JP2021533100A - 眼を治療するための組成物 - Google Patents

Abstract

本発明は、角膜からかつ／又は角膜内でのヒアルロン酸の産生／放出／送達／排出を誘導、促進、及び／又は改善する１種若しくは２種以上の化合物及び／又は抽出物を含む組成物、並びに眼を治療するための組成物を使用する方法に関する。

Description

本発明は、角膜からかつ／又は角膜内でのヒアルロン酸の産生／放出／送達／排出を誘導、促進、及び／又は改善する１種若しくは２種以上の化合物及び／又は抽出物を含む組成物、並びに眼を治療するための組成物を使用する方法に関する。

「ドライアイは、涙液膜の恒常性の損失を特徴とし、涙液膜不安定性及び遠視性、眼球表面炎症及び損傷、並びに神経感覚異常が病因的役割を果たす眼の症状を伴う眼の表面の多要因疾患である。」Ｃｒａｉｇ，Ｊ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．ＴＦＯＳ ＤＥＷＳ ＩＩ ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｒｅｐｏｒｔ．Ｏｃｕｌ Ｓｕｒｆ．２０１７；１５：２７６−２８３。ドライアイは、異常な又は不十分な涙液の形成、及びムチン分泌の欠乏（すなわち、角膜炎症）をもたらす可能性がある。ドライアイ症状は、リウマチ性関節炎、シェーグレン症候群、全身性エリスリマトーデス、並びに全身性硬化症及びサルコイドーシスなどの涙（すなわち、涙生成）腺を損傷する自己免疫異常などの様々な基礎疾患の結果として顕在化する場合がある。ドライアイはまた、レーシック（登録商標）手術などの眼科手術後に誘導される可能性がある。ドライアイは、米国において１３００万人を超える個体が罹患していると推定される。

基礎病理にもかかわらず、ドライアイは、通常、眼球前涙液膜の急速な破壊を伴い、露出した外表面の脱水をもたらす。角膜及び結膜の湿った状態を維持するためには正常な涙液の形成が必要であり、これは、角膜の透明性を維持するために、両方の潰瘍を予防するのに役立つ。加えて、涙液は、眼の表面上の眼瞼の動き（例えばまばたき）及び眼からの異物の除去を促進する。涙液は、通常、眼における感染を予防するのに有用なリゾチームを含有する。ドライアイは、眼における重度の痛みに対する軽度の不快感に関連する可能性がある。それが長期間にわたって発生すると、かすみ眼、異物感、及び／又は灼熱感、及び痒みを引き起こす可能性がある。治療なしに状態が持続される場合、更に角膜潰瘍及び／又は瘢痕をもたらす可能性がある。

ドライアイ症状としては、眼の痛み又は倦怠感、まばたきの増加、及び充血した眼が挙げられる。更に、細菌は、引っ掻きを介して侵入し、感染を引き起こす可能性があり、引っ掻きが十分に深い場合には、人の視覚に影響を及ぼす可能性がある。眼精疲労に加えて、ドライアイの原因としては、シェーグレン症候群、シュベニ・ジョンソン症候群、火傷及び眼への損傷、並びに斜辺薬、精神薬、緑内障を治療するための点眼剤、並びに他のそのような薬物の副作用が挙げられる。

点眼剤は、ドライアイを治療するための効果的な方法である。このような点眼剤は、通常、ドライアイ治療活性物質を含み、このような点眼剤中の一般的な活性物質はヒアルロン酸である。ヒアルロン酸は、生物学的に誘導された高分子物質であり、非常に高い保水性及び高粘弾性、良好な増粘特性、及び良好な糸状形成機能などの特有の特性を有し、様々な種類の皮膚の問題などを治療するための局所剤において保湿剤として使用されている。乾燥が全身にわたって見られるシェーグレン症候群によって引き起こされるドライアイの場合、ヒアルロン酸を含有する点眼剤の点眼が有効である。しかしながら、点眼剤として点眼されるとき、ヒアルロン酸は角膜上での比較的短い滞留時間を有し、したがって、ヒアルロン酸点眼剤の効果は、約２時間又は３時間しか持続せず、これは、患者がより頻繁に（例えば、１日当たり５〜１０回）点眼剤を点眼しなければならないことを意味する。

ヒアルロン酸（hyaluronic acid、ＨＡ）は、眼内の上角膜細胞によって産生される。特に、有意に高いヒアルロン酸濃度は、高齢者よりも若年のヒト集団の角膜において見出されている。（Ｐａｃｅｌｌａ，Ｅ．，Ｐａｓｃｅｌｌａ，Ｆ．，Ｄｅ Ｐａｏｌｉｓ，Ｇ．，ｅｔ ａｌ．のＧｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｃｏｒｎｅａ：ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ ｃｈａｎｇｅｓ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｅｙｅ Ｄｉｓ．７：１−５，２０１５を参照）。

ヒアルロン酸はまた、一般的な創傷の治癒において有用であり、全体的な眼の健康維持に不可欠である。

したがって、角膜から又は角膜内でのヒアルロン酸の産生及び／又は放出を促進及び／又は改善すると考えられる眼科用医薬組成物が必要とされている。

本発明者らは、角膜からかつ／又は角膜内でのヒアルロン酸の産生／放出／送達／排出を、十分な角膜流体レベルで誘導、促進、及び／又は改善することができるピキア属の抽出物又は抽出物源を発見した。

したがって、本発明の一態様は、角膜からかつ／又は角膜内でのヒアルロン酸の産生／放出／送達／排出を誘導、促進、及び／又は改善するための方法であって、安全かつ有効な量のピキア属の１種若しくは２種以上の抽出物又は抽出物源を含む眼科用組成物を投与する工程を含む、方法に関する。

本発明の別の態様は、角膜からかつ／又は角膜内でのヒアルロン酸の産生／放出／送達／排出を誘導、促進、及び／又は改善するための方法であって、角膜からかつ／又は角膜内でのヒアルロン酸の産生／放出／送達／排出を誘導、促進、及び／又は改善する、安全かつ有効な量のピキア属の１種若しくは２種以上の抽出物又は抽出物源を含む眼科用組成物を投与する工程を含み、涙中のヒアルロン酸の濃度を上昇させて、タンパク質１ミリグラム当たり、１０（又は約１０）以上、任意選択で１５（又は約１５）以上、任意選択で２０（又は約２０）以上、任意選択で２５（又は約２５）ナノグラム以上、任意選択で３０（又は約３０）以上、任意選択で３５（又は約３５）以上、任意選択で４０（又は約４０）以上、又は任意選択で４５（又は約４５）ナノグラム〜タンパク質１ミリグラム当たり、１００（又は約１００）、任意選択で９０（又は約９０）、任意選択で８０（又は約８０）、任意選択で７０（又は約７０）、又は任意選択で６０（又は約６０）ナノグラムとするために、組成物が、タンパク質１ミリグラム当たり、１０（又は約１０）ナノグラム未満、任意選択で１５（又は約１５）ナノグラム未満、任意選択で２０（又は約２０）ナノグラム未満、又は任意選択で２５（又は約２５）ナノグラム未満のヒアルロン酸濃度を有する患者の涙中に投与され得る、方法に関する。

特定の実施形態では、本発明の化合物及び／又は抽出物に起因する、患者の涙中の上述のヒアルロン酸の濃度は、最大少なくとも約２時間、任意選択で約４時間、任意選択で約６時間、任意選択で約８時間、任意選択で約１０時間、任意選択で約１２時間、又は任意選択で約１２〜約２４時間維持される。

上記に詳述されるヒアルロン酸の濃度は、Ｄｒｅｙｆｕｓｓ法（以下の定義において記載）を使用して求められる。

本発明の別の態様は、角膜からかつ／又は角膜内でのヒアルロン酸の産生／放出／送達／排出を誘導、促進、及び／又は改善して、ドライアイ又はドライアイに関連する症状を治療（例えば、低減）及び／又は予防するための方法であって、安全かつ有効な量のピキア属の１種若しくは２種以上の抽出物又は抽出物源を含む眼科用組成物を投与する工程を含む、方法に関する。

本発明の別の態様は、角膜表面内及び／又は角膜表面上のヒアルロン酸の濃度ように、角膜からかつ／又は角膜内でのヒアルロン酸の産生／放出／送達／排出を誘導、促進、及び／又は改善する、安全かつ有効な量のピキア属の１種若しくは２種以上の抽出物又は抽出物源を含む組成物を投与することにより、角膜からかつ／又は角膜内でのヒアルロン酸の減少した又は低レベルの産生／放出／送達／排出に起因する、眼の症状を予防及び／又は治療する方法に関する。

本発明の別の態様は、角膜からかつ／又は角膜内でのヒアルロン酸の産生／放出／送達／排出を増加させる、安全かつ有効な量のピキア属の１種若しくは２種以上の抽出物又は抽出物源を含む組成物を投与することにより、患者の眼内かつ／又は眼上の創傷（例えば、非ドライアイ関連の眼の外傷、術後外科創傷、又は非特異的創傷）の治癒を促進するか、又は治癒速度を増加させる方法に関する。特定の実施形態では、上述の方法は、安全かつ有効な量のピキア属の１種若しくは２種以上の抽出物又は抽出物源を含む組成物を投与しない場合、そのような患者によって通常産生されるヒアルロン酸の濃度レベルを超えて、角膜からかつ／又は角膜内でのヒアルロン酸の産生／放出／送達／排出を増加させる。

本発明は、角膜からかつ／又は角膜内でのヒアルロン酸の産生／放出／送達／排出が減少した又は低レベルの患者を治療するための方法であって、（任意選択で、そのようなヒアルロン酸の産生／放出／送達／排出の増加を必要とする患者の）患者の眼に組成物を局所投与する工程を含み、組成物が、
ｉ）少なくとも約０．３ｍｇ／ｍＬの眼の角膜組織内の角膜流体中のピキア属抽出物濃度を達成するための、安全かつ有効な量のピキア属の１種若しくは２種以上の抽出物又は抽出物源と、
ｉｉ）任意選択で、安全かつ有効な量の透過促進剤と、
ｉｉｉ）任意選択で、眼科的に許容可能な担体と、を含む、方法に関する。

本発明は、（任意選択で、眼の創傷の治癒の促進又は治癒速度の増加を必要とする患者の）眼内かつ／又は眼上のそのような創傷の治癒を促進するか、又は治癒速度を増加させる方法であって、そのような患者に組成物（すなわち、特定の実施形態では、安全かつ有効な量のピキア属の１種若しくは２種以上の化合物及び／又は抽出物若しくは抽出物源を投与しない場合（又はそれらなしで）、そのような患者によって産生されるヒアルロン酸の濃度レベルを超えて、角膜からかつ／又は角膜内でのヒアルロン酸の産生／放出／送達／排出を増加させる）を局所投与する工程を含み、組成物が、
ｉ）少なくとも約０．３ｍｇ／ｍＬの眼の角膜組織内の角膜流体中のピキア属抽出物濃度を達成するための、安全かつ有効な量のピキア属の１種若しくは２種以上の抽出物又は抽出物源と、
ｉｉ）任意選択で、安全かつ有効な量の透過促進剤と、
ｉｉｉ）任意選択で、眼科的に許容可能な担体と、を含む、方法。

２４及び４８時間でのピキア・アノマーラ抽出物の局所適用後の上角膜細胞におけるＨＡ産生の増加を示す棒グラフを図示する。 ピキア・アノマーラ抽出物を含有する増殖培地内に上角膜細胞を配置した４８時間後の、上角膜細胞におけるＨＡ産生の統計的に有意な増加を示す棒グラフを図示する。

当業者であれば、本明細書の記載に基づいて本発明を最大限に利用できると考えられる。以下の具体的な実施形態は、あくまで例示的なものとして解釈され得、いかなる意味においても以下の開示を限定するものとして解釈してはならない。

本発明の組成物は、本明細書に記載される本発明の要素、工程及び制限事項、並びに本明細書に記載される追加若しくは任意成分、構成成分、又は制限事項を含む、これらからなる、又はこれらから本質的になることができる。

本明細書で使用する場合、用語「含む（comprising）」（及びその文法的変形）は、「有する（having）」又は「含む（including）」を包括する意味で用いられ、「のみからなる（consisting only of）」とする排他的な意味では用いられない。本発明で使用する場合、用語「ａ」及び「ｔｈｅ」は、単数に加えて複数も包含すると理解される。

別段の定めがある場合を除き、本明細書で用いられる全ての科学技術用語は、本発明が属する技術分野における当業者が一般に理解するものと同じ意味を有する。また、本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、それらが本明細書と矛盾しない範囲で、参照によりその全体が組み込まれる。本明細書で使用するとき、全ての百分率は、特に規定しない限り、組成物全体の重量による。

本明細書で使用するとき、用語「角膜」又は「角膜の」は、虹彩、瞳孔、及び前房を覆う眼の透明な前方部分を含み、かつ／又はこれらに関連し、透明な前方部分の層は、（上角膜細胞を含む）角膜上皮層、（前方限界膜としても知られる）ボーマン膜、（固有質でもある）角膜実質、（後方限界膜でもある）デスメ膜、及び角膜内皮（およそ５μｍ厚であるミトコンドリアに富んだ細胞の単純な扁平又は低立方状単層）を含む。

多様な層の機能は以下のとおりである。
上皮は、
・化学物質及び水に対するバリアを提供し、
・微生物に対するバリアを提供し、
・眼の屈折力に寄与する涙液膜−角膜境界面の内側部分としての滑らかな光学面を提供し、
・重要な免疫学的機能を行うランゲルハンス細胞を収容する。
ボーマン膜は、
・角膜形状の維持を助ける。
角膜実質は、
・角膜に機械的強度を提供し、
・角膜の透明性を提供し、
・屈折レンズとして機能する。
デスメ膜は、
・内皮細胞の休止層として機能する。
角膜内皮は、
・角膜実質から水を除去することによって角膜の透明度を維持する。

角膜上皮層は、５〜７層の細胞でかなり均一に構成される。角膜上皮は、厚さ約５０μである。上皮は、平滑な正則曲面を提供するように均一であり、非ケラチン化された層状扁平上皮から構成される。理論に束縛されるものではないが、角膜上皮層は、タイトジャンクション構造（すなわち、組織への化学的浸透を通常阻害するこれらのタイトジャンクション構造［例えば、膜又は膜バリア］）を更に含有し、タイトジャンクション構造は、ピキア属の１種若しくは２種以上の抽出物又は抽出物源の拡散を妨害するか、又は拡散に対するバリアとして作用することができ、角膜上皮を横切って角膜組織内へのピキア属の１種若しくは２種以上の抽出物又は抽出物源の拡散を低減することによって、角膜組織内に蓄積し、ヒアルロン酸の産生に関与するそのような組織の細胞部分と接触することができる抽出物の濃度レベルを低減すると考えられる。

本明細書で使用するとき、「角膜からかつ／又は角膜内でのヒアルロン酸の減少した又は低レベルの産生／放出／送達／排出」という語句は、正常な（すなわち、非疾患の）人の涙におけるヒアルロン酸の濃度よりも低いヒアルロン酸の濃度を意味し、あるいは特定の実施形態では、Ｄｒｅｙｆｕｓｓ ＪＬ，Ｒｅｇａｔｉｅｒｉ ＣＶ，Ｃｏｅｌｈｏ Ｂ，ｅｔ ａｌ．のＡｌｔｅｒｅｄ ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｔｅａｒ ｆｌｕｉｄ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｉｔｉｓ．Ａｃａｄ Ｂｒａｓ Ｃｉｅｎｃ．２０１５；８７（１）：４５５−４６２に記載の方法を使用して決定されるように、タンパク質１ミリグラム当たり２５（又は約２５）ナノグラム未満である。この方法（Ｄｒｅｙｆｕｓｓの方法）を以下に再現する。
・試料収集
涙液を収集するために、５分間、局所麻酔薬を使用せずに、各眼の側頭側の眼瞼下にシルマーストリップを配置した。ストリップを室温で乾燥させて、分析まで−２０℃で保管した。
・涙液試料の調製
１００μＬの蒸留水を使用して、シルマーストリップから涙液化合物を溶出させ、ヒアルロン酸及びタンパク質含量分析を行った。
・ヒアルロン酸測定
涙液中のヒアルロン酸含量を、非同位体蛍光アッセイにより測定した（Ｍａｒｔｉｎｓ Ｊｒ，Ｐａｓｓｅｒｏｔｔｉ ＣＣ，Ｍａｃｉｅｌ ＲＭ，Ｓａｍｐａｉｏ Ｌｏ，Ｄｉｅｔｒｉｃｈ ＣＰ ａｎｄ Ｎａｄｅｒ ＨＢ．２００３．）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ ｂｙ ａ ｎｅｗ ｎｏｎｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ−ｂａｓｅｄ ａｓｓａｙ ｏｎ ｓｅｒｕｍ ｏｆ ｎｏｒｍａｌ ａｎｄ ｃｉｒｒｈｏｔｉｃ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ ３１９：６５−７２を参照されたい）。溶出した涙液及び標準濃度のヒアルロン酸（Ｓｉｇｍａ、ミズーリ州、セントルイス）を、ヒアルロン酸結合タンパク質が予めにコーティングされた９６マルチウェルプレート（ＦｌｕｏｒｏＮＵＮＣ Ｍａｘｉｓｏｒｐ−ｍｉｃｒｏｔｉｔｅｒｐｌａｔｅ，Ｒｏｓｋｉｌｄｅ，Ｄｅｎｍａｒｋ）に添加した。次いで、プレートをビオチン化ヒアルロン酸結合タンパク質及びユーロピウム標識化ストレプトアビジン（Ａｍｅｒｓｈａｎ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）と共に、プレートを連続的にインキュベートした。その後、固相に残存するユーロピウムは強化溶液によって遊離され、時間分解蛍光光度計（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｗａｌｌａｃ Ｏｙ、フィンランド、トゥルク）を使用して蛍光を測定した。データ（ｃｏｕｎｔｓ／ｓ）は、ＭｕｌｔｉＣａｌｃソフトウェアプログラム（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｗａｌｌａｃ Ｏｙ）を使用して自動的に処理され、値はｎｇ／ｍｇを単位とするタンパク質の量として表される。
・タンパク質分析
総涙液タンパク質濃度を、製造業者の取扱説明書（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ，Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）に従って比色分析キットを使用して決定した。タンパク質のプロファイルを、前述のようにドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によって分析した（Ｌａｅｍｍｌｉ ＵＫ．１９７０．）Ｃｌｅａｖａｇｅ ｏｆ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ａｓｓｅｍｂｌｙ ｏｆ ｔｈｅ ｈｅａｄ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅ Ｔ４．Ｎａｔｕｒｅ ２２７：６８０−６８５を参照）。簡潔に述べると、涙液試料からの１０μｇのタンパク質を、還元条件下で３〜２０％線形勾配ポリアクリルアミドゲルに適用した。電気泳動後、ゲルを、クマシーブルー（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）により染色した。各タンパク質バンドは、Ｍａｃ用のソフトウェアＩｍａｇｅＪ Ｖｅｒｓｉｏｎ １０．２（米国国立衛生研究所、Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，ＵＳＡ）を使用して、各タンパク質バンドを濃度測定によって定量化した。結果は、任意の密度測定単位（ａｒｂｉｔｒａｒｙ ｄｅｎｓｉｔｏｍｅｔｒｉｃ ｕｎｉｔ、ＡＤＵ）によって表される。

本明細書で使用するとき、ある成分を「本質的に含まない」組成物とは、組成物の総重量に基づいて、その成分を約２重量％以下しか有しない組成物を意味する。好ましくは、ある成分を本質的に含まない組成物は、組成物の総重量に基づいて、約１重量％以下、より好ましくは約０．５重量％以下、より好ましくは約０．１重量％以下、より好ましくは約０．０５重量以下、より好ましくは約０．０１重量％以下しか当該成分を有しない。特定のより好ましい実施形態では、ある成分を本質的に含まない組成物は、その成分を含まない、すなわち組成物中にその成分が存在しない。

本明細書で使用するとき、「眼科的に許容可能な」とは、この用語がさす成分が、過度の毒性、不適合性、不安定性、刺激、アレルギー反応などを伴わず、組織（例えば、眼又は眼窩周囲皮膚組織の軟組織）と接触して使用するのに好適であることを意味する。当業者に認識されるように、化粧用として／皮膚科学的に許容可能な塩は、酸性／アニオン性又は塩基性／カチオン性の塩である。

本明細書で使用するとき、用語「安全かつ有効な量」とは、角膜の１つ又は２つ以上の層からかつ／又は層内でのヒアルロン酸の産生／放出／送達／排出を誘導、促進、及び／又は改善するのに十分であるが、深刻な副作用を回避できる程度に少ない、開示された抽出物、化合物、又は組成物の量を意味する。安全かつ有効な量の化合物、抽出物、又は組成物は、例えば、エンドユーザーの年齢、健康状態、及び環境曝露、治療の期間及び性質、利用される特定の抽出物、成分、又は組成物、利用される特定の眼科学的に許容可能な担体、並びに同様の要因に応じて異なる。

特定の実施形態では、本明細書にて開示する本発明は、本明細書に具体的に開示されていない任意の化合物若しくは要素（又は、化合物群若しくは要素群）がなくとも実施し得るものである。

一般に、ＩＵＰＡＣ命名法は、本明細書において、以下の用語の定義に従って使用される。

用語「Ｃ１〜８アルキル」は、単独で使用されようと、置換基の一部として使用されようと、１〜８個の炭素原子を有する飽和脂肪族分枝鎖又は直鎖一価炭化水素ラジカルを指す。例えば、「Ｃ１〜８アルキル」は、具体的には、ラジカルメチル、エチル、１−プロピル、２−プロピル、１−ブチル、２−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、１−ブチル、１−ペンチル、２−ペンチル、３−ペンチル、１−ヘキシル、２−ヘキシル、３−ヘキシル、１−ヘプチル、２−ヘプチル、３−ヘプチル、１−オクチル、２−オクチル、３−オクチルなどを含む。この用語はまた、対応するアルキルジイルラジカルも指し得る。アルキル及びアルキルジイルラジカルは、末端炭素原子を介して又は鎖内の原子を介してコア分子に結合し得る。同様に、利用可能な原子価が許せば、任意の数の置換基変数が、アルキル又はアルキルジイルラジカルに結合し得る。

用語「Ｃ_１〜４アルキル」は、単独で使用されようと、置換基の一部として使用されようと、特定の数の炭素原子を有する飽和脂肪族分枝鎖又は直鎖一価炭化水素ラジカル又はアルキルジイル連結基を指し、当該ラジカルは、炭素原子から１個の水素原子を除去することによって得られ、当該アルキルジイル連結基は、鎖内の２個の炭素原子のそれぞれから１個の水素原子を除去することによって得られる。用語「Ｃ_１〜４アルキル」は、直鎖又は分枝鎖配置の１〜４個の炭素原子を有するラジカルを指す。例えば、「Ｃ_１〜４アルキル」は、具体的には、メチル、エチル、１−プロピル、２−プロピル、１−ブチル、２−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、１−ブチルなどのラジカルを含む。アルキル及びアルキルジイルラジカルは、末端炭素原子を介して又は鎖内の原子を介してコア分子に結合し得る。同様に、利用可能な原子価が許せば、任意の数の置換基変数が、アルキル又はアルキルジイルラジカルに結合し得る。

用語「Ｃ_２〜４アルケニル」は、２〜４個の炭素原子を有するアルケニルラジカルを指す。例えば、具体的には、ラジカルエテニル、プロペニル、アリル（２−プロペニル）、ブテニルなどを含む。上述のように、アルケニルラジカルも同様にコア分子に結合し得、指定される場合は更に置換されてもよい。

用語「ハロ」は、それ自体又は他の用語と組み合わせて、フルオロ、クロロ、ブロモ、又はヨードなどのハロゲン原子を意味する。

用語「置換された」は、１個又は２個以上の水素原子が、利用可能な原子価が許す量の置換基で置換されているコア分子を指す。置換は、コア分子には限定されず、置換基ラジカルでも生じ得、それによって、ラジカルは連結基になる。

用語「独立して選択される」は、置換基変数群から選択され得る２つ又はそれ以上の置換基を指し、選択された置換基は同じであっても異なっていてもよい。

用語「依存的に選択される」は、コア分子内の置換について指定の組み合わせで特定される１つ又は２つ以上の置換基変数（例えば、化合物の表のリストに記載されている置換基の群を指す変数）を指す。

無機塩基由来の許容可能な塩としては、例えば、ナトリウム又はカリウムの塩などが挙げられる。有機塩基由来の許容可能な塩としては、例えば、一級、二級、又は三級のアミンなどと形成された塩が挙げられる。

角膜内でのヒアルロン酸の産生／放出／送達／排出を誘導、促進、及び／又は改善する化合物及び／又は抽出物。
本発明は、角膜からかつ／又は角膜内でのヒアルロン酸の産生／放出／送達／排出を誘導、促進、及び／又は改善する１種若しくは２種以上の化合物及び／又は抽出物を含む。

特定の実施形態では、角膜からかつ／又は角膜内でのヒアルロン酸の産生／放出／送達／排出を誘導、促進、及び／又は改善する化合物及び／又は抽出物は、ピキア属の抽出物又は抽出物源であるか、あるいはピキア属の抽出物又は抽出物源を含む。

ピキア属は、サッカロミセス科の酵母の属である。この属の１００を超える種が既知である。本発明の組成物に使用するのに好適な種としては、ピキア・アノマーラ、ピキア・ギリエルモンディ、ピキア・ノルベジェンシス、及びピキア・オーメリが挙げられる（これらから選択されるか、又はこれらからなる群から選択される）。ピキア・アノマーラ（以前はハンゼヌラ・アノマーラと命名されていた）は、生乳及びチーズで見出すことができる。ピキア属の酵母の抽出物は、マンノースモノマーで構成される多糖類であるマンナンを多く含んでいる。ピキア属の抽出物又は抽出物源は、植物の果実又は他の地上部から単離されてもよい。ピキア属の任意の眼科的に許容される抽出物を使用してもよい。ピキア属由来の上記種の抽出物又は抽出物源の混合物を使用してもよい。

特定の実施形態では、本発明で使用されるピキア属由来の抽出物、又は抽出物源は、ピキア・アノマーラの抽出物である。特定の実施形態では、ピキア・アノマーラの好適な抽出物は、キウイ植物の果実又は葉に存在するピキア・アノマーラの株から産生される。別の実施形態では、ピキア・アノマーラの抽出物は、ＰＲＯ−ＬＩＰＩＳＫＩＮ又はＵＮＦＬＡＭＡＧＹＬ（登録商標）としてＳｉｌａｂ−Ｆｒａｎｃｅから市販されており、抽出物は、サトウキビに存在するピキア・アノマーラの株から産生される。

一実施形態では、ピキア・アノマーラ抽出物は、共に参照により本明細書に組み込まれている仏国特許第２８９７２６６号及び同第２９３８７６８号に記載されているような以下のプロセスに従って得られる。

特定の実施形態では、以下に記載される抽出プロセスは、ピキアの抽出物由来のタンパク質の多くを除去し、マンナンに関しては、活性物質を濃縮する。このプロセスは、ペプチド及び小タンパク質を得るための、タンパク質の少なくとも１つの酵素加水分解工程と、特定の実施形態では、このような分子のサイズの選択に基づいて濾過によってこれらの小ペプチド及び小タンパク質を除去する更なる工程を含む。

特定の実施形態では、ピキア・アノマーラ抽出物を含むピキア属の抽出物は、ピキア属のタンパク質を連続的に又は同時にのいずれか一方で加水分解するための１つ又は２つ以上の加水分解酵素を含む抽出プロセスによって得られる。

特定の実施形態では、酵素加水分解を使用して、ピキア属の抽出物中のタンパク質を、５０００Ｄａ未満の重量平均分子量を有するタンパク質画分に分解する。好適な加水分解酵素としては、特定の実施形態では、パパイン、トリプシン、キモトリプシン、サブチリシン、ペプシン、サーモリシン、プロナーゼ、フラバスタシン、エンテロキナーゼ、因子Ｘａプロテアーゼ、チューリン、ブロメライン、プロテイナーゼＫ、ゲネナーゼＩ、テルミターゼ、カルボキシペプチダーゼＡ、カルボキシペプチダーゼＢ、コラゲナーゼ又はこれらの混合物から選択される少なくとも１つのペプチダーゼが挙げられるが、これらに限定されない。

特定の実施形態では、ピキア属の抽出物を得るために使用される酵素は、結果として生じる可溶性相と不溶性相とを分離する前に不活性化される。

一実施形態では、ピキア・アノマーラ抽出物は、以下を有するものとして特徴付けられる。
−５〜３００ｇ／Ｌの固形分含量、
−４〜９のｐＨ、
−２〜１７０ｇ／Ｌのタンパク質含量、及び
−１〜１００ｇ／Ｌの範囲の糖含量

特定の実施形態では、ピキア属の抽出物は、乾燥ピキア属の抽出物の総重量の３０重量％以上のマンナン含量、又は任意選択で、乾燥ピキア属の抽出物の総重量の少なくとも５０重量％のマンナン含量を含む。

特定の実施形態では、ピキア属の抽出物を含有する相を、砂が存在する１０５℃（又は約１０５℃）のオーブン熱の中を、一定重量が得られる／観察されるまで通過させることにより、ピキア属の抽出物の相を乾燥させる（かつ固形分含量を測定する）。

特定の実施形態では、ピキア属の乾燥抽出物の固形分含量は、１０〜２００ｇ／Ｌ、又は任意選択で、２６〜４０ｇ／Ｌである。

特定の実施形態では、室温（２５℃）で電位差法により測定されるｐＨは、４．５〜８．５の値、任意選択で、６．０〜７．０となる。

総糖含量の判定に、デュボワ法を使用することができる。濃縮硫酸及びフェノールの存在下で、還元糖から橙黄色の化合物が得られる。標準範囲から、サンプルの総糖含量を測定することができる。特定の実施形態では、ピキア属の乾燥抽出物の総糖含量は、７〜１４５ｇ／Ｌ、又は任意選択で、１８〜２９ｇ／Ｌである。特定の実施形態では、ピキア属の乾燥抽出物は、ピキア属の乾燥抽出物の全固形分の重量と比較して、ピキア属の乾燥抽出物の少なくとも３０重量％の総糖重量を含有し、任意選択で、ピキア属の乾燥抽出物の少なくとも５０重量％を含有する。

特定の実施形態では、ピキア属の乾燥抽出物の炭水化物画分は、約１８０〜約８００，０００Ｄａ、任意選択で、約５０００〜約５１５，０００Ｄａ、任意選択で、約６０００〜約２７０，０００Ｄａの重量平均分子量を有するオリゴ糖及び多糖類の形態の（又は本質的にそれらの形態の）マンノース及びグルコースから構成される。特定の実施形態では、ピキア属の乾燥抽出物中のオリゴ糖及び多糖類の、少なくとも７０％（又は約７０％）、任意選択で、少なくとも７５％（又は約７５％）、少なくとも８０％（又は約８０％）、任意選択で、少なくとも８５％（又は約８５％）、少なくとも９０％（又は約９０％）、任意選択で、少なくとも９５％（又は約９５％）、又は１００％（又は約１００％）は、前述の重量平均分子量の範囲内にある。

タンパク質含量タンパク質の測定は、ケルダール法によって得られる。特定の実施形態では、ピキア属の乾燥抽出物のタンパク質含量は、４〜９０ｇ／Ｌ、又は任意選択で、１２〜１８ｇ／Ｌである。ピキア属の乾燥抽出物は、ピキア属の乾燥抽出物中の全固形分の、４５％未満のタンパク質、又は任意選択で、３０％未満のタンパク質を含有する。

特定の実施形態では、ピキア属の乾燥抽出物は、マンナン、オリゴ糖及び多糖類の形態で重合したマンノースを含み、その重量平均分子量は、約１８０〜約８００，０００Ｄａ、任意選択で、約５０００〜約５１５，０００Ｄａ、任意選択で、約６０００〜約２７０，０００Ｄａのピキア属の乾燥抽出物を含む。特定の実施形態では、ピキア属の乾燥抽出物中のオリゴ糖及び多糖類の、少なくとも７０％（又は約７０％）、任意選択で、少なくとも７５％（又は約７５％）、少なくとも８０％（又は約８０％）、任意選択で、少なくとも８５％（又は約８５％）、少なくとも９０％（又は約９０％）、任意選択で、少なくとも９５％（又は約９５％）、又は１００％（又は約１００％）は、前述の重量平均分子量の範囲内にある。

特定の実施形態では、抽出プロセスは、タンパク質の酵素加水分解の工程後に、５０００Ｄａ未満の重量平均分子量を有するタンパク質を（例えば、濾過により）除去する工程を含む。したがって、ピキア属の抽出物は、５０００Ｄａ未満の重量平均分子量を有するタンパク質及び／又はペプチドを含まないか、又は実質的に含まない。

特定の実施形態では、上記の抽出プロセスは、濾過前にピキア属の抽出物を脱臭、脱色及び／又は安定化させる工程を含んでもよい。濾過は、プレス濾過、及び滅菌濾過であり得る。

特定の実施形態では、使用される抽出物は、様々なピキア・アノマーラに属する。産生プロセスの特定の非限定的な例を以下に記載する。
−ピキア・アノマーラの抽出物（又は酵母）を、成長に適合した培養培地中で培養し、次いで遠心分離してバイオマスを回収する。
−次いで、バイオマスをボールミルで粉砕する。次いで、粉砕された材料を、１リットル当たり５０グラムの濃度で水に再懸濁させた後、基本培地で３０℃で６時間、酵素加水分解する。
−加水分解後、産生物を遠心分離し、滅菌前に濾過する。
−異なるサイズのフィルタ上で連続的に濾過することにより、固形物の総重量に対して少なくとも３０％のマンナンを含有する加水分解物が得られ、かつ／又は特定の重量平均分子量のタンパク質が得られる。（得られた加水分解物は淡黄色の透明な液体水溶液の形態である。）

特定の実施形態では、ピキア・アノマーラ抽出物は、以下の製造例に従って得られる。

１．ピキア・アノマーラ抽出物Ａ：
Ｉ．ピキア・アノマーラ抽出物Ａの抽出：
ピキア・アノマーラ抽出物Ａの調製は、以下の工程を含む。
−成長に適合した環境における酵母ピキア・アノマーラの培養、
−バイオマスを回収するための遠心分離、
−バイオマスの可溶化、
−塩基性ｐＨでの酵素加水分解、
−可溶性相と不溶性相との分離、
−熱処理
−濾過、及び
−滅菌濾過。
ＩＩ．ピキア・アノマーラ抽出物Ａの特性評価：
上記のピキア・アノマーラ抽出物Ａは、以下を特徴とする。
− −４８〜８４ｇ／Ｌの固形分含量、
− −４〜９のｐＨ、
− −１９〜４８ｇ／Ｌのタンパク質含量、及び
− −１０〜４２ｇ／Ｌの総糖含量。

２．ピキア・アノマーラ抽出物Ｂ
Ｉ．ピキア・アノマーラ抽出物Ｂの抽出：
ピキア・アノマーラ抽出物Ｂの調製は、以下の工程を含む。
−成長に適合した環境における酵母ピキア・アノマーラの培養、
−バイオマスを回収するための遠心分離、
−バイオマスの可溶化、
−酸ｐＨでの酵素加水分解、
−可溶性相と不溶性相との分離、
−熱処理
−濾過、及び
−滅菌濾過。
ＩＩ．ピキア・アノマーラ抽出物Ｂの特性評価：
上記のピキア・アノマーラ抽出物Ｂは、以下を特徴とする。
− −５８〜９５ｇ／Ｌの固形分含量、
− −４〜９のｐＨ、
− −２３〜５４ｇ／Ｌのタンパク質含量、及び
− −１２〜３２ｇ／Ｌの総糖含量。

３．ピキア・アノマーラ抽出物Ｃ
Ｉ．ピキア・アノマーラ抽出物Ｃの抽出：
ピキア・アノマーラ抽出物Ｃの調製は、以下の工程を含む。
−成長に適合した環境における酵母ピキア・アノマーラの培養、
−バイオマスを回収するための遠心分離、
−バイオマスの可溶化、
−基本培地での連続的な酵素加水分解、
−可溶性相と不溶性相との分離、
−熱処理
−濾過、及び
−滅菌濾過。
ＩＩ．ピキア・アノマーラ抽出物Ｃの特性評価：
上記のピキア・アノマーラ抽出物Ｃは、以下を特徴とする。
− −９１〜１９５ｇ／Ｌの固形分含量、
− −４〜９のｐＨ、
− −３６〜１１１ｇ／Ｌのタンパク質含量、及び
− −１８〜６５ｇ／Ｌの総糖含量。

４．ピキア・アノマーラ抽出物Ｄ
Ｉ．ピキア・アノマーラ抽出物Ｄの抽出：
ピキア・アノマーラ抽出物Ｄの調製は、以下の工程を含む。
−成長に適合した環境における酵母ピキア・アノマーラの培養、
−バイオマスを回収するための遠心分離、
−バイオマスの可溶化、
−酸ｐＨで少なくとも２つの酵素と同時に加水分解、
−可溶性相と不溶性相との分離、
−熱処理
−濾過、及び
−滅菌濾過。
ＩＩ．ピキア・アノマーラ抽出物Ｄの特性評価：
上記のピキア・アノマーラ抽出物Ｄは、以下を特徴とする。
− −５〜５３ｇ／Ｌの固形分含量、
− −４〜９のｐＨ、
− −２〜３０ｇ／Ｌのタンパク質含量、及び
− −１〜１８ｇ／Ｌの総糖含量。

５．ピキア・アノマーラ抽出物Ｅ
Ｉ．ピキア・アノマーラ抽出物Ｅの抽出：
ピキア・アノマーラ抽出物Ｅの調製は、以下の工程を含む。
−成長に適合した環境における酵母ピキア・アノマーラの培養、
−バイオマスを回収するための遠心分離、
−ヒドログリコール性環境におけるバイオマスの可溶化、
−酸ｐＨで少なくとも２つの酵素と同時に加水分解、
−可溶性相と不溶性相との分離、
−熱処理
−濾過、及び
−滅菌濾過。
ＩＩ．ピキア・アノマーラ抽出物Ｅの特性評価：
上記のピキア・アノマーラ抽出物Ｅは、以下を特徴とする。
− −１７２〜３００ｇ／Ｌの固形分含量、
− −４〜９のｐＨ、
− −６９〜１７０ｇ／Ｌのタンパク質含量、及び
− −３４〜１００ｇ／Ｌの総糖含量。

特定の実施形態では、ピキア属の抽出物又は抽出物源は、ＤＰ１〜ＤＰ４４４４の平均重合度を有するオリゴ糖及び多糖類を含み、ＤＰ３０〜ＤＰ２８６０、任意選択で、ＤＰ３５〜ＤＰ１５００の平均重合度を有するオリゴ糖及び多糖類を含む。特定の実施形態では、ピキア属の乾燥抽出物中のオリゴ糖及び多糖類の、少なくとも７０％（又は約７０％）、任意選択で、少なくとも７５％（又は約７５％）、少なくとも８０％（又は約８０％）、任意選択で、少なくとも８５％（又は約８５％）、少なくとも９０％（又は約９０％）、任意選択で、少なくとも９５％（又は約９５％）、又は１００％（又は約１００％）は、前述の平均重合度の範囲内にある。

特定の実施形態では、ピキア属の抽出物、又は抽出物源は、少なくとも０．３ｍｇ／ｍＬ（又は約０．３ｍｇ／ｍＬ）、任意選択で、少なくとも０．５ｍｇ／ｍＬ（又は約０．５ｍｇ／ｍＬ）、任意選択で、少なくとも１ｍｇ／ｍＬ（又は約１ｍｇ／ｍＬ）、任意選択で、少なくとも１．５ｍｇ／ｍＬ（又は約１．５ｍｇ／ｍＬ）、任意選択で、少なくとも２ｍｇ／ｍＬ（又は約２ｍｇ／ｍＬ）、任意選択で、少なくとも２．５ｍｇ／ｍＬ（又は約２．５ｍｇ／ｍＬ）、任意選択で、少なくとも３ｍｇ／ｍＬ（又は約３ｍｇ／ｍＬ）、任意選択で、少なくとも３．５ｍｇ／ｍＬ（又は約３．５ｍｇ／ｍＬ）、任意選択で、少なくとも４ｍｇ／ｍＬ（又は約４ｍｇ／ｍＬ）、任意選択で、少なくとも４．５ｍｇ／ｍＬ（又は約４．５ｍｇ／ｍＬ）、任意選択で、少なくとも５ｍｇ／ｍＬ（又は約５ｍｇ／ｍＬ）、又は少なくとも５．５ｍｇ／ｍＬ（又は約５．５ｍｇ／ｍＬ）、任意選択で、少なくとも６ｍｇ／ｍＬ（又は約６ｍｇ／ｍＬ）、又は、任意選択で、少なくとも６．５ｍｇ／ｍＬ（又は約６．５ｍｇ／ｍＬ）、任意選択で、少なくとも７ｍｇ／ｍＬ（又は約７ｍｇ／ｍＬ）、任意選択で、少なくとも７．５ｍｇ／ｍＬ（又は約７．５ｍｇ／ｍＬ）、任意選択で、少なくとも８ｍｇ／ｍＬ（又は約８ｍｇ／ｍＬ）、任意選択で、少なくとも８．５ｍｇ／ｍＬ（又は約８．５ｍｇ／ｍＬ）、任意選択で、少なくとも９ｍｇ／ｍＬ（又は約９ｍｇ／ｍＬ）、任意選択で、少なくとも８．５ｍｇ／ｍＬ（又は約８．５ｍｇ／ｍＬ）、任意選択で、少なくとも９ｍｇ／ｍＬ（又は約９ｍｇ／ｍＬ）、任意選択で、少なくとも９．５ｍｇ／ｍＬ（又は約９．５ｍｇ／ｍＬ）、又は任意選択で、少なくとも１０ｍｇ／ｍＬ（又は約１０ｍｇ／ｍＬ）、１００ｍｇ／ｍＬ（又は約１００ｍｇ／ｍＬ）まで、任意選択で、９５ｍｇ／ｍＬ（又は約９５ｍｇ／ｍＬ）まで、任意選択で、９０ｍｇ／ｍＬ（又は約９０ｍｇ／ｍＬ）まで、任意選択で、８５ｍｇ／ｍＬ（又は約８５ｍｇ／ｍＬ）まで、任意選択で、８０ｍｇ／ｍＬ（又は約８０ｍｇ／ｍＬ）まで、任意選択で、７５ｍｇ／ｍＬ（又は約７５ｍｇ／ｍＬ）まで、任意選択で、７０ｍｇ／ｍＬ（又は約７０ｍｇ／ｍＬ）まで、任意選択で、６５ｍｇ／ｍＬ（又は約６５ｍｇ／ｍＬ）まで、任意選択で、６０ｍｇ／ｍＬ（又は約６０ｍｇ／ｍＬ）まで、任意選択で、５５ｍｇ／ｍＬ（又は約５５ｍｇ／ｍＬ）まで、任意選択で、５０ｍｇ／ｍＬ（又は約５０ｍｇ／ｍＬ）まで、任意選択で、４５ｍｇ／ｍＬ（又は約４５ｍｇ／ｍＬ）まで、任意選択で、４０ｍｇ／ｍＬ（又は約４０ｍｇ／ｍＬ）まで、任意選択で、３５ｍｇ／ｍＬ（又は約３５ｍｇ／ｍＬ）まで、任意選択で、３０ｍｇ／ｍＬ（又は約３０ｍｇ／ｍＬ）まで、任意選択で、２５ｍｇ／ｍＬ（又は約２５ｍｇ／ｍＬ）まで、任意選択で、２０ｍｇ／ｍＬ（又は約２０ｍｇ／ｍＬ）まで、任意選択で、１５ｍｇ／ｍＬ（又は約１５ｍｇ／ｍＬ）までの濃度のピキアの抽出物を、局所適用後に、使用者の角膜組織細胞（すなわち、内部の角膜液面）に提供するように、又はこれらに接触して提供するように本発明の組成物中に存在している。

特定の実施形態では、ピキア属の抽出物又は抽出物源は、本発明の組成物中に、組成物全体の０．０１重量％（又は約０．０１重量％）から、任意選択で、０．０５重量％（又は約０．０５重量％）から、任意選択で、０．１重量％（又は約０．１重量％）から、任意選択で、０．５重量％（又は約０．５重量％）から、任意選択で、１重量％（又は約１重量％）から、任意選択で、１．５重量％（又は約１．５重量％）から、任意選択で、２重量％（又は約２重量％）から、任意選択で、２．５重量％（又は約２．５重量％）から、任意選択で、３重量％（又は約３重量％）から、任意選択で、３．５重量％（又は約３．５重量％）から、任意選択で、４重量％（又は約４重量％）から、任意選択で、４．５重量％（又は約４．５重量％）から、任意選択で、５重量％（又は約５重量％）から、任意選択で、５．５重量％（又は約５．５重量％）から、任意選択で、６重量％（又は約６重量％）から、任意選択で、６．５重量％（又は約６．５重量％）から、任意選択で、７重量％（又は約７重量％）から、任意選択で、７．５重量％（又は約７．５重量％）から、任意選択で、８重量％（又は約８重量％）から、任意選択で、８．５重量％（又は約８．５重量％）から、任意選択で、９重量％（又は約９重量％）から、任意選択で、９．５重量％（又は約９．５重量％）から、任意選択で、１０重量％（又は約１０重量％）から、任意選択で、１０．５重量％（又は約１０．５重量％）から、任意選択で、１１重量％（又は約１１重量％）から、任意選択で、１１．５重量％（又は約１１．５重量％）から、任意選択で、１２重量％（又は約１２重量％）から、任意選択で、１２．５重量％（又は約１２．５重量％）から、任意選択で、１３重量％（又は約１３重量％）から、任意選択で、１３．５重量％（又は約１３．５重量％）から、任意選択で、１４重量％（又は約１４重量％）から、任意選択で、１４．５重量％（又は約１４．５重量％）から、任意選択で、１５重量％（又は約１５重量％）から、任意選択で、１５．５重量％（又は約１５．５重量％）から、任意選択で、１６重量％（又は約１６重量％）から、任意選択で、１６．５重量％（又は約１６．５重量％）から、任意選択で、１７重量％（又は約１７重量％）から、任意選択で、１７．５重量％（又は約１７．５重量％）から、任意選択で、１８重量％（又は約１８重量％）から、任意選択で、１８．５重量％（又は約１８．５重量％）から、任意選択で、１９重量％（又は約１９重量％）から、任意選択で、１９．５重量％（又は約１９．５重量％）から、任意選択で、２０重量％（又は約２０重量％）から、任意選択で、２０．５重量％（又は約２０．５重量％）から、３０重量％（又は約３０重量％）まで、任意選択で、３５重量％（又は約３５重量％）まで、任意選択で、４０重量％（又は約４０重量％）まで、任意選択で、４５重量％（又は約４５重量％）まで、任意選択で、５０重量％（又は約５０重量％）まで、任意選択で、５５重量％（又は約５５重量％）まで、任意選択で、６０重量％（又は約６０重量％）まで、任意選択で、６５重量％（又は約６５重量％）まで、任意選択で、７０重量％（又は約７０重量％）まで、任意選択で、７５重量％（又は約７５重量％）まで、任意選択で、８０重量％（又は約８０重量％）まで、任意選択で、８５重量％（又は約８５重量％）まで、任意選択で、９０重量％（又は約９０重量％）まで、任意選択で、９５重量％（又は約９５重量％）まで、又は任意選択で、１００重量％（又は約１００重量％）の濃度で存在する。

透過促進剤
特定の実施形態では、本発明の組成物は、任意選択で、透過促進剤を含む。

好適な透過促進剤は、サポニン、ポリオキシエチレン、ポリオキシエチレン４−、９−、１０−、及び２３−ラウリルエーテルなどの脂肪酸のポリオキシエチレンエーテル、ポリオキシエチレン１０−及び２０−セチルエーテル、ポリオキシエチレン１０−及び２０−ステアリルエーテル、モノオレイン酸ソルビタン、モノラウリン酸ソルビタン、モノラウリン酸ポリオキシエチレン、モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタンなどのポリオキシエチレンソルビタン、デカメトニウム、臭化デカメトニウム、及び臭化ドデシルトリメチルアンモニウムなどの界面活性剤；天然ポリ酸（例えば、クエン酸）、リン酸塩（例えば、ピロリン酸二ナトリウム）、ホスホン酸塩、ビスホスホン酸塩（例えば、エトリドロン酸）、アミノカルボン酸（例えば、エチレンジアミン四酢酸（ethylenediaminetetraacetic acid、ＥＤＴＡ）及びＥＤＴＡ二ナトリウム）及びエチレンジアミン−Ｎ、Ｎ’−二コハク酸（ethylenediamine-N,N'-disuccinic acid、ＥＤＤＳ））などのキレート化剤；コール酸、デオキシコール酸、グリココール酸、グリコデオキシコール酸、タウロコール酸、タウロデオキシコール酸、コール酸ナトリウム、グリココール酸ナトリウム、グリココール酸塩、デオキシコール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、グリコデオキシコール酸ナトリウム、タウロデオキシコール酸ナトリウム、ケノデオキシコール酸、及びウルソデオキシコール酸などの胆汁酸塩及び胆汁酸；サポニンＥＤＴＡ、フシジン酸、ポリオキシエチレン９−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン２０−ステアリルエーテル、グリココール酸塩、又は上記のいずれかの混合物を含む、フシジン酸誘導体、グリチルリジン酸、及びグリチルリチン酸アンモニウムを単独で又は組み合わせてのいずれか一方で含む（これらから選択されるか、又はこれらからなる群から選択される）。

投与される透過促進剤の濃度は、眼の粘膜又は他のバリア膜を介した化合物及び／又は抽出物の吸収を十分に増加させるために必要な最小量であるべきである。概ね、組成物全体（ｗ／ｖ）の０．０１％（又は約０．０１％）から、任意選択で、０．０５％（又は約０．０５％）から、任意選択で、０．１％（又は約０．１％）から、任意選択で、０．１５％（又は約０．１５％）から、任意選択で、０．２％（又は約０．２％）から、任意選択で、０．２５％（又は約０．２５％）から２％（又は約２％）まで、任意選択で、２．５％（又は約２．５％）まで、任意選択で、３％（又は約３％）まで、任意選択で、３．５％（又は約３．５％）まで、任意選択で、４％（又は約４％）まで、任意選択で、４．５％（又は約４．５％）まで、任意選択で、５％（又は約５％）まで、任意選択で、５．５％（又は約５．５％）まで、任意選択で、６％（又は約６％）まで、任意選択で、６．５％（又は約６．５％）まで、任意選択で、７％（又は約７％）まで、任意選択で、７．５％（又は約７．５％）まで、任意選択で、８％（又は約８％）まで、任意選択で、８．５％（又は約８．５％）まで、任意選択で、９％（又は約９％）まで、任意選択で、９．５％（又は約９．５％）まで、任意選択で、１０％（又は約１０％）まで、任意選択で、１０．５％（又は約１０．５％）まで、任意選択で、１１％（又は約１１％）まで、任意選択で、１１．５％（又は約１１．５％）まで、任意選択で、１２％（又は約１２％）まで、任意選択で、１２．５％（又は約１２．５％）まで、任意選択で、１３％（又は約１３％）まで、任意選択で、１３．５％（又は約１３．５％）まで、任意選択で、１４％（又は約１４％）まで、任意選択で、１４．５％（又は約１４．５％）まで、任意選択で、１５％（又は約１５％）まで、任意選択で、１５．５％（又は約１５．５％）まで、任意選択で、１６％（又は約１６％）まで、任意選択で、１６．５％（又は約１６．５％）まで、任意選択で、１７％（又は約１７％）まで、任意選択で、１７．５％（又は約１７．５％）まで、任意選択で、１８％（又は約１８％）まで、任意選択で、１８．５％（又は約１８．５％）まで、任意選択で、１９％（又は約１９％）まで、任意選択で、１９．５％（又は約１９．５％）まで、任意選択で、２０％（又は約２０％）までの範囲に及ぶ濃度が、本発明の組成物で有用である。

眼科的に許容可能な担体
本発明の組成物はまた、水性、水中油型エマルション、又は油中水型エマルション担体も含む。担体は、眼科的に許容可能である。有用な水中油型担体及び水−油担体は、米国特許公開第２００３０１６５５４５Ａ１号、並びに米国特許第９４８０６４５号、同第８８２８４１２号、及び同第８４９６９７６号に見出すことができ、これらの特許文献の各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

眼科的に許容可能な担体（又は、本発明の組成物）は、任意選択で、１つ若しくは２つ以上の更なる賦形剤及び／又は１つ若しくは２つ以上の更なる有効成分を含んでもよい。このような任意選択の構成成分の例について、以下に説明する。

眼科用組成物において使用される賦形剤としては、粘滑剤、等張化剤、防腐剤、キレート剤、緩衝剤（本発明の有機酸以外、及びそれに加えて）、並びに界面活性剤が挙げられるが、これらに限定されない。その他の賦形剤としては、可溶化剤、安定化剤、快適性増強剤、ポリマー、皮膚軟化剤、ｐＨ調整剤（本発明の有機酸以外、及びそれに加えて）、並びに／又は潤滑剤が挙げられる。水、水と水混和性溶媒の混合物、例えば０．５％〜５％の非毒性水溶性ポリマーを含む植物油又は鉱物油、天然生成物、例えば寒天及びアカシア、デンプン誘導体、例えば酢酸デンプン及びヒドロキシプロピルデンプン、並びに他の合成生成物、例えばポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメチルエーテル、酸化ポリエチレン、及び、好ましく架橋したポリアクリル酸、並びにこれらの組み合わせをも含む任意の種々の賦形剤が、本発明の組成物において使用されてよい。

本発明の実施形態と共に使用される粘滑剤又は平滑化剤としては、セルロース誘導体（ヒドロキシエチルセルロース、メチルセルロース、ヒプロメロース、又はこれらの混合物など）、ヒアルロン酸、タマリンド種子抽出物、グリセリン、ポリビニルピロリドン、酸化ポリエチレン、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、及びポリアクリル酸、並びにこれらの混合物が挙げられるが、これに限定されない。特定の実施形態では、ヒアルロン酸、プロピレングリコール、タマリンド種子抽出物、グリセリン及び／又はポリエチレングリコール４００のうちの１つ若しくは２つ以上が、粘滑剤又は平滑化剤である。特定の実施形態では、粘滑材又は平滑化剤は、ヒアルロン酸、タマリンド種子抽出物又はこれらの混合物から選択される。

本発明の組成物は、被験者の眼への適用に対して眼科的に適している。用語「水溶性」は、通常、賦形剤が約５０重量％よりも多く、より好ましくは約７５重量％よりも多く、特に約９０重量％よりも多い水である水性製剤を表す。特定の実施形態では、本発明の組成物はまた、眼を刺激する化合物を本質的に含まない。特定の実施形態では、本発明の組成物は、遊離脂肪酸及びＣ_１〜Ｃ_４アルコールを本質的に含まない。特定の実施形態では、本発明の組成物は、組成物全体の４０重量％（又は約４０重量％）未満、任意選択で、３５重量％（又は約３５重量％）未満、任意選択で、３０重量％（又は約３０％）未満、任意選択で、２５重量％（又は約２５重量％）未満、任意選択で、２０重量％（又は約２０重量％）未満、任意選択で、１５重量％（又は約１５重量％）未満、任意選択で、１０重量％（又は約１０重量％）未満、又は任意選択で、５重量％（又は約５重量％）未満の非アルコール、有機賦形剤又は溶媒を含む。これらの液滴は、好ましくは無菌であり得、したがって、製剤の静菌成分を不要にし得る単回用量のアンプルから送達され得る。あるいは、滴は、当該技術分野において周知である装置のような、送達される際に組成物から任意の防腐剤を抽出する装置を好ましくは備え得る、多回用量ボトルから送達され得る。

特定の実施形態では、本発明の組成物は等張性である、又は蒸発及び／若しくは疾患により引き起こされるあらゆる涙の高張性と闘うために、わずかに低張性である。これは、製剤のオスモル濃度をキログラム当たり２１０〜３２０ミリオスモル（ｍＯｓｍ／ｋｇ）又はその近傍のレベルに近づけるために、等張化剤を必要とする場合がある。本発明の組成物は、一般に、２２０〜３２０ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲のオスモル濃度を有する、又は任意選択で、２３５〜３００ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲のオスモル濃度を有する。眼科用組成物は、一般に、無菌水溶液として製剤化することができる。

本発明の組成物のオスモル濃度は、組成物の意図される使用と適合する値に等張化剤を用いて調節され得る。例えば、組成物の浸透圧は、水中の塩化ナトリウム約０．９ｗ／ｖ％に相当する正常な涙液の浸透圧に近似するように調節されてもよい。好適な等張性調整剤の例としては、ナトリウム、カリウム、カルシウム、及び塩化マグネシウム、デキストロース、グリセリン、プロピレングリコール、マンニトール、ソルビトールなど及びこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、組成物の張度を調整するために塩化ナトリウムと塩化カリウムとの組み合わせを使用する。

本発明の組成物はまた、医薬的に活性な化合物を投与するために使用することができる。このような化合物としては、緑内障治療薬、鎮痛剤、抗炎症薬及び抗アレルギー薬、並びに抗菌薬が挙げられるが、これらに限定されない。医薬的に活性な化合物のより具体的な例としては、ベタキソロール、チモロール、ピロカルピン、炭酸脱水酵素阻害剤及びプロスタグランジン、ドーパミン作動性アンタゴニスト、術後抗高血圧剤、例えばパラアミノクロニジン（アプラクロニジン）塩、シプロフロキサシン、モキシフロキサシン、及びトブラマイシンなどの抗感染症剤、非ステロイド性及びステロイド性抗炎症薬、例えばナプロキセン、ジクロフェナク、ネパフェナク、スプロフェン、ケトロラク、テトラヒドロコルチゾール及びデキサメタゾン、ＰＤＥ４阻害剤などのドライアイ治療薬、並びにＨ１／Ｈ４阻害剤、Ｈ４阻害剤、オロパジン又はこれらの混合物などの抗アレルギー薬が挙げられる。

本発明の製剤を構成する成分の濃度が変化し得ることも、想定されている。当業者は、所与の製剤中の成分の添加、置換、及び／又は削除に応じて濃度が変化し得ることを理解するであろう。

特定の実施形態では、本発明の組成物は、意図される使用と適合性のあるｐＨを有してもよく、多くの場合、４（又は約４）〜１０（又は約１０）、任意選択で、６（又は約６）〜８（又は約８）、任意選択で、６．５（又は約６．５）〜７．５（又は約７．５）、又は任意選択で、６．８（又は約６．８）〜７．２（又は約７．２）の範囲である。

特定の実施形態では、リン酸塩、ホウ酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、ヒスチジン、トリス、ビス−トリスなど、及びこれらの混合物などの様々な従来の緩衝剤が用いられてもよい。ホウ酸塩緩衝剤としては、ホウ酸及びその塩、例えば、ホウ酸ナトリウム又はホウ酸カリウムが挙げられる。ホウ酸又はホウ酸の塩を溶液中で生成する、四ホウ酸カリウム又はメタホウ酸カリウムも使用してもよい。ホウ酸ナトリウム十水和物などの水和塩も使用し得る。リン酸緩衝液としては、リン酸及びその塩、例えば、Ｍ_２ＨＰＯ_４及びＭＨ_２ＰＯ_４が挙げられ、ここで、Ｍはナトリウム及びカリウムなどのアルカリ金属である。水和塩も使用し得る。本発明の一実施形態では、Ｎａ_２ＨＰＯ_４．７Ｈ_２Ｏ及びＮａＨ_２ＰＯ_２．Ｈ_２Ｏは緩衝剤として使用される。リン酸塩という用語はまた、溶液中にリン酸又はリン酸の塩を生成する化合物を含む。加えて、上記緩衝剤のための有機対イオンも用いられてもよい。緩衝剤の濃度は、一般に、約０．０１〜２．５ｗ／ｖ％で変化し、より好ましくは約０．０５〜約０．５ｗ／ｖ％で変化する。

特定の実施形態では、本発明の組成物の粘度は、ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ ＡＲ ２０００レオメータを使用して測定されるとき、約１〜約５００ｃｐｓ、任意選択で、約１０〜約２００ｃｐｓ、又は任意選択で、約１０〜約１００ｃｐｓの範囲である。ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ ＡＲ ２０００レオメータは、４０ｍｍの鋼板形状を用いるＴＡ Ｒｈｅｏｌｏｇｉｃａｌ ＡｄｖａｎｔａｇｅソフトウェアのＡＲ２０００フロー試験方法と共に使用されるべきであり、粘度範囲は、０ｓｅｃ^−１〜２００ｓｅｃ^−１の剪断速度を制御する定常状態流量を測定することによって得られるべきである。

特定の実施形態では、本発明の組成物は、点眼溶液、洗眼溶液、コンタクトレンズ潤滑及び／若しくは再湿潤溶液、スプレー、ミスト、又は組成物を眼に投与する任意の他の様式の形態として、及びその形態において有用である。

本発明の組成物はまた、コンタクトレンズ用の充填溶液として及び充填溶液の形態において有用であり得る。特定の実施形態では、充填溶液として、本発明の組成物はブリスターパッケージで封止されてもよく、また滅菌が施されるのに好適であってもよい。

ブリスターパッケージ及び滅菌技術の例は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる以下の参考文献、米国特許第Ｄ４３５，９６６号、同第４，６９１，８２０号、同第５，４６７，８６８号、同第５，７０４，４６８号、同第５，８２３，３２７号、同第６，０５０，３９８号、同第５，６９６，６８６号、同第６，０１８，９３１号、同第５，５７７，３６７号、及び同第５，４８８，８１５号に開示されている。製造プロセスのこの部分は、抗アレルギー剤で眼科用デバイスを処理する、すなわち、パッケージを封止する前に抗アレルギー剤を溶液に添加し、続いてパッケージを滅菌する別の方法を提示する。これは、抗アレルギー剤を用いて眼科用デバイスを処理する好ましい方法である。

滅菌は、異なる温度及び時間で行い得る。好ましい滅菌条件は、約１００℃で約８時間〜約１５０℃で約０．５分間の範囲である。より好ましい滅菌条件は、約１１５℃で約２．５時間〜約１３０℃で約５．０分間の範囲である。最も好ましい滅菌条件は約１２４℃で約１８分間である。

充填溶液として使用する場合、本発明の組成物は水系溶液であってもよい。典型的な溶液としては、生理食塩水、他の緩衝液及び脱イオン水が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、充填溶液は、塩化ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、リン酸水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、又は同酸の対応するカリウム塩を含む、塩を含有する脱イオン水又は生理食塩水の水系溶液であるが、これらに限定されない。これらの成分は一般に化合して、酸及びその共役塩基を含む緩衝液を形成するので、酸及び塩基が加わっても、ｐＨには比較的小さな変化しか起こらない。特定の実施形態では、充填溶液のｐＨは上記のとおりである。緩衝液は更に、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、水酸化ナトリウム、２，２−ビス（ヒドロキシメチル）−２，２’，２”−ニトリロトリエタノール、ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸、クエン酸、クエン酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、酢酸、酢酸ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸など、及びこれらの組み合わせを含んでもよい。好ましくは、溶液は、リン酸塩緩衝生理食塩水又は脱イオン水である。特に好ましい溶液は、約５００ｐｐｍ〜約１８，５００ｐｐｍのホウ酸ナトリウム、最も特に好ましくは約１０００ｐｐｍのホウ酸ナトリウムを含有する。

充填溶液中に組み込まれたいずれかの成分が酸化的分解を受ける場合、そのような成分を含有する充填溶液を安定化させる剤を添加してもよい。このような「酸化安定化剤」としては、限定するものではないが、ＥＤＴＡと、デイクエストと、デスフェラールと、シリカと、キトサン、セルロース及びその誘導体などのキチン誘導体と、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”−ヘキサン（２−ピリジル）−１，３，５−トリス（アミノメチル）ベンゼンと、クラウンエーテル、ノット及びカテナンを含有するリガンドなどの特定のマクロ環式配位子とが挙げられるが、これらに限定されない。Ｄａｖｉｄ Ａ．Ｌｅｉｇｈ ｅｔ ａｌ Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ．Ｅｄ．，２００１，４０，Ｎｏ．８，ｐｇｓ．１５３８−１５４２及びＪｅａｎ−Ｃｌａｕｄｅ Ｃｈａｍｂｒｏｎ ｅｔ ａｌ．のＰｕｒｅ ＆ Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９０，Ｖｏｌ．６２，Ｎｏ．６、ｐｇｓ．１０２７−１０３４を参照。酸化安定化剤としては、２，２’，２”，６，６’，６”−ヘキサン−（１，１−ジメチルエチル）４，４’，４”−［（２，４，６−トリメチル−１，３，５−ベンゼントリイル）−トリメチレン］−トリフェノール（Ｉｒｇａｎｏｘ １３３０）、１，３，５トリス［３，５−ジ（１，１−ジメチルエチル）４−ヒドロキシベンジル］−１Ｈ，３Ｈ，５Ｈ−１，３，５−トリアジン−２，４，６トリオン、ペンタエリスリチルテトラキス［３−［３，５−ジ（１，１−ジメチルエチル）−４−ヒドロキシフェニル］−プロピオネート］、オクタデシル−３−［３，５−ジ（１，１−ジメチルエチル）−４−ヒドロキシフェニル］−プロピオネート、トリス［２，４−ジ（１，１−ジメチルエチル）−フェニル］−ホスファイト、２，２’−ジ（オクタデシルオキシ）−５，５’−スピロビ（１，３，２−ジオキサホスホリナン）、ジオクタデシルジスルフィド、ジオクタデシル−３，３’−チオジプロピオネート、ジオクタデシル−３，３’−チオジプロピオネート、ブチルヒドロキシトルエン、エチレンビス［３，３−ジ［３−（１，１−ジメチルエチル）−４−ヒドロキシフェニル］ブチレート］及びこれらの混合物からなる群から選択される化合物などの酸化を抑制する他の化合物が挙げられ得る。好ましい酸化安定化剤は、ジエチレントリアミン五酢酸（「ＤＴＰＡ」）、又はＣａＮａ３ＤＴＰＡ、ＺｎＮａ３ＤＴＰＡ、及びＣａ２ＤＴＰＡなどのＤＴＰＡの塩である。参照によりその全体が本明細書に組み込まれる「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇ Ｏｘｉｄａｔｉｖｅｌｙ Ｕｎｓｔａｂｌｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ」と題された、２００６年３月１７日出願の米国特許出願公開第６０／７８３，５５７号及びその対応する非仮出願を参照。特定の実施形態では、溶液中の酸化安定化剤の濃度は、約２．５μｍｏｌ／リットル〜約５０００μｍｏｌ／リットル、任意選択で、約２０μｍｏｌ／リットル〜約１０００μｍｏｌ／リットル、任意選択で約１００μｍｏｌ／リットル〜約１０００μｍｏｌ／リットル、又は任意選択で約１００μｍｏｌ／リットル〜約５００μｍｏｌ／であり得る。

特定の実施形態では、本発明の組成物は、週に１回、５日毎に１回、３日毎に１回、２日毎に１回、１日に２回、１日に３回、１日に４回、１日に５回、１日に６回、１日に８回、毎時間、又はより高頻度を含む任意の投与頻度での投与のために、製剤化される。このような投与頻度はまた、ユーザの治療ニーズに応じて変化する持続期間にて維持される。特定の治療レジメンの持続期間は、１回の投与から月又は年にわたるレジメンまで変化し得る。当業者は、特定の適応症に関する治療レジメンを決定することに精通しているであろう。

本発明のこのような組成物を含有する組成物及び製品は、当業者に周知の方法を用いて調製することができる。

以下の実施例にて示されるような本発明の任意の組成物は、本発明の組成物の具体的な実施形態を示すものであり、本発明を限定するものではない。その他の変更は、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、当業者により実行されることができる。

以下の試験方法を実施例で使用した。

（実施例１）
ピキア・アノマーラ発酵抽出物（ヒアルロジン）は、角膜組織細胞に局所適用されたときに、ヒト上角膜３Ｄ組織においてヒアルロン酸分泌を誘導した。理論に束縛されるものではないが、このような局所適用は、ピキア・アノマーラ発酵抽出物がヒト上角膜組織のタイトジャンクション構造（すなわち、組織内への化学的浸透を通常阻害するこれらの構造［例えば、膜又は薄膜バリア］）を通って拡散し、上角膜組織の内側に到達することを必要とすると考えられる。

上角膜３Ｄヒト組織は、ＭａｔＴｅｋ Ｃｏｍｐａｎｙ（Ａｓｈｌａｎｄ，ＭＡ，ＵＳＡ）から購入した。上角膜３Ｄヒト組織を受容すると、製造業者の取扱説明書に従って、それをＭａｔＴｅｋアッセイ培地で一晩インキュベートした。上角膜３Ｄヒト組織を、１群当たり３つの組織を有する５つの処置群に分割した。４種類の濃度のリン酸緩衝水溶液（ＰＢＳ）ビヒクル中のピキア・アノマーラ発酵抽出物（ヒアルロジン）１．９５ｍｇ／ｍＬ、７．８ｍｇ／ｍＬ、１９．５ｍｇ／ｍＬ、及び３９ｍｇ／ｍＬを、それぞれ、（ピキア・アノマーラ発酵抽出物を上述のタイトジャンクション構造を通して送達するように）処置群のうちの４つの角膜上皮表面に局所適用した。５つの処置群全てにおける上角膜組織を２日間インキュベートした。ピキア・アノマーラ発酵抽出物は、Ｓｉｌａｂ（Ｓｔ．Ｖｉａｎｃｅ，Ｆｒａｎｃｅ）により供給された。２日後、製造業者のプロトコルに従って、ＨＡ酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）キット（Ｋ−１２００，Ｅｃｈｅｌｏｎ，Ｓａｌｔ Ｌａｋｅ Ｃｉｔｙ，ＵＴ，ＵＳＡ）を使用して、ヒアルロン酸（ＨＡ）分泌を測定するために培養培地を収集した。活性を評価するために、比色変化は、マイクロプレートリーダー（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ２Ｅ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して測定した。このアッセイは、競合酵素結合免疫吸着アッセイ法を採用するため、試料中のＨＡ濃度と比色分析の変化との間に逆相関がある。標準曲線を生成して、ｘ軸上のＨＡ濃度及びｙ軸上の吸光度を用いて、対応するＨＡ濃度を示した。結果を図１に示す。

結果は、試験された濃度における局所適用が、角膜細胞におけるＨＡ産生の誘導を指向的に示すことを示唆しているが、タイトジャンクション構造（又は、他の表面膜若しくは薄膜層バリア）などの因子は、内部角膜組織に到達するピキア・アノマーラの濃度を低減し得る。このような状況では、浸透促進剤を組み込む本発明の実施形態が有用であり得る。

（実施例２）
上記のタイトジャンクション構造（又は、膜若しくは薄膜バリア）によって潜在的に引き起こされる妨害を低減するために、ヒト上角膜３Ｄ組織におけるヒアルロン酸分泌の誘導は、角膜組織の底部細胞層（すなわち、組織への化学的浸透を阻害するタイトジャンクション構造を有しない細胞層）を増殖培地中に浸漬するように、角膜組織をピキア・アノマーラ発酵抽出物（ヒアルロジン）を含有する増殖培地（すなわち、「処置」培地）と接触させることによって観察された。角膜組織の底部細胞層をピキア・アノマーラ発酵抽出物を含有する増殖培地と接触させることによって、抽出物は、任意のタイトジャンクション構造又は他の表面バリアを最初に通過する必要なく直接接触し、内側角膜組織内へと上方に移動することができ、角膜組織細胞へのピキア・アノマーラの改善された生物学的利用能をもたらす。

上角膜３Ｄヒト組織は、ＭａｔＴｅｋ Ｃｏｍｐａｎｙ（Ａｓｈｌａｎｄ，ＭＡ，ＵＳＡ）から購入した。上角膜３Ｄヒト組織を受領してから、製造元の使用説明書に従って、これらの組織をＭａｔＴｅｋアッセイ培地で終夜インキュベートした。上角膜３Ｄヒト組織を、１群当たり３つの組織を有する５つの処置群に分割した。ピキア・アノマーラ発酵抽出物（ヒアルロジン）を処置群のうちの４つの培養培地に添加して、それぞれ０．３９ｍｇ／ｍＬ、０．７８ｍｇ／ｍＬ、１．５６ｍｇ／ｍＬ、及び１．９５ｍｇ／ｍＬの培地濃度をそれぞれ生成し、ヒト上角膜組織の底部細胞層を接触させた。処置群の５つ全ての上角膜組織を２日間インキュベートした。ピキア・アノマーラ発酵抽出物は、Ｓｉｌａｂ（Ｓｔ．Ｖｉａｎｃｅ，Ｆｒａｎｃｅ）により供給された。２日後、製造業者のプロトコルに従って、ＨＡ酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）キット（Ｋ−１２００，Ｅｃｈｅｌｏｎ，Ｓａｌｔ Ｌａｋｅ Ｃｉｔｙ，ＵＴ，ＵＳＡ）を使用して、ヒアルロン酸（ＨＡ）分泌を測定するために培養培地を収集した。活性を評価するために、比色変化は、マイクロプレートリーダー（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ２Ｅ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して測定した。このアッセイは、競合酵素結合免疫吸着アッセイ法を採用するため、試料中のＨＡ濃度と比色分析の変化との間に逆相関がある。標準曲線を生成して、ｘ軸上のＨＡ濃度及びｙ軸上の吸光度を用いて、対応するＨＡ濃度を示した。結果を図２に示す。

結果は、角膜組織細胞におけるＨＡ産生の統計的に有意な増加が、少なくとも０．３ｍｇ／ｍＬのピキア・アノマーラのそのような組織環境濃度（すなわち、そのような内部角膜組織細胞と接触するピキア・アノマーラ抽出物の濃度［例えば、角膜液面濃度］）で観察されたことを示す。

実施例３〜４に示されるように、本発明の１種若しくは２種以上の化合物及び／又は抽出物を含有する溶液を調製することができる。

（実施例３）
表１は、従来の混合技術を使用して、その構成成分を以下に記載されるように組み込むことができる、（製剤３Ａ及び３Ｂに示すような）そのような製剤の構成成分を示す。

^＊２８０〜２９０ｍＯｓｍ／Ｋｇの張度に調整
^＊＊ｐＨ７．２に調整
^＊＊＊１００重量／重量％までの適量

実施例３Ａ〜３Ｂに関して、ヒアルロン酸ナトリウムは、ＣＯＮＴＩＰＲＯ Ａ．Ｓ．（ＤＯＬＮＩ，ＤＯＢＲＯＵＣ，ＣＺＥＣＨ ＲＥＰＵＢＬＩＣ）により供給することができる

実施例３Ａ及び３Ｂに関して、ピキア・アノマーラ抽出物は、ＳＩＬＡＢ（ＳＡＩＮＴ ＶＩＡＮＣＥ，ＦＲＡＮＣＥ）により供給することができる。

実施例３Ａ〜３Ｂに関して、ポリソルベート２０は、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ（ＤＡＲＭＳＴＡＤＴ，ＧＥＲＭＡＮＹ）により供給することができる。

実施例３Ａ〜３Ｂに関して、ポリソルベート８０は、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ（ＤＡＲＭＳＴＡＤＴ，ＧＥＲＭＡＮＹ）により供給することができる。

実施例３Ａに関して、ポリエチレングリコール４００は、Ｃｌａｒｉａｎｔ Ｐｒｏｄｕｋｔｅ（ＢＵＲＧＫＩＲＣＨＥＮ，ＧＥＲＭＡＮＹ）により供給することができる。

実施例３Ａ〜３Ｂに関して、ホウ酸は、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ（ＤＡＲＭＳＴＡＤＴ，ＧＥＲＭＡＮＹ）により供給することができる。

実施例３Ａ〜３Ｂに関して、ホウ酸ナトリウムは、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ（ＤＡＲＭＳＴＡＤＴ，ＧＥＲＭＡＮＹ）により供給することができる。

実施例３Ａ〜３Ｂに関して、塩化ナトリウムは、Ｃａｌｄｉｃ（ＤＵＳＳＥＬＤＯＲＦ，ＧＥＲＭＡＮＹ）により供給することができる。

実施例３Ａ〜３Ｂに関して、塩化カリウムは、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ（ＤＡＲＭＳＴＡＤＴ，ＧＥＲＭＡＮＹ）により供給することができる。

実施例３Ａ〜３Ｂに関して、塩化カルシウム二水和物は、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ（ＤＡＲＭＳＴＡＤＴ，ＧＥＲＭＡＮＹ）により供給することができる。

実施例３Ａ〜３Ｂに関して、塩化マグネシウムは、ＫＧａＡ（ＤＡＲＭＳＴＡＤＴ，ＧＥＲＭＡＮＹ）により供給することができる。

実施例３Ａ〜３Ｂに関して、ポリクオタニウム−４２（３３％水溶液）は、ＤＳＭ ＢＩＯＭＥＤＩＣＡＬ（ＢＥＲＫＥＬＥＹ，ＣＡ，ＵＳＡ）により供給することができる。

実施例３Ａ〜３Ｂに関して、亜塩素酸ナトリウム二水和物は、Ｏｘｙｃｈｅｍ（ＷＩＣＨＩＴＡ，ＫＳ，ＵＳＡ）により供給することができる。

実施例３Ａ〜３Ｂに関して、１Ｎ水酸化ナトリウムは、ＶＷＲ（ＲＡＤＮＥＲ，ＰＡ，ＵＳＡ）により供給することができる。

実施例３Ａ〜３Ｂに関して、１Ｎ塩酸は、ＶＷＲ（ＲＡＤＮＥＲ，ＰＡ，ＵＳＡ）により供給することができる。

溶液３Ａは、以下のように調製することができる。
１．１５００ｍＬビーカーに、８００グラムの精製水ＵＳＰを添加する。
２．上記に、１０ｇのポリソルベート８０及び５０ｇのポリソルベート２０を添加する。両者が十分混合及び溶解するまで、溶液を混合する。
３．上記に、２０．０ｇのピキア・アノマーラ抽出物を添加する。ピキア・アノマーラ抽出物が溶解するまで溶液を混合する。
４．溶液を０．４５マイクロメートルのフィルタを通して濾過し、１５００ｍＬビーカーに戻す。
５．工程４の溶液に、２．０グラムのヒアルロン酸ナトリウムを添加する。溶液を混合して、ヒアルロン酸ナトリウムを完全に溶解させる。
６．次に、以下の成分を順次添加し、次のものを添加する前に各々を溶解させる：２．５グラムのポリエチレングリコール４００、６．０グラムのホウ酸、０．０５グラムのホウ酸ナトリウム、１．０グラムの塩化カリウム、０．０６グラムの塩化カルシウム二水和物、０．０６グラムの塩化マグネシウム、及び０．００１５グラムのポリクオタニウム４２（水溶液）。
７．混合を継続しながら、０．１４グラムの亜塩素酸ナトリウム二水和物を添加し、かつ混合して溶解させる。
８．処方物の張度を求め、塩化ナトリウムで２８０ｍＯｓｍ／Ｋｇに調整する。
９．１Ｎ水酸化ナトリウム及び／又は１Ｎ塩酸を用いて、処方物のｐＨを７．２のｐＨに調整する。
１０．精製水ＵＳＰを用いて溶液を１０００．０グラムにし、かつ１０分間混合して完全に均一にする。
１１．０．２２マイクロメートルのフィルタを用いて溶液を濾過する。

溶液３Ｂは、以下のように調製することができる。
１．１５００ｍＬビーカーに、８００グラムの精製水ＵＳＰを添加する。
２．上記に、２０ｇのポリソルベート１０及び１００ｇのポリソルベート２０を添加する。両者が十分混合及び溶解するまで、溶液を混合する。
３．上記に、５０ｇのピキア・アノマーラ抽出物を添加する。ピキア・アノマーラ抽出物が溶解するまで溶液を混合する。
４．溶液を０．４５マイクロメートルのフィルタを通して濾過し、１５００ｍＬビーカーに戻す。
５．工程４の溶液に、１．５グラムのヒアルロン酸ナトリウムを添加する。溶液を混合して、ヒアルロン酸ナトリウムを完全に溶解させる。
６．次に、以下の成分を順次添加し、次のものを添加する前に各々を溶解させる：６．０グラムのホウ酸、０．０５グラムのホウ酸ナトリウム、１．０グラムの塩化カリウム、０．０６グラムの塩化カルシウム二水和物、０．０６グラムの塩化マグネシウム、及び０．００１５グラムのポリクオタニウム４２（水溶液）。
７．混合を続けながら、０．１４グラムの塩化ナトリウム二水和物を添加し、かつ混合して溶解させる。
８．処方物の張度を求め、塩化ナトリウムで２８０ｍＯｓｍ／Ｋｇに調整する。
９．１Ｎ水酸化ナトリウム及び／又は１Ｎ塩酸を用いて、処方物のｐＨを７．２のｐＨに調整する。
１０．精製水ＵＳＰを用いて溶液を１０００．０グラムにし、かつ１０分間混合して完全に均一にする。
１１．０．２２マイクロメートルのフィルタを用いて溶液を濾過する。

（実施例４）
表２は、従来の混合技術を使用して、その構成成分を以下に記載されるように組み込むことができる、（製剤４Ａ及び４Ｂに示すような）本発明の製剤の構成成分を示す。

^＊２８０〜２９０ｍＯｓｍ／Ｋｇの張度に調整
^＊＊ｐＨ７．２に調整
^＊＊＊１００．００％体積までの適量

実施例４Ａ及び４Ｂに関して、ピキア・アノマーラ抽出物は、ＳＩＬＡＢ（ＳＡＩＮＴ ＶＩＡＮＣＥ，ＦＲＡＮＣＥ）により供給することができる。

実施例４Ａ〜４Ｂに関して、ポリソルベート２０は、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ（ＤＡＲＭＳＴＡＤＴ，ＧＥＲＭＡＮＹ）により供給することができる。

実施例４Ａ〜４Ｂに関して、ポリソルベート８０は、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ（ＤＡＲＭＳＴＡＤＴ，ＧＥＲＭＡＮＹ）により供給することができる。

実施例４Ａ〜４Ｂに関して、ホウ酸は、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ（ＤＡＲＭＳＴＡＤＴ，ＧＥＲＭＡＮＹ）により供給することができる。

実施例４Ａ〜４Ｂに関して、ホウ酸ナトリウムは、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ（ＤＡＲＭＳＴＡＤＴ，ＧＥＲＭＡＮＹ）により供給することができる。

実施例４Ａ〜４Ｂに関して、塩化ナトリウムは、Ｃａｌｄｉｃ（ＤＵＳＳＥＬＤＯＲＦ，ＧＥＲＭＡＮＹ）により供給することができる。

実施例４Ａ〜４Ｂに関して、塩化カリウムは、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ（ＤＡＲＭＳＴＡＤＴ，ＧＥＲＭＡＮＹ）により供給することができる。

実施例４Ａ〜４Ｂに関して、ヒプロメロースＥ３ ２９１０は、ＤＯＷ ＣＨＥＭＩＣＡＬ（ＰＬＡＱＵＥＭＩＮＥ，ＬＯＵＩＳＩＡＮＡ，ＵＳＡ）により供給することができる。

実施例４Ａ〜４Ｂに関して、グリセリンは、Ｅｍｅｒｙ Ｏｌｅｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ ＧｍｂＨ（ＤＵＳＳＥＬＤＯＲＦ，ＧＥＲＭＡＮＹ）により供給することができる。

実施例４Ａ〜４Ｂに関して、リン酸二ナトリウムは、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ（ＤＡＲＭＳＴＡＤＴ，ＧＥＲＭＡＮＹ）により供給することができる。

実施例４Ａ〜４Ｂに関して、クエン酸ナトリウムは、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ（ＤＡＲＭＳＴＡＤＴ，ＧＥＲＭＡＮＹ）により供給することができる。

実施例４Ａ〜４Ｂに関して、乳酸ナトリウムは、乳酸ナトリウム（５０％水溶液）としてＭｅｒｃｋ ＫＧａＡ（ＤＡＲＭＳＴＡＤＴ，ＧＥＲＭＡＮＹ）により供給することができる。

実施例４Ａ〜４Ｂに関して、グルコースは、Ｒｏｑｕｅｔｔｅ Ｆｒｅｒｅｓ（ＬＡＳＴＲＥＭ，ＦＲＡＮＣＥ）により供給することができる。

実施例４Ａ〜４Ｂに関して、グリシンは、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ（ＤＡＲＭＳＴＡＤＴ，ＧＥＲＭＡＮＹ）により供給することができる。

実施例４Ａ〜４Ｂに関して、アスコルビン酸は、ＤＳＭ ＮＵＴＲＩＴＩＯＮＡＬ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（ＤＲＡＫＥＭＹＲＥ，ＳＣＯＴＬＡＮＤ，ＵＫ）により供給することができる。

実施例４Ａ〜４Ｂに関して、ポリクオタニウム４２は、ポリクオタニウム４２（３３％水溶液）としてＤＳＭ ＢＩＯＭＥＤＩＣＡＬ（ＢＥＲＫＥＬＥＹ，ＣＡ）により供給することができる。

実施例４Ａ〜４Ｂに関して、エデト酸二ナトリウムは、Ｍｅｒｃｋ ＮＶ／ＳＡ（ＯＶＥＲＩＪＳＥ，ＢＥＬＧＩＵＭ）により供給することができる。

実施例４Ａ〜４Ｂに関して、１Ｎ水酸化ナトリウムは、ＶＷＲ（ＲＡＤＮＥＲ，ＰＡ，ＵＳＡ）により供給することができる。

実施例４Ａ〜４Ｂに関して、１Ｎ塩酸は、ＶＷＲ（ＲＡＤＮＥＲ，ＰＡ，ＵＳＡ）により供給することができる。実施例４Ａ〜４Ｂに関して、亜塩素酸ナトリウム二水和物は、Ｏｘｙｃｈｅｍ（ＷＩＣＨＩＴＡ，ＫＳ，ＵＳＡ）により供給することができる。

溶液４Ａは、以下のように調製することができる。
１．１５００ｍＬビーカーに、８００グラムの精製水ＵＳＰを添加する。
２．上記に、１０ｇのポリソルベート８０及び３０ｇのポリソルベート２０を添加する。両者が十分混合及び溶解するまで、溶液を混合する。
３．上記に、１０．０ｇのピキア・アノマーラ抽出物を添加する。ピキア・アノマーラ抽出物が溶解するまで溶液を混合する。
４．溶液を０．４５マイクロメートルのフィルタを通して濾過し、１５００ｍＬビーカーに戻す。
５．上記に、１．９８ｇのヒプロメロースＥ３ Ｐｒｅｍｉｕｍを添加する。ヒプロメロースＥ３ Ｐｒｅｍｉｕｍが溶解するまで溶液を混合する。
６．次に、以下の成分を順次添加し、次のものを添加する前に各々を溶解させる：２．５０グラムのグリセリン、４．０グラムのホウ酸、０．２２グラムのホウ酸ナトリウム、０．２７グラムのリン酸二ナトリウム、４．００グラムのクエン酸ナトリウム二水和物、１グラムの塩化カリウム、０．５７グラムの乳酸ナトリウム（５０％水溶液）、０．１３グラムの塩化マグネシウム、０．０３６グラムのグルコース、０．０００２グラムのグリシン、０．０００１グラムのアスコルビン酸、０．１０グラムのエデト酸二ナトリウム、０．０３０グラムのポリクオタニウム−４２（３３％水溶液）、及び０．１４グラムの亜塩素酸ナトリウム。
７．溶液の張度を求め、かつ塩化ナトリウムで２８０ｍＯｓｍに調整する。
８．溶液のｐＨを測定し、かつ１Ｎ水酸化ナトリウム及び／又は１Ｎ塩酸で７．２に調整する。
９．溶液を精製水で１，０００．００グラムの体積にし、かつ１０分間混合する。
１０．０．２２マイクロメートルのフィルタを用いて溶液を濾過する。

溶液４Ｂは、以下のように調製することができる。
１．１５００ｍＬビーカーに、８００グラムの精製水ＵＳＰを添加する。
２．上記に、１０ｇのポリソルベート８０及び５０ｇのポリソルベート２０を添加する。両者が十分混合及び溶解するまで、溶液を混合する。
３．上記に、２０．０ｇのピキア・アノマーラ抽出物を添加する。ピキア・アノマーラ抽出物が溶解するまで溶液を混合する。
４．溶液を０．４５マイクロメートルのフィルタを通して濾過し、１５００ｍＬビーカーに戻す。
５．上記に、１．９８ｇのヒプロメロースＥ３ Ｐｒｅｍｉｕｍを添加する。ヒプロメロースＥ３ Ｐｒｅｍｉｕｍが溶解するまで溶液を混合する。
６．次に、以下の成分を順次添加し、次のものを添加する前に各々を溶解させる：２．５０グラムのグリセリン、４．０グラムのホウ酸、０．２２グラムのホウ酸ナトリウム、０．２７グラムのリン酸二ナトリウム、４．００グラムのクエン酸ナトリウム二水和物、１グラムの塩化カリウム、０．５７グラムの乳酸ナトリウム（５０％水溶液）、０．１３グラムの塩化マグネシウム、０．０３６グラムのグルコース、０．０００２グラムのグリシン、０．０００１グラムのアスコルビン酸、０．０５グラムのエデト酸二ナトリウム、０．０１５グラムのポリクオタニウム−４２（３３％水溶液）、及び０．１４グラムの亜塩素酸ナトリウム。
７．溶液の張度を求め、かつ塩化ナトリウムで２８０ｍＯｓｍに調整する。
８．溶液のｐＨを測定し、かつ１Ｎ水酸化ナトリウム及び／又は１Ｎ塩酸で７．２に調整する。
９．溶液を精製水で１，０００．００グラムの体積にし、かつ１０分間混合する。
１０．０．２２マイクロメートルのフィルタを用いて溶液を濾過する。

本発明の実施形態
１．角膜からかつ／又は角膜内でヒアルロン酸の産生／放出／送達／排出が減少した又は低レベルの患者を治療するための方法であって、患者の眼に組成物を局所投与する工程を含み、組成物が、
ｉ）少なくとも約０．３ｍｇ／ｍＬの眼の角膜組織内の角膜流体中のピキア属抽出物濃度を達成するための、安全かつ有効な量のピキア属の１種若しくは２種以上の抽出物又は抽出物源と、
ｉｉ）任意選択で、安全かつ有効な量の透過促進剤と、
ｉｉｉ）任意選択で、眼科的に許容可能な担体と、を含む、方法。
２．組成物中のピキア属の抽出物が、約１８０〜約８００，０００Ｄａの重量平均分子量を有するオリゴ糖及び多糖類を含む、実施形態１（又は、以下の実施形態のいずれか）に記載の方法。
３．組成物中のピキア属の抽出物が、ＤＰ１〜ＤＰ４４４４の平均重合度を有するオリゴ糖及び多糖類を含む、実施形態１及び／又は２（又は、以下の実施形態のいずれか）に記載の方法。
４．組成物が、透過促進剤を含む、実施形態１〜３のいずれか１つ又はこれらの組み合わせ（又は、以下の実施形態のいずれか）に記載の方法。
５．透過促進剤が、組成物全体の約０．０１％（ｗ／ｖ）〜約２０％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、実施形態１〜４のいずれか１つ又はこれらの組み合わせ（又は、以下の実施形態のいずれか）に記載の方法。
６．透過促進剤が、組成物全体の約０．１％（ｗ／ｖ）〜１０％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、実施形態１〜５のいずれか１つ又はこれらの組み合わせ（又は、以下の実施形態のいずれか）に記載の方法。
７．透過促進剤が、組成物全体の約０．２５％（ｗ／ｖ）〜５％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、実施形態１〜６のいずれか１つ又はこれらの組み合わせ（又は、以下の実施形態のいずれか）に記載の方法。
８．透過促進剤が、ポリオキシエチレン、脂肪酸のポリオキシエチレンエーテル、モノオレイン酸ソルビタン、モノラウリン酸ソルビタン、モノラウリン酸ポリオキシエチレン、モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン、フシジン酸及びその誘導体、ＥＤＴＡ、ＥＤＴＡ二ナトリウム、コール酸、デオキシコール酸、グリココール酸、グリコデオキシコール酸、タウロコール酸、タウロデオキシコール酸、コール酸ナトリウム、グリココール酸ナトリウム、グリココール酸塩、デオキシコール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、グリコデオキシコール酸ナトリウム、タウロデオキシコール酸ナトリウム、ケノデオキシコール酸、ウルソデオキシコール酸、サポニン、グリチルリチン酸、グリチルリチン酸アンモニウム、デカメトニウム、臭化デカメトニウム、及び臭化ドデシルトリメチルアンモニウム、又は上記のいずれかの混合物から選択される、実施形態１〜７のいずれか１つ又はこれらの組み合わせ（又は、以下の実施形態のいずれか）に記載の方法。
９．患者の涙中のヒアルロン酸濃度が、タンパク質１ミリグラム当たり約１０ナノグラム未満である場合に、組成物が投与される、実施形態１〜８のいずれか１つ又はこれらの組み合わせ（又は、以下の実施形態のいずれか）に記載の方法。
１０．患者の涙中のヒアルロン酸濃度が、タンパク質１ミリグラム当たり約１５ナノグラム未満である場合に、組成物が投与される、実施形態１〜９のいずれか１つ又はこれらの組み合わせ（又は、以下の実施形態のいずれか）に記載の方法。
１１．患者の涙中のヒアルロン酸濃度が、タンパク質１ミリグラム当たり約２０ナノグラム未満である場合に、組成物が投与される、実施形態１〜１０のいずれか１つ又はこれらの組み合わせ（又は、以下の実施形態のいずれか）に記載の方法。
１２．患者の涙中のヒアルロン酸濃度が、タンパク質１ミリグラム当たり約２５ナノグラム未満である場合に、組成物が投与される、実施形態１〜１１のいずれか１つ又はこれらの組み合わせ（又は、以下の実施形態のいずれか）に記載の方法。
１３．患者の涙中のヒアルロン酸の濃度を上昇させて、タンパク質１ミリグラム当たり約１０ナノグラム以上とするために、組成物が患者の眼に投与される、実施形態１〜１２のいずれか１つ又はこれらの組み合わせ（又は、以下の実施形態のいずれか）に記載の方法。
１４．患者の涙中のヒアルロン酸の濃度を上昇させて、タンパク質１ミリグラム当たり約１５ナノグラム以上とするために、組成物が患者の眼に投与される、実施形態１〜１３のいずれか１つ又はこれらの組み合わせ（又は、以下の実施形態のいずれか）に記載の方法。
１５．患者の涙中のヒアルロン酸の濃度を上昇させて、タンパク質１ミリグラム当たり約２０ナノグラム以上とするために、組成物が患者の眼に投与される、実施形態１〜１４のいずれか１つ又はこれらの組み合わせ（又は、以下の実施形態のいずれか）に記載の方法。
１６．患者の涙中のヒアルロン酸の濃度を上昇させて、タンパク質１ミリグラム当たり約２５ナノグラム以上とするために、組成物が患者の眼に投与される、実施形態１〜１５のいずれか１つ又はこれらの組み合わせ（又は、以下の実施形態のいずれか）に記載の方法。

〔実施の態様〕
（１） 角膜からかつ／又は角膜内でのヒアルロン酸の産生／放出／送達／排出が減少した又は低レベルの患者を治療するための方法であって、前記患者の眼に組成物を局所投与する工程を含み、前記組成物が、
ｉｖ）少なくとも約０．３ｍｇ／ｍＬの眼の角膜組織内の角膜流体中のピキア属抽出物濃度を達成するための、安全かつ有効な量のピキア属の１種若しくは２種以上の抽出物又は抽出物源と、
ｖ）任意選択で、安全かつ有効な量の透過促進剤と、
ｖｉ）任意選択で、眼科的に許容可能な担体と、を含む、方法。
（２） 前記組成物中の前記ピキア属の抽出物が、約１８０〜約８００，０００Ｄａの重量平均分子量を有するオリゴ糖及び多糖類を含む、実施態様１に記載の方法。
（３） 前記組成物中の前記ピキア属の抽出物が、ＤＰ１〜ＤＰ４４４４の平均重合度を有するオリゴ糖及び多糖類を含む、実施態様１に記載の方法。
（４） 前記組成物が、透過促進剤を含む、実施態様１に記載の方法。
（５） 前記透過促進剤が、前記組成物全体の約０．０１％（ｗ／ｖ）〜約２０％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、実施態様１及び／又は２に記載の方法。

（６） 前記透過促進剤が、前記組成物全体の約０．１％（ｗ／ｖ）〜１０％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、実施態様３に記載の方法。
（７） 前記透過促進剤が、前記組成物全体の約０．２５％（ｗ／ｖ）〜５％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、実施態様４に記載の方法。
（８） 前記透過促進剤が、ポリオキシエチレン、脂肪酸のポリオキシエチレンエーテル、モノオレイン酸ソルビタン、モノラウリン酸ソルビタン、モノラウリン酸ポリオキシエチレン、モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン、フシジン酸及びその誘導体、ＥＤＴＡ、ＥＤＴＡ二ナトリウム、コール酸、デオキシコール酸、グリココール酸、グリコデオキシコール酸、タウロコール酸、タウロデオキシコール酸、コール酸ナトリウム、グリココール酸ナトリウム、グリココール酸塩、デオキシコール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、グリコデオキシコール酸ナトリウム、タウロデオキシコール酸ナトリウム、ケノデオキシコール酸、ウルソデオキシコール酸、サポニン、グリチルリチン酸、グリチルリチン酸アンモニウム、デカメトニウム、臭化デカメトニウム、及び臭化ドデシルトリメチルアンモニウム、又は上記のいずれかの混合物から選択される、実施態様４に記載の方法。
（９） 前記患者の涙中のヒアルロン酸濃度が、タンパク質１ミリグラム当たり約１０ナノグラム未満である場合に、前記組成物が投与される、実施態様１に記載の方法。
（１０） 前記患者の涙中のヒアルロン酸濃度が、タンパク質１ミリグラム当たり約１５ナノグラム未満である場合に、前記組成物が投与される、実施態様１に記載の方法。

（１１） 前記患者の涙中のヒアルロン酸濃度が、タンパク質１ミリグラム当たり約２０ナノグラム未満である場合に、前記組成物が投与される、実施態様１に記載の方法。
（１２） 前記患者の涙中のヒアルロン酸濃度が、タンパク質１ミリグラム当たり約２５ナノグラム未満である場合に、前記組成物が投与される、実施態様１に記載の方法。
（１３） 前記患者の涙中のヒアルロン酸の濃度を上昇させて、タンパク質１ミリグラム当たり約１０ナノグラム以上とするために、前記組成物が前記患者の眼に投与される、実施態様１に記載の方法。
（１４） 前記患者の涙中のヒアルロン酸の濃度を上昇させて、タンパク質１ミリグラム当たり約１５ナノグラム以上とするために、前記組成物が前記患者の眼に投与される、実施態様１に記載の方法。
（１５） 前記患者の涙中のヒアルロン酸の濃度を上昇させて、タンパク質１ミリグラム当たり約２０ナノグラム以上とするために、前記組成物が前記患者の眼に投与される、実施態様１に記載の方法。

（１６） 前記患者の涙中のヒアルロン酸の濃度を上昇させて、タンパク質１ミリグラム当たり約２５ナノグラム以上とするために、前記組成物が前記患者の眼に投与される、実施態様１に記載の方法。

Claims (16)

1. 角膜からかつ／又は角膜内でのヒアルロン酸の産生／放出／送達／排出が減少した又は低レベルの患者を治療するための方法であって、前記患者の眼に組成物を局所投与する工程を含み、前記組成物が、
   ｉｖ）少なくとも約０．３ｍｇ／ｍＬの眼の角膜組織内の角膜流体中のピキア属抽出物濃度を達成するための、安全かつ有効な量のピキア属の１種若しくは２種以上の抽出物又は抽出物源と、
   ｖ）任意選択で、安全かつ有効な量の透過促進剤と、
   ｖｉ）任意選択で、眼科的に許容可能な担体と、を含む、方法。
2. 前記組成物中の前記ピキア属の抽出物が、約１８０〜約８００，０００Ｄａの重量平均分子量を有するオリゴ糖及び多糖類を含む、請求項１に記載の方法。
3. 前記組成物中の前記ピキア属の抽出物が、ＤＰ１〜ＤＰ４４４４の平均重合度を有するオリゴ糖及び多糖類を含む、請求項１に記載の方法。
4. 前記組成物が、透過促進剤を含む、請求項１に記載の方法。
5. 前記透過促進剤が、前記組成物全体の約０．０１％（ｗ／ｖ）〜約２０％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、請求項１及び／又は２に記載の方法。
6. 前記透過促進剤が、前記組成物全体の約０．１％（ｗ／ｖ）〜１０％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、請求項３に記載の方法。
7. 前記透過促進剤が、前記組成物全体の約０．２５％（ｗ／ｖ）〜５％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、請求項４に記載の方法。
8. 前記透過促進剤が、ポリオキシエチレン、脂肪酸のポリオキシエチレンエーテル、モノオレイン酸ソルビタン、モノラウリン酸ソルビタン、モノラウリン酸ポリオキシエチレン、モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン、フシジン酸及びその誘導体、ＥＤＴＡ、ＥＤＴＡ二ナトリウム、コール酸、デオキシコール酸、グリココール酸、グリコデオキシコール酸、タウロコール酸、タウロデオキシコール酸、コール酸ナトリウム、グリココール酸ナトリウム、グリココール酸塩、デオキシコール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、グリコデオキシコール酸ナトリウム、タウロデオキシコール酸ナトリウム、ケノデオキシコール酸、ウルソデオキシコール酸、サポニン、グリチルリチン酸、グリチルリチン酸アンモニウム、デカメトニウム、臭化デカメトニウム、及び臭化ドデシルトリメチルアンモニウム、又は上記のいずれかの混合物から選択される、請求項４に記載の方法。
9. 前記患者の涙中のヒアルロン酸濃度が、タンパク質１ミリグラム当たり約１０ナノグラム未満である場合に、前記組成物が投与される、請求項１に記載の方法。
10. 前記患者の涙中のヒアルロン酸濃度が、タンパク質１ミリグラム当たり約１５ナノグラム未満である場合に、前記組成物が投与される、請求項１に記載の方法。
11. 前記患者の涙中のヒアルロン酸濃度が、タンパク質１ミリグラム当たり約２０ナノグラム未満である場合に、前記組成物が投与される、請求項１に記載の方法。
12. 前記患者の涙中のヒアルロン酸濃度が、タンパク質１ミリグラム当たり約２５ナノグラム未満である場合に、前記組成物が投与される、請求項１に記載の方法。
13. 前記患者の涙中のヒアルロン酸の濃度を上昇させて、タンパク質１ミリグラム当たり約１０ナノグラム以上とするために、前記組成物が前記患者の眼に投与される、請求項１に記載の方法。
14. 前記患者の涙中のヒアルロン酸の濃度を上昇させて、タンパク質１ミリグラム当たり約１５ナノグラム以上とするために、前記組成物が前記患者の眼に投与される、請求項１に記載の方法。
15. 前記患者の涙中のヒアルロン酸の濃度を上昇させて、タンパク質１ミリグラム当たり約２０ナノグラム以上とするために、前記組成物が前記患者の眼に投与される、請求項１に記載の方法。
16. 前記患者の涙中のヒアルロン酸の濃度を上昇させて、タンパク質１ミリグラム当たり約２５ナノグラム以上とするために、前記組成物が前記患者の眼に投与される、請求項１に記載の方法。

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