KR20240095316A - Bcma 단일클론 항체 및 항체-약물 접합체 - Google Patents

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Abstract

본 개시내용은 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 대해 지향되는, 세포독소에 접합된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 항체 및 항체-약물 접합체(ADC)에 관한 것이다. BCMA 항체 및 이의 ADC는 다발성 골수종 세포, B 세포 매개 또는 혈장 세포 매개 질병, 면역 장애의 치료뿐만 아니라 BCMA 검출에도 유용하다. 제약 조성물 및 의학적 치료 방법이 추가로 개시된다.

Description

BCMA 단일클론 항체 및 항체-약물 접합체
우선권 정보
본 출원은 2021년 11월 3일에 출원된 PCT/CN2021/128453의 우선권을 주장하며, 이는 본 명세서에 참조로 포함된다.
서열 목록에 대한 언급
본 출원은 2022년 10월 10일에 생성되고 40KB를 포함하는 FE00688PCT-Sequence listed.xml이라는 파일명의 전자 서열 목록을 포함하고 있으며, 이는 본 명세서에 참고로 포함된다.
B 세포 성숙 항원(BCMA, CD269)은 종양 괴사 인자(TNF) 수용체 수퍼패밀리의 구성원이다(Marino, S. F., et al, Data Brief. 2015, 6: 394-7. doi: 10.1016/j.dib. 2015.12.023). BCMA는 B 세포 활성화 인자(BAFF; BlyS, TALL-1, TNFSF13B 및 THANK로도 알려져 있음)와 증식-유도 리간드(APRIL, TNFSF13)의 두 가지 별개의 리간드에 결합한다(Schiemann, B, et al. al, Science. 2001, 293(5537): 2111-4; Vidal-Laliena, M. et al, Cell Immunol. 236(1-2): 6-16). BCMA에 대한 리간드는 2개의 추가 TNF 수용체, 막횡단(transmembrane) 활성화제 및 칼슘 조절제 및 사이클로필린 리간드 상호작용자(TACI) 및 BAFF 수용체(BAFF-R은 BR3이라고도 함)에 결합한다(Yan, M. et al, Curr Biol. 2001, 11(19): 1547-52). 따라서, BCMA는 대부분 장기간 체액성 면역을 유지하는 형질세포의 생존을 중재하는 기능적 활동으로 알려져 있다.
BCMA의 발현은 다수의 암, 자가면역 장애 및 감염성 질환과 연관되어 있다(Coquery, C. M. and Erickson, L. D. Crit. Rev. Immunol. 2012; 32(4): 287-305). BCMA 단백질은 다발성 골수종 환자의 혈장 세포 표면에서 고도로 발현된다(Novak et al., Blood, 103(2): 689-694 (2004); Neri et al., Clinical Cancer Research, 73(19): 5903-5909 (2007); 및 Moreaux et al., Blood, 703(8): 3148-3157 (2004)). 이처럼, BCMA는 지난 10년간 다발성 골수종 및 자가 면역질환의 치료 표적으로 광범위하게 연구되었다(Ni, B. and Hou, J., Hematology. 2022, 27(1):343-352; Tan, C. R. and Shah, U. A. , CurrHematolMalig Rep. 2021,16(5): 367-383).
다발성 골수종(MM)은 전 세계적으로 빈번하게 발생하는 혈액학적 악성 종양이다(Sung, H, et al, CA Cancer J Clin.2021,71(3): 209-249). 이는 단일 클론성 면역글로불린의 생성 여부에 관계없이 형질세포의 증식을 특징으로 하는 혈액학적 악성종양이다. MM에 걸린 환자의 관리는 적격 환자의 경우, 일반적으로 유도/신보조 요법(화학요법, 방사선, 수술, 바이오포스포네이트 포함), 일반적으로 프로테아좀 억제제(PI)와 면역 조절제(IMID)인 덱사메타손을 사용한 후, 자가(조혈) 줄기세포 이식(ASCT)으로 시작된다. 지난 5년 동안, 미국 FDA는 다발성 골수종 치료를 위한, 3개의 단일클론 항체(다라투무맙, 이사툭시맙, 엘로투주맙), 엑스포틴-1 억제제(셀리넥서), 항-BCMA 항체-약물 접합체(벨란타맙마포도틴) 및 2개의 BCMA 키메라 항원 수용체(CAR)T-세포 치료제(idecabtagenevicleucel 및 ciltacabtageneautoleucel)를 승인하였다.
다발성 골수종의 BCMA, GPRC5D 및 FCRH5를 표적으로 하는 이중특이적 항체를 포함하여, 새로운 표적 및 구조체(construct)를 사용하는 많은 임상 시험이 진행 중이다. 치료 요법의 점진적인 개선으로, 다발성 골수종(MM) 환자의 생존 기간이 크게 연장되었다. 그럼에도 불구하고, MM은 여전히 예후가 좋지 않은 악몽이며, 질병 자체는 치료할 수 없는 상태로 남아 있다(Davis, J. A. et al, J Oncol Pharm Pract. 2022 Jan 10,doi: 10.1177/10781552211073517; Fuchsl, F. and Krackhardt, A. M. Cells 2022 Jan 25;11(3),doi: 10.3390/cells11030410). 그리고, 단일클론 항체 사용을 포함한, 여러 치료 라인 이후, 질병이 진행된 환자의 전체 생존 기간은 평균값이 8.6개월에 불과하다. 새로 승인된 BCMA CAR-T 세포 치료법은 임상 연구에서 80% 이상의 전반적인 효능을 입증했지만, 환자의 자가 세포에서 제조하는 데는 여러 한계나 과제가 있어서, 치료 비용이 매우 많이 든다. 또한, 퍼스트-인 클래스(first-in-class) BCMA ADC인 벨란타맙마포도틴은 MM에 대한 전체 반응률이 32%에 불과하며, 이러한 ADC를 사용한 환자의 60% 이상이 투여량 조정, 투여량 지연 및 치료 중단이 필요한 여러 안구 독성의 독특한 부작용을 보고하였다(Wahab, A. et al, Front Oncol.2021, 11:678634.doi:10.3389/fonc.2021.678634). 따라서, 타당성, 안전성 및 유망한 효능 측면에서 더 많은 MM 치료 옵션, 특히 기존 약물의 내성을 극복하기 위한 치료법이 여전히 시급히 필요하다.
본 특허 출원에서, 우리는 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 대해 지향되는, BCMA 항체 및 BCMA 단일클론 항체를 포함하는 항체-약물 접합체(ADC), 또는 세포독소에 접합된 BCMA 항원-결합 단편을 개시한다. BCMA 항체 및 그 ADC는 다양한 암, 자가면역 질환 및 감염성 질환의 치료 및 진단뿐만 아니라, BCMA 검출에도 유용하다. 본 발명은 또한 이러한 BCMA ADC를 구축하기 위해, 특정 접합 방법(PCT/CN2021/128453)을 계속해서 적용한다. 추가로, 약학적 조성물, 스크리닝 및 의학적 치료 방법이 개시된다.
본 발명은 BCMA(CD269)에 특이적으로 결합하는 항원 결합 단백질, 예를 들어 BCMA에 특이적으로 결합하고 BAFF 및/또는 APRIL이 BCMA 수용체에 결합하는 것을 억제하는 항체를 제공한다. 본 발명은 또한 BCMA에 특이적으로 결합하고 BAFF 및/또는 APRIL이 BCMA에 결합하는 것을 억제하고 내재화할 수 있는 항원 결합 단백질을 제공한다. BCMA 단일클론 항체는 (a) 서열번호 1의 상보성 결정 영역 1(HCDR1) 아미노산 서열, 서열번호 2의 HCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 3의 HCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, (b) 서열번호 4의 상보성 결정 영역 1(LCDR1) 아미노산 서열, 서열번호 5의 LCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 6의 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
본 발명은 또한 B세포 성숙항원(BCMA)에 대해 지향되는, 세포독소에 접합된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 항체-약물 접합체(ADC)를 제공한다. 추가 실시예에서, 항원 결합 단백질은 아투부리신 유사체, PBD 이량체 또는 아우리스타틴 유사체와 같은 독소에 접합된다.
또한, 본 발명은 상기 항체-약물 접합체 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 조성물, 그리고 다발성 골수종 세포를 ADC와 접촉시켜, BCMA를 발현하는 다발성 골수종 세포(다발성 골수종 줄기세포 포함)를 사멸시키는 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면에서, 항체 매개 또는 형질세포 매개 질환 또는 예를 들어 다발성 골수종(MM)과 같은 형질세포 악성종양과 같은 B 세포 관련 장애 또는 질환을 앓고 있는 인간 환자를 치료하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 상기 환자에게 치료 유효량의 본 명세서에 기술된 항원 결합 항체 및/또는 그 ADC를 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명의 추가 측면에서, 류마티스 관절염, 건선, 제1형 진성 당뇨병 또는 다발성 경화증을 앓고 있는 인간 환자를 치료하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 상기 환자에게 치료 유효량의 본 명세서에 기술된 항원 결합 단백질 및/또는 ADC를 투여하는 단계를 포함한다.
도 1은 재조합 발현 TrxA-BCMA에 대한, 하이브리도마 항체 BCMA-A2-6H4-5D2와 양성 대조군 항체 J6M0의 결합 친화도를 도시한다.
도 2는 재조합 발현 TrxA-BCMA에 대한, 하이브리도마 항체 BCMA-A2-6H4-5D2, 키메라 항체 c5D2, 인간화 항체 hu5D2 및 양성 대조군 항체 J6M0의 결합 친화도를 도시한다.
도 3은 내인성 BCMA 발현 세포주 NCI-H929에 대한, 인간화 항체 hu5D2, hu5D2 접합 ADC 및 아이소타입 대조군 항체의 결합 친화성을 도시한다.
도 4a는 항체 약물 접합체, hu5D2-튜불리신 B 유사체 접합체(C-390)에 의한 BCMA 과-발현 RPMI-8226 세포주의 사멸을 예시한다.
도 4b는 항체 약물 접합체: hu5D2-튜불리신 B 유사체 접합체(C-390)에 의한 세포주 NCI-H929의 사멸을, ADC J6M0-튜불리신 B 유사체 접합체(C-390), 네이키드 hu5D2 항체, 비접합 튜불리신 B 유사체(화합물 390) 및 파클리탁셀과 비교하여 예시한다.
도 4c는 항체 약물 접합체: hu5D2-튜불리신 B 유사체 접합체(C-390)에 의한 세포주 MM.1S의 사멸을, ADC J6M0-튜불리신 B 유사체 접합체(C-390), 네이키드 hu5D2 항체, 비접합 튜불리신 B 유사체(화합물 390) 및 파클리탁셀과 비교하여 예시한다.
도 4d는 항체 약물 접합체: hu5D2-튜불리신 B 유사체 접합체(C-390)에 의한 BCMA 음성 발현 세포주 주르카트(Jurkat)의 사멸을, ADC J6M0-튜불리신 B 유사체 접합체(C-390), 네이키드 hu5D2 항체, 비접합 튜불리신 B 아날로그(화합물 390) 및 파클리탁셀과 비교하여 예시한다.
도 4e는 BCMA 항체(hu5D2)-약물 접합체: C-221, C-202, C-88, C-326, C-30에 의한 BCMA 발현 세포주 U266B1의 사멸을, 파클리탁셀과 비교하여 예시한다.
도 5(a) 내지 (h)는 BCMA 항체의 글리코펩티드의 MS/MS 도터(daughter) 또는 생성물 이온 스펙트럼을 도시한다. (a): 비-당화된 펩티드; (b): 글리코펩티드를 함유하는 Man5; (c): 글리코펩티드를 함유하는 G0F-GlcNAc; (d): 글리코펩티드를 함유하는 G0; (e): 글리코펩티드를 함유하는 G0F; (f): 글리코펩티드를 함유하는 G1; (g): 글리코펩티드를 함유하는 G1F; (h): 글리코펩티드를 함유하는 G2F.
도 6은 N-탈당화 및 환원 후, BCMA-튜불리신 B 유사체 ADC(C-390)의 중간-레벨 특성 분석을 도시하다. (a) 탈당화 및 DTT 환원 후에 얻은 ADC 단편의 rpHPLC 크로마토그램. 0개 또는 1개의 약물 분자(L0 및 L1)가 부착된 경쇄(LC), (b) 0, 1, 2 또는 3개의 약물 분자(H0, H1, H2 및 H3)가 부착된 중쇄.
도 7은 BCMA ADC(C-390)의 약물 로딩된 펩티드의 백분율을 도시한다. (a): 0개 또는 1개의 약물 분자(D0 및 D1)가 부착된 LC 펩티드[GEC]; (b): 암(arm)에 0개 또는 1개의 약물 분자(D0 및 D1)가 부착된 HC 펩티드[SCDK]; (c): 힌지에 0개, 1개 또는 2개의 약물 분자(D0, D1 및 D2)가 부착된 HC 펩티드[THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPK].
도 8은 BCMA-ADC(C-390)의 약물 로딩 펩티드의 MS/MS 도터(daughter) 또는 생성 이온 스펙트럼을 도시한다.
(a): 중쇄 [SC(223)DK]+1 약물;
(b): 중쇄 [THTC(229)PPCPAPELLGGPSVFLFPPKPK]+1 약물;
(c): 중쇄 [THTCPPC(232)PAPELLGGPSVFLFPPKPK]+1 약물;
(d): 중쇄 [THTC(229)PPC(232)PAPELLGGPSVFLFPPKPK]+2 약물;
(e): 경쇄 [GEC(219)]+1 약물.
도 9는 BCMA(hu5D2) ADC(C-68a, C-115, C-192, C-202, C-221, C-290, C-306, C-385, C-390, C-399, C-402, C-417, 표 7에 표시된 DAR)를 사용한 일련의 단일 용량(3 mg/Kg) 치료에 반응하여, 다발성 골수종의 NCI-H929 세포 이종이식 마우스 모델에서 종양 부피의 변화를, BCMA-mcMMAF(벨란타마브 mc-MMAF) 및 PBS 완충액(대조군)과 비교하여 도시한다. 도 9는 13개 접합체가 모두 항종양 활성을 갖고 있음을 나타내며, 항종양 활성의 순서는 C-385 < C-306 < C-290 < C-68a < C-115 < BCMA-mcMMAF< C-192 < C-202 < C-399 < C-390 < C-417 < C-402 < C-221이다.
도 10은 hu5D2-ADC를 사용한 일련의 단일 용량(5mg/Kg) 치료에 반응하여, 다발성 골수종의 JJN-3세포 이종이식 마우스 모델에서 종양 부피의 변화를, 벨란타마브 mc-MMAF 및 PBS 완충액(대조군)과 비교하여 도시하다. 도 10은 9개 결합체가 모두 항종양 활성을 갖고 있음을 나타내며, 항종양 활성의 순서는 파클리탁셀 < C-385 < 벨란타마브 mc-MMAF < C-195 < C-137 < C-181b < C-126 < C-83 < C-277 < C-258이다.
도 11은 hu5D2-ADC를 사용한 일련의 단일 용량(2mg/Kg) 치료에 반응하여, 다발성 골수종의 NCI-H929 세포 이종이식 마우스 모델에서 종양 부피의 변화를, 벨란타마브 mc-MMAF 및 PBS 완충액(대조군)과 비교하여 도시하다. 도 11은 7개 접합체가 모두 항종양 활성을 갖고 있음을 나타내며, 항종양 활성의 순서는 벨란타마브 mc-MMAF < C-406 < C-396 < C-399 < C-400 < C-221b < C-402이다.
도 12는 비스-링커 성분의 일반적인 합성을 도시한다.
도 13은 비스-접합 링커를 함유하는 캄프토테신 유사체의 합성을 도시한다.
도 14는 비스-접합 링커를 함유하는 캄프토테신 유사체의 합성을 도시한다.
도 15는 비스-접합 링커를 함유하는 캄프토테신 유사체의 합성을 도시한다.
도 16은 비스-링커 성분의 일반적인 합성을 도시한다.
도 17은 비스-접합 링커를 함유하는 캄프토테신 유사체의 합성을 도시한다.
도 18은 비스-접합 링커를 함유하는 캄프토테신 유사체의 합성을 도시한다.
도 19는 비스-접합 링커를 함유하는 캄프토테신 유사체의 합성을 도시한다.
도 20은 비스-링커 성분의 일반적인 합성을 도시한다.
도 21은 비스-접합 링커를 함유하는 캄프토테신 유사체의 합성을 도시한다.
도 22는 비스-접합 링커를 함유하는 튜불리신 B 유사체의 합성을 도시한다.
도 23은 비스-접합 링커를 포함하는 튜불리신 B 유사체의 합성을 도시한다.
도 24는 비스-접합 링커를 함유하는 튜불리신 B 유사체의 합성을 도시한다.
도 25는 비스-접합 링커를 함유하는 튜불리신 B 유사체의 합성을 도시한다.
도 26은 비스-접합 링커를 함유하는 튜불리신 B 유사체의 합성을 도시한다.
도 27은 비스-접합 링커를 함유하는 튜불리신 B 유사체의 합성을 도시한다.
도 28은 튜불리신 B 유사체 성분의 합성을 도시한다.
도 29는 비스-접합 링커를 함유하는 튜불리신 B 유사체의 합성을 도시한다.
도 30은 비스-접합 링커를 포함하는 튜불리신 B 유사체의 합성을 도시한다.
도 31은 비스-접합 링커를 함유하는 캄프토테신 유사체의 합성을 도시한다.
도 32는 비스-접합 링커를 함유하는 캄프토테신 유사체의 합성을 도시한다.
도 33은 비스-접합 링커를 함유하는 캄프토테신 유사체의 합성을 도시한다.
도 34는 비스-접합 링커를 함유하는 캄프토테신 유사체의 합성을 도시한다.
도 35는 비스-접합 링커를 함유하는 캄프토테신 유사체의 합성을 도시한다.
도 36은 비스-접합 링커와 아마니틴 유사체 성분을 포함하는 캄프토테신 유사체의 합성을 도시한다.
도 37은 비스-접합 링커를 포함하는 아마니틴 유사체의 합성을 도시한다.
도 38은 비스-접합 링커를 포함하는 아마니틴 유사체의 합성을 도시한다.
도 39는 비스-접합 링커를 포함하는 아마니틴 유사체의 합성을 도시한다.
도 40은 비스-접합 링커를 포함하는 아마니틴 유사체의 합성을 도시한다.
도 41은 링커를 포함하는 튜불리신 B 유사체의 합성을 도시한다.
도 42는 링커를 포함하는 튜불리신 B 유사체의 합성을 도시한다.
도 43은 링커를 포함하는 튜불리신 B 유사체의 합성을 도시한다.
도 44는 링커를 포함하는 튜불리신 B 유사체의 합성을 도시한다.
도 45는 링커를 포함하는 튜불리신 B 유사체의 합성을 도시한다.
도 46은 링커를 포함하는 튜불리신 B 유사체의 합성을 도시한다.
도 47은 링커를 포함하는 튜불리신 B 유사체의 합성을 도시한다.
도 48은 링커를 포함하는 튜불리신 B 유사체의 합성을 도시한다.
도 49는 링커를 포함하는 튜불리신 B 유사체의 합성을 도시한다.
도 50은 링커를 포함하는 튜불리신 B 유사체의 합성을 도시한다.
도 51은 링커를 포함하는 튜불리신 B 유사체의 합성을 도시한다.
도 52는 링커를 포함하는 튜불리신 B 유사체의 합성을 도시한다.
도 53은 링커를 포함하는 튜불리신 B 유사체의 합성을 도시한다.
도 54는 링커를 포함하는 튜불리신 B 유사체의 합성을 도시한다.
도 55는 링커를 포함하는 튜불리신 B 유사체의 합성을 도시한다.
도 56은 링커와 PBD 유사체 성분을 포함하는 튜불리신 B 유사체의 합성을 도시한다.
도 57은 링커를 포함하는 PBD 유사체의 합성을 도시한다.
도 58은 링커를 포함하는 PBD 유사체의 합성을 도시한다.
도 59는 링커를 포함하는 PBD 유사체와 링커를 포함하는 튜불리신 B 유사체의 합성을 도시한다.
도 60은 링커를 포함하는 튜불리신 B 유사체의 합성을 도시한다.
도 61은 링커를 포함하는 튜불리신 B 유사체의 합성을 도시한다.
정의
"알킬"은 지방족 탄화수소기 또는 탄소 원자로부터의 1개 또는 2개의 수소 원자의 제거에 의해서 알칸으로부터 유래된 1가 기를 지칭한다. 이것은 사슬 내에 C1-C8(1 내지 8개의 탄소 원자)을 갖는 선형 또는 분지형일 수 있다. "분지형"은 메틸, 에틸 또는 프로필과 같은 하나 이상의 저급 C 알킬기가 선형 알킬 사슬에 부착된 것을 의미한다. 예시적인 알킬기는 메틸, 에틸, n-프로필, i-프로필, n-부틸, t-부틸, n-펜틸, 3-펜틸, 옥틸, 노닐, 데실, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸, 2,2-디메틸펜틸, 2,3-디메틸펜틸, 3,3-디메틸펜틸, 2,3,4-트리메틸펜틸, 3-메틸-헥실, 2,2-디메틸헥실, 2,4-디메틸헥실, 2,5-디메틸헥실, 3,5-디메틸헥실, 2,4-디메틸펜틸, 2-메틸헵틸, 3-메틸헵틸, n-헵틸, 이소헵틸, n-옥틸 및 이소옥틸을 포함한다. C1-C8 알킬기는 -C1-C8 알킬, -O-(C1-C8 알킬), -아릴, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2, -C(O)NHR', -C(O)N(R')2, -NHC(O)R', -SR', -S(O)2R', -S(O)R', -OH, -할로겐, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2 및 -CN을 포함하지만, 이들에 제한되지 않는 하나 이상의 기로 치환되거나 또는 비치환될 수 있고; 여기서 각각의 R'는 -C1-C8 알킬 및 아릴로부터 독립적으로 선택된다.
"할로겐"은 플루오린, 염소, 브로민 또는 요오드 원자; 바람직하게는 플루오린 및 염소 원자를 지칭한다.
"헤테로알킬"은 1 내지 4개의 탄소 원자가 O, S 및 N으로 이루어진 군으로부터의 헤테로원자로 독립적으로 대체된 C2-C8 알킬을 지칭한다.
"카보사이클"은 모노사이클(단환식)로서 3 내지 8개의 탄소 원자 또는 비사이클(이환식)로서 7 내지 13개의 탄소 원자를 갖는 포화 또는 불포화 고리를 지칭한다. 모노사이클릭 카보사이클은 3 내지 6개의 고리 원자, 보다 전형적으로 5 또는 6개의 고리 원자를 갖는다. 비사이클릭 카보사이클은 비사이클 [4,5], [5,5], [5,6] 또는 [6,6] 시스템으로서 배열된 7 내지 12개의 고리 원자, 또는 비사이클 [5,6] 또는 [6,6] 시스템으로서 배열된 9 또는 10개의 고리 원자를 갖는다. 대표적인 C3-C8 카보사이클은 -사이클로프로필, -사이클로부틸, -사이클로펜틸, -사이클로펜타디에닐, -사이클로헥실, -사이클로헥센일, -1,3-사이클로헥사디에닐, -1,4-사이클로헥사디에닐, -사이클로헵틸, -1,3-사이클로헵타디에닐, -1,3,5-사이클로헵타트리에닐, -사이클로옥틸 및 -사이클로옥타디에닐을 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다.
"C3-C8 카보사이클"은 3-, 4-, 5-, 6-, 7- 또는 8-원의 포화 또는 불포화 비방향족 카보사이클릭 고리를 지칭한다. C3-C8 카보사이클기는 -C1-C8 알킬, -O-(C1-C8 알킬), -아릴, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2, -C(O)NHR', -C(O)N(R')2, -NHC(O)R', -SR', -S(O)R',-S(O)2R', -OH, -할로겐, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2 및 -CN을 포함하지만, 이들에 제한되지 않는 하나 이상의 기로 치환되거나 또는 비치환될 수 있고; 여기서 각각의 R'는 -C1-C8 알킬 및 아릴로부터 독립적으로 선택된다.
"알케닐"은 사슬 내에 2 내지 8개의 탄소 원자를 갖는 선형 또는 분지형일 수 있는 탄소-탄소 이중 결합을 함유하는 지방족 탄화수소기를 지칭한다. 예시적인 알케닐기는 에테닐, 프로페닐, n-부테닐, i-부테닐, 3-메틸부트-2-에닐, n-펜테닐, 헥실레닐, 헵테닐, 옥테닐을 포함한다.
"알키닐"은 사슬 내에 2 내지 8개의 탄소 원자를 갖는 선형 또는 분지형일 수 있는 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하는 지방족 탄화수소기를 지칭한다. 예시적인 알키닐기는 에티닐, 프로핀일, n-부티닐, 2-부티닐, 3-메틸부티닐, 5-펜티닐, n-펜티닐, 헥시닐, 헵테닐 및 옥티닐을 포함한다.
"알킬렌"은 1 내지 18개의 탄소 원자를 갖는 포화, 분지형 또는 직쇄형 또는 사이클릭 탄화수소 라디칼을 지칭하고, 모(parent) 알칸의 동일하거나 상이한 2개의 탄소 원자로부터 2개의 수소 원자를 제거함으로써 유래된 2개의 1가 라디칼 중심을 갖는다. 전형적인 알킬렌 라디칼은 메틸렌(-CH2-), 1,2-에틸(-CH2CH2-), 1,3-프로필(-CH2CH2CH2-), 1,4-부틸(-CH2CH2CH2CH2-) 등을 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다.
"알케닐렌"은 2 내지 18개의 탄소 원자의 불포화, 분지형 또는 직쇄형 또는 사이클릭 탄화수소 라디칼을 지칭하며, 모 알켄의 동일하거나 상이한 2개의 탄소 원자로부터 2개의 수소 원자를 제거함으로써 유래된 2개의 1가 라디칼 중심을 갖는다. 전형적인 알케닐렌 라디칼은 1,2-에틸렌(-CH=CH-)을 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다.
"알키닐렌"은 2 내지 18개의 탄소 원자의 불포화, 분지형 또는 직쇄형 또는 사이클릭 탄화수소 라디칼을 지칭하고, 모 알킨의 동일하거나 상이한 2개의 탄소 원자로부터 2개의 수소 원자를 제거함으로써 유래된 2개의 1가 라디칼 중심을 갖는다. 전형적인 알키닐렌 라디칼은 아세틸렌, 프로파길 및 4-펜티닐을 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다.
"아릴" 또는 "Ar"은 3 내지 14개의 탄소 원자, 바람직하게는 6 내지 10개의 탄소 원자를 포함하는, 하나 또는 수 개의 고리로 구성된 방향족 또는 헤테로 방향족기를 지칭한다. "헤테로 방향족기"의 용어는 방향족기 상의 하나 또는 수 개의 탄소를 지칭하고, 바람직하게는 1, 2, 3 또는 4개의 탄소 원자가 O, N, Si, Se, P 또는 S로, 바람직하게는 O, S 및 N으로 대체된다. 용어 아릴 또는 Ar은 또한 하나 또는 수 개의 H 원자는 -R', -할로겐, -OR', 또는 -SR', -NR'R", -N=NR', -N=R', -NR'R", -NO2, -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)2OR', -OS(O)2OR', -PR'R", -P(O)R'R", -P(OR')(OR"), -P(O)(OR')(OR") 또는 -OP(O)(OR')(OR")에 의해서 독립적으로 대체된 방향족 기를 지칭하고, 여기서 R', R"는 독립적으로 H, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 아릴, 아릴알킬, 카르보닐, 또는 제약상 염이다.
"헤테로사이클"은 1 내지 4개의 고리 탄소 원자가 O, N, S, Se, B, Si 및 P의 군으로부터의 헤테로원자로 독리적으로 대체된 고리 시스템을 지칭한다. 바람직한 헤테로원자는 O, N 및 S이다. 헤테로사이클은 또한 The Handbook of Chemistry and Physics, 78th Edition, CRC Press, Inc., 1997-1998, p. 225 to 226]에 기술되어 있고, 이의 개시내용은 참고로 여기에 포함된다. 바람직한 비방향족 헤테로환식은 에폭시, 아지리딘일, 티란일, 피롤리딘일, 피라졸리딘일, 이미다졸리딘일, 옥시란일, 테트라하이드로퓨란일, 디옥솔란일, 테트라하이드로피란일, 디옥산일, 디옥솔란일, 피페리딘일, 피페라진일, 모폴린일, 피란일, 이미다졸린일, 피롤린일, 피라졸린일, 티아졸리딘일, 테트라하이드로티오피란일, 디티안일, 티오모폴린일, 디하이드로피란일, 테트라하이드로피란일, 디하이드로피란일, 테트라하이드로피리딜, 디하이드로피리딜, 테트라하이드로피리미딘일, 디하이드로티오피란일, 아제판일, 뿐만 아니라 페닐기와의 축합으로부터 생성된 융합 시스템을 포함한다.
용어 "헤테로아릴" 또는 방향족 헤테로사이클은 3 내지 14, 바람직하게는 5 내지 10원의 방향족 헤테로, 모노-, 비- 또는 멀티-사이클릭 고리를 지칭한다. 예는 피롤릴, 피리딜, 피라졸릴, 티에닐, 피리미딘일, 피라진일, 테트라졸릴, 인돌릴, 퀴놀린일, 퓨린일, 이미다졸릴, 티에닐, 티아졸릴, 벤조티아졸릴, 퓨란일, 벤조퓨란일, 1,2,4-티아디아졸릴, 이소티아졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 이소퀴놀릴, 벤조티에닐, 이소벤조퓨릴, 피라졸릴, 카바졸릴, 벤즈이미다졸릴, 아이속사졸릴, 피리딜-N-옥사이드, 뿐만 아니라 페닐기와의 축합으로부터 생성된 융합 시스템을 포함한다.
"알킬", "사이클로알킬", "알케닐", "알키닐", "아릴", "헤테로아릴", "헤테로사이클릭" 등은 또한 2개의 수소 원자의 제거에 의해서 형성된 대응하는 "알킬렌", "사이클로알킬렌", "알케닐렌", "알키닐렌", "아릴렌", "헤테로아릴렌", "헤테로사이클렌"을 지칭한다.
"아릴알킬"은 탄소 원자, 전형적으로 말단 또는 sp3 탄소 원자에 결합된 수소 원자 중 하나가 아릴 라디칼로 대체된 비환식(acyclic) 알킬 라디칼을 지칭한다. 전형적인 아릴알킬기는 벤질, 2-페닐에탄-1-일, 2-페닐에텐-1-일, 나프틸메틸, 2-나프틸에탄-1-일, 2-나프틸에텐-1-일, 나프토벤질, 2-나프토페닐에탄-1-일 등을 포함한다.
"헤테로아릴알킬"은 탄소 원자, 전형적으로 말단 또는 sp3 탄소 원자에 결합된 수소 원자 중 하나가 헤테로아릴 라디칼로 대체된 비환식 알킬 라디칼을 지칭한다. 헤테로아릴알킬기의 예는 2-벤즈이미다졸릴메틸, 2-퓨릴에틸이다.
"하이드록실 보호기"의 예는 메톡시메틸 에터, 2-메톡시에톡시메틸 에터, 테트라하이드로피란일 에터, 벤질 에터, p-메톡시벤질 에터, 트리메틸실릴 에터, 트리에틸실릴 에터, 트리이소프로필실릴 에터, t-부틸디메틸실릴 에터, 트리페닐메틸실릴 에터, 아세테이트 에스터, 치환된 아세테이트 에스터, 피발로에이트, 벤조에이트, 메탄설폰에이트 및 p-톨루엔설폰에이트를 포함한다.
"이탈기"는 또 다른 작용기에 의해서 치환될 수 있는 작용기를 지칭한다. 이러한 이탈기는 관련 기술 분야에 널리 공지되어 있고, 예는 할라이드(예를 들어, 클로라이드, 브로마이드 및 아이오다이드), 메탄설폰일(메실), p-톨루엔설폰일(토실), 트리플루오로-메틸설폰일(트리플레이트) 및 트리플루오로메틸설폰에이트를 포함한다. 바람직한 이탈기는 니트로페놀; N-하이드록시숙신이미드(NHS); 페놀; 디니트로페놀; 펜타플루오로페놀; 테트라플루오로페놀; 디플루오로페놀; 모노플루오로페놀; 펜타클로로페놀; 트리플레이트; 이미다졸; 디클로로페놀; 테트라클로로페놀; 1-하이드록시벤조트리아졸; 토실레이트; 메실레이트; 2-에틸-5-페닐아이속사졸륨-3'-설폰에이트, 그 자체에 의해서 형성되거나 또는 다른 무수물과 함께 형성된 무수물, 예를 들어, 아세틸 무수물, 폼일 무수물; 또는 펩티드 커플링 반응 또는 미츠노부 반응을 위한 축합 시약을 사용하여 생성된 중간체 분자로부터 선택된다.
하기 약어가 본 명세서에서 사용될 수 있고, 제시된 정의를 갖는다: Boc, tert-부톡시 카르보닐; BroP, 브로모트리스피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트; CDI, 1,1'-카르보닐디이미다졸; DCC, 디사이클로헥실카보다이이미드; DCE, 디클로로에탄; DCM, 디클로로메탄; DIAD, 디이소프로필아조다이카복실레이트; DIBAL-H, 디이소부틸-알루미늄 하이드라이드; DIPEA, 디이소프로필에틸아민; DEPC, 디에틸 포스포로사이아나이데이트; DMA, N,N-디메틸 아세트아마이드; DMAP, 4-(N,N-디메틸아미노)피리딘; DMF, N,N-디메틸폼아미드; DMSO, 디메틸설폭사이드; DTT, 디티오트레이톨; EDC, 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이미드 염산염; ESI-MS, 전자분무 질량분석; HATU, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트; HOBt, 1-하이드록시벤조트리아졸; HPLC, 고압 액체 크로마토그래피; NHS, N-하이드록시숙신이미드; MMP, 4-메틸모폴린; PAB, p-아미노벤질; PBS, 인산염-완충 염수(pH 7.0 내지 7.5); PEG, 폴리에틸렌 글리콜; SEC, 크기 배제 크로마토그래피; TCEP, 트리스(2-카복시에틸)포스핀; TFA, 트리플루오로아세트산; THF, 테트라하이드로퓨란; Val, 발린.
"아미노산(들)"은 자연 및/또는 비자연 아미노산, 바람직하게는 알파-아미노산일 수 있다. 자연 아미노산은 유전자 암호에 의해서 암호화된 것이며, 이것은 알라닌, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파트산, 시스테인, 글루탐산, 글루타민, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 라이신, 메티오닌, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 타이로신. 트립토판 및 발린이다. 비자연 아미노산은 단백질생성 아미노산의 형태로 유래된다. 예는 하이드록시프롤린, 란티오닌, 2-아미노이소부티르산, 데하이드로알라닌, 감마-아미노부티르산(신경 전달 물질), 오르니틴, 시트룰린, 베타 알라닌(3-아미노프로판산), 감마-카복시글루타메이트, 셀레노시스테인(대부분의 진핵 생물뿐만 아니라 많은 비진핵 생물에 존재하지만, DNA에 의해 직접 암호화되지는 않음) 피롤리신(일부 고등어와 하나의 박테리아에서만 발견됨) N-폼일메티오닌(종종 박테리아, 미토콘드리아 및 엽록체 내의 단백질의 초기 아미노산임), 5-하이드록시트립토판, L-디하이드록시페닐알라닌, 트리아이오도타이로닌, L-3,4-디하이드록시페닐알라닌(DOPA) 및 O-포스포세린을 포함한다. 용어 아미노산은 또한 아미노산 유사체 및 모방체를 포함한다. 유사체는 R기가 자연 아미노산에서 발견되는 것이 아닌 것을 제외하고는, 자연 아미노산의 동일한 일반식 H2N(R)CHCO2H 구조식을 갖는 화합물이다. 유사체의 예는 호모세린, 노르류신, 메티오닌-설폭사이드 및 메티오닌 메틸 설포늄을 포함한다. 바람직하게는, 아미노산 모방체는 알파-아미노산의 일반적인 화학 구조식과 상이한 구조식을 갖지만 그것과 유사한 방식으로 작용하는 화합물이다. 용어 "비자연 아미노산"은 "D" 입체화학 형태를 나타내도록 의도되며, 자연 아미노산은 "L"형이다. 1 내지 8개의 아미노산이 본 특허 출원에서 사용되는 경우, 아미노산 서열은 바람직하게는 프로테아제에 대한 절단 인식 서열이다. 다수의 절단 인식 서열이 관련 기술 분야에 공지되어 있고[예를 들어, Matayoshi et al. Science 247: 954(1990); Dunn et al. Meth. Enzymol. 241: 254(1994); Seidah et al. Meth. Enzymol. 244: 175(1994); Thornberry, Meth. Enzymol. 244: 615(1994); Weber et al. Meth. Enzymol. 244: 595(1994); Smith et al. Meth. Enzymol. 244: 412(1994); 및 Bouvier et al. Meth. Enzymol. 248: 614(1995) 참조]; 이들의 개시 내용은 본 명세서에 참고로 포함된다. 특히, 그러한 서열은 Val-Cit, Ala-Val, Val-Ala-Val, Lys-Lys, Ala-Asn-Val, Val-Leu-Lys, Cit-Cit, Val-Lys, Ala-Ala-Asn, Lys, Cit, Ser, 및 Glu로 이루어진 군으로부터 선택된다.
"제약상으로" 또는 "제약상으로 허용 가능한"은 동물, 또는 인간에게 적절하게 투여되는 경우, 유해한, 알레르기성 또는 다른 부적절한 반응을 일으키지 않는 분자 실체 및 조성물을 지칭한다.
"제약상으로 허용 가능한 용매화물" 또는 "용매화물"은 하나 이상의 용매 분자 및 개시된 화합물의 결합(association)을 지칭한다. 제약상으로 허용 가능한 용매화물을 형성하는 용매의 예는 물, 이소프로판올, 에탄올, 메탄올, DMSO, 에틸 아세테이트, 아세트산 및 에탄올아민을 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다.
"제약상으로 허용 가능한 부형제"는 임의의 담체, 희석제, 보조제 또는 비히클, 예컨대, 보존제 또는 항산화제, 충전제, 붕해제, 습윤제, 유화제, 현탁제, 용매, 분산 매질, 코팅제, 항박테리아 및 항진균제, 등장제 및 흡수지연제 등을 포함한다. 제약상 활성 물질을 위한 그러한 매질 및 작용제의 사용은 관련 기술 분야에 널리 공지되어 있다. 임의의 통상적인 매질 또는 작용제가 활성 성분과 비혼화성인 경우를 제외하고, 치료 조성물에서의 그의 사용이 고려된다. 보충 활성 성분은 또한 적합해진 치료 조합물로서 조성물에 혼입될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 "제약상 염"은 모 화합물이 그의 산 또는 염기염을 제조함으로써 변형되는 개시된 화합물의 유도체를 지칭한다. 제약상으로 허용 가능한 염은 예를 들어, 비독성 무기산 또는 유기산으로부터 형성된 모 화합물의 통상적인 무독성 염 또는 4차 암모늄 염을 포함한다. 예를 들어, 그러한 통상적인 무독성 염은 무기산, 예컨대, 염산, 브로민산, 황산, 설팜산, 인산, 질산 등; 유기산, 예컨대, 아세트산, 프로피온산, 숙신산, 타타르산, 시트르산, 메탄설폰산, 벤젠설폰산, 글루쿠론산, 글루탐산, 벤조산, 살리실산, 톨루엔설폰산, 옥살산, 퓨마르산, 말레산, 락트산 등으로부터 제조된 염을 포함한다. 추가의 부가염은 암모늄염, 예컨대, 트로메타민, 메글루민, 에포라민 등; 금속염, 예컨대 나트륨, 칼륨, 칼슘, 아연 또는 마그네슘을 포함한다.
본 발명의 제약상 염은 통상적인 화학적 방법에 의해서 염기성 또는 산성 모이어티를 함유하는 모 화합물로부터 합성될 수 있다. 일반적으로, 이러한 염은 이들 화합물의 유리(free) 산성 또는 염기성 형태를 물 또는 유기 용매 또는 이들 둘의 혼합물 중에서 화학양론적 양의 적절한 염기 또는 산과 반응시킴으로써 제조될 수 있다. 일반적으로, 비수성 매질, 예컨대, 에터, 에틸 아세테이트, 에탄올, 이소프로판올 또는 아세토나이트릴이 바람직하다. 적합해진 염의 목록은 Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1985, p. 1418에서 찾을 수 있으며, 이들 개시내용은 본 명세서에 참고로 포함된다.
"투여하는" 또는 "투여"는 대상체에게 제약상 약물 또는 기타 작용제를 전송, 전달, 도입 또는 수송하는 임의의 모드를 지칭한다. 이러한 모드는 경구 투여, 국소 접촉, 정맥내, 복강내, 근육내, 병변내, 비강내, 피하 또는 척추강내 투여를 포함한다. 작용제의 투여 시 장치 또는 장비를 사용하는 것이 또한 본 발명에서 고려된다. 이러한 장치는 능동적 또는 수동적 수송을 이용할 수 있고, 느린-방출(서방형) 또는 신속-방출(속방형) 전달 장치일 수 있다.
생물학적 완충제의 약어와 화학명은 다음과 같다.
ACES(N-(2-아세트아미도)-2-아미노에탄술폰산)은 pH 6.1-7.5(pKa = 6.88)에서 완충하는 데 사용된다.
ADA(N-(2-아세트아미도)이미노디아세트산, N-(카르바모일메틸)이미노디아세트산)은 pH 6.0-7.2(pKa = 6.65)에서 완충하는 데 유용하다.
AMPD(2-아미노-2-메틸-1,3-프로판디올))은 pH 7.8-9.7에서 유용한 완충제이다.
AMPSO(N-(1,1-디메틸-2-히드록시에틸)-3-아미노-2-히드록시프로판술폰산).
BES(N,N-비스(2-히드록시에틸)-2-아미노에탄술폰산).
비신(N,N-비스(2-히드록시에틸)글리신], 비스(2-히드록시에틸)아미노-트리스(히드록시메틸)메탄)은 pH 5.8-7.2(pKa = 8.35)에서 완충하는 데 사용된다.
비스트리스(비스-(2-하이드록시에틸)아미노-트리스(하이드록시메틸)메탄).
비스트리스 프로판(1,3-비스[트리스(히드록시메틸)메틸아미노]프로판).
DIPSO(N, N-비스(2-히드록시에틸)-3-아미노-2-히드록시프로판술폰산)은 pH 7.0-8.2에서 완충하는 데 사용된다.
Gly-Gly(디글리신; 글리실-글리신)는 pH 7.5-8.9(pKa = 8.30)에서 완충하는 데 사용된다.
HEBPS(N-(2-하이드록시에틸)피페라진-N'-(4-부탄설폰산))은 더 높은 pKa(pKa = 8.30)를 갖는 HEPES 및 EPPS의 동족체이며, pH 7.6-9.0에서 완충하는 데 사용된다.
HEPES(4-(2-히드록시에틸)-1-피페라진에탄술폰산; 2-모르폴리노에탄술폰산; 2-(4-모르폴리노)에탄술폰산; 2-(N-모르폴리노)에탄술폰산; 모르폴린-4-에탄술폰산 수화물)은 pH 6.8-8.2; 20°C pKa: 7.45-7.65)에서 완충하는 데 널리 사용된다.
HEPPS 또는 EPPS(3-[4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라지닐]프로판설폰산 수화물; 4-(2-하이드록시에틸)피페라진-1-(2-하이드록시프로판설폰산)수화물)은 pH 7.3-8.7(pKa = 8.00/피페라진 고리)에서 완충제로 사용된다.
HEPPSO(4-(2-하이드록시에틸)피페라진-1-(2-하이드록시프로판설폰산)수화물).
MES(2-(N-모르폴리노)에탄술폰산, 일수화물)은 pH 5.2-7.1(pKa:6.16)에서 완충제로 사용된다.
MOBS(4-모르폴린부탄술폰산; 3-(N-모르폴리노)부탄술폰산 헤미나트륨염)은 더 높은 pKa를 갖는 MES 및 MOPS의 동족체이며 pH 6.9-8.3(pKa:7.6)에서 용액을 완충하는 데 사용된다.
MOPS(4-모르폴린프로판술폰산 나트륨염).
MOPSO(β-하이드록시-4-모르폴린프로판설폰산, 3-모르폴리노-2-하이드록시프로판설폰산).
PIPES(피페라진-1, 4-비스(2-에탄설폰산)은 pH 6.1-7.5(pKa = 6.80)에서 완충하는 데 사용된다.
POPSO(피페라진-1,4-비스(2-히드록시프로판술폰산)이수화물).
TAPS([(2-하이드록시-1,1-비스(하이드록시메틸)에틸)아미노]-1-프로판설폰산).
TAPSO(2-하이드록시-3-[트리스(하이드록시메틸)메틸아미노]-1-프로판설폰산).
TES(2-[(2-하이드록시-1,1-비스(하이드록시메틸)에틸)아미노]에탄설폰산).
트리신(피페라진-N,N'-비스[2-히드록시프로판술폰산)]은 pH 7.4-8.8(pKa:8.16)에서 완충하는 데 사용된다.
용어 "항체"는 본 명세서에서 가장 넓은 의미로 사용되며, 이는 단일클론 항체, 다클론 항체, 다중특이적 항체(예를 들어, 이중특이적 항체) 및 원하는 항원-결합 활성을 나타내는 한, 항체 단편, 항체를 포함하는 융합 단백질, 및 항원 인식 부위를 포함하는 면역글로불린 분자의 다른 변형된 구조를 포함하지만, 이들에 제한되지 않는 다양한 항체 구조를 포함한다. 항체에는 IgG, IgA 또는 IgM(또는 이의 서브클래스)과 같은 모든 클래스의 항체가 포함되며, 항체는 특정 클래스일 필요는 없다. 항체의 중쇄 불변(constant) 영역의 아미노산 서열에 따라, 면역글로불린은 상이한 클래스로 분류될 수 있다. 면역글로불린에는 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM의 5가지 주요 클래스가 있으며, 이들 중 일부는 서브클래스(아이소타입)(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2)로 더 분류될 수 있다. 상이한 클래스의 면역글로불린에 대응하는 중쇄 불변 영역을 각각 알파, 델타, 엡실론, 감마 및 뮤라고 지칭한다. 상이한 클래스의 면역글로불린의 서브유닛(subunit) 구조와 3-차원 구성은 잘 알려져 있다. "항체 단편"은 무손상(intact, 온전한) 항체의 일부를 포함하며 무손상 항체가 결합하는 항원에 결합하는 무손상 항체 이외의 분자를 지칭한다. 항체 단편의 예는 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2; 디아바디; 선형 항체; 단일-사슬 항체 분자(예를 들어, scFv); 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다. "인간화(humanized)" 항체는 비-인간 HVR로부터의 아미노산 잔기 및 인간 FR로부터의 아미노산 잔기를 포함하는 키메라 항체를 지칭한다. 특정 실시예에서, 인간화 항체는 적어도 1개, 전형적으로는 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이며, 여기서 HVR(예를 들어, CDR)의 전부 또는 실질적으로 전부는 비-인간 항체의 그것에 대응하고, FR의 전부 또는 실질적으로 전부는 인간 항체의 그것에 대응한다. 인간화 항체는 선택적으로 인간 항체로부터 유래된 항체 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 항체의 "인간화 형태", 예를 들어 비-인간 항체는 인간화를 거친 항체를 지칭한다. "가변 도메인" 또는 "가변 도메인"이라는 용어는 항체를 항원에 결합시키는 데 관여하는 항체 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 지칭한다. 천연 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인(각각 VH 및 VL)은 일반적으로 유사한 구조를 가지며, 각 도메인은 4개의 보존된 프레임워크 영역(FR) 및 3개의 초가변 도메인(HVR)을 포함한다.(예를 들어, Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91(2007) 참조). 단일 VH 또는 VL 도메인은 항원-결합 특이성을 부여하는데 충분할 수 있다. 또한, 특정 항원에 결합하는 항체는 각각 상보적인 VL 또는 VH 도메인의 라이브러리를 스크리닝하기 위해 항원에 결합하는 항체로부터 VH 또는 VL 도메인을 사용하여 단리될(isolated) 수 있다[ 예를 들어, Portolano et al., J. Immunol. 150: 880-887(1993); Clarksonetal.,Nature352:624-628(1991) 참조].
본 명세서에 사용된 "단일클론 항체"는 실질적으로 균질한 항체 군집(population)으로부터 수득된 항체를 지칭하며, 즉 해당 군집을 구성하는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 단일클론 항체는 단일 항원 부위에 대해 지향되는 매우 특이적이다. 또한, 일반적으로 상이한 결정인자(에피토프)에 대해 지향되는 상이한 항체를 포함하는 다클론성 항체 제제와 달리, 각각 단일클론 항체는 항원의 단일 결정인자에 대해 지향된다. 수식어 "단클론성"은 실질적으로 균질한 항체 군집으로부터 수득되는 항체의 특성을 나타내며, 임의의 특정 방법에 의한 항체의 생산을 필요로 하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용되는 단일클론 항체는 Kohler and Milstein, Nature 256:495, 1975에 최초로 기술된 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있거나, 또는 미국 특허 제4,816,567호에 기술된 바와 같은 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다. 단일클론 항체는 또한 예를 들어, McCafferty et al., Nature 348:552-554, 1990에 기재된 기술을 사용하여 생성된 파지 라이브러리로부터 단리될 수도 있다.
본 명세서에 사용된 "인간화" 항체는 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 포함하는, 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 사슬 또는 이들의 단편(예를 들어, Fv, Fab, Fab', F(ab')2 또는 항체의 기타 항원 결합 하위서열)인 비-인간(예를 들어, 쥐) 항체의 형태를 지칭한다. 바람직하게는, 인간화 항체는 수용자의 상보성 결정 영역(CDR)의 잔기가 [원하는 특이성, 친화력(affinity) 및 용량을 갖는] 마우스, 래트 또는 토끼와 같은 비-인간 종(공여자 항체)의 CDR의 잔기로 대체된 인간 면역글로불린(수용자 항체)이다. 어떤 경우에는, 인간 면역글로불린의 Fv 프레임워크 영역(FR) 잔기가 대응하는 비-인간 잔기로 대체된다. 더욱이, 인간화 항체는 수용자 항체나 도입된(imported) CDR 또는 프레임워크 서열에서 발견되지 않은 잔기를 포함할 수 있지만, 항체 성능을 더욱 개선하고 최적화하기 위해 포함횔 수 있다. 일반적으로, 인간화 항체는 CDR 영역의 전부 또는 실질적으로 전부가 비-인간 면역글로불린의 그것에 대응하고 및 FR 영역의 전부 또는 실질적으로 전부가 인간 면역글로불린 컨센서스 서열의 그것에 대응하는 적어도 하나, 전형적으로 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이다. 인간화 항체는 또한 최적으로 면역글로불린 불변 영역 또는 도메인(Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 면역글로불린의 일부를 포함할 것이다. WO 99/58572에 기술된 바와 같이 변형된 Fc 영역을 갖는 항체가 바람직하다. 다른 형태의 인간화 항체는 원래의 항체와 관련하여 변경된 하나 이상의 CDR(CDR L1, CDR L2, CDR L3, CDR H1, CDR H2 또는 CDR H3)을 가지며, 이는 원래 항체로부터의 하나 이상의 CDR로부터 "유래된" 하나 이상의 CDR이라고도 지칭된다.
본 명세서에 사용된 "인간 항체"는 인간에 의해 생산된 항체의 서열에 상응하는 아미노산 서열을 갖고, 및/또는 당업자에게 공지되거나 본 명세서에 개시된 인간 항체를 제조하기 위한 임의의 기술을 사용하여 제조된 항체를 지칭한다. 인간 항체의 이러한 정의에는 적어도 하나의 인간 중쇄 폴리펩티드 또는 적어도 하나의 인간 경쇄 폴리펩티드를 포함하는 항체가 포함된다. 그러한 예 중 하나는 쥐의 경쇄와 인간의 중쇄 폴리펩티드를 포함하는 항체이다. 인간 항체는 당업계에 공지된 다양한 기술을 사용하여 생산될 수 있다. 일 실시예에서, 인간 항체는 파지 라이브러리가 인간 항체를 발현하는 파지 라이브러리로부터 선택된다(Vaughan et al., Nature Biotechnology, 14:309-314, 1996; Sheets et al., Proc. Natl. Acad. Sci.(USA) 95:6157-6162, 1998; Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381, 1991; Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581, 1991). 인간 항체는 또한 내인성 유전자좌(loci) 대신에 인간 면역글로불린 유전자좌가 형질전환 방식으로 도입된 동물, 예를 들어 내인성 면역글로불린 유전자가 부분적으로 또는 완전히 비활성화된 마우스의 면역화에 의해 제조될 수 있다. 이러한 접근법은 미국특허 제5,545,807호; 제5,545,806호; 제5,569,825호; 제5,625,126호; 제5,633,425호; 및 제5,661,016호에 기재되어 있다. 대안적으로, 인간 항체는 표적 항원에 대해 지향되는 항체를 생성하는 인간 B 림프구를 불멸화함으로써(immortalizing) 제조될 수 있다(이러한 B 림프구는 개인으로부터 또는 cDNA의 단일 세포 클로닝으로부터 회수될 수 있거나, 또는 시험관 내에서 면역되었을 수 있다). 예를 들어, Cole et al. 단일 클론 항체 및 암 치료, Alan R. Liss, p. 77, 1985; Boerner et al., J. Immunol., 147(1):86-95, 1991; 및 미국 특허 제5,750,373호 참조.
용어 "키메라 항체"는 가변 도메인 서열이 한 종으로부터 유래되고 불변 영역 서열이 또 다른 종으로부터 유래되는 항체, 예를 들어 가변 도메인 서열이 마우스 항체로부터 유래되고 불변 영역 서열이 인간 항체로부터 유래된 항체를 지칭하도록 의도된다.
용어 "폴리펩티드", "올리고펩티드", "펩티드" 및 "단백질"은 임의의 길이, 바람직하게는 비교적 짧은(예를 들어, 10-100개의 아미노산) 아미노산 사슬을 지칭하기 위해 본 명세서에서 상호교환적으로 사용된다. 사슬은 선형 또는 분지형일 수 있고, 변형된 아미노산을 포함할 수 있고, 및/또는 비-아미노산에 의해 중단될(interrupted) 수 있다. 이러한 용어는 또한 자연적으로 또는 개입; 예를 들어, 이황화 결합 형성, 글리코실화, 지질화, 아세틸화, 인산화, 또는 표지 성분과의 접합과 같은 임의의 다른 조작 또는 개질에 의해 변형된 아미노산 사슬을 포함한다. 또한, 정의에는 예를 들어, 하나 이상의 아미노산 유사체(예를 들어, 비-천연 아미노산 등 포함)를 함유하는 폴리펩티드뿐만 아니라, 당업계에 공지된 다른 변형도 포함된다. 폴리펩티드는 단일 사슬 또는 연관된 사슬로서 발생할 수 있는 것으로 이해된다.
"1가 항체"는 분자당 하나의 항원 결합 부위(예를 들어, IgG 또는 Fab)를 포함한다. 어떤 경우에는, 1가 항체가 2개 이상의 항원 결합 부위를 가질 수 있지만, 결합 부위는 서로 다른 항원으로부터 유래한다.
"단일특이적 항체"는 분자당 2개의 동일한 항원 결합 부위(예를 들어, IgG)를 포함하여, 2개의 결합 부위가 항원의 동일한 에피토프에 결합하도록 한다. 따라서, 그들은 하나의 항원 분자에 결합할 때 서로 경쟁한다. 자연에서 발견되는 대부분의 항체는 단일특이적이다. 어떤 경우에는, 단일특이적 항체가 1가 항체(예를 들어, Fab)일 수도 있다.
"2가 항체"는 분자당 2개의 항원 결합 부위(예를 들어, IgG)를 포함한다. 어떤 경우에는, 2개의 결합 부위가 동일한 항원 특이성을 갖는다. 그러나, 2가 항체는 이중특이적일 수 있다.
"이중특이적" 또는 "듀얼-특이적"은 2개의 서로 다른 항원 결합 부위를 갖는 하이브리드 항체이다. 이중특이적 항체의 두 항원 결합 부위는 동일하거나 상이한 단백질 표적에 존재할 수 있는 2개의 서로 다른 에피토프에 결합해진다.
"이작용성(bifunctional)"은 두 암(arm)에 동일한 항원 결합 부위(즉, 동일한 아미노산 서열)를 갖지만, 각각의 결합 부위가 2개의 서로 다른 항원을 인식할 수 있는 항체이다.
"이종다량체", "이종다량체 복합체" 또는 "이종다량체 폴리펩티드"는 적어도 제1 폴리펩티드 및 제2 폴리펩티드를 포함하는 분자이고, 여기서 제2 폴리펩티드는 적어도 하나의 아미노산 잔기에 의해 제1 폴리펩티드와 아미노산 서열에서 상이하다. 이종다량체는 제1 및 제2 폴리펩티드에 의해 형성된 "이종이량체"를 포함할 수 있거나, 또는 제1 및 제2 폴리펩티드 이외의 폴리펩티드가 존재하는 고차원의 3차 구조를 형성할 수 있다.
"이종이량체", "이종이량체 단백질", "이종이량체 복합체" 또는 "이종다량체 폴리펩티드"는 제1 폴리펩티드 및 제2 폴리펩티드를 포함하는 분자이고, 여기서 제2 폴리펩티드는 적어도 하나의 아미노산 잔기에 의해 제1 폴리펩티드와 아미노산 서열에서 상이하다.
본 명세서에 사용된 "힌지(hinged) 영역", "힌지 서열" 및 이들의 변형은 당업계에 공지된 의미를 포함하며, 이는 예를 들어, Janeway et al., ImmunoBiology: the immune system in health and disease,(Elsevier Science Ltd., NY)(4th ed., 1999); Bloom et al., Protein Science(1997), 6:407-415; Humphreys et al., J. Immunol. Methods(1997), 209:193-202에 설명되어 있다.
본 명세서에 사용된 "면역글로불린 유사 힌지 영역", "면역글로불린 유사 힌지 서열" 및 이들의 변형은 면역글로불린 유사 또는 항체 유사 분자(예를 들어, 면역접합체(immunoadhesin))의 힌지 영역 및 힌지 서열을 지칭한다. 일부 실시예에서, 면역글로불린 유사 힌지 영역은 임의의 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 하위유형, 또는 IgA, IgE, IgD 또는 IgM(이들의 키메라 형태, 예를 들어 키메라 IgG1/2 힌지 영역 포함)로부터 존재하거나 유래될 수 있다.
본 명세서에 사용된 용어 "면역 이펙터(effector) 세포" 또는 "이펙터 세포"는 활성화되어 표적 세포의 생존력에 영향을 미칠 수 있는 인간 면역계 세포의 자연 레퍼토리 내의 세포를 지칭한다. 표적 세포의 생존력에는 세포 생존, 증식 및/또는 다른 세포와 상호작용하는 능력이 포함될 수 있다.
본 발명의 항체는 당업계에 널리 공지된 기술, 예를 들어 재조합 기술, 파지 디스플레이 기술, 합성 기술 또는 이러한 기술의 조합 또는 당업계에 쉽게 공지된 다른 기술을 사용하여 생산될 수 있다(예를 들어, Jayasena, S. D., Clin. Chem., 45: 1628-50, 1999 and Fellouse, F. A., et al, J. Mol. Biol., 373(4): 924-40, 2007 참조).
본 명세서에서 사용된 용어 "세포독성제"는 세포 기능을 억제 또는 방지하고, 및/또는 세포 사멸 또는 파괴를 유발하는 물질을 지칭한다. 세포독성제는 방사성 동위원소(예를 들어, At211, I131, I125, Y90, In111, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212, Zr89, F18 및 Lu의 방사성 동위원소, 예를 들어, Lu177); 화학요법제 또는 약물(예를 들어, 튜불리신, 메이탄신, 아우리스타틴, DNA 작은 홈 결합제(예를 들어, PBD 이량체), 두카르미신, 토포이소머라제 억제제, RNA 중합효소 억제제, DNA 알킬화제, 메토트렉세이트, 아드리아마이신, 빈카 알칼로이드(빈크리스틴, 빈블라스틴, 에토포시드), 독소루비신, 멜팔란, 미토마이신 C, 클로람부실, 다우노루비신 또는 기타 삽입제(interclaating agent)); 성장 억제제; 핵산분해 효소와 같은 효소 및 이의 단편; 항생제; 박테리아, 곰팡이, 식물 또는 동물 기원의 소분자 독소 또는 효소 활성 독소(이의 단편 및/또는 변형 포함)와 같은 독소; 및 출원서 전반에 걸쳐 개시된 다양한 항종양제 또는 항암제를 포함를 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다.
"링커"는 항체를 약물 모이어티에 공유적으로 부착하는 원자 사슬 또는 공유 결합을 포함하는 화학적 모이어티를 지칭한다. 다양일 실시예에서, 링커는 알킬디일, 아릴디일, 헤테로아릴디일과 같은 2가 라디칼, --(CR2)nO(CR2)n--과 같은 모이어티, 알킬옥시의 반복 유닛(예를 들어, 폴리에틸렌옥시, PEG, 폴리메틸렌옥시) 및 알킬아미노(예를 들어, 폴리에틸렌아미노); 및 숙시네이트, 숙신아미드, 디글리콜레이트, 말로네이트 및 카프로아미드를 포함하는 이산 에스테르 및 아미드를 포함한다. 다양일 실시예에서, 링커는 발린, 페닐알라닌, 라이신 및 호모라이신과 같은 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다.
본 명세서 및 청구범위에 사용될 때, "포함한다(comprise)", "포함하는", "포함한다(include)", "포함하는"이라는 단어는 언급된 특징, 정수, 구성 요소 또는 단계의 존재를 특정하기 위한 것이지만, 하나 이상의 다른 특징, 정수, 구성 요소, 단계 또는 이들 그룹의 존재 또는 추가를 배제하지는 않는다. 본 명세서에 개시된 신규 접합체는 BSMA 항체 접합체이다. 접합체 및 이의 합성의 예는 아래 실시예 9-379에 도시된다.
BCMA 항체와 그 항체 약물 접합체.
본 발명은 BCMA(CD269)에 특이적으로 결합하는 단일클론 항체를 제공한다. 달리 표시하지 않는 한, BCMA는 인간 BCMA를 의미한다. 예시적인 인간 핵산 및 아미노산 서열은 서열번호 1 및 2에 의해 제공된다. BMCA에 대한 문맥 참조에서 달리 명백하지 않는 한, 적어도 단백질의 세포외 도메인(대략 서열번호 7의 잔기 1-54) 및 때로는 완전한 단백질을 의미한다.
본 발명은 인간 대상체에서 의학적 장애를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 상기 의학적 장애는 B 세포 성숙 항원(BCMA)을 발현하는 병원성 B 세포의 존재와 연관되어 있고, 상기 방법은 인간 대상체에게, BCMA(CD269)에 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 BCMA 항체(예를 들어, q.hu5D2)는 실시예에 기술된 바와 같이, 인간 BCMA에 특이적으로 결합하는 인간화 단일클론 항체이다. 5D2 항체는 하이브리도마 BCMA-A2-6H4-5D2에 의해 생산되었다. 부다페스트 조약에 따라 2022년 6월 23일에, 중국 기준 배양 수집(China Center for Type Culture Collection, CCTCC)에 기탁이 이루어졌다. CCTCC는 중국, 우편번호 430000, 후베이, 우한시, 우한대학교에 위치하고 있다. CCTCC 기탁에는 CCTCC C2022188이라는 수탁 번호가 부여되었다. Hu5D2항체는 BCMA가 이의 리간드인 APRIL 및 BAFF 모두에 결합하는 것을 억제한다. Hu5D2항체는 인간 IgG1에 연결될 때 ADCC를 유도하고, Fcγ 수용체에 결합하여 Fcγ 수용체를 통한 신호전달을 유도하다. Hu5D2항체는 또한 BCMA를 발현하는 세포의 내부로 연결된 약물을 전달하기 위해 항체 약물 접합체에 통합될 수 있다.
Hu5D2항체는 인간 BCMA에 특이적으로 결합하고 그 리간드에 대한 결합을 억제하며 BCMA를 발현하는 세포 내부에 연결된 약물을 전달할 수 있는 또 다른 인간화 단일클론 항체이다.
본 발명은 막 결합 표적에 결합하고 내재화할 수 있는 항원 결합 단백질을 제공한다. 추가 실시예에서는, 본 발명의 항원 결합 단백질 및 세포독성제를 포함하는 면역 접합체가 제공된다. 추가 실시예에서, 항원 결합 단백질은 ADCC 이펙터(effector) 기능을 가지며, 예를 들어 항원 결합 단백질은 향상된 ADCC 이펙터 기능을 갖는다.
이러한 일 실시예에서는, BCMA에 특이적으로 결합하는, 예를 들어 인간 BCMA(hBCMA)에 특이적으로 결합하고 BCMA 수용체에 대한 BAFF 및/또는 APRIL의 결합을 억제하는 항원 결합 단백질 또는 이의 단편이 제공된다.
추가 실시예에서, 본 발명의 항원 결합 단백질 또는 단편은 BCMA에 특이적으로 결합하고, BCMA에 대한 BAFF 및/또는 APRIL의 결합을 억제하고, 여기서 항원 결합 단백질 또는 이의 단편은 FcγRIIIA에 결합하고 FcgRIIIA 매개 이펙터 기능을 매개하는 능력을 갖거나, 향상된 FcγRIIIA 매개 이펙터 기능을 갖는다. 본 명세서에 제공된 바와 같은 본 발명의 일 실시예에서, 항원 결합 단백질은 내재화될 수 있다.
본 발명의 일 측면에서, 비-막 결합(non-membrane bound) BCMA, 예를 들어 혈청 BCMA에 결합하는, 본 명세서에 기재된 바와 같은 본 발명에 따른 항원 결합 단백질이 제공된다.
본 발명의 일 측면에서, 서열번호 3의 CDRH3 또는 서열번호 3의 변형(variant)을 포함하는, 본 명세서에 기재된 항원 결합 단백질이 제공된다.
본 발명의 추가 측면에서, 서열번호 1의 CDRH1, 서열번호 2의 CDRH2, 서열번호 4의 CDRL1, 서열번호 5의 CDRL2 및/또는 서열번호 6의 CDRL3 및/또는 이의 변형 중 하나 이상을 추가로 포함하는, 본 명세서에 기재된 바와 같은 항원 결합 단백질이 제공된다.
본 발명의 항원 결합 단백질은 천연 항체 또는 기능적 단편 또는 이의 등가물의 구조로 포맷될 수 있는 본 발명의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함할 수 있다. 따라서, 본 발명의 항원 결합 단백질은 적절한 경쇄와 쌍을 이루는 경우, 전장 항체, (Fab')2 단편, Fab 단편, 또는 이의 등가물(예를 들어, scFV, bi-, tri-, 또는 tetra-bodies, Tandabs 등)로 포맷된 본 발명의 VH 영역을 포함할 수 있다. 항체는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4일 수 있으며; 또는 IgM; IgA, IgE 또는 IgD 또는 이의 변형된 변이체일 수 있다. 이에 따라, 항체 중쇄의 불변 도메인이 선택될 수 있다. 경쇄 불변 도메인은 카파(kappa) 또는 람다(lambda) 불변 도메인일 수 있다. 더욱이, 항원 결합 단백질은 모든 부류의 변형, 예를 들어 더 이상 Fc 수용체에 결합하지 않거나 C1q 결합을 매개하지 않는 Fc 돌연변이, IgG 이량체를 포함할 수 있다. 항원 결합 단백질은 또한 항원 결합 영역 및 비-면역글로불린 영역을 포함하는, WO86/001533에 기술된 유형의 키메라 항체일 수 있다.
불변 영역은 필요한 기능에 따라 선택되며, 예를 들어 IgG1은 보체(complement)와의 결합을 통해 용해 능력을 입증할 수 있고, 및/또는 ADCC(항체 의존성 세포 독성)를 매개할 것이다.
본 발명의 항원 결합 단백질은 서열번호 10 및 서열번호 11에 기재된 가변 도메인을 갖는 쥐과 항체, 또는 이의 비-쥐과 등가물, 예컨대 쥐, 인간, 키메라 또는 인간화 변이체로부터 유래된다. 예를 들어, 이들은 서열번호 10에 기재된 가변 중쇄 서열 및/또는 서열번호 11에 기재된 가변 경쇄 서열을 갖는 항체로부터 유래된다.
본 발명의 일 측면에서, 서열번호 8, 서열번호 10 또는 서열번호 13 중 어느 하나로부터 선택되는, 단리된 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 단백질이 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에서, 서열번호 9, 서열번호 11 또는 서열번호 15 중 어느 하나로부터 선택되는, 단리된 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 단백질이 제공된다.
본 발명의 추가 측면에서는, 서열번호 8, 서열번호 10 및 서열번호 13 중 어느 하나로부터 선택되는 단리된 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 9, 서열번호 11 및/또는 서열번호 15 중 어느 하나로부터 선택되는 단리된 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 단백질이 제공된다.
일 측면에서, 본 발명의 항원 결합 단백질은 서열번호 20 또는 서열번호 22에 의해 암호화된 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 21 또는 서열번호 23에 의해 암호화된 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일 측면에서, 서열번호 28, 또는 서열번호 29, 또는 서열번호 30을 포함하며, 단리된 가변 중쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 제공된다.
일 측면에서, 서열번호 31, 또는 서열번호 32, 또는 서열번호 33을 포함하며, 단리된 가변 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 제공된다.
추가 측면에서, 항원 결합 단백질은 본 명세서에 기술된 경쇄 중 어느 하나와 조합하여, 본 명세서에 기술된 가변 중쇄 중 어느 하나를 포함할 수 있다.
일 측면에서, 항원 결합 단백질은 본 명세서에 기술된 본 발명에 따른 하나 이상의 CDR, 또는 본 명세서에 기술된 본 발명에 따른 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일 실시예에서, 항원 결합 단백질은 영장류 BCMA에 결합한다. 이러한 일 실시예에서, 항원 결합 단백질은 비-인간 영장류 BCMA, 예를 들어 시노몰구스 마카크 원숭이 BCMA에 추가로 결합한다.
또 다른 측면에서, 항원 결합 단백질은 dAb, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 미니항체 및 미니바디로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명의 일 측면에서, 항원 결합 단백질은 인간화 또는 키메라 항체이고, 추가 측면에서, 항체는 인간화된다. 일 측면에서, 항체는 단일클론 항체이다.
또 다른 측면에서, 항원 결합 단백질은 예를 들어, Biacore로 측정할 때, 높은 친화도로 인간 BCMA에 결합한다. 항원 결합 단백질은 20 nM 이하의 친화도 또는 15 nM 이하의 친화도 또는 5 nM 이하의 친화도 또는 1000pM 이하의 친화도 또는 500pM 이하의 친화도 또는 400pM 이하의 친화도 또는 300pM 이하의 친화도 또는 예를 들어, 약 120pM의 친화도로, 인간 BCMA에 결합한다. 추가 실시예에서, 항원 결합 단백질은 Biacore로 측정할 때, 약 100pM 내지 약 500pM 또는 약 100pM 내지 약 400pM 또는 약 100pM 내지 약 300pM로 인간 BCMA에 결합한다. 본 발명의 일 실시예에서, 항원 결합 단백질은 150pm 미만의 친화도로 BCMA에 결합한다.
이러한 일 실시예에서, 이는 예를 들어, 실시예 4에 제시된 바와 같이, Biacore에 의해 측정된다.
또 다른 측면에서, 항원 결합 단백질은 인간 BCMA에 결합하고, 세포 중화 분석에서 BCMA 수용체에 대한 리간드 BAFF 및/또는 APRIL의 결합을 중화시키며, 여기서 항원 결합 단백질은 약 1 nM 내지 약 500 nM, 또는 약 1nM 내지 약 100nM, 또는 약 1nM 내지 약 50nM, 또는 약 1nM 내지 약 25nM, 또는 약 5nM 내지 약 15nM의 I050을 갖는다. 본 발명의 추가 실시예에서, 항원 결합 단백질은 BCMA에 결합하고, 세포 중화 분석에서 BCMA를 중화시키며, 여기서 항원 결합 단백질은 약 10 nM의 I050을 갖는다.
본 발명의 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체는 본 발명의 항원 결합 단백질에 대한 암호화 서열을 포함하는 발현 벡터로 숙주 세포를 형질감염시켜 생산될 수 있다. 발현 벡터 또는 재조합 플라스미드는 숙주 세포에서의 복제 및 발현 및/또는 분비를 제어할 수 있는 통상적인 조절 제어 서열과 작동적으로 연관되는, 항원 결합 단백질에 대한 이들 암호화 서열을 배치함으로써 생산된다. 조절 서열에는 프로모터 서열, 예를 들어 CMV 프로모터, 및 다른 공지된 항체로부터 유래될 수 있는 신호 서열이 포함된다. 유사하게, 상보적인 항원 결합 단백질 경쇄 또는 중쇄를 암호화하는 DNA 서열을 갖는 제2 발현 벡터가 생산될 수 있다. 특정 실시예에서, 이러한 제2 발현 벡터는 암호화 서열 및 선별 마커에 관한 것을 제외하고, 제1 발현 벡터와 동일하여, 가능한 한 각각의 폴리펩티드 사슬이 기능적으로 발현되도록 보장한다. 대안적으로, 항원 결합 단백질에 대한 중쇄 및 경쇄 암호화 서열은 단일 벡터에 존재할 수 있다.
선택된 숙주 세포는 제1 및 제2 벡터 모두를 사용하여 통상적인 기술에 의해 동시 형질감염(또는 단순히 단일 벡터에 의해 형질감염)되어, 재조합 또는 합성 경쇄 및 중쇄를 모두 포함하는 본 발명의 형질감염된 숙주 세포를 생성한다. 그 다음, 형질감염된 세포를 통상적인 기술에 의해 배양하여, 본 발명의 조작된 항원 결합 단백질을 생산한다. 재조합 중쇄 및/또는 경쇄 모두의 결합을 포함하는 항원 결합 단백질은 ELISA 또는 RIA와 같은 적절한 분석에 의해 배양물로부터 스크리닝된다. 유사한 통상적인 기술이 다른 항원 결합 단백질을 구성하는데 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물의 방법 및 구성에 사용되는 클로닝 및 서브클로닝 단계에 적합한 벡터는 당업자에 의해 선택될 수 있다. 예를 들어, 기존의 pUC 시리즈 클로닝 벡터를 사용할 수 있다. 하나의 벡터인 pUC19는 AmershamBioscience(영국 버킹엄셔) 또는 GenScript(중국 난징)와 같은 공급업체에서 상업적으로 구입할 수 있다. 또한, 쉽게 복제할 수 있고, 클로닝 부위와 선택 가능 유전자(예를 들어, 항생제 내성)가 풍부하며, 쉽게 조작할 수 있는 모든 벡터를 클로닝에 사용할 수 있다. 따라서, 클로닝 벡터의 선택은 본 발명의 제한 요소가 아니다.
발현 벡터는 또한 이종 DNA 서열의 발현을 증폭시키는데 적합한 유전자, 예를 들어 포유동물 디히드로폴레이트 리덕타제 유전자(DHFR)를 특징으로 할 수 있다. 다른 벡터 서열에는 소 성장 호르몬(BGH) 및 베타글로빈 프로모터 서열(베타글로프로)과 같은 폴리 A 신호 서열이 포함된다. 본 명세서에서 유용한 발현 벡터는 당업자에게 잘 알려진 기술에 의해 합성될 수 있다.
이러한 벡터의 구성 요소, 예를 들어 레플리콘, 선택 유전자, 인핸서, 프로모터, 신호 서열 등은 상업적 또는 천연 공급원으로부터 얻을 수 있거나, 선택된 숙주에서 재조합 DNA 생성물의 발현 및/또는 분비를 지시하는 데 사용하기 위해 공지된 절차에 의해 합성될 수 있다. 포유동물, 박테리아, 곤충, 효모 및 진균 발현을 위해 수많은 유형이 당업계에 공지되어 있는 다른 적절한 발현 벡터도 이러한 목적을 위해 선택될 수 있다.
본 발명은 또한 본 발명의 항원 결합 단백질의 암호화 서열을 함유하는 재조합 플라스미드로 형질감염된 세포주를 포함한다. 이들 클로닝 벡터의 클로닝 및 기타 조작에 유용한 숙주 세포도 또한 통상적이다. 그러나, E. Coli의 다양한 균주로부터의 세포가 클로닝 벡터의 복제 및 본 발명의 항원 결합 단백질의 구축의 다른 단계에 사용될 수 있다.
본 발명의 항원 결합 단백질의 발현에 적합한 숙주 세포 또는 세포주는 NS0, Sp2/0, CHO(예를 들어, DG44), COS, HEK, 섬유아세포(예를 들어, 3T3) 및 골수종 세포와 같은 포유동물 세포를 포함한다. 예를 들어, 이는 CHO 또는 골수종 세포에서 발현될 수 있다. 인간 세포를 사용하여, 분자를 인간 글리코실화 패턴으로 변형시킬 수 있다.
대안적으로, 다른 진핵 세포주가 사용될 수 있다. 적합한 포유동물 숙주 세포의 선택 및 형질전환, 배양, 증폭, 스크리닝 및 생성물 생산 및 정제 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, Sambrook et al., (1989). Molecular cloning: a laboratory manual, 2nd ed. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y.를 참조하라.
박테리아 세포는 재조합 Fab 또는 본 발명의 다른 실시예의 발현에 적합한 숙주 세포로서 유용한 것으로 입증될 수 있다(예를 들어, Pluckthun, A., Immunol. Rev., 130:151-188 (1992) 참조). 그러나, 박테리아 세포에서 발현되는 단백질이 접히지 않거나(unfolded) 부적절하게 접힌 형태 또는 비-당화된 형태를 가지는 경향 때문에, 박테리아 세포에서 생산된 모든 재조합 Fab는 항원 결합 능력의 유지 여부를 스크리닝해야 하다. 박테리아 세포에 의해 발현된 분자가 적절하게 접힌 형태로 생성된 경우, 그 박테리아 세포는 바람직한 숙주가 될 것이며, 대안적인 실시예에서, 상기 분자는 박테리아 숙주에서 발현된 후 후속적으로 다시 접힐 수 있다. 예를 들어, 발현에 사용되는 다양한 E. Coli 균주는 생명공학 분야에서 숙주 세포로 잘 알려져 있다. B. 서브틸리스, 스트렙토미세스, 기타 바실루스(간균) 등의 다양한 균주도 이 방법에 사용될 수 있다.
원할 경우, 당업자에게 공지된 효모 세포의 균주는 또한 숙주 세포뿐만 아니라 곤충 세포, 예를 들어 초파리(Drosophila) 및 나비목(Lepidoptera) 및 바이러스 발현 시스템으로도 이용 가능하다. Miller et al., Genetic Engineering, 8:277-298, Plenum Press (1986) 및 McGuire, S. et al, Trends Genet. (2004) 20, 384-391 및 여기에 인용된 참고문헌을 참조하라.
벡터를 구성할 수 있는 일반적인 방법, 본 발명의 숙주 세포를 생산하는데 필요한 형질감염 방법, 및 이러한 숙주 세포로부터 본 발명의 항원 결합 단백질을 생산하는 데 필요한 배양 방법은 모두 통상적인 기술일 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 배양 방법은 무혈청 배양방법으로서, 일반적으로 무혈청 세포를 현탁액에서 배양한다. 마찬가지로, 일단 생산되면, 본 발명의 항원 결합 단백질은 암모늄 침전, 친화성 컬럼, 컬럼 크로마토그래피, 겔 전기영동 등을 포함하는 당업계의 표준 절차에 따라 세포 배양 내용물로부터 정제될 수 있다. 이러한 기술은 해당 분야의 기술 범위 내에 있으며, 본 발명을 제한하지 않는다. 예를 들어, 변경된 항체의 제조는 WO 99/058679 및 WO 96/016990에 기술되어 있다. 항원 결합 단백질의 또 다른 발현 방법은 미국 특허 제4,873,316호에 기술된 바와 같이, 트랜스제닉 동물에서의 발현을 이용할 수 있다. 이것은 포유동물에 형질전환적으로 도입될 때, 암컷이 우유에서 원하는 재조합 단백질을 생산할 수 있도록 하는 동물 카제인 프로모터를 사용하는 발현 시스템에 관한 것이다.
본 발명의 추가 실시예에서는, 본 발명의 항체를 생산하는 방법에 제공되며, 상기 방법은 본 발명의 항체의 경쇄 및/또는 중쇄를 암호화하는 벡터로 형질전환되거나 형질감염된 숙주 세포를 배양하는 단계 및 이에 의해 생산된 항체를 회수하는 단계를 포함한다.
본 발명에 따르면, 인간 BCMA에 결합하여 활성을 중화시키는 본 발명의 항-BCMA 항체를 생산하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 항체의 중쇄를 암호화하는 제1 벡터를 제공하는 단계; 항체의 경쇄를 암호화하는 제2 벡터를 제공하는 단계; 포유동물 숙주 세포(예를 들어, CHO)를 상기 제1 및 제2 벡터로 형질전환시키는 단계; 상기 숙주 세포로부터 상기 배양 배지로 항체의 분비에 도움이 되는 조건 하에서 단계 (c)의 숙주 세포를 배양하는 단계; 단계 (d)에서 분비된 항체를 회수하는 단계를 포함한다.
일단 원하는 방법으로 발현되면, 항체는 적절한 분석법을 사용하여 시험관 내 활성에 대해 검사된다. 현재 BCMA에 대한 항체의 정성적 및 정량적 결합을 평가하기 위해 기존의 ELISA 분석 포맷이 사용된다. 또한, 일반적인 제거(clearance) 메커니즘에도 불구하고, 체내 항체의 지속성을 평가하기 위해 수행되는 후속 인간 임상 연구에 앞서, 중화 효능을 확인하기 위해 다른 시험관 내 분석을 사용할 수도 있다.
치료 용량 및 기간은 인간 순환계에서 본 발명의 분자(항체 및 항체-약물 접합체)의 상대적 기간과 관련되며, 치료하는 병태 및 환자의 전반적인 건강에 따라 당업자에 의해 조정될 수 있다. 최대 치료 효능을 달성하려면, 연장된 기간(예를 들어, 4~6개월)에 걸쳐 반복 투여(예를 들어, 일주일에 한 번 또는 2주에 한 번 또는 3주에 한 번 또는 4주에 한 번)가 필요할 것으로 예상된다.
본 발명의 일 실시예에서는, 적어도 하나의 발현 카세트를 포함하는 재조합 형질전환, 형질감염 또는 형질도입된 숙주 세포가 제공되며, 예를 들어 상기 발현 카세트는 본 명세서에 기재된 본 발명에 따른 항원 결합 단백질의 중쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하거나, 본 명세서에 기술된 본 발명에 따른 항원 결합 단백질의 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 추가로 포함하거나, 또는 2개의 발현 카세트가 있는 경우 첫 번째는 경쇄를 암호화하고 두 번째는 중쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 추가로 포함한다. 예를 들어, 일 실시예에서, 제1 발현 카세트는 본 명세서에 기재된 본 발명에 따른 불변 영역에 연결되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 항원 결합 단백질의 중쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 나아가 제2 발현 카세트는 본 명세서에 기재된 본 발명에 따른 불변 영역에 연결된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 항원 결합 단백질의 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 예를 들어, 제1 발현 카세트는 서열번호 18, 또는 서열번호 25로부터 선택된 중쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 제2 발현 카세트는 서열번호 19, 또는 서열번호 27로부터 선택된 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 본 명세서에 기재된 불변 영역에 결합되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 항체의 중쇄 및/또는 경쇄를 암호화하는 하나 이상의 발현 카세트를 포함하는 벡터를 포함하는, 안정하게 형질전환된 숙주 세포가 제공된다. 예를 들어, 이러한 숙주 세포는 경쇄를 암호화하는 제1 벡터 및 중쇄를 암호화하는 제2 벡터를 포함할 수 있으며, 예를 들어 제1 벡터는 서열번호 18, 또는 서열번호 25로부터 선택된 중쇄를 암호화하고, 제2 벡터는 예를 들어, 서열번호 19, 또는 서열번호 27로부터 선택된 경쇄를 암호화한다. 이러한 일 실시예에서, 제1 벡터는 서열번호 18로부터 선택된 중쇄를 암호화하고, 제2 벡터는 예를 들어, 서열번호 19의 경쇄를 암호화한다.
본 발명의 또 다른 실시예에서는, 세포가 진핵생물이고, 예를 들어 세포가 포유동물인 본 명세서에 기술된 본 발명에 따른 숙주 세포가 제공된다. 이러한 세포주의 예로는 CHO 또는 NS0이 있다.
본 발명의 또 다른 실시예에서는, 본 명세서에 기재된 본 발명에 따른 불변 영역에 연결된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 항체의 생산 방법이 제공되며, 상기 방법은 숙주 세포를 배양 배지, 예를 들어 무혈청 배양 배지에서 배양하는 단계를 포함한다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 항체가 무혈청 배양 배지를 함유하는 상기 항체에 대해 적어도 95% 이상(예를 들어 98% 이상)으로 추가로 정제되는, 본 명세서에 기술된 본 발명에 따른 방법이 제공된다.
또 다른 실시예에서는, 항원 결합 단백질 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
본 발명의 또 다른 실시예에서는, 사용 지침과 함께 본 명세서에 기술된 본 발명에 따른 조성물을 포함하는 부품 키트가 제공된다.
본 발명의 치료제의 투여 방식은 치료제를 숙주에게 전달하는 임의의 적합한 경로일 수 있다. 본 발명의 항원 결합 단백질 및 약제학적 조성물은 비경구 투여, 즉 피하(s.c.), 척수강내, 복강내, 근육내(i.m.) 또는 정맥내(i.v.) 투여에 특히 유용하다. 이러한 일 실시예에서, 본 발명의 항원 결합 단백질은 정맥내 또는 피하로 투여된다.
본 발명의 치료제는 약제학적으로 허용되는 담체 중에 활성 성분으로서 유효량의 본 발명의 항원 결합 단백질을 함유하는 약제학적 조성물로서 제조될 수 있다. 일 실시예에서, 본 발명의 예방제는 주사 가능한 형태로 항원 결합 단백질을 함유하는 수성 현탁액 또는 용액이다. 일 실시예에서, 현탁액 또는 용액은 생리학적 pH로 완충된다. 일 실시예에서, 비경구 투여용 조성물은 약학적으로 허용되는 담체에 용해된 본 발명의 항원 결합 단백질의 용액 또는 이의 칵테일을 포함할 것이다. 일 실시예에서, 담체는 수성 담체이다. 다양한 수성 담체, 예를 들어 0.9% 식염수, 0.3% 글리신 등이 사용될 수 있다. 이러한 용액은 멸균되어, 일반적으로 미립자 물질이 없을 수 있다. 이러한 용액은 기존의 잘 알려진 멸균 기술(예를 들어, 여과)로 멸균될 수 있다. 조성물은 pH 조정제 및 완충제 등과 같은 생리학적 조건을 근사화하는 데 필요한 약학적으로 허용되는 보조 물질을 함유할 수 있다. 이러한 약학적 제제 중 본 발명의 항원 결합 단백질의 농도는 광범위하게, 즉 약 0.5% 미만으로부터, 일반적으로 약 1% 이상 내지 약 15 또는 20wt% 정도로 다양할 수 있으며, 선택된 특정 투여 방식에 따라 주로 유체 부피, 점도 등에 기초하여 선택될 것이다.
따라서, 정맥내 주입을 위한 본 발명의 약제학적 조성물은 약 250ml의 멸균 링거액, 및 약 1 내지 약 30 또는 5mg 내지 약 25mg의 링거액 당 본 발명의 항원 결합 단백질을 함유하도록 구성될 수 있다. 비경구 투여 가능한 조성물을 제조하기 위한 실제 방법은 잘 알려져 있거나 당업자에게 명백할 것이며, 예를 들어 Remington's Pharmaceutical Science, 15.sup.th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, USA에 더 자세히 설명되어 있다. 본 발명의 정맥내 투여가능한 항원 결합 단백질 제제의 제조에 대해서는, Parkins D.and Lasmar U. "바이오 의약품의 제형화(The formulation of Biopharmaceutical products)", Pharm. Sci. Tech. Today, 3 (2000) 129-137; Wang, W "액상 단백질 의약품의 불안정성, 안정화 및 제형화(Instability, stabilisation and formulation of liquid protein pharmaceuticals)", Int. J. Pharm 185 (1999) 129-188;Jorgensen, L. et al, "의약품 제제에서 펩티드와 단백질을 안정화하는 최근 동향 - 부형제 선택 시 고려사항(Recent trends in stabilising peptides and proteins in pharmaceutical formulation - considerations in the choice of excipients)" Expert Opin Drug Deliv. 6 (2009) 1219-1230; Akers, M. J. "비경구 제제에서의 부형제-약물 상호작용(Excipient-Drug interactions in Parenteral Formulations)", J. Pharm Sci 91 (2002) 2283-2300; Imamura, K et al "당 유형이 건조 상태의 단백질 안정화에 미치는 영향(Effects of types of sugar on stabilization of Protein in the dried state)", J Pharm Sci 92 (2003) 266-274; Izutsu, Kkojima, S. "동결건조 시 부형제의 결정성과 단백질 구조 안정화 효과(Excipient crystallinity and its protein-structure-stabilizing effect during freeze-drying)", J. Pharm. Pharmacol, 54 (2002) 1033-1039; Johnson, R, et al "만니톨-수크로스 혼합물--단백질 동결건조를 위한 다양한 제제(Mannitol-sucrose mixtures--versatile formulations for protein lyophilization)", J. Pharm. Sci, 91 (2002) 914-922; Kerwin B."단백질 바이오치료제 제제에 사용되는 폴리소르베이트 20 및 80: 구조 및 분해 경로(Polysorbates 20 and 80 used in the formulation of protein biotherapeutics: structure and degradation pathways)" J. Pharm Sci. 97 (2008) 2924-2935; Ha, E., et al "폴리소르베이트 80의 과산화물 형성 및 단백질 안정성(Peroxide formation in polysorbate 80 and protein stability)", J. Pharm Sci, 91 (2002), 2252-2264, and He, F., et al, "고농도 단일클론항체 용액의 점도에 대한 당분자의 영향(Effect of sugar molecules on the viscosity of high concentration monoclonal antibody solutions)" Pharm Res. 28 (2011) 1552-1560를 참조하고; 이들 전체 내용은 본 명세서에 참조로 포함되며, 독자는 이를 구체적으로 참조해야 한다.
일 실시예에서, 본 발명의 항체는 제약 제제일 경우, 단위 투여 형태로 존재한다. 적절한 치료 유효 용량은 당업자에 의해 쉽게 결정될 것이다. 적합한 용량은 환자의 체중에 따라 계산될 수 있으며, 예를 들어 적합한 용량은 약 0.1 내지 약 200mg/kg, 예를 들어 약 1 내지 약 20mg/kg, 예를 들어 약 10 내지 약 20mg/kg, 또는 예를 들어 약 1 내지 약 15 mg/kg, 예를 들어 약 5 내지 약 15 mg/kg 범위일 수 있다. 인간의 다발성 골수종, SLE 또는 IPT와 같은 병태를 효과적으로 치료하기 위해, 적합한 용량은 본 발명의 항원 결합 단백질의 약 0.1 내지 약 2000 mg, 예를 들어 약 0.1 내지 약 500 mg, 예를 들어 약 500 mg, 예를 들어 약 0.1 mg 내지 약 150 mg, 또는 약 0.1 내지 약 80 mg, 또는 약 0.1 내지 약 60 mg, 또는 약 0.1 내지 약 40 mg, 또는 예를 들어 약 1 내지 약 100 mg, 또는 약 1 내지 약 50 mg 범위 이내일 수 있고, 이는 비경구, 예를 들어 피하, 정맥내 또는 근육내로 투여될 수 있다. 이러한 용량은 필요한 경우, 의사가 적절하게 선택한 적절한 시간 간격으로 반복될 수 있다.
본 명세서에 기술된 항원 결합 단백질은 저장을 위해 동결건조될 수 있고, 사용 전에 적합한 담체에 재구성될 수 있다. 이러한 기술은 통상적인 면역글로불린에 효과적인 것으로 나타났으며, 당업계에 공지된 과산화 및 재구성 기술이 사용될 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면에서, 약제에 사용하기 위해 본 명세서에 기술된 항원 결합 단백질이 제공된다.
본 발명의 일 측면에서, 류마티스 관절염, 제1형 진성 당뇨병, 다발성 경화증 또는 건선의 치료에 사용하기 위해 본 명세서에 기술된 바와 같은 본 발명에 따른 항원 결합 단백질이 제공되며, 여기서 상기 방법은 상기 환자에게 치료학적 유효량의 본 명세서에 기술된 항원 결합 단백질을 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명의 일 실시예에서, BCMA에 특이적으로 결합하는 항원 결합 단백질을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 인간에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 어떤 경우에는, 항원 결합 단백질이 면역접합체의 일부이다.
본 발명의 또 다른 측면에서, B 세포 매개 또는 혈장 세포 매개 질환 또는 항체 매개 질환 또는 장애의 치료에 사용하기 위한 본원에 기재된 본 발명에 따른 항체가 제공되며, 여기서 상기 질환 또는 장애는 다발성 골수종(MM), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 비분비성 다발성 골수종, 무증상 다발성 골수종, 의미 미확인 단일클론 감마병증(MGUS), 고립성 형질세포종(뼈, 골수외), 림프형질구성 림프종(LPL), 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 형질세포 백혈병, 원발성 아밀로이드증(AL), 중쇄 질환, 전신홍반루푸스(SLE), POEMS 증후군/골경화성 골수종, 제1형 및 제2형 한랭글로불린혈증, 경쇄 침착 질환, 굿패스쳐 증후군, 특발성 혈소판 감소성 자반증(ITP), 급성 사구체신염, 천포창 및 천포창양 장애, 후천성 표피박리증; 또는 BCMA 발현이 있는 비-호지킨 림프종 B-세포 백혈병 또는 호지킨 림프종(HL), 또는 환자가 재조합 단백질 대체 요법에 대한 중화 항체를 생성하는 모든 질병으로부터 선택되고, 여기서 상기 방법은 치료 유효량의 본 명세서에 기술된 항원 결합 단백질을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
B 세포 장애는 B 세포 발달/면역글로불린 생산 결함(면역 결핍)과 과도한/통제되지 않는 증식(림프종, 백혈병)으로 나눌 수 있다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, B 세포 장애는 두 가지 유형의 질병 모두를 의미하며, 항원 결합 단백질을 사용하여 B 세포 장애를 치료하는 방법이 제공된다.
특정 측면에서, 질환 또는 장애는 다발성 골수종(MM), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 고립성 형질세포종(뼈, 골수외), 발덴스트롬 마크로글로불린혈증으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명의 일 측면에서, 질환은 다발성 골수종, 무증상 다발성 골수종(SMM) 또는 고립성 형질세포종(뼈, 골수외)이다.
본 발명의 일 측면에서, 질환은 다발성 골수종이다.
본 발명의 일 측면에서, 질환은 전신홍반루푸스(SLE)이다.
본 발명의 일 측면에서, 질환은 특발성 혈소판 감소성 자반증(ITP)이다.
본 명세서에 기술된 바와 같은 질환 및 장애를 치료하기 위한 약제의 제조에 있어서, 본 명세서에 기술된 항원 결합 단백질의 용도가 또한 제공된다.
예를 들어, 본 발명의 일 측면에서는, BCMA와 리간드(BAFF 및 APRIL)사이의 상호작용의 조절(예를 들어, 억제 또는 차단)에 반응하는 질환 및 장애의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 본 명세서에 기술된 항원 결합 단백질의 용도가 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에서, 류마티스 관절염, 제1형 당뇨병, 다발성 경화증 또는 다발성 경화증 또는 건선으로부터 선택되는 항체 매개 또는 형질세포 매개 질환 또는 장애의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 본 명세서에 기술된 항원 결합 단백질의 용도가 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에서, 항체 매개 또는 형질세포 매개 질환 또는 장애의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 본원에 기술된 항체의 용도가 제공되며, 여기서 상기 질환 또는 장애는 다발성 골수종(MM), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 의미불명 단클론성 감마병증(MGUS), 무증상 다발성 골수종(SMM), 고립성 형질세포종(뼈, 골수외), 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 원발성 아밀로이드증(AL), 중쇄질환, 전신홍반루푸스(SLE), POEMS 증후군/골경화성 골수종, 제1형 및 제2형 한랭글로불린혈증, 경쇄 침착 질환, 굿패스처스 증후군, 특발성 혈소판감소성 자반증(ITP), 급성 사구체신염, 천포창 및 천포창양 장애 및 후천성 표피박리증, 또는 BCMA 발현이 있는 비-호지킨 림프종 및 백혈병, 또는 환자가 재조합 단백질 대체 요법에 대한 중화 항체를 생성하는 모든 질병으로부터 선택되고, 여기서 상기 방법은 치료 유효량의 본 명세서에 기술된 항원 결합 단백질을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
일 측면에서, 본 발명은 류마티스 관절염, 제1형 당뇨병, 다발성 경화증 또는 건선 또는 항체 매개 또는 형질세포 매개 질환 또는 장애의 치료 또는 예방을 위한 본 발명의 항체 또는 이의 기능적 단편 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물이 제공되며, 상기 질환 또는 장애는 다발성 골수종(MM), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 의미불명 단클론성 감마병증(MGUS), 무증상 다발성 골수종(SMM), 고립성 형질세포종(뼈, 골수외), 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 원발성 아밀로이드증(AL), 중쇄질환, 전신홍반루푸스(SLE), POEMS 증후군/골경화성 골수종, 제1형 및 제2형 한랭글로불린혈증, 경쇄 침착 질환, 굿패스처스 증후군, 특발성 혈소판감소성 자반증(ITP), 급성 사구체신염, 천포창 및 천포창양 장애 및 후천성 표피박리증, 또는 BCMA 발현이 있는 비-호지킨 림프종 및 백혈병, 또는 환자가 재조합 단백질 대체 요법에 대한 중화 항체를 생성하는 모든 질병으로부터 선택되고, 여기서 상기 방법은 치료 유효량의 본 명세서에 기술된 항원 결합 단백질을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 또 다른 실시예에서는, 류마티스 관절염, 제1형 당뇨병, 다발성 경화증 또는 건선, 또는 항체 매개 또는 혈질세포 매개 장애 또는 질환을 앓고 있는 인간 환자를 치료하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 기재된 바와 같은 본 발명에 따른 항원 결합 단백질의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하고, 예를 들어, 다발성 골수종(MM), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 의미 불명 단일클론 감마병증(MGUS), 무증상 다발성 골수종(SMM), 고립성 형질세포종(뼈, 골수외), 발덴스트롬 거대 글로불린혈증, 원발성 아밀로이드증(AL), 중쇄 질환, 전신 홍반 루푸스(SLE), POEMS 증후군/골경화성 골수종, 제1형 및 제2형 한랭글로불린혈증, 경쇄 침착 질환, 굿패스처 증후군, 특발성 혈소판 감소성 자반증(ITP), 급성 사구체신염, 천포창 및 천포창양 장애, 후천성 표피박리증, BCMA 발현이 있는 비-호지킨 림프종 및 백혈병, 또는 환자가 재조합 단백질 대체 요법에 대한 중화 항체를 생성하는 모든 질병으로부터 선택된 항체 매개 또는 형질세포 매개 질환 또는 장애를 앓고 있는 인간 환자를 치료하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 본 발명에 따른 항원 결합 단백질을 약학적으로 허용되는 담체와 함께 포함하는 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
추가 실시예에서, 다발성 골수종(MM)을 앓고 있는 인간 환자를 치료하는 방법이 제공된다.
본 명세서에 기술된 BCMA 항체는 입양 세포 전달(ACT), 이중특이적 T 세포 인게이져(BiTE) 및 나노입자와 같이, BCMA를 표적화하는 것이 바람직한 모든 치료에 유용하다. 일 실시예에서, 본 개시내용은 T 세포 활성화 모이어티에 연결된 본 명세서에 기재된 BCMA 단일클론 항체의 항원 결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 제공한다. "키메라 항원 수용체(CAR)"는 T 세포 신호전달 또는 T 세포 활성화 모이어티에 연결된 항체의 항원 결합 도메인(예를 들어, 단일 사슬 가변 단편(scFv))을 함유하는 인공적으로 구축된 하이브리드 단백질 또는 폴리펩티드이다. CAR 구조는 지난 20년 동안 단일클론 항체(mAb)에서 유래된 단일 사슬 가변 단편(scFv)과 TCR 사슬의 신호 전달 모티프를 가장 일반적으로 포함하도록 진화해 왔다(이는 "1세대" CAR이라고 지칭됨)(예를 들어, Okur, F. V., Brenner, M. K., Methods Mol. Biol., 651: 319-45 (2010); and Lee et al., Clin. Cancer. Res., 18(10): 2780-2790 (2012) 참조). 보다 최근에는, 예를 들어 CD28, 4-1BB(CD137) 및/또는 CD134(OX-40)로부터 1개("2세대") 또는 2개("3세대") 공동자극 활성화 모티프를 통합하는 2세대 및 3세대 CAR이 개발되었고, 이는 생체 내에서 증식, 세포독성 및 지속성을 향상시킨다(예를 들어, Finney et al., J. Immunol., 172: 104-13 (2004);Altvater et al, Clin Exp Immunol. 144(3): 447-57 (2006); Chu et al, J Transl Med. 20(1): 240 (2022); Maher et al., Nat Biotechnol., 20:70-5 (2002); Milone et al., Mol Ther., 17: 1453-64 (2009); SafarzadehKozani et al, Biomark Res. 10(1): 24 (2022); Xu et al, Blood Sci. 1(2):156-160 (2019) and Qian et al.,Front Immunol. 13: 841425 (2022) 참조).
CAR의 항원 결합 도메인은 본 명세서에 기재된 바와 같이, 전체 단일클론 항체 또는 단일클론 항체 단편을 포함할 수 있다. 일 실시예에서, CAR의 항원 결합 도메인은 항-BCMA 단일클론 항체의 단일 사슬 Fv(scFv) 단편을 포함할 수 있다. 키메라 항원 수용체 및 CAR을 생성하기 위한 방법은 예를 들어, Ohmine K, and Uchibori R. Int J Hematol. 115(6): 799-810 (2022); Ding L, et al, Stem Cell Investig. 8: 1 (2021); Riviere, I. and M. Sadelain, Mol. Ther., 25(5): 1117-1124 (2017); Chan L. Y. et al, Biomedicines. 10(4): 804 (2022); Davila, M. L. and M. Sadelain, Int. J. Hematol., 104(1): 6-17 (2016); and Mohty et al, Leukemia. 33(12): 2767-2778 (2019)에 추가적으로 기재되어 있다.
본 명세서에 사용된 용어 "항체-약물 접합체(ADC)"는 화학적 링커를 통해 세포독성제(일반적으로, 높은 전신 독성을 갖는 소분자 약물)에 부착된 단일클론 항체(mAb)를 포함하는 화합물을 의미한다. ADC는 하기 식으로 표현된다:
여기서, D, D1 및 D2는 소분자 세포독소 또는 일반적으로 페이로드라고 불리는 기능성 소분자를 의미하며; L, L1 및 L2는 링커이고; mAb는 단일클론 항체이다. 일부 실시예에서, ADC는 링커를 함유하도록 화학적으로 변형된 소분자 세포독소를 포함할 수 있거나, 링커는 미량(traceless) 링커로 불리는 페이로드의 일부이다. 링커는 일반적으로 세포독소를 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 접합시키는 데 사용된다. 세포 표면의 표적 항원에 결합하면, ADC는 내재화되어 리소좀으로 이동하며(trafficked), 여기서 절단 가능한 링커의 단백질 분해(예를 들어, 리소좀에서 발견되는 카텝신 B에 의함), 또는 절단 불가능한 링커를 통해 세포독소에 부착된 경우 항체의 단백질 가수분해에 의해, 세포독소가 방출된다. 그 다음, 세포독소는 리소좀으로부터 세포질이나 핵으로 이동하여, 작용 메커니즘에 따라 표적에 결합할 수 있다.
본 명세서에 기재된 항체-약물 접합체는 전체 항체 또는 항체 단편을 포함할 수 있다. 전체 항체는 일반적으로 4개의 폴리펩티드, 즉 중쇄(H) 폴리펩티드의 동일한 복사본 2개와 경쇄(L) 폴리펩티드의 동일한 복사본 2개로 구성된다. 각각의 중쇄는 1개의 N-말단 가변(VH) 영역과 3개의 C-말단 불변(CH1, CH2 및 CH3) 영역을 포함하고, 각각의 경쇄는 1개의 N-말단 가변(VL) 영역과 1개의 C-말단 불변(CL) 영역을 포함한다. 각 쌍의 경쇄와 중쇄의 가변 영역은 항체의 항원 결합 부위를 형성한다. VH 및 VL 영역은 동일한 일반 구조를 가지며, 각 영역은 4개의 프레임워크 영역으로 구성되며, 그 서열은 상대적으로 보존된다. 프레임워크 영역은 3개의 상보성 결정 영역(CDR)에 의해 연결된다. CDR1, CDR2 및 CDR3으로 알려진 3개의 CDR은 항원 결합을 담당하는 항체의 "초가변 영역"을 형성한다.
ADC는 항체의 항원 결합 단편을 포함할 수 있다. 용어 "항체 단편", "항원-결합 단편", "항체의 기능적 단편" 및 "항원-결합 부분"은 본 명세서에서 상호교환적으로 사용되며, 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 항체의 하나 이상의 단편 또는 부분을 의미한다. 항체 단편은 예를 들어, 하나 이상의 CDR, 가변 영역(또는 이의 일부), 불변 영역(또는 이의 일부) 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 항체 단편의 예에는 (i) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 구성된 1가 단편인 Fab 단편; (ii) 힌지 영역에서 이황화 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (iii) 항체의 단일 암의 VL 및 VH 도메인으로 구성된 Fv 단편; (iv) 두 도메인이 단일 폴리펩티드 사슬로 합성될 수 있게 하는 합성 링커에 의해 연결된 Fv 단편의 두 도메인(즉, VL 및 VH)으로 구성된 1가 분자인 단일 사슬 Fv(scFv) (예를 들어, Kabat EA, Wu TT., J Immunol. 1991, 147(5): 1709-19 참조) 및 (v) 폴리펩티드 사슬의 이량체인 디아바디(각각의 폴리펩티드 사슬은 너무 짧아서 동일한 폴리펩티드 사슬 상의 VH와 VL 사이의 쌍(pairing)을 형성할 수 없도록 하는 펩티드 링커에 의해 VL에 연결된 VH를 포함하며, 이로써 서로 다른 VH-VL 폴리펩티드 사슬 상의 상보적 도메인 사이의 쌍 결합을 유도하여, 2개의 기능성 항원 결합 부위를 갖는 이량체 분자를 생성함)(예를 들어, Hudson PJ, Kortt AA, J Immunol Methods. 1999, 231(1-2): 177-89; Holliger P, Winter G.Cancer Immunol Immunother. 1997, 45(3-4):128-30 참조)가 포함되지만, 이들에 제한되지 않는다.
일 실시예에서, 본 명세서에 기술된 항체-약물 접합체는 B 세포 성숙 항원(BCMA, CD269로도 알려짐)에 대해 지향되는, 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 (a) 서열번호 1의 상보성 결정 영역 1(HCDR1) 아미노산 서열, 서열번호 2의 HCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 3의 HCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 (b) 서열번호 4의 상보성 결정 영역 1(LCDR1) 아미노산 서열, 서열번호 5의 LCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 6의 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변영역을 포함한다. 또 다른 실시예에서, 단일클론 항체는 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및/또는 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
BCMA에 대한 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 BCMA 또는 이의 에피토프에 대한 임의의 적합한 결합 친화도를 포함할 수 있다. "친화도"라는 용어는 두 물질의 가역적 결합에 대한 평형 상수를 의미하며, 해리 상수(KD)로 표현된다. 관심 항원 또는 에피토프에 대한 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 친화도는 당업계에 공지된 임의의 방법을 사용하여 측정될 수 있다. 이러한 방법은 예를 들어, 형광 활성화 세포 분류(FACS), 표면 플라스몬 공명(예를 들어, BiacoreTM, ProteOnTM), 생물층 간섭계(BLI, 예를 들어, Octet), 동역학 배제 분석(예를 들어, KinExATM), 분리 가능한 비드(예를 들어, 자기 비드), 항원 패닝 및/또는 ELISA(예를 들어, J R Crowther, Methods Mol Biol. 2000,149:III-IV, 1-413 참조)를 포함한다. 특정 항체의 결합 친화도는 결합 친화도를 분석하는 데 사용되는 방법에 따라 달라질 것이라는 것이 해당 분야에 알려져 있다.
에피토프에 대한 항체의 친화도와 같은 리간드에 대한 결합제의 친화도는 예를 들어, 약 1 피코몰(pM) 내지 약 1 마이크로몰(1 μM)(예를 들어, 약 1 피코몰(pM) 내지 약 1 나노몰(nM), 또는 약 1 nM 내지 약 1 마이크로몰(μM))일 수 있다. 일 실시예에서, 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 100 나노몰 이하(예를 들어, 100 nM, 약 90 nM, 약 80 nM, 약 70 nM, 약 60 nM, 약 60 nM, 약 50nM, 약 40nM, 약 30nM, 약 20nM, 또는 약 10nM, 또는 상기 값 중 임의의 2개에 의해 정의된 범위)의 Kd로 BCMA에 결합할 수 있다.
다른 실시예에서, 단일클론 항체는 10나노몰 이하(예를 들어, 약 9nM, 약 8nM, 약 7nM, 약 6nM, 약 5nM, 약 4nM, 약 3nM, 약 2nM, 약 1nM, 약 0.9nM, 약 0.8nM, 약 0.7nM, 약 0.6nM, 약 0.5nM, 약 0.4nM, 약 0.3nM, 약 0.2nM, 약 0.1nM, 약 0.05nM, 약 0.02 nM, 약 0.01 nM, 약 0.001 nM, 또는 상기 값 중 임의의 2개에 의해 정의된 범위)의 Kd로 BCMA에 결합할 수 있다.
다른 실시예에서, 단일클론 항체는 200pM 이하(예를 들어, 약 190pM, 약 175pM, 약 150pM, 약 125pM, 약 110pM, 약 100pM, 약 90pM, 약 80pM, 약 70pM, 약 60pM, 약 50pM, 약 40pM, 약 30pM, 약 25pM, 약 20pM, 약 15pM, 약 10pM, 약 5pM, 약 1pM, 또는 전술한 값 중 임의의 2개에 의해 정의된 범위)의 Kd로 BCMA에 결합할 수 있다.
일 실시예에서, 표면 플라스몬 공명(SPR)에 의해 측정된 바와 같이, 단량체성 BCMA에 대한 BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 친화도는 약 90 nM, 약 80 nM, 약 70 nM, 약 60 nM, 약 50 nM, 약 40nM, 약 30nM, 또는 전술한 값 중 임의의 2개에 의해 정의된 범위, 예를 들어 약 50nM 내지 약 70nM, 약 55nM 내지 약 65nM, 또는 약 58nM 내지 약 62nM이다.
일 실시예에서, FACS에 의해 측정된 바와 같이, 막-결합 BCMA에 대한 BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 친화도는 10 나노몰 이하(예를 들어, 약 9 nM, 약 8 nM, 약 7 nM, 약 6nM, 약 5nM, 약 4nM, 약 3nM, 약 2nM, 약 1nM, 약 0.9nM, 약 0.8nM, 약 0.7nM, 약 0.6nM, 약 0.5nM, 약 0.4nM, 약 0.3 nM, 약 0.2 nM, 약 0.1 nM, 약 0.05 nM, 약 0.02 nM, 약 0.01 nM, 약 0.001 nM, 또는 전술한 값 중 임의의 2개에 의해 정의된 범위)이다.
단일클론 항체의 항원 결합 부분 또는 단편은 그 부분이 BCMA에 결합하는 한, 어떠한 크기도 될 수 있다. 이와 관련하여, BCMA에 대한 단일클론 항체(본 명세서에서는 "항-BCMA 단일클론 항체"라고도 함)의 항원 결합 부분 또는 단편은 바람직하게는 약 5 내지 25개의 아미노산(예를 들어, 약 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 35 또는 전술한 값 중 임의의 2개에 의해 정의된 범위)을 포함한다.
일 실시예에서, 항체-약물 접합체는 항-BCMA 단일클론 항체의 가변 영역을 포함한다. 이러한 점에서, ADC는 항-BCMA 단일클론 항체의 경쇄 가변 영역, 중쇄 가변 영역, 또는 경쇄 가변 영역과 중쇄 가변 영역 둘 다를 포함할 수 있다. 바람직하게는, ADC는 항-BCMA 단일클론 항체의 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일 실시예에서, 본 명세서에 기술된 ADC의 단일클론 항체는 (a) TSFLIHW(서열번호 1)의 상보성 결정 영역 1(HCDR1) 아미노산 서열, FIIPGNGGTKYNQKFQ(서열번호 2)의 HCDR2 아미노산 서열, 및 YDGSFEGYFDV(서열번호 3)의 HCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 (b) SSQSLVHSDGNTYLH(서열번호 4)의 상보성 결정 영역 1(LCDR1) 아미노산 서열, KVSNRDS(서열번호 5)의 LCDR2 아미노산 서열, 및 SQSTHWPWT(서열번호 6)의 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인를 포함한다. 다른 실시예에서, 본 명세서에 기술된 ADC의 단일클론 항체는 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및/또는 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함할 수 있다.
BCMA 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 부위 특이적 또는 비-부위 특이적 접합 방법을 비롯하여, 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법을 사용하여 세포독소에 접합될 수 있다. 항체에 대한 기존의 접합 전략은 일반적으로 리신 또는 시스테인을 통해, 페이로드를 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 무작위로(즉, 비-특이적으로) 접합하는 데 의존하다. 따라서, 일부 측면에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 예를 들어, 항체 또는 항체 단편의 부분적 환원에 이어, 링커 모이어티가 부착되거나 부착되지 않은 원하는 제제와의 반응에 의해, 세포독성제에 무작위로 접합된다. 예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 디티오트레이톨(DTT), TCEP, 티올레테놀 또는 유사한 환원제를 사용하여 환원될 수 있다. 그 다음, 링커 모이어티가 부착되거나 부착되지 않은 세포독성제가 디메틸 설폭사이드(DMSO) 또는 DMA의 존재 하에 환원된 항체 또는 항체 단편에 몰 과량으로 첨가될 수 있다. 접합 후, 과량의 유리 시스테인을 첨가하여, 미반응 물질을 켄칭할 수 있다. 아미노-반응성 또는 페놀-반응성 또는 기타 반응성 기(예를 들어, NHS, PFP)를 갖는 링커 모이어티가 있거나 없는 세포독성제가 DMSO 또는 DMA가 존재 하에 항체 또는 항체 단편에 몰 과량으로 직접 첨가되어, 접합체를 형성할 수 있다. 이어서, 반응 혼합물은 크로마토그래피를 통해 정제되거나, 인산염 완충 식염수(PBS)로 완충액 교환될 수 있다.
"세포독소" 및 "세포독성제"라는 용어는 세포 기능을 억제 또는 방지하고, 및/또는 세포 파괴(세포 사멸)를 유발하고, 및/또는 항-증식 효과를 발휘하는 모든 분자를 의미한다. ADC의 세포독소 또는 세포독성제는 또한 당업계에서 ADC의 "페이로드"로 지칭된다. 다양한 부류의 세포독성제들이 ADC 분자에서 잠재적인 유용성을 갖는 것으로 당업계에 알려져 있으며, 이들은 본 명세서에 기술된 ADC에 사용될 수 있다. 이러한 종류의 세포독성제는 예를 들어, 항-미세소관(예를 들어, 튜불리신, 아우리스타틴 및 메이탄시노이드), DNA 마이너 그루브 결합제(예를 들어, 피롤로벤조디아제핀(PBD) 또는 인돌리노벤조디아제핀(IGN)), RNA 폴리머라제 II 억제제(예를 들어, 아마톡신), DNA 토포이소머라제 I 억제제(예를 들어, 캄프토테신) 및 DNA 알킬화제(예를 들어, 듀오카르마이신, CC-1065, 피롤로벤조디아제핀 또는 인돌리노벤조디아제핀슈도이량체)를 포함한다. 본 명세서에 기술된 ADC에 사용될 수 있는 특정 세포독성제의 예는 튜불리신, 아마니틴, 아우리스타틴, 칼리케아미신, 캄프토테신, 다우노마이신, 독소루비신, 듀오카르마이신, 돌라스타틴, 에네디인, 렉시트로신, 탁산, 푸로마이신, 메이탄시노이드, 빈카 알칼로이드 및 피롤로벤조디아제핀(PBD)을 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다. 보다 구체적으로, 세포독성제는 예를 들어, 튜불리신, 아우리스타틴(AFP, MMAF, MMAE, AEB, AEVB, E), 파클리탁셀, 도세탁셀, CC-1065(두카르미신, DC1, DC4, CBI-다이머), 캄프토테신(SN-38, 토포테칸), 모르폴리노-독소루비신, 리족신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 돌라스타틴-10, 에키노마이신, 콤브레타스타틴, 칼리케아미신, 메이탄신(DM1, DM4, DM21), 빈블라스틴, 메토트렉세이트, 네트롭신, 또는 이들의 유도체 또는 유사체일 수 있다. ADC에 사용하기에 적합한 세포독소는 또한 예를 들어, 국제 특허 출원 번호 PCT/CN2021/128453에 기재되어 있다.
일반적으로, 화학요법제 또는 기능성 화합물도 본 발명의 BCMA 항체에 접합될 수 있다. 화학요법제 또는 기능성 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:
(1) 하기로 구성되는 군으로부터 선택되는 화학요법제:
a) 알킬화제: 질소 머스타드: 클로람부실, 클로르나파진, 사이클로포스파마이드, 다카바진, 에스트라무스틴, 이포스파마이드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥사이드 하이드로클로라이드, 만노무스틴, 미토브로니톨, 멜팔란, 미톨락톨, 피포브로만, 노벰비친, 페네스테린, 프레드니무스틴, 티오테파, 트로포스파마이드, 우라실 머스타드; CC-1065 및 아도젤레신, 카르젤레신, 비젤레신 또는 이들의 합성 유사체; 듀오카르마이신 및 이의 합성 유사체, KW-2189, CBI-TMI 또는 CBI 이량체; 벤조디아제핀 이량체 또는 피롤로벤조디아제핀(PBD) 이량체, 토메이마이신(tomaymycin) 이량체, 인돌리노벤조디아제핀 이량체, 이미다조벤조티아디아제핀 이량체, 또는 옥사졸리디노벤조디아제핀 이량체; 니트로소우레아: 카르무스틴, 로무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 니무스틴, 라니무스틴을 포함함; 알킬술포네이트: 부설판, 트레오설판, 임프로설판 및 피포설판을 포함함; 트리아젠 또는 다카르바진; 백금 함유 화합물: 카보플라틴, 시스플라틴 및 옥살리플라틴을 포함함; 아지리딘, 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파 또는 우레도파; 알트레타민, 트리에틸렌멜라민을 포함하는 에틸렌이민 및 메틸아멜라민으로부터 선택됨;
b) 식물 알칼로이드: 빈카 알칼로이드: 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신, 비노렐빈, 및 나벨빈을 포함함; 탁소이드(taxoid): 파클리탁셀, 도세탁솔 및 이들의 유사체, DM1, DM2, DM3, DM4, DM5, DM6, DM7, D21, 메이탄신, 안사미토신 및 이들의 유사체를 포함하는 메이탄시노이드, 크립토피신(크립토피신 1 및 크립토피신 8로 구성되는 군 포함)을 포함함; 에포틸론, 엘류테로빈, 디스코더몰리드, 브리오스타틴, 돌로스타틴, 아우리스타틴, 튜불리신, 세팔로스타틴; 판크라티스타틴; 에르불린, 사르코딕틴; 스폰지스타틴으로 이루어진 군으로부터 선택됨;
c) DNA 토포이소머라제 억제제: 에피포도필린스(epipodophyllins): 9-아미노캄프토테신, 캄프토테신, 크리스나톨, 다우노마이신, 에토포사이드, 에토포사이드 포스페이트, 이리노테칸, 미톡산트론, 노반트론, 레티노산(또는 레티놀), 테니포사이드, 토포테칸, 9-니트로캄프토테신 또는 RFS 2000을 포함함; 및 미토마이신 및 이들의 유사체로 이루어진 군으로부터 선택됨;
d) 항대사물질: {[항-엽산: (DHFR 억제제: 메토트렉세이트, 트리메트렉세이트, 데노프테린, 프테로프테린, 아미노프테린(4-아미노프테르 산) 또는 엽산 유사체를 포함함); IMP 탈수소효소 억제제: (미코페놀산, 티아조푸린, 리바비린, EICAR를 포함함); 리보뉴클레오티드 환원효소 억제제(하이드록시우레아, 데페록사민을 포함함)]; [피리미딘 유사체: 우라실 유사체(안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카페시타빈(Xeloda), 카모퍼, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 5-플루오로우라실, 플록스우리딘, 라티트렉세드를 포함함); 시토신 유사체(시타라빈, 시토신 아라비노사이드, 플루다라빈을 포함함); 퓨린 유사체(아자티오프린, 플루다라빈, 메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌을 포함함)]; 엽산 보충제, 프롤린산}; 및 니코틴아미드 포스포리보실트랜스퍼라제(NAMPT) 억제제로 이루어진 군으로부터 선택됨;
e) 호르몬 요법: {수용체 길항제: [항-에스트로겐:(메게스트롤, 랄록시펜, 타목시펜); LHRH 작용제:(고스크르클린(goscrclin), 류프롤라이드 아세테이트); 항-안드로겐:(비칼루타미드, 플루타미드, 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 고세렐린, 류프롤리드, 메피티오스탄, 닐루타미드, 테스토락톤, 트리로스탄 및 기타 안드로겐 억제제)]; 레티노이드/델토이드: [비타민 D3 유사체:(CB 1093, EB 1089, KH 1060, 콜레칼시페롤, 에르고칼시페롤); 광역학 요법:(베르테포르핀, 프탈로시아닌, 광민감제 Pc4, 데메톡시하이포크렐린 A); 사이토카인:(인터페론-알파, 인터페론-감마, 종양 괴사 인자(TNF), TNF 도메인을 함유하는 인간 항체 유사 단백질)]}으로부터 선택됨;
f) 키나제 억제제: BIBW 2992(항-EGFR/Erb2), 이마티닙, 게피티닙, 페갑타닙, 소라페닙, 다사티닙, 수니티닙, 에를로티닙, 닐로티닙, 라파티닙, 악시티닙, 파조파닙, 반데타닙, E7080(항-VEGFR2), 뮤브리티닙, 포나티닙(AP24534), 바페티닙(INNO-406), 보수티닙(SKI-606), 카보잔티닙, 비스모데깁, 이니파립, 룩솔리티닙, CYT387, 악시티닙, 티보자닙, 소라페닙, 베바시주맙, 세툭시맙, 트라스투주맙, 라니비주맙, 파니투무맙, 이스피네십으로 이루어진 군으로부터 선택됨;
g) 폴리(ADP-리보스) 중합효소(PARP) 억제제: 올라파립, 니라파립, 이니파립, 탈라조파립, 벨리파립, CEP 9722(세팔론사(Cephalon)), E7016(에이자이사(Eisai), BGB-290(베이젠사(BeiGene)) 또는 3-아미노벤자미드로 이루어진 군으로부터 선택됨.
h) 항생제: 에네다인 항생제(칼리케아미신, 칼리케아미신 γ1, δ1, α1 또는 β1; 다이네미신(dynemicin) A 및 데옥시다이네미신을 포함하는 다이네미신; 에스페라미신, 케다르시딘, C-1027, 마두로펩틴, 또는 네오카르지노스타틴 크로모포어 및 관련 크로모프로테인 에네다인 항생제 크로모포어의 군으로부터 선택됨), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신(authramycin), 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카미노마이신, 카르지노필린; 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신, 모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신, 에피루비신, 에리불린, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 니토마이신, 마이코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 폿피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘(tubercidin), 우베니멕스(ubenimex), 지노스타틴, 조루비신으로 이루어진 군으로부터 선택됨;
i) 폴리케타이드(아세토게닌), 불라타신 및 불라타시논; 젬시타빈, 에폭소마이신(epoxomicin) 및 카르필조밉, 보르테조밉, 탈리도마이드, 레날리도마이드, 포말리도마이드, 토세도스타트, 자이브레스타트, PLX4032, STA-9090, 스티무박스(Stimuvax), 알로벡틴-7, 제게바(Xegeva), 프로벤지(Provenge), 예르보이(Yervoy), 이소프레닐화 억제제 및 로바스타틴, 도파민성 신경독소 및 1-메틸-4-페닐피리디늄 이온, 세포 사이클 억제제(스타우로스포린으로부터 선택됨), 악티노마이신(악티노마이신 D, 닥티노마이신 포함), 아마니틴, 블레오마이신(블레오마이신 A2, 블레오마이신 B2, 페플로마이신 포함), 안트라사이클린(다우노루비신, 독소루비신(아드리아마이신), 이다루비신, 에피루비신, 피라루비신, 조루비신, 엠톡산트론, MDR 억제제 또는 베라파밀, Ca2+ ATPase 억제제 또는 탑시가르긴, 히스톤 데아세틸라제 억제제(보리노스타트, 로미뎁신, 파노비노스타트, 발프로산, 모세티노스타트(MGCD0103), 벨리노스타트, PCI-24781, 엔티노스타트, SB939, 레스미노스타트, 지비노스타트, AR-42, CUDC-101, 설포라판, 트리코스타틴 A 포함); 탑시가르긴, 셀레콕시브, 글리타존, 에피갈로카테킨 갈레이트, 디설피람, 살리노스포라마이드 A; 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄으로 이루어진 군으로부터 선택되는 항-아드레날; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 암사크린; 아라비노사이드, 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 에플로르니틴(DFMO), 엘포미틴; 엘립티늄 아세테이트, 에토글루시드; 갈륨 나이트레이트; 가시토신, 하이드록시우레아; 이반드로네이트, 렌티난; 로니다민; 미토구아존; 미톡산트론; 모피다몰; 니트라크린; 펜토스타틴; 페나멧; 피라루비신; 포도필린산; 2-에틸히드라지드; 프로카바진; 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2''-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센(T-2 독소, 베루카린 A, 로리딘 A 및 안구아딘으로 이루어진 군 포함); 우레탄, siRNA, 안티센스 약물;
(2) 항-자가면역 질환제: 사이클로스포린, 사이클로스포린 A, 아미노카프로산, 아자티오프린, 브로모크립틴, 클로람부실, 클로로퀸, 사이클로포스파미드, 코르티코스테로이드(암시노나이드, 베타메타손, 부데소나이드, 히드로코르티손, 플루니솔리드, 플루티카손 프로피오네이트, 플루오코르톨론 다나졸, 덱사메타손, 트리암시놀론 아세토니드, 베클로메타손 디프로피오네이트로 이루어진 군 포함), DHEA, 에나네르셉(enanercept), 히드록시클로로퀸, 인플릭시맙, 멜록시캄, 메토트렉세이트, 모페틸, 마이코페닐레이트, 프레드니손, 시롤리무스, 타크로리무스;
(3) 하기 a) 내지 u)를 포함하는 항-감염성 질환제:
a) 아미노글리코시드: 아미카신, 아스트로마이신, 겐타마이신(네틸마이신, 시소마이신, 이세파마이신), 하이그로마이신 B, 카나마이신(아미카신, 아르베카신, 베카나마이신, 디베카신, 토브라마이신), 네오마이신(프라마이세틴, 파로모마이신, 리보스타마이신), 네틸마이신, 스펙티노마이신, 스트렙토마이신, 토브라마이신, 베르다마이신;
b) 암페니콜: 아지담페니콜, 클로람페니콜, 플로르페니콜, 티암페니콜;
c) 안사마이신: 겔다나마이신, 헤르비마이신;
d) 카르바페넴: 비아페넴, 도리페넴, 에르타페넴, 이미페넴/실라스타틴, 메로페넴, 파니페넴;
e)세펨: 카르바세펨(로라카르베트(loracarbef)), 세파세트릴, 세파클로르, 세프라딘, 세파드록실, 세팔로늄, 세팔로리딘, 세팔로틴(cefalotin) 또는 세팔로씬(cefalothin), 세팔렉신, 세팔로글리신, 세파만돌, 세파피린, 세파트리진, 세파자플루르, 세파제돈, 세파졸린, 세프부페라존, 세프카펜, 세프달록심, 세페핌, 세프미녹스, 세폭시틴, 세프프로질, 세프록사딘, 세프테졸, 세푸록심, 세픽심, 세프디니르, 세프디토렌, 세페핌, 세페타메트, 세프메녹심, 세포디짐, 세포니시드, 세포페라존, 세포라니드, 세포탁심, 세포티암, 세포조프란, 세팔렉신, 세프피미졸, 세프피라미드, 세프피롬, 세프포독심, 세프프로질, 세프퀴놈, 세프술로딘, 세프타지딤, 세프테람, 세프티부텐, 세프티올렌, 세프티족심, 세프토비프롤, 세프트리악손, 세푸록심, 세푸조남, 세파마이신(세폭시틴, 세포테탄, 세프메타졸), 옥사세펨(플로목세프, 라타목세프);
f) 글리코펩티드: 블레오마이신, 반코마이신(오리타반신, 텔라반신), 테이코플라닌(달바반신), 라모플라닌;
g) 글리실사이클린: 티게사이클린;
h) β-락타마제 억제제: 페남(설박탐, 타조박탐), 클라밤(클라불란산);
i) 린코사미드: 클린다마이신, 린코마이신;
j) 리포펩티드: 답토마이신, A54145, 칼슘-의존성 항생제(CDA);
k) 마크로리드: 아지트로마이신, 세트로마이신, 클라리트로마이신, 디리트로마이신, 에리트로마이신, 플루리트로마이신, 조사마이신, 케톨리드(텔리트로마이신, 세트로마이신), 미데카마이신, 미오카마이신, 올레안도마이신, 리파마이신(리팜피신, 리팜핀, 리파부틴, 리파펜틴), 로키타마이신, 록시트로마이신, 스펙티노마이신, 스피라마이신, 타크로리무스(FK506), 트롤리안도마이신, 텔리트로마이신;
l) 모노박탐: 아즈트레오남, 티게모남;
m) 옥사졸리디논: 리네졸리드;
n) 페니실린: 아목시실린, 암피실린, 피밤피실린, 헤타실린, 바캄피실린, 메타암피실린, 탈람피실린, 아지도실린, 아즐로실린, 벤질페니실린, 벤자틴 벤질페니실린, 벤자틴 페녹시메틸페니실린, 클로메토실린, 프로카인 벤질페니실린, 카르베니실린(카린다실린), 클록사실린, 디클록사실린, 에피실린, 플루클록사실린, 메실리남(피브메실리남), 메즐로실린, 메티실린, 나프실린, 옥사실린, 페나메실린, 페니실린, 페네티실린, 페녹시메틸페니실린, 피페라실린, 프로피실린, 설베니실린, 테모실린, 티카르실린;
o) 폴리펩티드: 바시트라신, 콜리스틴, 폴리믹신 B;
p) 퀴놀론: 알라트로플록사신, 발로플록사신, 시프로플록사신, 클리나플록사신, 다노플록사신, 디플록사신, 에녹사신, 엔로플록사신, 플록신, 가레녹사신, 가티플록사신, 제미플록사신, 그레파플록사신, 카노 트로바플록사신, 레보플록사신, 로메플록사신, 마르보플록사신, 목시플록사신, 나디플록사신, 노르플록사신, 오르비플록사신, 오플록사신, 페플록사신, 트로바플록사신, 그레파플록사신, 시타플록사신, 스파플록사신, 테마플록사신, 토수플록사신, 트로바플록사신;
q) 스트렙토그라민: 프리스티나마이신, 퀴누프리스틴/달포프리스틴;
r) 설폰아미드: 마페니드, 프론토실, 설파세타미드, 설파메티졸, 설파닐이미드, 설파살라진, 설피속사졸, 트리메토프림, 트리메토프림-설파메톡사졸(코-트리목사졸);
s) 스테로이드 항균제: 푸시딘산으로부터 선택됨;
t) 테트라사이클린: 독시사이클린, 클로르테트라사이클린, 클로모사이클린, 데메클로사이클린, 리메사이클린, 메클로사이클린, 메타사이클린, 미노사이클린, 옥시테트라사이클린, 페니메피사이클린, 롤리테트라사이클린, 테트라사이클린, 글리실사이클린(티게사이클린 포함);
u) 기타 항생제: 아노나신, 아르스페나민, 박토프레놀 억제제(바시트라신), DADAL/AR 억제제(사이클로세린), 딕티오스타틴, 디스코더몰리드, 엘류테로빈, 에포틸론, 에탐부톨, 에토포사이드, 파로페넴, 푸시딘산, 푸라졸리돈, 이소니아지드, 라우리말리드, 메트로니다졸, 뮤피로신, 미코락톤, NAM 합성 억제제(포스포마이신), 니트로푸란토인, 파클리탁셀, 플라텐시마이신, 피라진아미드, 퀴누프리스틴/달포프리스틴, 리팜피신(리팜핀), 타조박탐 티니다졸, 우바리신으로 이루어진 군으로부터 선택됨;
(4) 하기 a) 내지 h)를 포함하는 항-바이러스 약물:
a) 엔트리/융합 억제제: 아플라비록, 마라비록, 비크리비록, gp41(엔푸비르티드), PRO 140, CD4(이발리주맙);
b) 인테그라제 억제제: 랄테그라비르, 엘비테그라비르, 글로보이드난 A;
c) 성숙 억제제: 베비리맛(bevirimat), 비베콘(vivecon);
d) 뉴라미니다제 억제제: 오셀타미비르, 자나미비르, 페라미비르;
e) 뉴클레오사이드 및 뉴클레오타이드: 아바카비르, 아시클로비르, 아데포비르, 암독소비르, 아프리시타빈, 브리부딘, 시도포비르, 클레부딘, 덱셀부시타빈, 디다노신(ddI), 엘부시타빈, 엠트리시타빈(FTC), 엔테카비르, 팜시클로비르, 플루오로우라실(5-FU), 3'-플루오로-치환된 2',3'-디데옥시뉴클레오시드 유사체(3'-플루오로-2',3'-디데옥시티미딘(FLT) 및 3'-플루오로-2',3'-디데옥시구아노신(FLG) 포함), 포미비르센, 간시클로비르, 이독수리딘, 라미부딘(3TC), l-뉴클레오시드(β-1-티미딘 및 β-1-2'-데옥시시티딘으로 이루어진 군 포함), 펜시클로비르, 라시비르, 리바비린, 스탐피딘, 스타부딘(d4T), 타리바비린(비라미딘), 텔비부딘, 테노포비르, 트리플루리딘 발라시클로비르, 발간시클로비르, 잘시타빈(ddC), 지도부딘(AZT);
f) 비-뉴클레오시드: 아만타딘, 아테비리딘, 카프라비린, 디아릴피리미딘(에트라비린, 릴피비린), 델라비르딘, 도코사놀, 에미비린, 에파비렌즈, 포스카르넷(포스포노포름산), 이미퀴모드, 인터페론 알파, 로비리드, 로데노신, 메티사존, 네비라핀, NOV-205, 페그인터페론 알파, 포도필로톡신, 리팜피신, 리만타딘, 레시퀴모드(R-848), 트로만타딘;
g) 프로테아제 억제제: 암프레나비르, 아타자나비르, 보세프레비르, 다루나비르, 포삼프레나비르, 인디나비르, 로피나비르, 넬피나비르, 플레코나릴, 리토나비르, 사퀴나비르, 텔라프레비르(VX-950), 티프라나비르;
h) 기타 유형의 항-바이러스 약물: 압자임, 아르비돌, 칼라놀리드 a, 세라게닌, 시아노비린-n, 디아릴피리미딘, 에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG), 포스카르넷, 그리피쓰신(griffithsin), 타리바비린(비라미딘), 하이드록시우레아, KP-1461, 밀테포신, 플레코나릴, 포트만테오(portmanteau) 억제제, 리바비린, 셀리시클립;
(5)(방사성 핵종) 3H, 11C, 14C, 18F, 32P, 35S, 64Cu, 68Ga, 86Y, 99Tc, 111In, 123I, 124I, 125I, 131I, 133Xe, 177Lu, 211At, 또는 213Bi으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있는 방사성 동위원소;
(6) UV광, 형광, IR광, 근적외선, 가시광선을 흡수할 수 있는 발색단 분자로서, 이는 크산토포어, 에리스로포어(erythrophore), 이리도포어, 류코포어(leucophore), 멜라노포어, 시아노포어, 빛에 따라 빛을 다시 방출하는 형광 화학 화합물인 형광단 분자, 시각적 광변환 분자, 포토포어 분자, 발광성 분자, 및 루시페린 화합물의 클래스 또는 서브클래스를 포함하고; 이는 비-단백질 유기 형광단: 크산텐 유도체(플루오레세인, 로다민, 오레곤 그린, 에오신 및 텍사스 레드 포함); 시아닌 유도체:(시아닌, 인도카르보시아닌, 옥사카르보시아닌, 티아카르보시아닌 및 메로시아닌 포함); 세타(Seta), 세타우(SeTau) 및 스퀘어(Square) 염료를 포함하는 스쿠아라인 유도체 및 고리-치환된 스쿠아레인; 나프탈렌 유도체(단실 및 프로단 유도체 포함); 쿠마린 유도체; 옥사디아졸 유도체(피리딜옥사졸, 니트로벤족사디아졸 및 벤족사디아졸 포함); 안트라센 유도체(안트라퀴논, DRAQ5, DRAQ7 및 CyTRAK Orange 포함); 피렌 유도체(캐스케이드 블루); 옥사진 유도체(나일 레드, 나일 블루, 크레실 바이올렛, 옥사진 170 포함); 아크리딘 유도체(프로플라빈, 아크리딘 오렌지, 아크리딘 옐로우 포함); 아릴메틴 유도체(오라민, 크리스탈 바이올렛, 말라카이트 그린 포함); 테트라피롤 유도체(포르핀, 프탈로시아닌, 빌리루빈 포함)로부터 선택되고; 하기 형광단 화합물의 유사체 및 유도체로부터 선택될 수 있고: CF 염료, DRAQ 및 CyTRAK 프로브, BODIPY, 알렉사 플루오르(Alexa Fluor), 디라이트 플루오르(DyLight Fluor), 아토(Atto) 및 트레이시(Tracy), 플루오프로브(FluoProbes), 아베리오르(Abberior) 염료, DY 및 메가스트로크(MegaStokes) 염료, 술포 시(Sulfo Cy) 염료, 하이라이트 플루오르(HiLyte Fluor), 세타(Seta), 세타우(SeTau) 및 스퀘어(Square) 염료, 쿠아사르(Quasar) 및 칼 플루오르(Cal Fluor) 염료, 슈어라이트(SureLight) 염료(APC, RPEPerCP, 피코빌리솜(Phycobilisomes)), APC, APCXL, RPE, BPE, 알로피코시아닌(APC), 아미노-쿠마린, APC-Cy7 접합체, BODIPY-FL, 캐스케이드 블루, Cy2, Cy3, Cy3.5, Cy3B, Cy5, Cy5.5, Cy7, 플루오레세인, 플루오르엑스(FluorX), 하이드록시쿠마린, 리사민 로다민 B, 루시퍼 옐로우, 메톡시쿠마린, NBD, 퍼시픽 블루, 퍼시픽 오렌지, PE-Cy5 접합체, PE-Cy7 접합체, PerCP, R-피코에리트린(PE), 레드 613, 세타-555-아지드, 세타-555-DBCO, 세타-555-NHS, 세타-580-NHS, 세타-680-NHS, 세타-780-NHS, 세타-APC-780, 세타-PerCP-680, 세타-R-PE-670, 세타우-380-NHS, 세타우-405-말레이미드, 세타우-405- NHS, 세타우-425-NHS, 세타우-647-NHS, 텍사스 레드, TRITC, 트루레드(TruRed), X-로다민, 7-AAD(7-아미노악티노마이신 D, CG-선택적), 아크리딘 오렌지, 크로모마이신 A3, CyTRAK 오렌지(적색 여기(excitation) 다크), DAPI, DRAQ5, DRAQ7, 에티듐 브로마이드(Ethidium Bromide), 휙스트(Hoechst)33258, 휙스트33342, LDS 751, 미트라마이신(Mithramycin), 프로피디움 요오드화물(PropidiumIodide)(PI), SYTOX 블루, SYTOX 그린, SYTOX 오렌지, 티아졸 오렌지, TO-PRO: 시아닌 단량체, TOTO-1, TO-PRO-1, TOTO-3, TO-PRO-3, YOSeta-1, YOYO-1; 하기를 포함하는 형광단 화합물: DCFH(2'7'디코로디히드로-플루오레세인, 산화 형태), DHR(디히드로로다민 123, 산화 형태, 광촉매 산화), Fluo-3(AM 에스테르. pH>6), Fluo-4(AM 에스테르. pH 7.2), Indo-1(AM 에스테르, 저/고 칼슘(Ca2+)) 및 SNARF(pH 6/9), 알로피코시아닌(APC), AmCyan1(4량체, Clontech), AsRed2(4량체, Clontech), 아자미(Azami) 그린(단량체), 아주라이트(Azurite), B-피코에리트린(BPE), 세룰리언(Cerulean), CyPet, DsRed 단량체(Clontech), DsRed2("RFP"), EBFP, EBFP2, ECFP, EGFP(약한 이량체), 에메랄드(Emerald)(약한 이량체), EYFP(약한 이량체), GFP(S65A 돌연변이), GFP(S65C 돌연변이), GFP(S65L 돌연변이), GFP(S65T 돌연변이), GFP(Y66F 돌연변이), GFP(Y66H 돌연변이), GFP(Y66W 돌연변이), GFPuv, HcRed1 , J-Red, 카츠샤(Katusha), 쿠사비라(Kusabira) 오렌지(단량체, MBL), mCFP, mCherry, mCitrine, 미도리시 시안(Midoriishi Cyan)(이량체, MBL), mKate(TagFP635, 단량체), mKeima-Red(단량체), mKO, mOrange, mPlum, mRaspberry, mRFP1(단량체), mStrawberry, mTFP1, mTurquoise2, P3(피코빌리솜 복합체), 페리디닌 엽록소(PerCP), R-피코에리트린(RPE), T-사파이어, TagCFP(이량체), TagGFP(이량체), TagRFP(이량체), TagYFP(이량체), tdTomato(탠덤 이량체), 토파즈, TurboFP602(이량체), TurboFP635(이량체), TurboGFP(이량체), TurboRFP(이량체), TurboYFP(이량체), 베누스(Venus), 야생형(Wild Type) GFP, YPet, ZsGreen1(4량체), ZsYellow1(4량체) 및 이들의 유도체;
(7) 하기로부터 선택될 수 있는 세포 결합 리간드 또는 수용체 작용제: 엽산 유도체; 글루탐산 우레아 유도체; 소마토스타틴 및 그 유사체(옥트레오타이드(산도스타틴) 및 란레오타이드(소마툴린)로 구성된 그룹으로부터 선택됨); 방향족 설폰아미드; 뇌하수체 아데닐레이트 시클라제 활성화 펩티드(PACAP)(PAC1); 혈관활성 장 펩티드(VIP/PACAP)(VPAC1, VPAC2); 멜라닌세포-자극 호르몬(α-MSH); 콜레시스토키닌(CCK)/가스트린 수용체 효능제; 봄베신(Pyr-Gln-Arg-Leu-Gly-Asn-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2로 구성된 군으로부터 선택됨)/가스트린-방출 펩티드(GRP); 뉴로텐신 수용체 리간드(NTR1, NTR2, NTR3); 물질 P(NK1 수용체) 리간드; 뉴로펩티드 Y(Y1-Y6); 호밍(Homing) 펩티드, 예를 들어 RGD(Arg-Gly-Asp), NGR(Asn-Gly-Arg), 이량체 및 다량체 고리형 RGD 펩티드(cRGDfV으로부터 선택), TAASGVRSMH 및 LTLRWVGLMS(콘드로이틴 설페이트 프로테오글리칸 NG2 수용체 리간드) 및 F3 펩티드; 세포 침투 펩티드(CPP); 황체형성 호르몬 방출 호르몬(LHRH) 작용제와 길항제, 성선 자극 호르몬 방출 호르몬(GnRH) 작용제로 구성된 그룹으로부터 선택된 펩티드 호르몬, 이는 난포 자극 호르몬(FSH)과 황체 형성 호르몬(LH)을 표적으로 삼아 작용할 뿐만 아니라, 부세레린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(OtBu)-Leu-Arg-Pro-NHEt), 고나도렐린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2), 고세렐린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(OtBu)-Leu-Arg-Pro-AzGly-NH2), 히스트렐린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-His(N-벤질)-Leu-Arg-Pro-NHEt), 류프롤리드(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt), 나파렐린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-2Nal-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2), 트립토렐린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2), 나파렐린, 데슬로렐린, 아바렐릭스(Ac-D-2Nal-D-4-클로로Phe-D-3-(3-피리딜)Ala-Ser-(N-Me)Tyr-D-Asn-Leu-이소프로필Lys-Pro-DAla-NH2), 세트로렐릭스(Ac-D-2Nal-D-4-클로로Phe-D-3-(3-피리딜)Ala-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2), 데가렐릭스(Ac-D-2Nal-D-4-클로로Phe-D-3-(3-피리딜)Ala-Ser-4-아미노Phe(L-히드로오로틸)-D-4-아미노Phe(카르바모일)-Leu-이소프로필Lys-Pro-D-Ala-NH2), 및 가니렐릭스(Ac-D-2Nal-D-4-클로로Phe-D-3-(3-피리딜)Ala-Ser-Tyr-D-(N9,N10-디에틸)-homoArg-Leu-(N9, N10-디에틸)-homoArg-Pro-D-Ala-NH2)으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 테스토스테론 생산도 가능함; Toll 유사 수용체(TLR) 리간드, C-형 렉틴 및 노드라이크(Nodlike) 수용체(NLR) 리간드로 구성된 그룹으로부터 선택되는 패턴 인식 수용체(PRR); 칼시토닌 수용체 작용제; 인테그린 수용체 및 이들의 수용체 아형(αVβ1, αVβ3, αVβ5, αVβ6, α6β4, α7β1, αLβ2, αIIbβ3으로 구성된 그룹으로부터 선택됨) 작용제(GRGDSPK, cyclo(RGDfV)(L1) 및 그 유도체[시클로(-N(Me)R-GDfV), 시클로(R-Sar-DfV), 시클로(RG-N(Me)D-fV), 시클로(RGD-N(Me)f-V), 시클로(RGDf-N(Me)V-)(실렌기타이드)]; 나노바디(VHH(카멜리드 Ig)의 유도체); 도메인 항체(dAb, VH 또는 VL 도메인의 유도체); 이중특이적 T 세포 인게이저(BiTE, 이중특이적 디아바디); 이중 친화성 재타겟팅(DART, 이중특이적 디아바디); 4가 탠덤 항체(TandAb, 이량체화된 이중특이적 디아바디); 안티칼린(리포칼린의 유도체); 아드넥틴(10차 FN3(피브로넥틴)); 설계된 안키린 반복 단백질(DARPins); 아비머; EGF 수용체 또는 VEGF 수용체 작용제로;
(8) 제약상 허용가능한 염, 산, 유도체, 수화물 또는 수화된 염; 또는 결정 구조; 또는 상기 약물의 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체.
또 다른 실시예에서, 약물 D는 포유동물에 투여될 때 세포 결합 항체 또는 항체 분자의 반감기를 연장하기 위해 사용되는 폴리알킬렌 글리콜일 수 있다. 폴리알킬렌 글리콜은 폴리(에틸렌 글리콜)(PEG), 폴리(프로필렌 글리콜) 및 에틸렌 옥사이드와 프로필렌 옥사이드의 공중합체를 포함하지만, 이들에 제한되지는 않고; 특히 바람직한 것은 PEG이고, 보다 특히 바람직한 것은 단일 기능적으로 활성화된 하이드록시 PEG(예를 들어, 하이드록시 PEG-모노카복실산, 하이드록시 PEG-모노알데히드, 하이드록시-PEG-모노아민, 하이드록시 PEG-모노히드라지드, 하이드록시 PEG-모노카바제이트, 하이드록실 PEG-모노요오도아세트아미드, 하이드록실 PEG-모노말레이미드, 하이드록실 PEG-모노오르토피리딜 이황화, 하이드록시 PEG-모노옥심, 하이드록시 PEG-모노페닐 카보네이트, 하이드록실 PEG-모노페닐 글리옥살, 하이드록실 PEG-모노티아졸리딘-2-티온, 하이드록실 PEG-모노티오에스테르, 하이드록실 PEG-모노티올, 하이드록실 PEG-모노트리아진 및 하이드록실 PEG-모노비닐설폰의 반응성 에스테르를 포함하여, 단일 말단에서 활성화되는 하이드록실 PEG)이다.
특정 실시예에서, 폴리알킬렌 글리콜은 약 10 달톤 내지 약 200 kDa, 바람직하게는 약 88 Da 내지 약 40 kDa의 분자량을 갖고; 각각 약 88 Da 내지 약 40 kDa의 분자량을 갖는 2개의 분지; 더욱 바람직하게는 각각 약 88 Da 내지 약 20 kDa인 2개의 분지이다.
특정 실시예에서, 폴리알킬렌 글리콜은 폴리(에틸렌) 글리콜이고 약 10 kD; 약 20kDa, 또는 약 40kDa의 분자량을 갖는다. 특정 실시예에서, PEG는 PEG 10 kDa(선형 또는 분지형), PEG 20 kDa(선형 또는 분지형), 또는 PEG 40 kDa(선형 또는 분지형)이다. 다수의 미국 특허는 선형 또는 분지형 "비-항원성" PEG 중합체 및 이의 유도체 또는 접합체의 제조를 개시한다(예를 들어, 미국 특허 5,428,128; 5,621,039; 5,622,986; 5,643,575; 5,728, 560; 5,730,990; 5,738,846; 5,811,076; 5,824,701; 5,840,900; 5,880,131; 5,900,402; 5,902,588; 5,919,455; 5,951,974; 5,965,119; 5,965,566; 5,969,040; 5,981,709; 6,011,042; 6,042,822; 6,113,906; 6,127,355; 6,132,713; 6,177,087, 및 6,180,095).
또 다른 실시예에서, 약물 D는 튜불리신 및 그 유사체, 메이탄시노이드 및 그 유사체, 탁사노이드(taxanoid)(탁산) 및 그 유사체, CC-1065 및 그 유사체, 다우노루비신 또는 독소루비신 및 그 유사체, 아마톡신 및 그 유사체, 벤조디아제핀 이량체(예를 들어, 피롤로벤조디아제핀(PBD), 토마이마이신, 안트라마이신, 인도리노벤조디아제핀, 이미다조벤조티아디아제핀 또는 옥사졸리디노벤조디아제핀의 이량체 포함) 및 그 유사체, 칼리케아미신 또는 에네디인 항생제 및 그 유사체, 악티노마이신 및 그 유사체, 아자세린 및 그 유사체, 블레오마이신 및 그 유사체, 에피루비신 및 그 유사체, 타목시펜 및 그 유사체, 이다루비신 및 그 유사체, 돌라스타틴 및 그 유사체, 아우리스타틴(모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE), MMAF, 아우리스타틴 PYE, 아우리스타틴 TP, 아우리스타틴 2-AQ, 6-AQ, EB(AEB) 및 EFP(AEFP) 포함) 및 그 유사체, 콤브레타스타틴, 듀오카마이신 및 그 유사체, 캄프토테신 및 그 유사체, 겔다나마이신 및 그 유사체, 메토트렉세이트 및 그 유사체, 티오테파 및 그 유사체, 빈데신 및 그 유사체, 빈크리스틴 및 그 유사체, 헤미아스테린 및 그 유사체, 나주마미드 및 그 유사체, 스플라이세오스타틴, 플라디에놀라이드, 마이크로크로기닌 및 그 유사체, 라디오수민 및 그 유사체, 알테로박틴 및 그 유사체, 마이크로스클레로더민 및 그 유사체, 테오넬라미드 및 그 유사체, 에스페라마이신 및 그 유사체, PNU-159682 및 그 유사체, 단백질 키나제 억제제, MEK 억제제, KSP 억제제, 니코틴아미드 포스포리보실트랜스퍼라제(NAMPT) 억제제, 면역독소, 및 이들의 입체이성질체, 동배체, 유사체 또는 유도체로부터 선택된 잠재적인 세포독성제이다.
튜불리신 및 그 유사체는 당업계에 잘 알려져 있으며, 공지된 방법에 따라 천연 공급원으로부터 단리되거나, 공지된 방법에 따라 합성으로 제조될 수 있다
(예를 들어, Balasubramanian, R., et al. J. Med. Chem., 2009, 52, 238-40; Wipf, P., et al. Org. Lett., 2004, 6, 4057-60; Pando, O., et al. J. Am. Chem. Soc., 2011, 133, 7692-5; Reddy, J. A., et al. Mol. Pharmaceutics, 2009, 6, 1518-25; Raghavan, B., et al. J. Med. Chem., 2008, 51, 1530-33; Patterson, A. W., et al. J. Org. Chem., 2008, 73, 4362-9; Pando, O., et al. Org. Lett., 2009, 11(24), 5567-9; Wipf, P., et al. Org. Lett., 2007, 9(8), 1605-7; Friestad, G. K., Org. Lett., 2004, 6, 3249-52; Peltier, H. M., et al. J. Am. Chem. Soc., 2006, 128, 16018-9; Chandrasekhar, S., et al J. Org. Chem., 2009, 74, 9531-4; Liu, Y., et al. Mol. Pharmaceutics, 2012, 9, 168-75; Friestad, G. K., et al. Org. Lett., 2009, 11, 1095-8; Kubicek, K., et al., Angew Chem Int Ed Engl, 2010.49: 4809-12; Chai, Y., et al., Chem Biol, 2010, 17: 296-309; Ullrich, A., et al., Angew Chem Int Ed Engl, 2009, 48, 4422-5; Sani, M., et al. Angew Chem Int Ed Engl, 2007, 46, 3526-9; Domling, A., et al., Angew Chem Int Ed Engl, 2006, 45, 7235-9; Patent applications: Zanda, M., et al, Can. Pat. Appl. CA 2710693(2011); Chai, Y., et al. Eur. Pat. Appl. 2174947(2010), WO 2010034724; Leamon, C. et al, WO2010033733, WO 2009002993; Ellman, J., et al, PCT WO2009134279; WO 2009012958, US appl. 20110263650, 20110021568; Matschiner, G., et al, WO2009095447; Vlahov, I., et al, WO2009055562, WO 2008112873; Low, P., et al, WO2009026177; Richter, W., WO2008138561; Kjems, J., et al, WO 2008125116; Davis, M.; et al, WO2008076333; Diener, J.; et al, U.S. Pat.Appl. 20070041901, WO2006096754; Matschiner, G., et al, WO2006056464; Vaghefi, F., et al, WO2006033913; Doemling, A., Ger. Offen. DE102004030227, WO2004005327, WO2004005326, WO2004005269; Stanton, M., et al, U.S. Pat. Appl. Publ. 20040249130; Hoefle, G., et al, Ger. Offen. DE10254439, DE10241152, DE10008089; Leung, D., et al, WO2002077036; Reichenbach, H., et al, Ger. Offen. DE19638870; Wolfgang, R., US20120129779; Chen, H., US appl. 20110027274 참조). 본 특허 출원의 공정을 통한 세포 결합 분자의 접합을 위한 튜불리신의 바람직한 구조는 PCT/IB2012/053554의 특허 출원에 기재되어 있다.
튜불리신 및 그 유사체는 하기 화학식 (IV):
또는 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 다형성 결정 구조; 또는 이들의 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체를 갖고,
여기서, 는 이들 중 1개 또는 2개가 독립적으로 L1 및/또는 L2에 연결될 수 있는 연결 부위이고; "" 중 2개가 L1과 L2 모두에 연결되는 경우, R1과 R2, 또는 Z2와 Z3은 바람직하게는 이중 연결 부위이고;
여기서, R1, R1', R2, R3 및 R4는 독립적으로 H, C1-C8 알킬; C2-C8 헤테로알킬 또는 헤테로사이클릭; C3-C8 아릴, Ar-알킬, 사이클로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 카르보사이클릭 또는 알킬카르보닐이고; 또는 R1R2, R1R3, R2R3, R3R4 또는 R5R6은 3~7원 카르보사이클릭, 사이클로알킬, 헤테로사이클릭, 헤테로사이클로알킬, 방향족 또는 헤테로방향족 고리 시스템을 형성하고;
R1 및 R2는 L1 또는 L2에 독립적으로 또는 동시에 연결될 때, 독립적으로 부재할 수 있고, Y1은 N 또는 CH이고;
R5, R6, R8, R10 및 R11은 독립적으로 H, 또는 C1-C4 알킬 또는 헤테로알킬이고;
R7은 독립적으로 H, R14 , -R14C(=O)X1R15이고; 또는 -R14X1R15이고; X1은 O, S, S-S, NH, CH2 또는 NR14이고;
R9는 H, OH, =O, -OR14, -OC(=O)R14, -OC(=O)NHR14, -OC(=O)NR14R15, OP(=O)(OR14)2, -OC(=O)NR14R15, 또는 OR14OP(=O)(OR15)2로부터 선택되고; R9가 L1 또는 L2에 연결될 때, R9는 -O-, -OC(=O)NH- 또는 -OC(=O)N(R14)-이고;
여기서, R11은 독립적으로 H, R14, -R14C(=O)R15, -R14C(=O)X2R15이고, 여기서, X2는 -O-, -S-, -NH- 또는 -N(R14)-이고;
여기서, R12는 -COOH, -COSH, -CONH2, CONHNH2, CONHNHR15, -CONH(R15), -COOR15, -R15COR16, -R15COOR16, -R15C(O)NH2, -R15C(O)NHR16, -COSR15, R15S(=O)2R16, -R15P(=O)(OR17)2, -R15OP(=O)(OR17)2, -COOCH2OP(=O)(OR17)2, -COX2SO2R17, -COOR15X2R16, 테트라졸, 이미다졸 또는 트리아졸이고,
여기서 X2 는 -O-, -S-, -NH-, -N(R15)-, -O-R15-, -S-R15-, CH2 또는 -NHR15-이고; R12가 L1 또는 L2에 연결될 때, R12는 -C(O)O-, -C(O)NH-, -C(=O)NHS(O)2R15- 또는 -C(=O)N(R15)-이고;
R13 및 R14는 독립적으로 C1-C8 알킬, 헤테로알킬; C2-C8 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 아릴, Ar-알킬이고;
Z2 및 Z3은 독립적으로 H, O, S, NH, N(R15), NHNH, -OH, -SH, -NH2, NH, NHNH2, -NH(R15), -OR15, CO, -COX2, -COX2R16, R17, F, Cl, Br, I, SR16, NR16R17, N=NR16, N=R16, NO2, SOR16R17, SO2R16, SO3R16, OSO3R16, PR16R17, POR16R17, PO2R16R17, OP(O)(OR17)2, OCH2OP(O)(OR17)2, OC(O)R17, OC(O)OP(O)(OR17)2, PO(OR16)(OR17), OP(O)(OR17)OP(O)(OR17)2, OC(O)NHR17;-O-(C4-C12 글리코시드), -N-(C4-C12 글리코시드); C1-C8 알킬, 헤테로알킬; C2-C8 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 아릴, Ar-알킬, 카르보사이클릭, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카르보닐, 헤테로아릴, 또는 2-8개의 탄소 원자로 구성된 에스테르, 에테르 또는 아미드; 또는 1~8개 아미노산(NH(Aa)1~8, 또는 CO(Aa)1~8(각각 N-말단 또는 C-말단 1~8의 동일하거나 다른 아미노산))을 포함하는 펩티드, 또는 폴리에틸렌옥시 유닛 화학식 (OH2CH2)p 또는(OH2CH(CH3))p(여기서, p는 0 내지 약 1000의 정수임), 또는 이들 기의 조합이고; X2는 O, S, S-S, NH, CH2, OH, SH, NH2, CHR15 또는 NR15이고;
R15, R16 및 R17은 독립적으로 H, C1-C8 알킬, 헤테로알킬; C2-C8 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 아릴, Ar-알킬, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카르보닐, 헤테로아릴, 알킬카르보닐, 또는 Na+, K+, Cs+, Li+, Ca2+, Mg+, Zn2+, N+(R1)(R2)(R3) (R4), HN+(C2H5OH)3 염이고;
Y1 및 Y2는 독립적으로 N 또는 CH이고; q는 0 또는 1이고; q=0일 때, Y3이 부재하고, Y4, Y5, Y6 및 Y7은 독립적으로 CH, N, NH, O, S 또는 N(R1)이므로, Y2, Y4, Y5, Y6 및 Y7은 푸란, 피롤 티오펜, 티아졸, 옥사졸 및 이미다졸, 피라졸, 트리아졸, 테트라졸, 티아디아졸의 헤테로방향족 고리를 형성하고; q=1일 때, Y3, Y4, Y5, Y6 및 Y7은 독립적으로 CH 또는 N이므로, Y2, Y3, Y4, Y5, Y6 및 Y7은 벤젠, 피리딘, 피리다진, 피리미딘, 피라진, 트리아진, 테트라진, 펜타진의 방향족 고리를 형성하고;
튜불리신 유사체 구조의 예는 하기와 같다:
여기서, R20은 H; C1-C8 선형 또는 분지형 알킬 또는 헤테로알킬; C2-C8 선형 또는 분지형 알케닐, 알키닐, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 선형 또는 분지형 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카르보사이클릭, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카르보닐, 헤테로아릴; 카보네이트(-C(O)OR17), 카바메이트(-C(O)NR17R18); 또는 1-8개 탄소 원자의 카르복실레이트, 에스테르, 에테르 또는 아미드; 또는 1~8개의 아미노산; 또는 화학식 (OCH2CH2)p 또는 (OCH2CH(CH3))p의 폴리에틸렌옥시 유닛(여기서, p는 0 내지 약 1000의 정수임)이고; 또는 R20은 부재하고, 산소는 케톤, 또는 이들의 조합을 형성하고; Z2 및 Z3은 독립적으로 H, OH, NH2, O, NH, COOH, COO, C(O), C(O), C(O)NH, C(O)NH2, R18, OCH2OP(O)(OR18)2, OC(O)OP(O)(OR18)2, OPO(OR18)2, NHPO(OR18)2, OP(O)(OR18)OP(O)(OR18)2, OC(O)R18, OC(O)NHR18, OSO2(OR18), O-(C4-C12-글리코시드), C1-C8 선형 또는 분지형 알킬 또는 헤테로알킬; C2-C8 선형 또는 분지형 알케닐, 알키닐, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 선형 또는 분지형 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카르보사이클릭, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카르보닐, 헤테로아릴; 카보네이트(-C(O)OR17), 카바메이트(-C(O)NR17R18)이고; R17 및 R18은 독립적으로 H, 선형 또는 분지형 알킬 또는 헤테로알킬; C2-C8 선형 또는 분지형 알케닐, 알키닐, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 선형 또는 분지형 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카르보사이클릭, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카르보닐, 헤테로아릴; 카보네이트(-C(O)OR17), 카바메이트(-C(O)NR17R18)이고; R19는 H, OH, NH2, OSO2(OR18), XCH2OP(O)(OR18)2, XPO(OR18)2, XC(O)OP(O)(OR18)2, XC(O)R18, XC(O)NHR18, C1-C8 알킬 또는 카르보일레이트; C2-C8 알케닐, 알키닐, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 아릴 또는 알킬카르보닐; 또는 약학적 염이고; X는 O, S, NH, NHNH 또는 CH2이고; R7은 위에서 정의한 것과 동일하고; 여기서, 화학식 (IV-01) 내지 (IV-79)의 연결 부위 ""는 화학식 (IV)에 따른 동일한 표시이다.
칼리케아미신 및 이와 관련된 에네디인 항생제는 하기 문헌에 기재되어 있다: Nicolaou, K. C. et al, Science 1992, 256, 1172-1178; Proc. Natl. Acad. Sci USA. 1993, 90, 5881-8), 미국 특허 4,970,198; 5,053,394; 5,108,912; 5,264,586; 5,384,412; 5,606,040; 5,712,374; 5,714,586; 5,739,116; 5,770,701; 5,770,710; 5,773,001; 5,877,296; 6,015,562; 6,124,310; 8,153,768. 예시적인 에네디인은 칼리케아미신, 에스페라미신, 운시알라미신, 다이네미신 및 이들의 유도체를 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다. 칼리케아미신의 바람직한 구조는 하기 화학식:
또는 화학 원소의 동위원소, 또는 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 다형성 결정 구조; 또는 이들의 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체를 갖고,
여기서, "" 는 L1 또는 L2에 연결된 부위이고;
겔다나마이신은 Hsp90(열 충격 단백질 90)에 결합하는 벤조퀴논 안사마이신 항생제로서, 항종양제로 사용되어 왔다. 예시적인 겔다나마이신은 17-AAG(17-N-알릴아미노-17-데메톡시겔다나마이신) 및 17-DMAG(17-디메틸아미노에틸아미노-17-데메톡시겔다나마이신)을 포함하지만, 이들에 제한되지는 않는다.
메이탄신 또는 그 유도체인 메이탄시노이드는 튜불린의 중합 억제를 통해 유사분열 동안 미세소관 형성을 억제함으로써 세포 증식을 억제한다(Remillard et al.,Science189:1002-1005(1975) 참조). 예시적인 메이탄신 및 메이탄시노이드는 메르탄신(DM1, DM4), 메이탄시놀 및 이의 유도체뿐만 아니라 안사미토신을 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다. 메이탄시노이드는 미국 특허 4,256,746, 4,361,650, 4,307,016, 4,294,757, 4,294,757, 4,371,533, 4,424,219, 4,331,598, 4,450,254, 4,364,866, 4,313,946, 4,315,929, 4,362,663, 4,322,348, 4,371,533, 4,424,219, 5,208,020, 5,416,064, 5,208,020; 5,416,064; 6,333,410; 6,441,163; 6,716,821, 7,276,497, 7,301,019, 7,303,749, 7,368,565, 7,411,063, 7,851,432, 및 8,163,888에 기재되어 있다. 메이탄시노이드의 구조는 바람직하게는 하기 화학식을 갖는다:
여기서, 는 L1 또는 L2에 연결된 부위이다.
DNA 재-결찰을 방지하여 세포사멸을 초래하는 DNA 손상을 유발하는 위상이성화효소 억제제인 캄프토테신(CPT) 및 이의 유도체는 Shang, X. F. et al, Med Res Rev. 2018, 38(3):775-828; Botella, P. and Rivero-Buceta, E. J Control Release. 2017, 247: 28-54; Martino, E. et al, Bioorg Med Chem Lett. 2017, 27(4):701-707; Lu, A., et al, Acta Pharmacol Sin 2007, 28(2): 307-314에 기재되어 있다. 이는 SN-38, 토포테칸, 이리노테칸(CPT-11), 실레이트칸(DB-67, AR-67), 코시테칸(BNP-1350), 에티리노테칸, 엑사테칸, 루르토테칸, 기마테칸(ST1481), 벨로테칸(CKD-602), 루비테칸 및 기타 여러 가지(Shang, X. F. et al, Med Res Rev. 2018, 38(3):775-828)를 포함한다. 지금까지 세 가지 CPT 유사체인 토포테칸, 이리노테칸 및 벨로테칸이 승인되었으며, 암 화학요법에 사용되고(Palakurthi, S., Expert Opin Drug Deliv. 2015;12(12):1911-21; Shang, X. F. et al, Med Res Rev. 2018, 38(3):775-828), SN-38과 엑사테칸 둘 모두는 임상 시험에서 ADC 접합체에 대한 페이로드로 성공적으로 사용되었다(Ocean, A. J. et al, Cancer. 2017, 123(19): 3843-3854; Starodub, A. N., et al, Clin Cancer Res. 2015, 21(17): 3870-8; Cardillo, T. M., et al, Bioconjug Chem. 2015, 26(5): 919-31; Ogitani, Y. et al, Bioorg Med Chem Lett. 2016, 26(20): 5069-5072; Takegawa, N. et al, Int J Cancer. 2017 Oct 15;141(8):1682-1689. 미국 특허 제7,591,994호; 제7,999,083호, 제8,080,250호, 제8,268,317호; 미국 특허 출원 제20130090458호, 제20140099258호, 제20150297748호, 제20160279259호).
캄프토테신(CPT)의 구조는 하기 화학식:
또는 하나 이상의 화학 원소의 동위원소, 또는 제약상 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체를 갖고;
여기서, R1, R2 및 R4는 H, F, Cl, Br, CN, NO2, C1-C8 알킬; O-C1-C8 알킬; NH-C1-C8 알킬; C2-C8 헤테로알킬, 알킬시클로알킬, 헤테로시클로알킬; C3-C8 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카르보사이클릭, 시클로알킬, 헤테로알킬시클로알킬, 알킬카르보닐, 헤테로아릴; 또는 2-8개 탄소 원자의 에스테르, 에테르, 아미드, 카르보네이트, 우레아 또는 카르바메이트로부터 독립적으로 선택되고;
R3은 H, OH, NH2, C1-C8 알킬; O-C1-C8 알킬; NH-C1-C8 알킬; C2-C8 헤테로알킬, 알킬시클로알킬, 헤테로시클로알킬; 또는 2-8개 탄소 원자의 에스테르, 에테르, 아미드, 카르보네이트, 우레아 또는 카르바메이트이고; 또는 R1R2, R2R3 및 R3R4는 독립적으로 5~7원 카르보사이클릭, 헤테로사이클릭, 헤테로시클로알킬, 방향족 또는 헤테로방향족 고리 시스템을 형성하고; 는 L1 또는 L2에 연결될 수 있는 분자 내 부위이다.
캄프토테신의 구조는 바람직하게는 하기 화학식:
또는 하나 이상의 화학 원소의 동위원소, 또는 제약상 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체를 갖고;
여기서, 은 L1 또는 L2에 연결된 부위이고; P1은 H, OH, NH2, COOH, C(O)NH2, OCH2OP(O)(OR18)2, OC(O)OP(O)(OR18)2, OPO(OR18)2, NHPO(OR18)2, OC(O)R18, OP(O)(OR18)OP(O)(OR18)2, OC(O)NHR18, OC(O)N(C2H4)2NCH3, OSO2(OR18), O-(C4-C12-글리코시드), OC(O)N(C2H4)2CH2N(C2H4)2CH3, O-(C1-C8 선형 또는 분지형 알킬), C1-C8 선형 또는 분지형 알킬 또는 헤테로알킬; C2-C8 선형 또는 분지형 알케닐, 알키닐, 알킬시클로알킬, 헤테로시클로알킬; C3-C8 선형 또는 분지형 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카르보사이클릭, 시클로알킬, 헤테로알킬시클로알킬, 알킬카르보닐, 헤테로아릴; 카보네이트(-C(O)OR17), 카바메이트(-C(O)NR17R18)이고; R17 및 R18은 독립적으로 H, 선형 또는 분지형 알킬 또는 헤테로알킬; C2-C8 선형 또는 분지형 알케닐, 알키닐, 알킬시클로-알킬, 헤테로시클로알킬; C3-C8 선형 또는 분지형 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카르보사이클릭, 시클로알킬, 헤테로알킬시클로알킬, 알킬카르보닐, 헤테로아릴; 카보네이트(-C(O)OR17), 카바메이트(-C(O)NR17R18)이다;
콤브레타스타틴은 종양에서 혈관 파괴 특성을 갖는 천연 페놀이다. 예시적인 콤브레타스타틴 및 이의 유도체는 콤브레타스타틴 A-4(CA-4), CA4-βGal, CA-4PD, CA4-NP 및 옴브라불린을 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다.
콤브레타스타틴은 하기 화학식을 갖는다:
세포독성 천연 생성물인 파클리탁셀(탁솔) 및 반합성 유도체인 도세탁셀(탁소테레)을 포함하는 탁산 및 접합에 바람직한 이들의 유사체는 예를 들어 다음 문헌에 설명되어 있다: K C. Nicolaou et al., J. Am. Chem. Soc. 117, 2409-20, (1995); Ojima et al, J. Med. Chem. 39:3889-3896 (1996); 40:267-78 (1997); 45, 5620-3 (2002); Ojima et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 96:4256-61 (1999); Kim et al., Bull. Korean Chem. Soc., 20, 1389-90 (1999); Miller, et al. J. Med. Chem., 47, 4802-5 (2004); 미국 특허 제5,475,011호, 제5,728,849호, 제5,811,452호; 제6,340,701호; 제6,372,738호; 제6,391,913호, 제6.436,931호; 제6,589,979호; 제6,596,757호; 제6,706,708호; 제7,008,942호; 제7,186,851호; 제7,217,819호; 제7,276,499호; 제7,598,290호; 및 제7,667,054호. 탁산의 구조는 바람직하게는 하기 화학식을 갖는다:
여기서, 은 L1 또는 L2에 연결된 부위이고; Ar 및 Ar'은 독립적으로 아릴 또는 헤테로아릴이다.
안트라사이클린은 DNA 가닥이 절단되어 항체에 공유 결합되는 효소-DNA 복합체를 안정화할 수 있는 포유동물 DNA 토포이소머라제 II 억제제이다. 이러한 항암제는 지난 수십 년 동안 다양한 형태의 고형 종양 및 급성 백혈병을 치료하는 데 탁월한 역할을 유지해 왔다. 그러나, 안트라사이클린은 심혈관 질환 및 사망을 유발한다(Sagi, J.C., et al, Pharmacogenomics. 2016, 17(9), 1075-87; McGowan, J.V., et al, Cardiovasc Drugs Ther. 2017, 31(1), 63-75). 따라서, 심장 독성을 감소시키면서 이러한 분자의 특정 활성을 향상시키기 위해, 연구자들은 안트라사이클린을 세포 결합 항체 또는 항체 분자에 접합시키는 것을 이러한 약물의 치료 지수를 개선하기 위한 일반적인 접근법으로 적극적으로 사용하고 있다((Mollaev, M. et al, Int J Pharm. 2018 Dec 29. pii: S0378-5173(18) 30991-8; Rossin, R., et al, Bioconjug Chem. 2016, 27(7):1697-706; Dal Corso, A., et al, J Control Release. 2017, 264:211-218). 예시적인 안트라사이클린는 다우노루비신, 독소루비신(즉, 아드리아마이신), 에피루비신, 이다루비신, 발루비신 및 미톡산트론을 포함하지만, 이들에 제한되지는 않는다. 본 출원에 사용된 안트라사이클린의 구조는 바람직하게는 하기 화학식과 같다:
여기서, 는 L1 또는 L2에 연결되는 부위이다.
빈카 알칼로이드(Vinca alkaloids)는 암세포의 분열 능력을 억제함으로써 작용하는 항-유사분열 및 항-미세소관 알칼로이드 제제 세트이다. 빈카 알칼로이드에는 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 류로신, 비노렐빈, 카타란틴, 빈돌린, 빈카미놀, 비네리딘, 미노빈신, 메톡시미노빈신, 미노빈시닌, 빈카디포르민, 데속시빈카미놀, 빈카마진, 빈카민, 빈포세틴 및 빈부닌이 포함된다. 빈카 알칼로이드의 구조는 하기 화학식을 갖는 빈블라스틴, 빈크리스틴이 바람직하다:
여기서, 은 L1 또는 L2에 연결된 부위이다.
돌라스타틴 및 그 펩티드 유사체 및 유도체인 아우리스타틴은 항암 및 항진균 활성을 갖는 것으로 밝혀진 매우 강력한 유사분열 억제제이다(예를 들어, 미국 특허 제5,663,149호 및 Pettit et al., Antimicrob. Agents Chemother. 42:2961-2965, 1998 참조). 예시적인 돌라스타틴 및 아우리스타틴은 돌라스타틴 10, 아우리스타틴 E(AE), 아우리스타틴 EB(AEB), 아우리스타틴 EFP(AEFP), MMAD(모노메틸 아우리스타틴 D 또는 모노메틸 돌라스타틴 10), MMAF(모노메틸 아우리스타틴 F 또는 N-메틸발린-발린-돌라이솔류인-돌라프로인-페닐알라닌), MMAE(모노메틸 아우리스타틴 E 또는 N-메틸발린-발린-돌라이솔류인-돌라프로인-노레페드린), 5-벤조일발레르산-AE 에스테르(AEVB), 아우리스타틴 F 페닐렌 디아민(AFP) 및 기타 신규한 아우리스타틴을 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다. 아우리스타틴은 Int. J. Oncol. 15: 367-72(1999); 분자암치료학, vol. 3, No. 8, pp. 921-32(2004); 미국 출원 11134826, 20060074008, 2006022925. 미국 특허 4414205, 4753894, 4764368, 4816444, 4879278, 4943628, 4978744, 5122368, 5165923, 5169774, 5286637, 5410024, 5521284, 5530097, 5554725, 5585089, 5599902, 5629197, 5635483, 5654399, 5663149, 5665860, 5708146, 5714586, 5741892, 5767236, 5767237, 5780588, 5821337, 5840699, 5965537, 6004934, 6033876, 6034065, 6048720, 6054297, 6054561, 6124431, 6143721, 6162930, 6214345, 6239104, 6323315, 6342219, 6342221, 6407213, 6569834, 6620911, 6639055, 6884869, 6913748, 7090843, 7091186, 7097840, 7098305, 7098308, 7498298, 7375078, 7462352, 7553816, 7659241, 7662387, 7745394, 7754681, 7829531, 7837980, 7837995, 7902338, 7964566, 7964567, 7851437, 7994135에 기재되어 있다. 아우리스타틴 유사체의 구조는 바람직하게는 하기 화학식 (Ih-01), (Ih-02), (Ih-03), (Ih-04), (Ih-05), (Ih-06), (Ih-07), (Ih-08), (Ih-09), (Ih-10), 및 (Ih-11)와 같다:
또는 하나 이상의 동위원소를 갖는 유도체; 또는 제약상 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체를 갖고;
여기서, R1, R2, R3, R4 및 R5는 독립적으로 H; C1-C8 선형 또는 분지형 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로알킬, 알킬사이클로알킬, 에스테르, 에테르, 아미드, 아민, 헤테로사이클로알킬 또는 아실옥실아민; 또는 1-8개의 아미노산을 함유하는 펩티드, 또는 화학식 (OCH2CH2)p 또는 (OCH2CH(CH3))p(여기서, p는 1 내지 약 1000의 정수임)를 갖는 폴리에틸렌옥시 유닛이고; 2개의 R: R1R2, R2R3, R1R3 또는 R3R4는 함께 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로알킬 또는 알킬사이클로알킬 기의 3~8원 환형 고리를 형성할 수 있고; Y1 및 Y2는 연결 부위 ""에 연결될 때(L1 및/또는 L2에 독립적으로 연결됨), 독립적으로 O, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(R1), N(R1)C(O)N(R2), C(O)NHNHC(O) 및 C(O)NR1 이고; 또는 연결 부위 ""에 연결되지 않을 때, OH, NH2, NHNH2, NHR5, SH, C(O)OH, C(O)NH2, OC(O)NH2, OC(O)OH, NHC(O)NH2, NHC(O)SH, OC(O)NH(R1), N(R1)C(O)NH(R2), C(O)NHNHC(O)OH 및 C(O)NHR1 이고; R12는 OH, NH2, NHR1, NHNH2, NHNHCOOH, O-R1-COOH, NH-R1-COOH, NH-(Aa)nCOOH, O(CH2CH2O)pCH2CH2OH, O(CH2CH2O)pCH2CH2NH2, NH(CH2CH2O)pCH2CH2NH2, NR1R1', NHOH, NHOR1, O(CH2CH2O)pCH2CH2COOH, NH(CH2CH2O)pCH2CH2COOH, NH-Ar-COOH, NH-Ar-NH2, O(CH2CH2O)pCH2CH2NH-SO3H, NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHSO3H, R1-NHSO3H, NH-R1-NHSO3H, O(CH2CH2O)pCH2-CH2NHPO3H2, NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, OR1, R1-NHPO3H2, R1-OPO3H2, O(CH2CH2O)pCH2CH2OPO3H2, OR1-NHPO3H2, NH-R1-NHPO3H2, NH(CH2CH2NH)pCH2-CH2NH2, NH(CH2CH2S)pCH2CH2NH2, NH(CH2CH2NH)pCH2CH2OH, NH(CH2CH2S)pCH2-CH2OH, NH-R1-NH2, 또는 NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2이고, 여기서 Aa는 1-8의 동일하거나 다른 아미노산이고; p는 1 내지 5000이고; R1, R2, R3, R4, R5, R5', Z1, Z2 및 n은 위와 동일하게 정의된다.
헤미아스테린과 그 유사체(예를 들어, HTI-286)는 튜불린에 결합하여 정상적인 미세소관 역학을 방해하고 화학양론적 양으로 미세소관을 단량체로 분해한다(depolymerize). 헤미아스테린의 구조는 바람직하게는 하기 화학식을 갖는다:
여기서, R1, R2, R3, R4 및 R5는 독립적으로 H; C1-C8 선형 또는 분지형 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로알킬, 알킬시클로알킬, 에스테르, 에테르, 아미드, 아민, 헤테로시클로알킬 또는 아실옥실아민; 또는 1-8개의 아미노산을 함유하는 펩티드, 또는 화학식 (OCH2CH2)p 또는 (OCH2CH(CH3))p를 갖는 폴리에틸렌옥시 유닛(여기서, p는 1 내지 약 5000의 정수임)이고; 또한 R2R3는 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로알킬 또는 알킬시클로알킬 기의 3~8원 사이클릭 고리를 형성할 수 있다.
기존 미세소관의 플러스 말단에 있는 소수의 고친화성 부위에 주로 결합하는 에리불린은 세포독성 및 비-세포독성 작용 메커니즘을 모두 가지고 있다. 이의 세포독성 효과는 암세포의 세포사멸이 장기간의 비가역적 유사분열 차단 후에 유도되는 항유사분열 활성과 관련이 있다(Kuznetsov, G. et al, Cancer Research. 2004, 64(16): 5760-6.; Towle, M. J, et al, Cancer Research. 2010, 71(2): 496-505). 인간 유방암 모델을 대상으로 한 전임상 연구에서는 세포독성, 항유사분열 기반 메커니즘 외에도, 에리불린이 항유사분열 효과와 관련없어 보이는 생존 암세포 및 잔존 종양의 생물학에도 복잡한 영향을 미치는 것으로 나타났다. 에리불린은 안트라사이클린- 및 탁산-기반 화학요법을 포함하여, 말기 질환에 대해 이전에 최소 2가지 화학 요법을 받은 전이성 유방암 치료와 수술로 제거할 수 없거나(절제 불가능) 진행된(전이성) 상태의 지방육종(연조직 육종의 특이적 유형) 치료용으로 미국 FDA의 승인을 받았다. 에리불린은 ADC 접합체에 대한 페이로드로 사용되었다(US20170252458). 에리불린의 구조는 바람직하게는 하기 화학식 Eb01와 같다:
여기서, 은 L1 및/또는 L2에 독립적으로 연결되는 연결 부위이다.
니코틴아미드 포스포리보실트랜스퍼라제(NAMPT)의 억제제는 강력한 활성의 독특한 메커니즘으로 인해 흥미로운 ADC 페이로드가 될 수 있다(Sampath D, et al, Pharmacol Ther 2015; 151, 16-31). NAMPT는 세포에서 NAD(니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드) 레벨을 조절하며, 여기서 NAD는 에너지 및 동화작용 대사를 지원하는 필수 산화환원 보조인자 역할을 한다. NAD는 신진대사에서 몇 가지 필수적인 역할을 한다. 이는 산화환원 반응에서 조효소로, ADP-리보실화 반응에서 ADP-리보스 모이어티의 공여체로, 제2 메신저 분자 고리형 ADP-리보스의 전구체로 작용할 뿐만 아니라, 박테리아 DNA 리가아제 및 단백질에서 아세틸 기를 제거하기 위해 NAD+를 사용하는 시르투인(sirtuin)이라 불리는 효소 그룹의 기질로 작용한다. 이러한 대사 기능 외에도, NAD+는 조절된 메커니즘에 의해 세포에서 자발적으로 방출될 수 있는 아데닌 뉴클레오티드로 나타나고(Smyth L. M, et al, J. Biol. Chem. 2004, 279(47), 48893-903; Billington R. A, et al, Mol Med. 2006, 12, 324-7), 따라서 중요한 세포외 역할을 가질 수 있다(Billington R. A, et al, Mol Med. 2006, 12, 324-7). NAMPT 억제제가 존재하면, NAD 레벨이 신진대사에 필요한 레벨 이하로 감소하여, 에너지 위기를 초래하고 이에 따라 세포 사멸이 발생한다. 지금까지, 임상 NAMPT 억제제 후보인 FK-866, CHS-828 및 GMX-1777은 임상 시험으로 진행되었지만, 각각 객관적인 반응 이전에 용량 제한 독성에 직면하였다(Holen K., et al, Invest New Drugs 2008, 26, 45-51; Hovstadius, P., et al, Clin Cancer Res 2002, 8, 2843-50; Pishvaian, M. J., et al, J Clin Oncol 2009, 27, 3581). 따라서, NAMPT 억제제 전달을 표적으로 하기 위해 ADC를 사용하면, 전신 독성을 회피하여, 훨씬 더 광범위한 치료 지수를 달성할 수 있다. NAMPT 억제제의 구조는 바람직하게는 하기 화학식 NP01, NP02, NP03, NP04, NP05, NP06, NP07, NP08 및 NP09과 같다:
또는 하나 이상의 동위원소를 갖는 유도체, 또는 제약상 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체를 갖고; 여기서, ""는 위와 동일하고; X5는 F, Cl, Br, I, OH, OR1, R1, OPO3H2, OSO3H, NHR1, OCOR1, NHCOR1이다.
벤조디아제핀 이량체 및 그 유사체:(예를 들어, 피롤로벤조디아제핀(PBD) 또는 (토메이마이신)의 이량체, 인돌리노벤조디아제핀(IGN)의 이량체, 이미다조벤조티아디아-제핀의 이량체 또는 옥사졸리디노벤조디아제핀의 이량체)은 이중 DNA에 결합하는 하나 이상의 이미민 작용기 또는 그 등가물을 함유하는 항종양제이다. PBD 및 IGN 분자는 천연 생성물인 아트라마이신을 기반으로 하며, 퓨린-구아닌-퓨린 서열을 선호하는 서열 선택 방식으로 DNA와 상호작용한다. 본 발명에 따른 바람직한 벤조디아제핀 이량체는 미국 특허 8,163,736; 8,153,627; 8,034,808; 7,834,005; 7,741,319; 7,704,924; 7,691,848; 7,678,787; 7,612,062; 7,608,615; 7,557,099; 7,528,128; 7,528,126; 7,511,032; 7,429,658; 7,407,951; 7,326,700; 7,312,210; 7,265,105; 7,202,239; 7,189,710; 7,173,026; 7,109,193; 7,067,511; 7,064,120; 7,056,913; 7,049,311; 7,022,699; 7,015,215; 6,979,684; 6,951,853; 6,884,799; 6,800,622; 6,747,144; 6,660,856; 6,608,192; 6,562,806; 6,977,254; 6,951,853; 6,909,006; 6,344,451; 5,880,122; 4,935,362; 4,764,616; 4,761,412; 4,723,007; 4,723,003; 4,683,230; 4,663,453; 4,508,647; 4,464,467; 4,427,587; 4,000,304; 미국 특허 출원 20100203007, 20100316656, 20030195196에 예시되어 있다. 항체-벤조디아제핀 이량체의 접합체 구조의 아래의 화학식: PB01, PB02, PB03, PB04, PB05, PB06, PB07, PB08, PB09, PB10, PB11, PB12, PB13, PB14, PB15, PB16, PB17, PB18, PB19, PB20:
또는 하나 이상의 동위원소를 갖는 유도체, 또는 제약상 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체로 예시되어 있고; 여기서 X1, X2, Y1, Y2, Z1, Z2 및 n은 위와 동일하게 정의되고; 바람직하게는 X1, X2, Y1 및 Y2는 독립적으로 O, N, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(R1), N(R1)C(O)N(R1), CH, C(O)NHNHC(O) 및 C(O)NR1이고; R1, R2, R3, R1', R2' 및 R3'는 독립적으로 H; F; Cl; =O; =S; =CH2; =CH-R1, OH; SH; C1-C8 선형 또는 분지형 알킬, 아릴, 알케닐, 헤테로아릴, 헤테로알킬, 알킬사이클로알킬, 에스테르(COOR5 또는 -OC(O)R5), 에테르(OR5), 아미드(CONR5), 카바메이트(OCONR5), 아민(NHR5, NR5R5'), 헤테로사이클로알킬 또는 아실옥실아민(-C(O)NHOH, -ONHC(O)R5); 또는 1-20개의 천연 또는 비천연 아미노산을 함유하는 펩티드, 또는 화학식 (OCH2CH2)p 또는 (OCH2CH(CH3))p의 폴리에틸렌옥시 유닛(여기서, p는 1 내지 약 5000의 정수임)이고, 2개의 R: R1R2, R2R3, R1R3 , R1'R2', R2'R3', 또는 R1'R3'는 독립적으로 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로알킬 또는 알킬사이클로알킬 기의 3~8원 환형 고리를 형성할 수 있고; X3 및 Y3은 독립적으로 N, NH, CH2 또는 CR5이거나, X3 및 Y3 중 하나는 부재할 수 있고; R1 및 R2는 C1-C8 선형 또는 분지형 알킬, 헤테로알킬; C3-C8 아릴, 헤테로아릴, 알킬사이클로알킬, 아실옥실, 알킬아릴, 알킬아릴옥실, 알킬아릴아미노, 알킬아릴티올; 또는 1-6개의 동일하거나 상이한 서열의 아미노산/펩티드(Ar)r, r=1-6이고; 여기서 R4, R5, R5', R6, R12 및 R12'는 독립적으로 H, OH, NH2, NH(CH3), NHNH2, COOH, SH, OZ3, SZ3, F, Cl, 또는 C1-C8 선형 또는 분지형 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로알킬, 알킬사이클로알킬, 아실록실아민이고; Z3은 H, OP(O)(OM1)(OM2), OCH2OP(O)(OM1)(OM2), OSO3M1 또는 O-글리코시드(글루코사이드, 갈락토사이드, 만노사이드, 글루쿠로노사이드/글루쿠로니드, 알로사이드, 프럭토사이드 등), NH-글리코시드, S-글리코시드 또는 CH2-글리코시드이고; M1 및 M2는 독립적으로 H, Na, K, Ca, Mg, NH4, NR1R2R3이고, X6은 CH, N, P(O)NH, P(O)NR1, CHC(O)NH, C3-C8 아릴, 헤테로아릴, 알킬사이클로알킬, 아실옥실, 알킬아릴, 알킬아릴옥실, 알킬아릴아미노, 또는 Aa(아미노산, 바람직하게는 Lys, Phe, Asp, Glu, Ser, Thr, His, Cys, Tyr, Trp, Gln, Asn, Arg로부터 선택됨)이고; “는 위와 동일하게 정의된다.
CC-1065 유사체 및 두카르마이신 유사체도 본 발명의 접합체에 사용되는 것이 바람직하다. CC-1065 유사체 및 두카르마이신 유사체의 예와 이들의 합성은 예를 들어, 하기 문헌에 설명되어 있다: Warpehoski, et al, J. Med. Chem. 31:590-603 (1988); D. Boger et al., J. Org. Chem; 66; 6654-61, 2001; 미국 특허 번호: 4169888, 4391904, 4671958, 4816567, 4912227, 4923990, 4952394, 4975278, 4978757, 4994578, 5037993, 5070092, 5084468, 5101038, 5117006, 5137877, 5138059, 5147786, 5187186, 5223409, 5225539, 5288514, 5324483, 5332740, 5332837, 5334528, 5403484, 5427908, 5475092, 5495009, 5530101, 5545806, 5547667, 5569825, 5571698, 5573922, 5580717, 5585089, 5585499, 5587161, 5595499, 5606017, 5622929, 5625126, 5629430, 5633425, 5641780, 5660829, 5661016, 5686237, 5693762, 5703080, 5712374, 5714586, 5739116, 5739350, 5770429, 5773001, 5773435, 5786377 5786486, 5789650, 5814318, 5846545, 5874299, 5877296, 5877397, 5885793, 5939598, 5962216, 5969108, 5985908, 6060608, 6066742, 6075181, 6103236, 6114598, 6130237, 6132722, 6143901, 6150584, 6162963, 6172197, 6180370, 6194612, 6214345, 6262271, 6281354, 6310209, 6329497, 6342480, 6486326, 6512101, 6521404, 6534660, 6544731, 6548530, 6555313, 6555693, 6566336, 6586618, 6593081, 6630579, 6756397, 6759509, 6762179, 6884869, 6897034, 6946455, 7049316, 7087600, 7091186, 7115573, 7129261, 7214663, 7223837, 7304032, 7329507, 7329760, 7388026, 7655660, 7655661, 7906545, 및 8012978. 특허의 링커를 통한 항체-CC-1065 유사체의 접합체 구조의 예는 하기 CC01, CC02, CC03, CC04, CC05, CC06 및 CC07로 예시된다:
여기서, X1, X2, Y1 및 Y2는 연결 부위 “에 연결될 때, 독립적으로 O, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(R1), N(R1)C(O)N(R2), C(O)NHNHC(O) 및 C(O)NR1 이고; 또는 연결 부위 “에 연결되지 않을 때, OH, NH2, NHNH2, NHR1, SH, C(O)OH, C(O)NH2, OC(O)NH2, OC(O)OH, NHC(O)NH2, NHC(O)SH, OC(O)NH(R1), N(R1)C(O)NH(R2), C(O)NHNHC(O)OH 및 C(O)NHR1이고; Z3은 H, PO(OM1)(OM2), SO3M1, CH2PO(OM1)(OM2), CH3N(CH2CH2)2NC(O)-, O(CH2CH2)2NC(O)-, R1 또는 글리코시드이고; R1, R2, R3, M1, M2 및 n은 위와 동일하게 정의된다.
원래 여러 종류의 독성 버섯, 특히 아마니타 팔로이드(Amanita phalloides) 및 기타 여러 버섯 종에서 발견되는 최소 10가지 독성 화합물의 하위 그룹인 아마톡신 및 그 유사체가 또한 본 특허의 접합에 바람직하다. α-아마니틴, β-아마니틴, γ-아마니틴, ε-아마니틴, 아마눌린, 아마눌린산, 아마닌아미드, 아마닌, 프로아마눌린으로 명명된 이러한 10가지 아마톡신은 35-아미노산 전구단백질로 합성되는 단단한 이환형 펩티드로서, 마지막 8개 아미노산이 프롤릴 올리고펩티다제에 의해 절단된다(Litten, W. 1975 Scientific American232 (3): 90-101;H. E. Hallen, et al 2007 Proc. Nat. Aca. Sci. USA 104, 19097-101; K. Baumann, et al, 1993 Biochemistry 32 (15): 4043-50; Karlson-Stiber C, Persson H. 2003, Toxicon 42 (4): 339-49; Horgen, P. A. et al. 1978 Arch. Microbio. 118 (3): 317-9). 아마톡신은 RNA 폴리머라제 II(Pol II)를 억제하고 유전자 전사 및 단백질 생합성을 차단하여 세포를 죽인다(Brodner, O. G. and Wieland, T. 1976 Biochemistry, 15(16): 3480-4; Fiume, L., Curr Probl Clin Biochem, 1977, 7: 23-8; Karlson-Stiber C, Persson H. 2003, Toxicon 42(4): 339-49; Chafin, D. R. , Guo, H. & Price, D. H. 1995 J. Biol. Chem. 270 (32): 19114-19; Wieland (1983) Int. J. Pept. Protein Res. 22(3): 257-76.). 아마톡신은 수집된 아마니타 팔로이드 버섯으로부터(Yocum, R. R. 1978 Biochemistry 17(18): 3786-9; Zhang, P. et al, 2005, FEMS Microbiol. Lett.252(2), 223-8), 담자균을 이용한 발효로부터(Muraoka, S. and Shinozawa T., 2000 J. Biosci. Bioeng. 89(1): 73-6), A. fissa를 이용한 발효로부터(Guo, X. W., et al, 2006 Wei Sheng Wu Xue) Bao 46(3): 373-8), 또는 속에 속하는 균주인 갈레리나 파스쿨라타(Galerina Fasculata) 또는 갈레리나 헬보리셉(Galerina helvoliceps)을 배양하여(WO/1990/009799, JP11137291), 생산될 수 있다. 그러나, 이러한 단리 및 발효의 수율은 매우 낮았다(5 mg/L 미만의 배양). 아마톡신 및 그 유사체의 여러 제제가 지난 30년 동안 보고되었고(W. E. Savige, A. Fontana, Chem. Commun. 1976, 600-1; Zanotti, G., et al, Int J Pept Protein Res, 1981. 18(2): 162-8; Wieland, T., et al, Eur. J. Biochem. 1981, 117, 161-4; P. A. Bartlett, et al, Tetrahedron Lett. 1982, 23, 619-22; Zanotti, G., et al., Biochim Biophys Acta, 1986. 870(3): 454-62; Zanotti, G., et al., Int. J. Peptide Protein Res. 1987, 30, 323-9; Zanotti, G., et al., Int. J. Peptide Protein Res. 1987, 30, 450-9; Zanotti, G., et al., Int J Pept Protein Res, 1988. 32(1): 9-20; G. Zanotti, T. et al, Int. J. Peptide Protein Res. 1989, 34, 222-8; Zanotti, G., et al., Int J Pept Protein Res, 1990. 35(3): 263-70; Mullersman, J. E. and J. F. Preston, 3rd, Int J Pept Protein Res, 1991. 37(6): 544-51; Mullersman, J.E., et al, Int J Pept Protein Res, 1991. 38(5): 409-16; Zanotti, G., et al, Int J Pept Protein Res, 1992. 40(6): 551-8; Schmitt, W. et al, J. Am. Chem. Soc. 1996, 118, 4380-7; Anderson, M.O., et al, J. Org. Chem., 2005, 70(12): 4578-84; J. P. May, et al, J. Org. Chem. 2005, 70, 8424-30; F. Brueckner, P. Cramer, Nat. Struct. Mol. Biol. 2008, 15, 811-8; J. P. May, D. M. Perrin, Chem. Eur. J. 2008, 14, 3404-9; J. P. May, et al, Chem. Eur. J. 2008, 14, 3410-17; Q. Wang, et al, Eur. J. Org. Chem. 2002, 834-9; May, J. P. and D. M. Perrin, Biopolymers, 2007. 88(5): 714-24; May, J. P., et al., Chemistry, 2008. 14(11): 3410-7; S. De Lamo Marin, et al, Eur. J. Org. Chem. 2010, 3985-9; Pousse, G., et al., Org Lett, 2010. 12(16): 3582-5; Luo, H., et al., Chem Biol, 2014. 21(12): 1610-7; Zhao, L., et al., Chembiochem, 2015. 16(10): 1420-5), 이들 제제의 대부분은 부분 합성에 의해 이루어졌다. 극도의 효능과 독특한 세포 독성 메커니즘 때문에, 아마톡신은 접합을 위한 페이로드로 사용되어 왔다(Fiume, L., Lancet, 1969. 2 (7625): 853-4; Barbanti-Brodano, G. and L. Fiume, Nat New Biol, 1973. 243(130): 281-3; Bonetti, E., M. et al, Arch Toxicol, 1976. 35(1): p. 69-73; Davis, M. T., Preston, J. F. Science 1981, 213, 1385-1388; Preston, J.F., et al, Arch Biochem Biophys, 1981. 209(1): 63-71; H. Faulstich, et al, Biochemistry 1981, 20, 6498-504; Barak, L.S., et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 1981. 78(5): 3034-8; Faulstich, H. and L. Fiume, Methods Enzymol, 1985. 112: 225-37; Zhelev, Z., A. et al, Toxicon, 1987. 25(9): 981-7; Khalacheva, K., et al, Eksp Med Morfol, 1990. 29(3): 26-30; U. Bermbach, H. Faulstich, Biochemistry 1990, 29, 6839-45; Mullersman, J. E. and J. F. Preston, Int. J. Peptide Protein Res. 1991, 37, 544-51; Mullersman, J.E. and J.F. Preston, Biochem Cell Biol, 1991. 69(7): 418-27; J. Anderl, H. Echner, H. Faulstich, Beilstein J. Org. Chem. 2012, 8, 2072-84; Moldenhauer, G., et al, J. Natl. Cancer Inst. 2012, 104, 622-34; A. Moshnikova, et al; Biochemistry 2013, 52, 1171-8; Zhao, L., et al., Chembiochem, 2015. 16(10): 1420-5; Zhou, B., et al., Biosens Bioelectron, 2015. 68: 189-96; WO2014/043403, US20150218220, EP 1661584). 우리는 한동안 아마톡신의 접합에 대해 연구해 왔다. 본 출원에 사용된 아마톡신의 구조의 예는 바람직하게는 하기 화학식 Am01, Am02 및 Am03:
또는 하나 이상의 화학 원소의 동위원소, 또는 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체를 갖고; 여기서, X1 및 Y1은 독립적으로 O, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(R1), N(R1)C(O)N(R1), CH2, CHNH, CH2O, C(O)NHNHC(O) 및 C(O)NR1이고; R7, R8 및 R9는 독립적으로 H, OH, OR1, NH2, NHR1, C1-C6 알킬이거나, 부재하고; Y2는 O, O2, NR1, NH이거나, 부재하고; R10은 CH2, O, NH, NR1, NHC(O), NHC(O)NH, NHC(O)O, OC(O)O, C(O), OC(O), OC(O)(NR1), (NR1)C(O)(NR1), C(O)R1이거나, 부재하고; R11은 OH, NH2, NHR1, NHNH2, NHNHCOOH, O-R1-COOH, NH-R1-COOH, NH-(Aa)rCOOH, O(CH2CH2O)pCH2CH2OH, O(CH2CH2O)pCH2CH2NH2, NH(CH2CH2O)pCH2CH2NH2, NR1R2, O(CH2CH2O)pCH2CH2-COOH, NH(CH2CH2O)pCH2CH2COOH, NH-Ar-COOH, NH-Ar-NH2, O(CH2CH2O)pCH2CH2-NHSO3H, NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHSO3H, R1-NHSO3H, NH-R1-NHSO3H, O(CH2CH2O)p-CH2CH2NHPO3H2, NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, OR1, R1-NHPO3H2, R1-OPO3H2, O(CH2CH2O)pCH2CH2OPO3H2, OR1-NHPO3H2, NH-R1-NHPO3H2, 또는 NH(CH2CH2O)pCH2-CH2NHPO3H2이고, (Aa)r은 1-8개의 아미노산이고; n 및 m1은 독립적으로 1-20이고; p는 1~5000이고; R1, R2 및 Ar은 출원서 전체에서 정의된 것과 동일이고; ""는 위와 동일하게 정의된다.
스플라이세오스타틴과 플라디에놀라이드는 스플라이싱을 억제하고 스플라이스좀(SF3b)과 상호작용하는 항-종양 화합물이다. 스플라이세오스타틴의 예에는 스플라이세오스타틴 A, FR901464, 및 (2S, 3Z)-5-{[(2R, 3R, 5S, 6S)-6-{(2E, 4E)-5-[(3R,4R,5R,7S)-7-(2-히드라지닐-2-옥소에틸)-4-히드록시-1,6-디옥사스피로[2.5]옥트-5-일]-3-메틸펜타-2,4-디엔-1-y-1}-2,5-디메틸테트라히드로-2H-피란-3-일]아미노}-5-옥소펜트-3-엔-2-일 아세테이트이 포함되지만, 이들에 제한되지 않고, 이는 하기 코어 구조를 갖는다:
플라디에놀라이드의 예는 플라디에놀라이드 B, 플라디에놀라이드 D 및 E7107를 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다.
항체의 세린, 트레오닌 또는 티로신 아미노산에 인산염(PO4) 기를 추가하는 효소의 작용을 차단하고 단백질 기능을 조절할 수 있는 단백질 키나제 억제제. 단백질 키나제 억제제는 암에서 과다활성 단백질 키나제(돌연변이 또는 과발현된 키나제 포함)로 인한 질병을 치료하거나, 다른 질병 요인을 극복하기 위해 세포 기능을 조절하는 데 사용될 수 있다. 단백질 키나제 억제제의 구조는 바람직하게는 아다보세르팁, 아파티닙, 액시티닙, 바페티닙, 보수티닙, 코비메티닙, 크리조티닙, 카보잔티닙, 다사티닙, 엔트렉티닙, 에르다피티닙, 에를로티닙, 에를로티닙, 포스타마티닙, 제피티닙, 이브루티닙, 이마티닙, 라파티닙, 렌바티닙, 무브리티닙, 닐로티닙, 파조파닙, 페갑타닙, 포나티닙, 레바스티닙, 레고라페닙, 룩소리티닙, 소라페닙, 수니티닙, SU6656, 토파시티닙, 반데타닙, 베무라페닙, 엔트렉티닙, 팔보시클립, 리보시클립, 아베마시클립, 다코미티닙, 네라티닙, 로실레티닙(CO-1686), 오시머티닙, AZD3759, 나자르티닙(EGF816)으로부터 선택되고, 이들은 하기 화학식 PK01~PK40를 갖는다:
_
여기서, Z5 및 Z5'는 O, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(R1), N(R1)C(O)N(R2), C(O)NHNHC(O) 및 C(O)NR1로부터 독립적으로 선택된다.
MEK 억제제은 일부 암에서 종종 과잉활성을 나타내는 미토겐-활성화 단백질 키나제 MEK1 및/또는 MEK2를 억제한다. MEK 억제제은 특히 BRAF 변이 흑색종, KRAS/BRAF 변이 대장암, 유방암, 비소세포 폐암(NSCLC) 치료에 사용된다. MEK 억제제은 PD0325901, 셀루메티닙(AZD6244), 코비메티닙(XL518), 레파메티닙, 트라메티닙(GSK1120212), 피마세르팁, 비니메티닙(MEK162), AZD8330, RO4987655, RO5126766, WX-554, E6201, GDC-0623, PD-325901 및 TAK-733로부터 선택된다. 바람직한 MEK 억제제은 트라메티닙(GSK1120212), 코비메티닙(XL518), 비니메티닙(MEK162), 셀루메티닙으로부터 되며, 이들은 하기 화학식을 갖는다:
여기서, Z5는 O, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(R1), N(R1)C(O)N(R2), C(O)NHNHC(O) 및 C(O)NR1로부터 선택된다.
페이로드로서 사용되는 단백질분해효소 억제제은 바람직하게는 하기 구조에 나타낸 바와 같이 카르필조밉, 클린다마이신, 레타파물린, 인디불린으로부터 선택된다:
본 명세서에서 면역독소는 디프테리아 독소(DT), 콜레라 독소(CT), 트리코산틴(TCS), 다이안틴, 슈도모나스 외독소 A(ETA'), 홍혈생성 독소, 디프테리아 독소, AB 독소, III형 외독소 등과 같이, 일반적으로 박테리아 또는 식물 단백질로부터 유래된 세포독성 단백질인 거대분자 약물이다. 이는 또한 활성화를 위해 단백질 분해 처리가 필요한 매우 독성이 강한 박테리아 기공-형성 프로톡신일 수 있다. 이러한 프로톡신의 예로는 프로에어로리신(proaerolysin)과 그 유전자 변형 형태인 톱살리신(topsalysin)이 있다. 톱살리신은 전립선의 효소에 의해 선택적으로 활성화되도록 조작된 변형된 재조합 단백질로서, 주변 조직과 신경을 손상시키지 않으면서, 국소적인 세포 사멸과 조직 파괴를 유도한다. 본 발명의 면역독소는 바람직하게는 유리 아미노, 티올 또는 카르복실산 기를 갖는 아미노산을 통해 본 출원의 공정에 의해 접합되며; 더욱 바람직하게는 N-말단 아미노산을 통해서이다.
또한, 특정 세포 수용체 작용제, 세포 자극 분자 또는 세포내 신호전달 분자는 본 발명의 공정을 통해 약물 D로서 접합될 수 있다.
세포 결합 리간드 또는 수용체 작용제는 하기로부터 선택된다: 엽산 유도체; 글루탐산 우레아 유도체; 소마토스타틴 및 그 유사체(옥트레오타이드(산도스타틴) 및 란레오타이드(소마툴린)로 구성된 그룹으로부터 선택됨); 방향족 설폰아미드; 뇌하수체 아데닐레이트 시클라제 활성화 펩티드(PACAP)(PAC1); 혈관활성 장 펩티드(VIP/PACAP)(VPAC1, VPAC2); 멜라닌세포-자극 호르몬(α-MSH); 콜레시스토키닌(CCK)/가스트린 수용체 효능제; 봄베신(Pyr-Gln-Arg-Leu-Gly-Asn-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2로 구성된 군으로부터 선택됨)/가스트린-방출 펩티드(GRP); 뉴로텐신 수용체 리간드(NTR1, NTR2, NTR3); 물질 P(NK1 수용체) 리간드; 뉴로펩티드 Y(Y1-Y6); 호밍(Homing) 펩티드, 예를 들어 RGD(Arg-Gly-Asp), NGR(Asn-Gly-Arg), 이량체 및 다량체 고리형 RGD 펩티드(cRGDfV으로부터 선택), TAASGVRSMH 및 LTLRWVGLMS(콘드로이틴 설페이트 프로테오글리칸 NG2 수용체 리간드) 및 F3 펩티드; 세포 침투 펩티드(CPP); 황체형성 호르몬 방출 호르몬(LHRH) 작용제와 길항제, 성선 자극 호르몬 방출 호르몬(GnRH) 작용제로 구성된 그룹으로부터 선택된 펩티드 호르몬, 이는 난포 자극 호르몬(FSH)과 황체 형성 호르몬(LH)을 표적으로 삼아 작용할 뿐만 아니라, 부세레린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(OtBu)-Leu-Arg-Pro-NHEt), 고나도렐린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2), 고세렐린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(OtBu)-Leu-Arg-Pro-AzGly-NH2), 히스트렐린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-His(N-벤질)-Leu-Arg-Pro-NHEt), 류프롤리드(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt), 나파렐린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-2Nal-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2), 트립토렐린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2), 나파렐린, 데슬로렐린, 아바렐릭스(Ac-D-2Nal-D-4-클로로Phe-D-3-(3-피리딜)Ala-Ser-(N-Me)Tyr-D-Asn-Leu-이소프로필Lys-Pro-DAla-NH2), 세트로렐릭스(Ac-D-2Nal-D-4-클로로Phe-D-3-(3-피리딜)Ala-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2), 데가렐릭스(Ac-D-2Nal-D-4-클로로Phe-D-3-(3-피리딜)Ala-Ser-4-아미노Phe(L-히드로오로틸)-D-4-아미노Phe(카르바모일)-Leu-이소프로필Lys-Pro-D-Ala-NH2), 및 가니렐릭스(Ac-D-2Nal-D-4-클로로Phe-D-3-(3-피리딜)Ala-Ser-Tyr-D-(N9,N10-디에틸)-homoArg-Leu-(N9, N10-디에틸)-homoArg-Pro-D-Ala-NH2)으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 테스토스테론 생산도 가능함; Toll 유사 수용체(TLR) 리간드, C-형 렉틴 및 노드라이크(Nodlike) 수용체(NLR) 리간드로 구성된 그룹으로부터 선택되는 패턴 인식 수용체(PRR); 칼시토닌 수용체 작용제; 인테그린 수용체 및 이들의 수용체 아형(αVβ1, αVβ3, αVβ5, αVβ6, α6β4, α7β1, αLβ2, αIIbβ3으로 구성된 그룹으로부터 선택됨) 작용제(GRGDSPK, cyclo(RGDfV)(L1) 및 그 유도체[시클로(-N(Me)R-GDfV), 시클로(R-Sar-DfV), 시클로(RG-N(Me)D-fV), 시클로(RGD-N(Me)f-V), 시클로(RGDf-N(Me)V-)(실렌기타이드)]; 안티칼린(리포칼린의 유도체); 아드넥틴(10차 FN3(피브로넥틴)); 설계된 안키린 반복 단백질(DARPins); 아비머; EGF 수용체 또는 VEGF 수용체 작용제.
세포 결합 분자/리간드 또는 세포 수용체 작용제는 하기로부터 선택된다: LB01(엽산), LB02(PMSA 리간드), LB03(PMSA 리간드), LB04(PMSA 리간드), LB05(소마토스타틴), LB06(소마토스타틴), LB07(옥트레오타이드, 소마토스타틴 유사체), LB08(란레오타이드, 소마토스타틴) 유사체), LB09(바프레오타이드(산바르), 소마토스타틴 유사체), LB10(CAIX 리간드), LB11(CAIX 리간드), LB12(가스트린 방출 펩티드 수용체(GRPr), MBA), LB13(황체형성 호르몬 방출 호르몬(LH-RH) 리간드 및 GnRH), LB14(황체형성 호르몬 방출 호르몬(LH-RH) 및 GnRH 리간드), LB15(GnRH 길항제, 아바렐릭스), LB16(코발라민, 비타민 B12 유사체), LB17(코발라민, 비타민 B12 유사체), LB18(αvβ3 인테그린 수용체, 고리형 RGD 펜타펩티드), LB19(VEGF 수용체용 헤테로-2가 펩티드 리간드), LB20(뉴로메딘 B), LB21(G-단백질 결합 수용체용 봄베신), LB22(톨 유사 수용체용 TLR2), LB23(안드로겐 수용체용), LB24(αv 인테그린 수용체용 실렝기타이드/사이클로(-RGDfV-), LB23(플루드로코르티손), LB25(리파부틴 유사체), LB26(리파부틴 유사체), LB27(리파부틴 유사체), LB28(플루드로코르티손), LB29(덱사메타손), LB30(플루티카손 프로피오네이트), LB31(베클로메타손 디프로피오네이트), LB32(트리암시놀론 아세토나이드), LB33(프레드니손), LB34(프레드니솔론), LB35(메틸프레드니솔론), LB36(베타메타손), LB37(이리노테칸 유사체), LB38(크리조티닙 유사체), LB39(보르테조밉 유사체), LB40(카르필조밉 유사체), LB41(카르필조밉 유사체), LB42(루프롤리드 유사체), LB43(트립토렐린 유사체), LB44(클린다마이신), LB45(리라글루타이드 유사체), LB46(세마글루타이드 유사체), LB47(레타파물린 유사체), LB48(인디불린 유사체), LB49(빈블라스틴 유사체), LB50(릭시세나타이드 유사체), LB51(오시머티닙 유사체), LB52(뉴클레오시드 유사체), LB53(에를로티닙 유사체) 또는 LB54(라파티닙 유사체); 이들은 하기 화학식을 갖고:
여기서, X4 및 Y1은 독립적으로 O, NH, NHNH, NR1, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(R1), N(R1)C(O)N(R1), CH2, C(O)NHNHC(O) 및 C(O)NR1이다.
특정 실시예에서, 1개, 2개 이상의 DNA, RNA, mRNA, 소형 간섭 RNA(siRNA), 마이크로RNA(miRNA) 및 PIWI 상호작용 RNA(piRNA)는 화학요법/작용성 화합물로서 하기 화학식을 갖는 본 발명의 BCMA 항체에 접합될 수 있고:
여기서, ""은 본 특허의 측쇄 링커를 연결하는 부위이고; 는 DNA, RNA, mRNA, siRNA, miRNA 또는 piRNA의 단일 또는 이중 가닥이고; X1 및 Y는 독립적으로 O, NH, NHNH, NR1, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(R1), N(R1)C(O)N(R1), CH2, C(O)NHNHC(O) 및 C(O)NR1이다.
링커 L1 및 L2는 동일하거나 상이하고, 독립적으로 O, NH, S, S-S, NHNH, N(R3), N(R3)N(R3'), C1-C8 알킬; C2-C8 헤테로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 아릴, Ar-알킬, 헤테로시클릭, 카르보시클릭, 시클로알킬, 헤테로알킬시클로알킬, 알킬카르보닐, 헤테로아릴; C2-C8(2-8 탄소 원자) 에스테르, 에테르 또는 아미드; 정의에 기재된 1~8개의 천연 또는 비천연 아미노산; 화학식 (OCH2CH2)p, (OCH2CH(CH3))p, (OCH2CH2)pOR3, (OCH2CH(CH3))pOR3, NH(CH2CH2O)pR3, NH(CH2CH(CH3)O)pR3, N[(CH2CH2-O)pR3][(CH2CH2O)pR3'], (OCH2CH2)pCOOR3, 또는 CH2CH2(OCH2CH2)pCOOR3의 폴리에틸렌옥시 유닛(여기서, p 및 p'는 독립적으로 0 내지 약 1000에서 선택된 정수임), 또는 이들의 조합으로부터 선택되고, R3 및 R3'은 독립적으로 H; C1-C8 알킬; C2-C8 헤테로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카르보닐, 헤테로아릴이고;
L1 또는 L2는 자가-희생 또는 비 자가-희생 성분, 펩티딜 유닛, 히드라존 결합, 이황화물, 에스테르, 옥심, 아미드 또는 티오에테르 결합을 함유할 수 있다. 자가-희생 유닛은 2-아미노이미다졸-5-메탄올 유도체, 헤테로고리형 PAB 유사체, 베타-글루쿠로나이드 및 오르토 또는 파라-아미노벤질아세탈과 같은 파라-아미노벤질카르바모일(PAB) 기와 전기적으로 유사한 방향족 화합물을 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다.
바람직하게는, 자가-희생 링커 성분은 하기 구조 중 하나를 갖는다:
여기서, (*) 원자는 추가 스페이서 또는 방출가능한 링커 유닛, 세포독성제 및/또는 세포 결합 분자(CBA)의 부착 지점이고; X1, Y1, Z2 및 Z3은 독립적으로 NH, O 또는 S이고; Z1은 독립적으로 H, NH, O 또는 S이고; v는 0 또는 1이고; U1은 독립적으로 H, OH, C1-C6 알킬, (OCH2CH2)nF, Cl, Br, I, OR5, SR5, NR5R5', N=NR5, N=R5, NR5R5', NO2, SOR5R5', SO2R5, SO3R5, OSO3R5, PR5R5', POR5R5', PO2R5R5', OPO(OR5)(OR5'), 또는 OCH2PO(OR5(OR5')이고; 여기서, R5 및 R5'는 위에서 정의한 바와 같고, 바람직하게는 R5 및 R5'는 H, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬; C3-C8 아릴, 헤테로사이클릭, 카르보사이클릭, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아랄킬, 알킬카르보닐; 또는 약학적 양이온 염으로부터 독립적으로 선택된다.
비 자가-희생 링커 성분은 하기 구조 중 하나이다:
여기서, (*) 원자는 추가적인 스페이서 R1 또는 방출 가능한 링커, 세포독성제 및/또는 결합 분자의 부착 지점이고; X1, Y1, U1, R1, R5, R5'는 위에서 정의한 바와 같고; r은 0~100이고; m과 n은 독립적으로 0~6이다.
보다 바람직하게는, L1 또는 L2는 6-말레이미도카프로일("MC"), 말레이미도프로파노일("MP"), 발린-시트룰린("val-cit" 또는 "vc"), 알라닌-페닐알라닌(ala-phe" 또는 "af"), p-아미노벤질옥시카르보닐("PAB"), 4-티오펜타노에이트("SPP"), 4-(N-말레이미도메틸)시클로헥산-1 카르복실레이트("MCC"), (4-아세틸)아미노-벤조에이트("SIAB"), 4-티오-부티레이트(SPDB), 4-티오-2-하이드록시설포닐-부티레이트(2-Sulfo-SPDB), 또는 1-8개의 천연 또는 비천연 아미노산 유닛을 갖는 천연 또는 비천연 펩티드의 하나 이상의 링커 성분으로 구성될 수 있다.
바람직하게는, L1 또는 L2는 방출가능한 링커일 수 있다. 방출가능한 링커라는 용어는 pH 불안정성(PH-laible), 산 불안정성, 염기 불안정성, 산화 불안정성, 대사 불안정성, 생화학적 불안정성 또는 효소 불안정성 결합과 같이, 생리적 조건 하에서 깨질 수 있는 적어도 하나의 결합을 포함하는 링커를 지칭할 수 있다. 결합 파괴를 초래하는 상기 생리학적 조건은 생물학적 또는 대사 과정을 반드시 포함하는 것은 아니며, 대신 가수분해 또는 치환 반응과 같은 표준 화학 반응, 예를 들어 세포질 pH보다 낮은 pH를 갖는 엔도솜 및/또는 악성 세포 내부에 밀리몰 범위의 풍부한(abundant) 글루타티온과 같은 세포내 티올과의 이황화 결합 교환 반응을 포함할 수 있다.
여기서, 방출가능한 링커(L1 또는 L2)는,
-(CR5R6)m(Aa)r-(CR7R8)n(OCH2CH2)t-, -(CR5R6)m(CR7R8)n(Aa)r(OCH2CH2)t-, -(Aa)r(CR5R6)m(CR7R8)n(OCH2CH2)t-, -(CR5R6)m(CR7R8)n-(OCH2CH2)r(Aa)t-, -(CR5R6)m-(CR7=CR8)(CR9R10)n(Aa) t(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(NR11CO)(Aa)t-(CR9R10)n-(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(Aa)t(NR11CO)(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(OCO)(Aa)t-(CR9R10)n-(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(OCNR7)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(CO)(Aa)t-(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(NR11CO)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m-(OCO)(Aa)t-(CR9R10)n-(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(OCNR7)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(CO)(Aa)t-(CR9R10)n-(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m-페닐-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -(CR5R6)m-푸릴-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -(CR5R6)m-옥사졸릴-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -(CR5R6)m-티아졸일-CO(Aa)t-(CCR7R8)n-, -(CR5R6)t-티에닐-CO(CR7R8)n-, -(CR5R6)t-이미다졸일-CO-(CR7R8)n-, -(CR5R6)t-모르폴리노-CO(Aa)t-(CR7R8)n-, -(CR5R6)t피레파지노-CO(Aa)t-(CR7R8)n-, -(CR5R6)t-N-메틸피페라진-CO(Aa)t-(CR7R8)n-, -(CR5R)m-(Aa)t페닐-, -(CR5R6)m-(Aa)t푸릴-, -(CR5R6)m-옥사졸일(Aa)t-, -(CR5R6)m-티아졸일(Aa)t-, -(CR5R6)m-티에닐-(Aa)t-, -(CR5R6)m-이미다졸일(Aa)t-, -(C R5R6)m-모르폴리노-(Aa)t-, -(CR5R6)m-피페라지노-(Aa)t-, -(CR5R6)m-N-메틸피페라지노-(Aa)t-, -K(CR5R6)m(Aa)r(CR7R8)n(OCH2CH2)t-, -K(CR5R6)m-(CR7R8)n(Aa)r(OCH2CH2)t-, -K(Aa)r-(CR5R6)m-(CR7R8)n(OCH2CH2)t-, -K(CR5R6)m(CR7R8)n-(OCH2CH2)r(Aa)t-, -K(CR5R6)m-(CR7=CR8)-(CR9R10)n(Aa)t(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m(NR11CO)-(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m(Aa)t-(NR11CO)(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m-(OCO)(Aa)t(CR9R10)n-(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m-(OCNR7)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m-(CO)(Aa)t-(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m-(NR11CO)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m-(OCO)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m-(OCNR7)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K-(CR5R6)m(CO)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m-페닐-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -K-(CR5R6)m-푸릴-CO(Aa)t-(CR7R8)n-, -K(CR5R6)m-옥사졸일-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -K(CR5R6)m-티아졸일-CO(Aa)t-(CR7R8)n-, -K(CR5R6)t-티에닐-CO(CR7R8)n-, -K(CR5R6)t이미다졸일-CO-(CR7R8)n-, -K(CR5R6)t-모르폴리노-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -K(CR5R6)t피페라지노-CO(Aa)t-(CR7R8)n-, -K(CR5R6)t-N-메틸피페라지노CO(Aa)t(CR7R8)n-, -K(CR5R)m(Aa)t페닐, -K-(CR5R6)m-(Aa)t푸릴-, -K(CR5R6)m-옥사졸일(Aa)t-, -K(CR5R6)m-티아졸일-(Aa)t-, -K(CR5R6)m-티에닐-(Aa)t-, -K(CR5R6)m-이미다졸일-(Aa)t-, -K(CR5R6)m-모르폴리노(Aa)t-, -K(CR5R6)m-피페라지노-(Aa)tG, -K(CR5R6)m-N-메틸피페라지노(Aa)t를 포함하지만, 이들에 제한되지 않고; 여기서, m, Aa, m, n, R3, R4, 및 R5는 위에 기재되어 있고; t 및 r은 독립적으로 0 내지 100이고; R6, R7, 및 R8은 독립적으로, H; 할라이드; C1-C8 알킬, 아릴, 알케닐, 알키닐, 에테르, 에스테르, 아민 또는 아미드(이는 하나 이상의 할라이드, CN, NR1R2, CF3, OR1, 아릴, 헤테로사이클, S(O)R1, SO2R1, -CO2H, -SO3H, -OR1, -CO2R1, -CONR1, -PO2R1R2, -PO3H 또는 P(O)R1R2R3로 선택적으로 치환됨)로부터 선택되고; K는 NR1, -SS-, -C(=O)-, -C(=O)NH-, -C(=O)O-, -C=NH-O-, -C=N-NH-, -C(=O)NH-NH-, O, S, Se, B 또는 C3-C6 헤테로방향족 기이다.
링커 L1 및 L2의 성분의 예시적 구조는 하기와 같다:
또는 이들의 조합; 여기서, 는 연결 부위이고; X2, X3, X4, X5, 또는 X6은 NH; NHNH; N(R12); N(R12)N(R12'); O; S; C1-C6 알킬; C2-C6 헤테로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카르보사이클릭, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카르보닐, 헤테로아릴; CH2OR12, CH2SR12, CH2NHR12, 또는 1~8개의 아미노산으로부터 독립적으로 선택되고; R12 및 R12'는 독립적으로 H; C1-C8 알킬; C2-C8 헤테로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카르보사이클릭, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카르보닐, 헤테로아릴; 또는 1-8개 탄소 원자의 에스테르, 에테르 또는 아미드; 또는 화학식 (OCH2CH2)p 또는 (OCH2CH(CH3))p(여기서, p는 0 내지 약 100의 정수임)의 폴리에틸렌옥시 유닛, 또는 이들의 조합이다.
바람직하게는, L1 및 L2는 하기로부터 독립적으로 선택된다:
여기서, ""은 약물을 연결하는 부위 또는 링커 L1 또는 L2의 부위이고; "#"은 항체의 S(티올), O(페놀), NH(아미노), CHO(알데히드), C(=O)(케톤), C(O)(NH)(아미드) 및 C(O)(OH)(카르복실레이트)를 연결하는 부위이고; Aa는 L- 또는 D-천연 또는 비천연 아미노산이고;
R1은 H, C1-C8 알킬, OH, CH2OH, CH2CH2OH, NH2, SH, SCH3, CH2COOH, CH2CH2COOH, CH2CH2CH2CH2NH2, C6H5, CH2C6H5, CH2C6H4OH, CH(OH)CH3, CH2C(O)NH2, CH2CH2C(O)NH2, 또는 CH2CH2CH2NHC(=NH)NH2이고;
r은 0-12이고; r이 0이 아닌 경우, (Aa)r은 동일하거나 상이한 아미노산 또는 펩티드 유닛이고;
m1 = 1-18; m2 = 1-100; m3 = 1-8; m4 = 0-8; m5 = 1-8;
Y7은 NNH, OCH2NH, NHC(=O), NHNH, C(=O)NH, N(R1), SO2, P(O)(OH), NHS(O)2, NHS(O)2NH, NHS(O)2NHC(O), NHS(O)2NHC(O)O, NHS(O)2NHC(O)NH, NHP(O)(OH), NHP(O)(OH)NH, OP(O)(OH)O, NHP(O)(OH)O, OP(O)(OH)NH, S, O, OP(O)(OH)OP(O)(OH)NH, NHP(O)(OH)OP(O)(OH)NH, NHP(O)(OH)OP(O)(OH)O, OCH2CH2O, OCH2CH2NH, N(CH2CH2)2N, NHC6H4NH, 또는 CH2이고;
Y8은 NHC(=O), NHS(O2), NH(SO), NHS(O2)NH, NHP(O)(OH)NH 또는 C(O)NH이고;
R9는 H, (O=)CR1, (O=)CNHR1, R1COOH, R1(COCH2NH)m2H, R1(Aa)r 또는 R1(COCH2NCH3)m2H이고; 여기서 R1은 위에 정의되어 있고;
Lv1’은 하기로부터 선택되고:
여기서, ""은 약물을 연결하는 부위 또는 링커 L1 또는 L2의 부위이고; "#"은 항체의 S(티올), O(페놀), NH(아미노), CHO(알데히드), C(=O)(케톤), C(O)(NH)(아미드) 및 C(O)(OH)(카르복실레이트)를 연결하는 부위이고; R1, X1' 및 X2'는 위에 설명되어 있고; X는 O, NH, S, CH2이고; 두 원자 중간에 있는 연결하는 결합 ""은 두 원자 중 어느 하나를 연결할 수 있음을 의미하고, Ar은 방향족 기이다.
보다 바람직하게, L1 및 L2가 하기로부터 독립적으로 선택된다:
여기서, Aa는 L- 또는 D-천연 또는 비천연 아미노산이고;
R1은 H, C1-C8 알킬, OH, CH2OH, CH2CH2OH, NH2, SH, SCH3, CH2COOH, CH2CH2COOH, CH2CH2CH2CH2NH2, C6H5, CH2C6H5, CH2C6H4OH, CH(OH)CH3, CH2C(O)NH2, CH2CH2C(O)NH2, CH2CH2CH2NHC(=NH)NH2이고;
r은 0-12이고; r이 0이 아닌 경우, (Aa)r은 동일하거나 상이한 서열의 아미노산 또는 펩티드 유닛이고;
m1 = 1-18; m2 = 1-100; m3 = 1-8; m4 = 0-8; m5 = 1-8;
Y7은 NH, OCH2NH, NHC(=O), NHNH, C(=O)NH, N(R1), SO2, P(O)(OH), NHS(O)2, NHS(O)2NH, NHS(O)2NHC(O), NHS(O)2NHC(O)O, NHS(O)2NHC(O)NH, NHP(O)(OH), NHP(O)(OH)NH, OP(O)(OH)O, NHP(O)(OH)O, OP(O)(OH)NH, S, O, OP(O)(OH)OP(O)(OH)NH, NHP(O)(OH)OP(O)(OH)NH, NHP(O)(OH)OP(O)(OH)O, OCH2CH2O, OCH2CH2NH, N(CH2CH2)2N, NHC6H4NH, 또는 CH2이고;
Y8는 NHC(=O), NHS(O2), NH(SO), NHS(O2)NH, NHP(O)(OH)NH 또는 C(O)NH이고；
R9는 H, (O=)CR1, (O=)CNHR1, R1COOH, R1(COCH2NH)m2H, R1(Aa)r 또는 R1(COCH2NCH3)m2H이고, 여기서 R1은 위에 정의되어 있다.
특정 실시예에서, 화학식 (I), (II) 및 (III)의 접합체는 각각 하기 화학식 (IV), (V) 및 (VI)를 갖는 화합물과 항체의 접합 반응을 통해 제조된다:
여기서: Lv1 및 Lv2는 반응성 기이고, 이는 하기로부터 독립적으로 선택되고:
여기서, X1' 및 X2'는 독립적으로 F, Cl, Br, I, OTf, OMs, OC6H4(NO2), OC6H3(NO2)2, OC6F5, OC6HF4, 또는 Lv3이고; X2는 O, NH, N(R1) 또는 CH2이고; R3 및 R5는 독립적으로 H, R1, 방향족, 헤테로방향족 또는 방향족 기이며, 여기서 하나 또는 여러 개의 H 원자는 독립적으로 -R1, -할로겐, -OR1, -SR1, -NR1R2, -NO2, -S(O)R1, -S(O)2R1, 또는 -COOR1로 대체되고; Lv3 및 Lv3'는 독립적으로 F, Cl, Br, I, 니트로페녹실; N-하이드록시숙신이미드(NHS); 페놀; 벤젠티올, 디니트로페놀; 펜타플루오로페놀; 테트라플루오로페놀; 디플루오로페놀; 모노플루오로페놀; 펜타클로로페놀; 트리플레이트(triflate); 이미다졸; 디클로로페놀; 테트라클로로페놀; 1-히드록시벤조트리아졸; 토실레이트; 메실레이트; 2-에틸-5-페닐이속사졸륨-3'-설포네이트, 자체적으로 형성되거나 다른 무수물과 함께 형성된 무수물, 예를 들어 아세틸 무수물, 포르밀 무수물; 또는 펩티드 커플링 반응 또는 미츠노부(Mitsunobu) 반응을 위한 축합 시약으로 생성된 중간 분자로부터 선택된 이탈기이다.
화학식 (V) 및 화학식 (VI)에서, ""과 ""의 성분은 독립적으로 하기로부터 선택되고:
여기서, Lv3, Lv3', X1', X2'는 위에 기재한 바와 같고, 두 원자 중간에 있는 연결하는 결합 ""은 두 원자 중 어느 하나를 연결할 수 있음을 의미한다.
일부 실시예에서, 본 발명의 접합체를 제조하는 과정에서, 하기에 예시된 화학식 (VII), (VIII) 또는 (IX)를 갖는 링커가 독립적으로 항체 내의 아미노산에 먼저 반응한 후, 이어서 세포독성 약물 또는 세포독성 약물/링커 복합체와 축합하여, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 접합체를 형성할 수 있다:
여기서, L1, L2, E1, Lv1 및 Lv2는 화학식 (I), (II), (III), (IV), (V) 및 (VI)에 대해 정의된 바와 동일하고; Lv5 및 Lv6은 독립적으로 하기로부터 선택된다:
여기서, X1'은 F, Cl, Br, I, OTs(토실레이트), OTf(트리플레이트), OMs(메실레이트), OC6H4(NO2), OC6H3(NO2)2, OC6F5, OC6HF4 또는 Lv3이고; X2'는 O, NH, N(R1) 또는 CH2이고; R3 및 R5는 독립적으로 H, R1, 방향족, 헤테로방향족 또는 방향족 기이며, 여기서 하나 또는 여러 개의 H 원자는 독립적으로 -R1, -할로겐, -OR1, -SR1, -NR1R2, -NO2, -S(O)R1, -S(O)2R1, 또는 -COOR1로 대체되고; Lv3 및 Lv3'는 독립적으로 F, Cl, Br, I, 니트로페녹실; N-하이드록시숙신이미드(NHS); 페녹실; 벤젠티올, 디니트로페녹실; 펜타플루오로페녹실; 테트라플루오로페녹실; 디플루오로페녹실; 모노플루오로페녹실; 펜타클로로페녹실; 트리플레이트; 이미다졸; 디클로로페녹실; 테트라클로로페녹실; 1-히드록시벤조트리아졸; 토실레이트; 메실레이트; 2-에틸-5-페닐이속사졸륨-3'-설포네이트, 자체적으로 형성되거나 다른 무수물과 함께 형성된 무수물, 예를 들어 아세틸 무수물, 포르밀 무수물; 또는 펩티드 커플링 반응 또는 미츠노부(Mitsunobu) 반응을 위한 축합 시약으로 생성된 중간 분자로부터 선택된 이탈기이고; 여기서, 작용기 Lv5 및/또는 Lv6은 반응이 Lv1 또는 Lv2와 항체, 특히 항체의 티올 사이의 반응보다 1배 이상 빠르거나 느리기만 하면, 세포독성 약물 내의 티올과도 반응할 수 있다.
일부 실시예에서, 본 발명의 접합체는 항체에 특정 작용기의 도입, 전형적으로 항체가 IgG 항체인 경우 중-경쇄 사이에 티올의 생성을 통해 제조될 수 있으며, 접합 과정에서 티올은 상기 예시된 화학식 (VII), (VIII) 또는 (IX)의 링커와 동시에 또는 순차적으로 반응하여, 하기 화학식 (X), (XI) 또는 (XII)의 항체/링커 복합체 분자를 형성한 후, 이어서 세포독성 약물 D1 또는 D2와 독립적으로 반응하여, 화학식 (I), (II), 또는 (III)의 접합체를 형성한다.
여기서, Lv5, Lv6, L1, L2, E1, Lv1' Lv2', mAb, n 및 n'은 위와 동일하게 정의된다.
본 발명의 방법에 따른 일부 실시예에서, 위에 예시된 화학식 (VII), (VIII) 또는 (IX)의 링커는 먼저 세포독성 약물과 반응하여, 화학식 (IV), (V) 또는 (VI)의 세포독성 약물/링커 복합체 분자를 형성하고, 이어서 항체 내의 환원된 작용기와 독립적으로 반응하여, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 접합체를 형성한다. 세포독성 약물에 대한 화학식 (VII), (VIII) 또는 (IX)의 제1 단계 축합 반응은 별도의 포트에서 이루어질 수 있으며, 결과적으로 화학식 (IV), (V) 또는 (VI)의 세포독성 약물/링커 복합체 분자는 항체의 작용기에 접합하기 이전에, 크로마토그래피, 추출 또는 침전을 통해 선택적으로 정제할 수 있다. 일반적으로, 항체에서 이황화 결합의 특정 환원에 관여하는 제1 단계에서는, 중간체를 분리하지 않고 동일한 포트에서 화학식 (IV), (V) 또는 (VI)와의 접합 반응이 바람직하다.
세포독성 약물에 대한 Lv5 및/또는 Lv6과, 항체 내 티올에 대한 Lv1 및/또는 Lv2 간의 반응을 구별하기 위해, 화학식 (VIII), (IX) 또는 (X)의 링커에 대한 반응의 각 단계는 동일하거나 상이한 반응 포트에서 다른 조건으로 수행될 수 있다. 예를 들어, 아미노기를 함유한 약물은 축합 시약(예를 들어, EDC, TBTU 또는 BroP)의 존재 하에서 링커의 카르복실산기와 축합을 겪어서, 아미드 결합을 보유하는 화학식 (IV), (V) 또는 (VI)의 변형된 약물/링커 복합체를 제공한다. 이러한 축합 반응은 생리학적 완충액에서 수행될 수 있고, 화학식 (VII), (VIII) 또는 (IX)의 링커 한쪽 말단의 카르복실산기가 활성화되어, N-하이드록실숙신이미딜(NHS), 펜트플루오로페닐, 디니트로페닐 에스테르, 또는 카르복실산 클로라이드 기 등이 될 수 있고, 이는 아미노기를 보유하는 약물과 반응하여, 화학식 (III), (IV) 또는 (V)의 약물/링커 복합체를 제공한 다음, 후속적으로 또는 동시에 항체의 티올에 접합을 거쳐, 화학식 (I), (II), 또는 (III)의 접합체를 형성한다.
또 다른 실시에서, 한쪽 말단에 티올 반응성 기(예를 들어, 말레이미도, 비닐설포닐, 할로아세틸, 아크릴, 치환된 프로피올산)와 다른 쪽 말단에 약물 반응성 기(예를 들어, 하이드록실숙신이미딜(NHS), 펜트플루오로페닐, 디니트로페닐 에스테르, 아미노, 알킬옥실아미노 또는 클릭 가능한(clickable) 화학 기(예를 들어, 아지드, 알킨, 디벤조사이클로옥틴, BCN((1R, 8S, 9s)-바이사이클로[6.1.0]비사이클로) 4-yn-9-일메탄올))를 모두 보유하는 화학식 (VII), (VIII) 또는 (IX)의 링커는 0~30%의 물 혼합 가능(혼화성) 유기 용매를 첨가하거나 첨가하지 않은 상태에서, pH 4.5-7.5, 2 ℃-40 ℃(바람직하게는 2 ℃-8 ℃, 보다 바람직하게는 2 ℃-6℃)의 완충 용액에서 항체의 티올에 접합을 거쳐서, 화학식 (X), (XI) 또는 (XII)의 항체 접합체를 독립적으로 형성한다. 이어서, 그에 따라 화학식 (X), (XI) 또는 (XII)의 항체-링커 접합체 내의 반응기와 매칭되는 반응기를 갖는 약물을 후속적으로 또는 동시에 반응 용액에 첨가하여, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 접합체를 제공할 수 있다. 제2 단계 반응에서, 화학식 (X), (XI) 또는 (XII)의 항체-링커 접합체는 약물과의 축합을 진행하기 이전에, 선택적으로 정제될 수 있고, 제2 단계의 축합 조건은 조정될 수 있는데, 예를 들어 필요한 경우 pH를 6.5~8.0으로 조정할 수 있고, 및/또는 온도를 20~45℃로 조정할 수 있다.
일부 실시예에서, 접합 공정 동안에, 약물과 접합하기 전에, 항체는 화학식 (X), (XI) 또는 (XII)의 이종 이작용성 가교 링커(예를 들어, 아민-대-설프히드릴(숙신이미딜(NHS) 에스테르/말레이미드, NHS 에스테르/피리딜디티올, NHS 에스테르/할로아세틸), 디아지린(SDA)-대-설프히드릴, 아지드-대-설프히드릴, 알킨-대-설프히드릴, 설프히드릴-대-탄수화물(말레이미드/히드라지드, 피리딜디티올/히드라지드, 할로아세틸/히드라지드), 하이드록실-대-설프히드릴(이소시아네이트/말레이미드), 설프히드릴-대-DNA(말레이미드/프소라렌, 피리딜디티올/프소라렌, 할로아세틸/프소라렌), 설프히드릴-대-카르복실(카르보디이미드))의 부착을 통해 변형될 수 있다.
따라서, 최종 접합체를 생성하기 위해 화학식 (X), (XI) 또는 (XII)의 변형된 항체-링커 접합체와 반응하는 약물/세포독성제의 반응성 기는 다양한 방식으로 존재할 수 있다. 예를 들어, 이황화 결합을 통해 연결된 접합체는 제1 단계를 통해 달성되고, 화학식 (VII), (VIII) 또는 (IX)의 링커는 2℃- 8℃, pH 4.5 - 6.0에서 항체에 접합되고, 상기 변형된 항체에 부착된 링커의 이황화 결합(예를 들어, 피리딜디티오 모이어티)와 유리 티올기를 함유하는 약물 사이의 이황화물 교환이 20 ℃- 40 ℃, pH 6.5 - 8.0에서 이루어진다. 접합을 위해 유리 티올을 함유한 약물을 첨가하기 전에, 과잉 환원제(예를 들어, TCEP 또는 트리(3-하이드록실프로필)포스핀)를 바람직하게는 반응 포트로부터 제거하거나, 아지드 화합물(예를 들어, 4-(아지도메틸)벤조산)을 첨가하여 켄칭한다.
티오에테르를 통해 연결된 접합체의 합성은 말레이미도 또는 할로아세틸 또는 에틸술포닐 또는 치환된 프로피올기의 티올 반응성 말단 모두를 함유하는 링커와 항체의 티올의 제1 반응에 의해 달성되고, 2℃- 8℃, pH 4.5 - 6.5에서 본 특허 출원의 공정에 의해 환원되어, 화학식 (X), (XI) 또는 (XII)의 항체-링커 접합체를 제공하고, 이어서 pH 6.5-8.0, 20 ℃-40 ℃에서 티올을 함유한 약물과 반응하여, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 접합체를 제공한다. 티오에테르 연결된 접합체에 대한 제2 단계 반응에 대해 동일한 pH 및/또는 온도 조건이 선택되면, 이중 말단 티올 반응성을 포함하는 링커의 4배 이상의 당량이 접합에 사용된다. 이황화물 또는 티올-에테르 연결된 접합체의 바람직한 합성 방법은 제1 화학적 합성을 통해 화학식 (IV), (V) 또는 (VI)의 이황화물 또는 티올-에테르 결합을 갖는 약물-링커 복합체를 합성하고; 이어서 본 발명의 공정에 따라 단백질(항체) 내의 티올과 반응한다는 점에 유의해야 한다. 산에 불안정한 히드라존 결합을 갖는 접합체의 합성은 당업계에 공지된 방법에 의해 카르보닐기와 링커의 히드라지드 모이어티의 반응에 의해 달성될 수 있다(예를 들어, P. Hamann et al., Cancer Res. 53, 3336-34, 1993; B. Laguzza et al., J. Med., 32; P. Trail et al., 100-5, 1997). 트리아졸 결합을 갖는 접합체의 합성은 클릭 화학(Huisgen cycloaddition)을 통해 약물의 1-인(yne) 기와 링커의 아지도 모이어티의 반응에 의해 달성될 수 있다(Lutz, J-F. et al, 2008, Adv. Drug Del. Rev.60, 958?70; Sletten, E. M. et al 2011, AccChem. Research44, 666-76). 옥심을 통해 연결된 접합체의 합성은 케톤 또는 알데히드를 함유한 변형된 항체와 옥시아민기를 함유한 약물의 반응에 의해 달성된다. 하이드록실 기 또는 티올 기를 함유한 약물은 약한 염기 존재(예를 들어 pH 8.0~9.5) 하에서, 할로겐, 특히 카르복실산염의 알파 할로겐화물을 함유한 화학식 (X), (XI) 또는 (XII)의 변형된 링커와 반응하여, 화학식 (IV), (V) 또는 (VI)의 에테르 또는 티올 에테르 결합을 갖는 변형된 약물/링커 복합체를 제공한다. 하이드록실기를 함유하는 약물은 EDC 또는 DCC와 같은 탈수제의 존재 하에서, 카르복실기를 함유하는 화학식 (X), (XI) 또는 (XII)의 링커와 축합하여, 에스테르 결합을 제공할 수 있고, 그 다음 본 발명의 약물/링커 복합체는 본 발명의 공정에 따라 항체와 접합을 겪는다. 아미노기를 함유한 약물은 화학식 (X), (XI) 또는 (XII)의 항체-링커에서, NHS, 이미다졸, 니트로페녹실; N-하이드록시숙신이미드(NHS); 메틸설포닐페녹실; 디니트로페녹실; 펜타플루오로페녹실; 테트라플루오로페녹실; 디플루오로페녹실; 모노플루오로페녹실; 펜타클로로페녹실; 트리플레이트; 이미다졸; 디클로로페녹실; 테트라클로로페녹실; 1-히드록시벤조트리아졸; 토실레이트; 메실레이트; 2-에틸-5-페닐이속사졸륨-3'-술포네이트의 카르복실 에스테르와 축합되어, 화학식 (I), (II), 또는 (III)의 아미드 결합 연결을 통해 접합체를 제공한다. 항체-약물 접합의 많은 일반적인 화학적 및 생화학적 과정은 당업계에 공지되어 있다(예를 들어, Matsuda, Y. and Mendelsohn, B. A.,Expert Opin Biol Ther. 2021, 21(7): 963-975; Puthenveetil, S. , Methods Mol Biol. 2020, 2078: 99-112; van Delft, F., and Lambert, J. M., ed. "항체-약물 접합체(ADC)의 화학적 링커(Chemical Linkers in Antibody-Drug Conjugates(ADC))", Royal Soc., 22. 2021, ISBN 978-1-83916-263-3, doi:10.1039/9781839165153; Tumey, L.N., ed., Springer Pub., 2020, ISBN: 978-1-4939 -9929-3; Khongorzul, P. et al, Mol Cancer Res. 2020,18(1):3-19 및 이들 책과 논문에 포함된 많은 문헌 참조).
일부 실시예에서, BCMA 항체 접합체는 바람직하게는 다음의 3가지 주요 단계를 포함하는 비균질 접합 공정을 통해 제조된다:
(a) 항체 내의 사슬 간 이황화 결합을 선택적으로 환원시켜 티올을 생성하기 위해, 완충 시스템(예를 들어, PBS, 메스(Mes), 비스-트리스(Bis-Tris), 비스-트리스 프로판, 파이프스(Pipes), 에이스(Aces), 맙소(Mopso), 베스(Bes), 맙스(Mops), 헤페스(Hepes), 테스(Tes), 핍스(Pipps), 딥소(Dipso), 탭소(Tapso), 헵소(Heppso), 트리스-업(Tris-up), 트리스-HCl, 트리신(Tricine), 헵스(Hepps), 글리-글리(Gly-Gly), 비신(Bicine), 탭스(Taps), 헤피(Hepee), 아세테이트(Acetates), 히스티딘(Histidine), 시트레이트(Citrates), MES, 붕산염(Borates))에서 유효량의 아연 양이온-아미노 킬레이트/복합체 (Zn(NR1R2R3)m1 2+) 및 환원제(예를 들어, Tris(2-카르복시에틸)포스핀(TCEP))의 존재 하에 항체를 배양하는 단계;
(b) 단계(a)에서 생성된 티올기와 반응시키기 위해, 티올 반응성 기(예를 들어, 말레이미드 말단을 함유하는 약물)를 함유하는, 화학식 (IV), (V) 또는 (VI)에 따른 유효량의 페이로드/링커 복합체/어셈블리, 또는 화학식 (VII), (VIII) 또는 (IX)에 따른 유효량의 링커를 도입하는 단계; 및
(c) 유효량의 산화제(예를 들어, 데히드로아스코르브산(DHAA))를 첨가하여, 미반응 티올기를 재-산화시킨 후, 생성된 접합체를 정제하는 단계;
(d) 단계 (c)는 티올 반응성 기(예를 들어, 말레이미드)를 함유하는 과잉 접합 링커 또는 링커/페이로드 복합체를 켄칭하기 위해 유효량의 시스틴을 첨가하는 단계; 및 미반응 환원제(예를 들어, TCEP 또는 트리스(히드록시프로필)포스핀)를 켄칭하기 위해 동시에 또는 순차적으로 아지도 화합물(예를 들어, 4-(아지도메틸)-벤조산) 또는 이황화 화합물(예를 들어, 시스틴)을 첨가하는 단계로 대체될 수 있다. 미반응 환원제(예를 들어, TCEP)를 켄칭하기 위해 시스틴을 첨가하면, 티올 반응성 기(예를 들어, 말레이미드)을 함유하는 과잉 접합 링커 또는 링커/페이로드 복합체를 동시에 켄칭할 수 있는 시스테인을 형성할 수 있다.
Zn(NR1R2R3)m1 2+의 화학식에서 R1, R2 및 R3은 독립적으로 C1-C8 알킬; C2-C8 헤테로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 아릴, Ar-알킬, 헤테로시클릭, 카르보시클릭, 시클로알킬, 헤테로알킬시클로알킬, 알킬카르보닐, 헤테로아릴로부터 선택되고; m1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8으로부터 선택되고; 바람직하게는 m1은 1, 2, 3 또는 4이다.
또한,(NR1R2R3)m1은 이량체, 삼량체, 사량체, 오량체 또는 육량체를 형성할 수 있으며, 여기서 이들 중합체는 N, R1, R2 및 R3 사이에 공유 결합되며; N, R1, R2 또는 R3 자체는 함께 헤테로사이클릭, 카르보사이클릭, 디헤테로사이클릭 또는 디카르보사이클릭 고리를 형성할 수 있다.
단계(a)에서 사용되는, 아연 양이온-아미노 킬레이트/복합체[ Zn(NR1R2R3)m1 2+]는 농도가 0.01mM~1.0mM, 즉 단백질 몰당 0.5~20당량이며, 이는 에탄올, 메탄올, 프로판올, 프로판디올, DMA, DMF, DMSO, THF, CH3CN으로부터 선택된, 수용성 유기 용매와 함께 반응 용액에 첨가될 수 있다. .
환원제는 바람직하게는 트리스(2-카르복시에틸)-포스핀(TECP) 또는 트리스(히드록시프로필)포스핀에서 선택되는 유기 포스핀이며, 반응 용액에서의 이의 사용은 농도가 0.02mM~1.0mM이거나 단백질 몰당 1.0~20당량이다. 단계(c)에서 첨가되는 산화제는 DHAA, Fe3+, I2, Cu2+, Mn3+, MnO2 또는 Fe3+/I-의 혼합물일 수 있다. 반응용액에 사용되는 산화제는 농도가 0.02mM~1.0mM, 단백질 몰당 0.2~100당량이다. 접합 반응의 최적 pH는 일반적으로 약 5.0~8.0, 바람직하게는 약 5.5~7.5이다. 접합 반응의 최적 온도는 일반적으로 약 -5 ~ 약 40℃, 바람직하게는 약 0 ~ 37℃, 보다 바람직하게는 약 2~8℃; 더욱 바람직하게는 약 2~6℃이다. 접합 반응의 최적 시간은 일반적으로 약 15분~약 48시간, 바람직하게는 약 30분~하룻밤(10~16시간), 더욱 바람직하게는 약 2시간~6시간이다. 물론 최적의 반응 조건(예를 들어, pH, 온도, 완충액, 반응물의 농도)은 구체적으로 사용된 항체 유사 단백질, 페이로드/링커 복합체, 환원제 및/또는 Zn(NR1R2R3)m1 2+에 따라 달라진다.
추가 실시예에서, 균질 접합 공정 하에서, 생성된 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 접합체는 항체의 중-경쇄 사이의 시스테인 부위에 75% 이상 연결되고, 15% 미만은 항체의 중-중쇄(경첩 영역) 사이의 시스테인 부위에 연결된다. 일반적으로 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 경우, 약물/항체 비율(DAR)이 4로 설정되면, 화학식 (III)의 경우, 항체 내 약물 수의 백분율 분포는 D0 < 1%, D2 < 10%, D4 > 65%, D6 < 10%, D8 < 10%이다.
생성된 접합체는 표준 생화학적 수단, 예를 들어 세파덱스(Sephadex) G25 또는 세파크릴(Sephacryl) S300 컬럼에서의 겔 여과, 흡착 크로마토그래피, 이온(양이온 또는 음이온) 교환 크로마토그래피 또는 투석(한외여과 또는 과여과(UF) 및 정용여과(DF))에 의해 정제될 수 있다. 어떤 경우에는, 소분자 약물과 접합된 소분자 항체 분자(예를 들어, <100 KD)을 HPLC, 중압 컬럼 크로마토그래피 또는 이온 교환 크로마토그래피와 같은 크로마토그래피로 정제할 수 있다.
일반적으로, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 접합체는 바람직하게는 원 포트 반응에서와 같이, 화학식 (IV), (V) 또는 (VI)의 약물/링커 복합체로부터 생성된다. 항체로부터 환원된 티올이 화학식 (IV), (V) 또는 (VI)의 약물/링커 복합체 말단의 티올 반응기와 반응하는 경우, 엘만(Ellman) 시약을 선택적으로 사용하여, 반응 중 유리 티올의 수 측정을 통하여 이황화물 결합의 효율적인 환원 및 티올의 접합을 모니터링할 수 있다. 190-390 nm, 바람직하게는 240-380 nm, 보다 바람직하게는 240-370 nm 파장 범위의 UV 분광법이 (접합의 모니터링 통해) 반응을 보조하는 것이 바람직하다. 따라서, 접합 반응은 온도 제어 환경에서 석영 셀 또는 피렉스(Pyrex) 플라스크에서 측정되거나 수행될 수 있다. 접합체의 약물/단백질(항체) 비율(DAR)은 약물 및 단백질의 농도 계산을 통한 240-380nm 파장 범위의 UV에 의해 측정되거나, 각 약물/단백질 단편의 통합(integration) 영역의 측정을 통한 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC-HPLC)에 의해 측정되거나, 모세관 전기영동(CE)에 의해 측정되거나, 및/또는 LC-MS 또는 LC-MS/MS 또는 CE-MS(각 약물/단백질 단편에 대한 LC 또는 CE의 통합 영역과 MS의 피크 강도 측정을 통한 액체 크로마토그래피(LC) 또는 CE와 질량 분석법(MS)의 조합)에 의해 측정될 수 있다. 또한, 본 발명의 접합 공정에서, 약물 또는 약물/링커 복합체가 수성 완충 용액에 잘 용해되지 않는 경우, DMA, DMF, 에탄올, 메탄올, 아세톤, 아세토니트릴, THF, 이소프로판올, 디옥산, 프로필렌 글리콜 또는 에틸렌 디올과 같은 물 혼합가능(혼화성) 유기 용매를 최대 30%만큼 물 기반 완충 용액에 공-용매로 첨가할 수 있다.
항체의 변형을 위한 수용액은 pH 4와 9 사이, 바람직하게는 6.0과 7.5 사이에서 완충되며, 이러한 pH 범위에 유용한 임의의 비-친핵성 완충염을 함유할 수 있다. 일반적인 완충액에는 인산염, 아세트산염, 트리에탄올아민 HCl, HEPES 및 MOPS 완충액이 포함되며, 여기에는 시클로덱스트린, 자당 및 염(예를 들어, NaCl 및 KCl)과 같은 추가 구성 요소가 포함될 수 있다. 접합 공정에 사용되는 기타 생물학적 완충제는 정의 섹션에 나열되어 있다. 반응의 진행은 254 nm와 같은 특정 UV 파장에서의 흡수 감소, 또는 280 nm와 같은 특정 UV 파장 또는 기타 적절한 파장에서의 흡수 증가를 측정하여 모니터링할 수 있다. 반응이 완료된 후, 변형된 세포 결합 항체 유사 단백질 제제의 분리는 예를 들어, 겔 여과 크로마토그래피 또는 흡착 크로마토그래피를 사용하여 일반적인 방식으로 수행될 수 있다.
항체의 변형을 위해 이황화 교환 반응을 사용하는 경우, 변형 정도는 UV 스펙트럼을 통해 방출되는 니트로피리딘 티온, 디니트로피리딘 디티온, 피리딘 티온, 카르복실아미도피리딘 디티온 및 디카르복실아미도피리딘 디티온 기의 흡광도를 측정하여 평가할 수 있다. 발색단이 없는 접합의 경우, 변형 또는 접합 반응은 LC-MS, 바람직하게는 UPLC-QTOF 질량 분석법 또는 모세관 전기영동-질량 분석법(CE-MS)으로 모니터링할 수 있다. 링커 화합물은 약물, 바람직하게는 적합해진 치환기를 갖는 세포독성제와 반응할 수 있는 다양한 작용기를 갖는다. 예를 들어, 아미노 또는 하이드록실 치환기를 함유하는 변형된 항체는 N-하이드록시숙신이미드(NHS) 에스테르를 함유하는 약물과 반응할 수 있고, 티올 치환기를 함유하는 변형된 항체는 말레이미도 또는 할로아세틸 기를 함유하는 약물과 반응할 수 있다. 또한, 카르보닐(케톤 또는 알데히드) 치환기를 함유하는 변형된 항체는 히드라지드 또는 알콕시아민을 함유하는 약물과 반응할 수 있다. 당업자는 링커 상의 이용가능한 작용기의 공지된 반응성에 기초하여 어느 링커를 사용할 것인지 쉽게 결정할 수 있다.
제형화 및 적용
특허 출원의 BCMA 접합체는 액체로 제형화되거나, 동결건조된 후 액체 제형로 재구성되기에 적합하다. 액체 제형 또는 제형화된 동결건조 분말 내의 접합체는 제형의 주요 구배로서 0.01%-99중량%를 차지할 수 있다. 일반적으로, 높은 레벨의 항체 응집(aggregation) 없이 환자에게 전달하기 위한 0.1g/L~300g/L 농도의 접합체 활성 성분을 포함하는 액체 제형은 하나 이상의 폴리올(예를 들어, 당), pH 4.5 내지 7.5의 완충제, 계면활성제(예를 들어, 폴리소르베이트 20 또는 80), 항산화제(예를 들어, 아스코르브산 및/또는 메티오닌), 긴장제(예를 들어, 만니톨, 소르비톨 또는 NaCl), 킬레이트제(예를 들어, EDTA); 금속 복합체(예를 들어, Zn-단백질 복합체); 폴리에스테르와 같은 생분해성 중합체; 보존제(예를 들어, 벤질 알코올) 및/또는 유리 아미노산을 포함할 수 있다.
제형에 사용하기에 적합한 완충제는 시트르산, 아스코르브산, 글루콘산, 탄산, 타르타르산, 숙신산, 아세트산 또는 프탈산의 나트륨, 칼륨, 암모늄 또는 트리히드록시에틸아미노 염과 같은 유기산염; 트리스, 트로메타민 염산염, 황산염 또는 인산염 완충액을 포함하지만 이들에 제한되지 않는다. 또한, 아미노산 양이온성 성분도 완충제로 사용될 수 있다. 이러한 아미노산 성분에는 아르기닌, 글리신, 글리실글리신 및 히스티딘이 포함되지만, 이들에 제한되지는 않는다. 아르기닌 완충제는 아르기닌 아세테이트, 아르기닌 클로라이드, 아르기닌 포스페이트, 아르기닌 설페이트, 아르기닌 숙시네이트 등을 포함한다. 일 실시예에서, 아르기닌 완충제는 아르기닌 아세테이트이다. 히스티딘 완충액의 예로는 염화히스티딘-염화아르기닌, 히스티딘 아세트산-아르기닌 아세트산, 히스티딘 인산염-아르기닌 인산염, 히스티딘 황산염-아르기닌 황산염, 히스티딘 숙신산염-아르긴 숙신산염 등이 포함된다. 완충액의 제형은 pH 4.5 내지 pH 7.5, 바람직하게는 약 4.5 내지 약 6.5, 보다 바람직하게는 약 5.0 내지 약 6.2를 갖는다. 일부 실시예에서, 완충액 중 유기산염의 농도는 약 10 mM 내지 약 500 mM이다.
제형에 선택적으로 포함될 수 있는 "폴리올"은 다중 하이드록실기를 갖는 물질이다. 폴리올은 액체 및 동결건조된 제형 모두에서 안정화 부형제 및/또는 등장제로 사용될 수 있다. 폴리올은 물리적 및 화학적 분해 경로 모두로부터 바이오의약품을 보호할 수 있다. 우선적으로 제외된 공-용매는 단백질 경계면에서 용매의 효과적인 표면 장력을 증가시키며, 이로 인해 가장 에너지적으로 유리한 구조 형태는 표면적이 가장 작은 구조이다. 폴리올에는 설탕(환원당 및 비환원당), 당알코올, 당산이 포함된다. "환원당"은 금속 이온을 환원시키거나 단백질의 라이신 및 기타 아미노기와 공유적으로 반응할 수 있는 헤미아세탈기를 함유하는 것이고, "비환원당"은 환원당의 이러한 특성을 갖지 않는 것이다. 환원당의 예로는 과당, 만노스, 말토스, 유당, 아라비노스, 자일로스, 리보스, 람노스, 갈락토스 및 포도당이 있다. 비환원당에는 자당, 트레할로스, 소르보스, 멜레지토스 및 라피노스가 포함된다. 당 알코올은 만니톨, 자일리톨, 에리트리톨, 말티톨, 락티톨, 에리트리톨, 트레이톨, 소르비톨 및 글리세롤로부터 선택된다. 당산에는 L-글루코네이트 및 이의 금속염이 포함된다. 액체 제형 또는 제형화된 동결건조 고체 내의 폴리올은 중량 기준으로 0.0%-20%일 수 있다. 바람직하게는, 약 0.1% 내지 15% 농도의 비환원당, 수크로스 또는 트레할로스가 제형에 선택되며, 여기서 트레할로스의 용액 안정성 때문에 트레할로스가 수크로스보다 바람직하다.
선택적으로 제형 중의 계면활성제는 폴리소르베이트(폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 65, 폴리소르베이트 80, 폴리소르베이트 81, 폴리소르베이트 85 등); 폴록사머(예를 들어, 폴록사머 188, 폴리(에틸렌 옥사이드)-폴리(프로필렌 옥사이드), 폴록사머 407 또는 폴리에틸렌-폴리프로필렌 글리콜 등); 트리톤; 나트륨 도데실 황산염(SDS); 나트륨 로렐 황산염; 나트륨 옥틸 글리코시드; 라우릴-, 미리스틸-, 리놀레일- 또는 스테아릴-설포베타인; 라우릴-, 미리스틸-, 리놀레일- 또는 스테아릴-사르코신; 리놀레일-, 미리스틸- 또는 세틸-베타인; 라우로아미도프로필-, 코카미도프로필-, 리놀레아미도프로필-, 미리스타미도프로필-, 팔미도프로필- 또는 이소스테아미도-프로필-베타인(예를 들어, 라우로아미도프로필); 미리스타미도프로필-, 팔미도프로필-, 또는 이소스테아르아미도-프로필-디메틸아민; 나트륨 메틸 코코일- 또는 이나트륨 메틸 올레일-타우레이트; 도데실 베타인, 도데실 디메틸아민 옥사이드, 코카미도프로필 베타인 및 코코 암포 글리시네이트; 및 MONAQUAT™ 시리즈(예를 들어, 이소스테아릴 에틸이미도늄 에토설페이트); 폴리에틸 글리콜, 폴리프로필 글리콜, 및 에틸렌과 프로필렌 글리콜의 공중합체(예를 들어, Pluronics, PF68 등); 등으로부터 선택된다. 바람직한 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르, 예를 들어 폴리소르베이트 20, 40, 60 또는 80(트윈(Tween) 20, 40, 60 또는 80)이다. 제형 중 계면활성제의 농도는 0.0중량% 내지 약 2.0중량%의 범위이다. 특정 실시예에서, 계면활성제의 농도는 약 0.01% 내지 약 0.2%이다. 일 실시예에서, 계면활성제의 농도는 약 0.02%이다.
선택적으로 제형에 포함된 "보존제"는 그 안에서 박테리아 작용을 본질적으로 감소시키는 화합물이다. 잠재적인 보존제의 예로는 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드, 헥사메토늄 클로라이드, 벤잘코늄 클로라이드(알킬기가 장-쇄 화합물인 알킬벤질디메틸암모늄 클로라이드의 혼합물) 및 벤제토늄 클로라이드가 포함된다. 다른 유형의 보존제에는 페녹실, 부틸 및 벤질 알코올과 같은 방향족 알코올, 메틸 또는 프로필 파라벤과 같은 알킬 파라벤, 카테콜, 레조르시놀, 시클로헥산올, 3-펜탄올 및 m-크레졸이 포함된다. 액체 제형 또는 제형화된 동결건조 분말의 보존제는 중량 기준으로 0.0%-5.0%일 수 있다. 일 실시예에서, 본 출원의 보존제는 벤질 알코올이다.
제형에서 벌키(bulky) 물질, 긴장제 또는 삼투압 조절제로서 적합한 유리 아미노산은 아르기닌, 시스틴, 글리신, 리신, 히스티딘, 오르니틴, 이소류신, 류신, 알라닌, 글리신 글루탐산 또는 아스파르트산 중 하나 이상으로부터 선택되지만, 이들에 제한되지는 않는다. 염기성 아미노산, 즉 아르기닌, 라이신 및/또는 히스티딘을 포함시키는 것이 바람직하다. 조성물이 히스티딘을 포함하는 경우, 이는 완충제 및 유리 아미노산 모두로 작용할 수 있지만, 히스티딘 완충제가 사용되는 경우, 비-히스티딘 유리 아미노산, 예를 들어, 히스티딘 완충액 및 라이신을 포함하는 것이 일반적이다. 아미노산은 D- 및/또는 L-형태로 존재할 수 있지만, L-형태가 일반적이다. 아미노산은 임의의 적절한 염, 예를 들어 아르기닌-HCl과 같은 염산염으로 존재할 수 있다. 액체 제형 또는 제형화된 동결건조 분말 내의 아미노산은 중량 기준으로 0.0%-30%일 수 있다.
제형은 선택적으로 항산화제로서 메티오닌, 글루타티온, 시스테인, 시스틴 또는 아스코르브산을, 액체 제형에서 최대 약 5 mg/ml 또는 제형화된 동결건조 분말에서 0.0%-5.0 중량%의 농도로 포함할 수 있고; 제형은 선택적으로 금속 킬레이트제, 예를 들어 EDTA, EGTA 등을, 액체 제형에서 최대 약 2 mM 또는 제형화된 동결건조 분말에서 0.0%-0.3 중량%의 농도로 포함할 수 있다.
최종 제형은 완충액 조정제(예를 들어, HCl, H2SO4, 아세트산, H3PO4, 시트르산 등과 같은 산, 또는 NaOH, KOH, NH4OH, 에탄올아민, 디에탄올아민 또는 트리에탄올아민, 인산나트륨, 인산칼륨, 구연산삼나트륨, 트로메타민 등과 같은 염기)를 사용하여 바람직한 pH로 조정될 수 있고, 제형은 "등장성"으로 제어되어야 하며, 이는 관심 제형이 인간 혈액과 본질적으로 동일한 삼투압을 갖는다는 것을 의미한다. 등장성 제형은 일반적으로 약 250 내지 350mOsm의 삼투압을 가질 것이다. 등장성은 예를 들어, 증기압 또는 얼음 동결형 삼투압계를 사용하여 측정할 수 있다. 등장화제는 만니톨, 소르비톨, 아세트산나트륨, 염화칼륨, 인산나트륨, 인산칼륨, 시트르산삼나트륨, 또는 NaCl로부터 선택된다. 일반적으로, 완충염과 등장화제는 모두 제형에서 최대 30중량%를 차지할 수 있다.
특허 출원의 액체 또는 동결건조 제형에 유용할 수 있는 다른 부형제는 예를 들어, 푸코스, 셀로비오스, 말토트리오스, 멜리비오스, 옥툴로스, 리보스, 자일리톨, 아르기닌, 히스티딘, 글리신, 알라닌, 메티오닌, 글루탐산, 라이신, 이미다졸, 글리실글리신, 만노실글리세레이트, 트리톤 X-100, 플루오로닉(Pluoronic) F-127, 셀룰로오스, 시클로덱스트린, (2-하이드록시프로필)-β-시클로덱스트린, 덱스트란(10, 40 및/또는 70 kD), 폴리덱스트로스, 말토덱스트린, 피콜, 젤라틴, 하이드록시프로필메트, 인산나트륨, 인산칼륨, ZnCl2, 아연, 산화아연, 구연산나트륨, 구연산삼나트륨, 트로메타민, 구리, 피브로넥틴, 헤파린, 인간 혈청 알부민, 프로타민, 글리세린, 글리세롤, EDTA, 메타크레졸, 벤질 알코올, 페녹실, 다가 알코올, 또는 다중 알코올, 1차 또는 2차 하이드록실기로 환원된 카르보닐기를 갖는 수소화된 형태의 탄수화물을 포함한다.
특허 출원의 수성 제약 조성물에 사용될 수 있는 다른 고려되는 부형제는 예를 들어, 향미제, 항미생물제, 감미제, 항산화제, 정전기 방지제, 인지질 또는 지방산과 같은 지질, 콜레스테롤과 같은 스테로이드, 혈청 알부민(인간 혈청 알부민)과 같은 단백질 부형제, 재조합 인간 알부민, 젤라틴, 카제인, 나트륨 등과 같은 염-형성 반대이온를 포함한다. 본 발명의 제형에 사용하기에 적합한 이들 및 추가의 공지된 제약 부형제 및/또는 첨가제는 예를 들어, "The Handbook of Pharmaceutical Excipients, 4th edition, Rowe et al., Eds., American Pharmaceuticals Association (2003); and Remington: the Science and Practice of Pharmacy, 21th edition, Gennaro, Ed., Lippincott Williams & Wilkins (2005)"에 나열된 바와 같이 당업계에 공지되어 있다.
제약 컨테이너 또는 용기는 특허 출원의 임의의 접합체의 제약 제형을 담는 데 사용된다. 용기는 바이알, 병, 사전 충전형 주사기, 사전 충전형 또는 자동 주사기이다. 액체 제형은 동결건조 또는 드럼건조하여(drum-dryed), 붕규산 바이알 또는 소다석회 유리 바이알 내의 케이크 또는 분말 형태로 만들 수 있다. 또한, 효율적인 분무 건조를 통해 고체 분말을 제조한 다음, 보관 및 유통을 위해 바이알이나 약품 용기에 포장할 수도 있다.
추가 실시예에서, 본 발명은 (a) 접합체, 부형제 및 완충 시스템을 포함하는 제형을 동결건조시키는 단계; 및 (b) 재구성된 제형이 안정하도록, 재구성 매질에서 단계(a)의 동결건조된 혼합물을 재구성하는 단계를 포함한다. 단계(a)의 제형은 안정화제 및 상기 기재된 바와 같은 증량제, 염, 계면활성제 및 보존제를 포함하는 군으로부터 선택된 하나 이상의 부형제를 추가로 포함할 수 있다. 재구성 매질로는, 여러 가지 희석된 유기산 또는 물(예를 들어, 멸균수, 주사용 정균수(BWFI))을 사용할 수 있다. 재구성 매질은 물, 즉 멸균수, 주사용 정균수(BWFI) 또는 아세트산, 프로피온산, 숙신산, 염화나트륨, 염화마그네슘, 염화나트륨 산성 용액, 염화마그네슘 산성 용액 및 및 아르기닌 산성 용액으로 구성된 군으로부터 약 10 내지 약 250mM의 양으로 선택될 수 있다.
특허 출원의 접합체의 액체 제약 제형은 미리 정의된 다양한 특성을 나타내야 한다. 액상 의약품의 주요 관심사 중 하나는 안정성이다. 이는 단백질/항체가 제조 및 보관 중에 가용성 및 불용성 응집체를 형성하는 경향이 있기 때문이다. 또한, 용액에서 다양한 화학 반응(탈아미드화, 산화, 클리핑, 이성질체화 등)이 발생하여, 분해 산물 레벨이 증가하거나, 생체 활성이 손실될 수 있다. 바람직하게는, 액체 또는 동결건조 제형의 접합체는 25℃에서 6개월 이상의 저장 수명을 나타내야 한다. 보다 바람직한 액체 또는 동결건조 제형의 접합체는 25℃에서 12개월 이상의 저장 수명을 나타내야 한다. 가장 바람직한 액체 제형는 2-8℃에서 약 24-36개월의 저장 수명을 나타내야 하고, 동결건조 제형은 2-8℃에서 최대 약 60개월의 저장 수명을 나타내야 한다. 액체 및 동결건조 제형 둘 다는 -20℃ 또는 -70℃에서 적어도 2년의 저장 수명을 나타내야 한다.
특정 실시예에서, 제형은 제형의 동결(예를 들어 -20℃ 또는 -70℃) 및 해동 후, 예를 들어 1, 2 또는 3회의 동결 및 해동 주기 후에 안정적이다. 안정성은 약물/항체(단백질) 비율 및 응집체 형성 평가(예를 들어, UV, 크기 배제 크로마토그래피를 사용함, 탁도 측정 및/또는 육안 검사에 의함); 양이온 교환 크로마토그래피, 이미지 모세관 등전점 전기영동(icIEF) 또는 모세관 구역 전기영동을 사용한 전하 이질성 평가함; 아미노-말단 또는 카르복시-말단 서열 분석; 질량 분석법 또는 매트릭스 보조 레이저 탈착 이온화/비행 시간 질량 분석법(MALDI/TOF MS), 또는 HPLC-MS/MS; 환원된 항체와 온전한(intact) 항체를 비교하기 위한 SDS-PAGE 분석; 펩티드 맵(예를 들어, 트립신 또는 LYS-C) 분석; 항체의 생물학적 활성 또는 항원 결합 기능 평가 등을 비롯한 다양한 방법으로 정성적 및/또는 정량적으로 평가될 수 있다. 불안정성은 응집, 탈아미드화(예를 들어, Asn 탈아미드화), 산화(예를 들어, Met 산화), 이성질체화(예를 들어, Asp 이성체화), 클리핑/가수분해/단편화(예를 들어, 힌지 영역 단편화), 숙신이미드 형성, 짝이 없는(unpaired) 시스테인(들), N-말단 연장, C-말단 프로세싱, 글리코실화 차이 등 중 하나 이상을 포함할 수 있다.
안정한 접합체는 또한 접합체의 생물학적 활성이 항원 결합 분석 및/또는 시험관내 세포독성 분석에서 결정된 바와 같이, 주어진 시간, 예를 들어 24개월 후에 약제학적 제형이 제조될 때 나타난 생물학적 활성의 약 20%, 바람직하게는 약 10%(분석 오차 범위 내) 이내에 있는 경우, 제약 제형에서 "생물학적 활성을 유지"해야 한다.
임상적 생체내 사용을 위해, 본 발명의 접합체는 주사용 멸균수에 재용해될 수 있는, 용액 또는 동결건조된 고체로 공급될 것이다. 접합체 투여의 적합한 프로토콜의 예는 다음과 같다. 접합체는 매일, 매주, 격주, 삼주마다, 4주 또는 매월 한 번, 8~54주 동안 i.v. 볼루스로 제공된다. 볼루스 용량은 인간 혈청 알부민(예를 들어, 인간 혈청 알부민 농축 용액 0.5~1mL, 100mg/mL)을 선택적으로 첨가할 수 있는, 50~1000ml의 일반 식염수로 제공된다. 복용량은 주당 체중 kg당 약 50μg~20mg이다(주사당 10 μg ~ 200 mg/kg 범위). 치료 후 4~108주 후에, 환자는 제2 치료 과정을 받을 수 있다. 투여 경로, 부형제, 희석제, 투여량, 시간 등에 관한 구체적인 임상 프로토콜은 숙련된 임상의에 의해 결정될 수 있다.
선택된 세포 집단을 죽이는 생체내 또는 생체외 방법에 따라 치료될 수 있는 의학적 병태의 예로는 모든 유형의 암의 악성종양, 자가면역 질환, 이식 거부반응 및 감염(바이러스, 박테리아 또는 기생충)이 포함된다.
원하는 생물학적 효과를 달성하는 데 필요한 접합체의 양은 접합체의 화학적 특징, 잠재성, 생체이용률, 질환의 유형, 환자가 속한 종, 환자의 질환 상태, 투여 경로, 요구되는 투여량, 전달 및 투여될 요법을 나타내는 모든 인자를 비롯하여, 다수의 인자에 따라 달라질 것이다.
일반적으로, 본 발명의 접합체는 비경구 투여의 경우 0.1 내지 10% w/v 접합체를 함유하는 수성 생리 완충액 중에 제공될 수 있다. 전형적인 투여량 범위는 일 단위; 주 단위; 격주 단위; 3주 단위 또는 개월 단위로 체중 1kg당 1㎍ 내지 0.1g이며, 바람직한 투여량 범위는 주 단위; 격주 단위; 3주 단위 또는 개월 단위로 체중 1kg당 0.01mg 내지 25mg이며, 이는 인간에게서 동등한 투여량이다. 투여될 약물의 바람직한 투여량은 질환 또는 장애의 유형 및 진행 정도, 특정 환자의 전반적인 건강 상태, 선택된 화합물의 상대적인 생물학적 효능, 화합물의 제형, 투여 경로(정맥내, 근육내 등), 선택된 전달 경로에 의한 접합체의 약동학 특성 및 투여 속도(볼러스 또는 연속적 주입) 및 투여 스케줄(주어진 시간 동안의 반복 횟수)과 같은 변수에 좌우될 것이다.
일부 실시예에서, 재구성된 접합체가 피부 아래, 근육 내 또는 신체의 다른 조직 내에 주사되는 경우, 히알루로니다제(HAase)가 접합체와 함께 투여되는 것이 바람직하다. 여기에서 히알루로니다아제는 환자의 신체가 주입된 접합체를 흡수하도록 돕는 보조제로 사용된다. 히알루로니다제는 시너지적으로 20~200 단위 용량, 바람직하게는 60~160 단위 용량으로 사용된다.
본 발명의 접합체는 또한 단위 용량 형태로 투여될 수 있는데, 여기서 용어 "단위 용량"은 환자에게 투여될 수 있고, 쉽게 취급 및 포장될 수 있고, 활성 접합체 자체 또는 하기에 기술된 바와 같은 약제학적으로 허용 가능한 조성물을 포함하는 물리학적으로 그리고 화학적으로 안정적인 단위 용량으로 유지되는 단일 용량을 의미한다. 이와 같이, 전형적인 전체 일 단위/주 단위/격주 단위/개월 단위 용량 범위는 체중 1kg당 0.01 내지 100㎎이다. 일반적인 가이드라인에 의해서, 인간의 경우 단위 용량은 일, 주, 2주(격주), 3주 또는 개월당 1㎎ 내지 3000㎎의 범위이다. 바람직하게는, 단위 용량 범위는 1개월에 1 내지 4회 투여되는 1 내지 500㎎이고, 보다 더 바람직하게는 1주 1회 또는 격주 1회 또는 3주 1회의 1㎎ 내지 100㎎이다. 본 명세서에 제공된 접합체는 1종 이상의 약제학적으로 허용 가능한 부형제와 혼합함으로써 약제학적 조성물로 제형화될 수 있다. 이러한 단위 용량 조성물은 경구 투여, 특히 정제, 단순 캡슐 또는 연질 젤 캡슐의 형태; 또는 비강내, 특히 분말, 비강 점적액 또는 에어로졸의 형태; 또는 피부, 예를 들어, 연고, 크림, 로션, 젤 또는 스프레이 또는 경피 패치를 통한 국소 사용을 위해서 제조될 수 있다. 조성물은 단위 용량 형태로 편리하게 투여될 수 있고, 이는 예를 들어, 문헌(Remington: Science and Practice of Pharmacy, 21th ed.; Lippincott Williams & Wilkins: 필라델피아, PA, 2005)에 기재된 바와 같이, 약학 분야에서 널리 알려진 방법에 의해 제조될 수 있다.
제형은 본 발명의 화합물이 경구 또는 비경구 투여용으로 제형화된 제약상 조성물을 포함한다. 경구 투여를 위해, 정제, 환제, 분말, 캡슐, 트로키 등은 하기 성분 또는 유사한 성질의 화합물: 미세결정질 셀룰로오스 또는 트라가칸틴 검과 같은 결합제; 전분 또는 유당과 같은 희석제; 전분 및 셀룰로오스 유도체와 같은 붕해제; 마그네슘 스테아레이트와 같은 윤활제; 콜로이드성 이산화규소와 같은 활택제; 자당 또는 사카린과 같은 감미제; 또는 페퍼민트 또는 메틸 살리실레이트와 같은 향미제 중 하나 이상을 함유할 수 있다. 캡슐은 경질 캡슐 또는 연질 캡슐의 형태일 수 있으며, 이는 일반적으로 가소제와 선택적으로 블렌딩된 젤라틴 블렌드 및 전분 캡슐로부터 제조된다. 또한, 투여 단위 형태는 투여 단위의 물리적 형태를 변형시키는 다양한 기타 물질, 예를 들어 설탕, 셸락 또는 장용제의 코팅을 함유할 수 있다. 다른 경구 투여 형태인 시럽 또는 엘릭서는 감미제, 방부제, 염료, 착색제 및 향료를 포함할 수 있다. 또한, 활성 화합물은 속용성, 변형 방출 또는 지속 방출 제제 및 제형에 혼입될 수 있으며, 여기서 이러한 지속 방출 제형은 바람직하게는 바이-모달(bi-modal)이다. 바람직한 정제는 락토스, 옥수수 전분, 마그네슘 실리케이트, 크로스카멜로스 나트륨, 포비돈, 마그네슘 스테아레이트 또는 활석을 임의의 조합으로 함유한다.
비경구 투여를 위한 액체 제제는 멸균된 수성 또는 비-수성 용액, 현탁액 및 에멀젼을 포함한다. 액체 조성물은 또한 결합제, 완충제, 방부제, 킬레이트제, 감미제, 향미제 및 착색제 등을 포함할 수 있다. 비-수성 용매는 알코올, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름 및 에틸 올레에이트와 같은 유기 에스테르를 포함한다. 수성 담체는 알코올과 물의 혼합물, 완충 매질 및 식염수를 포함한다. 특히, 생체적합성, 생분해성 락타이드 중합체, 락타이드/글리콜라이드 공중합체, 또는 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체는 활성 화합물의 방출을 제어하는 데 유용한 부형제일 수 있다. 정맥내 비히클은 유체 및 영양 보충제, 전해질 보충제, 예켄대 링거 덱스트로스(Ringer's dextrose)를 기반으로 하는 것 등을 포함할 수 있다. 이러한 활성 화합물에 대한 다른 잠재적으로 유용한 비경구 전달 시스템은 에틸렌-비닐 아세테이트 공중합체 입자, 삼투 펌프, 이식 가능한 주입 시스템 및 리포솜을 포함한다.
대체 투여 방식은 건조 분말, 에어로졸 또는 점적제와 같은 수단을 포함하는 흡입용 제형을 포함한다. 이들은 예를 들어, 폴리옥시에틸렌-9-라우릴 에테르, 글리코콜레이트 및 데옥시콜레이트를 함유하는 수용액, 또는 점비제 형태 또는 비강내 도포되는 겔 형태로 투여하기 위한 유성 용액일 수 있다. 협측 투여를 위한 제형은 예를 들어, 로젠지 또는 캔디(pastilles)를 포함하고, 또한 자당 또는 아카시아와 같은 향미 베이스 및 글리코콜레이트와 같은 기타 부형제를 포함할 수 있다. 직장 투여에 적합한 제형은 바람직하게는 코코아 버터와 같은 고체 기반 담체와 함께 단위 용량 좌제로 제공되며, 살리실레이트를 포함할 수 있다. 피부에 국소 적용하기 위한 제형은 바람직하게는 연고, 크림, 로션, 페이스트, 겔, 스프레이, 에어로졸 또는 오일의 형태를 취한다. 사용될 수 있는 담체에는 바셀린, 라놀린, 폴리에틸렌 글리콜, 알코올 또는 이들의 조합이 포함된다. 경피 투여에 적합한 제형은 개별 패치로 제공될 수 있으며, 중합체 또는 접착제에 용해 및/또는 분산된 친유성 에멀젼 또는 완충된 수용액일 수 있다.
또 다른 실시예에서, 치료 유효량의 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 접합체 또는 본 특허를 통해 기술된 임의의 접합체를 포함하는 제약 조성물은 화학요법제, 방사선 요법, 면역요법제, 자가면역 장애 제제, 항-감염제 또는 기타 항체-약물 접합체와 같은 다른 치료제와 공동 투여되어(coadministered), 암, 자가면역 질환 또는 감염성 질환의 치료 또는 예방에서 시너지(상승작용) 효과를 발생시킨다. 본 명세서에 사용된 용어 "공동 투여"는 항체 또는 ADC는 하나 이상의 추가 치료제의 효과를 향상시킬 수 있도록, 하나 이상의 추가 치료제 및 본원에 기술된 항체 또는 ADC, 또는 항체 또는 ADC 함유 조성물을 시간적으로 충분히 근접하게 투여하는 것을 의미한며, 그 반대도 마찬가지이다. 이와 관련하여, 항체 또는 ADC 또는 이를 포함하는 조성물을 먼저 투여하고, 하나 이상의 추가 치료제를 두 번째로 투여할 수도 있고, 그 반대로 투여할 수도 있다. 예를 들어, 항체 또는 ADC 또는 이를 함유하는 조성물은 다발성 골수종의 치료 또는 예방을 위해, 다른 제제(예를 들어, 보조제)와 조합하여 투여될 수 있다. 이러한 점에서, 항체 또는 ADC 또는 항체 또는 ADC 함유 조성물은 예를 들어, 당업계에 공지된 임의의 적합한 화학요법제, 이온화 방사선, 소분자 항암제, 암 백신, 생물학적 치료법(예를 들어, 기타 단일클론 항체, 암-사멸 바이러스, 유전자 치료법 및 입양 T 세포 이식) 및/또는 수술을 포함하는 적어도 하나의 다른 항암제와 조합하여 사용될 수 있다. 상승작용 약물 또는 방사선 요법은 본 발명의 접합체 투여 전 또는 후에, 일 측면에서는 적어도 1시간, 12시간, 1일, 1주, 2주, 3주, 1개월 이상, 추가 측면에서는 수개월에 투여될 수 있다.
상승작용제는 바람직하게는 다음 약물 중 하나 또는 여러 개로부터 선택된다: 아바타셉트, 아비라테론 아세테이트, 아브락산, 아세트아미노펜/하이드로코돈, 아칼라브루티닙, 아두카누맙, 아달리무맙, ADXS31-142, ADXS-HER2, 아파티닙 디말레에이트, 알데스류킨, 알렉티닙, 알렘투주맙, 알리트레티노인, 아도-트라스투주맙 엠탄신, 암페타민/덱스트로암페타민, 아나스트로졸, 아리피프라졸, 안트라사이클린, 아리피프라졸, 아타자나비르, 아테졸리주맙, 아토르바스타틴, 아벨루맙, 악시캅타진 실로류셀(Axicabtagene ciloleucel), 악시티닙, 벨리노스타트, BCG 라이브, 베바시주맙, 벡사로텐, 블리나투모맙, 보르테조밉, 보수티닙, 브렌툭시맙 베도틴, 브리가티닙, 부데소니드, 부데소니드/포르모테롤, 부프레노르핀, 카바지탁셀, 카보잔티닙, 캡마티닙, 카페시타빈, 카르필조밉, 키메라 항원 수용체-조작된 T(CAR-T) 세포, 셀레콕시브, 세리티닙, 세툭시맙, 치다마이드(Chidamide), 시클로스포린, 시나칼셋, 크리조티닙, 코비메티닙, 코센틱스(Cosentyx), 크리조티닙, CTL019, 다비가트란, 다브라페닙, 다카르바진, 다클리주맙, 다코모티닙, 답토마이신, 다라투무맙, 다르베포에틴 알파, 다루나비르, 다사티닙, 데닐류킨 디프티톡스, 데노수맙, 데파코트, 덱스란소프라졸, 덱스메틸페니데이트, 덱사메타손, 디누툭시맙, 독시사이클린, 둘록세틴, 두벨리십, 두르발루맙, 엘로투주맙, 엠트리시타빈/릴피비린/테노포비르, 디소프록실 푸마레이트, 엠트리시트빈/테노포비르/에파비렌즈, 에녹사파린, 엔사르티닙, 엔잘루타마이드, 에포에틴 알파, 에를로티닙, 에소메프라졸, 에스조피클론, 에타네르셉, 에베롤리무스, 엑세메스탄, 에베롤리무스, 엑세나타이드 ER, 에제티미브, 에제티미브/심바스타틴, 페노피브레이트, 필그라스팀, 핀골리모드, 플루티카손 프로피오네이트, 플루티카손/살메테롤, 풀베스트란트, 가지바, 제피티닙, 글라티라머, 고세렐린 아세테이트, 이코티닙, 이마티닙, 이브리투모맙 티욱세탄, 이브루티닙, 이델라리십, 이포스파미드, 인플릭시맙, 이미퀴모드, ImmuCyst, 면역 BCG, 이니파립, 인슐린 아스파트, 인슐린 디터미르(detemir), 인슐린 글라르진, 인슐린 리스프로, 인터페론 알파, 인터페론 알파-1b, 인터페론 알파-2a, 인터페론 알파-2b, 인터페론 베타, 인터페론 베타 1a, 인터페론 베타 1b, 인터페론 감마-1a, 이아파티닙, 이필리무맙, 이프라트로피움 브로마이드/살부타몰, 익사조밉, 카누마, 란레오타이드 아세테이트, 레날리도미드, 레날리오마이드, 렌바티닙 메실레이트, 레트로졸, 레보티록신, 레보티록신, 리도카인, 리네졸리드, 리라글루타이드, 리스덱삼페타민, LN-144, 로라티닙, 메만틴, 메틸페니데이트, 메토프롤롤, 메키니스트, 메리시타빈/릴피비린/테노포비르, 모다피닐, 모메타손, 마이시닥(Mycidac)-C, 네시투무맙, 네라티닙, 닐로티닙, 니라파립, 니볼루맙, 오파투무맙, 오비누투주맙, 올라파립, 올메사르탄, 올메사르탄/히드로클로로티아지드, 오말리주맙, 오메가-3 지방산 에틸 에스테르, 온코린, 오셀타미비르, 오시머티닙, 옥시코돈, 팔보시클립, 팔리비주맙, 파니투무맙, 파노비노스타트, 파조파닙, 펨브롤리주맙, PD-1 항체, PD-L1 항체, 페메트렉세드, 퍼투주맙, 폐렴구균 접합 백신, 포말리도마이드, 포지오티닙, 프레가발린, 프로스카 백스(Prosca Vax), 프로프라놀롤, 퀘티아핀, 라베프라졸, 라듐 223 클로라이드, 랄록시펜, 랄테그라비르, 라무시루맙, 라니비주맙, 레고라페닙, 리툭시맙, 리바록사반, 로미뎁신, 로수바스타틴, 룩솔리티닙 포스페이트, 살부타몰, 사볼리티닙, 세마글루타이드, 세벨라머, 실데나필, 실툭시맙, 시풀류셀-T, 시타글립틴, 시타글립틴/메트포르민, 솔리페나신, 솔라네주맙, 소니데깁, 소라페닙, 수니티닙, 타크로리무스, 타크리무스, 타달라필, 타목시펜, 타핀라르, 탈리모진 라헤르파렙벡, 탈라조파립, 텔라프레비르, 탈라조파립, 테모졸로마이드, 템시롤리무스, 테노포비르/엠트리시타빈, 테노포비르 디소프록실 푸마레이트, 테스토스테론 겔, 탈리도마이드, TICE BCG, 티오트로피움 브로마이드, 티사젠레클레우셀(Tisagenlecleucel), 토레미펜, 트라메티닙, 트라스투주맙, 트라스투주맙 데룩스테칸, 트라벡테딘(엑테이나시딘 743), 트라메티닙, 트레멜리무맙, 트리플루리딘/티피라실, 트레티노인, Uro-BCG, 우스테키누맙, 발사르탄, 벨리파립, 반데타닙, 베무라페닙, 베네토클락스, 보리노스타트, 지브-애플리베르셉, 조스타박스 및 이들의 유사체, 유도체, 제약상 허용가능한 염, 담체, 희석제 또는 부형제, 또는 이들의 조합.
일부 실시예에서, 본 개시내용은 또한 상기 기재된 항체 또는 항체-약물 접합체 및 약학적으로 허용되는 (예를 들어, 생리학적으로 허용되는) 담체를 포함하는 조성물을 제공한다. 당업계에 공지된 임의의 적합한 담체가 본 발명의 맥락 내에서 사용될 수 있다. 담체의 선택은 부분적으로 조성물이 투여될 수 있는 특정 부위 및 조성물을 투여하는데 사용되는 특정 방법에 의해 결정될 것이다. 조성물은 선택적으로 멸균될 수 있다. 조성물은 예를 들어 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, Pa. (2001)]에 기술된 통상적인 기술에 따라 생성될 수 있다.
본 발명의 조성물은 바람직하게는 다발성 골수종을 치료 또는 예방하는데 효과적인 양으로 항체 또는 ADC를 포함한다. 따라서, 본 개시내용은 다발성 골수종 세포를 사멸시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 BCMA를 발현하는 다발성 골수종 세포를 본 명세서에 기재된 항체 또는 ADC, 또는 본 명세서에 기재된 항체 또는 ADC를 포함하는 조성물과 접촉시키고, 이로써 항체 또는 ADC가 다발성 골수종 세포 상의 BCMA에 결합하여 다발성 골수종 세포를 사멸시키는 것을 포함한다. 본 개시내용은 또한 다발성 골수종을 치료하기 위한 약제의 제조에 있어서, 본 명세서에 기술된 항체 또는 ADC, 또는 항체 또는 ADC를 포함하는 조성물의 용도를 제공한다. 본 명세서에 논의된 바와 같이, 형질 세포 골수종 또는 칼러병으로도 알려진 다발성 골수종은 일반적으로 항체 생산을 담당하는 백혈구의 일종인 형질 세포의 암이다(Raab et al., Lancet, 374: 324). -329(2009)). 다발성 골수종은 연간 100,000명당 1~4명에게 영향을 미친다. 이 질병은 남성에게 더 흔하며, 아직 알려지지 않은 이유로 백인 미국인보다 아프리카계 미국인에서 두 배 더 흔하다. 다발성 골수종은 가장 흔하지 않은 혈액학적 악성종양(14%)이며, 전체 암의 1%를 차지하다. 다발성 골수종의 치료에는 일반적으로 고용량 화학요법과 조혈모세포 이식(동종 또는 자가)이 포함된다. 그러나, 이러한 치료를 받은 다발성 골수종 환자의 경우, 재발률이 높은 것이 일반적이다. 위에서 논의한 바와 같이, BCMA는 다발성 골수종 세포에 의해 고도로 발현된다.
본 명세서에서 입증된 바와 같이, BCMA는 다발성 골수종 줄기 세포에서도 발현된다. 이와 같이, 본 개시내용은 BCMA를 발현하는 다발성 골수종 줄기세포를 본 명세서에 기술된 항체-약물 접합체 또는 본 명세서에 기술된 ADC를 포함하는 조성물과 접촉시킴으로써, 항체-약물 접합체가 다발성 골수종 줄기세포의 BCMA에 결합하게 하여, 다발성 골수종 줄기세포를 사멸시키는 방법을 제공한다. 다발성 골수종 줄기 세포는 CD19의 표면 발현 및 CD138 표면 발현의 결여에 의해 다발성 골수종 환자의 골수에서 식별될 수 있다(예를 들어, Matsui et al., Blood, 103: 2332-6 (2004) 참조). 이들 세포는 독특하게 클론 생성 및 생착 면역결핍 마우스인 반면, CD138+CD19-로 정의되는 골수종 형질 세포는 그렇지 않다. 다발성 골수종 줄기 세포는 또한 현재 치료법에 내성이 있다(Matsui et al., Cancer Res., 68: 190-7 (2008)). 따라서, 본 발명은 BCMA를 발현하는 암을 갖거나 가질 위험이 있는 환자에게 상기 기재된 바와 같은 BCMA 항체 또는 BCMA ADC의 효과적인 요법을 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자를 치료하는 방법을 제공한다. 선택적으로, 암은 혈액암이다. 선택적으로, 혈액암은 골수종, 백혈병 또는 림프종이다. 선택적으로, 혈액암은 다발성 골수종이다. 선택적으로, 혈액암은 비호지킨 림프종(NHL) 또는 호지킨 림프종이다. 선택적으로, 혈액암은 골수이형성증후군(MDS), 골수증식증후군(MPS), 발덴스트롬 마크로글로불린혈증 또는 버킷 림프종이다.
본 명세서에 사용된 용어 "치료", "치료하는" 등은 원하는 약리학적 및/또는 생리학적 효과를 얻는 것을 의미한다. 바람직하게는, 효과는 치료적이며, 즉 효과는 질병 및/또는 질병에 기인한 유해 증상을 부분적으로 또는 완전히 치료한다. 이를 위해, 본 발명의 방법은 "치료 유효량"의 항체 또는 ADC, 또는 항체 또는 ADC 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다. "치료 유효량"은 원하는 치료 결과를 달성하는 데 필요한 투여량 및 기간 동안 효과적인 양을 의미한다. 치료 유효량은 개인의 질병 상태, 연령, 성별, 체중, 그리고 개인에서 원하는 반응을 이끌어내는 항체 또는 ADC의 능력과 같은 요인에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 ADC의 치료 유효량은 다발성 골수종 세포의 BCMA에 결합하여 이를 파괴하는 양이다.
치료의 약리학적 및/또는 생리학적 효과는 예방적일 수 있다. 즉, 해당 효과는 질병 또는 이의 증상을 완전히 또는 부분적으로 예방하다. 이러한 점에서, 본 발명의 방법은 다발성 골수종에 걸리기 쉬운 포유동물에게 ADC 또는 ADC를 포함하는 조성물의 "예방적 유효량"을 투여하는 것을 포함한다. "예방적 유효량"은 원하는 예방적 결과(예를 들어, 질병 발병 예방)를 달성하는 데 필요한 투여량 및 기간 동안 효과적인 양을 의미한다. 치료 또는 예방 효능은 치료받은 환자의 주기적인 평가를 통해 모니터링할 수 있다. 일 실시예에서, 본 명세서에 기술된 ADC는 BCMA-발현 골수종 세포의 증식을 적어도 약 10%(예를 들어, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 적어도 약 100%)) 억제한다. 세포 증식은 표지된 뉴클레오시드(예를 들어, 3H-티미딘 또는 브로모데옥시우리딘 Brd(U))의 게놈 DNA 내로의 통합을 측정하는 것과 같은 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법을 사용하여 측정될 수 있다(예를 들어, Madhavan, H.N., J. Stem Cells Regen.Med., 3(1): 12-14 (2007)참조).
BCMA 항체 및 BCMA ADC의 발명은 BCMA를 발현하는 면역 세포에 의해 매개되는 면역 장애를 갖거나 가질 위험이 있는 환자를 치료하는 방법을 추가로 제공하며, 이는 상기 환자에게 상기 기술된 임의의 항체 또는 ADC의 효과적인 요법을 투여하는 것을 포함한다. 선택적으로, 장애는 B 세포 매개 장애이다. 선택적으로, 면역 장애는 류마티스 관절염, 전신성 루푸스 E(SLE), 제I형 당뇨병, 천식, 아토피성 피부염, 알레르기성 비염, 혈소판 감소성 자반증, 다발성 경화증, 건선, 쇼그렌 증후군, 하시모토 갑상선염, 그레이브병, 원발성 담즙성 간경변, 베게너 육아종증, 결핵, 이식편대숙주병이다.
일부 실시예에서, BCMA 항체 및 BCMA ADC의 발명은 암, 자가면역 질환, 감염성 질환, 바이러스성 질환 또는 병원성 감염을 갖거나 가질 위험이 있는 환자를 치료하는 방법을 추가로 제공하며, 이는 화학요법제, 방사선요법, 면역요법제, 자가면역질환제, 항감염제 또는 기타 접합체와 같은 다른 치료제와 동시에, 상기 환자에게 상기 기술된 항체 또는 ADC 중 임의의 것, 또는 상기 기술된 항체 또는 ADC 중 임의의 것의 효과적인 요법을 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
표적 암에는 부신피질 암종, 항문암, 방광암, 뇌종양(성인, 뇌 줄기 세포종, 유년기, 소뇌 성상 세포종, 대뇌 성상 세포종, 뇌실막종, 수아종, 천막상 원시 신경 외배엽 및 송과체 종양, 시각 경로 및 시상하부 신경교종), 유방암, 카르시노이드 종양, 위장내, 미지의 원발성 암종, 경부암, 결장암, 자궁내막암, 식도암, 간외 담관암, 유잉(Ewing) 패밀리의 종양(PNET), 두개외 배아 세포 종양, 안구암, 안내 흑색종, 담낭암, 위암(위), 배아 세포 종양, 생식선외, 임신성 영양아층 종양, 두경부암, 하인두암, 도 세포 암종, 신장암(신장세포암), 후두암, 백혈병(급성 림프구성, 급성 골수성, 만성 림프구성, 만성 골수성, 털 세포), 입술 및 구강암, 간암, 폐암(비소세포, 소세포, 림프종(AIDS-관련, 중추 신경계, 피층 T-세포, 호지킨병, 비-호지킨병, 악성 중피종, 흑색종, 머켈 세포 암종, 잠복 원발성 다발성 골수종을 동반한 전이성 편평 두부암 및 기타 형질 세포 신생물, 균상식육종, 골수이형성 증후군, 척수 증식성 장애, 비인두암, 신경모세포종, 구강암, 구강인두암, 골육종, 난소암(상피, 배아 세포 종양, 저 악성 잠재성 종양), 췌장암(외분비, 도세포 암종), 부비동 및 비강암, 부갑상선암, 음경암, 크롬친화성세포종 암, 뇌하수체암, 형질 세포 신생물, 전립선암, 횡문근 육종, 직장암, 신장 세포 암(신장암), 신장 골반 및 폐렴(이행세포), 침샘 암, 세자리 증후군, 피부암, 피부암(피부 T-세포 림프종, 카포시 육종, 흑색종), 소장암, 연조직 육종, 위암, 고환암, 흉선종(악성), 갑상선암, 요도암, 자궁암(육종), 유년기의 특이한 암, 질암, 불바르(Vulvar)암, 빌름스(Wilms) 종양이 포함되지만, 이들에 제한되지 않는다.
자가면역 질환에는 아클로히드라(Achlorhydra) 자가면역 활성 만성 감염, 급성 파종 뇌척수염, 급성 출혈성 뇌백질염, 애디슨병, 무감마글로불린혈증, 원형 탈모증, 경화증, 강직성 척추염, 항-GBM/TBM 신염, 항인지질 증후군, 항합성효소 증후군, 관절염, 아토피성 알레르기, 아토피성 피부염, 자가면역성 재생불량성 빈혈, 자가면역성 심근증, 자가면역성 용혈성 빈혈, 자가면역성 간염, 자가면역성 내이병, 자가면역성 림프증식 증후군, 자가면역성 말초 신경병증, 자가면역성 췌장염, 자가면역성 다선 증후군 타입 I, II 및 III, 자가면역성 프로게스테론 피부염, 자가면역성 혈소판감소성 자반증, 자가면역성 포도막염, 발로병/발로 동심성 경화증, 바체트 증후군, 버거병, 비커스태프 뇌염, 블라우 증후군, 수포성 유사천포창, 캐슬맨병, 사가스병, 만성 피로 면역 이상 증후군, 만성 염증성 탈수초성 다발성신경병증, 만성 재발성 다병소성 골수염, 만성 라임병, 만성 폐쇄성 폐 질환, 척 슈트라우스 증후군, 흉터유사천포창, 실리악병, 코간 증후군, 한냉 응집 질환, 보체 성분 2 결핍, 두개 동맥염, CREST 증후군, 크론병(특발성 염증성 장질환의 유형), 쿠싱 증후군, 피부 백혈구파괴성 혈관염, 데고병, 더쿰병, 포진형 피부염, 피부근육염, 당뇨병 타입 1, 광범위 피부 전신 경화증, 드레슬러 증후군, 원판상 홍반성 낭창, 습진, 자궁내막증, 착부염-관련 관절염, 호산구성 근막염, 후천성 표피 수포증, 결절성 홍반, 필수 혼합 한랭글로불린혈증, 에반 증후군, 진행성 골화성 섬유이형성증, 섬유근육통, 섬유근염, 섬유화 아베올리티스, 위염, 위장 천포창, 거대 세포 동맥염, 사구체 신염, 굿파스처 증후군, 그레이브스병, 길랑-바레 증후군(GBS), 하시모토 뇌염, 하시모토 갑상선염, 용혈성 빈혈, 헤노흐-숀라인 자반증, 임신성 포진, 화농성 한선염, 휴게스 증후군(항 인지질 증후군 참조), 저감마글로불린혈증, 특발성 염증성 탈수초성 질환, 특발성 폐섬유증, 특발성 혈소판 감소성 자반증(자가면역 혈소판 감소성 자반증 참조), IgA 신증(또한 버거병), 인클루전 바디 근염, 염증성 탈수초성 다발성 신경병증, 간질성 방광염, 과민성 대장 증후군(IBS), 청소년 특발성 관절염, 청소년 류마티스 관절염, 가와사키병, 램버트-이튼 근무력 증후군, 백혈구파괴 혈관염, 편평 태선, 경화성 태선, 선형 IgA 질환(LAD), 루게릭병(또한 루게릭 경화증), 루포이드 간염, 홍반성 낭창, 마지드 증후군, 메니에르병, 현미경 다발성 맥관염, 밀러-피셔 증후군, 혼합 결합 조직 질환, 경화증, 무차-하버만병, 머클-웰스 증후군, 다발성 골수종, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 근염, 기면증, 시신경척수염(또한 데빅병), 신경근육기장증, 안구 반흔 천포창, 안구간대경련-근간대경련 증후군, 오드 갑상선염, 재발성 류마티스, PANDAS(스트렙토코쿠스 연관 소아 면역 신경 정신 장애), 부신생물 소뇌 변성, 발작성 야간 혈색소뇨증, 패리 롬베르그 증후군, 파르소니지-터너 증후군, 중간부 포도막염, 천포창, 심상성 천포창, 악성 빈혈, 정맥주위 뇌척수염, POEMS 증후군, 결절성 다발 동맥염, 다발성 근육통, 다발성 근염, 원발성 담즙 간경변, 원발성 경화성 담관염, 진행성 염증성 신경병증, 건선, 건선 관절염, 괴저성 농피증, 순수 적혈구 무형성증, 라스무센 뇌염, 레이노 현상, 재발성 다발 연골염, 라이터 증후군, 하지불안 증후군, 후복막 섬유증, 류마티스 관절염, 류마티스 열, 사르코이드증, 정신분열증, 슈미트 증후군, 슈니츨러 증후군, 공막염, 경피증, 쇼그렌 증후군, 척추 관절증, 점착성 혈액 증후군, 스틸병, 강직인간 증후군, 아급성 세균성 심내막염, 수사크 증후군, 스위트 증후군, 시데남무도병, 교감 안염, 타카야수 동맥염, 측두 동맥염(거대 세포 동맥염함), 톨로사-헌트 증후군, 횡단성 척수염, 궤양성 대장염(특발성 염증성 장 질환의 유형), 미분화 결합 조직 질환, 미분화 척추 관절병증, 혈관염, 백반증, 베게너 육아종증(Wegener's granulomatosis), 윌슨 증후군(Wilson's syndrome) 및 위스코트-아드리치 증후군(Wiskott-Aldrich syndrome)이 포함되지만, 이들에 제한되지 않는다.
감염성 질환에는 아시네토박터(Acinetobacter) 감염, 방선균증(Actinomycosis), 아프리카 수면병(아프리카 트리파노소마증(African trypanosomiasis)), AIDS(후천성 면역결핍증), 아메바증, 아나플라즈마증(Anaplasmosis), 탄저병, 용혈성 아카노박테리아균 감염(Arcanobacterium haemolyticum infection), 아르헨티나 출혈열, 회충증, 아스페르길루스증 (Aspergillosis), 아스트로바이러스 감염(Astrovirus infection), 바베시아증, 바실루스 세레우스 감염(Bacillus cereus infection), 세균성 폐렴, 세균성 질염, 박테로이데스 감염, 발란티듐증, 바일리사스카리스 감염(Baylisascaris infection), BK 바이러스 감염, 흑색사모증, 블라스토시스티스 호미니스 감염, 분아진균증, 볼리비아 출혈열, 보렐리아 감염, 보툴리누스증(및 영아 보툴리누스증), 브라질 출혈열, 브루셀라증, 버크홀데리아 감염(Burkholderia infection), 부룰리 궤양(Buruli ulcer), 칼리시바이러스 감염(Calicivirus infection)(노로바이러스(Norovirus) 및 사포바이러스(Sapovirus)), 캠필로박테리아증(Campylobacteriosis), 칸디다증(모닐리아증; 아구창), 고양이 할큄병(Cat-scratch disease), 봉와직염, 샤가스병(아메리카 수면병), 무른 궤양, 수두, 클라미디아, 클라미마이도필라 폐렴균 감염(Chlamydophila pneumoniae infection), 콜레라, 색소모세포진균증(Chromoblastomycosis), 간흡충증(Clonorchiasis), 클로스트리디움 디피실 감염(Clostridium difficile infection), 콕시디오이데스 진균증(Coccidioidomycosis), 콜로라도 진드기열(Colorado tick fever), 통상의 감기(급성 바이러스 비인두염; 급성 비염), 크로이츠펠트-야콥병(Creutzfeldt-Jakob disease), 크리민-콩고 출혈열(Crimean-Congo hemorrhagic fever), 크립토코커스증(Cryptococcosis), 크립토스포리디움증(Cryptosporidiosis), 피부 유충이행증(Cutaneous larva migrans), 원포자증, 낭미충증, 사이토메갈로바이러스 감염, 댕기열, 이핵아메바증, 디프테리아, 열두조충증, 메디나충증, 에볼라 출혈열, 포충증(Echinococcosis), 에를리히아증(Ehrlichiosis), 요충증(Enterobiasis)(요충 감염), 엔테로코쿠스 감염(Enterococcus infection), 엔테로바이러스 감염(Enterovirus infection), 발진 티푸스(Epidemic typhus), 전염성 홍반 (Erythema infectiosum)(제5 질환(Fifth disease)), 돌발진, 비대흡충증, 간질증, 치명적 가족성 불면증, 사상충증, 클로스트리디움 퍼프린겐스에 의한 식중독(Food poisoning by Clostridium perfringens), 자유 생존 아메바 감염(Free-living amebic infection), 푸소박테리움 감염(Fusobacterium infection), 가스괴사병(크로스티리디아성 근괴사(Clostridial myonecrosis)), 게오트리쿰증, 게르스트만-슈트로이슬러-샤인커 증후군(Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome), 편모충증, 마비저, 악구충증, 임질, 서혜부 육아종(도노바니아증), 군 A 스트렙토코쿠스 감염(streptococcal infection), 군 B 스트렙토코쿠스 감염, 헤모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae) 감염, 수족구병(hand, foot and mouse disease: HFMD), 한타바이러스 폐 증후군, 헬리코박터 파일로리(Helicobacter pylori) 감염, 용혈성-요독성 증후군, 신장 증후군 동반 출혈열, A형 간염, B형 간염, C형 간염, D형 간염, E형 간염, 단순 포진, 히스토플라스마증, 구충 감염(Hookworm infection), 인간 보카바이러스 감염(Human bocavirus infection), 인간 에윈기 에를리히아증(Human ewingii ehrlichiosis), 인간 과립구성 아나플라마증(Human granulocytic anaplasmosis), 인간 메타뉴모바이러스 감염(Human metapneumovirus infection), 인간 단핵구성 에를리히아증(Human monocytic ehrlichiosis), 인간 파필로마 감염, 인간 파라인플루엔자 바이러스 감염, 왜소조충증(Hymenolepiasis), 엡스타인-바르 바이러스 전염성 단핵증(Mononucleosis(Mono)), 인플루엔자, 포자충증, 가와사키병, 각막염, 킨겔라 킨개(Kingella kingae) 감염, 구루병, 라사열, 레지오넬라증(재향군인병), 레지오넬라증(폰티악열병), 리슈만편모충증, 한센병, 렙토스피라증, 리스테리아증, 라임병(라임 보렐리아증(Lyme borreliosis)), 림프성 사상충증(상피병), 림프구성 맥락수막염, 말라리아, 마르부르크 출혈열, 홍역, 유비저(휘트모어병(Whitmore's disease)), 뇌수막염(Meningitis), 수막구균 질환, 요코가와흡충증, 미포자충증, 전염성 연속종, 유행성 이하선염, 발진열(전염성 티푸스), 마이코플라스마 폐렴(Mycoplasma pneumonia), 진균종, 구더기증, 신생아 결막염(신생아 안염), (신규) 변종 크로이츠펠트-야콥병(vCJD, nvCJD), 노카르디아증, 회선사상충층(사상충증), 파라콕시디오이데스 진균증(Paracoccidioidomycosis)(남아메리카 분아균증(South American blastomycosis)), 폐흡충증, 파스투렐라병, 머리이 기생증(머릿니), 몸니 기생증(몸니), 사면발이 기생증(사면발이(Pubic lice, Crab lice)), 골반 염증성 질병, 백일해(Pertussis, Whooping cough), 흑사병, 폐렴구균 감염, 주폐포자충 폐렴, 폐렴, 소아마비, 프레보텔라 감염, 원발성 아메바성 수막뇌염, 진행성 다병소성 백질뇌증, 앵무새병(Psittacosis), Q 열, 광견병(Rabies), 서교증, 호흡기 융합 바이러스 감염, 리노스포리듐증, 리노바이러스 감염, 리케차 감염, 리케차두창, 리프트 밸리 열, 록키산 홍반열, 로타바이러스 감염, 풍진, 살모넬라증, SARS(중증 급성 호흡기 증후군), 옴, 주혈흡충증, 패혈증, 세균성 이질(Shigellosis, Bacillary dysentery), 대상포진(Shingles, Herpes zoster), 천연두(Smallpox, Variola), 스포로트리쿰증, 스타필로코쿠스 식중독, 스타필로코쿠스 감염, 분선충증, 매독, 조충증, 파상풍(Tetanus, Lockjaw), 수염백선증(Tinea barbae, Barber's itch), 머리백선증(Tinea capitis, Ringworm of Scalp), 몸백선증(Tinea corporis, Ringworm of Body), 샅백선증(Tinea cruris, Jock itch), 수부백선(Tinea manuum, Ringworm of Hand), 흑색백선증, 무좀(Tinea pedis, Athlete's foot), 손발톱백선증(Tinea unguium, Onychomycosis), 어루르기(Tinea versicolor, Pityriasis versicolor), 톡소카라증(안구유충이행증), 톡소카라증(내장유충이행증), 톡소플라스마증, 선모충증, 트리코모나스증, 편충증(편충 감염), 폐결핵, 산토끼병, 우레아플라스마 감염, 베네수엘라 마뇌염, 베네수엘라 출혈열, 바이러스성 폐렴, 웨스트 나일 열, 백색사모증(백색 윤선), 가성 결핵균 감염, 예시니아증, 황열병 및 접합균증이 포함되지만, 이들로 제한되지 않는다.
아시네토박터 바우마니(Acinetobacter baumannii), 악티노마이세스 이스라엘리(Actinomyces israelii), 악티노마이세스 제렌세리애(Actinomyces gerencseriae) 및 프로피온니박테리움 프로피오니쿠스(Propionibacterium propionicus), 트리파노소마 브루세이(Trypanosoma brucei), HIV(인간 면역결핍 바이러스), 이질아메바(Entamoeba histolytica), 안나플라즈마 속(Anaplasma genus), 바실루스 안트라시스(Bacillus anthracis), 용혈성 아카노박테리아균(Arcanobacterium haemolyticum), 주닌 바이러스, 아카리스 루브리코이데스(Ascaris lumbricoides), 아스페르길루스 속(Aspergillus genus), 아스트로비리대 패밀리(Astroviridae family), 바베시아 속(Babesia genus), 바실루스 세레우스(Bacillus cereus), 멀티플 박테리아(multiple bacteria), 박테로이데스 속(Bacteroides genus), 발란티디움 콜라이(Balantidium coli), 배이리사스카리스 속(Baylisascaris genus), BK 바이러스, 피에드라이아 호르태(Piedraia hortae), 블라스토시스티스 호미니스(Blastocystis hominis), 블라스토마이세스 더마티티데스(Blastomyces dermatitides), 마추포(Machupo) 바이러스, 보렐리아 속(Borrelia genus), 클로스트리디움보툴리늄(Clostridium botulinum), 사비아(Sabia), 브루셀라 속(Brucella genus), 통상 부르크홀데리아 세파시아(usually Burkholderia cepacia) 및 기타 부르크홀데리아 종, 마이코박테리움 울세란스(Mycobacterium ulcerans), 칼리시비리대 패밀리(Caliciviridae family), 캄필로박터 속(Campylobacter genus), 통상 칸디다 알비칸스(Candida albicans) 및 기타 칸디다 종, 바르토넬라 헨셀래(Bartonella henselae), 군 A 스트렙토코쿠스 및 스타필로코쿠스, 트리파노소마 크루지(Trypanosoma cruzi), 헤모필루스 듀크레이(Haemophilus ducreyi), 바리셀라 조스터(Varicella zoster) 바이러스(VZV), 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis), 클라미도필라 뉴모니애(Chlamydophila pneumoniae), 비브리오 콜레라(Vibrio cholerae), 포세카애 페드로소이(Fonsecaea pedrosoi), 클로노치스 시엔시스(Clonorchis sinensis), 클로스트리듐 디피실(Clostridium difficile), 콕시디오이데스 임미티스(Coccidioides immitis) 및 콕시디오이데스 포사다시(Coccidioides posadasii), 콜로라도 진드기 열 바이러스, 리노바이러스, 코로나바이러스, CJD 프리온, 크리민-콩고 출혈열 바이러스, 크립토코쿠스 네오포르만스(Cryptococcus neoformans), 크립토스포르디움 속(Cryptosporidium genus), 안사이클로토마 브라질리엔스(Ancylostoma braziliense); 멀티플 기생충, 사이클로스포라 카이에타넨시스(Cyclospora cayetanensis), 태니아 솔리움(Taenia solium), 사이토메갈로바이러스, 뎅기 바이러스(DEN-1, DEN-2, DEN-3 및 DEN-4) - 플라비바이러스(Flavivirus), 장관기생아메바(Dientamoeba fragilis), 코리네박테리움 디프테리애(Corynebacterium diphtheriae), 디필로보트륨(Diphyllobothrium), 드라쿤쿨루스 메디엔시스(Dracunculus medinensis), 에볼라바이러스, 에치노코쿠스 속(Echinococcus genus), 에를리히아속(Ehrlichia genus), 엔테로비우스 버미쿨라리스(Enterobius vermicularis), 엔테로코쿠스 속(Enterococcus genus), 엔테로바이러스 속, 리케치아 프로와제키(Rickettsia prowazekii), 파보바이러스(Parvovirus) B19, 인간 헤르페스바이러스 6 및 인간 헤르페스바이러스 7, 파실로롭시스 부스키(Fasciolopsis buski), 파시올라 헤파티카(Fasciola hepatica) 및 파시올라 지간티카(Fasciola gigantica), FFI 프리온(prion), 필라리오데 슈퍼패밀리(Filarioidea superfamily), 클로스트리디움 퍼프린젠스(Clostridium perfringens), 푸소박테륨 속(Fusobacterium genus), 클로스트리디움 퍼프리젠스(Clostridium perfringens); 기타 클로스트리듐 종, 게오트리쿰 칸디둠(Geotrichum candidum), GSS 프리온, 지아디아 인테스티날리스(Giardia intestinalis), 부르크홀데리아 말레이(Burkholderia mallei), 그나토스토마 스피니게룸(Gnathostoma spinigerum) 및 그나토마스토마 히스피둠(Gnathostoma hispidum), 니세리아 고노호애(Neisseria gonorrhoeae), 클레브시엘라 그라눌로마티스(Klebsiella granulomatis), 스트렙토코쿠스 파이오제네스(Streptococcus pyogene), 스트렙토코쿠스 아갈락티애(Streptococcus agalactiae), 해모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae), 엔테로바이러스, 주로 콕사키(Coxsackie) A 바이러스 및 엔테로바이러스 71, 신 놈브레(Sin Nombre) 바이러스, 헬리코박터 파일로리, 에쉐리키아 콜리(Escherichia coli) O157:H7, 부니아비리대 패밀리(Bunyaviridae family), A형 간염 바이러스, B형 간염 바이러스, C형 간염 바이러스, D형 간염 바이러스, E형 간염 바이러스, 단순 포진 바이러스 1, 단순 포진 바이러스 2, 히스토플라스마 캡슐라툼(Histoplasma capsulatum), 십이지장충(Ancylostoma duodenale) 및 아메리카 구충(Necator americanus), 헤모필루스 인플루엔자(Hemophilus influenzae), 인간 보카바이러스(Human bocavirus), 에를리히아 유잉이(Ehrlichia ewingii), 아나플라즈마 파고시토필륨(Anaplasma phagocytophilum), 인간 메타뉴모바이러스(metapneumovirus), 에를리히아 샤펜시스(Ehrlichia chaffeensis), 인간 파필로마바이러스, 인간 파라인플루엔자 바이러스, 소형조충(Hymenolepis nana) 및 쥐조충(Hymenolepis diminuta), 엡스테인-바르 바이러스, 오르토믹소비리대 패밀리(Orthomy-xoviridae family), 이소스포라 벨리(Isospora belli), 킨젤라 킨가에(Kingella kingae), 클레브시엘라 뉴모니애(Klebsiella pneumoniae), 클레브시엘라 오자에나스(Klebsiella ozaenas), 클레브시엘라 리노스클레로모티스(Klebsiella rhinoscleromotis), 크루 프리온(Kuru prion), 라사(Lassa) 바이러스, 레지오넬라 뉴모필라(Legionella pneumophila), 레지오넬라 뉴모필라(Legionella pneumophila), 레이쉬마니아 속(Leishmania genus), 마이코박테리움 레프래(Mycobacterium leprae) 및 마이코박테리움 레프로마토시스(Mycobacterium lepromatosis), 렙토스피라 속(Leptospira genus), 리스테리아 모노시토제네스(Listeria monocytogenes), 보렐리아 부르그도르페리(Borrelia burgdorferi) 및 기타 보렐리아 종(Borrelia species), 반크로프트사상충(Wuchereria bancrofti) 및 말레이사상충(Brugia malayi), 림프구성 맥낙 뇌막염 바이러스(Lymphocytic choriomeningitis virus: LCMV), 플라스모디움 속(Plasmodium genus), 마버그(Marburg) 바이러스, 메슬레스(Measles) 바이러스, 부르콜데리아 슈도말레이(Burkholderia pseudomallei), 나이세리아 메닝지티데스(Neisseria meningitides), 메타고니무스 요카가와이(Metagonimus yokagawai), 마이코플라스마 문(Microsporidia phylum), 감염성 연속종 바이러스(Molluscum contagiosum virus: MCV), 볼거리(Mumps) 바이러스, 리케치아 티피(Rickettsia typhi), 마이코플라스마 뉴모니애, 다수중 종의 박테리아(악티노마이세토마) 및 진균(에우미세토마(Eumycetoma)), 기생충 날개 달린 파리 유충(parasitic dipterous fly larvae), 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis) 및 임균(Neisseria gonorrhoeae), vCJD 프리온, 노카디아 아스테로이드(Nocardia asteroides) 및 기타 노카르디아 종(Nocardia species), 회선사상충(Onchocerca volvulus), 파라콕시디오이데스 브라질리엔시스(Paracoccidioides brasiliensis), 폐흡충(Paragonimus westermani) 및 기타 폐흡충 종, 파스테우렐라 속(Pasteurella genus), 머리이(Pediculus humanus capitis), 몸니(Pediculus humanus corporis), 사면발이(Phthirus pubis), 보르데텔라 퍼투시스(Bordetella pertussis), 에르시니아 페스티스), 스트렙토콕쿠스 뉴모니애(Streptococcus pneumoniae), 뉴모사이스티스 지로베시(Pneumocystis jirovecii), 폴리오바이러스(Poliovirus), 프레보텔라 속(Prevotella genus), 내글러리아 파울레리(Naegleria fowleri), JC 바이러스, 클라미도필라 프시타시(Chlamydophila psittaci), 콕시엘라 부르네티(Coxiella burnetii), 광견병 바이러스, 스트렙토바실루스 모닐리포르미스(Streptobacillus moniliformis) 및 스피리룸 미너스(Spirillum minus), 호흡기 융합 바이러스, 리노스포리듐 시베리(Rhinosporidium seeberi), 리노바이러스, 리케치아 속(Rickettsia genus), 리케차 아카리(Rickettsia akari), 리프트 밸리 열 바이러스(Rift Valley fever virus), 리케차 리케트시(Rickettsia rickettsii), 로타 바이러스, 루벨라 바이러스, 살모넬라 속(Salmonella genus), SARS 코로나바이러스, 사르콥테스 스카비에이(Sarcoptes scabiei), 스치스토소마 속(Schistosoma genus), 시겔라 속(Shigella genus), 바리셀라 조스터(Varicella zoster) 바이러스, 바리올라 메이저(Variola major) 또는 바리올라 마이너(Variola minor), 스포로트릭스 셴키(Sporothrix schenckii), 스타필로코쿠스 속, 스타필로코쿠스 속, 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 스트렙토코쿠스 피오제네스(Streptococcus pyogenes), 분선충(Strongyloides stercoralis), 매독트레포네마(Treponema pallidum), 태니아 속(Taenia genus), 클로스트리듐 테타니(Clostridium tetani), 트리코피톤 속(Trichophyton genus), 트리코피톤 토수란스(Trichophyton tonsurans), 트리코피톤 속, 에피더모피톤 플록코섬(Epidermophyton floccosum), 트리코피톤 루브룸(Trichophyton rubrum) 및 트리코피톤 메타그로피테스(Trichophyton mentagrophytes), 트리코피톤 루브룸(Trichophyton rubrum), 호르태아 웨넥키(Hortaea werneckii), 트리코피톤 속(Trichophyton genus), 말라세지아 속(Malassezia genus), 톡소카라 카니스(Toxocara canis) 또는 톡소카라 카티(Toxocara cati), 톡소플라스마 곤디(Toxoplasma gondii), 트리키넬라 스피랄리스(Trichinella spiralis), 트리코모나스 바지날리스(Trichomonas vaginalis), 트리처리스 트리치우라(Trichuris trichiura), 마이코박테리움 투버쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis), 프란시셀라 투라렌시스(Francisella tularensis), 우레아플라즈마 우레알리티쿰(Ureaplasma urealyticum), 베네수엘라마뇌염(Venezuelan equine encephalitis) 바이러스, 비브리오 콜레라, 구아나리토(Guanarito) 바이러스, 웨스트 나일(West Nile) 바이러스, 트리초스포론 베이겔리(Trichosporon beigelii), 예러시니아 슈도투벨르큘로시스(Yersinia pseudotuberculosis), 예르시니아 엔테로코리티카(Yersinia enterocolitica), 황열병 바이러스, 무코랄레스 오더(Mucorales order)(털곰팡이증(Mucormycosis)) 및 엔토프토랄레스 오더(Entomophthorales order)(엔토모프토라증(Entomophthoramycosis), 슈도모나스 녹농균, 캄필로박터(Campylobacter)(비브리오) 태아, 아에로모나스 하이드로필라(Aeromonas hydrophila), 에드워드시엘라 타르다(Edwardsiella tarda), 에르시니아 페스티스(Yersinia pestis), 시겔라 디센테리애(Shigella dysenteriae), 시겔라 플렉스네리(Shigella flexneri), 시겔라 손네이(Shigella sonnei), 살모넬라 티피무리움(Salmonella typhimurium), 트레포네마 페르테누에(Treponema pertenue), 트레포네마 카르테움(Treponema carateneum), 보렐리아 빈센티(Borrelia vincentii), 보렐리아 부르고도리페리(Borrelia burgdorferi), 렙토스피라 이시테로헤모르하지애(Lept6ospira icterohemorrhagiae), 뉴모시스티스 카리니(Pneumocystis carinii), 브루셀라 아보르투스(Brucella abortus), 브루셀라 수이스(Brucella suis), 브루셀라 멜리텐시스(Brucella melitensis), 마이코플라스마 종(Mycoplasma spp.), 리케차 프로와제키(Rickettsia prowazeki), 리케차 츠츠구무쉬(Rickettsia tsutsugumushi), 클라미디아 종(Clamydia spp.); 병원성 진균(pathogenic fungi)(아스페르질루스 푸미가투스(Aspergillus fumigatus), 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 히스토플라스마 캅술라툼(Histoplasma capsulatum); 원생동물(이질 아메바, 트리초모나스 테나스(Trichomonas tenas), 트리초모나스 호미니스(Trichomonas hominis), 트리오아노소마 감비엔스(Tryoanosoma gambiense), 트리파노소마 로데시엔세(Trypanosoma rhodesiense), 레이시마니아 도노바니(Leishmania donovani), 레이시마니아 트로피카(Leishmania tropica), 레이시마니아 브라질리엔시스(Leishmania braziliensis), 뉴모사이스티스 뉴모니아(Pneumocystis pneumonia), 플라스모디움 비백스(Plasmodium vivax), 플라스모디움 팔시파룸(Plasmodium falciparum), 플라스모디움 말라리아(Plasmodium malaria)); 또는 헬미니스(Helminith)(쉬스토소마 자포니쿰(Schistosoma japonicum), 쉬스토소마 만소니(Schistosoma mansoni), 쉬스토소마 해바토비움(Schistosoma haematobium) 및 십이지장충(hookworm)이 포함되지만 이들에 제한되지 않는다.
병원성 바이러스에는 폭시리대(Poxyiridae), 헤르페스비리대(Herpesviridae), 아데노비리대(Adenoviridae), 파포바비리대(Papovaviridae), 엔테로비리대(Enteroviridae), 피코르나비리대(Picornaviridae), 파르보비리대(Parvoviridae), 레오비리대(Reoviridae), 레트로비리대(Retroviridae), 인플루엔자 바이러스, 파라인플루엔자 바이러스, 볼거리, 홍역, 호흡기 융합 바이러스, 풍진, 아르보비리대(Arboviridae), 라브도비리대(Rhabdoviridae), 아레나비리대(Arenaviridae), 비-A형/비-B형 간염 바이러스, 리노비리대(Rhinoviridae), 코로나비리대(Coronaviridae), 로토비리대(Rotoviridae), 온코바이러스[예컨대, HBV(간세포 암종), HPV(경부암, 항문암), 카포시 육종 연관 포진 바이러스(카포시 육종), 엡스타인-바르 바이러스(비인두 암종, 버킷 림프종, 원발성 중추 신경계 림프종), MCPyV(머켈 세포암), SV40(시미안 바이러스 40), HCV(간세포 암종), HTLV-I(성인 T-세포 백혈병/림프종)], 면역 장애 유발된 바이러스: [예컨대, 인간 면역결핍바이러스(AIDS)]; 중추 신경계 바이러스: [예컨대, JCV(진행성 다병소성 백혈구증), MeV(아급성 경화성 뇌막염), LCV(림프구성 맥락수막염), 아르보바이러스(Arbovirus) 뇌염, 오쏘믹소비리대(Orthomyxoviridae)(가능성)(기면성 뇌염), RV(광견병), 찬디푸라 바이러스, 헤르페스바이러스 수막염, 램지 헌트 증후군 유형 II; 폴리오 바이러스(소아마비, 소아마비후 증후군), HTLV-I(열대성 경성 대마비)]; 사이토메갈로바이러스(사이토메갈로 바이러스 망막염, HSV(포진성 각막염)); 심혈관계 바이러스[예컨대, CBV(심막염, 심근염)]; 호흡기/급성 바이러스성 비인두염/바이러스성 폐렴: [엡스테인-바르 바이러스(EBV 감염/감염성 단핵구증), 사이토메갈로바이러스; SARS 코로나바이러스(중증 급성 호흡기 증후군), 오쏘믹소비리대: 인플루엔자 A/B/C(인플루엔자/조류 인플루엔자), 파라믹소바이러스(Paramyxovirus): 인간 파라인플루엔자 바이러스(파라인플루엔자), RSV(인간 호흡기 신티알바이러스(syncytialvirus), hMPV]; 소화계 바이러스[MuV(볼거리), 사이토메갈로바이러스(사이토메갈로바이러스 에소파지티스(esophagitis); 아데노바이러스(아데노바이러스 감염); 로타바이러스, 노로바이러스, 아스트로바이러스, 코로나바이러스; HBV(B형 간염 바이러스), CBV, HAV(A형 간염 바이러스), HCV(C형 간염 바이러스), HDV(D형 간염 바이러스), HEV(E형 간염 바이러스), HGV(G형 간염 바이러스)]; 비뇨생식기 바이러스[예컨대, BK 바이러스, MuV(볼거리)]가 포함되지만, 이들에 제한되지 않는다.
추가 목적에 따르면, 본 발명은 또한 암, 감염 또는 자가면역 질환의 치료를 위한 약학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제와 함께 본 발명의 BCMA 항체 또는 ADC를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 암, 감염 및 자가면역 장애의 치료 방법은 시험관내, 생체내 또는 생체외에서 수행될 수 있다. 시험관내 사용의 예는 표적 항원을 발현하지 않는 목적하는 변이체를 제외한 모든 세포를 사멸시키거나, 또는 목적하지 않은 항원을 발현하는 변이체를 사멸시키기 위한 세포 배양물의 처리를 포함한다. 생체외 사용의 예는 병에 걸린 세포 또는 악성 세포를 사멸시키기 위해 동일한 환자에게 이식(HSCT)을 수행하기 전에, 조혈 줄기세포(HSC)를 처리하는 단계를 포함한다. 예를 들어, 암 치료 또는 자가면역 질환의 치료에서 자가유래 이식 이전에, 골수로부터 종양 세포 또는 림프 세포를 제거하는 임상적 생체외 처리, 또는 이식편대숙주병을 예방하기 위해서 이식 이전에 동종이계 골수 또는 조직으로부터 T 세포 및 다른 림프구 세포를 제거하는 임상적 생체외 처리는 하기와 같이 수행될 수 있다. 골수를 환자 또는 다른 개체로부터 수거하고, 이어서 약 37℃에서 약 30분 내지 약 48시간 동안, 약 1pM 내지 0.1mM의 농도 범위의 본 발명의 접합체가 첨가된 혈청을 함유하는 배지에서 배양시킨다. 정확한 농도 조건 및 배양 시간(=용량)은 숙련된 임상의에 의해 쉽게 결정된다. 배양 후, 골수 세포를 혈청을 함유하는 배지로 세척하고, 공지된 방법에 따라 i.v. 주입에 의해서 환자에게 다시 제공한다. 환자가 골수 수거와, 처리된 세포의 재주입 시간 사이에 절제(ablative) 화학 요법 또는 전신 방사선 조사의 과정과 같은 다른 치료를 받는 상황에서, 처리된 골수 세포는 표준 의료 장비를 사용하여 액체 질소에 냉동 보관된다.
본 명세서에 인용된 간행물, 특허 출원 및 특허를 포함한 모든 참고문헌은 마치 각 참고문헌이 참고로 포함되도록 개별적으로 및 구체적으로 지시된 것과 동일한 정도로, 그 전체가 본 명세서에 참고로 포함되며, 그 전체로 개시된다.
본 발명을 설명하는 맥락에서(특히 하기 청구범위의 맥락에서) 용어 "a", "an" 및 "the" 및 "적어도 하나" 및 유사한 지시어의 사용은 본 명세서에 달리 명시되지 않거나 문맥상 명확하게 모순되지 않는 한, 단수형과 복수형 두 가지 모두를 포함하는 것으로 해석되어야 하다. 하나 이상의 항목의 목록(예를 들어, "A와 B 중 적어도 하나")이 뒤따르는 "적어도 하나"라는 용어의 사용은 본 명세서에 달리 명시되지 않거나 문맥상 명확하게 모순되지 않는 한, 나열된 항목(A 또는 B)으로부터 선택된 하나의 항목, 또는 나열된 항목(A 및 B) 중 둘 이상의 조합을 의미하는 것으로 해석되어야 하다. "포함하는(comprising)", "갖는(having)", "포함하는(including)" 및 "함유하는(containing)"이라는 용어는 달리 명시하지 않는 한, 제한이 없는(open-ended) 용어(즉, "포함하지만 이들에 제한되지 않음"을 의미)로 해석된다. 본 명세서에서 값의 범위를 언급하는 것은 본 명세서에서 달리 표시되지 않는 한, 단지 범위 내에 속하는 각각의 개별 값을 개별적으로 언급하는 약식 방법의 역할을 하도록 의도되었으며, 각각의 개별 값은 본 명세서에서 개별적으로 언급된 것처럼 본 명세서에 포함된다. 본 명세서에 기술된 모든 방법은 본 명세서에 달리 명시되지 않거나 문맥상 명확하게 모순되지 않는 한, 임의의 적합한 순서로 수행될 수 있다. 본 명세서에 제공된 임의의 모든 예 또는 예시적인 언어(예를 들어, "~와 같은")의 사용은 단지 본 발명을 더 잘 설명하기 위한 것이며, 달리 청구되지 않는 한 본 발명의 범위를 제한하지 않는다. 명세서의 어떤 언어도 청구되지 않은 요소를 발명의 실시에 필수적인 것으로 나타내는 것으로 해석되어서는 안 된다.
본 발명을 수행하기 위해 발명자들에게 알려진 최상의 모드를 포함하여, 본 발명의 바람직일 실시예가 여기에 설명되어 있다. 이러한 바람직일 실시예의 변형은 전술한 설명을 읽음으로써 당업자에게 명백해질 수 있다. 본 발명자는 숙련된 기술자가 그러한 변형을 적절하게 사용할 것으로 기대하며, 본 발명자는 본 발명이 본 명세서에 구체적으로 설명된 것과 달리 실시되기를 의도한다. 따라서, 본 발명은 해당 법률이 허용하는 대로 여기에 첨부된 청구범위에 인용된 주제의 모든 수정 및 등가물을 포함한다. 더욱이, 위에서 설명된 요소들의 모든 가능한 변형의 임의의 조합은 본 명세서에 달리 명시되지 않거나 문맥상 명확하게 모순되지 않는 한, 본 발명에 포함된다.
하기 실시예는 본 발명을 추가로 예시하지만, 물론 어떤 방식으로든 그 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
실시예
본 발명은 하기 실시예에서 추가로 설명되며, 이는 본 발명의 범위를 제한하려는 의도가 아니다. 하기 실시예에 설명된 세포주는 달리 명시하지 않는 한, 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(American Type Culture Collection (ATCC)) 또는 독일 미생물 및 세포 배양 수집부(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Germany (DMSZ)), 또는 중국 과학 아카데미 상하이 세포 배양 연구소(The Shanghai Cell Culture Institute of Chinese Acadmy of Science)에 의해 지정된 조건에 따라 배양물로 유지되었다. 세포 배양 시약은 달리 명시하지 않는 한, 인비트로젠 사(Invitrogen Corp.)에서 구입하였다. 모든 무수 용매는 상업적으로 구입하여 질소 하에서 슈어-실(Sure-seal) 병에 보관하였다. PEG 화합물은 중국 자싱 소재 Biomatrik Inc에서 구입하였다. 합성이 언급되지 않은 일부 화합물은 중국의 CRO(예를 들어, Wuxi Apptec, HaoyuanChemexpress, Raybow Pharma)이 제공하였다. 실험 동물은 GemPharmatech. Co., Ltd.(중국 나징 소재) 및 Shanghai SLAC Laboratory Animal Co., Ltd.(중국 상하이 소재)를 통해 National Resource Center of Model Mice에서 구입하였고; T-DM1은 중국 홍콩의 약국을 통해 로슈(Roche)에서 구입하였다. 그 외 시약 및 용매는 모두 최고급 등급으로 구매하여 추가 정제 없이 사용하였다. 분취용 HPLC 분리는 VarrainPreStar HPLC를 사용하여 수행되었다. HPLC 분석은 아질런트(Agilent) 1260에서 수행되었다. 질량 스펙트럼 데이터는 WatersAcquityUPLC 분리 모듈 및 AcquityTUV 검출기가 장착된 WatersXevoQTOF 질량 스펙트럼에서 수집되었다. NMR 스펙트럼은 Zhejiang Sci-Tech University 화학과의 Zhongke-niujin WNMR-I 400MHz 기기에서 기록되었다. 화학적 이동(δ)은 테트라메틸실란 0.00을 기준으로 백만분율(ppm) 단위로 보고되었고, 결합 상수(J)는 Hz 단위로 보고되었다. C, H 및/또는 N의 원소 분석은 Zhejiang Sci-Tech University 화학과에서 제공되었으며, Elementar UNICUBE에서 수행되었다. 금속 원자의 정량 분석은 Agilent ICPOES 730 ICP-MS에서 수행되었다.
실시예 1. B 세포 성숙 항원(BCMA)에 대한 단일클론 항체의 생성.
Kilpatrick et al., Hybridoma, 16(4): 381-389 (1997)에 기술된 RIMMS 면역화 방식에 따라, 6주령의 BalB/c에 정제된 재조합 인간(rHu) TrxA-BCMA를 4 회(round) 피하 주사하였다. 마우스는 2-3일 간격으로 13일에 걸쳐 면역화되었다. 각각의 면역화 라운드마다 마우스를 먼저 이소플루란으로 마취시켰다. 면역원을 완전 또는 불완전 프로인트(Freund's) 보조제에 유화시켰다. 금 보조제(Sigma-Aldrich)를 사용하고 여러 부위에 양측으로(bilaterally) 주사하였다. 테스트 출혈은 13일에 수집되었으며 항원 ELISA로 분석되었다. 양호한 혈청 역가를 가진 마우스에게 복강내 예비-융합 부스트를 제공하고 17일에 희생시켰다. 비장 세포를 수확하고, 폴리에틸렌 글리콜 융합 방법(Roche Diagnostics)에 따라 골수종 세포주 P3-X63-Ag8.653에 융합하여, 안정한 하이브리도마를 얻었다.
직접 결합 ELISA에 이어 BCMA-발현 RPMI-8226-BCMA 세포에 대한 FACS에 의해 하이브리도마 상청액을 스크리닝함으로써, 항-BCMA 특이적 하이브리도마를 식별하였다. 시험관 내에서 RPMI-8226-BCMA 세포에 결합하고 내재화하는 능력에 대해 그리고 세포주에서 발현된 BCMA에 대한 FACS 결합에 의해 양성 하이브리도마를 추가로 테스트하였다.
선별 및 서브클론인 BCMA-A2-6H4-5D2 클론을 선택한 후, 항-BCMA 항체 J6M0(미국 특허 제9,273,141호에 설명되어 있으며, 출원서에서는 벨란타맙 또는 DXA009B라고 함)과 함께 엘리사(Elisa) 분석을 통해, 항체 결합 친화도를 결정하였고, 결과치는 도 1에 도시되어 있다. 부다페스트 조약에 따라 2022년 6월 23일에 China Center for Type Culture Collection(CCTCC)에 기탁되었다. CCTCC는 중국, 우편번호 430000, 후베이, 우한시, 우한대학교에 위치하고 있다. CCTCC 기탁에는 CCTCC C2022188이라는 수탁번호가 할당되었다.
단일클론 항체 BCMA-A2-6H4-5D2의 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 표 1에 나타내었다.
본 실시예의 결과는 BCMA에 대한 단일클론 항체의 생산을 입증한다.
[표 1]
실시예 2. BCMA-A2-6H4-5D2의 인간화 단일클론 항체의 생성.
BCMA-A2-6H4-5D2(SEQ ID NO:10)와 인간 IgG1 HC 불변 도메인(SEQ ID NO:12, 이는 SEQ ID NO:24에 의해 암호화됨)의 융합 VH에 의해 구축된 키메라 항체 c5D2 HC(SEQ ID NO:13), 및 BCMA-A2-6H4-5D2(서열 번호 11)와 인간 카파 LC 불변 도메인(서열 번호 14, 이는 서열 번호 26에 의해 암호화됨)의 융합 VL에 의해 구축된 키메라 항체 c5D2 LC(서열 번호 15). 상응하는 5D2의 아미노산을 인간 생식선(germine line) 유전자 아미노산으로 치환하여 생성된 인간화 항체 hu5D2 HC(서열번호 8), 상응하는 5D2의 아미노산을 인간 생식선 유전자 아미노산으로 치환하여 생성된 인간화 항체 hu5D2 LC(서열번호 9). hu5D2의 친화도는 도 2에 도시되어 있다.
단일클론 항체 c5D2 및 hu5D2의 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 표 2에 나타내었다.
[표 2]
실시예 3. 말단에 말레이미도기를 갖는 세포독소에 접합된 BCMA 단일클론 항체를 포함하는 항체-약물 접합체(ADC)를 제조하는 전통적인 방법.
hu5D2 단일클론 항체는 말레이미도기의 말단을 갖는 세포독소에 접합되었다. 구체적으로, 정제된 항체를 PBS pH 7.2, 1mM EDTA(에틸렌디아민 테트라아세트산)에서 3.2~4.2 몰 과량의 환원제 TCEP(트리스(2-카르복시에틸)포스핀)와 함께, 37℃에서 1시간 동안 배양하였다. 이후, 10%(v/v) DMA 또는 DMSO에 용해된 스톡 용액으로부터 말단에 말레이미도기를 갖는 세포독소의 페이로드 당량 6.5~9.0을 첨가한 후, 실온에서 1시간 내지 3시간 동안 부드럽게 회전시키면서 배양하였다. N-아세틸 시스테인의 4 몰 당량(페이로드에 대해)을 첨가함으로써 접합 반응을 선택적으로 켄칭하였다. 배양 후, 10,000 MWCO 투석 카세트를 사용하여, 환원제 및 과량의 페이로드/링커 복합체를 4℃의 PBS pH 5.0 내지 7.2에서 2 내지 10번 투석하여 제거하였다.
접합 과정에서 응집체(aggregate) 형성의 0.1~10%가 발생할 수 있다. 시스테인 켄칭된 페이로드를 포함하는, 고분자 응집체, 접합 시약은 예를 들어, Thompson et al., J. Control Release, 236: 100-116 (2016)에 설명된 바와 같이, 세라믹 수산화인회석 유형 II 크로마토그래피(CHT)를 사용하여 제거할 수 있다. ADC는 선택적으로 25mM 히스티딘-HCl, 7% 수크로스, 0.02% 폴리소르베이트-20 또는 80, pH 6에서 제형화되었다.
단량체 함량, 응집체 및 단편을 결정하기 위해, TSKgel.RTMG.3000WXL 컬럼(Tosoh Bioscience, Tokyo, Japan)에 로드된 100m(100μL 부피)의 항체 또는 ADC를 사용하여, 분석 크기-배제(size-exclusion) 크로마토그래피(SEC-HPLC)를 수행하였다. 이동상은 0.1M 황산나트륨, 0.1M 인산나트륨, 10% 이소프로판올, pH 6.8로 구성되었다. 유속은 1mL/분이었고, 각각의 분석은 실온에서 10~45분 동안 수행되었다. 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC-HPLC)를 사용하여, 접합 및 약물 로드 분포를 평가했으며, 부틸-비다공성 수지(NPR) 컬럼(4.6mm ID x3.5cm, 2.5μm, Tosoh Bioscience)을 사용하여 수행하였다. 이동상 A는 25mM 트리스-HCl, 1.5M (NH4)2SO4, pH 8.0로 구성되었고; 이동상 B는 25 mM 트리스-HCl 및 5% 이소프로판올, pH 8.0로 구성되었다. 1mg/mL 농도의 항체 또는 ADC 100μL를 로딩하고, 10~30분에 걸쳐 5% B에서 100% B까지의 구배를 사용하여 1mL/분의 유속으로 용출하였다. 환원된(reduced) 역상 크로마토그래피(rRP-HPLC)를 사용하여 사슬-특이적 접합을 확인하였다. 항체와 ADC는 37℃에서 감소하였다.
PBS(pH 7.2)에 용해된 42mM 디티오트레이톨(DTT)을 사용하여 항체와 ADC를 37℃에서 20분 동안 환원시켰다. 10μg의 환원된 항체 또는 ADC를 고분자 역상 매질(PLRP-S) 1000A 컬럼(2.1 x 50mm)(Agilent Technologies, Santa Clara, CA)에 로딩하고, 5% B에서 100% B까지의 구배로 20~35분에 걸쳐 80℃에서 1mL/분의 유속으로 용출하였다(이동상 A: 물 중 0.1% 트리플루오로아세트산, 이동상 B: 아세토니트릴 중 0.1% 트리플루오로아세트산).
중쇄 및 경쇄에서의 접합 및 약물/항체 비율(DAR)은 Agilent 6230 TOF(Agilent Technologies, Santa Clara, CA)와 결합된 Agilent 1290 시리즈 uHPLC에서 수행된 환원된 액체 크로마토그래피 질량 분석(rLCMS)에 의해 결정되었다. 2 μg의 환원된 항체 또는 ADC를 ZORBAX.RTM.RRHD(Rapid Resolution High Definition) 300-디페닐 컬럼(2.1 x50mm, 1.8μm)(Agilent Technologies, Santa Clara, CA)에 로딩하고, 2.1분 이후 80% B의 단계 구배를 사용하여 0.5mL/분의 유속으로 용출하였다(이동상 A: 물 중 0.1% 포름산, 이동상 B: 아세토니트릴 중 0.1% 포름산). 양성 비행 시간(positive time-of-flight) MS 스캔을 획득하고, MassHunter 소프트웨어(Agilent Technologies, Santa Clara, CA)를 사용하여 데이터 수집 및 처리를 수행하였다.
실시예 4. BCMA 발현 세포주의 생산 방법.
RPMI-8226 세포를 전장(full-length) BCMA 클론 또는 빈 벡터 공동발현 GFP 단백질로 형질감염시킴으로써, 안정한 세포주를 개발하였다. 유세포 분석을 통해 형질감염된 BCMA(RPMI-8226-BCMA) 표면에서 BCMA의 양성 발현이 확인되었다. 이들 세포주는 클로닝된 BCMA 항체의 특이성을 확인하기 위한 도구로 이후에 사용되었다.
실시예 5. 가용성 및 막-결합 BCMA에 대한, 본원에 기재된 단일클론 BCMA 항체 및 ADC의 결합 친화도
가용성 BCMA에 대한 BCMA-A2-6H4-5D2, hu5D2 및 c5D2의 결합은 엘리사 분석을 사용하여 결정되었다. 엘리사 분석은 1μg/ml 가용성 BCMA, 50μL/well을 37℃에서 1시간 동안 코팅한 후, PBS+2% BSA로 차단하는 방식으로 수행되었다. 다양한 농도의 항체를 희석하고, 사전 코팅된 엘리사 플레이트에 첨가하여, 37℃에서 1시간 동안 배양한 후, PBST(BioTek 405)로 3회 세척한 다음, 검출을 위해 50μL/Well 염소 항-인간 IgG(Fab 특이적)-퍼옥시다제(Sigma-Aldrich)(1:20000 희석)를 첨가하였다. 검출 전, 플레이트를 PBST로 3회 세척한 다음, TMB를 첨가하고, 2M H2SO4를 첨가하여 중단하였다. 이러한 실험의 결과는 도 2에 도시되어 있다.
막-결합 인간 BCMA에 대한 hu5D2, c5D2 및 hu5D2-tub196의 결합은 BCMA(NCI-H929)를 내인성으로 발현하는 다발성 골수종 세포주에서 유세포 분석을 사용하여 평가되었다. 결합 분석은 항-BCMA 항체를 200,000개의 세포와 함께 4℃에서 30분 동안 배양한 후, PBS+2% FBS(FACS 완충액)로 2회 세척하여 수행하였다. 다양한 항체 농도는 11-지점, 4-배 희석 시리즈를 사용하여 평가되었다. 그 다음, 세포를 5 ug/mL 염소 항-인간 IgG Fc 2차 항체, PE(Thermo Fisher Scientific)와 함께 4℃에서 배양한 후, PBS+2% FBS에서 2회 세척하였다. 세포를 200uL PBS+2% FBS에 재현탁시켰다.
Guava easyCyte HT 세포측정기를 사용하여, 살아있는 단일 세포의 형광을 측정하였다. 평균 형광 강도 값을 사용하여 결합 백분율을 결정하고, Prism 소프트웨어를 사용하여 EC50을 결정하였다. 이러한 실험의 결과는 도 3에 도시되어 있다.
실시예 6. 항체-약물 접합체를 사용하여 시험관 내에서 다발성 골수종 세포를 사멸시키는 방법.
hu5D2를 포함하는 항체-약물 접합체, 또는 튜부리신 유사체(예컨대 화합물 322 또는 390)에 접합된 이들의 친화도-최적화 클론에 의한 다발성 골수종 및 혈장 세포 백혈병 세포주의 사멸은 CCK8 키트(Dojindo Laboratories, Japan)에서 권장되는 프로토콜을 사용하여 시험관 내에서 평가되었다. 간단히 말하면, 180μL RPMI+10% FBS에 들어 있는 5000개의 세포를 96-웰 플레이트의 내부 웰에 첨가하였다. 다음 BCMA-발현 세포주를 테스트하였다: RPMI-8226-BCMA, NCI-H929, MM.1S 및 주르카트(Jurkat)도 테스트하였다. 항체-약물 접합체를 RPMI+10% FBS에서 10x 스톡(100μg/mL)으로 희석하였다. 그 다음, 처리물을 RPMI+10% FBS에 1:10으로 연속 희석하였다. 이러한 시리즈 중 20μL를 세포에 3중으로 첨가하여, 최고 농도 10μg/mL부터 최저 농도 0vg/mL 범위의 항체-약물 접합체의 8-점 용량 곡선을 얻었다. 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 96시간 동안 배양하였다. 배양 기간이 끝날 때, 기질 용액 10μL를 각 웰에 첨가하였다. 450nm에서의 흡광도는 SpectraMax i3x 플레이트 리더(Molecular Device, USA)를 사용하여 측정되었다. GraphPad Prismor Excel 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석하고 그래프를 작성했으며, 반-최고(half-maximal) 억제 농도(IC50)를 결정하였다. 본 실험의 결과는 도 4a, 4b, 4c, 4d에 도시되어 있다.
실시예 7. LC-MS에 의한 BCMA 항체에 대한 당화 부위 분석.
샘플 정보: 재조합 인간화 항-BCMA 단일클론 항체(DXA009 DS), 배치 번호는 009A2201B(본 특허의 출원인: Hangzhou DAC Biotechnology Co., Ltd에 의해 생산됨)이다.
샘플 준비: 아스파라긴 위치에 글리칸이 부착된 글리코펩티드 EEQYNSTYR(서열 번호 34). 재조합 인간화 항-BCMA 단일클론 항체(DXA009 DS, 배치 번호는 009A2201B임)는 변성되었으며, 6M 우레아, 10mM 디티오트레이톨로 56℃에서 약 40분 동안 환원되었으며, (약 30mM 요오도아세트아미드, 암실에서 실온에서 40분)알킬화되었으며, 50mM NH4HCO3에 희석하고 트립신(1/50, 효소/기질 중량비, 4시간, 37℃)으로 분해되었다(digested).
표 3에 예시된 글리코펩티드의 질량 및 반응. 글리코펩티드 종(Man5, G0F-GlcNAc, G0, G0F, G1, G1F 및 G2F 포함)의 백분율은 표 4에 표시되어 있다.
글리코펩티드의 MS/MS 도터(daughter) 이온 또는 생성물 이온 스펙트럼은 도 5(a) 내지 도 (h)에 도시되어 있다.
[표 3] BCMA 항체의 글리코펩티드의 질량 및 반응 요약
따라서, N-글리코시드의 위치는 Asn(N)-300에서 확인된다.
[표 4] BCMA 항체의 글리코펩티드 종(Man5, G0F-GlcNAc, G0, G0F, G1, G1F 및 G2F 포함)의 백분율 요약
UPLC 조건:LC 시스템: Waters ACQUITY UPLC H-클래스 시스템, 검출기: ACQUITY UPLC TUV, 흡수 파장: 214nm; 트랩 컬럼: ACQUITY UPLC BEH C18 1.7μm 2.1×100mm 컬럼; 이동상 A: 물 중 0.1% 포름산(FA), 이동상 B: ACN 중 0.1% 포름산(FA). 이동상 B(0.1% FA를 갖는 ACN)의 선형 구배를 사용하여 0.25 ml/min의 유속으로 95분 동안 1%에서 40%로, 이어서 10분 동안 40%에서 80%로, 그 다음 5분 동안 80%에서 80%로, 크로마토그래피 분리를 수행하였다.
MS 조건: MS 시스템: Waters Xevo-G2XS Q-TOF; 이온화 모드: ESI 양성, 감도 모드; 데이터 획득: MSE; 질량 범위: m/z 100-2500 Da; 정보학: UNIFI V1.8.2.169 소프트웨어(Waters)를 사용하여 데이터 분석을 수행한다.
실시예 8. LC-MS에 의한 탈당화된 BCMA-Tub ADC에 대한 환원된 분자량 및 DAR 분석.
샘플 제조: 5mM 디티오트레이톨을 사용하여 37˚C에서 약 2시간 동안 ADC(예를 들어, (DXC009 DP)를 환원한 후, 밤새 37˚C에서 PNGase F를 사용한 탈당화 단계를 거쳐, 도 6 및 도 7에 도시된 바와 같이, 6개의 단편이 생성하였다. HC 및 LC는 최대 3개의 페이로드를 운반하는 네이키드 또는 접합 형태로 존재하였다. 각각의 ADC 단편의 질량 및 ADC의 평균 DAR이 표 5에 표시되어 있다. 종래의 접합 ADC의 평균 DAR 계산에는 하기 방정식이 사용되었다.
[표 5] 상이한 ADC 단편의 질량과 비율 및 피크 영역으로부터 측정된 평균 DAR에 대한 요약
방법 조건: UPLC 시스템: Waters ACQUITY UPLC H-클래스 시스템; 검출기: ACQUITY UPLC TUV; 흡수 파장: 280nm; 트랩 컬럼: ACQUITY UPLC C4 1.7μm 2.1 x 50mm 컬럼; 이동상 A: 물 중 0.1% 포름산(FA), 이동상 B: ACN 중 0.1% 포름산(FA);
이동상 B(0.1% FA를 갖는 ACN)의 선형 구배를 사용하여 0.4 ml/min의 유속으로, 2분 동안 5%에서 25%로, 이어서 8분 동안 25%에서 45%로, 그 다음 2분 동안 45%에서 85%로, 크로마토그래피 분리를 수행하였다.
MS 조건: MS 시스템: Waters Xevo-G2XS Q-TOF; 이온화 모드: ESI 양성; 질량 범위: m/z 500-4000 Da. 정보학: UNIFI V1.8.2.169 소프트웨어(Waters)를 사용한 데이터 분석.
실시예 9. LC-MS에 의한 BCMA-ADC에 대한 약물 접합 부위 분석.
샘플 준비: 재조합 인간화 항-BCMA 단일클론 항체-튜불리신 B 접합체(예를 들어, DXC009 DP), 배치 번호는 22030251, 팩 크기는 100mg/병, 이는 Hangzhou DAC Biotechnology Co., Ltd.에서 제조됨. ADC 샘플은 변성 및 환원되었으며(6M 요소, 10mM 디티오트레이톨, 56˚C에서 약 40분), 알킬화되었으며(약 30mM 요오도아세트아미드, 실온 암실에서 40분), 50mM HEPES로 희석되었고, 트립신(1/50, 효소/기질 중량비, 4시간, 37˚C)으로 분해되었다.
표 6에 예시된 ADC의 약물-로딩된(loaded) 펩티드. 각각의 ADC 단편의 질량 및 평균 DAR이 도 7에 도시되어 있다. ADC의 약물-로딩된 펩티드의 MS/MS 도터 이온 또는 생성물 이온 스펙트럼.
[표 6] BCMA-ADC의 약물-로딩된 펩티드의 질량 및 반응 요약.
방법 조건: LC 시스템: Waters ACQUITY UPLC H-클래스 시스템; 검출기: ACQUITY UPLC TUV, 흡수 파장: 214nm; 트랩 컬럼: ACQUITY UPLC C18 1.7μm 2.1×100mm 컬럼; 이동상 A: 물 중 0.1% 포름산(FA), 이동상 B: ACN 중 0.1% 포름산(FA); 이동상 B(0.1% FA를 갖는 ACN)의 선형 구배를 사용하여 0.2ul/min의 유속으로, 95분 동안 1%에서 40%로, 이어서 15분 동안 40%에서 80%로 크로마토그래피 분리를 수행한다. MS 조건: MS 시스템: Waters Xevo-G2XS Q-TOF; 이온화 모드: ESI 양성, 감도 모드; 데이터 수집: MSE; 질량 범위: m/z 100-2500 Da; 정보학: UNIFI V1.8.2.169 소프트웨어(Waters)를 사용하여 데이터 분석을 수행한다.
실시예 10. 메소-2,3-비스((2,4-디메톡시벤질)아미노)숙신산(2)의 합성
에탄올(3.6L) 중의 메소-2,3-디브로모석신산(500g, 1.80mol)의 용액에, 트리메틸아민(729g, 7.20mol)을 첨가한 다음, 2,4-디메톡시벤질아민(903g, 5.4mol)을 첨가하였다. 첨가가 완료된 후, 혼합물을 90℃로 가열하고 환류 하에 밤새 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 형성된 고체를 여과하고, 에탄올로 헹구고, 건조하여, 메소-2,3-비스(2,4-디메톡시벤질아미노)숙신산(600g, 72% 수율)을 얻었다.
실시예 11. 메소-2,3-디아미노숙신산(3)의 합성
디클로로메탄(100mL)에 용해된 메소-2,3-비스(2,4-디메톡시벤질아미노)숙신산(800g, 1.78 mol) 용액을 실온에서 트리플루오로아세트산(2035g, 17.8 mol)으로 밤새 처리하였다. 혼합물을 농축한 후, 1N NaOH(6L)를 천천히 첨가하고 30분 동안 교반하였다. 침전물을 여과하고, aq. HCl를 사용하여 용액을 pH 5-6으로 조정하였다. 생성된 백색 침전물을 여과에 의해 수집하고, 물로 헹구고, 건조하여, 메소-2,3-디아미노숙신산(217g, 78% 수율)을 얻었다.
실시예 12. 메소-2,3-비스(((벤질옥시)카르보닐)아미노)숙신산(4)의 합성
메소-2,3-디아미노숙신산(386g, 2.6mol)을 2N NaOH(6.5L)에 용해시키고, 1,4-디옥산(2.1L)과 혼합하였다. 용액을 0 ℃로 냉각하고 벤질 클로로포르메이트(1333g, 7.8 mol)를 내부 온도를 5 ℃ 미만으로 유지하는 속도로 첨가하였다. 첨가 완료 후, 혼합물을 3시간 동안 교반하고, 실온으로 가온하고 밤새 교반하였다. 반응물을 물(2 L)로 희석하고 에틸 아세테이트(2 x 1 L)로 세척하였다. 수성층을 농축 HCl로 pH 3에 도달할 때까지 산성화한 후, 에틸 아세테이트(3 x 2 L)로 추출하였다. 유기상을 합하고 물(1 L)로 세척하고 무수 Na2SO4로 건조시키고 여과하고 농축하였다. 잔류물을 디클로로메탄/석유 에테르(1:1)로 분쇄하고, 여과하여, 메소-2,3-비스(((벤질옥시)카르보닐)아미노) 숙신산(900g, 83%)을 얻었다.
실시예 13. 디-tert-부틸 4,4'-((2,3-비스(((벤질23옥시)카르보닐)아미노)숙시닐) 비스(아잔디일))디부티레이트(6)의 합성
테트라히드로푸란(200mL) 중의 화합물 4(10g, 28.7mmol) 및 tert-부틸 아미노부티레이트 염산염(11.2g, 57.4 mol)의 용액에, HATU(32.8g, 86.3mmol) 및 디이소프로필에틸아민(19mL, 115mmol)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 밤새 교반하고, 물(400mL)로 희석하고, 10분 동안 교반하고, 여과하고, 오븐에서 건조하여, 백색 고체(17.7g, > 100% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C36H51N4O10에 대한 계산치, 699.35; 실측치, 699.35.
실시예 14. 디-tert-부틸 4,4'-((2,3-디아미노숙시닐)비스(아잔디일))디부티레이트(7)의 합성
화합물 6(16g, 22.9mmol)을 메탄올(200mL)에 용해시킨 후, Pd/C(2.0g)를 첨가하였다. 반응 플라스크를 비우고 수소로 다시 채우고, 60℃로 가열하고, 반응이 완료될 때까지 교반하였다. 여과 및 농축하여, 생성물 7(9.8g, 100% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C20H39N4O6에 대한 계산치, 431.28; 실측치, 431.28.
실시예 15. 화합물 9의 합성
화합물 7(9.8g, 22.8mmol)을 디클로로메탄(200mL)에 용해시키고, 엑소-3,6-에폭시-1,2,3,6-테트라히드로프탈산 무수물(7.5g, 45.5mmol)과 트리에틸아민(6.3ml, 45.5mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 완료될 때까지 교반하고, 농축 건조시켜, 백색 거품 고체를 얻었다(17.3g, 100% 수율). MS-ESI (m/z): [M+H]+ C36H51N4O14에 대한 계산치, 763.33; 실측치, 763.33.
실시예 16. 디-tert-부틸 4,4'-((2,3-비스((4R,7S)-1,3-디옥소-1,3,3a,4,7,7a-헥사히드로-2H-4,7-에폭시이소인돌-2-일)숙시닐)비스(아잔디일))디부티레이트(10)의 합성
DMF(300mL)에 용해된 화합물 9(17.3g, 22.7mmol)의 용액에, EDC(13g, 68.2mmol), HOBt(9.2g, 68.2mmol) 및 DBU(10.4g, 68.2mmol)를 느리게 첨가하였다. 혼합물을 60℃로 가열하고 5시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시키고 물(1L)에 붓고, 디클로로메탄(3×200mL)으로 추출하였다. 합한 유기상을 2 N HCl(100mL), 염수(100mL)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르/에틸 아세테이트(200mL/500mL)로 분쇄하고, 백색 고체를 여과 제거하였다. 여과액을 농축하고 실리카겔 컬럼으로 정제하여, 흰색 거품 고체(8.2g, 49% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C36H47N4O12에 대한 계산치, 727.31; 실측치, 727.31.
실시예 17. 디-tert-부틸 4,4'-((2,3-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)숙시닐)비스(아잔디일))디부티레이트(11)의 합성
화합물 10(8.2g, 11.2mmol)을 톨루엔(80mL)과 DMF(80mL)의 혼합물에 용해시키고, 120℃로 가열하고 4시간 동안 환류 하에 교반하였다. 이어서, 반응물을 실온으로 냉각시키고 30분 이상 교반하고, 백색 고체가 침전된 후, 여과하여 수집하고, 건조하여, 원하는 생성물(3.0g, 45% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C28H39N4O10에 대한 계산치, 591.26; 실측치, 591.26.
실시예 18. 4,4'-((2,3-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)숙시닐)비스(아잔디일))디부티르산(12)의 합성
화합물 11(1.6g, 2.7mmol)을 디클로로메탄(10mL) 및 트리플루오로아세트산(10mL)에 용해시키고, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 농축한 후 디클로로메탄으로 2회 공-증발시키고, 잔류물을 디클로로메탄 및 에틸 아세테이트(10mL/10mL)로 분쇄하여, 백색 고체(1.3g, 100% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C20H23N4O10에 대한 계산치, 479.13; 실측치, 479.13.
실시예 19. 디벤질((3R,4S)-2,5-디옥소테트라히드로푸란-3,4-디일)-디카르바메이트(13)의 합성
Ac2O(1L) 중의 메소-2,3-비스(((벤질옥시)카르보닐)아미노)숙신산(100g, 0.24mol)의 용액을 90℃에서 6시간 동안 가열하고, 냉각하고 농축 건조하였다. 잔류물을 톨룬과 함께 공-증발시킨 후, 아세톤(200mL)과 석유 에테르(400mL)의 혼합물로 분쇄하였다. 백색 고체(80g 부분입체이성체 혼합물)를 수집하고 디클로로메탄(300mL)과 함께 밤새 교반하였다. 백색 고체인 라세미 혼합물(61g)을 수집하고, 모액으로부터 라세미/메조 혼합물도 회수하였고, 이를 재처리하여 깨끗한 메조 화합물(2g) 및 기타 라세미/메조 혼합물(15g)을 얻었다.
실시예 20. 디-tert-부틸 4,4'-(((2R,3R)-2,3-비스(((벤질옥시)카르보닐)아미노)숙시닐)비스(아잔디일))디부티레이트(14)의 합성
테트라히드로푸란(1L)에 용해된 화합물 13(60g, 0.151mol)의 용액에, tert-부틸 아미노부티레이트 염산염(31g, 0.151mol)을 첨가하였다. 용액을 0℃로 냉각시키고 트리에틸아민(42mL, 0.302mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온하고, 30분 동안 교반하였다. tert-부틸 아미노부티레이트(31g, 0.151 mol), HATU(86.12g, 0.226 mol) 및 트리에틸아민(42mL, 0.302mmol)의 추가 부분을 첨가하고, 반응물을 실온에서 밤새 교반하고, 물(2L)로 희석하고, 10분 동안 교반하고, 여과하여, 백색 고체(93g, 88.13% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C36H51N4O10에 대한 계산치, 699.35; 실측치, 699.35.
실시예 21. 디-tert-부틸 4,4'-(((2R,3R)-2,3-디아미노숙시닐)비스(아잔디일)) 디부티레이트(15)의 합성
화합물 14(93g, 0.133mol)를 메탄올(2L)에 용해시킨 후, Pd/C(10g)를 첨가하였다. 반응 플라스크를 비우고 수소로 다시 채우고, 60°C로 가열하고 6시간 동안 교반하였다. 여과 및 농축하여, 생성물 7(57g, 100% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C20H39N4O6에 대한 계산치, 431.28, 실측치, 431.28.
실시예 22. 화합물 16의 합성
화합물 15(57g, 0.13mol)을 디클로로메탄(600mL)에 용해시키고, 엑소-3,6-에폭시-1,2,3,6-테트라히드로프탈산 무수물(46g, 0.27mol)과 트리에틸아민(36ml, 0.27mol)을 첨가하였다. 반응물을 3시간 동안 실온에서 교반하고, 농축 건조시키고, 디클로로메탄과 공-증발시켜, 백색 거품 고체(100g, 100% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C36H51N4O14에 대한 계산치, 763.33; 실측치, 763.33.
실시예 23. 디-tert-부틸 4,4'-(((2R,3R)-2,3-비스((4R,7S)-1,3-디옥소-1,3,3a,4,7,7a-헥사하이드로-2H-4,7-에폭시이소인돌-2-일)숙시닐)비스(아잔디일))디부티레이트(17)의 합성.
DMF(1L)에 용해된 화합물 16(100g, 0.13mol)의 용액에, EDC(75g, 0.39mol), HOBt(53g, 0.39mol) 및 DBU(59g, 0.39mol)를 느리게 첨가하였다. 혼합물을 60℃로 가열하고 5시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시키고, 물(2L)에 붓고, 디클로로메탄(3×500mL)으로 추출하였다. 합한 유기상을 2 N HCl(300mL), 염수(300mL)로 세척하고 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르/에틸 아세테이트(200mL/500mL)로 분쇄하고, 백색 고체를 여과 제거하였다. 여과액을 농축하고 실리카겔 컬럼으로 정제하여, 백색 거품 고체(67g, 70% 수율)를 얻었다. S-ESI (m/z): [M+H]+ C36H47N4O12에 대한 계산치, 727.31; 실측치, 727.31.
실시예 24. 디-tert-부틸 4,4'-(((2R,3R)-2,3-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)숙시닐)비스(아잔디일))디부티레이트(18)의 합성
화합물 17(67g, 92mmol)을 톨루엔(600mL)과 DMF(60mL)의 혼합물에 용해시키고, 120℃로 가열하고 4시간 동안 환류하에 교반하였다. 이어서, 반응물을 실온으로 냉각시키고 30분 이상 교반하고, 백색 고체가 침전된 후, 여과하여 수집하고 건조하여, 원하는 생성물(41g, 75% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C28H39N4O10에 대한 계산치, 591.26; 실측치, 591.26.
실시예 25. 4,4'-(((2R,3R)-2,3-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)숙시닐)비스(아잔디일))디부티르산(19)의 합성
화합물 18(41g, 69mmol)을 디클로로메탄(200mL) 및 트리플루오로아세트산(200mL)에 용해시키고 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 농축한 후, 디클로로메탄으로 2회 공-증발시키고, 잔류물을 디클로로메탄 및 에틸 아세테이트(200mL/200mL)로 분쇄하여, 백색 고체(33g, 99% 수율)를 얻었다.
실시예 26. tert-부틸(S)-(37-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자옥타트리아콘탄-38-오일)글리시네이트(21)의 합성
THF(40mL) 중의 (S)-37-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자옥타트리아콘탄-38-오익산(20, 4.0g, 5.34mmol) 및 H-Gly-OtBu·HCl(0.9g, 5.34mmol)의 용액에, HATU(3.05g, 8.01mmol) 및 디이소프로필에틸아민(1.5mL, 10.68)을 첨가하였다. 반응물을 LC-MS에 의해 지시된 대로, 완료될 때까지 실온에서 교반하였다. 용매를 제거하고 잔류물을 물(100mL)에 붓고, 디클로로메탄(3 x 50mL)으로 추출하였다. 합한 유기상을 물(50mL), 포화 중탄산나트륨(50mL), 2N HCl(50mL) 및 염수(50mL)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 농축하고, 실리카겔 컬럼(디클로로메탄/MeOH = 100/0 내지 20/1 내지 10/1)으로 정제하여, 화합물 21(4.1g, 89% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C41H72N3O16에 대한 계산치, 862.48; 실측치, 862.48.
실시예 27. tert-부틸(S)-(37-아미노-31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자옥타트리아콘탄-38-오일)글리시네이트(22)의 합성
화합물 21(2.9g, 3.3mmol)을 THF(50mL)에 용해시키고, 탄소상 10% 팔라듐(0.3g)을 첨가하고, 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채웠다. 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 여과하고, 여과액을 농축하여, 표제 화합물 2(2.1g, 84% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C33H66N3O14에 대한 계산치, 728.45; 실측치 728.45.
실시예 28. 디-tert-부틸(5S,13S,14S,22S)-13,14-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-4,7,12,15,20,23-헥사옥소-5,22-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,11,16,21,24-헥사아자헥사코산디오에이트(23)의 합성
THF(10mL) 및 DMF(5mL)의 혼합 용매 중의 화합물 19(120mg, 0.251mmol) 및 화합물 22(365mg, 0.502mmol)의 용액에, HATU(286mg, 0.75mmol) 및 디이소프로필에틸아민(82μL, 0.5mmol)을 첨가하였다. 반응물을 LC-MS에 의해 지시된 대로, 완료될 때까지 실온에서 교반하였다. 용매를 제거하고 잔류물을 디클로로메탄(100mL)에 용해시키고, 물(50mL), 포화 중탄산나트륨(50mL), 2N HCl(50mL) 및 염수(50mL)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 농축하고, 실리카겔 컬럼(디클로로메탄/MeOH = 100/0 내지 20/1 내지 10/1)으로 정제하여, 화합물 23(0.3g, 62% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C86H149N10O36에 대한 계산치, 1898.01; 실측치, 1898.01.
실시예 29. (5S,13S,14S,22S)-13,14-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-4,7,12,15,20,23-헥사옥소-5,22-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,11,16,21,24-헥사아자헥사코산디오익산(24)의 합성
화합물 23(0.3g, 0.158mmol)을 포름산(10mL)과 디클로로메탄(5mL)에 용해시킨 후, 60 ℃로 가열하였다. 반응물을 LC-MS에 의해 지시된 대로, 완료될 때까지 교반한 후 농축하여, 표제 화합물(280mg, 100% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C78H133N10O36에 대한 계산치, 1785.88; 실측치 1785.88.
실시예 30. (2S,3S)-2,3-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-N1,N4-비스((S)-37-((2-(((1S,9S)-9-에틸-5-플루오로-9-하이드록시-4-메틸-10,13-디옥소-1,2,3,9,10,12,13,15-옥타히드로벤조[de]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-1-일)아미노)-2-옥소에틸)카르바모일)-31,39-디옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,38-디아자도테트라콘탄-42-일)숙신아미드(25)의 합성
화합물 24(200mg, 0.102mmol) 및 엑사테칸 메실레이트(108mg 0.204mmol)를 DMF(5mL)에 용해시키고, HATU(116mg, 0.306mmol) 및 디이소프로필에틸아민(71μL, 0.408mmol)을 첨가하였다. 전환이 완료될 때까지 반응물을 실온에서 교반한 후, 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 생성물 25(120mg, 46% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C126H173F2N16O42에 대한 계산치, 2620.18; 실측치, 2620.18.
실시예 31. tert-부틸 (S)-(S)-(37-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자옥타트리아콘탄-38-오일)글리실글리시네이트(26)의 합성
THF(50mL) 중의 화합물 20(5g, 6.78mmol) 및 H-Gly-Gly-OtBu·HCl(1.5g, 6.78mmol)의 용액에, HATU(3.81g, 10.01mmol) 및 디이소프로필에틸아민(1.8ml, 13.35mmol)을 첨가하였다. 반응물을 LC-MS에 의해 지시된 대로, 완료될 때까지 실온에서 교반하였다. 용매를 제거하고 잔류물을 물(100mL)에 붓고, 디클로로메탄(3 x 50mL)으로 추출하였다. 합한 유기상을 물(50mL), 포화 중탄산나트륨(50mL), 2N HCl(50mL) 및 염수(50mL)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 농축하고, 실리카겔 컬럼(디클로로메탄/MeOH = 100/0 내지 20/1 내지 10/1)으로 정제하여, 화합물 26(3.7g, 60% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C43H75N4O17에 대한 계산치, 919.50; 실측치, 919.50.
실시예 32. tert-부틸(S)-(S)-(37-아미노-31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자옥타트리아콘탄-38-오일)글리실글리시네이트(27)의 합성
화합물 26(819mg, 0.89mmol)을 THF(20mL)에 용해시키고, 탄소상 10% 팔라듐(0.1g)을 첨가하고, 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채웠다. 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 여과하고, 여과액을 농축하여, 표제 화합물 27(700mg, 100% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C35H69N4O15에 대한 계산치, 785.47; 실측치, 785.47.
실시예 33. 디-tert-부틸(8S,16S,17S,25S)-16,17-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-4,7,10,15,18,23,26,29-옥타옥소-8,25-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,14,19,24,27,30-옥타아자도트리아콘탄디오에이트(28)의 합성
THF(10mL) 및 DMF(5mL) 혼합 용매 중의 화합물 19(180mg, 0.376mmol) 및 화합물 27(649mg, 0.828mmol) 용액에, HATU(429mg, 1.13mmol) 및 디이소프로필에틸아민(186μL, 1.13mmol)을 첨가하였다. 반응물을 LC-MS에 의해 지시된 대로, 완료될 때까지 실온에서 교반하였다. 용매를 제거하고 잔류물을 디클로로메탄(100mL)에 용해시키고, 물(30mL), 포화 중탄산나트륨(30mL), 2N HCl(30mL) 및 염수(30mL)로 세척하고 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 농축하고, 실리카겔 컬럼(디클로로메탄/MeOH = 100/0 내지 20/1 내지 10/1)으로 정제하여, 화합물(0.45g, 59% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C90H155N12O38에 대한 계산치, 2012.05; 실측치, 2012.05.
실시예 34. (8S,16S,17S,25S)-16,17-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-4,7,10,1518,,23,26,29-옥타옥소-8,25-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일) -3,6,9,14,19,24,27,30-옥타아자도트리아콘탄디오익산(29)의 합성
화합물 28(0.30g, 0.194mmol)을 포름산(10mL)과 디클로로메탄(5mL)에 용해시킨 후, 60℃로 가열하였다. 반응물을 LC-MS에 의해 지시된 대로, 완료될 때까지 교반한 후 농축하여, 표제 화합물(280mg, 100% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C82H139N12O38에 대한 계산치, 1899.92; 실측치, 1899.92.
실시예 35 (2S,3S)-2,3-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-N1,N4-비스((S)-37-((2-((2-(((1S,9S)-9-에틸-5-플루오로-9-하이드록시-4-메틸-10,13-디옥소-1,2,3,9,10,12,13,15-옥타히드로벤조[de]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-1-일)아미노)-2-옥소에틸)아미노)-2-옥소에틸)카르바모일)-31,39-디옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,38-디아자도테트라콘탄-42-일)숙신아미드(30)의 합성
화합물 29(142mg, 0.075mmol) 및 엑사테칸 메실레이트(65mg, 0.15mmol)를 DMF(5mL)에 용해시키고, HATU(85mg, 0.225mmol) 및 디이소프로필에틸아민(37μL, 0.225mmol)을 첨가하였다. 전환이 완료될 때까지 반응물을 실온에서 교반한 후, 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 표제 화합물(60mg, 28% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C130H179F2N18O4에 대한 계산치, 2734.22; 실측치, 2734.22.
실시예 36. tert-부틸(S)-(37-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-31,38-디옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,39-디아자트리테트라콘탄-43-오일)글리시네이트(32)의 합성.
THF(50mL) 중의 화합물 20(5.00g, 6.78mmol) 및 tert-부틸(4-아미노부타노일)글리시네이트 염산염(31, 1.71g, 6.78mmol)의 용액에, HATU(3.81g, 10.01mmol) 및 디이소프로필에틸아민(1.8mL, 13.35mmol)을 첨가하였다. 반응물을 LC-MS에 의해 지시된 대로, 완료될 때까지 실온에서 교반하였다. 용매를 제거하고 잔류물을 물(100mL)에 붓고, 디클로로메탄(3 x 50mL)으로 추출하였다. 합한 유기상을 물(50mL), 포화 중탄산나트륨(50mL), 2N HCl(50mL) 및 염수(50mL)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 농축하고, 실리카겔 컬럼(디클로로메탄/MeOH = 100/0 내지 20/1 내지 10/1)으로 정제하여, 화합물 32(5.4g, 85% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C45H78N4O17에 대한 계산치, 947.54; 실측치, 947.57.
실시예 37. tert-부틸(S)-(37-아미노-31,38-디옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,39-디아자트리테트라콘탄-43-오일)글리시네이트(33)의 합성
화합물 32(819mg, 0.86mmol)를 THF(20mL)에 용해시키고, 탄소상 10% 팔라듐(0.1g)을 첨가하고, 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채웠다. 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 여과하고, 여과액을 농축하여, 표제 화합물(700mg, 100% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C37H73N4O15에 대한 계산치, 813.50; 실측치, 813.50.
실시예 38. 디-tert-부틸(10S,18S,19S,27S)-18,19-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-4,9,12,17,20,25,28,33-옥타옥소-10,27-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,8,11,16,21,26,29,34-옥타아자헥사트리아콘탄디오에이트(34)의 합성
THF(10mL) 및 DMF(5mL)의 혼합 용매 중의 화합물 19(246mg, 0.514mmol) 및 화합물 33(1.0g, 1.286mmol)의 용액에, HATU(586mg, 1.54mmol) 및 디이소프로필에틸아민(245μL, 1.54mmol)을 첨가하였다. 반응물을 LC-MS에 의해 지시된 대로, 완료될 때까지 실온에서 교반하였다. 용매를 제거하고 잔류물을 디클로로메탄(100mL)에 용해시키고, 물(50mL), 포화 중탄산나트륨(50mL), 2N HCl(50mL) 및 염수(50mL)로 세척하고 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 농축하고, 실리카겔 컬럼(디클로로메탄/MeOH = 100/0 내지 20/1 내지 10/1)으로 정제하여, 표제 화합물(0.54g, 51% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C94H163N12O38에 대한 계산치, 2068.11; 실측치, 2068.11.
실시예 39. (10S,18S,19S,27S)-18,19-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-4,9,12,17,20,25,28,33-옥타옥소-10,27-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일) -3,8,11,16,21,26,29,34-옥타아자헥사트리아콘탄디오익산(35)의 합성
화합물 34(0.50g, 0.242mmol)를 포름산(10mL)과 디클로로메탄(5mL)에 용해시킨 후, 60℃로 가열하였다. 반응물을 LC-MS에 의해 지시된 대로, 완료될 때까지 교반한 후 농축하여, 표제 화합물(470mg, 100% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C86H147N12O38에 대한 계산치, 1955.99; 실측치, 1955.99.
실시예 40. (2S,3S)-2,3-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-N1,N4-비스((S)-37-((4-((2-(((1S,9S)-9-에틸-5-플루오로-9-하이드록시-4-메틸-10,13-디옥소-1,2,3,9,10,12,13,15-옥타히드로벤조[de]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-1-일)아미노)-2-옥소에틸)아미노)-4-옥소부틸)카르바모일) -31,39-디옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,38-디아자도테트라콘탄-42-일)숙신아미드(36)의 합성
화합물 35(200mg, 0.102mmol) 및 엑사테칸 메실레이트(108mg, 0.204mmol)를 DMF(5mL)에 용해시키고, HATU(116mg, 0.306mmol) 및 디이소프로필에틸아민(53μL, 0.306mmol)을 첨가하였다. 전환이 완료될 때까지 반응물을 실온에서 교반한 후, 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 표제 화합물(120mg, 42% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C130H179F2N18O4에 대한 계산치, 2734.22; 실측치, 2734.22.
실시예 41. tert-부틸((벤질옥시)카르보닐)글리실글리실글리시네이트(38)의 합성
Cbz-Gly-Gly-OH(20.3g, 76.2mmol) 및 H-Gly-OtBu(10.0g, 76.2mmol)를 디클로로메탄(300mL)에 용해시키고, 빙수조에서 0℃로 냉각시켰다. HATU(34.8g, 91.5mmol) 및 트리에틸아민(32mL, 228.7mmol)을 첨가한 후, 반응물을 실온으로 가온하고 밤새 교반하였다. 반응 용액을 염수로 세척한 후, 건조하고, 농축하고, 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄:MeOH = 20:1)로 정제하여, 원하는 생성물 25g을 86% 수율로 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C18H25N3O6에 대한 계산치, 380.17; 실측치, 379.9.
실시예 42. tert-부틸 글리실글리실글리시네이트(39)의 합성
화합물 38(16.5g, 43.5mmol)을 THF(300mL)에 용해시키고, 탄소상 10% 팔라듐(2.0g)을 첨가하고, 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채웠다. 4시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 여과하고 여과액을 농축하여, 회백색 고체(10.2g, 95% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C10H19N3O4에 대한 계산치, 246.14; 실측치, 246.14.
실시예 43. tert-부틸 (S)-(S)-(S)-(37-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자옥타트리아콘탄-38-오일)글리실글리실글리시네이트(40)의 합성.
THF(50mL) 중의 화합물 20(5.0g, 6.78mmol) 및 화합물 39(1.67g, 6.78mmol)의 용액에, HATU(3.81g, 10.01mmol) 및 디이소프로필에틸아민(1.8ml, 13.35mmol)을 첨가하였다. 반응물을 LC-MS에 의해 지시된 대로, 완료될 때까지 실온에서 교반하였다. 용매를 제거하고 잔류물을 물(100mL)에 붓고, 디클로로메탄(3 x 50mL)으로 추출하였다. 합한 유기상을 물(50mL), 포화 중탄산나트륨(50mL), 2N HCl(50mL) 및 염수(50mL)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하고, 실리카겔 컬럼(디클로로메탄/MeOH = 100/0 내지 20/1 내지 10/1)으로 정제하여, 화합물 40(4.3g, 65% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C47H77N5O18에 대한 계산치, 976.53; 실측치 976.53.
실시예 44. tert-부틸 (S)-(S)-(S)-(37-아미노-31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥-32-아자옥타트리아콘탄-38-오일)글리실글리실글리시네이트(41)의 합성
화합물 40(1.5g, 1.53mmol)을 THF(20mL)에 용해시키고, 탄소상 10% 팔라듐(0.1g)을 첨가하고, 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채웠다. 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 여과하고, 여과액을 농축하여, 표제 화합물 41(1.3g, 100% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C37H71N5O16에 대한 계산치, 842.49; 실측치, 842.49.
실시예 45. 디-tert-부틸(11S,19S,20S,28S)-19,20-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-4,7,10,13,18,21,26,29,32,35-데카옥소-11,28-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,12,17,22,27,30,33,36-데카아자옥타트리아콘탄디오에이트(42)의 합성
화합물 20(911mg, 1.08mmol) 및 화합물 41(225mg, 0.470mmol)을 DMF(5mL)에 용해시키고, HATU(536mg, 1.411mmol) 및 디이소프로필에틸아민(0.233mL, 1.411mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 교반한 후, 물 50mL에 붓고, 디클로로메탄 40mL로 3회 추출하였다. 유기상을 염수 20mL로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 컬럼으로 정제하여, 화합물 42를 오일(671mg, 0.316mmol, 67%)로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C94H160N14O40에 대한 계산치, 2127.37; 실측치, 2128.16.
실시예 46. (11S,19S,20S,28S)-19,20-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-4,7,10,13,18,21,26,29,32,35-데카옥소-11,28-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,12,17,22,27,30,33,36-데카아자옥타트리아콘탄디오익산(43)의 합성
화합물 42(671mg, 0.316mmol)를 디클로로메탄(4mL)에 용해시키고, 트리플루오로아세트산(2mL)으로 처리하였다. 8시간 동안 교반한 후, 반응 용액을 농축하여, 화합물 43을 오일(456mg, 0.226mmol, 71%)로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C86H144N14O40에 대한 계산치, 2015.16; 실측치, 2016.09.
실시예 47. 비스(퍼플루오로페닐)(11S,19S,20S,28S)-19,20-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-4,7,10,13,18,21,26,29,32,35-데카옥소-11,28-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,12,17,22,27,30,33,36-데카아자옥타트리아콘탄디오에이트(44)의 합성
화합물 43(323mg, 0.160mmol)을 디클로로메탄(10mL)에 용해시키고, 펜타플루오로페놀(73.8mg, 0.401mmol) 및 EDCI(76.8mg, 0.401mmol)를 첨가하였다. 3시간 동안 교반한 후, 반응 용액을 염수 10mL로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 농축하여, 화합물 44를 오일(376mg, 0.160mmol, 99%)로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C98H142F10N14O40에 대한 계산치, 2347.26; 실측치, 2348.26.
실시예 48. (2S,3S)-2,3-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-N1,N4-비스((S)-37-((2-((2-((2-((1S,9S)-9-에틸-5-플루오로-9-하이드록시-4-메틸-10,13-디옥소-1,2,3,9, 10,12,13,15-옥타하이드로벤조[데]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-1-일)아미노)-2-옥소에틸)아미노)-2-옥소에틸)아미노)-2-옥소에틸)카르바모일)-31,39-디옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,38-디아자도테트라콘탄-42-일) 숙신아미드(45)의 합성
화합물 44(188mg, 0.080mmol) 및 엑사테칸 메실레이트(87mg, 0.200mmol)를 DMF(2mL)에 용해시키고, 디이소프로필에틸아민(0.053mL, 0.321mmol)을 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하고, 분취용 HPLC(아세토니트릴/물)로 정제하여, 고체로서 화합물 45(48mg, 0.017mmol, 21%)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C134H184F2N20O46에 대한 계산치, 2850.04; 실측치, 1426.00.
실시예 49. (S)-(S)-(37-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자옥타트리아콘탄-38-오일)글리실글리신(46)의 합성
화합물 26(12.0g, 13.06mmol)을 디클로로메탄(20mL) 및 포름산(40mL)에 용해시켰다. 3시간 동안 교반한 후, 반응 용액을 농축하고, 디클로로메탄으로 희석하고, 물로 2회, 염수로 1회 세척하였다. 용액을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 농축하여, 화합물 46(10.4g, 92% 수율)을 얻었다.
실시예 50. tert-부틸((S)-37-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자옥타트리아콘탄-38-오일)글리실글리실-L-알라니네이트(47)의 합성.
30mL 디클로로메탄 중의 화합물 46(2.10g, 2.43mmol) 용액에, H-Ala-OtBu(0.53g, 2.92mmol), HATU(1.41g, 3.65mmol) 및 디이소프로필에틸아민(0.63g, 4.87mmol)을 순차적으로 첨가하고, 반응이 실온에서 30분 동안 수행되었다. 물을 반응 용액에 첨가하고, 층을 분리하였다. 유기상을 0.5 N HCl, 0.5 N NaHCO3 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여과액을 농축시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC(물/아세토니트릴)로 정제하고, 적절한 분획을 농축하여, 표제 화합물(1.4g, 58% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C46H79N5O18에 대한 계산치, 991.54; 실측치, 991.20.
실시예 51. tert-부틸((S)-37-아미노-31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자옥타트리아콘탄-38-오일)글리실글리실-L-알라니네이트(48)의 합성
화합물 47(1.4g, 1.40mmol)을 THF(20mL)에 용해시키고, 탄소상 10% 팔라듐(0.1g)을 첨가하고, 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채웠다. 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 여과하고, 여과액을 농축하여, 표제 화합물 48(1.2g, 99% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C38H73N5O16에 대한 계산치, 856.51; 실측치, 857.00.
실시예 52. 디-tert-부틸(2S,11S,19S,20S,28S,37S)-19,20-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2,37-디메틸-4,7,10,13,18,21,26,29,32,35-데카옥소-11,28-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,12,17,22,27,30,33,36-데카아자옥타트리아콘탄디오에이트(49)의 합성
5mL DMF 중의 화합물 19(0.31g, 0.64mmol) 용액에, 5mL DMF 중의 화합물 48(1.2g, 1.4mmol)을 첨가하고, 이어서 HATU(0.75g, 1.93mmol) 및 디이소프로필에틸아민(0.35g, 2.57mmol)을 첨가하고, 반응물을 1시간 동안 교반하고, 농축하고, 디클로로메탄에 용해시키고, 물, 0.5 N HCl, 0.5 NaHCO3 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여과액을 농축하여, 표제 화합물(1.1g, 79% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C96H164N14O40에 대한 계산치, 2154.12; 실측치, 2155.40.
실시예 53. (2S,11S,19S,20S,28S,37S)-19,20-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2,37-디메틸-4,7,10,13,18,21,26,29,32,35-데카옥소-11,28-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,12,17,22,27,30,33,36-데카아자옥타트리아콘탄디오익산(50)의 합성
화합물 49(1.1g, 0.51mmol)를 디클로로메탄(10mL) 및 포름산(20mL)에 용해시켰다. 50℃에서 2시간 동안 교반한 후, 반응 용액을 농축하고, 잔류물을 분취용 HPLC(물/아세토니트릴)로 정제하여, 화합물 50(300mg, 30% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C88H148N14O40에 대한 계산치, 2042.00; 실측치, 2043.2。
실시예 54. (2S,3S)-2,3-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-N1,N4-비스((S)-37-((2-((2-(((S)-1-(((1S,9S)-9-에틸-5-플루오로-9-하이드록시-4-메틸-10,13-디옥소-1,2, 3,9,10,12,13,15-옥타히드로벤조[데]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-1-일)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-2-옥소에틸)아미노)-2-옥소에틸)카르바모일)-31,39-디옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32, 38-디아자도테트라콘탄-42-일)숙신아미드(51)의 합성.
1mL의 DMF 중의 화합물 50(70.0mg, 0.034mmol) 용액에, 엑사테칸 메실레이트(32.0mg, 0.075mmol) 및 HATU(39.0mg, 0.103mmol)을 첨가한 후, 이어서 디이소프로필에틸아민(18mg, 0.137mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 농축하고, 분취용 HPLC(물/아세토니트릴)로 정제하였다. 분획 풀을 합치고, 농축하고, 동결건조하여, 표제 화합물(57.3mg, 수율 58%)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C136H188F2N20O46에 대한 계산치, 2876.30; 실측치, 2878.10.
실시예 55. tert-부틸((벤질옥시)카르보닐)글리실글리실글리실글리시네이트(52)의 합성.
50mL 디클로로메탄 중의 화합물 39(1.92g, 7.83mmol) 용액에, H-Ala-OtBu(1.96g, 9.41mmol), HATU(3.56g, 9.41mmol) 및 디이소프로필에틸아민(1.22g, 9.41mmol)을 순차적으로 첨가하고, 반응물을 실온에서 30분 동안 교반한 후, 물로 켄칭하였다. 상 분리 후, 유기 상을 0.5 N HCl, 0.5 N NaHCO3 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여과액을 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(2.74g, 80% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C20H28N4O7에 대한 계산치, 437.20; 실측치 437.20.
실시예 56. tert-부틸 글리실글리실글리실글리시네이트(53)의 합성
화합물 52(2.74g, 6.28mmol)를 THF(20mL)에 용해시키고, 탄소상 10% 팔라듐(0.10g)을 첨가하고, 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채웠다. 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 여과하고, 여과액을 농축하여, 표제 화합물 53(1.90g, 99% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C12H22N4O5에 대한 계산치, 303.16; 실측치, 303.18.
실시예 57. tert-부틸 (S)-(S)-(S)-(S)-(37-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자옥타트리아콘탄-38-오일)글리실글리실글리실글리시네이트(54)의 합성
THF(20mL) 및 DMF(20mL) 중의 화합물 20(4.5g, 6.01mmol) 및 H-Gly-Gly-Gly-Gly-OtBu(1.9g, 6.28mmol)의 용액에, HATU(3.43g, 9.01mmol) 및 디이소프로필에틸아민(1.9mL, 12.0mmol)을 첨가하였다. 반응물을 LC-MS에 의해 지시된 대로, 완료될 때까지 실온에서 교반하였다. 용매를 제거하고 잔류물을 물(100mL)에 붓고, 디클로로메탄(3 x 50mL)으로 추출하였다. 합한 유기상을 물(50mL), 포화 중탄산나트륨(50mL), 2N HCl(50mL) 및 염수(50mL)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 농축하고, 실리카겔 컬럼(디클로로메탄/MeOH = 100/0 내지 20/1 내지 10/1)으로 정제하여, 화합물 54(4.9g, 79% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C47H81N6O19에 대한 계산치, 1033.55; 실측치, 1033.55.
실시예 58. tert-부틸 (S)-(S)-(S)-(S)-(37-아미노-31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자옥타트리아콘탄-38-오일)글리실글리실글리실글리시네이트(55)의 합성
화합물 54(4.9g, 4.7mmol)를 THF(80mL)에 용해시키고, 탄소상 10% 팔라듐(0.5g)을 첨가하고, 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채웠다. 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 여과하고, 여과액을 농축하여, 표제 화합물(700mg, 100% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C39H75N6O17에 대한 계산치, 899.51; 실측치, 899.51.
실시예 59. 디-tert-부틸(14S,22S,23S,31S)-22,23-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-4,7,10,13,16,21,24,29,32,35,38,41-도데카옥소-14,31-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,12,15,20,25,30,33,36,39,42-도데카아자테트라테트라콘탄디오에이트(56)의 합성.
THF(30mL) 및 DMF(15mL) 혼합 용매 중의 화합물 19(1.0g, 2.09mmol) 및 화합물 55(3.7g, 4.1mmol)의 용액에, HATU(2.38mg, 6.27mmol) 및 디이소프로필에틸아민(1.4mL, 8.36mmol)을 첨가하였다. 반응물을 LC-MS에 의해 지시된 대로, 완료될 때까지 실온에서 교반하였다. 용매를 제거하고 잔류물을 디클로로메탄(300mL)에 용해시키고, 물(50mL), 포화 중탄산나트륨(50mL), 2N HCl(50mL) 및 염수(50mL)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하고, 실리카겔 컬럼(디클로로메탄/MeOH = 100/0 내지 20/1 내지 10/1)으로 정제하여, 표제 화합물(3.2g, 68% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C98H167N16O42에 대한 계산치, 2240.13; 실측치, 2240.13.
실시예 60. (14S,22S,23S,31S)-22,23-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-4,7,10,13,16,21,24,29,32,35,38,41-도데카옥소-14,31-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,12,15,20,25,30,33,36,39,42-도데카아자테트라테트라콘탄디오익산(57)의 합성
화합물 56(3.2g, 1.4mmol)을 포름산(20mL)과 디클로로메탄(10mL)에 용해시킨 후, 60℃로 가열하였다. 반응물을 LC-MS에 의해 지시된 대로, 완료될 때까지 교반한 후, 농축하여, 표제 화합물(690mg, 22% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C90H151N16O42에 대한 계산치, 2128.01; 실측치, 2128.01.
실시예 61. (2S,3S)-2,3-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-N1,N4-비스((S)-37-((2-((2-((2-((2-(((1S,9S))-9-에틸-5-플루오로-9-하이드록시-4-메틸-10,13-디옥소-1,2,3,9,10,12,13,15-옥타히드로벤조[데]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-1-일)아미노)-2-옥소에틸)아미노)-2-옥소에틸)아미노)-2-옥소에틸)아미노)-2-옥소에틸)카르바모일)-31,39-디옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,38-디아자도테트라콘탄-42-일)숙신아미드(58a)의 합성
화합물 57(420mg, 0.197mmol) 및 엑사테칸 메실레이트(209mg 0.395mmol)를 DMF(5mL)에 용해시키고, HATU(255mg, 0.592mmol) 및 디이소프로필에틸아민(130μL, 0.789mmol)을 첨가하였다. 전환이 완료될 때까지 반응물을 실온에서 교반한 후, 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 표제 화합물(274mg, 47% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C138H191F2N22O48에 대한 계산치, 2962.31; 실측치, 2962.31.
실시예 62. tert-부틸((벤질옥시)카르보닐)-L-알라닐-L-알라니네이트(59)의 합성.
Cbz-Ala-OH(15.0g, 67.1mmol) 및 H-Ala-OtBu HCl(12.3g, 67.7mmol)을 디클로로메탄(100mL)에 용해시키고, 0℃로 냉각시키고, EDC(25.7g, 134mmol)를 첨가하고, 이어서 디이소프로필에틸아민(18.0g, 134mmol)을 적가하였다. 약 30분 동안 교반한 후, 반응물을 물 100mL, 염수 100mL로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 농축하고, 실리카겔 컬럼으로 정제하고, 석유 에테르 및 에틸 아세테이트로 용출하여, 무색의 액체(19.2g, 81% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C18H27N2O5에 대한 계산치, 351.18; 실측치, 351.18
실시예 63. ((벤질옥시)카르보닐)-L-알라닐-L-알라닌(60)의 합성.
화합물 59(5.0g, 14.0mmol)를 디클로로메탄(20mL)에 용해시키고, 4시간 동안 실온에서 트리플루오로아세트산 20mL로 처리하고, 농축 건조시키고, 50mL의 디클로로메탄으로 공-증발시키고, 농축 건조시키고, 에틸 아세테이트/석유 에테르로 결정화하고, 여과하고, 건조하여, 백색 고체(3.6g, 84% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C14H19N2O5에 대한 계산치, 295.12; 실측치, 295.12.
실시예 64. tert-부틸 L-알라닐-L-알라니네이트(61)의 합성
화합물 59(10.0g, 29.0mmol)를 THF(80mL)에 용해시키고, 10% Pd/C(1.1g)를 첨가하였다. 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채운 다음, 수소 벌룬 하에 4시간 동안 실온에서, 그리고 2시간 동안 45-50°C에서 교반하고, 이어서 여과하고 농축 건조시켰다. 에틸 아세테이트 중의 2M HCl을 첨가하고, 용액을 증발 건조시켜, 화합물 61을 백색 고체(5.8g, 80% 수율)로 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C10H21N2O3에 대한 계산치, 217.15; 실측치, 217.15.
실시예 65. tert-부틸((벤질옥시)카르보닐)-L-알라닐-L-알라닐-L-알라닐-L-알라니네이트(62)의 합성
화합물 60(3.0g, 10.2mmol) 및 화합물 61(3.0g, 13.8mmol)을 디클로로메탄(50mL)에 용해시킨 후, 여기에 EDC(3.91g, 20.4mmol) 및 디이소프로필에틸아민(2.67g, 20.4mmol)을 첨가하고, 반응물을 0℃에서 1시간 동안 교반하고, 여과하고, 농축하여, 회색 고체(5.0g, 100% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C24H37N4O7에 대한 계산치, 493.26; 실측치, 493.26.
실시예 66. tert-부틸 L-알라닐-L-알라닐-L-알라닐-L-알라니네이트(63)의 합성.
조 화합물 62(5.0g, 10.0mmol)를 메탄올(160mL)에 용해시키고, 10% Pd/C(1.1g)를 첨가하였다. 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채운 다음, 수소 벌룬 하에 실온에서 1시간 동안 교반하고, 여과하고, 농축 건조하여, 오일(3.0g, 82% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C16H31N4O5에 대한 계산치, 359.22; 실측치, 359.22.
실시예 67. tert-부틸((S)-37-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자옥타트리아콘탄-38-오일)-L-알라닐-L-알라닐-L-알라닐-L-알라니네이트(64)의 합성
화합물 63(1.8g, 2.404mmol) 및 화합물 20(1.0g, 2.874mmol)을 THF(30mL)에 용해시키고, HATU(1.36g, 3.592mmol) 및 디이소프로필에틸아민(0.7g, 4.789mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 농축하고, 물 20mL 및 디클로로메탄 25mL로 희석하고, 분리된 유기상을 5% Na2CO3, 1M HCl로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축 건조시키고 분취용 HPLC로 정제하여, 무색 액체(1.5g, 57% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C51H89N6O19에 대한 계산치, 1089.61; 실측치, 1089.61.
실시예 68. tert-부틸((S)-37-아미노-31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자옥타트리아콘탄-38-오일)-L-알라닐-L-알라닐-L-알라닐-L-알라니네이트(65)의 합성
화합물 64(1.0g, 0.918mmol)를 메탄올(100mL)에 용해시키고, 10% Pd/C(0.23g)를 첨가하고, 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채운 다음, 수소 벌룬하에 실온에서 2시간 동안 교반하고, 여과하고, 농축 건조하여, 오일 10(0.9g, 100% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C43H83N6O17에 대한 계산치, 955.57; 실측치, 955.57.
실시예 69. 디-tert-부틸(2S,5S,8S,11S,14S,22S,23S,31S,34S,37S,40S,43S)-22,23-비스(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-2,5,8,11,34,37,40,43-옥타메틸-4,7,10,13,16,21,24,29,32,35,38,41-도데카옥소-14,31-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,12,15,20,25,30,33,36,39,42-도데카아자테트라테트라콘탄디오에이트(66)의 합성
화합물 19(204.9mg, 0.428mmol) 및 화합물 65(880mg, 0.921mmol)를 THF(10mL) 및 DMF(10mL)에 용해시키고, HATU(485mg, 1.27mmol) 및 디이소프로필에틸아민(216.5mg, 1.27mmol)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 약 30분 동안 교반하고, 농축한 후 디클로로메탄(40mL)으로 희석하고 염수 30mL로 세척하였다. 수성상을 100mL 디클로로메탄으로 2회 추출하고, 유기상을 합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켜, 무색 오일(985mg, 100% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C106H183N16O42에 대한 계산치, 2352.26; 실측치, 2352.26.
실시예 70. (2S,5S,8S,11S,14S,22S,23S,31S,34S,37S,40S,43S)-22,23-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2,5,8,11,34,37,40,43-옥타메틸-4,7,10,13,16,21,24,29,32,35,38,41-도데카옥소-14,31-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,12 ,15,20,25,30,33,36,39,42-도데카아자테트라테트라콘탄디오익산(67)의 합성
화합물 66(985mg, 0.419mmol)을 디클로로메탄(10mL) 및 20mL의 포름산에 용해시키고, 55-60℃에서 3시간 동안 반응시키고, 농축 건조시키고 분취용 HPLC로 정제하여, 무색 오일(0.6g, 64% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C98H167N16O42에 대한 계산치, 2240.13; 실측치, 2240.13.
실시예 71. (2S,3S)-2,3-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-N1,N4-비스((S)-37-(((S)-1-(((S)-1-(((S)-1-(((S)-1-(((1S,9S)-9-에틸-5-플루오로-9- 하이드록시-4-메틸-10,13-디옥소-1,2,3,9,10,12,13,15-옥타하이드로벤조[de]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-1-일)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-1-옥소프로판-2-일)카르바모일)-31,39-디옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,38-디아자도테트라콘탄-42-일)숙신아미드(68a); (2S,3S)-2,3-비스(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-N1,N4-비스((S)-37-(((4S,7S,10S,13S)-1-((S)-4-에틸-8-플루오로-4-하이드록시-9-메톡시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라하이드로-1H-피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-11-일)-4,7,10-트리메틸-3,6,9,12-테트라옥소-2,5,8,11-테트라아자테트라데칸-13-일)카르바모일)-31,39-디옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,38-디아자도테트라콘탄-42-일)숙신아미드(68b); 및 (2S,3S)-2,3-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-N1,N4-비스((S)-37-(((S)-1-(((S)-1-(((S)-1-(((S)-1-(4-(((S)-4-에틸-8-플루오로-4-히드록시-9-메톡시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1H-피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-11-일)메틸)피페라진-1-일)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-1-옥소프로판-2-일)카바모일)-31,39-디옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,38-디아자도테트라콘탄-42-일)숙신아미드(68c)의 합성
DMF(10mL) 중의 화합물 67(202.2mg, 0.090mmol), HATU(110.3mg, 0.290mmol) 및 디이소프로필에틸아민(46.5mg, 0.360mmol)의 용액에, 각각 엑사테칸 메실레이트(98.5mg, 0.185mmol), (S)-11-(아미노메틸)-4-에틸-8-플루오로-4-하이드록시-9-메톡시-1H-피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-3,14(4H,12H)-디온, HCl 염(86.2mg, 0.187mmol) 또는 (S)-4-에틸-8-플루오로-4-히드록시-9-메톡시-11-(피페라진-1-일메틸)-1H-피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-3,14(4H,12H)-디온, HCl 염(98.8mg, 0.186mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 약 3시간 동안 교반한 후, 농축하고, 분취용 HPLC로 정제하고, 동결건조하여, 각각의 화합물 68a를 담황색 고체로(189.1mg, 67% 수율)[MS-ESI (m/z): [M+H]+ C146H207F2N22O48에 대한 계산치, 3074.73; 실측치, 3074.73], 화합물 60b를 연황색 고체로(192.2mg, 70% 수율)[MS-ESI (m/z): [M+H]+ C142H203F2N22O50에 대한 계산치, 3054.40; 실측치, 3054.90], 그리고 화합물 60c를 담황색 고체로(205.8mg, 71% 수율)[MS-ESI (m/z): [M+H]+ C150H217F2N24O50에 대한 계산치, 3192.51; 실측치, 3192.95] 얻었다.
실시예 72. 디-tert-부틸 5,5'-((((10S,18S,19S,27S)-18,19-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-)1-일)-4,9,12,17,20,25,28,33-옥타옥소-10,27-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,8,11,16,21,26,29,34-옥타아자헥사트리아콘탄디오일)비스(아잔디일))비스(4-히드록시-3,1-페닐렌))(4R,4'R)-비스(4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)펜타노에이트)(70)의 합성
화합물 35(720mg, 0.368mmol) 및 tert-부틸(R)-5-(3-아미노-4-히드록시페닐)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)펜타노에이트(69, 350mg, 0.920mmol)를 디클로로메탄(20mL)에 용해시키고, 여기에 EDCI(211mg, 1.10mmol)를 첨가하고, 반응물을 0.5시간 동안 교반한 후, 농축 건조시켰다. 조 생성물을 분취용 HPLC(H2O 중 57% MeCN)로 정제하여, 화합물 70을 오일(200mg, 0.075mmol, 20.27%)로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M + 2H]2+ C126H206N16O46에 대한 계산치, 1342.05; 실측치, 1341.91.
실시예 73. (4R,4'R)-5,5'-((((10S,18S,19S,27S)-18,19-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H)-피롤-1-일)-4,9,12,17,20,25,28,33-옥타옥소-10,27-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,8,11,16,21,26,29,34-옥타아자헥사트리아콘탄디오일)비스(아잔디일))비스(4-히드록시-3,1-페닐렌))비스(4-아미노펜탄산)(71)의 합성
화합물 70(200mg, 0.075mmol)을 디클로로메탄(4mL)에 용해시키고, 트리플루오로아세트산(1mL)을 첨가하고, 반응물을 밤새 교반한 후, 농축하고, 디클로로메탄으로 2회 공-증발시키고, 오일 펌프에서 건조시켜, 화합물 71을 오일(176.69mg, 0.075mmol, 100.00%)로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M + 2H]2+ C108H174N16O42에 대한 계산치, 1184.60; 실측치, 1185.17.
실시예 74. (4R,4'R)-5,5'-((((10S,18S,19S,27S)-18,19-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H)-피롤-1-일)-4,9,12,17,20,25,28,33-옥타옥소-10,27-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,8,11,16,21,26,29,34-옥타아자헥사트리아콘탄디오일)비스(아잔디일))비스(4-히드록시-3,1-페닐렌))비스(4-(2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복스아미도)펜탄산)(72a); 및 (R,R,S,S,S,4R,4'R)-5,5'-((((10S,18S,19S,27S)-18,19-bis(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-4,9,12,17,20,25,28,33-옥타옥소-10,27-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,8,11,16,21,26,29,34-옥타아자헥사트리아콘탄-1,36-디오일)비스(아잔디일))비스(4-히드록시-3,1-페닐렌))비스(4-(2-((3S,6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-3,9-디이소프로필-2,8-디메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복스아미도)펜탄산)(72b)의 합성
DMF(1mL) 중의 화합물 71(88mg, 0.037mmol) 및 디이소프로필에틸아민(0.025mL, 0.149mmol)을 퍼플루오로페닐 2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복실레이트(Tub-1, 64mg, 0.093mmol) 또는 퍼플루오로페닐 2-((3S,6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-3,9-디이소프로필-2,8-디메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복실레이트(Tub-3, 67mg, 0.095mmol)에 각각 첨가되었다. 반응물을 4시간 동안 교반하고, 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 72a를 고체로(72mg, 0.021mmol, 57%)[MS-ESI (m/z): [M + 3H]3+ C158H254N24O52S2에 대한 계산치, 1128.91; 실측치, 1129.72], 그리고 화합물 73b를 고체로(69mg, 0.020mmol, 54%)[MS-ESI (m/z): [M + 3H]3+ C160H261N24O52S2에 대한 계산치, 1138.26; 실측치, 1139.15] 얻었다.
실시예 75. (4R,4'R)-5,5'-((((10S,18S,19S,27S)-18,19-비스(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-4,9,12,17,20,25,28,33-옥타옥소-10,27-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,8,11,16,21,26,29,34-옥타아자헥사트리아콘탄디오일)비스(아잔디일))비스(4-히드록시-3,1-페닐렌))비스(4-(2-((3S,6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-3,9-디이소프로필-2,8-디메틸-4,7-디옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자트리데칸-11-일)티아졸-4-카르복스아미도)펜탄산)(73)의 합성.
화합물 71(83.75mg, 0.035mmol) 및 퍼플루오로페닐 2-((3S,6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-3,9-디이소프로필-2,8-디메틸-4, 7-디옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자트리데칸-11-일)티아졸-4-카르복실레이트(Tub-2, 60mg, 0.088mmol)를 DMF(1.5mL)에 용해시키고, 디이소프로필에틸아민(0.023mL, 0.141mmol)을 첨가하였다. 반응물을 2시간 동안 교반하고 분취용 HPLC로 정제하여, 고체 화합물 73(54mg, 0.016mmol, 45%)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M + 3H]3+ C158H258N24O50S2에 대한 계산치, 1120.68; 실측치, 1120.48.
실시예 76. tert-부틸((S)-37-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자옥타트리아콘탄-38-오일)-L-발릴-L-알라니네이트(74)의 합성.
화합물 20(8.0g, 10.7mmol) 및 H-Val-Ala-OtBu(2.7g, 10.7mmol)를 디클로로메탄(150mL)에서 용해시키고, HATU(5.4g, 13.9mmol) 및 디이소프로필에틸아민(2.8g, 21.4mmol)을 첨가하고 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 농축한 후, 잔류물을 실리카겔 컬럼(디클로로메탄:메탄올=20:1)으로 정제하여, 표제 화합물 9.4g을 90% 수율로 얻었다. MS m/z: 976.1 ([M+H]+).
실시예 77. ((S)-37-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자옥타트리아콘탄-38-오일)-L-발릴-L-알라닌(75)의 합성.
화합물 74(9.4g, 9.6mmol)를 디클로로메탄(50mL)에 용해시키고, 트리플루오로아세트산(50mL)으로 실온에서 1시간 동안 처리하였다. 반응 용액을 농축하여 트리플루오로아세트산을 대부분 제거하고, 디클로로메탄 200mL로 희석한 후, 용액을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시킨 후, 여과 및 농축하여, 표제 화합물 8.1g을 수율 82%로 얻었다. MS m/z: 919.9 ([M+H]+).
실시예 78. 2,5-디옥소피롤리딘-1-일((S)-37-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자옥타트리아콘탄-38-오일)-L-발릴-L-알라니네이트(76)의 합성.
화합물 75(8.1g, 8.8mmol)를 디클로로메탄(120mL)에 용해시키고, EDCI(6.1g, 32mmol) 및 NHS(2.5g, 21.3mmol)를 0℃에서 첨가하고, 반응물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 염수로 세척하고 무수 황산나트륨으로 건조시킨 후, 여과하고 농축하여, 표제 화합물 8.1g(수율 91%)을 얻었다. MS m/z: 1017.1([M+H]+).
실시예 79. (2S,4R)-5-(3-((37S,40S,43S)-37-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-40-이소프로필-43-메틸-31,38,41-트리옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,39,42-트리아자테트라콘탄-44-아미도)-4-히드록시페닐)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-2-메틸펜탄산(78)의 합성.
화합물 76(8.1g, 7.9mmol) 및 (2S,4R)-5-(3-아미노-4-히드록시페닐)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-2-메틸펜탄산(77, 2.7g. 7.9mmol)을 THF(150mL)에 용해시키고, 50℃로 가열하고 밤새 교반하였다. 반응물을 농축하고 잔류물을 실리카겔 컬럼(디클로로메탄:메탄올 = 20:1)으로 정제하여, 8.0g의 표제 화합물(82% 수율)을 얻었다. MS m/z: 1240.1([M+H]+).
실시예 80. (2S,4R)-5-(3-((37S,40S,43S)-37-아미노-40-이소프로필-43-메틸-31,38,41-트리옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,39,42-트리아자테트라콘탄-44-아미도)-4-히드록시페닐)-4-((tert-부톡,시카르보닐)아미노)-2-메틸펜탄산 (79)의 합성.
화합물 78(8.0g, 6.4mmol)을 이소프로판올(100mL)에 용해시키고, 탄소상 팔라듐(10wt%, 2g)을 첨가하고, 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채우고, 50°C에서 4시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과액을 농축하여, 표제 화합물 6.8g(96% 수율)을 얻었다. MS m/z: 1106.1([M+H]+).
실시예 81. 비스(2,5-디옥소피롤리딘-1-일) 4,4'-(((2S,3S)-2,3-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)숙시닐)비스(아잔디일))디부티레이트(80)의 합성.
화합물 19(2.40g, 5.0mmol)를 DMF(100mL)에 용해시키고, EDCI(2.86g, 15mmol) 및 NHS(1.41g, 12mmol)를 0℃에서 첨가하고, 반응물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 농축하였다. 잔류물을 디클로로메탄으로 희석하고, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 농축하여, 표제 화합물 3.19g(95% 수율)을 얻었다.
실시예 82. (2S,2'S,4R,4'R)-5,5'-((((2S,5S,8S,16S,17S,25S,28S,31S)-16,17-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-5,28-디이소프로필-2,31-디메틸-4,7,10,15,18,23,26,29-옥타옥소-8,25-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,14,19 ,24,27,30-옥타아자도트리아콘탄디오일)비,스(아잔디일)) 비스(4-히드록시-3,1-페닐렌))비스(4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-2-메틸펜탄산)(81)의 합성.
화합물 80(400mg, 0.6mmol) 및 화합물 79(1.3g, 1.2mmol)를 THF(15mL)에 용해시키고, 50℃로 가열하고 밤새 교반하였다. 반응 용액을 농축하고, 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하고 동결건조한 후, 표제 화합물 670mg을 얻었다(수율 42%). MS: m/z=1328.0[1/2M+H+]
실시예 83. (2S,2'S,4R,4'R)-5,5'-((((2S,5S,8S,16S,17S,25S,28S,31S)-16,17-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-5,28-디이소프로필-2,31-디메틸-4,7,10,15,18,23,26,29-옥타옥소-8,25-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,14,19,24,27,30-옥타아자도트리아콘탄디오일)비스(아잔디일))비스(4-히드록시-3,1-페닐렌))비스(4-아미노-2-메틸펜탄산)(82)의 합성
화합물 81(670mg, 0.25mmol)을 디클로로메탄(8mL)에 용해시키고, 실온에서 1시간 동안 트리플루오로아세트산(4mL)과 함께 교반하였다. 반응물을 농축하고, 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하고, 동결건조한 후, 표제 화합물 500mg을 얻었다(수율 80%). MS m/z: 1227.1([M + 2H]2+).
실시예 84. (2S,2'S,4R,4'R)-5,5'-((((2S,5S,8S,16S,17S,25S,28S,31S)-16,17-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-5,28-디이소프로필-2,31-디메틸-4,7,10,15,18,23,26,29-옥타옥소-8,25-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,14,19,24,27,30-옥타아자도트리아콘탄디오일)비스(아잔디일))비스(4-히드록시-3,1-페닐렌))비스(4-(2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)- 2-메틸펜탄산)(83)의 합성.
DMF(2mL) 중의 화합물 82(200mg, 0.08mmol) 및 Tub-1(120mg, 0.16mmol)의 용액에, 디이소프로필에틸아민(30mg, 0.24mmol)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이 후, 반응 용액을 분취용 HPLC로 정제하고, 동결건조한 후, 생성물 50mg을 얻었다(수율 18%). MS m/z: 1736.1([M + 2H]2+).
실시예 85. tert-부틸 (R)-5-(3-(2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)아세트아미도)-4-히드록시페닐)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)펜타노에이트(84)의 합성.
Cbz-Gly-OH(2.09g, 10.0mmol)를 디클로로메탄(150mL)에 용해시키고, 화합물 69(4.19g, 11.0mmol) 및 EDCI(3.83g, 20.0mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 농축하고, 조 생성물을 실리카 겔 컬럼(20%-50% EA/PE)으로 정제하여, 화합물 84(4.88g, 85% 수율)를 얻었다.
실시예 86. tert-부틸(R)-5-(3-(2-아미노아세트아미도)-4-히드록시페닐)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)펜타노에이트(85)의 합성.
화합물 84(1.44g, 2.52mmol)를 메탄올(40mL)에 용해시키고, Pd/C(10% 습윤, 0.3g)를 첨가하였다. 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채운 다음, 수소 벌룬 하에서 6시간 동안 교반하고, 여과하고, 농축하고, 50mL의 디클로로메탄으로 공-증발시키고, 오일 펌프에서 건조하여, 화합물 85(0.9g, 82% 수율)를 얻었다.
실시예 87. 디-tert-부틸 5,5'-((((11S,19S,20S,28S)-19,20-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-4,7,10,13,18,21,26,29,32,35-데카옥소-11,28-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,12,17,22,27,30,33,36-데카아자옥타트리아콘탄디오일)비스(아잔디일))비스(4-하이드록시-3,1-페닐렌))(4R,4'R)-비스(4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)펜타노에이트)(86)의 합성
100mL 단일구 반응 플라스크에서, 화합물 29(840mg, 0.44mmol)를 디클로로메탄(50mL)에 용해시키고, 혼합물을 실온에서 자기적으로 교반한 다음, 화합물 85(391mg, 0.89mmol) 및 EDC(362mg, 1.89mmol)을 첨가하고, 반응이 실온에서 1시간 동안 수행된 후, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과하고 농축하였다. 조 생성물을 분취용 HPLC(아세토니트릴/물)로 정제하여, 화합물 86(244mg, 20% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C126H204N18O48에 대한 계산치, 1370.55; 실측치, 1370.56.
실시예 88. (4R,4'R)-5,5'-((((11S,19S,20S,28S)-19,20-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-4,7,10,13,18,21,26,29,32,35-데카옥소-11,28-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,12,17,22,27,30,33,36-데카아자옥타트리아콘탄디오일)비스(아잔디일))비스(4-하이드록시-3,1-페닐렌))비스(4-아미노펜탄산)(87)의 합성.
100mL 단일구 반응 플라스크에서, 화합물 86(244mg, 0.089mmol), 디클로로메탄(8mL) 및 트리플루오로아세트산(8mL)을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하고, 오일 펌프에 놓아서, 화합물 87을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 사용하여, 100% 수율을 가정하였다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C108H172N18O44에 대한 계산치, 1214.33; 실측치, 1214.02.
실시예 89. (4R,4'R)-5,5'-((((11S,19S,20S,28S)-19,20-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-4,7,10,13,18,21,26,29,32,35-데카옥소-11,28-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,12,17,22,27,30,33,36-데카아자옥타트리아콘탄디오일)비스(아잔디일))비스(4-하이드록시-3,1-페닐렌))비스(4-(2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8 -테트라메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)펜탄산)(88)의 합성
100mL 단일구 반응 플라스크에서, DMF(10mL) 중의 화합물 87(이전 단계의 조 생성물, 0.089mmol) 및 Tub-1(128mg, 0.185mmol)의 용액에, 디이소프로필에틸아민(128mg, 0.990mmol)를 적가하였다. 실온에서 5시간 동안 교반한 후, 반응물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 10mL의 디클로로메탄으로 희석하고, 0.2mL의 포름산을 적가하고, 혼합물을 농축한 후, 분취용 HPLC(아세토니트릴/물)로 정제하여, 화합물 88(40mg, 13% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M + 2H]2+ C158H252N26O54S2에 대한 계산치, 1723.00; 실측치, 1722.84.
실시예 90. 디-tert-부틸 5,5'-((((14S,22S,23S,31S)-22,23-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-4,7,10,13,16,21,24,29,32,35,38,41-도데카옥소-14,31-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,12,15,20,25,30,33,36,39,42-도데카아자테트라테트라콘탄디오일)비스(아잔디일))비스(4-히드록시-3,1-페닐렌))(4R,4'R)-비스(4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)펜타노에이트)(89)의 합성.
디클로로메탄(5mL) 중의 화합물 43(350mg, 0.17mmol) 및 화합물 85(170mg, 0.38mmol)의 용액에, EDCI(100mg, 0.52mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LC-MS에 의해 지시된 대로, 반응을 완료하였다. 그리고, 반응 용액을 염수로 세척한 후, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 농축하였다. 잔류물을 분취용 HPLC(0.1% HCOOH를 함유하는 아세토니트릴/물)로 정제하여, 170mg의 표제 화합물(34% 수율)을 얻었다.
실시예 91. (4R,4'R)-5,5'-((((14S,22S,23S,31S)-22,23-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-4,7,10,13,16,21,24,29,32,35,38,41-도데카옥소-14,31-비스(31-옥소-2,5,8, 11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,12,15,20,25,30,33,36,39,42-도데카아자테트라테트라콘탄디오일)비스(아잔디일))비스(4-히드록시-3,1-페닐렌))비스(4-아미노펜탄산)(90)의 합성.
화합물 89(170mg, 0.06mmol)를 디클로로메탄(4mL)에 용해시키고, 실온에서 2시간 동안 트리플루오로아세트산(2mL)과 반응시켰다. 반응 혼합물을 농축하고, 분취용 HPLC(0.1% HCOOH를 함유하는 아세토니트릴/물)로 정제하여, 140mg의 표제 화합물(93% 수율)을 얻었다. MS m/z: 1271.0 ([M + 2H]2+).
실시예 92 (4R,4'R)-5,5'-((((14S,22S,23S,31S)-22,23-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-4,7,10,13,16,21,24,29,32,35,38,41-도데카옥소-14,31-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,12,15,20,25,30,33,36,39,42-도데카아자테트라테트라콘탄디오일)비스(아잔디일))비스(4-히드록시-3,1-페닐렌))비스(4-(2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복스아미도)펜탄산)(91)의 합성.
화합물 90(140mg, 0.05mmol) 및 Tub-1(95mg, 0.14mmol)을 디클로로메탄(5mL)에 용해시킨 후, DIEA(20mg)를 용액에 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LC-MS에 의해 지시된 대로, 반응을 완료하였다. 그리고, 반응 용액을 농축하고 분취용 HPLC(0.1% HCOOH를 함유하는 아세토니트릴/물)로 정제하여, 150mg의 표제 화합물(75% 수율)을 얻었다. MS m/z: 1780.0 ([M + 2H]2+).
실시예 93. 디-tert-부틸(13S,21S,22S,30S)-21,22-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-4,7,12,15,20,23,28,31,36,39-데카옥소-13,30-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,11,14,19,24,29,32,37,40-데카아자도테트라콘탄디오에이트(92)의 합성.
디클로로메탄(30mL) 중의 화합물 35(870mg, 0.445mmol)의 용액에, 펜타플루오로페놀(245mg, 1.334mmol) 및 DIC(224mg, 1.779mmol)를 첨가하였다. 1시간 동안 교반한 후, H-Gly-OtBu·HCl(164mg, 0.978mmol) 및 디이소프로필에틸아민(0.294mL, 1.779mmol)을 첨가하였다. 반응물을 25분 동안 교반한 다음, 염수 20mL로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고 농축하여, 화합물 92를 오일(970mg, 0.444mmol, 99%)로서 생성하였다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C98H168N14O40에 대한 계산치, 2183.48; 실측치, 2185.45.
실시예 94. (13S,21S,22S,30S)-21,22-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-4,7,12,15,20,23,28,31,36,39-데카옥소-13,30-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,11,14,19,24,29,32,37,40-데카아자도테트라콘탄디오익산(93)의 합성.
화합물 92(0.97g, 0.444mmol)를 디클로로메탄(10mL)에 용해시키고, 트리플루오로아세트산(5mL)으로 처리하였다. 반응 용액을 밤새 교반하고, 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 오일(636mg, 0.307mmol, 69%)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C90H152N14O40에 대한 계산치, 2071.26; 실측치, 2071.72.
실시예 95. 디-tert-부틸 5,5'-((((16S,24S,25S,33S)-24,25-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-4,7,10,15,18,23,26,31,34,39,42,45-도데카옥소-16,33-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,14,17,22,27,32,35,40,43,46-도데카아자옥타테트라콘탄디오일)비스(아잔디일))비스(4-히드록시-3,1-페닐렌))(4R,4'R)-비스(4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)펜타노에이트)(94)의 합성.
디클로로메탄(20mL) 중의 화합물 93(636mg, 0.307mmol)의 용액에, 화합물 85(296mg, 0.676mmol) 및 EDCI(177mg, 0.922mmol)를 첨가하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 염수 20mL로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고 농축하고, 분취용 HPLC(아세토니트릴/물)로 정제하여, 화합물 94를 오일(263mg, 0.090mmol, 29%)로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C134H218N20O50에 대한 계산치, 1456.15; 실측치, 1455.84.
실시예 96. (4R,4'R)-5,5'-((((16S,24S,25S,33S)-24,25-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-4,7,10,15,18,23,26,31,34,39,42,45-도데카옥소-16,33-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,14,17,22,27,32,35,40,43,46-도데카아자옥타테트라콘탄디오일)비스(아잔디일))비스(4-히드록시-3,1-페닐렌))비스(4-아미노펜탄산)(95)의 합성.
화합물 94(263mg, 0.090mmol)를 디클로로메탄(12mL)에 용해시키고, 트리플루오로아세트산(6mL)으로 처리하였다. 반응물을 5시간 동안 교반하고, 농축 건조시켰다. 화합물 95를 오일(234mg, 0.090mmol, 99%)로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C116H186N20O46에 대한 계산치, 1299.93; 실측치, 1299.77.
실시예 97. (4R,4'R)-5,5'-((((16S,24S,25S,33S)-24,25-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-4,7,10,15,18,23,26,31,34,39,42,45-도데카옥소-16,33-비스(31-옥소-2,5,8, 11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,14,17,22,27,32,35,40,43,46-도데카아자옥타테트라콘탄디오일)비스(아잔디일))비스(4-히드록시-3,1-페닐렌))비스(4-(2-((3S,6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-3 ,9-디이소프로필-2,8-디메틸-4,7-디옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자트리데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)펜탄산)(96)의 합성.
DMF(2mL) 중의 95(234mg, 0.090mmol) 및 Tub-2(152mg, 0.225mmol)의 용액에, 디이소프로필에틸아민(0.060mL, 0.360mmol)을 첨가하고, 반응물을 5시간 동안 교반하고, 포름산으로 중화시켰다. 혼합물을 분취용 HPLC(아세토니트릴/물)로 정제하여, 화합물 96을 고체(100mg, 0.028mmol, 31%)로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M + 2H]2+ C166H270N28O54S2에 대한 계산치, 1794.63; 실측치, 1794.83.
실시예 98. 디-tert-부틸(2S,13S,21S,22S,30S,41S)-21,22-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2,41-디메틸-4,7,12,15,20,23,28,31,36,39-데카옥소-13,30-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17 ,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,11,14,19,24,29,32,37,40-데카아자도테트라콘탄디오에이트(97)의 합성.
디클로로메탄(30mL) 중의 화합물 35(827mg, 0.423mmol)의 용액에, 펜타플루오로페놀(233.46mg, 1.268mmol) 및 DIC(213.41mg, 1.691mmol)를 첨가하였다. 1시간 동안 교반한 후, H-Ala-OtBu·HCl(169mg, 0.930mmol) 및 디이소프로필에틸아민(0.280mL, 1.691mmol)을 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반한 다음, 염수 20mL로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 농축하였다. 화합물 97을 오일(934mg, 0.423mmol, 99.94%)로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C100H172N14O40에 대한 계산치, 2211.53; 실측치, 2212.50.
실시예 99. (2S,13S,21S,22S,30S,41S)-21,22-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2,41-디메틸-4,7,12,15,20,23,28,31,36,39-데카옥소-13,30-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,11,14,19,24,29,32,37,40-데카아자도테트라콘탄디오익산(98)의 합성.
화합물 97(0.93g, 0.421mmol)을 디클로로메탄(10mL)에 용해시키고, 트리플루오로아세트산(5mL)으로 밤새 처리하였다. 반응 용액을 농축하고 분취용 HPLC(아세토니트릴/물)로 정제하여, 화합물 98을 오일(695mg, 0.331mmol, 79%)로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C92H156N14O40에 대한 계산치, 2099.32; 실측치, 2100.87.
실시예 100. 디-tert-부틸 5,5'-((((2S,5S,16S,24S,25S,33S,44S,47S)-24,25-비스(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-2,5,44,47-테트라메틸-4,7,10,15,18,23,26,31,34,39,42,45-도데카옥소-16,33-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,14,17, 22,27,32,35,40,43,46-도데카아자옥타테트라콘탄디오일)비스(아잔디일))비스(4-히드록시-3,1-페닐렌))(4R,4'R)-비스(4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)펜타노에이트)(100)의 합성.
화합물 98(695mg, 0.331mmol) 및 tert-부틸(R)-5-(3-((S)-2-아미노프로판아미도)-4-히드록시페닐)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)펜타노에이트(99, 329mg, 0.729mmol)을 디클로로메탄(30mL)에 용해시키고, EDCI(190mg, 0.994mmol)를 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반한 후, 염수 20mL로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 농축하였다. 잔류물을 분취용 HPLC(아세토니트릴/물)로 정제하여, 화합물 100을 오일(231mg, 0.076 mol, 23.52%)로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M + 2H]2+ C138H226N20O50에 대한 계산치, 1484.21; 실측치, 1484.44.
실시예 101. (4R,4'R)-5,5'-((((2S,5S,16S,24S,25S,33S,44S,47S)-24,25-비스(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-2,5,44,47-테트라메틸-4,7,10,15,18,23,26,31,34,39,42,45-도데카옥소-16,33-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,14 ,17,22,27,32,35,40,43,46-도데카아자옥타테트라콘탄디오일)비스(아잔디일))비스(4-히드록시-3,1-페닐렌))비스(4-아미노펜탄산)(101)의 합성.
화합물 100(231mg, 0.078mmol)을 디클로로메탄(8mL)에 용해시키고, 트리플루오로아세트산(4mL)으로 처리하였다. 반응물을 3시간 동안 교반한 후, 농축하고, 디클로로메탄과 2회 공-증발시켰다. 화합물 101을 오일(206mg, 0.078mmol, 99%)로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M + 2H]2+ C120H194N20O46에 대한 계산치, 1327.98; 실측치, 1327.73.
실시예 102. (4R,4'R)-5,5'-((((2S,5S,16S,24S,25S,33S,44S,47S)-24,25-비스(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-2,5,44,47-테트라메틸-4,7,10,15,18,23,26,31,34,39,42,45-도데카옥소-16,33-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,14,17,22,27,32,35,40,43,46-도데카아자옥타테트라콘탄디오일)비스(아잔디일))비스(4-히드록시-3,1-페닐렌))비스(4-(2-((3S,6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-3,9-디이소프로필-2,8-디메틸-4,7-디옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자트리데칸-11-일)티아졸-4-카르복스아미도)펜탄산)(102)의 합성.
화합물 101(206mg, 0.078mmol) 및 Tub-2(131mg, 0.194mmol)를 DMF(2mL)에 용해시킨 다음, 디이소프로필에틸아민(0.051mL, 0.311mmol)을 첨가하였다. 반응물을 4시간 동안 교반하고, 포름산으로 중화시키고, 분취용 HPLC(아세토니트릴/물, 0.1% 포름산 함유)로 정제하여, 화합물 102를 고체(90mg, 0.02mmol, 30% 수율)로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M + 4H]4+ C170H278N28O54S2에 대한 계산치, 911.84; 실측치, 911.67.
실시예 103. 2,5-디옥소피롤리딘-1-일((벤질옥시)카르보닐)-L-알라니네이트(103)의 합성.
Cbz-Ala-OH(8.93g, 40mmol)를 디클로로메탄(300mL)에 용해시킨 후, NHS(9.20g, 80mmol)를 첨가하고, 5분간 교반한 후, EDCI(23.00g, 120mmol)를 부분적으로 첨가하였다. 첨가가 완료된 후, 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 농축하여, 조 생성물을 얻었고, 이를 100% 수율로 가정하여 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
실시예 104. (2S,4R)-5-(3-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노) 프로판아미도)-4-히드록시페닐)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-2-메틸펜탄산(104)의 합성.
화합물 103(이전 단계의 조 생성물, 40mmol) 및 화합물 77(13.54g, 40mmol)을 테트라히드로푸란(300mL)에 용해시키고, 환류 하에 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축한 후, 디클로로메탄으로 희석하고, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 농축하였다. 조 생성물을 실리카겔 컬럼(MeOH/디클로로메탄)으로 정제하여, 화합물 104(13.5g, 62% 수율)를 얻었다.
실시예 105. (2S,4R)-5-(3-((S)-2-아미노프로판아미도)-4-히드록시페닐)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-2-메틸펜탄산(105)의 합성.
화합물 104(3.70g, 6.80mmol)를 메탄올(100mL)에 용해시키고, Pd/C(10% 습윤, 0.7g)를 첨가하였다. 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채운 다음, 수소 벌룬 하에서 6시간 동안 교반하고, 여과하고, 농축하고, 50mL의 디클로로메탄으로 공-증발시키고, 오일 펌프에서 건조하여, 화합물 105(2.79g, 100% 수율)을 얻었다.
실시예 106. (2S,4R)-5-(3-((S)-2-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)프로판아미도)프로판아미도)-4-히드록시페닐)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-2-메틸펜탄산(106)의 합성.
화합물 105(2.79, 6.8mmol) 및 화합물 103(2.18g, 6.8mmol)을 테트라히드로푸란(100mL)에 용해시키고, 환류 하에 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축한 후, 디클로로메탄으로 희석하고, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 농축하였다. 조 생성물을 실리카겔 컬럼(MeOH/디클로로메탄)으로 정제하여, 화합물 106(2.2g, 53% 수율)을 얻었다.
실시예 107. (2S,4R)-5-(3-((S)-2-((S)-2-아미노프로판아미도)프로판아미도)-4-히드록시페닐)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-2-메틸펜탄산(107)의 합성.
화합물 106(1.39g, 2.26mmol)을 메탄올(50mL)에 용해시키고, Pd/C(10% 습윤, 0.3g)를 첨가하였다. 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채운 다음, 수소 벌룬 하에서 4시간 동안 교반하고, 여과하고, 농축하고, 50mL의 디클로로메탄으로 공-증발시키고, 오일 펌프에서 건조하여, 화합물 107(1.01g, 93% 수율)을 얻었다
실시예 108. tert-부틸((S)-37-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자옥타트리아콘탄-38-오일)-L-알라니네이트(108)의 합성.
H-Ala-OtBu HCl(3.63g, 2.00mmol) 및 화합물 20(1.48g, 2.40mmol)을 THF(30mL)에 용해시키고, HATU(1.36g, 2.40mmol) 및 트리에틸아민(0.33mL, 2.40mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 농축하고, 물 20mL 및 디클로로메탄 25mL로 희석하고, 분리된 유기상을 5% Na2CO3, 1M HCl로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축 건조시키고, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 무색 액체(1.51g, 86% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C42H73N3O16에 대한 계산치, 876.50; 실측치, 876.50.
실시예 109. tert-부틸((S)-37-아미노-31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자옥타트리아콘탄-38-오일)-L-알라니네이트(109)의 합성.
화합물 108(1.50g, 1.70mmol)을 메탄올(80mL)에 용해시키고, 10% Pd/C(0.20g)를 첨가하고, 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채운 후, 수소 벌룬 하에 실온에서 2시간 동안 교반하고, 여과하고, 농축 건조하여, 오일(1.26g, 100% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C34H67N3O14에 대한 계산치, 742.46; 실측치, 742.50.
실시예 110. 디-tert-부틸(2S,5S,13S,14S,22S,25S)-13,14-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2,25-디메틸-4,7,12,15,20,23-헥사옥소-5,22-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,11,16,21,24-헥사아자헥사코산디오에이트(110)의 합성.
화합물 19(0.41g, 0.85mmol) 및 화합물 109(1.26g, 1.70mmol)를 THF(10mL) 및 DMF(10mL)에 용해시키고, HATU(0.78g, 2.04mmol) 및 트리에틸아민(0.28mL, 2.04mmol)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 농축하고, 디클로로메탄(40mL)으로 희석하고 염수 30mL로 세척하였다. 수성 상을 100mL의 디클로로메탄으로 2회 추출하고, 유기 상을 합하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켜, 무색 오일(1.44g, 88% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C88H152N10O36에 대한 계산치, 1926.04; 실측치, 1926.04.
실시예 111. (2S,5S,13S,14S,22S,25S)-13,14-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2,25-디메틸-4,7,12,15,20,23-헥사옥소-5,22-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,11,16,21,24-헥사아자헥사코산디오익산(111)의 합성.
화합물 110(1.44g, 0.75mmol)을 디클로로메탄(10mL) 및 포름산(20mL)에 용해시키고, 55-60℃에서 3시간 동안 교반하고, 농축 건조시키고, 분취용 HPLC로 정제하여, 무색 오일(1.36g, 100% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C80H136N10O36에 대한 계산치, 1813.91; 실측치, 1813.95.
실시예 112. 비스(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)(2S,5S,13S,14S,22S,25S)-13,14-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2,25-디메틸-4,7,12,15,20,23-헥사옥소-5,22-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,11,16,21,24-헥사아자헥사코산디오에이트(112)의 합성.
화합물 111(0.50g, 0.276mmol)을 디클로로메탄(50mL)에 용해시키고, NHS(0.13g, 1.103mmol)를 첨가하고, 5분간 교반한 후, EDCI(0.32g, 1.656mmol)를 얼음-물 냉각 하에서 첨가하였다. 그 다음, 반응물을 실온으로 가온하고 3시간 동안 교반하고, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하여, 조 생성물을 얻었고, 이를 100% 수율을 가정하여 정제 없이 직접 사용하였다. MS-ESI (m/z): [M + 2H]2+ C88H142N12O40에 대한 계산치, 1005.08; 실측치, 1004.80.
실시예 113. (2S,2'S,4R,4'R)-5,5'-((((2S,5S,8S,11S,19S,20S,28S,31S,34S,37S)-19,20-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2,5,8,31,34,37-헥사메틸-4,7,10,13,18,21,26,29,32,35-데카옥소-11,28-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,12,17,22,27,30,33,36-데카아자옥타트리아콘탄디오일)비스(아잔디일))비스(4-히드록시-3,1-페닐렌))비스(4-((tert-부톡시카르보닐))아미노)-2-메틸펜탄산)(113)의 합성.
화합물 112(이전 단계의 조 생성물, 0.276mmol) 및 화합물 107(0.25g, 0.521mmol)을 테트라히드로푸란(50mL)에 용해시키고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 농축 후, 조 생성물을 분취용 HPLC(아세토니트릴/물)로 정제하여, 화합물 113(268mg, 35% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M + 2H]2+ C126H204N18O48에 대한 계산치, 1370.55; 실측치, 1370.93.
실시예 114. (2S,2'S,4R,4'R)-5,5'-((((2S,5S,8S,11S,19S,20S,28S,31S,34S,37S)-19,20-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2,5,8,31,34,37-헥사메틸-4,7,10,13,18,21,26,29,32,35-데카옥소-11,28-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,12,17,22,27,30,33,36-데카아자옥타트리아콘탄디오일)비스(아잔디일))비스(4-히드록시-3,1-페닐렌))비스(4-아미노-2-메틸펜탄산)(114)의 합성.
100mL 단일구 반응 플라스크에서, 화합물 113(268mg, 0.098mmol), 디클로로메탄(12mL) 및 트리플루오로아세트산(3mL)을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하고, 오일 펌프에 놓아서, 화합물 114를 얻었고, 이를 100% 수율을 가정하여 추가 정제 없이 사용하였다.
실시예 115. (2S,2'S,4R,4'R)-5,5'-((((2S,5S,8S,11S,19S,20S,28S,31S,34S,37S)-19,20-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2,5,8,31,34,37-헥사메틸-4,7,10,13,18,21,26,29,32,35-데카옥소-11,28-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,12,17,22,27,30,33,36-데카아자옥타트리아콘탄디오일)비스(아잔디일))비스(4-히드록시-3,1-페닐렌))비스(4-(2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-2-메틸펜탄산)(115)의 합성.
100mL 단일구 반응 플라스크에서, DMF(10mL) 중의 화합물 114(이전 단계의 조 생성물, 0.098mmol) 및 Tub-1(122mg, 0.176mmol)의 용액에, 디이소프로필에틸아민(101mg, 0.784mmol)을 적가하였다. 실온에서 5시간 동안 교반한 후, 반응물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 10mL의 디클로로메탄으로 희석하고, 포름산 0.2mL를 적가하고, 혼합물을 농축한 후, 분취용 HPLC(아세토니트릴/물)로 정제하여, 표제 화합물(106mg, 30% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M + 2H]2+ C166H268N26O54S2에 대한 계산치, 1779.11; 실측치, 1779.40.
실시예 116. tert-부틸 (R)-5-(3-((S)-2-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)프로판아미도)프로판아미도)-4-히드록시페닐)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)펜타노에이트(116)의 합성
.
디클로로메탄(20mL) 중의 화합물 99(1.33g, 2.945mmol) 및 Cbz-Ala-OH(0.69g, 3.093mmol)의 용액에, EDCI(1.13g, 5.891mmol)를 첨가하고, 반응물을 1시간 동안 교반하고, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 표제 화합물(1.65g, 2.512mmol, 85%)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C34H48N4O9에 대한 계산치, 657.34; 실측치 657.31.
실시예 117. tert-부틸 (R)-5-(3-((S)-2-((S)-2-아미노프로판아미도)프로판아미도)-4-히드록시페닐)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)펜타노에이트(117)의 합성.
메탄올(20mL) 중의 화합물 116(1.65g, 0.003mol)의 용액에, 10% Pd/C(0.27g, 0.003mol)를 첨가하고, 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채운 다음, 수소 벌룬 하에 실온에서 2시간 동안 교반하고, 여과하고, 농축 건조하여, 화합물 117(1.24g, 95% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C26H42N4O7에 대한 계산치, 523.31; 실측치 523.29.
실시예 118. 디-tert-부틸 5,5'-((((2S,5S,8S,11S,19S,20S,28S,31S,34S,37S)-19,20-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2,5,8,31,34,37-헥사메틸-4,7,10,13,18,21,26,29,32,35-데카옥소-11,28-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,12,17,22,27,30,33,36-데카아자옥타트리아콘탄디오일)비스(아잔디일))비스(4-하이드록시-3,1-페닐렌))(4R,4'R)-비스(4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)펜타노에이트)(118)의 합성.
화합물 112(0.34g, 0.647mmol) 및 화합물 117(0.65g, 0.324mmol)을 THF(15mL)에 용해시켰다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 118(0.25g, 27% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+2H]2+ C132H216N18O48에 대한 계산치, 1411.75; 실측치 1412.88.
실시예 119. (4R,4'R)-5,5'-((((2S,5S,8S,11S,19S,20S,28S,31S,34S,37S)-19,20-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2,5,8,31,34,37-헥사메틸-4,7,10,13,18,21,26,29,32,35-데카옥소-11,28-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,12,17,22,27,30,33,36-데카아자옥타트리아콘탄디오일)-비스(아잔디일))비스(4-히드록시-3,1-페닐렌))비스(4-아미노펜탄산)(119)의 합성.
화합물 118(0.25g, 0.089mmol)을 디클로로메탄(8mL) 및 트리플루오로아세트산(8mL)에 용해시켰다. 1시간 동안 교반한 후, 반응 용액을 농축하여, 화합물 119(0.413g, >100% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+2H]2+ C114H184N18O44에 대한 계산치, 1255.63; 실측치 1256.01.
실시예 120. (4R,4'R)-5,5'-((((2S,5S,8S,11S,19S,20S,28S,31S,34S,37S)-19,20-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2,5,8,31,34,37-헥사메틸-4,7,10,13,18,21,26,29,32,35-데카옥소-11,28-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,12,17,22,27,30,33,36-데카아자옥타트리아콘탄디오일)비스(아잔디일))비스(4-히드록시-3,1-페닐렌))비스(4-(2-((6S,9R, 11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복스아미도)펜탄산)(120)의 합성.
화합물 119(0.12g, 0.175mmol) 및 Tub-1(0.22g, 0.088mmol)을 DMF(2mL)에 용해시키고, 디이소프로필에틸아민(0.116mL, 0.701mmol)을 적가하였다. 반응물을 2시간 동안 교반하고 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 120(0.119g, 38% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+2H]2+ C164H264N26O54S2에 대한 계산치, 1763.91; 실측치 1765.30.
실시예 121. (2S,2'S,4R,4'R)-5,5'-((((2S,5S,8S,16S,17S,25S,28S,31S)-16,17-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-5,28-디이소프로필-2,31-디메틸-4,7,10,15,18,23,26,29-옥타옥소-8,25-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,14,19 ,24,27,30-옥타아자도트리아콘탄디오일)비스(아잔디일))비스(4-히드록시-3,1-페닐렌))비스(4-(2-((3S,6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-3,9-디이소프로필-2,8-디메틸-4,7-디옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자트리데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-2-메틸펜탄산)(121)의 합성.
화합물 82(250mg, 0.102mmol) 및 Tub-2(207mg, 0.306mmol)를 DMF(2mL)에 용해시키고, 디이소프로필에틸아민(0.034mL, 0.204mmol)을 첨가하였다. 반응물을 6시간 동안 교반하고 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 121(180mg, 51% 수율)을 얻었다. ESI-MS (m/z): [M+2H]2+　 C164H270N24O50S2에 대한 계산치, 1720.94; 실측치 1721.94.　
실시예 122. tert-부틸(R)-5-(3-((37S,40S,43S)-37-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-40-이소프로필-43-메틸-31,38,41-트리옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,39,42-트리아자테트라콘탄-44-아미도)-4-히드록시페닐)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)펜타노에이트(122)의 합성.
화합물 76(6.0g, 5.9mmol) 및 화합물 69(2.7g, 7.1mmol)를 THF(100mL)에 용해시키고, 20시간 동안 60℃로 가열하였다. 반응물을 농축하고, 잔류물을 실리카겔 컬럼(디클로로메탄:MeOH=20:1)으로 정제하여, 7.1g의 원하는 생성물을 회색 고체로(93% 수율)로서 얻었다.
실시예 123. tert-부틸(R)-5-(3-((37S,40S,43S)-37-아미노-40-이소프로필-43-메틸-31,38,41-트리옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,39,42-트리아자테트라콘탄-44-아미도)-4-히드록시페닐)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)펜타노에이트 (123)의 합성.
화합물 122(7.1g, 5.7mmol)를 이소프로판올(80mL)에 용해시키고, Pd/C(10% 습식, 0.8g)를 첨가하였다. 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채운 후, 수소 벌룬 하에 50℃에서 2.5시간 동안 교반하고, 여과하고, 농축하고, 오일 펌프에서 건조하여, 회색 고체(5.9g, 93%)를 얻었다.
실시예 124. 디-tert-부틸 5,5'-((((2S,5S,8S,16S,17S,25S,28S,31S)-16,17-비스(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-5,28-디이소프로필-2,31-디메틸-4,7,10,15,18,23,26,29-옥타옥소-8,25-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,14,19,24,27,30-옥타아자도트리아콘탄디오일)비스(아잔디일))비스(4-히드록시-3,1-페닐렌))(4R,4'R)-비스(4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)펜타노에이트)(124)의 합성.
화합물 80(510mg, 0.7mmol) 및 화합물 123(1900mg, 1.7mmol)을 DMF(20mL)에 용해시키고, 0℃로 냉각시켰다. N-메틸모르폴린(190mg, 1.9mmol)을 첨가하고, 0℃에서 3시간 동안 반응을 계속하였다. 반응 용액을 디클로로메탄(50mL)으로 희석하고, 염수(4 x 60mL)로 세척하였다. 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여과액을 농축하고, 실리카겔 컬럼(디클로로메탄:MeOH=20:1~6:1)으로 정제하여, 원하는 생성물 1.2g을 밤회색 오일(58% 수율)로서 얻었다. ESI-MS (m/z): [M+2H]2+ C130H214N16O46에 대한 계산치, 1368.75; 실측치 1369.34.
실시예 125. (4R,4'R)-5,5'-((((2S,5S,8S,16S,17S,25S,28S,31S)-16,17-비스(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-5,28-디이소프로필-2,31-디메틸-4,7,10,15,18,23,26,29-옥타옥소-8,25-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,14,19,24,27,30-옥타아자도트리아콘탄디오일)비스(아잔디일))비스(4-히드록시-3,1-페닐렌))비스(4-아미노펜탄산)(125)의 합성.
화합물 124(500mg, 0.18mmol)를 디클로로메탄(5mL)에 용해시키고, 트리플루오로아세트산(5mL)으로 2시간 동안 처리하였다. 반응 용액을 농축하여, 600 mg의 조 생성물을 주황색-적색 오일로서 얻었다. ESI-MS (m/z): [M+2H]2+ C112H182N16O42에 대한 계산치, 1213.63; 실측치 1213.83.
실시예 126. (4R,4'R)-5,5'-((((2S,5S,8S,16S,17S,25S,28S,31S)-16,17-비스(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-5,28-디이소프로필-2,31-디메틸-4,7,10,15,18,23,26,29-옥타옥소-8,25-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,14,19,24,27,30-옥타아자도트리아콘탄디오일)비스(아잔디일))비스(4-히드록시-3,1-페닐렌))비스(4-(2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복스아미도)펜탄산)(126)의 합성.
화합물 125(440mg, 0.18mmol) 및 Tub-1(320mg, 0.45mmol)을 DMF(5mL)에 용해시키고, 디이소프로필에틸아민(70mg, 0.54mmol)을 0℃에서 첨가하고 교반한 후, 반응을 0°C에서 3시간 동안 계속하였다. 반응 용액을 농축하고 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여, 92 mg의 원하는 생성물을 백색 고체(15% 수율)로서 얻었다. ESI-MS (m/z): [M+2H]2+ C162H262N24O52S에 대한 계산치, 1720.90; 실측치 1721.66.
실시예 127. tert-부틸((S)-35-아미노-24-메틸-1-(11-옥시다네일)-29-옥소-3,6,9,12,15,18,21,2413,27-노나옥사-30-아자헥사트리아콘탄-36-오일)-L-발릴-L-알라니네이트(127)의 합성.
화합물 74(15g, 15.4mmol)를 이소프로필 알코올(150mL)에 용해시키고, 탄소상 팔라듐(10wt%, 2.0g)을 첨가하고, 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채웠다. 2일 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 여과하고, 여과액을 농축하여, 표제 화합물 127(12g, 92% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C39H77N4O15에 대한 계산치, 841.53; 실측치 841.53.
실시예 128. 디-tert-부틸(2S,5S,8S,16S,17S,25S,28S,31S)-16,17-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-5,28-디이소프로필-2,31-디메틸-4,7,10,15,18,23,26,29-옥타옥소-8,25-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,14,19,24,27,30-옥타아자도트리아콘탄디오에이트(128)의 합성.
DMF(100mL) 중의 화합물 127(5.5g, 6.6mmol) 및 화합물 19(1.5g, 3.1mmol)의 용액에, HATU(4.8g, 12.5mmol) 및 NMM(1.3g, 12.5mmol)을 첨가하였다. 반응물을 완전히 전환될 때까지 실온에서 교반한 후, 진공 하에서 농축하고 물(200mL)에 붓고, 디클로로메탄(3 x 100mL)으로 추출하였다. 합한 유기상을 물(50mL) 및 염수(50mL)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하여, 화합물 128(6.5g, 100% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+2H]2+ C98H171N12O38에 대한 계산치, 1063.08; 실측치 1063.78.
실시예 129. (2S,5S,8S,16S,17S,25S,28S,31S)-16,17-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-5,28-디이소프로필-2,31-디메틸-4,7,10,15,18,23,26,29-옥타옥소-8,25-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,14,19,24,27,30-옥타아자도트리아콘탄디오익산(129)의 합성.
화합물 128(6.5g, 3.1mmol)을 디클로로메탄(50mL) 및 트리플루오로아세트산(50mL)에 용해시켰다. 혼합물을 2시간 동안 교반하고, 진공하에 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 생성물 129(3.1g, 50% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+2H]2+ C90H155N12O38에 대한 계산치, 1006.03; 실측치 1006.13.
실시예 130. (2S,3S)-2,3-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-N1,N4-비스((S)-37-(((S)-1-(((S)-1-(((1S,9S)-9-에틸-5-플루오로-9-히드록시-4-메틸-10,13-디옥소-1,2,3,9,10,12,13,15-옥타히드로벤조[데]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-1-일)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-31,39-디옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,38-디아자도테트라콘탄-42-일)숙신아미드(130)의 합성.
DMF(5mL) 중의 화합물 129(280mg, 0.139mmol) 및 엑사테칸 메실레이트(148mg, 0.278mmol)의 용액에, HATU(158mg, 0.417mmol) 및 디이소프로필에틸아민(92μL, 0.557mmol)을 첨가하였다. 전환이 완료될 때까지 반응물을 실온에서 교반한 후, 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 생성물 130(101mg, 25% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): C138H195F2N18O44에 대한 계산치 [M+2H]2+: 1424.18, 실측치 1425.00.
실시예 131. tert-부틸((벤질옥시)카르보닐)-L-알라닐-L-알라닐-L-알라니네이트(131)의 합성.
화합물 61(4.0g,18.49mmol) 및 Cbz-Ala-OH(4.1g,18.49mmol)을 디클로로메탄(100mL)에 용해시키고, 여기에 EDCI(7.0g, 36.51mmol) 및 디이소프로필에틸아민(4.7g, 36.36mmol)을 5℃에서 첨가하였다. 약 0.5시간 동안 교반한 후, 반응물을 물 및 염수로 세척하고, 실리카겔 컬럼으로 정제하고, 디클로로메탄 및 메탄올로 용출하여, 화합물 131을 백색 고체(1.6g, 20% 수율)로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C21H32N3O6에 대한 계산치, 422.22; 실측치 422.22.
실시예 132. tert-부틸 L-알라닐-L-알라닐-L-알라니네이트(132)의 합성.
화합물 131(1.6g, 3.79mmol)을 메탄올(100mL)에 용해시키고, 10% Pd/C(0.16g)를 첨가하고, 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채운 다음, 수소 벌룬 하에 실온에서 1시간 동안 교반하고, 여과하고, 농축하여, 화합물 132를 무색 액체(1.1g, 100% 수율)로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C13H26N3O4에 대한 계산치, 288.18; 실측치 288.18.
실시예 133. tert-부틸((S)-37-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자옥타트리아콘탄-38-오일)-L-알라닐-L-알라닐-L-알라니네이트(133)의 합성.
화합물 132(1.1g, 3.83mmol) 및 화합물 20(2.6g, 3.47mmol)을 THF(50mL)에 용해시키고, HATU(2.0g, 5.25mmol) 및 디이소프로필에틸아민(0.9g, 6.94mmol)을 5℃에서 첨가하였다. 약 0.5시간 동안 교반한 후, 반응물을 농축하고, 디클로로메탄으로 희석하고, 물(100mL), 5% Na2CO3(80mL), 1M HCl(80mL)로 세척하고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 컬럼으로 정제하고, 디클로로메탄 및 메탄올로 용출하여, 화합물 133을 백색 고체(2.9g, 81% 수율)로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C48H84N5O18에 대한 계산치, 1018.57; 실측치 1018.57.
실시예 134. tert-부틸((S)-37-아미노-31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자옥타트리아콘탄-38-오일)-L-알라닐-L-알라닐-L-알라니네이트(134)의 합성.
화합물 133(2.9g, 2.84mmol)을 메탄올(150mL)에 용해시키고, 10% Pd/C(0.29g)를 첨가하였다. 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채운 다음, 수소 벌룬 하에 실온에서 1시간 동안 교반하고, 여과하고 농축하여, 화합물 134를 무색 오일(2.5g, 100% 수율)로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C40H78N5O16에 대한 계산치, 884.54; 실측치 884.54.
실시예 135. 디-tert-부틸(2S,5S,8S,11S,19S,20S,28S,31S,34S,37S)-19,20-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2,5,8,31,34,37-헥사메틸-4,7,10,13,18,21,26,29,32,35-데카옥소-11,28-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,12,17,22,27,30,33,36-데카아자옥타트리아콘탄디오에이트(135)의 합성.
화합물 134(0.83g, 0.94mmol) 및 화합물 19(204.3mg,0.43mmol)를 THF(10mL) 및 DMF(10mL)의 혼합 용매에 용해시켰다. HATU(470mg, 1.24mmol) 및 디이소프로필에틸아민(216mg, 1.67mmol)을 첨가하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응물을 농축하고, 100mL의 디클로로메탄으로 희석하고, 염수(50mL)로 세척하고, 농축하여, 화합물 135를 무색 오일(0.924g, 100% 수율)로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+2H]2+ C100H173N14O40에 대한 계산치, 1106.04; 실측치 1106.25.
실시예 136. (2S,5S,8S,11S,19S,20S,28S,31S,34S,37S)-19,20-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-yl)-2,5,8,31,34,37-헥사메틸-4,7,10,13,18,21,26,29,32,35-데카옥소-11,28-비스(31-옥소- 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,12,17,22,27,30,33,36-데카아자옥타트리아콘탄디오익산(136)의 합성.
화합물 135(924.1mg, 0.42mmol)를 디클로로메탄 10mL 및 포름산 20mL에 용해시켰다. 55-60℃에서 3시간 동안 교반한 후, 반응물을 농축하고, 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 136을 백색 고체(0.42g, 48% 수율)로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C92H157N14O40에 대한 계산치, 1050.03; 실측치 1050.03.
실시예 137. (2S,3S)-2,3-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-N1,N4-비스((S)-37-(((S)-1-(((S)-1-(((S)-1-(((1S,9S)-9-에틸-5-플루오로-9-히드록시-4-메틸-10,13-디옥소-1,2,3,9,10,12,13,15-옥타히드로벤조[데]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-1-일)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-1-옥소프로판-2-일)카르바모일)-31,39-디옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,38-디아자도테트라콘탄-42-일)숙신아미드(137)의 합성.
화합물 136(202.5mg, 0.09mmol) 및 엑사테칸(111.1mg,0.21mmol)을 10mL의 DMF에 용해시키고, HATU(110.0mg,0.29mmol) 및 디이소프로필에틸아민(50.0mg, 0.38mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 약 30분 동안 교반하고, 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 137을 백색 고체(176.0mg, 62% 수율)로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C140H197F2N20O46에 대한 계산치, 1467.18; 실측치 1468.62.
실시예 138. 디-tert-부틸(2S,5S,8S,11S,28S,31S,34S,37S)-19,20-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2,5,8,31,34,37-헥사메틸-4,7,10,13,18,21,26,29,32,35-데카옥소-11,28-비스(31-옥소 -2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,12,17,22,27,30,33,36-데카아자옥타트리아콘탄디오에이트(138)의 합성.
DMF(40ml) 중의 화합물 134(4.07g, 4.60mmol) 및 화합물 12(1.00g, 2.09mmol)의 용액에, HATU(2.38g, 6.27mmol) 및 디이소프로필에틸아민(0.69mL, 4.18mmol)을 첨가하였다. 완전히 전환될 때까지 반응물을 실온에서 교반한 후, 진공하에 농축하고 물(200mL)로 희석하고, 디클로로메탄(3 x 100mL)으로 추출하였다. 합한 유기상을 물(50mL) 및 염수(50mL)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하여, 생성물 138(4.6g, 100% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C100H173N14O40에 대한 계산치, 2210.19; 실측치 2210.19.
실시예 139. (2S,5S,8S,11S,28S,31S,34S,37S)-19,20-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2,5,8,31,34,37-헥사메틸-4,7,10,13,18,21,26,29,32,35-데카옥소-11,28-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,12,17,22,27,30,33,36-데카아자옥타트리아콘탄디오익산(139)의 합성.
화합물 138(4.6g, 1.2mmol)을 포름산(40mL) 및 디클로로메탄(20mL)에 용해시켰다. 혼합물을 60℃로 가열하고 3시간 동안 교반한 후, 진공 하에 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 생성물 139(2.7g, 61% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C92H158N14O40에 대한 계산치, 2098.06; 실측치 2098.06.
실시예 140. 2,3-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-N1-((S)-31,39-디옥소-37-(((S)-1-옥소-1-(((S)-1-옥소-1-(((S)-3-옥소부탄-2-일)아미노)프로판-2-일)아미노)프로판-2-일)카르바모일)-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,38-디아자도테트라콘탄-42-일)-N4-((S)-37-(((S)-1-(((S)-1-(((S)-1-(((1S,9S)-9-에틸-5-플루오로-9-히드록시-4-메틸-10,13-디옥소-1,2,3,9,10,12,13,15-옥타히드로벤조[데]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-1-일)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-1-옥소프로판-2-일)카르바모일)-31,39-디옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,38-디아자도테트라콘탄-42-일)숙신아미드(140)의 합성.
DMF(10mL) 중의 화합물 139(300mg, 0.143mmol) 및 엑사테칸 메실레이트(152mg, 0.286mmol)의 용액에, HATU(163mg, 0.429mmol) 및 디이소프로필에틸아민(94μL, 0.572mmol)을 첨가하였다. 전환이 완료될 때까지 반응물을 실온에서 교반한 후, 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 생성물 140(263mg, 62% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C140H197F2N20O46에 대한 계산치, 2932.36; 실측치 2932.36.
실시예 141. tert-부틸((S)-37-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자옥타트리아콘탄-38-오일)-L-발리네이트(141)의 합성.
THF(100mL) 중의 화합물 20(10.0g, 13.4mmol) 및 H-Val-OtBu·HCl(2.40g, 13.8mmol)의 용액에, HATU(7.60g, 20.0mmol) 및 디이소프로필에틸아민(4.4mL, 26.7mmol)을 첨가하였다. LC-MS에 의해 지시된 대로, 완료될 때까지 반응물을 실온에서 교반하였다. 용매를 제거하고 잔류물을 디클로로메탄(200mL)으로 희석하고, 물(50mL), 포화 중탄산나트륨(50mL), 2N HCl(50mL) 및 염수(50mL)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하여, 화합물 141(12.0g, 100% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C44H78N3O16에 대한 계산치, 904.53; 실측치 904.53.
실시예 142. tert-부틸((S)-37-아미노-31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자옥타트리아콘탄-38-오일)-L-발리네이트(142)의 합성.
화합물 141(10.0g, 11.1mmol)을 THF(100mL)에 용해시키고, 탄소상 10% 팔라듐(1.0g)을 첨가하고, 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채웠다. 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 여과하고 여과액을 농축하여, 표제 화합물 142(8.6g, 100% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C36H72N3O14에 대한 계산치, 770.49; 실측치 770.49.
실시예 143. 디-tert-부틸(2S,5S,13S,14S,22S,25S)-13,14-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2,25-디이소프로필-4,7,12,15,20,23-헥사옥소-5,22-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,11,16,21,24-헥사아자헥사코산디오에이트(143)의 합성.
THF(50mL) 및 DMF(10mL)의 혼합 용매 중의 화합물 19(1.20g, 2.5mmol) 및 화합물 142(4.10g, 5.5mmol)의 용액에, HATU(2.80g, 7.5mmol) 및 디이소프로필에틸아민(1.0mL, 7.5mmol)을 첨가하였다. LC-MS에 의해 지시된 대로, 완료될 때까지 반응물을 실온에서 교반하였다. 용매를 제거하고 잔류물을 디클로로메탄(200mL)에 용해시키고, 물(50mL), 포화 중탄산나트륨(50mL), 2N HCl(50mL) 및 염수(50mL)로 세척하고 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하여, 표제 화합물(4.8g, 100% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C92H161N10O36에 대한 계산치, 1982.10; 실측치 1982.10.
실시예 144. (2S,5S,13S,14S,22S,25S)-13,14-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2,25-디이소프로필-4,7,12,15,20,23-헥사옥소-5,22-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,11,16,21,24-헥사아자헥사코산디오익산(144)의 합성.
화합물 143(4.8g, 2.5mmol)을 포름산(40mL) 및 디클로로메탄(20mL)에 용해시킨 후, 60℃로 가열하였다. LC-MS에 의해 지시되는 대로 완료될 때까지 반응물을 교반한 후, 농축하여, 표제 화합물(2.2g, 48% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C84H145N10O36에 대한 계산치, 1869.97; 실측치 1869.97.
실시예 145. (2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)아세트아미도)메틸 아세테이트(146)의 합성.
테트라히드로푸란(100mL) 및 톨루엔(30mL) 중의 Fmoc-Gly-Gly-OH(7.3g, 20.6mmol)의 용액에, 피리딘(2mL, 24.8mmol)을 첨가한 후, 이어서 N2 하에 납 테트라아세테이트(11g, 24.8mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5시간 동안 환류 가열하고, 실온으로 냉각한 후, 여과하였다. 여과액을 농축하고, 에틸 아세테이트(300mL) 및 물(50mL)로 희석하였다. 분리된 유기상을 염수(50mL)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 컬럼으로 정제하고, 석유 에테르/에틸 아세테이트로 용출하여, 백색 고체(7.1g, 76% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C20H20N2O5에 대한 계산치, 369.14; 실측치 369.14.
실시예 146. 벤질(2-히드록시아세틸)-L-알라니네이트(147)의 합성.
글리콜산(3.3g, 43.39mmol) 및 H-Ala-OBn·HCl(8.5g 39.44mmol)을 디클로로메탄(100mL)에 용해시키고, 여기에 EDCI(11.3g, 59.17mmol) 및 디이소프로필에틸아민(13.0ml, 78.89mmol)을 첨가하였다. 전환이 완료될 때까지 반응물을 실온에서 교반한 후, 물(50ml), 염수(50ml)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 컬럼(PE/EA=10/0 → 1/1 → 0/10)으로 정제하여, 표제 화합물(2.9g, 31% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C12H16NO4에 대한 계산치, 238.10; 실측치 238.10.
실시예 147. 벤질(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)아세트아미도)메톡시)아세틸)-L-알라니네이트(148)의 합성.
톨루엔(60ml) 중의 화합물 147(2.9g, 12.22mmol) 및 화합물 146(4.5g, 12.22mmol), 그리고 촉매량의 PPTS(0.3g)의 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 생성된 백색 고체를 여과 제거하고, 여과액을 농축하고 100mL의 에틸 아세테이트로 희석하고, 물(50ml)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 농축하고, 실리카겔 컬럼(PE/EA=10/0 내지 1/1 내지 1/3 내지 0/10)으로 정제하여, 표제 화합물(2.8g, 42% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C30H32N3O7에 대한 계산치, 546.22; 실측치 546.22.
실시예 148. (2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)아세트아미도)메톡시)아세틸)-L-알라닌(149)의 합성.
화합물 148(2.0g, 3.66mmol)을 메탄올(40mL)에 용해시키고, 탄소상 10% 팔라듐(0.2g)을 첨가하고, 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채웠다. 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 여과하고 여과액을 농축하여, 표제 화합물 149(1.45g, 86% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C23H26N3O7에 대한 계산치, 456.17; 실측치 456.17.
실시예 149. (9H-플루오렌-9-일)메틸(2-(((2-(((S)-1-(((1S,9S)-9-에틸-5-플루오로-9-히드록시-4-메틸-10,13-디옥소-2,3,9,10,13,15-헥사히드로-1H,12H-벤조[de]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-1-일)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-2-옥소에톡시)메틸)아미노)-2-옥소에틸)카르바메이트(150)의 합성.
화합물 149(300mg, 0.659mmol) 및 엑사테칸 메실레이트(350mg, 0.659mmol)를 DMF(10mL)에 용해시키고, HATU(375mg, 0.988mmol) 및 디이소프로필에틸아민(217μL, 1.317mmol)을 첨가하였다. 전환이 완료될 때까지 반응물을 실온에서 교반한 후, 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 표제 화합물 150(400mg, 70% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C47H45FN6O10에 대한 계산치, 873.32; 실측치 873.32.
실시예 150. (S)-2-(2-((2-아미노아세트아미도)메톡시)아세트아미도)-N-((1S,9S)-9-에틸-5-플루오로-9-히드록시-4-메틸-10,13-디옥소-2,3,9,10,13,15-헥사하이드로-1H,12H-벤조[데]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-1-일)프로판아미드(151)의 합성.
화합물 150(170mg, 0.195mmol)을 DMF(4mL) 및 피페리딘(0.4mL)의 혼합물에 용해시키고, 완료될 때까지 반응물을 실온에서 교반하였다. 용매를 제거하고, 잔류물을 DMF(3mL)와 함께 공-증발시켜, 표제 화합물(0.13g, 100% 수율)을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에 직접 사용하였다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C32H35FN6O8에 대한 계산치, 651.25; 실측치 651.26.
실시예 151. (2S,3S)-2,3-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-N1,N4-비스((S)-37-(((2S,13S)-1-(((1S,9S)-9-에틸-5-플루오로-9-하이드록시-4-메틸-10,13-디옥소-1,2,3,9,10,12,13,15-옥타히드로벤조[de]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-1-일)아미노)-2,14-디메틸-1,4,9,12-테트라옥소-6-옥사-3,8,11-트리아자펜타데칸-13-일)카르바모일)-31,39-디옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29- 데카옥사-32,38-디아자도테트라콘탄-42-일)숙신아미드(152)의 합성.
화합물 144(180mg, 0.096mmol) 및 화합물 151(125mg, 0.193mmol)을 DMF(5mL)에 용해시키고, 약 0℃로 냉각시켰다. HATU(109mg, 0.289mmol) 및 디이소프로필에틸아민(31μL, 0.193mmol)을 첨가한 후, 반응물을 실온으로 가온하고, 완료될 때까지 교반하였다. 용매를 제거하고 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 152(101mg, 34% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+3H]3+ C148H210F2N22O50에 대한 계산치, 1045.81; 실측치 1046.10.
실시예 152. (2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)아세트아미도)메톡시)아세틸)글리신(154)의 합성.
화합물 153(600.3mg, 1.1mmol)을 20mL의 MeOH에 용해시키고, 10wt% Pd/C(10.1mg, 0.1mmol)를 첨가하고, 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채웠다. 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 여과하고, 여과액을 농축하고, 에틸 아세테이트로 분쇄하였다. 여과하여, 백색 고체를 수집(420.2mg, 수율 84%)하였다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C22H24N3O7에 대한 계산치, 442.15; 실측치: 442.15.
실시예 153. (9H-플루오렌-9-일)메틸(2-(((2-((2-((1S,9S)-9-에틸-5-플루오로-9-히드록시-4-메틸-10,13-디옥소-2,3,9,10,13,15-헥사하이드로-1H,12H-벤조[데]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-1-일)아미노)-2-옥소에틸)아미노)-2-옥소에톡시)메틸)아미노)-2-옥소에틸)카르바메이트(155)의 합성.
화합물 154(302.1mg, 0.68mmol)를 10mL의 DMF에 용해시키고, 빙수조에서 0 ℃로 냉각시켰다. 엑사테칸(325.1mg, 0.61mmol) 및 HATU(387.5mmol, 1.01mmol)를 첨가한 후, 디이소프로필에틸아민(180.2μL, 1.36mmol)을 적가하였다. 반응물을 실온에서 약 20분 동안 교반하고, 여과하였다. 여과액을 분취용 HPLC로 정제하여, 표제 화합물(135.2mg, 23% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C46H44FN6O10에 대한 계산치, 859.30; 실측치: 859.30.
실시예 154. 2-아미노-N-((2-((2-(((1S,9S)-9-에틸-5-플루오로-9-히드록시-4-메틸-10,13-디옥소-2,3,9,10,13,15-헥사하이드로-1H,12H-벤조[데]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-1-일)아미노)-2-옥소에틸)아미노)-2-옥소에톡시)메틸)아세트아미드(156)의 합성.
화합물 155(135mg, 0.157mmol)를 5mL의 DMF에 용해시키고, 0.5mL의 피페리딘을 첨가하고, 반응물을 실온에서 20분 동안 교반하고, 농축한 후, DMF에 재용해하고 다시 농축하여, 표제 화합물(100.9mg, > 100% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C31H34FN6O8에 대한 계산치, 637.23; 실측치: 637.23.
실시예 155. (2S,3S)-2,3-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-N1,N4-비스((S)-37-(((S)-1-(((1S,9S)-9-에틸-5-플루오로-9-하이드록시-4-메틸-10,13-디옥소-1,2,3,9,10,12,13,15-옥타히드로벤조[de]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-1-일)아미노)-14-메틸-1,4,9,12-테트라옥소-6-옥사-3,8,11-트리아자펜타데칸-13-일)카르바모일)-31,39-디옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,38-디아자도테트라콘탄-42-일)숙신아미드(157)의 합성.
화합물 144(140.2mg, 0.075mmol) 및 화합물 156(100.9mg, 0.157mmol)을 DMF 5mL에 용해시키고, 0℃로 냉각시키고, HATU(86.2mg, 0.224mmol)를 첨가한 후, 이어서 디이소프로필에틸아민(23.6mg, 0.15mmol)을 적가하였다. 반응물을 실온으로 가온하고, 20분 동안 교반한 후, 혼합물을 분취용 HPLC로 정제하였다. 분획물을 농축하고 동결건조하여, 표제 화합물(36.6mg, 16% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C146H207F2N22O50에 대한 계산치, 3106.42; 실측치: 3106.42.
실시예 156. 1-(2-아미노-4-플루오로-5-메톡시페닐)-2-클로로에탄-1-온(158)의 합성.
디클로로메탄(20mL) 중의 3-플루오로-4-메톡시아닐린(5g, 35.4mmol) 용액을 얼음-물 냉각된 삼염화붕소(디클로로메탄에 녹인 1 M, 38.9mL) 용액에 적가하였다. 반응물을 10분 동안 교반한 다음, 클로로아세토니트릴(3.2g, 42.5mmol) 및 삼염화알루미늄(5.2g, 38.9mmol)을 첨가하였다. 첨가가 완료된 후, 반응물을 실온으로 가온하고, 밤새 환류하였다. 이어서, 반응 혼합물을 약 0℃로 냉각시키고, 2M HCl(80mL)로 켄칭하고, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 층을 분리하고 수성상을 디클로로메탄(3 x 80mL)으로 추출하였다. 합한 유기상을 물(100mL)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하고, 실리카겔 컬럼에서 정제하고, 석유 에테르/에틸 아세테이트로 용출하여, 화합물 158(2g, 26% 수율)을 황색 고체로 얻었다. ESI-MS m/z: [M+H]+ C9H9ClFNO2에 대한 계산치, 218.03; 실측치 218.03.
실시예 157. (S)-11-(클로로메틸)-4-에틸-8-플루오로-4-히드록시-9-메톡시-1,12-디히드로-14H-피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-3,14(4H)-디온(160)의 합성.
화합물 158(0.50g, 2.29mmol) 및 화합물 159(0.57g, 2.19mmol)를 무수 톨루엔(40mL)에 용해시키고, p-톨루엔술폰산(42mg, 0.219mmol)을 첨가하였다. 현탁액을 2일 동안 환류 가열하고 실온으로 냉각시켰다. 톨루엔의 약 2/3를 제거한 후, 잔류물을 여과하고 필터 케이크를 디클로로메탄으로 세척하고, 공기 건조하여, 화합물 160(0.7g, 72% 수율)을 회색 분말 고체로서 얻었다. ESI-MS m/z: [M+H]+ C22H18ClFN2O5에 대한 계산치, 445.09; 실측치 445.09.
실시예 158. tert-부틸(S)-(1-((4-(히드록시메틸)페닐)아미노)-1-옥소프로판-2-일)카르바메이트(161)의 합성.
p-아미노벤질 알코올(5.0g, 0.04 mol) 및 Boc-L-알라닌(8.0g, 0.042 mol)을 무수 THF(100mL)에 용해시키고, 2-에톡시-1-에톡시카르보닐-1,2-디하이드로퀴놀린(11g, 0.044 mol)을 첨가하고 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물(300mL)에 붓고, 에틸 아세테이트(3 x 100mL)로 추출하고, 합한 유기 상을 물(100mL)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 에틸 아세테이트/석유 에테르(1:3)로 분쇄하고 여과하여, 화합물 161(9.8g, 84% 수율)을 백색 고체로서 얻었다. ESI-MS m/z: [M + H] + C15H22N2O4에 대한 계산치, 295.16; 실측치 295.16.
실시예 159. tert-부틸(S)-(1-((4-(브로모메틸)페닐)아미노)-1-옥소프로판-2-일)카르바메이트(162)의 합성.
화합물 161(3.5g, 11.9mmol)과 사브롬화탄소(5.9g, 17.8mmol)를 디클로로메탄(80mL)에 용해시킨 후, 약 0℃로 냉각하고, 트리페닐포스핀(4.7g, 17.8mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온하고 30분 동안 교반한 후, 실리카겔 20g을 첨가하고, 혼합하고, 회전증발기(rotavap)에서 건조시킨 후, 실리카겔 컬럼(실리카겔 100g)에 로딩하고 석유에테르/에틸아세테이트로 용출하여, 화합물 162(2.6g, 62% 수율)를 얻었다. ESI-MS m/z: [M+H]+ C15H21BrN2O3에 대한 계산치, 357.07; 실측치 357.07.
실시예 160. (S)-4-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-1-(4-(2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로판아미도)벤질)-1-메틸피페라진-1-이움(164)의 합성.
화합물 162(2.3g, 6.4mmol) 및 (9H-플루오렌-9-일)메틸 4-메틸피페라진-1-카르복실레이트(163, 2.1g, 6.4mmol)를 무수 THF(100mL)에 용해시키고, 실온에서 밤새 교반하였다. 회전증발기에서 대부분의 THF를 제거한 후, 에틸 아세테이트(200mL)를 잔류물에 첨가하였다. 생성된 슬러리를 여과하여, 백색 고체(3.8g, 87% 수율)를 얻었다. ESI-MS m/z: M+ C35H43N4O5에 대한 계산치, 599.32; 실측치 599.32.
실시예 161. (S)-1-(4-(2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로판아미도)벤질)-1-메틸피페라진-1-ium(165)의 합성.
화합물 164(3.12g, 4.6mmol)를 DMF(25mL)에 용해시키고, 피페리딘(3mL)을 첨가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 200mL의 에틸아세테이트를 첨가하고 10분 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하여, 백색 고체(1.54g, 77% 수율)를 얻었다. ESI-MS m/z: M+ C20H33N4O3에 대한 계산치, 377.26; 실측치 377.26.
실시예 162. 1-(4-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로판아미도)벤질)-4-(((S)-4-에틸-8-플루오로-4-히드록시-9-메톡시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1H-피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-11-일)메틸)-1-메틸피페라진-1-이움(166)의 합성.
DMF(10mL) 중의 화합물 165(0.30g, 0.66mmol) 및 화합물 160(0.25g, 0.56mmol)의 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반한 후, N,N-디이소프로필에틸아민(49μL, 0.28mmol)을 첨가하고, 반응물을 실온으로 가온하고, 밤새 교반하고, 농축하고, 분취용 HPLC(아세토니트릴/포름산을 함유한 물)로 정제하여, 화합물 166(0.40g, 80% 수율)을 얻었다. ESI-MS m/z: M+ C42H50FN6O8에 대한 계산치, 785.37; 실측치 785.37.
실시예 163. 1-(4-((S)-2-아미노프로판아미도)벤질)-4-(((S)-4-에틸-8-플루오로-4-히드록시-9-메톡시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1H-피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-11-일)메틸)-1-메틸피페라진-1-이움 (167)의 합성.
화합물 166(0.30g, 0.35mmol)을 디클로로메탄과 트리플루오로아세트산(3mL/3mL)의 혼합물에 용해시키고, 실온에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 농축하고 진공 펌프에서 건조하여, 화합물 167(0.27g, 100% 수율)을 황색 고체로서 얻었다. ESI-MS m/z: M+ C37H42FN6O6에 대한 계산치, 685.31; 실측치 685.31.
실시예 164. 화합물 168의 합성.
화합물 20(50mg, 0.1mmol) 및 화합물 167(160mg, 0.23mmol)을 DMF(3mL)에 용해시키고, HATU(120mg, 0.3mmol) 및 NMM(65mg, 0.6mmol)을 첨가하고, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 분취용 HPLC(0.1% HCOOH를 함유하는 아세토니트릴/물)로 직접 정제하여, 86mg의 화합물 168을 46% 수율로 얻었다. ESI-MS m/z: M2+ C94H102F2N16O20에 대한 계산치, 906.4; 실측치 907.1.
실시예 165. 1-(2-아미노-4-플루오로-5-메톡시페닐)에탄-1-온(169)의 합성.
디클로로메탄(20mL) 중의 3-플루오로-4-메톡시아닐린(5.0g, 35.4mmol) 용액에, 디클로로메탄에 중의 BCl3(1M, 39.0mL)을 0℃에서 첨가한 다음, CH3CN(2.2mL, 42.5mmol) 및 AlCl3(5.2g, 38.9mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 가열하여 환류시키고 환류하에 밤새 교반하고, 0℃로 냉각시켰다. 2N HCl(80mL)을 첨가하고 2시간 동안 교반한 후, 에틸 아세테이트(3 x 50mL)로 추출하였다. 유기상을 합하고 물(100mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 진공하에 여과하고 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 컬럼으로 정제하여, 황색 고체(0.7g, 11% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C9H11FNO2에 대한 계산치, 184.07; 실측치 184.07.
실시예 166. 1-(2-아미노-4-플루오로-5-히드록시페닐)에탄-1-온(170)의 합성.
디클로로메탄(10mL) 중의 화합물 169(0.71g, 3.87mmol)의 용액에, BBr3(1M, 7.7mL)을 첨가하였다. 용액을 실온으로 가온하고 48시간 동안 교반하고, 0 ℃로 냉각하고, 물(100mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(3 x 50mL)로 추출하였다. 유기상을 합치고 물(100mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 진공하에 여과하고 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 컬럼으로 정제하여, 황색 고체(0.4g, 60% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C8H9FNO2에 대한 계산치, 170.05; 실측치 170.05.
실시예 167. (S)-4-에틸-8-플루오로-4,9-디히드록시-11-메틸-1,12-디히드로-14H-피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-3,14(4H)-디온(171)의 합성.
톨루엔(80mL) 중의 화합물 170(2.65g, 10.05mmol) 및 (S)-4-에틸-4-하이드록시-7,8-디하이드로-1H-피라노[3,4-f]인돌리진-3,6,10(4H)-트리온(2.65g, 10.05mmol)의 용액에, p-톨루엔술폰산(0.1g)을 첨가하고, 혼합물을 가열 환류시키고, 24시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시켰다. 생성된 고체를 여과하고, 디클로로메탄으로 헹구고, 건조시켜, 화합물 171(1.3g, 100% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C21H18FN2O5에 대한 계산치, 397.11; 실측치 397.11.
실시예 168. (S)-1-(tert-부틸) 4-(4-에틸-8-플루오로-4-히드록시-11-메틸-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1H-피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-9-일)피페라진-1,4-디카르복실레이트(172)의 합성.
디클로로메탄(5mL) 중의 tert-부틸 1-피페라진카르복실레이트(1.0g, 5.36mmol) 및 피리디늄(0.65ml, 8.05mmol)의 용액에, 트리포스겐(1.9g, 6.44mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 가온하고 1시간 동안 교반한 후, 디클로로메탄(50mL)으로 희석하고, 1N HCl(10mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하여, 황색 고체(1.3g, 100% 수율)를 얻었다.
DMF(5mL) 중의 화합물 171(400mg, 1.01mmol) 및 디이소프로필에틸아민(0.33mL, 2.02mol)의 용액에, 상기 화합물(326mg, 1.31mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 가온하고 4시간 동안 교반한 후, 진공하에 농축하고 실리카겔 컬럼으로 정제하여, 갈색 고체(430mg, 70% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C31H33FN4O8에 대한 계산치, 609.23; 실측치 609.23.
실시예 169. (S)-4-에틸-8-플루오로-4-히드록시-11-메틸-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1H-피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-9-일 피페라진-1-카르복실레이트(173)의 합성.
화합물 172(100mg, 0.164mmol)를 디클로로메탄(6mL) 및 트리플루오로아세트산(2mL)에 용해시키고, 반응물을 30분 동안 교반한 후, 농축하고, 디클로로메탄으로 2회 공-증발시키고, 오일 펌프에서 건조시켜, 화합물 173을 갈색 고체(83mg, 100.00%)로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C49H84N6O19에 대한 계산치, 1061.58; 실측치 1061.58.
실시예 170. tert-부틸((S)-37-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자옥타트리아콘탄-38-오일)글리실글리실-L-알라닐-L-알라니네이트(174)의 합성.
THF(60mL) 중의 화합물 46(3.02g, 3.5mmol) 및 H-Ala-Ala-OtBu(0.9g, 3.56mmol)의 용액에, HATU(1.99g, 5.23mmol) 및 디이소프로필에틸아민(1.1mL, 6.95mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 전환이 완료될 때까지 교반한 후, 진공하에 농축하고 물(100mL)에 붓고, 디클로로메탄(3 x 50mL)으로 추출하였다. 합한 유기상을 물(50mL), 포화 중탄산나트륨(50mL), 2N HCl(50mL) 및 염수(50mL)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하여, 화합물 174(3.6g, 100% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C49H84N6O19에 대한 계산치, 1061.58; 실측치 1061.58.
실시예 171. tert-부틸((S)-37-아미노-31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자옥타트리아콘탄-38-오일)글리실글리실-L-알라닐-L-알라니네이트(175)의 합성.
화합물 174(3.6g, 3.88mmol)를 THF(60mL)에 용해시키고, 탄소상 팔라듐(10wt%, 0.4g)을 첨가하고, 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채웠다. 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 여과하고 여과액을 농축하여, 표제 화합물 175(2.6g, 74% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C41H79N6O17에 대한 계산치, 927.54; 실측치 927.54.
실시예 172. 디-tert-부틸(2S,5S,14S,22S,23S,31S,40S,43S)-22,23-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2,5,40,43-테트라메틸-4,7,10,13,16,21,24,29,32,35,38,41-도데카옥소-14,31-비스(31-옥소 -2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,12,15,20,25,30,33,36,39,42-도데카아자테트라테트라콘탄디오에이트(176)의 합성.
THF/DMF(20mL/4mL) 중의 화합물 175(2.6g, 2.8mmol) 및 화합물 19(0.6g, 1.25mmol)의 용액에, HATU(1.43g, 3.76mmol) 및 디이소프로필에틸아민(0.62mL, 3.79mmol)을 첨가하였다. 전환이 완료될 때까지 반응물을 실온에서 교반하고, 진공 하에 농축하고 물(200mL)에 붓고, 디클로로메탄(3 x 100mL)으로 추출하였다. 합한 유기상을 물(50mL) 및 염수(50mL)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하여, 화합물 176(2.8g, 100% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C102H175N16O42에 대한 계산치, 2296.20; 실측치 2296.20.
실시예 173. (2S,5S,14S,22S,23S,31S,40S,43S)-22,23-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2,5,40,43-테트라메틸-4,7,10,13,16,21,24,29,32,35,38,41-도데카옥소-14,31-비스(31-옥소-2,5, 8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,12,15,20,25,30,33,36,39,42-도데카아자테트라테트라콘탄디오익산(177)의 합성.
화합물 176(2.8g, 1.2mmol)을 포름산(40mL) 및 디클로로메탄(20mL)에 용해시켰다. 혼합물을 50℃로 가열하고 밤새 교반한 후, 진공 하에 농축하고, 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 177(1.6g, 61% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C94H159N16O42에 대한 계산치, 2184.07; 실측치 2184.07.
실시예 174. 비스((S)-4-에틸-8-플루오로-4-히드록시-11-메틸-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1H-피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-9-일) 4,4'-((2S,5S,14S,22S,23S,31S,40S,43S)-22,23-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2,5,40,43-테트라메틸-4,7,10,13,16,21,24,29,32,35,38,41-도데카옥소-14,31-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3 ,6,9,12,15,20,25,30, 33,36,39,42-도데카아자테트라테트라콘탄디오일)비스(피페라진-1-카르복실레이트)(178)의 합성.
DMF(5mL) 중의 화합물 177(125mg, 0.057mmol) 및 화합물 173(58mg, 0.115mmol)의 용액에, HATU(65mg,0.173mmol) 및 디이소프로필에틸아민(38μL, 0.230mmol)을 첨가하였다. 전환이 완료될 때까지 반응물을 실온에서 교반한 후, 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 178(67mg, 37% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C146H205F2N24O52에 대한 계산치, 3164.40; 실측치 3164.40.
실시예 175. (S)-tert-부틸(4-에틸-8-플루오로-4-히드록시-11-메틸-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1H-피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-9-일)에탄-1,2-디일비스(메틸카르바메이트)(179)의 합성.
디클로로메탄(20mL) 중의 tert-부틸 2-(메틸아미노)에틸카르바메이트(1.0g, 5.74mmol) 및 피리디늄(0.69mL, 8.61mmol)의 용액에, 트리포스겐(2.0g, 6.89mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 가온하고 1시간 동안 교반하고, 디클로로메탄(50mL)으로 희석하고, 1N HCl(10mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하여, 황색 오일(1.3g, 100% 수율)을 얻었다.
DMF(10mL) 중의 화합물 171(712mg, 1.79mmol) 및 디이소프로필에틸아민(0.59mL, 3.59 mol)의 용액에, 상기 화합물(710mg, 3.00mmol) 및 DMAP(43mg, 0.36mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온하고 밤새 교반한 다음, 진공하에 농축하고 실리카겔 컬럼으로 정제하여, 갈색 고체(700mg, 65% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C30H34FN4O8에 대한 계산치, 597.23; 실측치 597.23.
실시예 176. (S)-4-에틸-8-플루오로-4-히드록시-11-메틸-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1H-피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-9-일 메틸(2-(메틸아미노)에틸)카르바메이트(180)의 합성.
화합물 179(55mg, 0.092mmol)를 디클로로메탄(3mL)에 용해시켰다. 트리플루오로아세트산(1mL)을 첨가하고 반응물을 30분 동안 교반한 후 농축하고, 디클로로메탄과 함께 2회 공-증발시키고, 오일 펌프에서 건조시켜, 화합물 180을 갈색 고체(50mg, >100.00% 수율)로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C25H26FN4O6에 대한 계산치, 497.18; 실측치 497.18.
실시예 177. 비스((S)-4-에틸-8-플루오로-4-히드록시-11-메틸-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1H-피라노[3'4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-9-일)((5S,8S,17S,25S,26S,34S,43S,46S)-25,26-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3,5,8,43,46,49-헥사메틸-4,7,10,13,16,19,24,27,32,35,38,41,44,47,48-펜타데카옥소-17,34-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,9,12,15,18,23,28,33,36,39,42,45,49-테트라데카아자헨펜타콘탄-1,51-디일)비스(메틸카르바메이트)(181)의 합성.
DMF(5mL) 중의 화합물 173(168mg, 0.08mmol) 및 화합물 180(81mg, 0.16mmol)의 용액에, HATU(100mg, 0.26mmol) 및 디이소프로필에틸아민(52μL, 0.32mmol)을 첨가하였다. 전환이 완료될 때까지 반응물을 실온에서 교반한 후, 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 181(97mg, 39% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C144H207F2N22O50에 대한 계산치, 3081.42, 실측치 3081.42.
실시예 178. (4-(4-((4-(((S)-1-카르복시-2-메틸프로필)아미노)-4-옥소부틸)아미노)-2,3-비스(2,5--2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-4-옥소부탄아미도)부타노일)-L-발린(184)의 합성.
무수 아세토니트릴(50mL) 중의 화합물 12(2.0g, 4.18mmol)의 혼합물에, 3-(에틸이미노메틸리덴아미노)-N,N-디메틸프로판-1-아민 하이드로클로라이드(3.2g, 16.72mmol) 및 N-하이드록시숙신이미드(1.9g, 16.72mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 전환이 완료될 때까지 실온에서 교반하고, DCM(100mL)으로 희석하고, 염수(200mL)로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4로 건조시키고 진공하에 농축하여, 회백색 고체를 얻었다.
생성된 화합물을 DMF(50mL)에 용해시키고, 발린(1.5g, 12.54mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 전환이 완료될 때까지 실온에서 교반하고, 이어서 분취용 HPLC로 직접 정제하여, 화합물 184(2.2g, 78% 수율)를 회백색 고체로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C30H40N6O12에 대한 계산치, 677.27; 실측치, 677.53.
실시예 179. 2,5-디옥소피롤리딘-1-일(4-(2,3-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-4-((4-(((R)-1-((2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-4-옥소부틸)아미노)-4-옥소부탄아미도)부타노일)-L-발리네이트(185)의 합성.
무수 아세토니트릴(40mL) 중의 화합물 184(1.0g, 1.48mmol)의 혼합물에, 3-(에틸이미노메틸리덴아미노)-N,N-디메틸프로판-1-아민 하이드로클로라이드(1.2g, 5.92mmol) 및 N-하이드록시숙신이미드(685mg, 5.92mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 전환이 완료될 때까지 실온에서 교반한 후, DCM(50mL)으로 희석하고 염수(150mL)로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4로 건조시키고 진공하에 농축하여, 화합물 185(1.2g, 93% 수율)를 회백색 고체로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C38H46N8O16에 대한 계산치, 871.30; 실측치, 871.65.
실시예 180. (S)-1-(4-(2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로판아미도)벤질)-4-(클로로카르보닐)-1-메틸피페라진-1-ium(187)의 합성.
DCM(15mL) 중의 화합물 186(300mg, 0.796mmol)의 용액에, 트리포스겐(98mg, 0.318mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 전환이 완료될 때까지 반응물을 0℃에서 교반한 후, 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 187(190mg, 54% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M]+ C21H32ClN4O4에 대한 계산치, 439.20; 실측치 439.35.
실시예 181. 화합물 188의 합성.
DMF(1mL) 중의 α-아마니틴(30mg, 0.033mmol) 및 화합물 187(42.9mg, 0.099mmol)의 용액에, 디이소프로필에틸아민(12.6mg, 0.099mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 완전히 전환될 때까지 반응물을 0℃에서 교반한 후, 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 189(36mg, 83% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): [M]+ C60H85N14O18S에 대한 계산치, 1321.58; 실측치 1321.69.
실시예 182. 화합물 189의 합성.
TFA/DCM(1/10, 1mL) 중의 화합물 188(36mg, 27.2 umol)의 용액을 전환이 완료될 때까지 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 진공하에 농축하여, 화합물 189(35mg, 조 생성물, 100% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): [M]+ C55H77N14O16S+에 대한 계산치, 1221.58; 실측치 1221.70.
실시예 183. 화합물 190의 합성.
무수 DMF(2mL)에 중의 화합물 185(4mg, 4.59μmol) 및 189(11.8mg, 9.65μmol)의 혼합물에, 디이소프로필에틸아민(1.5mg, 11.47μmol)을 0℃에서 첨가하였다. 전환이 완료될 때까지 혼합물을 0℃에서 교반하고, 분취용 HPLC로 직접 정제하여, 화합물 190(8.6mg, 60% 수율)을 회백색 고체로 얻었다. MS-ESI (m/z): [M]+ C140H190N34O42S2에 대한 계산치, 1541.66; 실측치, 1541.69.
실시예 184. 비스(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)(2S,5S,13S,14S,22S,25S)-13,14-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2,25-디이소프로필-4,7,12,15,20,23-헥사옥소-5,22-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6,11,16,21,24-헥사아자헥사코산디오에이트(191)의 합성.
무수 DCM(5mL) 중의 화합물 144(100mg, 53.47 umol)의 혼합물에, 3-(에틸이미노메틸리덴아미노)-N,N-디메틸프로판-1-아민 하이드로클로라이드(41mg, 214 umol) 및 N-하이드록시숙신이미드(25mg, 214umol)를 첨가하였다. 혼합물을 전환이 완료될 때까지 0℃에서 교반한 후, DCM(10mL)으로 희석하고, 염수(2 x 10mL)로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4로 건조시키고 진공 하에 농축하여, 화합물 191(100mg, 91% 수율)을 오일로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C92H150N12O40에 대한 계산치, 2064.01; 실측치, 2064.12.
실시예 185. 화합물 192의 합성.
무수 DMF(2mL) 중의 화합물 191(8mg, 3.88 μmol) 및 189(10mg, 8.14 μmol)의 혼합물에, 디이소프로필에틸아민(1.5mg, 11.47 umol)을 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 전환이 완료될 때까지 0℃에서 교반하고 분취용 HPLC로 직접 정제하여, 화합물 192(10.6mg, 64% 수율)를 회백색 고체로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M]+ C194H294N38O66S2에 대한 계산치, 2138.03; 실측치, 2138.03.
실시예 186. (2S,5S,22S,25S)-13,14-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-5,22-디이소프로필-2,25-디메틸-4,7,12,15,20,23-헥사옥소-3,6,11,16,21,24-헥사아자헥사코산디오익산(193)의 합성.
무수 DMF(20mL) 중의 화합물 185(600mg, 689 μmol) 및 L-아날린(184mg, 2.07mmol)의 혼합물에, 디이소프로필에틸아민(267mg, 2.07mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 전환이 완료될 때까지 0℃에서 교반하고 분취용 HPLC로 직접 정제하여, 화합물 193(510mg, 91% 수율)을 회백색 고체로 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C36H50N8O14에 대한 계산치, 819.36; 실측치, 819.53.
실시예 187. 2,3-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-N1,N4-비스(4-(((S)-3-메틸-1-옥소-1-(((S)-1-옥소-1-((4-옥소사이클로헥실)아미노)프로판-2-일)아미노)부탄-2-일)아미노)-4-옥소부틸)숙신아미드(194)의 합성.
무수 DMF(2mL) 중의 화합물 193(100mg, 122 μmol) 및 4-아미노사이클로헥산-1-온 하이드로클로라이드(55mg, 366 umol)의 혼합물에, 4-(4,6-디메톡시-1,3 ,5-트리아진-2-일)-4-메틸 모르폴리늄 클로라이드(DMTMM, 135mg, 488μmol)을 첨가하였다. 혼합물을 전환이 완료될 때까지 0℃에서 교반하고, DCM(10mL)으로 희석하고 염수(3 x 10mL)로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4로 건조시키고 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 컬럼으로 정제하여, 화합물 194(110mg, 89% 수율)를 회백색고체로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C48H68N10O14에 대한 계산치, 1009.49; 실측치, 1009.68.
실시예 188. 화합물 195의 합성.
무수 THF(5mL) 중의 화합물 191(5mg, 4.95μmol), 톨루엔-4-설폰산(1mg, 5.86μmol) 및 α-아만틴(182, 9.6mg, 10.41μmol)의 혼합물을 60°C에서 전환이 완료될 때까지 교반하였다. 혼합물을 진공하에 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 195(4.6mg, 33% 수율)를 회백색 고체로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C128H174N28O42S2에 대한 계산치, 2840.18; 실측치, 2840.75.
실시예 189. 3-(4-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)페닐)아크릴산(197)의 합성.
DCM(20mL) 중의 4-아미노신남산(1.0g, 6.13mmol) 및 N-(9-플루오레닐메톡시카르보닐옥시)숙신이미드(2.3g, 6.74mmol)의 혼합물에, 트리메틸아민(930mg, 9.21mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 전환이 완료될 때까지 0℃에서 교반한 다음, 염수(20mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 컬럼으로 정제하여, 화합물 197(2.2g, 93% 수율)을 백색 고체로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C24H19NO4에 대한 계산치, 386.13; 실측치, 386.24.
실시예 190. (9H-플루오렌-9-일)메틸(E)-(4-(3-(메톡시(메틸)아미노)-3-옥소프로프-1-엔-1-일)페닐)카르바메이트(198)의 합성.
DCM(20mL) 중의 화합물 197(2.0g, 5.19mmol) 및 N-메톡시메탄아민(610mg, 6.23mmol)의 혼합물에, HATU(3.0g, 7.80mmol) 및 트리메틸아민(1.1g, 10.20mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 혼합물을 전환이 완료될 때까지 0℃에서 교반한 후, 염수(20mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 컬럼으로 정제하여, 화합물 198(1.8g, 81% 수율)을 백색 고체로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C26H24N2O4에 대한 계산치,429.17; 실측치, 429.30
실시예 191. (9H-플루오렌-9-일)메틸(E)-(4-(3-옥소프로프-1-엔-1-일)페닐)카르바메이트(199)의 합성.
DCM(20mL) 중의 화합물 198(1.8g, 4.20mmol)의 혼합물을 N2하에 -60℃로 냉각시켰다. 디이소부틸알루미늄 하이드라이드(12.6mL, 12.6mmol, THF 중 1.0 M)를 혼합물에 적가하였다. 첨가 후, 혼합물을 전환이 완료될 때까지 -60℃에서 교반하였다. 반응물을 10% NH4Cl로 켄칭한 후, 염수(20mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래시 컬럼으로 정제하여, 화합물 199(900mg, 58% 수율)를 회백색 고체로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C24H19NO3에 대한 계산치,370.17; 실측치, 370.58.
실시예 192. 화합물 200의 합성.
무수 THF(5mL) 중의 화합물 199(8.8mg, 23.94 μmol), 톨루엔-4-술폰산(1mg, 5.86 μmol) 및 α-아만틴(20.0mg, 21.76 μmol)의 혼합물을 전환이 완료될 때까지 60℃에서 교반하고 진공하에 농축하였다. 잔류물을 플래쉬 컬럼으로 정제하여, 화합물 200(16mg, 57.9% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C63H71N11O16S에 대한 계산치, 1270.48; 실측치, 1270.85.
실시예 193. 화합물 201의 합성.
피페리딘/DMF(1mL, 1/10) 중의 화합물 200(16mg, 12.60μmol)의 용액을 실온에서 10분 동안 교반하고 진공 하에 농축하여, 화합물 201(16mg, 조물질)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C48H61N11O14S에 대한 계산치, 1048.48; 실측치, 1048.85.
실시예 194. 화합물 202의 합성.
무수 DMF(1mL) 중의 화합물 193(5mg, 6.11 μmol) 및 화합물 201(13mg, 12.81 μmol)의 혼합물에, DMTMM(4-(4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진)-2-일)-4-메틸 모르폴리늄 클로라이드)(7mg, 24.44μmol)를 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 전환이 완료될 때까지 0℃에서 교반한 후 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 202(10mg, 57% 수율)를 회백색 고체로서 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C132H168N30O40S2에 대한 계산치, 2878.44; 실측치, 2878.92.
실시예 195. (2R,3R)-2,3-비스(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-4-((4-(tert-부톡시)-4-옥소부틸)아미노)-4-옥소부탄산(203)의 합성.
드라이 DCM 20mL 중의 화합물 13(4.25g, 10.68mmol, 1.0eq) 및 DMAP(13mg, 0.11mmol, 0.01eq)의 혼합물에, 무수 DCM 10mL 중의 t-부틸 아미노부티레이트(1.78g, 11.21mmol, 1.05eq)의 용액을 첨가하였다. 첨가가 완료된 후, 화합물 13은 완전히 용해되었고, 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 조 생성물을 실리카겔 컬럼에 로딩하고, 3-5% MeOH/DCM으로 용출시켰다. 분획물을 합하고 농축하고, 잔류물을 PE/DCM(1:1)으로 분쇄하여, 3.3g의 백색 고체(수율 56%)를 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C28H36N3O9에 대한 계산치 558.2; 실측치, 558.2.
실시예 196. 1-벤질 25-(tert-부틸)(18R,19R)-18,19-비스(((벤질옥시)-카르보닐)아미노)-17,20-디옥소-4,7,10,13-테트라옥사-16,21-디아자펜타코산디오에이트(204)의 합성.
벤질 1-아미노-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-오에이트(365mg, 1.03mmol, 1.0eq)를 10mL의 DMF에 용해시키고, 빙수조에서 냉각시켰다. 여기에, DIPEA(0.53g, 4.12mmol, 4.0eq), 화합물 203(0.56g, 1.03mmol, 1.0eq) 및 HATU(1.17g, 3.09mmol, 3.0eq)를 차례로 첨가하였다. 빙수조에서 1시간 동안 교반한 후, 물 100mL를 첨가하고, 고체가 석출되었다. 여과에 의해 고체를 수집하고 물로 세척하고, DCM에 용해시키고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔류물을 소량의 DCM에 용해시키고, 실리카겔 컬럼에 로딩한 후, 0-10% MeOH/DCM으로 용출하여, 연황색 거품 0.60g(수율 65%)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C46H62N4O14에 대한 계산치 [M+H]+ 895.43; 실측치, 895.40.
실시예 197. (20R,21R)-20,21-비스(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3,19,22-트리옥소-1-페닐-2,6,9,12,15-펜타옥사-18,23-디아자헵타코산-27-오익산(205)의 합성.
화합물 204(0.60g, 0.67mmol, 1.0eq)를 5mL의 DCM에 용해시키고, 5mL의 TFA와 함께 실온에서 3시간 동안 교반하고, 반응 완료를 LCMS로 모니터링하였다. DCM을 제거하고 잔류물을 DCM과 함께 3회 공-증발시키고, 고진공 펌프에 두었다. 조 생성물을 소량의 DCM에 용해시키고 실리카겔 컬럼에 로딩한 후, 15-20% MeOH/DCM으로 용출시켰다. 분획물을 합치고 농축하여, 0.34g의 백색 거품(수율 60%)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C42H54N4O14에 대한 계산치 [M+H]+ 839.36; 실측치, 839.45.
실시예 198. 1-벤질 25-(퍼플루오로페닐)(18R,19R)-18,19-비스(((벤질-옥시)카르보닐)아미노)-17,20-디옥소-4,7,10,13-테트라옥사-16,21-디아자펜타코산디오에이트(206)의 합성.
화합물 205(0.34g, 0.40mmol, 1.0eq)를 10mL DCM에 용해시키고, 여기에 펜타플루오로페놀(0.081g, 0.44mmol, 1.1eq) 및 EDC(0.38g, 2.0mmol, 5.0eq)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반한 후, 물(2 x 10mL) 및 염수(20mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 농축하였다. 조 생성물을 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS-ESI (m/z): 계산치. C48H53 F5N4O14에 대한 계산치 [M+H]+ 1561.6; 실측치, 1561.6.
실시예 199. 화합물 207의 합성.
이전 단계의 조 생성물(0.40mmol, 1.0eq)을 10mL DMF에 용해시키고, 빙수조에서 냉각시켰다. 여기에, 화합물 183(0.39g,0.4mmol,1.0eq) 및 DIPEA(0.15g, 1.2mmol, 3.0eq)를 차례로 첨가하였다. 빙수조에서 1시간 동안 교반한 후, 반응물을 농축하고, 소량의 DCM에 재용해하고, 실리카겔 컬럼에 로딩하고, 0-20% MeOH/DCM으로 용출하여, 무색 오일(0.40g, 58% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C81H107N15O26S에 대한 계산치 [M+2H]2+: 869.86; 실측치, 869.96.
실시예 200. 화합물 208의 합성.
화합물 207(0.40g, 0.23mmol, 1.0eq)을 5mL 메탄올에 용해시키고, 드라이 팔라듐 탄소(0.1g, 10%wt)를 첨가하고, 반응 플라스크를 비우고 H2로 3회 다시 채웠다. 반응 혼합물을 H2하에 밤새 교반하고, 여과하고, 여과액을 농축하여, 0.32g의 조 물질을 얻었고, 이는 다음 반응에 직접 사용되었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C58H89N15O22S에 대한 계산치 [M+2H]2+ 690.80; 실측치, 690.85.
실시예 201. 화합물 209의 합성.
이전 단계의 조 생성물(0.32g, 0.23mmol, 1.0eq)을 2mL의 에탄올에 용해시키고, 0.2mL의 0.1M NaH2PO4 N-(4-말레이미도부티릴옥시)숙신이미드(0.19g, 0.69mmol, 3.0eq)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 밤새 교반한 후, 농축하고 DCM에 재용해하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 농축하였다. 잔류물을 소량의 DCM에 용해시키고, 실리카겔 컬럼에 로딩하고, 0-20% MeOH/DCM으로 용출하여, 무색 오일(0.13g, 33% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C74H103N17O28S에 대한 계산치 [M+2H]2+ 855.84; 실측치, 855.86.
실시예 202. 디-tert-부틸(6S,13S)-9,10-비스(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-5,8,11,14-테트라옥소-6,13-비스(4-(((2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐)아미노)부틸)-4,7,12,15-테트라아자옥타데칸디오에이트(211)의 합성.
DMA(60mL) 중의 tert-부틸 (S)-3-(2-아미노-6-(((2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐)아미노)헥사미도)프로파노에이트(6.88g, 14.4mmol) 및 2,3-비스(((벤질옥시)카르보닐)아미노)숙신산(5.00g, 12.0mmol)의 용액에, EDC·HCl(2.76g, 14.4mmol) 및 DIPEA(4.7mL, 26.4mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 후, 디클로로메탄 150mL로 희석하고, 분별 깔대기에 물 100mL를 부었다. 유기상을 분리하고, 염수(2 x 50mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 농축하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(10-80% 에틸 아세테이트/석유 에테르)로 정제하여, 표제 화합물 211(13.0g, 85% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C52H72Cl6N8O16에 대한 계산치 [M+H]+ 638.16; 실측치, 638.18.
실시예 203. 디-tert-부틸(6S,13S)-9,10-디아미노-5,8,11,14-테트라옥소-6,13-비스(4-(((2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐)아미노)부틸)-4,7,12,15-테트라아자옥타데칸디오에이트(212)의 합성.
메탄올(50mL) 중의 화합물 211(12.4g, 9.72mmol)의 용액에, 수소화 병 중의 Pd/C(10wt%, 0.10g)를 첨가하였다. 병을 비우고 수소로 3회 다시 채운 후, 혼합물을 2시간 동안 진탕하고, 셀라이트(여과 보조제)를 통해 여과하고, 여과액을 농축하여, 화합물 212(9.47g, 97% 수율)를 무색 오일로서 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C36H60Cl6N8O12에 대한 계산치 [M+H]+ 1007.25; 실측치, 1007.82.
실시예 204. 디-tert-부틸(6S,13S)-9,10-비스(3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로판아미도)-5,8,11,14-테트라옥소-6,13-비스(4-(((2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐)아미노)부틸)-4,7,12,15-테트라아자옥타데칸디오에이트(213)의 합성.
디클로로메탄(50mL) 중의 화합물 210(9.47g, 9.40mmol)의 용액에, 3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로판산(1.91g, 11.3mmol) 및 EDC·HCl(2.17g, 11.3mmol)을 첨가한 후, 이어서 DIPEA(4.0mL, 23.5mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 물(50mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(3 x 30mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 염수(30mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 컬럼(10-80% 에틸 아세테이트/석유 에테르)으로 정제하여, 무색 오일(9.49g, 77% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C50H70Cl6N10O18에 대한 계산치 [M+2H]2+ 655.15; 실측치, 655.10.
실시예 205. (6S,13S)-9,10-비스(3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로판아미도)-5,8,11,14-테트라옥소-6,13-비스(4-(((2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐)아미노)부틸)-4,7,12,15-테트라아자옥타데칸디오익산(214)의 합성.
THF(15mL) 중의 화합물 213(9.49g, 7.60mmol)의 용액을 4N HCl(2mL)로 0℃에서 30분 동안 처리한 후, 농축하고 짧은 실리카겔 컬럼에 로딩하고 O-15% 메탄올/디클로로메탄으로 용출시켜, 무색 오일(8.50g, 93% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C42H54Cl6N10O18에 대한 계산치 [M+2H]2+ 599.08; 실측치, 599.10.
실시예 206. 화합물 215의 합성.
DMF(1mL) 중의 화합물 183(10.0mg, 0.0109mmol) 및 화합물 214(6.5mg, 0.00545mmol)의 용액에, TBTU(3.50mg, 0.0109mmol) 및 DIPEA(2.0μL, 0.0109mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 고진공 하에서 DMF를 제거한 후, 잔류물을 분취용 HPLC(아세토니트릴/물)로 정제하여, 무색 오일(14.0 mg)을 얻었다. 이 오일을 THF(1.0mL)에 용해시키고 TBAF(THF 중 1.0M, 35μL)로 0°C에서 30분 동안 처리한 후, 농축하고 짧은 실리카겔 컬럼(0-10% 메탄올/디클로로메탄)으로 정제하여, 무색 오일(10.0mg, 34% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C114H158N32O38S2에 대한 계산치 [M+3H]3+ 883.36; 실측치, 883.36.
실시예 207. tert-부틸((S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31-옥소-2,5,8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32-아자옥타트리아콘탄-38-오일)-L-알라닐-L-알라닐-L-알라니네이트(216)의 합성.
화합물 134(1.70g, 1.92mmol) 및 4-말레이미도부탄산(0.35g, 1.92mmol)을 DCM 20mL에 용해시킨 후, EDC·HCl(0.74g)을 첨가하였다. 0℃에서 2시간 동안 교반한 후, 반응물을 50mL의 DCM으로 희석하고, 50mL의 물, 50mL의 염수로 세척하고, 농축하여, 백색 고체(1.9g, 94% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C48H85N6O19에 대한 계산치[M+H]+1049.58; 실측치, 1049.58.
실시예 208. ((S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31-옥소-2,5,8,11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32-아자옥타트리아콘탄-38-오일)-L-알라닐-L-알라닐-L-알라닌(217)의 합성.
화합물 216(1.9g, 1.81mmol)을 15mL의 DCM 및 15mL의 TFA에 용해시켰다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응물을 농축시킨 후, 분취용 HPLC로 정제하여, 무색 액체(1.1g, 63% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C44H77N6O19에 대한 계산치[M+H]+993.52; 실측치, 993.52.
실시예 209. 2,5-디옥소피롤리딘-1-일((S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31-옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32-아자옥타트리아콘탄-38-오일)-L-알라닐-L-알라닐-L-알라니네이트(218)의 합성.
화합물 217(1.1g, 1.14mmol)을 40mL의 DCM에 용해시키고, NHS(0.21g, 1.82mmol) 및 EDC·HCl(0.45g, 2.35mmol)을 첨가하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응물을 물 50mL, 염수 50mL로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하여, 백색 고체(1.0g, 100% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C48H80N7O21에 대한 계산치[M+H]+1090.53; 실측치, 1090.55.
실시예 210. (2S,4R)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-(3-((37S,40S,43S,46S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40,43,46-트리메틸-31,38,41,44-테트라옥소-2,5,8,11,14,17,20,23, 26, 29-데카옥사-32, 39, 42, 45-테트라아자헵타테트라콘탄-47-아미도)-4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산(219)의 합성.
화합물 218(1.00g, 0.91mmol) 및 화합물 77(0.43g, 1.27mmol)을 THF 40mL에 용해시켰다. 50℃에서 밤새 교반한 후, 반응물을 농축하고, 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여, 무색 액체(0.50g, 33% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C61H101N8O23에 대한 계산치[M+H]+1313.69; 실측치, 1313.69.·
실시예 211. (2S,4R)-4-아미노-5-(3-((37S,40S,43S,46S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40,43,46-트리메틸-31,38,41,44-테트라옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32, 39, 42, 45-테트라아자헵타테트라콘탄-47-아미도)-4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산(220)의 합성.
화합물 219(286mg, 0.22mmol)를 10mL의 DCM 및 10mL의 TFA에 용해시켰다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응물을 농축하여, 연황색 액체(563mg, 100% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C56H93N8O21에 대한 계산치[M+H]+1213.64; 실측치, 1213.64.
실시예 212. (2S,4R)-4-(2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-5-(3-((37S, 40S, 43S, 46S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40,43,46-트리메틸-31,38,41,44-테트라옥소-2,5,8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39, 42, 45-테트라아자헵타테트라콘탄-47-아미도)-4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산(221)의 합성.
화합물 220(260.0mg, 0.21mmol) 및 Tub-1(178mg, 0.26mmol)을 DMF 10mL에 용해시키고, N,N-디이소프로필에틸아민(499mg, 3.86mmol)을 pH~9까지 첨가하였다. 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 반응물을 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 연황색 액체(407mg, 100% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C81H133N12O26S에 대한 계산치[M+H]+1721.91; 실측치, 1721.91.
실시예 213. tert-부틸 (S)-(S)-(37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31, 38-디옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32,39-디아자트리테트라콘탄-43-오일)글리실글리시네이트(222)의 합성.
화합물 27(6.10g, 0.007 mol)을 DCM(80mL)에 용해시키고, 펜타플루오로페놀(1.83g, 0.010 mol) 및 N,N'-디이소프로필카보디이미드(1.67g, 0.013 mol)를 첨가하였다. 1시간 동안 교반한 후, 4-말레이미도부탄산(1.22g, 0.007mol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(2.2mL, 0.013mol)을 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하고, 100mL의 물, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하고 실리카겔 컬럼(DCM/MeOH=100/12)으로 정제하여, 화합물 222(6.85g, 100% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z):계산치. C47H82N6O19에 대한 계산치 [M+H]+　1035.56; 실측치, 1035.61 .　
실시예 214. (S)-(S)-(37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31,38-디옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39-디아자트리테트라콘탄-43-오일)글리실글리신(223)의 합성.
화합물 222(6.85g, 0.007mol)를 DCM(30mL) 및 TFA(15mL)에 용해시켰다. 반응물을 밤새 교반하고, 농축하고, 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 223(6.03g, 93% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C43H74N6O19에 대한 계산치 [M+H]+　 979.50; 실측치, 980.21 .　
실시예 215. 2,5-디옥소피롤리딘-1-일(S)-(S)-(37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31, 38-디옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39-디아자트리테트라콘탄-43-오일)글리실글리시네이트(224)의 합성.
화합물 223(3.52g, 0.004mol)을 DCM(40mL)에 용해시키고, N-히드록시숙신이미드(0.54g, 0.005mol) 및 EDC·HCl(1.24g, 0.006mol)을 첨가하였다. 반응물을 1.5시간 동안 교반하고, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하여, 화합물 224(3.20g, 83% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C47H77N7O21에 대한 계산치[M+H]+ 1076.52; 실측치, 1076.69.　
실시예 216. (2S,4R)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-(3-((S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31, 38, 43, 46-테트라옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39, 44, 47-테트라아자노네이트트라콘탄-49-아미도)-4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산(225)의 합성.
화합물 224(3.20g, 0.003mol) 및 화합물 77(1.21g, 0.004mol)을 THF(30mL)에 용해시키고, 25℃에서 2일 동안 교반하고, 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 225(2.66g, 69% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C60H98N8O23에 대한 계산치 [M+H]+1299.67; 실측치, 1300.30.　
실시예 217. (2S,4R)-4-아미노-5-(3-((S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31, 38, 43, 46-테트라옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39, 44, 47-테트라아자노네이트트라콘탄-49-아미도)-4-히드록시페닐)-2-메틸펜탄산(226)의 합성.
화합물 225(2.66g, 0.002mol)를 DCM(10mL) 및 TFA(20mL)에 용해시켰다. 반응물을 2시간 동안 교반한 후, 농축시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 226(2.46g, 100% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C55H90N8O21에 대한 계산치 [M+H]+　1199.62; 실측치, 1199.92.　
실시예 218. (2S,4R)-4-(2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-5-(3-((S)-37-(4-(2, 5-디옥소-2, 5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31, 38, 43, 46-테트라옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29 -데카옥사-32, 39, 44, 47-테트라아자노네이트트라콘탄-49-아미도)-4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산(227)의 합성.
화합물 226(2.46g, 0.002mol)및 Tub-1(1.71g, 0.002mol)을 DMF(30mL)에 용해시키고, N,N-디이소프로필에틸아민(0.339mL, 0.002mol)을 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하고 농축하고, 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 227(1.225g, 35% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C80H130N12O26S에 대한 계산치 [M+H]+　1707.89; 실측치, 1708.42.　
실시예 219. tert-부틸 (S)-(S)-(S)-(37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31, 38-디옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32,39-디아자트리테트라콘탄-43-오일)글리실글리실글리시네이트(228)의 합성.
화합물 41(1.85g, 2.00mmol) 및 4-말레이미도부탄산(0.46g, 2.50mmol)을 DCM 20mL에 용해시킨 후, EDC·HCl(0.58g, 3.00mmol)을 첨가하였다. 0℃에서 2시간 동안 교반한 후, 반응물을 DCM 50mL로 희석하고, 50mL의 물, 50mL의 염수로 세척하고, 농축하여, 백색 고체(2.10g, 95% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C49H85N7O20에 대한 계산치 [M+H]+1092.58; 실측치, 1092.58.
실시예 220. (S)-(S)-(S)-(37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31, 38-디옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39-디아자트리테트라콘탄-43-오일)글리실글리실글리신(229)의 합성.
화합물 228(2.10g, 1.92mmol)을 DCM(30mL) 및 TFA(15mL)에 용해시켰다. 반응물을 밤새 교반하고, 농축하고, 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 229(1.83g, 92% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C45H75N7O20에 대한 계산치 [M+H]+　1036.52; 실측치, 1036.55.　
실시예 221. 2,5-디옥소피롤리딘-1-일(S)-(S)-(S)-(37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31, 38-디옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26,29-데카옥사-32,39-디아자트리테트라콘탄-43-오일)글리실글리실글리시네이트(230)의 합성.
화합물 229(500mg, 0.483mmol)를 DCM(10mL)에 용해시키고, N-히드록시숙신이미드(67mg, 0.579mmol) 및 EDC·HCl(139mg, 0.724mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 6시간 동안 교반하고, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하여, 화합물 230(546mg, 99% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C49H80N8O22에 대한 계산치 [M+H]+　1133.54; 실측치, 1134.01.　
실시예 222. (2S,4R)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-(3-((S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31, 38, 43, 46, 49-펜타옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39, 44, 47, 50-펜타아자도펜타콘탄-52-아미도)-4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산(231)의 합성.
화합물 230(360mg, 0.318mmol) 및 화합물 77(129mg, 0.381mmol)을 THF(15mL) 및 DCM(10mL)에 용해시켰다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하고, 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 231(200mg, 0.147mmol, 46% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C62H101N9O24에 대한 계산치 [M+H]+　1356.70; 실측치, 1357.00.　
실시예 223. (2S,4R)-4-아미노-5-(3-((S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31, 38, 43, 46, 49-펜타옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39, 44, 47, 50-펜타아자도펜타콘탄-52-아미도)-4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산(232)의 합성.
화합물 231(200mg, 0.147mmol)을 DCM(4mL) 및 TFA(2mL)에 용해시켰다. 2시간 동안 교반한 후, 반응 용액을 농축하여, 232(185mg, 100% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C57H93N9O22에 대한 계산치[M+H]+　1256.64; 실측치, 1257.07.　
실시예 224. (2S,4R)-4-(2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-5-(3-((S)-37-(4-(2, 5-디옥소-2, 5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31, 38, 43, 46, 49-펜타옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26 , 29-데카옥사-32, 39, 44, 47, 50-펜타아자도펜타콘탄-52-아미도)-4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산(233)의 합성.
화합물 232(185mg, 0.147mmol) 및 Tub-1(102mg, 0.147mmol)을 DMF(2mL)에 용해시키고, N,N-디이소프로필에틸아민(0.097mL, 0.589mmol)을 첨가하였다. 반응물을 밤새 교반하고 분취용 HPLC로 직접 정제하여, 화합물 233(107mg, 41% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C82H133N13O27S에 대한 계산치 [M+H]+　1764.92; 실측치, 1765.19.
실시예 225. tert-부틸(S)-2-((4-(37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31,38,43-트리옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,39,44-트리아자헥사테트라콘탄-46-아미도)벤질)옥시)아세테이트(236)의 합성.
화합물 234(8.40g, 9.11mmol) 및 화합물 235(2.59g, 10.9mmol)을 DCM 60mL에 용해시켰다. EDC·HCl(3.48g, 18.2mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(3.49g, 18.2mmol)을 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 1시간 동안 교반하고, 100mL의 물로 세척하고, 수성상을 50mL의 DCM으로 추출하였다. 유기상을 합치고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 농축시켰다. 조 생성물을 실리카겔 컬럼으로 정제하고 에틸 아세테이트/석유 에테르로 용출하고, 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 236을 갈색 액체(3.0g, 29% 수율)로 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C54H89N6O20에 대한 계산치[M+H]+1141.61; 실측치, 1141.61.
실시예 226. (S)-2-((4-(37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31, 38, 43-트리옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39, 44-트리아자헥사테트라콘탄-46-아미도)벤질)옥시)아세트산(237)의 합성.
화합물 236(3.0g, 2.63mmol)을 30mL의 포름산과 30mL의 DCM에 용해시켰다. 반응물을 40-50℃에서 3시간 동안 교반하고, 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 237을 무색 액체(1.2g, 42% 수율)로서 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C50H81N6O20에 대한 계산치[M+H]+1085.54; 실측치, 1085.54.
실시예 227. 2,5-디옥소피롤리딘-1-일(S)-2-((4-(37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31, 38, 43-트리옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39, 44-트리아자헥사테트라콘탄-46-아미도)벤질)옥시) 아세테이트(238)의 합성.
화합물 237(450mg, 0.41mmol) 및 N-히드록시숙신이미드(71mg, 0.617mmol)를 DCM 10mL에 용해시킨 후, EDC·HCl(126mg, 0.657mmol)을 첨가하였다. 실온에서 3시간 동안 교반한 후, 반응물을 물 30mL, 염수 30mL로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하여, 238을 무색 액체(0.71g, 100% 수율)로서 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C54H84N7O22에 대한 계산치[M+H]+1182.56; 실측치, 1182.56.
실시예 228. (2S,4R)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-(3-(2-((4-((S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31,38,43-트리옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,39,44-트리아자헥사테트라콘탄-46-아미도)벤질)옥시)아세트아미도)-4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산(239)의 합성.
화합물 238(710mg, 0.41mmol) 및 화합물 77(174mg, 0.51mmol)을 THF 10mL에 용해시킨 후, 50-55℃에서 밤새 교반하였다. 이어서, 반응물을 농축하고, 30mL의 DCM으로 희석하고, 30mL의 물, 30mL의 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 무색 액체(114mg, 20% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C67H105N8O24에 대한 계산치[M+H]+1405.72; 실측치, 1405.72.
실시예 229. (2S,4R)-4-아미노-5-(3-(2-((4-((S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31,38,43-트리옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,39,44-트리아자헥사테트라콘탄-46-아미도)벤질)옥시)아세트아미도)-4-히드록시페닐)-2-메틸펜탄산(240)의 합성.
화합물 239(100mg, 0.07mmol)를 10mL의 DCM 및 3mL의 TFA에 용해시켰다. 0℃에서 2시간 동안 교반한 후, 반응물을 농축하여, 무색 액체(0.50g, 100% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C62H97N8O22에 대한 계산치[M+H]+13.5.66; 실측치, 1305.66.
실시예 230. (2S,4R)-4-(2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-5-(3-(2-((4-((S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31, 38, 43-트리옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39, 44-트리아자헥사테트라콘탄-46-아미도)벤질)옥시)아세트아미도)-4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산(241)의 합성.
화합물 239(92.8mg, 0.07mmol)과 Tub-1(60.2mg, 0.08mmol)을 DMF 10mL에 용해시킨 후, N,N-디이소프로필에틸아민(445mg, 3.44mmol)을 첨가하였다. 0℃에서 0.5시간 동안, 그리고 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 반응물을 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 연황색 고체를 얻었다(75mg, 58% 수율). MS-ESI (m/z): 계산치. C87H137N12O27S에 대한 계산치[M+H]+1813.94; 실측치, 1813.94.
실시예 231. tert-부틸(S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31,38,43,48-테트라옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29, 49-운데카옥사-32, 39, 44, 47-테트라아자헨펜타콘탄-51-오에이트(244)의 합성.
화합물 243(2.80g, 12.8mmol) 및 화합물 242(4.44g, 5.13mmol)를 DCM(50mL)에 용해시키고, HATU(2.14g, 5.64mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(2.5mL, 15.4mmol)을 첨가하였다. 반응물을 3시간 동안 교반한 후, 농축하고, 잔류물을 실리카겔 컬럼(DCM/MeOH=100/8)으로 정제하여, 화합물 244(4.70g, 86% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C48H84N6O20에 대한 계산치[M+H]+　1065.57; 실측치, 1065.94.　
실시예 232. (S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31,38,43,48-테트라옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29, 49-운데카옥사-32, 39, 44, 47-테트라아자헨펜타콘탄-51-오익산(245)의 합성.
화합물 244(4.70g, 0.004mol)를 DCM(40mL) 및 TFA(20mL)에 용해시켰다. 반응물을 밤새 교반하고, 농축하고, 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 245(1.00g, 22% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C44H76N6O20에 대한 계산치 [M+H]+　1009.51; 실측치, 1009.72.　
실시예 233. (2S,4R)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-(3-((S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31, 38, 43, 48-테트라옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29, 49-운데카옥사-32, 39, 44, 47-테트라아자헨펜타콘탄-51-아미도)-4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산(246)의 합성.
화합물 245(343mg, 0.340mmol)를 DCM(10mL)에 용해시키고, N-히드록시숙신이미드(47mg, 0.408mmol) 및 EDC·HCl(98mg, 0.510mmol)을 첨가하였다. 반응물을 4시간 동안 교반한 후, 염수(5mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 농축하였다. 잔류물을 무수 THF 20mL에 용해시키고, 화합물 77(138mg, 0.408mmol)을 첨가하였다. 반응물을 밤새 교반하고, 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 246(177mg, 39% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C61H100N8O24에 대한 계산치[M+H]+　1329.69; 실측치, 1329.98.　
실시예 234. (2S,4R)-4-아미노-5-(3-((S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31, 38, 43, 48-테트라옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29, 49-운데카옥사-32, 39, 44, 47-테트라아자헨펜타콘탄-51-아미도)-4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산(247)의 합성.
화합물 246(177mg, 0.133mol)을 DCM(4mL) 및 TFA(2mL)에 용해시켰다. 반응물을 1시간 동안 교반하고, 농축하여, 화합물 247(0.16g, 97% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C56H92N8O22에 대한 계산치 [M+H]+　1229.63; 실측치, 1231.31.　
실시예 235. (2S,4R)-4-(2-((6S,9R,11R)-6,9-디이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-5-(3-((S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31, 38, 43, 48-테트라옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29, 49-운데카옥사-32, 39, 44, 47-테트라아자헨펜타콘탄-51-아미도)-4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산(248)의 합성.
화합물 247(160mg, 0.130mmol) 및 Tub-1(90mg, 0.130mmol)을 DMF(2mL)에 용해시키고, N,N-디이소프로필에틸아민(17mg, 0.130mmol)을 첨가하였다. 반응물을 4시간 동안 교반하고 분취용 HPLC로 직접 정제하여, 화합물 248(127mg, 56% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C81H132N12O27S에 대한 계산치 [M+H]+　1737.90; 실측치, 1738.58.
실시예 236. tert-부틸(6S, 9S, 12S, 15S)-6-(3-메톡시-3-옥소프로필)-2,2,9,12,15-펜타메틸-4,7,10,13-테트라옥소-3-옥사-5,8,11,14-테트라아자헥사데칸-16-오에이트(249)의 합성.
화합물 132(4.00g, 0.014mol) 및 Boc-Glu(OMe)-OH(3.64g, 0.014mol)를 DCM(100mL)에 용해시키고, HATU(7.94g, 0.021mol) 및 TEA(3.870mL, 0.028mol)를 첨가하였다. 반응물을 1.5시간 동안 교반하고, 염수(2 x 150mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 농축하여, 화합물 249(7.39g, 100% 수율)를 얻었고, 이는 다음 단계에서 추가 정제 없이 직접 사용되었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C24H42N4O9에 대한 계산치[M+H] +　531.30; 실측치, 531.26.　
실시예 237. ((S)-2-아미노-5-메톡시-5-옥소펜타노일)-L-알라닐-L-알라닐-L-알라닌(250)의 합성.
화합물 249(7.39g, 0.014mol)를 DCM(20mL) 및 TFA(20mL)에 용해시켰다. 반응물을 밤새 교반하고, 농축하여, 화합물 250(5.21g, 100% 수율)을 얻었고, 이는 다음 단계에서 추가 정제 없이 직접 사용되었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C15H26N4O7에 대한 계산치[M+H]+　375.18; 실측치, 375.22.　
실시예 238. ((S)-2-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-5-메톡시-5-옥소펜타노일)-L-알라닐-L-알라닐-L-알라닌(251)의 합성.
화합물 250(1.38g, 0.004mol)을 DCM(60mL)에 용해시키고, N,N-디이소프로필에틸아민(1.2mL, 0.007mol)을 첨가한 후, 이어서 4-말레이미도부티르산 N-히드록시숙신이미드 에스테르(2.06g, 0.008mol)를 첨가하였다. 3시간 동안 교반한 후, 반응물을 물(2 x 100mL)로 추출하고, 수성상을 농축하여, 백색 고체(1.40g, 70% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C23H33N5O10에 대한 계산치[M+H]+　540.22; 실측치, 540.29.　
실시예 239. 2,5-디옥소피롤리딘-1-일(2S, 5S, 8S, 11S)-16-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-11-(3-메톡시-3-옥소프로필)-2,5,8-트리메틸-4,7,10,13-테트라옥소-3,6,9,12-테트라아자헥사데카노에이트(252)의 합성.
화합물 251(1.40g, 0.003mol)을 DCM(100mL)에 용해시키고, NHS(0.33g, 0.003mol) 및 EDC·HCl(0.99g, 0.005mol)을 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하고, 염수 50mL로 세척하고, 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 농축하여, 화합물 252(1.65g, 100% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C27H36N6O12에 대한 계산치[M+H]+　637.24; 실측치, 637.36.　
실시예 240. (2S,4R)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-(3-((6S,9S,12S,15S)-6-(4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-9,12,15-트리메틸-3,7,10,13-테트라옥소-2-옥사-8,11,14-트리아자헥사데칸-16-아미도)-4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산(253)의 합성.
화합물 252(1.65g, 0.003mol) 및 화합물 77(0.88g, 0.003mol)을 THF(50mL)에 용해시키고, 50℃에서 밤새 반응시켰다. 농축하고, 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 253(0.17g, 7.6% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C40H57N7O14에 대한 계산치[M+H]+　860.40; 실측치, 860.44.
실시예 241. (2S,4R)-4-아미노-5-(3-((6S,9S,12S,15S)-6-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-9,12,15-트리메틸-3,7,10,13-테트라옥소-2-옥사-8,11,14-트리아자헥사데칸-16-아미도)-4-히드록시페닐)-2-메틸펜탄산(254)의 합성.
화합물 253(0.17g, 0.198mmol)을 DCM(4mL) 및 TFA(4mL)에 용해시켰다. 반응물을 1시간 동안 교반하고, 농축하여, 화합물 254(0.15g, 100% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C35H49N7O12에 대한 계산치 [M+H]+　760.34; 실측치, 760.42.　
실시예 242. (2S,4R)-4-(2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복스아미도)-5-(3-((6S, 9S, 12S, 15S)-6-(4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-9,12,15-트리메틸-3,7,10,13-테트라옥소-2-옥사-8, 11,14-트리아자헥사데칸-16-아미도)-4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산(255)의 합성.
화합물 254(0.14g, 0.20mmol) 및 Tub-1(0.15g, 0.21mol)을 DMF(2mL)에 용해시키고, N,N-디이소프로필에틸아민(0.098mL, 0.001mol)을 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하고, 분취용 HPLC로 직접 정제하여, 화합물 255(55mg, 22% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C60H89N11O17S에 대한 계산치 [M+H]+　1268.62; 실측치, 1268.94.
실시예 243. (2S,4R)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-(3-((37S,40S,43S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40-이소프로필-43-메틸-31, 38, 41-트리옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29 -데카옥사-32,39,42-트리아자테트라콘탄-44-아미도)-4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산(256)의 합성.
DCM(20mL) 중의 4-말레이미도부티르산 N-하이드록시숙신이미드 에스테르(2.6mmol)의 용액에, 화합물 79(1.95g, 1.7mmol) 및 N-메틸모르폴린(0.53g, 5.2mmol)을 첨가하였다. 실온에서 밤새 교반한 후. 반응물을 염수(2 x 20mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 농축하였다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여, 백색 고체(1.8g, 80% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C60H99N7O22에 대한 계산치 [M+H]+ 1270.68; 실측치,1271.24.
실시예 244. (2S,4R)-4-아미노-5-(3-((37S,40S,43S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40-이소프로필-43-메틸-31,38,41-트리옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,39,42-트리아자테트라콘탄-44-아미도)-4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산(257)의 합성.
화합물 256(1.8g, 1.4mmol)을 DCM(10mL) 및 TFA(10mL)에 용해시켰다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 농축하고, 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 257(1.6g, 95% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C55H91N7O20에 대한 계산치[M+H]+　1170.63; 실측치,1171.10.
실시예 245. (2S,4R)-4-(2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-5-(3-((37S,40S,43S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40-이소프로필-43-메틸-31, 38, 41-트리옥소-2, 5, 8, 11, 14 , 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39, 42-트리아자테트라콘탄-44-아미도)-4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산(258)의 합성.
화합물 257(520mg, 0.44mmol) 및 Tub-1(320mg, 0.44mmol)을 DMF 5mL에 용해시키고, N,N-디이소프로필에틸아민(90mg, 0.67mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 0℃에서 2시간 동안 교반한 후, 반응물을 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 회백색 고체(435mg, 58% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C80H131N11O25S에 대한 계산치[M+H]+　1678.90; 실측치,1679.56.
실시예 246. (2S,4R)-4-아미노-5-(4-하이드록시-3-니트로페닐)-2-메틸펜탄산(260)의 합성.
화합물 259(2.0g, 5.43mmol)를 메탄올성 HCl(4M, 20mL)에 용해시키고, 3시간 동안 교반한 후, 농축하여, 황색 오일(1.66g, 100% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C12H16N2O5에 대한 계산치[M+H]+269.12; 실측치,269.32.
실시예 247. (2S,4R)-4-(2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-5-(4-히드록시-3-니트로페닐)-2-메틸펜탄산(261)의 합성.
화합물 260(1.5g, 5.59mmol) 및 Tub-1(3.9g, 5.59mmol)을 DMF 30mL에 용해시킨 후, 0℃로 냉각하고, N,N-디이소프로필에틸아민(1.5g, 11.2mmol)을 첨가하였다. 0℃에서 2시간 동안 교반한 후, 반응물을 DCM(50mL)으로 희석하고, 염수(4 x 50mL)로 세척하고, 건조시키고, 여과 및 농축하고, 분취용 HPLC로 정제하여, 연황색 고체(3.5g, 80% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C37H56N6O10S에 대한 계산치[M+H]+777.38; 실측치,777.58.
실시예 248. 벤질(2S,4R)-5-(4-(벤질옥시)-3-니트로페닐)-4-(2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-2-메틸펜타노에이트 (262)의 합성.
화합물 261(3.5g, 4.51mmol) 및 벤질 브로마이드(2.3g, 13.5mmol)를 드라이 DMF(60mL)에 용해시키고, 빙수조에서 0℃로 냉각시켰다. 나트륨 수소(540mg, 60wt%)를 나누어 첨가하고, 첨가 후, 반응물을 실온으로 가온하고 밤새 교반하였다. 용액을 DCM(100mL)으로 희석하고, 염수(4×100mL)로 세척하였다. 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여과액을 농축하고 실리카겔 컬럼(DCM/MeOH=20:1~10:1)으로 정제하여, 황색 고체(2.8g, 65% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C51H68N6O10S에 대한 계산치[M+H]+957.47; 실측치,957.85.
실시예 249. 벤질(2S,4R)-5-(3-아미노-4-(벤질옥시)페닐)-4-(2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-2-메틸펜타노에이트(263)의 합성.
화합물 262(2.8g, 2.93mmol)를 95% 수율 에탄올(50mL)에 용해시키고, 염화암모늄(1.6g, 29.25mmol) 및 철 분말(1.6g, 29.25mmol)을 첨가하고, 반응물을 환류 하에 밤새 가열하였다. 용액을 DCM(100mL)으로 희석하고 염수(200mL)로 세척하였다. 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여과액을 농축하고, 실리카겔 컬럼(DCM/MeOH=1:0~20:1)으로 정제하여, 황색 고체(2.3g, 85% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C51H70N6O8S에 대한 계산치[M+H]+　927.51; 실측치,927.65.
실시예 250. 벤질(2S,4R)-5-(3-((S)-37-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-31,38,41-트리옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29, 44-운데카옥사-32,39,42-트리아자헵타테트라콘탄-47-아미도)-4-(벤질옥시)페닐)-4-(2 -((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-2-메틸펜타노에이트(265)의 합성.
화합물 264(750mg, 0.75mmol) 및 화합물 263(700mg, 0.75mmol)을 DMC(20mL)에 용해시키고, PyBrOP(360mg, 0.85mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(100mg, 0.75mmol)을 첨가하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 용액을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여과액을 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 컬럼(DCM/MeOH=20:1~10:1)으로 정제하여, 황갈색 고체(420mg, 29% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C99H142N10O25S에 대한 계산치[M+H]+1903.99; 실측치,1904.53.
실시예 251. 벤질(2S,4R)-5-(3-((S)-37-아미노-31,38,41-트리옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,44-운데카옥사-32,39,42-트리아자헵타테트라콘탄-47-아미도)-4-(벤질옥시)페닐)-4-(2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)- 2-메틸펜타노에이트(266)의 합성.
화합물 265(420mg, 0.22mmol)를 이소프로판올(10mL)에 용해시키고, 탄소상 팔라듐(100mg, 10wt%)을 첨가한 다음, 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채우고, 50℃로 가열하고, 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여과액을 농축하고, 분취용 HPLC로 정제하여, 백색 고체(110mg, 33% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C70H120N10O23S에 대한 계산치[M+H]+　1501.83; 실측치,1502.12.
실시예 252. (2S,4R)-4-(2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-5-(3-((S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31, 38, 41-트리옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29, 44 -운데카옥사-32, 39, 42-트리아자헵타테트라콘탄-47-아미도)-4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산(267)의 합성.
DCM(5mL) 중의 화합물 266(110mg, 0.07mmol) 및 4-말레이미도부티르산 N-히드록시숙신이미드 에스테르(21mg, 0.07mmol)의 용액에, N-메틸모르폴린(10mg, 0.07mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하고, 농축한 후, 분취용 HPLC(물/아세토니트릴)로 정제하여, 화합물 267(15mg, 12% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C78H127N11O26S에 대한 계산치[M+H]+　1666.87; 실측치,1667.52.
실시예 253. 2,5-디옥소피롤리딘-1-일(S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜타노에이트(269)의 합성.
200mL의 DCM에 용해된 화합물 268(4.00g, 8.06mmol)의 용액에, NHS(1.39g, 12.10mmol) 및 EDC·HCl(3.09g, 16.13mmol)을 첨가하였다. 반응물을 4시간 동안 교반하고, 물 100mL로 희석하고, 여과하여, 4.40g의 백색 고체(92% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C30H35N5O8에 대한 계산치[M+H]+　594.25; 실측치, 594.25.
실시예 254. (2S,4R)-5-(3-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-4-히드록시페닐)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-2-메틸펜탄산(270)의 합성.
150mL의 무수 THF에 용해된 화합물 269(2.00g, 3.37mmol) 및 화합물 77(1.25g, 3.70mmol)의 용액을 70℃에서 밤새 가열하였다. 반응물을 농축하고 실리카겔 컬럼(11% MeOH/DCM)에서 정제하여, 적색 고체(0.79g, 29% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C43H56N6O10에 대한 계산치 [M+H]+　817.41; 실측치, 817.32.　
실시예 255. (2S,4R)-5-(3-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-4-히드록시페닐)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-2-메틸펜탄산(271)의 합성.
DMF 중의 화합물 270(0.79g, 0.97mmol)의 용액을 실온에서 10분 동안 피페리딘(0.50mL)과 함께 교반한 후, 농축하고, 5mL의 THF와 함께 공-증발시켜, 화합물 271(0.87g, >100% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C28H46N6O8에 대한 계산치 [M+H]+　595.34; 실측치, 595.35.
시예 256. (2S,4R)-5-(3-((37S,40S,43S)-37-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-40-이소프로필-31,38,41-트리옥소-43-(3-우레이도프로필)-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39, 42-트리아자테트라콘탄-44-아미도)-4-히드록시페닐)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-2-메틸펜탄산(273)의 합성.
20mL의 무수 THF에 용해된 조 화합물 271(0.97mmol) 및 화합물 272(1.34mmol)의 용액을 70℃에서 0.5시간 동안 가열하였다. 반응물을 농축하고 실리카겔 컬럼(13% MeOH/DCM)에서 정제하여, 화합물 273(1.13g, 88% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C63H104N8O22에 대한 계산치[M+H]+　1325.73; 실측치, 1326.28.
실시예 257. (2S,4R)-5-(3-((37S,40S,43S)-37-아미노-40-이소프로필-31,38,41-트리옥소-43-(3-우레이도프로필)-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39, 42-트리아자테트라콘탄-44-아미도)-4-히드록시페닐)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)- 2-메틸펜탄산(274)의 합성.
화합물 273(1.13g, 8.52mmol)을 메탄올(20mL)에 용해시키고, 탄소상 팔라듐(310mg, 10wt%)을 첨가하고, 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채우고, 30℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여과액을 농축하여, 화합물 274(0.77g, 75% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C55H98N8O20에 대한 계산치[M+H]+　1191.69; 실측치, 1192.10.
실시예 258. (2S,4R)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-(3-((37S,40S,43S)-37-(4-(2,5-디옥소-2, 5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40-이소프로필-31, 38, 41-트리옥소-43-(3-우레이도프로필)-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23 , 26, 29-데카옥사-32, 39, 42-트리아자테트라콘탄-44-아미도)-4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산(275)의 합성.
THF(20mL) 중의 화합물 274(0.77g, 6.44mmol) 및 4-말레이미도부티르산 N-하이드록시숙신이미드 에스테르(0.18g, 6.55mmol)의 용액을, 30℃에서 1시간 동안 교반하고, 농축한 다음, 분취용 HPLC(물/아세토니트릴)로 정제하여, 화합물 275(0.66g, 76% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C63H105N9O23에 대한 계산치[M+H]+　1356.73; 실측치, 1356.33.
실시예 259. (2S,4R)-4-아미노-5-(3-((37S,40S,43S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40-이소프로필-31,38,41-트리옥소-43-(3-우레이도프로필)-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사- 32,39,42-트리아자테트라콘탄-44-아미도)-4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산(276)의 합성.
DCM(10mL) 중의 화합물 276(0.66g, 4.86mmol)의 용액을, TFA(10mL)와 함께 40분 동안 교반한 후 농축하여, 조 생성물(1.02g, > 100% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C58H97N9O21에 대한 계산치 [M+H]+　1256.68; 실측치, 1257.23.
실시예 260. (2S,4R)-4-(2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-5-(3-((37S,40S,43S)-37-(4 -(2, 5-디옥소-2, 5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40-이소프로필-31, 38, 41-트리옥소-43-(3-우레이도프로필)-2, 5, 8 , 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39, 42-트리아자테트라콘탄-44-아미도)-4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산(277)의 합성.
화합물 276(0.31g, 2.47mmol) 및 Tub-1(0.17g, 2.49mmol)을 DMF 2mL에 용해시킨 후, N,N-디이소프로필에틸아민(163μL, 0.99mmol)을 첨가하고, 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 277(343mg, 79% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C83H137N13O26S에 대한 계산치 [M+H]+　1764.95; 실측치, 1765.99.
실시예 261. tert-부틸 (S)-(S)-(37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31, 38-디옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39-디아자트리테트라콘탄-43-오일)글리실글리시네이트(278)의 합성.
화합물 234(1.60g, 1.73mmol), 펜타플루오로페놀(0.47g, 2.55mmol), N,N'-디이소프로필카보디이미드(0.43g, 3.40mmol)를 DCM 20mL에 용해시킨 후, 2시간 동안 교반하였다. 그 다음, H-Gly-OtBu(0.32g, 1.91mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(0.45g, 3.47mmol)을 첨가하고, 반응물을 밤새 교반하고, 50mL의 물, 50mL의 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과하고 농축 건조시켰다. 조 생성물을 실리카겔 컬럼으로 정제하여, 화합물 278(1.5g, 83% 수율)을 담황색 액체로 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C47H83N6O19에 대한 계산치[M+H]+1035.56; 실측치, 1035.56.
실시예 262. (S)-(S)-(37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31,38-디옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39-디아자트리테트라콘탄-43-오일)글리실글리신(279)의 합성.
화합물 278(1.50g, 1.45mmol)을 DCM(10mL)에 용해시키고, 20mL의 포름산과 함께 교반하였다. 40℃에서 2시간 동안 교반한 후, 반응물을 농축하여, 화합물 279(1.50g, 100% 수율)를 무색 액체로 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C43H75N6O19에 대한 계산치[M+H]+979.50; 실측치, 979.50.
실시예 263. tert-부틸((2R,4S)-1-(3-((S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31, 38, 43, 46-테트라옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39, 44, 47-테트라아자노네이트트라콘탄-49-아미도) -4-하이드록시페닐)-5-((2-하이드록시에틸)아미노)-4-메틸-5-옥소펜탄-2-일)카바메이트(281)의 합성.
화합물 279(500mg, 0.51mmol) 및 화합물 280(234mg, 0.61mmol)을, DCM 10mL 및 DMF 3mL에 용해시킨 후, 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축하고 실리카 겔 컬럼으로 정제하여, 화합물 281을 담황색 액체로 얻었다(0.22g, 32% 수율). MS-ESI (m/z): 계산치. C62H104N9O23에 대한 계산치[M+H]+1342.72; 실측치, 1342.72.
실시예 264. N-((S)-6-((4-((2-((2-((5-((2R,4S))-2-아미노-5-((2-히드록시에틸)아미노)-4-메틸-5-옥소펜틸)-2-히드록시페닐)아미노)-2-옥소에틸)아미노)-2-옥소에틸)아미노)-4-옥소부틸)아미노)-5-(4-(2,5-디옥소 -2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-6-옥소헥실)-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사엔트리아콘탄-31-아미드(282)의 합성.
화합물 281(0.11g, 0.08mmol)을 6mL의 DCM 및 2mL의 TFA에 용해시켰다. 반응물을 0℃에서 2시간 동안 교반한 후 농축하여, 화합물 282를 담황색 액체로 얻었다(0.10g, 100% 수율). MS-ESI (m/z): 계산치. C57H96N9O21에 대한 계산치[M+H]+1242.66; 실측치, 1242.66.
실시예 265. (1R,3R)-3-((2S,3S)-2-(2-(디메틸아미노)-2-메틸프로판아미도)-N,3-디메틸펜탄아미도)-1-(4-(((2R), 4S)-1-(3-((S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31, 38, 43, 46 -테트라옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39, 44, 47-테트라아자노네이트트라콘탄-49-아미도)-4-하이드록시페닐)-5-((2 -히드록시에틸)아미노)-4-메틸-5-옥소펜탄-2-일)카르바모일)티아졸-2-일)-4-메틸펜틸 아세테이트(283)의 합성.
화합물 282(0.10g, 0.08mmol) 및 Tub-1(61mg, 0.08mmol)을 DMF 5mL에 용해시킨 후, 0℃에서 N,N-디이소프로필에틸아민(125mg, 0.96mmol)을 첨가하여, pH를 ~ 9로 조정하였다. 반응물을 0℃에서 2시간 동안, 그리고 실온에서 1시간 동안 교반하고, 분취용 HPLC로 직접 정제하여, 화합물 283을 담황색 액체로 얻었다(45mg, 31% 수율). MS-ESI (m/z): 계산치. C82H136N13O26S에 대한 계산치[M+H]+1750.94; 실측치, 1750.94.
실시예 266. (2S,4R)-4-(2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4,7-디옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자트리데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-5-(3-((37S,40S,43S)-37-(4-(2, 5-디옥소-2, 5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40-이소프로필-43-메틸-31, 38, 41-트리옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17 , 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39, 42-트리아자테트라콘탄-44-아미도)-4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산(284)의 합성.
DMF(5mL) 중의 화합물 257(300mg, 0.256mmol) 및 Tub-3(175mg, 0.256mmol)의 용액에, N,N-디이소프로필에틸아민(66mg, 0.512mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 2시간 동안 교반하고 농축한 후, 분취용 HPLC(물/아세토니트릴)로 정제하여, 화합물 284(60mg, 14% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C79H131N11O24S에 대한 계산치[M+H]+ 1650.90; 실측치,1651.50.
실시예 267. tert-부틸(R)-5-(3-((37S,40S,43S)-37-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-40-이소프로필-43-메틸-31, 38,41-트리옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39, 42-트리아자테트라콘탄-44-아미도)-4-히드록시페닐)-4-((tert- 부톡시카르보닐)아미노)펜타노에이트(286)의 합성.
THF(100mL) 중의 화합물 76(6.0g, 5.9mmol) 및 화합물 69(2.7g, 7.1mmol)을 60 ℃에서 20시간 동안 가열한 후 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 컬럼(DCM/MeOH=20:1)에서 정제하여, 회백색 고체로서 화합물 286(7.1g, 93% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C164H266N24O52S2에 대한 계산치[M+H]+ 3472.19; 실측치, 3472.95.
실시예 268. tert-부틸(R)-5-(3-((37S,40S,43S)-37-아미노-40-이소프로필-43-메틸-31,38,41-트리옥소-2,5, 8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,39,42-트리아자테트라콘탄-44-아미도)-4-히드록시페닐)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)펜타노에이트(287)의 합성.
이소프로판올(80mL)에 용해된 화합물 286(7.1g, 5.7mmol)의 용액에, Pd/C(5wt%, 800mg)를 첨가하였다. 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채운 다음, 50°C로 가열하고 2.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 여과액을 농축하여, 회백색 고체를 얻었다(5.9g, 93% 수율). MS-ESI (m/z): 계산치. C55H98N6O19에 대한 계산치[M+H]+ 1147.69; 실측치,1148.12.
실시예 269. tert-부틸(R)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-(3-((37S,40S,43S)-37-(4-(2,5-디옥소-2, 5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40-이소프로필-43-메틸-31, 38, 41-트리옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39, 42-트리아자테트라콘탄-44-아미도)-4-하이드록시페닐)펜타노에이트(288)의 합성.
DCM(20mL) 중의 화합물 287(2.0g, 1.7mmol), 4-말레이미도부티르산 N-히드록시숙신이미드 에스테르(2.6mmol) 및 N-메틸모르폴린(0.53g, 5.2mmol)의 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 염수(2 x 20mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 컬럼(DCM/MeOH = 20:1)으로 정제하여, 화합물 288(2.1g, 91% 수율)을 밝은 갈색 오일로서 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C63H105N7O22에 대한 계산치[M+H]+ 1312.73; 실측치,1313.12.
실시예 270. (R)-4-아미노-5-(3-((37S, 40S, 43S)-37-(4-(2, 5-디옥소-2, 5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40-이소프로필-43-메틸-31,38,41-트리옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,39,42- 트리아자테트라테트라콘탄-44-아미도)-4-히드록시페닐)펜탄산(289)의 합성.
DCM(10mL) 중의 화합물 288(2g, 1.5mmol)의 용액을, 실온에서 TFA(10mL)로 2시간 동안 처리하였다. 그 다음, 용액을 농축하고 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여, 백색 고체를 얻었다(1.4g, 78% 수율). MS-ESI (m/z): 계산치. C54H89N7O20에 대한 계산치 [M+H]+　1156.63; 실측치, 1157.23.
실시예 271. (R)-4-(2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4, 7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-5-(3-((37S,40S,43S)-37-(4-(2, 5-디옥소-2, 5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40-이소프로필-43-메틸-31, 38, 41-트리옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17 , 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39, 42-트리아자테트라콘탄-44-아미도)-4-하이드록시페닐)펜탄산(290)의 합성.
DMF(12mL) 중의 화합물 289(1.37g, 1.19mmol), Tub-1(0.90g, 1.30mmol)의 용액에, N,N-디이소프로필에틸아민(0.31g, 2.37mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 용액을 0℃에서 2시간 동안 교반한 후 농축하였다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여, 백색 고체를 얻었다(880mg, 45% 수율). MS-ESI (m/z): 계산치. C79H129N11O25S에 대한 계산치[M+H]+1664.89; 실측치, 1665.63.
실시예 272. (R)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-(3-((37S,40S,43S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40,43-디메틸-31,38,41-트리옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32 , 39, 42-트리아자테트라콘탄-44-아미도)-4-하이드록시페닐)펜탄산(293)의 합성.
DCM(10mL) 중의 화합물 291(470mg, 0.51mmol) 및 화합물 292(250mg, 0.66mmol)의 용액에, EDC·HCl(120mg, 0.63mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 2시간 동안 교반한 후, 반응 용액을 물(50mL) 및 염수(50mL)로 세척하고, 건조 및 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 컬럼(DCM/MeOH=10:1)으로 정제하여, 화합물 293(390mg, 56% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C57H93N7O22에 대한 계산치 [M+H]+ 1229.64; 실측치, 1229.64.
실시예 273. (R)-4-아미노-5-(3-((37S,40S,43S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40,43-디메틸-31,38,41-트리옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,39,42-트리아자테트라테트라콘탄- 44-아미도)-4-하이드록시페닐)펜탄산(294)의 합성.
DCM(10mL) 중의 화합물 293(390mg, 0.30mmol)의 용액을 실온에서 TFA(5mL)로 1시간 동안 처리한 후 농축하여, 화합물 294(580mg, >100% 수율)를 얻었고, 이는 다음 단계에서 직접 사용되었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C52H85N7O20에 대한 계산치 [M+H]+ 1129.64; 실측치, 1129.64.
실시예 274. (R)-4-(2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4, 7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-5-(3-((37S,40S,43S)-37-(4-(2, 5-디옥소-2, 5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40, 43-디메틸-31, 38, 41-트리옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20 , 23, 26, 29-데카옥사-32, 39, 42-트리아자테트라콘탄-44-아미도)-4-하이드록시페닐)펜탄산(295)의 합성.
DMF(5mL) 중의 화합물 294(580mg, 0.43mmol), Tub-1(210mg, 0.31mmol)의 용액에, N,N-디이소프로필에틸아민(0.3mL)을 0℃에서 첨가하였다. 용액을 0℃에서 2시간 동안 교반한 후 농축하였다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여, 백색 고체(227mg, 46% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C77H125N11O25S에 대한 계산치 [M+H]+ 1636.86; 실측치, 1636.86.
실시예 275. 2,5-디옥소피롤리딘-1-일((S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31-옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32-아자옥타트리아콘탄-38-오일)-L-발리네이트(297)의 합성.
DCM(30mL) 중의 화합물 296(879.0mg, 1.0mmol)의 용액에, NHS(126.6mg, 1.1mmol) 및 EDC·HCl(383.4mg, 2.0mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하고 물로 켄칭하였다. 유기상을 분리하고 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하여, 표제 화합물을 얻었다(1.1g, >100 수율). MS-ESI (m/z): 계산치. C44H74N5O19에 대한 계산치 [M+H]+ 976.49; 실측치,: 976.49.
실시예 276. tert-부틸(R)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-(3-((37S,40S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40-이소프로필-31, 38, 41-트리옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39,42-트리아자테트라콘탄-44-아미도)-4-히드록시페닐)펜타노에이트(298)의 합성.
이전 단계의 화합물 297(550mg, 0.5mmol)을 THF(10mL)에 용해시켰다. 용액에 화합물 85(215.0mg, 0.5mmol)을 첨가하고 완전히 소모될 때까지 교반하였다. 반응 혼합물을 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 298(201mg, 31% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C62H104N7O22에 대한 계산치 [M+H]+ 1298.72; 실측치, 1298.72.
실시예 277. (R)-4-아미노-5-(3-((37S,40S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40-이소프로필-31, 38, 41-트리옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39, 42-트리아자테트라콘탄-44-아미도) -4-히드록시페닐)펜탄산(299)의 합성.
DCM(1mL) 중의 화합물 298(101mg, 0.078mmol)의 용액을 실온에서 TFA(2mL)로 1시간 동안 처리한 후 농축하여, 화합물 299(128mg, >100% 수율)를 얻었고, 이는 다음 단계에서 직접 사용되었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C53H88N7O20에 대한 계산치 [M+H]+ 1142.60; 실측치, 1142.60.
실시예 278. (R)-4-(2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4, 7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복스아미도)-5-(3-((37S,40S)-37-(4-(2, 5-디옥소-2, 5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40-이소프로필-31, 38, 41-트리옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26 , 29-데카옥사-32, 39, 42-트리아자테트라콘탄-44-아미도)-4-하이드록시페닐)펜탄산(300)의 합성.
DMF(2mL) 중의 화합물 299(70mg, 0.06mmol), Tub-1(40mg, 0.06mmol)의 용액에, N,N-디이소프로필에틸아민(15mg, 0.12mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 용액을 실온에서 2시간 동안 교반한 후 농축시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여, 백색 고체(38mg, 38% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C78H128N11O25S에 대한 계산치 [M+H]+ 1650.87; 실측치, 1650.87.
실시예 279. N-((S)-5-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-6-(((S)-1-(((S)-1-(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-6-옥소헥실)-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사헨트리아콘탄-31-아미드(302)의 합성.
DCM(3mL) 중의 화합물 301(300mg, 0.325mmol), NHS(42mg, 0.36mmol) 및 EDC·HCl(95mg, 0.50mmol)의 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM(20mL)으로 희석하고 물(25mL) 및 염수(25mL)로 세척하고, 건조시키고 농축하여, 화합물 302(280mg, 85% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C45H72N6O20에 대한 계산치 [M+H]+ 1017.48; 실측치, 1017.48.
실시예 280. tert-부틸(R)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-(3-((37S,40S,43S,46S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40,43,46-트리메틸-31,38,41,44-테트라옥소-2,5,8,11,14,17,20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39, 42, 45-테트라아자헵타테트라콘탄-47-아미도)-4-하이드록시페닐)펜타노에이트(304)의 합성.
THF(5mL) 중의 화합물 302(280mg, 0.28mmol) 및 화합물 303(200mg, 0.44mmol)의 용액을 r.t에서 2시간 동안 교반한 다음 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 컬럼(DCM/MeOH = 10:1)으로 정제하여, 화합물 304(180mg, 48% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C64H106N8O23에 대한 계산치 [M+H]+ 1355.74; 실측치, 1355.74.
실시예 281. (R)-4-아미노-5-(3-((37S, 40S, 43S, 46S)-37-(4-(2, 5-디옥소-2, 5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40,43,46-트리메틸-31,38,41,44-테트라옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32, 39,42,45-테트라아자헵타테트라콘탄-47-아미도)-4-하이드록시페닐)펜탄산(305)의 합성.
DCM(6mL) 중의 화합물 307(180mg, 0.13mmol)의 용액을 실온에서 TFA(3mL)로 1시간 동안 처리한 후 농축하여, 화합물 305(300mg, >100% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C55H90N8O21에 대한 계산치 [M+H]+ 1199.62; 실측치, 1199.62.
실시예 282. (R)-4-(2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4, 7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복스아미도)-5-(3-((37S, 40S, 43S, 46S)-37-(4 -(2, 5-디옥소-2, 5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40, 43, 46-트리메틸-31, 38, 41, 44-테트라옥소-2, 5, 8, 11 , 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39, 42, 45-테트라아자헵타테트라콘탄-47-아미도)-4-하이드록시페닐)펜탄산(306)의 합성.
DMF(5mL) 중의 화합물 305(160mg, 0.13mmol), Tub-1(100mg, 0.14mmol)의 용액에, N,N-디이소프로필에틸아민(0.3mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 용액을 실온으로 가온하고 1시간 동안 교반한 후 농축하였다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여, 백색 고체를 얻었다(58mg, 25% 수율). MS-ESI (m/z): 계산치. C80H130N12O26S에 대한 계산치 [M+H]+ 1707.89; 실측치, 1707.89.
실시예 283. 메틸(S)-5-(((S)-1-(((S)-1-(((S)-1-((5-((R)-5-(tert-부톡시)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-옥소펜틸)-2-히드록시페닐)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-1- 옥소프로판-2-일)아미노)-4-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-5-옥소펜타노에이트(307)의 합성.
DMF(2mL) 중의 화합물 251(0.28g, 0.5mmol) 및 화합물 69(0.20g, 0.5mmol)의 용액에, HATU(0.30g, 0.8mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(130μL, 0.8mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 10분 동안 교반하고, 분취용 HPLC로 직접 정제하여, 백색 고체(324mg, 69% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C43H63N7O14에 대한 계산치[M+H]+　902.44; 실측치, 902.81.
실시예 284. (R)-4-아미노-5-(3-((6S, 9S, 12S, 15S)-6-(4-(2, 5-디옥소-2, 5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-9,12,15-트리메틸-3,7,10,13-테트라옥소-2-옥사-8,11,14-트리아자헥사데칸-16-아미도)-4-히드록시페닐)펜탄산(308)의 합성.
DCM(10mL) 중의 화합물 307(0.32g, 0.36mmol)의 용액을 실온에서 TFA(10mL)로 1시간 동안 처리한 후 농축하여, 화합물 308(0.27g, >100 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C34H47N7O12에 대한 계산치[M+H]+746.33; 실측치, 746.67.
실시예 285. (R)-4-(2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4, 7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복스아미도)-5-(3-((6S, 9S, 12S, 15S)-6-(4 -(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-9,12,15-트리메틸-3,7,10,13-테트라옥소-2-옥사-8,11 , 14-트리아자헥사데칸-16-아미도)-4-히드록시페닐)펜탄산(309)의 합성.
DMF(2mL) 중의 화합물 308(0.27g, 0.36mmol), Tub-1(0.25g, 0.36mmol)의 용액에, N,N-디이소프로필에틸아민(180μL, 1.09mmol)을 첨가하였다. 용액을 실온에서 30분 동안 교반한 후 농축하였다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여, 백색 고체를 얻었다(367mg, 59% 수율). MS-ESI (m/z): 계산치. C59H87N11O17S에 대한 계산치 [M+H]+　1254.60; 실측치, 1255.32.
실시예 286. (1R,3R)-1-(4-(((R)-5-아미노-1-(3-((37S,40S,43S)-37-(4-(2,5-디옥소-2, 5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40-이소프로필-43-메틸-31, 38, 41-트리옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23 , 26, 29-데카옥사-32, 39,42-트리아자테트라콘탄-44-아미도)-4-히드록시페닐)-5-옥소펜탄-2-일)카르바모일)티아졸-2-일)-3-((2S, 3S) -2-(2-(디메틸아미노)-2-메틸프로판아미도)-N,3-디메틸펜탄아미도)-4-메틸펜틸 아세테이트(310)의 합성.
DCM(10mL) 중의 화합물 290(300mg, 0.2mmol)의 용액에, NHS(31mg, 0.27mmol) 및 EDC·HCl(52mg, 0.27mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 1시간 동안 교반하고, 염화암모늄(15mg, 0.4mmol) 및 N-메틸모르폴린(55mg, 0.54mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 밤새 교반하였다. LC-MS는 중간체의 완전한 전환을 나타냈고, 이어서 조 생성물을 분취용 HPLC로 직접 정제하여, 화합물 310(140mg, 47% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C79H130N12O24S에 대한 계산치 [M+H]+1663.90;실측치, 1664.93.
실시예 287. (1R,3R)-3-((2S,3S)-2-(2-(디메틸아미노)-2-메틸프로판아미도)-N,3-디메틸펜탄아미도)-1-(4-(((R))-1-(3-((37S, 40S, 43S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40-이소프로필-43 -메틸-31,38,41-트리옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,39,42-트리아자테트라콘탄-44-아미도)-4-히드록시페닐) -5-히드라진일-5-옥소펜탄-2-일)카르바모일)티아졸-2-일)-4-메틸펜틸 아세테이트(312)의 합성.
DCM(10mL) 중의 화합물 290(300mg, 0.2mmol)의 용액에, NHS(42mg, 0.36mmol) 및 EDC·HCl(70mg, 0.36mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 1시간 동안 교반하고, 히드라진(20mg, 0.36mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(70mg, 0.54mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 밤새 교반하였다. LC-MS는 중간체의 완전한 전환을 나타냈고, 이어서 조 생성물을 분취용 HPLC로 직접 정제하여, 화합물 312(100mg, 33% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z):　계산치. C79H131N13O24S에 대한 계산치 [M+H] +1678.92;실측치, 1678.90.
실시예 288. (S, E)-37-((4-((2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)아미노)-4-옥소부틸)카르바모일)-31,39,44-트리옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 38, 43-트리아자헵타테트라콘트-45-엔-47-오익산(314)의 합성.
아세토니트릴(20mL) 및 탄산나트륨 용액(10mL)에 용해된 화합물 313(1.3g, 0.001mol)의 혼합물을 밤새 교반하였다. 유기용매를 제거하고 물 30mL를 용액에 첨가하였다. 묽은 염산으로 pH를 약산성으로 조절한 후, 용액을 DCM(5×30mL)으로 추출하였다. 합한 유기상을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하여, 화합물 314(1.30g, 98% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C45H81N5O19에 대한 계산치 [M+H]+　996.55; 실측치, 996.65.　
실시예 289. 1-(tert-부틸) 20-메틸(S,E)-4,9,12,17-테트라옥소-10-(31-옥소-2,5,8,11,14,17, 20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,8,11,16-테트라아자이코스-18-엔디오에이트(315)의 합성.
메탄올(15mL) 중의 화합물 314(1.30g, 0.001mol)의 용액에, 티오닐 클로라이드(0.095mL, 0.001mol)를 빙수조 위에서 적가하였다. 욕조를 제거한 후, 반응물을 실온에서 밤새 교반하고 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 315(474mg, 36% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C46H83N5O19에 대한 계산치 [M+H]+　1010.57; 실측치, 1010.61.　
실시예 290. (S, E)-(37-(4-(4-메톡시-4-옥소부트-2-에나미도)부탄아미도)-31, 38-디옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39-디아자트리테트라콘탄-43-오일)글리신(316)의 합성.
DCM(10mL) 중의 화합물 315(474mg, 0.469mmol)의 용액을 실온에서 TFA(5mL)로 4시간 동안 처리하고 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 316(213mg, 47.33% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C42H75N5O19에 대한 계산치[M+H]+　954.51; 실측치, 954.87.
실시예 291. 메틸(S,E)-37-((4-((2-((5-((R)-5-(tert-부톡시)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-옥소펜틸)-2-히드록시페닐)아미노)-2-옥소에틸)아미노)-4-옥소부틸)카르바모일)-31, 39, 44-트리옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 38, 43-트리아자헵타테트라콘트-45-엔-47-오에이트(317)의 합성.
DCM(10mL) 중의 화합물 316(213mg, 0.223mmol) 및 화합물 69(144mg, 0.378mmol)의 용액에, EDC·HCl(74mg, 0.386mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반한 후 농축하고, 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 317(171mg, 59% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C62H105N7O23에 대한 계산치[M+H]+　1316.73; 실측치, 1317.66.　
실시예 292. (R)-4-아미노-5-(4-하이드록시-3-((S)-37-(4-((E)-4-메톡시-4-옥소부트-2-에나미도)부탄아미도)-31, 38, 43-트리옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39, 44-트리아자헥사테트라콘탄-46-아미도)페닐)펜탄산(318)의 합성.
화합물 317(171mg, 0.130mmol)을 DCM(3mL) 및 TFA(1mL)에 용해시켰다. 용액을 실온에서 2시간 동안 교반한 후 농축하여, 화합물 318(0.15g, 100% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C53H89N7O21에 대한 계산치 [M+H]+　1160.61; 실측치, 1161.26.　
실시예 293. (R)-4-(2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4, 7-디옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자트리데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-5-(4-히드록시-3-((S)-37-(4-((E)-4-메톡시-4-옥소부트-2-에나미도)부탄아미도)-31, 38, 43-트리옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39 , 44-트리아자헥사테트라콘탄-46-아미도)페닐)펜탄산(319)의 합성.
DMF(2mL) 중의 화합물 318(150mg, 0.129mmol) 및 Tub-1(89mg, 0.129mmol)의 용액에, N,N-디이소프로필에틸아민(0.021mL, 0.129mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하고, 분취용 HPLC로 직접 정제하여, 화합물 319(17mg, 8% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C78H129N11O26S에 대한 계산치 [M+H]+　1668.88; 실측치, 1669.34.
실시예 294. tert-부틸(R)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-(3-((S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31, 38, 43, 48-테트라옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29, 49-운데카옥사-32, 39, 44, 47-테트라아자헨펜타콘탄-51-아미도)-4-하이드록시페닐)펜타노에이트(320)의 합성.
화합물 245(327mg, 0.324mmol) 및 화합물 69(148mg, 0.389mmol)를 DCM(10mL)에 용해시키고, EDC·HCl(75mg, 0.389mmol)을 첨가하고, 반응물을 1시간 동안 교반시킨 다음, 바로 다음 단계로 넘어갔다. MS-ESI (m/z): 계산치. C64H106N8O24에 대한 계산치 [M+H]+　1371.73; 실측치, 1372.41.　
실시예 295. (R)-4-아미노-5-(3-((S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31, 38, 43, 48-테트라옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29, 49-운데카옥사-32, 39, 44, 47-테트라아자헨펜타콘탄-51-아미도) -4-히드록시페닐)펜탄산(321)의 합성.
이전 단계의 반응 혼합물에 TFA 10mL를 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하고, 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 321(0.20g, 51% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C55H90N8O22에 대한 계산치 [M+H]+　1215.62; 실측치, 1216.25.　
실시예 296. (R)-4-(2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4, 7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-5-(3-((S)-37-(4-(2,5- 디옥소-2, 5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31, 38, 43, 48-테트라옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29, 49 -운데카옥사-32, 39, 44, 47-테트라아자헨펜타콘탄-51-아미도)-4-하이드록시페닐)펜탄산(322)의 합성.
화합물 321(200mg, 0.165mmol)과 Tub-1(114mg, 0.165mmol)을 DMF(2mL)에 용해시키고, N,N-디이소프로필에틸아민(0.027mL, 0.165mmol)을 첨가하고 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 분취용 HPLC로 직접 정제하여, 화합물 322(94mg, 33% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C80H130N12O27S에 대한 계산치 [M+H]+　1723.89; 실측치, 1724.81.　
실시예 297. 2,5-디옥소피롤리딘-1-일(S)-(37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31,38-디옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39-디아자트리테트라콘탄-43-오일)글리시네이트(323)의 합성.
DCM(20mL) 중의 화합물 234(1.0g, 1.08mmol)의 용액에, NHS(0.15g, 1.30mmol) 및 EDC·HCl(0.43g, 2.17mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고 물로 켄칭하였다. 층을 분리하고, 유기상을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하여, 화합물 323(1.1g, 99% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C45H75N6O20에 대한 계산치 [M+H]+ 1019.50; 실측치, 1019.50.
실시예 298. tert-부틸 (R)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-(3-((S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31,38,43-트리옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,39,44-트리아자헥사테트라콘탄- 46-아미도)-4-하이드록시페닐)펜타노에이트(324)의 합성.
이전 단계의 화합물 323(1.1g, 1.08mmol)을 THF(10mL)에 용해시켰다. 용액에 화합물 69(215.0mg, 0.5mmol)를 첨가하고 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 농축하고 실리카겔 컬럼(6% MeOH/DCM)으로 정제하여, 화합물 324(200mg, 15% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C61H102N7O22에 대한 계산치 [M+H]+ 1284.70; 실측치,1284.70.
실시예 299. (R)-4-아미노-5-(3-((S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31, 38, 43-트리옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39, 44-트리아자헥사테트라콘탄-46-아미도)-4-히드록시페닐)펜탄산 산(325)의 합성.
DCM(4mL) 중의 화합물 324(180mg, 0.15mmol)의 용액을 실온에서 TFA(2mL)로 2시간 동안 처리하고, 농축하고, MTBE(10mL)로 분쇄하여, 화합물 325(174mg, > 100% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C52H86N7O20에 대한 계산치 [M+H]+ 1128.58; 실측치, 1128.58.
실시예 300. (R)-4-(2-((3S,6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-3,9-디이소프로필-2,8-디메틸-4, 7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-5-(3-((S)-37-(4-(2,5- 디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31,38,43-트리옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32 , 39,44-트리아자헥사테트라콘탄-46-아미도)-4-히드록시페닐)펜탄산(326)의 합성.
DMF(0.5mL) 중의 화합물 325(174mg, 0.15mmol)의 용액에, DMF(0.5mL) 중의 Tub-4(98mg, 0.13mmol)를 첨가한 후, N,N-디이소프로필에틸아민(40mg, 0.29mmol)을 첨가하였다. 용액을 실온에서 30분 동안 교반한 후 농축하였다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 326(34mg, 14% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C78H128N11O25S에 대한 계산치 [M+H]+ 1650.87; 실측치, 1650.87.
실시예 301. (2S,4R)-4-(2-((3S,6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-3,9-디이소프로필-2,8-디메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-5-(3-((S)-37-(4-(2, 5-디옥소-2, 5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31, 38, 43-트리옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사 -32,39,44-트리아자헥사테트라콘탄-46-아미도)-4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산(328)의 합성.
DMF(2mL)에 용해된 Tub-4(95mg, 0.13mmol) 및 화합물 327(150mg, 0.13mmol)의 용액에, N,N-디이소프로필에틸아민(34mg, 0.36mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온하고, 2시간 동안 교반하고 농축한 다음 분취용 HPLC(물/아세토니트릴)로 정제하여, 화합물 328(50mg, 23% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C79H130N11O25S에 대한 계산치 [M+H]+1666.01; 실측치,1666.01.
실시예 302. (R)-4-(2-((3S,6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-3,9-디이소프로필-2,8-디메틸-4, 7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-5-(3-((S)-37-(4-(2,5- 디옥소-2, 5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31, 38-디옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39 -디아자트리테트라콘탄-43-아미도)-4-히드록시페닐)펜탄산(330)의 합성.
DMF(2mL) 중의 Tub-4(49mg, 0.070mmol) 및 화합물 329(74mg, 0.070mmol)의 용액에, N,N-디이소프로필에틸아민(0.036mL, 0.28mmol)을 실온에서 첨가하였다. 반응물을 3시간 동안 교반하고 농축한 다음 분취용 HPLC(물/아세토니트릴)로 정제하여, 화합물 330(51mg, 46% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C76H124N10O24S에 대한 계산치 [M+H]+　1593.85; 실측치, 1594.62.　
실시예 303. (2S,4R)-4-(2-((3S,6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-3,9-디이소프로필-2,8-디메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-5-(3-((S)-37-(4-(2, 5-디옥소-2, 5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31, 38-디옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32 , 39-디아자트리테트라콘탄-43-아미도)-4-히드록시페닐)-2-메틸펜탄산(332)의 합성.
DMF(2mL) 중의 Tub-4(100mg, 0.14mmol) 및 화합물 331(146mg, 0.14mmol)의 용액에, N,N-디이소프로필에틸아민(0.073mL, 0.42mmol)을 실온에서 첨가하였다. 반응물을 3.5시간 동안 교반하고 농축한 다음 분취용 HPLC(물/아세토니트릴)로 정제하여, 화합물 332(82mg, 37% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C75H122N10O23S에 대한 계산치 [M+H]+　1563.84; 실측치, 1564.46.　
실시예 304. (R)-4-(2-((3S,6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-3,9-디이소프로필-2,8-디메틸-4, 7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-5-(3-((S)-37-(4-(2,5- 디옥소-2, 5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31, 38, 41-트리옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32 , 39, 42-트리아자테트라콘탄-44-아미도)-4-히드록시페닐)펜탄산(334)의 합성.
DMF(2mL) 중의 Tub-4(117mg, 0.17mmol) 및 화합물 333(180mg, 0.17mmol)의 용액에, N,N-디이소프로필에틸아민(45mg, 0.33mmol)을 실온에서 첨가하였다. 반응물을 2시간 동안 교반하고 농축한 다음 분취용 HPLC(물/아세토니트릴)로 정제하여, 화합물 334(73mg, 27% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C76H124N11O25S에 대한 계산치 [M+H]+1622.84; 실측치,1622.84.
실시예 305. (R)-4-(2-((3S,6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-3,9-디이소프로필-2,8-디메틸-4, 7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-5-(3-((37S,40S,43S)-37-(4-(2, 5-디옥소-2, 5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40-이소프로필-43-메틸-31, 38, 41-트리옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17 , 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39, 42-트리아자테트라콘탄-44-아미도)-4-히드록시페닐)펜탄산(335)의 합성.
DMF(5mL) 중의 Tub-4(185mg, 0.256mmol) 및 화합물 316(300mg, 0.256mmol)의 용액에, N,N-디이소프로필에틸아민(66mg, 0.512mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 2시간 동안 교반하고 농축한 다음 분취용 HPLC(물/아세토니트릴)로 정제하여, 화합물 335(120mg, 29% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C80H131N11O25S에 대한 계산치[M+H]+　1678.90; 실측치, 1679.30.
실시예 306. (2S,4R)-4-(2-((3S,6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-3,9-디이소프로필-2,8-디메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-5-(3-((37S,40S,43S)-37-(4 -(2, 5-디옥소-2, 5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40-이소프로필-43-메틸-31, 38, 41-트리옥소-2, 5, 8, 11, 14 , 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39, 42-트리아자테트라콘탄-44-아미도)-4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산(336)의 합성.
DMF(5mL) 중의 Tub-2(180mg, 0.256mmol) 및 화합물 257(300mg, 0.256mmol)의 용액에, N,N-디이소프로필에틸아민(66mg, 0.512mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 반응물을 0 ℃에서 2시간 동안 교반하고 농축한 다음 분취용 HPLC(물/아세토니트릴)로 정제하여, 화합물 336(90mg, 20% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C80H133N11O24S에 대한 계산치 [M+H+]　1664.92; 실측치, 1665.50.
실시예 307. (R)-4-(2-((3S,6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-3,9-디이소프로필-2,8-디메틸-4, 7-디옥소-12-옥사-2, 5,8-트리아자트리데칸-11-일)티아졸-4-카르복스아미도)-5-(3-((37S, 40S, 43S)-37-(4-(2, 5-디옥소-2, 5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40-이소프로필-43-메틸-31, 38, 41-트리옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20 , 23, 26, 29-데카옥사-32, 39, 42-트리아자테트라콘탄-44-아미도)-4-히드록시페닐)펜탄산(337)의 합성.
DMF(2mL) 중의 Tub-2(58.1mg, 0.085mmol) 및 화합물 316(128.0mg, 0.094mmol)의 용액에, N,N-디이소프로필에틸아민(20mg, 0.17mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온하고, 2시간 동안 교반하고 농축한 후 분취용 HPLC(물/아세토니트릴)로 정제하여, 화합물 337(26mg, 19% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C79H132N11O24S에 대한 계산치 [M+H]+ 1650.91; 실측치, 1650.91.
실시예 308. (R)-4-(2-((3S,6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-3,9-디이소프로필-2,8-디메틸-4, 7-디옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자트리데칸-11-일)티아졸-4-카르복스아미도)-5-(3-((S)-37-(4-(2,5-디옥소- 2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31, 38, 41-트리옥소-2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29-데카옥사-32, 39 , 42-트리아자테트라콘탄-44-아미도)-4-히드록시페닐)펜탄산(338)의 합성.
DMF(2mL) 중의 Tub-2(37.0mg, 0.055mmol) 및 화합물 333(60.0mg, 0.055mmol)의 용액에, N,N-디이소프로필에틸아민(0.009mL, 0.055mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온하고, 2.5시간 동안 교반하고 농축한 후 분취용 HPLC(물/아세토니트릴)로 정제하여, 화합물 338(52mg, 60% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C75H123N11O24S에 대한 계산치[M+H]+　594.83; 실측치, 1596.26.　
실시예 309. (4-(벤질옥시)-5-메톡시-2-니트로페닐)((2R)-2-(히드록시메틸)시클로펜틸)메탄온(342)의 합성.
DMF(500mL) 중의 화합물 340(30.3g, 0.1mol), 화합물 341(10.1g, 0.1mol)의 용액에, 트리에틸아민(20.1g, 0.2mol) 및 HATU(49.4g, 0.13mol)를 실온에서 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, DCM(2L)으로 희석하고, 물, 염수로 2회 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고 여과하고 농축하여, 조 생성물을 얻었고, 이를 실리카겔 컬럼(EA/PE = 30%-100%)으로 정제하여, 표제 화합물(36.8g, 95% 수율)을 얻었다.
실시예 310. (1R)-2-(4-(벤질옥시)-5-메톡시-2-니트로벤조일)사이클로펜탄-1-카브알데히드(343)의 합성.
N2 하에서, DCM(150mL)에 녹인 염화옥살릴(4.34g, 34.19mmol) 용액을 드라이아이스/아세톤 배치에서 냉각하고, 여기에 30mL DCM에 녹인 DMSO(5.57g, 71.23mmol) 용액을 적가하고, 첨가 후 반응을 -65°C 미만에서 20분 동안 유지하였다. 100mL의 DCM에 용해된 화합물 342(11.01g, 28.49mmol)의 용액을 적가하고, 반응물을 -65℃ 미만으로 유지하고 20분 동안 교반하였다. 60mL의 DCM에 용해된 TEA(14.42g, 142.47mmol)의 용액을 마지막으로 적가하였다. 첨가가 완료된 후, 드라이아이스/아세톤 욕조를 제거하고, 반응물을 서서히 실온으로 가온하고, 1시간 동안 교반한 후, 0.2N HCl, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 컬럼 크로마토그래피 정제(EA/PE = 20%-100%)로 표제 화합물(9.1g, 83% 수율)을 얻었다.
실시예 311. (S)-8-히드록시-7-메톡시-1,2,3,10,11,11a-헥사히드로-5H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-5-1(344)의 합성.
메탄올(400mL) 중 화합물 343(9.1g, 23.67mmol), 팔라듐/탄소(2.0g, 10wt%)를 수소화 반응 플라스크에 충전하고, 반응물을 수소 하에 실온에서 밤새 교반하고, 여과하고 농축하여, 표제 화합물을 얻었다(5.8g, 98% 수율).
실시예 312. (S)-8-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-7-메톡시-1,2,3,10,11,11a-헥사히드로-5H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-5-1(345)의 합성.
DCM(150mL) 중의 화합물 344(4.3g, 17.32mmol)의 용액에, 이미다졸(2.4g, 34.64mmol) 및 TBSCl(3.1g, 20.78mmol)을 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 반응시키고, 염수로 세척하고 무수 황산나트륨으로 건조시킨 후, 여과하고 농축하였다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(EA/PE= 20%-100%)로 정제하여, 표제 화합물(3.7g, 59% 수율)을 얻었다.
실시예 313. (9H-플루오렌-9-일)메틸(S)-(2-(8-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-일)-2-옥소에틸)카르바메이트(347)의 합성.
DCM(50mL) 중의 화합물 345(1.09g, 3.00mmol) 및 피리딘(0.36g, 4.50mmol)의 용액을 얼음/물로 냉각시켰다. 화합물 346(1.14g, 3.60mmol)을 첨가하고 1시간 동안 교반하였다. 반응액을 0.3N HCl 용액, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시킨 후 여과 및 농축하였다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(EA/PE= 20%-100%)로 정제하여, 표제 화합물(1.35g, 70% 수율)을 얻었다.
실시예 314. (S)-10-글리실-8-하이드록시-7-메톡시-1,2,3,10,11,11a-헥사하이드로-5H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-5-1(348)의 합성.
화합물 347(1.01g, 1.57mmol)을 DCM(20mL)에 용해시키고, 여기에 피롤리딘(1mL)을 실온에서 첨가하였다. 첨가 후, 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 농축하고, 컬럼 크로마토그래피(MeOH/DCM= 0%-30%)로 정제하여, 표제 화합물(0.41g, 85% 수율)을 얻었다.
실시예 315. tert-부틸(S)-(2-(8-히드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2- a][1,4]디아제핀-10(5H)-일)-2-옥소에틸)카르바메이트(349)의 합성.
화합물 348(0.41g, 1.34mmol)을 DCM(20mL)에 용해시키고, 디-t-부틸 디카보네이트(0.35g, 1.61mmol)를 실온에서 첨가하였다. 첨가 후, 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 농축하고, 컬럼 크로마토그래피(EA/PE= 20%-100%)로 정제하여, 표제 화합물(0.20g, 37% 수율)을 얻었다.
실시예 316. (4-(벤질옥시)-5-메톡시-2-니트로페닐)((2R)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)시클로펜틸)메탄온(350)의 합성.
DCM(1000mL) 중의 화합물 342(38.0g, 0.10mol)의 용액에, 이미다졸(27.2g, 0.40mol) 및 TBSCl(30.1g, 0.20mmol)을 교반 하에 실온에서 첨가하였다. 첨가 후, 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반 한 후, 물, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시킨 후, 여과하고 농축하였다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(EA/PE= 10%-50%)로 정제하여, 표제 화합물(45.0g, 90% 수율)을 얻었다.
실시예 317. (2-아미노-4-히드록시-5-메톡시페닐)((2R)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)시클로펜틸)메탄온(351)의 합성.
화합물 350(45g, 90mmol), 메탄올(800mL), 팔라듐/탄소(8.0g, 10wt%)를 수소화 반응 플라스크에 충전하였다. 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채우고, 실온에서 밤새 교반하였다. 여과하고 오일 펌프 하에서 농축하여, 표제 화합물을 얻었다(34g, 100% 수율).
실시예 318. (2-아미노-5-메톡시-4-((트리이소프로필실릴)옥시)페닐)((2R)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)시클로펜틸)메탄온(352)의 합성.
에틸 아세테이트(30mL) 중의 화합물 351(19.0g, 0.05 mol), 이미다졸(6.8g, 0.1 mol) 및 TIPSCl(14.4g, 0.075mmol)의 혼합물을 환류하도록 가열하고 1시간 동안 교반하였다. 냉각 후, DCM을 첨가하고 혼합물을 물, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(EA/PE= 10%-50%)로 정제하여, 표제 화합물(22g, 82% 수율)을 얻었다.
실시예 319. 알릴(2-((2R)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)사이클로펜탄-1-카르보닐)-4-메톡시-5-((트리이소프로필실릴)옥시)페닐)카바메이트(353)의 합성.
DCM(500mL) 중의 화합물 352(92.7g, 0.173mol)의 용액에, 피리딘(31.3g, 0.397mol)을 실온에서 교반하면서 첨가하였다. 혼합물을 드라이아이스/아세톤 욕조 상에서 냉각시키고, 알릴 클로로포르메이트(24.97g, 0.207mol)를 약 -65℃에서 적가하였다. 첨가 후, 드라이아이스/아세톤 욕을 제거하고, 반응물을 자연적으로 실온으로 가온한 후, 3시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 0.3N HCl 용액, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하여, 조 생성물(104g, 99% 수율)을 얻었다.
실시예 320. 알릴(2-((2R)-2-(히드록시메틸)시클로펜탄-1-카르보닐)-4-메톡시-5-((트리이소프로필실릴)옥시)페닐)카르바메이트(354)의 합성.
화합물 353(104g, 0.173mol)을 아세트산(600mL), 메탄올(85mL), THF(85mL) 및 물(170mL)에 녹인 용액을 실온에서 8시간 동안 교반한 후, 에틸아세테이트로 희석하고 물로 3회, 염수로 1회 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과하고 농축하였다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(EA/PE= 30%-70%)로 정제하여, 표제 화합물(59g, 2 단계에 걸쳐 69% 수율)을 얻었다.
실시예 321. 알릴(11aS)-11-히드록시-7-메톡시-5-옥소-8-((트리이소프로필실릴)옥시)-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트(355)의 합성.
N2 하에서, DCM(400mL)에 녹인 옥살릴 클로라이드(19.9g, 155mmol) 용액을 드라이아이스/아세톤 배치에서 냉각하고, 여기에 50mL DCM에 녹인 DMSO(23.4g, 299mmol) 용액을 적가하고, 반응물을 -65°C 미만에서 20분 동안 유지하였다. 첨가 후, 200mL의 DCM에 용해된 화합물 354(59.0g, 119mmol)의 용액을 적가하고, 반응물을 -65℃ 미만으로 유지하고 20분 동안 교반하였다. 100mL의 DCM에 용해된 TEA(60.6g, 598mmol)의 용액을 마지막으로 적가하였다. 첨가가 완료된 후, 드라이아이스/아세톤 욕을 제거하고, 반응물을 서서히 실온으로 가온하고, 1시간 동안 교반한 후, 0.2N HCl, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 컬럼 크로마토그래피 정제(EA/PE = 10%-50%)로, 표제 화합물(49.7g, 84% 수율)을 얻었다.
실시예 322. 알릴(11aS)-11-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-7-메톡시-5-옥소-8-((트리이소프로필실릴)옥시)-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트(356)의 합성.
DCM(100mL) 중의 화합물 355(5.8g, 11.82mmol)의 용액에, 2,6-루티딘(5.07g, 47.28mmol) 및 TBSOTf(9.37g, 35.46mmol)를 첨가하였다. 첨가 후, 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 물, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시킨 후, 여과하고 농축하였다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(EA/PE= 10%-50%)로 정제하여, 표제 화합물(6.3g, 88% 수율)을 얻었다.
실시예 323. 알릴(11aS)-11-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-8-히드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실산염(357)의 합성.
DMF(78mL) 및 물(1.5mL) 중의 화합물 356(6.3g, 10.41mmol) 및 리튬 아세테이트(0.69g, 10.41mmol)의 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응액을 에틸아세테이트로 희석하고, 물로 3회, 염수로 1회 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시킨 후, 여과하고 농축하였다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(EA/PE= 30%-100%)로 정제하여, 표제 화합물(3.3g, 70% 수율)을 얻었다.
실시예 324. 알릴(11aS)-11-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-8-((5-요오도펜틸)옥시)-7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트(358)의 합성.
아세톤(100mL) 중의 화합물 357(1.39g, 3mmol)의 용액에, 디요오도펜탄(4.86g, 15mmol) 및 탄산칼륨(0.62g, 4.5mmol)을 교반하면서 첨가하였다. 첨가 후, 반응물을 8시간 동안 환류 하에 가열하고, 냉각시킨 후, 컬럼 크로마토그래피(EA/PE= 20%-80%)로 직접 정제하여, 표제 화합물(1.85g, 93% 수율)을 얻었다.
실시예 325. 알릴(11aS)-8-((5-(((S)-10-((tert-부톡시카르보닐)글리실)-7-메톡시-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사하이드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-11-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-7- 메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트(359)의 합성.
화합물 349(121mg, 0.3mmol)를 아세톤(20mL)에 용해시킨 후, 여기에 화합물 359(197mg, 0.3mmol) 및 탄산칼륨(83mg, 0.6mmol)을 교반하면서 첨가하였다. 반응물을 8시간 동안 환류 하에 가열하고, 냉각한 후, 컬럼 크로마토그래피(MeOH/DCM = 0%-10%)로 직접 정제하여, 표제 화합물(240mg, 85% 수율)을 얻었다.
실시예 326. 알릴(11aS)-8-((5-(((S)-10-글리실-7-메톡시-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-11-히드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a- 테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트(360)의 합성.
화합물 359(199.9mg, 0.21mmol)를 2mL의 TFA 및 6mL의 DCM에 용해시키고, 실온에서 ~3시간 동안 교반하고, 10mL의 DCM으로 희석하고, 5mL의 염수 및 5mL의 포화 중탄산나트륨으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과하고 농축하여, 연한 노란색 거품 고체를 얻었다(177.5mg, 100% 수율). MS-ESI (m/z): 계산치. C37H48N5O10에 대한 계산치 [M+H]+ 721.33; 실측치 721.33.
실시예 327. N-((S)-5-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-6-(((S)-1-(((S)-1-((2-((S)-7-메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-5-옥소-2,3,5,11a- 테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H- 벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-일)-2-옥소에틸)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-1-옥소프로판-2 -일)아미노)-6-옥소헥실)-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사엔트리아콘탄-31-아미드(361)의 합성.
화합물 360(77.0mg, 0.11mmol)을 2mL의 DCM에 용해시키고, 여기에 피롤리딘 (7.6mg, 0.11mmol) 및 Pd(PPh3)4의 촉매량을 첨가한 후, 실온에서 20분 동안 교반하였다. 반응물을 0-5℃로 냉각시키고, 2mL의 DCM 중의 화합물 291(147.6mg, 0.16mmol) 및 EDC·HCl(40.9mg, 0.21mmol)을 첨가하였다. 2시간 동안 교반한 후, 반응물을 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 담황색 고체를 얻었다(65mg, 41% 수율). MS-ESI (m/z): 계산치. C74H111N10O24에 대한 계산치 [M+H]+ 1523.77; 실측치 1523.77.
실시예 328. N-((5S,8S,11S,14S)-14-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-1-((S)-7-메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-5-옥소-2,3,5,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2- a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1 ,4]디아제핀-10(5H)-일)-5,8,11-트리메틸-1,4,7,10,13-펜타옥소-3,6,9,12-테트라아자옥타데칸-18-일)-2, 5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사엔트리아콘탄-31-아미드(362)의 합성.
화합물 360(77.0mg, 0.11mmol)을 4mL의 DCM에 용해시키고, 여기에 피롤리딘(7.6mg, 0.11mmol) 및 Pd(PPh3)4의 촉매량을 첨가한 후 실온에서 20분 동안 교반하였다. 반응물을 0-5℃로 냉각시키고, 2mL의 DCM 중의 화합물 217(175.3mg, 0.17mmol) 및 EDC·HCl(41.0mg, 0.21mmol)을 첨가하였다. 2시간 동안 교반한 후, 반응물을 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 담황색 고체를 얻었다(18.6mg, 11% 수율). MS-ESI (m/z): 계산치. C77H116N11O25에 대한 계산치[M+H]+1594.81; 실측치 1594.81.
실시예 329. (9H-플루오렌-9-일)메틸(S)-(1-클로로-1-옥소프로판-2-일)카르바메이트(364)의 합성.
Fmoc-Ala-OH(10.4g, 33.40mmol)을 DCM 100mL에 용해시키고, 여기에 DMF 6방울과 SOCl2 12mL를 첨가하였다. 반응 혼합물을 40-50℃로 가열하고, 1시간 동안 환류시키고, 실온으로 냉각하고, 농축하였다. 잔류물을 50mL의 n-헥산으로 분쇄하고, 여과하고 건조하여, 백색 고체(9.7g, 88% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C18H18NO4에 대한 계산치 [M+H]+ 312.12; 실측치 312.12.
실시예 330. (9H-플루오렌-9-일)메틸((S)-1-((S)-8-(벤질옥시)-7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-일)-1-옥소프로판-2-일)카르바메이트(366)의 합성.
화합물 364(1.23g, 3.03mmol) 및 화합물 365(1.00g, 3.03mmol)를 10mL의 DCM에 용해시키고 실온에서 ~5시간 동안 교반하였다. 반응물을 40mL의 DCM으로 희석하고, 40mL의 0.3N HCl, 50mL의 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켰다. 잔류물을 실리카겔 컬럼(에틸 아세테이트/석유 에테르)으로 정제하여, 담황색 고체를 얻었다(1.4g, 73% 수율). MS-ESI (m/z): 계산치. C38H38N3O6 에 대한 계산치[M+H]+ 632.27; 실측치 632.27.
실시예 331. (S)-10-(L-알라닐)-8-(벤질옥시)-7-메톡시-1,2,3,10,11,11a-헥사히드로-5H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-5-1(367)의 합성.
10mL의 DCM 및 1mL의 피롤리딘 중의 화합물 366(0.66g, 1.04mmol)의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 농축하여, 연한 노란색 고체를 얻었다(1.06g, 100% 수율). MS-ESI (m/z): 계산치. C23H28N3O4에 대한 계산치 [M+H]+ 410.20; 실측치 410.20.
실시예 332. tert-부틸((S)-1-((S)-8-(벤질옥시)-7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-일)-1-옥소프로판-2-일)카르바메이트(368)의 합성.
10mL의 DCM에 용해된 화합물 367(430mg, 1.05mmol)의 용액에, 디-tert-부틸 디카보네이트(901.1mg, 4.13mmol), DMAP(24mg, 0.196mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 실리카겔 컬럼(에틸 아세테이트/석유 에테르)으로 직접 정제하여, 무색 오일(297.1mg, 55% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C28H36N3O6에 대한 계산치 [M+H]+ 510.25; 실측치 510.25.
실시예 333. tert-부틸((S)-1-((S)-8-히드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-일)-1-옥소프로판-2-일)카르바메이트(369)의 합성.
화합물 368(567mg, 1.11mmol), 메탄올(60mL), 팔라듐/탄소(126mg, 10wt%)를 수소화 반응 플라스크에 충전하였다. 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채우고 실온에서 밤새 교반하였다. 오일 펌프 하에서 여과 및 농축하여, 무색 오일을 얻었다(469mg, 100% 수율). MS-ESI (m/z): 계산치. C21H30N3O6에 대한 계산치 [M+H]+ 420.21; 실측치 420.21.
실시예 334. 알릴(11aS)-8-((5-(((S)-10-((tert-부톡시카르보닐)-L-알라닐)-7-메톡시-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사하이드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-11-((tert-부틸디메틸실릴)옥시) -7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트(370)의 합성.
아세톤 40mL, 탄산칼륨(167.0mg, 1.21mmol) 중의 화합물 369(254mg, 0.61mmol) 및 화합물 358(598mg, 0.91mmol)의 혼합물을 환류하도록 가열하고, 7시간 동안 교반하였다. 반응물을 농축하고 실리카 겔 컬럼(에틸 아세테이트/석유 에테르에 이어 디클로로메탄/메탄올)으로 정제하여, 연황색 고체(413mg, 72% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C49H72IN5O12Si에 대한 계산치 [M+H]+ 950.49; 실측치 950.49.
실시예 335. 알릴(11aS)-8-((5-(((S)-10-(L-알라닐)-7-메톡시-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사하이드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-11-하이드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3, 11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트(371)의 합성.
화합물 370(413mg, 0.43mmol)을 2mL의 TFA 및 6mL의 DCM에 용해시키고, 실온에서 2시간 동안 교반하고, 농축시켰다. 잔류물을 20mL의 DCM으로 희석하고, 6mL의 염수, 6mL의 포화 중탄산나트륨으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하여, 연황색 고체를 얻었다(334mg, 100% 수율). MS-ESI (m/z): 계산치. C38H50IN5O10에 대한 계산치 [M+H]+ 736.35; 실측치 736.35.
실시예 336. N-((S)-5-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-6-((4-(((S)-1-((S)-7-메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-5-옥소-2,3,5,11a-테트라히드로-1H-벤조[e] 피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1, 2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-일)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-4-옥소부틸)아미노)-6-옥소헥실)-2,5,8,11, 14,17,20,23,26,29-데카옥사엔트리아콘탄-31-아미드(372)의 합성.
화합물 371(79.9mg, 0.11mmol)을 8mL의 DCM에 용해시키고, 여기에 피롤리딘 (7.7mg, 0.11mmol)과 촉매량의 Pd(PPh3)4를 첨가하고 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응물을 0-5℃로 냉각시키고, 8mL의 DCM 중의 화합물 242(140mg, 0.16mmol) 및 EDC·HCl(42.0mg, 0.22mmol)을 첨가하였다. 2시간 동안 교반한 후, 반응물을 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 갈색 오일(33mg, 20% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C73H110IN9O23에 대한 계산치 [M+H]+ 1480.76; 실측치 1480.76.
실시예 337. N-((S)-5-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-6-((4-((2 -(((R)-1-((S)-7-메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-5-옥소-2,3,5,11a-테트라히드로-1H- 벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e] 피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-일)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-2-옥소에틸)아미노)-4-옥소부틸)아미노)-6- 옥소헥실)-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사엔트리아콘탄-31-아미드(373)의 합성.
화합물 371(79.9mg, 0.11mmol)을 8mL의 DCM에 용해시키고, 여기에 피롤리딘 (7.7mg, 0.11mmol)과 촉매량의 Pd(PPh3)4를 첨가하고 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응물을 0-5℃로 냉각시키고, 8mL의 DCM 중의 화합물 234(150mg, 0.16mmol) 및 EDC·HCl(42.0mg, 0.22mmol)을 첨가하였다. 2시간 동안 교반한 후, 반응물을 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 연황색 고체(32mg, 19% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C75H113IN10O24에 대한 계산치 [M+H]+ 1537.79; 실측치 1537.79.
실시예 338. N-((S)-5-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-6-(((S)-1-(((S)-1-(((R)-1-((S)-7-메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-5-옥소-2,3, 5,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-5-옥소-2,3,11,11a- 테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-일)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-1-옥소프로판-2-일) 아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-6-옥소헥실)-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사엔트리아콘탄-31-아미드(374)의 합성.
화합물 371(79.9mg, 0.11mmol)을 8mL의 DCM에 용해시키고, 여기에 피롤리딘 (7.7mg, 0.11mmol)과 촉매량의 Pd(PPh3)4를 첨가하고 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응물을 0-5℃로 냉각시키고, 10mL의 DCM 중의 화합물 291(164mg, 0.17mmol) 및 EDC·HCl(42.0mg, 0.22mmol)을 첨가하였다. 2시간 동안 교반한 후, 반응물을 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 갈색 오일을 얻었다(56mg, 32% 수율). MS-ESI (m/z): 계산치. C75H113IN10O24에 대한 계산치 [M+H]+ 1537.79; 실측치 1537.79.
실시예 339. N-((2S,5S,8S,11S,14S)-14-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-1-((S)-7-메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-5-옥소-2,3,5,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1, 2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a] [1,4]디아제핀-10(5H)-일)-2,5,8,11-테트라메틸-1,4,7,10,13-펜타옥소-3,6,9,12-테트라아자옥타데칸-18-일)-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사엔트리아콘탄-31-아미드(375)의 합성.
화합물 371(79.9mg, 0.11mmol)을 10mL의 DCM에 용해시키고, 여기에 피롤리딘 (7.7mg, 0.11mmol)과 촉매량의 Pd(PPh3)4를 첨가하고 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응물을 0-5℃로 냉각시키고, 10mL의 DCM 중의 화합물 217(162mg, 0.16mmol) 및 EDC·HCl(43.0mg, 0.22mmol)을 첨가하였다. 2시간 동안 교반한 후, 반응물을 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 갈색 오일(45mg, 25% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C78H118IN11O25에 대한 계산치 [M+H]+ 1608.82; 실측치 1608.82.
실시예 340. 4-니트로페닐(S)-8-(벤질옥시)-7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실산염(377)의 합성.
DCM(100mL) 중의 화합물 365(2.03g, 6.0mmol)의 용액에, 교반하면서 DIPEA(0.93g, 7.2mmol) 및 4-니트로페닐 클로로포르메이트(1.33g, 6.6mmol)를 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 물, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(EA/PE= 20%-100%)로 정제하여, 표제 화합물(2.6g, 86% 수율)을 얻었다.
실시예 341. 4-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로판아미도)벤질(S)-8-(벤질옥시)-7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트(379)의 합성.
무수 THF(5mL) 및 DMA(10mL)에 용해된 화합물 378(0.71g, 2.4mmol)의 용액을 얼음-염 배치에서 0℃ 미만으로 냉각시켰다. LiHMDS(2.4mL, 1 mol/L)를 N2하에 적가하고, 반응물을 20분 동안 0℃ 미만으로 유지하였다. 10mL의 THF 중의 tert-부틸 (S)-(1-((4-(히드록시메틸)-페닐)아미노)-1-옥소프로판-2-일)카르바메이트(화합물 377)(1.01g, 2mmol)의 용액을 적가하고, 반응물을 20분 동안 0℃ 미만으로 유지하고, 실온으로 가온하고, 4시간 동안 교반하였다. 반응액을 DCM으로 희석한 후, 염화암모늄 용액, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시킨 후, 여과하고 농축하였다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(EA/PE= 20%-100%)로 정제하여, 표제 화합물(0.84g, 63% 수율)을 얻었다.
실시예 342. 4-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로판아미도)벤질(S)-8-히드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트(380)의 합성.
화합물 379(1.17g, 1.77mmol), 메탄올(25mL), 팔라듐/탄소(0.20g, 10wt%)를 수소화 반응 플라스크에 충전하였다. 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채우고, 0°C에서 1시간 동안 교반하였다. 오일 펌프 하에서 여과 및 농축하여, 표제 화합물을 얻었다(0.91g, 90% 수율).
실시예 343. 알릴(11aR)-8-((5-(((R)-10-(((4-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로판아미도)벤질)옥시)카르보닐)-7-메톡시-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일) 옥시)펜틸)옥시)-11-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a] [1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실산염(381)의 합성.
80mL의 아세톤 및 탄산칼륨(0.44g, 3.2mmol) 중의 화합물 380(0.91g, 1.6mmol) 및 화합물 358(1.37g, 2.1mmol)의 혼합물을 가열 환류시키고 8시간 동안 교반하였다. 반응물을 실리카 겔 컬럼(0-10% MeOH/DCM)으로 직접 정제하여, 표제 화합물(1.4g, 79% 수율)을 얻었다.
실시예 344. 알릴(11aR)-8-((5-(((R)-10-(((4-((S)-2-아미노프로판아미도)벤질)옥시)카르보닐)-7-메톡시-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-11 -히드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트(382)의 합성.
화합물 381(0.70g, 0.64mmol)을 15mL의 DCM에 용해시키고 5℃로 냉각시킨 후, 여기에 TFA(5mL)를 첨가하고 실온에서 40분 동안 교반하였다. 반응물을 DCM으로 희석하고, 10% 포화 중탄산나트륨 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 컬럼(0-15% MeOH/DCM)으로 정제하여, 표제 화합물(0.38g, 66% 수율)을 얻었다.
실시예 345. 4-((S)-2-아미노프로판아미도)벤질(R)-7-메톡시-8-((5-(((R)-7-메톡시-5-옥소-2,3,5,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로 -1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트(383)의 합성.
화합물 382(62mg, 0.07mmol)을 2mL의 DCM에 용해시킨 후, 여기에 피롤리딘(4.7mg, 0.07mmol)과 촉매량의 Pd(PPh3)4(1mg)을 첨가한 후, 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응물을 DMF로 희석하고 증발시켜 DCM을 제거하였다. DMF 중 생성된 조 생성물을 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS-ESI (m/z): 계산치. C42H50N6O9에 대한 계산치[M+H]+:783.90; 실측치 783.85.
실시예 346. 4-((37S,40S,43S,46S,49S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40,43,46,49-테트라메틸-31,38,41,44,47-펜타옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,39,42,45 ,48-펜타아자펜타콘탄-50-아미도)벤질 (S)-7-메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-5-옥소-2,3,5,11a-테트라히드로-1H- 벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e] 피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트(384)의 합성.
화합물 382(100mg, 0.11mmol)을 10mL의 DCM에 용해시킨 후, 여기에 피롤리딘(8.0mg, 0.11mmol)과 촉매량의 Pd(PPh3)4를 첨가하고 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응물을 0-5℃로 냉각시키고, 10mL의 DCM 중의 화합물 217(156mg, 0.17mmol) 및 EDC·HCl(86.6mg, 0.45mmol)을 첨가하였다. 2시간 동안 교반한 후, 반응물을 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 백색 고체(43mg, 22% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C86H125IN12O27에 대한 계산치 [M+H]+ 1756.87; 실측치 1756.87.
실시예 347. ((((2S,5S,8S,11S,14S,22S,23S,31S,34S,37S,40S,43S)-22,23-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2,5,8,11,34,37,40,43-옥타메틸-4,7,10,13,16,21,24,29,32,35,38,41-도데카옥소-14,31-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6, 9,12,15,20,25,30,33,36,39,42-도데카아자테트라테트라콘탄디오일)비스(아잔디일))비스(4,1-페닐렌))비스(메틸렌) (11aS,11a'S)-비스(7- 메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-5-옥소-2,3,5,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10 (5H)-카르복실레이트)(385)의 합성.
DMF(1mL) 중의 화합물 136(73mg, 0.035mmol), HATU(40mg, 0.105mmol)의 용액을 실온에서 15분 동안 교반하고, DMF 중의 383(0.07mmol)의 조 생성물을 반응 용액에 첨가한 후, 이어서 DIPEA(14mg, 0.105mmol)를 첨가하였다. 실온에서 30분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 분취용 HPLC로 직접 정제하여, 담황색 고체를 얻었다(45mg, 18% 수율). MS-ESI (m/z): 계산치. C176H252N26O56에 대한 계산치[2M+H]+:1815.08; 실측치 1815.11.
실시예 348.(S)-2,5-디옥소피롤리딘-1-일 37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31,38,43-트리옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,39,44-트리아자헥사테트라콘탄-46-오에이트(387)의 합성.
화합물 234(12.6g, 13.7mmol)를 DCM(150mL)에 용해시키고, N-히드록시숙신이미드(3.2g, 27.8mmol) 및 EDC·HCl(7.9g, 41.2mmol)을 빙수조 위에서 첨가하였다. 반응물을 실온에서 3.5시간 동안 교반하고, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하여, 화합물 387(14.0g)을 얻었고, 이는 다음 단계에서 직접 사용되었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C45H75N6O20에 대한 계산치 [M+H]+ 1019.50; 실측치, 1019.58.　
실시예 349.(2S,4R)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-(3-((S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31,38,43-트리옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,39,44-트리아자헥사테트라콘탄아미도)- 4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산(388)의 합성.
화합물 387(14.0g, 13.7mmol)과 화합물 77(4.2g, 12.3mmol)을 THF(150mL)에 용해시키고, 25℃에서 8시간 동안 교반한 후, 농축하고 에틸아세테이트로 희석하고 물로 세척하였다. 수성상을 염화 고형물(solidum)로 포화시키고, 디클로로메탄으로 2회 추출하였다. 합한 유기상을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 컬럼(MeOH/CH2Cl2)으로 정제하여, 화합물 388(7.6g, 2단계에 걸쳐 50% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C58H96N7O22에 대한 계산치 [M+H]+ 1242.65; 실측치, 1242.65.　
실시예 350.(2S,4R)-4-아미노-5-(3-((S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31,38,43-트리옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,39,44-트리아자헥사테트라콘탄아미도)-4-히드록시페닐)-2- 메틸펜탄산(389)의 합성.
화합물 388(0.50g, 0.40mmol)을 DCM(10mL) 및 TFA(5mL)에 용해시켰다. 반응물을 1시간 동안 교반한 후, 농축하여, 화합물 389(0.46g)를 얻었고, 이는 다음 단계에서 직접 사용되었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C53H88N7O20에 대한 계산치 [M+H]+　1142.60; 실측치, 1142.62.　
실시예 351. (2S,4R)-4-(2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-5-(3-((S)-37-(4-(2, 5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31,38,43-트리옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사 -32,39,44-트리아자헥사테트라콘탄아미도)-4-하이드록시페닐)-2-메틸펜탄산(390)의 합성.
화합물 389(0.46g, 0.40mmol) 및 Tub-1(0.30g, 0.44mol)을 DMF(5mL)에 용해시키고, N,N-디이소프로필에틸아민(0.52g, 4.0mol)을 얼음-염 욕 위에 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하고 농축시켰다. 잔류물을 디클로로메탄(10mL) 및 포름산(0.5mL)에 용해시키고, 다시 농축시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여, 화합물 390(0.26g, 40% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): 계산치. C78H128N11O25S에 대한 계산치 [M+H]+　1650.87; 실측치, 1650.87.　
실시예 352. (5S,8S,11S)-tert-부틸 11-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-5,8-디메틸-4,7,10,17-테트라옥소-19,22,25,28,31,34,37,40,43,46-데카옥사-2,3,6,9,16-펜타아자헵타테트라콘탄-1-오에이트(392)의 합성.
DCM(20mL) 중의 화합물 391(2.67g, 3.00mmol) 및 tert-부틸 카바제이트(0.48g, 3.60mmol)의 용액에, EDC·HCl(0.69g, 3.60mmol)을 첨가하고, 반응물을 1시간 동안 교반하고, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하고, 실리카 겔 컬럼(MeOH/CH2Cl2)으로 정제하여, 표제 화합물(2.56g, 85% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ 계산치. C46H80N6O18에 대한 계산치, 1005.55; 실측치, 1005.65.
실시예 353. (5S,8S,11S)-tert-부틸 11-아미노-5,8-디메틸-4,7,10,17-테트라옥소-19,22,25,28,31,34,37,40,43,46-데카옥사-2,3,6,9,16-펜타아자헵타테트라콘탄-1-오에이트(393)의 합성.
메탄올(20mL) 중의 화합물 392(2.56g, 2.55mmol)의 용액에, 10wt% Pd/C(0.30g)를 첨가하고, 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채운 다음, 실온에서 수소 벌룬 아래에서 2시간 동안 교반하고, 여과하고 농축 건조시켜, 화합물 393(2.10g, 94% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M+H]+ C38H74N6O16에 대한 계산치, 871.52; 실측치, 871.56.
실시예 354. (5S,8S,11S)-tert-부틸 11-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-5,8-디메틸-4,7,10,17-테트라옥소-19,22,25,28,31,34,37,40,43,46-데카옥사-2,3,6,9,16-펜타아자헵타테트라콘탄-1-오에이트(394)의 합성.
DCM(25mL) 중의 화합물 393(2.10g, 2.41mmol) 및 4-말레이미도부티르산 N-하이드록시숙신이미드 에스테르(0.81g, 2.89mmol)의 용액에, N-메틸모르폴린(0.29g, 2.89mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하고, 농축한 후, 실리카겔 컬럼(MeOH/CH2Cl2)으로 정제하여, 화합물 394(2.30g, 92% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): C46H81N7O19에 대한 계산치 [M+H]+　1036.56; 실측치, 1037.20.
실시예 355. N-((S)-5-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-6-(((S)-1-(((S)-1-히드라지닐-1-옥소프로판-2-일)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-6-옥소헥실)-2,5,8,11,14,17,20 ,23,26,29-데카옥사엔트리아콘탄-31-아미드(395)의 합성.
DCM(10mL) 중의 화합물 394(0.52g, 0.50mmol)의 용액을 TFA(5mL)와 함께 30분 동안 교반한 후, 농축하여 조생성물(0.45g)을 얻었고, 이는 다음 단계에 직접 사용되었다. MS-ESI (m/z): C41H73N7O17에 대한 계산치 [M+H]+　936.51; 실측치, 936.55.
실시예 356. (1R,3R)-3-((2S,3S)-2-(2-(디메틸아미노)-2-메틸프로판아미도)-N,3-디메틸펜탄아미도)-1-(4-(((37S,40S,43S,48S,50R)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40,43,48-트리메틸-31,38 ,41,44,47-펜타옥소-51-페닐-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,39,42,45,46-펜타아자헨펜타콘탄-50-일)카르바모일)티아졸-2-일)-4-메틸펜틸 아세테이트(396)의 합성.
DMF(10mL) 중의 화합물 395(0.045g, 0.050mmol) 및 Tub-5(0.039g, 0.055mmol)의 혼합물에, HATU(0.021g, 0.055mmol) 및 트리메틸아민(5.5mg, 0.055mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 전환이 완료될 때까지 혼합물을 0℃에서 교반한 다음, 염수(20mL)로 2회 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC(물/아세토니트릴)로 정제하여, 화합물 396(0.042g, 52% 수율)을 백색 폼으로 생성하였다. MS-ESI (m/z): [M+2H]2+ C78H128N12O23S에 대한 계산치, 817.45; 실측치, 817.56.
실시예 357. (2S,4R)-4-(2-((6S,9R,11R)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-13-(4-니트로페녹시)-4,7,13-트리옥소-6-프로필-12-옥사-2,5,8-트리아자트리데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-2-메틸-5-페닐펜탄산(397)의 합성.
20mL의 드라이 디클로로메탄 중의 화합물 Tub-6(0.034g, 0.050mmol) 및 4-니트로벤조일 클로라이드(0.011g, 0.060mmol)의 혼합물에, N,N-DIISOPROPYLETHYLAMINE(8mg, 0.060mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 30분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 짧은 실리카겔 컬럼에 로딩하고, MeOH/CH2Cl2로 용출시켰다. 분획을 합치고 농축하여, 표제 화합물을 얻었다(0.030g, 72% 수율). MS-ESI (m/z): [M+H]+ C41H56N6O10S에 대한 계산치 825.38; 실측치, 825.60.
실시예 358. N-((S)-6-(((S)-1-(((S)-1-((2-아미노에틸)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-5-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-6-옥소헥실)-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사엔트리아콘탄-31-아미드(398)의 합성.
Tert-부틸 ((37S,40S,43S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40,43-디메틸-31,38,41,44-테트라옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,39,42,45-테트라아자헵타테트라콘탄-47-일)카바메이트(0.043g, 0.040mmol)을 디클로로메탄(5mL)에 용해시키고, TFA(2.5mL)로 30분 동안 처리한 후, 반응물을 농축하여, 표제 화합물을 얻었고, 이는 다음 단계에서 직접 사용되었다.
실시예 359.(2S,4R)-4-(2-((37S,40S,43S,51R,53R,56S)-56-((S)-sec-부틸)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-53-이소프로필-40,43,54,59,59,60-헥사메틸-31,38,41,44,49,55,58-헵타옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,50-운데카옥사-32,39,42,45,48,54,57,60-옥타아자헨헥사콘탄-51- 일)티아졸-4-카르복스아미도)-2-메틸-5-페닐펜탄산(399)의 합성.
DMF(5mL)에 용해된 화합물 397(0.030g, 0.036mmol) 및 화합물 398(0.040mmol)의 용액에, N,N-디이소프로필에틸아민(13mg, 0.10mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 2시간 동안 교반하고 농축한 다음, 분취용 HPLC(물/아세토니트릴)로 정제하여, 화합물 399(53mg, 90% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): C79H130N12O24S에 대한 계산치 [M+2H]2+　832.45; 실측치, 832.56.
실시예 360. (1R,3R)-3-((2S,3S)-2-(2-(디메틸아미노)-2-메틸프로판아미도)-N,3-디메틸펜탄아미도)-1-(4-(((37S,40S,43S,50S,52R)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40,43,50-트리메틸-31,38 ,41,44,49-펜타옥소-53-페닐-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,39,42,45,48-펜타아자트리펜타콘탄-52-일)카르바모일)티아졸-2-일)-4-메틸펜틸 아세테이트(400)의 합성.
빙수조 상에서 냉각된 DMF(10mL) 중의 Tub-5(29mg, 0.040mmol) 및 화합물 398(0.040mmol)의 용액에, HATU(0.19g, 0.050mmol) 및 트리에틸아민(10mg, 0.10mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온하고, 밤새 교반하고, 염수로 세척하고, 건조하고, 농축하고, 분취용 HPLC(물/아세토니트릴)로 정제하여, 백색 거품(55mg, 83% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): [M + 2H]2+ C80H132N12O23S에 대한 계산치, 831.46; 실측치, 832.58.
실시예 361. (37S,40S,43S)-2,5-디옥소피롤리딘-1-일 37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40,43-디메틸-31,38,41,44-테트라옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,39,42,45-테트라아자헵타테트라콘탄-47 -오에이트(401)의 합성.
DCM(10mL) 중의 ((S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자옥타트리아콘탄-38-오일)-L-알라닐-L-알라닐글리신(0.98g, 0.10mmol)의 용액에, N-하이드록시숙신이미드(14mg, 0.12mmol) 및 EDC·HCl(23mg, 0.12mmol)을 빙수조 위에 첨가하였다. 반응물을 실온에서 3.5시간 동안 교반하고, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하여, 화합물 401(0.11g)을 얻었고, 이는 다음 단계에서 직접 사용되었다. MS-ESI (m/z): C47H77N7O21에 대한 계산치 [M+H]+ 1076.52; 실측치, 1077.50.　
실시예 362. (2S,4R)-4-(2-((6S,9R,11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-5-(4-((37R,40R,43R)-37-(4 -(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40,43-디메틸-31,38,41,44-테트라옥소-2,5,8,11,14 ,17,20,23,26,29-데카옥사-32,39,42,45-테트라아자헵타테트라콘탄아미도)페닐)-2-메틸펜탄산(402)의 합성.
화합물 401(0.11g, 0.10mmol)과 Tub-7(44mg, 0.06mmol)을 DMF 2mL에 용해시킨 후, N,N-디이소프로필에틸아민(13mg, 0.10mmol)을 첨가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 반응물을 농축하고 분취용 HPLC로 정제하여, 연황색 액체를 얻었다(62mg, 61% 수율). MS-ESI (m/z): C80H130N12O25S에 대한 계산치 [M+2H]2+ 846.45; 실측치, 846.40.
실시예 363. 벤질((37S,40S,43S)-40-이소프로필-43-메틸-31,38,41,44,47,50-헥사옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,39,42,45,48-펜타아자펜타콘탄-37-일)카바메이트(403)의 합성.
디클로로메탄(5mL) 중의 벤질((37S,40S,43S)-40-이소프로필-50-메톡시-43-메틸-31,38,41,44,47-펜타옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,51-운데카옥사-32,39,42,45,48-펜타아자도펜타콘탄-37-일)카르바메이트(102mg, 0.10mmol)의 용액에, p-톨루엔술폰아미드(1.7mg, 0.010mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 밤새 교반하고, 농축하고, 고속 실리카겔 컬럼(에틸 아세테이트/디클로로메탄)으로 정제하여, 무색 오일(69mg, 68% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): C47H80N6O18에 대한 계산치 [M+2H]2+ 509.27; 실측치, 509.26.
실시예 364. (2S,4R)-4-(2-((37S,40S,43S,55S,58R,60R)-37-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-55-((S)-sec-부틸)-40,58-디이소프로필-43,51,52,52,57-펜타메틸-31,38,41,44,47,53,56,62-옥타옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,61-운데카옥사-32,39,42,45,48,51,54,57-옥타아자트리헥사콘탄-60-일)티아졸-4-카르복사미도)-5-(4-(벤질옥시)페닐)-2-메틸펜탄산(404)의 합성.
이소프로필 알코올(2.0mL) 및 아세트산(0.2mL)에 용해된 화합물 403(69mg, 0.068mmol) 및 Tub-8(48mg, 0.060mmol)의 용액에, 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드(38mg, 0.18mmol)를 0°C에서 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하고, 농축하고 분취용 HPLC(물/아세토니트릴)로 정제하여, 흰색 거품을 얻었다(92mg, 85% 수율). MS-ESI (m/z): C90H141N11O25S에 대한 계산치 [M+2H]2+904.99; 실측치, 905.10.
실시예 365.(2S,4R)-4-(2-((37S,40S,43S,55S,58R,60R)-37-아미노-55-((S)-sec-부틸)-40,58-디이소프로필-43,51,52,52,57-펜타메틸-31,38,41,44,47,53,56,62-옥타옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,61-운데카옥사-32,39,42,45,48,51,54,57-옥타아자트리헥사콘탄-60-일)티아졸-4-카르복사미도)-5-(4-히드록시페닐)-2-메틸펜탄산 (405)의 합성.
화합물 404(92mg, 0.051mmol)를 메탄올(5mL)에 용해시키고, 탄소상 팔라듐(10 중량%, 10 mg)을 첨가하고, 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채우고, 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과액을 농축하여, 표제 화합물을 얻었다(77mg, 96% 수율). MS-ESI (m/z): [M+2H]2+ C75H129N11O23S에 대한 계산치, 792.95; 실측치, 973.91.
실시예 366. (2S,4R)-4-(2-((37S,40S,43S,55S,58R,60R)-55-((S)-sec-부틸)-37-(4-(2 ,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-60-히드록시-40,58-디이소프로필-43,51,52,52,57-펜타메틸-31,38,41, 44,47,53,56-헵타옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,39,42,45,48,51,54,57-옥타아자헥사콘탄- 60-일)티아졸-4-카르복스아미도)-5-(4-히드록시페닐)-2-메틸펜탄산(406)의 합성.
THF(1.5mL) 및 PBS(pH 6.2, 1.0mL)에 용해된 화합물 405(77mg, 0.048mmol) 및 4-말레이미도부티르산 N-하이드록시숙신이미드 에스테르(13mg, 0.048mmol)의 용액을 실온에서 밤새 교반하고 농축한 후, 분취용 HPLC(물/아세토니트릴)로 정제하여, 화합물 406(47mg, 58% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): C81H134N12O25S에 대한 계산치 [M+2H]2+　854.46; 실측치, 854.20.
실시예 367. (2S,4R)-벤질 4-(2-((37S,40S,43S,53R,55R)-37-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-52-((2S,3S)-2-(2-(디메틸아미노)-2-메틸프로판아미도)-3-메틸펜타노일)-53-이소프로필-40,43-디메틸-31,38,41,44,49,57-헥사옥소-2,5,8, 11,14,17,20,23,26,29,56-운데카옥사-32,39,42,45,48,52-헥사아자옥타펜타콘탄-55-일)티아졸-4-카르복스아미도)-5-(4-(벤질옥시)페닐)-2-메틸펜타노에이트(408)의 합성.
화합물 407(50mg, 0.05mmol) 및 Tub-9(58mg, 0.06mmol)를 DMF(2.5mL)에 용해시키고, 여기에 EDC·HCl(17mg, 0.09mmol) 및 N,N-DIISOPROPYLETHYLAMINE(19mg, 0.15mmol)을 첨가하고, 반응물을 0.5시간 동안 교반한 후, 농축 건조시켰다. 조 생성물을 분취용 HPLC(물/아세토니트릴)로 정제하여, 화합물 408을 오일로서 얻었다(83mg, 88% 수율). MS-ESI (m/z): [M + 2H]2+ C96H145N11O25S에 대한 계산치, 942.00; 실측치, 942.12.
실시예 368.(2S,4R)-4-(2-((37S,40S,43S,53R,55R)-52-((2S,3S)-2-(2-(디메틸아미노)-2-메틸프로판아미도)-3-메틸펜타노일)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-53-이소프로필-40,43-디메틸-31,38, 41,44,49,57-헥사옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,56-운데카옥사-32,39,42,45,48,52-헥사아자옥타펜타콘탄-55- 일)티아졸-4-카르복스아미도)-5-(4-히드록시페닐)-2-메틸펜탄산(409)의 합성.
화합물 408(83mg, 0.044mmol)을 메탄올(5mL)에 용해시키고, 탄소상 팔라듐(10 중량%, 10 mg)을 첨가하고, 반응 플라스크를 비우고 수소로 3회 다시 채우고, 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여과액을 농축한 후, THF(1.5mL)와 PBS(pH 6.2, 1.0mL)에 다시 용해시키고, 4-말레이미도부티르산 N-하이드록시숙신이미드 에스테르(12mg, 0.043mmol)를 첨가하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 농축하고 분취용 HPLC(물/아세토니트릴)로 정제하여, 표제 화합물(34mg, 45% 수율)을 얻었다. MS-ESI (m/z): C82H134N12O26S에 대한 계산치 [M+2H]2+867.46; 실측치, 868.02.
실시예 369. 4-니트로페닐(S)-8-(벤질옥시)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1, 2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트(410)의 합성.
DCM(100mL) 중의 (S)-8-(벤질옥시)-7-메톡시-2-메틸렌-1,2,3,10,11,11a-헥사히드로-5H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-5-온(2.118g, 6.051mmol)의 용액에, DIPEA(0.931g, 7.201mmol) 및 4-니트로페닐 클로로포르메이트(1.331g, 6.601mmol)를 교반하면서 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 물, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(EA/DCM= 15%-45%)로 정제하여, 표제 화합물(2.618g, 84% 수율)을 얻었다. C28H26N3O7 [M+H]+516.177; 실측치, 516.195.
실시예 370. 4-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로판아미도)벤질(S)-8-(벤질옥시)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트(411)의 합성.
무수 THF(5mL) 및 DMA(10mL)에 용해된 화합물 410(0.70g, 1.36mmol)의 용액을 얼음-염 배치에서 0℃ 미만으로 냉각시켰다. LiHMDS(2.4mL, 1 mol/L)를 N2하에 적가하고, 반응물을 20분 동안 0℃ 미만으로 유지하였다. 10mL의 THF 중의 tert-부틸 (S)-(1-((4-(히드록시메틸)-페닐)아미노)-1-옥소프로판-2-일)카르바메이트(화합물 377)(1.01g, 2.0mmol)의 용액을 적가하고, 반응물을 20분 동안 0℃ 미만으로 유지하고, 실온으로 가온하고 4시간 동안 교반하였다. 반응액을 DCM으로 희석한 후, 염화암모늄 용액, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시킨 후, 여과하고 농축하였다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(EA/DCM= 15%-40%)로 정제하여, 표제 화합물(0.59g, 65% 수율)을 얻었다. MS, C37H43N4O8 [M+H]+671.31; 실측치, 671.60.
실시예 371. 4-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로판아미도)벤질(S)-8-히드록시-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트(412)의 합성.
DCM(15mL) 중의 화합물 411(1.10g, 1.64mmol)을 실온에서 45분 동안 AlCl3(0.65g, 4.93mmol) 및 N,N-디메틸아닐린(0.30g, 2.48mmol)으로 처리하였다. 혼합물을 DCM(15ml)으로 희석하고, 0.1M HCl(10ml), 염수(10ml), 5% NaHCO3 용액 및 염수(10ml)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축하고 컬럼 크로마토그래피(EA/DCM= 20%-40%)으로 정제하여, 표제 화합물을 얻었다(0.685g, 72% 수율). MS, C30H37N4O8 [M+H]+581.26; 실측치, 581.40.
실시예 372. (11aR)-알릴 11-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-8-((5-요오도펜틸)옥시)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트(413)의 합성.
아세톤(100mL) 중의 (11aR)-알릴 11-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-8-히드록시-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트(1.45g, 3.06mmol)의 용액에, 디요오도펜탄(4.86g, 15mmol) 및 탄산칼륨(0.62g, 4.5mmol)을 교반하면서 첨가하였다. 첨가 후, 반응물을 8시간 동안 가열 환류시키고, 냉각시킨 후, 컬럼 크로마토그래피(EA/DCM= 15%-30%)로 직접 정제하여, 표제 화합물(1.87g, 91% 수율)을 얻었다. MS, C29H44IN2O6Si [M+H]+671.20; 실측치, 671.45.
실시예 373. (11aR)-알릴 8-((5-(((R)-10-(((4-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-프로판아미도)벤질)옥시)카르보닐)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀 -8-일)옥시)펜틸)옥시)-11-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트(414)의 합성.
80mL의 아세톤 및 탄산 칼륨(0.44g, 3.2mmol) 중의 화합물 413(0.90g, 1.34mmol) 및 화합물 412(0.80g, 1.38mmol)의 혼합물을 가열 환류시키고 8시간 동안 교반하였다. 반응물을 실리카 겔 컬럼(0-10% MeOH/DCM)으로 직접 정제하여, 표제 화합물(1.13g, 75% 수율)을 얻었다. MS, C59H79N6O14Si [M+H]+ 1123.542; 실측치, 1123.565.
실시예 374. (11aR)-알릴 8-((5-(((R)-10-(((4-((S)-2-아미노프로판아미도)벤질)-옥시)카르보닐)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-11-하이드록시-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라하이드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀 -10(5H)-카르복실산염(415)의 합성.
화합물 414(0.70g, 0.62mmol)를 디옥산 15mL에 용해시킨 후, 5 ℃로 냉각한 후, 여기에 HCl (conc., 5mL)을 첨가하고 실온에서 40분 동안 교반하였다. 반응물을 디옥산/톨루엔으로 희석하고 농축하였다. 조 생성물을 실리카 겔 컬럼(1:5:25, Et3N/MeOH/아세톤)으로 정제하여, 표제 화합물(0.41g, 72% 수율)을 얻었다. MS, C48H57N6O12 [M+H]+909.40; 실측치, 909.60.
실시예 375. (R)-4-((S)-2-아미노프로판아미도)벤질 7-메톡시-8-((5-(((R)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-2-메틸렌-5-옥소-2 ,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트(415)의 합성.
Figure pct00511
화합물 414(115mg, 0.126mmol)를 2mL의 DCM에 용해시킨 후, 여기에 피롤리딘 (19.0mg, 0.28mmol)과 촉매량의 Pd(PPh3)4(3 mg)을 첨가한 후, 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응물을 DMF로 희석하고 증발시켜 DCM을 제거하였다. DMF 중 생성된 조 생성물을 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS-ESI (m/z): C44H51N6O9에 대한 계산치[M+H]+:807.37; 실측치 807.50.
실시예 376. 4-((37S,40S,43S,46S,49S)-37-(4-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)부탄아미도)-40,43,46,49-테트라메틸-31,38,41,44,47-펜타옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32,39,42,45 ,48-펜타아자펜타콘탄-50-아미도)벤질 (S)-7-메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a- 테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a- 테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트(416)의 합성.
화합물 415(~105mg, ~0.131mmol)를 10mL의 DMF에 용해시키고, 여기에 화합물 218(158.0mg, 0.145mmol) 및 DIPEA(0.1ml)를 첨가하였다. 2시간 동안 교반한 후, 반응물을 농축하고 분취용 C-18 HPLC로 정제하여, 백색 고체(118mg, 51% 수율)를 얻었다. MS-ESI (m/z): C88H125IN12O27에 대한 계산치 [M+H]+ 1780.87; 실측치 1781.25.
실시예 377. ((((2S,5S,8S,11S,14S,22S,23S,31S,34S,37S,40S,43S)-22,23-비스(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2,5,8,11,34,37,40,43-옥타메틸-4,7,10,13,16,21,24,29,32,35,38 ,41-도데카옥소-14,31-비스(31-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-데카옥사-32-아자헥사트리아콘탄-36-일)-3,6, 9,12,15,20,25,30,33,36,39,42-도데카아자테트라테트라콘탄디오일)비스(아잔디일))비스(4,1-페닐렌))비스(메틸렌) (11aS,11a'S)-비스(7- 메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a] [1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a] [1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실산염)(417)의 합성.
DMF(1mL) 중의 화합물 136(73mg, 0.035mmol), HATU(40mg, 0.105mmol)의 용액을 실온에서 15분 동안 교반하고, DMF 중의 415(60mg, 0.074mmol)의 조 생성물을 반응 용액에 첨가한 후, 이어서 DIPEA(5mg, 0.039mmol)를 첨가하였다. 실온에서 90분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 분취용 HPLC로 직접 정제하여, 담황색 고체를 얻었다(61mg, 47% 수율). MS-ESI (m/z): C180H253N26O56에 대한 계산치[M+H]2+:1837.3875; 실측치 1837.3960.
실시예 378. 균질한 접합 반응을 통한 BCMA 접합체의 제조.
아연 아미노 복합체(예를 들어, 아연 2-메틸프로판-1, 2-디아민 클로라이드 복합체)(10~60mM, 사용된 항체의 1.0~5.0eq.) 및 TCEP(100mM, 사용된 항체의 2.5~4.5eq.)를 2~8℃에서 BCMA 항체(10~30mg/mL, 20mM PBS 중, pH 5.5~7.5)가 포함된 용액에 순서대로 첨가하였다. 2~8°C에서 12~16시간(밤새) 동안 배양한 후, 페이로드/링커 복합체(100~200mM, 사용된 항체의 2.0~8.0eq.)를 도입하고, 추가로 2~8°C에서 2~4시간 동안 배양하였다. 배양 후, 시스틴 또는 4-(아지도메틸)벤조산(100 - 200 mM, 항체의 4.0 - 8.0eq.)을 첨가하여, 과량의 TCEP을 고갈시켰고, 시스테인(100-200 mM, 항체의 2.0 - 6.0eq.)을 첨가하여, 과량의 페이로드를 고갈시켰고, EDTA(100~200mM, 항체의 4.0~6.0eq.)를 첨가하여, 아연을 포획하였고(trap), DHAA(100~200mM, 항체의 8.0~30.0eq.)를 첨가하여, 항체의 유리 티올 기를 산화(리-브릿지 연결)하였다. 반응 혼합물을 탈염 컬럼(Zeba Spin Desalting Columns, 40K MWCO), 또는 UF/DF 또는 이온 교환 크로마토그래피를 이용하여 최종 정제하였고, 약물/항체 비율(DAR)은 HIC-HPLC 또는 HPLC-MS를 이용하여 분석하였다.
전통적인 접합 공정과 균질 접합 공정 모두에 의해 제조된 접합체의 구조는 아래에 도시되어 있다:
여기서, mAb는 본 발명의 항체이고, n = 1 내지 20이고, 바람직하게는 n = 2 내지 8이다.
실시예 379. DAR 분석.
DAR은 HIC-HPLC를 이용하여 분석하였으며, HPLC 파라미터는 하기 표 10과 같다:
[표 10] HIC-HPLC에 의한 DAR 분석을 위한 조건
실시예 380. 접합체 제형의 일반적인 제조.
4mL의 멸균수에 240 mg의 수크로스, 0.8 mg의 폴리소르베이트-80, 24 mg의 구연산나트륨을 함유한 10mL의 붕규산 바이알에 들어 있는, 각 접합체: :C-25, C-30, C-36, C-45, C-51, C-58, C-68a, C-68b, C-68c, C-72a, C-72b, C-73, C-83, C-88, C-91, C-96, C-102, C-115, C-120, C-121, C-126, C-130, C-137, C-140, C-152, C-157, C-168, C-178, C-181a, C-181b, C-181c, C-181d, C-190, C-192, C-195, C-202, C-209, C-215, C-221, C-227, C-233, C-241, C-255, C-258, C-267, C-277, C-283, C-284, C-290, C-295, C-300, C-306, C-309, C-310, C-312, C-319, C-322, C-326, C-328, C-330, C-332, C-334, C-335, C-336, C-337, C-338, C-361, C-362, C-372, C-373, C-374, C-375, C-384, C-385, C-390, C-396, C-399, C-400, C-402, C-406, C-409, C-416, C-417의 80 mg 액상 제형을 구연산을 사용하여 pH 6.0으로 조정하였다. 그 다음, 각각의 접합체 용액을 -65℃ 내지 0℃의 온도에서 동결건조시키고, 감압(5~10 torr) 하에서 실온까지 동결건조시켜, 건조 케이크를 형성하였다. 케이크 접합체는 2~8℃에 보관한 후, 추가 적용 내지 응용을 위해 4mL의 멸균수로 재구성하였다.
실시예 381. 전통적인 접합 공정(Doronina, S, O., et al, Bioconjug Chem. 2006, 17(1):114-24)으로 자체 제조된 파클리탁셀(Paclitaxel) 및 벨란타마브엠씨(Belantamabmc)-MMAF 접합체와 비교하여, BCMA-접합체: C-25, C-30, C-36, C-45, C-51, C-58, C-68a, C-68b, C-68c, C-72a, C-72b, C-73, C-83, C-88, C-91, C-96, C-102, C-115, C-120, C-121, C-126, C-130, C-137, C-140, C-152, C-157, C-168, C-178, C-181a, C-181b, C-181c, C-181d, C-190, C-192, C-195, C-202, C-209, C-215, C-221, C-227, C-233, C-241, C-255, C-258, C-267, C-277, C-283, C-284, C-290, C-295, C-300, C-306, C-309, C-310, C-312, C-319, C-322, C-326, C-328, C-330, C-332, C-334, C-335, C-336, C-337, C-338, C-361, C-362, C-372, C-373, C-374, C-375, C-384, C-385, C-390, C-396, C-399, C-400, C-402, C-406, C-409, C-416, C-417의 시험관내 세포독성 평가.
세포독성 분석에 사용된 세포주는 (1)이었다. NCI-H929, JJN3, U266, MM1S는 ATCC에서 구입하였고, 8226-2A1cell은 ATCC의 RPMI-8226의 배양 및 클론-피킹을 통한 골수종 항원발현 세포이다. 세포는 제조사 매뉴얼에 따라 배양하였다. 분석을 실행하기 위해, 세포(180μl, 6000개 세포)를 96-웰 플레이트의 각 웰에 첨가하고, 5% CO2와 함께 37°C에서 24시간 동안 배양하였다. 그 다음, 세포를 적절한 세포 배양 배지(총 부피, 0.2mL) 내 다양한 농도의 테스트 화합물(20μL)로 처리하였다. 대조군 웰에는 세포와 배지가 포함되어 있지만, 테스트 화합물은 없다. 플레이트를 5% CO2와 함께 37°C에서 120시간 동안 배양하였다. 그 다음, MTT(5mg/mL)를 웰(20μl)에 첨가하고, 플레이트를 37°C에서 1.5시간 동안 배양하였다. 배지를 조심스럽게 제거한 후, DMSO(180μL)를 첨가하였다. 15분 동안 진탕한 후, 620 nm의 레퍼런스 필터를 사용하여 490 nm 및 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. 억제%는 다음 방정식에 따라 계산되었다: 억제% = [1-(분석물(assay)-블랭크)/(대조군-블랭크)] × 100. BCMA-ADC의 MTT 결과는 표 7에 나열되어 있다.
[표 7] 6000개 세포, 96시간 배양에서, NCI-H929, MM1S, JJN-3의 종양 세포에 대한 BCMA 항체 접합체의 MTT 분석. 표 7에 표시된 DAR은 본 발명의 균질 접합 공정을 통해 제조된 접합 DAR이었다.
실시예 382. 생체내 항종양 활성(NCI-H929 또는 MM1S, 이종이식 종양을 독립적으로 보유하는 BALB/c 누드 마우스).
이종 이식 모델에서 인간 다발성 골수종 NCI-H929 세포 또는 JJN-3 세포에 대항하여, 벨란타마브엠씨-MMAF와 함께 C-68a, C-83, C-115, C-126, C-137, C-181b, C-192, C-195, C-202, C-212b, C-258, C-277, C-290, C-306, C-385, C-390, C-396, C-399, C-400, C-402, C-406, 및 C-417의 BCMA 접합체의 생체내 효능
5-주령 암컷 BALB/c 누드 마우스(그룹당 6마리)의 오른쪽 어깨 아래 부위에, 0.1~0.2mL의 무혈청 배지 내의 각각의 암종 세포(5 x 106개 세포/마우스)를 피하 접종하였다. 종양은 6~8일 동안 성장하여, 평균 크기 150mm3, 또는 9~10일 동안 평균 크기 200mm3로 성장하였다. 그 다음, 동물을 무작위로 여러 그룹(그룹당 6마리)으로 나누었다. 첫 번째 그룹의 마우스는 대조군으로 사용되었으며, 인산염 완충 식염수(PBS) 비히클로 치료하였다. 다른 그룹에는 NCI-H929 세포 모델의 경우 2 또는 3mg/Kg의 용량으로, JJN-3 세포 모델의 경우 5mg/Kg의 용량으로 접합체를 정맥 내 투여하여 치료하였다. 종양의 3차원을 3 또는 4일마다(주 2회) 측정하고, 종양 부피 =1/2(길이 × 너비 × 높이) 공식을 사용하여 종양 부피를 계산하였다. 동시에 동물의 체중도 측정하였다. 다음 기준 중 하나가 충족되면 마우스를 희생시켰다: (1) 치료 전 체중보다 20% 이상 체중 감소, (2) 종양 부피가 1500mm3보다 큼, (3) 너무 아파서 음식과 물에 접근할 수 없음 또는 (4) 피부 괴사. 종양이 만져지지 않으면 마우스는 종양이 없는 것으로 간주되었다.
결과는 도 9 내지 도 11에 표시되어 있다. 모든 접합체는 투여된 용량에서 동물 체중 감소를 유발하지 않았다. 모든 접합체는 PBS 완충액과 비교하여 항종양 활성을 나타냈고, 많은 BCMA 접합체는 벨란타마브엠씨-MMAF보다 더 우수한 항종양 활성을 나타냈다.
상기 설명에 언급된 서열은 하기와 같다:
SEQ-ID-NO:1-hu5D2-HCDR1
TSFLIHW
SEQ-ID-NO:2-hu5D2-HCDR2
FIIPGNGGTKYNQKFQ
SEQ-ID-NO:3-hu5D2-HCDR3
YDGSFEGYFDV
SEQ-ID-NO:4-hu5D2-LCDR1
SSQSLVHSDGNTYLH
SEQ-ID-NO:5-hu5D2-LCDR2
KVSNRDS
SEQ-ID-NO:6-hu5D2-LCDR3
SQSTHWPWT
SEQ-ID-NO:7-BCMA-extracellular-domain
mlqmagqcsqneyfdsllhacipcqlrcssntppltcqrycnasvtnsvkgtna
SEQ-ID-NO:8-hu5D2-heavy-chain
qvqlvqsgaevvkpgasvkmsckasgytftsflihwvkqapgqglewigfiipgnggtkynqkfqgkatltsdtssstaymelsslrsedsavyycarydgsfegyfdvwgqgttltvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
SEQ-ID-NO:9hu5D2-Light-chain
dvvmtqsplslpvslrqpasiscrssqslvhsdgntylhwylqkpgqsprlliykvsnrdsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedlgvyfcsqsthwpwtfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
SEQ-ID-NO:10-5D2-VH evqlqqsgpelvkpgasvkmsckasgytftsflihwvkqkpgqglewigfiipyndgtkynekfkgkatltsdkssstaymelssltsedsavyycarydgsfegyfdvwgagttltvssa
SEQ-ID-NO:11-5D2-VL
dvlmtqtplslpvslrdqasiscrssqslvhsdgntylhwylqkpgqspklliykvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedlgvyfcsqsthvpwtfgggtkleik
SEQ-ID-NO:12-IgG1-constant stkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
SEQ-ID-NO:13-c5D2-HC
evqlqqsgpelvkpgasvkmsckasgytftsflihwvkqkpgqglewigfiipyndgtkynekfkgkatltsdkssstaymelssltsedsavyycarydgsfegyfdvwgagttltvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
SEQ-ID-NO:14-Kappa-constant
tvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
SEQ-ID-NO:15-c5D2-LC
dvlmtqtplslpvslrdqasiscrssqslvhsdgntylhwylqkpgqspklliykvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedlgvyfcsqsthvpwtfgggtkleiktvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
SEQ-ID-NO:16-hu5D2-VH
qvqlvqsgaevvkpgasvkmsckasgytftsflihwvkqapgqglewigfiipgnggtkynqkfqgkatltsdtssstaymelsslrsedsavyycarydgsfegyfdvwgqgttltvssa
SEQ-ID-NO:17-hu5D2-VL
dvvmtqsplslpvslrqpasiscrssqslvhsdgntylhwylqkpgqsprlliykvsnrdsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedlgvyfcsqsthwpwtfgqgtkleikr
SEQ-ID-NO:18-hu5D2-heavy-chain
atggagttcggcctgtcctgggtgttcctggtggccctgtttaggggagtgcagtgccaggtgcagctggtgcagagcggagctgaggtggtgaagccaggagctagcgtgaagatgtcttgtaaggcctccggctacaccttcacatcttttctgatccactgggtgaagcaggctccaggacagggactggagtggatcggcttcatcatccctggcaacggcggcaccaagtacaatcagaagtttcagggcaaggccaccctgacatccgacacctccagctctacagcttatatggagctgtccagcctgaggtctgaggattccgccgtgtactattgcgctcggtacgacggcagcttcgagggctattttgacgtgtggggccagggcaccacactgacagtgtctagcgcttctaccaagggaccatccgtgttcccactggccccctccagcaagtccaccagcggaggaacagccgctctgggatgcctggtgaaggactacttcccagagcccgtgacagtgagctggaactctggcgctctgacctccggcgtgcacacatttccagctgtgctgcagtcttccggcctgtacagcctgagctctgtggtgaccgtgccctccagctctctgggcacccagacatatatctgcaacgtgaatcacaagccatccaatacaaaggtggacaagaaggtggagcccaagagctgtgataagacccatacatgccccccttgtcctgccccagagctgctgggaggaccatccgtgttcctgtttccacccaagcctaaggacaccctgatgatctctaggacccccgaggtgacatgcgtggtggtggacgtgtcccacgaggaccccgaggtgaagtttaactggtacgtggatggcgtggaggtgcataatgctaagaccaagcctagggaggagcagtacaacagcacctatcgggtggtgtctgtgctgacagtgctgcaccaggattggctgaacggcaaggagtataagtgcaaggtgagcaataaggccctgcccgctcctatcgagaagaccatctctaaggccaagggccagcctagagagccacaggtgtacacactgcctccaagccgcgaggagatgaccaagaaccaggtgtctctgacatgtctggtgaagggcttctatccttctgacatcgctgtggagtgggagtccaatggccagccagagaacaattacaagaccacaccccctgtgctggactccgatggcagcttctttctgtattccaagctgaccgtggataagagcagatggcagcagggcaacgtgttttcttgctccgtgatgcatgaggctctgcacaatcattatacacagaagagcctgtctctgtcccctggcaagtga
SEQ-ID-NO:19-hu5D2-Light-chain
atggagttcggcctgtcctgggtgttcctggtggccctgtttagaggcgtgcagtgcgacgtggtcatgacacagtcccccctgagcctgcctgtgagcctgagacagcccgcttctatctcctgtcgctccagccagtctctggtgcattccgatggcaacacctacctgcattggtatctgcagaagccaggccagtctccccgcctgctgatctacaaggtgagcaatagggactctggcgtgcctgatcggttcagcggctctggctccggaaccgactttacactgaagatctccagggtggaggccgaggatctgggcgtgtatttctgcagccagtctacccactggccatggacatttggccagggcaccaagctggagatcaagcggacagtggcggcgccgtccgtgttcatctttccccctagcgacgagcagctgaagagcggcaccgcctctgtggtgtgcctgctgaacaatttctacccaagggaggccaaggtgcagtggaaggtggataacgctctgcagagcggcaattctcaggagtccgtgaccgagcaggacagcaaggattctacatattccctgtccagcaccctgacactgtctaaggccgactacgagaagcacaaggtgtatgcttgcgaggtgacccatcagggcctgtcttcccccgtgacaaagtcctttaaccggggcgagtgttgatga
SEQ-ID-NO:20-hu5D2-VH
caggtgcagctggtgcagagcggagctgaggtggtgaagccaggagctagcgtgaagatgtcttgtaaggcctccggctacaccttcacatcttttctgatccactgggtgaagcaggctccaggacagggactggagtggatcggcttcatcatccctggcaacggcggcaccaagtacaatcagaagtttcagggcaaggccaccctgacatccgacacctccagctctacagcttatatggagctgtccagcctgaggtctgaggattccgccgtgtactattgcgctcggtacgacggcagcttcgagggctattttgacgtgtggggccagggcaccacactgacagtgtctagcgct
SEQ-ID-NO:21-hu5D2-VL
gacgtggtcatgacacagtcccccctgagcctgcctgtgagcctgagacagcccgcttctatctcctgtcgctccagccagtctctggtgcattccgatggcaacacctacctgcattggtatctgcagaagccaggccagtctccccgcctgctgatctacaaggtgagcaatagggactctggcgtgcctgatcggttcagcggctctggctccggaaccgactttacactgaagatctccagggtggaggccgaggatctgggcgtgtatttctgcagccagtctacccactggccatggacatttggccagggcaccaagctggagatcaag
SEQ-ID-NO:22-5D2-VH
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SEQ-ID-NO:23-5D2-VL
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SEQ-ID-NO:24-IgG1-constant
tctaccaagggaccatccgtgttcccactggccccctccagcaagtccaccagcggaggaacagccgctctgggatgcctggtgaaggactacttcccagagcccgtgacagtgagctggaactctggcgctctgacctccggcgtgcacacatttccagctgtgctgcagtcttccggcctgtacagcctgagctctgtggtgaccgtgccctccagctctctgggcacccagacatatatctgcaacgtgaatcacaagccatccaatacaaaggtggacaagaaggtggagcccaagagctgtgataagacccatacatgccccccttgtcctgccccagagctgctgggaggaccatccgtgttcctgtttccacccaagcctaaggacaccctgatgatctctaggacccccgaggtgacatgcgtggtggtggacgtgtcccacgaggaccccgaggtgaagtttaactggtacgtggatggcgtggaggtgcataatgctaagaccaagcctagggaggagcagtacaacagcacctatcgggtggtgtctgtgctgacagtgctgcaccaggattggctgaacggcaaggagtataagtgcaaggtgagcaataaggccctgcccgctcctatcgagaagaccatctctaaggccaagggccagcctagagagccacaggtgtacacactgcctccaagccgcgaggagatgaccaagaaccaggtgtctctgacatgtctggtgaagggcttctatccttctgacatcgctgtggagtgggagtccaatggccagccagagaacaattacaagaccacaccccctgtgctggactccgatggcagcttctttctgtattccaagctgaccgtggataagagcagatggcagcagggcaacgtgttttcttgctccgtgatgcatgaggctctgcacaatcattatacacagaagagcctgtctctgtcccctggcaag
SEQ-ID-NO:25-c5D2-HC
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SEQ-ID-NO:26-Kappa-constant
cgtgaggtggcggcgccgtccgtgttcatctttccccctagcgacgagcagctgaagagcggcaccgcctctgtggtgtgcctgctgaacaatttctacccaagggaggccaaggtgcagtggaaggtggataacgctctgcagagcggcaattctcaggagtccgtgaccgagcaggacagcaaggattctacatattccctgtccagcaccctgacactgtctaaggccgactacgagaagcacaaggtgtatgcttgcgaggtgacccatcagggcctgtcttcccccgtgacaaagtcctttaaccggggcgagtgt
SEQ-ID-NO:27-c5D2-LC
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SEQ-ID-NO:28-hu5D2-HCDR1
acatcttttctgatccactgg
SEQ-ID-NO:29-hu5D2-HCDR2
ttcatcatccctggcaacggcggcaccaagtacaatcagaagtttcag
SEQ-ID-NO:30-hu5D2-HCDR3
tacgacggcagcttcgagggctattttgacgtg
SEQ-ID-NO:31-hu5D2-LCDR1
tccagccagtctctggtgcattccgatggcaacacctacctgcat
SEQ-ID-NO:32-hu5D2-LCDR2
aaggtgagcaatagggactct
SEQ-ID-NO:33-hu5D2-LCDR3
Agccagtctacccactggccatggaca
SEQ ID NO: 34
EEQYNSTYR
SEQ ID NO: 35
THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPK
서열목록 전자파일 첨부

Claims (30)

  1. B 세포 성숙 항원(BCMA 또는 CD 269)에 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편으로서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 (i) VH 도메인으로서, 상기 VH 도메인은 서열번호 1(TSFLIHW)을 포함하는 CDR H1, 서열번호 2(FIIPGNGGTKYNQKFQ)를 포함하는 CDR H2, 및 서열번호 3(YDGSFEGYFDV)을 포함하는 CDR H3을 포함하는, 상기 VH 도메인; 및 (ii) VL 도메인으로서, 상기 VL 도메인은 서열번호 4(SSQSLVHSDGNTYLH)을 포함하는 CDR L1, 서열번호 5(KVSNRDS)를 포함하는 CDR L2, 서열번호 6(SQSTHWPWT)을 포함하는 CDR L3을 포함하는, 상기 VL 도메인을 포함하고, 여기서 병원성 B 세포의 존재와 관련된 의학적 질환은 형질 세포의 암 또는 B 림프구의 암인, 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편.
  2. 제1항에 있어서, 상기 형질 세포의 암은 다발성 골수종, 형질세포종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증 또는 형질 세포 백혈병이거나, 상기 B 림프구의 암은 호지킨 병인, 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편.
  3. 제1항에 있어서, 상기 VL 및 VH 도메인은 각각 인간 Ig kappa(서열 번호 14 또는 서열 번호 26에 의해 암호화됨) 및 IgG1(서열 번호 12 또는 서열 번호 24에 의해 암호화됨) 불변(constant) 도메인에 융합되는, 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편.
  4. 제1항에 있어서, 상기 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 10 또는 서열번호 16을 포함하는 VH 도메인, 및 서열번호 11 또는 서열번호 17을 포함하는 VL 도메인을 포함하고; 또는 상기 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 8 또는 서열번호 13을 포함하는 중쇄를 포함하고; 또는 상기 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 9 또는 서열번호 15를 포함하는 경쇄를 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편.
  5. 제1항에 있어서, 상기 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 키메라, 인간화, 부분 인간화, 이중특이적 또는 단일 사슬 항체, 또는 이들의 조합인, 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편.
  6. 제1항에 있어서, 상기 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 (i) 서열번호 20 또는 서열번호 22에 의해 암호화된 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 (ii) 서열번호 21 또는 서열번호 23에 의해 암호화된 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하거나: 또는
    상기 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 18 또는 서열번호 25에 의해 암호화된 중쇄를 포함하고;
    상기 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 19 또는 서열번호 27에 의해 암호화된 경쇄를 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편.
  7. 제1항에 있어서, 상기 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 글리코실화되는, 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편.
  8. 제7항에 있어서, 상기 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄의 Asn300에 N-연결된 올리고당 사슬을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편.
  9. 세포독소에 접합된 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 대해 지향되는, 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 항체-약물 접합체(ADC)로서, 상기 단일클론 항체는 (a) 서열번호 1의 상보성 결정 영역 1(CDRH1) 아미노산 서열, 서열번호 2의 CDR H2 아미노산 서열, 및 서열번호 3의 CDR H3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 (b) 서열번호 4의 상보성 결정 영역 1(CDR L1) 아미노산 서열, 서열번호 5의 CDR L2 아미노산 서열, 및 서열번호 6의 CDR L3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체-약물 접합체(ADC).
  10. 제9항에 있어서, 하기 화학식을 갖는, 항체-약물 접합체:

    여기서, D, D1 및 D2는 일반적으로 페이로드라고 불리는 소분자 세포독소 또는 기능성 소분자이고; L, L1 및 L2는 링커이고; mAb는 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편이다.
  11. 제10항에 있어서, 상기 세포독소 또는 기능성 소분자 D, D1 및 D2는 하기로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되는, 항체-약물 접합체:
    (1) 하기로 구성되는 군으로부터 선택되는 화학요법제:
    a) 알킬화제: 질소 머스타드: 클로람부실, 클로르나파진, 사이클로포스파마이드, 다카바진, 에스트라무스틴, 이포스파마이드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥사이드 하이드로클로라이드, 만노무스틴, 미토브로니톨, 멜팔란, 미톨락톨, 피포브로만, 노벰비친, 페네스테린, 프레드니무스틴, 티오테파, 트로포스파마이드, 우라실 머스타드; CC-1065 및 아도젤레신, 카르젤레신, 비젤레신 또는 이들의 합성 유사체; 듀오카르마이신 및 이의 합성 유사체, KW-2189, CBI-TMI 또는 CBI 이량체; 벤조디아제핀 이량체 또는 피롤로벤조디아제핀(PBD) 이량체, 토메이마이신(tomaymycin) 이량체, 인돌리노벤조디아제핀 이량체, 이미다조벤조티아디아제핀 이량체, 또는 옥사졸리디노벤조디아제핀 이량체; 니트로소우레아: 카르무스틴, 로무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 니무스틴, 라니무스틴을 포함함; 알킬술포네이트: 부설판, 트레오설판, 임프로설판 및 피포설판을 포함함; 트리아젠 또는 다카르바진; 백금 함유 화합물: 카보플라틴, 시스플라틴 및 옥살리플라틴을 포함함; 아지리딘, 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파 또는 우레도파; 알트레타민, 트리에틸렌멜라민을 포함하는 에틸렌이민 및 메틸아멜라민으로부터 선택됨;
    b) 식물 알칼로이드: 빈카 알칼로이드: 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신, 비노렐빈, 및 나벨빈을 포함함; 탁소이드(taxoid): 파클리탁셀, 도세탁솔 및 이들의 유사체, DM1, DM2, DM3, DM4, DM5, DM6, DM7, D21, 메이탄신, 안사미토신 및 이들의 유사체를 포함하는 메이탄시노이드, 크립토피신(크립토피신 1 및 크립토피신 8로 구성되는 군 포함)을 포함함; 에포틸론, 엘류테로빈, 디스코더몰리드, 브리오스타틴, 돌로스타틴, 아우리스타틴, 튜불리신, 세팔로스타틴; 판크라티스타틴; 에르불린, 사르코딕틴; 스폰지스타틴으로 이루어진 군으로부터 선택됨;
    c) DNA 토포이소머라제 억제제: 에피포도필린스(epipodophyllins): 9-아미노캄프토테신, 캄프토테신, 크리스나톨, 다우노마이신, 에토포사이드, 에토포사이드 포스페이트, 이리노테칸, 미톡산트론, 노반트론, 레티노산(또는 레티놀), 테니포사이드, 토포테칸, 9-니트로캄프토테신 또는 RFS 2000을 포함함; 및 미토마이신 및 이들의 유사체로 이루어진 군으로부터 선택됨;
    d) 항대사물질: {[항-엽산: (DHFR 억제제: 메토트렉세이트, 트리메트렉세이트, 데노프테린, 프테로프테린, 아미노프테린(4-아미노프테르 산) 또는 엽산 유사체를 포함함); IMP 탈수소효소 억제제: (미코페놀산, 티아조푸린, 리바비린, EICAR를 포함함); 리보뉴클레오티드 환원효소 억제제(하이드록시우레아, 데페록사민을 포함함)]; [피리미딘 유사체: 우라실 유사체(안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카페시타빈(Xeloda), 카모퍼, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 5-플루오로우라실, 플록스우리딘, 라티트렉세드를 포함함); 시토신 유사체(시타라빈, 시토신 아라비노사이드, 플루다라빈을 포함함); 퓨린 유사체(아자티오프린, 플루다라빈, 메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌을 포함함)]; 엽산 보충제, 프롤린산}; 및 니코틴아미드 포스포리보실트랜스퍼라제(NAMPT) 억제제로 이루어진 군으로부터 선택됨;
    e) 호르몬 요법: {수용체 길항제: [항-에스트로겐:(메게스트롤, 랄록시펜, 타목시펜); LHRH 작용제:(고스크르클린(goscrclin), 류프롤라이드 아세테이트); 항-안드로겐:(비칼루타미드, 플루타미드, 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 고세렐린, 류프롤리드, 메피티오스탄, 닐루타미드, 테스토락톤, 트리로스탄 및 기타 안드로겐 억제제)]; 레티노이드/델토이드: [비타민 D3 유사체:(CB 1093, EB 1089, KH 1060, 콜레칼시페롤, 에르고칼시페롤); 광역학 요법:(베르테포르핀, 프탈로시아닌, 광민감제 Pc4, 데메톡시하이포크렐린 A); 사이토카인:(인터페론-알파, 인터페론-감마, 종양 괴사 인자(TNF), TNF 도메인을 함유하는 인간 항체 유사 단백질)]}으로부터 선택됨;
    f) 키나제 억제제: BIBW 2992(항-EGFR/Erb2), 이마티닙, 게피티닙, 페갑타닙, 소라페닙, 다사티닙, 수니티닙, 에를로티닙, 닐로티닙, 라파티닙, 악시티닙, 파조파닙, 반데타닙, E7080(항-VEGFR2), 뮤브리티닙, 포나티닙(AP24534), 바페티닙(INNO-406), 보수티닙(SKI-606), 카보잔티닙, 비스모데깁, 이니파립, 룩솔리티닙, CYT387, 악시티닙, 티보자닙, 소라페닙, 베바시주맙, 세툭시맙, 트라스투주맙, 라니비주맙, 파니투무맙, 이스피네십으로 이루어진 군으로부터 선택됨;
    g) 폴리(ADP-리보스) 중합효소(PARP) 억제제: 올라파립, 니라파립, 이니파립, 탈라조파립, 벨리파립, CEP 9722(세팔론사(Cephalon)), E7016(에이자이사(Eisai), BGB-290(베이젠사(BeiGene)) 또는 3-아미노벤자미드로 이루어진 군으로부터 선택됨.
    h) 항생제: 에네다인 항생제(칼리케아미신, 칼리케아미신 γ1, δ1, α1 또는 β1; 다이네미신(dynemicin) A 및 데옥시다이네미신을 포함하는 다이네미신; 에스페라미신, 케다르시딘, C-1027, 마두로펩틴, 또는 네오카르지노스타틴 크로모포어 및 관련 크로모프로테인 에네다인 항생제 크로모포어의 군으로부터 선택됨), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신(authramycin), 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카미노마이신, 카르지노필린; 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신, 모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신, 에피루비신, 에리불린, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 니토마이신, 마이코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 폿피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘(tubercidin), 우베니멕스(ubenimex), 지노스타틴, 조루비신으로 이루어진 군으로부터 선택됨;
    i) 폴리케타이드(아세토게닌), 불라타신 및 불라타시논; 젬시타빈, 에폭소마이신(epoxomicin) 및 카르필조밉, 보르테조밉, 탈리도마이드, 레날리도마이드, 포말리도마이드, 토세도스타트, 자이브레스타트, PLX4032, STA-9090, 스티무박스(Stimuvax), 알로벡틴-7, 제게바(Xegeva), 프로벤지(Provenge), 예르보이(Yervoy), 이소프레닐화 억제제 및 로바스타틴, 도파민성 신경독소 및 1-메틸-4-페닐피리디늄 이온, 세포 사이클 억제제(스타우로스포린으로부터 선택됨), 악티노마이신(악티노마이신 D, 닥티노마이신 포함), 아마니틴, 블레오마이신(블레오마이신 A2, 블레오마이신 B2, 페플로마이신 포함), 안트라사이클린(다우노루비신, 독소루비신(아드리아마이신), 이다루비신, 에피루비신, 피라루비신, 조루비신, 엠톡산트론, MDR 억제제 또는 베라파밀, Ca2+ ATPase 억제제 또는 탑시가르긴, 히스톤 데아세틸라제 억제제(보리노스타트, 로미뎁신, 파노비노스타트, 발프로산, 모세티노스타트(MGCD0103), 벨리노스타트, PCI-24781, 엔티노스타트, SB939, 레스미노스타트, 지비노스타트, AR-42, CUDC-101, 설포라판, 트리코스타틴 A 포함); 탑시가르긴, 셀레콕시브, 글리타존, 에피갈로카테킨 갈레이트, 디설피람, 살리노스포라마이드 A; 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄으로 이루어진 군으로부터 선택되는 항-아드레날; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 암사크린; 아라비노사이드, 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 에플로르니틴(DFMO), 엘포미틴; 엘립티늄 아세테이트, 에토글루시드; 갈륨 나이트레이트; 가시토신, 하이드록시우레아; 이반드로네이트, 렌티난; 로니다민; 미토구아존; 미톡산트론; 모피다몰; 니트라크린; 펜토스타틴; 페나멧; 피라루비신; 포도필린산; 2-에틸히드라지드; 프로카바진; 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2''-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센(T-2 독소, 베루카린 A, 로리딘 A 및 안구아딘으로 이루어진 군 포함); 우레탄, siRNA, 안티센스 약물;
    (2) 항-자가면역 질환제: 사이클로스포린, 사이클로스포린 A, 아미노카프로산, 아자티오프린, 브로모크립틴, 클로람부실, 클로로퀸, 사이클로포스파미드, 코르티코스테로이드(암시노나이드, 베타메타손, 부데소나이드, 히드로코르티손, 플루니솔리드, 플루티카손 프로피오네이트, 플루오코르톨론 다나졸, 덱사메타손, 트리암시놀론 아세토니드, 베클로메타손 디프로피오네이트로 이루어진 군 포함), DHEA, 에나네르셉(enanercept), 히드록시클로로퀸, 인플릭시맙, 멜록시캄, 메토트렉세이트, 모페틸, 마이코페닐레이트, 프레드니손, 시롤리무스, 타크로리무스;
    (3) 하기 a) 내지 u)를 포함하는 항-감염성 질환제:
    a) 아미노글리코시드: 아미카신, 아스트로마이신, 겐타마이신(네틸마이신, 시소마이신, 이세파마이신), 하이그로마이신 B, 카나마이신(아미카신, 아르베카신, 베카나마이신, 디베카신, 토브라마이신), 네오마이신(프라마이세틴, 파로모마이신, 리보스타마이신), 네틸마이신, 스펙티노마이신, 스트렙토마이신, 토브라마이신, 베르다마이신;
    b) 암페니콜: 아지담페니콜, 클로람페니콜, 플로르페니콜, 티암페니콜;
    c) 안사마이신: 겔다나마이신, 헤르비마이신;
    d) 카르바페넴: 비아페넴, 도리페넴, 에르타페넴, 이미페넴/실라스타틴, 메로페넴, 파니페넴;
    e)세펨: 카르바세펨(로라카르베트(loracarbef)), 세파세트릴, 세파클로르, 세프라딘, 세파드록실, 세팔로늄, 세팔로리딘, 세팔로틴(cefalotin) 또는 세팔로씬(cefalothin), 세팔렉신, 세팔로글리신, 세파만돌, 세파피린, 세파트리진, 세파자플루르, 세파제돈, 세파졸린, 세프부페라존, 세프카펜, 세프달록심, 세페핌, 세프미녹스, 세폭시틴, 세프프로질, 세프록사딘, 세프테졸, 세푸록심, 세픽심, 세프디니르, 세프디토렌, 세페핌, 세페타메트, 세프메녹심, 세포디짐, 세포니시드, 세포페라존, 세포라니드, 세포탁심, 세포티암, 세포조프란, 세팔렉신, 세프피미졸, 세프피라미드, 세프피롬, 세프포독심, 세프프로질, 세프퀴놈, 세프술로딘, 세프타지딤, 세프테람, 세프티부텐, 세프티올렌, 세프티족심, 세프토비프롤, 세프트리악손, 세푸록심, 세푸조남, 세파마이신(세폭시틴, 세포테탄, 세프메타졸), 옥사세펨(플로목세프, 라타목세프);
    f) 글리코펩티드: 블레오마이신, 반코마이신(오리타반신, 텔라반신), 테이코플라닌(달바반신), 라모플라닌;
    g) 글리실사이클린: 티게사이클린;
    h) β-락타마제 억제제: 페남(설박탐, 타조박탐), 클라밤(클라불란산);
    i) 린코사미드: 클린다마이신, 린코마이신;
    j) 리포펩티드: 답토마이신, A54145, 칼슘-의존성 항생제(CDA);
    k) 마크로리드: 아지트로마이신, 세트로마이신, 클라리트로마이신, 디리트로마이신, 에리트로마이신, 플루리트로마이신, 조사마이신, 케톨리드(텔리트로마이신, 세트로마이신), 미데카마이신, 미오카마이신, 올레안도마이신, 리파마이신(리팜피신, 리팜핀, 리파부틴, 리파펜틴), 로키타마이신, 록시트로마이신, 스펙티노마이신, 스피라마이신, 타크로리무스(FK506), 트롤리안도마이신, 텔리트로마이신;
    l) 모노박탐: 아즈트레오남, 티게모남;
    m) 옥사졸리디논: 리네졸리드;
    n) 페니실린: 아목시실린, 암피실린, 피밤피실린, 헤타실린, 바캄피실린, 메타암피실린, 탈람피실린, 아지도실린, 아즐로실린, 벤질페니실린, 벤자틴 벤질페니실린, 벤자틴 페녹시메틸페니실린, 클로메토실린, 프로카인 벤질페니실린, 카르베니실린(카린다실린), 클록사실린, 디클록사실린, 에피실린, 플루클록사실린, 메실리남(피브메실리남), 메즐로실린, 메티실린, 나프실린, 옥사실린, 페나메실린, 페니실린, 페네티실린, 페녹시메틸페니실린, 피페라실린, 프로피실린, 설베니실린, 테모실린, 티카르실린;
    o) 폴리펩티드: 바시트라신, 콜리스틴, 폴리믹신 B;
    p) 퀴놀론: 알라트로플록사신, 발로플록사신, 시프로플록사신, 클리나플록사신, 다노플록사신, 디플록사신, 에녹사신, 엔로플록사신, 플록신, 가레녹사신, 가티플록사신, 제미플록사신, 그레파플록사신, 카노 트로바플록사신, 레보플록사신, 로메플록사신, 마르보플록사신, 목시플록사신, 나디플록사신, 노르플록사신, 오르비플록사신, 오플록사신, 페플록사신, 트로바플록사신, 그레파플록사신, 시타플록사신, 스파플록사신, 테마플록사신, 토수플록사신, 트로바플록사신;
    q) 스트렙토그라민: 프리스티나마이신, 퀴누프리스틴/달포프리스틴;
    r) 설폰아미드: 마페니드, 프론토실, 설파세타미드, 설파메티졸, 설파닐이미드, 설파살라진, 설피속사졸, 트리메토프림, 트리메토프림-설파메톡사졸(코-트리목사졸);
    s) 스테로이드 항균제: 푸시딘산으로부터 선택됨;
    t) 테트라사이클린: 독시사이클린, 클로르테트라사이클린, 클로모사이클린, 데메클로사이클린, 리메사이클린, 메클로사이클린, 메타사이클린, 미노사이클린, 옥시테트라사이클린, 페니메피사이클린, 롤리테트라사이클린, 테트라사이클린, 글리실사이클린(티게사이클린 포함);
    u) 기타 항생제: 아노나신, 아르스페나민, 박토프레놀 억제제(바시트라신), DADAL/AR 억제제(사이클로세린), 딕티오스타틴, 디스코더몰리드, 엘류테로빈, 에포틸론, 에탐부톨, 에토포사이드, 파로페넴, 푸시딘산, 푸라졸리돈, 이소니아지드, 라우리말리드, 메트로니다졸, 뮤피로신, 미코락톤, NAM 합성 억제제(포스포마이신), 니트로푸란토인, 파클리탁셀, 플라텐시마이신, 피라진아미드, 퀴누프리스틴/달포프리스틴, 리팜피신(리팜핀), 타조박탐 티니다졸, 우바리신으로 이루어진 군으로부터 선택됨;
    (4) 하기 a) 내지 h)를 포함하는 항-바이러스 약물:
    a) 엔트리/융합 억제제: 아플라비록, 마라비록, 비크리비록, gp41(엔푸비르티드), PRO 140, CD4(이발리주맙);
    b) 인테그라제 억제제: 랄테그라비르, 엘비테그라비르, 글로보이드난 A;
    c) 성숙 억제제: 베비리맛(bevirimat), 비베콘(vivecon);
    d) 뉴라미니다제 억제제: 오셀타미비르, 자나미비르, 페라미비르;
    e) 뉴클레오사이드 및 뉴클레오타이드: 아바카비르, 아시클로비르, 아데포비르, 암독소비르, 아프리시타빈, 브리부딘, 시도포비르, 클레부딘, 덱셀부시타빈, 디다노신(ddI), 엘부시타빈, 엠트리시타빈(FTC), 엔테카비르, 팜시클로비르, 플루오로우라실(5-FU), 3'-플루오로-치환된 2',3'-디데옥시뉴클레오시드 유사체(3'-플루오로-2',3'-디데옥시티미딘(FLT) 및 3'-플루오로-2',3'-디데옥시구아노신(FLG) 포함), 포미비르센, 간시클로비르, 이독수리딘, 라미부딘(3TC), l-뉴클레오시드(β-1-티미딘 및 β-1-2'-데옥시시티딘으로 이루어진 군 포함), 펜시클로비르, 라시비르, 리바비린, 스탐피딘, 스타부딘(d4T), 타리바비린(비라미딘), 텔비부딘, 테노포비르, 트리플루리딘 발라시클로비르, 발간시클로비르, 잘시타빈(ddC), 지도부딘(AZT);
    f) 비-뉴클레오시드: 아만타딘, 아테비리딘, 카프라비린, 디아릴피리미딘(에트라비린, 릴피비린), 델라비르딘, 도코사놀, 에미비린, 에파비렌즈, 포스카르넷(포스포노포름산), 이미퀴모드, 인터페론 알파, 로비리드, 로데노신, 메티사존, 네비라핀, NOV-205, 페그인터페론 알파, 포도필로톡신, 리팜피신, 리만타딘, 레시퀴모드(R-848), 트로만타딘;
    g) 프로테아제 억제제: 암프레나비르, 아타자나비르, 보세프레비르, 다루나비르, 포삼프레나비르, 인디나비르, 로피나비르, 넬피나비르, 플레코나릴, 리토나비르, 사퀴나비르, 텔라프레비르(VX-950), 티프라나비르;
    h) 기타 유형의 항-바이러스 약물: 압자임, 아르비돌, 칼라놀리드 a, 세라게닌, 시아노비린-n, 디아릴피리미딘, 에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG), 포스카르넷, 그리피쓰신(griffithsin), 타리바비린(비라미딘), 하이드록시우레아, KP-1461, 밀테포신, 플레코나릴, 포트만테오(portmanteau) 억제제, 리바비린, 셀리시클립;
    (5) (방사성 핵종) 3H, 11C, 14C, 18F, 32P, 35S, 64Cu, 68Ga, 86Y, 99Tc, 111In, 123I, 124I, 125I, 131I, 133Xe, 177Lu, 211At, 또는 213Bi으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있는 방사성 동위원소;
    (6) UV광, 형광, IR광, 근적외선, 가시광선을 흡수할 수 있는 발색단 분자로서, 이는 크산토포어, 에리스로포어(erythrophore), 이리도포어, 류코포어(leucophore), 멜라노포어, 시아노포어, 빛에 따라 빛을 다시 방출하는 형광 화학 화합물인 형광단 분자, 시각적 광변환 분자, 포토포어 분자, 발광성 분자, 및 루시페린 화합물의 클래스 또는 서브클래스를 포함하고; 이는 비-단백질 유기 형광단: 크산텐 유도체(플루오레세인, 로다민, 오레곤 그린, 에오신 및 텍사스 레드 포함); 시아닌 유도체:(시아닌, 인도카르보시아닌, 옥사카르보시아닌, 티아카르보시아닌 및 메로시아닌 포함); 세타(Seta), 세타우(SeTau) 및 스퀘어(Square) 염료를 포함하는 스쿠아라인 유도체 및 고리-치환된 스쿠아레인; 나프탈렌 유도체(단실 및 프로단 유도체 포함); 쿠마린 유도체; 옥사디아졸 유도체(피리딜옥사졸, 니트로벤족사디아졸 및 벤족사디아졸 포함); 안트라센 유도체(안트라퀴논, DRAQ5, DRAQ7 및 CyTRAK Orange 포함); 피렌 유도체(캐스케이드 블루); 옥사진 유도체(나일 레드, 나일 블루, 크레실 바이올렛, 옥사진 170 포함); 아크리딘 유도체(프로플라빈, 아크리딘 오렌지, 아크리딘 옐로우 포함); 아릴메틴 유도체(오라민, 크리스탈 바이올렛, 말라카이트 그린 포함); 테트라피롤 유도체(포르핀, 프탈로시아닌, 빌리루빈 포함)로부터 선택되고; 하기 형광단 화합물의 유사체 및 유도체로부터 선택될 수 있고: CF 염료, DRAQ 및 CyTRAK 프로브, BODIPY, 알렉사 플루오르(Alexa Fluor), 디라이트 플루오르(DyLight Fluor), 아토(Atto) 및 트레이시(Tracy), 플루오프로브(FluoProbes), 아베리오르(Abberior) 염료, DY 및 메가스트로크(MegaStokes) 염료, 술포 시(Sulfo Cy) 염료, 하이라이트 플루오르(HiLyte Fluor), 세타(Seta), 세타우(SeTau) 및 스퀘어(Square) 염료, 쿠아사르(Quasar) 및 칼 플루오르(Cal Fluor) 염료, 슈어라이트(SureLight) 염료(APC, RPEPerCP, 피코빌리솜(Phycobilisomes)), APC, APCXL, RPE, BPE, 알로피코시아닌(APC), 아미노-쿠마린, APC-Cy7 접합체, BODIPY-FL, 캐스케이드 블루, Cy2, Cy3, Cy3.5, Cy3B, Cy5, Cy5.5, Cy7, 플루오레세인, 플루오르엑스(FluorX), 하이드록시쿠마린, 리사민 로다민 B, 루시퍼 옐로우, 메톡시쿠마린, NBD, 퍼시픽 블루, 퍼시픽 오렌지, PE-Cy5 접합체, PE-Cy7 접합체, PerCP, R-피코에리트린(PE), 레드 613, 세타-555-아지드, 세타-555-DBCO, 세타-555-NHS, 세타-580-NHS, 세타-680-NHS, 세타-780-NHS, 세타-APC-780, 세타-PerCP-680, 세타-R-PE-670, 세타우-380-NHS, 세타우-405-말레이미드, 세타우-405- NHS, 세타우-425-NHS, 세타우-647-NHS, 텍사스 레드, TRITC, 트루레드(TruRed), X-로다민, 7-AAD(7-아미노악티노마이신 D, CG-선택적), 아크리딘 오렌지, 크로모마이신 A3, CyTRAK 오렌지(적색 여기(excitation) 다크), DAPI, DRAQ5, DRAQ7, 에티듐 브로마이드(Ethidium Bromide), 휙스트(Hoechst)33258, 휙스트33342, LDS 751, 미트라마이신(Mithramycin), 프로피디움 요오드화물(PropidiumIodide)(PI), SYTOX 블루, SYTOX 그린, SYTOX 오렌지, 티아졸 오렌지, TO-PRO: 시아닌 단량체, TOTO-1, TO-PRO-1, TOTO-3, TO-PRO-3, YOSeta-1, YOYO-1; 하기를 포함하는 형광단 화합물: DCFH(2'7'디코로디히드로-플루오레세인, 산화 형태), DHR(디히드로로다민 123, 산화 형태, 광촉매 산화), Fluo-3(AM 에스테르. pH>6), Fluo-4(AM 에스테르. pH 7.2), Indo-1(AM 에스테르, 저/고 칼슘(Ca2+)) 및 SNARF(pH 6/9), 알로피코시아닌(APC), AmCyan1(4량체, Clontech), AsRed2(4량체, Clontech), 아자미(Azami) 그린(단량체), 아주라이트(Azurite), B-피코에리트린(BPE), 세룰리언(Cerulean), CyPet, DsRed 단량체(Clontech), DsRed2("RFP"), EBFP, EBFP2, ECFP, EGFP(약한 이량체), 에메랄드(Emerald)(약한 이량체), EYFP(약한 이량체), GFP(S65A 돌연변이), GFP(S65C 돌연변이), GFP(S65L 돌연변이), GFP(S65T 돌연변이), GFP(Y66F 돌연변이), GFP(Y66H 돌연변이), GFP(Y66W 돌연변이), GFPuv, HcRed1 , J-Red, 카츠샤(Katusha), 쿠사비라(Kusabira) 오렌지(단량체, MBL), mCFP, mCherry, mCitrine, 미도리시 시안(Midoriishi Cyan)(이량체, MBL), mKate(TagFP635, 단량체), mKeima-Red(단량체), mKO, mOrange, mPlum, mRaspberry, mRFP1(단량체), mStrawberry, mTFP1, mTurquoise2, P3(피코빌리솜 복합체), 페리디닌 엽록소(PerCP), R-피코에리트린(RPE), T-사파이어, TagCFP(이량체), TagGFP(이량체), TagRFP(이량체), TagYFP(이량체), tdTomato(탠덤 이량체), 토파즈, TurboFP602(이량체), TurboFP635(이량체), TurboGFP(이량체), TurboRFP(이량체), TurboYFP(이량체), 베누스(Venus), 야생형(Wild Type) GFP, YPet, ZsGreen1(4량체), ZsYellow1(4량체) 및 이들의 유도체;
    (7) 하기로부터 선택될 수 있는 세포 결합 리간드 또는 수용체 작용제: 엽산 유도체; 글루탐산 우레아 유도체; 소마토스타틴 및 그 유사체(옥트레오타이드(산도스타틴) 및 란레오타이드(소마툴린)로 구성된 그룹으로부터 선택됨); 방향족 설폰아미드; 뇌하수체 아데닐레이트 시클라제 활성화 펩티드(PACAP)(PAC1); 혈관활성 장 펩티드(VIP/PACAP)(VPAC1, VPAC2); 멜라닌세포-자극 호르몬(α-MSH); 콜레시스토키닌(CCK)/가스트린 수용체 효능제; 봄베신(Pyr-Gln-Arg-Leu-Gly-Asn-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2로 구성된 군으로부터 선택됨)/가스트린-방출 펩티드(GRP); 뉴로텐신 수용체 리간드(NTR1, NTR2, NTR3); 물질 P(NK1 수용체) 리간드; 뉴로펩티드 Y(Y1-Y6); 호밍(Homing) 펩티드, 예를 들어 RGD(Arg-Gly-Asp), NGR(Asn-Gly-Arg), 이량체 및 다량체 고리형 RGD 펩티드(cRGDfV으로부터 선택), TAASGVRSMH 및 LTLRWVGLMS(콘드로이틴 설페이트 프로테오글리칸 NG2 수용체 리간드) 및 F3 펩티드; 세포 침투 펩티드(CPP); 황체형성 호르몬 방출 호르몬(LHRH) 작용제와 길항제, 성선 자극 호르몬 방출 호르몬(GnRH) 작용제로 구성된 그룹으로부터 선택된 펩티드 호르몬, 이는 난포 자극 호르몬(FSH)과 황체 형성 호르몬(LH)을 표적으로 삼아 작용할 뿐만 아니라, 부세레린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(OtBu)-Leu-Arg-Pro-NHEt), 고나도렐린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2), 고세렐린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(OtBu)-Leu-Arg-Pro-AzGly-NH2), 히스트렐린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-His(N-벤질)-Leu-Arg-Pro-NHEt), 류프롤리드(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt), 나파렐린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-2Nal-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2), 트립토렐린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2), 나파렐린, 데슬로렐린, 아바렐릭스(Ac-D-2Nal-D-4-클로로Phe-D-3-(3-피리딜)Ala-Ser-(N-Me)Tyr-D-Asn-Leu-이소프로필Lys-Pro-DAla-NH2), 세트로렐릭스(Ac-D-2Nal-D-4-클로로Phe-D-3-(3-피리딜)Ala-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2), 데가렐릭스(Ac-D-2Nal-D-4-클로로Phe-D-3-(3-피리딜)Ala-Ser-4-아미노Phe(L-히드로오로틸)-D-4-아미노Phe(카르바모일)-Leu-이소프로필Lys-Pro-D-Ala-NH2), 및 가니렐릭스(Ac-D-2Nal-D-4-클로로Phe-D-3-(3-피리딜)Ala-Ser-Tyr-D-(N9,N10-디에틸)-homoArg-Leu-(N9, N10-디에틸)-homoArg-Pro-D-Ala-NH2)으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 테스토스테론 생산도 가능함; Toll 유사 수용체(TLR) 리간드, C-형 렉틴 및 노드라이크(Nodlike) 수용체(NLR) 리간드로 구성된 그룹으로부터 선택되는 패턴 인식 수용체(PRR); 칼시토닌 수용체 작용제; 인테그린 수용체 및 이들의 수용체 아형(αVβ1, αVβ3, αVβ5, αVβ6, α6β4, α7β1, αLβ2, αIIbβ3으로 구성된 그룹으로부터 선택됨) 작용제(GRGDSPK, cyclo(RGDfV)(L1) 및 그 유도체[시클로(-N(Me)R-GDfV), 시클로(R-Sar-DfV), 시클로(RG-N(Me)D-fV), 시클로(RGD-N(Me)f-V), 시클로(RGDf-N(Me)V-)(실렌기타이드)]; 나노바디(VHH(카멜리드 Ig)의 유도체); 도메인 항체(dAb, VH 또는 VL 도메인의 유도체); 이중특이적 T 세포 인게이저(BiTE, 이중특이적 디아바디); 이중 친화성 재타겟팅(DART, 이중특이적 디아바디); 4가 탠덤 항체(TandAb, 이량체화된 이중특이적 디아바디); 안티칼린(리포칼린의 유도체); 아드넥틴(10차 FN3(피브로넥틴)); 설계된 안키린 반복 단백질(DARPins); 아비머; EGF 수용체 또는 VEGF 수용체 작용제로;
    (8) 제약상 허용가능한 염, 산, 유도체, 수화물 또는 수화된 염; 또는 결정 구조; 또는 상기 약물의 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체.
  12. 제10항에 있어서, 세포독소 D, D1 및 D2는 독립적으로 항-미세소관, DNA 마이너 그루브 결합제, RNA 폴리머라제 II 억제제, DNA 토포이소머라제 I 또는 III 억제제, 또는 DNA 알킬화제이고, 이는 튜불리신, 아마니틴, 아우리스타틴(AFP, MMAF, MMAE, AEB, AEVB, E의 유사체 포함), 칼리케아미신, 캄프토테신(SN-38, 토포테칸 또는 엑사테칸 포함), 에토포시드, 테니포시드, 다우노마이신, 독소루비신(모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신), 듀오카르마이신(CC1065 유사체, DC1, DC4, CBI-이량체 포함), 돌라스타틴, 에네디인, 에리불린, 렉시트로신, 탁산, 퓨로마이신, 메이탄시노이드, 빈카 알칼로이드, 파클리탁셀, 도세탁셀, 피롤로벤조디아제핀(PBD, IGN 포함), 리족신, 돌라스타틴, 에키노마이신, 콤브레타스타틴, 빈카 알칼로이드, 칼리케아미신, 메이탄신(DM1, DM4, DM21), 젤다나마이신, 빈블라스틴, 메토트렉세이트, 헤미아스테린, 네트롭신, 니코틴아미드 포스포리보실트랜스퍼라제(NAMPT) 억제제, 스플리세오스타틴, 플라디에놀라이드, 단백질 키나제 억제제, MEK 억제제, 단백질분해효소 억제제, 면역독소, 세포 수용체 작용제 또는 이들의 유도체 또는 유사체로부터 선택되는, 항체-약물 접합체:
    여기서:
    (a) 튜불리신 및 그 유사체는 하기 화학식 IVa:

    또는 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 다형성 결정 구조; 또는 이들의 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체를 갖고;
    여기서, 는 이들 중 1개 또는 2개가 독립적으로 L1 및/또는 L2에 연결될 수 있는 연결 부위이고;
    "" 중 2개가 L1과 L2 모두에 연결되는 경우, R1과 R2, 또는 Z2와 Z3은 바람직하게는 이중 연결 부위이고;
    여기서, R1, R1', R2, R3 및 R4는 독립적으로 H, C1-C8 알킬; C2-C8 헤테로알킬 또는 헤테로사이클릭; C3-C8 아릴, Ar-알킬, 사이클로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 카르보사이클릭 또는 알킬카르보닐이고; 또는 R1R2, R1R3, R2R3, R3R4 또는 R5R6은 3~7원 카르보사이클릭, 사이클로알킬, 헤테로사이클릭, 헤테로사이클로알킬, 방향족 또는 헤테로방향족 고리 시스템을 형성하고; R1 및 R2는 L1 또는 L2에 독립적으로 또는 동시에 연결될 때, 독립적으로 부재할 수 있고, Y1은 N 또는 CH이고;
    R5, R6, R8, R10 및 R11은 독립적으로 H, 또는 C1-C4 알킬 또는 헤테로알킬이고;
    R7은 독립적으로 H, R14 , -R14C(=O)X1R15이고; 또는 -R14X1R15이고; X1은 O, S, S-S, NH, CH2 또는 NR14이고;
    R9는 H, OH, =O, -OR14, -OC(=O)R14, -OC(=O)NHR14, -OC(=O)NR14R15, OP(=O)(OR14)2, -OC(=O)NR14R15, 또는 OR14OP(=O)(OR15)2로부터 선택되고; R9가 L1 또는 L2에 연결될 때, R9는 -O-, -OC(=O)NH- 또는 -OC(=O)N(R14)-이고;
    여기서, R11은 독립적으로 H, R14, -R14C(=O)R15, -R14C(=O)X2R15이고, 여기서, X2는 -O-, -S-, -NH- 또는 -N(R14)-이고;
    여기서, R12는 -COOH, -COSH, -CONH2, CONHNH2, CONHNHR15, -CONH(R15), -COOR15, - R15COR16, - R15COOR16, -R15C(O)NH2, -R15C(O)NHR16, -COSR15, R15S(=O)2R16, - R15P(=O)(OR17)2, -R15OP(=O)(OR17)2, -COOCH2OP(=O)(OR17)2, -COX2SO2R17, -COOR15X2R16, 테트라졸, 이미다졸 또는 트리아졸이고, 여기서 X2 는 -O-, -S-, -NH-, -N(R15)-, -O-R15-, -S-R15-, CH2 또는 -NHR15-이고; R12가 L1 또는 L2에 연결될 때, R12는 -C(O)O-, -C(O)NH-, -C(=O)NHS(O)2R15- 또는 -C(=O)N(R15)-이고;
    R13 및 R14는 독립적으로 C1-C8 알킬, 헤테로알킬; C2-C8 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 아릴, Ar-알킬이고;
    Z2 및 Z3은 독립적으로 H, O, S, NH, N(R15), NHNH, -OH, -SH, -NH2, NH, NHNH2, -NH(R15), -OR15, CO, -COX2, -COX2R16, R17, F, Cl, Br, I, SR16, NR16R17, N=NR16, N=R16, NO2, SOR16R17, SO2R16, SO3R16, OSO3R16, PR16R17, POR16R17, PO2R16R17, OP(O)(OR17)2, OCH2OP(O)(OR17)2, OC(O)R17, OC(O)OP(O)(OR17)2, PO(OR16)(OR17), OP(O)(OR17)OP(O)(OR17)2, OC(O)NHR17;-O-(C4-C12 글리코시드), -N-(C4-C12 글리코시드); C1-C8 알킬, 헤테로알킬; C2-C8 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 아릴, Ar-알킬, 카르보사이클릭, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카르보닐, 헤테로아릴, 또는 2-8개의 탄소 원자로 구성된 에스테르, 에테르 또는 아미드; 또는 1~8개 아미노산(NH(Aa)1~8, 또는 CO(Aa)1~8(각각 N-말단 또는 C-말단 1~8의 동일하거나 다른 아미노산))을 포함하는 펩티드, 또는 폴리에틸렌옥시 유닛 화학식 (OCH2CH2)p 또는 (OCH2CH(CH3))p(여기서, p는 0 내지 약 1000의 정수임), 또는 이들 기의 조합이고; X2는 O, S, S-S, NH, CH2, OH, SH, NH2, CHR15 또는 NR15이고;
    R15, R16 및 R17은 독립적으로 H, C1-C8 알킬, 헤테로알킬; C2-C8 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 아릴, Ar-알킬, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카르보닐, 헤테로아릴, 알킬카르보닐, 또는 Na+, K+, Cs+, Li+, Ca2+, Mg+, Zn2+, N+(R1)(R2)(R3) (R4), HN+(C2H5OH)3 염이고;
    Y1 및 Y2는 독립적으로 N 또는 CH이고; q는 0 또는 1이고; q=0일 때, Y3이 부재하고, Y4, Y5, Y6 및 Y7은 독립적으로 CH, N, NH, O, S 또는 N(R1)이므로, Y2, Y4, Y5, Y6 및 Y7은 푸란, 피롤 티오펜, 티아졸, 옥사졸 및 이미다졸, 피라졸, 트리아졸, 테트라졸, 티아디아졸의 헤테로방향족 고리를 형성하고; q=1일 때, Y3, Y4, Y5, Y6 및 Y7은 독립적으로 CH 또는 N이므로, Y2, Y3, Y4, Y5, Y6 및 Y7은 벤젠, 피리딘, 피리다진, 피리미딘, 피라진, 트리아진, 테트라진, 펜타진의 방향족 고리를 형성하고;
    튜부리신 유사체는 구체적으로 하기 구조를 갖고:














    여기서, R20은 H; C1-C8 선형 또는 분지형 알킬 또는 헤테로알킬; C2-C8 선형 또는 분지형 알케닐, 알키닐, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 선형 또는 분지형 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카르보사이클릭, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카르보닐, 헤테로아릴; 카보네이트(-C(O)OR17), 카바메이트(-C(O)NR17R18); 또는 1-8개 탄소 원자의 카르복실레이트, 에스테르, 에테르 또는 아미드; 또는 1~8개의 아미노산; 또는 화학식 (OCH2CH2)p 또는 (OCH2CH(CH3))p의 폴리에틸렌옥시 유닛(여기서, p는 0 내지 약 1000의 정수임)이고; 또는 R20은 부재하고, 산소는 케톤, 또는 이들의 조합을 형성하고; Z2 및 Z3은 독립적으로 H, OH, NH2, O, NH, COOH, COO, C(O), C(O), C(O)NH, C(O)NH2, R18, OCH2OP(O)(OR18)2, OC(O)OP(O)(OR18)2, OPO(OR18)2, NHPO(OR18)2, OP(O)(OR18)OP(O)(OR18)2, OC(O)R18, OC(O)NHR18, OSO2(OR18), O-(C4-C12-글리코시드), C1-C8 선형 또는 분지형 알킬 또는 헤테로알킬; C2-C8 선형 또는 분지형 알케닐, 알키닐, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 선형 또는 분지형 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카르보사이클릭, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카르보닐, 헤테로아릴; 카보네이트(-C(O)OR17), 카바메이트(-C(O)NR17R18)이고; R17 및 R18은 독립적으로 H, 선형 또는 분지형 알킬 또는 헤테로알킬; C2-C8 선형 또는 분지형 알케닐, 알키닐, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 선형 또는 분지형 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카르보사이클릭, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카르보닐, 헤테로아릴; 카보네이트(-C(O)OR17), 카바메이트(-C(O)NR17R18)이고; R19는 H, OH, NH2, OSO2(OR18), XCH2OP(O)(OR18)2, XPO(OR18)2, XC(O)OP(O)(OR18)2, XC(O)R18, XC(O)NHR18, C1-C8 알킬 또는 카르보일레이트; C2-C8 알케닐, 알키닐, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 아릴 또는 알킬카르보닐; 또는 약학적 염이고; X는 O, S, NH, NHNH 또는 CH2이고; R7은 위에서 정의한 것과 동일하고; 여기서, 화학식 (IV-01) 내지 (IV-94)의 연결 부위 ""는 여기서 생략되었으나, 청구항 제12항의 화학식(IVa)에서 표시된 동일한 위치를 따르고;

    (b) 칼리케아미신 및 이와 관련된 에네디인 항생제는 하기 화학식:

    또는 하나 이상의 동위원소를 갖는 유도체, 또는 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 다형성 결정 구조; 또는 이들의 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체를 갖고;
    여기서, "" 는 L1 또는 L2에 연결된 부위이고;
    여기서, 젤다나마이신, 메이탄시노이드, 에리불린 및 스플라이세오스타틴은 각각 하기 화학식을 갖는다:

    (c) 젤다나마이신은 하기 화학식을 갖고:

    여기서, X는 O, NH, CH2이고, 는 L1 또는 L2에 연결된 연결 부위이고;

    (d) 메이탄신 또는 그 유도체 메이탄시노이드는 하기 화학식:

    또는 하나 이상의 동위원소를 갖는 유도체, 또는 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 다형성 결정 구조; 또는 이들의 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체를 갖고;
    여기서, 는 L1 또는 L2에 연결된 부위이고;

    (e) 캄프토테신(CPT) 및 그 유도체는 하기 화학식:

    또는 하나 이상의 화학 원소의 동위원소, 또는 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체를 갖고;
    여기서, R1, R2 및 R4는 독립적으로 H, F, Cl, Br, CN, NO2, C1-C8 알킬; O-C1-C8 알킬; NH-C1-C8 알킬; C2-C8 헤테로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카르보사이클릭, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카르보닐, 헤테로아릴; 또는 2-8개 탄소 원자의 에스테르, 에테르, 아미드, 카르보네이트, 우레아 또는 카바메이트로부터 선택되고;
    R3은 H, OH, NH2, C1-C8 알킬; O-C1-C8 알킬; NH-C1-C8 알킬; C2-C8 헤테로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; 또는 2-8개 탄소 원자의 에스테르, 에테르, 아미드, 카르보네이트, 우레아 또는 카바메이트가고; 또는 R1R2, R2R3 및 R3R4는 독립적으로 5~7원 카르보사이클릭, 헤테로사이클릭, 헤테로사이클로알킬, 방향족 또는 헤테로방향족 고리 시스템을 형성하고; 는 L1 또는 L2에 연결될 수 있는 분자 내 부위이고;
    캄프토테신(CPT) 및 그 유도체는 구체적으로 하기 화학식:





    또는 하나 이상의 화학 원소의 동위원소, 또는 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체를 갖고; P1은 H, OH, NH2, COOH, C(O)NH2, OCH2OP(O)(OR18)2, OC(O)OP(O)(OR18)2, OPO(OR18)2, NHPO(OR18)2, OC(O)R18, OP(O)(OR18)OP(O)(OR18)2, OC(O)NHR18, OC(O)N(C2H4)2NCH3, OSO2(OR18), O-(C4-C12-글로코시드), OC(O)N(C2H4)2CH2N(C2H4)2CH3, O-(C1-C8 선형 또는 분지형 알킬), C1-C8 선형 또는 분지형 알킬 또는 헤테로알킬; C2-C8 선형 또는 분지형 알케닐, 알키닐, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 선형 또는 분지형 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카보사이클릭, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카르보닐, 헤테로아릴; 카보네이트(-C(O)OR17), 카바메이트(-C(O)NR17R18)이고; R17 및 R18은 독립적으로 H, 선형 또는 분지형 알킬 또는 헤테로알킬; C2-C8 선형 또는 분지형 알케닐, 알키닐, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 선형 또는 분지형 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카보사이클릭, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카르보닐, 헤테로아릴; 카보네이트(-C(O)OR17), 카바메이트(-C(O)NR17R18)이고; R1 및 R2는 H; O-C1-C8 알킬; C2-C8 헤테로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 아릴, Ar-알킬로부터 독립적으로 선택되고; 여기서 상기 CPT 구조(Icp-01 내지 Icp-24)의 연결 부위 ""는 여기서 생략되었지만, 이는 화학식(Cpt-I)에 표시된 것과 동일한 위치로 정의되고;

    (f) 콤브레타스타틴 및 그 유도체는 하기 화학식:


    또는 하나 이상의 동위원소를 갖는 유도체, 또는 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 다형성 결정 구조; 또는 이들의 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체를 갖고; 여기서 ""는 L1 또는 L2에 연결된 부위이고;

    (g). 탁산 및 그 유도체는 하기 화학식:


    또는 하나 이상의 동위원소를 갖는 유도체, 또는 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 다형성 결정 구조; 또는 이들의 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체를 갖고; 여기서, 는 L1 또는 L2에 연결된 부위이고; Ar 및 Ar'은 독립적으로 아릴 또는 헤테로아릴이고;

    (h). 안트라사이클린 및 그 유도체는 하기 화학식:

    또는 하나 이상의 동위원소를 갖는 유도체, 또는 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 다형성 결정 구조; 또는 이들의 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체를 갖고; 여기서, 는 L1 또는 L2에 연결된 부위이고;





    (i). 빈카 알칼로이드 및 그 유도체는 하기 화학식:



    또는 하나 이상의 동위원소를 갖는 유도체, 또는 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 다형성 결정 구조; 또는 이들의 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체를 갖고; 여기서, 는 L1 또는 L2에 연결된 부위이고;

    (j). 돌라스타틴, 아우리스타틴 및 이들의 유도체는 하기 화학식:



    또는 하나 이상의 화학 원소의 동위원소, 또는 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체를 갖고; 여기서, R1, R2, R3, R4 및 R5는 독립적으로 H; C1-C8 선형 또는 분지형 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로알킬, 알킬사이클로알킬, 에스테르, 에테르, 아미드, 아민, 헤테로사이클로알킬 또는 아실옥실아민; 또는 1-8개의 아미노산을 함유하는 펩티드, 또는 화학식 (OCH2CH2)p 또는 (OCH2CH(CH3))p(여기서, p는 1 내지 약 1000의 정수임)를 갖는 폴리에틸렌옥시 유닛이고; 2개의 R: R1R2, R2R3, R1R3 또는 R3R4는 함께 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로알킬 또는 알킬사이클로알킬 기의 3~8원 환형 고리를 형성할 수 있고; Y1 및 Y2는 연결 부위 ""에 연결될 때(L1 및/또는 L2에 독립적으로 연결됨), 독립적으로 O, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(R1), N(R1)C(O)N(R2), C(O)NHNHC(O) 및 C(O)NR1 이고; 또는 연결 부위 ""에 연결되지 않을 때, OH, NH2, NHNH2, NHR5, SH, C(O)OH, C(O)NH2, OC(O)NH2, OC(O)OH, NHC(O)NH2, NHC(O)SH, OC(O)NH(R1), N(R1)C(O)NH(R2), C(O)NHNHC(O)OH 및 C(O)NHR1 이고; R12는 OH, NH2, NHR1, NHNH2, NHNHCOOH, O-R1-COOH, NH-R1-COOH, NH-(Aa)nCOOH, O(CH2CH2O)pCH2CH2OH, O(CH2CH2O)pCH2CH2NH2, NH(CH2CH2O)pCH2CH2NH2, NR1R1', NHOH, NHOR1, O(CH2CH2O)pCH2CH2COOH, NH(CH2CH2O)pCH2CH2COOH, NH-Ar-COOH, NH-Ar-NH2, O(CH2CH2O)pCH2CH2NH-SO3H, NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHSO3H, R1-NHSO3H, NH-R1-NHSO3H, O(CH2CH2O)pCH2-CH2NHPO3H2, NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, OR1, R1-NHPO3H2, R1-OPO3H2, O(CH2CH2O)pCH2CH2OPO3H2, OR1-NHPO3H2, NH-R1-NHPO3H2, NH(CH2CH2NH)pCH2-CH2NH2, NH(CH2CH2S)pCH2CH2NH2, NH(CH2CH2NH)pCH2CH2OH, NH(CH2CH2S)pCH2-CH2OH, NH-R1-NH2, 또는 NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2이고, 여기서 Aa는 1-8의 동일하거나 다른 아미노산이고; p는 1 내지 5000이고; R1, R2, R3, R4, R5, R5', Z1, Z2 및 n은 위와 동일하게 정의되고;

    (k) 헤미아스터린 및 그 유도체는 하기 화학식:

    또는 하나 이상의 동위원소를 갖는 유도체, 또는 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 다형성 결정 구조; 또는 이들의 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체를 갖고; 여기서, 는 L1 또는 L2에 연결된 부위이고; 여기서 R1, R2, R3, R4 및 R5는 독립적으로 H; C1-C8 선형 또는 분지형 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로알킬, 알킬사이클로알킬, 에스테르, 에테르, 아미드, 아민, 헤테로사이클로알킬 또는 아실옥실아민; 또는 1-8개의 아미노산을 함유하는 펩티드, 또는 화학식 (OCH2CH2)p 또는 (OCH2CH(CH3))p(여기서, p는 1 내지 약 5000의 정수임)를 갖는 폴리에틸렌옥시 유닛이고; 또한, R2R3는 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로알킬 또는 알킬사이클로알킬 기의 3~8원 환형 고리를 형성할 수 있고;

    (l) 에리불린 및 그 유도체는 하기 화학식:

    또는 하나 이상의 동위원소를 갖는 유도체, 또는 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 다형성 결정 구조; 또는 이들의 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체를 갖고; 여기서 ""는 L1 또는 L2에 연결된 부위이고;

    (m). 니코틴아미드 포스포리보실트랜스퍼라제(NAMPT) 억제제 및 그 유도체는 하기 화학식:


    또는 하나 이상의 화학 원소의 동위원소, 또는 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체를 갖고; 여기서, ""는 위와 동일하고; X5는 F, Cl, Br, I, OH, OR1, R1, OPO3H2, OSO3H, NHR1, OCOR1, NHCOR1이고;

    (n). 벤조디아제핀 이량체 및 그 유도체는 하기 화학식:





    또는 하나 이상의 화학 원소의 동위원소, 또는 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체를 갖고; 여기서 X1, X2, Y1, Y2, Z1, Z2 및 n은 위와 동일하게 정의되고; 바람직하게는 X1, X2, Y1 및 Y2는 독립적으로 O, N, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(R1), N(R1)C(O)N(R1), CH, C(O)NHNHC(O) 및 C(O)NR1이고; R1, R2, R3, R1', R2' 및 R3'는 독립적으로 H; F; Cl; =O; =S; =CH2; =CH-R1, OH; SH; C1-C8 선형 또는 분지형 알킬, 아릴, 알케닐, 헤테로아릴, 헤테로알킬, 알킬사이클로알킬, 에스테르(COOR5 또는 -OC(O)R5), 에테르(OR5), 아미드(CONR5), 카바메이트(OCONR5), 아민(NHR5, NR5R5'), 헤테로사이클로알킬 또는 아실옥실아민(-C(O)NHOH, -ONHC(O)R5); 또는 1-20개의 천연 또는 비천연 아미노산을 함유하는 펩티드, 또는 화학식 (OCH2CH2)p 또는 (OCH2CH(CH3))p의 폴리에틸렌옥시 유닛(여기서, p는 1 내지 약 5000의 정수임)이고, 2개의 R: R1R2, R2R3, R1R3 , R1'R2', R2'R3', 또는 R1'R3' 는 독립적으로 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로알킬 또는 알킬사이클로알킬 기의 3~8원 환형 고리를 형성할 수 있고; X3 및 Y3은 독립적으로 N, NH, CH2 또는 CR5이거나, X3 및 Y3 중 하나는 부재할 수 있고; R1 및 R2는 C1-C8 선형 또는 분지형 알킬, 헤테로알킬; C3-C8 아릴, 헤테로아릴, 알킬사이클로알킬, 아실옥실, 알킬아릴, 알킬아릴옥실, 알킬아릴아미노, 알킬아릴티올; 또는 1-6개의 동일하거나 상이한 서열의 아미노산/펩티드(Ar)r, r=1-6이고; 여기서 R4, R5, R5', R6, R12 및 R12'는 독립적으로 H, OH, NH2, NH(CH3), NHNH2, COOH, SH, OZ3, SZ3, F, Cl, 또는 C1-C8 선형 또는 분지형 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로알킬, 알킬사이클로알킬, 아실록실아민이고; Z3은 H, OP(O)(OM1)(OM2), OCH2OP(O)(OM1)(OM2), OSO3M1 또는 O-글리코시드(글루코사이드, 갈락토사이드, 만노사이드, 글루쿠로노사이드/글루쿠로니드, 알로사이드, 프럭토사이드 등), NH-글리코시드, S-글리코시드 또는 CH2-글리코시드이고; M1 및 M2는 독립적으로 H, Na, K, Ca, Mg, NH4, NR1R2R3이고, X6은 CH, N, P(O)NH, P(O)NR1, CHC(O)NH, C3-C8 아릴, 헤테로아릴, 알킬사이클로알킬, 아실옥실, 알킬아릴, 알킬아릴옥실, 알킬아릴아미노, 또는 Aa(아미노산, 바람직하게는 Lys, Phe, Asp, Glu, Ser, Thr, His, Cys, Tyr, Trp, Gln, Asn, Arg로부터 선택됨)이고; “는 위와 동일하게 정의되고;

    (o) CC-1065 유사체 또는 두카르마이신 유사체 및 그 유도체는 하기 화학식:



    또는 하나 이상의 화학 원소의 동위원소, 또는 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체를 갖고; 여기서, X1, X2, Y1 및 Y2는 연결 부위 “에 연결될 때, 독립적으로 O, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(R1), N(R1)C(O)N(R2), C(O)NHNHC(O) 및 C(O)NR1 이고; 또는 연결 부위 “에 연결되지 않을 때, OH, NH2, NHNH2, NHR1, SH, C(O)OH, C(O)NH2, OC(O)NH2, OC(O)OH, NHC(O)NH2, NHC(O)SH, OC(O)NH(R1), N(R1)C(O)NH(R2), C(O)NHNHC(O)OH 및 C(O)NHR1이고; Z3은 H, PO(OM1)(OM2), SO3M1, CH2PO(OM1)(OM2), CH3N(CH2CH2)2NC(O)-, O(CH2CH2)2NC(O)-, R1 또는 글리코시드이고; R1, R2, R3, M1, M2 및 n은 위와 동일하게 정의되고;

    (p). 아마톡신 및 그 유도체는 하기 화학식: Am01, Am02 및 Am03:\

    또는 하나 이상의 화학 원소의 동위원소, 또는 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 이들 화합물의 다형성 결정 구조; 또는 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체를 갖고; 여기서, X1 및 Y1은 독립적으로 O, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(R1), N(R1)C(O)N(R1), CH2, CHNH, CH2O, C(O)NHNHC(O) 및 C(O)NR1이고; R7, R8 및 R9는 독립적으로 H, OH, OR1, NH2, NHR1, C1-C6 알킬이거나, 부재하고; Y2는 O, O2, NR1, NH이거나, 부재하고; R10은 CH2, O, NH, NR1, NHC(O), NHC(O)NH, NHC(O)O, OC(O)O, C(O), OC(O), OC(O)(NR1), (NR1)C(O)(NR1), C(O)R1이거나, 부재하고; R11은 OH, NH2, NHR1, NHNH2, NHNHCOOH, O-R1-COOH, NH-R1-COOH, NH-(Aa)rCOOH, O(CH2CH2O)pCH2CH2OH, O(CH2CH2O)pCH2CH2NH2, NH(CH2CH2O)pCH2CH2NH2, NR1R2, O(CH2CH2O)pCH2CH2-COOH, NH(CH2CH2O)pCH2CH2COOH, NH-Ar-COOH, NH-Ar-NH2, O(CH2CH2O)pCH2CH2-NHSO3H, NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHSO3H, R1-NHSO3H, NH-R1-NHSO3H, O(CH2CH2O)p-CH2CH2NHPO3H2, NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, OR1, R1-NHPO3H2, R1-OPO3H2, O(CH2CH2O)pCH2CH2OPO3H2, OR1-NHPO3H2, NH-R1-NHPO3H2, 또는 NH(CH2CH2O)pCH2-CH2NHPO3H2이고, (Aa)r은 1-8개의 아미노산이고; n 및 m1은 독립적으로 1-20이고; p는 1~5000이고; R1, R2 및 Ar은 출원서 전체에서 정의된 것과 동일이고; ""는 위와 동일하게 정의되고;

    (q) 스플라이세오스타틴, 플라디에놀리드 및 이들의 유도체는 하기 화학식:

    또는 화학 원소의 동위원소, 또는 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 다형성 결정 구조; 또는 이들의 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체를 갖고, 여기서 ""는 L1 또는 L2에 연결된 연결 부위이고;

    (r). 단백질 키나제 억제제 및 그 유도체는 하기 화학식:







    또는 화학 원소의 동위원소, 또는 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 다형성 결정 구조; 또는 이들의 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체를 갖고; 여기서, Z5 및 Z5'는 O, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(R1), N(R1)C(O)N(R2), C(O)NHNHC(O) 및 C(O)NR1로부터 독립적으로 선택되고; 여기서 는 L1 또는 L2에 연결된 링크 부위이고;

    (s). MEK 억제제 및 그의 유도체는 하기 화학식:

    또는 화학 원소의 동위원소, 또는 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 다형성 결정 구조; 또는 이들의 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체를 갖고; 여기서, Z5는 O, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(R1), N(R1)C(O)N(R2), C(O)NHNHC(O) 및 C(O)NR1로부터 선택되고; 여기서, 은 L1 또는 L2에 연결된 링크 부위이고;

    (t). 단백질분해효소 억제제 및 그 유도체는 하기 화학식:

    또는 화학 원소의 동위원소, 또는 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 다형성 결정 구조; 또는 이들의 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체를 갖고; 여기서, 는 L1 또는 L2에 연결된 연결 부위이고;

    (u). 본 발명의 접합을 위한 페이로드로서 사용될 수 있는 면역독소는 디프테리아 독소(DT), 콜레라 독소(CT), 트리코산틴(TCS), 디안틴, 슈도모나스 외독소 A(ETA'), 에리트로게닉(Erythrogenic) 독소, 디프테리아 독소, AB 독소, 유형 III 외독소, 프로에어로리신 및 톱살리신으로부터 선택되고, 면역독소는 단백질 융합의 생명공학을 통해, 또는 유리 아미노, 티올 또는 카르복실산 기를 갖는 면역독소의 아미노산을 통해 본 발명의 항체에 구축되고(constructed);

    (v).세포 결합 분자/리간드 또는 세포 수용체 작용제 및 이들의 유도체는 하기 화학식:












    또는 화학 원소의 동위원소, 또는 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 수화된 염; 또는 다형성 결정 구조; 또는 이들의 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체 또는 거울상 이성질체를 갖고, 여기서 는 L1 또는 L2에 연결되는 연결 부위이고; 여기서 X4 및 Y1은 독립적으로 O, NH, NHNH, NR1, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(R1), N(R1)C(O)N(R1), CH2, C(O)NHNHC(O) 및 C(O)NR1이고;

    (w) 1개, 2개 이상의 DNA, RNA, mRNA, 소형 간섭 RNA(siRNA), 마이크로RNA(miRNA) 및 PIWI 상호작용 RNA(piRNA)는 화학요법/작용성 화합물로서 하기 화학식을 갖는 본 발명의 BCMA 항체에 접합될 수 있고:

    여기서, ""은 본 특허의 측쇄 링커를 연결하는 부위이고; 는 DNA, RNA, mRNA, siRNA, miRNA 또는 piRNA의 단일 또는 이중 가닥이고; X1 및 Y는 독립적으로 O, NH, NHNH, NR1, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(R1), N(R1)C(O)N(R1), CH2, C(O)NHNHC(O) 및 C(O)NR1이다.
  13. 제10항에 있어서, 링커 L1 및 L2는 하기로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 항체-약물 접합체:
    O, NH, S, NHNH, N(R3), N(R3)N(R3'), 화학식 (OCH2CH2)pOR3, 또는 (OCH2CH(CH3))pOR3, 또는 NH(CH2CH2O)pR3, 또는 NH(CH2CH(CH3)O)pR3, 또는 N[(CH2CH2O)pR3][(CH2CH2O)p'R3'], 또는 (OCH2CH2)pCOOR3, 또는 CH2CH2(OCH2CH2)pCOOR3의 폴리에틸렌옥시 유닛(여기서, p 및 p'는 0 내지 약 1000으로부터 독립적으로 선택된 정수임), 또는 이들의 조합; C1-C8 알킬; C2-C8 헤테로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카르보사이클릭, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카르보닐, 헤테로아릴;
    여기서, R3 및 R3'는 독립적으로 H; C1-C8 알킬; C2-C8 헤테로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카르보사이클릭, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카르보닐, 헤테로아릴; 또는 1-8개 탄소 원자의 에스테르, 에테르 또는 아미드; 또는 정의에 기재된 1~8개의 천연 또는 비천연 아미노산; 또는 화학식 (OCH2CH2)p 또는 (OCH2CH(CH3))p의 폴리에틸렌옥시 유닛(여기서, p는 0 내지 약 1000의 정수), 또는 이들의 조합이고;
    여기서, L1 또는 L2는 자가-희생(self-immolative) 또는 비 자가-희생 성분, 펩티딜 유닛, 히드라존 결합, 이황화물, 에스테르, 옥심, 아미드 또는 티오에테르 결합을 함유할 수 있고, 자가-희생 유닛은 2-아미노이미다졸-5-메탄올 유도체, 헤테로고리형 PAB 유사체, 베타-글루쿠로니드 및 오르토 또는 파라-아미노벤질아세탈을 포함하여, 파라-아미노벤질카바모일(PAB) 기를 포함하고;
    여기서, 자가-희생 링커 성분은 하기 구조 중 하나를 갖고:

    여기서, (*) 원자는 추가 스페이서 또는 방출가능한 링커 유닛, 세포독성제 및/또는 세포 결합 분자(CBA)의 부착 지점이고; X1, Y1, Z2 및 Z3은 독립적으로 NH, O 또는 S이고; Z1은 독립적으로 H, NH, O 또는 S이고; v는 0 또는 1이고; U1은 독립적으로 H, OH, C1-C6 알킬, (OCH2CH2)nF, Cl, Br, I, OR5, SR5, NR5R5', N=NR5, N=R5, NR5R5', NO2, SOR5R5', SO2R5, SO3R5, OSO3R5, PR5R5', POR5R5', PO2R5R5', OPO(OR5)(OR5'), 또는 OCH2PO(OR5(OR5')이고; 여기서, R5 및 R5'는 위에서 정의한 바와 같고, 바람직하게는 R5 및 R5'는 H, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬; C3-C8 아릴, 헤테로사이클릭, 카르보사이클릭, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아랄킬, 알킬카르보닐; 또는 약학적 양이온 염으로부터 독립적으로 선택되고;
    여기서, 비 자가-희생 링커 성분은 하기 구조 중 하나이고;


    여기서, (*) 원자는 추가적인 스페이서 R1 또는 방출 가능한 링커, 세포독성제 및/또는 결합 분자의 부착 지점이고; X1, Y1, U1, R1, R5, R5'는 위에서 정의한 바와 같고; r은 0~100이고; m과 n은 독립적으로 0~6이고;
    여기서, L1 또는 L2는 6-말레이미도카프로일("MC"), 말레이미도프로파노일("MP"), 발린-시트룰린("val-cit" 또는 "vc"), 알라닌-페닐알라닌(ala-phe" 또는 "af"), p-아미노벤질옥시카르보닐("PAB"), 4-티오펜타노에이트("SPP"), 4-(N-말레이미도메틸)시클로헥산-1 카르복실레이트("MCC"), (4-아세틸)아미노-벤조에이트("SIAB"), 4-티오-부티레이트(SPDB), 4-티오-2-하이드록시설포닐-부티레이트(2-Sulfo-SPDB), 또는 1-8개의 천연 또는 비천연 아미노산 유닛을 갖는 천연 또는 비천연 펩티드의 하나 이상의 링커 성분으로 구성될 수 있고;
    여기서, L1 또는 L2는 pH 불안정성(labile), 산 불안정성, 염기 불안정성, 산화 불안정성, 대사 불안정성, 생화학적 불안정성 또는 효소 불안정성 결합일 수 있는 적어도 하나의 결합을 포함하는 방출 가능한 링커일 수 있고; 방출 가능한 링커(L1 또는 L2)의 성분은 -(CR5R6)m(Aa)r-(CR7R8)n(OCH2CH2)t-, -(CR5R6)m(CR7R8)n(Aa)r(OCH2CH2)t-, -(Aa)r(CR5R6)m(CR7R8)n(OCH2CH2)t-, -(CR5R6)m(CR7R8)n-(OCH2CH2)r(Aa)t-, -(CR5R6)m-(CR7=CR8)(CR9R10)n(Aa) t(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(NR11CO)(Aa)t-(CR9R10)n-(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(Aa)t(NR11CO)(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(OCO)(Aa)t-(CR9R10)n-(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(OCNR7)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(CO)(Aa)t-(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(NR11CO)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m-(OCO)(Aa)t-(CR9R10)n-(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(OCNR7)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(CO)(Aa)t-(CR9R10)n-(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m-페닐-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -(CR5R6)m-푸릴-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -(CR5R6)m-옥사졸릴-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -(CR5R6)m-티아졸일-CO(Aa)t-(CCR7R8)n-, -(CR5R6)t-티에닐-CO(CR7R8)n-, -(CR5R6)t-이미다졸일-CO-(CR7R8)n-, -(CR5R6)t-모르폴리노-CO(Aa)t-(CR7R8)n-, -(CR5R6)t피레파지노-CO(Aa)t-(CR7R8)n-, -(CR5R6)t-N-메틸피페라진-CO(Aa)t-(CR7R8)n-, -(CR5R)m-(Aa)t페닐-, -(CR5R6)m-(Aa)t푸릴-, -(CR5R6)m-옥사졸일(Aa)t-, -(CR5R6)m-티아졸일(Aa)t-, -(CR5R6)m-티에닐-(Aa)t-, -(CR5R6)m-이미다졸일(Aa)t-, -(C R5R6)m-모르폴리노-(Aa)t-, -(CR5R6)m-피페라지노-(Aa)t-, -(CR5R6)m-N-메틸피페라지노-(Aa)t-, -K(CR5R6)m(Aa)r(CR7R8)n(OCH2CH2)t-, -K(CR5R6)m-(CR7R8)n(Aa)r(OCH2CH2)t-, -K(Aa)r-(CR5R6)m-(CR7R8)n(OCH2CH2)t-, -K(CR5R6)m(CR7R8)n-(OCH2CH2)r(Aa)t-, -K(CR5R6)m-(CR7=CR8)-(CR9R10)n(Aa)t(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m(NR11CO)-(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m(Aa)t-(NR11CO)(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m-(OCO)(Aa)t(CR9R10)n-(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m-(OCNR7)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m-(CO)(Aa)t-(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m-(NR11CO)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m-(OCO)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m-(OCNR7)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K-(CR5R6)m(CO)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m-페닐-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -K-(CR5R6)m-푸릴-CO(Aa)t-(CR7R8)n-, -K(CR5R6)m-옥사졸일-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -K(CR5R6)m-티아졸일-CO(Aa)t-(CR7R8)n-, -K(CR5R6)t-티에닐-CO(CR7R8)n-, -K(CR5R6)t이미다졸일-CO-(CR7R8)n-, -K(CR5R6)t-모르폴리노-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -K(CR5R6)t피페라지노-CO(Aa)t-(CR7R8)n-, -K(CR5R6)t-N-메틸피페라지노CO(Aa)t(CR7R8)n-, -K(CR5R)m(Aa)t페닐, -K-(CR5R6)m-(Aa)t푸릴-, -K(CR5R6)m-옥사졸일(Aa)t-, -K(CR5R6)m-티아졸일-(Aa)t-, -K(CR5R6)m-티에닐-(Aa)t-, -K(CR5R6)m-이미다졸일-(Aa)t-, -K(CR5R6)m-모르폴리노(Aa)t-, -K(CR5R6)m-피페라지노-(Aa)tG, -K(CR5R6)m-N-메틸-피페라지노(Aa)t를 포함하고; 여기서, m, Aa, m, n, R3, R4, 및 R5는 위에 기재되어 있고; t 및 r은 독립적으로 0 내지 100이고; R6, R7, 및 R8은 독립적으로, H; 할라이드; C1-C8 알킬, 아릴, 알케닐, 알키닐, 에테르, 에스테르, 아민 또는 아미드(이는 하나 이상의 할라이드, CN, NR1R2, CF3, OR1, 아릴, 헤테로사이클, S(O)R1, SO2R1, -CO2H, -SO3H, -OR1, -CO2R1, -CONR1, -PO2R1R2, -PO3H 또는 P(O)R1R2R3로 선택적으로 치환됨)로부터 선택되고; K는 NR1, -SS-, -C(=O)-, -C(=O)NH-, -C(=O)O-, -C=NH-O-, -C=N-NH-, -C(=O)NH-NH-, O, S, Se, B 또는 C3-C6 헤테로방향족 기이고;
    여기서, 링커 L1 및/또는 L2의 성분의 구조는 하기와 같다:






    또는 이들의 조합; 여기서, 는 연결 부위이고; X2, X3, X4, X5, 또는 X6은 NH; NHNH; N(R12); N(R12)N(R12'); O; S; C1-C6 알킬; C2-C6 헤테로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카르보사이클릭, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카르보닐, 헤테로아릴; CH2OR12, CH2SR12, CH2NHR12, 또는 1~8개의 아미노산으로부터 독립적으로 선택되고; R12 및 R12'는 독립적으로 H; C1-C8 알킬; C2-C8 헤테로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카르보사이클릭, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카르보닐, 헤테로아릴; 또는 1-8개 탄소 원자의 에스테르, 에테르 또는 아미드; 또는 화학식 (OCH2CH2)p 또는 (OCH2CH(CH3))p(여기서, p는 0 내지 약 100의 정수임)의 폴리에틸렌옥시 유닛, 또는 이들의 조합이다.
  14. 제10항에 있어서, 링커 L1 및 L2가 하기로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 항체-약물 접합체:





    여기서, ""은 약물을 연결하는 부위 또는 링커 L1 또는 L2의 부위이고; "#"은 항체의 S(티올), O(페놀), NH(아미노), CHO(알데히드), C(=O)(케톤), C(O)(NH)(아미드) 및 C(O)(OH)(카르복실레이트)를 연결하는 부위이고; Aa는 L- 또는 D-천연 또는 비천연 아미노산이고;
    R1은 H, C1-C8 알킬, OH, CH2OH, CH2CH2OH, NH2, SH, SCH3, CH2COOH, CH2CH2COOH, CH2CH2CH2CH2NH2, C6H5, CH2C6H5, CH2C6H4OH, CH(OH)CH3, CH2C(O)NH2, CH2CH2C(O)NH2, 또는 CH2CH2CH2NHC(=NH)NH2이고;
    r은 0-12이고; r이 0이 아닌 경우, (Aa)r은 동일하거나 상이한 아미노산 또는 펩티드 유닛이고;
    m1 = 1-18; m2 = 1-100; m3 = 1-8; m4 = 0-8; m5 = 1-8;
    Y7은 NNH, OCH2NH, NHC(=O), NHNH, C(=O)NH, N(R1), SO2, P(O)(OH), NHS(O)2, NHS(O)2NH, NHS(O)2NHC(O), NHS(O)2NHC(O)O, NHS(O)2NHC(O)NH, NHP(O)(OH), NHP(O)(OH)NH, OP(O)(OH)O, NHP(O)(OH)O, OP(O)(OH)NH, S, O, OP(O)(OH)OP(O)(OH)NH, NHP(O)(OH)OP(O)(OH)NH, NHP(O)(OH)OP(O)(OH)O, OCH2CH2O, OCH2CH2NH, N(CH2CH2)2N, NHC6H4NH, 또는 CH2이고;
    Y8은 NHC(=O), NHS(O2), NH(SO), NHS(O2)NH, NHP(O)(OH)NH 또는 C(O)NH이고;
    R9는 H, (O=)CR1, (O=)CNHR1, R1COOH, R1(COCH2NH)m2H, R1(Aa)r 또는 R1(COCH2NCH3)m2H이고; 여기서 R1은 위에 정의되어 있고;
    Lv1’은 하기로부터 선택되고:







    여기서, ""은 약물을 연결하는 부위 또는 링커 L1 또는 L2의 부위이고; "#"은 항체의 S(티올), O(페놀), NH(아미노), CHO(알데히드), C(=O)(케톤), C(O)(NH)(아미드) 및 C(O)(OH)(카르복실레이트)를 연결하는 부위이고; R1, X1' 및 X2'는 위에 설명되어 있고; X는 O, NH, S, CH2이고; 두 원자 중간에 있는 연결하는 결합 ""은 두 원자 중 어느 하나를 연결할 수 있음을 의미하고, Ar은 방향족 기이다.
  15. 제10항에 있어서, 링커 L1 및 L2가 독립적으로 하기 화학식 (If) 및 (Ig)인 항체-약물 접합체:

    여기서, Aa는 L- 또는 D-천연 또는 비천연 아미노산이고;
    R1은 H, C1-C8 알킬, OH, CH2OH, CH2CH2OH, NH2, SH, SCH3, CH2COOH, CH2CH2COOH, CH2CH2CH2CH2NH2, C6H5, CH2C6H5, CH2C6H4OH, CH(OH)CH3, CH2C(O)NH2, CH2CH2C(O)NH2, CH2CH2CH2NHC(=NH)NH2이고;
    r은 0-12이고; r이 0이 아닌 경우, (Aa)r은 동일하거나 상이한 서열의 아미노산 또는 펩티드 유닛이고;
    m1 = 1-18; m2 = 1-100; m3 = 1-8; m4 = 0-8; m5 = 1-8;
    Y7은 NH, OCH2NH, NHC(=O), NHNH, C(=O)NH, N(R1), SO2, P(O)(OH), NHS(O)2, NHS(O)2NH, NHS(O)2NHC(O), NHS(O)2NHC(O)O, NHS(O)2NHC(O)NH, NHP(O)(OH), NHP(O)(OH)NH, OP(O)(OH)O, NHP(O)(OH)O, OP(O)(OH)NH, S, O, OP(O)(OH)OP(O)(OH)NH, NHP(O)(OH)OP(O)(OH)NH, NHP(O)(OH)OP(O)(OH)O, OCH2CH2O, OCH2CH2NH, N(CH2CH2)2N, NHC6H4NH, 또는 CH2이고;
    Y8는 NHC(=O), NHS(O2), NH(SO), NHS(O2)NH, NHP(O)(OH)NH 또는 C(O)NH이고；
    R9는 H, (O=)CR1, (O=)CNHR1, R1COOH, R1(COCH2NH)m2H, R1(Aa)r 또는 R1(COCH2NCH3)m2H이고, 여기서 R1은 위에 정의되어 있다.
  16. 제10항에 있어서, 항체-약물 접합체는 본 발명의 항체의 아미노산과 반응하여, 화학식 (I), (II) 및 (III)의 접합체를 형성하도록, 하기 화학식 (IV), (V) 및 (VI)를 각각 갖는 약물/링커 복합체로부터 제조된, 항체-약물 접합체

    여기서: Lv1 및 Lv2는 반응성 기이고, 이는 하기로부터 독립적으로 선택되고:







    여기서, X1' 및 X2'는 독립적으로 F, Cl, Br, I, OTf, OMs, OC6H4(NO2), OC6H3(NO2)2, OC6F5, OC6HF4, 또는 Lv3이고; X2는 O, NH, N(R1) 또는 CH2이고; R3 및 R5는 독립적으로 H, R1, 방향족, 헤테로방향족 또는 방향족 기이며, 여기서 하나 또는 여러 개의 H 원자는 독립적으로 -R1, -할로겐, -OR1, -SR1, -NR1R2, - NO2, -S(O)R1, -S(O)2R1, 또는 -COOR1로 대체되고;
    Lv3 및 Lv3'는 독립적으로 F, Cl, Br, I, 니트로페놀; N-하이드록시숙신이미드(NHS); 페놀; 벤젠티올, 디니트로페놀; 펜타플루오로페놀; 테트라플루오로페놀; 디플루오로페놀; 모노플루오로페놀; 펜타클로로페놀; 트리플레이트(triflate); 이미다졸; 디클로로페놀; 테트라클로로페놀; 1-히드록시벤조트리아졸; 토실레이트; 메실레이트; 2-에틸-5-페닐이속사졸륨-3'-설포네이트, 자체적으로 형성되거나 다른 무수물과 함께 형성된 무수물, 예를 들어 아세틸 무수물, 포르밀 무수물; 또는 펩티드 커플링 반응 또는 미츠노부(Mitsunobu) 반응을 위한 축합 시약으로 생성된 중간 분자로부터 선택된 이탈기이고;
    L1' 및 L2'는 동일하거나 상이하고, O, NH, S, S-S, NHNH, N(R3), N(R3)N(R3'), C1-C8 알킬; C2-C8 헤테로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카르보사이클릭, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카르보닐, 헤테로아릴; C2-C8(2-8 탄소 원자) 에스테르, 에테르 또는 아미드; 정의에 기재된 1~8개의 천연 또는 비천연 아미노산; 화학식 (OCH2CH2)p, (OCH2CH(CH3))p, (OCH2CH2)pOR3, (OCH2CH(CH3))pOR3, NH(CH2CH2O)pR3, NH(CH2CH(CH3)O)pR3, N[(CH2CH2-O)pR3][(CH2CH2O)pR3'], (OCH2CH2)pCOOR3, 또는 CH2CH2(OCH2CH2)pCOOR3의 폴리에틸렌옥시 유닛(여기서, p 및 p'는 독립적으로 0 내지 약 1000에서 선택된 정수임), 또는 이들의 조합으로부터 독립적으로 선택되고; R3 및 R3'은 독립적으로 H이고; C1-C8 알킬; C2-C8 헤테로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카르보닐, 헤테로아릴이고;
    L1' 및/또는 L2'는 자가-희생 또는 비 자가-희생 성분, 펩티딜 유닛, 히드라존 결합, 이황화물, 에스테르, 옥심, 아미드 또는 티오에테르 결합을 포함할 수 있고, 자기 희생적 성분과 비 자가-희생적 성분은 모두 청구항 13에 기재된 바와 동일하고;
    화학식 (V) 및 화학식 (VI)에서, ""과 ""의 성분은 독립적으로 하기로부터 선택되고:







    여기서, Lv3, Lv3', X1', X2'는 위에 기재한 바와 같고, 두 원자 중간에 있는 연결하는 결합 ""은 두 원자 중 어느 하나를 연결할 수 있음을 의미한다.
  17. 제10항에 있어서, 상기 항체-약물 접합체는 먼저 세포독성 약물과 각각 반응하여, 화학식 (IV), (V) 또는 (VI)의 화합물을 형성하고, 이어서 항체 내 아미노산과 반응하여 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 접합체를 형성하도록, 하기 화학식 (VII), (VIII) 또는 (IX)를 갖는 링커 화합물로부터 제조되는, 항체-약물 접합체.

    L1', L2', E1, Lv1, Lv2는 화학식 (I), (II), (III), (IV), (V) 및 (VI)과 동일하게 정의되고; Lv5 및 Lv6은 하기로부터 독립적으로 선택되고:


    여기서, X1'은 F, Cl, Br, I, OTs(토실레이트), OTf(트리플레이트), OMs(메실레이트), OC6H4(NO2), OC6H3(NO2)2, OC6F5, OC6HF4 또는 Lv3이고; X2'는 O, NH, N(R1) 또는 CH2이고; R3 및 R5는 독립적으로 H, R1, 방향족, 헤테로방향족 또는 방향족 기이며, 여기서 하나 또는 여러 개의 H 원자는 독립적으로 -R1, -할로겐, -OR1, -SR1, -NR1R2, - NO2, -S(O)R1, -S(O)2R1, 또는 -COOR1로 대체되고; Lv3 및 Lv3'는 독립적으로 F, Cl, Br, I, 니트로페녹실; N-하이드록시숙신이미드(NHS); 페녹실; 벤젠티올, 디니트로페녹실; 펜타플루오로페녹실; 테트라플루오로페녹실; 디플루오로페녹실; 모노플루오로페녹실; 펜타클로로페녹실; 트리플레이트; 이미다졸; 디클로로페녹실; 테트라클로로페녹실; 1-히드록시벤조트리아졸; 토실레이트; 메실레이트; 2-에틸-5-페닐이속사졸륨-3'-설포네이트, 자체적으로 형성되거나 다른 무수물과 함께 형성된 무수물, 예를 들어 아세틸 무수물, 포르밀 무수물; 또는 펩티드 커플링 반응 또는 미츠노부(Mitsunobu) 반응을 위한 축합 시약으로 생성된 중간 분자로부터 선택된 이탈기이고; 여기서, 작용기 Lv5 및/또는 Lv6은 반응이 Lv1 또는 Lv2와 항체, 특히 항체의 티올 사이의 반응보다 1배 이상 빠르거나 느리기만 하면, 세포독성 약물 내의 티올과도 반응할 수 있다.
  18. 제10항에 있어서, 상기 항체-약물 접합체는 이황화 결합의 환원에 의해 항체 내 티올이 생성되고, 이어서 티올이 제17항의 화학식 (VII), (VIII) 또는 (IX)의 링커와 동시에 또는 순차적으로 반응하여, 하기 화학식 (X), (XI) 또는 (XII)의 항체/링커 복합체 분자를 형성하고, 이어서 세포독성 약물 D1 또는 D2와 독립적으로 반응하여, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 접합체를 형성하도록, 제조되는 항체-약물 접합체:

    여기서, Lv5, Lv6, L1, L2, E1, Lv1' Lv2', mAb, n 및 n'은 제13항, 제14항, 제15항, 제16항 및 제17항과 동일하게 정의된다.
  19. 제10항에 있어서, 상기 항체-약물 접합체는 하기 단계들을 포함하는 균질 접합 공정을 통해 제조되는, 항체-약물 접합체:
    (a) 항체 내의 사슬간 이황화 결합을 선택적으로 감소시키기 위해, 완충 시스템에서 유효량의 아연 양이온-아미노 킬레이트/복합체 Zn(NR1R2R3)m1 2+ 및 환원제의 존재 하에 본 발명의 항체를 배양하는 단계;
    (b) 단계(a)에서 생성된 티올기와 반응시키기 위해, 제16항의 화학식 (IV), (V) 또는 (VI)에 따른 유효량의 페이로드/링커 복합체/어셈블리, 또는 제17항의 화학식 (VII), (VIII) 또는 (IX)에 따른 링커를 도입하는 단계; 및
    (c) 선택적으로 유효량의 산화제(데히드로아스코르브산)를 첨가하여, 미반응된 티올기를 재산화시키는 단계;
    (d) 그 다음, 생성된 접합체를 정제하는 단계;
    (e) 선택적인 상기 단계(c)는 미반응 환원제를 켄칭하기 위해 유효량의 시스틴 또는 상대(relative) 이황화 화합물 또는 4-(아지도메틸)벤조산을 첨가하는 한편, 티올 반응성기를 함유하는 과도한 접합 링커 또는 링커/페이로드 복합체를 켄칭하기 위해 시스틴의 환원으로부터 시스테인을 생성하는 단계로 대체될 수 있고, 여기서 유효량의 시스테인 또는 상대 티올 화합물이 또한 과도한 링커 또는 링커/페이로드 복합체 분자를 켄칭하기 위해 첨가될 수 있고;
    여기서, 상기 아연 양이온-아미노 킬레이트/복합체 Zn(NR1R2R3)m1 2+의 화학식에서, R1, R2 및 R3은 독립적으로 C1-C8 알킬; C2-C8 헤테로알킬, 알킬사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬; C3-C8 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카르보사이클릭, 사이클로알킬, 헤테로알킬사이클로알킬, 알킬카르보닐, 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택되고; m1은 1, 2, 3 또는 4이고;
    여기서, (Zn(NR1R2R3)m1 2+는 Zn(NH2CH3)2 2+, Zn(NH2CH2CH3)2 2+, Zn(NH2CH2CH2CH3)2 2+, Zn(NH2CH(CH3)2)2 2+, Zn(NH2C(CH3)3)2 2+, Zn(NH2CH2C(CH3)3)2 2+, Zn(NH(CH3)2)2 2+, Zn(NH(CH2CH3)2)2 2+, Zn(NH(CH(CH3)2)2)2 2+, Zn(NH(C(CH3)3)2)2 2+, Zn(NH(CH(CH2CH3)2)2)2 2+, Zn(NH(CH2C(CH3)3)2)2 2+, Zn(NH(CH2C(CH2CH3)3)2)2 2+, Zn(NH(CH2CH2C(CH3)3)2)2 2+, Zn(NH2CH2CH2OH)2 2+, Zn(NH(CH2CH2OH)2)2 2+, Zn(N(CH2CH2OH)3)2 2+, Zn(NH2CH2COOH)2 2+, Zn(NH2CH2CONH2)2 2+, Zn(NH2CH2COOCH3)2 2+, Zn(NH2CH2COOCH2CH3)2 2+, Zn(NH2CH2COOC(CH3)3)2 2+, Zn(NH2CH2COOCH(CH3)2)2 2+, Zn(NH2CH2CH2COOH)2 2+, Zn(NH(CH2COOH)2)2 2+, Zn(N(CH2CH2COOH)3)2 2+, Zn(NH2CH3)4 2+, Zn(NH2CH2CH3)4 2+, Zn(NH2CH2CH2CH3)4 2+, Zn(NH2CH(CH3)2)4 2+, Zn(NH2C(CH3)3)4 2+, Zn(NH2CH2C(CH3)3)4 2+, Zn(NH(CH3)2)4 2+, Zn(NH(CH2CH3)2)4 2+, Zn(NH(CH(CH3)2)2)4 2+, Zn(NH(C(CH3)3)2)4 2+, Zn(NH(CH(CH2CH3)2)2)4 2+, Zn(NH(CH2C(CH3)3)2)4 2+, Zn(NH(CH2C(CH2CH3)3)2)4 2+, Zn(NH(CH2CH2C(CH3)3)2)4 2+, Zn(NH2CH2CH2OH)4 2+, Zn(NH(CH2CH2OH)2)4 2+, Zn(N(CH2CH2OH)3)4 2+, Zn(NH2CH2COOH)4 2+, Zn(NH2CH2CONH2)4 2+, Zn(NH2CH2COOCH3)4 2+, Zn(NH2CH2COOCH2CH3)4 2+, Zn(NH2CH2COOC(CH3)3)4 2+, Zn(NH2CH2COOCH(CH3)2)4 2+, Zn(NH2CH2CH2COOH)4 2+, Zn(NH(CH2COOH)2)4 2+, Zn(N(CH2CH2COOH)3)4 2+,


    로부터 선택되고;
    상기 모든 복합체 양이온은 Cl-, Br-, I-, SO4 2-, HSO4 -, NO3 -, PO4 3-, HPO4 2-, H2PO4 -, CO3 2-, HCO3 -, HCOO-, CH3COO-, F3CCOO-, Cl3CCOO-, FCH2COO-, ClCH2COO-, F2CHCOO-, Cl2CHCOO-, BF4 -, SO3 2-, HSO3 -, CH3SO3-, C6H5CH2SO3-, C6H5SO3-, C6H5COO-, C6H5CH2COO-, C6F5O-, C6H4(OH)COO-, C6H2F3O-, C6 H4(NO2)O-, C6 H2(NO2)3O-로부터 선택된 음이온과 염으로 형성될 수 있고, 반응 용액 중의 전이금속 양이온-아미노 복합체는 농도 0.01mM~1.0mM 또는 항체 몰당 0.5~20당량이고, 에탄올, 메탄올, 프로판올, 프로판디올, DMA, DMF, DMSO, THF 또는 CH3CN로부터 선택된 물-혼화성 유기용매와 함께 반응 용액에 첨가될 수 있고;
    상기 환원제는 트리스(2-카르복시에틸)포스핀(TCEP)(P(CH2CH2COOH)3) 또는 트리스(히드록시프로필)포스핀(P(CH2CH2CH2OH)3)이며, 이들은 반응에서 항체 몰당 1.0~20당량으로 사용되고;
    단계(c)에서 첨가되는 상기 산화제는 DHAA, Fe3+, I2, Cu2+, Mn3+, MnO2, 또는 Fe3+/I-의 혼합물로부터 선택되고, 반응 용액에 사용되는 산화제는 농도 0.02mM~1.0mM 또는 항체 몰당 1~100당량이고;
    여기서, 접합 반응의 pH는 일반적으로 약 5.0 내지 8.0이고; DMA, DMF, 에탄올, 메탄올, 아세톤, 아세토니트릴, THF, 이소프로판올, 디옥산, 프로필렌 글리콜 또는 에틸렌 디올로부터 선택된 최대 30%의 물 혼합가능(혼화성) 유기 용매의 최대 30%가 물 기반 완충액에 공-용매로 첨가될 수 있고;
    여기서, 접합 반응의 최적 온도는 일반적으로 약 -5℃ 내지 40℃, 바람직하게는 약 0 내지 37℃이고; 더욱 바람직하게는 2 내지 8℃이고, 접합 반응 공정의 최적 시간은 전형적으로 약 15분 내지 약 48시간, 바람직하게는 약 30분 내지 16시간이고;
    여기서, 생성된 접합체는 세파덱스(Sephadex) G25 또는 세파크릴(Sephacryl) S300 컬럼에서의 겔 여과, 흡착 크로마토그래피, 이온(양이온 또는 음이온) 교환 크로마토그래피 또는 투석(한외여과 또는 과여과(UF) 및/또는 다이아필트레이션(DF))에 의해 정제될 수 있다.
  20. 제10항에 있어서, 상기 항체-약물 접합체는 제19항의 균일 접합 공정을 통해 제조되고, 생성된 화학식 (I), (II), (III), (X), (XI) 또는 (XII)의 접합체는 항체의 중-경쇄 사이의 시스테인 부위에 주로 (60% 이상) 연결되고, 약물/항체 비율(DAR)이 4로 설정될 때, 항체 내 약물 수의 백분율 분포는 D0<5%, D2<10%, D4>60%, D6<10%, D8<10%이고;
    여기서, 접합체의 약물/항체 비율(DAR)은 240-380nm 범위의 파장에서 UV, 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC-HPLC), 역상 크로마토그래피(RP-HPLC), 모세혈관 전기영동(CE), LC-MS, CE-MS 또는 LC-MS/MS에 의해 측정되는, 항체-약물 접합체.
  21. 제10항 또는 제20항에 있어서, 하기 구조를 갖는, 항체-약물 접합체:




















    여기서, mAb는 본 발명의 항체이고, n = 1 ~ 20, 바람직하게는 n = 2 ~ 8이다.
  22. 제16항에 있어서, 하기 구조를 갖는 화학식 (IV), (V) 및 (VI)의 약물/링커 복합체:



















  23. 다발성 골수종 세포, B-세포 매개 또는 형질세포 매개 질환, 또는 항체 매개 질환 또는 장애를 치료하기 위해, 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 치료 유효량의 BCMA 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 제9항, 제10항, 제12항, 제20항 또는 제21항 중 어느 한 항에 따른 접합체, 및 약학적으로 허용되는 염, 담체, 희석제 또는 부형제 또는 이들 접합체의 조합을 포함하는 제약 조성물.
  24. 제23항에 있어서, 중량 기준으로, 제1항의 BCMA 항체, 또는 제9항, 제10항, 제12항, 제20항 또는 제21항 중 어느 한 항에 따른 접합체 0.01%-99%; 하나 이상의 폴리올 0.0%-20.0%; 하나 이상의 계면활성제 0.0%-2.0%; 하나 이상의 보존제 0.0%-5.0%; 하나 이상의 아미노산 0.0%-30%; 하나 이상의 항산화제 0.0%-5.0%; 하나 이상의 금속 킬레이트제 0.0%-0.3%; 제형의 pH를 pH 4.5-7.5로 조절하기 위한 하나 이상의 완충염 0.0%-30.0%; 및 환자에게 투여하기 위해 재구성될 때 삼투압을 약 250 내지 350 mOsm 사이로 조절하기 위한 하나 이상의 등장제 0.0% 내지 30.0%를 포함하는 액체 제형 또는 제형화된 동결건조된 고체/분말의 제약 조성물로서,
    여기서, 폴리올은 프럭토스, 만노스, 말토스, 락토스, 아라비노스, 자일로스, 리보스, 람노스, 갈락토스, 글루코스, 수크로스, 트레할로스, 소르보스, 멜레지토스, 라피노스, 만니톨, 자일리톨, 에리트리톨, 말티톨, 락티톨, 에리트리톨, 트레이톨, 소르비톨, 글리세롤, 또는 L-글루코네이트 및 그 금속염이고;
    여기서, 계면활성제는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 65, 폴리소르베이트 80, 폴리소르베이트 81, 또는 폴리소르베이트 85, 폴록사머, 폴리(에틸렌 옥사이드)-폴리(프로필렌 옥사이드), 폴리에틸렌-폴리프로필렌, 트리톤; 나트륨 도데실 황산염(SDS), 나트륨 로렐 황산염; 나트륨 옥틸 글리코시드; 라우릴-, 미리스틸-, 리놀레일- 또는 스테아릴-설포베타인; 라우릴-, 미리스틸-, 리놀레일- 또는 스테아릴-사르코신; 리놀레일-, 미리스틸- 또는 세틸-베타인; 라우로아미도프로필-, 코카미도프로필-, 리놀레아미도프로필-, 미리스타미도프로필-, 팔미도프로필- 또는 이소스테아미도프로필-베타인(라우로아미도프로필); 미리스타미도프로필-, 팔미도프로필-, 또는 이소스테아르아미도프로필-디메틸아민; 나트륨 메틸 코코일- 또는 이나트륨 메틸 올레일-타우레이트; 도데실 베타인, 도데실 디메틸아민 옥사이드, 코카미도프로필 베타인 및 코코 암포 글리시네이트; 또는 이소스테아릴 에틸이미도늄 에토설페이트; 폴리에틸 글리콜, 폴리프로필 글리콜, 및 에틸렌과 프로필렌 글리콜의 공중합체로부터 선택되고;
    여기서, 보존제는 벤질 알코올, 옥타데실디메틸벤질 염화암모늄, 헥사메토늄 클로라이드, 벤잘코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드, 페놀, 부틸 및 벤질 알코올, 메틸 또는 프로필 파라벤과 같은 알킬 파라벤, 카테콜, 레조르시놀, 시클로헥산올, 3-펜탄올, 또는 m-크레졸로부터 선택되고;
    여기서, 아미노산은 아르기닌, 시스틴, 글리신, 리신, 히스티딘, 오르니틴, 이소류신, 류신, 알라닌, 글리신 글루탐산 또는 아스파르트산으로부터 선택되고;
    여기서, 항산화제는 아스코르브산, 글루타티온, 시스틴 및 메티오닌으로부터 선택되고;
    여기서, 킬레이트제는 EDTA 또는 EGTA로부터 선택되고;
    여기서, 완충염은 나트륨, 칼륨, 암모늄, 또는 시트르산, 아스코르브산, 글루콘산, 탄산, 타르타르산, 숙신산, 아세트산 또는 프탈산의 트리히드록시에틸아미노 염; 트리스 또는 트로메타민 염산염, 인산염 또는 황산염; 아르기닌, 글리신, 글리실글리신 또는 히스티딘과 음이온성 아세테이트, 클로라이드, 포스페이트, 설페이트 또는 숙시네이트 염으로부터 선택되고
    여기서, 등장제는 만니톨, 소르비톨, 아세트산나트륨, 염화칼륨, 인산나트륨, 인산칼륨, 시트르산삼나트륨, 또는 염화나트륨으로부터 선택되는 제약 조성물.
  25. 제23항 또는 제24항에 있어서, 액체 또는 동결건조된 고체의 형태로 바이알, 병, 사전충전형 주사기 또는 사전충전형 자동주사기에 포장된 제약 조성물.
  26. 시험관내, 생체내 또는 생체외 세포 사멸 활성을 갖는, 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 BCMA 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 제9항, 제10항, 제12항, 제20항 또는 제21항 중 어느 한 항에 따른 접합체, 또는 제23항 또는 제24항에 따른 제약 조성물 형태.
  27. 제1항에 따른 BCMA 항체, 또는 제9항, 제10항, 제12항, 제20항 또는 제21항 중 어느 한 항에 따른 접합체의 제약 조성물, 또는 제23항 또는 제24항에 따른 제약 조성물 형태로서, 제약 조성물이 다발성 골수종 세포, B-세포 매개 또는 혈장 세포 매개 질환의 상승적 치료를 위해, 화학요법제, 방사선 요법, 면역요법제, 자가면역 장애 치료제, 항-감염제 또는 다른 접합체와 동시에 투여되는, 제약 조성물.
  28. 제27항에 있어서, 상승 작용제는 하기 약물 중 하나 이상으로부터 선택된, 제약 조성물:
    아바타셉트, 아비라테론 아세테이트, 아브락산, 아세트아미노펜/하이드로코돈, 아칼라브루티닙, 아두카누맙, 아달리무맙, ADXS31-142, ADXS-HER2, 아파티닙 디말레에이트, 알데스류킨, 알렉티닙, 알렘투주맙, 알리트레티노인, 아도-트라스투주맙 엠탄신, 암페타민/덱스트로암페타민, 아나스트로졸, 아리피프라졸, 안트라사이클린, 아리피프라졸, 아타자나비르, 아테졸리주맙, 아토르바스타틴, 아벨루맙, 악시캅타진 실로류셀(Axicabtagene ciloleucel), 악시티닙, 아자시티딘, 벨리노스타트, BCG 라이브, 베바시주맙, 벡사로텐, 블리나투모맙, 보르테조밉, 보수티닙, 브렌툭시맙 베도틴, 브리가티닙, 부데소니드, 부데소니드/포르모테롤, 부프레노르핀, 카바지탁셀, 카보잔티닙, 캡마티닙, 카페시타빈, 카르필조밉, 키메라 항원 수용체-조작된 T(CAR-T) 세포, 셀레콕시브, 세리티닙, 세툭시맙, 치다마이드(Chidamide), 시클로스포린, 시나칼셋, 크리조티닙, 코비메티닙, 코센틱스(Cosentyx), 크리조티닙, CTL019, 다비가트란, 다브라페닙, 다카르바진, 다클리주맙, 다코모티닙, 답토마이신, 다라투무맙, 다르베포에틴 알파, 다루나비르, 다사티닙, 데닐류킨 디프티톡스, 데노수맙, 데파코트, 덱스란소프라졸, 덱스메틸페니데이트, 덱사메타손, 디누툭시맙, 독시사이클린, 둘록세틴, 두벨리십, 두르발루맙, 엘로투주맙, 엠트리시타빈/릴피비린/테노포비르, 디소프록실 푸마레이트, 엠트리시트빈/테노포비르/에파비렌즈, 에녹사파린, 엔사르티닙, 엔잘루타마이드, 에포에틴 알파, 에를로티닙, 에소메프라졸, 에스조피클론, 에타네르셉, 에베롤리무스, 엑세메스탄, 에베롤리무스, 엑세나타이드 ER, 에제티미브, 에제티미브/심바스타틴, 페노피브레이트, 필그라스팀, 핀골리모드, 플루티카손 프로피오네이트, 플루티카손/살메테롤, 풀베스트란트, 가지바, 제피티닙, 글라티라머, 고세렐린 아세테이트, 이코티닙, 이마티닙, 이브리투모맙 티욱세탄, 이브루티닙, 이델라리십, 이포스파미드, 인플릭시맙, 이미퀴모드, ImmuCyst, 면역 BCG, 이니파립, 인슐린 아스파트, 인슐린 디터미르(detemir), 인슐린 글라르진, 인슐린 리스프로, 인터페론 알파, 인터페론 알파-1b, 인터페론 알파-2a, 인터페론 알파-2b, 인터페론 베타, 인터페론 베타 1a, 인터페론 베타 1b, 인터페론 감마-1a, 이아파티닙, 이필리무맙, 이프라트로피움 브로마이드/살부타몰, 익사조밉, 카누마, 란레오타이드 아세테이트, 레날리도미드, 레날리오마이드, 렌바티닙 메실레이트, 레트로졸, 레보티록신, 레보티록신, 리도카인, 리네졸리드, 리라글루타이드, 리스덱삼페타민, LN-144, 로라티닙, 메만틴, 메틸페니데이트, 메토프롤롤, 메키니스트, 메리시타빈/릴피비린/테노포비르, 모다피닐, 모메타손, 마이시닥(Mycidac)-C, 네시투무맙, 네라티닙, 닐로티닙, 니라파립, 니볼루맙, 오파투무맙, 오비누투주맙, 올라파립, 올메사르탄, 올메사르탄/히드로클로로티아지드, 오말리주맙, 오메가-3 지방산 에틸 에스테르, 온코린, 오셀타미비르, 오시머티닙, 옥시코돈, 팔보시클립, 팔리비주맙, 파니투무맙, 파노비노스타트, 파조파닙, 펨브롤리주맙, PD-1 항체, PD-L1 항체, 페메트렉세드, 퍼투주맙, 폐렴구균 접합 백신, 포말리도마이드, 포지오티닙, 프레가발린, 프로스카 백스(Prosca Vax), 프로프라놀롤, 퀘티아핀, 라베프라졸, 라듐 223 클로라이드, 랄록시펜, 랄테그라비르, 라무시루맙, 라니비주맙, 레고라페닙, 리툭시맙, 리바록사반, 로미뎁신, 로수바스타틴, 룩솔리티닙 포스페이트, 살부타몰, 사볼리티닙, 세마글루타이드, 세벨라머, 실데나필, 실툭시맙, 시풀류셀-T, 시타글립틴, 시타글립틴/메트포르민, 솔리페나신, 솔라네주맙, 소니데깁, 소라페닙, 수니티닙, 타크로리무스, 타크리무스, 타달라필, 타목시펜, 타핀라르, 탈리모진 라헤르파렙벡, 탈라조파립, 텔라프레비르, 탈라조파립, 테모졸로마이드, 템시롤리무스, 테노포비르/엠트리시타빈, 테노포비르 디소프록실 푸마레이트, 테스토스테론 겔, 탈리도마이드, TICE BCG, 티오트로피움 브로마이드, 티사젠레클레우셀(Tisagenlecleucel), 토레미펜, 트라메티닙, 트라스투주맙, 트라스투주맙 데룩스테칸, 트라벡테딘(엑테이나시딘 743), 트라메티닙, 트레멜리무맙, 트리플루리딘/티피라실, 트레티노인, Uro-BCG, 우스테키누맙, 발사르탄, 벨리파립, 반데타닙, 베무라페닙, 베네토클락스, 보리노스타트, 지브-애플리베르셉, 조스타박스 및 이들의 유사체, 유도체, 제약상 허용가능한 염, 담체, 희석제 또는 부형제, 또는 이들의 조합.
  29. B 세포 성숙 항원(BCMA)을 발현하는 병원성 B 세포의 존재와 관련된 의학적 질환을, 인간 대상체에서 치료하기 위한 방법으로서,
    상기 방법은 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 BCMA 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 제9항, 제10항, 제12항, 제20항 또는 제21항 중 어느 한 항에 따른 접합체, 또는 제23항 또는 제24항에 따른 제약 조성물을 인간 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
    여기서, 병원성 B 세포의 존재와 관련된 의학적 질환은 형질 세포의 암 또는 B 림프구의 암인 방법.
  30. B 세포 성숙 항원(BCMA)을 발현하는 병원성 B 세포의 존재와 관련된 의학적 장애를 치료하기 위한 약제의 제조 시, 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 BCMA 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 제9항, 제10항, 제12항, 제20항 또는 제21항 중 어느 한 항에 따른 접합체, 또는 제23항 또는 제24항에 따른 제약 조성물의 용도로서, 여기서 상기 병원성 B 세포의 존재와 관련된 의학적 장애는 형질 세포의 암 또는 B 림프구의 암인 용도.






KR1020247017883A 2021-11-03 2022-10-08 Bcma 단일클론 항체 및 항체-약물 접합체 KR20240095316A (ko)

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