DERIVES D ' IMIDAZOLE , LEUR PREPARATION ET LEUR APPLICATION EN
THERAPEUTIQUE
La présente invention a pour obj et des dérivés d' imidazole de formule générale ( I )
dans laquelle : f\\
A représente un hétérocycle, saturé ou insaturé, comprenant un atome d'azote de formule (B) , (D) , (E) ou (F) :
(B) (D)
R et R3 représentent, indépendamment l'un de l'autre, un hydrogène, un groupe C .g alkyle, ou ensemble forment un groupe polymethylene -(CH )n-, n pouvant prendre les valeurs de 3 à 6,
R5 représente un phényle ou une 2-, 3- ou _4-pyridine, le phényle ou la pyridine étant substitué par R3 et R'3, où R3 et R'3 réprésentent, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène, d'halogène, un hydroxy, un groupe Cx_4 alkyle ou C^g alcoxy, R6 représente un phényle ou une 2-, 3- ou 4-pyridine le phényle ou la pyridine étant substitué par -R4 et R'4( où R4 et R'4 représentent, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène, un halogène, un hydroxy, un ammo, un cyano, un sulfonami e, un aminocarbonyle, un
trifluorométhyle, un groupe C1_6 alcoxy, (di) hydroxy-C1.6 alcoxy ou Cχ_4 alkyle, et R7 représente un atome d'hydrogène ou un groupe C _2 alkyle.
Parmi ceux-ci, les composés préférés selon l'invention sont les composés pour lesquels :
A représente une pipéridine (B) , plus spécialement A représente une pipéridine (B) et R5 représente un phényle.
Parmi ces derniers les composés pour lesquels R6 représente également un phényle et R7 représente un hydrogène sont encore plus particulièrement préférés.
Dans le cadre de la présente invention, on entend par :
- C .z , où z peut prendre les valeurs entre 2 et 6, une chaîne carbonée pouvant avoir de 1 à z atomes de carbone,
- alkyle, un groupe aliphatique saturé linéaire ou ramifié; par exemple, un groupe Cx_β alkyle représente une chaîne carbonée de 1 à 6 atomes de carbone, linéaire ou ramifiée, ou de préférence de 1 à 6, et plus particulièrement consiste en un méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle, tertbutyle, etc;
- alcoxy, un groupe alkyloxy à chaîne aliphatique saturée linéaire ou ramifié, et
- atome d'halogène, un fluor, un chlore, un brome ou un iode.
Les composés de formule générale (I) peuvent se présenter sous forme de base libre, N-oxyde ou de sels d'addition à des acides pharmaceutiquement acceptables, qui font également partie de l'invention.
Les composés de formule générale (I) comportent un ou plusieurs atomes de carbone asymétriques. Ils peuvent donc exister sous forme d'énantiomêres ou de diastéréoisomères . Ces énantiomères, diastéréoisomères, ainsi que leurs mélanges, y compris les mélanges racémiques, font partie de 1 ' invention.
Les composés de l'invention peuvent être préparés par des procédés illustrés dans les schémas qui suivent, dont les conditions opératoires sont classiques pour l'homme du métier.
Schéma 1
POCI3 Oxone reflux (KHS05)
On fait réagir un époxyde de formule (II) successivement avec de l'acide triflique dans le diméthylsuifoxyde puis avec de la diisopropyléthylamine pour conduire à 1 ' hydroxycétone (III) suivant la méthode décrite par B.M. Trost dans Tetrahedron letters 29, (18) 2163-66 (1988) .
L' hydroxycétone (III) est opposée à une arylurée (R5NHCONH2) à 180°C dans l'hexanol, en présence éventuellement de tamis moléculaire, pour conduire à l' imidazolone (IV).
Cette imidazolone (IV) peut également être obtenue à partir de 1 ' alphahalocétone (V), par réactions successives de phtalimide de potassium (PhtalK) puis d'acide bro hydrique concentré et d'acide acétique, pour conduire tout d'abord au bromhydrate de 1 ' aminocétone (VI) qui par traitement avec un phenylisocyanate (R5NCO) dans la pyridine ou le diméthylformamide aboutit au composé (IV) .
Alternativement, l' imidazolone (IV) peut être préparée comme indiqué dans le schéma 2 selon la méthode décrite dans le brevet US3432520.
Schéma 2
R1 N =0
R2 N
R5
(IV)
On fait réagir une propargylamine de formule (XV) , dans laquelle Rx est tel que défini précédemment et R'2 représente R2 moins un atome de carbone (R2 = R'2-(Cs)-), avec un
phenylisocyanate (R5-NCO) dans le toluène pour conduire à l'urée (XVI) qui par traitement par un alcoolate alcalin, tel que le méthylate ou éthylate de sodium ou le tert-butylate de potassium, dans l'alcool correspondant, entraîne un réarrangement allenique suivi d'une cyclisation pour aboutir à l' imidazolone (IV).
L' imidazolone (IV) est alors chauffée au reflux de
1 ' oxychlorure de phosphore, éventuellement en présence de pentachlorure de phosphore ou d'acide chlorhydrique gazeux, pour conduire à le chloroimidazole (VII) .
La condensation du chloroimidazole (VII) avec un alcool de formule (XIV) , dans laquelle A, R6 et R7 sont tels que définis précédemment, s'effectue par action préalable d'une base non nucléophile tel que l'hydrure de sodium sur cet alcool, suivi de la réaction avec le chloroimidazole dans le diméthylformamide à des températures comprises entre 20 et 120°C (bain d'huile ou four à micro-ondes) pour donner les composés de formule (I) .
Alternativement, les composés de formule (I) peuvent être obtenus à partir d'alphahalocétone de formule (V) que l'on condense thermiquement avec le formamide pour donner l'imidazole (VIII).
Cet imidazole (VIII) est alors soumis à l'action d'un triaryle de bismuth ((R5)3Bi) en présence d'acétate de cuivre et de triéthylamine dans le dichlorométhane pour conduire à l'imidazole (IX) .
Le proton en position 2 de cet imidazole (IX) est alors arraché au moyen de butyllithium dans le tétrahydrofurane à des températures comprises entre -78 et -10°C. L'anion ainsi formé est piégé au moyen de diméthyldisulfure pour conduire au sulfure (X) .
Alternativement, les sulfures de formule (X) et plus particulièrement ceux pour lesquels R2 est un atome
d'hydrogène peuvent être obtenus selon le schéma 3.
Schéma 3
L' isothiocyanate de formule (XVIII) est mis en contact dans un solvant organique tel que le toluène ou le dichlorométhane avec un dialkyle acétal de formule (XIX) pour conduire intermédiairement à une thiourée qui est cyclisée en imidazolinethione de formule (XX) par chauffage dans une solution aqueuse (0,01 à 12 N) d'acide chlorhydrique . L' imidazolinethione de formule (XX) peut être S-méthylée par action successive de l'hydrure de sodium et de l'iodure de méthyle dans le diméthylformamide à des températures comprises entre -20°C et 60°C, pour donner le composé de formule (X) , ou bien par action du méthanol dans l'acide chlorhydrique à des températures comprises entre 20°C et le reflux.
Le sulfure (X) est oxydé en sulfone (XI) par l'action de l'Oxone® (peroxymonosulfate de potassium) en présence d'alumine humide. Cependant d'autres oxydants peuvent être utilisés tels que l'eau oxygénée ou le permanganate de potassium dans l'acide acétique.
La condensation de la sulfone (XI) avec un alcoolate, formé par action d'une base non nucléophile telle que l'hydrure de sodium sur l'alcool de formule (XIV), s'effectue dans le diméthylformamide à des températures comprises entre 20 et 120°C, pour conduire aux composés de formule (I) .
Alternativement, les composés de formule (I) , dans laquelle
R6 est un phényle , R4 = H et R' 4=H, peuvent être modifiés pour conduire à d' autres dérivés de formule ( I ) comme indiqué dans le schéma 4 .
Schéma 4
Les composés de formule (I) , dans laquelle R6 représente un phényle, R4 et R'4=H sont débenzylés par l'action du formiate d'ammonium au reflux du methanol en présence d'une quantité catalytique de palladium sur charbon, pour conduire au dérivé (XII) •
Les composés de formule (XII) peuvent alors être mis en réaction avec un halogénure d'aryle de formule (XVII, R6 = phényle ou pyridyle dans laquelle R4 et R'4 peuvent être différents d'un hydrogène) en présence d'une aminé acceptrice de proton ou d'une base minérale comme le carbonate de potassium, ou par amination réductrice au moyen d'un aldéhyde de formule (XXI, R6 étant tel que défini ci-dessus) en présence d'acide chlorhydrique et de cyanoborohydrure de sodium dans le methanol , pour conduire aux composés de formule (I) , dans laquelle R4 et /ou R'4 ne représente pas un hydrogène .
Dans le cas où (R4 et/ou R'4) et/ou (R3 et/ou R'3) est un groupement fonctionnel dérivâtisable, il peut être éventuellement oxydé, réduit, alkyle ou déalkylé par des méthodes classiques connues de l'homme de l'art.
Les composés de formule (XIV) sont disponibles dans le commerce ou peuvent être synthétisés selon des méthodes connues de l'homme du métier.
Par exemple, le composé de formule (XIV) , dans laquelle A représente une pipéridine, R6 et R7 sont tels que définis ci- dessus, peut être obtenu suivant le schéma 5.
Schéma 5
L' isonipécotate d'éthyle est alkyle avec le composé de formule (XVII) , tel que défini précédemment, pour conduire à l'ester (XIII) qui est réduit par l'hydrure mixte de lithium et d'aluminium pour donner l'alcool (XIV), selon des méthodes connues de l'homme du métier.
Selon un autre exemple le composé de formule (XIV) , dans laquelle A représente un hétérocycle insaturé de formule (D) , R6 et R7 sont tels que définis ci-dessus, peut être obtenus selon le schéma 6.
Schéma 6
Selon ce schéma, le 4-pirydineméthanol est mis en réaction avec l'halogénure de formule (XVII), dans le toluène sous reflux. Le composé de formule (XXII) ainsi obtenu est ensuite réduit, en présence par exemple de borohydrure de sodium dans l'éthanol, pour donner le composé (XIV).
Les composés de formule (XIV) , dans laquelle A représente un hétérocycle de formule (E) ou (F) , R6 et R7 sont tels que définis ci-dessus, peuvent être obtenus selon la méthode décrite par . Schneider (Ger. Arch. Phar ., 308(5), 365-75 (1975)) .
Les autres matières premières sont directement disponibles dans le commerce, sont décrites dans la littérature ou peuvent être synthétisées par des méthodes classiques connues de l' homme de l' art .
Les exemples suivants illustrent les procédés et techniques mises en oeuvre pour la préparation de cette invention, sans toutefois limiter l'étendue de la revendication. Les microanalyses élémentaires et les spectres RMN et IR confirment les structures des composés obtenus.
Exemple 1 : 2-hydroxycyclohexanone
On refroidit au bain de glace 9,8g (0,1 mol) d'oxyde de cyclohèxene dans 75 ml de diméthylsuifoxyde et additionne une solution de 9 ml (0,1 mol) d'acide triflique dans 25 ml de
diméthylsulfoxyde en 30 minutes.
On laisse revenir à température ambiante et agite encore pendant 2 heures .
On ajoute 150 ml de dichlorométhane, refroidit à -78°C et additionne en 30 minutes, 87 ml (0,5 mol) de diisopropyléthylamine .
On laisse revenir à température ambiante, agite encore pendant 1 heure et verse sur 1500 ml d'une solution de bisulfate de sodium à 10 %. On extrait au dichlorométhane, sèche sur MgS04 puis évapore. On purifie l'huile résiduelle par chromatographie flash sur silice en éluant avec du chlorure de méthylène et récupère 4,5g de produit. Rendement = 39,5 % .
Exemple 2 : l-phényl-4 , 5, 6, 7-tétrahydro-2H-benzimidazol-2-one
On agite sous reflux pendant 20 heures, un mélange de 4,5g (39,4 mmol) de 2-hydroxycyclohexanone, 7,5g (55 mmol) de phénylurée et 7 ml d'hexanol.
On concentre sous vide et recristallise le résidu solide dans l'acétone et récupère 2,5g de produit F = 220°. Rendement = 29,6 % .
Exemple 3 :Bromhydrate de 2-aminocyclohexanone
Suivant le mode opératoire de Curtin D.Y. (J.Am. Chem. Soc.
77, 1105-10 (1955)), on agite à 95°C pendant 8 heures un mélange de 50g (0,27mol) de phthalimide de potassium, 50g
(0,27mol) de chloro-2 cyclohexanone et 200ml de diméthylformamide .
On verse sur de l'eau glacée, ajoute de l'éther et agite jusqu'à cristallisation 2-phtalimidocyclohexanone. On essore, lave à l'eau et à l'éther, sèche sous vide. On obtient 40g du composé (F = 155°) .
On agite ensuite au reflux pendant 4 heures un mélange de 40g
(0,16mol) du dérivé précédent dans 200ml d'acide acétique et
200ml d'acide bromhydrique à 48 %.
On refroidit au bain de glace, filtre l'acide phthalique et concentre sous vide. Le résidu d'évaporation est repris par 100ml d'éthanol et 100 ml de toluène puis concentré sous vide. Cette opération est répétée jusqu'à obtention d'un résidu bien cristallisé. On reprend avec un mélange alcool/éther 50:50 filtre, sèche sous vide. On obtient 20g de produit. Rendement = 64 % (F = 153°) .
Exemple 4 : l-phényl-4 , 5 , 6, 7-tétrahydro-2H-benzimidazol-2-one
On agite à 125° pendant 4 heures un mélange de 1,94g
(0,01mol) de bromhydrate de 2-aminocyclohexanone, 1,19g
(0,01mol) d'isocyanate de phényle et 4ml de pyridine. On ajoute de l'eau, agite jusqu'à cristallisation, essore, lave à 1 ' eau et sèche .
On purifie le composé par chromatographie flash sur silice en éluant avec un mélange CH2C12/CH30H 95:5.
On récupère 0 , 7g de produit . Rendement = 33 % (F = 224°).
Exemple 5 : 2-chloro-l-phényl-4 , 5, 6, 7-tétrahydro-2H- benzimidazole
On agite sous reflux pendant 6 heures un mélange de 2,3g
(0,0107mol) de l-phényl-4, 5, 6, 7-tétrahydro 2H-benzimidazol-2- one et 30 ml de P0C13-
On évapore l'excès de P0C13 sous vide et hydrolyse le résidu avec de l'eau et de l'ammoniaque concentrée. On extrait au chlorure de méthylène deux fois, évapore et purifie le résidu par chromatographie flash sur silice avec un éluant heptane/acétate d'éthyle 80 : 20.
On récupère 0,8g de produit.
Rendement = 32,2 %.
Exemple 6 : 4 , 5, 6, 7-tétrahydro-2H-benzimidazole
A 50 g (0,377 mol) de 2 chloro-cyclohexanone placé dans un tricol de 1 litre on rajoute 400 ml de formamide puis chauffe
le mélange à 180°C pendant 2h30.
Le milieu revenu à température ambiante est jeté sur une solution de soude IN (380 ml) . Ce milieu est alors placé dans un extracteur en continu liquide-liquide et extrait avec 400 ml d'acétate d'éthyle pendant 6h. La phase organique est sèchée sur MgS04 concentrée sous vide puis purifiée sur colonne de silice en utilisant un gradient (methanol de 5 à 10 % dans le dichlorométhane). On obtient 10,2 g de produit sous forme de gomme . Rendement = 22 %.
Exemple 7 : l-phényl-4 , 5, 6, 7-tétrahydro-2H-benzimidazole
250 mg (2 mmol) de 4 , 5, 6, 7-tétrahydrobenzimidazole, 1,1 g (2,5 mmol) de triphenyl bismuth, 363 mg (2 mmol) d'acétate de cuivre et 203 mg (2 mmol) de triéthylamine sont agités dans 5 ml de dichlorométhane à température ambiante pendant 24 heures. On ajoute alors 2 grammes de silice puis concentre le milieu sous pression réduite. La poudre obtenue est déposée sur un gel de silice et le produit attendu est élue par un mélange dichlorométhane/méthanol/ammoniaque (95/5/0,5). On obtient 315 mg (79,5 %) de l-phényl-4 , 5, 6, 7-tétrahydro-2H- benzimidazole .
Exemple 8 : 1-phenyl-2-méthylthio-4, 5, 6, 7-tétrahydro-lH- benzimidazole
Dans un tricol de 100 ml sous azote on place 2,36 g (12 mmol) de l-phényl-4,5, 6, 7-tétrahydro-lH-benzimidazole, rajoute 20 ml de tetrahydrofurane, puis refroidit le mélange à -78°C. On additionne alors lentement 9 ml (14,3 mmol) d'une solution de butyllithium 1,6 N dans l'hexane. On agite à -80°C pendant 5 minutes puis laisse remonter à -20°C et agite encore 45 minutes à cette température. Le milieu réactionnel est alors refroidit à -80°C et on y introduit au goutte-à-goutte une solution de 2,24 g (24 mmol) de diméthyldisulfure dilué dans 10 ml de tetrahydrofurane. L'addition terminée, on laisse revenir à température ambiante. On refroidit alors à 0°C avant d'introduire doucement 15 ml d'eau puis 15 ml d'acétate
d'éthyle. Les phases sont séparées puis on extrait 2 fois la phase aqueuse avec 10 ml d'acétate d'éthyle. Les phases organiques regroupées sont lavées 2 fois avec 10 ml d'eau, 1 fois avec 5 ml de saumure puis sèchées sur MgS04 et concentrées sous vide. Le brut de réaction est purifié sur gel de silice en utilisant comme solution éluante un gradient de 1 à 2 % de methanol dans le dichlorométhane. On obtient 2,17 g de
1-phenyl-2-méthylthio-4 , 5,6, 7-tétrahydrobenzimidazole . Rendement = 74 % (F = 112°) .
Exemple 9 : l-phényl-2-méthylsulfonyl-4 , 5, 6, 7-tétrahydro-lH- benzimidazole
3,8 g d'alumine préalablement humidifiée, 7,07 g (11,5 mmol) d'oxone et 10 ml de chloroforme sont vigoureusement agités. On ajoute à ce milieu une solution de 0,9 g (3,7 mmol) de 1-phenyl-2-méthylthio-4 ,5,6, 7-tétrahydro-lH-benzimidazole solubilisé dans 10 ml de chloroforme puis poursuit l'agitation en portant au reflux pendant 2 heures.
On refroidit à 0°C puis filtre le mélange, rince le solide avec 10 ml de chloroforme et 10 ml d'un mélange THF/CH3OH
9/1.
Le filtrat est concentré sous pression réduite puis purifié sur colonne de silice à l'aide d'un mélange dichlorométhane/méthanol 99/1 puis 98/2. On obtient 0,65 g de produit.
Rendement = 62 % .
Exemple 10 : Fumarate de 1-phenyl-2 - [ [1- (phénylméthyl) pipéridin-4-yl]méthoxy] -4,5,6, 7-tétrahydro-lH-benzimidazole
0,031g (1,33 mmol) d'hydrure de sodium à 60 % et 0,25g de 1- benzyl-4 pipéridine methanol sont chauffés progressivement à 70°C dans 0,5 ml de diméthylformamide jusqu'à fin du dégagement d'hydrogène. On refroidit à 0° et on additionne 0,23g (1 mmol) de 2-chloro- l-phényl-4, 5, 6, 7-tétrahydro-lH- benzimidazole en solution dans 0,5 ml de diméthylformamide . On chauffe à 100° pendant 10 heures, rajoute de l'eau et
extrait le composé au chlorure de méthylène. Après concentration on purifie sur gel de silice avec un mélange
CH2Cl2/CH3OH/NH4OH 97 : 3 : 0,3.
On récupère 0,15g d'huile épaisse qui est salifiée sous forme de fumarate dans l'alcool.
Rendement = 19,6 % (F = 102°)
Exemple 11 : 1-phenyl -2- (pipéridin-4-ylméthoxy) -4 , 5, 6, 7- tétrahydro- IH-benzimidazole
0,98g (2,44 mmol) de 1-phényl- [ [1- (phénylméthyl)pipéridin-4- yljméthoxy] -4, 5, 6, 7-tétrahydro-lH-benzimidazole sont mis en suspension dans 20 ml de methanol et additionnés successivement de 1,54g (2,44 mmol) de formiate d'ammonium et 0,75g de palladium à 10 % sur charbon. On porte à ébullition pendant 1 heure, filtre, concentre sous vide. On reprend par de la soude 5N, extrait avec du chlorure de méthylène, sèche sur Na2S04. Après concentration, on récupère 0,55g de produit. Rendement = 72 %.
Exemple 12 : Fumarate de l-phényl-2- [ [1- (3- hydroxyphényl éthyl) pipéridin-4-yl]méthoxy] -4,5,6,7- tétrahydro- 1H-benzimidazole.
On agite à 75° pendant 15 heures un mélange de 0,55g (1,176 mmol) de 1-phenyl-2- (pipéridin-4-ylméthoxy) -4,5, 6,7- tétrahydro-1H-benzimidazole 0,12 g (0,88 mmol) de chlorure de 3-hydroxybenzyle dans 6 ml de diméthylformamide. On verse sur de l'eau, extrait avec du chlorure de méthylène, sèche sur Na2S04, évapore à sec.
On purifie sur gel de silice le composé attendu en éluant avec un mélange CH2Cl2/CH3OH/NH4OH 97 : 3 : 0,3. On fait le fumarate dans l'alcool. Rendement = 15 % (F = 149°)
Exemple 13 : N-phényl-N' -propargylurée
A une suspension de 50 ml (0,45 mol) d'isocyanate de phényle dans 160 ml de toluène, on ajoute goutte à goutte 25g (0,45 mol) de propargylaminé en solution dans 80 ml de toluène. On agite le mélange pendant lh30, filtre le précipité, lave avec un peu de toluène puis sèche à l'étuve sous vide à 40°. On obtient 70,7g de produit. (F = 133°) .
Exemple 14 : 1, 3-dihydro-5-méthyl-l-phényl-2H-imidazol-2-one
A une suspension de 10g (0,062 mol) de N-phényl-N' - propargylurée dans 140 ml de toluène, on ajoute 0,8 ml de méthylate de sodium 5,35N.
On porte à la température du reflux pendant 4 heures.
On évapore le solvant puis reprend le résidu solide avec de
1 ' acétone .
Le produit précipite, on filtre, lave avec un peu d'acétone, sèche sous vide à 50°.
On obtient 6g de produit. (F = 207°) .
Exemple 15 : 1- (2-hydroxyphényl) -2- [ [1- (phénylméthyl) pipéridin-4-yl]méthoxy] -1H-imidazole
A une solution de 0,5 g (1,32 mmol) de 1- (2-méthoxyphényl) -2- [ [1- (phénylméthyl) pipéridin-4-yl]méthoxy] - 1H-imidazole dans 15ml de dichlorométhane on ajoute lentement, à 0°C, 2,7 ml d'une solution d'acide chlorhydrique (0,5 N) dans l' isopropanol . Les solvants sont éliminés par évaporation, puis on reprend par 15 ml de dichlorométhane. On refroidie la solution à -15°C et on ajoute lentement 1,05 ml de tribromure de brome. On agite le milieu réactionnel pendant 3h30 en laissant la température revenir à 20°C. On jette le mélange réactionnel sur de la glace et ajoute du bicarbonate de sodium jusqu'à l'obtention d'un pH =8. Après décantation, la phase aqueuse est extraite deux fois à l'acétate d'éthyle et les phases organiques réunies sont lavées avec de l'eau puis
de la saumure. On sèche sur sulfate de magnésium, filtre et concentre .
On purifie sur gel de silice le composé attendu en éluant avec un mélange CH2Cl2/CH3OH 99 : 1 à 93/7. On obtient 0.355 g de produit. (Rendement 74%)
Exemple 16 : 1- (2-méthoxyphényl) -2-méthylthio-lH-imidazole
On additionne sous azote 8,8 ml (0,065 mol) d'aminoacétaldéhyde-diéthylacétal dilué dans 15 ml de toluène à une solution de 10 g (0,065 mol) de 2- méthoxyphénylisothiocyanate dans 105 ml de toluène. Le mélange réactionnel est agité pendant lh30 à température ambiante. On ajoute 2,75 ml (0,030 mol) d'acide chlorhydrique à 35 % et on agite pendant 2 heures sous reflux. On concentre le mélange et on ajoute de l'eau et triture le précipité. On essore, lave par un mélange éther/n-heptane et sèche sur P205 durant une nuit .
On obtient ainsi 8,18g de l-(2- éthoxyphényl) imidazoline-2-thione
On ajoute goutte à goutte, sous azote à 0°C, une solution de
8,1 g (0,039 mol) de cette l-(2- méthoxyphényl) imidazoline-2-thione dans 88 ml de diméthylformamide à une suspension de 1,19 g (0,047 mol) d'hydrure de sodium (95%) dans 88 ml de diméthylformamide anhydre. Le mélange réactionnel est agité pendant 3/4h à 0°C. On ajoute 2,7 ml (0,043 mol) d'iodure de méthyle préalablement dilué dans 24 ml de diméthylformamide et on agite pendant 1 heure à 0°C.
On jette le mélange réactionnel sur de la glace, on extrait par trois fois avec de l'acétate d'éthyle et lave deux fois avec de l'eau puis de la saumure. On sèche sur sulfate de magnésium, on filtre et on concentre. On obtient 8,6 g d'huile
Le tableau qui suit illustre les structures chimiques et les propriétés physiques de certains composés de formule (I) selon l'invention.
Tableau
(I)
1) Composés de formule (I) dans laquelle A =
R'3 = R'4 = -H, R5 = phényle, R6 = phényle, R7 = -H
*De la même manière les composés pour lesquels R1# R2 et R3 = H et R4 = 2-CH3, F, CN ou CF3; ou 3-F, CN, OCH3 ou CF3 ; OU 4-CH3, F, OCH3 ou CF3 ont été synthétisés.
2) Composés de formule (I) dans laquelle A = N— R3 et R'3 = -H, R5 = phényle, R6 = phényle, R7 = -H .
3) Composés de formule (I) dans laquelle A = —<^ N— R4 et R'4 = H, R5 = phényle, R6 ≈ phényle, R7 = -H.
4) Composés de formule (I) dans laquelle A = N— R5 = pyridine, R6 = phényle, R7 ≈ -H.
5) Composés de formule (I) dans laquelle A
R5 = phényle, R7 = -H.
6) Composés de formule (I) dans laquelle A = R5 = phényle, R6 = phényle, R7 = -H.
7) Composés de formule (I) dans laquelle A = R5 = phényle, R6 ≈ phényle, R7 = -H. ^
8) Composés de formule (I) dans laquelle A = R5 = phényle, R6 = phényle, R7 = -CH3.
Les composés de l'invention ont fait l'objet d'essais pharmacologiques qui ont montré leur intérêt comme substances actives en thérapeutique.
Ils ont en particulier été testés quant à leurs effets inhibiteurs de la liaison de la [3H] -N-méthyl-scopolamine avec les récepteurs muscariniques de type M3 humains transfectés dans des cellules CHO (chinese hamster ovarian cells) (Buckley et al., Mol. Pharmacol . 35 : 469-476, 1989).
Des membranes de cellules CHO, en solution dans un tampon TRIS- HC1 lOmM, EDTA 2 M pH 7,2, exprimant le sous-type de récepteur muscarinique humain M3 ont été fournis par la société Receptor Biology (Baltimore, USA) .
10 à 30 μg de membranes ont été incubées dans un tampon phosphate, pH 7,4 (Sigma, St Louis, MO) en présence de 0,5 nM de [3H] N-méthyl-scopolamine (NEN-Dupont, les Ulis, France) , et d'un composé de l'invention, dans un volume total de 1 ml. La non-spécificité de la liaison a été déterminée par 0,5 μM d'atropine (Sigma, St Louis, Mo). L'incubation (60 min à 25°C) a été stoppée par une filtration rapide sur filtres Whatmann GF/B par un dispositif de filtration Brandel. Les filtres ont été lavés trois fois par 4 ml de tampon phosphate froid, séchés et la radioactivité a été mesurée par scintillation liquide (scintillant Ultima Gold) . La concentration de composé déplaçant de 50% la liaison spécifique (IC50) a été utilisée pour calculer les valeurs de Ki selon l'équation de Cheng- Prusoff. L'efficacité de chaque produit étudié est exprimée par le logarithme négatif de leur Ki (pKi) .
Les CI50 des composés de l'invention vis-à-vis des récepteurs M3 se situent entre 1 et 350 nM.
Les composés de l'invention ont également été étudiés quant à leurs effets antagonistes vis-à-vis des contractions du détrusor de lapin femelle, médiées par les récepteurs M3. Des lapins femelles (Néo-Zélandais, 3-4Kg ; fournisseur ESD) âgés de 20 semaines environ ont été sacrifiés par dislocation cervicale puis exsanguinés . Après ouverture de l'abdomen, les vessies ont été prélevées puis mises rapidement dans une
solution de Krebs bicarbonatée de composition (mM) : NaCl : 114 ; KC1 : 4,7 ; CaCl2 : 2,5 ; MgS04 : 1,2 ; KH2P04 : 1,2 ; NaHC03 : 25, ; acide ascorbique : 1,1 ; glucose : 11,7. Du propranolol (lμM) , du méthylsergide (lμM) , de 1 ' ondansetron (lμM) , du GR113808 (lμM) ont été ajoutés au Krebs afin d'inhiber respectivement les récepteurs β-adrénergiques et les différents sous-types de récepteurs sérotoninergiques 5-HTx/5-HT2, 5-HT3 et 5-HT4. Les vessies ont été nettoyées, dégraissées puis chaque face a été découpée en deux lambeaux longitudinaux d'environ 4 mm de large et 15 mm de long. Les tissus ont été ensuite placés dans des cuves de 20 ml thermostatées à 37°C sous aération carbogène (95 % 02, 5% C02) et ont été soumis à une tension basale de lg. La tension a été mesurée par l'intermédiaire de jauges isométriques (Hugo Sacks, type 351) reliées à des coupleurs (Gould) qui transforment et amplifient les réponses qui seront tracées sur des enregistreurs potentiométriques 4 pistes (Gould) et reliées à un système d'acquisition de données (Jad, Notocord) . Un temps d'équilibration d'environ 45 minutes a été observé pendant lequel le Krebs est renouvelé et la tension basale rectifiée.
Après une période d'équilibration de 30 minutes, une contraction initiale au carbachol (lμM) , puissant agoniste muscarinique, a été réalisée. Les tissus ont été ensuite rincés abondamment puis après une nouvelle période d'équilibration de 30 minutes, les tissus ont été incubés 30 minutes en présence ou non d'un composé de l'invention à étudier (concentration 0,1 ou 1 μM) avant la réalisation d'une gamme concentration - réponse au carbachol par intervalle d'une demie unité de logarithme .
Les concentrations produisant la moitié de l'effet maximal (EC50 (μM) ) ont été calculées pour chaque gamme (absence ou présence du composé à étudier) , puis la puissance du composé à déplacer la courbe de réponse au carbachol a été déterminée par un calcul de l'affinité de l'antagoniste (pKb ou pA2 apparent) selon la méthode de Furchgott (Handbook of Expérimental Pharmacology, 1972, 283-335) .
Les pKb des composés de l'invention se situent entre 7 et 9,5.
Les composés de l'invention ont également été étudiés quant à leur affinité vis-à-vis des récepteurs 5-HT4 dans le striatum de cobaye, selon la méthode décrite par Grossman et coll., dans Br. J. Pharmacol., 109, 618-624 (1993).
On euthanasie des cobayes (Hartley, Charles River) de 300 à 400 g et on prélève leur cerveau. On excise les striata et on les congèle à -80°C. Le jour de l'expérience, on décongèle le tissu à +4°C dans 33 volumes de tampon Hépès-NaOH 50 mM (pH=7,4 à 20°C) et on l'homogénéise à l'aide d'un broyeur Polytron®. On centrifuge l'homogénat pendant 10 minutes à 48000xg, on récupère le culot, on le remet en suspension et on le centrifuge de nouveau dans les mêmes conditions. On suspend le culot final dans du tampon Hépès-NaOH (30 mg de tissu frais/ml) . Cette suspension membranaire est utilisée telle quelle.
On incube 100 μl de la suspension membranaire à 0°C pendant 120 minutes, en présence de 0,1 nM de [3H]GR113808 (activité spécifique : 80-85 Ci/mmol) , dans un volume final de 1 ml de tampon Hépès-NaOH (50 mM, pH = 7,4), en l'absence ou en présence du composé à tester. On arrête l'incubation par filtration sur filtres hatman GF/B®, préalablement traités avec de la polyéthylèneimine 0,1 %, on rince chaque tube par 4ml de tampon à 0°C et on filtre de nouveau. On mesure la radioactivité retenue sur les filtres, par scintigraphie liquide. On détermine la liaison non spécifique en présence de sérotonine 30 μM.
La liaison spécifique représente 90 % de la radioactivité totale récupérée sur le filtre.
Pour chaque concentration de composé étudié, on détermine le pourcentage d'inhibition de la liaison spécifique du
[3H]GR118808 puis la concentration du composé testé qui inhibe
50 % de la liaison spécifique (CI50) .
Les CI50 des composés de l'invention se situent entre 1 et 350 nM.
Enfin, les composés de l'invention ont été étudiés quant à leurs effets antagonistes vis-à-vis des récepteurs 5-HT4 dans 1 ' oesophage de rat .
On utilise des rats mâles Sprague-Dawley pesant de 300 à 450 g. On prélève rapidement un fragment d'environ 1,5 cm de la partie terminale de l'oesophage, on élimine la couche musculaire, on ouvre longitudinalement la tunique muqueuse musculaire interne, on la monte dans une cuve à organe isolé contenant une solution de Krebs-Henseleit à 32°C oxygénée par un courant carbogène (95 % 02 et 5% C0 ) , et on la connecte à un transducteur isométrique sous une tension basale de 0,5 g. Les composés sont étudiés à une concentration de 1 μM. On mesure leur capacité à déplacer la relaxation introduite par la 5-HT (à des concentrations de 0,1 nM) du tissu oesophagien précontracté à la substance P lμM. Les composés de l'invention sont actifs dans ce test.
Les résultats des tests biologiques montrent que les composés de l'invention sont des antagonistes des récepteurs muscariniques M3 et sérotoninergiques 5-HT4.
Ils peuvent donc être utilisés dans le traitement du syndrome du colon irritable, des troubles de la mémoire, de l'obstruction des voies aériennes et des instabilités vésicales, en particulier l'incontinence urinaire d'urgence.
Les composés de l'invention, en association avec des excipients appropriés, pharmaceutiquement acceptables, peuvent être présentés sous toutes formes convenant à une administration orale ou parentérale, telles que comprimés, dragées, gélules, capsules, suspension ou solutions buvables ou injectables, et dosées pour permettre une administration de 0,1 à 50 mg/kg par jour.