EA039591B1 - Способ получения осушенных микробных клеток - Google Patents
Способ получения осушенных микробных клеток Download PDFInfo
- Publication number
- EA039591B1 EA039591B1 EA201891064A EA201891064A EA039591B1 EA 039591 B1 EA039591 B1 EA 039591B1 EA 201891064 A EA201891064 A EA 201891064A EA 201891064 A EA201891064 A EA 201891064A EA 039591 B1 EA039591 B1 EA 039591B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- microbial cells
- cells
- dispersion medium
- drying
- antioxidant
- Prior art date
Links
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 title claims abstract description 47
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract 3
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 claims abstract description 36
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims abstract description 20
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims abstract description 20
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 claims abstract description 20
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 claims abstract description 20
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 claims abstract description 20
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 18
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims abstract description 11
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 235000013923 monosodium glutamate Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M sodium ascorbate Substances [Na+].OC[C@@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M 0.000 claims abstract description 6
- 235000010378 sodium ascorbate Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 229960005055 sodium ascorbate Drugs 0.000 claims abstract description 6
- PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M sodium-L-ascorbate Chemical compound [Na+].OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M 0.000 claims abstract description 6
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims abstract description 5
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 20
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 8
- LPUQAYUQRXPFSQ-DFWYDOINSA-M monosodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O LPUQAYUQRXPFSQ-DFWYDOINSA-M 0.000 claims description 8
- 239000004223 monosodium glutamate Substances 0.000 claims description 8
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 claims description 7
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 claims description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 5
- 230000008520 organization Effects 0.000 claims 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 abstract description 27
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 17
- 230000007774 longterm Effects 0.000 abstract description 6
- PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L disodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC([O-])=O PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L 0.000 abstract 1
- 229940073490 sodium glutamate Drugs 0.000 abstract 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 16
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 description 14
- 235000013958 Lactobacillus casei Nutrition 0.000 description 13
- 229940017800 lactobacillus casei Drugs 0.000 description 13
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 10
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000012733 comparative method Methods 0.000 description 8
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 7
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 6
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- 229940123973 Oxygen scavenger Drugs 0.000 description 5
- 238000007872 degassing Methods 0.000 description 5
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 5
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 5
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 5
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 5
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 5
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 4
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 3
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 3
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 3
- ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N catechin Natural products OC1Cc2cc(O)cc(O)c2OC1c3ccc(O)c(O)c3 ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000005487 catechin Nutrition 0.000 description 3
- 229950001002 cianidanol Drugs 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 3
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 3
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 3
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 3
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 2
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000199885 Lactobacillus bulgaricus Species 0.000 description 2
- 235000013960 Lactobacillus bulgaricus Nutrition 0.000 description 2
- 241000194034 Lactococcus lactis subsp. cremoris Species 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 235000014962 Streptococcus cremoris Nutrition 0.000 description 2
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- NRNCYVBFPDDJNE-UHFFFAOYSA-N pemoline Chemical compound O1C(N)=NC(=O)C1C1=CC=CC=C1 NRNCYVBFPDDJNE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 2
- PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N (+)-catechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- JEBFVOLFMLUKLF-IFPLVEIFSA-N Astaxanthin Natural products CC(=C/C=C/C(=C/C=C/C1=C(C)C(=O)C(O)CC1(C)C)/C)C=CC=C(/C)C=CC=C(/C)C=CC2=C(C)C(=O)C(O)CC2(C)C JEBFVOLFMLUKLF-IFPLVEIFSA-N 0.000 description 1
- 241000186012 Bifidobacterium breve Species 0.000 description 1
- 241001608472 Bifidobacterium longum Species 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- IMQLKJBTEOYOSI-GPIVLXJGSA-N Inositol-hexakisphosphate Chemical compound OP(O)(=O)O[C@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H]1OP(O)(O)=O IMQLKJBTEOYOSI-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 150000000996 L-ascorbic acids Chemical class 0.000 description 1
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 description 1
- 235000013956 Lactobacillus acidophilus Nutrition 0.000 description 1
- 241001647786 Lactobacillus delbrueckii subsp. delbrueckii Species 0.000 description 1
- 241000186840 Lactobacillus fermentum Species 0.000 description 1
- 241000186606 Lactobacillus gasseri Species 0.000 description 1
- 240000002605 Lactobacillus helveticus Species 0.000 description 1
- 235000013967 Lactobacillus helveticus Nutrition 0.000 description 1
- 241001468157 Lactobacillus johnsonii Species 0.000 description 1
- 241000186869 Lactobacillus salivarius Species 0.000 description 1
- 241000194041 Lactococcus lactis subsp. lactis Species 0.000 description 1
- 241000194038 Lactococcus plantarum Species 0.000 description 1
- 241000194037 Lactococcus raffinolactis Species 0.000 description 1
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- IMQLKJBTEOYOSI-UHFFFAOYSA-N Phytic acid Natural products OP(O)(=O)OC1C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C1OP(O)(O)=O IMQLKJBTEOYOSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014969 Streptococcus diacetilactis Nutrition 0.000 description 1
- 244000057717 Streptococcus lactis Species 0.000 description 1
- 235000014897 Streptococcus lactis Nutrition 0.000 description 1
- 241000194020 Streptococcus thermophilus Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- BZHJMEDXRYGGRV-UHFFFAOYSA-N Vinyl chloride Chemical compound ClC=C BZHJMEDXRYGGRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000013793 astaxanthin Nutrition 0.000 description 1
- 229940022405 astaxanthin Drugs 0.000 description 1
- MQZIGYBFDRPAKN-ZWAPEEGVSA-N astaxanthin Chemical compound C([C@H](O)C(=O)C=1C)C(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)C(=O)[C@@H](O)CC1(C)C MQZIGYBFDRPAKN-ZWAPEEGVSA-N 0.000 description 1
- 239000001168 astaxanthin Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 229940009291 bifidobacterium longum Drugs 0.000 description 1
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 1
- 235000015155 buttermilk Nutrition 0.000 description 1
- 235000010376 calcium ascorbate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011692 calcium ascorbate Substances 0.000 description 1
- 229940047036 calcium ascorbate Drugs 0.000 description 1
- BLORRZQTHNGFTI-ZZMNMWMASA-L calcium-L-ascorbate Chemical compound [Ca+2].OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-].OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] BLORRZQTHNGFTI-ZZMNMWMASA-L 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 1
- 239000007910 chewable tablet Substances 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 1
- 235000015140 cultured milk Nutrition 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- WDRWZVWLVBXVOI-QTNFYWBSSA-L dipotassium;(2s)-2-aminopentanedioate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC([O-])=O WDRWZVWLVBXVOI-QTNFYWBSSA-L 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 235000003969 glutathione Nutrition 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000007902 hard capsule Substances 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 229940039695 lactobacillus acidophilus Drugs 0.000 description 1
- 229940004208 lactobacillus bulgaricus Drugs 0.000 description 1
- 229940012969 lactobacillus fermentum Drugs 0.000 description 1
- 229940054346 lactobacillus helveticus Drugs 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000012792 lyophilization process Methods 0.000 description 1
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 235000020124 milk-based beverage Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 235000013919 monopotassium glutamate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000467 phytic acid Substances 0.000 description 1
- 229940068041 phytic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000002949 phytic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 235000013580 sausages Nutrition 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000007901 soft capsule Substances 0.000 description 1
- 235000014214 soft drink Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- RYCLIXPGLDDLTM-UHFFFAOYSA-J tetrapotassium;phosphonato phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O RYCLIXPGLDDLTM-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/04—Preserving or maintaining viable microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/125—Casei
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
Изобретение относится к дисперсионной среде для сушки микробных клеток, представляющей собой водный раствор, содержащий глутамат натрия и трегалозу в качестве протективных агентов, аскорбат натрия в качестве антиоксиданта и цитрат натрия в качестве хелатообразующего агента. Целью изобретения также является разработка способа получения осушенных микробных клеток с высокой степенью жизнеспособности после их длительного хранения при высокой температуре. Способ получения осушенных микробных клеток, который позволяет достичь вышеупомянутой цели, отличается тем, что микробные клетки суспендируют в дисперсионной среде, содержащей протективный агент, антиоксидант и хелатообразующий агент, с последующей сушкой полученной суспензии.
Description
Область, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к способу получения осушенных микробных клеток, а более конкретно, к способу получения осушенных микробных клеток с высокой степенью жизнеспособности после длительного хранения при высокой температуре.
Предпосылки создания изобретения
Молочнокислые бактерии, известные как кишечные бактерии, широко используются, главным образом, для приготовления молочных продуктов, таких как йогурт и сыр, а также для приготовления пищевых продуктов, напитков и т.п. с использованием осушенных молочнокислых бактерий, которые все чаще применяются в последнее время. При этом для достижения эффекта молочнокислых бактерий желательно использовать живые микробные клетки, однако при проведении стадии получения осушенных микробных клеток эти клетки часто разрушаются и погибают, а поэтому достаточно трудно получить жизнеспособные клетки в необходимом количестве.
Кроме того, известно, что для снижения степени повреждения или гибели микробных клеток большое значение имеет компонент, содержащийся в дисперсионной среде, используемой при сушке микробных клеток, и в настоящем изобретении описано, например, добавление глутамата натрия (PTL 1) или трегалозы (NPL 1) в дисперсионную среду или использование комбинации этих компонентов (PTL 2).
С другой стороны, при рассмотрении аспекта распределения осушенных микробных клеток необходимо получить осушенные клетки, степень выживаемости которых поддерживается на высоком уровне в течение длительного периода времени даже при хранении клеток в течение длительного периода времени при нормальной температуре (20-40°С). Обычно считается, что по мере повышения температуры разложение продукта во время хранения ускоряется даже в пределах нормальных температур, а в частности, важное значение имеет сохранение качества продукта при высокой температуре (30-40°С).
Список цитируемой литературы
Патентная литература.
PTL 1: Японский патент No. 3504365.
PTL 2: JP-A-2010-4787.
Непатентная литература.
NPL 1: G.L. DE ANTONI et al., Trehalose, a Cryoprotectant for Lactobacillus bulgaricus, Cryobiology 26, p. 149-153, 1989.
Сущность изобретения Техническая проблема
В соответствии с этим целью настоящего изобретения является разработка способа получения осушенных микробных клеток с высокой степенью жизнеспособности после длительного хранения при высокой температуре.
Решение проблемы
Авторами настоящего изобретения были проведены интенсивные исследования для достижения вышеупомянутой цели, в результате чего авторами было обнаружено, что степень выживаемости жизнеспособных клеток после длительного хранения при высокой температуре повышается, если перед сушкой микробных клеток проводят предварительное суспендирование микробных клеток в дисперсионной среде, содержащей комбинацию протективного агента, антиоксиданта и хелатообразующего агента, а затем их сушку, и на этом основано настоящее изобретение.
То есть, настоящее изобретение относится к способу получения осушенных микробных клеток, заключающемуся в суспендировании микробных клеток в дисперсионной среде, содержащей протективный агент, антиоксидант и хелатообразующий агент, с последующей сушкой этих клеток.
Кроме того, настоящее изобретение относится к осушенным микробным клеткам, которые были получены путем сушки микробных клеток с использованием дисперсионной среды, содержащей протективный агент, антиоксидант и хелатообразующий агент.
Кроме того, настоящее изобретение относится к дисперсионной среде для сушки микробных клеток, содержащей протективный агент, антиоксидант и хелатообразующий агент.
Преимущественные эффекты изобретения
В соответствии со способом согласно изобретению были получены осушенные микробные клетки с высокой степенью выживаемости жизнеспособных клеток даже при хранении этих клеток при высокой температуре в течение длительного периода времени. Следовательно, осушенные микробные клетки, полученные способом согласно изобретению, являются превосходными с точки зрения их распределения и хранения.
Описание вариантов осуществления изобретения
Микроорганизмы, из которых получают осушенные микробные клетки способом согласно изобретению, не имеют конкретных ограничений, однако примерами таких как микроорганизмов являются бактерии Lactobacillus, такие как Lactobacillus casei, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus cremoris, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus yoghurti, Lactobacillus delbrueckii подвид bulgaricus, Lactobacillus delbrueckii подвид delbrueckii, Lactobacillus johnsonii и Lactobacillus mail, бифидобактерии, такие как Bifidobacterium
- 1 039591 bifidum, Bifidobacterium breve и Bifidobacterium longum, стрептококковые бактерии, такие как Streptococcus thermophilus и Streptococcus lactis, лактококковые бактерии, такие как Lactococcus lactis подвид lactis, Lactococcus lactis подвид cremoris, Lactococcus plantarum и Lactococcus raffinolactis, и энтерококковые бактерии, такие как Enterococcus faecalis и Enterococcus faecium, и среди этих бактерий могут быть использованы бактерии одного вида или двух или более видов. Предпочтительными примерами являются бактерии Lactobacillus, более предпочтительной является Lactobacillus casei, а особенно предпочтительной является Lactobacillus casei YIT 9029 (FERM BP-1366, дата депонирования: 1 мая 1981 г., Международный Депозитарий патентованных микроорганизмов, Национальный Институт технологии и анализа (#120, 2-5-8 Kazusakamatari, Kisarazu-shi, Chiba-ken, 292-0818, Japan).
При осуществлении способа согласно изобретению сначала микроорганизм культивируют стандартным методом, а затем клетки собирают, например, на центрифуге де Лаваля или т.п., после чего их промывают, если это необходимо.
Собранные таким образом микробные клетки добавляют в дисперсионную среду, которая представляет собой водный раствор, содержащий протективный агент, антиоксидант и хелатообразующий агент (далее эта среда будет называться просто дисперсионной средой согласно изобретению), и суспендируют в этой среде, а затем полученную суспензию сушат, в результате чего могут быть получены осушенные микробные клетки-мишени. Растворители для дисперсионной среды не имеют конкретных ограничений, однако, может быть использована, например, питьевая вода, такая как очищенная вода или деионизованная вода. Дисперсионной средой согласно изобретению является дисперсионная среда для сушки микробных клеток, содержащая протективный агент, антиоксидант и хелатообразующий агент. Кроме того, предпочтительной дисперсионной средой является дисперсионная среда, состоящая из протективного агента, антиоксиданта и хелатообразующего агента.
Протективный агент, используемый в дисперсионной среде согласно изобретению, не имеет конкретных ограничений, однако могут быть использованы, например, глутаминовая кислота или ее соль, дисахарид, глицерин, мальтодекстрин, циклодекстрин, порошкообразное сепарированное молоко или т.п., предпочтительно использовать глутаминовую кислоту или ее соль и/или дисахарид, причем предпочтительными примерами соли глутаминовой кислоты являются глутамат натрия и глутамат калия, особенно глутамат натрия. Примерами дисахаридов являются трегалоза, сахароза, лактоза и мальтоза, предпочтительно трегалоза. Кроме того, предпочтительными являются глутамат натрия и/или дисахарид, более предпочтительными являются глутамат натрия и/или трегалоза. Содержание протективного агента в дисперсионной среде согласно изобретению составляет предпочтительно от 1 до 40 мас.% (далее обозначаемое в %), более предпочтительно от 5 до 30%.
Кроме того, антиоксидант, используемый в дисперсионной среде согласно изобретению, не имеет конкретных ограничений, однако могут быть использованы, например, аскорбиновая кислота или ее соль, витамин Е, катехин, глутатион, астаксантин или т.п., предпочтительными примерами соли аскорбиновой кислоты являются аскорбат натрия и аскорбат кальция, особенно, аскорбат натрия. Содержание антиоксиданта в дисперсионной среде согласно изобретению предпочтительно составляет от 0,01 до 10%, более предпочтительно от 0,05 до 5%.
Кроме того, хелатообразующий агент, используемый в дисперсионной среде согласно изобретению, не имеет конкретных ограничений, однако могут быть использованы, например, этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA), лимонная кислота или ее соль, фитиновая кислота или т.п. Примерами соли лимонной кислоты является, среди прочих, цитрат натрия. Содержание хелатообразующего агента в дисперсионной среде согласно изобретению составляет предпочтительно от 0,1 до 10%, более предпочтительно от 0,5 до 5%.
Кроме того, в качестве дисперсионной среды согласно изобретению предпочтительно использовать водный раствор, содержащий глутамат натрия, трегалозу, аскорбат натрия и цитрат натрия.
Количество микробных клеток в клеточной суспензии, в которой суспендируют микробные клетки в дисперсионной среде согласно изобретению, составляет приблизительно 1,0x105-4,0x1014 к.о.е./мл, более предпочтительно 1,0x107-4,0x1013 к.о.е./мл.
Сушка способом согласно изобретению не имеет конкретных ограничений, и, например, может быть применен известный метод сушки, такой как лиофилизация или сушка распылением, однако для повышения степени выживаемости микробов на стадии сушки предпочтительной является лиофилизация. Примерами условий сушки в способе лиофилизации являются сушка путем заморозки при температуре от -35 до -45°С в течение 6-12 ч, а затем сушка при температуре 12-32°С в течение 40-90 ч. Примером лиофилизатора является лиофилизатор TAKARA FREEZE-DRYER TF20-80 TANNS (TAKARA ATM Ltd.).
Полученные таким образом осушенные микробные клетки (далее называемые осушенными микробными клетками согласно изобретению) имеют высокую степень выживаемости после длительного хранения при высокой температуре, как показано в упомянутых ниже примерах, в частности, в случае, когда осушенные микробные клетки измельчают на мельнице, а затем измельченные клетки загружают в капсулы (состоящие из гидроксипропилметилцеллюлозы) в количестве 0,2 г на капсулу в обычных атмо
- 2 039591 сферных условиях без дегазирования и капсулы помещают в алюминиевый пакет вместе с поглотителем кислорода (изготовленным компанией Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc.) и хранят при 35°С в течение 4 недель, то отношение числа жизнеспособных клеток после хранения к числу жизнеспособных клеток в начале хранения (степень выживаемости) составляет 30% или более. Кроме того, в случае, когда осушенные микробные клетки измельчают на мельнице, а затем измельченные клетки загружают в капсулы (состоящие из гидроксипропилметилцеллюлозы) в количестве 0,2 г на капсулу в обычных атмосферных условиях без дегазирования и капсулы помещают в алюминиевый пакет вместе с поглотителем кислорода (изготовленным компанией Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc.) и хранят в различных условиях, например при 2°С в течение 1 дня, при 35°С в течение 2 дней, при 30°С в течение 6 дней и при 22°С в течение 6 месяцев, при температуре, которая изменялась во время хранения, то степень выживаемости составляет 40% или более.
Осушенные микробные клетки согласно изобретению не обладают высокой плотностью сразу после лиофилизации, а поэтому эти клетки могут быть затем легко измельчены. Кроме того, осушенные микробные клетки обладают хорошей диспергируемостью при их суспендировании в воде, а поэтому лиофилизация этих клеток может быть проведена за короткий период времени. Кроме того, осушенные микробные клетки обладают низкой гигроскопичностью, а поэтому они не образуют агрегатов даже после длительного хранения и могут быть легко транспортированы, а также сохраняют свой внешний вид, цвет, запах и т.п. как и в начале хранения, и являются предпочтительными.
Кроме того, осушенными микробными клетками согласно изобретению являются осушенные микробные клетки, полученные путем сушки микробных клеток с использованием дисперсионной среды, содержащей протективный агент, антиоксидант и хелатообразующий агент. Осушенные микробные клетки могут быть использованы для приготовления пищевых продуктов и напитков либо непосредственно, либо путем смешивания с другим пищевым продуктом, обычно добавляемым в пишу. Примерами пищевых продуктов являются мясные полуфабрикаты, такие как окорок и сосиски, рыбные полуфабрикаты, такие как Камабоко (рулет из отварной рыбной пасты) и Чикува (завернутый в трубочку пирог из отварной рыбной пасты), хлеб, кондитерские изделия, масло и ферментированное молоко, такое как йогурт, а примерами напитков являются безалкогольные напитки, молочные напитки на основе молочнокислых бактерий и напитки на основе молочнокислых бактерий. Кроме того, примерами таких пищевых продуктов и напитков являются обычно используемые формы пищевых продуктов и напитков, например продукты в твердой форме, такие как порошки и гранулы; пасты; жидкости и т.п. Кроме того, осушенные микробные клетки могут быть подвергнуты обработке с получением таблеток, порошков, жевательных таблеток, жестких капсул, мягких капсул, драже и т.п.
Примеры
Настоящее изобретение более подробно описано в нижеследующих примерах, однако настоящее изобретение не ограничивается этими примерами. Кроме того, в нижеследующих примерах число жизнеспособных клеток Lactobacillus casei было определено методом, описанным ниже.
Подсчет жизнеспособных клеток Lactobacillus casei.
Осушенные клетки Lactobacillus casei серийно разводили физиологическим раствором (0,85% NaCl). Разведенный раствор (1 мл) перемешивали и разводили агаровой средой для подсчета клеток в планшете с добавлением ВСР, а затем клетки культивировали при 37°С в течение 72 ч. Затем образовавшиеся колонии подсчитывали и полученное число умножали на коэффициент разведения, полученный результат использовали как число жизнеспособных клеток Lactobacillus casei.
Пример 1.
Получение осушенных клеток Lactobacillus casei (1).
Бактерии Lactobacillus casei YIT 9029 культивировали в анаэробных условиях при 37°С в течение 20 ч в среде (pH 7), содержащей дрожжевой экстракт (1%), монофосфат калия (0,1%), дифосфат калия (0,2%) и лактозу (2%). После завершения культивирования культуральный раствор охлаждали до температуры 20°С или ниже и pH раствора доводили до 7,0 путем добавления 5н. раствора гидроксида натрия. Клетки, полученные путем центрифугирования этого культурального раствора (14000 г, 4°С, 30 мин), собирали. Дисперсионную среду приготавливали в общем объеме 1000 мл, и состав этой среды указан в табл. 1, представленной ниже. Затем клетки суспендировали в дисперсионной среде при 2,0x1011 к.о.е./мл. Клеточную суспензию распределяли по поддонам, и осушенные клетки получали методом лиофилизации. Кроме того, лиофилизацию осуществляли на лиофилизаторе TAKARA FREEZE-DRYER TF20-80 TANNS (TAKARA ATM Ltd.) в условиях хранения при температуре -40°С в течение 9 ч, а затем при температуре 20°С в течение 80 ч. Полученные осушенные клетки измельчали на мельнице, а затем измельченные клетки загружали в капсулы (состоящие из гидроксипропилметилцеллюлозы) в количестве 0,2 г на капсулу в обычных атмосферных условиях без дегазирования и капсулы помещали в алюминиевый пакет вместе с поглотителем кислорода (изготовленным компанией Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc.) и хранили при 35°С в течение 4 недель, а затем подсчитывали число жизнеспособных клеток Lactobacillus casei. Отношение числа жизнеспособных клеток после хранения к числу жизнеспособных клеток в начале хранения (степень выживаемости) указано в табл. 1.
- 3 039591
Таблица 1
| Компоненты дисперсионной среды (%) | Способ 1 согласно изобретен ИЮ | Сравнител ьный способ 1 | Сравнител ьный способ 2 | |
| Протективный агент | Глутамат Na | 10 | 10 | 10 |
| Трегалоза | 10 | 10 | 10 | |
| Декстрин | - | - | 5 | |
| Антиоксидант | Аскорбат Na | 1 | - | - |
| Витамин Е | - | - | - | |
| Катехин | - | - | - | |
| Хелатообразующий агент | Цитрат Na | 1 | - | - |
| Очищенная вода | Остальное | Остальное | Остальное | |
| Степень выживаемости (%) после хранение при 35°С в течение 4 недель | 33 | 22 | 22 |
Способ 1 согласно изобретению, в котором использовалась дисперсионная среда, содержащая протективный агент (глутамат натрия и трегалозу), антиоксидант (аскорбат натрия) и хелатообразующий агент (цитрат натрия), давал более высокую степень выживаемости, чем сравнительный способ 1 и сравнительный способ 2, в котором использовалась дисперсионная среда, не содержащая антиоксиданта или хелатообразующего агента.
Пример 2.
Получение осушенных клеток Lactobacillus casei (2).
Лиофилизованные клетки Lactobacillus easel YIT 9029 получали, как описано в примере 1, за исключением того, что состав дисперсионной среды был изменен, как указано в табл. 2, и клетки помещали в капсулы (состоящие из гидроксипропилметилцеллюлозы) в количестве 0,2 г на капсулу в обычных атмосферных условиях без дегазирования, эти капсулы помещали в алюминиевый пакет вместе с поглотителем кислорода (изготовленным компанией Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc.) и хранили при 35°С в течение 4 недель, а затем подсчитывали число жизнеспособных клеток Lactobacillus casei. Отношение числа жизнеспособных клеток после хранения к числу жизнеспособных клеток в начале хранения (степень выживаемости) указано в табл. 2.
Таблица 2
| Компоненты дисперсионной среды (%) | Способ 1 согласно изобретению | Сравнительн ый способ 3 | Сравнительн ый способ 4 | Сравнительн ый способ 5 | |
| Протективный агент | Глутамат Na | 10 | 10 | 10 | 10 |
| Трегалоза | 10 | 10 | 10 | 10 | |
| Декстрин | - | - | - | - | |
| Антиоксидант | Аскорбат Na | 1 | - | - | - |
| Витамин Е | - | - | 0, 85 | - | |
| Катехин | - | - | - | 0, 05 | |
| Хелатообразующий агент | Цитрат Na | 1 | - | - | - |
| Очищенная вода | Остальное | Остальное | Остальное | Остальное | |
| Степень выживаемости (%) после хранение при 35°С в течение 4 недель | 33 | 27 | 17 | 16 |
- 4 039591
Степень выживаемости в сравнительных способах 3-5, в которых использовалась дисперсионная среда, не содержащая хелатообразующего агента, была ниже, чем в способе 1 согласно изобретению. Исходя из результатов примеров 1 и 2 было обнаружено, что степень выживаемости осушенных клеток, хранящихся в течение длительного периода времени при высокой температуре и полученных с использованием дисперсионной среды, содержащей нижеследующие три компонента: протективный агент, антиоксидант и хелатообразующий агент, была выше, чем в случае использования только протективного агента или только протективного агента и антиоксиданта.
Пример 3.
Получение осушенных клеток Lactobacillus casei (3).
Лиофилизованные клетки Lactobacillus easel YIT 9029 получали способом 1 согласно изобретению, описанным в примере 1, и помещали в капсулы (состоящие из гидроксипропилметилцеллюлозы) в количестве 0,2 г на капсулу в обычных атмосферных условиях без дегазирования, а затем эти капсулы упаковывали в РТР (путем прессования в упаковке, изготовленной из алюминиевого листа и винилхлорида), после чего капсулы в упаковке помещали в алюминиевый пакет вместе с поглотителем кислорода (изготовленным компанией Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc.) и хранили в условиях, указанных в табл. 3, а затем подсчитывали число жизнеспособных клеток Lactobacillus casei. Отношение числа жизнеспособных клеток после хранения к числу жизнеспособных клеток в начале хранения (степень выживаемости) указано в табл. 3. Кроме того, хранение осуществляли в следующих условиях: 2°С, 1 день —> 35°С, 2 дня —> 30°С, 6 дней 22°С, 6 месяцев, и эти условия были выбраны с учетом того, что лиофилизованные клетки транспортировали при 30-35°С, а затем хранили при 22°С. Кроме того, лиофилизованные клетки после хранения обладали низкой гигроскопичностью, не образовывали агрегатов и сохраняли свой внешний вид, цвет, запах и т.п., как и в начале хранения, а поэтому эти клетки являются предпочтительными.
Таблица 3
| 2°С, 1 день —> 35°С, 2 дня —> 30°С, 6 дней —> 22°С, 6 месяцев | 22°С, б месяцев | |
| Степень выживаемости (%) | 39 | 41 |
Было показано, что жизнеспособность клеток была подходящей в следующих условиях хранения: 2°С, 1 день 35°C, 2 дня —> 0°С, 6 дней —> 22°С, 6 месяцев и в условиях хранения при 22°С в течение 6 месяцев, в частности, было показано, что жизнеспособность клеток была подходящей даже в условиях хранения: 2°С, 1 день —> 35°С, 2 дня —> 30°С, 6 дней —> 22°С, 6 месяцев, которые были выбраны с учетом их практического применения.
Промышленное применение
Осушенные микробные клетки, полученные способом согласно изобретению, имеют высокую степень жизнеспособности даже при хранении этих клеток при высокой температуре в течение длительного периода времени. Следовательно, осушенные микробные клетки являются превосходными с точки зрения их распределения и хранения. Кроме того, осушенные микробные клетки, полученные способом согласно изобретению, могут быть использованы для приготовления пищевых продуктов, напитков и т.п.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Claims (5)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Дисперсионная среда для сушки микробных клеток, представляющая собой водный раствор, содержащий глутамат натрия и трегалозу в качестве протективных агентов, аскорбат натрия в качестве антиоксиданта и цитрат натрия в качестве хелатообразующего агента.
- 2. Дисперсионная среда по п.1, где содержание протективного агента, антиоксиданта и хелатообразующего агента составляет от 5 до 30 мас.%, от 0,05 до 5 мас.% и от 0,5 до 5 мас.% соответственно.
- 3. Способ получения осушенных микробных клеток, отличающийся тем, что микробные клетки суспендируют в водной дисперсионной среде по п.1 или 2 с последующей сушкой полученной суспензии.
- 4. Способ по п.3, где микробными клетками являются клетки микроорганизма, принадлежащего к роду Lactobacillus.
- 5. Способ по п.1 или 4, в котором сушку осуществляют методом лиофилизации.Евразийская патентная организация, ЕАПВ
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2015214299 | 2015-10-30 | ||
| PCT/JP2016/082125 WO2017073752A1 (ja) | 2015-10-30 | 2016-10-28 | 微生物乾燥菌体の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201891064A1 EA201891064A1 (ru) | 2019-01-31 |
| EA039591B1 true EA039591B1 (ru) | 2022-02-15 |
Family
ID=58630294
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201891064A EA039591B1 (ru) | 2015-10-30 | 2016-10-28 | Способ получения осушенных микробных клеток |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10844347B2 (ru) |
| EP (1) | EP3369805B1 (ru) |
| JP (2) | JP6823601B2 (ru) |
| CN (1) | CN108271382A (ru) |
| EA (1) | EA039591B1 (ru) |
| WO (1) | WO2017073752A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA201802802B (ru) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110869036A (zh) * | 2017-07-07 | 2020-03-06 | 奥赛尔股份有限公司 | 阴道乳杆菌的高效能稳定制剂 |
| US20210024878A1 (en) * | 2018-04-05 | 2021-01-28 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | Method for producing highly viable dried microbial cells |
| WO2020004933A1 (ko) * | 2018-06-26 | 2020-01-02 | 씨제이제일제당 (주) | 구연산염을 포함하는 유산균 동결 보호용 조성물 |
| JP7178203B2 (ja) * | 2018-08-07 | 2022-11-25 | 株式会社ヤクルト本社 | 乳酸菌凍結乾燥菌体の製造方法 |
| CN109335063A (zh) * | 2018-10-17 | 2019-02-15 | 西北农林科技大学 | 一种微生物固体菌剂的包装方式 |
| CN115335335A (zh) * | 2020-03-24 | 2022-11-11 | 三菱化学株式会社 | 废水处理方法 |
| WO2022239840A1 (ja) * | 2021-05-14 | 2022-11-17 | 日本曹達株式会社 | 植物保護能を有する微生物の保存 |
| CN113603235B (zh) * | 2021-08-18 | 2023-04-21 | 中冶生态环保集团有限公司 | 一种用于ifas/mbbr工艺熟化悬浮载体的保藏方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58107181A (ja) * | 1981-12-18 | 1983-06-25 | Nippon Oil Co Ltd | 微生物生菌体の固定化・増殖法 |
| JP3504365B2 (ja) * | 1995-02-01 | 2004-03-08 | 森永乳業株式会社 | 微生物保護剤及び該保護剤を用いた凍結又は凍結乾燥微生物の製造法 |
| JP2010004787A (ja) * | 2008-06-26 | 2010-01-14 | Kaneka Corp | ラクトバチルス・ブレビス菌の培養方法 |
| JP2013535222A (ja) * | 2010-08-13 | 2013-09-12 | アドバンスド バイオニュートリション コーポレイション | 生体物質用の乾燥貯蔵安定化組成物 |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3897307A (en) | 1974-10-23 | 1975-07-29 | Hansens Lab Inc | Stabilized dry cultures of lactic acid-producing bacteria |
| JP3363438B2 (ja) * | 2000-05-02 | 2003-01-08 | ビオフェルミン製薬株式会社 | 噴霧乾燥による菌体乾燥物 |
| US6653062B1 (en) | 2000-07-26 | 2003-11-25 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Preservation and storage medium for biological materials |
| DK1325749T3 (da) * | 2000-10-13 | 2007-02-12 | Yakult Honsha Kk | Knoglemetabolismeforbedrende middel |
| WO2003087327A2 (en) | 2002-04-11 | 2003-10-23 | Medimmune Vaccines, Inc. | Preservation of bioactive materials by freeze dried foam |
| EP1493806A1 (en) | 2003-07-02 | 2005-01-05 | Chr. Hansen A/S | Use of compounds involved in biosynthesis of nucleic acids as cryoprotective agents |
| JP2005325077A (ja) * | 2004-05-17 | 2005-11-24 | Mitsui Chemicals Inc | シュードモナス属細菌の固定化物及びその固定化方法、及びその固定化物から成る、植物の地上部病害防除剤の製剤化方法 |
| ES2393160T3 (es) | 2007-05-18 | 2012-12-19 | Medimmune, Llc | Conservación de materiales bioactivos con espuma liofilizada |
| CA2760248C (en) | 2009-04-30 | 2019-05-28 | Actogenix Nv | Cryoprotectants for freeze drying of lactic acid bacteria |
| EP2471544B1 (en) * | 2009-10-22 | 2016-05-25 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | Lactobacillus casei for use in reducing risk of developing cancer |
| US7888062B1 (en) | 2010-02-01 | 2011-02-15 | Microbios, Inc. | Process and composition for the manufacture of a microbial-based product |
| JP2011223990A (ja) * | 2010-03-30 | 2011-11-10 | Nippon Soda Co Ltd | 凍結乾燥菌体の製造方法 |
| EP2744888B1 (en) | 2011-08-18 | 2017-12-13 | Chr. Hansen A/S | Method for purifying bacterial cells |
| US20130089638A1 (en) | 2011-10-11 | 2013-04-11 | Mead Johnson Nutrition Company | Compositions Comprising Maltotriose And Methods Of Using Same To Inhibit Damage Caused By Dehydration Processes |
| CN102559539B (zh) | 2011-12-02 | 2015-04-15 | 北京大北农科技集团股份有限公司 | 嗜酸乳杆菌及其应用与饲料添加剂和预混料 |
| CN102978143B (zh) | 2012-12-21 | 2014-04-30 | 哈尔滨工业大学 | 乳杆菌冻干产品及其制备方法 |
-
2016
- 2016-10-28 WO PCT/JP2016/082125 patent/WO2017073752A1/ja active Application Filing
- 2016-10-28 CN CN201680063748.3A patent/CN108271382A/zh active Pending
- 2016-10-28 EP EP16859980.1A patent/EP3369805B1/en active Active
- 2016-10-28 JP JP2017547902A patent/JP6823601B2/ja active Active
- 2016-10-28 US US15/771,728 patent/US10844347B2/en active Active
- 2016-10-28 EA EA201891064A patent/EA039591B1/ru unknown
-
2018
- 2018-04-26 ZA ZA2018/02802A patent/ZA201802802B/en unknown
-
2019
- 2019-10-28 JP JP2019195170A patent/JP6921465B2/ja active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58107181A (ja) * | 1981-12-18 | 1983-06-25 | Nippon Oil Co Ltd | 微生物生菌体の固定化・増殖法 |
| JP3504365B2 (ja) * | 1995-02-01 | 2004-03-08 | 森永乳業株式会社 | 微生物保護剤及び該保護剤を用いた凍結又は凍結乾燥微生物の製造法 |
| JP2010004787A (ja) * | 2008-06-26 | 2010-01-14 | Kaneka Corp | ラクトバチルス・ブレビス菌の培養方法 |
| JP2013535222A (ja) * | 2010-08-13 | 2013-09-12 | アドバンスド バイオニュートリション コーポレイション | 生体物質用の乾燥貯蔵安定化組成物 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ZA201802802B (en) | 2019-02-27 |
| CN108271382A (zh) | 2018-07-10 |
| US10844347B2 (en) | 2020-11-24 |
| US20190062693A1 (en) | 2019-02-28 |
| EP3369805B1 (en) | 2020-08-26 |
| JP2020010725A (ja) | 2020-01-23 |
| JPWO2017073752A1 (ja) | 2018-08-16 |
| EA201891064A1 (ru) | 2019-01-31 |
| JP6921465B2 (ja) | 2021-08-18 |
| EP3369805A1 (en) | 2018-09-05 |
| EP3369805A4 (en) | 2019-06-12 |
| WO2017073752A1 (ja) | 2017-05-04 |
| JP6823601B2 (ja) | 2021-02-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6921465B2 (ja) | 微生物乾燥菌体の製造方法 | |
| EP2016834B1 (en) | Food product comprising bacteria and sorbitan fatty acid | |
| CN107810264A (zh) | 适于保护微生物的组合物 | |
| KR102429539B1 (ko) | 구연산염을 포함하는 유산균 동결 보호용 조성물 | |
| US8889120B2 (en) | Method for constructing novel bacterium belonging to the genus Bifidobacterium | |
| JP7444949B2 (ja) | 乳酸菌用培地 | |
| WO2021256476A1 (ja) | 乳酸菌の胃液・胆汁耐性向上方法 | |
| JP7178203B2 (ja) | 乳酸菌凍結乾燥菌体の製造方法 | |
| Teanpaisan et al. | Survival rates of human-derived probiotic Lactobacillus paracasei SD1 in milk powder using spray drying | |
| KR102290654B1 (ko) | 동결보호용 조성물 및 이를 포함하는 유산균제 | |
| CA3118263A1 (en) | Use of cysteine or salt thereof for cryoprotecting lactic acid bacteria | |
| TWI810246B (zh) | 高存活性微生物乾燥菌體之製造方法 | |
| KR20220089491A (ko) | 프로바이오틱스 배양용 한방 배지 조성물 및 이를 포함하는 발효 조성물 | |
| Olaniyi et al. | Antimicrobial characteristics of lactic acid bacteria in African yam bean-based drink. | |
| EA046292B1 (ru) | Способ получения высокожизнеспособных высушенных микробных клеток | |
| JP2012056921A (ja) | 生菌製剤 | |
| Hermana et al. | Mikroenkapsulasi Strain Probiotik Leuconostoc mesenteroides ssp. cremonis BN12 menggunakan Berbagai Penyalut | |
| Hamsupo et al. | Different growth media and growth phases affecting on spray drying and freeze drying of Lactobacillus reuteri KUB-AC5 | |
| JP2011024437A (ja) | 新規乳酸菌、及びその利用 | |
| Julean et al. | Lyophilisation of Probiotic Bacteria for Inclusion in Poultry Feed | |
| JP2021126061A (ja) | 新規乳酸菌用培地 |