EP1675876A2 - Derives amphiphiles de cyclodextrines, leur procede de preparation et leurs utilisations - Google Patents

Derives amphiphiles de cyclodextrines, leur procede de preparation et leurs utilisations

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Publication number
EP1675876A2
EP1675876A2 EP04805762A EP04805762A EP1675876A2 EP 1675876 A2 EP1675876 A2 EP 1675876A2 EP 04805762 A EP04805762 A EP 04805762A EP 04805762 A EP04805762 A EP 04805762A EP 1675876 A2 EP1675876 A2 EP 1675876A2
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
group
formula
compound
vii
methyl
Prior art date
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Withdrawn
Application number
EP04805762A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Bruno Perly
Stéphane MOUTARD
Florence Pilard
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Commissariat a lEnergie Atomique et aux Energies Alternatives CEA
Original Assignee
Commissariat a lEnergie Atomique CEA
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Filing date
Publication date
Application filed by Commissariat a lEnergie Atomique CEA filed Critical Commissariat a lEnergie Atomique CEA
Publication of EP1675876A2 publication Critical patent/EP1675876A2/fr
Withdrawn legal-status Critical Current

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    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6949—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit inclusion complexes, e.g. clathrates, cavitates or fullerenes
    • A61K47/6951—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit inclusion complexes, e.g. clathrates, cavitates or fullerenes using cyclodextrin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
    • C08B37/0009—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid alpha-D-Glucans, e.g. polydextrose, alternan, glycogen; (alpha-1,4)(alpha-1,6)-D-Glucans; (alpha-1,3)(alpha-1,4)-D-Glucans, e.g. isolichenan or nigeran; (alpha-1,4)-D-Glucans; (alpha-1,3)-D-Glucans, e.g. pseudonigeran; Derivatives thereof
    • C08B37/0012—Cyclodextrin [CD], e.g. cycle with 6 units (alpha), with 7 units (beta) and with 8 units (gamma), large-ring cyclodextrin or cycloamylose with 9 units or more; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C08B37/0012—Cyclodextrin [CD], e.g. cycle with 6 units (alpha), with 7 units (beta) and with 8 units (gamma), large-ring cyclodextrin or cycloamylose with 9 units or more; Derivatives thereof
    • C08B37/0015—Inclusion compounds, i.e. host-guest compounds, e.g. polyrotaxanes

Definitions

  • the present invention relates to new amphiphilic derivatives of cyclodextrins, more precisely of ⁇ -, ⁇ - and ⁇ -cyclodextrins, as well as to their preparation process and to their uses.
  • these amphiphilic derivatives show remarkable stability, which makes their manufacture, their conservation and their handling. particularly easy. They are likely to be used in all fields of application of cyclodextrins.
  • Cyclodextrins are non-reducing cyclic oligosaccharides, which are obtained industrially by degrading amylose (that is to say the linear form of starch) by cyclodextrin glucosyltransferase, enzyme of origin bacterial.
  • the three most frequently encountered cyclodextrins are the oc-, ⁇ - and ⁇ -cyclodextrins which consist respectively of 6, 7 and 8 D-glucopyranosic units, linked together by glycosidic linkages ⁇ (l—> 4).
  • the cyclodextrins have a three-dimensional structure in the form of a truncated cone, the wall of which is formed by D-glucopyranosic units, in chair conformation 4 C ⁇ 1,2 and .... delimits a cavity also called "cage".
  • the secondary hydroxyl groups of the D-glucopyranosic units are located at the base of the wall of the truncated cone, while the primary hydroxyl groups of these units are located at the top of this wall.
  • the outer part of the cyclodextrins is naturally hydrophilic while their inner part, which is lined with hydrogen atoms and interglucosidic oxygen atoms, is hydrophobic.
  • This feature makes it possible to include in the cyclodextrin cage hydrophobic molecules to form inclusion complexes soluble in water.
  • the biodegradable nature of cyclodextrins predisposes them to important applications in the pharmaceutical and food industries where the ability of cyclodextrins to serve as a "host" molecule makes it possible to protect fragile molecules, to ensure their controlled release or, in the case of hydrophobic molecules, their solubilization in an aqueous medium.
  • Pharmaceutical specialties using cyclodextrins are already commercially available.
  • amphiphilic derivatives of a-, ⁇ - or ⁇ -cyclodextrin obtained by grafting a derivative steroid, via a spacer arm, on the carbon of the primary hydroxyl group of at least one D-glucopyranosic unit of these cyclodextrins.
  • This team was able to obtain, from these derivatives, perfectly spherical micelles, comprising on average 24 monomers and lined on the surface by the cages of these monomers.
  • R 4 represent either a hydroxyl group or R 2 except when R 2 is a hydroxypropyl group, or one or more R 4 are identical to R 1 and the other R 4 (s) represent either a group hydroxyl, ie R 2 except when R 2 is a hydroxypropyl group; - n is an integer equal to 5, 6 or 7.
  • heteroatom is meant an atom chosen from nitrogen, oxygen, sulfur and halogens (bromine, iodine , chlorine and fluorine).
  • residue of an amino acid means the group of atoms which remains of this amino acid when the latter is covalently linked, on the one hand, to the spacer arm E and, on the other hand share in one and / or the other of groups L 1 and L 2 .
  • E which serves as a spacer arm, corresponds to formula (III): -CO-XG 1 -, in which X represents an alkylene group forming a bridge and comprising from 1 to 8 carbon atoms, while G 1 represents a group -CO-, -NH- or -NR- in which R is an alkyl group, advantageously Ci to Ce
  • X represents, preferably, an alkylene group forming a bridge and comprising from 1 to 4 carbon atoms and, better still, 2 carbon atoms.
  • the amino acid is preferably chosen from the twenty amino acids which conventionally enter into the constitution of proteins, namely aspartic acid, glutamic acid , alanine, arginine, asparagine, cysteine, glutamine, glycine, histidine, isoleucine, leucine, lysine, methionine, phenylalanine, proline, serine, threonine, tyrosine, tryptophan and valine.
  • it is chosen from aspartic acid, glutamic acid, isoleucine, leucine and phenylalanine, aspartic acid and glutamic acid being particularly preferred.
  • this amino acid can also be chosen from rarer amino acids such as, for example, ⁇ -alanine, ⁇ -aminobutyric acid, ⁇ -aminoadipic acid, hydroxyproline, hydroxy-lysine, phenylserine, ⁇ , ⁇ -diaminopimelic acid and ornithine, any amino acid being- a priori likely to be suitable since it comprises, by definition, two functional groups, one carboxylic acid, the other amino, allowing its covalent bond, on the one hand, to the spacer arm E, and, on the other hand, to at least one group L 1 or L 2 .
  • rarer amino acids such as, for example, ⁇ -alanine, ⁇ -aminobutyric acid, ⁇ -aminoadipic acid, hydroxyproline, hydroxy-lysine, phenylserine, ⁇ , ⁇ -diaminopimelic acid and ornithine
  • amino acid depends in particular on the value which it is desired to give to p and q in formula (II), insofar as it must contain at least three functional groups so that p and q can be all two equal to 1 (that is, for the two groups L 1 and L 2 to be present), when it suffices - and it is even desirable to simplify the preparation of the cyclodextrin derivative - that it has only two functional groups when one of the integers p and q is equal to 0.
  • AA is the remainder of an amino acid belonging to the series L.
  • L 1 and / or L 2 correspond to formula (IV): -G 2 -Y in which G 2 represents a group —C0-, -NH - or -NR- where R is an alkyl group, advantageously Ci to Ce, while Y represents a linear Cs to C ⁇ 8 alkyl chain or a cyclic or polycyclic group known to be lipophilic as a steroid group, for example derived from cholesterol, a polyaromatic group, for example derived from naphthalene, dansyl, anthracene or even a group derived from alkaloids.
  • - Z represents: • either a covalent bond, in which case R 5 represents a hydrogen atom, a methyl group, the side chain of an amino acid or a group of formula: - (CH 2 ) t _ CO-NH- Y in which t is worth 1 or 2 and Y has the same meaning as above, • or a hydrocarbon group forming a bridge, comprising from 1 to 4 carbon atoms and comprising one or more heteroatoms chosen from 0 and N, in which case R 5 represents a primary amino group or a group of formula: -NH-CO-Y in which Y has the same meaning as above.
  • AA represents, in formula (II), the remainder of an amino acid chosen from aspartic acid, glutamic acid, isoleucine, leucine and phenylalanine
  • formula (VI) - Z represents a covalent bond
  • - Y preferably represents a linear C 8 to C ⁇ 8 and, better still, C 12 to C ⁇ 6 alkyl chain
  • - Y preferably represents a linear C 8 to C ⁇ 8 and, better still, C ⁇ 2 to Ci ⁇ alkyl chain;
  • cyclodextrin derivatives represent a group of formula: - (CH 2) t -CO-NH-Y, wherein t is 1 or 2 and Y is preferably a linear alkyl chain C 8 C ⁇ 8 and, better still, in C 12 to C ⁇ 6 .
  • the cyclodextrin derivatives contain only one substituent R 1 per molecule of derivative. However, it is also possible that one or more or even all of the substituents R 4 are identical to R 1 .
  • the cyclodextrin derivatives according to the invention can be derivatives of a-, ⁇ - or ⁇ -cyclodextrin.
  • the derivatives are used ⁇ -cyclodextrin, that is to say the derivatives of formula (I) in which n is equal to 6.
  • these derivatives can in particular be: - dimethylated, in which case, in the formula ( I), R 2 are methyl groups, R 3 are hydrogen atoms, while R 4 are methoxy groups when they are not identical to R 1 , permethylated, in which case, in formula (I ), all R 2 and R 3 are methyl groups, while R 4 represent methoxy groups when they are not identical to R 1 ,
  • the cyclodextrin derivatives of formula (I) can be prepared by conventional coupling processes starting from monoamine derivatives corresponding cyclodextrins. In particular, they can be prepared by a process comprising the coupling of a monoamine derivative of an ⁇ -, ⁇ - or ⁇ -cyclodextrin previously grafted from the spacer arm, with an amino acid previously grafted from the group or groups L 1 and / or L 2. Also, the subject of the invention is also a process for the preparation of cyclodextrin derivatives of formula (I) which comprises a step in which a cyclodextrin derivative of formula (VII) is reacted:
  • R 3 represents a hydrogen atom or is identical to R 2 except when R 2 is a hydroxypropyl group
  • R 4 represent either a hydroxyl group or R 2 except when R 2 is a hydroxypropyl group, or one or more R 4 represent a group -NH-E 'and the other R or R 4 represent either a hydroxyl group, ie R except when R 2 is a hydroxypropyl group;
  • - n is an integer equal to 5, 6 or 7;
  • * AA ' represents an amino acid comprising a hydroxyl, amino, carboxylic acid or free thiol group
  • L 1 and L 2 identical or different, represent a hydrocarbon group, linear, branched and / or cyclic, saturated or unsaturated, comprising from 6 to 24 carbon atoms and optionally comprising one or more heteroatoms;
  • Leaving groups are, for example, halogens, tosylates, mesylates and other sulfonates.
  • the monoamine cyclodextrin derivative of formula (IX) can itself be prepared by subjecting the monoazide derivative of cyclodextrin corresponding to a Staudinger reaction, using triphosphine and ammonia, as described in reference [1].
  • this grafting is carried out in a single step by reacting the amino acid with a precursor compound which is the same for the two groups, while, in the case where it is desired to graft on the amino acid two different groups L 1 and L 2 , this grafting is carried out in two successive stages: a first stage in which the acid is reacted amine with one of the precursor compounds of groups L 1 and L 2 after having protected the functional group of the amino acid intended to react with the other of these compounds, and a second step in which, after deprotection of said functional group, the amino acid is reacted with the other of said precursor compounds.
  • the free functional group of the precursor compounds of groups L 1 and L 2 may in particular be a carboxylic acid group, a group derived from carboxylic acid, a primary or secondary amino group or a leaving group, depending on the nature of the functional group. of the amino acid with which it must react.
  • the group E 'precursor compound is preferably an acid anhydride of formula (X):
  • amphiphilic cyclodextrin derivatives according to the invention have many advantages, including in particular that of having both a very high affinity with respect to organized surfactant systems and a remarkable stability, which makes them very easy to handle.
  • these compounds are stable in the solid state for several months at room temperature and in the light. They are also stable for several weeks in aqueous or organic solution, which is not the case for lipid derivatives of the phospholipid type which are only stable at -80 ° C. They are in . furthermore, relatively simple to prepare, essentially because their synthesis can be carried out by conventional peptide coupling methods.
  • the invention also relates to inclusion complexes of cyclodextrin derivatives of formula (I) with hydrophobic compounds.
  • cyclodextrin derivatives of formula (I) can be of different types: thus, they can in particular be principles drug active ingredients (steroids, neurotropes, antivirals, bacteriostats, vitamins, etc.), molecules useful in cosmetology, contrast agents for medical imaging, or compounds useful in proteomics such as, for example, detergents suitable for destroy the lipid layers of cell membranes without affecting the membrane proteins.
  • inclusion complexes can be prepared by conventional methods, for example by adding to a solution or a suspension of a cyclodextrin derivative of formula (I), a solution of the hydrophobic compound in a suitable organic solvent, for example the acetone.
  • the invention also relates to organized surfactant systems comprising a cyclodextrin derivative of formula (I) or an inclusion complex of this derivative.
  • the surfactants capable of forming such organized systems can be of different types. By way of example, mention may be made of phospholipids corresponding to the general formula below:
  • R 3 represents CH 3 - (CH 2 ) p-CO, p being an integer from 6 to 18.
  • R 3 represents CH 3 - (CH 2 ) p-CO, p being an integer from 6 to 18.
  • the invention will be better understood in the light of the additional description, which refers to exemplary embodiments of amphiphilic cyclodextrin derivatives according to the invention and which is given by way of illustration and not by way of limitation.
  • ESI-HRMS high resolution with detection in positive mode: m / z measured at 1683.8441 [M + H] + , calculated at 1683, 8441 for C 74 Hi 3 iN 4 ⁇ 38 (deviation: 0 ppm); m / z measured at 1705.8169 [M + Na] + , calculated at 1705.8261 for C 74 Hi 3 c ⁇ N 4 0 38 Na (deviation: 5.4 ppm)
  • H-4 II_VII CD 4.19 (H- ⁇ 'cD); 4.06 (H- ⁇ ⁇ co); 3.99-4.14 (m, H-2 II "VII CD ); 3.91 (dd, 1H, H-2 I CD ); 3.81 (t, 1H, H-4 I CD ); 3 , 36, 3.31 (2m, 4H, H-l ⁇ , H-l ⁇ ); 3.12 (d, 1H, H- ⁇ ); 3.07 (d, 1H, H- ⁇ '); 2.5 -3.0 (m, 4H, Hb / Hc); 1.53, 1.46 (2m, 4H, H-2 ⁇ , H-2 ⁇ ); 1.20, 1.18 (H-30C, H-3 ⁇ ); 1.13 (H-ll ⁇ / H-ll ⁇ ); 1.05-1.25 (m,
  • Compound 20 is prepared by following the same experimental protocol as that described for the preparation of compound 19 in Example 1 above, but using: - 5.89 g (16.0 mmol; 1 eq.) Of compound 18 - 7.4 mL (47.8 mmol; 3 eq.) of DIC - 6.47 g (47.9 mmol; 3 eq.) Of HOBT - 8.87 g (47.9 mmol; 3 eq.) Of dodecylamine. 9.29 g (13.2 mmol) of compound 20 are thus obtained.
  • H _ 6 II- V H CD H _ 6 II- V H CD
  • 4.28-4.53 m, II-VII C D
  • 4.41 H-5 J CD
  • 4.14-4.27 m, H-4 II-VII CD
  • 4.19 H- ⁇ ⁇
  • 4.06 H-6 ,]: C D
  • 3.98-4.13 m, H-2 II "V1I CD ); 3.92 (dd, 1H, H-2 ⁇ CD); 3.80 (t, 1H, H-4 I CD); 3 , 35, 3.30 (m, 4H, H-l ⁇ , H-l ⁇ ); 2.6-3.0 (m, Hb / Hc); 2.61 (m, H- ⁇ / H- ⁇ ') ; 2.61 (m, H- ⁇ ); 2.34 (m, 1H, H- ⁇ '); 1.50, 1.47 (m, 4H, H-2 ⁇ , H-2 ⁇ ); 1.18 (H-3 ⁇ / H-3 ⁇ ); 1.05-1.25 (m,
  • the residual solid from the decantation is taken up with dichloromethane (3 X 100 mL) and then filtered.
  • the organic phases are combined, washed with a saturated aqueous sodium chloride solution (3 X 130 mL), then with water (3 x 130 mL), dried over sodium sulfate and concentrated in a rotary evaporator (40 ° C) until a residual oil is obtained.
  • This residue is precipitated in 250 ml of hexane with stirring.
  • the precipitate is filtered, washed with hexane and dried in a vacuum oven.
  • H-b / H-c 2.46 (m, 1H, H- ⁇ ); 2.29 (m, 1H, H- ⁇ '); 2.08 (m, 1H, H- ⁇ ); 1.99 (m, 1H, H- ⁇ '); 1.49 (m, 4H,
  • the solution is then concentrated on a rotary evaporator (40 ° C) and the oily residue is taken up in 140 ml of water.
  • the white precipitate formed (mixture of triphenylphosphine and triphenylphosphine oxide) is filtered and washed (2 x 20 ml of water).
  • the precipitate is recovered by centrifugation (10,000 rpm, 20 min).
  • the solid is dried, then a final stage of recrystallization from methanol (dissolution in a minimum of boiling methanol, filtration of the insoluble materials in the hot state and recrystallization at 4 ° C.) makes it possible to isolate by filtration, and after drying overnight at l vacuum oven, 196 mg (0.37 mmol) of compound 32 in the form of a white powdery powder.
  • H- ⁇ ' 1.48 (m, 4H, H-2 ⁇ / H-2 ⁇ ); 1.24-1.32 (m, 44 H, H-3 ⁇ to H-11 ⁇ / H-3 ⁇ to H-15 ⁇ ); 0.88 (t, 6H, H-12 ⁇ / H-16 ⁇ )
  • Hio / Hi ⁇ 2.6 (m, 2H, H ⁇ , H ⁇ ; 1.6-1.1 (m, H 2 ⁇ to H ⁇ 6 ⁇ / H 2 ⁇ to Hig ⁇ ); 0.87 (t, 6H, H ⁇ g ⁇ / H ⁇ g ⁇ )
  • the compound 21a is prepared by following the same experimental protocol as that described for the preparation of 21 in Example 1 above but using 8.2 g (16.6 mmol, 1 eq.) Of the compound 19a. 3.6 g (13.3 mmol, 80% yield) of compound 21a are thus obtained.
  • reaction medium is left at room temperature for 72 hours then the reaction is stopped with 6 ml of water.
  • the precipitate formed is filtered and washed with DMF.
  • the filtrate is concentrated on a rotary evaporator.
  • the pasty residue is taken up in water and extracted with chloroform (5 x 50 mL).
  • the organic phase is washed with water (3 x 100 mL).
  • the organic phases are combined, dried over Na 2 S ⁇ 4, filtered and then evaporated.
  • the residue is taken up a last time in water and left to settle overnight to remove the fat containing sodium hydride. After evaporation and lyophilization, compound 3a is obtained with a quantitative yield.
  • the thin layer chromatographies were carried out on aluminum plates (5 ⁇ 7.5 cm) coated with silica gel 60 F 254 (Merck).
  • the melting points were determined using a ⁇ fler bench requiring calibration with reference products from Merck Eurolab.

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Abstract

L'invention concerne des dérivés de cyclodextrines de formule (I), dans laquelle : R1 = -NH-E-AA-(L1)p(L2)q ; avec E = groupe hydrocarboné en C1-C15, linéaire ou ramifié, avec éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes ; AA = reste d'un acide aminé ; L1 et L2 = groupe hydrocarboné en C6-C24, avec éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes ; p et q = 0 ou 1, l'un au moins étant ≠ 0 ; R2 = H, -CH3, isopropyle, hydroxypropyle, sulfobutyléther ; R3 = H ou R2 sauf quand R2 = hydroxypropyle ; tous les R4 = -OH ou R2 sauf quand R2 = hydroxypropyle, ou l'un au moins des R4 = R1 ; n = 5, 6 ou 7. L’invention concerne également un procédé pour les préparer, des complexes d’inclusion et des systèmes de tensioactifs organisés les comprenant.

Description

DERIVES AMPHIPHILES DE CYCLODEXTRINES, LEUR PROCEDE DE PREPARATION ET LEURS UTILISATIONS
DESCRIPTION DOMAINE TECHNIQUE La présente invention se rapporte à de nouveaux dérivés amphiphiles de cyclodextrines, plus précisément d'α-, β- et γ-cyclodextrines, ainsi qu'à leur procédé de préparation et à leurs utilisations. Outre le fait qu'ils présentent des propriétés d'auto-organisation en milieu aqueux et d'incorporation dans des systèmes de tensioactifs organisés, ces dérivés amphiphiles font preuve d'une remarquable stabilité, ce qui rend leur fabrication, leur conservation et leur manipulation particulièrement aisées . Ils sont susceptibles d'être utilisés dans tous les domaines d'application des cyclodextrines. Toutefois, leur capacité à s'incorporer dans des systèmes organisés peut notamment être mise à profit dans le domaine pharmaceutique pour permettre le transport, en particulier par voie transmembranaire, dans un organisme vivant de principes actifs peu ou pas solubles dans l'eau, ou pour permettre la délivrance sélective de médicaments au niveau d'organes ou de cellules cibles en vue d'optimiser leur action thérapeutique . Elle peut également être utilisée dans le domaine de la protéomique, par exemple pour véhiculer des molécules détergentes aptes à détruire les couches lipidiques des membranes cellulaires sans altérer pour autant les protéines membranaires .
ETAT DE LA TECHNIQUE ANTERIEURE Les cyclodextrines sont des oligo- saccharides cycliques non réducteurs, qui sont obtenus industriellement en dégradant l'amylose (c'est-à-dire la forme linéaire de l'amidon) par la cyclodextrine glucosyltransférase, enzyme d'origine bactérienne. Les trois cyclodextrines les plus fréquemment rencontrées sont les oc-, β- et γ-cyclodextrines qui sont respectivement constituées de 6, 7 et 8 unités D-glucopyranosiques, liées entre elles par des liaisons glycosidiques α(l—>4) . Les cyclodextrines ont une structure tridimensionnelle en forme de tronc de cône dont la paroi est formée par les unités D-glucopyranosiques, en conformation chaise 4Cι1,2 et....délimite une cavité encore appelée "cage". Les groupes hydroxyles secondaires des unités D-glucopyranosiques sont situés à la base de la paroi du tronc de cône, alors que les groupes hydroxyles primaires de ces unités sont situés au sommet de cette paroi. Il en résulte que la partie extérieure des cyclodextrines est naturellement hydrophile tandis que leur partie intérieure, qui est tapissée d'atomes d'hydrogène et d'atomes d'oxygène interglucosidiques, est hydrophobe . Cette particularité permet d'inclure dans la cage des cyclodextrines des molécules hydrophobes pour former des complexes d'inclusion solubles dans l'eau. Le caractère biodégradable des cyclodextrines les prédispose à des applications importantes dans les domaines pharmaceutiques et agroalimentaires où l'aptitude des cyclodextrines à servir de molécule "hôte" permet de protéger des molécules fragiles, d'assurer leur libération contrôlée ou encore, dans le cas de molécules hydrophobes, leur solubilisation en milieu aqueux. Des spécialités pharmaceutiques utilisant des cyclodextrines sont d'ailleurs déjà disponibles commercialement. Au cours des quinze dernières années, de nombreuses recherches ont été réalisées dans le but d'augmenter le caractère amphiphile des cyclodextrines, par greffage d'un ou plusieurs groupes hydrophobes, et de les rendre ainsi aptes à s'insérer, par leur partie hydrophobe, dans des systèmes lipidiques ou de s'auto- organiser en milieu aqueux sous forme de micelles, sans qu'elles perdent pour autant leur capacité de complexation vis-à-vis de molécules hydrophobes. En particulier, l'équipe de chercheurs à laquelle appartiennent les Inventeurs a proposé, dans FR-A-2 792 942 [1], des dérivés amphiphiles de l'a-, β- ou γ-cyclodextrine obtenus par greffage d'un dérivé stéroïde, via un bras espaceur, sur le carbone du groupe hydroxyle primaire d'au moins une unité D-glucopyranosique de ces cyclodextrines. Cette équipe a pu obtenir, à partir de ces dérivés, des micelles parfaitement sphériques, comportant en moyenne 24 monomères et tapissées à la surface par les cages de ces monomères. Elle a pu également montrer, par différentes techniques physico-chimiques (diffusion de rayons X, calorimétrie différentielle, R 31P, ...) une excellente incorporation de ces dérivés dans des matrices de phospholipides (Auzély-Velty et al . , Carbohydrate Research, 1999, 318, 82-90 [2]). Or, poursuivant leurs travaux sur les cyclodextrines, les Inventeurs ont constaté que le greffage, toujours par l'intermédiaire d'un bras espaceur, d'un acide aminé porteur d'un ou de deux groupes lipophiles, sur le groupe hydroxyle primaire d'au moins une unité D-glucopyranosique d'une α-, β- ou γ-cyclodextrine, conduit à l'obtention de dérivés amphiphiles particulièrement intéressants dans la mesure où ils cumulent une très grande affinité vis-à- vis des systèmes organisés et une remarquable stabilité. C'est cette constatation qui est à la base de l'invention.
EXPOSE DE L'INVENTION L'invention a donc pour objet des dérivés amphiphiles de cyclodextrines qui répondent à la formule (I) :
dans laquelle :
- R1 répond à la formule (II) : -NH-E-AA- (L1) p (L2) q (II) dans laquelle : • E représente un groupe hydrocarboné, linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, comprenant de 1 à 15 atomes de carbone et comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes ; • AA représente le reste d'un acide aminé ; L1 et L2, identiques ou différents, représentent un groupe hydrocarboné, linéaire, ramifié et/ou cyclique, saturé ou insaturé, comprenant de 6 à 24 atomes de carbone et comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes ; • p et q, identiques ou différents, sont des entiers égaux à 0 ou à 1, à condition toutefois que l'un au moins de ces entiers soit différent de 0 ;
- R2 représente un atome d'hydrogène, un groupe méthyle, un groupe isopropyle, un groupe hydroxypropyle ou un groupe suifobutyléther ; - R3 représente un atome d'hydrogène ou est identique à R2 sauf quand R2 est un groupe hydroxypropyle ;
- tous les R4 représentent soit un groupe hydroxyle, soit R2 sauf quand R2 est un groupe hydroxypropyle, ou bien l'un ou plusieurs R4 sont identiques à R1 et le ou les autres R4 représentent soit un groupe hydroxyle, soit R2 sauf quand R2 est un groupe hydroxypropyle ; - n est un entier égal à 5, 6 ou 7. Dans ce qui précède et ce qui suit, on entend par "hétéroatome" , un atome choisi parmi l'azote, l'oxygène, le soufre et les halogènes (brome, iode, chlore et fluor) . Par ailleurs, on entend par "reste d 'un acide aminé" , le groupe d'atomes qui subsiste de cet acide aminé lorsque celui-ci est lié de façon covalente, d'une part, au bras espaceur E et, d'autre part, à l'un et/ou l'autre des groupes L1 et L2. Selon une première disposition préférée de l'invention, dans la formule (II), E, qui sert de bras espaceur, répond à la formule (III) : -CO-X-G1-, dans laquelle X représente un groupe alkylène formant pont et comprenant de 1 à 8 atomes de carbone, tandis que G1 représente un groupe -CO-, -NH- ou -NR- dans lequel R est un groupe alkyle, avantageusement en Ci à Ce Dans la formule (III) , X représente, de préférence, un groupe alkylène formant pont et comprenant de 1 à 4 atomes de carbone et, mieux encore, 2 atomes de carbone. L'acide aminé, dont le reste est symbolisé par AA dans la formule (II) , est, de préférence, choisi parmi les vingt acides aminés qui entrent classiquement dans la constitution des protéines, à savoir l'acide aspartique, l'acide glutamique, l'alanine, l'arginine, 1 ' asparagine, la cystéine, la glutamine, la glycine, l'histidine, 1 ' isoleucine, la leucine, la lysine, la méthionine, la phénylalanine, la proline, la serine, la thréonine, la tyrosine, le tryptophane et la valine. En particulier, il est choisi parmi l'acide aspartique, l'acide glutamique, 1 'isoleucine, la leucine et la phénylalanine, l'acide aspartique et l'acide glutamique étant particulièrement préférés. Toutefois, cet acide aminé peut également être choisi parmi des acides aminés plus rares comme, par exemple, la β-alanine, l'acide γ-aminobutyrique, l'acide α-aminoadipique, 1 'hydroxyproline, l'hydroxy- lysine, la phénylsérine, l'acide α,ε-diaminopimélique et l'ornithine, tout acide aminé étant- a priori susceptible de convenir puisqu'il comporte, par définition, deux groupes fonctionnels, l'un acide carboxylique, l'autre aminé, autorisant sa liaison covalente, d'une part, au bras espaceur E, et, d'autre part, à au moins un groupe L1 ou L2. Le choix de l'acide aminé dépend notamment de la valeur que l'on souhaite donner à p et q dans la formule (II) , dans la mesure où il doit comporter au moins trois groupes fonctionnels pour que p et q puissent être tous les deux égaux à 1 (c'est-à-dire, pour que les deux groupes L1 et L2 soient présents) , alors qu'il suffit - et il est même souhaitable pour simplifier la préparation du dérivé de cyclodextrine - qu'il ne comporte que deux groupes fonctionnels lorsque l'un des entiers p et q est égal à 0. Conformément à l'invention, on préfère que AA soit le reste d'un acide aminé appartenant à la série L. Toutefois, il est également possible que AA soit le reste d'un acide aminé de la série D. Selon une autre disposition préférée de l'invention, dans la formule (II), L1 et/ou L2 répondent à la formule (IV) : -G2-Y dans laquelle G2 représente un groupe —C0-, -NH- ou -NR- où R est un groupe alkyle, avantageusement en Ci à Ce, tandis que Y représente une chaîne alkyle linéaire en Cs à Cι8 ou un groupe cyclique ou polycyclique connu pour être lipophile comme un groupe steroïde, par exemple dérivé du cholestérol, un groupe polyaromatique, par exemple dérivé de naphtalene, du dansyle, de l'anthracène ou encore un groupe dérivé d' lcaloïdes . Dans la formule (IV) , Y représente, de préférence, une chaîne alkyle en Cι2 à C6. Parmi les dérivés de cyclodextrines selon l'invention, on préfère ceux dans lesquels le bras espaceur E est lié par une liaison amide au reste AA, ce reste étant lui-même lié par une liaison amide au (x) groupe (s) L1 et/ou L2, pour des raisons de facilité de préparation. Dans ce cas, E répond, de préférence, à la formule : -CO-X-CO- dans laquelle X a la même signification que précédemment, tandis que L1 et/ou L2 répondent, de préférence, à la formule: -NH-Y dans laquelle Y a la même signification que précédemment . Dans ce cas également, on préfère que R1 réponde à la formule (VI) :
dans laquelle :
— X et Y ont la même signification que précédemment ; tandis que
- Z représente : • soit une liaison covalente, auquel cas R5 représente un atome d'hydrogène, un groupe méthyle, la chaîne latérale d'un acide aminé ou un groupe de formule : - (CH2) t_CO-NH-Y dans laquelle t vaut 1 ou 2 et Y a la même signification que précédemment, • soit un groupe hydrocarboné formant pont, comprenant de 1 à 4 atomes de carbone et comportant un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi 0 et N, auquel cas R5 représente un groupe aminé primaire ou un groupe de formule : -NH-CO-Y dans laquelle Y a la même signification que précédemment . En particulier, lorsque AA représente, dans la formule (II), le reste d'un acide aminé choisi parmi l'acide aspartique, l'acide glutamique, 1 ' isoleucine, la leucine et la phénylalanine, alors, dans la formule (VI) : - Z représente une liaison covalente ; - Y représente, de préférence, une chaîne alkyle linéaire en C8 à Cι8 et, mieux encore, en Ci2 à Cι6 ; tandis que
- R5 représente un groupe alkyle ramifié à 4 atomes de carbone, un groupe benzyle ou un groupe de formule : - (CH2) t-CO-NH-Y, dans laquelle t est égal à 1 ou 2 et Y représente, de préférence, une chaîne alkyle linéaire en C8 à Cι8 et, mieux encore, en C12 à Ciε. Lorsque AA représente, dans la formule (II), le reste d'un acide aminé choisi parmi 1 ' aci'de aspartique et l'acide glutamique, alors, dans la formule (VI) :
- Z représente une liaison covalente ;
- Y représente, de préférence, une chaîne alkyle linéaire en C8 à Cι8 et, mieux encore, en Cι2 à Ciε ; tandis que
- R5 représente un groupe de formule : - (CH2) t-CO-NH-Y, dans laquelle t est égal à 1 ou 2 et Y représente, de préférence, une chaîne alkyle linéaire en C8 à Cι8 et, mieux encore, en C12 à Cι6. Selon encore une autre disposition préférée de l'invention, les dérivés de cyclodextrine ne comportent qu'un seul substituant R1 par molécule de dérivé. Toutefois, il est également possible qu'un ou plusieurs substituants R4, voire tous, soient identiques à R1. Les dérivés de cyclodextrine selon l'invention peuvent être des dérivés de l'a-, β- ou γ-cyclodextrine. De préférence, on utilise les dérivés de la β-cyclodextrine, c'est-à-dire les dérivés de formule (I) dans laquelle n est égal à 6. Conformément à l'invention, ces dérivés peuvent notamment être : - diméthylés, auquel cas, dans la formule (I) , les R2 sont des groupes methyles, les R3 sont des atomes d'hydrogène, tandis que les R4 sont des groupes méthoxy quand ils ne sont pas identiques à R1, perméthylés, auquel cas, dans la formule (I) , tous les R2 et R3 sont des groupes methyles, tandis que les R4 représentent des groupes méthoxy quand ils ne sont pas identiques à R1,
- 2-hydroxypropylés, auquel cas, dans la formule (I) , tous les R2 sont des groupes hydroxypropyles, les R3 sont des atomes d'hydrogène, tandis que les R4 sont des groupes hydroxyles quand ils ne sont pas identiques à R1,
- suifobutyléthers, auquel cas, "dans la formule (I) , les R2, R3 et R4 sont des groupes hydroxyles ou des groupes suifobutyléthers . Parmi les dérivés de cyclodextrines selon l'invention, on préfère tout particulièrement :
• le JV', "-didodécyl-JVû;- (6I-amido-succinyl-6I-désoxy- cyclomaltoheptaose) -L-aspartamide, • le N ' , N"-didodécyl-Nα- (6I-amido-succinyl-βI-désoxy- cyclomaltoheptaose) -L-glutamide,
• le N ' , N"-d±dodécyl-Na- (6I-amido-succinyl-6I-désoxy- 2I-0-méthyl-hexakis (2XI~VI1, 6II-vι:ι:-di-0-méthyl) cyclo- maltoheptaose) -L-aspartamide, • le N ' , N"-didodécyl-Nα- (6I-amido-succinyl-6I-désoxy- 2I-0-méthyl-hexakis (2ττ→ττ , 6II~"VII-di-0-méthyl) cyclo- maltoheptaose) -L-glutamide,
• le N ' , N"-didodécyl-Na- (6I-amido-succinyl-6I-désoxy- 21, S^di-O-méthyl-hexakis (2II_VI1, 3II_VI1, 6II~VII-tri-0- méthyl) cyclomaltoheptaose) -L-aspartamide, le W|,-dodécyl- "-hexadécyl-Wûr- (6I-amidosuccinyl-6I- désoxy-cyclomaltoheptaose) -L-aspartamide, » le N ' , "-didodécyl-Nα- (6I-amido-succinyl-6I-désoxy- 21, S^di-O-méthyl-hexakis (2ττ~vιτ, 3ll~VI1 , 6II-VII-tri-0- méthyl) cyclomaltoheptaose) -L-glutamide,
• le W , i\?'"-dihexadécyl-Nûr- (6I-amidosuccinyl-6I-désoxy- 21, S^di-O-méthyl-hexakis (2II~VI1, 3II-VI1, 6ι;[~ II-tri-0- méthyl) cyclomaltoheptaose) -L-aspartamide, et • le N' -dodécyl-Na- ( 6I-amidosuccinyl-6I-désoxy-2I, 3I-di- O-méthyl-hexakis (2ΣI"VI1, 3"-VI1, β^^^-tri-O- méthyl) cyclomaltoheptaose) -L-leucinamide . Les dérivés de cyclodextrines de formule (I) peuvent être préparés par des procédés classiques de couplage à partir des dérivés monoamines de cyclodextrines correspondants. En particulier, ils peuvent être préparés par un procédé comprenant le couplage d'un dérivé monoamine d'une α-, β- ou γ-cyclodextrine préalablement greffé du bras espaceur, avec un acide aminé préalablement greffé du ou des groupes L1 et/ou L2. Aussi, l'invention a-t-elle aussi pour objet un procédé de préparation de dérivés de cyclodextrines de formule (I) qui comprend une étape dans laquelle on fait réagir un dérivé de cyclodextrine de formule (VII) :
dans laquelle :
— E' représente un groupe hydrocarboné, linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, comprenant de 1 à 15 atomes de carbone,, un ou plusieurs hétéroatomes et un groupe fonctionnel libre apte à réagir avec un groupe hydroxyle, aminé, acide carboxylique ou thiol d'un acide aminé pour former une liaison covalente ;
- R2 représente un atome d'hydrogène, un groupe méthyle, un groupe isopropyle, un groupe hydroxy- propyle ou un groupe sulfobutyléther ;
- R3 représente un atome d'hydrogène ou est identique à R2 sauf quand R2 est un groupe hydroxypropyle ;
— tous les R4 représentent soit un groupe hydroxyle, soit R2 sauf quand R2 est un groupe hydroxypropyle, ou bien l'un ou plusieurs R4 représentent un groupe -NH-E ' et le ou les autres R4 représentent soit un groupe hydroxyle, soit R sauf quand R2 est un groupe hydroxypropyle ; - n est un entier égal à 5, 6 ou 7 ;
avec un composé de formule (VIII) :
AA'-(L1)p(L2)q (VIII)
dans laquelle : * AA' représente un acide aminé comportant un groupe hydroxyle, aminé, acide carboxylique ou thiol libre ;
• L1 et L2, identiques ou différents, représentent un groupe hydrocarboné, linéaire, ramifié et/ou cyclique, saturé ou insaturé, comprenant de 6 à 24 atomes de carbone et comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes ;
• p et q, identiques ou différents, sont des entiers égaux à 0 ou à 1, à condition toutefois que l'un au moins de ces entiers soit différent de 0. Le groupe fonctionnel libre de E' peut notamment être un groupe acide carboxylique, un groupe dérivé d'acide carboxylique (halogénure d'acide, anhydride d'acide), un groupe aminé primaire ou secondaire (-NHR où R est un groupe alkyle, avantageusement en Ci à Cg) , ou encore un groupe partant, selon la nature du groupe fonctionnel de l'acide aminé avec lequel il doit réagir. Dans ce qui précède et ce qui suit, on entend par "groupe partant" , un groupe susceptible de se dissocier du composé qui le porte par attaque d'un centre nucléophile. Des groupes partants sont, par exemple, les halogènes, les tosylates, les mesylates et autres sulfonates. Pour la préparation du dérivé de cyclodextrine de formule (VII) , le procédé selon 1 ' invention prévoit de faire réagir un dérivé monoamine de cyclodextrine de formule (IX) :
dans laquelle :
— R2, R3 et n ont la même signification que dans la formule (VII) ;
— tous les R4 représentent soit un groupe hydroxyle, soit R2 sauf quand R2 est un groupe hydroxypropyle, ou bien l'un ou plusieurs R4 représentent un groupe -NH2 et le ou les autres R4 représentent soit un groupe hydroxyle, soit R2 sauf quand R2 est un groupe hydroxypropyle ; avec un composé précurseur du groupe E' qui comporte un groupe fonctionnel libre apte à réagir avec le groupe aminé du dérivé de cyclodextrine de formule (IX) , ce composé précurseur devenant le groupe E' au cours de la réaction . Le composé précurseur du groupe E' peut notamment être un groupe acide carboxylique, un groupe dérivé d'acide carboxylique ou un groupe partant. Le dérivé monoamine de cyclodextrine de formule (IX) peut, lui, être préparé en soumettant le dérivé monoazide de cyclodextrine correspondant à une réaction de Staudinger, à l'aide de triphosphine et d'ammoniaque, comme décrit dans la référence [1] . Pour la préparation du composé de formule (VIII), le procédé selon l'invention prévoit les étapes suivantes : — faire réagir un acide aminé, dont le groupe fonctionnel prévu pour réagir avec le groupe fonctionnel libre du groupe E ' du dérivé de cyclodextrine de formule (VII) a été préalablement protégé, avec un composé précurseur du groupe L1 et/ou un composé précurseur du groupe L2, ce ou ces composés précurseurs comportant un groupe fonctionnel libre apte à réagir avec un groupe hydroxyle, aminé, acide carboxylique ou thiol d'un acide aminé pour former une liaison covalente, et devenant le ou les groupes L1 et/ou L2 au cours de la réaction ; puis — déprotéger le groupe fonctionnel protégé de 1 ' acide aminé . Bien entendu, dans le cas où l'on souhaite ne greffer qu'un seul des deux groupes L1 et L2 sur
1 ' acide aminé et où ce dernier comporte plus de deux groupes fonctionnels, alors il convient de protéger tous les groupes qui ne sont pas prévus pour réagir avec le composé précurseur du groupe L1 ou L2 avant de procéder à cette réaction. Par ailleurs, dans le cas où l'on souhaite greffer sur 1 ' cide aminé deux groupes L1 et L2 identiques, ce greffage est effectué en une seule étape en faisant réagir l'acide aminé avec un composé précurseur qui est le même pour les deux groupes, tandis que, dans le cas où l'on souhaite greffer sur l'acide aminé deux groupes L1 et L2 différents, ce greffage est réalisé en deux étapes successives : une première étape dans laquelle on fait réagir l'acide aminé avec l'un des composés précurseurs des groupes L1 et L2 après avoir protégé le groupe fonctionnel de l'acide aminé prévu pour réagir avec l'autre de ces composés, et une seconde étape dans laquelle, après déprotection dudit groupe fonctionnel, on fait réagir l'acide aminé avec l'autre desdits composés précurseurs . Là également, le groupe fonctionnel libre des composés précurseurs des groupes L1 et L2 peut notamment être un groupe acide carboxylique, un groupe dérivé d'acide carboxylique, un groupe aminé primaire ou secondaire ou un groupe partant, selon la nature du groupe fonctionnel de 1 ' acide aminé avec lequel il doit réagir. Lorsque l'on souhaite préparer l'un des dérivés de cyclodextrines préférés selon l'invention, c'est-à-dire un dérivé de formule (I) dans laquelle R1 répond à la formule (VI) ci-avant, alors : - le composé précurseur du groupe E' est, de préférence, un anhydride d'acide de formule (X) :
dans laquelle X a la même signification que précédemment, que l'on fait réagir avec le dérivé monoamine de cyclodextrine de formule (IX) en milieu anhydre, par exemple dans du diméthylformamide anhydre, et sous atmosphère inerte ; - l'acide aminé, après protection du groupe aminé prévu pour réagir avec le groupe acide carboxylique du dérivé de cyclodextrine de formule (XI), par exemple par un groupe N- ( 9- fluorénylméthoxycarbonyloxy) (Fmoc) , est mis à réagir avec : • soit un seul composé précurseur de formule : NH2-Y dans laquelle a la même signification que précédemment, soit deux composés précurseurs différents de formule : NH2-Y dans laquelle Y a la même signification que précédemment, la réaction étant alors effectuée en deux étapes avec des opérations intermédiaires de protection et de déprotection ; • soit un composé précurseur de formule : NH2-Y et un composé précurseur de formule -COOH-Y, dans lesquelles Y a la même signification que précédemment, cette réaction étant également effectuée en deux étapes avec des opérations intermédiaires de protection et de déprotection ; - la réaction entre le dérivé de cyclodextrine (VII) et le composé de formule (VIII) est, de préférence, réalisée en présence d'agents de couplage peptidiques comme le N, JV'-diisopropyl- carbodiimide (DIC) et l'hydroxybenzotriazole (HOBT) afin d'éviter que ne se produise une racémisation. Les dérivés amphiphiles de cyclodextrines selon l'invention présentent de nombreux avantages dont notamment celui de présenter à la fois une très grande affinité vis-à-vis des systèmes de tensioactifs organisés et une remarquable stabilité, ce qui les rend très aisément manipulables. Ainsi, ces composés sont stables à l'état solide, plusieurs mois à température ambiante et à la lumière. Ils sont également stables plusieurs semaines en solution aqueuse ou organique, ce qui n'est pas le cas des dérivés lipidiques de type phospholipides qui ne sont stables qu'à -80°C. Ils sont, en . outre, relativement simples à préparer, essentiellement en raison de ce que leur synthèse peut être réalisée par des procédés classiques de couplage peptidique . Leur affinité vis-à-vis des systèmes de tensioactifs organisés et, donc, leur capacité à s'incorporer dans de tels systèmes peuvent être mises à profit pour permettre le transport, en particulier par voie transmembranaire, de composés hydrophobes. Aussi, l'invention a-t-elle également pour objet des complexes d'inclusion de dérivés de cyclodextrines de formule (I) avec des composés hydrophobes. Ces derniers peuvent être de différents types : ainsi, il peut notamment s'agir de principes actifs médicamenteux (stéroïdes, neurotropes, antiviraux, batériostatiques, vitamines, ...) , de molécules utiles en cosmétologie, de produits de contraste pour l'imagerie médicale, ou encore de composés utiles en protéomique comme, par exemple, des détergents aptes à détruire les -couches lipidiques des membranes cellulaires sans affecter les protéines membranaires . Ces complexes d'inclusion peuvent être préparés par des procédés classiques, par exemple en ajoutant à une solution ou une suspension d'un dérivé de cyclodextrine de formule (I) , une solution du composé hydrophobe dans un solvant organique approprié, par exemple l'acétone. L'invention a encore pour objet des systèmes de tensioactifs organisés comprenant un dérivé de cyclodextrine de formule (I) ou un complexe d'inclusion de ce dérivé. Les tensioactifs susceptibles de former de tels systèmes organisés peuvent être de différents types. A titre d'exemple, on peut citer les phospholipides répondant à la formule générale ci- après :
dans laquelle R3 représente CH3- (CH2)p-CO, p étant un nombre entier de 6 à 18. Ces phospholipides sont capables de former de petites vésicules unilamellaires . C'est le cas, en particulier, de la dimyristoyl- phosphatidylcholine qui répond à la formule ci-dessus avec p = 12. L'invention sera mieux comprise à la lumière du complément de description, qui se réfère à des exemples de réalisation de dérivés amphiphiles de cyclodextrines selon l'invention et qui est donné à titre illustratif et non, limitatif.
EXPOSÉ DÉTAILLÉ DE MODES DE RÉALISATION PARTICULIERS
Exemple 1 : N' , N"-d±d décγl-Ncg- (6τ-aιιι±ά -svLCC±Ω.yl-6τ- désoxy-cyclomalto eptaose) -L-aspartamide : On obtient le composé titre, ou composé 23, de formule :
23
en couplant le 6I-amidosuccinyl-6I-désoxy-cyclomalto- heptaose, ou composé 5, avec le N' , N"-didodécyl-L- aspartamide, ou composé 21. 1.1. Préparation du composé 5 : a) Préparation du tosylimidazone, ou composé 1, de formule :
1 Dans un tricol de 1 litre équipé d'un thermomètre et sous atmosphère inerte, du chlorure de tosyle (80,27 g ; 0,421 mol ; 1 éq.) dissous dans 250 mL de dichlorométhane est ajouté pendant 4 heures à de l'imidazole (65,08 g ; 0,956 mol ; 2,27 éq.) dissous dans 250 mL de dichlorométhane. Le milieu réactionnel est laissé agité toute la nuit à température ambiante puis filtré sur de la -célite et lavé avec 500 mL d'un mélange acétate d'éthyle/cyclohexane (1/1). Le filtrat est concentré à 1 'evaporateur rotatif puis le résidu solide est repris dans 50 mL d'acétate d'éthyle et précipité dans 500 mL de cyclohexane. Le précipité formé est filtré, séché et repris dans un minimum de dichlorométhane. La phase organique est lavée à l'eau puis avec une solution saturée de chlorure de sodium. La phase aqueuse est extraite au dichlorométhane. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur Na2S04 et concentrées sous pression réduite. Enfin, le solide résiduel est recristallisé dans l'éther isopropylique . Après filtration et lavage à l'éther, le composé 1 est obtenu avec un rendement de 75%. CCM : Rf = 0,6 éluant : CH2Cl2/MeOH 98/2 (v/v) P.f. : 78°C
RMN XH CDC13 δ (ppm) : 8 (s, 1H, H3) ; 7,82 (d, 2H, Hb/b' , 3Ja-b = 8 Hz) ; 7,34 (d, 2H, Hc/o' , 3Jb-a = 8 Hz) ; 7,28 (dd, 1H, 3J = 1,6 Hz, 3J = 1,4 Hz, H2) ; 7,08 (m, 1H, H3) ; 2,42 (s, 3H, He) b) Préparation du 61- (O-p-tolylsulf onyl) -61 désoxy-cyclomaltoheptaose, ou composé 2, de formule :
Dans un erlenmeyer de 500 L, 25 g (0,022 mol ; 1 éq. ) de β-cyclodextrine (Roquette Frères SA) sont mis en suspension dans 200 ml d'eau distillée puis de la soude en pastilles (8,8 g) est ajoutée en une seule fraction. Le milieu réactionnel devient limpide. Le composé 1 (5 g ; 0,022 mol ; 1 éq.) est rapidement additionné au milieu réactionnel (le tosylimidazole reste en suspension) . Au bout d'une heure, le pH est acidifié à pH 6 avec de l'HCl concentré. Le précipité blanc formé est filtré puis lavé à l'eau distillée chaude (2 x 100 mL) et à l'acétone (3 X100 mL) , puis recristallisé dans l'eau. Après filtration et lavage à l'acétone, le composé 2 est obtenu avec un rendement de 21%.
CCM : Rf ≈ 0,4 éluant : NH40H 6%/EtOH/BuOH 5/5/4 (v/v/v) P.f. : 180°C (point de décomposition entre 175°C et 210°C)
RMN 1H DMSO-d6 δ (ppm) : 7,75 (d, 2H, Hb/b' , 3Ja-b = 9 Hz) ; 7,4 (d, 2H, Hc/c' , 3Jb-a = 9 Hz) ; 5,8-5,5 (m, OH) ; 4,8 (m, 7H, Hi-CD) ; 4,5-4,3 (m, 2H, ; (m, 14H, H2-CD/H4-CD) ; 2,4 (s, 3H, CH3)
ESI-MS +: m/z mesuré à 1290,2 pour [M+H]+, calculé à 1290,2 pour C49H77037S c) Préparation du 6I-azido-6I-désoxy-cyclo- malto-heptao'se, ou composé 3, de formule :
Dans un ballon de 1 litre, le composé 2 (6,74 g ; 0,0052 mol ; 1 éq.) est mis en suspension dans 550 mL d'eau sous agitation. Une solution aqueuse (12,5 mL ; 0,052 mol ; 10 éq.) d' azoture de lithium à 20% (m/v) (Acros Organics) est ajoutée et le milieu réactionnel est porté à reflux pendant 4 heures puis laissé à température ambiante pendant 4 jours. Après filtration des insolubles, la solution est concentrée à 1' evaporateur rotatif jusqu'à obtenir un volume de 10 mL. Le résidu huileux est repris dans 190 mL d' éthanol puis laissé au réfrigérateur toute la nuit. Le mélange obtenu est porté à ébullition et filtré à chaud. Le solide est lavé à l'ethanol bouillant puis à l'acétone et séché sous vide. Après lyophilisation, le composé 3 est obtenu avec un rendement estimé de 60%.
CCM : Rf = 0,3 éluant : NH4OH 6%/EtOH/BuOH 5/5/4 (v/v/v) P.f. : 160°C (décomposition)
RMN XH D20 δ (ppm) : 5,2-5,1 (m, 7H, Hi-CD) ; 4,1-3,8 (m, 30H, H3-CD/H5-CD/Hg-CD/H6 -CD) ; 3,75-3,55 (m, 14H, H2-CD/H4-CD)
ESI-MS + : m/z mesuré à 1166,5 pour [M+Li]+, calculé à 1166,4 pour C42H69N3θ 4Li d) Préparation du 6I-amino-6I-désoxy-cyclo- maltoheptaose, ou composé 4, de formule:
Dans un ballon de 2 litres, le composé 3
(12,53 g ; 0,0108 mol ; 1 éq.) est dissous dans 800 L de DMF. Une solution de triphénylphosphine (11,38 g ; 0,043 mol ; 4 éq.) dissoute dans 40 mL de DMF est additionnée lentement. Après 3 heures sous agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est refroidi à 0°C et 410 mL d'ammoniaque à 20% sont ajoutés, le milieu réactionnel est agité toute la nuit à température ambiante puis concentré à 1 'evaporateur rotatif. Le résidu huileux est repris dans 600 mL d'eau, le précipité blanc formé est filtré et lavé à l'eau (2 x 80 mL) . Le filtrat est ensuite concentré sous vide et le résidu solide est repris dans un minimum d'eau puis amené à pH 4,5 (pH initial de 8,9), les insolubles sont filtrés et le filtrat est passé sur de la résine Le atit® SP 1080 (Merck) en batch. Le composé 4 est décroché avec de l'ammoniaque à 6% puis le filtrat est concentré à 1 ' evaporateur rotatif et repris dans un minimum d'eau. Les insolubles sont filtrés et le filtrat est précipité dans l'acétone. Après séchage sous vide toute la nuit, on récupère 7,25 g de brut dissous à nouveau dans l'eau. Les insolubles sont filtrés sur papier filtre et le filtrat est amené à pH 4,5. La moitié est alors passée sur une colonne de résine Lewatit SP 1080 et l'autre en batch. Les différentes fractions sont évaporées à sec puis reprises dans un minimum d'eau et enfin lyophilisées. Le composé 4 est obtenu avec un rendement global sur les 2 étapes de 45%.
CCM : Rf = 0,2 éluant : NH4OH 6%/EtOH/BuOH : 5/5/4 (v/v/v)
P.f. : 160°C (décomposition)
RMN XH D20 δ (ppm) : 5 , 2-5 , 05 (m, 7H, Hi-CD ) ; 4 , 1-3 , 75 (m, 28H, H3-CD/H5-CD/H6 II~VII-CD/H6' :ι:I"VII-CD ) ; 3 , 75-3 , 5 (m, 14H, H2-CD/H4-CD) ; 3 , 25 (d, 1H, H6 I-CD, 3J6-5 = 10 Hz ) ; 3 , 05 (d, 1H, Hg^CD , 3Jg-5 = 10 Hz ) ESI-MS + : m/z mesuré à 1134 , 5 [M+H] +, calculé à 1134 , 4 pour C42H 2N034 e) Préparation du 6I-amidosuccinyl-6I-désoxy- cyclomaltoheptaose, ou composé 5, de formule :
Dans un ballon de 100 mL propre et sec, le composé 4 (1 g ; 0,88 mmol ; 1 éq.) est dissous dans 20 ml de DMF anhydre sous atmosphère inerte. L'anhydre succinique (0,135 g ; 1,34 mmol ; 1,5 éq.) dissous dans 6 mL de DMF anhydre est additionné. Le milieu réactionnel est laissé sous atmosphère inerte pendant- 18 heures à température ambiante. La réaction est stoppée avec 120 μL d'eau puis la solution est précipitée dans 200 mL d'acétone. Le solide obtenu est filtré puis séché au dessicateur. Le solide est repris dans un minimum d'eau, les insolubles sont filtrés et le filtrat lyophilisé. Le composé 5 est obtenu avec un rendement de 55%.
CCM : Rf = 0,6 éluant : DMF/BuOH/H20 1/2/1 (v/v/v) P.f. : 160°C (décomposition)
RMN 4l pyridine-d5 δ (ppm) : 8,75 (s, 1H, NH-CD) ; 7,9-7,6 (140H) ; 5,8-5,55 (m, 7H, Hi-CD) ; 4,95-3,95 (m, H3-CD/H6-CD/Hg' -CD/H5-CD /H4-CD/H2-CD ) ; 3 (m, 4H, Hb/Hc)
ESI-MS + : m/z mesuré à 1234 , 5 [M+H] +, calculé à 1234 , 4 pour C46H76N03-7
1.2. Préparation du composé 21 : a) Préparation de l'acide Na- (9-fluorényl- méthoxycarbonyl) -L-aspartique, ou composé 17, de formule :
17 Dans un ballon de 250 mL sec, 3,03 g (22,8 mmol ; 1,2 éq.) d'acide L-aspartique (Fluka) sont dissous dans 54 mL (68,8 mmol ; 3,6 éq.) d'une solution aqueuse de carbonate de sodium à 13,5% (m/v). Le milieu est refroidi dans un bain de glace à 0°C, puis une solution de 6,41 g (19,0 mmol ; 1 éq.) de N- (9-fluorénylméthoxycarbonyloxy) succinimide (N-Fmoc) dissous dans 44 mL de DMF est additionnée sous forte agitation (un précipité se forme dans le milieu réactionnel) . L'agitation est maintenue pendant 1 heure à température ambiante. Le mélange est alors dilué dans 665 mL d'eau, extrait à l'éther (1 X 80 mL) puis à l'acétate d' éthyle (2 x 60 mL) . La phase aqueuse résultante est refroidie dans un bain de glace et acidifiée à pH 2 avec de l'acide chlorhydrique concentré (6 N) . La phase aqueuse contenant le produit précipité (sous forme d'huile) est extraite à l'acétate d' éthyle (6 x 60 mL) . La phase organique issue de l'extraction est lavée avec une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium (3 x 35 mL) , puis à l'eau (2 x 35 mL) , séchée sur du sulfate de sodium et concentrée à l' evaporateur rotatif (35°C) jusqu'à obtention d'un petit volume résiduel. Le composé 17 est recristallisé par ajout d' éther de pétrole (environ 10 fois le volume résiduel) sous forte agitation. Après avoir laissé décanter pendant 2 heures à 4°C, le précipité est filtré puis séché pendant 24 heures à l'étuve à vide. On isole 6,22 g (17,5 mmol) du composé 17 sous forme d'une fine poudre blanche.
Formule brute : Cι9Hι7N06, M = 355,35 g.mol-1 Rendement : 92% P.f. : 181°C CCM : Rf = 0,8 éluant : AcOH 60%/BuOH 4/6 (v/v)
ESI-MS + : m/z mesuré à 378,1 [M+Na]+, calculé à 378,1 pour CιgHιNOgNa
RMN ^Η (dmso-dtr, 500,13 MHz) δ (ppm) : 12,60 (si, 2H, COOH) ; 7,89 (d, 2H, H-4/H-4', 3J4~3 = 3J4'-3' = 7,5 Hz) ; 7,72 (d, 1H, N»») ; 7,70 (d, 2H, H-l/H-1' , 3Jι_2 = 3ûV-2' = 7,5 Hz) ; 7,42 (t, 2H, H-3/H-3' , 3J3-2 = 3J3-4 = 3J3'-2' = 3J3'-4' = 7,5 Hz) ; 7,33 (t, 2H, H-2/H-2', 3J2_ι = 3J2-3 = 3J2'-i' = 3J2'-3' = 7,5 Hz) ; 4,34 (m, 1H, H-α) ; 4,29 (d, 2H, H-8) ; 4,22 (t, 1H, H-7) ; 2,73 (dd, 1H, H-β,3Jβ_α = 5,5 Hz, 3Jβ_β, = 16,4 Hz) ; 2,58 (dd, 1H, H-β' , 3Jβ'--α = 8,3 Hz, 3Jβ_p, = 16,4 Hz)
RMN 13 C (dmso-ds, 125,77 MHz) δ (ppm) 172,8, 171, (CαH-COOH, CβH2-COOH) ; 155,9 (C-9) ; 143,9 (C-5/C-5') ; 140,8 (C-6/C-6') ; 127,7 (C-3/C-3' ) ; 127,2 (C-2/C- 2') ; 125,4 (C-l/C-1' ) ; 120,2 (C-4/C-4' ) ; 65,8 (C-8) ; 50,6 (C-α) ; 46,7 (C-7) ; 36,1 (C-β) b) Préparation du N ' , JV"-didodécyl-Ng- (9- fluorenylmethoxycarbonyl) -L-aspartamide, ou composé 19, de formule :
19 Dans un ballon de 500 mL sec, 5, 03 g
(14,2 mmol ; 1 éq.) du composé 17 sont dissous dans 30 L de DMF anhydre sous agitation et sous atmosphère inerte. 6,6 mL (42,5 mmol ; 3 éq.) de N, N'-diisopropyl- carbodiimide (DIC) puis 5,74 g (42,5 mmol ; 3 éq.) d'hydroxybenzotriazole (HOBT) , en solution dans 20 mL de DMF anhydre, sont successivement additionnés. La réaction est maintenue pendant 2 heures sous agitation et sous atmosphère inerte à température ambiante. 7,91 g (42,7 mmol ; 3 éq.) de dodécylamine, en solution dans 100 mL de chloroforme anhydre
(fraîchement distillé sur P205) , sont enfin ajoutés au milieu réactionnel et le tout est laissé pendant
24 heures, sous agitation et sous atmosphère inerte, à température ambiante (un précipité abondant se forme rapidement) . Le mélange est ensuite concentré à
1' evaporateur rotatif (40 °C) et repris dans du DMF. Le solide pâteux est filtré et lavé, d'abord au DMF, puis à l'éther. Après une nuit de séchage à l'étuve à vide, on isole 6,95 g (10,1 mmol) du composé 19 sous forme d'une fine poudre blanche.
Formule brute : C43H6.7 3O4, M = 690,02 g.mol-1 Rendement : 71% P.f. : 174°C
CCM : Rf = 0,9 éluant : CHCl3/MeOH 9/1 (v/v) RMN 1H (CDCI3, 500,13 MHz) δ (ppm) : 7,78 (d, 2H, H-4/H- 4', 3J4-a = 3J4'-3' = 7,5 Hz) ; 7,61 (d, 2H, H-l/H-1' , 3Jι-2 = 3Ji'-2' = 7,5 Hz) ; 7,41 (tt, 2H, H-3/H-3' , 3J3-2 = 3J3-4 = 3J3'-2' = 3J3'-4' = 7,5 Hz) ; 7,32 (tt, 2H, H-2/H-2' ,
3J2_ι = 3J2-3 = 3J2<-i' = 3J2'-3' = 7,5 Hz) ; 7,00 (tl, 1H,
N'f) ; 6,55 (d, 1H, Nαiî) ; 5,85 (tl, 1H, N'Η) ; 4,48 (ml, 1H, H-α) ; 4,42 (d, 2H, H-8, 3J8_7 = 7,2 Hz) ; 4,23 (t, 1H, H-7, 3J7_8 = 7,2 Hz) ; 3,23 (m, 4H, H-lα/H-lβ) ; 2,87 (d, 1H, H-β, 3Jβ_β< = 14,8 Hz) ; 2,52 (dd, 1H, H-β' ,
3Jβ'-α = 6,8 Hz , 3Jβ_β, = 14,8 Hz) ; 1,49 (m, 4H, H-2α/H-
2β) ; 1,25-1,32 (m, H-3α à H-llα/H-3β à H-llβ) ; 0,89
(t, 6H, H-12α/H-12β)
RMN 13C (CDCI3, 125,77 MHz) δ (pp ) : 170,9, 170,3 (-CO- N'H, -CO-N"H) ; 156,1 (C-9) ; 143,6 (C-5/C-5' ) ; 141,2 (C-6/C-6') ; 127,6 (C-3/C-3' ) ; 127,0 (C-2/C-2') ; 125,0 (C-l/C-1') ; 119,9 (C-4/C-4') ; 67,1 (C-8) ; 51,6 (C-α) ; 47,0 (C-7) ; 39,6 (C-lα/C-lβ) ; 37,9 (C-β) ; 31,8 (C-lOα/C-lOβ) ; 29,1-29,6 (C-2α, C-4α à C-9α/C-2β, C-4β à C-9β) ; 26,8 (C-3α/C-3β) ; 22,6 (C-llα/C-llβ) ; 14,0 (C-12α/C-12β) c) Préparation du N', Àf-didodécyl-L-aspartamide, ou composé.21, de formule :
21 Dans un ballon de 100 mL, 2,09 g (3,03 mmol ; 1 éq.) du composé 19 sont mis en solution dans 40 mL d'une solution à 20% (v/v) de pipéridine dans le chloroforme. La solution est chauffée quelques minutes à 40 °C. Le milieu réactionnel, d'abord hétérogène à cause de la faible solubilité du produit de départ dans le chloroforme, devient rapidement limpide. La solution est ensuite évaporée à sec, sous vide primaire (40°C) , pour éliminer le maximum de pipéridine (bp 101-106°C) . Le résidu solide est repris dans 10 mL de chloroforme pour être ensuite précipité dans 200 mL d'hexane sous agitation. Après avoir laissé décanter pendant 2 heures à 4°C, le précipité est filtré puis séché. Une ultime étape de recristallisation dans le methanol (dissolution dans un minimum de methanol bouillant, filtration des insolubles à chaud et recristallisation à 4°C) permet d'isoler par filtration, et après une nuit de séchage à l'étuve à vide, 1,20 g (257 mmol) du composé 21 sous forme d'une poudre blanche.
Formule brute : C28H57N3θ2, M = 467,78 g.mol"1
Rendement : 85%
P.f. : 121°C
CCM : Rf = 0,4 éluant : CHCl3/MeOH 9/1 (v/v)
[o]D 20 + 5° (c 0,27, CHC13) IR : 3311 cm-1 (large) V(NH2) ; 1630 cm"1 V (C=0 amides)
ESI-MS + : m/z mesuré à 468,5 [M+H]+, calculé à 468,5 pour C28H5SN3O2 ; m/z mesuré à 490,5 [M+Na]+, calculé à
490,4 pour C28H57N3θ2Na .
RMN XIL (CDCI3, 500,13 MHz) δ (ppm) : 7,51 (t, 1H, N' H, 3JNΉ-ICX = 5,7 Hz) ; 6,26 (t, 1H, N"fl, 3JιrΗ-ιβ = 5,5 Hz) ;
3,65 (dd, 1H, H-α, 3Jα-β = 4,5 Hz, 3Jα-β' = 7,1 Hz) ; 3,21 (m, 4H, H-lα/H-lβ) ; 2,61 (dd, 1H, H-β, 3Jβ-α = 4,5 Hz,
3Jβ_β, = 14,4 Hz) ; 2,54 (dd, 1H, H-β', 3Jβ<-α = 7,1 Hz,
3Jβ'-β = 14,4 Hz) ; 1,48 (m, 4H, H-2α/H-2β) ; 1,25-1,32 (m, H-3α à H-llα/H-3β à H-llβ) ; 0,88 (t, 6H, H-12GC/H-
12β)
RMN 13C (CDCI3, 125,77 MHz) δ (ppm) : 173,7 (-CO-N'H) ;
170,8 (-CO-N"H) ; 52,7 (C-α) ; 40,9 (C-β) ; 39,4, 39,2
(C-lα, C-lβ) ; 31,8 (C-lOα/C-lOβ) ; 29,1-29,6 (C-2α, C-4α à C-9α/C-2β, C-4β à C-9β) ; 26 , 8 (C-3α/C-3β) ; 22 , 6 (C-llα/C-llβ) ; 14 , 0 (C-12α/C-12β)
1.3. Préparation du composé 23 : Dans un ballon de 100 mL sec, 407,7 mg (0,33 mmol ; 1 éq.) du composé 5, préalablement lyophilisés, sont dissous dans 10 mL de DMF anhydre sous agitation et sous atmosphère inerte. 205 μL (1,32 mmol ; 4 éq.) de DIC puis 179,3 mg (1,33 mmol ; 4 éq.) de HOBT, en solution dans 5 mL de DMF anhydre, sont successivement additionnés. La réaction est maintenue pendant 2 heures sous agitation et sous atmosphère inerte à température ambiante . 185,3 mg (0,40 mmol ; 1,2 éq.) du composé 21, dissous dans 15 mL de chloroforme anhydre (fraîchement distillé sur P2O5) , sont ajoutés au milieu réactionnel. Après 24 heures d'agitation à température ambiante et sous atmosphère inerte, la réaction est . stoppée par ajout de 100 μL d'eau. La solution est concentrée à l' evaporateur rotatif (40 °C) jusqu'à obtenir un résidu huileux, qui est ensuite précipité dans 100 mL d'acétone sous agitation. Le précipité est récupéré par centrifugation (10 000 tours/min ;
15 min), lavé à l'acétone propre et séché une nuit sous une hotte. 486,8 mg de produit brut sont ainsi isolés et sont purifiés par CLHP à polarité de phase normale
(μPorasil® ; A/B 20/80 (v/v) avec A : CH3OH et
B : CHCI3/CH3OH/NH3 20% (80/19,5/0,5) (v/v/v) en
20 min). On isole 465,9 mg (0,28 mmol) du composé 23 sous forme d'une fine poudre blanche après lyophilisation . Formule brute : C74H130N4O38, M = 1683,85 g. mol-1 Rendement : 85%
P.f. : 160°C (déc.) CCM : Rf = 0,2 éluant : CHCl3/MeOH/H20 6/3/0,5 (v/v/v) [α]D 20 + 83° (c 0,26, DMF)
ESI-HRMS (haute résolution avec détection en mode positif) : m/z mesuré à 1683,8441 [M+H]+, calculé à 1683, 8441 pour C74Hi3iN4θ38 (déviation : 0 ppm) ; m/z mesuré à 1705,8169 [M+Na]+, calculé à 1705,8261 pour C74Hi3cιN4038Na (déviation : 5,4 ppm)
RMN 1H (pyridine-ds, 500,13 MHz) δ (ppm) : 9,14 (d, 1H, NαH) ; 8,80 (t, 1H, NHCD) ; 8,68 (t, 1H, N"H) ; 8,51 (t, 1H, WH ) ; 5,38 (m, 1H, H-α) ; 5,42-5,61 (m, 6H, H-1II_ VII CD) ; 5,43 (d, 1H, H-l1^) ; 4,62-4,75 (m, H-3II-VII CD) , 4,62 (H^CD) 4,55-4,64 (m, H-6I3 VII CD) ; 4,31-4,52 (m, H_5 II-VIICD/H_6,II-VII CD) . 4^42 (H-Ô^D) ; 4,15-4,29 (m,
H-4II_VIICD) ; 4,19 (H-β'cD) ; 4,06 (H-β^co) ; 3,99-4,14 (m, H-2II"VII CD) ; 3,91 (dd, 1H, H-2I CD) ; 3,81 (t, 1H, H-4I CD) ; 3,36, 3,31 (2m, 4H, H-lα, H-lβ) ; 3,12 (d, 1H, H-β) ; 3,07 (d, 1H, H-β') ; 2,5-3,0 (m, 4H, H-b/H-c) ; 1,53, 1,46 (2m, 4H, H-2α, H-2β) ; 1,20, 1,18 (H-30C, H-3β) ; 1,13 (H-llα/H-llβ) ; 1,05-1,25 (m,
H-4α à H-10α/H-4β à H-lOβ) ; 0,75 (t, 6H, H-12α/H-12β) RMN 13C (pyridine-ds, 125,77 MHz) δ (ppm) : 173,6 (C-a) ; 173,4 (C-d) ; 172,3 (-CO-N'H) ; 171,5 (-CO-
N"H-) ; 104,1-104,6 (C-1I_VII CD) ; 85,8 (C-4I CD) ; 83,7-
84,3 (C-4II_VII CD) ; 74,1-75,4 (C-3I~VIICD/C-5II"VIICD/C-21-
VIICD) ; 72,3 (C-S1^) ; 62,6 (C-β1^) ; 61,9-62,3 (C-6II_ VII CD) ; 52,0 (C-α) ; 40,3, 40,5 (C-lα, C-lβ) ; 39,1 (C-β) ; 32,6 (C-10α/C-10β) ; 32,1, 32,4 (C-b, C-c) ; 30,5 (C-2α/C-2β) ; 30,1 (C-4α/C-4β) ; 30,1-30,6
(C-5α à C-9α/C-5β à C-9β) ; 27,8, 27,9 (C-3α, C-3β) ; 23,4 (C-llα/C-llβ) ; 14,8 (C-12α/C-12β)
Exemple 2 : Préparation du N^-W'-didodécyl-Nα-^-amido- succinyl—6I-désoxy-cyclomalto eptaose) -L-glutamide : On obtient le composé titre, ou composé 24, de formule :
en couplant le composé 5 synthétisé dans l'exemple 1 ci-avant, avec le N',.N"-didodécyl-L-glutamide, ou composé 22.
2.1. Préparation du composé 22 : a) Préparation de l'acide Na- (9-fluorényl- méthoxycarbonyl) -L-glutamique, ou composé 18, de formule :
18 On prépare le composé 18 en suivant le même protocole expérimental que celui décrit pour la préparation du composé 17 dans l'exemple 1 ci-avant, mais en utilisant : - 3,40 g (23,1 mmol ; 1,2 éq.) d'acide L-glutamique (Fluka) - 54,5 mL (69,3 mmol ; 3,6 éq.) de solution aqueuse de carbonate de sodium à 13,5% (m/v), et - 6,50 g (19,3 mmol ; 1 éq.) de N- (fluorénylméthoxy- carbonyloxy) succinimide. On obtient ainsi 6,07 g (16,4 mmol) du composé 18.
Formule brute : C2oHι9N06, M = 369,37 g.mol-1 Rendement : 85%
P.f. : 197°C
CCM : Rf = 0,9 éluant : AcOH 60%/BuOH 4/6 (v/v) ESI-MS + : m/z mesuré à 392,2 [M+Na]+, calculé à 392,1 pour C2oHι N06Na ; m/z mesuré à 408,2 [M+K]+, calculé à 408,1 pour C20HιsNO6K
RMN XH (dmso-d6, 500,13 MHz) δ (ppm) 12,42 (si, 2H, COOiî) ; 7,89 (d, 2H, H-4/H-4', 3J4_3 = 3J4<-3' = 7,5 Hz) ; 7,72 (d, 2H, H-l/H-1', 3Jι--2 = 3Jι--2' = 7,5 Hz) ; 7,67 (d, 1H, NαH, 3JNC.H-H = 8,2 Hz) ; 7,42 (t, 2H, H-3/H-3' , 3J3-2 = 3J3-4 = 3J3'-2' = 3J3'-4- = 7,5 Hz) ; 7,33 (t, 2H, H-2/H- 2', 3J2_ι = 3J2-3 = 3J2'-ι- = 3J2'-3' = 7,5 Hz) ; 4,28 (d, 2H, H-8) ; 4,23 (t, 1H, H-7) ; 4,00 (ddd, 1H, H-α, 3Jα-β = 5,0 Hz , 3Jα_β, ≈ 1,6 Hz, 3Jα-N H = 8,2 Hz) ; 2,32 (m, 1H, Hγ) ; 1,99 (m, 1H, H-β) ; 1,79 (m, 1H, H-β') b) Préparation du N ' , N"-d±dodécyl-Ng- ( 9- fluorényl-méthoxycarbonyl) -L-glutamide, ou composé 20, de formule :
20 On prépare le composé 20 en suivant le même protocole expérimental que celui décrit pour la préparation du composé 19 dans l'exemple 1 ci-avant, mais en utilisant : — 5,89 g (16,0 mmol ; 1 éq.) du composé 18 - 7,4 mL (47,8 mmol ; 3 éq.) de DIC - 6,47 g (47,9 mmol ; 3 éq.) de HOBT - 8,87 g (47,9 mmol ; 3 éq.) de dodécylamine . On obtient ainsi 9,29 g (13,2 mmol) du composé 20.
Formule brute : C44H69N3θ4, M = 704,05 g. mol"1
Rendement : 83%
P.f. : 165°C
CCM : Rf = 0,9 éluant : CHCl3/MeOH 9/1 (v/v) RMN 1H (CDC13, 500,13 MHz) δ (ppm) : 7,77 (d, 2H, H-4/H- 4', 3J4-3 = 3J4'-3' = 7,5 Hz) ; 7,61 (d, 2H, H-l/H-1' , 3Jι_2 = 3Ji'-2' = 7,5 Hz) ; 7,41 (t, 2H, H-3/H-3' , 3J3-2 = 3J3-4 = 3J3,_2, = 3J3-_4, = 7,5 Hz) ; 7,32 (t, 2H, H-2/H-2', 3J2-ι = 3J2-3 = 3J2'-ι- = 3J2'-3' = 7,5 Hz) ; 6,69 (tl, 1H, N'H) ; 6,24 (dl, 1H, NαH, 3JNαH-H = 6,8 Hz) ; 5,81 (tl, 1H, N"H) ; 4,37 (d, 2H, H-8, 3J8-7 = 7,2 Hz) ; 4,22 (t, 1H, H-7, 3J7-8 = 7,2 Hz) ; 4,17 (m, 1H, H-α) ; 3,26 (q, 4H, H-lα/H-lγ) ; 2,40 (m, 1H, H-γ) ; .2,31 (m, 1H, H-γ') ; .2,11 (m, 1H, H-β) ; 2,00 (m, 1H, H-β') ; 1,51 (m, 4H, H-2α/H-2γ) ; 1,23-1,33 (m, H-3α à H-llα/H- 3γ à H-llγ) ; 0,89 (t, 6H, H-12α/H-12γ)
c) Préparation du N", Àf-didodécyl-L-glutamide, ou composé 22, de formule :
22 On prépare le composé 22 en suivant le même protocole opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 21 dans l'exemple 1 ci-avant, mais en utilisant 9,29 g (13,2 mmol ; 1 éq.) du composé 20. On obtient ainsi 5,01 g (10,4 mmol) du composé 22.
Formule brute : C29H59N302, M = 481,81 g. ol-1 Rendement : 79%
P.f. : 118°C
CCM : Rf = 0,4 éluant : CHCl3/MeOH 9/1 (v/v)
[α]D 20 + 45° (c 0,25, CHC13)
IR : 3324 cm-1 V(NH2) ; 1633 cm-1 V (C=0 amides) ESI-MS + : m/z mesuré à 504,6 [M+Na]+, calculé à 504,5 pour C29H59N302Na
RMN *Η (CDC13, 500,13 MHz) δ (ppm) : 7,37 (tl, 1H,
N'iï) ; 6,27 (tl, 1H, N"H) ; 3,40 (t, 1H, H-α, 3Jα"β = 6,8
Hz) ; 3,21 (m, 4H, H-lα/H-lγ) ; 2,30 (m, 2H, H-γ) ; 1,93 (m, 2H, H-β) ; 1,48 (m, 4H, H-2α/H-2γ) ; 1,22-1,33 (m, H-3α à H-llα/H-3γ à H-llγ) ; 0,87 (t, 6H, H-12α/H-12γ, Jιια"i2α = Jιιγ"i2γ = 7,0 Hz)
RMN 13C (CDCI3, 125,77 MHz) δ (ppm) : 174,6 (-CO-N'H) ;
172,5 (-CO-N"H) ; 54,1 (C-α) ; 39,5, 38,9 (C-lα, C-lγ) ; 33,1 (C-γ) ; 31,8 (C-10α/C-10γ) ,- 31,6 (C-β) ;
29,1-29,6 (C-2α, C-4α à C-9α/C-2β, C-4γ à C-9γ) ; 26,8 (C-3α/C-3γ) ; 22,5 (C-llα/C-llγ) ; 14,0 (C-12α/C-12γ)
2.2. Préparation du composé 24 : Le couplage des composés 5 et 22 est réalisé en suivant le même protocole opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 23 dans l'exemple 1 ci-avant, mais en utilisant : - 1,04 g (0,84 mmol ; 1 éq.)du composé 5 - 525 μL (3,39 mmol ; 4 éq.) de DIC - 456,5 mg (3,38 mmol ; 4 éq.) de HOBT - 610,2 mg (1,27 mmol ; 1,5 éq.) du composé 22. On obtient ainsi 1,10 g (0,65 mmol) du composé 24.
Formule brute : C75H132N4O38, M = 1697,88 g. mol"1
Rendement : 77%
P.f. : 160°C (déc.)
CCM : Rf = 0,2 éluant : CHCl3/MeOH/H20 6/3/0,5 (v/v/v) ) [ ]D 20 + 69° (c 0,27, DMF)
ES-HRMS (haute résolution avec détection en mode positif) : m/z mesuré à 1697,8624 [M+H]+, calculé à 1697,8598 pour C 5H133N4O38 (déviation : 1,6 ppm) RMN R (pyridine-ds, 500,13 MHz) δ (ppm) : 9,17 (d, 1H, Nαiï) ; 8,82 (t, 1H, NHCD) ; 8,56 (t, 1H, N"tf) ; 8,37 (t, 1H, N'H ) ; 4,94 (m, 1H, H-α) ; 5,56-5,60 (m), 5,55
(d), 5,46(d) (6H, H-1II_VIICD) ; 5,43 (d, 1H, H-1X CD) }
4,62-4,76 (m, ; 4,56-4,64 (m,
H_6II-VHCD) . 4,28-4,53 (m, II-VII CD) ; 4,41 (H-5JCD) ; 4,14-4,27 (m, H-4II-VII CD) ; 4,19 (H-β^) ; 4,06 (H-6, ]: CD) ; 3,98-4,13 (m, H-2II"V1I CD) ; 3,92 (dd, 1H, H-2ΣCD) ; 3,80 (t, 1H, H-4ICD) ; 3,35, 3,30 (m, 4H, H-lα, H-lγ) ; 2,6-3,0 (m, H-b/H-c) ; 2,61 (m, H-γ/ H-γ' ) ; 2,61 (m, H-β) ; 2,34 (m, 1H, H-β') ; 1,50, 1,47 (m, 4H, H-2α, H-2γ) ; 1,18 (H-3α/H-3γ) ; 1,05-1,25 (m,
H-4α à H-llα/H-4γ à H-llγ) ; 0,75 (t, 6H, H-12α/H-12γ) RMN 13C (pyridine-d5, 125,77 MHz) δ (ppm) : 173,7 (C-a) ; 173,6 (C-d) ; 173,2 (-CO-N'H) ; 172,9 (-CO- N"H) ; 104,1-104,6 (C-1I_VII CD) ; 85,8 (C-4I CD) ; 83,8- 84,2 (C-4II"VII CD) ,* 74,1-75,4 (C-3I"VII CD/C-5II"V:!:I CD/C-2:I:" VII CD) ; 72,3 (C-Ô^D) ; 62,7 (C-6X CD) ; 62,0-62,3 (C-6II_ VII CD) ; 41,6 (C-α) ; 40,3 (C-lα/C-lγ) ; 33,8 (C-γ) ; 32,6 (C-10α/C-10γ) ; 32,1, 32,3 (C-b, C-c) ; 30,5 (C-2α/C-2γ) ; 30,1 (C-4α/C-4γ) ; 30,1-30,7 (C-5α à C-9α/C-5γ à C-9γ) ; 30,0 (C-β) ; 27,8, 27,9 (C-3α, C-3γ) ; 23,4 (C-llα/C-llγ) ; 14,8 (C-12α/C-12γ)
Exemple 3 : Préparation du N ' , W'-didodécyl-WOr (6I-amido- succinyl-6I-désoxy-2I-0-mét yl- exakis (2 II-VII , 6-II-VII -di-O- méthyl) cyclomaltoheptaose) -L-aspartamide : On obtient le composé titre, ou composé 25, de formule :
25 en couplant le 6I-amidosuccinyl-6I-désoxy-per(2, 6-di-O- méthyl) cyclomaltoheptaose, ou composé 9, avec le composé 21 synthétisé dans l'exemple 1 ci-avant.
3.1. Préparation du composé 9 a) Préparation du 6I-azido-6I-désoxy-2I-0- méthyl-hexakis {2ll"vττ , 6ι:E"v]:ι-di-0-méthyl) cyclomalto- heptaose, ou composé 7, de formule :
Dans un bicol de 250 mL sec, 4,45 g (3,84 mmol ; 1 éq. ) du composé 3 synthétisé dans l'exemple 1 ci-avant, préalablement séchés à l'étuve à vide, sont dissous dans 55,7 mL de DMF anhydre sous agitation et sous atmosphère inerte. Après avoir placé le milieu réactionnel dans un bain à 8°C, 55,7 mL de DMSO anhydre sont introduits, puis 8,25 g (53,8 mmol ; 14 éq.) d'oxyde de baryum et 8,50 g (26,9 mmol ; 7 éq.) d'hydroxyde de baryum octahydraté sont successivement ajoutés. On additionne enfin 6 mL (63,0 mmol) de sulfate de méthyle, et le tout est maintenu pendant 72 heures à 8°C, sous agitation et sous atmosphère inerte. A la suspension grisâtre obtenue, sont ensuite ajoutés lentement 27,5 mL d'ammoniaque (solution à 20% v/v) . Le mélange est alors maintenu 3 heures sous agitation et à température ambiante. Après avoir laissé décanter la suspension pendant 2 heures à 4°C, le surnageant est isolé dans un ballon de 500 mL, concentré à l' evaporateur rotatif (50 °C) jusqu'à obtenir un résidu huileux, puis repris dans 300 mL de dichlorométhane. Le solide résiduel de la décantation est repris avec du dichlorométhane (3 X 100 mL) puis filtré. Les phases organiques sont rassemblées, lavées avec une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium (3 X 130 mL) , puis à l'eau (3 x 130 mL) , séchées sur sulfate de sodium et concentrées à l' evaporateur rotatif (40°C) jusqu'à l'obtention d'une huile résiduelle. Ce résidu est précipité dans 250 mL d'hexane sous agitation. Le précipité est filtré, lavé avec de l'hexane et séché à l'étuve à vide. On isole 3,59 g (2,67 mmol) d'une fine poudre blanche, correspondant au composé 7, et à de la per (2, 6-di—0- méthyl) cyclomaltoheptaose (DIMEB) , formée à partir de la β-CD régénérée lors de la synthèse du composé 3. Ce mélange sera purifié lors de l'étape suivante (préparation du composé 8) .
Formule brute : C55H95N3θ34,- = 1342,36 g.mol"1
Rendement : 70%
CCM : Rf = 0,9 éluant : CHCl3/MeOH 9/1 (v/v)
P.f. : 160°C (déc.)
IR : 2101 cm"1 V(N3) ESI-MS + : m/z mesuré à 1364,5 [M+Na]+, calculé à 1364,6 pour C55Hg5N3034 a
RMN H (CDC13, 500,13 MHz) δ (ppm) 5,25-5,32 (H-1CD) ; 3,99-4,05 (H-3CD) ; 3,88-3,98 (H-5CD) ; 3,70-3,85 (H-6CD/H-6'CD) ; 3,60 (OCH3-6CΏ) ; 3,53-3,68 (H-4CD) ; 3,43 (OCH3-2CΌ) ; 3,40-3,46 (H-2CD) b) Préparation du 6I-amino-6I-désoxy-2I-Q- heptaose, ou composé 8, de formule :
8 Dans un ballon de 500 mL, 3,51 g (2,61 mmol ; 1 éq.) du composé 7 sont dissous dans 200 L de DMF sous agitation. Une solution de 2,74 g (10,46 mmol ; 4 éq.) de triphénylphosphine (fraîchement recristallisée dans l'ethanol bouillant) dissous dans 10 mL de DMF est ajoutée. Après 2 heures sous agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est refroidi à 0°C dans un bain de glace et 99 mL d'ammoniaque (solution à 20% v/v) sont lentement additionnés. La réaction est maintenue pendant 18 heures sous agitation à température ambiante. La solution est ensuite concentrée à l' evaporateur rotatif (40 °C) et le résidu huileux est repris dans 150 mL d'eau. Le précipité blanc formé (mélange de triphénylphosphine et d'oxyde de triphénylphosphine) est filtré et lavé (2 x 20 mL d'eau) . Le filtrat est concentré sous vide à 40 °C, puis repris dans un minimun d'eau et ajusté à pH = 4,5 par ajout de quelques gouttes d'HCl 1 N. Cette solution est passée sur une colonne de résine échangeuse d'ions (V = 160 cm3), remplie de résine anionique Lewatit SP 1080, préalablement régénérée par trois cycles de lavages successifs alternant ammoniaque 10%, eau, et HC1 0,1 M. Le composé 8 est fortement retenu sur la colonne, tandis que la DIMEB présente est éluée avec de l'eau (5 volumes de colonne) . Le composé 8 est à son tour élue avec une solution d'ammoniaque à 10% (3 volumes de colonne) . L'éluat basique est évaporé à sec à l' evaporateur rotatif (40°C) ; le résidu est repris dans un minimum d'eau puis lyophilisé. On isole ainsi 1,68 g (1,28 mmol) du composé 8, sous forme d'une poudre blanche.
Formule brute : Cs5H97 034, M = 1316,36 g.mol -1 Rendement estimé : 75% P.f. : 160°C (déc.)
CCM : Rf = 0,4 éluant : CHCl3/MeOH 9/1 (v/v) IR : absence de bande V (N3)
ESI-MS + : m/z mesuré à 1316,8 [M+H]+, calculé à
1316,6 pour C55H913NO34
RMN ^Η (D20, 500,13 MHz) δ (ppm) 5,24-5,30 (7H, H-l1-
VII -II-VII CD) ; 3,92-3,98 (H-3 ; 3,80-3,90 (H-51 ~V^ CD) , I-VII 3,72-3,80 (H-6I :"VIICD, H- 6 , I ; 3,71 (H-5XCD) ; 3,61 (0C#3-6CD) '* 3,58-3,65 (H-4I]:"VIICCDD)/ ; 3,55 ((HH--44II CCDD)) ; ; 3,43 (OCH3-2CD) ; 3,38-3,44 (H-2 I-VII CD) ; 3,06 (dd, 1H,
H-6XcD) ; 2,92 (dd, 1H, H-6'XCD)
RMN 13 C (D20, 125,77 MHz) δ (ppm) 99,3-99,9 (C-1 I-VII CD il, 5-82, 2 (C-4 I-VII -VII CD /C-2 I CD/ 72,4-72,7 (C-3 I-VII CDJ
70,4-72,7 ; 59,6-59,8 (0CH3-6CD) 58,8-59,0 (OCH3-2CD) ; 41,5 (C-β1^) c) Préparation du 6I-amidosuccinyl-6I-désoxy-
2I-Q-méthyl-hexakis (2XIII"-VVII1I, 6 (-II-VII di-O-méthyl) cyclomaltoheptaose, ou composé 9, de formule
Dans un ballon de 100 mL, 1,093 g (0,83 mmol ; 1,1 éq.) du composé 8, préalablement lyophilisés, sont dissous dans 20 mL de DMF anhydre sous agitation et sous atmosphère inerte. 75,7 mg (0,76 mmol ; 1 éq.) d'anhydride succinique en solution dans 5 mL de DMF anhydre sont alors additionnés. Le milieu réactionnel est maintenu, sous agitation et sous atmosphère inerte, pendant 18 heures à température ambiante. La réaction est stoppée par ajout de 100 μL d'eau. Le solvant est évaporé à sec sous vide (40°C) puis le résidu est repris dans un minimum d'eau jusqu'à dissolution complète. Cette solution acide est passée sur une colonne de résine échangeuse d'ions (V = 10 cm3) , remplie de résine anionique Lewatit SP 1080, préalablement régénérée par trois cycles de lavages successifs alternant ammoniaque 10 %, eau, et HC1 0,1 M. Le composé 9 est élue avec de l'eau alors que le composé 8 en excès (sous forme d'un ion ammonium) est fortement retenu dans la colonne. L'éluat est concentré à l' evaporateur rotatif (40°C) puis lyophilisé. On obtient 821 mg (0,58 mmol) du composé 9 sous forme d'une poudre blanche.
Formule brute : C59H101NO37, M = 1416,44 g.mol-1 Rendement : 77% P.f. : 160°C (déc.)
CCM : Rf = 0 , 2 éluant : CHCl3/MeOH 9/1 (v/v)
ESI-MS - : m/z mesuré à 1414 , 5 pour [M-H] ~, calculé à
1414 , 6 pour C59H100NO37 3.2. Préparation du composé 25 : Dans un ballon de 50 mL sec, 338,9 mg (0,24 mmol ; 1 éq.) du composé 9, préalablement lyophilisés, sont dissous dans 10 mL de DMF anhydre sous agitation et sous atmosphère inerte. 149 μL (0,96 mmol ; 4 éq.) de DIC puis 129,3 mg (0,96 mmol ; 4 éq.) de HOBT, en solution dans 5 mL de DMF anhydre, sont successivement additionnés. La réaction est alors maintenue pendant 2 heures sous agitation et sous atmosphère inerte à température ambiante. 169,6 mg (0,36 mmol ; 1,5 éq.) du composé 21, dissous dans 15 mL de chloroforme anhydre (fraîchement distillé sur P2O5) , sont enfin ajoutés au milieu réactionnel. Après 24 heures d'agitation à température ambiante et sous atmosphère inerte, la réaction est stoppée par ajout de 100 μL d'eau. La solution est évaporée à sec sous vide primaire (40°C), le résidu est repris dans 20 mL de chloroforme et les insolubles sont filtrés. Le filtrat est concentré à l' evaporateur rotatif (30 °C) et purifié grâce à une colonne chromatographique sur gel de silice 60 Fluka (élution avec CHC13/CH30H 98/2 puis 95/5 (v/v)). On isole ainsi 267,0 mg (0,14 mmol) du composé 25 sous forme d'une poudre blanche après lyophilisation .
Formule brute : C87Hι5gN4θ38, M = 1866,20 g.mol-1 Rendement : 60%
P.f. : 160°C (déc.)
CCM : Rf = 0,3 éluant : CHCl3/MeOH 8/2 (v/v)
[α]D 20 + 84° (c 0,25, CHC13)
IR : 3300-3500 cm-1 (large) v (OH) ; 1655 cm-1 v (C≈O amides)
ES-HRMS (haute résolution avec détection en mode positif) : m/z mesuré à 1866, 0394 [M+H] +, calculé à 1866, 0476 pour C87Hι57 θ38 (déviation : 4, 4 ppm) ; m/z mesuré à 1888 , 0214 [M+Na] +, calculé à 1888 , 0295 pour C87Hi5 N4θ38Na (déviation : 4 , 3 ppm) RMN XH (CDCI3, 500,13 MHz) δ (ppm) : 7,50 (7,58*) (t, 1H, N'H ou N"fl) ; 7,44 (7,38*) (d, 1H, N«χf0 ; 6,27 (6,21*) (t, 1H, N'H ou N"H) ; 6,11 (t, 1H, NHCD) ; 4,93- 5,10 (m, ; 4,64 (m, 1H, H-α) ; 3,88- 3,96 (m, H-S1" 11-^) 3,63 (m, OCH3-6CD) ; 3,55-3,77 (m, ; 3,40 (m, 0Ci?3-2CD) ; 3,38- 3,50 (m, H-4I"VII CD) ; 3,22-3,32 (m, H-2I"VII CD) ; 3,19 (m, H-lα/H-lβ) ; 2,88 (dd, 1H, H-β) ; 2,4-2,7 (m, 4H, H-b/H-c) ; 2,42 (dd, 1H, H-β') ; 1,47 (m, H-2α/H-2β) ; 1,24-1,31 (m, H-3α à H-llα/H-3β à H-llβ) ; 0,87 (t, 6H, H-12α/H-12β) * conformères
RMN 13C (CDCI3, 125,77 MHz) δ (ppm) : 171,9, 171,8,
171,2, 170,2 (4s, -CO-NH) ; 100,8-101,5 (C-l1^13^) ; 83,0-83,7, 84,9 (C-4I"VII CD) ; 81,7-82,3 (C-2X"VI:ECD) ;
73,0-73,3 (C-3I_VIICD) ; 69,6-71,6 (C-5I_ II CD) ; 70,6-71,0 (C-6I_VIICD) ; 60,2-60,5 (OCH3-6CD) ; 58,9-59,1, 59,5(OCH3- 2CD) ; 50,0 (C-α) ; 39,7 (C-lα/C-lβ) ; 37,4 (C-β) ; 31,9 (C-lOα/C-lOβ) ; 31,1, 31,4 (C-b, C-c) ; 29,6 (C-2GC/C- 2β) ; 29,2-29,7 (C-4α à C-9α/C-4β à C-9β) ; 26,9 (C-3α/C-3β) ; 22,6 (C-llα/C-llβ) ; 14,0 (C-12α/C-12β)
Exemple 4 : Préparation du N' , W'-didodécy 1-Nα- ( 6I-amido- succinyl-6I-désoxy-2I-0-méthyl-hexakis (2xτ~vττ , 6ττ~vxz-d±-0- mét yl) cyclomaltoheptaose) -L-glutamide : On obtient le composé titre, ou composé 26, de formule :
26 en couplant le composé 9 synthétisé dans l'exemple 3 ci-avant, avec le composé 22 synthétisé dans l'exemple 2 ci-avant. Pour ce couplage, on suit le même protocole t. opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 25 dans l'exemple 3 ci-avant, mais en utilisant : - 804 mg (0,57 mmol ; 1 éq.) du composé 9 - 355 μL (2,29 mmol ; 4 éq.) de DIC - 313,4 mg (2,32 mmol ; 4 éq.) de HOBT - 411,8 mg (0,855 mmol ; 1,5 éq.) du composé 22. On obtient ainsi 672,6 g (0,36 mmol) du composé 26. Formule brute : C8βHi5βN4038, M = 1880 , 23 g . mol-1 Rendement : 63% P . f . : 160 °C (déc . ) CCM : Rf = 0 , 3 éluant : CHCl3/MeOH 8/2 (v/v) [α]D 20 + 98° (c 0,26, CHC13)
IR : 3300-3500 cm"1 (large) v (OH) ; 1655 cm-1 v (C=0 ami de s)
ES-HRMS (haute résolution avec détection en mode positif) : m/z mesuré à 1902,0529 [M+Na]+, calculé à 1902,0452 pour (déviation : 4,0 ppm) RMN XH (CDCI3, 500,13 MHz) δ (ppm) : 7,29 (d, 1H, NαH) ; 7,04 (tl, 1H, N'H ou N"H) ; 6,31 (tl, 1H, NHCD) ; 6,05 (t, 1H, N'H ou N"H) ; 4,94-5,06 (m, 7H, H-1I-VIICD) ; 4,31 (m, 1H, H-CC) ; 3,82-4,01 (m, H-3I-VIICD) ; 3,63 (m,
OCH3-6CD) ; 3,55-3,80 (m, i
3,39-3,52 (m, H-4I"VII CD) ; 3,40 (m, OCH3-2CD) ; 3,15-3,33 (m, H-2I"VII CD) ; 3,21 (m, H-lα/H-lγ) ; 2,5-2,6 (m, 4H,
H-b/H-c) ; 2,46 (m, 1H, H-γ) ; 2,29 (m, 1H, H-γ') ; 2,08 (m, 1H, H-β) ; 1,99 (m, 1H, H-β') ; 1,49 (m, 4H,
H-2α/H-2γ) ; 1,24-1, 32 % (m, H-3 à H-llα/H-3γ à H-llγ) ;
0,88 (t, 6H, H-12α/H-12γ)
RMN 13C (CDCI3, 125,77 MHz) δ (ppm) 172,9, 172,1, 172,0,
170,9 (4s, -CO-NH) ; 100,8-101,5 (C-lτ'V11 CD) ; 83,0- 83,7, 85,0 (C-4I"VII CD) ; 81,7-82,4 (C-2I"VII CD) ; 73,0-73,4 (C_3I- HCD) . 69,7-71,7 (C-51"^^) ; 70,5-71,4 (C-61" VXI CD) ; 60,1-60,5 (OCH3-6CD) ; 58,9-59,2, 59,4 (OCH3- 2CD) ; 52,8 (C-α) ; 39,7, 39,8 (2s, C-lOC, C-lγ) ; 32,9 (C-γ) ; 31,9 (C-10α/C-10γ) ; 31,4 (C-b/C-c) ; 29,4 (C-2α/C-2γ) ; 29,2-29,7 (C-4CX à C-9α/C-4γ à C-9γ) ; 29,1 (C-β) ; 27,0, 26,9 (2s, C-30C, C-3γ) ; 22,6 (C-llα/C- llγ) ; 14,0 (C-12α/C-12γ) Exemple 5 : Préparation du N ' , W"-didodécyl-WQ^ (6I-amido- succinyl-6I-désoxy-2I, 3I-di-0-méthyl-hexakis (2 X~VXX , 311- VI1, 6II_VI:ι:-tri-0-méthyl) cyclomaltoheptaose) -L- aspartamide : On obtient le composé titre, ou composé 27, de formule :
27 en couplant le 6I-amidosuccinyl-6I-désoxy-21, 3x-di-0- méthyl-hexakis (2XI"VI1, 3τι~VIÏ , 6II-VII-tri-0-méthyl) cyclomaltoheptaose, ou composé 13, avec le composé 21 synthétisé dans 1 ' exemple 1 ci-avant .
5.1. Préparation du composé 13 : a) Préparation du 6I-azido-6I-désoxy-2:ι:, 31-di-
O-méthyl-hexakis (2ιτ~vιτ, 3τι'vτι , 6ι:E"vι:ι-tri-0-méthyl) cyclomaltoheptaose, ou composé 11, de formule :
11 Dans un bicol de 500 mL sec, 6,2 g (0,26 mol ; ~ 100 éq.) d'hydrure de sodium (enrobé sous huile à 60% m/m, soit 10 g d'enrobé) sont introduits. Le produit est placé sous atmosphère inerte, lavé avec de l'hexane anhydre (2 x 50 mL) pour éliminer l'enrobage puis séché sous un courant d'azote. L'hydrure de sodium est alors mis en suspension dans 130 mL de DMF anhydre sous agitation. 3,01 g (2,60 mmol ; 1 éq.) du composé 3 synthétisé dans l'exemple 1 ci-avant, préalablement séchés à l'étuve à vide, sont dissous dans 200 mL de DMF anhydre sous agitation et sous atmosphère inerte, puis ajoutés au milieu réactionnel. Le mélange est refroidi à 0°C dans un bain de glace puis 30 mL (0,48 mol ; ~ 185 éq.) d' iodure de méthyle sont additionnés. La réaction est maintenue sous agitation pendant 24 heures à température ambiante. Le milieu réactionnel est ensuite filtré et le filtrat est concentré à l' evaporateur rotatif (40 °C) . Le résidu huileux est repris dans un minimum d'eau puis extrait au chloroforme (4 x 40 mL) . La phase organique est lavée à l'eau (2 x 50 mL) , séchée sur sulfate de sodium, filtrée, et concentrée à l' evaporateur rotatif (40°C) . Le résidu huileux est repris dans un minimum d'eau, les insolubles sont filtrés et la solution est lyophilisée. On isole 3,38 g (2,35 mmol) d'une poudre blanche, correspondant au composé 11, et à de la per (2, 3, 6-tri-O- méthyl) cyclomaltoheptaose (TRIMEB) , formée à partir de la β-CD régénérée lors de la synthèse du composé 3. Ce mélange sera purifié lors de l'étape suivante (préparation du composé 12) . Formule brute : C 2Hιo9 3θ34 M = 1440,55 g.mol"1
Rendement : 90%
P.f. : 160°C (déc.)
CCM : Rf = 0,9 éluant : CHCl3/MeOH 9/1 (v/v)
IR : 2096 cm"1 v (N3)
ES-MS + : m/z mesuré à 1462,8 [M+Na]+, calculé à 1462,7
RMN X (CDC13, 500,13 MHz) δ (ppm) : 5,31-5,36 (H-1CD)
3,88-3,96 (H-5CD/H-6CD) ; 3,69-3,84 (H-4CD/H-6' CD/H-3CD)
3,65 (0C£.3-6CD) ; 3,56 (OCff3-3CD) /' 3,43 (OC .3-2CD)
3,38-3,42 (H-2CD) b) Préparation du 6I-amino-6I-désoxy-21, 3I-di- O-méthyl-hexakis (2I:L~vιτ, 3τι~vτx , 6"~V]:ι-tri-0-méthyl) cyclomaltoheptaose, ou composé 12, de formule :
12 Dans un ballon de 500 mL, 3,37 g (2,34 mmol ; 1 éq.) du composé 11 sont dissous dans 180 mL de DMF sous agitation. Une solution de 2,46 g (9,38 mmol ; 4 éq.) de triphénylphosphine (fraîchement recristallisée dans l'ethanol bouillant) dissous dans 10 mL de DMF est ajoutée. Après 2 heures sous agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est refroidi à 0°C dans un bain de glace et 88,5 mL d'ammoniaque (solution à 20% v/v) sont lentement additionnés. La réaction est maintenue 18 heures sous agitation à température ambiante. La solution est ensuite concentrée à l' evaporateur rotatif (40°C) et le résidu huileux est repris dans 140 mL d'eau. Le précipité blanc formé (mélange de triphénylphosphine et d' oxyde de triphénylphosphine) est filtré et lavé (2 x 20 mL d'eau) . Le filtrat est concentré sous vide à 40 °C, puis repris dans un minimum d'eau et ajusté à pH = 4,5 par ajout de quelques gouttes d' HC1 1 N. Cette solution est passée sur une colonne de résine échangeuse d'ions (V = 160 cm3), remplie de résine anionique Lewatit SP 1080, préalablement régénérée par trois cycles de lavages successifs alternant ammoniaque 10%, eau, et HC1 0,1 M. Le composé 12 est fortement retenu sur la colonne, tandis que la TRIMEB présente est éluée avec de l'eau (5 volumes de colonne) . Le composé 12 est à son tour élue avec une solution d'ammoniaque à 10 % (3 volumes de colonne). L'éluat basique est évaporé à sec sous vide (40 °C) ; le résidu est repris dans un minimum d'eau puis lyophilisé. On isole ainsi 1,85 g (1,31 mmol) du composé 12, sous forme d'une poudre blanche.
Formule brute : Cg2HmN034, M = 1414.55 g.mol"1 Rendement estimé : 86%
P.f. : 160°C (déc.)
CCM : Rf = 0 , 7 éluant : CHCl3/MeOH 8/2 (v/v)
IR : Absence de la bande v (N3)
ES-MS + : m/z mesuré à 1414 , 8 [M+H] +, calculé à 1414 , 7 RMN XH (D20, 500,13 MHz) δ (ppm) 5,36 (d, IH, H-l: CD, Ji -2 = 3,6 Hz) ; 5,30-5,35 (m, 6H, H-l II-VII CD 3,86-
3,96 (m, I H- 5 II-VI CD 3,87-3,92 (m, H- 6 II-VII 3,83
(H-5XCD) 3,75-3,83 (m, H-4"-VII CD) 3,76
3,69-3,79 (m, H-3 II-VII CD/ 3,71 (H-4I CD) ; 3,65-3,73 (m,
H-ι -, II-VII CDJ 3,64-3,66 (m, OC£.3-6CD) 3,55-3,57 (m,
0CH-3CD) 3,43 (H-2I CD) ; 3,42-3,43 (m, 0CH3-2CD)
3,36-3,44 (m, H-2 II-VII CD ) ; 3,05 (dd, IH, H-β1™, e -5 =
5,5 Hz, J6 14,2 Hz) ; 2,96 (dd, IH, 3JE
= 3,0 Hz, 3JgrI_6 I = 14,2 Hz) 13,
RMN iJC (D20, 125,77 MHz) δ (ppm) 97,1-97,8 I-VII (C-I^^CD) 10,9-81,6 (C-3I_VIICD) ; 80,2-80,6 (C-2I"VII CD) ; 76,7-78,6 (C-4™CD) 71,0-71,4 ; 70,7-71,7 (C-51"
VII CD) ; 59,8-60,4 (OCH3-6CD) ; 58,3-59,0 (OCH3-3CD/OCH3- 2CD) ; 41,6 (C-6τ cτ>) c) Préparation du 6I-amidosuccinyl-6I-désoxy- 21, S^di-Q-méthyl-hexakis (2ττ~ylτ , 3IX"VI1, 6II"VII-tri-0- méthyl) cyclomaltoheptaose, ou composé 13, de formule :
13 Dans un ballon de 100 mL, 996,7 mg (0,70 mmol ; 1 éq.) du composé 12, préalablement lyophilisés, sont dissous dans 20 mL de DMF anhydre sous agitation et sous atmosphère inerte. 105,7 mg (1,06 mmol ; 1,5 éq.) d'anhydride succinique en solution dans 5 mL de DMF anhydre sont alors additionnés. Le milieu réactionnel est maintenu 18 heures sous agitation, sous atmosphère inerte et à température ambiante. La réaction est stoppée par ajout de 100 μL d'eau. Le solvant est éliminé à l' evaporateur rotatif (40 °C) puis le résidu est repris dans 50 mL de chloroforme. Les insolubles (acide succinique) sont filtrés sur filtre Téflon 0,22 μm et le chloroforme est évaporé à sec sous vide (40°C). Le résidu est repris dans un minimum d'eau et lyophilisé. On obtient 1,03 g (0,68 mmol) du composé 13, sous forme d'une poudre blanche.
Formule brute: C6gHιι5N037, M = 1514,62 g.mol"1 Rendement : 96%
P.f. : 160°C (déc.)
CCM : Rf = 0,6 éluant : CH2Cl2/MeOH 9/1 (v/v)
IR : 1733 cm-1 V(C=0 acide) ; 1676 cm"1 v(C=0 amide)
ES-MS + : m/z mesuré à 1536,9 [M+Na]+, calculé à 1536,7 pour CggHn5 037Na
RMN XR (CDC13, 500,13 MHz) δ (ppm) 6,40 (t, IH, NHCD,
3JNH-6I = 5,6 Hz) ; 5,24, 5,22, 5,14, 5,11, 5,07, 5,07 (6d, H-1II~VIICD, 3Jι-2 = 3,7 Hz) ; 5,08 (d, 3JII-2 I =
3,7 Hz) ; 3,85 - 3,95 (m, H-6II-VII CD) ; 3,87 (H-S1^) ; 3,86, 3,73, 3,78, 3,87, 3,82, 3,79 (H-5II-VII CD) ; 3,77 (H-6XCD) ; 3,62-3,68 (m, OCH3-6CD) ; 3,63, 3,63, 3,63, 3,60, 3,62, 3,70 (H-4II_VIICD) ; 3,55-3,65 (H-6' II_VII CD) ; 3,57 (H^CD) 3,46, 3,57, 3,56, 3,50, 3,50, 3,44 (H-3II-VIICD) ; 3,49-3,53 (m, OCH3-3CD) ; 3,38-3,42 (m, 0Cff3-2cD) 3,36 (H-4I CD) ; 3,35 (H-6'X CD) ; 3,20, 3,19, 3,18, 3,18, 3,18, 3,18 (H-2II_VII CD) ; 3,18 (H-2I CD) ; 2,74, 2,65, 2,49 (4H, H-b/H-c, syst . AA'B)
RMN 13C (CDCl3, 125,77 MHz) δ (ppm) 174,5 (C-d) ; 172,7 (C-a) ; 98,7-99,9 (7s, C-1I~"VII CD) ; 82,0-82,9 (C-31"
VIICD/C-2I"VIICD) ; 79,6-81,4 (C-4I-VII CD) ; 71,5-72,2 (C-611"
VIICD) ; 70,7-71,9 (C-5I_VIICD) ; 61,7-62,3 (OCH3-6CD) ;
58,9-60,1 (0CH3-3CD/0CH3-2CD) ; 42,0 (C-6I CD) ; 31,5, 30,5 (C-b, C-c) 5.2. Préparation du composé 27 : Dans un tricol de 100 mL sec, 1,01 g (0,67 mmol ; 1 éq.) du composé 13, préalablement lyophilisés, sont dissous dans 15 mL de DMF anhydre sous agitation et sous atmosphère inerte. 415 μL (2,68 mmol ; 4 éq.) de DIC puis 361,4 mg (2,68 mmol ; 4 éq.) de HOBT, en solution dans 5 mL de DMF anhydre, sont successivement additionnés. La réaction est alors maintenue pendant 2 heures sous agitation et sous atmosphère inerte à température ambiante. 376,1 mg (0,80 mmol ; 1,2 éq.) du composé
21, dissous dans 20 mL de chloroforme anhydre (fraîchement distillé sur P2O5) , sont ajoutés au milieu réactionnel. Après 24 heures d'agitation à température ambiante et sous atmosphère inerte, la réaction est stoppée par ajout de 100 μL d'eau. La solution est évaporée à sec sous vide primaire (40°C), le résidu est repris dans 20 mL de chloroforme et les insolubles sont filtrés. Le filtrat est concentré à l' evaporateur rotatif (30 °C) et purifié grâce à une colonne chromatographique sur gel de silice 60 Fluka (élution avec CHC13/CH30H 99/1 puis 98/2 puis 95/5 (v/v)). On isole ainsi 605 mg (0,31 mmol) du composé 27 sous forme d'une poudre blanche après lyophilisation.
Formule brute : C94Hi7oN4θ38, M = 1964,39 g.mol"1 Rendement : 46%
P.f. : 160°C (déc.)
CCM : Rf = 0,4 éluant : CHCl3/MeOH 95/5 (v/v)
[α]D 20 + 107° (c 0,27, CHC13)
IR : /Absence de bande v (OH) ; 1651 cm"1 (C=0 amides) ES-HRMS (haute résolution avec détection en mode positif) : m/z mesuré à 1986,1432 [M+Na]+, calculé à 1986,1391 pour C94Hι70N4θ38Na (déviation : 2,1 ppm) RMN ΕL (CDC13, 500,13 MHz) δ (ppm) : 7,56 (t, IH, N' H ou N"H) ; 7,45 (d, IH, Nαiî) ; 6,37 (t, IH, N'H ou N"H) ; 6,16 (t, IH, NHCD) ; 5,08-5,17 (m, H-l1"^^) ; 4,65 (m,
H- ) ; 3,70-3,90 ; 3,4-3,7 (H-411" ; 3,63 (m, OCH3-6CD) ; 3,42-3,56 (H-31"
VIICD) ; 3,50 (m, 0Ci?3-3CD) ; 3,38 (m, 0CH3-2CD) ; 3,36 (H-4I CD) ; 3,12-3,24 (H-2I-VIICD) ; 3,18 (m, H-lα / H-lβ) ; 2,87 (dd, IH, H-β) ; 2,4-2,7 (m, 4H, H-b/H-c) ; 2,43 (dd, IH, H-β') ; 1,47 (m, H-2α /H-2β) ; 1,23-1,31 (m,
H-3α à H-llα/H-3β à H-llβ) ; 0,87 (t, 6H, H-120C /H-12β)
RMN 13C (CDCI3, 125,77 MHz) δ (ppm) : 170,3, 171,1,
171,8, 171,9 (4s, -CO-NH) ; 98,0-99,2 (C-1I-VII CD) ; 79,1-82,3 (C-3I"VIICD/C-2I"VII CD/C-4I"VIICD) ; 70,5-71,5 (C_6II-VIICD/C_5II-VIICD) . 70^0 {c_5iCD) ; 61,0-61,6 (OCH3-
6CD) ; 58,0-59,5 (0CH3-2CD/0CH3-3CD) ; 49,9 (C-α) ; 40,1 (C-6∑ CD) ; 39,6 (C-lα/C-lβ) ; 37,3 (C-β) ; 31,8 (C-lOα/C-lOβ) ; 31,0, 31,4 (C-b, C-c) ; 29,0-29,7 (C-4α àC-9α/C-4β à C-9β) ; 26,8 (C-3α/C-3β) ; 22,5
(C-llα/C-llβ) ; 14,0 (C-12α/C-12β)
Exemple 6 : Préparation du W-dodécyl-W'-hexadécyl-WOr (6I-amidosuccinyl-6I-désoxy-cyclomaltoheptaose) -L- aspartamide : On obtient le composé titre, ou composé 33, de formule :
33 en couplant le composé 5 ' synthétisé dans l'exemple 1 ci-avant avec le '-dodécyl-W'-hexadécyl-L-aspartamide, ou composé 32.
6.1. Préparation du composé 32 : a) Préparation du AT'-dodécyl-Zv""- (tert-butyl- oxycarbonyl) -Na- (9-fluorénylméthoxycarbonyl) -L- aspartamide, ou composé 29, de formule :
29 Dans un ballon de 100 mL sec, 504,7 mg (1,23 mmol ; 1 éq.) d'acide N"- (tert-butyloxycarbonyl) - JVα- (9-fluorénylméthoxycarbonyl) -L-Aspartique (Fluka) sont dissous dans 5 mL de DMF anhydre sous agitation et sous^atmosphère inerte. 285 μL (1,84 mmol ; 1,5 éq.) de DIC puis 249,5 mg (1,85 mmol ; 1,5 éq.) de HOBT dissous dans 1 mL de DMF anhydre, sont successivement additionnés. La réaction est alors maintenue pendant 2 heures sous agitation et sous atmosphère inerte à température ambiante. 344,2 mg (1,86 mmol ; 1,5 éq.) de dodécyla ine, en solution dans 20 mL de chloroforme anhydre, sont enfin ajoutés au milieu réactionnel. Après 18 heures d'agitation à température ambiante et sous atmosphère inerte, la réaction est stoppée par ajout de 100 μL d'eau. La solution est évaporée à sec sous vide primaire (40°C), le résidu est repris dans 20 mL de chloroforme et les insolubles sont filtrés. Le filtrat est concentré à l' evaporateur rotatif (30°C) et purifié grâce à une colonne chromatographique sur gel de silice 60 Fluka (élution avec CHC13 + AcOH (0,2%)) . L'éluat est évaporé à sec et le résidu repris dans un minimum de methanol. Le composé 29 est alors précipité par ajout de 50 mL d'eau. Le solide est filtré sur verre fritte et lavé avec de l'eau. Après une nuit de séchage à l'étuve à vide, on isole 619,4 mg (1,07 mmol) du composé 29, sous forme d'une poudre blanche.
Formule brute : C35H5oN205, M = 578,79 g. mol"1 Rendement : 87%
IR : 3349 cm"1 (large) v (NH- amide) ; 1744 cm"1 V(C=0 ester) ; 1701 cm-1 V(C=0 carbamate) ; 1646 cm"1 V(C=0 amide) ESI-MS + : m/z mesuré à 601,5 [M+Na]+, calculé à 601,4 pour C35H5oN205Na
RMN XR (CDC13, 500,13 MHz) δ (ppm) : 7,77 (d, 2H, H-4/H- 4', 3J4-3 = 3J4<-3< = 7,5 ,Hz) ; 7,62 (d, H-l, 3Jι_2 = 7,5 Hz) ; 7,61 (d, H-l', 3ϋ -2' = 7,5 Hz) ; 7,41 (t, 2H, H-3/H-3', 3J3-2 = 3J3_4 = 3J3'-2' = 3J3'-4' = 7,5 Hz) ; 7,32 (t, 2H, H-2/H-2', 3J2-ι = 3J2-3 = 3J2'-ι< = 3J2'-3' = 7,5
Hz) ; 6,09 (d, IH, NαH, 3JNαH- = 8,3 Hz) ; 5,62 (tl, IH,
N'if) ; 4,48 (m, IH, H-α) ; 4,40 (dd, IH, H-8) ; 4,32 (dd, IH, H-8') ; 4,23 (t, IH, H-7) ; 3,24 (m, 2H, H-lα) ; 2,87 (dd, IH, H-β, 3Jβ-β> = 15,5 Hz, 3Jβ-« = 5,1 Hz) ; 2,71 (dd, IH, H-β', 3Jβ'-β = 15,5 Hz, 3Jβ<-α = 4,3 Hz) ; 1,49 (s, 3χCE3 tBu) ; 1,47 (m, H-2α) ; 1,24-1,32 (m, 18H, H-3α à H-llα) ; 0,89 (t, 3H, H-12α, 3Jι2α-ιι = 6,8 Hz) RMN 13C (CHC13, 125,77 MHz) δ (ppm) : 170,7 (-CO-N'H) ; 170,3 (-CO-OtBu) ; 156,9 (C-10) ; 144,6, 144,5 (C-5, C-5') ; 141,9 (C-6/C-6' ) ; 128,4 (C-3/C-3' ) ; 127,7 (C-2/ C-2') ; 125,9 (C-l/C-1') ; 120,6 (C-4/C-4') ; 83,0 (-C-tBu) ; 67,9 (C-8) ; 52,1 (C-α) ; 47,8 (C-7) ; 40,3 (C-lα) ; 38,8 (C-β) ; 32,6 (C-10α) ; 29,9-30,4, C-4α à C-9α) ; 30,0 (C-2α) ; 28,6 (3xCH3 tBu) ; 27,6 (C-3α) ; 23,4 (C-llα) ; 14,8 (C-12α) b) Préparation du N' -dodécyl-Ng- (9-fluorényl- méthoxycarbonyl) -L-aspartamide, ou composé 30, de formule :
30 Dans un ballon de 50 mL, 542,6 mg (0,94 mmol ; 1 éq.) du composé 29 sont dissous dans 10 mL d'une solution à 20% (v/v) d'acide trifluoro- acétique dans le dichlorométhane. Le milieu réactionnel est maintenu 3 heures sous agitation à température ambiante. La solution est alors évaporée à sec sous vide primaire (30 °C) . Le résidu est repris dans un minimum d'acétate d' éthyle et précipité par ajout de 40 mL d' éther de pétrole. Après avoir laissé décanter pendant 2 heures à 4°C, le précipité est filtré sur verre fritte puis séché une nuit à l'étuve à vide. On obtient 461,7 mg (0,88 mmol) du composé 30 sous forme d'une poudre de couleur blanche.
Formule brute : C3ιH2N205, M = 522,68 g.mol-1 Rendement : 94%
P.f. : 155°C
CCM : Rf = 0,1 éluant : CHCl3/MeOH 9/1 (v/v)
IR : 3306 cm"1 (large) V (NH- amide) ; 1703 cm-1 (2s)
V(C=0 acide) et v (C=0 carbamate) ; 1645 cm-1 V(C=0 amide)
ESI-MS + : m/z mesuré à 545,5 [M+Na]+, calculé à 545,3
RMN ^Η (DMSO-d6, 500,13 MHz) δ (ppm) : 12,8 (si,
-COOfl) ; 7,99 (d, 2H, H-4/H-4' , 3J4-3 = 3J4'-3' = 7,5 Hz) ; 7,92 (tl, IH, N'H) ; 7,80 (d, 2H, H-l/H-1' , 3Jι-2
= 3Ji'_2' = 7,5 Hz) ; 7,64 (d, IH, N«H, 3JNαH-α = 8,3 Hz) ;
7,51 (t, 2H, H-3/H-3', 3J3-2 = 3J3-4 = 3J3'-2' = 3J3'-4' = 7,5
Hz) 7,42 (t, 2H, H-2/H-2' J2-1 — J2-3 — J2' — J2'-3
= 7,5 Hz) ; 4,46 (dt, IH, H-α, J α-N H = J -β' = 8,3 Hz, 3Jα-β = 5,2 Hz) ; 4,34 (H-8) ; 4,31 (H-7) ; 3,12 (m, 2H,
H-lα) ; 2,67 (dd, IH, H-β, 3Jβ-β> = 15 Hz, 3Jβ_α = 5,2
Hz) ; 2,57 (dd, IH, H-β', 3Jβ'-β = 15 Hz, 3Jβ'_α = 8,3
Hz) ; 1,45 (m, 2H, H-2α) ; 1,28-1,36 (m, 18H,
H-3α à H-llα) ; 0,94 (t, 3H, H-12α, 3Jι2α-uα = 6,8 Hz) RMN 13C (DMSO-d6, 125,77 MHz) δ (ppm) : 173,1 (-COOH) ;
168,8 (-CO-N'H) ; 155,7 (C-10) ; 143,7 (C-5/C-5') ;
140,7 (C-6/C-6') ; 127, 6 (C-3/C-3' ) ; 127,0 (C-2/C-
2') ; 125,2 (C-l/C-1' ) ; 120,1 (C-4/C-4') ; 65,7 (C-8) ; 50,7 (C-α) ; 46,6 (C-7) ; 38,6 (C-lα) ; 37,0 (C-β) ; 31 , 3 (C-10G6) ; 28 , 6-29 , 1 (C-2CC, C-4α à C-9α) ; 26, 3 (C-3α) ; 22 , 1 (C-llα) ; 13 , 9 (C-12α) c) Préparation du N -dodécyl-N"-hexadécyl-N - (9-fluorénylméthoxycarbonyl) -L-aspartamide, ou composé 31, de formule :
31 Dans un ballon de 50 mL sec, 396,0 mg (0,76 mmol ; 1 éq.) du composé 30 sont 'dissous dans
5 mL de DMF anhydre sous agitation et sous atmosphère inerte. 176 μL (1,14 mmol ; 1,5 éq.) de DIC puis
155,2 mg (1,15 mmol ; 1,5 éq.) de HOBT dissous dans 1 mL de DMF anhydre, sont successivement additionnés. Le réaction est alors maintenue pendant 2 heures sous agitation et sous atmosphère inerte à température ambiante. 276,9 mg (1,15 mmol ; 1,5 éq.) d'hexa- décylamine, en solution dans 20 mL de chloroforme anhydre, sont ajoutés au milieu réactionnel et le tout est laissé pendant 24 heures, sous agitation et sous atmosphère inerte, à température ambiante (un précipité abondant se forme rapidement) . Le mélange est ensuite concentré à l' evaporateur rotatif (40 °C) et repris dans du DMF. Le solide pâteux est filtré sur verre fritte et lavé, d'abord au DMF, puis à l'éther. Après une nuit de séchage à l'étuve à vide, on isole 335,7 mg (0,46 mmol) du composé 31, sous forme d'une poudre blanche fine.
Formule brute : C47H75 304, M = 746,13 g.mol"1 Rendement : 61%
CCM : Rf = 0,85 éluant : CHCl3/MeOH 95/5 (v/v) d) Préparation du '-dodécyl-W'-hexadécyl-L- aspartamide, ou composé 32, de formule :
32 Dans un ballon de 50 mL, 330 mg (0,44 mmol ; 1 éq.) du composé 31 sont mis en solution dans 10 mL d'une solution à 20% (v/v) de pipéridine dans le chloroforme. La solution est chauffée quelques minutes à 40 °C. Le milieu réactionnel, d'abord hétérogène à cause de la faible solubilité du produit de départ dans le chloroforme, devient rapidement limpide. La solution est ensuite évaporée à sec, sous vide primaire (40°C), pour éliminer le maximum de pipéridine (bp 101-106°C) . Le résidu solide est repris dans 1 L de chloroforme pour être ensuite précipité dans 100 mL d'hexane sous agitation. Après avoir laissé décanter pendant 2 heures à 4°C, le précipité est récupéré par centrifugation (10 000 tours/min, 20 min) . Le solide est séché, puis une ultime étape de recristallisation dans le methanol (dissolution dans un minimum de methanol bouillant, filtration des insolubles à chaud et recristallisation à 4°C) permet d'isoler par filtration, et après une nuit de séchage à l'étuve à vide, 196 mg (0,37 mmol) du composé 32 sous forme d'une poudre blanche pulvérulente.
Formule brute : C32H5N3θ2, M = 523,89 g.mol-1 Rendement : 84% P.f. : 104°C
CCM : Rf = 0,5 éluant : CHCl3/MeOH 9/1 (v/v)
IR : 3315 cm-1 (large) V (NH- amide) et v(NH2) ;
1631 cm"1 V(C=0 amide)
ESI-MS + : /z mesuré à 524,6 [M+Na]+, calculé à 524,5 pour C32Hg 302
RMN XR (CDC13, 500,13 MHz) δ (ppm) : 7,50 (tl, IH,
N'H) ; 6,23 (tl, IH, N" H) ; 3,65 (m, IH, H-α) ; 3,21 (m, 4H, H-lα/H-lβ) ; 2,61 (dd, IH, H-β) ; 2,55 (dd, IH,
H-β') ; 1,48 (m, 4H, H-2α/H-2β) ; 1,24-1,32 (m, 44 H, H-3α à H-llα/H-3β à H-15β) ; 0,88 (t, 6H, H-12α/H-16β)
RMN 13C (CDCI3, 125,77 MHz) δ (ppm) : 174,4 (CO-N'H) ;
171,6 (C0~N"H) ; 53,5 (C-0C) ; 41,7 (C-β) ; 40,2, 40,0 (C-lα, C-lβ) ; 32,6 (C-10α/C-14β) ; 30,2-30,4
(C-40C à C-9α, C-4β à C-13β) ; 30,0 (2s, C-2α/C-2β) ; 27,6 (2s, C-3α/C-3β) ; 23,4 (C-llα/C-15β) ; 14,8 (C-12α/C-16β)
6.2. Préparation du composé 33 : Le couplage des composés 5 et 32 est réalisé en suivant le même protocole expérimental que celui décrit pour la préparation du composé 23 dans l'exemple 1 ci-avant, mais en utilisant : - 191,6 mg (0,16 mmol ; 1 éq.) du composé 5 - 96 μL (0,62 mmol ; 4 éq.) de DIC - 86,0 mg (0,64 mmol ; 4 éq.) de HOBT - 122,9 mg (0,23 mmol ; 1,5 éq.) du composé 32. On obtient ainsi 178 mg (0,10 mmol) du composé 33.
Formule brute : C78Hι38N403s, M = 1739,96 g. mol-1
Rendement : 66%
P.f. : 160°C (déc.)
CCM : Rf = 0,2 éluant : CHCl3/MeOH/H20 6/3/0,5 (v/v/v) [α]D 20 + 80 ° (c 0,26, DMF)
IR : 3000-3500 cm"1 (large) V(OH) ; 1652 cm"1 v(C=0 ami de s)
ES-HRMS (haute résolution avec détection en mode positif) : m/z mesuré à [M+H]+, calculé à 1739,9067
RMN XR (pyridine-ds, 500,13 MHz) δ (ppm) : 9,17 (d, IH,
NDH) ; 8,82 (t, IH, Nf.CD) ; 8,56 (t, IH, N"fl) ; 8,37 (t,
IH, N'A ) ; 4,94 (m, IH, H-α) ; 5,56-5,60 (m), 5,55 (d), 5,46(d) (6H, H-1II_VIICD) ; 5,43 (d, IH, H-I^D) ; 4,62-4,76 (m, H-3II-VIICD) ; 4,62 (H-3∑CD) ; 4,56-4,64 (m, H_6"- IICD) . 4,28-4,53 (m, H-5XI-VII CD/H-6' II_VII CD) ; 4,41 -5τ CO) ; 4,14-4,27 (m, H-4II"VII CD) ; 4,19 (H-6X CD) ; 4,06
(H-6rIcD) ; 3,98-4,13 (m, H-2II'_VIICD) ; 3,92 (dd, IH,
H-2r CD) ; 3,80 (t, IH, H-4I CD) ; 3,35, 3,30 (m, 4H, H-lα, H-lγ) ; 2,6-3,0 (m, H-b/H-c) ; 2,61 (m, H-γ/ H-γ' ) ; 2,61 (m, H-β) ; 2,34 (m, IH, H-β') ; 1,50, 1,47 (m, 4H,
H-2α, H-2γ) ; 1,18 (H-3α/H-3γ) ; 1,05-1,25 (m,
H-4α à H-llα/H-4γ à H-llγ) ; 0,75 (t, 6H, H-12α/H-12γ)
RMN 13C (pyridine-ds, 125,77 MHz) δ (ppm) : 173,7 (C-a) ; 173,6 (C-d) ; 173,2 (-CO-N'H) ; 172,9 (-CO-
N"H) ; 104,1-104,6 (C-11-VII CD) ; 85,8 (C-4I CD) ; 83,8-
84,2 (C-4II_VII CD) ; 74,1-75,4 (C-3I~VII CD/C-5II"V1I CD/C-2I"
VII CD) ; 72,3 (C-δ^o) ; 62,7 {C-6XCD) ; 62,0-62,3 (C-611-
VII CD) ; 41,6 (C-α) ; 40,3 (C-lα/C-lγ) ; 33,8 (C-γ) ; 32,6 (C-10α/C-10γ) ; 32,1, 32,3 (C-b, C-c) ; 30,5 (C-2α/C-2γ) ; 30,1 (C-4α/C-4γ) ; 30,1-30,7 (C-5α à C-9α/C-5γ à C-9γ) ; 30,0 (C-^) ; 27,8, 27,9 (C-3α, C-3γ) ; 23,4 (C-llα/C-llγ) ; 14,8 (C-12α/C-12γ)
Exemple 7 : Préparation du N', N"-didodécyl-Nar (6I-amido- succinyl-6I-désoxy-2I, 3I-di-0-méthyl-hexakis (2XX~VXX, 3XX~ VI1, 6II_VII-tri-0-méthyl) cyclomaltoheptaose) -L-glutamide : On obtient le composé titre, ou composé 9a, de formule
9a en couplant le 6I-amidosuccinyl-6I-désoxy-21, 3I-di-0- méthyl-hexakis (2II_VI1, 3II_VI1, 6II_VII-tri-0-méthyl) cyclo- maltoheptaose, ou composé 13 synthétisé dans l'exemple 5 ci— avant, avec le W',Zv""-didodécyl-L-glutamide, ou composé 22 synthétisé dans l'exemple 2 ci-avant, mais en utilisant : — 1,01 g (0,67 mmol ; 1 éq.) du composé 13 - 415 μl (2,.68 mmol, 4 éq.) de DIC — 361,4 mg (2,68 mmol ; 4 éq.) de HOBT — 376,1 mg (0.80 mmol ; 1.2 éq.) du composé 22. On obtient ainsi 605 mg (0,31 mmol, 46% de rendement) du composé 9a. Exemple 8 : Préparation du N' , N"-dihexadécyl-.NQr (61- amidosuccinyl-6I-désoxy-2:!:, 3I-di-0-méthyl-hexakis (2II_ ra, 3II_VI1, 6II_VII-tri-0-méthyl) cyclomaltoheptaose) -L- aspartamide : On obtient le composé titre, ou composé 9b, de formule :
9b en couplant le composé 13 synthétisé dans 1 ' exemple 5 ci-avant avec le N', W-dihexadécyl-L-aspartamide, ou composé 8b. ..
8.1. Préparation du composé 8b : a) Préparation du N ' , Àr'-dihexadécyl-Ng- (9- fluorenylmethoxycarbonyl) -L-aspartamide, ou composé 7b, de formule :
7b Dans un ballon de 250 mL, le composé 17 synthétisé dans l'exemple 1 ci-avant (1,5 g, 4,22 mmol, 1 éq.) est dissous dans 10 mL de DMF, 2 mL (3 éq.) de DIC puis 1,71 g de HOBT hydraté (3 éq.) dissous dans 8 mL de DMF sont successivement additionnés. Le milieu réactionnel est maintenu sous agitation pendant 3 heures 30. Une solution de hexadécylamine (3,06 g, 12,6 mmol, 3 éq.) dans 70 mL de CHC13 est alors ajoutée puis le milieu réactionnel est laissé à température ambiante pendant 48 heures. Le mélange est concentré sous vide, pris repris dans du DMF. Le précipité est filtré, lavé au DMF puis à l'éther. Enfin, le solide est séché sous vide. Le composé 7b est obtenu avec un rendement de 81%.
CCM : Rf ≈ 0,9 éluant : CHCl3/MeOH 95/5 (v/v)
P.f. : 189°C
RMN XR CDC13 δ (ppm) : 7,78 (d, 2H, H4/H4< , 3J4-3 = 3J4'-3' = 7,5 Hz) ; 7,60 (d, 2H, Hι/H , 3Jι-2 = 3Jι-- ' = 7,5
Hz) ; 7,35 (m, 4H, H2/H2» /H3/H3' ) ; 6,98 (tl, IH, N'H) ;
6,5 (d, IH, NαH) ; 5,75 (tl, IH, N"H) ; 4,4-4,3 (m,
Hα/H8) ; 4,21 (t, IH, H7, 3J7-s = 7,2 Hz) ; 3,23 (m, 4H,
Hiα/Hiβ) ; 2,75 (d, IH, Hβ, 3Jβ-β- = 15 Hz) ; 2,5 (dd, IH, Hβ., 3Jβ-β' = 15 Hz, 3Jα_β, = 7 Hz) ; 1,5 (m, 4H, H2α/H2β) ;
1,4-1,1 (m, H3α à Hι5α/H3β à Hisβ) ; 0,9 (t, 6H, Hι6α/Hι6β) b) Préparation du composé 8b
8b Dans un ballon de 250 mL, le composé 7b (1,42 g, 3,02 mmol, 1 éq.) est mis en solution dans 93 mL de pipéridine à 20% dans le chloroforme. Le milieu réactionnel est maintenu à 40 °C pendant 3 heures puis évaporé à sec et enfin repris dans 120 mL de chloroforme. 300 mL d'hexane sont ajoutés et le précipité formé mis au réfrigérateur toute la nuit puis filtré. Un lavage à l'ethanol est effectué afin d'éliminer les traces de pipéridine. Après séchage au dessicateur, le composé 8b est obtenu avec 86% de rendement .
CCM : Rf = 0,45 éluant : CHCl3/MeOH 95/5 (v/v)
P.f. : 120°C
RMN R CDC13 δ (ppm) : 7,5 (tl, IH, N'H) ; 6,15 (tl, IH,
N"H) ; 3,65 (t, Hα, 3J -β = 3J -β' = 7 Hz' ) ; 3,2 (m, 4H,
Hio/Hiβ) ; 2,6 (m, 2H, Hβ, Hβ ; 1,6-1,1 (m, H2α à Hι6α/H2β à Higβ) ; 0,87 (t, 6H, Hιgα/Hιgβ)
RMN 13, C CDCI3 δ (ppm) : 174,6 (-CO-N'H) ; 171,7 (-CO-
N"H) ; 53,8 (c-α) 42,03 (C-β) 40,4-40,2 (C-lα, C-lβ) ; 32 , 7 (C-140C /C-14β) ; 30 , 5-30 , 2 (C-20C, C-4α à C-13α /C-2β, C-4β à C-13β) ; 27 , 8 (C-3CC /C-3β) ; 23 , 5 (C-15α /C-15β) ; 14 , 95 (C-16α /C-16β) 8.2. Préparation du composé 9b : Dans un ballon de 100 mL, le composé 13 (500 mg, 0,33 mmol, 1 éq.) est dissous dans 15 ml de DMF, 90 μL (2 éq.) de DIC puis 50 mg (2 éq.) de HOBT dissous dans 4 mL de chloroforme sont successivement ajoutés. Après 2 heures 30 à température ambiante, on rajoute ii d'équivalent de chacun des réactifs afin que tout le composé 13 soit consommé. Après 1 heure, le composé 8b (287 mg, 0,5 mmol, 1,2 éq.), dissous dans 40 ml de chloroforme, est ajouté. Après 24 heures à température ambiante, la réaction est stoppée avec 100 μL d'eau et le milieu réactionnel est concentré à sec à l' evaporateur rotatif. Le produit brut obtenu est passé sur une colonne de chromatographie sur gel de silice 60 Fluka (gradient d' éluant : CHCl3/MeOH : 99/1, 97/3 et 95/5) . Après évaporation de toutes les fractions pures, on obtient le composé 9b avec 30% de rendement .
Exemple 9 : Préparation du N'-dodécyl-Nor (61- amidosuccinyl-6I-désoxy-2I, 3I-di-0-méthyl-hexakis (2II_ TO, 3II_VI1, 6II_VII-tri- -méthyl) cyclomaltoheptaose) -L- leucina ide : On obtient le composé titre, ou composé 9c, de formule :
9c en couplant le composé 13 synthétisé dans l'exemple 5 ci-avant avec le N'-dodécyl-L-Leucinamide, ou composé 21a.
9.1. Préparation du composé 21a : a) Préparation de la N - (9-fluorénylméthoxy- carbonyl) -L-Leucine, ou composé 17a, de formule :
17a On prépare le composé 17a en suivant le même protocole expérimental que celui décrit pour la préparation de 17 dans l'exemple 1 mais en utilisant : - 3,64 g (35 mmol, 1 éq.) de L-leucine - 83 mL (105 mmol, 3,6 éq.) d'une solution aqueuse de carbonate de sodium à 13% (m/v) , et - 9,84 g (29,16 mmol, 1 éq) de N-Finoc. On obtient ainsi 8,9 g (27,30 mmol, rendement de 93%) du composé 17a. b) Préparation du Nf-dodécyl-Nα- (9-fluorenylmethoxycarbonyl) -L-leucinamide, ou composé 19a, de formule :
19a On prépare le composé 19a en suivant le même protocole expérimental que celui décrit pour la préparation du composé 19 dans l'exemple 1 mais en utilisant : - 6,84 g (21 mmol, 1 éq.) du composé 17a - 9,8 mL (63 mmol, 3 éq.) de DIC - 8,5 g (63 mmol, 3 éq.) de HOBT - 11,67 (63 mmol, 3 éq.) de dodécylamine . On obtient ainsi 7,25 g (14,70 mmol, rendement de 70%) du composé 19a. c) Préparation du '-dodécyl-L-leucinamide, ou composé 21a, de formule :
21a On prépare le composé 21a en suivant le même protocole expérimental que celui décrit pour la préparation de 21 dans l'exemple 1 ci-avant mais en utilisant 8.2 g (16,6 mmol, 1 éq.) du composé 19a. On obtient ainsi 3,6 g (13,3 mmol, rendement de 80%) du composé 21a.
9.2. Préparation du composé 9c : Dans un ballon de 50 mL, le composé 13 (427 mg, 0,28 mmol, 1 éq.) est dissous dans 15 ml de
DMF, 108 μL (2,5 éq.) de DIC puis 70 mg (2,5 éq.) de
HOBT dissous dans 1 mL de DMF sont successivement ajoutés. Après 2 heures à température ambiante, on rajoute 0,25 équivalent de chacun des réactifs afin que tout le composé 13 soit consommé. Après 1 heure, le composé 21a (100 mg, 0,33 mmol, 1,2 éq.), dissous dans
7 ml de chloroforme, est ajouté. Après 18 heures à température ambiante, la réaction est stoppée avec
100 μL d'eau et le milieu réactionnel est concentré à sec à l' evaporateur rotatif. Le produit brut obtenu est passé sur une colonne de chromatographie sur gel de silice 60 Fluka (gradient d' élution : CHCl3/MeOH : 99/1 (v/v) puis 97/3 (v/v) ) .
Exemple 10 : Préparation de la Nr , N"~dodécyl-Na- (61- amidosuccinyl-6I-désoxy-per(2, 3, 6-di-O-méthyl) cyclomaltoheptaose) -β-alanine : On obtient le composé titre, ou composé 9d, de formule :
9d en couplant le 6I-amidosuccinyl-6I-désoxy-per (2 , 3, 6-tri- O-méthyl) cyclomaltoheptaose, ou composé 5a, avec la N-dodécyl-jNO- ( 9-f luorenylmethoxycarbonyl) -β-alanine, ou composé 7c .
10.1. Préparation du composé 5a : a) Préparation du 6I-azido-6I-désoxy- per (2, 3, 6-tri-Q-méthyl) cyclomaltoheptaose, ou composé 3a, de formule :
3a Dans un bicol propre et sec, de l'hydrure de sodium (enrobé à 60% m/m) (11,01 g, 0,46 mol, 88 éq.) est mis en suspension dans 150 mL de DMF anhydre et sous atmosphère inerte. Une solution obtenue par dissolution du composé 3 (3,64 g, 0,0031 mol, 1 éq.) synthétisé dans l'exemple 1 dans 240 mL de DMF anhydre, est ajoutée sous atmosphère inerte et à température ambiante. Après 1 heure 30, le milieu réactionnel est refroidi à 0°C et l'iodure de méthyle (38 mL, 0,6 mol, 190 éq.) est ajouté goutte à goutte. Le milieu réactionnel est laissé à température ambiante pendant 72 heures puis la réaction est stoppée avec 6 ml d'eau. Le précipité formé est filtré et lavé avec du DMF. Le filtrat est concentré à l' evaporateur rotatif. Le résidu pâteux est repris dans l'eau et extrait au chloroforme (5 x 50 mL) . La phase organique est lavée à l'eau (3 x 100 mL) . Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur Na2Sθ4, filtrées puis évaporées. Le résidu est repris une dernière fois dans l'eau et laissé décanter pendant toute la nuit afin d'éliminer les graisses contenant l'hydrure de sodium. Après evaporation et lyophilisation, le composé 3a est obtenu avec un rendement quantitatif.
CCM : Rf = 0,9 éluant : CHCl3/MeOH 9/1 (v/v) P.f. : 80°C (décomposition)
RMN R CDC13 δ (ppm) : 5,2-5 (m. 7H, Hi-CD) ; 4-3,25 (m,
H3-CD/H4-CD/H5-CD/Hg-CD/Hg'-CD/OCH3-CD) 3,25-3,1 (dd, 7H, H2-CD, 3Jι_2 = 10 Hz / 3J2-3 = 4 Hz) b) Préparation du 6I-amino-6I-désoxy- per (2, 3, 6-tri-O-méthyl) cyclomaltoheptaose, ou composé
4a, de formule
4a Dans un ballon de 1 litre, le composé 3a (4,33 g, 3mmol, 1 éq.) est dissous dans 220 mL de DMF. Une solution de triphénylphosphine (3,15 g, 0,012 mol, 4 éq.) dissoute dans 13 mL de DMF est additionnée lentement. Après 3 heures sous agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est refroidi à 0°C et 115 mL d'ammoniaque à 20% sont ajoutés. Celui-ci est agité toute la nuit à température ambiante puis concentré à 1 ' evaporateur rotatif. Le résidu huileux est repris dans 250 mL d'eau, le précipité blanc formé est filtré, lavé avec 2 x 40 mL d'eau. Le filtrat est ensuite concentré sous vide, le résidu solide est repris dans un minimum d'eau puis amené à un pH de 4,5 (pH initial = 8,2), les insolubles sont filtrés et le filtrat est passé sur colonne de résine Lewatit SP 1080. Le composé 4a est décroché avec de l'ammoniaque 6% puis le filtrat est concentré à 1 'evaporateur rotatif, repris dans un minimum d'eau puis lyophilisé. Le composé 4a est obtenu avec un rendement global de 60%.
CCM : Rf = 0,25 éluant : CHCl3/MeOH 95/5 (v/v)
P.f. : 80°C (décomposition)
RMN XR (CDC13, 500,13 MHz) δ (ppm): 5,36 (d, IH, H-I^D,
3JιI_2I = 3,6 Hz) ; 5,30-5,35 (m, 6H, H-1II_VIICD) ; 3,86- 3,96 (m, H-5XI~VXX CD) ; 3,87-3,92 (m, H-6II_V1ICD) ; 3,83 (H-5∑CD) ; 3,75-3,83 (m, H-4XI"VXI CD) ; 3,76 (H-3X CD) ;
3,69-3,79 (m, H-3XI"VII CD) ; 3,71 (H-4X CD) ; 3,65-3,73 (m,
H_6,II-VIICD) . 3,64-3,66 (m, OCi?3-6CD) ; 3,55-3,57 (m,
0CH3-3CD) ; 3,43 (H-2ICD) ; 3,42-3,43 (m, 0Ctf3-2CD) ; 3,36-3,44 (m, H-2XI"VX:I:CD) ; 3,05 (dd, IH, H-6X CD, W-S1 = 5,5 Hz, 3J6 I-6'1 = 14,2 Hz) ; 2,96 (dd, IH, H-6'X CD, 3Jg'I-sI = 3,0 Hz, 3Jg,1_g1 = 14,2 Hz)
c) Préparation du 6I-amidosuccinyl-6:ι:-désoxy- per (2, 3, 6-tri-O-méthyl) cyclomaltoheptaose, ou composé
5a, de formule
5a Dans un ballon de 100 mL propre et sec, le composé 4a (1,5 g, 1,08 mmol, 1 éq.) est dissous dans 30 ml de DMF anhydre sous atmosphère inerte. L'anhydride succinique (0,170 g, 1,7 mmol, 1,6 éq.,) dissous dans 8 mL de DMF anhydre est additionné. Le milieu réactionnel est laissé sous atmosphère inerte pendant 20 heures à température ambiante. La réaction est stoppée avec 170 μL d'eau puis les insolubles sont filtrés sur papier. Le filtrat est concentré à 1' evaporateur rotatif puis le résidu est repris dans un minimum d'eau et lyophilisé. Le composé 5a est obtenu avec un rendement de 76%.
CCM : Rf = 0,5 éluant : CHCl3/MeOH 9/1 (v/v) P.f. : 80°C (décomposition)
RMN XR CDC13 δ (ppm): 6,4 (t, IH, NH-CD, 3JNH-H6 = 6 HZ) ; 5,25-5 (m, 7H, Hi-CD) ; 3,95-3,25 (m, H3-CD/H4-CD/H5- CD/H6-CD/Hg'-CD/0CH3-CD) 3 , 25-3 , 15 (m, H2-CD) ; 2 , 75- 2 , 4 (m, 4H, H /Hc)
10.2. Préparation de la W-dodécyl-Jffκ- (9-fluorényl- méthoxycarbonyl) -β-alanine, ou composé 7c, de formule :
7c Dans un ballon de 100 mL, la Nα-(9- fluorenylmethoxycarbonyl) -L-β-alanine (produit commercial) (2 g, 6,42 mmol, 1 éq.) est dissoute dans 12 mL de DMF, 3 mL (3 éq.) de DIC puis 1,93 g de HOBT hydraté (3 éq.) dissous dans 7 mL de DMF sont successivement additionnés. Le milieu réactionnel est maintenu sous agitation pendant 2 heures. Une solution de dodécylamine (1,75 g, 9,46 mmol, 1,5 éq.) dans 40 mL de chloroforme est alors ajoutée puis le milieu réactionnel est laissé à température ambiante 18 heures. Le mélange est concentré sous vide pris repris dans du DMF. Après 3 heures au réfrigérateur, le précipité est filtré, lavé au DMF puis séché à l'éther. Le filtrat est récupéré et reprécipité au réfrigérateur. Le précipité obtenu est filtré et séché à l'éther. Enfin, le solide est séché sous vide. Le composé 7c est obtenu avec un rendement de 47%. CCM : Rf = 0,8 éluant : CHCl3/MeOH 95/5 (v/v) P.f. : 143°C
RMN XR (CDC13, 500,13 MHz) δ (ppm) : 7,78 (d, 2H, H4/H4 ,, 3J4-3 = 3J4'-3' = 7,5 Hz) ; 7,60 (d, 2H, Hι/H , 3Jι-2 = 3Ji'-2' = 7,5 Hz) ; 7,35 (m, 4H, H2/H2- /H3/H3 ; 5,55 (tl, IH, NH) ; 5,52 (tl, IH, NH) ; 4,36 (d, 2H, H8, 3J-s = 2,8 Hz ) ; 4,21 (t, IH, H7, 3J7-8 = 2,8 Hz) ; 3,5 (m, 2H, H«) ; 3,23 (q, 2H, Hlα) ; 2,4 (t, 2H, Hβ, 3Jα_β = 2,2 Hz) 1,6 (m, 2H, H2α) ; 1,4-1,1 (m, H3α à Hllα) ; 0,89 (t,
10.3. Préparation du composé 9d : Dans un ballon de 100 mL, le composé 5a (780 mg, 0,51 mmol, 1 éq) est dissous dans 30 ml de DMF, 220 μL (2,75 eq) de DIC puis 142 mg (2,75 éq) de HOBT dissous dans 2 mL de DMF sont successivement ajoutés. Après 3 heures 30, le composé 7c (160 mg, 0,62 mmol, 41,2 éq.) dissous dans 6 ml de chloroformé est additionné. Après 24 heures à température ambiante, la réaction est stoppée avec 100 μL d'eau et le milieu réactionnel est concentré à sec à l' evaporateur rotatif. Le produit brut obtenu est passé sur une colonne de chromatographie sur gel de silice (gradient d' éluant : CHCl3/MeOH) .
Dans les exemples qui précèdent, les chromatographies sur couche mince (CCM) ont été réalisées sur des plaques d'aluminium (5 X 7,5 cm) recouvertes de gel de silice 60 F254 (Merck) . Les composés ont été révélés sous lumière UV (λ = 254 nm) , par pulvérisation d'une solution aqueuse de H2S04 à 10% suivie d'une étape de chauffage pour tous les dérivés de cyclodextrines, ou par aspersion d'une solution de ninhydrine à 0,2% dans l'ethanol suivie d'une étape de chauffage pour les composés possédant une fonction aminé primaire . Les points de fusion ont été déterminés à l'aide d'un banc δfler nécessitant une calibration avec des produits de référence provenant de Merck Eurolab. Les expériences RMN du proton et du carbone ont été enregistrées en routine respectivement à la fréquence de 200,13 MHz et 50,32 MHz sur un appareil Brucker AC 200 équipé d'une sonde multinoyaux (1H, 13C, 15N, 31P) . Les déplacements chimiques sont donnés par rapport à une référence externe, le tétraméthylsilane (δ = 0 ppm) , et les calibrations internes ont été effectuées à l'aide du signal résiduel de solvant, avec une éventuelle correction pour le signal de l'eau en fonction de la température. Les solvants deutérés employés (D20, DMSO-c , CDC13, Pyr-d5) provenaient de Eurisotop. Les mesures ont été effectuées à l'aide d'un contrôle rigoureux de la température (+/- 0.1 K) à 298 K sauf précision. Les valeurs de puises 90° étaient de ca . 10 μs pour XH (atténuation 0 dB) , et de ca . 20 μs pour le 13C (atténuation 2 dB) . Les spectres monodimensionnels ont été acquis sur 16 K points, et transformés sur 32 K points (zero-filling) . Une éventuelle correction de la ligne de base a été effectuée sur les spectres . Afin de faciliter l'attribution des signaux, des spectres mono et bidimensionnels ont été effectués. Ils ont été enregistrés respectivement à la fréquence de 500,13 MHz et 125,77 MHz sur un appareil Brucker DRX 500 équipé d'une sonde Broad Band Inverse
(bbi) 3 axes à 5 mm et acquis sur 2048 points en F2 avec 256 incréments de temps en FI, le temps de recyclage pour chaque scan étant d'environ 1,5 secondes. Les expériences phasées ont été acquises en mode TPPI, et transformées en matrice de IK x IK points (matrice réels-réels) . Les spectres ont été traités par une fonction d' apodisation en sinus décalé de π/2 dans les deux dimensions, avec une correction de la ligne de base. Tous les spectres ont été traités à l'aide des logiciels Mestrec ou UXNMR (Brucker Analytische Messtechnik) sur la station de travail INDY (Silicon Graphics) ou sur PC. Pour faciliter l'analyse des spectres, les abréviations suivantes ont été adoptées : s, singulet, d, doublet, dd, doublet dédoublé, t, triplet, tl, triplet large, q, quadruplet, et m, multiplet.
BIBLIOGRAPHIE
[1] FR-A-2 792 942 .
[2] Auzély-Velty et al . , Carbohydrate Research, 1999, 318, 82-90.

Claims

REVENDICATIONS
1. Dérivé de cyclodextrine répondant à la formule (I) :
dans laquelle :
- R1 répond à la formule (II)
-NH-E-AA- (L1) p (L2) q (II) dans laquelle : • E représente un groupe hydrocarboné, linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, comprenant de 1 à 15 atomes de carbone et comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes, • AA représente le reste d'un acide aminé, • L1 et L2, identiques ou différents, représentent un groupe hydrocarboné, linéaire, ramifié et/ou cyclique, saturé ou insaturé, comprenant de 6 à 24 atomes de carbone et comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes ; • p et q, identiques ou différents, sont des entiers égaux à 0 ou à 1, à condition toutefois que l'un au moins de ces entiers soit différent de 0 ;
— R2 représente un atome d'hydrogène, un groupe méthyle, un groupe isopropyle, un groupe hydroxypropyle ou un groupe sulfobutyléther ; - R3 représente un atome d'hydrogène ou est identique à R2 sauf quand R2 est un groupe hydroxypropyle ;
— tous les R4 représentent soit un groupe hydroxyle, soit R2 sauf quand R2 est un groupe hydroxypropyle, ou bien l'un ou plusieurs R4 sont identiques à R1 et le ou les autres R4 représentent soit un groupe hydroxyle, soit R2sauf quand R2 est un groupe hydroxypropyle ;
— n est un entier égal à 5, 6 ou 7.
2. Dérivé selon la revendication 1, dans lequel, dans la formule (II) , E répond à la formule (III) : -CO-X-G1-, dans laquelle X représente un groupe alkylène formant pont et comprenant de 1 à 8 atomes de carbone, tandis que G1 représente un groupe -C0-, -NH- ou -NR- dans lequel R est un groupe alkyle en Ci à Cg.
3. Dérivé selon la revendication 2, dans lequel, dans la formule (III) , X représente un groupe alkylène formant pont et comprenant de 1 à 4 atomes de carbone et, de préférence, 2 atomes de carbone.
4. Dérivé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel, dans la formule (II), AA représente le reste d'un acide aminé choisi parmi l'acide aspartique, l'acide glutamique, l'alanine, l'arginine, 1 ' asparagine, la cystéine, la glutamine, la glycine, l'histidine, 1 ' isoleucine, la leucine, la lysine, la méthionine, la phénylalanine, la proline, la serine, la thréonine, la tyrosine, le tryptophane et la valine .
5. Dérivé selon la revendication 4, dans lequel, dans la formule (II) , AA représente le reste d'un acide aminé choisi parmi l'acide aspartique, l'acide glutamique, 1 ' isoleucine, la leucine et la phénylalanine, et, de préférence, parmi l'acide aspartique et l'acide glutamique.
6. Dérivé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel, dans la formule (II), AA représente le reste d'un acide aminé appartenant à la série L.
7. Dérivé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel, dans la formule (II) , L1 et L2 répondent à la formule (IV) : -G2-Y, dans laquelle G2 représente un groupe -CO-, -NH- ou -NR- où R est un groupe alkyle en Ci à Cs, tandis que Y représente une chaîne alkyle linéaire en C8 à Cι8 ou un groupe cyclique ou polycyclique lipophile.
8. Dérivé selon la revendication 7, dans lequel, dans la formule (IV) , Y représente une chaîne alkyle en Ci2 à Cig.
9. Dérivé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel, dans la formule (II) , E est lié par une liaison amide au reste AA, ce reste étant lui-même lié par une liaison amide au (x) groupe (s) L1 et/ou L2.
10. Dérivé selon l'une des revendications précédentes, dans lequel, dans la formule (II) , E répond à la formule : -CO-X-CO- dans laquelle X a la même signification que précédemment, tandis que L1 et L2 répondent à la formule : -NH-Y dans laquelle Y a la même signification que précédemment.
11. Dérivé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel, dans la formule (I) , R1 répond à la formule particulière (VI) :
dans laquelle : — X et Y ont la même signification que précédemment ; tandis que - Z représente : soit une liaison covalente, auquel cas R5 représente un atome d'hydrogène, un groupe méthyle, la chaîne latérale d'un acide aminé ou un groupe de formule : - (CH2) t-CO-NH-Y dans laquelle t vaut 1 ou 2 et Y a la même signification que précédemment, • soit un groupe hydrocarboné formant pont, comprenant de 1 à 4 atomes de carbone et comportant un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi O et N, auquel cas R5 représente un groupe aminé primaire ou un groupe de formule : -NH-CO-Y dans laquelle Y a la même signification que précédemment .
12. Dérivé selon la revendication 11, dans lequel, dans la formule (VI) :
- Z représente une liaison covalente ;
- Y représente, de préférence, une chaîne alkyle linéaire en C8 à Cι8 et, mieux encore, en Cι2 à Cig ; tandis que
- R5 représente un groupe alkyle ramifié à 4 atomes de carbone, un groupe benzyle ou un groupe de formule : - (CH2) t-CO-NH-Y, dans laquelle t est égal à 1 ou 2 et Y représente, de préférence, une chaîne alkyle linéaire en C8 à Cι8 et, mieux encore, en Ci2 à Cι6.
13. Dérivé selon la revendication 11 ou la revendication 12, dans lequel, dans la formule (VI) : - Z représente une liaison covalente ; - Y représente, de préférence, une chaîne alkyle linéaire en C8 à Cι8 et, mieux encore, en Ci2 à Cι6 ; tandis que
- R5 représente un groupe de formule : - (CH2) t-C0-NH-Y, dans laquelle t est égal à 1 ou 2 et Y représente, de préférence, une chaîne alkyle linéaire en C8 à Cι8 et, mieux encore, en Cι2 à Cι6.
14. Dérivé selon l'une quelconque des revendications précédentes, qui ne comporte qu'un seul substituant R1 par molécule de dérivé.
15. Dérivé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel, dans la formule (I), n est égal à 6.
16. Dérivé selon l'une quelconque des revendications précédentes, qui est choisi parmi : ...
• le N ', N"-didodécyl-.Z7ar- (6I-amido-succinyl-6x-désoxy- cyclomaltoheptaose) -L-aspartamide ;
• le 2v"',iV"-didodécyl-N- (6I-amido-succinyl-6I-désoxy- cyclomaltoheptaose) -L-glutamide ;
» le iV r, N"-didodécyl-Nor- (6I-amido-succinyl-6I-désoxy- 2x-0-méthyl-hexakis (2XX_VIX, 6IX"VII-di-0-méthyl) cyclo- maltoheptaose) -L-aspartamide ; le ', N"-didodécyl-Nα- (6x-amido-succinyl-6x-désoxy- 2x-0-méthyl-hexakis (2IX"VIX, 6II_VII-di-0-méthyl) cyclomaltoheptaose) -L-glutamide ;
• le TV '/ TV-didodécyl-Nα- (6I-amido-succinyl-6I-désoxy- 2X, 3x-di-0-méthyl-hexakis (2II_VI1, 3XI_VI1, 6xx"VIX-tri-0- méthyl) cyclomaltoheptaose) -L-aspartamide ; le N '-dodécyl-iV'-hexadécyl-Nor ( 6I-amidosuccinyl-6I- désoxy-cyclomaltoheptaose) -L-aspartamide ; le N ' , 77"-didodécyl-Nα- ( 6I-amido-succinyl-6I-désoxy- 2X, 3x-di-0-méthyl-hexakis (2XI_VIX, 3XI"VXI, 6II_VII-tri-0- méthyl) cyclomaltoheptaose) -L-glutamide ; le N' , W-dihexadécyl-ΛTor- (6I-amidosuccinyl-6I-désoxy- 21, 3 -di-O-méthyl-hexakis (2J II-VII L,3II-VII , /6-IJI-VIIr-tri-0- méthyl) cyclomaltoheptaose) -L-aspartamide ; et le N'-dodécyl-Ttar- ( 6I-amidosuccinyl-6I-désoxy-2I, 3x-di- O-méthyl-hexakis (2II_VXI, 3II_VI1, 6IX"v:r:ι-tri-0- méthyl) cyclomaltoheptaose) -L-leucinamide .
17. Procédé de préparation d'un dérivé de cyclodextrine selon l'une quelconque des revendications 1 à 16, qui comprend une étape dans laquelle on fait réagir un dérivé de cyclodextrine de formule (VII) :
dans laquelle :
- E' représente un groupe hydrocarboné, linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, comprenant de 1 à 15 atomes de carbone, un ou plusieurs hétéroatomes et un groupe fonctionnel libre apte à réagir avec un groupe hydroxyle, aminé, acide carboxylique ou thiol d'un acide aminé pour former une liaison covalente ; - R2 représente un atome d'hydrogène, un groupe méthyle, un groupe isopropyle, un groupe hydroxypropyle ou un groupe sulfobutyléther ;
- R3 représente un atome d'hydrogène ou est identique à R2 sauf quand R2 est un groupe hydroxypropyle ; - tous les R4 représentent soit un groupe hydroxyle, soit R2 sauf quand R2 est un groupe hydroxypropyle ou bien l'un ou plusieurs R4 représentent un groupe -NH-E ' et le ou les autres R4 représentent soit un groupe hydroxyle, soit R2 sauf quand R2 est un groupe hydroxypropyle ;
— n est un entier égal à 5, 6 ou 7 ;
avec un composé de formule (VIII) : - : \ AA'-(L1)p(L2)q (VIII)
dans laquelle :
• AA' représente un acide aminé comportant un groupe hydroxyle, aminé, acide carboxylique ou thiol libre ;
• L1 et L2, identiques ou différents, représentent un groupe hydrocarboné, linéaire, ramifié et/ou cyclique, saturé ou insaturé, comprenant de 6 à 24 atomes de carbone et comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes ; • p et q, identiques ou différents, sont des entiers égaux à 0 ou à 1, à condition toutefois que l'un au moins de ces entiers soit différent de 0.
18. Procédé selon la revendication 17, qui comprend, de plus, une étape consistant à faire réagir un dérivé monoamine de cyclodextrine de formule (IX) :
dans laquelle :
- R2, R3 et n ont la même signification que dans la formule (VII) ;
— tous les R4 représentent soit un groupe hydroxyle, soit R2 sauf quand R2 est un groupe hydroxypropyle, ou bien l'un ou plusieurs R4 représentent un groupe -NH2 et le ou les autres R4 représentent soit un groupe hydroxyle, soit R2 sauf quand R2 est un groupe hydroxypropyle, avec un composé précurseur du groupe E' comportant un groupe fonctionnel libre apte à réagir avec le groupe aminé du dérivé de formule (IX) , pour obtenir le dérivé de cyclodextrine de formule (VII) .
19. Procédé selon la revendication 17, qui comprend, de plus, les étapes consistant à : — faire réagir un acide aminé, dont le groupe fonctionnel prévu pour réagir avec le groupe fonctionnel libre du groupe E ' du dérivé de cyclodextrine de formule (VII) a été préalablement protégé, avec un composé précurseur du groupe L1 et/ou un composé précurseur du groupe L2, ce (s) composé (s) précurseur (s) comportant un groupe fonctionnel libre apte à réagir avec un groupe hydroxyle, aminé, acide carboxylique ou thiol d'un acide aminé pour former une liaison covalente ; puis — déprotèger le groupe fonctionnel protégé de l'acide aminé, pour obtenir le composé de formule (VIII) .
20. Procédé selon la revendication 18, dans lequel le composé précurseur du groupe E ' est un anhydride d'acide de formule (X) :
dans laquelle X a la même signification que précédemment, que l'on fait réagir avec le dérivé monoamine de cyclodextrine de formule (IX) en milieu anhydre et sous atmosphère inerte.
21. Procédé selon l'une quelconque des revendications 17 à 20, dans lequel le dérivé de cyclodextrine de formule (VII) et le composé de formule (VIII) sont mis à réagir en présence de N, W'-diisopropylcarbodiimide (DIC) et d'hydroxy- benzotriazole (HOBT) .
22. Complexe d'inclusion d'un dérivé de cyclodextrine selon l'une quelconque des revendications
1 à 16, et d'un composé hydrophobe.
23. Complexe d'inclusion selon la revendication 22, dans lequel le composé hydrophobe est un principe actif médicamenteux.
24. Complexe d'inclusion selon la revendication 22, dans lequel le composé hydrophobe est un détergent des membranes cellulaires.
25. Système de tensioactifs organisé comprenant un dérivé de cyclodextrine selon l'une quelconque des revendications 1 à 16 ou un complexe d'inclusion selon l'une quelconque des revendications 22 à 24.
26. Système de tensioactifs organisé selon la revendication 25, dans lequel le tensioactif est un phospholipide .
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