévenir ou traiter les troubles de la cicatrisation ou pour prévenir ou pour réparer les vergetures, - pour lutter contre les troubles de la fonction sébacée tels que l'hyperséborrhée de l'acné ou la séborrhée simple, - pour conférer un aspect améliorer à la peau, notamment en 10 améliorant son hydratation, -pour traiter les troubles de l'alopécie, de la dépilation, de l'hypertrichose, de l'hirsutisme, et - pour éliminer les callosités. 15 Les troubles cutanés plus particulièrement visés par la présente invention sont ceux liés à un dysfonctionnement de la prolifération et/ou de la différentiation des kératinocytes. Selon un autre aspect, la présente invention concerne l'utilisation d'un 20 polypeptide conforme à l'invention, ou d'une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, à titre d'outil de criblage de composés biologiques ou chimiques susceptibles de moduler l'activité biologique et/ou l'expression dudit polypeptide, et en particulier de la carboxypeptidase A4, ou de ladite séquence d'acides nucléiques. En particulier la présente invention se rapporte à un procédé de criblage de 25 composés biologiques ou chimiques susceptibles de moduler l'activité biologique d'un polypeptide conforme à l'invention comprenant au moins les étapes consistant à : a) mettre en contact, avec au moins un composé chimique ou biologique à tester, au moins un polypeptide conforme à l'invention dans des conditions propices à une manifestation de son activité biologique, et 30 b) déterminer l'activité biologique dudit polypeptide. 2904223 18 Dans un tel procédé, l'activité biologique du polypeptide, en particulier l'activité carboxypeptidase, peut, par exemple, être déterminée par tout procédé connu de l'homme de l'art. Selon un mode de réalisation, l'activité biologique du polypeptide peut être 5 comparée à une valeur de référence. Une valeur de référence peut être obtenue en effectuant un procédé conforme à l'invention en absence de tout composé biologique ou chimique

à

tester. Selon un autre mode de réalisation, la détermination de la propriété d'un composé chimique ou biologique à moduler l'activité biologique d'un polypeptide 10 conforme à l'invention peut également être déterminée par détermination de la capacité dudit composé à moduler la liaison dudit polypeptide à un substrat. Selon un autre mode de réalisation, le criblage d'un composé biologique ou chimique susceptible de moduler l'activité d'un polypeptide conforme à l'invention peut se faire soit par mesure d'une interaction directe avec ledit polypeptide comme indiqué 15 précédemment, soit par mesure de l'activité biologique ou de l'expression d'une molécule cible appartenant aux voies de signalisation ou de métabolisme dans lesquelles peut être impliqué ledit polypeptide. Un procédé conforme à l'invention peut être effectué sur un échantillon cellulaire, obtenu soit d'une biopsie cutanée, soit à partir de cellules en culture, ou tout 20 autre méthode de prélèvement non invasive du stratum corneum, comme par exemple par stripping vernis ou au moyen d'un D'SquamTM commercialisé par la société Cuderm, ou sur un échantillon acellulaire, par exemple un lysat cellulaire. Avantageusement, à titre d'échantillon cellulaire, on peut mentionner les kératinocytes différenciées.

25 Avantageusement, un polypeptide mis en oeuvre dans un procédé selon la présente invention peut être la protéine CPA4. La présente invention concerne également un procédé de criblage de composés biologiques ou chimiques susceptibles de moduler l'expression d'un polypeptide conforme à l'invention comprenant au moins les étapes consistant à : 30 a) mettre en contact, avec au moins un composé chimique ou biologique à tester, au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour un polypeptide conforme à l'invention dans des conditions propices à l'expression de ladite séquence, et 2904223 19 b) déterminer l'expression de ladite séquence. L'expression d'une séquence d'acide nucléique peut être déterminée, par exemple, au moyen de sondes oligonucléotidiques, par des protocoles connus de l'homme de l'art.

5 L'expression d'une séquence d'acide nucléique conforme à l'invention peut être comparée à une valeur de référence obtenue, par exemple, en effectuant un procédé conforme à l'invention en absence de composé à tester. Selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne également 10 l'utilisation d'au moins un polypeptide conforme à l'invention, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, à titre d'outil d'évaluation d'un état de l'épiderme ou du cuir chevelu. En particulier, la présente invention concerne un procédé d'évaluation d'un état de l'épiderme comprenant au moins les étapes consistant à : 15 a) déterminer une teneur d'un polypeptide conforme à l'invention, ou d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, dans un échantillon d'épiderme, et b) comparer ladite teneur déterminée à l'étape a) à une valeur de référence. La comparaison effectuée à l'étape b) peut permettre de tirer une information concernant un éventuel trouble cutané.

20 Selon un mode de réalisation, un procédé selon l'invention peut être effectué sur un échantillon d'épiderme prélevé chez un individu. Un procédé selon l'invention peut également être effectué sur un échantillon d'épiderme prélevé sur une peau reconstruite afin d'en qualifier l'état. Un échantillon d'épiderme peut être prélevé par toute méthode connue de 25 l'homme de l'art, et notamment comme indiqué précédemment. Un procédé selon l'invention peut être effectué in vitro ou ex vivo. Une valeur de référence peut être, par exemple, une teneur en polypeptide ou en séquence d'acides nucléiques déterminée sur un échantillon d'épiderme prélevé sur une peau saine ou un épiderme reconstruit de référence.

30 L'expression peau saine doit s'entendre dans le sens habituellement utilisé par l'homme de l'art dans le domaine.

2904223 20 En particulier les troubles cutanés visés par la présente invention peuvent être ceux résultant d'une déficience ou d'une surexpression de la protéine CPA4. Un polypeptide convenant à la mise en oeuvre d'un procédé selon l'invention peut être avantageusement la protéine CPA4.

5 Une séquence d'acide nucléique convenant à la mise en oeuvre d'un procédé selon l'invention peut être avantageusement une séquence d'acides nucléiques codant pour la CPA4, par exemple de type ARNm. La détermination d'une teneur en polypeptide conforme à l'invention ou en acides nucléiques conforme à l'invention dans un échantillon d'épiderme peut être 10 effectuée par tout protocole connu de l'homme de l'art. A titre de méthodes de détection d'un polypeptide, il peut être fait mention du procédé ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay), du Western Blot, de l'immunoprécipitation ou de l' immunofluorescence. Ainsi, il peut être envisagé de détecter la présence d'un polypeptide conforme 15 à l'invention au moyen d'un anticorps, le cas échéant sous une forme marquée Un tel anticorps peut être tel que défini précédemment. Avantageusement, un tel anticorps peut être marqué au moyen d'une substance détectable directement ou détectable par réaction avec un autre réactif. A titre d'exemple de méthodes de détection d'acides nucléiques, il peut être 20 fait mention du Southern Blot, de RT-PCR, de NorthernBlot et de Q-PCR. A titre d'exemple d'agents convenant à la détection d'acides nucléiques, et en particulier d'ARNm, il peut être fait mention de sondes d'acides nucléiques marquées pouvant s'hybrider aux séquences d'acides nucléiques. Une telle sonde d'acide nucléique peut être aisément obtenue par toute 25 méthode connue de l'homme de l'art. Les séquences d'acides nucléiques conformes à l'invention peuvent ainsi être utilisées pour réaliser des amorces oligonucléotidiques sens et/ou antisens, qui s'hybrident dans des conditions de forte stringence à la séquence SEQ ID NO : 1, SEQ ID NO : 2, SEQ ID NO : 3, SEQ ID NO : 4, ou SEQ ID NO 5 ou un analogue de celle-ci.

30 Selon une variante de réalisation, la présente invention concerne un procédé d'évaluation d'un état d'un épiderme comprenant au moins les étapes consistant à : 2904223 21 a) déterminer une valeur de l'activité biologique d'un polypeptide conforme à l'invention dans un échantillon d'épiderme, et b) comparer ladite valeur déterminée à l'étape a) à une valeur de référence. La comparaison effectuée à l'étape b) peut permettre de tirer une information 5 indicative d'un éventuel trouble cutané. Avantageusement, l'activité biologique dont la valeur est déterminée peut être l'activité enzymatique de la carboxypeptidase A4. Toute méthode de mesure d'une activité enzymatique connue de l'homme de l'art peut être mise en oeuvre dans un procédé conforme à l'invention.

10 Par exemple, il peut être utilisé une méthode mettant en oeuvre une mesure de l'hydrolyse d'un substrat. Ainsi, un procédé d'évaluation d'un état d'un épiderme selon l'invention peut être mis en oeuvre dans un procédé de diagnostic d'un trouble cutané ou du cuir chevelu.

15 Selon un autre aspect, la présente invention se rapporte à un procédé de traitement cosmétique comprenant au moins une étape consistant à appliquer sur une partie au moins de la peau, des muqueuses et/ou des fibres kératiniques, au moins une composition cosmétique conforme à l'invention.

20 Selon un autre aspect, la présente invention concerne également un procédé, non thérapeutique, pour mettre en évidence un effet d'un traitement susceptible de faire régresser un trouble cutané ou du cuir chevelu chez un individu, comprenant au moins les étapes consistant à : a) effectuer, avant le traitement, au moins une première détermination, dans 25 un premier échantillon cutané ou du cuir chevelu prélevé chez ledit individu, d'une activité biologique et/ou de l'expression d'un polypeptide conforme à l'invention, ou d'une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, b) effectuer, après le traitement, au moins une seconde détermination, dans un second échantillon cutané ou du cuir chevelu prélevé chez ledit individu, de ladite activité 30 biologique et/ou de ladite expression dudit polypeptide ou de ladite séquence d'acides nucléiques déterminés à l'étape a), et c) comparer les première et deuxième déterminations, afin d'en déduire une 2904223 22 information relative à un effet au moins du traitement. En particulier, le traitement dont l'effet est à évaluer peut être un traitement destiné à un trouble cutané ou du cuir chevelu lié à un dysfonctionnement de la prolifération et/ou de la différenciation des kératinocytes.

5 L'activité biologique et l'expression d'un polypeptide peuvent être déterminées comme indiqué précédemment. La présente invention concerne également l'utilisation d'au moins un polypeptide conforme à l'invention, ou d'une séquence d'acides nucléiques codant pour 10 ledit polypeptide, pour la préparation d'une peau reconstruite isolée. En particulier la présente invention concerne un procédé de préparation d'une peau reconstruite isolée comprenant au moins l'étape consistant à mettre en contact au moins un polypeptide conforme à l'invention, ou une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, avec des cellules susceptibles de générer une peau reconstruite 15 isolée, et notamment des kératinocytes Au sens de la présente invention, un doit se comprendre, sauf indication contraire, au sens de au moins un . Les exemples figurant ci-après sont présentés à titre illustratif et non limitatif 20 de l'invention. FIGURES - Figure 1 : Gel obtenu selon l'exemple lA illustrant la détection par RT-PCR de l'expression de la CPA4 dans différents échantillons tissulaires (1 : cerveau ; 2 : colon ; 25 3 : oesophage ; 4 : coeur ; 5 : placenta ; 6 : peau ; 7 : petit intestin ; 8 : estomac ; 9 : langue) - Figure 2 : Gel obtenu selon l'exemple lB, illustrant la détection par RT-PCR de l'expression de la CPA4 à différents jours d'émersion (J1, J3, J8, J10, J13, J15 et J18) d'une peau reconstruite.

30 2904223 23 EXEMPLES Exemple I- Evaluation de l'expression de la carboxypeptidase A4 dans différents échantillons tissulaires A- Evaluation de l'expression de la carboxypeptidase A4 dans différents tissus 5 humains par RT-PCR (reverse transcriptase polymerase chain reaction) De l'ADNc humain de différents organes (cerveau, colon, oesophage, coeur, placenta, peau, petit intestin, estomac et langue) est obtenu auprès de Biochain (C 8234501 et C 8234502 DNA panel human tissue). La concentration en ADN a été ajustée à 2,5 g/ml.

10 Des amorces spécifiques de la CPA4 ont été synthétisées à façon (SC258 : 5' TGTTGCCTGTGGCCAA 3' (SEQ ID NO 14) et SC259 : 5' AGCCATAGGTCCCGGTA 3' (SEQ ID NO 15), par la société PROLIGO). Chaque PCR est réalisée selon le protocole suivant : 1 l ADNc + 5 l tampon 10X + 1 l dATP à 10 M+ 1 pi de chaque amorce à 50 M + 1 l de TAQ polymérase 15 ACCU + 40 pi d'eau. La température d'hybridation des amorces a été fixée à 45 C. Les températures de séparation des brins et d'élongation ont été fixées à 94 C et 72 C. Chaque produit de PCR a été analysé sur gel d'agarose à 1 % en diluant un aliquot de PCR avec du tampon de charge.

20 Le gel est ensuite visualisé sous une lampe UV (Gel Doc, Biorad), après marquage au moyen d'un marqueur fluorescent d'acide nucléique GelStar (Tebu-Bio, réf.

50535 BMA). Les résultats de la figure lA révèlent que l'ARNm de la CPA4 n'est pas exprimé dans le colon, le coeur, le placenta, le petit intestin, l'estomac et la langue. Par 25 contre, une forte expression de l'ARNm est observée dans la peau et de façon moindre dans l'oesophage. B- Evaluation de l'expression de la CPA4 au cours de la reconstruction épidermique par RT-PCR 30 L'ADNc d'épiderme est obtenu après extraction de l'ARNn de kératinocytes en culture à différents jours d'émersion (de Jl à J18) à l'aide des kits RNeasy (Qiagen) et FirstStrand cDNA synthesis (Amersham Pharmacia Biotech).

2904223 24 Les conditions de PCR sont celles décrites à l'exemple lA. La figure lB met en évidence l'expression de l'ARNn de la CPA4 sur des extraits d'ADN de kératinocytes à différents stades de différenciation. Une bande de 490 pb est amplifiée par le couple d'amorces SC258/SC259 5 (SEQ ID NO 13 et SEQ ID NO 14). La séquence de cet amplicon a été confirmée. La perte du signal à partir de J13 pourrait correspondre à un début de dégénération des kératinocytes survivants de moins en moins nombreux. L'induction de l'expression de la carboxypeptidase visible de J1 à J3 pourrait 10 être concomitante au début de stratification des kératinocytes et impliquer la CPA4 dans le phénomène de migration de ces cellules. Exemple IIPréparation d'anticorps spécifiques de la carboxypeptidase 4 Les séquences peptides immunogènes suivantes de la carboxypeptidase A4 ont 15 été identifiées. CBP4-I (SEQ ID NO 11) ED DEM QHN EGQ ERS CBP4-II (SEQ ID NO 12) NI AAD FPD LAR RVK CBP4-III (SEQ ID NO 13) YS VKK APD AEE LDK Une cystéine a été rajoutée en N-terminal des peptides naturels afin de 20 favoriser le couplage sur l'adjuvant immunogène. Ainsi, les peptides synthétisés ont été couplés sur l'hémocyanine de la patelle (Keyhole Limpet Hemocyanine, KLH). Deux lapins ont été immunisés par administration des peptides ainsi préparés. Les anticorps ont été immuno-purifiés après prélèvement à J74.

25 Les anticorps obtenus ont été utilisés pour marquer des coupes de follicules pileux. Le protocole de marquage a été effectué comme suit. L'échantillon tissulaire a été placé dans une cuvette de Coplin, et fixé pendant 10 minutes dans de l'acétone à û 20 C.

30 Puis l'échantillon est successivement rincé par un tampon PBS pendant 15 minutes, puis un tampon PBS-lait 1 % pendant 15 minutes, puis un tampon PBS-tween 0,05 %.

2904223 25 Les anticorps primaires ont ensuite été incubés avec les échantillons pendant 30 minutes à température ambiante. L'anticorps anti-CBP4 II a été dilué au 1/50 et l'anticorps anti-CBP4 III a été dilué au 1/10 dans un tampon PBS-tween 0,05 % et sérum de chèvre à 10 %.

5 Les échantillons ont été rincés trois fois par un tampon PBS-tween 0,05 %, puis incubés en présence d'un anticorps secondaire de chèvre anti-lapin couplé FITC (fluoroisothiocyanate) dilué au 1/80 dans du PBS-tween 0,05 % pendant 30 minutes à température ambiante. Puis les échantillons ont été lavés trois fois avec un tampon PBS-tween.

10 Les résultats, validés par observation en microscopie par fluorescence, indiquent la présence de CPA4 au niveau du follicule pileux.

15 20 25 30 2904223 26 LISTE DE SEQUENCES SEQ ID NO 1 5 1 ccactgtatg actgactccc cggggacatg aggtggatac tgttcattgg 51 ggcccttatt gggtccagca tctgtggcca agaaaaattt tttggggacc 101 aagttttgag gattaatgtc agaaatggag acgagatcag caaattgagt 151 caactagtga attcaaacaa cttgaagctc aatttctgga aatctccctc 10 201 ctccttcaat cggcctgtgg atgtcctggt cccatctgtc agtctgcagg 251 catttaaatc cttcctgaga tcccagggct tagagtacgc agtgacaatt 301 gaggacctgc aggccctttt agacaatgaa gatgatgaaa tgcaacacaa 351 tgaagggcaa gaacggagca gtaataactt caactacggg gcttaccatt 401 ccctggaagc tatttaccac gagatggaca acattgccgc agactttcct 15 451 gacctggcga ggagggtgaa gattggacat tcgtttgaaa accggccgat 501 gtatgtactg aagttcagcactgggaaagg cgtgaggcgg ccggccgttt 551 ggctgaatgc aggcatccat tcccgagagt ggatctccca ggccactgca 601 atctggacgg caaggaagat tgtatctgat taccagaggg atccagctat 651 cacctccatc ttggagaaaa tggatatttt cttgttgcct gtggccaatc 20 701 ctgatggata tgtgtatact caaactcaaa accgattatggaggaagacg 751 cggtcccgaa atcctggaag ctcctgcatt ggtgctgacc caaatagaaa 801 ctggaacgct agttttgcag gaaagggagc cagcgacaac ccttgctccg 851 aagtgtacca tggaccccac gccaattcgg aagtggaggt gaaatcagtg 901 gtagatttca tccaaaaaca tgggaatttc aagggcttca tcgacctgca 25 951 cagctactcg cagctgctga tgtatccata tgggtactca gtcaaaaagg 1001 ccccagatgc cgaggaactc gacaaggtgg cgaggcttgc ggccaaagct 1051 ctggcttctg tgtcgggcac tgagtaccaa gtgggtccca cctgcaccac 1101 tgtctatcca gctagcggga gcagcatcga ctgggcgtat gacaacggca 1151 tcaaatttgc attcacattt gagttgagag ataccgggac ctatggcttc 30 1201 ctcctgccag ctaaccagat catccccact gcagaggaga cgtggctggg 1251 gctgaagacc atcatggagc atgtgcggga caacctctac taggcgatgg 1301 ctctgctctg tctacattta tttgtaccca cacgtgcacg cactgaggcc 1351 attgttaaag gagctctttc ctacctgtgt gagtcagagc cctctgggtt 1401 tgtggagcac acaggcctgc ccctctccag ccagctccct ggagtcgtgt 1451 gtcctggcgg tgtccctgca agaactggtt ctgccagcct gctcaatttt 1501 ggtcctgctg tttttgatga gccttttgtc tgtttctcct tccaccctgc 1551 tggctgggcg gctgcactca gcatcacccc ttcctgggtg gcatgtctct 1601 ctctacctca tttttagaac caaagaacat ctgagatgat tctctaccct 1651 catccacatc tagccaagcc agtgaccttg ctctggtggc actgtgggag 1701 acaccacttg tctttaggtg ggtctcaaag atgatgtaga atttccttta 1751 atttctcgca gtcttcctgg aaaatatttt cctttgagca gcaaatcttg 1801 tagggatatc agtgaaggtc tctccctccc tcctctcctg tttttttttt 1851 tttgagacag agttttgctc ttgttgccca ggctggagtg tgatggctcg 1901 atcttggctc accacaacct ctgcctcctg ggttcaagca attctcctgc 1951 ctcagcctct tgagtagctt ggtttatagg cgcatgccac catgcctggc 2001 taattttgtg tttttagtag agacagggtt tctccatgtt ggtcaggctg 2051 gtctcaaact cccaacctca ggtgatctgc cctccttggc ctcccagagt 2101 gctgggatta caggtgtgag ccactgtgcc gggcccgtcc cctccttttt 2151 taggcctgaa tacaaagtag aagatcactt tccttcactg tgctgagaat 2904223 27 2201 ttctagatac tacagttctt actcctctct tccctttgtt attcagtgtg 2251 accaggatgg cgggagggga tctgtgtcac tgtaggtact gtgcccagga 2301 aggctgggtg aagtgaccat ctaaattgca ggatggtgaa attatcccca 2351 tctgtcctaa tgggcttacc tcctctttgc cttttgaact cacttcaaag 5 2401 atctaggcct catcttacag gtcctaaatc actcatctgg cctggataat 2451 ctcactgccc tggcacattc ccatttgtgc tgtggtgtat cctgtgtttc 2501 cttgtcctgg tttgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg 2551 tgtttgtgtg tgtgtgtctg tctattttgt atcctggacc acaagttcct 2601 aagtagagca agaattcatc aaccagctgc ctcttgtttc atttcacctc 10 2651 agcacgtacc atctgtcctt ttgttgttgt tttgtttttg tttttttgct 2701 tttaccaaac atgtctgtaa atcttaacct cctgcctagg atttgtacag 2751 catctggtgt gtgcttataa gccaataaat attcaatgtg aaaaaaaaaa 2801 aaaaaaa 15 SEQ ID NO 2 1 atgaggtgga tactgttcat tggggccctt attgggtcca gcatctgtgg 51 ccaagaaaaa ttttttgggg accaagtttt gaggattaat gtcagaaatg 20 101 gagacgagat cagcaaattg agtcaactag tgaattcaaa caacttgaag 151 ctcaatttct ggaaatctcc ctcctccttc aatcggcctg tggatgtcct 201 ggtcccatct gtcagtctgc aggcatttaa atccttcctg agatcccagg 251 gcttagagta cgcagtgaca attgaggacc tgcaggccct tttagacaat 301 gaagatgatg aaatgcaaca caatgaaggg caagaacgga gcagtaataa 25 351 cttcaactac ggggcttacc attccctgga agctatttac cacgagatgg 401 acaacattgc cgcagacttt cctgacctgg cgaggagggt gaagattgga 451 cattcgtttg aaaaccggcc gatgtatgta ctgaagttca gcactgggaa 501 aggcgtgagg cggccggccg tttggctgaa tgcaggcatc cattcccgag 551 agtggatctc ccaggccact gcaatctgga cggcaaggaa gattgtatct 30 601 gattaccaga gggatccagc tatcacctcc atcttggaga aaatggatat 651 tttcttgttg cctgtggcca atcctgatgg atatgtgtat actcaaactc 701 aaaaccgatt atggaggaag acgcggtccc gaaatcctgg aagctcctgc 751 attggtgctg acccaaatag aaactggaac gctagttttg caggaaaggg 801 agccagcgac aacccttgct ccgaagtgta ccatggaccc cacgccaatt 35 851 cggaagtgga ggtgaaatca gtggtagatt tcatccaaaa acatgggaat 901 ttcaagggct tcatcgacct gcacagctac tcgcagctgc tgatgtatcc 951 atatgggtac tcagtcaaaa aggccccaga tgccgaggaa ctcgacaagg 1001 tggcgaggct tgcggccaaa gctctggctt ctgtgtcggg cactgagtac 1051 caagtgggtc ccacctgcac cactgtctat ccagctagcg ggagcagcat 40 1101 cgactgggcg tatgacaacg gcatcaaatt tgcattcaca tttgagttga 1151 gagataccgg gacctatggc ttcctcctgc cagctaacca gatcatcccc 1201 actgcagagg agacgtggct ggggctgaag accatcatgg agcatgtgcg 1251 ggacaacctc tactag 45 SEQ ID NO 3 1 ggccaagaaa aattttttgg ggaccaagtt ttgaggatta atgtcagaaa 51 tggagacgag atcagcaaat tgagtcaact agtgaattca aacaacttga S oNI QI (Ms bq-poq-poopb p-ebgobbbbq obbgbo-eb-eb b-eb- eobgopo 000q-poq-ebp bbogbgbqoq gobbgoqabp ppoobbobgq obb-ebobbgb b-epo-ebogop bgob-eabogo -egob-popobq oo-eboq-pogq obbb-epoggq p-ebbbq-popp oo-ebbq-poop gbgb-e-ebooq obgg000ppo pbobpoabpb bbpppbbiab -egbgbq-eq-eb bq-ebgooq-ep oobbgbgoob ggbqqoqqqq -eq-ebbgpp-ep q-pobb-eobTe -ebgobbgqqb oobboobbob b-ebgbobb-ep -ebbbgopobp bbb-ebb-ebob bgoopbgooq qqo-eb-eoboo bqq-poppopb bq-eb-ebopoo T06 St Tg8 T08 TSL TOL TS9 017 T09 TSS TOS IS~ T0 S Tg8 T08 TSZ TOZ TST 0 TOT Tg T 17 ONI QI (MS SZ bgbq-pob-ebb q-poq-poopbp -ebgobbbbgo bbgbo-eb-ebb -eb-eobgopoo ooq-poq-eb-eo oppgab-piab googooqqob bq-egoo-ebbb oo-eq-eb-eb-eb qb-ebgopobb bogbgbqoqq obbgogab-ep poobbabggo bb-ebobbgbb b-ep-ebb-eabq ggqbpqabop -ebbgopp-ebp gppp000pbq obgbbgq-pob q-egbgq-eb-ep bbppobbopb bgogppobqo poobb-p000q oq-ebbgb-ebp b000gq-pooq pobb-eobgpp bgobbgqqbo obboobbobb pbgbobb-epp bqq-eb-e-ebgb bb-ebb-ebobb goopbgooqq qo-eb-eoboob qq-poppo-ebb po-eb-eggqqo oobb-eobgoo -ebb-ebggppo pbgb-eobo-eq b-eb-eggabbb 8Z TOIT TSTT TOIT ISOI OZ IOOI IS6 T06 Tg8 T08 SI ISL IOL IS9 T09 ISS 01 IOS IS~ I0 Tg8 T08 S ISZ IOZ ISI TOT ZZtO6Z 2904223 29 5 1 ggccaagaaa aattttttgg ggaccaagtt ttgaggatta atgtcagaaa 51 tggagacgag atcagcaaat tgagtcaact agtgaattca aacaacttga 101 agctcaattt ctggaaatct ccctcctcct tcaatcggcc tgtggatgtc 151 ctggtcccat ctgtcagtct gcaggcattt aaatccttcc tgagatccca 10 201 gggcttagag tacgcagtga caattgagga cctgcaggcc cttttagaca 251 atgaagatga tgaaatgcaa cacaatgaag ggcaagaacg g SEQ ID NO 6 (préproprotéine) 15 1 MRWILFIGAL IGSSICGQEK FFGDQVLRIN VRNGDEISKL SQLVNSNNLK 51 LNFWKSPSSF NRPVDVLVPS VSLQAFKSFL RSQGLEYAVT IEDLQALLDN 101 EDDEMQHNEG QERSSNNFNY GAYHSLEAIY HEMDNIAADF PDLARRVKIG 151 HSFENRPMYV LKFSTGKGVR RPAVWLNAGI HSREWISQAT AIWTARKIVS 20 201 DYQRDPAITS ILEKMDIFLL PVANPDGYVY TQTQNRLWRK TRSRNPGSSC 251 IGADPNRNWN ASFAGKGASD NPCSEVYHGP HANSEVEVKS VVDFIQKHGN 301 FKGFIDLHSY SQLLMYPYGY SVKKAPDAEE LDKVARLAAK ALASVSGTEY 351 QVGPTCTTVY PASGSSIDWA YDNGIKFAFT FELRDTGTYG FLLPANQIIP 401 TAEETWLGLK TIMEHVRDNL Y 25 SEQ ID NO 7 (proprotéine) ISKLSQLVNS NNLKLNFWKS PSSFNRPVDV 1 GQEKFFGDQV LRINVRNGDE 30 51 LVPSVSLQAF KSFLRSQGLE YAVTIEDLQA LLDNEDDEMQ HNEGQERSSN 101 NFNYGAYHSL EAIYHEMDNI AADFPDLARR VKIGHSFENR PMYVLKFSTG 151 KGVRRPAVWL NAGIHSREWI SQATAIWTAR KIVSDYQRDP AITSILEKMD 201 IFLLPVANPD GYVYTQTQNR LWRKTRSRNP GSSCIGADPN RNWNASFAGK 251 GASDNPCSEV YHGPHANSEV EVKSVVDFIQ KHGNFKGFID LHSYSQLLMY 301 PYGYSVKKAP DAEELDKVAR LAAKALASVS GTEYQVGPTC TTVYPASGSS 351 IDWAYDNGIK FAFTFELRDT GTYGFLLPAN QIIPTAEETW LGLKTIMEHV 401 RDNLY 35 SEQ ID NO 8 (protéine) 1 SSNNFNYGAY HSLEAIYHEM DNIAADFPDL ARRVKIGHSF ENRPMYVLKF 51 STGKGVRRPA VWLNAGIHSR EWISQATAIW TARKIVSDYQ RDPAITSILE 40 101 KMDIFLLPVA NPDGYVYTQT QNRLWRKTRS RNPGSSCIGA DPNRNWNASF 151 AGKGASDNPC SEVYHGPHAN SEVEVKSVVD FIQKHGNFKG FIDLHSYSQL 201 LMYPYGYSVK KAPDAEELDK VARLAAKALA SVSGTEYQVG PTCTTVYPAS 251 GSSIDWAYDN GIKFAFTFEL RDTGTYGFLL PANQIIPTAE ETWLGLKTIM 301 EHVRDNLY 45 SEQ ID NO 9 (peptide signal) 1 MRWILFIGAL IGSSIC 10 15 20 25 30 2904223 SEQ ID NO 10 (propeptide) 5 1 GQEKFFGDQV LRINVRNGDE ISKLSQLVNS NNLKLNFWKS PSSFNRPVDV 51 LVPSVSLQAF KSFLRSQGLE YAVTIEDLQA LLDNEDDEMQ HNEGQER SEQ ID NO 11 1 ED DEM QHN EGQ ERS SEQ ID NO 12 1 NI AAD FPD LAR RVK SEQ ID NO 13 1 YS VKK APD AEE LDK SEQ ID NO 14 TGTTGCCTGTGGCCAA SEQ ID NO 15 AGCCATAGGTCCCGGTA 30

Claims (22)

REVENDICATIONS

1. Composition cosmétique ou pharmaceutique, comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un polypeptide de séquence d'acides aminés codée par une séquence d'acides nucléiques représentée en tout ou partie par une séquence choisie parmi SEQ ID NO 1, des analogues de celle-ci, ou un fragment de celle-ci.

2. Composition selon la revendication précédente, dans laquelle ledit polypeptide a une séquence d'acides aminées codée par une séquence d'acides nucléiques représentée en tout ou partie par une séquence choisie parmi SEQ ID NO 1, SEQ ID NO 2, SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 4, ou SEQ ID NO 5 ou un analogue de celle-ci.

3. Composition selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle ledit polypeptide a une séquence d'acides aminés représentée en tout ou partie par une séquence choisie parmi SEQ ID NO 6, SEQ ID NO 7, SEQ ID NO 8, SEQ ID NO 10, SEQ ID NO 11, SEQ ID NO 12, ou SEQ ID NO 13 ou un analogue de celle-ci.

4. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle ledit polypeptide est fusionné avec un autre polypeptide, un agent de criblage hydrophile ou hydrophobe, un précurseur de bioconversion, un agent de marquage luminescent ou radioactif.

5. Composition cosmétique ou pharmaceutique, comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour une polypeptide tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, ou une séquence sens, anti-sens ou interférentielle correspondant à ladite séquence.

6. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, comprenant en outre au moins un agent actif cosmétique et/ou thérapeutique.

7. Utilisation d'au moins un polypeptide tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques, codant pour le polypeptide, pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement et/ou à la prévention d'un trouble cutané ou du cuir chevelu.

8. Utilisation d'au moins un composé chimique ou biologique apte à moduler l'activité biologique et/ou l'expression d'au moins un polypeptide tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, pour la préparation d'une composition 2904223 32 cosmétique ou pharmaceutique destinée au traitement et/ou à la prévention d'un trouble cutané ou du cuir chevelu.

9. Utilisation selon la revendication précédente, dans laquelle ledit composé est un inhibiteur de l'activité biologique et/ou de l'expression dudit polypeptide. 5

10. Utilisation selon la revendication précédente, dans laquelle ledit inhibiteur est choisi parmi une protéase, la latéxine et ses analogues, l'héparine et ses dérivés, l'héparane sulfate et ses dérivés, un anticorps, un polypeptide de séquence d'acides aminés représentée en tout ou partie par la séquence SEQ ID NO 10 ou un analogue de celle-ci.

11. Utilisation selon la revendication 8, dans laquelle ledit composé est un 10 activateur de l'activité biologique et/ou de l'expression dudit polypeptide.

12. Utilisation selon la revendication précédente, dans laquelle l'activateur est choisi parmi une protéase, un anticorps, un inhibiteur d'histone déacétylase.

13. Utilisation selon la revendication précédente, dans laquelle la protéase est choisie parmi la thrombine, la trypsine, les kallikréines 1 et 2, la furine, les proprotéines 15 convertases 1, 2, 4, 5 et 7, ADAM 17, la stromélysine, et la yapsine.

14. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 7 à 13, dans laquelle le trouble cutané est un trouble lié au dysfonctionnement de la différenciation et/ou de la prolifération de cellules épidermiques, et notamment des kératinocytes.

15. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 7 à 14, dans laquelle 20 le trouble cutané est un vieillissement cutané, un trouble de la réhydratation de la peau, une desquamation anormale, un dérèglement de la mélanogénèse ou de la sébogénèse, une ichtyose, un psoriasis, un eczéma, une rosacée, un lichen, un prurit, une alopécie, l'hirsutisme, un trouble de la cicatrisation, une hyperkératose, une parakératose, une pathologie cutanée ayant une composante inflammatoire, ou résultant d'une altération de 25 la réponse immunitaire ou impliquant des phénomènes de sécrétion et de processus d'invasion cellulaire.

16. Utilisation d'au moins un polypeptide tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, à titre d'outil de criblage de composés biologiques ou 30 chimiques susceptibles de moduler l'activité biologique et/ou l'expression dudit polypeptide ou de ladite séquence d'acides nucléiques. 2904223 33

17. Utilisation d'au moins un polypeptide tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, à titre d'outil d'évaluation d'un état de l'épiderme ou du cuir chevelu. 5

18. Utilisation selon la revendication précédente, dans laquelle l'état de l'épiderme est indicatif d'un trouble cutané lié au dysfonctionnement de la différenciation et/ou de la prolifération de cellules épidermiques, et notamment de kératinocytes.

19. Utilisation d'au moins un polypeptide tel que défini selon l'une quelconque des revendication 1 à 4, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques 10 codant pour ledit polypeptide, pour la préparation d'une peau reconstruite isolée.

20. Procédé de préparation d'une peau reconstruite isolée comprenant au moins l'étape consistant à mettre en contact au moins un polypeptide tel que défini selon l'une quelconque des revendication 1 à 4, ou d'une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, avec des cellules susceptibles de générer une peau reconstruite 15 isolée, et notamment des kératinocytes.

21. Procédé, non thérapeutique, pour mettre en évidence un effet d'un traitement susceptible de faire régresser un trouble cutané ou du cuir chevelu chez un individu, comprenant au moins les étapes consistant à : a) effectuer, avant le traitement, au moins une première détermination, dans 20 un premier échantillon cutané ou du cuir chevelu prélevé chez ledit individu, d'une activité biologique et/ou de l'expression d'un polypeptide tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, ou d'une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, b) effectuer, après le traitement, au moins une seconde détermination, dans un 25 second échantillon cutané ou du cuir chevelu prélevé chez ledit individu, de ladite activité biologique et/ou de ladite expression dudit polypeptide ou de ladite séquence d'acides nucléiques déterminés à l'étape a), et c) comparer les première et deuxième déterminations, notamment afin d'en déduire une information relative à un effet au moins du traitement. 30

22. Procédé de traitement cosmétique, comprenant au moins une étape consistant à appliquer au moins sur une partie de la peau, des muqueuses, et/ou des fibres 2904223 34 kératiniques, au moins une composition cosmétique telle que définie selon l'une quelconque des revendications 1 à 6.