EA038512B1 - Конъюгаты майтанзиноидов и их терапевтическое применение - Google Patents

Конъюгаты майтанзиноидов и их терапевтическое применение Download PDF

Info

Publication number
EA038512B1
EA038512B1 EA201500905A EA201500905A EA038512B1 EA 038512 B1 EA038512 B1 EA 038512B1 EA 201500905 A EA201500905 A EA 201500905A EA 201500905 A EA201500905 A EA 201500905A EA 038512 B1 EA038512 B1 EA 038512B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
asparagine
citrulline
compound
formula
phenylalanine
Prior art date
Application number
EA201500905A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201500905A1 (ru
Inventor
Томас Ниттоли
Original Assignee
Регенерон Фармасьютикалз, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Регенерон Фармасьютикалз, Инк. filed Critical Регенерон Фармасьютикалз, Инк.
Publication of EA201500905A1 publication Critical patent/EA201500905A1/ru
Publication of EA038512B1 publication Critical patent/EA038512B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D507/00—Heterocyclic compounds containing a condensed beta-lactam ring system, not provided for by groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D505/00; Such ring systems being further condensed
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5365—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68033—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a maytansine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6869—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of the reproductive system: ovaria, uterus, testes, prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6871—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting an enzyme
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)

Abstract

Изобретение относится к соединениям сшивающих агентов, применимых при ковалентном сшивании биологически активных молекул с лигандами. Описываемые соединения также относятся к биологически активным молекулам и конъюгатам лигандов, где биологически активная молекула сшита с лигандом с помощью сшивающего агента. В раскрытии также приводятся составы, включающие в себя конъюгаты биологически активной молекулы-лиганда, методы изменения роста идиобласта и методы лечения с помощью конъюгатов или составов.

Description

Область техники
В настоящем раскрытии приводятся конъюгаты лиганда - биологически активной молекулы, где лиганд соединен с биологически активной молекулой с помощью сшивающего агента. В настоящем раскрытии также приводятся конъюгатные соединения в лекарственных препаратах для применения в различных терапевтических целях.
Уровень техники
Пролиферативные заболевания характеризуются неконтролируемым ростом и распространением идиобластов. Если распространение не контролируется, это может привести к смерти. Патологическое разрастание, например рак, вызывается как внешними факторами (например, табак, химические вещества, радиация и возбудители инфекции), так и внутренними факторами (наследственные мутации, состояние иммунной системы, мутации, возникшие вследствие метаболизма). Эти причинные факторы могут действовать вместе или последовательно для возбуждения или ускорения патологического разрастания клеток. Рак лечится хирургией, радиотерапией, химиотерапией, гормонами и иммунотерапией. Тем не менее, существует потребность в более эффективных лекарствах против разрастания клеток.
Идеальной терапией разрастания клеток было бы обеспечение нацеленной доставки крайне цитотоксических средств в клетки опухоли и оставление нормальных клеток нетронутыми. Обычное химиотерапевтическое лечение, например, с помощью майтансина, является ограниченным в силу токсичных побочных эффектов, возникающих из-за воздействия препарата на нераковые клетки. Были испробованы различные подходы к целевой доставке лекарств, включая применение конъюгатов, нацеленных на опухоль зондов (таких как антитела или факторы роста) с токсинами, такими как токсины синегнойной палочки или дифтерии, останавливающими синтез белков и клеток. Однако побочные эффекты включали в себя реакцию иммунной системы из-за нечеловеческих компонентов конъюгатов. Более того, полураспад конъюгатов лекарства был ограниченным в силу устранения из сосудистого русла через почечное фильтрование и краткое разрушение, поглощение ретикулоэндотелиальной системой (РЭС), а также накопления в нецелевых органах и тканях.
В другом подходе, чтобы использовать преимущества гиперпроницаемости эндотелия сосудов опухолевой ткани, применяются пассивные переносчики лекарственного препарата, такие как полимеры, липосомы и полимерные мицеллы. Полимерные препараты и макромолекулы накапливаются в плотных опухолях в силу увеличенной проницаемости и механизма удержания. Однако, барьерами на пути применения таких целевых доставок являются быстрая очистка крови от посторонних веществ, а также технологические преграды в получении высоко стандартизированных, фармацевтически приемлемых систем доставки препарата с требуемой специфичностью и избирательностью для фиксации опухолевых клеток.
Таким образом, существует потребность в целевых лекарственных препаратах против разрастания клеток.
Краткое описание изобретения
Настоящее раскрытие относится к конъюгатным соединениям, представленным следующей структурной формулой (I):
где Z2 представлен следующей структурной формулой:
-Z2A-Z2B-Z2C-Z2D-, где -Z2A-, -Z2B-, -Z2C- и -Z2D-, каждый независимо, являются отсутствующими, -С(=О)-, -алкилен-, или -C(=S)-N(R4)-;
А является природным или искусственным аминокислотным остатком или пептидным остатком, имеющим 2-20 аминокислотных остатков;
Ab представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент;
АА1-АА2 представляет собой пептидный остаток выбранный из группы, включающей валинцитруллин, цитруллин-валин, лизин-фенилаланин, фенилаланин-лизин, валин-аспарагин, аспарагинвалин, треонин-аспарагин, серин-аспарагин, аспарагин-серин, фенилаланин-аспарагин, аспарагинфенилаланин, лейцин-аспарагин, аспарагин-лейцин, изолейцин-аспарагин, аспарагин-изолейцин, глицин аспарагин, аспарагин-глицин, глутаминовая кислота-аспарагин, аспарагин-глутаминовая кислота, цитруллин-аспарагин, аспарагин-цитруллин, аланин-аспарагин и аспарагин-аланин остатки;
а представляет собой целое число от 1 до 10;
q представляет собой ноль или целое число от 1 до 5;
- 1 038512
A3 представляет собой -СН2-, -СН2СН2-, или -СН2СН2СН2СН2-;
R4, R9, R10, R11, и R12 каждый представляет собой независимо водород или C1-6алкил; и
R4a представляет собой С1-6алкил.
В одном из вариантов осуществления изобретения q равно 4.
В одном из вариантов осуществления изобретения Ab способен связываться со специально выбранной клеточной популяцией. В одном из вариантов Ab является антителом или его антигенсвязывающим фрагментом, специфически связывающим опухолевый специфический антиген.
В одном из вариантов осуществления изобретение относится к конъюгатным соединениям, представленным следующей структурной формулой (Ia):
где Ab является антителом или его антигенсвязывающим фрагментом.
В одном из вариантов осуществления изобретение относится к соединениям формулы (Id)
где Ab является антителом или его антигенсвязывающим фрагментом;
АА1-АА2 является пептидным остатком, выбираемым из группы, содержащей валин-цитруллин, цитруллин-валин, лизин-фенилаланин, фенилаланин-лизин, валин-аспарагин, аспарагин-валин, треонинаспарагин, серин-аспарагин, аспарагин-серин, фенилаланин-аспарагин, аспарагин-фенилаланин, лейцинаспарагин, аспарагин-лейцин, изолейцин-аспарагин, аспарагин-изолейцин, глицин-аспарагин, аспарагинглицин, глутаминовая кислота-аспарагин, аспарагин-глутаминовая кислота, цитруллин-аспарагин, аспарагин-цитруллин, аланин-аспарагин и аспарагин-аланиновые остатки;
а является целым числом от 1 до 10;
q представляет собой ноль или целое число от 1 до 5;
А3 представляет собой -СН2-, -СН2СН2- или -СН2СН2СН2СН2-;
R4, R9, R10, R11, и R12, каждый независимо, представляет собой водород или C1-6алкил; и
R4a представляет собой С1-6алкил.
В одном из вариантов осуществления изобретение относится к соединениям формулы (Ii)
где а является целым числом от 1 до 10.
Настоящее изобретение также относится к конъюгатным соединениям, представленным следующей структурной формулой (Ib):
- 2 038512 где Ab является антителом или его антигенсвязывающим фрагментом;
а является целым числом от 1 до 10;
Z2 представляет собой следующую структурную формулу:
-Z2A-Z2в-Z2C-Z2D-, где Z2A, Z2B, Z2C и Z2D, каждый независимо, являются отсутствующими, -С(=О)-, -алкилен-, -арилен-, или -C(=S)-N(R4)-;
AA1-AA2 представляет собой пептидный остаток, выбранный из группы, включающей валинцитруллин, цитруллин-валин, лизин-фенилаланин, фенилаланин-лизин, валин-аспарагин, аспарагинвалин, треонин-аспарагин, серин-аспарагин, аспарагин-серин, фенилаланин-аспарагин, аспарагинфенилаланин, лейцин-аспарагин, аспарагин-лейцин, изолейцин-аспарагин, аспарагин-изолейцин, глицинаспарагин, аспарагин-глицин, глутаминовая кислота-аспарагин, аспарагин-глутаминовая кислота, цитруллин-аспарагин, аспарагин-цитруллин, аланин-аспарагин, и аспарагин-аланин остатки;
А3 представляет собой -СН2-, -СН2СН2- или -СН2СН2СН2СН2-;
R4, R9, R10, Rn, и R12 каждый представляет собой независимо водород или С1-6алкил; и
R4a представляет собой С1-6алкил.
В одном из вариантов осуществления изобретения относится к соединениям формулы (Ic)
где а является целым числом от 1 до 10.
В другом аспекте изобретение направлено на сшивающий агент и биологически активные вещества, представленные следующей структурной формулой (II)
Н ОнРСНз
Rio
осн3
Ζ2—ΑΑιΑΑ2 —N
R4 Rg где Z2 представлен следующей структурной формулой:
-Z2A-Z2B-Z2C-Z2D-, где -Z2A-, -Z2B-, -Z2C- и -Z2D-, каждый независимо, от остальных является отсутствующим, алкилом или -алкиленом-, арилом или -ариленом-, -С(=О)-, -О-С(=О)-, -C(=S)-N(R4)-, -N=C=S,
q представляет собой ноль или целое число от 1 до 5;
AA1-AA2 представляет собой пептидный остаток выбранный из группы, включающей валинцитруллин, цитруллин-валин, лизин-фенилаланин, фенилаланин-лизин, валин-аспарагин, аспарагинвалин, треонин-аспарагин, серин-аспарагин, аспарагин-серин, фенилаланин-аспарагин, аспарагинфенилаланин, лейцин-аспарагин, аспарагин-лейцин, изолейцин-аспарагин, аспарагин-изолейцин, глицинаспарагин, аспарагин-глицин, глутаминовая кислота-аспарагин, аспарагин-глутаминовая кислота, цитруллин-аспарагин, аспарагин-цитруллин, аланин-аспарагин, и аспарагин-аланин остатки;
Аз представляет собой -СН2-, -СН2СН2-, или -СН2СН2СН2СН2-;
R4, R9, R10, Rn, и R12 каждый представляет собой независимо водород или С1-6алкил; и
R4a представляет собой С1-6алкил.
В частных вариантах осуществления изобретение относится к соединениям структурных формул, выбранных из группы, состоящей из (IIa, IIb, IIc):
- 3 038512
В ещё одном варианте осуществления изобретение относится к соединению формулы (IId)
Настоящее изобретение относится к фармацевтическому препарату, содержащему терапевтически эффективное количество соединения формулы (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii) или его фармацевтически приемлемую соль и один или несколько фармацевтически приемлемых переносчиков, разбавителей или субстанций.
В настоящем изобретении также приводится метод снижения, замедления или остановки роста идиобластов, состоящий из взаимодействия соединения формулы (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii) с идиобластом в количестве, достаточном для замедления, снижения или остановки роста идиобласта, и при котором рост идиобластов замедляется, снижается или останавливается.
В настоящем изобретении также приводится метод ликвидации клетки, состоящий из взаимодействия соединения формулы (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii), в количестве, достаточном для гибели клетки, и при котором клетка погибает.
В настоящем изобретении также приводится метод лечения заболевания у физического лица, страдающего от болезни, состоящий из назначения этому лицу эффективного объема препарата, содержащего соединение формулы (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii).
В настоящем изобретении также приводится метод уменьшения размера опухоли, остановки роста опухоли, уменьшения прогрессии опухоли, или предотвращения прогрессии опухоли у соответствующего лица, состоящий из назначения этому лицу эффективного объема препарата для уменьшения размера опухоли, остановки роста опухоли, уменьшения прогрессии опухоли, или предотвращения прогрессии опухоли, при котором препарат содержит в своем составе соединение формулы (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii).
Настоящее изобретение также относится к предшественнику соединений биологически активной молекулы со сшивающим агентом, в виде, представленном формулами (II, IIa, IIb, IIc, IId). Соединения формул (II, IIa, IIb, IIc, IId) предоставляют структурные элементы для сопряженных соединений формул (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii). В дополнение, соединения формул (II, IIa, IIb, IIc, IId) могут быть представлены в виде препаратов, лекарственных препаратов и их фармацевтически приемлемых солей.
Кроме этого, в настоящее изобретение включено применение любого из препаратов, имеющих в составе соединения формул (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii) и/или фармацевтические композиции при производстве медикаментов для лечения, профилактики и/или улучшения состояния при заболевании.
Кроме этого, в настоящее изобретение включено применение любого из препаратов, имеющих в составе соединения формул (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii) и/или фармацевтические композиции при производстве медикаментов для лечения, профилактики и/или улучшения состояния при опухоли.
Краткое пояснение к фигурам
Фиг. 1-8 показывают результаты испытаний жизнеспособности клетки, в которых, в искусственных условиях, были выращены различные линии раковых клеток, и подвергнуты воздействию антител серий- 4 038512 ного разведения, лекарственного вещества, не связанного с белками плазмы крови, или, как показано, конъюгатов антитело-медикамент. Процент жизнеспособности был установлен в соответствии с методами, приведенными в примере 14.
Фиг. 1А показывает результаты жизнеспособности клеток С4-2 (линия клеток рака предстательной железы), подвергшихся воздействию соединения 2, изотипического контроля антитела, сопряженного с соединением 3 (Изотипический контроль-3), анти-ПСМА (простатического специфического мембранного антигена) антитела, сопряженного с соединением 3 (ПСМА-3), и не сопряженного анти-ПСМА антитела (ПСМА).
Фиг. 1В показывает результаты жизнеспособности клеток С4-2 (линия клеток рака предстательной железы), подвергшихся воздействию соединения 6, изотипического контроля антитела, сопряженного с соединением 7 (Изотипический контроль-7), анти-ПСМА антитела, сопряженного с соединением 7 (ПСМА-7), и не сопряженного анти-ПСМА антитела (ПСМА).
Фиг. 1С показывает результаты жизнеспособности клеток С4-2 (линия клеток рака предстательной железы), подвергшихся воздействию соединения 25, изотипического контроля антитела, сопряженного с соединением 21 (Изотипический контроль-21), анти-ПСМА (простатического специфического мембранного антигена) антитела, сопряженного с соединением 21 (ПСМА-21), и не сопряженного антиПСМА антитела (ПСМА).
Фиг. 2 показывает результаты жизнеспособности клеток РС3/hSTEAP1 (линия клеток рака предстательной железы, выражающая экзогенный hSTEAP1), подвергшихся воздействию соединения 6, изотипического контроля антитела, сопряженного с соединением 7 (Изотипический контроль-7), антиSTEAP1 антитела, сопряженного с соединением 7 (STEAP1-7), и не сопряженного αнти-STEAP1 антитела (STEAP1).
Фиг. 3 показывает результаты жизнеспособности клеток T47D (линия клеток рака молочной железы) подвергшихся воздействию соединения 6, изотипического контроля антитела, сопряженного с соединением 7 (Изотипический контроль-7), анти-PRLR антитела, сопряженного с соединением 7 (PRLR7), и не сопряженного анти-PRLR антитела (PRLR).
Фиг. 4 показывает результаты жизнеспособности клеток HEK293/hEGFRvIII (клетки HEK293, выражающие экзогенный hEGFRvIII), подвергшихся воздействию соединения 6, изотипического контроля антитела, сопряженного с соединением 7 (Изотипический контроль-7), анти-EGFRvIII антитела, сопряженного с соединением 7 (EGFRvIII-7), и не сопряженного анmи-EGFRvШ антитела (EGFRvIII).
Фиг. 5 показывает результаты жизнеспособности клеток MMT/hEGFRvIII (клетки ММТ, выражающие экзогенный hEGFRvIII), подвергшихся воздействию соединения 6, изотипического контроля антитела, сопряженного с соединением 7 (Изотипический контроль-7), анти-EGFRvIII антитела, сопряженного с соединением 7 (EGFRvIn-7), и не сопряженного αнти-EGFRvШ антитела (EGFRvIII).
Фиг. 6 показывает результаты жизнеспособности клеток U251/hEGFRvIII (клетки U251, выражающие экзогенный hEGFRvIII), подвергшихся воздействию соединения 6, изотипического контроля антитела, сопряженного с соединением 7 (Изотипический контроль-7), анти-EGFRvШ антитела, сопряженного с соединением 7 (EGFRvIII-7), и не сопряженного анти-EGFRvIII антитела (EGFRvIII).
Фиг. 7, части А и В показывают, соответственно, результаты жизнеспособности клеток HEK293 и U87MG, подвергшихся воздействию соединений 6, 27, 29, и 31 (все несопряженные).
Фиг. 8, части А-Е показывают, соответственно, результаты жизнеспособности клеток HEK293, U251, С4-2, РС3 и ММТ, подвергшихся воздействию соединений 6, 9, 33, и 35 (все несопряженные).
Подробное описание
Приведенные в данном описании ссылки на определенные примеры осуществления считаются только наглядными пояснениями принципов настоящего раскрытия. Более того, так как для специалистов многочисленные варианты и изменения будут очевидно выраженными, то ограничение раскрытия описанными в настоящем документе конкретными конструкциями и процессами, не предполагается. Соответствующим образом, можно будет прибегать ко всем подходящим вариантам и аналогам, попадающим в сферу раскрытия, и определенным последующими формулами изобретения.
Слова содержать, состоящий из, включать и включая, при использовании в настоящем описании и в последующих формулах изобретения, предназначены для уточнения наличия указанных свойств, целых чисел, компонентов или этапов, но они не исключают наличия или добавления одного или нескольких их дополнительных свойств, целых чисел, компонентов или этапов.
Общие термины, использованные в любом из примеров осуществления в настоящем документе, могут быть определены следующим образом; однако, указанное значение не должно толковаться как ограничивающее состав термина самим собой.
Термин конъюгатный, как используется в настоящем документе, относится к лиганду, сшивающему агенту и биологически активной молекуле. Наглядные примеры включают в себя соединения формул (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii).
Термин буфер, как используется в настоящем документе, относится к химическим структурным элементам сшивающего агента, используемого для пространственного отделения лиганда от биологически активной молекулы, а также для получения возможности разложения сшивающего агента внутри
- 5 038512 клеток. Буфер может быть представлен Z1 и Z2.
Термин макролид, как используется в настоящем документе, относится к любой биологически активной молекуле, имеющей макролидное кольцо.
Термин алкил, как используется в настоящем документе, относится к группе углеводородов, имеющей общую формулу CnH2n+1. Примеры алкила включают в себя: метил, этил, 1-пропил, 2-пропил, 1-бутил и им подобные. Типичный алкил имеет от одного до десяти атомов углерода, от одного до девяти атомов углерода, от одного до восьми атомов углерода, от одного до семи атомов углерода, от одного до шести атомов углерода, от одного до пяти атомов углерода, от одного до четырех атомов углерода, от одного до трех атомов углерода, от одного до двух атомов углерода или один атом углерода.
Термин арил, как используется в настоящем документе, относится к одновалентным или полициклическим ароматическим углеводородам, имеющих, как правило, от 6 до 18 атомов углерода. Примерами арила являются фенил (подобный бензолу), замещенные бензолы, нафтален, антрацен, инденил, тетрагидронафтил, и им подобные.
Термин алкенил, как используется в настоящем документе, относится к алифатическому линейному или разветвленному одновалентному углеводородному радикалу из двух или нескольких атомов углерода, с, как минимум, одним местом ненасыщенности. Алкенил имеет общую формулу R2C=CR2. Примеры алкенила включают в себя: этиленил, винил, аллил и тому подобные.
Термин алкинил, как используется в настоящем документе, относится к одновалентному алифатическому углеводородному радикалу, имеющему тройную связь. Типичный алкинил состоит из двух и до двадцати атомов углерода (и имеет, как минимум, одну тройную связь). Примеры алкинила включают в себя этинил, пропинил, 1-бутинил, 2-бутинил, 1-пентинил, гексинил и тому подобные.
Термин циклоалкил, как используется в настоящем документе, относится к одновалентному насыщенному радикалу карбоциклического кольца. Типичный циклоалкил состоит из от 3 до 7 элементных моноциклических кольцевых радикалов. Одним примером циклоалкила является циклогексил.
Термин гетероарил, как используется в настоящем документе, относится к одновалентному ароматическому радикалу из 5 или 6 элементных колец. Гетероарил включает в себя системы с сочлененными кольцами (как минимум одна должна быть ароматической), имеющих вплоть до от 5 до 18 атомов, содержащие один или несколько гетероатомов, выбранных из азота, серы или кислорода. Наглядными примерами гетероарила являются пиридинил, триазолил, фурил, пиразинил, тиенил, изоксазолил, индазолил, фуразанил, бензотиазофил, квиназолинил и фуропиридинил.
Термин гетероциклил, как используется в настоящем документе, относится к насыщенному или частично насыщенному карбоциклическому радикалу, как правило, из от 3 до 18 атомов углерода, в котором, как минимум, один кольцевой атом является гетероатомом, выбранным из азота, кислорода, фосфора и серы. Гетероциклил может быть, например, моноциклическим или бициклическим. Примерами гетероциклила являются пиролидинил, тетрагидрофуранил, дигидропиранил, тиоксанил, 2Н-пиранил, диоксанил, дитипнил, пиперидин и им подобные.
Фраза фармацевтически приемлемая соль, как используется в настоящем документе, относится как к органическим, так и неорганическим солям, описанным в настоящем документе конъюгатных соединений, например, соединениям формул (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii). Соли являются фармацевтически приемлемыми, и включают в себя: сульфаты, цитраты, нитраты, фосфаты, аскорбаты, бромиды, глюконаты, бензоаты, оксалаты, пантотенаты и им подобные. Следует обратить внимание на то, что фармацевтически приемлемые соли настоящего документа могут в своей структуре иметь более одного заряженного атома, а также один или несколько противоионов. Приготовление конъюгатных соединений из настоящего документа в виде фармацевтически приемлемых солей хорошо известно специалистам.
Термин человеческое антитело, как используется в настоящем документе, предназначен для охвата антител, имеющих переменные и постоянные области, полученные из цепочек человеческого иммуноглобулина.
Человеческие моноклональные антитела (mAbs) изобретения могут включать в себя остатки аминокислот, некодированные цепочками человеческого иммуноглобулина (напр., мутации, вызванные случайным или зависящим от местных условий мутагенезом в искусственных условиях, или соматической мутацией в естественных условиях), например, в комплементарно определяемых областях (CDR), в частности, в CDR3. Однако, термин человеческое антитело как используется в настоящем документе, не предназначен для охвата моноклональных антител, в которых цепочки CDR полученных из генеративных линий других млекопитающих видов, привитых к человеческим FR цепочкам.
Термин терапевтически эффективное количество, как используется в настоящем документе, относится количеству, дающему необходимый эффект, для которого он назначается. Точный объем будет зависеть от цели лечения, и будет определенным специалистом с использованием известных методик (см., например, Lloyd (1999) The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding).
Лиганды и партнеры по связыванию
Эффективность конъюгатного соединения из описанных в настоящем документе примеров осуществления зависит от избирательности лиганда связываться со своим партнером по связыванию.
В одном примере осуществления лигандами являются любые молекулы, способные с некоторой
- 6 038512 специфичностью к связыванию с заданным партнером в млекопитающем, где взаимодействие может быть использовано в терапии. В некоторых аспектах лиганд способен связываться с клеткой или клеточной популяцией.
Используемыми в настоящем документе лигандами являются антитела, лимфокины, гормоны, факторы роста, вирусные рецепторы, интерлейкины, или любые другие, связывающие клетки или пептиды молекулы или вещества.
В одном примере осуществления лигандом является антитело. Как установлено в настоящем документе, антитело относится к моноклональным антителам, поликлональным антителам, фрагментам антитела (Fab, Fab', и F(ab)2, мини антителам, дителам, триотелам и им подобным), и биспецифическим антителам. В настоящем документе, антитела могут очеловечиваться с помощью методов, описанных в патенте США № 6,596,541, и патентной заявке США №2012/0096572, каждый из которых полностью включен посредством ссылки.
Когда лиганд является антителом, он связывается со связывающим партнером антигена, являющимся полипептидом, и может являться трансмембранной молекулой (напр., рецептором) или фактором роста. Примеры антигенов включают в себя, но не ограничиваются, молекулы, такие как ренин; гормон роста, включая человеческий гормон роста и гормон роста крупного рогатого скота; фактор, стимулирующий выделение гормона роста; гормон паращитовидной железы; тиреостимулирующий гормон; липопротеины; альфал-антитрипсин; инсулин А-цепочки; инсулин В-цепочки; проинсулин; фолликулостимулирующий гормон; тиреокальцитонин; лютеинизирующий гормон; глюкагон; факторы свертывания крови, такие как фактор vmc, фактор IX, тканевой тромбопластин (ТТ), и фактор фон Виллебранда; факторы, препятствующие свертыванию крови, такие как протеин С; предсердный натрийуретический фактор; легочный сурфактант; активатор плазмогена, такой как урокиназа или человеческая моча или тканевой активатор плазминогена (t-РА); бомбезин; тромбин; гемопоэтический фактор роста; факторы некроза опухолей альфа и бета; энкефалиназа; RANTES, хемокин, выделяемый Т-клетками при активации (регулируемый при активации обычно выраженных и выделяемых Т-клеток); человеческий макрофагальный белок воспаления (MIP-I-альфа); сывороточный альбумин, такой как человеческий сывороточный альбумин; мюллерова ингибирующая субстанция; релаксин А-цепочки; релаксин В-цепочки; прорелаксин; мышиный гонадотропинсвязанный пептид; микробный белок, такой как бета-лактамаза; DNase; 19E; цитотоксический Т-лимфоцит связанный антиген (CTLA), такой как CTLA-4; ингибин; активин; фактор роста эндотелия сосудов (VEGF); рецепторы гормонов или факторы роста; протеин А или D; ревматоидные факторы; нейротрофический фактор, такой как производимый из костей нейротрофический фактор (BDNF), нейротропин-3, -4, -5, или -6 (NT-3, NT4, NT-5 или NT-6), или фактор роста нервов такой как NGF-β; фактор роста тромбоцитов (PDGF); фактор роста фибробластов, такой как aFGF и bFGF; рецептор 2 фактора роста фибробластов (FGFR2), эпидермальный фактор роста (ЭФР); трансформирующий фактор роста (TGF), такой как TGF-альфа и TGF-бета, включая TGF-βΓ TGF-e2, TGF-e3, TGF-e4 или TGF-e5; инсулиноподобный ростовой фактор-I и -II (ИФР-I и ИФР-II) (IGF-I ; IGF-II); des(I3)-IGF-I (мозговой ИФР-1), инсулиноподобный ростовой фактор связывающий белок, ЕрСАМ, GD3, FLT3, PSMA, PSCA, MUCI, MuCi6, STEAP, CEA, TENB2, рецепторы EphA, рецепторы EphB, фолатный рецептор, FOLRI, мезотелин, крипто, альфаубетаб, интегрины, VEGF, VEGFR, EGFR, трансферриновый рецептор, 1RTAI, 1RTA2, 1RTA3, 1RTA4, 1RTA5; CD такие протеины, как CD2, CD3, CD4, CD5, CD6, CD8, CDII, CDI4, CDI9, CD20, CD21, CD22, CD25, CD26, CD28, CD30, CD33, CD36, CD37, CD38, CD40, CD44, CD52, CD55, CD56, CD59, CD70, CD79, CD80. CD81, CD103, CD105, CD134, CD137, CD138, CDI52, или антитело, которое связывается с одним или несколькими опухолевыми антигенами, или рецепторами клеточной поверхности, как раскрыто в публикациях США № 2008/0171040 или №2008/0305044, и полностью включенные в данный документ посредством ссылок; эритропоэтин; остеиндуктивные факторы; иммунотоксины; костный морфогенетический белок (BMP); интерферон, такой как интерферон-альфа, -бета и -гамма; колониестимулирующие факторы (CSF), напр., M-CSF, GM-CSF и G-CSF; интерлейкины (IL), напр., от IL-1 до IL-10; супероксиддисмутаза; Т-клеточные рецепторы; белки оболочки; фактор распада; вирусный антиген, например, часть оболочки герпесвируса кошек; транспортные белки; хоминг-рецепторы; адресины; регуляторные белки; интегрины, такие как CD11a, CD11b, CD11c, CDI8, молекулы межклеточной адгезии (ICAM), VLA-4 и VCAM; опухолевый специфический антиген, такой как белки AFP, ALK, B7H4, BAGE, бета-катенин, ген brc-abl, BRCA1, BORIS, CA9 (карбоангидраза IX), каспаза-8, CD20, CD40, CD123, CDK4, СЕА, CLEC12A, рецепторная тирозинкиназа, продукт гена KIT, cMET, CTLA4, циклин-В1, CYP1B1, EGFR, EGFRvIII, эндоглин, адгезивная молекула эпителиальных клеток, EphA2, ErbB2/Fler2, ErbB3/Her3, ErbB4/HeR4, ETV6-AML, Fra-1, FOLR1, белки GAGE (напр., GAGE-1, -2), GD2, GD3, GloboH, глипикан-3, GM3, gp100, Her2, HLA/B-raf, HLA/EBNA1, HLA/k-ras, HLA/MAGE-A3, hTERT, IGF1R, LGR5, LMP2, белки MAGE (напр., MAGE-1, -2, -3, -4, -6, и -12), MART-1, мезотелин, ML-IAP, Mucl, Mucl6 (CA-125), MUM1, NA17, NGEP, NY-BR1, NYBR62, NY-BR85, NY-ESO1, OX40, pl5, p53, PAP, РАХ3, РАХ5, PCTA-1, PDGFR-α, PDGFR-β, PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C, PDGF-D, PLAC1, PRLR, PRAME, PSCA, PSGR, PSMA (FOLH1), белки RAGE, Ras, RGS5, Rho, SART-I, SART-3, Steap-1, Steap-2, STn, сурвивин, TAG-72, TGF-β, TMPRSS2, Tn, TNFRSF17,
- 7 038512
TRP-1, TRP-2, тирозиназа и уроплакин-3, и фрагменты любого из вышеперечисленных полипептидов.
Лиганды также могут включать в себя белки с анкириновым повтором, интерфероны, лимфокины такие как IL-2 или IL-3, гормоны, такие как инсулин и глюкокортикоиды, факторы роста, такие как ЭФР (EGF), трансферрин, фибронектин типа III, и т.п.
Приведенные в настоящем документе примеры осуществления являются направленными на терапевтическое применение. В одном примере осуществления лиганды готовятся для взаимодействия и связывания с антигенами, определенными как опухолевые антигены, в том числе антигены, специфичные для вида опухоли, или антигены, которые распределены, сверхэкспрессированы или модифицированы в конкретном типе опухоли. Примеры включают в себя: альфа-актинин-4 при раке легких, ARTC1 при меланоме, BCR-ABL фузоген при хроническом миелолейкозе, B-RAF, CLPP или Cdc27 при меланоме, CASP-8 при плоскоклеточной карциноме, и hsp70-2 при почечно-клеточной карциноме, а также следующие распределенные опухолевые специфические антигены, например: BAGE-1, GAGE, GnTV, KK-LC-1, MAGE-A2, NA88-A, TRP2-INT2.
Биологически активные молекулы
В настоящем документе биологически активные молекулы включают в себя любые молекулы, имеющие терапевтический эффект на млекопитающих. В типичных примерах осуществления, молекула успешно доставляется до цели в млекопитающем, и, в частности, успешно доставляется до, и внутрь клетки (напр., эндоцитоз), по сравнению с молекулами, выпускающимися в сосудистую или лимфатическую системы.
С одной стороны, биологически активные молекулы являются соединениями, приводящими к угнетению, замедлению, снижению и/или предотвращению пролиферации клеток. Биологически активные молекулы также могут приводить к гибели клеток путем их некроза или апоптоза. Наглядным примером биологически активных молекул для использования в описанных в настоящем документе конъюгатных соединениях являются: майтанзиноид (напр., DM1, DM4 и т.п.), ауристатин (напр., ММАЕ, MMAD, MMAF и т.п.), дуокармицин (напр., MGBA), доластатин, токсоиды и другие химиотерапевтически эффективные лекарства.
Другими конкретными примерами биологически активных молекул для использования в контексте настоящего изобретения, являются, например, 1-дегидротестостерон, 2-пирролинодоксорубицин, 5флуороурацил, 6-меркаптопурин, 6-тиогуанин, актиномицин D, антрациклин, антрамицин (АМС), блеомицин, бусульфан, калихемицины, кармустин цисплатин, колхицин, цианоморфолино-доксорубицин, циклофосфамид, цитарабин, цитохалазин В, дактиномицин, даунорубицин, декарбазин, дибромоманмтол, дигидрокси антрацин дион, доксорубицин, эметин, эпирубицин, этидия бромид, этопозид, грамицидин D, глюкокортикоиды, лидокаин, ломустин (CCNU), мехлоретамин, мелфалан, метотрексат, митрамицин, митомицин, митоксантрон, морфолино-доксорубицин, прокаин, пропранолол, пуромицин, пирролобензодиазапины, сибиромицин, стрептозотоцин, таксол, тенопозид, тетракаин, тиоэпа хлорамбуцил, трихотхецины, тубулизин, винкристин, а также стереоизомеры, изостеры, аналоги или производные от любого из вышеупомянутых.
В одном примере осуществления биологически активной молекулой является майтанзиноид или аналог майтанзиноида. Примеры майтанзиноидов для использования в настоящем документе описаны Widdison и др., в J. Med. Chem., 2006, 49, стр. 4392-4408, для всех целей включенные в данный документ посредством ссылок.
Материалы сшивающего агента
В настоящее изобретение включено соединение сшивающего агента, химически способного к ковалентной связи двух химических молекул. Сшивающий агент связывает две молекулы. Например, сшивающий агент может связать лиганд и биологически активную молекулу. С одной стороны, сшивающий агент является саморасщепляющимся, и, в случае связи сшивающим агентом двух или более химических молекул, высвобождает, как минимум, одну из указанных химических молекул в присутствии фермента. С другой стороны, сшивающий агент может прикрепляться к другим химическим молекулам, включая, но не ограничиваясь, аналитические средства, биомолекулы, нацеливающие средства, детектируемые метки, диагностические средства, и тому подобные. В одном примере осуществления, сшивающий агент соединяет биологически активную молекулу с лигандом. В другом примере осуществления, сшивающий агент соединяет биологически активный макролид с лигандом. В еще одном примере осуществления, сшивающий агент соединяет биологически активный макролид с антителом, или их комбинациями.
С одной стороны, сшивающие агенты полезны для ковалентной связи лигандов с терапевтическими средствами и маркерами. С другой стороны, сшивающие агенты улучшают химическую и/или системную устойчивость прикрепленных молекул. С другой стороны, сшивающие агенты снижают физиологическую токсичность прикрепленных молекул. С другой стороны, сшивающие агенты улучшают фармакокинетику, фармакодинамику и/или биологическую доступность прикрепленных молекул. С одной стороны, сшивающие агенты высвобождают биологически активную молекулу в месте, или вблизи целевой клетки или клеточной популяции в фармакологически эффективной форме. С одной стороны, высвобождение производится ферментами. С одной стороны, расположенные на сшивающих агентах группы для ферментного расщепления включают в себя, но не ограничиваются, пептидные связи, сложные эфирные
- 8 038512 связи и бисульфидные соединения. С другой стороны, сшивающий агент расщепляется с помощью изменений уровня кислотности, рН.
В соответствии с определенными примерами осуществления, сшивающие агенты, биологически активные молекулы и другие соединения настоящего изобретения, могут соединяться с антителом или антигенсвязывающей молекулой путем прикрепления к определенной аминокислоте антитела или антигенсвязывающей молекулы. Примеры прикрепления к аминокислоте, которые могут использоваться в контексте раскрытия, включают в себя, напр., лизин (см. напр., US 5,208,020; US2010/0129314; Hollander и др., Bioconjugate Chem., 2008, 19:358-361; WO 2005/089808; US 5,714,586; US 2013/0101546; и US 2012/0585592), цистеин (см., напр., US 2007/0258987; WO 2013/055993; WO 2013/055990; WO 2013/053873; WO 2013/053872; WO 2011/130598; US 2013/0101546; и US 7,750,116), селеноцистеин (см., напр., WO 2008/122039; и Hofer и др., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 2008, 105:12451-12456), формил глицин (см., напр., Carrico и др., Nat. Chem. Biol, 2007, 3:321-322; Agarwal и др., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 2013, 110:46-51, и Rabuka и др., Nat. Protocols, 2012, 10:1052-1067), искусственные аминокислоты (см., напр., WO 2013/068874, и WO 2012/166559), и кислые аминокислоты (см., напр., WO 2012/05982). Сшивающие агенты также могут быть сопряжены с антигенсвязывающим белком путем прикрепления к углеводам (см., напр., патентную заявку США 2008/0305497, и Ryan и др., Food & Agriculture Immunol., 2001,13:127-130), и дисульфидным сшивающим агентам (см., напр., WO 2013/085925, WO 2010/010324, WO 2011/018611, и Shaunak и др., Nat. Chem. Biol, 2006, 2:312- 313).
В соответствии с другими определенными примерами осуществления, сшивающие агенты, биоло гически активные молекулы, такие как лекарственные препараты, могут соединяться с антителом или антигенсвязывающей молекулой путем прикрепления к определенной аминокислоте антитела или антигенсвязывающей молекулы, образуя конъюгат антитела с лекарственным препаратом (ADC).
Соединения
В одном аспекте настоящего изобретения приводятся конъюгаты биологически активной молекулы и лиганда, представленные следующей структурной формулой (I):
где Z2 представлен следующей структурной формулой
-Z2A-Z2B-Z2C-Z2D-, где -Z2A-, -Z2B-, -Z2C-, и -Z2D- каждый независимо являются отсутствующими, -С(=О)-, -алкилен-, или -C(=S)-N(R4)-;
А является природным или искусственным аминокислотным остатком, или пептидным остатком, имеющим 2-20 аминокислотных остатков;
Ab представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент;
ЛЛ1-АА2 представляет собой пептидный остаток выбранный из группы, включающей валинцитруллин, цитруллин-валин, лизин-фенилаланин, фенилаланин-лизин, валин-аспарагин, аспарагинвалин, треонин-аспарагин, серин-аспарагин, аспарагин-серин, фенилаланин-аспарагин, аспарагинфенилаланин, лейцин-аспарагин, аспарагин-лейцин, изолейцин-аспарагин, аспарагин-изолейцин, глицин аспарагин, аспарагин-глицин, глутаминовая кислота-аспарагин, аспарагин-глутаминовая кислота, цитруллин-аспарагин, аспарагин-цитруллин, аланин-аспарагин, и аспарагин-аланин остатки;
а представляет собой целое число от 1 до 10;
q представляет собой ноль или целое число от 1 до 5;
А3 представляет собой -СН2-, -СН2СН2-, или -СН2СН2СН2СН2-;
R4, R9, R10, Rh, и R12 каждый представляет собой независимо водород или C1-6алкил; и
R4a представляет собой С1-6алкил.
В одном из вариантов осуществления изобретения q равно 4.
В одном из вариантов осуществления изобретения Ab способен связываться со специально выбранной клеточной популяцией. В одном из вариантов Ab является антителом или его антигенсвязывающим фрагментом, специфически связывающим опухолевый специфический антиген.
В одном из вариантов осуществления изобретение относится к конъюгатным соединениям, представленным следующей структурной формулой (Ia):
- 9 038512
где Ab является антителом или его антигенсвязывающим фрагментом.
В одном из вариантов осуществления изобретения относится к соединениям формулы (Id):
где Ab является антителом или его антигенсвязывающим фрагментом;
АА1-АА2 является пептидным остатком, выбираемым из группы, содержащей валин-цитруллин, цитруллин-валин, лизин-фенилаланин, фенилаланин-лизин, валин-аспарагин, аспарагин-валин, треонинаспарагин, серин-аспарагин, аспарагин-серин, фенилаланин-аспарагин, аспарагин-фенилаланин, лейцинаспарагин, аспарагин-лейцин,изолейцин-аспарагин, аспарагин-изолейцин, глицин-аспарагин, аспарагинглицин, глутаминовая кислота-аспарагин, аспарагин-глутаминовая кислота, цитруллин-аспарагин, аспарагин-цитруллин, аланин-аспарагин, и аспарагин-аланиновые остатки;
а является целым числом от 1 до 10;
q представляет собой ноль или целое число от 1 до 5;
А3 представляет собой -СН2-, -СН2СН2-, или -СН2СН2СН2СН2-;
R4, R9, R10, R11, и R12, каждый независимо, представляет собой водород или C1-6алкил; и
R4a представляет собой C1-6алкил.
В одном из вариантов осуществления изобретение относится к соединениям формулы (Ii):
где а является целым числом от 1 до 10.
Настоящее изобретение также относится к конъюгатным соединениям, представленным следующей структурной формулой (Ib):
где Ab является антителом или его антигенсвязывающим фрагментом;
а является целым числом от 1 до 10;
Z2 представляет собой следующую структурную формулу:
^a^b^c^dгде Z2A, Z2B, Z2C и Z2D, каждый независимо, являются отсутствующими, -С(=О)-, -алкилен-, -арилен, или -C(=S)-N(R)-;
АА1-АА2 представляет собой пептидный остаток, выбранный из группы, включающей валинцитруллин, цитруллин-валин, лизин-фенилаланин, фенилаланин-лизин, валин-аспарагин, аспарагинвалин, треонин-аспарагин, серин-аспарагин, аспарагин-серин, фенилаланин-аспарагин, аспарагинфенилаланин, лейцин-аспарагин, аспарагин-лейцин, изолейцин-аспарагин, аспарагин-изолейцин, глицинаспарагин, аспарагин-глицин, глутаминовая кислота-аспарагин, аспарагин-глутаминовая кислота, цитруллин-аспарагин, аспарагин-цитруллин, аланин-аспарагин, и аспарагин-аланин остатки;
- 10 038512
А3 представляет собой -СН2-, -СН2СН2-, или -СН2СН2СН2СН2-;
R4, R9, R10, R11, и R12 каждый представляет собой независимо водород или С1-6алкил; и
R4a представляет собой C1-6алкил.
В одном из вариантов осуществления изобретения относится к соединениям формулы (Ic)
где а является целым числом от 1 до 10.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к соединениям, в которых биологически активной молекулой является цитотоксичный биологически активный макролид.
В одном варианте осуществления биологически активные макролиды являются майтанзиноидами, представленными формулой (III)
где А3а представляет собой -СН2-, -СН2СН2-, или -СН2СН2СН2СН2-, R4a представляет собой С1-6ал кил.
В ещё одном варианте настоящего изобретения майтанзиноиды представлены формулой (IIIa):
о сн3
В еще одном варианте майтанзиноиды представлены формулами (IVa, IVb и IVc):
В еще одном варианте майтанзиноиды представлены формулой (IVd) н он Рснз СНз
В одном варианте изобретения приводится соединение формул (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii), где лиганд способен связываться с клеткой или клеточной популяцией.
В другом варианте изобретения приводится соединение формул (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii), где лиганд выбирается из группы, состоящей из белков, антител, фрагментов антител, нуклеиновых кислот, антигенсвязывающих остовов и углеводов.
В одном примере осуществления изобретения приводится соединение формул (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii), где лигандом является антитело или его фрагмент.
- 11 038512
В одном примере осуществления изобретения приводится соединение формул (I, Ia, Ib, Ic, Id, li), где лигандом является антитело или его фрагмент, специфически связывающие опухолевый специфический антиген.
В одном примере осуществления изобретения приводится соединение формул (I, Ia, Ic, Id), где антитело или его фрагмент имеют сернистую группу, прикрепленную ковалентной связью к Z2.
В одном примере осуществления изобретения приводится соединение формулы (Ib), где антитело или его фрагмент имеют сернистую группу, прикрепленную ковалентной связью к Z2A.
В одном аспекте изобретение относится к соединениям сшивающего агента и биологически активных веществ, представленным следующими структурными формулами (II, IIa, IIb, IIc, IId):
где Z2 представлен следующей структурной формулой:
-Z2A-Z2B-Z2C-Z2D- , где -Z2A-, -Z2B-, -Z2C- и -Z2D-, каждый независимо от остальных, является отсутствующим, алкилом или -алкиленом-, арилом или -ариленом-, -С(=О)-, -О-С(=О)-, -C(=S)-N(R4)-, -N=C=S,
q представляет собой ноль или целое число от 1 до 5;
АА1-АА2 представляет собой пептидный остаток выбранный из группы, включающей валинцитруллин, цитруллин-валин, лизин-фенилаланин, фенилаланин-лизин, валин-аспарагин, аспарагинвалин, треонин-аспарагин, серин-аспарагин, аспарагин-серин, фенилаланин-аспарагин, аспарагинфенилаланин, лейцин-аспарагин, аспарагин-лейцин, изолейцин-аспарагин, аспарагин-изолейцин, глицинаспарагин, аспарагин-глицин, глутаминовая кислота-аспарагин, аспарагин-глутаминовая кислота, цитруллин-аспарагин, аспарагин-цитруллин, аланин-аспарагин, и аспарагин-аланин остатки;
Аз представляет собой -СН2-, -СН2СН2-, или -СН2СН2СН2СН2-;
R4, R9, R10, R11, и R12 каждый представляет собой независимо водород или С1-6алкил; и
R4a представляет собой С1-6алкил.
- 12 038512
В одном варианте изобретения IC50 соединений превышает примерно 10 нМ.
В одном варианте приводятся соединения формул (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii) и (II, IIa, IIb, IIc, IId), где А является пептидом, расщепляемым с помощью протеазы.
В ещё одном варианте приводятся соединения формул (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii) и (II, IIa, IIb, IIc, IId), где
А является пептидом, расщепляемым с помощью протеазы в опухолевой ткани.
В примере осуществления изобретения приводятся соединения формул (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii) и (II, IIa, IIb, IIc, IId), где А является пептидом, расщепляемым с помощью протеазы, и протеаза является катепсином или плазмином.
Составы
Примеры осуществления изобретения описывают составы, включающие в себя конъюгатные соединения формул (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii), а также их смеси. В некоторых вариантах, соединение далее представлено соединением формул (II, IIa, IIb, IIc, IId).
Составами могут быть лекарственные препараты, далее включающие в себя один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей и/или субстанций. В некоторых вариантах лекарственным препаратом является фармацевтически приемлемая соль составов формул (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii) и (II, IIa, IIb, IIc, IId) или их смесей.
Подходящие фармацевтически приемлемые носители, разбавители и субстанции известны специалистам, и могут быть определены средним специалистом как обоснование клинической ситуации. Примерами подходящих носителей, разбавителей и субстанций включают в себя: буферы для сохранения правильной кислотности состава (напр., цитратные буферы, сукцинатные буферы, ацетатные буферы, фосфатные буферы, лактатные буферы, оксалатные буферы и т. п.), белки-носители (напр., человеческий сывороточный альбумин), физиологический раствор, полиолы (напр., трегалоза, сахароза, ксилит, сорбит и т.п.), сурфактанты (напр., полисорбат 20, полисорбат 80, полиоксолат, и т.п.), антибактериальные препараты и антиоксиданты.
По желанию, лекарственные препараты настоящего документа могут включать в себя второе или более лечебных средств (напр., стимулятор конъюгатных соединений формул (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii), противоопухолевые вещества, антибиотики, противовоспалительные средства, и т. п.). Второе лечебное средство может быть включено в тот же состав, что и соединения формул (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii), или (II, IIa, IIb, IIc, IId), или может вводиться отдельно от соединений формул (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii) или (II, IIa, IIb, IIc, IId) (по времени, или типу и месту введения).
Специалист в области биологически активных молекул поймет, что каждое из соединений формул (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii) или (II, IIa, IIb, IIc, IId) может быть изменено таким образом, что получившееся соединение по-прежнему сохраняет специфичность и/или активность, идентичную начальному соединению. В этом свете, биологически активная молекула соединений формул (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii) или (II, IIa, IIb, IIc, IId) может включать в себя все возможные аналоги и производные биологически активных молекул. В одном примере осуществления, биологически активными молекулами являются макролид, а далее и майтансин, или аналог майтансина, как описано в публикации Widdison и др., J. Med. Chem., 2006, 49 (14), 4392-4408.
В одном варианте приводится лекарственный препарат, состоящий из терапевтически эффективного количества соединения формул (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii) или его фармацевтически приемлемой соли, и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или субстанций.
В другом варианте, приводится лекарственный препарат, состоящий из терапевтически эффективного количества соединения формул (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii) или (II, IIa, IIb, IIc, IId), или его фармацевтически приемлемой соли, и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или субстанций.
В другом варианте, приводится лекарственный препарат, состоящий из терапевтически эффективного количества соединения формул (II, IIa, IIb, IIc, IId) или его фармацевтически приемлемой соли, и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или субстанций.
Способ применения
Как описано выше, конъюгатные соединения формул (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii) могут быть получены с различными функциональными группами, в результате чего лиганд прикрепляется к сшивающему агенту, и посредством этого биологически активная молекула образует ковалентный конъюгат. Лиганд специально нацеливается на сопряжение соединения с партнером по связыванию лиганда, как правило, полипептидом, или другим подобным антигеном. В типичном примере осуществления, конъюгат предназначен для включения лиганда, имеющего партнера по связыванию, находящегося в клетках, испытывающих рост идиобластов, или клеток, соучаствующих в пролиферативном заболевании. Конъюгатные соединения формул (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii) были созданы так, чтобы сшивающий агент каждого соединения катаболизировался внутри клетки, связанной посредством конъюгата. В таком качестве, доставка биологически активной молекулы при помощи конъюгата, описанного в примерах осуществления настоящего документа, дает возможность доставки биологически активных молекул которые, в обычных условиях, были бы слишком токсичными для обычного введения. Примеры осуществления настоящего документа, дают возможность высоко избирательной и специфической доставки этих молекул в клетки, испытывающие
- 13 038512 рост идиобластов, или клетки, соучаствующие в пролиферативном заболевании (по сравнению с катаболизмом вне клетки, выпуская, посредством этого, биологически активное соединение в кровь или лимфатическую систему, например).
Как может быть предусмотрено специалистом, описанные в настоящем документе ковалентные конъюгатные соединения также могут использоваться для доставки любого типа полезных биологически активных молекул, и могут быть избирательно нацелены на любой тип клеточной популяции. Например, конъюгат может использоваться для доставки противопролиферативных лекарств к клеткам, переживающим патологический рост, или противовирусных препаратов к клеткам, инфицированных вирусом, пока выбранный лиганд распознает корректного партнера по связыванию клеток.
В данном свете, способы применения приводятся для описанных в настоящем документе примеров конъюгатных соединений.
Описанные в настоящем документе лекарственные препараты полезны для задержки, замедления и/или предотвращения роста идиобластов, или при лечении различных пролиферативных заболеваний или болезней у млекопитающих. В типичных примерах осуществления, млекопитающим является человек (описанные в настоящем документе примеры осуществления относятся к человеку). В число других млекопитающих входят любые млекопитающие, которые могут страдать от диагностируемых пролиферативных заболеваний, в том числе: приматы, собаки, кошки, лошади, козы, овцы, крупный рогатый скот, верблюды и им подобные. Кроме этого, известно, что конъюгатные соединения лекарственных средств предназначены для избирательного воздействия на клетки, переживающие рост идиобластов или лечения различных пролиферативных заболеваний или болезней, описанных в настоящем документе.
В связи с этим, описанные в настоящем документе примеры осуществления включают в себя методы задержки роста идиобластов или лечения пролиферативных заболеваний человека, включающие введение в организм человека терапевтически эффективного количества лекарственного средства, описанного в настоящем документе.
Введение описанного в настоящем документе терапевтически эффективного количества лекарственного средства может осуществляться несколькими путями, напр., путем внутривенного, внутрибрюшинного, подкожного, внутримышечного, топического, внутрикожного, интраназального или эндобронхиального введения. Описанные в настоящем документе лекарственные средства также могут вводиться непосредственно в место роста идиобластов (прямо и косвенно соприкасаясь с ростом идиобластов) путем, например, биолистической доставки (биолистическая доставка описанных в настоящем документе лекарственных средств в легочную или мозговую опухоль, например). Рекомендуемая дозировка для введения описанных в настоящем документе лекарственных средств будет определяться лечащим врачом или другим специалистом этой области, а также основываться на конкретной клинической ситуации. Как известно специалистам в фармацевтике, дозировки для любого человека, т.е., пациента, зависят от нескольких факторов, в том числе от размеров пациента, площади тела пациента, его возраста и общего состояния здоровья, пола пациента, времени и способа введения, а также наличия второго лекарственного средства. В некоторых случаях, конъюгатные соединения формул (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii) могут присутствовать в количестве от 1 мкг до 100 мг/кг массы тела на дозу (обратите внимание на то, что когда рассматривается способ введения путем непрерывной инфузии, может рассматриваться введение всего 1 мкг/кг массы тела в минуту). Фармацевтические композиции могут вводиться один или несколько раз в день и в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет.
Лечение пролиферативной патологии или заболевания, например, опухоли, включает в себя методы уменьшения размера опухоли, вызывающие некроз или апоптоз в опухоли, цитолиз опухоли, остановку увеличения размера опухоли, и/или предотвращения инвазивности или метастаз опухоли.
Примеры состояний здоровья, которые могут быть вылечены в соответствии с методами задержки роста идиобластов, или лечения пролиферативных патологий, включают в себя: злокачественные опухоли любого типа, например рак легкого, толстой кишки, предстательной железы, почек, поджелудочной железы, печени, яичника, кожи, лимфома, лейкемия и т.п.; аутоиммунные заболевания, напр., системная волчанка, ревматоидный артрит, рассеянный склероз; вирусные инфекции, напр., цитомегаловирусная инфекция, ВИЧ инфекция, СПИД, гепатит, ВПЧ (вирус палилломы человека); боль; психические расстройства и воспалительное заболевания.
Как отмечалось выше, описанные в настоящем документе фармацевтические композиции также полезны при профилактике или лечении вирусных инфекций, болей, воспалительных заболеваний, аутоиммунных заболеваний и т.п. у млекопитающих.
В одном варианте изобретения, приводится метод снижения, замедления или остановки роста идиобластов, состоящий из взаимодействия соединения формул (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii) с идиобластом в количестве, достаточном для замедления, снижения или остановки роста идиобласта, и при котором рост идиобластов замедляется, снижается или останавливается.
В одном варианте изобретения, приводится метод ликвидации клетки, состоящий из взаимодействия соединения формул (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii) с клеткой в количестве, достаточном для гибели клетки, и при котором клетка погибает.
В одном примере осуществления изобретения приводится метод ликвидации клетки, состоящий из
- 14 038512 взаимодействия соединения формул (I, Ia Ib, Ic, Id, Ii) с клеткой в количестве, достаточном для гибели клетки, и при котором клетка погибает, и где клеткой является опухолевая клетка.
В одном варианте приводится метод лечения болезни у страдающего от болезни лица, состоящий из назначения этому лицу эффективного количества препарата, содержащего соединение формул [I, Ia Ib,
Ic, Id, Ii).
В одном примере осуществления приводится метод лечения болезни у страдающего от болезни лица, состоящий из назначения этому лицу эффективного количества препарата, содержащего соединение формул (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii), и далее включающий последовательное назначение дополнительной терапии.
В одном примере осуществления приводятся методы, при которых дополнительной терапией является лучевая терапия, химиотерапия или сочетание обеих.
В одном примере осуществления приводится метод лечения болезни у страдающего от болезни лица, состоящий из назначения этому лицу эффективного количества препарата, содержащего соединение формул (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii), и далее включающий последовательное назначение дополнительной терапии, а также назначение как минимум одного дополнительного лекарственного препарата.
В одном варианте санируемое заболевание выбирается из опухолей, рака, инфекционных болезней, нейродегенеративных болезней, поражений костей и сердечно-сосудистых заболеваний.
В описанных в настоящем документе примерах осуществления также приводятся методы получения соединений формулы (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii) из предшественника, или построения блочных соединений формул (II, IIa, IIb, IIc, IId). В некоторых вариантах, соединения формулы (II, IIa, IIb, IIc, IId) также могут применяться в терапевтических целях, где соединение формул (II, Па, IIb, IIc, IId) является фармацевтической композицией.
Наконец, описанные в настоящем документе примеры осуществления могут включать в себя смеси соединений, как представлено формулами (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii) и (II, IIa, IIb, IIc, IId).
Получение конъюгатов
Конъюгатные соединения лиганд-биологически активная молекула могут формироваться с помощью любой известной специалистам технологии. Конъюгатные соединения лиганд-биологически активная молекула имеют элемент лиганда, биологически активную молекулу и, дополнительно, сшивающий агент, соединяющий биологически активную молекулу с лигандом. Ковалентное соединение биологически активных молекул и/или сшивающих агентов с лигандом может осуществляться с помощью множества реакций, использующих аминокислотные остатки лиганда, например антитело, включая аминогруппы лизина, свободные группы карбоновой кислоты глутаминовой и аспарагиновой кислот, сульфгидрильные группы цистеина и различные молекулы ароматических аминокислот.
Кроме того, конъюгаты в соответствии с описанными в настоящем документе примерами осуществления могут быть получены любым методом, известным специалистам. Пояснительный протокол получения конъюгатов приводится ниже в примерах. Тем не менее, могут использоваться и другие известные способы, включая, например, протоколы, описанные в публикации международной заявки WO 2009/134977, Патенте США US№7,811,572 и Патенте США US№6,441,163, пока они используются для получения соединений, описанных в настоящем документе. Эти справки включены посредством отсылки на их целевое назначение.
В одном примере осуществления конъюгаты могут быть получены путем i) реакции лиганда со сшивающим агентом для получения модифицированного соединения лиганд-Сшивающий агент; ii) необязательной очистки соединения лиганд-Сшивающий агент; iii) сопряжения биологически активной молекулы, например макролида, с лигандом-Сшивающим агентом для получения конъюгата формул (I, Ia, Ib, Ic, Id, Ii); и iv) очистки конъюгата.
В альтернативном примере осуществления конъюгаты могут быть получены путем реакции биологически активной молекулы с первым компонентом Сшивающего агента (Z1), с последующими реакциями для построения Сшивающего агента.
В альтернативном примере осуществления, конъюгаты могут быть получены путем реакции лиганда, Сшивающего агента и биологически активного макролида в одной реакции. Сразу после получения, конъюгаты в соответствии с настоящим изобретением могут быть очищены.
Определение цитотоксичности конъюгатных соединений
В одном примере осуществления, описанные в настоящем документе конъюгатные соединения могут оцениваться по их способности подавлять размножение различных линий раковых клеток вне организма. Анализы цитотоксичности вне организма могут производиться с помощью известных специалистам методов (см. Widdison и др., J. Med. Chem., 2006,49(14), 4392-408), и как показано в примере 7 настоящего документа. Например, конъюгатные соединения могут применяться вне организма к посеянным на чашке раковым клеткам в течение предустановленного числа дней, а выжившие клетки могут измеряться анализами с помощью известных методов. Для обеспечения действительности результатов, могут применяться надлежащие средства контроля, как могут значения IC50. Примеры эффективности конъюгатных соединений настоящего документа вне организма можно увидеть на фиг. 1 и фиг. 2. Дополнительная эффективность в организме может использоваться для подтверждения эффективности предлагаемого конъюгатного соединения, например, используя модель голой мыши.
- 15 038512
Приведенные выше формулировка, примеры и данные дают полное описание получения и использования состава настоящего изобретения. Так как многие примеры осуществления изобретения могут быть сделаны без отступления от существа и объема настоящего изобретения, изобретение заключается в приложенных далее по тексту формулах изобретения.
Все ссылки, процитированные в настоящем документе и последующих Примерах, явным образом полностью включены в данный документ посредством ссылок.
Представленные ниже описание и примеры сделаны для иллюстрации рассматриваемого изобретения. Специалисту будет понятно, что эти примеры приводятся только для наглядности, а не с целью ограничения данного изобретения.
Примеры
Подробности экспериментов.
Протонный спектры ЯМР (для соединений, которые невозможно обнаружить УФ-излучением) были получены с помощью оборудования Varian Inova 300 МГц, а массовые спектры были собраны на оборудовании масс-селективного детектора/жидкостной хроматографии Agilent серии 1100 с источником электрораспылительной ионизации и анализатором с тройной квадрупольной ионной ловушкой. Соответствующие конъюгаты были анализированы с помощью масс-спектрометра времяпролетной ионизации лазерной десорбцией с использованием матрицы Bruker ultraFleXtreme. Все исходные материалы и растворители были приобретены на открытом рынке, и, если не указано иное, использовались без очист ки.
Пример 1.
Этап 1. Майтансин-3-N-метил-L-αланин (2).
Титульное соединение было получено как твердое вещество золотого цвета из майтансинола (1) с помощью методов, описанных в заявке на патент США US 2007/0037972 А1. МС (электрораспылительная ионизация, поз.): рассчитан для С C32H44ClN3O9, 649,3; полученный 650,6 (М+Н).
Этап 2. Майтансин-3-N-метил-L-(S)-аланин-N-[4-(амино-цитруллин-валин-гексанамид-6-мαлеимидил)бензил]карбамат (3).
Продукт из предыдущего этапа (2, 0,020 г, 0,031 ммоль) и p-NO2-Ph-карбонато-Bn-Cit-Val-мaлеимид (MA-VC-PAB-PNP, 0,027г, 0,037 ммоль; компания Concortis Biosystems) были растворены в N,Nдиметилформамиде (DMF, ок. 0,25 мл) в конической пробирке, обработаны щелочным оксидом алюминия Brockmann I (0,10 г). Пробирка была прочищена аргоном, а реакция перемешивалась при комнатной температуре в течение 4 дней. После этого, смесь была отфильтрована, твердые частицы промыты смесью ацетонитрила с водой, а фильтрат очищен непосредственно в 5u, 30x150 мм колонне Phenome nex Gemini C18 через ЖХВД (30-90% ацетонитрила в воде, 0,1% трифторуксусной кислоты в обоих, в течение 25 мин, 15 мл/мин.). Лиофилизация химически чистой фракции на следующий день дала титуль ное соединение в виде бледно-желтого твердого вещества (0,021 г, 55%). МС (электрораспылительная ионизация, поз.): рассчитано для C61H82ClN9O17, 1247,6; получено 1248,8 (М+Н), 1270,7 (M+Na), 1231,5 (М-Н2О+Н).
з
Пример 2.
Этап 1. N-трет-Бутоксикарбонил-бета-аланин сукцинат эфир (4).
Титульное соединение было получено из имеющегося на рынке трет-бутоксикарбонил-бета-аланина с помощью метода, хорошо известного специалистам (для сравнения - Widdison и др., J. Med. Chem., 2006, 49 (14), 4401). 1H ЯМР (300 МГц, CDCl3): 8 3,62 (bm, 2H), 2,88 (m, 9H), 1,47 (s, 9H).
Этап 2. Майтансин-3-N-метил-L-(S)-αланин-трет-бутоксикарбонил-бета-αланин аминокислота (5).
Продукт из предыдущего этапа (4, 0,45 г, 1,51 ммоль) и майтансин-3-N-метил-L-αланин (2, 0,30 г, 0,23 ммоль) были растворены в смеси (3:1) ацетонитрила с водой (8 мл), обработанной 1М водного NaHCO3 (0,5 мл), и перемешаны при комнатной температуре в течение 18 ч. Когда реакция была завершена тонкослойной хроматографией, она затем была перемешана с соляным раствором в течение 10 мин, и
- 16 038512 трижды экстрагирована с этилацетатом (EtOAc). После этого, объединенные органические слои были высушены на Na2SO4, отфильтрованы, а фильтрат сконцентрирован и высушен в вакууме до состояния золотистого сиропа, который был очищен путем колоночной флэш-хроматографии на кассете с 20 г силикагеля (0-10% МеОН в этилацетате в течение 15 мин.), с получением титульного соединения в виде твердого вещества белого цвета (0,084 г, 43%). МС (электрораспылительная ионизация, поз.): рассчитано для C41H59QN4O12, 834,4; получено 835,2 (М+Н), 857,2 (M+Na), 817,4 (М-^О+И).
Этап 3. Майтансин-3-N-метил-L-(S)-аланин-бета-аланин аминокислота (6).
Продукт из предыдущего этапа (5, 0,080 г, 0,095 ммоль) был растворен в смеси (3:1:1) ацетонитрил/вода/трифторуксусная кислота (4 мл) и перемешан при комнатной температуре в течение 26 ч. Необработанная реакционная смесь была впрыснута непосредственно в колонну с 40 г силикагеля С18 и элюирована через систему очистки ISCO CombiFlash (10-90% ацетонитрила в воде, 0,1% трифторуксусной кислоты (TFA) в каждом растворителе, в течение 18 мин, 40 мл/мин), а объединенные химически чистые фракции были сублимированы для получения титульного соединения в виде твердого вещества бледножелтого цвета (0,025 г, 31%). МС (электрораспылительная ионизация, поз.): рассчитан для C36H51CIN4O10, 734,3; получено 735,5 (М+Н).
Этап 4. Майтансин-3-N-метил-L-(S)-аланин-пропанамидил-3-N-метил-N-[4-(аминоцитруллинвалин-гексанамид-6-малеимидил)бензил]карбамат (7).
Продукт из предыдущего этапа (6, 0,014 г, 0,019 ммоль) и MA-VC-PAB-PNP (0,020 г, 0,027 ммоль; компания Concortis Biosystems) были растворены в смеси (4:1) ацетонитрил/вода (2,5 мл), обработаны 0,1М водного NaHCO3 (0,5 мл), и перемешаны при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакция была очищена напрямую с помощью хроматографии с обращенной фазой на силикагеле С18 (с применением 0,1% трифторуксусной кислоты в градиентах ацетонитрила/воды). Сублимационная сушка заключительных колонных фракций дала титульное соединение в виде твердого вещества белого цвета (0,002 г, 8%). МС (электрораспылительная ионизация, поз.): рассчитано для C65H89ClN10O18, 1332,6; получено 1333,9 (М+Н), 1316,5 (М-Н2О+Н), 1355,9 (M+Na).
Пимер 3.
Этап 1. 3-Метилдигио пропионовой кислоты сукцинат эфир (8).
Титульное соединение было получено в виде твердого вещества белого цвета из 3-меркаптопропионовой кислоты с помощью методов Widdison и др. J. Med. Chem., 2006, 49 (14), 4392-4408. 1H ЯМР (300 МГц, CDCl3) 5 3,09 (m, 2H), 3,01 (m, 2H); 2,86 (s, 4H); 2,44 (s, 3Н).
Этап 2. Майтансин-3-N-метил-L-(S)-аланин-пропанамидил-3-метилдисульфид (9).
Продукт из предыдущего этапа (8, 2,96 г, 11,9 ммоль) и майтансин-3-N-метил-L-аланин (2, 1,54 г, 2,37 ммоль) были растворены в смеси (4:1) ацетонитрил/вода (25 мл), обработаны насыщенным водным NaHCO3 (2 мл), и перемешаны при комнатной температуре в течение 24 ч. Реакционная смесь подверглась обработке солевым раствором, была трижды экстрагирована с этилацетатом, водный слой был насыщен NaCl, экстрагирован повторно с этилацетатом, а объединенные органические слои высушены на Na2SO4, и отфильтрованы. Фильтрат был сконцентрирован в вакууме до получения сиропа золотистого цвета (ок. 4,5 г), который был очищен путем колоночной флэш-хроматографии на кассете с 80 г силикагеля (0-100% этилацетата в гексанах в течение 30 мин), с получением титульного соединения в виде твердого вещества белого цвета (1,14 г, 61%). МС (электрораспылительная ионизация, поз.): рассчитано для C36H50ClN3O10S2, 783,3; получено 784,3 (М+Н), 766,6 (М-Н2О+Н).
Этап 3. Майтансин-3-N-метил-L-(S)-аланин-пропанамид-3-тиол (10).
Титульное соединение было получено с помощью измененного метода, описанного Whitesides и др. (J. Org. Chem., 1991, 56, 2648-2650). Продукт из предыдущего этапа (9, 2,42 г, 3,09 ммоль) был растворен в ацетонитриле (30 мл), обработан раствором трис(2-карбоксиэтил)фосфин гидрохлорида (8,23 г, 28,7 ммоль) в воде (30 мл), показатель кислотности рН был увеличен до 3 с добавлением насыщенного водного NaHCO3 (5 мл), очищен в колбе с помощью аргона, и реакционная смесь перемешивалась при комнатной температуре под резиновой диафрагмой (вентилируемой вследствие бурного выделения газов). Через 2 ч, реакция была обработана солевым раствором (ок. 100 мл), газирована аргоном в течение 5 мин
- 17 038512 (для удаления свободного метилмеркаптана), а фазы были разделены. Водная фаза была дважды экстрагирована с помощью этилацетата, насыщена NaCl, и еще дважды экстрагирована с помощью этилацетата. После этого, объединенные органические слои были высушены на Na2SO4, отфильтрованы, а фильтрат сконцентрирован и высушен в вакууме для получения титульного соединения в виде твердого вещества белого цвета (2,24 г, 98%). МС (электрораспылительная ионизация, поз.): рассчитано для C35H48ClN3O10S, 737,3; получено 738,3 (М+Н), 720,3 (М-Н2О+Н).
Этап 4. 4-Амино-(N-бензилоксикарбонил)бензиламин (14).
4-Аминобензиламин (1,00 г, 8,18 ммоль) и триэтиламин (1,20 мл, 8,61 ммоль) были растворены в безводном тетрагидрофуране (THF, 10 мл) в атмосфере N2, охлаждены в соляно-ледяной ванне с перемешиванием, и капельно обработаны в течение 20 мин раствором бензил хлорформиата (1,20 мл, 8,41 ммоль) в безводном THF (10 мл). По завершению добавления, ледяная баня была удалена, и реакция перемешивалась при комнатной температуре в течение 20 ч, после чего фильтровалась через стеклокерамическую воронку для удаления нерастворимых веществ. Твердые вещества были промыты с помощью этилацетата, фильтрат был выпарен в вакууме, а осадок очищен с помощью колоночной флэшхроматографии на колонне с 40 г силикагеля (0-100% этилацетата в гексанах, в течение 20 мин, 40 мл/мин). Выпаривание химически чистых средних фракций в вакууме дало титульное соединение в виде бледно-желтого твердого вещества (1,47 г, 70%). МС (электрораспылительная ионизация, поз.): рассчитано для C15H16N2O2, 256,1; получено 256,9 (М+Н), 278,9 (M+Na).
Этап 5. 6-Малеимидикапроновой кислоты сукцинат эфир (20).
Титульное соединение было получено в виде бесцветной смолы из имеющейся на рынке 6аминокапроновой кислоты методом, схожим с описанным Marnett и др. (J. Med. Chem., 1996, 39, 16921703). Ή ЯМР (300 МГц, CDCl3) 6 6,72 (s, 2Н); 3,56 (t, 2Н, J = 7 Гц); 2,86 (s, 4H); 2,64 (t, 2H, J = 1 Гц); 1.81 (пентет, 2Н, J= 8 Гц); 1,66 (m, 2Н); 1,45 (m, 2Н).
Этап 6. трет-Бутоксикарбонил-валин-сукцинат (11).
Титульное соединение было получено из трет-бутоксикарбонил-валина-ОН с помощью метода, хорошо известного специалистам (для сравнения - Widdison и др., J. Med. Chem., 2006, 49 (14), 4401). 1H ЯМР (300 МГц, CDCl3) 55,03 (d, 1H, J = 10 Гц); 4,60 (dd, 1H, J = 9 Гц, 5 Гц); 2,85 (s, 4H); 2,32 (m, 1H); 1,47 (s,9H); 1,05 (m,6H).
Этап 7. трет-Бутоксикарбонил-валин-цитруллин (12).
Продукт из предыдущего этапа (11,4,23 г, 13,5 ммоль) был растворен в ацетонитриле (70 мл), обработан раствором L-цитруллина (3,20г, 18,3 ммоль) в воде (30 мл) и насыщенным раствором NaHCO3 (18мл), очищен в колбе с помощью N2, и реакция перемешивалась при комнатной температуре в течение 24 часов. Смесь была сконцентрирована в вакууме для удаления ацетонитрила, однократно промыта с этилацетатом для удаления неполярных загрязнений, а водный слой насыщен NaCl и подкислен до уровня рН3 с помощью 10% HCl. Получившаяся непрозрачный смесь была четырежды экстрагирована с помощью 10% изопропанола в этилацетате, объединенные органические слои высушены на Na2SO4, и отфильтрованы. Концентрация и высушивание фильтрата в вакууме дали титульное соединение в виде твердого вещества желтого цвета (4,53 г, 90%). МС (электрораспылительная ионизация, поз.): рассчитано для C16H30N4O6, 374,2; получено 373,0 (М-Н).
Этап 8. трет-Бутоксикарбонил-валин-цитруллин-амино-4-бензиламино-N-бензилоксикарбамат (15).
Продукт из предыдущего этапа (12,3,08 г, 8,23 ммоль) был растворен в N,N-диметилформамиде (DMF, 30 мл, высушен на молекулярных ситах), обработан дициклогексилкарбодиимидом (DCC, 2,31 г, 11,2 ммоль) и 1-гидроксибензотриазол гидратом (HOBt, 1,51 г, 11,2 ммоль), колба продута N2 и перемешан при комнатной температуре в течение 1 ч. После этого, был добавлен раствор 4-амино-(Nбензилоксикарбонила)бензиламина (14,2,30 г, 8,97 ммоль) в DMF (15 мл), реакция перемешивалась еще 3 дня, была отфильтрована через стеклокерамическую воронку, а твердые вещества вымыты с помощью этилацетата. Фильтрат был промыт смесью (1:1) воды и насыщенного NaHCO3 (100 мл), водный слой трижды экстрагирован с помощью 10% изопропанола/этилацетата, а органические слои промыты солевым раствором, высушены на Na2SO4, и отфильтрованы. Во время фильтрации образовался нерастворимый гель, который был растворен смесью метанола/этилацетата. Концентрация фильтрата в вакууме дала смолистый гель золотого цвета, который был обработан диэтиловым эфиром (50 мл), соникацией, отфильтрован и высушен разряжением для получения твердого вещества бледно-желтого цвета. Оно было очищено с помощью колоночной флэш-хроматографии на колонне с 330 г силикагеля (0-10% метанола в дихлорметане, 100 мл/мин) с получением титульного соединения в виде твердого вещества бледножелтого цвета (4,07 г, 81%). МС (электрораспылительная ионизация, поз.): рассчитано для C31H44N6O7, 612,3; получено 613,4 (М+Н)
Этап 9. трет-Бутоксикарбонил-валин-цитруллин-амино-4-бензиламин (16).
Продукт из предыдущего этапа (15, 3,04 г, 4,96 ммоль) и 10% палладий (0) на активированном угле (0,286 г, 0,269 ммоль) были обработаны в атмосфере N2 метанолом (50 мл) и ледяной уксусной кислотой (0,57 мл, 9,95 ммоль). Реакция газировалась несколько минут с помощью N2 и водорода, и активно перемешивалась под водородным баллоном при комнатной температуре и давлении в течение 1 ч. По завершении реакции с тонкослойной хроматографией, баллон был удален, суспензия газировалась несколько
- 18 038512 минут с помощью N2, и далее на фильтрующем агенте Celite 521. Фильтрующий агент Celite был промыт метанолом, фильтрат выпарен насухо в вакууме, а остаток однократно растерт в порошок с диэтиловым эфиром, и высушен в вакууме, с получением титульного соединения в виде твердого вещества белого цвета (2,95 г, 99%). МС (электрораспылительная ионизация, поз.): рассчитано для C23H38N6O5,
478,3; получено 479,2 (М+Н).
Этап 10. трет-Бутоксикарбонил-валин-цитруллин-амино-4-бензилизотиоцианат (17).
Продукт из предыдущего этапа (16, 0,586 г, 0,979 ммоль) был растворен в сухом тетрагидрофуране (20 мл) и сухом N,N-диметилформамиде (5 мл) в атмосфере N2, обработан триэтиламином (0,40 мл, 2,87 ммоль), охлажден в ледяной бане, и капельно обработан сероуглеродом (0,10 мл, 1,66 ммоль) в течение 5 мин. Реакция была подогрета до комнатной температуры и перемешана в течение 2 ч, снова охлаждена во льду, и обработана р-толуолсульфонил хлоридом (0,281 г, 1,47 ммоль). После нагрева до комнатной температуры и перемешивания в течение 18 ч, реакция была промыта смесью (1:1) воды/соляного раствора, дважды экстрагирована этилацетатом, водный слой был насыщен NaCl, еще дважды экстрагирована этилацетатом, а объединенные органические слои были промыты солевым раствором, высушены на Na2SO4, и отфильтрованы. Выпаренный фильтрат был очищен с помощью колоночной флэш-хроматографии на колонне с 20 г силикагеля (0-100% ацетонитрила в этилацетате, 35 мл/мин), с получением титульного соединения в виде твердого вещества золотого цвета (0,391 г, 77%) после азеотропии с дихлорметаном и высушивания под глубоким вакуумом. МС (электрораспылительная ионизация, поз.): рассчитано для C24H36N6O5S, 520,3; получено 521,1 (М+Н).
Этап 11. Майтансин-3-N-метил-L-(S)-αланин-пропанамидил-3-N-метил-N-[4-(аминоцитруллинтрет-бутоксикарбонил-валин)бензил]дитиокарбамат (18).
Продукт из предыдущего этапа (17, 0,068 г, 0,131 ммоль) и майтансин-3-N-метил-L-(S)-αланинпропанамид-3-тиол (10, 0,048 г, 0,065 ммоль) были растворены в безводном THF (3 мл) в атмосфере аргона, обработаны триэтиламином (0,050 мл, 0,359 ммоль) через шприц, и перемешивались при комнатной температуре под резиновой диафрагмой в течение 18 ч. Реакция была концентрирована в вакууме, растворена в 10% изопропаноле/этилцетате, и промыта с помощью 0,5Н водной HCl. Водный слой был трижды экстрагирован с помощью 10% изопропанола/этилцетата, объединенные органические слои были промыты солевым раствором, высушены на Na2SO4, и отфильтрованы. Выпаренный фильтрат был очищен с помощью колоночной флэш-хроматографии на колонне с 12 г силикагеля (0-20% метанола в этилацетате, 30 мл/мин) с получением титульного соединения в виде твердого вещества белого цвета (0,042 г, 51%). МС (электрораспылительная ионизация, поз.): рассчитано для C59H84ClN9O15S2, 1257,5; получено 1258,8 (М+Н), 1241,5 (М-Н2О+Н), 1280,6 (M+Na).
Этап 12. Майтансин-3 -N-метил-L-(S)-αланин-пропанамидил-3 -N- [4-(амино-цитруллин-валин) бензил]дитиокарбамат (19).
Титульное соединение было получено в виде твердого вещества золотистого цвета (0,016 г, 100%) из продукта предыдущего этапа (18, 0,014 г, 0,011 ммоль) методом из примера 2, этап 3 (соединение 6). Соединение использовалось без дополнительной очистки. МС (электрораспылительная ионизация, поз.): рассчитано для C54H76ClN9O13S2, 1157,5; получено 1159,4 (М+н).
Этап 13. Майтансин-3-N-метил-L-(S)-αланин-пропанамидил-3-N-[4-(амино-цитруллин-вαлин-гексанамид-6-малеимидил)бензил]дитиокарбамат (21).
Продукт из предыдущего этапа (19, 0,055 г, 0,032 ммоль) был растворен в смеси (1:1) ацетонитрил/вода (4 мл), обработан 1N водной NaHCO3 (0,5 мл) и раствором 6-малеимидилкапроновая кислоты сукцинат эфира (20, 0,070 г, 2,27 ммоль) в ацетонитриле (6 мл), и очищен в колбе аргоном под резиновой диафрагмой. После перемешивания реакции при комнатной температуре в течение 5 ч, перед последующим нагреванием до комнатной температуры и растворения солевым раствором, она была оставлена на 3 дня при температуре в -20°С. Смесь была трижды экстрагирована этилацетатом, объединенные органические слои были промыты солевым раствором, высушены на Na2SO4, и отфильтрованы. Выпаренный фильтрат был очищен с помощью колоночной флэш-хроматографии на колонне с 12 г силикагеля (0-20% метанола в этилацетате, в течение 18 мин, 25 мл/мин) с получением титульного соединения в виде твердого вещества бледно-желтого цвета (0,011 г, 26%). МС (электрораспылительная ионизация, поз.): рассчитано для C64H87CIN10O16S2, 1350,5; получено 1352,0 (М+Н), 1334,5 (М-Н2О+Н), 1373,5 (M+Na).
- 19 038512
Пример 4.
Этап 1. N-(4-Аминометилфенил)ацетамид гидрохлорид (23).
Титульное соединение было получено в виде твердого вещества светло-желтого цвета из 4-аминобензиламина с помощью метода King и др. (J. Am. Chem. Soc, 1992,114 (8), 3033), 1H ЯМР (300 МГц, DMSO-d6): 8 10,18 (s, 1H); 8,36 (br s, 3H); 7,63 (d, 2H, J = 8,7 Гц); 7,41 (d, 2H, J = 8,7 Гц); 3,95 (s, 2H); 2,06 (s, 3H).
Этап 2. N-(4-Изотиоцианатометилфенил)ацетамид (24).
Продукт из предыдущего этапа (23, 0,277 г, 1,38 ммоль) был растворен в THF (4,5 мл) и DMF (2,0 мл), охлажден в ледяной бане в атмосфере N2, обработан триэтиламином (0,66 мл, 4,73 ммоль), после чего капельно обработан сероуглеродом (0,125 мл, 2,07 ммоль). Реакция была подогрета до комнатной температуры, перемешивалась в течение 3 ч, после чего снова охлаждена во льду. После обработки ртолуолсульфонил хлоридом (0,274 г, 1,45 ммоль), реакция была медленно подогрета до комнатной температуры с одновременным перемешиванием в течение 18 ч. Смесь была разбавлена водой, подкислена до рН 2 с помощью 10% водной HCl, и трижды экстрагирована с этилацетатом. Объединенные органические слои были промыты солевым раствором, высушены на Na2SO4, и отфильтрованы. Выпаренный фильтрат был очищен с помощью колоночной флэш-хроматографии на колонне с 20 г силикагеля (0-50% ацетонитрила в этилацетате, в течение 20 мин, 30 мл/мин) с получением титульного соединения в виде твердого вещества кремового цвета (0,157 г, 55%). 1H ЯМР (300 МГц, CDCl3) S 7,55 (d, 2Н, J = 8,7 Гц); 7,29 (m, 3Н); 4,70 (s, 2H); 2,23 (s, 3Н).
Этап 3. Майтансин-3-N-метил-L-(S)-αланин-пропанамидил-3-N-[4-(ацетамидил)бензил]дитиокарбамат (25).
Продукт из предыдущего этапа (24, 0,093 г, 0,45 ммоль) и продукт из примера 3, Этап 3 (10, 0,070 г, 0,095 ммоль) были растворены в ацетонитриле (MeCN, 2 мл) и безводном DMF (1 мл), и обработаны щелочным оксидом алюминия (активированным, Brockmann I, 0,357 г). После продувки колбы аргоном, реакция перемешивалась при комнатной температуре в течение 2 дней, была отфильтрована, а твердые вещества промыты метанолом/ацетонитрилом. Выпаренный фильтрат был очищен с помощью колоночной флэш-хроматографии на колонне с 12 г силикагеля (0-50% ацетонитрила в этилацетате, в течение 15 мин, 25 мл/мин), а более медленные фракции продукта были сконцентрированы в вакууме до неочищенной смолы бледно-желтого цвета. Она была очищена путем обращено-фазовой высоко эффективной жидкостной хроматографии (Phenomenex Gemini C18, колонна 30x150 мм, 30-90% ацетонитрила в воде, 0,1% трифторуксусной кислоты в обоих веществах), а чистые фракции были сублимированы с получением титульного соединения в виде твердого вещества белого цвета (0,016 г, 18%). МС (электрораспылительная ионизация, поз.): рассчитано для C45H58ClN5OnS2, 943,3; получено 944,7 (М+Н), 927,1 (МН2О+Н), 966,6 (M+Na).
- 20 038512
Пример 5. Майтансин-3-N-метил-L-(S)-аланин-бета-аланин (27).
Титульное соединение было получено в виде твердого вещества бледно-желтого цвета из 2,5диоксопиролидин-1-ил 3-((трет-бутоксикарбонил)амино)пропаноат (26) методом из примера 2, этапы 13. МС (электрораспылительная ионизация, поз.): рассчитано для C35H49ClN4O10, 720.3; получено 721,4 (М+Н).
Пример 6. Майтансин-3-N-метил-L-(S)-αланин-гамма-аминобутирамид (29).
Титульное соединение было получено в виде твердого вещества бледно-желтого цвета из N-третбутоксикарбонил-ОАВ А-ОН (28) методом из примера 2, этапы 1-3. МС (электрораспылительная ионизация, поз.): рассчитано для C36H51ClN4O10, 734,3; получено 735,5 (М+Н).
Пример 7. Майтансин-3-N-метил-L-(S)-αланин-N-Ме-гамма-аминобутирамид (31).
Титульное соединение было получено в виде твердого вещества бледно-желтого цвета из N-третбутоксикарбонил-N-Ме GABA-ОН (30) методом из примера 2, этапы 1-3. МС (электрораспылительная ионизация, поз.): рассчитано для C37H53ClN4O10, 748,4; получено 749,5 (М+Н).
Пример 8.
Этап 1. Майтансин-3-N-метил-L-(S)-αланин-N-карбокси-6-[3,4-дигидро-2-(трет-бутоксикарбонил)1Н-изохинолин].
Майтан-3-N-метил-L-(S)-αланин (2, 0,034 г, 0,052 ммоль), техническая N-трет-бутоксикарбонил1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-6-карбоновая кислота (32, 0,019 г,0,069 ммоль), и 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид гидрохлорид (EDC, 0,024 г, 0,125 ммоль) были взвешены в круглодонной лабораторной колбе с магнитным мешальником, растворены в дихлорметане (3 мл), колба продута аргоном и запечатана резиновой диафрагмой. Реакция перемешивалась при комнатной температуре. Через 2 дня реакция была разбавлена этилацетатом, и промыта раствором водного NaHCO3, а водный слой был дважды экстрагирован этилацетатом. Объединенные органические слои были промыты солевым раствором, высушены на Na2SO4, и отфильтрованы. После этого, выпаренный фильтрат был очищен на колонне с 12 г силикагеля RediSep Gold через систему ISCO (этилацетат- 5:5:1 этилацетат/дихлорметан/МеОН в течение 12 мин, 30 мл/мин), а объединенные, чистые по тонкослойной хроматографии, фракции были
- 21 038512 выпарены и высушены в вакууме с получением титульного соединения в виде твердого вещества палевого цвета (0,026 г, 55%). МС (электрораспылительная ионизация, поз.): рассчитано для C47H61ClN4O12,
908,4; получено 909,2 (М+Н), 891,2 (М-Н2О+Н).
Этап 2. Майтансин-3-N-метил-L-(S)-аланин-N-карбокси-6-(1,2,3,4-тетрагидроизохинолин) (33).
Титульное соединение было получено в виде твердого вещества золотистого цвета (0,013 г, 52%) из продукта предыдущего этапа (0,025 г, 0,027 ммоль) методом из примера 2, этап 3 (соединение 6). МС (электрораспылительная ионизация, поз.): рассчитано для C42H53ClN4O10, 808,3; получено 809,2 (М+Н).
Пример 9. Этап 1. Майтансин-3-N-метил-L-(S)-аланин-N-карбокси-4-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин].
Титульное соединение было получено в виде твердого вещества белого цвета (0,027 г, 46%) из майтан-3-N-метил-L-(S)-аланина (2, 0,045 г, 0,069 ммоль) и технического 1-1-бутоксикарбонилпиперидина-4карбоновая кислоты (34, 0,024 г, 0,105 ммоль) методом из примера 8, этап 1. МС (электрораспылительная ионизация, поз.): рассчитано для C43H61ClN4O12, 860,4; получено 861,2 (М+Н), 843,2 (М-Н2О+Н).
Этап 2. Майтансин-3-N-метил-L-(S)-аланин-N-карбокси-4-пиперидин (35).
Титульное соединение было получено в виде твердого вещества золотистого цвета (0,012 г, 50%) из продукта предыдущего этапа (0,025 г, 0,029 ммоль) методом из примера 2, этап 3 (соединение 6). Соединение было очищено на колонне С18 с использованием другого градиента и модификатора (20-80% MeCN в воде, 0,05% уксусной кислоты в обоих). Лиофилизация чистых фракций дала титульное соединение (0,008 г, 35%). МС (электрораспылительная ионизация, поз.): рассчитано для C38H53ClN4O10, 760,3; получено 761,2 (М+Н).
35
Пример 10.
Этап 1. Майтансин-3-N-метил-L-(S)-аланин-N-метил-бета-аланин-N-[4-(трет-бутоксикарбонилвалин-цитруллин-амино)бензилокси]карбамат.
Трет-бутоксикарбонил-валин-цитруллин-р-аминобензилокси-(р-нитрофенилокси)карбонат (36), полученный в соответствии с публикацией международной заявки WO2005112919, (0,092 г, 0,143 ммоль), продукт из примера 2, Этап 3 (6, 0,110 г, 0,130 ммоль), и 1-гидрокси-7-азабензотриазол (НОАТ, 0,037 г, 0,272 ммоль) были растворены в DMF (7 мл), обработаны метиламином (0,100 мл, 0,717 ммоль), и перемешаны при комнатной температуре в колбе с пробкой. Через 18 ч, реакционная смесь была сконцентрирована в вакууме до состояния масла, растворена в дихлорметане, и очищена на 24 г колонным RediSep Gold через ISCO Combiflash (0-20% метанола в этилацетате).
После этого, выпаривание фракций продукта в вакууме дало титульное соединение в виде твердого вещества бледно-желтого цвета (0,129 г, 80%). МС (электрораспылительная ионизация, поз.): рассчитано для C60H86ClN9O17, 1239,6; получено 1240,8 (М+Н).
Этап 2. Майтансин-3-N-метил-L-(S)-аланин-N-метил-бета-аланин-N-[4-(валин-цитруллин-амино) бензилокси]карбамат (37).
Титульное соединение было получено в виде твердого вещества белого цвета (0,074 г, 63%) из продукта предыдущего этапа (0,128 г, 0,103 ммоль) методом из примера 2, этап 3 (соединение 6). МС (электрораспылительная ионизация, поз.): рассчитано для C55H78ClN9O15, 1139,5; получено 1141,4 (М+Н).
Этап 3. Майтансин-3-N-метил-L-(S)-аланин-N-метил-бета-аланин-N-[4-(4-{изотиоцианатофенил} тиоуреидо-валин-цитруллин-амино)бензилокси]карбамат (39).
Продукт из предыдущег этапа (37, 0,037 г, 0,029 ммоль) был растворен в тетрагидрофуране (THF, 5 мл) в пробирке, обработан триэтиламином (0,020 мл, 0,143 ммоль), а получившийся раствор был капельно добавлен в колбу, содержащую перемешанный раствор 1,4-фенилендиизотиоцианата (38, 0,055 г, 0,286 ммоль) в THF (10 мл) в течение 15 мин. Пробирка была промыта THF (2 мл), и раствор был добав
- 22 038512 лен в реакционную колбу, которая была закрыта резиновой диафрагмой. После перемешивания при комнатной температуре в течение 24 ч, реакция была сконцентрирована в вакууме до осушения, неочищенный продукт растворен в ацетонитриле, и отфильтрован через тефлоновую мембрану с размером ячейки в 0,45 мкм. После этого, фильтрат был очищен на 30 г колонны С18 RediSep Gold через ISCO (2080% MeCN в воде, 0,05% НОАс в обоих растворителях), а химически чистые фракции (по жидкостной хроматографии) объединены, заморожены при температуре 78°С, и лиофилизованы с получением титульного соединения в виде твердого вещества белого цвета (0,023 г, 59%). МС (электрораспылительная ионизация, поз.): рассчитано для C63H82ClNnO15S2, 1331,5; получено 1332,0 (М+Н).
Пример 11.
Этап 1. 1-(4-Аминобутил)малеимид.
Раствор технического трет-бутоксикарбонил-1-аминобутил-4-малеимида (0,304 г, 1,13 ммоль) в дихлорметане (10 ил) был обработан трифторуксусной кислотой (1,00 мл, 13,1 ммоль), колба продута аргоном, запечатана резиновой диафрагмой и воздуховодом, и перемешивалась при комнатной температуре. Через 18 ч реакция завершилась тонкослойной хроматографией, поэтому она была концентрирована в вакууме, дважды растерта в порошок с диэтиловым эфиром, и высушена в вакууме до состояния смолы.
Смола была еще дважды растерта в порошок с эфиром (с одновременным выскабливанием шпателем), осажена, и снова высушена в вакууме с получением титульного соединения в виде твердого вещества белого цвета (0,321 г, 100%). МС (электрораспылительная ионизация, поз.): рассчитано для C8H12N2O2, 168,1; получено 169,0 (М+Н).
Этап 2. 1-(4-Изотиоцианатобутил)малеимид (41).
Продукт из предыдущего этапа был растворен в ацетонитриле (MeCN, 3x40 мл) и концентрирован в вакууме при 60°С с помощью ротационного испарителя. Высушенный продукт (0,650 г, 2,45 ммоль) был растворен в MeCN (75 мл) и хлороформе (30 мл) в колбе, обработан триэтиламином (1,0 мл, 7,35 ммоль), а полученный раствор был капельно добавлен в колбу, содержащую 1,1'-тиокарбонилди-2,2'-пиридон (0,68 г, 2,94 ммоль) в хлороформе (25 мл) в атмосфере азота в течение 10 мин. Реакция перемешивалась при комнатной температуре в течение 18 ч, концентрирована в вакууме до осушения. Неочищенный продукт был растворен в дихлорметане (DCM) и очищен на колонне с 120 г силикагеля RediSep Gold путем колоночной флэш-хроматографии (0-10% МеОН в DCM). Технически чистые фракции (по LC) были объединены и концентрированы до осушения с получением титульного соединения в виде твердого вещества белого цвета (0,26 г, 50%). МС (электрораспылительная ионизация, поз.): рассчитано для C9H10N2O2S, 210,0; получено 211,2 (М+Н).
Этап 3. Майтансин-3-N-метил-L-(S)-аланин-N-метил-бета-аланин-N-[4-(4-{малеимuдuлбутил}тиоуреидо-валин-цитруллин-амино)бензилокси]карбамат (42).
Продукт из примера 10, Этап 2 (37, 0,029 г, 0,023 ммоль) был растворен в безводном DMF (2 мл), обработан диизопропилэтиламином (0,020 мл, 0,115 ммоль) с помощью сухого шприца, после чего раствором продукта из предыдущего этапа (41, 0,026 г, 0,124 ммоль) в сухом DMF (2 мл). Реакционная колба была продута аргоном, закрыта резиновой диафрагмой, а реакция перемешана при комнатной температуре. Через 18 ч реакция оказалась на 80% завершенной с помощью жидкостной хромато-масс спектрометрии, поэтому она была выпарена в вакууме, до состояния масла, растворена в смеси MeCN/вода, и
- 23 038512 очищена на колонне с 30 г С18 RediSep Gold с помощью колоночной флэш-хроматографии (20-80% MeCN в воде, 0,05% НОАс в обоих растворителях). Химически чистые (по жидкостной хромато массспектрометрии) фракции были объединены, быстро выпарены ротационным способом, заморожены на сухом льду, и лиофилизованы за ночь с получением титульного соединения в виде твердого вещества белого цвета (0,020 г, 65%). МС (электрораспылительная ионизация, поз.): рассчитано для C64H88N11O17SCl, 1349,6; получено 1351.1 (М+Н), 1372.9 (M+Na), 1333.6 (М-Н2О+Н).
О 1.TFA, DCM О .C'S 37, DIEA, DMF
An^-^NHBoc -----* An^^^n' -------* у 7 2. TCDP, TEA У /
DCM/MeCN
41
Приммер 12. Получение конъюгата и определение характеристик.
Для начальной серии опытов, с помощью описанной ниже процедуры, четыре антитела были сопряжены с различными соединениями сшивающего агента с лекарственным препаратом настоящего раскрытия. Четырьмя антителами, использованными в этих экспериментах, были:
(1) антитело PSMA (простатический специфический мембранный антиген), имеющее тяжелые и легкие цепные вариабельные домены клона AB-PG1-XG1-006, как указано в публикации международной заявки WO 2007002222A2, (2) антитело STEAP1 (Шесть трансмембранных эпителиальных антигенов простаты 1), имеющее тяжелые и легкие цепные вариабельные домены клона mu120, выраженное в виде hIgG1, как указано в публикации международной заявки WO 2008052187А2, (3) антитело EGFRvIII, имеющее тяжелые и легкие цепные вариабельные домены клона 131, как указано в публикации международной заявки WO 2013075048A1, и (4) PRLR (рецептор пролактина), имеющее тяжелые и легкие цепные вариабельные домены клона H1H6953N, как указано в публикации заявки США с серийным номером 61/868,185; зарегистрированной 21 августа 2013 г. (раскрытие которой настоящим включено путем отсылки полностью). Все моноклональные антитела были выражены в виде клеток яичника китайского хомячка (СНО), и очищены белком А. Также использован не имеющий обязательной силы контроль, полученный иммунологического антигена, не имеющего отношения к онкологии.
Метод конъюгации для соединений 3, 7, 21 и 42.
Антитело (10 мг/мл) в 50 мМ ГЭПЭС (HEPES), 150 мМ NaCl, Ph 7,5, было обработано 1 мМ дитиотреитола при 37°С в течение 30 мин. После гель-фильтрации (G-25, рН 4,5 ацетат натрия), к ослабленному антителу и смеси, доведенной до рН 7,0 с помощью 1 М ГЭПЭС (рН 7,4) было добавлено производное полезной нагрузки малеимидного сшивающего агента (1,2 эквивалента/группа инокуляционного гепатита) в ДМСО (DMSO) (10 мг/мл).
Через 1 ч, реакция была резко охлаждена с помощью избыточного N-этил малеимида. Конъюгаты были очищены путем эксклюзионной хроматографии и стерильно отфильтрованы. Концентрации белка и полезной нагрузки сшивающего агента были определены с помощью ультрафиолетового спектрального анализа. Эксклюзионная ЖХВД установила, что все использованные конъюгаты были более чем на 95% мономерными, а обращенно-фазовая высоко эффективная жидкостная хроматография установила наличие менее чем 0,5% неконьюгированной полезной нагрузки сшивающего агента. Результаты приводятся в табл. 1 на основе белка. Все коньюгированные антитела были анализированы с помощью ультрафиолета на значения загруженности полезной нагрузки сшивающего агента в соответствии с Hamblett и др., Cancer Res., 2004 10 7063. Результаты обобщены в табл. 1.
Метод конъюгации для соединения 39.
К антителу (2-5 мг/мл) в 50 мМ карбоната, 150 мМ NaCl, pH 9,0, было добавлено 15% по объему диметилацетамида. К антителу было добавлено производное полезной нагрузки сшивающего агента 39 (5-10 эквивалентов) в ДМСО (10 мг/мл), и смесь инкубировалась при 37°С в течение 4-12 ч. Конъюгаты были очищены путем эксклюзионной хроматографии и стерильно отфильтрованы. Концентрации белка и полезной нагрузки сшивающего агента были определены с помощью ультрафиолетового спектрального анализа. Эксклюзионная ЖХВД установила, что все использованные конъюгаты были более чем на 95% мономерными, а обращенно-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография установила наличие менее чем 0,5% неконьюгированной полезной нагрузки сшивающего агента. Для этих конъюгатов, отношение полезной нагрузки к антителу было установлено с помощью времяпролетной ионизации лазерной десорбцией с использованием матрицы (табл. 1).
- 24 038512
Таблица 1
Соединение е252 нм (см1 М1) е280 нм (см1 М1)
3 32000 8500
7 50600 8100
21 44190 9460
39 — —
Антитело е252 нм (см1 М1) е280 нм (см1 М1)
STEAP1 87939 244276
PSMA 77652 224320
PRLR 80673 220420
EGFRvIII 79579 209420
Изотипический контроль 75113 218360
Полезная нагрузка:
Коньюгат антитела Антитело (УФ) Выход, %
STEAP1-7 1.4 36
PSMA-3 3.5 44
PSMA-7 3.4 60
PSMA-21 0.9 45
PRLR-7 3.0 70
EGFRvIII-7 3.4 64
EGFRvIII-39 1.3 (МАЛДИ) 40
Изотипический контроль -3 3.0 48
Изотипический контроль -7 2.3 51
Изотипический контроль -21 2.3 45
Изотипический контроль -39 1.1 (МАЛДИ) 40
Пример 13.
Бесклеточный ферментный анализ конъюгат антитела-лекарственного препарата (ADC) вне организма.
Инкубация Катепсина В.
Процедура бесклеточного ферментного анализа вне организма была принята от Dubowchik, и др., Bioconjugate Chem. 2002 13 855. Скорректированная коэффициентом абсорбции концентрация PRLR-7 и Изотипического контроля-7 была задана как 7,00 мкМ в 25 мМ буфере ацетата натрия, 1 мМ ЭДТК (EDTA), рН 5,0 и предварительно инкубирована при 37°С. Катепсин В (Sigma #C8571) был активирован при комнатной температуре в течение 15 мин с 1 эквивалентом 30 мМ ДТТ (DTT), 15 мМ ЭДТК на 2 эквивалента исходного раствора Катепсина В. Активированный раствор Катепсина В был добавлен к растворам конъюгатов антитела с лекарственным препаратом в молярном отношении 1:750. Образцы были инкубированы при 37°С в течение 24 ч и аликвотированы либо для выявления путем ЖХВД (HISEP)-УФ, или для выявления путем жидкостной хроматографии масс-спектрометрии, см. ниже.
Выявление путем жидкостной хромато масс-спектрометрии.
В установленные моменты времени, небольшая аликвота вынималась, и сравнивалась с 2 объемными эквивалентами холодного метанола. Супернатант восстанавливался, и анализировался с помощью жидкостной хроматографии масс-спектрометрии для расщепления произведенного соединения 6 полезной нагрузки сшивающего агента Катепсина В с помощью колонны Merck Chromolith FastGradient RP18e, 2x50 мм, от 10 до 90% MeCN в течение 5 минут, в Н2О с 0,05% НОАс в обоих растворителях и расходом в 1 мл. Профиль элюции наблюдался при длине волны в 254 нм. Все аликвоты, инкубированные при 37°С с Катепсином В, содержали соединение 6, элюировавшее в 5,1 минуты с массой в 735 М+Н (рассчитано для C36H51ClN4O10, 734,3), и ни одна из аликвот без Катепсина В не содержала соединения 6. Это также было подтверждено инъекцией чистого соединения 6 из примера 2, этап 3.
Выявление путем ЖХВД (HISEP)-УФ.
Растворы впрыскивались без изменений в установленные моменты времени. Использовался следующий градиентный метод: буфер А, 100% 100 мМ NH4OAC, рН 7,0 и буфер В, 100% ацетонитрил, скорость потока 0,4 мл/мин., от 5 до 70% буфера В, в колонне ЖХ Supelco HISEP; 150 мм x 4,6 мм. Профиль элюции наблюдался при длине волны в 280 нм и 252 нм. Все аликвоты конъюгатов антитела с лекарственным препаратом, инкубированные с Катепсином В, содержали продукты, которые элютировали через 19,4 минуты. В идентичных условиях градиента, чистое соединение 6 элютирует с таким же временем удержания. Образцы со временем в 19,4 минуты отсутствовали в аликвотах без Катепсина В.
Результаты данного примера являются важными в некоторой степени, так как протеолиз Катепсина В в 6 должен происходить только после интернализации конъюгата антитела с лекарственным препаратом в клетке, в которой имеются ферменты. Нецелевые результаты должны быть уменьшены, так как антитело доставляет цитотоксичную полезную нагрузку напрямую в адресные клетки.
Пример 14. Реакции цитотоксичности вне организма.
В данном примере была произведена оценка способности различных конъюгатов антитела с лекар- 25 038512 ственным препаратом к уничтожению антиген отжимающих опухолевых клеток вне организма.
Клетки были посеяны в 96-луночные плашки с поли-Э-лизиновым покрытием в количестве 375 (MMT/hEGFRvIII), 1500 (U251/hEGFRvIII), 2000 (HEK293/hEGFRvIII) или 3000 (С4-2, PC3/hSTEAP1, T47D и U87-MG) клеток на плашку в комплексную среду для роста, и выращивались за один день. Для кривых жизнеспособности клетки, к клеткам добавлялись последовательно разбавленные конъюгаты или свободно репрезентативные полезные нагрузки в конечной концентрации в диапазоне от 500 нМ до 1 пМ, и инкубировались в течение 3 суток. Для измерения жизнеспособности в MMT/hEGFRvIII, U251/hEGFRvIII, HEK293/hEGFRvIII, C4-2, PC3/hSTEAP1 и U87-MG, клетки инкубировались с холецистокинин октапептидом CCK8 (Dojindo) в течение последних 1-3 ч, а поглощение при длине волны в 450 нм (OD450) было определено с помощью спектрофотометра Flexstation 3 (компания Molecular Devices). Для измерения жизнеспособности в T47D, клетки инкубировались на льду в течение 30 мин в 4% формальдегид + 3 мкг/мл хехста. Изображения окрашенных хехстом ядер были получены системой ImageXpress Micro XL (компания Molecular Devices), а число ядер было определено с помощью аналитического ПО Columbus (компания PerkinElmer). Фоновые уровни OD450 (CCK8) или число ядер от дигитонина (40 нМ) обработанных клеток были вычтены из всех плашек и жизнеспособность была выражена как процент от необработанных контрольных образцов. Значения IC50 были установлены на основе четырех-параметрического логистического уравнения на 10-точечной характеристической кривой (ПО GraphPad Prism). Все кривые и значения IC50 были скорректированы на эквиваленты полезной нагрузки.
В клетках С4-2 (линия рака предстательной железы), по умолчанию выражающих PSMA при 271 кратности выше фиксации изотипического контроля, майтанзиноидные конъюгаты PSMA-3, PSMA-7 и PSMA-21 имеют значения IC50 равные 3.8; 0.5 и 8.3 нМ соответственно (фиг. 1). Голое антитело PSMA было лишено какой-либо антипролиферативной активности.
В клетках PC3/hSTEAP1 (линия рака предстательной железы), выражающих hSTEAP1 при 352 кратности выше фиксации изотипического контроля, майтанзиноидный конъюгат STEAP1-7 имеет значение IC50 в 4 нМ (фиг. 2). Голое антитело STEAP1 было лишено какой-либо антипролиферативной активности.
В клетках T47D (линия рака молочной железы), по умолчанию выражающих PRLR при 14 кратности выше фиксации изотипического контроля, майтанзиноидный конъюгат PRLR-7 имеет значение IC50 в 1,0 нМ (фиг. 3). Голое антитело T47D было лишено какой-либо антипролиферативной активности.
В клетках HEK293/hEGFRvIII, выражающих hEGFRvIII при 360 кратности выше фиксации изотипического контроля, майтанзиноидный конъюгат EGFRvIII-7 имеет значение IC50 в 0,4 нМ (фиг. 4). Голое антитело EGFRvIII было лишено какой-либо антипролиферативной активности.
В клетках MMT/hEGFRvIII, выражающих hEGFRvIII при 280 кратности выше фиксации изотипического контроля, майтанзиноидный конъюгат EGFRvIII-7 имеет значение IC50 в 0,3 нМ (фиг. 5). Голое антитело EGFRvIII было лишено какой-либо антипролиферативной активности.
В клетках U251/hEGFRvIII (линия глиобластомы), выражающих hEGFRvIII при 165 кратности выше фиксации изотипического контроля, майтанзиноидный конъюгат hEGFRvIII-7 имеет значение IC50 в 0.3 нМ (фиг. 6). Голое антитело EGFRvIII было лишено какой-либо антипролиферативной активности.
Вне организма цитотоксичность предположительно выпускаемых полезных нагрузок (лекарственные вещества, не связанные с белками плазмы крови) была также проверена в описанных выше различных клеточных линиях, и нанесена вдоль коньюгированных антител для сравнения (см. замкнутые квадраты (и) на фиг. 1-6). Для полезных нагрузок сшивающих агентов 3 и 7, предлагаемые выпускаемые полезные нагрузки 2 и 6, соответственно, могут использоваться в цитологических анализах напрямую, так как являются стабильными. Тем не менее, для полезной нагрузки сшивающего агента 21, предлагаемой выпускаемой полезной нагрузкой является сульфгидрильное соединение 10. Так как соединение 10 может быть сильно химически активным, что могло бы привести к ненадежным результатам, в этих анализах, для представления выпускаемой полезной нагрузки, было выбрано соединение 25.
В отдельной серии опытов, соединение 6, вместе с аминовыми аналогами 27, 29 и 31 было проанализировано в HEK293 и U87MG на предмет антипролиферативной активности (фиг. 7). Все эти соединения имеют значения IC50 более 30 нМ, указывая на то, что они высоко цитотоксичны только в случае прикрепления к антителу с помощью соответствующего сшивающего агента. (Для этих экспериментов, фоновая коррекция с помощью дигитонина не производилась).
В еще одной серии опытов, соединения 6, 9, 33 и 35 были проанализированы в HEK293, U251, С4-2, РС3 и ММТ на предмет анти-пролиферативной активности (фиг. 8). Аминосоединения 6, 33, и 35 имели переменные значения IC50, как показано в табл. 2. Тенденция в эффективности следует 9>33>35> 6, и соответствует 5 проанализированным клеточным линиям.
- 26 038512
Таблица 2
IC5Q (нМ)
Соединение НЕК293 U251 С4-2 РСЗ ммт
9 0.2 0.4 1.5 0.4 0.3
33 20 15 20 30 20
35 50 25 55 65 60
6 200 150 200 250 250
Не будучи привязанными к какой-либо теории, результаты этих экспериментов демонстрируют, что выпущенная или не связанная с белками плазмы крови версии соединений настоящего раскрытия (т.е., соединения, не сопряженные с антителом) были, в большинстве случаев, значительно менее цитотоксичными, чем будучи коньюгированными с антителом против клетки-мишени. Это свойство настоящего раскрытия означает, что конъюгаты антитела с лекарственным препаратом, составляющие соединения изобретения, дадут меньше побочных эффектов и меньше нежелательной токсичности, так как свойства уничтожения клетки будут специально сконцентрированы в месте целевого антигена.
Приммер 15.
Конъюгаты антитела с лекарственным препаратом против EGFRvIII являются эффективными ингибиторами роста опухоли в физиологических моделях аллотрансплантатов, положительных на рак молочной железы EGFRvIII.
В этом примере два различных конъюгата антитела с лекарственным препаратом иллюстративного антитела H1H1863N2 против EGFRvIII были испытаны на их способность замедлять рост опухоли в организме. (Аминокислотная последовательность и различные свойства H1H1863N2 установлены в патенте США US61/950,963, зарегистрированном 11 марта 2014, настоящим включенным путем ссылки во всей полноте). H1H1863N2 содержит область вариабельности тяжелой цепи (HCVR), имеющую идентификатор последовательности №1; область вариабельности легкой цепи (LCVR), имеющую идентификатор последовательности №5; антигенсвязывающие участки тяжелой цепи (HCDR1, HCDR2 и HCDR3), имеющие идентификаторы последовательности №№: 2, 3 и 4 соответственно; и антигенсвязывающие участки легкой цепи (LCDR1, LCDR2 и LCDR3), имеющие идентификаторы последовательности №№: 6, 7 и 8, соответственно.
Первый конъюгат антитела с лекарственным препаратом был получен путем сопряжения H1H1863N2 с майтанзиноидом DM1 с участием не расщепляемого сшивающего агента МСС (см., напр., патент США US №5,208,020 и патентную заявку США US № 20100129314) для получения H1H1863N2MCC-DM1. Второй конъюгат антитела с лекарственным препаратом был получен путем сопряжения H1H1863N2 с 7 для получения H1H1863N2-7. При испытании на цитотоксичность вне организма против клеток MMT/EGFRvIII с помощью формата анализа, описанного в примере 14, H1H1863N2-MCCDM1 показал значение IC50 в 12 нМ, тогда как H1H1863N2-7 показал значение IC50 только в 0,8 нМ. Таким образом, вне организма, конъюгат антитела с лекарственным препаратом против EGFRvIII, H1H1863N2-7, показал значительно более эффективную способность уничтожения опухолевых клеток, чем соответствующее антитело, сопряженное с DM1 с участием не сшивающего агента МСС.
Для сравнения действенности антител, коньюгированных с MCC-DMI и 7 против EGFRvIII в организме, были проведены исследования на мышах с ослабленной иммунной системой, несущих аллотрансплантаты, положительные на рак молочной железы EGFRvIII. Вкратце, опухолевые аллотрансплантаты были установлены путем подкожной пересадки 0,5 х106 MMT/EGFRvIII клеток в левую боковую поверхность самок мышей с ТКИН СВ17 (Taconic, Hudson, NY). После достижения опухолями среднего объема в 140 мм3 (примерно на 8 день), мыши были случайным порядком разделены на группы по семь особей, и получили конъюгаты антител с лекарственным препаратом против EGFRvIII, полученными с форматами сшивающего агента-препарата либо с MCC-DM1, либо с 7. Также анализировались и контрольные реактивы, включая несвязанные конъюгаты антител с лекарственным препаратом, полученными с форматами сшивающего агента-препарата либо с MCC-DM1, либо с 7, и проводник, фосфатно-солевой буферный раствор. Конъюгаты антител с лекарственным препаратом вводились с дозировкой в 1 и 5 мг/кг три раза в день в течение одной недели, и впоследствии контролировались вплоть до достижения опухолями среднего объема около 2000 мм3 в группе, получавшей только проводник. В этот момент было рассчитано угнетение роста опухоли.
Средний размер опухоли по сравнению с группой, получавшей только проводник, рассчитывался следующим образом: опухоли измерялись дважды в неделю с помощью циркулей до достижения среднего размера у контрольной группы в 1000 мм3; размер опухоли был рассчитан с помощью формулы (длина х ширина2)/2. Угнетение роста опухоли было рассчитано в соответствии со следующей формулой:
(1-((Т оконч.
-Тнач. )/(Соконч.
-Снач.)))*100, где Т (группа лечения) и С (контрольная группа) представляют среднюю массу опухоли на день, когда опухоль у группы, получавшей только проводник, достигла 1000 мм3. Результаты обобщены в табл. 3.
- 27 038512
Таблица 3. Размер опухоли и угнетение роста опухоли после введения конъюгатов антител с лекарственным препаратом против EGFRvIII и контрольных препаратов, введенных с повторной дозой
Группа лечения Окончательный размер опухоли на 8 день, мм3 (среднее ±СКО) Среднее угнетение роста опухоли (%)
“Проводник”, фосфатно-солевой буферный раствор 2253 ±217 0
Контроль-MCC-DMl (1 мг/кг) 2827 ±278 -27
Контроль-MCC-DMl (5 мг/кг) 2402 ±256 -7
Контроль-7 (1 мг/кг) 2729 ±470 -22
Контроль-7 (5 мг/кг) 2787 ±503 -25
H1H1863N2-MCC-DM1 (1 мг/кг) 931 ±292 62
H1H1863N2-MCC-DM1 (5 мг/кг) 471 ±227 84
H1H1863N2-7 (1 мг/кг) 679 ±265 74
H1H1863N2-7 (5 мг/кг) 96 ±34 102
Как показано в данном примере, наибольшее угнетение опухоли наблюдалось у мышей, получавших 5 мг/кг H1H1863N2-7, у которых была отмечена регрессия первоначальной опухоли. Угнетение роста опухоли в 102% в результате лечения 5 мг/кг H1H1863N2-7 было значительно больше по сравнению с наблюдаемым последующим лечением опухоли 5 мг/кг H1H1862N2-MCC-DM1 (83%). Превосходство угнетения роста опухоли, вызванного H1H1863N2-7 по сравнению с H1H1863N2-MCC-DM1, также сохранилось и при дозировке в 1 мг/кг. Никакого влияния на опухоль не наблюдалось в группах, получавших контрольный конъюгат антитела с лекарственным препаратом с использованием MCC-DM1 или 7.

Claims (27)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Соединение формулы (I)
    где Z2 представлен следующей структурной формулой:
    -Z2A-Z2B-Z2C-Z2D-, где -Z2A-, -Z2B-, -Z2C- и -Z2D-, каждый независимо, являются отсутствующими, -С(=О)-, и C1-6алкилен-, или -C(=S)-N(R4)-;
    Ab представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент;
    АА1-АА2 представляет собой пептидный остаток выбранный из группы, включающей валинцитруллин, цитруллин-валин, лизин-фенилаланин, фенилаланин-лизин, валин-аспарагин, аспарагинвалин, треонин-аспарагин, серин-аспарагин, аспарагин-серин, фенилаланин-аспарагин, аспарагинфенилаланин, лейцин-аспарагин, аспарагин-лейцин, изолейцин-аспарагин, аспарагин-изолейцин, глицинаспарагин, аспарагин-глицин, глутаминовая кислота-аспарагин, аспарагин-глутаминовая кислота, цитруллин-аспарагин, аспарагин-цитруллин, аланин-аспарагин и аспарагин-аланин;
    а представляет собой целое число от одного до десяти;
    А3 представляет собой -СН2-, -СН2СН2- или -СН2СН2СН2СН2-;
    R4, R9, R10, R11, и R12 каждый представляет собой независимо водород или С1-6алкил и
    R4a представляет собой C1-6алкил.
  2. 2. Соединение по п.1, где Ab способен связываться со специально выбранной клеточной популяцией.
  3. 3. Соединение по п.1 или 2, где Ab является антителом или его антигенсвязывающим фрагментом, специфически связывающим опухолевый специфический антиген.
  4. 4. Соединение по п.1, представленное формулой (Ia)
    - 28 038512
    где Ab является антителом или его антигенсвязывающим фрагментом.
  5. 5. Соединение по п.1, где AA1-AA2 является пептидным остатком, расщепляемым протеазой.
  6. 6. Соединение по п.1, в котором АА1-АА2 является пептидным остатком, расщепляемым протеазой, которую экспрессирует опухолевая ткань.
  7. 7. Соединение по п.6, где протеазой является катепсин или плазмин.
  8. 8. Фармацевтическая композиция, включающая терапевтически эффективное количество соединения по п. 1 или его фармацевтически приемлемую соль и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или субстанций для лечения онкологических заболеваний.
  9. 9. Способ снижения, замедления или остановки роста аномальной клетки, состоящий из взаимодействия аномальной клетки с соединением по п.1.
  10. 10. Способ ликвидации клетки, состоящий из взаимодействия клетки с соединением по п.1.
  11. 11. Способ по п.11, где клетка является опухолевой клеткой.
  12. 12. Способ лечения онкологического заболевания у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества композиции, содержащей соединение по п.1
  13. 13. Способ по п.12, где субъект является млекопитающим.
  14. 14. Способ по п.12, дополнительно включающий последовательное или непрерывное применение дополнительной терапии, которой является радиационная терапия, химиотерапия или их сочетание.
  15. 15. Способ по п.12, дополнительно включающий введение по меньшей мере одного дополнительного химиотерапевтического средства.
  16. 16. Способ уменьшения размера опухоли, прекращения увеличения размера опухоли, уменьшения разрастания опухоли или предотвращения распространения опухоли у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества композиции для уменьшения размера опухоли, прекращения увеличения размера опухоли, уменьшения разрастания опухоли или предотвращения распространения опухоли, где композиция содержит соединение по п.1.
  17. 17. Соединение формулы (II)
    где Z2 представлен следующей структурной формулой:
    -Z2A-Z2B-Z2C-Z2D-, где -Z2A-, -Z2B-, -Z2C- и -Z2D-, каждый независимо от остальных, является отсутствующим, C1-6алкилом или С1-6алкиленом-, С6-18арилом или С6-18ариленом-, -С(=О)-, -О-С(=О)-, -C(=S)-N(R4)-, -N=C=S,
    АА1-АА2 представляет собой пептидный остаток выбранный из группы, включающей валинцитруллин, цитруллин-валин, лизин-фенилаланин, фенилаланин-лизин, валин-аспарагин, аспарагинвалин, треонин-аспарагин, серин-аспарагин, аспарагин-серин, фенилаланин-аспарагин, аспарагинфенилаланин, лейцин-аспарагин, аспарагин-лейцин, изолейцин-аспарагин, аспарагин-изолейцин, глицинаспарагин, аспарагин-глицин, глутаминовая кислота-аспарагин, аспарагин-глутаминовая кислота, цитруллин-аспарагин, аспарагин-цитруллин, аланин-аспарагин и аспарагин-аланин;
    A3 представляет собой -СН2-, -СН2СН2- или -СН2СН2СН2СН2-;
    R4, R9, R10, R11 и R12 каждый представляет собой независимо водород или C1-6αлкил; и
    R4a представляет собой C1-6αлкил.
  18. 18. Соединение по п.17, имеющее формулу, выбранную из группы, состоящей из (IIa, IIb, IIc)
    - 29 038512
  19. 19. Соединение формулы (III)
    или где А3а представляет собой -СН2-, -СН2СН2кил.
  20. 20. Соединение формулы (Ib)
    -СН2СН2СН2СН2- и R4a представляет собой С1.6ал-
    где Ab является антителом или его антигенсвязывающим фрагментом;
    а является целым числом от одного до десяти;
    Z2 представляет собой следующую структурную формулу:
    -Z2A-Z2B-Z2C-Z2D-, где Z2A, Z2B, Z2C и Z2D, каждый независимо, являются отсутствующими, -С(=О)-, С1.6алкилен-, С6-18 арилен- или -C(=S)-N(R4)-;
    АА1-АА2 представляет собой пептидный остаток, выбранный из группы, включающей валинцитруллин, цитруллин-валин, лизин-фенилаланин, фенилаланин-лизин, валин-аспарагин, аспарагинвалин, треонин-аспарагин, серин-аспарагин, аспарагин-серин, фенилаланин-аспарагин, аспарагинфенилаланин, лейцин-аспарагин, аспарагин-лейцин, изолейцин-аспарагин, аспарагин-изолейцин, глицинаспарагин, аспарагин-глицин, глутаминовая кислота-аспарагин, аспарагин-глутаминовая кислота, цитруллин-аспарагин, аспарагин-цитруллин, аланин-аспарагин и аспарагин-аланин;
    А3 представляет собой -СН2-, -СН2СН2- или -СН2СН2СН2СН2-;
    R4, R9, R10, Rii, и R12 каждый представляет собой независимо водород или С1-6алкил и
    R4a представляет собой С1-6алкил.
  21. 21. Соединение по п.20, представленное формулой (Ic)
    - 30 038512
    где а является целым числом от одного до десяти.
  22. 22. Соединение формулы по п.1, имеющее формулу (Id) где Ab является антителом или его антигенсвязывающим фрагментом; АА1-АА2 является пептидным остатком, выбираемым из группы, содержащей валин-цитруллин, цитруллин-валин, лизинфенилаланин, фенилаланин-лизин, валин-аспарагин, аспарагин-валин, треонин-аспарагин, серинаспарагин, аспарагин-серин, фенилаланин-аспарагин, аспарагин-фенилаланин, лейцин-аспарагин, аспарагин-лейцин, изолейцин-аспарагин, аспарагин-изолейцин, глицин-аспарагин, аспарагин-глицин, глутаминовая кислота-аспарагин, аспарагин-глутаминовая кислота, цитруллин-аспарагин, аспарагинцитруллин, аланин-аспарагин и аспарагин-аланин;
    а является целым числом от одного до десяти;
    q представляет собой ноль или целое число от одного до пяти;
    A3 представляет собой -СН2-, -СН2СН2- или -СН2СН2СН2СН2-;
    R4, R9, R10, Rn, и R12, каждый независимо, представляет собой водород или С1-6алкил и
    R4a представляет собой С1-6алкил.
  23. 23. Соединение по п.22, представленное формулой (Ii)
    где а является целым числом от одного до десяти.
  24. 24. Соединение по п.19, имеющее формулу (IIIa)
  25. 25. Соединение, имеющее формулу, выбранную из группы, включающей (IVa, IVb, и IVc)
    - 31 038512
  26. 26. Соединение, имеющее формулу (IVd)
    О СН3
  27. 27. Соединение, имеющее формулу (IId)
EA201500905A 2013-03-15 2014-03-14 Конъюгаты майтанзиноидов и их терапевтическое применение EA038512B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361792216P 2013-03-15 2013-03-15
PCT/US2014/029757 WO2014145090A1 (en) 2013-03-15 2014-03-14 Biologically active molecules, conjugates thereof, and therapeutic uses

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201500905A1 EA201500905A1 (ru) 2017-02-28
EA038512B1 true EA038512B1 (ru) 2021-09-08

Family

ID=50933481

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201500905A EA038512B1 (ru) 2013-03-15 2014-03-14 Конъюгаты майтанзиноидов и их терапевтическое применение

Country Status (19)

Country Link
US (3) US10570151B2 (ru)
EP (2) EP2968593A1 (ru)
JP (3) JP6847388B2 (ru)
KR (1) KR102306490B1 (ru)
CN (1) CN105188766B (ru)
AU (1) AU2014233385C1 (ru)
BR (1) BR112015022585B1 (ru)
CA (1) CA2902872A1 (ru)
CL (1) CL2015002765A1 (ru)
EA (1) EA038512B1 (ru)
HK (1) HK1212890A1 (ru)
IL (1) IL240418B (ru)
MA (1) MA38496B2 (ru)
MX (1) MX2015011348A (ru)
MY (1) MY183572A (ru)
PH (1) PH12015502131A1 (ru)
SG (1) SG11201507481WA (ru)
WO (1) WO2014145090A1 (ru)
ZA (1) ZA201505813B (ru)

Families Citing this family (58)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8542802B2 (en) 2007-02-15 2013-09-24 Global Tel*Link Corporation System and method for three-way call detection
JP6482471B2 (ja) 2012-12-21 2019-03-13 バイオアライアンス コマンディテール フェンノートシャップ 親水性の自壊性リンカー及びそのコンジュゲート
CA2902872A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Biologically active molecules, conjugates thereof, and therapeutic uses
US9545451B2 (en) 2013-08-21 2017-01-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-PRLR antibodies and methods for killing PRLR-expressing cells
TWI641620B (zh) 2013-08-21 2018-11-21 再生元醫藥公司 抗－ｐｒｌｒ抗體及其用途
US20160354482A1 (en) 2013-08-26 2016-12-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions comprising macrolide diastereomers, methods of their synthesis and therapeutic uses
SG11201606979TA (en) * 2014-03-11 2016-09-29 Regeneron Pharma Anti-egfrviii antibodies and uses thereof
JP6800021B2 (ja) 2014-06-02 2020-12-16 レゲネロン ファーマシューティカルス，インコーポレーテッド 抗体−薬物コンジュゲート、それらの製造、及びそれらの治療用途
CA2952876A1 (en) 2014-06-20 2015-12-23 Bioalliance C.V. Anti-folate receptor alpha (fra) antibody-drug conjugates and methods of using thereof
CA2978340C (en) * 2015-03-27 2024-05-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Maytansinoid derivatives, conjugates thereof, and methods of use
JP6802840B2 (ja) 2015-06-09 2020-12-23 エックスディーシーエクスプローラー （シャンハイ） カンパニー リミテッド 抗体薬物複合体、中間体、その製造方法、薬学的組成物及び応用
AU2016289480C1 (en) 2015-07-06 2021-10-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Multispecific antigen-binding molecules and uses thereof
TWI753875B (zh) 2016-01-08 2022-02-01 美商美國全心醫藥生技股份有限公司 四價抗psgl-1抗體及其用途
MA43094B1 (fr) 2016-01-25 2020-10-28 Regeneron Pharma Dérivés de maytansinoïde, leurs conjugués, et procédés d'utilisation
MA45328A (fr) 2016-04-01 2019-02-06 Avidity Biosciences Llc Compositions acide nucléique-polypeptide et utilisations de celles-ci
EP3448891A1 (en) 2016-04-28 2019-03-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of making multispecific antigen-binding molecules
WO2017210489A1 (en) 2016-06-01 2017-12-07 M3 Biotechnology, Inc. Compounds
CA3037536A1 (en) 2016-09-23 2018-03-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-muc16 (mucin 16) antibodies
AU2017331361B2 (en) 2016-09-23 2024-07-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-STEAP2 antibodies, antibody-drug conjugates, and bispecific antigen-binding molecules that bind STEAP2 and CD3, and uses thereof
TWI782930B (zh) * 2016-11-16 2022-11-11 美商再生元醫藥公司 抗ｍｅｔ抗體，結合ｍｅｔ之雙特異性抗原結合分子及其使用方法
JP7174699B2 (ja) 2016-11-29 2022-11-17 レゲネロン ファーマシューティカルス，インコーポレーテッド Ｐｒｌｒ陽性乳癌の治療方法
JP2020505330A (ja) 2017-01-06 2020-02-20 アビディティー バイオサイエンシーズ エルエルシー エクソンスキッピングを誘導する核酸ポリペプチド組成物および方法
WO2018159582A1 (ja) 2017-02-28 2018-09-07 学校法人近畿大学 抗ｈｅｒ３抗体－薬物コンジュゲート投与によるｅｇｆｒ－ｔｋｉ抵抗性の非小細胞肺癌の治療方法
TW201836647A (zh) 2017-04-06 2018-10-16 美商艾伯維有限公司 抗－ｐｒｌｒ抗體藥物軛合物（ａｄｃ）及其用途
CN110944718A (zh) 2017-05-18 2020-03-31 里珍纳龙药品有限公司 环糊精蛋白质药物偶联物
WO2018237335A1 (en) 2017-06-23 2018-12-27 VelosBio Inc. IMMUNOCONJUGUATED ROR1 ANTIBODIES
GB201711809D0 (en) 2017-07-21 2017-09-06 Governors Of The Univ Of Alberta Antisense oligonucleotide
CN118267396A (zh) 2017-10-04 2024-07-02 艾维迪提生物科学公司 核酸-多肽组合物及其用途
KR20200085807A (ko) * 2017-11-07 2020-07-15 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 항체 약물 접합제용 친수성 링커
CN118667812A (zh) 2017-12-06 2024-09-20 艾维迪提生物科学公司 治疗肌萎缩和强直性肌营养不良的组合物和方法
CN112074538A (zh) 2018-04-30 2020-12-11 瑞泽恩制药公司 结合her2和/或aplp2的抗体和双特异性抗原结合分子、其缀合物和用途
BR112020023145A2 (pt) 2018-05-17 2021-02-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. anticorpo anti-cd63 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, molécula de ligação ao antígeno biespecífica, proteína terapêutica de múltiplos domínios, polinucleotídeo composição farmacêutica, e, composto
JP2021528471A (ja) * 2018-06-26 2021-10-21 イミュノジェン・インコーポレーテッド Ａｄａｍ９を標的とする免疫コンジュゲート、及び、その使用の方法
JPWO2020059772A1 (ja) 2018-09-20 2021-08-30 第一三共株式会社 抗ｈｅｒ３抗体−薬物コンジュゲート投与によるｈｅｒ３変異がんの治療
KR20240015162A (ko) 2018-12-21 2024-02-02 어비디티 바이오사이언시스 인크. 항트랜스페린 수용체 항체 및 이의 용도
AU2020224136A1 (en) 2019-02-21 2021-09-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating ocular cancer using anti-MET antibodies and bispecific antigen binding molecules that bind MET
JP2022535588A (ja) 2019-06-06 2022-08-09 アビディティー バイオサイエンシーズ，インク． 核酸ポリペプチド組成物およびその使用
CN114375297A (zh) 2019-06-06 2022-04-19 艾维迪提生物科学公司 Una亚酰胺及其用途
CA3146933A1 (en) 2019-09-16 2021-03-25 Marcus KELLY Radiolabeled met binding proteins for immuno-pet imaging
US11814428B2 (en) 2019-09-19 2023-11-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-PTCRA antibody-drug conjugates and uses thereof
WO2021097220A1 (en) 2019-11-15 2021-05-20 Seagen Inc. Methods of treating her2 positive breast cancer with tucatinib in combination with an anti-her2 antibody-drug conjugate
KR20220131266A (ko) 2020-01-24 2022-09-27 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 단백질-항바이러스 화합물 접합체
IL295312A (en) 2020-02-28 2022-10-01 Regeneron Pharma Bispecific antigen binding molecules that bind her2 and methods of using them
US11525137B2 (en) 2020-03-19 2022-12-13 Avidity Biosciences, Inc. Compositions and methods of treating Facioscapulohumeral muscular dystrophy
CN115697418A (zh) 2020-03-27 2023-02-03 艾维迪提生物科学公司 治疗肌营养不良的组合物和方法
US11701427B2 (en) 2020-04-16 2023-07-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Diels-alder conjugation methods
CN116157417A (zh) 2020-07-17 2023-05-23 第一三共株式会社 抗体-药物缀合物的制造方法
JP2023547323A (ja) 2020-10-22 2023-11-10 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 抗ｆｇｆｒ２抗体及びその使用方法
CA3198294A1 (en) 2020-11-10 2022-05-19 Thomas Nittoli Selenium antibody conjugates
AU2022238571A1 (en) 2021-03-18 2023-09-14 Seagen Inc. Selective drug release from internalized conjugates of biologically active compounds
WO2022211075A1 (ja) 2021-03-31 2022-10-06 日本マイクロバイオファーマ株式会社 抗体薬物複合体の製造方法及びそれに用いる酵素
AU2022255573A1 (en) 2021-04-05 2023-11-23 Altheia Science S.R.L. Diagnosis and treatment of myeloid disorders and acute leukemias using novel tumor specific antigens
AU2022345098A1 (en) 2021-09-16 2024-04-04 Avidity Biosciences, Inc. Compositions and methods of treating facioscapulohumeral muscular dystrophy
AU2022422149A1 (en) 2021-12-23 2024-08-01 Mirecule, Inc. Compositions for delivery of polynucleotides
WO2023194501A1 (en) 2022-04-05 2023-10-12 Altheia Science S.R.L. Treatment of myeloid disorders and acute leukemias targeting novel tumor specific antigens
US12071621B2 (en) 2022-04-05 2024-08-27 Avidity Biosciences, Inc. Anti-transferrin receptor antibody-PMO conjugates for inducing DMD exon 44 skipping
WO2024026474A1 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for transferrin receptor (tfr)-mediated delivery to the brain and muscle
US20240173426A1 (en) 2022-11-14 2024-05-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for fibroblast growth factor receptor 3-mediated delivery to astrocytes

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130029900A1 (en) * 2011-06-21 2013-01-31 Immunogen, Inc. Novel maytansinoid derivatives with peptide linker and conjugates thereof

Family Cites Families (83)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4307016A (en) 1978-03-24 1981-12-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Demethyl maytansinoids
JPS5566585A (en) 1978-11-14 1980-05-20 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
CA2026147C (en) 1989-10-25 2006-02-07 Ravi J. Chari Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US20070258987A1 (en) 2000-11-28 2007-11-08 Seattle Genetics, Inc. Recombinant Anti-Cd30 Antibodies and Uses Thereof
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
IL163573A0 (en) * 2002-03-01 2005-12-18 Univ Tulane Conjugates of therapeutic or cytotoxic agents and biologically active peptides
US20090068178A1 (en) 2002-05-08 2009-03-12 Genentech, Inc. Compositions and Methods for the Treatment of Tumor of Hematopoietic Origin
US20110250133A1 (en) 2003-01-13 2011-10-13 Bracco Imaging S.P.A. Gastrin releasing peptide compounds
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
US7276497B2 (en) 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
CA2530172A1 (en) 2003-06-27 2005-02-10 Abgenix, Inc. Antibodies directed to the deletion mutants of epidermal growth factor receptor and uses thereof
GB0316294D0 (en) 2003-07-11 2003-08-13 Polytherics Ltd Conjugated biological molecules and their preparation
TW200539855A (en) 2004-03-15 2005-12-16 Wyeth Corp Calicheamicin conjugates
EP1747021B1 (en) 2004-05-19 2015-09-09 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Self-immolative linkers and drug conjugates
CN114053429A (zh) * 2004-06-01 2022-02-18 健泰科生物技术公司 抗体-药物偶联物和方法
US20080305044A1 (en) 2004-11-29 2008-12-11 Seattle Genetics, Inc. Engineered Antibodies and Immunoconjugates
CN101287498B (zh) 2005-06-20 2013-03-27 Psma开发有限公司 Psma抗体-药物缀合物
KR100970824B1 (ko) * 2005-06-20 2010-07-16 제넨테크, 인크. 종양의 진단 및 치료를 위한 조성물 및 방법
US7598375B2 (en) 2005-08-09 2009-10-06 Millenium Pharmaceuticals, Inc. Method of acylating maytansinol with chiral amino acids
EP2399609B1 (en) * 2005-08-24 2015-03-18 ImmunoGen, Inc. Process for preparing maytansinoid antibody conjugates
US7750116B1 (en) 2006-02-18 2010-07-06 Seattle Genetics, Inc. Antibody drug conjugate metabolites
AU2007308792B2 (en) 2006-10-27 2013-01-24 Genentech, Inc. Antibodies and immunoconjugates and uses therefor
JP5394246B2 (ja) * 2007-03-30 2014-01-22 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗体及びイムノコンジュゲートとこれらの使用方法
WO2008122039A2 (en) 2007-04-02 2008-10-09 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Selenocysteine mediated hybrid antibody molecules
CN101687037B (zh) 2007-05-08 2013-07-10 健泰科生物技术公司 半胱氨酸改造的抗muc16抗体和抗体药物偶联物
CA2687178C (en) 2007-05-23 2014-02-04 Ventana Medical Systems, Inc. Polymeric carriers for immunohistochemistry and in situ hybridization
US8663643B2 (en) 2008-03-18 2014-03-04 Genentech, Inc. Combinations of an anti-HER2 antibody-drug conjugate and chemotherapeutic agents, and methods of use
ES2588194T3 (es) * 2008-04-11 2016-10-31 Seattle Genetics, Inc. Detección y tratamiento de cáncer pancreático, de ovario y otros cánceres
KR20100137585A (ko) * 2008-04-30 2010-12-30 이뮤노젠 아이엔씨 강력한 복합체 및 친수성 링커
NO2281006T3 (ru) 2008-04-30 2017-12-30
DK2326349T3 (en) 2008-07-21 2015-05-26 Polytherics Ltd Novel Reagents and Methods for Conjugation of Biological Molecules
EP2403538B1 (en) 2009-03-04 2017-10-04 Polytherics Limited Conjugated proteins and peptides
TW201038286A (en) * 2009-04-01 2010-11-01 Genentech Inc Anti-FcRH5 antibodies and immunoconjugates and methods of use
CA2770617C (en) 2009-08-10 2018-02-20 Mark Smith Reversible covalent linkage of functional molecules
UY32913A (es) 2009-10-02 2011-04-29 Sanofi Aventis Nuevos maitansinoides y el uso de dichos maitansinoides para preparar conjugados con un anticuero
KR20120080611A (ko) 2009-10-06 2012-07-17 이뮤노젠 아이엔씨 효능 있는 접합체 및 친수성 링커
GEP20196956B (en) * 2009-10-23 2019-03-25 British Columbia Amgen Anti-gcc antibody molecules and related compositions and methods
WO2011081928A2 (en) 2009-12-14 2011-07-07 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods for altering cocaine esterase activity
SI2528625T1 (sl) 2010-04-15 2013-11-29 Spirogen Sarl Pirolobenzodiazepini in njihovi konjugati
WO2012005982A2 (en) 2010-07-06 2012-01-12 Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College Reporter for rna polymerase ii termination
MX345251B (es) 2010-08-02 2017-01-23 Regeneron Pharma Ratones que producen proteinas de union que comprenden dominios vl.
BR112013005070B1 (pt) 2010-09-01 2018-04-03 Bayer Intellectual Property Gmbh Compostos n-(tetrazol-5-il)- e n-(triazol-5-il) arilcarboxamidas, composição herbicida, seus usos como herbicidas e método para controlar plantas indesejadas
WO2012058592A2 (en) 2010-10-29 2012-05-03 Immunogen, Inc. Non-antagonistic egfr-binding molecules and immunoconjugates thereof
WO2012061590A1 (en) 2010-11-03 2012-05-10 Immunogen, Inc. Cytotoxic agents comprising new ansamitocin derivatives
WO2012074757A1 (en) * 2010-11-17 2012-06-07 Genentech, Inc. Alaninyl maytansinol antibody conjugates
ES2920373T3 (es) 2011-05-16 2022-08-03 Tagworks Pharmaceuticals B V Activación de fármaco bioortogonal
EP3170821B1 (en) 2011-05-27 2021-09-15 Ambrx, Inc. Compositions containing, methods involving, and uses of non-natural amino acid linked dolastatin derivatives
US8815226B2 (en) 2011-06-10 2014-08-26 Mersana Therapeutics, Inc. Protein-polymer-drug conjugates
BR112014009055B1 (pt) 2011-10-14 2021-12-14 Seattle Genetics, Inc. Compostos pirrolobenzodiazepinas, conjugados alvos, ligante de fármaco e uso dos ditos conjugados para tratar uma doença proliferativa
CN103987384A (zh) 2011-10-14 2014-08-13 西雅图基因公司 吡咯并苯并二氮杂卓和靶向结合物
CA2850103C (en) 2011-10-14 2019-09-10 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines
EP2751076B1 (en) 2011-10-14 2018-04-25 MedImmune Limited Synthesis method and intermediates useful in the preparation of pyrrolobenzodiazepines
WO2013068874A1 (en) 2011-11-11 2013-05-16 Pfizer Inc. Antibody-drug conjugates
WO2013075048A1 (en) 2011-11-16 2013-05-23 Amgen Inc. Methods of treating epidermal growth factor deletion mutant viii related disorders
WO2013085925A1 (en) 2011-12-05 2013-06-13 Igenica, Inc. Antibody-drug conjugates and related compounds, compositions, and methods
GB201210770D0 (en) 2012-06-18 2012-08-01 Polytherics Ltd Novel conjugation reagents
AU2013279099A1 (en) 2012-06-19 2014-12-18 Polytherics Limited Novel process for preparation of antibody conjugates and novel antibody conjugates
SI3912642T1 (sl) * 2012-10-23 2023-09-29 Synaffix B. V. Modificirano protitelo, konjugat protitelesa in postopek za pripravo le-teh
NO2789793T3 (ru) 2012-10-24 2018-01-27
CN105849086B (zh) 2012-11-24 2018-07-31 杭州多禧生物科技有限公司 亲水性链接体及其在药物分子和细胞结合分子共轭反应上的应用
TW201425336A (zh) 2012-12-07 2014-07-01 Amgen Inc Ｂｃｍａ抗原結合蛋白質
CN104688740A (zh) 2012-12-21 2015-06-10 百奥泰生物科技(广州)有限公司 类美登素衍生物及其制备方法和用途
CN103254213B (zh) 2012-12-21 2015-02-25 百奥泰生物科技(广州)有限公司 类美登素酯的制备方法及用于所述方法的组合物
CA2902872A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Biologically active molecules, conjugates thereof, and therapeutic uses
CN103254311B (zh) 2013-05-09 2015-05-13 齐鲁制药有限公司 一种制备抗体-美登素类生物碱药物偶联物的方法
WO2014194030A2 (en) 2013-05-31 2014-12-04 Immunogen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
WO2014197866A1 (en) 2013-06-06 2014-12-11 Igenica Biotherapeutics, Inc. Modified antibodies and related compounds, compositions, and methods of use
US20140363454A1 (en) 2013-06-06 2014-12-11 Igenica Biotherapeutics, Inc. Antibody-Drug Conjugates, Compositions and Methods of Use
NZ714765A (en) 2013-06-06 2021-12-24 Pf Medicament Anti-c10orf54 antibodies and uses thereof
WO2014197854A1 (en) 2013-06-06 2014-12-11 Igenica Biotherapeutics, Inc. Novel linkers for antibody-drug conjugates and related compounds, compositions, and methods of use
US9545451B2 (en) 2013-08-21 2017-01-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-PRLR antibodies and methods for killing PRLR-expressing cells
US20160354482A1 (en) 2013-08-26 2016-12-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions comprising macrolide diastereomers, methods of their synthesis and therapeutic uses
WO2015081281A1 (en) 2013-11-26 2015-06-04 Segway Orthopaedics, Inc. Surgical blade with viewing aperture
EP3074010A4 (en) 2013-11-27 2017-10-25 Redwood Bioscience, Inc. Hydrazinyl-pyrrolo compounds and methods for producing a conjugate
CN105793268B (zh) 2013-12-02 2019-03-15 香港浸会大学 具有两个稠合大环的抗癌性美登木素类化合物
JP6800021B2 (ja) 2014-06-02 2020-12-16 レゲネロン ファーマシューティカルス，インコーポレーテッド 抗体−薬物コンジュゲート、それらの製造、及びそれらの治療用途
CA2978340C (en) 2015-03-27 2024-05-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Maytansinoid derivatives, conjugates thereof, and methods of use
MA43094B1 (fr) 2016-01-25 2020-10-28 Regeneron Pharma Dérivés de maytansinoïde, leurs conjugués, et procédés d'utilisation
AU2017331361B2 (en) 2016-09-23 2024-07-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-STEAP2 antibodies, antibody-drug conjugates, and bispecific antigen-binding molecules that bind STEAP2 and CD3, and uses thereof
US11814428B2 (en) 2019-09-19 2023-11-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-PTCRA antibody-drug conjugates and uses thereof

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130029900A1 (en) * 2011-06-21 2013-01-31 Immunogen, Inc. Novel maytansinoid derivatives with peptide linker and conjugates thereof

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
J. A. DAVIS, D. A. ROCK, L. C. WIENKERS, J. T. PEARSON: "In Vitro Characterization of the Drug-Drug Interaction Potential of Catabolites of Antibody-Maytansinoid Conjugates", DRUG METABOLISM AND DISPOSITION, vol. 40, no. 10, 1 October 2012 (2012-10-01), pages 1927 - 1934, XP055135213, DOI: 10.1124/dmd.112.046169 *
J. A. REDDY, E. WESTRICK, H. K.R. SANTHAPURAM, S. J. HOWARD, M. L. MILLER, M. VETZEL, I. VLAHOV, R. V.J. CHARI, V. S. GOLDMACHER, : "Folate Receptor-Specific Antitumor Activity of EC131, a Folate-Maytansinoid Conjugate", CANCER RESEARCH, AMERICAN ASSOCIATION FOR CANCER RESEARCH, vol. 67, no. 13, 1 July 2007 (2007-07-01), pages 6376 - 6382, XP055135216, ISSN: 00085472, DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-06-3894 *
JEFFREY, S.C. ; NGUYEN, M.T. ; ANDREYKA, J.B. ; MEYER, D.L. ; DORONINA, S.O. ; SENTER, P.D.: "Dipeptide-based highly potent doxorubicin antibody conjugates", BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 16, no. 2, 15 January 2006 (2006-01-15), AMSTERDAM, NL, pages 358 - 362, XP027965900, ISSN: 0960-894X *

Also Published As

Publication number Publication date
SG11201507481WA (en) 2015-10-29
EP2968593A1 (en) 2016-01-20
IL240418A0 (en) 2015-09-24
JP2021105007A (ja) 2021-07-26
PH12015502131B1 (en) 2016-01-25
JP2019135239A (ja) 2019-08-15
MX2015011348A (es) 2016-01-15
HK1212890A1 (zh) 2016-06-24
MA38496A1 (fr) 2018-06-29
CA2902872A1 (en) 2014-09-18
BR112015022585B1 (pt) 2023-04-04
JP6847388B2 (ja) 2021-03-31
US20200277306A1 (en) 2020-09-03
US20220332729A1 (en) 2022-10-20
AU2014233385A1 (en) 2015-09-17
KR20150128932A (ko) 2015-11-18
MY183572A (en) 2021-02-26
KR102306490B1 (ko) 2021-09-28
PH12015502131A1 (en) 2016-01-25
BR112015022585A2 (pt) 2017-10-24
IL240418B (en) 2020-11-30
JP2016521256A (ja) 2016-07-21
CN105188766A (zh) 2015-12-23
CL2015002765A1 (es) 2016-06-24
WO2014145090A1 (en) 2014-09-18
NZ710814A (en) 2020-10-30
AU2014233385C1 (en) 2019-09-19
EA201500905A1 (ru) 2017-02-28
MA38496B2 (fr) 2021-01-29
EP3964237A1 (en) 2022-03-09
ZA201505813B (en) 2023-01-25
CN105188766B (zh) 2019-07-12
US11345715B2 (en) 2022-05-31
US10570151B2 (en) 2020-02-25
AU2014233385B2 (en) 2019-03-07
US20160030591A1 (en) 2016-02-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20220332729A1 (en) Biologically active molecules, conjugates thereof, and therapeutic uses
US11970506B2 (en) Bioactive molecule conjugate, preparation method and use thereof
JP6800021B2 (ja) 抗体−薬物コンジュゲート、それらの製造、及びそれらの治療用途
TWI681778B (zh) 改良配體－藥物結合物之藥物動力學之聚乙二醇化藥物連接子
TWI709412B (zh) 自行穩定之接合劑共軛物
KR20210006362A (ko) 캄토테신 펩타이드 접합체들
KR20240095316A (ko) Bcma 단일클론 항체 및 항체-약물 접합체
CN111757757A (zh) 吡咯并苯并二氮呯抗体共轭物
JP2018118953A (ja) 多剤抗体薬物コンジュゲート
CN116196435A (zh) 包含sting激动剂的抗体药物缀合物
CN106029083A (zh) 亲水性抗体-药物偶联物
US20230277679A1 (en) Method for producing antibody-drug conjugate
NZ710814B2 (en) Biologically active molecules, conjugates thereof, and therapeutic uses
JP2022105640A (ja) 四級化チューブリシン化合物の複合体