FR2938768A1 - Utilisation cosmetique d'un extrait de pichia pour restructurer la peau, principe actif, procede d'obtention et compositions - Google Patents
Utilisation cosmetique d'un extrait de pichia pour restructurer la peau, principe actif, procede d'obtention et compositions Download PDFInfo
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Abstract
L'objet de l'invention est l'utilisation d'un extrait issu d'au moins une levure appartenant au genre Pichia, présentant une teneur en mannanes d'au moins 30% du poids total de l'extrait sec, en tant que principe actif dans une composition cosmétique, pour restructurer la peau. L'invention concerne également des compositions cosmétiques incluant un principe actif issu de Pichia, un principe actif issu de Pichia et son procédé d'obtention.
Description
UTILISATION COSMETIQUE D'UN EXTRAIT DE PICHIA POUR RESTRUCTURER LA PEAU, PRINCIPE ACTIF, PROCEDE D'OBTENTION ET COMPOSITIONS
La présente invention concerne l'utilisation cosmétique d'un extrait issu de Pichia pour restructurer la peau. L'invention se rapporte également à un principe actif issu de Pichia, à un procédé d'obtention ainsi qu'à des compositions restructurantes comprenant un principe actif issu de Pichia. La peau est un organe complexe qui couvre la surface totale du corps et exerce de nombreuses fonctions vitales. Elle est organisée en trois couches principales l'épiderme, le derme et l'hypoderme. L'épiderme comprend en surface la couche la plus externe de la peau nommée stratum corneum.
Le stratum corneum, constitué de kératinocytes kératinisés appelés cornéocytes entourés de membranes lipidiques lamellaires, est essentiel car il protège des agressions physiques et chimiques, et joue un rôle de barrière pour réguler la perte en eau et la pénétration des xénobiotiques. En plus de cette fonction barrière cutanée, la stratum corneum assure également une protection mécanique importante. Or, avec l'âge ou lorsque la peau est agressée, la fonction barrière cutanée est affectée, et l'équilibre et l'aspect de la peau sont menacés. Il est établi depuis plusieurs années que les lipides du Stratum corneum jouent un rôle essentiel dans la fonction barrière de la peau. C'est pourquoi pour restructurer la barrière cutanée, des principes actifs capables de favoriser la synthèse des lipides épidermiques ont été proposés.
Toutefois les principes actifs connus ne sont pas toujours satisfaisants et il subsiste un besoin pour un produit cosmétique efficace capable de renforcer ou normaliser la barrière cutanée qui a perdu son intégrité. Pour répondre à cette problématique, la présente invention vise à utiliser au moins un extrait riche en mannanes issu d'au moins une levure du genre Pichia en tant que principe actif dans une composition cosmétique restructurante. En effet, de façon surprenante, les extraits de levures du genre Pichia, riches en mannanes, présentent des propriétés remarquables qui permettent de restructurer efficacement le ciment lipidique du stratum corneum en agissant sur l'ensemble des étapes impliquées dans sa formation, et par conséquent de renforcer l'intégrité de la fonction barrière. L'invention vise également un principe actif cosmétique restructurant, obtenu à partir d'au moins une levure appartenant au genre Pichia riche en mannanes, un procédé d'obtention de ce principe actif ainsi que des compositions cosmétiques incluant au moins un tel principe actif. Par restructurant ou restructurer on entend renforcer ou renormaliser la barrière cutanée. Les mannanes sont des polyosides composés exclusivement de monomères de mannose, linéaires ou ramifiés.
Les principes actifs issus de Pichia selon l'invention peuvent être obtenus par un procédé comprenant au moins une étape d'hydrolyse enzymatique des protéines. De manière préférentielle, les compositions cosmétiques selon l'invention contiennent 0,01 à 20% d'un extrait riche en mannanes issus de Pichia. L'administration d'une composition contenant un extrait de Pichia selon l'invention est effectuée par voie topique. Les compositions selon l'invention peuvent se présenter sous toutes formes permettant l'application par voie topique. La présente invention est maintenant décrite en détail.
UTILISATION Selon un premier aspect l'invention vise donc l'utilisation d'un extrait issu d'au moins une levure appartenant au genre Pichia, présentant une teneur en mannanes d'au moins 30% du poids total de l'extrait sec, préférentiellement d'au moins 50%, en tant que principe actif dans une composition cosmétique, pour restructurer la peau. De façon préférée il s'agit d'un extrait de Pichia anomala. En particulier l'invention a pour objet l'utilisation d'un extrait issu d'au moins une levure appartenant au genre Pichia en tant que principe actif dans une composition cosmétique pour stimuler l'ensemble du flux de lipides épidermiques, permettant ainsi de maintenir ou de reformer le ciment lipidique lamellaire qui joue un rôle prépondérant dans la perméabilité de la barrière cutanée. Les lipides lamellaires des membranes des cornéocytes du Stratum corneum jouent un rôle primordial dans la structure de l'épiderme et dans ses fonctions. Ils cimentent les cornéocytes et forment avec eux la barrière perméable de l'épiderme. Leur composition particulière (céramides, cholestérol et acides gras libres à longues chaînes) et leur arrangement en bi-couches lamellaires au sein de l'espace intercornéocytaire conditionnent la fonctionnalité de la fonction barrière cutanée. Le processus de synthèse, de transport, de sécrétion et de maturation des lipides épidermiques est un équilibre dynamique permettant de garantir l'homéostasie de la fonction barrière. La production des corps lamellaires, qui déversent leur contenu lipidique dans les espaces intercellulaires, assure la régénération continue du ciment lipidique de la barrière cutanée et répond également aux altérations pouvant l'endommager.
La dynamique du flux lipidique épidermique repose sur plusieurs étapes. Les lipides sont tout d'abord néo-synthétisés par les cellules épidermiques sous la forme de précurseurs polaires formés dans l'appareil de Golgi des kératinocytes granuleux. Ils sont soit néo-synthétisés, soit dérivés d'acides gras d'origine extra-cutanée. Afin d'internaliser ces acides gras exogènes, les kératinocytes sont dotés de protéines membranaires spécialisées, les FATPs ( Fatty Acid Transporter Proteins , Protéine transporteur d'acides gras), leur permettant de transloquer les lipides à travers leur membrane plasmidique. Le recrutement des acides gras est directement corrélé avec le taux d'expression de FATP. Selon l'invention, un extrait de Pichia riche en mannanes peut être utilisé pour stimuler l'expression des FATPs, en particulier des FATP-3 impliqués dans l'internalisation des lipides exogènes dans les kératinocytes, et ainsi augmenter le recrutement des lipides exogènes au sein des kératinocytes. Les précurseurs lipidiques polaires, une fois synthétisés, sont ensuite stockés dans les corps lamellaires, petits organites sécrétoires issus de l'appareil de Golgi. Ces corps lamellaires, composés majoritairement de glucosylcéramides, assurent le trafic des lipides au sein des kératinocytes, processus complexe qui nécessite plusieurs étapes : la néo-synthèse des céramides à partir d'acides gras et de sérine, la glucosylation des céramides pour former des précurseurs, les glucosylcéramides, et le transfert des précurseurs lipidiques au sein des corps lamellaires et leur sécrétion. La conversion des céramides en glucosylcéramides est effectuée au niveau de l'appareil de Golgi grâce à la glucosylcéramide synthase. L'activité de la glucosylcéramide synthase augmente lors de la différenciation des kératinocytes et régule la production et la compartimentation spécialisées des sphingolipides. Les glucosylcéramides sont les précurseurs de plus de 60% des céramides épidermiques totaux. La formation transitoire de glucosylcéramides conditionne aussi la formation des corps lamellaires, le métabolisme des céramides ainsi que leur arrangement ordonné au sein de la matrice lipidique. Une déficience en glucosylcéramide synthase induit une altération de la synthèse des glucosylcéramides et aboutit à une rupture de la fonction barrière.
Selon l'invention, un extrait de Pichia riche en mannanes peut être utilisé pour stimuler l'expression de la glucosylcéramide synthase impliquée dans la synthèse des glucosylcéramides, précurseur majoritaires des céramides. Le transfert des précurseurs lipidiques dans les corps lamellaires est assuré par des protéines ABCAl2. Les protéines ABCAl2 sont exprimées dans l'épiderme au niveau des cellules granuleuses sur la membrane des corps lamellaires. Elles jouent un rôle important dans la formation de la couche cornée car elles sont impliquées à la fois dans la régulation du trafic intracellulaire des lipides précurseurs et dans leur sécrétion. Les corps lamellaires possédant des protéines ABCAl2 sur leur membrane fusionnent en effet avec la membrane plasmique apicale des kératinocytes et libèrent leur contenu dans l'espace intercellulaire. Il a été montré qu'une mutation du gène ABCAl2 altérait le transport et la sécrétion des lipides bloquant la dynamique du flux lipidique permettant de maintenir le ciment lipidique de la fonction barrière.
Selon l'invention, un extrait de Pichia riche en mannanes peut être utilisé pour stimuler l'expression des protéines ABCAl2 impliquées dans la formation des corps lamellaires et dans la sécrétion de leur contenu. Après avoir été sécrétés, les précurseurs lipidiques sont convertis en lipides matures qui s'arrangent en lamelles. Cette conversion est assurée par différentes enzymes déversées en même temps que les précurseurs lipidiques dans l'espace intercellulaire. En particulier les glucosylcéramides sont transformées en céramides via la p-glucocérébrosidase. La p-glucocérébrosidase est une enzyme clé du métabolisme extracellulaire des lipides. En présence de son activateur, la saponine C, la p-glucocérébrosidase hydrolyse les résidus glucoses des glucosylcéramides conduisant à la production de céramides matures dans le Stratum corneum. L'activité de la pglucocérébrosidase est notamment régulée par l'acidification Stratum corneum. Il a été montré qu'une déficience en p-glucocérébrosidase ou une absence de son activateur induisait une forte diminution qualitative et quantitative des céramides impactant l'intégrité et la fonctionnalité des membranes lipidiques et conduisant à une augmentation drastique de la perte insensible en eau (PIE). Selon l'invention, un extrait de Pichia riche en mannanes peut être utilisé pour stimuler l'activité enzymatique de la p-glucocérébrosidase, enzyme responsable de la synthèse des céramides fonctionnels. Les lipides fonctionnels matures qui constituent la matrice extracellulaire de la couche cornée présentent une composition unique : céramides, cholestérol et acides gras libres. Chaque famille de lipides joue un rôle spécifique et fondamental dans la structure de l'épiderme et dans ses fonctions, notamment dans le contrôle de l'hydratation. Les acides gras libres contribuent à l'acidification du Stratum Corneum et permettent également l'arrangement latéral des membranes lipidiques et le contrôle de la perte en eau de la peau.
Le cholestérol, stérol le plus important de l'épiderme, est largement impliqué dans la formation des membranes lamellaires. En particulier, le cholestérol sulfate, bien que mineur, est indispensable à la régulation de la desquamation. Enfin, les céramides de la couche cornée ont été identifiées selon trois familles distinctes : les céramides non hydroxylés, les céramides alpha-hydroxylés et les céramides oméga-hydroxylés ou oméga-hydroxycéram ides. Les oméga-hydroxycéramides participent notamment à la cohésion de la couche cornée de deux façons distinctes. Elles interviennent d'une part dans l'organisation des lipides lamellaires extracellulaires, en particulier les omégahydroxycéramides estérifiées qui sont essentielles à la conformation des bicouches lipidiques. Ils agissent comme des rivets moléculaires attachant les différentes membranes lamellaires entre elles, assurant ainsi la stabilité et la cohésion de l'ensemble. D'autre part, les oméga-hydroxycéramides sont liées de façon covalente à l'enveloppe cornée des cornéocytes qui assure la cohésion entre les cornéocytes hydrophiles et les membranes lamellaires lipophiles. Les omégahydroxycéramides liées permettent aux cornéocytes d'acquérir l'hydrophobicité nécessaire pour former une enveloppe mature ou rigide, élément nécessaire à l'homéostasie de la barrière perméable. La maturation de l'enveloppe cornéocytaire conduit en effet à un véritable renforcement de cette structure insoluble et protectrice participant activement au maintien des qualités de la fonction barrière. Il a été montré que des défauts de métabolisme des lipides épidermiques s'accompagnent d'une anomalie de la fonction barrière.
Selon l'invention, un extrait de Pichia riche en mannanes peut être utilisé pour stimuler la synthèse des céramides non hydroxylées, du cholestérol sulfate et des oméga-hydroxycéramides liés à l'enveloppe cornée. Ainsi, un extrait de Pichia riche en mannanes peut être utilisé pour stimuler les trois étapes impliquées dans la formation du ciment lipidique du Stratum 15 corneum, à savoir : - pour augmenter le recrutement des lipides exogènes au sein des kératinocytes par le biais de transporteurs spécifiques, en particulier en augmentant l'expression des transporteurs FATP-3, et/ou - pour augmenter le trafic et la sécrétion des lipides intracellulaires via 20 les corps lamellaires, en particulier en augmentant l'expression de la glucosylcéramide synthase et en augmentant l'expression des protéines ABCAl2, et/ou - pour augmenter la maturation des lipides épidermiques, en particulier en augmentant l'activité de la p-glucocérébrosidase et en augmentant le taux des 25 lipides intercellulaires et cornéocytaires (notamment céramides non hydroxylées, cholestérol sulfate et oméga-hydroxycéramides). Avantageusement, en stimulant la synthèse des lipides épidermiques, mais également leur transport, leur sécrétion et leur maturation dans l'espace intercellulaire, un extrait de Pichia riche en mannanes peut stimuler l'ensemble du flux permettant de garantir à la fois une composition et une organisation optimale des lipides des membranes lamellaires et de l'enveloppe cornéocytaire. Il peut être utilisé en tant que principe actif dans une composition cosmétique pour restructurer le ciment lipidique et ainsi renforcer l'intégrité de la fonction barrière pour un effet restructurant de la peau.
PRINCIPE ACTIF Selon un deuxième aspect, l'invention concerne un principe actif cosmétique restructurant, obtenu à partir d'au moins une levure appartenant au genre Pichia, présentant une teneur en mannanes supérieure ou égale à 30% du poids total de l'extrait sec. Préférentiellement le principe actif comprend au moins 50% en poids de mannanes par rapport au poids total de l'extrait sec. De façon préférée le principe actif est obtenu à partir de Pichia anomala.
Le principe actif selon l'invention peut être défini par les caractéristiques exposées ci-après. Matières sèches : On mesure le taux de matières sèches par passage à l'étuve à 105°C en présence de sable d'un échantillon de poids initial donné jusqu'à obtention d'un poids constant. Le taux de matières sèches d'un principe actif issu de Pichia selon l'invention est compris entre 10 et 200 g/I, plus particulièrement entre 26 et 40 g/I. Mesure du pH : Le pH mesuré par la méthode potentiométrique à température ambiante conduit à des valeurs comprises entre 4,5 et 8,5, plus particulièrement entre 6,0 et 7,0.
Détermination de la teneur en sucres totaux On utilise la méthode de DUBOIS. En présence d'acide sulfurique concentré et de phénol, les sucres réducteurs donnent un composé jaune orangé. A partir d'une gamme étalon, on peut déterminer le taux de sucres totaux d'un échantillon. Le taux de sucres totaux d'un principe actif issu de Pichia selon l'invention est compris entre 7 et 145 g/I, préférentiellement entre 18 et 29 g/I. Le principe actif contient au moins 30% de sucres totaux par rapport aux matières sèches totales, préférentiellement au moins 50%.
Caractérisation des carbohydrates La fraction glucidique d'un principe actif extrait de Pichia selon l'invention est composée de mannose et de glucose essentiellement sous forme d'oligosaccharides et de polysaccharides entre 500 et 5000Da. Détermination de la teneur en protéines Le taux de protéines est obtenu par la méthode de Kjedhal. Les résultats donnent une teneur en protéines comprise entre 4 et 90 g/I, plus particulièrement entre 12 et 18 g/I. Le principe actif contient moins de 45% de protéines par rapport aux matières sèches totales, préférentiellement moins de 30 %.
Fraction active La fraction active du principe actif issu de Pichia selon l'invention est une fraction saccharidique dont le poids moléculaire est compris entre 500 et 5000 Da. Le principe actif selon l'invention est composé majoritairement de mannanes, mannoses polymérisés sous forme d'oligosaccharides et de polysaccharides, dont le poids moléculaire est compris entre 500 et 5000 Da.
PROCEDE D'OBTENTION Selon un autre aspect, la présente invention vise un procédé d'obtention d'un principe actif issu d'au moins une levure appartenant au genre Pichia. Il s'agit d'un procédé qui permet d'éliminer une grande partie des protéines d'un extrait de Pichia et de concentrer l'actif en terme de mannanes. Le procédé comprend au moins une étape d'hydrolyse enzymatique des protéines, afin d'obtenir des peptides et petites protéines. Préférentiellement le procédé comprend également une étape d'élimination de ces petites protéines par filtration basée sur la sélection de la taille des molécules.
Encore plus préférentiellement il s'agit d'un procédé comprenant les étapes suivantes - solubilisation de levures du genre Pichia dans l'eau, - hydrolyse enzymatique afin de couper les protéines et d'obtenir une fraction protéique de masse moléculaire inférieure à 5000Da, - inactivation des enzymes utilisées pour l'hydrolyse, - séparation des phases soluble et insoluble, - ultrafiltration pour éliminer la fraction protéique de masse moléculaire inférieure à 5000Da, et - filtrations.
Le procédé peut comprendre une étape de désodorisation, de décoloration et/ou de stabilisation avant les filtrations. Les filtrations peuvent être les suivantes : - filtration Presse, et - filtration stérilisante.
Préférentiellement les levures utilisées appartiennent à la variété Pichia anomala. Un exemple particulier non limitatif de procédé d'obtention est décrit en suivant. Des levures de Pichia anomala sont cultivées dans un milieu de culture adapté à leur développement, puis centrifugées pour récupérer la biomasse.
La biomasse est ensuite broyée dans un broyeur à billes. Ensuite le broyât est remis en suspension dans de l'eau à une concentration de 50 grammes par litre avant une hydrolyse enzymatique en milieu basique à 30°C pendant 6 heures.
Après hydrolyse, le produit est centrifugé puis filtré avant stérilisation. Par des filtrations successives sur filtres de tailles différentes, on obtient un hydrolysat contenant au moins 30% de mannanes par rapport au poids total de l'extrait sec. L'hydrolysat obtenu se présente sous la forme d'une solution aqueuse liquide limpide de couleur jaune clair.
COMPOSITIONS COSMETIQUES La présente invention couvre aussi les compositions cosmétiques incluant au moins un principe actif issu de Pichia, préférentiellement de Pichia anomala, dans différentes formes galéniques, adaptées à l'administration par voie topique cutanée. Ces compositions peuvent se présenter notamment sous forme de crèmes, émulsions huile-dans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples, solutions, suspensions ou poudres. Elles peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse, ou sous forme solide. Ces compositions contiennent entre 0,01 et 20% en poids de principe(s) actif(s) issu(s) de Pichia selon la présente invention, préférentiellement entre 0,5% et 5%.
Ces compositions sont notamment destinées au soin, au traitement, à la protection et/ou à l'hydratation de la peau humaine, en particulier pour traiter la sécheresse cutanée et améliorer l'effet restructurant et protecteur de la couche cornée.
Des tests ont montré la compatibilité du principe actif avec les matières premières utilisées en cosmétique : épaississants, émulsionnants, solvants. On peut également citer des exemples de compositions cosmétiques restructurantes destinées à améliorer et/ou renforcer la fonction barrière de la peau, incluant le principe actif selon l'invention. Les exemples de composition qui suivent sont obtenus par mélange des différents composants. Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Bien entendu, l'homme du métier veillera à choisir les éventuels composés complémentaires, actifs ou non-actifs, et/ou leur quantité, de telle sorte que les propriétés avantageuses du mélange ne soient pas, ou sensiblement pas, altérées par l'adjonction envisagée. Exemple de composition hydratante La formulation est la suivante : - Cetearyl octonate : 5% - Isopropyl palmitate : 5% - Polyacrylamide/C12-C14 Isoparaffine/laureth7 : 2% - Polysorbate 60 : 1,7% - Sorbitan sesquioleate : 1,3% - Phenonip : 0,7% - Extrait de Pichia anomala: 4% - Eau : 80,3% Exemple de composition restructurante La formulation est la suivante : - Isohexadecane: - Arachidyl alcool/Behenyl alcool/ Arachidyl glucoside : 3% - Butylène glycol : 3% - Isopropyl palmitate : - Polyacrylamide/C-13-C-14 paraffine/ Laureth7 : 1,5% - Cetearyl alcool : 1,0% - PEG-100 stearate : 1,0% - Glyceryl stearate : 1,0% - Phenonip : 0,7% - bimethicone/Cyclomethicone : 0,5% - Extrait de Pichia anomala : 4% - Eau : 77,3% Exemple de composition anti-rides La formulation est la suivante : - Cetearyl alcool/Cetearyl glycoside : 2% - Arachidyl alcool/Behenyl alcool/ Arachidyl glycoside : 3% - Isononyl isononanoate : 5% - Polyacrylamide/C13-14Isoparaffine/laureth-7 : 0,3% - Phenonip : 0,7% - Extrait de Pichia anomala : 4% - Eau : 85% EVALUATION DE L'EFFET D'UN PRINCIPE ACTIF ISSU DE PICHIA SELON L'INVENTION L'extrait utilisé pour les études qui suivent est un extrait de Pichia anomala présentant les caractéristiques suivantes : - solution aqueuse - aspect : liquide limpide - couleur : jaune clair - matières sèches : 36,4g/l - sucres totaux : 21,0g/1 - teneur en protéines : 3,8g/l - pourcentage de mannanes par rapport à la matière sèche : 58% - pH:6,7 Cet exemple d'extrait n'est bien entendu pas limitatif. 1/ Etudes in vitro 1-1/Evaluation de l'effet sur le recrutement des lipides exogènes Cette étude a pour objectif d'évaluer l'effet d'un principe actif extrait de Pichia sur sa capacité à augmenter l'expression des ARNm (Acide ribonucléique messager) codant pour la FATP-3. Les protéines FATP-3 sont des transporteurs membranaires impliqués dans le recrutement des lipides exogènes au sein des kératinocytes.
L'étude est réalisée sur kératinocytes humains normaux. Les kératinocytes sont traités avec le principe actif extrait de Pichia à 0,30%, puis incubés pendant au moins 24 heures, de préférence 6 jours. Les cellules sont ensuite récupérées et les ARN totaux sont extraits pour être reverse-transcripts. Les ADN complémentaires obtenus sont analysés par PCR (réaction en chaîne polymérase) quantitative. Les ARNm témoins de la p-2 microglobuline, témoin interne de référence, sont également analysés en parallèle des ARNm de la FATP-3.
Les résultats obtenus, exprimés en pourcentage d'expression de FATP-3, sont présentés dans le tableau suivant : Expression de FATP-3 % Témoin 100 Principe actif extrait de Pichia 0,30% 133 On constate que testé à 0,3% sur kératinocytes humains normaux, un principe actif extrait de Pichia riche en mannanes augmente l'expression des ARNm codant pour FATP-3 de 33% Ainsi un extrait de Pichia riche en mannanes favorise le recrutement des lipides exogènes dans les kératinocytes. 1-2/Evaluation de l'effet sur le trafic et la sécrétion des lipides intracellulaires a. Etude de l'expression des ARNm codant pour la glucosylceramide synthase Cette étude a pour objectif d'évaluer l'effet d'un principe actif extrait de Pichia sur sa capacité à augmenter l'expression des ARNm codant pour la glucosylcéramide synthase.
La glucosylcéramide synthase intervient dans la synthèse des glucosylcéramides, précurseurs majoritaires des céramides.. L'étude est réalisée sur kératinocytes humains normaux. Les kératinocytes sont traités avec le principe actif selon l'invention à 0,30%, puis incubés pendant au moins 24 heures, de préférence pendant 6 jours. Les cellules sont ensuite récupérées et les ARN totaux sont extraits pour être reverse-transcripts. Les ADN complémentaires obtenus sont analysés par PCR (réaction en chaîne polymérase) quantitative. Les ARNm témoins de la 13-2 microglobuline, témoin interne de référence, sont également analysés en parallèle des ARNm de la glucosylcéramide synthase. Les résultats obtenus, exprimés en pourcentage d'expression de glucosylcéramide synthase, sont présentés dans le tableau suivant : Expression glucosylcéramid e synthase (%) Témoin 100 Principe actif extrait de Pichia 0,30% 122 On constate que testé à 0,3% sur kératinocytes humains normaux, un principe actif extrait de Pichia riche en mannanes augmente l'expression des ARNm codant pour la glucosylcéramide synthase de 22%.
Ainsi un extrait de Pichia riche en mannanes favorise la synthèse des glucosylcéramides, précurseurs majoritaires des céramides dans le Stratum corneum. b. Etude de l'expression des ARNm codant les protéines ABCAl2 Cette étude a pour objectif d'évaluer l'effet d'un principe actif extrait de Pichia sur sa capacité à augmenter l'expression des ARNm codant pour la protéine ABCAl2, nécessaire à la formation des corps lamellaires et à la sécrétion de leur contenu. L'étude est réalisée sur kératinocytes humains normaux. Les kératinocytes sont traités avec le principe actif selon l'invention 20 à 0,30%, puis incubés pendant au moins 24 heures, de préférence 6 jours. Les cellules sont ensuite récupérées et les ARN totaux sont extraits pour être reverse-transcripts. Les ADN complémentaires obtenus sont analysés par PCR (réaction en chaîne polymérase) quantitative. Les ARNm témoins de la 13-2 microglobuline, témoin interne de référence, sont également analysés en parallèle des ARNm de la protéine ABCAl2. Les résultats obtenus, exprimés en pourcentage d'expression de ABCAl2, sont présentés dans le tableau suivant : Expression de ABCAl2 (%) Témoin 100 Principe actif extrait de Pichia 0,30% 125 On constate que testé à 0,3% sur kératinocytes humains normaux, un principe actif extrait de Pichia riche en mannanes augmente l'expression des ARNm codant la protéine ABCAl2 de 25%.
Ainsi un extrait de Pichia riche en mannanes favorise la formation des corps lamellaires et la sécrétion de leur contenu. 2/ Etudes in vivo 2-1/Evaluation de l'effet sur la maturation des lipides épidermiques a. Etude de l'activité de la p-glucocérébrosidase L'objectif de cette étude est de quantifier in vivo sur volontaires l'effet d'un extrait de Pichia riche en mannanes formulé à 3% en émulsion sur l'activité de la p-glucocérébrosidase, enzyme intervenant dans la conversion des glucocéramides en céramides, phénomène essentiel au maintien d'une fonction barrière optimale.
L'effet a été observé après 7 jours d'applications biquotidiennes et comparé au placebo après une perturbation artificielle chronique de la fonction barrière à l'aide d'un détergent, le Lauryl Sulfate de Sodium (SLS) afin d'induire une désorganisation de la structure lipidique du Stratum corneum.
L'étude est réalisée sur 20 volontaires sains présentant une peau normal au niveau des bras. Les échantillons de Stratum corneum sont prélevés à l'aide d'adhésifs adaptés avant et après applications biquotidiennes, sur des zones symétriques au niveau du haut des bras. Le dosage de l'activité enzymatique de la p-glucocérébrosidase est réalisé selon une méthode modifiée à partir de celles de Redoules et al. et Takagi et al. Les résultats sont exprimés en nM/h/mg de protéines. La concentration totale de protéines de chaque prélèvement est dosée à l'aide d'un kit adapté. Les résultats obtenus montrent une variation de la présence de 13-glucocérébrosidase sur les zones traitées avec l'actif selon l'invention par rapport au placebo de 38%.
Ainsi, en stimulant l'activité enzymatique de la p-glucocérébrosidase, enzyme responsable de la formation des céramides, un extrait de Pichia riche en mannanes selon l'invention participe à la préservation de la structure lipidique du Stratum corneum nécessaire au maintien d'une fonction barrière optimale. b. Etude des lipides de l'enveloppe cornée L'objectif de cette étude est de quantifier in vivo sur volontaires l'effet d'un extrait de Pichia riche en mannanes formulé à 3% en émulsion sur la synthèse des lipides liés de façon covalente aux protéines de l'enveloppe cornée. Ces lipides sont fortement impliqués dans l'architecture de l'enveloppe cornée ainsi que dans l'organisation des couches lamellaires des lipides intercellulaires, participant ainsi activement au maintien des qualités de la fonction barrière.
L'effet a été observé après 7 jours d'applications biquotidiennes et comparé au placebo après une perturbation artificielle chronique de la fonction barrière à l'aide d'un détergent, le Lauryl Sulfate de Sodium (SLS) afin d'induire une désorganisation de la structure lipidique du Stratum corneum. L'étude est réalisée sur 20 volontaires sains, présentant une peau normal au niveau des bras. Les échantillons de Stratum corneum sont prélevés à l'aide d'adhésifs adaptés avant et après applications biquotidiennes, sur des zones symétriques au niveau du haut des bras. Après extraction des cornéocytes, le marquage est réalisé à l'aide du colorant rouge Nil. La fluorescence de chaque échantillon est observée grâce à un microscope fluorescent couplé à un logiciel d'analyse d'images.
Plus l'intensité de fluorescence des images est importante, plus la moyenne des niveaux de gris est élevée et plus la concentration en matériel hydrophobe tels que les lipides de l'enveloppe cornée, est importante. Les résultats obtenus montrent que dans les conditions de cette étude après 7 jours d'applications biquotidiennes et en comparaison au placebo, un extrait de Pichia riche en mannanes formulé à 3% en émulsion, augmente de 14% le taux de lipides de l'enveloppe cornée du Stratum corneum après une agression répétée au SLS. Ainsi, en stimulant l'expression des lipides cornéocytaires, un extrait de Pichia riche en mannanes selon l'invention contribue à préserver l'organisation architecturale lipidique de l'enveloppe cornée responsable du maintien des qualités de la fonction barrière. c. Dosage des lipides épidermiques par HPTLC L'objectif de cette étude est de quantifier in vivo sur volontaires l'effet d'un extrait de Pichia riche en mannanes formulé à 3% en émulsion sur la synthèse des lipides de la peau. L'effet a été observé après 7 jours d'application biquotidiennes et comparé au placebo. L'étude est réalisée sur 18 volontaires, présentant une peau à tendance sèche au niveau des mollets. Les échantillons de Stratum corneum sont prélevés à l'aide d'une colle cyanoacrylate avant et après 7 jours d'applications biquotidiennes de l'actif selon l'invention ou du placebo, au niveau des mollets. Les lipides extraits sont séparés et identifiés par HPTLC et quantifiés par densitométrie. L'étude analytique est réalisée pour quantifier et évaluer les proportions de différentes classes de lipides : cholestérol sulfates, cholestérol acétate, céramides hydroxylées, céramides non hydroxylées, acides gras et triglycérides. Les résultats sont exprimés en pourcentage de lipides extraits rapportés aux taux de protéines. Les résultats correspondant à la variation par rapport au placebo sont présentés dans le tableau suivant : Variation/placebo (%) Cholestérol sulfate +9,7 Céramides non hydroxylées +6,6 Cholestérol -7,3 Acide gras -7,7 Triglycérides -3,4 On constate donc que dans les conditions de cette étude, après 7 jours d'applications biquotidiennes et en comparaison au placebo, le principe actif selon l'invention formulé à 3 % en émulsion augmente la teneur en cholestérol sulfate de 9,7% et la teneur en céramides non hydroxylées de 6,6%. Ainsi, en favorisant la synthèse de la principale classe lipidique de la peau que sont les céramides et stimulant la synthèse du cholestérol sulfate qui joue un rôle primordial dans les processus de desquamation, un extrait de Pichia riche en mannanes selon l'invention participe de façon active au renforcement de la fonction barrière. 2-2/Evaluation de l'effet sur la perte insensible en eau L'objectif de cette étude est de quantifier in vivo sur volontaires l'effet d'un extrait de Pichia riche en mannanes formulé à 3% en émulsion sur la perte insensible en eau (PIE). L'effet est observé après 7 et 14 jours d'applications biquotidiennes et comparé au placebo après une perturbation artificielle chronique de la fonction barrière à l'aide du SLS, afin d'introduire une désorganisation de la structure lipidique du Stratum Corneum.
L'étude est réalisée sur 20 volontaires sains de sexe féminin et d'âge compris entre 25 et 51 ans, présentant une peau normale au niveau des bras.
Les mesures sont effectuées à l'aide d'un Tewamètre sur des zones symétriques au niveau des bras. Les résultats obtenus pour la mesure de la PIE sont présentés dans le tableau suivant en pourcentage de variation des résultats obtenus avec l'actif selon 5 l'invention par rapport à ceux obtenus avec le placebo : Variation/placebo (%) Après 7 jours -6 Après 14 jours -14 Ainsi, dans les conditions de cette étude, après 14 jours d'applications biquotidiennes et en comparaison au placebo, un extrait de Pichia riche en mannanes formulé à 3% en émulsion diminue de 14% la PIE après agressions répétées au SLS.
10 Un extrait de Pichia riche en mannanes permet donc de limiter les perturbations de la structure lipidique du Stratum corneum engendrées par l'application répétées de SLS et favorise ainsi le maintien d'une fonction barrière optimale.
Claims (17)
- REVENDICATIONS1. Utilisation d'un extrait issu d'au moins une levure appartenant au genre Pichia, présentant une teneur en mannanes d'au moins 30% du poids total de l'extrait sec, en tant que principe actif dans une composition cosmétique, pour restructurer la peau.
- 2. Utilisation d'un extrait issu d'au moins une levure appartenant au genre Pichia selon la revendication 1, caractérisée en ce que la teneur en mannanes est d'au moins 50% du poids total de l'extrait sec.
- 3. Utilisation d'un extrait issu d'au moins une levure appartenant au genre Pichia selon la revendication 1 ou 2, en tant que principe actif dans une composition cosmétique pour augmenter le recrutement des lipides exogènes des cellules de la peau et/ou pour augmenter le trafic et la sécrétion des lipides intracellulaires de la peau et/ou pour augmenter la maturation des lipides épidermiques.
- 4. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que l'extrait est issu de Pichia anomala.
- 5. Principe actif cosmétique restructurant, obtenu à partir d'au moins une levure appartenant au genre Pichia, présentant une teneur en mannanes d'au moins 30% du poids total de l'extrait sec.
- 6. Principe actif cosmétique restructurant, obtenu à partir d'au moins une levure appartenant au genre Pichia selon la revendication 5, caractérisé en ce qu'il présente une teneur en mannanes d'au moins 50% du poids total de l'extrait sec.
- 7. Principe actif cosmétique restructurant, obtenu à partir d'au moins une levure appartenant au genre Pichia selon la revendication 5 ou 6, caractérisé 25 en ce qu'il présente une teneur en sucres supérieure à 50% du poids total del'extrait sec et une teneur en protéines inférieure à 45% du poids total de l'extrait sec.
- 8. Principe actif cosmétique restructurant, obtenu à partir d'au moins une levure appartenant au genre Pichia selon l'une des revendications 5 à 7, 5 présentant les caractéristiques suivantes - un taux de matières sèches compris entre 10 et 200 g/I, - un pH compris entre 4,5 et 8,5 , et - une teneur en sucres totaux comprise entre 7 et 145 g/I.
- 9. Principe actif cosmétique restructurant, obtenu à partir d'au moins 10 une levure appartenant au genre Pichia selon l'une des revendications 5 à 8, présentant un taux de matières sèches compris entre 26 et 40 g/I.
- 10. Principe actif cosmétique restructurant, obtenu à partir d'au moins une levure appartenant au genre Pichia selon l'une des revendications 5 à 9, présentant un pH compris entre 6,0 et 7,0. 15
- 11. Principe actif cosmétique restructurant, obtenu à partir d'au moins une levure appartenant au genre Pichia selon l'une des revendications 5 à 10, présentant une teneur en sucres totaux comprise entre 18 et 29 g/I.
- 12. Principe actif cosmétique restructurant selon l'une des revendications 5 à 11, caractérisé en ce qu'il est obtenu à partir de Pichia 20 anomala.
- 13. Procédé d'obtention d'un principe actif cosmétique restructurant selon l'une des revendications 5 à 12, comprenant au moins une étape d'hydrolyse enzymatique des protéines d'au moins une levure du genre Pichia.
- 14. Procédé d'obtention selon la revendication 13, comprenant 25 également une étape d'élimination de la fraction protéique de masse moléculaire inférieure à 5000ba par filtration.
- 15. Procédé d'obtention selon l'une des revendications 13 ou 14 comprenant les étapes suivantes : - solubilisation de levures du genre Pichia dans l'eau, - hydrolyse enzymatique afin de couper les protéines et d'obtenir une 5 fraction protéique de masse moléculaire inférieure à 5000ba, - inactivation des enzymes utilisées pour l'hydrolyse, - séparation des phases soluble et insoluble, - ultrafiltration pour éliminer la fraction protéique de masse moléculaire inférieure à 5000ba, et 10 - filtrations.
- 16. Procédé d'obtention selon l'une des revendications 13 à 15, caractérisé en ce que les levures utilisées sont des Pichia anomala.
- 17. Composition cosmétique restructurante, contenant entre 0,01% et 20% d'au moins un principe actif obtenu à partir de Pichia selon l'une des 15 revendications 5 à 12.
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