EA032881B1 - Применение торасемида для лечения болезни альцгеймера или родственного болезни альцгеймера расстройства или травмы спинного мозга - Google Patents

Применение торасемида для лечения болезни альцгеймера или родственного болезни альцгеймера расстройства или травмы спинного мозга Download PDF

Info

Publication number
EA032881B1
EA032881B1 EA201300975A EA201300975A EA032881B1 EA 032881 B1 EA032881 B1 EA 032881B1 EA 201300975 A EA201300975 A EA 201300975A EA 201300975 A EA201300975 A EA 201300975A EA 032881 B1 EA032881 B1 EA 032881B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
torasemide
baclofen
disease
combination
intoxication
Prior art date
Application number
EA201300975A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201300975A1 (ru
Inventor
Даниель Коэн
Илья Чумаков
Сергей Набирочкин
Эмманюэль Вьяль
Микаэль Гуэдж
Original Assignee
Фарнекст
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Фарнекст filed Critical Фарнекст
Publication of EA201300975A1 publication Critical patent/EA201300975A1/ru
Publication of EA032881B1 publication Critical patent/EA032881B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/135—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline
    • A61K31/137—Arylalkylamines, e.g. amphetamine, epinephrine, salbutamol, ephedrine or methadone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/135—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline
    • A61K31/138—Aryloxyalkylamines, e.g. propranolol, tamoxifen, phenoxybenzamine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/28—Compounds containing heavy metals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/42—Oxazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/42—Oxazoles
    • A61K31/423—Oxazoles condensed with carbocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4709—Non-condensed quinolines and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/48—Ergoline derivatives, e.g. lysergic acid, ergotamine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4985—Pyrazines or piperazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/50—Pyridazines; Hydrogenated pyridazines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/58—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids containing heterocyclic rings, e.g. danazol, stanozolol, pancuronium or digitogenin
    • A61K31/585—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids containing heterocyclic rings, e.g. danazol, stanozolol, pancuronium or digitogenin containing lactone rings, e.g. oxandrolone, bufalin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/64—Sulfonylureas, e.g. glibenclamide, tolbutamide, chlorpropamide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A61P25/32—Alcohol-abuse
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Addiction (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Изобретение раскрывает применение торасемида или комбинации торасемида с вторым соединением для лечения болезни Альцгеймера или родственного болезни Альцгеймера расстройства или травмы спинного мозга и для защиты корковых нейронов или мозговых эндотелиальных клеток от интоксикации Aβпептидом. Изобретение также раскрывает применение торасемида или комбинации торасемида с вторым соединением для приготовления лекарственного средства для лечения болезни Альцгеймера или родственного болезни Альцгеймера расстройства или травмы спинного мозга и для приготовления лекарственного средства для защиты корковых нейронов или мозговых эндотелиальных клеток против интоксикации Aβпептидом. Изобретение также раскрывает способ лечения болезни Альцгеймера или родственного болезни Альцгеймера расстройства или травмы спинного мозга, включающий введение субъекту торасемида или комбинации торасемида с вторым соединением.

Description

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение имеет отношение к композициям и способам лечения неврологических заболеваний. В частности, настоящее изобретение имеет отношение к новой комбинированной терапии для таких заболеваний, включая болезнь Альцгеймера и родственные заболевания, рассеянный склероз, боковой амиотрофический склероз, болезнь Паркинсона, невропатии, алкоголизм, синдром отмены алкоголя, болезнь Хантингтона и травмы спинного мозга.
Уровень техники
Болезнь Альцгеймера (AD) является типичной корковой деменцией, которая характеризуется дефицитом памяти вместе с дисфазией (расстройство речи, при котором отмечается нарушение речи и понимания речи), диспраксией (нарушение способности к координации и выполнению определенных целенаправленных движений и жестов при отсутствии моторных и сенсорных нарушений) и агнозией (нарушение способности к распознаванию предметов, лиц, звуков, образов или запахов), что объясняется участием ассоциативных областей коры головного мозга (1-4).
В настоящее время AD является самой распространенной причиной деменции. Клинически она характеризуется общим снижением когнитивной функции, которое медленно прогрессирует и делает больных на последней стадии прикованными к постели, страдающими недержанием и зависимыми от посторонней помощи. Смерть наступает в среднем через 9 лет после постановки диагноза (5).
Заболеваемость AD сильно возрастает с возрастом. По оценкам роста населения ООН, количество людей старше 80 лет приблизится к 370 миллионам к 2050 г. В настоящее время считается, что 50% людей старше 85 лет страдают AD. Таким образом, через 50 лет более 100 миллионов людей во всем мире будут страдать слабоумием. То, что огромное число людей будет нуждаться в постоянном уходе и других услугах, сильно скажется на медицинских, денежных и людских ресурсах (6). Ранним признаком заболевания является нарушение памяти, которое затрагивает эпизодическую память (память на текущие события). Семантическая память (память на вербальные и визуальные значения) вовлекается в заболевание позже.
Отличительной чертой патологии AD являются амилоидные бляшки, содержащие бета-амилоид (A3), нейрофибриллярные клубки (NFT), содержащие Tau, а также дисфункция и потеря нейронов и синапсов (7-9). За последнее десятилетие были выдвинуты две основные гипотезы о причинах AD: гипотеза амилоидного каскада, которая гласит, что нейродегенеративный процесс представляет собой ряд событий, запускаемых аномальным процессингом предшественника амилоидного белка (АРР) (10), и гипотеза дегенерации цитоскелета нейронов (11), в которой предполагается, что пусковым событием являются изменения цитоскелета. Наиболее общепринятой теорией, объясняющей течение AD, остается гипотеза амилоидного каскада (12-14), причем исследователи AD в основном сосредоточились на определении механизмов, лежащих в основе токсичности, связанной с белками A3. В качестве ключевых событий, способствующих токсичности АРР в амилоидном каскаде (15), установлены проницаемость и перестройка микрососудов, аберрантный ангиогенез и нарушение гематоэнцефалического барьера. Напротив, белок Tau получил гораздо меньше внимания со стороны фармацевтической промышленности, чем амилоид, как по фундаментальным, так и по практическим причинам. Кроме того, изменение плотности синапсов является тем патологическим повреждением, которое лучше всего коррелирует с когнитивными нарушениями по сравнению с двумя другими.
Исследования показали, что амилоидная патология развивается специфичным к нейромедиаторам образом, причем холинергические окончания наиболее уязвимы, а затем следуют глутаматергические окончания и, наконец, ГАМКергические окончания (9). Наиболее распространенным возбуждающим нейромедиатором в нервной системе млекопитающих является глутамат. При патологических условиях его чрезмерное накопление в синаптической щели ведет к избыточной активации глутаматных рецепторов (16). Чрезмерное накопление глутамата в синаптической щели вызывает перевозбуждение глутаматных рецепторов, что приводит к патологическим процессам и, наконец, к гибели нервных клеток. Этот процесс, именуемый эксцитотоксичностью, обычно наблюдается в нервных тканях при острых и хронических неврологических заболеваниях.
Становится очевидным, что эксцитотоксичность участвует в патогенезе многих заболеваний различной этиологии, таких как травмы спинного мозга, инсульт, травматическое повреждение мозга, потеря слуха, алкоголизм и синдром отмены алкоголя, алкогольная невропатия, невропатические боли, а также такие нейродегене-ративные заболевания, как рассеянный склероз, болезнь Альцгеймера, боковой амио-трофический склероз, болезнь Паркинсона и болезнь Хантингтона (17-19). Разработка эффективного лечения этих заболеваний остается главной проблемой здравоохранения из-за их частоты, а также отсутствия действенного лечения.
Для противодействия эксцитотоксйчности тестировали антагонисты NMDAR, нацеленные на различные участки этого рецептора. Неконкурентные антагонисты NMDAR воздействуют на пору ионного канала, тем самым уменьшая вход кальция в постсинаптические нейроны. Некоторые из них достигли утвержденного статуса. Так, например, мемантин в настоящее время разрешен при умеренной и тяжелой форме болезни Альцгеймера. Его испытывали клинически и при других показаниях, включающих ком
- 1 032881 понент эксцитотоксичности, таких как алкогольная зависимость (фаза II), боковой амиотрофический склероз (фаза III), слабоумие в связи с болезнью Паркинсона (фаза II), эпилепсия, болезнь Хантингтона (фаза IV), рассеянный склероз (фаза IV), болезнь Паркинсона (фаза IV) и черепно-мозговая травма (фаза IV). Однако эта молекула приносит ограниченную пользу для большинства пациентов с болезнью Альцгеймера, поскольку она оказывает только умеренные симптоматические эффекты. Другой подход к ограничению эксцитотоксичности заключается в ингибировании пресинаптического высвобождения глутамата. Ритузол, который в настоящее время разрешен при боковом амиотрофическом склерозе, показал обнадеживающие результаты на моделях ишемии и черепно-мозговой травмы (20-23). В настоящее время он проходит II фазу испытаний при ранней стадии рассеянного склероза, болезни Паркинсона (проявляет не лучшие результаты, чем плацебо), а также травмы спинного мозга. В 1995 г. препарат получил статус препарата-сироты для лечения бокового амиотрофического склероза, а в 1996 г. -для лечения болезни Хантингтона.
В WO 2009/133128, WO 2009/133141, WO 2009/133142 и WO 2011/054759 раскрыты молекулы, которые могут применяться в композициях для лечения неврологических заболеваний.
Несмотря на активные исследования в этой области по-прежнему существует потребность в альтернативных или улучшенных эффективных способах терапии для неврологических заболеваний, в частности таких неврологических заболеваний, которые связаны с токсичностью глутамата и/или βамилоида. Настоящее изобретение обеспечивает новые способы лечения таких неврологических заболеваний центральной нервной системы (ЦНС) и периферической нервной системы (ПНС).
Сущность изобретения
Целью настоящего изобретения является разработка терапевтических подходов к лечению неврологических заболеваний.
Первый аспект настоящего изобретения предусматривает применение торасемида или его соли для лечения болезни Альцгемера (AD) или родственного болезни Альцгемера расстройства, выбранного из сенильной деменции AD-типа (SDAT), деменции с тельцами Леви, сосудистой деменции, умеренного когнитивного нарушения (MCI) и возрастного нарушения памяти (AAMI), бокового амиотрофического склероза, или травмы спинного мозга у нуждающегося в этом субъекта.
Согласно изобретению торасемид или его соль применяют в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем или наполнителем в форме с пролонгированным высвобождением.
Согласно изобретению торасемид или его соль вводят субъекту неоднократно.
Второй аспект настоящего изобретения предусматривает применение комбинации, содержащей торасемид и по меньшей мере одно соединение, выбранное из сульфисоксазола, метимазола, прилокаина, дифиллина, хинакрина, карбеноксолона, аминокапроновой кислоты, баклофена, каберголина, диэтилкарбамазина, цинакальцета, циннаризина, эплеренона, фенолдопама, лефлуномида, левосимендана, сулодексида, тербинафина, зонисамида, этомидата, фенформина, триметазидина, мексилетина, ифенпродила, моксифлоксацина или бромокриптина или их солей для лечения болезни Альцгеймера (AD) или родственного болезни Альцгемера расстройства, выбранного из сенильной деменции AD-типа (SDAT), деменции с тельцами Леви, сосудистой деменции, умеренного когнитивного нарушения (MCI) и возрастного нарушения памяти (AAMI), бокового амиотрофического склероза, или травмы спинного мозга у нуждающегося в этом субъекта.
Согласно изобретению предложенную комбинацию выбирают из следующих комбинаций, включающих баклофен и торасемид, сульфисоксазол и торасемид, эплеренон и торасемид, тербинафин и торасемид, баклофен, триметазидин и торасемид, баклофен, цинакальцет и торасемид, сульфисоксазол, триметазидин, торасемид и зонисамид, сульфисоксазол, мексилетин, торасемид и цинакальцет или их соли.
Согласно изобретению предложенная комбинация дополнительно включает фармацевтически приемлемый носитель(и) или наполнитель(и) в форме с пролонгированным высвобождением.
Согласно изобретению соединения предложенной комбинации вводят в виде единой композиции, раздельно или последовательно.
Согласно изобретению предложенную комбинацию применяют для защиты корковых нейронов или эндотелиальных клеток мозга от интоксикации Aβl-42 пептидом у нуждающегося в этом субъекта.
Третий аспект настоящего изобретения предусматривает применение торасемида или его соли для приготовления лекарственного средства для лечения болезни Альцгеймера (AD) или родственного болезни Альцгемера расстройства, выбранного из сенильной деменции AD-типа (SDAT), деменции с тельцами Леви, сосудистой деменции, умеренного когнитивного нарушения (MCI) и возрастного нарушения памяти (AAMI), амиотрофического бокового склероза, или травмы спинного мозга у нуждающегося в
- 2 032881 этом субъекта.
Четвертый аспект настоящего изобретения предусматривает применение торасемида или его соли для приготовления лекарственного средства для защиты корковых нейронов или мозговых эндотелиальных клеток против интоксикации Άβ1-42 пептидом у нуждающегося в этом субъекта.
Пятый аспект настоящего изобретения предусматривает применение комбинации торасемида и баклофена или их солей для приготовления лекарственного средства для усиления роста нейритов кортикальных нейронов, интоксицированных Άβ3-42 пептидом, у нуждающегося в этом субъекта.
Согласно изобретению субъект страдает от травмы спинного мозга.
Шестой аспект настоящего изобретения предусматривает применение предложенной комбинации для приготовления лекарственного средства для лечения болезни Альцгеймера (AD) или родственного болезни Альцгеймера расстройства, выбранного из сенильной деменции AD-типа (SDAT), деменции с тельцами Леви, сосудистой деменции, умеренного когнитивного нарушения (MCI) и возрастного нарушения памяти (ΆΆΜΙ), бокового амиотрофического склероза, или травмы спинного мозга у нуждающихся в этом субъекта.
Седьмой аспект настоящего изобретения предусматривает применение предложенной комбинации для приготовления лекарственного средства для защиты корковых нейронов или эндотелиальных клеток мозга от интоксикации Άβ3-42 пептидом у нуждающегося в этом субъекта.
Восьмой аспект настоящего изобретения предусматривает применение торасемида или его соли для защиты корковых нейронов или мозговых эндотелиальных клеток от интоксикации Άβ3-42 пептидом у нуждающегося в этом субъекта.
Девятый аспект настоящего изобретения предусматривает применение комбинации торасемида и баклофена или их солей для усиления роста нейритов кортикальных нейронов, интоксицированных Άβ3-42 пептидом, у нуждающегося в этом субъекта.
Согласно изобретению субъект страдает от травмы спинного мозга.
Десятый аспект настоящего изобретения предусматривает способ лечения болезни Альцгеймера (ΆΟ) или родственного болезни Альцгеймера расстройства, выбранного из сенильной деменции ΆΟ-типа (SDΆT), деменции с тельцами Леви, сосудистой деменции, умеренного когнитивного нарушения (MCI) и возрастного нарушения памяти (ΆΆΜΙ), бокового амиотрофического склероза, или травмы спинного мозга у нуждающегося в этом субъекта, который включает введение субъекту торасемида или его соли или предложенной комбинации.
Согласно изобретению предложенный способ включает одновременное, раздельное или последовательное введение субъекту торасемида или его соли и по меньшей мере одного дополнительного соединения, выбранного из сульфисоксазола, метимазола, прилокаина, дифиллина, хинакрина, карбеноксолона, аминокапроновой кислоты, баклофена, каберголина, диэтилкарбамазина, цинакальцета, циннаризина, эплеренона, фенолдопама, лефлуномида, левосимендана, сулодексида, тербинафина, зонисамида, этомидата, фенформина, триметазидина, мексилетина, ифенпродила, моксифлоксацина или бромокриптина или их солей.
Согласно изобретению предложенную комбинацию выбирают из следующих комбинаций, включающих баклофен и торасемид, сульфисоксазол и торасемид, эплеренон и торасемид, тербинафин и торасемид, баклофен, триметазидин и торасемид, баклофен, цинакальцет и торасемид, сульфисоксазол, триметазидин, торасемид и зонисамид, сульфисоксазол, мексилетин, торасемид и цинакальцет, или их соли.
Согласно изобретению предложенную комбинацию вводят субъекту неоднократно. Изобретение может применяться на любых субъектах - млекопитающих, предпочтительно на людях, на любой стадии заболевания.
Краткое описание фигур
Для всех фигур * р<0,05 означает значимое отличие от контроля (без интоксикации; ns - незначительный эффект (ANOVA + post-hoc критерий Dunnett).
Фиг. 1. Влияние предварительной обработки выбранными препаратами на вызванные Άβ3-42 повреждения у НВМЕС.
(А) Проверка экспериментальной модели, используемой для скрининга препаратов. Предобработка VEGF при 10 нМ в течение 1 ч существенно защищает капиллярную сеть от повреждения этим амилоидом (+70% капиллярной сети по сравнению с амилоидной интоксикацией). Интоксикация существенно предотвращается торасемидом (В) и бромокриптином (С) при таких низких дозах, как 400 нМ и 3,2 пМ соответственно, тогда как при больших или меньших дозах не отмечается эффекта или же отмечается
- 3 032881 слабый эффект. 0 р<0,05, значимое отличие от амилоидной интоксикации.
Фиг. 2. Влияние предварительной обработки выбранными препаратами на высвобождение LDH при анализе токсичности Άβι.42 человека на первичных корковых клетках крыс.
(А) Проверка экспериментальной модели, используемой для скрининга препаратов. Предобработка эстрадиолом (150 нг/мл) в течение 1 ч существенно защищает нейроны от повреждения этим амилоидом (-70%), что считается положительным контролем на нейропротекцию. Во всех экспериментах Άβ1-42 вызывает значительную интоксикацию по сравнению с обработанными носителем нейронами. Интоксикация существенно предотвращается бромокриптином (40 нМ, -29%) (В), триметазидином (40 нМ, -94%) (С), ифенпродилом (600 нМ, -94%) (D), мексилетином (3,2 нМ, -73%) (Е), моксифлоксацином (20 нМ, -63%) (F). Отметим, что при других концентрациях препаратов не отмечается эффекта или же отмечается слабый эффект при больших или меньших дозах. 0 р<0,05, значимое отличие от интоксикации Άβ1-42.
Фиг. 3. Влияние комбинированной терапии баклофеном и торасемидом на общую длину капиллярной сети в культурах НВМЕС при бета-амилоидной интоксикации.
Агрегированный амилоидный пептид человека Αβ1-42, 2,5 мкМ) вызывает значительную интоксикацию, больше чем на 40% по сравнению с обработанными носителем клетками. Эта интоксикация существенно предотвращается комбинацией баклофена и торасемида (А), тогда как при тех же концентрациях баклофен (В) и торасемид (С) сами по себе не оказывают значительного влияния на интоксикацию.
р<0,05, значимое отличие от интоксикации Άβ1-42.
Фиг. 4. Влияние комбинированной терапии сульфисоксазолом и торасемидом на общую длину капиллярной сети в культурах НВМЕС при бета-амилоидной интоксикации.
Агрегированный амилоидный пептид человека Αβ1-42, 2,5 мкМ) вызывает значительную интоксикацию больше чем на 40% по сравнению с обработанными носителем клетками. Эта интоксикация существенно предотвращается комбинацией сульфисоксазола и торасемида (А), тогда как при тех же концентрациях сульфисоксазол (В) и торасемид (С) сами по себе не оказывают значительного влияния на интоксикацию. 0 р<0,05, значимое отличие от интоксикации Άβ1-42.
Фиг. 5. Влияние комбинированной терапии эплереноном и торасемидом на общую длину капиллярной сети в культурах НВМЕС при бета-амилоидной интоксикации.
Агрегированный амилоидный пептид человека Αβ1-42, 2,5 мкМ) вызывает значительную интоксикацию больше чем на 40% по сравнению с обработанными носителем клетками. Эта интоксикация существенно предотвращается комбинацией эплеренона и торасемида (А), тогда как при тех же концентрациях торасемид (В) и эплеренон (С) сами по себе не оказывают значительного влияния на интоксикацию. 0 р<0,05, значимое отличие от интоксикации Άβ1-42.
Фиг. 6. Влияние комбинированной терапии бромокриптином и сульфисоксазолом на общую длину капиллярной Сети в культурах НВМЕС при бета-амилоидной интоксикации.
Агрегированный амилоидный пептид человека (Άβ1-42, 2,5 мкМ) вызывает значительную интоксикацию больше чем на 40% по сравнению с обработанными носителем клетками. Эта интоксикация существенно предотвращается комбинацией бромокриптина и сульфисоксазола (А), тогда как при тех же концентрациях бромокриптин (В) и сульфисоксазол (С) сами по себе не оказывают значительного влияния
- 4 032881 на интоксикацию. 0 р<0,05, значимое отличие от интоксикации Αβι_42.
Фиг. 7. Влияние комбинированной терапии акампросатом и ифенпродилом на высвобождение LDH при вызванной Αβι_42 человека токсичности на первичных корковых клетках крыс.
Агрегированный амилоидный пептид человека (Αβ1-42, 10 мкМ) вызывает значительную интоксикацию по сравнению с обработанными носителем нейронами. Эта интоксикация существенно предотвращается комбинацией акампросата и ифенпродила (А), тогда как при тех же концентрациях акампросат (В) и ифенпродил (С) сами по себе не оказывают значительного влияния на интоксикацию. 0 р<0,05, значимое отличие от интоксикации Αβ1-42.
Фиг. 8. Влияние комбинированной терапии баклофеном и мексилетином на высвобождение LDH при вызванной Αβ1-42 человека токсичности на первичных корковых клетках крыс.
Агрегированный амилоидный пептид человека (Αβ1-42, 10 мкМ) вызывает значительную интоксикацию по сравнению с обработанными носителем нейронами. Эта интоксикация существенно предотвращается комбинацией баклофена и мексилетина (А), тогда как при тех же концентрациях баклофен (В) и мексилетин (С) сами по себе не оказывают значительного влияния на интоксикацию. 0 р=0,051, отличается от интоксикации Αβ1-42.
Фиг. 9. Влияние комбинированной терапии баклофеном и триметазидином на высвобождение LDH при вызванной Αβ1-42 человека токсичности на первичных корковых клетках крыс. Агрегированный амилоидный пептид человека (Αβ1-42, 10 мкМ) вызывает значительную интоксикацию по сравнению с обработанными носителем нейронами. Эта интоксикация существенно предотвращается комбинацией баклофена и триметазидина (А), тогда как при тех же концентрациях баклофен (В) и триметазидин (С) сами по себе не оказывают значительного влияния на интоксикацию. 0 р<0,05, значимое отличие от интоксикации Α β1-42.
Фиг. 10. Влияние комбинированной терапии цинакальцетом и мексилетином на высвобождение LDH при вызванной Αβ1-42 человека токсичности на первичных корковых клетках крыс.
Агрегированный амилоидный пептид человека (Αβ1-42. 10 мкМ) вызывает значительную интоксикацию по сравнению с обработанными носителем нейронами. Эта интоксикация существенно предотвращается комбинацией цинакальцета и мексилетина (А), тогда как при тех же концентрациях цинакальцет (В) и мексилетин (С) сами по себе не оказывают значительного влияния на интоксикацию. 0 р<0,05, значимое отличие от интоксикации Αβ1-42.
Фиг. 11. Влияние комбинированной терапии циннаризином и триметазидином на высвобождение LDH при вызванной Αβ1-42 человека токсичности на первичных корковых клетках крыс.
Агрегированный амилоидный пептид человека (Αβ1-42, 10 мкМ) вызывает значительную интоксикацию по сравнению с обработанными носителем нейронами. Эта интоксикация существенно предотвращается комбинацией циннаризина и триметазидина (А), тогда как при тех же концентрациях циннаризин (В) и триметазидин (С) сами по себе не оказывают значительного влияния на интоксикацию. 0 р<0,05, значимое отличие от интоксикации Α β1-42.
Фиг. 12. Влияние комбинированной терапии триметазидином и зонисамидом на высвобождение
- 5 032881
LDH при вызванной Λβι-42 человека токсичности на первичных корковых клетках крыс.
Агрегированный амилоидный пептид человека (Λβι_42, 10 мкМ) вызывает значительную интоксикацию по сравнению с обработанными носителем нейронами. Эта интоксикация существенно предотвращается комбинацией триметазидина и зонисамида (А), тогда как при тех же концентрациях триметазидин (В) и зонисамид (С) сами по себе не оказывают значительного влияния на интоксикацию, 0 р<0,05, значимое отличие от интоксикации Λβ1-42.
Фиг. 13. Влияние комбинированной терапии тербинафином и торасемидом на общую длину капиллярной сети в культурах НВМЕС при бета-амилоидной интоксикации.
Агрегированный амилоидный пептид человека (Λβ1-42, 2,5 мкМ) вызывает значительную интоксикацию больше чем на 40% по сравнению с обработанными носителем клетками. Эта интоксикация существенно предотвращается комбинацией тербинафина и торасемида (А), тогда как при тех же концентрациях тербинафин (В) и торасемид (С) сами по себе не оказывают значительного влияния на интоксикацию. 0 р<0,05, значимое отличие от интоксикации Λ β1-42.
Фиг. 14. Влияние комбинированной терапии цинакальцетом и мексилетином на общую длину капиллярной сети в культурах НВМЕС при бета-амилоидной интоксикации.
Агрегированный амилоидный пептид человека (Λβ1-42, 10 мкМ) вызывает значительную интоксикацию по сравнению с обработанными носителем клетками. Эта интоксикация существенно предотвращается комбинацией цинакальцета и мексилетина (А), тогда как при тех же концентрациях цинакальцет (В) и мексилетин (С) сами по себе не оказывают значительного влияния на интоксикацию. 0 р<0,05, значимое отличие от интоксикации Λβ1-42.
Фиг. 15. Влияние комбинированной терапии баклофеном и торасемидом на высвобождение LDH при вызванной Λβ1-42 человека токсичности на первичных корковых клетках крыс.
Агрегированный амилоидный пептид человека (Λβ1-42, 10 мкМ) вызывает значительную интоксикацию по сравнению с обработанными носителем нейронами. Эта интоксикация существенно предотвращается комбинацией баклофена и торасемида (А), тогда как при тех же концентрациях баклофен (В) и торасемид (С) сами по себе не оказывают значительного влияния на интоксикацию. 0 р<0,05, значимое отличие от интоксикации Λβι-42.
Фиг. 16. Влияние комбинированной терапии торасемидом и сульфисоксазолом на высвобождение LDH при вызванной Λβι-42 человека токсичности на первичных корковых клетках крыс. Агрегированный амилоидный пептид человека (Λβι-42, 10 мкМ) вызывает значительную интоксикацию по сравнению с обработанными носителем нейронами. Эта интоксикация существенно предотвращается комбинацией сульфисоксазола и торасемида (А), тогда как при тех же концентрациях торасемид (В) и сульфисоксазол (С) сами по себе не оказывают значительного влияния на интоксикацию. 0 р<0,05, значимое отличие от интоксикации Λβ1-42.
Фиг. 17. Влияние комбинированной терапии моксифлоксацином и триметазидином на высвобождение LDH при вызванной Λβ1-42 человека токсичности на первичных корковых клетках крыс.
Агрегированный амилоидный пептид человека (Λ β1-42, 10 мкМ) вызывает значительную интоксикацию по сравнению с обработанными носителем нейронами. Эта интоксикация существенно предотвращается комбинацией моксифлоксацина и триметазидина (А). В сочетании с моксифлоксацином происходит повышение на 100% эффекта, наблюдаемого с одним лишь триметазидином (С), тогда как при
- 6 032881 той же концентрации сам моксифлоксацин (В) не оказывает значительного влияния на интоксикацию. 0 р<0,05, значимое отличие от интоксикации Λβι-42.
Фиг. 18. Влияние комбинированной терапии моксифлоксацином и баклофеном на высвобождение LDH при вызванной Λβ1-42 человека токсичности на первичных корковых клетках крыс.
Агрегированный амилоидный пептид человека (Λβ1-42, 10 мкМ) вызывает значительную интоксикацию по сравнению с обработанными носителем нейронами. Эта интоксикация существенно предотвращается комбинацией моксифлоксацина и баклофена (А), тогда как при тех же концентрациях моксифлоксацин (В) и баклофен (С) сами по себе не оказывают значительного влияния на интоксикацию. 0 р<0,05, значимое отличие от интоксикации Λβ1-42.
Фиг. 19. Влияние комбинированной терапии моксифлоксацином и цинакальцетом на высвобождение LDH при вызванной Λβ1-42 человека токсичности на первичных корковых клетках крыс.
Агрегированный амилоидный пептид человека (Λβι-42, 10 мкМ) вызывает значительную интоксикацию по сравнению с обработанными носителем нейронами. Эта интоксикация существенно предотвращается комбинацией моксифлоксацина и цинакальцета (А), тогда как при тех же концентрациях моксифлоксацин (В) и цинакальцет (С) сами по себе не оказывают значительного влияния на интоксикацию. 0 р<0,05, значимое отличие от интоксикации Λβ1-42.
Фиг. 20. Влияние комбинированной терапии моксифлоксацином и зонисамидом на высвобождение LDH при вызванной Λβ1-42 человека токсичности на первичных корковых клетках крыс.
Агрегированный амилоидный пептид человека (Λβι-42, 10 мкМ) вызывает значительную интоксикацию по сравнению с обработанными носителем нейронами. Эта интоксикация существенно предотвращается комбинацией моксифлоксацина и зонисамида (А). В сочетании с моксифлоксацином происходит повышение на 81% эффекта, наблюдаемого с одним лишь зонисамидом (С), тогда как при той же концентрации сам моксифлоксацин (В) не оказывает значительного влияния на интоксикацию. 0 р<0,05, значимое отличие от интоксикации Λβ1-42.
Фиг. 21. Влияние комбинированной терапии моксифлоксацином и сульфисоксазолом на высвобождение LDH при вызванной Λβ1-42 человека токсичности на первичных корковых клетках крыс.
Агрегированный амилоидный пептид человека (Λβ1-42, 10 мкМ) вызывает значительную интоксикацию по сравнению с обработанными носителем нейронами. Эта интоксикация существенно предотвращается комбинацией моксифлоксацина и сульфисоксазола (А), тогда как при тех же концентрациях моксифлоксацин (В) и сульфисоксазол (С) сами по себе не оказывают значительного влияния на интоксикацию. 0 р<0,05, значимое отличие от интоксикации Λβ1-42.
Фиг. 22. Влияние комбинированной терапии мексилетином (МЕХ) и ифенпродилом (IFN) на высвобождение LDH при вызванной Λβ1-42 человека токсичности на первичных корковых клетках крыс.
Агрегированный амилоидный пептид человека (Λβι-42, 10 мкМ) вызывает значительную интоксикацию по сравнению с обработанными носителем нейронами. Эта интоксикация существенно предотвращается комбинацией мексилетина (25,6 пМ) и ифенпродила (24 нМ), тогда как при тех же концентрациях мексилетин и ифенпродил сами по себе не оказывают значительного влияния на интоксикацию. 0 p<0,0572, значимое отличие от интоксикации Λβ1.42.
- 7 032881
Фиг. 23. Влияние комбинированной терапии баклофеном (BCL) и торасемидом (TOR) на общую длину сети нейритов у корковых нейронов при бета-амилоидной интоксикации.
Амилоидный пептид человека (Λβι-42, 2,5 мкМ) вызывает значительную интоксикацию, больше чем на 15% по сравнению с обработанными носителем клетками. Эта интоксикация существенно предотвращается комбинацией баклофена и торасемида; более того, эта комбинация сцособствует усилению роста нейритов, 0 р<0,05, значимое отличие от интоксикации Λβ1-42.
Фиг. 24. Влияние комбинированной терапии цинакальцетом и мексилетином на токсичность глутамата на клетках корковых нейронов.
Глутаматная интоксикация существенно предотвращается комбинацией цинакальцета (64 пМ) и мексилетина (25,6 пМ), тогда как при тех же концентрациях цинакальцет и мексилетин сами по себе не оказывают значительного влияния на интоксикацию. 0 р<0,001, значимое отличие от глутаматной интоксикации (ANOVA + post-hoc критерий Dunnett).
Фиг. 25. Влияние комбинированной терапии сульфисоксазолом и торасемидом на токсичность глутамата на клетках корковых нейронов.
Глутаматная интоксикация существенно предотвращается комбинацией сульфисоксазола (6,8 нМ) и торасемида (400 нМ), тогда как при тех же концентрациях сульфисоксазол и торасемид сами по себе не оказывают значительного влияния на интоксикацию. 0 р<0,001, значимое отличие от глутаматной интоксикации (ANOVA + post-hoc критерий Dunnett).
Фиг. 26. Влияние предварительной обработки торасемидом на высвобождение LDH при анализе токсичности Λβ1-42 человека на первичных корковых клетках крыс.
Λβ1 -42 вызывает значительную интоксикацию по сравнению с обработанными носителем нейронами. Интоксикация существенно предотвращается торасемидом (200 нМ, -90%). ◊ р<0,0001, значимое отличие от интоксикации Λβ1-42.
Фиг. 27. Сравнение предварительной обработки акампросатом и его производным гомотаурином на высвобождение LDH при анализе токсичности Λβ1-42 человека на первичных корковых клетках крыс.
Λβ1 -42 вызывает значительную интоксикацию по сравнению с обработанными носителем нейронами. Интоксикация в равной степени существенно предотвращается гомотаурином и акампросатом (99%, 8 нМ). ◊ р<0,0001, значимое отличие от интоксикации Λβ1-42.
Раскрытие сущности изобретения
Настоящим изобретением предусмотрены новые композиции для лечения неврологических заболеваний. В изобретении раскрыто новое применение препаратов или новых комбинаций препаратов, которые способствуют эффективной коррекции таких заболеваний и могут применяться для лечения пациентов.
Изобретение подходит для лечения любых неврологических заболеваний, будь то центральных или периферических, особенно таких заболеваний, в которые вовлечены амилоид или глутаматная эксцитотоксичность. Конкретные примеры таких заболеваний включают нейродегенеративные заболевания, такие как болезнь Альцгеймера и родственные заболевания, рассеянный склероз (MS), боковой амиотрофический склероз (ALS), болезнь Паркинсона (PD), болезнь Хантингтона (HD), или другие неврологические заболевания типа невропатии (к примеру, алкогольной невропатии или невропатических болей), алкоголизма или синдрома отмены алкоголя и травмы спинного мозга. К невропатиям относятся такие заболевания, при которых повреждаются нервы периферической нервной системы, что включает повреждения периферической нервной системы, вызванные генетическими факторами, воспалительными заболеваниями или химическими веществами, включая лекарственные препараты (винкрйстин, оксалиплатин, этиловый спирт). Лечение невропатий также включает лечение невропатических болей.
Изобретение особенно подходит для лечений AD и родственных заболеваний. В контексте настоящего изобретения термин родственные AD заболевания охватывает старческое слабоумие типа AD (SDAT), деменцию с тельцами Леви, сосудистую деменцию, умеренные когнитивные нарушения (MCI) и связанное с возрастом ухудшение памяти (AAMI).
В настоящем изобретении термин лечение включает терапию, предупреждение, профилактику, замедление или уменьшение симптомов или причин вышеуказанных заболеваний. В частности, термин
- 8 032881 лечение включает контролирование течения заболевания и связанных с ним симптомов. Термин лечение в особенности включает: i) защиту от токсичности, вызванной бета-амилоидом, либо уменьшение или замедление этой токсичности, и/или ii) защиту от глутаматной эксцитотоксичности либо уменьшение или замедление этой токсичности у субъектов, подвергающихся лечению. Термин лечение также обозначает улучшение когнитивных симптомов или защиту нервных клеток.
В контексте настоящего изобретения указание определенного соединения подразумевает не только указание конкретно названной молекулы, но также и любых её фармацевтически приемлемых солей, гидратов, производных (напр., сложных эфиров, простых эфиров), изомеров, рацематов, конъюгатов или: пролекарственных форм любой степени чистоты.
Термин пролекарственная форма или пролекарство в настоящем изобретении относится к любым функциональным производным (или предшественникам) соединений настоящего изобретения, которые при введении в биологическую систему образуют указанное соединение в результате, напр., спонтанной химической реакции, катализируемой ферментом химической реакции й/йли метаболической химической реакции. Пролекарства обычно являются неактивными или менее активными, чем образующийся препарат, и могут применяться, к примеру, для улучшения физико-химических свойств лекарственного препарата, направления препарата в определенную ткань, улучшения фармакокинетических и фармакодинамических свойств препарата и/или уменьшения нежелательных побочных эффектов. Некоторые из общих функциональных групп, подходящих для разработки пролекарств, включают, без ограничения, карбоксильные, гидроксильные, аминогруппы, фосфатные/фосфонатные и карбонильные группы. Пролекарства, которые обычно получают при модификации этих групп, включают, без ограничения, эфиры, карбонаты, карбаматы, амиды и фосфаты. Конкретные технические руководства для выбора подходящих пролекарств общеизвестны (24-28). Кроме того, получение пролекарств может осуществляться стандартными методами, известными специалистам в данной области. Методы, которые можно использовать для синтеза других пролекарств, описаны в многочисленных обзорах по предмету (25, 29-35). Например, в базе данных ChemID plus Advance (http://chem.sis.nlm.nih.gov/chemidplus/) приведен арбаклофен плакарбил, который является хорошо известной пролекарственной формой баклофена (36, 43).
Термин производное какого-либо соединения охватывает любые молекулы, которые функционально и/или структурно родственны данному соединению, как-то кислотные, амидные, сложноэфирные, эфирные, ацетилированные, гидроксилированные или алкилированные (C1-C6) варианты такого соединения. Термин производное также включает структурно родственные соединения, потерявшие один или несколько заместителей, перечисленных выше. Например, гомотаурин является дезацитилированным производным акампросата. Предпочтительными производными соединения являются молекулы, имеющие значительную степень сходства с данным соединением при определении известными методами. Сходственные соединения вместе с их индексом сходства с исходной молекулой приведены в различных базах данных, таких как PubChem (http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/search/) или DrugBank (http://www.drugbank.ca/). В более предпочтительном воплощении производные должны иметь индекс сходства Танимото с исходным препаратом больше чем 0,4, предпочтительно больше чем 0,5, более предпочтительно больше чем 0,6, еще более предпочтительно больше чем 0,7. Индекс сходства Танимото широко применяется для измерения степени структурного сходства между двумя молекулами. Индекс сходства Танимото можно рассчитать с помощью такого программного обеспечения, как Small Molecule Subgraph Detector (37-38), доступного через интернет (http://www.ebi.ac.uk/thomton-srv/software/SMSD/). Предпочтительные производные должны быть и структурно, и функционально родственны исходному соединению, т. е. они также должны сохранять по меньшей мере часть активности исходного препарата, более предпочтительно должны обладать защитным действием против токсичности A3 или глутамата.
Термин производные также включает метаболиты препарата, например молекулы, которые возникают при (биохимической) модификации или процессинге данного препарата после введения в организм, обычно через специализированные ферментные системы, и проявляют или сохраняют биологическую активность препарата. Метаболиты оказались ответственными за большую часть терапевтического действия исходного препарата. В определенном воплощении метаболит означает модифицированный или подвергшийся процессингу препарат, сохраняющий по меньшей мере часть активности исходного препарата, предпочтительно обладающий защитным действием против токсичности A3 или глутамата. Примеры метаболитов включают гидроксилированные формы торасемида, возникающие при метаболизме препарата в печени (база данных DrugBank (39).
Термин соль относится к фармацевтически приемлемым и относительно нетоксичным солям с неорганическими или органическими кислотами соединений настоящего изобретения. Образование фармацевтической соли состоит в образовании пары кислой, основной или цвиттерионной молекулы препарата с противоионом с образованием солевой разновидности препарата. При реакции нейтрализации может использоваться целый ряд химических соединений. Таким образом, фармацевтически приемлемые соли по изобретению включают соли, полученные при реакции основного соединения, функционирующего как основание, с неорганической или органической кислотой с образованием соли, к примеру, соли уксусной кислоты, азотной кислоты, винной кислоты, соляной кислоты, серной кислоты, фосфорной ки
- 9 032881 слоты, метансульфоновой кислоты, камфоросульфоновой кислоты, щавелевой кислоты, малеиновой кислоты, янтарной кислоты или лимонной кислоты. Фармацевтически приемлемые соли по изобретению также включают соли, в которых основное соединение действует как кислота и реагирует с соответствующим основанием с образованием, например, соли натрия, калия, кальция, магния, аммония или холина. Хотя большинство солей данного активного начала биоэквивалентны, однако некоторые могут обладать, в частности, свойствами повышенной растворимости или биодоступности. Выбор соли теперь является обычной стандартной операцией в процессе разработки лекарственных средств, как излагают Н. Stahl and C.G. Wermuth в своем руководстве (40).
Термин комбинация или комбинированное лечение/терапия обозначает такое лечение, при котором по меньшей мере два или несколько препаратов вводятся совместно субъекту, чтобы вызвать биологический эффект. При комбинированной терапии по настоящему изобретению по меньшей мере два препарата могут вводиться совместно или раздельно, одновременно или последовательно. Кроме того, эти по меньшей мере два препарата можно вводить различными способами и по разным схемам. При этом, хотя они и составляются вместе, препараты из комбинации также могут быть составлены по отдельности.
Как изложено в примерах, торасемид, триметазидин, мексилетин, ифенпродил, бромокриптин и моксифлоксацин оказывают неожиданно сильное действие на биологические процессы, связанные с неврологическими заболеваниями. Более того, эти соединения in vivo также проявляют очень эффективную способность корректировать симптомы таких заболеваний. Таким образом, эти молекулы, сами по себе или в виде комбинированной терапии, представляют новые подходы к лечению неврологических заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера, рассеянный склероз, боковой амиотро-фический склероз, болезнь Паркинсона, болезнь Хантингтона, невропатии (к примеру, невропатические боли или алкогольная невропатия), алкоголизм или синдром отмены алкоголя и травмы спинного мозга. Особенно выгодны комбинации этих препаратов с другими выбранными соединениями (см. табл. 2), так как они вне ожидания проявляют синергическое действие при таких дозах, при которых сами препараты практически не оказывают действия. К тому же, вследствие их эффективности, раскрытые здесь комбинации препаратов могут применяться в малых дозах, что также является очень существенным преимуществом.
В связи с этим, в определенном воплощении, изобретение касается композиции для применения при лечении AD и родственных AD заболеваний, MS, PD, ALS, HD, невропатий (к примеру, невропатических болей или алкогольной невропатии), алкоголизма или синдрома отмены алкоголя и травмы спинного мозга, которые содержат по меньшей мере торасемид, триметазидин, мексилетин, ифенпродил, бромокриптин или моксифлоксацин либо их соли, пролекарственные формы, производные или формы с пролонгированным высвобождением.
Ниже в табл. 1 приведены индивидуальные номера CAS для каждого из этих соединений. В табл. 1 также приведены, неограничивающим образом, обычные соли, рацематы, пролекарства, метаболиты или производные этих соединений, используемые в композициях по изобретению.
- 10 032881
Таблица 1
Препарат Номер CAS Класс или индекс сходства Танимото
Мексилетин и родственные ему соединения
Мексилетин 31828-71-4; 5370-01-4
6-Гидроксиметилмексилетин 53566-98-6 метаболит
4-Гидроксимексилетин 53566-99-7 метаболит
З-Гидроксимексилетин (МНМ) 129417-37-4 метаболит
N-Γ идроксимексилетинглюкуронид 151636-18-9 метаболит
Сульфисоксазол и родственные ему соединения
Сульфисоксазол 127-69-5; 4299-60-9
Ь1(4)-Ацетилсульфисоксазол 4206-74-0 метаболит
Ацетилсульфисоксазол 80-74-0 пролекарство
Сульфаметоксазол 723-46-6 0,52
Цинакальцет и родственные ему соединения
Цинакальцет 226256-56-0; 364782-34-3
Гидрокоричная кислота 501-52-0 метаболит
Торасемид и родственные ему соединения
Торасемид 56211-40-6; 72810-59-4
Г идрокситорасемид 99300-68-2; 99300-67-1 метаболит
Карбокситорасемид метаболит
Толбутамид 64-77-7 0,55
Бромокриптин и родственные ему соединения
Бромокриптин 25614-03-3; 22260-51-1
Ифенпродил и родственные ему соединения
Ифенпродил 23210-56-2; 23210-58-4
Вышеприведенные молекулы могут применяться по отдельности или же, предпочтительно, в виде комбинированной терапии для Оказания наиболее действенной клинической пользы. В связи с этим, в определенном воплощении, изобретение касается композиции для применения при лечении неврологических заболеваний, предпочтительно AD и родственных AD заболеваний, MS, PD, ALS, HD, невропатий (к примеру, невропатических болей или алкогольной невропатии), алкоголизма или синдрома отмены алкоголя либо травмы спинного мозга, которые содержат любое из вышеприведенных соединений в комбинации с по меньшей Мере еще одним соединением, выбранным из сульфисоксазола, метимазола, прилокаина, дифиллина, хинакрина, карбеноксолона, акампросата, аминокапроновой кислоты, баклофена, каберголина, диэтилкарбамазина, цинакальцета, циннаризина, эплеренона, фенолдопама, лефлуномида, левосимендана, сулодексида, тербинафина, зонисамида, этомидата, фенформина, триметазидина, мексилетина, ифенпродила, мрксифлоксацина, бромокриптина и торасемида либо их солей, пролекарственных форм, производных или форм с пролонгированным высвобождением.
Ниже в табл. 2 представлены индивидуальные номера CAS для каждого из этих дополнительных соединений, не приведенных в табл. 1.
Таблица 2
Наименование препарата Номер CAS
Акампросат 77337-76-9; 77337-73-6; 107-35-7; 3687-18- 1
Аминокапроновая кислота 60-32-2
Баклофен П34-47-0; 66514-99-6; 69308-37-8; 7020622-3; 63701-56-4; 63701-55-3; 847353-30-4
Каберголин 81409-90-7
Карбеноксолон 5697-56-3 или 7421-40-1
Циннаризин 298-57-7
Диэтилкарбамазин 90-89-1 или 1642-54-2
Дифиллин 479-18-5
Эплеренон 107724-20-9
Этомидат 33125-97-2
Фенолдопам 67227-57-0 или 67227-56-9
Лефлуномид 75706-12-6 ,
Левосимендан 141505-33-1
Метимазол : 60-56-0
Моксифлоксацин 151096-09-2 или 186826-86-8 или 19292763-2 или 354812-41-2
Фенформин 114-86-3 или 834-28-6
Прилокаин 721-50-6 или 14289-31-7 или 14289-32-8
Хинакрин 83-89-6 или 69-05-6 или 6151-30-0
Сулодексид 57821-29-1
Тербинафин 91161-71-6
Триметазидин 5011-34-7 или 13171-25-0
Зонисамид 68291-97-4
Конкретные примеры пролекарственных форм баклофена приведены в Hanafi et al., 2011 (41), в частности сложные эфиры баклофена и карбаматы сложных эфиров баклофена, которые представляют особый интерес для воздействия на ЦНС. Поэтому такие пролекарственные формы особенно подходят для композиции настоящего изобретения. Баклофен плакарбил, как уже было сказано, также является
- 11 032881 известным пролекарством и может применяться вместо баклофена в композициях изобретения. Другие пролекарственные формы баклофена приведены в следующих патентных заявках: WO 2010102071, US 2009197958, WO 2009096985, WO 2009061934, WO 2008086492, US 2009216037, WO 2005066122, US 2011021571, WO 2003077902, WO 2010120370.
Полезные пролекарственные формы акампросата, как-то сложные неопентил-сульфонйловые эфиры пантоевой кислоты, другие неопентилсульфониловые эфиры или блокированные неопентилсульфониловые эфиры карбоксилатов акампросата, приведены в WO 2009033069, WO 2009033061, WO 2009033054 WO 2009052191, WO 2009033079, US 2009/0099253, US 2009/0069419, US 2009/0082464, US 2009/0082440 и US 2009/0076147.
В предпочтительном воплощении изобретение касается композиции, включающих по меньшей мере одно первое соединение, выбранное из торасемида, триметазидина, мексилетина, ифенпродила, бромокриптина и моксифлоксацина, их солей, пролекарственных форм, производных любой степени чистоты или форм с пролонгированным высвобождением, в комбинации с по меньшей мере с одним вторым соединением, отличным от данного первого соединения, выбранным из сульфисоксазола, метимазола, прилокаина, дифиллина, хинакрина, карбеноксолона, акампросата, аминокапроновой кислоты, баклофена, каберголина, диэтилкарбамазина, цинакальцета, циннаризина, эплеренона, фенолдопама, лефлуномида, левосимендана, сулодексида, тербинафина, зонисамида, этомидата, фенформина, триметазидина, мексилетина, бромокриптина, ифенпродила, торасемида и моксифлоксацина, их солей, пролекарственных форм, производных любой степени чистоты или форм с пролонгированным высвобождением, для применения при лечении неврологических заболеваний у нуждающихся в этом субъектов.
В определенном воплощении изобретение касается применения этих препаратов или композиции для лечения AD или родственных заболеваний у нуждающихся в этом субъектов.
В определенном воплощении изобретение касается применения этих препаратов или композиции для лечения MS, PD, ALS, HD? невропатий (к примеру, невропатических болей или алкогольной невропатии), алкоголизма или синдрома отмены алкоголя либо травмы спинного мозга у нуждающихся в этом субъектов.
Как показано в примерах, комбинированная терапия с использованием одного или нескольких из вышеперечисленных препаратов приводит к эффективной коррекции болезни Альцгеймера и других неврологических заболеваний. Как показано в экспериментальном разделе, композиции, содержащие, по крайней мере, торасемид, триметазидин, мексилетин, ифенпродил, бромокриптин и моксифлоксацин, дают существенный терапевтический и биологический эффект, предотвращая токсические эффекты белка или пептида β-амилоида (A3) на человеческие клетки. Более того, in vivo эти композиции приводят к улучшению когнитивных симптомов, а также к ингибированию молекулярных путей, которые запускаются при интоксикации A3 или при глутаматной токсичности. Поэтому они представляют новые и мощные способы лечения таких заболеваний. В экспериментальном разделе дополнительно показывает, что вышеуказанные композиции также эффективно i) синергически защищают нервные клетки in vitro от токсичности глутамата и ii) приносят клиническую пользу in vivo на моделях заболеваний, связанных с эксцитотоксичностью глутамата.
Более предпочтительно композиции препаратов по изобретению могут содержать 1, 2, 3, 4 или 5 различных препаратов, еще более предпочтительно 2, 3 или 4 различных препарата для комбинированного лечения болезни Альцгеймера (AD), родственных AD заболеваний, MS, PD, ALS, HD, невропатий (к примеру, невропатических болей или алкогольной невропатии), алкоголизма или синдрома отмены алкоголя либо травмы спинного мозга у нуждающихся в этом субъектов. В предпочтительном воплощении препараты по изобретению применяются в комбинациях для комбинированного, раздельного или последовательного введения, чтобы обеспечить наиболее эффективное действие.
В определенном воплощении композиции содержат (i) торасемид и (ii) соединение, выбранное из бромокриптина, баклофена, сульфисоксазола, эплеренона и тербинафина либо их солей, пролекарственных форм, производных или форм с пролонгированным высвобождением данных соединений (i) и (ii).
В другом определенном воплощении композиции содержат (i) триметазидин и (ii) соединение, выбранное из баклофена, циннаризина, зонисамида и моксифлоксацина либо их солей, пролекарственных форм, производных или форм с пролонгированным высвобождением данных соединений (i) и (ii).
В соответствии с другим определенным воплощением, композиции содержат (i) моксифлоксацин и (ii) соединение, выбранное из баклофена, цинакальцета, зонисамида, сульфисоксазола и триметазидина либо их солей, пролекарственных форм, производных или форм с пролонгированным высвобождением данных соединений (i) и (ii).
В следующем определенном воплощении композиции содержат (i) мексилетин и (ii) соединение, выбранное из баклофена, цинакальцета, ифенпродила и левосимендана либо их солей, пролекарственных форм, производных или форм с пролонгированным высвобождением данных соединений (i) и (ii).
Еще одно определенное воплощение касается композиции, содержащих (i) ифенпродил и (ii) соединение, выбранное из акампросата, левосимендана и мексилетина либо их солей, пролекарственных форм, производных или форм с пролонгированным высвобождением данных соединений (i) и (ii).
- 12 032881
Предпочтительные композиции по изобретению для применения при лечении неврологических заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера (AD), родственные AD заболевания, MS, PD, ALS, HD, невропатии (к примеру, невропатические боли или алкогольная невропатия), алкоголизм или синдром отмены алкоголя либо травмы спинного мозга, содержат одну из следующих комбинаций препаратов для комбинированного, раздельного или последовательного введения:
баклофен и торасемид, эплеренон и торасемид, акампросат и ифенпродил, баклофен и мексилетин, баклофен и триметазидин, бромокриптин и сульфисоксазол, цинакальцет и мексилетин, циннаризин и триметазидин, сульфисоксазол и торасемид, триметазидин и зонисамид, левосимендан и мексилетин, левосимендан и ифенпродил, левосимендан и триметазидин, левосимендан и моксифлоксацин, тербинафин и торасемид, моксифлоксацин и триметазидин, моксифлоксацин и баклофен, моксифлоксацин и цинакальцет, моксифлоксацин и зонисамид, моксифлоксацин и сульфисоксазол или мексилетин и ифенпродил.
Примеры предпочтительных композиций по изобретению, содержащих комбинацию из по меньшей мере трех соединений для комбинированного, раздельного или последовательного введения, представлены ниже:
баклофен и триметазидин и торасемид, баклофен и цинакальцет и торасемид, баклофен и акампросат и торасемид, левосимендан и баклофен и триметазидин, левосимендан и аминокапроевая кислота и триметазидин, левосимендан и тербинафин и триметазидин,или левосимендан и сульфисоксазол и триметазидин.
Примеры предпочтительных композиции по изобретению, содержащих комбинацию из по меньшей мере четырех соединений для комбинированного, раздельного или последовательного введения, представлены ниже:
сульфисоксазол и триметазидин и торасемид и зонисамид, сульфисоксазол и мексилетин и торасемид и цинакальцет, баклофен и акампросат и торасемид и диэтилкарбамазин или баклофен и акампросат и торасемид и ифенпродил.
Как показано в экспериментальной части, вышеприведенная терапия по изобретению вызывает сильный нейропротекторный эффект против токсичности Αβ и дает положительные результаты в поведенческих тестах и при биохимических анализах in vivo. Результаты показывают, что композиции по изобретению i) эффективно корректируют молекулярные пути, которые запускаются in vivo агрегатами Αβ, и ii) приводят к исправлению нейрофизиологических нарушений, наблюдающихся у больных животных, по выживаемости нейронов или целостности синапсов.
Более того, представленные результаты также показывают, что вышеуказанная комбинированная терапия оказывает важное синергическое нейропротекторное действие против глутаматной эксцитотоксичности (фиг. 24 и 25, табл. 8) - пути, который участвует в различных неврологических заболеваниях, таких как AD, невропатии (к примеру, невропатические боли или алкогольная невропатия), алкоголизм или синдром отмены алкоголя либо травмы спинного мозга. Такая терапия дает положительные результаты на моделях этих заболеваний in vivo или in vitro.
Кроме того, результаты in vivo показывают, что композиции по изобретению эффективно восстанавливают целостность гематоэнцефалического барьера, которая нарушается при некоторых неврологических заболеваниях.
Итак, предметом настоящего изобретения также являются приведенные выше композиции для лечения таких неврологических заболеваний, как болезнь Альцгеймера (AD), родственные AD заболевания, MS, PD, ALS, HD, невропатии (к примеру, алкогольная невропатия или невропатические боли), ал
- 13 032881 коголизм или синдром отмены алкоголя либо травмы спинного мозга.
Другим предметом настоящего изобретения является применение приведенных выше композиции для изготовления лекарств для лечения неврологических заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера (AD), родственные AD заболевания, MS, PD, ALS, HD, невропатии (к примеру, невропатические боли или алкогольная невропатия), алкоголизм или синдром отмены алкоголя либо травмы спинного мозга.
Изобретением также предусмотрен способ лечения неврологических заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера (AD), родственные AD заболевания, MS, PD, ALS, HD, невропатии (к примеру, невропатические боли или алкогольная невропатия), алкоголизм или синдром отмены алкоголя либо травмы спинного мозга, который включает введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества композиции, как изложено выше.
Как указано ранее, при комбинированной терапии или в композициях по настоящему изобретению соединения могут быть составлены вместе или по отдельности и могут вводиться вместе, раздельно или последовательно и/или неоднократно.
В этой связи следующим предметом изобретения является способ лечения AD и родственных AD заболеваний, MS, PD, ALS, HD, невропатий (к примеру, невропатических болей или алкогольной невропатии), алкоголизма или синдрома отмены алкоголя либо травмы спинного мозга, который включает одновременное, раздельное или последовательное введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества композиции, как изложено выше.
В предпочтительном воплощении изобретение касается способа лечения болезни Альцгеймера (AD) и родственных AD заболеваний, MS, PD, ALS, HD, невропатий (к примеру, невропатических болей или алкогольной невропатии), алкоголизма или синдрома отмены алкоголя либо травмы спинного мозга у нуждающегося в этом субъекта, который включает введение субъекту эффективного количества торасемида, тримета-зидина, мексилетина, ифенпродила, бромокриптина или моксифлоксацина либо их солей, пролекарственных форм, производных или форм с пролонгированным высвобождением, предпочтительно в виде комбинации, как изложено выше.
В другом воплощении изобретение касается способа лечения болезни Альцгеймера (AD) и родственных AD заболеваний, MS, PD, ALS, HD, невропатий (к примеру, невропатических болей или алкогольной невропатии), алкоголизма или синдрома отмены алкоголя либо травмы спинного мозга у нуждающегося в этом субъекта, который включает одновременное, раздельное или последовательное введение субъекту по меньшей мере одного первого соединения, выбранного из группы, состоящей из торасемида, триметазидина, мексилетина, ифенпродила, бромокриптина и моксифлоксацина, их солей, пролекарственных форм, производных или лекарственных форм, в комбинации с по меньшей мере одним вторым соединением, отличным от данного первого соединения, выбранным из сульфисоксазола, метимазола, прилокаина, дифиллина, хинакрина, карбеноксолона, акампросата, аминокапроновой кислоты, баклофена, каберголина, диэтилкарбамазина, цинакальцета, циннаризина, эплеренона, фенолдопама, лефлуномида, левосимендана, сулодексида, тербинафина, зонисамида, этомидата, фенформина, триметазидина, мексилетина, бромокриптина, ифенпродила, торасемида и моксифлоксацина, их солей, пролекарственных форм, производных или лекарственных форм.
В следующем воплощении изобретение касается способа лечения болезни Альцгеймера (AD) и родственных AD заболеваний, MS, PD, ALS, HD, невропатий (к примеру, невропатических болей или алкогольной невропатии), алкоголизма или синдрома отмены алкоголя либо травмы спинного мозга, который включает введение нуждающегося в этом субъекту по меньшей мере одного первого соединения, выбранного из группы, состоящей из торасемида, триметазидина, мексилетина, ифенпродила, бромокриптина и моксифлоксацина, их солей, пролекарственных форм, производных или лекарственных форм, в комбинации с по меньшей мере одним вторым соединением, отличным от данного первого соединения, выбранным из сульфисоксазола, метимазола, прилокаина, дифиллина, хинакрина, карбеноксолона, акампросата, аминокапроновой кислоты, баклофена, каберголина, диэтилкарбамазина, цинакальцета, циннаризина, эплеренона, фенолдопама, лефлуномида, левосимендана, сулодексида,; тербинафина, зонисамида, этомидата, фенформина, триметазидина, мексилетина, бромокриптина, ифенпродила, торасемида и моксифлоксацина, их солей, пролекарственных форм, производных или лекарственных форм.
Несмотря на высокую эффективность in vitro и in vivo, в зависимости от субъекта или конкретных условий, способы и композиции изобретения также могут применяться в сочетании с дополнительными препаратами или способами лечения, приносящими пользу при лечении неврологических заболеваний у субъектов. В связи с этим, в определенном воплощении, препараты или композиции по настоящему изобретению можно дополнительно комбинировать с экстрактами Ginkgo biloba. Подходящими экстрактами являются, без ограничения, экстракты Ginkgo biloba, улучшенные экстракты Ginkgo biloba (к примеру, обогащенные активными ингредиентами или с меньшими загрязнениями) или любые препараты, содержащие экстракты Ginkgo biloba.
Экстракты Ginkgo biloba могут применяться в композициях, содержащих, по меньшей мере, торасемид, триметазидин, мексилетин, ифенпродил, бромокриптин или моксифлоксацин.
В предпочтительных воплощениях экстракты Ginkgo biloba применяются в сочетании с любыми из следующих комбинаций препаратов:
- 14 032881 акампросат и ифенпродил, баклофен и мексилетин, баклофен и торасемид, баклофен и триметазидин, бромокриптин и сульфисоксазол, цинакальцет и мексилетин, циннаризин и триметазидин, эплеренон и торасемид, сульфисоксазол и торасемид, триметазидин и зонисамид, левосимендан и мексилетин, левосимендан и ифенпродил, левосимендан и триметазидин, левосимендан и моксифлоксацин, тербинафин и торасемид., моксифлоксацин и баклофен, моксифлоксацин и цинакальцет, моксифлоксацин и зонисамид, моксифлоксацин и сульфисоксазол, мексилетин и ифенпродил, баклофен и триметазидин и торасемид, баклофен и цинакальцет и торасемид, баклофен и акампросат и торасемид, сульфисоксазол и триметазидин и торасемид и зонисамид, сульфисоксазол и мексилетин и торасемид и цинакальцет, баклофен и акампросат и торасемид и диэтилкарбамазин, баклофен и акампросат и торасемид и ифенпродил, левосимендан и баклофен и триметазидин, левосимендан и аминокапроевая кислота и триметазидин, левосимендан и тербинафин и триметазидин или левосимендан и сульфисоксазол и триметазидин. Другие способы лечения, применяемые в сочетании с препаратами или комбинациями препаратов по настоящему изобретению, могут включать один или несколько препаратов, облегчающих симптомы болезни Альцгеймера (AD) и родственных AD заболеваний, MS, PD, ALS, HD, невропатий (к примеру, невропатических болей или алкогольной невропатии), алкоголизма или синдрома отмены алкоголя либо травмы спинного мозга, или же препаратов, которые могут применяться для паллиативного лечения этих заболеваний.
Например, комбинации по изобретению могут применяться в сочетании с донепезилом (CAS: 120014-06-4), габапентином (CAS: 478296-72-9; 60142-96-3), ривастигмином (123441-03-2) или мемантином (CAS: 19982-08-2).
Следующим предметом настоящего изобретения является применение соединений или комбинаций соединений, как изложено выше, для изготовления лекарств для лечения вышеперечисленных заболеваний путем комбинированного, раздельного или последовательного введения нуждающимся в этом субъектам.
Следующим предметом настоящего изобретения является способ приготовления фармацевтических композиций, который включает смешивание вышеприведенных соединений в соответствующем наполнителе или носителе.
Продолжительность лечения зависит от стадии подлежащего лечению заболевания, используемой комбинации, возраста и состояния пациента и того, как пациент реагирует на лечение. Дозировка, частота и способ введения каждого компонента комбинации может контролироваться независимо. Например, один препарат может вводиться перорально, а второй внутримышечно. Комбинированная терапия может проводиться с перерывами циклами, которые включают периоды отдыха с тем, чтобы организм пациента имел возможность оправиться от любых непредвиденных побочных эффектов. Препараты также могут быть составлены вместе так, что при одном введении вводятся все препараты.
Введение каждого препарата из комбинации может осуществляться любым подходящим способом, дающим такую концентрацию препарата, которая в сочетании с другим компонентом способна облегчить состояние пациента или эффективно лечить заболевание.
Хотя активные ингредиенты комбинации можно вводить в виде химически чистых веществ, но предпочтительно их представляют в виде фармацевтических композиций, которые также называют лекарственными формами. Возможные композиции включают такие композиции, которые подходят для перорального, ректального; топического (в том числе трансдермального, буккального и подъязычного) или парентерального (в том числе подкожного, внутримышечного, внутривенного и внутрикожного)
- 15 032881 введения.
Чаще всего эти лекарственные формы назначаются пациентам в упаковках для пациента, содержащих ряд дозовых единиц или других средств для введения стандартных дозовых единиц для использования в отдельный период лечения в одной упаковке, обычно в блистерной упаковке. Упаковки для пациента обладают преимуществом перед традиционными рецептами, когда фармацевт выделяет пациенту порцию лекарственного препарата из общего запаса, в том, что пациент всегда имеет доступ к вкладышу, вложенному в упаковку, который обычно отсутствует при традиционных рецептах. Наличие вкладыша в упаковке, как оказалось, улучшает соблюдение пациентами инструкций врача. Так что изобретение также охватывает лекарственные формы, как описано здесь ранее, в комбинации с упаковочным материалом, подходящим для данных форм. При этом предназначение лекарственной формы при комбинированном лечении можно узнать из инструкций, приспособлений, условий, адаптации и/или других средств, способствующих правильному применению лекарственной формы при лечении. Такие меры делают упаковки для пациента особенно подходящими и приспособленными для применения при лечении с помощью комбинаций настоящего изобретения.
Препарат может содержаться в любом подходящем количестве, в любом подходящем веществе носителя (напр., наполнителя, носителя, подложки), которое может составлять 1-99% от общей массы композиции. Композиция может быть представлена в дозовой форме, подходящей для перорального, парентерального (напр., внутривенного, внутримышечного), ректального, кожного, интраназального, вагинального, ингаляционного, кожного (пластырь) или глазного способа введения. Таким образом, композиция может иметь вид, напр., таблеток, капсул, пилюль, порошков, гранул, суспензий, эмульсий, растворов, гелей, в том числе гидрогелей, паст, мазей, кремов, пластырей, насадок, осмотических устройств для доставки, свечей, клизм, инъекций, имплантатов, спреев или аэрозолей.
Фармацевтические композиции могут быть составлены в соответствии с обычной фармацевтической практикой (напр., см. Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20th ed.), ed. A.R. Gennaro, Lippincott, Williams & Wilkins, 2000; и Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick and J.C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, New York).
Фармацевтические композиции по изобретению могут быть составлены так, чтобы активный препарат высвобождался практически немедленно после введения или в любое заданное время или период времени после введения.
Лекарственные формы с контролируемым высвобождением включают (i) формы, которые создают практически постоянную концентрацию препарата в организме в течение длительного периода времени; (ii) формы, которые по истечении заданного времени задержки создают практически постоянную концентрацию препарата в организме в течение длительного периода времени; (iii) формы, которые поддерживают действие препарата в течение заданного периода времени путем поддержания относительно постоянного эффективного уровня препарата в организме и тем самым сводят к минимуму нежелательные побочные эффекты, связанные с колебаниями уровня активного вещества препарата в плазме; (iv) формы, которые локализуют действие препарата, например, путем пространственного размещения композиции с контролируемым высвобождением возле или в больной ткани или органе; и (v) формы, которые направляют действие препарата при помощи носителей или химических производных так, чтобы препарат попадал в клетки мишени определенного типа.
Введение препаратов в виде форм с контролируемым высвобождением особенно предпочтительно в тех случаях, когда препарат, сам по себе или в комбинации, имеет (i) узкий терапевтический индекс (т.е. небольшая разница между концентрацией в плазме, вызывающей вредные побочные эффекты или токсические реакции, и концентрацией в плазме, дающей терапевтический эффект; в общем, терапевтический индекс, TI, определяется как отношение средней летальной дозы (LD50) к средней эффективной дозе (ED50)); (ii) узкое окошко всасывания в желудочно-кишечном тракте; или (iii) очень короткий биологический период полужизни, так что требуется частое введение дозы в течение суток для того, чтобы поддерживать уровень в плазме на терапевтическом уровне.
Для того, чтобы получить контролируемое высвобождение, можно придерживаться различных стратегий, при которых скорость высвобождения превосходит скорость метаболизма данного препарата, контролируемое высвобождение можно получить при соответствующем выборе различных параметров состава и ингредиентов, включая, например, различные типы композиции с контролируемым высвобождением и покрытий. При этом препарат заключается вместе с соответствующими наполнителями в фармацевтическую композицию, из которой, после введения, препарат высвобождается контролируемым образом (композиции в виде таблеток или капсул для одной или нескольких дозовых единиц, масляных растворов, суспензий, эмульсий, микрокапсул, микросфер, наночастиц, пластырей и липосом).
Твердые дозовые формы для приема внутрь
Лекарственные формы для приема внутрь включают таблетки, содержащие активные ингредиенты в смеси с нетоксическими фармацевтически приемлемыми наполнителями. Такими наполнителями могут быть, к примеру, инертные разбавители или заполнители (например, сахароза, микрокристаллическаяцеллюлоза, крахмал, включая картофельный крахмал, карбонат кальция, хлорид натрия, фосфат кальция, сульфат кальция или фосфат натрия); гранулирующие и дезинтегрирующие вещества (напр., производ
- 16 032881 ные целлюлозы, включая микрокристаллическую целлюлозу, крахмал, включая картофельный крахмал, натриевая кроскармеллоза, альгинаты или альгиновая кислота); связывающие вещества (напр., гуммиарабик, альгиновая кислота, альгинат натрия, желатин, крахмал, желатинизированный крахмал, микрокристаллическая целлюлоза, натриевая карбоксиметйлцеллюлоза, метидцёллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, этилцеллюлоза, поливинилпирролидон или полиэтиленгликоль); и смазывающие вещества, скользящие и антиадгезивные вещества (например, стеариновая кислота, диоксид кремния или тальк). Другие фармацевтически приемлемые наполнителя - красители, ароматизаторы, пластификаторы, увлажнители, буферные вещества и др.
Таблетки могут быть непокрытыми или же они могут быть покрыты известными методами, необязательно чтобы задержать дезинтеграцию и всасывание в желудочно-кишечном тракте и тем самым обеспечить непрерывное действие в течение длительного времени. Покрытие может быть приспособлено для высвобождения активного вещества препарата в заданном режиме (напр., для получения формы с контролируемым высвобождением) или же не высвобождать активное вещество до полного прохождения через желудок (энтеросолюбильная оболочка). Покрытие может представлять собой сахарное покрытие, пленочное покрытие (напр., на основе гидроксипропилметилцеллюлозы, метилцеллюлозы, метилгидроксиэтидцеллюлозы, гидроксипропилцеллюлозы, карбокси-метилцеллюлозы, сополимеров акрилата, полйэтиленгликрлей и/или поливинилпирро-лидона) или энтеросолюбильное покрытие (напр., на основе сополимера метакриловой кислоты, ацетат-фталата целлюлозы, фталата гидроксипропилметилцеллюлозы, ацетат-сукцината гидроксипропилметилцеллюлозы, поливинилацетат-фталата, шеллака и/или этилцеллюлозы). Можно использовать материал, вызывающий задержку по времени, такой, напр., как глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат.
Твердые композиции типа таблеток могут включать покрытие, приспособленное для защиты композиции от нежелательных химических изменений (напр., химической деградации до высвобождения активного вещества препарата). Покрытие может быть нанесено на твердую дозовую форму таким же образом, как описано в Encyclopedia of Pharmaceutical Technology.
Препараты могут быть смешаны вместе в таблетке или могут быть разделены. Например, первый препарат содержится внутри таблетки, а второй препарат находится на внешней стороне, так что значительная часть второго препарата высвобождается до высвобождения первого препарата.
Лекарственные формы для приема внутрь также могут быть представлены в виде жевательных таблеток или в виде твердых желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешан с инертным твердым разбавителем (напр., картофельным крахмалом, микрокристаллической целлюлозой, карбонатом кальция, фосфатом кальция или каолином), либо в виде мягких желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешан с водой или масляной средой, к примеру, жидким парафином или оливковым маслом. Порошки и гранулы могут быть получены с использованием указанных выше ингредиентов под таблетки и капсулы стандартным образом.
Композиции с контролируемым высвобождением для приема внутрь, напр., могут быть составлены так, чтобы высвобождение активного препарата контролировалось растворением и/или диффузией активного вещества препарата.
Контролируемое растворением или диффузией высвобождение может осуществляться путем соответствующего покрытия таблеток, капсул, шариков или гранул препарата либо путем заключения препарата в соответствующий матрикс. Покрытие для контролируемого высвобождения может включать одно или несколько из покрывающих веществ, указанных выше, и/или, например шеллак, пчелиный воск, гликовоск, касторовый воск, карнаубский воск, стеариловый спирт, глицерилмоностеарат, глицерилдистеарат, пальмитостеарат глицерина, этилцеллюлозу, акриловые смолы, dl-полимолочную кислоту, ацетат-бутират целлюлозы, поливинилхлорид, поливинилацетат, винилпирролидон, полиэтилен, полиметакрилат, метилметакрилат, 2-гидроксиметакрилат, гидрогели из метакрилата, 1,3-бутиленгликоль, этиленгликоль метакрилат и/или полиэтиленгликоли. В состав матрикса для контролируемого высвобождения также может входить, например, гидратированная метилцеллюлоза, карнаубский воск и стеариловый спирт, карбопол 934, силикон, глйцерилтристеарат, метилакрилат-метилметакрилат, поливинилхлорид, полиэтилен и/или галогенироватаый фторуглерод.
Композиции с контролируемым высвобождением, содержащие один или несколько препаратов из заявленных комбинаций, также могут иметь вид плавучих таблеток или капсул (т.е. таких таблеток или капсул, которые при приеме внутрь плавают на поверхности содержимого желудка в течение определенного времени). Лекарственная форма препаратов в виде плавучих таблеток может быть получена путем гранулирования смеси препаратов с наполнителями и 20-75 мас.% таких гидроколлоидов, как гидроксиэтилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза или гидроксипропилметилцеллюлоза. Затем полученные гранулы могут быть спрессованы в таблетки. При контакте с желудочным соком таблетка образует практически водонепроницаемый слой геля вокруг своей поверхности. Этот слой геля принимает участие в поддержании плотности меньше единицы, что позволяет таблетке оставаться на плаву в желудочном соке.
- 17 032881
Жидкости для приема внутрь
Порошки, диспергируемые порошки или гранулы, подходящие для получения водной суспензии при добавлении воды, являются удобной дозовой формой для перорального введения. Формы в виде суспензии обеспечивают активный ингредиент в смеси с диспергирующим или смачивающим веществом у суспендирующим веществом и одним или несколькими консервантами. Подходящими суспендирующими веществами являются, к примеру, натриевая карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, альгинат натрия и др.
Парентеральные композиции
Фармацевтические композиции также могут вводиться парентерально посредством инъекции, инфузии или имплантации (внутривенно, внутримышечно, подкожно и т.п.) в виде дозовых лекарственных форм или через соответствующие устройства для доставки либо имплантаты, содержащие стандартные нетоксичные фармацевтически приемлемые носители и вспомогательные вещества. Составы и получение таких композиции хорошо известны специалистам в области лекарственных форм.
Композиции для парентерального применения могут быть представлены в виде стандартных дозовых форм (например, в ампулах с однократной дозой) или во флаконах, содержащих несколько доз, в которые может быть добавлен подходящий консервант (см. ниже). Композиция может быть в виде раствора, суспензии, эмульсии, инфузионного устройства или имплантационного устройства или же в виде сухого порошка для разведения водой или другим подходящим носителем перед употреблением. Помимо активных препаратов, композиция может включать подходящие парентерально приемлемые носители и/или наполнители. Активные препараты могут быть заключены в микросферы, микрокапсулы, наночастицы, липосомы и т. п. для контролируемого высвобождения. Композиция может включать суспендирующие, солюбилизирующие, стабилизирующие, pH-регулирующие вещества и/или диспергирующие вещества.
Фармацевтические композиции по изобретению могут иметь вид, подходящий для стерильных инъекций. Для получения таких композиции подходящие активные средства растворяют или суспендируют в парентерально приемлемом жидком носителе. К приемлемым носителям и растворителям, которые можно использовать, относятся вода или вода, доведенная до нужного pH добавлением соответствующего количества соляной кислоты, гидроокиси натрия или подходящего буфера, 1,3-бутандиол, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Водные составы также могут содержать один или несколько консервантов (например, метил-, этил- или н-пропил-n-гидроксибензоат). В тех случаях, когда один из препаратов лишь умеренно или слабо растворим в воде, можно добавить усиливающее растворение или солюбилизирующее вещество, или же растворитель может включать 10-60 мас.% пропиленгликоля или др.
Парентеральные композиции с контролируемым высвобождением могут иметь вид водных суспензий, микросфер, микрокапсул, магнитных микросфер, масляных растворов, масляных суспензий или эмульсий. С другой стороны, активные препараты могут быть заключены в биосовместимые носители, липосомы, наночастицы, имплантаты или инфузионные устройства, Материалы, используемые при получении микросфер и/или микрокапсул, представлены, напр., биоразлагаемыми/биоразрушимыми полимерами, такими как полигалактин, поли-(изобутилцианоакрилат), поли-(2-гидроксиэтил-Б-глутамин). Биосовместимые носители, которые можно использовать при составлении парентеральных форм с контролируемым высвобождением, представлены углеводами (например, декстраны), белками (например, альбумин), липопротеинами или антителами. Материалы, используемые в имплантатах, могут не быть биоразлагаемыми (например, полидиметилсилоксан) или же быть биоразлагаемыми (например, поликапролактон, полигликолевая кислота или полиортоэфиры).
Альтернативные способы введения
Хотя это и менее предпочтительно и менее удобно, но предусмотрены и другие способы введения и, таким образом, другие составы. При этом подходящие для ректального введения дозовые формы для композиции включают свечи (типа эмульсии или суспензии) и ректальные желатиновые капсулы (растворы или суспензии). В типичной рецептуре свечей активные препараты сочетаются с соответствующей фармацевтически приемлемой основой свечи, такой как масло какао, этерифицированные жирные кислоты, глицериновый желатин и различные водорастворимые или диспергируемые основы типа полиэтиленгликолей. Могут входить и различные добавки, усилители или поверхностно-активные вещества.
Фармацевтические композиции также могут применяться топически на кожу для всасывания через кожу в виде дозовых лекарственных форм, содержащих стандартные нетоксичные фармацевтически приемлемые носители и наполнители, в том числе микросферы и липосомы. Лекарственные формы включают кремы, мази, лосьоны, линименты, гели, гидрогели, растворы, суспензии, палочки, спреи, пасты, пластыри и другие разновидности трансдермальных систем для доставки лекарств. Фармацевтически приемлемые носители или наполнители могут включать эмульгирующие вещества, антиоксиданты, буферные вещества, консерванты, увлажнители, усилители проникновения, хелаторы, гелеобразующие вещества, основы мазей, отдушки и защищающие кожу вещества.
Консерванты, увлажнители, усилители проникновения могут быть представлены парабенами, такими как метил- или пропил-n-гидроксибензоат и бензалкония хлорид, глицерином, пропиленгликолем,
- 18 032881 мочевиной и др.
Фармацевтические композиции, описанные выше для топического нанесения на кожу, также могут применяться при топическом нанесении на или вблизи части тела, подлежащей лечению. Композиции могут быть приспособлены для непосредственного нанесения или для нанесения с помощью специальных устройств для доставки лекарств, таких как повязки или же пластыри, прокладки, губки, полоски или другие формы из подходящего гибкого материала.
Дозировки и продолжительность лечения
Следует иметь в виду, что препараты из комбинации могут вводиться либо одновременно в одной и той же или в разных лекарственных формах, либо последовательно. При последовательном введении промежуток при введении второго (или дополнительного) активного ингредиента должен быть таким, чтобы не исчезло преимущество эффективного действия комбинации активных ингредиентов. Минимальное требование к комбинации согласно этому описанию состоит в. том, что комбинация предназначается для комбинированного применения с преимуществом эффективного действия комбинации активных ингредиентов. Предназначение комбинации можно узнать из приспособлений, условий, адаптации и/или других средств, способствующих применению комбинации по изобретению.
Хотя активные препараты настоящего изобретения могут вводиться дробными дозами, например, два или три раза в день, однако предпочтительным является введение каждого препарата из комбинации один раз в день, при этом наиболее предпочтительным является однократное введение суточной дозы всех препаратов в одной фармацевтической композиции (стандартной дозовой форме).
Термин стандартная дозовая форма относится к физически дискретным единицам (таким как капсулы, таблетки или заряженные цилиндры шприца), пригодным в качестве единичных доз для человека, причем каждая единица содержит заранее определенное количество активного материала или материалов, рассчитанное на получение нужного терапевтического эффекта, в сочетании с требуемым фармацевтическим носителем.
Введение обычно является неоднократным. Оно может проводиться от одного до нескольких раз в день на протяжении от нескольких дней до нескольких лет и даже в течение всей жизни пациента. В большинстве случаев показано хроническое или, по меньшей мере, периодически повторяющееся продолжительное введение.
Кроме того, на дозировку может повлиять фармакогеномная (влияние генотипа на фармакокинетику, фармакодинамику или профиль эффективности лекарственного средства) информация о конкретном пациенте.
За исключением особо тяжелых случаев, когда могут потребоваться более высокие дозы, предпочтительная дозировка каждого препарата в комбинации, как правило, должна находиться в диапазоне доз, не превышающих те дозировки, которые обычно назначаются при долгосрочном поддерживающем лечении или которые оказались безопасными в фазе 3 клинических испытаний.
Замечательным преимуществом изобретения является то, что каждое соединение может применяться в малых дозах при комбинированной терапии, при этом принося в комбинации существенную клиническую пользу Комбинированная терапия может оказаться эффективной при таких дозах, в которых соединения по отдельности оказывают слабое или не оказывают действия. Таким образом, особенное преимущество изобретения заключается в возможности использовать субоптимальные дозы каждого соединения, т.е. меньшие дозы, чем те, которые обычно назначаются, предпочтительно 1/2 от терапевтической дозы, более предпочтительно 1/3, 1/4, 1/5 или еще более предпочтительно 1/10 от терапевтической дозы. В определенных случаях применяются такие низкие дозы, как 1/20, 1/30, 1/50, 1/100 или еще меньше от терапевтической дозы.
При таких субоптимальных дозировках соединения сами по себе будут практически неактивными, тогда как комбинации по изобретению будут полностью эффективными.
Предпочтительная дозировка составляет от 1 до 50% от тех, которые обычно назначаются для долгосрочного поддерживающего лечения.
Наиболее предпочтительная дозировка может составлять от 1 до 10% от тех, которые обычно назначаются для долгосрочного поддерживающего лечения.
Конкретные примеры дозировки препаратов для применения в изобретении представлены ниже:
бромокриптин перорально от 0,01 до 10 мг в день, предпочтительно менее 5 мг в день, более предпочтительно менее 2,5 мг в день, еще более предпочтительно менее 1 мг в день, причем такие дозировки особенно подходят для перорального введения;
ифенпродил перорально от 0,4 до 6 мг в день, предпочтительно менее 3 мг в день, более предпочтительно менее 1,5 мг/день, еще более предпочтительно менее 0,75 мг в день, причем такие дозировки особенно подходят для перорального введения;
мексилетин перорально от 6 до 120 мг в день, предпочтительно менее 60 мг в день, более предпочтительно менее 30 мг/день, еще более предпочтительно менее 15 мг в день, причем такие дозировки особенно подходят для перорального введения;
моксифлоксацин перорально от 4 до 40 мг в день, предпочтительно менее 20 мг в день, более предпочтительно менее 10 мг/день, еще более предпочтительно менее 5 мг в день, причем такие дозировки
- 19 032881 особенно подходят для перорального введения;
торасемид перорально от 0,05 до 4 мг в день, предпочтительно менее 2 мг в день, более предпочтительно менее 1 мг в день, еще более предпочтительно менее 0,5 мг в день, причем такие дозировки особенно подходят для перорального введения;
триметазидин перорально от 0,4 до 6 мг в день, предпочтительно менее 3 мг в день, более предпочтительно менее 1,5 мг/день, еще более предпочтительно менее 0,75 мг в день, причем такие дозировки особенно подходят для перорального введения;
акампросат перорально от 1 до 400 мг в день;
аминокапроновая кислота перорально от 0,1 г до 2,4 г в день;
баклофен перорально от 0,15 до 15 мг в день; диэтилкарбамазин перорально от 0,6 до 600 мг в день; цинакальцет перорально от 0,3 до 36 мг в день; циннаризин перорально от 0,6 до 23 мг в день; эплеренон перорально от 0,25 до 10 мг в день; лефлуномид перорально от 0,1 до 10 мг в день;
левосимендан перорально от 0,04 до 0,8 мг в день; сульфисоксазол перорально от 20 до 800 мг в день; сулодексид перорально от 0,05 до 40 мг в день; тербинафин перорально от 2,5 до 25 мг в день; зонисамид перорально от 0,5 до 50 мг в день.
Следует иметь в виду, что количество вводимого препарата должно определяться врачом в свете конкретных обстоятельств, в том числе заболевания или заболеваний, подлежащих лечению, конкретной вводимой композиции, возраста, веса и реакции индивидуального пациента, тяжести симптомов у пациента и выбранного способа введения. Таким образом, вышеприведенные диапазоны дозировки предназначаются для общего руководства и поддержки приведенных здесь положений, а не для ограничения объема изобретения.
Следующие примеры приводятся для раскрытия изобретения, а не для его ограничения.
Примеры
Содержание и уход за животными, а также эксперименты проводились в соответствии с директивами Комитета по исследованиям и вопросам этики I.A.S.P. (1983).
А. Лечение заболеваний, связанных с токсичностью A β
В этой серии экспериментов соединения-кандидаты проверяли на их способность предотвращать или уменьшать токсические эффекты A3i-42 человека. A3i-42 является полноразмерным пептидом, из которого состоят агрегаты, обнаруженные в биопсиях больных людей, страдающих AD. Препараты сначала проверяли индивидуально, а затем анализировали их комбинированное действие. Эффект определяли на различных типах клеток, чтобы подробно документировать активность соединений на моделях in vitro, иллюстрирующих различные физиологические особенности AD. Также проводились исследования in vivo на мышиной модели AD, чтобы проверить такой защитный эффект путем исследования эффекта соединений на i) когнитивную Способность животных и ii) на молекулярные признаки AD (индуцирование апоптоза, появление окислительного стресса, появление воспалительных путей).
I. Соединения предотвращают токсичность A3i-42 человека
I.1. Защита от токсичности A3i-42 на модели на эндотелиальных клетках микрососудов мозга человека
Для исследования защитного действия соединений-кандидатов на токсичность A βι-42 использовали культуры эндотелиальных клеток микрососудов мозга человека.
Эндотелиальные клетки церебральных микрососудов мозга человека (НВМЕС, ScienCell, кат. № 1000, замороженные при 10 пересеве) быстро оттаивали на водяной бане при +37°C. Супернатант немедленно вносили в 9 мл модифицированной Дюльбекко среды Игла (DMEM; Pan Biotech, кат. № Р0403600), содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки (FCS; GIBCO, кат. № 10270-106). Суспензию клеток центрифугировали при 180 х g в течение 10 мин при +4°C, а осадки суспендировали в бессывороточной среде CSC (CSC бессывороточная, Cell System, кат. № SF-4Z0-500-R, серия 51407-4) с 1,6% бессывороточного RocketFuel (Cell System, кат. № SF-4Z0-500-R, серия 54102), 2% пенициллина 10 000 ед./мл и стрептомицина 10 мг/мл (PS; Pan Biotech, кат. № Р06-07100, серия 133080808) и высеивали при плотности 20 000 клеток на лунку в 96-луночные планшеты (Matrigel layer biocoat angiogenesis system, BD, кат. № 354150, серия А8662) в конечном объеме 100 мкл. На подложке из матригеля эндотелиальные церебральные клетки спонтанно запускали процесс морфогенеза капиллярной сети (33).
Ставили три отдельные культуры на 1 условие, по 6 лунок на 1 условие.
Соединения-кандидаты и обработка амилоидом-31-42 человека
Вкратце, пептид A3i-42 (Bachem, кат. № Н1368, серия 1010533) растворяли в культуральной среде определенного состава при 20 мкМ (маточный раствор) и медленно встряхивали при +37°C в течение 3 дней в темноте. Контрольную среду получали в тех же условиях.
- 20 032881
Через 3 дня этот агрегированный амилоидный пептид человека использовали на клетках НВМЕС при 2,5 мкМ, разбавленный в контрольной среде (оптимальное время инкубации). Пептид Άβ1-42 добавляли через 2 ч после посева НВМЕС на матригель для инкубации в течение 18 ч.
Через 1 ч после посева НВМЕС на матригель, тестируемые соединения и VEGF-165 растворяли в культуральной среде (+ 0,1% DMSO), а затем преинкубировали с НВМЕС в течение 1 ч перед внесением Ά βι-42 (в конечном объеме 100 мкл на лунку). Через 1 ч после инкубации тестируемых соединений или VEGF (через 2 ч после посева клеток на матригель) добавляли 100 мкл петида Άβ3-42 до конечной концентрации 2,5 мкМ, разбавленного в контрольной среде в присутствии тестируемых соединений или VEGF (в общем объеме 200 мкл на лунку), чтобы избежать дальнейшего разбавления препарата.
Организация культур на чашках
В качестве контрольного соединения для всех экспериментов в данном исследовании использовали VEGF-165, который, как известно, является проангиогенной изоформой VEGF-Ά. VEGF-165 является одной из самых распространенных изоформ VEGF, участвующих в ангиогенезе. VEGF использовали в качестве эталонного тест-соединения при 10 нМ (фиг. 1).
Оценивали следующие условия:
отрицательный контроль: сама среда + 0, 1% DMSQ интоксикация: амилоид^1-42 (2,5 мкМ) в течение 18 ч положительный контроль: VEGF-165 (10 нМ) (1 эталонное соединение на 1 культуру) за 1 ч перед добавлением Άβ3-42 (2,5 мкМ) для инкубации в течение 18 ч исследуемые соединения: тест-соединение за 1 ч перед добавлением Ά β1.42 (2,5 мкМ) для инкубации в течение 18 ч.
Количественная оценка капиллярной сети
Делали по 2 снимка на лунку с увеличением 4 х при помощи InCell Άnalyzer ™ 1000 (GE Healthcare) в режиме светопропускания. Все снимки делали в одинаковых условиях. Анализ сети ангиогенеза проводили с помощью программы Developer (GE Healthcare). Оценивали общую длину капиллярной сети.
Обработка данных
Все значения выражали в виде среднего ± SEM из 3 культур (n = 6 лунок на условие). Проводили статистический анализ на различные условия методом ΆΝΟνΆ с последующим тестом Dunnett, если он проходит (программа Statview, версии 5.0). Приведенные на графиках значен, (6 %) представляют развитие амилоидной токсичности. Так, токсичность амилоида принимали за 100%, а эффекты тестсоединений выражали в % от этой токсичности амилоида.
Результаты
Результаты представлены на фиг. 1. Они свидетельствуют, что препараты сами по себе вызывают значительный защитный эффект против токсичности, обусловленной пептидом Άβ3-42:
торасемид при низкой дозе, например, 400 нМ, вызывает сильный защитный эффект; бромокриптин при низкой дозе, например, 3,2 нМ, вызывает сильный защитный эффект.
Результаты также показывают, что вне ожидания большие или меньшие концентрации препаратов по сравнению с вышеприведенными концентрациями могут дать худшие результаты или даже не оказать эффекта на токсичность Άβ3-42 на этой модели.
Ι.2. Защита оттоксичности Ά β3-42 на клетках первичных корковых нейронов
Исследуемые соединения и обработка амилоидом-р1-42 человека
Корковые нейроны крыс культивировали, как описано в Singer et al. (42). Вкратце, беременных самок крыс на 15-й день беременности забивали смещением шейных позвонков (крысы Вистар) и извлекали плоды из матки. Кору головного мозга извлекали и помещали в ледяную среду Leibovitz (L15), содержащую 2% пенициллина 10 000 ед./мл и стрептомицина 10 мг/мл и 1% бычьего сывороточного альбумина (BS^. Кору подвергали диссоциации трипсином в течение 20 мин при 37°C (0,05%). Реакцию останавливали добавлением модифицированной Дюльбекко среды Игла (DMEM), содержащей ДНКазу-1 класса II и 10% эмбриональной телячьей сыворотки (FCS). Затем клетки подвергали механической диссоциации, пропуская их по 3 раза через пипетку на 10 мл, и центрифугировали при 515 xg в течение 10 мин при +4°C. Супернатант отбрасывали, а осадок клеток ресуспендировали в культуральной среде определенного состава, состоящей из Neurobasal с добавлением В27 (2%), L-глутамина (0,2 мМ), 2% раствора PS и 10 нг/мл BDNF. Подсчитывали жизнеспособные клетки на цитометре Neubauer по исключению трипанового синего. Клетки высеивали при плотности 30 000 клеток на лунку в 96-луночные планшеты (лунки предварительно покрывали полиВ-лизином (10 мкг/мл)) и культивировали при +37°C в увлажненной атмосфере из воздуха (95%) и CO2 (5%).
Вкратце, пептид Άβ3-42 растворяли в культуральной среде определенного состава при 40 мкМ (маточный раствор) и медленно встряхивали при +37°C в течение 3 дней в темноте для его агрегирования. Контрольную среду получали в тех же условиях.
Через 3 дня раствор использовали на первичных корковых нейронах следующим образом.
После 10 дней культивирования нейронов препараты растворяли в культуральной среде (+ 0,1% DMSO), а затем преинкубировали с нейронами в течение 1 ч перед внесением Άβ1-42 (в конечном объеме
- 21 032881
100 мкл на лунку). Через 1 ч после инкубации с препаратами добавляли 100 мкл пептида Άβ1-42 до конечной концентрации 10 мкМ, разбавленного в присутствии препаратов, чтобы избежать дальнейшего их разбавления. Корковые нейроны подвергали интоксикации в течение 24 ч. Ставили три отдельные культуры на 1 условие, по 6 лунок на 1 условие.
В качестве положительного контроля и эталонного соединения использовали BDNF (50 нг/мл) и βэстрадиол (150 нМ), соответственно.
Организация культур на чашках
В качестве положительного контроля использовали β-эстрадиол при 150 нМ. β-Эстрадиол растворяли в культуральной среде и преинкубировали в течение 1 ч перед внесением агрегированного амилоида- β1-42.
Оценивали следующие условия: контрольный планшет: по 12 лунок на 1 условие отрицательный контроль: сама среда + 0,1% DMSO интоксикация: амилоидф1-42 (10 мкМ) в течение 24 ч эталонное соединение: эстрадиол (150 нМ) в течение 1 ч планшет с препаратами: по 6 лунок на 1 условие отрицательный контроль: сама среда + 0,1% DMSO интоксикация: амилоидф1-42 (10 мкМ) в течение 24 ч препараты: препарат за 1 ч перед добавлением амилоидаф1-42 (10 мкМ) на 24 ч.
Определение активности лактатдегидрогеназы (LDH)
После 24-часовой интоксикации отбирали супернатанты и анализировали с помощью набора Cytotoxicity Detection kit (LDH, Roche Applied Science, кат. № 11644793001, серия 11800300). Этот колориметрический метод количественной оценки клеточной токсичности основан на измерении активности лактатдегидрогеназы (LDH), выделяющейся из цитозоля погибающих клеток в супернатант.
Обработка данных
Все значения выражали в виде среднего ± SEM из 3 культур (n = 6 лунок на условие). Проводили статистический анализ на различные условия методом ANOVA с последующим тестом Dunnett, если он проходит (программа Statview версии 5.0).
Результаты
Результаты по индивидуальным препаратам, полученные при анализе токсичности на клетках первичных корковых нейронов, представлены на фиг. 1 и 26. Они свидетельствуют, что препараты сами по себе вызывают значительный защитный эффект против токсичности, обусловленной пептидом Άβl-42: триметазидин при низкой дозе, например, 40 нМ, вызывает сильный защитный эффект; мексилетин при такой низкой дозе, как 3,2 нМ, вызывает сильный защитный эффект; бромокриптин при такой низкой дозе, как 40 нМ, вызывает сильный защитный эффект; ифенпродил при такой низкой дозе, как 600 нМ, вызывает сильный защитный эффект; моксифлоксацин при такой низкой дозе, как 20 нМ, вызывает сильный защитный эффект; торасемид при дозе в 200 нМ вызывает сильный защитный эффект;
гомотаурин при дозе в 8 нМ вызывает сильный защитный эффект. Полученные результаты также показывают, что вне ожидания большие или меньшие концентрации препаратов до сравнению с вышеприведенными могут дать худшие результаты или даже не оказать защитного эффекта на токсичность A βι-42 для клеток нейронов.
II. Комбинированная терапия предотвращает токсичность Άβl-42 человека
II.1. Влияние комбинированной терапии на токсичность пептида A β3-42 человека на клетках НВМЕС человека
Оценивали эффективность комбинаций препаратов по изобретению на клетках человека. При этом использовали те же методики, которые описаны выше в разделе I.1.
Результаты
Все исследованные комбинации препаратов давали защитный эффект против токсичности пептида Aft -42 человека на модели НВМЕС, как это видно из табл. 3 внизу и представлено на фиг. 3-6 и фиг. 13 и 14. Результаты четко показывают, что интоксикация агрегированным амилоидным пептидом человека Αβ^, 2,5 мкМ) значительно предотвращается комбинациями по изобретению, тогда как при тех же концентрациях эти препараты сами по себе не производят существенного эффекта на интоксикацию при описанных выше экспериментальных условиях.
- 22 032881
Таблица 3
Комбинация препаратов Защитный эффект при интоксикации Λβι^2 клеток НВМЕС
Баклофен и торасемид +
Эплеренон и торасемид +
Бромокриптин и сульфисоксазол '+ '
Сульфисоксазол и торасемид +
Тербинафин и торасемид +
Мексилетин и цинакальцет +
Баклофен и триметазидин и торасемид +
Баклофен и цинакальцет и торасемид +
Баклофен и акампросат и торасемид ' +
Сульфисоксазол и триметазидин и торасемид и зонисамид ' +
Сульфисоксазол и мексилетин и торасемид и цинакальцет +
Баклофен и акампросат и торасемид и диэтилкарбамазин +
Баклофен и акампросат и торасемид и ифенпродил . ' . +
Левосимендан и баклофен и триметазидин . 1 +
Левосимендан и аминокапроевая кислота и триметазидин +
Левосимендан и тербинафин и триметазидин +
Левосимендан и сульфисоксазол и триметазидин +
Как видно из фиг. 3-6, 13 и 14, особенно интересные защитные эффекты против токсичности пептида пептида A β1-42 человека при интоксикации клеток НВМЕС давали следующие комбинации препаратов:
баклофен и торасемид, сульфисоксазол и торасемид, торасемид и эплеренон, сульфисоксазол и бромокриптин, тербинафин и торасемид, цинакальцет и мексилетин.
II.2. Влияние комбинированной терапии на токсичность пептида Αβ1-42 человека на клетках первичных корковых нейронов
Оценивали эффективность комбинаций препаратов по изобретению на клетках первичных корковых нейронов. При этом использовали те же методики, которые описаны выше в разделе I.2.
Результаты
Все исследованные комбинации препаратов давали защитный эффект против токсичности пептида Αβ1-42 человека на клетках первичных корковых нейронов, как это видно из табл. 4 внизу и представлено на фиг. 7-12 и фиг. 16-22. Результаты четко показывают, что интоксикация агрегированным амилоидным пептидом человека (Αβ1-42, 10 мкМ) значительно предотвращается комбинациями по изобретению, тогда как при тех же концентрациях эти препараты сами по себе не производят существенного эффекта на интоксикацию при описанных выше экспериментальных условиях.
Таблица 4
Комбинация препаратов Защитный эффект при интоксикации Αβι—42 клеток первичных корковых нейронов
Акампросат и ифенпродил +
Баклофен и мексилетин +
Баклофен и триметазидин +
Баклофен и торасемид +
Цинакальцет и мексилетин +
Циннаризин и триметазидин +
Триметазидин и зонисамид +
Левосимендан и мексилетин +
Левосимендан и ифенпродил +
Левосимендан и триметазидин +
Левосимендан и моксифлоксацин + λ
Мексилетин и ифенпродил +
Моксифлоксацин и баклофен • + .
Моксифлоксацин и цинакальцет +
Моксифлоксацин и триметазидин +
Моксифлоксацин и сульфисоксазол +
Моксифлоксацин и зонисамид +
Торасемид и сульфисоксазол +
Баклофен и триметазидин и торасемид +
Баклофен и цинакальцет и торасемид . +
Баклофен и акампросат и торасемид ' + '
Сульфисоксазол и триметазидин и торасемид и зонисамид +
Сульфисоксазол и мексилетин и торасемид и цинакальцет +
Баклофен и акампросат и торасемид и диэтилкарбамазин +
Баклофен и акампросат и торасемид и ифенпродил
Левосимендан и баклофен и триметазидин +
Левосимендан и аминокапроевая кислота и триметазидин +
Левосимендан и тербинафин и триметазидин +
Левосимендан и сульфисоксазол и триметазидин +
- 23 032881
Как видно из фиг. 7-12 и 15-22, особенно интересные защитные эффекты против токсичности пептида Λβι-42 человека при интоксикации клеток первичных корковых нейронов давали следующие комбинации препаратов:
акампросат и ифенпродил баклофен и мексилетин баклофен и торасемид, баклофен и триметазидин, цинакальцет и мексилетин, циннаризин и триметазидин, триметазидин и зонисамид, мексилетин и ифенпродил, моксифлоксацин и баклофен, моксифлоксацин и цинакальцет, моксифлоксацин и триметазидин, моксифлоксацин и сульфисоксазол, моксифлоксацин и зонисамид, торасемид и сульфисоксазол.
II. 4. Защита роста нейритов от токсичности пептида Λβι-42 Исследуемые соединений и обработка пептидом Λβι-42
Первичные корковые нейроны крыс культивировали, как описано ранее. После 10 дней культивирования клетки инкубировали с препаратами. Через 1 ч клетки подвергали интоксикаций при 2,5 мкМ β-амилоида (1-42; Bachem) в среде определенного состава без BDNF, но вместе с препаратами. Корковые нейроны подвергали интоксикации в течение 24 ч. В качестве положительного (нейропротекторного) контроля использовали BDNF (10 нг/мл). Ставили три независимые культуры на 1 условие, по 6 лунок на 1 условие.
Длина нейритов
После 24-часовой интоксикации убирали супернатанты, а корковые нейроны фиксировали в холодном растворе этанола (95%) и уксусной кислоты (5%) в течение 5 мин. После пермеабилизации с помощью 0,1% сапонина клетки блокировали в течение 2 ч PBS, содержащим 1% эмбриональной телячьей сыворотки. Затем клетки инкубировали с моноклональным антителом против ассоциированного с микротрубочками белка 2 (МАР-2; Sigma). Это антитело проявляли с помощью козьего антитела против IgG мыши с Д1еха Fluor 488 (Molecular Probe). Ядра нейронов метили флуоресцентным маркером (раствор Hoechst, Sigma).
Делали по 10 снимков на лунку с увеличением 20 х при помощи InCell Λna1yzer™ 1000 (GE Healthcare). Все снимки делали в одинаковых условиях. Анализ сети нейритов проводили с помощью программы Developer (GE Healthcare) для оценки общей длины сети нейритов.
Результаты
Комбинация баклофена и торасемида оказывает значительный защитный эффект против токсичности пептида Λβι-42 человека (улучшение сети нейритов на 531%) на клетках первичных корковых нейронов, как это видно из фиг. 23. Результаты четко показывают, что интоксикация амилоидным пептидом человека (Λβι-42, 2,5 мкМ) значительно предотвращается этой комбинацией, более того, она увеличивает сеть нейритов по сравнению с контролем.
Таким образом, данная комбинация обеспечивает эффективную защиту клеток корковых нейронов и сетей нервных клеток от токсичности пептида Λβι-42 человека. Более того, увеличение сети нейритов подтверждает эффективность таких препаратов при неврологических заболеваниях типа травмы спинного мозга.
III. Соединения предотвращают токсичность Λβ25-35 человека in vivo
Животные
На протяжении всего исследования использовали самцов мышей Swiss. Животных содержали в пластиковых клетках со свободным доступом к лабораторному корму и воде, за исключением поведенческих экспериментов и держали в регулируемых условиях при 12-часовом цикле свет/темнота (свет включали в 8:00 утра). Поведенческие эксперименты проводили в звуконепроницаемой экспериментальной комнате с регулируемым воздухом, к которой мыши привыкали по меньшей мере за 30 мин перед каждым экспериментом.
Приготовление и введение амилоидных пептидов
Пептид Λβ25-35 и беспорядочный пептид Λ β25-35 растворяли в стерильной бидистиллированной воде и хранили при -20°C до употребления. Световая микроскопия показала, что инкубация с пептидом Λβ25-35, но не с беспорядочным пептидом Λβ25-35 вела к появлению нерастворимых осадков двух типов: двоякопреломляющих волокнистых структур и аморфных глобулярных агрегатов. Затем β-амилоидные пептиды вводили внутрь желудочков мозга (i.c.v.). Вкратце, каждую мышь слегка анестезировали эфиром и вставляли калиброванную иглу из нержавеющей стали унилатерально на 1 мм вправо от точки на срединной
- 24 032881 линии на равном расстоянии от каждого глаза, на равном расстоянии между глазами и ушами и перпендикулярно к плоскости черепа. Пептиды или носители вводили постепенно в течение примерно 3 сек. Мыши проявляли нормальное поведение через 1 мин после инъекции. Точку введения проверяли путем введения черной туши в предварительных экспериментах. Ни введение иглы, ни введение носителя не оказывали значительного влияния на выживание, поведенческие реакции или когнитивные функции.
Обработка препаратами
В день -1, т.е. за 24 ч до введения пептида A β25-35, вводили препараты, комбинации препаратов или раствор носителя гаважем per os два раза в день (в 8:00 утра и в 6:00 вечера).
В день 0 (в 10:00 утра) мышам вводили i.c.v. пептид Αβ25-35 или беспорядочный пептид Αβ25-35 (контроль) в конечном объеме 3 мкл (3 мМ).
Между днем 0 и днем 7 вводили препараты, комбинации препаратов или раствор носителя гаважем per os один или два раза в день (в 8:00 утра и в 6:00 вечера). Одна группа животных получала донепезил (эталонное соединение - 1 мг/кг/день) гаважем per os за один раз (в 8:00 утра). Препараты растворяли в воде и готовили свежими прямо перед каждым введением гаважем.
В день 7 всех животных тестировали на показатели спонтанного чередования в Y-образном лабиринте как показатели пространственной рабочей памяти.
В день 7 и 8 оценивали контекстную долговременную память у животных по методике пассивного избегания типа ухода/перехода.
В день 8 животных забивали. Мозги препарировали и хранили при -80°C для дальнейшего анализа.
Наблюдались положительные результаты по поведенческим показателям и биохимическим анализам, выполненным через 7 дней после i.c.v. инъекции пептида Aβ25-35, особенно для комбинаций, приведенных в табл. 5.
Таблица 5
Комбинация препаратов
Результаты при поведенческих и/или биохимических анализах
Баклофен и торасемид________________________
Мексилетин и цинакальцет__
Сульфисоксазол и торасемид__
Баклофен и триметазидин и торасемид_________
Баклофен и цинакальцет и торасемид___________
Баклофен и акампросат и торасемид____________
Сульфисоксазол и триметазидин и торасемид и зонисамид__________________________________
Сульфисоксазол и мексилетин и торасемид и цинакальцет__________________________________
Баклофен и акампросат и торасемид и диэтилкарбамазин __________________
Баклофен и акампросат и торасемид и ифенпродил Левосимендан и баклофен и триметазидин_______
Левосимендан и аминокапроевая кислота и триметазидин________________________________
Левосимендан и тербинафин и триметазидин
Левосимендан и сульфисоксазол и триметазидин
IV. Соединения улучшают поведенческие и когнитивные показатели у подвергнутых интоксикации животных
Животных подвергали интоксикации так же, как и в предыдущем разделе.
Показатели спонтанного чередования при тестировании в Y-образном лабиринте
На 7-й день всех животных тестировали на показатели спонтанного чередования в Y-образном лабиринте как показатели пространственной рабочей памяти. Y-образный лабиринт сделан из серого поливинилхлорида, Каждый рукав длиной 40 см, высотой 13 см, шириной 3 см в нижней части и 10 см в верхней части, причем все они сходятся под равными углами. Каждую мышь ставят в конце одного рукава и дают свободно перемещаться по лабиринту на протяжении 8 мин. Визуально отмечают все заходы в рукава, в том числе возможные возвращения в один и тот же рукав. Чередование определяется как заходы во все три рукава поочередно. Следовательно, максимальное число чередований есть общее число заходов в рукава минус два, а степень чередования рассчитывается в процентах как (фактические чередования/ максимальное число чередований) Х100. Параметры включают степень чередования (показатель памяти) и общее число заходов в рукава (показатель поиска). Животных, проявляющих экстремальное поведение (степень чередования < 25% или > 85% либо число заходов в рукава < 10), не учитывают. Обычно они составляют 0-5% животных. Этот тест, кстати, служит для анализа на поведенческом уровне воздействия и амнестического эффекта, вызванного у мышей инъекцией Aβ25-35.
Тест на пассивное избегание
Установка представляет собой ящик (15 х20 Х15 см высотой) из двух отсеков: один освещенный со стенками из белого поливинилхлорида, а другой затемненный со стенками из черного поливинилхлорида и с сетчатым полом. Каждый отсек отделяется дверью типа гильотины. Белый отсек во время эксперимента освещается лампой на 60 Вт, расположенной на 40 см над установкой. На сетку пола подаются
- 25 032881 беспорядочные разряды для лап (0,3 мА в течение 3 с) с помощью генератора-скремблера разрядов (Lafayette Instruments, Lafayette, USA). Дверь-гильотина изначально закрыта во время тренировочного сеанса. Каждая мышь помещается в белый отсек. Через 5 с дверца поднимается. Когда мышь заходит в темный отсек и становится всеми лапами на сетчатый пол, дверца закрывается и подается разряд на лапы в течение 3 с. Отмечается латентность до перехода, то есть латентный период до вхождения в темный отсек, и количество издаваемых звуков. Через 24 ч после тренировки проводится тест на запоминание. Каждая мышь опять помещается в белый отсек. Через 5 с дверцы поднимаются и отмечается латентность до перехода и латентность до ухода, т.е. время, затраченное на возвращение в белый отсек, вплоть до 300 с.
Наблюдались положительные результаты для каждой из исследованных комбинаций, приведенных в табл. 6.
Таблица^
Комбинация препаратов Тест на Y-лабиринт Пассивное избегание
Латентность до ухода Латентность до перехода
Баклофен и торасемид ' ; У :j+ ' . +
Баклофен и акампросат и торасемид + + +
Мексилетин и цинакальцет + + +
Сульфисоксазол и торасемид + + +
V. Соединения по изобретению улучшают нейрофизиологический аспект неврологических заболеваний
Тестировали комбинированные терапии на модели интоксикации Λβ in vivo. Оценивали их эффекты на некоторые параметры, которые ухудшаются при неврологических заболеваниях:
уровень экспрессии каспаз 3 и 9, которые считаются показателями апоптоза;
перекисное окисление липидов, которое считается показателем уровня окислительного стресса; уровень экспрессии ΘΓΛΡ, который считается показателем уровня воспаления в мозге; целостность гематоэнцефалического барьера;
общая целостность синапсов (ELISΛ на синаптофизин).
Целостность гематоэнцефалического барьера
Схема экспериментов по интоксикации животных Λ β была такая же, как и в части III.
Возможный защитный эффект комбинированной терапии на целостность гематоэнцефалического барьера (ВВВ) анализировали на мышах, которым через 7 дней после инъекции в желудочки мозга (i.c.v.) вводили олигомерный амилоидный пептид β25-35 (Λβ25-35) или беспорядочный контрольный пептид Λβ25-35 (ScA β).
На 7-й день после инъекции Λβ25-35 животных тестировали для определения целостности ВВВ по методу ЕВ (Evans Blue). Краситель ЕВ связывается с сывороточным альбумином после периферической инъекции и его использовали в качестве индикатора для сывороточного альбумина.
Краситель ЕВ (2% в физрастворе, 4 мл/кг) вводили внутрибрюшиннр (i.p.) за 3 ч до транскардиальной перфузии. Затем мышей анестезировали i.p. с помощью 200 мкл готовой смеси кетамина 80 мг/кг и ксилазина 10 мг/кг и вскрывали грудную клетку. Мышей перфузировали транскардиально 250 мл физраствора примерно 15 мин до тех пор, пока жидкость из правого предсердия не становилась бесцветной. После декапитации извлекали мозг и рассекали на три части: церебральная кора (левая + правая), гиппокамп (левый + правый), промежуточный мозг. Затем каждую часть мозга взвешивали для количественно го измерения вышедшего из сосудов ЕВ-альбумина.
Образцы гомогенизировали в физрастворе с фосфатным буфером и перемешивали на вибромешалке после добавления 60% трихлоруксусной кислоты для осаждения белка. Образцы охлаждали при 4°C, а затем центрифугировали 30 мин при 10000 xg, при 4°C. В супернатанте измеряли поглощение ЕВ при 610 нм на спектрофотометре.
ЕВ определяли количественно:
в мкг/мг ткани мозга по стандартной кривой, полученной при известных концентрациях ЕВальбумина, и в мкг/мг белка.
Как видно из табл. 7, комбинированные терапии по изобретению эффективно поддерживали целостность ВВВ по сравнению с необработанными животными с интоксикацией.
Общая целостность синапсов (ELISA на синаптофизин)
В качестве маркера целостности синапсов был выбран синаптофизин, который определяли с помощью коммерческого набора для ELISΛ (USCN, кат. № Е90425Ми). Готовили образцы из ткани гиппокампа и гомогенизировали в специальном буфере для экстракции, как описано производителем и в справочной литературе.
Ткани тщательно промывали в ледяном PBS (0,02 моль/л, pH 7,0-7,2) для удаления лишней крови и взвешивали, а затем замораживали в жидком азоте и хранили при -80°C. Ткани нарезали на мелкие кусочки и гомогенизировали в 1 мл ледяного физраствора с фосфатным буфером (PBS) в стеклянном гомогенизаторе. Полученную суспензию обрабатывали ультразвуком с помощью ультразвукового дезинте
- 26 032881 гратора или подвергали двум циклам замораживания-оттаивания для дальнейшего разрушения клеточных мембран. Затем гомогенаты центрифугировали 5 мин при 5000 xg и сразу же отбирали супернатанты для анализа.
Все образцы анализировали в трех повторах.
Количественное определение белка проводили с помощью набора Pierce BCA для определения белка с бицинхониновой кислотой (Pierce, кат. № 23227), чтобы оценить эффективность экстракции и для нормализации. Затем рассчитывали общую концентрацию белка по стандартной кривой из разведений, которая служила для нормализации результатов ELISA.
Результаты (табл. 7) свидетельствуют, что комбинированные терапии эффективно поддерживали общий уровень синаптофизина в головном мозге обработанных животных по сравнению с необработанными животными с интоксикацией.
Анализ окислительного стресса
Мышей забивали путем декапитации и быстро извлекали оба гиппокампа, взвешивали и хранили в жидком азоте до проведения анализа. После оттаивания гиппокамп гомогенизировали в холодном метаноле (1/10 w/v), центрифугировали при 1000 xg в течение 5 мин, а супернатант помещали в эппендорфовскую пробирку. Порцию каждого гомогената вносили в раствор 1 мМ FeSO4, 0,25 М H2SO4, 1 мМ ксиленолового оранжевого и инкубировали 30 мин при комнатной температуре. После измерения поглощения при 580 нм (A580 № 1) в образец добавляли 10 мкл 1 мМ гидроперекиси кумена (CHP) и. инкубировали 30 мин при комнатной температуре для определения максимального уровня окисления. Измеряли поглощение при 580 нм (A580 № 2). Уровень перекисного окисления липидов определяли в виде эквивалентов СНР (CHPE) в соответствии с: СНРЕ = (А580 № 1/A580 № 2) x [СНР] и выражали в виде эквивалентов СНР на вес ткани и в процентах от контроля.
Результаты (табл. 7) свидетельствуют, что комбинированные терапии эффективно уменьшали общий уровень вызванного A3 окислительного стресса в головном мозге обработанных животных по сравнению с необработанными животными с интоксикацией.
Анализ индукции каспазного пути и анализ экспрессии GFAP
Мышей забивали путем декалитации и быстро извлекали оба гиппокампа, тщательно промывали в ледяном PBS (0,02 моль/л, pH 7,0-7,2) для удаления лишней крови, взвешивали хранили в жидком азоте до анализа. Ткани нарезали на мелкие кусочки и гомогенизировали в 1 мл ледяного PBS в стеклянном гомогенизаторе. Полученную суспензию обрабатывали ультразвуком с помощью ультразвукового дезинтегратора или подвергали двум циклам замораживания-оттаивания для дальнейшего разрушения клеточных мембран. Затем гомогенаты центрифугировали 5 мин при 5000 xg и сразу же отбирали супернатанты для анализа.
Эксперименты проводили с помощью коммерческих наборов для определения каспазы-3 (USCN B90626Mu), каспазы-9 (USCN - E90627Mu), GFAP (USCN - Е90068).
Количественное определение белка проводили с помощью набора Pierce BCA для определения белка с бицинхониновой кислотой (Pierce, кат. № 23227), чтобы оценить эффективность экстракции и для нормализации.
Результаты (табл. 7) свидетельствуют, что комбинированные терапии оказывают положительный эффект на маркеры апоптоза и воспаления в головном мозге обработанных животных по сравнению с необработанными животными с интоксикацией.
Таблица 7
Комбинация препаратов Каспазный путь Окислит, стресс Экспрессия GFAP Целостность ВВВ Общая целостность синапсов
Баклофен и торасемид + + + + +
Баклофен и акампросат и торасемид . + . . + + + +
Мексилетин и цинакальцет + + + . + +
Сульфисоксазол и торасемид + + + + , +
В. Предотвращение токсичности глутамата на нервных клетках
В следующей серии экспериментов соединения-кандидаты тестировали на их способность предотвращать или снижатьтоксические эффекты глутамата на нервные клетки. Глутаматная токсичность участвует в патогенезе таких неврологических заболеваний, как рассеянный склероз, болезнь Альцгеймера, боковой амиотрофический склероз, болезнь Паркинсона, болезнь Хантингтона, невропатии, алкоголизм или синдром отмены алкоголя и травмы спинного мозга. Препараты сначала проверяли по отдельности, а затем анализировали их комбинированное действие.
Методы
Эффективность комбинаций препаратов по изобретению оценивали на клетках первичных корковых нейронов. При этом использовали те же методики, которые описаны выше в разделе A.I.2.
Оценка глутаматной токсичности
- 27 032881
Нейропротекторный эффект соединений оценивали путем количественной оценки сети нейритов (иммуноокрашивание нейрофиламентов (NF)), которая специфически отражает глутаматергические нейроны.
После 12 дней культивирования нейронов препараты из комбинаций-кандидатов растворяли в культуральной среде (+0,1% DMSO). Затем комбинации-кандидаты преин-кубировали с нейронами в течение 1 ч перед глутаматным повреждением. Через 1 ч после инкубации добавляли глутамат на 20 мин до конечной концентрации 40 мкМ, в присутствии комбинаций-кандидатов, чтобы избежать дальнейшего разбавления препаратов. По окончании инкубации среду заменяли средой с комбинацией-кандидатом, но без глутамата. Через 24 ч после глутаматного повреждения культуры фиксировали. В качестве положительного контроля использовали MK801 (дизоцилпин гидрогенмалеат, 77086-22-7-20 мкМ).
После пермеабилизации сапонином (Sigma) клетки блокировали в течение 2 ч с помощью PBS, содержащего 10% козьей сыворотки, а затем клетки инкубировали с первичным моноклональным антителом мыши против нейрофиламентов (NF, Sigma). Это антитело проявляли с помощью козьего антитела против IgG мыши с Alexa Fluor 488.
Ядра нейронов метили флуоресцентным маркером (раствор Hoechst, Sigma) и количественно оценивали сеть нейритов, Для оценки выживаемости нейронов использовали по шесть лунок на 1 условие в 3 различных культурах.
Результаты
Все исследованные комбинации препаратов давали защитный эффект против токсичности глутамата для клеток корковых нейронов. Результаты представлены ниже в табл. 8.
Как видно из фиг. 24 и 25, комбинации по изобретению сильно защищают нейроны от глутаматной Токсичности при описанных выше экспериментальных условиях. Следует отметить, что эффективная защита наблюдалась при таких концентрациях препаратов, при которых препараты сами по себе дают незначительный или меньший защитный эффект.
Таблица 8
Комбинация препаратов Нейропротекторный эффект против глутаматной токсичности
Баклофен и торасемид ' +
Баклофен и акампросат и торасемид +
Мексилетин и цинакальцет • +
Сульфисоксазол и торасемид +
С. Улучшение при других заболеваниях, связанных с эксцитотоксичностью глутамата, с помощью комбинаций по изобретению
Вышеприведенный защитный эффект in vitro против глутаматной токсичности у препаратов или комбинаций препаратов по изобретению в сочетании с защитными эффектами, установленными на нескольких моделях AD, побудили авторов изобретения проверить эти препараты и комбинаций на некоторых моделях других заболеваний, в патогенезе которых также участвует глутаматная токсичность, таких как MS, ALS и невропатические боли.
I. Защитный эффект комбинаций на модели рассеянного склероза in vivo
Для демонстрации положительного эффекта композиции по изобретению при лечении рассеянного склероза использовали модель, при которой у мышей, иммунизированных гликопротеином олигодендроцитов миелина (MOG-иммунизированных), развивается хронический прогрессирующий ЕАЕ.
Животные и химикаты
Самок мышей C57L/6J (8-недельного возраста) приобретали у Janvier (Франция); после 2 недель привыкания у самок мышей (в возрасте 10 недель) развивался хронический паралич после иммунизации пептидом MOG (гликопротеин олигодендроцитов миелина). Экспериментальный энцефаломиелит индуцировали с помощью набора Hooke Kit MOG35-55/CFA Emulsion РТХ (коклюшный токсин) для индуцирования ЕАЕ (EK-0110, EK-0115; Hooke Laboratories). Контрольным набором служил СК-0115 (Hooke Laboratories).
Экспериментальная процедура
Экспериментальный энцефаломиелит индуцировали по следующей методике. В день 0 делали две подкожные инъекции по 0,1 мл: одну в верхнюю часть спины мыши и одну в нижнюю часть спины. Каждая инъекция содержит 100 мкг пептида MOG35-55 (MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK), 200 мкг инактивированного H37Ra Mycobacterium tuberculosis и эмульгирована в полном адъюванте Фрейнда (CFA) (Hooke Laboratories). Эмульсия обеспечивает антиген, необходимый для экспансии и дифференцировки MOG-специфичных аутоиммунных Т-клеток.
Через 2 ч (день 0) и 24 ч (день 1) после введения MOG делали две внутрибрюшинные инъекции по 500 нг крклюшного токсина в PBS (Hooke kit). Коклюшный токсин усиливает развитие ЕАЕ, обеспечивая дополнительный адъювант.
Через 8 дней после иммунизации у мышей развивался ЕАЕ и они оставались хронически парализованными на всем протяжении эксперимента. После иммунизации мышей ежедневно обследовали на клинические симптомы по слепой методике. Животных содержали в стандартной свободной от патогенов
- 28 032881 среде и все эксперименты проводились и были одобрены в соответствии с директивами, предписанными постоянным местным комитетом по биоэтике.
Экспериментальные группы и обработка препаратами
Перед иммунизацией подбирали по весу следующие группы самок мышей:
контрольная группа: инъекция носителя при тех же условиях, что у мышей с ЕАЕ (со дня -1 до дня 28 ежедневно вводится плацебо);
группа ЕАЕ: инъекция MOG (день 0) + инъекции коклюшного токсина (день 0 и день 1), а со дня-1 до дня 28 ежедневно перорально вводится плацебо;
ЕАЕ + положительньй контроль: инъекция MOG (день 0) + инъекции коклюшного токсина (день 0 и день 1), а со дня -1 до дня 28 ежедневно перорально вводится дексаметазон;
группа ЕАЕ + обработка: инъекция MOG (день 0) + инъекции коклюшного токсина (день 0 и день 1). Обработка начиналась за 1 день перед иммунизацией и продолжалась до дня 28.
Измеряли клинические показатели в дни 0-5-8-9-12-14-16-19-21-23-26-28.
Для статистического анализа повсюду применяли программу Statistica (Statsoft Inc.). Для анализа клинических показателей заболевания применяли метод ANOVA и t-критерий Стьюдента. Значимым считали p < 0,05.
Сравнивали замедление возникновения заболевания, клинические показатели и замедление наступления смерти между каждой группой относительно контрольной группы immu по кривым Kaplan-Meier и на модели Cox (пакет R выживаемость). Полученные значения р являются односторонними и по ним проверяется гипотеза улучшения по сравнению с контрольной группой immu.
Общий клинический показатель состоит из хвостового показателя, показателя задних лап, показателя передних лап и показателя мочевого пузыря, как изложено ниже.
Хвостовой показатель
0 баллов В норме мыщь держит хвост прямо при передвижении.
1 балл Если кончик хвоста отвис и почти упал.
2 балла Если хвост полностью отвис и волочится по столу.
Показатель задних лап
0 баллов В норме мышь имеет энергичную походку и не волочит лапы.
1 балл Один из следующих тестов дает положительный результат: А - тест на переворачивание: держа за хвост между большим и указательным пальцем, переверните животное на спину и наблюдайте, сколько времени ему потребуется, чтобы выпрямиться. Здоровая мышь выпрямляется немедленно. Задержка означает слабость задних конечностей. В - поставить мышь на проволочную клетку и наблюдать, как она переходит из одной стороны на другую. Если одна или обе конечности часто проскальзывают между полосками, то это означает частичный паралич.
2 балла Оба предыдущих теста положительны.
3 балла Одна или обе задние конечности проявляют признаки паралича, но некоторые движения сохраняются; например: животное может ухватиться снизу за верхнюю часть проволочной клетки и удерживаться там на короткое время, прежде чем отпустит и упадет.
4 балла Когда обе задние лапы парализованы и мышь волочит их при передвижении.
Показатель передних лап
0 баллов В норме мышь активно использует свои передние лапы для захвата и ходьбы и держит голову прямо.
1 балл Ходьба возможна, но затруднена из-за слабости в одной или обеих лапах, к примеру, передние лапы считаются слабыми, если мышь с трудом ухватывается снизу за верхнюю часть проволочной клетки. Другим признаком слабости является опущенная голова.
2 балла Если парализована одна передняя конечность (не может ухватиться и мышь вращается вокруг парализованной конечности). При этом и голова теряет большую часть своего мышечного тонуса.
3 балла Мышь не может двигаться и не может добраться до корма и воды.
Показатель мочевого пузыря
0 баллов В йорме мышь полностью контролирует свой мочевой пузырь.
1 балл Мышь страдает недержанием мочи, если нижняя часть её тела пропитана мочой.
Глобальный показатель для каждого животного определяется сложением всех вышеупомянутых категорий. Максимальный показатель для живых животных составляет 10 баллов.
Результаты: комбинированная терапия эффективна на модели MS Наблюдалось значительное улучшение глобального клинического показателя у мышей в группе ЕАЕ + обработка, особенно для комбинаций, приведенных в табл. 9.
- 29 032881
Таблица 9
Комбинация препаратов Улучшение глобального клинического показателя у животных с ЕАЕ
Баклофен и торасемид +
Баклофен и акампросат и торасемид +
Мексилетин и цинакальцет - +
Сульфисоксазол и торасемид +
II. Защитный эффект комбинаций на моделях ALS
Комбинированные терапии по настоящему изобретению тестировали in vitro, на модели при совместном культивировании, и in vivo, на мышиной модели ALS. В этом разделе представлены методики и результаты,
II.1. Защитный эффект против токсичности глутамата на первичных совместных культурах нервных и мышечных клеток
Первичные совместные культуры нервных и мышечных клеток
Мышечную ткань человека получали согласно ранее описанному методу из части биоптата от здорового пациента (44). Мышечные клетки получали из диссоциированных клеток (10000 клеток на лунку), посеянных на покрытый 0,1% желатином 48-луночный планшет, и культивировали в пролиферативной среде, состоящей из смеси среды MEM и среды М199.
Сразу же после слияния спутниковых клеток целые поперечные срезы спинного мозга от 13дневных эмбрионов крыс Вистар с прикрепленными ганглиями задних корешков (DRG) помещали на мышечный монослой по 1 эксплантату на лунку (в центральной части). DRG необходимы для получения хорошего соотношения иннервации. Иннервированные культуры поддерживали в смешанной среде. Обычно через 24 ч в смешанной культуре наблюдались нейриты, растущие из эксплантатов спинного мозга. Они устанавливают контакты с мышечными трубочками и через 8 дней индуцируют первые сокращения. Вскоре после этого практически непрерывно сокращаются иннервированные мышечные волокна, расположенные возле эксплантатов спинного мозга. Иннервированные волокна морфологически и пространственно отличаются от неиннервированных и их можно легко отличить от них.
Ставили одну совместную культуру (6 лунок на 1 условие).
Глутаматное повреждение
На 27-й день совместные культуры инкубировали с соединениями-кандидатами или рилузолом за 1 час перед интоксикацией глутаматом (60 мкМ) в течение 20 мин. Затем культуры промывали и добавляли соединения-кандидаты или рилузол еще на 48 ч. По окончании инкубации нефиксированные культуры инкубировали с α-бунгаротоксином, конъюгированным с Alexa 488, при концентрации 500 нмоль/л в течение 15 мин при комнатной температуре. Затем культуры фиксировали с помощью PFA в течение 20 мин при комнатной температуре. После пермеабилизации 0,1% сапонином совместные культуры инкубировали с антителом против нейрофиламентов (NF).
Эти антитела проявляли с помощью козьего антитела против IgG мыши с Alexa Fluor 568 (Molecular Probe). Ядра нейронов метили флуоресцентным маркером (раствор Hoechst). Конечные точки: (1) общая длина нейритов, (2) количество моторных единиц, (3) общая площадь моторных единиц, которая свидетельствует о выживаемости и функциональности двигательных нейронов.
Для каждого условия делали по 2 х10 снимков на лунку с увеличением 20 х при помощи InCell Analyzer™ 1000 (GE Healthcare). Все снимки делали в одинаковых условиях.
Результаты
Препараты по изобретению эффективно, защищают мотонейроны и моторные единицы на модели в совместной культуре. Более того, наблюдалась лучшая защита, если препараты использовались в виде комбинаций препаратов, приведенных в табл. 10.
Таблица 10
Комбинация препаратов Защитный эффект против глутаматной интоксикации на совместных нервно-мышечцых культурах
Баклофен и торасемид
Баклофен и акампросат и торасемид ' +
Мексилетин и цинакальцет +
Сульфисоксазол и торасемид +
II.2. Комбинированная терапия эффективна на мышиной модели ALS
Эксперименты проводили на самцах мышей. Для воспроизведения ALS в этой серии экспериментов были выбраны самцы трансгенных мышей B6SJL-Tg(SOD1)2Gur/J и их контроли (соответственно, SN2726 и SN2297 от Jackson Laboratories, Ben Harbor, USA, которые во Франции распространяются фирмой Charles River).
У больных мышей экспрессируется трансген SOD1-G93A, сконструированный с мутантным SOD1 человека (замена одной аминокислоты из глицина на аланин по кодону 93) под управлением эндогенного промотора SOD1 человека. У контрольных мышей экспрессируется контрольный ген SOD1 человека.
Введение препаратов
Мышам вводили препараты-кандидаты, разведенные в носителе, начиная с 60-го дня после рождения до самой смерти. Разбавленные растворы препаратов готовили на воде при комнатной температуре
- 30 032881 непосредственно перед началом введения.
С питьевой водой:
в питьевую воду добавляли рилузол до конечной концентрации 6 мг/мл (подбирали по средней массе тела в каждой группе) в 5% циклодекстрине. Поскольку мыши выпивают примерно 5 мл в день, то вводимая доза составляла 30 мг/кг/день, что представляет дозу, которая, как было показано, повышает выживаемость у мышей;
в качестве носителя использовали циклодекстрин в конечной концентрации 5%, разведенный в воде при комнатной температуре из маточного раствора (20% циклодекстрина).
Пероральное введение (per os):
комбинации препаратов вводили per os, ежедневно;
в качестве носителя использовали циклодекстрин в конечной концентрации 5%, разведенный в воде при комнатной температуре из маточного раствора (20% циклодекстрина).
Клиническое наблюдение
Клиническое наблюдение каждой мыши проводили ежедневно с первого дня обработки (в возрасте 60 дней) до самой смерти (или забоя). Клиническое наблюдение состоит в проведении поведенческих тестов:
возникновения паралича, на обвисание, потерю рефлекса выпрямления и общего наблюдения за походкой:
начало паралича: наблюдение состоит в наблюдении за параличом по каждой конечности. Начало паралича соответствует дню появления первых признаков паралича;
тест на обвисание заключается в появлении тремора или дрожания и в положении задних лап (свисающих или торчащих в стороны) при подвешивании мыши за хвост;
тест на потерю рефлекса выпрямления: оценивается способность мыши к выпрямлению в течение 30 с после переворачивания на любую сторону. Рефлекс считается утерянным, если мышь не способна выпрямиться. Потеря рефлекса выпрямления означает конечную стадию заболевания: мышей, неспособных выпрямиться, подвергают эвтаназии.
Результаты: комбинированная терапия эффективна на модели ALS in vivo У больных животных, получавших препараты и комбинации препаратов по изобретению, отмечается улучшение. А именно, комбинации препаратов, приведенные в табл. 11, эффективно улучшают клинические показатели у этих животных на различных стадиях заболевания.
Таблица 11
Комбинация препаратов Эффект на клинические показатели у больных животных
Баклофен и торасемид +
Баклофен и акампросат и торасемид +
Мексилетин и цинакальцет • 3'<.У- У / У - ' <д-·· \ /. ' - . · ..
Сульфисоксазол и торасемид ' +
III. Защитный эффект комбинаций по изобретению при индуцированной оксалиплатином невропатии в качестве модели невропатических болей in vivo
Комбинированную терапию по настоящему изобретению тестировали in vivo на подходящих моделях периферической невропатии, т.е. острой модели индуцированной оксалиплатином невропатии и хронической модели индуцированной оксалиплатином невропатии. В этом разделе представлены животные, методики и результаты.
Содержание животных
Использовали крыс Sprague-Dawley (CERJ, Франция) весом 150-175 г в начале экспериментов по обработке оксалиплатином (D0). Животных содержали в виварии с ограниченным доступом в комнате с контролируемой температурой (19,5-24,5°C) и относительной влажностью (45-65%) при 12-часовом цикле свет/темнота, со свободным доступом к стандартному гранулированному корму и воде в течение всего исследования. Животных содержали по 4 или 5 на клетку и соблюдали период акклиматизации в течение одной недели перед тестированием.
Схема экспериментов
Во всех экспериментах использовали следующие 4 группы крыс.
Контрольные группы
Группа 1: носитель для оксалиплатина (дистиллированная вода), i.p./носитель для комбинацийкандидатов (дистиллированная вода), per os, ежедневно.
Группа 2: оксалиплатин (дистиллированная вода), i.p./носитель для комбинаций-кандидатов (дистиллированная вода), per os, ежедневно.
Группа 3: оксалиплатин 3 мг/кг i.p./один препарат в дистиллированной воде, per os, ежедневно х9.
Группы по тестированию комбинаций
Группа 4: оксалиплатин 3 мг/кг i.p./комбинация-кандидат в дистиллированной воде, per os, ежедневно х9.
Группа 5: оксалиплатин 3 мг/кг i.p./габапентин (100 мг/кг) в дистиллированной воде, per os, в дни тестирования (т.е. D1 и D8).
- 31 032881
Носители и исследуемые вещества вводили ежедневно с D1 до D7 (за день перед последним днем тестирования), тогда как габапентин вводили в дни тестирования (за 120 мин перед тестированием).
Все обработки проводились в закодированном виде и в случайном порядке, по возможности. Дозы выражали в пересчете на свободную активную субстанцию.
Индуцирование невропатии
Острую невропатию индуцировали однократным внутрибрюшинным введением оксалиплатина (3 мг/мг).
Хроническую периферическую невропатию индуцировали многократным внутрибрюшинным введением оксалиплатина (3 мг/мг, i.p,) в дни 0, 2, 4 и 7 (CD = 12 мг/кг, i.p.). Хроническая невропатия у людей к тому же является кумулятивной, поэтому наиболее часто она наблюдается у тех пациентов, которые получили общие дозы оксалиплатина > или = 540 мг/м2, что соответствует -15 мг/кг в виде кумулятивной дозы у крыс (Cersosimo R.J., 2005).
Вызванная оксалиплатином болевая невропатия у крыс воспроизводит болевые симптомы у пациентов, принимающих оксалиплатин:
самым ранним симптомом является тепловая гипералгезия. Она измеряется с помощью теста с ацетоном или теста с погружением хвоста;
позже появляется механическая гипералгезия. Она измеряется с помощью теста Von Frey или теста с надавливанием на лапу.
Дозировка и тестирование животных
Все комбинации препаратов начинали вводить за день до первой внутрибрюшинной инъекции оксалиплатина 3 мг/кг (D-1) и продолжали вводить каждый день перорально до дня D7. В дни тестирования (т.е. D1 и D7) комбинации препаратов вводили после тестирования. Животные из группы, подучавшей контрольный препарат (габапентин), получали дозы только в дни тестирования.
Тест с ацетоном
Холодовую аллодинию оценивали с помощью теста с ацетоном путем измерения реакции на термальную неноцицептивную стимуляцию в день D1, примерно через 24 ч после первой инъекции оксалиплатина 3 мг/кг (острый эффект оксалиплатина), и день D8 (хронический эффект оксалиплатина).
В тесте с ацетоном измеряется латентность (задержка) отдергивания задней лапы после нанесения капли ацетона на поверхность подошвы обеих задних лап и оценивается интенсивность реакции (холодовой показатель). Измеряется время реакции на охлаждающее действие ацетона в пределах 20 с (точка отсечения) после нанесения ацетона. Реакция на ацетон также оценивается по следующей 4-балльной шкале: 0 (никакой реакции); 1 (быстрое отдергивание, отряхивание лапы); 2 (продолжительное отдергивание или заметное отряхивание лапы); 3 (повторяющееся отряхивание лапы с облизыванием или покусыванием).
Результаты для каждой экспериментальной группы выражали в виде времени реакции, которое определяется как время в сек, необходимое для того, чтобы вызвать реакцию лапы (среднее из 6 измерений для каждой крысы в целом ± SEM);
кумулятивного холодового показателя, который определяется как сумма из 6 показателей для каждой крысы в целом ± SEM. Минимальное значение равно 0 (никакой реакции при любом из 6 испытаний), а максимальное возможное значение равно 18 (многократное отряхивание и облизывание или покусывание лап при каждом из шести испытаний).
Статистический анализ
Проверка по критерию Стьюдента, одностороннему, 3 типа. Уровень значимости задавали на уровне p<0,05; все группы сравнивали с группой болезнь + носитель (группа, получавшая оксалиплатин). На фигурах приводятся средние значения и стандартные ошибки среднего значения.
Результаты
Оксалиплатин вызывал значительное уменьшение времени реакции отдергивания лапы после нанесения ацетона (группа болезнь + носитель) с течением времени. Это уменьшение прогрессировало и было значимым с 1-го дня (острая модель вызванной оксалиплатином невропатии) до 8-го дня (хроническая модель) по сравнению с группой носителя.
Антиаллодинное действие на острой модели вызванной оксалиплатином невропатии
Комбинации препаратов испытывали на острой модели вызванной оксалиплатином невропатии с помощью теста с ацетоном. В табл. 12 представлены те комбинации препаратов (группа 4), которые вызывали значительное снижение кумулятивного холо-дового показателя и значительное увеличение времени реакции по сравнению с группой, получавшей оксалиплатин и носитель (группа 2). Таким образом, эти комбинации препаратов защищают животных от острой невропатии, вызванной оксалиплатином.
- 32 032881
Таблица 12
Комбинация препаратов при . тестировании в группе 4 Холодовой показатель по сравн. с группой 2 Время реакции по сравн. с группой 2 Антиаллодинное действие
Баклофен и торасемид снижается повышается +
Баклофен и акампросат и торасемид снижается повышается +
Мексилетин и цинакальцет снижается повышается +
Сульфисоксазол и торасемид снижается ' повышается +
+ означает антиаллодинный эффект у крыс в группе 4 при анализе кумулятивного холодового показателя и времени реакции в тесте с ацетоном на острой модели вызванной оксалиплатином невропатии
Антиаллодинное действие на хронической модели вызванной оксалиплатином невропатии
Комбинации препаратов испытывали на хронической модели вызванной оксалиплатином невропатии с помощью теста с ацетоном. В табл. 13 представлены те комбинации препаратов, после обработки которыми значительно повышалось время реакции и уменьшался холодовой показатель в группе 4 (животные, получавшие комбинации препаратов и оксалиплатин) на хронической модели невропатии по сравнению с группой, получавшей оксалиплатин и носитель (группа 2). Таким образом, эти комбинации препаратов защищают животных от хронической невропатии, вызванной оксалиплатином.
Таблица 13
Комбинация препаратов при тестировании в группе 4 Холодовой показатель по сравн. с группой 2 Время реакции . по сравн. с группой 2 Антиаллодинное действие
Баклофен и торасемид . снижается повышается +
Баклофен и акампросат и торасемид снижается повышается +
Мексилетин и цинакальцет снижается повышается +
Сульфисоксазол и торасемид снижается повышается +
+ означает антиаллодинный эффект у крыс в группе 4 при анализе кумулятивного холодового показателя и времени реакции в тесте с ацетоном на хронической модели вызванной оксали-платином невропатии
Библиография
1. Crook R. et al. (1998). A Variant of Alzheimer's disease with spastic paraparesis and unusual plaques due to deletion of oxon 9 of presenilin 1. Nat Med. 4(4): 452-5.
2. Houlden H., Baker M. et al. (2000). Variant Alzheimer's disease with spastic paraparesis and cotton wool plaques is caused by PS-1 mutations that lead to exceptionally high amyloid-beta concentrations. Ann Neurol. 48(5): 806-8.
3. Kwok J.B., Taddei K. et al. (1997). Two novel presenilin-1 mutations in early-onset Alzheimer's disease pedigrees and preliminary evidence for association of presenilin-1 mutations with a novel phenotype. Neuroreport 8(6): 1537-42.
4. Verkkoniemi A., Kalimo H. et al. (2001). Variant Alzheimer disease with spastic paraparesis: neuropathological phenotype. J Neuropathol Exp Neurol. 60(5): 483-92.
5. Citron M. (2004). Strategies for disease modification in Alzheimer's disease. Nat Rev Neurosci. 5(9): 677-85.
6. Suh Y.H. and Checler F. (2002). Amyloid precursor protein, presenilins, and alpha-synuclein: molecular pathogenesis and pharmacological applications in Alzheimer's disease. Pharmacol Rev. 54(3): 469-525.
7. Glenner G.G., Wong C.W. et al. (1984). The amyloid deposits in Alzheimer's disease: their nature and pathogenesis. Appl Pathol. 2(6): 357-69.
8. Ballatore C., Lee V.M. et al. (2007). tau-mediated neurodegeneration in Alzheimer's disease and related disorders. Nat Rev Neurosci. 8(9): 663-72.
9. Bell K.F. and Claudio Cuello A. (2006). Altered synaptic function in Alzheimer's disease. Eur J Pharmacol. 545(1): 11-21.
10. Hardy J.A. and Higgins G.A. (1992). Alzheimer's disease: the amyloid cascade hypothesis. Science. 256(5054): 18-4-5.
11. Braak H. and Braak E. (1991). Neuropathological stageing of Alzheimer-related changes. Acta Neuropathol. 82(4): 239-59:
12. Golde Т.Е. (2005). The Abeta hypothesis: leading us to rationally-designed therapeutic strategies for the treatment or prevention of Alzheimer disease. Brain Pathol. 15(1): 84-7.
13. Hardy J. arid Selkoe D.J, (2002), The amyloid hypothesis of Alzheimer's disease: progress and problems on the road to therapeutics. Science 297(5580): 353-6.
14. Selkoe D.J. (2000). The genetics and molecular pathology of Alzheimer's disease: roles of amyloid and the presenilins. Neurol Clin. 18(4): 903-22.
15. Zlokovic B.V. The blood brain barrier in health and chronic neurodegenerative disorders. Neuron Review. 2008,57, 178-201.
16. Budd Haeberlein S.L.; and Upton S.A. Excitotoxicity in neurodegenerative disease, in Encyclopedia of Neuroscience,L.R, Squire, Editor. 2009, Elsevier. p. 77-86.
17. Hughes J.R. Alcohol withdrawal seizures. Epilepsy Behav., 2009. 15(2): 92-7.
- 33 032881
18. Kim A.H., Kerchner G.A, and C. DW. Blocking Excitotoxicity, in CNS Neuroprotection, F.W. Marcoux and D.W. Choi, Editors. 2002, Springer: New York. p. 3-36.
19. Hama A., Sageri J. Antinociceptive effect of riluzole in rats with neuropathic spinal cord injury pain. J Neurotrauma 2011, 2.8(1): 127-34.
20. Lees K.R. et al. Glycine antagonist (gavestinel) in neuroprotection in patients with acute stroke: a randomised controlled trial. GAIN International Investigators. Lancet, 2000, 355(9219): 1949-54.
21. Malgouris C. et al. Riluzple, a, novel antiglutamate, prevents memory loss and hippocampal neuronal damage in ischemic gerbils. J Neurosci., 1989. 9(11): 3720-7.
22. Wahl F. et al. Effect of riluzole on focal cerebral ischemia in rats. Eur J Pharmacol., 1993,230(2): 20914.
23. Wahl F. et al. Riluzole reduces brain lesions and improves neurological function in rats after a traumatic brain injury. Brain Res; 1997, 756 (1-2): 247-55.
24. Ettmayer P., Amidon G.L., Clement B. & Testa B. Lessons learned from marketed and investigational prodrugs. J. Med. Chem. 47,2393-2404 (2004).
25. Beaumont K., Webster R., Gardner I. & Dack K. Design of ester prodrugs to enhance oral absorption of poorly permeable compounds: challenges to the discovery scientist. Curr. Drug Metab. 4, 461-485 (2003).
26. Heimbach T. et al. Enzyme-mediated precipitation of parent drugs from their phosphate prodrugs. Int. J. Pharm. 261, 81-92 (2003).
27. Yang C.Y., Dantzig A-H. & Pidgeon C. Intestinal peptide transport systems and oral drug availability. Pharm. Res. 16, 1331-1343 (1999).
28. Steffansen B. et al. Intestinal solute carriers: an overview of trends and strategies for improving oral drug absorption. Eur. J. Pharm. Sci. 21, 3-16 (2004).
29. Stella V. et al. Prodrugs: Challenges and Rewards (AAPS, New York, 2007).
30. Wermuth CG. The Practice of Medicinal Chemistry (Hardbound, 2003). Part VI, Chap 33: Designing prodrugs and bioprecursors.
31. Pezron I. et al. Prodrug strategies in nasal drug delivery. Expert Opin. Ther. Pat., vol. 12, No. 3, 331340 (2002).
32. Stella. V.J. Prodrugs as therapeutics. Expert Opin. Ther. Pat. 14, 277-280 (2004).
33. Stella V.J. & Nti-Addae K.W. Prodrug strategies to overcome poor water solubility. Adv. Drug Deliv. Rev. 59, 677-694 (2007).
34. Higuchi Т.; Stella V., eds. Prodrugs as Novel Drug Delivery Systems. ACS Symposium Series. American Chemical Society: Washington, DC (1975). 31.
35. Roche E.B. Design of Biopharmaceutical Properties through Prodrugs and Analogs. American Phammceutical Association: Washington, DC (1977).
36. Lal R. et al. Arbaclofen placarbil, a novel R-baclofen prodrug: improved absorption, distribution, metabolism, and elimination properties compared with R-baclofen. J Pharmacol Exp Ther, 2009, 330(3): 911-21.
37. Andrew R. Leach, Valerie J. Gillet. An Introduction to Chemoinformatics. Springer 2007.
38. Asad Rahman S., Bashton M, Holliday G.L., Schrader R. and Thornton J.M. Small molecule subgraph detector (SMSD) toolkit. Journal of Cheminformatics 2009, 1:12 doi:10.1186/1758-2946-1-12.
39. Wishart DS, Knox C, Guo AC, Cheng D, Shrivastava S, Tzur D, Gautam B, Hassanali M. DrugBank: a knowledgebase for drags, drug actions and drag targets. Nucleic Acids Res. 36, suppl 1, D901-D906 (2008).
40. Stahl H, Wermuth CG. (Eds.) Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use. Wiley-VCH, 2nd edition (March 29,2011).
41. Hanafi R, Mosad S, Abouzid K, Niess R, Spahn-Langguth H. Baclofen ester and carbamate prodrag candidates: a simultaneous chromatographic assay, resolution optimized with DryLab. J Pharm Biomed Anal., 2011, 56(3): 569-76.
42. Singer С. et al. Mitogen-activated protein kihase pathway mediates estrogen neuroprotection after glutamate toxicity in primary cortical neurons. J. Neuroscience, 1999, 19(7): 2455-2463.
43. Feng Xu, Ge Peng, Thu Phan, Usha Dilip, Jian Lu Chen, Tania Chernov-Rogan, Xuexiang Zhang, Kent Grindstaff, Thamil Annamalai, Kerry Roller, Mark A. Gallop, David J.
Wustrow. Discovery of a novel potent GABAB receptor agonist. Bioorg Med Chem Lett. 2011 21(21): 6582-5.
44. Braun S, Croizatb B, Lagrangec MC, Wartera JM, Poindron P. Neurotrophins increase motoneurons' ability to innervate skeletal muscle fibers in rat spinal cord-human muscle cocultures. Volume 136, Issues 1-2, March 1996, Pages 17-23.

Claims (21)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Применение торасемида или его соли для лечения болезни Альцгеймера (AD) или родственного болезни Альцгеймера расстройства, выбранного из сенильной деменции AD-типа (SDAT), деменции с тельцами Леви, сосудистой деменции, умеренного когнитивного нарушения (MCI) и возрастного нарушения памяти (AAMI), бокового амиотрофического склероза, или травмы спинного мозга у нуждающе
    - 34 032881 гося в этом субъекта.
  2. 2. Применение по п.1 в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем или наполнителем в форме с пролонгированным высвобождением.
  3. 3. Применение по п.1, где торасемид вводят субъекту неоднократно.
  4. 4. Применение комбинации, содержащей торасемид и по меньшей мере одно соединение, выбранное из сульфисоксазола, метимазола, прилокаина, дифиллина, хинакрина, карбеноксолона, аминокапроновой кислоты, баклофена, каберголина, диэтилкарбамазина, цинакальцета, циннаризина, эплеренона, фенолдопама, лефлуномида, левосимендана, сулодексида, тербинафина, зонисамида, этомидата, фенформина, триметазидина, мексилетина, ифенпродила, моксифлоксацина или бромокриптина или их солей для лечения болезни Альцгеймера (AD) или родственного болезни Альцгеймера расстройства, выбранного из сенильной деменции AD-типа (SDAT), деменции с тельцами Леви, сосудистой деменции, умеренного когнитивного нарушения (MCI) и возрастного нарушения памяти (AAMI), бокового амиотрофического склероза, или травмы спинного мозга у нуждающегося в этом субъекта.
  5. 5. Применение по п.4, где указанную комбинацию выбирают из следующих комбинаций, включающих:
    баклофен и торасемид, сульфисоксазол и торасемид, эплеренон и торасемид, тербинафин и торасемид, баклофен, триметазидин и торасемид, баклофен, цинакальцет и торасемид, сульфисоксазол, триметазидин, торасемид и зонисамид, сульфисоксазол, мексилетин, торасемид и цинакальцет или их соли.
  6. 6. Применение по п.4 или 5, в котором комбинация дополнительно включает фармацевтически приемлемый носитель(и) или наполнитель(и) в форме с пролонгированным высвобождением.
  7. 7. Применение по любому из пп.4-6, где соединения указанной комбинации вводят в виде единой композиции, раздельно или последовательно.
  8. 8. Применение торасемида или его соли для приготовления лекарственного средства для лечения болезни Альцгеймера (AD) или родственного болезни Альцгеймера расстройства, выбранного из сенильной деменции AD-типа (SDAT), деменции с тельцами Леви, сосудистой деменции, умеренного когнитивного нарушения (MCI) и возрастного нарушения памяти (AAMI), амиотрофического бокового склероза, или травмы спинного мозга у нуждающегося в этом субъекта.
  9. 9. Применение торасемида или его соли для приготовления лекарственного средства для защиты корковых нейронов или мозговых эндотелиальных клеток против интоксикации A[J>1-42 пептидом у нуждающегося в этом субъекта.
  10. 10. Применение комбинации торасемида и баклофена или их солей для приготовления лекарственного средства для усиления роста нейритов кортикальных нейронов, интоксицированных A[J>1-42 пептидом, у нуждающегося в этом субъекта.
  11. 11. Применение по п.10, где субъект страдает от травмы спинного мозга.
  12. 12. Применение комбинации, охарактеризованной в п.4 или 5, для приготовления лекарственного средства для лечения болезни Альцгеймера (AD) или родственного болезни Альцгеймера расстройства, выбранного из сенильной деменции AD-типа (SDAT), деменции с дельцами Леви, сосудистой деменции, умеренного когнитивного нарушения (MCI) и возрастного нарушения памяти (AAMI), бокового амиотрофического склероза, или травмы спинного мозга у нуждающихся в этом субъекта.
  13. 13. Применение комбинации, охарактеризованной в п.4 или 5, для приготовления лекарственного средства для защиты корковых нейронов или эндотелиальных клеток мозга от интоксикации A[J>1-42 пептидом у нуждающегося в этом субъекта.
  14. 14. Применение торасемида или его соли для защиты корковых нейронов или мозговых эндотелиальных клеток от интоксикации A[J>1-42 пептидом у нуждающегося в этом субъекта.
  15. 15. Применение комбинации торасемида и баклофена или их солей для усиления роста нейритов кортикальных нейронов, интоксицированных A[J>1-42 пептидом, у нуждающегося в этом субъекта.
  16. 16. Применение по п.15, где субъект страдает от травмы спинного мозга.
  17. 17. Применение по п.4 или 5 для защиты корковых нейронов или эндотелиальных клеток мозга от интоксикации A[J>1-42 пептидом у нуждающегося в этом субъекта.
  18. 18. Способ лечения болезни Альцгеймера (AD) или родственного болезни Альцгеймера расстройства, выбранного из сенильной деменции AD-типа (SDAT), деменции с тельцами Леви, сосудистой деменции, умеренного когнитивного нарушения (MCI) и возрастного нарушения памяти (AAMI), бокового амиотрофического склероза или травмы спинного мозга у нуждающегося в этом субъекта, который включает введение субъекту торасемида или его соли или комбинации, охарактеризованной в п.4 или 5.
  19. 19. Способ по п.18, который включает одновременное, раздельное или последовательное введение субъекту торасемида или его соли и по меньшей мере одного дополнительного соединения, выбранного
    - 35 032881 из сульфисоксазола, метимазола, прилокаина, дифиллина, хинакрина, карбеноксолона, аминокапроновой кислоты, баклофена, каберголина, диэтилкарбамазина, цинакальцета, циннаризина, эплеренона, фенолдопама, лефлуномида, левосимендана, сулодексида, тербинафина, зонисамида, этомидата, фенформина, триметазидина, мексилетина, ифенпродила, моксифлоксацина или бромокриптина или их солей.
  20. 20. Способ по п.19, в котором указанную комбинацию выбирают из следующих комбинаций, включающих баклофен и торасемид, сульфисоксазол и торасемид, эплеренон и торасемид, тербинафин и торасемид, баклофен, триметазидин и торасемид, баклофен, цинакальцет и торасемид, сульфисоксазол, триметазидин, торасемид и зонисамид, сульфисоксазол, мексилетин, торасемид и цинакальцет или их соли.
  21. 21. Способ по любому из пп.18-20, в котором указанную комбинацию вводят субъекту неоднократно.
EA201300975A 2011-03-01 2012-03-01 Применение торасемида для лечения болезни альцгеймера или родственного болезни альцгеймера расстройства или травмы спинного мозга EA032881B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP11305217 2011-03-01
US201161468658P 2011-03-29 2011-03-29
PCT/EP2012/053565 WO2012117073A2 (en) 2011-03-01 2012-03-01 New compositions for treating neurological disorders

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201300975A1 EA201300975A1 (ru) 2014-02-28
EA032881B1 true EA032881B1 (ru) 2019-07-31

Family

ID=44124101

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201300975A EA032881B1 (ru) 2011-03-01 2012-03-01 Применение торасемида для лечения болезни альцгеймера или родственного болезни альцгеймера расстройства или травмы спинного мозга

Country Status (17)

Country Link
EP (1) EP2680836B1 (ru)
JP (1) JP6328428B2 (ru)
KR (2) KR101918669B1 (ru)
CN (2) CN108420819A (ru)
AU (1) AU2012222348B2 (ru)
BR (1) BR112013022102A2 (ru)
CA (1) CA2828763C (ru)
DK (1) DK2819664T3 (ru)
EA (1) EA032881B1 (ru)
ES (2) ES2690490T3 (ru)
HK (2) HK1258223A1 (ru)
IL (2) IL228176A (ru)
MX (2) MX360871B (ru)
SG (2) SG192970A1 (ru)
UA (2) UA113165C2 (ru)
WO (2) WO2012117073A2 (ru)
ZA (2) ZA201306038B (ru)

Families Citing this family (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012075408A1 (en) * 2010-12-02 2012-06-07 Massachusetts Institute Of Technology Chemical and rnai suppressors of neurotoxicity in huntington's disease
US9241933B2 (en) 2011-03-01 2016-01-26 Pharnext Compositions for treating amyotrophic lateral sclerosis
US10010515B2 (en) 2011-03-01 2018-07-03 Pharnext Therapeutic approaches for treating Parkinson's disease
DK2560631T3 (da) 2011-03-01 2014-02-10 Pharnext Baclofen- og acamprosat-baseret af neurologiske forstyrrelser
UA113165C2 (xx) * 2011-03-01 2016-12-26 Застосування комбінації баклофену і акампросату для лікування неврологічних захворювань та композиція, яка містить баклофен і акампросат
US9867837B2 (en) * 2011-03-01 2018-01-16 Pharnext Compositions for treating neurological disorders
US9248111B2 (en) 2011-03-01 2016-02-02 Pharnext Therapeutic approaches for treating parkinson's disease
EP2705842A1 (en) * 2012-09-05 2014-03-12 Pharnext Therapeutic approaches for treating parkinson's disease
US9931326B2 (en) 2011-03-29 2018-04-03 Pharnext Composition comprising torasemide and baclofen for treating neurological disorders
MX2014010481A (es) * 2012-03-01 2015-03-20 Pharnext Nuevas composiciones para el tratamiento de la esclerosis lateral amiotrofica.
EP2705843A1 (en) * 2012-09-05 2014-03-12 Pharnext Therapeutic approaches for treating epilepsy and related disorders through reduction of epileptogenesis
EP2705841A1 (en) 2012-09-05 2014-03-12 Pharnext Combinations of nootropic agents for treating cognitive dysfunctions
EP2727587A1 (en) * 2012-10-30 2014-05-07 Pharnext Compositions, methods and uses for the treatment of diabetes and related conditions by controlling blood glucose level
UA114811C2 (uk) * 2013-02-28 2017-08-10 Фарнекст Застосування акампросату та баклофену для лікування аміотрофічного бічного склерозу
EP2996684A4 (en) * 2013-03-15 2016-11-30 Univ Iowa Res Found THERAPEUTIC PROCEDURES
CA2915811C (en) 2013-06-19 2021-08-31 Som Innovation Biotech, S.L. Therapeutic agents for use in the prophylaxis and/or treatment of hyperkinetic movement disorders
MX2016006678A (es) * 2013-11-22 2016-09-13 Genzyme Corp Nuevos metodos para tratar enfermedades neurodegenerativas.
CN106456583B (zh) 2014-02-11 2020-04-07 法奈克斯公司 用于治疗神经障碍的巴氯芬、阿坎酸和中链甘油三酯的组合
CN107072994B (zh) * 2014-10-15 2020-04-21 奥赖恩公司 用于治疗运动神经元疾病(例如als)的左西孟旦
DK3220891T3 (da) * 2014-11-21 2019-11-04 Biohaven Therapeutics Ltd Sublingual formulering af riluzol
ES2894801T3 (es) * 2015-12-29 2022-02-15 Univ Kyoto Agente para prevenir y/o tratar la enfermedad de Alzheimer
WO2017134280A1 (en) * 2016-02-05 2017-08-10 Pharnext Novel combinatorial therapies of neurological disorders
WO2019004321A1 (ja) * 2017-06-28 2019-01-03 国立大学法人京都大学 アルツハイマー病の予防及び／又は治療剤
US11878001B2 (en) 2017-07-31 2024-01-23 Novartis Ag Use of mavoglurant in the reduction of cocaine use or in preventing relapse into cocaine use
US10322114B2 (en) * 2017-07-31 2019-06-18 Above And Beyond Nb, Llc Formulation of a riluzole solution with beta-cyclodextrins
CA3088715A1 (en) * 2018-01-29 2019-08-01 Pharnext Baclofen and acamprosate based therapy of alzheimer's disease in patients having lost responsiveness to acetylcholinesterase inhibitor therapy
KR20200121495A (ko) 2019-04-16 2020-10-26 동아대학교 산학협력단 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
US20220280613A1 (en) * 2019-07-12 2022-09-08 University Of South Florida Compositions and methods for treating alzheimers disease
JPWO2022054927A1 (ru) * 2020-09-11 2022-03-17
JP2023155212A (ja) * 2022-04-07 2023-10-20 ミトス セラピューティクス インコーポレーティッド スルホンアミド系化合物を含む筋肉疾患改善、治療または予防用組成物
CN117323305B (zh) * 2023-11-07 2024-06-07 杭州沐源生物医药科技有限公司 溴隐亭片剂及其制备方法

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1992019245A1 (de) * 1991-04-27 1992-11-12 Boehringer Mannheim Gmbh Verwendung von torasemid zur behandlung von hirnödemen
US5677344A (en) * 1990-07-19 1997-10-14 E. R. Squibb & Sons, Inc. Method for treating Parkinson's disease employing an ATP-sensitive potassium channel blocker
US20060276411A1 (en) * 2002-03-20 2006-12-07 University Of Maryland, Baltimore Novel non-selective cation channel in neuronal cells and methods for treating brain swelling
WO2008046014A1 (en) * 2006-10-12 2008-04-17 Remedy Pharmaceuticals, Inc. Treatment of alzheimer's disease using compounds that reduce the activity of non-selective ca++- activated atp-sensitive cation channels regulated by sur1 receptors
WO2009000406A1 (en) * 2007-06-22 2008-12-31 Bayer Healthcare Ag Use of antibodies against the cd52 antigen for the treatment of neurological disorders, particularly transmissible spongiform encephalopathy and alzheimer's disease
CN101365451A (zh) * 2005-11-21 2009-02-11 阿拉巴马大学董事会 使用小分子化合物用于神经保护的方法
WO2009133128A1 (en) * 2008-04-29 2009-11-05 Pharnext Combination compositions for treating alzheimer disease and related disorders with zonisamide and acamprosate
WO2009133141A2 (en) * 2008-04-29 2009-11-05 Pharnext New therapeutic approaches for treating alzheimer disease and related disorders through a modulation of angiogenesis
WO2009133142A1 (en) * 2008-04-29 2009-11-05 Pharnext New therapeutic approaches for treating alzheimer disease and related disorders through a modulation of cell stress response
WO2010085352A2 (en) * 2009-01-22 2010-07-29 Neurotherapeutics Pharma, Inc. Bumetanide, furosemide, piretanide, azosemide, and torsemide analogs, compositions and methods of use

Family Cites Families (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4742054A (en) * 1982-11-23 1988-05-03 Naftchi Nosrat E Treatment of mammals suffering from damage to the central nervous system
US5486530A (en) * 1991-04-27 1996-01-23 Boehringer Mannheim Gmbh Use of torasemide for the treatment of brain oedemas
FR2722989B1 (fr) * 1994-07-29 1997-05-30 Synthelabo Utilisation de l'ifenprodil et de ses enantiomeres pour la preparation de medicaments utiles dans le traitement des neuropathies peripheriques et des maladies neurodegeneratives centrales
AU2002316231A1 (en) 2002-02-19 2003-09-29 Xenoport, Inc. Methods for synthesis of prodrugs from 1-acyl-alkyl derivatives and compositions thereof
PT1660440E (pt) 2003-08-20 2012-05-15 Xenoport Inc Pró-fármacos de aciloxialquilcarbamato, métodos de síntese e utilização
EP1716115B1 (en) 2003-12-30 2013-02-27 XenoPort, Inc. Synthesis of acyloxyalkyl carbamate prodrugs and intermediates thereof
WO2008086492A1 (en) 2007-01-11 2008-07-17 Xenoport, Inc. Sustained release oral dosage forms of a prodrug of r-baclofen and methods of treatment
US20090082464A1 (en) 2007-09-07 2009-03-26 Bernd Jandeleit Externally masked neopentyl sulfonyl ester cyclization release prodrugs of acamprosate, compositions thereof, and methods of use
TW200924747A (en) 2007-09-07 2009-06-16 Xenoport Inc Simple pantoic acid ester neopentyl sulfonyl ester cyclization release prodrugs of acamprosate, compositions thereof, and methods of use
TW200932734A (en) 2007-10-15 2009-08-01 Xenoport Inc Internally masked neopentyl sulfonyl ester cyclization release prodrugs of acamprosate, compositions thereof, and methods of use
WO2009061934A1 (en) 2007-11-06 2009-05-14 Xenoport, Inc. Use of prodrugs of gaba b agonists for treating neuropathic and musculoskeletal pain
EP2065038A1 (en) 2007-11-30 2009-06-03 Pharnext New therapeutic approaches for treating Charcot-Marie-Tooth disease
US20100137442A2 (en) 2008-02-01 2010-06-03 Xenoport, Inc. Sustained Release Particulate Oral Dosage Forms of (R)-Baclofen and Methods of Treatment
WO2009096985A1 (en) 2008-02-01 2009-08-06 Xenoport, Inc. Sustained release particulate oral dosage forms of (r)-baclofen prodrugs and methods of treatment
EP2135607A1 (en) 2008-06-18 2009-12-23 Pharnext Combination of pilocarpin and methimazol for treating Charcot-MarieTooth disease and related disorders
EP2403486A1 (en) 2009-03-03 2012-01-11 XenoPort, Inc. Sustained release oral dosage forms of an r-baclofen prodrug
EP2419401A2 (en) 2009-04-17 2012-02-22 XenoPort, Inc. GAMMA-AMINO-BUTYRIC ACID DERIVATIVES AS GABAb RECEPTOR LIGANDS
WO2011011692A2 (en) * 2009-07-24 2011-01-27 Stc.Unm Methods of treating and preventing/reducing the likelihood of mesial temporal lobe epilepsy (tle)
CN101632665B (zh) * 2009-09-01 2011-08-17 严洁 一种托拉塞米口服药物组合物
EP2322163A1 (en) 2009-11-03 2011-05-18 Pharnext New therapeutics approaches for treating alzheimer disease
UA113165C2 (xx) * 2011-03-01 2016-12-26 Застосування комбінації баклофену і акампросату для лікування неврологічних захворювань та композиція, яка містить баклофен і акампросат
DK2560631T3 (da) * 2011-03-01 2014-02-10 Pharnext Baclofen- og acamprosat-baseret af neurologiske forstyrrelser

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5677344A (en) * 1990-07-19 1997-10-14 E. R. Squibb & Sons, Inc. Method for treating Parkinson's disease employing an ATP-sensitive potassium channel blocker
WO1992019245A1 (de) * 1991-04-27 1992-11-12 Boehringer Mannheim Gmbh Verwendung von torasemid zur behandlung von hirnödemen
US20060276411A1 (en) * 2002-03-20 2006-12-07 University Of Maryland, Baltimore Novel non-selective cation channel in neuronal cells and methods for treating brain swelling
CN101365451A (zh) * 2005-11-21 2009-02-11 阿拉巴马大学董事会 使用小分子化合物用于神经保护的方法
WO2008046014A1 (en) * 2006-10-12 2008-04-17 Remedy Pharmaceuticals, Inc. Treatment of alzheimer's disease using compounds that reduce the activity of non-selective ca++- activated atp-sensitive cation channels regulated by sur1 receptors
WO2009000406A1 (en) * 2007-06-22 2008-12-31 Bayer Healthcare Ag Use of antibodies against the cd52 antigen for the treatment of neurological disorders, particularly transmissible spongiform encephalopathy and alzheimer's disease
WO2009133128A1 (en) * 2008-04-29 2009-11-05 Pharnext Combination compositions for treating alzheimer disease and related disorders with zonisamide and acamprosate
WO2009133141A2 (en) * 2008-04-29 2009-11-05 Pharnext New therapeutic approaches for treating alzheimer disease and related disorders through a modulation of angiogenesis
WO2009133142A1 (en) * 2008-04-29 2009-11-05 Pharnext New therapeutic approaches for treating alzheimer disease and related disorders through a modulation of cell stress response
WO2010085352A2 (en) * 2009-01-22 2010-07-29 Neurotherapeutics Pharma, Inc. Bumetanide, furosemide, piretanide, azosemide, and torsemide analogs, compositions and methods of use

Non-Patent Citations (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CARTER M D; SIMMS G A; WEAVER D F: "The development of new therapeutics for Alzheimer's disease", CLINICAL PHARMACOLOGY AND THERAPEUTICS, NATURE PUBLISHING GROUP, US, vol. 88, no. 4, 1 January 2010 (2010-01-01), US, pages 475 - 486, XP009149444, ISSN: 0009-9236, DOI: 10.1038/clpt.2010.165 *
GLEN THOMAS SAWYER: "Treatment of Multiple Sclerosis with Tolbutamide", JAMA, vol. 174, 1 October 1960 (1960-10-01), pages 470 - 473, XP055033178, ISSN: 00987484, DOI: 10.1001/jama.1960.03030050012004 *
HEWITT KIMBERLEY E; STYS PETER K; LESIUK HOWARD J: "The use-dependent sodium channel blocker mexiletine is neuroprotective against global ischemic injury", BRAIN RESEARCH, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 898, no. 2, 20 April 2001 (2001-04-20), AMSTERDAM, NL, pages 281 - 287, XP009164465, ISSN: 0006-8993, DOI: 10.1016/S0006-8993(01)02195-3 *
ISAMU YOSHITAKE, EL-BANAYOSY ALY, YODA MASATAKA, HATA MITSUMASA, SEZAI AKIRA, NIINO TETSUYA, WAKUI SHINJI, KOERFER REINER, MINAMI : "First Clinical Application of the DuraHeart Centrifugal Ventricular Assist Device for a Japanese Patient", ARTIFICIAL ORGANS, BLACKWELL SCIENCE, vol. 33, no. 9, 1 September 2009 (2009-09-01), pages 763 - 766, XP055000961, ISSN: 0160564X, DOI: 10.1111/j.1525-1594.2009.00902.x *
KAPTANOGLU ERKAN; CANER HAKAN; SOLAROGLU IHSAN; KILINC KAMER: "Mexiletine treatment-induced inhibition of caspase-3 activation and improvement of behavioral recovery after spinal cord injury.", JOURNAL OF NEUROSURGERY. SPINE, AMERICAN ASSOCIATION OF NEUROLOGICAL SURGEONS, US, vol. 3, no. 1, 1 July 2005 (2005-07-01), US, pages 53 - 56, XP009164469, ISSN: 1547-5654, DOI: 10.3171/spi.2005.3.1.0053 *
LEE, K.H. ; YOON, D.H. ; CHUNG, M.A. ; SOHN, J.H. ; LEE, H.J. ; LEE, B.H.: "Neuroprotective effects of mexiletine on motor evoked potentials in demyelinated rat spinal cords", NEUROSCIENCE RESEARCH., ELSEVIER, SHANNON., IR, vol. 67, no. 1, 1 May 2010 (2010-05-01), IR, pages 59 - 64, XP027014848, ISSN: 0168-0102 *
LEONARDO KAPURAL, LOKEY KRISTI, LEONG MICHAEL S., FIEKOWSKY SHARON, STANTON-HICKS MICHAEL, SAPIENZA-CRAWFORD ANNE J., WEBSTER LYNN: "Intrathecal Ziconotide for Complex Regional Pain Syndrome: Seven Case Reports", PAIN PRACTICE, BLACKWELL SCIENCE, vol. 9, no. 4, 1 July 2009 (2009-07-01), pages 296 - 303, XP055009163, ISSN: 15307085, DOI: 10.1111/j.1533-2500.2009.00289.x *
NISHIYAMA K., SAKUTA M.: "MEXILETINE FOR PAINFUL ALCOHOLIC NEUROPATHY.", INTERNAL MEDICINE., JAPANESE SOCIETY OF INTERNAL MEDICINE, TOKYO., JP, vol. 34., no. 06., 1 June 1995 (1995-06-01), JP, pages 577 - 579., XP002913454, ISSN: 0918-2918 *
NISTIC� ROBERT; PICCIRILLI SILVIA; SEBASTIANELLI L; NISTIC� GIUSEPPE; BERNARDI G; MERCURI N B: "The blockade of K(+)-ATP channels has neuroprotective effects in an in vitro model of brain ischemia.", INTERNATIONAL REVIEW OF NEUROBIOLOGY., ACADEMIC PRESS, LONDON., GB, vol. 82, 1 January 2007 (2007-01-01), GB, pages 383 - 395, XP009161198, ISSN: 0074-7742 *
NOBUAKI EGASHIRA, HIRAKAWA SHINGO, KAWASHIRI TAKEHIRO, YANO TAKAHISA, IKESUE HIROAKI, OISHI RYOZO: "Mexiletine Reverses Oxaliplatin-Induced Neuropathic Pain in Rats", JOURNAL OF PHARMACOLOGICAL SCIENCES, JAPANESE PHARMACOLOGICAL SOCIETY, vol. 112, no. 4, 1 January 2010 (2010-01-01), pages 473 - 476, XP055043849, ISSN: 13478613, DOI: 10.1254/jphs.10012SC *
OZKAN ATES ; SULEYMAN R. CAYLI ; EYUP ALTINOZ ; NESLIHAN YUCEL ; AYHAN KOCAK ; OZCAN TARIM ; AKIF DURAK ; YUSUF TURKOZ ; SAIM YOLO: "Neuroprotective effect of mexiletine in the central nervous system of diabetic rats", MOLECULAR AND CELLULAR BIOCHEMISTRY, KLUWER ACADEMIC PUBLISHERS, BO, vol. 286, no. 1-2, 16 March 2006 (2006-03-16), Bo, pages 125 - 131, XP019403479, ISSN: 1573-4919, DOI: 10.1007/s11010-005-9102-6 *
ROGER H UNGER, LEONARD L. MADISON AND NORMAN W. CARTER: "Tolbutamide-Phenformin in Ketoacidosis-Resistant Patients", JAMA, vol. 174, no. 17, 1 January 1960 (1960-01-01), pages 2132 - 2136, XP055032787, ISSN: 00987484, DOI: 10.1001/jama.1960.03030170022005 *
S SATYANARAYANA, NITIN M AND PRASAD K: "Pharmacodynamic and Pharmacokinetic Drug Interaction of Mexiletine with Tolbutamide in Rabbits", INDIAN JOURNAL OF PHARMACEUTICAL EDUCATION AND RESEARCH, vol. 45, no. 1, 1 January 2011 (2011-01-01), pages 40 - 45, XP055032786, ISSN: 00195464 *
WING, MINERS: "Cotrimoxazole as an inhibitor of oxidative drug metabolism: effects of trimethoprim and sulphamethoxazole separately and combined on tolbutamide disposition.", BRITISH JOURNAL OF CLINICAL PHARMACOLOGY, vol. 20, no. 5, 1 November 1985 (1985-11-01), pages 482 - 485, XP055032788, ISSN: 03065251, DOI: 10.1111/j.1365-2125.1985.tb05102.x *
WPI / Thomson Week 200762, 31 May 2007 Derwent World Patents Index; XP002661053, CALDWELL G A; CALDWELL K A; CAO S: "Prevention of neurodegeneration and neuronal loss associated with protein misfolding or aggregation or reactive oxygen species associated with e.g. Alzheimer's disease, comprises administering small molecule compound to mammal" *
ZHAO W , WANG J, HO L, ET AL: "Identification of antihypertensive drugs which inhibit amyloid-[beta] protein oligomerization", JOURNAL OF ALZHEIMER'S DISEASE, IOS PRESS, NL, vol. 16, no. 1, 1 January 2009 (2009-01-01), NL, pages 49 - 57, XP002643365, ISSN: 1387-2877, DOI: 10.3233/jad-2009-0925 *

Also Published As

Publication number Publication date
EP2680836B1 (en) 2018-06-13
NZ614267A (en) 2015-07-31
CN108420819A (zh) 2018-08-21
ES2690490T3 (es) 2018-11-21
ZA201306038B (en) 2014-10-29
EA201300975A1 (ru) 2014-02-28
KR101918669B1 (ko) 2018-11-15
UA113165C2 (xx) 2016-12-26
CN103608007A (zh) 2014-02-26
JP6328428B2 (ja) 2018-05-23
SG11201405336VA (en) 2014-09-26
CA2828763C (en) 2020-07-21
KR102014883B1 (ko) 2019-10-21
KR20140041457A (ko) 2014-04-04
ES2635872T3 (es) 2017-10-05
MX360871B (es) 2018-11-16
BR112013022102A2 (pt) 2018-06-26
HK1258223A1 (zh) 2019-11-08
AU2012222348A1 (en) 2013-09-05
ZA201406913B (en) 2016-03-30
WO2012117073A2 (en) 2012-09-07
SG192970A1 (en) 2013-09-30
HK1245650A1 (zh) 2018-08-31
AU2012222348B2 (en) 2017-05-25
IL234023A0 (en) 2014-09-30
WO2013127917A1 (en) 2013-09-06
KR20150002642A (ko) 2015-01-07
UA115968C2 (uk) 2018-01-25
MX2019011905A (es) 2019-11-25
IL234023B (en) 2018-10-31
EP2680836A2 (en) 2014-01-08
IL228176A (en) 2017-10-31
CA2828763A1 (en) 2012-09-07
WO2012117073A3 (en) 2013-01-10
MX2013010044A (es) 2014-02-17
JP2014506909A (ja) 2014-03-20
DK2819664T3 (en) 2017-08-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10434109B2 (en) Compositions for treating neurological disorders
AU2017210501B2 (en) Baclofen and acamprosate based therapy of neurological disorders
AU2012222348B2 (en) New compositions for treating neurological disorders
US9931326B2 (en) Composition comprising torasemide and baclofen for treating neurological disorders
IL256992A (en) Treatment of neurological disorders based on baclofen and acamprosate
NZ614267B2 (en) New compositions for treating neurological disorders
NZ614184B2 (en) Baclofen and acamprosate based therapy of neurogical disorders

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU