EA032403B1 - Лентивирусные векторы, псевдотипированные гликопротеином оболочки вируса синдбис - Google Patents

Abstract

Представлены лентивирусные векторные частицы, способные инфицировать дендритные клетки, включающие оболочку, содержащую вариант гликопротеина E2 вируса Синдбис, и лентивирусный векторный геном, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую антиген. Кроме того, представлены фармацевтические композиции для иммунизации указанным антигеном, содержащие указанные лентивирусные частицы и фармацевтически приемлемый носитель.

Description

Настоящее изобретение относится к лентивирусной векторной частице, способной инфицировать дендритные клетки, включающей:

(a) оболочку, содержащую вариант гликопротеина Е2 вируса Синдбис, идентичный по меньшей мере на 90% аминокислотной последовательности 8ЕС ГО N0: 1, в которой: (1) остаток в положении 160 отсутствует или является остатком аминокислоты, отличной от глутаминовой кислоты, (и) остаток в положении 70 является неосновным остатком, причем вариант гликопротеина Е2 не является частью гибридного белка с гликопротеином Е3 вируса Синдбис; и (b) лентивирусный векторный геном, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую антиген.

В одном из вариантов осуществления изобретения указанный вариант гликопротеина Е2 связывается с ПС-81СК

Еще один вариант осуществления изобретения относится к лентивирусной векторной частице, в которой остаток в положении 160 является остатком глицина, аланина, валина, лейцина или изолейцина, предпочтительно, где остаток в положении 160 является остатком глицина.

В следующем варианте осуществления изобретения аминокислотная последовательность указанного варианта гликопротеина Е2 состоит из аминокислотных остатков 66-488 последовательности 8ЕС ГО N0: 3, аминокислотных остатков 66-488 последовательности 8ЕС ГО N0: 4 или аминокислотных остатков 66-486 последовательности 8 ЕС ГО N0: 5, или идентична указанным аминокислотным остаткам по меньшей на мере на 95%.

В одном из вариантов осуществления изобретения указанный антиген представляет собой опухолеспецифичный антиген или вирусный антиген, в частности опухолеспецифичный антиген представляет собой карбоангидразу IX, N¥^80-1, МАСЕ, ВАСЕ, ВАСЕ, МАК.Т-1/Ме1ап-Л. др100, др75, тба-7, тирозиназу, тирозиназа-связанный белок, 5Т4, 8М22-а, карбоангидразу I, ΗΙΡ-1α, ΗΙΡ-2α, Р8МА, Р8А, 8ТЕАР или НКХ3.1, а вирусный антиген представляет собой антиген Ηΐν, антиген 8ΐν, антиген аденовируса, антиген энтеровируса, антиген коронавируса, антиген калицивируса, антиген вируса собачьей чумки, антиген вируса Эбола, антиген флавивируса, антиген вируса гепатита, антиген вируса герпеса, антиген вируса инфекционного перитонита, антиген вируса гриппа, антиген вируса лейкемии, антиген вируса марбургской болезни, антиген ортомиксовируса, антиген вируса папилломы, антиген вируса парагриппа, антиген парамиксовируса, антиген парвовируса, антиген пестивируса, антиген пикорнавируса, антиген полиовируса, антиген поксвируса, антиген вируса бешенства, антиген реовируса, антиген ретровируса или антиген ротавируса.

В следующем варианте изобретения лентивирусный векторный геном лентивирусной векторной частицы имеет инактивированный 3' длинный терминальный повтор (ЬТВ) или самоинактивирующийся 3' длинный терминальный повтор (ЬТВ), в частности, лентивирусный векторный геном содержит И3 элемент, не имеющий энхансерной последовательности, ТАТА-бокса, сайта 8р1, сайта НК-кВ и/или полипуринового тракта (РРТ).

Настоящее изобретение также относится к лентивирусной векторной частице, в которой лентивирусный векторный геном содержит И3 элемент, не имеющий энхансерной последовательности, ТАТАбокса, сайта 8р1, сайта ПК-кВ и/или полипуринового тракта (РРТ), или в которой лентивирусный векторный геном содержит любую из нуклеотидных последовательностей 8ЕС ГО N0: 21, 22 или 23. Кроме того, лентивирусный векторный геном может дополнительно содержать нуклеотидную последовательность, кодирующую фактор созревания/стимуляции дендритных клеток, при этом, в частности, фактор созревания/стимуляции дендритных клеток представляет собой СМ-С8Е, 1Ь-2, 1Ь-4, 1Ь-6, 1Ь-7, 1Ь-15, 1Ь21, 1Ь-23, ТМ% В7.1, В7.2, 4-1ВВ, СЭ40-лиганд или индуцируемый лекарствами СЭ40.

Кроме того, лентивирусная векторная частица по изобретению характеризуется тем, что экспрессия нуклеотидной последовательности, кодирующей антиген, контролируется промотором, который представляет собой промотор Убиквитина-С человека (ЦЫС), немедленно-ранний промотор цитомегаловируса (СМ’У), промотор вируса саркомы Рауса (Β8ν) и реагирующий на тетрациклин промотор.

В одном из вариантов изобретения лентивирусная векторная частица характеризуется тем, что лентивирусный векторный геном дополнительно содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую второй антиген.

В другом варианте изобретения лентивирусная векторная частица характеризуется тем, что остаток

- 4 032403 в положении 76 является неосновным остатком, или остаток в положении 159 является неосновным остатком или отсутствует.

В следующем аспекте настоящее изобретение относится к лентивирусной векторной частице, способной инфицировать дендритные клетки, включающей:

(a) оболочку, содержащую вариант гликопротеина Е2 вируса Синдбис, идентичный по меньшей мере на 90% аминокислотной последовательности 8ЕЭ ΙΌ N0: 1, в которой:

(ί) остаток в положении 160 отсутствует или является остатком аминокислоты, отличной от глутаминовой кислоты, (ίί) остаток в положении 70 заменен остатком глутаминовой кислоты или аспарагиновой кислоты, (ΐϊϊ) остаток в положении 159 заменен остатком глутаминовой кислоты или аспарагиновой кислоты;

(ίν) остатки в положениях 71-75 являются неизмененными; причем вариант гликопротеина Е2 не является частью гибридного белка с гликопротеином Е3 вируса Синдбис; и (b) лентивирусный векторный геном, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую антиген, в частности, где остаток в положении 160 заменен остатком глицина, остаток в положении 159 заменен остатком глутаминовой кислоты, остаток в положении 70 заменен остатком глутаминовой кислоты, причем лентивирусный векторный геном содержит ЬТВ, не имеющий полипуринового тракта (РРТ).

В следующем аспекте настоящее изобретение относится к лентивирусной векторной частице, способной инфицировать дендритные клетки, содержащей:

(a) оболочку, содержащую вариант гликопротеина Е2 вируса Синдбис, образованный остатками 66488 аминокислотной последовательности 8ЕЭ ΙΌ N0: 3, причем вариант гликопротеина Е2 не является частью гибридного белка с гликопротеином Е3 вируса Синдбис; и (b) лентивирусный векторный геном, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую антиген.

В одном варианте осуществления изобретения лентивирусный векторный геном лентивирусной векторной частицы содержит нуклеотидную последовательность 8ЕЭ ΙΌ N0: 21, или нуклеотидную последовательность 8ЕЭ ΙΌ N0: 22, или нуклеотидную последовательность 8ЕЭ ΙΌ N0: 23.

В следующем аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для иммунизации антигеном, содержащей лентивирусные частицы по изобретению, которые кодируют указанный антиген, и фармацевтически приемлемый носитель.

В одном из вариантов осуществления изобретения фармацевтическая композиция содержит лентивирусные частицы, имеющие МЕ по меньшей мере 10⁵/мл.

В следующем варианте осуществления изобретения фармацевтическая композиция дополнительно содержащая иммуностимулирующий агент или адъювант.

Эти и другие аспекты настоящего изобретения станут очевидными после ссылки на последующее детальное описание и прилагаемые фигуры. Кроме того, заявка на патент США № 61/228491, поданная на регистрацию 24 июля 2009 г., включена сюда в качестве ссылки в полном объеме для всех целей.

Краткое описание фигур

На фиг. 1 представлена последовательность белка оболочки из четырех оболочек вируса Синдбиса, БУСти, БШ-УагЕ БШ-Уаг2 и БШ-Уаг3. Последовательность показана в сравнении с 8У6ши, описанной ранее оболочки Синдбиса. Основные отличия от БУСти включают регенерацию фуриноподобной протеазы сайта расщепления (К8КК; БЕЭ ΙΌ N0: 27) между Е3 и Е2, удаление НА эпитопной метки и серии замен лизина для уменьшения связывания гепарина.

Фиг. 2 является схемой приведенных в качестве примера векторов, используемых для упаковки вирусных частиц.

На фиг. 3 представлен график титров неочищенного супернатанта препаратов лентивирусных векторных частиц, в которых векторный геном был псевдотипирован тремя различными белками оболочки вируса Синдбиса, БУСти и БШ-НЕ. Супернатанты вируса были получены путем транзиентной трансфекции с использованием стандартных методов и собраны через 48 ч после трансфекции. Титры определялись на клетках 293Т, экспрессирующих человеческий ЭС-БЮН (293Т-ОС-8ЮН). Титры выражаются как число СЕР-экспрессирующих единиц на 1 мл супернатанта и являются средними величинами трех независимых трансфекций. Планки погрешностей представляют стандартное отклонение от среднего.

Фиг. 4А, 4В и 4С являются графиками, показывающими иммунологический ответ Т-клеток мышей, следующий за введением псевдотипированных лентивирусных векторных частиц. (А) Мыши С57ВЬ/6 были иммунизированы подкожно одной или двумя дозами (показано на ид р24) лентивирусного вектора с интеграционным дефектом, кодирующего 0УА. Число и функция 0УА257-специфичных СЭ8 Т-клеток в селезенке определялись на 9 день с помощью МНСЧ/пептидного мультиметра и внутриклеточного окрашивания цитокинов. (В) Мыши С57ВЬ/6 были иммунизированы подкожно различными дозами лентивирусного вектора с интеграционным дефектом, кодирующего 0УА. Процент 0УА257-специфичных СЭ8 Т-клеток в селезенке определялся на 11 день с помощью окрашивания МНСЧ/пепдидного мультиметра. (С) Мыши С57ВЬ/6 были иммунизированы подкожно различными дозами лентивирусного вектора с интеграционным дефектом, кодирующего 0УА. Процент 0УА257-специфичных С.П8 Т-клеток в

- 5 032403 селезенке определялся на 9 день с помощью внутриклеточного окрашивания цитокинов.

На фиг. 5А представлены изображения приведенных в качестве примера лентивирусных геномов. Фиг. 5В представляет последовательности региона ИЗ трех векторных конструктов. (А) Элементы, содержащиеся во всех лентивирусных векторах, показаны сверху в приведенном в качестве примера векторном геноме. Использованные промоторы включают промотор Убиквитина-С человека (ЦЫС), цитомегаловируса немедленно-ранний промотор (СМУ) или промотор вируса саркомы Рауса (ВЕУ). В дополнение к стандартному региону ИЗ ΕΙΝ показаны серии обширных делеций. Выравнивания последовательностей регионов ИЗ из всех 3 векторов показаны на (В). Показанная последовательность включает полипуриновый участок (РРТ), который удален в конструкте 704, и обширную делецию ИЗ, представленную как в 703, так и в 704 конструктах.

Фиг. 6А и 6В показывают экспрессию СВР из лентивирусного вектора, следующую за трансдукцией клеток 293Т. На фиг. 6А СВР был оперативно связан с ИЫС промотором, и на фиг. 6В, СВР был оперативно связан с СМУ промотором. Уровни экспрессии СВР были определены по лентивирусным векторам с дефицитом интегразы через 48 ч после трансдукции клеток 293Т, экспрессирующих ЭС-ЕИСМ СВР экспрессия в трансдуцированных клетках определялась по стандартным цитометрическим проточным методам; с каждого пула трансдуцированных клеток было собрано 50000 единиц для определения средних уровней экспрессии.

Фиг. 7 показывает число СВР позитивных клеток за пять проходов. Клетки были трансдуцированы различными векторными препаратами, и каждый проход длился 72 ч. Относительные СВР титры определялись в культурах клеток 293Т, трансдуцированных различными МГУ конструктами. Векторы были упакованы с использованием или интегразы дикого типа (ΙΝ+), или Э64У мутантной интегразы (ΙΝ-), и использованы для трансдуцирования 293 клеток, экспрессирующих ЭС-ЕЮМ Трансдуцированные клеточные культуры затем анализировались каждые 72 ч в течение 15 дней. На каждом проходе число СВР+ клеток в культуре определялось с использованием стандартных методов проточной цитометрии. Исчезновение СВР экспрессии во время прохода указывает на исчезновение векторных эписом за это время.

Фиг. 8 показывает реакцию СЭ8 Т-клеток, следующую за введением интегрированного (ΙηΓ¹) или неинтегрированного (1пГ^64У) лентивирусных векторов. Мыши С57ВЬ/6 были иммунизированы подкожно 2,5*10¹⁰ геномами интегрированных (ΙηΓ⁴) или неинтегрированных (Ιηΐ^ϋ64ν) лентивирусных векторов, кодирующих Сад антиген из вируса иммунодефицита обезьян (ВИО). Число антиген-специфичных Тклеток в селезенке и их профиль цитокиновой секреции определялись на 10 день путем внутриклеточного окрашивания цитокинов.

Фиг. 9 представляет график, показывающий размер опухоли у мышей, получивших или пустой наполнитель, или вирусные частицы, кодирующие опухолевый антигент (левый график) и процент выживаемости (правый график). Мышам ВАЬВ/е было введено подкожно 2Л0⁴ клеток СТ26 карциномы кишечника. Через день мышам подкожно ввели или наполнитель, или 3,2 мкг (р24 капсул) ДК-нацеленного неинтегрирующегося лентивирусного вектора (ПС-МЬУ), кодирующего пептид АН1А5 (8Р8УАУНОВ; 8ЕО ΙΌ ΝΟ: 25), модифицированный эпитоп Т-клеток СЭ8 СТ26. Изображены первичный рост опухоли и долговременное выживание вакцинированных мышей по сравнению с контрольными.

Детальное описание

Настоящее раскрытие сущности изобретения представляет способы и композиции для проникновения в дендритные клетки (ДКл) с использованием лентивирусных векторных частиц (например, вирион, лентивирусная частица) для доставки целевой последовательности в ДКл. Лентивирусная векторная частица содержит вариант гликопротеина оболочки, полученный из Е2 вируса Синдбис, и геном, который содержит целевую последовательность, и необязательно другие компоненты. Вариант гликопротеина показывает уменьшенное связывание гепарансульфата по сравнению с НВ, референсным штаммом вируса Синдбис. Гликопротеин оболочки облегчает инфицирование дендритных клеток лентивирусными векторными частицами. Облегченное инфицирование при использовании в настоящем документе означает то же самое, что и облегченная трансдукция, и относится к роли гликопротеина оболочки, действующему в одиночку или во взаимодействии с другими молекулами, способствуя или улучшая рецепторопосредованный вход псевдотипированного ретровируса или лентивирусной частицы в клетку-мишень.

Как правило, лентивирусные векторные частицы вырабатываются клеточной линией, которая содержит один или более плазмидных векторов и/или интегрированных элементов, которые вместе кодируют компоненты, необходимые для производства функциональных векторных частиц. Эти лентивирусные векторные частицы обычно не являются компетентными к репликации, то есть они способны лишь к одному циклу инфицирования. Чаще всего множественные плазмидные векторы или отдельные кассеты экспрессии, стабильно интегрированные в хромосомы клетки-продуцента, используются для отделения различных генетических компонентов, которые вырабатывают лентивирусные векторные частицы, однако можно использовать один плазмидный вектор, имеющий все лентивирусные компоненты. В одном иллюстративном примере упаковочная клеточная линия трансфицируется одной или более плазмидой, содержащей вирусный векторный геном, включая ЬТВк, действующую в цис-положении упаковочную последовательность и целевую(ые) последовательность(и), по меньшей мере одну плазмиду, кодирующую энзимные и структурные компоненты вируса (например, дад и ро1), и по меньшей мере одну плаз

- 6 032403 миду, кодирующую гликопротеин оболочки арбовируса. Вирусные частицы проникают сквозь клеточную мембрану и содержат ядро, которое обычно включает два РНК-генома, содержащие целевую последовательность, и гликопротеин оболочки арбовируса, который связывается с дендритными клетками. Если гликопротеин арбовируса является гликопротеином Е2 вируса Синдбис, гликопротеин конструируется так, чтобы он обладал пониженным связыванием с гепарансульфатом по сравнению с референсным штаммом НВ. Это обычно включает по меньшей мере одну аминокислотную замену по сравнению с последовательностью гликопротеина Е2 НВ.

Не ограничиваясь теорией, считается, что связывание вирусной частицы с клеточной поверхностью вызывает эндоцитоз, доставку вируса в эндосому, запуск слияния с мембраной и дает возможность ядру вируса войти в цитозоль. В определенных вариантах воплощения изобретения, в которых используются интегрированные лентивирусные векторные частицы, с последующей реверсной транскрипцией и миграцией продукта в ядро, геном вируса интегрируется с геномом клетки-мишени, встраивая целевую последовательность(и) в геном клетки-мишени. Однако, чтобы снизить вероятность инсерционного мутагенеза и содействовать транзиентной экспрессии определенного(ых) антигена(ов), в других вариантах воплощения изобретения используются неинтегрирующие векторные частицы, которые не интегрирутся с геномом клетки-мишени, но, напротив, экспрессируют целевые последовательность(и) из эписомы. Так или иначе, инфицированная ДК затем экспрессирует целевую(ые) последовательность(и), например, антиген, стимулирующую молекулу.

Антиген затем может обрабатываться дендритными клетками и презентироваться Т- и В-клеткам, вызывая антиген-специфичный иммунный ответ. Специфичный путь, описанный выше, не требуется, пока дендритная клетка способна стимулировать антиген-зависимый иммунный ответ.

Вирусные частицы могут вводиться пациенту для того, чтобы обеспечить профилактический или терапевтический эффект. Продукт целевой последовательности обычно является антигеном к вызывающему болезнь агенту или больной клетке (например, опухолевой клетке). Вслед за инфицированием дендритных клеток и экспрессией продукта вырабатывается иммунная реакция на продукт. Иммунная реакция может быть гуморальной, или клеточной, или и той, и другой.

А. Оболочка вирусного вектора.

Переносимые членистоногими вирусы (арбовирусы) - это вирусы, которые передаются хозяину, такому как люди, лошади или птицы, путем инфицирования членистоногим-переносчиком, таким как москит. Арбовирусы подразделяются на подсемейства вирусов, включая альфавирусы и флавивирусы, которые имеют однонитевый РНК-геном позитивной полярности и гликопротеинсодержащую оболочку. Например, вирус лихорадки Денге, вирус желтой лихорадки и вирус Западного Нила относятся к семейству флавивирусов, а вирус Синдбис, вирус леса Семлики и вирус венесуэльского энцефалита лошадей являются членами семейства альфавирусов (Шаид с1 а1. Т У1го1. 66, 4992 (1992)). Оболочка вируса Синдбис включает два трансмембранных гликопротеина (Микйорабйуау с1 а1. №1игс Веу. МкгоЫо. 3, 13 (2005)): Е1, который, как считается, отвечает за гибридизацию, и Е2, который, как считается, отвечает за связывание клеток. Известно, что гликопротеины оболочки вируса Синдбис псевдотипируют другие ретровирусы, включая онкоретровирусы и лентивирусы.

Как обсуждалось выше, гликопротеин оболочки арбовируса может быть использован для псевдотипирования векторного генома на лентивирусной основе. Псевдотипированный лентивирус является лентивирусной частицей, имеющей один или более гликопротеинов оболочки, которые кодируются вирусом, отличным от лентивирусного генома. Гликопротеин оболочки может быть модифицирован, мутирован или сконструирован, как описано в настоящем документе.

Оболочка вируса Синдбис и других альфавирусов встроена в липидный бислой мембраны вирусной частицы и обычно включает множественные копии двух гликопротеинов, Е1 и Е2. Каждый гликопротеин имеет проникающие через мембрану регионы; Е2 имеет цитоплазматический домен из около 33 остатков, тогда как цитоплазматический хвост Е1 очень короткий (около 2 остатков). Как Е1, так и Е2 имеют пальмовые кислоты, присоединенные в проникаюшем через мембрану регионе или около него. Е2 первоначально синтезируется как белок-предшественник, который расщепляется фурином или другой Са2+зависимой сериновой протеиназой на Е2 и маленький гликопротеин, называемый Е3. Между последовательностями, кодирующими Е2 и Е1, расположена последовательность, кодирующая белок, называемый 6К. Е3 и 6К являются сигнальными последовательностями, которые служат для транслокации Е2 и Е1 гликопротеинов, соответственно, в мембрану. В геноме вируса Синдбис кодирующий регион для белков оболочки Синдбис включает последовательность, кодирующую Е3, Е2, 6К и Е1. При использовании в настоящем документе оболочка вируса арбовируса обязательно включает Е2 и может также включать Е1, 6К и Е3. Служащая примером последовательность гликопротеинов оболочки вируса Синдбис, штамм НВ, представлена как ЗЕО Ш N0: 17. Последовательности гликопротеинов оболочки для других арбовирусов могут быть найдены, например, в ОеиВаик. Например, последовательность, кодирующую гликопротеины вируса Денге, можно найти в поступлении 00252677 (в числе прочих в ОеиВаик) и в базе данных вариаций вирусов в NСВI (поступления в ОеиВаик и вариации вирусов включены посредством ссылки на последовательности гликопротеинов оболочки) и последовательность, кодирующую гликопротеин оболочки вируса энцефалита лошадей в поступлении ΝΡ 040824 (включенный посредством

- 7 032403 ссылки на последовательности гликопротеинов оболочки).

Хотя клеточный(е) рецептор(ы) дендритных клеток для альфавирусов и вируса Синдбис в первую очередь к настоящему времени точно не определены, один рецептор, по-видимому, является ΌΟ-8ΙΟΝ (К11т81та е! а1., 1. νίτοί. 77: 12022, 2003). Термины присоединение, связывание, нацеливание и т.п. используются взаимозаменяемо, и не подразумевается, что они указывают на механизм взаимодействия между гликопротеином оболочки вируса Синдбис и клеточным компонентом. ΌΟ-8ΙΟΝ (специфичные для дендритных клеток 1САМ-3 (молекулы внутриклеточной адгезии 3)-захватывающий неинтегрин; также известен как СЭ209 является лектин-подобным рецептором С-типа, способным к быстрому связыванию и эндоцитозу материалов (6еу1епЬеек, Т.В., е! а1. Аппи. Веу. 1ттипо1. 22: 33-54, 2004). Видимо, Е2 нацеливает вирус на дендритные клетки благодаря ИС-БЮХ Как показано в настоящем документе, клетки, экспрессирующие ИС-Б1СХ трансдуцируются вирусными векторными частицами, псевдотипированными Е2 вируса Синдбис, лучше (по меньшей мере в 2 раза, по меньшей мере в 3 раза, по меньшей мере в 4 раза, по меньшей мере в 5 раз, по меньшей мере в 6 раз, по меньшей мере в 7 раз, по меньшей мере в 8 раз, по меньшей мере в 9 раз или по меньшей мере в 10 раз лучше) чем изогенные клетки, которые не экспрессируют ИС-БЮХ Видимо, механизм того, как Е2 гликопротеин способствует вирусному проникновению, включает ИС-Б1СХ возможно благодаря прямому связыванию с ί.'-8Ι6Ν или из-за изменения в конформации, или по какому-то другому механизму. Вне зависимости от действительного механизма лучше связываются с Е2 клетки, экспрессирующие ИС-БЮ^ называемые дендритными клетками.

По-видимому, вирус Синдбис также связывается с клетками посредством гепарансульфата (К11т81та е! а1., 1. νίτο1. 72: 7357, 1998; Вигтек апб Спйш, 1. νίτο1. 72: 7349, 1998). Поскольку гепарансульфат и другие глюкозамингликаны клеточной поверхности обнаруживаются на поверхности большинства типов клеток, желательно уменьшить взаимодействие между гепарансульфатом и гликопротеинами оболочки Синдбис. Этого можно достигнуть путем уменьшения связывания оболочки вируса Синдбис с гепарансульфатом или путем усиления связывания, например, усиления авидности, оболочки вируса Синдбис с дендритными клетками или обоими способами. В результате уменьшается неспецифичное связывание с другими молекулами, которое может проявляться другими типами клеток и которое может происходить даже если оболочка специфична для ИС-БЮ^ и усиленная специфичность может служить во избежание нежелательных побочных эффектов, таких как побочные эффекты, которые могут уменьшить желательный иммунный ответ, или побочных эффектов, связанных с ненацеленной трансдукцией других клеточных типов. Альтернативно или в дополнение к преимуществам сравнительно специфичной трансдукции клеток, экспрессирующих ИС-БЮ^ вирусные частицы, псевдотипированные Е2 гликопротеином оболочки вируса Синдбис, могут давать другие преимущества перед вирусными частицами, псевдотипированными гликопротеинами, такими как VБVС. Примеры таких преимуществ включают уменьшенный комплимент-опосредованный лизис и/или уменьшенное связывание с нейрональными клетками, и предполагается, что и то, и другое связано с введением VБV-С псевдотипированных вирусных частиц.

В различных иллюстративных примерах лентивирусные векторные частицы специфически связываются с клетками, экспрессирующими ИС-Б1СХ и обладают уменьшенным или отсутствующим связыванием с гепарансульфатом. Таким образом, Е2 гликопротеин оболочки вируса Синдбис может быть модифицирован предпочтительно для направления вируса к дендритным клеткам, которые экспрессируют ИС-БЮ^ по сравнению с другими клеточными типами. Основываясь на информации, полученной из структурных исследований, и молекулярном моделировании, различные последовательности белков оболочки, особенно Е2 и Е1 гликопротеины, были разработаны и произведены таким образом, чтобы гликопротеин сохранил свои функции белка оболочки, но имел заданную специфичность связывания, авидности или уровня связывания. Возможные варианты последовательностей могут быть созданы для каждого белка и исследованы с использованием способов, описанных ниже, или других способов, известных специалистам в данной области для идентификации гликопротеинов оболочки с наиболее желательными характеристиками.

Определенные варианты последовательностей Синдбис Е2 имеют по меньшей мере одно аминокислотное изменение в остатке 160 по сравнению с БЕО 1И ΝΟ: 1. Остаток 160 удален или заменен на аминокислоту, отличную от глютаминовой кислоты. Изменение чаще всего является заменой по меньшей мере одной аминокислоты, но альтернативно может быть добавлением или делецией одной или более аминокислот. Предпочтительно любые дополнительные аминокислоты немногочисленны и не содержат антигенный эпитоп (например, гематогглютина маркерная последовательность), что может быть небезопасным. Если есть два или более изменения, они оба могут быть или одинакового типа (например, замена), или различных типов (например, замена и делеция). Множественные изменения могут быть разбросаны по последовательности белка или расположены рядом.

В первом случае варианты последовательностей содержат по меньшей мере одно аминокислотное изменение в участке примерно от 50 до 180 остатка. Внутри этого участка есть аминокислоты, которые участвуют в связывании с гепарансульфатом. Можно уменьшить электростатическое взаимодействие с гепарансульфатом путем уменьшения положительного заряда Е2, что приводит к уменьшению связывания с гепарансульфатом. Возможные положительно заряженные аминокислоты в этом участке включают

- 8 032403 лизин в остатках 63, 70, 76, 84, 97, 104, 129, 131, 133, 139, 148, 149, 159 и аргинин в остатках 65, 92, 128, 137, 157, 170, 172 (Веаг е! а1., У1го1о§у 347: 183-190, 2006). По меньшей мере, несколько из этих аминокислот непосредственно участвуют в связывании Е2 с гепарансульфатом. Положительный заряд может быть уменьшен путем делеции лизина или аргинина или замены лизина или аргинина на нейтрально или отрицательно заряженную аминокислоту. Например, один или более из этих лизинов или аргининов может быть заменен глютаминовой или аспарагиновой кислотами. Некоторые варианты воплощения изобретения имеют по меньшей мере одну замену лизина 70, 76 или 159. В случаях, когда Е2 экспрессируется как полипротеин с Е3, лизин, расположенный рядом с природным сайтом расщепления Е3/Е2, сохраняется, таким образом, последовательность распознавания и сайт расщепления остается неизменным. Альтернативно, природная последовательность сайта расщепления эндопептидазы заменяется на последовательность распознавания для другой эндопептидазы.

Определенные варианты Е2 также модифицируются способом, который положительно влияет на связывание с дендритными клетками. Изменение в глютаминовой кислоте, обнаруживаемое в остатке 160 в референсной НК последовательности, может улучшить связывание с дендритными клетками (см. публикацию Сагбпег е! а1., 1. У1го1. 74, 11849, 2000, включенную сюда в полном объеме). Изменения, такие как делеция остатка 160 или замена остатка 160, обнаруживаются в некоторых вариантах. В определенных вариантах незаряженная аминокислота заменяется на С1и. в других вариантах некислая аминокислота заменяется на С1и. Обычно С1и160 заменяется на одну из маленьких или алифатических аминокислот, включая глицин, аланин, валин, лейцин или изолейцин.

Другие варианты включают два или более аминокислотных изменения. Обычно в этих вариантах одним из изменений является 61и160, а оставшееся(иеся) изменение(я) - изменения в одном или более лизинов и аргининов в участке проникающих оснований примерно от 50 до 180. Определенные варианты включают изменение С1и160 на некислый остаток или делецию и одно или более изменений в лизине 70, лизине 76 или лизине 159 на неосновную аминокислоту. Некоторые специфические варианты включают замену 61и160 на 61у, Ьу§ 70 на 61и и Ьу§ 159 на 61и; 61и 160 на 61у, Ьу§ 70, 76 и 159 на 61и; делецию 61и 160 и замену Ьу§ 70 и 159 на 61и и делецию 61и 160 и замену Ьу§ 70, 76, и 159 на 61и.

В некоторых случаях Е2 белок вначале экспрессируется как полипротеин в соединении, по меньшей мере, с Е3 или в соединении с лидирующей последовательностью. Безотносительно того, является ли лидирующая последовательность Е3 или другой лидирующей последовательностью, Е2 в вирусной оболочке должен быть свободен от Е3 или другой лидирующей последовательности. Другими словами, Е2 предпочтительно не является белком слияния Е3/Е2 (например, белком слияния Е3/Е2, называемым 8У6ти). В некоторых вариантах воплощения Е2 экспрессируется как часть полипротеина Е3-Е2-6К-Е1. Вирус Синдбис в природе экспрессирует Е2 как часть полипротеина, и участки связывания для Е3/Е2, Е2/6К и 6К/Е1 имеют последовательности, распознаваемые и расщепляемые эндопептидазами. Обычно соединение Е3/Е2 расщепляется фурином или фуриноподобной сериновой эндопептидазой между остатками 65 и 66. Фурин обладает специфичностью к парным аргининовым остаткам, разделенным двумя аминокислотами. Чтобы сохранить расщепление Е3/Е2 фурином, остатки 62-66 (К8КК8; 8ЕЦ Ш N0: 26) должны сохранять два аргининовых остатка с двумя разделенными аминокислотами и сериновым остатком. Альтернативно, другая расщепляемая последовательность может быть использована вместо Е3/Е2 расщепляемой фурином последовательности или любых других расщепляемых последовательностей. Могут быть вставлены сайты распознавания и расщепления для эндопептидаз, включая, но не ограничиваясь, эндопептидазы аспарагиновой кислоты (например, катепсин И, химозин, ВИЧ протеаза), эндопептидазы цистеина (бромелаины, папаин, кальпаин), металлоэндопептидазы, (например, коллагеназа, термолизин), сериновые эндопептидазы (например, химотрипсин, фактор 1Ха, фактор X, тромбин, трипсин), стрептокиназы. Последовательности сайтов распознавания и расщепления для этих энзимов хорошо известны.

Могут быть также изменены другие аминокислоты в Е2, отличные от уже упомянутых. Как правило, вариант последовательности Е2 будет иметь последовательность аминокислот, по меньшей мере на 80% идентичную референсаной Е2 последовательности, или может иметь последовательность, идентичную по меньшей мере на 82%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 87%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 98%. Вариант гликопротеина должен демонстрировать биологическую функцию, такую как способность облегчать инфицирование дендритных клеток вирусной частицей, имеющей оболочку, содержащую Е2. Эксперименты идентифицировали участки в гликопротеинах оболочки, которые, по видимости, играют важную роль в различных аспектах вирусной сборки, присоединения к клеточной поверхности и инфицирования. При создании вариантов в качестве руководства может использоваться следующая информация. Цитоплазматический хвост Е2 - остатки приблизительно от 408 до 415 - важен для вирусной сборки (^е§! е! а1. 1. У1го1. 80: 4458-4468, 2006; включен в полном объеме). Другие участки задействованы в формировании вторичной структуры (приблизительно остатки 33-53) и участвуют в транспортировке и стабильности белка (приблизительно остатки 86-119) (№уага1тага)а11 е! а1., 1. У1го1. 363: 124-147, 2007; включен в полном объеме). Вариант может сохранять гидрофобный характер участка, который проникает через мембрану, приблизительно остатки 370-380. Вариант может сохранять один или оба Ν-связанных сайта гли

- 9 032403 колизации ΝΙΤ (остатки 196-198) и ΝΕΤ (остатки 318-320) и может сохранять один или более пальмитоилированных сайтов (С-396, С416 и С417) (§1гаи88 аий 81гаи55 МюгоЬю1 Ксу 58, 491-562, 1994; с. 499-509 включены). С другой стороны, многие участки Е2 могут быть изменены без какого-либо вреда. Например, после вставок транспозонов во многие различные районы Е2 вирусы сохраняют жизнеспособность Щауага1тага)ай, там же).

В некоторых вариантах воплощения в Е3, 6К или Е1 белки может быть вставлен маркерный пептид. Для определенных целей маркер может быть вставлен в Е2, но маркер нежелателен для использования в продукте, предназначенном для введения людям. Маркерный пептид, который является короткой последовательностью (например, 5-30 аминокислот), может быть использован для улучшения детекции экспрессии оболочки и ее наличия в вирусных частицах. Для целей детекции маркерная последовательность обычно обнаруживается антителами или химическими реагентами. Другое использование маркера улучшение очистки вирусных частиц. Для абсорбции вируса может использоваться субстрат, содержащий связывающий партнер для маркера. Элюция вируса может быть выполнена обоработкой частицами, которые замещают маркер от связывающего партнера, или если маркерная последовательность находится в связи с расщепляемой последовательностью, то воздействие соответствующей эндопептидазой позволит удобно высвободить вирус (см., например, О|;щсп са1а1од. Рас1ог Ха Рго1са5С Зуйет). Удаление маркерного пептида в основном желательно для целей безопасности использования вирусных частиц у пациентов, являющихся животными. Если маркер не удалять, может появиться иммунный ответ на маркер.

Подходящие маркеры включают, не ограничиваясь, ЕЬАС (ΌΎΚΌΌΌΌΚ) (И.8. Ра1еШ № 4703004, включен в полном объеме), антитела для которого доступны в продаже, хитинсвязывающий белок, мальтозасвязывающий белок, глютатион-8-трансфераза, поли(Нк) (патент США № 4569794, включен в полном объеме), тиоредоксин, НА (гемагглютинин)-маркер, в числе прочего. Поли(Нк) можно адсорбировать на аффинную среду, содержащую связанные ионы металла, например никеля или кобальта, и элюировать средой с низким рН.

Вирусные частицы могут быть измерены для определения специфичности гликопротеина оболочки, встроенного в вирус, к целевым дендритным клеткам. Например, смешанная популяция клеток костного мозга может быть извлечена из пациента и культивироваться ίη уйго. Альтернативно, могут быть получены и использованы изогенные клеточные линии, которые экспрессируют или не экспрессируют ЭС8ΙΟΝ. Рекомбинантный вирус может вводиться в смешанную популяцию клеток костного мозга или изогенных клеточных линий, и экспрессия репортерного гена, встроенного в вирус, может быть оценена в культивируемых клетках. В некоторых вариантах воплощения изобретения могут использоваться анализы с предельным разведением, в которых смешанная популяция клеток разделяется на отдельные части, которые затем раздельно инкубируются с уменьшающимися количествами вируса (например, 2-кратное, 5-кратное, 10-кратное разведение вируса в каждой части). В некоторых вариантах воплощений изобретения по меньшей мере около 50%, более предпочтительно по меньшей мере около 60, 70, 80 или 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере около 95% инфицированных клеток в смешанной клеточной популяции являются дендритными клетками, которые экспрессируют ΌΟ-8ΙΟΝ. В некоторых вариантах воплощения изобретения соотношение инфицированных дендритных клеток к инфицированным недендритным клеткам (или не ΌΟ-8ΙΟΝ экспрессирующим клеткам) составляет по меньшей мере около 2:1, по меньшей мере около 3:1, по меньшей мере около 4:1, по меньшей мере около 5:1, по меньшей мере около 6:1, по меньшей мере около 7:1, по меньшей мере около 8:1, по меньшей мере около 9:1, по меньшей мере около 10:1, по меньшей мере около 20:1, по меньшей мере около 30:1, по меньшей мере около 40:1, по меньшей мере около 50:1, по меньшей мере около 100:1, по меньшей мере около 200:1, по меньшей мере около 500:1, по меньшей мере около 1000:1, по меньшей мере около 5000:1, по меньшей мере около 10000:1 или более. Для предельного разведения обычно наблюдается более высокая избирательность у более сильных разведений (например, более низкие количества) внесенного вируса.

Активность псевдотипированных вирусных частиц может определяться по любому из возможных способов. Например, предпочитаемым способом оценки инфекционной эффективности (МЕ, инфекционные единицы) является введение вирусных частиц в клетки и оценка экспрессии продукта, кодируемого в векторном геноме. Может использоваться любой продукт, который можно оценить. Одним подходящим типом продукта является флюоресцентный белок, такой как зеленый флюоресцентный белок (ОЕР). СЕР и анализ приведены в примерах, таких как пример 3. Другие продукты, которые можно использовать, включают белки, экспрессируемые на клеточной поверхности (например, детекция путем присоединения антител), энзимы и тому подобное. Если продукт является антигеном, и клетки являются дендритными клетками, инфекционность/активность могут оцениваться путем определения иммунного ответа. Более того, возможно обнаружить побочный эффект у млекопитающих. Способность специфично поражать дендритные клетки также может быть тестирована напрямую, например, в клеточной культуре, как описано ниже.

Вирусные частицы могут также быть приготовлены и тестированы по их селективности и/или по их способности улучшать проникновение в мембрану целевых клеток. Вирусные частицы, которые имеют оболочку с немодифицированными гликопротеинами, могут использоваться как контроль для сравнения.

- 10 032403

Коротко говоря, клетки, экспрессирующие рецептор для гликопротеина оболочки, инфицируются вирусом с использованием стандартного инфекционного исследования. После определенного времени, например через 48 ч после инфицирования, клетки могут быть собраны и процент клеток, инфицированных вирусом, можно определить, например, проточной цитометрией. Селективность может быть оценена путем подсчета процента клеток, инфицированных вирусом. Подобным образом действие варианта гликопротеина оболочки на вирусный титр может быть подсчитано путем сравнения процента клеток, инфицированных вирусом, содержащим вариант оболочки, с процентом клеток, инфицированных вирусом, содержащим соответствующий дикий тип (немодифицированный) гликопротеина оболочки. Особенно подходящий вариант будет иметь лучшую комбинацию селективного и инфекционного титра. Когда вариант выбран, может быть осуществлен анализ концентрации вируса для подтверждения того, что эти вирусы можно концентрировать без потери активности. Вирусные супернатанты собираются и концентрируются ультрацентрифугированием. Титры вирусов можно определять предельным разведением вирусного маточного раствора и инфицированием клеток, экспрессирующих рецептор для гликопротеина оболочки, подсчитывая экспрессию продукта, экспрессируемого вирусами, как описано выше.

Вход лентивирусной векторной частицы в целевую клетку является другим типом подсчета активности. В1аМ-Ург (β-лактамазе Ург) гибридный белок используется для оценки ШУ-1 вирусного проникновения; гибридизация В1аМ и гликопротеина оболочки вируса Синдбис, такого как гибридный белок Е1 или Е2/Е1, может использоваться для оценки эффективности белка оболочки в облегчении гибридизации и проникновения в целевую клетку. Вирусные частицы могут быть приготовлены, например, путем транзиентной трансфекции упакованных клеток с одним или более векторами, содержащими вирусные элементы, В1аМ-Ург, и вариантом интересующей оболочки (и аффинной молекулы, если это соответствует). Получившийся в результате вирус может использоваться для инфицирования клеток, экспрессирующих целевую молекулу (или аффинную молекулу), специфично связывающуюся в отсутствие или в присутствии свободного ингибитора связывания (такого как антитело). Клетки затем можно промыть С0₂независимой средой и окрасить ССЕ2 красителем (Аигога Вюктепсе). После инкубации при комнатной температуре для того, чтобы реакция расщепления прошла полностью, клетки можно фиксировать параформальдегидом и анализировать путем проточной цитометрии и микроскопии. Процент голубых клеток указывает на проникновение вирусов в цитоплазму; малое количество голубых клеток будет ожидаться при добавлении блокирующего антитела (С’аугоД е1 а1. Вю1ес11по1 20: 1151-1154, 2002; включен в полном объеме).

Чтобы исследовать, зависит ли пенетрация от низкого рН, и идентифицировать гликопротеины оболочки с желаемой рН-зависимостью, можно добавить на этапе инфицирования МН₄С1 или другие компоненты, которые изменяют рН (N4^1 нейтрализует кислые компартменты эндосом). В случае N4^0 отсутствие голубых клеток будет указывать на то, что пенетрация вирусами имеет низкую рН-зависимость. Кроме того, для подтверждения того, что активность является рН-зависимой, лизосомотрофные агенты, такие как аммония хлорид, хлорохин, конканамицин, бафиломицин А1, моненсин, нигерицин и т. д., могут быть добавлены в инкубационный буфер. Эти агенты повышают рН внутри эндосомальных компартментов (например, Эгоке апй АНепйогЕ Т Ехр. Вю1. 200, 1-8, 1997). Ингибирующее действие этих агентов будет показывать действие рН на вирусную гибридизацию и проникновение. Можно сравнить различную кинетику проникновения между вирусами, демонстрирующими различные фузогенные молекулы, и наиболее подходящие выбрать для определенного применения.

РСК-основанный анализ проникновения можно использовать для мониторинга обратной транскрипции и оценки кинетики синтеза вирусной ДНК как показателя кинетики вирусного проникновения. Например, вирусные частицы, содержащие определенную белковую молекулу оболочки, инкубируются с целевыми клетками, такими как 293Т клетки, ДКл, или любыми другими клетками, которые сконструированы для экспрессирования, или которые естественным образом экспрессируют подходящий связывающий партнер (рецептор) для белковой молекулы оболочки. Либо немедленно, либо через некоторое время (чтобы дать инфекции возможность проявиться) несвязавшиеся вирусы удаляются и аликвоты клеток анализируются на вирусные нуклеиновые кислоты. ДНК экстрагируется из этих аликвот и подвергается анализу амплификации, обычно полуколичественным методом, с затравкой ЬТКспецифичными праймерами. Появление ЬТК-специфичного ДНК-продукта показывает успешность вирусного проникновения.

В. Лентивирусный векторный геном.

Вирусная векторная частица содержит геном, который содержит интересующую(ие) последовательность(и). Могут включаться другие последовательности, такие как последовательности, которые позволяют геному упаковываться в вирусную частицу, и последовательности, которые активизируют экспрессию интересующей(их) последовательности(ей), после чего следует трансдукция целевой клетки. Геном может быть получен из любого из множества подходящих доступных основанных на лентивирусном геноме векторов, включая идентифицированные для применения в генной терапии человека, такие как описаны в публикации РГейсг апй Уегта (Аппи. Кеу. Сепот1С5 Нит. Сепе1. 2:177-211, 2001; включена путем ссылки в полном объеме). С целью упрощения такой геном также называется вирусным векторным геномом или векторным геномом.

- 11 032403

1. Основная цепь.

Подходящие лентивирусные векторные геномы включают основанные на вирусе иммунодефицита человека (ВИЧ-1), ВИЧ-2, вирус иммунодефицита кошачьих (ВИК), вирус инфекционной анемии у лошадей, вирус иммунодефицита обезьян (ВИО) и вирус меди-висна. Желаемой характеристикой лентивирусов является их способность инфицировать как делящиеся, так и неделящиеся клетки, и для целевых клеток не является необходимым состояние деления (или стимуляция целевых клеток к делению). В основном, геном и гликопротеины оболочки базируются на различных вирусах, и получившаяся в результате вирусная векторная частица является псевдотипированной. Желательно включить в векторный геном свойства, обеспечивающие безопасность. Свойства, обеспечивающие безопасность, включают самоинактивацию ЬТК и неинтеграцию в геном. Векторы, приведенные в качестве примера, обсуждаются в дальнейшем в примере 5 и на фиг. 5, и такие векторы можно использовать в воплощениях изобретения для экспрессии интересующих антигенов.

В некоторых примерах воплощений вирусный векторный геном содержит последовательности из лентивирусного генома, такие как ВИЧ-1 геном или ВИО геном. Конструкт вирусного генома может содержать последовательности из 5' и 3' ЬТК лентивируса, и в особенности может содержать Я и И5 последовательности из 5' ЬТЯ лентивируса и инактивированных или самоинактивированных 3' ЬТЯ из лентивируса. ЬТЯ последовательности могут быть ЬТЯ последовательностями из любого лентивируса любого вида. Например, они могут быть ЬТЯ последовательностями из ВИЧ, ВИО, ВИК или БВИ. Обычно ЬТЯ последовательности являются ВИЧ ЬТЯ последовательностями.

Векторный геном может содержать инактивированные или самоинактивированные 3' ЬТЯ (ΖιιΓίοϊΌν е! а1. 1. У1го1. 72: 9873, 1998; М1уо§Ы е! а1., 1. У1го1. 72:8150, 1998; и то, и другое включено в полном объеме). Самоинактивирующийся вектор обычно имеет делецию энхансерной и промотерной последовательностей из 3' длинного терминального повтора (ЬТЯ), который копируется в 5' ЬТЯ во время векторной интеграции. В одном случае, И3 элемент 3' ЬТЯ содержит делецию в энхансерной последовательности, ТАТА-бокс, Зр1 и ΝΡ-кВ сайтах. В результате самоинактивации 3' ЬТЯ провирус, который образуется после проникновения и обратной транскрипции, будет содержать инактивированную 5' ЬТЯ. Рационально повышать безопасность путем уменьшения риска мобилизации векторного генома и влияния ЬТЯ на соседние клеточные промоторы. Самоинактивация 3' ЬТЯ может быть создана по любому способу, известному специалистам в данной области.

Необязательно, И3 последовательность из лентивирусной 5' ЬТЯ может быть замещена промоторной последовательностью в вирусном конструкте, таком как гетерологичная промоторная последовательность. Это может повышать титр вируса, полученного из упаковочной клеточной линии. Также может быть включена энхансерная последовательность. Может быть использована любая комбинация энхансер/промотор, которая повышает экспрессию вирусного РНК генома. В одном примере используется СМУ последовательность энхансер/промотор (ИЗ 5385839 и ИЗ 5168062, каждый из которых включен в полном объеме).

В некоторых воплощениях риск инсерционного мутагенеза минимизируется путем конструирования лентивирусного векторного генома с интеграционным дефектом. Для производства неинтегрирующегося векторного генома могут использоваться различные подходы. Эти подходы включают разработку мутации(й) в интегразном энзимном компоненте ро1 гена, такие как кодировку белка с инактивной интегразой. Сам векторный геном может быть модифицирован для предотвращения интеграции, например, путем мутации или делеции одного или обоих сайтов присоединения, или путем создания нефункционального 3' ЬТЯ-проксимального полипуринового тракта (РРТ) благодаря делеции или модификации. Кроме того, возможны негенетические подходы; они включают фармакологические агенты, которые ингибируют одну или более функций интегразы. Подходы не исключают друг друга, то есть одновременно может быть использован более чем один. Например, и интеграза, и сайты присоединения могут быть нефункциональны, или интеграза и РРТ сайт могут быть нефункциональны, или сайты присоединения и РРТ сайт могут быть нефункциональны, или все они могут быть нефункциональны.

Как утверждалось выше, в одном подходе создается и используется нефункциональная интеграза. Интеграза задействована в расщеплении вирусной двунитевой ДНК без липких концов и присоединении концов к 5'-фосфатазам в двух нитях хромосомного целевого домена: Ν-терминального домена, который содержит цинксвязывающий мотив (ННСС), сердцевину центрального домена, которая содержит каталитическое ядро и консервативный ЭЭ35Е мотив (Ό64, Ό116, Е152 в ВИЧ-1), и С-концевой домен, который обладает ДНК-связывающими свойствами. Точечных мутаций, вставленных в интегразу, достаточно для разрушения нормальной функции. Многие мутации в интегразе созданы и охарактеризованы (см., Р1н1ро(( апб Тйгакйег, Нитап Сепе Тйегару 18:483, 2007; Аро1оша, Тйеык 8иЬтй!еб !о ишуегебу Со11еде Ьопбоп, Аргй 2009, с. 82-97; Епде1тап е! а1. 1. У1го1. 69: 2729, 1995; №дйбпда1е е! а1. Мо1. Тйегару, 13: 1121, 2006; все включены в полном объеме). Последовательность, кодирующая интегразный белок, может быть удалена или мутирована для возмещения белковой неактивности, предпочтительно без значительно ослабленной активности обратной транскриптазы или нуклеиновой нацеленности, тем самым предотвращая интеграцию провируса в геном целевой клетки. Приемлемые мутации могут уменьшать интегразный катализ, перенос цепи, связывание с а!! сайтами, связывание с хромосомальной ДНК хозяи

- 12 032403 на и другие функции. Например, одна аспарагиновая кислота для аспарагинового замещения в остатке 35 у ВИЧ или ВИО интегразы полностью аннулирует вирусную ДНК-интеграцию. Делеции в интегразе обычно подтверждаются С-концевым доменом. Делеция кодирующей последовательности для остатков 235-288 дает в результате пригодную нефункциональную интегразу. (Епде1тап с1 а1. 1. У1го1. 69:2729, 1995). В дальнейших примерах мутации могут быть сделаны, например, Азр64 (номера остатков даются для ВИЧ-1, соответствующие номера остатков для интегразы из других лентивирусов или ретровирусов могут быть легко определены специалистами в данной области) (например, И64Е, И64У), Азр116 (например, И116Щ, Ази120 (например, Ш20К), С1и152, С1п148 (например, Р148А), Ьув156, Ьув159, Тгр235 (например, \У235Е). Ьуз264 (например, К264Е), Ьуз266 (например, К266Е), Ьуз273 (например, К273Е). Другие мутации могут быть созданы и протестированы в отношении интеграции, трансгенной экспрессии и любого другого желаемого параметра. Анализы этих функций хорошо известны. Мутации могут быть созданы при помощи любой из множества техник, включая сайт-направленный мутагенез и химический синтез нуклеиновой последовательности. Может быть произведена одна мутация, или же в интегразе может присутствовать больше одной из подобных мутаций. Например, в интегразе могут быть мутации по двум аминокислотам, трем аминокислотам, четырем аминокислотам и так далее.

Альтернативно или в комбинации с использованием мутанта(ов) по интегразе, сайты присоединения (ай) в И3 и И5 также могут быть мутированы. Интеграза связывает эти сайты, и 3'-терминальный динуклеотид расщепляется на обоих концах векторного генома. СА динуклеотид локализуется в 3' конце; СА требуется для процессинга, мутация нуклеотидов блокирует интегацию в хромосомы хозяина. А в СА динуклеотиде является самым критичным нуклеотидом для интеграции, и мутации на обоих концах генома дадут лучшие результаты. (Вго^и е1 а1. 1. Уйо1. 73:9011 (1999). В одном примере СА на каждом конце изменяется на ТС. В других примерах СА на каждом конце изменяется на ТС на одном конце и на СТ на другом конце. В других примерах СА на каждом конце удаляется; в других примерах А в СА удаляется на каждом конце.

Интеграция также может ингибироваться путем мутации или делеции полипуринового тракта (РРТ) (\У0 2009/076524; включен в полном объеме), локализованного проксимально к 3' ЬТК. РРТ является полипуриновой последовательностью из около 15 нуклеотидов, которая может служить связывающим праймер сайтом для плюс-нити ДНК-синтеза. В этом случае мутации или делеции РРТ нацелены на процесс обратной транскрипции. Не привязываясь к определенному механизму, мутации или делеции РРТ, образование линейной ДНК радикально уменьшается и образуются практически только 1-ЬТК ДНКкольца. Интеграция требует линейного двухнитевого ДНК векторного генома, и интеграция практически исчезает без него. Как утверждалось выше, РРТ может быть создан нефункциональным путем мутации или делеции. Обычно осуществляется делеция всей 15 п1 РРТ, хотя в некоторых вариантах воплощения могут быть сделаны более короткие делеции 14 пк 13, пк 12 пк 11 пк 10 пк, 9 пк, 8 пк, 7 пк, 6 пк, 5 пк, 4 пк, 3 пк и 2 пк. При осуществлении мутаций обычно осуществляются множественные мутации, обычно в 5' половине РРТ (Мс^1Шат8 ек а1., I. Уйо1. 77:11150, 2003), хотя одиночные и двойные мутации в первых четырех основаниях тоже уменьшают транскрипцию. Мутации, сделанные на 3'-конце РРТ, обычно имеют более выраженный эффект (Ро\уе11 аи4 Бетт 1. У1го1. 70:5288, 1996).

Такие различные подходы к созданию неинтегрирующегося векторного генома могут использоваться по отдельности или в комбинации. Применение более чем одного подхода может быть использовано для конструирования надежного безопасного вектора с помощью избыточного механизма. Таким образом, РРТ мутации или делеции могут комбинироваться с мутациями или делециями акк сайта или с мутацией интегразы или РРТ мутации или делеции можно комбинировать с мутациями акк сайта или делециями и мутациями интегразы. Подобным образом, мутации акк сайта или делеции и мутации интегразы могут комбинироваться друг с другом или с РРТ мутациями или делециями.

2. Регуляторные элементы.

Как обсуждалось в настоящем документе, вирусный векторный геном содержит интересующую последовательность, экспрессия которой желаема в клетках-мишенях. Обычно интересующая последовательность локализуется между 5' ЬТК и 3' ЬТК последовательностями. Далее интересующая последовательность предпочтительно находится в функциональном родстве с другими генетическими элементами, например, последовательностями, регулирующими транскрипцию, включая промоторы или энхансеры, для регуляции экспрессии интересующей последовательности особым образом. В некоторых случаях используемыми транскрипционными регуляторными последовательностями являются те, которые высокорегулируемы при сохранении активности как во времени, так и в пространстве. Контролирующие экспрессию элементы, которые могут быть использованы для регуляции экспрессии компонентов, известны специалистам и включают, не ограничиваясь, индуцируемые промоторы, конститутивные промоторы, секреционные сигналы, энхансеры и другие регуляторные элементы.

Интересующая последовательность и любые другие экспрессируемые последовательности обычно состоят в функциональном родстве с внутренними промоторными/энхансерными регуляторными последовательностями. Внутренним промотором/энхансером является тот, который локализован между 5' ЬТК и 3' ЬТК последовательностями в вирусном векторном конструкте и функционально связан с интересующей последовательностью. Внутренним промотором/энхансером может быть любой промотор,

- 13 032403 энхансер или комбинация промотор/энхансер, известная как увеличивающая экспрессию гена, с которым есть функциональное родство. Функциональное родство и функционально связана означают, не ограничиваясь этим, что последовательность находится в правильном местоположении и ориентации по отношению к промотору и/или энхансеру таким образом, что интересующая последовательность будет экспрессироваться, когда промотор и/или энхансер контактирует с соответствующими молекулами.

Выбор внутреннего промотора/энхансера основан на желаемом способе экспрессии интересующей последовательности и на специфических свойствах известных промоторов/энхансеров. Таким образом, внутренний промотор может быть конститутивно активным. Неограничивающие примеры конститутивных промоторов, которые могут быть использованы, включают промотор для убиквитина (публикации и8 5510474; \У0 98/32869, каждая из которых включена в настоящий документ в полном объеме путем ссылки), СМV (публикации Тйоткеп е! а1., РNА8 81:659, 1984; И8 5168062, каждая из которых включена в настоящий документ в полном объеме путем ссылки), β-актин (публикация Сипшпд е! а1. 1989 Ргос. №И. Асаб. 8с1. И8А 84:4831-4835, включена в настоящий документ в полном объеме путем ссылки) и рдк (см., например, публикации Абга е! а1. 1987 Сепе 60:65-74; 8тдег-8ат е! а1. 1984 Сепе 32:409-417; и ЭоЬкоп е! а1. 1982 №.1с1е1с Ас1бк Век. 10:2 635-2 637, все вышеперечисленные публикации включены в настоящий документ в полном объеме путем ссылки).

Альтернативно промотор может быть тканеспецифичным промотором. В некоторых предпочтительных вариантах воплощения промотор является целевым тканеспецифичным промотором. Например, промотор может происходить из любого продукта, экспрессируемого дендритными клетками, включая СЮ 11с, СВ103, ТЬВк, ОС^КА', ВВСА-3, ВЕС-205, ВС1В2, рецептор маннозы, Весбп-1, С1ес9А, МНС с1аккП. Кроме того, промоторы могут быть избраны для допущения индуцируемой экспрессии интересующей последовательности. Число систем для индуцируемой экспрессии, известных специалистам в данной области, включают систему тетрациклиновой реакции, систему 1ас оператор-репрессор, а также промоторы, реагирующие на множество внешних или физиологических изменений, включая тепловой шок, ионы металлов, такие как металлотионеина промотор, интерфероны, гипоксию, стероиды, такие как промотор рецептора к прогестерону или глюкокортикоиду, излучение, такой как АЕСЕ промотор. Комбинация промоторов также может быть использована для получения желаемой экспрессии интересующего гена. Специалист со стандартным набором навыком может выбрать промотор, основываясь на желаемом способе экспрессии гена в организме или целевой клетке.

Вирусный геном может содержать по меньшей мере один промотор, реагирующий на РНК полимеразу II или III. Этот промотор может быть функционально связан с интересующей последовательностью и может также быть связан с терминальной последовательностью. Кроме того, может быть встроен более чем один промотор РНК полимерезы II или III. Промоторы РНК полимеразы II и III хорошо известны специалистам в данной области. Список подходящих промоторов РНК полимеразы III можно найти, например, в публикации Раи1е апб ХУййе, М.1с1е1с Аабк Векеагсй., νο1. 28, рр. 1283-1298 (2000), которая включена в настоящий документ путем ссылки в полном объеме. Промоторы РНК полимеразы II или III также включают любые синтетические или сконструрованные фрагменты ДНК, которые могут направлять РНК полимеразу II или III транскрибировать правосторонние РНК-кодирующие последовательности. Затем могут индуцироваться промотор или промоторы РНК-полимеразы II или III (Ро1 II или III), используемые как часть вирусного векторного генома. Любой подходящий индуцируемый промотор Ро1 II или III может использоваться со способами настоящего изобретения. Особенно пригодные промоторы Ро1 II или III включают реагирующие на тетрациклин промоторы, представленные в публикациях 0йка\\'а апб Тапа, Нитап Сепе Тйегару, ^1. 11, с. 577-585 (2000) и Ме1ккпег е! а1. М.1с1е1с Ас1бк Векеагсй, Vο1. 29, с. 1672-1682 (2001), каждая из которых включена в настоящий документ путем ссылки в полном объеме.

Внутренний энхансер может также быть представлен в вирусном конструкте для увеличения экспрессии интересующего гена. Например, может быть использован СМV энхансер (публикация Вокйай е! а1. Се11, 41:521, 1985; включена в настоящий документ путем ссылки в полном объеме). Многие энхансеры в вирусных геномах, таких как ВИЧ, СМV, и геномах млекопитающих идентифицированы и охарактеризованы (см. СепВапк). Энхансер может быть использован в комбинации с гетерологичным промотором. Специалист в данной области может выбрать подходящий энхансер, основываясь на желаемом способе экспрессии.

Вирусный геном будет обычно содержать промотор, который распознается целевой клеткой и который функционально связан с интересующей последовательностью, вирусными компонентами и другими последовательностями, обсуждаемыми в настоящем документе. Промотор является контролирующим экспрессию элементом, образуемым последовательностью нуклеиновой кислоты, которая запрещает связывание РНК-полимеразы и транскрипцию. Промоторы могут быть индуцируемыми, конститутивными, временно активными или тканеспецифичными. Активность индуцируемых промоторов вызывается присутствием или отсутствием биотических или абиотических факторов. Индуцируемые промоторы могут быть полезным инструментом в генной инженерии, поскольку экспрессия генов, с которыми они функционально связаны, может включаться или выключаться на определенных стадиях развития организма, его создания, ил в определенных тканях. Индуцируемые промоторы могут группироваться как химиче

- 14 032403 ски регулируемые промоторы или физически регулируемые промоторы. Обычные химически регулируемые промоторы включают, не ограничиваясь, алкогольрегулируемые промоторы (например, промотор гена алкогольдегидрогеназы I (а1сА)), тетрациклинрегулируемые промоторы (например, промотор тетрациклинового ответа), стрероидрегулируемые промоторы (например, промотор на основе крысиного глюкокортикоидного рецептора (ОВ), промотор на основе рецептора к эстрогену человека (ЕВ), промотор на основе рецептора к экдизону моли и промоторы на основе суперсемейства рецепторов стероидов/ретиноидов/тироидов), металлрегулируемые промоторы (например, промоторы на основе гена металлотионеина), и связанные с патогенезом промоторы (напримр, АгаЬ1бор818 и кукурузы патогенсвзанные (РВ) промоторы на основе белка). Типичные физически регулируемые промоторы включают, но не ограничиваясь этим, температурорегулируемые промоторы (например, промоторы теплового шока), и светорегулируемые промоторы (например, 88И промотор соевых бобов). Другие служащие примером промоторы описаны в других источниках, например в публикации Ргото1егз изеб 1о геди1а1е депе ехргеззюп на веб-сайте Ра1еШ Ьепз, добавленной 18 мая 2009 г. (включена в настоящий документ путем ссылки в полном объеме).

Специалист в данной области может выбрать подходящий промотор, основываясь на специфических условиях. Многие различные промоторы хорошо известны специалистам, так же как способы для функциональной связи промотора с экспрессируемым геном. Как естественные промоторные последовательности, так и многие гетерологичные промоторы могут использоваться для прямой экспрессии в упаковочных клетках и целевых клетках. Однако гетерологичные промоторы предпочтительней, поскольку они обычно не допускают повышенную транскрипцию и повышенные уровни желаемого белка по сравнению с естественными промоторами.

Промотор может быть получен, например, из геномов вирусов, таких как вирус полиомы, вирус оспы кур, аденовирус, бычий вирус папилломы, вирус саркомы птиц, цитомегаловирус, ретровирус, вирус гепатита В и вирус обезьян 40 (8У40). Промотор также может быть, например, гетерологичным промотором млекопитающих, напр., промотором актина или промотором иммуноглобулина, промотором теплового шока или промотором, обычно связанным с естественной последовательностью, если такие промоторы совместимы с клеткой-мишенью. В одном варианте воплощения промотор является естественным вирусным промотором, присутствующим в вирусной системе экспрессии. В некоторых вариантах воплощения промотор является специфичным для дендритных клеток промотором. Специфичный для дендритных клеток промотор может быть, например, СЭ11с промотором.

Транскрипция может возрастать благодаря вставке энхансерной последовательности в вектор(ы). Энхансеры являются типичными цис-активными элементами ДНК, обычно примерно от 10 до 300 300 Ьр в длину, которые действуют на промотор, повышая его транскрипцию. В настоящее время известны многие энхансерные последовательности из генов млекопитающих (глобин, эластаза, альбумин, афетопротеин и инсулин) и из вирусов эукариотных клеток. примеры включают 8У40 энхансер на поздней стороне точки начала репликации (Ьр 100-270), энхансер раннего промотора цитомегаловируса, энхансер полиомы на поздней стороне точки начала репликации, и энхансер аденовируса. Энхансер может быть соединен в вектор в положении 5' или 3' с антиген-специфичной полинуклеотидной последовательностью, но предпочтительно локалиузется в положении 5' от промотора.

Векторы экспрессии также могут содержать последовательности, необходимые для терминации транскрипции и для стабилизации мРНК. Эти последовательности часто обнаруживаются в 5' и иногда 3' нетранслируемых регионах эукариотной или вирусной ДНК или кДНК и хорошо известны специалистам в данной области.

Вирусный векторный геном также может содержать добавочные генетические элементы. Типы элементов, которые могут быть включены в конструкт, не ограничиваются никаким образом и могут быть выбраны для достижения определенного результата. Например, может быть включен сигнал, который способствует нуклеотидному вхождению вирусного генома в клетку-мишень. примером такого сигнала является ВИЧ-1 флап-сигнал. Кроме того, могут быть включены элементы, облегчающие характеристику провирусного интеграционного сайта в клетке-мишени. Например, в конструкт может быть включена тРНК последовательности амбер-супрессора. В вирусный геномный конструкт может быть также включена инсуляторная последовательность, например, из куриного β-глобина. Этот элемент снижает вероятность молчания интегрированного в клетке-мишени провируса вследствие эффектов метилирования и гетерохроматинизации. Кроме того, инсулятор может защищать внутренний энхансер, промотер и экзогенный ген от позитивных и негативных позициональных эффектов из окружающей ДНК интеграционного сайта хромосомы. Кроме того, векторный геном может содержать один или более генетических элементов, разработанных для усиления экспрессии интересующего гена. Например, в конструкт может быть помещен элемент, реагирующий на вирус гепатита сурков (ШВЕ) (публикации ХиГГегеу е1 а1. 1999. 1. У1го1. 74:3668-3681; Эед1оп е! а1. 2000. Нит. Оепе Тйег. 11:179-190, каждая их которых включена в настоящий документ путем ссылки в полном объеме).

Вирусный векторный геном обычно конструируется в форме плазмиды, которую можно трансфицировать в упаковочную или производящую клеточную линии. Плазмида обычно содержит последовательности, полезные для репликации плазмиды в бактерии. Такие плазмиды хорошо известны специали

- 15 032403 стам в данной области. Кроме того, векторы, которые включают прокариотическую точку начала репликации, также могут включаться в ген, экспрессия которого подтверждается детектирующим или селектирующим маркером, таким как устойчивость к лекарствам. Типичные продукты, устойчивые к бактериальным к лекарствам, подтверждают резистентность к ампициллину или тетрациклину.

Плазмиды, содержащие один или более из компонентов, описанных в настоящем документе, легко конструируются с использованием стандартных техник, известных специалистам в данной области. Для анализа, подтверждающего правильность последовательности в сконструированной плазмиде, плазмиду можно реплицировать в Е. сой, очистить и анализировать путем рестрикционного эндонуклеазного расщепления, или же ДНК-последовательность подтверждается стандартными способами.

Можно также использовать векторы, сконструированные для транзиентной экспрессии в клетках млекопитающих. Транзиентная экспрессия включает использование вектора экспрессии, который способен эффективно реплицироваться в клетках хозяина, таким образом, в клетке хозяина аккумулируется множество копий вектора экспрессии и, в свою очередь, синтезируются высокие уровни полипептидов, кодируемых антиген-специфичным полинуклеотидом в векторе экспрессии. См. ЕатЬгоок с! а1., кирга, с. 16.17-16.22. Другие векторы и способы, подходящие для адаптации к экспрессии полипепдидов, хорошо известны специалистам в данной области и легко адаптируются к специфическим условиям.

С использованием представленных в настоящем документе техник, специалисту в данной области понятно, что эффективность определенной системы экспрессии может быть протестирована путем трансфекции упаковочных клеток в вектор, содержащий ген, кодирующий репортерный белок и оценки экспрессии с использованием подходящей техники, например, подсчета флюоресценции конъюгата белка с зеленым флюоресцентом. Подходящие репортерные гены хорошо известны специалистам в данной области.

3. Типы интересующих последовательностей.

Интересующая последовательность не имеет никаких ограничений и включает любую нуклеиновую кислоту, которую специалист желает интегрировать, транскрибировать и использовать в целевой клетке. Продукт может быть белком или нуклеиновой кислотой. Интересующая последовательность может кодировать белок или молекулу нуклеиновой кислоты, включая миРНК, микроРНК, самокомплементарную двунитевую РНК, в которой комплементарный регион больше чем 20 рибонуклеотидов в длину, или РНК, которая комплементарна смысловой РНК, где связывание вышеупомянутой комплементарной (антисмысловой) РНК со смысловой РНК блокирует ее способность транслироваться в белок. В отдельных случаях интересующая последовательность может кодировать антиген, против которого желателен иммунный ответ. В особенности желательны опухолевые антигены и антигены инфекционных болезней из таких агентов, как ВИЧ, ВПГ, НСУ, НРУ, малярия или туберкулез.

В определенных случаях интересующая последовательность может быть геном, кодирующим малую ингибирующую РНК (миРНК) или микроРНК, которые отрицательно регулируют экспрессию молекулы. Например, ген, кодирующий миРНК или микроРНК, может использоваться для отрицательного регулирования экспрессии негативных регуляторов в клетке, включая те, которые ингибируют активацию или созревание дендритных клеток. миРНК и микроРНК хорошо известны специалистам в данной области (В1ге с! а1., №11игс 391:806, 1998; см. также ТНс Κ.ΝΛ [п1сгГсгспсс Вскоигсе в Аррйсб ВюкукВтк, Тгапд с! а1., Опсодспе Еирр1 2:Е52, 2008; Тадапоу, К., с! а1. 2007. Iттишίу 26:133-137; ПаЫЬсгд, ВЕ. апб Е. Ьипб. 2007. Ес1. ЕТКЕ 387:рс25; Т1стапп апб Во881, ЕМВО Мо1. Меб. 1: 142, 2009). Альтернативно, интересующая последовательность может кодировать самокомплементарную двунитевую РНК, в которой комплементарный регион больше чем около 20 рибонуклеотидов в длину, или антисмысловую РНК, которая больше чем около 20 рибонуклеотидов в длину. Специалистам в данной области понятно, что молекулы миРНК, микроРНК, дсРНК и антисмысловой РНК могут экспрессироваться от промотора РНК полимеразы ΙΙΙ или, альтернативно, могут быть компонентом некодирующей РНК, которая транскрибируется от промотора РНК полимеразы ΙΙ.

Кроме того, интересующая последовательность может кодировать более одного продукта. В некоторых конфигурациях поставляемая последовательность может включать множество генов, кодирующих по меньшей мере один белок, по меньшей мере одну миВNА, по меньшей мере одну микроВNА, по меньшей мере одну днНВNА или по меньшей мере одну антисмысловую РНК молекулу или их комбинации. Например, поставляемая последовательность может включать один или более генов, которые кодируют один или более антигенов, на которые желателен иммунный ответ. Один или более антигенов может быть связан с одной болезнью или заболеванием, или они могут быть связаны со многими болезнями. В некоторых случаях ген, кодирующий иммунный регуляторный протеин, может быть включен в ген, кодирующий антиген, на который желателен иммунный ответ, и комбинация может вызывать и регулировать иммунный ответ в желаемом направлении и размере. В других случаях последовательность, кодирующая миРНК, микроРНК, днРНК или антисмысловые РНК молекулы, может быть сконструирована с геном, кодирующим антиген, на который желателен иммунный ответ, и комбинация может регулировать границы иммунной реакции. Продукты могут быть изготовлены как инициирующий гибридизацию продукт, в котором кодирующая последовательность находится в функциональном родстве с одним промотором. Альтернативно продукты могут кодироваться раздельно, и каждая кодирующая после

- 16 032403 довательность находится в функциональном родстве с промотором. Промоторы могут быть одинаковыми или разными.

В определенных конфигурациях векторы содержат полинуклеотидные последовательности, которые кодируют факторы созревания/стимуляции дендритных клеток. примеры стимулирующих молекул включают СМ-С8Р, Ш-2, Ш-4, Ш-6, Ш-7, Ш-15, Ш-21, Ш-23, ΤΝΡα, В7.1, В7.2, 4-1ВВ, СЭ40 лиганд (СО40Б). индуцируемый лекарствами СЭ40 (1СО40), и тому подобные. Эти полинуклеотиды обычно находятся под контролем одного или более регуляторных элементов, которые направляют экспрессию кодирующей последовательности в дендритных клетках. Созревание дендритных клеток способствует успешной вакцинации (Вапсйегеаи, 1. апб Ра1иска, А.К. Ναι. Реу. Iттиηο1. 5:296-306 (2005); 8ски1ег, С. е1 а1. Сигг. Ορίη. Iттипο1. 15:138-147 (2003); Ндбог, С.С. е1 а1. №к Меб. 10:475-480 (2004)). Созревание может трансформировать ДКл из клеток, активно включенных в антигенный захват, в клетки, специализирующиеся на стимулировании Τ-клеток. Например, встреча СЭ40 с СЭ40Б на СЭ4-хелпере Τ-клеток является ключевым сигналом для ДК созревания, приводящим к мощной активации СЭ8 Τ-клеток. Такие стимулирующие молекулы также относятся к факторам созревания или факторам, стимулирующим созревание. Иммунные контрольные точки представляют собой важный барьер для активации функционального клеточного иммунитета при раке, и антагонистические антитела, специфичные для ингибиторных лигандов Τ-клеток, включая С'ГЬА4 и программируемую гибель-1 (ΡΌ-1), являются примерами нацеленных агентов, получивших оценку в клинической практике. Важным механизмом толерантности при хронических инфекциях и раке является функциональное истощение Ад-специфичных Τ-клеток, которые экспрессируют высокие уровни ΡΌ-1. Поскольку показано, что потенциал терапевтической иммунизации значительно усиливается при комбинации с иммунной контрольной точкой, в качестве не ограничивающего примера специалистам в данной области понятно, что альтернативным подходом к ингибирования иммунной контрольной точке является ингибирование экспрессии лигандов программируемой гибели (ΡΌ) - первого и второго (Р0-Б1/Б2). Один путь выполнить ингибицию заключается в экпрессии РНКмолекул, таких как описанные в настоящем документе, которые подавляют экспрессию Р0-Б1/Б2 в ДКл, трансдуцированных лентивирусным вектором, кодирующим одну или более РНК-молекул. Созревание ДКл или экспрессия определенных элементов, таких как иммунные контрольные точки, например ΡΌ-1 лиганды, может быть охарактеризовано анализом проточной цитометрии на положительную регуляцию поверхностных маркеров, таких как МНС ΙΙ, и профиля экспрессируемых хемокинов и цитокинов.

Последовательность, кодирующая детектируемый продукт, обычно являющаяся белком, может быть включена для идентификации клеток, которые экспрессируют желаемый продукт. Например, флюоресцирующий маркерный белок, такой как зеленый флюоресцентный белок (СРР), включен в конструкт вместе с интересующей последовательностью (например, кодирующей антиген). В других случаях белок может детектироваться антителом или же белок может быть энзимом, который действует на субстрат, вырабатывая детектируемый продукт, или продукт, который позволяет провести селекцию трансфектной или трансдуцированной целевой клетки, например подтверждает устойчивость к лекарствам, такую как устойчивость к гигромицину. Обычные селекционные гены кодируют белки, которые подтверждают устойчивость к антибиотикам или другим токсинам, подходящим для использования в эукариотических клетках, например, неомицину, метотрексалу, бластицидину и другим, известным специалистам, или дополнительным ауксотрофным дефицитам, или важным пищевым добавкам, отсутствующим в среде. Селектирующие маркеры могут необязательно быть представлены на отдельной плазмиде и интродуцированы путем котрансфекции.

Может быть использована одна или более мультицистронных единиц экспрессии, которые включают два или более элементов (например, интересующая(ие) последовательность(и), молекулы оболочки, факторы созревания ДК), необходимых для образования желаемого вируса в упаковочных клетках. Использование мультицистронных векторов уменьшает общее число требуемых молекул нуклеиновых кислот и таким образом препятствует возникновению возможных трудностей, связанных с координацией экспрессии из множественных векторных геномов. В мультицистронном векторе различные экспрессируемые элементы функционально связаны с одним или более промоторами (и при необходимости другими контрольными элементами экспрессии). В некоторых конфигурациях мультицистронный вектор содержит интересующую последовательность, последовательность, кодирующую репортерный продукт, и вирусные элементы. Интересующая последовательность обычно кодирует антиген и, необязательно, фактор созревания ДК. Иногда мультицистронный вектор содержит ген, кодирующий антиген, ген, кодирующий фактор созревания ДК и вирусные элементы.

Каждый компонент, экспрессирующийся в мультицистронном векторе экспрессии, может быть отделен, например, внутренним рибосомальным элементом сайта входа (ШЕ8) или вирусным 2А элементом, что допускает раздельную экспрессию различных белков с одного промотора. ШЕ8 элементы и 2А элементы известны специалистам в данной области (патент США № 4937190; бе Ребре е1 а1. 2004. ΤπιΓίΓ 5: 616-626, каждый из которых включен в настоящий документ путем ссылки в полном объеме). В одном варианте воплощения олигонуклеотиды, кодирующие сайт фуринового расщепления последовательности (ВАКЕ) (публикация Рапд е1 а1. 2005. №к Вю1есб 23: 584-590, которая включена в настоящий документ путем ссылки в полном объеме), связанные с 2А-подобными последовательностями из вируса ящу

- 17 032403 ра (ΕΜΌν), вируса А ринита лошадей (ЕКАУ), и вируса бюкеа ак1дпа (ТаУ) (публикация Бхутсхак е! а1. 2004. №11. Вю1ее11по1. 22: 589-594, включенная в настоящий документ путем ссылки в полном объеме), используются для разделения генетических элементов в мультицистронном векторе. Эффективность определенного мультицистронного вектора легко может быть протестирована путем определения экспрессии каждого из генов с использованием стандартных протоколов.

В отдельном примере вирусный векторный геном содержит цитомегаловируса (СМУ) энхансерную/промоторную последовательность; К и И5 последовательности из ВИЧ 5' ЬТК; упаковочную последовательность (ψ); ВИЧ-1 флап-сигнал; внутренний энхансер; внутренний промотор; интересующий ген; ответный элемент вируса гепатита сурка; тРНК последовательности амбер-супрессора; И3 элемент с делецией в своей энхансерной последовательности; инсулятор куриного β-глобина; и К и И5 последовательности 3' ВИЧ ЬТК. В некоторых примерах векторный геном содержит интактную лентивирусную 5' ЬТК и самоинактивирующуюся 3' ЬТК (публикация Гетакита е! а1. νίΐΌ1ο§\· 15:120, 1999, включена путем ссылки в полном объеме).

Конструкция векторного генома может быть осуществлена с использованием любой подходящей техники генной инженерии, известной специалистам в данной области, включая, но не ограничиваясь ими, стандартные техники рестрикционного эндонуклеазного расщепления, лигации, трансформации, плазмидной очистки, и ДНК-секвенирования, например, как описано в публикациях БатЬ^οοк е! а1. (1989, ΜοΚοιι1ιγ Οοππ^: А ^аЬο^аΐο^у Мапиа1. ^16 Брппд ΗηώοΓ ^аЬο^аΐο^у Ргекк, Ν.Υ.), ^йт е! а1. (Ке1гоу1ги8е8. ^16 Брппд ΗιΛογ Ьа^гаЮгу Ргекк, Ν.Υ. (1997)) и ΡΝΛ Мгикек: А РгасДса1 Арргоасй (А1ап 1. Сапп, Еб., Охйгб Ишуегкйу Ргекк, (2000), каждая из вышеупомянутых публикаций включена в настоящий документ путем ссылки в полном объеме.

4. Производство вирусных частиц.

Любой из множества способов, уже известных специалистам в данной области, может быть использован для создания инфекционных лентивирусных частиц, геном которых содержит РНК копию вирусного векторного генома. В одном способе вирусный векторный геном вводится в упаковочную клеточную линию, которая содержит все компоненты, необходимые для упаковки вирусной геномной РНК, транскрибируемой из вирусного векторного генома в вирусные частицы. Альтернативно, вирусный векторный геном может содержать один или более генов, кодирующих вирусные компоненты в добавление к одной или более интересующим последовательностям. Однако для того чтобы предотвратить репликацию генома в целевой клетке, эндогенные вирусные гены, необходимые для репликации, обычно удаляются и доставляются отдельно в упаковочную клеточную линию.

Обычно лентивирусные векторные частицы вырабатываются клеточной линией, которая трансфицируется одной или более плазмидными векторами, содержащими компоненты, необходимые для образования частиц. Такие лентивирусные векторные частицы обычно не являются компетентными к репликации, т. е. они способны лишь к одному циклу инфицирования. Чаще всего множественные плазмидные векторы используются для разделения различных генетических компонентов, которые образуют лентивирусные векторные частицы, прежде всего для уменьшения вероятности рекомбинации, которая может иным образом генерировать репликацию компетентных вирусов. Однако при желании может использоваться единственный плазмидный вектор, имеющий все лентивирусные компоненты. примером системы, в которой используются множественные плазмидные векторы, является клеточная линия, трансфицированная по меньшей мере одной плазмидой, содержащей вирусный векторный геном (т.е. векторный геном плазмиды), включая ЬТКк, цис-активную упаковочную последовательность и интересующую(ие) последовательность(и), которые часто рабочим образом связаны с гетерологичным промотором, как минимум одной плазмидой, кодирующей вирусные энзимные и структурные компоненты (т.е. упаковочную плазмиду, которая кодирует компоненты, такие как Сад и Рο1), и по меньшей мере одну плазмиду, кодирующую гликопротеин оболочки Арбовируса. Для усиления образования ретровирусных частиц могут быть использованы дополнительные плазмиды, например, Кеу-экспрессии плазмиды, как описано в настоящем документе и известно специалистам в данной области. Вирусные частицы проникают через клеточную мембрану и содержат сердцевину, которая включает геном, содержащий интересующую последовательность и гликопротеин оболочки Арбовируса, мишенью для которого являются дендритные клетки. Если гликопротеин Арбовируса является гликопротеином Е2 вируса Синдбис, гликопротеин конструируется так, чтобы иметь ослабленное связывание с гепарансульфатом по сравнению с референсным штаммом НК.

Трансфекция упаковочных клеток плазмидными векторами настоящего изобретения может быть проведена хорошо известными способами, и используемый способ ничем не ограничен. Специалистам в данной области известно множество невирусных систем доставки, включая, например, электропорацию, основанные на липидах системы доставки, включая липосомы, доставку оголенной ДНК, и доставку с использованием полициклодекстриновых компонентов, таких как описанные в публикации Бс11а!х1ет АС (2001, Νοι·ι-νίη1 УгсЮгк ш Сапсег Сепе Тйегару: Рппар1е8 апб Ргодгеккек. Апбсапсег Игцдк, включена в настоящий документ путем ссылки в полном объеме). Обычно используются способы воздействия с помощью катионных липидов или солей, см., например, публикацию Сгайат е! а1. (1973. νίτο1. 52:456; ^1д1ег е! а1. (1979. Ргас. Νη!1. Асаб. Бс1. ИБА 76:1373-76), все вышеперечисленные публикации включены

- 18 032403 в настоящий документ путем ссылки в полном объеме. Чаще всего используется способ осаждения фосфата кальция. Однако могут также использоваться другие способы для введения вектора в клетку, включая ядерную микроинъекцию и бактериальное слияние протопластов.

Упаковочная клеточная линия представляет компоненты, включая вирусные регуляторные и структурные белки, которые требуются в !гаи8 для упаковки вирусной геномной РНК в лентивирусные векторные частицы. Упаковочной клеточной линией может быть любая клеточная линия, которая способна экспрессировать лентивирусные белки и образовывать функциональные лентивирусные векторные частицы. Некоторые подходящие упаковочные клеточные линии включают 293 (АТСС ССЬ X), 293Т, НеЬа (АТСС ССЬ 2), Ό17 (АТСС ССЬ 183), МОСК (АТСС ССЬ 34), ВНК (АТСС ССЬ-10) и СТ2Т11 (АТСС СКЬ 1430) клетки. Упаковочная клеточная линия может стабильно экспрессировать необходимый вирусный белок. Такая упаковочная линия описана, например, в патенте США № 6218181, который включен в настоящий документ путем ссылки в полном объеме. Альтернативно, упаковочная клеточная линия может быть транзиентно трансфицирована молекулами нуклеиновой кислоты, кодирующими один или более необходимых вирусных белков по вирусному векторному геному. Получившиеся в результате вирусные частицы собираются и используются для инфицирования целевых клеток. Ген(ы), кодирующий^) гликопротеин(ы) оболочки, обычно клонируется в вектор экспрессии, такой как ροΟΝΛ3 (ΙηνίΙΐΌдеп, СА И8А). Эукариотные векторы клеточной экспрессии хорошо известны специалистам в данной области и доступны во множестве коммерческих источников. Упаковочные клетки, такие как 293Т клетки, затем котрансфектируются вирусным векторным геномом, кодирующим интересующую последовательность (обычно кодирующую антиген), по меньшей мере одной плазмидой, кодирующей вирусные упаковочные компоненты, и вектором для экспрессии целевой молекулы. Оболочка экспрессируется на мембране упаковочной клетки и встраивается в вирусный вектор.

По одному сценарию один или более векторов используются для введения полинуклеотидных последовательностей в упаковочную клеточную линию для производства лентивирусных векторных частиц, псевдотипированных гликопротеином оболочки вируса Синдбис, таким как Е2, как описано в настоящем документе. Векторы могут содержать полинуклеотидные последовательности, кодирующие различные компоненты вируса, включая оболочку вируса Синдбис, интересующую(ие) последовательность(и) (обычно кодирующую антиген), и любые компоненты, необходимые для производства вируса, которые не предоставляются упаковочной клеткой.

По другим сценариям упаковочные клетки котрансфектируются вирусным векторным геномом, кодирующим антиген и один или более дополнительных векторов. Например, в дополнение к вирусному вектору, кодирующему антиген, второй вектор предпочтительно несет гены, кодирующие модифицированную (также называемую вариантом) оболочку вируса Синдбис. В некоторых ситуациях вирусный векторный геном, кодирующий антиген, также включает полинуклеотидную последовательность, кодирующую избранный иммуномодулирующий фактор, включая не ограничивающие примеры хемокинов, цитокинов, фактора созревания ДК или фактора, который регулирует механизм иммунной контрольной точки. В других ситуациях полинуклеотидная последовательность, кодирующая избранный иммуномодулирующий фактор, содержится в третьем векторе, который котрансфектируется вирусным вектором, кодирующим антиген, и одним или более дополнительных векторов в упаковочной клетке.

Продукция вируса измеряется так, как описано в настоящем документе, и выражается в МЕ на объем. МЕ является инфекционной единицей или альтернативной единицей трансдукции (ТЕ); МЕ и ТЕ могут использоваться взаимозаменяемо как количественная оценка титра препарата, содержащего вирусный вектор. Как описано в настоящем документе, в произведенном вирусе геном может экспрессировать продукт, который легко количественно оценить. Предпочтителен флюоресцентный белок, зеленый флюоресцентный белок. Лентивирусный вектор обычно является не интегрирующимся. Вирус затем вводится в целевые клетки и определяется число целевых клеток, которые экспрессируют СЕР, например, методом проточной цитометрии (см. пример 3). Титр затем расчитывается. Предпочтителен как можно более высокий титр, но не менее 1*10⁵ МЕ/мл, не менее 3*10⁵ МЕ/мл, не менее 1^χ10⁶ МЕ/мл, не менее 3*10⁶ МЕ/мл или не менее 1*10⁷ МЕ/мл клеточного супернатанта (до какого-либо концентрирования). Альтернативно, титр составляет по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 100% от титра того же лентивирусного вектора, псевдотипированного в тех же клетках оболочкой У8У-С.

С. Доставка вируса.

Вирус может быть доставлен в целевую клетку любым образом, который позволяет вирусу контактировать с целевыми дендритными клетками (ДКл), в которые желательно доставить интересующий полинуклеотид. Иногда подходящее количество вируса вводится человеку или другому животному напрямую (ίη У1уо), например, путем инъкции в организм. Подходящие животные включают, не ограничиваясь, лошадей, собак, кошек, коров, свиней, овец, кроликов, кур и других птиц. Вирусные частицы могут инъецироваться множеством способов, таких как внутривенно, внутрикожно, подкожно, внутрибрюшинно или внутримышечно. Вирус может быть доставлен с использованием субдермальных инъекционных приспособлений, таких как приспособления, раскрытые в патентах США №№ 7241275, 7115108, 7108679, 7083599, 7083592, 7047070, 6971999, 6808506, 6780171, 6776776, 6689118, 6670349, 6569143,

- 19 032403

6494865, 5997501, 5848991, 5328483, 5279552, 4886499, все из которых включены путем ссылки в полном объеме. Также пригодны другие места для инъекций, такие как напрямую в орган, содержащий целевые клетки. Например, может быть использована инъекция внутрь лимфоузла, инъекция внутрь селезенки или инъекция внутрь костного мозга для доставки вируса в лимфоузел, селезенку и костный мозг соответственно. В зависимости от определенных условий и природы целевых клеток введение может быть осуществлено другими способами, включая, например, ингаляцию или прямой контакт с эпителиальными тканями, например, такими как в глазах, ротовой полости или коже.

Альтернативно, целевые клетки представляются и контактируют с вирусом ίη νίίΐΌ, например, в культуральных планшетах. Целевые клетки обычно являются популяцией клеток, содержащих дендритные клетки, полученные от здорового субъекта или субъекта, нуждающегося в лечении, или у которого желательно стимулировать иммунный ответ на антиген. Способы получения клеток из организма субъекта хорошо известны специалистам в данной области и включают кровоизвлечение из вены, хирургическое иссечение и биопсию. Человеческие ДКл также могут быть произведены путем получения ΟΌ34α+ предшественников гемопоэза человека и использованы в культуральном способе ίη νίίΐΌ, как описано в других источниках (например, публикации ВапсНегеаи е1 а1. Се11. 106, 271-274 (2001), включенной путем ссылки в полном объеме).

Вирус может быть суспендирован в среде и помещен в лунки культуральной чашки, фалькона или другого контейнера. Среда, содержащая вирус, может быть добавлена перед посадкой клеток или после посадки клеток. Клетки обычно инкубируются в соответствующем количестве среды, подходящем для нормальной жизнедеятельности и достижения подходящей концентрации вируса в среде, такой, которая пригодная для трансдукции в клетки хозяина. Клетки предпочтительно инкубируются с вирусом в течение времени, достаточного для того, чтобы вирус инфицировал клетки. Предпочтительно клетки инкубируются с вирусом по меньшей мере 1 ч, по меньшей мере 5 ч или по меньшей мере 10 ч.

При доставке как ίη νίνΌ, так и ίη νίΐΐΌ, может быть использована аликвота вирусных частиц, содержащая достаточное количество для инфицирования желаемых целевых клеток. Если культивируются целевые клетки, то концентрация вирусных частиц обычно составляет по меньшей мере 1 МЕ/мкл, более предпочтительно по меньшей мере 10 МЕ/мкл, еще более предпочтительно по меньшей мере 300 МЕ/мкл, еще более предпочтительно по меньшей мере 1*10⁴ МЕ/мкл, еще более предпочтительно по меньшей мере 1*10⁵ МЕ/мкл, еще более предпочтительно по меньшей мере Ι^χ10⁶ МЕ/мкл или еще более предпочтительно по меньшей мере 1*10⁷ МЕ/мкл.

После инфицирования вирусами ίη νίΟΌ, целевые клетки можно ввести (или повторно ввести) в организм человека или животного. Клетки могут быть введины в кожу, под кожу или в периферийный кровоток. Клетки, введенные животному, предпочтительно являются клетками, извлеченными из этого животного, чтобы предотвратить вредоносную иммунную реакцию. Также могут быть использованы клетки, извлеченные из донора, имеющего схожий иммунный фон. Также могут быть использованы другие клетки, включая те, которые разработаны для предотвращения вредоносной иммунной реакции.

Целевые клетки могут быть анализированы для изучения, например, интеграции, транскрипции и/или экспрессии интересующей последовательности или гена(ов), числа копий интегрированного гена и локализации интеграции. Такие анализы могут произведены в любое время и могут быть произведены любым способом, известным специалистам в данной области.

Субъекты, которым введен вирус или инфицированные вирусом дендритные клетки, могут быть проанализированы для изучения локализации инфецированых клеток, экспрессии доставляющих вирус полинуклеотидов или интересующего гена, стимуляции иммунного ответа и мониторинга симптомов, связанных с болезнью, любым способом, известным специалистам в данной области.

Способы инфицирования клеток, раскрытые в настоящем документе, не зависят от индивидуальных специфических свойств клеток. Следовательно, они легко распространяются на множество видов животных. В некоторых случаях вирусные частицы доставляются человеку или в дендритные клетки человека, а в других случаях они доставляются животным, таким как мыши, лошади, собаки, кошки, или птицы. Как обсуждалось в настоящем документе, вирусный векторный геном псевдотипируется так, чтобы предоставить широкий диапазон хозяинов, а также характеристик целевых клеток. Специалисту в данной области также хорошо известны подходящие внутренние промоторы и другие элементы для достижения желаемой экспрессии интересующей последовательности у определенных видов животных. Таким образом, специалист в данной области сможет модифицировать метод инфицирования дендритных клеток для любого вида.

Ό. Терапевтическая и профилактическая иммунизация.

Дендритные клетки могут быть инфицированы лентивирусной векторной частицей, как описано в настоящем документе, для предотвращения или лечения болезни или расстройства здоровья, особенно тех, для лечения или предотвращения которых полезна активация иммунного ответа у пациента. Многие такие болезни хорошо известны. Например, болезни или расстройства здоровья, которые поддаются лечению или предотвращению способами настоящего изобретения, включают, не ограничиваясь, раковые заболевания, аутоиммунные расстройства и инфекции, включая вирусные, бактериальные, грибковые и паразитические инфекции. В одном способе заболевание лечится вирусными частицами, описанными в

- 20 032403 настоящем документе, которые доставляют интересующую последовательность в дендритные клетки, где экспрессия интересующей последовательности продуцирует специфический для заболевания антиген и приводит к стимуляции антиген-специфичной клеточной иммунной реакции и гуморальной иммунной реакции. В основном интересующая последовательность кодирует антиген, на который желательна иммунная реакция, но он в норме не экспрессируется в дендритных клетках. Антиген экспрессируется и предоставляется дендритными клетками. Вирусный векторный геном может впоследствии кодировать фактор созревания ДК.

При типичном использовании вирусные частицы доставляют к дендритным клеткам последовательности, кодирующие антиген, на который желательна иммунная реакция. Доставка может быть достигнута путем контакта дендритных клеток с вирусом ш νίίΓΟ, когда инфицированные дендритные клетки вводятся пациенту. В других случаях доставка может быть достигнута путем доставки вируса субъекту для инфицирования дендритных клеток ш νίνο. Дендритные клетки затем стимулируют антигенспецифичные Т-клетки или В-клетки у пациента для индукции клеточной и гуморальной реакции на экспрессируемый антиген. В таких случаях пациент, который подвержен болезни или расстройству здоровья, получает лечение путем образования иммунных клеток с заданной специфичностью.

Любой антиген, который связан с болезнью или расстройством здоровья, может быть доставлен в дендритные клетки при использовании вирусных частиц, как описано в настоящем документе. Антиген, который связан с болезнью или расстройством, идентифицируется для приготовления вирусной частицы, которая поражает дендритные клетки. Антигены, связанные со многими болезнями и расстройствами здоровья, хорошо известны специалистам в данной области. Про антиген может быть предварительно известно, что он связан с болезнью или расстройством, или может быть идентифицирован любым способом, известным специалистам в данной области. Например, может быть известен антиген для того типа рака, которым страдает пациент, такого как связанный с опухолью антиген, или может быть идентифицирован из самой опухоли с помощью любого из множества способов, известных специалистам в данной области.

Связанные с опухолью антигены известны для множества видов рака, включая, например, почечноклеточную карциному, рак простаты, меланому и рак молочной железы. Например, при некоторых видах рака молочной железы рецептор Нег-2 сверхэкспресируется на поверхности раковых клеток. Являющиеся примером опухолевые антигены включают, но не ограничиваясь этим, МАСЕ, ВАСЕ, КАСЕ и NΥЕБ0-1, которые являются невидоизмененными антигенами, экспрессируемыми в иммунопривилегированных областях семенников и во множестве опухолевых клеток; линиеспецифические опухолевые антигены, такие как антигены линии меланоцит-меланомы МАКТ-1/Ме1ап-А, др100, др75, т4а7, тирозиназа и тирозиназасвязанный белок, почечноклеточная карцинома - 5Т4, 8М22-а, карбоангидразы Ι и ΙΧ (также известные как С250), гипоксия-индуцируемые факторы (например, ΗΙΡ-1α и ΗΙΡ-2α), УЕСЕ или простатоспецифичный мембранный антиген (Р8МА), простатоспецифичный антиген (Р8А), кислые фосфаты простаты и трансмембранный эпителиальный антиген простаты (8ТЕАР), ИКХ3.1, где антигены, экспрессируемые в нормальных и опухолевых клетках, происходят из одной и той же ткани; эпитопные белки/пептиды, происходящие от генов, мутировавших в опухолевых клетках, или генов, транскрибированных в различных уровнях опухоли по сравнению с нормальными клетками, такие как энзим теломераза, сурвивин, мезотелин, мутировавший гак, реорганизованный Ьсг/аЬ1, Нег2/пеи, мутировавший или дикого типа р53, цитохром Р450 1В1 и анормально экспрессирующиеся интронные последовательности, такие как №ацетилглюкозаминилтрансфераза-У; клональные перестройки иммуноглобулиновых генов, генерирующие уникальные идиотипы в миеломе и В-клеточных лимфомах; эпитопные белки/пептиды, получающиеся в результате онковирусных процессов, такие как белки вируса папилломы человека Е6 и Е7; немутировавшие онкофетальные белки с опухоле-избирательной экспрессией, такие как карциноэмбриональный антиген и α-фетопротеин. Описано множество связанных с опухолями антигенов (см., например, публикации Титог-АиЕдеик Кесодшхей Ву Т-Еутрйосукек, Вооп Т., СегокИш ЕС., Уап4епеуп4е В., УапйегЬгиддеп Р., Уапре1 А., Аппиа1 Кет1е\\· 0£ Iттипο1οду 12: 337-365, 1994; А Нкктд о£ Нитап китог апЕдепк гесодшхе4 Ьу Т се11к, Кепкт181 К, СаккеШ С., КоЬЫпк Р.Е., Рагт1аш С. Сапсег [ттипо1оду [ттипоШегару 50: (1) 3-15 МАК 2001, каждая из которых включена в настоящий документ путем ссылки в полном объеме).

Антиген также может быть антигеном, связанным с инфекционной болезнью, такой как, например, ВИЧ/СПИД. Антиген может быть, например, др120 (публикация КИтккга, ^.В., ек а1. 2003. 1. У1го1. 77:12022-12032; Ветаг4, К.А., ек а1. 2000. У1го1оду 276:93-103; Вугпек, А.Р., ек а1. 1998. I. У1го1. 72: 73497356, каждая из которых включена в настоящий документ путем ссылки в полном объеме). Другие являющиеся примером антигены включают, но не ограничиваясь этим, дад, ро1, епт, как, пе£ и гет (публикации Е1еЬегтап, I. ек а1. 1997. АГО8 Кек Нит Кекготиикек 13(5): 383-392; Мепеп4е7-Апак, Ь. ек а1. 1998. У1га1. Тттипок 11(4): 167-181, каждая из которых включена в настоящий документ путем ссылки в полном объеме).

Примеры вирусных антигенов включают, но не ограничиваясь этим, полипептиды аденовируса, полипептиды альфавируса, полипептиды калицивируса, например, антиген капсида калицивируса, поли

- 21 032403 пептиды коронавируса, полипептиды вируса собачьей чумки, полипептиды вируса Эбола, полипептиды энтеровируса, полипептиды флавивируса, полипептиды вируса гепатита (АЕ), например, гепатита В ядерный или поверхностный антиген, или гликопротеины Е1 или Е2 вируса гепатита С, ядерные или неструктурные белки, полипептиды вируса герпеса, например, гликопротеин вируса простого герпеса или вируса ветряной оспы, полипептиды вируса иммунодефицита, например, оболочка или протеаза вируса иммунодефицита человека, полипептиды вируса инфекционного перитонита, полипептиды вируса гриппа, например, гемагглютинин, нейраминидаза или нуклеопротеин гриппа А, полипептиды вируса лейкемии, полипептиды вируса марбургской болезни, полипептиды ортомиксовируса, полипептиды вируса папилломы, полипептиды вируса парагриппа, например, гемагглютинин/нейраминидаза, полипептиды парамиксовируса, полипептиды парвовируса, полипептиды пестивируса, полипептиды пикорнавируса, например, полипептид капсида полиовируса, полипептиды поксвируса, например, полипептид вируса коровьей оспы, полипептиды вируса бешенства, например, гликопротеин С вируса бешенства, полипептиды реовируса, полипептиды ретровируса и полипептиды ротавируса.

Примеры бактериальных антигенов включают, но не ограничиваясь этим, полипептиды АсОпотусек, полипептиды ВасШик, полипептиды Вас1его14ек, полипептиды Вогйе1е11а, полипептиды Ваг1оие11а, полипептиды Воггейа, например, полипептиды В. ЬигдйогГел 0крА, Вгисе11а, полипептиды Сатру1оЬас1ег, полипептиды СарпосутрНада, полипептиды СЫату&а, полипептиды С1ок1п4шт, полипептиды СогупеЬасегшт, полипептиды Сох1е11а, полипептиды Пегта1орЫ1ик, полипептиды Ейегососсик, полипептиды ЕНгйсЫа, полипептиды ЕксйепсШа, полипептиды Егапс1ке11а, полипептиды ЕикоЬас1егшт, полипептиды НаетоЬа^ιоие11а. полипептиды НаеторШик, например, белок, проникающий сквозь мембрану гемофильной палочки типа Ь, полипептиды Не1юоЬас1ег, полипептиды К1еЬк1е11а, полипептиды бактерий Ь-формы, полипептиды ЬерФкрпа, полипептиды □Чела, полипептиды МусоЬас1епа, полипептиды Мусор1акта, полипептиды Шакела, полипептиды №опскейк1а, полипептиды ШсагФа, полипептиды Рак1еиге11а, полипептиды РерЮсоссик, полипептиды Рер1ок1гер1ососсик, полипептиды РпеитососсиБ, полипептиды Рго1еик, полипептиды Ркеийотопак, полипептиды КюкеИыа, полипептиды Коскайтаеа, полипептиды 8а1тоие11а, полипептиды 8Ыде11а, полипептиды 81арку1ососсик, полипептиды 81гер1ососсик, например, белки 8. руодепек М, полипептиды Тгеропета, и полипептиды Уегаша, например, антигены Υ. рекйк Е1 и У.

Примеры грибковых антигенов включают, но не ограничиваясь этим, полипептиды ЛЬДЛа, полипептиды Асгетотит, полипептиды Айетайа, полипептиды АкрегдШик, полипептиды ВакИюЬо1ик, полипептиды В1ро1апк, полипептиды В1ак1отусек, полипептиды СапйИа, полипептиды Соссйюйек, полипептиды СошйюЬо1ик, полипептиды СгурФсоссик, полипептиды Сигуа1апа, полипептиды Бр^ел^рНуЮ!! полипептиды ЕхорЫа1а, полипептиды беойтсйит, полипептиды Н1к1ор1акта, полипептиды Майигейа, полипептиды Ма1акке/1а, полипептиды Мюгокрогит, полипептиды Мошйе11а, полипептиды Могйеге11а, полипептиды Мисог, полипептиды Раесйотусек, полипептиды Решсййит, полипептиды РЫа1етотит, полипептиды РЫа1орйога, полипептиды Рго1о1йеса, полипептиды Ркеийа11ексйепа, полипептиды РкеийотюгойосЫит, полипептиды РуНит, полипептиды Кйтокропйтт, полипептиды КН1хорик, полипептиды 8со1есоЬак1йшт, полипептиды 8рого1Нпх, полипептиды 81етрйуйит, полипептиды ТлсНорНуЮп, полипептиды ТлсНокрогоп, и полипептиды Ху1оНурНа.

Примеры антигенов одноклеточных паразитов включают, но не ограничиваясь этим, полипептиды ВаЬек1а, полипептиды Вак-тЕйтт, полипептиды ВекпоШа, полипептиды СгурЮкроййшт, Еипела полипептиды, полипептиды ЕисерНа1^ιоζоои. полипептиды ЕпатоеЬа, полипептиды С1агй1а, полипептиды НаттопФа, полипептиды НераЮ/ооп, полипептиды [кокрога, полипептиды Ее1кйташа, полипептиды МюгокройФа, полипептиды Шокрога, полипептиды Шкета, полипептиды РепЕилсНотопак, полипептиды Р1актой1ит, например, Р. Га1арагит циркумспорозоит (РГС8Р), спорозоита поверхностный белок 2 (РГ88Р2), карбоксильный конец антигена 1 печени 1 (РГЕ8А1 сйегт), и экспортируемый белок 1 (РГЕхр1), полипептиды Риеитосукΐ^к, полипептиды 8агсосукйк, полипептиды 8сЫк1окота, полипептиды ТНейепа, полипептиды Тохор1акта и полипептиды Тгурапокота.

Примеры антигенов паразитов-гельминтов включают, но не ограничиваясь этим, полипептиды ΛсаиιНосНе^1оиета. полипептиды Ае1и^окΐ^оиду1ик, полипептиды Апсукйота, полипептиды Апд^окΐ^оиду1ик, полипептиды Аксапк, полипептиды Вгид1а, полипептиды ВипобЮтит, полипептиды СарП1апа, полипептиды СйаЬегйа, полипептиды Соорела, полипептиды Сгепокота, полипептиды Ою1уосаи1ик, полипептиды Пюс1орйуте, полипептиды ^^реΐа1оиета, полипептиды П1рйу11оЬо1йпит, полипептиды П1р1уйшт, полипептиды ОйоШапа, полипептиды □гасипсЫик, полипептиды ЕпегоЬшк, полипептиды Ейаго1йек, полипептиды НаетопсНик, полипептиды ЬадосШаксапк, полипептиды Ьоа, полипептиды Маикоие11а, полипептиды Мие11егшк, полипептиды ШпорНуеШк, полипептиды №са1ог, полипептиды №та1ой1гик, полипептиды 0екорНадок1отит, полипептиды ОисНосе^са. полипептиды 0р1к1йогсЫк, полипептиды 0к1ег1ад1а, полипептиды РагаГйала, полипептиды Рагадоштик, полипептиды Рагаксапк, полипептиды РНука1ор1ега, полипептиды Р^оΐокΐ^оиду1ик, полипептиды 8е(аг1а, полипептиды 8р1госегса, полипептиды 8рйоте1га, полипептиды 81ерНапоП1аг1а, полипептиды 8ΐ^оиду1о^йек, полипептиды 8ΐ^оиду1ик, полипептиды ТНеЕ-Ша, полипептиды Тохаксапк, полипептиды Тохосага, полипептиды ТлсНтеПа, полипептиды Т^^сНокι^оиду1ик. полипептиды ТлсНилк, полипептиды ипстапа и полипептиды ХУисНегела.

- 22 032403

Примеры антигенов эктопаразитов включают, но не ограничиваясь этим, полипептиды (включая защитные антигены, а также аллергены) из блох; клещей, включая твердых клещей и мягких клещей; мух, таких как мошки, комары, москиты, слепни, жигалки малые, мухи це-це, жигалки обыкновенные, вызывающие миаз мухи и кровососущий гнус-муравьи; пауки, вши; клещи; и клопы, такие как постельные клопы и поцелуйные клопы.

После того как антиген идентифицирован и выбран, идентифицируется последовательность, которая кодирует желаемый антиген. Предпочтительно последовательность содержит кДНК. После вирусной инфекции интересующая последовательность (например, кодирующая антиген) экспрессируется целевыми дендритными клетками. При контакте ех у1уо целевые дендритные клетки затем трансферрируются обратно пациенту, например путем инъекции, где они взаимодействуют с иммунными клетками, которые способны генерировать иммунный ответ на заданный антиген. В предпочтительных вариантах воплощения рекомбинантный вирус инъецируется в организм пациента, где он трансдуцируется целевыми дендритными клетками ίη δίΐιι. Дендритные клетки затем экспрессируют определенный антиген, связанный с болезнью или расстройством здоровья, которую подвергают лечению, и организм пациента способен усилить эффективную иммунную реакцию на болезнь или расстройство здоровья.

Вирусный векторный геном может содержать полинуклеотидную последовательность, кодирующую более чем один антиген, и после трансдукции целевой дендритной клетки генерирует иммунный ответ на множесто антигенов, доставленных в клетку. В некоторых вариантах воплощения антигены связаны с одной болезнью или расстройством здоровья. В других вариантах воплощения антигены связаны с множеством болезней или расстройств здоровья.

В некоторых вирусах факторы созревания ДК, которые активируют и/или стимулируют созревание ДКл, доставляются вместе с интересующей последовательностью. В альтернативных вариантах ДКл предварительно активируются при доставке факторов созревания ДК, одновременно или после доставки вируса. Факторы созревания ДК могут быть предоставлены отдельно от введения вируса.

Как описано в настоящем документе, одна или более иммунных модуляций или факторов созревания ДК могут кодироваться одной или боле последовательностями, которые содержатся в вирусном геноме и экспрессируются после инфицирования вируса в дендритную клетку. Последовательности, кодирующие факторы иммуномодуляции, также могут быть предоставлены в отдельном векторе, который котрансфицируется с вирусным вектором, кодирующим один или более антигенов в упаковочной клеточной линии.

Способы, описанные в настоящем документе, могут быть использованы для адаптивной иммунотерапии у пациента. Как описано выше, идентифицируется антиген, против которого желателен иммунный ответ. Получают и упаковывают в рекомбинантный вирус полинуклеотид, кодирующий желаемый антиген. Целевые дендритные клетки получают из организма пациента и трансдуцируют с рекомбинантным вирусом, содержащим полинуклеотид, который кодирует заданный антиген. Дендритные клетки затем трансфицируются обратно в организм пациента.

Вирусные частицы могут инъецироваться ίη у1уо, когда они инфицируют ДКл и доставляют интересующую последовательность, обычно кодирующую антиген. Число вирусных частиц составляет по меньшей мере 3*10⁶ МЕ и может быть по меньшей мере 1*10⁷ МЕ, по меньшей мере 3*10⁷ МЕ, по меньшей мере 1*10⁸ МЕ, по меньшей мере 3*10⁸ МЕ, по меньшей мере 1*10⁹ МЕ или по меньшей мере 3*10⁹ МЕ. В выбранных интервалах ДКл из лимфоидных органов реципиента может быть использовано для оценки экспрессии, например, при наблюдении маркера экспрессии, такого как ОЕР или люцифераза. Техники мониторинга нуклеиновых кислот и оценки активности реверсной транскриптазы (РТ) также могут быть использованы для анализа биораспределения вирусных частиц. Т-клетки из периферийных кровяных мононуклеарных клеток, лимфоузлов, селезенки или злокачественной или целевой патогенинфицированной ткани реципиентов, подвергнутых лечению лентивирусными векторными частицами, может быть подсчитано по величине и продолжительности реакции на антигенную стимуляцию. Тканевые клетки, отличные от ДКл, такие как эпителиальные клетки и лимфоидные клетки, могут быть проанализированы на специфичность генной доставки ίη у1уо.

Принято считать, что наиболее эффективным потенциальным способом для прекращения эпидемии СПИД (и других вирусных болезней) является эффективная превентивная вакцина. На сегодняшний день ни один способ вакцинации против ВИЧ успешно не прошел фазу III клинического исследования. Таким образом, имеется неотложная потребность в новых эффективных стратегиях вакцинации. Одной стратегией является вакцинация ДКл. Для ее осуществления последовательность, кодирующая вирусный белок, такая как описана выше, клонируется в вирусный вектор. Пациенты инфицируются вирусами, сконструированными так, как описано в настоящем документе. На животной модели молекулярно клонированные ВИЧ-репортерные вирусы (№№2-г-Н8А§, ^-г-Н8А8) и клинические изоляты могут быть использованы для введения животному путем инъекции в хвостовую вену. Признаки инфицирования можно контролировать во времени в спленоцитах, лимфоузлах и периферийной крови. ПЦР-амплификация для ВИЧ-дад белка и проточная цитометрия для НА8 в репортерных вирусах могут быть использованы в качестве теста на вирусную интеграцию и репликацию. Продуктивная вакцинация ДК ίη δίΐιι может увеличить резистентность к введению ВИЧ.

- 23 032403

Вакцины часто включают вспомогательное вещество.

Лентивирусные векторные частицы, описанные в настоящем документе, также могут быть введены вместе со вспомогательным веществом. Вспомогательное вещество может быть введено с рекомбинантными вирусными частицами, до рекомбинантных вирусных частиц или после рекомбинантных вирусных частиц. Если вводить вместе с вирусными частицами, желаемые вспомогательные вещества не должны значительно разрушать цельность вирусной частицы, например, разрушая вирусную мембрану, содержащую гликопротеины оболочки.

Различные вспомогательные вещества могут быть использованы в комбинации с вирусом для вызова иммунной реакции на антиген, кодируемый в вирусном векторном геноме. Предпочтительные вспомогательные вещества усиливают реакцию на антиген, не вызывая конформационных изменений в антигене, которые действуют на качественную форму реакции. Предпочтительные вспомогательные вещества включают квасцы, 3 де-0-ацилированный монофосфорилированный липид А (МРЬ) (см. СВ 2220211). 0821 является гликозидом тритерпена или сапонином, выделенным из коры килайи 8аропапа Мой па дерева, растущего в Южной Америке (см. КепкП е! а1., ш Vасс^пе Оекщп: Тйе 8иЬипй апб Абщуап! Арргоасй (ебк. Ро\хе11 апб Ке^тап, Р1епит Ргекк, ΧΥ, 1995); патент США № 5057540). Другими вспомогательными веществами являются эмульсии масло-в-воде (такие как скваленовое или арахисовое масло), необязательно в комбинации с иммунными стимуляторами, такими как монофосфорилированный липид А (см. 81ои1е е! а1., N. Епд1. 1. Меб. 336, 86-91 (1997)). Другим вспомогательным веществом является СрС (Вю\уог1б Тобау, №у. 15, 1998). Альтернативно, А1!ета!1уе1у, Ав может быть связан со вспомогательным веществом. Например, липопептидная версия Ав может быть приготовлена путем связывания пальмитиловой кислоты или других липидов прямо с ^концом Ав, как описано для вакцинации антигеном гепатита В (Ь1утдк!оп, 1. Iттипο1. 159, 1383-1392 (1997)). Однако такое связывание не должно значительно менять конформацию Ав, так чтобы это тем самым влияло на природу иммунного ответа. Вспомогательные вещества могут быть введены как компонент терапевтической композиции с активным агентом или могут быть введены отдельно, до, одновременно с или после введения терапевтического средства.

Одним классом вспомогательных веществ являются соли алюминия (квасцы), такие как алюминия гидроксид, алюминия фосфат, алюминия сульфат. Такие вспомогательные вещества могут быть использованы со специальными специальными иммуностимулирующими агентами или без них, такими как МРЬ или 3-ЭМР, 0821, полимерных или мономерных аминокислот, таких как полиглютаминовая кислота или полилизин. Другим классом вспомогательных веществ являются формулы эмульсий масло-в-воде. Такие вспомогательные вещества могут быть использованы со специальными иммуностимулирующими агентами или без них, такими как мурамилпептиды (например, N-ацетилмурамил-^-треонил-^изоглютамин (1йг-МЭР), N-ацетил-нормурамил-^-аланил-Ο-изоглютамин (пог-МЭР), N-ацетилмурамилЕ-аланил-О-изоглютаминил-Е-аланин-2-( 1 '-2'-дипальмитол-кп-глицеро-3 -гидроксифосфорилокси)этиламин (МТР-РЕ), N-ацетилглютаминил-N-ацетилмурамил-^-А1-^-изоглю-^-А1а-дипальмитоксипропиламид (ОТР-ЭРР) терамид™), или другие компоненты бактериальной клеточной стенки. Эмульсии масло-в-воде включают: (а) МЕ59 (\У0 90/14837), содержащую 5% 8дпа1епе, 0,5% Т\уееп 80 и 0,5% 8рап 85 (необязательно содержащие различные количества МТР-РЕ), произведенные в виде субмикронных частиц с использованием микрофлюидайзера, такого как Модель 110Υ микрофлюидайзер (Мюгойшбюк, №\\1оп Макк.), (Ь) 8АЕ, содержащий 10% 8циа1апе, 0,4% Т\уееп 80, 5% блокирующий поверхностноактивные вещества полимер Ь121 и 1йг-МЭР, так же микрофлюидизированный в сумбикронную эмульсию или размешанный на вортексе для создания эмульсии с частицами большего размера, и (с) В1Ь1 вспомогательная система (ВА8), (В1Ь1 [ттипосйет, Нат1Йоп, Моп!.), содержащая 2% 8циа1епе, 0,2% Тетееп 80 и один или более компонентов бактериальной клеточной стенки из группы, состоящей из монофосфорилипида А (МРЬ), трегалозы димиколата (ТОМ) и каркаса клеточной стенки (СУ8), предпочтительно МРЙ+С\У8 (Ое!ох™). Другим классом предпочтительных вспомогательных веществ являются сапониновые вспомогательные вещества, такие как 8!1ти1оп™ (0821, Ацийа, Уогсек!ег, Макк.) или частицы, произведенные из таких соединений, как КС0Мк (иммуностимулирующие комплексы) и Αί,ΌМАТВРХ. Другие вспомогательные вещества включают Сотр1е!е Егеипб'к Абщуап! (СЕА) и Й1сотр1е1е Егеипб'к Абщуап! (ГЕА). Другие вспомогательные вещества включают цитокины, такие как интерлейкины (Ш-1, Ш-2 и Ш-12), колониестимулирующий фактор макрофагов (М-С8Е), фактор некроза опухолей (ЮТ).

Другое вспомогательное вещество, которое можно использовать с приведенными в настоящем документе композициями, идентифицируется по химической формуле (I)

- 24 032403

где группы А1 и А2 независимо избираются из группы, состоящей из водорода, фосфата и фосфатных солей. Натрий и калий являются примерами противоионов для фосфатных солей. Группы К¹, К², К³, К⁴, К⁵ и К⁶ независимо выбираются из группы углеводородных радикалов, имеющих от 3 до 23 атомов углерода, обозначенных как С₃-С₂₃. Для ясности, это следует объяснить следующим образом: когда функциональная группа независимо выбирается из определенной группы, имеющей много членов, это следует понимать так, что член, выбираемый для первой функциональной группы, никаким образом не влияет или ограничивает выбор члена, избираемого для второй функциональной группы. Атомы углерода, к которым присоединяются К¹, К³, К⁵ и К⁶, являются асимметричными, и таким образом могут существовать или в К-, или в З-стереохимии. В одном варианте воплощения все эти атомы углерода существуют в К-стереохимии, тогда как в другом варианте воплощения все эти атомы углерода существуют в Зстереохимии.

Углеводородный радикал относится к химической группе, образованной только из водорода и углерода, где атомы углерода могут быть организованы в прямую или разветвленную цепь, нециклическую или циклическую, и где связи между соседними атомами углерода могут быть только одинарными связями, то есть с образованием насыщенного углеводородного радикала, или могут присутствовать двойные или тройные связи между любыми двумя соседними атомами углерода, то есть с образованием ненасыщенного углеводородного радикала, и число атомов углерода в углеводородном радикале составляет от 3 до 24 атомов углерода. Углеводородный радикал может быть алкилом, где типичные алкилы прямого строения включают метил, этил, н-пропил, н-бутил, н-пентил, н-гексил и тому подобное, включая ундецил, додецил, тридецил, тетрадецил, пентадецил, гексадецил, гептадецил, октадецил и т.д.; разветвленные алкилы включают изопропил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, изопентил и тому подобные. Типичные насыщенные циклические углеводородные радикалы включают цикропропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и тому подобные; ненасыщенные циклические углеводородные радикалы включают циклопентенил и циклогексенил и тому подобные. Ненасыщенные углеводородные радикалы содержат по меньшей мере одну двойную или тройную связь между соседними атомами углерода (обозначаются как алкенил или алкинил соответственно, если углеводородный радикал является нециклическим, и циклоалкенил и циклоалкинил соответственно, если углеводородный радикал, по меньшей мере частично, является циклическим). Типичные алкенилы прямого и разветвленного строения включают этиленил, пропиленил, 1-бутенил, 2-бутенил, изобутенил, 1-пентенил, 2-пентенил, 3-метил-1бутенил, 2-метил-2-бутенил, 2,3-диметил-2-бутенил и тому подобные; типичные прямого и разветвленного строения включают ацетиленил, пропинил, 1-бутинил, 2-бутинил, 1-пентинил, 2-пентинил, 3-метил1-бутинил и тому подобные.

Вспомогательное вещество формулы (Ι) может быть получено синтетическими способами, известными специалистам в данной области, например по синтетической методике, раскрытой в международной публикации РСТ № АО 2009/035528, которая включена в настоящий документ путем ссылки, а также публикациями, идентифицированными в АО 2009/035528, где каждая из этих публикаций также включена в настоящий документ путем ссылки. Некоторые вспомогательные вещества также могут быть получены коммерческим путем. Предпочтительным вспомогательным веществом является продукт № 699800, как указано в каталоге ΛνηπΙι Ро1аг Ь1р1бз, А1аЬазХег АЬ, см. Е1 в комбинации с Е10 ниже.

В различных вариантах воплощения изобретения вспомогательное вещество имеет химическую структуру формулы (Ι), но группы А1, А2, К1, К2, К3, К4, К5 и К6 выбираются из подмножества вариантов, ранее предоставленных для этих групп, где эти подмножества обозначаются ниже как Е1, Е2 и т.д.

Е1: А1 является фосфатом или солью фосфата, а А2 является водородом.

Е2: К¹, К³, К⁵ и К⁶ являются С3-С21 алкилом; а К² и К⁴ являются С5-С₂₃ углеводородным радикалом. Е3: К¹, К³, К⁵ и К⁶ являются С5-С17 алкилом; а К² и К⁴ являются С7-С1₉ углеводородным радикалом. Е4: К¹, К³, К⁵ и К⁶ являются С7-С15 алкилом; а К² и К⁴ являются С9-С1₇ углеводородным радикалом. Е5: К¹, К³, К⁵ и К⁶ являются С9-С13 алкилом; а К² и К⁴ являются С11-С₁₅ углеводородным радикалом. Е6: К¹, К³, К⁵ и К⁶ являются С9-С15 алкилом; а К² и К⁴ являются С11-С₁₇ углеводородным радикалом.

Е7: В¹, В³, В⁵ и В⁶ являются С7-С13 алкилом; а В² и В⁴ являются С9-С15 углеводородным радикалом.

Е8: В¹, В³, В⁵ и В⁶ являются Сц-С20 алкилом; а В² и В⁴ являются С32-С₂₀ углеводородным радикалом.

Е9: В¹, В³, В⁵ и В⁶ являются Си алкилом; а В² и В⁴ являются С₁₃ углеводородным радикалом.

Е10: В¹, В³, В⁵ и В⁶ являются ундецилом, а В² и В⁴ являются тридецилом.

В некоторых вариантах каждый компонент от Е2 до Е10 комбинируется с вариантом Е1, и/или углеводородные группы от Е2 до Е9 являются алкильными группами, предпочтительно алкильными группами прямого строения.

Вспомогательное вещество формулы (Ι) может быть создано в виде фармацевтической композиции, необязательно вместе с дополнительными вспомогательными веществами, каждое из которых обсуждается ниже. В этом отношении делается ссылка на публикацию патента США № 2008/0131466, в которой представлены композиции, например водные композиции (АВ) и композиции стабильных эмульсий (ЕЕ) для вспомогательного вещества СЬА, где эти композиции могут быть использованы для любого из вспомогательных веществ формулы (Ι).

Вспомогательное вещество может быть введено с вирусом изобретения как единая композиция или может быть введено до, совместно или после введения рекомбинантного вируса настоящего изобретения. Иммуноген и вспомогательное вещество могут быть упакованы и доставлены в одной упаковке или могут быть упакованы в раздельных упаковках и смешаны перед использованием. Иммуноген и вспомогательное вещество обычно упаковываются с этикеткой, указывающей предполагаемое терапевтическое применение. Если иммуноген и вспомогательное вещество упакованы раздельно, упаковка обычно включает инструкции по смешиванию перед использованием. Выбор вспомогательного вещества и/или носителя зависит от стабильности вакцины, содержащей вспомогательное вещество, пути введения, схемы дозирования, действия вспомогательного вещества на виды, подвергаемые вакцинированию, и, у людей, фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом является то, которое подходит или приемлемо для введения людям по соответствующим регулирующим предписаниям. Например, вспомогательное вещество Сотр1с!с Вгсипб не подходит для введения людям. Предпочтительны квасцы, МРЬ и 0821. Необязательно, два или более различных вспомогательных вещества могут быть использованы одновременно, такие как квасцы с МРЬ, квасцы с 0821, МРЬ с 0821 и квасцы, 0821 и МРЬ вместе. Также может быть использовано вспомогательное вещество ШсотрШе Вгсипб (СЕапд с! а1., Абуапсеб Эгид ОсПуегу Всу1с^8 32, 173-186 (1998)), необязательно в комбинации с любым из квасцов, 0821 и МРЬ и всеми их комбинациями.

Е. Фармацевтические композиции и наборы.

Также рассмотренные в настоящем документе фармацевтические композиции и наборы содержат вирус, предоставленный в настоящем документе, и один или более компонентов. Фармацевтические композиции могут включать вирусные векторные частицы, как предоставлено в настоящем документе, и фармацевтический носитель. Наборы могут включать фармацевтические композиции и/или комбинации, представленные в настоящем документе, и один или более компонентов, таких как инструкции по использованию и приспособление для введения состава пациенту.

Представленные в настоящем документе фармацевтические композиции содержат вирусные частицы, как представлено в настоящем документе, и подходящий фармацевтический носитель.

Фармацевтические составы, представленные в настоящем документе, могут быть в различных формах, например в твердой, жидкой, порошковой, водной или лиофилизированной формах. Примеры подходящих фармацевтических носителей известны специалистам в данной области. Формулы таких носителей и/или добавок могут быть разработаны стандартными способами, и их можно вводить пациенту в подходящей дозировке. Стабилизирующие агенты, такие как липиды, нуклеазные ингибиторы, полимеры и хелатирующие агенты могут предохранять составы от разрушения внутри организма.

Вирусные векторные частицы, представленные в настоящем документе, могут быть упакованы в наборы. Наборы могут необязательно включать один или более компонентов, таких как инструкции по использованию, приспособления и дополнительные реагенты, и компоненты, такие как пробирки, контейнеры и пипетки для осуществления способов. Примеры наборов могут включать вирусы, представленные в настоящем документе, и могут необязательно включать инструкции по использованию, приспособление для детекции вируса у пациента, приспособление для введения вируса пациенту, и приспособление для введения соединения пациенту.

Наборы, включающие полинуклеотиды, кодирующие интересующий ген (обычно антиген), также рассмотрены в настоящем документе. Наборы могут включать не менее одной плазмиды, кодирующей компоненты, упаковывающие вирус, и вектор, кодирующий вариант вируса Синдбиса гликопротеина Е2. Некоторые наборы содержат не менее одной плазмиды, кодирующей компоненты, упаковывающие вирус, вектор, кодирующий вариант вируса Синдбиса гликопротеина Е2, и вектор, кодирующий, по меньшей мере, один фактор созревания ДК.

Наборы, содержащие вирусный вектор, кодирующий интересующую последовательность (обычно антиген) и необязательно полинуклеотидную последовательность, кодирующую фактор созревания ДК, также упомянуты в настоящем документе. В некоторых наборах набор включает по меньшей мере одну

- 26 032403 плазмиду, кодирующую компоненты, упаковывающие вирус, и вектор, кодирующий вариант вируса Синдбиса гликопротеина Е2.

Набор может также содержать инструкции. Инструкции обычно включают фактические выражения, описывающие вирус, и, необязательно, другие компоненты, включенные в набор, и способы для введения, включая способы для определения подходящего состояния пациента, подходящей количественной дозировки и подходящего способа введения вируса. Инструкции могут также включать руководство по мониторингу пациента во время лечения.

Наборы, представленные в настоящем документе, также могут влючать приспособление для введения вируса пациенту. Любое из множества известных специалистам приспособлений для введения лекарств или вакцин может быть включено в набор, представленный в настоящем документе. примеры приспособлений включают, но не ограничиваясь этим, внутривенную иглу, катетер, безигловое приспособление для инъекции, ингалятор и диспенсер жидкостей, такой как глазная пипетка. Обычно приспособление для введения вируса в наборе будет совместимо с вирусом набора; например, безигловое приспособление для инъекции, такое как приспособление для инъекции под высоким давлением, может быть включено в наборы с вирусами, которые не повреждаются при инъекции высоким давлением, но обычно не включается в наборы с вирусами, которые повреждаются при инъекции высоким давлением.

Наборы, представленные в настоящем документе, также могут включать приспособление для введения компонента, такого как ДК-активатор или стимулятор, пациенту. Любое из множества известных специалистам в данной области приспособлений для введения лекарств пациенту может быть включено в наборы, представленные в настоящем документе. примеры приспособлений включают, но не ограничиваясь этим, гиподермические иглы, внутривенные иглы, катетер, безигловые инъекции, ингаляторы и жидкостные диспенсеры, такие как глазная пипетка. Обычно приспособление для введения состава кита будет совместимо с желаемым способом введения состава.

Следующие примеры предлагаются для иллюстрации, но не являются ограничивающими.

Примеры

Пример 1. Конструирование варианта оболочки вируса Синдбис.

Вирус Синдбис (8У) - представитель рода А1рЬау1ги8 и семейства Τодаν^^^бае - способен инфицировать ДКл, возможно благодаря Οί.’-8^Ν (публикация КИткВа, А.В., е! а1. 2003. 1. Упо1. 77: 12022-12032, включенная в настоящую заявку путем ссылки в полном объеме). Однако канонический вирусный рецептор лабораторного штамма 8У является поверхностным гепарансульфатом (Н8), который обнаружен во многих типах клеток (публикации 81гаи55, 1.Н., е! а1. 1994. Агсб. У1го1. 9: 473-484; Вугпек, А.Р., и О.Е. СпШп. 1998. 1. Упо1. 72: 7349-7356, каждая из которых включена в настоящую заявку путем ссылки в полном объеме). Для того чтобы уменьшить связывание с гепарансульфатом, измененный Е2 оболочки (называемый 8УСти) был сконструирован Аапд е! а1. (публикация И8 2008/0019998, включенная в полном объеме). Часть этой стратегии включала делецию четырех аминокислот соединения пробелка Е3/Е2 и делецию двух аминокислот с последующим добавлением 10-аминокислотной последовательности из гемагглютинина (см. фиг. 1А и 1В). Получившийся в результате Е2 белок экспрессируется как соединение Е3 и Е2 (также известное как рЕ2), поскольку природная последовательность расщепления была нарушена, и он также проявляет свойства чужеродного эпитопа (гемагглютинин). Как показано ниже, 8УСти, помимо других проблем, испытывает недостаток экспрессии.

Используя другую стратегию, изобретатели сконструировали Е2 гликопротеин вируса Синдбис для уменьшения связывания с гепарансульфатом, увеличения специфичности к дендритным клеткам и усиления экспрессии. Основной подход к достижению этих характеристик - повышение инфективности дендритных клеток путем изменения остатка 160 в Е2 (остатки 233 на фиг. 1) на некислую аминокислоту, особенно на аминокислоту, отличную от аланина, или удаления его, для уменьшения связывания с гепарином путем понижения положительного заряда белка, удаления НА (гемагглютинин) эпитопа и восстановления сайта расщепления на Ν-конце Е2, в этом случае сайта расщепления фурином. Как часть вирусной оболочки, эти Е2 гликопротеины способны опосредовать инъекцию ДКл, а также уменьшать или прекращать инфицирование других клеточных типов.

Следуя этим принципам, несколько вариативных последовательностей Е2 были разработаны и показаны в следующей таблице. Полужирный шрифт указывает на изменение в НВ цепи последовательности оболочки вируса Синдбис (СепВапк NС 001547.1).

- 27 032403

ЗЕО ΙΌ Νο:	70	76	159	160
3	Е	К	Е	с
4	Е	Е	Е	с
5	Е	К	Δ	Δ
6	Е	Е	Е	Δ
7	К	К	Е	с
8	К	К	Е	Δ
9	К	Е	Е	с
10	к	Е	Е	Δ
11	к	Е	К	с
12	к	Е	К	Δ
13	Е	К	К	с
14	Е	К	к	Δ
15	Е	Е	к	с
16	Е	Е	к	Δ

Были синтезированы последовательности нуклеиновых кислот, кодирующие некоторые из вариантов (см. также фиг. 1), включая последовательности нуклеиновых кислот, которые были кодоноптимизированы для человека. ДНК для вариантов клонировалась в экпрессионном векторе, таком как рсДНК3.

Пример 2. Приготовление вирусной векторной частицы, содержащей вариант гликопротеина Е2 оболочки вируса Синдбис.

Псевдотипированный по оболочке вирус Синдбис приготовлялся путем стандартной опосредованной фосфатом кальция транзиентной трансфекции 293Т клеток лентивирусным вектором, таким как НКЛУ или его производные, упаковочными плазмидами, кодирующими дад, ро1 и ΐΌν, и вариантом последовательности оболочки вируса Синдбис. ЕИОШ - это самоинактивирующийся лентивирусный вектор, несущий промотор иммуноглобулина-С человека, который усиливает экспрессию ОЕР репортерного гена (публикация ЬоЕ, С., е! а1. 2002. Зае^е 295:868-872, которая включена в настоящий документ путем ссылки в полном объеме). Лентивирусные трансфертные векторы (ЕИОШ и его производные) являются третьим поколением лентивирусных векторов на основе ВИЧ (см., главным образом, публикацию Соскге11 аηά Кайт Мо1. В^ес^оЕ 36: 184, 2007), в которых большая часть и3 региона 3' Ι.ΤΙΚ отсутствует, что приводит к самоинактивации 3'-ЬТК.

Образование рекомбинантных лентивирусных векторов было завершено при опосредованной фосфатом кальция (СаРО₄) транзиентной трансфекции 293Τ клеток (293ЬТУ клеточная линия; СЕЛЬ ΒΙΟЬАВЗ ШС, ЬТУ-100). 293Τ клетки были трансфектированы четырьмя плазмидами, осажденными СаРО₄. Следующие четыре плазмиды, использованные для образования препаратов лентивирусного вектора, показаны схематически на фиг. 3 и соответствуют следующему: 1) лентивирусный вектор; ίί) ВИЧ Кет кодирующая плазмида; ΐΐΐ) ВИЧ Оад/Ро1 кодирующая плазмида; и ΐν) кодирующая оболочку плазмида. Лентивирусные векторы могут кодировать желаемые антигены или иммуномодуляторные элементы и содержать определенные целевые делеции для предотвращения интеграции в хромосому хозяина в инфицированных клетках. Дальнейшие примеры альтернативных плазмид, которые можно использовать для транзиентной трансфекции, включают кодирующие холоэнзим Полимеразу, которая соответствует дефективной мутации в интегразе, такой как Э64У мутация, описанная в настоящем документе. Для определенных целей кодирующая оболочку плазмида может кодировать ненацеленную на ДК пантропическую оболочку, такую как УЗУ-О.

Для экспериментов, описанных в настоящем документе, СаРО4 препараты, содержащие 20 мкг вектора и по 60 мкг Оад/Ро1 и Кет плазмид и 240 мкг плазмиды оболочки, были профильтрованы через фильтр с порами размером 0,45 мкм и были добавлены к примерно 6*10⁷ клеткам 293Т, выращенным в цилиндрических флаконах, содержащих 75 мл среды ЭМЕМ с добавкой 10% эмбриональной телячьей сыворотки. Через 6 ч после трансфекции среда была замещена 100 мл свежей среды и собрана через 36 ч после трансфекции. Культуральные супернатанты были центрифугированы при низкой скорости (1200 об/мин) для удаления разрушенных клеток, затем следовала фильтрация через 0,45 мкм фильтры. Фильтрат, содержащий препарат лентивирусного вектора, был необязательно концентрирован путем центрифугирования при 17,700*г в течение 5 ч при 20°С. Отобранный пипеткой лентивирусный вектор был затем ресуспендирован в РВЗ в заданном объеме. Этот процесс типично дает >5*10⁵ МЕ/мл с использованием гликопротеина оболочки вируса Синдбис, описанного в настоящем документе, или всего 5*10⁷ МЕ на каждый цилиндрический флакон, содержащий культуру. Более типично этот процесс дает по меньшей мере всего 1*10⁸ МЕ на каждый цилиндрический флакон, содержащий культуру.

Более подробно, на день -4 150 мл среды клеточной культуры добавляли к цилиндрическим флаконам (ΚΒ), которые помещаются в цилиндрический инкубатор на подставке при 37°С (0,2 об/мин) на ~1 ч.

- 28 032403

В каждый КВ помещался конфлюэнт 15 см на планшет. На день -2 среда отбиралась из КВ и замещалась 100 мл предварительно нагретой среды. На день -1 клетки были собраны в препараты для трансфекции. КВ предварительно нагревались со 100 мл клеточной культуральной среды в течение ~1 ч. Среда отбиралась и добавлялось 10-12 мл РВЗ. КВ помещались на свои места и прокручивались дважды, чтобы покрыть клетки. РВЗ отбирался, и добавлялось 10-12 мл раствора трипсина. КВ снова помещались на свои места и прокручивались дважды, чтобы покрыть клетки. Раствор трипсина отбирался, и КВ помещались в инкубатор на 5 мин. К КВ добавлялось 10 мл теплой среды, и КВ интенсивно прокручивались один раз, чтобы отделить клетки. Используя 10 мл пипетку, клетки отбирались пипеткой и сливались обратно, например, 10 раз, чтобы получить суспензию одной клетки. Клетки удалялись в новый контейнер и разводились средой (40 мл среды на КВ). Клетки подсчитывались и пересаживались в свежие КВ в количестве 7*10⁷/мл и помещались в инкубатор на ночь.

В день 0 приблизительно через 22 ч после пересадки раствор плазмид был приготовлен следующим образом.

Для каждой КВ смешивался вместе раствор плазмид (120 мкг вектора, 60 мкг Сад/Ро1, 60 мкг Кеу, 60 мкг оболочки), 2,5 мл 1,25М СаС1₂ и фильтрованная стерильная вода до 12,5 мл конечного объема. Добавлялось 2,7 мл 2*НВЗ (50 мМ НЕРЕЗ, 10 мМ КС1, 12 мМ декстрозы, 280 мМ №С1, 1,5 мМ №₂НР0₄-7Н₂0, рН 7,0, стерильно профильтрованный) буфер к 50 мл тубе (одна туба/КВ). Добавлялось по каплям 12,7 мл смеси вода-СаС1₂-ДНК к 12,7 мл 2*НВЗ на вортексе со средней скоростью. Пробирки закрывались и размешивание на вортексе продолжалось с максимальной скоростью в течение 5-10 с. Удалялось 25 мл среды из КВ и добавлялся осадок (25 мл) к КВ. Инкубировались 6 ч, затем среда аспирировалась и добавлялось 100 мл свежей, предварительно нагретой среды клеточной культуры. Помещались обратно в инкубатор при 37°.

Через 36-48 ч после трансфекции супернатанты из КВ были собраны в 250 мл конический фалькон и обработаны следующим образом. Супернатант центрифугировался в течение 10 мин при 2000 об/мин. Супернатант фильтровался через 0,45 мкм фильтр. Супернатант центрифугировался в 500 мл фальконе в течение 5 ч при 10,000 об/мин при 20°С. Вектор ресуспендировался в РВЗ или НВЗЗ до заданной концентрации и хранился при -80°С.

Получившиеся в результате псевдотипированные вирусные векторы затем назывались ЕИС^/У1, ЕИС№/У2 и так далее. Вирусные векторные геномы с оболочкой, содержащей УЗУ-С гликопротеин, затем назывались ЕИСЖУЗУ-С.

Пример 3. Производство лентивирусных векторных частиц, содержащих гликопротеины оболочки вируса Синдбис.

В этом примере определялись титры для лентивирусных векторов, псевдотипированных различными оболочками вируса Синдбис. Использовались следующие гликопротеины: Е2: ЗШ-Уаг1 (ЗЕЦ ΙΌ N0: 3), ЗШ-Уаг2 (ЗЕО ΙΌ N0: 4), ЗШ-Уаг3 (ЗЕО ΙΌ N0: 5), ЗУСти (ЗЕО ΙΌ N0: 2), НК (ЗЕО ΙΌ N0: 18).

Гликопротеины вируса Синдбис, псевдотипированные лентивирусными векторными частицами, были получены путем трансфекции клеток 293Т, как описано в примере 2. Необработанные супернатанты были собраны через 48 ч после трансфекции и использованы для трансдукции 293Т клеток, экспрессирующих человеческий ^С-ЗIСN (293-ОС8ЮЦ), помещенных в 6-луночные планшеты за день до этого в количестве 2Е5 клеток на лунку. Титр определялся через 72 ч после инкубации при 37°С путем анализа трансдуцированных клеток на цитометре Спаса Еа§у-Су!е (М1Шроге). Было подсчитано всего 25000 точек для определения процента СЕР+ трансдуцированных клеток, который в свою очередь использовался для подсчета титра СЕР (МЕ, инфекционная единица) для каждого вируса.

Для облегчения изучения целевой трансдукции были сконструированы клеточные линии, экспрессирующие человеческий ЭС-ЗЮН Клеточные линии генерируются путем стабильной трансдукции родительских клеток 293Т с УЗУС-псевдотипированным лентивектором, содержащим кодирующую последовательность для человеческого ОС-ЗЮК кДНК для человеческой ^С-ЗIСN амплифицировалась из плазмид рυN0-й^С8IСN1Аа (ЧпсЕ'оСепе) и клонировалась с правой стороны промотора убиквитина-С человека в лентивирусной плазмиде ЕИ^ для образования Еυ^-й^СЗIСN. Альтернативно клеточные линии образуются путем стабильной трансдукции родительских клеток 293Т с УЗУСпсевдотипированным амфотрофным (нелентивирусным) вектором, содержащим кодирующую последовательность для ОС-ЗЮ^ для лучшего содействия основанному на нуклеиновых кислотах анализу трансдукции лентивирусными векторными частицами. Лентивекторы или амфотрофные векторы затем псевдотипируются УЗУС и используются для трансдукции клеток 293Т. Альтернативно, клеточные линии образуются путем стабильной трансдукции родительских клеток 293Т плазмидой, кодирующей человеческий ОС-ЗЮК Получившиеся в результате клетки окрашиваются антителами (антитело к ^С-ЗIСN человека (ВО Вюкшепсек)) и клетки сортируются для получения однородной популяции ОС^С^ клеточных линий.

В трех независимых экспериментах лентивирусный вектор, псевдотипированный ЗШ-Уаг1 оболочкой, имел титры приблизительно в 10 раз более высокие, чем титры псевдотипированного ЗУСти или НК штамма вируса Синдбис (фиг. 3, нижний график). В последующем исследовании сравнивалась продуктивность трех вариантов оболочки Синдбис. Показан типичный результат. Зт-Уаг1, Зт-Уаг2 и ЗШ

- 29 032403

Уаг3 оболочки производят векторные частицы с практически одинаковыми титрами.

Специфичность вирусных векторных частиц, содержащих вариант вируса Синдбис гликопротеина Е2, оценивалась по трансдукции 293Т.й^С-8IОN или родительских клеток 293Т и оценке экспрессии видимого маркера (например, ОЕР) внутри клеточных линий.

Целевые клетки (293Т.111)С-МО№ или клетки 293Т) пересаживались в 24-луночный культуральный планшет (0,2*10⁶ клеток на лунку) и трансдуцировались вирусными супернатантами (1 мл на лунку) путем центрифугирования планшетов при 2,500 об/мин и при 30°С в течение 90 мин. Затем супернатанты перемещались в свежую культуральную среду и культивировались в течение 3 дней при 37°С. Процент клеток, экспрессирующих маркер, оценивался проточной цитометрией.

Как показано в таблице ниже, как Е2 вариант 1, так и Е2 вариант 3 предпочтительно поражают клетки (специфичны для клеток), экспрессирующие ЬОС-ЗЮК

Таблица 1
Оболочка	Клеточный тип	ски/мл	Соотношение
УЗУ-С	ΗϋΟ-3ΙΟΝ	1,35Ε+08	1,19
	293Т	1,13Ε+08
31п-УагЗ (Эксп. 1)	293-НЭС-3ΙΟΝ	4,2Ε+07	35, 4
	293Т	1,2Ε+06
31п-УагЗ (Эксп. 2)	ΗϋΟ-3ΙΟΝ	8,12Ε+07	11, 09
	293Т	7,33Ε+06
З1п-Уаг2	293-НОС-3ΙΟΝ	1,7Ε+08	18,2
	293Τ	9,1Ε+06
3ίη-νΑΚ-1	ΗϋΟ-3ΙΟΝ	2,93Ε+08	13,75
	293Τ	2,13Ε+07
3ίη-ΗΚ	293-ΗϋΟ-3ΙΟΝ	6,4Ε+06	9,4
	293Τ	6,8Ε+05
ЗУСши (Эксп. 1)	293-ΗϋΟ-3ΙΟΝ	3,4Ε+06	27,0
	293Τ	1,3Ε+05
ЗУСши (Эксп. 2)	ΗϋΟ-3ΙΟΝ	4,65Ε+ 0 6	12,24
	293Τ	3,80Ε+05

Пример 4. Иммуногенетичность лентивирусных векторных частиц, содержащих гликопротеины оболочки вируса Синдбис.

В этом примере оценивалась иммуногенность для лентивирусных векторов, псевдотипированных различными оболочками вируса Синдбис. Более конкретно, определялось количество антигенспецифичных СО8 Т-клеток и их профилей цитокиновой секреции. Использованными Е2 гликопротеинами были 8Ш-Уаг1 (^ ГО N0: 3), 8Ш-Уаг2 (^ ГО N0: 4), 8Ш-Уаг3 (^ ГО N0: 5), 8УОти (^ ГО N0: 2).

Вирусный геном содержал последовательность, кодирующую яичный альбумин (0УА). Лентивирусные векторные частицы образовывались путем трансфектирования 293Т клеток, как описано в примере 2. Супернатанты собирались, и количество р24 определялось с использованием набора ЕЕТ8А (Абуапсеб ВюЖепсе ЕаЬз, Кеп§тд1оп МП). Белок р24 является белком ядра ВИЧ, обнаруживаемым в псевдотипированных вирионах и продуктом дад гена. С57ВЕ/6 мыши (5 мышей на группу) были иммунизированы подкожно не способным к интеграции лентивектором, кодирующим яичный альбумин 0УА. Число и функции 0УА2 57 (МГЛЕЕКЕ) (8Е^ ГО N0: 24) пептид-специфичных СО8 Т-клеток и профилей цитокиновой секреции в селезенке определялось на 9 день при помощи МНС-1/пептидного мультиметра и внутриклеточного цитокинового окрашивания.

Вкратце, селезенки извлекались и гомогенизировались путем продавливания через 70 мкм нейлоновый фильтр. Красные кровяные клетки лизировались гипотоническим шоком путем короткой выдержки в дистиллированной воде и немедленно перемещались в изотоническую среду с добавлением 10* РВ8. примерно 5*10⁶ спленоцитов на пробу окрашивались РЕ-меченым Н-2КЬ/0УА257 пентамером (Рго1ттипе) при 25°С в РВ8 с 2% ЕС8 и 2 мМ ЭДТА (ЕАС8 буфер). Клетки затем промывались дважды и окрашивались прижизненным красителем Е!УЕГОЕА1) Nеа^-Iηί^а^ес1 (Е/П МВ; ЕпуЕгодеп) и затем метились флуорохромными антителами: СО44 ΕΠΌ, СО19 РегСР-Су5.5 и СО8 РасШс В1ие (еВюЖепсе) при 4°С. Данные собирались на ВО Е8В II проточном цитометре (50,000 СО8+ точек) и анализировались с помощью программы ЕЕжЗо (Тгее81аг). Стратегия пропуска для идентификации СО8 Т-клеток была следующей: лимфоциты (нижняя медиана переднего рассеяния, боковое рассеяние нижнее), одиночные клетки (область бокового рассеяния = высота бокового рассеяния), живые клетки (Е/Ό МВ-), СО8 Т-клетки (СО8+ СО19-). Определялся процент клеток, экспрессирующих №N-7 внутри СО8+ ворот, и был представлен на фиг. 4А и 4В. Горизонтальная линия показывает средние значения. Неспецифическое ГОМу окрашивание определялось в клетках селезенки у мышей, которым инъецировали пустой носитель (НВ88), у которых клетки стимулировались т уЕго пептидом. ГОМу окрашивание было ниже 0,2% для всех проб, культивируемых без белка (не показано). В дополнение к фракции СО8 Т-клеток, образующих ГОМу, также изображается фракция ^N-7+ клеток, также образующих Т\Е(/. и/или ГО-2, как показано в легенде.

В одной серии экспериментов количество используемого вируса содержало или 2500 нг, или 125 нг

- 30 032403 р24. Фиг. 4А иллюстрирует, что лентивекторы, псевдотипированные вариантом оболочек Синдбис, имеют схожую активность ш νί\Ό. Как показано на крайней левой панели, среднее значение антигенспецифичных Т-клеток практически такое же, как при двух отличных дозировках. Кроме того, средний процент ГЕИ-у клеток также одинаков. Паттерны цитокиновой секреции, особенно фракции ГЕ^-уположительных клеток, также экспрессирующих ΙΕ-2 или ТХЕ-а, также похожи, с более высоким процентом ΙΕΧ-γ клеток, негативных для ΙΕ-2 и ТЫЕ-ц.

В другой серии экспериментов группы из 5 мышей получили дозировку серийным разведением вируса или носителем. Вирус был псевдотипирован или БшУаг1, или БУСти. Процент клеток с СИ44Ы Н2КЬ/0УА257 пентамер+ фенотип обозначен на фиг. 4В. Соответствующая линия показывает средние значения. Как показано на фиг. 4В, БшУаг1-псевдотипированный ЬУ вызывал значительно более сильную экспансию антиген-специфичных СИ8 Т-клеток, чем БУСти. Больше того, БшУаг1псевдотипированные лентивекторы вызывали более сильную функциональную реакцию СИ8 Т-клеток, чем БУСти (фиг. 4С). Неспецифическое окрашивание определялось в НВББ-инъецированных (носитель) мышах, рестимулированных пептидом. ΙΕ^γ окрашивание было ниже 0,2% для всех проб, культивируемых без пептида (не показано).

Пример 5. Конструкция неинтегрирующих лентивирусных векторов (МЕУ).

Было сконструировано множество неинтегрирующих лентивирусных векторов. Схема примеров лентивирусных векторов показана на фиг. 5А. Верхний рисунок показывает вектор в провирусной форме. Все векторы содержат донор сплайсируемого фрагмента, упаковочный сигнал (рк1), реагирующий на Кет элемент (ККЕ), донор сплайсируемого фрагмента, акцептор сплайсируемого фрагмента, центральный полипуриновый путь (сРРТ) и ^РКЕ элемент. Кроме того, все векторные конструкты содержат промотор для экспрессии в клетках млекопитающих и интересующую последовательность, меченную антиген в конструкте-примере. Промоторы, использованные в примерах, включают промотор человеческого убиквитина С (ИЬ1С), цитомегаловируса немедленно-ранний промотор (СМУ) и промотор вируса саркомы Рауса (КБУ).

Просмотр в увеличенном масштабе И3 региона показан ниже как открытый участок с последовательностью РРТ (полипуринового пути) сразу же перед ним. Ниже показаны три различных И3 региона в схематической форме; их последовательности показаны на фиг. 5В и БЕР ΙΌ N0: 21-23. Конструкты содержат делеции в И3 регионах. БЕЫ конструкт имеет делецию около 130 нуклеотидов в И3 (М1уокЫ, ек а1. I. У1го1. 72: 8150, 1998; Уи ек а1. РNАБ 83: 3194, 1986), которая удаляет ТАТА-бокс, делая невозможной активность ЬТК промотора. Делеции в конструктах 703 и 704 повышают экспрессию из лентивирусных векторов (публикация Вауег ек а1. Мо1. Тйегару 16: 1968, 2008, включена в полном объеме). Кроме того, конструкт 704 содержит делецию 3' РРТ, которая уменьшает интеграцию вектора (публикация \У0 2009/076524, включена в полном объеме). Последовательности И3 региона всех конструктов показаны на фиг. 5В. 3' РРТ начинается в позиции 3, и показаны распространенные делеции, относящиеся к вектору с делециями БШ.

Пример 6. Экспрессия в дендритных клетках, за которой следует трансдукция лентивирусными векторными частицами.

Этот пример показывает уровень экспрессии СЕР (зеленого флюоресцирующего белка) в дендритных клетках, образованных векторами с распространенными делециями И3.

Серии вирусов были созданы путем трансфекции 293Т клеток, как описано выше. Все вирусы содержали оболочку БЕН-УаИ, векторный геном, содержащий ЦЬ1С или СМУ промотор, функционально связанный с СЕР трансгеном, и дефектную интегразу в силу содержания Э64У мутации. Необработанные супернатанты были собраны через 48 ч после трансдукции, и эквивалентные объемы каждого супернатанта использовались для трансдукции 293Т-^СБIСN клеток. СЕР экспрессия определялась через 72 ч после трансдукции с использованием СИАУА Еаку-Суке проточного цитометра. 50000 точек были подсчитаны для каждой трансдуцированной популяции клеток. Данные анализировались с использованием аналитической программы для цитометрии Е1о\\7о.

Такие же результаты были получены как с ИЬ1С (фиг. 6, панель А), так и СМУ (фиг. 6, панель В) промоторами. Показано, что у лентивирусных векторов, содержащих распространенные делеции И3 (703 и 704), выше трансгенная экспрессия, связанная с векторами с делецией по БIN. Делеция РРТ в конструкте 704 слабо уменьшает экспрессию по сравнению с конструктом 703.

Пример 7. Векторы с большими делециями в И3 являются неинтегрирующимися.

Этот пример демонстрирует сравнительную интеграционную эффективность БШ-УаН псевдотипированных векторов, содержащих комбинации различных векторных делеций с дефектной или дикого типа интегразой после трансдукции 293-^С-БIСN клеток.

Стоки векторов были созданы из множества различных комбинаций интегразных генов и И3 делеций. Векторы с делециями И3 (см. фиг. 5А и 5В), БIN, 703 и 704 были трансфектированы, как описано выше, или геном интегразы дикого типа, или геном мутантной интегразы. Векторы в этих экспериментах содержали СЕР-2А-№о трансген, который кодирует устойчивость как к СЕР, так и к С418. Рамки считывания связаны посредством 2А саморасщепляющегося белка для образования отдельных белков. Титры СЕР для всех векторных стоков определялись с использованием стандартных методов проточной цито

- 31 032403 метрии. Векторные стоки затем использовались для инфицирования 293-ОС-З1СН клеток, помещенных за день до этого в 6-луночные планшеты по 5*10⁵ клеток на лунку. После трансдукции клетки обрабатывались трипсином каждые 72 ч. На каждом проходе 2*10⁵ клетки были перенесены в 6-луночные планшеты с 2 мл ЭМЕМ + 10% ЕВЗ. Оставшиеся клетки были использованы для определения числа СЕР+ клеток путем проточной цитометрии.

На фиг. 7 представлен соответствующий СЕР титр как фракция титра, наблюдаемого в одном проходе. Отсутствие СЕР экспрессии отражает отсутствие СЕР трансгена, что является результатом отсутствия интеграции на первичном этапе транскрипции. Как и ожидалось, было обнаружено, все вирусы, содержащие Э64У мутантную интегразу (ΙΝ-), являлись неинтегрирующимися. Кроме того, было обнаружено, что вирусы, содержащие РРТ делецию (704), являются дефектными в отношении интеграции даже в присутствии дикого типа ΙΝ гена. Это показывает, что делеция 3' РРТ предоставляет избыточный механизм безопасности в комбинации с интегразной мутацией.

Пример 8. Интегрирующиеся и неинтегрирующиеся лентивирусные векторы являются иммуногенетически эквивалентными.

В этом примере реакции СЭ8 Т-клеток оценивались после иммунизации интегрирующимися или неинтегрирующимися вирусами.

С57ВБ/6 мыши иммунизировались подкожно 2,5*10¹⁰ геномами интегрирующихся (Ιΐ'ΐ(“') или неинтегрирующихся (ΙπΙ¹⁵⁶⁴'''') лентивирусов, кодирующих Сад антиген из вируса иммунодефицита обезьян (ВИО). Число и функции ВИО Сад-специфичных СЭ8 Т-клеток в селезенке определялось на 10 день внутриклеточным цитокиновым окрашиванием, как описано выше, с тем исключением, что для рестимуляции использовался ВИО Сад-производный пептид ААУКЖУМТОТЕ. Фиг. 8 иллюстрирует, что неинтегрирующиеся лентивекторы могут вызывать СЭ8 Т-клеточный ответ, эквивалентный интегрирующимся лентивекторам. Более того, паттерн цитокиновой экспрессии был таким же.

Пример 9. Иммунизация ОС-МТУ обеспечивает терапевтический эффект.

В этом примере мыши, которые получили опухолевые клетки, прошли лечение иммунизацией ОСМЬУ, экспрессирующими опухолевый антиген.

ВАЬВ/с мышам инъецировали подкожно 2*10⁴ СТ26 клеток карциномы кишечника. Через один день мышам подкожно ввели или пустой носитель, или препарат ЗШУаг1 псевдотипированных лентивирусных векторных частиц, содержащий 3,2 мкг р24 капсидного белка. Вирусная векторная оболочка содержала вариант вируса Синдбис Е2, как описано выше, и вектор являлся неинтегрирующим и кодировал АН1А5 пептид (ЗРЗУАУНОЕ; ЗЕО ΙΌ NΟ: 25), модифицированный ММТУ др70 СЭ8 Т-клеток эпитоп, который является трансплантационным антигеном, соответствующим СТ26 опухолевым клеткам. Определялся первичный рост опухоли, а также долгосрочное выживание иммунизированных мышей по сравнению с контрольными. Фиг. 9 показывает, что опухолевый рост медленней у мышей, получивших ОС-МЬУ, и, более того, долгосрочное выживание (оценивавшееся в течение 75 дней) было значительно лучше (60% выживания по сравнению с 20%). Следовательно, ЭС-нацеленные неинтегрирующиеся лентивекторы (ОС-МЕУ) являются эффективными в терапевтическом лечении опухолей.

Список последовательностей <110> 1ттипе Безтдп СогрогаЫоп <120> ЛЕНТИВИРУСНЫЕ ВЕКТОРЫ, ПСЕВДОТИПИРОВАННЫЕ ГЛИКОПРОТЕИНОМ ОБОЛОЧКИ ВИРУСА СИНДБИС <130> ΣΏΟ 203РС <160> 27 <170> Патентная Версия 3.5 <210> 1 <211> 423 <212> белок <213> Вирус Синдбис <220>

<221> разное <222> (160)..(160) <223> Xаа может быть любая аминокислота, встречающаяся в природе

- 32 032403 <400> 1

Зег 1

Уа1

11е

Азр Азр 5

РНе ТНг

Ьеи ТНг

Зег 10

Рго

Туг

Ьеи С1у

ТНг 15

Суз

Зег

Туг

Суз

Η13

Н1з

ТЬг

Уа1

Рго

Суз

РНе

Зег

Рго

Уа1

Ьуз

11е

С1и

20

25

30

С1п

Уа1

Тгр

Азр

С1и

А1а

Азр

Азр

Азп

ТНг

11е

Агд

11е

С1п

ТНг

Зег

35

40

45

А1а

С1п

РЬе

С1у

Туг

Азр

С1п

Зег

С1у

А1а

А1а

Зег

А1а

Азп

Ьуз

Туг

50

55

60

Агд

Туг

Мек

Зег

Ьеи

Ьуз

С1п

Азр

Н1з

ТНг

Уа1

Ьуз

С1и

С1у

ТНг

Мек

65

70

75

80

Азр

Азр

11е

Ьуз

11е

Зег

ТЬг

Зег

С1у

Рго

Суз

Агд

Агд

Ьеи

Зег

Туг

85

90

95

Ьуз

С1у

Туг

РЬе

Ьеи

Ьеи

А1а

Ьуз

Суз

Рго

Рго

С1у

Азр

Зег

Уа1

ТНг

100

105

110

Уа1

Зег

11е

Уа1

Зег

Зег

Азп

Зег

А1а

ТНг

Зег

Суз

ТНг

Ьеи

А1а

Агд

115

120

125

Ьуз

11е

Ьуз

Рго

Ьуз

РЬе

Уа1

С1у

Агд

С1и

Ьуз

Туг

Азр

Ьеи

Рго

Рго

130

135

140

Уа1

Η1Ξ

С1у

Ьуз

Ьуз

11е

Рго

Суз

ТНг

Уа1

Туг

Азр

Агд

Ьеи

Ьуз

Хаа

145

150

155

160

ТЬг

ТЬг

А1а

С1у

Туг

11е

ТЬг

Мек

Н1з

Агд

Рго

Агд

Рго

Н1з

А1а

Туг

165

170

175

ТЬг

Зег

Туг

Ьеи

С1и

С1и

Зег

Зег

С1у

Ьуз

Уа1

Туг

А1а

Ьуз

Рго

Рго

180

185

190

Зег

С1у

Ьуз

Азп

11е

ТЬг

Туг

С1и

Суз

Ьуз

Суз

С1у

Азр

Туг

Ьуз

ТНг

195

200

205

С1у

ТЬг

Уа1

Зег

ТЬг

Агд

ТЬг

С1и

11е

ТНг

С1у

Суз

ТНг

А1а

11е

Ьуз

210

215

220

С1п

Суз

Уа1

А1а

Туг

Ьуз

Зег

Азр

С1п

ТНг

Ьуз

Тгр

Уа1

РНе

Азп

Зег

225

230

235

240

- 33 032403

Рго

Азр

Ьеи

11е Агд 245

Ηίδ

Азр Азр

Η^з

ТЬг А1а 250

С1п

С1у

Ьуз

Ьеи 255

Η^з

Ьеи

Рго

РЬе

Ьуз

Ьеи

11е

Рго

Зег

ТЬг

Суз

Меб

Уа1

Рго

Уа1

А1а

Η^з

260

265

270

А1а

Рго

Азп

Уа1

11е

Ηίδ

С1у

РЬе

Ьуз

Η^з

11е

Зег

Ьеи

С1п

Ьеи

Азр

275

280

285

ТЬг

Азр

Ηίδ

Ьеи

ТЬг

Ьеи

Ьеи

ТЬг

ТЬг

Агд

Агд

Ьеи

С1у

А1а

Азп

Рго

290

295

300

Б1и

Рго

ТЬг

ТЬг

С1и

Тгр

11е

Уа1

С1у

Ьуз

ТЬг

Уа1

Агд

Азп

РЬе

ТЬг

305

310

315

320

Уа1

Азр

Агд

Азр

С1у

Ьеи

С1и

Туг

11е

Тгр

С1у

Азп

Η^з

С1и

Рго

Уа1

325

330

335

Агд

Уа1

Туг

А1а

С1п

С1и

Зег

А1а

Рго

С1у

Азр

Рго

Η^з

С1у

Тгр

Рго

340

345

350

Η1Ξ

С1и

11е

Уа1

С1п

Η^з

Туг

Туг

Η^з

Агд

Η^з

Рго

Уа1

Туг

ТЬг

11е

355

360

365

Ьеи

А1а

Уа1

А1а

Зег

А1а

ТЬг

Уа1

А1а

Меб

Меб

11е

С1у

Уа1

ТЬг

Уа1

370

375

380

А1а

Уа1

Ьеи

Суз

А1а

Суз

Ьуз

А1а

Агд

Агд

С1и

Суз

Ьеи

ТЬг

Рго

Туг

385

390

395

400

А1а

Ьеи

А1а

Рго

Азп

А1а

Уа1

11е

Рго

ТЬг

Зег

Ьеи

А1а

Ьеи

Ьеи

Суз

405

410

415

Суз

Уа1

Агд

Зег

А1а

Азп

А1а

420

<210>	2
<211>	986
<212>	белок
<213>	Вирус	Синдбис
<400>	2
Меб Зег А1а	А1а Рго	Ьеи Уа1 ТЬг А1а Меб Суз	Ьеи Ьеи С1у Азп Уа1
1		5	10	15

- 34 032403

Зег

РИе

Рго

Суз 20

Азр

Агд

Рго

Рго

ТИг 25

Суз

Туг

ТИг

Агд

С1и 30

Рго

Зег

Агд

А1а

Ьеи

Азр

11е

Ьеи

С1и

С1и

Азп

Уа1

Азп

Н1з

С1и

А1а

Туг

Азр

35

40

45

ТИг

Ьеи

Ьеи

Азп

А1а

11е

Ьеи

Агд

Суз

С1у

Зег

Зег

С1у

Зег

Уа1

11е

50

55

60

Азр

Азр

РИе

ТИг

Ьеи

ТИг

Зег

Рго

Туг

Ьеи

С1у

ТИг

Суз

Зег

Туг

Суз

65

70

75

80

Η1Ξ

Η13

ТИг

Уа1

Рго

Суз

РИе

Зег

Рго

Уа1

Ьуз

11е

С1и

С1п

Уа1

Тгр

85

90

95

Азр

С1и

А1а

Азр

Азр

Азп

ТИг

11е

Агд

11е

С1п

ТИг

Зег

А1а

С1п

РИе

100

105

110

С1у

Туг

Азр

С1п

Зег

С1у

А1а

А1а

Зег

А1а

Азп

Ьуз

Туг

Агд

Туг

МеЕ

115

120

125

Зег

Ьеи

Ьуз

С1п

МеЕ

Туг

Рго

Туг

Азр

Уа1

Рго

Азр

Туг

А1а

ТИг

Уа1

130

135

140

Ьуз

С1и

С1у

ТИг

МеЕ

Азр

Азр

11е

Ьуз

11е

Зег

ТИг

Зег

С1у

Рго

Суз

145

150

155

160

Агд

Агд

Ьеи

Зег

Туг

Ьуз

С1у

Туг

РИе

Ьеи

Ьеи

А1а

Ьуз

Суз

Рго

Рго

165

170

175

С1у

Азр

Зег

Уа1

ТИг

Уа1

Зег

11е

Уа1

Зег

Зег

Азп

Зег

А1а

ТИг

Зег

180

185

190

Суз

ТИг

Ьеи

А1а

Агд

Ьуз

11е

Ьуз

Рго

Ьуз

РИе

Уа1

С1у

Агд

С1и

Ьуз

195

200

205

Туг

Азр

Ьеи

Рго

Рго

Уа1

Н15

С1у

Ьуз

Ьуз

11е

Рго

Суз

ТИг

Уа1

Туг

210

215

220

Азр

Агд

Ьеи

А1а

А1а

ТИг

ТИг

А1а

С1у

Туг

11е

ТИг

МеЕ

Н1з

Агд

Рго

225

230

235

240

Агд

Рго

Η13

А1а

Туг

ТИг

Зег

Туг

Ьеи

С1и

С1и

Зег

Зег

С1у

Ьуз

Уа1

245

250

255

- 35 032403

Туг

А1а

Ьуз

Рго 260

Рго

Зег

С1у

Ьуз

Азп 265

11е

ТЬг

Туг

С1и

Суз 270

Ьуз

Суз

С1у

Азр

Туг

Ьуз

ТЬг

С1у

ТЬг

Уа1

Зег

ТЬг

Агд

ТЬг

С1и

11е

ТЬг

С1у

275

280

285

Суз

ТЬг

А1а

11е

Ьуз

С1п

Суз

Уа1

А1а

Туг

Ьуз

Зег

Азр

С1п

ТЬг

Ьуз

290

295

300

Тгр

Уа1

РЬе

Азп

Зег

Рго

Азр

Ьеи

11е

Агд

Η^з

Азр

Азр

Η^з

ТЬг

А1а

305

310

315

320

С1п

С1у

Ьуз

Ьеи

Ηίδ

Ьеи

Рго

РЬе

Ьуз

Ьеи

11е

Рго

Зег

ТЬг

Суз

МеЬ

325

330

335

Уа1

Рго

Уа1

А1а

Ηίδ

А1а

Рго

Азп

Уа1

11е

Η^з

С1у

РЬе

Ьуз

Η^з

11е

340

345

350

Зег

Ьеи

С1п

Ьеи

Азр

ТЬг

Азр

Η^з

Ьеи

ТЬг

Ьеи

Ьеи

ТЬг

ТЬг

Агд

Агд

355

360

365

Ьеи

С1у

А1а

Азп

Рго

С1и

Рго

ТЬг

ТЬг

С1и

Тгр

11е

Уа1

С1у

Ьуз

ТЬг

370

375

380

Уа1

Агд

Азп

РЬе

ТЬг

Уа1

Азр

Агд

Азр

С1у

Ьеи

С1и

Туг

11е

Тгр

С1у

385

390

395

400

Азп

ΗΪ3

С1и

Рго

Уа1

Агд

Уа1

Туг

А1а

С1п

С1и

Зег

А1а

Рго

С1у

Азр

405

410

415

Рго

ΗΪ3

С1у

Тгр

Рго

Η^з

С1и

11е

Уа1

С1п

Η^з

Туг

Туг

Η^з

Агд

Η^з

420

425

430

Рго

Уа1

Туг

ТЬг

11е

Ьеи

А1а

Уа1

А1а

Зег

А1а

ТЬг

Уа1

А1а

МеЬ

МеЬ

435

440

445

11е

С1у

Уа1

ТЬг

Уа1

А1а

Уа1

Ьеи

Суз

А1а

Суз

Ьуз

А1а

Агд

Агд

С1и

450

455

460

Суз

Ьеи

ТЬг

Рго

Туг

А1а

Ьеи

А1а

Рго

Азп

А1а

Уа1

11е

Рго

ТЬг

Зег

465

470

475

480

Ьеи

А1а

Ьеи

Ьеи

Суз

Суз

Уа1

Агд

Зег

А1а

Азп

А1а

С1и

ТЬг

РЬе

ТЬг

485

490

495

- 36 032403

Б1и ТЬг Меб

Зег 500

Туг

Ьеи Тгр

Зег Азп 505

Зег

С1п

Рго

РЬе

РЬе 510

Тгр

Уа1

Б1п

Ьеи

Суз

11е

Рго

Ьеи

А1а

А1а

РЬе

11е

Уа1

Ьеи

Меб

Агд

Суз

Суз

515

520

525

Зег

Суз

Суз

Ьеи

Рго

РЬе

Ьеи

Уа1

Уа1

А1а

С1у

А1а

Туг

Ьеи

А1а

Ьуз

530

535

540

Уа1

Азр

А1а

Туг

Б1и

Н1з

А1а

ТЬг

ТЬг

Уа1

Рго

Азп

Уа1

Рго

С1п

11е

545

550

555

560

Рго

Туг

Ьуз

А1а

Ьеи

Уа1

С1и

Агд

А1а

С1у

Туг

А1а

Рго

Ьеи

Азп

Ьеи

565

570

575

С1и

11е

ТЬг

Уа1

Меб

Зег

Зег

С1и

Уа1

Ьеи

Рго

Зег

ТЬг

Азп

С1п

С1и

580

585

590

Туг

11е

ТЬг

Суз

Ьуз

РЬе

ТЬг

ТЬг

Уа1

Уа1

Рго

Зег

Рго

Ьуз

11е

Ьуз

595

600

605

Суз

Суз

С1у

Зег

Ьеи

С1и

Суз

С1п

Рго

А1а

А1а

Н1з

А1а

С1у

Туг

ТЬг

610

615

620

Суз

Ьуз

Уа1

РЬе

Б1у

С1у

Уа1

Туг

Рго

РЬе

Меб

Тгр

С1у

С1у

А1а

С1п

625

630

635

640

Суз

РЬе

Суз

Азр

Зег

С1и

Азп

Зег

С1п

Меб

Зег

С1и

А1а

Туг

Уа1

С1и

645

650

655

Ьеи

Зег

А1а

Азр

Суз

А1а

Зег

Азр

Н1з

А1а

С1п

А1а

11е

Ьуз

Уа1

Н1з

660

665

670

ТЬг

А1а

А1а

Меб

Ьуз

Уа1

С1у

Ьеи

Агд

11е

Уа1

Туг

С1у

Азп

ТЬг

ТЬг

675

680

685

Зег

РЬе

Ьеи

Азр

Уа1

Туг

Уа1

Азп

С1у

Уа1

ТЬг

Рго

С1у

ТЬг

Зег

Ьуз

690

695

700

Азр

Ьеи

Ьуз

Уа1

11е

А1а

С1у

Рго

11е

Зег

А1а

Зег

РЬе

ТЬг

Рго

РЬе

705

710

715

720

Азр

Н1з

Ьуз

Уа1

Уа1

11е

Н1з

Агд

С1у

Ьеи

Уа1

Туг

Азп

Туг

Азр

РЬе

725

730

735

- 37 032403

Рго С1и Туг С1у

А1а

Ме5

Ьуз

Рго С1у 745

А1а

РЬе

С1у

Азр

11е 750

С1п

А1а

740

ТЬг

Зег

Ьеи

ТЬг

Зег

Ьуз

Азр

Ьеи

11е

А1а

Зег

ТЬг

Азр

11е

Агд

Ьеи

755

760

765

Ьеи

Ьуз

Рго

Зег

А1а

Ьуз

Азп

Уа1

Н1з

Уа1

Рго

Туг

ТЬг

С1п

А1а

Зег

770

775

780

Зег

С1у

РЬе

С1и

Ме5

Тгр

Ьуз

Азп

Азп

Зег

С1у

Агд

Рго

Ьеи

С1п

С1и

785

790

795

800

ТЬг

А1а

Рго

РЬе

С1у

Суз

Ьуз

11е

А1а

Уа1

Азп

Рго

Ьеи

Агд

А1а

Уа1

805

810

815

Азр

Суз

Зег

Туг

С1у

Азп

11е

Рго

11е

Зег

11е

Азр

11е

Рго

Азп

А1а

820

825

830

А1а

РЬе

11е

Агд

ТЬг

Зег

Азр

А1а

Рго

Ьеи

Уа1

Зег

ТЬг

Уа1

Ьуз

Суз

835

840

845

С1и

Уа1

Зег

С1и

Суз

ТЬг

Туг

Зег

А1а

Азр

РЬе

С1у

С1у

Ме5

А1а

ТЬг

850

855

860

Ьеи

С1п

Туг

Уа1

Зег

Азр

Агд

С1и

С1у

С1п

Суз

Рго

Уа1

Н1з

Зег

Н1з

865

870

875

880

Зег

Зег

ТЬг

А1а

ТЬг

Ьеи

С1п

С1и

Зег

ТЬг

Уа1

Н1з

Уа1

Ьеи

С1и

Ьуз

885

890

895

С1у

А1а

Уа1

ТЬг

Уа1

Н13

РЬе

Зег

ТЬг

А1а

Зег

Рго

С1п

А1а

Азп

РЬе

900

905

910

11е

Уа1

Зег

Ьеи

Суз

С1у

Ьуз

Ьуз

ТЬг

ТЬг

Суз

Азп

А1а

С1и

Суз

Ьуз

915

920

925

Рго

Рго

А1а

Азр

Н13

11е

Уа1

Зег

ТЬг

Рго

Н1з

Ьуз

Азп

Азр

С1п

С1и

930

935

940

РЬе

С1п

А1а

А1а

11е

Зег

Ьуз

ТЬг

Зег

Тгр

Зег

Тгр

Ьеи

РЬе

А1а

Ьеи

945

950

955

960

РЬе

С1у

С1у

А1а

Зег

Зег

Ьеи

Ьеи

11е

11е

С1у

Ьеи

Ме5

11е

РЬе

А1а

965

970

975

- 38 032403

Суз

Зег МеЕ МеЕ Ьеи ТИг

980

Зег ТИг Агд Агд

985 <210>3 <211>982 <212> белок <213> Вирус Синдбис <400>3

МеЕ 1

Зег

А1а

А1а

Рго 5

Ьеи Уа1

ТИг

А1а МеЕ 10

Суз

Ьеи

Ьеи

С1у

Азп 15

Уа1

Зег

РИе

Рго

Суз

Азр

Агд

Рго

Рго

ТИг

Суз

Туг

ТИг

Агд

С1и

Рго

Зег

20

25

30

Агд

А1а

Ьеи

Азр

11е

Ьеи

С1и

С1и

Азп

Уа1

Азп

Ηίδ

С1и

А1а

Туг

Азр

35

40

45

ТИг

Ьеи

Ьеи

Азп

А1а

11е

Ьеи

Агд

Суз

С1у

Зег

Зег

С1у

Агд

Зег

Ьуз

50

55

60

Агд

Зег

Уа1

11е

Азр

Азр

РИе

ТИг

Ьеи

ТИг

Зег

Рго

Туг

Ьеи

С1у

ТИг

65

70

75

80

Суз

Зег

Туг

Суз

ΗΪ3

Η13

ТИг

Уа1

Рго

Суз

РИе

Зег

Рго

Уа1

Ьуз

11е

85

90

95

С1и

С1п

Уа1

Тгр

Азр

С1и

А1а

Азр

Азр

Азп

ТИг

11е

Агд

11е

С1п

ТИг

100

105

110

Зег

А1а

С1п

РИе

С1у

Туг

Азр

С1п

Зег

С1у

А1а

А1а

Зег

А1а

Азп

Ьуз

115

120

125

Туг

Агд

Туг

МеЕ

Зег

Ьеи

С1и

С1п

Азр

Η15

ТИг

Уа1

Ьуз

С1и

С1у

ТИг

130

135

140

МеЕ

Азр

Азр

11е

Ьуз

11е

Зег

ТИг

Зег

С1у

Рго

Суз

Агд

Агд

Ьеи

Зег

145

150

155

160

Туг

Ьуз

С1у

Туг

РИе

Ьеи

Ьеи

А1а

Ьуз

Суз

Рго

Рго

С1у

Азр

Зег

Уа1

165

170

175

ТИг

Уа1

Зег

11е

Уа1

Зег

Зег

Азп

Зег

А1а

ТИг

Зег

Суз

ТИг

Ьеи

А1а

180

185

190

- 39 032403

Агд Ьуз

11е 195

Ьуз

Рго

Ьуз

РЬе Уа1 200

С1у Агд

С1и

Ьуз

Туг 205

Азр

Ьеи

Рго

Рго

Уа1

Η13

С1у

Ьуз

Ьуз

11е

Рго

Суз

ТЬг

Уа1

Туг

Азр

Агд

Ьеи

С1и

210

215

220

С1у

ТЬг

ТЬг

А1а

С1у

Туг

11е

ТЬг

МеЬ

Η^з

Агд

Рго

Агд

Рго

Η^з

А1а

225

230

235

240

Туг

ТЬг

Зег

Туг

Ьеи

С1и

С1и

Зег

Зег

С1у

Ьуз

Уа1

Туг

А1а

Ьуз

Рго

245

250

255

Рго

Зег

С1у

Ьуз

Азп

11е

ТЬг

Туг

С1и

Суз

Ьуз

Суз

С1у

Азр

Туг

Ьуз

260

265

270

ТЬг

С1у

ТЬг

Уа1

Зег

ТЬг

Агд

ТЬг

С1и

11е

ТЬг

С1у

Суз

ТЬг

А1а

11е

275

280

285

Ьуз

С1п

Суз

Уа1

А1а

Туг

Ьуз

Зег

Азр

С1п

ТЬг

Ьуз

Тгр

Уа1

РЬе

Азп

290

295

300

Зег

Рго

Азр

Ьеи

11е

Агд

Η^з

Азр

Азр

Η^з

ТЬг

А1а

С1п

С1у

Ьуз

Ьеи

305

310

315

320

ΗΪ3

Ьеи

Рго

РЬе

Ьуз

Ьеи

11е

Рго

Зег

ТЬг

Суз

МеЬ

Уа1

Рго

Уа1

А1а

325

330

335

Η13

А1а

Рго

Азп

Уа1

11е

Η^з

С1у

РЬе

Ьуз

Η^з

11е

Зег

Ьеи

С1п

Ьеи

340

345

350

Азр

ТЬг

Азр

Η^з

Ьеи

ТЬг

Ьеи

Ьеи

ТЬг

ТЬг

Агд

Агд

Ьеи

С1у

А1а

Азп

355

360

365

Рго

С1и

Рго

ТЬг

ТЬг

С1и

Тгр

11е

Уа1

С1у

Ьуз

ТЬг

Уа1

Агд

Азп

РЬе

370

375

380

ТЬг

Уа1

Азр

Агд

Азр

С1у

Ьеи

С1и

Туг

11е

Тгр

С1у

Азп

Η^з

С1и

Рго

385

390

395

400

Уа1

Агд

Уа1

Туг

А1а

С1п

С1и

Зег

А1а

Рго

С1у

Азр

Рго

Η^з

С1у

Тгр

405

410

415

Рго

Η13

С1и

11е

Уа1

С1п

Η^з

Туг

Туг

Η^з

Агд

Η^з

Рго

Уа1

Туг

ТЬг

420

425

430

- 40 032403

11е

Ьеи А1а Уа1 435

А1а

Зег

А1а

ТЬг 440

Уа1

А1а

Мек

Мек

11е 445

С1у

Уа1

ТЬг

Уа1

А1а

Уа1

Ьеи

Суз

А1а

Суз

Ьуз

А1а

Агд

Агд

С1и

Суз

Ьеи

ТЬг

Рго

450

455

460

Туг

А1а

Ьеи

А1а

Рго

Азп

А1а

Уа1

11е

Рго

ТЬг

Зег

Ьеи

А1а

Ьеи

Ьеи

465

470

475

480

Суз

Суз

Уа1

Агд

Зег

А1а

Азп

А1а

С1и

ТЬг

РЬе

ТЬг

С1и

ТЬг

Мек

Зег

485

490

495

Туг

Ьеи

Тгр

Зег

Азп

Зег

С1п

Рго

РЬе

РЬе

Тгр

Уа1

С1п

Ьеи

Суз

11е

500

505

510

Рго

Ьеи

А1а

А1а

РЬе

11е

Уа1

Ьеи

Мек

Агд

Суз

Суз

Зег

Суз

Суз

Ьеи

515

520

525

Рго

РЬе

Ьеи

Уа1

Уа1

А1а

С1у

А1а

Туг

Ьеи

А1а

Ьуз

Уа1

Азр

А1а

Туг

530

535

540

С1и

ΗΪ3

А1а

ТЬг

ТЬг

Уа1

Рго

Азп

Уа1

Рго

С1п

11е

Рго

Туг

Ьуз

А1а

545

550

555

560

Ьеи

Уа1

С1и

Агд

А1а

С1у

Туг

А1а

Рго

Ьеи

Азп

Ьеи

С1и

11е

ТЬг

Уа1

565

570

575

Мек

Зег

Зег

С1и

Уа1

Ьеи

Рго

Зег

ТЬг

Азп

С1п

С1и

Туг

11е

ТЬг

Суз

580

585

590

Ьуз

РЬе

ТЬг

ТЬг

Уа1

Уа1

Рго

Зег

Рго

Ьуз

11е

Ьуз

Суз

Суз

С1у

Зег

595

600

605

Ьеи

С1и

Суз

С1п

Рго

А1а

А1а

Ηίδ

А1а

Азр

Туг

ТЬг

Суз

Ьуз

Уа1

РЬе

610

615

620

С1у

С1у

Уа1

Туг

Рго

РЬе

Мек

Тгр

С1у

С1у

А1а

С1п

Суз

РЬе

Суз

Азр

625

630

635

640

Зег

С1и

Азп

Зег

С1п

Мек

Зег

С1и

А1а

Туг

Уа1

С1и

Ьеи

Зег

А1а

Азр

645

650

655

Суз

А1а

Зег

Азр

Η13

А1а

С1п

А1а

11е

Ьуз

Уа1

Ηίδ

ТЬг

А1а

А1а

Мек

660

665

670

- 41 032403

Ьуз

Уа1

Б1у 675

Ьеи

Агд

11е Уа1

Туг 680

Б1у Азп ТЬг

ТЬг

Зег 685

РЬе

Ьеи

Азр

Уа1

Туг

Уа1

Азп

Б1у

Уа1

ТЬг

Рго

Б1у

ТЬг

Зег

Ьуз

Азр

Ьеи

Ьуз

Уа1

690

695

700

11е

А1а

Б1у

Рго

11е

Зег

А1а

Зег

РЬе

ТЬг

Рго

РЬе

Азр

Η^з

Ьуз

Уа1

705

710

715

720

Уа1

11е

Η^з

Агд

Б1у

Ьеи

Уа1

Туг

Азп

Туг

Азр

РЬе

Рго

Б1и

Туг

Б1у

725

730

735

А1а

Меб

Ьуз

Рго

Б1у

А1а

РЬе

Б1у

Азр

11е

С1п

А1а

ТЬг

Зег

Ьеи

ТЬг

740

745

750

Зег

Ьуз

Азр

Ьеи

11е

А1а

Зег

ТЬг

Азр

11е

Агд

Ьеи

Ьеи

Ьуз

Рго

Зег

755

760

765

А1а

Ьуз

Азп

Уа1

Η^з

Уа1

Рго

Туг

ТЬг

С1п

А1а

Зег

Зег

Б1у

РЬе

Б1и

770

775

780

Меб

Тгр

Ьуз

Азп

Азп

Зег

Б1у

Агд

Рго

Ьеи

С1п

Б1и

ТЬг

А1а

Рго

РЬе

785

790

795

800

Б1у

Суз

Ьуз

11е

А1а

Уа1

Азп

Рго

Ьеи

Агд

А1а

Уа1

Азр

Суз

Зег

Туг

805

810

815

Б1у

Азп

11е

Рго

11е

Зег

11е

Азр

11е

Рго

Азп

А1а

А1а

РЬе

11е

Агд

820

825

830

ТЬг

Зег

Азр

А1а

Рго

Ьеи

Уа1

Зег

ТЬг

Уа1

Ьуз

Суз

Б1и

Уа1

Зег

Б1и

835

840

845

Суз

ТЬг

Туг

Зег

А1а

Азр

РЬе

Б1у

Б1у

Меб

А1а

ТЬг

Ьеи

С1п

Туг

Уа1

850

855

860

Зег

Азр

Агд

Б1и

Б1у

Б1п

Суз

Рго

Уа1

Η^з

Зег

Η^3

Зег

Зег

ТЬг

А1а

865

870

875

880

ТЬг

Ьеи

Б1п

Б1и

Зег

ТЬг

Уа1

Η^3

Уа1

Ьеи

Б1и

Ьуз

Б1у

А1а

Уа1

ТЬг

885

890

895

Уа1

Η^з

РЬе

Зег

ТЬг

А1а

Зег

Рго

С1п

А1а

Азп

РЬе

11е

Уа1

Зег

Ьеи

900

905

910

- 42 032403

Суз

С1у

Ьуз 915

Ьуз

ТЬг ТЬг

Суз

Азп 920

А1а

С1и Суз

Ьуз

Рго 925

Рго

А1а

Азр

ΗΪ3

11е

Уа1

Зег

ТЬг

Рго

Η13

Ьуз

Азп

Азр

С1п

С1и

РЬе

С1п

А1а

А1а

930

935

940

11е

Зег

Ьуз

ТЬг

Зег

Тгр

Зег

Тгр

Ьеи

РЬе

А1а

Ьеи

РЬе

С1у

С1у

А1а

945

950

955

960

Зег

Зег

Ьеи

Ьеи

11е

11е

С1у

Ьеи

Меб

11е

РЬе

А1а

Суз

Зег

Меб

Меб

965

970

975

Ьеи

ТЬг

Зег

ТЬг

Агд

Агд

980

<210>4 <211>982 <212> белок <213> Вирус Синдбис <400>4

Меб 1

Зег А1а А1а

Рго 5

Ьеи Уа1

ТЬг

А1а

Меб 10

Суз

Ьеи

Ьеи

С1у

Азп 15

Уа1

Зег

РЬе

Рго

Суз

Азр

Агд

Рго

Рго

ТЬг

Суз

Туг

ТЬг

Агд

С1и

Рго

Зег

20

25

30

Агд

А1а

Ьеи

Азр

11е

Ьеи

С1и

С1и

Азп

Уа1

Азп

Н1з

С1и

А1а

Туг

Азр

35

40

45

ТЬг

Ьеи

Ьеи

Азп

А1а

11е

Ьеи

Агд

Суз

С1у

Зег

Зег

С1у

Агд

Зег

Ьуз

50

55

60

Агд

Зег

Уа1

11е

Азр

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Зег

Рго

Туг

Ьеи

С1у

ТЬг

65

70

75

80

Суз

Зег

Туг

Суз

Н1з

Н1з

ТЬг

Уа1

Рго

Суз

РЬе

Зег

Рго

Уа1

Ьуз

11е

85

90

95

С1и

С1п

Уа1

Тгр

Азр

С1и

А1а

Азр

Азр

Азп

ТЬг

11е

Агд

11е

С1п

ТЬг

100

105

110

Зег

А1а

С1п

РЬе

С1у

Туг

Азр

С1п

Зег

С1у

А1а

А1а

Зег

А1а

Азп

Ьуз

115

120

125

Туг

Агд

Туг

Меб

Зег

Ьеи

С1и

С1п

Азр

Н1з

ТЬг

Уа1

С1и

С1и

С1у

ТЬг

- 43 032403

130

135

140

Мек 145

Азр

Азр

11е

Ьуз

11е 150

Зег

ТНг

Зег

С1у

Рго 155

Суз

Агд Агд

Ьеи

Зег 160

Туг

Ьуз

С1у

Туг

РНе

Ьеи

Ьеи

А1а

Ьуз

Суз

Рго

Рго

С1у

Азр

Зег

Уа1

165

170

175

ТНг

Уа1

Зег

11е

Уа1

Зег

Зег

Азп

Зег

А1а

ТНг

Зег

Суз

ТНг

Ьеи

А1а

180

185

190

Агд

Ьуз

11е

Ьуз

Рго

Ьуз

РНе

Уа1

С1у

Агд

С1и

Ьуз

Туг

Азр

Ьеи

Рго

195

200

205

Рго

Уа1

Н13

С1у

Ьуз

Ьуз

11е

Рго

Суз

ТНг

Уа1

Туг

Азр

Агд

Ьеи

С1и

210

215

220

С1у

ТНг

ТНг

А1а

С1у

Туг

11е

ТНг

Мек

Н13

Агд

Рго

Агд

Рго

Н13

А1а

225

230

235

240

Туг

ТНг

Зег

Туг

Ьеи

С1и

С1и

Зег

Зег

С1у

Ьуз

Уа1

Туг

А1а

Ьуз

Рго

245

250

255

Рго

Зег

С1у

Ьуз

Азп

11е

ТНг

Туг

С1и

Суз

Ьуз

Суз

С1у

Азр

Туг

Ьуз

260

265

270

ТНг

С1у

ТНг

Уа1

Зег

ТНг

Агд

ТНг

С1и

11е

ТНг

С1у

Суз

ТНг

А1а

11е

275

280

285

Ьуз

С1п

Суз

Уа1

А1а

Туг

Ьуз

Зег

Азр

С1п

ТНг

Ьуз

Тгр

Уа1

РНе

Азп

290

295

300

Зег

Рго

Азр

Ьеи

11е

Агд

Н13

Азр

Азр

Н13

ТНг

А1а

С1п

С1у

Ьуз

Ьеи

305

310

315

320

Н1з

Ьеи

Рго

РНе

Ьуз

Ьеи

11е

Рго

Зег

ТНг

Суз

Мек

Уа1

Рго

Уа1

А1а

325

330

335

Н13

А1а

Рго

Азп

Уа1

11е

Н13

С1у

РНе

Ьуз

Н13

11е

Зег

Ьеи

С1п

Ьеи

340

345

350

Азр

ТНг

Азр

Н13

Ьеи

ТНг

Ьеи

Ьеи

ТНг

ТНг

Агд

Агд

Ьеи

С1у

А1а

Азп

355

360

365

Рго

С1и

Рго

ТНг

ТНг

С1и

Тгр

11е

Уа1

С1у

Ьуз

ТНг

Уа1

Агд

Азп

РНе

- 44 032403

370

375

380

тнг ναι 385

Азр Агд

Азр

С1у 390

Ьеи

С1и

Туг

11е Тгр С1у 395

Азп

Ηίδ

С1и

Рго 400

νβΐ

Агд

νβ1

Туг

А1а

С1п

С1и

Зег

А1а

Рго

С1у

Азр

Рго

Ηίδ

С1у

Тгр

405

410

415

Рго

ΗΪ3

С1и

11е

Уа1

С1п

Η13

Туг

Туг

Ηίδ

Агд

Ηίδ

Рго

Уа1

Туг

ТЙГ

420

425

430

11е

Ьеи

А1а

Уа1

А1а

Зег

А1а

ТЙГ

Уа1

А1а

Мек

Мек

11е

С1у

Уа1

ТЙГ

435

440

445

Уа1

А1а

Уа1

Ьеи

Суз

А1а

Суз

Ьуз

А1а

Агд

Агд

С1и

Суз

Ьеи

ТЙГ

Рго

450

455

460

Туг

А1а

Ьеи

А1а

Рго

Азп

А1а

Уа1

11е

Рго

ТЙГ

Зег

Ьеи

А1а

Ьеи

Ьеи

465

470

475

480

Суз

Суз

Уа1

Агд

Зег

А1а

Азп

А1а

С1и

ТЙГ

Рке

ТЙГ

С1и

ТЙГ

Мек

Зег

485

490

495

Туг

Ьеи

Тгр

Зег

Азп

Зег

С1п

Рго

Рке

Рке

Тгр

Уа1

С1п

Ьеи

Суз

11е

500

505

510

Рго

Ьеи

А1а

А1а

Рке

11е

Уа1

Ьеи

Мек

Агд

Суз

Суз

Зег

Суз

Суз

Ьеи

515

520

525

Рго

Рке

Ьеи

Уа1

Уа1

А1а

С1у

А1а

Туг

Ьеи

А1а

Ьуз

Уа1

Азр

А1а

Туг

530

535

540

С1и

Η13

А1а

ТЙГ

ТЙГ

Уа1

Рго

Азп

Уа1

Рго

С1п

11е

Рго

Туг

Ьуз

А1а

545

550

555

560

Ьеи

Уа1

С1и

Агд

А1а

С1у

Туг

А1а

Рго

Ьеи

Азп

Ьеи

С1и

11е

ТЙГ

Уа1

565

570

575

Мек

Зег

Зег

С1и

Уа1

Ьеи

Рго

Зег

ТЙГ

Азп

С1п

С1и

Туг

11е

ТЙГ

Суз

580

585

590

Ьуз

Рке

ТЙГ

ТЙГ

Уа1

Уа1

Рго

Зег

Рго

Ьуз

11е

Ьуз

Суз

Суз

С1у

Зег

595

600

605

Ьеи

С1и

Суз

С1п

Рго

А1а

А1а

Ηίδ

А1а

Азр

Туг

ТЙГ

Суз

Ьуз

Уа1

Рке

- 45 032403

610

615

620

С1у 625

С1у

Уа1

Туг

Рго

РИе 630

МеЕ

Тгр С1у

С1у

А1а 635

С1п

Суз

РИе

Суз

Азр 640

Зег

С1и

Азп

Зег

С1п

МеЕ

Зег

С1и

А1а

Туг

Уа1

С1и

Ьеи

Зег

А1а

Азр

645

650

655

Суз

А1а

Зег

Азр

Н1з

А1а

С1п

А1а

11е

Ьуз

Уа1

Н1з

ТИг

А1а

А1а

МеЕ

660

665

670

Ьуз

Уа1

С1у

Ьеи

Агд

11е

Уа1

Туг

С1у

Азп

ТИг

ТИг

Зег

РИе

Ьеи

Азр

675

680

685

Уа1

Туг

Уа1

Азп

С1у

Уа1

ТИг

Рго

С1у

ТИг

Зег

Ьуз

Азр

Ьеи

Ьуз

Уа1

690

695

700

11е

А1а

С1у

Рго

11е

Зег

А1а

Зег

РИе

ТИг

Рго

РИе

Азр

Н1з

Ьуз

Уа1

705

710

715

720

Уа1

11е

Н1з

Агд

С1у

Ьеи

Уа1

Туг

Азп

Туг

Азр

РИе

Рго

С1и

Туг

С1у

725

730

735

А1а

МеЕ

Ьуз

Рго

С1у

А1а

РИе

С1у

Азр

11е

С1п

А1а

ТИг

Зег

Ьеи

ТИг

740

745

750

Зег

Ьуз

Азр

Ьеи

11е

А1а

Зег

ТИг

Азр

11е

Агд

Ьеи

Ьеи

Ьуз

Рго

Зег

755

760

765

А1а

Ьуз

Азп

Уа1

Н1з

Уа1

Рго

Туг

ТИг

С1п

А1а

Зег

Зег

С1у

РИе

С1и

770

775

780

МеЕ

Тгр

Ьуз

Азп

Азп

Зег

С1у

Агд

Рго

Ьеи

С1п

С1и

ТИг

А1а

Рго

РИе

785

790

795

800

С1у

Суз

Ьуз

11е

А1а

Уа1

Азп

Рго

Ьеи

Агд

А1а

Уа1

Азр

Суз

Зег

Туг

805

810

815

С1у

Азп

11е

Рго

11е

Зег

11е

Азр

11е

Рго

Азп

А1а

А1а

РИе

11е

Агд

820

825

830

ТИг

Зег

Азр

А1а

Рго

Ьеи

Уа1

Зег

ТИг

Уа1

Ьуз

Суз

С1и

Уа1

Зег

С1и

835

840

845

Суз

ТИг

Туг

Зег

А1а

Азр

РИе

С1у

С1у

МеЕ

А1а

ТИг

Ьеи

С1п

Туг

Уа1

- 46 032403

850

855

860

Зег 865

Азр

Агд

С1и С1у

С1п Суз 870

Рго

Уа1

Η^з

Зег 875

Η^з

Зег

Зег

ТЬг

А1а 880

ТЬг

Ьеи

С1п

С1и

Зег

ТЬг

Уа1

Η^3

Уа1

Ьеи

С1и

Ьуз

С1у

А1а

Уа1

ТЬг

885

890

895

Уа1

Η^з

РЬе

Зег

ТЬг

А1а

Зег

Рго

С1п

А1а

Азп

РЬе

11е

Уа1

Зег

Ьеи

900

905

910

Суз

С1у

Ьуз

Ьуз

ТЬг

ТЬг

Суз

Азп

А1а

С1и

Суз

Ьуз

Рго

Рго

А1а

Азр

915

920

925

Η^з

11е

Уа1

Зег

ТЬг

Рго

Η^з

Ьуз

Азп

Азр

С1п

С1и

РЬе

С1п

А1а

А1а

930

935

940

11е

Зег

Ьуз

ТЬг

Зег

Тгр

Зег

Тгр

Ьеи

РЬе

А1а

Ьеи

РЬе

С1у

С1у

А1а

945

950

955

960

Зег

Зег

Ьеи

Ьеи

11е

11е

С1у

Ьеи

Меб

11е

РЬе

А1а

Суз

Зег

Меб

Меб

965

970

975

Ьеи

ТЬг

Зег

ТЬг

Агд

Агд

980

<210>5 <211>980 <212> белок <213> Вирус Синдбис <400>5

Меб 1

Зег

А1а

А1а

Рго 5

Ьеи

Уа1

ТЬг А1а

Меб 10

Суз

Ьеи

Ьеи

С1у

Азп 15

Уа1

Зег

РЬе

Рго

Суз

Азр

Агд

Рго

Рго

ТЬг

Суз

Туг

ТЬг

Агд

С1и

Рго

Зег

20

25

30

Агд

А1а

Ьеи

Азр

11е

Ьеи

С1и

С1и

Азп

Уа1

Азп

Η^з

С1и

А1а

Туг

Азр

35

40

45

ТЬг

Ьеи

Ьеи

Азп

А1а

11е

Ьеи

Агд

Суз

С1у

Зег

Зег

С1у

Агд

Зег

Ьуз

50

55

60

Агд

Зег

Уа1

11е

Азр

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Зег

Рго

Туг

Ьеи

С1у

ТЬг

65

70

75

80

- 47 032403

Суз

Зег Туг

Суз

Н1з 85

Н13

ТЬг

Уа1

Рго

Суз 90

РЬе

Зег

Рго

Уа1

Ьуз 95

11е

Б1и

Б1п

Уа1

Тгр

Азр

Б1и

А1а

Азр

Азр

Азп

ТЬг

11е

Агд

11е

Б1п

ТЬг

100

105

110

Зег

А1а

Б1п

РЬе

Б1у

Туг

Азр

Б1п

Зег

Б1у

А1а

А1а

Зег

А1а

Азп

Ьуз

115

120

125

Туг

Агд

Туг

Меб

Зег

Ьеи

Б1и

Б1п

Азр

Н1з

ТЬг

Уа1

Ьуз

Б1и

Б1у

ТЬг

130

135

140

Меб

Азр

Азр

11е

Ьуз

11е

Зег

ТЬг

Зег

Б1у

Рго

Суз

Агд

Агд

Ьеи

Зег

145

150

155

160

Туг

Ьуз

Б1у

Туг

РЬе

Ьеи

Ьеи

А1а

Ьуз

Суз

Рго

Рго

Б1у

Азр

Зег

Уа1

165

170

175

ТЬг

Уа1

Зег

11е

Уа1

Зег

Зег

Азп

Зег

А1а

ТЬг

Зег

Суз

ТЬг

Ьеи

А1а

180

185

190

Агд

Ьуз

11е

Ьуз

Рго

Ьуз

РЬе

Уа1

Б1у

Агд

Б1и

Ьуз

Туг

Азр

Ьеи

Рго

195

200

205

Рго

Уа1

Н1з

Б1у

Ьуз

Ьуз

11е

Рго

Суз

ТЬг

Уа1

Туг

Азр

Агд

Ьеи

ТЬг

210

215

220

ТЬг

А1а

Б1у

Туг

11е

ТЬг

Меб

Н1з

Агд

Рго

Агд

Рго

Н13

А1а

Туг

ТЬг

225

230

235

240

Зег

Туг

Ьеи

Б1и

Б1и

Зег

Зег

Б1у

Ьуз

Уа1

Туг

А1а

Ьуз

Рго

Рго

Зег

245

250

255

Б1у

Ьуз

Азп

11е

ТЬг

Туг

Б1и

Суз

Ьуз

Суз

Б1у

Азр

Туг

Ьуз

ТЬг

Б1у

260

265

270

ТЬг

Уа1

Зег

ТЬг

Агд

ТЬг

Б1и

11е

ТЬг

Б1у

Суз

ТЬг

А1а

11е

Ьуз

Б1п

275

280

285

Суз

Уа1

А1а

Туг

Ьуз

Зег

Азр

Б1п

ТЬг

Ьуз

Тгр

Уа1

РЬе

Азп

Зег

Рго

290

295

300

Азр

Ьеи

11е

Агд

Н1з

Азр

Азр

Н1з

ТЬг

А1а

Б1п

Б1у

Ьуз

Ьеи

Н1з

Ьеи

305

310

315

320

- 48 032403

Рго

РЬе

Ьуз

Ьеи

11е 325

Рго

Зег

ТЬг

Суз

МеЬ 330

Уа1

Рго

Уа1

А1а

Η^з 335

А1а

Рго

Азп

Уа1

11е

Η^з

С1у

РЬе

Ьуз

Η^з

11е

Зег

Ьеи

С1п

Ьеи

Азр

ТЬг

340

345

350

Азр

Η^з

Ьеи

ТЬг

Ьеи

Ьеи

ТЬг

ТЬг

Агд

Агд

Ьеи

С1у

А1а

Азп

Рго

С1и

355

360

365

Рго

ТЬг

ТЬг

С1и

Тгр

11е

Уа1

С1у

Ьуз

ТЬг

Уа1

Агд

Азп

РЬе

ТЬг

Уа1

370

375

380

Азр

Агд

Азр

С1у

Ьеи

С1и

Туг

11е

Тгр

С1у

Азп

Η^з

С1и

Рго

Уа1

Агд

385

390

395

400

Уа1

Туг

А1а

С1п

С1и

Зег

А1а

Рго

С1у

Азр

Рго

Η^3

С1у

Тгр

Рго

Η^з

405

410

415

С1и

11е

Уа1

С1п

Η^з

Туг

Туг

Η^з

Агд

Η^з

Рго

Уа1

Туг

ТЬг

11е

Ьеи

420

425

430

А1а

Уа1

А1а

Зег

А1а

ТЬг

Уа1

А1а

МеЬ

МеЬ

11е

С1у

Уа1

ТЬг

Уа1

А1а

435

440

445

Уа1

Ьеи

Суз

А1а

Суз

Ьуз

А1а

Агд

Агд

С1и

Суз

Ьеи

ТЬг

Рго

Туг

А1а

450

455

460

Ьеи

А1а

Рго

Азп

А1а

Уа1

11е

Рго

ТЬг

Зег

Ьеи

А1а

Ьеи

Ьеи

Суз

Суз

465

470

475

480

Уа1

Агд

Зег

А1а

Азп

А1а

С1и

ТЬг

РЬе

ТЬг

С1и

ТЬг

МеЬ

Зег

Туг

Ьеи

485

490

495

Тгр

Зег

Азп

Зег

С1п

Рго

РЬе

РЬе

Тгр

Уа1

С1п

Ьеи

Суз

11е

Рго

Ьеи

500

505

510

А1а

А1а

РЬе

11е

Уа1

Ьеи

МеЬ

Агд

Суз

Суз

Зег

Суз

Суз

Ьеи

Рго

РЬе

515

520

525

Ьеи

Уа1

Уа1

А1а

С1у

А1а

Туг

Ьеи

А1а

Ьуз

Уа1

Азр

А1а

Туг

С1и

Η^з

530

535

540

А1а

ТЬг

ТЬг

Уа1

Рго

Азп

Уа1

Рго

С1п

11е

Рго

Туг

Ьуз

А1а

Ьеи

Уа1

545

550

555

560

- 49 032403

С1и Агд А1а

С1у Туг 565

А1а

Рго

Ьеи

Азп

Ьеи 570

С1и

11е

ТИг

Уа1

МеЕ 575

Зег

Зег

С1и

Уа1

Ьеи

Рго

Зег

ТИг

Азп

С1п

С1и

Туг

11е

ТИг

Суз

Ьуз

РИе

580

585

590

ТИг

ТИг

Уа1

Уа1

Рго

Зег

Рго

Ьуз

11е

Ьуз

Суз

Суз

С1у

Зег

Ьеи

С1и

595

600

605

Суз

С1п

Рго

А1а

А1а

Η^з

А1а

Азр

Туг

ТИг

Суз

Ьуз

Уа1

РИе

С1у

С1у

610

615

620

Уа1

Туг

Рго

РИе

МеЕ

Тгр

С1у

С1у

А1а

С1п

Суз

РИе

Суз

Азр

Зег

С1и

625

630

635

640

Азп

Зег

С1п

МеЕ

Зег

С1и

А1а

Туг

Уа1

С1и

Ьеи

Зег

А1а

Азр

Суз

А1а

645

650

655

Зег

Азр

Η^з

А1а

С1п

А1а

11е

Ьуз

Уа1

Η^з

ТИг

А1а

А1а

МеЕ

Ьуз

Уа1

660

665

670

С1у

Ьеи

Агд

11е

Уа1

Туг

С1у

Азп

ТИг

ТИг

Зег

РИе

Ьеи

Азр

Уа1

Туг

675

680

685

Уа1

Азп

С1у

Уа1

ТИг

Рго

С1у

ТИг

Зег

Ьуз

Азр

Ьеи

Ьуз

Уа1

11е

А1а

690

695

700

С1у

Рго

11е

Зег

А1а

Зег

РИе

ТИг

Рго

РИе

Азр

Η^з

Ьуз

Уа1

Уа1

11е

705

710

715

720

Η^з

Агд

С1у

Ьеи

Уа1

Туг

Азп

Туг

Азр

РИе

Рго

С1и

Туг

С1у

А1а

МеЕ

725

730

735

Ьуз

Рго

С1у

А1а

РИе

С1у

Азр

11е

С1п

А1а

ТИг

Зег

Ьеи

ТИг

Зег

Ьуз

740

745

750

Азр

Ьеи

11е

А1а

Зег

ТИг

Азр

11е

Агд

Ьеи

Ьеи

Ьуз

Рго

Зег

А1а

Ьуз

755

760

765

Азп

Уа1

Η^з

Уа1

Рго

Туг

ТИг

С1п

А1а

Зег

Зег

С1у

РИе

С1и

МеЕ

Тгр

770

775

780

Ьуз

Азп

Азп

Зег

С1у

Агд

Рго

Ьеи

С1п

С1и

ТИг

А1а

Рго

РИе

С1у

Суз

785

790

795

800

- 50 032403

Ьуз

11е А1а

Уа1

Азп 805

Рго

Ьеи Агд

А1а Уа1 810

Азр

Суз

Зег

Туг

С1у 815

Азп

11е

Рго

11е

Зег

11е

Азр

11е

Рго

Азп

А1а

А1а

РЬе

11е

Агд

ТЬг

Зег

820

825

830

Азр

А1а

Рго

Ьеи

Уа1

Зег

ТЬг

Уа1

Ьуз

Суз

С1и

Уа1

Зег

С1и

Суз

ТЬг

835

840

845

Туг

Зег

А1а

Азр

РЬе

С1у

С1у

Мек

А1а

ТЬг

Ьеи

С1п

Туг

Уа1

Зег

Азр

850

855

860

Агд

С1и

С1у

С1п

Суз

Рго

Уа1

Η^з

Зег

Η^з

Зег

Зег

ТЬг

А1а

ТЬг

Ьеи

865

870

875

880

С1п

С1и

Зег

ТЬг

Уа1

Η^3

Уа1

Ьеи

С1и

Ьуз

С1у

А1а

Уа1

ТЬг

Уа1

Η^з

885

890

895

РЬе

Зег

ТЬг

А1а

Зег

Рго

С1п

А1а

Азп

РЬе

11е

Уа1

Зег

Ьеи

Суз

С1у

900

905

910

Ьуз

Ьуз

ТЬг

ТЬг

Суз

Азп

А1а

С1и

Суз

Ьуз

Рго

Рго

А1а

Азр

Η^з

11е

915

920

925

Уа1

Зег

ТЬг

Рго

Η^з

Ьуз

Азп

Азр

С1п

С1и

РЬе

С1п

А1а

А1а

11е

Зег

930

935

940

Ьуз

ТЬг

Зег

Тгр

Зег

Тгр

Ьеи

РЬе

А1а

Ьеи

РЬе

С1у

С1у

А1а

Зег

Зег

945

950

955

960

Ьеи

Ьеи

11е

11е

С1у

Ьеи

Мек

11е

РЬе

А1а

Суз

Зег

Мек

Мек

Ьеи

ТЬг

965

970

975

Зег

ТЬг

Агд

Агд

980

<210>	6
<211>	981
<212>	белок
<213>	Вирус	Синдбис
<400>	6
Мек Зег А1а	А1а Рго	Ьеи Уа1 ТЬг А1а Мек Суз	Ьеи Ьеи С1у Азп Уа1
1		5	10	15

- 51 032403

Зег

РЬе

Рго

Суз 20

Азр

Агд

Рго

Рго

ТЬг 25

Суз

Туг

ТЬг

Агд

С1и 30

Рго

Зег

Агд

А1а

Ьеи

Азр

11е

Ьеи

С1и

С1и

Азп

Уа1

Азп

Н1з

С1и

А1а

Туг

Азр

35

40

45

ТЬг

Ьеи

Ьеи

Азп

А1а

11е

Ьеи

Агд

Суз

С1у

Зег

Зег

С1у

Агд

Зег

Ьуз

50

55

60

Агд

Зег

Уа1

11е

Азр

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Зег

Рго

Туг

Ьеи

С1у

ТЬг

65

70

75

80

Суз

Зег

Туг

Суз

Н1з

Н1з

ТЬг

Уа1

Рго

Суз

РЬе

Зег

Рго

Уа1

Ьуз

11е

85

90

95

С1и

С1п

Уа1

Тгр

Азр

С1и

А1а

Азр

Азр

Азп

ТЬг

11е

Агд

11е

С1п

ТЬг

100

105

110

Зег

А1а

С1п

РЬе

С1у

Туг

Азр

С1п

Зег

С1у

А1а

А1а

Зег

А1а

Азп

Ьуз

115

120

125

Туг

Агд

Туг

Ме5

Зег

Ьеи

С1и

С1п

Азр

Н1з

ТЬг

Уа1

С1и

С1и

С1у

ТЬг

130

135

140

Ме5

Азр

Азр

11е

Ьуз

11е

Зег

ТЬг

Зег

С1у

Рго

Суз

Агд

Агд

Ьеи

Зег

145

150

155

160

Туг

Ьуз

С1у

Туг

РЬе

Ьеи

Ьеи

А1а

Ьуз

Суз

Рго

Рго

С1у

Азр

Зег

Уа1

165

170

175

ТЬг

Уа1

Зег

11е

Уа1

Зег

Зег

Азп

Зег

А1а

ТЬг

Зег

Суз

ТЬг

Ьеи

А1а

180

185

190

Агд

Ьуз

11е

Ьуз

Рго

Ьуз

РЬе

Уа1

С1у

Агд

С1и

Ьуз

Туг

Азр

Ьеи

Рго

195

200

205

Рго

Уа1

Н1з

С1у

Ьуз

Ьуз

11е

Рго

Суз

ТЬг

Уа1

Туг

Азр

Агд

Ьеи

С1и

210

215

220

ТЬг

ТЬг

А1а

С1у

Туг

11е

ТЬг

Ме5

Н1з

Агд

Рго

Агд

Рго

Н1з

А1а

Туг

225

230

235

240

ТЬг

Зег

Туг

Ьеи

С1и

С1и

Зег

Зег

С1у

Ьуз

Уа1

Туг

А1а

Ьуз

Рго

Рго

245

250

255

- 52 032403

Зег

Б1у Ьуз

Азп 260

11е

ТЬг

Туг Б1и Суз 265

Ьуз

Суз

Б1у

Азр

Туг 270

Ьуз

ТЬг

Б1у

ТЬг

Уа1

Зег

ТЬг

Агд

ТЬг

Б1и

11е

ТЬг

Б1у

Суз

ТЬг

А1а

11е

Ьуз

275

280

285

С1п

Суз

Уа1

А1а

Туг

Ьуз

Зег

Азр

С1п

ТЬг

Ьуз

Тгр

Уа1

РЬе

Азп

Зег

290

295

300

Рго

Азр

Ьеи

11е

Агд

Η^з

Азр

Азр

Η^з

ТЬг

А1а

С1п

Б1у

Ьуз

Ьеи

Η^з

305

310

315

320

Ьеи

Рго

РЬе

Ьуз

Ьеи

11е

Рго

Зег

ТЬг

Суз

Меб

Уа1

Рго

Уа1

А1а

Η^з

325

330

335

А1а

Рго

Азп

Уа1

11е

Η^з

Б1у

РЬе

Ьуз

Η^з

11е

Зег

Ьеи

С1п

Ьеи

Азр

340

345

350

ТЬг

Азр

Η^з

Ьеи

ТЬг

Ьеи

Ьеи

ТЬг

ТЬг

Агд

Агд

Ьеи

Б1у

А1а

Азп

Рго

355

360

365

Б1и

Рго

ТЬг

ТЬг

Б1и

Тгр

11е

Уа1

Б1у

Ьуз

ТЬг

Уа1

Агд

Азп

РЬе

ТЬг

370

375

380

Уа1

Азр

Агд

Азр

Б1у

Ьеи

Б1и

Туг

11е

Тгр

Б1у

Азп

Η^з

Б1и

Рго

Уа1

385

390

395

400

Агд

Уа1

Туг

А1а

С1п

Б1и

Зег

А1а

Рго

Б1у

Азр

Рго

Η^з

Б1у

Тгр

Рго

405

410

415

Η^з

Б1и

11е

Уа1

С1п

Η^з

Туг

Туг

Η^з

Агд

Η^з

Рго

Уа1

Туг

ТЬг

11е

420

425

430

Ьеи

А1а

Уа1

А1а

Зег

А1а

ТЬг

Уа1

А1а

Меб

Меб

11е

Б1у

Уа1

ТЬг

Уа1

435

440

445

А1а

Уа1

Ьеи

Суз

А1а

Суз

Ьуз

А1а

Агд

Агд

Б1и

Суз

Ьеи

ТЬг

Рго

Туг

450

455

460

А1а

Ьеи

А1а

Рго

Азп

А1а

Уа1

11е

Рго

ТЬг

Зег

Ьеи

А1а

Ьеи

Ьеи

Суз

465

470

475

480

Суз

Уа1

Агд

Зег

А1а

Азп

А1а

Б1и

ТЬг

РЬе

ТЬг

Б1и

ТЬг

Меб

Зег

Туг

485

490

495

- 53 032403

Ьеи

Тгр

Зег

Азп 500

Зег

С1п

Рго

РЬе

РЬе Тгр 505

Уа1

С1п

Ьеи

Суз 510

11е

Рго

Ьеи

А1а

А1а

РЬе

11е

Уа1

Ьеи

Меб

Агд

Суз

Суз

Зег

Суз

Суз

Ьеи

Рго

515

520

525

РЬе

Ьеи

Уа1

Уа1

А1а

С1у

А1а

Туг

Ьеи

А1а

Ьуз

Уа1

Азр

А1а

Туг

С1и

530

535

540

Η^з

А1а

ТЬг

ТЬг

Уа1

Рго

Азп

Уа1

Рго

С1п

11е

Рго

Туг

Ьуз

А1а

Ьеи

545

550

555

560

Уа1

С1и

Агд

А1а

С1у

Туг

А1а

Рго

Ьеи

Азп

Ьеи

С1и

11е

ТЬг

Уа1

Меб

565

570

575

Зег

Зег

С1и

Уа1

Ьеи

Рго

Зег

ТЬг

Азп

С1п

С1и

Туг

11е

ТЬг

Суз

Ьуз

580

585

590

РЬе

ТЬг

ТЬг

Уа1

Уа1

Рго

Зег

Рго

Ьуз

11е

Ьуз

Суз

Суз

С1у

Зег

Ьеи

595

600

605

С1и

Суз

С1п

Рго

А1а

А1а

Η^з

А1а

Азр

Туг

ТЬг

Суз

Ьуз

Уа1

РЬе

С1у

610

615

620

С1у

Уа1

Туг

Рго

РЬе

Меб

Тгр

С1у

С1у

А1а

С1п

Суз

РЬе

Суз

Азр

Зег

625

630

635

640

С1и

Азп

Зег

С1п

Меб

Зег

С1и

А1а

Туг

Уа1

С1и

Ьеи

Зег

А1а

Азр

Суз

645

650

655

А1а

Зег

Азр

Η^з

А1а

С1п

А1а

11е

Ьуз

Уа1

Η^з

ТЬг

А1а

А1а

Меб

Ьуз

660

665

670

Уа1

С1у

Ьеи

Агд

11е

Уа1

Туг

С1у

Азп

ТЬг

ТЬг

Зег

РЬе

Ьеи

Азр

Уа1

675

680

685

Туг

Уа1

Азп

С1у

Уа1

ТЬг

Рго

С1у

ТЬг

Зег

Ьуз

Азр

Ьеи

Ьуз

Уа1

11е

690

695

700

А1а

С1у

Рго

11е

Зег

А1а

Зег

РЬе

ТЬг

Рго

РЬе

Азр

Η^з

Ьуз

Уа1

Уа1

705

710

715

720

11е

Η^з

Агд

С1у

Ьеи

Уа1

Туг

Азп

Туг

Азр

РЬе

Рго

С1и

Туг

С1у

А1а

725

730

735

- 54 032403

Меб

Ьуз

Рго С1у А1а 740

РЬе

С1у

Азр

11е С1п 745

А1а

ТЬг

Зег

Ьеи 750

ТЬг

Зег

Ьуз

Азр

Ьеи

11е

А1а

Зег

ТЬг

Азр

11е

Агд

Ьеи

Ьеи

Ьуз

Рго

Зег

А1а

755

760

765

Ьуз

Азп

Уа1

Н1з

Уа1

Рго

Туг

ТЬг

С1п

А1а

Зег

Зег

С1у

РЬе

С1и

Меб

770

775

780

Тгр

Ьуз

Азп

Азп

Зег

С1у

Агд

Рго

Ьеи

С1п

С1и

ТЬг

А1а

Рго

РЬе

С1у

785

790

795

800

Суз

Ьуз

11е

А1а

Уа1

Азп

Рго

Ьеи

Агд

А1а

Уа1

Азр

Суз

Зег

Туг

С1у

805

810

815

Азп

11е

Рго

11е

Зег

11е

Азр

11е

Рго

Азп

А1а

А1а

РЬе

11е

Агд

ТЬг

820

825

830

Зег

Азр

А1а

Рго

Ьеи

Уа1

Зег

ТЬг

Уа1

Ьуз

Суз

С1и

Уа1

Зег

С1и

Суз

835

840

845

ТЬг

Туг

Зег

А1а

Азр

РЬе

С1у

С1у

Меб

А1а

ТЬг

Ьеи

С1п

Туг

Уа1

Зег

850

855

860

Азр

Агд

С1и

С1у

С1п

Суз

Рго

Уа1

Н1з

Зег

Н1з

Зег

Зег

ТЬг

А1а

ТЬг

865

870

875

880

Ьеи

С1п

С1и

Зег

ТЬг

Уа1

Н1з

Уа1

Ьеи

С1и

Ьуз

С1у

А1а

Уа1

ТЬг

Уа1

885

890

895

Н1з

РЬе

Зег

ТЬг

А1а

Зег

Рго

С1п

А1а

Азп

РЬе

11е

Уа1

Зег

Ьеи

Суз

900

905

910

С1у

Ьуз

Ьуз

ТЬг

ТЬг

Суз

Азп

А1а

С1и

Суз

Ьуз

Рго

Рго

А1а

Азр

Н1з

915

920

925

11е

Уа1

Зег

ТЬг

Рго

Н1з

Ьуз

Азп

Азр

С1п

С1и

РЬе

С1п

А1а

А1а

11е

930

935

940

Зег

Ьуз

ТЬг

Зег

Тгр

Зег

Тгр

Ьеи

РЬе

А1а

Ьеи

РЬе

С1у

С1у

А1а

Зег

945

950

955

960

Зег

Ьеи

Ьеи

11е

11е

С1у

Ьеи

Меб

11е

РЬе

А1а

Суз

Зег

Меб

Меб

Ьеи

965

970

975

- 55 032403

ТНг Зег ТНг Агд Агд

980 <210>7 <211>982 <212> белок <213> Вирус Синдбис <400>7

Мек 1

Зег

А1а

А1а

Рго 5

Ьеи Уа1

ТНг

А1а Мек 10

Суз

Ьеи

Ьеи

С1у

Азп 15

Уа1

Зег

РНе

Рго

Суз

Азр

Агд

Рго

Рго

ТНг

Суз

Туг

ТНг

Агд

С1и

Рго

Зег

20

25

30

Агд

А1а

Ьеи

Азр

11е

Ьеи

С1и

С1и

Азп

Уа1

Азп

Н1з

С1и

А1а

Туг

Азр

35

40

45

ТНг

Ьеи

Ьеи

Азп

А1а

11е

Ьеи

Агд

Суз

С1у

Зег

Зег

С1у

Агд

Зег

Ьуз

50

55

60

Агд

Зег

Уа1

11е

Азр

Азр

РНе

ТНг

Ьеи

ТНг

Зег

Рго

Туг

Ьеи

С1у

ТНг

65

70

75

80

Суз

Зег

Туг

Суз

Н1з

Н1з

ТНг

Уа1

Рго

Суз

РНе

Зег

Рго

Уа1

Ьуз

11е

85

90

95

С1и

С1п

Уа1

Тгр

Азр

С1и

А1а

Азр

Азр

Азп

ТНг

11е

Агд

11е

С1п

ТНг

100

105

110

Зег

А1а

С1п

РНе

С1у

Туг

Азр

С1п

Зег

С1у

А1а

А1а

Зег

А1а

Азп

Ьуз

115

120

125

Туг

Агд

Туг

Мек

Зег

Ьеи

Ьуз

С1п

Азр

Н1з

ТНг

Уа1

Ьуз

С1и

С1у

ТНг

130

135

140

Мек

Азр

Азр

11е

Ьуз

11е

Зег

ТНг

Зег

С1у

Рго

Суз

Агд

Агд

Ьеи

Зег

145

150

155

160

Туг

Ьуз

С1у

Туг

РНе

Ьеи

Ьеи

А1а

Ьуз

Суз

Рго

Рго

С1у

Азр

Зег

Уа1

165

170

175

ТНг

Уа1

Зег

11е

Уа1

Зег

Зег

Азп

Зег

А1а

ТНг

Зег

Суз

ТНг

Ьеи

А1а

180

185

190

- 56 032403

Агд Ьуз

11е 195

Ьуз

Рго

Ьуз

РЬе Уа1 200

С1у Агд

С1и

Ьуз

Туг 205

Азр

Ьеи

Рго

Рго

Уа1

Η15

С1у

Ьуз

Ьуз

11е

Рго

Суз

ТЙГ

Уа1

Туг

Азр

Агд

Ьеи

С1и

210

215

220

С1у

Тйг

Тйг

А1а

С1у

Туг

11е

ТЙГ

Мек

Η15

Агд

Рго

Агд

Рго

Η15

А1а

225

230

235

240

Туг

Тйг

Зег

Туг

Ьеи

С1и

С1и

Зег

Зег

С1у

Ьуз

Уа1

Туг

А1а

Ьуз

Рго

245

250

255

Рго

Зег

С1у

Ьуз

Азп

11е

ТЙГ

Туг

С1и

Суз

Ьуз

Суз

С1у

Азр

Туг

Ьуз

260

265

270

Тйг

С1у

Тйг

Уа1

Зег

ТЙГ

Агд

ТЙГ

С1и

11е

ТЙГ

С1у

Суз

ТЙГ

А1а

11е

275

280

285

Ьуз

С1п

Суз

Уа1

А1а

Туг

Ьуз

Зег

Азр

С1п

ТЙГ

Ьуз

Тгр

Уа1

Рке

Азп

290

295

300

Зег

Рго

Азр

Ьеи

11е

Агд

Η15

Азр

Азр

Η15

ТЙГ

А1а

С1п

С1у

Ьуз

Ьеи

305

310

315

320

Η15

Ьеи

Рго

Рке

Ьуз

Ьеи

11е

Рго

Зег

ТЙГ

Суз

Мек

Уа1

Рго

Уа1

А1а

325

330

335

Η15

А1а

Рго

Азп

Уа1

11е

Η15

С1у

Рке

Ьуз

Η15

11е

Зег

Ьеи

С1п

Ьеи

340

345

350

Азр

Тйг

Азр

Η15

Ьеи

ТЙГ

Ьеи

Ьеи

ТЙГ

ТЙГ

Агд

Агд

Ьеи

С1у

А1а

Азп

355

360

365

Рго

С1и

Рго

ТЙГ

ТЙГ

С1и

Тгр

11е

Уа1

С1у

Ьуз

ТЙГ

Уа1

Агд

Азп

Рке

370

375

380

Тйг

Уа1

Азр

Агд

Азр

С1у

Ьеи

С1и

Туг

11е

Тгр

С1у

Азп

Η15

С1и

Рго

385

390

395

400

Уа1

Агд

Уа1

Туг

А1а

С1п

С1и

Зег

А1а

Рго

С1у

Азр

Рго

Η15

С1у

Тгр

405

410

415

Рго

Η15

С1и

11е

Уа1

С1п

Η15

Туг

Туг

Η15

Агд

Η15

Рго

Уа1

Туг

ТЙГ

420

425

430

- 57 032403

11е

Ьеи А1а Уа1 435

А1а

Зег

А1а

ТИг 440

Уа1

А1а

МеЕ

МеЕ

11е 445

С1у

Уа1

ТИг

Уа1

А1а

Уа1

Ьеи

Суз

А1а

Суз

Ьуз

А1а

Агд

Агд

С1и

Суз

Ьеи

ТИг

Рго

450

455

460

Туг

А1а

Ьеи

А1а

Рго

Азп

А1а

Уа1

11е

Рго

ТИг

Зег

Ьеи

А1а

Ьеи

Ьеи

465

470

475

480

Суз

Суз

Уа1

Агд

Зег

А1а

Азп

А1а

С1и

ТИг

РИе

ТИг

С1и

ТИг

МеЕ

Зег

485

490

495

Туг

Ьеи

Тгр

Зег

Азп

Зег

С1п

Рго

РИе

РИе

Тгр

Уа1

С1п

Ьеи

Суз

11е

500

505

510

Рго

Ьеи

А1а

А1а

РИе

11е

Уа1

Ьеи

МеЕ

Агд

Суз

Суз

Зег

Суз

Суз

Ьеи

515

520

525

Рго

РИе

Ьеи

Уа1

Уа1

А1а

С1у

А1а

Туг

Ьеи

А1а

Ьуз

Уа1

Азр

А1а

Туг

530

535

540

С1и

Н1з

А1а

ТИг

ТИг

Уа1

Рго

Азп

Уа1

Рго

С1п

11е

Рго

Туг

Ьуз

А1а

545

550

555

560

Ьеи

Уа1

С1и

Агд

А1а

С1у

Туг

А1а

Рго

Ьеи

Азп

Ьеи

С1и

11е

ТИг

Уа1

565

570

575

МеЕ

Зег

Зег

С1и

Уа1

Ьеи

Рго

Зег

ТИг

Азп

С1п

С1и

Туг

11е

ТИг

Суз

580

585

590

Ьуз

РИе

ТИг

ТИг

Уа1

Уа1

Рго

Зег

Рго

Ьуз

11е

Ьуз

Суз

Суз

С1у

Зег

595

600

605

Ьеи

С1и

Суз

С1п

Рго

А1а

А1а

Н1з

А1а

Азр

Туг

ТИг

Суз

Ьуз

Уа1

РИе

610

615

620

С1у

С1у

Уа1

Туг

Рго

РИе

МеЕ

Тгр

С1у

С1у

А1а

С1п

Суз

РИе

Суз

Азр

625

630

635

640

Зег

С1и

Азп

Зег

С1п

МеЕ

Зег

С1и

А1а

Туг

Уа1

С1и

Ьеи

Зег

А1а

Азр

645

650

655

Суз

А1а

Зег

Азр

Н1з

А1а

С1п

А1а

11е

Ьуз

Уа1

Н1з

ТИг

А1а

А1а

МеЕ

660

665

670

- 58 032403

Ьуз

Уа1

Б1у 675

Ьеи

Агд

11е Уа1

Туг 680

С1у Азп ТЬг

ТЬг

Зег 685

РЬе

Ьеи

Азр

Уа1

Туг

Уа1

Азп

Б1у

Уа1

ТЬг

Рго

Б1у

ТЬг

Зег

Ьуз

Азр

Ьеи

Ьуз

Уа1

690

695

700

11е

А1а

Б1у

Рго

11е

Зег

А1а

Зег

РЬе

ТЬг

Рго

РЬе

Азр

Н1з

Ьуз

Уа1

705

710

715

720

Уа1

11е

Н1з

Агд

Б1у

Ьеи

Уа1

Туг

Азп

Туг

Азр

РЬе

Рго

Б1и

Туг

Б1у

725

730

735

А1а

Меб

Ьуз

Рго

Б1у

А1а

РЬе

Б1у

Азр

11е

Б1п

А1а

ТЬг

Зег

Ьеи

ТЬг

740

745

750

Зег

Ьуз

Азр

Ьеи

11е

А1а

Зег

ТЬг

Азр

11е

Агд

Ьеи

Ьеи

Ьуз

Рго

Зег

755

760

765

А1а

Ьуз

Азп

Уа1

Н1з

Уа1

Рго

Туг

ТЬг

Б1п

А1а

Зег

Зег

Б1у

РЬе

Б1и

770

775

780

Меб

Тгр

Ьуз

Азп

Азп

Зег

Б1у

Агд

Рго

Ьеи

Б1п

Б1и

ТЬг

А1а

Рго

РЬе

785

790

795

800

Б1у

Суз

Ьуз

11е

А1а

Уа1

Азп

Рго

Ьеи

Агд

А1а

Уа1

Азр

Суз

Зег

Туг

805

810

815

Б1у

Азп

11е

Рго

11е

Зег

11е

Азр

11е

Рго

Азп

А1а

А1а

РЬе

11е

Агд

820

825

830

ТЬг

Зег

Азр

А1а

Рго

Ьеи

Уа1

Зег

ТЬг

Уа1

Ьуз

Суз

Б1и

Уа1

Зег

Б1и

835

840

845

Суз

ТЬг

Туг

Зег

А1а

Азр

РЬе

Б1у

Б1у

Меб

А1а

ТЬг

Ьеи

Б1п

Туг

Уа1

850

855

860

Зег

Азр

Агд

Б1и

Б1у

Б1п

Суз

Рго

Уа1

Н1з

Зег

Н1з

Зег

Зег

ТЬг

А1а

865

870

875

880

ТЬг

Ьеи

Б1п

Б1и

Зег

ТЬг

Уа1

Н1з

Уа1

Ьеи

Б1и

Ьуз

Б1у

А1а

Уа1

ТЬг

885

890

895

Уа1

Н1з

РЬе

Зег

ТЬг

А1а

Зег

Рго

Б1п

А1а

Азп

РЬе

11е

Уа1

Зег

Ьеи

900

905

910

- 59 032403

Суз

С1у

Ьуз 915

Ьуз

ТЬг ТЬг

Суз

Азп 920

А1а

С1и Суз

Ьуз

Рго 925

Рго

А1а

Азр

Η^3

11е

Уа1

Зег

ТЬг

Рго

Η^з

Ьуз

Азп

Азр

С1п

С1и

РЬе

С1п

А1а

А1а

930

935

940

11е

Зег

Ьуз

ТЬг

Зег

Тгр

Зег

Тгр

Ьеи

РЬе

А1а

Ьеи

РЬе

С1у

С1у

А1а

945

950

955

960

Зег

Зег

Ьеи

Ьеи

11е

11е

С1у

Ьеи

Мек

11е

РЬе

А1а

Суз

Зег

Мек

Мек

965

970

975

Ьеи

ТЬг

Зег

ТЬг

Агд

Агд

980

<210> 8 <211> 981 <212> белок <213> Вирус Синдбис <400> 8

Мек 1

Зег А1а А1а

Рго 5

Ьеи Уа1

ТЬг

А1а

Мек 10

Суз

Ьеи

Ьеи

С1у

Азп 15

Уа1

Зег

РЬе

Рго

Суз

Азр

Агд

Рго

Рго

ТЬг

Суз

Туг

ТЬг

Агд

С1и

Рго

Зег

20

25

30

Агд

А1а

Ьеи

Азр

11е

Ьеи

С1и

С1и

Азп

Уа1

Азп

Η^з

С1и

А1а

Туг

Азр

35

40

45

ТЬг

Ьеи

Ьеи

Азп

А1а

11е

Ьеи

Агд

Суз

С1у

Зег

Зег

С1у

Агд

Зег

Ьуз

50

55

60

Агд

Зег

Уа1

11е

Азр

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Зег

Рго

Туг

Ьеи

С1у

ТЬг

65

70

75

80

Суз

Зег

Туг

Суз

Η^з

Η^з

ТЬг

Уа1

Рго

Суз

РЬе

Зег

Рго

Уа1

Ьуз

11е

85

90

95

С1и

С1п

Уа1

Тгр

Азр

С1и

А1а

Азр

Азр

Азп

ТЬг

11е

Агд

11е

С1п

ТЬг

100

105

110

Зег

А1а

С1п

РЬе

С1у

Туг

Азр

С1п

Зег

С1у

А1а

А1а

Зег

А1а

Азп

Ьуз

115

120

125

Туг

Агд

Туг

Мек

Зег

Ьеи

Ьуз

С1п

Азр

Η^з

ТЬг

Уа1

Ьуз

С1и

С1у

ТЬг

- 60 032403

130

135

140

МеБ 145

Азр

Азр

11е

Ьуз

11е 150

Зег

ТЬг

Зег

С1у

Рго 155

Суз

Агд Агд

Ьеи

Зег 160

Туг

Ьуз

С1у

Туг

РЬе

Ьеи

Ьеи

А1а

Ьуз

Суз

Рго

Рго

С1у

Азр

Зег

Уа1

165

170

175

ТЬг

Уа1

Зег

11е

Уа1

Зег

Зег

Азп

Зег

А1а

ТЬг

Зег

Суз

ТЬг

Ьеи

А1а

180

185

190

Агд

Ьуз

11е

Ьуз

Рго

Ьуз

РЬе

Уа1

С1у

Агд

С1и

Ьуз

Туг

Азр

Ьеи

Рго

195

200

205

Рго

Уа1

Η^з

С1у

Ьуз

Ьуз

11е

Рго

Суз

ТЬг

Уа1

Туг

Азр

Агд

Ьеи

С1и

210

215

220

ТЬг

ТЬг

А1а

С1у

Туг

11е

ТЬг

МеБ

Η^з

Агд

Рго

Агд

Рго

Η^з

А1а

Туг

225

230

235

240

ТЬг

Зег

Туг

Ьеи

С1и

С1и

Зег

Зег

С1у

Ьуз

Уа1

Туг

А1а

Ьуз

Рго

Рго

245

250

255

Зег

С1у

Ьуз

Азп

11е

ТЬг

Туг

С1и

Суз

Ьуз

Суз

С1у

Азр

Туг

Ьуз

ТЬг

260

265

270

С1у

ТЬг

Уа1

Зег

ТЬг

Агд

ТЬг

С1и

11е

ТЬг

С1у

Суз

ТЬг

А1а

11е

Ьуз

275

280

285

С1п

Суз

Уа1

А1а

Туг

Ьуз

Зег

Азр

С1п

ТЬг

Ьуз

Тгр

Уа1

РЬе

Азп

Зег

290

295

300

Рго

Азр

Ьеи

11е

Агд

Η^з

Азр

Азр

Η^з

ТЬг

А1а

С1п

С1у

Ьуз

Ьеи

Η^з

305

310

315

320

Ьеи

Рго

РЬе

Ьуз

Ьеи

11е

Рго

Зег

ТЬг

Суз

МеБ

Уа1

Рго

Уа1

А1а

Η^з

325

330

335

А1а

Рго

Азп

Уа1

11е

Η^з

С1у

РЬе

Ьуз

Η^3

11е

Зег

Ьеи

С1п

Ьеи

Азр

340

345

350

ТЬг

Азр

Η^з

Ьеи

ТЬг

Ьеи

Ьеи

ТЬг

ТЬг

Агд

Агд

Ьеи

С1у

А1а

Азп

Рго

355

360

365

С1и

Рго

ТЬг

ТЬг

С1и

Тгр

11е

Уа1

С1у

Ьуз

ТЬг

Уа1

Агд

Азп

РЬе

ТЬг

- 61 032403

370

375

380

Уа1 385

Азр

Агд Азр

С1у Ьеи 390

С1и

Туг

11е

Тгр С1у Азп 395

Η^з

С1и

Рго

Уа1 400

Агд

Уа1

Туг

А1а

С1п

С1и

Зег

А1а

Рго

С1у

Азр

Рго

Η^з

С1у

Тгр

Рго

405

410

415

Η^з

С1и

11е

Уа1

С1п

Η^з

Туг

Туг

Η^з

Агд

Η^з

Рго

Уа1

Туг

ТИг

11е

420

425

430

Ьеи

А1а

Уа1

А1а

Зег

А1а

ТИг

Уа1

А1а

МеЕ

МеЕ

11е

С1у

Уа1

ТИг

Уа1

435

440

445

А1а

Уа1

Ьеи

Суз

А1а

Суз

Ьуз

А1а

Агд

Агд

С1и

Суз

Ьеи

ТИг

Рго

Туг

450

455

460

А1а

Ьеи

А1а

Рго

Азп

А1а

Уа1

11е

Рго

ТИг

Зег

Ьеи

А1а

Ьеи

Ьеи

Суз

465

470

475

480

Суз

Уа1

Агд

Зег

А1а

Азп

А1а

С1и

ТИг

РИе

ТИг

С1и

ТИг

МеЕ

Зег

Туг

485

490

495

Ьеи

Тгр

Зег

Азп

Зег

С1п

Рго

РИе

РИе

Тгр

Уа1

С1п

Ьеи

Суз

11е

Рго

500

505

510

Ьеи

А1а

А1а

РИе

11е

Уа1

Ьеи

МеЕ

Агд

Суз

Суз

Зег

Суз

Суз

Ьеи

Рго

515

520

525

РИе

Ьеи

Уа1

Уа1

А1а

С1у

А1а

Туг

Ьеи

А1а

Ьуз

Уа1

Азр

А1а

Туг

С1и

530

535

540

Η^з

А1а

ТИг

ТИг

Уа1

Рго

Азп

Уа1

Рго

С1п

11е

Рго

Туг

Ьуз

А1а

Ьеи

545

550

555

560

Уа1

С1и

Агд

А1а

С1у

Туг

А1а

Рго

Ьеи

Азп

Ьеи

С1и

11е

ТИг

Уа1

МеЕ

565

570

575

Зег

Зег

С1и

Уа1

Ьеи

Рго

Зег

ТИг

Азп

С1п

С1и

Туг

11е

ТИг

Суз

Ьуз

580

585

590

РИе

ТИг

ТИг

Уа1

Уа1

Рго

Зег

Рго

Ьуз

11е

Ьуз

Суз

Суз

С1у

Зег

Ьеи

595

600

605

С1и

Суз

С1п

Рго

А1а

А1а

Η^з

А1а

Азр

Туг

ТИг

Суз

Ьуз

Уа1

РИе

С1у

- 62 032403

610

615

620

О1у Уа1 625

Туг

Рго

РЬе

Меб 630

Тгр

С1у

С1у А1а

С1п 635

Суз

РЬе

Суз

Азр

Зег 640

С1и

Азп

Зег

С1п

Меб

Зег

С1и

А1а

Туг

Уа1

С1и

Ьеи

Зег

А1а

Азр

Суз

645

650

655

А1а

Зег

Азр

Η^з

А1а

С1п

А1а

11е

Ьуз

Уа1

Η^з

ТЬг

А1а

А1а

Меб

Ьуз

660

665

670

Уа1

С1у

Ьеи

Агд

11е

Уа1

Туг

С1у

Азп

ТЬг

ТЬг

Зег

РЬе

Ьеи

Азр

Уа1

675

680

685

Туг

Уа1

Азп

С1у

Уа1

ТЬг

Рго

С1у

ТЬг

Зег

Ьуз

Азр

Ьеи

Ьуз

Уа1

11е

690

695

700

А1а

С1у

Рго

11е

Зег

А1а

Зег

РЬе

ТЬг

Рго

РЬе

Азр

Η^з

Ьуз

Уа1

Уа1

705

710

715

720

11е

Η^з

Агд

С1у

Ьеи

Уа1

Туг

Азп

Туг

Азр

РЬе

Рго

С1и

Туг

С1у

А1а

725

730

735

Меб

Ьуз

Рго

С1у

А1а

РЬе

С1у

Азр

11е

С1п

А1а

ТЬг

Зег

Ьеи

ТЬг

Зег

740

745

750

Ьуз

Азр

Ьеи

11е

А1а

Зег

ТЬг

Азр

11е

Агд

Ьеи

Ьеи

Ьуз

Рго

Зег

А1а

755

760

765

Ьуз

Азп

Уа1

Η^з

Уа1

Рго

Туг

ТЬг

С1п

А1а

Зег

Зег

С1у

РЬе

С1и

Меб

770

775

780

Тгр

Ьуз

Азп

Азп

Зег

С1у

Агд

Рго

Ьеи

С1п

С1и

ТЬг

А1а

Рго

РЬе

С1у

785

790

795

800

Суз

Ьуз

11е

А1а

Уа1

Азп

Рго

Ьеи

Агд

А1а

Уа1

Азр

Суз

Зег

Туг

С1у

805

810

815

Азп

11е

Рго

11е

Зег

11е

Азр

11е

Рго

Азп

А1а

А1а

РЬе

11е

Агд

ТЬг

820

825

830

Зег

Азр

А1а

Рго

Ьеи

Уа1

Зег

ТЬг

Уа1

Ьуз

Суз

С1и

Уа1

Зег

С1и

Суз

835

840

845

ТЬг

Туг

Зег

А1а

Азр

РЬе

С1у

С1у

Меб

А1а

ТЬг

Ьеи

С1п

Туг

Уа1

Зег

- 63 032403

850

855

860

Азр 865

Агд С1и С1у С1п

Суз 870

Рго

Уа1

Н1з

Зег

Н1з 875

Зег

Зег

ТНг

А1а

ТНг 880

Ьеи

С1п

С1и

Зег

ТНг

Уа1

Н1з

Уа1

Ьеи

С1и

Ьуз

С1у

А1а

Уа1

ТНг

Уа1

885

890

895

Н15

РНе

Зег

ТНг

А1а

Зег

Рго

С1п

А1а

Азп

РНе

11е

Уа1

Зег

Ьеи

Суз

900

905

910

С1у

Ьуз

Ьуз

ТНг

ТНг

Суз

Азп

А1а

С1и

Суз

Ьуз

Рго

Рго

А1а

Азр

Н1з

915

920

925

11е

Уа1

Зег

ТНг

Рго

Н1з

Ьуз

Азп

Азр

С1п

С1и

РНе

С1п

А1а

А1а

11е

930

935

940

Зег

Ьуз

ТНг

Зег

Тгр

Зег

Тгр

Ьеи

РНе

А1а

Ьеи

РНе

С1у

С1у

А1а

Зег

945

950

955

960

Зег

Ьеи

Ьеи

11е

11е

С1у

Ьеи

Мек

11е

РНе

А1а

Суз

Зег

Мек

Мек

Ьеи

965

970

975

ТНг

Зег

ТНг

Агд

Агд

980

<210>9 <211>982 <212> белок <213> Вирус Синдбис <400>9

Мек 1

Зег

А1а

А1а

Рго 5

Ьеи

Уа1

ТНг А1а

Мек 10

Суз

Ьеи

Ьеи

С1у

Азп 15

Уа1

Зег

РНе

Рго

Суз

Азр

Агд

Рго

Рго

ТНг

Суз

Туг

ТНг

Агд

С1и

Рго

Зег

20

25

30

Агд

А1а

Ьеи

Азр

11е

Ьеи

С1и

С1и

Азп

Уа1

Азп

Н1з

С1и

А1а

Туг

Азр

35

40

45

ТНг

Ьеи

Ьеи

Азп

А1а

11е

Ьеи

Агд

Суз

С1у

Зег

Зег

С1у

Агд

Зег

Ьуз

50

55

60

Агд

Зег

Уа1

11е

Азр

Азр

РНе

ТНг

Ьеи

ТНг

Зег

Рго

Туг

Ьеи

С1у

ТНг

65

70

75

80

- 64 032403

Суз

Зег Туг

Суз

Η^з 85

Η^з

ТЬг

Уа1

Рго

Суз 90

РЬе

Зег

Рго

Уа1

Ьуз 95

11е

Б1и

С1п

Уа1

Тгр

Азр

Б1и

А1а

Азр

Азр

Азп

ТЬг

11е

Агд

11е

С1п

ТЬг

100

105

110

Зег

А1а

С1п

РЬе

Б1у

Туг

Азр

С1п

Зег

Б1у

А1а

А1а

Зег

А1а

Азп

Ьуз

115

120

125

Туг

Агд

Туг

Меб

Зег

Ьеи

Ьуз

С1п

Азр

Η^з

ТЬг

Уа1

Б1и

Б1и

Б1у

ТЬг

130

135

140

Меб

Азр

Азр

11е

Ьуз

11е

Зег

ТЬг

Зег

Б1у

Рго

Суз

Агд

Агд

Ьеи

Зег

145

150

155

160

Туг

Ьуз

Б1у

Туг

РЬе

Ьеи

Ьеи

А1а

Ьуз

Суз

Рго

Рго

Б1у

Азр

Зег

Уа1

165

170

175

ТЬг

Уа1

Зег

11е

Уа1

Зег

Зег

Азп

Зег

А1а

ТЬг

Зег

Суз

ТЬг

Ьеи

А1а

180

185

190

Агд

Ьуз

11е

Ьуз

Рго

Ьуз

РЬе

Уа1

Б1у

Агд

Б1и

Ьуз

Туг

Азр

Ьеи

Рго

195

200

205

Рго

Уа1

Η^з

Б1у

Ьуз

Ьуз

11е

Рго

Суз

ТЬг

Уа1

Туг

Азр

Агд

Ьеи

Б1и

210

215

220

Б1у

ТЬг

ТЬг

А1а

Б1у

Туг

11е

ТЬг

Меб

Η^з

Агд

Рго

Агд

Рго

Η^з

А1а

225

230

235

240

Туг

ТЬг

Зег

Туг

Ьеи

Б1и

Б1и

Зег

Зег

Б1у

Ьуз

Уа1

Туг

А1а

Ьуз

Рго

245

250

255

Рго

Зег

Б1у

Ьуз

Азп

11е

ТЬг

Туг

Б1и

Суз

Ьуз

Суз

Б1у

Азр

Туг

Ьуз

260

265

270

ТЬг

Б1у

ТЬг

Уа1

Зег

ТЬг

Агд

ТЬг

Б1и

11е

ТЬг

Б1у

Суз

ТЬг

А1а

11е

275

280

285

Ьуз

С1п

Суз

Уа1

А1а

Туг

Ьуз

Зег

Азр

С1п

ТЬг

Ьуз

Тгр

Уа1

РЬе

Азп

290

295

300

Зег

Рго

Азр

Ьеи

11е

Агд

Η^з

Азр

Азр

Η^з

ТЬг

А1а

С1п

Б1у

Ьуз

Ьеи

305

310

315

320

- 65 032403

Н1з

Ьеи

Рго

РЬе

Ьуз 325

Ьеи

11е

Рго

Зег

ТЬг 330

Суз

Ме5

Уа1

Рго

Уа1 335

А1а

Н13

А1а

Рго

Азп

Уа1

11е

Н13

С1у

РЬе

Ьуз

Н13

11е

Зег

Ьеи

С1п

Ьеи

340

345

350

Азр

ТЬг

Азр

Н13

Ьеи

ТЬг

Ьеи

Ьеи

ТЬг

ТЬг

Агд

Агд

Ьеи

С1у

А1а

Азп

355

360

365

Рго

С1и

Рго

ТЬг

ТЬг

С1и

Тгр

11е

Уа1

С1у

Ьуз

ТЬг

Уа1

Агд

Азп

РЬе

370

375

380

ТЬг

Уа1

Азр

Агд

Азр

С1у

Ьеи

С1и

Туг

11е

Тгр

С1у

Азп

Н13

С1и

Рго

385

390

395

400

Уа1

Агд

Уа1

Туг

А1а

С1п

С1и

Зег

А1а

Рго

С1у

Азр

Рго

Н13

С1у

Тгр

405

410

415

Рго

Н13

С1и

11е

Уа1

С1п

Н13

Туг

Туг

Н13

Агд

Н13

Рго

Уа1

Туг

ТЬг

420

425

430

11е

Ьеи

А1а

Уа1

А1а

Зег

А1а

ТЬг

Уа1

А1а

Ме5

Ме5

11е

С1у

Уа1

ТЬг

435

440

445

Уа1

А1а

Уа1

Ьеи

Суз

А1а

Суз

Ьуз

А1а

Агд

Агд

С1и

Суз

Ьеи

ТЬг

Рго

450

455

460

Туг

А1а

Ьеи

А1а

Рго

Азп

А1а

Уа1

11е

Рго

ТЬг

Зег

Ьеи

А1а

Ьеи

Ьеи

465

470

475

480

Суз

Суз

Уа1

Агд

Зег

А1а

Азп

А1а

С1и

ТЬг

РЬе

ТЬг

С1и

ТЬг

Ме5

Зег

485

490

495

Туг

Ьеи

Тгр

Зег

Азп

Зег

С1п

Рго

РЬе

РЬе

Тгр

Уа1

С1п

Ьеи

Суз

11е

500

505

510

Рго

Ьеи

А1а

А1а

РЬе

11е

Уа1

Ьеи

Ме5

Агд

Суз

Суз

Зег

Суз

Суз

Ьеи

515

520

525

Рго

РЬе

Ьеи

Уа1

Уа1

А1а

С1у

А1а

Туг

Ьеи

А1а

Ьуз

Уа1

Азр

А1а

Туг

530

535

540

С1и

Н13

А1а

ТЬг

ТЬг

Уа1

Рго

Азп

Уа1

Рго

С1п

11е

Рго

Туг

Ьуз

А1а

545

550

555

560

- 66 032403

Ьеи Уа1

С1и Агд А1а С1у 565

Туг

А1а

Рго

Ьеи Азп Ьеи 570

С1и

11е

ТЬг 575

Уа1

Меб

Зег

Зег

С1и

Уа1

Ьеи

Рго

Зег

ТЬг

Азп

С1п

С1и

Туг

11е

ТЬг

Суз

580

585

590

Ьуз

РЬе

ТЬг

ТЬг

Уа1

Уа1

Рго

Зег

Рго

Ьуз

11е

Ьуз

Суз

Суз

С1у

Зег

595

600

605

Ьеи

С1и

Суз

С1п

Рго

А1а

А1а

Н1з

А1а

Азр

Туг

ТЬг

Суз

Ьуз

Уа1

РЬе

610

615

620

С1у

С1у

Уа1

Туг

Рго

РЬе

Меб

Тгр

С1у

С1у

А1а

С1п

Суз

РЬе

Суз

Азр

625

630

635

640

Зег

С1и

Азп

Зег

С1п

Меб

Зег

С1и

А1а

Туг

Уа1

С1и

Ьеи

Зег

А1а

Азр

645

650

655

Суз

А1а

Зег

Азр

Н1з

А1а

С1п

А1а

11е

Ьуз

Уа1

Н1з

ТЬг

А1а

А1а

Меб

660

665

670

Ьуз

Уа1

С1у

Ьеи

Агд

11е

Уа1

Туг

С1у

Азп

ТЬг

ТЬг

Зег

РЬе

Ьеи

Азр

675

680

685

Уа1

Туг

Уа1

Азп

С1у

Уа1

ТЬг

Рго

С1у

ТЬг

Зег

Ьуз

Азр

Ьеи

Ьуз

Уа1

690

695

700

11е

А1а

С1у

Рго

11е

Зег

А1а

Зег

РЬе

ТЬг

Рго

РЬе

Азр

Н1з

Ьуз

Уа1

705

710

715

720

Уа1

11е

Н1з

Агд

С1у

Ьеи

Уа1

Туг

Азп

Туг

Азр

РЬе

Рго

С1и

Туг

С1у

725

730

735

А1а

Меб

Ьуз

Рго

С1у

А1а

РЬе

С1у

Азр

11е

С1п

А1а

ТЬг

Зег

Ьеи

ТЬг

740

745

750

Зег

Ьуз

Азр

Ьеи

11е

А1а

Зег

ТЬг

Азр

11е

Агд

Ьеи

Ьеи

Ьуз

Рго

Зег

755

760

765

А1а

Ьуз

Азп

Уа1

Н1з

Уа1

Рго

Туг

ТЬг

С1п

А1а

Зег

Зег

С1у

РЬе

С1и

770

775

780

Меб

Тгр

Ьуз

Азп

Азп

Зег

С1у

Агд

Рго

Ьеи

С1п

С1и

ТЬг

А1а

Рго

РЬе

785

790

795

800

- 67 032403

С1у

Суз

Ьуз

11е

А1а 805

Уа1

Азп

Рго

Ьеи Агд 810

А1а

Уа1

Азр

Суз

Зег 815

Туг

С1у

Азп

11е

Рго

11е

Зег

11е

Азр

11е

Рго

Азп

А1а

А1а

Рке

11е

Агд

820

825

830

Тйг

Зег

Азр

А1а

Рго

Ьеи

Уа1

Зег

ТЙГ

Уа1

Ьуз

Суз

С1и

Уа1

Зег

С1и

835

840

845

Суз

Тйг

Туг

Зег

А1а

Азр

Рке

С1у

С1у

Мек

А1а

ТЙГ

Ьеи

С1п

Туг

Уа1

850

855

860

Зег

Азр

Агд

С1и

С1у

С1п

Суз

Рго

Уа1

Η15

Зег

Η15

Зег

Зег

ТЙГ

А1а

865

870

875

880

Тйг

Ьеи

С1п

С1и

Зег

ТЙГ

Уа1

Η15

Уа1

Ьеи

С1и

Ьуз

С1у

А1а

Уа1

ТЙГ

885

890

895

Уа1

Η15

Рке

Зег

ТЙГ

А1а

Зег

Рго

С1п

А1а

Азп

Рке

11е

Уа1

Зег

Ьеи

900

905

910

Суз

С1у

Ьуз

Ьуз

ТЙГ

ТЙГ

Суз

Азп

А1а

С1и

Суз

Ьуз

Рго

Рго

А1а

Азр

915

920

925

Η15

11е

Уа1

Зег

ТЙГ

Рго

Η15

Ьуз

Азп

Азр

С1п

С1и

Рке

С1п

А1а

А1а

930

935

940

11е

Зег

Ьуз

ТЙГ

Зег

Тгр

Зег

Тгр

Ьеи

Рке

А1а

Ьеи

Рке

С1у

С1у

А1а

945

950

955

960

Зег

Зег

Ьеи

Ьеи

11е

11е

С1у

Ьеи

Мек

11е

Рке

А1а

Суз

Зег

Мек

Мек

965

970

975

Ьеи

ТЙГ

Зег

ТЙГ

Агд

Агд

980

<210>	10
<211>	981
<212>	белок
<213>	Вирус	Синдбис
<400>	10
Мек Зег А1а	А1а Рго	Ьеи Уа1 ТЬг А1а Мек Суз	Ьеи Ьеи С1у Азп Уа1
1		5	10	15

- 68 032403

Зег

РЬе

Рго

Суз 20

Азр

Агд

Рго

Рго

ТЬг 25

Суз

Туг

ТЬг

Агд

Б1и 30

Рго

Зег

Агд

А1а

Ьеи

Азр

11е

Ьеи

Б1и

Б1и

Азп

Уа1

Азп

Н1з

Б1и

А1а

Туг

Азр

35

40

45

ТЬг

Ьеи

Ьеи

Азп

А1а

11е

Ьеи

Агд

Суз

Б1у

Зег

Зег

Б1у

Агд

Зег

Ьуз

50

55

60

Агд

Зег

Уа1

11е

Азр

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Зег

Рго

Туг

Ьеи

Б1у

ТЬг

65

70

75

80

Суз

Зег

Туг

Суз

Н1з

Нбз

ТЬг

Уа1

Рго

Суз

РЬе

Зег

Рго

Уа1

Ьуз

11е

85

90

95

Б1и

Б1п

Уа1

Тгр

Азр

Б1и

А1а

Азр

Азр

Азп

ТЬг

11е

Агд

11е

Б1п

ТЬг

100

105

110

Зег

А1а

Б1п

РЬе

Б1у

Туг

Азр

Б1п

Зег

Б1у

А1а

А1а

Зег

А1а

Азп

Ьуз

115

120

125

Туг

Агд

Туг

Меб

Зег

Ьеи

Ьуз

Б1п

Азр

Н1з

ТЬг

Уа1

Б1и

Б1и

Б1у

ТЬг

130

135

140

Меб

Азр

Азр

11е

Ьуз

11е

Зег

ТЬг

Зег

Б1у

Рго

Суз

Агд

Агд

Ьеи

Зег

145

150

155

160

Туг

Ьуз

Б1у

Туг

РЬе

Ьеи

Ьеи

А1а

Ьуз

Суз

Рго

Рго

Б1у

Азр

Зег

Уа1

165

170

175

ТЬг

Уа1

Зег

11е

Уа1

Зег

Зег

Азп

Зег

А1а

ТЬг

Зег

Суз

ТЬг

Ьеи

А1а

180

185

190

Агд

Ьуз

11е

Ьуз

Рго

Ьуз

РЬе

Уа1

Б1у

Агд

Б1и

Ьуз

Туг

Азр

Ьеи

Рго

195

200

205

Рго

Уа1

Н1з

Б1у

Ьуз

Ьуз

11е

Рго

Суз

ТЬг

Уа1

Туг

Азр

Агд

Ьеи

Б1и

210

215

220

ТЬг

ТЬг

А1а

Б1у

Туг

11е

ТЬг

Меб

Н1з

Агд

Рго

Агд

Рго

Н1з

А1а

Туг

225

230

235

240

ТЬг

Зег

Туг

Ьеи

Б1и

Б1и

Зег

Зег

Б1у

Ьуз

Уа1

Туг

А1а

Ьуз

Рго

Рго

245

250

255

- 69 032403

Зег

С1у Ьуз

Азп 260

11е

ТИг

Туг С1и Суз 265

Ьуз

Суз

С1у

Азр

Туг 270

Ьуз

ТИг

С1у

ТИг

Уа1

Зег

ТИг

Агд

ТИг

С1и

11е

ТИг

С1у

Суз

ТИг

А1а

11е

Ьуз

275

280

285

С1п

Суз

Уа1

А1а

Туг

Ьуз

Зег

Азр

С1п

ТИг

Ьуз

Тгр

Уа1

РИе

Азп

Зег

290

295

300

Рго

Азр

Ьеи

11е

Агд

Н1з

Азр

Азр

Н1з

ТИг

А1а

С1п

С1у

Ьуз

Ьеи

Н1з

305

310

315

320

Ьеи

Рго

РИе

Ьуз

Ьеи

11е

Рго

Зег

ТИг

Суз

МеЕ

Уа1

Рго

Уа1

А1а

Н1з

325

330

335

А1а

Рго

Азп

Уа1

11е

Н1з

С1у

РИе

Ьуз

Н1з

11е

Зег

Ьеи

С1п

Ьеи

Азр

340

345

350

ТИг

Азр

Н1з

Ьеи

ТИг

Ьеи

Ьеи

ТИг

ТИг

Агд

Агд

Ьеи

С1у

А1а

Азп

Рго

355

360

365

С1и

Рго

ТИг

ТИг

С1и

Тгр

11е

Уа1

С1у

Ьуз

ТИг

Уа1

Агд

Азп

РИе

ТИг

370

375

380

Уа1

Азр

Агд

Азр

С1у

Ьеи

С1и

Туг

11е

Тгр

С1у

Азп

Н1з

С1и

Рго

Уа1

385

390

395

400

Агд

Уа1

Туг

А1а

С1п

С1и

Зег

А1а

Рго

С1у

Азр

Рго

Н1з

С1у

Тгр

Рго

405

410

415

Н1з

С1и

11е

Уа1

С1п

Н1з

Туг

Туг

Н1з

Агд

Н1з

Рго

Уа1

Туг

ТИг

11е

420

425

430

Ьеи

А1а

Уа1

А1а

Зег

А1а

ТИг

Уа1

А1а

МеЕ

МеЕ

11е

С1у

Уа1

ТИг

Уа1

435

440

445

А1а

Уа1

Ьеи

Суз

А1а

Суз

Ьуз

А1а

Агд

Агд

С1и

Суз

Ьеи

ТИг

Рго

Туг

450

455

460

А1а

Ьеи

А1а

Рго

Азп

А1а

Уа1

11е

Рго

ТИг

Зег

Ьеи

А1а

Ьеи

Ьеи

Суз

465

470

475

480

Суз

Уа1

Агд

Зег

А1а

Азп

А1а

С1и

ТИг

РИе

ТИг

С1и

ТИг

МеЕ

Зег

Туг

485

490

495

- 70 032403

Ьеи

Тгр

Зег

Азп 500

Зег

С1п

Рго

РЬе

РЬе Тгр 505

Уа1

С1п

Ьеи

Суз 510

11е

Рго

Ьеи

А1а

А1а

РЬе

11е

Уа1

Ьеи

Мек

Агд

Суз

Суз

Зег

Суз

Суз

Ьеи

Рго

515

520

525

РЬе

Ьеи

Уа1

Уа1

А1а

С1у

А1а

Туг

Ьеи

А1а

Ьуз

Уа1

Азр

А1а

Туг

С1и

530

535

540

Η^з

А1а

ТЬг

ТЬг

Уа1

Рго

Азп

Уа1

Рго

С1п

11е

Рго

Туг

Ьуз

А1а

Ьеи

545

550

555

560

Уа1

С1и

Агд

А1а

С1у

Туг

А1а

Рго

Ьеи

Азп

Ьеи

С1и

11е

ТЬг

Уа1

Мек

565

570

575

Зег

Зег

С1и

Уа1

Ьеи

Рго

Зег

ТЬг

Азп

С1п

С1и

Туг

11е

ТЬг

Суз

Ьуз

580

585

590

РЬе

ТЬг

ТЬг

Уа1

Уа1

Рго

Зег

Рго

Ьуз

11е

Ьуз

Суз

Суз

С1у

Зег

Ьеи

595

600

605

С1и

Суз

С1п

Рго

А1а

А1а

Η^з

А1а

Азр

Туг

ТЬг

Суз

Ьуз

Уа1

РЬе

С1у

610

615

620

С1у

Уа1

Туг

Рго

РЬе

Мек

Тгр

С1у

С1у

А1а

С1п

Суз

РЬе

Суз

Азр

Зег

625

630

635

640

С1и

Азп

Зег

С1п

Мек

Зег

С1и

А1а

Туг

Уа1

С1и

Ьеи

Зег

А1а

Азр

Суз

645

650

655

А1а

Зег

Азр

Η^з

А1а

С1п

А1а

11е

Ьуз

Уа1

Η^з

ТЬг

А1а

А1а

Мек

Ьуз

660

665

670

Уа1

С1у

Ьеи

Агд

11е

Уа1

Туг

С1у

Азп

ТЬг

ТЬг

Зег

РЬе

Ьеи

Азр

Уа1

675

680

685

Туг

Уа1

Азп

С1у

Уа1

ТЬг

Рго

С1у

ТЬг

Зег

Ьуз

Азр

Ьеи

Ьуз

Уа1

11е

690

695

700

А1а

С1у

Рго

11е

Зег

А1а

Зег

РЬе

ТЬг

Рго

РЬе

Азр

Η^з

Ьуз

Уа1

Уа1

705

710

715

720

11е

Η^з

Агд

С1у

Ьеи

Уа1

Туг

Азп

Туг

Азр

РЬе

Рго

С1и

Туг

С1у

А1а

725

730

735

- 71 032403

Меб

Ьуз

Рго С1у А1а 740

РЬе

С1у

Азр

11е С1п 745

А1а

ТЬг

Зег

Ьеи 750

ТЬг

Зег

Ьуз

Азр

Ьеи

11е

А1а

Зег

ТЬг

Азр

11е

Агд

Ьеи

Ьеи

Ьуз

Рго

Зег

А1а

755

760

765

Ьуз

Азп

Уа1

Η^з

Уа1

Рго

Туг

ТЬг

С1п

А1а

Зег

Зег

С1у

РЬе

С1и

Меб

770

775

780

Тгр

Ьуз

Азп

Азп

Зег

С1у

Агд

Рго

Ьеи

С1п

С1и

ТЬг

А1а

Рго

РЬе

С1у

785

790

795

800

Суз

Ьуз

11е

А1а

Уа1

Азп

Рго

Ьеи

Агд

А1а

Уа1

Азр

Суз

Зег

Туг

С1у

805

810

815

Азп

11е

Рго

11е

Зег

11е

Азр

11е

Рго

Азп

А1а

А1а

РЬе

11е

Агд

ТЬг

820

825

830

Зег

Азр

А1а

Рго

Ьеи

Уа1

Зег

ТЬг

Уа1

Ьуз

Суз

С1и

Уа1

Зег

С1и

Суз

835

840

845

ТЬг

Туг

Зег

А1а

Азр

РЬе

С1у

С1у

Меб

А1а

ТЬг

Ьеи

С1п

Туг

Уа1

Зег

850

855

860

Азр

Агд

С1и

С1у

С1п

Суз

Рго

Уа1

Η^з

Зег

Η^з

Зег

Зег

ТЬг

А1а

ТЬг

865

870

875

880

Ьеи

С1п

С1и

Зег

ТЬг

Уа1

Η^3

Уа1

Ьеи

С1и

Ьуз

С1у

А1а

Уа1

ТЬг

Уа1

885

890

895

Η^з

РЬе

Зег

ТЬг

А1а

Зег

Рго

С1п

А1а

Азп

РЬе

11е

Уа1

Зег

Ьеи

Суз

900

905

910

С1у

Ьуз

Ьуз

ТЬг

ТЬг

Суз

Азп

А1а

С1и

Суз

Ьуз

Рго

Рго

А1а

Азр

Η^з

915

920

925

11е

Уа1

Зег

ТЬг

Рго

Η^з

Ьуз

Азп

Азр

С1п

С1и

РЬе

С1п

А1а

А1а

11е

930

935

940

Зег

Ьуз

ТЬг

Зег

Тгр

Зег

Тгр

Ьеи

РЬе

А1а

Ьеи

РЬе

С1у

С1у

А1а

Зег

945

950

955

960

Зег

Ьеи

Ьеи

11е

11е

С1у

Ьеи

Меб

11е

РЬе

А1а

Суз

Зег

Меб

Меб

Ьеи

965

970

975

- 72 032403

ТНг Зег ТНг Агд Агд

980 <210> 11 <211> 982 <212> белок <213> Вирус Синдбис <400> 11

Мек 1

Зег

А1а

А1а

Рго 5

Ьеи Уа1

ТНг

А1а Мек 10

Суз

Ьеи

Ьеи

С1у

Азп 15

Уа1

Зег

РНе

Рго

Суз

Азр

Агд

Рго

Рго

ТНг

Суз

Туг

ТНг

Агд

С1и

Рго

Зег

20

25

30

Агд

А1а

Ьеи

Азр

11е

Ьеи

С1и

С1и

Азп

Уа1

Азп

Н1з

С1и

А1а

Туг

Азр

35

40

45

ТНг

Ьеи

Ьеи

Азп

А1а

11е

Ьеи

Агд

Суз

С1у

Зег

Зег

С1у

Агд

Зег

Ьуз

50

55

60

Агд

Зег

Уа1

11е

Азр

Азр

РНе

ТНг

Ьеи

ТНг

Зег

Рго

Туг

Ьеи

С1у

ТНг

65

70

75

80

Суз

Зег

Туг

Суз

Н1з

Н1з

ТНг

Уа1

Рго

Суз

РНе

Зег

Рго

Уа1

Ьуз

11е

85

90

95

С1и

С1п

Уа1

Тгр

Азр

С1и

А1а

Азр

Азр

Азп

ТНг

11е

Агд

11е

С1п

ТНг

100

105

110

Зег

А1а

С1п

РНе

С1у

Туг

Азр

С1п

Зег

С1у

А1а

А1а

Зег

А1а

Азп

Ьуз

115

120

125

Туг

Агд

Туг

Мек

Зег

Ьеи

Ьуз

С1п

Азр

Н1з

ТНг

Уа1

С1и

С1и

С1у

ТНг

130

135

140

Мек

Азр

Азр

11е

Ьуз

11е

Зег

ТНг

Зег

С1у

Рго

Суз

Агд

Агд

Ьеи

Зег

145

150

155

160

Туг

Ьуз

С1у

Туг

РНе

Ьеи

Ьеи

А1а

Ьуз

Суз

Рго

Рго

С1у

Азр

Зег

Уа1

165

170

175

ТНг

Уа1

Зег

11е

Уа1

Зег

Зег

Азп

Зег

А1а

ТНг

Зег

Суз

ТНг

Ьеи

А1а

180

185

190

- 73 032403

Агд Ьуз

11е 195

Ьуз

Рго

Ьуз

РЬе Уа1 200

С1у Агд

С1и

Ьуз

Туг 205

Азр

Ьеи

Рго

Рго

Уа1

Η^з

С1у

Ьуз

Ьуз

11е

Рго

Суз

ТЬг

Уа1

Туг

Азр

Агд

Ьеи

Ьуз

210

215

220

С1у

ТЬг

ТЬг

А1а

С1у

Туг

11е

ТЬг

МеБ

Η^з

Агд

Рго

Агд

Рго

Η^з

А1а

225

230

235

240

Туг

ТЬг

Зег

Туг

Ьеи

С1и

С1и

Зег

Зег

С1у

Ьуз

Уа1

Туг

А1а

Ьуз

Рго

245

250

255

Рго

Зег

С1у

Ьуз

Азп

11е

ТЬг

Туг

С1и

Суз

Ьуз

Суз

С1у

Азр

Туг

Ьуз

260

265

270

ТЬг

С1у

ТЬг

Уа1

Зег

ТЬг

Агд

ТЬг

С1и

11е

ТЬг

С1у

Суз

ТЬг

А1а

11е

275

280

285

Ьуз

С1п

Суз

Уа1

А1а

Туг

Ьуз

Зег

Азр

С1п

ТЬг

Ьуз

Тгр

Уа1

РЬе

Азп

290

295

300

Зег

Рго

Азр

Ьеи

11е

Агд

Η^з

Азр

Азр

Η^з

ТЬг

А1а

С1п

С1у

Ьуз

Ьеи

305

310

315

320

Η^з

Ьеи

Рго

РЬе

Ьуз

Ьеи

11е

Рго

Зег

ТЬг

Суз

МеБ

Уа1

Рго

Уа1

А1а

325

330

335

Η^з

А1а

Рго

Азп

Уа1

11е

Η^з

С1у

РЬе

Ьуз

Η^з

11е

Зег

Ьеи

С1п

Ьеи

340

345

350

Азр

ТЬг

Азр

Η^з

Ьеи

ТЬг

Ьеи

Ьеи

ТЬг

ТЬг

Агд

Агд

Ьеи

С1у

А1а

Азп

355

360

365

Рго

С1и

Рго

ТЬг

ТЬг

С1и

Тгр

11е

Уа1

С1у

Ьуз

ТЬг

Уа1

Агд

Азп

РЬе

370

375

380

ТЬг

Уа1

Азр

Агд

Азр

С1у

Ьеи

С1и

Туг

11е

Тгр

С1у

Азп

Η^з

С1и

Рго

385

390

395

400

Уа1

Агд

Уа1

Туг

А1а

С1п

С1и

Зег

А1а

Рго

С1у

Азр

Рго

Η^з

С1у

Тгр

405

410

415

Рго

Η^з

С1и

11е

Уа1

С1п

Η^з

Туг

Туг

Η^з

Агд

Η^з

Рго

Уа1

Туг

ТЬг

420

425

430

- 74 032403

11е

Ьеи А1а Уа1 435

А1а

Зег

А1а

ТИг 440

Уа1

А1а

МеЕ

МеЕ

11е 445

С1у

Уа1

ТИг

Уа1

А1а

Уа1

Ьеи

Суз

А1а

Суз

Ьуз

А1а

Агд

Агд

С1и

Суз

Ьеи

ТИг

Рго

450

455

460

Туг

А1а

Ьеи

А1а

Рго

Азп

А1а

Уа1

11е

Рго

ТИг

Зег

Ьеи

А1а

Ьеи

Ьеи

465

470

475

480

Суз

Суз

Уа1

Агд

Зег

А1а

Азп

А1а

С1и

ТИг

РИе

ТИг

С1и

ТИг

МеЕ

Зег

485

490

495

Туг

Ьеи

Тгр

Зег

Азп

Зег

С1п

Рго

РИе

РИе

Тгр

Уа1

С1п

Ьеи

Суз

11е

500

505

510

Рго

Ьеи

А1а

А1а

РИе

11е

Уа1

Ьеи

МеЕ

Агд

Суз

Суз

Зег

Суз

Суз

Ьеи

515

520

525

Рго

РИе

Ьеи

Уа1

Уа1

А1а

С1у

А1а

Туг

Ьеи

А1а

Ьуз

Уа1

Азр

А1а

Туг

530

535

540

С1и

Η^з

А1а

ТИг

ТИг

Уа1

Рго

Азп

Уа1

Рго

С1п

11е

Рго

Туг

Ьуз

А1а

545

550

555

560

Ьеи

Уа1

С1и

Агд

А1а

С1у

Туг

А1а

Рго

Ьеи

Азп

Ьеи

С1и

11е

ТИг

Уа1

565

570

575

МеЕ

Зег

Зег

С1и

Уа1

Ьеи

Рго

Зег

ТИг

Азп

С1п

С1и

Туг

11е

ТИг

Суз

580

585

590

Ьуз

РИе

ТИг

ТИг

Уа1

Уа1

Рго

Зег

Рго

Ьуз

11е

Ьуз

Суз

Суз

С1у

Зег

595

600

605

Ьеи

С1и

Суз

С1п

Рго

А1а

А1а

Η^з

А1а

Азр

Туг

ТИг

Суз

Ьуз

Уа1

РИе

610

615

620

С1у

С1у

Уа1

Туг

Рго

РИе

МеЕ

Тгр

С1у

С1у

А1а

С1п

Суз

РИе

Суз

Азр

625

630

635

640

Зег

С1и

Азп

Зег

С1п

МеЕ

Зег

С1и

А1а

Туг

Уа1

С1и

Ьеи

Зег

А1а

Азр

645

650

655

Суз

А1а

Зег

Азр

Η^з

А1а

С1п

А1а

11е

Ьуз

Уа1

Η^з

ТИг

А1а

А1а

МеЕ

660

665

670

- 75 032403

Ьуз

Уа1

Б1у 675

Ьеи

Агд

11е Уа1

Туг 680

Б1у Азп ТЬг

ТЬг

Зег 685

РЬе

Ьеи

Азр

Уа1

Туг

Уа1

Азп

Б1у

Уа1

ТЬг

Рго

Б1у

ТЬг

Зег

Ьуз

Азр

Ьеи

Ьуз

Уа1

690

695

700

11е

А1а

Б1у

Рго

11е

Зег

А1а

Зег

РЬе

ТЬг

Рго

РЬе

Азр

Η^з

Ьуз

Уа1

705

710

715

720

Уа1

11е

Η^з

Агд

Б1у

Ьеи

Уа1

Туг

Азп

Туг

Азр

РЬе

Рго

Б1и

Туг

Б1у

725

730

735

А1а

Меб

Ьуз

Рго

Б1у

А1а

РЬе

Б1у

Азр

11е

С1п

А1а

ТЬг

Зег

Ьеи

ТЬг

740

745

750

Зег

Ьуз

Азр

Ьеи

11е

А1а

Зег

ТЬг

Азр

11е

Агд

Ьеи

Ьеи

Ьуз

Рго

Зег

755

760

765

А1а

Ьуз

Азп

Уа1

Η^з

Уа1

Рго

Туг

ТЬг

С1п

А1а

Зег

Зег

Б1у

РЬе

Б1и

770

775

780

Меб

Тгр

Ьуз

Азп

Азп

Зег

Б1у

Агд

Рго

Ьеи

С1п

Б1и

ТЬг

А1а

Рго

РЬе

785

790

795

800

Б1у

Суз

Ьуз

11е

А1а

Уа1

Азп

Рго

Ьеи

Агд

А1а

Уа1

Азр

Суз

Зег

Туг

805

810

815

Б1у

Азп

11е

Рго

11е

Зег

11е

Азр

11е

Рго

Азп

А1а

А1а

РЬе

11е

Агд

820

825

830

ТЬг

Зег

Азр

А1а

Рго

Ьеи

Уа1

Зег

ТЬг

Уа1

Ьуз

Суз

Б1и

Уа1

Зег

Б1и

835

840

845

Суз

ТЬг

Туг

Зег

А1а

Азр

РЬе

Б1у

Б1у

Меб

А1а

ТЬг

Ьеи

С1п

Туг

Уа1

850

855

860

Зег

Азр

Агд

Б1и

Б1у

С1п

Суз

Рго

Уа1

Η^з

Зег

Η^3

Зег

Зег

ТЬг

А1а

865

870

875

880

ТЬг

Ьеи

С1п

Б1и

Зег

ТЬг

Уа1

Η^3

Уа1

Ьеи

Б1и

Ьуз

Б1у

А1а

Уа1

ТЬг

885

890

895

Уа1

Η^з

РЬе

Зег

ТЬг

А1а

Зег

Рго

С1п

А1а

Азп

РЬе

11е

Уа1

Зег

Ьеи

900

905

910

- 76 032403

Суз

С1у

Ьуз 915

Ьуз

ТЬг ТЬг

Суз

Азп 920

А1а

С1и Суз

Ьуз

Рго 925

Рго

А1а

Азр

Н1з

11е

Уа1

Зег

ТЬг

Рго

Н1з

Ьуз

Азп

Азр

С1п

С1и

РЬе

С1п

А1а

А1а

930

935

940

11е

Зег

Ьуз

ТЬг

Зег

Тгр

Зег

Тгр

Ьеи

РЬе

А1а

Ьеи

РЬе

С1у

С1у

А1а

945

950

955

960

Зег

Зег

Ьеи

Ьеи

11е

11е

С1у

Ьеи

Меб

11е

РЬе

А1а

Суз

Зег

Меб

Меб

965

970

975

Ьеи

ТЬг

Зег

ТЬг

Агд

Агд

980

<210> 12 <211> 981 <212> белок <213> Вирус Синдбис <400> 12

Меб 1

Зег А1а А1а

Рго 5

Ьеи Уа1

ТЬг

А1а

Меб 10

Суз

Ьеи

Ьеи

С1у

Азп 15

Уа1

Зег

РЬе

Рго

Суз

Азр

Агд

Рго

Рго

ТЬг

Суз

Туг

ТЬг

Агд

С1и

Рго

Зег

20

25

30

Агд

А1а

Ьеи

Азр

11е

Ьеи

С1и

С1и

Азп

Уа1

Азп

Н1з

С1и

А1а

Туг

Азр

35

40

45

ТЬг

Ьеи

Ьеи

Азп

А1а

11е

Ьеи

Агд

Суз

С1у

Зег

Зег

С1у

Агд

Зег

Ьуз

50

55

60

Агд

Зег

Уа1

11е

Азр

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Зег

Рго

Туг

Ьеи

С1у

ТЬг

65

70

75

80

Суз

Зег

Туг

Суз

Н1з

Н1з

ТЬг

Уа1

Рго

Суз

РЬе

Зег

Рго

Уа1

Ьуз

11е

85

90

95

С1и

С1п

Уа1

Тгр

Азр

С1и

А1а

Азр

Азр

Азп

ТЬг

11е

Агд

11е

С1п

ТЬг

100

105

110

Зег

А1а

С1п

РЬе

С1у

Туг

Азр

С1п

Зег

С1у

А1а

А1а

Зег

А1а

Азп

Ьуз

115

120

125

Туг

Агд

Туг

Меб

Зег

Ьеи

Ьуз

С1п

Азр

Н1з

ТЬг

Уа1

С1и

С1и

С1у

ТЬг

- 77 032403

130

135

140

Меб 145

Азр

Азр

11е

Ьуз

11е 150

Зег

ТЬг

Зег

С1у

Рго 155

Суз

Агд Агд

Ьеи

Зег 160

Туг

Ьуз

С1у

Туг

РЬе

Ьеи

Ьеи

А1а

Ьуз

Суз

Рго

Рго

С1у

Азр

Зег

Уа1

165

170

175

ТЬг

Уа1

Зег

11е

Уа1

Зег

Зег

Азп

Зег

А1а

ТЬг

Зег

Суз

ТЬг

Ьеи

А1а

180

185

190

Агд

Ьуз

11е

Ьуз

Рго

Ьуз

РЬе

Уа1

С1у

Агд

С1и

Ьуз

Туг

Азр

Ьеи

Рго

195

200

205

Рго

Уа1

Н1з

С1у

Ьуз

Ьуз

11е

Рго

Суз

ТЬг

Уа1

Туг

Азр

Агд

Ьеи

Ьуз

210

215

220

ТЬг

ТЬг

А1а

С1у

Туг

11е

ТЬг

Меб

Н1з

Агд

Рго

Агд

Рго

Н1з

А1а

Туг

225

230

235

240

ТЬг

Зег

Туг

Ьеи

С1и

С1и

Зег

Зег

С1у

Ьуз

Уа1

Туг

А1а

Ьуз

Рго

Рго

245

250

255

Зег

С1у

Ьуз

Азп

11е

ТЬг

Туг

С1и

Суз

Ьуз

Суз

С1у

Азр

Туг

Ьуз

ТЬг

260

265

270

С1у

ТЬг

Уа1

Зег

ТЬг

Агд

ТЬг

С1и

11е

ТЬг

С1у

Суз

ТЬг

А1а

11е

Ьуз

275

280

285

С1п

Суз

Уа1

А1а

Туг

Ьуз

Зег

Азр

С1п

ТЬг

Ьуз

Тгр

Уа1

РЬе

Азп

Зег

290

295

300

Рго

Азр

Ьеи

11е

Агд

Н1з

Азр

Азр

Н1з

ТЬг

А1а

С1п

С1у

Ьуз

Ьеи

Н1з

305

310

315

320

Ьеи

Рго

РЬе

Ьуз

Ьеи

11е

Рго

Зег

ТЬг

Суз

Меб

Уа1

Рго

Уа1

А1а

Н1з

325

330

335

А1а

Рго

Азп

Уа1

11е

Н1з

С1у

РЬе

Ьуз

Н1з

11е

Зег

Ьеи

С1п

Ьеи

Азр

340

345

350

ТЬг

Азр

Н1з

Ьеи

ТЬг

Ьеи

Ьеи

ТЬг

ТЬг

Агд

Агд

Ьеи

С1у

А1а

Азп

Рго

355

360

365

С1и

Рго

ТЬг

ТЬг

С1и

Тгр

11е

Уа1

С1у

Ьуз

ТЬг

Уа1

Агд

Азп

РЬе

ТЬг

- 78 032403

370

375

380

Уй1 385

Азр

Агд Азр

С1у Ьеи 390

С1и

Туг

11е

Тгр С1у Азп 395

Η15

С1и

Рго

Уй1 400

Агд

Уй1

Туг

А1а

С1п

С1и

Зег

А1а

Рго

С1у

Азр

Рго

Η15

С1у

Тгр

Рго

405

410

415

Η15

С1и

11е

Уй1

С1п

Η15

Туг

Туг

Η15

Агд

Η15

Рго

Уй1

Туг

ТЙГ

11е

420

425

430

Ьеи

А1а

Уй1

А1а

Зег

А1а

ТЙГ

Уй1

А1а

Мек

Мек

11е

С1у

Уй1

ТЙГ

Уй1

435

440

445

А1а

Уй1

Ьеи

Суз

А1а

Суз

Ьуз

А1а

Агд

Агд

С1и

Суз

Ьеи

Тйг

Рго

Туг

450

455

460

А1а

Ьеи

А1а

Рго

Азп

А1а

Уй1

11е

Рго

ТЙГ

Зег

Ьеи

А1а

Ьеи

Ьеи

Суз

465

470

475

480

Суз

Уй1

Агд

Зег

А1а

Азп

А1а

С1и

ТЙГ

Рке

ТЙГ

С1и

ТЙГ

Мек

Зег

Туг

485

490

495

Ьеи

Тгр

Зег

Азп

Зег

С1п

Рго

Рке

Рке

Тгр

Уй1

С1п

Ьеи

Суз

11е

Рго

500

505

510

Ьеи

А1а

А1а

Рке

11е

Уй1

Ьеи

Мек

Агд

Суз

Суз

Зег

Суз

Суз

Ьеи

Рго

515

520

525

Рке

Ьеи

Уй1

Уй1

А1а

С1у

А1а

Туг

Ьеи

А1а

Ьуз

Уй1

Азр

А1а

Туг

С1и

530

535

540

Η15

А1а

Тйг

Тйг

Уй1

Рго

Азп

Уй1

Рго

С1п

11е

Рго

Туг

Ьуз

А1а

Ьеи

545

550

555

560

Уй1

С1и

Агд

А1а

С1у

Туг

А1а

Рго

Ьеи

Азп

Ьеи

С1и

11е

ТЙГ

Уй1

Мек

565

570

575

Зег

Зег

С1и

Уй1

Ьеи

Рго

Зег

ТЙГ

Азп

С1п

С1и

Туг

11е

ТЙГ

Суз

Ьуз

580

585

590

Рке

ТЙГ

ТЙГ

Уй1

Уй1

Рго

Зег

Рго

Ьуз

11е

Ьуз

Суз

Суз

С1у

Зег

Ьеи

595

600

605

С1и

Суз

С1п

Рго

А1а

А1а

Η15

А1а

Азр

Туг

ТЙГ

Суз

Ьуз

Уй1

Рке

С1у

- 79 032403

610

615

620

О1у Уа1 625

Туг

Рго

РЬе

Меб 630

Тгр

С1у

С1у А1а

С1п 635

Суз

РЬе

Суз

Азр

Зег 640

С1и

Азп

Зег

С1п

Меб

Зег

С1и

А1а

Туг

Уа1

С1и

Ьеи

Зег

А1а

Азр

Суз

645

650

655

А1а

Зег

Азр

Η^з

А1а

С1п

А1а

11е

Ьуз

Уа1

Η^з

ТЬг

А1а

А1а

Меб

Ьуз

660

665

670

Уа1

С1у

Ьеи

Агд

11е

Уа1

Туг

С1у

Азп

ТЬг

ТЬг

Зег

РЬе

Ьеи

Азр

Уа1

675

680

685

Туг

Уа1

Азп

С1у

Уа1

ТЬг

Рго

С1у

ТЬг

Зег

Ьуз

Азр

Ьеи

Ьуз

Уа1

11е

690

695

700

А1а

С1у

Рго

11е

Зег

А1а

Зег

РЬе

ТЬг

Рго

РЬе

Азр

Η^з

Ьуз

Уа1

Уа1

705

710

715

720

11е

Η^з

Агд

С1у

Ьеи

Уа1

Туг

Азп

Туг

Азр

РЬе

Рго

С1и

Туг

С1у

А1а

725

730

735

Меб

Ьуз

Рго

С1у

А1а

РЬе

С1у

Азр

11е

С1п

А1а

ТЬг

Зег

Ьеи

ТЬг

Зег

740

745

750

Ьуз

Азр

Ьеи

11е

А1а

Зег

ТЬг

Азр

11е

Агд

Ьеи

Ьеи

Ьуз

Рго

Зег

А1а

755

760

765

Ьуз

Азп

Уа1

Η^з

Уа1

Рго

Туг

ТЬг

С1п

А1а

Зег

Зег

С1у

РЬе

С1и

Меб

770

775

780

Тгр

Ьуз

Азп

Азп

Зег

С1у

Агд

Рго

Ьеи

С1п

С1и

ТЬг

А1а

Рго

РЬе

С1у

785

790

795

800

Суз

Ьуз

11е

А1а

Уа1

Азп

Рго

Ьеи

Агд

А1а

Уа1

Азр

Суз

Зег

Туг

С1у

805

810

815

Азп

11е

Рго

11е

Зег

11е

Азр

11е

Рго

Азп

А1а

А1а

РЬе

11е

Агд

ТЬг

820

825

830

Зег

Азр

А1а

Рго

Ьеи

Уа1

Зег

ТЬг

Уа1

Ьуз

Суз

С1и

Уа1

Зег

С1и

Суз

835

840

845

ТЬг

Туг

Зег

А1а

Азр

РЬе

С1у

С1у

Меб

А1а

ТЬг

Ьеи

С1п

Туг

Уа1

Зег

- 80 032403

850

855

860

Азр 865

Агд С1и С1у С1п

Суз 870

Рго

Уа1

Н1з

Зег

Н1з 875

Зег

Зег

ТЬг

А1а

ТЬг 880

Ьеи

С1п

С1и

Зег

ТЬг

Уа1

Н1з

Уа1

Ьеи

С1и

Ьуз

С1у

А1а

Уа1

ТЬг

Уа1

885

890

895

Н15

РЬе

Зег

ТЬг

А1а

Зег

Рго

С1п

А1а

Азп

РЬе

11е

Уа1

Зег

Ьеи

Суз

900

905

910

С1у

Ьуз

Ьуз

ТЬг

ТЬг

Суз

Азп

А1а

С1и

Суз

Ьуз

Рго

Рго

А1а

Азр

Н1з

915

920

925

11е

Уа1

Зег

ТЬг

Рго

Н1з

Ьуз

Азп

Азр

С1п

С1и

РЬе

С1п

А1а

А1а

11е

930

935

940

Зег

Ьуз

ТЬг

Зег

Тгр

Зег

Тгр

Ьеи

РЬе

А1а

Ьеи

РЬе

С1у

С1у

А1а

Зег

945

950

955

960

Зег

Ьеи

Ьеи

11е

11е

С1у

Ьеи

Меб

11е

РЬе

А1а

Суз

Зег

Меб

Меб

Ьеи

965

970

975

ТЬг

Зег

ТЬг

Агд

Агд

980

<210>13 <211>982 <212> белок <213> Вирус Синдбис <400>13

Меб 1

Зег

А1а

А1а

Рго 5

Ьеи

Уа1

ТЬг А1а

Меб 10

Суз

Ьеи

Ьеи

С1у

Азп 15

Уа1

Зег

РЬе

Рго

Суз

Азр

Агд

Рго

Рго

ТЬг

Суз

Туг

ТЬг

Агд

С1и

Рго

Зег

20

25

30

Агд

А1а

Ьеи

Азр

11е

Ьеи

С1и

С1и

Азп

Уа1

Азп

Н1з

С1и

А1а

Туг

Азр

35

40

45

ТЬг

Ьеи

Ьеи

Азп

А1а

11е

Ьеи

Агд

Суз

С1у

Зег

Зег

С1у

Агд

Зег

Ьуз

50

55

60

Агд

Зег

Уа1

11е

Азр

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Зег

Рго

Туг

Ьеи

С1у

ТЬг

65

70

75

80

- 81 032403

Суз

Зег Туг

Суз

Н1з 85

Н1з

ТНг

Уа1

Рго

Суз 90

РНе

Зег

Рго

Уа1

Ьуз 95

11е

С1и

С1п

Уа1

Тгр

Азр

С1и

А1а

Азр

Азр

Азп

ТНг

11е

Агд

11е

С1п

ТНг

100

105

110

Зег

А1а

С1п

РНе

С1у

Туг

Азр

С1п

Зег

С1у

А1а

А1а

Зег

А1а

Азп

Ьуз

115

120

125

Туг

Агд

Туг

Мек

Зег

Ьеи

С1и

С1п

Азр

Н1з

ТНг

Уа1

Ьуз

С1и

С1у

ТНг

130

135

140

Мек

Азр

Азр

11е

Ьуз

11е

Зег

ТНг

Зег

С1у

Рго

Суз

Агд

Агд

Ьеи

Зег

145

150

155

160

Туг

Ьуз

С1у

Туг

РНе

Ьеи

Ьеи

А1а

Ьуз

Суз

Рго

Рго

С1у

Азр

Зег

Уа1

165

170

175

ТНг

Уа1

Зег

11е

Уа1

Зег

Зег

Азп

Зег

А1а

ТНг

Зег

Суз

ТНг

Ьеи

А1а

180

185

190

Агд

Ьуз

11е

Ьуз

Рго

Ьуз

РНе

Уа1

С1у

Агд

С1и

Ьуз

Туг

Азр

Ьеи

Рго

195

200

205

Рго

Уа1

Н1з

С1у

Ьуз

Ьуз

11е

Рго

Суз

ТНг

Уа1

Туг

Азр

Агд

Ьеи

Ьуз

210

215

220

С1у

ТНг

ТНг

А1а

С1у

Туг

11е

ТНг

Мек

Н1з

Агд

Рго

Агд

Рго

Н1з

А1а

225

230

235

240

Туг

ТНг

Зег

Туг

Ьеи

С1и

С1и

Зег

Зег

С1у

Ьуз

Уа1

Туг

А1а

Ьуз

Рго

245

250

255

Рго

Зег

С1у

Ьуз

Азп

11е

ТНг

Туг

С1и

Суз

Ьуз

Суз

С1у

Азр

Туг

Ьуз

260

265

270

ТНг

С1у

ТНг

Уа1

Зег

ТНг

Агд

ТНг

С1и

11е

ТНг

С1у

Суз

ТНг

А1а

11е

275

280

285

Ьуз

С1п

Суз

Уа1

А1а

Туг

Ьуз

Зег

Азр

С1п

ТНг

Ьуз

Тгр

Уа1

РНе

Азп

290

295

300

Зег

Рго

Азр

Ьеи

11е

Агд

Н1з

Азр

Азр

Н1з

ТНг

А1а

С1п

С1у

Ьуз

Ьеи

305

310

315

320

- 82 032403

Η^3

Ьеи

Рго

РЬе

Ьуз 325

Ьеи

11е

Рго

Зег

ТЬг 330

Суз

Мек

Уа1

Рго

Уа1 335

А1а

Η^3

А1а

Рго

Азп

Уа1

11е

Η^з

С1у

РЬе

Ьуз

Η^з

11е

Зег

Ьеи

С1п

Ьеи

340

345

350

Азр

ТЬг

Азр

Η^з

Ьеи

ТЬг

Ьеи

Ьеи

ТЬг

ТЬг

Агд

Агд

Ьеи

С1у

А1а

Азп

355

360

365

Рго

С1и

Рго

ТЬг

ТЬг

С1и

Тгр

11е

Уа1

С1у

Ьуз

ТЬг

Уа1

Агд

Азп

РЬе

370

375

380

ТЬг

Уа1

Азр

Агд

Азр

С1у

Ьеи

С1и

Туг

11е

Тгр

С1у

Азп

Η^з

С1и

Рго

385

390

395

400

Уа1

Агд

Уа1

Туг

А1а

С1п

С1и

Зег

А1а

Рго

С1у

Азр

Рго

Η^з

С1у

Тгр

405

410

415

Рго

Η^з

С1и

11е

Уа1

С1п

Η^з

Туг

Туг

Η^з

Агд

Η^з

Рго

Уа1

Туг

ТЬг

420

425

430

11е

Ьеи

А1а

Уа1

А1а

Зег

А1а

ТЬг

Уа1

А1а

Мек

Мек

11е

С1у

Уа1

ТЬг

435

440

445

Уа1

А1а

Уа1

Ьеи

Суз

А1а

Суз

Ьуз

А1а

Агд

Агд

С1и

Суз

Ьеи

ТЬг

Рго

450

455

460

Туг

А1а

Ьеи

А1а

Рго

Азп

А1а

Уа1

11е

Рго

ТЬг

Зег

Ьеи

А1а

Ьеи

Ьеи

465

470

475

480

Суз

Суз

Уа1

Агд

Зег

А1а

Азп

А1а

С1и

ТЬг

РЬе

ТЬг

С1и

ТЬг

Мек

Зег

485

490

495

Туг

Ьеи

Тгр

Зег

Азп

Зег

С1п

Рго

РЬе

РЬе

Тгр

Уа1

С1п

Ьеи

Суз

11е

500

505

510

Рго

Ьеи

А1а

А1а

РЬе

11е

Уа1

Ьеи

Мек

Агд

Суз

Суз

Зег

Суз

Суз

Ьеи

515

520

525

Рго

РЬе

Ьеи

Уа1

Уа1

А1а

С1у

А1а

Туг

Ьеи

А1а

Ьуз

Уа1

Азр

А1а

Туг

530

535

540

С1и

Η^з

А1а

ТЬг

ТЬг

Уа1

Рго

Азп

Уа1

Рго

С1п

11е

Рго

Туг

Ьуз

А1а

545

550

555

560

- 83 032403

Ьеи Уа1

С1и Агд А1а С1у 565

Туг

А1а

Рго

Ьеи Азп Ьеи 570

С1и

11е

ТИг 575

Уа1

МеЕ

Зег

Зег

С1и

Уа1

Ьеи

Рго

Зег

ТИг

Азп

С1п

С1и

Туг

11е

ТИг

Суз

580

585

590

Ьуз

РИе

ТИг

ТИг

Уа1

Уа1

Рго

Зег

Рго

Ьуз

11е

Ьуз

Суз

Суз

С1у

Зег

595

600

605

Ьеи

С1и

Суз

С1п

Рго

А1а

А1а

Н1з

А1а

Азр

Туг

ТИг

Суз

Ьуз

Уа1

РИе

610

615

620

С1у

С1у

Уа1

Туг

Рго

РИе

МеЕ

Тгр

С1у

С1у

А1а

С1п

Суз

РИе

Суз

Азр

625

630

635

640

Зег

С1и

Азп

Зег

С1п

МеЕ

Зег

С1и

А1а

Туг

Уа1

С1и

Ьеи

Зег

А1а

Азр

645

650

655

Суз

А1а

Зег

Азр

Н1з

А1а

С1п

А1а

11е

Ьуз

Уа1

Н1з

ТИг

А1а

А1а

МеЕ

660

665

670

Ьуз

Уа1

С1у

Ьеи

Агд

11е

Уа1

Туг

С1у

Азп

ТИг

ТИг

Зег

РИе

Ьеи

Азр

675

680

685

Уа1

Туг

Уа1

Азп

С1у

Уа1

ТИг

Рго

С1у

ТИг

Зег

Ьуз

Азр

Ьеи

Ьуз

Уа1

690

695

700

11е

А1а

С1у

Рго

11е

Зег

А1а

Зег

РИе

ТИг

Рго

РИе

Азр

Н1з

Ьуз

Уа1

705

710

715

720

Уа1

11е

Н1з

Агд

С1у

Ьеи

Уа1

Туг

Азп

Туг

Азр

РИе

Рго

С1и

Туг

С1у

725

730

735

А1а

МеЕ

Ьуз

Рго

С1у

А1а

РИе

С1у

Азр

11е

С1п

А1а

ТИг

Зег

Ьеи

ТИг

740

745

750

Зег

Ьуз

Азр

Ьеи

11е

А1а

Зег

ТИг

Азр

11е

Агд

Ьеи

Ьеи

Ьуз

Рго

Зег

755

760

765

А1а

Ьуз

Азп

Уа1

Н1з

Уа1

Рго

Туг

ТИг

С1п

А1а

Зег

Зег

С1у

РИе

С1и

770

775

780

МеЕ

Тгр

Ьуз

Азп

Азп

Зег

С1у

Агд

Рго

Ьеи

С1п

С1и

ТИг

А1а

Рго

РИе

785

790

795

800

- 84 032403

С1у

Суз

Ьуз

11е

А1а 805

Уа1

Азп

Рго

Ьеи Агд 810

А1а

Уа1

Азр

Суз

Зег 815

Туг

С1у

Азп

11е

Рго

11е

Зег

11е

Азр

11е

Рго

Азп

А1а

А1а

РИе

11е

Агд

820

825

830

ТИг

Зег

Азр

А1а

Рго

Ьеи

Уа1

Зег

ТИг

Уа1

Ьуз

Суз

С1и

Уа1

Зег

С1и

835

840

845

Суз

ТИг

Туг

Зег

А1а

Азр

РИе

С1у

С1у

МеЕ

А1а

ТИг

Ьеи

С1п

Туг

Уа1

850

855

860

Зег

Азр

Агд

С1и

С1у

С1п

Суз

Рго

Уа1

Η^з

Зег

Η^з

Зег

Зег

ТИг

А1а

865

870

875

880

ТИг

Ьеи

С1п

С1и

Зег

ТИг

Уа1

Η^3

Уа1

Ьеи

С1и

Ьуз

С1у

А1а

Уа1

ТИг

885

890

895

Уа1

Η^з

РИе

Зег

ТИг

А1а

Зег

Рго

С1п

А1а

Азп

РИе

11е

Уа1

Зег

Ьеи

900

905

910

Суз

С1у

Ьуз

Ьуз

ТИг

ТИг

Суз

Азп

А1а

С1и

Суз

Ьуз

Рго

Рго

А1а

Азр

915

920

925

Η^з

11е

Уа1

Зег

ТИг

Рго

Η^з

Ьуз

Азп

Азр

С1п

С1и

РИе

С1п

А1а

А1а

930

935

940

11е

Зег

Ьуз

ТИг

Зег

Тгр

Зег

Тгр

Ьеи

РИе

А1а

Ьеи

РИе

С1у

С1у

А1а

945

950

955

960

Зег

Зег

Ьеи

Ьеи

11е

11е

С1у

Ьеи

МеЕ

11е

РИе

А1а

Суз

Зег

МеЕ

МеЕ

965

970

975

Ьеи

ТИг

Зег

ТИг

Агд

Агд

980

<210>	14
<211>	981
<212>	белок
<213>	Вирус	Синдбис
<400>	14
МеЕ Зег А1а	А1а Рго	Ьеи Уа1 ТИг А1а МеЕ Суз	Ьеи Ьеи С1у Азп Уа1
1		5	10	15

- 85 032403

Зег

РЬе

Рго

Суз 20

Азр

Агд

Рго

Рго

ТЬг 25

Суз

Туг

ТЬг

Агд

С1и 30

Рго

Зег

Агд

А1а

Ьеи

Азр

11е

Ьеи

С1и

С1и

Азп

Уа1

Азп

Η^з

С1и

А1а

Туг

Азр

35

40

45

ТЬг

Ьеи

Ьеи

Азп

А1а

11е

Ьеи

Агд

Суз

С1у

Зег

Зег

С1у

Агд

Зег

Ьуз

50

55

60

Агд

Зег

Уа1

11е

Азр

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Зег

Рго

Туг

Ьеи

С1у

ТЬг

65

70

75

80

Суз

Зег

Туг

Суз

Η^з

Η^з

ТЬг

Уа1

Рго

Суз

РЬе

Зег

Рго

Уа1

Ьуз

11е

85

90

95

С1и

С1п

Уа1

Тгр

Азр

С1и

А1а

Азр

Азр

Азп

ТЬг

11е

Агд

11е

С1п

ТЬг

100

105

110

Зег

А1а

С1п

РЬе

С1у

Туг

Азр

С1п

Зег

С1у

А1а

А1а

Зег

А1а

Азп

Ьуз

115

120

125

Туг

Агд

Туг

МеБ

Зег

Ьеи

С1и

С1п

Азр

Η^з

ТЬг

Уа1

Ьуз

С1и

С1у

ТЬг

130

135

140

МеБ

Азр

Азр

11е

Ьуз

11е

Зег

ТЬг

Зег

С1у

Рго

Суз

Агд

Агд

Ьеи

Зег

145

150

155

160

Туг

Ьуз

С1у

Туг

РЬе

Ьеи

Ьеи

А1а

Ьуз

Суз

Рго

Рго

С1у

Азр

Зег

Уа1

165

170

175

ТЬг

Уа1

Зег

11е

Уа1

Зег

Зег

Азп

Зег

А1а

ТЬг

Зег

Суз

ТЬг

Ьеи

А1а

180

185

190

Агд

Ьуз

11е

Ьуз

Рго

Ьуз

РЬе

Уа1

С1у

Агд

С1и

Ьуз

Туг

Азр

Ьеи

Рго

195

200

205

Рго

Уа1

Η^з

С1у

Ьуз

Ьуз

11е

Рго

Суз

ТЬг

Уа1

Туг

Азр

Агд

Ьеи

Ьуз

210

215

220

ТЬг

ТЬг

А1а

С1у

Туг

11е

ТЬг

МеБ

Η^з

Агд

Рго

Агд

Рго

Η^з

А1а

Туг

225

230

235

240

ТЬг

Зег

Туг

Ьеи

С1и

С1и

Зег

Зег

С1у

Ьуз

Уа1

Туг

А1а

Ьуз

Рго

Рго

245

250

255

- 86 032403

Зег

Б1у Ьуз

Азп 260

11е

ТЬг

Туг Б1и Суз 265

Ьуз

Суз

Б1у

Азр

Туг 270

Ьуз

ТЬг

Б1у

ТЬг

Уа1

Зег

ТЬг

Агд

ТЬг

Б1и

11е

ТЬг

Б1у

Суз

ТЬг

А1а

11е

Ьуз

275

280

285

С1п

Суз

Уа1

А1а

Туг

Ьуз

Зег

Азр

С1п

ТЬг

Ьуз

Тгр

Уа1

РЬе

Азп

Зег

290

295

300

Рго

Азр

Ьеи

11е

Агд

Η^з

Азр

Азр

Η^з

ТЬг

А1а

С1п

Б1у

Ьуз

Ьеи

Η^з

305

310

315

320

Ьеи

Рго

РЬе

Ьуз

Ьеи

11е

Рго

Зег

ТЬг

Суз

Меб

Уа1

Рго

Уа1

А1а

Η^з

325

330

335

А1а

Рго

Азп

Уа1

11е

Η^з

Б1у

РЬе

Ьуз

Η^з

11е

Зег

Ьеи

С1п

Ьеи

Азр

340

345

350

ТЬг

Азр

Η^з

Ьеи

ТЬг

Ьеи

Ьеи

ТЬг

ТЬг

Агд

Агд

Ьеи

Б1у

А1а

Азп

Рго

355

360

365

Б1и

Рго

ТЬг

ТЬг

Б1и

Тгр

11е

Уа1

Б1у

Ьуз

ТЬг

Уа1

Агд

Азп

РЬе

ТЬг

370

375

380

Уа1

Азр

Агд

Азр

Б1у

Ьеи

Б1и

Туг

11е

Тгр

Б1у

Азп

Η^з

Б1и

Рго

Уа1

385

390

395

400

Агд

Уа1

Туг

А1а

С1п

Б1и

Зег

А1а

Рго

Б1у

Азр

Рго

Η^з

Б1у

Тгр

Рго

405

410

415

Η^з

Б1и

11е

Уа1

С1п

Η^з

Туг

Туг

Η^з

Агд

Η^з

Рго

Уа1

Туг

ТЬг

11е

420

425

430

Ьеи

А1а

Уа1

А1а

Зег

А1а

ТЬг

Уа1

А1а

Меб

Меб

11е

Б1у

Уа1

ТЬг

Уа1

435

440

445

А1а

Уа1

Ьеи

Суз

А1а

Суз

Ьуз

А1а

Агд

Агд

Б1и

Суз

Ьеи

ТЬг

Рго

Туг

450

455

460

А1а

Ьеи

А1а

Рго

Азп

А1а

Уа1

11е

Рго

ТЬг

Зег

Ьеи

А1а

Ьеи

Ьеи

Суз

465

470

475

480

Суз

Уа1

Агд

Зег

А1а

Азп

А1а

Б1и

ТЬг

РЬе

ТЬг

Б1и

ТЬг

Меб

Зег

Туг

485

490

495

- 87 032403

Ьеи

Тгр

Зег

Азп 500

Зег

С1п

Рго

РЬе

РЬе Тгр 505

Уа1

С1п

Ьеи

Суз 510

11е

Рго

Ьеи

А1а

А1а

РЬе

11е

Уа1

Ьеи

Меб

Агд

Суз

Суз

Зег

Суз

Суз

Ьеи

Рго

515

520

525

РЬе

Ьеи

Уа1

Уа1

А1а

С1у

А1а

Туг

Ьеи

А1а

Ьуз

Уа1

Азр

А1а

Туг

С1и

530

535

540

Η^з

А1а

ТЬг

ТЬг

Уа1

Рго

Азп

Уа1

Рго

С1п

11е

Рго

Туг

Ьуз

А1а

Ьеи

545

550

555

560

Уа1

С1и

Агд

А1а

С1у

Туг

А1а

Рго

Ьеи

Азп

Ьеи

С1и

11е

ТЬг

Уа1

Меб

565

570

575

Зег

Зег

С1и

Уа1

Ьеи

Рго

Зег

ТЬг

Азп

С1п

С1и

Туг

11е

ТЬг

Суз

Ьуз

580

585

590

РЬе

ТЬг

ТЬг

Уа1

Уа1

Рго

Зег

Рго

Ьуз

11е

Ьуз

Суз

Суз

С1у

Зег

Ьеи

595

600

605

С1и

Суз

С1п

Рго

А1а

А1а

Η^з

А1а

Азр

Туг

ТЬг

Суз

Ьуз

Уа1

РЬе

С1у

610

615

620

С1у

Уа1

Туг

Рго

РЬе

Меб

Тгр

С1у

С1у

А1а

С1п

Суз

РЬе

Суз

Азр

Зег

625

630

635

640

С1и

Азп

Зег

С1п

Меб

Зег

С1и

А1а

Туг

Уа1

С1и

Ьеи

Зег

А1а

Азр

Суз

645

650

655

А1а

Зег

Азр

Η^з

А1а

С1п

А1а

11е

Ьуз

Уа1

Η^з

ТЬг

А1а

А1а

Меб

Ьуз

660

665

670

Уа1

С1у

Ьеи

Агд

11е

Уа1

Туг

С1у

Азп

ТЬг

ТЬг

Зег

РЬе

Ьеи

Азр

Уа1

675

680

685

Туг

Уа1

Азп

С1у

Уа1

ТЬг

Рго

С1у

ТЬг

Зег

Ьуз

Азр

Ьеи

Ьуз

Уа1

11е

690

695

700

А1а

С1у

Рго

11е

Зег

А1а

Зег

РЬе

ТЬг

Рго

РЬе

Азр

Η^з

Ьуз

Уа1

Уа1

705

710

715

720

11е

Η^з

Агд

С1у

Ьеи

Уа1

Туг

Азп

Туг

Азр

РЬе

Рго

С1и

Туг

С1у

А1а

725

730

735

- 88 032403

Мек

Ьуз

Рго С1у А1а 740

Рке

С1у

Азр

11е С1п 745

А1а

ТЙГ

Зег

Ьеи 750

ТЙГ

Зег

Ьуз

Азр

Ьеи

11е

А1а

Зег

ТЙГ

Азр

11е

Агд

Ьеи

Ьеи

Ьуз

Рго

Зег

А1а

755

760

765

Ьуз

Азп

Vа1

Η15

Vа1

Рго

Туг

ТЙГ

С1п

А1а

Зег

Зег

С1у

Рке

С1и

Мек

770

775

780

Тгр

Ьуз

Азп

Азп

Зег

С1у

Агд

Рго

Ьеи

С1п

С1и

ТЙГ

А1а

Рго

Рке

С1у

785

790

795

800

Суз

Ьуз

11е

А1а

Vа1

Азп

Рго

Ьеи

Агд

А1а

Vа1

Азр

Суз

Зег

Туг

С1у

805

810

815

Азп

11е

Рго

11е

Зег

11е

Азр

11е

Рго

Азп

А1а

А1а

Рке

11е

Агд

ТЙГ

820

825

830

Зег

Азр

А1а

Рго

Ьеи

Vа1

Зег

ТЙГ

Vа1

Ьуз

Суз

С1и

Vа1

Зег

С1и

Суз

835

840

845

Тйг

Туг

Зег

А1а

Азр

Рке

С1у

С1у

Мек

А1а

ТЙГ

Ьеи

С1п

Туг

Vа1

Зег

850

855

860

Азр

Агд

С1и

С1у

С1п

Суз

Рго

Vа1

Η15

Зег

Η15

Зег

Зег

ТЙГ

А1а

ТЙГ

865

870

875

880

Ьеи

С1п

С1и

Зег

ТЙГ

Vа1

Η15

Vа1

Ьеи

С1и

Ьуз

С1у

А1а

Vа1

ТЙГ

Vа1

885

890

895

Η15

Рйе

Зег

ТЙГ

А1а

Зег

Рго

С1п

А1а

Азп

Рке

11е

Vа1

Зег

Ьеи

Суз

900

905

910

С1у

Ьуз

Ьуз

ТЙГ

ТЙГ

Суз

Азп

А1а

С1и

Суз

Ьуз

Рго

Рго

А1а

Азр

Η15

915

920

925

11е

Уй1

Зег

ТЙГ

Рго

Η15

Ьуз

Азп

Азр

С1п

С1и

Рке

С1п

А1а

А1а

11е

930

935

940

Зег

Ьуз

ТЙГ

Зег

Тгр

Зег

Тгр

Ьеи

Рке

А1а

Ьеи

Рке

С1у

С1у

А1а

Зег

945

950

955

960

Зег

Ьеи

Ьеи

11е

11е

С1у

Ьеи

Мек

11е

Рке

А1а

Суз

Зег

Мек

Мек

Ьеи

965

970

975

- 89 032403

ТЬг Зег ТЬг Агд Агд

980 <210>15 <211>982 <212> белок <213> Вирус Синдбис <400>15

Меб 1

Зег

А1а

А1а

Рго 5

Ьеи Уа1

ТЬг

А1а Меб 10

Суз

Ьеи

Ьеи

С1у

Азп 15

Уа1

Зег

РЬе

Рго

Суз

Азр

Агд

Рго

Рго

ТЬг

Суз

Туг

ТЬг

Агд

С1и

Рго

Зег

20

25

30

Агд

А1а

Ьеи

Азр

11е

Ьеи

С1и

С1и

Азп

Уа1

Азп

Н1з

С1и

А1а

Туг

Азр

35

40

45

ТЬг

Ьеи

Ьеи

Азп

А1а

11е

Ьеи

Агд

Суз

С1у

Зег

Зег

С1у

Агд

Зег

Ьуз

50

55

60

Агд

Зег

Уа1

11е

Азр

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Зег

Рго

Туг

Ьеи

С1у

ТЬг

65

70

75

80

Суз

Зег

Туг

Суз

Н1з

Н1з

ТЬг

Уа1

Рго

Суз

РЬе

Зег

Рго

Уа1

Ьуз

11е

85

90

95

С1и

С1п

Уа1

Тгр

Азр

С1и

А1а

Азр

Азр

Азп

ТЬг

11е

Агд

11е

С1п

ТЬг

100

105

110

Зег

А1а

С1п

РЬе

С1у

Туг

Азр

С1п

Зег

С1у

А1а

А1а

Зег

А1а

Азп

Ьуз

115

120

125

Туг

Агд

Туг

Меб

Зег

Ьеи

С1и

С1п

Азр

Н1з

ТЬг

Уа1

С1и

С1и

С1у

ТЬг

130

135

140

Меб

Азр

Азр

11е

Ьуз

11е

Зег

ТЬг

Зег

С1у

Рго

Суз

Агд

Агд

Ьеи

Зег

145

150

155

160

Туг

Ьуз

С1у

Туг

РЬе

Ьеи

Ьеи

А1а

Ьуз

Суз

Рго

Рго

С1у

Азр

Зег

Уа1

165

170

175

ТЬг

Уа1

Зег

11е

Уа1

Зег

Зег

Азп

Зег

А1а

ТЬг

Зег

Суз

ТЬг

Ьеи

А1а

180

185

190

- 90 032403

Агд Ьуз

11е 195

Ьуз

Рго

Ьуз

РЬе Уа1 200

С1у Агд

Б1и

Ьуз

Туг 205

Азр

Ьеи

Рго

Рго

Уа1

Н13

Б1у

Ьуз

Ьуз

11е

Рго

Суз

ТЬг

Уа1

Туг

Азр

Агд

Ьеи

Ьуз

210

215

220

Б1у

ТЬг

ТЬг

А1а

Б1у

Туг

11е

ТЬг

Меб

Н13

Агд

Рго

Агд

Рго

Н13

А1а

225

230

235

240

Туг

ТЬг

Зег

Туг

Ьеи

Б1и

Б1и

Зег

Зег

Б1у

Ьуз

Уа1

Туг

А1а

Ьуз

Рго

245

250

255

Рго

Зег

Б1у

Ьуз

Азп

11е

ТЬг

Туг

Б1и

Суз

Ьуз

Суз

Б1у

Азр

Туг

Ьуз

260

265

270

ТЬг

Б1у

ТЬг

Уа1

Зег

ТЬг

Агд

ТЬг

Б1и

11е

ТЬг

Б1у

Суз

ТЬг

А1а

11е

275

280

285

Ьуз

Б1п

Суз

Уа1

А1а

Туг

Ьуз

Зег

Азр

Б1п

ТЬг

Ьуз

Тгр

Уа1

РЬе

Азп

290

295

300

Зег

Рго

Азр

Ьеи

11е

Агд

Н13

Азр

Азр

Н13

ТЬг

А1а

Б1п

Б1у

Ьуз

Ьеи

305

310

315

320

Н1з

Ьеи

Рго

РЬе

Ьуз

Ьеи

11е

Рго

Зег

ТЬг

Суз

Меб

Уа1

Рго

Уа1

А1а

325

330

335

Н13

А1а

Рго

Азп

Уа1

11е

Н13

Б1у

РЬе

Ьуз

Н13

11е

Зег

Ьеи

Б1п

Ьеи

340

345

350

Азр

ТЬг

Азр

Н13

Ьеи

ТЬг

Ьеи

Ьеи

ТЬг

ТЬг

Агд

Агд

Ьеи

Б1у

А1а

Азп

355

360

365

Рго

Б1и

Рго

ТЬг

ТЬг

Б1и

Тгр

11е

Уа1

Б1у

Ьуз

ТЬг

Уа1

Агд

Азп

РЬе

370

375

380

ТЬг

Уа1

Азр

Агд

Азр

Б1у

Ьеи

Б1и

Туг

11е

Тгр

Б1у

Азп

Н13

Б1и

Рго

385

390

395

400

Уа1

Агд

Уа1

Туг

А1а

Б1п

Б1и

Зег

А1а

Рго

Б1у

Азр

Рго

Н13

Б1у

Тгр

405

410

415

Рго

Н13

Б1и

11е

Уа1

Б1п

Н13

Туг

Туг

Н13

Агд

Н13

Рго

Уа1

Туг

ТЬг

420

425

430

- 91 032403

11е

Ьеи А1а Уа1 435

А1а

Зег

А1а

ТНг 440

Уа1

А1а

Мек

Мек

11е 445

С1у

Уа1

ТНг

Уа1

А1а

Уа1

Ьеи

Суз

А1а

Суз

Ьуз

А1а

Агд

Агд

С1и

Суз

Ьеи

ТНг

Рго

450

455

460

Туг

А1а

Ьеи

А1а

Рго

Азп

А1а

Уа1

11е

Рго

ТНг

Зег

Ьеи

А1а

Ьеи

Ьеи

465

470

475

480

Суз

Суз

Уа1

Агд

Зег

А1а

Азп

А1а

С1и

ТНг

РНе

ТНг

С1и

ТНг

Мек

Зег

485

490

495

Туг

Ьеи

Тгр

Зег

Азп

Зег

С1п

Рго

РНе

РНе

Тгр

Уа1

С1п

Ьеи

Суз

11е

500

505

510

Рго

Ьеи

А1а

А1а

РНе

11е

Уа1

Ьеи

Мек

Агд

Суз

Суз

Зег

Суз

Суз

Ьеи

515

520

525

Рго

РНе

Ьеи

Уа1

Уа1

А1а

С1у

А1а

Туг

Ьеи

А1а

Ьуз

Уа1

Азр

А1а

Туг

530

535

540

С1и

Н1з

А1а

ТНг

ТНг

Уа1

Рго

Азп

Уа1

Рго

С1п

11е

Рго

Туг

Ьуз

А1а

545

550

555

560

Ьеи

Уа1

С1и

Агд

А1а

С1у

Туг

А1а

Рго

Ьеи

Азп

Ьеи

С1и

11е

ТНг

Уа1

565

570

575

Мек

Зег

Зег

С1и

Уа1

Ьеи

Рго

Зег

ТНг

Азп

С1п

С1и

Туг

11е

ТНг

Суз

580

585

590

Ьуз

РНе

ТНг

ТНг

Уа1

Уа1

Рго

Зег

Рго

Ьуз

11е

Ьуз

Суз

Суз

С1у

Зег

595

600

605

Ьеи

С1и

Суз

С1п

Рго

А1а

А1а

Н1з

А1а

Азр

Туг

ТНг

Суз

Ьуз

Уа1

РНе

610

615

620

С1у

С1у

Уа1

Туг

Рго

РНе

Мек

Тгр

С1у

С1у

А1а

С1п

Суз

РНе

Суз

Азр

625

630

635

640

Зег

С1и

Азп

Зег

С1п

Мек

Зег

С1и

А1а

Туг

Уа1

С1и

Ьеи

Зег

А1а

Азр

645

650

655

Суз

А1а

Зег

Азр

Н1з

А1а

С1п

А1а

11е

Ьуз

Уа1

Н1з

ТНг

А1а

А1а

Мек

660

665

670

- 92 032403

Ьуз

Уа1

С1у 675

Ьеи

Агд

11е Уа1

Туг 680

С1у Азп ТЬг

ТЬг

Зег 685

РЬе

Ьеи

Азр

Уа1

Туг

Уа1

Азп

С1у

Уа1

ТЬг

Рго

С1у

ТЬг

Зег

Ьуз

Азр

Ьеи

Ьуз

Уа1

690

695

700

11е

А1а

С1у

Рго

11е

Зег

А1а

Зег

РЬе

ТЬг

Рго

РЬе

Азр

Н1з

Ьуз

Уа1

705

710

715

720

Уа1

11е

Н1з

Агд

С1у

Ьеи

Уа1

Туг

Азп

Туг

Азр

РЬе

Рго

С1и

Туг

С1у

725

730

735

А1а

Меб

Ьуз

Рго

С1у

А1а

РЬе

С1у

Азр

11е

С1п

А1а

ТЬг

Зег

Ьеи

ТЬг

740

745

750

Зег

Ьуз

Азр

Ьеи

11е

А1а

Зег

ТЬг

Азр

11е

Агд

Ьеи

Ьеи

Ьуз

Рго

Зег

755

760

765

А1а

Ьуз

Азп

Уа1

Н1з

Уа1

Рго

Туг

ТЬг

С1п

А1а

Зег

Зег

С1у

РЬе

С1и

770

775

780

Меб

Тгр

Ьуз

Азп

Азп

Зег

С1у

Агд

Рго

Ьеи

С1п

С1и

ТЬг

А1а

Рго

РЬе

785

790

795

800

С1у

Суз

Ьуз

11е

А1а

Уа1

Азп

Рго

Ьеи

Агд

А1а

Уа1

Азр

Суз

Зег

Туг

805

810

815

С1у

Азп

11е

Рго

11е

Зег

11е

Азр

11е

Рго

Азп

А1а

А1а

РЬе

11е

Агд

820

825

830

ТЬг

Зег

Азр

А1а

Рго

Ьеи

Уа1

Зег

ТЬг

Уа1

Ьуз

Суз

С1и

Уа1

Зег

С1и

835

840

845

Суз

ТЬг

Туг

Зег

А1а

Азр

РЬе

С1у

С1у

Меб

А1а

ТЬг

Ьеи

С1п

Туг

Уа1

850

855

860

Зег

Азр

Агд

С1и

С1у

С1п

Суз

Рго

Уа1

Н1з

Зег

Н1з

Зег

Зег

ТЬг

А1а

865

870

875

880

ТЬг

Ьеи

С1п

С1и

Зег

ТЬг

Уа1

Н1з

Уа1

Ьеи

С1и

Ьуз

С1у

А1а

Уа1

ТЬг

885

890

895

Уа1

Н1з

РЬе

Зег

ТЬг

А1а

Зег

Рго

С1п

А1а

Азп

РЬе

11е

Уа1

Зег

Ьеи

900

905

910

- 93 032403

Суз

С1у

Ьуз 915

Ьуз

ТЬг ТЬг

Суз

Азп 920

А1а

С1и Суз

Ьуз

Рго 925

Рго

А1а

Азр

Η^3

11е

Уа1

Зег

ТЬг

Рго

Η^з

Ьуз

Азп

Азр

С1п

С1и

РЬе

С1п

А1а

А1а

930

935

940

11е

Зег

Ьуз

ТЬг

Зег

Тгр

Зег

Тгр

Ьеи

РЬе

А1а

Ьеи

РЬе

С1у

С1у

А1а

945

950

955

960

Зег

Зег

Ьеи

Ьеи

11е

11е

С1у

Ьеи

Мек

11е

РЬе

А1а

Суз

Зег

Мек

Мек

965

970

975

Ьеи

ТЬг

Зег

ТЬг

Агд

Агд

980

<210> 16 <211> 981 <212> белок <213> Вирус Синдбис <400> 16

Мек 1

Зег А1а А1а

Рго 5

Ьеи Уа1

ТЬг

А1а

Мек 10

Суз

Ьеи

Ьеи

С1у

Азп 15

Уа1

Зег

РЬе

Рго

Суз

Азр

Агд

Рго

Рго

ТЬг

Суз

Туг

ТЬг

Агд

С1и

Рго

Зег

20

25

30

Агд

А1а

Ьеи

Азр

11е

Ьеи

С1и

С1и

Азп

Уа1

Азп

Η^з

С1и

А1а

Туг

Азр

35

40

45

ТЬг

Ьеи

Ьеи

Азп

А1а

11е

Ьеи

Агд

Суз

С1у

Зег

Зег

С1у

Агд

Зег

Ьуз

50

55

60

Агд

Зег

Уа1

11е

Азр

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Зег

Рго

Туг

Ьеи

С1у

ТЬг

65

70

75

80

Суз

Зег

Туг

Суз

Η^з

Η^з

ТЬг

Уа1

Рго

Суз

РЬе

Зег

Рго

Уа1

Ьуз

11е

85

90

95

С1и

С1п

Уа1

Тгр

Азр

С1и

А1а

Азр

Азр

Азп

ТЬг

11е

Агд

11е

С1п

ТЬг

100

105

110

Зег

А1а

С1п

РЬе

С1у

Туг

Азр

С1п

Зег

С1у

А1а

А1а

Зег

А1а

Азп

Ьуз

115

120

125

Туг

Агд

Туг

Мек

Зег

Ьеи

С1и

С1п

Азр

Η^з

ТЬг

Уа1

С1и

С1и

С1у

ТЬг

- 94 032403

130

135

140

МеЕ 145

Азр

Азр

11е

Ьуз

11е 150

Зег

ТИг

Зег

С1у

Рго 155

Суз

Агд Агд

Ьеи

Зег 160

Туг

Ьуз

С1у

Туг

РИе

Ьеи

Ьеи

А1а

Ьуз

Суз

Рго

Рго

С1у

Азр

Зег

Уа1

165

170

175

ТИг

Уа1

Зег

11е

Уа1

Зег

Зег

Азп

Зег

А1а

ТИг

Зег

Суз

ТИг

Ьеи

А1а

180

185

190

Агд

Ьуз

11е

Ьуз

Рго

Ьуз

РИе

Уа1

С1у

Агд

С1и

Ьуз

Туг

Азр

Ьеи

Рго

195

200

205

Рго

Уа1

Η^з

С1у

Ьуз

Ьуз

11е

Рго

Суз

ТИг

Уа1

Туг

Азр

Агд

Ьеи

Ьуз

210

215

220

ТИг

ТИг

А1а

С1у

Туг

11е

ТИг

МеЕ

Η^з

Агд

Рго

Агд

Рго

Η^з

А1а

Туг

225

230

235

240

ТИг

Зег

Туг

Ьеи

С1и

С1и

Зег

Зег

С1у

Ьуз

Уа1

Туг

А1а

Ьуз

Рго

Рго

245

250

255

Зег

С1у

Ьуз

Азп

11е

ТИг

Туг

С1и

Суз

Ьуз

Суз

С1у

Азр

Туг

Ьуз

ТИг

260

265

270

С1у

ТИг

Уа1

Зег

ТИг

Агд

ТИг

С1и

11е

ТИг

С1у

Суз

ТИг

А1а

11е

Ьуз

275

280

285

С1п

Суз

Уа1

А1а

Туг

Ьуз

Зег

Азр

С1п

ТИг

Ьуз

Тгр

Уа1

РИе

Азп

Зег

290

295

300

Рго

Азр

Ьеи

11е

Агд

Η^з

Азр

Азр

Η^з

ТИг

А1а

С1п

С1у

Ьуз

Ьеи

Η^з

305

310

315

320

Ьеи

Рго

РИе

Ьуз

Ьеи

11е

Рго

Зег

ТИг

Суз

МеЕ

Уа1

Рго

Уа1

А1а

Η^з

325

330

335

А1а

Рго

Азп

Уа1

11е

Η^з

С1у

РИе

Ьуз

Η^з

11е

Зег

Ьеи

С1п

Ьеи

Азр

340

345

350

ТИг

Азр

Η^з

Ьеи

ТИг

Ьеи

Ьеи

ТИг

ТИг

Агд

Агд

Ьеи

С1у

А1а

Азп

Рго

355

360

365

С1и

Рго

ТИг

ТИг

С1и

Тгр

11е

Уа1

С1у

Ьуз

ТИг

Уа1

Агд

Азп

РИе

ТИг

- 95 032403

370

375

380

Уа1 385

Азр

Агд Азр

01у Ьеи 390

С1и

Туг

11е

Тгр С1у Азп 395

Η^з

С1и

Рго

Уа1 400

Агд

Уа1

Туг

А1а

С1п

С1и

Зег

А1а

Рго

С1у

Азр

Рго

Η^з

С1у

Тгр

Рго

405

410

415

Η15

С1и

11е

Уа1

С1п

Η13

Туг

Туг

Η^з

Агд

Η^з

Рго

Уа1

Туг

ТЬг

11е

420

425

430

Ьеи

А1а

Уа1

А1а

Зег

А1а

ТЬг

Уа1

А1а

Меб

Меб

11е

С1у

Уа1

ТЬг

Уа1

435

440

445

А1а

Уа1

Ьеи

Суз

А1а

Суз

Ьуз

А1а

Агд

Агд

С1и

Суз

Ьеи

ТЬг

Рго

Туг

450

455

460

А1а

Ьеи

А1а

Рго

Азп

А1а

Уа1

11е

Рго

ТЬг

Зег

Ьеи

А1а

Ьеи

Ьеи

Суз

465

470

475

480

Суз

Уа1

Агд

Зег

А1а

Азп

А1а

С1и

ТЬг

РЬе

ТЬг

С1и

ТЬг

Меб

Зег

Туг

485

490

495

Ьеи

Тгр

Зег

Азп

Зег

С1п

Рго

РЬе

РЬе

Тгр

Уа1

С1п

Ьеи

Суз

11е

Рго

500

505

510

Ьеи

А1а

А1а

РЬе

11е

Уа1

Ьеи

Меб

Агд

Суз

Суз

Зег

Суз

Суз

Ьеи

Рго

515

520

525

РЬе

Ьеи

Уа1

Уа1

А1а

С1у

А1а

Туг

Ьеи

А1а

Ьуз

Уа1

Азр

А1а

Туг

С1и

530

535

540

Η13

А1а

ТЬг

ТЬг

Уа1

Рго

Азп

Уа1

Рго

С1п

11е

Рго

Туг

Ьуз

А1а

Ьеи

545

550

555

560

Уа1

С1и

Агд

А1а

С1у

Туг

А1а

Рго

Ьеи

Азп

Ьеи

С1и

11е

ТЬг

Уа1

Меб

565

570

575

Зег

Зег

С1и

Уа1

Ьеи

Рго

Зег

ТЬг

Азп

С1п

С1и

Туг

11е

ТЬг

Суз

Ьуз

580

585

590

РЬе

ТЬг

ТЬг

Уа1

Уа1

Рго

Зег

Рго

Ьуз

11е

Ьуз

Суз

Суз

С1у

Зег

Ьеи

595

600

605

С1и

Суз

С1п

Рго

А1а

А1а

Η13

А1а

Азр

Туг

ТЬг

Суз

Ьуз

Уа1

РЬе

С1у

- 96 032403

610

615

620

С1у Уа1 625

Туг

Рго

РИе

МеЕ 630

Тгр

С1у

С1у А1а

С1п 635

Суз

РИе

Суз

Азр

Зег 640

С1и

Азп

Зег

С1п

МеЕ

Зег

С1и

А1а

Туг

Уа1

С1и

Ьеи

Зег

А1а

Азр

Суз

645

650

655

А1а

Зег

Азр

Н1з

А1а

С1п

А1а

11е

Ьуз

Уа1

Н1з

ТИг

А1а

А1а

МеЕ

Ьуз

660

665

670

Уа1

С1у

Ьеи

Агд

11е

Уа1

Туг

С1у

Азп

ТИг

ТИг

Зег

РИе

Ьеи

Азр

Уа1

675

680

685

Туг

Уа1

Азп

С1у

Уа1

ТИг

Рго

С1у

ТИг

Зег

Ьуз

Азр

Ьеи

Ьуз

Уа1

11е

690

695

700

А1а

С1у

Рго

11е

Зег

А1а

Зег

РИе

ТИг

Рго

РИе

Азр

Н1з

Ьуз

Уа1

Уа1

705

710

715

720

11е

Н1з

Агд

С1у

Ьеи

Уа1

Туг

Азп

Туг

Азр

РИе

Рго

С1и

Туг

С1у

А1а

725

730

735

МеЕ

Ьуз

Рго

С1у

А1а

РИе

С1у

Азр

11е

С1п

А1а

ТИг

Зег

Ьеи

ТИг

Зег

740

745

750

Ьуз

Азр

Ьеи

11е

А1а

Зег

ТИг

Азр

11е

Агд

Ьеи

Ьеи

Ьуз

Рго

Зег

А1а

755

760

765

Ьуз

Азп

Уа1

Н1з

Уа1

Рго

Туг

ТИг

С1п

А1а

Зег

Зег

С1у

РИе

С1и

МеЕ

770

775

780

Тгр

Ьуз

Азп

Азп

Зег

С1у

Агд

Рго

Ьеи

С1п

С1и

ТИг

А1а

Рго

РИе

С1у

785

790

795

800

Суз

Ьуз

11е

А1а

Уа1

Азп

Рго

Ьеи

Агд

А1а

Уа1

Азр

Суз

Зег

Туг

С1у

805

810

815

Азп

11е

Рго

11е

Зег

11е

Азр

11е

Рго

Азп

А1а

А1а

РИе

11е

Агд

ТИг

820

825

830

Зег

Азр

А1а

Рго

Ьеи

Уа1

Зег

ТИг

Уа1

Ьуз

Суз

С1и

Уа1

Зег

С1и

Суз

835

840

845

ТИг

Туг

Зег

А1а

Азр

РИе

С1у

С1у

МеЕ

А1а

ТИг

Ьеи

С1п

Туг

Уа1

Зег

- 97 032403

850

855

860

Азр 865

Агд С1и С1у С1п

Суз 870

Рго

Уа1

Η^з

Зег

Η^з 875

Зег

Зег

ТЬг

А1а

ТЬг 880

Ьеи

С1п

С1и

Зег

ТЬг

Уа1

Η^3

Уа1

Ьеи

С1и

Ьуз

С1у

А1а

Уа1

ТЬг

Уа1

885

890

895

Η^з

РЬе

Зег

ТЬг

А1а

Зег

Рго

С1п

А1а

Азп

РЬе

11е

Уа1

Зег

Ьеи

Суз

900

905

910

С1у

Ьуз

Ьуз

ТЬг

ТЬг

Суз

Азп

А1а

С1и

Суз

Ьуз

Рго

Рго

А1а

Азр

Η^з

915

920

925

11е

Уа1

Зег

ТЬг

Рго

Η^з

Ьуз

Азп

Азр

С1п

С1и

РЬе

С1п

А1а

А1а

11е

930

935

940

Зег

Ьуз

ТЬг

Зег

Тгр

Зег

Тгр

Ьеи

РЬе

А1а

Ьеи

РЬе

С1у

С1у

А1а

Зег

945

950

955

960

Зег

Ьеи

Ьеи

11е

11е

С1у

Ьеи

МеБ

11е

РЬе

А1а

Суз

Зег

МеБ

МеБ

Ьеи

965

970

975

ТЬг

Зег

ТЬг

Агд

Агд

980

<210>17 <211>982 <212> белок <213> Вирус Синдбис <400>17

МеБ 1

Зег

А1а

А1а

Рго 5

Ьеи

Уа1

ТЬг А1а

МеБ 10

Суз

Ьеи

Ьеи

С1у

Азп 15

Уа1

Зег

РЬе

Рго

Суз

Азр

Агд

Рго

Рго

ТЬг

Суз

Туг

ТЬг

Агд

С1и

Рго

Зег

20

25

30

Агд

А1а

Ьеи

Азр

11е

Ьеи

С1и

С1и

Азп

Уа1

Азп

Η^з

С1и

А1а

Туг

Азр

35

40

45

ТЬг

Ьеи

Ьеи

Азп

А1а

11е

Ьеи

Агд

Суз

С1у

Зег

Зег

С1у

Агд

Зег

Ьуз

50

55

60

Агд

Зег

Уа1

11е

Азр

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Зег

Рго

Туг

Ьеи

С1у

ТЬг

65

70

75

80

- 98 032403

Суз

Зег Туг

Суз

Η^з 85

Η^з

ТЬг

Уа1

Рго

Суз 90

РЬе

Зег

Рго

Уа1

Ьуз 95

11е

Б1и

С1п

Уа1

Тгр

Азр

Б1и

А1а

Азр

Азр

Азп

ТЬг

11е

Агд

11е

С1п

ТЬг

100

105

110

Зег

А1а

С1п

РЬе

Б1у

Туг

Азр

С1п

Зег

Б1у

А1а

А1а

Зег

А1а

Азп

Ьуз

115

120

125

Туг

Агд

Туг

Меб

Зег

Ьеи

Ьуз

С1п

Азр

Η^з

ТЬг

Уа1

Ьуз

Б1и

Б1у

ТЬг

130

135

140

Меб

Азр

Азр

11е

Ьуз

11е

Зег

ТЬг

Зег

Б1у

Рго

Суз

Агд

Агд

Ьеи

Зег

145

150

155

160

Туг

Ьуз

Б1у

Туг

РЬе

Ьеи

Ьеи

А1а

Ьуз

Суз

Рго

Рго

Б1у

Азр

Зег

Уа1

165

170

175

ТЬг

Уа1

Зег

11е

Уа1

Зег

Зег

Азп

Зег

А1а

ТЬг

Зег

Суз

ТЬг

Ьеи

А1а

180

185

190

Агд

Ьуз

11е

Ьуз

Рго

Ьуз

РЬе

Уа1

Б1у

Агд

Б1и

Ьуз

Туг

Азр

Ьеи

Рго

195

200

205

Рго

Уа1

Η^з

Б1у

Ьуз

Ьуз

11е

Рго

Суз

ТЬг

Уа1

Туг

Азр

Агд

Ьеи

Ьуз

210

215

220

Б1и

ТЬг

ТЬг

А1а

Б1у

Туг

11е

ТЬг

Меб

Η^з

Агд

Рго

Агд

Рго

Η^з

А1а

225

230

235

240

Туг

ТЬг

Зег

Туг

Ьеи

Б1и

Б1и

Зег

Зег

Б1у

Ьуз

Уа1

Туг

А1а

Ьуз

Рго

245

250

255

Рго

Зег

Б1у

Ьуз

Азп

11е

ТЬг

Туг

Б1и

Суз

Ьуз

Суз

Б1у

Азр

Туг

Ьуз

260

265

270

ТЬг

Б1у

ТЬг

Уа1

Зег

ТЬг

Агд

ТЬг

Б1и

11е

ТЬг

Б1у

Суз

ТЬг

А1а

11е

275

280

285

Ьуз

С1п

Суз

Уа1

А1а

Туг

Ьуз

Зег

Азр

С1п

ТЬг

Ьуз

Тгр

Уа1

РЬе

Азп

290

295

300

Зег

Рго

Азр

Ьеи

11е

Агд

Η^з

Азр

Азр

Η^з

ТЬг

А1а

С1п

Б1у

Ьуз

Ьеи

305

310

315

320

- 99 032403

Ηίδ

Ьеи

Рго

Рке

Ьуз 325

Ьеи

11е

Рго

Зег

Тйг 330

Суз

Мек

Уй1

Рго

Уй1 335

А1а

Ηίδ

А1а

Рго

Азп

Уй1

11е

Н1з

С1у

Рке

Ьуз

Н1з

11е

Зег

Ьеи

С1п

Ьеи

340

345

350

Азр

Тйг

Азр

Н1з

Ьеи

ТЙГ

Ьеи

Ьеи

ТЙГ

ТЙГ

Агд

Агд

Ьеи

С1у

А1а

Азп

355

360

365

Рго

С1и

Рго

ТЙГ

ТЙГ

С1и

Тгр

11е

Уй1

С1у

Ьуз

ТЙГ

Уй1

Агд

Азп

Рке

370

375

380

Тйг

Уй1

Азр

Агд

Азр

С1у

Ьеи

С1и

Туг

11е

Тгр

С1у

Азп

Н1з

С1и

Рго

385

390

395

400

Уй1

Агд

Уй1

Туг

А1а

С1п

С1и

Зег

А1а

Рго

С1у

Азр

Рго

Н1з

С1у

Тгр

405

410

415

Рго

Н1з

С1и

11е

Уй1

С1п

Н1з

Туг

Туг

Н1з

Агд

Н1з

Рго

Уй1

Туг

ТЙГ

420

425

430

11е

Ьеи

А1а

Уй1

А1а

Зег

А1а

ТЙГ

Уй1

А1а

Мек

Мек

11е

С1у

Уй1

ТЙГ

435

440

445

Уй1

А1а

Уй1

Ьеи

Суз

А1а

Суз

Ьуз

А1а

Агд

Агд

С1и

Суз

Ьеи

Тйг

Рго

450

455

460

Туг

А1а

Ьеи

А1а

Рго

Азп

А1а

Уй1

11е

Рго

ТЙГ

Зег

Ьеи

А1а

Ьеи

Ьеи

465

470

475

480

Суз

Суз

Уй1

Агд

Зег

А1а

Азп

А1а

С1и

ТЙГ

Рке

ТЙГ

С1и

ТЙГ

Мек

Зег

485

490

495

Туг

Ьеи

Тгр

Зег

Азп

Зег

С1п

Рго

Рке

Рке

Тгр

Уй1

С1п

Ьеи

Суз

11е

500

505

510

Рго

Ьеи

А1а

А1а

Рке

11е

Уй1

Ьеи

Мек

Агд

Суз

Суз

Зег

Суз

Суз

Ьеи

515

520

525

Рго

Рке

Ьеи

Уй1

Уй1

А1а

С1у

А1а

Туг

Ьеи

А1а

Ьуз

Уй1

Азр

А1а

Туг

530

535

540

С1и

Н1з

А1а

Тйг

Тйг

Уй1

Рго

Азп

Уй1

Рго

С1п

11е

Рго

Туг

Ьуз

А1а

545

550

555

560

- 100 032403

Ьеи Уа1

С1и Агд А1а С1у 565

Туг

А1а

Рго

Ьеи Азп Ьеи 570

С1и

11е

ТНг 575

Уа1

Меб

Зег

Зег

С1и

Уа1

Ьеи

Рго

Зег

ТНг

Азп

С1п

С1и

Туг

11е

ТНг

Суз

580

585

590

Ьуз

РНе

ТНг

ТНг

Уа1

Уа1

Рго

Зег

Рго

Ьуз

11е

Ьуз

Суз

Суз

С1у

Зег

595

600

605

Ьеи

С1и

Суз

С1п

Рго

А1а

А1а

Н1з

А1а

Азр

Туг

ТНг

Суз

Ьуз

Уа1

РНе

610

615

620

С1у

С1у

Уа1

Туг

Рго

РНе

Меб

Тгр

С1у

С1у

А1а

С1п

Суз

РНе

Суз

Азр

625

630

635

640

Зег

С1и

Азп

Зег

С1п

Меб

Зег

С1и

А1а

Туг

Уа1

С1и

Ьеи

Зег

А1а

Азр

645

650

655

Суз

А1а

Зег

Азр

Н1з

А1а

С1п

А1а

11е

Ьуз

Уа1

Н1з

ТНг

А1а

А1а

Меб

660

665

670

Ьуз

Уа1

С1у

Ьеи

Агд

11е

Уа1

Туг

С1у

Азп

ТНг

ТНг

Зег

РНе

Ьеи

Азр

675

680

685

Уа1

Туг

Уа1

Азп

С1у

Уа1

ТНг

Рго

С1у

ТНг

Зег

Ьуз

Азр

Ьеи

Ьуз

Уа1

690

695

700

11е

А1а

С1у

Рго

11е

Зег

А1а

Зег

РНе

ТНг

Рго

РНе

Азр

Н1з

Ьуз

Уа1

705

710

715

720

Уа1

11е

Н1з

Агд

С1у

Ьеи

Уа1

Туг

Азп

Туг

Азр

РНе

Рго

С1и

Туг

С1у

725

730

735

А1а

Меб

Ьуз

Рго

С1у

А1а

РНе

С1у

Азр

11е

С1п

А1а

ТНг

Зег

Ьеи

ТНг

740

745

750

Зег

Ьуз

Азр

Ьеи

11е

А1а

Зег

ТНг

Азр

11е

Агд

Ьеи

Ьеи

Ьуз

Рго

Зег

755

760

765

А1а

Ьуз

Азп

Уа1

Н1з

Уа1

Рго

Туг

ТНг

С1п

А1а

Зег

Зег

С1у

РНе

С1и

770

775

780

Меб

Тгр

Ьуз

Азп

Азп

Зег

С1у

Агд

Рго

Ьеи

С1п

С1и

ТНг

А1а

Рго

РНе

785

790

795

800

- 101 032403

С1у

Суз

Ьуз

11е

А1а 805

Уа1

Азп

Рго

Ьеи Агд 810

А1а

Уа1

Азр

Суз

Зег 815

Туг

С1у

Азп

11е

Рго

11е

Зег

11е

Азр

11е

Рго

Азп

А1а

А1а

РЬе

11е

Агд

820

825

830

ТЬг

Зег

Азр

А1а

Рго

Ьеи

Уа1

Зег

ТЬг

Уа1

Ьуз

Суз

С1и

Уа1

Зег

С1и

835

840

845

Суз

ТЬг

Туг

Зег

А1а

Азр

РЬе

С1у

С1у

Меб

А1а

ТЬг

Ьеи

С1п

Туг

Уа1

850

855

860

Зег

Азр

Агд

С1и

С1у

С1п

Суз

Рго

Уа1

Н13

Зег

Н13

Зег

Зег

ТЬг

А1а

865

870

875

880

ТЬг

Ьеи

С1п

С1и

Зег

ТЬг

Уа1

Н13

Уа1

Ьеи

С1и

Ьуз

С1у

А1а

Уа1

ТЬг

885

890

895

Уа1

Н13

РЬе

Зег

ТЬг

А1а

Зег

Рго

С1п

А1а

Азп

РЬе

11е

Уа1

Зег

Ьеи

900

905

910

Суз

С1у

Ьуз

Ьуз

ТЬг

ТЬг

Суз

Азп

А1а

С1и

Суз

Ьуз

Рго

Рго

А1а

Азр

915

920

925

Н15

11е

Уа1

Зег

ТЬг

Рго

Н13

Ьуз

Азп

Азр

С1п

С1и

РЬе

С1п

А1а

А1а

930

935

940

11е

Зег

Ьуз

ТЬг

Зег

Тгр

Зег

Тгр

Ьеи

РЬе

А1а

Ьеи

РЬе

С1у

С1у

А1а

945

950

955

960

Зег

Зег

Ьеи

Ьеи

11е

11е

С1у

Ьеи

Меб

11е

РЬе

А1а

Суз

Зег

Меб

Меб

965

970

975

Ьеи

ТЬг

Зег

ТЬг

Агд

Агд

980

<210>	18
<211>	423
<212>	белок
<213>	Вирус	Синдбис
<400>	18
Зег Уа1 11е	Азр Азр РЬе ТЬг	Ьеи ТЬг Зег	Рго Туг Ьеи С1у ТЬг Суз
1		5	10	15

- 102 032403

Зег Туг

Суз

Н1з 20

Нбз

ТЬг Уа1

Рго

Суз 25

РЬе

Зег

Рго

Уа1

Ьуз 30

11е

Б1и

Б1п

Уа1

Тгр

Азр

Б1и

А1а

Азр

Азр

Азп

ТЬг

11е

Агд

11е

Б1п

ТЬг

Зег

35

40

45

А1а

Б1п

РЬе

Б1у

Туг

Азр

Б1п

Зег

Б1у

А1а

А1а

Зег

А1а

Азп

Ьуз

Туг

50

55

60

Агд

Туг

Меб

Зег

Ьеи

Ьуз

Б1п

Азр

Н1з

ТЬг

Уа1

Ьуз

Б1и

Б1у

ТЬг

Меб

65

70

75

80

Азр

Азр

11е

Ьуз

11е

Зег

ТЬг

Зег

Б1у

Рго

Суз

Агд

Агд

Ьеи

Зег

Туг

85

90

95

Ьуз

Б1у

Туг

РЬе

Ьеи

Ьеи

А1а

Ьуз

Суз

Рго

Рго

Б1у

Азр

Зег

Уа1

ТЬг

100

105

110

Уа1

Зег

11е

Уа1

Зег

Зег

Азп

Зег

А1а

ТЬг

Зег

Суз

ТЬг

Ьеи

А1а

Агд

115

120

125

Ьуз

11е

Ьуз

Рго

Ьуз

РЬе

Уа1

Б1у

Агд

Б1и

Ьуз

Туг

Азр

Ьеи

Рго

Рго

130

135

140

Уа1

Н1з

Б1у

Ьуз

Ьуз

11е

Рго

Суз

ТЬг

Уа1

Туг

Азр

Агд

Ьеи

Ьуз

Б1и

145

150

155

160

ТЬг

ТЬг

А1а

Б1у

Туг

11е

ТЬг

Меб

Н1з

Агд

Рго

Агд

Рго

Н1з

А1а

Туг

165

170

175

ТЬг

Зег

Туг

Ьеи

Б1и

Б1и

Зег

Зег

Б1у

Ьуз

Уа1

Туг

А1а

Ьуз

Рго

Рго

180

185

190

Зег

Б1у

Ьуз

Азп

11е

ТЬг

Туг

Б1и

Суз

Ьуз

Суз

Б1у

Азр

Туг

Ьуз

ТЬг

195

200

205

Б1у

ТЬг

Уа1

Зег

ТЬг

Агд

ТЬг

Б1и

11е

ТЬг

Б1у

Суз

ТЬг

А1а

11е

Ьуз

210

215

220

Б1п

Суз

Уа1

А1а

Туг

Ьуз

Зег

Азр

Б1п

ТЬг

Ьуз

Тгр

Уа1

РЬе

Азп

Зег

225

230

235

240

Рго

Азр

Ьеи

11е

Агд

Н1з

Азр

Азр

Н1з

ТЬг

А1а

Б1п

Б1у

Ьуз

Ьеи

Н1з

245

250

255

- 103 032403

Ьеи

Рго

РЬе

Ьуз 260

Ьеи

11е

Рго

Зег

ТЬг 265

Суз

Мек

Уа1

Рго

Уа1 270

А1а

Η^з

А1а

Рго

Азп

Уа1

11е

Η^з

С1у

РЬе

Ьуз

Η^з

11е

Зег

Ьеи

С1п

Ьеи

Азр

275

280

285

ТЬг

Азр

Η^з

Ьеи

ТЬг

Ьеи

Ьеи

ТЬг

ТЬг

Агд

Агд

Ьеи

С1у

А1а

Азп

Рго

290

295

300

С1и

Рго

ТЬг

ТЬг

С1и

Тгр

11е

Уа1

С1у

Ьуз

ТЬг

Уа1

Агд

Азп

РЬе

ТЬг

305

310

315

320

Уа1

Азр

Агд

Азр

С1у

Ьеи

С1и

Туг

11е

Тгр

С1у

Азп

Η^з

С1и

Рго

Уа1

325

330

335

Агд

Уа1

Туг

А1а

С1п

С1и

Зег

А1а

Рго

С1у

Азр

Рго

Η^з

С1у

Тгр

Рго

340

345

350

Η^з

С1и

11е

Уа1

С1п

Η^з

Туг

Туг

Η^з

Агд

Η^з

Рго

Уа1

Туг

ТЬг

11е

355

360

365

Ьеи

А1а

Уа1

А1а

Зег

А1а

ТЬг

Уа1

А1а

Мек

Мек

11е

С1у

Уа1

ТЬг

Уа1

370

375

380

А1а

Уа1

Ьеи

Суз

А1а

Суз

Ьуз

А1а

Агд

Агд

С1и

Суз

Ьеи

ТЬг

Рго

Туг

385

390

395

400

А1а

Ьеи

А1а

Рго

Азп

А1а

Уа1

11е

Рго

ТЬг

Зег

Ьеи

А1а

Ьеи

Ьеи

Суз

405

410

415

Суз

Уа1

Агд

Зег

А1а

Азп

А1а

420

<210> <211> <212> <213>	19 65 белок Вирус Синдбис
<400>	19

Мек Зег А1а А1а Рго Ьеи Уа1 ТЬг А1а Мек Суз

5 10

Ьеи Ьеи С1у Азп Уа1

Зег РЬе Рго Суз Азр Агд Рго Рго

ТЬг Суз

Туг ТЬг Агд С1и Рго Зег

- 104 032403

Агд

А1а

Ьеи Азр 35

11е

Ьеи С1и С1и Азп Уа1 40

Азп Н15

С1и 45

А1а

Туг Азр

ТЬг

Ьеи

Ьеи

Азп

А1а

11е

Ьеи

Агд

Суз

С1у

Зег

Зег

С1у

Агд

Зег

Ьуз

50

55

60

Агд <210> 20 <211> 488 <212> белок <213> Вирус Синдбис <400> 20

Меб 1

Зег А1а

А1а

Рго 5

Ьеи Уа1

ТЬг А1а

Меб 10

Суз

Ьеи

Ьеи

С1у

Азп 15

Уа1

Зег

РЬе

Рго

Суз

Азр

Агд

Рго

Рго

ТЬг

Суз

Туг

ТЬг

Агд

С1и

Рго

Зег

20

25

30

Агд

А1а

Ьеи

Азр

11е

Ьеи

С1и

С1и

Азп

Уа1

Азп

Н1з

С1и

А1а

Туг

Азр

35

40

45

ТЬг

Ьеи

Ьеи

Азп

А1а

11е

Ьеи

Агд

Суз

С1у

Зег

Зег

С1у

Агд

Зег

Ьуз

50

55

60

Агд

Зег

Уа1

11е

Азр

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Зег

Рго

Туг

Ьеи

С1у

ТЬг

65

70

75

80

Суз

Зег

Туг

Суз

Н1з

Н1з

ТЬг

Уа1

Рго

Суз

РЬе

Зег

Рго

Уа1

Ьуз

11е

85

90

95

С1и

С1п

Уа1

Тгр

Азр

С1и

А1а

Азр

Азр

Азп

ТЬг

11е

Агд

11е

С1п

ТЬг

100

105

110

Зег

А1а

С1п

РЬе

С1у

Туг

Азр

С1п

Зег

С1у

А1а

А1а

Зег

А1а

Азп

Ьуз

115

120

125

Туг

Агд

Туг

Меб

Зег

Ьеи

Ьуз

С1п

Азр

Н1з

ТЬг

Уа1

Ьуз

С1и

С1у

ТЬг

130

135

140

Меб

Азр

Азр

11е

Ьуз

11е

Зег

ТЬг

Зег

С1у

Рго

Суз

Агд

Агд

Ьеи

Зег

145

150

155

160

Туг

Ьуз

С1у

Туг

РЬе

Ьеи

Ьеи

А1а

Ьуз

Суз

Рго

Рго

С1у

Азр

Зег

Уа1

- 105 032403

165

170

175

ТЬг Уа1

Зег

11е Уа1 180

Зег

Зег

Азп

Зег 185

А1а

ТЬг

Зег

Суз

ТЬг 190

Ьеи

А1а

Агд

Ьуз

11е

Ьуз

Рго

Ьуз

РЬе

Уа1

С1у

Агд

С1и

Ьуз

Туг

Азр

Ьеи

Рго

195

200

205

Рго

Уа1

Η^з

С1у

Ьуз

Ьуз

11е

Рго

Суз

ТЬг

Уа1

Туг

Азр

Агд

Ьеи

Ьуз

210

215

220

С1и

ТЬг

ТЬг

А1а

С1у

Туг

11е

ТЬг

Меб

Η^з

Агд

Рго

Агд

Рго

Η^з

А1а

225

230

235

240

Туг

ТЬг

Зег

Туг

Ьеи

С1и

С1и

Зег

Зег

С1у

Ьуз

Уа1

Туг

А1а

Ьуз

Рго

245

250

255

Рго

Зег

С1у

Ьуз

Азп

11е

ТЬг

Туг

С1и

Суз

Ьуз

Суз

С1у

Азр

Туг

Ьуз

260

265

270

ТЬг

С1у

ТЬг

Уа1

Зег

ТЬг

Агд

ТЬг

С1и

11е

ТЬг

С1у

Суз

ТЬг

А1а

11е

275

280

285

Ьуз

С1п

Суз

Уа1

А1а

Туг

Ьуз

Зег

Азр

С1п

ТЬг

Ьуз

Тгр

Уа1

РЬе

Азп

290

295

300

Зег

Рго

Азр

Ьеи

11е

Агд

Η^з

Азр

Азр

Η^з

ТЬг

А1а

С1п

С1у

Ьуз

Ьеи

305

310

315

320

Η^з

Ьеи

Рго

РЬе

Ьуз

Ьеи

11е

Рго

Зег

ТЬг

Суз

Меб

Уа1

Рго

Уа1

А1а

325

330

335

Η^з

А1а

Рго

Азп

Уа1

11е

Η^з

С1у

РЬе

Ьуз

Η^з

11е

Зег

Ьеи

С1п

Ьеи

340

345

350

Азр

ТЬг

Азр

Η^з

Ьеи

ТЬг

Ьеи

Ьеи

ТЬг

ТЬг

Агд

Агд

Ьеи

С1у

А1а

Азп

355

360

365

Рго

С1и

Рго

ТЬг

ТЬг

С1и

Тгр

11е

Уа1

С1у

Ьуз

ТЬг

Уа1

Агд

Азп

РЬе

370

375

380

ТЬг

Уа1

Азр

Агд

Азр

С1у

Ьеи

С1и

Туг

11е

Тгр

С1у

Азп

Η^з

С1и

Рго

385

390

395

400

Уа1

Агд

Уа1

Туг

А1а

С1п

С1и

Зег

А1а

Рго

С1у

Азр

Рго

Η^з

С1у

Тгр

- 106 032403

405 410 415

Рго

Η^з

С1и

11е 420

Уа1

С1п

Η^з

Туг

Туг 425

Η^з

Агд

Η^з

Рго Уа1 430

Туг

ТИг

11е

Ьеи

А1а

Уа1

А1а

Зег

А1а

ТИг

Уа1

А1а

МеЕ

МеЕ

11е

С1у

Уа1

ТИг

435

440

445

Уа1

А1а

Уа1

Ьеи

Суз

А1а

Суз

Ьуз

А1а

Агд

Агд

С1и

Суз

Ьеи

ТИг

Рго

450

455

460

Туг

А1а

Ьеи

А1а

Рго

Азп

А1а

Уа1

11е

Рго

ТИг

Зег

Ьеи

А1а

Ьеи

Ьеи

465

470

475

480

Суз

Суз

Уа1

Агд

Зег

А1а

Азп

А1а

485

<210> 21 <211> 683 <212> ДНК <213> ВИЧ	типа 1
<400> 21 ссЕадааааа 60	саЕддадсаа	ЕсасаадЕад	сааЕасадса	дсЕассааЕд	сЕдаЕЕдЕдс
сЕддсЕадаа 120	дсасаададд	аддаддаддЕ	дддЕЕЕЕсса	дЕсасассЕс	аддЕассЕЕЕ
аадассааЕд 180	асЕЕасаадд	садсЕдЕада	ЕсЕЕадссас	ЕЕЕЕЕаааад	аааадддддд
асЕддааддд 240	сЕааЕЕсасЕ	сссаасдаад	асаадаЕаЕс	сЕЕдаЕсЕдЕ	ддаЕсЕасса
сасасааддс 300	ЕасЕЕсссЕд	аЕЕддсадаа	сЕасасасса	дддссаддда	ЕсадаЕаЕсс
асЕдассЕЕЕ 360	ддаЕддЕдсЕ	асаадсЕадЕ	ассадЕЕдад	саададаадд	Еадаадаадс
сааЕдаадда 420	дадаасассс	дсЕЕдЕЕаса	сссЕдЕдадс	сЕдсаЕддда	ЕддаЕдассс
ддадададаа 480	дЕаЕЕададЕ	ддаддЕЕЕда	садссдссЕа	дсаЕЕЕсаЕс	асаЕддсссд
ададсЕдсаЕ 540	ссддасЕдЕа	сЕдддЕсЕсЕ	сЕддЕЕадас	садаЕсЕдад	ссЕдддадсЕ
сЕсЕддсЕаа 600	сЕадддаасс	сасЕдсЕЕаа	дссЕсааЕаа	адсЕЕдссЕЕ	дадЕдсЕЕса

- 107 032403

адБадБдБдБ 660 дБсадБдБдд 683	дсссдБсБдБ ааааБсБсБа	БдБдБдасБс дса	БддБаасБад	адаБсссБса	дасссББББа
<210> 22 <211> 416 <212> ДНК <213> ВИЧ <400> 22	типа 1
ссБадааааа 60	саБддадсаа	БсасаадБад	сааБасадса	дсБассааБд	сБдаББдБдс
сБддсБадаа 120	дсасаададд	аддаддаддБ	дддББББсса	дБсасассБс	аддБассБББ
аадассааБд 180	асББасаадд	садсБдБада	БсББадссас	БББББаааад	аааадддддд
асБддааддд 240	сБааББсасБ	сссаасдаад	асаадаБсБд	сБББББдссБ	дБасБдддБс
БсБсБддББа 300	дассадаБсБ	дадссБддда	дсБсБсБддс	БаасБаддда	асссасБдсБ
БаадссБсаа 360	БааадсББдс	сББдадБдсБ	БсаадБадБд	БдБдсссдБс	БдББдБдБда
сБсБддБаас 416	БададаБссс	БсадасссББ	ББадБсадБд	БддааааБсБ	сБадса
<210> 23 <211> 401 <212> ДНК <213> ВИЧ	типа 1
<400> 23 ссБадааааа 60	саБддадсаа	БсасаадБад	сааБасадса	дсБассааБд	сБдаББдБдс
сБддсБадаа 120	дсасаададд	аддаддаддБ	дддББББсса	дБсасассБс	аддБассБББ
аадассааБд 180	асББасаадд	садсБдБада	БсББадссас	БББББасБдд	аадддсБааБ
БсасБсссаа 240	сдаадасаад	аБсБдсББББ	БдссБдБасБ	дддБсБсБсБ	ддББадасса
даБсБдадсс 300	БдддадсБсБ	сБддсБаасБ	адддаассса	сБдсББаадс	сБсааБааад
сББдссББда 360	дБдсББсаад	БадБдБдБдс	ссдБсБдББд	БдБдасБсБд	дБаасБадад
аБсссБсада 401	сссББББадБ	садБдБддаа	ааБсБсБадс	а

- 108 032403 <210>24 <211> 8 <212> белок <213> Са11из да11из <400>24

Зег 11е 11е Азп РЬе Б1и Ьуз Ьеи

<210> <211> <212> <213>	25 9 белок Миз тизси1из
<400>	25

Зег Рго Зег Туг А1а Туг Нтз С1п РЬе

<210>	26
<211>	5
<212>	белок
<213>	Вирус Синдбис
<400>	26

Агд Зег Ьуз Агд Зег <210>27 <211>4 <212> белок <213> Вирус Синдбис <400>27

Агд Зег Ьуз Агд

Claims (31)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Лентивирусная векторная частица, способная инфицировать дендритные клетки, включающая:

   (a) оболочку, содержащую вариант гликопротеина Е2 вируса Синдбис, идентичный по меньшей мере на 90% аминокислотной последовательности 8ЕО ΙΌ N0: 1, в которой: (1) остаток в положении 160 отсутствует или является остатком аминокислоты, отличной от глутаминовой кислоты, (и) остаток в положении 70 является неосновным остатком, причем вариант гликопротеина Е2 не является частью гибридного белка с гликопротеином Е3 вируса Синдбис; и (b) лентивирусный векторный геном, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую антиген.
2. 2. Лентивирусная векторная частица по п.1, в которой вариант гликопротеина Е2 связывается с ИС8ΙΟΝ.
3. 3. Лентивирусная векторная частица по п.1, отличающаяся тем, что остаток в положении 160 является остатком глицина, аланина, валина, лейцина или изолейцина.
4. 4. Лентивирусная векторная частица по п.3, отличающаяся тем, что остаток в положении 160 явля

   - 109 032403 ется остатком глицина.
5. 5. Лентивирусная векторная частица по п.1, отличающаяся тем, что аминокислотная последовательность варианта гликопротеина Е2 состоит из аминокислотных остатков 66-488 последовательности 8ЕО ΙΌ N0: 3, аминокислотных остатков 66-488 последовательности 8ЕС ΙΌ N0: 4 или аминокислотных остатков 66-486 последовательности 8ЕС ΙΌ N0: 5 или идентична указанным аминокислотным остаткам по меньшей мере на 95%.
6. 6. Лентивирусная векторная частица по п.1, отличающаяся тем, что указанный антиген представляет собой опухолеспецифичный антиген или вирусный антиген.
7. 7. Лентивирусная векторная частица по п.6, отличающаяся тем, что опухолеспецифичный антиген представляет собой карбоангидразу IX, ΝΥ-Ε80-1, МАСЕ, ВАСЕ, ВАСЕ, МАК.Т-1/Ме1ап-А, др 100, др75, шба-7, тирозиназу, тирозиназа-связанный белок, 5Т4, 8М22-а, карбоангидразу I, ΗΙΕ-1α, ΗΙΕ-2α, Р8МА, Р8А, 8ТЕАР или ΝΚΧ3.1.
8. 8. Лентивирусная векторная частица по п.6, отличающаяся тем, что вирусный антиген представляет собой антиген ΗΙν, антиген 8Ιν, антиген аденовируса, антиген энтеровируса, антиген коронавируса, антиген калицивируса, антиген вируса собачьей чумки, антиген вируса Эбола, антиген флавивируса, антиген вируса гепатита, антиген вируса герпеса, антиген вируса инфекционного перитонита, антиген вируса гриппа, антиген вируса лейкемии, антиген вируса марбургской болезни, антиген ортомиксовируса, антиген вируса папилломы, антиген вируса парагриппа, антиген парамиксовируса, антиген парвовируса, антиген пестивируса, антиген пикорнавируса, антиген полиовируса, антиген поксвируса, антиген вируса бешенства, антиген реовируса, антиген ретровируса или антиген ротавируса.
9. 9. Лентивирусная векторная частица по п.1, отличающаяся тем, что лентивирусный векторный геном имеет инактивированный 3' длинный терминальный повтор (ЬТК.) или самоинактивирующийся 3' длинный терминальный повтор (ЬТВ).
10. 10. Лентивирусная векторная частица по п.9, отличающаяся тем, что лентивирусный векторный геном содержит И3 элемент, не имеющий энхансерной последовательности, ТАТА-бокса, сайта 8р1, сайта ΝΚ-кВ и/или полипуринового тракта (РРТ).
11. 11. Лентивирусная векторная частица по п.1, отличающаяся тем, что лентивирусный векторный геном содержит И3 элемент, не имеющий энхансерной последовательности, ТАТА-бокса, сайта 8р1, сайта ΝΚ-кВ и/или полипуринового тракта (РРТ).
12. 12. Лентивирусная векторная частица по п.1, отличающаяся тем, что лентивирусный векторный геном содержит любую из нуклеотидных последовательностей 8ЕС ΙΌ N0: 21, 22 или 23.
13. 13. Лентивирусная векторная частица по п.1, отличающаяся тем, что лентивирусный векторный геном дополнительно содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую фактор созревания/стимуляции дендритных клеток.
14. 14. Лентивирусная векторная частица по п.13, отличающаяся тем, что фактор созревания/стимуляции дендритных клеток представляет собой СМ-С8Е, ΙΕ-2, ГЬ-4, ГЬ-6, ΙΕ-7, ГЬ-15, ГЬ-21, ГЬ23, Т>а, В7.1, В7.2, 4-1ВВ, СЭ40-лигаид или индуцируемый лекарствами СЭ40.
15. 15. Лентивирусная векторная частица по п.1, отличающаяся тем, что экспрессия нуклеотидной последовательности, кодирующей антиген, контролируется промотором, который представляет собой промотор Убиквитина-С человека (ИЫС), немедленно-ранний промотор цитомегаловируса (СМУ), промотор вируса саркомы Рауса (Κδν) и реагирующий на тетрациклин промотор.
16. 16. Лентивирусная векторная частица по п.1, отличающаяся тем, что лентивирусный векторный геном дополнительно содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую второй антиген.
17. 17. Лентивирусная векторная частица по п.1, отличающаяся тем, что остаток в положении 76 является неосновным остатком.
18. 18. Лентивирусная векторная частица по п.1, отличающаяся тем, что остаток в положении 159 является неосновным остатком или отсутствует.
19. 19. Лентивирусная векторная частица по п.17, отличающаяся тем, что остаток в положении 159 является неосновным остатком или отсутствует.
20. 20. Лентивирусная векторная частица, способная инфицировать дендритные клетки, включающая:

    (a) оболочку, содержащую вариант гликопротеина Е2 вируса Синдбис, идентичный по меньшей мере на 90% аминокислотной последовательности 8ЕС ΙΌ N0: 1, в которой:

    (ί) остаток в положении 160 отсутствует или является остатком аминокислоты, отличной от глутаминовой кислоты, (ίί) остаток в положении 70 заменен остатком глутаминовой кислоты или аспарагиновой кислоты, (ΐϊϊ) остаток в положении 159 заменен остатком глутаминовой кислоты или аспарагиновой кислоты;

    (ίν) остатки в положениях 71-75 являются неизмененными;

    причем вариант гликопротеина Е2 не является частью гибридного белка с гликопротеином Е3 вируса Синдбис; и (b) лентивирусный векторный геном, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую антиген.

    - 110 032403
21. 21. Лентивирусная векторная частица по п.20, отличающаяся тем, что остаток в положении 160 заменен остатком глицина, остаток в положении 159 заменен остатком глутаминовой кислоты, остаток в положении 70 заменен остатком глутаминовой кислоты, причем лентивирусный векторный геном содержит ЬТК, не имеющий полипуринового тракта (РРТ).
22. 22. Лентивирусная векторная частица, способная инфицировать дендритные клетки, содержащая:

    (a) оболочку, содержащую вариант гликопротеина Е2 вируса Синдбис, образованный остатками 66488 аминокислотной последовательности ВЕС ΙΌ N0: 3, причем вариант гликопротеина Е2 не является частью гибридного белка с гликопротеином Е3 вируса Синдбис; и (b) лентивирусный векторный геном, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую антиген.
23. 23. Лентивирусная векторная частица по п.20, отличающаяся тем, что лентивирусный векторный геном содержит нуклеотидную последовательность ВЕС) ΙΌ N0: 21.
24. 24. Лентивирусная векторная частица по п.20, отличающаяся тем, что лентивирусный векторный геном содержит нуклеотидную последовательность ВЕР ΙΌ N0: 22.
25. 25. Лентивирусная векторная частица по п.20, отличающаяся тем, что лентивирусный векторный геном содержит нуклеотидную последовательность ВЕР ΙΌ N0: 23.
26. 26. Фармацевтическая композиция для иммунизации антигеном, содержащая лентивирусные частицы по п.1, которые кодируют указанный антиген, и фармацевтически приемлемый носитель.
27. 27. Фармацевтическая композиция по п.26, отличающаяся тем, что лентивирусные частицы имеют МЕ по меньшей мере 10⁵/мл.
28. 28. Фармацевтическая композиция по п.26, дополнительно содержащая иммуностимулирующий агент.
29. 29. Фармацевтическая композиция по п.26, дополнительно содержащая адъювант.
30. 30. Фармацевтическая композиция для иммунизации антигеном, содержащая лентивирусные частицы по п.20, которые кодируют указанный антиген, и фармацевтически приемлемый носитель.

    <.....^Ё·³.

    10 .... 1 .... 1 .... 1 20 30 1_____1 .... 1 40 1_____1 .... 1 50 60 70 1 . . . . 1 - . . . 1 . . 1 . . 11 . . . 1 . 1 80 ^! . . I ЗУСгаи М8АА₽1.УТАМСЫЛНУ8Р₽С0ВРРТСУТНЕР8НА1.01ЬЕЕКУМНЕАУ0ТЫЛА11.НСС88е-—- ЗУХ00ЕТ1.ТЗРУЬСТ 8ХН-Уаг1 81И-Уаг2 .................К8КК.......... 31Н-УахЗ .............. ЙВКП.......... 90 .... 1 ... .1 .... 1 100 ....1,...1 110 1....1....1 120 1 .... I .... 1 130 140 150 ί .... 1 .... ί .... 1 ... .1 160 . I 8У6ти С5УСННТУРСГЗРУК1Е0УТОЕАПОНТ1«10ТЗА0Г6УО08СААЗАНК¥АУМЗЕК0МУР¥0УРОУАТУКЕСТМПО1К18Т 51М-Уах1 .........Ε.--------ОН......... 81Н-Уаг2 .........Ε.--------ОН. .Ε......

    51К-УагЗ ......................................................Е.---------ОН..Е

    170 180 190 200 210 220 230 240

    I .... I .... I .... I .... 1 .... I ....1 .... I .... I .... 1 .... I .... I .... I ... .1 .... I .... I

    5У(5гаи 8ΟΡσΚΚΧ5ΥΚεϊίΙ.1ΑΚΟΡΡδ05ντν5Χν55Η6ΑΤ8εΤΙΑΚΚΙΚ₽Κ1Γν(3Μ:ΚΥ0Ι.₽ΡνΗ6ΚΚΙΡΟΤνΥ0ΐαΑΑΤΤΑ6ΪΙΤ 31К-Уаг1 .......ЕС. . 81Я-Уаг2 .......ЕС..< δΙΝ-УагЗ 250 .... 1 .. ..1 .... 1 260 1 .... 1.... 270 1 1 280 1....1....1 290 1 .... 1 .... 1 300 1 .... 1... . 310 1 .... 1 .... 1. 320 .... 1

    ЗУОти МНК₽КРНАХТ8ХМ:Е335КУГАКРгзеКМ1ТУЕСКС6ОГКТ6ТУ8ТКТЕ1Т<ЗСТА1К<2СУАУК8ОеТКНУЕ№РПЫКЯ0 31И-Уаг1 ................................................................................

    8Ш-Уах2 ................................................................................

    ЗПЯ-УагЗ ................................................................................

    330 340 350 36С 370 380 390 400

    .... I .... I .... I .... I .... I .... I .... I ....ί .... II .... I .... I .... I .... I .... |

    ЗУбгаи ОНТАОСКЬНЬРЕКЫРЗТСМУРУАНАРКУ1НСЕКН13ЬОЬОТОНЬТЫ.ТТННЬеАКРЕРТТЕИ1УСКТУ1ЖГГУОНОЗЬЕ

    8ΧΝ-νβε1 .................. . . ...........
31. 31Н-Уаг2 ................................................................................

    31Ы-УагЗ ................................................................................

    410 420 430 440 450 400 470 480 | I .... I .... I .... I .... I ||I .... I .... I |I .... I .... I .... I ЗУОгаи ΪΙΗδΝΗΕΡνκνΎΑβΕδΑΡαϋΡΗΟΗΡΗΕΐνΰΗϊΥΗΗΗΡνϊΤΙΙΛνΑΕΑΤνΑΜΜΙΟντνΑνΕΟΑαυΛΡΕείΤΡΥΜΛΡΝΑν ЗШ-Уаг1 ................................................................................

    ЗШ-Уаг2 ................................................................................

    ЗШ-УагЗ ................................................................................