JPS58107181A - 微生物生菌体の固定化・増殖法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、微生物生菌体の固定化・増り［α法に係り、
！侍に、弾力性に富み機械的強度に優れた高含水性ゲル
中に微生物生菌体を包括（捕捉）後、これを効県的に増
殖させる方法に関する。

本発明は、ポリビニルアルコール、微生物生菌体および
特定の粘土鉱物の３者を含む混合懸濁水溶液の凍結・乾
操体（ゲル）中の空洞に、微生物中１体を包括（捕捉・
包埋）し、ここへ増殖用培地を供給することにより、微
生物菌体包括空洞が膨張すること、しかも、この空洞の
大きさを一定限度（直径５５０μｍ）にとどめるよう、
前記増殖用培地の供給量を制御することにより、ゲル内
の固定化微生物生菌体の効果的増殖と活用が達成される
ことを見いだした事実に基づく。

すなわち、本発明はけん化度９５モルチ以上で、しかも
粘度平均重合度１＋５００以上のポリビニルアルコール
と、３層型（２：１型）複合層を基本単位とする積層構
造型粘土鉱物、および微生物生菌体の８者全含み、しか
も、ポリビニルアルコールに対する粘土鉱物の添加量を
、ポリビニルアルコールの５倍以下とした混合懸浅水溶
液を成型用鋳型へ注入し、これを−６℃よシ低い温度で
凍結・成型し、しかる後、この凍結成型体を融解させる
ことなく脱水率５ｗｔ％以上に真空脱水し、８聾に応じ
水中に浸漬することにより、含水率２０〜９２ｗｔ％（
湿潤体基準）に到達させ、微生物生菌体を包括（包埋）
したゲルを得、このゲルへ微生物増殖用培地を供給し、
これにより形成される増殖微生物菌体集落の直径を５０
〜５５０μｎｈｉで拡大させることのである。

微生物生菌体をゲル内に捕捉（包括）俊、これを増殖さ
せる試みは既に公知であるが、下記（１）〜（６）に要
約するとおり、いずれにも難点があり、更に優れた固定
化増殖法が望１れてさた。

（１）　　コリネバクテリウム・シンプレックス（Ｃｏ
ｒｙｎｅ　−ｂａｃｔｅｒｉ？ｂｔｎＳｉｍ７ｙｌｅｒ
；、別名アルトロバクター−’／７プレツクス（Ａｒｔ
ｈ、ｒｏｂａｃｔｅｒ　Ｓｉｍｙｐｌｅｘ）　）、バシ
ルス・サプチルス（Ｂａ、ｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌ
ｎｓ）、シュードモナス−プチダ（Ｐｓｅｖ、ｄｏｍｏ
ｎ４ｚｓ　Ｐｕｔｉｄ、ａ）　等の細菌を、ポリアクリ
ルアミド・ゲル中に固定化後、栄養源（培地）を供給し
て増殖させ、それぞれの活性、すなわち、ステロイド変
換能、α−アミラーゼ生産能、ベンゼンの酸化分解能な
どを高める方法が公知である（Ｎａｔｕｒｅ、２６　Ｂ
　、Ｑｃｔ、２８゜７９６　（１９７６）、Ｉ）ｉｏｔ
ｅｃｈ、Ｂｉｏｅｎｇ、＋２０ｔ　１２６７（１９７８
）、Ｅｕ、ｒｏｐ、ＪｈＡｐｐｌｏＭｉｃｒｏｂｉｏｌ
。

１３ｉｏｔｅｃｈｎｏ１．．５　、２８３　（１９７８
）、先、７５（１９７７））。

しかし、これらの場合、増殖による活性上昇率は、たか
だか５〜１０倍程度にすぎないほか、この固定化担体の
原料モノマー（アクリルアミド）が猛毒（微生物に対し
有害）で（醗酵と工業、８５．９２（１９７７）、Ｂｉ
ｏｔｅｃｈ。

ｌイｉｏｅｎｇ、、２０．１２６７　（１９７８））、
さらに、固定化（モノマーの重合およびポリマーの架橋
）に用いるラジカル開始剤により、微生物（タンパク質
）が損傷を受ける（Ｓｃｉｅｎｃｅ＋　１４２．６７８
　（１９６８）、Ａｃ１ｖ。

１ｉｉｏｃｈｅｍ、Ｅｎｇ、、　５　、１２５　（１９
’７’７　）、Ａｇｒ　、　Ｂｉ　ｏ　ｌ。

Ｃｈ、ｅｍ−，４２，６８８（１９７８）、化学工学、
す。

２６９（１，９７９））ほか、固定化ゲル自体が軟弱で
（化５− 学工学、４（］、１８９　（１９７６））、実用上、き
わめて不満足な点が多い。

（２）寒天に各種微生物を固定化後、これを増殖させる
ことは、古来広く行なわれているが、この寒天ゲルは、
機械的強度に劣り、実験室的に利用することはできるも
のの、固定化担体として工業的に用いるには難がある。

寸た、微生物の増殖に伴ない、ゲル内部から亀裂の生じ
る難点も指摘されている（Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｂｉｏｅｎ
ｇ、２２．６８１（１９８０））。

（８）　　ロイコノストック・メセンテロイデス（Ｌｅ
ｒＬｃｏｎｏｓｔｏｃＬＩｒＬｅ　８　ｅ　ｎ　ｉ　ｇ
　ｒＯＺ　（１ｅ　８　）を、ポリビニルアルコールＱ
ホウ酸錯体ゲルに包括後、これを増殖させる試みもある
（％開昭５４−１８５２９５）。しかし、この場合、け
Ａ７化度の高いポリビニルアルコールから生成するホウ
酸錯体（ゲル）は軟弱で、成型し難い。この場合、けん
化メｆの低いポリビニルアルコールを用いることにより
、この難点はかなり改６−一 善されるが、ゲルの粘着性が強いため成型後の形状は維
持され難く、実用に剛えない。

（４）サツカロマイセス・セレビシェ（Ｓａｃｃｈａｒ
ｏｍｙｃｅｓｓ　ｅｒｅｖｉｓｉａｅ）　を、ゼラチン
膜に固定化後、増殖させる提案もあるが、活性は４倍程
度に上昇するにとどま択また、ゲル成型体は軟弱で、そ
の形状は不安定である（Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｄｉｏｅｎｇ
６．２２．１７８５　（１９８０）　）。

（５）　　サツカロ・マイセス・セレビシェをアルギン
酸カルシウム・ゲルにシバ１定化後、これを増殖さぐる
試みもあるが、天然系多糖類ゲルにしばしば見られると
おり、雑菌汚染を招きやすいうえ、指先につまんでわず
かに指圧を加えることにより、的ちに形くずれして軟弱
な糊状を呈するほか、栄養源として供給されるリン酸塩
によ・す、ゲル構造組織が破壊される（　Ｈｉｏｔｅｃ
ｈ、、Ｄｉｏｅｎｇ、ｎ　１９．８８７（１９７７））
。

（６）寒天と同様のポリガラクトース酸性硫酸エステル
型構造を有する天然系多糖類、すなわちに−カラゲナン
に、サツカロマイセス・セレビシェ＜５ａｃｃんαｒｏ
ｍｙｃｅｓＣｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、サツカロマイセス
愉カルスベルゲンシス（、’：：、ｃｒｙｌｓｂｅｒｇ
ｅｎｓｉｓ）、アセトバクター・サブオキシダンス（Ａ
ｔｅｔｏｂａｃｔｅｒ　　５ｕｂｏｚｌｒｔａｎｓ）、
セラチア−’？ルセセンス（５ｅｒｒａｔｉａ　ｒｎａ
ｒｓｃｅｓｃｅｎｓ）、ニジエリシア・コリ（Ｅ：５ｃ
ｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ）、プレビバクテリウム−
フラブム（Ｈｒｅｖｉｂａ、ｃｔｅｒｉｗｍ　ｆｌａ、
ｖｕｍ）、ストレプトマイセス・フエオクロモケネス（
ＳｔｒｅｐｔｏｍＩＢｅｓｐｈａｅｏｃｈｒｏｍｏｇｅ
？１．ｅｓ）、ブレビバクテリウム・アンモニアゲネス
（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｖｓｎ、　ａｎｍｔｏｎｉ
ａｇｅｎｅｓ）などを固定化後、これらを増殖させる試
みもある。しかし、このゲルは軟弱で（引張り強度〈１
智／ｎ％）、さらに塩化カリウム、ヘキサメチレンジア
ミン、グルタルアルデヒド、タンニン等を用いる硬化処
理を施しても、ポリアクリルアミド・ゲルと同程度の強
度（１〜Ｌ　５　ｋｇ　／ｒｉ）にまで改善されるにす
ぎず、きわめて軟弱である。従って、ゲル内で微生物が
増殖するに伴ない、ゲル組織に亀裂が発生し、破壊され
る＜Ｊ、５ｏｌｉｃｌ　Ｐｈａｓｅ　Ｂｉｏｃｈｅｍ、
、　　２　、２２５（１，９７７）、Ｅｎｚｙｍｅ　Ａ
４１ｃｒｏｂ、Ｔｅｃｈｎｏｌ　、、　１　、９５（１
９７９）、Ｊ、Ｆ’ｅｒｍｅｎｔ　、Ｔｅｃｈｎｏｌ　
、　＋　５８　＋（４）８２７（１９８０）、高分子、
２９，２８８　（１９８０））。

これらの例に見るとおり、従来の微生物固定化用却体の
いずれにも、問題点かあシ、更に優れた担体（ゲル）が
望１れている（高分子、す、２８Ｂ　（１８９０）　）
。これら公知の手法と異なり、本発明によれば、ポリビ
ニルアルコール、粘土鉱物、微生物生菌体の混合性Ｙｌ
液を凍結・成型・脱水する過程でゲルが生成し、しかも
、微生物生菌体の代ぼ全量が、このゲル中に包括される
。本発明では、この同定化（包括）過程で、酸Ｊルカリ
、枚射線、ラジカル９− 発生剤、有機溶媒、反応試薬などを全く用いず、丑だ、
２次的硬化処理も全く心安としない。本発明のゲルは、
含水性に冨み、微生物生菌体の活動に要する炭素源、窒
素源、酸素ガス、二酸化炭素ガスその他の無機物の透過
性にも優れるゴム状の弾性体でちり、引張９強度の点で
も、前記のカラゲナン（＜１に９／ｉ）ｉたは、２次的
硬化処理を施したカラゲナン（１〜１．５１ｃ９　／ｉ
）を遥かに（７のぐ強度（〉４〜６に９／ｃりを有する
。このゲルに増殖用培地を供給することにより、微生物
生菌体は当然のことながら増殖するが、本発明のゲルに
おいては、この増殖に伴ない、微生物包括空洞が押し拡
げられる。しかし、本発明のゲルがきわめて弾力性に富
み、しかも機械的強度に優れることがら、ゲル内空洞の
直径が、当初（８〜３　Ｑ　！ｘ　ｍ　）の２０〜７０
倍（５５０μｍ）に達する激しい増殖（ｊ杉１１投）に
も耐え、ゲル組織は破壊されない。もっとも、本発明の
ゲルに１０− おいて、増殖集落直径が約１５０μｍに到達すると、増
殖菌体の一部は、空洞壁（微細網目構造から成るゲル組
織）の少なくとも一部の網目をくぐシ抜け、空洞外へ排
出され、その排出位首（小空洞）において引続き、増殖
・排出の過程を反復し、最終的には、ゲル表面近傍の空
洞から、ゲル外へ排除される。また、更に、増殖用培地
を供給することにより、増殖集落直径が約５５０μ情を
超えろと、上記函体流失量が著しく増加する。

したがって、増殖菌体の流失（損失）を回避するには、
大部分の増殖菌体集落の直径を１５０μｍ以下にとどめ
るのがよい。ところで、一般に、微生物生菌体は、増殖
すると同時に、少なくともその一部は死滅する。この死
滅菌体の自己消化残留分（主として細胞壁構成分）が生
菌体集落中に蓄積し続けることは好ましくないため、本
発明のゲルにおいてイ１、これを断続約１たは連続的に
、ゲル外へ排除しなければならない。しかるに１死菌体
（自己消化残留分）のみを選択的にゲル外へ排出する方
法はまだ知られていないため、止むをえず生繭体および
死滅体から成る集落菌体の一部を、断続的または連続的
にゲル外へ流失させなければならない。これに関しては
、本発明において、集落直径を前記の１５０μｍ以上に
達せしめることにより、容易に上記の目的を達成するこ
とができる。捷た、集落直径が５５０μｍを超えること
は、前記の増殖菌体の大量流失を招ぎ、好捷しくない。

従って、本発明においては、菌体集落の直径を５５０μ
ｍ以下、例えば５０〜５５０μ常に維持することにより
、増殖生菌体の無益な大量流失を回避して固定化生菌体
を有効に増殖せしめ、これを活用すると共に、必要に応
じ死菌体を排出することができる。

本発明における菌体集落の直径の制御は、たとえば、該
集落の拡大状況を追跡観察することにより、増殖用培地
の供給量を制御することによって容易に行うことができ
る。

本発明は、ポリビニルアルコールと粘土鉱物を併用する
。

この、ポリビニルアルコールと粘土鉱物との併用に関し
て（才、本発明における併用効果と異なる、ある種の効
果が既に周知である。すなわち、競技場の表面土壌へポ
リビニルアルコール（希薄水溶液）を散布することによ
シ、比較的はこりの立ち難い土壌に改質する試みがある
。また、田畑へ少量のポリビニルアルコール（希薄水溶
液）を散布して、土壌の透水性または保水性を改良する
試み、更には、泥水（粘土懸濁水）へ少量のポリビニル
アルコールを加えて、粘土（コロイド粒子）の凝集沈降
を促進する技術も著名である。これらの場合、ポリビニ
ルアルコールの作用により、土壌粒子の分散状況あるい
は、土壌の粒径に変化をきたすことが確認されているが
、少なくとも、外見上は単なる土壌にすぎず、水中では
もちろん乾つ粉末の状態においても、１３− きわめてもろくくずれ易い。ポリビニルアルコール水溶
液へ粘土を加え、加熱乾性することにより、硬質皮膜の
得られることも公知である。しかし、これは吸水性の乏
しい硬直皮膜である。本発明のゲルは上述の、土壌改良
剤または硬質皮膜として知られる従来のポリビニルアル
コール・粘土複合体とは全く異なる。

モンモリロナイト、バーミキュライト、合成テニオライ
ト（ｔσ、ｅｎｉｏｌｉｔｅ）等の粘土鉱物が酸素（ま
たはポリビニルアルコールなど）を吸着することも周知
である。しかし、これは、粘土鉱物結晶層間へ酸素等が
侵入する現象であることが立証されており、その結晶層
間隔は、たかだか１．５〜６ｎｍであるとされている。

したがって、この吸着用結晶層間隔は、微生物の細胞壁
の厚み（２０〜８０　ｎｍ）にも及ばず、ましてや微生
物（１〜１０μｍ）は、到底ここへ侵入できないことが
明らかである。したがって、本発明は、−１４＝ 粘土鉱物と酵素、あるいは、粘土鉱物とポリビニルアル
コールとの相互作用に関する従来の知識と全く異なる微
生物の固定化・増殖制御技術を提供することが明白であ
る。

本発明では、けん比変９５モルチ以上、好ましくは９７
モルチ以上のポリビニルアルコールを用いる。前述の土
壌改良に好ましいとされているけん化度８０〜８８モル
−〇ポリビニルアルコールを本発明に用いても、泥同然
の軟弱なゲルが生成するにすぎない。

また、本発明では粘度平均重合度１５００以上のポリビ
ニルアルコールを用いる。ポリビニルアルコールの重合
度が低下すると共に、得られるゲルの機械的強度も低下
するため、本発明では、通常市販されている高重合度品
（重合ｌｆｔ、７００〜２．６００程度）を用いるのが
良い。

木々１明では、まずポリビニルアルコールの水＠液を調
合する。その濃度に特に制限は々いが、例えば１〜２０
ｕ峠、好オしくは７〜１５ｕｔ％とすることができる。

この濃度を更に例えば９０ｗｔチまで高めることもでき
るが、常温における水溶液の粘度が１０，０００　ｃｐ
以上にも達し、才た、貯蔵中に粘度上昇あるいはゲル化
をきたすこともあシ、若干取扱い難い（なお、この、ポ
リビニルアルコール水溶液の貯蔵中に生成するゲルは、
水溶性で、しかも寒天同様のもろいゲルであシ、本発明
のゲルとは全く異なる）。才だ、ポリビニルアルコール
水溶液の濃度を３？υｔ％以下とすることもできるが、
後述の脱水（乾燥）所要時間が長びき、経費（脱水動力
費）がかさむ。

ポリビニルアルコールの使用量としては、重量で後述の
粘土鉱物使用量のイ以−ヒ（すなわち粘土鉱物の量をポ
リビニルアルコールの量の５倍以下）とする。この比率
が低い場合、例えばイ０では、生成するゲルの機械的強
度が劣る。

前述の土壌改良においては、ポリビニルアルコールド粘
土鉱物の混合比はイ。。ｏ−イ。０であるが、このよう
な条件では、本発明の微生物固定化用担体（ゲル）は決
して得られない。

本発明に用いる粘土鉱物として、モンモリロナイト（ｑ
ｎｏｎｔｍｏｒｉｌｌｏｎｉｔｅ）、バーミキュライト
（ｖｅｒｍｉ−ｃｗｌｉｔｅ）、イライト（ｉｌｌｉｔ
ｅ）、パイロフィライト（ｐｙｒｏｐｈｙｌｌｉｔｅ）
、タルク（滑石、ｔａｌｅ）　に代表される８層型（２
：１型）複合層を基本単位とする積層構造型粘土鉱物を
用いることができるが、一般的な粘土として知られるベ
ントナイト（ｂｅｎｔｏｎｉｔｅ）　　が安価で、しか
も入手し易い。この粘土は、凝灰岩、流紋岩等の風化に
より生成したモンモリロナイト主体のコロイド粒子集合
体であり、北海道、秋田、山形、新潟、群馬、島根等の
各地に産する。

ベントナイトの主成分モンモリロナイトはスメクタイト
（Ｂｍｅｃｔｉｔｅ）とも呼ばれ、シリカ（四面体構造
）・アル１７− ミナ丁なわちギブサイ）　（ｇｉｂｂｓｉｔｅ）　（八
面体構造）・シリカ（四面体構造）の８層（２：１）複
合層全基本単位とする積層構造体で、しかも複合層を構
成するアルミニウムの一部は、マグネシウムに置換され
、また複合層相互間には、水およびナトリウム、カリウ
ム、カルシウム、リチウム、ストロンチウム、バリウム
、アルミニウム、セシウム、マグネシウム、アンモニウ
ムまたは水素等のカチオンが介在する。七ンモリトナイ
トの近似（代表）構造としては、例えば、（Ａ／？ＭＡ
（（７％）Ｓｚ４Ｑ＋ｏ　（ＯＨ）ｔＸＨ２０＜ＫＸＨ
ａ、Ｃａ、Ｈ，Ｎ１ｆ４　、Ｍ１７ＸＡ、ｅｚ　Ｚ／Ｚ
％　Ｃ８、Ｓｒ。

Ｚ？ａ）ｙ　　と示される。

この複合層構成主要元素（アルミニウム、ケイ素）を、
更に他の元素で置換して得られる同族体として、ノント
ロナイト（ｎｏｎｔｒｏｎｉｔｅ）（鉄置換）、ヘクト
ライト（ｈｅｃｔｏｒｉｔｅ）　（マグネシウム置換）
、サホナイト−１８＝ （ｓａｐｏｎｉｔｅ）（−ｒグネシウム首換）、ビープ
ライト（ｂｅｉｒｌｅｌｌｉｔｅ）　（アルミニウムｉ
ｌｔ換）、ンーコナイト（ｓａ、ｗｃｏｎｉｔｅ）　（
鉄、マグネシウム、亜鉛置換）、ゲルコンスカイト（ｖ
ｏｌｋｏｎｓｋｏｉｔｅ）（クロム置換）が著名である
が、これらもやけシモンモリロナイト群鉱物と呼ばれ、
前記ベントナイト中にしばしば見いだされる。

ベントナイトには、モンモリロナイトおよび上記モンモ
リロナイト群鉱物が５０〜８５チ程度含まれるが、その
他、石英、長石、沸石、カオリン、イライト（マイカ、
ｍｉｃａ）、クリストバライト（ｃｒｉｓｔｏｂａｌｉ
ｔｅ’Ｊなども混在する。

したがって、ベントナイトの組成（ｗ　ｔ　％　）は一
定しないが、ＳｉＯ２４２〜６８、Ａｌ２Ｏ２１４〜２
８、Ｈρ１１〜２８、Ａ４ｇ０　１〜２５、Ｆｅ２Ｏ３
０〜４、Ｎα２００〜３．５、Ｃａ０Ｏ〜３、Ｋ２Ｏ０
，１〜０．７、Ｔｉ（Ｊｈ　　Ｏ〜０．７、ＦｅＯＯ〜
０．３、Ｐ２Ｏ，０〜０．０４が一般的である。

日本薬局法では、ベントナイトの膨潤性およびゲル形成
能（かゆ状の、酸化マグネシウム・ベントナイト複合ゲ
ル生成能）に関する試ｉ１ｙを規定しているが、市販の
ベントナイト（試薬）は、通常この規格に合格しない。

しかしこのようなベントナイトも、本発明の粘土鉱物と
してなんら差支えない。ベントナイトは、その膨潤性、
分散性、比表面積等を高めるため、塩化ナトリウム、水
酸化す）　ＩＪウム、炭酸ナトリウム、硝酸ナトリウム
、水酸化アンモニウム、ピロリン酸ナトリウム、ヘギサ
メタリン酸ナトリウム（メタリン酸ナトリウム低重合体
）、塩酸、硫酸、クエン酸などの水溶液で処理されるこ
とも多い。本発明では、ベントナイ）［特にこのような
処理を施す必明けないが、このような処理を施しても、
本発明に支障はない。

本発明においては、モンモリロナイト系粘土鉱物として
、ベントナイトのほか酸性白土（薄層粘土、Ｋａｍｂａ
、τａｅａｒｔｈ）、活性白土、フラース・アース（Ｆ
ｖ、ｌ　ｌ　ｅｒｓ６ａ、ｒｔｈ）、フロリダ・アーｘ
　（Ｆ’１ｏｒｉｄａｅａｒｔｈ）、ジョーシア・アー
ス（Ｇｅｏｒｇｉａ　ｅａｒｔｈ７ｆ６用いることがで
きる。これらはモンモリロナイトおよび後述するモンモ
リロナイトａ似の３層型粘土鉱物のいずれにも属さない
カオリナイ）　（ｋａｏｌｉｎｉｔｅ）および非晶質粘
土鉱物と見なされるアロフェン（ａｌｌｏｐｈａｎｅ）
をかなシ含んではいるが、主成分はやけりモンモリロナ
イト群鉱物である。

本発明の粘土鉱物としては、モンモリロナイト群鉱物の
ほか、下記に述べるモンモリロナイト類似の３層型（２
：１型）粘土鉱物を用いることもできる。すなわち長崎
系（五島鉱山）、岡山系（玉石鉱山）、長野系（穏波鉱
山、米子鉱山）に産する陶石は、パイロフィライ）　＜
ｐＨｒｏｐｈｙ−１ｌｉｔｅ）を主成分とする。これら
は、マグネシウム含量がきわめて低く、寸た１・丘とん
ど膨潤性を示さない点でモンモ２１− リロナイト系粘土と区別されるが、シリカ・アルミナ−
シリカの３Ｊ＠型（２：１型）複合層を基本とする積層
構造体である点で、モンモリロナイトに頑似する。

兵庫、岡山、広島、山口、長崎地方に産する滑石（ｔａ
ｌｃ）は、アルミニウム含量が低く、マグネシウムが特
に多いなどの点でモンモリロナイトと異なるが、やはり
シリカ・アルミナ・シリカの３層型（２：１型）複合層
を基本とする積層構造体である。

熊本、新潟地方の粘土にはイライトｆｆＩＭが多い。こ
れは鉄、フッ素、マグネシウム等の含量によシ、詳しく
はヒドロマイカ（ｈ、７１ｄｒｏｍｉｃａ）、グロコナ
イト（ｇｌａｒｂｒ、ｏｎｉｔ、ｅ）、ムスコバイト（
ｍ１ｔｓｃｏｖｉｔｅ）、マイカ（ｍｉｃａ）　、イラ
イ）　（１ｌｌｉｔｔｔ）その他に細分されるが、いず
れもカリウム含量が多く、モンモリロナイトと区別され
ている。しかしこれらも、シリカ・アルミナ・シリカの
３層型（２：１型）−２２＝ 粘土鉱物である。

ブラジル、アメリカ（Ｋンシルバニア）、インドなどに
主に産するバーミキュライトは、わが国でも古ぐから、
蛭砂、蛭石として注目されているが、マグネシウム含量
が特に高い点でモンモリロナイトと異なる。しかし、こ
れは、シリカ（四面体）・アルミナおよびマグネシア（
八面体）・シリカ（四面体）の３層型複合層を基本単位
とする積層構造を有する点で、モンモリロナイトに類似
している。

本発明では、上記３層型粘土鉱物のいずれをも使用でき
るほか、人工的に合成された３層型粘土鉱物を用いるこ
ともできる。例えば、南グリーンランドに産するテニオ
ライ）　（ｔａｅｎＡ、ｏｌｉｔｅ）はカリウム、フッ
累、マグネシウムに富むイライト類に属すが、これはフ
ッ化ナトリウム、フッ化リチウム、酸化マグネシウム、
二酸化ケイ素を混合溶融しても得られ、これを本発明に
用いて差支えない。

本発明では上記３層型粘土鉱物を、粒径０．１５ｘｍ　
（１００メツシユ）以下の粉末として用いるのが良い。

前述のベントナイトは、通常その大半（５０〜９５％）
が、径７４μｍ（２００メツシユ）よりも微細な粒子で
占められ、特に粗粘土分（０，２〜２μ？７＋）と細粘
土分（０，２μｍ以下）に富むため好都合である。滑石
（ｔａｌｃ）も化粧品用として、１５０〜２７０メツシ
ユ（０，１−０，０５１）の粉末が市販されている。ｅ
性白土、活性白土、フラース・アース、パイロフィライ
ト、イライト、バーミキュライト等の３０〜１００メツ
シユ（０５９〜Ｑ１５ｒｍ）の粒状品を用いた場合、生
、暎するゲルの機械的強度が不均一となる傾向があるた
め、これらも、メッシュ度１００以上、さらに好ましく
は１５０メツシユ以上に粉砕して用いるのがよい。

本発明においては上記粘土鉱物（含有粘土）の粉末を前
記ポリビニルアルコール水溶液へ添加して分散させるか
、あらかじめ粘土鉱物の懸濁水を調合し、これを前記ポ
リビニルアルコール水溶液へ混合する。また、粘土鉄物
＠濁水へポリビニルアルコールを添加し、溶解させるこ
とも差支えない。

いずれにしても、得られるポリビニルアルコールと粘土
鉱物の懸濁水溶液における、ポリビニルアルコールと粘
土鉱・吻との濃度比（電量比）は、前述のとおダイ以上
、すなわち、粘土鉱物の懸濁濃度を、ポリビニルアルコ
ールｅ４Ｗの５４文以下にとどめる。更に長寸の粘土鉱
物を用いる場合、前述のとおり、得られるゲルの機械的
強度が低下する傾向にあり、この傾向は、ポリビニルア
ルコールに対して１０倍以上の粘土＠物を用いる場合、
特に著しい。３層型粘土鉱物は、このように過剰に使用
しないかぎり、本発明罠おいて、ゲルの高含水性と機械
的強度の両立に寄与する。この、高含水性と機械的強度
とは、従来から、医用高分子お＝２５− よび選択的透過膜を開発するうえで、両立し難い難題と
されているが、本発明の粘土鉱物はこの点において、従
来予期されなかった特異な効果を示す。この粘土鉱物の
寄与は、３層型粘土鉱物をポリビニルアルコールのイ〜
イ、量（すなわちポリビニルアルコールと粘土鉱物の濃
度比１−Ｊ”ｌ）とするとき、特に著しい。

このようにして得た懸濁水溶液は、必ずしも中性である
とは限らず、例えばベントナイトの場合、しばしばｐＨ
８〜１０、また活性白土、酸性白土ではｐＨ８〜６を示
す。

一方、本発明において固定される微生物生昭体の生育お
よび活動には、それぞれ周有の至適７）Ｈ領域が存在す
る。その若干例を挙げるならば、ニジエリシア・コリ（
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ）７〜７．５、サツ
カロマイセス・セレビシェ（Ｓａｃ、ｃｈａｒｏｍｙｃ
ｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）　５〜？、アシュピャー
ゴシピ（Ａｓｈｂｙａ、　ｇｏｓｓｙｙｐｉｉ）　　６
．８〜７．０．バシ２６一 ルスーサブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｗｂｔｉｌｉ
ｓ）４．８−６．８、アセトバクター・アセトスム（Ａ
ｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ　ａｃｅｔｏ−ｓｕｍ）　８．５
〜６．５、トラメタス・サンギネアＩＴｒａｍｅｔａｓ
ｓａｎＯｒｂｉｎｅα）２〜６などである。したがって
、前述の懸濁水溶液のｐＨ値を、固定化対象とする犠生
物生菌体の至適７）Ｈ値に合致させる目的で、塩酸、硫
酸、硝酸、クエン酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウ
ムに代表されるｐＨ調整剤を用いるのがよい。

本発明においてはこの懸濁水溶液の調合に用いる全ての
資材を、あらかじめ滅菌しておくこともできるが、懸濁
水溶液の調合完了後、これを一括滅閉するのが至便であ
る。

滅菌は１００°Ｃｘ５ｍｚｎで完結できる場合もあるが
、懸濁水溶液が耐熱性閑によシ汚染されている場合は、
必快に応じ、タリえは、１２０℃に１５ｍ１ｎ〜６ｈの
高圧・蒸気滅菌を施さねばならない。紫外線照射（滅菌
）法も使用できるが、その効県が照射表面に限ら力、る
ことから、上記カロ熱滅菌法との併用が望寸しい。甘た
、いずれにしても、これらの滅菌処作により、本発明に
用いる骨材（ポリビニルアルコール、粘土鉱物）が特に
変質して本発明の実施に支障をきたすことはない。

滅＠Ｌ、た懸濁水溶液に、固定化対象とする微生物生菌
体を混合する。既に述べたとおり本発明は、固定化過程
において、酸、アルカリ、放射線、ラジカル発生剤、有
機溶媒、反応試薬などを全く用いないため、微生物生菌
体に損傷を与えることがなく、したがって、微生物生菌
体の耐有機試薬性、耐酸性、耐アルカリ性、耐放射線性
のいかんを問わず、全ての耐熱性および非耐熱性微生物
生菌体を固定化することができるが、その代表例として
は、アメ４ルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉ　ｌ　ｈｔ、ｓ　
ｌ　属、リゾプス（Ｒｈｉｚｏ７ｎｂｓ）属等のかび類
、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　）属、ア
セトバクター（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）属、ストレプ
トマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）　　属、ニジ
エリシア（ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａＪ属等の細菌、サツ
カロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属、キャ
ンデイダ（Ｃａｎｄ、１ｄａ）属等の酵母を挙げること
ができる。

微生物生菌体としては、凍結・乾燥保存生菌体、生菌体
培養液あるいは、この培養液の遠心分離される生菌体濃
縮懸濁液などのいずれを用いることもできる。微生物生
菌体の混合操作は、常温の無菌室で行なうのが至便であ
るが、酬熱性微生物生閑体を固定化する場合は、むしろ
、それらの耐熱性に応じ、常温以上で操作するのが、雑
菌汚染防止の観点から、更に好ましい。低温では懸濁水
溶液の粘度が高捷り、微生物生菌体の混合・分散が、比
較的緩慢であるが、この点に留意するならば、上記操作
を０〜１５℃程度で行なうのも差支えない。

＝２９− 微生物生菌体の添加酸（乾燥体基準）としては、懸濁水
溶液中のポリビニルアルコールと粘土鉱物との合計量の
７倍控以下にとどめるのが、微生物生菌体のほぼ全量を
固定化する観点から好寸しく、この場合、後述の脱水（
ゲル化）工程を経ることにより、微生物生菌体の９６〜
９８チを確実に捕捉（包括・；相定化）できる。

後述する凍結・成型・脱水工程を経て得られる本発明の
ゲルを走を型′市子顕ｇＩ傭によシ観察した結果、例え
ば、懸濁水溶液中のポリビニルアルコールと粘土歎・吻
の合計量に対しｙ４相当重量に及ぶサツカロマイセス・
セレビシェ１．ｊｆｄ定化した場合でさえ、微生物生菌
体は個別分散し、それぞれ８〜３０μｍの空洞に包埋さ
れており、空洞壁面は、主に０．１〜Ｉ　ＩＩ　ｒｎ、
の網状組織から構成されている。しかも、この個別分散
包埋された微生物生菌体は、後述の増殖操作により容易
に飯しく増殖する。したｆ）Ｓって、本発明におい−３
０＝ ては、あらかじめゲル中へ特に大量の微生物生菌体を包
埋するより、むしろ後述の増殖による包括空洞の膨張の
余地を残すのが良い。すなわち、本発明における固定化
当初の微生物生菌体添加量としては、ポリビニルアルコ
ールと粘土鉱物との合計量の７倍以下とし例えば、％。

、。。０以上、好ましくはイ３．。。ｏ　−Ｋ　　とす
ることができる。

本発明では、このようにして得たポリビニルアルコール
粘土鉱物、微生物生菌体の混合懸濁水溶液へ雑菌が混入
しないよう留意し、しかも殺菌燈（紫外線）が直接照射
されぬよう留意しつつ、ｇ濁水溶液を任意形状の容器ま
たは所望の成型用鋳型へ注入し、凍結・成型する。この
場合、冷却剤としては、例えば、食塩−氷（２３：　７
７）（−２１℃）、塩化カルシウム−氷（８０ニア０）
（５５℃）などの寒斉１　あるいはドライアイス−メチ
ルアルコール（−７２℃）、液体窒素（−１９６℃）な
どを用い、−６℃よす低い温度に冷却し、凍結させる。

冷却が不十分であると、後述する乾伜工程を経て得られ
るゲルの形状が、当初予期した形態すなわち、ポリビニ
ルアルコール水溶液注人容′ａまたは成型用鋳型の形状
と合致し難いほか、ゲルの機械的強度に劣る。液体ヘリ
ウムを用いれば一２６９℃まで冷却できるが、実用上は
フレオン冷凍機を用い、例えば−３５℃以下に冷却する
のが良い。微生物生菌体の多くは、−２０℃近辺の温度
に長時間さらされるのは好ましくないことから、むしろ
−２０℃以下、例えば−３５℃〜−８０℃まで急速に冷
却するのが良い。このような低温で凍結・成型すること
は、微生物生菌体担持用ゲルの機械的強邸を高めること
に寄与し、−２０℃と一６℃との間の温度で凍結・成型
するより好ましい。

本発明による凍結・成型においては、ポリビニルアルコ
ール・粘土鉱物・微生ｆ吻生菌体の混合懸濁水溶液は任
意形状の鋳型内で固化（氷結）・成型され、しかる後、
鋳型の上面カバーまたは下面カバー（あるいはその双方
）を取りはずし、成型体の形状を保持しつつ凍結・乾操
することができる。

したがって、本発明のゲルの形状としては、固定化微生
物生菌体の増殖・生育活動に好都合な気・液・固相間の
拡散を考慮し、任意の大きさと形状を選定することがで
きる。。

好ましい成型体の形状としては、既に化学工業において
、蒸留塔外たけガス吸収塔などに用いられているラシヒ
リング（ｒａｓｃｈｉｇ　ｒｉｎｇ）、多孔板（ｐｅｒ
ｆｏｒａｔｅｄ　ｐｌａｔｅ。

５ｉｔｉｖｅ　　ｔｒａｙ）、テラレット（ｔｅｌｌｅ
ｒｅｔｔｅ）、インター０７り・サドル（１ｎｔａｌｏ
ｘ　ｓａｄ、ｄｌｅ）、ボールリング（ｐａｕ　ｒｉｎ
ｇ）などの成型用鋳型によることができる。甘だ特願昭
５６−５１０９６に記載した突起を有する平板又は曲板
状の鋳型を用いることもできる。これらの成型用３３− 鋳型を用いて得ら九る２Ｆ：発明の微生物生菌体固定化
ゲルは、いずれも、固定化イ）′夕生物生菌体の増殖・
生育活動に心安な栄養汀または基質との接触、物質移動
の点において優れ、また反応塔へ充てんした場合の塔内
用損失の低い点においても、粒状品、球状品、膜状品、
板状晶等に比し、逍かに勝る。

前述の凍結・成型を目的とする冷却操作の冷却速度とし
ては、前述の微生物生菌体への影響を考慮して、−ｉｏ
℃までは０．１〜ｂ その後は、７〜ｂ 本発明においては、前述の容器または鋳型へ注入された
ポリビニルアルコール、粘土鉱物、微生物生菌体の混合
懸濁水溶液が、凍結されたことを確詔後、これに真空脱
水を施す。この場合、冷株室から凍結・成型体を取り出
し、これを真空屹慄室へ移し、直ちに吸引・脱水するな
らば、ボ３４− 分の除去（昇華）に伴ない、試料が冷却されるので、特
に外部冷却を施さなくとも、凍結・成型体が融解するこ
とはない。凍結・成型体が融解しない程度に加熱するこ
とは差支えなく、これにより脱水を促進することができ
る。っ寸り脱水工程の温度としては、凍結・成型体を融
解させないかぎり、特に制限はなく、これがゲルの品位
に特に影響することはない。この脱水工程においては、
ゲルの含水率を２０〜９２％、好１．＜’は６０〜９０
　ｗｔ％　（湿潤体基準）に到達させる。含水率を２１
以下とすることもできるが、この場合においても後述す
るように水中に浸漬させること虻より含水率５０〜９０
　ｗｔ％に到達させることができる。

本発明においては、ポリビニルアルコールと粘土鉱物の
ＧＫのいかんにかかわらず、凍結・成型体に若干の脱水
処理（真空乾■）を施す。この場合、脱水率（凍結・成
型体の重＋ｊＩＣ減少率）としては、例えば５　ｗｔチ
、更には１５　ｗｔ係以上が採用される。すなわち、脱
水の進行と共に、ゲル強朋が著しく高まることから、所
望のゲル強度に応じ、脱水量を選定するのが良い。

この脱水工程（凍結・乾燥）を省略することはできない
。

すなわち、これを実施しないかぎり、本発明の弾性に富
む、しかも機械的強度の優れた高含水性ゲルは得られず
、したがって、固定化微生物生萌体ゲルはきわめて軟弱
である。

甘だ、凍結状態を維持することなく、凍結・成型体を融
解後、減圧脱水する方式によるときは、泡立ちが激しく
、はとんど、操作続行不可能であるうえ、たとえ長時間
を費して脱水しても、弾性の乏しい白濁ゲルが生成する
にすぎない。

本発明における真空脱水の真空度は凍結水分が脱水しう
るものであればいずれでも良く、りとえば］０荀Ｈ９以
下、好ましくは１　ｔａｕ　ｆＪｃＩ以下、さらに好−
、＋Ｌ、＜は０．１ｖｔｒｓＨ’ｌ　以下が通常用いら
れる。

本発明では、次に凍結・成型・脱水体を、例えば常温放
けし、融解（解凍）させることによシ、弾性に富む微生
物固定化ゲルが得られる。この場合の融解操作としては
、１〜ｂ 慮したうえで、場合によっては３〜ｂ 速昇温によることもできる。いずれにしても６０℃以上
では、ゲルの表面に硬質皮膜が急速に生じることから、
微生物生菌体の耐熱性のいかんにかかわらず、解凍（融
解）操作温度としては４０〜５０℃以下が望オしい。こ
の解凍操作後、容器または鋳型の支持部から、微生物固
定化ゲルを容易に取り出すことができる。このゲルは、
必要により水中に浸漬することにより吸水１−１含水率
５０〜９５　ｖｔｔ％（漫潤体基ｓ、Ｊ［達するが、な
お強固な弾性体であるため、ゲル内に包括された微生物
の生育活動に好適である。前述３７− の走査型電子′Ｍ微鏡による知見ならびに、上記の含水
率（５０〜９５　ｗｔ％）から明らかなとおり、ゲルの
内部の大半を空孔（水相）が占めている。このゲルの含
水率は、例えＣば、こんにゃく（含水本釣９７　ｗｔ％
　、多糖類湿潤ゲル）には及ばないが、生体細胞、人間
・動物等の生体組織などの含水率（７０〜９０　ｗｔ％
　）に類似し、しかも、強度と弾性の点で、こんにゃく
、寒天、アルギン酸、カラゲナン、グアール・ゴム、ロ
ーカストビーン・ガム、アガロース、トラガント・ゴム
等の多ａ類のゲルをはるかにしのぎ、人間、動物等の生
体組織【で類似する。

本発明のゲルは、多機の水分を言むにもがかわらず、弾
性を示し堅く握りしめても、一時的に変形するが、直ち
罠元の形状に復し、形くずれしない。しかもこの場合、
含有水分の浸出（廿１とんど見られず、例えば含水率９
（Ｊｗｔ％のゲルＶＣ’２に９７ｃｍ２の圧縮応力を課
しても、浸出（流出）水３８− 量は、含有水の１〜２ヴにすぎない。引張シ強度も４に
９／Ｃｍ２以上に及び、このような高含水率のゲルとし
ては、きわめて優れた弾性体であり、従来のポリビニル
アルコール水溶液の風乾皮膜あるいは、前述のポリビニ
ルアルコール水浴液を０〜３０℃に貯蔵する場合、ある
いはポリビニルアルコール水溶液を単に凍結・融解する
場合などに得られる軟弱なゲルとは全く異なる。多くの
水分を保持することからも明らかなとおり、このゲルの
見かけ比重はほぼ水と同程度でちり、水中で辛うじて沈
降するにすぎない。

本発明のゲルには、粘着性がない。板状（８ＭｍＸ　８
７１１１１＋Ｘ２朋）、円筒状（内径３πＥ１外径６朋
、長さ６ｇｍ１、球状（直径４　〕ｕ＋　）等【成型し
たゲル約１０９を、５０ｍ１の水中で１０８ｉ￥１かき
咄ぜても、相互付着、形くずれ等の現象は全く認められ
ない。なお、水道水中に１年間浸漬したが溶１ｆ１イせ
ず、弾性および強度も変らない（これは、例えばこんに
やくを数田用水道水に浸漬した場合、激しい形くずれが
起るのと、きわめて対照的である）。

不発明では、微生′吻生菌体の懸濁水溶液を凍結・成型
することを不可欠とする。一般に、微生物または生体組
織あるいはこれらの懸濁水を凍結する場合、多少とも、
これらが凍結障害を受けることは、古くからよく知られ
ている。

この生体またはその組織、タンパク質等への凍結障害を
回ルセルロース等の水酸基含有水浴性高分子物質、さら
には各種の凍結・乾燥障害保護剤を少量添加する方法が
著名である。

本発明においては、ポリビニルアルコール（ゲルｆｔＪ
材）自体が、強力な凍結・乾燥障害保護剤として作用す
るため、通常、微生物生繭体の大部分が保護され、後述
するとおり十分な生育・活動が確保されるが、更に公知
の凍結・乾燥　゛障害保緻剤を共存させることができる
。凍結・乾燥障害を軽減する物質は、一般に、保護剤、
保護物質（ｐｒｏ　ｔ　ｅｃｔａ′ｒＬｔ。

ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　５ｕｂｓｔａｎｃｅ）、添加剤
、添加物（ａｔｌｔｌｉ、ｔｉｖｅｓ。

ａｒｌｄｉｔｉｏｎａｌ　　５ｕｂＳｔａｎｃｅ）、媒
質、媒剤、媒液（ａｄｊｗ−ｖａｘｔ）、分散媒（５ｗ
５ｐｅｎｃｌｅｄ、　ｍｅｄｉｑｔ、ｍ）、安定剤（ｓ
ｔａｂｉｌｉｚｅｒ）などと呼ばれ、具体例としては、
マグネシウム・イオン、グリセリン、ジメチルスルホキ
シド、蜂蜜、イブトン（ｐｅｐｔｏｎｅ）、肉エキス、
酵母エキス、脱脂乳（スキンミルク）、血清、アルブミ
ン（αｌｂｗｍｉｎ）、Ｌ−またはＤ−グルタミン酸の
ナトリウム塩、カリウム塩、Ｎ−アセチルグルタミン酸
塩、Ｄ−またはＬ−アルギニン、ＤＬ−２，−ピロリド
ン−５−カルボン酸塩、ポリビニルピロリドン、Ｌ−ホ
モアルギン酸、Ｄ−グルコース、Ｄ−−ｉたはＬ−アス
パラギン酸（α５ｐａｒｔｉｃ　ａｃｉｄ）、アスコル
４１− ビン酸、ＤＬ−トＶオ＝ン（ｔｈｓｅｏｎｉｎｅ）、Ｄ
Ｌ−７ｏ　）レオ＝ン（ａｌ　１ｏｔｈｒｅｏｎｉｎｅ
）、ゼラチン、ムチン、乳糖、ＤＬ−リンゴ酸、Ｌ−シ
スティン（ｃｙｓｔｉｎｅ）、Ｌ−ソルビトール、アラ
ビトール、硬りチン、アラビアゴム、マンノース、ガラ
クトース、Ｌ−リジン、Ｄ−フルクトース、テキストリ
ン、デキストラン、スクロース、可溶性殿粉、ラフィノ
ース、クエン酸、アセチルグリシン、り一キシリトール
などが知られているほか、グルタミン酸塩−脱脂乳（寸
たけデキストラン、可溶性殿粉、ポリビニルピロリドン
、カルボキシメチルセルロース、ゼラチン、乳糖）の組
合せ、あるいは、デキストラン−塩化アンモニウム−チ
オ尿素−アスコルビン酸の組合せ、脱哨乳−アスコルピ
ン酸（′＝またけスクロース）の組合せ、グルコースと
血清の併用処決も知られている。その添加量としては、
前述の懸濁混合水浴液に０．５〜２チ加對−て十分目的
を達することが多いが、４２− １０チ程度加えることもできる。

このように、本発明によシ、微生物生菌体を高含水性の
弾性に富む、機械的強度の優れたゲル内に捕捉すること
ができるが、このようにして得られる固定化微生物生菌
体は、本発明の増殖制御により、著しく増殖して活性を
高め、本発明の目的どする微生物生菌体の固定化・増殖
が達成される。

微生物生菌体が増殖用培地の供給を受けて増殖すること
自体はなんら特筆すべき新事実ではなく、古来きわめて
当然の原理であるが、本発明のゲルが弾性に富むことか
ら、ゲル中に包埋された微生物生菌体は、容易にその包
括空洞を押し拡げつつ増殖して巨大な集落に成長し、し
かも、本発明のゲルが機械的強度に優れることから、微
生物生菌体の増殖に伴なうゲル組織の破裂（亀裂）が回
避される。本発明のゲルは、引張シ強度、圧縮強度とも
４１ｃ９／ｃｍ２以上Ｋ及び、天然系多糖類（寒天、カ
ラゲナン、イタチン等。

強度１に９７ｃｍ２以下）または、カラゲナンの２次的
硬化処理品（強度１〜１５Ｊｃ９／ｉ）　ｆＣ比し、墓
かに優れる。しかし、本発明のゲルにおいて、増殖菌体
集落直径が１５０μ処程度に到達すると、増殖菌体の一
部は、空洞壁の少なくとも一部の網目をくぐり抜け、空
洞外へ排出され、その排出位置（小空洞）において、引
続き、増殖・排出の過程を反復し、最終的には、ゲル表
面近傍の空洞からゲル外へ排除される。才だ、なおも増
殖用Ｊ＠地を供給すると、増殖集落直径が約５５０μｍ
を超え、これに因り、上記肉体流失量も著しく増加する
。したｉＪｓつて、本発明において、増殖菌体の流失を
回避するには、集落の直径を通常１５０μｍ以下にとど
める。また、集落中に死滅体の蓄積するのを回避するｒ
（は、多量の増殖用培地を供給して集落直径を１５０μ
ｍ以上に達せしめる手法を採ることができる。ただし、
集落直径が５５０μｍを超えることは、前述したとおり
、増殖菌体の大量流失をきたし、好ましくない。従って
本発明においては、菌体集落の直径を５５０μｍ以下、
例えば５０〜５５０μｍ１好ましくけ１００〜５００μ
ｍＫ維持して増殖哨体の無益な大量流失を回避すると共
に、菌体集落直径を断続的または連続的に１５０μｍ〜
５５０１ｔｍＫ達せしめることにより、菌体集落から死
菌体（自己消化残留分）を含む一部の菌体をゲル外へ排
除する。

すなわち、本発明では、増殖菌体集落の直径を５５０μ
ｍ以下にとどめるよう、増殖用培地の供給を制御するこ
とにより、増殖菌体の無益な大量流失を回避する。すな
わち、本発明においては、固定化微生物生菌体へ増殖用
培地を供給し、断続的にゲルの極微量を採取し、例えば
走査型電子顕微鏡により、ゲル内の増殖集落を観察し、
その直径が５５０μｍ以下に達した時点で、増殖用培地
の供給を停４５− 止することにより、増殖生菌体の大量流失をまぬがれる
ことができる。

一方、固定化微生物生菌体の活性を高めるには、ゲル内
の生菌体溌度を高める必要がある。単位体積のゲルに収
容しうる生繭体数はもちろん有限で、その限界値（最密
光てん濃度）は、生菌体の形状と大きさに基づき、数学
的に算出され、例えばサツカロマイセス・セレビシェ（
球形マたは楕円形・平均的５μｍ）では約イ・１０９個
／ｄである。

実際のゲルにおいては、ゲル素材も若干の空間を占有す
るため、上記の極限値を完全に達成することは不可能で
あるが、本発明において、増殖菌体集落の直径が前記５
５０μｍを超えない範囲で、上記極限値にきわめて近い
菌体濃度を達成することができる。すなわち、ポリビニ
ルアルコールと粘土鉱物の合計量に対し、例えばイｏｏ
（乾燥体基準重量）のサツカロマイセス・セレビシェを
添加し、本発明４６− の包括処理を施し、増殖用培地を３〜４日供給した場合
、ゲル内に、直径約４００μｍの菌体集落が密集し、酵
母濃度は約１０９個／ｍｌ−ゲルと推算された。また、
同じく、サツカロマイセス・セレビシェを、ポリビニル
アルコールと粘土鉱物の合計量に対しイ０程度添加し、
増殖用培地を２日間供給しｆｃ場合、ゲル内に、直径２
００μｍ程度の菌体集落が密集し、酵母濃度としてはや
はシ約１０９個／ｍ／ｊ−ゲルと推算される。

このようにして得られる固定化増殖菌体の活性は、増殖
用培地の供給停止後も急激に低下することはなく、シば
しば２〜３週間同様の活性が持続される。もつとも１〜
２力月後には、菌体集落の直径が当初の２〜４割程度減
少し、活性も３割程度低下する例が多いが、このような
事態を招いた段階においても、再び、増殖用培地を１２
〜２４ｈ供給することにより、固定化菌体の活性および
集落直径は元に復する。

本発明においては、ゲル内に直径５０〜５５０μｍ、好
捷しくけ１００〜５００μｍの菌体集落を多数生成せし
め、しかる後、ここへ増殖用培地を断続的もしくは少量
ずつ連続的に切絵することによし、当初の偵体活性を維
持することを特徴とする。本発明のゲルに、上記桿作を
４力月以上反復・継続しても、ゲル組織の強度に変化は
なく、ゲル組織の亀裂・破壊は全く認められない。

本発明のポリビニルアルコール・粘土鉱物ゲルに、ポリ
ヒニルアルコールｆＲ維マタハポリヒニルアルコールフ
イルムに対する硬化処理を施すことにより、更に若干、
ゲルの機械的強度が高壕る。この公知の硬化（架橋）処
理としては、例えば、アルデヒド、ジアルデヒド、ジイ
ソシアナート、フェノール４’Ｊあるいは、チタニウム
、クロム、ジルコニウム等の金属化合物、さらにはホウ
砂、テクリロニトリル、トリメチロールメラミン、エビ
クロロヒドリン、ビス−（β−ヒドロキシエチル）スル
ホン、ポリアクリル酸、ジメチロール尿素、無水マレイ
ン酸等による方法を挙げることができる。しかし、本発
明のゲルは既に述べたとおシの強度（ｆｒｆ′ｆ荷重性
）全重性、また上記の補助的硬化処理によシ、固定化機
生物生菌体がしばし、−１゛損傷を受けることや、ゲル
の製造費がいたずらにかさむことを考慮するならば、天
然多糖類にしばしば用いられるこれらの硬化処理を、本
発明においては全く必要としない。

実施例１ 市販ポリビニルアルコール（けん化度９７モル敷粘度平
均重合度１，８００．４％水溶液の粘度（２０℃）　２
９．５ｃＰ）の粉末８４ｇ（含水率５　ｑｕｔ％）を、
水９１６ｇに溶解し、８０ｗｔ％水溶液（ｐ７７６．９
）を得た。

市販ベントナイト（試薬用粉末　含水率１−２ｗｔ％）
　１００４９− ｇを、水１，５００　ｇに分散して、ベントナイト５．
５　ｗｔ％懸濁水（７）＃１０．４）ｆｆｉ得、ここに
６　Ｎ’ｊｌｔ、酸４　ｍｌ　１，１添加して、懸濁水
の７ＪＨ値を７．０に調整した。

上記ポリビニルアルコール水溶液６０ｇとベントナイト
懸γ絢水１００ｇを混合後、１２０℃×６ｈの加圧水蒸
気滅菌処理全権し、次に、無菌室において、放冷後、こ
こへ、サツカロマイセス・セレビシェ（Ｓａｃ　ｃ　ｈ
αｒｏｍｙｃｔｔｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）　　４９を
含む１Ｈｆｆｉ水（リン酸緩衝液、ｐＨ７）２０ｇを注
ぎ、７　ｖＬｉｒｄ’ａ拶４寸ぜた５、この懸濁水溶液
のポリビニルアルコール濃度は２．’７ｑｔ）ｔφ、ベ
ントナイト懸１％　濃＃Ｉは８．１　ｍ％である。一方
、＠記ベントナイト（粉末）の分析結果（Ｘ線回折分析
、示差熱分析、電子顕微鏡による同定、加熱脱水、グリ
セリンによる１−間膨張、陽イオン交換：　１８７ｍｇ
ｑ／１００ｇ、化学分析：５ｉ０２　７１、Ａｌｐ’ｓ
　９、Ｐ’ｅ２０．、　３、Ｃａ、ＯＯ，５，１１４ｇ
θ８、ＴｉＯ２５０− ０．５　、Ａ７（Ｚ２　Ｑ　　４、ｒｃｔｏ　　Ｏ，５
、Ａ４ｎ０　　Ｏ，０、Ｐ２Ｏ５０，０，１ｉ２０　　
Ｂ、５ｗｔ％　）から、その乾燥粘土鉱物組成（７Ｉ）
ｔ％）は、モンモリロナイト群６６、イライト類１、タ
ルク１、パイロフィライト１４、バーミキュライト１で
ある。したがって、上記＠濁水溶液の３層型粘土鉱物濃
度は２．６ｗ祷、才だ、３層型粘土鉱物の使用量は、ポ
リビニルアルコールと等量である。この懸濁水溶液１８
０ｇを、無菌室例おいて、外径８肩−内径４ｍｍｚ長さ
８Ｔπの中空円筒（ラシヒリング）６００個分の成型用
鋳型へ注ぎ込み、−５０’ＣＸ０１５ｈの冷却（凍結・
成型）を施した後、鋳型の上面カバｙ、）９１り去シ、
成型体（ラシヒ・リング）を支持する鋳型下面カバーを
７．１ｍｙｎｌｉ’；）で６Ｌ＊空脱水した結果、解凍
後、イ（（１性に富むゲル成型品５３ｇ（脱水率７　Ｏ
ｗｔ係、含水率８０　ｗｔ％）を得た。このラシヒ・リ
ングを、あらかじめ滅菌した０、９％食地水８４ｍにｌ
　Ｑ　／ｌ、浸漬した結果、６４ｑ（含水率８４ｗｔ％
）に述した。この浸漬液には、前記酵母は検出されなか
った。次に、グルコース５ｗムチ、硫１賃マグネシウム
七水和物６０襄凱の、アルコール合成用基質水溶液４９
ｍ１ｆ坂ロフラス：Ｉ　（５ｏ　ＯｍＡ）に採シ、１２
０℃×２５ｍ１ｎの７１１２菌処理をゲ）ｉＬ、無菌室
に放冷後、ここへ、上記の成型ゲル（ラシヒ・リング）
４．５ｇ（４５個分）を投入し、焼綿俺を付し、２８〜
３１℃の恒温室において振とうした結果、この基質水溶
液には、２４ｈ後に４００節ｍのエチルアルコールを認
めたにすき゛なかった。

次に、培養液（グルコース６係、Ｋブトン０．５係、酵
母エキス０．３％、麦芽エキス０．８％、Ｇ−に化カリ
ウム１％、ｐＨ５，５，２５℃）４０蛯を坂ロフラスコ
（５００罰）Ｋ採シ、１２０℃Ｘ２５ｍ４ｆＬの滅菌処
理を施し無菌室に放冷後、ここへ前記成型ゲル（ラシヒ
・リング１４．５ｇ（４５個分）を投入し、焼綿栓を付
し、２８〜３１℃の恒温室において振とうした。この操
作開始前のラシヒ・リングの４返微所を採り、走査型電
子顕微儒により観察した結果、ゲル中に少数の酵母が個
別分散・包括されているにすぎなかったが、上ｎｒ２操
作を３４ん継続後は、直径１００μｍの酵母集落を認め
た。また、この増殖酵母包括空洞には亀裂を全く認める
ことができなかった。

このフラスコから培養液を取出し、前記基質水溶液（滅
菌処理済）４０彪を入れ、焼綿栓を付し、２８〜３１℃
の恒温室ておいて振とうした結果、１８ｈ後、基質水溶
液中に２．８ｗｔ％（理論収率の９０チ）のエチルアル
コールが検出された。捷た、基質水溶液への酵母の流出
は認められながった。

前記市販ベントナイト粉末（２，０ｇ’）につき、日本
薬局法の規定による膨潤力試験を実施した。すなわち、
メスシリンダーに水１ｏｏｍｚを採取し、上記粉末を、
１０回に分　　　。

５３− けて加える。ただし、先に加えた試料がほとんど全て沈
着した後、次の試料を添加する。全量添加後、２４ｈ放
置した場合、沈殿の見かけ容積は、規定の２０ｍｔ（以
上）に到底及ばず、わずか９プにすぎない。同じく、ベ
ントナイト粉末（６，０！９）につき、日本薬局法に定
めるゲル形成力試験を実施した。すなわち、上記粉末を
酸化マグネシウム０．８０９と混合後、水２００ｍ／へ
数回に分けて加え、１ｈ振とう後、得られた懸濁液の１
００ｍ１を採り、２４Ａ放置したが、上ｌ（至）に分離
する透明液は、規定の２ｄ（以下）Ｋとどまらず、４ｍ
ｌに達した。

このように、本実施例に用いた市販ベントナイトは日本
薬局法の規冨を充足しないが、既に述べたとおシ、本発
明になんら差支えないことが明らかである。

実施例２ 実施例１に従い、ポリビニルアルコール８Ｑ　７Ｉ）ｔ
％　水溶液−５番− を調合する。

実施例１のベントナイト粉末３０ゾを、ビロリン酸ナト
リウム水溶液（Ｎ山Ｐ、０７１０　　Ｈρ　１０．７Ｗ
ｔチ）５６０ｇに分散して、ベントナイ）４．５ｍ％懸
濁水溶液（ｐＨ１０，６）を得、ここへ６Ｎ硫酸９彪を
加えて、懸濁水溶液の７Ｊｆｌ値を６．９に調整した。

上記ポリビニルアルコール水溶液１１０ｇとベントナイ
ト懸濁水６０９を混合後、１２０℃×６ｈの加圧水蒸気
滅菌処理を施し、次に無い室において放冷後、ここへ、
バシルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　５ｓｂｔｉ
ｌｉｓ）２　ｏｍ９ｗ含む懸濁水（リン酸緩衝液）２０
ｇを注ぎ、７ｍＡ細１かき才ぜた。この懸濁水溶液のポ
リビニルアルコールａ度は４．５？ｔ）ｔ’ｌ’ｚベン
トナイ）Ｉｌｌ濁濃度は１．５ｍヴである。また、こ□ の場合、３層型粘土＠物の懸濁濃兜は１．２　？ａｔチ
、３層型粘土社物の使用量はポリビニルアルコールの％
である。

この懸濁水溶液（１９（Ｅｉりを無菌室において、ラシ
ヒ・リング（８ｉｍＸ８ｍｍ）成型用鋳型（６３０個分
）へ注入し、＝４７℃Ｘ　Ｏ，５ｈ、の冷却（凍結・成
型）を施した後、鋳型の−Ｆ面カバーを取り去り、成型
体（ラシヒ・リング）を支持する鋳型下面カバーを９　
ＩＬ間真空脱水した結果、解凍後、弾性に富むゲル成型
品４９９（脱水率Ｔ４ｗｔ％、含水率７’１ｗｔ係）を
得た。このゲルを、あらかじめ滅菌した０、９−食塩水
６０ｒｎＬに６ｈ浸漬することにより、ゲル（す吸水し
て５８ｇ（含水率８０　ｑｖｔ係）を得た。

直径８ｃｍ、、高さ６０確のアクリル樹脂製円筒形カラ
ムに１上記ラシヒ・リング５８ゾを不規則光てＡ７シ、
あらかじめ１２０８ＣＸ　２０ｍ１ｎの滅菌処理を施し
た。培養液（可溶性殿粉５幅、−ぐブトン１ヴ、肉エキ
ス１係、酵母エキス０．１条、食塩０．５％、塩化カル
シウム０．０２％、硫酸マグネシウム七水和物０．０１
％、ｐＨ７、ＲＯＴ：）を、２８ｍ、ｔ／ｈ。

の流速で塔底から送入し、４８ｈ後、ゲルの極微量を採
取し、走査型電子顕微鏡により観察した結果、直径４６
０μｍの細菌集落の密集を認めたが、ゲル組織に亀裂は
認められず、塔頂流出液はわずか１で懸濁するにすぎず
、菌体流失量は１イ微（１ｈあたりの流失損失量ニゲル
内呵体量のイ。。。）にすぎないことを知った。史に増
殖用培地を１０ｈ供給すること罠より、箔体集落の増大
状況と塔頂流出液の濁度を追跡観察した結果、集落直径
５５０μｍ　（８ｈ　）を超える頃から、流出液の濁度
が著しく増大することを知った。したがって、増殖によ
る集落直径は５５０μｍ以下にとどめるよう制御するの
が有効である。

実施例３ 市販ポリビニルアルコール（けん化度９７モル係、粘度
平均重合１１ｉ１，５００．４％水溶液の粘度（２０℃
）２４ｃＰ）の粉末８６ｇ（含水率’Ｉｗｔ％）を、水
９１４ｇに溶解し、５７− ８．０マ〃ｔ％水尋液（ｐｉｆ　６．８　）を得た。

市販ベントナイト（試薬用粉末、含水率１５１ｖｔ％）
　１０４ゾを水１，５０１に分散して、ベントナイ）　
５．５　ｗｔ％懸濁水（ｐＨ１０，７）を得、ここへ６
Ｎ硫酸４ｍノを加え、懸濁水のｐｉ−を値を６．８に調
整した。

上記ポリビニルアルコール水溶液１２０ｇとベントナイ
ト懸濁水５０５＋を混合後、１２０℃Ｘ６Ａの加圧水蒸
気滅菌処理を旋し、次に、無窮室において放冷後、ここ
へ、サツカロマイセス・セレビシェ（Ｓ、ｃｅｒｅｖｉ
ｓｉａｅ）　２００〜を含む懸濁水（リン酸緩衝液）２
０ｇを注ぎ、７慴、ｉ　ｎ　：’ｒ）］かき１ぜた。こ
の聚７蜀水溶液のポリビニルアルコール水溶液は５？ａ
鄭、ベントナイト懸濁醤度は１．５ｗ嬶である。一方、
前記ベントナイト（粉末）の分析結果（Ｘ線回折分析、
示差熱分析、′Ｉｉ子顕徹鏡による同定、加熱脱水、グ
リセリンによる層間膨張、陽イオン交換：　８９ｍｇｑ
／１００！７．化＝５８− 学分析：　Ｓ　ｉ（ｈ　６６．７、ＡｋＯｓ　　８．７
、Ｆｅ、Ｏｓ８．１、Ｃａ０　０．８、ＭｇＯ１，６、
Ｎ　ａｔ　Ｏ８、２、Ｋｔｏ　　０．８、ＴｉＯ２０，
０、Ｍｎ０　０．０、ＰｔＯ５０，０、ｆｌｔｏ　　１
５ｗ　ｔ　％　）から、その乾燥粘土鉱物組成（ｗｔ％
）は、モンモリロナイト群６４、イライト類１、タルク
３、パイロフィライト１８、バーミキュライト１である
。したがって、上記懸濁水溶液の３層型粘土鉱物濃度は
１．８ｗｔ％、また、３層型粘土鉱物の使用量は、ポリ
ビニルアルコールの％である。

この懸濁水溶液１９０ｇを、無菌室において、ラシヒ・
リング（８ｇｍｘ８詣）成型用鋳型（６８，０個分）へ
注入し、−’１０℃×０．５んの冷却（凍結・成型）を
施した後、鋳型の上面カバーを取シ去シ、成型体（ラシ
ヒ・リング）を支持する鋳型下面カバーを８ん間真空脱
水した結果、解凍後、弾性に富むゲル成型品３９ｇ（脱
水率７９　ｗｔ％、含水率ＧＢｗｔ係）を得た。この成
型品を、あらかじめ滅菌した０、９チ食塩水８０彪に６
ｈ浸漬した結果、成型ゲルは吸水し４８ｇ（含水率６６
％）に達した。−また、この浸漬液に、前記細菌は検出
されなかった。

直径３（：ｒｎ、高さ６０ｃｒｎの磁製円筒に、上記成
型ゲル４８ｇを不規副光てんし、あらかじめ１２０℃Ｘ
　２０ｍ１ｎの滅菌処理を施した培地（グルコース４チ
、酵母エキス１チ、塩化アンモニウム０．２％、硫酸マ
グネシウム七水和物０．０１チ、塩化カルシウム０．０
０６％、ｐＨ５，５，２９°Ｃ）を２５ｍ１７ｈの流速
で塔底へ８５＆送人後、ゲルの微少量を採シ、走査型電
子顕微鏡により観察した結果、直径３１０μｍの酵母集
落を多数認めたが、包括空洞の亀裂は見られなかった。

次に、塔底へ、エチルアルコール合成用基質水浴液（グ
ルコース１０ｗｔ％、硫酸マグネシウム七水和物１００
７）ｌＦ？？１ｋ７）Ｈ５，５，３０℃）を８０ｍ１：
／ｈの流速で送入し、流出液につき、エチルアルコール
（ガスクロマド分析法）とグルコース（ジニトロサリチ
ル酸法）を分析した結果、グルコース残存率は０．４％
にすぎず、エチルアルコール濃度４７ｗｔ係（理論収率
の９２チ）に達したことを知った。

１力月後に、上記エチルアルコール濃度は８．８　ｗｔ
％へ低下したため、このゲルの微量を採取し、同様に観
察した結果、多数の酵母集落がいずれも直径２６０μｍ
に収縮したことを知った。次に、上記カラムの塔底へ、
再び、前記培地を２５ｍｂ／ｈの流速で１５ん送入し、
ゲルの微量につき同様に観察した結果、多数の集落はい
ずれも、直径８１０μｍＶＣ復したことを知った。その
後、塔底へ、前記エチルアルコール、合成用基質水溶液
を８０ｍ１／ｈの流速で供給し、６ｈ後には、流出液の
エチルアルコール濃ｅ　４．７　ｗｔ％が再現された。

上記操作を通じ、流出液に酵母は検出されず、固定化当
初の酵母はもちろんのこと、カラム内で増殖６１− した酵母も、はとんど全てゲル内に捕捉されたことを確
かめた。

本実施例に用いた市販ベントナイト粉末（２，０ｇ）に
つき、日本薬局法による前記膨潤試験を実施したが、沈
殿の見かけ容積は、規定のＱＯｍｂ（以上）に到底及ば
ず、わずか８ｔｎ、ｂにすぎない。同じく日本薬局法に
よるゲル形成力試験を実施したが、上層に分離した透明
液は、規定の２ｍｔ（以下）にとど１らず、１２咄に達
した。

このように、本実施例に用いた市販ベントナイトも、日
本！；局法の規定を充足しないが、既に述べたとおり、
有用な細菌同定化増殖用担体資材となりうろことが明ら
かである。

実施例４ 市販ポリビニルアルコール（けん化興９７モルチ、粘度
平均重合度２，２００．４％水溶液の粘度（２０℃）５
４６２− ｃＰ）の粉末８５ｇ（含水率６ｗｔ％）を、水９１５ｇ
に溶解し、８．Ｏｗｔ％水溶液（ｐＨ６，９）　’ｉ得
た。

市販ベントナイト（試薬用粉末、含水率１７ｖｔ％）１
０６ｇを水１．４９０　ｇに分散して、ベントナイト５
．５　ｗｔ％Ｉｇｌ’ｌＡ水（フッＨ１（１，１）を得
、ここへ６Ｎ硫酸４　ｍ、／、を加え、懸濁水のｐＨ値
を６．６に？Ａ整した。

上記ポリビニルアルコール水溶液８８０９とベントナイ
ト懸濁水２０ｇを混合後、１２０℃ｘ　６　ｌｌの加圧
水蒸気滅菌処理を施し、次に、無萌室において放冷後、
ここへ、クルイフエロマイセス・マルキシアヌス（Ｊ（
ｌｔｂｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓｍａｒｘｉａｎｊｔ、ｓ）
　０．０９９を含む懸濁液２０祷を添加し、７ｍ１ｎ間
かきまぜた。このｉｔ’！　濁水溶液のポリビニルアル
コール丙；度は７　ｗｔ％　、ベントナイト懸濁濃度は
０．２５ｕ鴻である。一方、上記ベントナイト（粉末）
の分析結果ＣＸｍ回折分析、示差熱分析、電子懸微鐘に
よるｌｉｌ定、加熱脱水、グリセリンによる層間膨張、
陽イオン交換：　７８　ｍｅｑ／ｌ　ｏ　ｏ　ｇ、化学
分析：５ＺＱ２　６７．２、Ａｔ、０３６．８、ノー”
ｅ２０．　　４１　、　Ｃａ　（ン　　０．８　、　Ｍ
ｆｌＯ１，６、Ｔ　ｉｅ。

０．４、−ＷｎＯＯ，１、Ｐ２Ｑ！　　０．１．１Ｊａ
２０　３．２、ＩＣ２００，４１０ｔ％）から、その乾
燥粘土鉱！１ｌＩＪ組成（ｗｔチ）は、モンモリロナイ
ト群５８、イライト類１、タルク１、パイロフィライト
１１、バーミキュライト１である。したがって、上記懸
濁水溶液の３層型粘土鉱物濃度は０．１７１Ｄ謁、また
、３ｊ響ノ〜す粘土鉱物１の仕度は、ポリビニルアルコ
ールの濃度のイ。である。

この時濁水？Ｗ＃、４２０９を、’Ｊｉｅ菌室において
、ラシヒ・リング（８罷ｘ　８　＋ｎｍ　）　ＦＺ４；
ｉ用鋳型（１，４０Ｏｆ＋、’１分）へ注入し、−６８
℃×５ｈの冷却（疎結・成型）を施した後、鋳型を解体
して成型体全敗り出し、７ｈ間真空脱水した結果、解凍
後、ゲル１６０？（脱水率６２ｗｔ％、含水率８０ｗｔ
％）を得た。

あらかじめ滅菌した０、９−食塩水１００威に６ｈ浸漬
した結果、成型ゲルは吸水して１８２ｇ（含水率８８ｒ
ｏｔ％）に達した。また、この浸漬液に前記酵母萌は検
出されなかった。

実施例２のカラムに、上記ゲル１８０ｇを不規別売てん
し、あらかじめ１２０℃Ｘ　２０ｎＬｉＴＬの滅菌処理
を施した増殖用培地（イヌリン１％、麦芽エキス０．８
％、酵母エキス０．８係、ｐＨ６，５，２７°Ｃ）を５
８１１７１／ｈＯ流速で塔底から送入した。４８　ｈ、
後のゲルを、走査型電子顕微鏡を用い観察した結果、ゲ
ル内に直径４５０μｍの集落を認めたが、ゲル組織に裂
目は見られなかった１、培地を更に１０ｈ送大した後、
同様に観察した結果、集落直径は５５０μ包を超え、ゲ
ル組織に亀裂は認められないものの塔頂流出液に酵母が
懸濁するのを認めた。したがって、集落直径としては６
５− ５５　ｔ）　ｔｉ　ｍを超えることなく制御する心安全
認めた。

本実施例に用い／こ市販ベントナイト粉末（２，１）に
つき日本薬局法の定める前記膨潤試験を実姉したが、沈
殿の見かけ容積は、規定の２０Ｉ＋ｌｌ（以上）に到底
及ばず、わずか９酩にすぎず、同じく日本薬局法による
ゲル形成力試験を天施１．だが、上層に分離した透明液
は、規定の２１（以下）に辛うじて合格する程度であっ
た。

このように、実施例１．３．４に用いた市販ベントナイ
ト３種は、いずれも日本薬局法の規定を充足しないが、
既に述べたとおり、本発明において、有用な微生物固定
化・増殖用担体質材となりうることか明らかである。

実施例５ 市販ポリビニルアルコール（けん化度９６モル獣粘度平
均重合度１，５００．４チ水溶液の粘度（２０℃）２４
ｃＰ）の粉末８７ｇ（含水率７　ｗｔ％　）を水９１９
ゾに溶解し、６６一 ８ｗｔ％水溶液（ｐＨ６，９）を得た。

市販バーミキュライト粉末（含水率９ｗｔ％）　１２０
　’Ｉｋ水１，２０１に分散し、ｆ３ｗｔ％ｉＦ’　／
ｆｉ水（ｐＨ６，６）を得た。

上記ポリビニルアルコール水溶液とバーミキュライト懸
濁水の各１９０９を混合後、１２０℃Ｘ　２０ｍ１ｎの
加圧水蒸気滅菌処理を施し、次に、無菌室において放冷
後、ここへ、アルトロバクター・シンプレックス（／４
ｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｓｉｍｐｌｅｘ）（別名コリネ
バクテリウム・シンプレックス、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃ　
ｔ、ｅｒｉｗｍ　ｓｉｍｐｌ　ｅｘ）　０．０２　’Ｊ
を含む懸濁液（トリス（ヒドロギシメチル）アミノメタ
ン・塩酸緩衝液、ｐ／−／７．５）２０９を注ぎ、７ｍ
ｊｎ間がきまぜた。この懸濁水溶液ノポリビニルアルコ
ールとバーミキュライトの儂度はそれぞれ８．８ｗｔ％
である。一方、バーミキュライト（粉末）の分析結果か
ら、その乾燥粘土鉱物組ｇ（ｗｔ係）は、モンモリロナ
イト群４、イライト類２、タルク３、パイロンＡｌｖ０
３　１９、ＴｉＯ２２、ｌｉ”ｅ２０３８、Ｆ’ｅ０　
２、Ｃａ０　１、Ｍ（７０２２、Ｋ２Ｏ１，Ｎａ３０　
１）である。

したがって、上記：特渇水溶液の３層型粘土鉱物９１Ｗ
は、８．５ｍ％、また３層型粘土鉱物の使用量はポリビ
ニルアルコールとほぼ等量である。この懸濁水溶液４０
０ｇを、無菌室忙おいて、ラシヒ・リング（８＋ｎ肩ｘ
８＋＋ｓ＋）成型用鋳型（１，３００１１，！ＩＩ分）
へ注ぎ込み、−６５℃Ｘ０．５ｈの冷却（Ｒ結・成型）
を施した後、鋳型の上面カバーを取り去り、成型体（ラ
ー／ヒ・リング）を支持する鋳型下面カバーを６ｈ間ノ
「空脱水した結果、解凍後、弾性に富むゲル成型品７６
９（脱水率８１ｗｔ％、含水率６０　ｔｎｔ％　）を得
た。これを、あらかじめ滅菌した０、９％食塩水１００
−に６ｈ浸漬した結果、８６ゾ（含水率６６ｗｔ％）に
達した。また、この浸漬液罠、前記に川幅は検出されな
かった。

増殖用培地（ペプトン０．５％、コルチダル１娯メチル
アルコール４％、３１℃）５０ａを、坂ロフラスコ（５
００就）に採り、１２０℃Ｎ２０ｍ１ｎの滅菌処理を施
し、無菌室に放冷後、ここへ、上記ラシヒ・リング１２
０個（８ｇ）を投入し、焼綿栓を付し、２７〜２９℃の
恒温室において４０　ｈ、振とうした。ゲルの極微量を
採り、走査型電子顕倣鏡によシ観察した結果、直径１７
０μｍの細菌集落を認めた。

上記フラスコから培地を除き、ここに、あらかじめ１２
０’ＣＸ　１５ｍ１ｎの滅菌処理を施した。プレドニゾ
ロン（Ｐｒｅｄｏｎｉｓｏｌｏｎｅ−，１１β、１７α
、２１−トリヒドロキシ−１，４−プレグナジェン−３
，２０−ジオン）合成用基質溶液（コルチゾルｃｏｒｔ
ｉｓｏｌ　”；Ｅ　１１β、１７α。

２１−トリヒドロキシ−４プレグネン−３，２０−ジオ
ン０、　Ｉ　Ａ４、メチルア／ｌ／　コー　ル４％、ｐ
Ｈ７，３５°Ｃ）５０ｍＡ６９− を注入し、焼綿栓を付し、２６〜２９℃の恒温室におい
て、２４娼振とうした。基質溶液を紫外線吸収ス被りト
ル分析（２８５ｎｒｎｆｙＩ光度）、薄層クロマト分析
（シリカゲル−プロピレングリコール−クロロホルム）
、高速液体クロマト分析（クロロホルム抽出）により分
析した結果、プレドニゾロン＃閑は１．４・ｗｔ％（収
率４８モル係）であった。

実姉例６ 市販ポリビニルアルコール（けん化度９９．７モル係、
粘度平均重合度２，６００．４係水溶液の粘度（２０℃
）６４ｃＰ）の粉末１８３ｇ（含水率８ｑｎｔ％　）を
、水１，０００　ｇに溶解し、１１　ｗｔ多水溶液（ｐ
ｉｆ　６．８　）を得た。

パイロフィライト（岡山県三石産、含水率６　ｗｔ％　
）　７８９を水１．０００　ｇに分散して、６．８ｗｔ
％懸濁水（ｐｌｉ　６．５）を得た。

上記ポリビニルアルコール水溶液９０ｇとパイロフィラ
ー７０＝ イト懸濁水１１を混合後、１２０℃ｘ５ｈの加圧水蒸気
滅菌処理を施し、次に、無菌室において放冷後、ここへ
、サツカロマイセス・セレビシェ２ｇを含む懸濁水（リ
ン酸緩衝液、ｐＨ７）２０ｇを注ぎ、’７ｍ１ｎ曲かき
まぜた。このｆｆ４濁水溶液のポリビニルアルコール濃
度はＳＷｔ係、パイロフィライト懸濁濃度は０．６ｔｏ
ｔ＄である。一方、前記パイロフィライトの分析結果か
ら、その乾燥粘土鉱物組成（？ｕｔ％）は、モンモリロ
ナイト群４、イライト０、タルク０１パイロフイライト
８３、バーミキュライト８（ＳｉＯｔ　　６６、Ａｉ、
０３２９、Ｔｉ１ｔ　Ｏ，０４、Ｉｔ’ｅ、Ｏｓ　Ｏ，
２、Ｆｅ０Ｏ８１、Δ４ｇＯＯ，５、ＣａＯＯ，４、Ｎ
勧０　０．０８、Ｐｔ　Ｏ＋　＋　Ｋ２Ｏこん跡）であ
る。したがって、上記懸濁水溶液の３層型粘土鉱物濃度
は０．５ｑｍ係、また、３層型粘土鉱物の使用量は、ポ
リビニルアルコールのイ６である。この懸濁水溶液１２
０ｇを、無菌室において、ラシヒ・リング（８？ＩＩ＊
ｘ８＊ｙ）成型用鋳型（４００個分）へ注入し、−６５
’ＣＸ０．５ｈの冷却（凍結・成型）を施した後、鋳型
の」二面カバーを取り去り、成型体を支持する鋳型下面
カバーを５ｉＬ間真空脱水した結果、解凍後、ゲル５９
ｇ（脱水率５１ｗｔ４ｒ、含水率７５　？ｏｔ％）のゲ
ルを得、これを、あらかじめ滅菌した０９％食塩水６０
１に６ｈ浸漬した結果、成型ゲルは吸水し、７１（含水
率７　ｇ　？ｏｔ％　）に達した。

次に、このゲルを多数の断片（２ｍＸ　’ＬＴｍＸ　ｉ
、　１α）に裁断片につき、機械的強度を測定した結果
、引；展り強度６に９／ｃｍｅまた圧縮強電は４に９／
ｃＩｎ２以上であった。咬だ、指先につ捷んで強烈に圧
迫しても、全く形ぐずルせず、再び元に復した。

実施例７ 市販ポリビニルアルコール（けん化ＩＷ９７モル係、粘
度平均重合度Ｌ７００．４チ水溶液の粘度（２０°Ｃ）
２７ｃＰ）の粉末１．０４０５’（含水率８　ｗｔ％）
を、水８．ＯＯＯｇに溶解して、１０．６ｗｔ％水溶液
（ｐＨ６，８）を得た。この水溶液へ市販活性白土（含
水率１１ｗｔ％）６８ｇを添加後、２５ｒｎ、ｉｎ間か
きまぜて得た懸濁水溶液（７ｔＨ８，５）へ、２Ｎ水酸
化ナトリウム２６ＩＱ−加え、７）Ｈ６，８に調整した
。

次に、１２０℃×８０ｍ１ｎの加圧水蒸気滅菌処理を施
し、無菌室において、放冷後、その２００ｇに、アセト
バクター・サブオキシダンス（Ａｃｅｔｏｂａ、ｃｔｅ
ｒ　ｓｖ、ｂｏｚｙｄａｎｓ）４０ｍ９を含む懸濁水（
リン酸緩衝液）２０９を注ぎ、Ｔｍｌｔｖ間かきまぜた
。この懸濁水溶液のポリビニルアルコール濃度は１０ｗ
ｔ％、活性白土懸濁濃度は０．６ｗｔ係である。

一方、活性白土の分析結果から、その乾燥粘土鉱物組成
（１１＋ｔ％）は、モンモリロナイト群４８、イライト
７、タルク４、パイロフィライト１４、バーミキュライ
ト２、カオリナイト＋ハロイサイト１７　（Ｓｉｎ２７
４、Ａｌｔｏｓ７３− １８、／”１１２０３　１、Ｍ（１０２、ＣａＯ４、ｙ
ａ２０＋に２０１）である。したがって、上記懸濁水浴
６ｉの３層型粘土鉱ｗＪ濃度は０．４５ｗｔ係、また、
８層型粘土鉱物の濃度はポリビニルアルコールのイ３で
アル。

この懸濁水溶液２２０ｇを、無菌室において、ラシヒ・
リング（８ｔｍＸ８Ｍｍ）成型用鋳型（７３０個分）へ
注入し、−４５℃Ｘ０．５ｈの冷却（凍結・成型）を施
した後、鋳型の上面カバーを取り去り、成型体を支持す
る鋳型下面カバーを８４ｈ間真空脱水した結果、解凍後
、ゲル６６ｇ（脱水率７０　ｗｔ％、含水率６４ｗｔチ
）宿杼だ。この成型体を、あらかじめ滅菌した０、９％
食塩水８ＱｍＡに６ｈ浸漬した結果、成型ゲルは、吸水
し、７４ｇ（含水率７４ｔｖｔ％）に達した。

実施例２のカラムに、上記ラシヒ・リング７４　ｇ’ｃ
不規則充副光し、あらかじめ１２０℃Ｘ　２０ｍ１ｎの
滅菌処理を施した培地（Ｄ−ソルビット５％、コーン・
ステイープ・リーフ← カーＣｏｒｎ　５ｔｅｅｐ　１ｉｑｕｏｒ　０．１％％
　フマール酸アンモニウム０５チ、ｐＨ６，５，８０℃
）を２８彪／ｈの流速で塔底から送入した。４０ｈ後に
、ラシヒリングの極微量を採り、走査型電子顕微鏡を用
いて観察した結果、ゲル内に直径２００μｍの細菌集落
を認めた。この場合、集落包括空洞に裂目は全く見られ
なかった。

次にあらかじめ１２０℃Ｘ　１５ｍ１ｎの滅菌処理を施
したＬ−ソルボース合成用基質水溶液（Ｄ−ソルビット
５チ、ｐＨ６，５）を２０ｍＡ／ｈの流速で塔底から送
入した結果、１７ｈ？差の流出液のＬ−ソルボースは８
．５ｗｔ係（収率７０モル％）であった。

実施例８ 市販ポリビニルアルコール（けん化度９９．７モルチ、
粘度平均重合度２，６００．４％水溶液の粘度（２０℃
）６４ｃＰ）の粉末８１ｇ（含水率９ｗｔ％）を、水ｔ
、１８０ｇに溶解し、６．１ｗぴ水溶液（ｚ＋Ｈ６，９
）を得た。市販酸性白土（含水率１２ｕｔ％）１２７ｇ
を水１，２８０ｇに分散して、酸性白土８．２ｗｔ多懸
多水濁水＃６）を得た。

上記ポリビニルアルコール水溶液１４０９と酸性白土懸
濁水２０９とを混合後、１２０℃×８０ｍ１Ｂの加圧水
蒸気滅菌処理を施し、次に、無菌室において放冷後、こ
こへ、セラチア　−マ／ｌ／セツセンス（Ｓｅｒｒａｔ
ｉａ　ｍｗｃｅｓｃｅｎｓ）４０■を含む懸濁水（リン
酸緩衝液）２０ゾを注ぎ、’ｌｍ１ｎ間かき１ぜた。こ
の懸濁水溶液のポリビニルアルコール濃度は４．７ｔｖ
ｔへ酸性白土懸濁濃度は０．９　ｗｔチである。一方、
前記酸性白土の分析結果から、その乾燥粘土鉱物組成（
ｗｔ％）は、モンモリロナイト群４６、イライト頭６、
タルク１、パイロフィライト１４、バーミキュライト４
、カオリナイト＋ハロイサイト２３　（５ｚＱｔ　６９
、Ａ、１２０３　１８、ＣａＯ８、ＭｇＯ１，５、Ａｌ
　ａｔ　Ｑ　　Ｏ−１、Ｋ２Ｏ０，１、ｐ゛ｅ２ｔ）、
　　２）である。したがって、上記懸濁水溶液の３層型
粘土鉱物濃度はＣ１６ｗｔ％、また、８層型粘土鉱物の
濃度は、ポリビニルアルコールのイである。

この懸濁水溶液１８０ｇを、無菌室において、ラクヒ・
リング（８ｍｗＸ８罷）成型用鋳型（６００個分）へ注
入１−１−６３℃Ｘ０．５＆の冷却（凍結・成型）を怖
じた後、鋳型を９ｗ体して成型体を取り出し、６ｈ間隔
真空脱水した結果、解凍後、ゲル７７９（脱水率５７　
ｗｔ％、含水率８Ｔｗｔチ）を得た。この成型体を、あ
らかじめ滅菌した０、９％食堪水８０ｒｎｔに６ｈ浸漬
した結果、成型ゲルは吸水し、８４ｇ（含水率８８ｗｔ
チ）に達した。また、この浸漬液に、前記１聞閑は検出
さ九なかった。

実姉例２０カラムへ、上記ラシヒ・リング８４７７を不
規則光てんし、あらかじめ１２０℃ｘ　２０ｍ１ｎの滅
菌処理を施した培地（グルコース０．４ｑＩｊＸ酵母工
キス１％、イプトー７７＝ ン１％、肉エキス０．４％、塩化ナトリウム０．／１．
％、ｐＨ７，３０℃）を２８祷／んの流速で塔底から送
入した。３５ん後に、ラシヒリングの極微量を採り、走
査型電子顕微鏡により観察した結果、直径２７０μｍの
細菌集落を認めたが、包括空洞には、全く亀裂はなかっ
た。

次に、あらかじめ１２０℃Ｘ　２０ｍ１ｎの滅菌処理を
施したＬ−イソロイシン合成用基質（グルコース８％、
Ｄ−トレオニンし５％、硫酸マグネシウム七水和物０．
０７％、リン酸緩衝液０．０６ＭＸｐＨ７，３０℃）を
２５１１１７ｈの流速で塔底から送入した結果、３５ｈ
後の流出液のＬ−イソロイシン（Ｌ−α−アミノカプロ
ン酸）濃度は０．６ｗｔ％（理論収率の８７％）に達し
た。

市販ポリビニルアルコール（けん化度９６モルチ、粘度
平均重合度１，７００．４％水溶液の粘度（２０℃）２
７ｃＰ）の粉末８７９（含水率’Ｉｗｔ％）を、氷９２
０ｇに溶解７８− し、８ｗｔ％水溶液（ｐＨ７−０）を得た。

市販タルク（含水率１４ｗｔ％）１２０！ｉ’を、水Ｌ
ｉ２Ｏゾに分散して、タルク８ｗｔチ懸渭水（ｐＨ８）
を得た。

上記ポリビニルアルコール水溶ｉｔ！８５０！ｌｉ＋と
タルク懸濁水８０ｇを混合後、１２０℃ｘ　２０ｍ１ｔ
Ｌの加圧水蒸気滅菌処理を施し、次に、無菌室において
放冷後、ここへ、アセトバクター・サブオキシダンス（
Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｓｗｂｏｘｙｄａｎｓ）　　４
　Ｑｍｐを含む懸濁水〔リン酸緩衝液ｐＨ７）２０鮎を
添加し、’ｌｍ１ｔｒ間かき寸ぜた。この懸濁水溶液の
ポリビニルアルコールとタルクの濃度は、それぞれ７ｗ
ｔチと０．６　ｗｔ％である。

一方、タルク（粉末）の分析結果から、その乾燥粘土鉱
物組成（ｖ）ｔ　％　ｌは、モンモリロナイト群６、イ
ライト類２、タルク８７、パイロフィライト２、バーミ
キュライト１、（Ａ４ｇ０８２．５ｉｆ２６４、Ａ１２
ｏｓ　　１、ＣａＯＯ，８、Ｋ２Ｏ０，８、Ｎａｑｏ　
　０．７、Ｆｅ、０．　０．５）である。したがって、
上記懸濁水溶液の３層型粘土鉱物濃度は０．６　ｗｔ％
−！たは、３層型粘土鉱物の濃度は、ポリビニルアルコ
ールの濃度のイ２である。

この懸濁水溶液４００ゾを、無菌室において、ラシヒ・
リング（８叩ｘ８＋ｕ＋）成型用鋳型（１，８８０個分
）へ注入し、−７５℃×０５ｈの冷却（凍結・成型）を
施ｊ〜た後、鋳型を解体して成型体を取り出し、８ん間
真空脱水した結果、解凍後、ゲル９８ｇ（脱水率Ｔ６ｗ
ｔ％、含水率６９ｗｔ％）を得た。この成型ゲルを、あ
らかじめ滅菌したｑ９９チ塩水１００配に６ん浸漬した
結果、成型ゲルは吸水して、１０５ｇ（含水率７１ｕｔ
％）に達した。また、この浸漬液に、前記細歯は検出さ
れなかった。

実柿例２のカラムに、上記ゲル１０５９’に不規別売て
んし、あらかじめ１２０℃ｘ　２０ｍ１ｎの滅菌処理を
施した培養液（Ｄ−ソルビット５チ、コーン・ステイー
プ・リカー０．２％、フマール酸アンモニウム１％、ｐ
Ｈ６５）を４３ｍ１．　／　ｈの流速で塔底から送入し
、３８Ａ後、ゲルの極微量を採り、走査型電子顕微鏡を
用いて観察した結果、直径３２０μｍの集落を認めたが
、ゲル組織の亀裂は認められなかった。次に、ジヒドロ
キシアセトン合成用基質水溶液（グリセリン２，５％、
コーン・ステイープ・リカー０．１係、フマール酸アン
モニウム１ｑ６、ｐＨ６，５，３０℃）を４５ｍＡ　／
　／Ｌの流速で塔底から送入した結果、３２ｈ後の流出
液のジヒドロキシアセトン濃度は１．２１ｔ＋ｔ％（収
率５０モル％）実施例１０ 市販ポリビニルアルコール（けん化度９７モルチ、粘度
平均重合度２，２００．４チ水溶液め粘度（２０℃）５
４ｃＰ）の粉末８５ｇ（含水率６　ｗｔ％）を、水９１
４ｇに溶解し、８．　Ｏｗｔ係氷水溶液　ｐＨ６，８）
を得た。

８１− イライト（島根県大田市産、含水率８１Ｄｔ％）９８ｇ
を、水１，２００　ｐに分散し、イライト８ｕｔ％、懸
濁水（７ＪＨ７，４）？：得た。

上記ポリビニルアルコール水溶液３７０ｇとイライト懸
濁液２０ｇを混合後、１２０℃×２ｈの加圧水蒸気滅菌
処理を施し、次に、無菌室において放冷後、ここへ、グ
ルコノバクタ−・サブオキシダｙｘ　（Ｇｌｗｃｏｎｏ
ｂａｃｔｅｒｓｕｂｏｘｙｄａｎｓ）　　４０ｍ９を含
む懸濁水（リン酸緩衝液ｐＨ７）２０ｄを加え、７ｍｚ
ｎ間かきまぜた。この懸濁水溶液のポリビニルアルコー
ルとイライトの濃度は、それぞれ’１．３ｗｔ％である
。一方、イライト（粉末）の分析結果から、その乾燥粘
土鉱物組成（ｗｔ％）は、モンモリロナイト群１、イラ
イト類８７、タルク１、グイロフィライト６、バーミキ
ュライト１（Ｓｉ０２５２、Ａｌｔｏｓ　２４、Ｆ’ｅ
２０．　３、Ｆｅ　Ｑ　８　、Ａ４　ａ　０４、Ｃ（Ｌ
Ｏ１、Ｋ２Ｏ７、ＮａｔＯ１、８２− Ｔｉｅ、１．　Ｍ勉０３２）である。したがって、上記
懸濁水溶液の３層型粘土鉱物濃度は、０．８６ｗｔ％、
寸た３層型粘土鉱物の濃度はポリビニルアルコールの濃
度のイ０である。

このＦＫ　濁水４１０ｇを無菌室において、ラシヒ・リ
ング（８間×８珂ｍ）成型用鋳型（１，８６０個分）へ
注入し、−５４℃×０．５にの冷却（凍結・成型）後、
鋳型の上面カバーを除き、成型体を支持する下面カバー
に、６ん間真空脱水を施した結果、解凍後、成型ゲル２
８０！ｉｌ　（脱水率４４７ｖ話、含水率８’１ｗｔ係
）を得た。この成型ゲルを、あらかじめ滅菌した０、９
チ食塩水１００ｍＡに６ｈ浸漬した結果、ゲルは吸水し
て、２６１７（含水率８８　ｑｏｔ％）に達した。

捷た、この浸漬液に、前記細菌は検出されなかった。

実施例２のカラムに、上記ゲル２６８　Ｐ全不規側光て
んし、あらかじめ１２０℃×２０ｍ１ｎの滅醒処理を施
した培地（Ｄ−アラビトール５％、コーン・ステイープ
・リカー０．１％、酵母エキス０．１％、リン酸カリウ
ム緩衝液０．０６ＭＸｐＨ５，３５℃）　ｆｆ１３０ｒ
Ｒｔ／ｈの流速で塔底から２０ｈ送人後、ラシヒ・リン
グの極微量を採り、走査型電子顕微鐘を用いて観察した
結果、直径１７０μｍの細菌集落を認めたが、ゲル組織
に亀裂は全く見られなかった。次に、塔底へ、あらかじ
め滅菌したＤ−キシロース合成用基質水溶液（Ｄ−アラ
ビトール５チ、硫酸マグネシウム七水和物０．０２チ、
リン酸カリウム緩衝液Ｃ１０６ＭＸｐＨ５，３５’Ｃ）
ｅ、５Ｆ３Ｔｌｌ／ｈ、の流速で塔底から送入した結果
、２４五後の流出液のＤ−キシロースの濃度は８．５　
ｗｔチ（収率４０モル％）であった。

以上、実施例１〜１０に示すとおり、３層型（２：１型
）粘土鉱物は、いずれも、本発明において、微生物固定
化増殖用担体として有用であることが明らかである。

手続補正書 昭和５７年５月１４日 特許庁長官　島１）　春樹　殿 １、事件の表示 昭和５６年特許願第２０３４２９号 ２、発明の名称 微生物生函体の固定化・増殖法 ３、補正をする者 事件との関係　　特許出願人 名称　（４４４ン　　日本石油株式会社４、代理人 ５０ １− ６、補正の内容 （１）明細書の下記の箇所を補正する。

２−

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. けん化度９５モルチ以上で、しかも粘度平均重合度Ｌ５
   ００以上のポリビニルアルコールと、８層型（２：１型
   ）複合層を基本単位とする積層構造型粘土鉱物、および
   微生物生菌体の３者を含み、しかも、ポリビニルアルコ
   ールに対する粘土鉱物の添加量を、ポリビニルアルコー
   ルの５倍以下とした混合懸濁水溶液を成型用鋳型へ注入
   し、これを−６℃より低い温度で凍結・成型し、しかる
   後、この凍結成型体を融解させることなく脱水率５ｗｔ
   ％以上に真空脱水し、必要に応じ水中に浸漬することに
   よ損金水率２０〜９２ｗｔ％（湿潤体基準）に到達させ
   、微生物生菌体を包括（包埋）したゲルを得、このゲル
   へ微生物増殖用培地を供給し、これによシ形成される増
   殖徹生物菌体集落の直径を５０〜５５０μｍまで拡大さ
   せること’ｅ４？徴とする微生物生菌体の固定化・増殖
   法。